RS56371B1 - Supstituisana tetrahidrokarbazol i karbazol karboksamid jedinjenja koja se koriste kao inhibitori kinaze - Google Patents

Description

Opis

[0001] Predmetni pronalazak se uopšteno odnosi na supstituisana tetrahidrokarbazol i karbazol karboksamid jedinjenja koja su korisna kao inhibitori kinaze, uključujući modulaciju Brutonove tirozin kinaze (Btk) i drugu Tek familiju kinaza kao što je Itk. Ovde su obezbeđena supstituisana tetrahidrokarbazol i karbazol karboksamid jedinjenja, kompozicije koje sadrže takva jedinjenja, i metode za njihovu primenu. Predmetni pronalazak se dalje odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje u skladu sa predmetnim pronalaskom koje je korisno za lečenje stanja koja su povezana sa modulacijom kinaze i metodama inhibiranja aktivnosti kinaza, uključujući Btk i drugu Tek familiju kinaza kao što je Itk, kod sisara.

[0002] Protein kinaze, najveća familija humanih enzima, obuhvataju preko 500 proteina. Btk je član Tek familije tirozin kinaza, i regulator je ranog B-ćelijskog razvoja, kao i aktivaciju zrelih B-ćelija, signaliziranja, i preživljavanja.

[0003] B-ćelijsko signaliziranje kroz B-ćelijski receptor (BCR) vodi do širokog opsega bioloških izlaza, koji zauzvrat zavise od razvojnog stadijuma B-ćelije. Opseg i trajanje signala BCR moraju da budu precizno regulisani. Aberantno signaliziranje posredovano BCR-om može da prouzrokuje dneregulisano B-ćelijsko dejstvo i/ili formiranje patogenih auto-antitela što vodi do brojnih autoimunih i/ili inflamatornih bolesti. Mutacija Btk kod ljudi dovodi do X-vezane agamaglobulinemije (XLA). Ova bolest je povezana sa oslabljenim sazrevanjem B-ćelija, smanjenom proizvodnjom imunoglobulina, kompromitovanim imunološkim odgovorima nezavisne T-ćelije i značajnim slabljenjem ravnomernog kalcijum signala prilikom BCR stimulacije.

[0004] Dokaz za ulogu Btk u alergijskim poremećajima i/ili autoimunoj bolesti i/ili inflamatornoj bolesti ustanovljen je u BTk-deficijentnim mišjim modelima. Na primer, u standardnim mišjim predkliničkim modelima sistemskog eritemskog lupusa (SLE), pokazano je da se Btk deficijencija ogleda u značajnom ublažavanju progresije bolesti. Osim toga, miševi koji su deficijentni za Btk su takođe otporni na razvijanje artritisa izazvanog kolagenom i manje su podložni artritisu koji je izazvan stafilokokama.

[0005] Veliki deo dokaza podržava ulogu B ćelija i humoralnog imunog sistema u patogenezi autoimunih i/ili inflamatornih bolesti. Terapije bazirane na proteinima (kao što je RITUXAN®) razvijene da osiromaše B ćelije, predstavljaju važan pristup lečenju brojnih autoimunih i/ili inflamatornih bolesti. Usled Btk uloge u B-ćelijskoj aktivaciji, inhibitori Btk mogu da se koriste kao inhibitori patogene aktivnosti posredovane B-ćelijom (kao što je proizvodnja autoantitela).

[0006] Btk je takođe eksprimirana u mastocitima i monocitima i pokazano je da je važna za funkciju ovih ćelija. Na primer, Btk deficijencija kod miševa je povezana sa oslabljenom IgE posredovanom aktivacijom mastocita (izraženo smanjenje TNF-alfa i drugo otpuštanje inflamatornih citokina), i Btk deficijencija kod ljudi je povezana sa vrlo smanjenom TNF-alfa produkcijom koju izazivaju aktivirani monociti.

[0007] Prema tome, inhibicija Btk aktivnosti može da bude korisna za lečenje alergijskih poremećaja i/ili autoimunih i/ili inflamatornih bolesti uključujući, ali nije ograničena na -SLE, reumatoidni artritis, multipli vaskulitis, idiopatska trombocitopenična purpura (ITP), mijastenija gravis, alergijski rinitis, multipla skleroza (MS), odbacivanje transplanta, dijabetes tip I, membranski nefritis, inflamatorna bolest creva, autoimuna hemolitička anemija, autoimuni tiroiditis, bolesti hladnih i toplih aglutinina, Evansov sindrom, hemolitički uremijski sindrom/trombotična trombocitopenična purpura (HUS/TTP), sarkoidoza, Sjogrenov sindrom, periferne neuropatije (npr., Gijen-Bareov sindrom), pemfigus vulgaris, i astma.

[0008] Dodatno, pokazano je da Btk igra ulogu u kontrolisanju B-ćelijskog preživljavanja u određenim B-ćelijskim kancerima. Na primer, pokazano je da je Btk važna za preživljavanje ćelija BCR-Abl-pozitivne B-ćelije akutne limfoblastne leukemije. Stoga inhibicija Btk aktivnosti može da bude korisna za lečenje B-ćelijskog limfoma i leukemije.

[0009] S obzirom na brojne uslove koji su razmatrani da imaju koristi od lečenja uvođenjem modulacije proteinskih kinaza, odmah je očigledno da nova jedinjenja sposobna za modulaciju proteinskih kinaza kao što je Btk i metode korišćenja ovih jedinjenja treba da obezbede suštinske terapijske dobrobiti mnoštvu raznovrsnih pacijenata.

[0010] Američki patent sa brojem 8,084,620 i WO 2011/159857 stavljaju na uvid javnosti triciklična karboksamid jedinjenja koja se koriste kao inhibitori kinaze, uključujući modulaciju Btk i druge Tek familije kinaza.

[0011] Još uvek ostaje potreba za jedinjenjima koja se koriste kao Btk inhibitori i ipak imaju selektivnost preko Jak2 tirozin kinaze. Pored toga, tu i dalje ostaje potreba za jedinjenjima koja se koriste kao Btk inhibitori koji imaju selektivnost preko Jak2 tirozin kinaze i takođe imaju poboljšanu potenciju u testu BCR-stimulisane CD69 ekspresije na uzorku pune krvi.

[0012] Prijavioci su pronašli potentna jedinjenja koja imaju aktivnost kao Btk inhibitori. Dalje, prijavioci su pronašli jedinjenja koja imaju aktivnost kao Btk inhibitori i selektivni su preko Jak2 tirozin kinaze. Još dalje, prijavioci su pronašli jedinjenja koja imaju aktivnost kao Btk inhibitori, selektivni su preko Jak2 tirozin kinaze, i imaju poboljšanu potenciju u testu BCR-stimulisane CD69 ekspresije na uzorku pune krvi. Ova jedinjenja su obezbeđena da budu korisna kao farmaceutski proizvodi sa željenom stabilnošću, biodostupnošću, terapijskim indeksom, i vrednostima toksičnosti koji su važni za njihovu lekovitu sposobnost.

REZIME PREDMETNOG PRONALASKA

[0013] Predmetni pronalazak obezbeđuje supstituisana tetrahidrokarbazol i karbazol jedinjenja, koja se koriste kao inhibitori Btk, i korisna su za lečenje proliferativnih bolesti, alergijskih bolesti, autoimunih bolesti i inflamatornih bolesti.

[0014] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0015] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) za primenu u inhibiranju Btk aktivnosti.

[0016] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) za primenu u lečenju alergijskih poremećaja i/ili autoimunih i/ili inflamatornih bolesti.

[0017] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) za primenu u lečenju proliferativnih bolesti, kao što je kancer.

[0018] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) za primenu u lečenju bolesti ili poremećaja koji su povezani sa Btk aktivnošću.

[0019] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje procese i intermedijere za pravljenje jedinjenja sa formulom(I).

[0020] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) za primenu u terapiji.

[0021] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja sa formulom (I) za proizvodnju leka za lečenje ili profilaksu stanja povezanih sa Btk, kao što su proliferativne bolesti, alergijske bolesti, autoimune bolesti i inflamatorne bolesti.

[0022] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja sa formulom (I) za proizvodnju leka za lečenje kancera.

[0023] Jedinjenja sa formulom (I) i kompozicije koje sadrže jedinjenja sa formulom (I) mogu da budu korišćena u tretiranju, prevenciji, ili lečenju različitih stanja povezanih sa Btk. Farmaceutske kompozicije koje sadrže ova jedinjenja su korisna u tretiranju, prevenciji ili usporavanju progresije bolesti ili poremećaja u različitim terapijskim oblastima, kao što su proliferativne bolesti, alergijske bolesti, autoimune bolesti ili inflamatorne bolesti.

[0024] Ove i druge karakteristike predmetnog pronalaska biće navedene u proširenom obliku kako se predmetna objava bude nastavila.

KRATAK OPIS NACRTA

[0025] Predmetni pronalazak je ilustrovan pozivanjem na prateće nacrte opisane ispod.

Sl.1 prikazuje apsolutnu stereohemiju intermedijera solvata disirćetne kiseline 30. Sl.2 prikazuje apsolutnu stereohemiju intermedijera 35.

Sl.3 prikazuje apsolutnu stereohemiju primera 2 metanolata, kristalni oblik M-1.

Sl.4 prikazuje apsolutnu stereohemiju primera 11 metanolata, kristalni oblik M-1. Sl.5 prikazuje apsolutnu stereohemiju primera 28 dimetanolata, kristalni oblik M2-1. Sl.6 prikazuje apsolutnu stereohemiju primera 33 dimetanolata, kristalni oblik M2-1. Sl.7 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD difraktograme na sobnoj temperaturi (Cu Kα radijacija λ = 1.5418 Å) primera 11 monohidrata, kristalni oblik H-1.

Sl.8 prikazuje simuliranu PXRD sliku na sobnoj temperaturi (Cu Kα radijacija λ = 1.5418 Å) kristalnog oblika N-2 primera 11.

Sl.9 prikazuje eksperimentalne i simulirane PXRD difraktograme na sobnoj temperaturi (Cu Kα radijacija λ = 1.5418 Å) primera 11 metanolat, kristalni oblik M-1.

Sl.10 prikazuje simuliranu PXRD sliku na 173 K (Cu Kα radijacija λ = 1.5418 Å) primera 28 dimetanolata, kristalni oblik M2-1.

Sl.11 predstavlja eksperimentalnu PXRD sliku na sobnoj temperaturi i simuliranu PXRD sliku na 173 K (Cu Kα radijacija λ = 1.5418 Å) primera 33 dimetanolat, kristalni oblik M2-1.

DETALJAN OPIS

[0026] Prvi aspekt predmetnog pronalaska obezbeđuje barem jedno jedinjenje sa formulom (I):

gde:

dve isprekidane linije predstavljaju ili dve jednostruke ili dve dvostruke veze;

Q je:

R1je F, Cl, -CN, ili -CH3;

R2 je Cl ili -CH3;

R3 je -C(CH3)2OH ili -CH2CH2OH;

Raje H ili -CH3;

svaki Rb je nezavisno F, Cl, -CH3, i/ili -OCH3; i

n je nula, 1, ili 2.

[0027] Atropizomeri su stereoizomeri koji su posledica otežane rotacije oko ose jednostruke veze gde je rotaciona barijera dovoljno visoka da dozvoli izolaciju individualnih rotacionih izomera. (LaPlante et al., J. Med. Chem., 54:7005-7022 (2011).)

[0028] Jedinjenja sa formulom (A):

imaju dve stereogene ose: veza (a) između triciklične tetrahidrokarbazol/karbazol grupe i fenil grupe; i veza (b) između asimetrične heterociklične dion grupe Q i fenil grupe. Usled nesimetrične prirode supstitucija na prstenovima koji su povezani pomoću jednostrukih veza koje su označene sa a i b, i usled ograničene rotacije oko ovih veza izazvanih sternom smetnjom, jedinjenja sa formulom (A) mogu da formiraju rotacione izomere. Ako su rotacione energetske barijere dovoljno visoke, otežane rotacije oko veze (a) i/ili veze (b) dešavaju se pri brzini koja je dovoljno spora da dozvoli izolaciju odvojenih atropizomera kao različitih jedinjenja. Stoga, jedinjenja sa formulom (A) mogu da formiraju četiri rotaciona izomera, koja pod određenim uslovima, kao što je hromatografija na hiralnoj stacionarnoj fazi, mogu da budu razdvojena na individualne atropizomere. U rastvoru, jedinjenja sa formulom (A) mogu da se dobiju kao smeša četiri dijastereomera, ili smeša dva para dijastereomera, ili kao pojedinačni atropizomeri.

[0029] Za jedinjenja sa formulom (A), par rotacionih izomera koji je formiran otežanom rotacijom oko stereogenih osa (a) može da bude predstavljen pomoću jedinjenja sa formulom (I) i formulom (B) koje imaju strukture:

Pronađeno je da jedinjenja sa formulom (I) i jedinjenja sa formulom (B) mogu da se odvoje i da budu stabilna u rastvoru na ambijentalnoj i fiziološkoj temperaturi. Dodatno, rotacioni izomeri su formirani pomoću otežane rotacije oko stereogenih osa (b). Takođe je pronađeno da ova dva atropizomera jedinjenja sa formulom (I) mogu da se odvoje i da budu stabilna u rastvoru na ambijentalnoj i fiziološkoj temperaturi.

[0030] Hiralna jedinjenja, kao što su jedinjenja sa formulom (A), mogu da budu odvojena pomoću različitih tehnika uključujući superkritičnu fluidnu hromatografiju (SFC). SFC, koja predstavlja oblik normalne fazne HPLC, je tehnika odvajanja koja koristi super/subkritični fluidni CO2 i polarne organske modifikatore kao što su alkoholi kao mobilne faze. (White et al., J. Hromatografijom A, 1074:175-185 (2005).)

[0031] Jedinjenja sa formulom (I) gde Q je

mogu da budu predstavljena pomoću formule (II) sa strukturom:

[0032] Četiri rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (A) gde Q je

mogu da budu predstavljena pomoću jedinjenja sa formulom (II) koja ima formule (II-1) i (II-2) sa strukturama:

i jedinjenja sa formulom (B) koja imaju formule (B-1) i (B-2) sa strukturama:

[0033] Jedinjenja sa formulom (I) gde Q je

mogu da budu predstavljena pomoću formule (III) sa strukturom:

[0034] Četiri rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (A) gde Q je

mogu da budu predstavljena jedinjenjima sa formulom (III) koja imaju strukture sa formulama (III-1) i (III-2):

i jedinjenja sa formulom (B) koja imaju strukture sa formulama (B-3) i (B-4):

[0035] Jedinjenja sa formulom (I) gde Q je

mogu da budu predstavljena pomoću strukture formule (IV):

[0036] Četiri rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (A) gde Q je

mogu da budu predstavljena pomoću jedinjenja sa formulom (IV) koja imaju strukture formula (IV-1) i (IV-2):

i jedinjenja sa formulom (B) koja ima strukture formula (B-5) i (B-6):

[0037] Jedinjenja sa formulom (I) gde Q je

mogu da budu predstavljena pomoću strukture sa formulom (V):

[0038] Četiri rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (A) gde Q je

mogu da budu predstavljena pomoću jedinjenja sa formulom (V), koja imaju strukture sa formulama (V-1) i (V-2):

i jedinjenja sa formulom (B) koja imaju strukture sa formulama (B-7) i (B-8):

[0039] Apsolutne prostorne konfiguracije atropizomera mogu da budu određene pomoću rendgenske kristalografije na pojedinačnom kristalu.

[0040] Jedinjenja sa formulom (I) mogu da budu obezbeđena kao individualni atropizomeri ili kao smeše koje sadrže dva atropizomera sa formulom (I) u bilo kojoj proporciji. Smeša dva atropizomera sa formulom (I) mogu opciono da sadrže jedan ili dva atropizomera sa formulom (B) u bilo kojoj proporciji.

[0041] Jedinjenja sa formulom (I) u kojoj R1 je F, Cl, ili -CH3 odgovaraju (R)-atropizomeru u odnosu na stereogenu osu formiranu pomoću veze (a). Jedinjenja sa formulom (B) u kojoj R1 je F, Cl, ili -CH3 odgovaraju (S)-atropizomeru u odnosu na stereogenu osu formiranu pomoću veze (a).

[0042] Jedinjenja sa formulom (I) u kojima R1 je -CN odgovaraju (S)-atropizomeru u odnosu na stereogenu osu formiranu pomoću veze (a). Jedinjenja sa formulom (B) u kojima R1 je -CN odgovaraju (R)-atropizomeru u odnosu na stereogenu osu formiranu pomoću veze (a).

[0043] Kao što je ovde korišćeno, faza "dve isprekidane linije predstavljaju ili dve jednostruke ili dve dvostruke veze" odnosi se na jedinjenja sa formulom (A), (B), (I), (II), (III), (IV), i (V) u kojima su dve isprekidane linije istovremeno jednostruke veze ili dve isprekidane linije su istovremeno dvostruke veze. Na primer, jedinjenja sa formulom (I) u kojoj su dve isprekidane linije istovremeno jednostruke veze su tetrahidrokarbazol jedinjenja koja imaju strukturu sa formulom (IA) i jedinjenja sa formulom (I) u kojoj su dve isprekidane linije istovremeno dvostruke veze su karbazol jedinjenja koja imaju strukturu sa formulom (IB):

[0044] Tetrahidrokarbazol jedinjenja predstavljena formulom (IA) takođe imaju hiralni centar na ugljenikovom atomu za koji je supstituent R<3>vezan, stoga mogu da postoje kao S- i R-izomeri u ovom hiralnom centru.

Ovi izomeri mogu da se razdvoje i stabilni su. Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (IA) sa hiralnim centrom ugljenika za koji je R<3>supstituent vezan, kao S-izomer. Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (IA) sa hiralnim centrom ugljenika za koji je R<3>supstituent vezan, kao R-izomer.

[0045] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R3 je -C(CH3)2OH; i R1, R2, i Q su definisani u prvom aspektu. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja u kojima Q je:

i Ra, Rb, i n su definisani u prvom spektu. Takođe u ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0046] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (II) gde R3je -C(CH3)2OH; i R1, R2, Ra, Rb, i n su definisani u prvom aspektu. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja u kojima Ra je -CH3 uključujući -CD3.

[0047] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (III) gde R3je -C(CH3)2OH; i R1, R2, Rb, i n su definisani u prvom aspektu. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja u kojima svako Rb je nezavisno F ili Cl.

[0048] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (IV) gde R3je -C(CH3)2OH; i R1i R2su definisani u prvom aspektu. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja u kojima R1 je F, Cl, ili -CH3.

[0049] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (V) gde R3 je -C(CH3)2OH; i R1i R2su definisani u prvom aspektu. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja u kojima R1 je F, Cl, ili -CH3.

[0050] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R1 je F. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja formule (IB).

[0051] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R1 je Cl. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0052] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R1 je F ili Cl. U ovo tehničko rešenje su uključena jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0053] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R1 je -CH3. ). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0054] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja formule (I) gde R1 je -CN. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja formule (IB).

[0055] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja formule (I) gde R1 je F, Cl, ili -CN. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja formule (IB).

[0056] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R1 je -CH3 ili -CN. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0057] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R1 je F, Cl, ili -CH3. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0058] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R2 je Cl. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB). Takođe, u ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja u kojima R3je -C(CH3)2OH.

[0059] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R2 je -CH3. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB). Takođe, u ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja u kojima R3 je -C(CH3)2OH.

[0060] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde R3 je -C(CH3)2OH. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0061] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde svako Rb je nezavisno F i/ili Cl. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja u kojima n je 1 ili 2. Takođe u ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja u kojima n je 2 i svako Rb je F.

[0062] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde n je 1 i Rb je -CH3 ili -OCH3.

[0063] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) gde n je nula. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IB).

[0064] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (II) u kojoj su dve isprekidane linije istovremeno jednostruke veze i R1, R2, R3, Ra, Rb, i n su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju strukturu formule (IIA):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (IIA) predstavljena su strukturama sa formulama (IIA-1) i (IIA-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IIA), (IIA-1), i (IIA-2) u kojima R3 je -C(CH3)2OH.

[0065] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (II) u kojoj su dve isprekidane linije istovremeno dvostruke veze i R1, R2, R3, Ra, Rb, i n su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju strukturu sa formulom (IIB):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (IIB) predstavljena su strukturama sa formulama (IIB-1) i (IIB-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IIB), (IIB-1), i (IIB-2) u kojima R3 je -C(CH3)2OH.

[0066] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (II) gde Ra je H. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IIA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IIB).

[0067] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (II) gde Ra je -CH3. U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja u kojima Raje -CD3. Takođe, u ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IIA). Druga jedinjenja uključena u ovo tehničko rešenje su jedinjenja sa formulom (IIB).

[0068] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (III) u kojoj su dve isprekidane linije istovremeno jednostruke veze i R1, R2, R3, Rb, i n su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju strukturu sa formulom (IIIA):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (IIIA) predstavljena su pomoću struktura sa formulama (IIIA-1) i (IIIA-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (IIIA), (IIIA-1), i (IIIA-2) u kojima R3 je -C(CH3)2OH.

[0069] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (III) u kojoj su dve isprekidane linije istovremeno dvostruke veze i R1, R2, R3, Rb, i n su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju strukturu sa formulom (IIIB):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (IIIB) su predstavljena pomoću struktura sa formulama (IIIB-1) i (IIIB-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulama (IIIB), (IIIB-1), i (IIIB-2) u kojima R3 je -C(CH3)2OH.

[0070] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (IV) u kojoj dve isprekidane linije su istovremeno jednostruke veze i R1, R2, i R3su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju strukturu sa formulom (IVA):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (IVA) predstavljena su pomoću struktura sa formulama (IVA-1) i (IVA-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulama (IVA), (IVA-1), i (IVA-2) u kojima R3je -C(CH3)2OH.

[0071] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (IV) u kojoj su dve isprekidane linije istovremeno dvostruke veze i R1, R2, i R3 su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju strukturu sa formulom (IVB):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (IVB) su predstavljena pomoću struktura sa formulama (IVB-1) i (IVB-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulama (IVB), (IVB-1), i (IVB-2) u kojima R3 je -C(CH3)2OH.

[0072] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (V) u kojima dve isprekidane linije su istovremeno jednostruke veze i R1, R2, i R3su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju stukturu formule (VA):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (VA) su predstavljena pomoću struktura formule (VA-1) i (VA-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulom (VA), (VA-1), i (VA-2) u kojima R3 je -C(CH3)2OH.

[0073] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (V) u kojima dve isprekidane linije su istovremeno dvostruke veze i R1, R2, i R3su definisani u prvom aspektu. Jedinjenja ovog rešenja imaju stukturu formule (VB):

Dva rotaciona izomera jedinjenja sa formulom (VB) predstavljena su strukturama sa formulama (VB-1) i (VB-2):

U ovo tehničko rešenje uključena su jedinjenja sa formulama (VB), (VB-1), i (VB-2) u kojima R3je -C(CH3)2OH.

[0074] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) koje ima strukturu:

gde R1 je Cl ili F; i Ra je -CH3 uključujući -CD3.

[0075] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) koje ima strukturu:

gde R1 je Cl ili F; i Ra je -CH3 uključujući -CD3.

[0076] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) koje ima strukturu:

gde R1 je Cl ili F; i Ra je -CH3 uključujući -CD3.

[0077] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) koje ima strukturu:

[0078] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) ili ima strukturu:

[0079] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) koje ima strukturu:

[0080] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje odabrano od prikazanih primera u okviru obima pronalaska prvog aspekta.

[0081] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje odabrano iz bilo koje liste podskupova jedinjenja u okviru obima pronalaska prvog aspekta ili bilo kog od prethodno pomenutih rešenja.

[0082] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje formule (II) gde je jedinjenje: 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (1); 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (2); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(2-metil-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (3); 3-hloro-4-(R)-(3-(1,8-dimetil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (4); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(R)-(7-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (5); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(S)-(7-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (6); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(8-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (7); 3-hloro-4-(R)-(3-(6-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (8); 3-hloro-4-(R)-(3-(7-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (9); 3-hloro-4-(R)-(3-(6,8-difluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (10); 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (11); 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (12); 3-hloro-4-(R)-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (13); 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (14); 3-cijano-4-(S)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (15 i 16); 3-fluoro-4-(R)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (17); 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (18); 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (19); 3-fluoro-4-(R)-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (20); 3-fluoro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (21); 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (22); 6-hloro-5-(R)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (25); 6-hloro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (26); 6-fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(R)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (27); 6-fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (28); 4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksamid (29); 3-hloro-4-(2-hloro-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (42); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(R)-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (43); 3-hloro-4-(2-hloro-3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (44); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(R)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (45); 4-(2-hloro-3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (46); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (47);

ili

[0083] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (III) gde je jedinjenje: 3-hloro-4-(R)-(3-(3-(4-fluorofenil)-2,6-diokso-2,3-dihidropirimidin-1(6H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (23); 4-(R)-(3-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (30 i 31); 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (32); 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (33); 3-hloro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (34); 3-hloro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (35 i 36); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(5-metoksi-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (37); 3-fluoro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (40 i 41);

ili

[0084] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (IV) gde je jedinjenje: 3-hloro-4-(R)-(3-(5,7-diokso-5H-tiazolo[3,2-c]pirimidin-6(7H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (38 i 39).

[0085] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (V) gde je jedinjenje: 3-hloro-4-(R)-(3-(3-(4-fluorofenil)-2,6-diokso-2,3-dihidropirimidin-1(6H)-il)-2-metilfenil)-7-(2 hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (24).

[0086] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje sa formulom (I). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji od (i) jedinjenja sa formulom (I) i (ii) jedinjenja sa formulom (B).

[0087] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (I), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (I) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (B). U ovo tehničko rešenje su uključene, kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (I) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (I) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (B). Kompozicije ovog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0088] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje sa formulom (II). U ovo tehničko rešenje uključena je kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji od (i) jedinjenja sa formulom (II) i (ii) jednog ili oba njegova atropizomerna jedinjenja sa formulama (B-1) i (B-2).

[0089] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (II), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (II) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulama (B-1) i (B-2). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (II) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (II) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulama (B-1) i (B-2). Kompozicije ovog tehičkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0090] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (III). U ovo tehničko rešenje uključena je kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji od (i) jedinjenja sa formulom (III) i (ii) jednog ili oba njegova atropizomerna jedinjenja sa formulom(B-3) i (B-4).

[0091] U jednom tehničkom rešenju, kompozicija koja je obezbeđena sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (III), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (III) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulama (B-3) i (B-4). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (III) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (III) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (B-3) i (B-4). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0092] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje sa formulom (IV). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji od (i) jedinjenja sa formulom (IV) i (ii) jednog ili oba njegova atropizomerna jedinjenja sa formulama (B-5) i (B-6).

[0093] U jednom tehičkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (IV), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (IV) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulama (B-5) i (B-6). U ovo tehničko rešenje su uključene kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (IV) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (IV) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulama (B-5) i (B-6). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0094] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (V). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (V) i (ii) jednog ili oba njegova atropizomerna jedinjenja sa formulom (B-7) i (B-8).

[0095] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (V), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (V) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulama (B-7) i (B-8). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (V) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (V) i njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulama (B-7) i (B-8). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0096] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (II-1). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (II-1) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (II-2), formule (B-1) i (B-2).

[0097] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (II-1), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (II-1), (II-2), (B-1), i (B-2). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (II-1) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (II-1), (II-2), (B-1), i (B-2). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0098] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (II-2). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (II-2) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (II-1), formule (B-1) i (B-2).

[0099] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (II-2), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (II-1), (II-2), (B-1), i (B-2). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (II-2) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (II-1), (II-2), (B-1), i (B-2). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0100] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (III-1). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (III-1) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (III-2), formule (B-3) i (B-4).

[0101] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (III-1), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (III-1), (III-2), (B-3), i (B-4). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (III-1) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (III-1), (III-2), (B-3), i (B-4). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0102] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (III-2). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (III-2) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (III-1), formule (B-3) i (B-4).

[0103] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (III-2), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (III-1), (III-2), (B-3), i (B-4). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (III-2) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (III-1), (III-2), (B-3), i (B-4). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0104] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (IV-1). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (IV-1) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (IV-2), formule (B-5) i (B-6).

[0105] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (IV-1), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (IV-1), (IV-2), (B-5), i (B-6). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (IV-1) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (IV-1), (IV-2), (B-5), i (B-6). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0106] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (IV-2). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (IV-2) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (IV-1), formule (B-5) i (B-6).

[0107] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (IV-2), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (IV-1), (IV-2), (B-5), i (B-6). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (IV-2) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (IV-1), (IV-2), (B-5), i (B-6). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0108] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (V-1). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom(V-1) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (V-2), formule (B-7) i (B-8).

[0109] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (V-1), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (V-1), (V-2), (B-7), i (B-8). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom(V-1) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom(V-1), (V-2), (B-7), i (B-8). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

[0110] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži jedinjenje formule (V-2). U ovo tehničko rešenje je uključena kompozicija koja sadrži smešu u bilo kojoj proporciji (i) jedinjenja sa formulom (V-2) i (ii) jednog ili više njegovih atropizomernih jedinjenja sa formulom (V-1), formule (B-7) i (B-8).

[0111] U jednom tehničkom rešenju, obezbeđena je kompozicija koja sadrži najmanje 98 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (V-2), bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (V-1), (V-2), (B-7), i (B-8). U ovo tehničko rešenje uključene su kompozicije koje sadrže 99 ekvivalentnih masenih %, 99.5 ekvivalentnih masenih %, 99.8 ekvivalentnih masenih %, i 99.9 ekvivalentnih masenih % jedinjenja sa formulom (V-2) bazirano na ukupnoj masi ekvivalenata jedinjenja sa formulom (V-1), (V-2), (B-7), i (B-8). Kompozicije ovog tehničkog rešenja uključuju farmaceutske kompozicije.

KRISTALNI OBLICI

[0112]

Tabela1

[0113] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenje iz primera 2 je obezbeđeno kao kristalni materijal koji sadrži oblik M-1. Ovaj kristalni oblik jedinjenja iz primera 2 sadrži kristalni oblik metanol solvata označen ovde kao "Oblik M-1" ili "M-1 Oblik" primera 2. M-1 oblik primera 2 sadrži jedan molekul metanola za svaki molekul primera 2.

[0114] U jednom tehničkom rešenju, M-1 Oblik jedinjenja iz primera 2 karakteriše se parametrima jedinične ćelije približno jednakim sledećem:

Dimenzije ćelije:

a = 9.75 Å

b = 14.21 Å

c = 21.26 Å

α = 90.0°

β = 90.0°

γ = 90.0°

Prostorna grupa: P212121

Molekuli primera 2/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji = 736 Å<3>

Gustina (izračunato) = 1.391 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika M-1 izmereni na temperaturi od oko 203 K.

[0115] U još jednom daljem tehičkom rešenju, M-1 Oblik iz primera 2 karakteriše se pomoću frakcionih koordinata atoma suštinski kao što je navedeno u Tabeli 2.

Tabela 2

[0116] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenje iz primera 11 je obezbeđeno kao kristalni materijal koji sadrži Oblik H-1. Ovaj kristalni oblik jedinjenja iz primera 11 sadrži kristalni oblik monohidrata koji je ovde označen kao "Oblik H-1" ili "H-1 Oblik" iz primera 11. H-1 Oblik iz primera 11 sadrži jedan molekul vode za svaki molekul iz primera 11.

[0117] U jednom tehničkom rešenju, H-1 Oblik jedinjenja iz primera 11 se karakteriše parametrima jedinične ćelije koji su približno jednaki sledećem:

Dimenzije ćelije:

a = 9.41 Å

b = 14.51 Å

c = 21.12 Å

α = 90.0°

β = 90.0°

γ = 90.0°

Prostorna grupa: P212121

Molekuli iz primera 11/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 721 Å<3>

Gustina (izračunato) = 1.396 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika H-1 izmereni na temperaturi od oko sobne temperature.

[0118] U drugom tehničkom rešenju, H-1 oblik iz primera 11 karakteriše se simuliranim difraktogramom (difrakcionom slikom) koji je dobijen rendgenskom difrakcijom praha (PXRD) suštinski u skladu sa difraktogramom koji je prikazan na slici 7 i/ili pomoću eksperimentalnog difraktograma koji je dobijen rendgenskom difrakcijom praha PXRD suštinski u skladu sa difraktogramom prikazanim na slici 7.

[0119] U još jednom daljem tehničkom rešenju, H-1 Oblik iz primera 11 se karakteriše pomoću frakcionih koordinata atoma suštinski kao što je navedeno u Tabeli 3.

Tabela 3

[0120] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenje iz primera 11 je obezbeđeno kao kristalni materijal koji sadrži Oblik N-2. Ovaj kristalni oblik jedinjenja iz primera 11 sadrži skladan kristalni oblik koji je ovde označen kao "Oblik N-2" ili "N-2 Oblik" iz primera 11.

[0121] U jednom tehničkom rešenju, N-2 oblik jedinjenja iz primera 11 se karakteriše parametrima jedinične ćelije koji su približno jednaki sledećem:

Dimenzije ćelije:

a = 10.89 Å

b = 9.47 Å

c = 14.28 Å

α = 90.0°

β = 105.5°

γ = 90.0°

Prostorna grupa: P21

Molekuli iz primera 11/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji = 710 Å<3>

Gustina (izračunato) = 1.369 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika N-2 izmereni na temperaturi od oko sobne temperature.

[0122] U drugom tehničkom rešenju, oblik N-2 iz primera 11 se karakteriše pomoću simuliranog difraktograma koji je dobijen rendgenskom difrakcijom praha (PXRD) suštinski u skladu sa difraktogramom koji je prikazan na slici 8.

[0123] U još jednom daljem tehičkom rešenju, Oblik N-2 iz primera 11 se karakteriše pomoću frakcionih koordinata atoma suštinski kao što je navedeno u tabeli 4.

Tabela 4

[0124] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenje iz primera 11 je obezbeđeno kao kristalni materijal koji sadrži Oblik M-1. Ovaj kristalni oblik jedinjenja iz primera 11 sadrži kristalni oblik metanol solvata označen ovde kao "Oblik M-1" ili "M-1 Oblik" iz primera 11. M-1 Oblik iz primera 11 sadrži jedan molekul metanola za svaki molekul iz primera 11.

[0125] U jednom tehničkom rešenju, M-1 Oblik jedinjenja iz primera 11 se karakteriše pomoću parametara jedinične ćelije koji su približno jednaki sledećem:

Dimenzije ćelije:

a = 9.78 Å

b = 14.26 Å

c = 21.38 Å

α = 90.0°

β = 90.0°

γ = 90.0°

Prostorna grupa: P212121

Molekuli iz primera 11/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 746 Å<3>

Gustina (izračunato) = 1.381 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika M-1 izmereni na temperaturi od oko sobne temperature.

[0126] U drugom tehničkom rešenju, M-1 oblik iz primera 11 se karakteriše pomoću simuliranog difraktograma koji je dobijen rendgenskom difrakcijom praha (PXRD) suštinski u skladu sa difraktogramom prikazanim na slici 9 i/ili pomoću eksperimentalnog difraktograma koji je dobijen rendgenskom difrakcijom praha PXRD suštinski u skladu sa difraktogramom prikazanim na slici 9.

[0127] U još jednom daljem rešenju, M-1 Oblik iz primera 11 se karakteriše pomoću frakcionih koordinata atoma suštinski kao što je navedeno u Tabeli 5.

Tabela 5

[0128] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenje iz primera 28 je obezbeđeno kao kristalni materijal koji sadrži Oblik M2-1. Ovaj kristalni oblik jedinjenja iz primera 28 sadrži kristalni oblik metanol solvata koji je ovde označen kao "Oblik M2-1" ili "M2-1 Oblik" iz primera 28. M2-1 Oblik iz primera 28 sadrži dva molekula metanola za svaki molekul iz primera 28.

[0129] U jednom tehničkom rešenju, M2-1 Oblik jedinjenja iz primera 28 se karakteriše pomoću parametara jedinične ćelije koji su približno jednaki sledećem:

Dimenzije ćelija:

a = 9.24 Å

b = 7.97 Å

c = 22.12 Å

α = 90.0°

β = 94.1°

γ = 90.0°

Prostorna grupa: P21

Molekuli iz primera 28/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 813 Å<3>

Gustina (izračunato) = 1.301 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije oblika M2-1 izmereni na temperaturi od oko 173 K.

[0130] U drugom tehničkom rešenju, M2-1 oblik iz primera 28 se karakteriše pomoću simuluranog difraktograma koji je dobijen pomoću rendgenske difrakcije na prahu (PXRD) u skladu sa difraktogramom koji je prikazan na slici 10.

[0131] U još jednom daljem tehničkom rešenju, M2-1 Oblik iz primera 28 se karakteriše pomoću frakcionih koordinata atoma suštinski kao što je navedeno u Tabeli 6.

Tabela 6

[0132] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenje iz primera 33 je obezbeđeno kao kristalni materijal koji sadrži Oblik M2-1. Ovaj kristalni oblik jedinjenja iz primera 33 sadrži kristalni oblik metanol solvata koji je označen ovde kao "Oblik M2-1" ili "M2-1 Oblik" iz primera 33. M2-1 oblik iz primera 33 sadrži dva molekula metanola za svaki molekul iz primera 33.

[0133] U jednom tehničkom rešenju, M2-1 Oblik jedinjenja iz primera 33 se karakteriše pomoću parametara jedinične ćelije koji su približno jednaki sledećem:

Dimenzije ćelije:

a = 7.41 Å

b = 9.74 Å

c = 44.55 Å

α = 90.0°

β = 90.0°

γ = 90.0°

Prostorna grupa: P212121

Molekuli iz primera 33/asimetrična jedinica: 1

Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 3214 Å<3>

Gustina (izračunato) = 1.346 g/cm<3>,

gde su parametri jedinične ćelije Oblika M2-1 izmereni na temperaturi od oko 173 K.

[0134] U drugom tehničkom rešenju, M2-1 oblik iz primera 33 se karakteriše pomoću simuliranog difraktora koji je dobijen rendgenskom simuliranom difrakcijom (PXRD) suštinski u skladu sa difraktogramom prikazanim na slici 11 i/ili pomoću eksperimentalnog difraktograma koji je dobijen rendgenskom difrakcijom na prahu PXRD suštinski u skladu sa difraktogramom prikazanim na slici 11.

[0135] U još jednom daljem tehničkom rešenju, M2-1 Oblik iz primera 33 se karakteriše pomoću frakcionih koordinata atoma suštinski kao što je navedeno u Tabeli 7.

Tabela 7

[0136] Predmetni pronalazak može da bude uključen u druge specifične oblike bez odstupanja od svojih esencijalnih osobina. Ovaj predmetni pronalazak obuhvata sve kombinacije aspekata i/ili tehnička rešenja predmetnog pronalaska koji su ovde naznačeni. Podrazumeva se da bilo koja i sva tehnička rešenja predmetnog pronalaska mogu da se povežu sa bilo kojim drugim tehničkim rešenjem ili tehničkim rešenjima da se opišu dodatna tehnička rešenja. Takođe, podrazumeva se da je svaki individualni elemenat tehničkih rešenja namenjen da bude kombinovan sa bilo kojim i svim drugim elementima iz bilo kog tehničkog rešenja da opiše dodatno tehničko rešenje.

DEFINICIJE

[0137] Osobine i prednosti predmetnog pronalaska mogu lakše da shvate prosečni poznavaoci oblasti nakon čitanja sledećeg detaljnog opisa. Treba razumeti da određene karakteristike predmetnog pronalaska, zbog jasnoće, opisane iznad i ispod u kontekstu odvojenih tehničkih rešenja, mogu takođe da budu kombinovane da formiraju jedno tehničko rešenje. Nasuprot tome, različite karakteristike predmetnog pronalaska koje su, zbog sažetosti, opisane u kontekstu jednog rešenja, mogu takođe da budu kombinovane tako da formiraju njegove podkombinacije. Tehnička rešenja koja su ovde identifikovana kao primeri ili kao poželjna treba da budu ilustrativna i neograničavajuća.

[0138] Sve dok specifično ovde nije naznačeno drugačije, reference koje su u jednini mogu takođe da uključuju i množinu. Na primer, "jedan" i "neki" mogu da se odnose na ili jedan, ili jedan ili više.

[0139] Kao što je ovde korišćeno, izraz "jedinjenja" odnosi se najmanje na jedno jedinjenje. Na primer, jedinjenje sa formulom (I) uključuje jedinjenje sa formulom (I) i dva ili više jedinjenja sa formulom (I).

[0140] Sve dok nije drugačije naznačeno, za bilo koji heteroatom sa nezadovoljavajućim valencama se pretpostavlja da ima vodonikove atome dovoljne da postignu valence.

[0141] Definicije različitih termina koje su navedene ispod koriste se da opišu predmetni pronalazak. Ove definicije su korišćene za termine kako se koriste kroz specifikaciju (sve dok nisu drugačije ograničeni u specifičnim slučajevima) ili individualno ili kao deo veće grupe.

[0142] Kroz specifikaciju, njene grupe i supstituenti mogu da budu izabrani od strane prosečnog poznavaoca stanja tehnike da bi se obezbedili stabilni segmenti i jedinjenja.

[0143] U skladu sa konvencijom koja je korišćena u stanju tehnike,

je korišćeno ovde u strukturalnim formulama da se prikaže veza koja je tačka vezivanja grupe ili supstituenta za jezgro ili kičmu strukture.

[0144] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi da označi ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, u okviru zdrave medicinske procene, pogodni za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno razumnom odnosu koristi i rizika.

[0145] Jedinjenja sa formulom (I) mogu da budu obezbeđena kao amorfne čvrste supstance ili kao kristalne čvrste supstance. Liofilizacija se može koristiti da se obezbede jedinjenja sa formulom (I) kao amorfne čvrste supstance.

[0146] Dalje treba razumeti da solvati (npr. hidrati) jedinjenja sa formulom (I) su takođe u okviru obima predmetnog pronalaska. Termin "solvat" označava fizičku povezanost jedinjenja sa formulom (I) sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organskog ili neorganskog. Ova fizička veza uključuje vezivanje vodonika. U određenim primerima solvat će biti sposoban za izolaciju, na primer kada jedan ili više molekula rastvarača su inkorporirana u kristalnu mrežu kristalne čvrste supstance. "Solvat" obuhvata i fazu rastvaranja i izolovane solvate. Primeri solvata uključuju hidrate, etanolate, metanolate, izopropanolate, solvate acetonitrila, i solvate acetat solvata. Metode solvatacije su poznate u stanju tehnike.

[0147] Dodatno, jedinjenja sa formulom (I), nakon njihove pripreme, mogu da budu izolovana i prečišćena da se dobije kompozicija koja sadrži količinu koja je po masi jednaka ili veća od 99% jedinjenja sa formulom (I) ("suštinski čisto"), što je zatim korišćeno ili formulisano kao što je ovde opisano. Takva "suštinski čista" jedinjenja sa formulom (I) su takođe ovde razmatrana kao deo predmetnog pronalaska.

[0148] "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" su namenjeni da označavaju jedinjenje koje je dovoljno snažno da preživi izolaciju do pogodnog stepena čistoće iz reakcione smeše, i formulaciju u efikasan terapijski agens. Predmetni pronalazak je namenjen da uključi stabilna jedinjenja.

[0149] "Terapijski efikasna količina" je namenjena da uključi količinu jedinjenja samog predmetnog pronalaska ili količinu kombinacije zahtevanih jedinjenja ili količinu jedinjenja predmetnog pronalaska u kombinaciji sa drugim aktivnim sastojcima koji su efikasni da deluju kao inhibitor Btk-a, ili su efikasni da leče ili spreče stanja autoimune i/ili inflamatorne bolesti, kao što je multipla skleroza i reumatoidni artritis.

[0150] Kao što je ovde korišćeno, "tretiranje" ili "lečenje" pokriva lečenje stanja bolesti kod sisara, posebno kod ljudi, i uključuje: (a) sprečavanje da se stanje bolesti javlja kod sisara, naročito kada je takav sisar predisponiran za stanje bolesti ali nije još dijagnostikovano da ga ima; (b) inhibiranje stanja bolesti, tj., zaustavljanje njenog razvoja; i/ili (c) ublažavanje stanja bolesti, tj., izazivanje regresije stanja bolesti.

[0151] Jedinjenja predmetnog pronalaska su namenjena da uključe sve izotope atoma koji se javljaju u predstavljenim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Kao opšti primer i bez ograničenja, izotopi vodonika uključuju deuterijum (D) i tritijum (T). Izotopi ugljenika uključuju<13>C i<14>C. Jedinjenja predmetnog pronalaska obeležena izotopima mogu generalno da budu pripremljena konvencionalnim tehnikama koje su poznate prosečnim poznavaocima stanja tehnike ili pomoću procesa koji su analogni onima koji su opisani ovde, korišćenjem reagensa koji je obeležen izotopom na mestu neobeleženog reagensa koji se inače koristi. Na primer, metil (-CH3) takođe uključuje deuterisane metil grupe kao što su -CD3.

[0152] Jedinjenja u skladu sa formulom (I) mogu da budu administrirana pomoću bilo kog sredstva koje je pogodno za stanje koje treba da se leči, koje može da zavisi od potrebe za lečenjem specifičnog mesta ili količinom jedinjenja sa formulom (I) koje se isporučuje.

[0153] U okviru ovog predmetnog pronalaska je takođe obuhvaćena klasa farmaceutskih kompozicija koje sadrže jedinjenje sa formulom (I) i jedan ili više ne toksičnih, farmaceutski prihvatljivih nosača i/ili diluenata i/ili pomoćnih sredstava (koji su kolektivno ovde označeni kao "nosač" materijali) i, ako je poželjno, druge aktivne sastojke. Jedinjenja sa formulom (I) mogu da budu administrirana bilo kojim odgovarajućim putem, poželjno u obliku farmaceutske kompozicije koja je prilagođena takvom putu, i u dozi koja je efikasna za nameravano lečenje. Jedinjenja i kompozicije predmetnog pronalaska mogu, na primer, da budu administrirana oralno, mukozno, ili parentalno uključujući intravaskularno, intravenski, intraperitonealno, subkutano, intramuskularno, i intrasternalno u formulacijama jedinične doze koja sadrži konvencionalno farmaceutski prihvatljive nosače, pomoćna sredstva, i transportere. Na primer, farmaceutski nosač može da sadrži smešu manitola ili laktoze i mikrokristalne celuloze. Smeša može da sadrži dodatne komponente kao što su agens za podmazivanje, npr., magnezijum stearat i agens za dezintegraciju kao što je krospovidon.

Smeša nosača može da popuni želatin kapsulu ili da bude kompresovana kao tableta. Farmaceutska kompozicija može da bude administrirana u oralnom doznom obliku ili kao infuzija, na primer.

[0154] Za oralno administriranje, farmaceutska kompozicija može da bude u obliku, na primer, tablete, kapsule, tečne kapsule, suspenzije, ili tečnosti. Farmaceutska kompozicija je poželjno napravljena u obliku dozne jedinice koja sadrži specifičnu količinu aktivnog sastojka. Na primer, farmaceutska kompozicija može da bude obezbeđena kao tableta ili kapsula koja sadrži količinu aktivnog sastojka u opsegu od oko 0.1 do 1000 mg, poželjno od oko 0.25 do 250 mg, i poželjnije od oko 0.5 do 100 mg. Pogodna dnevna doza za ljude ili druge sisare može široko da varira u zavisnosti od stanja pacijenta i drugih faktora, ali, može da bude određena korišćenjem rutinskih metoda.

[0155] Bilo koja farmaceutska kompozicija koja se ovde spominje može, na primer, da bude isporučena oralno pomoću bilo kojih prihvatljivih i pogodnih oralnih preparata. Oralni preparati koji služe kao primer, uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, tablete, pastile, lozenge, vodene i uljane suspenzije, prahove ili granule koji su disperzibilni, emulzije, tvrde i meke kapsule, tečne kapsule, sirupe, i eliksire. Farmaceutske kompozicije namenjene za oralno administriranje mogu da budu pripremljene u skladu sa bilo kojim metodama koje su poznate u stanju tehnike za proizvodnju farmaceutskih kompozicija koje su namenjene za oralno administriranje. Da bi se obezbedili farmaceutski preparati prijatnog ukusa, farmaceutske kompozicije u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu da sadrže najmanje jedan agens odabran od agenasa za zaslađivanje, agenasa za poboljšavanje ukusa, agenasa za bojenje, demulcenata, antioksidansa, i konzervansa.

[0156] Tableta može, na primer, da bude pripremljena mešanjem najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) sa najmanje jednim netoksičnim farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju tableta. Ekscipijensi koji služe kao primer uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, inertne diluente, kao što su, na primer, kalcijum karbonat, natrijum karbonat, laktoza, kalcijum fosfat, i natrijum fosfat; agensi za granuliranje i dezintegraciju, kao što su, na primer, mikrokristalna celuloza, natrijum kroskarmeloza, kukuruzni skrob, i alginska kiselina; vezujući agensi, kao što su, na primer, skrob, želatin, polivinil-pirolidon, i akacija; i agensi za podmazivanje, kao što su, na primer, magnezijum stearat, stearinska kiselina, i talk. Dodatno, tableta može ili da bude neobložena, ili obložena pomoću poznatih tehnika da ili maskira neprijatan ukus leka, ili da odloži dezintegraciju i apsorpciju aktivnog sastojka u gastrointestinalnom traktu čime održava efekte aktivnog sastojka u dužem periodu.

Materijali za maskiranje ukusa rastvorljivi u vodi koji služe kao primer, uključuju, ali nisu ograničeni na, hidroksipropil-metilcelulozu i hidroksipropil-celulozu. Materijali za odlaganje vremena koji služe kao primer, uključuju, ali nisu ograničeni na, etil celulozu i celuloza acetat butirat.

[0157] Tvrde želatinaste kapsule mogu, na primer, da budu pripremljene mešanjem najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) sa najmanje jednim inertnim čvrstim diluentom, kao što je, na primer, kalcijum karbonat; kalcijum fosfat; i kaolin.

[0158] Meke želatinaste kapsule mogu, na primer, da budu pripremljene mešanjem najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) sa najmanje jednim vodenim rastvorljivim nosačem, kao što je, na primer, polietilen glikol; i najmanje jedno srednje ulje, kao što je, na primer, ulje kikirikija, tečni parafin, i maslinovo ulje.

[0159] Vodena suspenzija može da bude pripremljena, na primer, mešanjem najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) sa najmanje jednim ekscipijensom pogodnim za proizvodnju vodene suspenzije. Ekscipijensi pogodni za proizvodnju vodene suspenzije koji služe kao primer, uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, agense za suspendovanje, kao što su, na primer, natrijum karboksimetilceluoza, metilceluloza, hidroksipropilmetilceluloza, natrijum alginat, alginska kiselina, polivinil-pirolidon, tragakant guma, i akacija guma; agense za raspršivanje ili vlaženje, kao što su, na primer, fosfatid koji se javlja u prirodi, npr., lecitin; proizvodi kondenzacije alkilen oksida sa masnim kiselinama, kao što je, na primer, polioksietilen stearat; proizvodi kondenzacije etilen oksida sa alifatičnim alkoholima sa dugim lancima, kao što su, na primer heptadekaetilen-oksicetanol; proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima koji su izvedeni iz masnih kiselina i heksitola, kao što su, na primer, polioksietilen sorbitol monooleat; i proizvodi kondenzacije etilen oksida sa parcijalnim estrima izvedenim iz masnih kiselina i heksitol anhidrida, kao što je, na primer, polietilen sorbitan monooleat. Vodena suspenzija može takođe da sadrži najmanje jedan konzervans, kao što je, na primer, etil i n-propil p-hidroksibenzoat; najmanje jedan agens za bojenje; najmanje jedan agens za poboljšavanje ukusa; i/ili najmanje jedan agens za zaslađivanje, uključujući ali ne ograničavajući se na, na primer, sukrozu, saharin, i aspartam.

[0160] Uljane suspenzije mogu, na primer, da budu pripremljene suspendovanjem najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) u ili biljnom ulju, kao što je, na primer, arašidovo ulje; maslinovo ulje; susamovo ulje; i kokosovo ulje; ili u mineralnom ulju, kao što je, na primer, tečni parafin. Uljana suspenzija može takođe da sadrži najmanje jedan agens za zgušnjavanje, kao što je, na primer, pčelinji vosak; čvrst parafin; i cetil alkohol. U cilju obezbeđivanja uljane suspenzije prijatnog ukusa, najmanje jedan od agenasa za zaslađivanje koji je već ovde opisan iznad, i/ili najmanje jedan agens za poboljšanje ukusa mogu da budu dodati uljanoj suspenziji. Uljana suspenzija može dalje da sadrži najmanje jedan konzervans, uključujući, ali ne ograničavajući se na, na primer, antioksidans, kao što je, na primer, butilovani hidroksianizol, i alfa-tokoferol.

[0161] Disperzni prahovi i granule mogu, na primer, da budu pripremljene mešanjem najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) sa najmanje jednim agensom za raspršivanje i/ili agensom za vlaženje; najmanje jednim agensom za suspendovanje; i/ili najmanje jednim konzervansom. Pogodni agensi za raspršivanje, agensi za vlaženje, i agensi za suspendovanje su već opisani iznad. Konzervansi koji služe kao primer uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, anti-ooksidanse, npr., askorbinska kiselina. Dodatno, prahovi i granule koji su disperzibilni takođe mogu da sadrže najmanje jedan ekscipijens, uključujući, ali ne ograničavajući se, na primer, agense za zaslađivanje; agense za poboljšavanje ukusa; i agense za bojenje.

[0162] Emulzija najmanje jednog jedinjenja sa njegovom formulom (I) može, na primer, da bude pripremljena kao emulzija ulja u vodi. Uljana faza emulzije koja sadrže jedinjenja sa formulom (I) može da bude napravljena od poznatih sastojaka na poznati način. Uljana faza može da se dobije pomoću, ali nije ograničena na, na primer, biljnog ulja, kao što je, na primer, maslinovo ulje i arašidovo ulje; mineralnog ulja, kao što je, na primer, tečni parafin; i njihove smeše. Dok faza može da sadrži samo emulgator, može da sadrži smešu od najmanje jednog emulgatora sa mašću ili ulje ili i mast i ulje. Pogodni agensi za emulgovanje uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, fosfatide koji se nalaze u prirodi, npr., sojin lecitin; estre ili parcijalne estre koji su izvedeni iz masnih kiselina i heksitol anhidrida, kao što su, na primer, sorbitan monooleat; i proizvode kondenzacije parcijalnih estara sa etilen oksidom, kao što su, na primer, polooksietilen sorbitan monooleat. Poželjno, hidrofilni emulgator je uključen zajedno sa lipofilnim emulgatorom koji se ponaša kao stabilizator. Takođe je poželjno da se uključi i ulje i mast. Zajedno, emulgator(i) sa ili bez stabilizatora sačinjava takozvani emulgirajući vosak, i vosak zajedno sa uljem i mašću sačinjava takozvanu emulgirajuću masnu podlogu koja formira uljanu dispergovanu fazu formulacija krema. Emulzija može takođe da sadrži agens za zaslađivanje, agens za poboljšavanje ukusa, konzervans, i/ili antioksidant. Emulgatori i stabilizatori emulzije pogodni za upotrebu u formulaciji predmetnog pronalaska uključuju Tween 60, Span 80, cetostearil alkohol, miristil alkohol, gliceril monostearat, natrijum lauril sulfat, gliceril distearat sam ili sa voskom, ili druge materijale dobro poznate u stanju tehnike.

[0163] Jedinjenja sa formulom (I) mogu, na primer, takođe da budu isporučena intravenski, subkutano, i/ili intramuskularno pomoću bilo kog farmaceutski prihvatljivog i pogodnog injektabilnog oblika. Injektabilni oblici koji služe kao primer uključuju, ali nisu ograničeni na, na primer, sterilne vodene rastvore koji sadrže prihvatljive transportere i rastvarače, kao što su, na primer, voda, Ringerov rastvor, i izotonični rastvor natrijum hlorida; sterilne mikroemulzije ulja u vodi; i vodene ili uljane suspenzije.

[0164] Formulacije za parenteralno administriranje mogu da budu u obliku vodenih ili nevodenih izotoničnih sterilnih rastvora ili suspenzija koji se ubrizgavaju. Ovi rastvori i suspenzije mogu da budu pripremljeni od sterilnih prahova ili granula korišćenjem jednog ili više nosača ili diluenata koji su pomenuti za upotrebu u formulacijama za oralno administriranje ili korišćenjem drugih pogodnih agenasa za raspršivanje ili vlaženje i agenasa za suspendovanje. Jedinjenja mogu da budu rastvorena u vodi, polietilen glikolu, propilen glikolu, etanolu, kukuruznom ulju, ulju od pamuka, ulju kikirikija, susamovom ulju, benzil alkoholu, natrijum hloridu, tragakant gumi, i/ili različitim puferima. Druga pomoćna sredstva i načini administriranja su dobro i široko poznati u farmaceutskoj oblasti. Aktivni sastojak može takođe da bude administriran injektiranjem kao kompozicija sa odgovarajućim nosačima uključujući fiziološki rastvor, dekstrozu, ili vodu, ili sa ciklodekstrinom (tj., CAPTISOL®), solubilizacija korastvaračima (tj., propilen glikolom) ili micelarnom solubilizacijom (tj., Tween 80).

[0165] Sterilni injektabilni preparat može takođe da bude sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom diluentu ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butanediolu. Među prihvatljivim transporterima i rastvaračima koji mogu da budu korišćeni su voda, Ringerov rastvor, i izotonični rastvor natrijum hlorida. Dodatno, sterilna, fiksna ulja su konvencionalno upotrebljena kao rastvarač ili suspendujući medijum. U ovu svrhu bilo koje blago neeterično ulje može da bude korišćeno, uključujući sintetičke mono- ili digliceride. Dodatno, masne kiseline kao što su oleinske kiseline nalaze primenu u pripremanju injektabilnih supstanci.

[0166] Sterilna injektabilna mikroemulzija ulje u vodi može, na primer, da bude pripremljena 1) rastvaranjem najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) u uljanoj fazi, kao što je, na primer, smeša sojinog ulja i lecitina; 2) kombinovanjem formule (I) koja sadrži uljanu fazu sa smešom vode i glicerola; i 3) obradom kombinacije za formiranje mikroemulzije.

[0167] Sterilna vodena ili uljana suspenzija može da bude pripremljena u skladu sa metodama koje su već poznate u stanju tehnike. Na primer, sterilni vodeni rastvor ili suspenzija mogu da budu pripremljeni sa netoksičnim parenteralno prihvatljivim diluentom ili rastvaračem, kao što je, na primer, 1,3-butan diol; i sterilna uljana suspenzija može da bude pripremljena sa sterilnim netoksičnim prihvatljivim rastvaračem ili suspendujućim medijumom, kao što su, na primer, sterilna fiksirana ulja, npr., sintetički mono- ili digliceridi; i masne kiseline, kao što je, na primer, oleinska kiselina.

[0168] Farmaceutski prihvatljivi nosači, pomoćna sredstva, i transporteri koji mogu da budu korišćeni u farmaceutskim kompozicijama ovog predmetnog pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, izmenjivače jona, aluminijum, aluminijum stearat, lecitin, samoemulgujuće sisteme za isporuku leka (SEDDS) kao što su d-alfa-tokoferol polietileneglikol 1000 sukcinat, surfaktanti koji se koriste u farmaceutskim doznim oblicima kao što su Tweens, polietoksilirano ricinusovo ulje kao što je CREMOPHOR® surfaktant (BASF), ili druge slične polimerne matrice za isporuku, proteine seruma, kao što je humani serum albumin, puferne supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, delimično glicerinske smeše zasićenih biljnih masnih kiselina, vode, soli ili elektrolita, protamin sulfat, dinatrijum vodonik fosfat, kalijum vodonik fosfat, natrijum hlorid, cinkove soli, koloidni silicijum, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, polietilen-polioksipropilen-blok polimeri, polietilen glikol i lanolin. Ciklodekstrini kao što su alfa-, beta-, i gamaciklodekstrin, ili hemijski modifikovani derivati kao što su hidroksialkilciklodekstrini, uključujući 2- i 3-hidroksipropil-ciklodekstrine, ili druge solubilizovane derivate koji mogu takođe da budu pogodno korišćeni da poboljšaju isporuku jedinjenja sa formulama koje su opisane iznad.

[0169] Farmaceutski aktivna jedinjenja ovog predmetnog pronalaska mogu da budu obrađena u skladu sa konvencionalnim metodama farmacije da se proizvedu medicinski agensi za administriranje kod pacijenata, uključujući ljude i druge sisare. Farmaceutske kompozicije mogu da budu izložene konvencionalnim farmaceutskim operacijama kao što je sterilizacija i/ili mogu da sadrže konvencionalna pomoćna sredstva, kao što su konzervansi, stabilizatori, agensi za vlaženje, emulgatori, puferi itd. Tablete i pilule mogu dodatno da budu pripremljene sa enteričnim oblaganjima. Takve kompozicije mogu takođe da sadrže pomoćna sredstva, kao što su agensi za vlaženje, zaslađivanje, poboljšavanje ukusa, agensi za mirise.

[0170] Količine jedinjenja koja su administrirana i režim doziranja za lečenje stanja bolesti sa jedinjenjima i/ili kompozicijama ovog predmetnog pronalaska zavisi od raznovrsnih faktora, uključujući godište, masu, pol, zdravstveno stanje subjekta, tip bolesti, težine bolesti, put i učestalost administracije, i specifičnog jedinjenja koje je upotrebljeno. Stoga, režim doziranja može široko da varira, ali može da bude redovno određen korišćenjem standardnih metoda. Dnevna doza od oko 0.001 do 100 mg/kg telesne mase, poželjno između oko 0.0025 i oko 50 mg/kg telesne mase i najpoželjnije između oko 0.005 do 10 mg/kg telesne mase, može da bude pogodna. Dnevna doza može da bude administrirana u jednoj do četiri doze dnevno. Ostali rasporedi doziranja uključuju jednu dozu nedeljno i jednu dozu po dvodnevnom ciklusu.

[0171] U terapijske svrhe, aktivna jedinjenja ovog predmetnog pronalaska su obično kombinovana sa jednim ili više pomoćnih sredstava koja su prikladna za naznačeni put administriranja. Ako su administrirana oralno, jedinjenja mogu da budu mešana sa - laktoza, sukroza, skrob u prahu, estri celuloze alkanoinskih kiselina, alkil estri celuloze, talk, stearinska kiselina, magnezijum stearat, magnezijum oksid, natrijumove i kalcijumove soli fosforne i sumporne kiseline, želatin, akacija guma, natrijum alginat, polivinilpirolidon, i/ili polivinil alkohol, i zatim su tabletirana ili enkapsulirana za pogodnu administraciju. Takve kapsule ili tablete mogu da sadrže formulaciju sa kontrolisanim oslobađanjem kao što mogu da budu obezbeđene u dispeziji aktivnog jedinjenja u hidroksipropilmetil celulozi.

[0172] Farmaceutske kompozicije ovog predmetnog pronalaska sadrže najmanje jedno jedinjenje sa formulom (I) i opciono dodatni agens odabran od bilo kog farmaceutski prihvatljivog nosača, pomoćnog sredstva, i transportera. Alternativne kompozicije ovog predmetnog pronalaska sadrže jedinjenje sa formulom (I) koje je ovde opisano, ili njegov prolek, i farmaceutski prihvatljiv nosač, pomoćno sredstvo, ili transporter.

KORISNOST

[0173] Jedinjenja predmetnog pronalaska moduliraju aktivnost kinaze, uključujući modulaciju Btk. Drugi tipovi aktivnosti kinaze koji mogu biti modulisani pomoću jedinjenja instant pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na, Tek familiju jedinjenja, kao što su BMX, Btk, ITK, TXK i Tek, i njihovi mutanti.

[0174] U skladu sa tim, jedinjenja sa formulom (I) imaju korisnost u lečenju stanja povezanih sa modulacijom aktivnosti kinaze, i posebno selektivnu inhibiciju Btk aktivnosti. Takva stanja uključuju bolesti posredovane B-ćelijama u kojima su nivoi citokina modulisani kao posledica međućelijske signalizacije.

[0175] Kao što je ovde korišćeno, termini "tretiranje" ili "lečenje" obuhvataju ili jednu ili obe odgovarajuće i preventivne mere, npr., mere dizajnirane da inhibiraju ili odlože početak bolesti ili poremećaja, da postignu potpunu ili parcijalnu redukciju simptoma ili stanja bolesti, i/ili da olakšaju, poboljšaju, smanje, ili da izleče bolest ili poremećaj i/ili njegove simptome.

[0176] U pogledu njihove aktivnosti kao selektivnih inhibitora Btk, jedinjenja sa formulom (I) su korisna u lečenju stanja koja su povezana sa citokinom uključujući, ali ne ograničavajući se na, inflamatorne bolesti kao što su Kronov i ulcerozni kolitis, astma, bolest kalema protiv domaćina, hronična opstruktivna plućna bolest; autoimune bolesti kao što su Gravesova bolest, reumatoidni artritis, sistemski eritemski lupus, psorijaza; destruktivni poremećaji kostiju kao što su bolest resorpcije kostiju, osteoartritis, osteoporoza, multipli mijelom povezan sa poremećajem kostiju; proliferativne poremećaje kao što su akutna mijelogena leukemija, hronična mijelogena leukemija; angiogenske poremećaje kao što su angiogenski poremećaji uključujući solidne tumore, očnu neovaskulizaciju, i infantilne hemangiome; infektivne bolesti kao što su sepsa, septički šok, i šigeloza; neurodegenerativne bolesti kao što su Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, celebralne ishemije ili neurodegenerativna bolest izazvana traumatičnom povredom, onkološke i virusne bolesti kao što su metastatični melanom, Kapošijev sarkom, multipli mijelom, i HIV infekcija i CMV retinitis, AIDS, redom.

[0177] Specifičnije, specifična stanja ili bolesti koja mogu da budu lečena sa inventivnim jedinjenjima uključuju, bez ograničenja - pankreatitis (akutni ili hronični), astma, alergije, sindrom respiratornog distresa odraslih, hronična opstruktivna bolest pluća, glomerulonefritis, reumatoidni artritis, sistemski eritemski lupus, skleroderma, hronični tiroiditis, Gravesova bolest, autoimuni gastritis, dijabetes, autoimuna hemolitička anemija, autoimuna neutropenija, trombocitopenija, atopični dermatitis, hronični aktivni hepatitis, mijastenija gravis, multipla skleroza, inflamatorna bolest creva, ulcerativni kolitis, Kronova bolest, psorijaza, bolest kalem protiv domaćina, inflamatorna reakcija izazvana endotoksinom, tuberkoloza, ateroskleroza, degeneracija mišića, kaheksija, psoriatični artritis, Reiterov sindrom, giht, traumatični artritis, artritis izazvan virusom rubeole, akutni sinovitis, bolest beta ćelija pankreasa; bolesti koje se karakterišu masivnom neutrofilnom infiltracijom; reumatoidni spondilitis, gihtični artritis i druga stanja artritisa, Kavasakijeva bolest, hronična inflamatorna demielinizirajuća polineuropatija (CIDP), dermatomiozitis, uveitis, anti-faktor-VIII bolest, ankilozni spondilitis, mijastenija gravis, Gudpastureova bolest, antifosfolipidni sindrom, vaskulitis povezan sa ANCA, dermatomiozitis/polimiozitis, cerebralna malarija, bolest hroničnog plućnog zapaljenja, silikoza, plućna sarkoidoza, bolest resorpcije kostiju, odbacivanje alografta, groznica i mijalgija usled infekcije, sekundarna kaheksija do infekcije, formiranje mijeloida, formiranje ožiljaka na tkivu, ulcerativni kolitis, gorušica, influenca, osteoporoza, osteoartritis, akutna mijelogena leukemija, hronična mijelogena leukemija, metastatični melanom, Kaposijev sarkom, multipli mijelom, sepsa, septički šok, i Šigeloza; Alchajmerova bolest, Parkinsonova bolest, celebralne ishemije ili neurodegenerativna bolest izazvana traumatskom povredom; angiogenski poremećaji uključujući solidne tumore, očnu neovaskulizaciju, i infantilne hemangiome; virusne bolesti uključujući akutnu infekciju hepatitisom (uključujući hepatitis A, hepatitis B i hepatitis C), HIV infekciju i CMV retinitis, AIDS, ARC ili malignost, i herpes; moždani udar, miokardijalna ishemija, ishemija kod srčanih udara, organska hipoksija, vaskularna hiperplazija, kardiološka i bubrežna reperfuziona povreda, tromboza, srčana hipertrofija, agregacija trombocita izazvana trombinom, endotoksemija i/ili sindrom toksičnog šoka, stanja povezana sa prostaglandin endopreoksidaza sindazom-2, i pemfigus vulgaris. Poželjne metode lečenja su one gde je stanje odabrano od Kronovog i ulcerativnog kolitisa, odbacivanja alografta, reumatoidnog artritisa, psorijaze, ankiloznog spondilitisa, psorijatičnog artritisa, i pemfigus vulgarisa. Alternativne poželjne metode lečenja su one gde je stanje odabrano od ishemijske reperfuzione povrede, uključujući cerebralnu ishemijsku reperfuzionu povredu koja potiče od moždanog udara i srčanu ishemijsku reperfuzionu povredu koja potiče od miokardijalnog infarkta. Drugi poželjni metod lečenja je onaj u kojem je stanje multipli mijelom.

[0178] Dodatno, Btk inhibitori predmetnog pronalaska inhibiraju ekspresiju inducibilnih proinflamatornih proteina kao što je prostaglandin endoperoksid sintaza-2 (PGHS-2), koja se takođe naziva ciklooksigenaza-2 (COX-2). U skladu sa tim, dodatna stanja povezana sa Btk uključuju edem, analgeziju, groznicu i bol, kao što su neuro-mišićni bol, glavobolja, bol prouzrokovan kancerom, zubobolja i bol od artritisa. Inventivna jedinjenja takođe mogu da budu korišćena za lečenje veterinarskih virusnih infekcija, kao što su lentivirusne infekcije, uključujući, ali koje nisu ograničene na virus infektivne anemije kopitara; ili retro virusne infekcije, uključujući virus mačje imunodeficijencije, virus goveđe imunodeficijencije, i virus pseće imunodeficijencije.

[0179] Kada su termini "stanje povezano sa Btk" ili "bolest ili stanje povezano sa Btk - " ovde korišćeni, svaki ima za cilj da obuhvati sva gora navedena stanja koja se ponavljaju u dužem vremenskom periodu, kao i bilo koja druga stanja na koje utiče aktivnost Btk kinaze.

[0180] "Terapijski efikasna količina" ima za cilj da uključi količinu jedinjenja predmetnog pronalaska koja je efikasna kada je administrirana sama ili u kombinaciji da inhibira Btk.

[0181] Jedno tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I) za upotrebu u lečenju takvih stanja povezanih sa Btk kinazom. Za lečenje takvih stanja može da bude korišćena terapijski efikasna količina. Jedinjenja predmetnog tehničkog rešenja mogu da budu korišćena u lečenju stanja koja su povezana sa Btk kinazom kao što je lečenje alergijskih poremećaja i/ili autoimunih i/ili inflamatornih bolesti uključujući, ali ne ograničavajući se na, SLE, reumatoidni artritis, multipla vaskulitis, idiopatska trombocitopenična purpura (ITP), mijastenija gravis, alergijski rinitis, multipla skleroza (MS), odbacivanje transplanta, dijabetes tip I, membranski nefritis, inflamatorna bolest creva, autoimuna hemolitička anemija, autoimuni tiroiditis, bolesti hladnih i toplih aglutinina, Evansov sindrom, hemolitički uremijski sindrom/trombotična trombocitopenična purpura (HUS/TTP), sarkoidoza, Sjogrenov sindrom, periferne neropatije (npr., Gijen-Bareov sindrom), pemfigus vulgaris, i astma.

[0182] Najmanje jedno jedinjenje sa formulom (I) samo ili u kombinaciji jedno sa drugim i/ili pogodni terapijski agensi korisni u lečenju takvih stanja mogu da budu korisni u lečenju stanja povezanih sa Btk kinazom. Terapijski efikasne količine najmanje jednog jedinjenja sa formulom (I) i drugi pogodni terapijski agensi za lečenje takvih stanja mogu da budu administrirani. U skladu sa tim, "terapijski efikasna količina" takođe ima za cilj da uključi količinu kombinacije zahtevanih jedinjenja koja je efikasna u lečenju stanja povezanih sa Btk kinazom. Kombinacija jedinjenja je poželjno sinergijska kombinacija. Sinergija, kao što je opisano, na primer, od strane Chou et al., Adv. Enzyme Regul., 22:27-55 (1984), se dešava kada je dejstvo (u ovom slučaju, inhibicija Btk) jedinjenja kada su administrirana u kombinaciji veće od aditivnog efekta jedinjenja kada je administrirano samo ili kao pojedinačni agens. Generalno, sinergijski efekat je najjasnije demonstriran pri suboptimalnoj koncentraciji jedinjenja. Sinergija može da bude u uslovima niže citotoksičnosti, povećavajući anti-Btk efekat, ili neki drugi povoljan efekat kombinacije u poređenju sa pojedinačnim komponentama.

[0183] Primeri takvih drugih terapijskih agenasa uključuju kortikosteroide, rolipram, kalfostin, citokin-supresivne anti-inflamatorne lekove (CSAIDs), 4-supstituisani imidazo[1,2A]hinoksaline kao što je stavljeno na uvid javnosti u američkom patentu br. 4,200,750; Interleukin-10, glukokortikoide, salicilate, azot okside, i druge imunosupresante; inhibitore nuklearnih translokacija, kao što su deoksispergualin (DSG); nesteroidne antiinflamatorne lekove (NSAIDs) kao što su ibuprofen, celekoksib i rofekoksib; steroide kao što su prednizon ili deksametazon; antivirusne agense kao što je abacavir; antiproliferativne agense kao što su metotreksat, leflunomid, FK506 (takrolimus, PROGRAF®); citotoksične lekove kao što su azatiprin i ciklofosfamid; TNF-α inhibitore kao što je tenidap, anti-TNF antitela ili rastvorljiv TNF receptor, i rapamicin (sirolimus ili RAPAMUNE®) ili njihovi derivati.

[0184] Drugi terapijski agensi, kada se koriste u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska, mogu da se koriste, na primer, u onim količinama koje su naznačene u Physicians' Desk Reference (PDR, komercijalno objavljena kompilacija informacija o prepisivanju lekova od strane proizvođača) ili kao što je drugačije određeno od strane prosečnog poznavaoca oblasti. U metodama predmetnog pronalaska, takav drugi terapijski agens(i) može da bude administriran pre, istovremeno sa, ili posle administriranja inventivnih jedinjenja. Prikazan predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje su u mogućnosti da leče stanja povezana sa Btk kinazom, uključujući IL-1, IL-6, IL-8, IFNγ i TNF-α-posredovana stanja, kao što je prikazano iznad.

[0185] Inventivne kompozicije mogu da sadrže druge terapijske agense kao što je opisano iznad i mogu da budu formulisane, na primer, upotrebom konvencionalnih čvrstih ili tečnih transportera ili diluenata, kao i farmaceutskih aditiva koji su prilagođeni načinu željene administracije (npr., ekscipijensi, vezivna sredstva, konzervansi, stabilizatori, aromati, itd.) u skladu sa tehnikama kao što su one dobro poznate u oblasti farmaceutskih formulacija.

[0186] Drugo tehničko rešenje obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I) za primenu u terapiji.

[0187] Prikazan predmetni pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja sa formulom (I) za proizvodnju leka za lečenje ili profilaksu alergijskog poremećaja i/ili autoimune i/ili inflamatorne bolesti.

[0188] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja sa formulom (I) za proizvodnju lekova za lečenje kancera.

[0189] U skladu sa tim, predmetni pronalazak dalje uključuje kompozicije koje sadrže jedno ili više jedinjenja sa formulom (I) i farmaceutski prihvatljiv nosač.

[0190] "Farmaceutski prihvatljiv nosač" odnosi se na medijume generalno prihvaćene u stanju tehnike za isporuku biološki aktivnih agenasa životinjama, posebno, sisarima.

Farmaceutski prihvatljivi nosači su formulisani u skladu sa brojnim faktorima koji su u području primene prosečnih poznavalaca oblasti. Ovo uključuje tip i prirodu formulisanog aktivnog agensa; subjekat kojem će biti administriran agens koji sadrži kompoziciju; planirani put administracije kompozicije; i, ciljanu terapijsku indikaciju. Farmaceutski prihvatljivi nosači uključuju i vodene i nevodene tečne medijume, kao i razne čvrste i polučvrste dozne oblike. Takvi nosači mogu da uključe brojne različite sastojke i pored aktivnog agensa, takvi dodatni sastojci uključeni su u formulaciju iz brojnih razloga, npr., stabilizacija aktivnog agensa, vezivnih sredstava, itd., koji su dobro poznati stručnjacima u stanju tehnike. Opisi pogodnih farmaceutski prihvatljivih nosača, i faktora koji su uključeni u njihov odabir, nalaze se u različitim lako dostupnim izvorima kao što je, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 17. izdanje (1985).

[0191] Jedinjenja sa formulom (I) mogu da budu administrirana bilo kojim sredstvima koja su pogodna za stanje koje treba lečiti, što može da zavisi od potrebe za lečenjem specifičnog mesta ili količinom leka koja treba da bude isporučena. Topikalna administracija je generalno poželjna za bolesti koje su povezane sa kožom, i sistematično lečenje je poželjno za kancerogena ili pred kancerogena stanja, iako su razmatrani drugi načini isporuke. Na primer, jedinjenja mogu da budu isporučena oralno, kao što je u obliku tableta, kapsula, granula, prahova, ili tečne formulacije uključujući sirupe; topikalno, kao što je u obliku rastvora, suspenzija, gelova ili masti; sublingvalno; bukalno; parenteralno, kao što je subkutanim, intravenskim, intramišićnim ili intrasternalnim ubrizgavanjem ili infuzionim tehnikama (npr., kao sterilni vodeni ili nevodeni rastvori ili suspenzije koji se mogu ubrizgavati); nazalno kao što je pomoću spreja za inhalaciju; topikalno, kao što je u obliku kreme ili masti; rektalno kao što je u obliku supozitorija; ili lipozomalno. Formulacije doznih jedinica koje sadrže netoksične, farmaceutski prihvatljive transportere ili diluente mogu da budu administrirane. Jedinjenja mogu da budu administrirana u obliku koji je pogodan za trenutno oslobađanje ili produženo oslobađanje. Trenutno oslobađanje ili produženo oslobađanje mogu da budu postignuti sa pogodnim farmaaceutskim kompozicijama ili, posebno u slučaju produženog oslobađanja, sa sredstvima kao što su subkutani implanti ili osmotske pumpe.

[0192] Primeri kompozicija za topikalnu administraciju uključuju topikalni nosač kao što je Plastibase (mineralno ulje želatinirano sa polietilenom).

[0193] Primeri kompozicija za oralno administriranje uključuju suspenzije koje mogu da sadrže, na primer, mikrokristalnu celulozu za povećanje mase, alginsku kiselinu ili natrijum alginat kao suspendujući agens, metilcelulozu kao pojačivač viskoznosti, i zaslađivače ili agense za poboljšavanje ukusa kao što su oni poznati u stanju tehnike; i trenutno oslobađanje tablete koje mogu da sadrže, na primer, mikrokristalnu celulozu, dikalcijum fosfat, skrob, magnezijum stearat i/ili laktozu i/ili druge ekscipijense, vezivna sredstva, ekstendere, dezintegrante, diluente i lubrikante kao što su oni poznati u stanju tehnike. Inventivna jedinjenja mogu takođe da budu oralno isporučena sublingvalnom i/ili bukalnom administracijom, npr., sa oblikovanim, kompresovanim, ili tabletama koje su osušene zamrzavanjem. Jedinjenja koja služe kao primer mogu da uključuju brzo rastvarajuće diluente kao što je manitol, laktoza, sukroza, i/ili ciklodekstrini. Takođe u takve formulacije mogu da budu uključeni ekscipijensi sa visokom molekulskom masom kao što su celuloze (AVICEL®) ili polietilen glikoli (PEG); ekscipijens koji potpomaže mukoznu adheziju kao što je hidroksipropil celuloza (HPC), hidroksipropil metil celuloza (HPMC), natrijum karboksimetil celuloza (SCMC), i/ili kopolimer maleinskog anhidrida (npr., Gantrez); i agensi da kontrolišu oslobađanje kao što je poliakrilni kopolimer (npr., Carbopol 934). Lubrikanti, glidanti, aromati, agensi za bojenje i stabilizatori mogu takođe da budu dodati u svrhu jednostavne izrade ili upotrebe.

[0194] Primeri kompozicija za nazalni aerosol ili aministraciju inhalacijom uključuju rastvore koji mogu da sadrže, na primer, benzil alkohol ili druge pogodne konzervanse, promotere apsorpcije da se poboljša apsorpcija i/ili biodostupnost, i/ili agense za solubiziranje ili raspršivanje kao što su oni poznati u stanju tehnike.

[0195] Primeri kompozicija za parenteralnu administraciju uključuju rastvore ili suspenzije koji se ubrizgavaju koji mogu da sadrže, na primer, pogodne netoksične, parenteralno prihvatljive diluente ili rastvarače, kao što su manitol, 1,3-butandiol, voda, Ringerov rastvor, izotonični rastvor natrijum hlorida, ili druge pogodne agense za raspršivanje ili vlaženje i suspendujuće agense, uključujući sintetičke mono- ili digliceride, i masne kiseline, uključujući oleinsku kiselinu.

[0196] Primeri kompozicija za rektalnu administraciju uključuju supozitorije koje mogu da sadrže, na primer, pogodne ne iritantne eksipijense, kao što su kakao puter, sintetičke estre glicerida ili polietilen glikoli, koji su čvrsti na običnim temperaturama ali se rastapaju i/ili se rastvaraju u rektalnoj šupljini da oslobode lek.

[0197] Terapijski efikasna količina jedinjenja predmetnog pronalaska može da bude određena od strane prosečnog poznavaoca oblasti, i uključuje primer doznih količina za sisare od oko 0.05 do 1000 mg/kg; 1-1000 mg/kg; 1-50 mg/kg; 5-250 mg/kg; 250-1000 mg/kg telesne mase aktivnog jedinjenja na dan, koja mogu da budu administrirana u pojedinačnoj dozi ili u obliku individualno podeljenih doza, kao što je od 1 do 4 puta na dan. Biće jasno da specifični nivo doziranja i učestalost doziranja za bilo koji određeni subjekat može da varira i zavisiće od različitih faktora, uključujući dejstvo upotrebljenog specifičnog jedinjenja, metaboličku stabilnost i dužinu dejstva tog jedinjenja, vrste, starosnu dob, telesnu masu, opšte zdravstveno stanje, pol i ishranu subjekta, način i vreme administracije, brzinu izlučivanja, kombinaciju leka, i ozbiljnost određenog stanja. Poželjni subjekti za lečenje uključuju životinje, najpoželjnije vrste sisara kao što su ljudi, i domaće životinje kao što su psi, mačke, konji, i slično. Stoga, kada je termin "pacijent" korišćen ovde, ovaj termin ima za cilj da uključi sve subjekte, najpoželjnije vrste sisara, koji su pogođeni posredovanjem nivoa Btk enzima.

[0198] Primeri jedinjenja sa formulom (I) kao što je naznačeno u odeljku "Primeri" ispod, su testirana u jednom ili više testova koji su opisani ispod.

[0199] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenja sa formulom (I) inhibiraju Btk enzime sa vrednostima IC506 nM ili manje, na primer, od 0.001 do 6 nM, kao što je izmereno pomoću testa za humani rekombinantni Btk enzim. Poželjno, jedinjenja sa formulom (I) inhibiraju Btk enzime sa vrednostima IC50od 2 nM i manje, na primer, od 0.001 do 2 nM. Druga poželjna jedinjenja inhibiraju Btk enzime sa vrednostima IC50 od 1.0 nM i manje, na primer, od 0.001 do 1.0 nM.

[0200] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenja sa formulom (I) imaju smanjenu inhibiciju Jak2 kinaze koja se karakteriše sa vrednostima IC50iznad 50 nM, na primer, većim nego 250 nM, kao što je izmereno pomoću testa za Jak2 tirozin kinazu. Poželjno, jedinjenja sa formulom (I) inhibiraju Jak2 enzime sa IC50 vrednostima većim od 400 nM, na primer, sa IC50vrednostima većim od 700 nM.

[0201] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenja sa formulom (I) imaju odnose selektivnosti kinaze aktivnosti Btk inhibicije u odnosu na Jak2 inhibitornu aktivnost koji su okarakterisani odnosima vrednosti Jak2 IC50inhibicije, kao što je izmereno pomoću testa Jak2 tirozin kinaze, u odnosu na vrednosti Btk IC50 inhibicije, kako je izmereno pomoću testa za humani rekombinantni Btk enzim, od 150 i više, na primer, odnosima od 300 i više. Poželjno, jedinjenja sa formulom (I) imaju odnose vrednosti Jak2 IC50inhibicije u odnosu na vrednosti Btk IC50inhibicije od 400 i više, na primer, odnose 500 i više.

[0202] U jednom tehničkom rešenju, jedinjenja sa formulom (I) imaju poboljšanu potenciju u testu BCR-stimulisane CD69 ekspresije na uzorku pune krvi sa IC50 vrednostima od 250 nM ili manje, na primer, od 0.1 do 250 nM. Poželjnije, jedinjenja sa formulom (I) imaju potencijal u testu BCR-stimulisane CD69 ekspresije na uzorku pune krvi sa IC50 vrednostima 160 nM ili manje, na primer, od 0.1 do 160 nM; i sa IC50vrednostima od 100 nM ili manje, na primer, od 0.1 do 100 nM.

METODE PRIPREMANJA

[0203] Jedinjenja sa formulom (I) mogu da budu pripremljena korišćenjem metoda koje su prikazane shemom 1.

[0204] Supstituisani estri boronske kiseline 1, gde Z predstavlja supstituisani monociklični ili fuzionisani biciklični heterociklični prsten (supstituent Q u jedinjenjima sa formulom (I)), može da reaguje sa supstituisanim karbazolkarboksamidima ili tetrahidrokarbazolkarboksamidima 2 (gde Y je adekvatna grupa kao što je Br, Cl ili trifluorometansulfoniloksi) da se obezbede jedinjenja 3. Ova reakcija može da se izvede korišćenjem odgovarajuće baze kao što je kalijum karbonat, cezijum karbonat ili trikalijum fosfat, i odgovarajući katalizator kao što je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum, 1,1'-bis(difenilfosfin)ferocen paladijum(II) hlorid, ili 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum(II) hlorid, u pogodnom rastvaraču kao što je dioksan ili tetrahidrofuran, opciono sa poodnim korastvaračem kao što je voda. Takve reakcije kuplovanja koje su uopšteno poznate kao Suzuki-Miyaura reakcije kuplovanja, i koje su veoma dobro poznate u hemijskoj literaturi (videti, na primer, Heravi, M.M. et al., Tetrahedron, 68:9145 (2012), i u njemu navedene reference).

[0205] Usled nesimetrične prirode prstenova koji su povezani pomoću jednostrukih veza koje su označene kao a i b na shemi 1, i usled ograničene rotacije oko ovih veza koja je prouzrokovana prostornom preprekom, jedinjenja ovog predmetnog pronalaska prikazuju hiralnost, poznatu kao atropizomerizam. Stoga, pod određenim uslovima, kao što je hromatografija na hiralnoj stacionarnoj fazi, četiri dijastereomerna atropizomera (što proizilazi od ograničene rotacije oko dve stereogene ose) mogu da budu posmatrana kao četiri odvojena pika na hromatogramu. Jedinjenja sa formulom (I) mogu da budu izolovana ili kao stabilne smeše od dva do četiri dijasteremerna atropizomera, ili kao pojedinačni stabilni atropizomeri.

[0206] Pošto je 1 racemsko, jedinjenja 3 biće normalno izolovana kao smeše od četiri dijastereomerna atropizomera. Alternativno, racemska jedinjenja 1 mogu da budu pretvorena u pojedinačne atropizomere 1a i 1b, sa prikazanim apsolutnim konfiguracijama, korišćenjem metoda koje su poznate u stanju tehnike, kao što je preparativna hromatografija na hiralnoj stacioniranoj fazi. Suzuki-Miyaura reakcije kuplovanja kao što je prikazano iznad mogu zatim da pretvore 1a u jedinjenja 3a, ili 1b u 3b, koje imaju apsolutnu konfiguraciju prikazanu oko veze b ali smeša dve konfiguracije oko veze a, kao i stanja Suzuki-Miyaura reakcija kuplovanja su takva da izomerizacija oko veze b se ne dešava. Jedinjenja 3a i 3b će stoga postojati kao smeša dva dijastereomerna atropizomera.

[0207] Kao što je prikazano na Shemi 2, jedinjenja 3, koja su smeša četiri dijastereomerna atropizomera, mogu da se razdvoje na četiri pojedinačna stabilna dijastereomerna atropizomera 3c, 3d, 3e i 3f, korišćenjem metoda koje su poznate u stanju tehnike, kao što je hromatografija na hiralnoj stacionarnoj fazi. Alternativno, jedinjenja 3a (smeša dva dijastereomerna atropizomera) mogu da budu razdvojena na pojedinačne stabilne atropizomere 3c i 3d, i jedinjenja 3b (smeše dva dijastereomerna atropizomera) mogu takođe da se odvajaju na pojedinačne stabilne atropizomere 3e i 3f.

[0208] U slučaju gde 2 je supstituisani tetrahidrokarbazol karboksamid (gde isprekidane linije predstavljaju jednostruke veze), 2 takođe sadrži hiralni centar, i stoga može da postoji kao racemat. U ovom slučaju, jedinjenja 3 pripremljena od ovih jedinjenja 2 postojaće kao smeša od osam dijastereomera, svaki od 3a i 3b postojaće kao smeša od četiri dijastereomera, i svaki od 3c, 3d, 3e i 3f će postojati kao smeša od dva dijastereomera. Bilo koja od ovih smeša može takođe da bude razdvojena na jednostruke stabilne dijastereomere korišćenjem metoda koje su poznate u stanju tehnike, kao što je hromatografija na hiralnoj stacioniranoj fazi. Alternativno, jedinjenja 2 mogu da budu pretvorena u dva razdvojena enantiomera korišćenjem metoda poznatih u stanju tehnike, kao što je hromatografija na hiralnoj stacionarnoj fazi.

[0209] U nekim slučajevima gde je jedan od intermedijera kuplovanja 1 ili 2 na Shemi 1 neracemski, hiralna indukcija može da se javi tokom Suzuki-Miyaura reakcija kuplovanja kao što je prikazano na shemi 1. U ovim slučajevima mogu da budu dobijene smeše dijastereomera koje nisu ekvimolarne smeše; to jest, proizvod 3 može da bude smeša dijastereomera u kojoj je jedan ili više dijastereomera, koji imaju vezu a sa jednom apsolutnom konfiguracijom, prisutan u većoj meri nego jedan ili više dijastereomera koji imaju vezu a sa suprotnom apsolutnom konfiguracijom.

[0210] Alternativni metod za sintezu određenih jedinjenja sa formulom (I) je prikazan na shemi 3. Pogodno supstituisan 4-arilimino-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2(4H)-on 4 može da reaguje sa 2 pod uslovima Suzuki-Miyaura reakcije kuplovanja kao što je prikazano iznad, da se dobiju jedinjenja sa formulom (I) koja imaju strukturu 5. U toku proticanja reakcije, 4-arilimino-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2(4H)-on deo prisutan u 4 preuređuje se u 3-arilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion deo koji je prisutan u reakcionom proizvodu 5.

[0211] Jedinjenja 1 Sheme 1, korišćena u pripremanju jedinjenja sa formulom (I), mogu da budu pripremljena pomoću različitih metoda. Neke od ovih metoda su prikazane na Shemi 4. Izatoični anhidrid 6 može da reaguje sa supstituisanim anilinom 7 (gde Y' je odgovarajuća grupa kao što je Br, Cl ili trifluorometansulfoniloksi) da proizvede amid 8. Takve reakcije mogu da budu izvedene pri različitim uslovima, na primer zagrevanjem u odgovarajućem rastvaraču, ili zagrevanjem u prisustvu pomoćnog reagensa kao što je trimetilaluminijum. Jedinjenje 8 može da bude pretvoreno u supstituisani hinazolindion 9, na primer tretiranjem u odgovarajućem rastvaraču sa fosgenom ili trifosgenom. Opciono, 9 može da bude pretvoren u odgovarajući estar boronske kiseline 10 (koji je primer jedinjenja 1 iz sheme 1) korišćenjem veoma poznatih metoda u hemijskoj literaturi (videti, na primer, Ishiyama, T. et al., Tetrahedron, 57:9813 (2001), i tamo navedene reference). Primeri takvih metoda su reakcije 9 sa borilacionim reagensom kao što je 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) ili 5,5,5',5'-tetrametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborinan) u prisustvu baze kao što je kalijum acetat i odgovarajući katalizator kao što je 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen paladijum(II) hlorid u odgovarajućem rastvaraču.

[0212] Alternativno, jedinjenje 9 može po izboru da bude pretvoreno u jedinjenje 11 gde Ra je alkil grupa, korišćenjem metoda koje su veoma dobro poznate u hemijskoj literaturi, na primer tretiranjem sa alkilirajućim agensom kao što je jodometan ili trideuterojodometan u prisustvu odgovarajuće baze kao što je cezijum karbonat. Jedinjenje 11 može zatim da bude pretvoreno u odgovarajući estar boronske kiseline 12 (koji je primer jedinjenja 1 iz sheme 1) korišćenjem istih metoda opisanih iznad. Jedinjenje 10 može takođe da opciono bude pretvoreno u odgovarajuće jedinjenje 12 pomoću metoda koje su slične onima opisanim za konverziju 9 u 11.

[0213] Jedinjenja 10 i 12 prikazuju hiralnost usled prostorne rotacije oko jednostruke veze vezujući supstituisani fenilni prsten za deo hinazolindiona. Po želji, ova jedinjenja mogu da budu razložena na odvojene enantiomerne atropizomere, na primer hromatografijom na hiralnoj stacionarnoj fazi. Odvojeni enantiomeriki atropizomeri 10 mogu zatim po izboru da budu pretvoreni u stabilne enantiomerne atropizomere 12 kao što je opisano iznad da se obezbede određeni primeri jedinjenja 1a ili 1b Sheme 1. Slično tome, racemski hinazolinedioni 12 mogu takođe da budu razloženi na odvojene enantiomerne atropizomere.

[0214] Alternativna sinteza jedinjenja intermedijera 8 iz sheme 4 je prikazana na shemi 5. Supstituisana 2-nitrobenzoeva kiselina 13 može da bude pretvorena u jedinjenje 14 korišćenjem dobro poznate amidne veze koja stvara reakcije, na primer konverzijom 8 u odgovarajući hlorid karboksilne kiseline i reakcijom sa supstituisanim anilinom 7, ili pomoću direktne reakcije 13 i 7 u prisustvu odgovarajućeg reagensa za kuplovanje kao što je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU), ili smeša od 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etil-karbodiimid hidrohlorid (EDC) i 1-hidroksibenzotriazol hidrat (HOBT), korišćenjem dobro poznatih metoda u literaturi. Nitro grupa 14 može zatim da bude smanjena, korišćenjem jedne iz širokog spektra poznatih u literaturi, da se dobije jedinjenje 8 iz sheme 4.

[0215] Jedinjenja 4 iz sheme 3 mogu da budu pripremljena korišćenjem metode koja je prikazana na shemi 6. N-supstituisani izatoični anhidrid 15, gde Ra je alkil grupa, može da reaguje sa supstituisanim anilinom 7 da proizvede amid 16. Takve reakcije mogu da budu izvedene pod uslovima kao što je opisano iznad, na primer zagrevanjem u odgovarajućem rastvaraču, ili zagrevanjem u prisustvu pomoćnog reagensa kao što je trimetilaluminijum. Jedinjenja 16 mogu da budu pretvorena u supstituisani ariliminobenzoksazinon 17, na primer tretiranjem u odgovarajućem rastvaraču sa fosgenom ili trifosgenom. Jedinjenje 17 može zatim da bude pretvoreno u odgovarajući estar boronske kiseline 4 korišćenjem metoda koje su slične onima koje su opisane iznad za konverziju jedinjenja 10 ili jedinjenja 11 u jedinjenje 12 (videti shemu 4).

[0216] Neke dodatne metode koje mogu da se koriste za pripremanje određenih jedinjenja 1, korišćene u pripremanju jedinjenja sa formulom (I), su prikazane na shemi 7. Supstituisana piridil-2-sirćetna kiselina 18, ili so supstituisane piridil-2-sirćetne kiseline kao što je natrijumova so (koje su ili komercijalno dostupne ili mogu da budu pripremljene dobro poznatim metodama u hemijskoj literaturi), može da reaguje sa anilinom 7 pod različitim dobro poznatim metodama u hemijskoj literaturi da se dobije amid 19. Na primer, reakcija može da se izvede u prisustvu reagensa za kuplovanje kao što je O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat (HATU), ili smeša od 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etil-karbodiimid hidrohlorida (EDC) i 1-hidroksibenzotriazol hidrata (HOBT). Amid 19 može da bude pretvoren u odgovarajući supstituisani 1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion 20 zagrevanjem sa reagensom kao što je karbonildiimidazol u odgovarajućem rastvaraču kao što je toluen. Jedinjenje 20 može da bude pretvoreno u odgovarajući estar boronske kiseline 21 (koji je primer intermedijera 1 iz sheme 1) korišćenjem metoda koje su prethodno opisane (videti shemu 4). Alternativno, jedinjenje 19 može da bude pretvoreno u odgovarajući estar boronske kiseline 22 korišćenjem metoda koje su prethodno opisane (videti shemu 4), nakon čega sledi konverzija 22 u 21 zagrevanjem sa reagensom kao što je karbonildiimidazol.

[0217] Na shemi 7, prsten piridila u prikazanim strukturama može takođe da bude zamenjen sa drugim azotnim heterociklusom, kao što je tiazol. U ovom slučaju, odgovarajuća jedinjenja 20 i 21 sadržaće 5H-tiazolo[3,2-c]pirimidin-5,7(6H)-dion deo na mestu prikazanog 1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion dela.

[0218] Jedinjenja 21 prikazuju hiralnost usled prostorne rotacije oko jednostruke veze koja spaja supstituisani fenilni prsten sa supstituisanim 1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion delom. Po želji, ova racemska jedinjenja mogu da budu rastavljena na odvojene enantiomerne atropizomere, na primer hromatografijom na hiralnoj stacionarnoj fazi, da se obezbede određeni primeri intermedijera 1a i 1b iz sheme 1.

[0219] Priprema jedinjenja 1 iz sheme 1, gde Z predstavlja supstituisani pirimidin-1,3-dion deo, može da bude postignuta korišćenjem metode koje je prikazana na shemi 8, nakon čega sledi generalna procedura koja je prikazana od strane Cao, J. et al. (Synthetic Commun., 39:205 (2009)). Jedinjenje 23 može da bude pripremljeno pomoću reakcije pmetoksibenzilamina, metil akrilata i fenil hipobromoselenoita. Ovaj materijal može da reaguje sa odgovarajućim aril izocijanatom 24 (koji može da bude pripremljen od anilina 7 koji je prikazan na shemi 4, korišćenjem dobro poznatih metoda u hemijskoj literaturi) da se obezbedi supstituisani dihidropirimidin-1,3-dion 25. Tretiranje ovog jedinjenja sa oksidujućem agensom kao što je vodonik peroksid može da obezbedi supstituisani pirimidin-1,3-dion 26. Otklanjanje p-metoksibenzil grupe 26 može da bude postignuto korišćenjem brojnih metoda koje su prikazane u hemijskoj literaturi, na primer tretiranjem sa smešom trifluorometansulfonske kiseline i trifluorosirćetne kiseline (kao što je prikazano od strane Wu, F. et al., J. Org. Chem., 69:9307 (2004)). Nastali pirimidin-1,3-dion 27 može da reaguje sa aril boronskom kiselinom kao što je 4-fluorobenzenboronska kiselina, na primer korišćenjem uslova koji su opisani od strane Jacobsen, M.F. et al. (J. Org. Chem., 71:9183 (2006)) da se dobije 28 (gde Ar predstavlja 4-fluorofenil). Ovo može zatim da bude pretvoreno u estar boronske kiseline 29, koji je primer jedinjenja 1 iz sheme 1, korišćenjem metoda koje su slične onima koje su opisane iznad.

[0220] Jedinjenja 2 prikazana na shemi 1, korišćena u pripremanju jedinjenja sa formulom (I), mogu da budu pripremljena korišćenjem procedura koje su prikazane na shemi 9. Supstituisana 2-aminobenzoeva kiselina 30 (poznata u literaturi, ili pripremljena korišćenjem procedura koje su poznate u literaturi) može da bude pretvorena u odgovarajuću 2-hidrazinilbenzoevu kiselinu 31 kao so hlorovodonične kiseline korišćenjem dobro poznatih metoda u literaturi, na primer pretvaranjem odgovarajuće diazonijum soli tretiranjem sa natrijum nitritom u vodenoj hlorovodoničnoj kiselini, što je praćeno redukcijom sa kalaj (II) hloridom. Reakcija 31 sa etil 3-oksocikloheksankarboksilatom 32 (koji može da bude pripremljen od etil 3-hidroksibenzoata; videti na primer Hirsch, J. et al., J. Org. Chem., 51:2218 (1986)) u odgovarajućem rastvaraču sa odgovarajućim katalizatorom, na primer etanol sa hlorovodoničnom kiselinom, toluen sa p-toluensulfonskom kiselinom ili trifluorosirćetnom kiselinom, ili sirćetnom kiselinom (u tom slučaju rastvarač takođe može da posluži kao katalizator), može da obezbedi odgovarajući tetrahidrokarbazol derivat 33. Ova reakcija je uopšteno poznata kao Fišerova sinteza indola, i dobro je poznata u hemijskoj literaturi (na primer, videti Kamata, J. et al., Chem. Pharm. Bull., 52:1071 (2004)). Alternativno, Fišerova sinteza indola može da se izvede kroz dva konsekutivna koraka: 31 može da reaguje sa 32 pri odgovarajućim uslovima (kao što je u odgovarajućem rastvaraču kao što je etanol ili toluen, po izboru sa odgovarajućim katalizatorom kao što je ptoluensulfonska kiselina) da formira intermedijer hidrazon, koji može da bude izolovan i zatim da reaguje dalje pod odgovarajućim uslovima (na primer, etanol sa hlorovodoničnom kiselinom, sirćetna kiselina sa cink hloridom, ili toluen sa trifluorosirćetnom kiselinom) da se obezbedi 33.

[0221] Karboksilna kiselina 33 može da bude pretvorena u odgovarajući karboksamid 34 korišćenjem dobro poznatih metoda u hemijskoj literaturi, na primer pretvaranjem 33 u kiseli hlorid tretiranjem sa oksalil hloridom ili tionil hloridom, što je praćeno tretiranjem sa amonijakom; ili tretiranjem 33 sa amonijakom u prisustvu reagensa za kuplovanje kao što je karbodiimid, ili smeša N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorida i 1-hidroksibenzotriazola ili 1-hidroksi-7-azabenzotriazola. Pretvaranje tetrahidrokarbazola 34 u odgovarajući karbazol 35 može da bude izvedeno korišćenjem dobro poznatih metoda u hemijskoj literaturi, na primer tretiranjem 34 sa oksidirajućim agensom kao što je 2,3-dihloro-5,6-dicijanobenzohinon u odgovarajućem rastvaraču.

[0222] Alternativno, redosled amidnog formiranja i koraka oksidacije može da bude izmenjen da se pretvori 33 u 35. Stoga, jedinjenje 33 može da bude oksidovano korišćenjem procedure koja je opisana iznad, ili slične procedure, da se dobije odgovarajuće jedinjenje 36. Karboksilna kiselina ovog jedinjenja može zatim da se pretvori u odgovarajući primarni amid, ponovo koristeći proceduru opisanu iznad ili sličnu proceduru, da se dobije odgovarajuće jedinjenje 35.

[0223] Konverzija 35 u odgovarajući tercijarni karbinol supstituisani karbazolkarboksamid 37 (koji je primer jedinjenja 2 u shemi 1) može da bude izveden korišćenjem dobro poznatih metoda u hemijskoj literaturi, na primer tretiranjem 35 sa reagensom kao što je metillitijum, metilmagnezijum bromid ili metilmagnezijum hlorid. Alternativno, konverzija 34 u odgovarajući tercijarni karbinol supstituisani tetrahidrokarbazol karboksamid 38 (koji je drugi primer jedinjenja 2 iz sheme 1) može da bude izvedena korišćenjem slične procedure.

[0224] Jedinjenja 33, 34 i 38 sadrže hiralni centar, i stoga postoje kao dva enantiomera. Pripremanje 33, 34 i 38 kao što je prikazano na shemi 9 obezbeđuje racemske proizvode, koji mogu da se koriste za pripremu jedinjenja sa formulom (I) kao što je prikazano na shemi 1. Alternativno, 33, 34 i 38 mogu da budu razloženi na odvojene enantiomere, korišćenjem dobro poznatih metoda kao što je hromatografija na hiralnoj stacionarnoj fazi.

[0225] Određena jedinjenja 2 iz sheme 1, korišćena za pripremanje jedinjenja sa formulom (I), mogu takođe da budu pripremljena korišćenjem procedura koje su prikazane na shemi 10. Jedinjenje 39, pripremljeno od odgovarajuće 2-hidrazinilbenzoeve kiseline kao što je prikazano na shemi 9 (videti američki patent br.8,084,620, intermedijer 48-1) može da bude tretirano sa odgovarajućim halogenizovanim reagensom da se dobije 40, gde R1 je atom halogena. Na primer, tretiranjem 39 sa reagensom za hlorinaciju kao što je N-hlorosukcinimid može da se dobije 40 gde R1je Cl, i tretiranjem 39 sa reagensom za fluorovanje kao što je 1-(hlorometil)-4-fluoro-1,4-diazoniabiciklo[2.2.2]oktanbis(tetrafluoroborat) [SELECTFLUOR®] može da se dobije 40 gde R1 je F. Tretiranjem 40 sa metillitijumom ili metilmagnezijum halidom kao što je opisano u shemi 9 može zatim da se obezbede jedinjenja 37 gde R1je F ili Cl (koji su primeri jedinjenja 2 iz sheme 1).

[0226] Jedinjenje 37 gde R1 je CN može da bude pripremljeno alternativnom procedurom, što je takođe prikazano na shemi 10. Jedinjenje 41, koje može da bude pripremljeno iz jedinjenja 39 (videti američki patent br. 8,084,620, primer 73-2) može da bude tretirano sa reagensom za jodiranje kao što je N-jodosukcinimid da se dobije 37 gde R1 je I. Ovo jedinjenje može da bude pretvoreno u 37 gde R1je CN (primer jedinjenja 2 iz sheme 1), na primer tretiranjem sa cink cijanidom u prisustvu katalizatora kao što je

tetrakis(trifenilfosfin)paladijum.

[0227] Drugi primer pripremanja jedinjenja 2 iz sheme 1 je prikazan na shemi 11. Korišćenjem procedura koje su opisane na shemi 9 i sličnih procedura, keton 42 (koji može da bude pripremljen reakcijom dietil malonata sa cikloheks-2-enonom, korišćenjem brojnih metoda koje su izložene u literaturi) može da reaguje sa hidrazinilbenzoevom kiselinom 31 da se dobije jedinjenje 43, koje zatim može da bude pretvoreno u jedinjenje 44 i naknadno u jedinjenje 45 korišćenjem metoda opisanih iznad u shemi 9. Korišćenjem poznatih metoda u literaturi, na primer zagrevanjem sa natrijum hloridom i vodom u odgovarajućem rastvaraču kao što je dimetil sulfoksid, jedinjenje 45 može da bude pretvoreno u jedinjenje 46. Estarski deo jedinjenja 46 može zatim da bude smanjen na karbinol korišćenjem poznatih procedura u literaturi, na primer tretiranjem sa litijum borohidridom, da se dobije jedinjenje 47, koje je primer jedinjenja 2 iz sheme 1.

PRIMERI

[0228] Jedinjenja ovog predmetnog pronalaska, i intermedijeri korišćeni u pripremanju jedinjenja ovog predmetnog pronalaska, mogu da budu pripremljeni korišćenjem procedura koje su prikazane u sledećim primerima i odgovarajućim procedurama. Metode i uslovi korišćeni u ovim primerima, i aktuelna jedinjenja pripremljena u ovim primerima, ne treba da budu ograničavajući, ali imaju za cilj da pokažu kako jedinjenja ovog pronalaska mogu da budu pripremljena. Polazni materijali i reagensi korišćeni u ovim primerima, kada nisu pripremljeni procedurom koja je ovde opisana, su generalno ili komercijalno dostupni, ili su navedeni u hemijskoj literaturi, ili mogu da budu pripremljeni korišćenjem procedura koje su opisane korišćenjem procedura koje su opisane u hemijskoj literaturi. Predmetni pronalazak je dalje definisan sledećim primerima. Treba razumeti da su primeri dati samo putem ilustracije. Iz prethodne diskusije i primera, prosečan poznavalac oblasti može da utvrdi suštinske karakteristike predmetnog pronalaska, i bez odstupanja od njegovog obima, može da napravi razne promene i modifikacije da prilagodi predmetni pronalazak raznim upotrebama i uslovima. Kao rezultat, predmetni pronalazak nije ograničen ilustrativnim primerima koji su ovde navedeni u nastavku, već su definisani zahtevima koji su priloženi ovde.

[0229] U datim primerima, fraza "osušen i koncentrovan" generalno se odnosi na sušenje rastvora u organskom rastvaraču preko ili natrijum sulfata ili magnezijum sulfata, što je praćeno filtracijom i uklanjanjem rastvarača iz filtrata (generalno pri smanjenom pritisku i na temperaturi pogodnoj za stabilnost materijala koji se priprema).

[0230] Kolonska hromatografija je generalno izvedena korišćenjem tehnike fleš hromatografije (Still, W.C. et al., J. Org. Chem., 43:2923 (1978)), ili sa prethodno upakovanim kertridžima sa silika gelom korišćenjem Isco hromatografskog aparata sa srednjim pritiskom (Teledyne Corporation), eluiranjem sa rastvaračem ili naznačenom smešom rastvarača. Preparativna tečna hromatografija visoke performanse (HPLC) je izvedena korišćenjem reverzno fazne kolone (Waters SunFire C18, Waters XBridge C18, PHENOMENEX® Axia C18, YMC S5 ODS ili slično) veličine koja je odgovarajuća za količinu materijala koja je razdvojena, generalno eluiranjem sa gradijentom povećanja koncentracije metanola ili acetonitrila u vodi, što takođe sadrži 0.05% ili 0.1% trifluorosirćetnu kiselinu ili 10 mM amonijum acetat, pri stopi eluiranja koja odgovara veličini kolone i razdvajanju koje treba da se postigne. Hiralno super-kritično tečno hromatografsko razdvajanje enantiomera ili atropizomera je izvedeno korišćenjem uslova koji su opisani za individualne slučajeve. Maseni spektralni podaci su dobijeni tečnom hromatografski-masenom spektrometrijom korišćenjem elektro-sprej jonizacije.

[0231] Podaci rendgenske difrakcije na pojedinačnom kristalu su sakupljeni na Bruker-AXS APEX2 CCD sistemu korišćenjem Cu Kα radijacije (λ = 1.5418 Å). Indeksiranje i obrada izmerenih podataka gustine izvedeni su sa APEX2 softverskim paketom/programskim paketom (videti APEX2 uputstvo za korišćenje, v1.27; Bruker AXS, Inc., WI 53711 USA). Kada je naznačeno, kristali su ohlađeni u hladnom mlazu aparata za hlađenje - Oxford Cryosystems cryostream cooler (Cosier, J. et al., J. Appl. Cryst., 19:105 (1986)) tokom skupljanja podataka. Strukture su rešene direktnim metodama i prerađene na osnovu posmatranih refleksija korišćenjem kristalografskog paketa SHELXTL (videti APEX2 uputstvo za upotrebu, v1.27; Bruker AXS, Inc., WI 53711 USA). Izvedeni atomski parametri (koordinate i temperaturni faktori) su prerađeni preko najmanjih kvadrata pune matrice. Funkcija minimizovana u obradu je bila ∑w(|Fo| - |Fc|)<2>. R je definisano kao ∑ ||Fo| - |Fc||/∑ |Fo| dok je Rw = [∑w(|Fo| - |Fc|)<2>/∑w |Fo|<2>]<1/2>gde w je odgovarajuća funkcija ponderiranja zasnovana na greškama u opaženim intenzitetima. Mape razlika su ispitane u svim fazama obrade. Vodonici su uvedeni u idealizovanim položajima sa izotropnim temperaturnim faktorima, ali parametri vodonika nisu varirali. Parametri jedinične ćelije dobijeni su u skladu sa procedurom koja je opisana u Stout et al., X-Ray Structure Determination: A Practical Guide, MacMillan (1968).

[0232] Hemijska imena su određena korišćenjem CHEMDRAW® Ultra, verzija 9.0.5 (CambridgeSoft). Korišćene su sledeće skraćenice:

SKRAĆENICE

[0233]

CDI karbonildiimidazol

DCM dihlorometan

DIEA diizopropiletilamin

DMF N,N-dimetilformamid

DMSO dimetil sulfoksid

dppf 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen

DSC diferencijalna skenirajuća kalorimetrija

DTT ditiotreitol

EDC 1-[3-(dimetilamino)propil]-3-etil-karbodiimid hidrohlorid EDTA etilendiamin tetraacetat

EtOAc etil acetat

EtOH etanol

g gram(i)

h sat(i)

HATU O-(7-azabenzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametiluronijum heksafluorofosfat

HOBT 1-hidroksibenzotriazol hidrat

HPLC tečna hromatografija pod visokim pritiskom

IPA izopropanol

MeCN acetonitril

MeOH metanol

min minut(i)

mmol milimol(i)

NBS N-bromosukcinimid

NCS N-hlorosukcinimid

NMP N-metilpirolidinon

t-butil tercijarni butil

TEA trietilamin

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

INTERMEDIJER 1 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-FLUOROHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0234]

INTERMEDIJER 1A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-3-FLUOROBENZAMID [0235]

Metod 1: Rastvor 8-fluoro-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (2.00 g, 11.04 mmol) i 3-bromo-2-metilanilina (4.11 g, 22.08 mmol) u dioksanu (20 mL) u zatvorenim reakcionim posudama je zagrevan na 110 °C tokom 4 dana. Ohlađena smeša je tretirana sa 10% vodenog K2CO3 i mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Smeša je ekstrahovana sa DCM 3 puta, i kombinovane organske faze su isprane vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je triturisan etrom da se dobije siva čvrsta supstanca (2.50 g). Matična tečnost je koncentrovana i ostatak je ponovo triturisan sa etrom da se dobije siva čvrsta supstanca (230 mg). Dve čvrste supstance su kombinovane da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-fluorobenzamid kao siva čvrsta supstanca (2.73 g, 78% prinos). Maseni spektar m/z 323, 325 (M+H)<+>.

Metod 2. Suspenzija 8-fluoro-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-dion (3.00 g, 16.6 mmol) u ksilenima (50 mL) je tretirana sa 3-bromo-2-metilanilina (3.08 g, 16.6 mmol) i zagrevana do refluksa. Posle 6 sati smeša je ostavljena da se ohladi do sobne temperature preko noći. Dobijena suspenzija je razblažena sa heksanima i talog je prikupljen filtracijom, ispran sa heksanima i sušen na vazduhu da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-fluorobenzamid kao bela čvrsta supstanca (4.50 g, 84% prinos).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.69 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.65 (br. s., 1H), 7.50-7.46 (m, 1H), 7.32 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.19-7.11 (m, 2H), 6.73-6.64 (m, 1H), 5.69 (br. s., 2H), 2.44 (s, 3H).

INTERMEDIJER 1:

[0236] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-fluorobenzamid (5.70 g, 17.6 mmol) u THF (100 mL) je tretiran sa bis(trihlorometil) karbonatom (trifosgen) (6.28 g, 21.2 mmol) na sobnoj temperaturi i mešan 15 minuta. Smeša je razblažena sa EtOAc, pažljivo tretirana sa zasićenim vodenim NaHCO3 i mešana na sobnoj temperaturi dok nije prestalo stvaranje gasa. Odvojena organska faza je isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, i osušena je i koncentrovana. Ostatak je triturisan sa etrom da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao prljavo bela čvrsta supstanca (6.00 g, 97% prinos). Maseni spektar m/z 349, 351 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroformd) δ 8.59 (d, J=17.6 Hz, 1H), 7.99 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.54 - 7.43 (m, 1H), 7.28 - 7.21 (m, 2H), 7.21 - 7.17 (m, 1H), 2.28 (s, 3H).

INTERMEDIJER 2 8-FLUORO-1-METIL-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0237]

INTERMEDIJER 2A: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-FLUORO-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0238]

[0239] Rastvor 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 1] (4.80 g, 13.8 mmol) u DMF (25 mL) je tretiran sa Cs2CO3(13.4 g, 41.2 mmol). Suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi i tretirana kapima (ali brzo) sa jodometanom (4.30 mL, 68.7 mmol) i mešana brzo na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Smeša je razblažena sa EtOAc i vodom (200 mL). Organska faza je odvojena i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, zatim je osušena i koncentrovana da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao žućkastosmeđa staklena pena (4.80 g, 96% prinos). Maseni spektar m/z 363, 365 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 2:

[0240] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (4.80 g, 13.2 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (4.36 g, 17.2 mmol), kalijum acetata (3.89 g, 39.6 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (0.540 g, 0.661 mmol) u dioksanu (65 mL) je zagrevana uz refluks tokom 2 sata. Nakon hlađenja do sobne temperature, smeša je filtrirana kroz CELITE® i čvrste supstance su isprane sa EtOAc. Filtrat je razblažen sa EtOAc, ispran sa vodom, i osušen i koncentrovan. Ostatak je podvrgnut kolonskoj hromatografiji na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-50%), da se dobije 8-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (4.61 g, 85% prinos). Maseni spektar m/z 411 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.14-8.08 (m, 1H), 7.93 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J=14.0, 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.34 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 3.88 (d, J=7.9 Hz, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.36 (s, 12H).

INTERMEDIJER 3 4-BROMO-3-HLORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID

[0241]

INTERMEDIJER 3A: ETIL 5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-HLORO-9H-KARBAZOL-2-KARBOKSILAT

[0242]

[0243] Smeša etil 5-bromo-8-karbamoil-9H-karbazol-2-karboksilata [sintetisana u skladu sa procedurom koja je opisana u američkom patentu br.8,084,620, intermedijer 48-1] (0.100 g, 0.277 mmol) i NCS (rekristalizovana iz toluena; 0.037 g, 0.277 mmol) u CCl4 (10 mL) i DMF (2 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 112 sati. Smeša je filtrirana, i prikupljeni talog je ispran sa CCl4i osušen preko noći pod vakuumom. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa heksanima, zatim sa EtOAc-heksanima (30%, zatim 50%), da se dobije etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-9H-karbazol-2-karboksilat kao mekana bela čvrsta supstanca (0.071g, 65% prinos). Maseni spektar m/z 395, 397, (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 12.13 (s, 1H), 8.77 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.53 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.36 (br. s., 1H), 8.29 (s, 1H), 7.89 (dd, J=8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.74 (br. s., 1H), 4.38 (q, J=7.0 Hz, 2H), 1.38 (t, J=7.0 Hz, 3H).

ALTERNATIVNO PRIPREMANJE INTERMEDIJERA 3A:

[0244] U smešu etil 5-bromo-8-karbamoil-9H-karbazol-2-karboksilata (90 g, 249 mmol), CCl4 (2900 mL), i NMP (600 mL) je dodat NCS (36.1 g, 271 mmol). Reakciona smeša je mešana na 45 °C tokom 2 sata. Nakon hlađenja do sobne temperature, čvrsta supstanca je skupljana vakuum-filtracijom. Čvrsta supstanca je mešana u metanolu (1L) na 60 °C tokom 2 sata i zatim je hlađena do sobne temperature. Čvrsta supstanca je prikupljena i osušena da se dobije etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-9H-karbazol-2-karboksilat (69.5 g, 167 mmol, 67% prinos) (95% čistoća).

[0245] Filtrat je koncentrovan pri smanjenom pritisku da se ukloni CCl4. NMP ostatku je zatim dodata voda (2 L). Dobijeni talog je prikupljen i osušen da se dobije dodatnih 13.7 g proizvoda (25% prinos, 75% čistoća).

INTERMEDIJER 3:

[0246] Rastvor etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-9H-karbazol-2-karboksilat (4.14 g, 10.5 mmol) u THF (200 mL) koji je ohlađen u kupatilu sa suvim ledom i acetonom je tretiran u delovima preko 30 minuta sa 1.6 M metillitijuma u heksanima (45.8 mL, 73.2 mmol). Smeša je mešana na -78 °C tokom 60 minuta, zatim je tretirana u delovima sa zasićenim vodenim NH4Cl. Voda je dodata i smeša je ekstrahovana dva puta i smeša je ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Kombinovane organske faze su isprane dva puta sa vodom. Sve vodene faze su kombinovane i ekstrahovane sa DCM, i ova organska faza je isprana sa vodom. Sve organske faze su kombinovane, osušene i koncentrovane. Ostatak je kristalizovan iz EtOAc da se dobije čvrsta supstanca. Ostatak iz koncentracije matične tečnosti je prečišćen pomoću hromatografije na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Dve čvrste supstance su kombinovane da se dobije 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao svetlo žuta čvrsta supstanca (3.13 g, 78% prinos). Maseni spektar m/z 363, 365, (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.71 (s, 1H), 8.56 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.29 (br. s., 1H), 8.17 (s, 1H), 7.97 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.66 (br. s., 1H), 7.42 (dd, J=8.6, 1.8 Hz, 1H), 1.52 (s, 6H).

ALTERNATIVNA PRIPREMA INTERMEDIJERA 3:

[0247] Suspenzija etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-9H-karbazol-2-karboksilata (58.56 g, 148 mmol) u THF (700 mL) pod azotom je ohlađena do -15 °C u kupatilu sa suvim ledom i acetonom. Smeša je tretirana kapima sa 3 M metilmagnezijum hlorida u THF (395 mL, 1.19 mol) pri stopi na kojoj se unutrašnja temperatura održava između -15 °C i -10 °C. Posle 5 sati smeša je sipana u 3 suda, pri čemu svaki sadrži otprilike 1.5 L mrvljenog leda i 500 mL zasićenog vodenog NH4Cl. Dobijene smeše su ekstrahovane sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane. Ostatak je kombinovan sa materijalom iz dve dodatne grupe, prva počinje od 146 mmol etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-9H-karbazol-2-karboksilat i druga počinje od 142 mmol etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-9H-karbazol-2-karboksilata, i mešana je 1 sat u acetonu (250 mL). Talog je skupljen pomoću filtracije, ispran sa heksanom i osušen da se dobije 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao čvrsta supstanca (134.56 g). Filtrat je koncentrovan i ostatak je ponovo mešan 1 sat u acetonu, formirajući talog koji je prikupljen filtracijom, ispran sa heksanom i osušen da se dobije 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao čvrsta supstanca (7.36 g) za ukupno 141.92 g (88% prinos). Filtrat iz druge filtracije je kombinovan sa nečistim materijalom iz drugih grupa i podvgnut je kolonskoj hromatografiji na silika gelu (2 x 1.5 kg), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 40-100%), obezbeđujući dodatni proizvod.

INTERMEDIJER 4 1-METIL-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0248]

INTERMEDIJER 4A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)BENZAMID

[0249]

Metod 1. Rastvor 2-aminobenzoeve kiseline (5.00 g, 36.5 mmol) i tionil hlorida (8.68 g, 72.9 mmol) u toluenu (50 mL) zagrevan je uz refluks 60 minuta. Smeša je koncentrovana in vacuo, i ostatak je suspendovan u THF (50 mL), hlađena je u ledeno-vodenom kupatilu i tretirana sa 3-bromo-2-metilanilinom (20.35 g, 109 mmol). Dobijena suspenzija zagrevana je uz refluks 2 sata. Ohlađena smeša je tretirana sa 10% vodenog K2CO3 (50 mL), koja je snažno mešana 15 minuta, i ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil) benzamid kao svetlo žuta čvrsta supstanca (4.70 g, 42% prinos). Maseni spektar m/z 305, 307 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.72 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.67 (br. s., 1H), 7.54 (dd, J=8.3, 1.2 Hz, 1H), 7.48 (dd, J=7.9, 0.9 Hz, 1H), 7.36-7.31 (m, 1H), 7.15 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.81-6.73 (m, 2H), 5.59 (br. s., 2H), 2.45 (s, 3H).

Metoda 2. Suspenzija 1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (5.00 g, 30.7 mmol) i 3-bromo-2-metilanilina (5.70 g, 30.7 mmol) u ksilenima (50 mL) je zagrevana uz refluks tokom 8 sati. Rastvarač je uklonjen destilacijom i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (120 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-50%), da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)benzamid kao prljavo bela čvrsta supstanca (2.30 g, 24% prinos).

Metoda 3. Suspenzija 1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-dion (10.00 g, 61.3 mmol) u DMF (150 mL) je tretirana sa 3-bromo-2-metilanilin (13.69 g, 73.6 mmol) i zagrevana uz refluks preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Cela smeša je filtrirana da se uklone sive čvrste supstance i slojevi filtrata su razdvojeni. Organska faza je isprana sa vodom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-50%), da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)benzamid kao čvrsta supstanca žutomrke boje (1.1 g, 6% prinos). Drugi eluent iz kolone daje 3-(3-bromo-2-metilfenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 4B] čvrstu supstancu žutomrke boje (3.4 g, 17% prinos).

INTERMEDIJER 4B: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION [0250]

[0251] Rastvor od 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)benzamida (2.00 g, 6.55 mmol) u THF (50 mL) je tretiran sa bis(trihlorometil)karbonat[trifosgen] (2.92 g, 9.83 mmol) i zagrevan uz refluks 60 minuta. Ohlađena smeša je tretirana sa zasićenim vodenim NaHCO3, ekstrahovana sa EtOAc, i kombinovane organske faze su isprane dva puta sa zasićenim NaHCO3, zatim sa vodom, osušene su i koncentrovane. Ostatak je triturisan sa DCM da se dobije bela čvrsta supstanca koja je sakupljena filtracijom. Ostatak iz koncentracije filtrata je triturisan sa DCM da se dobije bela čvrsta supstanca koja je sakupljena filtracijom. Dve čvrste supstance su kombinovane da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (2.10 g, 97% prinos). Maseni spektar m/z 331, 333 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.07 (dd, J=7.92, 1.32 Hz, 1H), 7.65-7.75 (m, 2H), 7.21-7.32 (m, 4H), 2.20 (s, 3H).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 9.38 (br. s., 1H), 8.19 (dd, J=7.9, 1.1 Hz, 1H), 7.76-7.69 (m, 1H), 7.69-7.60 (m, 1H), 7.35-7.17 (m, 3H), 7.04-6.97 (m, 1H), 2.28 (s, 3H).

INTERMEDIJER 4C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0252]

[0253] Suspenzija 3-(3-bromo-2-metilfenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona (23.02 g, 69.5 mmol) i Cs2CO3 (34.0 g, 104 mmol) u DMF (70 mL) ohlađena u ledeno-vodenom kupatilu je tretirana u delovima sa jodometanom (5.22 mL, 83 mmol). Smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana do sobne temperature 30 minuta. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je podeljen između EtOAc i vode. Talog koji je formiran sakupljen je filtracijom. Sakupljena čvrsta supstanca je isprana sa vodom i osušena preko noći pod vakuumom da se dobije bela čvrsta supstanca. Organska faza filtrata je odvojena, isprana 3 puta sa 10% vodenog LiCl, zatim je isprana dva puta sa vodom, osušena i koncentrovana da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Dve čvrste supstance su kombinovane da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (15.56 g, 92% prinos). Maseni spektar m/z 345, 347 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 4:

[0254] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (36.39 g, 105 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (40.2 g, 158 mmol), PdCl2(dppf) DCM adukta (4.30 g, 5.27 mmol) i kalijum acetata (31.0 g, 316 mmol) u dioksanu (500 mL) i DMSO (50 mL) je zagrevana uz refluks tokom 24 sata. Dodatni PdCl2(dppf) DCM adukt (1.47 g) je dodat i smeša je zagrevana uz refluks još 6 sati. Ohlađena smeša je filtrirana kroz CELITE® i filtrat je koncentrovan. Ostatak je razblažen sa EtOAc, promućkan sa vodom, i obe faze su filtrirane kroz CELITE® da se ukloni crni talog. Organska faza filtrata je odvojena, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (dve kolone 330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-100%). Dobijena čvrsta supstanca je triturisana sa EtOAc da se dobije čvrsta supstanca koja je sakupljena filtracijom. Filtrat je koncentrovan i kristalizovan od EtOAc da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Matična tečnost iz ove kristalizacije je koncentrovana i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-50%), da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Tri čvrste supstance su kombinovane da se dobije 1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (21.2 g, 51% prinos). Maseni spektar m/z 393 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz,) δ 8.35 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.64 (ddd, J=8.5, 7.3, 1.5 Hz, 1H), 7.59 (dd, J=7.4, 1.4 Hz, 1H), 7.33-7.27 (m, 1H), 7.24-7.17 (m, 1H), 7.12 (d, J=8.1 Hz, 2H), 3.55 (s, 3H), 1.59 (s, 3H), 1.39 (s, 12H).

INTERMEDIJER 5 8-HLORO-1-METIL-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0255]

INTERMEDIJER 5A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-3-HLOROBENZAMID [0256]

[0257] Suspenzija 8-hloro-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (4.00 g, 20.3 mmol) i 3-bromo-2-metilanilina (5.65 g, 30.4 mmol) u ksilenu (20 mL) je zagrevana uz refluks tokom 2.5 sata. Ohlađena smeša je formirala žuti talog. Smeša je razblažena sa heksanima, i talog je prikupljen filtracijom, ispran sa heksanima i osušen da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-hlorobenzamid kao žuta čvrsta supstanca (6.28 g, 91% prinos). Maseni spektar m/z 339, 341 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.68 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.61 (br. s., 1H), 7.52-7.43 (m, 3H), 7.15 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.70 (t, J=7.8 Hz, 1H), 6.12 (br. s., 2H), 2.44 (s, 3H).

INTERMEDIJER 5B: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-HLOROHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0258]

[0259] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-hlorobenzamida (780 mg, 2.30 mmol) u THF (20 mL) je tretiran sa bis(trihlorometil) karbonatom (1.02 g, 3.45 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 21 sat. Smeša je razblažena sa DCM i isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3, vodom i slanim rastvorom. Organska faza je osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 25-50%), da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-hlorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (800 mg, 95% prinos). Maseni spektar m/z 365, 367 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 5C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-HLORO-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0260]

[0261] Rastvor 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-hlorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona (1.45 g, 3.97 mmol) u DMF (15 mL) je tretiran sa Cs2CO3(3.88 g, 11.9 mmol) i jodometanom (2.48 mL, 39.7 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi 1.5 sat. Smeša je razblažena sa vodom i smešom EtOAc i heksana. Organska faza je isprana sa vodom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 5-40%), da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-hloro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (1.3 g, 81% prinos). Maseni spektar m/z 379, 391 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 5:

[0262] Rastvor 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-hloro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (1.14 g, 3.00 mmol) u dioksanu (20 mL) je tretiran sa 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.915 g, 3.60 mmol), kalijum acetatom (0.884 g, 9.01 mmol), i PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.123 g, 0.150 mmol). Smeša je zatvorena u reakcionoj bočici pod pritiskom i zagrevana na 110 °C tokom 4 sata. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, filtrirana kroz CELITE®, i filtrat je ispran sa vodom, osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-50%), da se dobije 8-hloro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (1.00 g, 78% prinos). Maseni spektar m/z 427 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.23 (dd, J=7.8, 1.7 Hz, 1H), 7.93 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.76 (dd, J=7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.37-7.31 (m, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 3.94 (s, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.36 (s, 15H).

INTERMEDIJERI 6 I 7 8-HLORO-1-METIL-3-(S)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (I-6), I

8-HLORO-1-METIL-3-(R)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (I-7)

[0263]

[0264] Uzorak racemskog 8-hloro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 5] je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: Regis WHELK-O® R,R (3 x 25 cm, 5µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (60:40) pri 85 mL/min; pripremanje uzorka: 17 mg/mL u MeOH-MeCN (1:1). Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje S enantiomer, 8-hloro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 6]. Drugi pik eluiranjem iz kolone daje R enantiomer, 8-hloro-1-metil-3-(R)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 7]. Maseni spektar i<1>H NMR za svaki enantiomerni atropizomer bili su isti kao oni za za intermedijer 5.

INTERMEDIJER 8 8-HLORO-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0265]

[0266] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-hlorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 5B] (1.00 g, 2.74 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.833 g, 3.28 mmol), kalijum acetata (0.805 g, 8.21 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (0.112 g, 0.137 mmol) u dioksanu (20 mL) je zagrevana na 90 °C tokom 8 sati. Ohlađena smeša je filtrirana, koncentrovana, i ostatak je podeljen između DCM i vode. Organska faza je osušena i koncentrovana, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (120 g), eluiranjem sa EtOAc-DCM (gradijent od 0-10%), da se dobije 8-hloro-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion (782 mg, 58% prinos). Maseni spektar m/z 413 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 9 1,8-DIMETIL-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0267]

INTERMEDIJER 9A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-3-METILBENZAMID [0268]

[0269] Smeša oftionil hlorida (3.15 g, 26.5 mmol) i 2-amino-3-metilbenzoeve kiseline (2.00 g, 13.23 mmol) u THF (50 mL) je zagrevana uz refluks 2 sata. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je kombinovan sa 3-bromo-2-metilanilinom (4.92 g, 26.5 mmol) u THF (50 mL) i zagrevan uz refluks tokom 5 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, tretirana sa 10% vodenog K2CO3i mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta. Dobijena smeša je ekstrahovana 3 puta sa DCM, i kombinovane organske faze su isprane sa vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-20%), da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-metilbenzamid kao žuta čvrsta supstanca (1.71g, 40% prinos). Maseni spektar m/z 319, 321 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.70 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.64 (br. s., 1H), 7.50-7.40 (m, 2H), 7.24 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.14 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.70 (t, J=7.6 Hz, 1H), 5.67 (br. s., 2H), 2.44 (s, 3H), 2.23 (s, 3H).

INTERMEDIJER 9B: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0270]

[0271] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-metilbenzamida (1.71 g, 5.36 mmol) i trifosgena (2.07 g, 6.96 mmol) u THF (20 mL) je zagrevan 1 sat. Smeša je ohlađena u ledenovodenom kupatilu i tretirana sa zasićenim vodenim NaHCO3. Mešanje je nastavljeno sve dok nije prestalo razvijanje gasa. Dobijena smeša je ekstrahovana 3 puta sa DCM. Kombinovane organske faze su isprane vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je triturisan sa etrom da se dobije čvrsta supstanca, sakupljena filtracijom. Druga trituracija koncentrovanog filtrata daje dodatnu čvrstu supstancu, prikupljenu filtracijom. Filtrat iz ovoga je koncentrovan i prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se obezbedi dodatna čvrsta supstanca. Tri čvrste supstance su kombinovane da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (1.69 g, 91% prinos). Maseni spektar m/z 345, 347 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d): δ 8.07 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.70 (dd, J=7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.27-7.17 (m, 3H), 2.41 (s, 3H), 2.28 (s, 3H).

INTERMEDIJER 9C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-1,8-DIMETILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0272]

[0273] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (470 mg, 1.36 mmol) i Cs2CO3(1.33 g, 4.08 mmol) u DMF (8 mL) je tretirana sa jodometanom (0.85 mL, 13.6 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi 1.5 sat. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i sa dva dela 10% vodenog LiCl. Kombinovane vodene faze su ekstrahovane sa EtOAc. Kombinovane organske faze su isprane sekencijalno sa 10% vodenog LiCl i vodom, osušene i koncentrovane da se dobije nečisti 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1,8-dimetilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (510 mg), koje se korsti bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 359, 361 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 9:

[0274] Korišćenjem iste procedure koja je opisana za pripremanje intermedijera 2, 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1,8-dimetilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion (489 mg, 1.36 mmol) je pretvoren u 1,8-dimetil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (410 mg, 74% prinos). Maseni spektar m/z 407 (M+H)<+>.

INTERMEDIJERI 10 I 11 8-FLUORO-1-METIL-3-(S)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (I-10), I

8-FLUORO-1-METIL-3-(R)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (I-11)

[0275]

[0276] Uzorak racemskog 8-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 2] je odvojen pomoću hiralne super-kritične fluidne hromatografije kao što sledi: kolona: (R,R)-WHELK-O® 1 (3 x 25 cm, 5 µm); mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) pri 200 mL/min, 100 bara, 30 °C; pripremanje uzorka: 97.3 mg/mL u MeOH:DCM (1:1); ubrizgavanje; 4 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (S) izomer, 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 10] kao belu čvrstu supstancu. Maseni spektar m/z 411 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.14-8.08 (m, 1H), 7.93 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J=14.0, 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.34 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 3.88 (d, J=7.9 Hz, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.36 (s, 12H).

[0277] Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (R) izomer, 8-fluoro-1-metil-3-(R)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 11] kao belu čvrstu supstancu. Maseni spektar m/z 411 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.13-8.08 (m, 1H), 7.93 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J=13.9, 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.37-7.31 (m, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 3.88 (d, J=7.9 Hz, 3H), 2.36 (s, 3H), 1.36 (s, 12H).

ALTERNATIVNO PRIPREMANJE INTERMEDIJERA 10:

[0278] Rastvor 8-fluoro-3-(2-metil-3-(S)-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 19] (40 g, 101 mmol) u tetrahidrofuranu (400 mL) je tretiran sa cezijum karbonatom (99 g, 303 mmol) i jodometanom (12.6 mL, 202 mmol). Dobijeni mutni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Voda (300 mL) je dodata i reakciona smeša je ekstrahovana sa EtOAc (3 x 150 mL). Kombinovane organske faze su isprane sekvencijalno sa slanim rastvorom i vodom, i osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen rekristalizacijom iz EtOAc da se dobije 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (38 g, 92% prinos).

INTERMEDIJER 12 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-METOKSI-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0279]

INTERMEDIJER 12A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-3-METOKSIBENZAMID

[0280]

[0281] Smeša 3-bromo-2-metilanilina (482 mg, 2.59 mmol) i 8-metoksi-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (500 mg, 2.59 mmol) u toluenu (20 mL) je tretirana sa 2 M trimetilaluminijuma u toluenu (3.24 mL, 6.47 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 10 minuta, zatim je zagrevana na 70 °C preko noći. Smeša je ohlađena do sobne temperature, tretirana sa 1 N vodenom HCl i ekstrahovana 3 puta sa EtOAc. Kombinovane organske faze su isprane sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3i vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je podvrgnut kolonskoj hromatografiji na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se obezbedi 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-metoksibenzamid kao bela čvrsta supstanca (302 mg, 35% prinos). Maseni spektar m/z 335, 337 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.72 (d, J=7.3 Hz, 2H), 7.46 (dd, J=8.0, 0.8 Hz, 1H), 7.17-7.10 (m, 2H), 6.90 (dd, J=7.9, 0.9 Hz, 1H), 6.72-6.66 (m, 1H), 5.88 (br. s., 2H), 3.92 (s, 3H), 2.43 (s, 3H).

INTERMEDIJER 12B: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-METOKSIHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0282]

[0283] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3-metoksibenzamida (302 mg, 0.901 mmol) i trifosgena (321 mg, 1.081 mmol) u THF (20 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. Smeša je pažljivo tretirana sa zasićenim vodenim NaHCO3i mešana dok nije prestalo razvijanje gasa. Smeša je ekstrahovana dva puta sa DCM, i kombinovane organske faze su isprane sa vodom, osušene i koncentrovane da se obezbedi 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-metoksihinazolin-2,4(1H,3H)-dion (339 mg) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 361, 363 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 12C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-METOKSI-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0284]

[0285] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-metoksihinazolin-2,4(1H,3H)-diona (535 mg, 1.48 mmol), jodometana (0.185 mL, 2.96 mmol) i Cs2CO3(965 mg, 2.96 mmol) u THF (20 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen u DCM, ispran sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3 i vodom, osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g silikata), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-metoksi-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion (442 mg). Maseni spektar m/z 375, 377 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.90 (dd, J=7.2, 2.3 Hz, 1H), 7.66 (dd, J=8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.31-7.22 (m, 2H), 7.22-7.19 (m, 1H), 7.17-7.13 (m, 1H), 3.97 (s, 3H), 3.89 (s, 3H), 2.23 (s, 3H).

INTERMEDIJER 12:

[0286] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-metoksi-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (380 mg, 1.01 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (309 mg, 1.22 mmol), kalijum acetata (298 mg, 3.04 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (41.4 mg, 0.051 mmol) u dioksanu (20 mL) je zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-55%), da se dobije 8-metoksi-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion u 75% čistoće, koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja (486 mg, 85% prinos). Maseni spektar m/z 423 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 13 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-6-FLUORO-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0287]

INTERMEDIJER 13A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-5-FLUOROBENZAMID

[0288]

[0289] Smeša 3-bromo-2-metilanilina (1.50 g, 8.06 mmol) i 6-fluoro-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (1.46 g, 8.06 mmol) u toluenu (40 mL) je ohlađena u ledenovodenom kupatilu i tretirana u delovima sa 2 M trimetilaluminijuma u toluenu (10.1 mL, 20.2 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta, zatim je zagrevana na 70 °C preko noći. Smeša je ohlađena do 0 °C, pažljivo tretirana sa 1 M vodenog HCl, i ekstrahovana 3 puta sa EtOAc. Kombinovane organske faze su isprane sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3 i vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je podvrgnut kolonskoj hromatografiji na silika gelu (120 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 5-40%), da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-5-fluorobenzamid (0.893 g, 87% čistoća, 30% prinos). Maseni spektar m/z 323, 325 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 7.54 (1 H, dd, J=8.03, 0.99 Hz), 7.48 (1 H, dd, J=9.68, 3.08 Hz), 7.33 (1 H, d, J=7.26 Hz), 7.16 (1 H, t, J=7.92 Hz), 7.04-7.12 (1 H, m), 6.83 (1 H, dd, J=9.02, 4.62 Hz), 2.39 (3 H, s).

INTERMEDIJER 13B: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-6-FLUOROHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0290]

[0291] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-5-fluorobenzamida (0.893 g, 2.76 mmol) i trifosgena (0.984 g, 3.32 mmol) u THF (30 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. Smeša je pažljivo tretirana sa zasićenim vodenim NaHCO3 i mešana sve dok nije prestalo razvijanje gasa. Smeša je ekstrahovana dva puta sa DCM. Kombinovane organske faze su isprane sa vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je triturisan sa DCM da se dobije bela čvrsta supstanca, izolovana filtracijom. Filtrat je koncentrovan i podvrgnut kolonskoj hromatografiji na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-80%), da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Dve čvrste supstance su kombinovane da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-6-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (845 mg, 87% prinos). Maseni spektar m/z 349, 351 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 13C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-6-FLUORO-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0292]

[0293] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-6-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona (742 mg, 2.13 mmol), jodometana (0.159 mL, 2.55 mmol) i Cs2CO3(1.039 g, 3.19 mmol) u THF (20 mL) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen u DCM i ispran sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3 i vodom, osušen i koncentrovan da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-6-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion (742 mg, 96% prinos). Maseni spektar m/z 363, 365 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 13:

[0294] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-6-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (742 mg, 2.04 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (623 mg, 2.45 mmol), kalijum acetata (602 mg, 6.13 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (83 mg, 0.102 mmol) u dioksanu (20 mL) je zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (120 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-40%), da se dobije 6-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion (866 mg), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 411 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 14 7-METOKSI-1-METIL-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0295]

INTERMEDIJER 14A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-4-METOKSIBENZAMID

[0296]

[0297] Smeša 3-bromo-2-metilanilina (482 mg, 2.59 mmol) 7-metoksi-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (500 mg, 2.59 mmol) u toluenu (20 mL) je tretirana sa 2 M trimetilaluminijuma u toluenu (3.24 mL, 6.48 mmol) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 10 minuta, zatim je zagrevana na 70 °C preko noći. Ohlađena smeša je tretirana sa 1 M vodenog HCl, ekstrahovana 3 puta sa EtOAc, i kombinovane organske faze su isprane sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3 i vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAcheksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije 4:1 smeša 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-4-metoksibenzamid i 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-metoksihinazolin-2,4(1H,3H)-dion (592 mg). Maseni spektar m/z 335, 337 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 14B: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-7-METOKSIHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0298]

[0299] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-4-metoksibenzamida (596 mg, 1.78 mmol) i trifosgena (633 mg, 2.13 mmol) u THF (30 mL) je mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. Smeša je tretirana sa zasićenim vodenim NaHCO3 i mešana sve dok nije prestalo razvijanje gasa. Dobijena smeša je ekstrahovana dva puta sa DCM, i kombinovane organske faze su isprane sa vodom, osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-metoksihinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (440 mg, 68% prinos). Maseni spektar m/z 361, 363 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 14C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-7-METOKSI-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0300]

[0301] Rastvor 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-metoksihinazolin-2,4(1H,3H)-diona (440 mg, 1.22 mmol) u THF (30 mL) je tretiran sa jodometanom (303 mg, 2.13 mmol) i Cs2CO3 (869 mg, 2.67 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim filtrirana i koncentrovana. Ostatak je razblažen u DCM i ispran sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3 i vodom, osušen i koncentrovan da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-metoksi-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion (502 mg), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 375, 377 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.21 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.24-7.18 (m, 1H), 7.17-7.13 (m, 1H), 6.88 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1H), 6.72 (d, J=2.2 Hz, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.64 (s, 3H), 2.24 (s, 3H). INTERMEDIJER 14:

[0302] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-metoksi-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (390 mg, 1.04 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (317 mg, 1.25 mmol), kalijum acetata (306 mg, 3.12 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (42.4 mg, 0.052 mmol) u dioksanu (20 mL) je zagrevan na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 10-55%), da se dobije 7-metoksi-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion (504 mg, 76% čistoća, 87% prinos), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 423 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 15 7-FLUORO-1-METIL-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0303]

INTERMEDIJER 15A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-4-FLUOROBENZAMID

[0304]

[0305] Smeša 7-fluoro-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (5.00 g, 27.6 mmol) i 3-bromo-2-metilanilina (5.14 g, 27.6 mmol) u ksilenu (50 mL) je zagrevana uz refluks 8 sati. Ohlađena smeša je filtrirana. Ohlađena čvrsta supstanca je isprana 3 puta sa DCM i kombinovani filtrati su koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-45%), da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-4-fluorobenzamid (3.65 g, 41% prinos). Maseni spektar m/z 323, 325 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.65 (1 H, d, J=8.14 Hz), 7.45-7.57 (3 H, m), 7.14 (1 H, t, J=8.03 Hz), 6.39-6.50 (2 H, m), 5.80 (2 H, br. s.), 2.43 (3 H, s).

INTERMEDIJER 15B: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-7-FLUOROHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0306]

[0307] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-4-fluorobenzamida (3.65 g, 11.3 mmol) u THF (50 mL) je tretiran sa trifosgenom (3.69 g, 12.4 mmol) na sobnoj temperaturi. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 sata, zatim je polako tretiran sa zasićenim vodenim NaHCO3 i mešan sve dok nije uočen prestanak evolucije gasa. Dobijena smeša je ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Kombinovane organske faze su isprane dva puta sa vodom, zatim sa slanim rastvorom, osušene i koncentrovane da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion (4.20 g), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 349, 351 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 15C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-7-FLUORO-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0308]

Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona (2.70 g, 7.73 mmol), jodometana (0.580 mL, 9.28 mmol) i Cs2CO3 (3.78 g, 11.6 mmol) u THF (20 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Smeša je filtrirana i filtrat je razblažen sa DCM i ispran sa vodom. Vodena faza je ekstrahovana sa DCM, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion (2.85 g), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 363, 365 (M+H)<+>, 385, 387 (M+Na)<+>.

INTERMEDIJER 15:

[0309] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (2.81 g, 7.74 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (2.36 g, 9.28 mmol), kalijum acetata (1.52 g, 15.5 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (0.190 g, 0.232 mmol) u dioksanu (20 mL) je zagrevana na 90 °C 8 sati. Dodatni PdCl2(dppf) DCM adukt (0.190 g, 0.232 mmol) i kalijum acetat (0.80 g) su dodati i smeša je zagrevana na 90 °C drugih 7 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3 i vodom. Kombinovane vodene faze su ekstrahovane sa EtOAc. Kombinovane organske faze su filtrirane kroz CELITE® i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (220 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-40%), da se dobije 7-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion (1.76 g, 56% prinos). Maseni spektar m/z 411 (M+H)<+>. INTERMEDIJER 16 6,8-DIFLUORO-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0310]

INTERMEDIJER 16A: N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-3,5-DIFLUORO-2-NITROBENZAMID

[0311]

[0312] Rastvor 3,5-difluoro-2-nitrobenzoeve kiseline (522 mg, 2.57 mmol) u DCM (10 mL) je tretiran sa oksalil hloridom (0.337 mL, 3.86 mmol), zatim sa DMF (3 kapi). Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Smeša je koncentrovana i ostatak je dva puta ponovo koncentrovan iz suvog DCM. Ostatak je razblažen u DCM (10 mL) i tretiran kapima sa 3-bromo-2-metilanilinom (478 mg, 2.57 mmol), što je praćeno dodavanjem u kapima TEA (0.537 mL, 3.86 mmol). Dobijena smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je tretirana sa zasićenim vodenim NaHCO3, formirajući beli talog. Organska faza je odvojena, i bela čvrsta supstanca je ekstrahovana dva puta sa DCM, zatim je filtrirana. Sakupljena čvrsta supstanca je isprana sa vodom i osušena. Kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane, i ostatak je triturisan sa DCM da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Obe čvrste supstance su kombinovane sa DCM i MeOH i koncentrovane da se dobije N-(3-bromo-2-metilfenil)-3,5-difluoro-2-nitrobenzamid (821 mg, 86% prinos). Maseni spektar mlz 371, 373 (M+H)<+>393, 395 (M+Na)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.65 (s, 1H), 7.98-7.90 (m, 1H), 7.81 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.55 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.40 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.21 (t, J=7.9 Hz, 1H), 2.32 (s, 3H).

INTERMEDIJER 16B: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-3,5-DIFLUOROBENZAMID

[0313]

[0314] Smeša N-(3-bromo-2-metilfenil)-3,5-difluoro-2-nitrobenzamida (821 mg, 2.21 mmol), NH4Cl (1.18 g, 22.1 mmol) i cinka (1.45 g, 22.1 mmol) u MeOH (10 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 60 minuta. Smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je suspendovan u DCM i ispran sa zasićenim vodenim NaHCO3. Organska faza, sa nerastvorljivim talogom, je odvojena od vodene faze i koncentrovana da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3,5-difluorobenzamid (760 mg), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 341, 343 (M+H)<+>, 363, 365 (M+Na)<+>.

INTERMEDIJER 16C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-6,8-DIFLUOROHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0315]

[0316] Rastvor 2-amino-N-(3-bromo-2-metilfenil)-3,5-difluorobenzamid (760 mg, 2.23 mmol) u THF (10 mL) je tretiran u delovima sa trifosgenom (722 mg, 2.43 mmol). Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 60 min, zatim je tretiran kapima sa zasićenim vodenim NaHCO3 i mešan sve dok nije uočen prestanak evolucije gasa. Organska faza je odvojena, isprana sa vodom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-6,8-difluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion (820 mg), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar mlz 367, 369 (M+H)<+>, 389, 391 (M+Na)<+>.

INTERMEDIJER 16:

[0317] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-6,8-difluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona (1.43 g, 3.89 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (1.29 g, 5.06 mmol), kalijum acetata (0.956 g, 9.74 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (0.159 g, 0.195 mmol) u dioksanu (20 mL) je zagrevana na 100 °C 5 sati. Ohlađena smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g 12 složenih kolona), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije 6,8-difluoro-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion (1.20 g, 74% prinos). Maseni spektar m/z 415 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 17 8-FLUORO-3-(RS)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0318]

[0319] Mešana smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 1] (0.349 g, 1.00 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.305 g, 1.20 mmol), PdCl2(dppf) DCM adukta (0.041 g, 0.050 mmol) i kalijum acetata (0.245 g, 2.50 mmol) u dioksanu (20 mL) i DMSO (4 mL) je ključala sa azotom 5 minuta, zatim je zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organska faza je isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (20:80) da se dobije 8-fluoro-3-(RS)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (0.326 g, 82% prinos). Maseni spektar m/z 397 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.78 (s, 1H), 7.80 (d, J=7.2 Hz, 1H), 7.72 (dd, J=7.4, 1.5 Hz, 1H), 7.71-7.56 (m, 1H), 7.45-7.35 (m, 1H), 7.35-7.29 (m, 1H), 7.29-7.16 (m, 1H), 2.22 (s, 3H), 1.33 (s, 12H).

INTERMEDIJERI 18 I 19 8-FLUORO-3-(R)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (18), I

8-FLUORO-3-(S)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (19)

[0320]

[0321] Uzorak 8-fluoro-3-(RS)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 17] je razdvojen super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALCEL® OD-H (5 x 25 cm, 5µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 300 mL/min, 100 bara, 40 °C; pripremanje uzorka: 103 mg/mL u DCM-MeOH (44:56); ubrizgavanje: 5.0 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje R enantiomer, 8-fluoro-3-(R)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 18] kao belu čvrstu supstancu. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje S enantiomer, 8-fluoro-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 19] kao belu čvrstu supstancu. Maseni spektar i<1>H NMR za svaki enantiomerni atropizomer bili su isti kao oni za intermedijer 17.

INTERMEDIJER 20 8-FLUORO-1-METIL(D3)-3-(RS)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION [0322]

INTERMEDIJER 20A: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-8-FLUORO-1-METIL(D3)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0323]

[0324] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 1] (3.00 g, 8.59 mmol) i Cs2CO3 (5.60 g, 17.2 mmol) u DMF (45 mL) je tretirana sa jodometand3(0.80 mL, 12.9 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 1.75 sati. Smeša je sipana u vodu iz brzo mešanje (400 mL) i mešana na sobnoj temperaturi, formirajući suspendovanu čvrstu supstancu. Filtrat je prikupljen filtracijom, ispran sa vodom i osušen pod vakuumom da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluoro-1-metil(d3) hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao prljavo bela čvrsta supstanca (3.05 g, 97% prinos). Maseni spektar m/z 366, 368 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.93 (dt, J=7.9, 0.7 Hz, 1H), 7.82-7.63 (m, 2H), 7.45-7.18 (m, 3H), 2.12 (s, 3H).

INTERMEDIJER 20:

[0325] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-8-fluoro-1-metil(d3)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona (3.00 g, 8.19 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (2.70 g, 10.7 mmol) i kalijum acetata (2.41 g, 24.6 mmol) u dioksanu (40 mL) je proključala sa argonom sa sonifikacijom za otprilike 2 minuta, zatim je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.335 g, 0.410 mmol). Smeša je zagrevana na 90 °C 15.75 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, filtrirana kroz CELITE®, i čvrste supstance su isprane sa EtOAc. Kombinovani filtrati su koncentrovani, i ostatak je prećišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-40%), da se dobije 8-fluoro-1-metil(d3)-3-(RS)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao prljavo bela čvrsta supstanca (3.23 g, 95% prinos). Maseni spektar m/z 414 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.14-8.07 (m, 1H), 7.93 (dd, J=7.4, 1.4 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J=13.9, 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.37-7.31 (m, 1H), 7.27-7.19 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 1.36 (s, 12H).

INTERMEDIJERI 21 I 22 8-FLUORO-1-METIL(D3)-3-(S)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (21), I

8-FLUORO-1-METIL(D3)-3-(R)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION (22)

[0326]

[0327] Uzorak 8-fluoro-1-metil(d3)-3-(RS)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 20] je odvojen superkritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: WHELK-O® R,R (3 x 25 cm, 5µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 200 mL/min, 100 bara, 30 °C; pripremanje uzorka: 97.3 mg/mL u MeOH:DCM (1:1); ubrizgavanje: 4 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje S enantiomer, 8-fluoro-1-metil(d3)-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 21] kao bela čvrsta supstanca. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje R enantiomer, 8-fluoro-1-metil(d3)-3-(R)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 22] kao belu čvrstu supstancu. Maseni spektar i<1>H NMR za svaki enantiomerni atropizomer su isti kao oni za Intermedijer 20.

[0328] Alternativna sinteza 8-Fluoro-1-metil(d3)-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 21]:

Rastvor 8-fluoro-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 19] (5.42 g, 13.7 mmol) u THF (100 mL) je mešan u ledeno-vodenom kupatilu i tretiran sa Cs2CO3 (6.24 g, 19.2 mmol), zatim sa jodometan-d3 (1.02 mL, 16.4 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi 16.25 sati. Smeša je filtrirana, čvrsta supstanca je isprana sa EtOAc, i kombinovani filtrati su koncentrovani. Ostatak je razblažen u EtOAc i ispran sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, osušen i koncentrovan da se dobije 8-fluoro-1-metil(d3)-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) hinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (5.538 g, 98% prinos). Maseni spektar m/z 414 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.11 (dq, J=7.8, 0.8 Hz, 1H), 7.93 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.48 (ddd, J=13.9, 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.38-7.30 (m, 1H), 7.27-7.20 (m, 2H), 2.36 (s, 3H), 1.36 (s, 12H).

INTERMEDIJER 23 3-4-BROMO-3-CIJANO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID

[0329]

INTERMEDIJER 23A: 4-BROMO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-3-JODO-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID

[0330]

[0331] Smeša 4-bromo-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [sintetizovan u skladu sa procedurom koja je opisana u američkom patentu br.8,084,620, primer 73-2] (2.00 g, 5.76 mmol), N-jodosukcinimid (1.69 g, 7.49 mmol), i piridin (1.9 mL, 23.0 mmol) u DMF (20 mL) je zagrevan na 65 °C tokom 2 dana. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana dva puta sa 10% vodenog LiCl i zatim sa slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 50%-65%), da se dobije 4-bromo-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-jodo-9H-karbazol-1-karboksamid kao žuta čvrsta supstanca (0.609 g, 23% prinos). Maseni spektar m/z 473, 475 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.66 (s, 1H), 8.49 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.26 (br. s., 1H), 7.94 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.58 (br. s., 1H), 7.40 (dd, J=8.6, 1.4 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), i 1.51 (s, 6H).

INTERMEDIJER 23:

[0332] Smeša 4-bromo-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-jodo-9H-karbazol-1-karboksamida (0.609 g, 1.29 mmol) i cink cijanida (0.076 g, 0.644 mmol) u DMF (7 mL) je podvrgnuta tri puta ciklusu pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa tetrakis(trifenilfosfin)paladijumom (0.074 g, 0.064 mmol) i zagrevana preko noći na 95 °C. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana dva puta sa 10% vodenog LiCl, zatim sa slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je triturisan i sonifikovan sa DCM i talog je prikupljen filtracijom da se dobije 4-bromo-3-cijano-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao bledo žuta čvrsta supstanca (0.400 g, 83% prinos). Maseni spektar m/z 372, 374 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.12 (s, 1H), 8.55 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.31 (br. s., 1H), 8.03 (s, 1H), 7.74 (br. s., 1H), 7.49 (dd, J=8.6, 1.1 Hz, 1H), i 1.52 (s, 6H).

INTERMEDIJER 24 5-BROMO-6-FLUORO-2-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (RACEMSKI)

[0333]

INTERMEDIJER 24A: 4-BROMO-2,5-DIFLUOROBENZOEVA KISELINA

[0334]

[0335] Rastvor 1,4-dibromo-2,5-difluorobenzen (640 mg, 2.35 mmol) u suvom dietil etru (10 mL) ohlađen u kupatilu sa suvim ledom i acetonom je tretiran kapima sa 2.5 M n-butilitijuma u heksanima (1.04 mL, 2.59 mmol). Rastvor je mešan na -78 °C tokom 30 min, zatim je tretiran sa komadom suvog leda. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno posle 5 minuta i smeša je mešana drugih 30 minuta dok se zagreva na sobnoj temperaturi. Smeša je razblažena sa EtOAc i vodom. Organska faza je odvojena i isprana dva puta sa zasićenim vodenim NaHCO3. Kombinovane vodene faze su zakiseljene sa 1 M vodenog HCl, ekstrahovane dva puta sa DCM, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane da se dobije 4-bromo-2,5-difluorobenzoeva kiselina kao bela čvrsta supstanca (297 mg, 53% prinos).

INTERMEDIJER 24B: HIDROHLORID 4-BROMO-5-FLUORO-2-HIDRAZINILBENZOEVE KISELINE

[0336]

[0337] Smeša 4-bromo-2,5-difluorobenzoeve kiseline (2.50 g, 10.6 mmol) i hidrazina (3.81 mL, 121 mmol) u N-metil-2-pirolidinonu (2 mL) je zagrevana na 95 °C tokom 4 sata. Ohlađena smeša je sipana u energično mešanu 6 M vodenu HCl (400 mL) koja je ohlađena u kupatilu sa NaCl i ledom. Dobijeni talog je prikupljen filtracijom, ispran sa 6 M vodenom HCl (200 mL) i osušen pod vakuumom da se dobije hidrohlorid 4-bromo-5-fluoro-2-hidrazinilbenzoeve kiseline kao žuta čvrsta supstanca (1.88 g, 71% čistoće, 44% prinos), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja.

ALTERNATIVNA SINTEZA HIDROHLORIDA 4-BROMO-5-FLUORO-2-HIDRAZINILBENZOEVE KISELINE:

[0338] Suspenzija 2-amino-4-bromo-5-fluorobenzoeva kiseline (10.0 g, 42.7 mmol) u smeši od 37% vodenog HCl (42.7 mL) i vode (14.3 mL), koja je ohlađena sa kupatilom sa NaCl i ledom, je tretirana kapima sa rastvorom natrijum nitrita (3.24 g, 47.0 mmol) u vodi (15.7 mL). Kada je dodavanje završeno, smeša je mešana još 30 minuta više. Rastvor od kalaj (II) hlorid dihidrata (28.9 g, 128 mmol) u 37% vodenog HCl (27.5 mL) je dodata u vidu kapi. Kupatilo za hlađenjeje uklonjena i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 45 minuta. Gusta suspenzija je filtrirana i sakupljeni talog je temeljno ispran sa vodom i osušen preko noći pod sniženim pritiskom. Čvrsta supstanca je triturisana sa MeOH sa sonifikacijom, i talog je prikupljen filtracijom, ispran sa MeOH i osušen. Filtrat je koncentrovan, i ostatak je triturisan sa DCM. Dobijena čvrsta supstanca je prikupljena filtracijom, osušena i kombinovana sa drugom čvrstom supstancom da se dobije hidrohlorid 4-bromo-5-fluoro-2-hidrazinilbenzoeve kiseline (5.37 g, 44% prinos) kao bela čvrsta supstanca. Maseni spektar m/z 249, 251 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 24C: 5-BROMO-2-(ETOKSIKARBONIL)-6-FLUORO-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSILNA KISELINA

[0339]

[0340] Smeša hidrohlorida 4-bromo-5-fluoro-2-hidrazinilbenzoeve kiseline (5.37 g, 18.8 mmol), etil 3-oksocikloheksankarboksilata (3.52 g, 20.7 mmol) i sirćetne kiseline (3.23 mL, 56.4 mmol) u toluenu (90 mL) je zagrevana na 110 °C tokom 20 sati. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom, i ostatak je razblažen sa toluenom (43 mL) i trifluorosirćetnom kiselinom (11 mL). Smeša je mešana na 90-94 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, sonifikovana, i talog je prikupljen filtracijom. Filtrat je koncentrovan i resuspendovan u EtOAc sa sonifikacijom, pri čemu se dobija novi talog koji je takođe sakupljen filtracijom i ispran sa EtOAc. Kombinovane čvrste supstance su triturisane dva puta sa MeOH da se dobije čvrsta supstanca. Kombinovani filtrati su koncentrovani i ostatak je triturisan sa MeOH da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Čvrste supstance su kombinovane da se dobije 5-bromo-2-etoksikarbonil-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilna kiselina kao bledo žuta čvrsta supstanca (3.38 g). Maseni spektar m/z 384, 386 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 24D: ETIL 5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-FLUORO-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-2-KARBOKSILAT

[0341]

[0342] Smeša 5-bromo-2-(etoksikarbonil)-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilne kiseline (0.513 g, 1.34 mmol), EDC (0.384 g, 2.00 mmol), i HOBT (0.307 g, 2.00 mmol) u THF (10 mL) i DCM (1.65 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Amonijum hidroksid (0.078 mL, 2.00 mmol) je dodat, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana dva puta sa zasićenim vodenim NaHCO3, zatim sa slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je triturisan u MeOH sa sonifikacijom da se dobije etil 5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-2-karboksilat kao žuta čvrsta supstanca (0.432 g, 84% prinos). Maseni spektar m/z 383, 385 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 24:

[0343] Rastvor etil 5-bromo-8-karbamol-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-2-karboksilata (10.0 g, 26.1 mmol) u THF (200 mL) na -78 °C je tretiran kapima preko 30 minuta sa 1.6 M metillitijumom u etru (49 mL, 78 mmol). Smeša je mešana na -78 °C tokom 45 minuta, zatim je tretirana sa dodatnim metillitijum rastvorom (33 mL) preko 25 minuta. Smeša je mešana na -78 °C tokom dodatnih 90 minuta, zatim je tretirana sa zasićenim vodenim NH4Cl i zagrevana na sobnoj temperaturi. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana je sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je razblažen u EtOAc (oko 100 mL) i filtriran kroz podlogu CELITE® koja je prekrivena sa podlogom od silika gela, koji je ispran dalje sa EtOAc (oko 1000 mL). Koncentracija filtrata dala je racemski 5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid kao bledo žutu čvrstu supstancu (9.24 g, 96% prinos). Maseni spektar m/z 369, 371 (M+H)<+>. ALTERNATIVNA SINTEZA INTERMEDIJERA 24:

[0344] Rastvoru etil 5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-2-karboksilata (10.0 g, 26.1 mmol) u tetrahidrofuranu (200 mL) na -78 °C je dodat metillitijum (1.6 M u etru) (3 ekvi.; 49 mL, 78 mmol) kapima preko 30 min. Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 45 minuta. Dodatna 2 ekvivalenta metillitijuma (33 mL) je dodato preko 25 min., i reakciona smeša je mešana na -78 °C dodatnih 1.5 sat. Reakcija je kvenčovana na -78 °C sa zasićenim vodenim rastvorom amonijum hlorida i zagrevana do sobne temperature. Smeša je razblažena sa etil acetatom, isprana sa vodom, i isprana sa slanim rastvorom. Organski sloj je sakupljen, i vodeni slojevi su sekvencijalno ekstrahovani sa etil acetatom. Kombinovani organski slojevi su osušeni preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen u ∼100 mL etil acetata i filtriran kroz podlogu CELITE® koja je prekrivena sa podlogom od silika gela u fritovani levak od 600 mL korišćenjem etil acetata (∼1 L). Koncentracija pod sniženim pritiskom je dala 5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-3-karboksimida (9.24 g, 25.03 mmol, 96% prinos) kao bledo žutu čvrstu supstancu.

INTERMEDIJERI 25 I 26 (R)-5-BROMO-6-FLUORO-2-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (I-25), I

(S)-5-BROMO-6-FLUORO-2-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (I-26)

[0345]

[0346] Uzorak racemskog 5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamida [Intermedijer 24] je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® OD-H (3 x 25 cm, 5µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 150 mL/min, 40 °C. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (R)-5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid [Intermedijer 25]. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (S)-5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid [Intermedijer 26]. Maseni spektar i<1>H NMR spektar dva enantiomera su isti. Maseni spektar m/z 369, 371 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.96 (s, 1H), 8.07 (br. s., 1H), 7.55 (d, J=10.3 Hz, 1H), 7.50 (br. s., 1H), 4.24 (s, 1H), 3.26 (dd, J=15.8, 4.4 Hz, 1H), 2.93 (dd, J=17.1, 4.6 Hz, 1H), 2.72 (t, J=11.7 Hz, 1H), 2.48-2.40 (m, 1H), 2.12 (d, J=9.2 Hz, 1H), 1.70-1.62 (m, 1H), i 1.32 (qd, J=12.4, 5.3 Hz, 1H).

ALTERNATIVNO SFC RAZDVAJANJE DA SE DOBIJE INTERMEDIJER 26:

[0347] CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (55:45) na 150 mL/min, 40 °C. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (S)-5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid [Intermedijer 26]. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (R)-5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid [Intermedijer 25].

INTERMEDIJER 27 4-BROMO-3-FLUORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID

[0348]

INTERMEDIJER 27A: 4-BROMO-7-ETOKSIKARBONIL-3-FLUORO-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSILNA KISELINA

[0349]

[0350] Rastvor 5-bromo-2-(etoksikarbonil)-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilne kiseline (2.87 g, 7.47 mmol) i 2,3-dihloro-5,6-dicijanobenzohinona (3.73 g, 16.4 mmol) u THF (45 mL) je zagrevan na 60 °C tokom 90 minuta. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc (oko 50 mL) i mešana tokom 60 minuta. Dobijeni talog je prikupljen filtracijom, ispran sa EtOAc i osušen. Filtrat je koncentrovan, i ostatak je triturisan sa MeOH sa sonifikacijom, filtriran, i talog je ispran sa MeOH i osušen. Dva taloga su kombinovana da se dobije 4-bromo-7-etoksikarbonil-3-fluoro-9H-karbazol-1-karboksilna kiselina kao bledo žuta čvrsta supstanca (2.39 g, 84% prinos). Maseni spektar m/z 380, 382 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 26B: ETIL 5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-FLUORO-9H-KARBAZOL-2-KARBOKSILAT

[0351]

[0352] Smeša 4-bromo-7-(etoksikarbonil)-3-fluoro-9H-karbazol-1-karboksilne kiseline (2.39 g, 6.29 mmol), EDC (1.81 g, 9.43 mmol) i HOBT (1.44 g, 9.43 mmol) u THF (30 mL) i DCM (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Amonijum hidroksid (0.367 mL, 9.43 mmol) je dodat, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 4 sata. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana dva puta sa zasićenim vodenim NaHCO3, zatim sa slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je triturisan sa MeOH sa sonifikacijom da se dobije etil 5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-9H-karbazol-2-karboksilat kao bledo žuta čvrsta supstanca (2.26 g, 95% prinos). Maseni spektar m/z 379, 381 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 12.02 (s, 1H), 8.70 (d, J=8.3 Hz, 1H), 8.51 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.29 (br. s., 1H), 8.10 (d, J=10.3 Hz, 1H), 7.87 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 7.74 (br. s., 1H), 4.37 (q, J=6.9 Hz, 2H), i 1.37 (t, J=7.1 Hz, 3H).<1>H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ 8.77 (d, J=8.2 Hz, 1H), 8.36 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.83 (d, J=8.2 Hz, 1H), 7.46 (d, J=8.2 Hz, 1H), 4.12 (q, J=7.0 Hz, 2H), 1.58-1.36 (m, 4H), i 1.26 (t, J=7.2 Hz, 3H).

ALTERNATIVNA SINTEZA ETIL 5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-FLUORO-9H-KARBAZOL-2-KARBOKSILATA:

[0353] Smeša etil 5-bromo-8-karbamoil-9H-karbazol-2-karboksilata [sintetisana u skladu sa procedurom opisanom u američkom patentu br.8,084,620, Intermedijer 48-1] (0.100 g, 0.277 mmol) i 1-(hlorometil)-4-fluoro-1,4-diazoniabiciklo[2.2.2]oktan bis(tetrafluoroborat) [SELECTFLUOR®] (0.100 g, 0.554 mmol) u THF (2 mL) i MeCN (2 mL) je zagrevana na 60 °C preko noći. Ohlađena smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen korišćenjem reverzno-fazne preparativne HPLC da se dobije etil 5-bromo-8-karbamoil-3-fluoro-9H-karbazol-2-karboksilat čvrsta supstanca žutomrke boje (0.035 g).

INTERMEDIJER 27:

[0354] Rastvor etil 5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-9H-karbazol-2-karboksilata (0.500 g, 1.32 mmol) u THF (9.0 mL) na -78 °C je tretiran kapima preko 10 minuta sa 1.6 M metillitijuma u etru (2.47 mL, 3.96 mmol). Smeša je mešana na -78 °C tokom 30 minuta, zatim je tretirana sa dodatnim rastvorom metillitijuma (1.65 mL, 2.64 mmol) i smeša je mešana na -78 °C 45 minuta više. Smeša je tretirana sa zasićenim vodenim NH4Cl i ostavljena je da se hladi do sobne temperature. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani da obezbede bledo žutu čvrstu supstancu koja je prečišćena reverzno faznom preparativnom HPLC. Odgovarajuće frakcije su neutralizovane sa zasićenim vodenim NaHCO3i koncentrovane. Ostatak je podeljen između EtOAc i vode, i organski sloj je ispran slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani da se dobije 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao bledo žuta čvrsta supstanca (0.240 g, 50% prinos). Maseni spektar m/z 347, 349 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.58 (s, 1H), 8.50 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.22 (br. s., 1H), 7.96 (d, J=10.3 Hz, 1H), 7.94 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.65 (br. s., 1H), 7.39 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 5.09 (s, 1H), i 1.51 (s, 6H).

ALTERNATIVNA SINTEZA 4-BROMO-3-FLUORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMIDA:

[0355] Rastvor etil 5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-9H-karbazol-2-karboksilata (10 g, 26.4 mmol) u THF (300 mL) je ohlađen u ledeno-vodenom kupatilu i tretiran je kapima sa 3.0 M metilmagnezijum hlorida u THF (70.3 mL, 211 mmol). Rastvor je mešan na 0 °C tokom 18 sati. Smeša je sipana u 1000 mL dobro izmešanog zasićenog vodenog NH4Cl koji je ohlađen u ledeno-vodenom kupatilu. Dobijena smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana dva puta EtOAc. Kombinovane organske faze isprane su dva puta sa vodom, zatim sa slanim rastvorom, i osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-DCM (gradijent od 20-100%), da se dobije 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (6.36 g, 65% prinos). INTERMEDIJER 28 4-BROMO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-3-METIL-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID

[0356]

INTERMEDIJER 28A: 5-BROMO-2-JODO-4-METILANILIN

[0357]

[0358] Rastvor 3-bromo-4-metilanilin (5.00 g, 26.9 mmol), N-jodosukcinimid (4.53 g, 20.2 mmol) i bis(piridin)jodonijum tetrafluoroborat (2.70 g, 7.26 mmol) u DCM (100 mL) je mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa DCM, isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHSO3 i vodom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima(sekvencijalno 1%, 2% i 3%), da se dobije 5-bromo-2-jodo-4-metilanilin kao žuta čvrsta supstanca (5.27 g, 63% prinos). Maseni spektar m/z 312, 314 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.49 (d, J=0.6 Hz, 1H), 6.94 (s, 1H), 4.17-3.91 (br.s, 2H), i 2.25 (s, 3H).

INTERMEDIJER 28B: 2-AMINO-4-BROMO-5-METILBENZONITRIL

[0359]

[0360] Smeša 5-bromo-2-jodo-4-metilanilin (5.25 g, 16.8 mmol) i cink cijanida (0.988 g, 8.41 mmol) u DMF (80 mL) je podvrgnuta tri puta ciklusu pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa tetrakis(trifenilfosfin)paladijumom (0.972 g, 0.841 mmol) i zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa 10% vodenog LiCl (dva puta) i slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 1%, 2.5%, 5% i 50%), da se dobije braon čvrsta supstanca. Ostatak je dalje prečišćen trituracijom sa MeOH da se dobiju tri grupe čvrstih supstanci. Filtrat je ponovo prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (5%, zatim 10%). Dobijena čvrsta supstanca je kombinovana sa drugim grupama da se dobije 2-amino-4-bromo-5-metilbenzonitril kao čvrsta supstanca žutomrke boje (2.95 g, 83% prinos). Maseni spektar m/z 211, 213 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 28C: 2-AMINO-4-BROMO-5-METILBENZOEVA KISELINA [0361]

[0362] Smeša 2-amino-4-bromo-5-metilbenzonitrila (2.95 g, 14.0 mmol) u smeši EtOH (21 mL) i 2 M vodenog NaOH (34.9 mL, 69.9 mmol) je zagrevana uz refluks preko noći. Nakon hlađenja do sobne temperature, etanol je uklonjen pod sniženim pritiskom, i vodeni ostatak je razblažen sa vodom. Nakon podešavanja pH do oko 5 sa koncentrovanom vodenom HCl, smeša je mešana tokom 30 min i talog je sakupljen filtracijom i ispran sa vodom. Dobijena vlažna čvrsta supstanca je razblažena u EtOAc, isprana slanim rastvorom, osušena i koncentrovana da se dobije 2-amino-4-bromo-5-metilbenzoeva kiselina kao bledo žuto čvrsta supstanca (2.92 g, 91% prinos). Maseni spektar m/z 212, 214 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 28D: HIDROHLORID 4-BROMO-2-HIDRAZINIL-5-METILBENZOEVE KISELINE

[0363]

[0364] Suspenzija 2-amino-4-bromo-5-metilbenzoeva kiselina (2.92 g, 12.7 mmol) u smeši od 37% vodenog HCl (12.7 mL) i vode (4.3 mL), ohlađena u kupatilu sa NaCl i ledom, je tretirana polako kapima sa rastvorom natrijum nitrita (0.963 g, 14.0 mmol) u vodi (4.5 mL). Dobijena smeša je mešana tokom 45 min, zatim je tretirana sporo kapima sa rastvorom u kalaj (II) hlorid dihidratu (8.59 g, 38.1 mmol) u 37% vodenog HCl (8.2 mL). Kupatilo za hlađenjeje uklonjena, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Smeša je filtrirana, i sakupljeni talog je ispran sa vodom i osušen. Čvrsta supstanca je triturisana i sonifikovana u MeOH, i smeša je koncentrovana. Ostatak je triturisan i sonifikovan sa DCM, i talog je sakupljen filtracijom i ispran sa DCM da se dobije hidrohlorid 4-bromo-2-hidrazinil-5-metilbenzoeve kiseline kao bela čvrsta supstanca (2.17 g, 61% prinos). Maseni spektar m/z 245, 247 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 28E: 5-BROMO-2-(ETOKSIKARBONIL)-6-METIL-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSILNA KISELINA

[0365]

[0366] Smeša hidrohlorida 4-bromo-2-hidrazinil-5-metilbenzoeve kiseline (2.17 g, 7.71 mmol), etil 3-oksocikloheksanekarboksilata (1.44 g, 8.48 mmol) i sirćetne kiseline (1.32 mL, 23.1 mmol) u toluenu (40 mL) je zagrevana u uljanom kupatilu na 117 °C tokom 5 sati. Smeša je koncentrovana i osušena pod vakuumom, i ostatak je razblažen sa toluenom (18 mL) i TFA (4.5 mL). Smeša je zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, sonifikovana, i talog je sakupljen filtracijom i ispran sa EtOAc da se dobije žuta čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan i ostatak je suspendovan u EtOAc sa sonifikacijom.

Talog je prikupljen filtracijom i kombinovan sa prvim talogom. Čvrsta supstanca je triturisana sa MeOH da se dobije 5-bromo-2-(etoksikarbonil)-6-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilna kiselina kao bledo žuta čvrsta supstanca (1.60 g, 55% prinos). Maseni spektar m/z 380, 382 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 28F: 4-BROMO-7-(ETOKSIKARBONIL)-3-METIL-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSILNA KISELINA

[0367]

[0368] Rastvor 5-bromo-2-(etoksikarbonil)-6-metil-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilne kiseline (1.60 g, 4.21 mmol) i 2,3-dihloro-5,6-dicijanobenzohinona (2.10 g, 9.26 mmol) u THF (45 mL) je zagrevan na 60 °C tokom 60 minuta. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc (oko 70 mL), mešana je 15 minuta, i talog je prikupljen filtracijom, ispran sa EtOAc i osušen. Filtrat je koncentrovan, i ostatak je triturisan sa MeOH, filtriran, i sakupljeni talog je ispran sa MeOH. Dve čvrste supstance kombinovane su da se dobije 4-bromo-7-(etoksikarbonil)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksilna kiselina kao bledo žuta čvrsta supstanca (1.40 g, 88% prinos). Maseni spektar m/z 376, 378 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 28G: ETIL 5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-METIL-9H-KARBAZOL-2-KARBOKSILAT

[0369]

[0370] Smeša 4-bromo-7-(etoksikarbonil)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksilne kiseline (1.40 g, 3.72 mmol), EDC (1.070 g, 5.58 mmol), i HOBT (0.855 g, 5.58 mmol) u smeši THF (30 mL) i DCM (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 60 min. Amonijum hidroksid (0.217 mL, 5.58 mmol) je dodat, i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa zasićenim vodenim NaHCO3. Fazno odvajanje nije moguće postići, tako da je smeša filtrirana, i prikupljena čvrsta supstanca je isprana sekvencijalno sa vodom i EtOAc, triturisana sa MeOH i osušena. Filtrat EtOAc-voda je odvojen i organska faza je isprana sa slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je triturisan sa MeOH, i dobijena čvrsta supstanca je kombinovana sa prvom čvrstom supstancom da se dobije etil 5-bromo-8-karbamoil-6-metil-9H-karbazol-2-karboksilat kao prljavo bela čvrsta supstanca (1.27 g, 91% prinos). Maseni spektar m/z 375, 377 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.88 (s, 1H), 8.77 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.48 (d, J=0.9 Hz, 1H), 8.20 (br. s., 1H), 7.84 (dd, J=8.5, 1.4 Hz, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 4.37 (q, J=7.0 Hz, 2H), 2.55 (s, 3H), i 1.37 (t, J=7.0 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 28:

[0371] Rastvor etil 5-bromo-8-karbamoil-6-metil-9H-karbazol-2-karboksilata (0.500 g, 1.33 mmol) u THF (12 mL) na -78 °C je tretiran kapima preko 10 minuta sa 1.6 M metillitijuma u etru (2.50 mL, 4.00 mmol). Smeša je mešana na -78 °C tokom 30 minuta, zatim je tretirana sa dodatnim rastvorom metillitijuma (1.67 mL, 2.67 mmol). Nakon još 30 minuta, dodatni rastvor metillitijuma (1.67 mL, 2.67 mmol) je dodat i mešanje je nastavljeno tokom 45 min. Smeša je zatim tretirana sa zasićenim vodenim NH4Cl i ostavljena je da se zagreje do sobne temperature. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani da se obezbedi prljavo bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je triturisana i sonifikovana sa MeOH i sakupljena filtracijom. Filtrat je prečišćen reverznofaznom preparativnom HPLC. Odgovarajuće frakcije su tretirane sa zasičenim vodenim NaHCO3 i koncentrovane. Ostatak je podeljen između EtOAc i vode. Organska faza je isprana sa slanim rastvorom, i vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani, i ostatak je kombinovan sa prvom čvrstom supstancom da se dobije 4-bromo-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksamid kao čvrsta supstanca žuto mrke boje (0.409 g, 85% prinos). Maseni spektar m/z 343, 345 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.42 (s, 1H), 8.56 (d, J=8.6 Hz, 1H), 8.12 (br. s., 1H), 7.91-7.89 (m, 2H), 7.48 (br. s., 1H), 7.36 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 5.06 (s, 1H), 2.53 (s, 3H), i1.51 (s, 6H).

INTERMEDIJER 29 5-BROMO-6-HLORO-2-(RS)-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (RACEMSKA SMEŠA)

[0372]

INTERMEDIJER 29A: HIDROHLORID 4-BROMO-5-HLORO-2-HIDRAZINILBENZOEVE KISELINE

[0373]

[0374] Rastvor natrijum nitrita (3.03 g, 43.9 mmol) u vodi (14.8 mL) je dodat kapima u ohlađenu (-10 °C, kupatilo sa NaCl i ledom) suspenziju 2-amino-4-bromo-5-hlorobenzoeve kiseline (10.0 g, 39.9 mmol) u 37% vodenog HCl (39.9 mL) i vode (13.3 mL), pri takvoj brzini da temperatura nije prelazila 0 °C. Dobijena suspenzija je mešana na 0 °C tokom 15 min, zatim je tretirana sa rastvorom kalaj (II) hlorid hidrata (22.7 g, 120 mmol) u 37% vodenog HCl (17 mL). Dobijena smeša je zagrevana do sobne temperature i mešana tokom 60 min. Talog je prikupljen filtracijom, ispran sa vodom i osušen na vazduhu preko noći da se dobije hidrohorid 4-bromo-5-hloro-2-hidrazinilbenzoeve kiseline kao prljavo bela čvrsta supstanca (12.86 g, 96% prinos). Maseni spektar m/z 365, 267 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9.05 (br. s., 1H), 7.95 (s, 1H), 7.55 (s, 1H).

INTERMEDIJER 29B: 5-BROMO-6-HLORO-2-(ETOKSIKARBONIL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSILNA KISELINA

[0375]

[0376] Suspenzija hidrohlorida 4-bromo-5-hloro-2-hidrazinilbenzoeve kiseline (12.89 g, 37.6 mmol), etil 3-oksocikloheksankarboksilat (7.03 g, 41.3 mmol), i sirćetne kiseline (6.45 mL, 113 mmol) u toluenu (188 mL) je zagrevana na 105 °C preko noći. Posle 16 sati, još sirćetne kiseline (6 mL) i etil 3-oksocikloheksankarboksilata (2.00 g) je dodato i smeša je zagrevana na 110 °C 4.5 sata. Smeša je koncentrovana, i ostatak je kombinovan sa toluenom (100 mL) i TFA (20 mL). Suspenzija je zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je suspendovan u EtOAc. Dobijena čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom, isprana sa EtOAc i osušena na vazduhu da se dobije 5-bromo-6-hloro-2-(etoksikarbonil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilna kiselina kao žuta čvrsta supstanca (11.0 g, 73% prinos). Maseni spektar m/z 400, 402 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.44 (br. s., 1H), 11.24 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 4.12 (qd, J=7.1, 2.3 Hz, 2H), 3.23-2.81 (m, 5H), 2.23-2.09 (m, 1H), 1.91-1.75 (m, 1H), 1.22 (t, J=7.0 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 29C: ETIL 5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-HLORO-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-2-KARBOKSILAT

[0377]

[0378] Nakon procedure koja je korišćena da se pripremi Intermedijer 24D, 5-bromo-6-hloro-2-(etoksikarbonil)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilna kiselina je pretvorena u etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-2-karboksilat kao svetlo braon čvrsta supstanca (8.54 g, 78% prinos). Maseni spektar m/z 399, 401 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 13.44 (br. s., 1H), 11.24 (s, 1H), 7.69 (s, 1H), 4.12 (qd, J=7.1, 2.3 Hz, 2H), 3.23-2.81 (m, 5H), 2.23-2.09 (m, 1H), 1.91-1.75 (m, 1H), 1.22 (t, J=7.0 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 29:

[0379]

Rastvor etil 5-bromo-8-karbamoil-6-hloro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-2-karboksilata (7.03 g, 17.6 mmol) u THF (200 mL) je ohlađen u kupatilu sa suvim ledom i acetonom i tretiran u delovima preko 40 minuta sa 1.6 M metillitijuma u THF (66.0 mL, 106 mmol). Posle 60 minuta, smeša je polako tretirana na -78 °C sa zasićenim vodenim NH4Cl i mešana 10 minuta uz zagrevanje do sobne temperature. Smeša je ekstrahovana 3 puta sa DCM, i kombinovane organske faze su isprane sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (120 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije 5-bromo-6-hloro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid kao žuta čvrsta supstanca (4.66 g). Maseni spektar m/z 385, 387 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11-08 (s, 1H), 8.13 (br. s., 1H), 7.76 (s, 1H), 7.50 (br. s., 1H), 3.28 (d, J=5.5 Hz, 1H), 2.94 (dd, J=17.1, 4.7 Hz, 1H), 2.79-2.66 (m, 1H), 2.49-2.39 (m, 1H), 2.14 (d, J=9.5 Hz, 1H), 1.66 (td, J=11.4, 4.1 Hz, 1H), 1.33 (qd, J=12.4, 5.2 Hz, 1H), 1.15 (s, 6H).

INTERMEDIJERI 30 I 31 (R)-5-BROMO-6-HLORO-2-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (I-30), I

(S)-5-BROMO-6-HLORO-2-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (I-31)

[0380]

[0381] Uzorak racemskog 5-bromo-6-hloro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamida [Intermedijer 29] (2.35 g) je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® IA (3 x 25 cm, 5µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (50:50) na 124 mL/min, 100 bara, 45 °C; pripremanje uzorka: 39 mg/ mL u MeOH-DMSO (4:1); ubrizgavanje: 2.33 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (R) izomer, (R)-5-bromo-6-hloro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid [Intermedijer 30] kao žutu čvrstu supstancu (1.15 g). Maseni spektar m/z 385, 387 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.07 (s, 1H), 8.12 (br. s., 1H), 7.75 (s, 1H), 7.57-7.45 (m, 1H), 4.23 (s, 1H), 3.27 (d, J=4.7 Hz, 1H), 2.93 (dd, J=17.2, 4.7 Hz, 1H), 2.78-2.67 (m, 1H), 2.48-2.39 (m, 1H), 2.16-2.08 (m, 1H), 1.69-1.59 (m, 1H), 1.37-1.26 (m, 1H), 1.14 (s, 6H).

[0382] Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje (S) izomer, (S)-5-bromo-6-hloro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid [Intermedijer 31] kao prljavo belu čvrstu supstancu (0.92 g). Maseni spektar m/z 385, 387 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.06 (s, 1H), 8.12 (br. s., 1H), 7.74 (s, 1H), 7.49 (br. s., 1H), 4.23 (s, 1H), 3.27 (d, J=5.0 Hz, 1H), 2.93 (dd, J=17.1, 4.6 Hz, 1H), 2.72 (t, J=11.8 Hz, 1H), 2.48-2.37 (m, 1H), 2.12 (d, J=9.2 Hz, 1H), 1.69-1.59 (m, 1H), 1.38-1.24 (m, 1H), 1.14 (s, 6H).

[0383] Apsolutna konfiguracija intermedijera 30 je potvrđena pojedinačnom kristalnom rengenskom analizom kristala kojii su pripremljeni rastvaranjem jedinjenja koja su pripremljena u višku 1,2-dihloroetan/EtOAc/sirćetne kiseline i sporim evaporisanjem rastvarača na sobnoj temperaturi da se dobije solvat di-sirćetne kiseline. Dimenzije jedinične ćelije: a = 11.690(2)Å, b = 7.0901(9)Å, c = 14.427(3)Å, α = 90°, β = 110.607(5)°, γ = 90°; Zapremina = 1119.2(3) Å<3>; Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 560 Å<3>; Prostorna grupa: P21; Molekuli intermedijera 30/asimetrična jedinica (Z'): 1; Gustina, kalc g-cm<-3>: 1.501. Frakcione atomske koordinate na sobnoj temperaturi su date su u tabeli 8, i opis strukture je prikazan na slici 1.

Tabela 8

INTERMEDIJER 32 5-METOKSI-2-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-1,3 (2H)-DION [0384]

INTERMEDIJER 32A: ETIL 2-(3-METOKSIPIRIDIN-2-IL)ACETAT

[0385]

[0386] Mešani rastvor diizopropilamina (0.385 mL, 2.70 mmol) u THF (2 mL) na 0 °C je tretiran sporo sa 1.6 M n-butillitijuma u heksanima (1.69 mL, 2.70 mmol). Smeša je mešana tokom 15 minuta, zatim je dodata preko 5 minuta u mešani rastvor 3-metoksi-2-pikolina (0.133 g, 1.08 mmol) i dietil karbonata (0.262 mL, 2.16 mmol) u THF (5 mL) na -78 °C. Nakon mešanja tokom drugih 45 minuta, kupatilo za hlađenje je uklonjeno i mešanje je nastavljeno preko noći na sobnoj temperaturi. Smeša je tretirana sa zasićenim vodenim NH4Cl i razblažena sa EtOAc. Organska faza je odvojena, isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (12 g), eluiranjem sa 50% EtOAc-heksanima, da se dobije etil 2-(3-metoksipiridin-2-il)acetat kao ulje (0.17 g, 81% prinos). Maseni spektar m/z 196 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 32B: NATRIJUM 2-(3-METOKSIPIRIDIN-2-IL)ACETAT

[0387]

[0388] Mešani rastvor etil 2-(3-metoksipiridin-2-il)acetata (0.17 g, 0.871 mmol) u THF (2.5 mL) na sobnoj temperaturi je tretiran sa 3 M vodenog NaOH (0.581 mL, 1.74 mmol). Nakon 7 sati, smeša je koncentrovana da se ukloni THF i vodeni ostatak je zamrznut na suvom ledu i liofilizovan da se dobije natrijum 2-(3-metoksipiridin-2-il)acetat kao bela čvrsta supstanca. Kvantitativni prinos je pretpostavljen i materijal koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 168 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 32C: N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-2-(3-METOKSIPIRIDIN-2-IL) ACETAMID

[0389]

[0390] Smeša natrijum 2-(3-metoksipiridin-2-il)acetata (0.166 g, 0.871 mmol), 3-bromo-2-metilanilina (0.118 mL, 0.958 mmol), DIEA (0.608 mL, 3.48 mmol) i HATU (0.397 g, 1.05 mmol) u DMF (4.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 1 sata, smeša je razblažena sa EtOAc i isprana dva puta sa 10% vodenog LiCl, zatim sa slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu da se dobije N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(3-metoksipiridin-2-il)acetamid kao bledo žuta čvrsta supstanca (0.213 g, 73% prinos). Maseni spektar m/z 335, 337 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 32D: 2-(3-METOKSIPIRIDIN-2-IL)-N-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)ACETAMID

[0391]

[0392] Smeša N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(3-metoksipiridin-2-il)acetamida (4.00 g, 11.9 mmol) i 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (3.48 g, 13.7 mmol) u DMSO (7 mL) i dioksanu (35 mL) je proključala sa argonom za 5 minuta, zatim je tretirana sa kalijum acetatom (2.93 g, 29.8 mmol). Ključanje je nastavljeno 2 minuta, zatim je smeša tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.487 g, 0.597 mmol). Reakciona posuda je zatvorena i zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je filtriran kroz čep od silika gela SA 60% EtOAc-heksanima, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije 2-(3-metoksipiridin-2-il)-N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)acetamid kao čvrsta supstanca žuto mrke boje (5.1 g, 82% prinos).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 9.65 (br. s., 1H), 8.20 (dd, J=4.3, 1.7 Hz, 1H), 8.14 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.54 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.24-7.17 (m, 3H), 4.01 (s, 2H), 3.88 (s, 3H), 2.45 (s, 3H), 1.35 (s, 12H).

Intermedijer 32:

[0393] Smeša 2-(3-metoksipiridin-2-il)-N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)acetamida (1.45 g, 3.78 mmol) i CDI (2.45 g, 15.1 mmol) u toluenu (19 mL) je zagrevana na 110 °C 3 h. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organski sloj je ispran sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije 5-metoksi-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c] pirimidin-1,3(2H)-dion kao žuta čvrsta supstanca (0.571 g, 37% prinos). Maseni spektar m/z 409 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 7.96 (d, J=7.0 Hz, 1H), 7.91 (dd, J=7.4, 1.2 Hz, 1H), 7.33 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.22 (dd, J=7.8, 1.2 Hz, 1H), 6.39-6.30 (m, 2H), 6.24 (s, 1H), 3.93 (s, 3H), 2.34 (s, 3H), 1.34 (s, 12H).

INTERMEDIJER 33 5-HLORO-2-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-1,3(2H)-DION (RACEMSKA SMEŠA)

[0394]

INTERMEDIJER 33A: DIETIL 2-(3-HLOROPIRIDIN-2-IL)MALONAT

[0395]

[0396] Smeša 3-hloro-2-fluoropiridina (5.00 g, 38.0 mmol), dietil malonata (14.6 g, 91 mmol) i Cs2CO3 (29.7 g, 91 mmol) u DMSO (42 mL) je zagrevana na 100 °C tokom 7 sati. Nakon mešanja preko noći na sobnoj temperaturi, smeša je razblažena sa EtOAc, isprana dva puta sa vodom, zatim sa slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane da se dobije sirovi dietil 2-(3-hloropiridin-2-il) malonat kao bezbojno ulje, koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 272 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 33B: ETIL 2-(3-HLOROPIRIDIN-2-IL)ACETAT

[0397]

[0398] Smeša dietil 2-(3-hloropiridin-2-il) malonata (10.32 g, 38 mmol), natrijum hlorida (5.55 g, 95 mmol) i vode (3.42 mL, 190 mmol) u DMSO (40 mL) je zagrevana na 145 °C tokom 8 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa EtOAc i isprana dva puta sa vodom, zatim sa slanim rastvorom. Organska faza je osušena i koncentrovana da se dobije sirovi etil 2-(3-hloropiridin-2-il)acetat, koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 200 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 33C: NATRIJUM 2-(3-HLOROPIRIDIN-2-IL)ACETAT

[0399]

[0400] Rastvor etil 2-(3-hloropiridin-2-il)acetata (7.59 g, 38 mmol) u THF (76 mL) je tretiran na sobnoj temperaturi sa 3 M vodenim NaOH (25.3 mL, 76 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći i koncentrovana da se ukloni THF. Vodeni ostatak je zamrznut na suvom ledu i liofilizovan da se dobije natrijum 2-(3-hloropiridin-2-il)acetat kao prljavo bela čvrsta supstanca, koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 172 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 33D: N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-2-(3-HLOROPIRIDIN-2-IL)ACETAMID

[0401]

[0402] Smeša natrijum 2-(3-hloropiridin-2-il)acetata (7.39 g, 38 mmol), 3-bromo-2-metilanilina (4.7 mL, 38.4 mmol), DIEA (13.3 mL, 76 mmol) i HATU (14.6 g, 38.4 mmol) u DMF (127 mL) je mešana na sobnoj temperaturi. Posle 90 minuta smeša je razblažena sa EtOAc i isprana dva puta sa 10% LiCl, zatim sa slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane do male zapremine. Rastvor je zasejan sa kristalom iz ranije grupe i omogućeno je da ostane preko noći da se dobije talog koji je prikupljen filtracijom i ispran sa 50% EtOAc-heksanima da se dobije bela čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan i rekristalizovan slično tri puta da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Čvrste supstance su kombinovane da se dobije N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(3-hloropiridin-2-il)acetamid kao bela čvrsta supstanca (11.43 g, 89% prinos). Maseni spektar m/z 339, 341 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 9.76 (br. s., 1H), 8.52 (d, J=3.5 Hz, 1H), 7.92 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.80 (dd, J=8.1, 1.1 Hz, 1H), 7.36 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.32-7.23 (m, 1H), 7.06 (t, J=8.0 Hz, 1H), 4.16 (s, 2H), 2.39 (s, 3H).

INTERMEDIJER 33E: 2-(3-HLOROPIRIDIN-2-IL)-N-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)ACETAMID

[0403]

[0404] Smeša N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(3-hloropiridin-2-il)acetamida (4.0 g, 11.78 mmol) i 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (3.29 g, 12.96 mmol) u DMSO (5 mL) i dioksanu (25 mL) je ključao sa argonom tokom 7 min, što je praćeno dodavanjem kalijum acetata (2.89 g, 29.4 mmol). Ključanje argona nastavljeno je 7 minuta nakon čega je PdCl2(dppf) DCM adukt (0.481 g, 0.589 mmol) dodat. Smeša je zahgrevana na 90 °C tokom 7 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana kroz CELITE®. Filtrat je ispran sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane. Ostatak je rekristalizovan iz EtOAc da se dobije bela čvrsta supstanca. Matična tečnost je koncentrovana i ostatak je rekristalizovan iz EtOAc. Dve čvrste supstance su kombinovane da se obezbedi 2-(3-hloropiridin-2-il)-N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)acetamid kao bela čvrsta supstanca (3.88 g, 85% prinos). Maseni spektar m/z 387 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 33:

[0405] Smeša 2-(3-hloropiridin-2-il)-N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)acetamida (0.192 g, 0.497 mmol) i CDI (0.322 g, 1.986 mmol) u toluenu (2 mL) je zagrevana na 110 °C. Posle 5 sati, ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije racemski 5-hloro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion kao svetlo žuta čvrsta supstanca (0.133 g, 65% prinos). Maseni spektar m/z 413 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.26 (dt, J=7.6, 0.9 Hz, 1H), 7.94 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.36 (t, J=7.6 Hz, 1H), 7.27-7.18 (m, 2H), 6.36 (t, J=7.3 Hz, 1H), 6.31 (s, 1H), 1.57 (s, 3H), 1.36 (s, 12H).

INTERMEDIJERI 34 I 35 5-HLORO-2-(R)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-1,3(2H)-DION (I-34), I 5-HLORO-2-(S)-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-1,3(2H)-DION (1-35)

[0406]

[0407] Uzorak racemskog 5-hloro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 33] je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: WHELK-O® R,R (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (55:45) na 200 mL/min, 100 bara, 35 °C; pripremanje uzorka: 96 mg/ mL u MeCN-DCM (1:4); ubrizgavanje: 5 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 5-hloro-2-(R)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion [Intermedijer 34]. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 5-hloro-2-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion [Intermedijer 35]. Maseni spektar i<1>H NMR za svaki enantiomerni atropizomer bili su isti kao oni za Intermedijer 33.

[0408] Alternativno, uzorak racemskog 5-hloro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion [Intermedijer 33] je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: WHELK-O® R,R (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-CH3CN (55:45) na 200 mL/min, 100 bara, 35 °C; pripremanje uzorka: 96 mg/ mL u MeCN-DCM (1:4); ubrizgavanje: 5 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 5-hloro-2-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c] pirimidin-1,3(2H)-dion [Intermedijer 35].

Materijal može dalje da bude prečišćen rastvaranjem u THF, razblaživanjem sa heksanima i sakupljanjem taloga filtracijom.

[0409] Apsolutna konfiguracija intermedijera 35 potvrđena je jedinstvenom kristalnom rendgenskom analizom kristala koji su pripremljeni razblaživanjem jedinjenja u višku acetona i sporim evaporisanjem rastvarača na sobnoj temperaturi. Dimenzije jedinične ćelije: a = 19.6161(8) Å, b = 9.1411(4) Å, c = 12.7541(6) Å, α = 90°, β = 113.165(2)°, γ = 90°; Prostorna grupa: C2; Molekuli intermedijera 35/asimetrična jedinica (Z'): 1; Gustina, kalc gcm<-3>: 1.304. Frakcione atomske koordinate na sobnoj temperaturi su date u tabeli 9, i opis strukture je dat na slici 2.

Tabela 9

INTERMEDIJER 36 6-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-5H-TIAZOLO[3,2-C] PIRIMIDIN-5,7(6H)-DION

[0410]

INTERMEDIJER 36A: N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-2-(TIAZOL-2-IL)ACETAMID [0411]

[0412] Smeša 3-bromo-2-metilanilina (0.764 mL, 6.20 mmol), 1,3-tiazol-2-il sirćetne kiseline (0.74 g, 5.17 mmol) i DIEA (1.63 mL, 9.30 mmol) u DMF (15 mL) je tretirana sa HATU (2.36 g, 6.20 mmol). Nakon mešanja preko noći, smeša je razblažena sa EtOAc, isprana dva puta sa 10% vodenog LiCl zatim slanim rastvorom, i kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(tiazol-2-il)acetamid kao bela čvrsta supstanca (0.681 g, 42% prinos).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 9.84-9.65 (m, 1H), 7.91 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.84 (d, J=3.3 Hz, 1H), 7.42-7.35 (m, 2H), 7.07 (t, J=8.0 Hz, 1H), 4.18 (s, 2H), 2.38 (s, 3H). INTERMEDIJER 36B: N-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-2-(TIAZOL-2-IL)ACETAMID

[0413]

[0414] Smeša N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(tiazol-2-il)acetamid (0.53 g, 1.70 mmol) 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (0.476 g, 1.87 mmol) i kalijum acetata (0.418 g, 4.26 mmol) u DMSO (1.6 mL) i dioksana (8 mL) je ključala sa azotom 5 minuta, što je praćeno dodavanjem PdCl2(dppf) DCM adukta (0.070 g, 0.085 mmol). Nakon ključanja sa azotom sledećih 5 minuta, smeša je zagrevana na 90 °C tokom 7 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana kroz CELITE®. Filtrat je ispran sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa 50% EtOAc-heksanima, da se dobije N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-2-(tiazol-2-il)acetamid kao prljavo bela čvrsta supstanca (0.45 g, 74% prinos). Maseni spektar m/z 359 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 36:

[0415] Smeša N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il) fenil)-2-(tiazol-2-il)acetamid (0.45 g, 1.26 mmol) i CDI (0.815 g, 5.02 mmol) u toluenu (6.5 mL) je zagrevana na 110 °C 2 sata. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, i kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa 70% EtOAc-heksanima, da se dobije blago nečist 6-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-5H-tiazolo[3,2-c]pirimidin-5,7(6H)-dion kao čvrsta supstanca žuto mrke boje (34% prinos). Materijal je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 385 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 37 RACEMSKI 5-FLUORO-2-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-1,3(2H)-DION [0416]

INTERMEDIJER 37A: DIETIL 2-(3-FLUOROPIRIDIN-2-IL)MALONAT

[0417]

[0418] Smeša 2,3-difluoropiridina (2.00 g, 17.4 mmol), Cs2CO3(13.59 g, 41.7 mmol) i dietil malonata (6.68 g, 41.7 mmol) u DMSO (19 mL) je zagrevana na 100 °C 4.5 sata. Smeša je sipana na led, razblažena sa EtOAc, i organska faza je odvojena, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 10%, 20% i 30%), da se dobije dietil 2-(3-fluoropiridin-2-il)malonat kao svetlo obojeno ulje (2.68 g, 60% prinos).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.42 (dt, J=4.6, 1.3 Hz, 1H), 7.43 (ddd, J=9.4, 8.3, 1.4 Hz, 1H), 7.30 (dt, J=8.5, 4.3 Hz, 1H), 5.09 (d, J=1.1 Hz, 1H), 4.30 (q, J=7.0 Hz, 4H), 1.33-1.26 (m, 6H).

INTERMEDIJER 37B: ETIL 2-(3-FLUOROPIRIDIN-2-IL)ACETAT

[0419]

[0420] Smeša dietil 2-(3-fluoropiridin-2-il)malonata (2.68 g, 10.5 mmol), natrijum hlorida (0.675 g, 11.6 mmol) i vode (0.378 mL, 21.0 mmol) u DMSO (15 mL) je zagrevana na 145 °C 4.5 sati. Smeša je ohlađena, razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Organska faza je osušena i koncentrovana da se dobije etil 2-(3-fluoropiridin-2-il)acetat kao svetlo obojeno ulje (1.90 g, 99% prinos) koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 184 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 37C: NATRIJUM 2-(3-FLUOROPIRIDIN-2-IL)ACETAT

[0421]

[0422] Mešani rastvor etil 2-(3-fluoropiridin-2-il)acetata (1.90 g, 10.4 mmol) u THF (26 mL) je tretiran sa 3 M vodenog NaOH (6.9 mL, 20.7 mmol) i mešan je na sobnoj temeperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana da se ukloni THF, i preostali vodeni rastvor je zamrznut i liofilizovan da se dobije natrijum 2-(3-fluoropiridin-2-il)acetat kao bela čvrsta supstanca (pretpostavljeno 100% prinos), koji je korišćen bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 156 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 3 7D: N-(3-BROMO-2-METILFENIL)-2-(3-FLUOROPIRIDIN-2-IL)ACETAMID

[0423]

[0424] Smeša natrijum 2-(3-fluoropiridin-2-il)acetata (1.847 g, 10.37 mmol), 3-bromo-2-metilanilina (1.41 mL, 11.4 mmol), DIEA (5.4 mL, 31.1 mmol) i HATU (4.73 g, 12.4 mmol) u DMF (30 mL) je mešana na sobnoj temperaturi 1.25 sati. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana dva puta sa 10% vodenog LiCl, zatim sa slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane. Ostatak je rastvoren u vrelom EtOAc, ostavljen je da se ohladi, i dobijena bela čvrsta supstanca sakupljena je filtracijom i isprana je sa 60% EtOAc-heksanima. Kombinovani filtrati su koncentrovani i ostatak je rekristalizovan dva puta korišćenjem iste procedure. Ostatak iz koncentracije krajnjeg filtrata je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije čvrsta supstanca koja je kombinovana sa rekristalizovanim grupama da se dobije N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(3-fluoropiridin-2-il)acetamid kao bela čvrsta supstanca (2.03 g, 61% prinos). Maseni spektar m/z 323, 325 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 37E: 2-(3-FLUOROPIRIDIN-2-IL)-N-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)ACETAMID

[0425]

[0426] Smeša N-(3-bromo-2-metilfenil)-2-(3-fluoropiridin-2-il)acetamida (4.20 g, 13.6 mmol) i 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (3.80 g, 14.9 mmol) u dioksanu (40 mL) je ključala sa azotom 10 minuta. Kalijum acetat (3.33 g, 34.0 mmol) je dodat u smešu, ključanje je nastavljeno narednih 5 minuta, i PdCl2(dppf) DCM adukt (0.555 g, 0.679 mmol) je dodat. Smeša je zagrevana na 100 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa DCM-metil t-butil etrom, da se dobije 2-(3-fluoropiridin-2-il)-N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)acetamid kao bela čvrsta supstanca (3.80 g, 76% prinos). Maseni spektar m/z 371 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 37:

[0427] Smeša 2-(3-fluoropiridin-2-il)-N-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)acetamida (9.01 g, 24.3 mmol) i CDI (15.78 g, 97 mmol) u toluenu (97 mL) je zagrevana na 120 °C 7 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (220 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-100%), da se dobije 5-fluoro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion kao žuta čvrsta supstanca (6.26 g, 65% prinos). Maseni spektar m/z 397 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.11 (dd, J=7.6, 0.8 Hz, 1H), 7.94 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.35 (t, J=7.5 Hz, 1H), 7.23 (dd, J=7.8, 1.4 Hz, 1H), 6.85-6.76 (m, 1H), 6.35 (td, J=7.4, 5.0 Hz, 1H), 6.09 (s, 1H), 2.36 (s, 3H), 1.36 (s, 12H).

INTERMEDIJERI 38 I 39 5-FLUORO-2-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-1,3(2H)-DION (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0428]

[0429] Uzorak racemskog 5-fluoro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 37] (7.5 g) je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALCEL® OD-H (5 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (76:24) na 280 mL/min, 100 bara, 40 °C; pripremanje uzorka: 62.5 mg/mL u DCM-MeOH (1:1); ubrizgavanje: 0.83 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje jedan atropizomer 5-fluoro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion [Intermedijer 38] kao žutu čvrstu supstancu (3.2 g, hiralna čistoća 99.3%). Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje drugi atropizomer 5-fluoro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion [Intermedijer 39] kao žutu čvrstu supstancu (2.98 g, hiralna čistoća 98.6%). Maseni spektar i<1>H NMR za oba enantiomera su isti kao za oni za Intermedijer 37.

INTERMEDIJER 40 (Z)-4-((2-HLORO-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)IMINO)-1-METIL-1H-BENZO[D][1,3]OKSAZIN-2(4H)-ON

[0430]

INTERMEDIJER 40A: N-(3-BROMO-2-HLOROFENIL)-2-(METILAMINO)BENZAMID [0431]

[0432] Smeša 3-bromo-2-hloroanilina [pripremljena u skladu sa procedurom koja je opisana u američkom patentu br. 8,242,260] (240 mg, 1.162 mmol) i toluena (10 mL) na 0 °C je polako tretirana sa 2 M trimetilaluminijuma u toluenu (0.99 mL, 1.98 mmol). Smeši je dozvoljeno da se zagreje do sobne temperature i mešana je 15 minuta. Delimična suspenzija 1-metil-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-diona (300 mg, 1.52 mmol) u toluenu (4 mL) je polako dodata. Dobijena smeša je zagrevana na 50 °C tokom 4 sata, ohlađena je do 0 °C, i tretirana kapima sa 1 M vodenog HCl sve dok nije prestalo oslobađanje gasa. Smeša je mešana tokom 2 sata uz zagrevanje do sobne temperature, zatim je ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je isprana sekvencijalno sa NaHCO3 i slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-30%), da se dobije N-(3-bromo-2-hlorofenil)-2-(metilamino)benzamid kao žuta čvrsta supstanca (110 mg, 28% prinos). Maseni spektar m/z 339, 341 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 10.00 (s, 1H), 7.78 (dd, J=7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.57 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.53 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.38 (ddd, J=8.4, 7.1, 1.4 Hz, 1H), 7.32 (t, J=8.0 Hz, 1H), 6.70 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.68-6.61 (m, 1H), 2.79 (d, J=5.1 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 40B: (Z)-4-((3-BROMO-2-HLOROFENIL)IMINO)-1-METIL-1H-BENZO[D][1,3] OKSAZIN-2(4H)-ON

[0433]

[0434] Rastvor N-(3-bromo-2-hlorofenil)-2-(metilamino)benzamida (150 mg, 0.442 mmol) u THF (15 mL) je ohlađen do 0 °C i tretiran sa trifosgenom (197 mg, 0.663 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 h, zatim je ohlađena do 0 °C i tretirana dok nije prestalo oslobađanje gasa. Smeša je koncentrovana, i ostatak je rastvoren u EtOAc i ispran sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-50%), da se dobije (Z)-4-((3-bromo-2-hlorofenil)imino)-1-metil-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2(4H)-on kao bež čvrsta supstanca (130 mg, 81% prinos).<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.33 (dd, J=7.8, 1.4 Hz, 1H), 7.72-7.61 (m, 1H), 7.41 (dd, J=7.9, 1.5 Hz, 1H), 7.36-7.28 (m, 1H), 7.16-7.08 (m, 2H), 7.07-7.01 (m, 1H), 3.55 (s, 3H). INTERMEDIJER 40:

[0435] Smeša (Z)-4-((3-bromo-2-hlorofenil)imino)-1-metil-1H-benzo[d][1,3] oksazin-2(4H)-on (130 mg, 0.356 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (117 mg, 0.462 mmol) i kalijum acetata (87 mg, 0.889 mmol) u dioksanu (4 mL) je ključala sa azotom 10 minuta. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (14.5 mg, 0.018 mmol), i zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organska faza je osušena i koncentrovana i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima(gradijent od 0-50%), da se dobije (Z)-4-((2-hloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)imino)-1-metil-1H-benzo[d][1,3] oksazin-2(4H)-on kao žuta čvrsta supstanca (120 mg, 82% prinos). Maseni spektar m/z 413 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.40-8.30 (m, 1H), 7.67-7.58 (m, 1H), 7.48-7.44 (m, 1H), 7.27 (s, 4H), 7.16-7.07 (m, 2H), 3.55-3.47 (m, 3H), 1.40-1.37 (m, 12H).

INTERMEDIJER 41 3-(2-HLORO-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-8-FLUORO-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0436]

INTERMEDIJER 41A: 2-AMINO-N-(3-BROMO-2-HLOROFENIL)-3-FLUOROBENZAMID

[0437]

[0438] Smeša 3-bromo-2-hloroanilina [pripremljena u skladu sa procedurom opisanom u američkom patentu br. 8,242,260] (600 mg, 2.91 mmol) i toluena (10 mL) je ohlađena do 0 °C i polako tretirana sa 2 M trimetilaluminijuma u toluenu (2.47 mL, 4.94 mmol). Smeši je dozvoljeno da se zagreje do sobne temperature i mešana je 15 minuta. Smeša je tretirana sa 8-fluoro-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2,4-dionom (684 mg, 3.78 mmol) i zagrevana na 50 °C 16 sati. Smeša je ohlađena do 0 °C i tretirana kapima sa 1 M vodenog HCl dok nije zaustavljeno izdvajanje gasa, i mešana 2 sata omogućavajući joj da se zagreje do sobne temperature. Smeša je ekstrahovana tri puta sa EtOAc. Kombinovane organske faze su isprane sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3 i slanim rastvorom, osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24 g), eluiranjem sa EtOAcheksanima (gradijent od 0-30%), da se dobije 2-amino-N-(3-bromo-2-hlorofenil)-3-fluorobenzamid kao bledo žuta čvrsta supstanca (350 mg, 35% prinos). Maseni spektar m/z 343, 345 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.46 (dd, J=8.4, 1.3 Hz, 1H), 8.42 (br. s., 1H), 7.43 (dd, J=8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.34 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.22 (t, J=8.3 Hz, 1H), 7.15 (ddd, J=11.0, 8.0, 1.2 Hz, 1H), 6.69 (td, J=8.0, 5.1 Hz, 1H), 5.72 (br. s., 2H).

INTERMEDIJER 41B: 3-(3-BROMO-2-HLOROFENIL)-8-FLUOROHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0439]

[0440] Trifosgen (453 mg, 1.53 mmol) je dodat u jedan deo rastvora amino-N-(3-bromo-2-hlorofenil)-3-fluorobenzamida (350 mg, 1.019 mmol) u THF (10 mL) na 0 °C. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 1 sata, zatim je ohlađena do 0 °C i tretirana sa vodom sve dok nije prestalo oslobađanje gasa. Smeša je koncentrovana i ostatak je rastvoren u EtOAc, ispran sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3, vodom i slanim rastvorom, i osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-50%), da se dobije 3-(3-bromo-2-hlorofenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao žuta čvrsta supstanca (320 mg, 85% prinos). Maseni spektar m/z 369, 371 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.54 (br. s., 1H), 7.97 (d, J=8.1 Hz, 1H), 7.77 (dd, J=6.8, 2.6 Hz, 1H), 7.46 (ddd, J=9.8, 8.3, 1.2 Hz, 1H), 7.36-7.29 (m, 2H), 7.24 (td, J=8.0, 4.8 Hz, 1H).

INTERMEDIJER 41C: 3-(3-BROMO-2-HLOROFENIL)-8-FLUORO-1-METILHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0441]

[0442] Jodometan (0.102 mL, 1.62 mmol) je dodat polako u smešu 3-(3-bromo-2-hlorofenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona (300 mg, 0.812 mmol), DMF (5 mL) i CS2CO3 (529 mg, 1.62 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata, zatim je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-30%), da se dobije 3-(3-bromo-2-hlorofenil)-8-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao žuta čvrsta supstanca (280 mg, 90% prinos). Maseni spektar m/z 383, 385 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.09 (dq, J=7.8, 0.8 Hz, 1H), 7.79-7.71 (m, 1H), 7.49 (ddd, J=13.9, 8.1, 1.5 Hz, 1H), 7.32-7.29 (m, 2H), 7.29-7.22 (m, 2H), 3.88 (s, 1.5 H), 3.86 (s, 1.5H).

INTERMEDIJER 41:

[0443] Smeša 3-(3-bromo-2-hlorofenil)-8-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (150 mg, 0.391 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (129 mg, 0.508 mmol), kalijum acetata (96 mg, 0.978 mmol) i dioksana (8 mL) je ključala sa azotom tokom 10 minuta i tretirana je sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (16 mg, 0.020 mmol). Smeša je zagrevana na 90 °C tokom 16 sati, zatim je ohlađena i podeljena između EtOAc i vode. Organska faza je osušena i koncentrovana, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (12 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-50%), da se dobije 3-(2-hloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-8-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao bela staklasta čvrsta supstanca (52 mg, 31% prinos). Maseni spektar m/z 431 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.14-8.05 (m, 1H), 7.90-7.82 (m, 1H), 7.51-7.35 (m, 3H), 7.26-7.19 (m, 1H), 3.86 (d, J=8.1 Hz, 3H), 1.36 (s, 12H).

INTERMEDIJER 42 3-(2-HLORO-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)-8-FLUOROHINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0444]

[0445] Smeša 3-(3-bromo-2-hlorofenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 41B] (990 mg, 2.68 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (884 mg, 3.48 mmol) i kalijum acetata (657 mg, 6.70 mmol) u dioksanu (8 mL) je ključala sa azotom tokom 10 minuta. PdCl2(dppf) DCM adukt (109 mg, 0.134 mmol) je dodat i smeša je zagrevana na 90 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, filtrirana, i filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa MeOH-DCM (gradijent od 0-5%), da se dobije 3-(2-hloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion kao braon čvrsta supstanca (710 mg, 64% prinos). Maseni spektar m/z 416 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.558.38 (m, 1H), 8.06-7.93 (m, 1H), 7.90-7.75 (m, 1H), 7.51-7.38 (m, 3H), 7.26-7.13 (m, 1H), 1.26 (br. s., 12H)

INTERMEDIJER 43 7-FLUORO-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL)FENIL)HINAZOLIN-2,4(1H,3H)-DION

[0446]

[0447] Korišćenjem procedure koja je upotrebljena da se pripremi Intermedijer 8, 3-(3-bromo-2-metilfenil)-7-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 15B] je pretvoren u 7-fluoro-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion. Maseni spektar m/z 397 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 44 1-(4-FLUOROFENIL)-3-(2-METIL-3-(4,4,5,5-TETRAMETIL-1,3,2-DIOKSABOROLAN-2-IL) FENIL)PIRIMIDIN-2,4(1H,3H)-DION

[0448]

INTERMEDIJER 44A: METIL 3-(4-METOKSIBENZILAMINO)-2-(FENILSELANIL)PROPANOAT

[0449]

[0450] Suspenzija fenil hipobromozelenoita (5.54 g, 23.5 mmol) i cink(II) hlorida (1.27 g, 9.29 mmol) u DCM (116 mL) je tretirana sa metil akrilatom (2.09 mL, 23.2 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 30 minuta, zatim je tretirana sa (4-metoksifenil)metanaminom (6.4 mL, 48.8 mmol), formirajući gustu suspenziju. Nakon mešanja od 16 sati, smeša je filtrirana, sakupljeni talog je ispran sa EtOAc, i kombinovani filtrati su koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (120 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-50%), da se dobije metil 3-(4-metoksibenzilamino)-2-(fenilselanil) propanoat kao svetlo braon ulje (3.68 g, 42% prinos). Maseni spektar m/z 380 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.53-7.49 (m, 2H), 7.39-7.28 (m, 3H), 7.18 (d, J=8.6 Hz, 2H), 6.88-6.82 (m, 2H), 3.89 (dd, J=8.8, 5.9 Hz, 1H), 3.73 (s, 3H), 3.61 (s, 2H), 3.55 (s, 3H), 2.93-2.78 (m, 2H).

INTERMEDIJER 44B: 1-BROMO-3-IZOCIJANAT-2-METILBENZEN

[0451]

[0452] Rastvor trifosgena (2.25 g, 7.58 mmol) u toluenu (27 mL), koji je ohlađen u ledeno vodenom kupatilu, je tretiran polako sa rastvorom 3-bromo-2-metilanilina (3.00 g, 16.1 mmol) i DIEA (5.6 mL, 32.2 mmol) u toluenu (5.4 mL). Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Talog je uklonjen filtracijom i ispran sa EtOAc. Kombinovani filtrati su razblaženi sa EtOAc, isprani sa slanim rastvorom, osušena i koncentrovana da se dobije1-bromo-3-izocijanat-2-metilbenzen kao braon ulje (3.68 g, 98% prinos), korišćeno bez prečišćavanja.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.49 (dd, J=8.1, 0.9 Hz, 1H), 7.31 (dd, J=7.9, 0.7 Hz, 1H), 7.15 (td, J=8.0, 0.7 Hz, 1H), 2.38 (s, 3H).

INTERMEDIJER 44C: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-1-(4-METOKSIBENZIL)-5-(FENILSELANIL) DIHIDROPIRIMIDIN-2,4(1H,3H)-DION

[0453]

[0454] Smeša metil 3-((4-metoksibenzil)amino)-2-(fenilselanil)propanoata (3.68 g, 9.73 mmol), 1-bromo-3-izocijanat-2-metilbenzena (2.27 g, 10.7 mmol), i K2CO3 (0.672 g, 4.86 mmol) u DMF (49 mL) je zagrevana na 65 °C 5 sati. Ohlađena smeša je podeljena između vode i EtOAc. I organska faza je isprana sa slanim rastvorom, osušena i koncentrovana da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-(4-metoksibenzil)-5-(fenilselanil)dihidropirimidin-2,4(1H,3H)-dion kao svetlo braon čvrsta supstanca (5.43 g), koja je korišćena bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 557, 559, 561 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 44D: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-1-(4-METOKSIBENZIL)PIRIMIDIN-2,4(1H,3H)-DION

[0455]

[0456] Rastvor 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-(4-metoksibenzil)-5-(fenilselanil)dihidropirimidin-2,4(1H,3H)-diona (5.43 g, 9.73 mmol) u THF (97 mL) je tretiran sa 30% vodenog vodonik peroksida (5.0 mL, 48.6 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 30 minuta. Voda je dodata i smeša je ekstrahovana sa EtOAc. Organska faza je isprana sa slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (220 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 25-70%), da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-(4-metoksibenzil)pirimidin-2,4(1H,3H)-dion kao bela čvrsta supstanca (2.10 g, 54% prinos). Maseni spektar m/z 401, 403 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.95 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.70-7.65 (m, 1H), 7.32-7.28 (m, 2H), 7.25-7.22 (m, 2H), 6.96-6.91 (m, 2H), 5.86 (d, J=7.9 Hz, 1H), 4.89 (d, J=2.4 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 2.02 (s, 3H).

INTERMEDIJER 44E: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)PIRIMIDIN-2,4(1H,3H)-DION [0457]

[0458] Rastvor 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-(4-metoksibenzil)pirimidin-2,4(1H,3H)-dion (0.87 g, 2.17 mmol) u TFA (5.5 mL) je tretiran sa trifluorometansulfonskom kiselinom (0.55 mL) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je polako sipana na led i mešana uz zagrevanje do sobne temperature. Talog je prikupljen filtracijom, ispran sa vodom i osušen da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)pirimidin-2,4(1H,3H)-dion kao purpurna čvrsta supstanca (0.62 g, 96% prinos). Maseni spektar m/z 281, 283 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.36 (d, J=4.4 Hz, 1H), 7.67 (dd, J=6.5, 2.8 Hz, 1H), 7.60 (dd, J=7.7, 5.9 Hz, 1H), 7.27-7.21 (m, 2H), 5.72 (dd, J=7.7, 1.3 Hz, 1H), 2.07 (s, 3H).

INTERMEDIJER 44F: 3-(3-BROMO-2-METILFENIL)-1-(4-FLUOROFENIL)PIRIMIDIN-2,4(1H,3H)-DION

[0459]

[0460] Mešana suspenzija bakar (II) acetata (0.543 g, 2.99 mmol), 3-(3-bromo-2-metilfenil)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (0.42 g, 1.49 mmol), (4-fluorofenil) boronske kiseline (0.418 g, 2.99 mmol), i aktiviranih molekulskih sita (750 mg) u suvom DCM (25 mL) je tretirana sa piridinom (0.363 mL, 4.48 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa DCM, filtrirana kroz CELITE®, i čvrste supstance su isprane sa DCM i THF. Kombinovani filtrati su isprani sa vodom, osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-40%), da se dobije 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-(4-fluorofenil)pirimidin-2,4(1H,3H)-dion kao žuta staklasta čvrsta supstanca (0.36 g, 43% prinos). Maseni spektar m/z 375, 377 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.91 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.68 (dd, J=7.9, 1.3 Hz, 1H), 7.60-7.51 (m, 2H), 7.40-7.22 (m, 4H), 5.95 (d, J=7.9 Hz, 1H), 2.21-2.12 (m, 3H).

INTERMEDIJER 44:

[0461] Smeša 3-(3-bromo-2-metilfenil)-1-(4-fluorofenil)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona (250 mg, 0.666 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (186 mg, 0.733 mmol), kalijum acetata (131 mg, 1.33 mmol), i PdCl2(dppf) DCM adukta (16 mg, 0.020 mmol) u dioksanu (4.4 mL) je zagrevana na 110 °C. Posle 3 sata, dodatni PdCl2(dppf) DCM adukt je dodat i smeša je zagrevana na 110 °C za još 6 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, filtrirana kroz CELITE® i čvrste supstance su isprane sa EtOAc. Kombinovani filtrati su isprani sekvencijalno sa zasićenim vodenim NaHCO3i slanim rastvorom, i osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 25-100%), da se dobije nečisti 1-(4-fluorofenil)-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) pirimidin2,4(1H,3H)-dion kao žuto staklasta čvrsta supstanca (217 mg), koji je korišćena bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 423 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7.90 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.69 (dd, J=7.0, 1.8 Hz, 1H), 7.61-7.52 (m, 2H), 7.40-7.26 (m, 4H), 5.94 (d, J=7.9 Hz, 1H), 2.24 (s, 3H), 1.32 (s, 12H).

INTERMEDIJER 45 4-BROMO-3-FLUORO-7-(2-HIDROKSIETIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID

[0462]

INTERMEDIJER 45A: DIETIL 2-(3-OKSOCIKLOHEKSIL)MALONAT

[0463]

[0464] Rastvor cikloheks-2-enona (3.05 mL, 30 mmol) i dietil malonata (4.58 mL, 30.0 mmol) u THF (30 mL) je tretiran sa 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (4.52 mL, 30.0 mmol) i zagrevan na 50 °C tokom 16 sati. Ohlađena smeša je sipana u EtOAc i isprana sekvencijalno sa 1 M vodenog HCl i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane da se dobije dietil 2-(3-oksocikloheksil)malonat kao ulje (8.0 g), koje je korišćeno bez daljeg prečišćavanja. Maseni spektar m/z 257 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 45B: 5-BROMO-2-(1,3-DIETOKSI-1,3-DIOKSOPROPAN-2-IL)-6-FLUORO-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSILNA KISELINA [0465]

[0466] Rastvor dietil 2-(3-oksocikloheksil)malonata (15.26 g, 59.5 mmol) i hidrohlorida 4-bromo-5-fluoro-2-hidrazinilbenzoeve kiseline [Intermedijer 24B] (17.0 g, 59.5 mmol) u sirćetnoj kiselini (120 mL) je zagrevan uz refluks tokom 2 sata, zatim je mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Talog koji se formirao je sakupljen filtracijom da se dobije bela čvrsta supstanca. Filtrat je koncentrovan i prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%). Dobijeni uljani proizvod je kristalizovan iz smeše EtOAc, etra i heksana da se dobije dodatna čvrsta supstanca, koja je kombinovana sa prvom čvrstom supstancom da se dobije 5-bromo-2-(1,3-dietoksi-1,3-dioksopropan-2-il)-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilna kiselina kao bela čvrsta supstanca (10.5 g, 49% prinos). Maseni spektar m/z 470, 472 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 45C: DIETIL 2-(5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-FLUORO-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-2-IL)MALONAT

[0467]

[0468] Smeša 5-bromo-2-(1,3-dietoksi-1,3-dioksopropan-2-il)-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksilna kiselina (0.981 g, 2.09 mmol), EDC (0.600 g, 3.13 mmol) i HOBT (0.383 g, 2.50 mmol) u THF (5 mL) je mešana na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta. Smeša je tretirana sa NH4OH (1.74 mL, 12.5 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim Na2CO3i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-100%), da se dobije dietil 2-(5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-2-il)malonat kao blago žuta čvrsta supstanca (440 mg, 45% prinos). Maseni spektar m/z 469, 471 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 45D: DIETIL 2-(5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-FLUORO-9H-KARBAZOL-2-IL)MALONAT

[0469]

[0470] Rastvor dietil 2-(5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-2-il)malonat (2.26 g, 4.82 mmol) i 2,3-dihloro-5,6-dicijanobenzohinon (2.30 g, 10.1 mmol) u THF (30 mL) je zagrevan uz refluks tokom 3 sata. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa zasićenim vodenim Na2CO3i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i delimično koncentrovane. Bela čvrsta supstanca koja je formirana je prikupljena filtracijom. Filtrat je propušten kroz podlogu od silika gela, eluiranjem sa EtOAc, i otpad je koncentrovan da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Dve čvrste supstance su kombinovane da se dobije dietil 2-(5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-9H-karbazol-2-il) malonat kao bela čvrsta supstanca (1.86 g, 83% prinos). Maseni spektar m/z 465, 467 (M+H)<+>.

INTERMEDIJER 45E: ETIL 2-(5-BROMO-8-KARBAMOIL-6-FLUORO-9H-KARBAZOL-2-IL)ACETAT

[0471]

[0472] Smeša dietil 2-(5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-9H-karbazol-2-il) malonata (1.30 g, 2.80 mmol), natrijum hlorida (0.28 g, 7.01 mmol) i vode (0.25 mL, 14.01 mmol) u DMSO (6 mL) je zagrevana na 150 °C tokom 20 sati. Ohlađena smeša je ubačena u vodu, formirajući talog. Talog je sakupljen filtracijom i osušen, zatim je triturisan sa DCM. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom i osušena da se dobije etil 2-(5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-9H-karbazol-2-il)acetat kao siva čvrsta supstanca (930 mg, 84% prinos). Maseni spektar m/z 393, 395 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.70 (s, 1H), 8.54 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.25 (br. s., 1H), 8.00 (d, J=10.1 Hz, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.69 (br. s., 1H), 7.19 (dd, J=8.4, 1.5 Hz, 1H), 4.11 (q, J=7.0 Hz, 2H), 3.82 (s, 2H), 1.21 (t, J=7.2 Hz, 3H).

INTERMEDIJER 45:

[0473] Rastvor etil 2-(5-bromo-8-karbamoil-6-fluoro-9H-karbazol-2-il)acetata (500 mg, 1.27 mmol) u THF (10 mL) je tretiran sa litijum borohidridom (139 mg, 6.36 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je tretirana sa zasićenim vodenim NH4Cl i mešana tokom 15 minuta. Smeša je razblažena sa vodom i ekstrahovana dva puta sa EtOAc. Kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 30-100%), da se dobije 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksietil)-9H-karbazol-1-karboksamid kao bela čvrsta supstanca (310 mg, 69% prinos). Maseni spektar mlz 351, 353 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.58 (s, 1H), 8.50 (d, J=8.4 Hz, 1H), 8.24 (br. s., 1H), 7.98 (d, J=10.3 Hz, 1H), 7.72-7.63 (m, 2H), 7.15 (dd, J=8.4, 1.3 Hz, 1H), 4.68 (t, J=5.3 Hz, 1H), 3.73-3.64 (m, 2H), 2.90 (t, J=7.0 Hz, 2H).

PRIMERI 1 I 2 3-HLORO-4-(R)-(3-(R)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (1), I

3-HLORO-4-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (2)

[0474]

PRIPREMANJE 1A: 3-HLORO-4-(3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0475] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (100 mg, 0.262 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(RS)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 2] (161 mg, 0.393 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (15 mg, 0.013 mmol) i 2 M vodenog K3PO4 (0.26 mL, 0.524 mmol) u THF (2 mL) u reakcionoj bočici pod pritiskom je zagrevana na 90 °C tokom 2.5 sata. Ohlađena smeša je koncentrovana, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa DCM-MeOH-NH4OH (gradijent od 90:9:1-97:2.7:0.3). Dobijeni nečisti proizvod je ponovo prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 50-100%), da se dobije 3-hloro-4-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od četiri atropizomera) kao bela čvrsta supstanca (110 mg, 68% prinos). Maseni spektar m/z 567 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.46 (s, 1H), 8.17-8.10 (m, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.69 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.59-7.53 (m, 1H), 7.48 (ddt, J=13.9, 8.1, 1.8 Hz, 1H), 7.39 (dd, J=12.4, 7.8 Hz, 2H), 7.28-7.19 (m, 2H), 6.97 (t, J=8.5 Hz, 1H), 3.87-3.93 (m, 3H), 1.87 (d, J=1.8 Hz, 3H), 1.65 (s, 3H), 1.65 (s, 3H).

PRIMERI 1 I 2:

[0476] Uzorak smeše od četiri atropizomera 3-hloro-4-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (90 mg) je odvojen hiralnom super-kritičkom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5µm); Mobilna faza: CO2-IPA (55:45) na 120 mL/min; pripremanje uzorka: 10 mg/mL; ubrizgavanje: 1 mL. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 1] kao belu čvrstu supstancu. Utvrđena je da je čistoća izomera 97.7%. Maseni spektar m/z 567 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.46 (s, 1H), 8.15 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.69 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.59-7.54 (m, 1H), 7.49 (ddd, J=13.9, 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.43-7.36 (m, 2H), 7.28-7.19 (m, 2H), 6.97 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.89 (d, J=7.9 Hz, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.65 (s, 6H).

[0477] Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 2] kao belu čvrstu supstancu. Utvrđena je da je čistoća izomera 99.5%. Maseni spektar m/z 567 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.46 (s, 1H), 8.13 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.69 (d, J=1.3 Hz, 1H), 7.59-7.53 (m, 1H), 7.48 (ddd, J=13.9, 8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.39 (dd, J=11.1, 7.8 Hz, 2H), 7.27-7.21 (m, 2H), 6.99 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.91 (d, J=7.9 Hz, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.66 (s, 6H).

[0478] Apsolutna konfiguracija iz primera 2 je potvrđena pojedinačnom kristalnom rengenskom analizom kristala koji su pripremljeni rastvaranjem jedinjenja u višku metanola i sporim evaporisanjem solventa na sobnoj temperaturi da se dobije metanol solvat (kristalni oblik M-1). Dimenzije jedinične ćelije: a = 9.75 Å, b = 14.21 Å, c = 21.26 Å, α = 90.0°, β = 90.0°, γ = 90.0°; Prostorna grupa: P212121; Molekuli primera 2/asimetrična jedinica: 1; Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 736 Å<3>; Gustina (izračunato) = 1.391 g/cm<3>. Frakcione atomske koordinate na 203 K su date u tabeli 2, i opis strukture je dat na slici 3.

PRIMER 3 3-HLORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-4-(R)-(2-METIL-3-(1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0479]

PRIPREMANJE 3A: 3-HLORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-4-(2-METIL-3-(L-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA OD ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0480] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamiad [Intermedijer 3] (100 mg, 0.262 mmol), 1-metil-3-(RS)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 4] (154 mg, 0.393 mmol), 2 M vodenog K3PO4 (0.26 mL, 0.524 mmol) i tetrakis (trifenilfosfin)paladijuma (15 mg, 0.013 mmol) u THF (2 mL) u reakcionoj bočici pod pritiskom je zagrevana na 90 °C tokom 4 sata. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa DCM:MeOH:NH4OH (gradijent od 90:9:1-97:2.7:0.3). Dobijeni nečisti proizvod je ponovo prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 50-100%), da se dobije 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(2-metil-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od četiri atropizomera) kao bela čvrsta supstanca (105 mg, 68% prinos). Maseni spektar m/z 549 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.46 (s, 1H), 8.33 (ddd, J=11.8, 7.9, 1.4 Hz, 1H), 7.80-7.74 (m, 2H), 7.69 (t, J=1.7 Hz, 1H), 7.58-7.52 (m, 1H), 7.41 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.38-7.30 (m, 3H), 7.24 (ddd, J=13.9, 8.4, 1.7 Hz, 1H), 6.98 (dd, J=12.8, 8.4 Hz, 1H), 3.67-3.76 (m, 3H), 1.88 (d, J=1.8 Hz, 3H), 1.65 (s, 3H), 1.65 (s, 3H).

PRIMER 3:

[0481] Uzorak smeše od četiri atropizomera 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(2-metil-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-9H-karbazol-1-karboksamida je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® IB (2 x 25 cm, 5µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (65:35) na 55 mL/min. Treći pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačni atropizomer 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(2-metil-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-9H-karbazol-1-karboksamida kao belu čvrstu supstancu. Određeno je da hiralna čistoća bude 97.7%. Maseni spektar m/z 549 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroformd) δ 10.45 (s, 1H), 8.32 (dd, J=8.0, 1.7 Hz, 1H), 7.80-7.73 (m, 2H), 7.69 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.59-7.53 (m, 1H), 7.44-7.31 (m, 4H), 7.26 (dd, J=8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.01 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.72 (s, 3H), 1.89 (s, 3H), 1.66 (s, 6H)

PRIMER 4 3-HLORO-4-(R)-(3-(1,8-DIMETIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0482]

PRIPREMANJE 4A: 3-HLORO-4-(3-(1,8-DIMETIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0483] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (100 mg, 0.262 mmol), 1,8-dimetil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 9] (138 mg, 0.341 mmol), Cs2CO3 (171 mg, 0.524 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (10.7 mg, 0.013 mmol) u THF (2 mL) i vodi (500 µl) je zagrevana na 60 °C tokom 18 sati. Ohlađena smeša je koncentrovana, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAcheksanima (gradijent od 30-100%), da se dobije 3-hloro-4-(RS)-(3-(RS)-(1,8-dimetil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) kao svetlo žuta čvrsta supstanca (97 mg, 57% prinos). Maseni spektar mlz 563 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.45 (s, 1H), 8.21-8.15 (m, 1H), 7.75 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.69 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.59-7.51 (m, 2H), 7.44-7.40 (m, 1H), 7.36 (dd, J=7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.26-7.19 (m, 2H), 6.98 (t, J=7.9 Hz, 1H), 3.80 (d, J=9.9 Hz, 3H), 2.70 (d, J=5.7 Hz, 3H), 1.88 (s, 3H), 1.64-1.66 (m, 6H).

PRIMER 4:

[0484] Uzorak smeše od četiri atropizomera 3-hloro-4-(3-(1,8-dimetil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (90 mg) je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (55:45) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 18 mg/mL in MeOH; ubrizgavanje: 2.5 mL. Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačni atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(1,8-dimetil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao belu čvrstu supstancu (17 mg). Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99%. Maseni spektar mlz 563 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.45 (s, 1H), 8.17 (dd, J=7.8, 1.2 Hz, 1H), 7.75 (s, 1H), 7.69 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.58-7.51 (m, 2H), 7.42 (dd, J=7.9, 1.1 Hz, 1H), 7.36 (dd, J=7.7, 1.1 Hz, 1H), 7.27-7.19 (m, 2H), 6.99 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.81 (s, 3H), 2.71 (s, 3H), 1.87 (s, 3H), 1.65 (s, 6H).

PRIMERI 5 I 6 3-HLORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-4-(R)-(3-(R)-(7-METOKSI-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID, I

3-HLORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-4-(R)-(3-(S)-(7-METOKSI-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0485]

[0486] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (200 mg, 0.524 mmol), 7-metoksi-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 14] (221 mg, 0.524 mmol), Cs2CO3 (512 mg, 1.57 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (21.4 mg, 0.026 mmol) u THF (3 mL) i vode (0.50 mL) je zagrevana na 60 °C preko noći, zatim na 90 °C tokom 4 sata. Ohlađena smeša je koncentrovana, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 50-100%), da se dobije 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(3-(7-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3 (4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od četiri atropizomera) (164 mg, 92% prinos). Ovaj materijal je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (60:40) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 20.3 mg/mL in MeOH; ubrizgavanje: 0.75 mL.

[0487] Treći pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačni atropizomer 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(7-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamida [Primer 5] (14 mg). Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99%. Maseni spektar m/z 579 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroformd) δ 10.43 (s, 1H), 8.24 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.65 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.55-7.49 (m, 1H), 7.44-7.34 (m, 1H), 7.35-7.31 (m, 1H), 7.19 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 6.94 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.85 (dd, J=8.8, 2.2 Hz, 1H), 6.69 (d, J=2.2 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.62 (s, 6H).

[0488] Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje drugi pojedinačni atropizomer 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(7-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 6] (28 mg). Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99%. Maseni spektar m/z 579 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroformd) δ 10.41 (s, 1H), 8.21 (d, J=8.8 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.66 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.55-7.49 (m, 1H), 7.41-7.36 (m, 1H), 7.35-7.31 (m, 1H), 7.22 (dd, J=8.4, 1.5 Hz, 1H), 6.97 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.84 (dd, J=9.0, 2.2 Hz, 1H), 6.70 (d, J=2.2 Hz, 1H), 3.95 (s, 3H), 3.65 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.63 (s, 6H).

PRIMER 7 3-HLORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-4-(R)-(3-(8-METOKSI-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0489]

[0490] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (200 mg, 0.524 mmol), 8-metoksi-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 12] (221 mg, 0.524 mmol), Cs2CO3 (512 mg, 1.57 mmol) PdCl2(dppf) DCM adukta (21.4 mg, 0.026 mmol) u THF (3 mL) i vode (0.50 mL) u reakcionoj bočici pod pritiskom je zagrevana na 60 °C preko noći, zatim na 90 °C tokom 4 sata. Ohlađena smeša je razblažena sa DCM i MeOH, i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 20-55%), da se dobije smeša od četiri atropizomera 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(3-(8-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (136 mg, 41% prinos). Ovaj materijal je odvojen hiralnom super-kritičkom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (55:45) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 17 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 1.0 mL. Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačan atropizomer 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(8-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3 (4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamida (26 mg, 20% prinos). Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99%. Maseni spektar m/z 579 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.42 (s, 1H), 7.90 (dd, J=7.2, 2.3 Hz, 1H), 7.71 (s, 1H), 7.66 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.55-7.49 (m, 1H), 7.40-7.36 (m, 1H), 7.35-7.31 (m, 1H), 7.25-7.19 (m, 3H), 6.97 (d, J=8.4 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.91 (s, 3H), 1.85 (s, 3H), 1.63 (s, 6H).

PRIMER 8 3-HLORO-4-(R)-(3-(6-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0491]

[0492] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (200 mg, 0.524 mmol), 6-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 13] (215 mg, 0.524 mmol), Cs2CO3 (512 mg, 1.57 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (21.4 mg, 0.026 mmol) u THF (3 mL) i vodi (1 mL) je zagrevana na 60 °C preko noći, zatim na 90 °C tokom 4 sata. Ohlađena smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen dva puta kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 50-100%), da se dobije smeša od četiri atropizomera 3-hloro-4-(3-(6-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (129 mg, 39% prinos). Ovaj materijal je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH-MeCN (65:17.5:17.5) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 15.4 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 0.5 mL. Treći pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačni atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(6-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (33 mg). Utvrđena je da je čistoća izomera veća od 98%. Maseni spektar m/z 567 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.44 (br. s., 1H), 8.29 (dd, J=8.1, 6.4 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.66 (s, 1H), 7.56-7.49 (m, 1H), 7.36 (dd, J=15.2, 7.3 Hz, 2H), 7.22 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.04-6.92 (m, 3H), 3.65 (s, 3H), 1.84 (s, 3H), 1.63 (s, 6H).

PRIMER 9 3-HLORO-4-(R)-(3-(7-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0493]

[0494] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 3] (200 mg, 0.524 mmol), 7-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 15] (215 mg, 0.524 mmol), Cs2CO3 (512 mg, 1.57 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (21.4 mg, 0.026 mmol) u THF (3 mL) i vode (0.50 mL) je zagrevana na 90 °C tokom 4 sata. Ohlađena smeša je koncentrovana, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (220 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-40%), da se dobije smeša od četiri atropizomera 3-hloro-4-(3-(7-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (164 mg, 53% prinos). Materijal je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: Lux Ce12 (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH-MeCN (62:19:19) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 30 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 0.5 mL. Izolovani materijal iz trećeg pika eluiranjem iz kolone je ponovo odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AS (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH-MeCN (68:16:16) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 11.4 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 3.5 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačni atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(7-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao belu čvrstu supstancu (25 mg, 15% prinos). Utvrđena je da je čistoća izomera veća od 98%. Maseni spektar m/z 567 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.46 (s, 1H), 8.31 (dd, J=8.6, 6.2 Hz, 1H), 7.76 (s, 1H), 7.68 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.58-7.52 (m, 1H), 7.38 (ddd, J=14.1, 7.8, 1.0 Hz, 2H), 7.24 (dd, J=8.4, 1.5 Hz, 1H), 7.06-6.95 (m, 3H), 3.67 (s, 4H), 1.86 (s, 3H), 1.65 (s, 6H).

PRIMER 10 3-HLORO-4-(RS)-(3-(RS)-(6,8-DIFLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0495]

[0496] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (10 mg, 0.026 mmol), 6,8-difluoro-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 16] (14.1 mg, 0.034 mmol), 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocenepaladijum(II) hlorid (12.8 mg, 0.020 mmol) i THF (2 mL) u reakcionoj bočici je tretirana sa 2 M vodenim K3PO4(0.039 mL, 0.079 mmol). Bočica je zatvorena i podvrgnuta tri puta ciklusu pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Faze smeše su odvojene, vodena faza je ekstrahovana dva puta sa EtOAc, i kombinovane organske faze su osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (40 g), eluiranjem sa EtOAcheksanima (gradijent od 80-100%). Izolovani materijal je triturisan sa MeOH da se dobije čvrsta supstanca nakon filtracije. Filtrat je koncentrovan i podvrgnut kolonskoj hromatografiji na siliku (40 g), eluiranjem sa DCM-MeOH-NH4OH (gradijent od 90:9:1-97:2.7:0.3) da se dobije dodatna čvrsta supstanca. Dve čvrste supstance su kombinovane da se dobije 3-hloro-4-(3-(6,8-difluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od četiri atropizomera) kao bledo žuta čvrsta supstanca (164 mg, 71% prinos). Maseni spektar m/z 571 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ 8.04 (d, J=2.0 Hz, 1H), 7.70-7.68 (m, 1H), 7.65 (dd, J=7.2, 3.2 Hz, 1H), 7.57-7.52 (m, 1H), 7.43-7.34 (m, 3H), 7.18-7.07 (m, 1H), 6.90 (dd, J=8.4, 3.0 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.62-1.56 (m, 6H).

PRIMER 11 3-HLORO-4-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL(D3)-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0497]

[0498] Rastvor 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 3] (3.08 g, 8.07 mmol) i 8-fluoro-1-metil(d3)-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 21] (4.00 g, 9.68 mmol) u THF (33 mL) je tretiran sa 2 M vodenog K3PO4 (8.25 mL, 16.5 mmol). Smeša je ključala sa argonom otprilike 4 min uz mešanje u ultrasoničnom kupatilu, zatim je tretirana sa 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum(II) hloridom (447 mg, 0.686 mmol). Reakciona posuda je zatvorena i podvrgnuta šest puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa argonom. Smeša je mešana na 50 °C tokom 16.5 sati, zatim je hlađena do sobne temperature. Smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa vodom. Vodena faza je ekstrahovana dva puta sa EtOAc i kombinovane organske faze su isprane sa slanim rastvorom, osušene i koncentrovane. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (330 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 40-100%), da se dobije 3-hloro-4-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od dva dijastereomera) kao svetlo žuta-žuto mrka čvrsta supstanca (3.877 g, 78% prinos).

[0499] Materijal pripremljen pomoću ove metode (5.01 g) je odvojen pomoću hiralne superkritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AS-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 160 mL/min, 40 °C; pripremanje uzorka: 22.75 mg/mL u 2:1 MeOH-dihlorometanu; ubrizgavanje: 1.4 mL. Objedinjenjene frakcije koje sadrže prvi pik eluiranjem iz kolone su koncentrovane, i ostatak je sonifikovan u maloj količini metanola. Talg je sakupljen filtracijom, ispran sa metanolom i osušen da se dobije 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao bela čvrsta supstanca (2.029 g). Maseni spektar m/z 570 (M+H-H2O)<+>, 610 (M+Na)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.12-8.03 (m, 2H), 7.74 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.67-7.53 (m, 2H), 7.46 (dd, J=7.9, 1.1 Hz, 1H), 7.39-7.29 (m, 2H), 7.17 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 6.96-6.87 (m, 1H), 1.81 (s, 3H), 1.61 (d, J=1.3 Hz, 6H).

[α]D: 85.1° (c 2.38, CHCl3). DSC početna temperatura tačke topljenja = 255.6 °C (brzina zagrevanja = 10 °C/min.).

[0500] Apsolutna konfiguracija primera 11 je potvrđena pojedinačnom kristalnom rengenskom analizom kristala koji su pripremljeni rastvaranjem jedinjenja u 1:1:1 metanol/acetonitril/aceton i sporim evaporisanjem solventa na sobnoj temperaturi da se dobije metanol solvat (kristalni oblik M-1). Dimenzije jedinične ćelije: a = 9.78 Å, b = 14.26 Å, c = 21.38 Å, α = 90.0°, β = 90.0°, γ = 90.0°; Prostorna grupa: P212121; Molekuli primera 11/asimetrične jedinice: 1; Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 746 Å<3>; Gustina (izračunato) = 1.381 g/cm<3>. Frakcione atomske koordinate na sobnoj temperaturi su date u tabeli 5, i opis strukture je dat na slici 4. Apsolutna konfiguracija je dalje potvrđena pojedinačnom kristalom rendgenskom analizom kristala koji su pripremljeni rastvaranjem primera 11 u višku vodenog acetona i sporim evaporisanjem solventa na sobnoj temperaturi da se dobije monohidrat (kristalni oblik H-1). Dimenzije jedinične ćelije: a = 9.41 Å, b = 14.51 Å, c = 21.12 Å, α = 90.0°, β = 90.0°, γ = 90.0°; Prostorna grupa: P212121; Molekuli primera 11/asimetrična jedinica: 1; Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 721 Å<3>; Gustina (izračunato) = 1.396 g/cm<3>. Frakcione atomske koordinate na sobnoj temperaturi date su u tabeli 3.

PRIMER 12 3-HLORO-4-(R)-(3-(R)-(8-FLUORO-1-METIL(D3)-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0501]

[0502] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (76 mg, 0.20 mmol), 8-fluoro-1-metil(d3)-3-(R)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 22] (75 mg, 0.18 mmol), i Cs2CO3 (118 mg, 0.363 mmol) u THF (1.6 mL) i vode (0.40 mL) u bočici je ključala sa argonom 1 minut sa sonifikacijom. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (7.4 mg, 0.009 mmol) i bočica je zatvorena i zagrevana na 45 °C tokom 19 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i vodom. Slojevi su odvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan ponovo sa EtOAc. Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni i koncentrovani. Ostatak je podvrgnut kolonskoj hromatografiji na silika gelu (12 g), eluirajući sa EtOAc-heksanima (gradijent od 60%-100%). Dobijeni nečisti proizvod je prečišćen reverznom fazom HPLC (Luna Axia 5µ C1830 x 100 mm), eluirajući sa MeCN-voda koji sadrži 0.1% TFA (gradijent od 10-100%, 30 mL/min). Odgovarajuće frakcije su tretirane sa zasićenim vodenim NaHCO3 i koncentrovane do vodene suspenzije. Talog je sakupljen filtracijom, ispran sa vodom i osušen pod vakuumom da se dobije smeša dva atropizomera 3-hloro-4-(3-(R)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao bela čvrsta supstanca (60.9 mg, 57% prinos). Ovaj materijal je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (5 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (60:40) na 250 mL/min, 35 °C; pripremanje uzorka: 7.5 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 2.5 mL. Ostatak dobijen iz koncentracije drugog pika eluiranjem iz kolone je dalje prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (4 g), eluirajući sa EtOAcheksanima (gradijent od 40%-100%), da se dobije 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao bela čvrsta supstanca (19.7 mg, 68% prinos). Maseni spektar m/z 570 (M+H-H2O)<+>, 610 (M+Na)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.11-8.04 (m, 2H), 7.74 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.66-7.53 (m, 2H), 7.46 (dd, J=7.9, 1.1 Hz, 1H), 7.38-7.28 (m, 2H), 7.14 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 6.90 (d, J=8.6 Hz, 1H), 1.80 (s, 3H), 1.60 (d, J=0.9 Hz, 6H).

PRIMER 13 3-HLORO-4-(3-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0503]

[0504] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 3] (0.360 g, 0.943 mmol), 8-fluoro-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 17] (0.392 g, 0.990 mmol), PdCl2(dppf) DCM adukta (0.039 g, 0.047 mmol) i Cs2CO3(0.615 g, 1.89 mmol) u dioksanu (10 mL) i vodi (2.5 mL) je zagrevana na 100 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sa vodom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 0-50%, zatim do 70% koji sadrži 1% MeOH), da se dobije 3-hloro-4-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od četiri atropizomera) kao bela čvrsta supstanca (0.361 g, 67% prinos). Maseni spektar m/z 354 (M+H-H2O)<+>, 394 (M+Na)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ 8.09 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.95 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.81-7.69 (m, 1H), 7.64-7.54 (m, 2H), 7.48 (dd, J=7.8, 1.1 Hz, 1H), 7.43-7.29 (m, 1H), 7.31-7.24 (m, 1H), 7.18 (dd, J=8.3, 1.7 Hz, 1H), 7.16-7.07 (m, 1H), 6.92 (dd, J=8.6, 5.3 Hz, 1H), 1.94-1.71 (m, 3H), 1.65-1.50 (m, 6H).

PRIMER 14 3-HLORO-4-(R)-(3-(R)-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0505]

[0506] Uzorak smeše od četiri atropizomera 3-hloro-4-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Primer 13] (250 mg) je odvojena hiralnom super-kritičkom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (5 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (60:40) na 220 mL/min, 35 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 21 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 3.0 mL. Treći pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (pojedinačni atropizomer) kao belu čvrstu supstancu (24 mg). Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 95%. Maseni spektar m/z 553 (M+H-H2O)<+>, 593(M+Na)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.09 (s, 1H), 7.95 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.74 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.60-7.54 (m, 2H), 7.54-7.43 (m, 1 H), 7.37 (d, J=7.5 Hz, 1 H), 7.28 (d, J=4.6 Hz, 1 H), 7.11 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1H), 6.91 (d, J=8.6 Hz, 1H), 2.00-1.76 (m, 3H), 1.69-1.52 (m, 6H).

PRIMERI 15 I 16 3-CIJANO-4-(S)-(3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0507]

PRIPREMA 15A: 3-CIJANO-4-(3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0508] Smeša 4-bromo-3-cijano-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 23] (0.400 g, 1.08 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 2] (0.573 g, 1.40 mmol), Cs2CO3 (0.700 g, 2.15 mmol), i dioksana (5 mL) je podvrgnuta tri puta ciklusu pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.053 g, 0.064 mmol) i podvrgnuta još 2 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je zagrevana na 88 °C tokom 2 dana. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 75%, 85% i 100%). Dobijeni čist proizvod je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC da se dobije 3-cijano-4-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od četiri atropizomera) kao bela čvrsta supstanca (0.200 g, 32% prinos). Maseni spektar m/z 576 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.96 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.35 (br. s., 1H), 8.00-7.94 (m, 1H), 7.92 (s, 1H), 7.77-7.68 (m, 2H), 7.60-7.52 (m, 2H), 7.41 (dd, J=6.6, 2.2 Hz, 1H), 7.38-7.29 (m, 1H), 7.13 (t, J=10.1 Hz, 1H), 6.85 (t, J=8.1 Hz, 1H), 5.05 (d, J=2.0 Hz, 1H), 3.74 (dd, J=8.1, 2.6 Hz, 3H), 1.73 (s, 3H), i 1.48-1.43 (m, 6H).

PRIMERI 15 I 16:

[0509] Uzorak 3-cijano-4-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša 4 atropizomera) je odvojena hiralnom super-kritičnom tečnom fluidnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (65:35) na 150 mL/min, 45 °C. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje jedan pojedinačan atropizomer 3-cijano-4-(S)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 15]. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 94%. Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje drugi pojedinačan atropizomer 3-cijano-4-(S)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 16]. Određeno je da hiralna čistoća bude 99%. Maseni spektar svakog pojedinačnog atropizomera je isti kao onaj od smeše četiri atropizomera.

PRIMER 17 3-FLUORO-4-(3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0510]

[0511] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 27] (0.080 g, 0.219 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 2] (0.094 g, 0.230 mmol), PdCl2(dppf) DCM adukta (9.0 mg, 11.0 µmol) i Cs2CO3 (0.143 g, 0.438 mmol) u dioksanu (8.0 mL) i vodi (2.0 mL) je zagrevana na 100 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i filtrirana. Filtrat je ispran sa vodom, osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC, što je praćeno prečišćavanjem kolonske hromatografije na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 50%-100%), da se dobije 3-fluoro-4-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša od četiri atropizomera) kao prljavo bela čvrsta supstanca (0.018 g, 15% prinos). Maseni spektar m/z 551 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, MeOH-d4) δ 7.66 (d, J=10.4 Hz, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.47-7.34 (m, 3H), 7.29 (t, J=7.2 Hz, 2H), 7.22-7.11 (m, 1H), 7.09-6.97 (m, 1H), 6.90 (t, J=8.1 Hz, 1H), 3.81-3.63 (m, 3H), 2.06 (br. s., 3H), i 1.77-1.58 (m, 6H).

PRIMER 18 3-FLUORO-4-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA DVA ATROPIZOMERA)

[0512]

[0513] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 27] (0.100 g, 0.274 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 10] (0.146 g, 0.356 mmol), 2 M vodenog K3PO4(0.41 mL, 0.821 mmol), i THF (2.0 mL) je podvrgnuta tri puta ciklusu pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa 1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferocen paladijum(II) hloridom (8.9 mg, 0.014 mmol), i podvrgnut je još 2 puta ciklusu pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 62%, 75% i 85%), da se dobije 3-fluoro-4-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao prljavo bela čvrsta supstanca (0.084 g, 53% prinos). Maseni spektar m/z 551 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 (s, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 7.99-7.92 (m, 3H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (ddt, J=14.4, 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.54-7.47 (m, 3H), 7.40 (dd, J=7.2, 1.7 Hz, 1H), 7.34 (tt, J=7.9, 4.0 Hz, 1H), 7.04 (ddd, J=11.5, 8.6, 1.5 Hz, 1H), 6.88 (t, J=8.0 Hz, 1H), 4.99 (d, J=2.2 Hz, 1H), 3.74 (dd, J=8.2, 1.0 Hz, 3H), 1.77 (s, 3H), i 1.49-1.42 (m, 6H).

ALTERNATIVNA SINTEZA 3-FLUORO-4-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA DVA ATROPIZOMERA):

[0514] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 27] (0.050 g, 0.137 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 10] (0.073 g, 0.178 mmol), Cs2CO3 (0.089 g, 0.274 mmol), i dioksana (0.8 mL) je podvrgnuta 3 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (6.7 mg, 8.21 µmol), podvrgnuta još 2 puta puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom, i zagrevana na 52 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 62% i 75%), da se dobije 3-fluoro-4-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao bela čvrsta supstanca (0.034 g, 42% prinos). PRIMER 19 3-FLUORO-4-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0515]

[0516] Uzorak 3-fluoro-4-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (smeša dva atropizomera) [Primer 18] je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AS-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 120 mL/min, 40 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 3.6 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 2.0 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99.4%. Maseni spektar m/z 551 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 (s, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 8.00-7.92 (m, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.73 (ddd, J=14.4, 8.0, 1.4 Hz, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.55-7.47 (m, 2H), 7.40 (dd, J=7.2, 1.4 Hz, 1H), 7.33 (td, J=8.0, 4.0 Hz, 1H), 7.05 (dd, J=8.3, 1.4 Hz, 1H), 6.89 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 3.74 (d, J=8.0 Hz, 3H), 3.17 (d, J=5.3 Hz, 3H), 1.77 (s, 3H), i 1.46 (d, J=4.2 Hz, 6H).

PRIMER 20 3-FLUORO-4-(3-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA 4 ATROPIZOMERA)

[0517]

[0518] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 27] (0.104 g, 0.285 mmol), 8-fluoro-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 17] (0.147 g, 0.370 mmol), Cs2CO3 (0.186 g, 0.570 mmol), i dioksana (1.6 mL) je podvrgnuta 3 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (14 mg, 0.017 mmol), i podvrgnuta još dva puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je zagrevana na 88°C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen reverznom faznom preparativnom HPLC. Odgovarajuće frakcije su tretirane sa zasićenim vodenim NaHCO3 i koncentrovane do vodenog ostatka koji je ekstrahovan sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 65% i 75%), da se dobije 3-fluoro-4-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) kao bela čvrsta supstanca (0.029 g, 18% prinos). Maseni spektar m/z 537 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.81 (br. s., 1H), 11.39 (d, J=1.4 Hz, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 7.95 (dd, J=10.7, 2.1 Hz, 1H), 7.86-7.80 (m, 2H), 7.64 (t, J=9.2 Hz, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.53-7.50 (m, 2H), 7.42-7.38 (m, 1H), 7.26-7.20 (m, 1H), 7.07-6.99 (m, 1H), 6.97-6.88 (m, 1H), 4.98 (d, J=9.7 Hz, 1H), 1.81-1.75 (m, 3H), i 1.48-1.41 (m, 6H).

PRIMERI 21 I 22 3-FLUORO-4-(R)-(3-(R)-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3 (4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID, I 3-FLUORO-4-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0519]

[0520] Uzorak 3-fluoro-4-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (smeša 4 atropizomera) [Primer 20] je odvojen pomoću hiralne super-kritičke tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (75:25) na 180 mL/min, 40 °C, 100 bara. Treći pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-fluoro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 21]. Određeno je da hiralna čistoća bude 98%. Maseni spektar m/z 537 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.83 (br. s., 1H), 11.38 (s, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 7.95 (d, J=10.8 Hz, 1H), 7.83 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.81 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.65-7.57 (m, 2H), 7.54-7.47 (m, 2H), 7.39 (dd, J=6.7, 1.9 Hz, 1H), 7.20 (br. s., 1H), 7.03-6.99 (m, 1H), 6.99-6.94 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 1.77 (s, 3H), i 1.44 (d, J=5.3 Hz, 6H).

[0521] Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 22]. Određeno je da hiralna čistoća bude 95%. Maseni spektar m/z 537 (M+H-H2O)<+>.1H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.80 (br. s., 1H), 11.39 (s, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 7.95 (d, J=10.8 Hz, 1H), 7.85-7.78 (m, 2H), 7.59 (br. s., 2H), 7.54-7.46 (m, 2H), 7.38 (d, J=6.1 Hz, 1H), 7.19 (br. s., 1H), 7.05 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 6.90 (d, J=8.3 Hz, 1H), 4.99 (s, 1H), 1.77 (s, 3H), i 1.46 (d, J=4.7 Hz, 6H).

ALTERNATIVNA PROCEDURA ZA PRIPREMANJE 3-FLUORO-4-(R)-(3-(R)-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMIDA [PRIMER 21]:

[0522] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 27] (0.118 g, 0.323 mmol), 8-fluoro-3-(R)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 18] (0.166 g, 0.420 mmol), 2 M vodenog K3PO4(0.485 mL, 0.969 mmol) i THF (2.0 mL) je podvrgnuta 3 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa 1,1'-bis(di-tercbutilfosfino)ferocen paladijum(II) hloridom (11 mg, 0.016 mmol) i podvrgnuta još 2 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 62%, 75% i 85%), da se dobije 3-fluoro-4-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao prljavo bela čvrsta supstanca (0.117 g, 65% prinos). Uzorak ovog materijala je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 180 mL/min, 45 °C; pripremanje uzorka: 30 mg/mL; ubrizgavanje: 1.0 mL. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-fluoro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99.9%. Maseni spektar m/z 537 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.83 (br. s., 1H), 11.38 (s, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 7.95 (d, J=10.8 Hz,1H), 7.83 (d, J=1.1 Hz,1H), 7.81 (d, J=8.0 Hz, 1H), 7.65-7.57 (m, 2H), 7.54-7.47 (m, 2H), 7.39 (dd, J=6.7, 1.9 Hz, 1H), 7.20 (br. s., 1H), 7.03-6.99 (m, 1H), 6.99-6.94 (m, 1H), 4.97 (s, 1H), 1.77 (s, 3H), i 1.44 (d, J=5.3 Hz, 6H).

ALTERNATIVNA PROCEDURA ZA PRIPREMANJE 3-FLUORO-4-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID [PRIMER 22]:

[0523] Prateći istu proceduru kao onu koja je korišćena za alternativno pripremanje primera 21, 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 27] (0.118 g, 0.323 mmol) i 8-fluoro-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 19] (0.166 g, 0.420 mmol) su pretvoreni u 3-fluoro-4-(3-(S)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao prljavo bela čvrsta supstanca (0.119 g, 66% prinos). Uzorak ovog materijala je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AS-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (75:25) na 180 mL/min, 45 °C; pripremanje uzorka: 10 mg/mL; ubrizgavanje: 1.0 mL. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99.9%.

PRIMER 23 3-HLORO-4-(3-(3-(4-FLUOROFENIL)-2,6-DIOKSO-2,3-DIHIDROPIRIMIDIN-1(6H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0524]

[0525] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (135 mg, 0.354 mmol), 1-(4-fluorofenil)-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)pirimidin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 44] (164 mg, 0.389 mmol), i tetrakis (trifenilfosfin)paladijuma (20 mg, 0.018 mmol) u toluenu (5.3 mL) i etanola (1.8 mL) je ključala sa argonom nekoliko minuta. Smeša je tretirana sa 2 M vodenog Na2CO3 (354 µl, 0.707 mmol), ključala je ponovo sa argonom, i zagrevana je na 90 °C tokom 16 sati. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organska faza je osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 25-100%), da se dobije 3-hloro-4-(3-(3-(4-fluorofenil)-2,6-diokso-2,3-dihidropirimidin-1(6H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) kao bela čvrsta supstanca (103 mg, 49% prinos). Maseni spektar m/z 579 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.52 (d, J=4.5 Hz, 1H), 8.29 (br. s., 1H), 8.13 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.91 (dd, J=7.9, 6.4 Hz, 1 H), 7.85-7.80 (m, 1H), 7.64-7.54 (m, 3H), 7.53-7.45 (m, 2H), 7.36 (dt, J=11.9, 8.7 Hz, 2H), 7.25 (ddd, J=7.3, 4.3, 1.2 Hz, 1H), 7.03-6.83 (m, 1H), 6.73-6.47 (m, 1H), 5.97 (dd, J=7.9, 3.5 Hz, 1H), 5.04-4.92 (m, 1H), 1.75 (d, J=1.5 Hz, 3H), 1.47-1.33 (m, 6H).

PRIMER 24 3-HLORO-4-(R)-(3-(3-(4-FLUOROFENIL)-2,6-DIOKSO-2,3-DIHIDROPIRIMIDIN-1(6H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0526]

[0527] Uzorak 3-hloro-4-(3-(3-(4-fluorofenil)-2,6-diokso-2,3-dihidropirimidin-1(6H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) [Primer 23] (103 mg) je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (60:40) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 6.1 mg/mL u 1:1 MeCN-MeOH; ubrizgavanje: 1.0 mL. Četvrti pik eluiranjem iz kolone je dalje prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (4 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 60-80%), da se dobije pojedinačni atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(3-(4-fluorofenil)-2,6-diokso-2,3-dihidropirimidin-1(6H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao prljavo bela čvrsta supstanca (16 mg, 13% prinos). Maseni spektar m/z 579 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.06 (s, 1H), 7.78 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.73 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.57-7.50 (m, 3H), 7.47-7.43 (m, 1H), 7.32 (dd, J=7.5, 1.1 Hz, 1H), 7.27 (t, J=8.7 Hz, 2H), 7.11 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 6.88 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.01 (d, J=7.9 Hz, 1H), 1.84 (s, 3H), 1.58 (d, J=3.1 Hz, 6H).

PRIMER 25 6-HLORO-5-(3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-2-(S)-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0528]

[0529] Smeša (S)-5-bromo-6-hloro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamida [Intermedijer 31] (100 mg, 0.259 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 2] (112 mg, 0.272 mmol), Cs2CO3(169 mg, 0.519 mmol) i PdCl2(dppf) DCM adukta (16.9 mg, 0.021 mmol) u THF (4.3 mL) i vodi (1.1 mL) je zagrevana na 50 °C tokom 17.5 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (24g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 50-80%). Nečisti proizvod je dalje prečišćen preparativnom HPLC da se dobije 6-hloro-5-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (smeša četiri atropizomera) (76 mg, 50% prinos). Maseni spektar m/z 589 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.89 (s, 1H), 8.13 (br. s., 1H), 7.94 (d, J=7.9 Hz, 1H), 7.76-7.68 (m, 2H), 7.46 (br. s., 1H), 7.40-7.28 (m, 3H), 7.22-7.16 (m, 1H), 4.21-4.13 (m, 1H), 3.77-3.64 (m, 3H), 2.95-2.82 (m, 1H), 2.40 (d, J=16.3 Hz, 1H), 1.94-1.70 (m, 3H), 1.70-1.61 (m, 3H), 1.58-1.48 (m, 1H), 1.16-1.02 (m, 7H).

PRIMER 26 6-HLORO-5-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-2-(S)-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0530]

[0531] Uzorak 6-hloro-5-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamida (smeša četiri atropizomera) [Primer 25] (76 mg) je odvojena pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® OD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 180 mL/min, 35 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 8.35 mg/mL u MeOH-DCM (4:1); ubrizgavanje: 3.0 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone je dalje prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (4 g), eluiranjem sa EtOAcheksanima (gradijent od 50-80%), da se dobije 6-hloro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid kao bela čvrsta supstanca (33.6 mg, 47% prinos). Maseni spektar m/z 589 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, MeOH-d4) δ 8.06-7.99 (m, 1H), 7.69 (s, 1H), 7.60 (ddd, J=114.3, 8.1, 1.4 Hz, 1H), 7.40 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.34-7.27 (m, 2H), 7.24 (dd, J=7.5, 1.1 Hz, 1H), 3.85 (d, J=7.9 Hz, 3H), 2.90 (dd, J=16.5, 5.1 Hz, 1H), 2.56 (dd, J=16.4, 12.0 Hz, 1H), 2.10-2.02 (m, 1H), 2.00-1.84 (m, 2H), 1.77 (s, 3H), 1.75-1.68 (m, 1H), 1.28 (d, J=3.1 Hz, 1H), 1.22 (d, J=2.2 Hz, 6H).

PRIMER 27 6-FLUORO-5-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-2-(R)-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0532]

PRIPREMANJE 27A: 6-FLUORO-5-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-2-(R)-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (SMEŠA 2 ATROPIZOMERA)

[0533] Smeša (R)-5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamida (pojedinačni enantiomer) [Intermedijer 25] (5.00 g, 13.5 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil) hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 10] (6.94 g, 16.9 mmol), 2 M vodenog K3PO4(20.3 mL, 40.6 mmol) i THF (60 mL) je podvrgnut tri puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino) ferocen paladijum(II) hloridom (441 mg, 677 µmol) i podvrgnuta je još dva puta puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 62%, 75% i 85%), da se dobije 6-fluoro-5-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(R)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao prljavo bela čvrsta supstanca (6.77 g, 87% prinos). Maseni spektar m/z 573 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.79-10.74 (m, 1H), 8.05 (br. s., 1H), 7.98-7.93 (m, 1H), 7.76-7.69 (m, 1H), 7.57-7.51 (m, 1H), 7.43 (br. s., 1H), 7.40-7.26 (m, 4H), 4.19-4.13 (m, 1H), 3.74-3.68 (m, 3H), 2.94-2.84 (m, 1H), 2.49-2.35 (m, 2H), 1.92-1.80 (m, 3H), 1.76-1.68 (m, 3H), 1.62-1.52 (m, 1H), i 1.12-1.06 (m, 6H).

PRIMER 27:

[0534] Uzorak 6-fluoro-5-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(R)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (smeša dva atropizomera) je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AS-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (70:30) na 120 mL/min, 35 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 9 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 1.7 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 6-fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(R)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99.5%. Maseni spektar m/z 573 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.76 (s, 1H), 8.05 (br. s., 1H), 7.96 (d, J=7.8 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J=14.3, 8.0, 1.2 Hz, 1H), 7.55 (d, J=10.8 Hz, 1H), 7.44 (br. s., 1H), 7.40-7.36 (m, 1H), 7.35-7.28 (m, 3H), 4.18 (s, 1H), 3.72 (d, J=8.0 Hz, 3H), 2.89 (dd, J=16.9, 4.4 Hz, 1H), 2.45-2.37 (m, 1H), 2.02-1.93 (m, 1H), 1.91-1.82 (m, 2H), 1.57 (td, J=11.7, 3.6 Hz, 1H), i 1.15-1.11 (m, 1H).

PRIMER 28 6-FLUORO-5-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-2-(S)-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-2,3,4,9-TETRAHIDRO-1H-KARBAZOL-8-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0535]

[0536] Prateći proceduru koja se koristi za pripremanje primera 27, (S)-5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (pojedinačni enantiomer) [Intermedijer 26] (0.045 g, 0.122 mmol) i 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-dion [Intermedijer 10] (0.065 g, 0.158 mmol) su pretvoreni u 6-fluoro-5-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao žuta čvrsta supstanca (0.035 g, 49% prinos). Odvajanje uzorka ovog materijala hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom, korišćenjem uslova koji su upotrebljeni da se odvoji primer 27, obezbeđuje (kao prvi pik eluiranjem iz kolone) 6-fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99.5%. Relativna i apsolutna konfiguracija su određene pomoću rendgenske kristalografije. Maseni spektar m/z 573 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 10.77 (s, 1H), 8.05 (br. s., 1H), 7.94 (dd, J=7.9, 1.2 Hz, 1H), 7.56-7.52 (m, 1H), 7.43 (br. s., 1H), 7.40-7.36 (m, 1H), 7.35-7.30 (m, 2H), 7.28 (dd, J=7.5, 1.4 Hz, 1H), 4.15 (s, 1H), 3.75-3.70 (m, 3H), 2.90 (dd, J=16.8, 4.6 Hz, 1H), 2.47-2.39 (m, 1H), 1.93-1.82 (m, 3H), 1.74 (s, 3H), 1.57 (td, J=11.7, 4.2 Hz, 1H), 1.16-1.11 (m, 1H), i 1.10 (d, J=1.9 Hz, 6H). [α]D: 63.8° (c 2.1, CHCl3). DSC početna temperatura tačke topljenja = 202.9 °C (brzina zagrevanja = 10 °C/min.).

[0537] Apsolutna konfiguracija primera 28 je potvrđena pojedinačnom kristalnom rendgenskom analizom kristala koji su pripremljeni rastvaranjem jedinjenja u višku metanola i sporim evaporisanjem solventa na sobnoj temperaturi da se dobije di-metanol solvat (kristalni oblik M2-1). Dimenzije jedinične ćelije: a = 9.24 Å, b = 7.97 Å, c = 22.12 Å, α = 90.0°, β = 94.1°, γ = 90.0°; Prostorna grupa: P21; Molekuli primera 28/asimetrična jedinica: 1; Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 813 Å<3>; Gustina (izračunato) = 1.301 g/cm<3>. Frakcione atomske koordinate na 173 K su date u tabeli 6, i opis strukture je dat na slici 5. ALTERNATIVNA SINTEZA PRIMERA 28:

[0538] Smeša (S)-5-bromo-6-fluoro-2-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid [Intermedijer 11] (5.00 g, 13.54 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 10] (6.67 g, 16.25 mmol), trikalijum fosfata (2 M u vodi) (20.31 mL, 40.6 mmol), i tetrahidrofurana (25 mL) je podvrgnut 3 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa 1,1'-bis(di-terc-butilfosfino)ferocen paladijum dihloridom (0.441 g, 0.677 mmol) i smeša je podvrgnuta još 2 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 62%, 75% i 85%), da se dobije 6-fluoro-5-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3-(S)-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid kao bela čvrsta supstanca (6.58 g, 85% prinos).

[0539] Materijal pripremljen pomoću ove metode (40.03 g, 69.9 mmol) je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije da se dobije (2S, 5R)-6-fluoro-5-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid. Dalje prečišćavanje je postignuto suspendovanjem ovog materijala u metanolu, sonifikovanjem tokom 5 minuta, sakupljanjem čvrste supstance filtracijom, ispiranjem čvrste supstance sa metanolom i sušenjem na sobnoj temperaturi pod smanjenim pritiskom da se dobije bela čvrsta supstanca (22.0 g, 90% prinos). PRIMER 29 4-(R)-(3-(S)-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-3-METIL-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0540]

[0541] Smeša 4-bromo-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 28] (0.091 g, 0.252 mmol), 8-fluoro-1-metil-3-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)hinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 10] (0.134 g, 0.327 mmol), 2 M vodenog K3PO4 (0.378 mL, 0.756 mmol), i THF (2.0 mL) je podvrgnuta 3puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa 1,1'-bis(di-tertbutilfosfino)ferocen paladijum(II) hloridom (8.2 mg, 0.013 mmol) i podvrgnuta 2 puta dodatnim 3 puta ciklusima pražnjenja i punjenja azotom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 62%, 75% i 85%) da se dobije 4-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao bledo žuta čvrsta supstanca (0.087 g, 59% prinos). Maseni spektar m/z 547 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.20 (s, 1H), 8.10 (br. s., 1H), 7.97 (ddd, J=7.9, 7.2, 1.0 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.76-7.68 (m, 1H), 7.53-7.48 (m, 1H), 7.44 (dd, J=7.9, 1.2 Hz, 1H), 7.40 (br. s., 1H), 7.36-7.30 (m, 1H), 7.23 (dd, J=7.4, 1.2 Hz, 1H), 6.98 (ddd, J=12.0, 8.4, 1.5 Hz, 1H), 6.68 (t, J=7.9 Hz, 1H), 4.94 (d, J=3.1 Hz, 1H), 3.73 (dd, J=8.2, 3.5 Hz, 3H), 2.17 (s, 3H), 1.66 (s, 3H), i 1.48-1.41 (m, 6H).

[0542] Uzorak ovog materijala je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (65:35) na 150 mL/min, 40 °C; pripremanje uzorka: 15 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 1.5 mL. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksamid. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99%. Maseni spektar m/z 547 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.19 (s, 1H), 8.10 (br. s., 1H), 7.97 (dd, J=7.9, 1.0 Hz, 1H), 7.90 (s, 1H), 7.78 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.72 (ddd, J=14.3, 8.0, 1.5 Hz, 1H), 7.53-7.48 (m, 1H), 7.44 (dd, J=7.8, 1.1 Hz, 1H), 7.40 (br. s., 1H), 7.33 (td, J=8.0, 4.2 Hz, 1H), 7.23 (dd, J=7.5, 1.1 Hz, 1H), 6.99 (dd, J=8.5, 1.5 Hz, 1H), 6.69 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.94 (s, 1H), 2.20-2.14 (m, 3H), 1.66 (s, 3H), i 1.45 (d, J=3.6 Hz, 6H).

PRIMERI 30 I 31 4-(R)-(3-(5-HLORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-3-FLUORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0543]

PRIPREMANJE 30A: 4-(3-(5-HLORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-3-FLUORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0544] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 27] (0.098 g, 0.268 mmol), 5-hloro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 33] (0.144 g, 0.349 mmol), Cs2CO3 (0.175 g, 0.537 mmol), i dioksana (1.6 mL) je podvrgnuta tri puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.013 g, 0.016 mmol) i podvrgnuta još dva puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je zagrevana na 52 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen reverzno-faznom preparativnom HPLC. Odgovarajuće frakcije su tretirane sa zasićenim vodenim NaHCO3 i koncentrovane. Ostatak je podeljen između EtOAc i vode, i organski sloj je ispran sa slanim rastvorom. Vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen dva puta kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 65% i 75%) da se dobije 4-(3-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) kao žuta čvrsta supstanca (0.013 g, 8% prinos). Maseni spektar m/z 571, 573 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.39 (d, J=5.3 Hz, 1H), 8.30-8.24 (m, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 7.95 (dd, J=10.5, 1.7 Hz, 1H), 7.84 (s, 1H), 7.60 (d, J=7.2 Hz, 2H), 7.55-7.47 (m, 2H), 7.42-7.39 (m, 1H), 7.04-6.99 (m, 1H), 6.93 (d, J=8.6 Hz, 0.6H), 6.84 (d, J=8.6 Hz, 0.4H), 6.57 (td, J=7.3, 3.5 Hz, 1H), 6.00 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.78 (d, J=1.9 Hz, 3H), i 1.45 (d, J=3.9 Hz, 6H).

PRIMERI 30 I 31:

[0545] Uzorak 4-(3-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (smeša 4 atropizomera) je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (55:45) na 120 mL/min, 45 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 5.6 mg/mL u MeOH; ubrizgavanje: 1.7 mL. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje jedan pojedinačan atropizomer 4-(R)-(3-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 30]. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 97.5%. Maseni spektar m/z 571 (M+H)<+>. Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje drugi pojedinačni atropizomer 4-(R)-(3-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 31]. Utvrđeno je da je da hiralna čistoća veća od 99.5%. Maseni spektar m/z 553 (M+H-H2O)<+>. PRIMERI 32 I 33 3-HLORO-4-(R)-(3-(R)-(5-HLORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9HKARBAZOL-1-KARBOKSAMID (32), I 3-HLORO-4-(R)-(3-(S)-(5-HLORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (33) (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0546]

[0547] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (1.11 g, 2.91 mmol), 5-hloro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 33] (1.00 g, 2.42 mmol) i Cs2CO3(1.58 g, 4.85 mmol) u THF (8 mL) i vodi (2 mL) je ključala sa argonom tri minuta. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.099 g, 0.121 mmol) i zagrevana na 60 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa DCM koja sadrži malu količinu MeOH. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani sve dok nije formiran talog žuto mrke boje, koji je uklonjen filtracijom. Filtrat je koncentrovan i prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (120 g), eluiranjem sa EtOAc-DCM (sekvencijalno 70%, 80%, i 100%), da se dobije 3-hloro-4-(3-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c] pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) kao žuta čvrsta supstanca (993 mg, 69% prinos). Materijal je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (50:50) na 150 mL/min, 45 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 5.6 mg/mL u MeOH-DCM (1:1); ubrizgavanje: 3 mL. Drugi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 32]. Maseni spektar m/z 587 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.50 (s, 1H), 8.27 (s, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.84 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.59 (d, J=6.8 Hz, 1H), 7.56-7.46 (m, 2H), 7.29 (dd, J=7.4, 1.2 Hz, 1H), 7.01 (dd, J=8.4, 1.5 Hz, 1H), 6.64 (d, J=78.6 Hz, 1H), 6.55 (t, J=7.3 Hz, 1H), 5.98 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.46-1.42 (m, 6H).

[0548] Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 33]. Maseni spektar m/z 569 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.49 (s, 1H), 8.34-8.24 (m, 2H), 8.14 (s, 1H), 7.84 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.60 (d, J=6.6 Hz, 1H), 7.56-7.46 (m, 2H), 7.28 (dd, J=7.4, 1.4 Hz, 1H), 6.99 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 6.72 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.57 (t, J=7.3 Hz, 1H), 5.99 (s, 1H), 5.75 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.45-1.42 (m, 6H). [α]D: 332.34° (c 2.0, CHCl3).

ALTERNATIVNO PRIPREMANJE PRIMERA 33:

[0549] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (50.5 g, 132 mmol), 5-hloro-2-(S)-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 35] (60.1 g, 146 mmol) i Cs2CO3(86 g, 265 mmol) u THF (342 mL) (85 mL) je ključao sa azotom 5 minuta, zatim je tretiran sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (11.9 g, 14.57 mmol). Ključanje sa azotom je nastavljeno 5 min više, zatim je smeša zagrevana na 62 °C pod azotom tokom 20 sati. Smeša je ohlađena do sobne temperature, MeOH (300 mL) je dodata uz mešanje što je praćeno 15 minuta kasnije dodavanjem vode (2 L) da se dobije rđavo-braonkasto obojena guma. Supernatant je uklonjen, gumeni ostatak je ispran dva puta sa vodom i zatim suspendovan u EtOAc (2 L) sa jednočasovnim mešanjem. Smeša je filtrirana, filtrat je koncentrovan do oko 1-1.5 L i tretiran sa heptanom (3 L). Smeša je mešana dva dana, talog je sakupljen filtracijom, ispran sa heptanom i osušen pod vakuumom da se dobije žuta čvrsta supstanca (104 g). Čvrsta supstanca je rastvorena u THF, apsorbovana na CELITE®, osušena pod vakuumom, smeštena na čep od silika gela i eluirana sa heptanom/EtOAc (10:90) da se dobije narandžasto-žuto ulje (74.87 g). Materijal je podvrgnut kolonskoj hromatografiji na silika gelu (3 kg), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (gradijent od 40-90%), da se dobije 3-hloro-4-(3-(S)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c] pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao žuta pena (44 g, 51% prinos). Kako bi se uklonio ostatak paladijuma, ostatak je rastvoren u EtOAc (oko 300 mL) i mešan sa 10% vodenog rastvora N-acetil-L-cisteina (500 mL) preko noći. Organski sloj je tretiran ponovo sa 10% rastvora N-acetil-L-cisteina (500 mL) šest sati, zatim je ispran sekvencijalno sa 5% NH4OH (dva puta) i slanim rastvorom, osušen i koncentrovan (43 g). Materijal je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AS-H (2 x 50 cm, 10 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (55:45) na 140 mL/min, 40 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 56 mg/mL u MeOH-DCM (1:1); ubrizgavanje: 3.33 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 33] kao žutu čvrstu supstancu (18.3 g, 24% prinos).

[0550] Apsolutna konfiguracija primera 33 je potvrđena pojedinačnom kristalnom rendgenskom analizom kristala koji su pripremljeni rastvaranjem jedinjenja u višku metanola i sporim evaporisanjem solventa na sobnoj temperaturi da se dobije di-metanol solvat (kristalni oblik M2-1). Dimenzije jedinične ćelije: a = 7.41 Å, b = 9.74 Å, c = 44.55 Å, α = 90.0°, β = 90.0°, γ = 90.0°; Prostorna grupa: P212121; Molekuli primera 33/asimetrična jedinica: 1; Zapremina/Broj molekula u jediničnoj ćeliji= 3214 Å<3>; Gustina (izračunato) = 1.346 g/cm<3>. Frakcione atomske koordinate na 173 K su date u tabeli 7, i opis strukture je dat na slici 6.

PRIMER 34 3-HLORO-4-(3-(5-FLUORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0551]

[0552] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (0.076 g, 0.200 mmol), 5-fluoro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 37] (0.072 g, 0.182 mmol) i Cs2CO3(0.118 g, 0.363 mmol) u THF (3 mL) i vodi (0.75 mL) je ključala sa azotom tokom 2 minuta, zatim je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (7.4 mg, 9.09 µmol). Ključanje sa azotom je nastavljeno 30 sekundi i reakciona bočica je zatvorena. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći, zatim je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa DCM. Kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije 3-hloro-4-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) kao žuta čvrsta supstanca (0.049 g, 43% prinos). Maseni spektar m/z 571 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.52-11.48 (m, 1H), 8.27 (br. s., 1H), 8.15-8.09 (m, 2H), 7.84 (s, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.56-7.46 (m, 2H), 7.30-7.26 (m, 1H), 7.03-6.97 (m, 1H), 6.72 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.60-6.51 (m, 2H), 5.85 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.46-1.42 (m, 6H).

PRIMERI 35 I 36 3-HLORO-4-(R)-(3-(5-FLUORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0553]

[0554] Uzorak 3-hloro-4-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (smeša četiri atropizomera) [Primer 34] (690 mg) je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® IB (2 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (63:37) na 50 mL/min, 45 °C, 100 bara. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje jedan pojedinačan atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 35]. Maseni spektar m/z 571 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.50 (s, 1H), 8.27 (br. s., 1H), 8.14 (s, 1H), 8.11 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.84 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.56-7.51 (m, 1H), 7.49-7.46 (m, 1H), 7.29 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.23 (dd, J=10.3, 7.5 Hz, 1H), 7.01 (dd, J=8.4, 1.5 Hz, 1H), 6.65 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.54 (td, J=7.4, 5.2 Hz, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.48-1.41 (m, 6H).

[0555] Treći pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje drugi pojedinačni atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 36]. Maseni spektar m/z 553 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.49 (s, 1H), 8.27 (br. s., 1H), 8.14 (s, 1H), 8.10 (d, J=7.7 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.56-7.45 (m, 2H), 7.30-7.20 (m, 2H), 6.99 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.72 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.56 (td, J=7.5, 5.3 Hz, 1H), 5.85 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.71 (s, 3H), 1.45-1.42 (m, 6H).

PRIMER 37 3-HLORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-4-(3-(5-METOKSI-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C] PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0556]

[0557] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (0.051 g, 0.135 mmol), 5-metoksi-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 32] (0.050 g, 0.122 mmol) i Cs2CO3 (0.080 g, 0.245 mmol) u THF (2 mL) i vodi (0.5 mL) je ključala sa azotom 2 minuta, zatim je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (5.0 mg, 6.12 µmol). Ključanje sa azotom je nastavljeno 30 sekundi i reakciona bočica je zatvorena. Smeša je zagrevana na 60 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa DCM i MeOH, osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(3-(5-metoksi-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera kao žuta čvrsta supstanca (32.8 mg, 44% prinos). Maseni spektar m/z 583 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.51-11.47 (m, 1H), 8.27 (br. s., 1H), 8.14 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.93 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.83 (s, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.55-7.45 (m, 3H), 7.30-7.25 (m, 1H), 7.03-6.97 (m, 1H), 6.71 (d, J=8.1 Hz, 1H), 6.56 (q, J=7.6 Hz, 1H), 5.90 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 3.91 (s, 3H), 1.69 (s, 3H), 1.45-1.42 (m, 6H).

PRIMERI 38 I 39 3-HLORO-4-(R)-(3-(5,7-DIOKSO-5H-TIAZOLO[3,2-C]PIRIMIDIN-6(7H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0558]

[0559] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (0.139 g, 0.364 mmol), 6-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-5H-thiazolo[3,2-c]pirimidin-5,7(6H)-dion [Intermedijer 36] (0.127 g, 0.331 mmol) i Cs2CO3 (0.215 g, 0.661 mmol) u THF (3.0 mL) i vodi (0.75 mL) je ključala sa argonom 3 minuta, zatim je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.013 g, 0.017 mmol). Smeša je ključala sa argonom 30 sekundi više i reakciona bočica je zatvorena. Smeša je mešana na 50 °C tokom 5 sati. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa EtOAc, i kombinovani organski slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (80 g), eluiranjem sa EtOAc-heksanima (90%, zatim 100%), da se dobije 3-hloro-4-(3-(5,7-diokso-5H-tiazolo[3,2-c]pirimidin-6(7H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera kao žuto mrka čvrsta supstanca (62.7 mg, 32% prinos). Ovaj materijal je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® AD-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (60:40) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 9 mg/mL u MeOH-DMSO; ubrizgavanje: 2 mL. Treći pik eluiran iz kolone obezbeđuje jedan pojedinačan atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(5,7-diokso-5H-tiazolo[3,2-c]pirimidin-6(7H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 38]. Maseni spektar m/z 559 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.50 (s, 1H), 8.27 (br. s., 1H), 8.14 (s, 1H), 7.83 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.69 (dd, J=4.6, 0.7 Hz, 1H), 7.59 (br. s., 1H), 7.54-7.49 (m, 1H), 7.47-7.43 (m, 1H), 7.26 (dd, J=7.4, 1.2 Hz, 1H), 7.03 (d, J=4.6 Hz, 1H), 6.99 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1H), 6.62 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.45-1.42 (m, 6H).

[0560] Četvrti pik eluiran iz kolone obezbeđuje drugi pojedinačan atropizomer 3-hloro-4-(R)-(3-(5,7-diokso-5H-tiazolo[3,2-c]pirimidin-6(7H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 39]. Maseni spektar m/z 541 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.49 (s, 1H), 8.27 (br. s., 1H), 8.13 (s, 1H), 7.83 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.73-7.65 (m, 2H), 7.59 (br. s., 1H), 7.54-7.43 (m, 2H), 7.26 (dd, J=7.5, 1.3 Hz, 1H), 7.05 (d, J=4.6 Hz, 1H), 6.98 (dd, J=8.5, 1.7 Hz, 1H), 6.71 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.28 (s, 1H), 1.70 (s, 3H), 1.43 (d, J=2.9 Hz, 6H).

PRIMERI 40 I 41 3-FLUORO-4-(R)-(3-(5-FLUORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMERI)

[0561]

PRIPREMANJE 40A: 3-FLUORO-4-(R)-(3-(5-FLUORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C]PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA DVA ATROPIZOMERA)

[0562] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 27] (0.200 g, 0.548 mmol), 5-fluoro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-diona [Intermedijer 37] (0.260 g, 0.657 mmol) i Cs2CO3(0.357 g, 1.10 mmol) u dioksanu (4 mL) i vodi (1 mL) je ključala sa azotom 2 minuta, zatim je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (0.022 g, 0.027 mmol). Ključanje sa azotom je nastavljeno 30 sekundi i reakciona bočica je zatvorena. Smeša je zagrevana na 60 °C preko noći. Ohlađena smeša je razblažena sa EtOAc i isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom. Kombinovani vodeni slojevi su ekstrahovani sa DCM, i kombinovovani slojevi su osušeni i koncentrovani. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima, da se dobije 3-fluoro-4-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera kao žuta čvrsta supstanca (0.194 g, 63% prinos).

PRIMERI 40 I 41:

[0563] Uzorak 3-fluoro-4-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida (smeša četiri atropizomera je odvojena pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® OD-H (5 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-IPA (55:45) na 120 mL/min, 50 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 6.8 mg/mL u MeOH-CHCl3(1:1); ubrizgavanje: 1 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje jedan pojedinačan atropizomer 3-fluoro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 40]. Maseni spektar m/z 555 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.40 (s, 1H), 8.21 (br. s., 1H), 8.12 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.95 (d, J=10.8 Hz, 1H), 7.84 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.60 (br. s., 1H), 7.56-7.46 (m, 2H), 7.41 (dd, J=7.4, 1.4 Hz, 1H), 7.23 (dd, J=10.2, 7.4 Hz, 1H), 7.02 (dd, J=8.6, 1.5 Hz, 1H), 6.88-6.82 (m, 1H), 6.56 (td, J=7.4, 5.2 Hz, 1H), 5.86 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 1.77 (s, 3H), 1.47-1.42 (m, 6H).

[0564] Treći pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje drugi pojedinačan atropizomer 3-fluoro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 41]. Maseni spektar m/z 537 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 11.41 (s, 1H), 8.29-8.17 (m, 1H), 8.13 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.96 (d, J=10.8 Hz, 1H), 7.85 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.65-7.57 (m, 1H), 7.57-7.47 (m, 2H), 7.43 (d, J=1.5 Hz, 1H), 7.28-7.21 (m, 1H), 7.02 (d, J=1.5 Hz, 1H), 6.90-6.83 (m, 1H), 6.64-6.53 (m, 1H), 5.87 (s, 1H), 4.99 (s, 1H), 1.78 (s, 3H), 1.48-1.44 (m, 6H).

ALTERNATIVNO PRIPREMANJE 3-FLUORO-4-(R)-(3-(5-FLUORO-1,3-DIOKSO-1H-PIRIDO[1,2-C] PIRIMIDIN-2(3H)-IL)-2-METILFENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER) [PRIMER 41]:

[0565] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 27] (6.00 g, 16.4 mmol), 5-fluoro-2-(2-metil-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-1,3(2H)-dion (pojedinačan enantiomer) [Intermedijer 38] (7.81 g, 19.7 mmol), 2 M vodenog K3PO4 (24.6 mL, 49.3 mmol), i THF (70 mL) je podvrgnut 3 puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je tretirana sa 1,1'-bis(di-tert-butilfosfino)ferocen paladijum(II) hloridom (0.535 g, 0.821 mmol), i podvrgnuta još 2 puta puta ciklusima pražnjenja i punjenja sa azotom. Smeša je mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena. Vodeni sloj je filtriran i sakupljena čvrsta supstanca je dodata organskom sloju. Organski sloj je koncentrovan, i ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa EtOAc-heksanima (sekvencijalno 50%, 62%, 75%, 85% i 100%), da se dobije 3-fluoro-4-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido [1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša dva atropizomera) kao žuta čvrsta supstanca (8.55 g, 94% prinos). Uzorak ovog materijala (kombinovan sa drugim serijama istog materijala) je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: CHIRALPAK® IC (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (50:50) na 165 mL/min, 45 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 55 mg/mL u MeOH-THF-DMSO (2:1:1); ubrizgavanje: 3 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačan atropizomer 3-fluoro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Primer 41].

PRIMER 42 3-HLORO-4-(2-HLORO-3-(1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0566]

[0567] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (36 mg, 0.094 mmol), (Z)-4-((2-hloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)imino)-1-metil-1H-benzo[d][1,3]oksazin-2(4H)-ona [Intermedijer 40] (42.8 mg, 0.104 mmol), EtOH (1 mL), toluena (1 mL) i 2 M vodenog Na2CO3(0.16 mL, 0.311 mmol) je ključala sa azotom 5 minuta. Smeša je tretirana sa tetrakis(trifenilfosfin)paladijumom (8.7 mg, 7.55 µmol), i reakciona bočica je zatvorena i zagrevana na 90 °C tokom 16 sati. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode, i organska faza je osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (4 g), eluiranjem sa MeOH-DCM koji sadrži 1% TEA (gradijent od 0-5%). Dobijeni materijal je dalje prečišćen korišćenjem preparativne HPLC (PHENOMENEX® Axia C1830 x 100 mm), eluiranjem sa MeCN-voda koji sadrži 0.1% TFA (gradijent od 20-100%, 30 mL/min). Odgovarajuće frakcije su tretirane sa zasićenim vodenim NaHCO3i koncentrovane. Ostatak je podeljen između EtOAc i vode, i organska faza je isprana sa slanim rastvorom, osušena i koncentrovana da se dobije 3-hloro-4-(2-hloro-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera kao bela čvrsta supstanca (2.5 mg, 4% prinos). Maseni spektar m/z 569 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 8.38-8.23 (m, 1H), 7.73 (d, J=1.5 Hz, 2H), 7.70-7.66 (m, 1H), 7.64 (s, 1H), 7.60-7.55 (m, 1H), 7.51-7.45 (m, 1H), 7.37-7.28 (m, 2H), 7.26-7.20 (m, 1H), 7.10-6.78 (m, 1H), 3.70 (s, 2H), 3.67 (s, 1H), 1.65 (s, 4H), 1.64 (s, 2H).

PRIMER 43 3-HLORO-4-(R)-(2-HLORO-3-(1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL) FENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0568]

[0569] Uzorak 3-hloro-4-(2-hloro-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) [Primer 42] (110 mg) je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: Lux Cel-4 (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (60:40) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 6.7 mg/mL u MeOH-aceton (9:1); ubrizgavanje: 3.0 mL. Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačan atropizomer 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao žutu čvrsta supstanca (20 mg, 18% prinos). Maseni spektar m/z 569 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.44 (s, 1H), 8.41-8.17 (m, 1H), 7.78-7.72 (m, 2H), 7.68 (s, 1H), 7.65-7.60 (m, 1H), 7.59-7.54 (m, 1H), 7.46 (d, J=7.5 Hz, 1H), 7.34-7.28 (m, 2H), 7.25 (s, 1H), 7.01 (d, J=8.6 Hz, 1H), 3.70 (s, 3H), 1.64 (s, 6H).

PRIMER 44 3-HLORO-4-(2-HLORO-3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL) FENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0570]

[0571] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamida [Intermedijer 3] (30 mg, 0.079 mmol), 3-(2-hloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-8-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 41] (40.6 mg, 0.094mmol), EtOH (1 mL), toluena (1 mL) i 2 M vodenog Na2CO3 (0.13 mL, 0.26 mmol) je ključala sa azotom 5 minuta. Smeša je tretirana sa tetrakis(trifenilfosfin)paladijumom (7.3 mg, 6.29 µmol), i reakciona bočica je zatvorena i zagrejana na 90 °C tokom 16 sati. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode, i organska faza je osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu (12 g), eluiranjem sa MeOH-DCM koji sadrži 1% TEA (gradijent od 0-5%). Dobijeni materijal je dalje prečišćen korišćenjem preparativne HPLC (PHENOMENEX® Axia C1830 x 100 mm), eluiranjem sa MeCN-voda koji sadrži 0.1% TFA (gradijent od 20-100%, 10 min, 30 mL/min). Odgovarajuće frakcije su tretirane sa zasićenim vodenim NaHCO3 i koncentrovane. Ostatak je podeljen između EtOAc i vode, i organska faza je isprana sa slanim rastvorom, osušena i koncentrovana da se dobije 3-hloro-4-(2-hloro-3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera kao bela čvrsta supstanca (6 mg, 11% prinos). Maseni spektar m/z 587 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.46 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.66-7.61 (m, 1H), 7.59-7.54 (m, 1H), 7.51-7.46 (m, 2H), 7.27-7.17 (m, 2H), 7.06-6.88 (m, 1H), 3.88 (dd, J=11.6, 8.0 Hz, 3H), 1.64 (s, 6H).<19>F NMR (400 MHz, hloroform-d) δ -121.34.

PRIMER 45 3-HLORO-4-(R)-(2-HLORO-3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0572]

[0573] Uzorak 3-hloro-4-(2-hloro-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) [Primer 44] (100 mg) je odvojen pomoću hiralne super-kritične tečne hromatografije kao što sledi: kolona: Lux Cel-4 (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH (60:40) na 85 mL/min, 50 °C, 100 bara; pripremanje uzorka: 6.7 mg/mL u MeOH-acetonu (1:1); ubrizgavanje: 3.0 mL. Četvrti pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačan atropizomer 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid kao žutu čvrstu supstancu (9.3 mg). Maseni spektar m/z 569 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.45 (s, 1H), 8.11 (d, J=7.3 Hz, 1H), 7.73 (s, 1H), 7.72 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.68 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.67-7.61 (m, 1H), 7.56 (dd, J=7.9, 1.8 Hz, 1H), 7.54-7.52 (m, 1H), 7.51-7.42 (m, 2H), 7.26-7.19 (m, 2H), 7.00 (d, J=8.6 Hz, 1H), 3.90 (d, J=8.1 Hz, 3H), 1.64 (s, 6H).<19>F NMR (376 MHz, hloroform-d) δ -121.33.

PRIMER 46 4-(2-HLORO-3-(8-FLUORO-1-METIL-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-3-FLUORO-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (SMEŠA ČETIRI ATROPIZOMERA)

[0574]

[0575] Smeša 4-bromo-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 27] (40 mg, 0.110 mmol), 3-(2-hloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-8-fluoro-1-metilhinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 41] (47 mg, 0.110 mmol), Cs2CO3 (107 mg, 0.329 mmol), dioksana (8 mL) i vode (2 mL) je ključala sa azotom 10 minuta. Smeša je tretirana sa PdCl2(dppf) DCM aduktom (7.2 mg, 8.76 µmol), i zagrevana na 60 °C preko noći. Ohlađena smeša je podeljena između EtOAc i vode. Organska faza je osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom na silika gelu, eluiranjem sa MeOH-DCM (gradijent od 0-5%), da se dobije 4-(2-hloro-3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera kao bela čvrsta supstanca (20 mg, 31% prinos). Maseni spektar m/z 569 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (400 MHz, hloroform-d) δ 10.46 (s, 1H), 7.74 (s, 1H), 7.68 (s, 1H), 7.66-7.61 (m, 1H), 7.59-7.54 (m, 1H), 7.51-7.46 (m, 2H), 7.27-7.17 (m, 2H), 7.06-6.88 (m, 1H), 3.88 (dd, J=11.6, 8.0 Hz, 3H), 1.64 (s, 6H).<19>F NMR (400 MHz, hloroform-d) δ -121.34, -127.34.

PRIMER 47 3-HLORO-4-(R)-(2-HLORO-3-(8-FLUORO-2,4-DIOKSO-1,2-DIHIDROHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID (POJEDINAČNI ATROPIZOMER)

[0576]

[0577] Smeša 4-bromo-3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid [Intermedijer 3] (103 mg, 0.269 mmol), 3-(2-hloro-3-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)fenil)-8-fluorohinazolin-2,4(1H,3H)-diona [Intermedijer 42] (140 mg, 0.336 mmol), THF (5 mL), 2 M vodenog K3PO4(0.504 mL, 1.01 mmol) je ključala sa azotom 15 minuta. Smeša je tretirana sa 1,1'-bis(di-tert-butilfosfino)ferocen paladijum(II) hloridom (17.5 mg, 0.027 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi preko noći. Smeša je koncentrovana, i ostatak je podeljen između EtOAc i vode. Organska faza je osušena i koncentrovana. Ostatak je prečišćen preparativnom HPLC. Odgovarajuće frakcije su tretirane sa zasićenim vodenim NaHCO3 i koncentrovane. Vodeni ostatak je ekstrahovan sa EtOAc. Organska faza je isprana sekvencijalno sa vodom i slanim rastvorom, i osušena i koncentrovana da se dobije 3-hloro-4-(2-hloro-3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (smeša četiri atropizomera) (30 mg, 15% prinos). Ovaj materijal je odvojen hiralnom super-kritičnom tečnom hromatografijom kao što sledi: kolona: CHIRALCEL® OJ-H (3 x 25 cm, 5 µm); Mobilna faza: CO2-MeOH-MeCN (65:17.5:17.5) na 85 mL/min; pripremanje uzorka: 6.8 mg/mL u MeOH-CHCl3 (1:1); ubrizgavanje: 3.0 mL. Prvi pik eluiranjem iz kolone obezbeđuje pojedinačni atropizomer 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid. Maseni spektar m/z 573 (M+H-H2O)<+>.<1>H NMR (500 MHz, DMSO-d6) δ 11.63-11.48 (m, 1H), 8.39-8.25 (m, 1H), 8.17-8.12 (m, 1H), 7.99-7.92 (m, 1H), 7.88-7.85 (m, 1H), 7.85-7.81 (m, 1H), 7.81-7.76 (m, 1H), 7.76-7.70 (m, 1H), 7.70-7.62 (m, 2H), 7.57-7.46 (m, 1H), 7.32-7.20 (m, 1H), 7.13-6.99 (m, 1H), 6.77-6.63 (m, 1H), 5.10-4.98 (m, 1H), 1.47-1.45 (m, 6H).<19>F NMR (400 MHz, hloroform-d) δ -129.63.

[0578] Jedinjenja u tabeli 10 su pripremljena uz pomoć procedura koje su analogne onim koje su opisane iznad, korišćenjem intermedijera opisanih ili pripremljenih pomoću metoda koje su slične onima koje su opisane.

Tabela 10

KOMPARATIVNI PRIMER 75 7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-4-(2-METIL-3-(4-OKSOHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-9H-KARBAZOL-1-KARBOKSAMID

[0579]

[0580] Komparativni primer 75 je objavljen u američkom patentu br. 8,084,620 kao primer 76-15 i pripremljen je u skladu sa procedurom koja je u njemu opisana.

KOMPARATIVNI PRIMER 76 7-(2-HIDROKSIPROPAN-2-IL)-3-METIL-4-(2-METIL-3-(4-OKSOHINAZOLIN-3(4H)-IL)FENIL)-9H-PIRIDO[3,4-B]INDOL-1-KARBOKSAMID [0581]

[0582] Komparativni primer 76 je objavljen u WO 2011/159857 kao primer 38 i pripremljen je u skladu sa procedurom koja je u njemu opisana.

BIOLOŠKI TESTOVI

[0583] Farmakološka svojstva jedinjenja ovog predmetnog pronalaska mogu da budu potvrđena brojnim biološkim testovima. Primeri bioloških testova, koji slede, izvedeni su sa jedinjenjima predmetnog pronalaska.

TEST HUMANOG REKOMBINANTNOG BTK ENZIMA

[0584] U posude sa dnom oblika slova V sa 384 bunarića su dodata testirana jedinjenja, humani rekombinantni Btk (1 nM, Invitrogen Corporation), fluoresceinovan peptid (1.5 µM), ATP (20 µM), i pufer za testiranje (20 mM HEPES pH 7.4, 10 mM MgCl2, 0.015% Brij 35 surfaktant i 4 mM DTT u 1.6% DMSO), sa finalnom zapreminom od 30 µL. Posle inkubacije na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta, reakcija je završena dodavanjem 45 µL 35 mM EDTA svakom uzorku. Reakciona smeša je analizirana na Caliper LABCHIP® 3000 (Caliper, Hopkinton, MA) pomoću elektroferetskog razdvajanja fluorescentnog supstrata i fosforilizovanog proizvoda. Podaci inhibicije su izračunati poređenjem sa reakcijama sa kontrolama bez enzima za 100% inhibicije i kontrolama bez inhibitora za 0% inhibicije. Krive doznog odgovora su generisane da se odredi koncentracija koja je potrebna za inhibiranje 50% kinazne aktivnosti (IC50). Jedinjenja su rastvorena u 10 mM u DMSO i procenjena u jedanaest koncentracija.

TEST ZA RAMOS FLIPR

[0585] Ramos RA1 B ćelije (ATCC CRL-1596) u gustini od 2 x 10<6>ćelija/mL u RPMI bez fenol crvenog (Invitrogen 11835-030) i 50 mM HEPES (Invitrogen 15630-130) koji sadrži 0.1% BSA (Sigma A8577) su dodate jednoj polovini zapremine pufera sa kalcijumom za nalivanje (“BD bulk” kit za probenecid senzitivne testove, #640177) i inkubirani su na sobnoj temperaturi u mraku tokom 1 sata. Ćelije koje su napunjene bojom su istaložene (Beckmann GS-CKR, 1200 rpm, sobna temperatura, 5 minuta) i ponovo rastvorene na sobnoj temperaturi u RPMI bez fenol crvenog sa 50 mM HEPES i 10% FBS do gustine od 1 x 10<6>ćelija/mL. Alikvoti od 150 µL (150,000 ćelija po bunariću) su naneti u ploče obložene poli-D-lizinom sa 96 bunarića (BD 35 4640) i kratko centrifugirane (Beckmann GS-CKR 800 rpm, 5 min, bez pauze). Zatim, 50 µL razblaženja jedinjenja u 0.4% DMSO/RPMI bez fenol crvenog 50 mM HEPES 10% FBS su dodati u bunariće i ploča je inkubirana na sobnoj temperaturi u mraku tokom 1 sata. Ploča koja se testira je kratko centrifugirana kao iznad pre merenja nivoa kalcijuma.

[0586] Korišćenjem FLIPR1 (Molecular Devices), ćelije su stimulisane dodavanjem kozjeg anti-humanog IgM (Invitrogen AHI0601) do 2.5 µg/mL. Promene u intracelularnim koncentracijama kalcijuma su izmerene za 180 sekundi i procenat inhibicije je određen u odnosu na najviše nivoe kalcijuma koji su opaženi u prisustvu samo stimulacije.

TEST JAK2 TIROZIN KINAZE

[0587] Primećeno je da jedinjenja sa aktivnošću protiv Jak2 tirozin kinaze izazivaju trombocitopeniju, anemiju i neutropeniju kod humanih pacijenata u kliničkim ispitivanjima (videti, na primer, Pardanani, A., Leukemia, 26:1449-1451 (2012)). Jak2 signaliziranje se dešava preko EPO i TPO, koji kontrolišu proliferaciju eritrocita i trombocita, redom. Stoga, inhibicija Jak2 tirozin kinaze može potencijalno da vodi do neželjenih efekata u klinici. Btk inhibitori sa poboljšanom selektivnošću iznad Jak2 tirozin kinaze su poželjni u cilju da se smanje ciljni neželjeni efekti koji su povezani sa inhibicijom Jak2 tirozin kinaze.

[0588] Testovi su izvedeni u pločama sa dnom u obliku V sa 384 bunarića. Finalna zapremina testa je 30 µl pripremljena od 15 µl dodataka enzima i supstrata (fluoresceinovani peptid i ATP) i test jedinjenja u puferu za testiranje (100 mM HEPES pH 7.4, 10 mM MgCl2, 25 mM beta-glicerolfosfat, 0.015% Brij 35 surfaktant i 4 mM DTT). Reakcija je inicirana kombinacijom Jak2 tirozin kinaze sa supstratima i test jedinjenjima. Reakciona smeša je inkubirana na sobnoj temperaturi tokom 60 minuta i završena dodavanjem 45 µL od 35 mM EDTA svakom uzorku. Reakciona smeša je analizirana na Caliper LABCHIP® 3000 uz pomoć elektroforetičkog odvajanja fluorescentnog supstrata i fosforizovanog proizvoda. Podaci inhibicije su izračunati poređenjem sa reakcijama sa kontrolama bez enzima za 100% inhibicije i reakcijama samo sa transporterom za 0% inhibicije. Finalna koncentracija u testovima je ATP, 30 µM; Jak2 fluorescentni peptid, 1.5 µM; Jak2, 1 nM; i DMSO, 1.6%. Krive doznih odgovora su generisane da odrede koncentraciju koja je zahtevana za inhibiranje 50% kinazne aktivnosti (IC50). Jedinjenja su rastvorena u 10 mM u DMSO i procenjena u jedanaest koncentracija, svaka u duplikatu. IC50 vrednosti su izvedene pomoću ne-linearne regresione analize.

TEST BCR STIMULISANE CD69 EKSPRESIJE U B ĆELIJAMA NA UZORKU PUNE KRVI

[0589] Efikasnost jedinjenja Btk inhibitor u supresiji CD69 ekspresije u testovima u humanim B ćelijama na uzorku pune krvi je korisna za predviđanje efikasnih doza u klinici i smanjivanje potencijalnih neželjenih efekata. Očekivano je da jedinjenja Btk inhibitor koja imaju veću aktivnost u testu CD69 ekspresije na uzorku pune krvi iziskuju niže doze nego jedinjenja koja imaju nižu aktivnost, i očekivano je da prouzrokuju manje neželjenih nuspojava. (Uetrecht, Chem. Res. Toxicol., 12:387-395 (1999); Nakayama, Drug Metabolism and Disposition, 37(9):1970-1977 (2009); Sakatis, Chem. Res. Toxicol. (2012)).

[0590] Da se izmere BCR-stimulisane B ćelije, ACD-A uzorak ljudske pune krvi je tretiran sa raznim koncentracijama test jedinjenja i stimulisan sa 30 µg/mL AffiniPure kozjeg anti humanog IgM sa F(ab')2 fragmentom (Jackson 109-006-1299 – očišćen od endotoksina) i 10 ng/mL humanog IL-4 (PeproTech 200-04) tokom 18 sati na 37 °C sa agitacijom. Ćelije su blokirane sa humanim gama globulinom (Jackson 009-000-002) i bojene sa FITC-konjugovanim mišjim anti-humanim CD20 (BD Pharmingen 555622) i PE-konjugovanim mišjim anti-humanim CD69 monoklonskim antitelom (BD Pharmingen 555531), lizirane i fiksirane, zatim isprane. Količina CD69 ekspresije je kvantifikovana pomoću srednjeg intenziteta fluoroscencije (MFI) posle “gejtovanja” (odabiranja) CD20-pozitivne B ćelijske populacije kao što je izmereno uz pomoć FACS analize.

[0591] U testu BCR-stimulisane CD69 ekspresije u B ćelijama na uzorku pune krvi, povećana efikasnost jedinjenja Btk inhibitor je naznačena nižom CD69 IC50vrednošću.

Tabela 11

[0592] Jedinjenja predmetnog pronalaska, kao što je prikazano primerima 1 do 74, su upoređena sa komparativnim primerima 75 i 76, koji su stavljeni na uvid javnosti u američkom patentu br. 8,084,620 i WO 2011/159857, redom, i utvrđeno je da su povoljna. Jedinjenja predmetnog pronalaska imaju iznenađujuću prednost kombinacije aktivnosti Btk inhibicije i poboljšane kinazne selektivnosti aktivnosti Btk inhibicije prema Jak2 inhibitornoj aktivnosti. Kao što je prikazano u tabeli 11, u prijavljenim testovima, primeri 1 do 74 pokazuju iznenađujuću prednost kombinacije efikasnosti Btk inhibicione aktivnosti i poboljšane kinazne selektivnosti Btk inhibicione aktivnosti prena Jak2 inhibicionoj aktivnosti, kao što je naznačeno odnosom Jak2/Btk IC50 vrednosti. Povećana selektivnost za Btk kinazu prema Jak2 kinazi je naznačena većom vrednošću za odnos Jak2/Btk IC50 vrednosti. Primeri 1 do 74 imaju Btk IC50vrednosti manje od 5 nM i odnose Jak2/Btk IC50vrednosti od 150 i više. Nasuprot tome, komparativni primeri 75 i 76 imaju Btk IC50 vrednosti 2.6 i 6.9 nM i odnose Jak2/Btk IC50 vrednosti 92 i 29, redom.

[0593] Dodatno, jedinjenja predmetnog pronalaska, kao što je prikazano primerima 1 do 74, takođe imaju poboljšanu potentnost u testu BCR stimulisane CD69 ekpresije u B ćelijama na uzorku pune krvi, upoređeno sa komparativnim primerom 75. Kao što je prikazano u tabeli 11, u prijavljenim testovima, primeri 1 do 74 pokazuju iznenađujuću prednost kombinacije efikasnosti Btk inhibicione aktivnosti, poboljšanu kinaznu selektivnost Btk inhibicione aktivnosti prema Jak2 inhibicionoj aktivnosti, i poboljšanu potentnost u testu BCR-stimulisne CD69 ekspresije na uzorku pune krvi. Primeri 1 do 74 imaju Btk IC50 vrednosti manje od 5 nM, odnosi Jak2/Btk IC50vrednosti od 150 i više, i CD69 IC50vrednosti od 260 nM i manje.

Nasuprot tome, komparativni primer 75 ima Btk IC50 vrednost od 2.6 nM, odnos Jak2/Btk IC50vrednost od 92, i CD69 IC50vrednosti od 650 nM.

Claims (15)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje sa formulom (I):

   gde: dve isprekidane linije predstavljaju ili dve jednostruke ili dve dvostruke veze; Q je:

   R1je F, Cl, -CN, ili -CH3; R2 je Cl ili -CH3; R3 je -C(CH3)2OH ili -CH2CH2OH; Raje H ili -CH3; svaki Rbje nezavisno F, Cl, -CH3, i/ili -OCH3; i n je nula, 1, ili 2.
2. 2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 koje ima strukturu formule (IA):
3. 3. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-2 gde: Q je:
4. 4. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-3 koje ima strukturu formule (IIA-1):
5. gde R3je -C(CH3)2OH. 5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 koje ima strukturu formule (IB):
6. 6. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 i 5 gde: Q je:
7. 7. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 i 5-6 koje ima strukturu formule (IIB-1):
8. gde R3 je -C(CH3)2OH. 8. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1 i 5-6 koje ima strukturu formule (IIIB-2):
9. gde R3 je -C(CH3)2OH. 9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 gde je navedeno jedinjenje odabrano od: 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (1); 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (2); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(2-metil-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (3); 3-hloro-4-(R)-(3-(1,8-dimetil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (4); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(R)-(7-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (5); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(S)-(7-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (6); 3-hloro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(8-metoksi-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (7); 3-hloro-4-(R)-(3-(6-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (8); 3-hloro-4-(R)-(3-(7-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (9); 3-hloro-4-(R)-(3-(6,8-difluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (10); 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (11); 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (12); 3-hloro-4-(R)-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (13); 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (14); 3-cijano-4-(S)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2hidroksipropan-2-Il)-9H-karbazol-1-karboksamid (15 i 16); 3-fluoro-4-(R)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (17); 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (18); 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (19); 3-fluoro-4-(R)-(3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (20); 3-fluoro-4-(R)-(3-(R)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (21); 3-fluoro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (22); 3-hloro-4-(R)-(3-(3-(4-fluorofenil)-2,6-diokso-2,3-dihidropirimidin-1(6H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (23); 3-hloro-4-(R)-(3-(3-(4-fluorofenil)-2,6-diokso-2,3-dihidropirimidin-1(6H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (24); 6-hloro-5-(R)-(3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (25); 6-hloro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (26); 6-fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(R)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (27); 6-fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid (28); 4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-3-metil-9H-karbazol-1-karboksamid (29); 4-(R)-(3-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (30 i 31); 3-hloro-4-(R)-(3-(R)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (32); 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (33); 3-hloro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (34); 3-hloro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (35 i 36); 3-hloro-7-(2hidroksipropan-2-il)-4-(R)-(3-(5-metoksi-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-9H-karbazol-1-karboksamid (37); 3-hloro-4-(R)-(3-(5,7-diokso-5H-tiazolo[3,2-c]pirimidin-6(7H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (38 i 39); 3-fluoro-4-(R)-(3-(5-fluoro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (40 i 41); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (42); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(R)-(1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (43); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (44); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(R)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (45); 4-(R)-(2-hloro-3-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-3-fluoro-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (46); 3-hloro-4-(R)-(2-hloro-3-(8-fluoro-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)fenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid (47);
10. 10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 koje ima strukturu:
11. 11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 koje ima strukturu:
12. 12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 gde je navedeno jedinjenje: 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid u kristalnom obliku M-1 kao što je naznačeno uz pomoć frakcionih koordinata atoma koje su navedene ispod, Izračunate na temperaturi od oko 203 K; Koordinate atoma (x10<4>)

    3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid u kristalnom obliku H-1 kao što je naznačeno uz pomoć frakcionih koordinata atoma koje su navedene ispod, Izračunate na sobnoj temperaturi; Koordinate atoma (x10<4>)

    3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil(d3)-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid u kristalnom obliku M-1 kao što je naznačeno uz pomoć frakcionih koordinata atoma koje su navedene ispod, Izračunate na sobnoj temperaturi; Koordinate atoma (x10<4>)

    6-fluoro-5-(R)-(3-(S)-(8-fluoro-1-metil-2,4-diokso-1,2-dihidrohinazolin-3(4H)-il)-2-metilfenil)-2-(S)-(2-hidroksipropan-2-il)-2,3,4,9-tetrahidro-1H-karbazol-8-karboksamid u kristalnom obliku M2-1 kao što je naznačeno uz pomoć frakcionih koordinata atoma koje su navedene ispod, Izračunate na temperaturi od oko 173 K; Koordinate atoma (x10<4>)

    ili 3-hloro-4-(R)-(3-(S)-(5-hloro-1,3-diokso-1H-pirido[1,2-c]pirimidin-2(3H)-il)-2-metilfenil)-7-(2-hidroksipropan-2-il)-9H-karbazol-1-karboksamid u kristalnom obliku M2-1 kao što je naznačeno uz pomoć frakcionih koordinata atoma koje su navedene ispod, Izračunate na temperaturi od oko 173 K; Koordinate atoma (x10<4>)
13. 13. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-12 i farmaceutski prihvatljiv nosač.
14. 14. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-12 za primenu u terapiji.
15. 15. Jedinjenje u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-12 za primenu u terapiji u lečenju autoimune bolesti ili hronične inflamatorne bolesti.