Deprecated: The each() function is deprecated. This message will be suppressed on further calls in /home/zhenxiangba/zhenxiangba.com/public_html/phproxy-improved-master/index.php on line 456
RS54978B1 - Genz 112638 za lečenje gošeove ili fabrijeve bolesti u kombinacionoj terapiji - Google Patents
[go: Go Back, main page]

RS54978B1 - Genz 112638 za lečenje gošeove ili fabrijeve bolesti u kombinacionoj terapiji - Google Patents

Genz 112638 za lečenje gošeove ili fabrijeve bolesti u kombinacionoj terapiji

Info

Publication number
RS54978B1
RS54978B1 RS20160645A RSP20160645A RS54978B1 RS 54978 B1 RS54978 B1 RS 54978B1 RS 20160645 A RS20160645 A RS 20160645A RS P20160645 A RSP20160645 A RS P20160645A RS 54978 B1 RS54978 B1 RS 54978B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
formula
hemitartrate
therapeutic agent
treatment
compound
Prior art date
Application number
RS20160645A
Other languages
English (en)
Inventor
Hanlan Liu
Chris Willis
Renu Bhardwaj
Diane P Copeland
Abizer Harianawala
Jeffrey Skell
John Marshall
Jianmei Kochlling
Gerard Palace
Judith Peterschmitt
Craig Siegel
Seng Cheng
Original Assignee
Genzyme Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=43431870&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS54978(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Genzyme Corp filed Critical Genzyme Corp
Publication of RS54978B1 publication Critical patent/RS54978B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D405/00—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom
    • C07D405/02—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings
    • C07D405/06—Heterocyclic compounds containing both one or more hetero rings having oxygen atoms as the only ring hetero atoms, and one or more rings having nitrogen as the only ring hetero atom containing two hetero rings linked by a carbon chain containing only aliphatic carbon atoms
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/335—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin
    • A61K31/357—Heterocyclic compounds having oxygen as the only ring hetero atom, e.g. fungichromin having two or more oxygen atoms in the same ring, e.g. crown ethers, guanadrel
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A61K31/4025—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil not condensed and containing further heterocyclic rings, e.g. cromakalim
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/06—Antihyperlipidemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C59/00—Compounds having carboxyl groups bound to acyclic carbon atoms and containing any of the groups OH, O—metal, —CHO, keto, ether, groups, groups, or groups
    • C07C59/235—Saturated compounds containing more than one carboxyl group
    • C07C59/245—Saturated compounds containing more than one carboxyl group containing hydroxy or O-metal groups
    • C07C59/255—Tartaric acid
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
    • C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D319/16—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D319/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having two oxygen atoms as the only ring hetero atoms
    • C07D319/10—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes
    • C07D319/14—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D319/16—1,4-Dioxanes; Hydrogenated 1,4-dioxanes condensed with carbocyclic rings or ring systems condensed with one six-membered ring
    • C07D319/18—Ethylenedioxybenzenes, not substituted on the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07B—GENERAL METHODS OF ORGANIC CHEMISTRY; APPARATUS THEREFOR
    • C07B2200/00—Indexing scheme relating to specific properties of organic compounds
    • C07B2200/13—Crystalline forms, e.g. polymorphs

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Obesity (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Heterocyclic Compounds That Contain Two Or More Ring Oxygen Atoms (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Steroid Compounds (AREA)
  • Enzymes And Modification Thereof (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Saccharide Compounds (AREA)

Description

POZADINA
Glikosfingolipidi (GSL) su klasa jedi nj enj a koje se nalazi u prirodi i koja imaju mnoge biološke funkcije, uključujući sposobnost da promovišu ćelijski rast, ćelijsku diferencijaciju, adheziju između ćelija ili između ćelija i proteina matriksa, vezanje mikroorganizama i virusa na ćelije i metastazu tumorskih ćelija. GSL su izvedeni iz glukozilceramida (GlcCer), koji se proizvodi iz ceramida i UDP-glukoze enzimom UDP-glukoza:jV-acilsfingozin glukoziltransferazom (GlcCer sintazom). Struktura ceramida je prikazana ispod:
Nakupljanje GSL je povezano sa brojnim bolestima, uključujući Tej-Saksovu. Gošeovu i Fabrijevu bolest (vidi, na primer, američki patent br. 6.051,598). GSL su takođe povezani sa određenim kancerima. Na primer. nađeno je da se određeni GSL javljaju samo u tumorima ili pri abnormalno visokim koncentracijama u tumorima; ispoljavaju značajna stimulatorna ili inhibitorna dejstva na tumorski rast kada se dodaju tumorskim ćelijama u medijumu za kulturu; i inhibišu normalni imunoobrambeni sistem tela kada se otpuštaju od strane tumora u okolinu vanćelijsku tečnost. Sastav tumorskih GSL se menja kako tumori postaju sve više maligni i antitela na određene GSL inhibišu rast tumora.
Jedinjenja koja inhibišu GlcCer sintazu mogu da snize GSL koncentracije i izvešćeno je da su korisna za lečenje subjekta sa jednom od prethodno pomenutih bolesti. Brojni snažni inhibitori GlcCer. na koje se ovde referira kao na "aminoceramidu slična jedinjenja". obelodanjeni su u američkim patentima br. 6.051.598. 5.952.370. 5.945.442. 5.916.911 i 6.030,995. Jedinjenje Formule (I), prikazano ispod, je inhibitor GlcCer sintaze trenutno u kliničkim ispitivanjima za lečenje Gošeove bolesti:
Postoji potreba za formama soli ovog leka kandidata koje su kristalne i inače poseduju fizičke osobine koje su povoljne za proizvodnju u velikom razmeru. Takođe postoji potreba za farmaceutskim formulacijama u kojima je ovaj lek kandidat stabilan i delotvorno dostavljen pacijentu, kao i za poboljšanim postupcima lečenja koji koriste ovo jedinjenje.
McEachern K et al, Molecular Genetics and Metabolism. 91(3). 2007. 259-267 se odnosi na inhibitor glukozilceramid sintaze za terapiju inhibisanja supstratom Gošeove bolesti.
WO 2006/053043 je usmeren prema postupcima lečenja dijabetičkog subjekta koji obuhvataju primenu inhibitora glukozilceramid sintaze na subjektu.
US 2003/050299 je usmeren prema sintezi inhibitora UDP-glukoza N-acilsfingozin glukozi Itransferaze.
REZIME PRONALASKA
Nađeno je kako hemitartaratna so jedinjenja Formule (I) (ovde nadalje "hemitartarat Formule (I)") može đa se kristališe pod dobro definisanim uslovima da se dobiju određeni nehigroskopski kristalni oblici. Hemitartarat Formule (1) poseduje nekoliko korisnih osobina u poređenju sa drugim solima Formule (I ). Kako je opisano nadalje u Primeru 1. mnoge soli Formule (I), uključujući citrat. malat, fumarnu. metilsulfonsku i acetatnu. nisu mogle da se dobiju u čvrstom obliku. Mada su hidrohloridna i 1:1 tartaratna so Formule (I) dobijene u čvrstom obliku, nijedna nije bila kristalna i obe su bile previše higroskopske za formulaciju. Hemitartarat Formule (I) se lakše formuliše i sintetizuje od slobodne baze i drugih soli. Hemitartarat Formule (I) je također kristalan, nehigroskopan, rastvoran u vođi i teče bolje od odgovarajuće slobodne baze (ovde nadalje "slobodna baza Formule (1)") i drugih soli. Prema tome. ove povoljne osobine čine hemitartarat Formule (I) podesnim za proizvodnju velikog opsega kao leka kandidata.
Nađeno je takođe kako stabilne granule za kapsulne formulacije hemitartarata Formule (I) mogu da se pripreme koristeći definisane razmere u vodi nerastvornog punioca, u vodi rastvornog punioca i hemitartarata Formule (I). Na temelju ovog otkrića, obelodanjene su stabilne farmaceutske formulacije hemitartarata Formule (1).
Nađeno je takođe kako se jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli od toga (uključujući hemitartarat Formule (1)) metabolizuju u jetri, primarno citohrom P450 enzimima. Na temelju ovog otkrića, obelodanjeni su postupci lečenja sa jedinjenjem Formule (I) ili farmaceutski prihvatljivim solima ođ toga (uključujući hemitartarat Formule (I)) koji smanjuju potencijal za lek/lek interakcije.
Nađeno je takođe kako Goše miševi na kojima je primenjena rekombinantna glukocerebrozidaza i zatim hemitartarat Formule (I) pokazuju niže razine GL1 u visceralnim organima te smanjeni broj Goše ćelija u jetri u poređenju sa lečenjem samo sa glukocerebrozidazom ili samo sa hemitartaratom Formule (1). Na temelju ovog otkrića, kombinacione terapije sa jedinjenjem Formule (I) ili farmaceutski prihvatljivim solima od toga (uključujući hemitartarat Formule (I)) su također obelodanjene.
Ovde opisana je hemitartaratna so jedinjenja predstavljenog Formulom (I). Kako je napomenuto iznad, na hemitartaratnu so jedinjenja predstavljenog Formulom (1) referira se ovde kao na "hemitartarat Formule (I)." Na jedinjenje predstavljeno Formulom (1) referira se ovde kao na "slobodnu bazu Formule (I)."
Također ovde opisana je farmaceutska kompozicija koja obuhvata farmaceutski prihvatljiv nosač ili diluens i hemitartarat Formule (I).
Također ovde opisan je postupak inhibisanja glukozilceramid sintaze ili snižavanja koncentracija glikosfingolipida u subjekta kojemu je to potrebno primenom na subjektu delotvorne količine hemitartarata Formule (I).
Također ovde opisano je korišćenje hemitartarata Formule (I) za proizvodnju medikamenta za inhibisanje glukozilceramid sintaze ili snižavanje koncentracija glikosfingolipida u subjekta kojemu je to potrebno.
Također ovde opisano je korišćenje hemitartarata Formule (I) za inhibisanje glukozilceramid sintaze ili snižavanje koncentracija glikosfingolipida u subjekta kojemu je to potrebno.
U jednom aspektu, ovaj pronalazak donosi prvi terapijski agens za korišćenje u postupku lečenja subjekta sa Gošeovom bolesti. Postupak obuhvata primenu na subjektu delotvorne količine prvog terapijskog agensa u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa. Prvi terapijski agens je predstavljen sa Formulom (I) ili farmaceutski prihvatljivom solju od toga; i drugi terapijski agens je delotvoran za lečenje Gošeove bolesti.
U drugom aspektu, ovaj pronalazak donosi prvi terapijski agens za korišćenje u postupku lečenja subjekta sa Fabrijevom bolesti. Postupak obuhvata primenu na subjektu delotvorne količine prvog terapijskog agensa u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa. Prvi terapijski agens je predstavljen sa Formulom (I) ili farmaceutski prihvatljivom solju od toga; i drugi terapijski agens je delotvoran za lečenje Fabrijeve bolesti.
Također ovde opisana je farmaceutska kompozicija koja obuhvata:
hemitartaratnu so jedinjenja predstavljenog sa Formulom (I); barem jedan u vodi rastvoran punioc; barem jedan u vodi nerastvoran punioc: barem jedno vezivo: i
barem jedan lubrikant.
Također ovde opisan je postupak lečenja subjekta sa Fabrijevom bolesti. Postupak obuhvata korake: a) primene na subjektu delotvorne količine jedinjenja Formule ( I). ili farmaceutski prihvatljive soli od toga; b) testiranja subjekta da se utvrdi da li je subjekt slab. intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator;
c) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator.
utvrđivanja prilagođene delotvorne količine jedinjenja: i
d) primene na subjektu prilagođene delotvorne količine jedinjenja Formule (I) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator i primene na subjektu
delotvorne količine jedinjenja Formule (I) ako je subjekt slab P450 metabolizator. Također ovde opisan je postupak lečenja subjekta sa Gošeovom bolesti. Postupak obuhvata korake:
a) primene na subjektu delotvorne količine jedinjenja Formule (1). ili farmaceutski prihvatljive soli od toga; b) testiranja subjekta da se utvrdi da li je subjekt slab, intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator; c) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator. utvrđivanja prilagođene delotvorne količine jedinjenja; i d) primene na subjektu prilagođene delotvorne količine jedinjenja Formule (I) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator i primene na subjektu delotvorne količine jedinjenja Formule (I ) ako je subjekt slab P450 metabolizator. Također ovde opisan je postupak lečenja subjekta sa Fabrijevom bolesti. Postupak obuhvata korake: a) primene na subjektu delotvorne količine jedinjenja predstavljenog sa sfedećom strukturnom formulom:
farmaceutski prihvatljive soli od toga;
b) procene najnižih razina jedinjenja u plazmi kod subjekta; i
c) podešavanja količine jedinjenja primenjene na subjektu tako da su najniže razine
jedinjenja u plazmi barem 5 ng/ml. Alternativno, najniže razine u plazmi i C,,iax jedinjenja
u subjekta se procene u koraku b) i u koraku c) količina jedinjenja primenjena na subjektu se podesi tako da su najniže razine jedinjenja u plazmi u subjekta barem 5 ng/ml i Cmax
jedinjenja kod subjekta je ispod 100 ng/ml.
Također ovde opisan je postupak lečenja subjekta sa Gošeovom bolesti. Postupak obuhvata korake:
a) primene na subjektu delotvorne količine jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
farmaceutski prihvatljive soli od toga:
b) procene najnižih razina jedinjenja u plazmi kod subjekta: i
c) podešavanja količine jedinjenja primenjene na subjektu tako da su najniže razine
jedinjenja u plazmi kod subjekta barem 5 ng/ml. Alternativno, najniže razine u plazmi i
Cnm jedinjenja kod subjekta se procene u koraku b) i u koraku c) količina jedinjenja primenjena na subjektu se podesi tako da su najniže razine jedinjenja u plazmi kod subjekta barem 5 ng/ml i Cmax jedinjenja u subjekta je ispod 100 ng/ml.
KRATAK OPIS CRTEŽA
SL. 1 pokazuje eksperimentalni XRPD uzorak (sobna temperatura) za hemitartarat Formule ( I).
SL. 2 je graf efikasnosti terapija enzimom i redukcijom supstrata u snižavanju razina glukozilceramida u jetri Goše miševa. Razine GL1 u jetri merene su u netretiranih 3 meseca starih Goše miševa (A) i nakon 2 sedmice tretmana sa rekombinantnom glukocerebrozidazom (B). Miševi tretirani sa rekombinantnom glukocerebrozidazom analizirani su 10 sedmica docnije bez daljnjeg tretiranja (C) ili nakon terapije sa hemitartaratom Formule (I) (D) pri 150 mg/kg hrane. Također su prikazane GL1 razine u jetri miševa na kojima je primenjen samo hemitartarat Formule (I) tokom celokupnog perioda studije (E) i kod netretiranih kontrola jednake starosti (F). Podaci su izraženi kao srednje vrednosti ± standardna pogreška srednje vrednosti (SEM) (n = 5). StatistČka značajnost je utvrđena neuparenim t testom.
SL. 3 je graf efikasnosti enzimske i terapije redukcijom supstrata u snižavanju razina glukozilceramida u slezeni Goše miševa. Razine GL1 u slezeni su merene kod netretiranih 3 meseca starih Goše miševa (A) i nakon 2 sedmice tretmana sa rekombinantnom glukocerebrozidazom (B). Miševi tretirani sa rekombinantnom glukocerebrozidazom analizirani su 10 sedmica docnije bez daljnjeg tretmana (C) ili nakon terapije sa hemitartaratom Formule (1) (D)- Također su prikazane razine GL1 u slezeni miševa na kojima je primenjen samo hemitartarat Formule (I) tokom celokupnog perioda studije (E) i kod netretiranih kontrola jednake starosti (F). Podaci su izraženi kao srednje vrednosti ± standardna pogreška srednje vrednosti (SEM) (n = 5). Statistčka značajnost je utvrđena neuparenim t testom.
SL. 4 je graf efikasnosti enzimske i terapije redukcijom supstrata u snižavanju razina glukozilceramida u plućima Goše miševa. Razine GL1 u plućima su merene kod netretiranih 3 meseca starih Goše miševa (A) i nakon 2 sedmice tretmana sa rekombinantnom glukocerebrozidazom (B). Miševi tretirani sa rekombinantnom glukocerebrozidazom analizirani su 10 sedmica docnije bez daljnjeg tretmana (C) ili nakon terapije sa hemitartaratom Formule (I) (D). Također su prikazane razine GL1 u plućima miševa na kojima je primenjen samo hemitartarat Formule (I) tokom celokupnog perioda studije (E) i kod netretiranih kontrola jednake starosti (F). Podaci su izraženi kao srednje vrednosti ± standardna pogreška srednje vrednosti (SEM) (n = 5). Statistčka značajnost je utvrđena neuparenim t testom.
SL. 5 je graf koji pokazuje kvantifikovanje stepena bojenja CD68 u jetri. Stepen CD68-pozitivnog bojenja na rezovima jetre kvantifikovan je koristeći MetaMorph program. Prikazane su razine kod netretirane 3 meseca stare Goše jetre (A) ili nakon tretmana sa glukocerebrozidazom (B). Miševi tretirani sa enzimom i zatim analizirani 10 sedmica docnije bez daljnje terapijske intervencije (C) ili nakon terapije sa hemitartaratom Formule (1) (D) također su prikazani. Također su prikazani stepeni bojanja u jetri Goše miševa na kojima je primenjen samo hemitartarat Formule (I) (E) i kod netretiranih kontrolnih miševa jednake starosti (F). Podaci su sakupljeni iz analize deset 400x slika po rezu od svakog od miševa. Statistčka značajnost je utvrđena neuparenim t testom.
SL. 6 je graf koji prikazuje efikasnost hemitartarata Formule (i) kod mladih D409V/nul miševa. Hemitartarat Formule (I) je primenjen dnevno na 10 sedmica starim D409V/nui miševima oralnom gavažom pri dozi od 75 ih 150 mg/kg tokom 10 sedmica. Razine glukozilceramida u jetri, plućima, vaskulaturi i slezeni su procenjeni na kraju studije pomoću FIP-TLC. Podaci su prikazani kao procenat GL-1 kod netretiranih kontrolnih miševa jednake starosti. Isprekidane linije pokazuju razine glukozilceramida uočene kod normalnih miševa divljeg tipa.<*>p< 0.05;<**>p < 0,01 u odnosu na netretiranu kontrolu (dvosmeran. neupareni t-test). Podaci su predstavljeni kao srednje vrednosti ± standardna pogreška srednje vrednosti (SEM) n= 5 za 75 mg/kg; n = 6 za 150 mg/kg).
SL. 7 prikazuje efekt terapije hemitartaratom Formule (I) na nakupljanje GL-3 u jetri, srcu, bubregu, slezeni, mozgu i krvi Fabri miša.
SL. 8 prikazuje graf efekta terapije hemitartaratom Formule (1) na početak i progresiju periferne neuropatije u Fabri miševa.
SL. 9 prikazuje grafove merenja nekih markera funkcije bubrega u Fabri miševa tretiranih sa hemitartaratom Formule (I).
SL. 10 pokazuje vremensku liniju za ERT i SRT studije populacija miševa koje primaju terapije različitim Jekovima: A) Fabrazvme dvomesečno, bez hemitartarata Formule (1); B) Fabrazvme dvomesečno i hemitartarat Formule (I) u hrani; C) Fabrazvme primenjen na početku studije i pri četvrtom mesecu studije i hemitartarat Formule (I) u hrani; D) bez Fabrazyme-a, hemitartarat Formule (I) u hrani; i E) terapija bez leka.
SL. 11 prikazuje grafove razina GL-3 u krvi u ng/ml krvi u šest populacija (n=?) miševa (A-E Fabri-Rag; i F divlji tip); populacije miševa primile su sledeće terapije: A) Fabrazvme dvomesečno. bez hemitartarata Formule (I); B) Fabrazvme dvomesečno i hemitartarat Formule (1) u hrani: C) Fabrazvme primenjen na početku studije i pri četvrtom mesecu studije i hemitartarat Formule (1) u hrani; D) bez Fabrazvme-a, hemitartarat Formule (I) u hrani; E) terapija bez leka; i F) terapija bez leka.
SL. 12 prikazuje grafove razina GL-3 u jetri i bubregu Fabri-Rag miševa; populacije miševa (n=?) primile su sledeće terapije: A) Fabrazvme dvomesečno, bez hemitartarata Formule (I); B) Fabrazvme dvomesečno i hemitartarat Formule (I) u hrani; C) Fabrazvme primenjen na početku studije i pri četvrtom mesecu studije i hemitartarat Formule (I) u hrani: D) bez Fabrazyme-a. hemitartarat Formule (I) u hrani; i E) terapija bez leka
SL. 13 prikazuje grafove razina GL-3 u urinu kod Fabri-Rag miševa; populacije miševa (n=?) primile su sledeće terapije: A) Fabrazvme dvomesečno. bez hemitartarata Formule (I): B) Fabrazvme dvomesečno i hemitartarat Formule (I) u hrani; C) Fabrazvme primenjen na početku studije i pri četvrtom mesecu studije i hemitartarat Formule (1) u hrani; D) bez Fabrazyme-a. hemitartarat Formule (I) u hrani; i E) terapija bez leka.
SL. 14 je graf koji pokazuje latenciju osetljivosti na toplotu u sekundima kod Fabri-Rag miševa koji su primili sledeće terapije: Fabrazvme dvomesečno« bez hemitartarata Formule (I); Fabrazvme dvomesečno i hemitartarat Formule (I) u hrani; Fabrazvme primenjen na početku studije i pri četvrtom mesecu studije i hemitartarat Formule (I) u hrani: bez Fabrazyme-a. hemitartarat Formule (1) u hrani; terapija bez leka; miševi divljeg tipa; i netretirani pri tri meseca.
Slika 15 je graf koji pokazuje površinu potpune količine degradacije HPLC traga različitih mešavina koje obuhvataju hemitartarat Formule (I), laktozu monohidrat kapsulirajuće čistoće i Avicel PH 301 (mikrokristalna celuloza) nakon što su izložene temperaturi od 85°C tokom 3 dana. Površina degradacije HPLC traga je razmer ukupne površine vrhova koji odgovaraju degradaciji u odnosu na ukupnu površinu vrhova koji odgovaraju hemitartaratu Fonnule (I) i produktima degradacije.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
Ovaj pronalazak opisuje jedinstvene kristalne oblike hemitartarata Fonnule (1) i nove farmaceutske kompozicije hemitartarata Formule (I) koje obuhvataju kristalne oblike hemitartarata Formule (I) ovde opisane. Ovaj pronalazak takođe opisuje postupke inhibisanja glukozilceramid sintaze ili snižavanja koncentracija glikosfingolipida u subjekta kojemu je to potrebno. Dodatno, ovaj pronalazak opisuje postupke za pripremu specifičnih kristalnih oblika hemitartarata Formule (I). Ovaj pronalazak takođe opisuje stabilne farmaceutske formulacije hemitartarata Formule (1), kombinacione terapije sa jedinjenjem Formule (I) ili farmaceutski prihvatljivim solima od toga (uključujući hemitartarat Formule (I)) i postupke lečenja sa jedinjenjem Formule (I) ili farmaceutski prihvatljivim solima od toga (uključujući hemitartarat Fonnule (I)) koji minimalizuju rizik za lek/lek interakcije.
Kristalni oblici hemitartarata Formule ( I)
U određenom izvođenju, barem određeni težinski procenat hemitartarata Formule (I) je kristalan. Određeni težinski procenti uključuju 70%. 72%. 75%. 77%. 80%. 82%. 85%. 86%.. 87%, 88%, 89%. 90%. 91%, 92%. 93%. 94%. 95%. 96%. 97%. 98%. 99%. 99.5%. 99.9%. ili procenat između 70% i 100%.
U drugom određenom izvođenju, barem određeni težinski procenat hemitartarata Formule (I) je pojedinačni kristalni oblik hemitartarata Formule (1). Određeni težinski procenti uključuju 70%. 72%, 75%. 77%, 80%. 82%. 85%. 86%. 87%. 88%. 89%. 90%. 91%, 92%. 93%. 94%. 95%. 96%, 97%, 98%. 99%. 99.5%. 99.9%. ili procenat između 70% i 100%.
Kako se ovde koristi, "kristalno" se odnosi na čvrstu supstancu koja poseduje kristalnu strukturu u čemu individualni molekuli imaju visoko homogenu regularnu nepromenjivu hemijsku konfiguraciju. Kristalni hemitartarat Formule (I) mogu da budu kristali pojedinačnog kristalnog oblika hemitartarata Formule (1). ili smeša kristala različitih pojedinačnih kristalnih oblika. Pojedinačni kristalni oblik znači hemitartarat Formule (I) kao jedinstveni kristal ili mnoštvo kristala u kojem svaki kristal poseduje isti kristalni oblik.
Kada je određeni težinski procenat hemitartarata Formule (I) pojedinačni kristalni oblik, ostatak hemitartarata Formule (I) je neka kombinacija amorfnog hemitartarata Formule (I), i/ili jednog ili više drugih kristalnih oblika hemitartarata Formule (I) sa izuzetkom tog pojedinačnog kristalnog oblika. Kada je kristalni hemitartarat Formule (I) definisan kao specifikovani procenat jednog određenog kristalnog oblika hemitartarata Formule (I), ostatak je sačinjen od amorfnog oblika i/ili kristalnih oblika različitih od jednog ili više određenih oblika koji su specifikovani. Primeri pojedinačnog kristalnog oblika uključuju Oblik A hemitartarata Formule (I) karakterisan sa jednom ili više osobina kako je ovde raspravljeno.
Zbog toga što vinska kiselina poseduje dve karboksilne kiselinske grupe, može da formira soli sa različitim molarnim razmerima jedinjenja predstavljenih sa Formulom (I) naprema tartaratu (konjugovanoj bazi vinske kiseline). Na primer. so u kojoj je približno jedan naprema jedan molarni razmer tartarata naprema Formuli (I) je tartarat Formule (I) (1 tartarat: 1 Formula (I)); i so u kojoj je molarna razmera tartarata naprema Formuli (I) približno jedan naprema dva je hemitartarat Formule (1) (1 tartarat: 2 Formula ( I)).
Hemitartaratna so može da postoji u različitim stereoizomernim oblicima. Stereoizomeri su jedinjenja koja se razlikuju samo u njihovom prostornom rasporedu. Enantiomeri su parovi stereoizomera čiji se likovi u ogledalu ne mogu poklopiti, najčešće zato što sadrže asimetrično supstituisani atom ugljenika koji deluje kao hiralni centar. Dijastereomeri su stereoizomeri koji se ne odnose kao likovi u ogledalu, najčešće zato što sadrže dva ili više asimetrično supstituisanih atoma ugljenika.
Kada je stereohemija navedena (kao u. na primer. L-(+)-vinska kiselina) ili prikazana strukturom (kao u. na primer. Formuli (I)). navedeni ili prikazani stereoizomer je barem 60%. 70%. 80%. 90%. 99% ili 99.9% težinski čist u odnosu na druge stereoizomere. Kada je naveden pojedinačni enantiomer (kao u, na primer. L-(+)-vinska kiselina) ili prikazan strukturom (kao u, na primer. Formuli (I)), prikazani ili navedeni enantiomer je barem 80%. 90%, 99% ili 99,9% težinski optički čist. Težinski procenat optičke čistoće je razmer težine enantiomera naprema težini enantiomera plus težini njegovog optičkog izomera.
"Racemat" ili "racemska smeša" znači smešu ekvimolamih količina dva enantiomera. pri čemu takve smeše ne pokazuju optičku aktivnost: tj. ne rotiraju ravan polarizovane svetlosti.
Vinska kiselina poseduje tri stereoizomera: L-(+)-vinska kiselina ili dekstrovinska kiselina, te njen enantiomer, levovinska kiselina ili D-(-)-vinska kiselina i ahiralni oblik mezovinska kiselina. L ili D obeležje ne upućuje na sposobnost kiseline da rotira ravan polarizovane svetlosti.
Bilo koji od stereoizomera vinske kiseline može da se koristi za pripremu hemitartarata Formule (I). Na primer, hemitartarat može da se formira iz samo jednog od njenih stereoizomera, ili od kombinacije njih. Hemitartaratna so se odabere između D-hemitartarata. L- hemitartarata, hemimezovinske kiseline ili racemskog D.L-hemitartarata. U specifičnom izvođenju, hemitartaratna soje L-hemitartarat. "L-hemitartarat" znači kako je hemitartaratna so formirana iz L-vinske kiseline. Racemski D.L-hemitartarat znači da su oba D-tartarat i L-tartarat korišćeni u pripremi hemitartarata Formule (I). Količina D-tartarata u racemskom D.L-hemitartaratu može da bude veća od. jednaka, ili manja od količine prisutnog L-tartarata.
"Levorotatorni" znači kako se polarizovana svetlost rotira na levo kada prolazi kroz asimetrično jedinjenje. Prefiks koji obeležava levorotatorno je "L".
"Dekstrorotatorni" znači kako se polarizovana svetlost rotira na desno kada prolazi kroz asimetrično jedinjenje. Prefiks koji obeležava dekstrorotatorno je "D".
Priprema hemitartarata Formule ( I)
Hemitartarat Formule (I) može da se pripremi umešavanjem Fonnule (I) sa L-vinskom kiselinom u podesnom rastvaraču. Taloženje hemitartarata Formule (I) može da se potpomogne dodavanjem kristala klice. Rastvarači koji mogu da se koriste su metanol, voda. etanol, aceton, etil acetat ili kombinacije od toga.
Određeni čvrsti oblici hemitartarata Formule (1) mogu da se pripreme, na primer. sporim evaporisanjem. sporim hlađenjem i taloženjem antirastvaračem. Rastvarači koji mogu da se koriste u ovim postupcima uključuju vodu, heptan. hcksan, toluen, dihlorometan. etanol, izopropil alkohol, acetonitril, etil acetat. metanol, aceton, metil tercijarni-butil etar {u daljnjem tekstu ovde "TBME"), p-dioksan i tetrahidrofuran (u daljnjem tekstu ovde " TUF").
Čvrsti oblici hemitartarata Formule (I) mogu da se pripreme evaporisanjem rastvarača iz rastvora hemitartarata Formule (1) u rastvaraču ili smeši rastvarača. Podesne smeše rastvarača uključuju metanol. etanol. aceton, vodu. etil acetat i dihlorometan. Poželjne smeše rastvarača uključuju etanol, metanol, vodu i aceton.
Čvrsti oblici hemitartarata Formule (I) mogu da se pripreme kroz sporo hlađenje grejanog rastvora hemitartarata Formule (I) u rastvaraču. Podesni rastvarači uključuju etanol. metanol, vodu, aceton i etil acetat.
Čvrsti oblici hemitartarata Fonnule (I) mogu da se pripreme kroz brzo hlađenje grejanog rastvora hemitartarata Formule (I) u rastvaraču. stavljanjem rastvora u kupatilo za hlađenje. Podesni rastvarači uključuju etanol, metanol. aceton, vodu. etil acetat ili smeše tih rastvarača.
Čvrsti oblici hemitartarata Formule (I) mogu da se pripreme dodavanjem rastvora hemitartarata Formule (1) u rastvaraču kako je opisano iznad u anti-rastvarač pri danoj temperaturi. Određenije, anti-rastvarač je etil acetat. aceton, acetonitril, toluen. THF. TBME. p-dioksan, izopropanol, ili heptan. Određene rastvarač/antirastvarač smeše uključuju metanol/etil acetat. metanol/aceton. metanol /heksan. metanol/heptan. metanoi/acetonitril. metanol/toluen, metanol/THF, metanol/TBME, metanol/p-dioksan, etanol/etil acetat. etanol/heksan, etanol/heptan. etanol, aceton, etanol/acetonitrii. etanol/toluen. etanol/TBME. etanol/THF, voda/THF. voda/izopropanol. voda/acetonitril, voda/aceton, dihlorometan/heptan, dihlorometan/aceton, đihlorometan/etil acetat, dihlorometan/acetonitril. đihlorometan/toluen, dihlorometan/THF. dihlorometan/TBME, đihlorometan/p-dioksan i d i hlorometan/izopropano I.
Poželjne rastvarač/antirastvarač smeše uključuju metanol/etil acetat, metanol/aceton. metanol/TBME i voda/aceton.
Kako se ovde koristi, "anti-rastvarač" se odnosi na rastvarač u kojem hemitartarat Formule (1) ima nisku rastvornost i koji uzrokuje da hemitartarat taloži iz rastvora u obliku finog praha ili kristala.
Dodatni postupci za dobijanje čvrstih oblika hemitartarata Formule (I) uključuju taloženje čvrste supstance iz etil acetat/aceton i po odabiru sušenje formirane čvrste supstance pri sobnoj temperaturi. U drugom postupku, čvrsta supstanca može zatim da se prekristaiiše iz acetona sa ili bez dodavanja kristala klice. Alternativno, hemitartarat Formule (I) može da se istaloži iz etil acetat/aceton rastvarača i prekristaiiše iz etil acetata. Alternativno, hemitartarat Formule (I) može zatim da se prekristaiiše iz izopropanola. Alternativno hemitartarat Formule (I) može da se pripremi koristeći samo aceton bez daljnjeg prekristalisanja. Alternativno hemitartarat Formule (I) može da se istaloži iz acetona nakon kratkog refluksa. bez daljnjeg prekristalisanja.
Alternativno, hemitartarat Formule (1) može zatim da se prekristaiiše iz metanol/aceton sa ili bez dodavanja kristala klice. Alternativno, hemitartarat Formule (I) može zatim da se prekristaiiše iz voda/aceton sa ili bez dodavanja kristala klice.
Karakterisanje kristalnih oblika hemitartarata Formule ( I)
U određenom izvođenju, kristalni oblik hemitartarata Formule (I), kristalni Oblik A. je karakterisan sa jednim, dva, tri, četiri ili pet glavnih XRPD vrhova pri 20 uglovima od 5.1 °. 6,6°, 10,7°, 11,0°, 15.9° i 21,7°. U još određenijem izvođenju, kristalni oblik je karakterisan sa XRPD vrhovima pri 29 uglovima od 5.1°. 6.6°. 10.7°. 11.0°. 13,3°. 15,1°. 15.9°. 16,5°. 17,6°, 18.6°. 18,7°. 19.0°. 20.2°, 21.7° i 23.5°. Podrazumeva se kako specifikovani 20 ugao znači specifikovani!vrednost ±0,2°.
Kako se ovde koristi, "glavni XRPD vrhovi" se odnosi na XRPD vrh sa relativnim intenzitetom većim od 25%. Relativni intenzitet se izračuna kao razmer intenziteta vrha za vrh od interesa naprema intenzitetu vrha za najveći vrh.
Postupci lečenja korišćenjem hemitartarata Formule ( I)
Kako se ovde koristi, subjekt je sisar, poželjno humani pacijent, ali takođe može da bude životinja kojoj treba veterinarsko lečenje, poput životinje ljubimca (npr. psi. mačke i slično), domaća životinja (npr. goveda, ovce, svinje, konji i slično) ili laboratorijska životinja (npr. pacovi, miševi, zamorci i slično). Subjekt i pacijent se koristi zamenjivo.
Ovde obelodanjen je postupak usporavanja, npr. inhibisanja ili smanjenja aktivnosti glukozilceramid sintaze ili snižavanja koncentracija glikosfingolipida u subjekta kojemu je to potrebno primenom na subjektu delotvorne količine soli hemitartarata Formule (1). uključujući kristalne oblike od toga, kako je opisano iznad.
Subjekt kojem treba lečenje je subjekt sa stanjem ili bolešću koji ima koristi od inhibisanja glukozilceramid sintaze ili snižavanja koncentracija glikosfingolipida u ćelijama, naročito lizosomu ili ćelijskoj membrani. Za inhibitore glukozilceramid sintaze je pokazano da su korisni za lečenje bolesti odlaganja u lizosomima poput Tej-Saksove. Gošeove ili Fabrijeve bolesti (vidi. na primer. američke patente br. 6.569.889; 6.255.336; 5.916.911; 5.302.609; 6,660.749; 6.610.703; 5,472.969; 5.525.616).
Primeri stanja ili bolesti uključuju bolest poliđstičnog bubrega i membranoznu glomerulopatiju (vidi američke privremene patentne prijave 61/130.401 i 61/102.5411, glomerulonefritis i glomerulosklerozu (vidi američku privremenu prijavu patenta 61/137.214) lupus (Vidi PCT/US2009/001773), dijabetes, uključujući dijabetes tipa 2 (vidi WO 2006/053043); lečenje poremećaja koji uključuju ćelijski rast i deobu. uključujući kancer. kolagene vaskularne bolesti, aterosklerozu i bubrežnu hipertrofiju dijabetičkih pacijenata (vidi američke patente br. 6,916,802 i 5.849.326): inhibisanje rasta ćelija arterijskog epiteta (vidi američke patente br. 6.916,802 i 5.849.326): lečenje pacijenata koji pate od infekcija (vidi Svensson. M. et al.. "Epithelial Glucosphingolipid Expression as a Determinant of Bacterial Adherence and Cvtokine Production," Infect. and Immun.. 62:4404-4410 (1994); sprečavanje domaćina, tj. pacijenta, da stvara antitela protiv tumora (vidi Inokuchi. J. et al.. "Antitumor Activitv in Miče of an Inhibitor of Glvcosphingolipid Biosvnthesis". Cancer Lett., 38:23-30(1987); i lečenje tumora (vidi Hakomori. S. "Nevv Directions in Cancer Therapy Based on Aberrant Expression of Glycosphingolipids: Anti-adhesion and Ortho-Signaling Therapv." Cancer Cells 3:461-470 (1991). Inokuchi. J. et al., "Inhibilion of Experimental Metastasis of Murine Lewis Long Carcinoma by an Inhibitor of Glucosylceramide Synthase and its Possible Mechanism of Action." Cancer Res.. 50:6731-6737 (1990) i Ziche, M. et al., "Angiogenesis Can Be Stimulateđ or Repressed In Vivo by a Change in GM3:GD3 Ganglioside Ratio." Lab. Invest.. 67:711-715 (1992).
Hemitartarat Formule (I) može takođe da se koristi za preparat protiv kancera nalik na vakcinu (vidi. na primer. američke patente br. 6.569.889: 6.255.336: 5.916,911: 5.302,609; 6,660.749; 6.610,703: 5,472.969; 5,525,616).
Jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so od toga (uključujući hemitartaratnu so od toga) može da se koristi u obelodanjenim postupcima kao monoterapija. tj. kao jedini farmaceutski aktivan sastojak kojeg se primenjuje za lečenje indikacije.
Prema ovom pronalasku, jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so od toga (uključujući hemitartaratnu so od toga) je za korišćenje u obelodanjenim postupcima kao kombinaciona terapija sa drugim terapijski aktivnim lekovima poznatim u struci za lečenje željenih bolesti ili indikacija. "Ko-terapija" ili "kombinacija" ili "kombinaciona terapija" ili "primenjeno zajedno" se ovde koriste zamenjivo i znače kako se jedinjenje Formule (1) ili farmaceutski prihvatljiva so od toga (uključujući hemitartaratnu so) primenjuju pre. posle, ili istovremeno sa jednim ili više drugih terapijskih agensa. Kombinaciona terapija se koristi za lečenje Gošeove bolesti ili Fabrijeve bolesti. Jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so od toga (uključujući hemitartaratnu so) može da bude primenjeno zajedno simultano (npr. istovremeno), bilo kao odvojene formulacije ili kao zajednička formulacija. Alternativno, agensi mogu da se primene sekvencijalno, kao odvojene kompozicije, unutar odgovarajućeg vremenskog okvira, kako je određeno od stručnog kliničara (npr. vreme dovoljno da omogući poklapanje farmaceutskih efekata terapija). Jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so od toga (uključujući hemitartaratnu so) i jedan ili više drugih terapijskih agensa mogu da se primene u jedinstvenoj dozi ili u više doza, u redosledu i po rasporedu podesnima za postizanje željenog terapijskog efekta.
Terapijski agensi delotvorni za lečenje Gošeove bolesti koji mogu da se koriste u izvođenju ovog pronalaska uključuju glukocerebrozidazu. analoge glukocerebrozidaze. inhibitore glukozilceramid sintaze i molekulske šaperone koji se vežu na glukocerebrozidazu i obnavljaju njenu ispravnu konformaciju. Glukocerebrozidaza ili analozi od toga mogu da budu dobijeni od čoveka ili sisara. Alternativno, glukocerebrozidaza i analozi od toga mogu da se dobiju rekombinantno. Analozi glukocerebrozidaze uključuju skraćene oblike enzima i/ili enzime sa aminokiselinskim supstitucijama u odnosu na nativnu aminokiselinsku sekvencu nativnog enzima, uz uslov daje sačuvana biološka aktivnost. Primeri analoga glukocerebrozidaze uključuju imiglucerazu (prodavano pod trgovačkim nazivom CerezyineK od Genzvme Corporation), taliglucerazu alfa (uskoro na tržištu pod trgovačkim nazivom Uplyso" i razvijeno od Protalix Biotherapeutics. Inc.) i velaglucerazu alta (razvijeno od Shire PLC). koji su rekombinantnom DNK dobijeni analozi humane p-glukocerebrozidaze. Primeri molekulskih šaperona uključuju izofagomin (u razvoju pod trgovačkim nazivom Plicera™ od Amicus Therapeutics, Cranburv. NJ). Izofagomin je takođe poznat kao afegostat tartarat i sadržava izofagomin u obliku tartaratne soli kao svoj aktivni sastojak. Primeri inhibitora glukocerebrozidaze uključuju miglustat (razvijen pod trgovačkim nazivom Zavesca™ od Actelion Farmaceutskis Ltd., Allschwil. Švajcarska).
Terapijski agensi delotvorni za lečenje Fabrijeve bolesti koji mogu da se koriste u izvođenju ovog pronalaska uključuju a galaktozidazu A, analoge a galaktozidaze A i molekulske šaperone koji se vežu na a galaktozidazu A i obnavljaju njenu ispravnu konformaciju. a galaktozidaza A ili analozi od toga mogu da budu dobijeni od čoveka ili sisara. Alternativno, a galaktozidaza A i analozi od toga mogu da se dobiju rekombinantno. Analozi a galaktozidaze A uključuju skraćene oblike enzima i/ili enzime sa aminokiselinskim supstitucijama u odnosu na nativnu aminokiselinsku sekvencu nativnog enzima, uz uslov da je zadržana biološka aktivnost. Primeri analoga a galaktozidaze A uključuju agalzidazu beta (rekombinantna humana a-galaktozidaza prodavana pod trgovačkim nazivom Fabrazvme" kao smrzavanjem osušen lek od Genzyme Corporation) i agalzidazu alfa (rekombinantni protein prodavan pod trgovačkim nazivom Replagal" od Shire PLC). Primeri molekulskih šaperona uključuju migalastat (razvijen pod trgovačkim nazivom Amigal™ od Amicus Therapeutics. Cranburv. NJ kao lek koji sadrži migalastat hidrohlorid kao svoj aktivni sastojak).
U jednom izvođenju, kombinaciona terapija za lečenje Gošeove ili Fabrijeve bolesti se izvodi u dva stepena. U prvom stepenu, lek delotvoran za lečenje Gošeove bolesti ili Fabrijeve bolest (tipično, glukocerebrozidaza ili analog od toga za Gošeovu bolest i galaktozidaza A ili analog od toga za Fabrijevu bolest) se koristi za stabilizovanje subjekta. Na primer. u Gošeovoj bolesti (ili Fabrijevoj bolesti), jedan od tih lekova se koristi da se smanji opterećenje nakupljanja GL-1 u visceralnim organima kao u jetri, slezeni, plućima i/ili bubregu. Kada se to postigne, jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljiva so od toga
(uključujući hemitartaratnu so) se koristi u drugom stepenu kao prikladna terapija održavanja. Prvi stepen tipično traje do jedne, dve, tri ili četiri sedmice ili do jednog, dva. tri. Četiri, šest, devet ili dvanaest meseci. ili dok broj trombocita kod subjekta nije jednak ili veći od 100 000 mm<3>; dok koncentraci ja hemoglobina nije jednaka ili veća od 11 g/dl (žensko) ili 12 g/dl
(muško); i/ili dok zapremina slezene subjekta nije manja od ili jednaka 10 količnika normale i dok zapremine jetre nisu manje od ili jednake 1.5 količnika normale. Primena prvog stepena se tipično završi kada se započne terapija sa jedinjenjem Formule (I).
Kako se ovde koristi, "delotvorna količina" se odnosi na količinu delotvornu ti ublažavanju postojećih simptoma kod subjekta kojeg se tretira uz minimalne neprihvatljive nuspojave kod subjekta. Tačna formulacija, put primene i doza se odaberu od strane individualnog lekara sa obzirom na pacijentovo stanje. Količina u doziranju i interval mogu da se podese individualno da pruže razine aktivnog jedinjenja u plazmi koje su dovoljne da održavaju željene terapijske efekte. Uz pacijentovo stanje i način primene, primenjena doza će da zavisi od težine pacijentovih simptoma, te pacijentove starosti i težine. Delotvorna količina će tipično da rezultuje u najnižim razinama jedinjenja u plazmi iznad barem 5 ng/ml. Ako su najniže razine u plazmi ispod 5 ng/ml nakon primene delotvorne količine jedinjenja, doza koju se primenjuje na tom subjektu se promeni u "prilagođenu delotvornu količinu" tako da su najniže razine jedinjenja barem 5 ng/ml. Alternativno, sko su najniže razine jedinjenja u plazmi ispod 5 ng/ml i/ili je Cmaxiznad 100 ng/ml nakon primene delotvorne količine jedinjenja, doza koju se primenjuje na subjektu se promeni u "prilagođenu delotvornu količinu" tako da su najniže razine jedinjenja u plazmi barem 5 ng/ml i Cmax je ispod 100 ng/ml. Delotvorne količine mogu da budu u rasponu od 0.1 do 500 mg/na dan. Alternativno, delotvorna količina je u rasponu od 50-300 mg/dan. U drugoj alternativi, delotvorna količina je u rasponu od 100-300 mg/dan. Jedinjenje ovog pronalaska može da se primeni kontinuisano ili u specifičnim vremenskim intervalima. Na primer. jedinjenje ovog pronalaska može da se primeni 1. 2. 3 ili 4 puta na dan, poput, npr. dnevne ili dvaput dnevno formulacije. Komercijalno dostupni eseji mogu da se upotrebe za određivanje raspona i/ili rasporeda za primenu optimalne doze.
U jednom slučaju, delotvorna količina za jedinjenje Formule (I) ili farmaceutski prihvatljivu so od toga (uključujući hemitartaratnu so opisanu iznad) je (bilo kao monoterapija ili kao ko-terapija) dnevna doza od 25 miligrama do 300 mi li grama (alternativno 25 miligrama do 150 miligrama; u drugoj alternativi od 50 miligrama do 300 miligrama: i u drugoj alternativi od 100 miligrama do 300 miligrama). poput 25. 50. 100. 200 ili 300 miligrama na dan. 1. specifičnom slučaju, delotvorna količina jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli od toga (uključujući hemitartarat Formule (I)) je (bilo kao monoterapija ili kao ko-terapija) dvaput dnevno doza od 50 miligrama (za ukupno od 100 miligrama na dan). 100 miligrama (za ukupno od 200 miligrama na dan) ili 150 miligrama (za ukupno od 300 miligrama na dan). U alternativnom slučaju, delotvorna količina za jedinjenje Formule (l) ili farmaceutski prihvatljivu so od toga (uključujući hemitartarat Formule (I)) se (bilo kao monoterapija ili kao ko-terapija) primeni kao jednom dnevno doza od 100 miligrama/dan, 200 miligrama/dan ili 300 miligrama/dan.
Delotvorna količina može da se utvrdi pretpostavljajući kako je subjekt "slab P450 metabolizator" i zatim procenjujući najniže razine u plazmi i/ili Cma*. Količina primenjena na subjektu se zatim promeni u prilagođenu delotvornu količinu, kako je opisano ispod, ako su najniže razine u plazmi ispod 5 ng/ml; ili su najniže razine jedinjenja ispod 5 ng/ml i/ili je Cmaxiznad 100 ng/ml; ili ako je utvrđeno daje subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultrabrzi P450 metabolizator. Delotvorna količina za slabe P450 metabolizatore je (bilo kao monoterapija ili kao ko-terapija) uobičajeno između 100-200 miligrama na dan. na primer 100 ili 200 miligrama, kao jednom dnevno doza ili dvaput dnevno doza.
Tipično, farmaceutske kompozicije ovde opisane mogu da se primene pre ili posle obroka, ili sa obrokom. Kako se ovde koristi, "pre" ili "posle" obroka je tipično unutar dva časa. poželjno unutar jednog časa. još poželjnije unutar trideset minuta, najpoželjnije unutar deset minuta od otpočinjanja ili završetka obroka, odnosno.
Sada je nađeno kako se jedinjenje Formule (I) i farmaceutski prihvatljive soli od toga (uključujući hemitartarat Formule (I)) metabolizuju u jetri, primarno sa citohrom P450 enzimima. Citohromi P450 ("CYP-ovi") su glavni jetreni enzimi za metabolizovanje ksenobiotika. Postoji jedanaest ksenobiotik-metabolizujućih citohroma P450 eksprimisanih u tipičnoj humanoj jetri (tj. CYP1A2. CYP2A6, CYP2B6. CYP2C8/9/18/19. CYP2D6. CYP2E1 i CYP3A4/5). Sada je takođe nađeno kako su CYP2D6 i CYP3A4 primarne citohrom P450 izoforme koje su odgovorne za detoksilikovanje jedinjenja Formule (I) i njegovih farmaceutski aktivnih soli. poput hemitartarata Fonnule (I). Razina aktivnosti P450 enzima razlikuje se u odnosu na individue. Na primer, individue mogu da se klasifikuju kao slabi, intermedijerni i ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator!. Zbog toga što niže razine P450 aktivnosti u individue mogu da rezultuju lek/lek interakcijama ("LLI"). drugo izvođenje pronalaska je da se utvrdi da lije subjekt slab. intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator. Ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi metabolizator, tada se doza primenjena na tom subjektu treba povećati do "prilagođene delotvorne doze", tj. količine koja rezultuje u najnižim razinama jedinjenja u plazmi od barem 5 ng/ml; ili količine koja rezultuje u najnižim razinama jedinjenja od barem 5 ng/m l i Cm;i\ jedinjenja ispod 100 ng/ml. Doza može da se povisi postepeno i subjekt može ponovo da se testira jednom, dvaput, tri. Četiri ili koliko god je puta neophodno da se postigne prilagođena delotvorna doza.
Za CYP 2D6 gen postoje četiri predviđena fenotipa:
"Slab P450 metabolizator" nosi dva mutantna alela. što rezultuje u potpunom gubitku enzimske aktivnosti.
"Intermedijerni P450 metabolizator" poseduje jedan alel za smanjenu aktivnost i jedan nul alel.
"Ekstenzivni P450 metabolizator" poseduje barem jedan i ne više od dva normalno funkcionalna alela.
"Ultra brzi P450 metabolizator" nosi višestruke kopije (3-13) funkcionalnih alela i stvara višak enzimske aktivnosti.
Subjekt se tipično proceni daje slab. intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator bilo putem genotipizacije ili kroz praćenje najnižih razina u plazmi leka koji se metabolizuje sa P450 enzimom poput CYP2D6 ili CYP3A4. Uobičajeno, najniže razine u plazmi i/ili Cmax jedinjenja Formule (I) ili farmaceutski prihvatljive soli od toga, uključujući hemitartarat Formule (I), se prate kod subjekta tokom do jedne, dve, tri ili četiri sedmice, ili do jednog, dva. tri, šest, devet ili dvanaest meseci ili više nakon početka lečenja sa jedinjenjem. Prilagođavanja doze se rade. kako je potrebno, da se razine zadrže unutar opisanih granica, tj. najniža razina u plazmi pri ili iznad 5 ng/ml.
Subjekti mogu da postanu slabi P450 metabolizatori kao rezultat lečenja sa određenim lekovima koji su inhibitori P450 enzima. Primeri takvih lekova uključuju paroksetin. fluoksetin. kvinidin ili ketokonazol. Alternativno, subjekt je slab P450 metabolizator kao rezultat niske ekspresije P450 enzima. U takvim slučajevima, niska ekspresija može da se proceni određivanjem ekspresije P450 enzima kod subjekta, tj. genotipizacijom subjekta za P450 enzim. Na primer. ekspresija CYP2D6 se uobičajeno proceni pomoću PCR (McElrov et.al. "CYP2D6 Genotyping as an Alternative to Phenotvping for Determination of Metabolic Status in a Clinical Trial Setting". AAPS PharmSci (2000) 2(4): član 33 (http://www.phannsci.org/)) ili na mikroereju baziranim farmakogenomskim testiranjem (Background Information, Roche Diagnostics "The CYP450 Gene Familv and Drug Metabolism". Hoffmann La Roche Ltd.). Kao takav, subjekt može lako da se genotipizuje za P450 ekspresiju (npr. CTP2D6) pre otpočinjanja lečenja i na njemu može da se primeni prilagođena delotvorna količina, ako je potrebno. U slučaju genotipizacije pre početka lečenja, još uvek je preporučljivo pratiti najniže razine u plazmi i Cm<w jedinjenja te prilagoditi dozu. kako je potrebno.
Delotvorne količine za migalastat. agalzidazu p. imiglucerazu. izofagomin i miglustat su kako je opisano na etiketi leka ili kako je izvođeno u kliničkim ispitivanjima svakog leka.
Jedinjenje Formule (1) može da reaguje sa farmaceutski prihvatljivim kiselinama da formira farmaceutski prihvatljivu so. Primeri farmaceutski prihvatljivih kiselina uključuju neorganske kiseline poput hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, jodovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline i slično, te organske kiseline poput p-toluensulfonske kiseline, metansulfonske kiseline, oksalne kiseline, p-bromofenil-sulfonske kiseline, ugljene kiseline, sukcinske kiseline, limunske kiseline, benzojeve kiseline, sirćelne kiseline i slično. Primeri takvih soli uključuju sulfat, pirosulfat. bisulfat, sulfit, bisulfit, fosfat, monohi dro gen fosfat, dihidrogenfosfat, metafosfat, pirofosfat, hlorid, bromid. jodid, acetat. propionat, dekanoat, kaprilat. akrilat. format, izobutirat. kaproat. heptanoat. propiolat. oksalat, malonat, sukcinat, suberat, sebacat, fumarat. maleat, butin-1.4-dioat. heksin-1.6-dioat. benzoat. hlorobenzoat, metilbenzoat, dinitrobenzoat, hidroksibenzoat. metoksibenzoat. ftalat. sulfonat. ksilensulfonat. fenilacetat, feni I propionat. fenilbutirat. citrat. laktat, gama-hidroksibutirat, glikolat, tartarat, metansulfonat. propliticasulfonal, naftalen-1-sulfonat, naftalen-2-sulfonat. mandelat i slično.
Farmaceutske kompozicije koje uključuju hemitartarat Formule ( I)
Podesne formulacije i načini primene za jedinjenje Fonnule (1) ili farmaceutski prihvatljivu so od toga (uključujući hemitartaratnu so od toga) uključuju one opisane u američkom patentu br. 7,253.185. Poželjna formulacija za hemitartarat Formule (1) je opisana u sledećim Paragrafima.
Ovde opisana je farmaceutska kompozicija koja obuhvata hemitartarat Formule ([). barem jedan u vodi rastvoran punioc, barem jedan u vodi nerastvoran punioc. barem jedno vezivo i barem jedan lubrikant. Podesni u vodi rastvorni punioci mogu da uključuju, na primer. bezvodnu laktozu. laktozu monohidrat, manitol. natrijum hlorid. šećeru prahu, sorbitol, saharozu. inozitol i prethodno gelirani škrob. Podesni u vodi nerastvorni punioci mogu da uključuju, na primer, mikrokristalnu celulozu, kalcijum fosfat i škrob. Podesna veziva mogu da uključuju, na primer. prethodno gelirani škrob, natrijum karboksimetil celulozu, hidroksipropil celulozu, hidroksipropi 1 metil celulozu, polivinil piroiidon. kopolividon. želatin, prirodne gume. škrobnu pastu, saharozu. kukuruzni sirup, polietilen glikole i natrijum alginat. Podesni lubrikanti mogu da uključuju, na primer. hidrogenisano biljno ulje. kalcijum stearat i gliceril behenat. U jednom slučaju farmaceutske kompozicije, u vodi rastvoran punioc se odabere iz grupe koja se sastoji od bezvodne laktoze. laktoza monohiđrata, manitola, natrijum hlorida, šećera u prahu, sorbitola. saharoze. inozitoia i prethodno geliranog škroba, u vodi nerastvoran punioc se odabere iz grupe koja se sastoji od mikrokristalne celuloze, kalcijum fosfata i škroba; vezivo se odabere iz grupe koja se sastoji od prethodno geliranog škroba, natrijum karboksimetil celuloze, hidroksipropil celuloze, hidroksipropil metil celuloze, polivinil pirolidona, kopolividona. želatina, prirodnih guma. škrobne paste, saharoze. kukuruznog sirupa, polietilen glikola i natrijum alginata; i lubrikant se odabere iz grupe koja se sastoji od hidrogenisanog biljnog ulja. kalcijum stearata i gliceril behenata.
Farmaceutska formula obuhvata između 8 tež% do 32lež%. između 8 tež.% do 24 tež%. između 12 tež% do 20 tež% ili između 14 tež% do 18 tež% u vodi nerastvornog punioca na bazi suvih čvrstih supstanci.
Farmaceutska formula obuhvata između 26 tež% do 50 tež%, između 30 tež% do 46 tež%. između 34 tež% do 46 tež% ili između 38 tež% do 44 tež% u vodi rastvornog punioca na bazi suvih čvrstih supstanci.
Farmaceutska kompozicija obuhvata između 30 tež% i 45 tež%. između 35 tež% i 40 tež % i 36 tež% do 39 tež % hemitartarata Formule (I) na bazi suvih čvrstih supstanci.
Farmaceutska formulacija tipično obuhvata između 2 tež% i 6 tež% veziva na bazi suvih čvrstih supstanci.
Farmaceutska formulacija tipično obuhvata između 0,1 tež% i 2 tež% veziva na bazi suvih čvrstih supstanci.
U specifičnom slučaju, farmaceutska formula obuhvata između 8 tež% do 32 tež% u vodi nerastvornog punioca, između 26 tež% do 50 tež% u vodi rastvornog punioca, između 30 tež% i 45 tež% hemitartarata Formule (I), između 2 tcž% i 6 tež% veziva i između 0.1 tež% i 2 tež% veziva, sve na bazi suvih čvrstih supstanci. Specifičnije, u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; i u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza. Još speci fičnije u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat: u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza: vezivo je hidroksipropil metilceluloza: i lubrikant je gliceril behenat.
U specifičnom slučaju, farmaceutska formula obuhvata između 8 tež% do 32 tež% u vodi nerastvornog punioca, između 26 tež% do 50 tež% u vodi rastvornog punioca, između 35 tež% i 40 tež% hemitartarata Formule (I), između 2 tež% i 6 tež% veziva i između 0.1 tež% i 2 tež% veziva, sve na bazi suvih čvrstih supstanci. Specifičnije, u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; i u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza. Još specifičnije u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza; vezivo je hidroksipropil metilceluloza; i lubrikant je gliceril behenat.
U drugom specifičnom slučaju, farmaceutska formula obuhvata između 8 tež% do 24 tež% u vodi nerastvornog punioca, između 30 tež% do 46 tež% u vodi rastvornog punioca, između 35 tež% i 40 tež% hemitartarata Formule (I). između 2 tež% i 6 tež% veziva i između 0,1 tež% i 2 tež% veziva, sve na bazi suvih čvrstih supstanci. Specifičnije, u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; i u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza. Još specifičnije u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; u vodi nerastvoran punioc je
mikrokristalna celuloza; vezivo je hidroksipropil metilceluloza; i lubrikant je gliceril behenat.
U drugom specifičnom slučaju, farmaceutska formula obuhvata između 12 tež% do 20 tež% u vodi nerastvornog punioca, između 34 tež% do 46 tež% u vodi rastvornog punioca, između 35 tež% i 40 tež% hemitartarata Fonnule (I). između 2 tež% i 6 tež% veziva i između 0.1 tež% i 2 tež% veziva, sve na bazi suvih čvrstih supstanci. Specifičnije, u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; i u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza. Još specifičnije u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza; vezivo je hidroksipropil metilceluloza: i lubrikant je gliceril behenat. U drugom specifičnom slučaju, farmaceutska formula obuhvata između 14 tež% do 18 tež% u vodi nerastvornog punioca, između 38 tež% do 44 tež% u vodi rastvornog punioca, između 35 tež% i 40 tež% hemitartarata Formule (I), između 2 tež% i 6 tež% veziva te između 0,1 tež% i 2 tež % veziva, sve na bazi suvih čvrstih supstanci. Specifičnije, u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; i u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza. Još specifičnije u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; u vodi nerastvoran punioc je
mikrokristalna celuloza; vezivo je hidroksipropil metilceluloza; i lubrikant je gliceril behenat.
U drugom specifičnom slučaju, farmaceutska formula obuhvata između 14 tež% do 18 tež% u vodi nerastvornog punioca, između 38 tež% do 44 tež% u vodi rastvornog punioca, između 36 tež% i 39 tež% hemitartarata Formule (I). između 2 tež % i 6 tež % veziva te između 0.1 tež% i 2 tež% veziva, sve na bazi suvih čvrstih supstanci. Specifičnije, u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; i u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza. Još specifičnije u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza; vezivo je hidroksipropil metilceluloza: i lubrikant je gliceril behenat.
Određeni aspekti ove objave uključuju one kako su opisani u sleđećim numerisanim Paragrafima.
Paragraf 1. Hemitartaratna so jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
u Čemu so je amorfna so.
Paragraf 2. Hemitartaratna so jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
u čemu barem 70% težinski sol i je kristalno.
Paragraf 3. Hemitartaratna so jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom: u čemu barem 70% težinski soli je u pojedinačnom kristalnom obliku. Paragraf 4. Hemitartaratna so jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
u čemu barem 99% težinski soli je kristalno.
Paragraf 5. Hemitartaratna so jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
u čemu barem 99% težinski soli je u pojedinačnom kristalnom obliku.
Paragraf 6. Hemitartaratna so iz bilo kojeg od Paragrafa 1-5. u čemu se hemitartaratna so odabere između D-hemitartarata. L- hemitartarata. hemimezovinske kiseline ili racemskog D.L-hemitartarata.
Paragraf 7. Hemitartaratna so hemitartarat so iz bilo kojeg od Paragrafa 1-5. u čemu hemitartaratna soje L-hemitartarat.
Paragraf 8. So iz Paragrafa 3 ili 5. u čemu barem 70 % težinski soli je pojedinačni kristalni oblik Oblik A.
Paragraf 9. So iz Paragrafa 3 ili 5. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem jednim glavnim vrhom difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5,1°, 6,6°, 10,7°, 11,0°. 15,9° i 21.7°.
Paragraf 10. So iz Paragrafa 3 ili 5. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem dva glavna vrha difrakcije x-zraka na prahu pri 29 uglovima od 5.1°. 6.6°. 10,7°, 11,0°, 15,9° i 21.7°.
Paragraf 11. So iz Paragrafa 3 ili 5. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem tri glavna vrha difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5.1 °. 6.6°. 10,7°, 11.0°. 15.9° i 21,7°.
Paragraf 12. So iz Paragrafa 3 ili 5. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem četiri glavna vrha difrakcije x-zraka na prahu pri 26 uglovima od 5.1 °. 6.6°. 10.7°, 11,0°. 15,9° i 21,7°.
Paragraf 13. So iz Paragrafa 3 ili 5, u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa glavnim vrhovima difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5.1°. 6,6°, 10,7°. 11.0°, 15,9° i 21,7°.
Paragraf 14. So iz Paragrafa 3 ili 5. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa vrhovima difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5.1°. 6,6°. 10.7°. 11.0°, 13,3°, 15,1°, 15,9°. 16,5°. 17,6°. 18,6°. 18.7°, 19.0°. 20.2°. 21,7° i 23.5°.
Paragraf 15. So iz Paragrafa 3 ili 5. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa uzorkom difrakcije x-zraka na prahu sa SL. 1.
Paragraf 16. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata hemitartaratnu so jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
i farmaceutski prihvatljiv nosač ili diluens.
Paragraf 17. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 16. u čemu so je amorfna so. Paragraf 18. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 16, u čemu je barem 70% težinski soli kristalno.
Paragraf 19. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 16. u čemu je barem 70% težinski soli u pojedinačnom kristalnom obliku.
Paragraf 20. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 16. u čemu je barem 99% težinski soli kristalno.
Paragraf 21. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 16. u čemu je barem 99% težinski soli u pojedinačnom kristalnom obliku.
Paragraf 22. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 16, u čemu se hemitartaratna so odabere između D-hemitartarata, L- hemitartarata. hemimezovinske kiseline ili racemskog D,L-hemitartarata.
Paragraf 23. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 16, u čemu je hemitartaratna so L-hemitartarat.
Paragraf 24. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 19 ili 21. u čemu je barem 70% težinski soli pojedinačni kristalni oblik Oblik A.
Paragraf 25. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 19 ili 21, u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem jednim glavnim vrhom difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5.1°, 6.6°. 10.7°, 11.0°. 15.9° i 21.7°.
Paragraf 26. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 19 ili 21. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem dva glavna vrha difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5,1°. 6.6°, 10.7°, 11.0°. 15.9° i 21,7°
Paragraf 27. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafe 19 ili 21. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem tri glavna vrha difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5,1°, 6,6°, 10,7°. 11.0°. 15.9° i 21.7°.
Paragraf 28. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 19 ili 21. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa barem četiri glavna vrha difrakcije x-zraka na prahu pri 26 uglovima od 5,1°. 6,6°. 10.7°, 11.0°. 15.9° i 21.7°.
Paragraf 29. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 19 ili 21. u Čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa glavnim vrhovima difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5,1 °, 6.6°, 10.7°. 11,0°. 15.9° i 21.7°.
Paragraf 30. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 19 ili 21, u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa vrhovima difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5.1°, 6,6°, 10.7°, 11,0°, 13.3°. 15.1°. 15.9°. 16,5°. 17.6°. 18.6°. 18.7°, 19.0°. 20.2°. 21.7° i 23,5°.
Paragraf 31. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 19 ili 21. u čemu je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa uzorkom difrakcije x-zraka na prahu sa SL. 1. Paragraf 32. Postupak lečenja subjekta sa Gošeovom bolesti, koji obuhvata primenu na subjektu delotvorne količine hemitartaratne soli iz bilo kojeg od Paragrafa 1-Paragrafa 15.
Paragraf 33. Postupak lečenja subjekta sa Fabrijevom bolesti, koji obuhvata primenu na subjektu delotvorne količine hemitartaratne soli iz bilo kojeg od Paragrafa l-Paragrafa 15.
Paragraf 34. Postupak inhibisanja glukozilceramid sintaze ili snižavanja koncentracija glikosfingolipida u subjekta kojemu je to potrebno primenom na subjektu delotvorne količine hemitartaratne soli iz bilo kojeg od Paragrafa 1-Paragrafa 15.
Paragraf 35. Postupak iz Paragrafa 32. 33 ili 34. koji obuhvata primenu hemitartaratne soli pri dvaput dnevno dozi od 25 miligrama do 200 miligrama.
Paragraf 36. Postupak iz Paragrafa 32, 33 ili 34, koji obuhvata primenu hemitartaratne soli pri dvaput dnevno dozi od 50 miligrama.
Paragraf 37. Postupak lečenja subjekta sa Gošeovom bolesti, koji obuhvata primenu na subjektu delotvorne količine prvog jedinjenja predstavljenog sledećom strukturalnom formulom: ili farmaceutski prihvatljive soli od toga u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa koji je delotvoran za lečenje Gošeove bolesti. Paragraf 38. Postupak iz Paragrafa 37 u čemu drugi terapijski agens je imigiuceraza. Paragraf 39. Postupak iz Paragrafe 37 u čemu drugi terapijski agens je izofagomin. Paragraf 40. Postupak iz Paragrafa 37 u čemu drugi terapijski agens je miglustat. Paragraf 41. Postupak lečenja subjekta sa Fabrijevom bolesti, postupak koji obuhvata primenu na subjektu delotvorne količine prvog terapijskog agensa predstavljenog sledećom strukturalnom formulom:
ili farmaceutski prihvatljive soli od toga u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa koji je delotvoran za lečenje Fabrijeve bolesti. Paragraf 42. Postupak iz Paragrafa 41 u čemu drugi terapijski agens je migalastat. Paragraf 43. Postupak iz Paragrafa 41 u čemu drugi terapijski agens je agalzidaza (B. Paragraf 44. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 37-43 u čemu se prvi terapijski agens primenjuje kao hemitartarat iz bilo kojeg od Paragrafa 1-15.
Paragraf 45. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 37-43. u čemu se lečenje sa prvim terapijskim agensom otpočne nakon lečenja tokom perioda od barem deset sedmica sa drugim terapijskim agensom.
Paragraf 46. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 37-43. u čemu se lečenje sa prvim terapijskim agensom otpočne nakon lečenja sa drugim terapijskim agensom i u čemu se lečenje sa prvim terapijskim agensom otpočne nakon što je subjeklov broj trombocita jednak ili veći od 100.000 mm<3>; koncentracija hemoglobina je jednaka ili veća od 11 g/dl (žensko) ili 12 g/dl (muško); i/ili zapremina subjektove slezene je manja od ili jednaka 10 količnika normale i zapremine jetre su manje od ili jednake 1,5 količnika normale.
Paragraf 47. Postupak iz Paragrafa 45 ili 46 u čemu se lečenje sa drugim terapijskim agensom završi nakon početka lečenjenja sa prvim terapijskim agensom.
Paragraf 48. Postupak, iz bilo kojeg od Paragrafa 37-47. koji obuhvata primenu prvog terapijskog agensa pri dvaput dnevno dozi od 25 miligrama do 200 miligrama. Paragraf 49. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 37-47. koji obuhvata primenu prvog terapijskog agensa pri dvaput dnevno dozi od 50 miligrama.
Paragraf 50. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata: hemitartaratnu so jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
barem jedan u vodi rastvoran punioc;
barem jedan u vodi nerastvoran punioc;
barem jedno vezivo: i
barem jedan lubrikant.
Paragraf 51. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 50, u čemu hemitartaratna so je hemitartaratna so iz bilo kojeg od Paragrafa 1-Paragrafa 15.
Paragraf 52. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 50, u čemu se u vodi rastvoran punioc odabere iz grupe koja se sastoji od bezvodne laktoze, laktoza monohidrata, manitola, natrijum hlorida, šećera u prahu, sorbitola. saharoze, inozitola i prethodno geliranog škroba.
Paragraf 53. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 50. u čemu se u vodi nerastvoran punioc odabere iz grupe koja se sastoji od mikrokristalne celuloze, kalcijum fosfata i škroba.
Paragraf 54. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 50, u čemu se vezivo odabere iz grupe koja se sastoji od prethodno geliranog škroba, natrijum karboksimetil celuloze, hidroksipropil celuloze, hidroksipropil metil celuloze, polivinil pirolidona, kopolividona, želatina, prirodnih guma, škrobne paste, saharoze, kukuruznog sirupa, polietilen glikola i natrijum alginata.
Paragraf 55. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 50, u čemu se lubrikant odabere iz grupe koja se sastoji od hidrogenisanog biljnog ulja, kalcijum stearata i gliceril behenata.
Paragraf 56. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 50. u čemu se u vodi rastvoran punioc odabere iz grupe koja se sastoji od bezvodne laktoze. laktoza monohidrata. manitola, natrijum hlorida, šećera u prahu, sorbitoia, saharoze. inozitola i prethodno geliranog škroba; u vodi nerastvoran punioc se odabere iz grupe koja se sastoji od mikrokristalne celuloze, kalcijum fosfata i škroba; vezivo se odabere iz grupe koja se sastoji od prethodno geliranog škroba, natrijum karboksimetil celuloze, hidroksipropil celuloze, hidroksipropil metil celuloze, polivinil pirolidona. kopolividona, želatina, prirodnih guma. škrobne paste, saharoze. kukuruznog sirupa, polietilen glikola i natrijum alginata; i lubrikant se odabere iz grupe koja se sastoji od hidrogenisanog biljnog ulja, kalcijum stearata i gliceril behenata.
Paragraf 57. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56. u čemu kompozicija obuhvata 26 tež% do 50 tež% u vodi rastvornog punioca na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 58. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56. u čemu kompozicija obuhvata 8 tež% do 32 tež% u vodi nerastvornog punioca na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 59. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56, u čemu kompozicija obuhvata 8 tež% do 24 tež% u vodi nerastvornog punioca na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 60. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56, u čemu kompozicija obuhvata 12 tež% do 20 tež% u vodi nerastvornog punioca na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 61. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56, u čemu kompozicija obuhvata 14 tež% do 18 tež% u vodi nerastvornog punioca na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 62. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56, u čemu kompozicija obuhvata 2 tež% do 6 tež% veziva na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 63. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56. u čemu kompozicija obuhvata 0,1 tež% do 2 tež% lubrikanta na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 64. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56, u čemu kompozicija obuhvata 35 tež% do 40 tež% hemitartaratne soli, 26 tež% do 50 tež.% u vodi rastvornog punioca: 8 tež% do 32 tež% u vodi nerastvornog punioca; 2 tež% do 6 tež% veziva; i 0,1 tež% do 2 tež% lubrikanta. sve na bazi suvih čvrstih supstanci. Paragraf 65. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 56. u čemu u vodi rastvoran punioc je laktoza monohidrat; u vodi nerastvoran punioc je mikrokristalna celuloza; vezivo je hidroksipropil metilceluloza; i lubrikant je gliceril behenat. Paragraf 66. Farmaceutska kompozicija iz Paragrafa 65. u čemu kompozici ja obuhvata 35 tež% do 40 tež% hemitartaratne soli, 26 tež% do 50 tež% laktoza monohidrata; 8 tež% do 32 tež% mikrokristalne celuloze; 2 tež% do 6 tež% hidroksipropil metilceluloze; i 0.1 tež% do 2 tež% gliceril behenata, sve na bazi suvih čvrstih supstanci.
Paragraf 67. Postupak lečenja subjekta sa Fabrijevom bolesti, postupak kojeg
obuhvata:
a) primenu na subjektu delotvorne količine jedinjenja Formule (I):
ili farmaceutski prihvatljive soli od toga; b) testiranje subjekta da se utvrdi je li subjekt slab. intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator;
c) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator.
utvrđivanje prilagođene delotvorne količine jedinjenja; i
d) primenu na subjektu prilagođene delotvorne količine jedinjenja Formule (I) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator i primenu na subjektu
delotvorne količine jedinjenja Formule (I) ako je subjekt slab P450 metabolizator.
Paragraf 68. Postupak lečenja subjekta sa Gošeovom bolesti, postupak kojeg
obuhvata:
a) primenu na subjektu delotvorne količine jedinjenja Formule (1):
ili farmaceutski prihvatljive soli od toga; b) testiranje subjekta da se utvrdi je li subjekt je slab, intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator; c) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator, utvrđivanje prilagođene delotvorne količine jedinjenja; i d) primenu na subjektu prilagođene delotvorne količine jedinjenja Formule (1) ako je subjekt intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator i primenu na subjektu
delotvorne količine jedinjenja Formule (I) ako je subjekt slab P450 metabolizator. Paragraf 69. Postupak iz Paragrafa 67 ili 68, u čemu jedinjenje je hemitartaratna so iz bilo kojeg od Paragrafa 1-Paragrafa 15.
Paragraf 70. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-69, u čemu testiranje obuhvata praćenje najnižih razina jedinjenja u plazmi kod subjekta tokom perioda od barem jedne sedmice. Paragraf 71. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-69, u čemu testiranje obuhvata praćenje najnižih razina jedinjenja u plazmi kod subjekta tokom perioda od barem deset sedmica. Paragraf 72. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-71, u čemu subjekt je intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 enzimski metabolizator ako su najniže razine jedinjenja u plazmi kod subjekta ispod 5 ng/ml i prilagođena delotvorna količina jedinjenja se odabere da rezultuje najnižim razinama jedinjenja kod subjekta od barem 5 ng/mg.
Paragraf 73. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-71. u čemu subjekt je slab P450 enzimski metabolizator ako su najniže razine jedinjenja u plazmi barem 5 ng/ml nakon što se na njemu primeni delotvorna količina jedinjenja.
Paragraf 74. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67 ili 68. u čemu se testiranje u koraku b) dešava pre ili nakon početka lečenja.
Paragraf 75. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-74. u čemu P450 enzim je CYP2D6 enzim i/ili CYP3A4 enzim.
Paragraf 76. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-75, u čemu subjekt je slab P450 metabolizator kao rezultat zajedničke primene inhibitora CYP2D6 enzima ili CYP3A4 enzima.
Paragraf 77. Postupak iz Paragrafa 76, u čemu se inhibitor odabere iz grupe koja se sastoji od paroksetina, tluoksetina. kvinidina i ketokonazola.
Paragraf 78. Postupak iz Paragrafa 67 ili 69. u čemu testiranje u koraku b) je genotipizacija za P450 enzim.
Paragraf 79. Postupak iz Paragrafa 78 u čemu P450 enzim je CYP2D6.
Paragraf 80. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-79. u čemu delotvorna količina jedinjenja je dvaput dnevno doza od 25 miligrama do 200 miligrama.
Paragraf 81. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 67-79, u čemu delotvorna količina jedinjenja je dvaput dnevno doza od 50 miligrama.
Paragraf 82. Postupak lečenja subjekta sa Fabrijevom bolesti koji obuhvata korake:
a) primene na subjektu delotvorne količine jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom: farmaceutski prihvatljive soli od toga; b) procene najnižih razina jedinjenja u plazmi kod subjekta; c) prilagođavanja količine jedinjenja primenjene na subjektu tako da najniže razine
jedinjenja u plazmi kod subjekta su barem 5 ng/ml.
Paragraf 83. Postupak lečenja subjekta sa Gošeovom bolesti koje obuhvata korake:
a) primene na subjektu delotvorne količine jedinjenja predstavljenog sa sledećom strukturnom formulom:
farmaceutski prihvatljive soli od toga:
b) procene najnižih razina jedinjenja u plazmi kod subjekta; c) prilagođavanja količine jedinjenja primenjene na subjektu tako da najniže razine
jedinjenja u plazmi kod subjekta su barem 5 ng/ml.
Paragraf 84. Postupak iz Paragrafa 82 ili 83. u čemu se subjekt testira pre nego lečenje sa jedinjenjem otpočne da se proceni je li subjekt slab. intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator i u čemu se delotvorna količina utvrdi na temelju toga da li je subjekt slab. intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator.
Paragraf 85. Postupak iz Paragrafa 82, 83 ili 84. u čemu jedinjenje je hemitartaratna so iz bilo kojeg od Paragrafa 1 - Paragrafa 15.
Paragraf 86. Postupak iz Paragrafa 82 ili 83. u čemu se u koraku b) kod subjekta takođe proceni Lm« jedinjenja i u Čemu se u koraku c) količina jedinjenja primenjena na subjektu prilagodi tako da najniže razine jedinjenja u plazmi kod subjekta su barem 5 ng/ml i Cmaxjedinjenja kod subjekta su ispod 100 ng/ml.
Paragraf 87. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 82-86, u čemu P450 enzim je C YP2D6 enzim i/ili CYP3A4 enzim.
Paragraf 88. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 82-86, u čemu subjekt je slab P450 enzimski metabolizator kao rezultat zajedničke primene inhibitora P450 enzima.
Paragraf 89. Postupak iz Paragrafa 88, u čemu se inhibitor odabere iz grupe koja se sastoji od paroksetina. fluoksetina. kvinidina i ketokonazola.
Paragraf 90. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 82-86. u čemu se ekspresija P450 enzima kod subjekta proceni da se utvrdi da li je subjekt slab. intermedijerni ili ekstenzivni/ultra brzi P450 metabolizator.
Paragraf 91. Postupak iz Paragrafa 90 u čemu P450 enzim je CYP2D6 ili CYP3A4. Paragraf 92. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 82-90, u čemu delotvorna količina jedinjenja je dvaput dnevno doza od 25 miligrama do 200 miligrama.
Paragraf 93. Postupak iz bilo kojeg od Paragrafa 82-90, u čemu delotvorna količina jedinjenja je dvaput dnevno doza od 50 miligrama.
Pronalazak je ilustrovan sleđećim primerima, za koje se podrazumeva da nisu ograničavajući na bilo koji način.
EKSPERIMENTALNI DEO
Primer I: Priprema sofi Formule ( I)
Hemitartaratna so Formule I se lako kristališe i pokazuje mnoge korisne osobine u poređenju sa drugim solima. Na primer, sledeće kiseline se koriste u pripremi soli jedinjenja predstavljenog sa Formulom (I): limunska kiselina (stvara soli u 1:1. 1:2 i 1:3 so:Formula (I) razmerima); L-jabučna (1:1 i 1:2); metan sulfonska kiselina (1:1); furnama kiselina (1:1 i 1:2); hlorovodonična kiselina (1:1); sirćetna kiselina (1:1) i vinska kiselina (1:1 i 1:2). Samo soli stvorene hlorovodoničnom kiselinom (1:1 >; vinskom kiselinom (1:1) i vinskom kiselinom (1:2) su u čvrstom obliku. Od tih tri, za soli hlorovodonične kiseline (1:1) i vinske kiseline (1:1) je nađeno da su higroskopne i nekristalne te prema tome neprihvatljive za korišćenje u farmaceutskom proizvodu. Za hemitartaratna {1 so: 2 Formula I) jedinjenja predstavljena sa Formulom I je nađeno da su kristalna i nehigroskopna.
Priprema hemitartarata Formule (I)izacetona
L-vinska kiselina (6,02 g. 40,11 mmol. 0.497 ekvivalenata) se rastvori u acetonu (175 ml,), refluksujući rastvor i zatim hlađeenjem na sobnu temperaturu. Slobodna baza Formule (I)
(32.67 g. 80.76 mmol) se rastvori u acetonu (300 mL) pri sobnoj temperaturi. Rastvor L-vinske kiseline se doda u rastvor slobodne baze Formule (1) pri sobnoj temperaturi tokom 15 min. Beli talog se formira pri polovini dodavanja. Smeša se mesa pri sobnoj temperaturi tokom 0.5 časova i zatim kratko refluksuje te ohladi na sobnu temperaturu. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 0,5 h. beli talog se profiltruje. Bela čvrsta supstanca se ispere dvaput sa acetonom (2 x 130 mL). Čvrsta supstanca se osuši na vazduhu i zatim osuši u vakuumu pri 55-60 °C. Prinos je 36.66 g ( 95 %).
Priprema hemitartarata Formule (I) iz5%metanola u acetonu.
Slobodna baza Formule (I). 10 g/24,7 mmol, se rastvori u 5% metanol/aceton 120 mL ili 240 mL. L-vinska kiselina. 1.85 g/12,3 mmol. se rastvori u 5% metanol/aceton 60 mL ili 120 mL (N ili 2N) grejanjem pri 40-45 °C i ovaj rastvor se doda u prvi rastvor. Nakon 1 časa bez taloženja, 1 mg hemitartarata Formule (I) se doda kao kristalna klica. Taloženje se desi nakon 5 minuta i reakcija se nastavi da se meša tokom 30 dodatnih minuta. Reakcija se zatim greje pri refluksu tokom 5 minuta (talog je potpuno rastvoran), te nakon toga ohladi na sobnu temperaturu u kupatilu sa vodom pri 20-22 °C. Formira se talog i reakcija se nastavi da se meša tokom 3 časa. Završni produkt se sakupi filtrovanjem i ispere sa acetonom. 2 x 40 mL. te zatim osuši u vakuumskoj pećnici pri 55-60 °C tokom 16 časova. Težina produkta je 8.72 g/74% prinos.
Priprema hemitartarata Formule (I) iz 1%vodeu acetonu.
Slobodna baza Fonnule (I) (10g/24.7mmol) se rastvori u 1% voda/aceton 120 mL ili 240 mL pri sobnoj temperaturi. L-vinska kiselina, 1.85 g/12.3 mmol. se rastvori u 1% voda/aceton 60 mL ili 120 mL (N ili 2N) grejanjem pri 40-45 °C i ovaj rastvor se doda u prvi rastvor. Nakon 1 časa bez taloženja, 1 mg hemitartarata Formule (I) se doda kao kristalna klica. Taloženje se desi nakon 5 minuta i reakcija se nastavi da se meša tokom 30 minuta. Reakcija se zatim greje pri refluksu tokom 5 minuta (taiog nije potpuno rastvoran), te nakon toga ohladi na sobnu temperaturu u kupatilu sa vodom pri 20-22 °C. Formira se talog i reakcija se nastavi da se meša tokom 3 časa. Završni produkt se sakupi filtrovanjem i ispere sa acetonom, 2 x 40 mL. te zatim osuši u vakuumskoj pećnici pri 55-60 °C tokom 16 časova. Težina produkta je 8.62 g. 73% prinosa.
Prekristlisanje hemitartarata Formule (I) iz 5% metanola u acetonu.
Hemitartarat Formule (I) (3,06 g) se rastvori u 116 mL 5 % metanola u acetonu pri refluksu. Rastvor se ohladi na sobnu temperaturu i meša pri sobnoj temperaturi tokom 2 h. Beli talog se profiltruje i ispere sa 10 mL of 5 % metanola u acetonu, te zatim acetonom (15 mL). Nakon sušenja u vakuumu tokom 18 h pri 55-60 °C. dobije se 2.38 g hemitartarata Formule (I) (78% prinosa).
Prekristlisanje hemitartarata Formule (I) iz 1% HiO u acetonu.
Hemitartarat Formule (1) (3,05 g) se rastvori u 125 mL 1% H2O u acetonu pri refluksu. Rastvor se ohladi na sobnu temperaturu i meša pri sobnoj temperaturi tokom 2 h. Beli talog se profiltruje i ispere sa 10 mL 1% H2O u acetonu, te zatim acetonom (15 mL). Nakon sušenja u vakuumu preko noći pri 55-60 °C. dobije se 2.35 g hemitartarata Fonnule (1) (77% prinosa).
Primer2:Priprema kristalnog hemitartarata Formule ( I)
Flemitartarat Formule (I) se kristališe pomoću nekoliko postupaka. Šarža 1 se pripremi koristeći etil acetat/aceton rastvarače i osuši pri sobnoj temperaturi. Šarža 3 se pripremi koristeći etil acetat/aceton rastvarače i prekristaiiše iz etil acetata. Šarža 4 se prekristaiiše iz acetona koristeći materijal Šarže 1. Šarža 5 se prekristaiiše iz izopropanola. Šarža 7 se pripremi koristeći etil acetat/aceton rastvarače slično Šarži 1 ali u većem opsegu, Šarža 8 se pripremi koristeći samo aceton bez daljnjeg prekristlisanja. Šarža 9 se pripremi koristeći samo aceton sa kratkim refluksom, opet bez daljnjeg prekristlisanja. Kristalni oblici hemitartarata Fonnule (I) takođe se pripreme koristeći sporo evaporisanje, sporo hlađenje, brzo hlađenje i taloženje anti-rastvaračem sa različitim rastvaračima.
Postupak sporog evaporisanja.Izvagani uzorak (uobičajeno 20 mg) se tretira sa alikvotima testnog rastvarača. Alikvoti su tipično 100-200 uL. Između dodavanja rastvarača. smeša se protresa ili sonifikuje. Kada se Čvrste supstance rastvore, kako se proceni vizualnim pregledom, rastvor se ostavi da evaporiše pod ambijentalnim uslovima u otvorenoj vijali pokrivenoj sa aluminijumskom folijom perforisanom sa sitnim rupicama. Rastvornosti se iz ovih eksperimenata procene bazirano na ukupnom rastvaraču dodanom da se dobije bistri rastvor.
Postupak sporog/ brzog hlađenja.Hemitartarat Formule (1) se rastvori u testnom rastvaraču pri 50-60 °C. Nastali rastvor se zatim ostavi da se ohladi na ambijentalnu temperaturu (sporo hlađenje). Ako se čvrste supstance nisu formirale nakon jednog dana. vijale se stave u hladionik. Za eksperimente brzog hlađenja, nastali rastvor se zatim ostavi da se ohladi u hladioniku. Čvrste supstance se sakupe filtrovanjem i osuše na vazduhu. Anti- rastvarač postupakHemitartarat Formule (1) se rastvori u rastvaraču. Anti-rastvarač se doda u rastvor. Čvrste supstance koje se formiraju sakupe se Mirovanjem i osuše na vazduhu.
Primer 3: Fizičke osobine hemitartarata Formule ( I)
Diferencijalna skenirajuća kalorimetrija ( DSK).DSK podaci se sakupe na TA Q100 instrumentu koristeći azot kao gas za produvavanjc. Približno 2-5 mg uzorka se precizno odvaže u aluminijumsku DSK pliticu. Plitica se pokrije sa poklopcem i perforira sa forcepsom. Ćelija za uzorak se ekvilibrira pri 30 °C i zagrejava pri brzini od 10 °C po minutu do konačne temperature od 220 °C.
Visokotemperaiuma ( hot stage) mikroskopija.Visokotemperaturna mikroskopija se izvede koristeći Linkam visokotemperaturni stolić (model FTIR 600) postavljen na Leica DM FP mikroskop opremljen sa Sony DXC-970MD 3CCD kamerom za prikupljanje slike. Da se posmatraju uzorci, koristi se 40x objektiv sa polarizovanom svetlošću. Svaki uzorak se postavi između dva pokrovna stakla. Svaki uzorak se vizualno posmatra dok se stolić zagrejava. Slike se zabeleže koristeći Links verziju 2.27 (Linkam). Visokotemperaturni stolić se kalibrira koristeći USP standarde za tačke topljenja.
Pomoću visokotemperaturne mikroskopije potvrdi se da je endotermićka tranzicija uočena u DSK profilu tranzicija topljenja pri temperaturi između 160-163°C.
Primer 4: Difrakcija X- zraka na prahu hemitartarata Formule ( I)
Sve analize difrakcije X-zraka na prahu (XRPD) se urade u SSCI. Inc. (West Lafavette. IN 47906). XPRD analize se izvedu koristeći Shimadzu XRD-6000 difraktometar X-zraka na prahu koristeći Cu K a zračenje. Instrument je opremljen sa cevi za X-zrake sa finim fokusom. Napon i jačina struje cevi postave se na 40 kV i 40 mA. odnosno. Otvori za divergenciju i rasejavanje postave se na 1° a primajući otvor se postavi na 0.15 mm. Difraktovano zračenje se detektuje sa Nal scinlilacionim detektorom. Koristi se theta-dva theta kontinuisani sken pri 3°/min (0,4 sek/0.02° korak) od 2.5 do 40 °20. Silicijumski standard se analizuje da se proveri poravnanje instrumenta. Podaci se sakupe i analizuju koristeći XRD-6000 v 4.1.
Primer 5: Poređenje hemitartarata Formule ( I) i slobodne baze Formule ( I)
Karakteri sanje čvrstog stanja slobodne baze i hemitartaratne soli je rezimirano u Tabeli 7. Hemitartarat formule I poseduje superiorne osobine u poređenju sa slobodnom bazom Formule I. Na primer. hemitartarat Fonnule I poseduje višu tačku topljenja (<>>150 °C). višu energiju pakovanja (veća endotermička entalpija), nižu varijansu u veličini čestica, višu rastvornost u vodi (preko 300 mg/mL u vodi), podesni kristalni oblik i višu zapreminsku gustinu u poređenju sa slobodnom bazom Formule I.
Primer6:Invitro aktivnost i specifičnost
Aktivnost hemitartarata Formule ( I) u inhihisanju sinteze glikosfingolipida in vitro.Dva eseja se koriste da se kvantifikuje inhibitorna aktivnost hemitartarata Formule (I) prema glukozilceramid sintazi. Kako je glukozilceramid prvi i korak koji ograničava brzinu u biosintezi glikosfingolipida, koristi se esej protočne cilometrije koji meri razine GM 1 i GM3 na ćelijskoj površini da se indirektno proceni aktivnost inhibitora u intaktnim ćelijama. Inkubacija K562 ili B16/F10 ćelija tokom 72 h sa rastućim količinama hemitartarata Formule (I) (0,6-1000 nM) rezultuje sa o dozi zavisnom smanjenju razina kako GM1, tako i GM3 na ćelijskoj površini. Srednja IC50vrednost za inhibisanje prisutnosti GMIna ćelijskoj površini kod K562 ćelija je 24 nM (raspon 14-34 nM) (Tabela 8) i rečena za GM3 kod B16/F10 ćelija je 29 nM (raspon 12-48 nM). Nije uočena očita ćelijska toksičnost u obe ćelijske linije čak i kada su testirane pri najvećoj dozi.
Alternativni esej za sa aktivnošću merenu inhibiciju glukozilceramid sintaze u mikrosomima dobijenim iz humanih ćelija. U ovom eseju, mikrosomi se pripreme iz ćelija humanog melanoma A375 sonifikovanjem i centrifugiranjem. Mikrosomalni preparat se inkubira sa fluorescentnim ceramid supstratom (NBD-C6-ceramid), UDP-glukozom i rastućim količinama hemitartarata Formule (I) (0-1000 nM) tokom jednog časa pri sobnoj temperaturi. Nakon inkubacije, fluorescentno obeleženi glukozilceramid i nereagovani ceramid se razdvoje, te kvantifikuju reverzno-faznom HPLC i detekcijom fluorescencije. U ovom je eseju ICso vrednost za inhibisanje sinteze glukozilceramida u rasponu od 20 do 40 nM. Ova vrednost je slična onima dobijenim iznad za GM1 i GM3. te sugeriše kako su merenja ovih glikolipida ćelijske površine dobri surogati za aktivnost hemitartarata Formule (I) na glukozilceramid sintazu.
Specifičnost inhibicije sinteze supstratom sa hemitartaratom Formule ( i).Specifičnost hemitartarata Fonnule (I) se proceni u serijiin vitroćelijski baziranih i eseja bez ćelija. Enzimi intestinalne glikozidaze se analizuju u homogenatima tkiva pacova (vidi U. Andersson. et al., Biochem. Pharm. 59 (2000) 821-829) i enzim odgranavanja glikogena se analizuje u eseju bez kako je opisano (vidi U. Andersson, et al., Biochem. Pharm. 67 (2004) 697-705). Nije nađena uočljiva inhibicija intestinalnih glikozidaza (laktaza, maltaza. sukraza), a-glukozidaze I i II. te citosolnog enzima odgranavanja <u-l,6-glukozidaza) pri koncentracijama sve do 2500 uM (Tabela 8).
Nelizosomalna glukozilceramidaza i lizosomalna glukocerebrozidaza analizuju se u intaktnim humanim ćelijama koristeći C6-NBD-glukozilceramid kao supstrat (vidi H.S. Overkleeft, et al. J. Biol. Chem. 273 (1998) 26522-26527). Konduritol p epoksid (specifični inhibitor lizosomalne glukocerebrozidaze) se koristi da se diferencira lizosomalna od nelizosomalne aktivnosti. Aktivnost glukocerebrozidaze se takođe meri fluorescencijom aktiviranim ćelijskim sortiranjem (FACS). K.562 ćelije se gaje u kulturi sa rastućim količinama hemitartarata Formule (I) u prisustvu 1 uM 5-(pentafluorobenzoilamino)-fluorescein di-P-D-glukopiranozida (PFB-FDGlu. Molecular Probes/lnvitrogen. Carlsbad, CA) tokom 30-60 min. Ćelije se odmah ohlade na ledu i fluorescencija kvantilikuje kao iznad. Nelizosomalna glukozilceramidaza je slabo inhibisana sa ICsood 1600 uM. Nema inhibicije lizosomalne glukocerebrozidaze, enzima koji je deficijentan u Gošeovoj bolesti, sve do najviše koncentracije od 2500 uM (Tabela 8). Prema tome, potrebna je razlika od približno 40 000 u koncentraciji da inhibiše glukozilceramid sintazu u poredenji sa bilo kojim drugim testiranim enzimima.
Primer 7: Poboljšana kontrola lizosomalnih razina glukozilceramida u mišjem modelu
A. Fabrijeva bolest.
Kako bi se utvrdilo da li kombinovano korišćenje kako enzimske zamenske terapije (ERT) tako i terapije redukcije supstrata (SRT) može da održi enzimsko smanjenje nakupljanja ili pruži dodatne koristi, upoređene su relativne delotvornosti zasebnih i kombinovanih terapija u mišjem modelu Fabrijeve bolesti (Fabri-Rag). Poreklo Fabri miševa je opisano u Wang, AM et al. Am. J. Hum. Genet. 59: A208 (1996). Fabri-Rag je ukrštcn sa RAG-1 mišem i ne razvija zrele limfocite ili T-ćelije (imunokompromitovan).
Studije na životinjama.
Za studije monoterapije, Fabri miševi se uključe u studiju sa 1 mesec starosti (model prevencije). Tretirane grupe prime hemitartarat Fonnule (I) (Genzyme Corp.. Cambridge, MA) kao komponentu ishrane peletiranom hranom. Lek se formuliše pri 0,15% (w/w) u standardnoj 5053 hrani za miševe (TestDiet. Richmond. IN) i da ad libitum. Ova formulacija obezbeduje 300 mg/kg hemitartarata Formule (I) na dan kod miša od 25 g.
Za studije kombinacione terapije, Fabri-Rag miševi se uključe u studiju sa 3 meseca starosti (model lečenja). Miševi u grupi A prime intravenozne injekcije rekombinantne humane alfa-galaktozidaze A (Genzvme Corp.) pri dozi od 1 mg/kg svaka 2 meseca (tj. 3, 5. 7 i 9 meseci stari). Grupa B primi iste intravenozne doze enzima plus primi hemitartarat Formule (1)
(Genzvme Corp.. Cambridge, MA) kao komponentu ishrane sa peletiranom hranom. Lek se formuliše pri 0,15% (w/w) u standardnoj 5053 hrani za miševe (TestDiet. Richmond. IN) i danoj ad libitum. Ova formulacija obezbeduje 300 mg/kg hemitartarata Formule (I) na dan kod miša od 25 g. Grupa C primi enzimske injekcije svaka 4 meseca (tj. 3 i 7 meseci stari) i boravi na istoj lek-u-hrani ishrani kao grupa B. Grupa D prima samo lek-u-hrani ishranu (isto kao grupe B i C). Grupa E su netretirani Fabri-Rag miševi i grupa F su kontrole divljeg tipa. Vidi SL. 10.
Kvantifikovanje tkivnih razina glohotriaosilceramida ( GL- 3, Gb3).Kvantifikovanje GL-3 se uradi sa tandem masenom spektrometrijom u suštini kao za GL-1.
Esej na vreloj ploči se izvede kako je prethodno opisano(Ziegler. RJ et al. Molec. Ther. 15(3), 492-500 (2007,1.
Rezultati
Monoterapija Fabri miševa sa hemitartaratom Formule (!)
SRT se proceni u mišjem modelu Fabrijeve bolesti, koja je uzrokovana deficijencijom aktivnosti a-galaktozidaze A. Terapija sa hemitartaratom Formule (I) otpočne sa jedan mesec starim Fabri miševima i nastavi se dok miševi ne dostignu jednu godinu starosti. Životinje se doziraju sa 300 mg/kg hemitartarata Formule (I) u njihovoj ishrani svaki dan. Bihavioralni testovi (tj. esej sa vrelom pločom) i biohemijski testovi (tj. analiza urina i analiza razina GL-3 u tkivima/krvi/urinu) miševa se izvedu dvomesečno.
Kako je prikazano na SLICI 7, primena hemitartarata Fonnule (I) na Fabri-Rag miševima tokom perioda od 11 meseci smanjila je stopu lizosomalne akumulacije globotriaosilceramida (GL-3) u somatskim organima (jetra, bubreg, srce i slezena) za približno 50%. lb je rezultiralo usporavanjem progresije bolesti kao što se vidi kasnijom pojavom neosetljivosti na odbojan stimulus toplotom (vidi SLIKU 8) i prevencijom pogoršanja faktora urinalize. npr. zapremine urina, razina kreatinina i natrijuma ( vidi SLIKU 9). Prema tome, hemitartaratom Formule (I) posredovana inhibicija glukozilceramid sintaze koja katalizuje prvi korak u sintezi glikosfingolipida nije korisna samo u životinjskim modelima Gošeove bolesti nego takođe i Fabrijeve bolesti, te može takođe da ima pozitivne efekte u drugim glikosfingolipidozama.
Kombinaciona terapija Fabri miševa sa a- gaiaktozidazom A i hemitartaratom Formule ( I)
Efikasnost ERT same i u kombinaciji sa SRT koristeći hemitartarat Formule (I) se proceni u pet populacija Fabri-Rag miševa (n=12/grupi).
Otpočevši sa tri meseca starosti, miševi se podvrgnu rasporedu bihavioralnih testova (tj. esej sa vrelom pločom) i biohemijskih testova (tj. analiza razine GL-3 u tkivima/krvi/urinu), kako je prikazano na SLICI 10. U miševa podvrgnutih ERT. 1 mg/kg doze (/-galaktozidaze A se primene po rasporedu kako je prikazano na SLICI 10. U miševa podvrgnutih SRT, 300 mg/kg doza hemitartarata Formule (I) se primene dnevno u ishrani miševa.
Kako je prikazano na SLICI 1 L ERT smanjuje razine GL-3 u krvi kod Fabri-Rag miševa, dok SRT ne. Kako je prikazano na SLICI 12. kombinacija ERT/SRT je najđelotvomija u smanjenju razina GL-3 u jetri i bubregu kod Fabri-Rag miševa.
Kako je prikazano na SLICI 13, SRT smanjuje razine GL-3 u urinu kod Fabri-Rag miševa, dok ERT ne. Kako je prikazano na SLICI 14. SRT ali ne i ERT odgađa početak neosetljivosti na toplotu kod Fabri-Rag miševa.
U rezimeu, Fabri-Rag miševi tretirani sa kombinacijom Fabrazyme-a i hemitartarata Formule (I) pokazuju poboljšanja u markerima bolesti u odnosu na ERT ili SRT same u modelu lečenja na sledeće načine: značajno smanjena akumulacija GL-3 u jetri i bubregu sa kombinacionom terapijom; poboljšan GL-3 u urinu kod SRT grupa; poboljšan GL-3 u krvi kod ERT grupa; i odgođena periferna neuropatija kod SRT grupa.
B. Gošeova bolest. Kako bi se utvrdilo da li sekvencijalno korišćenje kako enzimske zamenske terapije (ERT) tako i terapije redukcije supstrata (SRT) može da pruži dodatne koristi, upoređene su relativne delotvomosti zasebnih i sekvencijalne terapije u mišjem modelu Gošeove bolesti (D409V/nul).
Postupci
Studije na životinjama.Procedure koje uključuju životinje pregledane su i odobrene od strane Institucionalnog odbora za gajenje i korišćenje životinja (IACUC) pri Genzvme Corporation sledeći smernice izdane od Udruženja za procenu i akreditaciju gajenja laboratorijskih životinja (AAALAC). Goše miš (D409V/nul) je model Gošeove bolesti tipa 1 koji pokazuje akumulaciju glukozilceramida u jetri, slezeni i plućima ali nema patologije kostiju ili mozga (vidi Y-H. Xu. et al.. Am. J. Pathol. 163, 2003. 2093-2101). Životinje oba pola se uključe u studiju sa 3 meseca starosti, jer prethodni eksperimenti ukazuju kako nema razlike u odgovoru između mužjaka i ženki na rekombinantnu glukocerebrozidazu ili hemitartarat Formule (I). Studija ima 6 grupa miševa sa grupom A koja se žrtvuje nakon 2 sedmice da se dobiju osnovne razine glukozilceramida u tkivu. Grupe B, C i D sve prime rekombinantnu humanu glukocerebrozidazu (Genzvme Corp., Cambridge. MA) (lOmg/kg) intravenozno putem repne vene (100 uE) svaka 2 dana sa ukupno 8 injekcija. Grupa B se žrtvuje na kraju ovog režima (u isto vreme kao grupa A) da se dobiju enzimom smanjene razine glukozilceramida u tkivu. Grupe D i E se obe hrane hemitartaratom Formule (I) (Genzvme Corp., Cambridge, MA) kao komponentom ishrane peletiranom hranom. Lek se formuliše pri 0,075% (w/w) u standardnoj 5053 hrani za miševe (TestDiet. Richmond, IN) i dajead libitum.Ova formulacija obezbeduje 150 mg/kg hemitartarata Fonnule (I) na dan u mišu od 25 g. Grupa F ne prima tretman i žrtvuje se zajedno sa grupama C, D i E 12 sedmica nakon početka studije. Potrošnja hrane i težine miševa se prate tri puta po sedmici da se utvrdi unos leka i potencijalni uticaj leka na opšte zdravlje. Životinje se ubiju udisanjem ugljen dioksida i njihova se tkiva odmah uzmu. Polovina svakog tkiva se brzo zamrzne na suvom ledu i pohrani pri -80°C dok nije spremna za daljnju obradu. Druga polovina se obradi za histološku analizu.
Kvantifikovanje razina glukozilceramida u tkivuRazine glukozilceramida se kvantifikuju masenom spektrometrijom kako je prethodno opisano (vidi K. McEachern. et al., J. Gene. Med. 8 (2006) 719-729; T. Doering. J. Biol. Chem. 274 (1999) 11038-11045). Poznata masa tkiva se homogenizuje u 2:1 (v/v) hloroforrmmetanol i inkubira pri 37°C tokom 15 min. Uzorci se centrifugiraju i supernatanti se ekstrahiraju sa 0.2 zapremine vode preko noći pri 4°C. Uzorci se centrifugiraju, vodena faza se odbaci i organska faza osuši do filma pod azotom. Za analizu masenom spektrometrijom sa elektrosprej jonizovanjem (ESI/MS). uzorci tkiva se rekonstituišu do ekvivalenta od 50 ng originalne težine tkiva u 1 ml hloroforrnrmetanol (2:1, v/v) i vorteksuju tokom 5 min. Alikvoti (40 pL) svakog uzorka se stave u Waters vijale za potpuni povrat i doda se 50 uT 10 ug/mL d3-C16-GL-l internog standarda (Matreva, Inc., Pleasant Gap. PA). Uzorci se osuše pod azotom i rekonstituišu sa 200 juL 1:4 (v/v) DMSO:metanol. ESI/MS analiza glukozilceramida različitih dužina lanca ugljenika se izvede na Waters Alliance HPLC (separacioni modul 2695) spregnut sa Micromass Quattro Micro sistemom opremljenim sa elektrosprej jonskim izvorom. Uzorci ekstrakta lipida (20 uL) se injektiraju na C8 kolonu (4 mL X 3 mm u.p.: Phenomenex, Torrance. CA) pri 45°C i eluiraju sa gradijentom od 50 do 100%) acetonitrila (2mM amonijum acetat, 0.1 % mravlja kiselina) pri 0.5 mL/min. Prvi 0.5 min se drži pri 50% organskog i brzo prebaci do 100% tokom finalnih 3.5 min. Temperatura izvora se drži konstantnom pri 150°C i azot se koristi kao desolvacioni gas pri brzini toka od 670 L/h. Kapilarni napon se održava pri 3.80 KV sa naponom kupe od 23 V, dok je vreme zadržavanja za svaku jonsku vrstu 100 ms. Spektri se prikupe sa MRM načinom da se prati osam dominantnih izoformi (C16:0. C18:0. C20:0. C22:l. C22:0, C22:l-OH. C24:l i C24:0). Kvantifikovanje glukozilceramida se bazira na zbiru tih osam izoformi u odnosu na interni standard, sa kalibracionom krivom u rasponu od 0.1 do 10 ug/mL.
Histologija.Za histološku analizu, tkiva se fiksiraju u cink formalinu (Electron Microscopv Sciences, Hatfielđ, PA) pri sobnoj temperaturi tokom 24 h. zatim pohrane u PBS pri 4°C dok nisu spremna za daljnju obradu. Svi uzorci se dehidriraju u etanolu. prosvetle u ksilenima, infiltriraju i uklope u Surgipath R parafin (Surgipath. Richmond, IL). Rezovi od pet mikrona se iseku koristeći rotacioni mikrotom i osuše u pećnici pri 60°C pre bojanja. Rezovi se deparaflniziaju u Hemo-De (Scientific Safety Solvents, Keller. TX) i rehidriraju u opadajućim koncentracijama etanola nakon čega sledi ispiranje sa PBS. Rezovi se obojaju hematoksilinom i eozinom (H&E), te obeleže koristeći pacovsko anti-miš CD68 monoklonsko antitelo (Serotec. Raleigh, NC) da se identilikuju makrofagi. Nakon ispiranja tokom 5 min u PBS, preparati se dehidriraju u etanolu. te prosvetle u Hemo-De pre prekrivanja sa SHUR/Mount™ medijumom za postavljanje pokrovnog stakla (TBS. Durham. NC). Procenat područja CD68 imunopozitivnosti u jetri se kvantitlkuje koristeći MetaMorph (MDS Analytical Technologies. Toronto. Kanada) analizu deset 400X slika po tkivnom rezu. Od odbora certifikovani veterinarski patolog slep na oznaku grupe pregleda sve rezove.
Rezultati
Dozni režim glukocerebrozidaze za smanjenje mase nakupljenog ULI u jetri, slezeni i
plućima 3 meseca starih Goše miševa.Da se ispitaju relativne koristi kombinacione i monoterapije sa bilo enzimskom ili terapijom redukcije supstrata, prvo se utvrdi enzimski režim koji maksimalno snižava razine GL1 u visceralnim organima Goše miševa. Na tri meseca starim Goše miševima (D409V/nul) se intravenozno primeni 2. 4 ili 8 doza od 10 mg/kg rekombinantne humane glukocerebrozidaze. Miševi koji su tretirani sa 2 ili 4 doze enzima prime infuzije leka svaka 3 dana, dok oni koji su tretirani sa 8 doza prime enzim svaka 2 dana. Korišćenje kraćeg vremenskog intervala između infuzija kod životinja koje su primile 8 tretmana osmišljeno je da minimalizuje potencijalni učinak bilo kakvog imunskog odgovora na primenjeni humani enzim. Životinje se ubiju 7 dana nakon poslednje infuzije enzima i izmeri se količina GL1 preostalog u njihovim jetri, slezeni i plućima.
Tretman sa 2 doze glukocerebrozidaze smanjuje razine GL1 u jetri za 50%. Povećanje broja infuzija enzima na 4 ili 8. kako je očekivano, smanjuje razine GL1 u jetri u većoj meri (za približno 75%). Manje od potpunog snižavanja razina GL1, čak sa 8 doza, je konzistentno sa iskustvom kod Goše subjekata koji pokazuju kako je hepatosplenomegalija smanjena samo nakon dužeg perioda lečenja (vidi G.A. Grabovvski. et al.. Ann. Int. Med. 122 (1995) 33-39). Razine supstrata u slezenama Goše miševa su više refraktorne prema tretmanu enzimom. Primena 2 doze glukocerebrozidaze ne menja značajno razine GL1 od onih uočenih kod netretiranih kontrola. Povećanje broja infuzija enzima na 4 ili 8 smanjuje razine GL1 u slezeni za oko 50%. U plućima, smanjenje do približno 60% od netretirane kontrole uoči se nakon 8 doza. Nešto niži obim redukcije supstrata u plućima je verovatno zbog slabije dostupnosti infuziranog enzima lipidima nakrcanim alveolarnim makrofagima. Opažanje većeg GL1 klirensa u jetri u poređenju sa slezenom i plućima verovatno odražava biodistribuciju enzima nakon sistemske infuzije (vidi S.M. Van Patten. et al.. Glycobiology 17 (2007). 467-478). Na temelju tih rezultata, režim lečenja koji se sastoji od 8 uzastopnih doza od 10 mg/kg glukocerebrozidaze primenjenih u intervalima od 2 dana se koristi za naredne studije.
Relativne mogućnosti enzimske i terapije redukcijom supstrata u snižavanju razina GL l u
jetri Goše miševa.Kohorte 3 meseca starih Goše miševa tretiraju se sa bilo rekombinantnom glukocerebrozidazom ili hemitartaratom Formule (1) zasebno ili sekvencijalno. Miševima u grupama B, C i D da se 8 doza enzima kako je opisano iznad (tokom perioda od 2 sedmice) da se očisti nakupljeni GL1. Različite grupe se tada hrane bilo sa regularnom hranom ili hranom koja sadrži hemitartarat Formule (1) (150 mg/kg/dan) tokom dodatnih 10 sedmica uz grupu F koja ne prima tretman i služi kao netretirana kontrola. Bez obzira na formulaciju hrane, miševi su jeli slične količine hrane i nema uočl jivih razlika u dobijanju na težini. Približno 80% razina pohranjenog GL1 se očiste iz jetre nakon 2 sedmice enzimske terapije same. Kada se te životinje pustilo da napreduju bez daljnjeg lečenja tokom 10 sedmica, njihove razine GL1 u jetri su se povećale, upućujući na to da se u međuvremenu desila reakumulacija supstrata (Slika 2, stupac C). Te razine nisu značajno različite od onih kod netretiranih kontrola (Slika 2. stupac F). Međutim, ako se miševi tretiraju sa enzimom i zatim hemitartaratom Formule (I) u njihovoj hrani tokom perioda od 10 sedmica, njihove razine GL1 u jetri su značajno niže od netretiranih kontrola (Slika 2, stupci D & F). Ovaj rezultat sugeriše kako je dodatni tretman sa hemitartaratom Formule (I) usporio reakumulaciju supstrata. Interesantno, Goše miševi tretirani samo sa hemitartaratom Formule (I) tokom celokupnog perioda studije (12 sedmica) takođe pokazuju niže razine GL-1 (Slika 2. stupac E) u poređenju sa netretiranim kontrolama iste starosti (Slika 2. stupac F). iako razlika nije značajna. Mogućnost SRT same da smanji razine GL1 u ovom životinjskom modelu je konzistentna sa našim pređašnjim izveštajem (vidi K.A. McEachern. et al.. Mol. Genet. Metab. 91 (2007). 259-267) i verovatno odražava činjenicu kako Goše miševi (D4()9V/nul)
zadržavaju rezidualnu enzimsku aktivnost (vidi Y-H. Xu. et al., Ani. J. Pathol. 163, 2003, 2093-2101).
Relativne mogućnosti enzimske i terapije redukcijom supstrata u snižavanju razina GL1 u
slezeni Goše miševa.Tretiranje 3 meseca starih Goše miševa samo sa rekombinantnom glukocerebrozidazom tokom 2 sedmice smanjuje razine GL1 u slezeni za približno 60%
(Slika 3, stupac B). Kada se te životinje pusti da ostare dodatnih 10 sedmica bez daljnje intervencije, razine supstrata vrate su se na one uočene na početku studije (Slika 3, stupac C) i nisu značajno različite od netretirane kontrole (Slika 3. stupac F). Ovo sugeriše kako je brzina reakumulacije GL1 u slezeni viša od one u jetri. Ova pretpostavka je takođe podržana opažanjem viših bazalnih razina supstrata u slezeni (-1500 mg/g tkiva; Slika 2. stupac A) od onih u jetri (-500 mg/g tkiva; Slika 3, stupac A). Životinje koje su tretirane sa enzimom i zatim hemitartaratom Formule (I) tokom sledećih 10 sedmica pokazuju najveće smanjenje razina GL1 u slezeni (Slika 3, stupac D) i one su značajno niže od onih u slezenama netretirane kontrole (Slika 3. stupac F). Ovo upućuje na to kako upotreba SRT ne samo da usporava reakumulaciju supstrata, već takođe deluje da dodatno smanji teret nakupljanja u ovom organu. Čini se da barem u ovom slučaju krajnji efekat rezidualnog endogenog enzima i redukcije supstrata dovodi do daljnjeg pada u ukupnim razinama supstrata. Opažanje nižih razina GL1 u slezeni kod miševa tretiranih samo sa hemitartaratom Formule (I) tokom 12 sedmica (Slika 3. stupac E) nego onih u netretiranim kontrolama (Slika 3, stupac F) je konzistentno sa ovim mišljenjem, iako razlika nije značajna. Prema tome. u pacijenata sa blagom Gošeovom bolesti tipa 1 sa visokom rezidualnom aktivnošću enzima, lečenje sa ERT nakon čega sledi SRT, može potencijalno da ubrza stopu i možda čak obim uklanjanja štetnog supstrata.
Relativne mogućnosti enzimske i terapije redukcijom supstrata u snižavanju razina GL l u
plućima Goše miševa.Kako je navedeno ranije, razine GL1 u plućima se najmanje delotvorno uklanjaju intravenoznom primenom rekombinantne glukocerebrozidaze. Tretman 3 meseca starih Goše miševa sa enzimom tokom 2 sedmice rezultuje u samo 30% smanjenja razina supstrata u plućima (Slika 4. stupac B). Kohorta životinja hranjenih normalnom hranom tokom sledećih 10 sedmica pokazuje, kako je očekivano, reakumulaciju GL1 i razine nisu značajno različite od razina kod netretiranih (Slika 4, stupac C & F). Suprotno tome, životinje hranjene hranom koja sadrži hemitartarat Formule (I) tokom istog međuperioda pokazuju smanjenje u razinama supstrata do ispod onih kod životinja na kojima je primenjen
samo enzim (Slika 4. stupac D) i značajno su niže od onih kod netretiranih kontrola (Slika 4. stupac Fj. Ponovo, ovo sugeriše kako u plućima, kao i u slezeni, krajnji efekt hemitartarata Formule (I) (u prisustvu rezidualne endogene enzimske aktivnosti) ne samo da usporava reakumulaciju GL1, već takođe deluje da dodatno smanji razine do ispod početnih razina. Kao i kod drugih visceralnih organa, tretman samo sa hemitartaratom Formule (I) je delotvoran u snižavanju razina GL1 u plućima (Slika 4. stupac E) u poređenju sa netretiranim kontrolama (Slika 4, stupac F).
Histopatološka analiza jetre Goše miševa nakon enzimskog i lečenja redukcijom supstrata.
Kako bi se vizualizirali efekti različitih terapijskih režima u jetri, tkivni rezovi se obojaju na CD68. marker makrofaga. Analiza rezova jetre od netretiranih 3 meseca starih Goše miševa pokazuje prisutnost velikog broja lipidima napunjenih. CD68-pozitivnih Goše ćelija koje ostaju uglavno nepromenjene kada se analizuju 12 sedmica kasnije. Konzistentno sa biohemijskim podacima iznad, jetre životinja na kojima je primenjena rekombinantna glukocerebrozidaza tokom perioda od 2 sedmice pokazuju značajni kiirens lipida u tim abnormalnim makrofagima. Ako se ove životinje pusti da ostare dodatnih 10 sedmica bez daljnjeg tretmana, pojavi se dokaz reakumulacije GL1 na što upućuje ponovna pojava Goše ćelija. Međutim, ovo povećanje u broju Goše ćelija se ne dešava ako je miševima dana terapija redukcije supstrata sa hemitartaratom Formule ( I) tokom istog međuperioda. Kako je ranije navedeno, Goše miševi koji su primili samo hemitartarat Formule (1) takođe pokazuju smanjenu akumulaciju supstrata, iako ne istog obima kao oni koji su primili kombinaciju F.RT i SRT. Obim CD68-pozitivnog bojanja na različitim rezovima takođe se kvantilikuje koristeći MetaMorph program (Slika 18). Stepen bojanja kod ovih odražava razine GL1 u jetri utvrđene biohemijski (Slika 15). nadalje podržavajući sugestiju o relativnim koristima različitih režima lečenja.
Primer 8: Efikasnost hemitartarata Formule ( 1) u mišjem modelu Gošeove bolesti
Studije na životinjama.Procedure koje uključuju životinje pregledane su i odobrene od strane Institucionalnog odbora za gajenje i korišćenje životinja (IACUC) sledeći smernice Udruženja za procenu i akređitaciju gajenja laboratorijskih životinja (AAALAC), te državne i savezne smernice.Goše gbam( m' im]miševi (Vidi Y.-H. Xu. et al.. Am. J. Pathol. 163 (2003). 2093-2101) se ostave da postanu zreli prema zahtevima studije. Nije nađena razlika u fenotipu ili odgovoru na hemitartarat Formule (I) između mužjaka i ženki, pa se oba pola koriste u studijama. Dostava hemitartarata Fonnule (!) uradi se jednom oralnom gavažom dnevno pri zapremini od 10 mL/kg. Životinje se navikne na oralnu gavažu sa sličnom zapreminom vode tokom jedne sedmice pre početka tretmana. Hemitartarat Fonnule (I) se rastvori u vodi za injekcije (WFI; VWR. West Chester. PA) i primeni uz eskalaciju doze od 75 mg/kg/dan do 150 mg/kg/dan tokom devet dana, sa tri dana između svake doze i inkrementima od 25 mg/kg/dan. Miševi se važu tri puta po sedmici da se prati potencijalni efekt leka na njihovo ukupno zdravlje. Životinje se ubiju udisanjem ugljen dioksida i njihova se tkiva odmah uzmu. Polovina svakog tkiva se brzo zamrzne na suvom ledu i pohrani pri - 80°C dok nije spremna za daljnju obradu. Druga polovina se sakupi za histološku analizu.
Kvantifikovanje ikivnih razina glukozilceramida sa tankoslojnom hromatografijom visoke
performanse.Analize tankoslojnom hromatografijom visoke performanse (HP-TLC) su kako je opisano (A. Abe. et al., J. Clin. Inv. 105 (2000), 1 56.1-1571; H. Zhao, et al.. Diabetes 56
(2007), 1341-1349; i S.P.F. Miller et al., J. Lab. Clin. Med. 127 (1996), 353-358). Ukratko, frakcija ukupnih lipida se dobije homogenizovanjem tkiva u hladnom PBS. ekstrahiranjem sa 2:1 (v/v) hloroforrmmetanol i sonifikovanjem sonifikatorom sa vodenim kupatilom. Uzorci se centrifugiraju da se razdvoje faze i supernatant se sačuva. Taloži se resonificiraju u hloroform:metanol:rastvor soli. centrifugitaju, te se nastali drugi supernatant sakupi i kombinuje sa prvim. Kombinovanim supernatantima doda se 1:1 (v/v) hlorofonn:rastvor soli smeša, vorteksuje i centrifugira. Nakon uklanjanja gornjeg vodenog sloja, doda se metanokrastvor soli, vorteksuje i ponovo centrifugira. Organska faza se odvoji i osuši pod azotom, rastvori u 2:1 (v/v) hloroforrmmetanol pri 1 mL po 0.1 g originalne težine tkiva i pohrani pri -20 °C.
Deo ekstrakta lipida se koristi da se izmeri ukupni fosfat. (Vidi B.N. Ames, Methods Enzvmol. 8 (1966), 115-118). tj. fosfolipidna sadržina za korišćenje kao interni standard. Ostatak se podvrgne alkalnoj metanolizi da se uklone fosfolipidi koji migriraju sa glukozilceramidom na HP-TLC ploči. Alikvoti ekstrakata koji sadrže ekvivalentne količine ukupnog fosfata se nanesu na HP-TLC ploču zajedno sa poznatim glukozilceramid standardima (Matreva ine. Pleasant Gap. PA). Lipidi se resolviraju i vizualiziraju sa 3% bakar(II) acetat monohidratom (w/v). Nakon 15% fosforne kiseline (v/v). sledi pečenje tokom 10 min pri 150 °C. Zone lipida skeniraju se na denzitometru (GS-700, Bio-Rad. Hercules, CA) i analiziraju Quantity One programom (Bio-Rad).
Kvantifikovanje tkivnih razina glukozilceramida masenom spektrometrijom.Glukozilceramid se kvantifikuje masenom spektrometrijom kako je opisano. (Vidi K. McEachern et al., J. Gene Med. 8 (2006), 719-729; T. Doering et al.. J. Biol. Chem. 274 (1999), 11038-11045). Tkivo se homogenizuje u 2:1 (v/v) hloroform:metanol i inkubira pri 37 °C. Uzorci se centrifugiraju i supernatanti se ekstrahiraju sa 0.2 zapremine vode preko noći. Uzorci se centrifugiraju ponovo, vodena faza se odbaci i organska faza osuši do tlima pod azotom.
Za analizu masenom spektrometrijom sa elektrosprej jonizovanjem (ESI/MS). uzorci tkiva se rekonstituišu do ekvivalenta od 50 ng originalne težine tkiva u 1 mL hloroform/metanol (2:1. v/v) i vorteksuju tokom 5 min. Alikvoti svakog uzorka (40 uL) se stave u VVaters vijale za potpuni povrat i doda se 50 uL 10 ug/mL d3-C16-GL-I internog standarda (Matreva, Inc.. Pleasant Gap. PA). Uzorci se osuše pod azotom i rekonstituišu sa 200 uL 1:4 DMSO:metanol. ESI/MS analiza glukozilceramida različitih dužina lanca ugljenika se izvede na Waters Alliance HPLC (separacioni modul 2695) spregnut sa Micromass Quattro Micro sistemom opremljenim sa elektrosprej jonskim izvorom. Dvadeset mikrolitara uzoraka ekstrakta lipida se injektiraju na C8 kolonu (4 ml x 3 mm u.p.: Phenomenex, Tonance. CA) pri 45 °C i eluiraju sa gradijentom od 50-100% acetonitrila (2 mM amonijum acetat. 0.1% mravlje kiseline) pri 0,5 mL/min. Prvih 0.5 min se drži pri 50% organskog i zatim brzo prebaci do 100% tokom finalnih 3,5 min. Temperatura izvora se drži konstantnom pri 150 °C i azot se koristi kao desolvacioni gas pri brzini toka od 670 L/h. Kapilarni napon se održava pri 3,80 KV uz napon kupe od 23 V. dok je vreme zadržavanja za svaku jonsku vrstu 100 ms. Spektri se prikupe sa MRM načinom da se prati osam dominantnih izoformi (Cl6:0. C18:0, C20:0, C22:l. C22:0. C22:l-OH, C24:l i C24:0). Kvantifikovanje glukozilceramida se bazira na zbiru tih osam izoformi u odnosu na interni standard, sa kalibracionom krivom u rasponu od 0,1 do 10 ug/mL.
Histologija.Za histološku analizu, tkiva se fiksiraju u cink formalinu (Electron Microscopv Sciences. Hatfield. PA) pri sobnoj temperaturi tokom 24 h. zatim pohrane u PBS pri 4 °C dok nisu spremna za daljnju obradu. Svi uzorci se dehidriraju u rastućim koncentracijama alkohola, prosvetle u ksilenima i infiltriraju, te uklope u Surgipath R parafin (Surgipath. Richmond, IL). Rezovi od pet mikrona se iseku koristeći rotacioni mikrotom i osuše u pećnici pri 60°C pre bojanja. Rezovi se deparafiniziraju u ksilenima i rehidriraju u opadajućim koncentracijama alkohola, nakon čega usledi ispiranje vodom. Nakon 1 min ispiranja u 3% sirćetnoj kiselini, preparati se bojaju tokom 40 min sa 1% Alcian Blue 8GX (Electron Microscopv Sciences) u 3% sirćetnoj kiselini pH 2.0. Nakon ispiranja u vodi i oksidovanja u 1% perjodnoj kiselini tokom 1 min, preparati se bojaju sa Šifovim reagensom (Surgipath) tokom 12 min. Nakon ispiranja tokom 5 min u vreloj vodi. preparati se dehidriraju u alkoholu i prosvetle u ksilenima pre prekrivanja sa SHUR/A/uz/w/'<M>medijumom za postavljanje pokrovnog stakla (TBS, Durham. NC). Goše ćelije identifikovane morfološki u jetri se kvantifikuju koristeći ručni brojač ćelija na 10 polja pri velikom povećanju (HPF. 400x).
Rezultati
Efekt primene hemitartarata Formule ( I) na D4() 9Vimil miševima.Proceni se efekt primene
hemitartarata Fonnule (I) na D409V/nul miševima. Na približno 7 meseci starim miševima se primeni 150 mg/kg/dan hemitartarata Formule (I) (doza za koju se u preliminarnim studijama pokazalo daje delotvorna u inhibisanju glukozilceramid sintaze) oralnom gavažom tokom 10 sedmica. Ovaj tretman nema uočljivih efekata na dobrobit ili prehrambene navike miševa.
Merenja njihove telesne težine tokom studije ne pokazuju značajno odstupanje od one netretiranih miševa, sugerišući kako se hemitartarat Formule (I) dobro podnosi pri dozi za koju se pokazalo da je delotvorna u inhibisanju sintaze.
Efikasnost hemitartarata Formule ( l) u lećenju mladih, presimpt ornat skih Goše miševa.
Hemitartarat Fonnule (I) se proceni za smanjenje lizosomalne akumulacije glukozilceramida i pojavu Goše ćelija u mladih (10 sedmica starih) D409V/nul miševa. Ovi mladi Goše miševi pokazuju niske razine GL-1 u pogođenim tkivima. Na deset sedmica starim životinjama primeni se bilo 75 ili 150 mg/kg/dan hemitartarata Fonnule (I) oralnom gavažom tokom 10 sedmica. Merenje razina glukozilceramida pokazuje o dozi zavisno smanjenje u poređenju sa nosačem tretiranim kontrolama iste starosti. U kohorti koja se tretira sa 150 mg/kg/dan. razine glukozilceramida su 60, 40 i 75% onih kod kontrola, u jetri, plućima i slezeni, odnosno (SL. 6). Statistički značajno niže razine glukozilceramida uočene u jetri i plućima tretiranih D409V/nul miševa upućuju na to daje hemitartarat Formule (I) delotvoran u smanjivanju akumulacije tog glikosfingolipida u ovim tkivima.
Histopatološka procena jetri netretiranih D409V/nul miševa na kraju studija (20 sedmica starosti) pokazuje prisutnost Goše ćelija širom jetre. Miševi tretirani sa 150 mg/kg/dan hemitartarata Formule (1) tokom 10 sedmica pokazuju samo povremeno prisustvo Goše ćelija koje su takođe uvek manje veličinom. Kvantifikovanje ovih ćelija u više različitih rezova potvrđuje kako je frekvencija Goše ćelija značajno niža kod hemitartaratom Formule (I) tretiranih miševa. Zajedno, ovi biohemijski i histološki nalazi sugerišu kako je dnevna oralna primena hemitartarata Formule (I) na presimptomatskim Goše miševima delotvorna u smanjivanju akumulacije glukozilceramida u pogođenim tkivima i posledičnog formiranja Goše ćelija u jetri.
Efikasnost hemitartarata Formule ( I) u tretiranju statijih Goše miševa sa već postojećom
patologijom.Takođe se proceni efikasnost hemitartarata f ormule (1) u zaustavljanju ili preokretanju progresije bolesti u starijih, simptomatskih Goše miševa. Na sedam meseci starim D409V/nul miševima primeni se 150 mg/kg/dan hemitartarata Formule (I) oralnom gavažom tokom 10 sedmica. Analize razina glukozilceramida u jetri, plućima i slezeni tretiranih miševa pri 5 i 10 sedmica nakon tretmana pokazuju kako se one nisu povećale iznad onih uočenih na početku studije. Nakon 10 sedmica tretmana, za razine glukozilceramida se utvrdi da su 60% niže u jetri. 50% niže u plućima i 40% nže u slezeni nego kod nosačem tretiranih miševa. Ovi rezultati pokazuju kako je hemitartarat Formule (I) delotvoran u inhibisanju daljnje akumulacije glukozilceramida kod miševa sa postojećim opterećenjem patologije nakupljanja.
Histopatološka analiza tkivnih rezova pokazuje smanjen broj Goše ćelija u jetri tretiranih D409V/nul miševa u poređenju sa netretiranim kontrolama. Kvantifikovanje broja Goše ćelija potvrđuje biohemijske nalaze; tretirani D409V/nul miševi pokazuju brojeve Goše ćelija koji nisu značajno različiti od onih na početku tretmana pri obe vremenske tačke od 5 i 10 sedmica. Brojevi Goše ćelija pri obe ove vremenske tačke su značajno niži od onih kod netretiranih D409V/nul miševa. Zajedno, ovi podaci pokazuju kako hemitartarat Formule (1) delotvorno inhibiše daljnju akumulaciju glukozilceramida i razvoj Goše ćelija kod životinja sa već postojećom patologijom.
Diskusija
Hemitartarat Formule (I) pokazuje visok stepen specifičnosti prema enzimu glukozilceramid sintazi. Takođe. nema merljive inhibicije aktivnosti glukocerebrozidaze pri delotvornoj dozi. što je važana osobina kada se leče pacijenti sa Gošeovom bolesti tipa 1. većina kojih zadrži rezidualnu aktivnost glukocerebrozidaze. Pri delotvornoj dozi od 150 mg/kg/dan, nema uočljivih gastrointestinalnih problema i nema razlike u telesnim težinama između tretirane i kontrolne netretirane grupe. Serumske koncentracije pri i iznad IC50(24-40 nM) se lako dosegnu sa oralnim dozama koje su ispod najveće tolerisane razine. Hemitartarat Fonnule (1) se takođe lako metabolizuje i izbaci: i početno jedinjenje i metaboliti se delotvorno izbace unutar 24 h kako je prikazano u ADME studijama pojedine i ponovljene oralne doze sa 14C-radioobeleženim jedinjenjem kod pacova i pasa.
Koristećenje neoptimizovanog doznog režima od jedne oralne gavaže dnevno uspešno preveniše akumulaciju glukozilceramida kako kod mladih, presimptomatskih miševa, tako i kod starijih Goše miševa koji već pokazuju patologiju nakupljanja. Mladi. 10 sedmica stari miševi, iako poseduju povišene razine glukozilceramida u odnosu na kontrole divljeg tipa, nisu još razvili karakteristične povećane tkivne makrofage. nazvane Goše ćelijama. Tretman sa 150 mg/kg/dan hemitartarata Formule (I) zaustavi svaku merljivu progresiju bolesti i inhibiše razvoj Goše ćelija. Kod starijih miševa koji pokazuju više razinu lizosomalnog glukozilceramida i broj Goše ćelija, nema daljnjeg povećanja u razinama glikosfingolipida ili broju ćelija sa nakupljanjem bilo nakon 5 sedmica ili 10 sedmica tretmana. Kako je za glavni izvor glukozilceramida u Goše ćelijama izvešćeno da je vanćelijskog porekla, ovi rezultati upućuju na to kako je inhibicija glukozilceramid sintaze hemitartaratom Formule (I) sistemska.
Opažanje kako je hemitartarat Formule (I) delotvoran u prevenciji daljnje akumulacije glukozilceramida sugeriše terapijsku strategiju koja bi mogla nadalje da pojača lečenje Gošeove bolesti.
Rezimirano, ovde predstavljeni podaci pokazuju kako je hemitartarat Formule (I) aktivan i specifični inhibitor glukozilceramid sintaze koji ne pokazuje očite nuspojave u mišjem modelu Gošeove bolesti. Uspešno je sprečio progresiju bolesti kako u presimptomatskih. tako i u starijih bolesnih Goše miševa inhibicijom akumulacije glukozilceramida i formiranja Goše ćelija. Ovi nalazi sugerišu kako hemitartarat Formule (1) može da predstavlja još jednu terapijsku opciju za Gošeovu bolest tipa 1 kako kod pedijatrijskih, tako i kod odraslih slučajeva, te potencijalno za druge poremećaje nakupljanja glikosfingolipida.
Primer 9: Faza 2 kliničkog ispitivanja hemitartarata Formule ( 1)
Postupci.U ovom kliničkom ispitivanju hemitartarata Formule (I), danog 50 ili 100 mg bid oralno, tretirano je 26 odraslih sa Gošeovom bolesti tipa 1 (GDI) (16F:10M; prosečna starost 34 godine, raspon 18-60; svi belci) na 7 lokacija u 5 zemalja. Pacijenti su imali splenomegaliju (zapremina 10 normalnih) i bilo trombocitopeniju (trombociti 45 000-100 000/mm<3>) ili anemiju (hemoglobin 8-10 g/dl žene; 8-11 g/dl muškarci). Niti jedan nije primio enzimsku zamensku ili terapiju redukcije supstrata u prethodnih 12 meseci. Kompozitna primarna krajnja tačka efikasnosti je razina globina (+0,5 g/dl) ili broj trombocita (+15 %) nakon 52 sedmice lečenja. Također se procene zapremina jetre, hitotriozidaza, glukozilceramid. Pacijente se nastavi lečiti i pratiti na duži rok.
Rezultati.Podaci iz 52. sedmice dosupni su za 20 pacijenata; 4 druga povukla su se prerano i 2 su još bila u toku studije. Kompozitnu primarnu krajnju tačku postiglo je 19 od 20 pacijenata. Prosečne (1SD) promene od osnovnih vrednosti u 52. sedmici bile su: hemoglobin + 1,6 (11.35) g/dL; broj trombocita +43.6% {137,59%): zapremina slezene i jetre (količnici normale) 40,2% (110.44%) i 15.8% (110,39%), odnosno; te hitotriozidaza 49.9% (120.75 %). Razine glukozilceramida u plazmi normalizuju se nakon 4 sedmice kod svih pacijenata, hemitartarat Formule (I) se dobro podnosi sa prihvatljivim bezbedonosnim profilom. Za sedam povezanih štetnih događaja u 6 pacijenata izvešćenoje da su povezani; svi su blagi i prolazne prirode.
Primer 10: Farmaceutska kompozicija hemitartarata Formule ( I), 100 mg kapsule
Postupak pripreme kapsula od 100 mg:Hemitartarat Formule (1), mikrokristalna cel uloza, laktoza monohidrat i hipromeloza. E15 se zasebno propuste kroz 20 mesh sito. Količine prosejanih sastojaka navedene u Tabeli 9 se pomešaju u granulatoru visokog smicanja tokom devet do dvanaest minuta.
Sastojci se zatim vlažno granulišu dodavanjem prečišćene vode {2.2 kg; 11,7% težine suvih sastojaka) u zdelu granulatora do završetka, kako se vizualno potvrdi. Vlažna granulacija se izbaci iz zdele i propusti kroz rotirajući impeler, prosejavajući mlin. Vlažna granulacija sc zatim osuši u pećnici za sušenje čvrste supstance u pliticama sa ležištem i direktnim grejanjem. statičkoj, pri 50±5°C. do sadržine vlažnosti od ne više od 3,5%. kako se potvrdi proverom tokom procesa. Suve granule se zatim propuste kroz prosejavajući mlin. te se prosejane granule prenesu u V-blender. Gliceril behenat (0.2 kg) se doda u V-blender i finalna mešavina se meša dok mešavina nije jednolika, kako se utvrdi testom jednolikosti mešavine na liniji ili dalje od linije, tipično tokom deset do dvadeset minuta. Finalna mešavina se zatim enkapsulira u kapsule veličine #2 koristeći poluautomatski punjač kapsula do odgovarajuće težine punjenja (270 mg prosečno), te se napunjene kapsule očiste od praha pre pakovanja.
Primer 11 A: Farmaceutska kompozicija hemitartarata Formule ( I), 10 mg kapsule
Postupak pripreme kapsula od 10 mg:Procedura Primera 10 se sledi sve do koraka enkapsulacije. Da se proizvede kapsula od 10 mg. finalana mešavina se enkapsulira u kapsulu veličine #4 ili #5 koristeći mašinu za punjenje kapsula do odgovarajuće težine punjenja (27 mg prosečno), te se napunjene kapsule očiste od praha pre pakovanja.
Primer 11B: Farmaceutska kompozicija hemitartarata Formule ( I), 50 mg kapsule
Postupak pripreme kapsula od 50 mg:Procedura Primera 10 se sledi sve do koraka enkapsulacije. Da se proizvede kapsula od 50 mg. finalana mešavina se enkapsulira u kapsulu veličine #3 koristeći mašinu za punjenje kapsula do odgovarajuće težine punjenja (135 mg prosečno). te se napunjene kapsule očiste od praha pre pakovanja.
Primer 11C: Farmaceutska kompozicija hemitartarata Formule ( 1), 150 mg kapsule
Postupak pripreme kapsula od 150 mg:Procedura Primera 10 se sledi sve do koraka enkapsulacije. Da se proizvede kapsula od 150 mg, finalana mešavina se enkapsulira u kapsulu veličine #0 koristeći mašinu za punjenje kapsula do odgovarajuće težine punjenja {405 mg prosečno). te se napunjene kapsule očiste od praha pre pakovanja.
Primer 12: Farmaceutska kompozicija hemitartarata Formule ( I), 25 mg kapsule
Postupak pripreme kapsula od 25 mg:Procedura Primera 10 se sledi sve do koraka enkapsulacije. Da se proizvede kapsula od 25 mg. finalana mešavina se enkapsulira u kapsulu veličine #4 koristeći mašinu za punjenje kapsula do odgovarajuće težine punjenja (67.5 mg prosečno), te se napunjene kapsule očiste od praha pre pakovanja.
Primer 13: Interakcije leka hemitartarata Formule ( I)-CYP2D6 inhibitori
Izvede se studija da se procene fannakokinetika. bezbednost i tolerabilnost višestrukih oralnih doza hemitartarata Formule (I) (100 mg BID) primenjenih sa i bez paroksetina (30 mg jednom dnevno), snažnog inhibitora CYP2D6. To je otvorena studija sa fiksnom sekvencom kod 36 zdravih subjekata (17 muških i 19 ženskih). Sekundarni ciljevi su proceniti PK paroksetina u kombinaciji sa višestrukim dozama hemitartarata Formule (I) (100 mg BID) kod zdravih subjekata, te nadalje proceniti PK hemitartarata Formule (1) nakon višestruke doze u poređenju sa primenom jedne doze hemitartarata Formule (I).
Srednje vrednosti PK parametera slobodne baze hemitartarata Formule (I) kako postoji u plazmi su nelinearne i pokazuju 2-ostruku akumulaciju u AUC i Cmaxuz ponovljenu primenu (100 mg BID) u poređenju sa primenom jedne doze. Istovremena primena hemitartarata Formule (1) i paroksetina rezultuje u 7-ostrukom povećanju Cmaxi 9-orostrukom povećanju AUC u poređenju sa primenom višestruke doze hemitartarata Formule (I) samog. Ti rezultati upućuju na to kako paroksetin može da inhibiše metabolizam hemitartarata Formule (I) i povećava koncentracije leka u krvnoj plazmi. Slični efekti se očekuju sa drugim snažnim CYP2D6 inhibitorima (npr. fiuoksetin i kvinidin). te su pažljivo praćenje razina leka u plazmi i potencijalne prilagodbe doze neophodni kada se hemitartarat Formule (I) primenjuje zajedno sa lekom za kojeg se zna da je snažan CYP2D6 inhibitor. Koncentracije paroksetina su oko 1,5 do 2 puta više od očekivanih što sugeriše kako je hemitartarat Formule (I) ili jedan od njegovih metabolita možda blagi inhibitor CYP2D6.
Primer 14: Interakcije leka hemitartarata Formule ( I) - CYP3A4 inhibitori i p-glikoprotein ( PGP) inhibitori
Izvede se studija da se procene farmakokinetika, bezbednost i tolerabilnost višestrukih doza hemitartarata Formule (I) (100 mg dvaput dnevno) sa i bez višestruke doze ketokonazola (400 mg jedanput dnevno) kod zdravih muških i ženskih subjekata. To je otvorena studija sa fiksnom sekvencom kod 36 zdravih subjekata (18 muških i ženskih) koja se sastoji od 3 perioda koji uključuju primenu jedne doze od 100 mg hemitartarata Formule (I), primene višestruke doze hemitartarata Formule (I) i istovremene primene hemitartarata Formule (I) 100 mg (dvaput dnevno) sa 400 mg ketokonazola (jednom dnevno). Ponovljena primena hemitartarata Formule (I) i ketokonazola. jakog inhibitora citohrom p450 3A4 ("CYP 3A4") i p-glikoproteina. rezultuje u 4-ostrukom povećanju izlaganja slobodnoj bazi hemitartarata Formule (I) kako postoji u plazmi u stanju ravnoteže. Prema tome. pacijenti koji već primaju hemitartarat Formule (I) mogu zahtevati privremenu redukciju doze dok su na istovremenoj terapiji sa jakim inhibitorima CYP 3A4 ili p-glikoproteina.
Primer 15: Studije stabilnosti za formulaciju hemitartarata Formule (I)
Mešavine se pripreme umešavanjem hemitartarata Formule (I) i ekscipijensa, laktoza monohidrata kapsulirajuće čistoće. Avicel PH 301 (mikrokristalna celuloza) i Methocel E15 Prem LV (hidroksipropilmetilceluloza) u scintilacionoj vijah pri opsegu od otprilike dva grama. 15,6% vode se doda u mešavinu i meša da se formiraju vlažne granule. Vlažne granule se proseju koristeći #10 sito (otvor 2000 mikrona). Prosejane granule se zatim osuše u pećnici pri 50°C tokom 2 časa. Suve granule se proseju koristeći #18 sito (otvor 1000 mikrona). Lubrikant, gliceril behenat. se doda u mešavinu i meša da se formira finalna mešavina. Pripremljene mešavine su prikazane u tabeli ispod:
Metocel (HPMC) se koristi u rasponu od 2 to 4%
Kompritol ATO 88 se koristi u rasponu od 1 to 1,6%
Sedam mešavina formulacije, koje imaju različite API:laktoza:Avicel razmere navedene iznad, izlože se visokoj temperaturi pri 85°C tokom 3 dana (uslovi studije forsirane degradacije) kako bi se shvatila stopa degradacije i stabilnost svake formulacije. Ovi ubrzani uslovi se odaberu na temelju rezultata studije koja je pokazala kako je obim degradacionih produkata 50 mg proizvoda leka pri 24 meseca sličan onima dobijenim pri 85°C tokom 3 dana.
Studija forsirane degradacije se izvede koristeći reverzno-fazni gradijentni HPLC postupak koji koristi Cl8 kolonu (Waters T3, 3 um, 100 x 4,6 mm), mobilne faze se sastoje od vode i acetonitrila sa 0,1% trifluorosirćetne kiseline (TFA), UV detekcija je pri 280 nm. temperatura kolone pri 40°C i brzina toka pri 2 mL/min. Gradijent otpočne zadržavanjem pri 5% B (acetonitril i 0,1 % TFA) tokom 0,5 minuta i zatim povećavanjem organske komponente pri 4.83% B po minutu sve do 15 minuta.
Ukupni produkti degradacije svake mešavine formulacije se rezimiraju i iscrtaju naprema razmeru API: laktoza:Avicel, te su rezultati prikazani na Slici 15. Rezultati studije sugerišu kako uz održavanje razmera API i laktoze konstantnima, smanjenje količine Avicel-a poboljšava stabilnost formulacije. Kada se Avicel ukloni, formulacija poseduje API:laktoza:Avicel razmer od 1:2.1:0. to je najstabilnija formulacija. Kada se ukloni laktoza. formulacija poseduje API:laktoza:Avicel razmer od 1:0:2.1 i ova formulacija nije najnestabilnija u poređenju sa drugim razmerima. Kombinovane informacije sugerišu kako laktoza stabilizuje formulaciju, dok Avicel destabilizuje formulaciju. Međutim, kada su prisutna oba ekscipijensa, oni reaguju jedan sa drugim. Razmer mora da se podesi kako bi se dobila stabilna formulacija.
Za aktivne farmaceutske sastojke poput hemihidrata Formule (1) koji su rastvorni u vodi. mikrokristalna celuloza pomaže u formiranju granula tokom vlažne granulacije budući je nerastvorna u vodi. Ako se mikrokristalna celuloza ne koristi, dešava se nagla pramena od oblika granule do oblika paste. Oblik paste je težak za rukovanje te nastale čestice nakon sušenja ne poseduju podesnu mehaničku snagu i distribuciju veličine čestica. Farmaceutska kompozicija koja sadrži 37 tež% hemitartarata Formule (I), 41.0 tež% u vodi rastvornog punioca: 16.7 tež% nerastvornog punioca, 2 tež% do oko 6 tež% veziva; i oko 0.1 tež% do oko 2 tež% lubrikanta. sve na bazi suvih čvrstih supstanci, poseduje najbolji profil stabilnosti u odnosu prema količini formiranih produkata degradacije.

Claims (19)

1. Prvi terapijski agens predstavljen sledećom strukturalnom rormulom: ili farmaceutski prihvatljiva so od toga, naznačeni time što su za korišćenje u lecenju Gošeove bolesti. u čemu pomenuto lečenje obuhvata primenu delotvorne količine prvog terapijskog agensa u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa koji je delotvoran za lečenje Gošeove bolesti.
2. Korišćenje prvog terapijskog agensa predstavljenog sledećom strukturalnom formulom: ili farmaceutski prihvatljive soli od toga, naznačeno time što je za proizvodnju medikamenta za korišćenje u lečenju Gošeove bolesti, u čemu pomenuto lečenje obuhvata primenu delotvorne količine prvog terapijskog agensa u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa koji je delotvoran za lečenje Gošeove bolesti.
3. Jedinjenje za korišćenje prema Patentnom zahtevu 1 ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 2, naznačeno time što se drugi terapijski agens odabere između glukocerebrozidaze. analoga glukocerebrozidaze, inhibitora glukozilceramid sintaze i molekulskih šaperona koji se vežu na glukocerebrozidazu i obnavljaju njenu ispravnu konformaciju.
4.Jedinjenje za korišćenje prema Patentnom zahtevu 1 ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 2, naznačeno time što drugi terapijski agens je imigluceraza. izofagomin, miglustat, taligluceraza alfa ili velagluceraza alfa.
5. Prvi terapijski agens predstavljen sa sledećom strukturalnom formulom: ili farmaceutski prihvatljiva so od toga. naznačeni time što su za korišćenje u lečenju Fabrijeve bolesti, u čemu pomenuto lečenje obuhvata primenu delotvorne količine prvog terapijskog agensa u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa koji je delotvoran za lečenje Fabrijeve bolesti.
6. Korišćenje prvog terapijskog agensa predstavljenog sledećom strukturalnom formulom: ili farmaceutski prihvatljive soli od toga, naznačeno time sto je za proizvodnju medikamenta za korišćenje u lečenju Fabrijeve bolesti. u čemu pomenuto lečenje obuhvata primenu delotvorne količine prvog terapijskog agensa u kombinaciji sa delotvornom količinom drugog terapijskog agensa koji je delotvoran za lečenje Fabrijeve bolesti.
7. Jedinjenje za korišćenje prema Patentnom zahtevu 5 ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 6, naznačeni time što se drugi terapijski agens odabere između a galaktozidaze A. analoga a galaktozidaze A i molekulskih šaperona koji se vežu na a galaktozidazu A i obnavljaju njenu ispravnu konformaciju.
8. Jedinjenje za korišćenje prema Patentnom zahtevu 5 ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 6, naznačeni time što drugi terapijski agens je migalastat. agalzidaza beta ili agalzidaza alfa.
9. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema bilo kojem od Patentnih zahteva 1 do 8. naznačeni time što se prvi terapijski agens primenjuje kao hemitartaratna so.
10. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 9, naznačeni time što je pomenuta so amorfna ili je barem 70% težinski pomenutc soli kristalno.
11.Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 9, naznačeni time stoje barem 70% težinski pomenute soli u pojedinačnom kristalnom obliku.
12. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 11, naznačeni time što je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa jednim, dva. tri, četiri ili pet glavnih vrhova difrakcije x-zraka na prahu pri 20 uglovima od 5,1 °. 6.6°, 10.7°. 11.0°. 15.9° i 21.7°.
13. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 11. naznačeni time što je pojedinačni kristalni oblik karakterisan sa vrhovima difrakcije x-zraka na prahu pri 28 uglovima od 5,1°. 6.6°. 10.7°, 11.0°, 13,3°. 15.1°, 15.9°. 16.5°. 17.6°. 18.6°. 18,7°. 19.0°.
20.2°, 21,7° i 23,5°.
14. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 11, naznačeni time što je pojedinačni kristalni oblik is karakterisan sa uzorkom difrakcije x-zraka na prahu sa Slike 1.
15. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema bilo kojem od Patentnih zahteva 1 do 14, naznačeni time što se lečenje sa prvim terapijskim agensom otpočne nakon lečenja tokom perioda od barem deset sedmica sa drugim terapijskim agensom.
16. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema bilo kojem od Patentnih zahteva 1 do 14, naznačeni time što se lečenje sa prvim terapijskim agensom otpočne nakon lečenja sa drugim terapijskim agensom i u čemu se lečenje sa prvim terapijskim agensom otpočne nakon sto je subjektov broj trombocita jednak ili veći od 100.000 mm<J>: koncentracija hemoglobina je jednaka ili veća od 11 g/dl (žensko) ili 12 g/dl (muško): i/ili je zapremina subjektove slezene manja od ili jednaka 10 količnika normale i zapremine jetre su manje od ili jednake 1,5 količnika normale.
17. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema Patentnom zahtevu 15 ili 16. naznačeni time što se lečenje sa drugim terapijskim agensom završi nakon početka lečenjenja sa prvim terapijskim agensom.
18. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema bilo kojem od Patentnih zahteva 1 do 17. naznačeni time što pomenuto lečenje obuhvata primenu prvog terapijskog agensa pri dvaput dnevno dozi od 25 miligrama do 200 miligrama.
19. Jedinjenje za korišćenje ili korišćenje prema bilo kojem od Patentnih zahteva 1 do 18, naznačeni time što pomenuto lečenje obuhvata primenu prvog terapijskog agensa pri dvaput dnevno dozi od 50 miligrama.
RS20160645A 2009-11-27 2010-11-24 Genz 112638 za lečenje gošeove ili fabrijeve bolesti u kombinacionoj terapiji RS54978B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US26474809P 2009-11-27 2009-11-27
EP14164650.5A EP2796457B1 (en) 2009-11-27 2010-11-24 Genz 112638 for treating Gaucher or Fabry disease in combination therapy

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS54978B1 true RS54978B1 (sr) 2016-11-30

Family

ID=43431870

Family Applications (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20191404A RS59543B1 (sr) 2009-11-27 2010-11-24 Eliglustat (genz 112638) kao inhibitor glukozikleramid sintaze za upotrebu u metodi lečenja fabrijeve ili gošeove bolesti, metoda obuhvata podešavanje pojedinačne terapeutske doze metabolizmu p-450 kod pacijenta
RS20160645A RS54978B1 (sr) 2009-11-27 2010-11-24 Genz 112638 za lečenje gošeove ili fabrijeve bolesti u kombinacionoj terapiji
RS20140446A RS53503B2 (sr) 2009-11-27 2010-11-24 Amorfna i kristalna forma genz 112638 hemitartarata kao inhibitor glikozilkeramid sintaze

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20191404A RS59543B1 (sr) 2009-11-27 2010-11-24 Eliglustat (genz 112638) kao inhibitor glukozikleramid sintaze za upotrebu u metodi lečenja fabrijeve ili gošeove bolesti, metoda obuhvata podešavanje pojedinačne terapeutske doze metabolizmu p-450 kod pacijenta

Family Applications After (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20140446A RS53503B2 (sr) 2009-11-27 2010-11-24 Amorfna i kristalna forma genz 112638 hemitartarata kao inhibitor glikozilkeramid sintaze

Country Status (40)

Country Link
US (7) US11458119B2 (sr)
EP (5) EP2796457B1 (sr)
JP (6) JP2013512252A (sr)
KR (6) KR20120115972A (sr)
CN (5) CN102712629B (sr)
AR (3) AR079152A1 (sr)
AU (3) AU2010324810B2 (sr)
BR (1) BR112012012947B8 (sr)
CA (3) CA3140959A1 (sr)
CL (2) CL2012001348A1 (sr)
CR (1) CR20120277A (sr)
CY (3) CY1115880T1 (sr)
DK (3) DK2796457T3 (sr)
DO (2) DOP2012000141A (sr)
EA (3) EA201890254A3 (sr)
EC (2) ECSP12011926A (sr)
ES (4) ES2586947T3 (sr)
GT (1) GT201200161A (sr)
HR (3) HRP20140780T4 (sr)
HU (2) HUE029371T2 (sr)
IL (4) IL310635A (sr)
LT (2) LT3133070T (sr)
MA (1) MA33838B1 (sr)
ME (1) ME02477B (sr)
MX (2) MX381242B (sr)
MY (2) MY160542A (sr)
NI (1) NI201200096A (sr)
NZ (3) NZ715108A (sr)
PE (2) PE20171255A1 (sr)
PH (2) PH12015502514B1 (sr)
PL (4) PL2504332T5 (sr)
PT (4) PT2504332E (sr)
RS (3) RS59543B1 (sr)
SG (2) SG10201407881WA (sr)
SI (3) SI3133070T1 (sr)
SM (1) SMT201600273B (sr)
TN (1) TN2012000237A1 (sr)
TW (3) TWI586663B (sr)
UA (1) UA113491C2 (sr)
WO (1) WO2011066352A1 (sr)

Families Citing this family (30)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8889127B2 (en) 2004-07-01 2014-11-18 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Targeted protein replacement for the treatment of lysosomal storage disorders
CA3140959A1 (en) 2009-11-27 2011-06-03 Genzyme Corporation An amorphous and a crystalline form of genz 112638 hemitartrate as inhibitor of glucosylceramide synthase
US9155784B2 (en) * 2011-06-20 2015-10-13 Icahn School Of Medicine At Mount Sinai Anti-TNF-α therapy for the mucopolysaccharidoses and other lysosomal disorders
LT2753346T (lt) 2011-09-07 2020-08-10 Mount Sinai School Of Medicine Ceramidazė ir ląstelių diferenciacija
WO2013078413A1 (en) * 2011-11-22 2013-05-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modulators of lipid storage
ES2897825T3 (es) 2012-06-01 2022-03-02 Icahn School Med Mount Sinai Niveles de ceramida en el tratamiento y prevención de infecciones
PT2968479T (pt) 2013-03-14 2019-08-07 Icahn School Med Mount Sinai Composições terapêuticas de ceramidase ácida e métodos de fabrico e utilização
JP6537500B2 (ja) * 2013-09-20 2019-07-03 ビオマリン プハルマセウトイカル インコーポレイテッド 疾患治療用のグルコシルセラミドシンターゼ阻害剤
EP3164128A4 (en) * 2014-07-03 2018-02-28 Dr. Reddy's Laboratories Ltd. Amorphous form of eliglustat hemitartarate
EP3283483B1 (en) 2015-04-14 2018-12-19 Sandoz AG Crystalline eliglustat hydrochloride
GB201508025D0 (en) 2015-05-11 2015-06-24 Ucl Business Plc Fabry disease gene therapy
MX2018006250A (es) 2015-11-18 2018-09-05 Genzyme Corp Biomarcador de enfermedad poliquistica renal y usos del mismo.
SG11201807012QA (en) 2016-02-25 2018-09-27 Asceneuron S A Acid addition salts of piperazine derivatives
CN107445938B (zh) * 2016-05-31 2020-04-03 北京启慧生物医药有限公司 依利格鲁司他半酒石酸盐的结晶形式、制备方法和含有所述结晶形式的药用组合物
CN106349210A (zh) * 2016-08-24 2017-01-25 北京阳光诺和药物研究有限公司 一种制备酒石酸艾力骨司坦的方法
EP3318277A1 (en) 2016-11-04 2018-05-09 Institut du Cerveau et de la Moelle Epiniere-ICM Inhibitors of glucosylceramide synthase for the treatment of motor neuron diseases
WO2018193090A2 (en) * 2017-04-21 2018-10-25 Amneal Pharmaceuticals Company Gmbh Process for preparation of eliglustat hemitartrate and intermediates thereof
WO2018225085A1 (en) 2017-06-05 2018-12-13 Cipla Limited Stable solid dispersions of eliglustat hemitartrate
TW201904577A (zh) * 2017-06-16 2019-02-01 美商貝達醫藥公司 N-(2-(2-二甲胺基)乙氧基)-4-甲氧基-5-((4-(1-甲基-1h-吲哚-3-基)嘧啶-2-基)胺基)苯基)丙烯醯胺及其鹽之醫藥調配物
WO2019030645A1 (en) 2017-08-08 2019-02-14 Kashiv Pharma Llc Pharmaceutical composition comprising eliglustat
US12472144B2 (en) * 2017-08-08 2025-11-18 Amneal Pharmaceuticals Llc Pharmaceutical composition comprising eliglustat
AU2018386182B2 (en) 2017-12-15 2024-03-28 Genzyme Corporation Methods for treating Gaucher disease
US12064414B2 (en) 2017-12-20 2024-08-20 Aizant Drug Research Solutions Private Limited. Stable amorphous Eliglustat premix and process for the preparation thereof
US11760741B2 (en) 2018-05-02 2023-09-19 Kashiv Biosciences, Llc Pro-drugs of eliglustat
AU2019276882A1 (en) * 2018-05-27 2021-01-14 Bioasis Technolgies Inc. Treatment of gaucher disease
CN110878079A (zh) * 2018-12-31 2020-03-13 北京启慧生物医药有限公司 一种高纯度依利格鲁司他的制备方法
AU2021455177B2 (en) * 2021-07-05 2025-01-09 Asceneuron Sa Medicaments comprising glycosidase inhibitors
CN116120274A (zh) * 2021-11-12 2023-05-16 曙方(上海)医药科技有限公司 依利格鲁司他可药用盐及其晶型
WO2026006099A1 (en) 2024-06-24 2026-01-02 Genzyme Corporation Eliglustat for the treatment of gaucher disease
EP4725474A1 (en) 2024-10-11 2026-04-15 Genepharm S.A. A solid composition of eliglustat

Family Cites Families (71)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB8311286D0 (en) 1983-04-26 1983-06-02 Searle & Co Carboxyalkyl peptide derivatives
DE3522475A1 (de) 1985-06-22 1987-01-02 Kali Chemie Pharma Gmbh Neue aromatische verbindungen, ihre herstellung und verwendung
US5041441A (en) 1988-04-04 1991-08-20 The Regents Of The University Of Michigan Method of chemotherapy using 1-phenyl-2-decanoylamino-3-morpholino-1-propanol
ZA929008B (en) 1991-12-13 1993-05-21 Bristol Myers Squibb Co Piperazinyl- and piperidinyl-cyclohexanols.
US5302609A (en) 1992-12-16 1994-04-12 The Regents Of The University Of Michigan Treatment of diabetic nephropathy
US5399567A (en) 1993-05-13 1995-03-21 Monsanto Company Method of treating cholera
HUT73527A (en) 1993-08-13 1996-08-28 Seikagaku Kogyo Co Ltd Remedy for nervous diseases
US6309823B1 (en) 1993-10-26 2001-10-30 Affymetrix, Inc. Arrays of nucleic acid probes for analyzing biotransformation genes and methods of using the same
JPH09508900A (ja) 1994-02-02 1997-09-09 ザ リポソーム カンパニー、インコーポレーテッド 薬理学的に活性な化合物及びリポソーム並びにそれらの使用方法
US5763438A (en) 1994-06-10 1998-06-09 Seikagaku Corporation 2-acylaminopropanol compound and medical composition
FR2734819B1 (fr) 1995-05-31 1997-07-04 Adir Nouveaux composes de la piperazine, de la piperidine et de la 1,2,5,6-tetrahydropyridine, leur procede de preparation et les compositions pharmaceutiques les contenant
US6255336B1 (en) 1995-09-20 2001-07-03 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
US6890949B1 (en) 1999-07-09 2005-05-10 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
WO2001004108A1 (en) 1999-07-09 2001-01-18 Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
US20030073680A1 (en) 1995-09-20 2003-04-17 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
US5916911A (en) 1995-09-20 1999-06-29 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide--like compounds and therapeutic methods of use
NO965193L (no) 1995-12-08 1997-06-09 Seikagaku Kogyo Kk Seikagaku C Aminalkoholderivat og fremgangsmåte for fremstilling derav
JP3993908B2 (ja) 1995-12-08 2007-10-17 生化学工業株式会社 アミノアルコール誘導体及び該誘導体の製造方法
JP4140984B2 (ja) 1995-12-20 2008-08-27 生化学工業株式会社 分化誘導作用を有する薬剤
US5972928A (en) 1997-05-21 1999-10-26 Johns Hopkins University Methods for treatment of conditions associated with lactosylceramide
JP4036500B2 (ja) 1997-05-23 2008-01-23 生化学工業株式会社 アミノアルコール誘導体及びそれを含有する医薬
JP4176170B2 (ja) 1997-06-06 2008-11-05 生化学工業株式会社 アミノアルコール誘導体を含む医薬及び異常増殖性疾患治療薬
US6465488B1 (en) 1997-12-11 2002-10-15 Chancellor, Masters & Scholars Of The University Of Oxford Inhibition of glycolipid biosynthesis
ATE358473T1 (de) 1998-07-27 2007-04-15 Univ Johns Hopkins Diamino-propanol-verbindungen zur behandlung von ischaemien
US6610703B1 (en) 1998-12-10 2003-08-26 G.D. Searle & Co. Method for treatment of glycolipid storage diseases
BR0012318A (pt) * 1999-07-09 2002-05-28 Univ Michigan Compostos semelhantes a amino ceramida e métodos terapêuticos de uso
US20040252299A9 (en) 2000-01-07 2004-12-16 Lemmo Anthony V. Apparatus and method for high-throughput preparation and spectroscopic classification and characterization of compositions
EP1248869A2 (en) * 2000-01-07 2002-10-16 Transform Pharmaceuticals, Inc. High-throughput formation, identification, and analysis of diverse solid-forms
ES2239558T3 (es) 2000-04-24 2007-04-01 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Hemitartrato de zolpidem micronizado.
US6436987B1 (en) 2000-06-08 2002-08-20 Pfizer Inc. Crystalline forms of (3S-trans)-2-[3,4-dihydro-4-hydroxy-3-(phenylmethyl)-2H-1-benzopyran-7-yl]-4-(trifluoromethyl)-benzoic acid
US20020198240A1 (en) 2001-01-10 2002-12-26 Shayman James A. Amino ceramide - like compounds and therapeutic methods of use
US7148251B2 (en) 2001-01-10 2006-12-12 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
US20040260099A1 (en) 2001-01-10 2004-12-23 The Regents Of The University Of Michigan Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
JP2004531478A (ja) 2001-01-10 2004-10-14 ザ リージェンツ オブ ザ ユニバーシティ オブ ミシガン アミノセラミド様化合物および治療目的での使用方法
JP2004525621A (ja) 2001-01-18 2004-08-26 メルク　パテント　ゲゼルシャフト　ミット　ベシュレンクテル　ハフトング グルコセレブロシダーゼ活性を有する二機能性融合タンパク質
EP2067775B1 (en) * 2001-07-16 2012-04-25 Genzyme Corporation A N-Acylsphingosine glucosyltransferase inhibitor
EP1281755A3 (en) 2001-07-31 2003-06-18 Pfizer Products Inc. Variants of the human cyp2d6 gene
EP2206702B1 (en) 2001-08-08 2011-12-28 Tobira Therapeutics, Inc. Bicyclic compound, production and use thereof
US7893101B2 (en) 2002-03-20 2011-02-22 Celgene Corporation Solid forms comprising (+)-2-[1-(3-ethoxy-4-methoxyphenyl)-2-methylsulfonylethyl]-4-acetylaminoisoindoline-1,3-dione, compositions thereof, and uses thereof
US6916802B2 (en) 2002-04-29 2005-07-12 Genzyme Corporation Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
US20060217560A1 (en) 2002-04-29 2006-09-28 Shayman James A Amino ceramide-like compounds and therapeutic methods of use
AU2003251829B2 (en) 2002-07-09 2009-12-10 Radical Therapeutix Method to inhibit ischemia and reperfusion injury
US20050032070A1 (en) 2003-08-05 2005-02-10 Sebastian Raimundo Polymorphisms in the human gene for CYP2D6 and their use in diagnostic and therapeutic applications
AR047459A1 (es) * 2004-01-27 2006-01-18 Synthon Bv Sales estables de 2-metil-4-(4-metil-1-piperazinil)-10h-tieno[2,3-b][1,5]benzodiazepina (olanzapina)
AU2005284727A1 (en) 2004-09-17 2006-03-23 University Of Massachusetts Compositions and their uses for lysosomal enzyme deficiencies
WO2006039663A2 (en) 2004-09-30 2006-04-13 Vanda Pharmaceuticals, Inc Methods for the administration of iloperidone
KR100872675B1 (ko) 2004-10-13 2008-12-10 파마시아 앤드 업존 캄파니 엘엘씨 3-[5-클로로-4-[(2,4-디플루오로벤질)옥시]-6-옥소피리미딘-1(6ｈ)-일]-ｎ-(2-히드록시에틸)-4-메틸벤즈아미드의결정형
EP1811991B1 (en) † 2004-11-10 2018-11-07 Genzyme Corporation Treatment of type 2 diabetes using inhibitors of glycosphingolipid synthesis
WO2007038676A2 (en) * 2005-09-28 2007-04-05 Teva Pharmaceutical Industries Ltd. Polymorphic forms of ladostigil tartrate
AU2006297475A1 (en) * 2005-10-03 2007-04-12 Mallinckrodt Inc. Process for preparing zolpidem hemitartrate and tartrate polymorphs
MX2007016179A (es) 2006-04-17 2008-03-11 Teva Pharma Formas cristalinas de o-desmetilvenlafaxina.
SI2032134T1 (sl) * 2006-05-09 2015-10-30 Genzyme Corporation Postopki zdravljenja bolezni zamaščenih jeter, ki obsegajo inhibicijo sintezo glukosfingolipida
KR101271225B1 (ko) 2006-10-31 2013-06-03 삼성디스플레이 주식회사 발광 다이오드 칩 및 발광 다이오드 광원 모듈의 제조 방법
TWI314226B (en) 2006-12-07 2009-09-01 Ind Tech Res Inst Piezoelectricity-driving optical lens module
EP1961765A1 (en) * 2006-12-08 2008-08-27 Zealand Pharma A/S Truncated PTH peptides with a cyclic conformation
CN101631536A (zh) * 2007-01-12 2010-01-20 惠氏公司 片中片组合物
MX2009010557A (es) * 2007-03-30 2009-11-19 Amicus Therapeutics Inc Metodo para el tratamiento de la enfermedad de fabry que utiliza chaperonas farmacologicas.
MX2009011473A (es) 2007-04-26 2010-01-18 Amicus Therapeutics Inc Regimenes de dosificacion para el tratamiento de enfermedades por almacenamiento lisosomal que utilizan chaperonas farmacologicas.
EP2594564B1 (en) * 2007-05-31 2016-09-28 Genzyme Corporation 2-acylaminopropanol-type glucosylceramide synthase inhibitors
DE102007029581B4 (de) 2007-06-26 2020-04-09 GM Global Technology Operations LLC (n. d. Ges. d. Staates Delaware) Kraftfahrzeugdach und Kraftfahrzeugkarosserie
US20090307180A1 (en) 2008-03-19 2009-12-10 Brandon Colby Genetic analysis
WO2009117150A2 (en) 2008-03-20 2009-09-24 Genzyme Corporation Method of treating lupus with ceramide derivatives
KR20240090632A (ko) 2009-11-27 2024-06-21 베링거 인겔하임 인터내셔날 게엠베하 리나글립틴과 같은 ｄｐｐ－ｉｖ 억제제를 사용한 유전자형 검사된 당뇨병 환자의 치료
FR2953139B1 (fr) 2009-11-27 2012-04-13 Servier Lab Composition pharmaceutique comprenant un sel de strontium, de la vitamine d et une cyclodextrine
PL2604608T3 (pl) 2009-11-27 2016-02-29 Adverio Pharma Gmbh Sposób wytwarzania {4,6-diamino-2-[1-(2-fluorobenzylo)-1H-pirazolo[3,4-b]pirydyn-3-ylo]pirymidyn-5-ylo}metylokarbaminianu metylu
CA3140959A1 (en) 2009-11-27 2011-06-03 Genzyme Corporation An amorphous and a crystalline form of genz 112638 hemitartrate as inhibitor of glucosylceramide synthase
US9006270B2 (en) 2011-06-21 2015-04-14 Novartis Ag Polymorphs of (S)-pyrrolidine-1,2-dicarboxylic acid 2-amide 1-({4-methyl-5-[2-(2,2,2-trifluoro-1,1-dimethyl-ethyl)-pyridin-4-yl]-thiazol-2-yl}-amide
JO3316B1 (ar) 2013-05-30 2019-03-13 Lilly Co Eli مركبات 3، 4-داي هيدرو أيزو كوينولين -2(1h)-يل
JP6728842B2 (ja) 2016-03-24 2020-07-22 オムロン株式会社 光学計測装置
CN107445938B (zh) 2016-05-31 2020-04-03 北京启慧生物医药有限公司 依利格鲁司他半酒石酸盐的结晶形式、制备方法和含有所述结晶形式的药用组合物
WO2018193090A2 (en) 2017-04-21 2018-10-25 Amneal Pharmaceuticals Company Gmbh Process for preparation of eliglustat hemitartrate and intermediates thereof

Also Published As

Publication number Publication date
PT2504332E (pt) 2014-09-02
CY1122698T1 (el) 2021-03-12
HRP20140780T4 (hr) 2021-08-06
SG10201407881WA (en) 2015-01-29
SI2504332T1 (sl) 2014-09-30
TWI606827B (zh) 2017-12-01
US20210393590A1 (en) 2021-12-23
EA029990B1 (ru) 2018-06-29
ES2493940T5 (es) 2021-11-23
PT2796457T (pt) 2016-07-14
IL260299A (en) 2018-08-30
TW201639562A (zh) 2016-11-16
KR102073207B1 (ko) 2020-02-05
MX358345B (es) 2018-08-14
BR112012012947A2 (pt) 2017-03-01
IL283935A (en) 2021-07-29
UA113491C2 (xx) 2017-02-10
US10888547B2 (en) 2021-01-12
CA2781676C (en) 2020-05-05
PT3133070T (pt) 2019-11-11
CA3140959A1 (en) 2011-06-03
US20130137743A1 (en) 2013-05-30
KR20180049255A (ko) 2018-05-10
TW201737910A (zh) 2017-11-01
DK2504332T3 (da) 2014-08-25
BR112012012947B8 (pt) 2021-05-25
CN105777707B (zh) 2020-10-13
NZ625712A (en) 2016-02-26
PE20121337A1 (es) 2012-10-12
AU2017265180B2 (en) 2019-08-01
PL3133070T3 (pl) 2020-01-31
NI201200096A (es) 2012-10-30
EA023923B1 (ru) 2016-07-29
JP2013512252A (ja) 2013-04-11
MY192644A (en) 2022-08-29
PH12015502514B1 (en) 2022-07-29
AR079152A1 (es) 2011-12-28
CN112521367A (zh) 2021-03-19
WO2011066352A1 (en) 2011-06-03
SMT201600273B (it) 2016-08-31
RS59543B1 (sr) 2019-12-31
DK2796457T3 (en) 2016-08-29
PL2504332T3 (pl) 2014-10-31
EP3133070B1 (en) 2019-08-14
CR20120277A (es) 2012-09-05
CL2016002589A1 (es) 2017-05-19
WO2011066352A8 (en) 2011-08-11
EP3133070A1 (en) 2017-02-22
ES2754398T3 (es) 2020-04-17
CA2781676A1 (en) 2011-06-03
ECSP12011926A (es) 2012-07-31
CY1117996T1 (el) 2017-05-17
US20160166542A1 (en) 2016-06-16
CN112521366A (zh) 2021-03-19
LT3133070T (lt) 2019-11-11
AU2010324810A1 (en) 2012-06-07
JP2020189873A (ja) 2020-11-26
IL310635A (en) 2024-04-01
MA33838B1 (fr) 2012-12-03
US20160120842A1 (en) 2016-05-05
EP2504332B1 (en) 2014-06-04
JP2015212291A (ja) 2015-11-26
IL219892A0 (en) 2012-07-31
EP3896069A1 (en) 2021-10-20
HK1203485A1 (en) 2015-10-30
HRP20140780T1 (en) 2014-11-07
GT201200161A (es) 2014-01-27
HRP20191647T1 (hr) 2019-12-13
EA201890254A3 (ru) 2019-02-28
AR121611A2 (es) 2022-06-22
CN105777707A (zh) 2016-07-20
TWI586663B (zh) 2017-06-11
DOP2012000141A (es) 2012-09-30
MY160542A (en) 2017-03-15
EP2796457B1 (en) 2016-05-18
RS53503B2 (sr) 2021-07-30
CY1115880T1 (el) 2017-01-25
CA3075788C (en) 2021-12-21
KR20250005503A (ko) 2025-01-09
CN102712629A (zh) 2012-10-03
RS53503B1 (sr) 2015-02-27
AU2010324810B2 (en) 2016-05-12
CN105753846A (zh) 2016-07-13
PE20171255A1 (es) 2017-08-28
CN102712629B (zh) 2016-10-12
ES2586947T3 (es) 2016-10-19
PH12015502514A1 (en) 2016-08-15
KR20200013105A (ko) 2020-02-05
SI2796457T1 (sl) 2016-10-28
EA201270646A1 (ru) 2013-01-30
EP2796457A1 (en) 2014-10-29
PH12012501048A1 (en) 2013-02-04
US20260115165A1 (en) 2026-04-30
NZ715108A (en) 2017-06-30
BR112012012947B1 (pt) 2021-04-06
JP7150528B2 (ja) 2022-10-11
AR121612A2 (es) 2022-06-22
DK3133070T3 (da) 2019-11-11
CA3075788A1 (en) 2011-06-03
EP3599237A1 (en) 2020-01-29
US12465586B2 (en) 2025-11-11
HUE045784T2 (hu) 2020-01-28
JP6370264B2 (ja) 2018-08-08
US20230172903A1 (en) 2023-06-08
MX2012006083A (es) 2012-06-19
CL2012001348A1 (es) 2012-08-24
AU2017265180A1 (en) 2017-12-14
AU2016202591B2 (en) 2017-11-30
HUE029371T2 (en) 2017-02-28
CN105753846B (zh) 2019-11-15
LT2796457T (lt) 2016-09-12
JP2019001809A (ja) 2019-01-10
ES2493940T3 (es) 2014-09-12
AU2016202591A1 (en) 2016-05-19
SI2504332T2 (sl) 2021-08-31
ES2875382T3 (es) 2021-11-10
EP3599237B1 (en) 2021-03-24
MX381242B (es) 2025-03-12
EA201592195A1 (ru) 2016-04-29
TWI656873B (zh) 2019-04-21
PL2796457T3 (pl) 2017-04-28
JP2016138124A (ja) 2016-08-04
KR20220162824A (ko) 2022-12-08
PL2504332T5 (pl) 2021-08-23
NZ600155A (en) 2014-10-31
TN2012000237A1 (en) 2013-12-12
US20210369672A1 (en) 2021-12-02
CN112521367B (zh) 2024-01-02
SG10201800136QA (en) 2018-02-27
SI3133070T1 (sl) 2019-11-29
EA201890254A2 (ru) 2018-10-31
JP6452635B2 (ja) 2019-01-16
EP2504332B2 (en) 2021-03-17
KR20120115972A (ko) 2012-10-19
US11458119B2 (en) 2022-10-04
DOP2016000250A (es) 2017-02-15
JP2023116764A (ja) 2023-08-22
ECSP18063798A (es) 2020-02-28
PT3599237T (pt) 2021-04-28
TW201130822A (en) 2011-09-16
ME02477B (me) 2017-02-20
KR20150125734A (ko) 2015-11-09
PL3599237T3 (pl) 2021-09-27
DK2504332T4 (da) 2021-06-07
HK1172031A1 (en) 2013-04-12
HRP20161038T1 (hr) 2016-10-21
EP2504332A1 (en) 2012-10-03

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US12465586B2 (en) Inhibitors of glucosylceramide synthase
HK40062640A (en) Pharmaceutical composition of the glucosylceramide synthase inhibitor eliglustat for the treatment gaucher&#39;s disease comprising adjusting the individual therapeutical dose to the p450 metabolism of the patient
HK40021462A (en) Pharmaceutical composition of the glucosylceramide synthase inhibitor eliglustat for the treatment of gaucher&#39;s disease comprising adjusting the individual therapeutical dose to the p450 metabolism of the patient
HK40021462B (en) Pharmaceutical composition of the glucosylceramide synthase inhibitor eliglustat for the treatment of gaucher&#39;s disease comprising adjusting the individual therapeutical dose to the p450 metabolism of the patient
HK1234743B (en) Eliglustat (genz 112638) as inhibitor of glucosylceramide synthase for use in a method of treating fabry&#39;s or gaucher&#39;s disease, the method comprising adjusting the individual therapeutical dose to the p-450 metabolism of the patient
HK1234743A1 (en) Eliglustat (genz 112638) as inhibitor of glucosylceramide synthase for use in a method of treating fabry&#39;s or gaucher&#39;s disease, the method comprising adjusting the individual therapeutical dose to the p-450 metabolism of the patient
HK1203485B (en) Genz 112638 for treating gaucher or fabry disease in combination therapy
HK1172031B (en) An amorphous and a crystalline form of genz 112638 hemitartrate as inhibitor of glucosylceramide synthase