RS55417B1 - Formulacija il-17 antitela - Google Patents

Description

[0001]Ovaj pronalazak se odnosi na oblast medicine. Još preciznije, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutsku formulaciju anti-IL-17 antitela. Očekuje se da ova farmaceutska formulacija anti-IL-17 antitela bude korisna u lečenju reumatoidnog artritisa (RA), psorijaze (Ps), ankiloznog spondilitisa (AS), psorijatičnog artritisa (PA) ili multiple mijelome (MM).

[0002]Farmaceutske formulacije anti-IL-17 antitela su potrebne za tretman pacijenata sa RA, Ps, AS, PA ili MM. Za farmaceutske formulacije su potrebne određene koncentracije anti-IL-17 antitela tako da antitelo može subkutano da se oslobodi na pacijentu. Ove farmaceutske formulacije sa određenom koncentracijom anti-IL-17 antitela moraju da održe fizičku i hemijsku stabilnost anti-IL-17 antitela, uz izbegavanje viskoznosti koja neočekivano može da poveća vreme oslobađanja i silu potrebnu za istiskivanje iz igle ili auto-injektornog uređaja.

[0003]U WO 07/70750 su otkrivena anti-IL-17 antitela koja neutrališu biološku aktivnost povezanu sa humanim IL-17 (SEQ ID NO: 1). Pored toga, WO 07/70750 otkriva farmaceutske kompozicije anti-IL-17 monoklonalnih antitela. Uz određene formulacije za mAb 126 i anti-IL-17 antitelo objavljene u WO 07/70750, kao deo ovog pronalaska prijavilac je otkrio da postoje tri problema stabilnosti u rastvorima pri koncentracijama većim od ili jednakim sa 50 mg/mL: faza separacije tečnost-tečnost; formiranje gela ili promena čvrste faze; i hemijska nestabilnost. Prema tome, za prevazilaženje ovih uočenih problema su potrebne farmaceutske formulacije za određene koncentracije anti-IL-17 antitela. Postoji potreba za alternativnim farmaceutskim formulacijama anti-IL-17 antitela. Pored toga, postoji potreba za alternativnim farmaceutskim formulacijama anti-IL-17 antitela u obliku rastvora.

[0004]U skladu sa prvim aspektom ovog pronalaska, obezbeđena je farmaceutska formulacija koja uključuje anti-IL-17 antitelo u koncentraciji u rasponu od 80 mg/mL do 150 mg/mL, citratni puffer u koncentraciji od 20 mM, natrijum hlorid u koncentraciji od 200 mM, polisorbat-80 u koncentraciji u rasponu od 0.02% (m/v) do 0.03% (m/v) i pH 5.7, pri čemu anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo sa lakim lancem (LC) i teškim lancem (HC), pri čemu je navedeni LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a navedeni HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5. [00051Preferirano, farmaceutska formulacija u skladu sa ovim pronalaskom ima koncentraciju anti-TL-17 antitela od 80 mg/mL.

[0006]Farmceutska formulacija u skladu sa ovim pronalaskom preferirano ima koncentraciju polisorbata-80 od 0.03% (m/v).

[0007]Formulacija je preferirano farmaceutska formulacija anti-IL-17 antitela u obliku rastvora.

[0008]Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje anti-IL-17 antitelo u koncentraciji od 80 mg/mL, citratni pufer u koncentraciji od 20 mM, natrijum hlorid u koncentraciji od 200 mM, polisorbat-80 u koncentraciji od 0.03% i pH od 5.7, pri čemu anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo koje sadrži dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5.

[0009]Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje RA, Ps, AS, PA ili MM koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno, efektivne količine farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska. Još preciznije, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje Ps koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje RA koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje PA koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za lečenje AS koji uključuje primenu na pacijentu kome je to potrebno efektivne količine farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska. [00101Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju iz ovog pronalaska za upotrebu u terapiji. Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju iz ovog pronalaska za upotrebu u tretmanu RA, Ps, AS, PA ili MM. Još preciznije, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju iz ovog pronalaska za upotrebu u tretmanu Ps. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju iz ovog pronalaska za upotrebu u tretmanu RA. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju iz ovog pronalaska za upotrebu u tretmanu PA. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju iz ovog pronalaska za upotrebu u tretmanu AS.

[0011]Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska u proizvodnji medikamenta za tretman RA, Ps, AS, PA ili MM. Još preciznije, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu farmaceutske formulacije u proizvodnji medikamenta za tretman Ps. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu farmaceutske formulacije u proizvodnji medikamenta za tretman RA. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu farmaceutske formulacije u proizvodnji medikamenta za tretman PA. Takođe, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu farmaceutske formulacije u proizvodnji medikamenta za tretman AS.

[0012]Preferirane su neke farmaceutske formulacije. Naredne nabrojane selekcije opisuju ovakve preferirane grupe: 1. ) anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo sa LCVR i HCVR, pri čemu je navedeni LCVR sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 2 a navedeni HCVR je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 3; uključuje antitelo sa lakim lancem (LC) i teškim lancem (HC), pri čemu je LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a navedeni HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; ili uključuje antitelo koje uključuje dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; 2. ) anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo sa lakim lancem (LC) i teškim lancem (HC), pri čemu je navedeni LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a navedeni HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; 3. ) anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo koje sadrži dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; 4. ) anti-IL-17 antitelo u koncentraciji u rasponu od približno 80 mg/mL do približno 150 mg/mL; 5. ) anti-IL-17 antitelo u koncentraciji od približno 80 mg/mL; 6. ) polisorbat-80 u koncentraciji u rasponu od približno 0.02% (m/v) do približno 0.03%

(m/v);

7. ) polisorbat-80 u koncentraciji od približno 0.03% (m/v).

[0013]Preferirane su neke farmaceutske formulacije u obliku rastvora. Naredne nabrojane selekcije opisuju ovakve preferirane grupe: 1. ) anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo sa LCVR i HCVR, pri čemu je navedeni LCVR sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 2 a navedeni HCVR je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 3; uključuje antitelo sa lakim lancem (LC) i teškim lancem (HC), pri čemu je LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a navedeni HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; ili uključuje antitelo koje se sastoji od dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; 2. ) anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo sa lakim lancem (LC) i teškim lancem (HC), pri čemu je navedeni LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a navedeni HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; 3. ) anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo koje sadrži dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino k iseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5; 4. ) anti-IL-17 antitelo u koncentraciji u rasponu od približno 80 mg/mL do približno 150 mg/mL; 5. ) anti-IL-17 antitelo u koncentraciji od približno 80 mg/mL; 6. ) polisorbat-80 u koncentraciji u rasponu od približno 0.02% (m/v) do približno 0. 03%

(m/v);

7. ) polisorbat-80 u koncentraciji od približno 0. 03% (m/v).

[0014]U jednom otelotvorenju, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju anti-IL-17 antitela od približno 80 mg/mL do približno 150 mg/mL. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju anti-IL-17 antitela u rasponu od 68 mg/mL do 92 mg/mL. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju anti-IL-17 antitela od približno 80 mg/mL. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju anti-IL-17 antitela od približno 120 mg/mL. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju anti-IL-17 antitela od približno 150 mg/mL.

[0015]U jednom otelotvorenju, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja je puferovana sa citratnim puferom u rasponu od približno 15 mM do približno 25 mM. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja je puferovana sa citratnim puferom u rasponu od 15 mM do 25 mM. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja je puferovana sa citratnim puferom u koncentraciji od približno 15 mM, približno 20 mM, približno 25 mM ili približno 30 mM. U još jednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja je puferovana sa cintratnim puferom u koncentraciji od približno 20 mM.

[0016]U jednom otelotvorenju, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju NaCl od približno 200 mM do približno 300 mM. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju NaCl od 175 mM do 225 mM. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju NaCl od približno 200 mM, približno 250 mM ili približno 300 mM. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju NaCl od približno 200 mM.

[0017]U jednom otelotvorenju, ovaj pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju polisorbata-80 ili polisorbata-20 od približno 0.01 % do približno 0.04 %. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju polisorbata-80 ili polisorbata-20 od 0.02 % do 0.04 %. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju polisorbata-80 ili polisorbata-20 od približno 0.01 %, približno 0.02 %, približno 0.03 % ili približno 0.04 %. U još jednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje koncentraciju polisorbata-80 ili polisorbata-20 od približno 0.03 %.

[0018]U jednom otelotvorenju, ovaj pronalazaik takođe obezbeđuje farmceutsku formulaciju koja uključuje pH u rasponu od približno 5.4 do približno 6.0. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje pH u rasponu od 5.4 do 6.0. U narednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje pH od približno 5.4, približno 5.7 ili približno 6.0. U još jednom otelotvorenju, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku formulaciju koja uključuje pH od približno 5.7.

[0019]Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska uključuju citratni pufer. Citratni pufer može da se izradi od limunske kiseline, trinatrijum citrat dihidrata i monohidratne limunske kiseline; ili monohidratne limunske kiseline, dibaznog natrijum fosfata i limunske kiseline. Takođe, može da se izradi citratni pufer koji sadrži monobazni natrijum citrat, trinatrijumovu so limunske kiseline ili hidrat tribaznog natrijum citrata. Preferirano, citratni pufer se izrađuje sa natrijum citrat dihidratom i limunskom kiselinom.

[0020]mAb 126 antitelo je anti-IL-17 antitelo koje se sastoji od dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5, i pri čemu su HCi unakrsno spojeni disulfidnim vezama.

[0021]Opšta struktura "antitela" je veoma dobro poznata u tehnici. Antitelo IgG tipa se sastoji od četiri lanca amino kiselina (dva "teška" lanca i dva "laka" lanca) koji su unakrsno spojeni disulfidnim vezama intra- i inter-lanca. Kada se pojavljuju u određenim biološkim sistemima, antitela koja imaju nemodifikovane humane Fc sekvence su glikozilirana u Fc regionu. Antitela mogu takođe da budu glikozilirana na drugim položajima. Stručnjak sa iskustvom u tehnici će da razume da antitela za upotrebu u formulaciji iz ovog pronalaska mogu da sadrže ovakve glikozilacije. Subjedinične strukture i trodimenzionalne konfiguracije antitela su dobro poznate u tehnici. Svaki teški lanac obuhvata varijabilni region N završetka teškog lanca ("HCVR") i konstantni region teškog lanca ("HCCR"). Konstantni region teškog lanca se sastoji od tri domena (CH1, CH2 i CH3) za IgG, IgD i IgA; i 4 domena (CH1, CH2, CH3 i CH4) za IgM i IgE. Svaki laki lanac se sastoji od varijabilnog regiona lakog lanca ("LCVR") i konstantnog regiona lakog lanca ("LCCR"). Varijabilni regioni svakog para laki/teški lanac formiraju mesto vezivanja antitela.

[0022]Anti-IL-17 antitelo za korišćenje u formulacijama iz ovog pronalaska može da se dobije koristeći tehnike koje su dobro poznate u tehnici, na primer, rekombinantne tehnologije, tehnologije ispoljavanja faga, sintetičke tehnologije ili kombinacije ovih tehnologija ili drugih tehnologija koje su već poznate u tehnici. Postupci za produkciju i prečišćavanje antitela i antigen-vezujućih fragmenata su dobro poznati u tehnici i mogu da se nađu, na primer, u Harlow and Lane (1988) Antibodies, A Laboratorv Manual, Cold Spring Harbor Laboratorv Press, Cold Spring Harbor, New York, chapters 5-8 and 15, ISBN 0-87969-314-2.

[0023]Anti-IL-17 antitelo za upotrebu u formulacijama iz ovog pronalaska je projektovano antitelo koje je osmišljeno tako da ima osnovnu građu, zavisne regione i konstantne regione ljudskog porekla koji su identični sa ili skoro potpuno identični (skoro potpuno ljudski) sa osnovnim strukturama i konstantnim regionima dobijenih od humanih genomičnih sekvenci. Potpune humane osnovne strukture, zavisni regioni i konstantni regioni su one sekvence humanih embriona kao i sekvence sa somatskim mutacijama koje se prirodno dešavaju i/ili one sa projektovanim mutacijama. Antitelo za upotrebu u formulaciji iz ovog pronalaska može da uključi osnovnu strukturu, zavisne ili konstantne regione dobijene potpuno od humane osnovne strukture, zavisnog ili konstantnog regiona koji sadrži jednu ili više supstitucija, oduzimanja ili dodavanja na tim amino kiselinama. Osim toga, antitelo za upotrebu u formulaciji iz ovog pronalaska je potpuno ne-imunogenično za ljude.

[0024] Stabilnost antitela u rastvoru zavisi od hemijske stabilnosti i fizičke stabilnosti antitela u formulaciji u kojoj je antitelo solubilizirano. Oksidacija, deaminacija i hidroiza su primeri problema hemijske stabilnosti koje antitelo može da ima u formulaciji. Agregacija i formiranje gela su primeri problema fizičke stabilnosti koje antitelo može da ima u formulaciji. Naredni problem fizičke stabilnosti sa antitelima u formulaciji u obliku rastvora može da bude faza separacije tečnost-tečnost (LLPS); LLPS u rastvoru antitela se obično prvo pojavljuje kao opalescencija a nakon toga dolazi do razdvajanja u laku i tešku fazu. Tačka zamućenja je temperatura kada se za date uslove prvi put uočava LLPS; tačka zamućenja je mera temperature kada rastvor postaje belo zamućen kao rezultat formiranja mikro-faza koje se na kraju razdvoje u tešku i laku fazu što se obično povezuje sa razdvajanjem faza.

[0025] Farmaceutska formulacija je stabilna formulacija pri čemu je stepen degradacije, modifikacije, agregacije, gubitka biološke aktivnosti i slično proteina/antitela u njoj prihvatljivo kontrolisan i ne raste neočekivano u toku vremena. Stabilnost može da se proceni postupcima koji su dobro poznati u tehnici, uključujući merenje rasipanja svetlosti uzoraka, vidljivog slabljenje svetlosti (apsorpcija ili optička gustina), veličine (na primer, hromatografijom razdvajanja po veličini (SEC)),in vitroiliin vivobiološke aktivnosti i/ili osobina izmerenih diferencijalnom skenirajućom kalorimetrijom (DSC). Drugi postupci za procenu stabilnosti su dobro poznati u tehnici i takođe mogu da se koriste u skladu sa ovim pronalaskom. Merenjem pomoću SEC, % monomera za farmaceutsku formulaciju anti-IL-17 treba da bude veći od 90% nakon čuvanja na 5 °C u toku perioda od 3 meseca, 6 meseci, 9 meseci, 12 meseci, 18 meseci ili preferirano 2 godine. Merenjem katjon izmenjivačkom hromatografijom (CEX), procenat ukupnih kiselih varijanti ne treba da pređe 30% za farmaceutsku formulaciju anti-IL-17 nakon čuvanja na 5 °C u toku perioda od 3 meseca, 6 meseci, 9 meseci, 12 meseci, 18 meseci ili preferirano 2 godine. Za merenja čistoće redukovanom CE-SDS, farmaceutska formulacija anti-IL-17 treba da ima čistoću veću od 85% nakon čuvanja na 5 °C u toku perioda od 3 meseca, 6 meseci, 9 meseci, 12 meseci, 18 meseci ili preferirano 2 godine. Preferirano, farmaceutska formulacija anti-IL-17 antitela zadovoljava jedan od prethodno pomenutih standarda za stabilnost na temperaturi od 5 °C za rastvor koji se čuva u toku dve godine. Još poželjnije, farmaceutska formulacija anti-IL-17 antitela zadovoljava sve prethodno pomenute standarde za stabilnost na 5 °C za rastvor koji se čuva u toku dve godine.

[0026] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska mogu da budu u tečnom doznom obliku rastvora, emulzije ili suspenzije. Preferirano, farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska su u tečnom doznom obliku rastvora.

[0027] Primena farmaceutskih formulacija iz ovog pronalaska može da bude parenteralnim načinom. U medicinskoj literaturi se obično podrazumeva daje parenteralna primena injekcija doznog oblika u telo preko sterilnog šprica ili preko nekog drugog mehaničkog uređaja kao što je infuziona pumpa. Parenteralni način može da uključi intravenozni, intramuskularni, subkutani i intraperitonealni način primene. Preferirani načinje subkutana primena.

[0028] Farmaceutske formulacije iz ovog pronalaska mogu da se koriste za lečenje subjekata sa RA, Ps, AS, PA ili MM. Efektivna količina formulacije anti-IL-17 antitela iz ovog pronalaska je količina koja oslobađa količinu anti-IL-17 antitela koja za rezultat ima željeni terapeutski i/ili profilaktički efekat bez izazivanja neočekivanih neželjenih dejstava kada se primenjuje na subjektu sa povećanim IL-17 vrednostima.

Primer 1

Formulisanje mAb 126

[0029]

[0030]Proces proizvodnje za farmaceutsku formulaciju anti-IL-17 antitela u obliku rastvora za mAb 126 (Tabela 1) se sastoji prvo od izrade kompozicije pufer ekscipijenta (Tabela 2) a nakon toga izrade finalne formulacije lekovitog produkta.

[0031]Kompozicija pufer ekscipijenta (Tabela 2) se izradi, filtrira i čuva za izradu formulacije lekovitog produkta. Odgovarajuća količina vode na temperaturi od 20 +/- 5 °C se odmeri u tariranu praznu posudu odgovarajuće veličine. Doda se odgovarajuća količina natrijum citrata i izmeša; nakon toga se doda odgovarajuća količina limunske kiseline i izmeša. Zatim se doda odgovarajuća količina natrijum hlorida i izmeša. U staklenoj posudi se precizno izmeri polisorbat 80 i u staklenu posudu se doda odgovarajuća količina vode na temperaturi od 20 +/- 5 °C da se dobije koncentracija iz Tabele 2, i rastvor se izmeša. Celokupni sadržaj rastvora polisorbata 80 se doda u druge ekscipijente. Posuda u kojoj je bio rastvor polisorbata 80 se ispere sa vodom kako bi se osigurao prenos celokupnog sadržaja. Nakon dodavanja rastvora polisorbata 80, rastvor se izmeša. Nakon što je rastvaranje i mešanje završeno, proveri se pH rastvora koji treba da bude u rasponu od 5.7 +/- 0.2; i ukoliko je potrebno pH se podesi sa rastvorom HC1 ili NaOH. Kompozicija pufer ekscipijenta se propusti kroz filter (poliviniliden fluorid [PVDF]) zbog redukcije biološkog onečišćenja.

[0032] Kompozicija pufer ekscipijenta se obogati sa dodatnom količinom polisorbata 80 da se postigne niža koncentracija (0.2 mg/mL polisorbata-80) u aktivnom farmaceutskom sastojku (API) u poređenju sa finalnom formulacijom lekovitog produkta. Kako koncentracija mAb 126 u API varira, količina pufera potrebnog za razblaženje se takođe menja. Ova varijacija zahteva da se koncentracija polisorbata 80 podesi u receptu kompozicija pufer ekscipijenta za svaku seriju.

[0033] Kontejneri u kojima se čuva mAb 126 API (mAb 126 se pojavljuje u ćelijama, prečisti i koncentruje; dobijeni API se nakon toga zamrzne u koncentraciji od približno 150 mg/mL do približno 160 mg/mL mAb 126 u 20 mM citratnom puferu, 200 mM NaCl, 0.02% polisorbata-80, na pH približno 5.7) se uravnoteže na temperaturi od 20 +/- 5 °C. API rastvor se nakon toga izmeša sa odgovarajućom količinom rastvora pufer ekscipijenta da se dostigne 80%o teoretske veličine serije. pH rastvora se proveri da bude u rasponu od 5.7 +/- 0.2. Nakon podešavanja pH, rastvor se izmeša i uzme uzorak za procesnu UV analizu da se odredi koncentracija mAb 126. Doda se odgovarajuća količina rastvora pufer ekscipijenta da se dostigne finalna tražena težina serije. Nakon mešanja, proveri se pH rastvora da bude u rasponu 5.7 +/- 0.2 i proveri se osmolaritet rastvora da bude unutar 360-480 mOsm/Kg. Rastvor mAb 126 lekovitog produkta se propusti kroz PVDF filter zbog redukcije biološkog onečićšenja i čuva na 5 °C.

Primer 2

Razdvajanje faza

[0034] Nađeno je da mAb 126 ima sklonost ka razdvajanju faza kada su u rastvoru koji je na temperaturi ispod 0 °C. Potrebno je da se prevaziđe razdvajanje faza tečnost-tečnost (LLPS) zbog čuvanja mAb 126 lekovitog produkta na 5 °C. Čuvanje lekovitog produkta na 5 °C zahteva stabilnost zbog periodičnog pada temperature na ispod 0 °C. Pokazano je da povećanje koncentracije NaCl snižava temperaturu na kojoj dolazi do LLPS u mAb 126 formulacijama a takođe je pokazano da povećanje koncentracije citrata snižava temperaturu na kojoj dolazi do LLPS u mAb 126 formulacijama.

[0035]Ispitivanje pojave LLPS je zasnovano na tehnici koja je posebno razvijena za opseg temperature (razdvajanje faza se dešava na temperaturi između -12 i 0 °C) koji je značajan za mAb 126. Dva mililitra (mL) uzoraka od 10 do 200 mg/mL mAb 126 se prenese u LvoStar II (FTS Svstems) jedinice za liofilizaciju u ciklusu pokazanom u Tabeli 3. U toku eksperimenata, pritisak se održava na atmosferskom. Uzorci se pod istim uslovima testiraju najmanje tri puta a standardna devijacija je približno 0.5 °C za uzorke merene u triplikatu. Uzorci se vizuelno prate u toku ciklusa liofilizacije na pojavu razdvajanja faza, uključujući tačku zamućenja (pojava belog zamućenja) i formiranja gustog, proteinski obogaćenog sloja na dnu posude. U toku hlađenja uzoraka se pojavljuje pojačana opalescencija, ali se ovaj efekat lako razlikuje od tačke zamućenja. Kada se pojavi tačka zamućenja, uzorak postaje beli mutan rastvor za manje od sekunde, nasuprot postepenom povećanju opalescencije kada je objekat iza posude još uvek vidljiv kroz uzorak.

[0036]Kako je pokazano u Tabeli 4, vidi se da povećanje koncentracije NaCl smanjuje temperaturu tačke zamućenja. Faktori koji ograničavaju povećanje koncentracije NaCl u farmaceutskoj formulaciji anti-IL-17 antitela su hipertoničnost i drugi efekti ne-faznog razdvajanja; ovi problemi se prevazilaze sa 200 mM NaCl uz dalje snižavanje temperature tačke zamućenja. Takođe je pokazano daje LLPS u mAbl26 bimodalno pri svim koncentracijama NaCl, izuzev sa 300 mM NaCl; LLPS je najjače pri koncentraciji od 100 mg/mL mAb 126 i efekti razdvajanja faza se smanjuju kako se koncentracija povećava ili smanjuje u odnosu na 100 mg/mL.

[0037]Meri se uticaj pH na tačku zamućenja mAb 126 rastvora. Nađeno je daje tačka zamućenja najniža pri dve vrednosti pH, pH 4 i pH 6. Smatra se da bi pH 6 trebalo da bude optimalan u odnosu na pH 4 kada se bira formulacija za mAb 126, zato što se hemijska nestabilnost mAb 126 na pH 4 isključuje korišćenjem niske tačke zamućenja na pH 4. Kako je pokazano u Primeru 3, na pH 6.3 - 6.4, za farmaceutske formulacije mAb 126, dolazi do formiranja gela, pa je u odnosu na pH 6 +/- 0.3 preferiran pH 5.7 +/- 0.3 kako bi se dobio pH opseg koji zadržava stabilnost u toku roka trajanja farmaceutske formulacije.

[0038] Efekti različitih pufera koji se uobičajeno koriste za razdvajanje faza tečnost-tečnost su ispitani kako bi se ustanovilo koji je optimalni sistem pufera za mAb 126 (Tabela 5); nađeno je daje citratni pufer najefikasniji pri sniženju temperature na kojoj dolazi do LLPS. Ove studije su izvedene sa 150 mM NaCl. Acetatni pufer je uporediv sa citratnim puferom na pH 5 u načinu na koji utiče na tačku zamućenja; međutim, hemijska nestabilnost na pH 5 čini ove pH uslove manje prihvatljivim.

[0039] Pokazano je da koncentracija citrata pozitivno utiče na LLPS (Tabela 6). Mada citrat smanjuje tačku zamućenja sve do 50 mM; takođe je zabeleženo da citratni pufer izaziva veći bol pri primeni injekcije. Zbog toga bi koncentracije citrata veće od 30 mM verovatno bile neprihvatljive od strane pacijenta.

Primer 3

Formiranje gela

[00401Biološki lekoviti produkti se čuvaju na 5 °C +/- 3 °C kako bi se minimizirala hemijska i fizička degradacija u toku roka trajanja produkta. Slučajevi kao što su termodinamička promena čvrste faze ili formiranje gela su uobičajeno neprihvatljivi, čak i ukoliko su reverzibilni, zato što mogu negativno da utiču na stabilnost i ometaju potreban vizuelni pregled uzoraka pre upotrebe.

[0041]Promena čvrste faze je uočena u uzorcima visoke koncentracije mAb 126 pri pH uslovima <pH 5 i >pH 7 na 5 °C. Pokazano je daje ova termodinamička promena reverzibilna uravnoteživanjem posuda na sobnoj temperaturi. Shodno tome, uzorci se testiraju pri različitim pH uslovima i prate termodinamičke promene kako bi se mnogo preciznije našle granice faza. Ovi testovi se izvode dijaliziranjem uzoraka u citratnom puferu na 5 °C pri pH 7, da se indukuje promena faze. Nakon toga se čvrsti materijal dijalizira na istoj temperaturi u odgovarajućim uslovima da se potvrdi da li će uzorci da se vrate u stanje rastvora. Postupak testiranja uravnoteživanj a je preferiran za uzorke koji se dugo čuvaju uz povremene provere zato što, iako određena formulacija može da bude termodinamički nestabilna, u nekim slučajevima mogu da budu potrebni meseci za promene kinetike čvrste faze.

[0042]Studije se izvode sa 100 mg/mL ili 150 mg/mL mAb 126 uz 200 mM NaCl, 10 mM citratnog pufera uz promene pH za 0.1 jedinica pH da se utvrdi gde su granice za formiranje čvrste faze. Nađeno je daje tranzicija između faza između pH 6.3 i 6.4 na 5 °C. Zbog granice faza, ciljani pH za mAb 126 formulaciju je snižen od pH 6 na 5.7, kako bi se osigurala stabilnost u toku čuvanja.

[0043]Dva eksperimenta sa 80 mg/mL mAb 126 na 5 °C su izvedena u 20 mM citratnom puferu, 200 mM NaCl i 0.03% polisorbata-80; nije došlo do formiranja gela na ili ispod pH 6.1, dok do formiranja gela dolazi iznad pH 6.1. Ovi eksperimenti pokazuju da formulacija sa 80 mg/mL mAb 126 ima prostor širine od pH 5.7 +/- 0.3 pH jedinica kako bi se izbeglo formiranje gela.

Primer 4

Hemijska nestabilnost

[0044]Za postizanje stabilnosti farmaceutske formulacije, potrebno je uzeti u obzir i fizičke i hemijiske izvore nestabilnosti u formulaciji. Hemijska nestabilnost može da dovede do razlaganja antitela.

[0045]Kako bi se ispitao uticaj pH na hemijsku stabilnost mAb 126 pri 100 i 150 mg/mL, uzorci mAb 126 se analiziraju hromatografijom na povećanje ukupnog % kiselih varijanti. Opseg pH 4 do 7 je ispitan u koracima od po pola pH jedinica. Pufer za studiju sadrži 10 mM citratni pufer, 150 mM NaCl i 0.02%> polisorbat 80. Dva mL rastvora se čuva u staklenim posudama za serum zapremine 3 mL sa gumenim zapušačima. Uzorci u ovim pH opsezima se čuvaju na 5 °C, 25 °C i 40 °C kako bi se mnogo preciznije odredio uticaj temperature na različite oblike razlaganja. Uzorci se analiziraju koristeći katjon izmenjivačku (CEX) HPLC uz upotrebu UV detektora i Dionex ProPac WCX-10 kolone (4x250mm) koristeći pH 6 lOmM Bis Tris Propan (mobilna faza A) i pH 9.6 lOmM Bis Tris Propan, 50mM NaCl (mobilna faza B).

[0046]Pomoću CEX, povećanja u ukupnom % kiselih varijanti (%AV) su mnogo pouzdaniji indikator razgradnje za mAb 126. Pomoću CEX je pokazano da su posude sa mAb 126 čuvane na 25 °C najstabilnije između pH 5-6 a manje stabilne sa porastom alkalnih pH uslova. Kada se uzorci čuvaju na 40 °C, najstabilniji su na pH 5 i 5.5, a na pH 6 su samo neznatno stabilniji nego na većim pH uslovima. Ovi rezultati pokazuju da pH farmaceutske formulacije u obliku rastvora za mAb 126 treba da bude između pH 5 i pH 6.

Primer5

Studija eksperimentalnog modela (DOE)

[0047]DOE studija koristi više različitih pristupa za ispitivanje fizičke i hemijske stabilnosti formulacija mAb 126 u obliku rastvora. Formulacije mAb 126 u obliku rastvora se izrađuju u skladu sa Tabelom 7. Svaka promenljiva se ispituje na pet nivoa da se izmeri bilo koje odstupanje koje može da postoji u parametrima dobijenog odgovora ili interkacijama između početnih promenljivih. Centralna tačka uslova za eksperiment je 20 mM citrata, 200 mM NaCl, pH 5.7, 0.02% polisorbata 80. Tri centralne tačke su raspoređene duž celog modela. Nezavisno izrađene tri centralne tačke obezbeđuju procenu pouzdanosti u analitičkim podacima bez potrebe da se svi uslovi izrade i analiziraju u duplikatu ili triplikatu. Uzorci se čuvaju na četiri različite temperature (5, 25, 30 i 40 °C). Ovaj raspon temperatura omogućava procenu aktivirane energije za dobijene rezultate. Pored toga, čuvanje na višoj temperaturi omogućava ranije predviđanje optimalnih uslova za formulaciju. [00481Brojne analitičke tehnike su izabrane za praćenje hemijske i fizičke stabilnosti, uključujući hromatografiju razdvajanja po veličini (SEC), katjon izmenjujuću hromatografiju (CEX) HPLC, analizu čestica na bazi HIAC, analizu čestica na bazi digitalne slike pomoću mikro-protočne imaginacije (MFI, Protein Simple/Brightvvell Model DPA 4200 sa opsegom veličine od 2-100um), spoljašnji izgled, redukovani ili ne-redukovani Bioanalvzer Lab-on-a-Chip (LoC), pH, viskozitet i UV absorpciju (za merenje sadržaja proteina).

[0049]Koristeći rezultate za sve temperature od početka perioda od tri meseca, izračunavaju se energije aktivacije (Ea) koristeći Arrhenius kinetički model (nula ili prvi redosled). Energije su nađene koristeći krivu regresije za sve pokušaje Model se nakon toga koristi za ekstrapolaciju trendova u toku 24 meseca na relevantnoj komercijalnoj temperaturi čuvanja (5 °C). Nulti redosled Arrhenius modela se koristi za SEC (monomer, polimer Rel. Sub/nečistoće), CEX (kisele varijante), redukovani/ne-redukovani LoC i UV sadržaj. Najpogodniji za trendove CEX bazne varijante je prvi model u redosledu.

Izdvajanje po veličini tečnom hromatografijom

[0050]Dve promenljive sa najjačim uticajem na procenat monomera na osnovu SEC rezultata su pH i koncentracija mAb 126. Uticaj koncentracije mAb 126 je linearan sa povećanjem koncentracije proteina što za rezultat ima smanjenje čistoće monomera.

[0051]Tri ulazne promenljive (pH, koncentracija NaCl i koncentracija pufera) pokazuju zakrivljeni oblik u svom uticaju na procenat monomera. U vezi sa koncentracijom NaCl i citrata, najstabilnije su vrednosti blizu centralne tačke. Uslovi nižeg pH su malo više stabilni nego u centralnoj tački, ali drugi rezultati puteva degradacije čine smanjivanje ciljanog pH manje atraktivnim.

[0052]Interakcije između uticaj a pH i koncentracije proteina dovode do efekta daje koncentracija proteina redukovana pri pH uslovima ispod 5.7. Predviđanja za čistoću monomera u toku dve godine pod uslovima centralne tačke u studiji je malo ispod 96.7%. Koncentracija polisorbata 80 od 0.02-0.04%) ima mali uticaj na stabilnost.

Katjonizmenjujućahromatografija

[0053]CEX analiza je fokusirana na porast kiselih vrsta u toku vremena. Statistički modeli CEX %AV (Ea je 23.7 kcal/g-mol) pokazuju da nakon 24 meseca čuvanja na 5 °C mogu da se očekuju male hemijske modifikacije. Generisanje kisele varijante je minimizirano blizu centralne tačke za pH, ali raste sa većom koncentracijom citrata. Predvidive koncentracije mAb 126 i polisorbata 80 pokazuju daje centralna tačka blizu skoro optimalnog položaja; međutim, na osnovu magnitude skale na y osi, razlika u stabilnosti centralne tačke za druge uslove je u osnovi zanemariva.

Redukovani Bioanalvzer LoC

[0054]Redukovani LoC procenat čistoće je kombinacija relativnih procenata teškog i lakog lanca. Dve ulazne varijabile sa najjačim uticajem na predviđanje u toku 24 meseca su pH i koncentracija NaCl. Procenat čistoće je maksimalan blizu centralne tačke od 200 mM NaCl. Procenat čistoće raste sa povećanjem pH. Čak i pri ekstremnim uslovima formulacije testiranim u DOE studiji, molekula je i dalje čista >98%, što ukazuje daje antitelo stabilno, mereno redukovanim LoC kroz opseg više različitih analiza. Ea je 21.8 kcal/g-mol.

Kombinovane projekcije

[0055]Svi uslovi u određivanju okvira studija u toku ovog eksperimenta su imali projekcije stabilnosti u toku 2 godine tako što predviđaju degradaciju <5%. Međutim, drugi fizički faktori ne dopuštaju pH uslove iznad pH 6.3, pa bi stoga ciljani uslovi za formulaciju trebalo da budu blizu ove pH vrednosti. Pored toga, važno je da se izabere cilj koji je optimalni globalni maksimum upotrebljene ulazne varijabile. Na osnovu sagledavanja procesa proizvodnje, koji ukazuje daje za ispumpavanje iz šprica potrebno >0.01% polisorbata 80, ciljana koncentracija polisorbata 80 je 0.03%. Na osnovu rezultata ove studije, optimalni uslovi za formulaciju su 20 mM citrata, 200 mM NaCl, pH 5.7 sa 0. 03% polisorbata 80.

Primer 6

Stabilnost sa 80mg/mLmAb 126

[0056]Stabilnost 80 mg/mL mAb 126 u 20 mM citrata, 200 mM NaCl, pH 5.7 sa 0.03% polisorbata 80 je ispitivana u toku 24 meseca. Za čuvanje na 5 °C, stabilnost farmaceutske formulacije anti-IL-17 antitela se meri nakon 0, 1, 3, 6, 9, 12, 18 i 24 meseca. Očekuje se da je temperatura čuvanja za farmaceutsku formulaciju anti-IL-17 antitela 5 °C. Ubrzane studije stabilnosti na 25 °C se izvode nakon 1, 3 i 6 meseci.

[0057]Brojne analitičke tehnike su izabrane za praćenje hemijske i fizičke stabilnosti, uključujući HPLC tečnu hromatografiju razdvajanja po veličini, katjon izmenjujuću hromatografiju HPLC, spoljašnji izgled, pH i UV absorpciju. CE-SDS se izvodi korišćenjem Beckman Coulter IgG Purity/Heterogeneity kita sa Beckman Coulter ProteorneLab PA800 pojačivačem ili Plus instrumenta za kapilarnu elektroforezu (CE). Za redukovani CE-SDS, uzorci se analiziraju u neobloženoj silika kapilari pod denaturisanim, redukujućim uslovima, molekularnim prosejavanjem kroz zamenljivi gel polimer matriks nakon injektovanja svakog uzorka. Za ne-redukovani CE-SDS, uzorci se razblaže do približno 5 mg/mL u vodi a nakon toga razblaže u razblaživaču uzorka (20mM IAM u lOOmM Tris, 1% SDS, pH 9.0) do približno 1 mg/mL. Nakon toga se uzorci analiziraju u neobloženoj silika kapilari pod denaturisanim ne-redukujućim uslovima molekularnim prosejavanjem kroz zamenljiv gel polimer matriks, pri konstantnom naponu. Za oba postupka, UV detekcija se izvodi na 214 nm. Rezultati su pokazani u Tabeli 8.

Claims (8)

1. Farmaceutska formulacija, naznačena time što uključuje anti-IL-17 antitelo u koncentraciji u rasponu od 80 mg/mL do 150 mg/mL, citratni pufer u koncentraciji od 20 mM, natrijum hlorid u koncentraciji od 200 mM, polisorbat-80 u koncentraciji u rasponu od 0.02% (m/v) do 0.03%o (m/v) i pH od 5.7, pri čemu anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo sa lakim lancem (LC) i teškim lanacem (HC), gde je navedeni LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a navedeni HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5.

2. Farmaceutska formulacija u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačena time što je koncentracija anti-IL-17 antitela 80 mg/mL.

3. Farmaceutska formulacija u skladu sa patentnim zahtevom 1 ili patentnim zahtevom 2, naznačena time što je koncentracija polisorbata-80 0.03%> (m/v).

4. Farmaceutska formulacija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 3, naznačena time što je formulacija anti-IL-17 antitela farmaceutska formulacija u obliku rastvora.

5. Farmaceutska formulacija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 4, naznačena time što uključuje anti-IL-17 antitelo u koncentraciji od 80 mg/mL, citratni pufer u koncentraciji od 20 mM, natrijum hlorid u koncentraciji od 200 mM, polisorbat-80 u koncentraciji od 0. 03% i pH od 5.7, pri čemu anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo koje sadrži dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5.

6. Formulacija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što anti-IL-17 antitelo uključuje antitelo koje sadrži dva laka lanca (LCa) i dva teška lanca (HCa), pri čemu je svaki LC sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 4 a svaki HC je sekvenca amino kiseline SEQ ID NO: 5.

7. Farmaceutska formulacija u skladu sa bilo kojim od prethodnih patentnih zahteva, naznačena time što je za upotrebu u terapiji.

8. Farmaceutska formulacija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 do 7, naznačena time što je za upotrebu u tretmanu reumatoidnog artritisa, psorijaze, ankiloznog spondilitisa, psorijatičnog artritisa ili multiple mijelome.