RS55515B1 - Postupak pripremanja pemetrekseda i njegovih lizinskih soli - Google Patents

Description

[0001]Predmetni pronalazak odnosi se na postupak pripremanja pemetrekseda i njegovih soli, preciznije njegovih lizinskih soli, na pomenute soli kao takve i na farmaceutske smeše koje ih sadrže.

OSNOV PRONALASKA

[0002]U farmaceutskim preparatima, pemetreksed se uobičajeno koristi u obliku dinatrijumove soli, specifično, dinatrijum-heptahidratna so je proizvod koji je na tržište iznela Eli Lilly and Companv pod zaštićenim imanom ALEVITA<®>i opisan je u EP1259513.

[0003]Pemetreksed je originalno opisan u EP432677/US5344932. Sinteza prikazana u ovom patentu daje 2-amino-7H-pirolo (2,3-d) pirimidin-4-ol kao sirovi materijal, amino grupa ovog derivata protektovana je pivaloil-hloridom, a dobijeni proizvod se u dva koraka transformiše u odgovarajući 3-jodo derivat. Reakcija kuplovanja sa dimetil N-(4-etinilbenzoil)-L-glutamatom, koja sledi, daje biarilacetilenski derivat koji se katalitičkom hidrogenizacijom i zatim saponifikacijom konvertuje u pemetreksed. Ovaj postupak, međutim, nije pogodan za industrijsku primenu.

[0004]Pemetreksedna dikiselina može da se dobije drugim novijim postupcima sinteze među kojima su oni saopšteni u U.S. 5,416,211, u EP 9916742 i u 905128AVO CJ Barnett et al, Org. Proc Res & Develop., 1999, 3, 184-188, korišćenjem industrijske sinteze koja zahteva pripremanje intermedijarnog pemetreksed-dietilestra 3 (Sema I):

[0005]U navedenoj referenci, pemetreksed-dietilestar 4 priprema se reakcijom

[000614-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo (2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoeve kiseline, (2), sa L-dietil-hidrohloridglutamatom u prisustvu kondenzujućeg sredstva, u N,N-dimetilformamidu kao rastvaraču. Ovaj postupak ne obezbeđuje izolaciju pemetreksed-dietilestra (3): posle postupaka ekstrakcije dihlorometanom i zamene rastvarača etanolom, gore pomenuti prozvod se izoluje i prečisti u vidu soli p-toluenesulfonske kiseline (4) koja se zatim baznom hidrolizom i acidifikacijom konvertuje u pemetreksed (5). Pemetreksedna dikiselina (5) konvertuje se u odgovarajuću dinatrijumovu so tretmanom vodenim rastvorom sode.

[0007]Ovaj postupak uključuje upotrebu DMF (rastvarač visoke toksičnosti) kao rastvarača za reakciju kuplovanja, i pored toga, iako omogućava dobijanje pemetrekseda visoke čistoće, sastoji se od duge sekvence operacija za izolaciju i prečišćavanje pemetreksed-diestarske soli (4), to jest, 3 mlevenja i kristalizacije sa odgovarajućim filtracijama, čime se posledično smanjuje efikasnost postupka.

[0008]Sledeći negativan aspekt postupka prečišćavanja pemetreksednog estra (3) preko formiranja soli p-toluenesulfonske kiseline predstavlja moguće formiranje estara reakcijom p-toluenesulfonske kiseline sa alkoholima. Takvi estarski p-toluensulfonski proizvodi klasifikuju se kao genotoksična alkilirajuća sredstva i njihov sadržaj mora da se smanji na veoma niske vrednosti (Genotoxic and carcinogenic impurities in drug substances and Products: Recommended Approaches, FDA Guidance for Industrv, 2008; Guideline on the Limits of genotoxic Impurities, EMEA/CHMP 2006).

[0009]Pemetreksed-dietilestar (3) se, međutim, opisuje u literaturi kao čvrsto jedinjenje: u CJ Barnett et al, Org. Proc Res & Develop., 1999, 3, 184-188, na strani 188, jedinjenje 13 prikazano je sa pf 169-171 °C; u E.C. Tavlor and B. Liu, J. Org. Chem., 2003, 68, 9938-9947, na strani 9945, jedinjenje 25a prikazano je sa pf 84-86 °C; u T. Miwa et al, J. Org. Chem., 1993, 58, 1696-1701, na strani 1700, jedinjenje 23a prikazano je sa pf 131-133 °C.

[0010]U EP 2409978 zahtevan je novi postupak pripremanja pemetreksed-diestra (3), koji omogućava da se eliminišu postupci sinteze i prečišćavanja (4). Preciznije, reakcija kuplovanja između kiseline (2) i dietil-glutamata obavlja se u aprotičkom organskom rastvaraču, tačnije, u mešavini DMF i dihlorometana; na kraju reakcije, mešavina se ispere baznim vodenim rastvorom, rastvor se koncentruje, doda mu se polarni organski rastvarač, poželjno etanol, i pemetreksed-diestar (3) se izoluje kristalizacijom. Čak i u ovom postupku koriste se visoko toksični rastvarači (DMF i dihlorometan), a pored toga, obrada reakcione mešavine posle kuplovanja obavezno uključuje veliku zapreminu rastvarača i brojna ispiranja organske faze vodenim rastvorima da bi se uklonio prisutni DMF, čime se posledično ograničavaju efikasnost i produktivnost postupka. Pemetreksed-dinatrijumova so (6) se zatim dobij a saponifikacijom estra (4).

[0011]Pemetreksed-dinatrijumova so koja se koristi u farmaceutskim formulacijama odlikuje se niskom stabilnošću i formiranjem degradacionih nečistoća, i u čvrstom stanju i u rastvoru, posebno u vezi sa efektima oksidativnog tipa, što zahteva pogodne uslove rukovanja i pakovanja u kontrolisanoj atmosferi i isključuje korišćenje tečnih formulacija spremnih za upotrebu. Nedavno, u WO 2012/015810, saopštene su vodene formulacije pemetreksednih soli sa antioksidantima i helirajućim sredstvima, sa boljom dugoročnom stabilnošću, mada i one pokazuju porast degradacionih proizvoda do vrednosti od 1-5%, što je, prema ICH vodiču, količina nečistoća neprihvatljiva za farmaceutske proizvode, ako nisu na odgovarajući način kvalifikovani.

[0012]Okvirom predmetnog pronalaska obuhvćeno je prevazilaženje problema koji postoje u stanju tehnike, a odnose se na sintezu pemetrekseda i nestabilnost njegovih dinatrijumovih soli.

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0013]Predmetni pronalazak zasniva se na otkriću da korišćenje mešavina voda-alkohol kao rastvarača, u reakciji kuplovanja (kuplovanje) tokom sinteze pemetrekseda, omogućava precipitaciju intermedijarnog dietilestra direktno u reakcionoj mešavini, bez potrebe za korišćenjem DMF. Tako dobijeni pemetreksed-dietilestar već ima visoku čistoću koja dopušta njegovo direktno korišćenje u kasnijim koracima sinteze pemetrekseda, bez potrebe za obavljanjem koraka salinifikacije, prečišćavanja i/ili ispiranja, opisanih u stanju tehnike u skladu sa metodima u kojima se koristi DMF.

[0014]Pored toga, pronalazači predmetnog pronalaska zapazili su da je (bi)lizinska so pemetrekseda iznenađujuće i neočekivano stabilnija od već poznate dinatrijumove soli. Ova povećana stabilnost bilizinske soli predstavlja značajnu tehničku pogodnost jer se njome prevazilaze problemi nestabilnosti aktivnog sastojka pemetrekseda, u koracima rukovanja i skladištenja.

[0015]Za potrebe predmetnog pronalaska, pemetreksed-bilizinska so može generički da se označi kao lizinska so, kao što dinatrijumova so može generički da se označi kao natrij umova so.

[0016]Prema tome, ciljevi predmetne prijave su:

postupak pripremanja pemetreksedne soli opšte formule I

gde je B+ pogodni katjon, poželjno Na+ ili protonisani lizin, koji uključuje sledeće korake: a) reakciju 4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo (2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoeve kiseline (2) sa L-dietilglutamat-hidrohloridom u prisustvu

kuplujućeg reagensa da se dobije pemetreksed-dietilestar (3)

b) hidrolizu pemetreksed-dietilestra (3) do pemetreksedne kiseline (5)

c) salinifikaciju bazom odabranom između NaOH ili lizina, da se dobije

odgovarajuća pemetreksedna so,

koji se karakteriše time što, u koraku a):

1) kiselina (2) je prethodno konvertovanain situu odgovarajući natrijum-karboksilat ili morfolin-karboksilat koji mogu da se izoluje ili da direktno reaguju; 2) upotrebljeni reakcioni rastvarač sastoji se od hidro-alkoholne mešavine rastvarača u kojoj se alkohol bira iz grupe: metanol, etanol, izopropanol, n-propanol; 3) intermedijarni pemetreksed-dietilestar (3) direktno precipitira u reakcionoj mešavini, sa čistoćom od >98%.

[0017]Sledeći cilj predmetnog pronalaska je (bi)lizinska so N-[4-[2-(2-amino-4-okso-4,7-dihidro-3H-pirolo [2,3-d] pirimidin-5-il) etil] benzoil]-L-glutaminske (pemetreksedne) kiseline formule (1) u anhidrovanom obliku ili u obliku hidrata, poželjno u kristalnom obliku definisanom spektrom difrakcije X-zraka prikazanim na Slici VII.

[0018] Sledeći ciljevi prijave su jedinjenja prema formuli (1) gore, za upotrebu u vidu medikamenta, poželjno antitumorskog sredstva;

postupak sinteze jedinjenja formule (1) uključuje korak salinifikacije pemetreksedne bikiseline (5) lizinskom bazom;

farmaceutska smeša koja sadrži jedinjenje prema formuli (1) i/ili njegov kristalni oblik kako je gore navedeno i najmanje jedan farmakološki prihvatljivi

ekscipijent.

CRTEŽI

[0019] Slika I prikazuje spektar difrakcije X-zraka dietilestra pemetrekseda, precipitiranog u izopropanolu/vodi.

Slika II prikazuje spektar difrakcije X-zraka dietilestra pemetrekseda precipitiranog u etanolu/vodi/acetonu.

Slika III prikazuje DSC (diferencijalna skenirajuća kalorimetrija, differential scanning calorimetrv) profil pemetreksed-dietilestra precipitiranog u etanolu/ vodi/acetonu.

Slika IV prikazuje spektar difrakcije X-zraka pemetreksed-dietilestra kristalisanog u 2-metil-tetrahidrofuranu/etanolu.

Slika V prikazuje spektar difrakcije X-zraka pemetreksed-dietilestra kristalisanog u etanolu/metiletil-ketonu.

Slika VI prikazuje DSC (diferencijalna skenirajuća kalorimetrija) profil pemetreksed-dietilestra kristalisanog u etanolu/metiletil-ketonu.

Slika VII prikazuje spektar difrakcije X-zraka pemetreksed-lizinske soli.

Slika VIII prikazuje podatke difrakcije X-zraka pemetreksed-lizinske soli.

Slika IX prikazuje DSC (diferencijalna skenirajuća kalorimetrija) profil lizinske soli.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0020] Predmetni pronalazak sastoji se od sledećih aspekata, detaljno opisanih dole.

Postupak sinteze

[0021] Postupak sinteze kao cilj predmetnog opisa je postupak pripremanja pemetreksedne soli, opšte formule I

gde je B+ pogodni katjon, poželjno odabran između Na+ ili protonisanog lizina.

[0022] Ova so dobijena je novim, industrijski primenljivim postupkom sinteze (šema II), koji omogućava lako dobijanje intermedijara sinteze (3), pemetreksed-etildiestra, u čvrstom stanju, uz izostavljanje upotrebe DMF.

[0023]Preciznije, upotreba hidroalkoholnih mešavina (poželjno izopropanol/voda) kao rastvarača za reakciju kuplovanja (kuplovanje) rezultuje precipitacijom intermedijara (3) u reakcionoj mešavini. Pemetreksed-diestar (3) dobijen posle filtracije, već ima visoku čistoću (>98%) koja omogućava njegovo direktno korišćenje u narednim koracima, bez dodatnog prečišćavanja.

[0024] Tako pripremljeni pemetreksed-diestar (3) može da se konvertuje direktno u željenu pemetreksednu so, na primer, dinatrijumovu ili dilizinsku so, bez potrebe da se pemetreksed izoluje u obliku slobodne kiseline koja je esencijalna kada se priprema pemetreksed-estarska so sa p-toluensulfonskom kiselinom, kako je opisano u stanju tehnike. Direktno formiranje pemetreksedne soli bez potrebe da se pemetreksed izoluje u obliku kiseline predstavlja dodatnu prednost postupka pripreme kao cilja predmetnog pronalaska.

[0025] Farmaceutski prihvatljive pemetreksedne soli koje se mogu dobiti postupkom predmetnog pronalaska su, posebno, bez ograničavanja, dinatrijumove soli i (bi)lizinske soli.

[0026] Ove soli mogu biti u anhidrovanom obliku ili u hidratisanom obliku. Poželjno, pomenuta so uključuje procenat vode u opsegu od 0-22% po težini. Treba imati u vidu, na primer, da jedinjenje koje je prisutno na tržištu, Alimta<®>, odgovara dinatrijum-pemetreksed-heptahidratu i sadrži procenat vode koji je jednak 21% po težini, a druga so pemetrekseda dobro poznata u literaturi, dinatrijum-pemetreksed-hemipentahidrat ima, umesto toga, procenat vode jednak 8.7% po težini.

[0027]Postupak pripremanja soli formule 1, prema predmetnom pronalasku uključuje, posebno, sledeće korake: a) reakciju 4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo (2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoeve kiseline (2) sa L-dietilglutamat-hidrohloridom u prisustvu

kuplujućeg reagensa da se dobije pemetreksed-dietilestar (3);

b) hidrolizu pemetreksed-dietilestra (3) do pemetreksedne kiseline (5)

c) salinifikaciju bazom odabranom između NaOH ili lizina, da se dobije

odgovarajuća pemetreksedna so.

[0028]U literaturi su saopšteni brojni postupci sinteze 4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo (2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoeve kiseline, (2) od kojih možemo navesti EP432677, EP 905 128, US 5,416,211, EP 2301909, CJ Barnett et al., Org. Proc Res & Dev., 1999, 3, 184-188. Uopšteno, kiselina 2 može pogodno da se pripremi u skladu sa opštim sintetskim postupkom opisanim na sledećoj Šemi III:

[0029]U EP 905 128 (Primer 1, str. 10), sirovi aldehid 7 (prinos 87%) se ne izoluje i prečišćava, ali se organski rastvor koji sadrži dobijeni aldehid 7 filtrira na smoli da bi se uklonio još uvek prisutni elementarni Pd, kao i organski rastvarač suvom evaporacijom. Tako dobij eni sirovi aldehid 7 se zatim prečišćava tretmanom natrijum-bisulfitom i formiranjem odgovarajuće derivatske natrijumove soli sulfonske kiseline (derivat poznat i kao 'Bertagnini-jevo jedinjenje') u vidu čvrste kristalne supstance (EP905128, Primer 2, strana 11).

[0030]U EP 2301909 umesto toga saopšteno je da nije neophodno da se sirovi aldehod prečišćava uz formiranje derivatske natrijumove soli sulfonske kiseline, nego je dovoljna ekstrakcija reakcione mešavine organskim rastvaračem (poželjno mešavinom rastvarača), diskoloracija na silika-gelu i zatim suva evaporacija organskog rastvarača, da se dobije aldehid (7) koji već ima čistoću od 96%, pogodan za sledeće korake sinteze.

[0031]Sada smo pronašli da je umesto toga dovoljno da se izvede postupak opisan u EP905128, primer 1, da bi se dobio rastvor sirovog aldehida 7 u etil-acetatu, koji može direktno da se koristi u narednom koraku bromovanja, bez potrebe za prečišćavanjem preko slanog natrijum-sulfonskog derivata, kako je očekivano na osnovu EP905128, ili ekstrakcijom, izolacijom i diskoloracijom, kako je očekivano na osnovu EP2301909.

[0032]Sirovi aldehid (7) transformiše se u odgovarajući bromoaldehid koji zatim direktno reaguje sa 2,4-diamino-6-hidroksipirimidinom, tako da se dobije metil-4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-lH-pirolo(2,3-d)pirimidin-5-il)etil)benzoat (9) (EP905128, primer 4, strana 11).

[0033]Saponifikacija estra (9) i zatim acidifikacija reakcione mešavine, vodi do karboksilne kiseline (2) (EP905128, primer 5, strana 11) koja ima odgovarajuću čistoću za pripremanje dinatrijum-pemetrekseda za farmaceutsku upotrebu.

[0034]Ciljni postupak sinteze pemetrekseda predmetne prijave karakteriše se uglavnom činjenicom da se reakcioni rastvarač upotrebljen u koraku sinteze a) Šeme I sastoji od mešavine vode i etanola kao rastvarača, u kojoj se alkohol bira iz grupe koja sadrži metanol, etanol, izopropanol, n-propanol. Poželjno mešavina rastvarača predstavljena je izopropanolom/vodom ili vodom/etanolom. Posebno, voda i izopropil-alkohol ili etil-alkohol su u odnosu v/v (zapr./zapr.) između 3/1 i 1/3, poželjno između 6/4 i 4/6. Količina korišćene mešavine rastvarača je između 5 i 25 zapremina u odnosu na kiselinski prekursor (2) i poželjno je između 10 i 20 zapremina, pod izrazom "zapremina" misli se na odnos rastvarač/rastvorak, izraženo u ml rastvarača/g prekursora.

[0035]Pod reakcionim uslovima u koraku sinteze a) intermedijarni pemetreksed-dietilestar (3) precipitira direktno u reakcionoj mešavini, sa čistoćom >98%, i može da se koristi direktno u sledećem koraku, bez daljeg prečišćavanja.

[0036]Pored toga, u koraku sinteze a), kiselina (2) se prethodno konvertujein situu odgovarajući natrijum-karboksilat koji može da se izoluje (US2008/0146799, primer 5, str. 13) ili da reaguje direktno. Alternativno, uvek u sintetskom koraku a), kiselina 2 može da se konvertujein situu odgovarajući morfolinijum-karboksilat koji zatim direktno reaguje. Salinifikacijain situmože da se obavi prema uobičajenim metodima poznatim stručnjaku u oblasti.

[0037]Kuplujući reagens bira se između CDMT (2-hloro-4,6-dimetoksi-l,3,5-triazina), EDC (l-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimida, DMTMM (4-(4,6-dimetoksi-1,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolin-hlorida) i poželjnije CDMT (2-hloro-4,6-dimetoksi-1,3,5-triazina).

[0038]Reakcija se odvija na temperaturi između 0 °C i 60 °C, poželjno između 15 i 50

°C.

[0039]Kompletna precipitacija pemetreksed-dietilestra (3) dobij a se daljim dodavanjem reakcione mešavine, 5-35 zapremina, poželjno 10-25 zapremina, vode ili mešavine voda/aceton u odnosu od 2/1 do 1/1.

[0040]Dobijena suspenzija može da se drži na mešalici na temperaturama između 0 i 5 °C, poželjno između 5 i 30 °C, tokom vremena od 1 do 24 sata, poželjno između 5 i 12 sati.

[0041]Tako dobijeni pemetreksed-diestar (3), posle filtracije i ispiranja hidroalkoholnom mešavinom rastvarača, može potom da se suši pod vakuumom na oko 50 °C do postizanja konstantne težine. Ovaj sirovi proizvod pokazuje visoku HPLC čistoću od >98% i, za potrebe predmetnog pronalaska, može da se koristi direktno bez daljeg prečišćavanja u narednim reakcijama hidrolize u slobodnu kiselinu.

[0042]Posle toga, konverzija pemetreksed-diestra (3) u kiselinu (5) može da se izvede prema procesu koji je već opisan u US 5,416,211 ili EP 905128, hidrolizom u vodenom rastvoru, u prisustvu baze. Pemetreksed se zatim izoluje posle acidifikacije, precipitacijom u mešavinama vode i alkohola.

[0043]Reakciona temperatura iznosi između 0 i 40 °C, poželjno između 10 i 30 °C.

[0044]U formiranju pemetreksedne soli, kiselina (5) se salinifikuje pogodnom bazom, poželjno odabranom između NaOH ili lizina, da se dobije odgovarajuća so pemetrekseda.

[0045]Ovde opisani postupak može da se koristi i za pripremanje pemetreksed-dinatrijumove soli koja može da se dobije od bikiselinskog prekursora (5), na primer, tretmanom natrijum-hidroksidom u vodenom rastvoru do pH 8 i precipitacijom sa rastvaračem koji se meša sa vodom, po analogiji sa onim što je saopšteno u EP 905 128.

[0046]Alternativno, visoka čistoća pemetreksed-diestra (3) omogućava dobijanje dinatrijumove soli u jednom koraku, direktno, baznom hidrolizom u hidroalkoholnom rastvoru (3) i precipitacijom dinatrijumove soli dodavanjem rastvarača koji se meša sa vodom.

[0047]Pemetreksed-diestar formule 3

dobijen prema gore opisanom postupku, ima pretežno amorfan oblik čiji stepen kristalizacije može da varira u zavisnosti od reakcione serije (Slika 1).

[0048]Sirovi pemetreksed-diestar može u narednim reakcijama da se koristi bez daljeg prečišćavanja, ili može da se dodatno prečišćava, za bolju karakterizaciju, kristalizacijom uz korišćenje niza rastvarača koji se biraju između acetonitrila, etil-acetata/etanola, 2-metil-tetrahidrofurana/etanola, metiletil-ketona/etanola, izopropanola/vode, dajući pemetreksed-dietilestar (3) sa čistoćom od >99.5%, kako je pokazano korišćenjem HPLC.

[0049]Posebno, autori predmetnog pronalaska zapazili su sledeće: korišćenjem 2-metil tetrahidrofurana/etanola kao mešavine za kristalizaciju, dobijena kristalna čvrsta supstanca pemetreksed-diestar (3) pokazuje spektar difrakcije X-zraka dat na Slici IV, dok korišćenjem etanol/metiletil-ketona kao mešavine za kristalizaciju, dobijena kristalna čvrsta supstanca pemetreksed-diestar (3) pokazuje spektar difrakcije X-zraka dat na Slici V.

[0050]Pemetreksed-lizinska so.

[0051]Cilj predmetnog pronalaska je i jedinjenje lizinska so N-[4-[2-(2-amino-4-okso-4,7-dihidro-3H-pirolo [2,3-d] pirimidin-5-il) etil] benzoil]-L-glutaminske (pemetreksedne) kiseline, formule (1)

u anhidrovanom ili hidratisanom obliku.

[0052]Poželjno, ova so ima procenat vode u opsegu od 0-22% po težini.

[0053]Pored toga, lizinska so može da se dobije u vidu kristalne čvrste supstance i karakteriše se spektrom difrakcije X-zraka pokazanim na Slici VII, i zbirno prikazanim na Slici VIII.

[0054]Lizinska so se karakteriše i DSC (diferencijalna skenirajuća kalorimetrija) profilom pokazanim na Slici IX, gde ima tačku topljenja na 230 °C, što je praćeno dekompozicijom. Termogravimetrijska analiza (TGA) pokazuje gubitak težine od 3.8%.

[0055]Ciljna pemetreksed-lizinska so predmetne prijave karakteriše se značajno višom stabilnošću u poređenju sa dinatrijumovom solju, kako je pokazano na sledećim tabelama.

[0056]Pemetreksedna dinatrijumova so pokazuje značajnu degradaciju u ubrzavajućim uslovima na 40 °C, i formiranje 3 glavne nečistoće u relativnim vremenima retencije 0:19, 0:26 i 1:15 zapaženo je već posle 3 meseca. U istim uslovima, lizinska so je praktično nepromenjena.

[0057]Ispitivanje u uslovima stresa na 100 °C tokom 6 dana, pokazuje primetan porast nečistoća u retencionim vremenima 0:19, 0:26 i 1:15, i u slučaju hemipentahidratne dinatrijumove soli (0.4% -2%) i u slučaju komercijalne heptahidratne dinatrijumove soli (0.4-1%).

[0058]Glavni degradacioni proizvodi identifikovani su pomoću HPLC/MS i izgleda da ove strukture mogu da se pripišu oksidaciji proizvoda. Sličan obrazac nečistoća zapažen je tretmanom pemetreksed-dinatrijumove soli u vodenom rastvoru, u prisustvu oksidišućih sredstava kao što je 10% vodonik-peroksid.

[0059]Kao dodatna potvrda degradacije oksidativnog tipa, uzorak dinatrijumove soli pakovan u kontrolisanoj atmosferi azota, pod stresnim uslovima od 100 °C tokom 6 dana, pokazuje upadljivo smanjenje sadržaja nečistoća.

[0060]Lizinska so je takođe mnogo stabilnija pod uslovima stresa od 100 °C tokom 6 dana i iste nečistoće ne prevazilaze vrednost od 0.2%.

[0061]Prema tome, ovi podaci pokazuju kako je pametreksed-lizinska so značajno stabilnija od odgovarajuće dinatrijumove soli i stoga može poželjno da se koristi kao so aktivnog sastojka pemetrekseda jer je manje podložna degradaciji/dekompoziciji izazvanoj oksidativnim stresom.

[0062]Pemetreksed-lizinska so, kao i njen kristalni oblik definisan spektrom difrakcije X-zraka sa Slike VII, pogodno se koristi kao medikament i poželjno, slično kao pemetreksed-dinatrijumova so, kao antitumorski lek.

[0063]Pemetreksed-lizinska so može da se dobije uopšteno putem salinifikacije pemetreksedne bikiseline (5) baznim lizinom. Preciznije, u jednoj formi metoda, so formule I može da se dobije dodavanjem vodenom rastvoru pemetreksedne kiseline (5) od 2 do 4 ekvivalenta lizin-hidrata, poželjno 3 ekvivalenta. Zatim, formirana lizinska so precipitira u reakcionoj mešavini, dodavanjem rastvarača koji se meša sa vodom, na primer, acetona, etanola, metanola ili izopropanola, poželjno etanola.

[0064]Zapremine vode iznose između 3 i 8 zapremina u odnosu na kiselinski prekursor i poželjno 5 zapremina, zapremine organskog rastvarača iznose između 18 i 48 zapremina u poređenju sa kiselinskim prekursorom, poželjno 30 zapremina, pod izrazom "zapremina" misli se na odnos rastvarač/rastvorak u ml rastvarača/g prekursora.

Farmaceutske smeše

[0065]Farmaceutske smeše predmetnog pronalaska su smeše/formulacije koje sadrže pemetreksed-lizinsku so formule I ili njen kristalni oblik definisan spektrom sa Slike 3, i jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenata. Prevashodna namena ovih smeša je da se koriste kao antitumorska sredstva.

[0066]Smeše opisane u ovom tekstu poželjno se primenjuju oralnim, parenteralnim ili intravenskim putem i, u svakom slučaju, svakim putem primene poznatim stručnjacima u oblasti i pogodnim za dostavu na ciljno mesto od farmakološkog interesa.

[0067]Smeše za oralnu primenu mogu da budu u vidu tečnih rastvora ili suspenzija ili praškova. Smeše mogu biti predstavljene jediničnom doznom formom, kako bi se olakšala primena.

[0068]Svaka pojedinačna doza sadrži prethodno određenu količinu aktivnog sastojka za koju je izračunato da proizvodi željeni terapijski efekat, udruženu sa pogodnim farmaceutskim ekscipijentom. Tipične jedinične dozne forme uključuju pilule, tablete, kapsule ili slično, u slučaju čvrstih smeša, i fiole ili špriceve, u slučaju tečnih smeša.

[0069]U takvim čvrstim oblicima, aktivni sastojak/sastojci mešaju se sa najmanje jednim inertnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijentom ili nosačem i, obično, aditivima.

[0070]Smeše za parenteralnu upotrebu mogu biti, na primer, rastvori, vodene ili uljane suspenzije ili emulzije i mogu da se formulišu u skladu sa onim što je poznato u struci, uz korišćenje pogodnih disepergujućih sredstava, vlažećih sredstava i suspendujućih sredstava.

[0071]Prisutni mogu biti i prezervansi i drugi aditivi kao što su antimikrobna sredstva, antioksidanti, helirajuća sredstva i inertni gasovi (Mack (1982) Remington's Pharmaceutical Sciences, 16<th>Edition).

[0072]Komponente sadržane u farmaceutskim smešama predmetnog pronalaska mogu da se liofilizuju za skladištenje i da se pre upotrebe rekonstituišu u pogodnom nosaču.

[0073]Tipičan primer farmaceutske smeše prema predmetnom pronalasku može da bude predstavljen sledećim:

[0074]Količina rastvora sa željenom količinom medikamenta distribuira se u fiole i liofilizuje.

PRTMERI

[0075]Slede neograničavajuće forme predmetnog pronalaska.

PRIMER 1

Pripremanje metil 4-(4-oksobutil)benzoat, (4-(4-karbometoksifenil) butanala), jedinjenje (7) Šeme III.

[0076]13.0 g litijumacetat-dihidrata, 14.7 g litijum-hlorida i 17.1 g tetrabutilamonijum-hlorida doda se u rastvor 25.0 g metil-p-bromobenzoata u 285 ml DMF. Azot se uvodi u mešavinu i zatim se doda 12 ml 3-buten-l-ola i 0.52 g paladijum-acetata. Mešavina zagrejana na 75 °C ostavi se da reaguje do potpune konverzije metil-p-bromobenzoata (kontrola korišćenjem HPLC).

[0077]Pošto se ohladi do sobne temperature, u reakcionu mešavinu se doda 285 ml vode i 285 ml etil-acetata. Posle razdvajanja faza, vodena faza se ekstrahuje etil-acetatom (2x143 ml), kombinovane organske faze se isperu sa 3% NaCl (3x285 ml) i vodom (2x285 ml). Proizvod (7) se dobija u rastvoru etil-acetata, sa prinosom koji iznosi oko 85% i u sledećoj reakciji se koristi kao takav, bez izolacije ili dodatnog prečišćavanja,.

PRIMER 2

Pripremanje metil-(RS)-4-(3-bromo-4-okso butil) benzoata, jedinjenje (8) Šeme III.

[0078]125 ml rastvora u etil-acetatu, iz Primera 1, koji sadrži 3 g (7), koncentruje se u vakuumu do oko 22 ml. Dobijeni rastvor se ohladi na 0 °C i doda mu se 0.126 ml 33% HBr u AcOH i 0.97 ml broma. Posle 1 sata mešanja na 0 °C, u reakcionu mešavinu se doda 2% natrijum-metabisulfit (21 ml), izdvojena organska faza se ispere zasićenim natrijum-bikarbonatom (21 ml) i 3% NaCl (21 ml). Rastvor se izloži suvoj evaporaciji na sniženom pritisku, rezidua se solubiliše u 46 ml acetonitrila i dobijeni rastvor se koristi direktno u sledećem koraku.

PRIMER 3

Pripremanje metil-4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoata, jedinjenje (9) Šeme 111.

[0079] 46 ml vode, 6.2 g 2,4-diamin-6-hidroksipirimidina i 2.72 g natrijum-acetata doda se u rastvor bromo-derivata (8) u acetonitrilu, iz Primera 2. Mešavina se meša na 40 °C oko 3.5 sati, ohladi do sobne temperature i filtrira. Čvrsta supstanca se ispere sa 35 ml acetonitrila/vode 1/1 i suši pod vakuumom na 50 °C. Dobija se 3.4 g (9) u vidu bledoružičaste čvrste supstance (kombinovani prinos u odnosu na (7) iznosi 69%).

PRIMER 4

Pripremanje 4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoeve kiseline, jedinjenje (2) Šeme I.

[0080] Suspenzija 14.0 g (9) iz primera 3 u 162 ml 2 M NaOH zagreva se na 40 °C 1 sat. Posle hlađenja na sobnoj temperaturi, reakciona mešavina se razblaži sa 170 ml acetona i pH se podesi na oko 4.4 korišćenjem 6 N HC1. Dobijena suspenzija se filtrira i ispere na filteru, sa 60 ml acetona/vode 1/1 i 60 ml acetona. Čvrsta supstanca se suši pod vakuumom na 50 °C da se dobije 13.58 g proizvoda (2) u vidu beličaste čvrste supstance (kvantitativni prinos).

PRIMER 5

Pripremanje natrijumove soli 4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoeve kiseline, natrijumova so jedinjenja (2) Šeme I.

[0081]2 M NaOH (pH oko 13) dodaje se do potpunog rastvaranja u suspenziju 10.0 g jedinjenja (2) iz primera 4 u 60 ml vode. pH se zatim podesi na 9 pomoću 1 M HC1, čime se dobij a obilna precipitacija proizvoda. Posle 1 sata mešanja na sobnoj temperaturi, filtriranja i sušenja pod vakuumom na 50 °C, dobija se natrijumova so jedinjenja (2), u vidu bele čvrste supstance.

PRIMER 6

Pripremanje dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoil-L-glutamata, jedinjenje (3) Šeme I.

[0082]36 ml 1 M NaOH, 60 ml vode i 64 ml izopropanola doda se u 10.72 g kiseline (2) iz Primera 4, na sobnoj temperaturi. Posle 60 minuta mešanja na sobnoj temperaturi, u mešavinu se doda 5.93 ml N-metil morfolina (NMM), 64 ml izopropanola i 9.47 g 2-hloro-4,6-dimetoksi-l,3,5-triazina (CDMT). Mešavina se meša na sobnoj temperaturi 20 minuta i zatim joj se doda 2.18 ml NMM i 4.74 g dietil-L-glutamat-hidrohlorida. Posle 40 minuta doda se još 2.18 ml NMM i 4.74 g dietil-L-glutamat-hidrohlorida. Posle 6 sati reakcije, mešavini se doda 192 ml vode, tako dobijena suspenzija se meša preko noći, filtrira i čvrsta supstanca se ispere vodom (3x30 ml) i suši pod vakuumom na 50 °C. Dobija se 15.76 g dietilestra pemetrekseda (3) u vidu čvrste supstance krem boje (prinos 90.7%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 98.9%

[0083]Proizvod ima spektar difrakcije X-zraka pokazan na Slici 1 i odgovara delimično amorfnom proizvodu.

[0084]Zavisno od serije reakcionih jedinjenja, može se dobiti manji stepen kristalnosti.

PRIMER 7

Pripremanje dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo (2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoil-L-glutamata, jedinjenje (3) Šeme I.

[0085]10.00 g kiseline (2) iz primera 4, doda se na sobnoj temperaturi u 90 ml etanola, 40 ml vode i 8.83 g 2-hloro-4,6-dimetoksi-l,3,5-triazina (CDMT).

[0086]Mešavina koja se sastoji od 21.1 g NaOH, 20 ml vode i 10.3 ml N-metil morfolina prvo se doda u dobijenu suspenziju, a zatim se doda 10,45 g dietil-L-glutamat- hidrohlorida.

[0087]Reakciona mešavina se meša na 40 °C 3 sata i filtrira kroz ležište koje se sastoji od 0,48 g aktivnog ugljenika i 0.48 g celita. Posle ispiranja filtera sa 20 ml mešavine etanola/vode 3/2, filtrat se zagreje na 40 °C i doda se u 49 ml vode i 55 ml acetona.

[0088]Mešavina se ohladi na sobnoj temperaturi i, posle hlađenja na 0 °C 1 sat, dobijena suspenzija se filtrira, čvrsta supstanca se ispere sa 80 ml mešavine vode/acetona 3/1 i 80 ml acetona. Čvrsta supstanca se suši pod vakuumom na 50 °C. Dobija se 14.25 g dietilestra pemetrekseda (3) u vidu čvrste supstance krem boje (prinos 93.5%).

pf (grejna ploča): 171 °C (sa različitom serijom dobija se p.f. 138 °C)

Spektar difrakcije X-zraka: pokazan na Slici II

DSC pokazan na Slici III

PRIMER 8

Pripremanje dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo (2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoil-L-glutamata, jedinjenje (3) Šeme I.

[0089]10.0 g kiseline (2) iz primera 4 doda se na sobnoj temperaturi u 40 ml izopropanola i 60 ml 0.50 M NaOH. Posle 10 minuta mešanja na sobnoj temperaturi, u mešavinu se doda 25 ml izopropanola, 5.15 ml N-metilmorfolina (NMM), 8.83 g CDMT i ponovo 25 ml izopropanola. Posle 5 minuta, doda se 4.80 ml N-metilmorfolina, zatim 10,45 g H-Glu (OEt)2HCl.

[0090]Reakciona mešavina se zatim zagreva na 40 °C 1 sat, zatim se doda 30 ml vode. Rastvor se ohladi do sobne temperature i zatim mu se doda 180 ml vode i meša se na sobnoj temperaturi 1 sat. Suspenzija se filtrira, ispere vodom/iPrOH=3/l (3x30 ml), vodom (3x40 ml) i čvrsta supstanca se suši pod vakuumom na 50 °C. Dobija sel4.52 g dietilestra pemetrekseda (3) u vidu čvrste supstance krem boje (prinos 89.1%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 98.4%

PRIMER 9

Pripremanje dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoil-L-glutamata, jedinjenje (3) Šeme I.

[0091]10.0 g kiseline (2) iz primera 4 doda se na sobnoj temperaturi u 40 ml izopropanola i 60 ml 0.50 M NaOH. Posle 10 minuta mešanja na sobnoj temperaturi, u mešavinu se doda 25 ml izopropanola, 5.15 ml N-metilmorfolina (NMM), 8.83 g CDMT i ponovo 25 ml izopropanola. Posle 5 minuta, doda se 4.80 ml N-metilmorfolina, zatim 10.45 g H-Glu (OEt)2HCl.

[0092]Reakciona mešavina se zatim zagreva na 40 °C 1 sat, zatim se doda 80 ml vode i 80 ml acetona. Rastvor se ohladi do sobne temperature i zatim drži na 0 °C 2 sata. Suspenzija se filtrira, ispere vodom/acetonom=3/l (40 ml), vodom (3x40 ml) i acetonom (2x20 ml) i čvrsta supstanca se suši pod vakuumom na 50 °C. Dobija se 13.90 g dietilestra pemetrekseda (3) u vidu čvrste supstance krem boje (prinos 85.7%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 98.5%

PRIMER 10

Pripremanje dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoil-L-glutamata, jedinjenje (3) Šeme I.

[0093]10.0 g kiseline (2) iz primera 4 doda se na sobnoj temperaturi u 60 ml izopropanola, 60 ml vode i 13.65 ml of NMM. Mešavina se zagreje na 40 °C i posle 40 minuta doda se 8.83 g CDMT, 30 ml izopropanola, 10.45 g H-Glu (OEt)2HCl. Reakciona mešavina se zagreva na 40 °C 2 sata, zatim se doda 80 ml vode i 50 ml acetona. Mešavina se ohladi do sobne temperature i zatim se drži 2 sata na 0 °C. Suspenzija se filtrira, ispere vodom/acetonom=3/l (40 ml), vodom (3x40 ml) i acetonom (2x20 ml) i čvrsta supstanca se suši pod vakuumom na 50 °C. Dobija se 13.58 g dietilestra pemetrekseda (3) u vidu čvrste supstance krem boje (prinos 83.8%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 98.7%

PRTMER 11

Trituracija/kristalizacija sa 2-metil tetrahidrofuranom/apsolutnim etanolom 10/1 dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il) etil) benzoil-L-glutamata, jedinjenje (3) Šeme I.

[0094]10.36 g sirovog pemetreksed-dietilestra (3) se truni/kristalizuje na slabom refluksu u 62 ml mešavine 2-Me THF/apsolutnog etanola 10/1. Rastvor se polako ohladi do sobne temperature i drži na 0 °C 5 sati. Suspenzija se zatim filtrira i čvrsta supstanca se ispere sa 10 ml 2-Me THF ohlađenog na 0 °C. Posle sušenja pod vakuumom na 40 °C, dobija se 11.8 g proizvoda 3 u vidu čvrste supstance krem boje (prinos 78.3%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 99.9%

Spektar difrakcije X-zraka: pokazan na Slici IV

PRTMER 12

Kristalizcija sa metiletil-ketonom/96% etanolom 9/2 dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d)pirimidin-5-il)etil) benzoil-L-glutamata, jedinjenje (3) Šeme I.

[0095]14.00 g sirovog pemetreksed-dietilestra (3) rastvori se uz mešanje na slabom refluksu sa 182 ml mešavine metetil-ketona/96% EtOH 9/2. Dobijeni rastvor se ostavi da se ohladi do sobne temperature, suspenzija se hladi na 0 °C 2 sata, filtrira i čvrsta supstanca se ispere sa 84 ml metiletil-ketona. Posle sušenja u vakuumu na 50 °C, dobija se 13.24 g proizvoda 3 u vidu čvrste supstance krem boje (prinos 94.5%).

Analiza: HPLC čistoća 99.83%

p.f. (vruća faza): 175 °C (pf blago varira u zavisnosti od serije)

Spektar difrakcije X-zraka: pokazan na Slici V

SDC pokazana na Slici VI

[0096]Analogno jedinjenje može da se dobije kristalizacijom iz sledećih rastvarača: etanol, etil acetat/etanol, acetonitril.

PRIMER 13 ( referentni primer)

Pripremanje p-toluensulfonata dietil-N-(4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo(2,3-d) pirimidin-5-il)etil)benzoil-L-glutamata, jedinjenje (4) Šeme I.

[0097]11.4 g proizvoda (3) iz Primera 5 suspenduje se u 142 ml apsolutnog etanola. Mešavina se zagreva na 50 °C i tako dobijeni rastvor se doda u rastvor 11.2 g p-toluensulfonske kiseline-monohidrata (pTsOHH20) u 142 ml apsolutnog etanola. Dobijena suspenzija se zagreva na 80 °C 2 sata, zatim ohladi do sobne temperature i filtrira. Vlažna čvrsta supstanca se trituriše na refluksu 1 sat, sa 242 ml apsolutnog etanola.

[0098]Suspenzija se filtrira i čvrsta supstanca suši pod vakuumom na 50 °C. Svetloružičasti proizvod se zagreva na refluksu u 65 ml DMSO i 260 ml apsolutnog etanola 1.5 sati. Posle hlađenja na 10 °C, suspenzija se filtrira i vlažna čvrsta supstanca se trituriše na 5 °C sa 250 ml apsolutnog etanola 30'. Čvrsta supstanca se suši pod vakuumom na 50 °C da se dobije 12.2 g svetloružičaste čvrste supstance (prinos 79%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 99.2%

PRIMER 14

Pripremanje pemetrekseda, jedinjenje (5)

[0099]Suspenzija 9.60 g proizvoda (3) dobijenog u Primeru 6 (ili alternativno jednom od Primera 7-12) u 62 ml 1 M NaOH meša se na sobnoj temperaturi oko 1 sat. Posle dodavanja 75 ml etanola, rastvor se zakiseli do pH 3 sa 4 M HC1 i mešavina se zagreva do 70-75 °C oko 20'. Dobijena suspenzija se ohladi do sobne temperature i filtrira. Vlažna čvrsta supstanca se trituriše sa 93 ml etanola/vode 1/1, na sobnoj temperaturi, 2 sata. Posle filtracije, čvrsta supstanca se suši pod vakuumom na 50 °C dajući 6.15 g beličaste čvrste supstance (prinos 98%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 99.8%

PRTMER 15

Pripremanje pemetreksedne hemipentahidratne dinatrijumove soli, jedinjenje (6).

[0100]U suspenziju 7.0 g pemetrekseda 5 u 38 ml vode, doda se 1 M NaOH do pH od oko 8 (pH opseg od 7.5 do 8.5). Rastvor se zagreva do 70 °C i doda se u 398 ml etanola. Suspenzija se ostavi da se ohladi do sobne temperature, filtrira i čvrsta supstanca se suši na 50 °C.

[0101]Dobija se 7.4 g dinatrijum-hemipentahidrata pemetrekseda u vidu bele čvrste supstance (prinos 88%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 99.8%

PRIMER 16

Pripremanje pemetreksedne hemipentahidratne dinatrijumove soli, jedinjenje (6).

[0102]U suspenziju 10.0 g pemetreksed-estra (3) dobijenog u Primeru 6 (ili alternativno jednom od Primera 7-12), doda se 100 ml 1 M NaOH i mešavina se meša na sobnoj temperaturi do potpunog rastvaranja čvrste supstance. Posle dodavanja 60 ml etanola polako se dodaje ratsvor 1 M HC1 do pH od oko 8 (pH opseg od 7.5 do 8.5). Mešavina se zagreva na 55 °C i doda se u 160 ml etanola. Suspenzija se ostavi da se hladi na sobnoj temperaturi, filtrira i čvrsta supstanca se suši na 50 °C.

[0103]Dobija se 9.6 g hemipentahidrat-dinatrijuma pemetrekseda u vidu bele čvrste supstance (prinos 90%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 99.8%

PRIMER 17

Pripremanje pemetreksed-lizinske soli, jedinjenje (1)

[0104]8.8 g pemetrekseda (5) doda se u rastvor 9 g lizin-hidrata u 41 ml vode. Rastvor se zagreva do 70 °C i doda se u 249 ml etanola. Suspenzija se ostavi da se hladi na sobnoj temperaturi, filtrira i čvrsta supstanca se suši na 50 °C.

[0105]Dobija se 13.8 g pemetreksed-lizinske soli u vidu bele čvrste supstance (prinos 93%).

Analitički podaci: HPLC čistoća 99.93%, sadržaj lizina (HPLC): 39.5% Težinski gubitak (TGA): 3.8%

Spektar difrakcije X-zraka: pokazan na Slikama VII i VIII

DSC pokazana na Slici IX: p.f. 230 °C (dec)

[0106]'H-NMR (D20): 8 1.46 (m, 2H), 1.52 (m, 2H), 1.73 (m, 4H), 1.92 (m, 4H), 2.9 (m, 1 H), 2.22 (m, 1 H), 2.37 (m, 2H), 2.81 (s, 4H), 3.03 (t, 4H), 3.78 (t, 2H), 4:37 (dd, IH), 6.34 (s, IH), 7.19 (d, 2H), 7.68 (d, 2H)

[0107]<13>C-NMR (D20): 8 24.2, 29.2, 29.6, 31.2, 32.7, 37.1, 38.2, 41.8, 57.3, 58.8, 101.5, 118.3, 120.9, 129.8, 131.3, 133.4, 149.5, 153.5, 154.8, 163.9, 172.8, 177.4, 181.8, 185.0.

PRIMER 18

[0108]Ispitivanje stabilnosti pemetreksed-(bi)lizin dinatrijumove soli.

[0109]Ispitivanje stabilnosti na 25 °C ± 5 °C, 45 °C ± 5 °C i 100 °C izvedeno je na solima dobijenim u skladu sa postupcima saopštenim u Primerima 15, 16, 17 i, radi poređenja, na heptahidratnoj natrijumovoj soli pripremljenoj prema postupku iz EP 1259513.

[0110]Uzorci su pakovani u staklene kontejnere na vazduhu ili, alternativno u kontrolisanoj atmosferi.

[0111]Čistoća uzoraka određuje se u različitim vremenskim intervalima (1, 3, 6 meseci za uzorke uskladištene na 25°C ± 5°C i 45 °C ± 5°C, 6 dana za uzorke uskladištene na 100 °C) pomoću HPLC analize, uz korišćenje sledećeg postupka: Aparat za tečnu hromatografiju visokih performansi sa UV detektorom sa varijabilnom talasnom dužinom Agilent 1100, ili ekvivalnento Kolona: Sunfire C18, 3.5 um, 100x4.6 mm

Uslovi rada:

Mobilna faza A: 0.1 % H3P04

Mobilna faza B = CH3CN

Gradijent elucije; t = 0, A/B 88/12, t= 10 min, A/B 88/12, t = 30 min, A/B 30/7 Stopa protoka: 1.5 ml / min Detektor:X =230 nm, injekciona zapremina: 20 1, T:

35 °C Belo: Voda

PRIMER 19

Pripremanje farmaceutske smeše sa pemetreksed-lizinskom solju.

[0112]U pogodnom reaktoru u inertnoj atmosferi, pemetreksed-dinatrijum (6), manitol i voda (voda za injekciju, water for injection, WFI) se koriste da bi se dobio rastvor koji se sastoji od 25 mg/ml pemetreksedne kiseline, 25 mg/ml manitola. pH dobijenog rastvora podesi se na 7.2±0.6, sa 0.1 N NaOH ili 0.1 N HC1. Rastvor se zatim dva puta filtrira na 0.22 um, doda se u fiole u potrebnoj količini i liofilizuje.

PRIMER 20

Pripremanje farmaceutske smeše sa pemetreksed-lizinskom solju.

[0113]U pogodnom reaktoru u inertnoj atmosferi, pemetreksed-lizinska so (1), manitol i voda (voda za injekciju, water for injection, WFI) se koriste da bi se dobio rastvor koji se sastoji od 25 mg/ml pemetreksedne kiseline, 25 mg/ml manitola. pH dobijenog rastvora podesi se na 7.2±0.6, sa 0.1 N NaOH ili 0.1 N HC1. Rastvor se zatim dva puta filtrira na 0-22 um, doda se u fiole u potrebnoj količini i liofilizuje.

Claims (16)

1.Postupak za pripremanje pemetreksedne soli koja ima opštu formulu I u kojoj B+ predstavlja Na+ ili protonisani lizin, koji uključuje sledeće korake: a) reakciju 4-(2-(2-amino-4,7-dihidro-4-okso-3H-pirolo (2,3-d) pirimidin- 5-il) etil) benzoeve kiseline (2) sa L-dietilglutamat-hidrohloridom u prisustvu kuplujućeg reagensa da se dobije pemetreksed-dietilestar (3) b) hidrolizu pemetreksed-dietilestra (3) do pemetreksedne kiseline (5) c) salinifikaciju bazom odabranom između NaOH ili lizina da se dobije odgovarajuća pemetreksedna so, naznačen time,što u koraku a): i) kiselina (2) je prethodno konvertovanain situu odgovarajući natrijum-karboksilat ili morfolin-karboksilat koji mogu da se izoluju ili da direktno reaguju; ii) upotrebljeni reakcioni rastvarač sastoji se od hidro-alkoholne mešavine rastvarača u kojoj se alkohol bira iz grupe: metanol, etanol, izopropanol, n-propanol; ih) intermedijarni pemetreksed-dietilestar (3) direktno precipitira u reakcionoj mešavini, sa čistoćom od >98%.

2. Postupak prema zahtevu 1,naznačen time,što je pomenuta hidro-alkoholna mešavina rastvarača predstavljena mešavinom vode i izopropil-alkohola ili etil-alkohola.

3. Postupak prema zahtevu 2,naznačen time,što su komponente pomenute mešavine voda/izopropil-alkohol ili etil-alkohol u koraku a) u međusobnom odnosu od 3/1 do 1/3.

4. Postupak prema bilo kojem od zahteva 1 do 3,naznačen time,što se kuplujući reagens u koraku a) bira iz grupe: CDMT (2-hloro-4,6-dimetoksi-l,3,5-triazin), EDC (l-etil-3(3-dimetilaminopropil) karbodiimid i DMTMM (4-(4,6-dimetoksi-l,3,5-triazin-2-il)-4-metilmorfolin hlorid), poželjno CDMT.

5. Postupak prema bilo kojem od zahteva 1 do 4,naznačen time,što se reakcija u koraku a) odvija na temperaturi između 0 °C i 50 °C ili između 15 °C i 50 °C.

6. Postupak prema bilo kojem od zahteva 1 do 5,naznačen time,što se lizinska so dobija dodavanjem pemetreksednoj kiselini (5) vodenog rastvora koji sadrži od 2 do 4 ekvivalenta lizin-hidrata, poželjno 3 ekvivalenta.

7. Postupak prema bilo kojem od zahteva 1 do 6,naznačen time,što u koraku c) lizinska so, formirana u rastvoru, precipitira dodavanjem organskog rastvarača koji se meša sa vodom, odabranog iz grupe: aceton, etanol, metanol ili izopropanol, poželjno etanol.

8. Postupak prema bilo kojem od zahteva 1-7,naznačen time,što je kao alternativa sintetskim koracima b) i c), moguće dobiti pemetreksed-dinatrijumovu so direktnom hidrolizom diestra (3) bez izolacije intermedijarne pemetreksedne kiseline (5).

9. Postupak prema bilo kojem od zahteva 1 do 8,naznačen time,što se pemetreksed-dietilestar (3) koristi direktno u sledećem koraku, bez daljeg prečišćavanja.

10. Jedinjenje formule (1), (bi)lizinska so N-[4-[2-(2-amino-4-okso-4,7-dihidro-3H-pirolo [2,3-d] pirimidin-5-il) etil] benzoil]-L-glutaminske (pemetreksedne) kiseline naznačeno time,što je u anhidrovanom ili hidratisanom obliku.

11. Jedinjenje prema zahtevu 10,naznačeno time,što ima procenat vode u opsegu od oko 0-22% po težini.

12. Postupak sinteze jedinjenja prema zahtevu 10, naznačen time, što uključuje korake salinifikacije pemetrekseda (5) protonisanim lizinom u skladu sa zahtevom 1.

13. Jedinjenje prema bilo kojem od zahteva 10-11, naznačeno time, što se koristi kao medikament.

14. Jedinjenje prema zahtevima 10-11 za upotrebu prema zahtevu 13, naznačeno time, što se koristi kao antikancerski medikament.

15. Farmaceutska smeša, naznačena time, što sadrži jedinjenje prema bilo kojem od zahteva 10 do 11 i najmanje jedan farmakološki prihvatljivi ekscipijent.

16. Farmaceutska smeša prema zahtevu 15, naznačena time, što se koristi kao antikancerska smeša.