Deprecated: The each() function is deprecated. This message will be suppressed on further calls in /home/zhenxiangba/zhenxiangba.com/public_html/phproxy-improved-master/index.php on line 456
RS55920B1 - Antitela protiv transferinskog receptora malog afiniteta i njihova primena za transfer terapeutskih jednolančanih varijabilnih fragmenata (scfv) kroz krvno-moždanu barijeru - Google Patents
[go: Go Back, main page]

RS55920B1 - Antitela protiv transferinskog receptora malog afiniteta i njihova primena za transfer terapeutskih jednolančanih varijabilnih fragmenata (scfv) kroz krvno-moždanu barijeru - Google Patents

Antitela protiv transferinskog receptora malog afiniteta i njihova primena za transfer terapeutskih jednolančanih varijabilnih fragmenata (scfv) kroz krvno-moždanu barijeru

Info

Publication number
RS55920B1
RS55920B1 RS20170442A RSP20170442A RS55920B1 RS 55920 B1 RS55920 B1 RS 55920B1 RS 20170442 A RS20170442 A RS 20170442A RS P20170442 A RSP20170442 A RS P20170442A RS 55920 B1 RS55920 B1 RS 55920B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
tfr
kmb
bace1
brain
Prior art date
Application number
RS20170442A
Other languages
English (en)
Inventor
Mark Dennis
Ryan Jefferson Watts
Yunhua Joy Yu
Yin Zhang
Original Assignee
Hoffmann La Roche
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=45316102&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS55920(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Hoffmann La Roche filed Critical Hoffmann La Roche
Publication of RS55920B1 publication Critical patent/RS55920B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6849—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a receptor, a cell surface antigen or a cell surface determinant
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K49/00—Preparations for testing in vivo
    • A61K49/001—Preparation for luminescence or biological staining
    • A61K49/0013—Luminescence
    • A61K49/0017—Fluorescence in vivo
    • A61K49/005—Fluorescence in vivo characterised by the carrier molecule carrying the fluorescent agent
    • A61K49/0058—Antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
    • A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
    • A61K51/04—Organic compounds
    • A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
    • A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
    • A61K51/1093—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody conjugates with carriers being antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A61P21/02—Muscle relaxants, e.g. for tetanus or cramps
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/04—Centrally acting analgesics, e.g. opioids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A61P27/02—Ophthalmic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2881—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against CD71
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/46—Hybrid immunoglobulins
    • C07K16/468—Immunoglobulins having two or more different antigen binding sites, e.g. multifunctional antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/30—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency
    • C07K2317/31—Immunoglobulins specific features characterized by aspects of specificity or valency multispecific
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/54—F(ab')2
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Neurology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Neurosurgery (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Cardiology (AREA)
  • Psychology (AREA)
  • Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Heart & Thoracic Surgery (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Ophthalmology & Optometry (AREA)
  • Hospice & Palliative Care (AREA)
  • Psychiatry (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Vascular Medicine (AREA)
  • Dermatology (AREA)

Description

SRODNE PRIJAVE
Prijava polaže pravo na korist od privremene prijave U.S serijski br. 61/418,223 podnete 30. novembra 2010.
OBLAST PRONALASKA
Predmetna prijava se odnosi na antitela koja vezuju receptore krvno-moždane barijere (KMB-R) i na postupke za njihovu primenu.
OSNOVA
Prolaz u mozak lekova sa velikim molekulima ozbiljno je ograničen uglavnom nepropusnom krvno-moždanom barijerom (KMB). Jedna od mnogih strategija za prevazilaženje ove prepreke je primena procesa transcitoze endogenih receptora eksprimiranih na endotelijumu kapilara mozga. Dizajnirani su rekombinantni proteini protiv ovih receptora, kao što su monoklonska antitela, kako bi se omogućila isporuka velikih molekula u mozak putem receptora. Međutim, nisu ispitane strategije koje bi maksimalno povećale prolaz u mozak uz istovremeno smanjivanje na najmanju meru reversne transcitoze nazad u krv, kao i obim nagomilavanja nakon primene terapeutske doze. Nadalje, nije poznato da li su antitela koja prođu kroz KMB farmakodinamički funkcionalna.
REZIME
Monoklonska antitela imaju ogroman terapeutski potencijal za lečenje neuroloških bolesti ili bolesti centralnog nervnog sistema (CNS), ali njihov prolaz u mozak je ograničen krvno-moždanom barijerom (KMB). Prethodna ispitivanja su pokazala da veoma mali procenat (oko 0,1%) IgG iz krvotoka prolazi kroz KMB u CNS (Felgenhauer, Klin. Wschr. 52: 1158-1164 (1974)), pri čemu koncentracija antitela u CNS-u može biti nedovoljna za jači efekat. Iako su objavljeni različiti pokušaji primene antitela koja vezuju transferinski receptor (TfR) ili humani insulinski receptor (HIR) kao nosača fuzionih proteina, prema konceptu molekula koji bi poslužio kao trojanski konj za prolaz kroz KMB (Boado et Al., Molecular Pharamaceutics, 7(1): 237-244, 2010; Pardridge, Bioengineered Bugs, 1(4): 231-234, 2010; Boado et Al, Biotechnology and Bioengineering, 105(3), 15: 961-969, 2010), izveštaj ni jednog od ovih istraživanja ne pominje varijacije prolaza u mozak nakon smanjivanja afiniteta anti-TfR ili anti-HIR antitela. Postupci i kompozicije iz pronalaska pružaju način za povećanje procenta antitela distribuiranih u CNS-u, i tako se lakše postižu terapeutske koncentracije antitela u CNS-u.
Ovde je opisana grupa antitela protiv transferinskog receptora (TfR) koja može da isporuči terapiju, uključujući antitela i male molekule, kroz KMB, i u tragovima i u terapeutski značajnim dozama nakon jedne sistemske injekcije kod miševa. Distribucija antitela promenila se od vaskularne do neuronalne 24 sata nakon injekcije, što ukazuje da je značajna količina antitela transcitozom prošla kroz endotelijalne ćelije mozga i došla do parenhima. Obim prolaza antitela u CNS, kao i njegova distribucija u CNS-u, obrnuto je srazmerna njegovom afinitetu vezivanja za TfR kod proučavanih anti-TfR varijanti. Dokaz za transport kroz KMB dobijen je pomoću bispecifičnog antitela, koje vezuje i TfR i enzim za razlaganje amiloid prekursor proteina (APP), b-sekretazu (BACE1). Jedna sistemska doza bispecifičnog anti-TfR/BACE1 antitela dizajniranog pomoću metodologije iz ovog pronalaska ne samo što je dovela do značajnog prolaza antitela u mozak, nego je i dramatično snizila nivoe Aβ1-40u mozgu u poređenju sa monospecifičnim anti-BACE1 kada se primeni samostalno, što ukazuje da prodiranje u KMB utiče na potentnost anti-BACE1. Slično tome, pokazano je da bispecifično antitelo koje vezuje i TfR i amiloid beta (tj. deo APP-a koji nastaje razlaganjem APP-a pod uticajem BACE1, a koji je jedan od glavnih sastojaka amiloidnih plakova) lako biva preuzeto u mozak pomoću metodologije iz ovog pronalaska. Ovde opisani podaci i eksperimenti ističu nekoliko uzročnih mehanizama koji stoje iza povećanog prolaza antitela u CNS, primenom pristupa nižeg afiniteta antitela. Kao prvo, antitela velikog afiniteta prema anti-KMB receptoru (KMB-R) (npr. anti-TfR<A>) ograničavaju prolaz u mozak tako što brzo zasite KMB-R u vaskulaturi mozga, i tako smanjuju ukupnu količinu antitela koje je uneto u mozak, i takođe ograničavaju njegovu distribuciju u vaskulaturi. Upadljivo je da snižavanje afiniteta prema KMB-R poboljšava prolaz i distribuciju u mozgu, uz snažno pomeranje lokalizacije od vaskulature do neurona i povezanog neuropila distribuiranog u CNS-u. Kao drugo, predloženo je da manji afinitet antitela prema KMB-R-u pogoršava sposobnost antitela da se vrati na vaskularnu stranu KMB putem KMB-R sa CNS strane membrane, jer je ukupni afinitet antitela prema KMB-R-u mali, i lokalna koncentracija antitela na CNS strani KMB nije zasićujuća, usled brzog dispergovanja antitela u CNS kompartmentu. Kao treće, in vivo, i kao što je primećeno za TfR sistem, antitela sa manjim afinitetom prema KMB-R-u ne uklanjaju se tako efikasno iz sistema kao ona sa većim afinitetom prema KMB-R-u, i tako u većim koncentracijama ostaju u krvotoku u poređenju sa odgovarajućim antitelima sa većim afinitetom. To predstavlja prednost, jer se nivoi antitela sa manjim afinitetom u krvotoku održavaju na terapeutskim nivoima u dužem periodu u poređenju sa odgovarajućim antitelima sa većim afinitetom, što ima za posledicu poboljšanje prolaza antitela u mozak u dužem periodu vremena. Nadalje, ovo poboljšanje izloženosti plazme i mozga može da smanji učestalost davanja doze na klinici, što bi potencijalno bilo korisno ne samo zbog komplijanse i pogodnosti za pacijente, nego bi uticalo na smanjenje svih potencijalnih neželjenih dejstava, ili dejstava antitela i/ili za njega vezanog terapeutskog jedinjenja koja nisu ciljana. I anti-TfR/BACE1 i anti-TfR/Abeta su novi i perspektivni kandidati za lekove koji leče Alchajmerovu bolest. Nadalje, tehnologija bispecifičnih ciljeva koja se zasniva na transportu posredstvom receptora (RMT) otvara mogućnosti za široku primenu potencijalnih lekova za bolesti CNS-a. Pronalazak daje postupke za dizajniranje terapeutika koji prodiru u KMB, koji u velikoj meri poboljšavaju transport kroz KMB i distribuciju terapeutika u CNS-u.
U skladu sa tim, u prvoj realizaciji, pronalazak daje postupak za transport jedinjenja kroz krvno-moždanu barijeru, koja uključuje izlaganje antitela koje se sa malim afinitetom vezuje za receptor krvno-moždane barijere (KMB-R), povezanog sa jedinjenjem, krvnomoždanoj barijeri, tako da antitelo transportuje jedinjenje koje je sa njim povezano kroz krvnomoždanu barijeru. U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje. U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin. U drugom aspektu, KMB se nalazi u sisaru. U drugom takvom aspektu, sisar je čovek. U drugom takvom aspektu, sisar ima neurološki poremećaj. U drugom takvom aspektu, neurološki poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga. U drugom aspektu, KMB se nalazi u čoveku.
U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo ima afinitet prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 30 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R. U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem primenjuje se u terapeutskoj dozi. U jednom takvom aspektu, terapeutska doza je doza koja zasićuje KMB-R za koji se antitelo specifično vezuje.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje postupak za povećanje izloženosti CNS-a jedinjenju, naznačenu time što je jedinjenje povezano sa antitelom koje se sa malim afinitetom vezuje za KMB-R, pri čemu se povećava izloženost CNS-a jedinjenju. U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin. U drugom aspektu, jedinjenje povezano sa antitelom primenjuje se na sisaru. U drugom takvom aspektu, sisar je čovek. U drugom takvom aspektu, sisar ima neurološki poremećaj. U drugom takvom aspektu, neurološki poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga.
U drugom aspektu, povećanje izloženosti CNS-a jedinjenju meri se u odnosu na izloženost CNS-a jedinjenju povezanom sa tipičnim antitelom koje nema smanjen afinitet prema KMB-R-u. U drugom aspektu, povećanje izloženosti CNS-a jedinjenju meri se kao odnos količine jedinjenja nađenog u CNS-u prema količini nađenoj u serumu nakon primene.
U drugom takvom aspektu, povećana izloženost CNS-a dovodi do odnosa koji je veći od 0,1%. U drugom aspektu, povećana izloženost CNS-a jedinjenju meri se u odnosu na izloženost CNS-a jedinjenju u odsustvu povezanog antitela. U drugom aspektu, povećana izloženost CNS-a jedinjenju meri se imidžingom. U drugom aspektu, povećana izloženost CNS-a jedinjenju meri se indirektnim rezultatima, kao što su modifikacije jednog ili više fizioloških simptoma.
U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo ima afinitet prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 30 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R. U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem primenjuje se u terapeutskoj dozi. U jednom takvom aspektu, terapeutska doza je doza koja zasićuje KMB-R za koji se antitelo specifično vezuje.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje postupak za smanjenje klirensa jedinjenja datog ispitaniku, naznačenu time što je jedinjenje povezano sa antitelom koje se sa malim afinitetom vezuje za KMB-R, tako da je klirens jedinjenja smanjen. U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje. U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin. U drugom aspektu, ispitanik je sisar. U drugom takvom aspektu, sisar je čovek. U drugom takvom aspektu, sisar ima neurološki poremećaj. U drugom takvom aspektu, neurološki poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga.
U drugom aspektu, smanjenje klirensa jedinjenja se meri u odnosu na klirens jedinjenja povezanog sa tipičnim antitelom koje nema smanjen afinitet prema KMB-R-u. U drugom aspektu, smanjenje klirensa jedinjenja se meri u odnosu na klirens jedinjenja u odsustvu vezanog antitela.
U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo ima afinitet prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 30 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R. U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem primenjuje se u terapeutskoj dozi. U jednom takvom aspektu, terapeutska doza je doza koja zasićuje KMB-R za koji se antitelo specifično vezuje.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
Postupak za povećanje zadržavanja u CNS-u jedinjenja koje je dato ispitaniku, naznačena time što je jedinjenje povezano sa antitelom koje se sa malim afinitetom vezuje za KMB-R, tako da je povećano zadržavanje jedinjenja u CNS-u. U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje. U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin. U drugom aspektu, jedinjenje se primenjuje na sisaru. U drugom takvom aspektu, sisar je čovek. U drugom takvom aspektu, sisar ima neurološki poremećaj. U drugom takvom aspektu, neurološki poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga.
U drugom aspektu, povećano zadržavanje jedinjenja u CNS-u meri se u odnosu na zadržavanje u CNS-u jedinjenja povezanog sa tipičnim antitelom koje nema smanjen afinitet prema KMB-R-u. U drugom aspektu povećano zadržavanje jedinjenja u CNS-u meri se kao odnos količine jedinjenja nađenog u CNS-u prema količini nađenoj u serumu u jednom ili više termina nakon primene. U drugom takvom aspektu, povećanje zadržavanja u CNS-u dovodi do odnosa koji je veći od 0,1% u jednom ili više termina nakon primene. U drugom aspektu, povećanje zadržavanja jedinjenja u CNS-u meri se u odnosu na zadržavanje u CNS-u jedinjenja u odsustvu vezanog antitela. U drugom aspektu, povećanje zadržavanja jedinjenja u CNS-u meri se imidžingom. U drugom aspektu, povećanje zadržavanja jedinjenja u CNS-u meri se putem indirektnih rezultata, kao što su modifikacije jednog ili više fizioloških simptoma.
U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo ima afinitet prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 30 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R. U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem primenjuje se u terapeutskoj dozi. U jednom takvom aspektu, terapeutska doza je doza koja zasićuje KMB-R za koji se antitelo specifično vezuje.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje postupak za optimizaciju farmakokinetike i/ili farmakodinamike jedinjenja kako bi bilo efikasno u CNS-u ispitanika, naznačenu time što je jedinjenje povezano sa antitelom koje se sa malim afinitetom vezuje za KMB-R, i antitelo je izabrano tako da njegov afinitet prema KMB-R-u nakon povezivanja sa jedinjenjem dovodi do obima transporta antitela povezanog sa jedinjenjem kroz KMB koji optimizuje farmakokinetiku i/ili farmakodinamiku jedinjenja u CNS-u. U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje. U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin. U drugom aspektu, KMB se nalazi u sisaru. U drugom takvom aspektu, sisar je čovek. U drugom takvom aspektu, sisar ima neurološki poremećaj. U drugom takvom aspektu, neurološki poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga. U drugom aspektu, KMB se nalazi u čoveku.
U jednom aspektu, optimizacija može da uključi stvaranje niza kompleksa antitelojedinjenje u kojima svako antitelo ima različit afinitet prema KMB-R-u, i procenu farmakokinetike i/ili farmakodinamike svakog od njih u CNS-u. U drugom aspektu, optimizacija može da bude u odnosu na poznati standard, kao što je, ali bez ograničavanja, farmakokinetika i/ili farmakodinamika jedinjenja kada se direktno unese u CNS ili kada se unese u ispitanika u odsustvu vezanog anti-KMB-R antitela.
U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo ima afinitet prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 30 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R. U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem primenjuje se u terapeutskoj dozi. U jednom takvom aspektu, terapeutska doza je doza koja zasićuje KMB-R za koji se antitelo specifično vezuje.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
U drugoj realizaciji, prijava daje postupak za lečenje neuroloških poremećaja kod sisara, koja obuhvata lečenje sisara antitelom koje vezuje KMB-R i povezano je sa jedinjenjem, naznačenu time što je antitelo izabrano tako da ima mali afinitet prema KMB-R-u i tako poboljšava prolaz antitela i povezanog jedinjenja u CNS. U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje. U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin. U jednom aspektu, sisar je čovek. U drugom takvom aspektu, sisar ima neurološki poremećaj. U drugom takvom aspektu, neurološki poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga.
U jednom aspektu, lečenje dovodi do smanjenja ili eliminacije simptoma poremećaja. U drugom aspektu, lečenje dovodi do poboljšanja neuroloških poremećaja.
U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo ima afinitet prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 30 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R. U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem primenjuje se u terapeutskoj dozi. U jednom takvom aspektu, terapeutska doza je doza koja zasićuje KMB-R za koji se antitelo specifično vezuje.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje postupak za dobijanje antitela korisnog za transport jedinjenja kroz KMB, uključujući izbor antitela specifičnog za receptor krvnomoždane barijere (KMB-R) jer ima poželjno mali afinitet prema KMB-R.
U jednom aspektu, antitelo je izabrano sa spiska antitela na osnovu afiniteta izabranog antitela. U drugom aspektu, antitelo je dizajnirano da poseduje afinitet. U jednom takvom aspektu, antitelo je napravljeno pomoću bilo kog postupka za dizajniranje proteina poznate u struci, uključujući ali se ne ograničavajući na, displej faga, displej kvasaca, nasumičnu mutagenezu i ciljnu mutagenezu.
U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje. U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin. U drugom aspektu, KMB se nalazi u sisaru. U drugom takvom aspektu, sisar je čovek. U drugom takvom aspektu, sisar ima neurološki poremećaj. U drugom takvom aspektu, neurološki poremećaj je izabran iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga. U drugom aspektu, KMB se nalazi u čoveku.
U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo ima afinitet prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 30 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R. U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem primenjuje se u terapeutskoj dozi. U jednom takvom aspektu, terapeutska doza je doza koja zasićuje KMB-R za koji se antitelo specifično vezuje.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje antitelo koje se sa malim afinitetom vezuje za receptor krvno-moždane barijere (KMB-R). U jednom aspektu, afinitet antitela prema KMBR je od oko 5 nM do oko 10 μM. U drugom aspektu, afinitet antitela prema KMB-R-u je od oko 20 nM do oko 1 μM. U drugom aspektu, antitelo ima IC50 za KMB-R od oko 1 nM do oko 100 µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 5 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 50 nM do oko 100µM. U drugom takvom aspektu, IC50 je od oko 100 nM do oko 100µM. U drugom aspektu, antitelo, kada je povezano sa jedinjenjem, ima afinitet prema KMB-R-u od oko 50 nM do oko 1 µM. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima afinitet prema TfR-u između onih afiniteta koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U drugom takvom aspektu, antitelo povezano sa jedinjenjem specifično se vezuje za TfR i ima IC50 za TfR između onih IC50 koji su zapaženi za anti-TfR<D>/BACE1 antitelo i anti-TfR<E>/BACE1 antitelo. U jednom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom Skačardove analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom BIACORE analize. U drugom aspektu, afinitet anti-KMB-R ili anti-KMB-R/jedinjenje prema KMB-R-u određuje se primenom kompetitivnog ELISA testa.
U drugom aspektu, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). U jednom takvom aspektu, KMB-R je TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira aktivnost TfR. U drugom takvom aspektu, KMB-R je TfR i antitelo ne inhibira vezivanje TfR za transferin. U drugom takvom aspektu, KMB-R je humani KMB-R.
U drugom aspektu, antitelo je povezano sa jedinjenjem. U jednom aspektu, jedinjenje je lek za neurološke poremećaje. U drugom aspektu, jedinjenje je agens za imidžing. U drugom aspektu, jedinjenje je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, antitelo ne pogoršava vezivanje KMB-R za jedan ili više svojih prirodnih liganda. U drugom takvom aspektu, antitelo se specifično vezuje za TfR na takav način da ne inhibira vezivanje TfR-a za transferin.
U drugom aspektu, jedinjenje je kovalentno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, jedinjenje je spojeno sa antitelom pomoću linkera. U jednom takvom aspektu, linker može da se raskine. U drugom takvom aspektu, linker ne može da se raskine. U drugom takvom aspektu, jedinjenje je direktno vezano za antitelo. U jednom takvom aspektu, antitelo je multispecifično antitelo i jedinjenje čini jedan deo multispecifičnog antitela. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo sadrži prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R i drugo mesto vezivanja antigena, koje vezuje moždani antigen. U drugom takvom aspektu, moždani antigen je izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, huntingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta. U drugom takvom aspektu, multispecifično antitelo je obeleženo. U drugom aspektu, jedinjenje je reverzibilno povezano sa antitelom, tako da se jedinjenje oslobađa od antitela istovremeno sa KMB transportom ili nakon toga.
U drugom aspektu, antitelo je fragment antitela sa antigen-vezujućim regionom koji vezuje KMB-R, uključujući, ali se ne ograničavajući na, Fab, Fab’, F(ab’)2i Fv. U drugom aspektu, antitelo je kompletno antitelo.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje upotrebu antitela koje se sa malim afinitetom vezuje za KMB-R za izradu leka za lečenje neurološkog poremećaja. Svako od napred opisanih anti-KMB-R antitela sa malim afinitetom ili svako od negde drugo opisanih anti-KMB-R antitela mogu se upotrebiti u ovom postupku.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje antitelo koje se sa malim afinitetom vezuje za KMB-R, za upotrebu u lečenju neurološkog poremećaja. Svako od napred opisanih anti-KMB-R antitela sa malim afinitetom ili svako od negde drugo opisanih anti-KMB-R antitela mogu se upotrebiti u ovom postupku. U skladu sa tim, u prvom aspektu, pronalazak daje antitelo koje se vezuje za receptor krvno-moždane barijere (KMB-R), naznačen time što je afinitet antitela prema KMB-R-u od oko 5 nM do oko 10 μM (npr. od oko 20 nM do oko 1μM). Opciono, KMB-R je izabran iz grupe koja se sastoji od transferinskog receptora (TfR), insulinskog receptora, receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF receptor), proteina 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1), proteina 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), i faktora rasta sličnog epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). Opciono, antitelo se vezuje za terapeutsko jedinjenje, kao što je lek za neurološki poremećaj. U jednoj realizaciji, antitelo je multispecifično antitelo koje uključuje prvo antigen vezujuće mesto, koje vezuje KMB-R, i drugo antigen vezujuće mesto, koje vezuje moždani antigen, gde je na primer moždani antigen izabran iz grupe u koju spadaju: betasekretaza 1 (BACE1), amiloid beta (Abeta), receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR), humani receptor epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoprotein A3 (ApoE3), apolipoprotein E4 (ApoE4), alfa-sinuklein, CD20, hantingtin, prionski protein (PrP), kinaza bogata ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkin, presenilin 1, presenilin 2, gama sekretaza, receptor smrti 6 (DR6), amiloid prekursor protein (APP), p75 neurotrofinski receptor (p75NTR) i kaspaza 6. Antitelo (npr. multispecifično antitelo) uključuje fragmente antitela i kompletna antitela.
U drugoj realizaciji, pronalazak daje postupak za transport terapeutskog jedinjenja, kao što je lek za neurološki poremećaj, kroz krvno-moždanu barijeru, koja uključuje izloženost anti-KMB-R antitela povezanog sa lekom za neurološki poremećaj krvno-moždanoj barijeri, tako da antitelo transportuje lek za neurološki poremećaj koji je sa njim povezan kroz krvnomoždanu barijeru. Krvno-moždana barijera u ovom postupku može biti kod sisara, npr. onog sa neurološkim poremećajem, gde primeri uključuju: Alchajmerovu bolest (AD) (uključujući, ali bez ograničavanja, blago kognitivno oštećenje i prodromalnu AD), moždani udar, demenciju, mišićnu distrofiju (MD), multiplu sklerozu (MS), amiotrofnu lateralnu sklerozu (ALS), cističnu fibrozu, Angelmanov sindrom, Lidlov sindrom, Parkinsonovu bolest, Pikovu bolest, Padžetovu bolest, kancer (npr. kancer koji zahvata CNS ili mozak) i traumatsku povredu mozga.
Pronalazak se dodatno odnosi na postupak za pripremu antitela korisnog za transport terapeutskog jedinjenja, kao što je lek za neurološke poremećaje, kroz krvno-moždanu barijeru, uključujući izbor antitela protiv receptora krvno-moždane barijere (KMB-R) jer ima afinitet prema KMB-R-u koji iznosi od oko 5 nM do oko 10 µM. U jednoj realizaciji, antitelo je izabrano sa spiska antitela jer ima željeni afinitet. Alternativno, ili dodatno, antitelo je dizajnirano da ima željeni afinitet. Postupak opciono dalje uključuje povezivanje antitela sa terapeutskim jedinjenjem, kao što je lek za neurološki poremećaj. Na primer, postupak može da obuhvati dobijanje multispecifičnog antitela koje uključuje prvo mesto za vezivanje antigena, koje vezuje KMB-R, i drugo mesto za vezivanje antigena, koje vezuje moždani antigen.
Pronalazak dodatno daje postupak za lečenje neurološkog poremećaja kod sisara, uključujući lečenje sisara multispecifičnim antitelom koje vezuje i receptor krvno-moždane barijere (KMB-R) i moždani antigen, naznačenu time što je anti-KMB-R antitelo izabrano tako da ima mali afinitet prema KMB-R-u, i tako poboljšava prolaz u mozak antitela protiv moždanog antigena. Opciono, multispecifično antitelo vezuje i transferinski receptor (TfR) i BACE1 ili Abeta.
KRATAK OPIS SLIKA
Slike 1A-E prikazuju značajan vaskularni prolaz u mozak sistemski primenjenog anti-TfR antitela. Sl. 1A prikazuje prolaz u mozak nakon IV primene doza u tragovima (oko 50 µg/kg) [<131>I]anti-TfR<A>i [<125>I]kontrolnog IgG kod miševa, i kvantifikovan je kao srednja vrednost procenta injektovane doze po gramu mozga u terminima 5, 30 min, 1, 4, 24, 48 i 72 sata nakon IV injekcije (n=6). Prolaz [<131>I]anti-TfR<A>bio je smanjen injektovanjem 4 mg/kg neobeleženog anti-TfR<A>(hladan). Sl. 1B prikazuje kvantifikaciju srednje vrednosti prolaza antitela u mozak 1 i 24 sata nakon IV injektovanja 20mg/kg kontrolnog IgG ili anti-TfR<A>(***p=0,0002, n=10). Sl. 1C prikazuje odnos srednje vrednosti procenta koncentracija u mozgu prema onima u serumu (**p=0,003, n=10). Sl.1D i 1E prikazuju imunohistohemijsko bojenje regija mozga nakon IV injektovanja anti-TfR<A>(Sl. 1D, gornji pravougaonici), koje pokazuje ko-lokalizaciju sa anti-kolagenom IV, vaskularnim markerom (donji pravougaonici). IV injektovanje kontrolnog IgG (Sl.1E, gornji pravougaonici) pokazuje vaskularnu distribuciju samo u mozgu nakon 1 sata i odsustvo antitela nakon 24 sata. Skala = 50μm.
Slike 2A-F pokazuju da je afinitet anti-TfR antitela i obim prolaza u mozak obrnuto srazmeran prilikom primene u terapeutski relevantnoj dozi (20 mg/kg) u poređenju sa malom dozom u tragovima (oko 50 µg/kg). Slika 2A prikazuje ELISA test sa kompetitivnim vezivanjem, gde se povećane koncentracije anti-TfR<A,B,C,D,E>varijanti antitela koriste da se nadmeću sa biotinilizovanim TfR<A>u vezivanju za TfR. Anti-TfR kompetitivni ELISA test izveden je na Maxisorp pločama (Neptune, N.J.) prevučenim sa 2,5 µg/ml prečišćenog mišjeg TfR ekstracelularnog domena u PBS-u na 4ºC preko noći. Ploče su isprane sa PBS/0,05% Tween 20 i blokirane pomoću Superblock pufera za blokiranje u PBS-u (Thermo Scientific, Hudson, NH). Titrirani anti-TfR<A>, anti-TfR<B>, anti-TfR<C>ili anti-TfR<D>(serijsko razblaženje 1:3) kombinovani su sa biotinilizovanim anti-TfR<A>(krajnja koncentracija 0,5 nM) i dodavani na ploču tokom 1 sata na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane sa PBS/0,05% Tween 20, i na ploče je dodat HRP-streptavidin (Southern Biotech, Birmingham), i inkubirane su 1 sat na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane sa PBS/0,05% Tween 20, i biotinilizovani anti-TfR<A>vezan za ploču je detektovan pomoću TMB supstrata (BioFX Laboratories, Owings Mills). Rezultati na Slici 2A predstavljaju podatke jednog eksperimenta u kome je odvojeno procenjeno svih pet anti-TfR varijanti. Vrednosti IC50 određene iz ovih podataka prikazane su u Tabeli 2. Sl.2B predstavlja kvantifikaciju srednjeg prolaza u mozak nakon IV injekcije doza u tragovima (oko 50 µg/kg) [<125>I]anti-TfR<A,B,C,D,E>varijanti nakon 5 min, 1, 4, 6 i 24 sata (n=3). Rezultati na Slici 2B prikazuju podatke iz jednog eksperimenta u kome je odvojeno procenjeno svih pet anti-TfR varijanti. Sl. 2C prikazuje kvantifikaciju srednjeg prolaza u mozak nakon IV injekcije od 20mg/kg anti-TfR varijanti nakon 1 i 24 sata, pomoću postupaka koji su opisani vezano za Sliku 1B. Eksperiment je ponovljen pod istim uslovima uz primenu anti-TfR<E>, i svi rezultati su predstavljeni na Slici 2C. Sl. 2D predstavlja model koji ilustruje obrnuto srazmeran odnos afiniteta i prolaza u mozak. Sl. 2E predstavlja poređenje imunohistohemijskog bojenja regija mozga nakon IV injekcije ili anti-TfR<A>antitela sa velikim afinitetom ili anti-TfR<B,C,D>antitela sa manjim afinitetom, koje pokazuje razlike u distribuciji antitela (bojenje u levim pravougaonicima se odnosi samo na anti-TfR) i obim ko-lokalizacije sa NeuN (bojenje u desnim pravougaonicima odnosi se i na anti-TfR i na NeuN). Skala = 50 μm. Sl.2F predstavlja veoma uvećanu sliku anti-TfR<D>lokalizacije u neuronima (kao što je pokazano NeuN bojenjem); ovi podaci pokazuju da su anti-TfR<D>i NeuN kolokalizovani, i da tako anti-TfR<D>prolazi kroz KMB i interaguje sa neuronima, dok je anti-TfR<A>uglavnom lokalizovan u vaskulaturi nasuprot neurona. Skala = 20μm.
Slike 3A-G pokazuju da bispecifično anti-TfR/BACE1 antitelo inhibira Aβ in vitro, i akumulira se u mozgu. Sl. 3A predstavlja šematski model bispecifičnog antitela koje je dizajnirano da veže i TfR i β-sekretazu (BACE1). Sl. 3B prikazuje afinitet vezivanja TfR parentalnog anti-TfR<A>i anti-TfR<A>/BACE1, meren anti-TfR kompetitivnim ELISA testom koji je gore opisan za Sliku 2A. Sl.3C prikazuje kvantifikaciju Aβ nivoa koje proizvode HEK293 ćelije koje stabilno eksprimiraju APP nakon tretmana sa anti-TfR<A>/BACE1, anti-BACE1 i kontrolnim IgG u testu baziranom na ćelijama. Sposobnost antitela da inhibiraju proizvodnju Aβ1-40 u HEK293 ćelijama koje stabilno eksprimiraju humani amiloid prekursor protein divljeg tipa procenjena je na sledeći način. HEK293-APPWT ćelije zasejane su preko noći sa gustinom od 3 x 10<4>ćelija/bazenu na ploči sa 96 bazena. 50 µl svežeg medijuma (DMEM 10% FBS) koji sadrži anti-BACE1 antitelo ili kontrolno IgG1 antitelo inkubirano je sa ćelijama tokom 24 sata na 37<o>C. Ćelijski medijum je sakupljen i ispitan na prisustvo Aβ1-40 pomoću Aβ1-40 HTRF® testa (CisBio) prema uputstvu proizvođača. Aβ1-40 vrednosti su normalizovane za vijabilnost ćelija, kao što je određeno pomoću testa CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability Assay (Promega). Eksperimenti su izvedeni najmanje tri puta, i svaka tačka u svakom eksperimentu je ponovljena dva puta. Sl. 3D prikazuje kvantifikaciju srednjeg prolaza u mozak nakon doza u tragovima [<125>I]-označenog antitela u terminima 30 min, 6, 24 i 48 sati nakon IV injekcije kod miševa (n=4). Sl. 3E prikazuje kvantifikaciju srednjeg prolaza antitela u mozak, a Sl.3F prosečni odnos koncentracije u mozgu prema onoj u serumu u terminima 1, 12, 24 i 48 sati nakon IV injekcije od 20mg/kg antitela kod miševa (n=10). Eksperimenti na Sl.3E i 3F izvedeni su prema istom protokolu kao eksperiment opisan u vezi sa Slikom 1B. Sl. 3G prikazuje imunohistohemijsko bojenje regija mozga miševa 24 sata nakon IV injekcije, ili sa anti-TfR/BACE1 (levi pravougaonici) ili sa kontrolnim IgG (desni pravougaonici). Ko-lokalizacija antitela sa NeuN primećena je nakon anti-TfR<A>/BACE1 tretmana (gornji desni pravougaonik, NeuN neuronsko bojenje podudara se sa ekstenzivnim bojenjem antitela) ali je nema kod miševa tretiranih kontrolnim IgG (donji desni pravougaonik, primećuje se samo NeuN neuronsko bojenje, nema bojenja antitela).
Slike 4A-E pokazuju da jedna sistemska doza anti-TfR<A>/BACE1 značajno smanjuje centralni i periferni Aβ1-40. Sl. 4A-D prikazuju kvantifikaciju nivoa u mozgu (A,B) i plazmi (C,D) Aβ1-40nakon IV injekcije 25mg/kg ili 50mg/kg kontrolnog IgG, anti-BACE1, ili anti-TfR/BACE1. Ukratko, za merenja Abeta1-40, hemisfere mozga su homogenizovane u 5M guanidin hidrohloridnom puferu, i uzorci su mešani 3 sata na sobnoj temperaturi pre razblaživanja (1:10) u 0,25% kazeinu, 5 mM EDTA (pH 8,0) u PBS-u koji sadrži sveže dodati aprotinin (20 mg/ml) i leupeptin (10 mg/ml). Razblaženi homogenati su centrifugirani na 14.000 o/min tokom 20 min, i supernatanti su izolovani za Abeta1-40 merenja. Za merenje koncentracije antitela, odgovarajuća hemisfera mozga svakog miša homogenizovana je u 1% NP-40 kao što je gore opisano. Puna krv je pre perfuzije sakupljena u EDTA microtainer epruvete (BD Diagnostics), centrifugirana na 5.000 g tokom 15 minuta, i supernatant je izolovan za merenje koncentracija Abeta 1-40 i anti-TfR/BACE1 u plazmi miša. Koncentracije ukupnog Abeta1-40 miša u plazmi i mozgu određene su pomoću sendvič ELISA testa nakon sličnih postupaka kao što su gore opisani. Zečje poliklonsko antitelo specifično za C-terminus Abeta1-40 (Millipore, Bedford MA) prevučeno je na ploče, a biotinilizovano anti-mišje Abeta monoklonsko antitelo M3.2 (Covance, Dedham MA) je upotrebljeno za detekciju. Test je imao niže granice kvantifikacije od 1,96 pg/ml u plazmi i 39,1 pg/g u mozgu. Statistička analiza razlika između eksperimentalnih grupa izvršena je pomoću dvostranog nesparenog t-testa. * predstavlja značajnost u poređenju sa kontrolnim IgG, dok # predstavlja značajnost u poređenju sa anti-BACE1. * p<0,05, ** p<0,01, *** p<0,001; n=10 za sve grupe. Sl.4E pokazuje srednju vrednost smanjenja Aβ1-40prema podacima iz (A-D) izračunatu kao procenat Aβ1-40nivoa u odnosu na miševe kojima je injektovan kontrolni IgG.
Slike 5A-B prikazuju sekvence lakog i teškog lanca aminokiselina anti-BACE1 klona YW412.8 dobijenog od naivnog soja iz biblioteke prirodno raznovrsnih faga i afinitetno sazrelih oblika YW412.8. Sl.5A prikazuje poravnavanja varijabilnih lakih (VL) sekvenci (SEQ ID BR.1-6). Sl.5B prikazuje poravnavanja varijabilnih teških (VH) sekvenci (SEQ ID BR.7-8). Na obema slikama, HVR sekvence za svaki klon naznačene su uokvirenim kućicama, gde prva kućica prikazuje HVR-L1 (Sl.5A) ili HVR-H1 (Sl.5B), druga kućica prikazuje HVR-L2 (Sl. 5A) ili HVR-H2 (Sl.5B), a treća kućica prikazuje HVR-L3 (Sl.5A) ili HVR-H3 (Sl.5B).
Slike 6A-B prikazuju sekvence lakog i teškog lanca aminokiselina klona Fab 12 dobijenog od naivnog soja iz biblioteke sintetički raznovrsnih faga i afinitetno sazrelih oblika Fab 12. Sl. 6A predstavlja poravnavanja sekvenci lakog lanca (SEQ ID BR. 9-12). Sl. 6B predstavlja poravnavanja sekvenci teškog lanca (SEQ ID Br. 13). Na obema slikama, HVR sekvence svakog klona su prikazane oblastima u kućicama, gde prva kućica prikazuje HVR-L1 (Sl.6A) ili HVR-H1 (Sl.6B), druga kućica prikazuje HVR-L2 (Sl.6A) ili HVR-H2 (Sl.6B), a treća kućica prikazuje HVR-L3 (Sl.6A) ili HVR-H3 (Sl.6B).
Slike 7A-B prikazuju teški lanac (Sl.7A; SEQ ID BR.14) i laki lanac (Sl.7B; SEQ ID BR. 15) anti-Abeta antitela navedenog kao primer.
Slike 8A-B prikazuju kvantifikaciju anti-TfR<A,B, C,D,E>u serumu (Slika 8A) i u mozgu (Slika 8B) nakon jedne terapeutske doze primenjene na mišu. Šest do osam nedelja stare ženke miševa divljeg tipa C57B/6 korišćene su za sva ispitivanja. Miševima je intravenski injektovano 20 mg/kg anti-TfR varijanti ili kontrolnog IgG. Nivoi antitela u mozgu i serumu mereni su u terminima 1 sat i 12 sati, i 1, 2, 4, 5, 6 i 8 dana nakon injekcije. Ukupna injekciona zapremina nije prelazila 260 µl, i antitela su po potrebi bila razblažena u D-PBS-u (Invitrogen). Eksperiment je izveden prema istom protokolu kao eksperiment čiji rezultati su prikazani na Slici 1B.
Slike 9A-E prikazuju različite stepene u kojima se bispecifična anti-TfR<A,D,E>/BACE1 antitela akumuliraju u mozgu i inhibiraju proizvodnju Aβ in vivo. Slika 9A prikazuje rezultate anti-TfR kompetitivnog ELISA testa pomoću anti-TfR<A,D,E>/BACE1, prema istoj proceduri testa kao što je ona koja je opisana na Slici 2A. Vrednosti IC50 određene iz ovih podataka prikazane su u Tabeli 3. Slike 9B i 9D kvantifikuju količinu praćenog antitela (9B) i količinu Abeta1-40 (9D) primećenu u plazmi u terminima 1, 2, 4, 6, 8 i 10 dana nakon IV injekcije 50mg/kg antitela kod miševa (n=6). Slika 9C prikazuje kvantifikaciju srednje vrednosti prolaza u mozak, a Slika 9E prikazuje količinu Abeta1-40 primećenu u mozgu istih tretiranih miševa u terminima 1, 2, 4, 6, 8 i 10 dana nakon tretmana. Šest do osam nedelja stare ženke divljeg tipa C57B/6 miševa korišćene su za sva ispitivanja. Miševima je intravenski injektovano 50mg/kg anti-TfR/BACE1 varijanti, kontrolni IgG ili anti-BACE1. Nakon naznačenog vremena, kod miševa je primenjena perfuzija D-PBS-om, i koncentracija antitela u mozgu i u plazmi za svaku životinju izmerena je kao što je gore opisano. Test je izveden kao što je opisano kod Slike 4.
Slike 10 i 11 prikazuju različite stepene u kojima se bispecifična anti-TfR<A,D,E>/Abeta antitela akumuliraju u mozgu PS2APP miševa (Slika 12) i divljih miševa (Slika 13). Slike 10A i 11A prikazuju kvantifikaciju količine posmatranog antitela u plazmi 1 dan nakon i.p. injekcije 50 mg/kg antitela kod miševa (n= 4-6). Slike 10B i 11B kvantifikuju srednju vrednost prolaza u mozak kod istih tretiranih miševa.
DETALJAN OPIS REALIZACIJE PRONALASKA
I. DEFINICIJE
"Krvno-moždana barijera" ili "KMB" odnosi se na fiziološku barijeru između perifernog krvotoka i mozga i kičmene moždine koja nastaje tesnim povezivanjem u endotelijalnim membranama plazme moždanih kapilara, stvarajući čvrstu barijeru koja ograničava transport molekula u mozak, čak i veoma malih molekula, kao š to je urea (60 daltona). Krvno-moždana barijera u mozgu, krvno-moždinska barijera u kičmenoj moždini i krvno-retinalna barijera u retini predstavljaju granične kapilarne barijere u CNS-u, i ovde se zbirno pominju kao krvno-moždana barijera ili KMB. KMB takođe obuhvata krvno-CSF barijeru (horoidni pleksus), gde se barijera sastoji od ependimalnih ćelija a ne od kapilarnih endotelijalnih ćelija.
"Centralni nervni sistem" ili "CNS" odnosi se na kompleks nervnih tkiva koja kontrolišu telesne funkcije, i uključuje mozak i kičmenu moždinu.
"Receptor krvno-moždane barijere" (ovde skraćeno "KMB-R") predstavlja transmembranski receptor protein eksprimiran na endotelijalnim ćelijama mozga, koji može da transportuje molekule kroz krvno-moždanu barijeru. Primeri KMB-R ovde uključuju: transferinski receptor (TfR), insulinski receptor, receptor insulinu sličnog faktora rasta (IGF-R), lipoproteinske receptore male gustine, uključujući bez ograničavanja protein 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i protein 8 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP8), kao i faktor rasta sličan epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF). Ovde je primer za KMB-R transferinski receptor (TfR).
"Transferinski receptor" ("TfR") je transmembranski glikoprotein (molekulske mase oko 180.000) sastavljen od dve podjedinice vezane disulfidnom vezom (svaka ima prividnu molekulsku masu oko 90.000) koji učestvuje u prenosu gvožđa kod kičmenjaka. U jednoj realizaciji, ovde je TfR humani TfR koji sadrži aminokiselinsku sekvencu kao u: Schneider et al. Nature 311: 675 - 678 (1984), na primer.
"Neurološki poremećaj", kao što je ovde upotrebljen, odnosi se na bolest ili poremećaj koji pogađa CNS i/ili koji ima etiologiju u CNS-u. Primeri bolesti ili poremećaja CNS-a uključuju, ali se ne ograničavaju na, neuropatiju, amiloidozu, kancer, bolest ili poremećaj oka, virusnu ili mikrobnu infekciju, upalu, ishemiju, neurodegenerativnu bolest, epilepsiju, poremećaje ponašanja i lizozomsku bolest nakupljanja. U svrhu ove prijave, podrazumevaće se da CNS uključuje oko, koje je inače odvojeno od ostatka tela krvno-retinalnom barijerom. Specifični primeri neuroloških poremećaja uključuju, ali se ne ograničavaju na, neurodegenerativne bolesti (uključujući, ali se ne ograničavajući na, demenciju sa Levijevim telima, postpolio sindrom, Šaj-Dregerov sindrom, olivopontocerebelarnu atrofiju, Parkinsonovu bolest, multiplu sistemsku atrofiju, strijatonigralnu degeneraciju, tauopatije (uključujući, ali se ne ograničavajući na, Alchajmerovu bolest i supranuklearnu paralizu), prionske bolesti (uključujući, ali se ne ograničavajući na, goveđu spongiformnu encefalopatiju, skrepi, Krojcfeld-Jakobov sindrom, kuru, Gerstman-Štrojsler-Šajnkerovu bolest, spongiformnu encefalopatiju kod jelena i fatalnu familijarnu insomniju), bulbarnu paralizu, bolest motornog neurona i heterodegenerativne poremećaje nervnog sistema (uključujući, ali se ne ograničavajući na, Kanavanovu bolest, Hantingtonovu bolest, neuronsku ceroidnu lipofuscinozu, Aleksanderovu bolest, Turetov sindrom, Menkesov sindrom lomljive kose, Kokejnov sindrom, Halervorden-Špacov sindrom, Laforinu bolest, Retov sindrom, hepatolentikularnu degeneraciju, Leš-Nihanov sindrom i Unferiht-Lundborgov sindrom), demenciju (uključujući, ali se ne ograničavajući na, Pikovu bolest i spinocerebelarnu ataksiju), kancer (npr. CNS-a i/ili mozga, uključujući metastaze na mozgu nastale od kancera koji se nalazi na nekom drugom mestu u telu).
"Lek za neurološki poremećaj" je lek ili terapeutski agens kojim se leči jedan ili više neuroloških poremećaja. Lekovi za neurološki poremećaj iz ovog pronalaska uključuju, ali se ne ograničavaju na, antitela, peptide, proteine, prirodne ligande jednog ili više CNS ciljeva, modifikovane verzije prirodnih liganda jednog ili više CNS ciljeva, aptamere, inhibitorne nukleinske kiseline (tj. male inhibitorne RNK (siRNA) i RNK molekule oblika male ukosnice (shRNA)), ribozime i male molekule, ili aktivne fragmente svega gore nabrojanog. Primeri lekova za neurološki poremećaj iz pronalaska opisani su ovde, i uključuju, ali se ne ograničavaju na: antitela, aptamere, proteine, peptide, inhibitorne nukleinske kiseline i male molekule i aktivne fragmente svega što je prethodno nabrojano, koji su ili sami po sebi CNS antigen ili ciljni molekul kao što je, ali bez ograničavanja, amiloid prekursor protein ili njegovi delovi, amiloid beta, beta-sekretaza, gama-sekretaza, tau, alfa-sinuklein, parkin, hantingtin, DR6, presenilin, ApoE, markeri glioma ili drugih CNS kancera i neurotrofini, ili ih specifično prepoznaju i/ili deluju na njih (tj. inhibiraju, aktiviraju ili detektuju). Neograničavajući primeri lekova za neurološki poremećaj i poremećaja za čije lečenje mogu da se koriste dati su u sledećoj Tabeli 1:
TABELA 1: Neograničavajući primeri lekova za neurološke poremećaje i odgovarajućih poremećaja za čije lečenje mogu da se koriste
"Agens za imidžing" je jedinjenje koje ima jednu ili više osobina koje dopuštaju da se njegovo prisustvo i/ili lokacija detektuju direktno ili indirektno. Primeri takvih agenasa za imidžing uključuju proteine i jedinjenja sa malim molekulom, koji u sebi sadrže obeleženi deo koji omogućava detekciju.
"CNS antigen" ili "moždani antigen" je antigen eksprimiran u CNS-u, uključujući mozak, koji može biti cilj za antitelo ili mali molekul. Primeri takvih antigena uključuju, bez ograničenja: beta-sekretazu 1 (BACE1), amiloid beta (Abeta), receptor epidermalnog faktora rasta (EGFR), receptor 2 humanog epidermalnog faktora rasta (HER2), Tau, apolipoprotein E4 (ApoE4), alfa-sinuklein, CD20, hantingtin, prionski protein (PrP), kinazu bogata ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkin, presenilin 1, presenilin 2, gama sekretazu, receptor smrti 6 (DR6), amiloid prekursor protein (APP), p75 neurotrofinski receptor (p75NTR) i kaspazu 6. U jednoj realizaciji, antigen je BACE1.
Termin "BACE1", kao što je ovde upotrebljen, odnosi se na svaku nativnu betasekretazu 1 (takođe se zove enzim 1 razlaganja b-mesta amiloidnog prekursorskog proteina, membranski vezana aspartatna proteaza 2, memapsin 2, aspartil proteaza 2 ili Asp2) koja potiče od bilo kog kičmenjaka, uključujući sisare, kao što su primati (npr. ljudi) i glodari (npr. miševi i pacovi), ukoliko nije drugačije naznačeno. Termin obuhvata "kompletnu", neobrađenu BACE1, kao i svaki oblik BACE1 dobijen obradom u ćeliji. Termin takođe obuhvata varijante BACE1 koje se nalaze u prirodi, npr. splajsovane varijante ili alelne varijante. Aminokiselinska sekvenca BACE1 polipeptida datog kao primer je sekvenca humanog BACE1, izooblik A, kao što je objavljena u: Vassar et al., Science 286:735-741 (1999). Postoji nekoliko drugih izooblika humane BACE1, uključujući izooblike B, C i D. Pogledajte UniProtKB/Swiss-Prot Entry P56817.
Termini "antitelo anti-beta-sekretaze", "anti-BACE1 antitelo", "antitelo koje se vezuje za beta-sekretazu" i "antitelo koje se vezuje za BACE1" odnose se na antitelo koje može da veže BACE1 sa dovoljnim afinitetom, tako da je antitelo korisno kao dijagnostički i/ili terapeutski agens za ciljanje BACE1. U jednoj realizaciji, obim vezivanja anti-BACE1 antitela za nepovezan protein koji nije BACE1 je manji od oko 10% od vezivanja antitela za BACE1 kao što je izmereno, npr. radioimunotestom (RIA). U nekim realizacijama, antitelo koje se vezuje za BACE1 ima konstantu disocijacije (Kd) od ≤ 1μM, ≤ 100 nM, ≤ 10 nM, ≤ 1 nM, ≤ 0,1 nM, ≤ 0,01 nM, ili ≤ 0,001 nM (npr.10<-8>M ili manje, npr. od 10<-8>M do 10<-13>M, npr. od 10<-9>M do 10<-13>M). U nekim realizacijama, anti-BACE1 antitelo se vezuje za epitop BACE1 koji je sačuvan između BACE1 različitih vrsta i izooblika. U jednoj realizaciji, dato je antitelo koje se vezuje za epitop na BACE1 koju je vezalo anti-BACE1 antitelo YW412.8.31. U drugim realizacijama, dato je antitelo koje se vezuje za egzo-mesto u BACE1 koje se nalazi u katalitičkom domenu BACE1. U jednoj realizaciji, dato je antitelo koje se takmiči sa peptidima identifikovanim u radu: Kornacker et al., Biochem. 44:11567-11573 (2005), koji je ovde u celosti uključen putem reference, (tj. peptidi 1, 2, 3, 1-11, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 2-12, 3-12, 4-12, 5-12, 6-12, 7-12, 8-12, 9-12, 10-12, 4, 5, 6, 5-10, 5-9, skremblovani, Y5A, P6A, Y7A, F8A, I9A, P10A i L11A) za vezivanje za BACE1. Primeri sekvenci BACE1 antitela prikazani su na Sl. 5A-B i Sl. 6A-B. Jedan primer antitela ovde obuhvata varijabilne domene antitela YW412.8.31 (npr. kao na Sl.5A-B).
Protein "nativne sekvence" se ovde odnosi na protein koji sadrži aminokiselinsku sekvencu proteina koji se nalazi u prirodi, uključujući varijante proteina koje postoje u prirodi. Termin kao što je ovde upotrebljen uključuje protein kao izolovan iz prirodnog izvora ili proizveden rekombinacijom.
Termin "antitelo" je ovde upotrebljen u najširem smislu, i specifično pokriva monoklonska antitela, poliklonska antitela, multispecifična antitela (npr. bispecifična antitela) nastala od najmanje dva netaknuta antitela, i fragmente antitela, dokle god pokazuju željenu biološku aktivnost.
"Fragmenti antitela" ovde uključuju deo netaknutog antitela koji zadržava sposobnost da veže antigen. Primeri fragmenata antitela uključuju Fab, Fab’, F(ab’)2i Fv fragmente; dvojna antitela; linearna antitela; jednolančane molekule antitela; i multispecifična antitela nastala od fragmenata antitela.
Termin "monoklonsko antitelo" kao što je ovde upotrebljen odnosi se na antitelo dobijeno iz populacije suštinski homogenih antitela, tj. pojedinačna antitela koja čine populaciju su identična i/ili vezuju isti epitop, osim mogućih varijanti koje mogu da se pojave tokom proizvodnje monoklonskih antitela, pri čemu su takve varijante generalno prisutne u manjim količinama. Nasuprot preparatima poliklonskih antitela, koji tipično uključuju različita antitela usmerena protiv različitih determinanti (epitopa), svako monoklonsko antitelo je usmereno protiv jedne determinante na antigenu. Pored specifičnosti, prednost monoklonskih antitela je što nisu kontaminirana drugim imunoglobulinima. Reč "monoklonska" ukazuje na karakter antitela koje je dobijeno iz suštinski homogene populacije antitela, i ne treba da se tumači tako da se zahteva proizvodnja antitela nekim određenim postupkom. Na primer, monoklonska antitela koja treba koristiti u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti napravljena pomoću postupka hibridoma, koju su prvi opisali Kohler et al., Nature, 256:495 (1975), ili mogu da se naprave po postupcima rekombinantne DNK (pogledajte npr. U.S. Patent No. 4,816,567). "Monoklonska antitela" takođe mogu da se izoluju iz biblioteka antitela faga, pomoću tehnika opisanih u: Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991) i Marks et al., J. Mol. Biol., 222:581-597 (1991), na primer. Specifični primeri monoklonskih antitela ovde uključuju himerna antitela, humanizovana antitela i humana antitela, uključujući i njihove fragmente koji vezuju antigen.
Monoklonska antitela ovde specifično uključuju “himerna” antitela (imunoglobuline), kod kojih je deo teškog i/ili lakog lanca identičan ili homolog sa odgovarajućim sekvencama antitela dobijenih od naročitih vrsta, ili koji pripadaju naročitoj klasi ili potklasi antitela, dok je ostatak lan(a)ca identičan ili homolog sa odgovarajućim sekvencama antitela dobijenih od drugih vrsta, ili koje pripadaju drugoj klasi ili potklasi antitela, kao i fragmente takvih antitela, sve dok oni ispoljavaju željenu biološku aktivnost (U.S. Patent No.4,816,567; Morrison et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 81:6851-6855 (1984)). Himerna antitela od interesa ovde uključuju "primatizovana" antitela, uključujući antigen-vezujuće sekvence varijabilnog domena, dobijene od primata koji nisu ljudi (npr. majmuni Starog sveta, kao što je babun, rezus ili cynomolgus majmun) i sekvence humanih konstantnih regiona (US Pat No.5,693,780).
"Humanizovani" oblici ne-humanih (npr. mišjih) antitela su himerna antitela koja sadrže minimalne sekvence dobijene od ne-humanog imunoglobulina. Najvećim delom, humanizovana antitela su humani imunoglobulini (antitelo primalac) kod kojih su ostaci hipervarijabilnog regiona primaoca zamenjeni ostacima hipervarijabilnog regiona ne-humane vrste (donorsko antitelo), kao što je miš, pacov, zec ili ne-humani primat koji ima željenu specifičnost, afinitet i kapacitet. U nekim slučajevima, ostaci okvirnog regiona (FR) humanog imunoglobulina zamenjeni su odgovarajućim ne-humanim ostacima. Nadalje, humanizovana antitela mogu da uključe ostatke koji nisu nađeni u antitelu primaocu ili u donorskom antitelu. Te modifikacije su načinjene kako bi se dodatno preradilo dejstvo antitela. U principu, humanizovano antitelo će obuhvatati suštinski sve od bar jednog, a tipično dva, varijabilna domena, kod kojih svi ili suštinski svi hipervarijabilni regioni odgovaraju onima ne-humanog imunoglobulina, i svi ili suštinski svi FR-ovi su od sekvence humanog imunoglobulina, osim FR supstitucije(a), kao što je gore navedeno. Humanizovano antitelo će opciono takođe da sadrži najmanje deo konstantnog regiona imunoglobulina, tipično humanog imunoglobulina.
Za više detalja pogledajte: Jones et al., Nature 321:522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988); i Presta, Curr. Op. Struct. Biol.2:593-596 (1992).
Ovde je "humano antitelo" ono koje sadrži strukturu aminokiselinske sekvence koja odgovara strukturi aminokiselinske sekvence antitela koje može da se dobije od humane B-ćelije, i uključujuje antigen-vezujuće fragmente humanih antitela. Takva antitela mogu da se identifikuju ili naprave različitim tehnikama, uključujući, ali se ne ograničavajući na: proizvodnju pomoću transgenih životinja (npr. miševa) koje mogu, nakon imunizacije, da proizvedu humana antitela u odsustvu endogene proizvodnje imunoglobulina (pogledajte, npr., Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:2551 (1993); Jakobovits et al., Nature, 362:255-258 (1993); Bruggermann et al., Year in Immuno., 7:33 (1993); i US Patent Nos.
5,591,669, 5,589,369 i 5,545,807)); izbor iz biblioteka displeja faga koje eksprimiraju humana antitela ili fragmente humanih antitela (pogledajte, na primer McCafferty et al., Nature 348:552-553 (1990); Johnson et al., Current Opinion in Structural Biology 3:564-571 (1993); Clackson et al., Nature, 352:624-628 (1991); Marks et al., J. Mol. Biol.222:581-597 (1991); Griffith et al., EMBO J. 12:725-734 (1993);US Patent br. 5,565,332 i 5,573,905); dobijanje putem in vitro aktiviranih B ćelija (pogledajte US Patent 5,567,610 i 5,229,275); i izolacija iz humanog antitela putem stvaranja hibridoma.
"Multispecifično antitelo" je ovde antitelo koje ima vezujuće specifičnosti za najmanje dva različita epitopa. Multispecifična antitela data kao primer mogu da vežu i KMB-R i moždani antigen. Multispecifična antitela mogu se pripremiti kao kompletna antitela ili kao fragmenti antitela (npr. F(ab’)2bispecifična antitela). Dizajnirana antitela sa dva, tri ili više (npr. četiri) funkcionalna antigen vezujuća mesta su takođe razmatrana (pogledajte npr. US Appln No. US 2002/0004587 A1, Miller et al.). Multispecifična antitela mogu se pripremiti kao kompletna antitela ili kao fragmenti antitela.
Antitela ovde uključuju "varijante aminokiselinskih sekvenci" sa izmenjenom antigenvezujućom ili biološkom aktivnošću. Primeri takvih izmena aminokiselina uključuju antitela sa povećanim afinitetom prema antigenu (npr. "afinitetno sazrela" antitela) i antitela sa izmenjenim Fc regionom, ukoliko je prisutan, npr. sa izmenjenom (povećanom ili smanjenom) ćelijskom citotoksičnošću koja zavisi od antitela (ADCC) i/ili komplementno zavisnom citotoksičnošću (CDC) (pogledajte, na primer, WO 00/42072, Presta, L. i WO 99/51642, Iduosogie et al.); i/ili povećan ili smanjen poluživot u serumu (pogledajte, na primer, WO00/42072, Presta, L.).
"Afinitetno modifikovana varijanta" ima jedan ili više supstituisanih hipervarijabilnih regiona ili okvirnih ostataka matičnog antitela (npr. matičnog himernog, humanizovanog ili humanog antitela) koji menjaju (povećavaju ili smanjuju) afinitet. U jednoj realizaciji, rezultujuća varijanta(e) izabrana za dalji razvoj imaće smanjen afinitet prema KMB-R-u, prema predmetnom pronalasku. Pogodan način za stvaranje takvih supstitucionih varijanti koristi displej faga. Ukratko, nekoliko hipervarijabilnih mesta regiona (npr. 6-7 mesta) je mutirano kako bi se dobile sve moguće amino supstitucije na svakom mestu. Tako nastale varijante antitela na monovalentan način se izlažu na česticama sa filamentnim fagom kao fuzije sa gen III proizvodom M13 koji se nalazi u svakoj čestici. Varijante izložene fagima se onda ispituju da se odredi njihova biološka aktivnost (npr. afinitet vezivanja). Da bi se odredili kandidati za mesta hipervarijabilnog regiona koja će se modifikovati, može da se izvrši alanin skenirajuća mutageneza, kako bi se identifikovali ostaci hipervarijabilnih regiona koji znatno doprinose vezivanju antigena. Alternativno, ili dodatno, može biti od koristi da se analizira kristalna struktura kompleksa antigen-antitelo, kako bi se identifikovale tačke kontakta između antitela i njegovog cilja. Takvi kontaktni ostaci i susedni ostaci predstavljaju kandidate za supstituciju, prema tehnikama koje su ovde detaljno izložene. Kada se takve varijante naprave, panel varijanti se podvrgava skriningu, i antitela sa izmenjenim afinitetom mogu da se izaberu za dalji razvoj.
Ovde antitelo može biti konjugovano sa "heterolognim molekulom", na primer da bi se povećao poluživot ili stabilnost, ili se na drugi način poboljšalo antitelo. Na primer, antitelo može biti vezano za jedan od raznovrsnih neproteinskih polimera, npr. polietilen glikol (PEG), polipropilen glikol, polioksialkilene, ili kopolimere polietilen glikola i polipropilen glikola. Fragmenti antitela, kao što je Fab’, vezani za jedan ili više PEG molekula, predstavljaju primer realizacije pronalaska.
Ovde antitelo može biti "varijanta glikozilacije" tako da svaki ugljovodonik vezan za Fc region, ako je prisutan, bude izmenjen. Na primer, antitela sa zrelom ugljovodoničnom strukturom koja nema fukozu vezanu za Fc region antitela opisana su u: US Pat Appl No US 2003/0157108 (Presta, L.). Pogledajte takođe US 2004/0093621 (Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd). Antitela sa ukrštajućim N-acetilglukozaminom (GlcNAc) u ugljovodoniku vezanom za Fc region antitela pomenuta su u WO 2003/011878, Jean-Mairet et al. i US Patent No.
6,602,684, Umana et al. Antitela sa najmanje jednim ostatkom galaktoze u oligosaharidu vezanom za Fc region antitela su objavljena u WO 1997/30087, Patel et al. Pogledajte takođe WO 1998/58964 (Raju, S.) i WO 1999/22764 (Raju, S.) u vezi sa antitelima sa izmenjenim ugljovodonikom vezanim za njihov Fc region. Pogledajte takođe US 2005/0123546 (Umana et al.) koji opisuje antitela sa modifikovanom glikozilacijom.
Termin "hipervarijabilni region" kada se ovde koristi odnosi se na aminokiselinske ostatke antitela koji su odgovorni za vezivanje antigena. Hipervarijabilni region sadrži ostatke aminokiselina od "regiona koji određuju komplementarnost" ili "CDR" (npr. ostaci 24-34 (L1), 50-56 (L2) i 89-97 (L3) u varijabilnom domenu lakog lanca i 31-35 (H1), 50-65 (H2) i 95-102 (H3) u varijabilnom domenu teškog lanca; Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991)) i/ili one ostatke iz "hipervarijabilne petlje" (npr. ostaci 26-32 (L1), 50-52 (L2) i 91-96 (L3) u varijabilnom domenu lakog lanca i 26-32 (H1), 53-55 (H2) i 96-101 (H3) u varijabilnom domenu teškog lanca; Chothia and Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917 (1987)). "Okvirni" ili "FR" ostaci su oni ostaci varijabilnog domena koji nisu ostaci hipervarijabilnog regiona kao što su ovde definisani.
"Kompletno antitelo" je ono koje sadrži antigen-vezujući varijabilni region, kao i konstantni domen lakog lanca (CL) i konstantne domene teškog lanca, CH1, CH2 i CH3. Konstantni domeni mogu biti konstantni domeni nativne sekvence (npr. konstantni domeni humane nativne sekvence) ili varijante njihove aminokiselinske sekvence.
"Golo antitelo" je antitelo (kao što je ovde definisano) koje nije konjugovano sa heterolognim molekulom, kao što je citotoksični deo, polimer ili radiološka oznaka.
"Efektorske funkcije" antitela odnose se na one biološke aktivnosti koje se pripisuju Fc regionu (Fc region nativne sekvence ili varijanta aminokiselinske sekvence Fc regiona) antitela. Primeri efektorskih funkcija antitela uključuju C1q vezivanje, komplementarno zavisnu citotoksičnost (CDC), vezivanje Fc receptora, ćelijski posredovanu citotoksičnost zavisnu od antitela (ADCC), itd. U jednoj realizaciji, ovde antitelo suštinski nema efektorsku funkciju.
U zavisnosti od aminokiselinske sekvence konstantnog domena njihovih teških lanaca, kompletna antitela mogu biti raspoređena u različite "klase". Postoji pet glavnih klasa kompletnih antitela: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, i neke od njih mogu dalje biti podeljene na "potklase" (izotipove), npr. IgGl, IgG2, IgG3, IgG4, IgA i IgA2. Konstantni domeni teškog lanca koji odgovaraju različitim klasama antitela zovu se alfa, delta, epsilon, gama, i mi, respektivno. Podjedinične strukture i trodimenzione konfiguracije različitih klasa imunoglobulina su dobro poznate.
Termin "rekombinantno antitelo", kao š to je ovde upotrebljen, odnosi se na antitelo (npr. himerno, humanizovano ili humano antitelo ili njihov antigen-vezujući fragment) koje eksprimira rekombinantna ćelija domaćin, koja sadrži nukleinsku kiselinu koja šifrira antitelo. Primeri "ćelije domaćina" za proizvodnju rekombinantnih antitela uključuju: (1) ćelije sisara, na primer, ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO), COS, ćelije mijeloma (uključujući Y0 i NS0 ćelije), ćelije bubrega mladunčeta hrčka (BHK), Hela i Vero ćelije; (2) ćelije insekata, na primer, sf9, sf21 i Tn5; (3) ćelije biljaka, na primer biljaka koje pripadaju rodu Nicotiana (npr. Nicotiana tabacum); (4) ćelije kvasca, na primer, onih koji pripadaju rodu Saccharomyces (npr. Saccharomyces cerevisiae) ili rodu Aspergillus (npr. Aspergillus niger); (5) bakterijske ćelije, na primer Escherichia. coli ćelije ili Bacillus subtilis ćelije, itd.
Kao što je ovde upotrebljeno, "specifično vezivanje" ili "specifično se vezuje za" odnosi se na antitelo koje se selektivno ili prvenstveno vezuje za antigen. Afinitet prema vezivanju se generalno određuje standardnim testom, kao što je Skačardova analiza, ili tehnika površinske plazmonske rezonance (npr. primenom BIACORE®).
"Antitelo koje se vezuje za isti epitop" kao referentno antitelo odnosi se na antitelo koje blokira vezivanje referentnog antitela za njegov antigen u kompetitivnom testu za 50% ili više, i obrnuto, referentno antitelo blokira vezivanje antitela za njegov antigen u kompetitivnom testu za 50% ili više. U jednoj realizaciji, anti-BACE1 antitelo se vezuje za BACE1 epitop vezan od strane YW412.8.31.
Termin "citotoksični agens" kao što se ovde koristi odnosi se na supstancu koja inhibira ili sprečava ćelijsku funkciju i/ili izaziva ćelijsku smrt ili uništenje. Citotoksični agensi uključuju, ali se ne ograničavaju na, radioaktivne izotope (npr. At<211>, I<131>, I<125>, Y<90>, Re<186>, Re<188>, Sm<153>, Bi<212>, P<32>, Pb<212>i radioaktivne izotope Lu); hemoterapeutske agense ili lekove (npr. metotreksat, adriamicin, vinka alkaloide (vinkristin, vinblastin, etopozid), doksorubicin, melfalan, mitomicin C, hlorambucil, daunorubicin ili druge interkalirajuće agense); agense za inhibiciju rasta; enzime i njihove fragmente, kao što su nukleolitički enzimi; antibiotike; toksine, kao što su toksini malog molekula ili enzimski aktivni toksini bakterijskog, fungalnog, biljnog ili životinjskog porekla, uključujući njihove fragmente i/ili varijante.
"Efikasna količina" agensa, npr. farmaceutske formulacije, odnosi se na količinu koja je u potrebnim dozama i vremenskim periodima efikasna za postizanje željenog terapeutskog ili profilaktičkog rezultata.
Termin "Fc region" ovde se koristi da definiše C-terminalni region imunoglobulinskog teškog lanca koji sadrži barem deo konstantnog regiona. Termin uključuje nativne sekvence Fc regiona i varijante Fc regiona. U jednoj realizaciji, Fc region teškog lanca humanog IgG pruža se od Cys226, ili od Pro230, do karboksilnog terminusa teškog lanca. Međutim, C-terminalni lizin (Lys447) Fc regiona može ali ne mora biti prisutan. Ako ovde nije drugačije naznačeno, označavanje aminokiselinskih ostataka u Fc regionu ili konstantnom regionu je prema EU sistemu numeracije, koji se zove i EU indeks, kao što je opisano u: Kabat et al., Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5. izd. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD, 1991.
"Okvir" ili "FR" se odnosi na ostatke varijabilnog domena koji nisu ostaci hipervarijabilnog regiona (HVR). FR varijabilnog domena generalno se sastoji od četiri FR domena: FR1, FR2, FR3 i FR4. Prema tome, HVR i FR sekvence generalno se pojavljuju u sledećoj sekvenci u VH (ili VL): FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4.
"Imunokonjugat" je antitelo konjugovano sa jednim ili više heterolognih molekula, uključujući, ali se ne ograničavajući na obeleživač ili citotoksični agens. Opciono, takva konjugacija je putem linkera.
"Linker", kao što je ovde upotrebljen, je struktura koja kovalentno ili nekovalentno povezuje anti-KMB-R antitelo sa heterolognim molekulom. U nekim realizacijama, linker je peptid. U drugim realizacijama, linker je hemijski linker.
"Obeleživač" je ovde marker povezan sa antitelom, koji se koristi za detekciju ili imidžing. Primeri takvih obeleživača uključuju: radioobeleživač, fluorofor, hromofor ili afinitetnu oznaku. U jednoj realizaciji, obeleživač je radioobeleživač upotrebljen za medicinsko snimanje, na primer tc99m ili I123, ili spin obeleživač za nuklearnu magnetnu rezonancu (NMR) (takođe se zove magnetna rezonanca, MR), kao što je ponovo jod-123, jod-131, indijum-111, fluor-19, ugljenik-13, azot-15, kiseonik-17, gadolinijum, mangan, gvožđe, itd.
"Pojedinac" ili "ispitanik" je sisar. Sisari uključuju, ali se ne ograničavaju na, domaće životinje (npr. krave, ovce, mačke, pse i konje), primate (npr. ljude i ne-humane primate, kao što su majmuni), zečeve i glodare (npr. miševe i pacove). U nekim realizacijama, pojedinac ili ispitanik je čovek.
"Izolovano" antitelo je ono koje je izdvojeno iz svog prirodnog okruženja. U nekim realizacijama, antitelo je prečišćeno do čistoće veće od 95% ili 99% kao što je određeno, na primer, elektroforetski (npr. SDS-PAGE, izoelektrično fokusiranje (IEF), kapilarna elektroforeza) ili hromatografski (npr. jonskom izmenom ili reverzno faznim HPLC postupkom). Za pregled postupaka za procenu čistoće antitela, pogledajte npr. Flatman et al., J. Chromatogr. B 848:79-87 (2007).
Termin "uputstvo za upotrebu" koristi se da se ukaže na uputstvo koje se uobičajeno nalazi u komercijalnim pakovanjima terapeutskih proizvoda, koje sadrži informacije o indikacijama, upotrebi, doziranju, primeni, kombinovanoj terapiji, kontraindikacijama i/ili upozorenjima u vezi sa upotrebom takvog terapeutskog proizvoda.
Termin "farmaceutska formulacija" odnosi se na preparat koji je u takvom obliku koji omogućava da biološka aktivnost aktivnog sastojka koji se u njoj sadrži bude efikasna, i koji ne sadrži dodatne komponente koje su neprihvatljivo toksične za ispitanika na kome će formulacija biti primenjena.
"Farmaceutski prihvatljiv nosač" odnosi se na sastojak farmaceutske formulacije, koji nije aktivni sastojak, koji je netoksičan za ispitanika. Farmaceutski prihvatljiv nosač uključuje, ali se ne ograničava na, pufer, ekscipijens, stabilizator ili konzervans.
Kao što je ovde upotrebljeno, "lečenje" (i gramatičke varijacije, kao što je "lečiti") se odnosi na kliničku intervenciju u pokušaju da se izmeni prirodni tok pojedinca koji se leči, i može se primenjivati ili radi profilakse ili tokom kliničke patologije. Poželjni efekti lečenja uključuju, ali se ne ograničavaju na, sprečavanje pojave ili recidiva bolesti, ublažavanje simptoma, smanjenje svih direktnih ili indirektnih patoloških posledica bolesti, sprečavanje metastaze, usporavanje napredovanja bolesti, poboljšavanje ili ublažavanje stanja bolesti, i remisiju ili poboljšanu prognozu. U nekim realizacijama, antitela iz ovog pronalaska se koriste da odlože razvoj bolesti, ili da uspore napredovanje bolesti.
II. KOMPOZICIJE I POSTUPCI
II. Proizvodnja anti-KMB-R antitela i njihovih konjugata
Postupci i proizvodi iz predmetnog pronalaska koriste, ili sadrže, antitelo koje se vezuje za KMB-R. KMB-R antigen koji će se koristiti za proizvodnju antitela, ili za skrining na antitela, može biti npr. njegov rastvoran oblik ili njegov deo (npr. ekstracelularni domen), koji sadrži željeni epitop. Alternativno, ili dodatno, ćelije koje eksprimiraju KMB-R na svojoj ćelijskoj površini mogu da se upotrebe za stvaranje antitela, ili skrining na antitela. Drugi oblici KMB-R korisni za dobijanje antitela biće očevidni stručnjacima za ovu oblast.Primeri KMB-R ovde uključuju transferinski receptor (TfR), insulinski receptor, receptor insulinu sličnog faktora rasta (IGF-R), protein 1 koji je u vezi sa lipoproteinskim receptorom male gustine (LRP1) i LRP8 itd, i faktor rasta sličan epidermalnom faktoru rasta koji vezuje heparin (HB-EGF).
Prema predmetnom pronalasku, anti-KMB-R "malog afiniteta" (npr. anti-TfR) antitelo je izabrano na osnovu ovde iznetih podataka koji pokazuju da takva antitela pokazuju poboljšan prolaz u CNS (na primer, mozak). Da bi se identifikovala takva antitela malog afiniteta, dostupni su različiti testovi za merenje afiniteta antitela, uključujući, bez ograničenja: Skačardov test i tehniku površinske plazmonske rezonance (npr. primenom BIACORE®). Prema jednoj realizaciji pronalaska, antitelo ima afinitet prema KMB-R antigenu (npr. prema TfR-u) od oko 5nM, ili od oko 20 nM, ili od oko 100 nM, do oko10 µM, ili do oko1 µM, ili do oko 500 nM. Tako, afinitet može biti u opsegu od oko 5 nM do oko 10 µM, ili u opsegu od oko 20 nM do oko 1 μM, ili u opsegu od oko 100 nM do oko 500 nM, npr. kao što je izmereno pomoću Skačardove analize ili BIACORE®.
Tako, pronalazak daje postupak za izradu antitela korisnog za transport leka za neurološki poremećaj kroz krvno-moždanu barijeru, uključujući izbor antitela iz panela antitela protiv receptora krvno-moždane barijere (KMB-R), jer ima afinitet prema KMB-R-u koji je u opsegu od oko 5nM, ili od oko 20 nM, ili od oko 100 nM, do oko 10 µM, ili do oko 1 µM, ili do oko 500 mM. Tako, afinitet može biti u opsegu od oko 5 nM do oko 10 µM, ili u opsegu od oko 20 nM do oko 1 μM, ili u opsegu od oko 100 nM do oko 500 nM, npr. kao što je određeno pomoću Skačardove analize ili BIACORE®. Kao što će razumeti stručnjaci sa uobičajenim znanjem o ovoj oblasti, vezivanje heterolognog molekula/jedinjenja za antitelo često dovodi do smanjenja afiniteta antitela prema njegovom cilju usled npr. sternih smetnji, ili čak do eliminacije jednog vezujućeg kraka, ako je antitelo napravljeno kao multispecifično, sa jednim ili više krakova koji se vezuju za antigen koji je različit od originalnog cilja antitela. U jednoj realizaciji, antitelo malog afiniteta iz pronalaska specifično za TfR vezan za BACE1 imalo je Kd za TfR određen pomoću BIACORE oko 30 nM. U drugoj realizaciji, antitelo malog afiniteta iz pronalaska specifično za TfR vezan za BACE1 imalo je Kd za TfR određen pomoću BIACORE oko 600 nM.
Jedan primer testa za procenjivanje afiniteta antitela je Skačardova analiza. Na primer, anti-KMB-R antitelo od interesa može biti jodovano postupkom sa laktoperoksidazom (Bennett i Horuk, Methods in Enzymology 288 str.134-148 (1997)). Radiološki obeleženo anti-KMB-R antitelo je prečišćeno od slobodnog<125>I-Na gel filtracijom na koloni NAP-5, i izmerena je njegova specifična aktivnost. Smeše za kompetitivnu reakciju od 50 µl sa konstantnom koncentracijom jodovanog antitela i opadajućim koncentracijama serijski razblaženog neobeleženog antitela stavljene su na ploče sa 96-bazena. Ćelije koje prolazno eksprimiraju KMB-R uzgajane su u kultivacionom medijumu, koji je sadržao Eagle-ovu podlogu modifikovanu po Dulbecco-u (Dulbecco’s modified eagle’s medium (DMEM)) (Genentech) uz dodatak 10% FBS, 2 mM L-glutamina i 1 ́ penicilin-streptomicin na 37°C u 5% CO2. Ćelije su uklonjene iz posuda pomoću rastvora za odvajanje ćelija (Sigma Cell Dissociation Solution), i isprane vezujućim puferom (DMEM sa 1% albumina goveđeg seruma, 50 mM HEPES, pH 7,2 i 0,2% natrijum azida). Isprane ćelije su dodate u približnoj gustini od 200.000 ćelija u 0,2 ml vezujućeg pufera na ploče sa 96-bazena koje su sadržale 50-µl kompetitivnih reakcionih smeša. Krajnja koncentracija neobeleženog antitela u kompetitivnoj reakciji sa ćelijama je različita, počevši od 1000 nM, a zatim smanjujući uz razblaženje 1:2 za 10 koncentracija, i uključujući nulti-uzorak, samo-pufer. Kompetitivne reakcije sa ćelijama za svaku koncentraciju neobeleženog antitela ponovljene su po tri puta. Kompetitivne reakcije sa ćelijama su inkubirane 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon 2-časovne inkubacije, kompetitivne reakcije su prenete na filter ploču i isprane četiri puta vezujućim puferom da se razdvoje slobodna od vezanih jodovanih antitela. Filteri su prebrojani gama brojačem, i podaci o vezivanju su ocenjeni pomoću podesnog algoritma Munsona i Rodbarda (1980), kako bi se odredio afintet vezivanja antitela.
Primer za Skačardovu analizu, pomoću kompozicija iz pronalaska, može da se sprovede na sledeći način. Anti-TFR<A>je jodovan postupkom sa laktoperoksidazom (Bennett i Horuk, Methods in Enzymology 288 str.134-148 (1997)). Radiološki obeležen anti-TFR<A>je prečišćen od slobodnog<125>I-Na gel filtracijom na koloni NAP-5; prečišćeni anti-TFR<A>imao je specifičnu aktivnost od 19,82 µCi/µg. Smeše za kompetitivnu reakciju od 50 µl sa konstantnom koncentracijom jodovanog antitela i opadajućim koncentracijama serijski razblaženih neobeleženih antitela stavljene su na ploče sa 96-bazena.293 ćelije koje prolazno eksprimiraju mišji TfR uzgajane su u kultivacionom medijumu, koji je sadržao Eagle-ovu podlogu modifikovanu po Dulbecco-u (Dulbecco’s modified eagle’s medium (DMEM)) (Genentech) uz dodatak 10% FBS, 2 mM L-glutamina i 1 ́ penicilin-streptomicin na 37°C u 5% CO2. Ćelije su uklonjene sa posuda pomoću rastvora za odvajanje ćelija (Sigma Cell Dissociation Solution) i isprane vezujućim puferom (DMEM sa 1% albumina goveđeg seruma, 50 mM HEPES, pH 7,2 i 0,2% natrijum azida). Isprane ćelije su dodate u približnoj gustini od 200.000 ćelija u 0,2 ml vezujućeg pufera na ploče sa 96-bazena koje su sadržale 50-µl smeša za kompetitivnu reakciju. Krajnja koncentracija jodovanog antitela u svakoj kompetitivnoj reakciji sa ćelijama iznosila je 100 pM (134.000 cpm u 0,25 ml). Krajnja koncentracija neobeleženog antitela u kompetitivnoj reakciji sa ćelijama je varirala, počinjući od 1000 nM a zatim se smanjujući uz razblaženje 1:2 za 10 koncentracija, i uključujući nulti-uzorak, samo-pufer. Kompetitivne reakcije sa ćelijama za svaku koncentraciju neobeleženog antitela ponovljene su po tri puta. Kompetitivne reakcije sa ćelijama su inkubirane 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon 2-časovne inkubacije, kompetitivne reakcije su prenete na Millipore Multiscreen filter ploču i isprane četiri puta vezujućim puferom da bi se razdvojila slobodna od vezanih jodovanih antitela. Filteri su prebrojani na Wallac Wizard 1470 gama brojaču (PerkinElmer Life and Analytical Sciences; Waltham, MA). Podaci o vezivanju su ocenjeni pomoću New Ligand softvera (Genentech), koji koristi prikladan algoritam Munsona i Rodbarda (1980) za određivanje afiniteta vezivanja antitela.
Primer za BIACORE® analizu pomoću kompozicija iz pronalaska može da se izvede na sledeći način. Kd je određen testom površinske plazmonske rezonance pomoću BIACORE®-2000 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) na 25°C pomoću kompleta sa antihumanim Fc (BiAcore Inc., Piscataway, NJ). Ukratko, biosenzorski čipovi sa karboksimetilovanim dekstranom (CM5, BIACORE, Inc.) aktivirani su uz pomoć N-etil-N’-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid hidrohlorida (EDC) i N-hidroksisukcinimida (NHS) prema uputstvu dobavljača. Anti-humano Fc antitelo razblaženo je 10 mM natrijum acetatom, pH 4,0, do 50 μg/ml pre injektovanja pri protoku od 5 μl/minut, kako bi se dobilo oko 10.000 jedinica odgovora (RU) kuplovanog proteina. Nakon injektovanja antitela, injektovan je1 M etanolamin da bi blokirao neizreagovale grupe. Za kinetička merenja, varijante anti-TfR antitela su injektovane u HBS-P da se dostigne oko 220 RU, a zatim su dvostruka serijska razblaženja MuTfR-His (0,61 nM do 157 nM) injektovana u HBS-P na 25°C pri protoku od oko 30 μl/min. Brzine asocijacije (kon) i brzine disocijacije (koff) izračunate su pomoću jednostavnog jedan-na-jedan Lengmirovog modela vezivanja (BIACORE® Evaluation Software verzija 3.2) simultanim podešavanjem asocijacionih i disocijacionih senzorgrama. Ravnotežna konstanta disocijacije (Kd) je izračunata kao odnos koff/kon. Pogledajte npr. Chen et al., J. Mol. Biol.293:865-881 (1999)
Prema drugoj realizaciji, Kd je izmerena pomoću testa površinske plazmonske rezonance, BIACORE®-2000 uređajem (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) na 25°C pomoću kompleta sa anti-humanim Fc (BiAcore Inc., Piscataway, NJ). Ukratko, biosenzorski čipovi sa karboksimetilovanim dekstranom (CM5, BIACORE, Inc.) aktivirani su pomoću N-etil-N’-(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid hidrohlorida (EDC) i N-hidroksisukcinimida (NHS) prema uputstvu dobavljača. Anti-humano Fc antitelo je razblaženo 10 mM natrijum acetatom, pH 4,0, do 50 μg/ml pre injektovanja pri protoku od 5 μl/minut da bi se dobilo oko 10.000 jedinica odgovora (RU) kuplovanog proteina. Nakon injektovanja antitela, injektovan je 1 M etanolamin da blokira neizreagovale grupe. Za kinetička merenja, varijante anti-KMB-R antitela su injektovane u HBS-P da se postigne oko 220 RU, a zatim su dvostruka serijska razblaženja KMB-R-His (0,61 nM do 157 nM) injektovana u HBS-P na 25°C pri protoku od oko 30 μl/min. Brzine asocijacije (kon) i brzine disocijacije (koff) su izračunate pomoću jednostavnog jedan-na-jedan Lengmirovog modela vezivanja (BIACORE ® Evaluation Software verzija 3.2) simultanim podešavanjem asocijacionih i disocijacionih senzorgrama. Ravnotežna konstanta disocijacije (Kd) je izračunata kao odnos koff/kon. Pogledajte npr. Chen et al., J. Mol. Biol.293:865-881 (1999).
Surogat merenja za afinitet jednog ili više antitela prema KMB-R je polovina njegove maksimalne inhibitorske koncentracije (IC50), što pokazuje koliko je antitela potrebno da inhibira vezivanje poznatog KMB-R liganda za KMB-R za 50%. Nekoliko postupaka za određivanje IC50 za dato jedinjenje poznato je u struci; uobičajeni pristup je da se uradi test kompetitivnog vezivanja, kao što je onaj koji je ovde opisan u primerima, tj. vezano za Sliku 2A. U principu, velika vrednost IC50 ukazuje da je potrebno više antitela za inhibiciju vezivanja poznatog liganda, a time da je afinitet antitela prema tom ligandu relativno mali. Obrnuto, mala vrednost IC50 ukazuje da je potrebna manja količina antitela za inhibiciju vezivanja poznatog liganda, a time i da je afinitet antitela prema tom ligandu relativno veliki.
Primer za kompetitivni ELISA test za merenje IC50 je onaj u kome se koriste rastuće koncentracije anti-TfR ili anti-TfR/moždani antigen (tj. anti-TfR/BACE1, anti-TfR/Abeta i slično) varijanti antitela koja se takmiče sa biotinilizovanim TfR<A>u vezivanju za TfR. Anti-TfR kompetitivni ELISA test izveden je na Maxisorp pločama (Neptune, N.J.) prevučenim sa 2,5 µg/ml prečišćenog mišjeg TfR ekstracelularnog domena u PBS-u na 4ºC preko noći. Ploče su isprane sa PBS/0,05% Tween 20 i blokirane pomoću Superblock pufera za blokiranje u PBS-u (Thermo Scientific, Hudson, NH). Svaki pojedinačni titrirani anti-TfR ili anti-TfR/moždani antigen (tj. anti-TfR/BACE1 ili anti-TfR/Abeta) (serijsko razblaženje 1:3) kombinovan je sa biotinilizovanim anti-TfR<A>(krajnja koncentracija 0,5 nM) i dodat na ploču, 1 sat na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane sa PBS/0,05% Tween 20, i HRP-streptavidin (Southern Biotech, Birmingham) je dodat na ploču i inkubacija je trajala 1 sat na sobnoj temperaturi. Ploče su isprane sa PBS/0,05% Tween 20, i biotinilizovani anti-TfR<A>vezan za ploču je detektovan pomoću TMB supstrata (BioFX Laboratories, Owings Mills).
U jednoj realizaciji, anti-KMB-R antitelo malog afiniteta ovde je povezano sa obeleživačem i/ili lekom za neurološki poremećaj ili agensom za imidžing, kako bi se obeleživač i/ili lek za neurološki poremećaj ili agens za imidžing efikasnije transportovali kroz KMB. Takvo vezivanje može se postići pomoću hemijskih kros-linkera ili stvaranjem fuzionih proteina itd.
Kovalentno vezivanje može biti direktno ili preko linkera. U pojedinim realizacijama, direktna veza je konstrukcijom proteinske fuzije (tj. genetskom fuzijom dva gena koji šifriraju KMB-R antitelo i lek za neurološki poremećaj i ekspresijom kao jedan protein). U pojedinim realizacijama, direktna veza je stvaranjem kovalentne veze između reaktivne grupe na jednom od dva dela anti-KMB-R antitela i odgovarajuće grupe ili akceptora na neurološkom leku. U pojedinim realizacijama, direktna veza je modifikacijom (tj. genetskom modifikacijom) jednog od dva molekula koji treba da se vežu da se obuhvati reaktivna grupa (kao neograničavajući primeri, sulfhidrilna grupa ili karboksilna grupa) koja formira kovalentnu vezu sa drugim molekulom koji treba da se veže pod odgovarajućim uslovima. Kao jedan neograničavajući primer, molekul (tj. aminokiselina) sa željenom reaktivnom grupom (tj. cisteinskim ostatkom) može biti uveden u npr. anti-KMB-R antitelo, i formirana disulfidna veza sa neurološkim lekom. Postupci za kovalentno vezivanje nukleinskih kiselina za proteine takođe su poznati u struci (tj. foto umrežavanje, pogledajte, npr. Zatsepin et al. Russ. Chem. Rev.74: 77-95 (2005)). Nekovalentno vezivanje može biti bilo kojim nekovalentnim načinom vezivanja, uključujući hidrofobne veze, jonske veze, elektrostatičke interakcije i slično, kao što će shvatiti stručnjaci sa uobičajenim znanjem iz ove oblasti. Vezivanje takođe može biti izvršeno pomoću raznovrsnih linkera. Na primer, anti-KMB-R antitelo i neurološki lek mogu se povezati pomoću raznovrsnih bifunkcionalnih agenasa za kuplovanje proteina, kao što je N-sukcinimidil-3-(2-piridilditio) propionat (SPDP), sukcinimidil-4-(N-maleimidometil) cikloheksan-1-karboksilat (SMCC), iminotiolan (IT), bifunkcionalni derivati imidoestara (kao što je dimetil adipimidat HCl), aktivni estri (kao što je disukcinimidil suberat), aldehidi (kao glutaraldehid), bis-azido jedinjenja (kao bis (p-azidobenzoil) heksandiamin), bis-diazonijum derivati (kao bis-(p-diazonijumbenzoil)-etilendiamin), diizocijanati (kao toluen 2,6-diizocijanat) i bis-aktivna jedinjenja fluora (kao 1,5-difluor-2,4-dinitrobenzen). Peptidni linkeri, koji se sastoje od jedne do dvadeset aminokiselina povezanih peptidnim vezama, mogu takođe da se koriste. U nekim takvim realizacijama, aminokiseline su izabrane od dvadeset aminokiselina koje postoje u prirodi. U nekim drugim takvim realizacijama, jedna ili više aminokiselina je izabrana između glicina, alanina, prolina, asparagina, glutamina i lizina.
Linker može biti "raskidivi linker", koji olakšava oslobađanje neurološkog leka nakon isporuke u mozak. Na primer, mogu da se koriste kiselo-labilni linker, linker osetljiv na peptidazu, fotolabilni linker, dimetil linker ili linker koji sadrži disulfid (Chari et al., Cancer Res.52:127-131 (1992); U.S. Patent No.5,208,020).
Pronalazak ovde izričito razmatra, ali nije ograničen na, konjugate dobijene sa reagensima za umrežavanje, uključujući, ali se ne ograničavajući na, BMPS, EMCS, GMBS, HBVS, LC-SMCC, MBS, MPBH, SBAP, SIA, SIAB, SMCC, SMPB, SMPH, sulfo-EMCS, sulfo-GMBS, sulfo-KMUS, sulfo-MBS, sulfo-SIAB, sulfo-SMCC i sulfo-SMPB, i SVSB (sukcinimidil-(4-vinilsulfon)benzoat) koji su komercijalno dostupni (npr. od kompanije Pierce Biotechnology, Inc., Rockford, IL., U.S.A).
Za neuropatski poremećaj može biti izabran neurološki lek koji je analgetik, uključujući, ali se ne ograničavajući na, narkotik/opioidni analgetik (tj. morfin, fentanil, hidrokodon, meperidin, metadon, oksimorfon, pentazocin, propoksifen, tramadol, kodein i oksikodon), nesteroidni anti-inflamatorni lek (NSAIL) (tj. ibuprofen, naproksen, diklofenak, diflunisal, etodolak, fenoprofen, flurbiprofen, indometacin, ketorolak, mefenaminska kiselina, meloksikam, nabumeton, oksaprozin, piroksikam, sulindak i tolmetin), kortikosteroid (tj. kortizon, prednizon, prednizolon, deksametazon, metilprednizolon i triamcinolon), antimigrenski agens (tj. sumatriptin, almotriptan, frovatriptan, sumatriptan, rizatriptan, eletriptan, zolmitriptan, dihidroergotamin, eletriptan i ergotamin), acetaminofen, salicilat (tj. aspirin, holin salicilat, magnezijum salicilat, diflunisal i salsalat), antiepileptik (tj. karbamazepin, klonazepam, gabapentin, lamotrigin, pregabalin, tiagabin i topiramat), anestetik (tj. izofluran, trihlretilen, halotan, sevofluran, benzokain, hlorprokain, kokain, ciklometikain, dimetokain, propoksikain, prokain, novokain, proparakain, tetrakain, artikain, bupivakain, kartikain, sinhokain, etidokain, levobupivakain, lidokain, mepivakain, piperokain, prilokain, ropivakain, trimekain, saksitoksin i tetrodotoksin), i cox-2-inhibitor (tj. selekoksib, rofekoksib i valdekoksib). Za neuropatski poremećaj koji uključuje vrtoglavicu, može biti izabran neurološki lek koji je lek protiv vrtoglavice, uključujući, ali se ne ograničavajući na, meklizin, difenhidramin, prometazin i diazepam. Za neuropatski poremećaj koji uključuje mučninu, može biti izabran neurološki lek koji je lek protiv mučnine, uključujući, ali se ne ograničavajući na, prometazin, hlorpromazin, prohlorperazin, trimetobenzamid i metoklopramid. Za neurodegenerativne bolesti može biti izabran neurološki lek koji je hormon rasta ili neurotrofni faktor; primeri uključuju, ali se ne ograničavaju na neurotrofni moždani faktor (BDNF), nervni faktor rasta (NGF), neurotrofin-4/5, faktor rasta fibroblasta (FGF)-2 i druge FGF, neurotrofin (NT)-3, eritropoetin (EPO), faktor rasta hepatocita (HGF), epidermalni faktor rasta (EGF), transformišući faktor rasta (TGF)-alfa, TGF-beta, vaskularni endotelijalni faktor rasta (VEGF), interleukin-1 receptor antagonist (IL-1ra), cilijarni neurotrofni faktor (CNTF), glijalni neurotrofni faktor (GDNF), neurturin, trombocitni faktor rasta (PDGF), heregulin, neuregulin, artemin, persefin, interleukine, glijalni neurotrofni faktor poreklom iz ćelijskih linija (GFR), faktor stimulacije kolonija granulocita (CSF), CSF granulocita-makrofaga, netrine, kardiotrofin-1, ježeve, faktor inhibicije leukemije (LIF), midkin, pleiotrofin, koštane morfogenetičke proteine (BMP), netrine, saposine, semaforine i faktor matičnih ćelija (SCF).
Za kancer može biti izabran neurološki lek koji je hemoterapeutski agens. Primeri hemoterapeutskih agenasa uključuju alkilujuće agense, kao što je tiotepa i CYTOXAN® ciklosfosfamid; alkil sulfonate kao što je busulfan, improsulfan i piposulfan; aziridine kao što je benzodopa, karbokvon, meturedopa i uredopa; etilenimine i metilamelamine, uključujući altretamin, trietilenmelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosfor-amid i trimetilolomelamin; acetogenine (naročito bulatacin i bulatacinon); delta-9-tetrahidrokanabinol (dronabinol, MARINOL®); beta-lapahon; lapahol; kolhicine; betulinsku kiselinu; kamptotecin (uključujući sintetičke analoge topotekan (HYCAMTIN®), CPT-11 (irinotekan, CAMPTOSAR®), acetilkamptotecin, skopolektin i 9-aminokamptotecin); briostatin; kalistatin; CC-1065 (uključujući njegove sintetičke analoge adozelesin, karzelesin i bizelesin); podofilotoksin; podofilinsku kiselinu; tenipozid; kriptoficine (naročito kriptoficin 1 i kriptoficin 8); dolastatin; duokarmicin (uključujući sintetičke analoge, KW-2189 i CB1-TM1); eleuterobin; pankratistatin; sarkodiktin; spongistatin; azotne iperite kao što je hlorambucil, hlornafazin, holofosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembicin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil iperit; nitrozouree kao što je karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin i ranimnustin; antibiotike kao što su endiinski antibiotici (npr. kaliheamicin, naročito kaliheamicin gama1I i kaliheamicin omegaI1 (pogledajte, npr. Agnew, Chem Intl. Ed. Engl., 33: 183-186 (1994)); dinemicin, uključujući dinemicin A; esperamicin; kao i neokarzinostatin hromofor i povezane hromofore hromoproteina endiinskih antibiotika), aklacinomisine, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicine, kaktinomicin, karabicin, karminomicin, karzinofilin, hromomicine, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, ADRIAMYCIN® doksorubicin (uključujući morfolino-doksorubicin, cijanomorfolino-doksorubicin, 2-pirolino-doksorubicin i deoksidoksorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicine kao što je mitomicin C, mikofenolnu kiselinu, nogalamicin, olivomicine, peplomicin, potfiromicin, puromicin, kvelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; anti-metabolite kao što je metotreksat i 5-fluoruracil (5-FU); analoge folne kiseline kao što je denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; purinske analoge kao što je fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, tioguanin; pirimidinske analoge kao što je ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin; androgene kao što je kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; anti-adrenale kao što je aminoglutetimid, mitotan, trilostan; obnavljač folne kiseline kao što je frolinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolevulinska kiselina; eniluracil; amsakrin; bestrabucil; bisantren; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikvon; elfornitin; eliptinijum acetat; epotilon; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiurea; lentinan; lonidainin; maitanzinoide kao što je maitanzin i ansamitocine; mitoguazon; mitoksantron; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; lozoksantron; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK® polisaharidni kompleks (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoksan; rizoksin; sizofiran; spirogermanijum; tenuazonska kiselina; triazikvon; 2,2’,2”-trihlortrietilamin; trihotecene (naročito T-2 toksin, verakurin A, roridin A i anguidin); uretan; vindezin (ELDISINE®, FILDESIN®); dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinozid (“Ara-C”); tiotepa; taksoide, npr. TAXOL® paklitaksel (Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANETM bez kremofora, nanočestičnu formulaciju paklitaksela dizajniranu pomoću albumina (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Illinois) i TAXOTERE® doksetaksel (Rhône-Poulenc Rorer, Antony, France); hloranbucil; gemcitabin (GEMZAR®); 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; platinske analoge kao što je cisplatin i karboplatin; vinblastin (VELBAN®); platinu; etoposid (VP-16); ifosfamid; mitoksantron; vinkristin (ONCOVIN®); oksaliplatin; leukovovin; vinorelbin (NAVELBINE®); novantron; edatreksat; daunomicin; aminopterin; ibandronat; inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluormetlilornitin (DMFO); retinoide kao što je retinonska kiselina; kapecitabin (XELODA®); farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate svega gore nabrojanog; kao i kombinacije dva ili više gorepomenutih jedinjenja, kao što je CHOP, što je skraćenica za kombinovanu terapiju ciklofosfamid, doksorubicin, vinkristin i prednizolon, i FOLFOX, što je skraćenica za režim lečenja oksaliplatinom (ELOXATINTM) u kombaciji sa 5-FU i leukovovinom.
U ovu definiciju hemoterapeutskih agenasa takođe su uključeni anti-hormonski agensi čije dejstvo reguliše, smanjuje, blokira ili inhibira dejstvo hormona koji mogu da podstiču rast kancera, i često su u obliku sistemskog lečenja, ili lečenja za ceo organizam. Oni takođe mogu biti hormoni. Primeri uključuju anti-estrogene i selektivne modulatore estrogenskog receptora (SERM), uključujući, na primer, tamoksifen (uključujući NOLVADEX® tamoksifen), EVISTA® raloksifen, droloksifen, 4-hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY117018, onapriston i FARESTON® toremifen; anti-progesterone; regulatore smanjenja estrogenskog receptora (ERD); agense koji deluju tako što suzbijaju ili zatvaraju jajnike, na primer, agoniste hormona za oslobađanje leutinizujućeg hormona (LHRH) kao što je LUPRON® iELIGARD® leuprolid acetat, goserelin acetat, buserelin acetat i tripterelin; druge anti-androgene kao što je flutamid, nilutamid i bikalutamid; i inhibitore aromataze koji inhibiraju enzim aromatazu, koji reguliše proizvodnju estrogena u nadbubrežnim žlezdama, kao što su, na primer, 4(5)-imidazoli, aminoglutetimid, MEGASE® megestrol acetat, AROMASIN® eksemestan, formestanie, fadrozol, RIVISOR® vorozol, FEMARA® letrozol i ARIMIDEX® anastrozol. Pored toga, takva definicija hemoterapeutskih agenasa uključuje bisfosfonate kao što je klodronat (na primer, BONEFOS® ili OSTAC®), DIDROCAL® etidronat, NE-58095, ZOMETA® zoledronska kiselina/zoledronat, FOSAMAX® alendronat, AREDIA® pamidronat, SKELID® tiludronat ili ACTONEL® risedronat; kao i troksacitabin (citozinski analog 1,3-dioksolanskog nukleozida); antisens oligonukleotide, naročito one koji inhibiraju ekspresiju gena na signalnim putevima koji učestvuju u aberantnoj ćelijskoj proliferaciji, kao što je, na primer, PKC-alfa, Raf, H-Ras i receptor epidermalnog faktora rasta (EGF-R); vakcine, kao što je THERATOPE® vakcina i vakcine za gensku terapiju, na primer, ALLOVECTIN® vakcina, LEUVECTIN® vakcina i VAXID® vakcina; LURTOTECAN® inhibitor topoizomeraze 1; ABARELIX® rmRH; lapatinib ditozilat (ErbB-2 i EGFR dvojna tirozin kinaza inhibitor malih molekula, takođe poznata kao GW572016); i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate svega gore navedenog.
Druga grupa jedinjenja koja mogu biti izabrana kao neurološki lekovi za lečenje ili prevenciju kancera su antitumorski imunoglobulini (uključujući, ali se ne ograničavajući na, trastuzumab, bevacizumab, alemtuksumab, cetuksimab, gemtuzumab ozogamicin, ibritumomab tiuksetan, panitumumab i rituksimab). U nekim slučajevima, antitela povezana sa toksičnim obeleživačem mogu se upotrebiti da ciljaju i usmrte željene ćelije (tj. ćelije kancera), uključujući, ali se ne ograničavajući na, tositumomab sa<131>I radiološkim obeleživačem.
Za bolest ili poremećaj očiju, neurološki lek može biti izabran tako da bude antiangiogeni oftalmološki agens (tj. bevacizumab, ranibizumab i pegaptanib), oftalmološki glaukomski agens (tj. karbahol, epinefrin, demekarijum bromid, apraklonidin, brimonidin, brinzolamid, levobunolol, timolol, betaksolol, dorzolamid, bimatoprost, karteolol, metipranolol, dipivefrin, travoprost i latanoprost), inhibitor ugljene anhidraze (tj. metazolamid i acetazolamid), oftalmološki antihistaminik (tj. nafazolin, fenilefrin i tetrahidrozolin), očni lubrikant, oftalmološki steroid (tj. fluormetolon, prednizolon, loteprednol, deksametazon, difluprednat, rimeksolon, fluocinolon, medrizon i triamcinolon), oftalmološki anestetik (tj. lidokain, proparakain i tetrakain), oftalmološki anti-infektiv (tj. levofloksacin, gatifloksacin, ciprofloksacin, moksifloksacin, hloramfenikol, bacitracin/polimiksin b, sulfacetamid, tobramicin, azitromicin, besifloksacin, norfloksacin, sulfisoksazol, gentamicin, idoksuridin, eritromicin, natamicin, gramicidin, neomicin, ofloksacin, trifluridin, ganciklovir, vidarabin), oftalmološki anti-inflamatorni agens (tj. nepafenak, ketorolak, flurbiprofen, suprofen, ciklosporin, triamcinolon, diklofenak i bromfenak), oftalmološki antihistaminik ili dekongestant (tj. ketotifen, olopatadin, epinastin, nafazolin, kromolin, tetrahidrozolin, pemirolast, bepotastin, nafazolin, fenilefrin, nedokromil, lodoksamid, fenilefrin, emedastin i azelastin).
Za poremećaj povezan sa epileptičnim napadom može biti izabran neurološki lek koji je antikonvulziv ili antiepileptik, uključujući, ali se ne ograničavajući na, barbiturat antikonvulzive (tj. primidon, metarbital, mefobarbital, alobarbital, amobarbital, aprobarbital, alfenal, barbital, bralobarbital i fenobarbital), benzodiazepinske antikonvulzive (tj. diazepam, klonazepam, i lorazepam), karbamatne antikonvulzive (tj. felbamat), antikonvulzive inhibitore ugljene anhidraze (tj. acetazolamid, topiramat i zonisamid), dibenzazepinske antikonvulzive (tj. rufinamid, karbamazepin i okskarbazepin), antikonvulzive derivate masnih kiselina (tj. divalproeks i valproinska kiselina), analoge gama-aminobuterne kiseline (tj. pregabalin, gabapentin i vigabatrin), inhibitore ponovnog preuzimanja gama-aminobuterne kiseline (tj. tiagabin), inhibitore transaminaze gama-aminobuterne kiseline (tj. vigabatrin), hidantoinske antikonvulzive (tj. fenitoin, etotoin, fosfenitoin i mefenitoin), mešovite antikonvulzive (tj. lakozamid i magnezijum sulfat), progestine (tj. progesteron), oksazolidindionske antikonvulzive (tj. parametadion i trimetadion), pirolidinske antikonvulzive (tj. levetiracetam), sukcinimidne antikonvulzive (tj. etosuksimid i metsuksimid), triazinske antikonvulzive (tj. lamotrigin) i antikonvulzive derivate uree (tj. fenacemid i feneturid).
Kod lizozomske bolesti nakupljanja, neurološki lek može biti izabran tako da bude enzim, ili da podražava aktivnost enzima koji je oštećen zbog bolesti. Primeri rekombinantnih enzima za lečenje poremećaja nakupljanja lizozoma uključuju, ali se ne ograničavaju na one koji su navedeni npr. u U.S. Patent Application publication no. 2005/0142141 (tj. alfa-L-iduronidaza, iduronat-2-sulfataza, N-sulfataza, alfa-N-acetilglukozaminidaza, N-acetilgalaktozamin-6-sulfataza, beta-galaktozidaza, arilsulfataza B, beta-glukuronidaza, kisela alfaglukozidaza, glukocerebrozidaza, alfa-galaktozidaza A, heksozaminidaza A, kisela sfingomijelinaza, beta-galaktocerebrozidaza, beta-galaktozidaza, arilsulfataza A, kisela ceramidaza, aspartoacilaza, palmitoil-protein tioesteraza 1 i tripeptidil amino peptidaza 1).
Za amiloidozu može biti izabran neurološki lek koji uključuje, ali se ne ograničava na, antitelo ili drugi vezujući molekul (uključujući, ali se ne ograničavajući na mali molekul, peptid, aptamer ili drugi vezivač proteina) koji se specifično vezuje za cilj izabran od: beta sekretaze, tau, presenilina, amiloid prekursor proteina ili njegovih delova, amiloid beta peptida ili njegovih oligomera ili fibrila, receptora smrti 6 (DR6), receptora za krajnje proizvode glikacije (RAGE), parkina i hantingtina; inhibitora holinesteraze (tj. galantamin, donepezil, rivastigmin i takrin); NMDA receptor antagonista (tj. memantin), agensa za iscrpljivanje monoamina (tj. tetrabenazin); ergoloid mezilata; antiholinergijskog antiparkinsonika (tj. prociklidin, difenhidramin, triheksilfenidil, benztropin, biperiden i triheksifenidil); dopaminergičkog antiparkinsonika (tj. entakapon, selegilin, pramipeksol, bromokriptin, rotigotin, selegilin, ropinirol, rasagilin, apomorfin, karbidopa, levodopa, pergolid, tolkapon i amantadin); tetrabenazina; anti-inflamatornog leka (uključujući, ali se ne ograničavajući na, nesteroidni anti-inflamatorni lek (tj. indometicin i druga gore nabrojana jedinjenja); hormona (tj. estrogen, progesteron i leuprolid); vitamina (tj. folat i nikotinamid); dimebolina; homotaurina (tj. 3-aminopropansulfonska kiselina; 3APS); modulatora aktivnosti serotoninskog receptora (tj. ksaliproden); interferona i glukokortikoida.
Za virusne bolesti ili bolesti izazvane mikroorganizmima, neurološki lek može biti izabran iz grupe koja uključuje, ali se ne ograničava na, antivirusno jedinjenje (uključujući, ali se ne ograničavajući na, adamantanska antivirusna jedinjenja (tj. rimantadin i amantadin), antivirusni interferon (tj. peginterferon alfa-2b), antagonist receptora hemokina (tj. maravirok), inhibitor integraze (tj. raltegravir), inhibitor neuraminidaze (tj. oseltamivir i zanamivir), nenukleozidni inhibitor reversne transkriptaze (tj. efavirenz, etravirin, delavirdin i nevirapin), nukleozidni inhibitor reversne transkriptaze (tenofovir, abakavir, lamivudin, zidovudin, stavudin, entekavir, emtricitabin, adefovir, zalcitabin, telbivudin i didanozin), inhibitor proteaze (tj. darunavir, atazanavir, fosamprenavir, tipranavir, ritonavir, nelfinavir, amprenavir, indinavir i sakvinavir), purinski nukleozid (tj. valaciklovir, famciklovir, aciklovir, ribavirin, ganciklovir, valganciklovir i cidofovir) i mešane antivirotike (tj. enfuvirtid, foskarnet, palivizumab i fomivirsen)), antibiotik (uključujući, ali se ne ograničavajući na, aminopenicilin (tj. amoksicilin, ampicilin, oksacilin, nafcilin, kloksacilin, dikloksacilin, flukoksacilin, temocilin, azlocilin, karbenicilin, tikarcilin, mezlocilin, piperacilin i bacampicilin), cefalosporin (tj. cefazolin, cefalksin, cefalotin, cefamandol, ceftriakson, cefotaksim, cefpodoksim, ceftazidim, cefadroksil, cefradin, lorakarbef, cefotetan, cefuroksim, cefprozil, cefaklor i cefoksitin), karbapenem/penem (tj. imipenem, meropenem, ertapenem, faropenem i doripenem), monobaktam (tj. aztreonam, tigemonam, norkardicin A i tabtoksinin-beta-laktam, inhibitor beta-laktamaze (tj. klavulanska kiselina, tazobaktam i sulbaktam) u vezi sa drugim beta-laktamskim antibiotikom, aminoglikozid (tj. amikacin, gentamicin, kanamicin, neomicin, netilmicin, streptomicin, tobramicin i paromomicin), ansamicin (tj. geldanamicin i herbimicin), karbacefem (tj. lorakarbef), glikopeptide (tj. teikoplanin i vankomicin), makrolid (tj. azitromicin, klaritromicin, diritromicin, eritromicin, roksitromicin, troleandomicin, telitromicin i spektinomicin), monobaktam (tj. aztreonam), kvinolon (tj. ciprofloksacin, enoksacin, gatifloksacin, levofloksacin, lomefloksacin, moksifloksacin, norfloksacin, ofloksacin, trovafloksacin, grepafloksacin, sparfloksacin i temafloksacin), sulfonamid (tj. mafenid, sulfonamidohrisoidin, sulfacetamid, sulfadiazin, sulfametizol, sulfanilamid, sulfasalazin, sulfisoksazol, trimetoprim, trimetoprim i sulfametoksazol), tetraciklin (tj. tetraciklin, demeklociklin, doksiciklin, minociklin i oksitetraciklin), antineoplastični ili citotoksični antibiotik (tj. doksorubicin, mitoksantron, bleomicin, daunorubicin, daktinomicin, epirubicin, idarubicin, plikamicin, mitomicin, pentostatin i valrubicin) i mešovita antibakterijska jedinjenja (tj. bacitracin, kolistin i polimiksin B)), antifungalni agens (tj. metronidazol, nitazoksanid, tinidazol, hlorokvin, jodokvinol i paromomicin) i antiparazitik (uključujući, ali se ne ograničavajući na, kinin, hlorokvin, amodiakvin, pirimetamin, sulfadoksin, proguanil, meflokvin, atovakvon, primakvin, artemezinin, halofantrin, doksiciklin, klindamicin, mebendazol, pirantel pamoat, tiabendazol, dietilkarbamazin, ivermektin, rifampin, amfotericin B, melarsoprol, efornitin i albendazol).
Za ishemiju, neurološki lek može biti izabran iz grupe koja uključuje, ali se ne ograničava na, trombolitik (tj. urokinazu, alteplazu, reteplazu i tenekteplazu), inhibitor agregacije trombocita (tj. aspirin, cilostazol, klopidogrel, prasugrel i dipiridamol), statin (tj. lovastatin, pravastatin, fluvastatin, rosuvastatin, atorvastatin, simvastatin, cerivastatin i pitavastatin) i jedinjenje koje poboljšava protok krvi ili elastičnost krvnih sudova, uključujući npr. lekove za krvni pritisak.
Za poremećaje ponašanja, neurološki lek može biti izabran od jedinjenja koja modifikuju ponašanje, uključujući, ali se ne ograničavajući na, atipični antipsihotik (tj. risperidon, olanzapin, apripiprazol, kvetiapin, paliperidon, asenapin, klozapin, iloperidon i ziprasidon), fenotiazinski antipsihotik (tj. prohlorperazin, hlorpromazin, flufenazin, perfenazin, trifluoperazin, tioridazin i mesoridazin), tioksanten (tj. tiotiksen), mešoviti antipsihotik (tj. pimozid, litijum, molindon, haloperidol i loksapin), selektivni inhibitor preuzimanja serotonina (tj. citalopram, escitalopram, paroksetin, fluoksetin i sertralin), inhibitor preuzimanja serotonina-norepinefrina (tj. duloksetin, venlafaksin, desvenlafaksin, triciklični antidepresiv (tj. doksepin, klomipramin, amoksapin, nortriptilin, amitriptilin, trimipramin, imipramin, protriptilin i desipramin), tetraciklični antidepresiv (tj. mirtazapin i maprotilin), fenilpiperazinski antidepresiv (tj. trazodon i nefazodon), inhibitor monoamin oksidaze (tj. izokarboksazid, fenelzin, selegilin i tranilcipromin), benzodiazepin (tj. alprazolam, estazolam, flurazeptam, klonazepam, lorazepam i diazepam), inhibitor preuzimanja norepinefrina-dopamina (tj. bupropion), CNS stimulans (tj. fentermin, dietilpropion, metamfetamin, dekstroamfetamin, amfetamin, metilfenidat, deksmetilfenidat, lisdeksamfetamin, modafinil, pemolin, fendimetrazin, benzfetamin, fendimetrazin, armodafinil, dietilpropion, kafein, atomoksetin, doksapram i mazindol), anksiolitik/sedativ/hipnotik (uključujući, ali se ne ograničavajući na, barbiturat (tj. sekobarbital, fenobarbital i mefobarbital), benzodiazepin (kao što je gore opisano) i mešoviti anksiolitik/sedativ/hipnotik (tj. difenhidramin, natrijum oksibat, zaleplon, hidroksizin, hloral hidrat, aolpidem, buspiron, doksepin, eszopiklon, ramelteon, meprobamat i etklorvinol)), sekretin (pogledajte, npr. Ratliff-Schaub et al. Autism 9: 256-265 (2005)), opioidni peptid (pogledajte, npr. Cowen et al., J. Neurochem. 89:273-285 (2004)), i neuropeptid (pogledajte, npr. Hethwa et al. Am. J. Physiol. 289: E301-305 (2005)).
Za upalu CNS-a, može biti izabran neurološki lek koji deluje na samu upalu (tj. nesteroidni anti-inflamatorni agens kao što je ibuprofen ili naproksen), ili koji leči osnovni uzrok upale (tj.anti-virusni ili antitumorski agens).
Prema jednoj realizaciji pronalaska, "kuplovanje" se postiže stvaranjem multispecifičnog antitela (npr. bispecifičnog antitela). Multispecifična antitela su monoklonska antitela koja imaju sposobnost specifičnog vezivanja za najmanje dva različita mesta. U jednoj realizaciji, multispecifično antitelo uključuje prvo mesto vezivanja antigena koje vezuje KMB-R, i drugo mesto vezivanja antigena koje vezuje moždani antigen, kao što je beta-sekretaza 1 (BACE1) ili Abeta, i drugi ovde objavljeni moždani antigeni.
Primer moždanog antigena koji vezuje takvo multispecifično/bispecifično antitelo je BACE1, a primer antitela koje je tu vezano je YW412.8.31 antitelo na Sl.5a-b ovde.
U drugoj realizaciji, moždani antigen je Abeta, a primeri takvih antitela su opisani u WO2007068412, WO2008011348, WO20080156622 i WO2008156621, sa primerom Abeta antitela koje sadrži IgG4 MABT5102A antitelo koje sadrži aminokiselinske sekvence teškog i lakog lanca na Sl.7a, odnosno 7b.
Tehnike za dobijanje multispecifičnih antitela uključuju, ali se ne ograničavaju na, rekombinantnu ko-ekspresiju dva imunoglobulinska para teški lanac-laki lanac koji imaju različite specifičnosti (pogledajte: Milstein and Cuello, Nature 305: 537 (1983)), WO 93/08829 i Traunecker et al., EMBO J.10: 3655 (1991)) i "knob-in-hole" inženjerstvo (pogledajte npr. U.S. Patent No. 5,731,168). Multispecifična antitela mogu takođe da se dobiju pomoću dizajniranja elektrostatičkih sternih efekata za dobijanje antitela koja su Fc-heterodimerni molekuli (WO 2009/089004A1); unakrsnim vezivanjem dva ili više antitela ili fragmenata (pogledajte npr. US Patent No.4,676,980, i Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)); pomoću leucinskih zatvarača, kako bi se proizvela bispecifična antitela (pogledajte npr. Kostelny et al., J. Immunol., 148(5):1547-1553 (1992)); primenom tehnologije "dvostrukih tela" za dobijanje bispecifičnih fragmenata antitela (pogledajte npr. Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 90:6444-6448 (1993)); i primenom jednolančanih Fv (sFv) dimera (pogledajte npr. Gruber et al., J. Immunol., 152:5368 (1994)); i pripremom trispecifičnih antitela kao što je opisano npr. u: Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991).
Dizajnirana antitela sa tri ili više funkcionalnih mesta za vezivanje antigena, uključujući "antitela-hobotnice" ili "imunoglobuline sa dvojnim varijabilnim domenom" (DVD) takođe su ovde obuhvaćena (pogledajte npr. US 2006/0025576A1, i Wu et al. Nature Biotechnology (2007)).
Ovde antitelo ili fragment takođe uključuje "FAb sa dvojnim dejstvom" ili "DAF" koji sadrži antigen-vezujuće mesto koje se vezuje za KMB-R (npr. TfR) kao i moždani antigen (npr. BACE1) (pogledajte US 2008/0069820, na primer).
U jednoj realizaciji, antitelo je fragment antitela, gde su različiti takvi fragmenti izneti u gornjem tekstu.
U drugoj realizaciji, antitelo je netaknuto ili kompletno antitelo. U zavisnosti od aminokiselinske sekvence konstantnog domena njihovih teških lanaca, netaknuta antitela mogu se svrstati u različite klase. Postoji pet glavnih klasa netaknutih antitela: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, a neke od njih mogu dalje da se dele na potklase (izotipove), npr. IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA i IgA2. Konstantni domeni teških lanaca koji odgovaraju različitim klasama antitela zovu se α, δ, ε, γ, odnosno μ. Podjedinične strukture i trodimenzione konfiguracije različitih klasa imunoglobulina su dobro poznate. U jednoj realizaciji, netaknuto antitelo nema efektorsku funkciju.
Tehnike za stvaranje antitela su poznate, a primeri su dati u gornjem tekstu, u delu ovog dokumenta sa definicijama. U jednoj realizaciji, antitelo je himerno, humanizovano ili humano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment.
Dostupne su različite tehnike za određivanje vezivanja antitela za KMB-R. Jedan takav test je test sa imunosorbentom vezanim za enzim (ELISA), kojim se potvrđuje sposobnost vezivanja za humani KMB-R (i moždani antigen). Prema ovom testu, ploče prevučene antigenom (npr. rekombinantnim sKMB-R) inkubiraju se sa uzorkom koji obuhvata anti-KMB-R antitelo i određuje se vezivanje antitela za antigen od interesa.
U jednom aspektu, antitelo iz pronalaska ispitano je da se odredi njegova antigen vezujuća aktivnost, npr. poznatim postupcima kao što je ELISA, vestern blot, itd.
Testovi za ocenu prolaza sistemski primenjenog antitela i druge biološke aktivnosti antitela mogu se sprovesti kao što je objavljeno u primerima, ili kako je poznato za željena antitela protiv moždanog antigena.
Sada će biti opisani primeri testova u kojima multispecifično antitelo vezuje BACE1. Kompetitivni testovi mogu da se koriste za identifikovanje antitela koje se takmiči sa bilo kojim od antitela ili Fab-ova koji su ovde opisani, na primer, YW412.8, YW412.8.31, YW412.8.30, YW412.8.2, YW412.8.29, YW412.8.51, Fab12, LC6, LC9, LC10 za vezivanje za BACE1. U nekim realizacijama, takvo kompetitivno antitelo se vezuje za isti epitop (npr. linearni ili konformacioni epitop) koji je vezalo bilo koje od ovde opisanih antitela ili Fab-ova, na primer, YW412.8, YW412.8.31, YW412.8.30, YW412.8.2, YW412.8.29, YW412.8.51, Fab12, LC6, LC9, LC10. Detaljni primeri postupaka za mapiranje epitopa za koji se vezuje antitelo dati su u: Morris (1996) “Epitope Mapping Protocols,” u Methods in Molecular Biology vol.66 (Humana Press, Totowa, NJ).
U primeru kompetitivnog testa, imobilizovana BACE1 je inkubirana u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo, koje se vezuje za BACE1 (npr. YW412.8, YW412.8.31, YW412.8.30, YW412.8.2, YW412.8.29, YW412.8.51, Fab12, LC6, LC9, LC10), i drugo neobeleženo antitelo, čija sposobnost da se takmiči sa prvim antitelom oko vezivanja za BACE1 se ispituje. Drugo antitelo može da se nalazi u supernatantu hibridoma. Kao kontrola, imobilisana BACE1 je inkubirana u rastvoru koji sadrži prvo obeleženo antitelo, ali ne i drugo neobeleženo antitelo. Nakon inkubacije pod uslovima koji dopuštaju vezivanje prvog antitela za BACE1, višak nevezanog antitela se uklanja, i meri se količina obeleživača vezanog za imobilisanu BACE1. Ako je količina obeleživača vezanog za imobilisanu BACE1 u test uzorku značajno smanjena u odnosu na kontrolni uzorak, to ukazuje da se drugo antitelo takmiči sa prvim antitelom oko vezivanja za BACE1. Pogledajte Harlow and Lane (1988) Antibodies: A Laboratory Manual gl.14 (Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, NY).
U jednom aspektu, dati su testovi za identifikaciju ovih anti-BACE1 antitela koja imaju biološku aktivnost. Biološka aktivnost može da uključi, npr. inhibiciju aktivnosti BACE1 aspartil proteaze. Antitela koja imaju takvu biološku aktivnost in vivo i/ili in vitro su takođe data, npr. kao što je određenjeno homogenom vremenski razdvojenom fluorescencijom (HTRF test) ili testom mikrofluidne kapilarne elektroforeze (MCE) pomoću sintetičkih peptidnih supstrata, ili in vivo na ćelijskim linijama koje ekspimiraju BACE1 supstrate, kao što je APP.
Ovde je antitelo (uključujući multispecifično antitelo) opciono proizvedeno rekombinantnim postupkom u ćeliji domaćinu, transformisanoj sekvencama nukleinskih kiselina koje šifriraju njene teške i lake lance (npr. gde je ćelija domaćin ovde transformisana pomoću jednog ili više vektora koji sadrže nukleinsku kiselinu). Ćelija domaćin je opciono ćelija sisara, na primer ćelija jajnika kineskog hrčka (CHO).
III. Farmaceutske formulacije
Terapeutske formulacije antitela koje se koriste prema predmetnom pronalasku pripremljenje su za čuvanje mešanjem antitela željenog stepena čistoće sa opcionim farmaceutski prihvatljivim nosačima, ekscipiensima ili stabilizatorima (Remington’s Pharmaceutical Sciences 16. izdanje, Osol, A. Ed. (1980)), u obliku liofilizovanih formulacija ili vodenih rastvora. Prihvatljivi nosači, ekscipijensi ili stabilizatori su netoksični za primaoce u primenjenim dozama i koncentracijama, i uključuju pufere, kao što je fosfatni, citratni, i pufere drugih organskih kiselina; antioksidanse, uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (kao što je oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid, benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabene, kao što je metil ili propil paraben; katehol; rezorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide male molekulske mase (manje od 10 ostataka); proteine, kao što je serum albumin, želatin, ili imunoglobulini; hidrofilne polimere, kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline, kao što je glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljene hidrate, uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; helatne agense, kao što je EDTA; šećere, kao što je saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; kontra-jone koji formiraju soli, kao što je natrijum; metalne komplekse (npr, komplekse Zn-protein); i/ili nejonske surfaktante, kao što je TWEEN™, PLURONICS™ ili polietilen glikol (PEG).
Ovde formulacije mogu takođe po potrebi da sadrže više od jednog aktivnog jedinjenja, opciono ona sa komplementarnim aktivnostima koje nemaju suprotan efekat jedna na drugu. Vrsta i efikasne količine takvih lekova, na primer, zavise od količine antitela koja se nalaze u formulaciji i kliničkih parametara ispitanika. O primerima takvih lekova govori se u nastavku.
Aktivni sastojci mogu takođe da se nalaze u mikrokapsulama pripremljenim, na primer, tehnikama koacervacije ili međupovršinske polimerizacije, na primer, hidroksimetilceluloze, odnosno želatinskih mikrokapsula i poli-(metilmetakrilat) mikrokapsula, u koloidnim sistemima za isporuku leka (na primer, lipozomima, albuminskim mikrosferama, mikroemulzijama, nanočesticama i nanokapsulama) ili u makroemulzijama. Takve tehnike su objavljene u: Remington’s Pharmaceutical Sciences 16. izdanje, Osol, A. Ed. (1980).
Mogu se pripremiti preparati sa produženim oslobađanjem. Pogodni primeri preparata sa produženim oslobađanjem uključuju polupropustljive matrice čvrstih hidrofobnih polimera koje sadrže antitelo, a te matrice su u određenom obliku, npr. film ili mikrokapsule. Primeri matrica sa produženim oslobađanjem obuhvataju poliestre, hidrogelove (na primer, poli(2-hidroksietil-metakrilat), ili poli(vinilalkohol)), polilaktide (U.S. Pat. No. 3,773,919), kopolimere L-glutaminske kiseline i γ etil-L-glutamat, nedegradabilni etilen-vinil acetat, degradabilne kopolimere mlečna kiselina-glikolna kiselina, kao što je LUPRON DEPOT™ (injektabilne mikrosfere sastavljene od kopolimera mlečna kiselina-glikolna kiselina i leuprolid acetata) i poli-D-(-)-3-hidroksibuternu kiselinu.
Formulacije koje se koriste za in vivo primenu moraju biti sterilne. To se lako postiže filtracijom kroz sterilne filtracione membrane.
U jednoj realizaciji, formulacija je izotonična.
IV. Terapeutska primena anti-KMB-R antitela
Anti-KMB-R antitela (uključujući multispecifična antitela koja ih sadrže) mogu da se koriste u različitim in vivo postupcima. Na primer, pronalazak daje postupak za transport terapeutskog jedinjenja kroz krvno-moždanu barijeru, uključujući izlaganje anti-KMB-R antitela povezanog sa terapeutskim jedinjenjem (npr. multispecifičnog antitela koje vezuje i KMB-R i moždani antigen) KMB-u, tako da antitelo transportuje terapeutsko jedinjenje koje je za njega vezano kroz KMB. U drugom primeru, pronalazak daje postupak za transport leka za neurološki poremećaj kroz krvno-moždanu barijeru, uključujući izlaganje anti-KMB-R antitela povezanog sa lekom za poremećaj mozga (npr. multispecifičnog antitela koje vezuje i KMB-R i moždani antigen) KMB-u, tako da antitelo transportuje lek za neurološki poremećaj koji je za njega vezan kroz KMB. U jednoj realizaciji, KMB je ovde u sisaru (npr. čoveku), npr. onom koji ima neurološki poremećaj, uključujući, bez ograničenja: Alchajmerovu bolest (AD), moždani udar, demenciju, mišićnu distrofiju (MD), multiplu sklerozu (MS), amiotrofnu lateralnu sklerozu (ALS), cističnu fibrozu, Angelmanov sindrom, Lidlov sindrom, Parkinsonovu bolest, Pikovu bolest, Padžetovu bolest, kancer, traumatsku povredu mozga, itd.
U jednoj realizaciji, neurološki poremećaj je izabran od: neuropatije, amiloidoze, kancera (npr. koji uključuje CNS ili mozak), očne bolesti ili poremećaja, virusne ili mikrobne infekcije, upale (npr. CNS -a ili mozga), ishemije, neurodegenerativne bolesti, epilepsije, poremećaja ponašanja, lizozomske bolesti nakupljanja, itd.
Neuropatski poremećaji su bolesti ili abnormalnosti nervnog sistema koje se karakterišu neodgovarajućom ili nekontrolisanom nervnom signalizacijom, ili potpunim njenim nedostatkom, i uključuju, ali nisu ograničene na, hronični bol (uključujući nociceptivni bol), bol izazvan povredom telesnih tkiva, uključujući bol vezan za kancer, neuropatski bol (bol izazvan abnormalnostima nerava, kičmene moždine ili mozga) i psihogeni bol (u potpunosti ili uglavnom vezan za psihološki poremećaj), glavobolju, migrenu, neuropatiju, kao i simptome i sindrome koji često prate takve neuropatske poremećaje, kao što je vrtoglavica ili mučnina.
Amiloidoze su grupa bolesti i poremećaja vezanih za ekstracelularne proteinske naslage u CNS-u, uključujući, ali se ne ograničavajući na, sekundarnu amiloidozu, amiloidozu vezanu za godine, Alchajmerovu bolest (AD), blago kognitivno oštećenje (MCI), demenciju sa Levijevim telima, Daunov sindrom, naslednu cerebralnu hemoragiju sa amiloidozom (holandski tip); guamski Parkinson-demencija kompleks, cerebralnu amiloidnu angiopatiju, Hantingtonovu bolest, progresivnu supranuklearnu paralizu, multiplu sklerozu; Krojcfeld Jakobovu bolest, Parkinsonovu bolest, prenosivu spongiformnu encefalopatiju, demenciju vezanu za HIV, amiotropnu lateralnu sklerozu (ALS), inkluzioni miozitis (IBM) i očne bolesti povezane sa beta-amiloidnim naslagama (tj. makularnu degeneraciju, optičke neuropatije vezane za drusen i kataraktu).
Kanceri CNS-a karakterišu se aberantnom proliferacijom jedne ili više ćelija CNS-a (tj. nervnih ćelija) i uključuju, ali se ne ograničavaju na, gliom, glioblastom multiforme, meningiom, astrocitom, akustični neurom, hondrom, oligodendrogliom, meduloblastome, gangliogliom, švanom, neurofibrom, neuroblastom i ekstraduralne, intramedularne ili intraduralne tumore.
Očne bolesti ili poremećaji su bolesti ili poremećaji oka, koje se za ove svrhe smatra organom CNS-a podvrgnutom KMB-u. Očne bolesti ili poremećaji uključuju, ali se ne ograničavaju na, poremećaje beonjače, rožnjače, dužice i cilijarnog tela (tj. skleritis, keratitis, čir rožnjače, abraziju rožnjače, snežno slepilo, fotokeratitis, površinsku tačkastu keratopatiju, neovaskularizaciju rožnjače, Fuksovu distrofiju, keratokonus, suvi keratokonjuktivitis, iritis i uveitis), poremećaje sočiva (tj. kataraktu), poremećaje sudovnjače i rožnjače (tj. odvajanje rožnjače, retinoshizu, hipertenzivnu retinopatiju, dijabetsku retinopatiju, retinopatiju, retinopatiju nedonoščadi, starosnu degeneraciju makule, degeneraciju makule (vlažnu ili suvu), epiretinalnu membranu, pigmentni retinitis i edem makule), glaukom, crne tačkice, poremećaje optičkog nerva i vidnih puteva (tj. Leberovu naslednu optičku neuropatiju i drusen optičkog diska), poremećaje očnih mišića/akomodaciju binokularnih pokreta/refrakciju (tj. strabizam, oftalmoparezu, progresivnu eksternu oftalmoplegiju, ezotropiju, egzotropiju, hipermetropiju, kratkovidost, astigmatizam, anizometropiju, dalekovidost i oftalmoplegiju), poremećaje vida i slepilo (tj. ambliopiju, Leverovu kongenitalnu amaurozu, skotom, slepilo za boje, ahromatopsiju, noćno slepilo, slepilo, rečno slepilo i mikro-oftalmiju/kolobom), crvenilo oka, Argajl-Robertsonovu zenicu, keratomikozu, kseroftalmiju i aniridiju.
Virusne ili mikrobne infekcije CNS-a uključuju, ali se ne ograničavaju na, infekcije virusima (tj. virus influence, HIV, poliovirus, rubela, ), bakterijama (tj. Neisseria sp., Streptococcus sp., Pseudomonas sp., Proteus sp., E. coli, S. aureus, Pneumococcus sp., Meningococcus sp., Haemophilus sp. i Mycobacterium tuberculosis) i drugim mikroorganizmima, kao što su gljivice (tj. kvasac, Cryptococcus neoformans), paraziti (tj. Toxoplasma gondii) ili amebe, koje dovode do patofiziologija CNS-a, uključujući, ali bez ograničavanja na, meningitis, encefalitis, mijelitis, vaskulitis i apsces, koji mogu biti akutni ili hronični.
Upala CNS-a je upala izazvana povredom CNS-a, koja može biti fizička povreda (tj. usled nezgode, operacije, traume mozga, povrede kičmene moždine, potresa) ili povreda usled, ili u vezi sa jednom ili više drugih bolesti ili poremećaja CNS-a (tj. apsces, kancer, virusne ili mikrobne infekcije).
Ishemija CNS-a, kao što se ovde upotrebljava, odnosi se na grupu poremećaja vezanih za aberantni protok krvi ili ponašanje krvnih sudova u mozgu, ili uzroke za to, i uključuje, ali se ne ograničava na: fokalnu moždanu ishemiju, globalnu moždanu ishemiju, moždani udar (tj. subarahnoidalnu hemoragiju i intracerebralnu hemoragiju) i aneurizmu.
Neurodegenerativne bolesti predstavljaju grupu bolesti i poremećaja povezanih sa gubitkom funkcije ili umiranjem nervnih ćelija u CNS-u, i uključuju, ali nisu ograničene na: adrenoleukodistrofiju, Aleksanderovu bolest, Alperovu bolest, amiotrofnu lateralnu sklerozu, ataksiju telangiektaziju, Batenovu bolest, Kokejnov sindrom, kortikobazalnu degeneraciju, degeneraciju izazvanu amiloidozom ili povezanu sa njom, Fridrajhovu ataksiju, frontotemporalnu lobarnu degeneraciju, Kenedijevu bolest, multiplu sistemsku atrofiju, multiplu sklerozu, primarnu lateralnu sklerozu, progresivnu supranuklearnu paralizu, spinalnu mišićnu atrofiju, transverzalni mijelitis, Refsumovu bolest i spinocerebelarnu ataksiju.
Epilepsije i epileptični poremećaji CNS-a obuhvataju neodgovarajuće i/ili nenormalno provođenje električnih impulsa u CNS-u, i uključuju, ali se ne ograničavaju na: epilepsiju (tj. apsans napadi, atonični napadi, benigna dečja epilepsija, dečji apsans, klonični napadi, kompleksni parcijalni napadi, epilepsija frontalnog režnja, febrilni napadi, infantilni spazmi, juvenilna mioklonična epilepsija, juvenilna apsans epilepsija, Lenoks-Gastoov sindrom, Landau-Klefnerov sindrom, Dravetov sindrom, Otaharin sindrom, Vestov sindrom, mioklonični napadi, mitohondrijski poremećaji, progresivne mioklonične epilepsije, psihogeni napadi, refleksna epilepsija, Rasmusenov sindrom, jednostavni parcijalni napadi, sekundarno generalizovani napadi, epilepsija temporalnog režnja, toniklonični napadi, tonični napadi, psihomotorni napadi, limbična epilepsija, parcijalni napadi, generalizovani napadi, status epilepticus, abdominalna epilepsija, akinetički napadi, autonomni napadi, masivni bilateralni mioklonus, katamenijalna epilepsija, iznenadni padovi, emocionalni napadi, fokalni napadi, gelastični napadi, Džeksonov marš, Laforina bolest, motorni napadi, multifokalni napadi, noćna epilepsija, fotosenzitivni napad, pseudo napadi, senzorni napadi, suptilni napadi, Rolandova epilepsija, napadi obustavljanja i vizuelno refleksni napadi).
Poremećaji ponašanja su poremećaji CNS-a koje karakteriše nenormalno ponašanje osoba koje su njime pogođene, i uključuju, ali nisu ograničeni na: poremećaje spavanja (tj. nesanicu, parasomnije, noćne more, cirkadijalne poremećaje vezane za spavanje i narkolepsiju), poremećaje raspoloženja (tj. depresiju, suicidalnu depresiju, anksioznost, hronične afektivne poremećaje, fobije, napade panike, opsesivno-kompulsivni poremećaj, poremećaj hiperaktivnosti i nedostatka pažnje (ADHD), poremećaj nedostatka pažnje (ADD), sindrom hroničnog umora, agorafobiju, posttraumatski stresni poremećaj, bipolarni poremećaj), poremećaje ishrane (tj. anoreksiju ili bulimiju), psihoze, razvojne poremećaje ponašanja (tj. autizam, Retov sindrom, Aspergerov sindrom), poremećaje ličnosti i psihotične poremećaje (tj. šizofreniju, deluzione poremećaje, i slično).
Lizozomski poremećaji nakupljanja su metabolički poremećaji koji su u nekim slučajevima vezani sa CNS-om ili imaju simptome specifične za CNS; takvi poremećaji uključuju, ali se ne ograničavaju na: Tej-Saksovu bolest, Gošeovu bolest, Fabrijevu bolest, mukopolisaharidozu (tip I, II, III, IV, V, VI i VII), poremećaj skladištenja glikogena, GM1-gangliozidozu, metahromatsku leukodistrofiju, Farberovu bolest, Kanavanovu leukodistrofiju i neuronske ceroidne lipofuscinoze tip 1 i 2, Niman-Pikovu bolest, Pompeovu bolest i Krabeovu bolest.
U jednom aspektu, antitelo se koristi za detekciju neurološkog poremećaja pre pojave simptoma i/ili za procenu ozbiljnosti ili trajanja bolesti ili poremećaja. U jednom aspektu, antitelo omogućava detekciju i/ili imidžing neurološkog poremećaja, uključujući tehnike radiografije, tomografije ili magnetne rezonance (MR).
U jednom aspektu, dato je antitelo malog afiniteta prema KMB-R-u za upotrebu kao lek. U daljim aspektima, dato je antitelo malog afiniteta prema KMB-R-u za upotrebu u lečenju neurološke bolesti ili poremećaja (npr. Alchajmerove bolesti). U nekim realizacijama, dato je antitelo malog afiniteta prema KMB-R-u za upotrebu u postupku lečenja. U nekim realizacijama, pronalazak daje antitelo malog afiniteta prema KMB-R -u za upotrebu u postupku lečenja pojedinca koji ima neurološku bolest ili poremećaj, uključujući primenu na pojedincu efikasne količine anti-KMB-R antitela (opciono povezanog sa lekom za neurološki poremećaj). U jednoj takvoj realizaciji, postupak dalje uključuje primenu na pojedincu efikasne količine bar jednog dodatnog terapeutskog agensa. U daljim realizacijama, pronalazak daje anti-KMB-R antitelo za primenu u smanjivanju ili inhibiranju stvaranja amiloidnog plaka kod pacijenta kod koga postoji rizik od neurološke bolesti ili poremećaja (npr. Alchajmerove bolesti), ili koji je već oboleo. "Pojedinac" prema bilo kom od gornjih realizacija je opciono čovek. U nekim aspektima, anti-KMB-R antitelo za upotrebu u postupcima iz pronalaska poboljšava prolaz leka za neurološki poremećaj sa kojim je povezano.
U daljem aspektu, pronalazak obezbeđuje upotrebu antitela malog afiniteta protiv KMB-R za proizvodnju ili pripremu leka. U jednoj realizaciji, lek služi za lečenje neurološke bolesti ili poremećaja. U daljoj realizaciji, lek služi za upotrebu u postupku za lečenje neurološke bolesti ili poremećaja, uključujući primenu efikasne količine leka na pojedincu koji ima neurološku bolest ili poremećaj. U jednoj takvoj realizaciji , postupak dalje uključuje primenu efikasne količine bar jednog dodatnog terapeutskog agensa na pojedincu.
U daljem aspektu, pronalazak daje postupak za lečenje Alchajmerove bolesti. U jednoj realizaciji, postupak uključuje davanje efikasne količine multispecifičnog antitela koje vezuje i BACE1 i TfR pojedincu koji ima Alchajmerovu bolest. U jednoj takvoj realizaciji, postupak dalje uključuje primenu efikasne količine bar jednog dodatnog terapeutskog agensa na pojedincu. "Pojedinac" prema bilo kom od gornjih realizacija može biti čovek.
Anti-KMB-R antitela iz pronalaska mogu da se koriste ili sama ili u kombinaciji sa drugim agensom u terapiji. Na primer, anti-KMB-R antitelo iz pronalaska može biti primenjeno zajedno sa bar jednim dodatnim terapeutskim agensom. U nekim realizacijama, dodatni terapeutski agens je terapeutski agens efikasan za lečenje istog ili različitog neurološkog poremećaja kao što je onaj za čije lečenje se koristi anti-KMB-R antitelo. Primeri dodatnih terapeutskih agenasa uključuju, ali se ne ograničavaju na: različite neurološke lekove koji su gore opisani, inhibitore holinesteraze (kao što je donepezil, galantamin, rovastigmin i takrin), antagoniste NMDA receptora (kao što je memantin), inhibitore agregacije amiloid beta peptida, antioksidanse, modulatore γ-sekretaze, imitatore nervnog faktora rasta (NGF) ili NGF gensku terapiju, PPARγ agoniste, inhibitore HMS-CoA reduktaze (statine), ampakine, blokatore kalcijumskih kanala, antagoniste GABA receptora, inhibitore glikogen sintaze kinaze, intravenski imunoglobulin, agoniste muskarinskog receptora, modulatore nikotinskog receptora, aktivnu ili pasivnu imunizaciju amiloid beta peptidom, inhibitore fosfodiesteraze, antagoniste serotoninskog receptora i antitela protiv amiloid beta peptida. U pojedinim realizacijama, najmanje jedan dodatni terapeutski agens je izabran zbog svoje sposobnosti da ublaži jedno ili više neželjenih dejstava neurološkog leka.
Takve kombinovane terapije koje su gore pomenute obuhvataju kombinovanu primenu (gde su dva ili više terapeutskih agenasa obuhvaćeni istom formulacijom, ili različitim formulacijama), i odvojenu primenu, u kom slučaju primena antitela iz pronalaska može da se odigra pre primene dodatnog terapeutskog agensa i/ili adjuvansa, istovremeno sa njim i/ili nakon njegove primene. Antitela iz pronalaska mogu takođe da se koriste u kombinaciji sa drugim interventnim terapijama kao što su, ali bez ograničavanja, radijaciona terapija, bihejvioralna terapija ili druge terapije poznate u struci i prikladne za lečenje ili prevenciju datog neurološkog poremećaja.
Anti-KMB-R antitelo iz pronalaska (i svaki dodatni terapeutski agens) može biti primenjeno na bilo koji pogodan način, uključujući parenteralni, intrapulmonarni i intranazalni, i, ukoliko je poželjno lokalno lečenje, intraleziona primena. Parenteralne infuzije uključuju intramuskularnu, intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu ili subkutanu primenu. Doziranje može biti bilo kojim prikladnim načinom, npr. putem injekcija, kao što su intravenske ili supkutane injekcije, što delimično zavisi od toga da li je primena kratkotrajna ili hronična. Ovde su razmatrani različiti rasporedi doziranja, uključujući, ali se ne ograničavajući na, pojedinačnu ili višestruku primenu u različitim terminima, bolusnu primenu i pulsnu infuziju.
Postupci transportovanja antitela ili njegovog fragmenta kroz krvno-moždanu barijeru zasnovane na lipidima uključuju, ali se ne ograničavaju na, enkapsulaciju antitela ili njegovog fragmenta u lipozome koji su vezani za antitelo-vezujuće fragmente, koji se vezuju za receptore na vaskularnom endotelijumu krvno-moždane barijere (pogledajte npr. U.S. Patent Application Publication No. 20020025313), i prevlačenje antitela ili njegovog aktivnog fragmenta u lipoproteinskim česticama male gustine (pogledajte npr. U.S. Patent Application Publication No. 20040204354) ili apolipoproteinu E (pogledajte npr. U.S. Patent Application Publication No. 20040131692).
Antitela iz predmetnog pronalaska bi bila formulisana, dozirana i primenjena u skladu sa dobrom lekarskom praksom. Faktori koje u ovom kontekstu treba razmotriti uključuju konkretan poremećaj koji se leči, konkretnog sisara koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto isporuke agensa, postupak primene, raspored primene i druge faktore poznate lekarima. Antitelo ne mora da bude, ali je opciono formulisano sa jednim ili više agenasa koji se tekuće primenjuju za sprečavanje ili lečenje poremećaja o kome se radi. Efikasna količina takvih drugih agenasa zavisi od količine antitela prisutnog u formulaciji, vrste poremećaja ili lečenja, kao i drugih faktora koji su razmatrani u gornjem tekstu. Oni se generalno koriste u istim dozama i sa istim načinom primene kao što je gore opisano, ili od oko 1 do 99% doza koje su ovde opisane, ili u bilo kojoj dozi i sa bilo kojim načinom primene za koje je empirijski/klinički dokazano da su odgovarajući.
Za prevenciju ili lečenje bolesti, odgovarajuća doza antitela iz pronalaska (kada se koristi samo ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih dodatnih terapeutskih agenasa) zavisiće od vrste bolesti koja se leči, vrste antitela, težine i toka bolesti, bilo da se antitelo primenjuje u preventivne ili terapeutske svrhe, kao i od prethodne terapije, kliničke istorije pacijenta i njegovog odgovora na antitela, i odluke nadležnog lekara. Antitelo se pogodno primenjuje na pacijentu jednokratno, ili kao serija terapija. U zavisnosti od vrste i težine bolesti, oko 1 µg/kg do 15 mg/kg (npr.0,1 mg/kg-10 mg/kg) antitela može biti kandidat za početnu dozu za primenu na pacijentu, na primer, bilo kao jedna ili više odvojenih primena, ili kao kontinualna infuzija. Jedna tipična dnevna doza može biti u opsegu od oko 1 µg/kg do 100 mg/kg ili više, u zavisnosti od gore pomenutih faktora. Kod ponovljene primene tokom nekoliko dana ili duže, u zavisnosti od stanja, lečenje će generalno biti nastavljeno sve do željenog suzbijanja simptoma bolesti.
Doza antitela navedena kao primer bila bi u opsegu od oko 0,05 mg/kg do oko 10 mg/kg. Tako, jedna ili više doza od oko 0,5 mg/kg, 2,0 mg/kg, 4,0 mg/kg ili 10 mg/kg (ili bilo koja njihova kombinacija) može se dati pacijentu. Takve doze mogu se primenjivati u intervalima, npr. svake nedelje ili svake tri nedelje (npr. tako da pacijent dobije od oko dve do oko dvadeset, ili, npr. oko šest doza antitela). Može se primeniti veća početna doza, a nakon toga jedna ili više manjih doza. Međutim, mogu biti korisni i drugi dozni režimi. Napredak ove terapije jednostavno se prati klasičnim tehnikama i testovima.
Podrazumeva se da bilo koja od gorenavedenih formulacija ili terapeutskih postupaka može biti izvedena uz upotrebu imunokonjugata iz pronalaska umesto anti-KMB-R antitela, ili kao dodatka anti-KMB-R antitelu.
V. Proizvodi
U drugom aspektu pronalaska, obezbeđen je proizvod koji sadrži materijale korisne za lečenje, prevenciju i/ili dijagnostikovanje gore opisanih poremećaja. Proizvod uključuje pakovanje i etiketu ili uložak ubačen u pakovanje ili povezan sa pakovanjem. Pojedina pakovanja uključuju, na primer, boce, bočice, špriceve, kese za IV rastvore, itd. Pakovanje može biti napravljeno od različitih materijala, kao što je staklo ili plastika. U pakovanju se nalazi kompozicija, koja je sama ili u kombinaciji sa drugom kompozicijom efikasna za lečenje, prevenciju i/ili dijagnostikovanje stanja, i može imati sterilni pristupni ulaz (na primer, pakovanje može biti kesa za intravenski rastvor, ili bočica čiji zapušač može da se probuši hipodermičnom iglom za injekciju). Najmanje jedan aktivni agens u kompoziciji je antitelo iz pronalaska. Etiketa ili uložak pakovanja ukazuje da se kompozicija koristi za lečenje stanja po izboru. Pored toga, proizvod može da sadrži (a) prvo pakovanje sa kompozicijom koja se u njemu nalazi, pri čemu kompozicija sadrži antitelo iz pronalaska; i (b) drugo pakovanje sa kompozicijom koja se u njemu nalazi, naznačeno time što kompozicija sadrži dodatni citotoksični ili drugi terapeutski agens. Proizvod u ovoj realizaciji pronalaska može dalje da sadrži uložak za pakovanje koji ukazuje da kompozicija može da se koristi za lečenje specifičnog stanja. Alternativno, ili dodatno, proizvod može dalje da sadrži drugo (ili treće) pakovanje koje sadrži farmaceutski prihvatljiv pufer, kao što je bakteriostatska voda za injekciju (BWFI), fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom, Ringerov rastvor i rastvor dekstroze. On dalje može da sadrži druge materijale poželjne sa stanovišta prodaje ili korisnika, uključujući druge pufere, rastvarače, filtere, igle i špriceve.
Podrazumeva se da svaki od gorepomenutih proizvoda može da sadrži imunokonjugat iz pronalaska umesto, ili pored anti-KMB-R antitela.
Pronalazak opciono dalje sadrži uložak pakovanja sa uputstvom za lečenje neurološkog poremećaja kod ispitanika, naznačen time što uputstvo ukazuje da lečenje antitelom kao što je ovde objavljeno leči neurološki poremećaj, i opciono ukazuje da antitelo ima poboljšan prolaz kroz KMB usled svog malog afiniteta prema KMB-R-u.
III. PRIMERI
U ovom primeru je ocenjivan transferinski receptor (TfR), koji posreduje u transportu gvožđa u mozak putem holo-transferinskog kompleksa (Skarlatos et al. Brain Res 683: 164-171 (1995)). Antitelo protiv humanog himernog anti-mišjeg transferinskog receptora (anti-TfR<A>) koje se ne takmiči sa vezivanjem endogenog transferina za TfR upoređeno je sa humanim kontrolnim IgG u dvostruko obeleženom eksperimentu za određivanje prolaza u mozak miša divljeg tipa. Jedna doza u tragovima (oko 50 µg/kg) [<131>I]anti-TfR<A>i [<125>I]kontrolnog IgG injektovana je u miševe divljeg tipa intravenski (i.v.), i prolaz u mozak je meren u terminima 5 min, 0,5, 1, 4, 24, 48 i 72 sata. Značajno povećanje prolaza [<131>I]anti-TfR<A>u mozak, mereno kao procenat injektovane doze po gramu mozga, primećeno je u svim terminima (Sl. 1A). Na piku, 1 sat nakon injektovanja, postoji razlika >11 puta između akumulacije [<131>I]anti-TfR<A>u mozgu u poređenju sa [<125>I]kontrolnim IgG (n=6). Ako se neobeleženi anti-TfR<A>(4mg/kg telesne težine) istovremeno primeni, akumulacija [<131>I]anti-TfR<A>u mozgu opadne skoro do nivoa kontrolnog IgG, što ukazuje na specifičan, ciljno orijentisan prolaz.
Da bi se ocenilo da li se značajan prolaz u mozak takođe dešava na terapeutskim doznim nivoima, na miševima divljeg tipa primenjen je ili anti-TfR<A>ili kontrolni IgG, u dozi od 20mg/kg intravenski (i.v.). Koncentracija humanog antitela u korteksu i serumu određena je 1 sat i 24 sata nakon injekcije, pomoću sendvič ELISA testa sa humanim Fc. Ukratko, nakon naznačenog vremena primene, miševi su perfundovani D-PBS-om pri brzini od 2 ml/min tokom 8 minuta. Ekstrahovani su mozgovi, i korteks i hipokampus su izolovani, homogenizovani u 1% NP-40 (Cal-Biochem) u PBS-u koji je sadržao koktel tablete Complete Mini EDTA-free protease inhibitor (Roche Diagnostics). Homogenizovani uzorci mozga su mešani na 4ºC tokom 1 sata pre centrifugiranja na 14.000 o/min tokom 20 minuta. Supernatant je izolovan radi merenja antitela u mozgu. Pre perfuzije je puna krv prikupljena u mikroepruvete za serumski separator (BD Diagnostics), ostavljena bar 30 minuta da se zgruša, i istaložena centrifugiranjem na 5.000 g tokom 90 sekundi. Supernatant je izolovan radi merenja antitela u serumu. Koncentracije antitela u mišjem serumu i uzorcima mozga određene su ELISA testom. NUNC Maxisorp imunoploče sa 384 bazena (Neptune, NJ) prevučene su F(ab’)2 fragmentom magarećeg anti-humanog IgG, Fc fragment-specifičnog poliklonskog antitela (Jackson ImmunoResearch, West Grove, PA) preko noći na 4ºC. Ploče su blokirane PBS-om sa dodatkom 0,5% BSA, tokom 1 sata na 25ºC. Svako antitelo je korišćeno kao interni standard za kvantifikaciju koncentracije odgovarajućeg antitela. Ploče su isprane PBS-om sa dodatkom 0,05% Tween-20 pomoću ispirača mikroploča (Bio-Tek Instruments, Inc., Winooski, VT). Standardi i uzorci su razblaženi u PBS-u sa dodatkom 0,5% BSA, 0,35 M NaCl, 0,25% CHAPS, 5 mM EDTA, 0,05% Tween-20 i 15 ppm Proclin, i naneti su na mikroploče tokom dva sata na 25ºC. Vezano antitelo je detektovano pomoću peroksidaza renakonjugovanog F(ab’)2 kozjeg anti-humanog IgG, Fc-specifičnog poliklonalnog antitela (Jackson ImmunoResearch), razvijeno pomoću 3,3’,5,5’-tetrametil benzidina (TMB) (KPL, Inc., Gaithersburg, MD), i apsorbanca je izmerena na 450 nm, na Multiskan Ascent čitaču (Thermo Scientific, Hudson, NH). Koncentracije su određene sa standardne krive pomoću programa četvoroparametarske nelinearne regresije. Test je imao vrednosti donjeg limita kvantifikacije (LLOQ) od 3,12 ng/ml u serumu i 15,6 ng/g u mozgu. Statistička analiza razlika između eksperimentalnih grupa izvršena je pomoću dvostranog nesparenog t-testa.
U poređenju sa kontrolnim IgG, koncentracija anti-TfR<A>je bila značajno viša u mozgu 24 sata nakon primene antitela (Sl.1B, p= 0,0002, n=10). Pored toga, koncentracija humanog IgG u mozgu bila je >2,5 puta veća u poređenju sa serumom, za anti-TfR<A>kada se uporedi sa kontrolnim IgG nakon 24 sata (Sl. 1C, p=0,003, n=10). Zajedno sa podacima radiološki obeleženih tragova, ovi rezultati ukazuju da sistemski primenjeni anti-TfR<A>može da se akumulira u mozgu, ali još treba da se shvati raspodela antitela u moždanom tkivu.
Da bi se razjasnila distribucija sistemski primenjenih antitela u mozgu, divljim miševima je injektovan ili TfR<A>ili kontrolni IgG, u dozi od 20mg/kg i.v., perfundovani su PBS-om da bi se isprali ostaci antitela u krvotoku, i regije mozga su obojene fluorescentnim antihumanim sekundarnim IgG da bi se odredila lokalizacija antitela. Nakon 1 sata cirkulacije, anti-TfR<A>je imao naglašenu vaskularnu distribuciju, kao što ukazuje njegova ko-lokalizacija sa markerom bazalne membrane anti-kolagenom IV (Sl. 1D, leva kolona). Mada manje naglašen, kontrolni IgG takođe se lokalizovao u vaskulaturi, ukazujući da nakon 1 sata izloženosti, terapeutski dozni nivoi sistemski primenjenog IgG zadržavaju vaskularnu distribuciju (Slika.1E, leva kolona). Međutim, postoji uočljiva razlika u lokalizaciji antitela 24 sata nakon injekcije. Distribucija anti-TfR<A>nije više bila isključivo vaskularna, već se pokazalo umereno bojenje parenhima (Sl.1D, desne kolone). Nasuprot tome, kontrolno IgG antitelo bilo je uglavnom odsutno iz moždanog tkiva 24 sata nakon injekcije (Sl. 1E, desne kolone). Ovi rezultati ukazuju na to da, kada je doziran u terapeutski relevantnim nivoima, anti-TfR<A>može da prodre kroz KMB, što pokazuje umereno bojenje parenhima, međutim, najveći deo antitela akumuliranog u mozgu uglavnom je ograničen na endotelijalne ćelije KMB.
Akumulacija u parenhimu zahteva vezivanje za površinske TfR-e eksprimirane na moždanim endotelijalnim ćelijama, kao i disocijaciju sa receptora nakon transporta posredstvom receptora (RMT). Ne vezujući se ni za jednu teoriju, postavljena je hipoteza da smanjeni afinitet prema TfR-u može da olakša disocijaciju nakon RMT, i da omogući povećanu akumulaciju u parenhimu. Nadalje, anti-TfR sa smanjenim afinitetom biće sa manjom efikasnošću uhvaćen i transportovan u okolini sa ograničenom koncentracijom, kao što je mozak, gde su anti-TfR koncentracije male. Međutim, u kliničkim uslovima će serumski nivoi anti-TfR terapeutika i dalje biti dovoljno visoki da se održi zasićenje receptora u vaskularnom lumenu.
Da bi se ispitala ova pretpostavka, napravljene su varijante anti-TfR<A>čiji afinitet vezivanja za TfR varira. Te varijante su ispitane kompetitivnim ELISA testom (Slika 2A); anti-TfR<A>je imao najjači afinitet i najniži IC50 od svih ispitanih antitela protiv TfR, a svako od anti-TfR<B,C,D>je imao sukcesivno manji afinitet i veći IC50. Kasnije je napravljena varijanta anti-TfR<E>i ispitana istim testom, uz anti-TfR<A,B,C,D>varijante; kao što je prikazano na Sl. 2A, ona je u znatno manjoj meri mogla da se takmiči u vezivanju za TfR nego bilo koje drugo anti-TfR antitelo, i imala je odgovarajuću visoku IC50 vrednost (Tabela 2).
TABELA 2: Merenja IC50 anti-TfR antitela
Ove varijante su ispitane u ne-TfR zasićujućem (doziranje u tragovima) i u TfR zasićujućem (terapeusko doziranje) okruženju. Nivoi u tragovima [<125>I]anti-TfR<A>, [<125>I]anti-TfR<B>, [<125>I]anti-TfR<C>, [<125>I]anti-TfR<D>i [<125>I]anti-TfR<E>(čiji afinitet prema TfR varira, tako da je afinitet anti-TfR<A>> afinitet anti-TfR<B>> afinitet anti-TfR<C>> afinitet anti-TfR<D>> afinitet anti-TfR<E>) injektovani su i.v. u miševe, i prolaz u mozak je izmeren 1, 4 ili 24 sata nakon injekcije.
Ovaj test prvobitno je izveden sa [<125>I]anti-TfR<A>, [<125>I]anti-TfR<B>, [<125>I]anti-TfR<C>i [<125>I]anti-TfR<D>, a zatim ponovljen nakon konstruisanja [<125>I]anti-TfR<E>, i ti rezultati su prikazani na Slici 2B. U saglasnosti sa predloženim modelom, nivoi doza u tragovima antitela sa manjim afinitetom prema TfR doveli su do manjeg prolaza u mozak u poređenju sa varijantama sa većim afinitetom (Sl.2B). Međutim, u iznenađujućoj suprotnosti sa doziranjem u tragovima, prolaz u mozak istih tih varijanti sa malim afinitetom na terapeutskim nivoima (20mg/kg određeno nakon 1 i 24 sata) pokazao je povećan prolaz u mozak nakon 24 sata kada je afinitet snižavan, dok nije primećena značajna razlika u prolazu nakon 1 sata (Sl. 2C). Ovi podaci podržavaju hipotezu da RMT antitela nižeg afiniteta pokazuje smanjeni transport pri ograničenim koncentracijama, dok transport pri zasićujućim uslovima ostaje neizmenjen.
Tako je predložen sledeći model: u poređenju sa antitelom velikog afiniteta, manji broj antitela malog afiniteta se vezuje za receptore na luminalnoj strani vaskulature pri nezasićujućim koncentracijama, što dovodi do manjeg prolaza u endotel (Sl. 2D, levi pravougaonici). Međutim, pri većoj terapeutskoj dozi, luminalni receptori bi bili zasićeni bez obzira na afinitet, što dovodi do sličnog prolaza u endotel (Sl.2D, desni pravougaonici). Pod tim uslovima, RMT antitela manjeg afiniteta mogu da dostignu veću akumulaciju u mozgu putem 1) maksimalnog povećanja disocijacije sa RMT cilja, što olakšava otpuštanje u mozak, i 2) smanjenja verovatnoće isticanja iz mozga, pošto su koncentracije ograničene na parenhimsku stranu KMB. Tako u terapeutskim uslovima antitelo manjeg afiniteta prema RMT cilju ima iznenađujuću prednost za akumulaciju u parenhimu.
Da bi se ocenila lokalizacija tih varijanti koje pokazuju povećan prolaz u mozak, miševima je data i.v. doza od 20mg/kg, ili anti-TfR<A>sa velikim afinitetom ili varijante sa manjim afinitetom anti-TfR<B,C,D>. Nakon 24 sata, životinje su perfundovane PBS-om, i regioni mozga su obojeni za istovremeno određivanje humanog IgG i neuronskog markera NeuN (Fig. 2E). Kao što je ranije primećeno, kod životinja tretiranih sa anti-TfR<A>velikog afiniteta bojenje je bilo uglavnom vaskularno, sa malim nivoima parenhimskog signala (Sl. 2E, gornji red). Međutim, anti-TfR<B,C,D>manjeg afiniteta imala su upadljivo naglašeno ćelijsko bojenje, bez bojenja krvnih sudova korteksa (Sl. 2E, podaci za anti-TfR<B,C,D>). Nadalje, ko-lokalizovano bojenje sa NeuN pokazalo je redistribuciju antitela od vaskulature na neurone. Ovo je naročito izraženo na primeru uvećane slike anti-TfR<D>varijante (Sl.2F). Zajedno sa podacima o prolazu u mozak, ovi rezultati ukazuju na to da značajno veća akumulacija u mozgu može biti postignuta smanjivanjem afiniteta anti-TfR prema TfR-u, i da se antitela manjeg afiniteta, kao što je anti-TfR<D>, selektivno distribuiraju u neurone.
Transport anti-TfR antitela kroz KMB dalje je potvrđen procenom bispecifičnog antitela (anti-TfR<A>/BACE1) koje vezuje i TfR i enzim za raskidanje amiloid prekursor proteina (APP), beta sekretazu (BACE1) (Sl. 3A). Anti-TfR<A>sa velikim afinitetom korišćeno je za dizajniranje vezujućeg kraka TfR-a bispecifičnog antitela pomoću standardne 'knob in hole' ('dugme u rupici') tehnologije za konstruisanje bispecifičnih antitela (pogledajte npr. Ridgway et al., Protein Eng. (1996) 9(7): 617-621). Pored mutacija dugmeta i rupice u Fc regionu za anti-TfR (rupica) i anti-BACE1 (dugme), anti-TfR krak antitela sadržao je mutaciju u Fc regionu koja je ukidala glikozilaciju (N297G). Polovine antitela koje su odgovarale dugmetu i rupici odvojeno su prečišćene, i rekombinovane da bi se dobio aglikozilovani bispecifični IgG in vitro. Afinitet vezivanja anti-TfR<A>/BACE1 antitela za TfR znatno je smanjen u poređenju sa parentalnim anti-TfR<A>usled gubitka bivalentnog vezivanja (Sl. 3B). BACE1 je eksprimiran prvenstveno na neuronima u CNS-u, i smatra se činiocem koji prvenstveno doprinosi stvaranju beta amiloida (Aβ1-40) putem raskidanja APP-a (Vassar et al., Science 286:735-741 (1999)). Antitelo prema BACE1 je opisano kao efikasno sredstvo za inhibiranje aktivnosti BACE1, i može da smanji proizvodnju Aβ1-40in vivo. Inhibicija BACE1 od strane anti-TfR/BACE1 ispitana je na HEK293 ćelijskoj liniji koja stabilno eksprimira APP. U poređenju sa anti-BACE1, bispecifično antitelo je imalo sličnu efikasnost i potentnost u inhibiranju proizvodnje Aβ1-40, što ukazuje da je anti-TfR/BACE1 potpuno funkcionalan inhibitor velikog molekula koji inhibira aktivnost BACE1 (Sl.3C).
Na osnovu ovog modela, očekivalo bi se da ovo bispecifično antitelo manjeg afiniteta bude povoljniji kandidat za povećani prolaz, u poređenju sa samim anti-TfR. Da bi se proučila akumulacija bispecifičnog antitela u mozgu, doze u tragovima [<125>I]anti-TfR<A>/BACE1 upoređene su sa [<125>I]anti-TfR<A>i [<125>I]anti-BACE1, i prolaz u mozak je određen u terminima 30 min, 6, 24 i 48 sati nakon i.v. injekcije. Značajno veći prolaz u mozak primećen je sa [<125>I]anti-TfR/BACE1 u poređenju sa [<125>I]anti-BACE1 u svim terminima (Sl. 3d, n=4). U skladu sa hipotezom o afinitetu, prolaz u mozak ove nezasićujuće doze u tragovima [<125>I]anti-TfR<A>bio je mnogo veći od prolaza [<125>I]anti-TfR<A>/BACE1 koje ima manji afinitet. Da bi se procenila akumulacija antitela u terapeutskim doznim nivoima, miševima je injektovan i.v. anti-TfR<A>/BACE1 ili anti-BACE1 u dozi od 20mg/kg, i prolaz antitela u mozak je određen nakon 1, 12, 24 i 48 sati. U poređenju sa monospecifičnim anti-BACE1, primena bispecifičnog anti-TfR<A>/BACE1 dovela je do značajno većeg prolaza u mozak u svim terminima (Sl.3E). Kao što predviđa afinitetni model, obim prolaza je znatno veći nego kod samog anti-TfR<A>većeg afiniteta (uporedite Sl. 3E sa 1B). Pik akumulacije postignut je 24 sata nakon injekcije, dostižući koncentracije od ~20nM, i ostao je povišen 48 sati nakon injekcije, čak i kada su periferni nivoi antitela opali na ~12% njegove koncentracije u terminu 1 sat. Povećan prolaz sa bispecifičnim antitelom je dramatično uočljiv kada se uporedi sa prosečnim procentom antitela u mozgu u odnosu na serum (Sl.3F).
Da bi se odredila lokalizacija anti-TfR<A>/BACE1 nakon sistemske primene, miševi su perfundovani PBS-om 24 sata nakon injekcije, i distribucija antitela je vizualizovana pomoću anti-humanog fluorescentnog sekundarnog (Sl. 3G). Slično lokalizaciji anti-TfR antitela manjeg afiniteta, postojalo je znatno bojenje parenhima pored vaskularnog bojenja. Parenhimska ko-lokalizacija sa NeuN je pokazala da su ta antitela lokalizovana u populaciji neurona. Nasuprot tome, životinje kojima je injektovan kontrolni IgG pokazale su potpuni nedostatak vaskularnog i parenhimskog bojenja. Ovi podaci zajedno ukazuju da bispecifično anti-TfR<A>/BACE1 prolazi kroz KMB, i može u značajnoj meri da se akumulira u moždanom parenhimu.
Da bi se procenilo dejstvo anti-TfR<A>/BACE1 na proizvodnju Aβ1-40in vivo, divljim miševima je data jedna doza od 25mg/kg ili 50mg/kg kontrolnog IgG, anti-BACE1 ili anti-TfR/BACE1. Na osnovu zapažanja da prolaz antitela u mozak pokazuje pik 24 sata nakon injekcije (pogledajte Sl.3E), nivoi Aβ1-40u mozgu i plazmi određeni su u terminima 24 i 48 sati nakon i.v. primene antitela. U dozi od 25mg/kg, anti-TfR<A>/BACE1 je mogao značajno da smanji nivoe Aβ1-40u mozgu u poređenju sa kontrolnim IgG, i 24 sata (p=0,001, n=10) i 48 sati (p=0,0003, n=10) nakon injekcije, dok anti-BACE1 nije uticao na smanjenje Aβ1-40(Sl.4A). U dozi od 50 mg/kg, anti-TfR<A>/BACE1 je čak još dramatičnije uticao na smanjenje Aβ1-40u mozgu u oba termina, u poređenju sa kontrolnim IgG (Sl.3B, p< 0,0001, n=10, i za 24 h i za 48 h). Primena anti-BACE1 u ovoj dozi takođe je značajno smanjila nivoe Aβ1-40u mozgu u poređenju sa kontrolom (p<0,0001, n=10 za 24h; p=0,006, n=10 za 48h), mada u značajno manjoj meri nego bispecifična anti-TfR<A>/BACE1 (p<0,0001, n=10, i za 24 sata i za 48 sati). Uočljivo je da je sposobnost bispecifičnog antitela da smanji Aβ1-40bila 2 do 3 puta veća nego što je to slučaj sa anti-BACE1 u svim terminima i dozama koje su merene. Maksimalni efekat anti-TfR<A>/BACE1 postignut je 48 sati nakon injekcije pri 50mg/kg, sa 50,0 ± 1,9% smanjenjem Aβ1-40u mozgu u poređenju sa kontrolnim IgG (Sl.4E). Značajno smanjenje perifernog Aβ1-40takođe je primećeno kod obe doze i termina za anti-TfR<A>/BACE1 (Sl.4C-D). Terapija sa anti-BACE1 dovela je do smanjenja perifernih Aβ1-40samo u terminu 24 sata (p=0,01 za 25mg/kg, p=0,002 za 50mg/kg; n=10 za svaki). Ovi podaci potvrđuju da antitela dizajnirana da prođu kroz KMB mogu da budu farmakodinamički efikasna. Nadalje, porast penetracije u mozak bispecifičnog antitela čini ga potentnijim BACE1 inhibitorskim lekom putem značajnog smanjivanja nivoa Aβ1-40u mozgu.
Međutim, u terapeutskim dozama od 20 mg/kg, penetracija kroz KMB i ulazak u nevaskularne delove CNS-a povećani su kod životinja kojima je dat anti-TfR<E>u odnosu na životinje koje su primale anti-TfR<A>ili anti-TfR<D>(Slika 8B). Zapaža se da je anti-TfR<D>postigao veće početne koncentracije u mozgu, koje su se konstantno smanjivale nakon 2. dana; sa druge strane, anti-TfR<E>je konstantno zadržao visok nivo izloženosti mozga tokom ispitivanog 8-dnevnog perioda. U vezi sa tim, koncentracija anti-TfR<E>u serumu smanjila se najmanje od svih anti-TfR antitela tokom perioda procene (Slika 8A). Sve u svemu, ovi podaci pokazuju da generalno manji afinitet prema TfR-u iznenađujuće smanjuje klirens u serumu, i povećava izloženost mozga, ali na određenoj granici manji afinitet počinje da pogoršava maksimalnu izloženost mozga koja može da se dobije pomoću antitela. U ovom primeru, izgleda da se optimum nalazi između afiniteta antitela anti-TfR<D>i anti-TfR<E>prema transferinskom receptoru.
Značajno je što ovi podaci ističu nekoliko uzročnih mehanizama koji stoje iza povećanog prolaza antitela u CNS, koristeći pristup manjeg afiniteta antitela. Kao prvo, veliki afinitet anti-TfR antitela (npr. anti-TfR<A>, Sl. 1D) ograničava prolaz u mozak brzim zasićavanjemTfR u vaskulaturi mozga, čime smanjuje ukupnu količinu antitela koje je prešlo u mozak, i takođe ograničava njegovu distribuciju na vaskulaturu. Upadljivo je da snižavanje afiniteta (npr. anti-TfR<B-E>i anti-TfR<A,D,E>/BACE1, Sl.2C, 2E, 2F, 3E-G i 9C) poboljšava prolaz u mozak i distribuciju u mozgu, a snažno pomeranje je primećeno u lokalizaciji od vaskulature na neurone i povezani neuropil. Kao drugo, predloženo je da manji afinitet antitela prema TfR-u pogoršava sposobnost antitela da se vrati na vaskularnu stranu KMB preko TfR sa CNS strane membrane, jer je ukupni afinitet antitela prema TfR-u mali, i lokalna koncentracija antitela na CNS strani KMB je nezasićujuća usled brzog dispergovanja antitela u CNS kompartmentu (pogledajte npr. Sl.1D, 2E i 2F). Kao treće, in vivo, antitela sa manjim afinitetom prema TfR-u nisu tako efikasno uklonjena iz sistema kao ona sa velikim afinitetom prema TfR-u (Pogledajte Sl.8A i 9B), i tako u većim koncentracijama ostaju u krvotoku u odnosu na svoje parnjake većeg afiniteta. To predstavlja prednost, jer se nivo antitela sa manjim afinitetom u krvotoku održava na terapeutskom nivou u dužem periodu nego što je to slučaj sa antitelima većeg afiniteta, što nadalje povećava prolaz antitela u mozak u dužem vremenskom periodu (uporedite anti-TfR<A>/BACE1 sa anti-TfR<D>/BACE1 na Sl. 9C). Nadalje, ovo poboljšanje izloženosti plazme i mozga može da smanji učestalost doziranja na klinici, što bi potencijalno bilo korisno ne samo zbog komplijanse pacijenata, nego bi uticalo na smanjenje svih potencijalnih neželjenih dejstava ili dejstava antitela i/ili za njega vezanog terapeutskog jedinjenja koja nisu ciljana.
Sprovedene su druge studije kako bi se procenilo da li dalje smanjenje afiniteta bispecifičnog anti-TfR<A>/BACE1 antitela može dalje da poboljša njegovu penetraciju u KMB i parenhim. Još dva bispecifična antitela su konstruisana: anti-TfR<D>/BACE1 i anti-TfR<E>/BACE1, pomoću iste metodologije za konstruisanje koja je korišćena za anti-TfR<A>/BACE1 antitelo. Urađeni su kompetitivni ELISA testovi (Slika 9A), i dobijene su sledeće vrednosti IC50:
TABELA 3: Merenja IC50/afiniteta anti-TfR/BACE1 antitela
Određivanja Kd pomoću površinske plazmonske rezonance takođe su izvršena za vezivanje između svakog bispecifičnog antitela i TfR. BIACORE® analiza u Tabeli 3 izvedena je na sledeći način. Kd je izmerena testovima površinske plazmonske rezonance pomoću BIACORE®-T-100 (BIAcore, Inc., Piscataway, NJ) na 25°C i penta-His Ab snimanja (Qiagen, Valencia, CA). Ukratko, biosenzorski čipovi sa karboksimetilovanim dekstranom (CM5, BIACORE, Inc.) aktivirani su pomoću N-etil-N’- (3-dimetilaminopropil)-karbodiimid hidrohlorida (EDC) i N-hidroksisukcinimida (NHS) prema uputstvu dobavljača. Penta-His antitelo je razblaženo 100 mM natrijum acetatom, pH 4,0, do 50 μg/ml pre injektovanja pri protoku od 5 μl/minut, da se dobije odgovor od oko 10.000 jedinica odgovora (RU) kuplovanog proteina. Nakon injektovanja antitela, injektovan je1 M etanolamin da bi blokirao neizreagovale grupe. Za kinetička merenja, MuTfR-His je injektovan u HBS-P da se dostigne oko 50 RU, zatim su dvostruka serijska razblaženja anti-TfR<A>/BACE1 (1,95 nM do 1000 nM) ili anti-TfR<D>/BACE1 (9,75 nM do 5000 nM) injektovana u HBS-P na 25°C pri protoku od oko 30 μl/min. Brzine asocijacije (kon) i brzine disocijacije (koff) izračunate su pomoću jednostavnog jedan-na-jedan Lengmirovog modela vezivanja (BIACORE® Evaluation Software verzija 3.2) simultanim podešavanjem sensorgrama asocijacije i disocijacije. Ravnotežna konstanta disocijacije (Kd) izračunata je kao odnos koff/kon. Pogledajte npr. Chen et al., J. Mol. Biol.
293:865-881 (1999). Afinitet anti-TfR<E>/BACE1 je bio previše slab da bi se odredio površinskom plazmonskom rezonancom.
Kao što je prikazano na Slici 9A i u Tabelama 2 i 3, bispecifična anti-TfR<A>/BACE1 i anti-TfR<D>/BACE1 antitela su se izrazito slabije vezivala za TfR od odgovarajućih monospecifičnih anti-TfR<A>i anti-TfR<D>(uporedite Sl. 9A sa Sl. 2A). U slučaju anti-TfR<E>/BACE1, parcijalne krive vezivanja za bispecifično i monospecifično antitelo takođe sugerišu da bispecifična anti-TfR<E>/BACE1 ima mnogo veći IC50 od odgovarajućeg monospecifičnog anti-TfR<E>.
Ta antitela su ispitana istim in vivo testom proizvodnje Aβ1-40koji je gore opisan. Ukratko, na 6-8 nedelja starim divljim C57Bl/6 miševima primenjena je putem i.v. injekcije u repnu venu jedna doza od 50 mg/kg kontrolnog IgG, monospecifičnog anti-BACE1, ili anti-TfR<A>/BACE1, anti-TfR<D>/BACE1, ili anti-TfR<E>/BACE1, na 6 miševa po tretmanu antitelom po terminu, pa je ukupan broj tretiranih miševa bio 180. Nivoi Aβ1-40u mozgu i plazmi određeni su 1, 2, 4, 6, 8. i 10. dana nakon i.v. primene antitela (Slike 9B-9E). Koncentracija bispecifičnih antitela u mozgu (Slika 9C) u najranijem terminu bila je najveća sa anti-TfR<A>/BACE1 i anti-TfR<D>/BACE1, pri čemu je svako od njih imalo koncentracije koje su više nego dvostruko veće od koncentracije dobijene sa anti-TfR<E>/BACE1 u terminu 1. dan. Međutim, koncentracioni nivoi anti-TfR<A>/BACE1 u mozgu vratili su se na kontrolne nivoe do 6. dana, a anti-TfR<D>/BACE1 nivoi do 10. dana. Nasuprot tome, bispecifično antitelo sa najmanjim afinitetom prema anti-TfR<E>/BACE1 imalo je mnogo manji relativni pad koncentracije antitela u mozgu u poređenju sa anti-TfR<A>/BACE1 i anti-TfR<D>/BACE1, u skladu sa predloženim modelom da manji afinitet prema anti-TfR dovodi do smanjene sposobnosti antitela da bude izvezeno iz parenhimskog prostora. Nivoi Abeta1-40 u mozgu (Slika 9E) bili su smanjeni otprilike u istoj razmeri koja je očekivana prema primećenim koncentracijama bispecifičnog antitela u mozgu: anti-TfR<A>/BACE1 i anti-TfR<D>/BACE1 imali su slične smanjene nivoe Abeta1-40 u mozgu u najranijim terminima (1.-2. dan), koji su se ili brzo povećavali u narednim terminima (anti-TfR<A>/BACE1) ili su se umerenije povećavali u narednim terminima (anti-TfR<D>/BACE1), u skladu sa primećenim smanjenjem koncentracija u mozgu svakog od ovih antitela (Slika 9C). Naročito, dok je tretman anti-TfR<E>/BACE1 antitelom doveo do relativno manjeg smanjenja nivoa Abeta1-40 u mozgu nego što je primećeno za druga bispecifična antitela, ovo smanjenje je bilo usklađeno u svim terminima (Slika 9E).
Merenja u plazmi (Slika 9B) pokazala su da je anti-TfR<A>/BACE1 bilo uklonjeno do 4. dana, dok je anti-TfR<D>/BACE1 opstalo u relativno niskim nivoima u svim terminima, a nivoi anti-TfR<E>/BACE1 ostali su slični kontrolama u svim terminima. U skladu sa ovim otkrićem, primećeni nivoi Abeta1-40 u plazmi (Slika 9D) na sličan način su bili smanjeni od nivoa kontrolnog anti-gD u svim terminima, sa svakim anti-TfR<D>/BACE1, anti-TfR<E>/BACE1 i anti-BACE1. Kod anti-TfR<A>/BACE1 zapažena su slična smanjenja u terminima 1, 2 i 4 dana, koja su se brzo vraćala na kontrolne nivoe u kasnijim terminima, u skladu sa primećenim nestankom antitela iz plazme.
Ovi rezultati ponovo pokazuju da bispecifična anti-TfR/BACE1 antitela efikasno prelaze KMB i inhibiraju aktivnost BACE1 u in vivo sistemu sisara. Oni takođe nagoveštavaju da afinitet prema TfR-u koji se nalazi između afiniteta anti-TFR<D>/BACE1 i anti-TfR<E>/BACE1 može da pruži optimalnu kombinaciju zadržavanja i aktivnosti u parenhimu/mozgu. Međutim, primećeno je da za svaki cilj u mozgu potentnost bispecifičnog kraka koji je specifičan za taj cilj diktira koliko bispecifičnog antitela anti-TfR/cilj mora biti prisutno sa CNS strane KMB da bi se postigli željeni rezultati, a tako i koji stepen afiniteta anti-TfR prema TfR mora biti upotrebljen kod bispecifičnog antitela da bi se dobila ta koncentracija. Ovaj pronalazak daje sredstva za određivanje i dizajniranje bispecifičnih antitela da bi se postigli takvi ciljni nivoi u CNS-u nakon primene na neprivilegovanoj strani KMB.
Ti rezultati su potvrđeni i prošireni upotrebom drugog anti-TfR bispecifičnog antitela, anti-TfR/Abeta, koje vezuje i TfR i amiloid beta. Pripremljene su tri bispecifične varijante: anti-TfR<A>/Abeta, anti-TfR<D>/Abeta i anti-TfR<E>/Abeta, primenom istih postupaka koje su korišćene za pripremu anti-TfR/BACE1 bispecifičnih antitela u gornjem tekstu. Abeta je glavni supstituent amiloidnih plakova, za koje se veruje da učestvuju u razvoju AD. Inhibicija formiranja plakova putem vezivanja i uklanjanja Abeta, bilo u slobodnom ili oligomernom stanju, može da inhibira razvoj ili napredovanje AD. Procenjene su farmakokinetičke osobine svakog od tih bispecifičnih antitela.
Jedna doza od 50 mg/kg kontrolnog IgG, monospecifičnog anti-Abeta antitela, ili svakog bispecifičnog antitela injektovana je i.p. u 8-16 nedelja stare divlje miševe C57BL/6J, ili miševe koji eksprimiraju i humani presenilin 2 i humani amiloid prekursor protein (PS2APP). Usled ograničenog broja transgenih životinja, samo dve bispecifične varijante (anti-TfR<D>/Abeta i anti-TfR<E>/Abeta) ispitane su na PS2APP miševima. U svakoj terapijskoj grupi doziranje je ponovljeno na četiri do šest miševa. Miševi su žrtvovani nakon 24 sata i izmereni su nivoi leka u mozgu i u plazmi, kao u studijama bispecifičnog anti-TfR/BACE1. Pre žrtvovanja, takođe je sakupljena krv 6 sati nakon doze, radi rane procene koncentracije antitela u plazmi. Merenja koncentracije antitela u plazmi (Slike 10A i 11A) pokazala su da su sva antitela prisutna u sličnim nivoima u terminu 6 sati nakon doze. Međutim, kontrolni nivoi monospecifičnih anti-Abeta smanjeni su u poređenju sa kontrolnim IgG nakon 24 sata. To je slično prethodnim zapažanjima za ovaj anti-Abeta molekul. Nakon 24 sata, pokazalo se da anti-TfR<A>/Abeta ima slične nivoe antitela na periferiji kao anti-Abeta, dok su anti-TfR<D>/Abeta i anti-TfR<E>/Abeta imali nešto više nivoe, između anti-Abeta i kontrolnog IgG.
Koncentracija bispecifičnih antitela u mozgu bila je povećana u poređenju i sa kontrolnim IgG i anti-Abeta (Slika 10B i 11B). U poređenju sa anti-Abeta, anti-TfR<A>/Abeta je imao 12 puta veće koncentracije, anti-TfR<D>/Abeta je imao 8 do 15 puta veće koncentracije, a anti-TfR<E>/Abeta 4 do 5 puta veće koncentracije. Povećan unos u mozak anti-TfR<A,D,E>/Abeta antitela u poređenju sa anti-Abeta bio je čak veći nego što je povećanje dobijeno za anti-TfR<A,D,E>/BACE bispecifična antitela u poređenju sa anti-BACE1. To je verovatno posledica smanjene periferne izloženosti anti-Abeta u poređenju sa kontrolnim IgG 24 sata nakon primene doze, što je dovelo do nižih nivoa anti-Abeta u mozgu u poređenju sa kontrolnim IgG.
Ovi nalazi prvi pokazuju da antitela velikog molekula primenjena u terapeutski značajnim dozama mogu da prođu kroz KMB i da dovedu do značajnog i produženog prolaza u mozak. Nadalje, ovi rezultati koji pokazuju obrnuto srazmeran odnos između afiniteta antitela i obima prolaza u mozak pomažu boljem razumevanju RMT dinamike. Ovo novo saznanje može biti primenjeno na veliki broj drugih potencijalnih RMT ciljeva, kako bi se dobila efikasnija strategija isporuke antitela za lečenje u CNS. Pored toga, ovi in vivo rezultati pokazuju da bispecifično antitelo može mnogo da poboljša potentnost perspektivnog antiamiloidogenog terapeutika tako što značajno povećava penetraciju ciljanog leka antitela u mozak. To može biti velika prednost, jer će povećana isporuka leka dovesti do manjeg broja potencijalnih neželjenih dejstava usled niže terapeutske doze koja je potrebna. Uopštenije, ova tehnologija ima veliki potencijal za primenu na terapeuticima za širok spektar CNS bolesti, i predstavlja poboljšan pristup dobijanju sigurnijih lekova antitela.
Iako je gornji pronalazak opisan prilično detaljno radi ilustracije i putem primera koji bi olakšali razumevanje, opisi i primeri ne treba da se tumače kao ograničavajući za obim pronalaska.
Lista sekvenci
<110> GENENTECH, INC.
<120> ANTITELA MALOG AFINITETA PREMA RECEPTORU KRVNO MOŽDANE BARIJERE I NJIHOVA PRIMENA
<130> P4499R1-WO
<141> 2011-11-29
<150> US 61/418,223
<151> 30.11.2010
<160> 15
<210> 1
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 1
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 2
<210> 3
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 3
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 4
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 5
<210> 6
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 6
<211> 119
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 7
<211> 119
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 8
<210> 9
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 9
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 10
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 11
<210> 12
<211> 108
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 12
<211> 126
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 13
<211> 438
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 14
<211> 219
<212> PRT
<213> Veštačka sekvenca
<220>
<223> sekvenca je sintetisana
<400> 15

Claims (7)

Patentni zahtevi
1. Agens za primenu u lečenju neurološkog poremećaja izabranog iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga kod sisara, naznačen time, što agens sadrži antitelo koje vezuje transferinski receptor (TfR) i vezano je za lek za neurološki poremećaj ili jedinjenje za imidžing, pri čemu izabrano antitelo ima IC50 od 100nM do 100µM za TfR, i tako poboljšava apsorpciju antitela u CNS i vezanog leka ili jedinjenja za imidžing kroz krvno-moždanu barijeru.
2. Agens za primenu u lečenju neurološkog poremećaja izabranog iz grupe koja se sastoji od Alchajmerove bolesti (AD), moždanog udara, demencije, mišićne distrofije (MD), multiple skleroze (MS), amiotrofne lateralne skleroze (ALS), cistične fibroze, Angelmanovog sindroma, Lidlovog sindroma, Parkinsonove bolesti, Pikove bolesti, Padžetove bolesti, kancera i traumatske povrede mozga kod sisara, naznačen time što je agens multispecifično antitelo koje sadrži prvo mesto za vezivanje antigena koje vezuje TfR koji ima IC50 od 100nM do 100µM, i tako poboljšava apsorpciju antitela u CNS kroz krvno-moždanu barijeru, i drugo mesto za vezivanje antigena koje vezuje moždani antigen.
3. Agens iz patentnih zahteva 1 ili 2, naznačen time što antitelo ne smanjuje vezivanje transferina za TfR.
4. Agens iz patentnih zahteva 2-3, naznačen time što je moždani antigen izabran iz grupe koja se sastoji od: beta-sekretaze 1 (BACE1), Abeta, receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), humanog receptora epidermalnog faktora rasta 2 (HER2), Tau, apolipoproteina E4 (ApoE4), alfa-sinukleina, CD20, hantingtina, prionskog proteina (PrP), kinaze bogate ponavljanjem leucina 2 (LRRK2), parkina, presenilina 1, presenilina 2, gama sekretaze, receptora smrti 6 (DR6), amiloid prekursora proteina (APP), p75 neurotrofinskog receptora (p75NTR) i kaspaze 6.
5. Agens iz patentnih zahteva 2 – 4, naznačen time što multispecifično antitelo vezuje i TfR i BACE1.
6. Agens iz patentnih zahteva 2 – 4, naznačen time što multispecifično antitelo vezuje i TfR i Abeta.
7. Agens iz patentnih zahteva 2 – 6, naznačen time što je multispecifično antitelo kompletno antitelo ili fragment antitela.
RS20170442A 2010-11-30 2011-11-29 Antitela protiv transferinskog receptora malog afiniteta i njihova primena za transfer terapeutskih jednolančanih varijabilnih fragmenata (scfv) kroz krvno-moždanu barijeru RS55920B1 (sr)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US41822310P 2010-11-30 2010-11-30
PCT/US2011/062445 WO2012075037A1 (en) 2010-11-30 2011-11-29 Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS55920B1 true RS55920B1 (sr) 2017-09-29

Family

ID=45316102

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20170442A RS55920B1 (sr) 2010-11-30 2011-11-29 Antitela protiv transferinskog receptora malog afiniteta i njihova primena za transfer terapeutskih jednolančanih varijabilnih fragmenata (scfv) kroz krvno-moždanu barijeru

Country Status (35)

Country Link
US (5) US20120171120A1 (sr)
EP (2) EP2646470B1 (sr)
JP (3) JP6125430B2 (sr)
KR (3) KR102052571B1 (sr)
CN (2) CN110251668A (sr)
AR (1) AR084020A1 (sr)
AU (2) AU2011336716B2 (sr)
BR (1) BR112013013083A2 (sr)
CA (1) CA2818173C (sr)
CL (1) CL2013001535A1 (sr)
CO (1) CO6721052A2 (sr)
CR (1) CR20130255A (sr)
CY (1) CY1118906T1 (sr)
DK (1) DK2646470T3 (sr)
EA (1) EA034333B1 (sr)
EC (1) ECSP13012724A (sr)
ES (1) ES2631356T3 (sr)
HR (1) HRP20170590T1 (sr)
IL (1) IL282877A (sr)
LT (1) LT2646470T (sr)
MA (1) MA34749B1 (sr)
MX (1) MX358367B (sr)
MY (1) MY188469A (sr)
NZ (2) NZ724348A (sr)
PE (1) PE20140981A1 (sr)
PH (1) PH12013501096B1 (sr)
PL (1) PL2646470T3 (sr)
PT (1) PT2646470T (sr)
RS (1) RS55920B1 (sr)
SG (1) SG190900A1 (sr)
SI (1) SI2646470T1 (sr)
TW (3) TWI689314B (sr)
UA (1) UA117801C2 (sr)
WO (1) WO2012075037A1 (sr)
ZA (1) ZA201303572B (sr)

Families Citing this family (144)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US8759297B2 (en) 2006-08-18 2014-06-24 Armagen Technologies, Inc. Genetically encoded multifunctional compositions bidirectionally transported between peripheral blood and the cns
AU2008282496B2 (en) 2007-07-27 2013-04-04 Armagen Technologies, Inc. Methods and compositions for increasing alpha-iduronidase activity in the CNS
US20090162359A1 (en) 2007-12-21 2009-06-25 Christian Klein Bivalent, bispecific antibodies
SG175077A1 (en) 2009-04-07 2011-11-28 Roche Glycart Ag Trivalent, bispecific antibodies
US9676845B2 (en) 2009-06-16 2017-06-13 Hoffmann-La Roche, Inc. Bispecific antigen binding proteins
EP2485761B1 (en) 2009-10-09 2019-02-27 Armagen, Inc. Methods and compositions for increasing iduronate 2-sulfatase activity in the cns
EP3252072A3 (en) 2010-08-03 2018-03-14 AbbVie Inc. Dual variable domain immunoglobulins and uses thereof
WO2012064836A1 (en) 2010-11-10 2012-05-18 Genentech, Inc. Methods and compositions for neural disease immunotherapy
CA2818173C (en) 2010-11-30 2022-05-03 Genentech, Inc. Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
MX342034B (es) 2011-02-28 2016-09-12 Hoffmann La Roche Proteinas monovalentes que se unen a antigenos.
AR085404A1 (es) 2011-02-28 2013-09-25 Hoffmann La Roche Proteinas de union a antigeno
WO2013177062A2 (en) * 2012-05-21 2013-11-28 Genentech, Inc. Methods for improving safety of blood-brain barrier transport
RU2684595C2 (ru) 2012-07-04 2019-04-09 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Ковалентно связанные конъюгаты антиген-антитело
HUE045144T2 (hu) * 2012-08-29 2019-12-30 Hoffmann La Roche Véragygát-shuttle
WO2014089209A2 (en) * 2012-12-04 2014-06-12 Abbvie, Inc. Blood-brain barrier (bbb) penetrating dual specific binding proteins
US9636418B2 (en) 2013-03-12 2017-05-02 Amgen Inc. Potent and selective inhibitors of NAV1.7
WO2014165277A2 (en) 2013-03-12 2014-10-09 Amgen Inc. POTENT AND SELECTIVE INHIBITORS OF Nav1.7
US9580486B2 (en) 2013-03-14 2017-02-28 Amgen Inc. Interleukin-2 muteins for the expansion of T-regulatory cells
EP3594240B1 (en) * 2013-05-20 2023-12-06 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
JP6692293B2 (ja) * 2013-07-22 2020-05-13 アーマジェン・インコーポレイテッドＡｒｍａｇｅｎ， Ｉｎｃ． Ｃｎｓにおける酵素活性を増大するための方法および組成物
KR20160037173A (ko) * 2013-08-02 2016-04-05 에프. 호프만-라 로슈 아게 치료학적 융합 단백질
RU2016107435A (ru) 2013-09-13 2017-10-18 Дженентек, Инк. Композиции и способы обнаружения и количественного определения белка клеток-хозяев в клеточных линиях и рекомбинантные полипептидные продукты
CN120904322A (zh) * 2013-09-13 2025-11-07 豪夫迈·罗氏有限公司 包含纯化的重组多肽的方法和组合物
BR112016006929A2 (pt) 2013-10-11 2017-09-19 Hoffmann La Roche Anticorpo, ácido nucleico, vetor de expressão, célula hospedeira, métodos de preparação de anticorpo, de tratamento de pacientes e de geração de um anticorpo, composição farmacêutica e uso do anticorpo
LT3071597T (lt) * 2013-11-21 2020-10-12 F. Hoffmann-La Roche Ag Antikūnai prieš alfa-sunukleiną ir jų naudojimo būdai
US9579374B2 (en) 2013-12-04 2017-02-28 The Johns Hopkins University Method for rapidly designing pharmaceutical preparations for preventing viral infection
RU2711322C1 (ru) 2013-12-20 2020-01-16 Ф. Хоффманн-Ля Рош Аг Улучшенные способы получения рекомбинантного полипептида
AU2014368696A1 (en) 2013-12-20 2016-06-02 F. Hoffmann-La Roche Ag Humanized anti-Tau(pS422) antibodies and methods of use
EP3088518A4 (en) 2013-12-25 2017-09-20 JCR Pharmaceuticals Co., Ltd. Novel anti-transferrin receptor antibody that passes through blood-brain barrier
EP3089758B1 (en) 2014-01-03 2021-01-27 F.Hoffmann-La Roche Ag Covalently linked helicar-anti-helicar antibody conjugates and uses thereof
CN105899540B (zh) * 2014-01-03 2020-02-07 豪夫迈·罗氏有限公司 双特异性抗-半抗原/抗-血脑屏障受体的抗体、其复合物及它们作为血脑屏障穿梭物的应用
BR112016014945A2 (pt) 2014-01-03 2018-01-23 F. Hoffmann-La Roche Ag conjugado, formulação farmacêutica e uso
CA2932547C (en) 2014-01-06 2023-05-23 F. Hoffmann-La Roche Ag Monovalent blood brain barrier shuttle modules
NZ724869A (en) 2014-03-06 2022-07-01 Nat Res Council Canada Insulin-like growth factor 1 receptor -specific antibodies and uses thereof
PE20170088A1 (es) 2014-03-06 2017-03-09 Nat Res Council Canada Anticuerpos especificos del receptor del factor 1 de crecimiento similar a la insulina y usos de los mismos
DK3114141T3 (da) 2014-03-06 2020-08-10 Nat Res Council Canada Insulinlignende vækstfaktor 1-receptor-specifikke antistoffer og anvendelse deraf
CA2944402A1 (en) 2014-04-08 2015-10-15 Prothena Biosciences Limited Blood-brain barrier shuttles containing antibodies recognizing alpha-synuclein
ES2913205T3 (es) 2014-05-13 2022-06-01 Bioatla Inc Proteínas biológicas activas condicionalmente
WO2015191781A2 (en) 2014-06-10 2015-12-17 Amgen Inc. Apelin polypeptides
AR100978A1 (es) * 2014-06-26 2016-11-16 Hoffmann La Roche LANZADERAS CEREBRALES DE ANTICUERPO HUMANIZADO ANTI-Tau(pS422) Y USOS DE LAS MISMAS
US11111288B2 (en) 2014-08-28 2021-09-07 Bioatla, Inc. Conditionally active chimeric antigen receptors for modified t-cells
DK4074735T3 (da) 2014-08-28 2025-07-14 Bioatla Inc Betinget aktive kimæriske antigenreceptorer til modificerede t-celler
EP3218411B1 (en) 2014-11-14 2022-01-12 Ossianix, Inc. Variable new antigen receptors (vnars) directed against transferrin receptor (tfr) and their use
US10508151B2 (en) 2014-11-19 2019-12-17 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and methods of use
JP6859259B2 (ja) 2014-11-19 2021-04-14 ジェネンテック， インコーポレイテッド ＢＡＣＥｌに対する抗体及び神経疾患免疫療法のためのその使用
WO2016081640A1 (en) * 2014-11-19 2016-05-26 Genentech, Inc. Anti-transferrin receptor / anti-bace1 multispecific antibodies and methods of use
EP3227332B1 (en) 2014-12-03 2019-11-06 F.Hoffmann-La Roche Ag Multispecific antibodies
KR20170085595A (ko) 2014-12-10 2017-07-24 제넨테크, 인크. 혈뇌 장벽 수용체 항체 및 사용 방법
US10093733B2 (en) 2014-12-11 2018-10-09 Abbvie Inc. LRP-8 binding dual variable domain immunoglobulin proteins
CR20170510A (es) 2015-04-10 2018-02-26 Amgen Inc Muteínas de interuquina 2 para la expansión de células t regulatorias
BR112017023862A2 (pt) 2015-05-04 2018-07-17 Cytomx Therapeutics Inc anticorpos anti-cd71, anticorpos anti-cd71 ativáveis, e métodos de uso destes
TWI614264B (zh) 2015-05-20 2018-02-11 免疫功坊股份有限公司 含胜肽核的多臂接合物及其應用
TW201710286A (zh) 2015-06-15 2017-03-16 艾伯維有限公司 抗ｖｅｇｆ、ｐｄｇｆ及／或其受體之結合蛋白
EA039366B1 (ru) 2015-06-24 2022-01-19 Джей Си Ар ФАРМАСЬЮТИКАЛЗ КО., ЛТД. Антитело к рецептору трансферрина человека, проникающее через гематоэнцефалический барьер
AU2016283344B2 (en) 2015-06-24 2022-08-04 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Fusion protein containing BDNF
WO2016207245A1 (en) 2015-06-24 2016-12-29 F. Hoffmann-La Roche Ag Humanized anti-tau(ps422) antibodies and methods of use
HUE057952T2 (hu) * 2015-06-24 2022-06-28 Hoffmann La Roche Anti-transzferrin receptor antitestek testreszabott affinitással
TWI873952B (zh) * 2015-10-02 2025-02-21 瑞士商赫孚孟拉羅股份公司 雙特異性抗‐人類cd20/人類轉鐵蛋白受體抗體及使用方法
AR106189A1 (es) 2015-10-02 2017-12-20 Hoffmann La Roche ANTICUERPOS BIESPECÍFICOS CONTRA EL A-b HUMANO Y EL RECEPTOR DE TRANSFERRINA HUMANO Y MÉTODOS DE USO
CA3023667A1 (en) * 2016-05-09 2017-11-16 Annexon, Inc. Compositions and methods for treating spinal muscular atrophy
PL3455261T3 (pl) 2016-05-13 2022-12-12 Bioatla, Inc. Przeciwciała anty-ror2, fragmenty przeciwciał, ich immunokoniugaty oraz ich zastosowania
BR112019000098A2 (pt) 2016-07-14 2019-04-09 Bioarctic Ab proteína de fornecimento ao cérebro, método de tratamento e/ou profilaxia de distúrbios cerebrais em mamíferos que possuem ou encontram-se em risco de desenvolver o mencionado distúrbio e método de diagnóstico e/ou detecção de distúrbios cerebrais em mamíferos suspeitos de possuir ou que se encontram em risco de desenvolver o mencionado distúrbio
EP3494216B1 (en) 2016-08-06 2025-10-15 Ossianix, Inc. In vivo methods for selecting peptides that cross the blood brain barrier, related compositions and methods of use
CN106442967B (zh) * 2016-09-27 2018-05-15 鸿运华宁（杭州）生物医药有限公司 一种检测跨膜蛋白单克隆抗体亲和力的方法
US10702589B2 (en) 2016-10-04 2020-07-07 Ann And Robert H. Lurie Children's Hospital Of Chicago Compositions and methods of treating neurological disorder and stress-induced conditions
CA3052936A1 (en) 2016-12-26 2018-07-05 Jcr Pharmaceuticals Co., Ltd. Fusion protein of bdnf and anti-transferrin receptor antibody
KR102497564B1 (ko) 2016-12-26 2023-02-07 제이씨알 파마 가부시키가이샤 혈액뇌관문을 통과하는 신규한 항인간 트랜스페린 수용체 항체
BR112019013953A2 (pt) 2017-01-06 2020-02-11 Abl Bio Inc. Anticorpo anti-a-syn e uso do mesmo
US10457717B2 (en) 2017-02-17 2019-10-29 Denali Therapeutics Inc. Engineered polypeptides
CN110506055A (zh) 2017-02-17 2019-11-26 戴纳立制药公司 工程改造的转铁蛋白受体结合多肽
US10143187B2 (en) 2017-02-17 2018-12-04 Denali Therapeutics Inc. Transferrin receptor transgenic models
US10363245B2 (en) 2017-02-22 2019-07-30 The Board Of Regents Of The University Of Texas System Methods for treating CNS lesions
JP7021245B2 (ja) * 2017-03-10 2022-02-16 エフ．ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 多重特異性抗体を生産するための方法
CN111201030B (zh) 2017-07-25 2024-11-01 真和制药有限公司 通过阻断tim-3和其配体的相互作用治疗癌症
EP3661961A4 (en) * 2017-08-02 2021-04-14 Stressmarq Biosciences Inc. ANTIBODIES BINDING TO ACTIVE ALPHA-SYNUCLEIN
EP3438128B1 (en) * 2017-08-04 2020-05-20 Alzheimur 2012 S.L. Anti-presenilin antibody for use in the prevention and/or treatment of cancer
EP3665194A4 (en) * 2017-08-10 2021-07-07 Denali Therapeutics Inc. AFFINITY BASED METHODS OF USING TRANSFERRIN RECEPTOR BINDING PROTEINS
CR20200129A (es) 2017-10-02 2020-08-22 Denali Therapeutics Inc Proteínas de fusión que comprenden enzimas de terapia de reemplazo de enzimas
US11780932B2 (en) 2017-10-09 2023-10-10 Wisconsin Alumni Research Foundation Antibodies targeting glioblastoma stem-like cells and methods of use thereof
WO2019089395A1 (en) 2017-11-02 2019-05-09 Ossianix, Inc. Improved tfr-selective binding peptides capable of crossing the blood brain barrier
EP3725806A4 (en) 2017-12-14 2022-03-30 ABL Bio Inc. BISPECIFIC ANTIBODIES AGAINST A-SYN/IGF1R AND ASSOCIATED USE
US10688191B2 (en) 2018-01-19 2020-06-23 Hr Biomed, Llc Delivery of a chemotherapy agent across the blood-brain barrier
US12258597B2 (en) 2018-02-07 2025-03-25 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. Methods and compositions for therapeutic protein delivery
WO2019243502A1 (en) 2018-06-21 2019-12-26 Novo Nordisk A/S Novel compounds for treatment of obesity
US12097263B2 (en) 2018-08-02 2024-09-24 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US11168141B2 (en) 2018-08-02 2021-11-09 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
SG11202100928QA (en) 2018-08-02 2021-02-25 Dyne Therapeutics Inc Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
CA3108282A1 (en) 2018-08-02 2020-02-06 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
US11911484B2 (en) 2018-08-02 2024-02-27 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
US12018087B2 (en) 2018-08-02 2024-06-25 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle-targeting complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and methods of delivering oligonucleotide to a subject
US12370264B1 (en) 2018-08-02 2025-07-29 Dyne Therapeutics, Inc. Complexes comprising an anti-transferrin receptor antibody linked to an oligonucleotide and method of delivering oligonucleotide to a subject
WO2020056327A1 (en) 2018-09-14 2020-03-19 Ossianix, Inc. Tfr-specific binding moieties and transcytosis method to select vnars that cross cellular barriers
KR102692543B1 (ko) * 2018-10-26 2024-08-07 재단법인 목암생명과학연구소 Ids를 포함하는 융합 단백질 및 이의 용도
WO2020138487A1 (ja) * 2018-12-28 2020-07-02 協和キリン株式会社 ＴｆＲに結合するバイスペシフィック抗体
CA3124790A1 (en) 2019-01-09 2020-07-16 Vect-Horus Transferrin receptor-binding molecules, conjugates thereof and their uses
WO2020160156A2 (en) 2019-01-30 2020-08-06 Immutics, Inc. Anti-gal3 antibodies and uses thereof
PH12022550326A1 (en) 2019-08-13 2023-03-13 Amgen Inc Interleukin-2 muteins for the expansion of t-regulatory cells
CA3147365A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Joanne LIM Extracellular vesicle-nlrp3 antagonist
CA3147366A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Adam T. BOUTIN Extracellular vesicles with stat3-antisense oligonucleotides
AU2020330133A1 (en) 2019-08-14 2022-03-17 Lonza Sales Ag Extracellular vesicle-ASO constructs targeting CEBP/beta
CA3147701A1 (en) 2019-08-14 2021-02-18 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles with antisense oligonucleotides targeting kras
KR20220070433A (ko) 2019-08-14 2022-05-31 코디악 바이오사이언시즈, 인크. Stat6을 표적으로 하는 세포외 소포-aso 작제물
EP4028048A1 (en) 2019-09-09 2022-07-20 F. Hoffmann-La Roche AG Glucocerebrosidase mutants
WO2021062058A1 (en) 2019-09-25 2021-04-01 Codiak Biosciences, Inc. Sting agonist comprising exosomes for treating neuroimmunological disorders
TWI739220B (zh) * 2019-11-26 2021-09-11 亞瑟瑞智科技管理顧問股份有限公司 包含克拉維酸與丙戊酸之組合物及其用途
PH12022551598A1 (en) 2019-12-23 2023-11-20 Denali Therapeutics Inc Progranulin variants
EP4085251B1 (en) * 2020-01-02 2024-07-31 F. Hoffmann-La Roche AG Method for determining the amount of a therapeutic antibody in the brain
CA3163283A1 (en) * 2020-01-10 2021-07-15 Romesh R. Subramanian Muscle targeting complexes and uses thereof for modulation of genes associated with muscle health
BR112022013892A2 (pt) * 2020-01-13 2022-10-04 Truebinding Inc Anticorpos anti-gal3 e métodos de uso
WO2021184020A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Codiak Biosciences, Inc. Methods of treating neuroinflammation
US20230114434A1 (en) 2020-03-13 2023-04-13 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicles for treating neurological disorders
WO2021184021A1 (en) 2020-03-13 2021-09-16 Codiak Biosciences, Inc. Extracellular vesicle-aso constructs targeting pmp22
CN121754667A (zh) * 2020-04-08 2026-03-31 阿里亚达治疗公司 用于血脑屏障递送的组合物和方法
EP4157338A4 (en) 2020-05-26 2024-11-13 TrueBinding, Inc. METHOD FOR TREATING INFLAMMATORY DISEASES BY GALECTIN-3 BLOCKING
US12187805B2 (en) 2020-11-11 2025-01-07 Ossianix, Inc. Type-II VNAR polypeptides which bind human TfR-1, encoding nucleic acids thereof and method of use thereof
CA3202832A1 (en) 2020-12-31 2022-07-07 Romesh R. Subramanian Muscle targeting complexes and uses thereof for treating myotonic dystrophy
CA3207944A1 (en) 2021-02-17 2022-08-25 Ajay Verma Extracellular vesicle-nlrp3 antagonist
CA3220572A1 (en) 2021-06-11 2022-12-15 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule
US11969475B2 (en) 2021-07-09 2024-04-30 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating facioscapulohumeral muscular dystrophy
US11638761B2 (en) 2021-07-09 2023-05-02 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating Facioscapulohumeral muscular dystrophy
JP2024525608A (ja) 2021-07-09 2024-07-12 ダイン セラピューティクス，インコーポレーテッド ジストロフィン異常症を処置するための筋標的化複合体および製剤
US11771776B2 (en) 2021-07-09 2023-10-03 Dyne Therapeutics, Inc. Muscle targeting complexes and uses thereof for treating dystrophinopathies
WO2023034409A1 (en) 2021-09-01 2023-03-09 Biogen Ma Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
WO2023166168A1 (en) 2022-03-03 2023-09-07 Vib Vzw Polystyrene sulfonate for use to treat neurodegenerative diseases
EP4508206A1 (en) 2022-04-12 2025-02-19 F. Hoffmann-La Roche AG Fusion proteins targeted to the central nervous system
IL316143A (en) 2022-04-15 2024-12-01 Dyne Therapeutics Inc Muscle targeting complexes and formulations for the treatment of myotonic dystrophy
IL317261A (en) 2022-07-29 2025-01-01 Regeneron Pharma Non-human animals containing a modified transferrin receptor locus
CA3263388A1 (en) 2022-07-29 2024-02-01 Regeneron Pharmaceuticals, Inc. VIRAL PARTICLES RETRIBUTED TO TRANSFERRIN RECEPTOR 1
WO2024059056A1 (en) * 2022-09-12 2024-03-21 Emory University Methods of managing traumatic brain injury
WO2024187057A2 (en) * 2023-03-08 2024-09-12 Biogen Ma Inc. Anti-transferrin receptor antibodies and uses thereof
KR20250162888A (ko) 2023-03-24 2025-11-19 바이오악틱 에이비 인간 트랜스페린 수용체 htfr1의 프로테아제-유사 도메인에 결합하는 이중특이적 항체
EP4480965A1 (en) 2023-06-22 2024-12-25 Vect-Horus Transferrin receptor-binding molecules, conjugates thereof and their uses to prevent or treat cns diseases
EP4731658A1 (en) 2023-06-22 2026-04-29 Vect-Horus Transferrin receptor-binding molecules, conjugates thereof and their uses to prevent or treat nervous system diseases
CN121794291A (zh) 2023-06-22 2026-04-03 维克塔-霍洛斯公司 转铁蛋白受体结合分子、其偶联物及其用于预防或治疗肌肉疾病的用途
EP4480964A1 (en) 2023-06-22 2024-12-25 Vect-Horus Transferrin receptor-binding molecules, conjugates thereof and their uses to prevent or treat muscular diseases
AU2024299328A1 (en) 2023-07-21 2026-01-22 Marrow Therapeutics, Inc. Hematopoietic cell targeting conjugates and related methods
WO2025097160A1 (en) * 2023-11-03 2025-05-08 The Medical College Of Wisconsin, Inc. Methods of enhancing levodopa therapeutic efficacy
CN117805395A (zh) * 2023-12-29 2024-04-02 上海药明合联生物技术有限公司 一种比较抗体偶联药物和抗体的亲和力的方法及其应用
KR20250160320A (ko) * 2024-05-03 2025-11-12 한양대학교 산학협력단 엔도좀 탈출 효율이 향상된 항 인간 트랜스페린 수용체 항체, 및 이를 이용한 다중특이적 항체 및 약학 조성물
WO2025262228A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule
WO2025262225A1 (en) 2024-06-20 2025-12-26 Bioarctic Ab Stabilized binding molecule
WO2026068532A1 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule
WO2026068513A1 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Bioarctic Ab Bispecific binding molecule
WO2026068519A1 (en) 2024-09-24 2026-04-02 Bioarctic Ab Ph sensitive binding molecule

Family Cites Families (200)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3773919A (en) 1969-10-23 1973-11-20 Du Pont Polylactide-drug mixtures
JPS55113334A (en) 1979-02-23 1980-09-01 Hitachi Ltd Manufacture of passivation film
US4332785A (en) 1980-04-09 1982-06-01 University Patents, Inc. Immunoassay for measurement of reticulocytes, and immunoreactive reagents for use therein
US4447547A (en) 1980-04-09 1984-05-08 University Patents, Inc. Immunoassay for measurement of reticulocytes, and immunoreactive reagents for use therein
US4626507A (en) 1980-09-25 1986-12-02 The Salk Institute For Biological Studies Hybridomas producing monoclonal antibodies specific for a human cell surface glycoprotein
US4434156A (en) 1981-10-26 1984-02-28 The Salk Institute For Biological Studies Monoclonal antibodies specific for the human transferrin receptor glycoprotein
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4545985A (en) 1984-01-26 1985-10-08 The United States Of America As Represented By The Secretary, Dept. Of Health And Human Services Pseudomonas exotoxin conjugate immunotoxins
JPS6210017A (ja) 1985-07-04 1987-01-19 Mochida Pharmaceut Co Ltd トランスフエリンレセプタ−の精製方法
US4676980A (en) 1985-09-23 1987-06-30 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Target specific cross-linked heteroantibodies
US4956453A (en) 1985-12-06 1990-09-11 Cetus Corporation Anti-human ovarian cancer immunotoxins and methods of use thereof
US4902505A (en) 1986-07-30 1990-02-20 Alkermes Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
US4801575A (en) 1986-07-30 1989-01-31 The Regents Of The University Of California Chimeric peptides for neuropeptide delivery through the blood-brain barrier
US5567610A (en) 1986-09-04 1996-10-22 Bioinvent International Ab Method of producing human monoclonal antibodies and kit therefor
US4892827A (en) * 1986-09-24 1990-01-09 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant pseudomonas exotoxins: construction of an active immunotoxin with low side effects
JP2736255B2 (ja) 1987-03-11 1998-04-02 フアルマシア・エ・アツプジヨン・エツセ・ピー・アー イムノグロブリン結合体
US5208021A (en) 1987-10-05 1993-05-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Method of preparing diphtheria immunotoxins
US5728383A (en) 1987-10-05 1998-03-17 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Treatment of tumors of the central nervous system with immunotoxins
US5352447A (en) 1987-10-05 1994-10-04 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Immunotoxins for treatment of intracranial lesions and as adjunct to chemotherapy
US5792458A (en) 1987-10-05 1998-08-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Mutant diphtheria toxin conjugates
US5231000A (en) * 1987-10-08 1993-07-27 The Mclean Hospital Antibodies to A4 amyloid peptide
US5601819A (en) 1988-08-11 1997-02-11 The General Hospital Corporation Bispecific antibodies for selective immune regulation and for selective immune cell binding
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5175384A (en) 1988-12-05 1992-12-29 Genpharm International Transgenic mice depleted in mature t-cells and methods for making transgenic mice
CA2006408A1 (en) 1988-12-27 1990-06-27 Susumu Iwasa Bispecific monoclonal antibody, its production and use
US5217713A (en) 1988-12-27 1993-06-08 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cytotoxic bispecific monoclonal antibody, its production and use
CA2011099A1 (en) 1989-04-19 1990-10-19 Stephen C. Wardlaw Determination of lymphocyte reactivity to specific antigens in blood
US5292869A (en) 1989-04-27 1994-03-08 The Board Of Governors Of The University Method for isolating and purifying transferrin and lactoferrin receptor proteins from bacteria and the preparation of vaccines containing the same
US5141743A (en) 1989-04-27 1992-08-25 University Technologies International, Inc. Method for isolating and purifying transferrin and lactoferrin receptor proteins and vaccines containing the same
US5672683A (en) 1989-09-07 1997-09-30 Alkermes, Inc. Transferrin neuropharmaceutical agent fusion protein
US5182107A (en) 1989-09-07 1993-01-26 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
US5527527A (en) 1989-09-07 1996-06-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
US5977307A (en) 1989-09-07 1999-11-02 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific ligand-neuropharmaceutical agent fusion proteins
US5154924A (en) 1989-09-07 1992-10-13 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical agent conjugates
US6329508B1 (en) 1989-09-07 2001-12-11 Alkermes, Inc. Transferrin receptor reactive chimeric antibodies
US5208020A (en) 1989-10-25 1993-05-04 Immunogen Inc. Cytotoxic agents comprising maytansinoids and their therapeutic use
WO1991014452A1 (en) 1990-03-27 1991-10-03 The Salk Institute For Biological Studies Method for inhibiting cell growth and compositions useful therefor
US5229275A (en) 1990-04-26 1993-07-20 Akzo N.V. In-vitro method for producing antigen-specific human monoclonal antibodies
ES2329979T3 (es) 1990-08-23 2009-12-03 The University Of North Carolina At Chapel Hill Proteinas de union de transferencia de neisseria gonorrhoeae y neisseria meningitis. su uso como vacuna.
US5912336A (en) 1990-08-23 1999-06-15 University Of North Carolina At Chapel Hill Isolated nucleic acid molecules encoding transferrin binding proteins from Neisseria gonorrhoeae and Neisseria meningitidis
JPH04187096A (ja) 1990-11-20 1992-07-03 Takeda Chem Ind Ltd 二重特異性を有するハイブリッド・モノクローナル抗体
US6099842A (en) 1990-12-03 2000-08-08 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Recombinant immunotoxin composed of a single chain antibody reacting with the human transferrin receptor and diptheria toxin
DE4110409C2 (de) 1991-03-29 1999-05-27 Boehringer Ingelheim Int Neue Protein-Polykation-Konjugate
US6287792B1 (en) 1991-06-17 2001-09-11 The Regents Of The University Of California Drug delivery of antisense oligonucleotides and peptides to tissues in vivo and to cells using avidin-biotin technology
US5637481A (en) 1993-02-01 1997-06-10 Bristol-Myers Squibb Company Expression vectors encoding bispecific fusion proteins and methods of producing biologically active bispecific fusion proteins in a mammalian cell
ES2196002T3 (es) 1991-07-25 2003-12-16 Idec Pharma Corp Anticuerpos recombinantes para terapia humana.
MX9204374A (es) 1991-07-25 1993-03-01 Idec Pharma Corp Anticuerpo recombinante y metodo para su produccion.
US5565332A (en) 1991-09-23 1996-10-15 Medical Research Council Production of chimeric antibodies - a combinatorial approach
US5254342A (en) 1991-09-30 1993-10-19 University Of Southern California Compositions and methods for enhanced transepithelial and transendothelial transport or active agents
WO1993008829A1 (en) 1991-11-04 1993-05-13 The Regents Of The University Of California Compositions that mediate killing of hiv-infected cells
JPH07509444A (ja) 1991-11-26 1995-10-19 アルカーメス・インコーポレーテツド トランスフェリンセレプター特異的抗体−神経薬又は診断薬複合体の製造法
WO1993016177A1 (en) 1992-02-11 1993-08-19 Cell Genesys, Inc. Homogenotization of gene-targeting events
US5573905A (en) 1992-03-30 1996-11-12 The Scripps Research Institute Encoded combinatorial chemical libraries
US5648469A (en) 1992-04-20 1997-07-15 The Salk Institute For Biological Studies Monoclonal antibodies reactive with transferrin receptor cytoplasmic domain
FR2692592B1 (fr) 1992-06-19 1995-03-31 Pasteur Merieux Serums Vacc Fragments d'ADN codant pour les sous-unités du récepteur de la transferrine de Neisseria meningitidis et procédés les exprimant.
ATE191853T1 (de) 1992-07-27 2000-05-15 Us Health Zielgerichte liposome zur blut-hirne schranke
US6361779B1 (en) 1993-11-08 2002-03-26 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor genes
CA2175332C (en) 1993-11-08 2009-04-07 Sheena M. Loosmore Haemophilus transferrin receptor genes
WO1995015982A2 (en) 1993-12-08 1995-06-15 Genzyme Corporation Process for generating specific antibodies
IL112372A (en) 1994-02-07 2001-08-26 Res Dev Foundation Non-viral vector for the delivery of genetic information to cells
US5731168A (en) 1995-03-01 1998-03-24 Genentech, Inc. Method for making heteromultimeric polypeptides
US6015555A (en) 1995-05-19 2000-01-18 Alkermes, Inc. Transferrin receptor specific antibody-neuropharmaceutical or diagnostic agent conjugates
US5817789A (en) 1995-06-06 1998-10-06 Transkaryotic Therapies, Inc. Chimeric proteins for use in transport of a selected substance into cells
JP3973169B2 (ja) 1995-09-26 2007-09-12 栄研化学株式会社 トランスフェリン−トランスフェリンレセプター・コンプレックス測定試薬および測定方法
US6290970B1 (en) 1995-10-11 2001-09-18 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor protein of Moraxella
US6497881B1 (en) 1995-11-30 2002-12-24 New York University High efficiency tissue specific compound delivery system using streptavidin-protein a fusion protein
AU2112697A (en) 1996-02-09 1997-08-28 Pi-Wan Cheng Receptor ligand-facilitated delivery of biologically active molecules
GB9603256D0 (en) 1996-02-16 1996-04-17 Wellcome Found Antibodies
US6440701B1 (en) 1996-03-08 2002-08-27 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor genes of Moraxella
US6090576A (en) 1996-03-08 2000-07-18 Connaught Laboratories Limited DNA encoding a transferrin receptor of Moraxella
AU5451598A (en) 1996-11-22 1998-06-10 Regents Of The University Of California, The Transport of liposomes across the blood-brain barrier
JPH10245400A (ja) 1997-02-28 1998-09-14 Eiken Chem Co Ltd トランスフェリンレセプターの安定化方法
ES2244066T3 (es) 1997-06-24 2005-12-01 Genentech, Inc. Procedimiento y composiciones de glicoproteinas galactosiladas.
AU759779B2 (en) 1997-10-31 2003-05-01 Genentech Inc. Methods and compositions comprising glycoprotein glycoforms
EP1064015A2 (en) 1998-02-24 2001-01-03 Receptron, Inc. Receptor derived peptides as modulators of receptor activity
ATE375365T1 (de) 1998-04-02 2007-10-15 Genentech Inc Antikörper varianten und fragmente davon
DK1071700T3 (da) 1998-04-20 2010-06-07 Glycart Biotechnology Ag Glykosylerings-modifikation af antistoffer til forbedring af antistofafhængig cellulær cytotoksicitet
US6891028B1 (en) 1998-11-06 2005-05-10 Cedars-Sinai Medical Center Nucleic acids encoding transferrin receptor-like proteins
AU1344400A (en) 1998-11-18 2000-06-05 Incyte Pharmaceuticals, Inc. Inflammation-associated genes
ATE483816T1 (de) 1998-11-19 2010-10-15 Univ Georgetown Systemisches virus/ligand genabgabemittel und gentherapie
PL209392B1 (pl) 1999-01-15 2011-08-31 Genentech Inc Przeciwciało, komórka gospodarza, sposób wytwarzania przeciwciała oraz zastosowanie przeciwciała
JP4799736B2 (ja) 1999-02-22 2011-10-26 ジョージタウン・ユニバーシティ 全身性遺伝子送達のための抗体フラグメント標的化イムノリポソーム
US7780882B2 (en) 1999-02-22 2010-08-24 Georgetown University Simplified and improved method for preparing an antibody or an antibody fragment targeted immunoliposome for systemic administration of a therapeutic or diagnostic agent
GB9908195D0 (en) 1999-04-09 1999-06-02 Microbiological Res Authority Treatment of intracellular infection
US7241449B1 (en) 1999-04-12 2007-07-10 Aventis Pasteur Limited Transferrin receptor genes of moraxella
US6511967B1 (en) 1999-04-23 2003-01-28 The General Hospital Corporation Use of an internalizing transferrin receptor to image transgene expression
AU780474B2 (en) 1999-06-16 2005-03-24 Boston Biomedical Research Institute Incorporated Immunological control of beta-amyloid levels in vivo
US20040146516A1 (en) 1999-06-17 2004-07-29 Utah Ventures Ii L.P. Lumen-exposed molecules and methods for targeted delivery
AU6607100A (en) 1999-07-23 2001-02-13 Regents Of The University Of California, The Anti-growth factor receptor avidin fusion proteins as universal vectors for drugdelivery
WO2001044300A2 (en) 1999-12-13 2001-06-21 Cambridge Antibody Technology Limited Brain specific binding members
AU2001244602A1 (en) 2000-03-30 2001-10-15 Ajinomoto Co. Inc. Drugs retained in target tissue over long time
JP2003531588A (ja) 2000-04-11 2003-10-28 ジェネンテック・インコーポレーテッド 多価抗体とその用途
WO2001082972A2 (en) 2000-04-23 2001-11-08 Arizeke Pharmaceuticals, Inc. Compositions comprising carriers and transportable complexes
US6372250B1 (en) 2000-04-25 2002-04-16 The Regents Of The University Of California Non-invasive gene targeting to the brain
GB0027328D0 (en) 2000-06-23 2000-12-27 Aventis Pharma Inc Bioengineered vehicles for targeted nucleic acid delivery
US20020048550A1 (en) 2000-07-20 2002-04-25 Vallera Daniel A. Radiolabeled immunotoxins
AU9063801A (en) 2000-09-06 2002-03-22 Aventis Pharma Sa Methods and compositions for diseases associated with amyloidosis
JP2002095476A (ja) 2000-09-20 2002-04-02 Eisai Co Ltd トランスフェリン受容体を介した遺伝子導入法
AU2002236499A8 (en) 2000-11-30 2009-12-03 Uab Research Foundation Receptor-mediated uptake of peptides that bind the human transferrin receptor
WO2002055736A2 (en) 2000-12-04 2002-07-18 Univ California Antisense imaging of gene expression of the brain in vivo
US7829084B2 (en) 2001-01-17 2010-11-09 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding constructs and methods for use thereof
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
DE10121982B4 (de) 2001-05-05 2008-01-24 Lts Lohmann Therapie-Systeme Ag Nanopartikel aus Protein mit gekoppeltem Apolipoprotein E zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und Verfahren zu ihrer Herstellung
WO2002094191A2 (en) 2001-05-23 2002-11-28 New York University Detection of alzheimer's amyloid by magnetic resonance imaging
US20100081792A1 (en) 2001-06-28 2010-04-01 Smithkline Beecham Corporation Ligand
NZ571596A (en) 2001-08-03 2010-11-26 Glycart Biotechnology Ag Antibody glycosylation variants having increased antibody-dependent cellular cytotoxicity
US20030226155A1 (en) 2001-08-30 2003-12-04 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin-antibody fusion proteins
AU2002323501C1 (en) 2001-08-30 2010-04-29 Biorexis Technology, Inc Modified transferrin fusion proteins
US7176278B2 (en) 2001-08-30 2007-02-13 Biorexis Technology, Inc. Modified transferrin fusion proteins
WO2004019872A2 (en) 2002-08-30 2004-03-11 Biorexis Pharmaceutical Corporation Oral delivery of modified transferrin fusion proteins
CA2463879C (en) 2001-10-25 2012-12-04 Genentech, Inc. Glycoprotein compositions
US20040093621A1 (en) 2001-12-25 2004-05-13 Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd Antibody composition which specifically binds to CD20
US7998704B2 (en) 2002-03-07 2011-08-16 Carnegie Mellon University Methods for magnetic resonance imaging
EP1487499B1 (en) 2002-03-07 2009-06-10 Carnegie-Mellon University Contrast agents for magnetic resonance imaging and methods related thereto
WO2003084470A2 (en) 2002-04-02 2003-10-16 Arizeke Pharmaceuticals, Inc. Compositions and methods for targeted biological delivery of molecular carriers
ATE452650T1 (de) 2002-08-30 2010-01-15 Biorexis Pharmaceutical Corp Transferrin-fusionsproteinbibliotheken
US20060130158A1 (en) 2002-08-30 2006-06-15 Turner Andrew J Modified transferrin fusion proteins comprising duplicate transferrin amino or carboxy terminal domains
EP1558645B1 (en) 2002-11-08 2011-07-27 Ablynx N.V. Stabilized single domain antibodies in pharmaceutical composition adapted for inhalation
US20050142141A1 (en) 2002-11-27 2005-06-30 Pardridge William M. Delivery of enzymes to the brain
US20040102369A1 (en) 2002-11-27 2004-05-27 The Regents Of The University Of California Transport of basic fibroblast growth factor across the blood brain barrier
JP4995423B2 (ja) 2002-12-03 2012-08-08 ブランシェット・ロックフェラー・ニューロサイエンスィズ・インスティテュート 物質を血液−脳関門を渡って輸送するための人工低密度リポタンパク質キャリア
CA2512717A1 (en) 2003-01-09 2004-07-29 Arizeke Pharmaceuticals Inc. Compositions and methods for targeted biological delivery of molecular carriers
US8026209B2 (en) * 2003-02-10 2011-09-27 Bbb Holding B.V. Methods and compositions for targeting agents into and across the blood-barrier and other endothelial cell microvascular barriers
CN1788017B (zh) * 2003-02-10 2013-04-24 to-BBB控股股份有限公司 炎症状态下在血脑屏障中差异表达的核酸
EP1626981A4 (en) 2003-03-04 2006-11-22 Biorexis Pharmaceutical Corp PROTEINS PROTECTED AGAINST DIPEPTIDYLPEPTIDASE
AU2003286870A1 (en) 2003-06-05 2005-01-04 Salk Institute For Biological Studies Targeting polypeptides to the central nervous system
EP1651670A2 (en) 2003-08-04 2006-05-03 Applied Research Systems ARS Holding N.V. Novel therapeutic fusion proteins
US20050042298A1 (en) 2003-08-20 2005-02-24 Pardridge William M. Immunonanoparticles
EP1663278A4 (en) 2003-08-28 2009-07-29 Biorexis Pharmaceutical Corp EPO MIMETIC PEPTIDES AND FUSION PROTEINS
JP2007505142A (ja) 2003-09-10 2007-03-08 セダーズ−シナイ メディカル センター 血液脳関門を通過する薬剤のカリウムチャネル媒介性送達
US9296820B2 (en) 2003-11-05 2016-03-29 Roche Glycart Ag Polynucleotides encoding anti-CD20 antigen binding molecules with increased Fc receptor binding affinity and effector function
US20050202075A1 (en) 2004-03-12 2005-09-15 Pardridge William M. Delivery of genes encoding short hairpin RNA using receptor-specific nanocontainers
WO2005094364A2 (en) 2004-03-31 2005-10-13 Chimeric Technologies, Inc. Iga antibody protein as a cytotoxic drug
CA2561830C (en) 2004-03-31 2013-05-21 Adnagen Ag Monoclonal antibodies with specificity for fetal erythroid cells
PT1740616E (pt) 2004-04-30 2012-03-23 Inst Nat Sante Rech Med Anticorpo anti-rtf
EP1755686A2 (en) 2004-06-02 2007-02-28 Sidney Kimmel Cancer Center Imaging and therapeutic agents targeting proteins expressed on endothelial cell surface
JP4824025B2 (ja) 2004-06-07 2011-11-24 マクロジェニックス ウエスト，インコーポレイテッド トランスフェリンレセプター抗体
WO2006004910A2 (en) 2004-06-28 2006-01-12 Transtarget Inc. Improved bispecific antibodies
WO2006088491A2 (en) 2004-06-29 2006-08-24 Massachusetts Institute Of Technology Methods and compositions related to the modulation of intercellular junctions
US20090285771A1 (en) 2004-10-04 2009-11-19 Trinity Biosystems, Inc. Methods and compositions for needleless delivery of macromolecules
WO2006096515A2 (en) 2005-03-04 2006-09-14 Biorexis Pharmaceutical Corporation Modified transferrin fusion proteins
US9943481B2 (en) 2005-05-26 2018-04-17 Biorest Ltd. Compositions and methods using same for delivering agents into a target organ protected by a blood barrier
JP2005321411A (ja) 2005-06-10 2005-11-17 Eiken Chem Co Ltd トランスフェリン−トランスフェリンレセプター・コンプレックス測定試薬および測定方法
US7736647B2 (en) 2005-06-15 2010-06-15 Monoclonal Antibodies Therapeutics Anti-CD71 monoclonal antibodies and uses thereof for treating malignant tumor cells
ATE439443T1 (de) 2005-06-17 2009-08-15 Ca Nat Research Council NEUES Aß-BINDUNGSPROTEIN UND DESSEN PEPTIDDERIVATE SOWIE VERWENDUNGEN DAVON
CA3000520C (en) 2005-08-24 2023-04-04 Immunogen, Inc. Process for preparing antibody maytansinoid conjugates
US8507439B2 (en) 2005-08-29 2013-08-13 Angela Shashoua Neuroprotective and neurorestorative method and compositions
US8124095B2 (en) 2005-10-07 2012-02-28 Armagen Technologies, Inc. Fusion proteins for delivery of erythropoietin to the CNS
US8053569B2 (en) 2005-10-07 2011-11-08 Armagen Technologies, Inc. Nucleic acids encoding and methods of producing fusion proteins
WO2007047504A2 (en) 2005-10-14 2007-04-26 Biorexis Pharmaceutical Corporation Natriuretic peptide modified transferrin fusion proteins
WO2007067597A2 (en) 2005-12-05 2007-06-14 Trinity Biosystems, Inc. Methods and compositions for needleless delivery of binding partners
WO2007067596A2 (en) 2005-12-05 2007-06-14 Trinity Biosystems, Inc. Methods and compositions for needleless delivery of antibodies
EP1959996A2 (en) 2005-12-12 2008-08-27 AC Immune S.A. Monoclonal antibody
WO2007103288A2 (en) 2006-03-02 2007-09-13 Seattle Genetics, Inc. Engineered antibody drug conjugates
US20070231300A1 (en) 2006-03-28 2007-10-04 Washington, University Of Covalent conjugates between endoperoxides and transferrin and lactoferrin receptor-binding agents
JP5103466B2 (ja) * 2006-03-30 2012-12-19 グラクソ グループ リミテッド アミロイド‐βペプチドに対する抗体
WO2008054544A2 (en) 2006-05-22 2008-05-08 Immune Disease Institute, Inc. Method for delivery across the blood brain barrier
US7744879B2 (en) * 2006-06-07 2010-06-29 Wisconsin Alumni Research Foundation Blood-brain barrier targeting antibodies
EP2046833B9 (en) 2006-07-14 2014-02-19 AC Immune S.A. Humanized antibody against amyloid beta
EP2051752A4 (en) 2006-07-27 2011-10-19 Univ Virginia Patent Found SYSTEM AND METHOD FOR THE INTRA-CRUCIAL IMPLANTATION OF THERAPEUTIC OR DIAGNOSTIC MEANS
US20090092660A1 (en) 2006-08-09 2009-04-09 Trinity Biosystems, Inc. Methods and compositions for needleless delivery of particles
WO2008021412A2 (en) 2006-08-14 2008-02-21 Biorexis Pharmaceutical Corporation Interferon beta and transferrin fusion proteins
US8759297B2 (en) * 2006-08-18 2014-06-24 Armagen Technologies, Inc. Genetically encoded multifunctional compositions bidirectionally transported between peripheral blood and the cns
WO2008027236A2 (en) 2006-08-30 2008-03-06 Genentech, Inc. Multispecific antibodies
US8821943B2 (en) 2006-09-12 2014-09-02 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Methods and compositions for targeted delivery of therapeutic agents
WO2008033395A2 (en) 2006-09-14 2008-03-20 Biorexis Pharmaceutical Corporation Melanocortin and transferrin fusion proteins
WO2008050133A2 (en) 2006-10-27 2008-05-02 Zapaloid Limited Inhibition of beta-amyloid aggregation
CN101245107B (zh) * 2007-02-14 2010-10-13 中国人民解放军军事医学科学院生物工程研究所 抗人转铁蛋白受体人源抗体及其应用
US20100113602A1 (en) 2007-02-27 2010-05-06 The United States Of America,As Represented By The Secretary,Department Of Health And Human Services Use of histone deacetylase inhibitors for the treatment of central nervous system metastases
PL2308514T3 (pl) 2007-03-23 2013-11-29 To Bbb Holding B V Koniugaty do ukierunkowanego dostarczania leku poprzez barierę krew-mózg
EP1975178A1 (en) 2007-03-30 2008-10-01 f-star Biotechnologische Forschungs- und Entwicklungsges.m.b.H. Transcytotic modular antibody
WO2008147526A1 (en) 2007-05-23 2008-12-04 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Targeted carriers for intracellular drug delivery
ES2529174T3 (es) 2007-06-12 2015-02-17 Ac Immune S.A. Anticuerpos humanizados para amiloide beta
NZ581835A (en) 2007-06-12 2012-09-28 Ac Immune Sa Monoclonal anti beta amyloid antibody
GB0711424D0 (en) 2007-06-13 2007-07-25 Novozymes Delta Ltd Recombinant transferrin mutants
US7973019B1 (en) 2007-10-03 2011-07-05 Alcon Research, Ltd. Transferrin/transferrin receptor-mediated siRNA delivery
GB0725065D0 (en) 2007-12-21 2008-01-30 Got A Gene Ab Method
JP6157046B2 (ja) 2008-01-07 2017-07-05 アムジェン インコーポレイテッド 静電的ステアリング（ｅｌｅｃｔｒｏｓｔａｔｉｃｓｔｅｅｒｉｎｇ）効果を用いた抗体Ｆｃヘテロ二量体分子を作製するための方法
US8420620B2 (en) 2008-01-24 2013-04-16 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Induced internalization of surface receptors
SG189682A1 (en) 2008-03-31 2013-05-31 Glaxo Group Ltd Drug fusions and conjugates
WO2009149281A1 (en) 2008-06-04 2009-12-10 The Government Of The United States Of America, As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Immunotoxins and uses thereof
WO2009155609A1 (en) * 2008-06-20 2009-12-23 Oklahoma Medical Research Foundation IMMUNOGENIC MEMAPSIN 2 β-SECRETASE PEPTIDES AND METHODS OF USE
US20100077498A1 (en) 2008-09-11 2010-03-25 Pardridge William M Compositions and methods for blood-brain barrier delivery in the mouse
US8946165B2 (en) 2008-09-29 2015-02-03 The Regents Of The University Of California Compounds for reversing and inhibiting protein aggregation, and methods for making and using them
US20100098693A1 (en) 2008-10-07 2010-04-22 Pardridge William M Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of organophosphatases
RU2636046C2 (ru) 2009-01-12 2017-11-17 Сайтомкс Терапьютикс, Инк Композиции модифицированных антител, способы их получения и применения
US8530629B2 (en) * 2009-01-30 2013-09-10 Ab Biosciences, Inc. Lowered affinity antibodies and uses therefor
CA2748889A1 (en) 2009-03-18 2010-09-23 Armagen Technologies, Inc. Compositions and methods for blood-brain barrier delivery of igg-decoy receptor fusion proteins
US20120156138A1 (en) 2009-04-14 2012-06-21 Smith Larry J Methods and Compositions for the Treatment of Medical Conditions Involving Cellular Reprogramming
WO2010146058A1 (en) * 2009-06-15 2010-12-23 Vib Vzw Bace1 inhibitory antibodies
JP2012533587A (ja) 2009-07-22 2012-12-27 セニックス バイオサイエンス ゲーエムベーハー 自然に存在する細胞内輸送経路を介して化合物を送達するための送達システム及びコンジュゲート
UY32808A (es) * 2009-07-29 2011-02-28 Abbott Lab Inmunoglobulinas como dominio variable dual y usos de las mismas
WO2011057216A1 (en) 2009-11-06 2011-05-12 The Pennsylvania State Research Foundation Bioconjugation of calcium phosphosilicate nanoparticles for selective targeting of cells in vivo
FR2953841B1 (fr) 2009-12-16 2011-12-30 Centre Nat Rech Scient Anticorps diriges contre le recepteur de la transferrine et leurs utilisations pour l'immunotherapie des tumeurs qui dependent du fer
CA2785907A1 (en) 2009-12-29 2011-07-28 Emergent Product Development Seattle, Llc Ron binding constructs and methods of use thereof
US8734799B2 (en) 2010-04-13 2014-05-27 The Regents Of The University Of California Unconjugated anti-TfR antibodies and compositions thereof for the treatment of cancer
FR2959416B1 (fr) 2010-05-03 2012-06-22 Monoclonal Antibodies Therapeutics Mat Biopharma Utilisation d'anticorps anti-cd71 pour la preparation d'un medicament
CA2818173C (en) 2010-11-30 2022-05-03 Genentech, Inc. Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses therefor
JP6210017B2 (ja) 2014-04-17 2017-10-11 マツダ株式会社 自動変速機

Also Published As

Publication number Publication date
CN110251668A (zh) 2019-09-20
US20150329636A1 (en) 2015-11-19
BR112013013083A2 (pt) 2016-12-13
TWI689314B (zh) 2020-04-01
JP6490721B2 (ja) 2019-03-27
WO2012075037A1 (en) 2012-06-07
JP2017105786A (ja) 2017-06-15
AU2011336716A1 (en) 2013-05-09
ZA201303572B (en) 2017-06-28
JP2019116485A (ja) 2019-07-18
US20170260292A1 (en) 2017-09-14
PH12013501096B1 (en) 2017-11-08
PL2646470T3 (pl) 2017-07-31
US9611323B2 (en) 2017-04-04
IL282877A (en) 2021-06-30
SG190900A1 (en) 2013-07-31
EP2646470A1 (en) 2013-10-09
CN103443125B (zh) 2019-05-03
MX2013005793A (es) 2013-07-22
MX358367B (es) 2018-08-15
ECSP13012724A (es) 2013-08-30
JP2014500886A (ja) 2014-01-16
TW202021621A (zh) 2020-06-16
EP2646470B1 (en) 2017-03-01
KR20200038560A (ko) 2020-04-13
MA34749B1 (fr) 2013-12-03
SI2646470T1 (sl) 2017-05-31
KR102052571B1 (ko) 2019-12-05
KR20130137654A (ko) 2013-12-17
US20210292440A1 (en) 2021-09-23
US10941215B2 (en) 2021-03-09
JP6800260B2 (ja) 2020-12-16
DK2646470T3 (en) 2017-05-08
TW201801743A (zh) 2018-01-16
CN103443125A (zh) 2013-12-11
HRP20170590T1 (hr) 2017-06-30
US20120171120A1 (en) 2012-07-05
EA034333B1 (ru) 2020-01-29
NZ724348A (en) 2019-12-20
CA2818173A1 (en) 2012-06-07
CY1118906T1 (el) 2018-01-10
AU2016202447B2 (en) 2018-05-17
MY188469A (en) 2021-12-10
EP3208282A1 (en) 2017-08-23
PT2646470T (pt) 2017-05-03
PE20140981A1 (es) 2014-08-20
CR20130255A (es) 2013-09-18
CA2818173C (en) 2022-05-03
JP6125430B2 (ja) 2017-05-10
CL2013001535A1 (es) 2014-03-07
TW201305200A (zh) 2013-02-01
LT2646470T (lt) 2017-06-12
UA117801C2 (uk) 2018-10-10
PH12013501096A1 (en) 2013-08-05
KR20190138314A (ko) 2019-12-12
NZ706751A (en) 2016-10-28
US20190202936A1 (en) 2019-07-04
KR102188544B1 (ko) 2020-12-08
CO6721052A2 (es) 2013-07-31
ES2631356T3 (es) 2017-08-30
AR084020A1 (es) 2013-04-17
EA201390785A1 (ru) 2013-11-29
AU2011336716B2 (en) 2016-01-21
KR102099462B1 (ko) 2020-04-10

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US10941215B2 (en) Low affinity blood brain barrier receptor antibodies and uses thereof
US11167038B2 (en) Methods for improving safety of blood-brain barrier transport
RS58928B1 (sr) Transporter za krvno-moždanu barijeru
HK1191341B (zh) 低亲和力血脑屏障受体抗体及其用途
HK1259793B (zh) 用於提高血脑屏障转运的安全性的方法