RS20140263A1 - Bioaktivni polučvrsti i tečni fitopreparati - Google Patents

Abstract

Pronalazak pripada oblasti farmaceutskih proizvoda, formulisanih u polučvrstom i tečnom obliku na bazi ekstrakata lišaja Usnea barbata L., Parmeliaceae, i virka Alchemilla vulgaris L., Rosaceae, i etarskog ulja čajnog drveta iz Melaleuca alternifolia (Maiden & Betche) Cheel, Myrtaceae, za primenu kod promena na koži i sluzokoži bakterijske i gljivične etiologije u preventivne i terapijske svrhe u humanoj i veterinarskoj medicini sa antimikrobnim, antiinflamatornim i antioksidativnim delovanjem, i promena kod kojih usled dejstva slobodnih radikala dolazi do upala i ubrzanog starenja kože, čime bi se prevazišli nedostaci i unapredila primena do sada sličnih farmaceutskih proizvoda.

Description

[0001] BIOAKTIVNIPOLUČVRSTII TEČNI FITOPREPARATI

[0002] Oblast tehnike

[0003] Pronalazak pripada oblasti farmaceutskih proizvoda, formulisanih u polučvrstom i tečnom obliku na bazi ekstrakata lišajaUsnea barbataL., Parmeliaceae, i virkaAlchemilla vulgarisL., Rosaceae, i etarskog ulja čajnog drveta izMelaleuca alternifolia(Maiden & Betche) Cheel, Mvrtaceae, za primenu kod promena na koži i sluzokoži bakterijske i gljivične etiologije u humanoj i veterinarskoj medicini, kao i promena kod kojih usled dejstva slobodnih radikala dolazi do upala i ubrzanog starenja kože. Prema međunsrodnoj klasifikaciji patenata pronalazak pripada klasama: A61K 8/02, A61K 8/18, A61K 8/97, A61K 9/02, A61K 9/06, A61K 9/08 i A61K9/62.

[0004] Tehnički problem

[0005] Tehnički problem koji se rešava ovim pronalaskom je dobijanje novih farmaceutskih proizvoda na bazi kompozicije koja se sastoji od ekstrakata lišajaUsnea barbataL., Parmeliaceae i virkaAlchemilla vulgarisL., Rosaceae, i etarskog ulja čajnog drvetaMelaleuca alternifolia(Maiden & Betche) Cheel, Mvrtaceae sa antimikrobnim, antiinflamatornim i antioksidativnim delovanjem, inkorporirane u odgovarajuće farmaceutske oblike u polučvrstom i tečnom obliku, čime se postiže neočekivano efikasna i jednostavna primena kod promena na koži i sluzokoži bakterijske i gljivične etiologije u humanoj i veterinarskoj medicini, i promena kod kojih usled dejstva slobodnih radikala dolazi do upala i ubrzanog starenja kože, čime bi se prevazišli nedostaci i unapredila primena do sada sličnih farmaceutskih proizvoda..

[0006] Stanje tehnike

[0007] Pregledom raspoložive naučne i patentne literature farmaceutskih proizvoda za primenu na koži na bazi aktivnih principa prirodnog porekla, kao što su ekstrakti i etarska ulja lekovitog bilja, nađeno je sledeće: 1. EP 2099525 se odnosi na biljkuAlchemilla vulgarisza primenu u usnoj duplji kao i preparat za oralnu primenu koji kao aktivni sastojaksadrži Alchemilla- u vulgaris(od 0,1 do 20%) i njegovu upotrebu u poboljšanju ili održavalju zdravlja usne duplje kod životinja, po mogućstvu uz redukciju ili kontrolu zubnih naslaga i/ili smanjenja bakterijskog sadržaja zubnih naslaga u usnoj duplji životinja. 2. US 5096709 opisuje preparat za opuštanje mišića i analgeziju koji sadrži najmanje 5%, a poželjno 10% etarskog uljaMelaleuca- e.Preparat sadrži i druga aromatična ulja kao što su kamfor, mentol i metil salicilat, a koristi se kod bola u mišićima i zglobovima kada se topikalno nanese na obolelo mesto. 3. US 0257510 navodi formulaciju farmaceutskih preparata za upotrebu u humanoj i veterinarskoj medicini za regeneraciju tkiva kod različitih vrsta gnojnih procesa i rana na koži, a na bazi ekstrakataEhinacee(do 15 %) iUsnee(do 1%). Ekstrakt lišaja prema ovoj formulaciji doprinosi inhibiciji dejstva UV zračenja. 4. US 7687083, RS 50550B, WO2005/099728 navodi postupak za dobijanje (formulaciju) farmaceutskih preparata za lečenje kožnih oboljenja, naročito zapaljenja kože i starenja kože, i za lečenje kožnih infekcija izazvanih gljivicomPityrosporum,akni i rozacec, koji sadrže 0.001-20.0 % ekstrakata lišaj brade i kantariona dobijenih natkritičnom ekstrakcijom sa CO<2>. 5. Patentom RS 49778 B se štite preparati na bazi farmaceutske sirovine Na-usninata i lekovitog bilja žalfije ili timijana ili morača ili mentola, a namenjen je održavanju zdravlja sluzokože usta.. 6. U EP 0256 566 usninska kiselina ili njeni derivati se mogu formulisati u paste za zube, prašak za zube, pripravke za higijenu veštačkih proteza, žvakaćih guma, pasta za korenske kanale i premaza za karijes i navodi formulacije za lečenje zubnog karijesa. 7. Prema DE 23 54 517 predmet zaštite je kozmetički proizvod za dermatološku primenu na bazi enantiomera (+)-usninske kiseline. 8. Prema patentnoj prijavi P-2011/0012 predmet zaštite je proizvod sa ekstraktom lišaj brade dobijen procesom natkrtične ekstrakcije ugljenik (IV)-oksidom, a definisana je upotreba kao antimikrobnog agensa, sa definisanim minimalnim innhibitornim koncentracijama. 9. Patentna prijava US 20120003292 navodi mogućnost upotrebe farmaceutskih oblika sa polimerima koji grade specijlni sloj, polako rastvarajući, u kome su inkorporirani biljni ekstrakti, medju kojima i ekstrakt lišaja,Usnea barbata.Prijavom nije specificiran način izrade ekstrakata, niti etiologija inflamacije koja se tretira navedenom kompozicijom. 10. Patent US 7850998 štiti kompoziciju i metod tretiranja viralnih infekcija preparata koji sadrži koloidno srebro i/ili srebro-nitrat i biljke, iz familija Rutaceae( Ruta graveolens),Mvrtaceae( Melaleuca alternifolia),Cupressaceae( Thuja occidentalis),Moraceae (unripe fig). Patentom nije preciziran oblik biljaka koji se upotrebljava u kompoziciji. 11. Predmet zaštite prema patentu AU 1993034257 je metod pravljenja stika sa usninskom kiselinom. Nije precizirano poreklo usninske kiseline. 12. Patent AU 2007336121 štiti upotrebu biljkeAlchemilla vulgarisu cilju očuvanja dobrog stanja usne duplje životinja, pre svega u cilju redukcije ili kontrole stvaranja dentalnog plaka i/ili alteracija dentalnog plaka bakterijske etiologije, za prevenciju gingivitisa, gubljenja zuba. Patentnim zahtevima nije preciziran oblik u kome se koristi navedena biljka. 13. Patentna prijava US 20080020074 odnosi se na upotrebu ekstrakta virlka,Alchemilla vulgarisu kozmetičkim preparatima namenjenim depigmentaciji koze.

[0008] Na osnovu navedene patentne literature može se reći da postoje patenti i patentne prijave koji se odnose na topikalnu primenu preparata na bazi lekovitog bilja za različite indikacije. Međutim, čak i u slučaju patentnih prijava i patenata koji opisuju farmaceutske proizvode za primenu kod kožnih infekcija, ni u jednom primeru nije opisana kombinacija prirodnih izolata prema našem pronalsku.. Kada se uzmu u razmatranje patenti i patentne prijave koje se odnose na pojedinačne biljne ekstrakte i etarska ulja obuhvaćene našim pronalaskom, virak( Achemilla vulgarisL., Rosaceae) se u patentnim prijavama pod rednim brojevima 1, 12, 13 opisuje kao antibakterijski i antiinflamatorni agens ali za primenu u usnoj duplji, ili agens namenjen depigmentaciji kože. Etarsko ulje čajnog drveta( Melaleuca alternifolia(Maiden & Betche) Cheel, Mvrtaceae) u patentima pod rednim brojevima 2, 10 se navodi kao sastojak kompozicije u topikalnom preparatu za otklanjanje bola u mišićima, odnosno za tretiranje viralnih infekcija. Patenti 3 i 4 odnose se na preparate koji sadrže pored drugih ekstrakata, i ekstrakt lišaja( Usnea barbataL., Parmeliaceae). Iako se patent opisan pod rednim brojem 4 odnosi na topikalni preparat za primenu kod kožnih infekcija, ona se odnosi na druge uzročnike odgovorne za etiologiju ovih oboljenja u odnosu na novo rešenje prema našem pronalasku. Patent pod rednim brojem 5 odnosi se na upotrebu Na-soli usninske kiseline za održavanje zdravlja sluzokože usta. Patentnom prijavom pod rednim brojem 6 štite se proizvodi na bazi usninske kiseline i njenih derivata namenjeni otklanjanju problema u usnoj duplji. Patent pod rednim brojem 7 štiti farmaceutski proizvod sa jednim od enantiomera usninske kiseline, odnosno sa (+)-usninskom kiselinom za kozmetičku dermatološku primenu, dok se naš pronalazak odnosi na farmaceutske proizvode druge namene. Takodje, patentnom prijavom pod rednim brojem 11 se štiti farmaceutski oblik, stik u kome je glavnodelujuća komponenta usninska kiselina, sa nenaznačenim poreklom. Patentni zahtevi predstavljeni u patentnoj prijavi pod rednim brojem 13 se ne odnose na tretiranje bakterisjih infekcija i inflamatornih procesa različite etiologije, već na kozmetičku primenu. Patentnom prijavom pod rednim brojem 8 štiti se farmaceutski oblik mast i kapi za uši sa ekstraktom lišaj brade, koji je dobijen procesom natkritične ekstrakcije i upotrebljen kao antimikrobni agens. Patentna prijava pod rednim brojem 9, iako se odnosi na farmaceutske oblike na bazi ekstrakata prirodnog porekla među kojima je ekstrakt lišaja ne navodi specifikaciju izrade ekstrakata, niti etiologiju inflamacije koja bi mogla da bude tretirana navedenim proizvodom.

[0009] Kratak opis slika nacrta

[0010] Slika 1.Eritema indeks (EI) nakon primene kremova sa 1%, 1,5%, 2% i 3% ekstrakta virka i placebo krema, (NN-neiritirana, netretirana koža; IN-iritirana, netretirana koža)

[0011] Slika 2.HPLC hromatogramUsneae barbatae extractumdobijen postupkom natkritične ekstrakcije sa UV spektrom identifikovane usninske kiseline

[0012] Slika 3. HPLC profil ekstrakta virka (Alchemilla hyb)sa identifikovanim flavonoidnim jedinjnejima 1. izokvercitrin; 2. derivat luteolina; 3. kvercetin

[0013] Slika4.GC-FID profil etarskog ulja čajnog drveta upotrebljenog u naznačenim farmaceutskim kompozicijama GC-FID( Maleluca alternifolia)

[0014] Slika5. Efekti primene patentom štićene kompozicije prilikomin vivoispitivanja (Prema Tabeli 6: 1. - pacijent 1; 2. - pacijent 2; 3. - pacijent 3; 4. - pacijent 4; 5. - pacijent 5; 6. - pacijent 6; 7. - pacijent 7, 8. - pacijent 8)

[0015] Opisrešenja tehničkog problema sa primerima izvođenja

[0016] Uprkos tome što se danas na tržištu lekova na raspolaganju nalazi preko 200 različitih polusintetskih i prirodnih antibiotika i hemioterapeutika uključujući 50 penicilina, 70 cefalosporina i 20 hinolona, rezistencija bakterija na antibiotike predstavlja jedan od najtežih problema moderne civilizacije. Krajem 20. veka došlo je do pojave i zabrinjavajućeg širenja takozvanih panrezistentnih sojeva bakterija, tj sojeva koji su rezistentni na sve postojeće antibiotike. Panrezistentni sojevi svakodnevno nastaju i umnožavaju se prevashodno u bolnicama i na faramama za intenzivan uzgoj životinja odakle se šire na civilno stanovništvo, biljke, ptice, mačke, pse, ribe i insekte, a putem njih i u druge ekološke niše i dovode do teških infekcija kod životinja i ljudi sa smrtnim ishodom. Panrezistentni sojevi bakterija detektovani su na svim kontinentima, tj. u svim državama na svetu, pa je shodno tome Svetska zdravstvena organizacija proglasilapandemiju panrezistencije.U najnovijim naučnim i stručnim publikacijama mogu se pronaći podaci o broju smrtnih slučajeva kod ljudi inficiranih multirezistentnim ili panrezistentnim uzročnicima. Na primer, tokom 2005, samo u bolnicama u SAD, sojevima meticilin-rezistentnihS. aureus(MRSA) je zaraženo preko preko 100.000 pacijenata od kojih je 18.650 umrlo, što je više umrlih nego od AIDS-a te godine (Klevens R.M et al., Journal of the American Medical Association 298 (2007) 1763-1771.). Sa druge strane, farmaceutska industrija u poslednjih 25 godina nije proizvela nijedan novi, takozvani „blockbuster" antibiotik širokog spektra delovanja koji bi bio namenjen za široku upotrebu u humanoj i veterinarskoj medicini, a nema čak ni najava da bi se u narednom periodu od 5 ili 10 godina na tržištu mogli naći novi antibakterijski lekovi.

[0017] Među prvim otkrivemm oblicima rezistencije spadaju MRSA - meticilin-rezistentneS. aureus.Ovaj oblik rezistencije je poznat naučnoj i stručnoj javanosti već decenij ama ali se tokom poslednjih godina, naročito od početka 21. veka, epidemiološka situacija pojave i širenja sojeva MRSA značajno pogoršala i MRSA se trenutno smatraju najopasnijim i najraširenijim oblikom rezistencije na antibiotike. Značaj MRSA u 21. veku se proširio iz oblasti humane i veterinarske kliničke prakse i na industriju hrane, pa su MRSA dobile status infektivnih agenasa zoonotskog karaktera i obuhvaćene su zakonima velikog broja država sa precizno definisanim protokolima o njihovom otkrivanju, uništavanju i sprečavanju pojave širenja.

[0018] Stoga su u poslednjih deset godina sve aktuelnija ispitivanja antibakterijskog delovanja neantibiotskih supstanci uključujući i biljne ekstrakte, a u cilju pronalaženja novih sredstava u borbi protiv infekcija izazvanih multirezistentnim sojevima bakterija.

[0019] Takodje, jedan od najvećih problema sa kojima se danas medicina sreće je lečenje inflamatornih oboljenja. Sam proces inflamacije predstavlja odgovor tela na infekcije i oštećenja tkiva. Naravno, postoji fina ravnoteža između pozitivnih efekata procesa koji predstavlja kaskadni odgovor organizma i njegovog potencijalno negativnog efekta na tkiva obuhvaćena infiamacijom, ako proces traje dugo. Ukoliko inflamatorni proces nije kontrolisan, onda takva promena tkiva uslovljava razvoj hroničnih oboljenja, astme, reumatoidnog artritisa, multiple skleroze, hronične upale mokraćnih kanala, psorijaze, i drugih. Poznato je da tokom inflamacije, aktivirane polimorfonuklearne ćelije proizvodeći veliku količinu slobodnih radikala, prvenstveno reaktivnih kiseoničnih vrsta (eng.reactive oxygen species- ROS)mogu dodatno da oštete tkivo koje je zahvaćeno upalom. Brojna istraživanja su pokazala da mnogi aktivni konstituenti lekovitih biljaka, naročito flavonoidi, i kao potklasa u okviru flavonoidne grupe - tanini, i polifenolna jedinjenja, koji sprečavaju infiltraciju neutrofila u zonu zapaljenja i vrše neutraliziraju ROS, igraju ulogu anti-inflamatornih agenasa. Smatra se da mehanizmi antiinflamatorne aktivnosti flavonoida, i uopšte polifenolnih jedinjenja obuhvataju inhibiranje sinteze ili oslobađanja metabolita arahidonske kiseline, medijatora uključenih u inflamatorni odgovor. Flavonoidi mogu ispoljavati antiinflamatorno delovanje mehanizmom koji podrazumeva inhibiciju proizvodnje azot monoksida (NO) i prostaglandina, kao rezultata inhibicije enzima NO sintetaze (NOS) i ciklooksigenaze 2 (COX-2). Navedeni enzimi su uključeni u proces nastajanja pro-inflamatornih medijatora (NO i prostaglandina). Svi efekti tanina na animalne i humane ćelije i tkiva su povezani sa njihovom osobinom da hemijski reaguju sa belančevinama i grade nerastvorne komplekse, što se manifestuje precipitacijom proteina u površinskim slojevima (adstringentni efekat). Tanini reaguju sa digestivnim i drugim enzimima, zatim sa proteinima bakterija, gljiva i virusa i ispoljavaju i antimikrobno dejstvo (Okuda T. Phytochemistry, 2005; 66: 2012-2031). Poznato je da su inflamatorna stanja kože često povezana sa invazijom mikroba, pre svega bakterijeS. aureus,štaviše, prema najnovijim istraživanjima, proteini kože kod atopijskog ekcema/dermatitisa narušeni su invazijom ove bakterije (Bath-Hextall FJ, Birnie AJ, Ravenscroft JC, Williams HC. Brit J Dermatol, 2010; 163: 12-26; Ohnemus U, Kohrmever K, Houdek P, Rohde H, Wladykowski E, Vidal S, Horstkottc MA, Aepfclbacher M, Kirschner N, Behne MJ, Moli I, Brandner Jm. J Investig Dermatol, 2008; 128: 906-916). Sa druge strane, poznato je da primena uobičajeno korišćenih topikalnih antimikrobnih agenasa (pre svega upotrebom antibiotika, eritromicina, klindamicina, tetraciklina) ima veliki broj ograničenja, uključujući rastuću rezistenciju, kao i dokumentavanu toksičnost na humane ćelije (Ghosh V, Saranva S, Mukherjee A, Chandrasekaran N. Colloid Surface B, 2013; 105: 152-157; Gisby J, Brvant J. Antimicrob Agents Chemother, 2000; 44: 255-260). Na osnovu navedenog, nameće se potreba za pronalaskom novih supstanci sa potencijalnom ihnibitornom aktivnošću protiv bakterija, gde je izolovanje sastojaka iz prirodnih izvora (tzv. bioaktivnih komponenti) vrlo poželjno (Weckesser S, Engel K, Simon-Haarhaus B, Wittmer A, Pelz K, Schempp C.M. Phvtomedicine 2007, 14: 508-516).

[0020] Dermatoze su često praćene suvom i perutavom kožom, te topikalna primena proizvoda koji izrazito vlaže kožu, uglavnom u obliku emulzija, predstavlja dobru strategiju za njihovo lečenje. Preparat za primenu na koži mora ispunjavati mnogobrojne zahteve, kao što su fizičko-hemijska stabilnost, kao i efikasnost i bezbednost primene (Jaksic I, Lukic M, Malenovic A, Reichl S, Hoffmann C, Muller-Goymann C, Daniels R, Savic S. Eur J Pharm Biopharm, 2012; 80: 164-175). Stoga, kod formulisnja ovakvog proizvoda, odabir podloge je, uporedo sa odabirom biljnih izolata koji će u kombinaciji pokazati sinergistički efekat, od suštinskog značaja (Daniels R, Knie U. J Dtsch Dermatol Ges 2007; 5: 367-383.). Poznato je da tradicionalno korišćeni emulgatori mogu narušiti barijernu funkciju kože i time u značajnoj meri povećati transepidermalni gubitak vlage, ili dovesti do njene iritacije (Simon P, Veyerat S, Piquemal P, Montastier C. Cosm Toil 1998; 113:69-72; Stubenrauch C. Cur Opin Colloid Interface Sci 2001; 6: 160-170). Sa druge strane, promovisanje proizvoda prirodnog porekla poslednjih godina dovelo je do strožih zahteva modernog pacijenta, a posebno kada je reč o topikalnim preparatima. U tom smislu, preporuka je primeni alkilpoliglukozida (APG), kao emulgatorima koji su u potpunosti zasnovani na obnovljivim izvorima, i sa veoma pogodnim dermatološkim karakteristikama, koje se ogledaju u mogućnosti produžene hidratacije i smanjenom potencijalu za alternaciju proteina kože (Holmberg K. Cur Opin Colloid Interface Sci 2001; 6: 148-159; Johansson I, Svensson M. Curr Opin Colloid Interf Sci 2001; 148-159.) S obzirom da su ovo enulgatori nove generacije, nema podataka o njihovoj primeni u preparatima koji kao aktivnu komponentu imaju biljne ekstrakte. Naša ispitivanja su išla u pravcu formulacije stabilnog krema sa APG i prirodnim ekstraktima i procene njegove stabilnosti, bezbednosti i efikasnosti. Kao rezultat našeg istraživanja uspešno su definisani uslovi inkorporiranja aktivnih ekstrakata prirodnog porekla u formulisanu podlogu sa pomoćnim materijama i navedenim APG emulgatorima, pri kojima dolazi do formiranja stabilnog krema, na osnovu čega možemo da zaključimo da kremovi sa APG mogu biti dobri ekscipijensi za inkorporiranje prirodnih ekstrakata. Potvrđena je kompatibilnost korišćenih biljnih ekstrakata sa APG. U kontekstu značaja efikasnosti i bezbednosti aktivnih materija kao i ekscipijensa na ukupne efekte preparata, utvrđen je zadovoljavajući stepen bezbednosti kao i efikasnost kremova baziranih na ekstraktima prirodnog porekla i novim ,,prirodnim"-APG emulgatorima.

[0021] Pri izboru ekscipijensa/podloge za preparate namenjene tretiranju infekcija izazvanih mikrobima, mora se uzeti u obzir da je invazija mikroba na kožu i sluzokožu kod nekomplikovanih infekcija kože i mekog tkiva praćena inflamatornim odgovorom, što rezultuje karakterističnim manifestacijama kao što su eritem, edem, osećaj topline, i bol ili osetljivost, pa je pored antimikrobnog značajno i antiinflamatorno/antieritematozno delovanje aktivnih principa. Pri formulisanju preparata za tretman kožnih infekcija, pored izbora emulgatora, odabrani su i adekvatni emolijensi (sredstava za vlaženje kože), kao što su trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline, koji, s jedne strane omekšavaju kožu i povećavaju njenu vlažnost a sa druge obnavljaju barijernu funkciju kože ublažavajući simptome koji prate infekcije kože.

[0022] Prema našem pronalasku ustanovljeno je da kombinacija ekstrakata lišaja( Usnea barbata),virka( Alchemilla vulgaris),i etarskog ulja čajnog drveta( Melaleuca altrnifolia)doprinosi neočekivanom pojačavanju antiinflamatornog dejstva pojedinačnih komponenti. Posebno je iznenadjujuće što kombinacija ekstrakata i etarskog ulja, prema našem pronalasku dovodi do neočekivanog antiiritantnog efekta, što je od značaja za aplikaciju na oštećenu kožu i sluzokožu. Na taj način su efekti antibakterijskog delovanja objedinjeni i pojačani novom farmaceutskom kompozicijom, obezbedjujući pojačanu antiinflamatornu i protektivniu aktivnost.

[0023] Odabir aktivnih sastojaka prirodnog porekla, prema našem pronalasku, izvršen je na osnovu naučno potvrđenih fizioloških delovanja lekovitog bilja i lišaja (antimikrobno, antiinflamatorno, protektivno), rezultatain vitroispitivanja antimikrobnog potencijala njihovih ekstrakata/etarskih ulja i njihovih kombinacija, kao i na osnovuin vivoispitivanja antiinflamatornog delovanja kremova u koje su inkorporirani ispitivani izolati (pojedinačno i kombinacija) i bezbedonosnog aspekta njihove primene na zdravu i veštački iritiranu kožu.

[0024] Karakteristike pojedinačnih vrsta, odabranih za naznačene farmaceutske kompozicije, preuzete iz literature su:

[0025] Lišaj,Usnea barbataL., Parmeliaceae

[0026] Lišaj kao i njegova aktivna komponenta, usninska kiselina, tradicionalno se koriste u medicinske i kozmetičke svrhe, kao i u homeopatiji. Ispoljavaju značajno antimikrobno, antivirusno, antiproliferativno, antiinflamatorno, antipiretično i analgetično delovanje. U literaturi je opisano da lišajevi roda usnea i usninska kiselina poseduju širok spektar antibakterijskog dejstva i da su zbog toga pogodni za lečenje površinskih infekcija. Pregledni radovi Perry N.B. et al. (Lichenologist 31 (1999) 627-636), Cocchietto M. et al. (Natunvissenschaften 89 (2002)137-146) i Ingolfsdottir K.

[0027] (Phytochemistry 61 (2002) 729-736.) pružaju podatke o antimikrobnom dejstvu usninske kiseline i ekrstarakata lišaja dobijenih ekstrakcijom organskim rastvaračima. U radovima Weckesser S. et al. (Phvtomedicine 14 (2007) 508-516), Zizovic et.al (J Supercrit Fluids 72 (2012) 7-14) i Ivanovic et al. (J Supercrit Fluids, 76 (2013) 1-9) prikazano je snažno antibakterijsko dejstvo ekstrakata lišaja brade dobijenih postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom na patogene kože.

[0028] Virak,Alchemilla vulgarisL., Rosaceae

[0029] Virak je višegodišnja zeljasta biljka.Alchemillae herba(Herba Leontopoli), oficinalnapo Ph Eur 7.0, 2001, DAB 10, BHP 1983. Pripadarodu AlchemillaL., familiji Rosaceae. Iako sam rod obuhvata najmanje 250 vrsta, malo je radova u kojima je obradjen hemijski sastav pojedinačnih vrsta, a takodje je i malo radova koji obradjuju farmakološke efekte ekstarkata u zavisnosti od hemijskog sastava. Sadrži 6-8% tanina, flavonoide i malo etarskog ulja. Medjutim, poznato je u literaturi da je flavonoidni kompleks interesantan, ne samo zbog biološke i ekološke značajnosti, već i zbog svojih anti-tumornih svojstava, s jedne strane, a sa druge zbog svojstava navedenih jedinjenja kao supstancija koje omogućavaju pobiljšanje opšteg zdravstvenog stanja. Koristi se kao adstringens, u narodnoj medicini (protiv blagih nespecifičnih proliva), kod nekih ginekoloških poremećaja (menoragija). Spolja se upotrebljava za ispiranje usta, grla, rana, ekcema i za ubrzavanje zarastanja rana (Kayal B, Menemen Y, Saltan FZ. Pak J Bot; 2012; 44: 595-597; Condrat D, Mosoarca C, Zamfir AD, Crisan F, Szabo MR, Lupea AX. Cent Eur J Chem; 2010; 8: 530-535; Nikolova M., Dincheva I, Vitkova A, Badjakov I. IJPSR; 2012; 3: 802-804).

[0030] Čajno drvo,Melaleuca alternifoliaL,

Myrtaceae

[0031] Čajno drvo se koristi kao sirovina iz koje se izoluje etarsko ulje koje poseduje antifungalno i antibiotsko delovanje. S obzirom na navedene efekte, koji su delimično potvrdjeniin vitroiin vivoispitivanjima, etarsko ulje čajnog drveta je nosliac farmakološke aktivnost u mnogobrojnim preparatima namenjenim tretiranju kožnih infekcija. S obzirom na činjenicu da se na tržištu nalazi etarsko ulje navedene vrste koja je poreklom iz različitih delova sveta, hemijski sastav i procentualna zastupljenost pojedinih komponenti su regulisane internacionalnim propisom "Oil ofMelaleuca—terpinen-4-ol type," s obzirom na činjenicu da je nosilac antibaktreijske aktivnost terpinen-4-ol. Pokazani su zadovoljalvajući antimikrobni efekti na neke od bakterija i gljivica:Echerichia coli, Proteus mirabilis, Staphylococcus aureus and Pseudomonas

[0032] aeruginosa, Mycobacterium avium, Haemophilus influenzae, Streptococcus pyogenes,

[0033] Streptococcus pneumoniae, Candida sp.(Carson CF, Hammer KA, Riley TV. Clin Microbiol Rev; 2006; 19: 50-62; Thomsen PS, Jensen TM, Hammer KA, Carson CF, M<0>lgaard P, Riley TV. J Altern Complement Med; 2011; 17:835-841.)

[0034] Kao rezultat našeg pronalaska dobijena je i formulisana delotvorna, nova kompozicija i data tehnologija izrade farmaceutskog proizvoda na bazi prirodnih ekstrakata i etarskih ulja za primenu kod promena na koži i sluzokoži bakterijske i gljivične etiologije u humanoj i veterinarskoj medicini, kao i kod promena kod kojih usled dejstva slobodnih radikala dolazi do upala i ubrzanog starenja kože. Našim pronalaskom se definiše originalni sastav i postupak izrade fitopreparata-krema

[0035] (baziranog na APG emulgatorima), gela, supozitorija, vagitorija, rastvora sa predmetnim biljnim izolatima sa potvrđenim bioaktivnim delovanjem - antimikrobno, antiiflamatorno i antioksidativno. Smatra se iznenadjujućim što ekstrakti lišaja, virka i etarskog ulja čajnog drveta, u kombinaciji definisanoj našim pronalaskom, pored osnovnog antibakterijskog delovanja, inhibiraju i progresivne degenerativne procese na koži uz prateći pojačani epitelizirajući i antiinflamatorni efekat (Slika 1).

[0036] Predmet ovog pronalaska su farmaceutske kompozicije, sadržaja: 0,001% - 20%, a pogodno 0,01% - 10% ekstrakta lišaja{ Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, sa definisanim sadržajem usninske kiseline (85 - 95%, Slika 2), 0,1% - 5,5%, a pogodno 0,5% - 5,0% ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima (definisan sadržajem tanina min. 3,5 % i ukupnih polifenola min 250 mg GA/g ekstrakta suve mase, sa izokvercitrinom min. 0,5%, Slika 3, Tabela 1 ) i 0,01% - 2,5%, a pogodno 0,01% -1,0% etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije (sa min. 30% terpinen-4-ola, Slika 4, Tabela 2).

[0037] Ustanovljeno je da kombinacija ekstrakata lišaja (ekstraktUsneae barbataedobijen postupkom natkritične ekstrakcije) i ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije predstavlja proizvod sa novom kombinacijom biljnih izolata ne samo snažnog antibakterijskog delovanja, već i sa neočekivanim i iznenadjujućim pojačanjem antiinflamatornog potencijala preparata.

[0038] Poznato je da ekstrakt lišaja ima izuzetan antimikrobni potencijal, što je potvrdjeno našim ispitivanjima. Ustanovili smo da su natkritični ekstrakti posebno pogodni za ugrađivanje u farmaceutske preparate, s obzirom da sadrže visok procenat glavnodelujuće usninske kiseline (Slika 2). Prema pronalasku se koristi ekstrakt lišaja brade( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije sa ugljenik(IV)-oksidom. Glavni aktivni sastojak ekstrakta je usninska kiselina. Postupci izdvajanja usninske kiseline iz lišajeva rodaUsneasu poznati (na primer patent DE 3213095), pri čemu se izolacija usninske kiseline izvodi organskim rastvaračima ili alkoholom. Nedostatak ovih, konvencionalnih načina ekstrakcije, je što se ekstrakcijom alkoholom ili drugim organskim rastvaračem iz lišaja ekstrahuju i štetne materije. Naime, poznato je da lišaji sakupljaju štetne materije iz vazduha i padavina (na primer teške metale). Nasuprot tome, metodom natkritične ekstrakcije pod visokim pritiscima, uz korišćenje ugljenik(IV)-oksida kao rastvarača, nije moguće ekstrahovati teške metale i ostale štetne materije jer one, za razliku od usninske kiseline, nisu rastvorljive u natkritičnom ugljenik(IV)-oksidu. Drugim recima, natkritični ugljenik(IV)-oksid pokazuje visoku selektivnost ka usninskoj kiselini. U skladu sa tim, ovom metodom se usninska kiselina može prečistiti do skoro čistog oblika. Ekstrakti dobijeni postupkom natkritične ekstrakcije se mogu formulisati biljnim uljima i emulgatorima tako da sadrže 2-7% usninske kiseline. Danas se na tržištu mogu nabaviti ekstrakti lišaja brade dobijeni postupkom natkritične ekstrakkcije sa ugljenik(IV)-oksidom i sardžajem usninske kiseline preko 85%, kao i između 2 i 7% (na primer proizvođača Flavex Naturextrakte

[0039] GmbH).

[0040] Ekstrakt lišaja brade( Usnea barbata),koji je prema pronalasku poželjno koristiti, proizvodi se ekstrakcijom sa natkritičnim ugljenik(IV)-oksidom, odnosno ugljenik(IV)-oksidom koji se nalazi na pritisku iznad kritičnog i temperaturi iznad kritične temperature. U zavisnosti od ekstrakcionih uslova (pritisak i temperatura), kao i od kvaliteta sirovine, dobijaju se ekstrakti sa sadržajem usninske kiseline u opsegu 40-60 %. Naknadnom ekstrakcijom lipofilnih komponenti prisutnih u sirovom ekstraktu natkritičnim ugljenik(IV)-oksidom na nižim pritiscima od ekstrakcionog, moguće je koncentrisati usninsku kiselinu u ekstraktu do 85-90%. HPLC hromatogram natkritičnog ekstrakta sa 85% usninske kiseline, dobijenog višestepenim prečišćavanjem sirovog ekstrakta na pritiscima 10-25 MPa, prikazanje na Slici 2. Sirovi ekstrakt (sa sadržajem usninske kiseline do 60%), je u drugom koraku tretmana natkritičnim ugljenik(IV)-oksidom moguće prečistiti i odstraniti nepotrebne lipofilne supstance kao što su masne kiseline, lako isparljiva ulja, ugljovodonici, hlorofili i ostale lišajne kiseline. Na taj način se dolazi do prečišćenog ekstrakta sa sadržajem usninske kiseline koji može da iznosi do 97%. Kako je navedeno u literaturi iz stanja tehnike (patent RS 50550 B), iako su opisane alergije na lišajne kiseline, moć lišajeva da vrše senzibilizaciju smatra se malom i uslovljena je drugim lišajnim kiselinama, a ne usninskom iselinom. Zbog toga je poželjno da se koriste prečišćeni ekstrakti sa sadržajem usninske kiseline 85% i više.

[0041] Sastojak kompozicije je i ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris),koji sadrži polifenolna jedinjenja iz klase flavonoida, tanina, koji su nosioci antiinflamatorne aktivnosti, pre svega, ali su poznata i po svom antibakterijskom potencijalu ((Kayal B, Menemen Y, Saltan FZ. Pak J Bot; 2012; 44: 595-597; Condrat D, Mosoarca C, Zamfir AD, Crisan F, Szabo MR, Lupea AX. Cent Eur J Chem; 2010; 8: 530-535; Nikolova M., Dincheva I, Vitkova A, Badjakov I. IJPSR; 2012; 3: 802-804; Bisset NG, Wichtl M. Herbal drugs and phvtopharmaceuticals. Scientific Publishers. CRC Press, Stuttgart, Boca Racon, London, New York, Washington D.C. 2001; 52-54.CRC Press; 2001; 52-54). Prema pronalsku upotrebljen je ekstrakt virka dobijen klasičnim postupkom cirkulatorne ekstrakcije. HPLC hromatogram i hemijski sastav upotrebljenog ekstrakta virka je prikazan na Slici 3 i Tabeli 1. Prisustvo izokvercitrina, kvercetina i derivata luteolina je značajno jer doprinosi antiinflamatornom efektu koji pokazuje virak. Poželjno je da ekstrakt sadrži tanine u procentu većem od 3,5%, daje ukupni procenat flavonoida veći od 1%, u okviru kojih je definisano prisustvo izokvercitrina min 0,5%, derivata luiteolina min. 0,5% i kvercetina min. 0,1 %, a da količina polifenolnih jedinjenja, računatih kao mg galne kiseline/g ekstrakta veća od 250. Prisustvo navedenih jedinjenja je od značaja za ispoljavanje željene aktivnosti zbog činjenice da kvercetin i izokvercitrin inhibiraju i akutnu i hroničnu fazu inflamacije, poseduju COX i lipoksigenaza (LOX) inhibitorne aktivnosti, inhibiraju proizvodnju kao i oslobađanje histamina, pa su se pokazali kao delotvorni i u tretmanu alergijskih reakcija. Svi efekti tanina na animalne i humane ćelije i tkiva su povezani s njihovom osobinom da hemijski reaguju s belančevinama i grade nerastvorne komplekse, što se manifestuje precipitacijom proteina u površinskim slojevima (adstringentni efekat). Tanini reaguju s digestivnim i drugim enzimima, zatim s proteinima bakterija, gljiva i virusa i ispoljavaju antimikrobno dejstvo (Okuda T. Phytochemistry, 2005; 66: 2012-2031). Navedena jedinjenja imaju i izraženo antioksidantno delovanje.

[0042] Etarsko ulje čajnog drveta je dobijeno postupkom hidrodestilacije (procentualni udeo etarskog ulja u biljnom materijalu je min 1%). Sastav etarskog ulja je prikazan Slikom 4 i Tabelom 2. Poželjno je da etarsko ulje sadrži minimalno 30% terpinen-4-ol, sabinena da ima manje od 3,5% , cineola manje od 15%, a da procenat y-terinena bude u intervalu 10 - 28%. Etarsko ulje čajnog drveta doprinosi antimikrobnoj aktivnosti prema rezultatima dobijenim našim ispitivanjima i u našoj laboratoriji (Tabela 2). Za antimikrobnu aktivnost etarskog ulja čajnog drveta odgovoran je sadržaj ugljovodonične frakcije, čije je osnovno svojstvo da penetrira kroz biološku membranu mikroorganizama i na taj način utiče na onemogućavanje njenog normalnog, fiziološkog funkcionisanja. Prisustvo terpinen-4-ola u etraskom ulju doprinosi navedenom mehanizmu antimikrobne aktivnosti etarskog ulja čajnog drveta. Prisustvo 1,8-cineola u etarskom ulju doprinosi povećanju permeabiliteta bakterijske membrane i olakšava penetraciju drugih komponenata etraskog ulja koja imaju jači antimikrobni efekat, na pr. terpinen-4-ola ili y-terpinena. U sprovedenim eksperimentima na veštački iritiranu kožu dobrovoljaca, odredjena je minimalna koncentracija etarskog ulja čajnog drveta koja ne utiče na pojačanje inflamatornih procesa koji uobičajeno izazivaju etarska ulja a koja prate topikalne promene izazvane različitim mikroorganizmima (Carson CF, Hammer KA, Riley TV. Clin Microbiol Rev; 2006; 19: 50-62.)

[0043] U okviru našeg pronalaska neočekivano je ustanovljeno da kombinacija ekstrakata, natkritičnog ekstrakta lišaja( Usnea barbata)i etanolnog ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta( Melaleuca alternifolia)daje poboljšani efekat, koji jasno prevazilazi obično sabiranje antiinflamatorne aktivnosti pojedinačnih ekstrakata. Posebno je značajno da se iritirajuće svojstvo pojedinačnih etraskih ulja kada se apliciraju topikalno, u navedenoj kombinaciji nije ispoljilo.

[0044] Na osnovu ispitivanja mikrobiološke aktivnosti većeg broja kompozicija, dokazano je da farmaceutska kompozicija sa natkritičnim ekstraktom lišajaU. barbata,etanolnim ekstraktomA. vulgarisi etarskim uljemM. alternifoliai ima najbolji antimikrobni potencijal.

[0045] Variranjem odnosa navedenih komponenata došlo se do optimalne kompozicije koja pored antimikrobnog pokazuje i značajan, neočekivano intenzivan antiinflamatorni efekat. Pored toga, farmaceutski oblici, koji mogu biti, prema našem pronalasku, polučvrsti (gelovi, kremovi), rastvori, a sadrže ekscipijense kroz podloge sa aktivnim komponentama, pokazuju snažno hidratišuće delovanje na kožu i sluzokožu, uspostavljajući optimalnu barijernu funkciju kože narušenu u procesima inflamacije i infekcije.

[0046] Ispitivanjem antiinflamatornog delovanja kremova sa 1%, 1,5%, 2% i 3% ekstrakta virka, definisana je optimalna koncentarcija ovog biljnog izolata. Efekti ovih kremova upoređivani su sa efektom primene placebo krema a vršena su merenja stanja kože koja je neiritirana i netretirana -NN, i kože koja je iritirana ali nije tretirana nijednim od kremova-IN (kontrlna mesta). Rezultati ispitivaanja pokazuju da ekstrakt virka inkorporiran u podlogu u koncentraciji od 1,5% daje najoptimalniji antiinflamatorni efekat. Ova koncentracija ekstrakta u polučvrstim formama, nakon njegove sedmodnevne aplikacije na veštački iritiranu kožu, dovodi do smanjenja iritacije i vraćanja EI (eritema indeksa) na nivo pre iritacije. Krem sa 1% ekstakta virka dovodi EI na nivo pre iritacije tek nakon devetodnevne aplikacije. Povećanje sadržaja ekstrakta virka sa 1,5% na 2% odnosno 3% ne uslovljava povećanje antiinflamatornog potencijala kremova (Slika 1).

[0047] Kremovi sa 0,1%, 0,5%, 1% i 1,5% etarskog ulja čajnog drveta aplikovani su (jednokratno) na zdravu kožu dobrovoljaca, koja je zatim pokrivena flasterom. Nakon 24 sata, skidan je flaster i očitavane eventualne kožne reakcije. Ustanovljene su česte alergijske reakcije kod ispitanika koji su aplikovali kremove sa 1% i 1,5% etarskog ulja čajnog drveta a dvoje ispitanika od 13 (15,4%) imalo je alergijski dermatitis nakon primene krema sa 0,5% etarskog ulja čajnog drveta. Krem sa 0,1% etarskog ulja čajnog drveta nije dovodio do pojave alergijskih reakcija.

[0048] Predmet ovog pronalaska su farmaceutske kompozicije, sadržaja: 0,001% - 20%, a pogodno 0,01% - 10% ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, poželjno sa 85% i više usninske kiseline, 0,1% - 5,5%, a pogodno 0,5% - 5,0% ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01% - 2,5%, a pogodno 0,01% -1,0% etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije. Farmaceutski oblici, prema našem pronalasku, obuhvataju polučvrste i tečne preparate

[0049] Na osnovu dobijenih rezultata, fitopreparati - polučvrsti preparati (gelovi, kremovi, gelkremovi, paste, masti, vagitorije, supozitorije) i tečni preparati (rastvori, sprejevi, kapi) prema pronalasku, mogu da sadrže: 0,001% - 20% ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, i 0,1% - 5,5% ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01% - 2,5% etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije i pogodni ekscipijens za odgovarajući farmaceutski oblik do 100%.

[0050] Rastvori za primenu na koži mogu da sadrže jednu ili više aktivnih supstanci, mogu biti različitog viskoziteta a namenji su postizanju lokalnog efekta. Mogu da sadrže konzervanse, antioksidansc, stabilizatore, emulgatore, sredstva za povećanje viskoziteta i druge pomoćne materije.

[0051] Prema našem pronalsku, lOOg rastvora sadrži 0,00 lg - 20,0g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, i 0,lg - 5,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01g - 2,5g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, etanol 5,0 - 20,0g, propilenglikol 10,0 - 25,0 g, polisorbat 20 1,0-2,5 g, i vodu do 100 g.

[0052] Neophodno je prvo rastvoriti 0,001g - 20,0g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom u mešavini propilenglikola i polisorbata 20 pribrzini mešalice od 1200 rpm. Zatim se dodaju ostali rastvarači (etanol i voda) i 0,lg - 5,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima, 0,0lg - 2,5g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije i aroma peperminta, tako dobijena masa (100 g) se meša (propelerska mešalica, brzina 500-700 rpm), do formiranja bistrog rastvora.

[0053] Vagitorije su čvrsti preparati, različitog, najčešće ovalnog oblika, takve veličine i konzistencije da su pogodni za vaginalnu primenu. Koriste se za lokalno delovanje. Pri njihovoj izradi, aktivne supstance se rastvaraju ili disperguju u podlozi koja može biti rastvorna u vodi, nerastvorna ili da se topi na telesnoj temperaturi, ili može da se meša sa vodom.

[0054] Prema našem pronalsku, u lOOg podloge za vagitorije, koja se satoji iz Witepsol 70,0 g - 91,0 g, holesterol 1.0 - 2,4 g, Cera alba 5,0 - 2,5 g, Polvsorbat 80 1,0 - 5,0 g, inkorporira se 0,001g - 20,0 g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, 0,lg - 5,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01g - 2,5g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije. Komponente podloge se izmere i istope na vodenom kupatilu. Aktivni biljni izolati se posebno homogeno izmešaju sa belim voskom i Polvsorbatom 80 koji su zagrejani na 40°C. Ova smeša se doda istopljenoj podlozi, dobijena masa se homogeno izmeša i izliva u plastične kalupe a zatim brzo hladi.

[0055] Supozitorije su čvrsti, jednodozni preparati. Oblik, veličina i konzistencija supozitorija moraju da budu pogodni za rektalnu primenu. Pri njihovoj izradi, aktivne supstance (jedna ili više) se rastvaraju ili disperguju u jednostavnoj ili složenoj podlozi koja može biti rastvorna u vodi, da se topi na telesnoj temperaturi, ili može da se meša sa vodom.

[0056] Prema našem pronalsku, u lOOg podloge za izradu supozitorija inkorporira se 0,001g - 20,0 g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, 0,lg - 5,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01g - 2,5g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije. Podloga se sastoji iz sledećih komponenata: Adeps solidus 70,0 - 83,0g, Paraffinum liquidum 5,0 -10,9g, Cera alba 2,0 - 5,5 g, Polvsorbat 80 1,0 - l,5g. Komponente podloge se izmere i istope na vodenom kupatilu. Aktivni biljni izolati se posebno homogeno izmešaju sa belim voskom i Polvsorbatom 80 koji su zagrejani na 40°C. Ova smeša se doda istopljenoj podlozi, dobijena masa se homogeno izmeša i izliva u plastične kalupe a zatim brzo hladi.

[0057] Gelovi spadaju u polučvrste preparate za spoljašnju upotrebu koji su namenjeni za primenu na koži ili određenoj sluzokoži, u cilju lokalnog delovanja. Sastoje se od tečnosti gelirane pogodnim gelirajućim sredstvom.

[0058] Prema našem pronalasku, za izradu lOOg gela, 0,00lg - 20,0 g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, 0,lg - 5,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01g - 2,5g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, se rastvore u mešavini vode (50,0-85,0g), glicerola (l,0-25,0g), propilenglikola (0-2,0g), etanola (l,0-15,0g) i Polvsorbata 20 (l,0-4,0g) na propelerskoj mešalici pri brzini od 500-700 rpm. Nakon rastvaranja po površini se pospe gelirajući agens (karbomer) u količini od 0,5-l,2g. Nakon bubrenja (15 minuta) i mešanja (ista brzina, 15 minuta) dodaje se agens za geliranje (10 % rastvor natrijum-hidroksida). Formirani gel se homogenizuje (700 rpm) i ostavi da odstoji na sobnoj temperaturi 24 sata radi potpunog strukturiranja sistema.

[0059] Masti su polučvrsti preparati za primenu na koži i namenjeni su za lokalnu ili transdermalnu primenu. Sastoje se od jednofazne podloge u kojoj mogu biti dispergovane čvrste supstance ili tečnosti. Lipofilne masti mogu da apsorbuju malu količinu vode. Masti koje emulguju vodu mogu da apsorbuju veću količinu vode i tako grade emulzije tipa voda u ulju ili ulje u vodi u zavisnosti od emulgatora koji sadrže. Hidrofilne masti su preparati sastavljeni od pogloga koje se mešaju sa vodom.

[0060] Prema našem pronalasku, za izradu 100 g masti, u 25,0-45,0 g prečišćene vode se rastvori kalijum sorbat (0,1-0,5 g), doda propilenglikol 2,0-5,5 g i rastvor zagreva do temperature od 70-72°C. Komponente masne faze se odmere (cetostearol 10,0-20,0 g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 10,0-27,0 g, beli vazelin 15,0-25,0 g, tečni parafin 7,0-15,5 g, Tween 60: 2,5-4,5 g, Span 60: 2,5- 4,5 g, isopropilmiristat 7,5-15,5 g) zagrevaju se na istu temperaturu. Masna faza se, zatim, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (500-800 rpm) u toku 10 minuta, a zatim se brzina smanji na 250-500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 10-25 minuta. Brzina mešanja se potom smanji na 200-400 rpm, do hlađenja mase. Na 25-35°C u masu se dodaju ekstrakti i etarska ulja: Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom 1 (0,001-10,0 g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima (1,0-10,5 g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijen postupkom hidrodestilacije (0,01-2,5g). Masa se meša pri brzini mešalice od 500 rpm dok se ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0061] Sprejevi su tečni preparati namenjeni za primenu na koži uz korišćenje najčešće mehaničke pumpice za raspršivanje rastvora.

[0062] Prema našem pronalasku, za izradu lOOg spreja, 0,001g - 20,0 g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, 0,lg - 5,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,0lg - 2,5g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, se rastvore u smeši rastvarača (etanol l,0-45,0g, voda l,0-55,0g, propilenglikol 15,0-2l,0g, glicerol l,0-15,0g, polisorbat 20 l,0-5,0g, tokoferol-acetat l,0-5,0g, aroma pepermint 0,l-0,4g) i masa meša na propelerskoj mešalici, pri brzini 500-700 rpm, da se formira homogeni rastvor koji se pakuje u staklene bočice sa mehaničkom pumpicom.

[0063] Kremovi su fišefazni preparati koji se sastoje iz masne (lipofilne) i vodene faze. Namenjeni su za primenu na koži i određenoj sluzokoži.

[0064] Prema našem pronalasku, za izradu lOOg krema, u prečišćenoj vodi se prethodno rastvori kalijum sorbat (0,l-l,0g) i rastvor zagreva do temperature od 70-72°C. Odvojeno se odmere komponente masne faze (cetostearol l,0-4,0g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 2,0-17,0g, beli vazelin 0,2-40,0g, tečni parafin 0,l-45,0g, C<12>-<14>alkil poliglukozid/C<i2>-<i4>alkohol 0-7,0g, koko glukozid/ alkohol kokosovog oraha 0-ll,0g), zagrevaju se na istu temperaturu (do otapanja svih komponenata tj. dok masa ne postane potpuno bistra). Masna faza se, zatim, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (800 rpm) u toku 10 minuta, a zatim se brzina smanji na 500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 15 minuta. Brzina mešanja se potom smanji na 400 rpm, do hlađenja mase. Na 35°C u gotov krem dodaju se ekstrakti i etarska ulja: 0,001g - 20,0 g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, 0,lg - 5,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01g - 2,5g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije. Masa se meša pri brzini mešalice od 500 rpm dok se krem ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0065] Gel-kremovi su fišefazni sistemi koji sadrže masnu fazu (lipofilnu) i vodenu fazu (hidrofilnu) čiji se optimalni viskozitet postiže dodatkom gelirajućeg sredstva.

[0066] Prema našem pronalasku, za izradu 100 g gel-krema, prvo se u prečišćenoj vodi-25,0-75,0 g rastvori kalijum sorbat (0,1-2,5 g) i doda glicerol (2,5-10,0 g), propilenglikol (2,0-10,0 g), etanol (1,0-5,5 g) i Polvsorbat 20 (1,0-5,5 g). Nakon rastvaranja svih komponenata po površini se pospe gelirajući agens (karbomer) u količini od 0,1-2,5 g. Rastvor se zagreva do temperature od 70-72°C. Odvojeno se odmere komponente masne faze (cetostearol 1,0-2,5 g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 5,0-12,0 g, beli vazelin 1,0-5,0 g, tečni parafin 0,5-5,0 g, C<12>.<i4>alkil poliglukozid/C<i2>-<i4>alkohol 2,5-7,0 g, koko glukozid/ alkohol kokosovog oraha 1,0-5,0 g), zagrevaju se na istu temperaturu. Masna faza se, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (500-800 rpm) u toku 10-25 minuta, a zatim se brzina smanji na 250-500 rpm i mešanje nastavi u toku 15-25 minuta. Zatim se dodaje agens za geliranje (10 % rastvor natrijum-hidroksida-0,1-12,2 g). Brzina mešanja se potom smanji na 250-400 rpm, do hlađenja mase. Na 35°C u gotov krem dodaju se ekstrakti i etarska ulja: Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom (0,00l-10,0g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima (l,5-5,0g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijen postupkom hidrodestilacije (0,l-2,5g). Masa se meša pri brzini mešalice od 250-500 rpm dok se gel-krem ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0067] Paste su polučvrsti preparati koji sadrže veliki deo sitnih, čvrstih supstanci dispergovanih (suspendovanih) u podlozi.

[0068] Prema našem pronalasku, za izradu 100 g paste, u 30,0-55,0 g prečišćene vode se rastvori kalijum sorbat (0,1-2,5 g), doda propilenglikol 5,5-7,0 g i rastvor zagreva do temperature od 70-72°C. Odvojeno se odmere komponente masne faze (cetostearol 2,5-10,0 g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 5,0-10,0 g, beli vazelin 5,5-10,0 g, tečni parafin 5,0-7,5 g, Tween 60- 2,5-4,0 g, Span 60- 2,5-4,0 g, isopropilmiristat 5,0-15,0 g) zagrevaju se na istu temperaturu (do otapanja svih komponenata tj. dok masa ne postane potpuno bistra). Masna faza se, zatim, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (800 rpm) u toku 10-25 minuta, a zatim se brzina smanji na 250-500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 10-15 minuta. Zatim se postepeno dodaje ZnO u količini od 15,0-27,0%. Brzina mešanja se potom smanji na 400 rpm, do hlađenja mase. Na 35°C u masu se dodaju ekstrakti i etarska ulja: Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom (0,001-10,0g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima (l,5-5,0g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijeno postupkom hidrodestilacije (0,l-2,5g). Masa se meša pri brzini od 500 rpm dok se ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0069] Pronalazak će dalje biti prikazan kroz sledeće primere koji ne ograničavaju pronalazak.

[0070] Primer 1.

[0071] EkstraktUsneae barbataedobijen postupkom natkritične ekstrakcije

[0072] Sirov ekstrakt sa sadržajem usninske kiseline od 60% dobija se postupkom natkritične ekstrakcije sa ugljenik(IV)-oksidom na pritisku od 30 MPa i temperaturi od 60°C. Lipofilne komponente se zatim uklanjaju iz sirovog ekstrakta višestepenim ekstrakcijama sa natkritičnom ugljenik(IV)-oksidom na temperaturi od 40°C i na pritiscima 10-25 MPa pri čemu se usninska kiselina koncentriše do 85% (hromatogram prikazan na slici 2).

[0073] Primer 2.

[0074] Suvi ekstrakt virka dobijen kontinuiranom ekstrakcijom organskim rastvaračem

[0075] Suvi ekstrakti( Extractum siccum)biljne drogeAlchemillae herbadobijen je cirkularnom ekstrakcijom pomoću 70% etanola, uparavanjem ekstrakta do 70% suve materije i sušenjem pod sniženim pritiskom.

[0076] Tretiranjem 70 kg na propisan način osušene i ustitnjene droge sa 800 kg 70% alkoha (536 kg koncentrovanog alkohola i 264 kg prečišćene vode), iz dva sukcesivna puta (450 kg prvo nalivanje i 350 kg drugo, propisanim rastvaračem), dobija se tečni ekstrakt koji se zatim uparava pod sniženim pritiskom do ugušćenog ekstrakta sa 70% suve materije, a zatim se suši do suva. Dobijeni suvi ekstrakt (oko 10 kg), sa max. količinom vlage od 5 % se čuva u staklenim posudama na hladnom mestu i zaštićeno od svetlosti. Ovako dobijeni ekstrakt je korišćen u formulaciji farmaceutskih oblika i mikrobioločkim testiranju u primerima koji slede.

[0077] Hemijska karakterizacija ekstrakta virka prema našem pronalasku je prikazana na Slici 3, gde je predstavljen njegov HPLC fmgerprint i u Tabeli 1, gde je naveden sadržaj flavonoida za koje je poznato da su nosioci antiinflamatornog potencijala ekstrakta. Hemijska karakterizacija je podrazumevala definisanje sadržaja tanina, polifenola i flavonoida, a u okviru flavonoidne frakcije definisan je minimalni sadržaj izokvercitrina.

[0078] Tabela1. Hemijska karakterizacija ekstrakta virka prema pronalasku, sa prikazanim sadržajem flavonoidnih jedinjenja u ekstraktu virka( Alchemilla vulgaris),identifikovanih HPLC metodom

[0079] Primer 3.

[0080] Etarsko ulje čajnog drveta dobijeno hidrodestilacijom

[0081] Etarsko ulje biljne drogeMalaleuca alternifolia ( Malaleucae Aetheroleum)dobijen je postupkom hidrodestilacije, pomoću vodene pare u destilatom, metodom jednostrukog punjenja. Trajanje destilacije je 4 sati, pritisak pri destilaciji je 400-500 kPa. Kraj destilacije se utvrđuje tako što se malo vode koja ističe (kohobaciona voda) prihvati u manji stakleni sud (epruveta, menzura i si.) i posmatra da li ima još kapi ulja na njenoj površini. Od 70 kg propisno usitnjenog biljnog materijala dobija se 0.84 kg ulja.

[0082] Hemijska karakterizacija etarskog ulja prema pronalasku je prikazana u u Tabeli 2, a na Slici 4 je dat GC/MS profil etarskog ulja. sadržaj etraskog ulja u biljnom materijalu definisan je masenim procentima i iznosi min. 1%. Naš uzorak je imao 1,2% etarskog ulja.

[0083] Mikrobiološkakarakterizacijabiljnihekstrakata

[0084] Za ispitivanje antibakterijske aktivnosti biljnih ekstrakata primenjena je mikrodiluciona metoda u bujonu, osim za ispitivanje ekstraktaUsnea barbata- eza čije je ispitivanje primenjena diluciona metoda u agaru. Metode su izvođene na osnovu preporuka CLSI( Clinical and Laboratory Standards Institute, USA)s tim da su umesto antibiotika u ispitivanja bili uključeni biljni ekstrakti. Primenom ovih metoda vršeno je određivanje vrednosti minimalne inhibitorne koncentracije-(MIC) ispitivanih ekstrakata. Svi ekstrakti su prethodno bili rastvarani u DMSO (dimetil sulfoksid). Antibakterijsko delovanje ekstrakata ispitivano je u koncentracijama od (izraženo u p.g/mL): 2560, 1280, 640, 320, 160, 80, 40, 20, 10, 5, 2,5, 1,25 i 0,625 ug/mL. Delovanje ekstrakata ispitivano je na sojevim bakterijskih vrsta koje su najčešći uzročnici infekcija kože, kako kod ljudi tako i kod životinja. Osim referentnih sojeva bakterija, korišćeni su i sojevi izolovani iz uzoraka briseva kože poreklom od bolesnih ljudi tj iz kliničkih materijala koji se dostavljaju na Katedru za Mikrobiologiju Fakulteta Veterinarske Medicine radi rutinskog mikrobiološkog ispitivanja. Izolacija i identifikacija izolovanih sojeva bakterija izvršena je primenom konvencionalnih bakterioloških metoda kao i primenom komercijalnih sitema za identifikaciju (Tabela 3).

[0085] Tabela3. Rezultati ispitivanja antimikrobne aktivnosti biljnih izolata protiv odabranih bakterija, uzročnika kožnih oboljenja, MA = etarsko uljeMelaleuca alternifolia;UB - natkritični ekstraktUsnea barbata- e;AV- EtOH -Alchemilla vidgarisetanolni (70%

[0086] (v/v)) ekstrakt.

[0087]

[0088] Ispitana je antimikrobna aktivnost i kombinacije koja je predmet našeg pronalaska (Tabela 4).

[0089] Kombinacija koja sadrži 0,06g ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, 93,64% ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračem i 6,3% etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, a koja je inkorporirana u različite farmaceutske oblike koji su predmet našeg pronalaska pokazala je antibakterijsku aktivnost prikazanu u Tabeli 4.

[0090] Tabela 4. Rezultati ispitivanja antibakterijske aktivnosti kombinacije natkritičnog ekstrakta lišaja( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta( Melaleuca altrenifolia)

[0091]

[0092] Primer 5.

[0093] Postupak dobijanja rastvora sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta lišaja( Usnea

[0094] barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0095] ( Melaleuca altrenifolia)

[0096] U sastav rastvora ulaze: ukstrakt lišaja( Usnea barbata)prema primeru 1 (0,001

[0097] g), etanolni ektrakt virka( Alchemilla vulgaris),dobijen prema primeru 2 (1,5 g) i etarsko ulje čajnog drveta( Melaleuca altrenifolia),dobijeno prema primeru 3 (0,1 g), etanol 15,0 g, propilenglikol 25,0 g polisorbat 20 2,5 g, i voda do 100 g.

[0098] Neophodno je prvo rastvoriti 0,001g ekstrakta lišaja brade( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom u mešavini propilenglikola i polisorbata 20-brzina mešalice 1200 rpm. Zatim se dodaju ostali rastvarači (etanol i voda) i l,5g ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima, 0,lg etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije i aroma peperminta, tako dobijena masa (100 g) meša (propelerska mešalica, brzina 500-700 rpm), do formiranja bistrog rastvora.

[0099] Primer 6.

[0100] Postupak dobijanja vagitorija sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta lišaja( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0101] ( Melaleuca altrenifolia)

[0102] U lOOg podloge za izradu vagitorija inkorpora se ekstrakt lišaj brade( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom prema primeru 1 (0,00lg), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima, prema primeru 2 (l,5g) i 0,lg etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, prema primeru 3. Podloga se sastoji iz sledećih komponenata: Witepsol 91g, holesterol 2,4g, Cera alba 2,5 g, Polvsorbat 80 lg.

[0103] Komponente podloge se izmere i istope na vodenom kupatilu. Aktivni biljni izolati se posebno homogeno izmešaju sa 3g belog voska i Polvsorbatom 80 koji su zagrejani na 40°C. Ova smeša se doda istopljenoj podlozi, dobijena masa se homogeno izmeša i izliva u plastične kalupe a zatim brzo hladi.

[0104] Primer 7.

[0105] Postupak dobijanja supozitorija sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta lišaja( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0106] ( Melaleuca altrenifolia)

[0107] U 100 g podloge za izradu supozitorija inkorpora se ekstrakt lišaj brade( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom prema primeru 1 (0,001 g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima, prema primeru 2 (1,5 g) i 0,1 g etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije organskim rastvaračima, prema primeru 3. Podloga se sastoji iz sledećih komponenata: Adeps solidus 83 g, Paraffinum liquidum 10,9 g, Cera alba 2 g, Polvsorbat 80, 1 g.

[0108] Komponente podloge se izmere i istope na vodenom kupatilu. Aktivni biljni izolati se posebno homogeno izmešaju sa 2g belog voska i Polvsorbatom 80 koji su zagrejani na 40°C. Ova smeša se doda istopljenoj podlozi, dobijena masa se homogeno izmeša i izliva u plastične kalupe a zatim brzo hladi.

[0109] Primer 8.

[0110] Postupak dobijanja gela sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta lišaja( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0111] ( Melaleuca altrenifolia)

[0112] Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1 (0,001g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim primerom 2 (l,5g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijeno postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3 (0,lg) se rastvore u mešavini vode (82,0g), glicerola (10,0g), propilenglikola (2,0g), etanola (l,5g) i Polvsorbata 20 (l,5g) na propelerskoj mešalici pri brzini od 500-700 rpm. Nakon rastvaranja po površini se pospe gelirajući agens (karbomer) u količini od 0,75g. Nakon bubrenja (15 minuta) i mešanja (ista brzina, 15 minuta) dodaje se agens za geliranje (10% rastvor natrijum-hidroksida-0,65g). Formirani gel se homogenizuje (700 rpm) i ostavi da odstoji na sobnoj temperaturi 24 sata radi potpunog strukturiranja sistema.

[0113] Primer 9.

[0114] Postupak dobijanja spreja sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta lišaja( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0115] ( Melaleuca altrenifolia)

[0116] Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1 (0,001 g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim primerom 2 (1,5 g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijeno postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3 (0,lg) se rastvore u smeši rastvarača (etanol 1,0-25,0g, voda 49,15g, propilenglikol 15,0g, glicerol 5,0g, polisorbat 20 2,5g, tokoferol-acetat l,5g, aroma pepermint 0,25g) i masa meša na propelerskoj mešalici, pri brzini 500-700 rpm, da se formira homogeni rastvor koji se pakuje u staklene bočice sa mehaničkom pumpicom.

[0117] Primer 10.

[0118] Postupak dobijanja krema sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta šumske brade( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0119] ( Melaleuca altrenifolia)

[0120] U prečišćenoj vodi (79,75g) se prethodno rastvori kalijum sorbat (0,15g) i rastvor zagreva do temperature od 70-72°C. Odvojeno se odmere komponente masne faze (cetostearol 2,5g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 5,0g, beli vazelin l,5g, tečni parafin 0,5g, C12-M alkil poliglukozid/Cn-u alkohol 7,0g, koko glukozid/ alkohol kokosovog oraha 2,0g), zagrevaju se na istu temperaturu (do otapanja svih komponenata tj. dok masa ne postane potpuno bistra). Masna faza se, zatim, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (800 rpm) u toku 10 minuta, a zatim se brzina smanji na 500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 15 minuta. Brzina mešanja se potom smanji na 400 rpm, do hlađenja mase. Na 35°C u gotov krem dodaju se ekstrakti i etarska ulja: Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1 (0,001g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim primerom 2 (l,5g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijen postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3 (O.lg). Masa se meša pri brzini mešalice od 500 rpm dok se krem ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0121] Primer 11.

[0122] Postupakdobijanja gel-krema sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta šumske brade( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta( Melaleuca altrenifolia)

[0123] U prečišćenoj vodi (74,03g) se prethodno rastvori kalijum sorbat (0,15g) i doda glicerol (5,0g), propilenglikol (2,0g), etanol (l,5g) i polisorbat 20 (l,5g). Nakon rastvaranja svih komponenata po površini se pospe gelirajući agens (karbomer) u količini od 0,25g. Rastvor se zagreva do temperature od 70-72°C. Odvojeno se odmere komponente masne faze (cetostearol l,25g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 5,0g, beli vazelin l,0g, tečni parafin 0,5g,C12-ualkil poliglukozid/Cn-u alkohol 5,0g, koko glukozid/ alkohol kokosovog oraha l,0g), zagrevaju se na istu temperaturu (do otapanja svih komponenata tj. dok masa ne postane potpuno bistra). Masna faza se, zatim, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (800 rpm) u toku 10 minuta, a zatim se brzina smanji na 500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 15 minuta. Zatim se dodaje agens za geliranje (10 % rastvor natrijum-hidroksida-0,22 g). Brzina mešanja se potom smanji na 400 rpm, do hlađenja mase. Na 35°C u gotov krem dodaju se ekstrakti i etarska ulja: Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1 (0,001 g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim primerom 2 (1,5 g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijeno postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3 (0,lg). Masa se meša pri brzini mešalice od 500 rpm dok se gel-krem ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0124] Primer 12.

[0125] Postupak dobijanja masti sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta šumske brade( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0126] ( Melaleuca altrenifolia)

[0127] U prečišćenoj vodi (25,75g) se prethodno rastvori kalijum sorbat (0,15g), doda propilenglikol (5,0g) i rastvor zagreva do temperature od 70-72°C. Odvojeno se odmere komponente masne faze (cetostearol 12,5g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 17,0g, beli vazelin 15,0g, tečni parafin 7,5g, polisorbat 60 4,0g, sorbitan-stearat 4,0g, isopropilmiristat 7,5g) zagrevaju se na istu temperaturu (do otapanja svih komponenata tj. dok masa ne postane potpuno bistra). Masna faza se, zatim, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (800 rpm) u toku 10 minuta, a zatim se brzina smanji na 500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 15 minuta. Brzina mešanja se potom smanji na 400 rpm, do hlađenja mase. Na 35°C u masu se dodaju ekstrakti i etarska ulja: Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1 (0,001g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim primerom 2 (l,5g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijeno postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3 (0,lg). Masa se meša pri brzini od 500 rpm dok se ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0128] Primer 13.

[0129] Postupak dobijanja paste sa kombinacijom natkritičnog ekstrakta šumske brade( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta

[0130] ( Melaleuca altrenifolia)

[0131] U prečišćenoj vodi (30,75g) se prethodno rastvori kalijum sorbat (0,15g), doda propilenglikol (7,0g) i rastvor zagreva do temperature od 70-72°C. Odvojeno se odmere komponente masne faze (cetostearol 2,5g, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 10,0g, beli vazelin 6,0g, tečni parafin 7,5g, polisorbat 60 4,0g, sorbitan-monostearat 4,0g, isopropilmiristat 5,5g) zagrevaju se na istu temperaturu (do otapanja svih komponenata tj. dok masa ne postane potpuno bistra). Masna faza se, zatim, dodaje u tankom mlazu u vodenu fazu uz mešanje (800 rpm) u toku 10 minuta, a zatim se brzina smanji na 500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 15 minuta. Zatim se postepeno dodaje ZnO u količini od 17,0% i talk u količini od 4,0%. Brzina mešanja se potom smanji na 400 rpm, do hlađenja mase. Na 35°C u masu se dodaju ekstrakti i etarska ulja: Ekstrakat lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1 (0,001g), ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim primerom 2 (l,5g) i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijeno postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3 (0,lg). Masa se meša pri brzini od 500 rpm dok se ne ohladi na sobnu temperaturu.

[0132] Primer 14.

[0133] Testiranjedejstva krema, prema našem pronalasku -in vivostudija

[0134] In vivostudija ispitivanja efekta primene kremova koji sadrže ekstrakt lišaja( Usnea barbata)dobijen postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1, ekstrakt virka( Alchemilla vulgaris)dobijen postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim postupkom 2 i etarsko ulje čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijeno postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3, izvršena je na zdravim humanim dobrovoljcima merenjem biofizičkih parametara kože: EI (eritema indeks kao mera promene boje kože izazvane inflamacijom kože), transepidermalnog gubitka vode (TEGV) kao mere barijerne funkcije kože i EC (električne kapacitivnosti, kao odraza stanja hidratisanosti površinskih slojeva kože), korišćenjem aparata Multi Probe Adapter MPA<®>9, i odgovarajućih sondi Mexameter® MX 18, Tewameter i Corneometer CM 825, (proizvođača Courage & Khazaka Electronic GmbH, Nemačka).

[0135] Utvrđena je razlika između vrednosti EI izmerenih na veštački iritiranoj koži zdravih dobrovoljaca, tretiranoj kremom sa kombinacijom bi<l>jnih izolata (ekstrakti lišaj brade i virka i etarsko ulje čajnog drveta) nakon 2 odnosno 7 dana tretmana u odnosu na vrednosti EI kože nakon aplikacije kremova sa pojedinačnim biljnim izolatima (krem sa ekstraktom usnee, odnosno krem sa ekstraktom virka). Neočekivano, pad vrednosti EI već dva dana nakon aplikacije kremova posle izazvane iritacije, na koži tretiranoj kremom sa kombinacijom biljnih izolata (-10,05%), toliki je da dolazi do potpuno efikasnog suzbijanja inflamacije. Istovremeno na koži tretiranoj kremovima sa pojedinačnim ekstraktima lišaj brade i virka još uvek se detektuju povećanja vrednosti EI u odnosu na bazalnu vrednost (+3,8%, +5,65). Kod krema sa etarskim uljem čajnog drveta u celokupnom ispitivanom periodu nema značajnijeg smanjenja EI. Ovo ukazuje na efikasno poboljšanje koje se javlja u pogledu antiinflamatornog delovanja odabrane kombinacije biljnih izolata koji prevezilazi nivo prostog sabiranja efekata kremova sa pojedinačnim bilkjnim izolatima.

[0136] Takođe, utvrđen je statistički značajan pad vrednosti TEGV na iritiranoj koži tretiranoj kremom sa kombinacijom biljnih izolata u odnosu na kožu tretiranu kremovima sa pojedinačnim ekstraktima u pomenutim vremenskim intervalima (Tabela 5). Ovo ukazuje na povoljno strukturiranje kremova sa kombinacijom odabranih biljnih izolata koje povoljno utiče na formiranje homogenog sloja krema na površini kože što smanjuje isparavanje vode sa površine kože, pojačava barijerna svojstva kože inače narušena u slučajevima bakterijskih infekcija kože ili kod inflamacija kože različite etiologije.

[0137] Primer 15.

[0138] Testiranjeefektakrema, premanašempronalasku, nastanjehidratisanosti veštački iritirane kože-/«vivostudija

[0139] Nakon iritacije kože zabeležen je pad vlažnosti kože kod primene svih ispitivanih kremova kao posledica narušavanja epidermalne barijere. Kod iritirane, netretirane kože (IN), statistički značajan pad vlažnosti kože održava se u toku celokupnog perioda ispitivanja, što pokazuje da iritirana koža nije bila sposobna da samostalno regeneriše svoju epidermalnu barijeru narušenu delovanjem rastvora NLS i uspostavi prvobitnu-bazalnu vlažnost površinskog sloja.

[0140] Aplikacija kremova uticala je na povećanje vlažnosti iritirane kože prosečno smanjenje iznosilo je 25,23%. Sedmodnevna aplikacija kremova sa kombinacijom biljnih izolata rezultovala je najznačajnijim povećanjem vlažnosti kože, tako da u odnosu na bazalnu vrednost više nije bilo razlike u vlažnosti, dok je ovaj efekat kod uzoraka kremova sa pojedinačnim biljnim izolatima bio značajno slabiji (Tabela 5). Pozitivan uticaj krema sa kombinacijom biljnih izolata na vlažnost iritirane kože, može da se posmatra u svetlu pozitivnog uticaj a krema sa kombinacijom biljnih izolata na TEGV što uslovljava efikasnije zadržavanje vode u epidermisu kože i efikasnije hidriranje. Pozitivan uticaj na nivo vlage u koži je kod kožnih, bakterijskih infekcija i upalnih procesa značajan jer infekcije (slično iritacijama) dovode do ugrožavanja kožne barijere, smanjenja vlage u koži i pojave suve kože (xerosis), što ih preporučuje za primenu u navedenim stanjima.

[0141] Primer 16.

[0142] Antimikrobno dejstvo krema, prema našem pronalasku

[0143] Krem, prikazan kroz primer 10, pokazao je uin vivouslovima neočekivani intenzitet antimikrobne i antiinflamatorne aktivnosti, kao i epitelizirajući efekat, što je prikazano kroz navedeni primer. Tretman je podrazumevao aplikaciju patentom štičene farmaceutske kompozicije 2 puta dnevno, tokom 7 dana na nekoliko pasa, uzastopce (Tabela 6). Ilustracije pojedinih slučajeva su prikazane na Slici 5.

[0144] Primer17.

[0145] Antimikrobno dejstvo na odabrane meticilin rezistentneStaphylococcussojeve,

[0146] Staphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella

[0147] sp,iEschericha colikombinacije ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom opisanom u primeru 1, ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris),dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima opisanim u primeru 2 i etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, opisanom u primeru 3, kao i krema, opisanom u primeru 10, prema našem pronalasku

[0148] Farmaceutski oblik, sa novom kombinacijom biljnih izolata, pripravljen na način pokazan kroz primer 10 pokazao je uin vitrouslovima izuzetan antimikrobni potencijal, što je prikazano kroz navedeni primer (Tabela 7).

[0149] Tabela 7. Antimikrobno dejstvo na odabrane meticilin rezistentneStaphylococcussojeveStaphylococcus aureus, Streptococcus pyogenes, Pseudomonas aeruginosa, Klebsiella sp,iEscherichia colikombinacije natkritičnog ekstrakta šumske brade( Usnea barbata),ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta( Melaleuca altrenifolia), kao i krema koji je predmet patentne zaštite.

Claims (15)

1. Farmaceutska kompozicija na bazi lekovitog bilja,naznačena time,da se sastoji od ekstrakata lišaja{ Usnea barbata)i virka( Alchemilla vulgaris)i etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)za izradu farmaceutskih proizvoda polučvrstih i tečnih farmaceutskih oblika za lečenje promena na koži.

2. Farmaceutska kompozicija prema zahtevu 1,naznačena time,da sadrži 0,063% - 71,428% ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, sa min. 85% usninske kiseline i 19,643% - 93,691% ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima sa min. 3,5% tanina, 250mg GA/g ekstrakta, min 0,5% izokvercitrina, i 0,1% kvercetina i 6,246% - 8,929% etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, sa min 30 % terpinen-4-ola i min 10 % 1,8-cineola, u farmaceutski prihvatljivom ekscipijensu.

3. Farmaceutski proizvodi prema zahtevima 1 i 2,naznačeni time,da su polučvrstih i tečnih oblika: krem, gel, gel-krem, vagitorije, supozitorije, masti, rastvor, sprej.

4. Farmaceutski proizvod u obliku krema prema zahtevima 1-3,naznačen time,što sadrži ekstrakte0,001%-20% lišaja( Usnea barbata)i 0.1%-5.5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,01%-2,5%etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)

inkorporirane u 72,00% - 98,39% ekscipijensa, koji se sastoji od emulzione podloge tipa ulje/voda (U/V) u sastavu: cetostearol, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline, C<12>-<14>alkil poliglukozid/C<i2>-<i4>alkohol, koko glukozid/alkohol kokosovog oraha, kalijum sorbat, glicerol, voda (etanol 1,0-45,0%, voda 1,0-55,0%, propilenglikol 15,0-21,0%, glicerol 1,0-15,0%, polisorbat 20 1,0-5,0%, tokoferol-acetat 1,0-5,0%, aroma pepermint 0,1-0,4%) 5. Farmaceutski proizvod u obliku krema prema zahtevu 4, naznačen time što sadrži emulgator alkilpoliglukozida (APG) u procentu 0,1% - 7,0% 6. Farmaceutski proizvod u obliku krema prema zahtevima 4 i 5, naznačen time što se dobija u nekoliko koraka podrazumevajući rastvaranje kalijum sorbata (0,1-1,0%) u prečišćenoj vodi 1,0-55,0% i zagrevanje vodene faze do temperature od 70-72°C u koju se dodaje zagrejana do iste temperature bistra rastvorena masna faza u malzu, u sastavu cetostearol 1,0-4,0%, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline 2,0-17,0%, beli vazelin 0,2-40,0%, tečni parafin 0,1-45,0%, C12-h alkil poliglukozid/C<i2>-<i4>alkohol 0-7,0%, koko glukozid/ alkohol kokosovog oraha 0-11,0%, uz neprekidno mešanje mešanje (800 rpm) u toku 10 minuta, a zatim se brzina smanji na 500 rpm i mešanje nastavi u toku narednih 15 minuta, nakon čega se do hladjenja mase brzina mešanja smanji na 400 rpm, a zatim se na 35°C u gotov krem dodaju ekstrakti i etarska ulja: 0,001g - 20,0% ekstrakta lišaja( Usnea barbata)dobijenog postupkom natkritične ekstrakcije ugljenik(IV)-oksidom, 0,1 % - 5,5% ekstrakta virka( Alchemilla vulgaris)dobijenog postupkom ekstrakcije organskim rastvaračima i 0,01% - 2,5% etarskog ulja čajnog drveta

( Aetheroleum melaleuca)dobijenog postupkom hidrodestilacije, uz stalno mešanje pri brzini mešalice od 500 rpm dok se krem ne ohladi na sobnu temperaturu.

5. 7. Farmaceutski proizvod u obliku rastvora prema zahtevima 1-3, naznačen time, što sadrži ekstrakte 0,01% - 15,0% lišaja( Usnea barbata)i 0,5% - 5,5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,01% - 1,5 % etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)inkorporirane u 78,0 - 99,48% ekscipijensa u sastavu: propilenglikol, 10,0 - 25,0%; etanol, 5,0 - 20,0%; aroma pepermint 0,1-0,4% i polisorbat 20 1,0 - 2,5%; i voda 1,0 - 55,0%

6. 8. Farmaceutski proizvod u obliku spreja prema zahtevima 1-3, naznačen time, što sadrži ekstrakte 0,01% - 15,0% lišaja( Usnea barbata)i 0,5% - 5,5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,01% - 1,5 % etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)inkorporirane u 78,0 - 99,98% ekscipijensa u sastavu: propilenglikol, 15,0 - 21,0%; etanol, 1,0 - 45,0%; glicerol 1,0 - 15,0%, tokoferol-acetat 1,0-5,0%, aroma pepermint 0,1-0,4% i polisorbat 20 1,0 - 5,0%; i voda 1,0 - 55,0%

7. 9. Farmaceutski proizvod u obliku gela prema zahtevima 1-3, naznačen time,što sadrži ekstrakte0,001%-20,0% lišaja( Usnea barbata)i 0,1%- 5,5%virka( Alchemilla vulgaris)i 0,01%-2,5%etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)

inkorporirane u 72,0% - 98,99% ekscipijensa, ekscipijensa u sastavu: karbomer 0,5-1,2%, propilenglikol, etanol 1,0-15,0%, glicerol 1,0-25,0%, voda 50,0-85,0%, 10,0% natrijum hidroksid (q.s.) i polisorbat 20 1,0-4,0%.

8. 10. Farmaceutski proizvod u obliku vagitorija prema zahtevima 1-3, naznačen time,što sadrži ekstrakte0,01%-18,0% lišaja( Usnea barbata)i 1,0%-5,5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,1%-2,5%etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)

inkorporirane u 72,0% - 99.9% ekscipijensa u sastavu: Witepsol 70,0 - 91,0%, holesterol 1,0-2,4%, Cera alba 2,5 - 5,0%, Polvsorbat 80 1,0 - 5,0%.

9. 11. Farmaceutski proizvod u obliku supozitorija prema zahtevima 1-3, naznačen time,što sadrži ekstrakte0,01%-18,0% lišaja( Usnea barbata)i 1,0%-5,5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,1%-2,5%etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)

inkorporirane u 72,0% - 99,9% ekscipijensa u sastavu: Adeps solidus 70,0 - 83,0%, Paraffinum liquidum 5 -10,9%, Cera alba 2,0 - 5,5%, Polvsorbat 80 1,0 - 1,5%.

10. 12. Farmaceutski proizvod u obliku masti prema zahtevima 1-3, naznačen time,što sadrži ekstrakte0,01%-15,0% lišaja( Usnea barbata)i 1,0%-5,5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,1%-2,5%etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)

inkorporirane u 65,0-99,5% ekscipijensa u sastavu: beli vazelin, tečni parafin, polisorbat 60, sorbitan-monostearat, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline, cetostearol, kalijum sorbat, propilenglikol, prečišćena voda.

11. 13. Farmaceutski proizvod u obliku paste prema zahtevima 1-3, naznačen time,što sadrži ekstrakte0,01%-15,0% lišaja( Usnea barbata)i 1.0%-5.5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,1%-2,5% etarskog ulja čajnogdrveta( Aetheroleum melaleuca)inkorporirane u 65,0-99,5% ekscipijensa u sastavu: beli vazelin, polisorbat 60, sorbitan-monostearat, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline, cetostearol, kalijum sorbat, propilenglikol, tečni parafin, izopropilmiristat, prečišćena voda, talk i cink oksid.

12. 14. Farmaceutski proizvod u obliku gel-krema prema zahtevima 1-3, naznačen time, što sadrži 0,01% - 15,0% ekstrakta lišaja( Usnea barbata)i 1.0% - 5.5% virka( Alchemilla vulgaris)i 0,1% - 2,5% etarskog ulja čajnog drveta( Aetheroleum melaleuca)inkorporirane u 65,0-99,5% ekscipijensa u sastavu: cetostearol, trigliceridi kaprilne i kapronske kiseline, C<12>-<14>alkil poliglukozid/C<i2>-<i4>alkohol, koko glukozid/alkohol kokosovog oraha, kalijum sorbat, glicerol, propilenglikol, etanol, polisorbat 20, beli vazelin, tečni parafin, karbomer, natrijum hidroksid i voda.

13. 15. Primena farmaceutske kompozicije i farmaceutskih proizvoda prema zahtevima 1-12 za lečenje promena na koži i sluzokoži bakterijske i g<l>jivične etiologije u humanoj i veterinarskoj medicini, kao i kod promena kod kojih usled dejstva slobodnih radikala dolazi do upala i ubrzanog starenja kože.

14. 16. Primena farmaceutske kompozicije i farmaceutskih proizvoda prema zahtevima 1-13, naznačena time, što ima antimikrobna i antiinflamatoma svojstva.

15. 17. Primena farmaceutske kompozicije i farmaceutskih proizvoda prema zahtevima 1-14 za lečenje promena na koži i sluzokoži izazavane MRSA sojevima.