RS56101B1 - 4'-azido-3'-fluoro supstituisani derivati nukleozida kao inhibitori hcv rnk replikacije - Google Patents

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Pronalazak se odnosi na derivate nukleozida koji deluju kao inhibitori RNK replikacije HCV replikona. Posebno, pronalazak se odnosi na upotrebu nukleozidnih derivata purina i pirimidina kao inhibitora subgenomske RNK replikacije virusa hepatitisa C (Hepatitis C Virus HCV) i farmaceutskih kompozicija koje obuhvataju takva jedinjenja.

[0002] Virus hepatitisa C je vodedi uzročnik hronične bolesti jetre u svetu. Pacijenti koji su inficirani HCV-om se nalaze u riziku razvijanja ciroze jetre i kasnijim hepatocelularnim karcionomom i stoga je HCV glavna indikacija za transplantaciju jetre. Samo dve odobrene terapije su trenutno dostupne za lečenje HCV infekcije (R. G. Gish, Sem. Liver. Dis., 1999, 19, 35). One obuhvataju interferon-α monoterapiju i, skoriju, kombinovanu terapiju nukleozida, ribavirin (Virazole), sa interferonom-α.

[0003] Mnogi lekovi koji su odobreni za lečenje virusnih infekcija su nukleozidi ili analozi nukleozida i vedina ovih analoga nukleozida inhibira virusnu replikaciju, pratedi konverziju u odgovarajude trifosfate kroz inhibiciju enzima virusnih polimeraza. Ova konverzija u trifosfate je uobičajeno posredovana delijskim kinazama i stoga direktna procena nukleozida kao inhibitora replikacije HCV se pogodno odvija testovima koji su zasnovani na delijama. Za HCV nedostaje, pravi test virusne replikacije koji je zasnovan na deliji ili životinjski model infekcije.

[0004] Antivirusna aktivnost monofluoro i difluoro analoga 4’-azidocitidina prema replikaciji virusa hepatitisa C, je procenjena od strane David B. Smith et al., J. Med. Chem., 2009, 52, 2971-2978. Shodno tome, najdelotvornija jedinjenja bila su 4’-azido-2’-fluoro- i 4’-azido-2’,2’-difluoro- derivati 4’-azidocitidin pri čemu su 3’-fluoro analozi 4’-azidocitidina u potpunosti neaktivni.

[0005] Virus hepatitisa C pripada familiji Flaviviridae. To je RNK virus, RNK genom kodira veliki poliprotein koji nakon obrade proizvodi neophodnu mašineriju za replikaciju koja osigurava sintezu nasledne RNK. Veruje se da su u RNK replikaciju uključeni vedina od ne-strukturnih proteina koje kodira HCV RNK genom. Lohmann et al. [V. Lohmann et al., Science, 1999, 285, 110-113] su opisali konstrukciju humane hepatom (Huh7) delijske linije gde su uvedeni subgenomski molekuli HCV RNK i imaju visoko efikasnu replikaciju . Veruje se da je mehanizam replikacije RNK u ovim delijskim linijama identičan sa replikacijom HCV RNK genoma pune dužine u inficiranim hepatocitima. Subgenomski HCV cDNK klonovi koji se upotrebljavaju za izolaciju ovih delijskih linija formirali su osnovu za razvoj testa na bazi delija za identifikaciju nukleozidnih analoga inhibitora HCV replikacije.

PREGLED PRONALASKA

[0006] Jedinjenja formule I su korisna za lečenje bolesti koje su posredovane virusom hepatitisa C (HCV) i za farmaceutske kompozicije koje obuhvataju takva jedinjenja.

[0007] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I

pri čemu:

R<1>je H, C1-7haloalkil, ili aril, pri čemu je aril fenil ili naftil, po potrebi supstituisan sa jednom ili više C1-7alkil, C2-7alkenil, C2-7alkinil, C1-7 alkoksi, halo, C1-7haloalkil, -N(R<1a>)2, acilamino, -SO2N(R<1a>)<2>, -COR<1b>, -SO2(R<1c>),

-NHSO2(R<1c>), nitro ili cijano;

svaki R<1a>je nezavisno H ili C1-7alkil;

svaki R<1b>je nezavisno -OR<1a>ili -N(R<1a>)2;

svaki R<1c>je C1-7alkil;

R<2a>i R<2b>su nezavisno H ili C1-7alkil;

R<3>je C1-7alkil, fenil, ili fenil C1-7alkil;

R<4>je H, C<1-7>alkil, ili R<2b>i R<4>zajedno obrazuju (CH2)3;

R<5>je H, C(=O)R<1c>, C(=O)R<1b>, P(=O)(OR<1>)(OR<1a>), ili P(=O)(OR<1>)(NR<4>R<7>); i

R<6>je

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0008] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje I za upotrebu u lečenju infekcije izazvane virusom hepatitisa C (HCV), pomenuta upotreba obuhvata davanje pacijentu kome je potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja formule I.

[0009] Pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja obuhvata jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljivi ekscipijent.

DETALJNI OPIS PRONALASKA

[0010] Jedinjenja formule I su inhibitori replikacije subgenomskog virusa hepatitisa C u delijskoj liniji hepatoma. Ova jedinjenja imaju potencijal da budu efikasna kao antivirusna jedinjenja za lečenje HCV infekcija kod ljudi.

[0011] Termin "alkil" kao što se ovde koristi označava pravi ili razgranati lanac ugljenvodoničnog ostatka koji sadrži 1 do 12 atoma ugljenika. Poželjno, termin "alkil" značava pravi ili razgranati lanac ugljenvodoničnog ostatka koji sadrži 1 do 7 ugljenikovih atoma. Najpoželjniji su metil, etil, propil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil ili pentil.

[0012] Termin "cikloalkil" kao što se ovde koristi označava cikloalkil grupu koja sadrži 3 do 7 ugljenikovih atoma, npr. ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil ili cikloheptil.

[0013] Termin "alkoksi" kao što se ovde koristi označava pravi ili razgrananti lanac alkil-oksi grupe pri čemu se deo"alkil" definiše gore u tekstu kao metoksi, etoksi, n-propiloksi, i-propiloksi, n-butiloksi, ibutiloksi, terc-butiloksi, pentiloksi, heksiloksi, heptiloksi uključujudi njihove izomere.

[0014] Termin "alkoksialkil" kao što se ovde koristi označava alkoksi grupu kao što se definiše u tekstu koja je povezana za alkil grupu kao što se definiše gore u tekstu. Primeri su metoksimetil, metoksietil, metoksipropil, etoksimetil, etoksietil, etoksipropil, propiloksipropil, metoksibutil, etoksibutil, propiloksibutil, butiloksibutil, terc-butiloksibutil, metoksipentil, etoksipentil, propiloksipentil uključujudi njihove izomere.

[0015] Termin "alkenil" kao što se ovde koristi označava radikal ugljovodičnog lanca koji ima od 2 do 7 ugljenikovih atoma, poželjno od 2 do 4 ugljenikovih atoma, i ima jednu ili dve olefinske dvostruke veze, poželjno jednu olefinsku dvostruku vezu. Primeri su vinil, 1-propenil, 2-propenil (alil) ili 2 -butenil (krotil).

[0016] Termin "alkinil" kao što se ovde koristi označava radikal ugljovodičnog lanca koji ima od 2 do 7 ugljenikovih atoma, poželjno 2 do 4 ugljenikovih atoma, i ima jednu ili gde je mogude tri dvostruke veze, poželjno jednu trostruku vezu. Primeri su etinil, 1-propinil, 2-propinil, 1-butinil, 2-butinil ili 3-butinil.

[0017] Termin "hidroksialkil" kao što se ovde koristi označava pravi ili razgranati lanac alkil grupe kao što se definiše gore u tekstu, pri čemu su 1, 2, 3 ili više atoma vodonika supstutuisani sa hidroksi grupom. Primeri su hidroksimetil, 1-hidroksietil, 2-hidroksietil, 1-hidroksipropil, 2-hidroksipropil, 3-hidroksipropil, hidroksiizopropil, hidroksibutil i slično.

[0018] Termin "haloalkil" kao što se ovde koristi označava pravi ili razgranati lanac alkil grupe kao što se definiše gore u tekstu, pri čemu su 1, 2, 3 ili više atoma vodonika supstutuisani sa halogenom. Primeri su 1-fluorometil, 1-hlorometil, 1-bromometil, 1-jodometil, trifluorometil, trihlorometil, tribromometil, trijodometil, 1-fluoroetil, 1-hloroetil, 1-bromoetil, 1-jodoetil, 2-fluoroetil, 2-hloroetil, 2-bromoetil, 2-jodoetil, 2,2-dihloroetil, 3-bromopropil ili 2,2,2-trifluoroetil i slično.

[0019] Termin "alkiltio" kao što se ovde koristi označava pravi ili razgranati lanac (alkil)S- grupe pri čemu je "alkil" deo definisan kao gore u tekstu. Primeri su metiltio, etiltio, n-propiltio, i-propiltio, nbutiltio, i-butiltio ili terc.-butiltio.

[0020] Termin "aril" kao što se ovde koristi označava fenil ili naftil (npr.1-naftil, 2-naftil ili 3-naftil).

[0021] Termin "heterociklil" kao što se ovde koristi označava zasideni, delimično nezasideni ili aromatični monociklični, biciklični ili triciklični heterociklični sistem koji sadrži jedan ili više hetero atoma, koji su odabrani od azota, kiseonika i sumpora koji takođe može da bude spojen sa zasidenim, delimično nezasidenim ili aromatičnim karbociklom ili heterociklom.

[0022] Primeri pogodnih heterocikla su oksazolil, izoksazolil, furil, tetrahidrofuril, 1,3-dioksolanil, dihidropiranil, 2-tienil, 3-tienil, pirazinil, izotiazolil, dihidrooksazolil, pirimidinil, tetrazolil, 1-pirolidinil, 2-pirolidinil, 3-pirolidinil, pirolidinonil, (N-oksid)-piridinil, 1-pirolil, 2-pirolil, triazolil npr. 1,2,3-triazolil ili 1,2,4-triazolil, 1-pirazolil, 2-pirazolil, 4-pirazolil, piperidinil, morfolinil (npr. 4-morfolinil), tiomorfolinil (npr. 4-tiomorfolinil), tiazolil, piridinil, dihidrotiazolil, imidazolidinil, pirazolinil, piperazinil, 1-imidazolil, 2-imidazolil, 4-imidazolil, tiadiazolil npr. 1,2,3-tiadiazolil, 4-metilpiperazinil, 4-hidroksipiperidin-1-il.

[0023] Termin "acil" ("alkilkarbonil") kao što se ovde koristi označava grupu koja ima formulu C(=O)R pri čemu je R vodonik, pravi ili razgranati lanac ugljovodoničkog ostatka koji sadrži 1 do 7 atoma ugljenika ili fenil grupu. Najpoželjnije acil grupe su one gde je R vodonik, nesupstituisani pravi lanac ili razgranati ugljovodonični ostatak koji sadrži 1 do 4 atoma ugljenika ili fenil grupu.

[0024] Termin halogen označava fluor, hlor, brom ili jod, poželjno fluor, hlor, brom.

[0025] U grafičkom prikazu jedinjenja prikazanih u ovom opisu, zadebljana linija koja se sužava ( ) ukazuje na supstituent koji je iznad ravni prstena u odnosu na kog se nalazi asimetrični ugljenik i isprekidana linija ( ) ukazuje na supstituent koji je ispod ravni prstena u odnosu na koga se nalazi asimetrični ugljenik.

[0026] Jedinjenja formule I iskazuju stereoizmerizam. Ova jedinjenja mogu da budu bilo koji izomer jedinjenja formule I ili smeše ovih izomera. Jedinjenja i intermedijeri predmetnog pronalaska koji imaju jedan ili više asimetričnih ugljenikovih atoma mogu da se dobiju kao racemske smeše stereoizomera koji mogu da se razdvoje.

[0027] Jedinjenja formule I ispoljavaju tautomeriju koja znači da jedinjenja ovog pronalaska mogu da postoje kao dva ili više hemijskih jedinjenja koja su sposobna za laku interkonverziju. U mnogim slučajevima, to samo znači razmenu vodonikovog atoma između dva druga atoma, na bilo koji gde se formira kovalentna veza. Tautomerna jedinjenja postoje u mobilnoj ravnoteži jedan u odnosu na drugi, tako da pokušaj da se dobiju razdvojene supstance obično za rezultat ima obrazovanje smeše koja pokazuje sva hemijska i fizička svojstva koja se očekuju na osnovu struktura komponenti.

[0028] Najčešdi tip tautomerizma je onaj koji uključuje karbonil, ili keto, jedinjenja i nezasidena hidroksilna jedinjenja, ili enola. Strukturna promena je prelaz vodonikovog atoma između atoma ugljenika i kiseonika, sa preuređenjem veza. Na primer, kod mnogih alifatičnih aldehida i ketona, kao što je acetaldehid, keto oblik je najzastupljeniji; kod fenola, enolni oblik je glavna komponenta.

[0029] Jedinjenja formule I koja su osnovna mogu da obrazuju farmaceutski prihvatljive soli sa neorganskim kiselinama kao što su halogenvodonične kiseline (npr. hlorovodonična kiselina i bromovodonična kiselina), sumporna kiselina, azotna kiselina i fosforna kiselina, i slično, i sa organskim kiselinama (npr. sa sirdetnom kiselinom, vinskom kiselinom, dilibarnom kiselinom, fumarnom kiselinom, maleinskom kiselinom, jabučnom kiselinom, salicilnom kiselinom, limunskom kiselinom, metansulfonskom kiselinom i p-toluen sulfonskom kiselinom, i slično). Obrazovanje i izolacija takvih soli moze da se izvede prema postupcima koji su poznati u oblasti tehnike.

Inhibitori HCV-a

[0030] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I

pri čemu:

R<1>je H, C1-7haloalkil, ili aril, pri čemu je aril fenil ili naftil, po potrebi supstituisan sa jednim ili više C1-7alkil, C2-7alkenil, C2-7alkinil, C1-7alkoksi, halo, C1-7haloalkil, -N(R<1a>)2, acilamino, -SO2N(R<1a>)2, -COR<1b>, -SO2(R<1c>),

-NHSO2(R<1c>), nitro ili cijano;

svaki R<1a>je nezavisno H ili C1-7alkil;

svaki R<1b>je nezavisno -OR<1a>ili -N(R<1a>)2;

svaki R<1c>je C1-7alkil;

R<2a>i R<2b>su (i) nezavisno H ili C1-7alkil; (ii) R<2a>je H i R<2b>i R4 zajedno obrazuju (CH2)3; ili (iii) R2ai R2bzajedno su C1-7alkil;

R<3>je C1-7alkil, fenil, ili fenil C1-7alkil;

R<4>je H, C1-7alkil, ili R<2b>i R<4>zajedno obrazuju (CH2)3;

R<5>je H, C(=O)R<1c>, C(=O)R<1b>, P(=O)(OR<1>)(OR<1a>), ili P(=O)(OR<1>)(NR<4>R<7>); i

R<6>je

ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0031] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<4>H.

[0032] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<6>

[0033] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<6>

[0034] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R4je H i R<6>je

[0035] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<4>je H i R<6>je

[0036] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>naftil ili fenil.

[0037] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>naftil.

[0038] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I pri čemu je R<1>fenil.

[0039] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>fenil i R<4>je H.

[0040] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>fenil i R<4>je H, i R<6>je

[0041] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>fenil i R<4>je H, i R<6>je

[0042] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>je naftil i R<4>je H.

[0043] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>je naftil i R<4>je H, i R<6>je

[0044] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu je R<1>je naftil i R<4>je H, i R<6>je

[0045] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<2a>je H.

[0046] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<2b>je metil.

[0047] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<2a>je H i R<2b>je metil.

[0048] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2a>je H, i R<6>je

[0049] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2b>je metil, i R<6>je

[0050] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2a>je H i R<2b>je metil, i R<6>je

[0051] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<3>je izopropil.

[0052] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<3>je etil.

[0053] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<3>je benzil.

[0054] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil i R<3>je izopropil.

[0055] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, i R<3>je izopropil.

[0056] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, i R<3>je izopropil, i R<6>je

[0057] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<3>je etil, i R<6>je

[0058] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<3>je benzil, i R<6>je

[0059] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<3>je izopropil, i R<6>je

[0060] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<3>je etil, i R<6>je

[0061] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<3>je benzil, i R<6>je

[0062] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2a>je H, R<3>je izopropil, i R<6>je

[0063] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je izopropil, i R<6>je

[0064] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2a>je H, R<3>je<izpropil, i R6 je>

[0065] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je izopropil, i R<6>je

[0066] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<5>je H.

[0067] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil i R<5>je H.

[0068] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, i R<5>je H.

[0069] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, i R<5>je H i R<6>je

[0070] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H,R<2a>je H, R<5>je H, i R<6>je

[0071] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H,R<2a>je H, R<2b>je metil, R<5>je H, i R<6>je

[0072] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H,R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je izopropil, R<5>je H, i R<6>je

[0073] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>is H,R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je etil, R<5>je H, i R<6>je

[0074] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H,R<2a>je H, R<2b>je metil,<R3 je benzil, R5 je H, i R6 je>

[0075] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H,R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je izopropil, R<5>je H, i R<6>je

[0076] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H,R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je etil, R<5>je H, i R<6>je

[0077] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H,R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je benzil, R<5>je H, i R<6>je

[0078] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<5>je C(=O)R<1c>.

<[0079] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R1 je naftil, R4 je H, R2a je H, R2b je metil,>R<3>je izopropil, R<5>je C(=O)R<1c>, i R<6>je

[0080] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1c>je etil.

[0081] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I, pri čemu R<1>je naftil, R<4>je H, R<2a>je H, R<2b>je metil, R<3>je izopropil, R<5>je C(=O)CH2CH3, i R<6>je

[0082] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je odabrano od grupe koju čine:

izopropil estar (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}-propionske kiseline; etil estar (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3 ,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}- propionske kiseline;

etil estar (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]- propionske kiseline; izopropil estar (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline; benzil estar (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline; etil estar (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksitetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline; izopropil estar (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}-propionske kiseline; izopropil estar (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-hidroksi-fosforilamino}-propionske kiseline; i

izopropil estar (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-Amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-propioniloksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline.

[0083] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebu u lečenju infekcije virusa hepatitisa C (HCV), pomenuta upotreba obuhvata davanje pacijentu kome je potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja formule I.

[0084] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotebu kao što je gore opisano, koje dalje obuhvata davanje modulatora imunog sistema ili antivirusnog agensa koji inhibira replikaciju HCV, ili njihovu kombinaciju.

[0085] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotebu kao što je gore opisano, pri čemu je modulator imunog sistema interferon ili hemijski derivatizovani interferon.

[0086] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotebe kao što je gore opisano, pri čemu se antivirusni agens odabira iz grupe koja se sastoji od HCV proteaznog inhibitora, HCV polimeraznog inhibitora, HCV inhibitora helikaze, HCV inhibitora primaze, HCV fuzionog inhibitora, i njihove kombinacije.

[0087] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebu u inhibiciji replikacije HCV u deliji koje obuhvata davanje jedinjenja formule I.

[0088] Pronalazak obuhvata kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule I i farmaceutski prihvatljivi ekscipijent.

[0089] Pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja formule I u pripremi leka za lečenje HCV-a.

[0090] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje, kompoziciju, ili upotrebu kao što se ovde opisuje.

Jedinjenja

[0091] Primeri reprezentativnih jedinjenja koji su obuhvadeni predmetnim pronalaskom i u okviru obima pronalaska dati su u slededoj tabeli. Ovi primeri i dobijanja koja slede obezbeđeni su da omogude stručnjacima u oblasti tehnike da jasnije razumeju i praktikuju predmetni pronalazak. Ne treba ih smatrati kao ograničenje obima pronalaska, ved samo kao njegovu ilustraciju i primer.

[0092] Uopšteno, nomenklatura koja se koristi u ovoj specifikaciji zasnovana je na AUTONOMTM v.4.0, Beilstein Institute kompjuterizovanom sistemu za dobijanje IUPAC sistematske nomenklature. Ukoliko postoji neslaganje između predstavljene slike strukture i imena koje je dato strukturi, tada vedi značaj treba dati predstavljenoj slici strukture. Dodatno, ukoliko stereohemija strukture ili deo strukture nije naznačen sa, na primer, podebljanim ili isprekidanim linijama, struktura ili deo strukture treba tumačiti tako da obuhvata sve njene stereoizomere.

TABELA I oslikava primere jedinjenja prema generičkoj formuli I

(nastavak)

Sinteza

[0093] Ova specifikacija je povezana sa publikacijom Smith, David B.; Kalayanov, Genadiy; Sund, Christian; Winqvist,Anna; Maltseva, Tatiana; Leveque, Vincent J.-P.; Rajyaguru, Sonal; Le Pogam, Sophie; Najera, Isabel; Benkestock, Kurt; et al Journal of Medicinal Chemistry (2009), 52(9), 2971-2978.

Generalne šeme

[0094] Postupci koji su prethodno razmatrani, su opisani detaljnije u tekstu ispod:

Komercijalno dostupni nukleozid 3’-fluoro-3’-deoksiuridin (1) može takođe da se dobije prema postupcima koji su opisani od strane Gosselin, G. et al, Collect. Czech. Chem. Commun. (2006), Vol.

71, No. 7, 991-1010. Jodinacija predena eliminacijom joda pod osnovnim uslovima može da dovede do intermedijera 3. Uvođenjem azido grupe na poziciji 4’ kod intermedijera 3, pradena oksidativnim premeštanjem 5’-joda sa m-hloroperbenzoevom kiselinom u intermedijeru 4 da se dobije 5 može da se postigne prema postupcima koji su opisani od strane Smith, D. B. et al, J. Med. Chem.(2009), 52(9), 2971-2978. Otklanjanje zaštite na 5’ m-hlorobenzoil grupama u intermedijeru 5 daje inermedijerni uridin 6 (šema 1).

Šema 1.

[0095] Citidin intermedijer 10 je prikazan od strane Smith, D. B. et al in J. Med. Chem. (2009), 52(9), 2971-2978. Alternativno, 10 može efikasno da se dobije pomodu sinteznog puta koji je prikazan u šemi 2.

Šema 2

[0096] Guanozin intermedijer 12 (referenca) može da se dobije reakcijom transaminacije od intermedijera 8 sa zaštidenim guaninom koju sledi reakcija uklanjanja zaštitnih grupa (šema 3).

Šema 3.

[0097] Jedinjenja fosforoamidata predmetnog pronalaska (ili referentna jedinjenja) mogu da se dobiju pomodu kondenzacije nukleozida 6 ili 10 (ili referentnog nukleozida 12) sa pogodno supstituisanim fosfohloridatnim jedinjenjem 15 u prisustvu jake baze (šema 4). Kondenzacija može da se izvrši na nezaštidenim nukleozidom 6 ili 10 (ili na nezaštidenim referentnim nukleozidom 12). Proizvodi reakcije kuplovanja 16 u formuli I se inicijalno dobijaju kao smeše dva diastereomera pod reakcijom kuplovanja i mogu da se razdvoje prema njihovim odgovarajudim hiralnim enantiomerima upotrebom hiralne kolone, hiralnog HPLC, ili hiralne SFC hromatografije.

Šema 4.

[0098] Reakcija kondenzacije takođe može da se izvede na zaštidenom nukleozidu 6 ili 10 (ili na zaštidenom referentnom nukleozidu 12). Na primer, nukleozid 6 može da bude zaštiden na poziciji 2’ da se dobije intermedijer 17. Reakcija kondenzacije sa 17 može da dovede do jedinjenja 18 u formuli I sa poboljšanim prinosom. U slučaju da je R<5>trietilsilil grupa, 18 može da bude selektivno nezaštiden da se ukloni 2’- trietilsilil pomodu tretmana sa sirdetnom kiselinom ili mravljom kiselinom na sobnoj<temperaturi da se dobije jedinjenje 16 pri čemu je R6 citidin (šema 5).>

Šema 5.

Doziranje i primena:

[0099] Kao što je prikazano u tabeli gore u tekstu, jedinjenja formule I imaju potencijal da budu efikasna kao antivirusni lekovi za lečenje HCV infekcija kod ljudi, ili da se metabolišu do jedinjenja koja ispoljavaju takve aktivnosti.

[0100] U drugom izvođenju pronalaska, aktivno jedinjenje ili njegov derivat ili so može da se primeni u kombinaciji sa drugim antivirusnim agensom, kao što je anti-hepatitis agens, uključujudi one koji imaju formulu I. Kada se aktivno jedinjenje ili njegov derivat ili so primenjuju u kombinaciji sa drugim antivirusnim agensom aktivnost može da se poveda preko roditeljskog jedinjenja. To može lako da se testira pomodu pripreme derivata i testiranja njegove anti-HCV aktivnosti prema postupku koji se ovde opisuje.

[0101] Primena aktivnog jedinjenja može da ima opseg od kontinualne (infuzijom) do nekoliko oralnih primena po danu (na primer, Q.I.D) i može da uključuje oralnu, topikalnu parenteralnu, intramuskularniu, intravenoznu, subkutanu, transdermalnu (koja može da uključuje i sredstvo za poboljšanje prodiranja), bukalnu i supozitornu primenu, između drugih načina primene.

[0102] Nukleozidni derivati koji su supstituisani na 4’-poziciji, kao i njihove farmaceutski upotrebljive soli, mogu da se koriste kao lekovi u obliku bilo koje farmaceutske formulacije. Farmaceutska formulacija može da se primeni enteralno, ili oralno, npr. u obliku tableta, obloženih tableta, dražeja, čvrstih i mekih želatinskih kapsula, rastvora, emulzija, sirupa, ili suspenzija, ili rektalno, npr. u obliku supozitorija. Takođe mogu da se primene parenteralno (intramuskularno, intravenozno, subkutano ili intrasternalnom injekcijom ili tehnikama infuzije), npr. u obliku injekcije rastvora, nazalno, npr. u obliku nazalnih sprejeva, ili spreja za inhalaciju, lokalno i tako dalje.

[0103] Za dobijanje farmaceutskih preparata, nukleozidni derivati koji su 4’-supstituisani, kao i njihove farmaceutski upotrebljive soli, mogu da s formulišu sa farmaceutski inertnim, neorganskim ili organskim ekscipijentom za dobijanje tableta, obloženih tableta, dražeja, tvrdih i mekih želatinskih kapsula, rastvora, emulzija ili suspenzija.

[0104] Jedinjenja formule I mogu da se fomulišu u smeši sa farmaceutski pihvatljivim nosačem. Na primer, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da se primene oralno kao farmaceutski prihvatljive soli. Zbog toga što su jedinjenja predmetnog pronalaska uglavnom rastvorljiva u vodi, mogu da se primene intravenozno u fiziološkom rastvoru (npr., puferovana na pH od približno 7,2 do 7,5). Konvencionalni puferi kao što su fosfati, bikarbonati ili citrati mogu da se koriste za ovu svrhu. Naravno, stručnjaci iz oblasti tehnike mogu da modifikuju formulacije sa učenjima predmetne specifikacije da bi obezbedili brojne formulacije za poseban način davanja bez činjenja kompozicije predmetnog pronalaska nestabilnom ili narušavanja njene terapeutske aktivnosti. Posebno, modifikacija predmetnih jedinjenja da bi postali više rastvorljivi u vodi ili drugom nosaču, na primer, može da se lako postigne pomodu manjih modifikacija (formulacije soli, esterifikacije, itd.) koje su dobro poznate stručnjacima u oblasti tehnike. Takođe je dobro poznato stručnjacima iz oblasti tehnike, da modifikuju način primene i režim doziranja određenog jedinjenja u cilju regulisanja farmakokinetika predmetnih pronalazaka za maksimalni korisni efekat kod pacijenata.

[0105] Za parenteralne formulacije, nosač de uglavnom da obuhvata sterinu vodu ili vodeni rastvor natrijum hlorida, iako drugi sastojci uključujudi one koji pomažu disperziju mogu da budu uključeni. Naravno, tamo gde se koristi sterilna voda, i održava kao sterilna, kompozicije i nosači takođe moraju da budu sterilisani. Suspenzije za davanje injekcijom takođe mogu da se pripreme, gde moraju da se upotrebe odgovarajudi tečni nosači, agensi za suspenziju i slično.

[0106] Pogodni ekscipijenti za tablete, obložene tablete, dražeje, i tvrde želatinske kapsule su, na primer, laktoza, skrob kukuruza i njegovi derivati, talk, i stearinska kiselina ili njene soli.

[0107] Po potrebi, tablete ili kapsule mogu da budu enterično obloženi ili sa odloženim oslobađanjem pomodu standardnih postupaka.

[0108] Pogodni ekscipijenti za meke želatinske kapsule su, na primer, biljna ulja, voskovi, masti, polučvrsti i čvrsti polioli.

[0109] Pogodni ekscipijenti za injekcione rastvore su, na primer, voda, rastvori soli, alkoholi, polioli, glicerin ili biljna ulja.

[0110] Pogodni ekscipijenti za supozitorije su, na primer, prirodna i čvrsta ulja, voskovi, masti, polutečni ili tečni polioli.

[0111] Pogodni ekscipijenti za rastvore i sirupe za enteralnu upotrebu su, na primer, voda, polioli, saharoza, invertni šeder i glukoza.

[0112] Farmaceutski preparati predmetnog pronalaska mogu takođe da se dobiju kao formulacije sa produženim oslobađanjem ili druge odgovarajude formulacije.

[0113] Farmaceutski preparati mogu takođe da sadrže konzervanse, sredstva za rastvaranje, stabilizatore, sredstva za vlaženje, emulgatore, zaslađivače, boje, arome, soli za podešavanje osmotskog pritiska, pufere, sredstva za maskiranje ili antioksidanse.

[0114] Farmaceutski preparati mogu takođe da sadrže druga terapeutski aktivna sredstva koja su poznata u oblasti tehnike.

[0115] Doza može da varira u okviru širokih granica i može, naravno, da se podesi prema individualnim zahtevima u svakom pojedinačnom slučaju. Za oralnu primenu, dnevna doza od između približno 0,01 i približno 100 mg/kg mase tela po danu treba da bude odgovarajuda u monoterapiji i/ili kombinovanoj terapiji. Poželjna dnevna doza je između približno 0,1 i približno 500 mg/kg mase tela, poželjnije 0,1 i približno 100 mg/kg mase tela i najpoželjnije 1,0 i približno 100 mg/kg mase tela po danu. Tipični preparat sadrži približno 5% do približno 95% aktivnog jedinjenja (mas./mas.). Dnevna doza može da se primeni kao jedna doza ili u podeljenim dozama, tipično između 1 i 5 doza po danu.

[0116] U određenim farmaceutskim doznim oblicima, oblik pro-leka jedinjenja, posebno uključujudi acilovane (acetilovane ili druge) derivate, poželjni su estri piridina i različiti oblici soli predmetnih jedinjenja. Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može da prepozna kako da lako modifikuje predmetna jedinjenja do oblika pro-leka da se olakša dostavljanje aktivnih jedinjenja u ciljnom mestu u okviru organizma domadina ili pacijenta. Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici takođe može da upotrebi prednost poželjnih farmaceutskih parametara pro-lek oblika, gde je to mogude, u dostavljenju predmetnih jedinjenja u ciljnom mestu u okviru organizma domadina ili pacijenta da se maksimizira planirani efekat jedinjenja.

Indikacije i tretman

[0117] Jedinjenja pronalaska i njihovi izomerni oblici i farmaceutski prihvatljive soli su korisni u lečenju i sprečavanju HCV infekcije.

[0118] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebu u lečenju infekcije virusom hepatitisa C (HCV), pomenuta upotreba obuhvata davanje pacijentu kome je potrebno terapijski efikasne količine jedinjenja formule I.

[0119] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebu u inhibiranju replikacije HCV-a u deliji, pomenuta upotreba obuhvata davanje jedinjenja formule I.

Kombinovana terapija

[0120] Jedinjenja pronalaska i njihovi izomerni oblici i farmaceutski prihvatljive soli su korisni u lečenju i sprečavanju same HCV infekcije ili kada se koriste u kombinaciji sa drugim jedinjenjima koja ciljaju virusne ili delijske elemente ili funkcije koje su uključene u životni cikllus HCV-a. Klase jedinjenja koja su korisna u pronalasku, uključuju, bez ograničenja, sve klase HCV antivirusa.

[0121] Za kombinovane terapije, mehaničke klase agenasa koji mogu da budu korisni kada se kombinuju sa jedinjenjima pronalaska uključuju, na primer, nukleozidne i ne-nukleozidne inhibitore HCV polimeraze, inhibitore proteaze, inhibitore helikaze, NS4B inhibitore i medicinske agense koji funkcionalno ihibiraju unutrašnje mesto za vezivanje ribozoma (IRES) i drugi medicinski agenski koji inhibiraju delijsko vezivanje HCV-a ili ulaz virusa, HCV-a RNK translaciju, RNK transkripciju HCV-a, replikaciju ili sazrevanje HCV-a, sklapanje ili oslobađanje virusa. Specifična jedinjenja u ovim klasama i koja su korisna u pronalasku uključuju, ali bez ograničenja, makrociklične, heterociklične i linearne HCV inhibitore proteaze kao što su telaprevir (VX-950), boceprevir (SCH-503034), narlaprevir (SCH-9005 18), ITMN- 191 (R-7227), TMC-435350 (a.k.a. TMC-435), MK- 7009, BI-201335, BI-2061 (ciluprevir), BMS-650032, ACH-1625, ACH-1095 (HCV NS4A ko-faktor inhibitor proteaze), VX-500, VX-8 13, PHX-1766, PHX2054, IDX- 136, IDX-3 16, ABT-450 EP-0 13420 (i kongeneri) i VBY-376; nukleozidni HCV polimerazni (replikazni) inhibitori koji su korisni u pronalasku uključuju, ali bez ograničenja, R7128, PSI-7851, IDX-184, IDX-102, R1479, UNX-08189, PSI-6130, PSI-938 i PSI-879 i i različite druge nukleozidne i nukleotidne analoge i HCV inhibitore uključujudi (ali bez ograničenja) one izvedene kao 2’-C-metil modifikovani nukleoz(t)idi, 4’-aza modifikovani nukleoz(t)idi, i 7’-deaza modifikovani nukleoz(t)idi. Ne-nukleozidni HCV polimerazni (replikazni) inhibitori koji su korisni u pronalasku, uključuju, ali bez ograničenja, HCV-796, HCV-371, VCH-759, VCH-916, VCH- 222, ANA-598, MK-3281, ABT-333, ABT-072, PF-00868554, BI-207127, GS-9190, A- 837093, JKT-109, GL-59728 i GL-60667.

[0122] Dodatno, jedinjenja pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa antagonistima ciklofilina i imunofilina (npr., bez ograničenja, DEBIO jedinjenja, NM-811 kao i ciklosporin i njegovi derivati), kinazni inhibitori, inhibitori proteina toplotnog šoka (npr., HSP90 i HSP70), drugi imunomodulatorni agensi koji uključuju, bez ograničenja, interferone (-alfa, -beta, -omega, -gama, -lambda ili sintetičke) kao što je Intron A, Roferon-A, Kanferon-A300, Advaferon, Infergen, Humoferon, Sumiferon MP, Alfaferon, IFN-β, Feron i slično; polietilen glikol derivatizovana (pegilovana) jedinjenja interferona, kao što su PEG interferon-α-2a (Pegasys), PEG interferon-α-2b (PEGIntron), pegilovani IFN-α-con1 i slično; dugotrajne formulacije i derivatizacije jedinjenja interferona kao što je interferon fuzionisan sa albuminom, Albuferon, Lokteron, i slično; interferoni sa različitim tipovima sistema za kontrolisano oslobađanje (npr., ITCA-638, omega-interferon dostavljen DUROS subkutanim sistemom za davanje); jedinjenja koja stimulišu sintezu interferona u delijama, kao što je resikvimod i slično; interleukini; jedinjenja koja podstiču razvoj tipa 1 odgovora pomodničkih T delija, kao što je SCV-07 i slično; agonisti TOLL-sličnog receptora kao što je CpG-10101 (aktilon), izotorabin, ANA773 i slično; timozin α-1; ANA-245 i ANA-246; histamin dihidrohlorid; propagermanijum; tetrahlorodekaoksid; ampligen; IMP-321; KRN-7000; antitela, kao što je civacir, XTL-6865 i slično i profilaktičke i terapeutske vakcine kao što su InnoVac C, HCV E1E2/MF59 i slično. Dodatno, bilo koja od gore opisanih upotreba uključuje davanje NS5A inhibitora, agonista Tip I interferon receptora (npr., IFN-α) i agonista Tip II interferon receptora (npr., IFN-γ) može da se poveda davanjem efikasne količine antagonista TNF-α. Primer, neograničavajudi antagonisti TNF-α su pogodni za upotrebu u takvim kombinacionim terapijama i uključuju ENBREL, REMICADE, i HUMIRA.

[0123] Dodatno, jedinjenja pronalaska mogu da se koriste u kombinaciji sa antiprotozoanima i drugim antivirusnim sredstvima koja se smatraju efikasnim u lečenju HCV infekcije, kao što je, bez ograničenja, pro-lek nitazoksanid. Nitazoksanid može da se koristi kao agens u kombinaciji sa jedinjenjima koja su prikazana u ovom pronalasku kao i u kombinaciji sa drugim agensima koji su korisni u lečenju HCV infekcije kao što je peginterferon α-2a i ribavirin.

[0124] Jedinjenja pronalaska takođe mogu da se koriste sa alternativnim oblicima interferona i pegilovanim interferonima ribavirin ili njegovim analozima (npr., tarabavarin, levoviron), mikroRNK, malim interferirajudim RNK jedinjenjima (npr., SIRPLEX-140-N i slično), nukleotidnim ili nukleozidnim analozima, imunoglobulinima, hepatoprotektantima, anti-inflamatornima agensima i drugim NS5A inhibitorima. Inhibitori drugih meta u HCV delijskom ciklusu uključuju NS3 helikazne inhibitore; NS4A ko-faktor inhibitore; inhibitori antisens oligonukleotida, kao što je ISIS-14803, AVI-4065 i slično; vektor-kodirane kratke RNK u obliku ukosnice (shRNK); HCV specifični enzimi kao što je heptazim, RPI, 13919 i slično; ulazni inhibitori kao što je HepeXC, HuMax-HepC i slično; alfa glukozidazni inhibitori kao što su celgosivir, UT-231B i slično; KPE-02003002 i BIVN 401 i IMPDH inhibitori. Druga ilustrativna HCV inhibitor jedinjenja uključuju ona koja su prikazana u slededim publikacijama: U.S. Pat. Nos. 5,807,876; 6,498,178; 6,344,465; and 6,054,472; PCT Patent Application Publication Nos. WO97/40028; WO98/4038 1; WO00/56331, WO02/04425; WO03/007945; WO03/010141; WO03/000254; WO01/32153; WO00/06529; WO00/18231; WO00/10573; WO00/13708; WO01/85172; WO003/037893; WO03/037894; WO03/037895; WO02/100851; WO02/100846; WO99/01582; WO00/09543; WO02/18369; WO98/17679, WO00/056331; WO98/22496; WO99/07734; WO05/073216, WO05/073195 and WO08/021927.

[0125] Dodatno, kombinacije, na primer, ribavirina i interferona, mogu da se primene kao višestruka kombinovana terapija sa najmanje jednim jedinjenjem pronalaska. Predmetni pronalazak nije ograničen na prethodno pomenute klase ili jedinjenja i razmatra poznata i nova jedinjenja i kombinacije biološki aktivnih agenasa. Namera je da kombinovane terapije predmetnog pronalaska uključuju bilo koju hemijski kompatibilnu kombinaciju jedinjenja ove grupe pronalaska sa drugim jedinjenjima grupe pronalaska ili drugim jedinjenjima koja se nalaze izvan grupe pronalaska, sve dok kombinacija ne eliminiše antivirusnu aktivnost jedinjenja ove grupe pronalaska ili antivirusne aktivnosti same farmaceutske kompozicije.

[0126] Kombinovana terapija može da bude sekvencijalna, što znači tretman sa jednim agensom prvo i potom sa drugim agensom (na primer, gde svaki tretman sadrži različito jedinjenje pronalaska ili gde jedan tratman sadrži jedinjenje pronalaska i drugi sadrži jedan ili više biološki aktivne agense) ili može da bude tretman sa oba agensa u istom vremenu (uporedo). Sekvencijalna terapija može da uključi razumno vreme nakon završetka prve terapije pre početka druge terapije. Tretman sa oba agensa istovremeno može da bude u istoj dnevnoj dozi ili u razdvojenim dozama. Kombinovana terapija ne treba da bude ograničena na dva agensa i može da uključi tri ili više agenasa. Doze za istovremenu i sekvencijalnu kombinovanu terapiju zavise od apsorpcije, distribucije, metabolizma i brzine izlučivanja komponenti kombinovane terapije kao i od drugih faktora koji su poznati stručnjaku u oblasti tehnike. Vrednosti doze se takođe razlikuju u zavisnosti od ozbiljnosti simptoma stanja koje treba da se ublaži. Dalje, treba razumeti, da za bilo kog posebnog subjekta, specifčni dozni režimi i rasporedi mogu da se prilagode tokom vremena prema potrebi pojedinca i proceni stručnjaka u oblasti koji daje ili nadgleda davanje kombinovane terapije.

[0127] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebu u lečenju infekcije virusom hepatitisa C (HCV), pomenuta upotreba obuhvata davanje pacijentu kome je potrebno terapeutski efikasne količine jedinjenja formule I.

[0128] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebu kao što je gore navedeno, dalje sadrži primenu modulatora imunskog sistema ili antivirusnog agensa koji inhibira replikaciju HCV-a, ili njihovu kombinaciju.

[0129] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebu kao što je gore navedeno, pri čemu je modulator imunskog sistema interferon ili hemijski derivatizovani interferon.

[0130] Pronalazak obezbeđuje jedinjenje formule I za upotrebe kao što se gore navodi, pri čemu se antivirusni agens bira iz grupe koja se sastoji iz HCV proteaznog inhibitora, HCV polimeraznog inhibitora, HCV helikaznog inhibitora, HCV inhibitora primaze, HCV fuzionog inhibitora, i njihove kombinacije.

PRIMERI

Opšti uslovi

[0131] Jedinjenja pronalaska mogu da se naprave pomodu različitih postupaka koji su prikazani u ilustrativnim sintetskim reakcijama koje su opisane ispod u delu Primeri.

[0132] Polazni materijali i reagensi upotrebljeni u dobijanju ovih jedinjenja generalno su dostupni ili od komercijalnih dobavljača, kao što su Aldrich Chemical Co., ili se dobijaju pomodu postupaka koji su poznati stručnjacima u oblasti, u skaldu sa procedurama koje su navedene u refencama kao što su Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons:New York, 1991, Volumes 1-15; Rodd’s Chemistry of Carbon Compounds, Elsevier Science Publishers, 1989, Volumes1-5 and Supplementals; and Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, Volumes 1-40. Treba imati u vidu da su šeme sintetičke reakcije koje su pokazane u sekciji primera samo ilustracija nekih postupaka pomodu kojih se jedinjenja pronalaska sintetišu, i mogu da se naprave različite modifikacije u ovim šemama sintetske reakcije, predložene su stručnjaku u oblasti tehnike u odnosu na prikaz koji se nalazi u opisu.

[0133] Polazni materijali i intermedijeri šema sintetske reakcije mogu da se izoluju i prečiste po potrebi upotrebom konvencionalnih tehnika, uključujudi ali bez ograničenja, ceđenje, destilaciju, kristalizaciju, hromatografiju, i slično. Takvi materijali mogu da se karakterišu pomodu konvencionalnih sredstava, uključujudi fizičke konstante i spektralne podatke.

[0134] Ukoliko nije drugačije naglašeno, reakcije koje su ovde opisane se tipično izvode u inertnoj atmosferi na atmosferskom pritisku u reakcionom temperaturnom opsegu od približno -78 °C do približno 150 °C, često od približno 0 °C do približno 125 °C, i često i povoljno na sobnoj (ili u ambijentu) temperaturi, npr., približno 20 °C.

[0135] Različiti supstituenti jedinjenja pronalaska mogu da se nalaze u polaznim jedinjenjima, kao dodatak bilo kom intermedijeru ili dodatak nakon obrazovanja finalnog proizvoda pomodu poznatih postupaka reakcija supstitucije ili konverzije Ukoliko su sami suptituenti reaktivni, onda sami supstituenti mogu da se zaštite prema postupcima koji su poznati u oblasti tehnike. Različite grupe mogu da se koriste koje štite i koje su poznate u oblasti tehnike. Primeri mnogih mogudih grupa mogu da se pronađu u "Protective Groups in Organic Synthesis" by Green et al., John Wiley and Sons, 1999. Na primer, nitro grupe mogu da se dodaju nitrovanjem i nitro grupe mogu da se konvertuju u druge grupe, kao što su amino grupe pomodu redukcije, i halogen pomodu diazotovanja amino grupe i zamenom diazo grupe sa halogenom. Acil grupe mogu da se dodaju Fridel-Kraftovom acilacijom. Acil grupe zatim mogu da se transformišu u odgovarajude alkil grupe pomodu različitih postupaka, uključujud Volff-Kišnerovu redukciju i Klemensonovu redukciju. Amino grupe mogu da budu alkilovane da se dobiju mono- i di-alkilamino grupe; i merkapto i hidroksi grupe mogu da se alkiluju da se dobiju odgovarajudi etri. Primarni alkoholi mogu da se oksiduju pomodu agenasa za oksidaciju koji su poznati u oblasti tehnike da se dobiju karboksilne kiseline ili aldehidi, i sekundarni alkoholi mogu da se oksiduju da se dobiju ketoni. Stoga, reakcije supstitucije ili izmene mogu da se upotrebe da obezbede različite supstituente u molekulu polaznog materijala, intermedijerima, ili finalnom proizvodu, uključujudi izolovane proizvode.

Skradenice

[0136] Skradenice u upotrebi u ovoj specifikaciji uključuju: acetil (Ac), sirdetnu kiselinu (HOAc), azobis-izobutirilnitril (AIBN), 1-N-hidroksibenzotriazol (HOBt), atmosfere (Atm), tečna hromatografija pod visokim pritiskom (HPLC), 9-borabiciklo[3.3.1]nonan (9-BBN ili BBN), metil (Me), tercbutoksikarbonil (Boc), acetonitril (MeCN), di-terc-butil pirokarbonat ili bok anhidrid (BOC2O), 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid (EDCI), benzoil (Bz), benzil (Bn), mhloroperbenzoeva kiselina (MCPBA), m-hlorobenzoeva kiselina (MCBA), butil (Bu), metanol (MeOH), benziloksikarbonil (cbz ili Z), tačka topljenja (mp), karbonil diimidazol (CDI), MeSO2-(mezil ili Ms), 1,4-diazabiciklo[2.2.2]oktan (DABCO), maseni spektar (ms) dietilaminosumpor trifluorid (DAST), metil tbutil etar (MTBE), dibenzilidenaceton (Dba), N-karboksianhidrid (NCA), 1,5-diazabiciklo[4.3.0]non-5-en (DBN), N-bromosukcinimid (NBS), 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (DBU), N-metilmorfolin (NMM), N-metilpirrolidon (NMP), 1,2-dihloretan (DCE), piridinijum hlorhromat (PCC), N,N’-dicikloheksilkarbodiimid (DCC), piridinijum dihromat (PDC), dihlormetan (DCM), propil (Pr), dietil azodikarboksilat (DEAD), fenil (Ph), di-izo-propilazodikarboksilat , DIAD, kilogrami po kvadratnom inču (psi), di-izo-propiletilamin (DIPEA), piridin (pyr), di-izo-butilaluminijumumhidrid, DIBAL-H, sobna temperatura, rt ili RT, N,N-dimetil acetamid (DMA), terc-butildimetilsilil ili t-BuMe2Si, (TBDMS), 4-N,N-dimetilaminopiridin (DMAP), trietilamin (Et3N ili TEA), N,N-dimetilformamid (DMF), triflat ili CF3SO2- (Tf), dimetil sulfoksid (DMSO), trifluorosirdetna kiselina (TFA), 1,1’-bis-(difenilfosfino)etan (dppe), 2,2,6,6-tetrametilheptan-2,6-dion (TMHD), 1,1’-bis-(difenilfosfino)ferocen (dppf), hromatografija na tankom sloju (TLC), etil acetat (EtOAc), tetrahidrofuran (THF), dietil etar (Et2O), trimetilsilil ili Me3Si(TMS), etil (Et), p-toluensulfonska kiselina monohidrat (TsOH ilir pTsOH), litijum heksametil disilazan (LiHMDS), 4-Me-C6H4SO2-ili tozil (Ts), izo-propil (i-Pr), N-uretan-N-karboksianhidrid (UNCA), etanol (EtOH). Konvencionalna nomenklatura uključujudi prefikse norman (n), izo (i-), sekundarni (sec-), tercijerni (tert-) i neo imaju svoje uobičajeno značenje kada se koriste zajedno sa alkilnim ostatkom. (J. Rigaudy and D. P. Klesney, Nomenclature in Organic Chemistry, IUPAC 1979 Pergamon Press, Oxford.).

Preparativni primeri

Preparat 1

Dobijanje intermedijera hiralnog 1-((2R,3S,4S,5S)-4-fluoro-3-hidroksi-5-jodometil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona

[0137]

[0138] Hiralni 3’-deoksi-3’- -fluoro-uridin (Green ChemPharma) (5,2 g, 21 mmol) i PPh3(7,7 g, 29 mmol) se rastvaraju u CH3CN/piridinu (95:5, 250 mL). Jod (7,0 g, 27,5 mmol) se dodaje i reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi pod N212 h. Voda (80 mL) se dodaje, i rastvarač isparava do isušivanja pod uslovima smanjenog pritiska. Azeotropna destilacija sa CH3CN i zatim sa CHCl3se izvodi da se ukloni ostatak vode. Ostatak se prečišdava pomodu hromatografije sa kolonom od silika gela (2-4% EtOH u CH2Cl2) da se dobije proizvod iz naziva (5 g).<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 11,45 (s, 1H), 7,72-7,69 (d, J=8.1Hz, 1H), 5,87-5,84 (d, J=8.1Hz, 1H), 5,74-5,71 (m,2H), 5,00-4,80 (dd, J = 54,3Hz, 4,2Hz, 1H), 4,53-4,41 (m, 1H), 4,32-4,19 (m, 1H), 3,56-3,40 (m, 2H).

Preparat 2

Dobijanje intermedijera hiralnog 1-((2R,3S,4S)-4-fluoro-3-hidroksi-5-metilen-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona

[0139]

[0140] Hiralnom 1-((2R,3S,4S,5S)-4-fluoro-3-hidroksi-5-jodometil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2,4-dion (10,7 g) u metanolu (650 mL) se dodaje NaOMe (16,2 g, 30 mmol). Reakciona smeša se zagreva na refluksu 2 h. Smeša se hladi do sobne temperature, smola (H+, ispran vodom) se dodaje u porcijama na 0 °C dok pH ne dostigne 6-7. Smola se ukljanja ceđenjem i ispira metanolom, i filtrat isparava do isušivanja pod uslovima smanjenog pritiska. Ostatak se prečišdava hromatografijom na koloni od silika gela (etil acetat kao eluent) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca (2,3 g)<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 11,53 (s, 1H), 7,79-7,76 (d, J=8,1Hz, 1H), 6,14-6,12 (d, J=6,3Hz, 1H), 6,08-6,06 (d,J=7,5Hz, 1H), 5,74-5,71 (d, J=8,1Hz, 1H), 5,40-5,19 (dd, J = 55,8Hz, 4,5Hz, 1H), 4,71-4,54 (m, 3H).MS [M+H]<+>= 229,2

Preparat 3

Dobijanje intermedijera hiralnog 1-((2R,3S,4S,5S)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-jodometil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona

[0142] [Bn(Et)3N]Cl (17 g, 75 mmol) i NaN3(4,5 g, 69 mmol) se suspenduju u anhidrovanom CH3CN (200 mL) i mešaju na sobnoj temperaturi preko nodi. Dobijena fina suspenzija se cedi u suvi rastvor THF (30 mL) hiralnog 1-((2R,3S,4S)-4-fluoro-3-hidroksi-5-metilen-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona (2 g, 8,8 mmol).4-metilmorfolin (0,3 mL, 2,6 mmol) se dodaje, dobijeni rastvor je ohlađen u ledenom vodenom kupatilu, i rastvor joda (8 g, 31 mmol) u anhidrovanom THF (30 mL) se dodaje kap po kap u periodu od 60 min. Reakciona smeša se meša na 0-9 °C 16 h. N-Acetil-L-cistein se dodaje, i rastvor se meša dok se mehuridi ne smanje. Rastvarač se koncentruje pod uslovima smanjenog pritiska do polovine zapremine, nakon čega se dodaju O,1M Na2S2O3i zasideni vodeni rastvor NaHCO3. Smeša se ekstrahuje sa 10%EtOH u CH2Cl2i ispira pomodu rastvora soli. Organski slojevi se suše preko Na2SO4, cede i isparavaju do isušivanja pod uslovima smanjenog pritiska. Smeša se prečišdava hromatografijom na koloni od silika gela [etil acetat : CH2Cl2:EtOH; 200:100:3] da se dobije sirovi željeni proizvod. Sirovi proizvod se prečišdava hromatografijom na koloni od silika gela (0∼3%EtOH u CH2Cl2) dva puta da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta supstanca (0,73 g, 21%) 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 9,09 (s, 1H), 7,38-7,35 (d, J=8,1Hz, 1H), 5,83-5,80 (d, J=8,1Hz, 1H), 5,76-5,75 (d, J=4,2Hz, 1H), 5,45-5,26 (dd, J = 52,2Hz, 5,7Hz, 1H), 4,84-4,77 (m, 1H), 3,60-3,48 (m, 1H).

Preparat 4

Dobijanje intermedijera hiralnog metil estra (2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-il- 3-hloro-benzoeve kiseline

[0144] Rastvor hiralnog 1-((2R,3S,4S,5S)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-jodometil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona (0,76 g, 1,9 mmol) u CH2Cl2(120 mL) se kombinuje sa smešom (Bu)4NHSO4(796 mg, 2,35 mmol) i m-hlorobenzoeve kiseline (500 mg, 3,2mmol) u K2HPO4(1,75 M, 40 mL). Dvofazni sistem se intenzivno meša na sobnoj temperaturi i dodaje se jedan deo mhloroperbenzoeve kiseline (3,6 g) [55% u ravnoteži sa 3-hlorobenzoeve kiseline (10%) i vode (35%)]. Posle 1 h, 3x1,2 g ove mešavine reagenasa se dodaje u intervalima od 1 h. Nakon poslednjeg davanja, smeša se intenzivno meša na sobnoj temperaturi 18 h. Dodaje se rastvor Na2S2O3(0,1 M) i zasideni vodeni NaHCO3(pH 7∼8). Smeša se intenzivno meša na sobnoj temperaturi 15 min. Organski sloj se razdvaja, i vodeni sloj se ekstrahuje sa CH2Cl2. Kombinovani vodeni ekstrakt se ispira sa zasidenim vodenim NaHCO3. Organski sloj se razdvaja i koncentruje pod uslovima smanjenog pritiska. Ostatak se prečišdava pomodu hromatografije na koloni od silika gela (0∼3%EtOH u CH2Cl2) da se dobije jedinjenje iz naziva kao čvrsta supstanca (0,35 g, 43%) 1H NMR (300 MHz, CDCl3):δ 9,00 (s, 1H), 8,09-7,91 (m, 2H), 7,59-7,56 (m, 1H), 7,44-7,39 (m, 1H), 7,32-7,29 (d, J=8,1Hz, 1H), 5,79-5,73 (m, 2H), 5,61-5,42 (dd, J = 51,9Hz, 5,7Hz, 1H), 4,81-4,78 (m, 1H).

Preparat 5

Dobijanje intermedijernog hiralnog 1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetiltetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona

[0145]

[0146] Rastvor NH3u MeOH (7N, 10 mL) se dodaje u hiralni metil estar (2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-il-3-hloro-benzoeve kiseline (100 mg, 0,24 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 2 h. Rastvarač isparava i ostatak se prečišdava pomodu prep-HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova kao bela čvrsta<supstanca (34,5 mg, 51 %) MS [M+H]+ = 288,0; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 11,52 (s, 1H), 7,84->7,82 (d, J=8,1Hz, 1H), 6,18-6,15 (m, 2H), 5,88-5,77 (m, 2H), 5,23-5,03 (dd, J = 53,7Hz, 4,5Hz, 1H), 4,60-4,40 (m, 1H), 3,54-3,53 (d, J = 5,1 Hz,2H).

Preparat 6

Dobijanje intermedijera hiralnog (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-fluoro-5-jodometil-tetrahidro-furan-3-il esterin-2,4-diona benzoeve kiseline

[0147]

[0148] U rastvor hiralnog 1-((2R,3S,4S,5S)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-jodometil-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona koji se dobija u preparatu 3 (1,5 g, 3,78 mmol) i DMAP (0,87 g, 7,56 mmol) u suvom THF (20 mL) u uslovima atomsfere azota 0 °C dodaje se BzCl (0,67 mL, 5,67 mmol) kap po kap. Reakciona smeša se meša na 0 °C 5 min. Smeša je zatim razblažena sa EA, isprana sa rastvorom soli i vodenim HCl (0,1 M). Organski sloj se razdvaja, suši preko Na2SO4i koncentruje. Ostatak se prečišdava pomodu hromatografije sa kolonom od silika gela (PE : EA = 5 : 1 prema 2 : 1) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca (1,78 g, 94 %). MS [M+H]<+>= 502

Preparat 7

Dobijanje intermedijera hiralne benzoeve kiseline (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-fluoro-5-benzoilmetil-tetrahidro-furan-3-il esterin-2,4-diona

[0149]

[0150] U smešu hiralne benzoeve kiseline (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-fluoro-5-jodometil-tetrahidro-furan-3-il esterin-2,4-diona (1,78 g, 3,55 mmol) u DMSO, dodaje se natrijum benzoat (2,56 g, 17,76 mmol) i 18-kruna-6 (0,187 g, 0,71 mmol). Reakciona smeša se zagreva pod azotom na 100 °C 18 h. Smeša se hladi do sobne temperature, rastvara u etil acetatu, zatim ispira sa rastvorom soli i vodom. Organski sloj se razdvaja i koncentruje pod uslovima smanjenog pritiska. Ostatak se prečišdava pomodu hromatografije sa kolonom od silika gela (PE : EA = 5 : 1) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca (1,30 g, 74 %). MS [M+H]<+>= 496

Preparat 8

Dobijanje intermedijera hiralnog 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona

[0151]

[0152] U rastvor hiralne benzoeve kiseline (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-fluoro-5-benzoilmetil-tetrahidro-furan-3-il esterin-2,4-diona (0,2 g, 2,6 mmol) i 1H-tetrazola (0,283 g, 26 mmol) u suvom piridinu (5 mL) pod uslovima atmosfere azota na 0 °C dodaje se 4-hlorofenilfosforodihloridat (0,297 g, 7,9 mmol). Reakciona smeša se meša na 0 - 5 °C 5 min, zatim se zagreva do sobne temperature i meša 5 h. Smeša se koncentruje pod uslovima smanjenog pritiska. Ostatak je podeljen između DCM i zasidenog NaHCO3. Organski sloj se razdvaja, ispira sa rastvorom soli, suši preko Na2SO4i koncentruje da se dobije čvrsti 1H-tetrazol intermedijer 9 u šemi 2 i upotrebi direktno bez daljeg prečišdavanja za slededi korak. Proizvod 1H-tetrazol 9 (0,2 g) se rastvara u dioksanu (70 mL) na sobnoj temperaturi, dodaje se NH3·H2O (10 mL). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 0,5 h. TLC analiza ukazuje da je polazni materijal bio u potpunosti iskorišden. Rastvarač se uklanja pod uslovima smanjenog pritiska, i ostatak je rastvoren u metanolnom rastvoru (7 N, 10 mL) NH3. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 16 h. Smeša se koncentruje, i ostatak se prečišdava pomodu pre-HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta bela supstanca<(50 mg, 50 %).MS [M+H]+ = 287,2; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6):δ 7,752-7,727 (d, 1 H, J= 7,5), 7,352>(br, 2 H), 6,220-6,195 (d, 1 H, J = 7,5), 6,018-5,997 (d, 1 H, J = 6,3), 5,816-5,791 (d, 1 H, J = 7,5), 5,758-5,719 (t, 1 H), 5,195-5,001 (dd, 1 H, J = 4,5, J = 53,4), 4,548-4,436 (m, 1 H), 3,539-3,462 (m, 2 H)

Preparat 9

Dobijanje intermedijerne hiralnog estra (2R,3S,4S,5R)-2-(2-acetilamino-6-okso-1,6-dihidro-purin-9-il)-5-azido-4-fluoro-5-benzoilmetil-tetrahidro-furan-3-il benzoeve kiseline (referenca)

[0153]

[0154] U smešu N-(6-okso-6,9-dihidro-1H-purin-2-il)-acetamida (154 mg, 0,8 mmol) u MeCN (20 mL) dodaje se BSA (325 mg, 0,8 mmol). Smeša se zagreva na 60 °C dok ne postane proziran rastvor. Dodaje se rastvor hiralne benzoeve kiseline (2R,3S,4S,5S)-5-azido-2-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-4-fluoro-5-benzoilmetil-tetrahidro-furan-3-il esterin-2,4-diona u preparatu 7 (200 mg, 0,4 mmol) u MeCN, nakon čega se dodaje TMSOTf (357mg, 1,6 mmol). Reakciona smeša koja nastaje se zagreva u uslovima mikrotalasnog zračenja na 100 °C 1 h. Smeša se hladi do sobne temperature, zatim gasi pomodu zasidenog rastvora NaHCO3(10 ml). Smeša se ekstrahuje sa EA (10 mlX3). Organski sloj se razdvaja, ispira sa rastvorom soli (10 ml), suši pomodu Na2SO4, i koncentruje. Ostatak se prečišdava pomodu hromatografije na koloni (DCM:MeOH = 50:1) da se dobije čvrsto jedinjenje iz naslova (120 mg, 51%) LC-MS (M+H)<+>= 577,2; LC-MS (M+Na)<+>= 599,1

Preparat 10

Dobijanje intermedijera hiralno 2-amino-9-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetiltetrahidrofuran-2-il)-1,9-dihidro-purin-6-ona (referenca)

[0155]

[0156] U rastvor estra hiralne benzoeve kiseline u čvrstom obliku (2R,3S,4S,5R)-2-(2-acetilamino-6-okso-1,6-dihidro-purin-9-il)-5-azido-4-fluoro-5-benzoilmetil-tetrahidro-furan-3-il (120 mg, 0,26 mmol) u MeOH (2 ml) dodaje se metanolski rastvor (2 ml, 7 N) amonijaka. Reakciona smeša se meša na 25°C 18 h. TLC analiza je pokazala da je reakcija završena. Smeša se koncentruje u vakuumu, prečišdava pomodu Pre-HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca (15 mg, 22%). LC-MS (M+H)<+>= 327,0

Primer 1

Dobijanje izopropil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}-propionske kiseline

[0157]

Korak A.

[0158] (S)-izopropil 2-aminopropanoat hidrohlorid (Oakwood, 300 mg, 1,95 mmol) i fenil fosforodihloridat (Aldrich, 397 mg, 280 µl, 1,79 mmol) se suspenduju u anhidrovanom DCM (10 mL). Reakcija se hladi do -78°C. Trietilamin (362 mg, 498 µl, 3,58 mmol) se dodaje kap po kap. Reakciona smeša se meša na -78 °C 1 h, zatim se zagreva do sobne temperature i meša 5 h. Rastvarač se uklanja, ostatak se ispira pomodu suvog etra. Filtrat se koncentruje da se dobije čvrsti (2S)-izopropil 2-(hloro(fenoksi)fosforilamino)propanoat kao ulje svetlo žute boje (0,5 g, 91 %) i koristi bez daljeg prečišdavanja.

Korak B.

[0159] U rastvor hiralnog 1-((2R,3S,4S,5R)-5-Azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona koji se dobija u preparatu 5 (54 mg, 188 µmol) u anhidrovanom THF (3,75 mL) dodaje se rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijum hlorida (470 µl, 470 µmol) kap po kap. Smeša se zagreva na sobnoj temperaturi 15 min, zatim se dodaje, kap po kap, rastvor THF (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(fenoksi)fosforilamino)propanoata (940 µl, 470 µmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 3 h. Zatim se dodaje MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, 0-15% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao beličasta supstanca (22 mg, 21%) LC-MS (M+H)<+>= 557,0

Primer 2

Dobijanje etil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}-propionske kiseline

[0160]

Korak A.

[0161] (S)-Etil 2-aminopropanoat hidrohlorid (Aldrich, 300 mg, 1,95 mmol) i fenil fosforodihloridat (Aldrich, 434 mg, 306 µl, 1,95 mmol) se suspenduje u anhidrovanom DCM (20 mL). Reakcija se hladi do -78 °C. Trietilamin (395 mg, 544 µl, 3,91 mmol) se dodaje kap po kap. Reakciona smeša se meša na -78 °C 1 h, zatim se zagreva do sobne temperature i meša 5 h. Rastvarač se uklanja, ostatak se ispira suvim etrom. Filtrat se koncentruje da se dobije čvrsti (2S)-etil 2-(hloro(fenoksi)fosforilamino)propanoat kao ulje svetlo žute boje (0,5 g, 88%) i koristi bez daljeg prečišdavanja.

Korak B.

[0162] U rastvor hiralnog 1-((2R,3S,4S,5R)-5-Azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona dobijenog u preparatu 5 (50 mg, 174 µmol) u anhidrovanom THF (5 mL) se dodaje rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezium hlorida (435 µl, 435 µmol) kap po kap. Smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min, zatim se dodaje kap po kap rastvor THF (0,5 M) čvrstog (2S)-etil 2-(hloro(fenoksi)fosforilamino)propanoata (870 µl, 435 µmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi preko nodi. Nakon toga se dodaje MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, 0-15% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta beličasta supstanca (7 mg, 7.4%). LC-MS (M+H)<+>= 543,0

Primer 3

Dobijanje etil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline

[0163]

Korak A.

[0164] Naftalen-1-ol (Aldrich, 0,72 g, 4.99 mmol) i fosfor (V) oksihlorid (Aldrich, 767 mg, 466 µl, 5,00 mmol) se suspenduju u anhidrovanom etru (20 mL), i temperatura se hladi do -78 °C. Trietilamin (505 mg, 695 µl, 4,99 mmol) se dodaje kap po kap i reakciona smeša se meša na -78 °C 0,5 h. Reakciona smeša se zagreva na sobnoj temperaturi i meša preko nodi. Smeša se cedi, i filtrat se koncentruje da se dobije čvrsta supstanca naftalen-1-il fosforodihloridat kao ulje svetlo žute boje (1,3 g, 100%) i koristi se za dalji korak bez dodatnog prečišdavanja.

Korak B.

[0165] (S)-Etil 2-aminopropanoat hidrohlorid (Aldrich, 300 mg, 1,95 mmol) i naftalen-1-il fosforodihloridat (510 mg, 1.95 mmol) se suspenduju u anhidrovanom DCM (30 mL). Reakcija se hladi do -78 °C. Trietilamin (395 mg, 544 µl, 3.91 mmol) se dodaje kap po kap. Reakciona smeša se meša na -78 °C 1 h, zatim se zagreva do sobne temperature i meša 5 h. Rastvarač se uklanja, i ostatak se ispira suvim etrom. Filtrat se koncentruje da se dobije čvrsti (2S)-etil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoat kao ulje svetlo žute boje (0,6 g, 90%) i upotrebljava bez daljeg prečišdavanja.

Korak C.

[0166] U rastvor hiralnog 1-((2R,3S,4S,5R)-5-Azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetil-tetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2,4-diona koji se dobija u preparatu 5 (90 mg, 313 µmol) u anhidrovanom THF (6,25 mL) se dodaje rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezium hlorida (783 µl, 783 µmol) kap po kap. Smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min, nakon čega se dodaje kap po kap, THF rastvor (0,5 M) čvrstog (2S)-etil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino) propanoata (1,57 mL, 783 µmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 3h. Zatim se dodaje MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, 0- 15% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca svetlo braon boje (70 mg, 38%). LC-MS (M+H)<+>= 593,0

Dobijanje 11

Dobijanje intermedijera hiralnog 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-5-hidroksimetil-3-trietilsilaniloksi-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2-on-a

[0167]

[0168] U rastvor hiralnog 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetiltetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona koji se dobija u preparatu 8 (300 mg, 1,05 mmol) u piridinu (24,5 mL) na -5 °C dodaje se hlorotrietilsilan (Fluka, 440 mg, 2,92 mmol) kap po kap u vremenskom periodu od 15 min. Reakciona smeša se meša na 0°C 2 h, zatim gasi pomodu dodavanja metanola (5 mL). Smeša se direktno prečišdava fleš hromatografijom (5-15% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (0,29 g, 69%)

Preparat 12

Dobijanje intermedijernog izopropil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-trietilsilaniloksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline

[0169]

Korak A.

[0170] (S)-izopropil 2-aminopropanoat hidrohlorid (Oakwood, 0,706 g, 4,21 mmol) i naftalen-1-il fosforodihloridat koji se dobija u primeru 3 korak A (1,1 g, 4,21 mmol) se suspenduje u anhidrovanom DCM (25 mL). Reakcija se hladi do -78 °C. Trietilamin (852 mg, 1,17 ml, 8,42 mmol) se dodaje kap po kap. Reakciona smeša se meša na -78 °C 1 h, zatim zagreva do sobne temperature i meša 5 h. Rastvarač se uklanja, i ostatak se uklanja pomodu suvog etil etra i cedi. Filtrat se koncentruje da se dobije čvrsti (2S)-izopropil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoat kao ulje svetlo žute boje (1,3 g, 87%) i koristi bez daljeg prečišdavanja.

Korak B.

[0171] U rastvor hiralnog 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-5-hidroksimetil-3-trietilsilaniloksi-tetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2-ona koji se dobij a u preparatu 11 (0,29 g, 724 µmol) u anhidrovanom THF (42 mL) dodaje se rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezium hlorida (1,81 mL, 1,81 mmol) kap po kap. Smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min, i nakon toga se dodaje rastvor THF (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata (3,62 mL, 1,81 mmol) kap po kap. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 h, nakon čega se dodaje rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezium hlorida (0,9 mL, 0,9 mmol) i THF rastvor (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata (1,81 mL, 0,9 mmol) redom. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi još dodatna2 h. Dodaje se MeOH (5 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, 2-18% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca beličaste boje (430 mg, 83%). LC-MS (M+H)<+>= 720,3

Primer 4

Dobijanje izopropil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline

[0172]

[0173] Izopropil estar (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-Amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-trietilsilaniloksi-tetrahidrofuran-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline koji se dobija u preparatu 12 (0,43 g, 597 µmol) rastvara se u sirdetnoj kiselini (80%, 28 mL). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 5 h. Rastvarač isparava pod uslovima smanjenog pritiska, i ostatak sirdetne kiseline se uklanja pomodu azeotropne koncentracije sa MeOH tri puta. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 2-18% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (0,2 g, 55%).LC-MS (M+H)<+>= 606,1

Primer 5

Dobijanje benzil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline

[0174]

Korak A.

[0175] (S)-Benzil 2-aminopropanoat hidrohlorid (Chem Impex, 0,66 g, 3,06 mmol) i naftalen-1-il fosforodihloridat koji se dobija u primeru 3 korak A (0,8 g, 3,06 mmol) suspenduje se u anhidrovanom DCM (15 mL). Reakcija se hladi do -78 °C. Trietilamin (619 mg, 852 µl, 6,12 mmol) se dodaje kap po kap. Reakciona smeša se meša na -78 °C 1 h, nakon čega se zagreva do sobne temperature 5 h. Rastvarač se uklanja, i ostatak se ispira suvim etrom i cedi. Filtrat se koncentruje da se dobije čvrsti (2S)- benzil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoat kao ulje svetlo žute boje (1 g, 81 %) i koristi bez daljeg prečišdavanja.

Korak B.

[0176] U rastvor hiralnog 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetiltetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona koji se dobija u preparatu 8 (85 mg, 292 µmol) u anhidrovanom THF (8,5 mL) se dodaje kap po kap THF rastvor (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezium hlorida (742 µL, 742 µmol). Smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 h, nakon čega se dodaje rastvor THF (0,5 M) čvrstog (2S)-benzil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata (1,48 mL, 742 µmol) . Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 h, nakon čega se dodaje rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijum hlorida (371 mL, 371 mmol) i rastvor THF (0,5 M) čvrstog (2S)-benzil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforlamino)propanoata (0.74 mL, 371 µmol) redom. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi još dodatna 2 h. Dodaje se MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 0-20% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca svetlo žute boje (10 mg, 5%). LC-MS (M+H)<+>= 654,1.

Primer 6

Dobijanje etil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline

[0177]

[0178] U rastvor hiralnog 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetiltetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona koji se dobija u preparatu 8 (50 mg, 175 µmol) u anhidrovanom THF (5 mL) se dodaje kap po kap THF rastvora (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijum hlorida (437 µL, 437 µmol). Smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min, nakon čega se dodaje kap po kap rastvora THF (0.5 M) čvrstog (2S)-etil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino) propanoata koji se dobija u primeru 3 korak B (873 µL, 437 µmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 1h, nakon čega se dodaje rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijium hlorida (219 µL, 219 µmol) i THF rastvor (0,5 M) čvrstog (2S)-benzil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata (437 µL, 219 µmol) redom. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi još dodatna 2 h. Dodaje se MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 0-16% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (5 mg, 5%). LC-MS (M+H)<+>= 592.2

Primer 7

Dobijanje izopropil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}-propionkse kiseline

[0179]

[0180] U rastvor hiralnog 4-amino-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetiltetrahidro-furan-2-il)-1H-pirimidin-2-ona koji se dobija u primeru 8 (43 mg, 150 µmol) u anidrovanom THF (8 mL) dodaje se kap po kap THF rastvora (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijum hlorida (376 µL, 376 µmol). Smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min, nakon čega se dodaje kap po kap rastvora THF (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(fenoksi)fosforilamino)propanoata koji se dobija u primeru 1 korak A (751 µL, 376 µmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 h, nakon čega se dodaje rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijum hlorida (188 µL, 188 µmol) i rastvor THF (0,5 M) čvrstog (2S)-benzil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata (376 µL, 188 µmol) redom. Reakciona smeša se zagreva na sobnoj temperaturi preko nodi. Dodaje se MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 0-18% MeOH uDCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (3 mg, 4%). LC-MS (M+H)<+>= 556,0

Preparat 13

Dobijanje intermedijera hiralnog 4-amino-1-[(2R,3S,4S,5R)-5-azido-3-(terc-butildifenil-silaniloksi)-4-fluoro-5-hidroksimetil-tetrahidro-furan-2-il]-1H-pirimidin-2-ona

[0181]

[0182] U rastvor hiralnog 4-amino-1-((2R,3S,4S,5R)-5-azido-4-fluoro-3-hidroksi-5-hidroksimetiltetrahidrofuran-2-il)-1H-pirimidin-2-ona koji se dobija u primeru 8 (50 mg, 175 µmol) i imidazolu (119 mg, 1,75 mmol) u anhidrovanom DMF (2,62 mL) dodaje se terc-butilhlorodifenilsilan (Aldrich, 480 mg, 1,75 mmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 20 min. Smeša se rastvara etil acetatom, ispira vodom i rastvorom soli nekoliko puta. Organski sloj se razdvaja, suši preko MgSO4i koncentruje. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (0-18% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (36 mg, 39%)

Preparat 14

Dobijanje intermedijera izopropil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-4-(terc-butil-difenilsilaniloki)-3-fluoro-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline

[0183]

[0184] U rastvor hiralnog 4-amino-1-[(2R,3S,4S,5R)-azido-3-(terc-butil-difenil-silaniloksi)-4-fluoro-5-hidroksimetil-tetrahidro-furan-2-il]-1H-pirimidin-2-ona (20 mg, 38,1 µmol) u anhidrovanom THF (4 mL) dodaje se kap po kap rastvora THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijum hlorida (95,3 µL, 95,3 µmol). Smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min, nakon čega se dodaje kap po kap rastvora THF (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata koji se dobija u preparatu 12 korak A (191 µL, 95,3 µmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 h, nakon čega se dodaje rastvor THF (Aldrich, 1 M) terc-butilmagnezijum hlorida (48 µL, 48 µmol) i rastvor THF (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata koji se dobija u preparatu 12 korak A (96 µL, 48 µmol) redom. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi preko nodi. Dodaje se MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, 2-18% MeOH u DCM) da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (22 mg, 68%). LC-MS (M+H)<+>= 844,2

Primer 8

Dobijanje hiralnog izopropil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-ilmetoksi]-hidroksi-fosforilamino}-propionske kiseline

[0185]

[0186] U rastvor izopropil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,SR)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-4-(terc-butil-difenil-silaniloksi)-3-fluoro-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline (18 mg, 21,3 µmol) u THF (2,88 mL) dodaje se rastvor THF (1 M) TBAF (21,3 µL, 21,3 µmol). Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 30 min. Rastvarač se uklanja, i ostatak se prečišdava pomodu Prep-HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (6 mg, 59%). LC-MS (M+H)<+>= 479,9

Primer 9

Dobijanje izopropil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-propioniloksi-tetrahidrofuran-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline

[0187]

[0188] U rastvor estra hiralne (2R,3S,4S,5R)-2-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-5-azido-4-fluoro-5-hidroksimetil-tetrahidro-furan-3-il estra propionske kiseline (dobijanje de biti prikazano odvojeno, 25 mg, 73,0 µmol) u anhidrovanom THF (5 mL) dodaje se kap po kap THF rastvora (Aldrich, 1 M) tercbutilmagnezijum hlorida (183 µL, 183 µmol). Smeša se meša na sobnoj temperaturi 15 min, nakon čega se dodaje kap po kap THF rastvora (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fosforilamino)propanoata koji se dobija u preparatu 12 korak A (365 µL, 183 µmol) Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 1 h, nakon čega se dodaje THF rastvor (Aldrich, 1M) tercbutilmagnezijum hlorida (92 µL, 92 µmol) i THF rastvor (0,5 M) čvrstog (2S)-izopropil 2-(hloro(naftalen-1-iloksi)fospforilamino)propanoata koji se dobija u preparatu 12 korak A (183 µL, 92 µmol) redom. Reakciona smeša se meša na sobnoj temperaturi 2h. Dodaje se MeOH (2 mL). Rastvarač se uklanja. Ostatak se prečišdava fleš hromatografijom (silika gel, 40 g, 2-18% MeOH u DCM), zatim Prep-HPLC da se dobije jedinjenje iz naslova kao čvrsta supstanca bele boje (28 mg, 58%). LC-MS (M+H)<+>= 662,2

Biološki primeri

HCV replikon test

[0189] Ovaj test meri sposobnost jedinjenja formule I da inhibiraju replikaciju HCV RNK, i stoga njihovu potencijalnu korist za lečene HCV infekcija. Test koristi reporter kao jednostavno čitanje delijskog nivoa RNK HCV replikona. Gen Renilla luciferase je uveden u prvi otvoreni okvir čitanja genotipa 1b konstrukta replikona NK5.1 (N. Krieger et al., J. Virol. 200175(10):4614), odmah posle unutrašnje sekvence za vezivanje ribozoma (IRES), i fuzionisan sa genom za neomicin fosfotransferazu (NPTII) pomodu peptida 2A koji se samostalno iseca iz virusa koji dovodi do bolesti stopala i usta (M.D. Ryan & J. Drew, EMBO 199413(4):928-933). Posle in vitro transkripcije RNK se ubacuje u humane hepatoma delije Huh7 pomodu elektroporacije, i G418-rezistentne kolonije se izoluju i proširuju. Stabilno selektovana delijska linija 2209-23 sadrži replikativnu HCV subgenomsku RNK, i aktivnost Renilla luciferase eksprimirana od strane replikona odražava njegov nivo RNK nivo u delijama. Test se izvodi na pločama u duplikatu, od kojih je jedna neprozirna bela i jedna transparentna, da bi se paralelno izmerila antivirusna aktivnost i citotoksičnost hemijskog jedinjenja čime se obezbeđuje da aktivnost koja se prati nije rezultat smanjenje proliferacije delije ili rezultat delijske smrti.

[0190] HCV delje replikona (2209-23), koje eksprimiraju Renilla luciferase reporter, se kultivišu u Dulbecco’s MEM (Invitrogen cat no. 10569-010) sa 5% serumom govečeta (FBS, Invitrogen cat. no.

10082-147) i sade na ploči sa 96-bunarida sa 5000 delija po bunaridu, i inkubiraju preko nodi. Dvadeset četiri časa kasnije, različita razblaženja hemijskih jedinjenja u medijumu za rast se dodaju delijama, koje se nakon toga inkubiraju na 37°C tri dana. Na kraju perioda inkubacije, delije koje se nalaze u belim pločama se pokupe i meri se aktivnost luciferaze pomodu R. luciferase test sistema (Promega cat no. E2820). Svi reagensi koji su opisani u slededem paragrafu uključeni su u kit proizvođača, i uputstva proizvođača se prate za pripremu reagenasa. Delije se ispiraju jednom sa 100 µL fosfatnim puferom (pH 7,0) (PBS) po bunaridu i liziraju sa 20 µl 1x R.luciferase puferom za test lizu pre inkubacije, na sobnoj temperaturi 20 min. Ploča se zatim ubacuje u Centro LB 960 microplate luminometer (Berthold Technologies), i 100 µl pufera za R. luciferase Assay test se ubacuje u svaki bunarid i signal se meri korišdenjem kašnjenja od 2-sekunda, 2-sekunde program merenja. IC50, koncentracija leka koji je neophodan za smanjenje nivoa replikona za 50% u odnosu na netretiranu vrednost delijske kontrole, može da se izraačuna sa plota procentualnog smanjenja aktivnosti luciferaze vs. koncentracije leka kao što se opisuje gore u tekstu.

[0191] WST-1 reagens od Roche Diagnostic (cat no.1644807) koristi se za test citotoksičnosti. Deset mikrolitara WST-1 reagensa se dodaje u svaki bunarid transparentnih ploča uključujudi bunaride koji sadrže samo medijum kao slepe kontrole. Delje se inkubiraju 2 h na 37° C, i OD vrednost se meri pomodu MRX Revelation microtiter čitača ploče (Lab System) na 450 nm (referentni filter na 650 nm). Ponovo CC50, koncentracija leka koja je neophodna za smanjenje delijske proliferacije za 50% u odnosu na netretiranu vrednost delijske kontrole, može da se izračuna iz plota procentualnog smanjenja WST-1 vrednosti vs. koncentraciji leka kao što se opisuje gore u tekstu.

[0192] Primeri bioloških podataka prikazani su u tabeli II ispod:

[0193] Jasno je da se reference koje se nalaze ovde za lečenje proširuju na profilaksu kao i na lečenje postojedih stanja, i da lečenje životinja uključuje lečenje ljudi kao i drugih sisara. Osim toga, lečenje infekcije virusa hepatitisa C (HCV), kao što se ovde koristi, takođe uključuju lečenje ili profilaksu bolesti ili stanja koje je udruženo sa ili posredovano infekcijom virusa hepatitisa C (HCV), ili njenim kliničkim simptomima.

[0194] Karakteristike koje su opisane u prethodnom opisu, ili slededim zahtevima, izražene su u njihovim specifičnim oblicima ili u smislu sredstva za izvođenje prikazane funkcije, ili postupka ili procesa za postizanje otkrivenog rezultata, po potrebi, može, odvojeno, ili u kombinaciji sa takvim karakteristikama, da se koristi za realizaciju pronalaska u njegovim različitim oblicima.

[0195] Navedeni pronalazak je detaljnije opisan u smislu ilustacija i primera, za svrhu jasnode i razumevanja. Treba razumeti da je gornji opis namenjen da bude ilustrativan a ne ograničavajudi. Obim pronalaska treba, stoga, da bude određen ne sa referencom prema opisu gore u tekstu, ved treba umesto toga da bude određen sa referencom prema slededim priloženim zahtevima.

Claims (14)

1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule I

   pri čemu: R<1>je H, C1-7haloalkil, ili aril, pri čemu je aril fenil ili naftil, po potrebi supstituisan sa jednim ili više C1-7alkil, C2-7alkenil, C2-7alkinil, C1-7alkoksi, halo, C1-7haloalkil, -N(R<1a>)2, acilamino, -SO2N(R<1a>)2, -COR<1b>, -SO2(R<1c>), -NHSO2(R<1c>), nitro ili cijano; svaki R<1a>je nezavisno H ili C1-7alkil; svaki R<1b>je nezavisno -OR<1a>ili -N(R<1a>)2; svaki R<1c>je C1-7alkil; R<2a>i R<2b>su nezavisno H ili C1-7alkil; R<3>je C1-7alkil, fenil, ili fenil C1-7alkil; R<4>je H, C1-7alkil, ili R<2b>i R<4>zajedno obrazuju (CH2)3; R<5>je H, C(=O)R<1c>, C(=O)R<1b>, P(=O)(OR<1>)(OR<1a>), ili P(=O)(OR<1>)(NR<4>R<7>); i R<6>je

   ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu R4je H.
3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 2, pri čemu R<1>je naftil ili fenil. <
4. 4. Jedinjenje prema zahtevu 3, , pri čemu R2a je H.>
5. 5. Jedinjenje prema zahtevu 4, pri čemu R<2b>je metil.
6. 6. Jedinjenje prema zahtevu 5, pri čemu R<3>je izopropil, etil, ili benzil.
7. 7. Jedinjenje prema zahtevu 6, pri čemu R<5>je H.
8. 8. Jedinjenje prema zahtevu 6, pri čemu R<5>je C(=O)R<1c>.
9. 9. Jedinjenje prema zahtevu 8, pri čemu R<1c>je etil.
10. 10. Jedinjenje prema zahtevu 7, pri čemu
11. 11. Jedinjenje prema zahtevu 7, pri čemu
12. 12. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu je pomenuti jedinjenje izabrano iz grupe koja se sastoji od: izopropil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}-propionske kiseline; etil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosforilamino}-propionske kiseline; etil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-2-azido-5-(2,4-diokso-3,4-dihidro-2H-pirimidin-1-il)-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidrofuran-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline; izopropil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-il metoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline; benzil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline; etil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline; izopropil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-fenoksi-fosphorilamino}-propionske kiseline; izopropil estra (S)-2-{[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-hidroksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-hidroksi-fosforilamino}-propionske kiseline; i izopropil estra (S)-2-[[(2R,3S,4S,5R)-5-(4-amino-2-okso-2H-pirimidin-1-il)-2-azido-3-fluoro-4-propioniloksi-tetrahidro-furan-2-ilmetoksi]-(naftalen-1-iloksi)-fosforilamino]-propionske kiseline.
13. 13. Jedinjenje prema bilo kojom od zahteva 1-12 za upotrebu u lečenju ili profilaksi infekcije virusom hepatitisa C (HCV).
14. 14. Farmaceutska kompozicija koja obuhvata jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1-12 i terapeutski inertne nosače. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5