RS55568B1 - Jedinjenja i preparati protein kinaznih inhibitora - Google Patents

Description

POVEZANOST ZA SRODNIM PRIJAVAMA PATENATA

POZADINA PRONALASKA

Oblast pronalaska

[0001] Pronalazak daje novu klasu jedinjenja, farmaceutskih kompozicija koje sadrže jedinjenja i metode korišćenja takvih jedinjenja u tretmanu bolesti ili oboljenja povezanih sa abnormalnom ili neregularnom aktivnošću kinaza, posebno bolesti ili oboljenja koja obuhvataju abnormalnu aktivaciju B-Raf.

Pozadina

[O0021 Protein kinase predstavljaju veliku familiju proteina koji igraju centralnu ulogu u regulaciji širokog spektra ćelijskih procesa i održavanju ćelijskih funkcija, Delimičan, ne-ograničavajući, spisak ovih kinaza obuhvata: receptor tirozinske kinaze kao što su receptor kinase faktora rasta poreklom od platela (PDGF-R), receptor nervnog faktora rasta, trkB, Met, i receptor faktora rasta fibroblasta, FGFR3; ne-receptorske tirozin kinaze kao što su Abl i fuzione kinaze BCR-Abl, Lck, Csk. Fes, Bmx i c-src; i serin/treonin kinaze kao što su B-Raf, sgk, MAP kinaze (npr., MKK4, MKK6, itd.) i SAPK2a, SAPK2P i SAPK3. Aberanma kinazna aktivnost je primećena u mnogim stadijumima bolesti uključujući benigne i maligne proliferativne poremećaje kao i poremećaje koji predstavljaju rezultat neadekvatne aktivacije imunskog i nervnog sistema.

VVO 2010/010154 opisuje 3,4-diarilpirazolne derivate kao ihibitore kinaze.

WO 2010/045627 opisuje ihibitore protein kinaz predstavljene Formulom I.

[0003] Nova jedinjenja ovog pronalaska inhibiraju aktivnosti B-Raf ili njegovih mutanmih formi (na primer V600E) i, stoga, se očekuje da budu korisne u tretmanu bolesti povezanih sa B-Raf.

SAŽETAK PRONALASKA

(0004] U jednom aspektu predmetni pronalazak obezbeduje jedinjenje Formule I;

gde:

Y je odabrano između N i CR^;

R, je -CH:CHMeNH(CO)OMe;

R2, R3, R5i Rt su nezavisno odabrani od vodonika, halo, cijano, d-j alkil, halo-zamenjen-Ci_talkil, Cm alkoksi i halo-zamenjen-Cij alkoksi; gde je R9uz uslov da kada je R5fluoro i R3 i R6 nisu oba hidrogen; R4 je odabran od -R9 i -NR10R11; gde R9 je odabran iz Cl-6 alkil, C3-8 cikloalkil, C3-8 hetero cikloalkil, aril ind heteroaril; gde navedeni alkil, cikloalkil, heterocikloalkil, aril or heteroaril iz R9 su opciono zamenjeni sa 1 do 3 radikala nezavisno odabrani od halo, cijano, Cl-4 alkil, halo-zamenjen-C 1-4 alkil, Cl-4 alkoksi i halo-zamenjen-Cl-4 alkoksi; i RIO i Rll ssu nezavisno odabrani iz hidrogena i R9;

Rt je odabran iz CM alkil, CM cikloalkil i C3oheterocikloalkil; gde su pomenuti alkil, cikloalkil ili heterocikloalkil iz R- opciono zamenjeni sa 1 do 3 radikala nezavisno odabranim među sledećim: halo, cijano, hidroksil, CM alkil, halo-zamenjen-C14 alkil, CM alkoksi i halo-zamenjen-Cw alkoksi; ili gde je R-hidrogen;

[00O5] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeduje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje Formule I ili derivata N-oksid, Ui farmaceutski prihvatljive soli, u smeši sa jednim ili više pogodnih ekscipijenata.

[0006] U trećem aspektu, predmetni pronalazak obezbeduje jedinjenje formule I ili farmaceutske kompozicije kao što je opisano gore, za upotrebu u postupku lečenja raka.

[00071 U četvrtom aspektu, ovaj pronalazak obezbeduje upotrebu jedinjenja formule I u proizvodnji leka za lečenje kancera.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[00081 Slika 1: Slika 1 ilustruje da dodavanje MEK malih molekul inhibitora može obrnuti indukovana ERK signalizacija, rast ćelija i transformaciju izazvanu Raf malih molekul inhibitora.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

PeJmicije

[00091 "Alkil" kao grupa i kao strukturni element dragih grupa, na primer halo-zamenjen-alkila i alkoksi grupa, može biti prost ili razgranat. C^-alkoksi obuhvata, metoksi, etoksi, i slično. Halo-zamenjen-Ci.4 alkil podrazumeva i alkil grupu (prosta ili ragranata) gde ma koji od vodonikovih atoma može biti zamenjen halogenom. Na primer, halo-zamenjen-Ci j alkil može biti trifluorometil, difluoroetil, pentafluoroetil, i slično. Slično, hidroksi-zamenjen-Ci-ealkil podrzumeva i alkil grupu (prosta ili ragranata) gde ma koji od vodonikovih atoma može biti zamenjen hidroksilom. Na primer, hidroksi-zamenjen-Ci-i;alkil obuhvata 2-hiđroksietil, i slično. Slično, cijano-zamenjen-Ci.Galkil podrazumeva i alkil grupu (prosta ili ragranata) gde ma koji od vodonikovih atoma može biti zamenjen cijano grupom.

[0010] "Aril" podrazumeva monociklični ili fuzionisani biciklični aromatični prsten sa šest do deset ugljenikovih atoma u prstenu. Na primer, aril može biti fenil ili naftil, poželjno fenil. "Arilen" podrazumeva dvovalentni radikal poreklom od arilne grupe.

[0011] "Cicloalkil" podrazumeva zasićeni monociklični prsten sa datim brojem atoma prstena. Na primer, C-mucikloalkil obuhvata ciklopropil, cikiobutil, ciklopentil, cikloheksil, itd.

[0012] "Heteroaril" je definisan za aril iznad gde jedan ili više članova prstena su heteroatomi. Na primer, heteroaril obuhvata piridil, indolil, indazolil, kvinoksalinil, kvinolinil, benzofuranil, benzopiranil, benzotiopiranil, benzo[l,3]dioksol, imidazolil, benzo-imidazolil, pirimidinil, furanil, oksazolil, isoksazolil, triazolil, tetrazolil, pirazolil, tienii, itd.

[0013] "Heterocikloalkil" označava cikloalkil, kako je definisano ovom patentnom aplikacijom, gde su jedan ili više neznačenih atoma prstena zamenjeni grupom -O-, -N= -NR-, -C(O)-, -S-, -S(O) - ili -S(0)3-, gde je R vodonik, Ct? alkil ili azotna zaštitna grupa. Na primer, Ci a heterocikloalkili koji se koriste u ovoj aplikaciji kako bi se opisala jedinjenja pronalaska obuhvataju 2H-piran, 4H-piran, piperidin, 1,4-dioksan, morfolin, 1,4-ditian, tiomorfolino, imidazolidin-2-on, tetrahidrofuran, piperazin, 1,3,5-tritian, pirolidin, pirolidinil-2-on, piperidin, piperidinon, 1,4-dioksa-8-aza-spiro[4.5]dek-8-il, itd.

[0014] "Halogen" (ili halo) predstavlja hloro, fluoro, bromo ili jodo.

[0015] "pMEK" podrazumeva fosforilisani Mek.

[0016] "pERK" podrazumeva fosforilisani ERK.

[0017] "Tretirati", "tretiranje" i "tretman" se odnose na metod ublažavanja ili smanjenja bolesti i/ili simptoma bolesti.

[0018] Jedinjenja pronalaska su imenovana korišćenjem Chemdravv Ultra (Version L0.0) i/ili ChemAxon Name Generator (JChem Version 5.3.1.0).

[0019] Dati pronalazak daje jedinjenja, preparate i metode tretmana bolesti povezanih sa kinazama, posebno bolesti povezanih sa B-Raf kinazom; na primer, metastatski melanomi, solidni tumori, moždani tumori kao što je giioblastoma multiforma (GBM), akutna mijelogenozna leukemija (AML), karcinom prostate, karcinom želuca, papilarni tiroidni karcinom, karcinom jajnika niskog gradusa, i kolorektalni karcinom.

[0020] U drugom aspektu [(2S)-l-({4-[3-(3-etanosulfonamid-2,4-difluorofenil)-l-(propan-2-yl)-lH-pirazo[-4-yllpirimidin-2-yl}amino)propan-2-yl]karbamat; metil N-[(2S)-2-({4-[3-(5hloro-2-fluoro-3-metanesulfonamidofenil)-l-(propan-2-yl)-lH-pirazol-4-yl]pirimidin-2-yl}amino)propil]karbamat; metil N-[(2S)-l-( {4-[3-(5-hloro-2-f luoro-3-metanesulfonamidofenil)- l-(oksan-2-y 1)- lH-pirazol-4-y I |pirimidin-2-yl}

amino)propan-2-yl]karbamat;

[0021] U drugom aspektu su jedinjenja Formule lb:

gde: R3je odabrano među hioro, fluoro i metil; R5je odabrano među fluoro i hloro; i R-je odabrano medu etil i izopropil grupe.

[0022] U drugom aspektu su jedinjenja odabrana od metil N~[(2S)-l-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metanesulfonamidofenil)-l-(propan-2-yl)-lH-pirazol-4-yl]pirimidin-2-yl}amino)propan-2-yl]karbamat; i metil N-[(2S)-l-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metanesulfonamidofenil)-lH-pirazol-4-yI]pirimidin-2-yl}amino)propan-2yl]karbamat.

[0023] Ovde opisana prejazna jedinjenja obuhvataju: 3-Bromo-5-hloro-2-fluoroanilin; terc-butil estar cijano-(2-metiltio-pirimidin-4-il)-sirćetne kiseline; l-izopropil-4-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin; 2-((2-benzilliden-l-etilhidrazjnil)metilen)-malononitriI; l-(3-Amino-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)etanon; l-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)etanon; l-(3-jodo-l-etil-lH-pirazol-4-il)etanon; l-(3-jodo-l-meril-lH-pirazol-4-iljetanon; 3-(Dimetilamino)-l-(3-jodo-l -izopropil-lH-pirazol-4-il)prop-2-en-1 -on; 3-(Dimetilamino)-l-(3-jodo-1 - eul-lH-pirazol-4-il)prop-2-en-l-on; 3-(Dimetilamino)-l-(3-jodo-l-metil-lH-pirazol-4-il)prop-2-en-l-on; 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-amin; 4-(3-jodo-l-eul-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-amin; 4-(3-jodo-l-metil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-amin; 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ol; 2-hloro-4-(3-jodo-1- izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin; (S)-Metil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il}pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat; (R)-Metil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-iIamino)propan-2-ilkarbamat; (S)-terc-butil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat; 3-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propannitril; 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-N-metilpirimidin-2-amin; N l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-il)-N 2,N2 -dimetiletan-1,2-diamin; N-(3-bromo-2,4-difluorofenil)propan-l-sulfonamid; 3-Fluoro-4-jodopiridin-2-amin; 3-hloro-4-jodopiridin-2-amin; 3-Bromo-2(5,6-trifluoroanilin; 2,4-Dibromo-3,6-dihloroanilin; 3-bromo-2-hloro-5-metilanilin; 3-bromo-2,5-difluoroanilin; 3-Bromo-5-hloro-2-fluorobenzoična kiselina; terc-butil 3-bromo-5-hloro-2-fluorofenilkarbamat; terc-butil 3-bromo-2-fluoro-5-metilfenilkarbamat; terc-butil 5-hloro-2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat; terc-butil 2,6-difluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat; N-(2,4-difluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenU)propan-l-sulfonamid; 2-(2-fluoro-3-nitrofenir)-4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan; 2,5-difluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; 2-hloro-5-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; 2,5-dihloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaboroIan-2-il)anilin; 2-hloro-5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; terc-butil 2-fluoro-5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat; 3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin; 2,3,6-trifluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; 3-hloro-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin; 3-hloro-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; i 3-metoksi-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2- il)anilin,

[00241 Dati pronalazak takođe obuhvata sve pogodne izotopske varijacije jedinjenja pronalaska, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Izotopske varijacije jedinjenja pronalaska ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli se definišu kao one u kojima je najmanje jedan atom zamenjen atomom koji ima isti atomski broj ali različitu atomsku masu od atomske mase koja se obično sreće u prirodi. Primeri ovakvih izotipova koji mogu biti

inkorporirani u jedinjenja pronalaska i njihove farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju ali nisu ograničena na izotope vodonika, ugljenika, azota i kiseonika kao što su<J>H, ;iH, "C,<B>C,<l4>C, 'r>N,l70, iaO, 35S, iaF, 16C1 i u\ Neke izotopske varijacije jedinjenja pronalaska i njihovih farmaceutski prihvatljivih soli, na primer, kod kojih je inkorporiran radioaktivni izotop kao što je ?H ili<14>C, su korisni u studijama distribucije leka i/ili supstrata tkiva. U određenim primerima,<J>H i 1JC izotopi mogu biti korišćeni radi lakše pripreme i detekcije, u drugim primerima, zamena sa izotopima kao što je<2>H mogu doprineti nekim terapeutskim prednostima koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, kao što je povećanje u in vivo poluživotu ili smanjenju doze. Izotopske varijante jedinjenja pronalaska ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli se generalno mogu pripremiti standardnim procedurama korišćenjem odgovarajućih izotopskih varijacija pogodnih reagenasa.

[0025] Neki Raf inhibitori, pored toga što dovode do povećanja MEK i ERK signalnih molekula u ćelijama sa divljim tipom B-Raf, takođe indukuju rast ćelija u kancerogenim ćelijskim linijama i uzrokuju transformaciju i rast fibroblasta. Indukcija nishodne signalizacije je ranije pripisana objavljenom signalnom putu Raf povratne sprege. Ipak, indukcija pMEK i pERK se može desiti u okviru minuta nakon Raf inhibitornog tretmana, čak pre nego što se primete fosforilacioni događaji povratne sprege na BRaf i C-Raf. Indukcija signalizacije i ćelijskog rasta se dešavaju u dvofaznom šablonu, gde jedinjenje niske koncentracije (0.01-0.1 mM) izaziva maksimum indukcije, i više koncentracije (1-10 mM) izazivaju indukciju manjeg obima. Takav dvofazni šablon je takođe primećen u biohemijskim esejima sa prečišćenim divljim tipovima B-Raf ili C-Raf i navodi na mehanizam koji uključuje interackiju dve subjedinice signalnog puta. Dodatno, Raf dimerizacija može ushodno regulisati pMEK, ne preko trans-fosforilacije Raf molekula već konformacionom aktivacijom kinate. U skladu sa ovim modelom, Raf inhibitorski tretman indukuje formaciju B-Raf/C-Raf dimera u ćelijama. Dodatno, "knockdown" A- ili B-Raf sa siRNK ne ukida indukciju pMEK i pERK Raf inhibitora, i "knockdown" C-Raf malo smanjuje indukciju. Posebno, "knockđown" K-Ras u K-Ras mutiranim ćelijama takođe samo malo smanjuje indukciju, što ukazuje da na to da ovaj efekat nije primarno Ras posredovan. Sve ukupno, rezultati ukazuju na model u kojem se inhibitor vezuje za jedan Raf molekul indukujući dimerizaciju i konformacionu aktivnost partnerskog Raf molekula u dimeru. Ovo može objasniti zašto su divlji tip Raf i mutantni Ras tumori nesenzitivni na selektivne Raf kinazne inhibitore i takođe može imati važne implikacije u toksičnosti, s obzirom da indukcija snažne mitogene signalizacije može dovesti do hiper-proliferacije normalnog tkiva. Razumevanje indukcionih mehanizama Raf inhibitora može dovesti do razvoja boljih inhibitora.

[0026J Dodatak MEK inhibitora u kombinaciji sa Raf inhibitorom dovodi do značajne inhibicije ERK signalizacije i smanjenja ćelijske proliferacije i transformacije. S obzirom da samostalni tretmani sa MEK inhibitorom vode dozno limitirajućoj toksičnosti u kliničkoj upotrebi, Raf sa MEK inhibitorom može predstavljati značajno bolju terapeutsku strategiju.

[0027] Dađ pronalazak takođe obuhvata kombinaciju BRaf inhibitora objavljenih u ovom pronalasku sa drugim agensima. Posebno, dati pronalazak daje kombinaciju sa MEKI/2 inhibitorima. Slika 1 ilustruje da dodavanje malog molekula inhibitora MEK može preokrenuti indukciju ERK signalnog puta, ćelijskog rasta i transformaciju uzrokovanu malik molekulom inhibitorom Raf. Na primer, jedinjenje Formule I (jedinjenje 9 pronalaska: ((S)-metil l-(4-(3-(5-hloro-2-fluoro-3-(metilsulfonamido)fenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat) može indukovati ćelijsku proliferaciju, u vidu negativne inhibicije na Slici 1 Cell Titer Glo eseja korišćenjem SW620 ćelija. Y osa prikazuje negativnu i pozitivnu inhibiciju. Svaki eksperiment je prikazan kao serija od 9 serijskih razblaženja između 10 i 0.002 (iM. Jedinjenje Al (N-(4-metil-3-(1-(6-(4-metilpiperazin-l-ilamino)pirimi kontrola, A3 je MEK inhibitor (PD0325901). Jedinjenje 9 je testirano u odsustvu i prisustvu lmM, O.lmM i O.OlmM MEK inhibitora A3.

Farmakolog ija i upotreba

[0028] Jedinjenja pronalaska moduliraju aktivnost kinaza i, kao takva, korisna su u tretmanu bolesti ili poremećaja u kojima kinaze doprinose patologiji i/ili simptomima bolesti. Primeri kinaza koje su inhibirane jedinjenjima i preparatima opisanim ovde i za koje su ovde opisane metode korisne, obuhvataju ali nisu ograničene na, B-Raf, uključujući mutantne forme B-Raf.

[0029] Mitogenom aktiviran protein kinazni (MAPK) signalni put posreduje u aktivaciji brojnih efektornih molekula koji koordiniraju kontrolu ćelijske proliferacije, preživljavanja, diferencijacije i migracije. Stimulacija ćelija, na primer, faktorima rasta, citokinima ili hormonima rezultuje nastankom GTP veze z Ras asociranim sa plazma membranom i tako aktiviranog da indukuje Raf. Ova interakcija vodi Raf kinaznoj aktivnosti što opet direktno vodi fosforilaciji MAPK/ERK (MEK), koji zauzvart fosforilišu vanćelijske signal-asocirane kinaze (ERK). Aktivirani ERK potom fosforiliše širok spektar efektornih molekula, na primer, kinaze, fosfataze, transkripcione faktore, i citoskeietne proteine. Stoga, Ras-Raf-MEK-ERK signalni put prenosi signale od ćelijske površine do nukleusa i esencijalan je u, na primer, ćelijskoj proliferaciji i preživljavanju. Regulacija ove signalne kaskade je dalje obogaćena brojnim izoformama Ras (obuhvatajući K-Ras, N-Ras i H-Ras), Raf (A-Raf, B-Raf, C-Raf/Raf-1), MEK (MEK-1 i MEK-2) i ERK (ERK-1 i ERK-2). S obzirom da 10-20% humanih karcinoma ima oknogenu Ras mutaciju i mnogi humani karcinomi se aktiviraju preko receptora faktora rasta, ovaj put može biti idealna meta intervencija.

[0030] Osnovna uloga i pozicija Raf u mnogim signalnim putevima pokazana je u studijama korišćenjem dominantnih i deregulisanih inhibitornih Raf mutanata u ćelijama sisara kao i u studijama koje koriste biohemijske i genetske tehnike kako bi izmenile organizme. Ranije, fokus na Raf kao na anti-tumorsku metu je bio zasnovan na njegovoj funkciji kao regulatora Ras. Ipak, skoriji podaci ukazuju na to da Raf moče imati značajnu ulogu u formiranju nekih tumora i bez onkogenog Ras alela. Posebno, aktivni aleli B-Raf i N-Ras su identifikovani u -70% melanoma, 40% papilamih tiroidnih carcinoma, 30% carcinoma jajnika niskog gradusa, i 10% kolorektalnih karcinoma. Mutacije u K-Ras se dešavaju u oko 90% karcinoma pankreasa. Većina B-Raf mutacija su nađene u okviru kinaznog dopmena, sa jednom zamenom (V600E) u najmanje 80%. Mutirani B-Raf protein aktiviraju Raf-MEK-ERK put bilo povećanjem kinazne aktivnosti MEK ili putem aktivacije C-Raf.

[0031] Stoga, razvoj kinaznih inhibitora B-Raf pruža nove terapeutske mogućnosti za tretman mnogo tipova humanih karcinoma, posebno kada su pitanju metastatski melanomi, solidni tumori, moždani tumori kao što je glioblastoma multiforma (GBM), akutna mijelogenozna leukemija (AML), karcinom pluća; papilami tiroidni karcinom, karcinom jajnika niskog gradusa, i kolorektalni karcinom. Nekoliko Raf kinaznih inhibitora su opisani kao potencijalno efikasni u inhibiciji proliferacije tumorskih ćelija u in vitro i/ili in vivo esejima (videti, na primer, SAD patentni br. 6,391,636, 6,358,932, 6,037,136, 5,717,100, 6,458,813, 6,204,467, i 6,268,391). Drugi patenti ili patentne prijave predlažu korišćenje Raf kinaznih inhibitora za u tretmanu leukemije (videti, na primer, SAD patentni br. 6,268,391. 6,204,467, 6,756,410, i 6,281,193; i napušten SAD patentni br aplikacija 20020137774 i 20010006975), ili u tretmanu karcinoma dojki (videti, na primer, SAD patentni br. 6,358,932, 5,717,100, 6,458,813, 6,268,391, 6,204,467 i 6,911,446). Rezultati ukazuju na to da Raf kinazni inhibitori mogu značajno inhibirati signalizaciju preko MAPK puta, što vodi smanjenju B-Raf B-Raf (V600E) tumora.

[0031] Jedinjenja datog pronalaska inhibiraju ćelijske procese koji uključuju B-Raf kinazu blokiranjem signalne kaskade u ovim kancerskim ćelijama i konačno indukujući stazu i/ili smrt ćelija.

[0033| U skladu sa navedenim, predmetna specifikacija dalje obezbeduje medicinsku primenu za sprečavanje ili tretman karcinoma pluća, karcinoma prostate, karcinoma želuca, karcinoma pankreasa, karcinoma bešike, karcinoma kolona, mijeloidnih oboljenja, karcinoma prostate, tiroidnog karcinoma, melanoma, adenoma, i karcinoma jajnika, oka, jetre, bilijamog trakta, i nervnog sistema. Dalje, predmetna specifikacija dalje obezbeduje medicinsku primenu za prevenciju ili lečenje bilo koje bolesti ili poremećaja opisanih kod subjekta kome je potreban takav tretman, pri čemu taj postupak obuhvata davanje pomenutom subjektu terapeutski efektivne količine.(Videti, " Primenu i farmaceutski preparati", infra).Za ma koju upotrebu, potrebna doza će zavisiti id načina primene, posebno stanja koje se tretira i željenih efekata.

Primena i farmaceutski preparati

[0034] Generalno, jedinjenja pronalaska će se davati u terapeutski efikasnim količinama na ma koji uobičajeni i prihvatljiv način, ili samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više terapeutskim agensima. Terapeutski efikasna količina može varirati u zavisnosti od težine bolesti, godina i opšteg zdravlja subjekta, potencije jedinjenja koje se koristi i drugih faktora. Generalno, zadovoljavajući rezultati bi se trebalo videti na sistemskom nivou pri dnevnim dozama od oko 0.03 do 30mg/kg težine. Navedena dnevna doza za veće sisare, npr. ljude je u rangu od oko 0.5mg do oko 2000mg, konvencionalno dato, npr. u odvojenim dozama do četiri puta dnevno ili u retard formi. Pogodne jedinice doze za oralnu upotrebu idu od oko 1 do 500mg aktivnog sastojka.

[0035J Jedinjenja pronalaska se može primeniti u vidu farmaceutskog preparata na ma koji način, posebno npr. oralno, npr. u fromi tableta ili kapsula, ili parenteralno, npr., u formi injektibilnih rastvora ili suspenzija, površinski, npr., u formi losiona, gelova, masti, ili krema, ili nazalno ili u vidu supozitorija. Farmaceutski preparati koji sadrže jedinjenje datog pronalaska su u slobodnoj formi ili u vidu farmaceutski prihvatljivih soli zajedno sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim nosačem ili rastvaračem se može proizvesti na konvencionalni način mesanjem, granulacijom ili prekrivanjem. Na primer, oralni preparati mogu biti tablete ili želatinozne kapsule koje sadrže aktivni sastojak zajedno sa a) razblaživačima, npr., laktozom, dekstrozom, saharozom, manitolom, sorbitolom, celulozom i/ili glicinom; b) lubrikantima, npr., silikom, talkom, stearinskom kiselinom, ili njenim magnezijumovim ili kalcijumovim solima i/ili polietilenglikol; za tablete takođe c) veziva, npr., magnezijum aluminijum silikatom, škrobnom pastom, želatinom, tragakantom, metilcelulozom, natrijum karboksimetilcelulozom i/ili polivinilpirolidonom; ako je poželjno d) dezintegrantima, npr., škrobom, agarom,

aiginskom kiselinom ili njenim natrijumovim solima, ili šumećim smešama; i/ili e) absorbentima, veslačkim bojama, ukusima i zaslađivaČima. lnjektibilni preparati mogu biti u vidu vodenih izotoničnih rastvora ili suspenzija, i supozitorije mogu biti pripremljene od masnih emulzija ili suspenzija. Preparati mog ubiti sterilni i/ili sa adjuvansima, kao što su konzervansi, stabilizeri, ovlaživačt ili emulgatori, rastvarači, soli za regulaciju osmotskog pritiska i/ili puferi. Dodatno, takođe mogu sadržati druge terapeutske supstance. Na primer, jedinjenja pronalaska mogu biti formulisana u mikroemulziju pre koncentrata (MEPC). Jedinjenja Formule I se mogu pripremiti 40mg/ml u smeši od 56% PEG400, 29% kremofora EL i 15% oleinske kiseline. Smeša, bez jedinjenja Formule I, je prvo pripremljena mešanjem. Jedinjenje pronalaska se dodaje i sonifikacijom rastvara puder u nosaču. Smeša se zagreva na 80°C u vodenom kupatilu tokom jednog sata uz mešanje i sonifikaciju svakih 15 minuta. Ova smeša je fizički i hemijski stabilna na sobnoj temperaturi tokom nedelju dana.

[0036] Pogodne formulacije za transdermalnu primenu obuhvataju efikasnu količinu jedinjenja datog pronalaska sa nosačem. Nosač može obuhvatiti absorbativne farmaceutski prihvatljive rastvarače kako bi pomogao prodor kroz kožu domaćina. Na primer, transdermalna pomagala su u formi flastera sa podlogom, rezervoar sa jedinjenjem opciono sa barijerom za kontrolu stope oslobađanja jedinjenja preko kože domaćina pri kontrolisanoj i prethodno deftnisanoj stopi tokom dužeg vremenkog perioda, i načinima za osiguravanje ovakvog pomagala za kožu. Matriksne transdermalne formulacije se takođe mogu koristiti. Pogodne formulacije za površinsku primenu, npr., za kožu i oči, su poželjno vodeni rastvori, masti, kreme ili gelovi poznati u oblasti. Takvi medikamenti mogu sadržati rastvarače, stabilizere, agense poboljšanja toničnosti, pufere i konzervanse.

[0037] Jedinjenja pronalaska se mogu primeniti u terapeutskim efektivnim količinama u kombinaciji sa jednim ili više terapeutskih agenasa (farmaceutskih kombinacija). Na primer, sinergistički efekti mogu postojati sa drugim antitumorskim ili antiproliferativnim agensima, na primer, mitotskim inhibitorima, alkilujućim agensima, anti-metabolitima, interkalirajućim antibioticima, inhibitorima faktora rasta, inhibitorima ćelijskog ciklusa, enzimima, inhibitorima topoizomeraza, modifikatorima biološkog odgovora, antitelima, citotoksinima, anti-hormonima, anti-androgenima, anti-angiogenim agensima, inhibitorima kinaza, inhibitorima pan kinaza ili inhibitorima faktora rasta.

[00381 Jedinjenja pronalaska se mogu primeniti u terapeutskim efektivnim količinama u kombinaciji sa jednim ili više pogodnih ekscipijenata odabranim u grupi koja sarži kukuruzni škrob, škrob kropmira, škrob tapioke, škrobnu pastu, pre-želatinizirani škrob, šećere, želatin, prirodnu gumu, sintetičku gumu, natrijum alginat, alginsku kiselinu, tragakant, gumu guara, celulozu, etil celulozu, celulozni acetat, karboksimetil celulozni kalcij um, natrijum karboksimetilcelulozu, metil celulozu, hidroksiproptl metilcelulozu, mikrokristalin celulozu, magnezijum aluminijum silikat, polivinil pirolidon, talk, kalcijum karbonat, puder celuloze, dekstrate, kaolin, manitol, silikatnu kiselinu, sorbitol, agar-agar, natrijum karbonat, natrijum kroskarmeloze, krospovidon, polakrilin kalijum, natrijum glikolat, gline, natrijum stearat, kalcijum stearat, magnezijum stearat, stearinsku kiselinu, mineralno ulje, glicerin, sorbitol, manitol, polietilen glikol, druge glikole natrijum lauril sulfat, hidrogenizovano povrtno ulje, ulje kikirikija, ulje semena pamuka, suncokretovo ulje, ulje sušama, maslinovo ulje, kukuruzno ulje, sojino ulje, cink stearat, natrijum oleat, etil oleat, etil laureat, siliku, i njihove kombinacije.

[0039] Jedinjenja pronalaska se mogu primeniti u kombinaciji sa dodatnim terapeutskim agensom. Dodatni terapeutski agens sadrži antikancerski lek, lek protiv bolova, antiemetik, anudepresiv ili antiinflamatomi agens. Dalje, dodatni terapeutski agens je različit od Raf kinaznog inhibitora ili inhibitora MEK, mTOR, HSP90, AKT, PI3K, CDK9, PAK, protein kinaze C, MAP kinaze, MAPK kinaze, ili ERK i daje se subjektu istovremeno sa jedinjenjem pronalaska.

[0040] Na primer, dodatak MEK inhibitora u kombinaciji sa Raf inhibitorom vodi značajnoj inhibiciji ERK signalnog puta i sledstveno smanjuje ćelijsku proliferaciju i transformaciju. S obzirom da MEK inhibitori samostalno dovode do toksičnosti koja ograničava dozvoljenu dozu, kombinacija Raf plus MEK inhibitor predstavlja superiornu strategiju u tretmanu. Primeri MEK inhibitora su AS703026 (EMD Serono); MSC1936369B (EMD Serono); GSK1120212 (GlaxoSmithKline); AZD6244 (Memorial Sloan-Kettering Cancer Center); PD-0325901 (Pfizer); ARRY-438162 (Array BioPharma); RDEA119 (Ardea Biosciences, Inc.); GDC0941 (Genentech); GDC0973 (Genentech); TAK-733 (Millennium Pharmaceuticals, Inc.); R05126766 (Hoffmann-La Roche); i XL-518 (Exelixis).

[0041] U jednom drugom aspektu pronalaska su kombinacije i metode za tretman karcinoma koje sadrže terapeutski efikanse količine jedinjenja Sažetka pronalaska (Raf inhibito) i najmanje jedan inhibitor MEK proteinske kinaze.

[0042] Kada se jedinjenje pronalaska primenjuje u konjukciji sa drugim terapijama, doze jedinjenja koja se daju sa njim će varirati u zavisnosti od tipa ko-leka koji se koristi, specifičnostima leka koji se koristi, stanja koje se tretira i tome slično.

[0043] Pronalazak takođe daje za farmaceutske kombinacije, npr., kit koji sadrži a) prvi agens koji je jedinjenje pronalaska kao što je objavljeno ovde, u slobodnoj formi ili u formi farmaceutski prihvatljive soli, i b) najmanje jedan ko-agens. Ovaj kit može da sadrži instrukcije za upotrebu.

[0044] Termini "ko-administracija" ili "kombinovana primena" ili i slično koji se koriste ovde se odnose na zajedničku primenu odabranih terapeutskih agenasa jednom pacijentu, i teže da obuhvate tretman u kojem se agensi nužno ne primenjuju na isti način ili u isto vreme.

[0045] Termin "farmaceutska kombinacija" kako se ovde koristi podrazumeva produkt koji je rezultat mešanja ili kombinovanja jednog aktivnost sastojka i obuhvata i fiksirane i ne-fiksirane kombinacije aktivnih sastojaka. Termin "fiskirana kombinacija" znači da se aktivni sastojci, jedinjenje Formule I i ko-agens, daju pacijentu istovremeno u formi jedinstvenog entiteta ili doze. Termin "ne-fiskirana kombinacija" znači da se aktivni sastojci npr. jedinjenje Formule I i ko-agens, daju pacijentu u vidu odvojenih entiteta ili istovremeno, ili uzastopno bez ograničenja u vremenskim razmacija, kada takva primena daje terapeutske efikasne niveo 2 jedinjenja u telu pacijenta. Poslednje se takođe odnosi na koktel-terapiju, npr., primenu 3 ili više aktivnih sastojaka.

Proces proizvodnje jedinjenja pronalaska

[0046J Dati pronalazak takođe obuhvata proces proizvodnje jedinjenja pronalaska. U opisanim reakcijama, može biti potrebno da se zaštite reaktivne funkcionalne grupe, na primer hidroksi, amino, imino, tio ili karboksi grupe, kada su one neophodne u finalnom produktu, kako bi se sprečilo neželjeno učestvovanje ovih grupa u reakcijama. Konvencionalne protektivne grupe se mogu koristiti u skladu sa standardnom praksom, na primer, videti T.W. Greene i P. G. M. Wuts in "Protective Grupas in Organic Chemistrv", John Wiley i Sons, 1991.

[0047] Jedinjenja Formule I se mogu pripremiti prema sledećom Reakcionoj Šemi I:

Gde su Ri, R2, Rj, Ri, R5, R7, i Y kako je definisano u Sažetku Pronalaska, P je pogodna protektivna grupa (na primer, MEM, MOM, SEM, RjS02, i slično), i M je odlazeća grupa (na primer, hloro, bromo, jodo, metansulfoniloksi, p-toluensulfoniloksi, i slično). Jedinjenje Formule I se može sintetisad uklanjanjem protektivne grupe P sa jedinjenja Formule 2 (na primer, tretmanom sa jakom kiselinom kao što je hloro-vodonična u prisustvu protonskog rastvarača kao što je metanol ili voda kada je P MEM, MOM, ili SEM; ili tretmanom vodenim rastvorom ili ili metanolnim natrijumom ili kalijum karbonatom, opciono u prisustvu ko-rastvarača kao što je toluen, kada je P druga sulfomilna grupa R4SOj).

[00481 Jedinjenja Formule 2 se mogu pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 3 sa alkilujućim agensom Formule 4 u prisustvu pogodnog rastvarača (na primer, DMF, DMSO, i slično) i pogodne baze (na primer, kalijum karbonat, natrijum hidrid, i slično). Reakcija se nastavlja u temperaturnom opsegu od oko 0 °C do oko 150 °C i i može trajati do oko 24 sata. Reakciona smeša se opciono dalje reaguje kako bi se uklonile protektivne grupe.

[0049] Jedinjenja Formule l takođe se mogu pripremiti prema uputstvima u narednoj Reakcionoj Šemi II:

gde suRi, R2lR3, Rj, R5, i Y kako je definisano u Sažetku Pronalaska. Jedinjenje Formule I se može sintetisati reakcijom sa jedinjenjem Formule 5 sa sulfonujućim reagensom Formule 6 u prisustvu pogodne baze (na primer, piridin, trietilamin, 4-(N,N-dimetilamino)piridin, i slično) i odgovarajućim rastvaračem (kao Što je piridin, dihlorometan, 2-metilTHF, i slično). Reakcija se nastavlja u temperaturnom opsegu od oko 0°C do oko 100°C i i može trajati do oko 24 sata. Reakciona smeša opciono dalje reaguje kako bi se uklonile protektivne grupe. U nekim slučajevima, sulfonujući reagens može reagovati dva puta kako bi se dobio bis-sulfonil derivat. U ovom slučaju, bis-sulfonilsko jedinjenje se može konvertovati u jedinjenje Formule a tretmanom sa pogodnom bazom (na primer, natrijum ili kalijum hidroksid, ili natrijum ili kalijum karbonat) u prisustvu protonskog rastvarača kao što je metanol ili voda, opciono u prisustvu ko-rastvarača kao što je toluen ili 2-metilTHF. Reakcija se odvija u temperaturnom opsegu od oko 20 °C do oko 100 °C i može trajati do oko 24 sata.

[00501 Jedinjenja Formule I takođe se mogu pripremiti prema uputstvima u narednoj Reakcionoj Šemi III:

gde su R], R2, R^, R4, Rs, i Y kako je definisano u Sažetku Pronalaska, Rsn je odlazeća grupa (na primer, jodo, bromo, hloro, trifluorometansulfoniloksi, i slično), svaki R' može biti, na primer vodonik, metil, i slično, ili se dve R' grupe mogu spojiti kako bi formirale ciklični boronami estar. Dve R90 grupe pojedinačno mogu biti vodonik, ili dve Rgogrupe, zajedno, mogu predstavljati pogodnu azotnu zaštitnu grupu (na primer, jedna R9nmože biti vodonik i druga može biti BOC). Jedinjenje Formule Ia se može sintetisati reakcijom sa jedinjenjem Formule 7 sa jedinjenjem Formule 8 u prisustvu pogodnog tranzicionog metalnog katalizatora (na primer, tetrakis(trifenilfosfinepaladijum)(0) ili PdCl2 (dppf), pogodnog rastvarača (na primer, DME, dioksan, toluen, etanol, i slično) i pogodne baze (na primer, anhidrovani kalijum karbonat ili vodeni rastvor natrijum karbonata, i slično). Reakcija se nastavlja u temperaturnom opsegu od oko 20°C do oko 120°C i i može trajali do oko 24 sata. Reakciona smeša opciono dalje reaguje kako bi se uklonile protektivne grupe.

[0051] Jedinjenje Formule l se takođe mogu pripremiti sličnom protokolu Suzuki reakciji gde je jedinjenje Formule 7 reagovano sa jedinjenjem Formule 8a kako bi se dobilo jedinjenje Formule 9. Nakon deprotekcije R<s„ grupa, reakcija sulfonilacije, kako je opisano Reakcionom Šemom II, daje jedinjenje Formule Ia.

[0052] Biće prepoznato od strane stručnjaka u oblasti da druge organometalne reakcije sparivanja, na primer korišćenje kalaja (Stille kuplovanje) ili reaganesa cinka (Negishi kuplovanje), može upotrebiti u okviru Suzuki reakcije kuplovanja korišćenjem boronskih reagenasa opisanih Reakcionom Šemom 111.

(0053] Jedinjenja Formule 7 se mogu pripremiti prema sledećom Reakcionoj Šemi IV:

[0054] U ovom slučaju, M je odlazeća grupa (na primer, hloro, bromo, jodo, metansulfonil, i slično), RM je odlazeća grupa (na primer, jodo, bromo, hloro, trifluoromelansulfoniloksi, i slično), i R7je definisan u Sažetku Pronalaska. Jedinjenje Formule 7 se može pripremiti reakcijom aminskog jedinjenja Formule 10 sa jedinjenjem Formule 11. Reakcija se odvija u prisustvu pogodne baze (na primer, trietilamin, kalijum karbonat, i slično) u rastvaraču kao što je izopropanol, DMSO, NMP, ili dioksan na temperaturi od oko 25 do oko 120°C. U nekim slučajevima dalje transformacije introdukovane Rigrupe mogu biti iskorišćenje u narednim koracima kako bi se došlo do finalne R, grupe.

[0055J Jedinjenja Formule 11a, koje su podgrupe jedinjenja Formule 11 gde je M metansulfonil, se mogu pripremiti prema sledećoj Reakcionoj Šemi V:

[0056] Gde su R7, R5(, kako je definisano u Sažetku Pronalaska. Jedinjenje Formule 11a se može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 12 odgovarajućim oksidišućim sistemom (na primer, m-hloroperbenzoična kiselina u rastvoru dihlorometan, ili Oxone™ u vodenom rastvoru metanola, i slično), na temperaturi od oko - 78 °C do oko 50 °C. Reakcija traje do oko 24 sata. [00571 Jedinjenje Formule 12 gde je R5flhloro, bromo, ili jodo može se zauzvrat pripremiti reakcijom aminskog jedinjenja Formule 13 koji je pogodan de-azotizacioni sistem (na primer, azotna kiselina u konjukciji sa bakar (I) halidnom solju, izoamil nitrit u konjukciji sa bakar (1) jodidom/metilen jodidom, izoamil nitrit u konjukciji sa boron trifluoridom, jodom, i kalijum jodidom u acetonitrilu, i slično). Reakcija se odvija na temperaturi od oko 0 do oko 80 °C, i traje od oko 1 do oko 6 sata.

[0058] Jedinjenje Formule 13 se može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 14 sa jedinjenjem Formule 3, kako je opisano Reakcionom Šemoml.

[0059] Jedinjenje Formule 14 se može pripremiti ciklizacijom enaminonitril jedinjenja Formule 15 sa hidrazinom ili hidrazin solju u odgovarajućem rastvaraču (na primer, etanol i slično). Reakcija se odvija na temperaturi od oko 25 do oko 100 °C, i i može trajati od oko 1 satado oko 24 sata.

[0060] Alternativno, jedinjenje Formule 13 se može pripremiti iz jedinjenja Formule 15 u jednom koraku reakcijom jedinjenja Formule 15 sa monosupstituisanim hidrazinom RvNH-NH3. Reakcija se odvija na temperaturi od oko 25 do oko 100°C, i može trajati od oko 1 satado oko 24 sata.

[0061] Jedinjenje Formule 15 se zauzvrat može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 16 sa DMF DMA ili Bredereck-ovim reagensom, opciono u prisustvu ko-rastvarača kao Što je DMF, na temperaturi od oko 50 do oko 150°C. Reakciji je potrebno od 1 do 24 sata do završetka.

[0062] Jedinjenje Formule 16 se može pripremiti tretiranjem jedinjenja Formule 17 sa pogodnom kiselinom (na primer, p-toluensulfonska kiselina, i slično) u pogodnom inerntnom rastvaraču (na primer, toluen, i slično). Reakcija se odvija na temperaturi od oko 50 do oko 120°C, i traje oko 1 do oka 24 sata.

[0063] Konačno, jedinjenje Formule 17 se može pripremiti reakcijom 4-hloro-2-(metiltio)pirimidin sa tercbutil cijanoacetatom u prisustvu pogodne baze (na primer, natrijum hidrid i slično) i pogodnim rastvaračem (na primer, DMSO i slično), na temperaturi od oko 25 do oko 80 °C. Reakcija traje od oko 1 do oko 24 sata.

[0064] Jedinjenja Formule 11b, koje su podgrupe jedinjenja Formule 11 u kojoj je M halogen, se mogu pripremiti prema sledećom Reakcionoj Šemi VI: gde su R7 i R50kako je definisano u Sažetku Pronalaska. Jedinjenje Formule 11b, u kojoj je M halogen, se može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 20 koji je pogodan de-azotizađoni sistem (na primer, azotna kiselina u konjukciji sa bakar (I) halidnom solju, natrijum nitritom u konjukciji sa p-toluensulfonskom kiselinom i kalijum jodidom). Reakcija se odvija na temperaturi od oko 0 do oko 80 °C, i traje od oko 1 do oko 6 sata. Alternativno, tretman jedinjenja Formule 20 diazotizacionim reagensom (na primer, natrijum nitrit i slično) u prisustvu karboksilne kiseline (na primer, trifluorosirćetna kiselina i slično) na 0 do 40°C tokom 0,5 do oko 6 sat, praćeno tretmanom sa baznim vodenim rastvorom (na primer vodeni rastvor kalijum karbonata i slično) daje jedinjenje Formule 21 (takvo jedinjenje može postojati u tautomernim formama). Sledstveni tretman jedinjenja Formule 21 sa agensom za hiorovanje (na primer, fosfor oksmlorid i slično), opciono u prisustvu baze kao što je N,N-dimetilanilin ili DIPEA, i opciono u prisustvu inertnog rastvarača kao što je acetonitril ili toluen, i aditiva kao što je DMF, na temperaturi od oko 50 do oko 110 °C, i tokom oko 1 do oko 72 sat, daje jedinjenje Formule 11b, gde je M hlorin.

[0065] Jedinjenje Formule 20 se zauzvrat može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 22 sa guanidinom ili soli guanidina (na primer, guanidinin hidrohlorid ili guanidin karbonat), opciono u prisustvu baze (na primer, litijum hidroksid i slično) u odgovarajućem rastvaraču (na primer, sek-butanol, NMP i slično), na temperaturi od oko 50 do oko 180 °C, i tokom oko 2 do oko 48 sati.

[0066] Jedinjenje Formule 22 se može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 23 sa DMF DMA ili Bredereck-ovim reagensom, opciono u prisustvu ko-rastvarača kao što je DMF, na temperaturi od oko 50 do oko 150°C. Reakciji je potrebno od 1 do 24 sata do završetka.

[0067] Jedinjenje Formule 23 gde je R50 hloro, bromo, ili jodo se može pripremiti reakcijom aminskog jedinjenja Formule 24 koji je pogodan de-azotizacioni sistem (na primer, azotna kiselina u konjukciji sa bakar (I) halidnom solju, natrijum nitritom u konjukciji sa p-toluensulfonskom kiselinom i kalijum jodidom, ili izoamilnitritom u konjukciji sa boron trifluorid-THF, jodinom, kalijum jodidom, i acetonitrilom). Reakcija se odvija na temperaturi od oko 0 do oko 80 °C, i traje od oko 1 do oko 6 sata.

[0068] Jedinjenje Formule 24 može zauzvrat biti pripremljeno reakcijom jedinjenja Formule 25 sa organometalnim reagensom kao što je metillitijum, metillitijum-litijum bromidni kompleks, ili metilmagnezijum halidnim reagensom, u inertnom rastvaraču kao što je THF, etru, ili ciklopropil metil etru, na temperaturi od oko 0 do oko 100 °C, praćeno gašenjem sa vodenim rastvorom. Reakcija traje od oko 2 do oko 48 sata.

[0069] Jedinjenje Formule 25 se može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 26 sa jedinjenjem Formule 3, kako je opisano Reakcionom Šemom I. Alternativno, jedinjenje Formule 25 se može pripremiti iz jedinjenja Formule 27, in which the two R" grupe zajedno formiraju kiselu labilnu protektivnu grupu (na primer, imin kao što je benziliden ili karbamat kao što je t-butilkarbamat). Reakcija se odvija tretmanom jedinjenja Formule 27 sa vodenim rastvorom kiselog reagensa (na primer, koncentrovanom hidrohlomom kiselinom i slično) u rastvaraču kao što je etanol, na temperaturi od oko 25 do oko 100 °C. Poželjno dve R" grupe, zajedno, formiraju imin kao Što je benzilidin.

[0070] Jedinjenje Formule 27 može zauzvrat biti pripremljeno reakcijom jedinjenja Formule 28 sa jedinjenjem Formule 29, gde dve R" grupe zajedno formiraju kiselu labilnu protektivnu grupu (na primer, imin kao što je benziliden ili karbamat kao što je t-butilkarbamat). Reakcija se odvija u rastvaraču (na primer toluen, metanol, ili etanol) na temperaturi od oko 25 do oko 120 °C, opciono u prisustvu katalizatora kao što je DMAP, i traje oko 1 do oko 24 sata. Opciono, reakcija se odvija u inertnom rastvaraču (na primer, THF i slično) u prisustvu baze (na primer n-butillitijum i slično) na temperaturi od oko - 80 do oko 25 °C, tokom oko 0.5 do oko 12 sati.

[0071] Jedinjenje Formule 29 se može pripremiti metodama poznatim stručnjacima u oblasti. Na primer, jedinjenje Formule 29, gde dve R" grupe formiraju benziliden grupu, se može pripremiti reakcijom benzaldehida sa monosupstituisanim hidrazinom R7NHNH2, u rastvaraču kao što je etanol ili toluen, tokom oko 1 do oko 24 sata, i na temperaturi od oko 25 do oko 120 °C. Alternativno, reakcija se može odvijati sa monosupstituisanom soli hidrazina (na primer, so hidrohlorida ili oksalatna salt, i slično), u konjukciji sa bazom (na primer natrijum acetat ili trietilamin).

[0072] Jedinjenja Formule 8 ili Formule 8a se može pripremiti kako je opisano sledećom Reakcionom Šemom

VII:

gde su R:, R3, R4, Rs, i Y kako je definisano u Sažetku Pronalaska, M je odlazeća grupa (na primer, jodo, bromo, hloro, trifluorometansulfoniloksi, i slično), i svaki R' može biti, na primer vodonik, metil, i slično, ili dve R' grupe se mogu spojiti kako bi formirale ciklični boronatni estar. Dve Rw grupe mogu biti pojedinačno vodonik, ili dve Rso grupe, zajedno, mogu predstavljati pogodnu azotnu zaštitnu grupu (na primer, jedna R™ može biti vodonik i druga može biti BOC). Jedinjenja Formule 8 ili Formule 8a se može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 50 ili Formule 50a, redom, sa diboronskim jedinjenjm (na primer, bis(pinakolato)diboron i slično) u prisustvu pogodnog tranzicionog metalnog katalizatora (na primer PdC12 (dppf)),) i pogodne baze (na primer, kalijum acetat i slično) u odgovarajućem rastvaraču (na primer, toluen, dioksan i slično). Reakcija se nastavlja u temperaturnom opsegu od oko 20 °C do oko 120 °C i i može trajati do oko 24 sata. Jedinjenje Formule 50 se može pripremiti sulfonilacijom jedinjenja Formule 51 kako je opisano Reakcionom Šemom II. Biće prepoznato od strane stručnjaka u oblasti da jedinjenja Formule 51 ili Formule 50a, na primer, 3-bromoanilini, ili N-BOC-protektovani 3-bromoanilini, se mogu pripremiti na razne načine, uključujući bez ograničenja, one dalje opisane u Primerima ispod.

[0073] Jedinjenje Formule 70 se može pripremiti kako je opisano sledećom Reakcionom Šemom VIII:

gde je Rebdefinisan u Sažetku Pronalaska i R5Sje odabrano medu C,«, alkil ili halosupstituisan-C w alkil. Jedinjenje Formule 70 se može pripremiti tretiranjem jedinjenja Formule 71 sa pogodnim redukujućim sistemom (na primer, hidrogenizacija sa paladijumskim katalizatorom, i slično) u odgovarajućem rastvaraču (na primer, etanol ili etil acetat) na temperaturi od oko 25 do oko 75°C, tokom perioda od oko 0.5 do oko 12 sati.

[0074] Jedinjenje Formule 71 se može pripremiti u procesu od dva koraka koji obuhvata konverziju hidroksi grupe jedinjenja Formule 73 u dogovarajuću odlazeću grupu, praćeno izmeštanjem sa azidnim anjonom. Za prvi korak, pogodni reagensi obuhvataju fosforne trubromide, ili metansulfonil hlorid u kombinaciji sa pogodnom bazom kao što je trietilamin. Reakcija se dovija u odgovarajućem rastvaraču (na primer, dihlorometan, i slično), na temperaturi od oko 0 do oko 50 °C. Za drugi korak, izmeštanje se vrši sa azidnim reagensom (na primer, natrijum azide, i slično) u odgovarajućem rastvaraču (na primer, DMF ili DMSO) na temperaturi od oko 25 do oko 150 °C. Reakcija traje od oko 1 do oko 24 sata. Alternativno, transformacija se može izvršiti u jednom koraku tretmanom jedinjenja Formule 73 sa fosfinskim reagensom (na primer, trifenilfosfin, i slično) i azodikarboksilatnim reagensom (na primer, dietilazodikarboksilat i slično) u prisustvu hidrazoične kiseline (fromirane in situ iz azidnih soli, kao stoje natrijum azid, i kiseline). Reakcija se odvija na temperaturi od oko -80 °C do oko 75 °C, i traje oko 1 do oko 24 sata.

[00751 Jedinjenje Formule 73 se može pripremiti tretiranjem jedinjenja Formule 74 sa hloroformatom (na primer, metil hloroformat i slično) ili alternativno alkoksikarbonilacionim reagensom kao što je di-terc-butildikarboksilat. Reakcija se odvija u inertnom rastvaraču (na primer, dihlorometan i slično) na temperaturi od oko -80 do oko 25 °C, i traje oko 1 do oko 12 sati. Baza kao što je troetilamin se takode može koristiti. Reakcija se takođe može izvesti u dvo-faznom sistemu koji sadrži rastvarač kao što je THF ili dioksan, i vodenog baznog rastvora, kao pto je vodeni rastvor natrijum bikarbonata, na temperaturi od oko 25°C, tokom perioda od oko 2 do oko 16 sati.

[00761 Jedinjenje Formule 70 se takođe može pripremiti kako je opisano u sledstvenoj Reakcionoj Šemi IX:

gde je Rabdefinisan u Sažetku Pronalaska, R55je odabrano među C,j alkil ili halo-supstituisan Cm alkil, i R3!, je pogodna protektivna grupa, na primer, benziloksikarbonil (CBz). Jedinjenje Formule 70 može biti pripremljeno deprotekcijom jedinjenja Formule 75. Na primer, jedinjenje Formule 70 se može pripremiti tretiranjem jedinjenja Formule 75, gde je RM Cbz, sa pogodnim redukujućim sistemom (na primer, hidrogenizacija sa paladijumskim katalizatorom, i slično) u odgovarajućem rastvaraču (na primer, etanol, metanol, MTBE, ili etil acetat) na temperaturi od oko 25 do oko 75°C, opciono u prisustvu kiseline kao što je hlorovodonična, tokom perioda od oko 0.5 do oko 12 sati. Alternativno, deprotekcija se može izvršiti u uslovima hidrogenizacije under, korišćenjem pogodnog donora vodonika kao što je mravlja kiselina, amonijum format, ili 1,4-cikloheksadien. Jedinjenje Formule 75 se zauzvrat može pripremiti reakcijom jedinjenja Formule 76 sa hloroformatom (na primer, metil hloroformat i slično) ili alternativno alkoksikarbonilacionim reagensom kao što je di-terc-butildikarboksilat. Reakcija se odvija u inertnom rastvaraču (na primer, dihlorometan i slično) na temperaturi od oko -80 do oko 25 °C, i traje oko 1 do oko 24 sata. Baza kao što je troetilamin se takođe može koristiti. Reakcija se takođe može izvesti u dvo-faznom sistemu koji sadrži rastvarač kao što je THF ili dioksan, i vodenog baznog rastvora, kao pto je vodeni rastvor natrijum bikarbonata, na temperaturi od oko 25°C, tokom perioda od oko 2 do oko 16 sati. Jedinjenje Formule 76 se može pripremiti protekcijom jedinjenja Formule 77. Uslovi protekcije se mogu odabrati tako da daju poželjno samo jedan izomer Formule 76. Alternativno, uslovi se mogu odabrati tako da bude malo ili nimalo formiranja jednog izomera Formule 77, kako je prikazano, ali gde jedinjenje Formule 76 ipak može biti izolovano u dovoljno čistom obliku za dalje korišćenje. Načini dobijanja ovako prečišćenog jedinjenja mogu obuhvatiti kristalizaciju ili slobodne baze ili soli. Jedinjenje Formule 76, gde je R% Cbz, se može pripremiti tretiranjem jedinjenja Formule 77 benzil hloroformatom. Reakcija se odvija u inertnom rastvaraču (na primer, dihlorometan i slično) na temperaturi od oko -80 do oko 25 °C, i traje oko 1 do oko 24 sata. Baza kao što je troetilamin se takođe može koristiti. Reakcija se takođe može izvesti u dvo-faznom sistemu koji sadrži rastvarač kao što je THF ili dioksan, i vodenog baznog rastvora, kao pto je vodeni rastvor natrijum bikarbonata, na temperaturi od oko 25°C, tokom 2 do oko 24 sata. So jedinjenja Formule 77 se može koristiti, u konjukciji sa bazom kao što je trietilamin ili natrijum karbonat.

[0077] Biće prepoznato od strane stručnjaka u oblasti da jedinjenje Formule 70 može biti ili pojedinačan enantiomer ili smeša enantiomera, i da jedan enantiomer jedinjenja Formule 70 može biti dobijen od odgovarajućeg jednog enantiomera jedinjenja Formule 74 ili Formule 77.

[0078] Detaljni primeri sinteze jedinjenja Formule Ia se mogu naći u Primerima, infra.

Dodatni procesi u spravljanju jedinjenja pronalaska

[0079] Jedinjenje pronalaska se može pripremiti kao farmaceutski prihvatljiva kisela so dodavanjem slobodne baze jedinjenja sa farmaceutski prihvaljitvim neorganskim ili organskim kiselinama. Alternativno, farmaceutski prihvatljive bazne soli jedinjenja pronalaska se mogu pripremiti reakcijom sa slobodnom formom kiseline jedinjenja i farmaceutski prihvaljitvim neorganskim ili organskim kiselinama.

[0080] Alternativno, soli jedinjenja pronalaska se mogu pripremiti korišćenjem soli početnih materijala ili intermedijara.

[0081] Slobodne kiseline ili slobodne baze jedinjenja pronalaska se mogu pripremiti od odgovarajućih baznih soli ili kiselina, redom. Na primer jedinjenje pronalaska u formi kisele soli se može konvertovati u odgovarajuću slobodnu bazu tretiranjem sa pogodnom bazom (npr., rastvorom amonijum hidroksida, natrijum hidroksida, i slično). Jedinjenje pronalaska formi bazne soli se može konvertovati u odgovarajuću slobodnu kiselinu tretmanom sa pogodnom kiselinom (npr., hidrohloma kiselina, itd.).

[0082] Jedinjenja pronalaska u neoksidovanoj formi se može pripremiti iz N-oksida jedinjenja pronalaska tretmanom sa redukujućim agensom (npr., sumpor, sumpor dioksid, trifenil fosfin, litijum borohidrid, natrijum borohidrid, fosfor trihlorid, tribromid, ili slično) u odgovarajućem inertnom organskom rastvaraču (npr. acetonitril, etanol, vodeni rastvor dioksana, ili slično) na 0 do 80°C.

[0083] Prolek derivati jedinjenja pronalaska se mogu pripremiti metodama poznatim stručnjacima u oblasti (npr., za detalje videu Saulnier et al., (1994), Bioorgank and Medicinal Chemistrv Letters, Vol. 4, p. 1985). Na primer, pogodni prolekovi se mogu pripremiti reakcijom sa ne-derivatizujućim jedinjenjem pronalaska i pogodnim karbamilujućim agensom (npr., 1,1-aciloksialkilkarbanohioridat, para-nitrofenil karbonat, ili slično).

[0084] Zaštićeni derivati jedinjenja pronalaska se mogu napraviti metodama poznatim stručnjaku u oblasti. Detaljan opis tehnika prigodnih u stvaranja određenih protektivnih grupa i njihovom uklanjanju se mogu naći u T. W. Greene, "Protecting Grupas in Organic Chemistrv", 3rd edition, John Wiley i Sons, Inc., 1999.

[0085] Jedinjenja datog pronalaska se mogu konvencionalno pripremiti, ili formirati toko procesa pronalaska, u vidu rastvarača (npr., hidrata). Hidrati jedinjenja datog pronalaska se mogu konvencionalno pripremiti rekristalizacijom od vodenih/organskih rastvora, korišćenjem organskih rastvarača kao što su dioksin, tetrahidrofuran ili metanol.

[0086] Jedinjenja pronalaska se može pripremiti u vidu individualnih stereizomera reakcijom racemske smeše jedinjenja sa optički aktivnih agensom kako bi se formirao par diastereizomernih jedinjenja, odvojili diastereomeri i prečistili optički čisti enantiomeri. Dok se rezolucija enantiomera može dobiti korišćenjem kovalentnih diastereomernih derivata jedinjenja pronalaska, disocijativi kompleksi su poželjni (npr., kristalinske diastereomerne soli). Diastereomeri imaju jasne fizičke karakteristike (npr., tačke topljenja, ključanja, rastvorljivost, reaktivnost, itd) i mogu biti brzo odvojeni s obzirom na ove razlike. Diastereomeri mogu biti razdvojeni hromatografski ili poželjno tehnikama odvajanja baziranim na razlikama u rastvorljivosti. Optički čisti enantiomeri se potom preuzimaju, zajedno sa agensom za preuzimanje, na ma koji praktičan način koji neće dovesti do racemizacije. Detaljniji opis tehnika koje se mogu primeniti u razdvajanju stereoizomera jedinjenja od njihovih racemskih smeša se može naći u Jean Jacques, Andre Col let, Samuel H. Wilen, "Enantiomers, Racemates and Resolutions", John Wiley And Sons, Inc., 1981.

[0087] U sažetku, jedinjenja Formule I se mogu dobiti procesom, koji obuhvata:

(a) one u reakcionim šemama od I do IX; i

(b) opciono konverzijom jedinjenja pronalaska u farmaceutski prihvatljivu so; (c) opciono konverzijom soli jedinjenja pronalaska u formu koja nije so; (d) opciono konverzijom ne-oksidovanom formom jedinjenja pronalaska u farmaceutski prihvatljivi N-oksid; (e) opciono konverzijom N-oksid forme jedinjenja pronalaska u njegovu neoksidovanu formu;

(0 opciono prečišćavanjem induvidualnog izomera, na primer stereoizomera, jedinjenja pronalaska iz smeše izomera;

(h) opciono konverzijom prolek derivata jedinjenja pronalaska u njegovu ne-derivatizujuću formu.

[0088] Do sada, kako produkcija od početnih materijala nije posebno opisivana, jedinjenja su poznata ili se mogu pripremiti analogno metodama poznatim u oblasti ili kako je objavljeno u Primerima koji slede.

[00891 Stručnjak u oblasti će ceniti da transformacije prikazane iznad su samo primeri metoda za pripremu jedinjenja datog pronalaska, i da druge poznate metode mogu biti slično upotrebljene.

Pr imeri

[0090) Dati pronalazak je dalje opisan, bez ograničenja, sledećim intermedijerima i primerima koji ilustraju pripremu jedinjenja Formule I shodno pronalasku. Samo ona jedinjenja koja su prikazana u patentnim zahtevima 1 i 3 su u skladu sa pronalaskom.

[0091] Korišćene skraćenice su: benziloksikarbonil (Cbz); terc-butoksikarbonil (BOC); ćelijska proliferacija (CP); dihlorometan, (DCM); N,N-diizopropiletilamin (DIPEA); [l,r-Bis(difenilfosfino)ferocen] dihloropaladijum(Il)

(PdCl2(dppf)); 1,2-dimetoksietan (DME); N,N-dimetil acetamid (DMA); N,N-dimetilaminopiridin (DMAP); N,N-dimetil formamid (DMF); N,N-dimetil formamid dimetilacetal (DMF DMA); dimetilsulfoksid (DMSO); etil acetat (EtOAc); tečna hromatografija visokog pritiska (HPLC); izopropil acetat (iPrOAc); metansulfonil (Ms); 2-metiltetrahidrofuran (2-metilTHF); N-metilpirolidinon (NMP); tetrahidrofuran (THF); hroamtografija tankog sloja (TLC); i para-toluensulfonska kiselina (pTsOH).

Intermedijer. Estar terc-butil cijano-(2-metiltio-pirimidin-4-il)-sirćetne kiseline

[0092]

[0093] Suspenziji natrijum hidrida (7.15 g, 179 mmol, 60% u ulju) u DMSO (100 mL) je dodat terc-butil cijanoacetat (24.8 g, 170 mmol) na 23 °C. Nakon što je vodonik oslobođen, 4-hloro-2-metiltiopirimidin (13.7g, 85 mmol) je dodat. Reakcija je zagrejana na 80 °C tokom 16 h. Reakciona smeša je potom ohlađena do sobne temperature i prekinuta sa ledeno hladnim zasićenim amonijum hloridom (300 mL). Čvrst deo je filtriran i ispran vodom (2x200 mL). 300 mL heksana je dodato čvrstom delu i suspenziji je zagrejana na 60 °C tokom 1 h i i potom ohlađena na sobnoj temperaturi. Čvrst deo je filtriran i ispran sa heksanom kako bi se dobilo traženo jedinjenje; 'H NMR 400 MHz (CDC1,) 57.82 (d, IH), 6.74 (d,lH), 2.63 (s, 3H), 2.61 (s,lH), 1.52 (s, 9H); MS m/z : 266.0 (M + 1).

Intermedijer. (2-Metiltio-pirimidin-4-il)-acetonitril

[0094]

[0095] Rastvoru intermedijara estra terc-butil cijano-(2-metiltio-pirimidin-4-il)-sirćetna kiselina (5.3 g, 20 mmol) u anhidrovanom toluenu (100 mL) je dodato p-toluensulfonske kiselina (800 mg). Smeša je zagrejana do refluksa tokom 8 h, ohlađena na sobnoj temperaturi i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran sa IN vodenim rastvorom natrijum hidroksida i slanim rastvorom, isušen sa natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (3:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje: 'H NMR 400 MHz (CDCI3) 6 8.56 (d, IH). 7.12 (d, IH), 3.84 (s,2H), 2.57 (s, 3H); MS mlz: 166.0 (M + ])■

Intermedijer. 4-(2-(Metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin

[0096] Korak 1. 3-(Dimeulamino)-2-(2-(metiM N,N-Dimetilformamid dimetil acetal (30 mL) je dodat lntermedijem (2-Metiltio-pirimidin-4-il)-acetonitril (2.62 g, 15.7 mmol) i smeša je zagrejana do 100 °C tokom 16 h. Ohlađena reakciona smeša je koncentrovana, i ostaci su korišćeni bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2. 4-(2-(Metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin. Smeša sirovog 3-(dimetilamino)-2-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)akrilonitril iz prethodnog koraka (celokupna količina) i hidrazin monohidrata (2.36 mL, 47 mmol) u anhidrovanom etanolu (75 ml) je zagrejana na 80<Q>C tokom 16 sati. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi i koncentrovana. Reakciona smeša je odvojena između etil acetata i sonog rastvora. Organski sloj je izdvojen i ispran slanim rastvorom, isušen sa natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (2 to 5% metanol u dihlorometan eluentu) kako bi se dobilo 4-(2-(metiitio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin: 'H NMR 400 MHz (DM50-d6) 511.9 (s, IH), 8.3 (s, IH), 7.87 (s, IH), 7.23 (s, brlH), 6.43 (s, IH), 5.74 (s, 'H), 2.53 (s, 3H); MS mlz:208.0 (M + 1).

Intermedijer. l-izopropil-4-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin:

[00971

[00981 Intermedijer 4-(2-(Metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin (10.0 g, 40 mmol) je rastvoren u THF (200 mL), praćeno dodavanjem 2-jodopropana (6.3 mL, 63 mmol) i natrijum metoksida (25% težine rastvora u metanolu, 14.3 ml, 63 mmol). Smeša je zagrejana na 50 °C uz mešanje pod azotnom atmosferom tokom 3 d, i potom koncentrisana u vakuumu. Ostatak je stavljen u etil acetat (200 mL) i ispran sa vodenim rastvorom kalijum karbonata i slanim rastvorom, potom isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovana kako bi se dobio braon ostatak. Ostatak je stavljen na hromatografiju na silika gelu (heksan/atil acetat eluent) kako bi se dobio 1-izopropil-4-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin u čvrstom obliku; 'H NMR 400 MHz (CDC^) 58.23 (d, J=5.6 Hz, IH), 7.60 (s, IH), 6.83 (d, J=5.6 Hz, IH), 5.23 (d, J=2.8 Hz, 2H), 4.21-4.25 (m, IH), 2.50 (s, 3H), 1.37 (d, J=6.8 Hz, 6H); MS m/z :250.1 (M + 1).

[0099] Slično su pripremljeni: l-etil-4-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin i l-Metil-4-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazol-3-amin.

Intermedijer. 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-2-(metikio)pirimidin:

[0100]

[0101] Smeša intermedijera l-izopropil-4-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-lH-pirazoI-3-amin (4.0 g, 16.0 mmol), izopentilnitrita (13.2 g, 112 mmol), i metilen jodida (30 mL) je zagrejana na 100°C tokom 3 h. Uklanjanje ispraljivih supstanci pod vakuumom je dalo taman ostatak, koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (2:1 heksan/atil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje u čvrstom obliku; MS m/z :361.1 (M+1),

[0102] Slično su pripremljeni: 4-(3-jodo-l-etil-lH-pirazol-4-il)-2-(metiltio)pirimidin; 4-(3-jodo-l-metil-lHpirazol-4-il)-2-(metiltio)pirimidin; i 4-(3-jodo-lH-pirazol-4-il)-2-(metiltio)pirimidin.

Intermedijer. 4-(3-jodo-l-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-4-il)-2-(meUltio)pirimidin.

[0103]

[0104] Rastvor 4-(3-jodo-lH-pirazol-4-il)-2-(metiltio)pirimidina (270 mg, 0.85 mmol) i monohidrata p-toluensulfonske kiseline (32 mg, 0.17 mmol) u 3,4-dihidro-2H-piran (1 ml) je zagrejan na 60 °C tokom 5 h. Ohlađena smeša je razblažena sa etil acetatom, i i smeša je isprana vođom i slanim rastvorom, i potom isušena sa natrijum sulfatom, filtrirana, i koncentrovana. Ostatak je stavljen na hromatografiju na silika gelu (10% etil acetat u heksanu) kako bi se dobio traženo jedinjenje. MS (m/z ): 402.7 (M+l).

Intermedijer. 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-2-(metilsulfonil)pirimidin:

[0105]

[0106] Rastvoru intermedijara 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-2-(metiltio)pirimidina (4.51 g, 12.5 mmol) u dihlorometanu (60 mL) na 0 °C je dodato m-hloroperbenzoična kiselina (3.65 g, 77% čistoće, 16.3 mmol). Smeša je mešana na 0 °C pod azotom tokom 3 h, i potom razblažena sa etil acetatom i isprana sa vodenim rastvorom kalijum karbonata i slanim rastvorom. Organski sloj je isušen preko magnezijum sulfata, filtriran, i koncentrovan kako bi se dobio 4-(3-jodo-l-izopropiI-lH-pirazol-4-il)-2-(metilsulfonil)pirimidin u čvrstom obliku. MS m/z : 393.0 (M + 1).

Slično su pripremljeni: 4-(3-jodo-l-etil-lH-pirazol-4-il)-2-(metilsulfonil)pirimidin; i 4-(3-jodo-l-metil-lH-pirazol-4-il)-2-(metilsulfonil)pirimidin.

[0107]

Intermedijer. l-benziIliden-2-izopropiihidrazin

[0108] U flask sa okruglim dnom sa anhidrovanim natrijum acetatom (8.2g, 0.1 mol) u 125 ml 50% etanolu je dodata so izopropilhidrazin HC1 (11.1 g, 0.1 mole) i benzaldehid (10.6 g, 0.1 mol). Smeša je mešana na rt tokom 20h. Reakcija je potom ekstrahovana sa etrom (3 x 250 ml). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom i isušeni sa natrijum sulfatom. Filtracija, koncentracija i ko-evaporacija sa toluenom (3x) dale su traženo jedinjenje u vidu ulja. MS m/z 163.3 (M+1).

[0109] Slično su pripremljeni: l-benzilliden-2-etilhidrazin počevši od etilhidrazin oksalata, korišćenjem metanola i trietilamina umesto etanola i natrijum acetata, redom; i l-benzilliden-2-metilhidrazin počevši od metilhidrazina, korišćenjem metanola kao rastvarača, bez dodavanja baze.

Intermedijer. 2-((2-benzilliden-l-izopropilhidrazinil)metilen)-malononitril:

[0110]

[0111] Rastvor intermedijera l-benziliden-2-izopropilhidrazina (12.9 g, 0.079 mol) u 200 ml anhidrovanom THF je ohlađen u suvom ledu/acetonu u argon atmosferi. Ovo rastvoru je dodat n-butillitijum (1.6 M u heksanima, 66ml, 0.106 mol) špricem. Nakon dodavanja, smeša je mešana na temperaturi suvog leda for tokom dodatnih 5 minuta. Rastvor (2-(etoksimetilen)malononitrila (13.6 g, 0.11 mol) u THF (30 ml) je dodat. Smeša je mešana na temperaturi suvog leda tokom 0.5 h, i potom prekinuta sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Prekinuda reakciona smeša se ohladila do sobne temperature i ekstrahovana je etil acetatom. Organski slojevi su kombinovani, isušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je rastvoren u etanolu uz sonifikaciju. Rezultujući precipitat je pokupljen filtracijom i ispran sa malom količinom hladnog etanola kako bi se dobio 2-((2-benziliden-l-izopropilhidrazinil)metilen)malononitril u vidu žutog čvrstog ostatka. Ostatak teČnosti je koncentrovan i ostatak je prečišćen na hromatografiji silika gelom (1:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobio dodatni 2-((2-benziliden-l-izopropilhidrazinil)metilen)malononitril. MS m/z 239.2 (M + 1).

Intermedijer. 2-((2-benzilliden-l-etilhidrazinil)meUlen)-malononitril:

[01121

[0113] Rastvoru 2-(etoksimetilen)malononitrila (15.2 g, 0.124 mole) u 100 ml toluena je dodat Intermedijer 1-benziliden-2-etilhidrazin (18.4 g, 0.124 mol). Smeša je držana na sobnoj temperaturi, i do formiranja taloga. Reakciona smeša je mešana dodatnih 16 h. Talog je sakupljen na filteru i ispran sa malom količinom hladnog etanola kako bi se dobio 2-((2-benziliden-l -etilhidrazinil)metilen)malononitril u čvrstom obliku.

[0114] Slično je pripremljen 2-((2-benzUliden-l-metilhidrazinil)-metilen)malononitril.

Intermedijer. 3-Amino-l-izopropil-lH-pirazole-4-karbonitril

[0115]

[0116] Smeša intermedijera 2-((2-benziliden-l-izopropilhidrazinil)-metilen)malononitrila (9.42 g, 40 mmol), koncentrovane hidrohlome kiseline (5 ml), i etanola (50 ml) je zagrejana na tokom 20 min. Reakciona smeša je koncentrovana i dodat je etar (50 ml). Smeša je sonifikovana, potom je odbačen gornji sloj. Ostatku je dodato 20 ml of 5N vodenim rastvorom natrijum hidroksida i smeša je ekstrahovan sa dihlorometan (3x). Organski slojevi su kombinovani, isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen na hromatografiji silika gela (1:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobio 3-amino-l-izopropil-'H-pirazole-4-karbonitril u vidu braon čvrstog ostatka. 'H NMR (400 MHz, DMSO-d«) 58.09 (s, IH), 5.51 (s, 2H), 4.22 (m, IH), 1.31 (đ, J=7 Hz, 6H); MS m/z 151.2 (M + 1).

[0117] Slično su pripremljeni: 3-amino-l-etil-lH-pirazole-4-karbonitril; i 3-amino-l-metil-lH-pirazol-4-karbonitril.

Intermedijer. l-(3-Amino-l-izopropi]-lH-pirazol-4-il)etanon

[0118]

[0119] Rastvoru intermedijara 3-amino-l-izopropil-lH-pirazol-4-karbonitrila (5.29 g, 36.5 mmol) u 200 ml anhidrovanog THF na 0 °C je dodat rastvor metilmagnezijum bromida (3 M u etru, 56.5 ml, 0.17 mol). Reakciona smeša je zagrejana na tokom 4 h. Smeša je ohlađena do 0 °C i potom prekinuta sa 10% vodenim rastvorom hidrohlorne kiseline do neutralnog pH. Reakcija je ekstrahovana sa velikom količinom 9:1 dihlorometan/izorpopanola. Organski slojevi su kombinovani i isušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani. Čvrst produkt je prečišćen silika gel hromatografijom na koloni (1:1 etil acetat/heksani do 9:1 etil acetat/metanol eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu svetio braon Čvrstog ostatka. "H NMR (400 MHz, DMSO-d,,) 68.18 (s, IH), 5.62 (s, 2H), 4.23 (m, IH), 2.20 (s, 3H), 1.37 (d, J=7 Hz, 6H); MS m/z 168.2 (M + 1).

[01201 Slično su pripremljeni: l-(3-Amino-l-etil-lH-pirazol-4-il)etanon; i 1 -(3-Amino-l-metil-1 H-pirazol-4-il)etanon.

Intermedijer. l-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)etanon

[0121]

[0122] Rastvoru intermedijara l-(3-amino-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)etanona (3.97 g, 24 mmol) i pTsOH.H20 (9.07 g, 48 mmol, 2 eq) u 150 ml acetonitrila na 0 °C je dodat kap po kap rastvor natrijum nitrita (2.97 g, 43 mmole, 1.8 eq) i kalijum jodida (8.0 g , 48 mmol, 2.0 eq) u 20 ml vode. SmeŠa je mešana na na ovoj temperaturi tokom 10 minuta i i potom zagrejana do sobne temperature i mešana tokom 3 h. Smeša je koncentrovana i potom razblažena vodom i neutralizovana sa vodenim rastvorom natrijum karbonata do pH 9 do 10. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa natrijum tiosulfat rastvorom, isušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen na hromatografiji silika gela (1:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu svetio braon čvrstog ostatka. 'H NMR (400 MHz, DMSO-dc) 58.51 (s, IH), 4.53 (m, IH), 2.37 (s, 3H), 1.41 (d, J=7 Hz, 6H); MS m/z 279.1 (M + 1).

[0123] Slično su pripremljeni:l-(3-jodo-l-etil-lH-pirazol-4-il)etanon; i l-(3-jodo-l-metil-lH-pirazol-4-il)etanon.

Intermedijer. 3-(Dimeti!amino)-l-(3-jodo-1-izopropil-lH-pirazol-4-il)prop-2-en-l-on:

[0124]

[0125] Smeša intermedijera l-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)etanona (5.0 g, 18.0 mmol) i N,N-đimetiformamid dimetil acetala (50 mL) je zagrejana na 155°C tokom 20 h. Smeša je koncentrovana u vakuumu kako bi se dobilo traženo sirovo jedinjenje. Ms m/z 334.0 (M + 1).

[0126] Slično su pripremljeni: 3-(Dimetilamino)-l-(3-jodo-l-etil-lH-pirazol-4-il)prop-2-en-l-on; i 3-(Dimetilamino)-l-(3-jodo-l-metil-lH-pirazol-4-il)prop-2-en-l-on.

Intermedijer. 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-amin

[0127]

[0128] Smeša sirovog Intermedijera 3-(dimetilamino)-l-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)prop-2-en-l-ona (4.0 g, 12.0 mmol), guanidin hidrohlorida (2.63 g, 27.6 mmol), litijum hidroksida (635 mg, 27.6 mmol), i sek-butanola (50 ml) je zagrejana uz mešanje u zatvorenom reakcionom sudu na 110 °C tokom 20 h. Ohlađena reakciona smeša je koncentrovana, potom je dodata voda i i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Kombinovani ekstrakti su isušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani. Etil acetat je dodat čvrstom delu ostatka, i smeša je sonifikovana. Čvrst produkt je sakupljen na filteru, ispran etil acetatom, i osušen kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu tamnog čvrstog ostatka. MS m/z 330.0 (M + 1).

[0129] Slično su pripremljeni: 4-(3-jodo-l-etil-lH-pirazoI-4-il)pirimidin-2-amin; i 4-(3-jodo-l-metil-1Hpirazol-4-il)pirimidin-2-amin.

Intermedijer. 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ol

[0130]

[0131] Natrijum nitrit (314 mg, 4.55 mmol) je dodat deo po deo uz mešanje u smesu Intermedijera 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-amina (500 mg, 1.52 mmol) i trifluorosirćetne kiseline (15 ml) na 0 °C. Smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom lh, i potom je rastvarač uklonjen u vakuumu. Sirova smeša je razblažena sa etil acetatom i isprana sa zasićenim vodenim rastvorom kalijum karbonata i slanim rastvorom kako bi se dobilo traženo jedinjenje u čvrstom obliku. MS m/z 331.0 (M + 1).

[0132] Slično su pripremljeni: 4-(3-jodo-l-etil-lH-pirazol-4-il)piirmidin-2-ol; i 4-(3-jodo-l-metil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ol.

Intermedijer. 2-hIoro-4-(3-jodo-l -izopropil- lH-pirazol-4-il)pirimidin

[0133]

[0134] Rastvor intermedijera 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ola (438 mg, 1.33 mmol) u fosfor oksihloridu (10 ml) je zagrejana na 110 °C tokom 16 h. SmeŠa je koncentrovana u vakuumu, potom je pažljivo dodat vodeni rastvor natrijum bikarbonata i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Kombinovani organski ekstrakti su isušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu žutog čvrstog ostatka. MS m/z 349.0 (M + 1).

[0135] Slično su pripremljeni: 2-hloro-4-(3-jodo-l-etil-lH-pirazol-4-il)pirimidin; i 2-hloro-4-(3-jodo-l-metil-lH-pirazol-4-il)pirimidin.

Intermedijer. (S)-Metil l-hidroksipropan-2-ilkarbamat

[0136]

[0137] Rastvoru (S)-alaninola (10 g, 130 mmol) i natrijum bikarbonata (32.8 g, 390 mmol) u THF-H20 (1:1, 650 mL) na 0 °C je dodat kap po kap metil hloroformat (11.4 mL, 143 mmol). Smeša je mešana i zagrejana do sobne temperature tokom 4 h, i potom ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran sa IN vodenim rastvorom natrijum hidroksida i slanim rastvorom, i potom isušen sa natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan kako bi se dobilo traženo sirovo jedinjenje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. MS m/z 134.1(M + 1).

[0138] Slično su pripremljeni: (R)-metil l-hidroksipropan-2-ilkarbamat, korišćenjem (R)-alinol umesto (S)-alaninola; i (S)-l,l-DimetiletiI l-hidroksipropan-2-ilkarbamat korišćenjem di-t-butil-dikarbonat umesto metil hloro formata.

Intermedijer. (S)-Metil l-azidopropan-2-ilkarbamat:

[01391

[0140] Rastvoru intermedijara (S)-metil l-hidroksipropan-2-ilkarbamat (2.65 g, 20 mmol) i trietilamin (7.0 ml, 50 mmol) u anhidrovanom dihlorometan (100 mL) je dodato metansulfonil hlorid (1.91 mL, 23.9 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h i potom ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran sa IN natrijum hidroksid solution i slanim rastvorom, i potom isušen sa natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Sirov proizvod mezilata je potom rastvoren u suvom DMF (70 mL) i natrijum azidu (5.2 g, 80 mmol). Smeša je zagrejana uz mešanje na 80 °C tokom 2 h. Ohlađena reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je odvojen sa etil acetatom i slanim rastvorom. Organski sloj je izdvojen i ispran slanim rastvorom; isušen sa natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu (8:1 heksan/atil acetat eluent) kako bi se dobio (S)-metil l-azidopropan-2-ilkarbamat. MS m/z 159.1(M + 1).

[0141] Slično su pripremljeni: (R)-Metil l-azidopropan-2-ilkarbamat; i (S)-l,l-dimetiletil l-azidopropan-2-ilkarbamat.

Intermedijer. (S)-Metil l-aminopropan-2-ilkarbamai

[0142|

[0143] Rastvoru intermedijara (S)-metil l-azidopropan-2-ilkarbamata (2.86 g, 18.2 mmol) u etil acetatu (200 ml) je dodat 10% paladijum na ugljeniku (vlažan, 286 mg). Flask je degasiran i napunjen vodonikom (balon, 1 atmosfera), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 sati. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i isprana sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan kako bi se dobio sirov (S)-metil l-aminopropan-2-ilkarbamat, koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. 'H NMR 400 MHz (CDC|3) 64.79 (s, IH), 3.71-3.65 (m, IH), 3.66 (s, 3H), 2.75 (dd, IH), 2.65 (dd, IH), 1.14 (d, 3H); MS m/z 133.1 (M + 1).

[0144] Slično su pripremljeni: (R)-Metil l-aminopropan-2-ilkarbamat; i (S)-l,l-dimetiletil 1-aminopropan-2-ilkarbamat.

Intermedijer. (S)-Metil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat:

[0145]

[0146] Rastvor intermedijera 2-hloro-4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidina (1.4 g, 4.01 mmol), (S)-metil l-aminopropan-2-ilkarbamata (0.8 g, 6 mmol) i trietilamina (2.8ml, 20 mmol) u izopropanolu (30ml) i dioksanu (20 mL) je zagrejan u zatvorenom sudu do 125 °C tokom 48 sati. Ohlađena smeša je koncentrovana u vakuumu, i vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat ostatku. Smeša je ekstrahovana etil acetatom, i kombinovani ekstrakti su isušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani, i koncentrovani. Sirov ostatak je prečišćen silika gel hromatografijom na koloni (1:2 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu belog čvrstog ostatka. MS m/z 445.0 (M + 1).

[0147) Slično su pripremljeni: (R)-Metil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat; (S)-terc-butil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-iIamino)propan-2-ilkarbamat; 3-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propannitril; 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-N-metilpirimidin-2-amin; i N'-(4-(3-jodo-1 -izopropil-1 H-pirazol-4-il)pirimidin-2-il)-N ',N'-dimetiletan-1,2-diamin.

Intermedijer. N-(3-bromo-2,4-difluorofenil)propan-l-sulfonamid

[0148]

[0149] Rastvor 3-bromo-2,4-difluoroanilina (4.16 g, 20 mmol, EP184384), n-propansulfonil hlorida (4.6 ml, 40 mmol), piridina, (8 ml), DMAP (97 mg), i DCM (100 ml) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat i i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (8:1 to 3:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje. MS m/z 313.9 (M + 1).

Intermedijer. 3-Fluoro-4-jodopiridin-2-amin

[0150]

[0151] Rastvor 2-amino-3-fluoropiridina (1.0 g, 8.9 mmol) u anhidrovanom THF (40 ml) je tretiran kap po kap na -78°C sa n-butillitijumom (1.6 M u heksanima, 13.9 ml, 22.3 mmol). Nakon dodavanja, smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h, potom je dodat rastvor joda (10.2 g, 40.1 mmol) u THF (20 ml). Smeša je ekstrahovana etil acetatom, i organski ekstrakti su isprani sa natrijum tiosulfatom, natrijum bikarbonatom i slanim rastvorom. Organska faza je isušen sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (8:1 to 2:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje. MS m/z 238.9 (M + 1).

[0152] Slično je pripremljen: 3-hloro-4-jodopiridin-2-amin.

intermedijer. 3-Bromo-2,5,6-trifluoroanilin

[0153]

[0154] U mikrotalasnu tubu je dodato l-bromo-2,3,4,5-tetrafIuorobenzena (1.0 g) i 28% vodenog rastvora amonijum hidroksida (5 mL). Smeša je zagrejana na mikrotalasnim zracima 150 °C tokom 2 sata, ipotom je smeša sipana u vodu i ekstrahovana sa heksanom. Organski sloj je izdvojen, osušen sa MgS04, i potom koncentrovan. Ostatak je prečišćen na silika gel hromatografiji (9:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilotraženo jedinjenje u vidu bezbojne tečnosti. 'H NMR (400 MHz, CDCU) 86.75 (m, IH), 3.95 (br s, 2H) ppm; MS m/z : 226, 228

(M+H)\

Intermedijer.2,4-Dibromo-3,6-dihloroanilin

[0155]

[0156] Smeša 2,5-dihloroanilin (0.2 g), N-bromosukcinimida (0.48 g) i THF (20 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Rastvarač je uklonjen, i ostatak je prečišćen na silika gel hromatografiji (8:2 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje. MS m/z : 318 (M+H) .

Intermedijer. l,3-Dibromo-2,5-dihlorobenzene

[0157]

[0158] Mešana smeša 2,4-dibromo-3,6-dihtoroanilina (5.0 g), terc-butil nitrita (3.3 g) i EtOH (50 mL) je zagrejana u zatvorenoj tubi na 50 °C tokom 2 sata. SmeŠa je koncentrovana i ostatak je prečišćen na silika gel hromatografiji (hexanes eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje. MS m/z :303 (M<+>H)\

Intermedijer. 3-Bromo-2-hloro-5-fluoroanilin

[01591

Korak 1. 3-bromo-2-hloro-N-(difenilmetilen)-5-fluoroaniiin. Smeša 2,6-dibromo-4-fluoro-l-hlorobenzena (865 mg, 3 mmol), benzofenon imina (0.61 ml, 3.6 mmol), Pd2 (dba)3(137 mg, 0.15 mmol), natrijum tbutoksida (432 mg, 4.5 mmol), (S)-BINAP (280 mg, 0.45 mmol), i toluena (30 ml) je zagrejana na 80 °C tokom 16 h. Smeša je ekstrahovana etil acetatom i kombinovana organska faza isprana slanim rastvorom. Organska faza je isušena sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Čvrst produkt je prečišćen na silika gel hromatografiji (40:1 to 20:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobio traženo jedinjenje u vidu pudera. MS m/z 388.9 (M + 1).

Korak 2. 3-Bromo-2-hloro-5-fluoroanilin. Rastvor 3-bromo-2-hloro-N-(difenilmetilen)-5-fluoroanilina (1.16 g) u THF (20 ml) je tretiran sa 2N hidrohlornom kiselinom (1.5 ml, 1 eq) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je ekstrahovana etil acetatom i kombinovana organska faza isprana slanim rastvorom. Organska faza je isušena sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Sirov ostatak je prečišćen hromatografski (40:1 to 15:1 heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje, zagađeno benzofenonom. MS m/z 223.9 (M + 1).

Slično su pripremljeni: 3-bromo-2,5-dihloroanilin; 3-bromo-2-hloro-5-metilanilin; i 3-bromo-2,5-difluoroanilin.

[0160]

Intermedijer. 3-Bromo-5-hloro-2-fluorobenzoična kiselina [01611

[0162] Rastvor 2-bromo-4-hloro-l-fluorobenzena (4.31 g, 20 mmol) je dodat kap po kap u -78 °C rastvor LDA u THF (pripremljen od diizopropilamina (3.38 ml, 24 mmol) i n-BuLi (1.6 M, 13.1 ml, 21 mmol)). Smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h, i potom je polako prebačena (~ 30-60 min) kanulom uz mešanje pri -78 °C smeši suvog leda i THF (40 ml). Smeša je mešana na -78 °C tokom 1 h, i potom zagrejana do sobne temperature (gas evolution). Smeša je koncentrovana, i potom tretirana sa 50 ml 1 N rastvorom natrijum hidroksida. Smeša je ekstrahovana etil acetatom (odbačen). Sloj vodenog rastvora je zakišeljen sa IN hidrohlornom kiselinom, i potom ekstrahovan sa hloroformom (3 x 400 ml). Hloroform ekstrakt je isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovan kako bi se dobilo traženo sirovo jedinjenje. Produkt je bio zagađen malom količinom izomemog produkta 2-bromo-6-hloro-3-flurobenzoičnom kiselinom. 'H NMR za traženo jedinjenje 3-Bromo-5-hloro-2-fluorobenzoična kiselina: (400 MHz, CDCb) 67.93 (dd, IH, J = 2.8, 5.6 Hz), 7.79 (dd, IH, J = 2.8, 5.6 Hz) ppm.

[0163] Slično su pripremljeni: 3-bromo-2,6-difluorobenzoična kiselina; i 3-bromo-2-fluoro-5-metilbenzoična kiselina.

Intermedijer. terc-butil 3-bromo-5-hloro-2-fluorofenilkarbamat

[0164]

[0165] Rastvor sirovog Intermedijera 3-bromo-5-hloro-2-fluorobenzoična kiselina (2.03 g, 8 mmol), difemlfosforil azid (2.07 mL, 9.6 mmol, 1.2 eq), i DIPEA(1.67 mL, 9.6 mmol, 1.2 eq) u 1:1 t-butanol/toluen (25 ml) je zagrejana na 110 °C tokom 36h. Smeša je koncentrovana, potom odvojena između etil acetata i vode. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, i potom isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovana. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (30:1 1 to 10.T heksani/etil acetat eluent) kako bi se dobio traženo jedinjenje. MS m/z : 267.8 (M+H)\ (M-'Bu).

[0166] Slično su pripremljeni: terc-butil 3-bromo-2,6-difluorofenilkarbamat; i terc-butil 3-bromo-2-fluoro-5-metilfenilkarbamat.

Intermedijer. 3-Bromo-5-hloro-2-fluoroanilin

[0167]

[0168] Rastvor terc-butil 3-bromo-5-hloro-2-f!uorofenilkarbamata (900 mg, 2.78 mmol) u DCM/TFA (1:1, 20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana, potom je ostatak sipan u etil acetat i ispran sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom. Organski sloj je isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovana kako bi se dobio traženo sirovo jedinjenje (736 mg). MS m/z 223.9 (M+l).

Intermedijer. 5-bromo-3-metoksi-2-metilanilin:

[0169]

[0170] Heterogena reakciona smeša 4-bromo-2-metoksi-6-nitrotoluena (500 mg, 2.032 mmol), sirćetne kiseline (20 ml), i gvožđa (1135 mg, 20.32 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 24 sata. Dodat je etil actetat, potom je smeša filtrirana kroz celit i filtrat koncentrovan. Ostatak je odvojen sa etil acetatom i zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata. Sloj vodenog rastvora je ekstrahovan dalje sa etil acetatom. Kombinovane organske faze su isprane vodom i slanim rastvorom, potom isušene sa natrijum sulfatom, filtrirane i koncentrovane kako bi se dobilo traženo jedinjenje. MS m/z : 218.0 (M+H)'.

Intermedijer. terc-butil 5-hloro-2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat:

[0171]

[0172] Smeša intermedijera terc-butil 3-bromo-5-hloro-2-fluorofenilkarbamata (1.45 g, 4.46 mmol), bis(pinacolato)diborona (1.7g, 6.69 mmol), kalijum acetata (1.53g, 15.6 mmol), PdCl2(dppf)-CH2Cl3(163 mg, 0.22mmol), i dioksana (100 ml) je zagrejana u zatvorenoj tubi na 100 °C tokom 16 h. Sirov proizvod reakcione smeše je sipan u etil acetat i ispran sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom. Organski sloj je isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovan. Sirovo jedinjenje je rastvoreno sa vrućim heksanom (600 mL), zagrejano do 65 °C tokom 30 min. i potom ohlađeno na sobnoj temperaturi. Braon smeša je filtrirana kroz celit i filter je ispran heksanom. Kombinovani filtrati su koncentrovani kako bi se dobilo traženo sirovo jedinjenje u vidu žutog ulja. MS m/z 233 (M-pinacol-tBu).

10173] Slično su pripremljeni: 5-hloro-2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametiI-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; terc-butil 2,6-difluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat; N-(2,4-difluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)propan-l-su!fonamid; 2-(2-fluoro-3-nitrofenil)-4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan; 2,5-difluoro-3-(4,4>5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; 2-hloro-5-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-iI)anilin; 2,5-dihloro-3-(4,4l5,5-tetrametil-ll3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; 2-hloro-5-metil-3-(4,4,5,5-tetramelil-l,3,2-dioksaborolan"2-il)anilin; terc-butil 2-fluoro-5-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat; 3-fluoro-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin; 2,3,6-trifluoro-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; 3-hloro-4-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-amin; 3-hloro-5-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin; 3-metoksi-2-metil-5-(4,4,5,5-tetrameti 1 -1,3,2-dioksaborolan-2-il)ani 1 in.

Intermedijer. 2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin:

[0174]

[0175] Smeša intermedijera 2-(2-fluoro-3-nitrofenil)-4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolana (500 mg), 10% paladijuma na ugljeniku (50 mg) i etil acetata (20 ml) je mešana pod 1 atmosferom vodonika tokom 16 h. Smeša je isprskana azotom i filtrirana. Filtrat je koncentrovan kako bi se dobilo traženo jedinjenje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. MS m/z. 237.1 (M + 1).

Primer 1

Metil N-rf2SV1-r(4-(3-f2.6-difluoro-3-fpropan-1-sulfonamidoWpn in- 1- fpropan- 2- in- lH- piraznl- 4- illpirimidin-2-

inaminolpropan- 2- illkarbamat fJedinjenje 7 u tabeli11

[01761

[0177] Smeša sirovog Intermedijera N-(2,4-difluoro-3-(4,4,5,5-tetrameul-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenii)propan-l-sulfonamida (854 mg), Intermedijera (S)-metil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamata (350 mg, 90% čistoće), tetrakis(trifenilfosfine)paladijuma(0) (90 mg), 2 M vodenog rastvora natrijum karbonata (6 ml), toluena (50 ml), i etanola (6 ml) je zagrejana na 80 °C tokom 16 h. Ohlađena smeša je ekstrahovana etil acetatom i kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom. Organska faza je isušena sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (70:1 to 40:1 DCM/metanol eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje.

Primer 2

Metil N- ff2SV1 - f ( 4- 13-( 2- hloro- 5- fluoro-3-metansulfonamidofenin- 1-fpropan-2-il)-1 H-pirazol-4-U lpirimidin-2-

illaminolpropan- 2- inkarbamat (Jedinjenje 15 u tabeli 11

[0178] Korak 1. (S)-Metil 1 -(4-(3-(3-amino-2-hloro-5-fluoro f enil)- 1-izopropil- lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat. Smeša sirovog Intermedijera 2-hloro-5-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilina (214 mg), Intermedijera (S)-metil l-(4-(3-jodo-I-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamata (68 mg, 0.14 mmol), tetrakis(trifenilfosfine)-paladijuma(0)

(16 mg), 2 M vodenog rastvora natrijum karbonata (3 ml)), toluena (18 ml), i etanola (3 ml) je zagrejana na 85 °C tokom 16 h. Smeša je ekstrahovana etil acetatom i kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim

rastvorom. Organska faza je isušena sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (60:1 to 40:1 DCM/metanol eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje (46 mg) zagađeno (S)-metil l-(4-(l-izopropiI-lH-pirazol-4-il)pirimiđin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamatom. MS m/z 462.1 (M + 1).

Korak 2. S)-Metil l-(4-(3-(2-hloro-5-fluoro-3-(metansulfonamido)fenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat. Smeša anilinskog produkta koraka 1 (46 mg), piridin (2 ml), trietilamin (1 mL), DCM (4 ml), i metansulfonil hlorida (23 ul, 0.3 mmol) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Sirova reakciona smeša je koncentrovana, i potom je ostatak dodat smeši toluena (9 ml), etanola (1 ml), natrijum karbonata (2 g), i vode (10 ml). Mešana smeša je zagrejana na 85 °C tokom 16 h. Proces kao u Korak 1 je dao sirov produkt, koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (60:1 to 40:1 DCM/metanol eluent) kako bi se dobio traženo jedinjenje.

Primer 3

Metil N-ir2Sl-l-[f4-{3-r5-ruoro-2-fluorQ-3^

iUpirimidin-2-inaminolpropan- 2- illkarbamat fJedinjenje 1 u tabeli 11

[01791

Korak 1. (S)-Metil l-(4-(3-(5-hloro-2-fluoro-3-(terc-butoksikarbonilar^ il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat. Smeša sirovog Intermedijera terc-butil 5-hloro-2-fluoro-3-(4,4>5)5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamata (2.0 g), Intermedijera (S)-metil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamata (600 mg, 1.34 mmol), tetrakis(trifenilfosfine)paladijuma(0) (150 mg, 0.13mmol), 2 M vodenog rastvora natrijum karbonata (6.7 ml, 13.5 mmol), toluena (80 mL), i etanola (6 mL) je zagrejana na 80 °C tokom 16 h. Smeša je ekstrahovana etil acetatom i kombinovani organski ekstrakti su ispran slanim rastvorom. Organska faza je isušena sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (80:1 to 60:1 DCM/metanol eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje zagađeno trifenilfosfine oksidom. MS m/z 562.1 (M + 1).

Korak 2. (S)-Metil l-(4-(3-(3-amino-5-hloro-2-fluorofenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat. Rastvor delimično prečišćenog (S)-metil l-(4-(3-(5-hloro-2-fluoro-3-(terc-butoksikarbonilamino)fenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamata (1.15 g) u DCM (50 mL) i TFA (20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi tokom lh. Rastvarači su uklonjeni, i potom je dodat vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Smeša je ekstrahovana etil acetatom, i potom su kombinovani organski ekstrakti isprani sa natrijum bikarbonatom i slanim rastvorom. Organska faza je isušena sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Produkt je dobijen hromatografijom na silika gelu (60:1 do 40:1 DCM/metanol eluent); MS m/z 462.1 (M + 1).

Korak 3. Metil N-[(2S)-l-[(4-{3-[5-hloro-2-fluoro-3-(propan-l-suIfonamido)fenil|-l-(propan-2-il)-lH-pirazol-4-il}pirimidin-2-il)aminolpropan-2-illkarbamat. Smeša (S)-metil l-(4~(3-(3-amino-5-hloro-2-fluorofenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamata (41 mg, 0.09 mmol), trietlilamina (1 ml), i DCM (4 ml) je tretirana sa propansulfonil hloridom (40 mg, 0.27 mmol). Smeša je mešana na rt tokom 16 h. Sirova smeša je koncentrovana, i ostatak je dodat smeši toluena (9 ml), etanola (1 ml), natrijum karbonata (2 g), i vode (10 ml). Mešana smeša je zagrejana na 85 °C tokom 16 h. Proces kao kod Koraka 1 je dao sirov produkt, koji je prečišćen hromatografijom na silika gelu (60:1 to 40:1 DCM/metanol eluent) kako bi se dobio traženo jedinjenje.

Primer 4

Metil N-f(2S)-l-((4-i3-(5-hloro-2-fluoro-3-meta nsulfonamidofenin- l-( oksan-2-in-lH-p irazol- 4- illpirim

illaminolprooan-2-illkarbamat Hedinj eme 33 u tabeli ltend Metil N- rf2SVl- n4- r3- f5- hloro- 2- fluoro- 3-me, tansulfonamidofenin- lH- pirazoI- 4- illpirunidin- 2- illamino) propan- 2- illkarbamat f Jedinjenje 31 u tabeli 1)

[0180] Korak 1. 5-hloro-2-lfuoro-3-(4-(2-(metiltio)pirimidin-4-il)-l-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il)anilin. Pripremljeno shodno proceduri u Primeru 3, korak 1, počevši od intermedijara 4-(3-jodo-l-(tetrahidro-2Hpiran-2-il)-lH-pirazol-4-il)-2-(meitltio)pirimidina i intermedijara 5-hloro-2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)anilina. MS m/z 420.0 (M + 1).

Korak 2. N-(5-hloro-2-fluoro-3-(4-(2-(metiluo)pirimidin-4-il)-l-(tetrah il)fenil)metansulfonamid) i N-C5-hloro-2-nuorO'3-(4-(2-(metiltio)pinmidin-4-il)-l-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il)fenil)-N-(metilsulfonil)metansulfonamid. Rastvoru 5-hloro-2-fluoro-3-(4-(2-(metiltio)pirimidin-4-i])-l-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-3-il)anW (233 mg, 0.55 mmol) i trietilamina (2 mL) u dihlorometanu (10 mL) je dodat metansulfonil hlorid (0.13 mL, 1.66 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h, dajući smešu traženih jedinjenja (LCMS analiza). Metil acetat je dodat i smeša je isprana vodom i slanim rastvorom, i potom je organski sloj isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovan kako bi se dobila sirova tražena smeša, koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja.

MSm/zmono-sulfonamid 498.0 (M + 1); bis-sulfonamid 576.0 (M + 1)

Korak 3. Metil N-[(2S)-l-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metansulfonamidofenil)-l-(oksan-2-il)-lH-pirazol-4-il]pirimidin-2-il}amino)propan-2-ilJkarbamat. Smeša sirovog produkta Koraka 2 je rastvorena u THF-HjO (1:1, 30 mL) i tretirana na sobnoj temperaturi sa Oxone® (1.68 g, 2.75 mmol). Smeša je mešana na rt tokom 16 h, potom je dodat etil acetat. Organski sloj je ispran sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata, vodom, i slanim rastvorom, potom isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovan. Sirov ostatak je rastvoren u NMP (5 mL) i tretiran sa indermedijerom (S)-metil l-aminopropan-2-ilkarbamatom (146 mg, 1.1 mmol) i natrijum karbonatom (233 mg, 2.2 mmol). Smeša je zagrejana uz mešanje na 110 °C tokom 16 h. Ohlađena reakciona smeša je razblažena sa etil acetatom, i potom isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je isušen sa natrijum sulfatom, filtriran, i koncentrovan. Ostatak je stavljen na hromatografiju na silika gelu (2% metanol u dihlorometan eluentu) kako bi se dobilo traženo jedinjenje.

Korak 4. Metil N-[(2S)-l-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metansulfonamidofenil)-lH-pirazol-4-il]pirimidin-2-il}amino)propan-2-il]karbamat. Rastvoru metil (2S)-l-(4-(3-(5-nloro-2-fluoro-3-(metilsulfonamido)fenil)-l-(tetrahidro-2H-piran-2-il)-lH-pirazol-4-il)pirimtdin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamata (94 mg, 0.16 mmol) u MeOH (15 mL) je dodata koncentrovana hidrohloma kiselina (0.5 mL). Smeša je mešana na rt tokom 16 h. Vodeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat kako bi se podesila pH do 9 i smeša je ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je ispran sa vodenim rastvorom natrijum bikarbonata i slanim rastvorom. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (30:1 do 15:1 dihlorometan/metanol eluent) kako bi se dobilo traženo jedinjenje.

Primer5

Metil N4f2Sl-l-ri443-f5-hloro-2-fluoro-3-metansulfonamidofenill-l-fpropan-2-ilVlH-pirazol-4-in

illaminolpropan-2- illkarbamat ( Jedinjenje 9 u tabeli 11

[0181]

[0182] Metansulfonil hlorid (0.277 mL, 3.57 mmol) je dodat u rastvor (S)-metil l-(4-(3-(3-amino-5-hloro-2-fluorofenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamata (550 mg, 1.2 mmol) u DCM (30 mL) i piridina (10 mL), i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 16 h. Vođeni rastvor natrijum bikarbonata je dodat, i smeša je ekstrahovana etil acetatom i isprana slanim rastvorom. Organska faza je isušena sa natrijum sulfatom i koncentrovana. Čvrst produkt je prečišćen hromatografijom na silika gelu (60:1 to 40:1 DCM/metanol) kako bi se dobilo traženo jedinjenje. Alternativna sinteza je opisana u primeru 6, infra.

[0183] Takođe izolovana jedinjenja iz reakcione smeše su: Metil N-[(2S)-2-([4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metansulfonamidofenil)-l-(propan-2-il)-lH-pirazol-4-illpirimidin-2-il}amino)propil]karbamat (Jedinjenje 32 u tabeli 1); N-{3-[4-(2-aminopirimidin-4-il)-l-(propan-2-il)-lH-pirazol-3-il]-5-hloro-2-fluorofeniljmetansulfonamid (Jedinjenje 30 u tabeli 1).

Primer 6

Metil N- rf2SM- fU4345- h] oro- 2- fiuorn^^

il) aminolpropan- 2- illkarbamat ( Jedinjenje 9 u tabeli 1)

[0184] Korak 1. l-benzilliden-2-izopropilhidrazin. U reaktor opremljenim sa mehaničkom mešalicom, termometrom, i dodatnim levkom pod azotom je dodata izopropilhidrazin hlorovodonična so (712 g, 6.43 mol), natrijum acetat (528 g, 6.43 mol), i 50% etanol (4500 mL). Smeša je mešana na 20 °C tokom 5 min. Benzaldehid (683 g, 6.43 mol) je dodat dok je temperatura održavana ispod 23 °C. Smeša je mešana na 20 °C tokom 20 h. Toluen (6500 mL) je dodat uz mešanje tokom 5 min. Organski sloj je izdvojen. Zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata (4800 mL) je polako dodat uz snažno mešanje organskog sloja (Opaska: pH sloja vodenog rastvora je bio -8.0). Organski sloj je izdvojen i ispran sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (3000 mL). Potom je organski sloj izdvojen i koncentrovan u vakuumu (50-20 torr) na 40 °C kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu žutog ulja (korišćeno bez daljeg prečišćavanja). Korak 2. 2-((2-benzilliden-l-izopropilhidrazinil)metilen)-malononitril. Flasku opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, i dodatnim levkom pod azotom je dodat (etoksietilidin)malononitril (755 g, 6.18 mol), DMAP (150 g, 1.23 mol), i etanol (6400 mL). Smeša je mešana kako bi se dobio tamno narandžasti rastvor uz endotermnu reakciju na 20 °C do 12 °C. l-benzilliden-2-izopropilhidrazin (1101 g, sirov) je dodato polako tokom 15 min kako bi se dobila egzotermna reakcija na 32 °C i narandžasta suspenzija. Narandžasta suspenzija je zagrejana do 50 °C i držana na 50 °C tokom 30 min kako bi se dobila tamno braon suspenzija. Etanol (3200 mL) je dodat smeši i smeša je ohlađena na 20 °C i držana na 20 °C tokom 1 h. Gusta masa je filtrirana i čvrst ostatak je ispran etanolom (3000 mL), Čvrst ostatak je sakupljen i osušen u vakuumu na 40 °C/5 torr tokom 3 h kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu žutog čvrstog ostatka. HPLC čistoća >99%. Korak 3. 3-Amino-l-izopropil-lH-pirazol-4-karbonitril. Flasku opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, kondenzorom, i dodatnim levkom pod azotom je dodato 2-((2-benziliden-l-izopropilhidrazinil)metilen)-malononitrila (632.6 g, 2.65 mol), MeOH (2.5 L), i konc. (12 N) HC1 (329.0 mL, 3.94 mol). Smeša je zagrejana do 63 °C i držana na 63 °C tokom 30 min kako bi se dobio narandžasti rastvor. Smeša je ohlađena do 15 °C. Heptan (4 L) i MTBE (1 L) su dodati i smeša je mešana tokom 5 min. Potom je dodatavoda (7.5 L) tokom 30 min na 15 °C do 25 °C. Smeša je mešana 10 min na 25 °C nakon dodavanja vode. Heptan/MTBE sloj je izdvojen. Sloj vodenog rastvora je ispran sa (4:1 v/v) heptan/MTBE smešom (2x5 L) mešanjem nakon svakog ispiranja tokom 10 min na 25 °C. Slojevi su razdvojeni. Čvrst natrijum hlorid (1 Kg) je dodat u sloj vodenog rastvora. Zasićeni vodeni rastvor kalijum karbonata potom je dodat u sloj vodenog rastvora polako uz kontrolu otpuštanja C02i podešavanja pH~9.0. Sloj vodenog rastvora je potom ekstrahovan dva puta sa CH2CI2(1 x 2.2 L, 1 x 800 mL). Kombinovani CH2C13slojevi su osušeni sa MgSd, filtrirani i filtrat je koncentrovan u vakuumu (200 torr) u kupatilu pri temperaturi od 30 °C dok ostatak nije iznosio~1 Kg. Heptan (6.0 L) je polako dodat (tokom~20 min) u CH2CI2rastvor uz mešanje i do formiranja guste smeše. Smeša je koncentrovana u vakuumu (60 torr) pri internoj temperaturi od 25 °C dok rezidualna zapremina nije iznosila - 6.2 L. Gusta masa je ohlađena na 15 °C i odražavana na ovoj temperaturi tokom 10 min. Produkt je filtriran i čvrsti ostatak je ispran sa heptanom (1 L). Čvrsti ostatak je osušen u vakuumu (5 torr) na 30 °C tokom 4 h kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu žutog čvrstog ostatka. HPLC čistoća >99%. Korak 4. l-(3-Amino-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-etanon. Flasku opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, kondenzorom, sa kapacitetom sa hlađenje/grejanje, dodatnim levkom, azotom, je dodat 3-amino-l-izopropil-lH-pirazol-4-karbonitril (274 g, 1.82 mole) i ciklopentil metil etar (2600 mL) pri 20 °C i pod azotom. Suspenzija je ohlađena na -10 °C. 1.5 M Metillitijum/litijum bromidni kompleks u dietil etru (6.0 L, 9.00 mol) je dodato kap po kap tokom 2.5 h na -10 °C do 0<D>C. Po završetku dodavanja metillitijuma suspenzija je brzo zagrejana na 5 °C do 10 °C i držana na ovoj temperaturi tokom lh. Smeša je ohlađena do 0 °C i 2N HCl (6.0 L) je dodato kap po kap na 5 -10 °C. Gornji organski sloj je izdvojen i ekstrahovan sa 2N HCl (500 mL). Kombinovani slojevi vodenog rastvora su mešani na rt tokom 16 h. Smeša je ohlađena do 15 °C i tretirana bazom 50% NaOH (260.0g) kako bi se dobio pH od~11.0. Smeša je ekstrahovana sa CHiCl2(l x 2.0 L, 1 x 1 L). Kombinovani CH2CI2slojevi su osušeni sa MgSOj, filtriran i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobio žut čvrst ostatak (278 g). Čvrst ostatak je rastvoren u EtOAc (750 mL) nakon zagrevanja do 65 °C. Rastvor je ohlađen do sobne temperature i i dobijena je gusta smeša. Heptan (1500 mL) je dodat polako tokom 40 min na sobnoj temperaturi. Gusta masa je ohlađena na -10 °C i držana na -10°C tokom 30 min. Gusta masa je filtrirana i filtrat je ispran heptanom (300 mL). Čvrsti ostatak je osušen u vakuumu (5 torr) na 40 °C tokom 3 h kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu svetio braon čvrstog ostatka. HPLC čistoća >99%. M.P. 136-139 °C. Korak 5. l-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-iI)-etanon. U flask opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, i dodatnim levkom pod azotom je dodato l-(3-amino-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-etanona (250.0 g, 1.49 mol) i acetonitrila (3725 mL). Smeša je ohlađena do -20 °C. BF3.THF (313.1 g, 2.23 mol) je dodato kap po kap dok je interna temperatura održavana na < -10 °C. Izoamil nitrit (227.5 g, 1.94 mol) je dodat kap po kap dok je interna temperatura održavana na < -10 °C. Smeša je zagrejana na 10 °C i je mešana na 10 °C tokom 30 min. Smeša je dodata u tankom mlazu flasku sa smešom 12 (28.5 g, 0.112 mol), Kl (371.9 g, 2.24 mol) i acetonitril (1160 mL) na 10-15 °C uz snažno mešanje. Ovo jedovelo do oslobađanja azota i blago egzotermne reakcije. Smeša je mešana na rt tokom 30 min. HPLC nije pokazao ostatko diazonijum intermedijara. Potom je dodat natrijum bisulfit (157.1 g, 1,51 mol) u 8% rastvor natrijum hlorida (4360 mL) pri 15-20 °C. Smeša je tretirana bazom zasićenom kalijum karbonatom do pH - 8.5. Površinski sloj acetonitrila je izdvojen i koncentrovan u vakuumu kako bi se dobio uljani ostatak. Ulje je rastvoreno u iPrOAc (2770 mL) i isprano sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata (IlOOmL). iPrOAc sloj je izdvojen i koncentrovan do zapremino od~1.5 L. Dobijena je suspenzija. Suspenziji je dodato heptane (5.5 L) tokom 30 min na 20 °C Suspenzija je mešana tokom 10 min na 20 °C nakon dodavanja heptana. Gusta masa je filtrirana i čvrsti deo je ispran heptanom (1L) i potom osušen na 20 °C u vakuumu (5 torr) tokom 16 h kako bi se dobilo traženo jedinjenje. MP: 90-92 °C. Korak 6. 3-(Dimetilamino)-l-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-prop-2-en-l-on. Flasku opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, i dodatnim levkom pod azotom je dodato l-(3-jodo-l-izopropil-lHpirazol-4-il)-etanona (640 g, 2.30 mol) i DMF (6.4 L). Rezultujući narandžasti rastvor je zagrejan do 120 °C. Bredereck-ovim reagens (598.6 g, 3.43 mol) je dodat odjednom. Ovo je izazvalo pad temperature na 114 °C i i bojenje rastvora do tamno narandžaste boje. Smeša je mešana na 120 °C tokom 20 min. Smeša je ohlađena do sobne temperature i potom koncentrovana na 5 mmHg na 60 °C kako bi se dobilo uljani ostatak. Ostatak je rastvoren u iPrOAc (2400 mL) zagrevanjem do 74 °C. Smeša je ohlađena do 35 °C i mešana kako bi se dobila gusta smeša. Heptan (6000 mL) je dodat pri 35 °C do sobne temperature tokom 1 h. Smeša je ohlađena do -15 °C i filtrirana i čvrsti deo je osušen u vakuumu na 40 °C tokom 3 h kako bi se dobilo traženo jedinjenje u čvrstom obliku. HPLC čistoća >98%. MP: 106-109 °C. Korak 7. 4-(3-jodo-i-izopropil-lH-pirazol-4-il)-pirimidin-2-amin. Flasku opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, Dean-Stark zamkom, i kondenzorom pod azotom je dodat (E)-3-dimetilamino-l-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-iI)- prop-2-en-l-on (735 g, 2.2 mol), guanidin karbonat (596 g, 3.3 mol) i NMP (5200 mL). Smeša je zagrejana do 130 °C i držana na 130 °C tokom 5 h. (Opaska: nisko-kljkučajuće frakcije su pokupljene Dean-Stark zamkom). Smeša je ohlađena do 80 °C i 15% aq, natrijum hlorida (7500 mL) je dodato na 80 °C do 35°C tokom~lh. Produkt je počeo da se taloži na oko pola puta tdodavanjem vodenog rastvora natrijum hlorida. Smeša je dalje ohlađena na rt i držana tokom 30 min. Čvrst ostatak je sakupljen filtriranjem i osušen u vakuumu na 65 °C tokom 16 h kako bi se dobilo traženo jedinjenje u čvrstom obliku. HPLC čistoća >99%. MP: 167-169 °C. Korak 8. 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-i!)-pirimidin-2-ol. Flasku opremljenim mehaničkom mešalicom i termometrom uz azot je dodat TFA (748.8 mL). 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazoI-4-il)-pirimidin-2-amin (300 g, 0.91 mol) je dodat deo po deo u čvrstom obliku uz održavanje interne temperature ispod 30 °C korišćenjem hladnog vodenog kupatila. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 min kako bi se dobio rastvor. Smeša je ohlađena do 20 °C i dodat je natrijum nitrit ( 79.7g, 1.27 mol) deo po deo tokom 5 h na 22-28 °C uz snažno mešanje. (Opaska: primećeno je otpuštanje gasa i uz blagu egzotermnu reakciju koja se kontroliše hladnim vodenim kupatilom). DCM (12 L) je dodato i smeša je zagrejana do 27 °C. Voda (4400 mL) je dodata (Opaska: otpuštanje gasa na početku). Zasićeni rastvor kalijum karbonata (~1500 mL) je dodat polako smeši kako bi se povećala pH vrednost do~9.0 (Opaska: Otpuštanje velike količine gasa). Smeši je dodat rastvor natrijum bisulfita (32 g, 0.30 mol) u vodi (100 mL). Smeša je mešana na 27 °C tokom 15 min i pH je podešen na~9.0. DCM sloj je izdvojen i koncentrovan u vakuumu (200-100 mmHg) pri temperaturi kupatila od 40 °C dok ostatak nije iznosio -2300 g (-1750 mL). Ostatku je dodato MTBE (1500 mL) na 20 °C. Smeša je mešana 10 min na 20 °C i potom filtrirana. Čvrsti ostatak je osušen 16 h na 30°C u vakuumu (5 torr) kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu prljavo belog čvrstog ostatka. HPLC Čistoća >99%. MP: 216-218°C. Korak 9. 2-hloro-4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-pirimidin. Flasku sa mešalicom, termometrom, kondenzorom, dodatnim levkom, azotom, je dodato 4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-pirimidin-2-ota (311 g, 942 mmol). Čvrstom delu je dodat acetonitril (2500 mL) na 20 °C. Smeša je mešana kako bi se dobila suspenzija. Suspenziji je dodato DIPEA (246.2 mL, 1.41 mol), praćeno dodatkom DMF (218.8 mL, 2.83 mol). Rezultujuća suspenzija je mešana 5 min na 20 °C. Suspenziji je dodato POCh (217 g, 1.41 mol) na 20 -40 °C kako bi se dobio narandžasti rastvor. Smeša je zagrejana do 80 °C i držana na 80 °C tokom 3 h. Smeša je ohlađena do 10 °C i a rastvor amonijum hidroksida (622 mL of 28%) u dejonizovanoj vodi (5550 mL) je dodat polako tokom 1.5 h, održavajući temperaturi ispod 20 °C. Nakon dodavanja amonijum hidroksida, rezultujuća suspenzija je mešana tokom 40 min na 10-20 °C. Čvrst ostatak je sakupljen filtriranjem i osušen tokom noći 40 °C u vakuumu (5 torr) kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu braon čvrstog ostatka HPLC čistoća >99%. Korak 10. (S)-benzill 2-(metoksikarbonilamino)propilkarbamat. Suspenziji (S)-l,2-diaminopropan dihidrohlorida (50g, 340 mmol) u dihlorometanu (500 mL) je dodat kalijum karbonat (1190 mmol). Suspenzija je mešana i filtrirana kako bi se sakupio filtrat. Filtrat je ohlađen na 0-5 °C i mešan uz dodavanje benzil hloroformat a(51 ml, 357 mmol) kap po kap. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana tokom 3 h na 0-5 °C, i potom zagrejana do sobne temperature i mešana na sobnoj temperaturi tokom noći. Ovoj smeši je dodato kap po kap trietilamina (71 ml, 510 mmol) i smeša je ohlađena na 0-5 °C. Metil hloroformat (28 ml, 357 mmol) je dodat polako na 0-5 °C i smeša je zagrejana do sobne temperature i mešana tokom noći. Smeša je sipana u vodu. Organski gasovi su izdvojeni u vakuumu. Rezultujući vodeni rastvor u vidu guste smeše je filtriran kako bi se sakupila čvrsta faza, i filtrat je potom ispran sa etil acetatom kako bi se dobio beo čvrst ostatak (65 g, 92-94% HPLC čistoća). Višestruka rekristalizacija sa etil acetatom je dala traženo jedinjenje u vidu belog čvrstog ostatka, HPLC čistoća 99.5%. Korak 11. So hlorovodonične kiseline (S)-Metil l-aminopropan-2-ilkarbamat. Rastvor (S)-benzill 2-(metoksikarbonilamino)propilkarbamata u metanolu je hidrogenizovan sa 5% paladijum/C katalizatorom na 50-60 psi. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan u vakuumu kako bi se dobilo bezbojno ulje. 60g bezbojnog ulja je rastvoreno u 200 mL anhidrovanog dihlorometana i rastvor je ohlađena na 0-5 °C u ledeno hladnom vodenom kupatilu. Rastvor HCl u metanolu (ca. 75 mL) je dodato kap po kap dok pH rastvora nije bila < 1. Rezultujuća suspenzija je mešana na 0-5 °C tokom 30 min, i potom je čvrsti deo pokupljen filtracijom. Čvrst ostatak je ispran sa dihlorometanom i potom sa heksanima kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu belog čvrstog ostatka. Korak 12. 3-Bromo-5-hloro-2-fluorobenzaldehid. Rastvor 2,2,6,6-tetrametilpiperidin (327 g, 98%, 2.274 mol) i THF (1.9 L, HPLC kvalitet) je ohlađena na -75 °C (suvi led-metanol kupatilo) pod argnoskom atmosferom. 1.6 M n-BuLi/heksan rastvor (1.47 L, 2.35 mol) je dodat polako smeši na -72 do -67 °C tokom 1 h. Smeša je mešana na -72 do -67 °C tokom 30 min kako bi se dobila bledo žuta suspenzija. 2-Bromo-4-hloro-l-fluorobenzen (435 g, 97%, 2.02 mol) je dodat polako smeši na -72 do -67 °C tokom 30 min, i potom smeša je mešana na -72 do -67 °C tokom dodatnih 30 min. Dimetilformamid (230 g, 99.5%, 3.14 mol) je dodat polako smeši na -70 do -65 °C tokom 30 min i potom je smeša mešana na -70 do -65 °C tokom 30 min kako bi se dobio svetio braon rastvor. Hlašenje je uklonjeno i potom je dodat zasićen amonijum hlorid (720 mL) na -60 do -30 °C tokom 15 min kako bi se dobio mutna smeša. 6 N hidrohlorna kiselina je brzo dodata smeši na -30 do 10 °C tokom 15 min do pH 1 i potom etil acetat (2.0 L) na 10 do 20 °C Slojevi su razdvojeni i sloj vodenog rastvora je ekstrahovan etil acetatom (1 x 300 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani vodom (1 x 800 mL) i slanim rastvorom (1 x 500 mL), isušeni preko magnezijum sulfata, i filtrirani. Filtrat je koncentrovan u vakuumu (60-65 °C) kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu mrkog viskoznog ulja, koje se stvrdnulo nakon nekoliko sati. 'H NMR(CDCla): 67.76-8.30 (m, 2H), 10.0-10.8 (br s, IH); MS m/z 238.0 (M+l). Korak 13. 3-Bromo-5-hloro-2-fluorobenzoična kiselina. Mešana smeša 3-bromo-5-hloro-2-fluorobenzaldehida (415 g), terc-butanola (1.2 L) i vode (1.2 L) je zagrejana do 30 °C i potom joj je dodat kalijum permanganat (335 g, 2.12 mol) (5 defova) pri 40-45 °C tokom 1 h. Tamno ljubičasti sadržaj je zagrejan korak po korak do 45-50 °C tokom 30 min, 50-55 °C tokom 30 min i 55-60 °C tokom 30 min kako bi se dobila ljubičasto-braon suspenzija. Reakciona smeša je ohlađena do 20 °C, potom joj je dodat zasićeni natrijum sulfit na 22-27 °C, dok nije dobijen negativan test na peroksid. Topla voda (2.5 L, -50 °C) i zasićeni natrijum karbonat (100 mL) su dodati uzastopno smeši tokom 15 min. Tamna suspenzija je filtrirana preko 1 cm celitnih jastučića, i filter je ispran toplom vodom (4 x 1 L, -50 C). Kombinovani filtrat je zakišeljen 6 N hidrohlornom kiselinom do pH 1 kako bi se dobio žuta uljasta suspenzija. Etil acetat (3 L) je dodat smeši i smeša je mešana tokom 10 min. Gornji organski sloj je ispran vodom (1.2 L), isušen preko magnezijum sulfata, filtriran, i koncentrovan u vakuumu (60-65 °C) kako bi se dobila gusta žuta suspenzija. Heksan (700 mL) je dodat ostatku i suspenzija je ohlađena na 5-10 °C. Čvrst ostatak je sakupljen filtracijom, i filtrat je osušen u vakuumu (65°C) tokom noći kako bi se dobilo traženo jedinjenje u vidu žutog čvrstog ostatka, mp 150-152 °C; HPLC čistoća (225 nm): 97.5%; 'H NMR(d6-DMSO): 87.82 (s, IH), 8.10 (s, IH), 13.82 (br s, IH); MS m/z 254 (M+H). Korak 14. terc-butil 3-bromo-5-hloro-2-fluorofenilkarbamat. Smeša 3-bromo-5-hloro-2-fluorobenzoične kiseline (243 g, 97.5%, 0.935 mol), trietilamina (105 g, 99.5%, 1.02 mol), i terc-butanola(1.4 L) je zagrejana do 74 °C. Rastvor difenilfosforil azida (260 g, 97%, 0.916 mol) u toluenu (960 mL) je dodat polako smeši na 75-79 °C tokom 1 h (nežno mešanje). Smeša je zagrejana polako do 83 °C tokom 30 min i održavana na 83-84 °C (nežno mešanje) tokom 1 h. Sadržaj je koncentrovan u vakuumu (65-70 °C) do viskoznog ulja. Toluen (2 L) i voda (1.5 L) su dodati uzastopno i smeša je potom mešana na 35 °C tokom 15 min. Sloj vodenog rastvora je odbačen. Organski sloj je ispran sa zasićenim natrijum bikarbonatom (400 mL) i vodom (400 mL). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu (60-65 °C) do -350 mL ostatka (-94% puritv). 10% etil acetat/heksana (-1.2 L, v/v) je dodato i smeša je potom zagrejana na 50 °C tokom 15 min kako bi se dobio a svetio žuti homogeni rastvor. Etil acetat/heksan rastvor je prenet na prethodno napravljen silika gel (1.8 kg, 70-200 mreža)/heksan postolje u 4-L Pyrex Biichner levku (sa grubim poroznim diskovima, 40-60mm, 16 cm dijametra, 18 cm visine), t-butil karbamat je ispran (gravitacijom) polako sa 3-5% etil acetat/heksanom (ukupne zapremine~5 L, v/v) kako bi se sakupilo traženo jedinjenje u vidu prljavo belog čvrstog ostatka, mp 87-88 °C; HPLC čistoća (225 nm): 97-98%; 'H NMR (d.-DMSO): 61.48 (s, 9H), 7.48-7.49 (m, IH), 7.80-7.82 (m, IH), 9.42 (s, IH); MS m/z 325 (M+H). Korak 15. (S)-Metil l-(4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat. Flasku sa 4 grla, opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, i kondenzorom pod azotom je dodat 2-hloro-4-(3-jodo-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)-pirimidin (300.0 g), so (S)-metil l-aminopropan-2-ilkarbamat hidrohlome kiseline (174.3 g), natrijum karbonat (365.7 g) i DMSO (2400 mL). Smeša je zagrejana uz mešanje tokom 18 h pri internoj temperaturi od 90 °C. Smeša je ohlađena do 40 °C. Toluen (3870 mL) je dodat na 37- 43 °C uz mešanje. Voda (7200 mL) je dodata na 37- 43 °C. The toluenski sloj je izdvojen na 37- 43 °C. To the Toluene layer je dodato 15 % vodenim rastvorom natrijum hlorid 1 solution (3870 mL) i the pH vodenog sloja sloj je pri pH~5.0 dodavanjem 10% vodenog rastvora limunske kiseline na 37 - 43 °C. pH podešavanje je zahtevalo -20 mL 10% vodenog rastvora limunske kiseline. Toluenski sloj je potom ispran sa zasićenim vodenim rastvorom natrijum bikarbonata (2880 mL) na 37 - 43 °C. Toluenski sloj je sadržao traženo jedinjenje i iskorišćen je kao početno jedinjenje u koraku 17. Korak 16. terc-butil 5-hloro-2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat. Flasku opremljenim mehaničkom mešalicom, termometrom, kondenzorom, i grejačem pod azotom je dodat terc-butil 3-bromo-5-hloro-2-fluorofenilkarbamat (33.0 g), bis(pinacolato)diboron (447.0 g), kalijum acetat (405.6 g) i toluen (2700 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 15 min i PdCI2(dppf) (50.4 g) je dodat. Smeša je potom zagrejana do 108 62 °C. (Opaska: Smeša je postala tamna na 50 - 60 °C) Rastvor terc-butil 3-bromo-5-hloro-2-fluorofenilkarbamata (414 g) u toluenu (1770 mL) je dodat na 108 62 °C tokom 70 min. Smeša je držana na 108 62 °C tokom 15 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature uz protok azota i potom filtriran celitom. Filtrat je sadržao traženo jedinjenje i iskorišćen je kao početno jedinjenje u koraku 17. Korak 17. (S)-Metil l-(4-(3-(5-hloro-2-fluoro-3-(terc-butoksikarbonilamino)fenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat. Flasku je dodat (S)-metil 1-(4-(3-jodo-l-izopropil-1H-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat (3870 ml toluenski rastvor,~382 g, 0.861 mol) i terc-butil 5-hloro-2-fluoro-3-(4,4,5,5-tetrametil-l,3,2-dioksaborolan-2-il)fenilkarbamat (4470 ml toluenski rastvor,~467.0 g, 1.26 mol). Do rezultujužeg braon rastvora je dodat rastvor natrijum karbonata (349.8 g, 3.30 mol) u vodi (1400 mL). Smeši je dodato PdCb(dppf) (34.5 g , 0.047 mol). Smeša je zagrejana do 80 °C uz mešanje i odražavana na ovoj temperaturi tokom 2 h. Smeša je ohlađena do 40 °C i filtrirana celitom. Slojevi filtrata su odvojeni. Toluenski sloj sa traženim jedinjenjem je korišćen direktno kao početno jedinjenje koraka 18. Korak 18. (S)-Metil l-(4-(3-(3-amino-5-hloro-241uom ilamino)propan-2-iikarbamat. Flasku je dodat (S)-metil l-(4-(3-(5-hloro-2-fluoro-3-(terc-butoksikarbonilamino)fenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-iI)pirim^ (-7.3 L toluenski rastvor, -483.3 g, 0.86 mol) na 20 °C u azotnoj atmosferi. Rastvoru je dodato 12N HCl (574.3 mL, 6.95 mol) tokom -20 min dok je temperatura održavana ispod 25 °C. Dodavanje HCl je dovelo do egzotermne reakcije na 19 °C do 24 °C. SmeŠa je mešana na 20 -23 °C tokom 1 h. Reakcionoj smeši je dodata voda (3100 mL). Smeša je mešana 10 min na 20 °C. Sloj vodenog rastvora je odvojen i ispran sa 2-metil-THF (3100 mL). Sloju vodenog rastvora je polako dodat zasićen vodeni rastvor kalijum karbonata (-778 mL). pH sloja vodenog rastvora je bio - 8.5. Sloj vodenog rastvora je ekstrahovan sa 2-metilTHF.

(3825 mL). 2-metilTHF sloj je koncentrovan u vakuumu (60 mmHg, 40 °C). Ostatak je rastvoren sa 2-metil-THF (-3800 mL) kako bi se dobio rastvor traženog jedinjenja, koji je korišćen direktno kao početno jedinjenje koraka 19. HPLC čistoća: 95%.

Korak 19. (S)-Metil 1 -(4-(3-(5-hloro-2-fluoro-3-(N-(metilsulfoniljmetilsulfonamido)fenil)-1 -izopropil-1H-pirazol-4-il)pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat. Flasku je dodat (S)-metil l-(4-(3-(3-amino-5-hloro-2-nuorofenil)-l-izopropil-lH-pirazol-4-il)pirimidin-2-iIamino)propan-2-ilkarbamat (-3.8 L metilTHF rastvor, -396.5 g, 0.86 mol) na 20 °C. Rastvoru je dodat trietilamin ( 435.0 g, 4.3 mol). Rastvor je ohlađen na 0 do -5 °C. Rastvoru je dodato metansulfonil hlorid (246.0 g, 2.15 mol) kap po kap uz mešanje tokom 20 min na 0 do -5 °C. Smeša je zagrejana na 18-20 °C i odražavana na ovoj temperaturi tokom 20 min. Reakcionoj smeši je dodata voda (2115 mL) tokom 30 min na 18-20 °C. Smeša je mešana 10 min na 20 °C nakon dodavanja. pH je potom podešen na 6.0 i 6.5 sa 2N HCl (-1230 mL). pH potom je potom podešen na 7 - 7.5 korišćenjem zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Smeša je mešana 10 min @ 20 °C. Slojevi su razdvojeni. The 2-melil-THF sloj sa traženim jedinjenjem je korišćeno direktno u koraku 20.

Korak 20. Metil N-[(2S)-l-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metansulfonamidofenil)-l-(propan-2-il)-lH-pirazol-4-iljpirimidin-2-il}amino)propan-2-il]karbamat. Flasku je dodat (S)-metil l-(4-(3-(5-hloro-2-fluoro-3-(N-(meti 1 sul fonil)metilsul fonamidojfenil)- 1-izopropi I -1 H-pirazol-4-il )pirimidin-2-ilamino)propan-2-ilkarbamat (-3.8 L metilTHF rastvor, -531.5 g, 0.86 mol). Rastvoru je dodato 3N vodeni rastvor natrijum hidroksida (1782.8 mL, 5.34 mol) na 15-20 °C uz mešanje. Smeša je snažno mešana na 20-23 °C tokom 30 min i mešanje je potom zaustavljeno. Sloj vodenog rastvora je odbačen. 2N HCl (~410 mL) je dodat organskom sloju kako bi se podesila pH na 6.0-6.5, i potom je dodat zasićen vodeni rastvor natrijum bikarbonata (-30 mL) kako bi se podesila pH na - 8.5. Sloj vodenog rastvora je odbačen. Organski sloj je ispran sa 15% vodenim rastvorom natrijum hlorida (2000 mL). Organski sloj je koncentrovan u vakuumu (80 ton ) u kupatilu pri temperaturi od 45 °C kako bi se dobio braon rastvor (780 g). The solution was diluted sa 2-metilTHF (3500 mL), i potom je dodata suspenzija PICA HP 120N aktivnog ugljenika (90 g, CDH858) u 2-metilTHF (1 L). Rezultujuža cma suspenzija je zagrejana do 60 °C i držana na 60 °C tokom 16 h. Nakon isteka 16 h Pd sadržaj je bio 309 ppm. Smeša je ohlađena do 20 °C i filtrirana kroz celit

(prethodno natopljen sa 2-metilTHF). Reakcija je prekinuta ispiranjem sa 2-metilTHF (500 mL). Ova smeša je potom filtrirana kroz PICA/celite. Filtrat je dodat PL-TMT resinu (90 g). Rezultujuća suspenzija je zagrejana uz mešanje na 60 °C i odražavana na ovoj temperaturi tokom 4 h. After 4h na 60 °C Pd sadržaj je bio 2.3 ppm. Smeša je ohlađena do 20 °C i mešana tokom noći na 20 °C. Smeša je filtrirana kroz celit (prethodno natopljen sa 2-metilTHF). Filtrat je koncentrovan u vakuumu (100 - 80 torr) na 40 - 45 °C kako bi se dobilo narandžasto ulje. Uljani ostatak je rastvoren u 3 L of 200 proof etanol zagrevanjem do 78 °C. The resulting clear orange solution potom ohlađen na 20 °C tokom 3h, i do formiranja taloga. SmeŠa je potom ohlađena na 0 °C i držana 1 h na 0 °C. Smeša je filtrirana i filtrat ispran sa etanolom (300 mL). Čvrsti ostatak je osušen 14 h na 40 °C kako bi se dobilo traženo jedinjenje; MP: I86-189°C.

[0185] Jedinjenja u sledećoj tabeli 1 su pripremana slično navedenim primerima, korišćenjem odgovarajućih početnih materijala:

Primer 122

B- Raf V6Q0E/ Mek ampiifikovani luminiscentni esej homogene bliskosti f B-Raf V600E biohemijski)

[0186] B-Raf (V600E; 4pM) i biotinilizovani Mek (umrtvljena kinaza; lOnM) su pomešani do 2X finalne koncentracije u puferu za esej (50 mM Tris, pH 7.5, 15 mM MgCb, 0.01% BSA i 1 mM DTT) i naneti 10 ml po bunariću u ploči za esej (Greiner bele ploče za eseje sa 384 bunarića #781207) sa 0.5 ml 40X jedinjenja pronalaska razblaženog u 100% DMSO. Ploča je inkubirana tokom 60 minuta na sobnoj temperaturi.

[0187] Reakcija B-Raf kinazne aktivnosti je započela dodavanjem 10 ml po bunariću 2X ATP (lOmM) razblaženog u puferu za esej. Nakon 3 sata, reakcija je prekinuta dodavanjem lOml stop reagensa (60 mM EDTA, 0.01%Tween20). Fosforilovani produkt je određen upotrebom zečjeg anti-p-MEK (Cell Signaling, #9121) antitela i Alpha Screen IgG (ProteinA) detekcionog kita (PerkinElmer #6760617R), dodavanjem 30 ml smeše antitela po bunariću (1:2000 razblaženje) i detekcionih perli (1:1000 razblaženje obeju perli) u puferu (50 mM Tris, pH 7.5, 0.01% Tween20). Ovaj korak je vršen u mraku kako bi se detekcione perle zaštitile od svetlosti. Poklopac je postavljen na ploču i ploča je inkubirana tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Luminiscenca je očitana na PerkinElmer Envision instrumentu. Koncentracija svakog jedinjenja tokom 50% inhibicije (ICM) je preračunata ne-lineamom regresijom korišćenjem XL Fit softvera za analizu.

[0188] Jedinjenja pronalaska, u slobodnoj formi ili u formi farmaceutski prihvatljive soli, iskazuju važne farmakološke karakteristike, na primer, kako je pokazano in vitro testom opisanom u ovoj aplikaciji. Na primer, jedinjenja pronalaska poželjno iskazuju IC50 u rangu od 1 x 10 1(1 do 1 x IO"<5>M, poželjno manje od 500nM, 250nM, lOOnM i 50nM V600E B-Raf.

[0189] Na primer, IC50rezultati nekih jedinjenja pronalaska u luminiscentnom eseju homogene bliskosti su prikazani u Tabeli, supra.

Primer123

A375 esej ćelijske proliferacije fA375 CP)

[0190] A375 je ćelijska linija melanoma koja nosi B-Raf V600E mutaciju. A375-luc ćelije projektovane da eksprimiraju luciferazu, su sađene na ploče sa 384 bunarića sa providnim belim dnompri 1500 ćelija/50ml/bunariću u DMEM sa 10% FBS. Jedinjenja pronalaska razblažena su u 100% DMSO pri odgovarajućim koncentracijama i prebačene u ćelije robotizovanim Pin Tool (lOOnl). Ćelije su inkubirane tokom 2 dana na 25°C, potom je dodato 25ml BrightGlo™ u svaki bunarić i ploče su očitane na luminometru. Koncentracija svakog jedinjenja tokom 50% inhibicije (ICOT) je preračunata ne-linearnom regresijom korišćenjem XL Fit softvera za analizu.

[0191] Jedinjenja pronalaska, u slobodnoj formi ili u formi farmaceutski prihvatljive soli, iskazuju korisne farmakološke karakteristike, na primer, na primer, kako je pokazano in vitro testom opisanom u ovoj aplikaciji. Na primer, jedinjenja pronalaska poželjno iskazuju IC50 u rangu manjem od 500nM, 250nM, lOOnM i 50nM za divlji tip i V600E B-Raf.

[0192] Na primer, IC3(Jrezultati nekih jedinjenja pronalaska u A375 esej ćelijske proliferacije su prikazani u Tabeli,infra.

Primer 124

Imunoeseji

[0193] Ćelije su sađene u 1640 RPMI + 10% FBS pri gustini od 30 x L03ćelija po 96-bunarića u tretiranim pločama za tkivne kulture, potom inkubirane na 37°C i 5% C02tokom 24 sata pre nego što su dodata jedinjenja. Jedinjenja za testiranje su serijski razblažena u DMSO i potom dodata ćelijama (finalna DMSO koncentracija od 0.1%) i inkubirana na 37°C i 5% C02 tokom 3 sata. pMEK i pERK nivoi su određivani korišćenjem sendvič imunoesejskog kita (Meso Scale Disctokomv). Supematanti kulture su uklonjeni i ćelije su lizirane dodavanjem hladnog pufera za liziranje (dostupan sa kitom) tokom 30 minuta uz blago mešanje. Za detekciju pMEKl/2 (Ser217/221) i pERKl/2 (Thr/Tyr202/204,Thr/Tyrl85/187), lizati su dodati blokiranom antitelu u pločama iz kita i inkubirani tokom noći na 4°C uz mešanje. Ploče su isprane i fosfoproteini detektovani korišćenjem obeleženih antitela i očitane na Sector 6000 instrumentu.

Primer125

SW620 esej ćelijske vijabilnosti

[01941 SW620 ćelije su sađene u 1640 RPMI + 10% FBS pri gustini od 1500 ćelija po 96-bunarića u tretiranim pločama prozirnog dna za tkivne kulture sa crnim zidovima. Jedinjenja za testiranje su serijski razblažena u DMSO i potom dodata ćelijama (finalna DMSO koncentracija od 0.1%) i inkubirana na 37°C i 5% C02 tokom 4 dana. Kako bi se odredila ćelijska vijabilnost, ćelijske ploče su donete na sobnu temperaturu, medijum za kulturu je uklonjen i 200 ml Cell Titer-Glo reagensa (Promega, komponente kita su pomešane kako je dato uputstvom proizvođača i potom razblažene 1:2 u medijumu za rast) je dodato u svaki bunarić. Ploče su protresene tokom 5 minuta, potom inkubirane na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta, nakon čega je očitana fluorescenca (Trilux, Perkin Elmer),

Primer 126

Ratl meki agarozni esej

[0195] Ratl ćelije su suspendovane u 1% agarozi (Lonza) pri gustini od 1000 ćeiija po 96-bunarića. Agaroza/ćelijska smeša je ostavljena da se stegne. Jedinjenja za testiranje su razblažena u DMSO (finalna DMSO koncentracija od 0.2%) i inkubirana na 37°C i 5% C02. Nakon 17 dana, rast kolonije je određen inkubacijom ćelija sa alamarBlue (TREK Diagnostics) i određivanjem metaboličke aktivnosti na Spectrama* čitaču ploča (Molecular Devices, Ine; absorbanca merena na 562 nm). ;Primer127 ;Esej mikrozomalnog klirensa jetre ;[0196] In vitro esej mikrozomalnog klirensa jetre je dizajniran da odredi potencijalne rizike asocirane sa hepatičnom metaboličkom stabilnošću jedinjenja. Testirano jedinjenje (1 mM) je inkubirano sa mikrozomima jetre (0.5 mg/mL) različitih vrsta (miš, pacov, majmun, pas i čovek) i NADPH (1 mM) u 100 mM kalijum fosfatnom puferu na 37°C. U odrešenim vremenskim tačkama reakcije (0, 5, 10 i 30 minuta), alikvoti reakcije su uklonjeni i reakcija je prekinuta dodavanje ledeno hladnog acetonitrila sa internim standardom za masenu spektrometriju. Uzorci su potom centrifugirani i supematanti analizirani na LC-MS/MS. In vitro metabolički polu-život (ti?, min) i unutrašnji klirens (CLint, mL/min/mg) su bazirani na stopi i opsegu metabolizma testiranog jedinjenja kako je određeno nestajanjem roditeljskog jedinjenja iz reakcione smeše. Ove vrednosti se mogu skalirati kako bi se predvidela stopa metaboličkog klirensa jetre (CLh, mL/min/kg) i odnos ekstrakcije (ER, izražen kao odnos pretpostavljenog metaboličkog klirensa jetre i protoka hepatične krvi te vrste). Generalno, jedinjenja sa visokim predviđenim CLint ili ER in vitro se smatraju visoko-rizičnim u smislu izlaganja i ograničenja u metabolizmu leka in vivo. ;[0197] Izmereni odnosi ekstrakcije nekih jedinjenja pronalaska su dati u tabeli ispod. ;Primer 128;A549 p. 38aMAP kinazni Bright- Glo esej genskog reportera ;[0198] A549 su stabilno transfekovane sa IL-8 promoterskim reporterom, pGL3-IL8-Luc. Ćelije su sađene pri 4xl0Vml u bele ploče sa 384-bunarića (40ul/bunariću, 5%CD-FBS, lxP/S, DMEM) i inkubirane tokom noći (18-20 sati) na 37 °C. Jedinjenja za testiranje su serijski razblažena u DMSO, potom je dodato po 50nl test-rastvora (finalna DMSO koncentracija od 0.1%). Nakon inkubacije sa jedinjenjima za testiranje tokom 30 min, ćelije su stimulisane sa lng/ml IL-1 beta (10u3 5ng/ml rastvora po bunariću). Bright-Glo (25ul/ bunariću) je dodato kako bi se odredila ekspresija luciferaze nakon 7-8 sati stimulacije. 1C50 rezultati nekih jedinjenja pronalaska su dati tabelom ispod. ;Primer 129;In vivo farmakokinetski esej ;[0199] Potpuna farmakokinetska studija: Mužjacima Balb/c miševa (n=3, telesna težina 22-25 g) ili mužjacima Wistar pacova (n=3, telesna težina 250-300 g) je dato testirano jedinjenje intravenozno putem iateralne repne vene ili oralno. Formulacija je bila u koncentraciji od 2.5 mg/mL rastvora jedinjenja u 75% PEG300 i 25% D5W. Šest uzoraka krvi od 50 mL je sakupljeno serijski tokom 24 h nakon doziranja. Uzorci krvi su centrifugirani i izdvojena je plazma. Uzorci plazme su analizirani i kvantifikovani na LC-MS/MS. ;[0200] Brza farmakokinetska studija: Mužjacima Balb/c miševa (n=3, telesna težina 22-25 g) ili mužjacima Wistar pacova (n=3, telesna težina 250-300 g) je dato testirano jedinjenje intravenozno (IV) putem Iateralne repne vene ili oralno (PO). Formulacija je bila u koncentraciji od 2.5 mg/mL rastvora jedinjenja u 75% PEG300 i 25% D5W. Šest uzoraka krvi od 50 mL je sakupljeno serijski tokom 24 h nakon doziranja. Uzorci krvi su centrifugirani i izdvojena je plazma, i pomešana od sve tri životinje u svakoj vremenskoj tački po dozi. Uzorci plazme su analizirani i kvantifikovani na LC-MS/MS. ;[0201] Za obe, potpunu i brzu farmakokinetsku studiju, sledeći parametri su računati ne-kompartmentalnom regresionom analizom korišćenjem VVinnonlin 5.0 softvera (Pharsight, Mountain View, CA, USA): klirens plazme (Cl), maksimalna koncentracija plazme (Cmax), površina-pod-koncentracijom vremenska kriva plazme plasma curve (AUCo-™r), i procenat oralne biodostupnosti (F%). ;[0202] Farmakokinetski parametri kod miša nekih jedinjenja pronalaska su dati u tabeli ispod. ;[0203] Jedinjenja Formule I, u slobodnoj formi ili u formi farmaceutski prihvatljive soli, iskazuju korisne farmakološke karakteristike, na primer, kako je pokazani in vitro i in vivo testovima opisanim u ovoj aplikaciji. Na primer, jedinjenja Formule J poželjno pokazuju IC50u A375 CP eseju ćelijske proliferacije u rangu od in 250nM ili bolje, poželjno manje od 200nM, ISOnM, lOOnM i 50nM. ;[0204] 2-(metoksikarboni]amino)-l-propil grupa na R, daje poželjan nivo aktivnosti i selektivnosti u odnosu na druge kinaze uključujući p38. Na primer, razlika od više od 30 puta porasta u aktivnosti postoji između jedinjenja 9 i 29 gde je A375 ICW 2nM i 76nM, redom. ;[0205] Fenilna zamena jedinjenja Formule lb je optimalna tokom metaboličke stabilnosti (ER kod miša i čoveka) sa fluoro ili hloro na R5 poziciji i fluoro, hloro, ili metil na Ra poziciji. U poređenju, na primer, sa ER (čovek) u jedinjenjima 9 i 6 od <0.2li 0.69, redom. ;[0206] Kombinacija 2-(metoksikarbonilamino)-l-propil grupe na R,, R3/K5zamene i metil grupe na R4 ima iznenađujući efekat na ukupnu izloženost leku (AUC). Videti, na primer, jedinjenje 9 (u poređenju sa jedinjenjima 1, 3,4, 6 i 7) gde je AUC, pri oralnoj dozi od 10 mg/kg, 3064 nucromolar'<*>hrs.

Primer 130

In vivo efikasnost- 14- todnevni A375 mišji ksenograft model

[0207] A375 ćelije su gajene u sterilnim uslovima na 37° C u inkubatoru sa 5%CO 2 tokom dvedo četiri nedelje. Ćelije su gajene u RPMI-1640 medijumu sa 10% FBS. Ćelije su pasažirane dva puta nedeljno sa 0.05% Trypsin/EDTA. Na dan implantacije, ćelije su sakupljene u HBSS (Hank's Balanced Salt Solution, Hank-ov balansirani slani rastvor). Ženkama Nu/Nu miševa (Charles River, 10-11 nedelja stare na početku studije) su implantirane 5xl06A375 ćelija/mišu u 50% matrigela, 0.2mL SQ u desni bok na dan 1. Nakon 19 dana post-implanta, miševi su nasumično podeljeni u 6 grupa (9 miševa po grupi), sa srednjom zapreminom tumora od 215 mm<!>i srednjom težinom od 24g. Jedinjenja za testiranje su dozirana BID tokom 14 dana počevši 19og dana korišćenjem dozne zapremine od 0.2 mL po dozi, sa jedinjenjem formulisanim pri odgovarajućoj koncentraciji kako bi se održao željeni nivo doze. Klinička posmatranja su vršena na dnevnom nivou. Veličina tumora i telesna težina su mereni dva puta nedeljno. Zaključak: ma koja individualna životinja koja je iskazala gubitak telesne težine preko 25% od početne i/ili povećanje tumora preko 3000 mm<1>.

[0208] Jedinjenje 9 (formulisano u 20%PEG300 / 3%ETPGS / 77% voda) je dozirano shodno protokolu iznad korišćenjem sledećeg doznog režima:

Grupa 1: Nosač, qd xl4

Grupa 2: 1 mg/kg Cpd 9, bid xl4

Grupa 3: 3 mg/kg Cpd 9, bid xl4

Grupa 4: 10 mg/kg Cpd 9, bid xl4

Grupa 5: 20 mg/kg Cpd 9, bid xl4

[0209] Zapremina tumora je procenjenja 14og dana nakon prve doze. Delimičan odgovor je definisan kao tumorski rast od 20-50% u odnosu na rast kontrolnog tumora. Stabilna bolest je definisana kao finalna zapremina tumora sa +/-20%inicijalne veličine tumora. Delimična regresija je definisana kao finalna zapremina tumora

<<>80% inicijalne zapremine tumora.

Grupa 2: delimičan odgovor

Grupa 3: stabilna bolest

Grupa 4: delimična regresija

Grupa 5: delimična regresija

Claims (20)

1. Jedinjenje Formule I: gde je: Y odabran od N i CR«; R, je -CH2CHMeNH(CO)OMe; R2, R3, Rs i Rssu nezavisno odabrani iz hidrogena, halo, cijano, Cm alkil, halo-zamenjen-CMalkil, Cm alkoksi i halo-zamenjen-CM alkoksi; uz uslov da kada R5 je fluoro, R3 i R6 nisu oba vodonik; Rije odabran iz -R9i -NR10Ru; gde je R9odabran iz Cj-salkil, Q.g cikloalkil, d-s heterocikloalkil, aril i heteroaril; gde navedeni alkil, cikloalkil, heterocikloalkil, aril ili heteroaril od R9 je opciono zamenjen sa 1 do 3 radikala nezavisno odabranih iz halo, cijano, Cm alkil, halo-zamenjen-d.jalkil, C[.4alkoksi i halo-zamenjen-Ci-4alkoksi; i Rm i Ru su nezavisno odabrani iz hidrogena i R9; R- je odabran od G-4 alkil, C3-5cikloalkil i C3-5heterocikloalkil; gde navedeni alkil, cikloalkil ili heterocikloalkil od R- je opciono zamenjen sa 1 do 3 radikala nezavisno odabranih iz halo, cijano, hidroksil, Cm alkil, halo-zamenjen-CMalkil, Cu alkoksi i halo-zamenjen-CM alkoksi; ili je R-hidrogen; i gde su N-oksid derivati tautomeri i farmaceutski prihvatljive soli i solvati (npr. hidrati) takvih jedinjenja.

2. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je R- odabran od Cm alkil, Cw ciklo alkil i C« hetero ciklo alkil; gde pomenuti alkil, ciklo alkil or hetero ciklo alkil od R? su opciono zamenjeni sa 1 do 3 radikala nezavisno odabranih iz halo, cijano, hidroksil, Cm alkil, halo-zamenjen-CM alkil, Cm alkoksi and halo-zamenjen-CM alkoksi.

3. Jedinjenje prema bilo kom od predhodnih patentnih zahteva gde R4 je -R9; gde je R9odabran od Ci-falkil id- H cikloalkil; gde su pomenuti alkil ili ciklo alkil od R9opciono zammenjeni sa 1 do 3 radikala nezavisno odabranih od halo i halo-zamenjen-CM alkil.

4. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 3 gde: R2 je izabran od hidrogena i fluoro; R3je izabran od hloro, fluoro i metil; R5 je izabran od hidrogena, hloro i fluoro; Y je izabran od N i CR«; i R« je izabran od hidrogena i fluoro.

5. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1 izabrano od: metil N-[(2S)-l-({4-[3-(3-etansulfonamid-2,4-difluorofenil)-l-(propan-2-yl)-lH-pirazol-4-yl ]pirimidin-2yl} aminojpiopan-2-y l]karbamat; metil N-[(2S)-2-({4-[3-(5-hIoro-2-fiuoro-3-metansuifonamidfenil)-l-(propan-2-yl)-lH-pirazol-4-y ] lp i ri mid in-2-y 1} a mi no)p ropy 11 ka rbama t; metil N-[(2S)-l-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metansulfonamidfenil)-l-(oksan-2-yl)-lH-pirazol-4-yl]pirimidin-2-yl}amino)propan-2-yl]karbamat; metil N-[(2S)-1-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metansuifonamidfenil)-1 H-pirazol-4-yl] pirimidin-2-yl}amino)propan-2-yl]karbamat; i

6. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 1, gde je jedinjenje jedinjenje Formule lb: gde: R3je izabran od hloro, fluoro i metil; R5je izabran od fluoro i hloro; i R- je izabran od ethyl i isopropil.

7. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema jednom od patentnih zahteva 1-6, pomešana sa najmanje jednim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom.

8. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7, gde je ekscipijent izabran iz grupe koju čine kukuruzni škrob, krompirov škrob, tapioka škrob, škrobne paste, preželatinizirani škrob, šećeri, želatin, prirodne gume, sintetičke gume, natrijum alginat, alginska kiselina, tragakant, guar guma, celuloza, etil celuloza, celuloza acetat, karbokimetil celuloza kalcijum, natrijum karbokimeti(celuloza, metil celuloza, hidroksipropil metilceluloza, mikrokristalna celuloza, magnezijum aluminijum silikat, polivinil pirolidon, talk, kalcijum karbonat, celuloza u prahu, dekstrati, kaolin, manitol, silicijumska kiselina, sorbitol, agar-agar, natrijum karbonat, kroskarmeloza, natrijum, krospovidon, polakrilin kalijum, natrijum škrob glikolat, glina, natrijum stearat, kalcijum stearat, magnezijum stearat, stearinska kiselina, mineralno ulje, lako mineralno ulje, glicerin, sorbitol, manitol, polietiien glikol, drugi glikoli, natrijum lauril sulfat, hidrogenizovano biljno ulje, kikiriki ulje, laneno ulje, suncokretovo ulje, susamovo ulje, maslinovo ulje, kukuruzno ulje, sojino ulje, cink stearat, natrijum oleat, etil oleat, etil laureat, silica, i njihove kombinacije.

9. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 7 koja dalje sadrži dodatni terapeutski agens.

10.Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 9, gde je dodatni terapeutski agens izabran od antikancer jedinjenja, analgetika, an antiemetika, antidepresiva i anti-inflamatornog agensa.

11. Jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6 ili farmaceutska kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 7-10 za korišćenje u postupku iečenja kancera.

12. Korišćenje jedinjenja prema bilo kom od patentnih zahteva 1-6 u proizvodnji medikamenata za lečenje kancera.

13. The compound for use in a method of treatment according to claim 11 or the use of đaim 12, wherein the cancer to be treated is setected from the group consisting of lung carcinoma, pancreatic carcinoma, bladder carcinoma, colon carcinoma, mveloid disorders, prostate cancer, thvroid cancer, melanoma, adenomas and carcinomas of the ovary, eye, liver, biliary tract, and nervous system.

14. Jedinjenje za korišćenje u postupku Iečenja prema patentnom zahtevu 11 ili korišćenje prema patetnom zahtevu 12, koji postupak dalje obuhvata davanje subjektu nekog dodatnog terapeutskog agensa, opciono gde dodatni terapeutski agens daje subjektu istovremeno sa jedinjenjem.

15. Jedinjenje za korišćenje u postupku Iečenja prema patentnom zahtevu 11 ili korišćenje prema patetnom zahtevu 12, koji postupak dalje obuhvata davanje subjektu nekog dodatni terapeutskog agensa, opciono gde se dodatni terapeutski agens daje subjektu sekvencijalno sa jedinjenjem,

16. Jedinjenje za korišćenje u postupku Iečenja prema patentnom zahtevu 15 ili korišćenje prema patetnom zahtevu 15, gde je jedinjenje Formule I metil N-[(2S)-l-({4-[3-(5-hloro-2-fluoro-3-metansulfonamidfenil)-l-(propan-2-yl)-lH-pirazol-4-yl]pirimidin-2-yl}amino)propan-2-yl]karbamat.

17. Jedinjenje za korišćenje u postupku Iečenja ili korišćenje prema bilo kom od patetnih zahteva 14-16, gde: (a) dodatni terapijski agens sadrži lek protiv kancera, lek protiv bolova, antiemetik, antidepresiv ili antiinflamatorno sredstvo; ili (b) dodatni terapijski agens je drugačiji inhibitor Raf kinaze ili inhibitor MEK, mTOR, HSP90, AKT, PI3K, CDK9, KAP, protein kinaza C, MAP kinaze, MAPK kinaze, ili ERK; ili (c) MEK inhibitor izabran od: AS703026; MSC1936369B; GSK1120212; AZD6244; PD-0325901; Arri 438162; RDEA119; GDC0941; GDC0973; PAK-733; R05126766; i KSL-518.

18. Jedinjenje za upotrebu u postupku Iečenja ili korišćenje prema bilo kom od patentnih zahteva 14 do 17, gde je kancer kancer melanoma ili kolorektalni kancer.

19. Jedinjenje za upotrebu u postupku Iečenja ili korišćenje prema patentnom zahtevu 18 gde je melanom metastatski melanom ili kolorektalni kancer je karcinom debelog creva.

20. Jedinjenje za upotrebu u postupku Iečenja ili korišćenje prema bilo kom od patentnih zahteva 11 do 19,gde je jedinjenje za lečenje stanja posredovanih Raf kinazom, opciono gde je Raf kinaza mutant B-Raf kinaze poput b- Raf (V600E).