RS56786B1 - Pirimidinoni kao inhibitori faktora xia - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PREDMETNOG PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se uopšteno odnosi na nova makrociklična jedinjenja, i njihove analoge, koji su inhibitori faktora XIa i/ili kalikreina plazme, kompozicije koje ih sadrže, i navedena jedinjenja za primenu, na primer, za lečenje ili profilaksu tromboembolijskih poremećaja, ili za lečenje retinalne vaskularne permeabilnosti koja je povezana sa dijabetesnom retinopatijom i dijabetesnim makularnim edemom.

STANJE TEHNIKE

[0002] Tromboembolijski poremećaji ostaju vodeći uzrok smrti u razvijenim zemljama uprkos dostupnosti antikoagulanasa kao što je varfarin (COUMADIN®), heparin, heparini male molekulske mase (low molecular weight heparins - LMWH), i sintetski pentasaharidi i antitrombocitna sredstva kao što su aspirin i klopidogrel (PLAVIX®). Oralni antikoagulans varfarin, inhibira post-translaciono sazrevanje faktora koagulacije VII, IX, X i protrombina, i pokazao se efikasnim u obe, venskoj i arterijskoj trombozi. Međutim, njegova upotreba je ograničena usled njegovog uskog terapijskog indeksa, sporog nastupanja terapijskog efekta, brojnih interakcija sa hranom i lekovima, i zbog potrebe za praćenjem i podešavanjem doze. Tako je otkrivanje i razvijanje bezbednih i efikasnih oralnih antikoagulanasa za prevenciju i lečenje tromboembolijskih poremećaja širokog spektra postalo sve važnije.

[0003] Jedan pristup je da se inhibira stvaranje trombina ciljanjem inhibicije koagulacionog faktora XIa (FXIa). Faktor XIa je plazma serin proteaza uključena u regulaciju koagulacije krvi, koja je inicirana in vivo vezivanjem tkivnog faktora (TF) za faktor VII (FVII) čime se stvara faktor VIIa (FVIIa). Dobijeni TF:FVIIa kompleks aktivira faktor IX (FIX) i faktor X (FX) što dovodi do stvaranja faktora Xa (FXa). Formirani FXa katalizira transformaciju protrombina u male količine trombina pre nego što ovaj put ne bude prekinut inhibitorom puta tkivnog faktora (tissue factor pathway inhibitor - TFPI). Proces koagulacije se dalje propagira putem povratne aktivacije Faktora V, VIII i XI pomoću katalitičkih količina trombina. (Gailani, D. i ostali, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 27:2507-2513 (2007).) Nastali nalet trombina konvertuje fibrinogen u fibrin koji polimerizuje da bi formirao strukturni okvir krvnog ugruška, i aktivira trombocite, koji su ključna ćelijska komponenta koagulacije (Hoffinan, M., Pregledi Krvi, 17:S1-S5 (2003)). Stoga, faktor XIa igra ključnu ulogu u propagiranju ove amplificirane petlje i tako je atraktivna meta za anti-trombotičku terapiju.

[0004] Plazma prekalikrein je zimogen tripsinu-slične serin proteaze i prisutan je u plazmi od 35 do 50 µg/mL. Struktura gena je slična strukturi faktora XI. Uopšte, amino kiselinska sekvenca plazma kalikreina ima 58% homologije faktora XI. Smatra se da plazma kalikrein igra ulogu u brojnim inflamatornim poremećajima. Glavni inhibitor plazma kalikreina je serpin C1 inhibitor esteraze. Pacijenti kod kojih je prisutan genetski nedostatak C1 inhibitor esteraze boluju od naslednog angioedema (hereditary angioedema - HAE) koji rezultira povremenim oticanjem lica, ruku, grla, gastro-intestinalnog trakta i genitalija. Blisteri koji se formiraju tokom akutnih epizoda sadrže visoke nivoe plazma kalikreina koji rastavlja kininogen velike molekulske mase oslobađajući bradikinin što vodi povećanju vaskularne propustljivosti. Lečenje velikim proteinskim plazma kalikrein inhibitorom se pokazalo efikasno za lečenje naslednog angioedema - HAE sprečavanjem oslobađanja bradikinina koji izaziva povećanu vaskularnu propustljivost (Lehmann, A., "Ecallantide (DX-88), a plasma kallikrein inhibitor for the treatment of hereditary angioedema and the prevention of blood loss in on-pump cardiothoracic surgery", Expert Opin. Biol. Ther., 8:187-199 (2008)).

[0005] Plazma kalikrein-kinin sistem je abnormalno prisutan kod pacijenata sa uznapredovalim dijabetesnim makularnim edemom. Nedavno je objavljeno da plazma kalikrein doprinosi retinalnoj vaskularnoj disfunkciji kod pacova sa dijabetesom (Clermont, A. i ostali, "Plazma kalikrein posreduje u retinalnoj vaskularnoj disfunkciji i izaziva zadebljanje retine kod pacova sa dijabetesom", Dijabetes, 60:1590-1598 (2011)). Osim toga, primena inhibitora plazma kalikreina ASP-440 je poboljšala i retinalnu vaskularnu propustljivost i abnormalnosti retinalnog krvotoka kod pacova sa dijabetesom. Stoga, inhibitor plazma kalikreina treba da kao tretmbude od koristi za smanjenje retinalne vaskularne propustljivosti povezane sa dijabetesnom retinopatijom i dijabetesnim makularnim edemom. Druge komplikacije dijabetesa kao što su cerebralna hemoragija, nefropatija, kardiomiopatija i neuropatija, od kojih svaka ima veze sa plazma kalikreinom mogu takođe biti razmatrane kao mete inhibitora plazma kalikreina.

[0006] Do danas, nijedan sintetski inhibitor plazma kalikreina koji je mali molekul nije odobren za medicinsku primenu. Veliko-molekulski inhibitori plazma kalikreina predstavljaju rizike od anafilaktičkih reakcija, kao što je prijavljeno za Ecallantide. Tako ostaje potreba za jedinjenja koja inhibiraju plazma kalikrein, da ne izazivaju anafilaksu i da su dostupni oralno. Osim toga, molekuli u poznatoj oblasti prikazuju visokopolarnu i jonizujuću gvanidin ili amidin funkcionalnost. Dobro je poznato da ove funkcionalnosti mogu biti ograničavajuće za crevnu propustljivost i stoga za oralnu dostupnost.

[0007] WO2014/022767 stavlja na uvid javnosti derivate dihidropiridona koji su korisni kao inhibitori Faktora XIa.

REZIME PREDMETNOG PRONALASKA

[0008] Predmetni pronalazak obezbeđuje nova makrociklična jedinjenja, njihove analoge, uključujući stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihove solvate, koji su korisni kao selektivni inhibitori enzima serinske proteaze, posebno faktora XIa i/ili kalikreina plazme.

[0009] Predmetna objava takođe obezbeđuje procese i intermedijare za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0010] Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač i najmanje jedno jedinjenje predmetnog pronalaska ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihove solvate.

[0011] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da budu korišćena u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskih poremećaja.

[0012] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da budu korišćena u lečenju retinalne vaskularne permeabilnosti koja je povezana sa dijabetesnom retinopatijom i dijabetesnim makularnim edemom.

[0013] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da budu korišćena u terapiji.

[0014] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da budu korišćena u proizvodnji leka za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0015] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu da budu korišćena sama, u kombinaciji sa predmetnim pronalaskom, ili u kombinaciji sa jednim ili više, poželjno jednim do dva druga agensa.

[0016] Ova i druga svojstva predmetnog pronalaska biće predstavljena u proširenoj formi kako se objava bude nastavljala.

DETALJAN OPIS PREDMETNOG PRONALASKA

I. JEDINJENJA PREDMETNOG PRONALASKA

[0017] U jednom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje, između ostalog, jedinjenja sa Formulom (I):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihove solvate, gde: prsten A je nezavisno odabran od

prsten B je nezavisno odabran od

R<1>je nezavisno odabran od H i C1-4alkila;

R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, CHF2, i COOH;

R<3>je nezavisno odabran od H, CHF2, CD3, i CH3;

R<4>je nezavisno odabran od H i F; i

R<5>je nezavisno odabran od H, F, Cl, CH3, i OCH3.

[0018] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa Formulom (II):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihove solvate, gde: R<1>je C1-4alkil;

R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, i CHF2;

R<3>je nezavisno odabran od CHF2, CD3, i CH3;

R<4>je H; i

R<5>je nezavisno odabran od F i Cl.

[0019] U drugom aspektu, predmetna objava obezbeđuje jedinjenja sa formulom (III):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihove solvate, gde: R<1>je C1-4alkil;

R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, i CHF2;

R<3>je nezavisno odabran od CHF2, CD3, i CH3;

R<4>je H; i

R<5>je nezavisno odabran od F i Cl.

[0020] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa formulom (IV):

ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihove solvate, gde: R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, i CHF2; i

R<3>je nezavisno odabran od CHF2, CD3, i CH3.

[0021] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja sa formulom (I), ili stereoizomere, tautomere, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihove solvate, gde:

prsten A je nezavisno odabran od

prsten B je

R<1>je nezavisno odabran od H i C1-4alkila;

R<2>je COOH;

R<3>je nezavisno odabran od H, CHF2, CD3, i CH3;

R<4>je nezavisno odabran od H i F; i

R<5>je nezavisno odabran od H, F, Cl, CH3, i OCH3.

[0022] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenja odabrana od

ili stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljive soli, ili njihovih solvata.

[0023] U drugom tehničkom rešenju, R<1>je nezavisno odabran od grupe koja se sastoji od H i C1-4alkila.

[0024] U drugom tehničkom rešenju, R<1>je nezavisno odabran od grupe koja se sastoji od H i metila, etila, i izopropila.

[0025] U drugom aspektu, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje koje je odabrano od bilo koje podliste jedinjenja koji su navedeni kao primeri u predmetnoj prijavi.

[0026] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Faktor XIa ili plazma kallikrein Ki vrednosti ≤ 10 µM.

[0027] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Faktor XIa ili plazma kallikrein Ki vrednosti ≤ 1 µM.

[0028] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Faktor XIa ili plazma kallikrein Ki vrednosti≤ 0.5 µM.

[0029] U drugom tehničkom rešenju, jedinjenja predmetnog pronalaska imaju Faktor XIa ili plazma kallikrein Ki vrednosti ≤ 0.1 µM.

II. DRUGA TEHNIČKA REŠENJA PREDMETNOG PRONALASKA

[0030] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njihove solvate.

[0031] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač i najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njegov solvat.

[0032] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži: farmaceutski prihvatljiv nosač i terapijski efikasnu količinu najmanje jednog od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njegov solvat.

[0033] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje proces za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0034] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje intermedijer za pravljenje jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0035] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e). U poželjnom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde si dodatni terapijski agens(i) antitrombocitni agens ili njihova kombinacija. Poželjno, anti-trombocitni agens(i) su klopidogrel i/ili aspirin, ili njihova kombinacija.

[0036] U drugom tehničkom rešenju, predmetna objava obezbeđuje metod za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja koji obuhvata administraciju pacijentu, kod kojeg postoji potreba za takvim lečenjem i/ili profilaksom, terapijski efikasne količine najmanje jednog od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljive soli, ili njegovog solvata.

[0037] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njegov solvat, za primenu u terapiji.

[0038] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njegov solvat, za primenu u terapiji za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0039] U drugom tehničkom rešenju, predmetna objava takođe obezbeđuje upotrebu jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljive soli, ili njegovog solvata, za pravljenje leka za lečenje i/ili profilaksu tromboembolijskog poremećaja.

[0040] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje prvi i drugi terapijski agens za primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja, gde je prvi terapijski agens jedinjenje predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljiva so, ili njegov solvat, i drugi terapijski agens je najmanje jedan agens odabran od inhibitora faktora Xa kao što je apiksaban, rivaroksaban, betriksaban, edoksaban, agens antikoagulacije, anti-trombocitni agens, agens koji inhibira trombin kao što je dabigatran, trombolitički agens, i fibrinolitički agens. Poželjno, drugi terapijski agens je najmanje jedan agens koji je odabran od: varfarina, nefrakcionisanog heparina, heparina male molekulske mase, sintetskog pentasaharida, hirudina, argatrobana, aspirina, ibuprofena, naproksena, sulindaka, indometacina, mefenamata, droksikama, diklofenaka, sulfinpirazona, piroksikama, tiklopidina, klopidogrela, tirofibana, eptifibatida, abciksimaba, melagatrana,

1

desulfatohirudina, tkivnog aktivatora plazminogena, modifikovanog tkivnog aktivatora plazminogena, anistreplaze, urokinaze, i streptokinaze. Poželjno, drugi terapijski agens je najmanje jedan anti-trombocitni agens. Poželjno, anti-trombocitni agens(i) su klopidogrel i/ili aspirin, ili njihova kombinacija.

[0041] Tromboembolijski poremećaj uključuje arterijske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, venske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, arterijske cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje, i venske cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje. Primeri tromboembolijskog poremećaja uključuju, ali nisu ograničeni na, nestabilnu anginu, akutni koronarni sindrom, atrijalnu fibrilaciju, prvi infarkt miokarda, rekurentni infarkt miokarda, ishemijsku iznenadnu smrt, prolazni ishemijski napad, moždani udar, aterosklerozu, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, vensku trombozu, trombozu dubokih vena, tromboflebitis, arterijsku emboliju, koronarnu arterijsku trombozu, cerebralnu arterijsku trombozu, cerebralnu emboliju, bubrežnu emboliju, plućnu emboliju, i trombozu koja je posledica medicinskih implantata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja pospešuje trombozu.

[0042] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njegov solvat za lečenje i/ili profilaksu inflamatornog poremećaja. Primeri inflamatornog poremećaja uključuju, ali nisu ograničeni na, sepsu, sindrom akutnog respiratornog distresa, i sindrom sistemskog inflamatornog odgovora.

[0043] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje najmanje jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska ili stereoizomer, tautomer, farmaceutski prihvatljivu so, ili njegov solvat za primenu u profilaksi bolesti ili stanja u kojima je prisutno dejstvo kalikrein plazme.

[0044] Bolest ili stanje u kojem je umešano dejstvo kalikrein plazme uključuje, ali nije ograničeno na, oštećenu oštrinu vida, dijabetesnu retinopatiju, dijabetesni makularni edem, nasledni angioedem, dijabetes, pankreatitis, nefropatiju, kardio miopatiju, neuropatiju, inflamatornu bolest creva, artritis, inflamaciju, septični šok, hipotenziju, kancer, sindrom respiratornog distresa odraslih, diseminovanu intravaskularnu koagulaciju, i kardiopulmonalni bajpas prilikom operacije.

[0045] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovano pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatni terapijski agens(e) za istovremenu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u terapiji.

[0046] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje kombinovano pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska i dodatnog terapijskog agensa(agenasa) za istovremenu, odvojenu ili sekvencijalnu primenu u lečenju i/ili profilaksi tromboembolijskog poremećaja.

[0047] Predmetni pronalazak može da bude predstavljen u drugim specifičnim oblicima bez odstupanja od njegovih esencijalnih karakteristika. Ovaj pronalazak obuhvata sve kombinacije poželjnih aspekata pronalaska koji su ovde istaknuti. Podrazumeva se da bilo koje i sva rešenja predmetnog pronalaska mogu da budu povezana sa bilo kojim drugim rešenjem ili rešenjima koja opisuju dodatna rešenja. Takođe se podrazumeva da svaki individualni element rešenja je sopstveno nezavisno rešenje. Osim toga, namera je da bilo koji element rešenja bude kombinovan sa bilo kojim i svim drugim elementima iz bilo kog rešenja da opiše dodatno rešenje.

III. HEMIJA

[0048] Kroz specifikaciju i priložene patentne zahteve, data hemijska formula ili ime obuhvata sve stereo i optičke izomere i njihove racemate gde takvi izomeri postoje. Ukoliko nije drugačije naznačeno, svi hiralni (enantiomerni i diastereomerni) i racemski oblici su u okviru obima predmetog pronalaska. Mnogi geometrijski izomeri C=C dvostruke veze, C=N dvostruke veze, prstenasti sistemi, i slično mogu takođe da budu prisutni u jedinjenjima, i svi takvi stabilni izomeri su razmatrani u predmetnom pronalasku. Cis- i trans- (ili E- i Z-) geometrijski izomeri jedinjenja predmetnog pronalaska su opisani i mogu da budu izolovani kao smeša izomera ili kao odvojeni izomerni oblici. Predmetna jedinjenja mogu da budu izolovana u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Optički aktivni oblici mogu da budu pripremljeni rastavljanjem racemskih oblika ili sintezom iz optički aktivnih početnih materijala. Svi procesi koji su korišćeni za pripremanje jedinjenja predmetnog pronalaska i intermedijera napravljenih ovde smatraju se delom predmetnog pronalaska. Kada su enantiomerni ili diastereomerni proizvodi pripremljeni, mogu da budu razdvojeni konvencionalnim metodama, na primer, hromatografijom ili frakcionom kristalizacijom. U zavisnosti od stanja u procesu krajnji proizvodi predmetnog pronalaska dobijeni su ili u slobodnom (neutralnom) ili u obliku soli. I slobodan oblik i njegove soli i proizvodi su u okviru obima pronalaska. Ako se želi, jedan oblik jedinjenja može da bude pretvoren u drugi oblik. Slobodna baza ili kiselina mogu da budu pretvoreni u so; so može da bude pretvorena u slobodno jedinjenje ili drugu so; smeša izomernih jedinjenja predmetnog pronalaska može da bude razdvojena na indidvidualne izomere. Jedinjenja predmetnog pronalaska, slobodan oblik i njegove soli, mogu da postoje u višestrukim tautomernim oblicima, u kojima su atomi vodonika prenešeni u druge delove molekula i hemijske veze između atoma molekula su zbog toga preuređene. Podrazumeva se da svi tautomerni oblici, u meri u kojoj mogu postojati, uključeni u prolazak.

[0049] Termin "stereoizomer" odnosi se na izomere identične konstitucije koji se razlikuju u rasporedu njihovih atoma u prostoru. Enantiomeri i diastereomeri su primeri stereoizomera. Termin "enantiomer" odnosi se na jedan par molekularnih vrsta koji su slika u ogledalu ovog drugog i ne mogu da se preklope. Termin "diastereomer" odnosi se na stereoizomere koji nisu slike u ogledalu. Termin "racemat" ili "racemska smeša" odnosi se na kompoziciju koja je sastavljena od ekvivalentnih količina dve enantiomerne vrste, gde je kompozicija lišena optičke aktivnosti.

[0050] Simboli "R" i "S" predstavljaju konfiguraciju supstituenata oko hiralnog ugljenikovog(ih) atoma. Izomerni deskriptori "R" i "S" su korišćeni kao što je opisano ovde da ukazuju na konfiguraciju(e) atoma u odnosu na jezgro molekula i nameravano je da se koriste kao što je definisano u literaturi (IUPAC Recommendations 1996, Pure and Applied Chemistry, 68:2193-2222 (1996)).

[0051] Termin "hiralni" odnosi se na strukturnu karakteristiku molekula koja mu onemogućava preklapanje sa svojom slikom u ogledalu. Termin "homohiralni" odnosi se na stanje enantiomerne čistoće. Termin "optička aktivnost" odnosi se na stepen do kojeg homohiralni molekul ili neracemska smeša hiralnih molekula rotira ravan polarizovanog svetla.

[0052] Kao što je ovde korišćeno, termin "alkil" ili "alkilen" nameravano je da uključi razgranati i prav lanac zasićenih alifatičnih ugljovodoničnih grupa koje imaju specifičan broj ugljenikovih atoma. Na primer, "C1to C10alkil" ili "C1-10alkil" (ili alkilen), nameravano je da uključi C1, C2, C3, C4, C5, C6, C7, C8, C9, i C10alkil grupe. Dodatno, na primer, "C1do C6alkil" ili "C1-C6alkil" označava alkil koji ima 1 do 6 ugljenikovih atoma. Alkil grupa može da bude nesupstituisana ili supstituisana sa najmanje jednim vodonikom koji se zamenjuje drugom hemijskom grupom. Primer alkil grupa uključuje, ali nije ograničen na, metil (Me),

1

etil (Et), propil (npr., n-propil i izopropil), butil (npr., n-butil, izobutil, t-butil), i pentil (npr., n-pentil, izopentil, neopentil). Kada je "C0alkil" ili "C0alkilen" korišćen, namenjen je da označi direktnu vezu.

[0053] "Alkinil" ili "alkinilen" je nameravano da uključi ugljovodonične lance ili prave ili razgranate konfiguracije koja ima jednu ili više, poželjno jednu do tri, ugljenik-ugljenik trostruke veze koje mogu da se dese u bilo kojoj stabilnoj tački duž lanca. Na primer, "C2to C6alkinil" ili "C2-6alkinil" (ili alkinilen), je nameravano da uključi C2, C3, C4, C5, i C6alkinil grupe; kao što je etinil, propinil, butinil, pentinil, i heksinil.

[0054] Termin "alkoksi" ili "alkiloksi" odnosi se na -O-alkil grupu. "C1to C6alkoksi" ili "C1-

6alkoksi" (ili alkiloksi), je nameravano da uključi C1, C2, C3, C4, C5, i C6alkoksi grupe. Primer alkoksi groupa uključuje, ali nije ograničen na, metoksi, etoksi, propoksi (npr., npropoksi i izopropoksi), i t-butoksi. Slično, "alkiltio" ili "tioalkoksi" predstavlja alkil grupu kao što je definisano iznad sa naznačenim brojem ugljenikovih atoma koji su vezani preko sumpornog mosta; na primer, metil-S- i etil-S-.

[0055] "Halo" ili "halogen" uključuje fluoro, hloro, bromo, i jodo. "Haloalkil" je nameravano da uključi i razgranat i prav lanac zasićenih alifatičnih ugljovodoničnih grupa koje imaju specifičan broj ugljenikovih atoma, supstituisanih sa 1 ili više halogena. Primeri haloalkila uključuju, ali nisu ograničeni na, fluorometil, difluorometil, trifluorometil, trihlorometil, pentafluoroetil, pentahloroetil, 2,2,2-trifluoroetil, heptafluoropropil, i heptahloropropil. Primeri haloalkila takođe uključuju "fluoroalkil" koji je nameravano da uključi i razgranati i prav lanac zasićenih alifatičnih ugljovodoničnih grupa koje imaju specifičan broj ugljenikovih atoma, supstituisanih sa 1 ili više atoma fluora.

[0056] "Haloalkoksi" ili "haloalkiloksi" predstavlja haloalkil grupu kao što je definisano iznad sa naznačenim brojem ugljenikovih atoma koji su vezani preko kiseonikovog mosta. Na primer, "C1to C6haloalkoksi" ili "C1-6haloalkoksi", je nameravano da uključi C1, C2, C3, C4, C5, i C6haloalkoksi grupe. Primeri haloalkoksi uključuju, ali nisu ograničeni na, trifluorometoksi, 2,2,2-trifluoroetoksi, i pentafluorotoksi. Slično, "haloalkiltio" ili "tiohaloalkoksi" predstavlja haloalkil grupu kao što je definisano iznad sa naznačenim brojem ugljenikovih atoma koji su vezani preko sumpornog mosta; na primer, trifluorometil-S-, i pentafluoroetil-S-.

[0057] Termin "amino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NH2.

[0058] Termin "supstituisani amino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na definisane termine ispod koji imaju sufiks "amino" kao što je "arilamino", "alkilamino", "arilamino", itd.

[0059] Termin "alkoksikarbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na alkoksi grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko karbonilne grupe.

[0060] Termin "alkoksikarbonilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde R je alkoksikarbonil grupa.

[0061] Termin "alkilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR, gde je R alkil grupa.

[0062] Termin "alkilkarbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na alkil grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko karbonilne grupe.

[0063] Termin "alkilkarbonilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde R je alkilkarbonil grupa.

[0064] Termin "aminosulfonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -SO2NH2.

[0065] Termin "arilalkil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na alkil grupu koja je supstituisana sa jednom, dva, ili tri aril grupe.

[0066] Termin"arilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde je R aril grupa.

[0067] Termin "arilkarbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na aril grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko karbonilne grupe.

[0068] Termin "arilkarbonilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde je R arilkarbonil grupa.

[0069] Termin"karbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -C(O)-.

[0070] Termin"cijano", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -CN.

[0071] Termin"cikloalkilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde R je cikloalkil grupa.

[0072] Termin"cikloalkilkarbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na cikloalkil grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko karbonilne grupe.

[0073] Termin "cikloalkilkarbonilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde je R cikloalkilkarbonil grupa.

1

[0074] Termin"cikloalkiloksi", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na cikloalkil grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko atoma kiseonika.

[0075] Termin "dialkilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na NR2, gde je svako R alkil grupa. Dve alkil grupe su iste ili različite.

[0076] Termin "haloalkoksi", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na haloalkil grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko atoma kiseonika.

[0077] Termin "haloalkil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na alkil grupu koja je supstituisana sa jednim, dva, tri ili četiri halogen atoma.

[0078] Termin "haloalkilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde je R haloalkil grupa.

[0079] Termin "karbonil" odnosi se na C(=O).

[0080] Termin "karboksi" odnosi se na C(=O)OH.

[0081] Termin"haloalkilkarbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na haloalkil grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko karbonilne grupe.

[0082] Termin "haloalkilkarbonilamino", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na -NHR gde R je haloalkilkarbonil grupu.

[0083] Termin "alkilkarbonil" odnosi se na alkil ili supstituisani alkil koji je vezan za karbonil.

[0084] Termin "alkoksikarbonil", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na alkoksi grupu koja je vezana za osnovni deo molekula preko karbonilne grupe.

[0085] Termin"hidroksi" ili "hidroksil" odnosi se na OH.

[0086] Termin"cikloalkil" odnosi se na ciklizovane alkil grupe, uključujući mono-, bi- ili policiklične prstenaste sisteme. "C3do C7cikloalkil" ili "C3-7cikloalkil" nameravano je da uključi C3, C4, C5, C6, i C7cikloalkil grupe. Primeri cikloalkil grupa uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, i norbornil. Razgranate cikloalkil grupe kao što je 1-metilciklopropil i 2-metilciklopropil su uključene u definiciju "cikloalkil".

[0087] Kao što je ovde korišćeno, "karbociklus" ili "karbociklični deo" nameravano je da označi bilo koji stabilni 3-, 4-, 5-, 6-, 7-, ili 8-očlani monociklični ili biciklični ili 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, ili 13-očlani biciklični ili triciklični ugljovodonični prsten, bilo koji od njih koji

1

može da bude zasićen, delimično nezasićen, nezasićen ili aromatičan. Primeri takvih karbociklusa uključuju, ali nisu ograničeni na, ciklopropil, ciklobutil, ciklobutenil, ciklopentil, ciklopentenil, cikloheksil, cikloheptenil, cikloheptil, cikloheptenil, adamantil, ciklooktil, ciklooktenil, ciklooktadienil, [3.3.0]biciklooktan, [4.3.0]biciklononan, [4.4.0]biciklodekan (dekalin), [2.2.2]biciklooktan, fluorenil, fenil, naftil, indanil, adamantil, antracenil, i tetrahidronaftil (tetralin). Kao što je prikazano iznad, premošteni prstenovi su takođe uključeni u definiciju karbociklusa (npr., [2.2.2]biciklooktan). Poželjni karbociklusi, sve dok nije drugačije naznačeno, su ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, fenil, i indanil. Kada je termin "karbociklus" korišćen, nameravano je da uključi "aril". Premošteni prsten dešava se kada jedan ili više atoma ugljenika vezuju dva nesusedna ugljenikova atoma. Poželjni mostovi su jedan ili dva atoma ugljenika. Primećeno je da most uvek pretvara monociklični prsten u triciklični prsten. Kada je prsten premošten, supstituenti obeleženi na prstenu mogu takođe da budu prisutni na mostu.

[0088] Kao što je ovde korišćeno, termin " biciklični karbociklus" ili "biciklična karbociklična grupa" je nameravano da označi stabilni 9- ili 10-člani karbociklični prstenasti sistem koji sadrži dva fuzionisana prstena i sastoji se od ugljenikovih atoma. Od dva fuzionisana prstena, jedan prsten je benzo prsten fuzionisan sa drugim prstenom; i drugi prsten je 5- ili 6-očlani ugljenikov prsten koji je zasićen, delimično nezasićen, ili nezasićen. Biciklična karbociklična grupa može da bude vezana za svoju bočnu grupu na bilo kom atomu ugljenika koji rezultira stabilnom strukturom. Biciklična karbociklična grupa opisana ovde može da bude supstituisana na bilo kom ugljeniku ako je dobijeno jedinjenje stabilno. Primeri biciklične karbociklične grupe su, ali nisu ograničeni na, naftil, 1,2-dihidronaftil, 1,2,3,4-tetrahidronaftil, i indanil.

[0089] "Aril" grupe odnose se na monociklične ili policiklične aromatične ugljovodonike, uključujući, na primer, fenil, naftil, i fenantranil. Aril delovi su dobro poznati i opisani, na primer, u Lewis, R.J., ed., Hawley's Condensed Chemical Dictionary, 13. izdanje, John Wiley & Sons, Inc., Nju Jork (1997). "C6ili C10aril" ili "C6-10aril" odnosi se na fenil i naftil. Sve dok nije drugačije naznačeno, "aril", "C6ili C10aril" ili "C6-10aril" ili "aromatični deo" može da bude nesupstituisan ili supstituisan sa 1 do 5 grupa, poželjno 1 do 3 grupa, OH, OCH3, Cl, F, Br, I, CN, NO2, NH2, N(CH3)H, N(CH3)2, CF3, OCF3, C(=O)CH3, SCH3, S(=O)CH3, S(=O)2CH3, CH3, CH2CH3, CO2H, i CO2CH3.

1

[0090] Termin"benzil" kao što je ovde korišćeno, odnosi se na metil grupu na kojoj je jedan od atoma vodonika zamenjen fenil grupom, gde navedena fenil grupa može opciono da bude supstituisana sa 1 do 5 grupa, poželjno 1 do 3 grupe, OH, OCH3, Cl, F, Br, I, CN, NO2, NH2, N(CH3)H, N(CH3)2, CF3, OCF3, C(=O)CH3, SCH3, S(=O)CH3, S(=O)2CH3, CH3, CH2CH3, CO2H, i CO2CH3.

[0091] Kao što je ovde korišćeno, termin "heterociklus" ili "heterociklični prsten" nameravano je da označi stabilni 3-, 4-, 5-, 6-, ili 7-očlani monociklični ili biciklični ili 7-, 8-, 9-, 10-, 11-, 12-, 13-, ili 14-očlani policiklični heterociklični prsten koji je zasićen, delimično zasićen, ili u potpunosti nezasićen, i koji sadrži atome ugljenika i 1, 2, 3 ili 4 heteroatoma koji su nezavisno odabrani od grupe koja se sastoji od N, O i S; i uključujući bilo koju policikličnu grupu u kojoj je bilo koji od iznad definisanih heterocikličnih prstenova fuzionisan za benzenov prsten. Heteroatomi azota i sumpora mogu opciono da budu oksidovani (t.j., N→O i S(O)p, gde p je 0, 1 ili 2). Atom azota može da bude supstituisan ili nesupstituisan (t.j., N ili NR gde R je H ili drugi supstituent, ako je definisano). Heterociklični prsten može da bude vezan za svoju bočnu grupu za bilo koji heteroatom ili atom ugljenika koji je stabilne strukture. Ovde opisani heterociklični prstenovi mogu da budu supstituisani na atomu ugljenika ili azota on ako je dobijeno jedinjenje stabilno. Azot u heterociklusu može opciono da bude kvaternizovan. Poželjno je da kada ukupan broj atoma S i O u heterociklusu prevazilazi 1, da onda ovi heteroatomi nisu susedni jedan sa drugim. Poželjno je da ukupan broj atoma S i O u heterociklusu nije veći od 1. Kada je termin "heterociklus" korišćen, nameravano je da uključi heteroaril.

[0092] Primeri heterociklusa uključuju, ali nisu ograničeni na, akridinil, azetidinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benztriazolil, benztetrazolil, benzizoksazolil, benzizotiazolil, benzimidazolinil, karbazolil, 4aH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, dekahidrohinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditiazinil, dihidrofuro[2,3-b]tetrahidrofuran, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, imidazolopiridinil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, izatinoil, izobenzofuranil, izohromanil, izoindazolil, izoindolinil, izoindolil, izohinolinil, izotiazolil, izotiazolopiridinil, izoksazolil, izoksazolopiridinil, metilendioksifenil, morfolinil, naftiridinil, oktahidroizohinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil, 1,2,5-oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolopiridinil, oksazolidinilperimidinil, oksindolil, pirimidinil, fenantridinil,

1

fenantrolinil, fenazinil, fenotiazinil, fenoksatiinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, piperidonil, 4-piperidonil, piperonil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolopiridinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazolil, piridoimidazolil, piridotiazolil, piridinil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2-pirolidonil, 2H-pirolil, pirolil, hinazolinil, hinolinil, 4H-hinolizinil, hinoksalinil, hinuklidinil, tetrazolil, tetrahidrofuranil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, 6H-1,2,5-tiadiazinil, 1,2,3-tiadiazolil, 1,2,4-tiadiazolil, 1,2,5-tiadiazolil, 1,3,4-tiadiazolil, tiantrenil, tiazolil, tienil, tiazolopiridinil, tienotiazolil, tienooksazolil, tienoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil, i ksantenil. Takođe su uključena fuzionisana prsten i spiro jedinjenja koja sadrže, na primer, heterocikluse iznad navedene.

[0093] Primeri 5- do 10-očlanih heterociklusa uključuju, ali nisu ograničeni na, piridinil, furanil, tienil, pirolil, pirazolil, pirazinil, piperazinil, piperidinil, imidazolil, imidazolidinil, indolil, tetrazolil, izoksazolil, morfolinil, oksazolil, oksadiazolil, oksazolidinil, tetrahidrofuranil, tiadiazinil, tiadiazolil, tiazolil, triazinil, triazolil, benzimidazolil, 1H-indazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benztetrazolil, benzotriazolil, benzizoksazolil, benzoksazolil, oksindolil, benzoksazolinil, benztiazolil, benzizotiazolil, izatinoil, izohinolinil, oktahidroizohinolinil, tetrahidroizohinolinil, tetrahidrohinolinil, izoksazolopiridinil, hinazolinil, hinolinil, izotiazolopiridinil, tiazolopiridinil, oksazolopiridinil, imidazolopiridinil, i pirazolopiridinil.

[0094] Primeri 5- do 6-očlanih heterociklusa uključuju, ali nisu ograničeni na, piridinil, furanil, tienil, pirolil, pirazolil, pirazinil, piperazinil, piperidinil, imidazolil, imidazolidinil, indolil, tetrazolil, izoksazolil, morfolinil, oksazolil, oksadiazolil, oksazolidinil, tetrahidrofuranil, tiadiazinil, tiadiazolil, tiazolil, triazinil, i triazolil. Takođe su uključena fuzionisana prsten i spiro jedinjenja koja sadrže, na primer, heterocikluse iznad pomenute.

[0095] Kao što je ovde korišćeno, termin "biciklični heterociklus" ili "biciklična heterociklična grupa" je nameravano da označi stabilni 9- ili 10-očlani heterociklični prstenasti sistem koji sadrži dva fuzionisana prstena i sastoji se od atoma ugljenika i 1, 2, 3, ili 4 heteroatoma koji su nezavisno odabrani od grupe koja se sastoji od N, O i S. Od dva fuzionisana prstena, jedan prsten je 5- ili 6-očlani monociklični aromatični prsten koji sadrži 5-očlani prsten heteroarila, 6-očlani prsten heteroarila ili benzo prsten, od kojih je svaki fuzionisan za drugi prsten. Drugi prsten je 5- ili 6-očlani monociklični prsten koji je zasićen,

1

delimično nezasićen, ili nezasićen, i sadrži 5-očlani heterociklus, 6-očlani heterociklus ili karbociklus (ako prvi prsten nije benzo kada je drugi prsten karbociklus).

[0096] Biciklična heterociklična grupa može da bude vezana za svoju bočnu grupu na bilo kom heteroatomu ili atomu ugljenika koji rezultira stabilnom strukturom. Ovde opisana biciklična heterociklična grupa može da bude supstituisana na atomu ugljenika ili azota ako je nastalo jedinjenje stabilno. Poželjno je da kada ukupan broj atoma S i O u heterociklusu prevazilazi 1, onda ovi heteroatomi nisu susedni jedan sa drugim. Poželjno je da ukupan broj atoma S i O u heterociklusu nije veći od 1.

[0097] Primeri biciklične heterociklične grupe su, ali nisu ograničeni na, hinolinil, izohinolinil, ftalazinil, hinazolinil, indolil, izoindolil, indolinil, 1H-indazolil, benzimidazolil, 1,2,3,4-tetrahidrohinolinil, 1,2,3,4-tetrahidroizohinolinil, 5,6,7,8-tetrahidro-hinolinil, 2,3-dihidro-benzofuranil, hromanil, 1,2,3,4-tetrahidro-hinoksalinil, i 1,2,3,4-tetrahidrohinazolinil.

[0098] Kao što je ovde korišćeno, termin "aromatična heterociklična grupa " ili "heteroaril" je namenjeno da označava stabilne monociklične i policiklične aromatične ugljovodonike koji uključuju najmanje jedan član prstena heteroatoma kao što je sumpor, kiseonik, ili azot. Heteroaril grupe uključuju, bez ograničenja, piridil, pirimidinil, pirazinil, piridazinil, triazinil, furil, hinolil, izohinolil, tienil, imidazolil, tiazolil, indolil, piroil, oksazolil, benzofuril, benzotienil, benztiazolil, izoksazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, indazolil, 1,2,4-tiadiazolil, izotiazolil, purinil, karbazolil, benzimidazolil, indolinil, benzodioksolanil, i benzodioksan. Heteroarilne grupe su supstituisane ili nesupstituisane. Atom azota je supstituisan ili nesupstituisan (t.j., N ili NR gde R je H ili drugi supstituent, ako je definisano). Heteroatomi azota i sumpora mogu opciono da budu oksidovani (t.j., N→O i S(O)p, gde p je 0, 1 ili 2).

[0099] Premošteni prstenovi su takođe uključeni u definiciju heterociklusa. Premošteni prsten dešava se kada jedan ili više atoma (t.j., C, O, N, ili S) vezuju dva nesusedna ugljenika ili atom azota. Primeri premoštenih prstenova uključuju, ali nisu ograničeni na, jedan atom ugljenika, dva atoma ugljenika, jedan atom azota, dva atoma azota, i ugljenik-azot grupu. Primećeno je da most uvek pretvara monociklični prsten u triciklični prsten. Kada je prsten premošten, supstituenti obeleženi na prstenu mogu takođe da budu prisutni na mostu.

[0100] Termin "kontrajon" korišćen je da predstavi negativno naelektrisane vrste kao što je hlorid, bromid, hidroksid, acetat, i sulfat.

2

[0101] Kada je tačkasti prsten korišćen u okviru prstenaste strukture, ovo označava da prstenasta struktura može da bude zasićena, parcijalno zasićena ili nezasićena.

[0102] Kao što je ovde pomenuto, termin "supstituisan" znači da je najmanje jedan atom vodonika zamenjen sa ne-vodonikovom grupom, pod uslovom da su održavane normalne valence i da se supstitucijom dobija stabilno jedinjenje. Kada je supstituent keto (t.j., =O), onda su 2 vodonika na atomu zamenjena. Keto supstituenti nisu prisutni na aromatičnim delovima. Kada se kaže da je prstenasti sistem (npr., karbociklični ili heterociklični) supstituisan sa karbonilnom grupom ili dvostrukom vezom, nameravano je da karbonilna grupa ili dvostruka veza bude deo (t.j., u okviru) prstena. Dvostruke veze u prstenu, kao što je ovde korišćeno, su dvostruke veze koje su formirane između dva susedna atoma u prstenu (npr., C=C, C=N, ili N=N).

[0103] U slučajevima gde su atomi azota (npr., amini) na jedinjenjima predmetnog pronalaska, oni mogu da budu pretvoreni u N-okside tretiranjem sa oksidacionim agensom (npr., mCPBA i/ili vodonik peroksidima) da se dobiju druga jedinjenja ovog pronalaska. Stoga, prikazani i zahtevani atomi azota smatrano je da pokrivaju kako prikazan azot tako i njegov N-oksid (N→O) derivat.

[0104] Kada se jedna varijabla pojavi više od jednog puta u bilo kom konstituentu ili formuli za jedinjenje, njegova definicija u svakom slučaju je nezavisna od njegove definicije u svakom drugom slučaju. Stoga, na primer, ako je prikazano da grupa treba da bude supstituisana sa 0-3 R grupe, onda navedena grupa može opciono da bude supstituisana sa do tri R grupe, i u svakom slučaju R je odabrano nezavisno od definicije R. Takođe, kombinacije supstituenata i/ili varijabli mogu se dozvoliti jedino ako takve kombinacije dovode do stabilnih jedinjenja.

[0105] Kada je prikazano da veza sa supstituentom prelazi vezu koja povezuje dva atoma u prstenu, onda takav supstituent može da bude vezan za bilo koji atom na prstenu. Kada je supstituent naveden bez naznačavanja atoma u kojem je takav supstituent vezan za ostatak jedinjenja date formule, onda takav supstituent može da bude vezan pomoću bilo kog atoma u takvom supstituentu. Kombinacije supstituenata i/ili varijabli mogu se dozvoliti jedino ako takve kombinacije dovode do stabilnih jedinjenja.

[0106] Izraz "farmaceutski prihvatljiv" je ovde upotrebljen da označi ona jedinjenja, materijale, kompozicije, i/ili dozne oblike koji su, koji su u okviru pouzdane medicinske procene, pogodni za primenu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora, i/ili drugog problema ili komplikacije, srazmerno sa razumnim odnosom benefit/rizik.

[0107] Kao što je ovde korišćeno, "farmaceutski prihvatljive soli" odnosi se na derivate jedinjenja koja su stavljena na uvid javnosti gde je osnovno jedinjenje modifikovano pravljenjem njegovih kiselih ili baznih soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali nisu ograničeni na, soli mineralne ili organske kiseline baznih grupa kao što su amini; i alkali ili organske soli kiselih grupa kao što su karboksilne kiseline. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju konvencionalne netoksične soli ili kvaternarne amonijumive soli formiranog osnovnog jedinjenja, na primer, od netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Na primer, takve konvencionalne netoksične soli uključuju one koje su izvedene od neorganskih kiselina kao što su hlorovodonična, bromovodonična, sumporna, sulfaminska, fosforna, i azotna; i soli pripremljene od organskih kiselina kao što su sirćetna, propionska, ćilibarna, glikolna, stearinska, mlečna, jabučna, vinska, limunska, askorbinska, pamoična, maleinska, hidroksimaleinska, fenilsirćetna, glutaminska, benzoeva, salicilna, sulfanilna, 2-acetoksibenzoeva, fumarna, toluensulfonska, metansulfonska, etan disulfonska, oksalna, i izetionska.

[0108] Farmaceutski prihvatljive soli predmetnog pronalaska mogu da budu sintetizovane od osnovnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiseli deo konvencionalnim hemijskim metodama. Generalno, takve soli mogu da budu pripremljene reakcijom slobodnih kiselih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva; generalno, nevodeni medijumi kao što su etar, etil acetat, etanol, izopropanol, ili acetonitril su poželjni. Lista pogodnih soli nalaze se u Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-to Izdanje, Mack Publishing Company, Iston, PA (1990), čije je stavljanje na uvid javnosti ovde uključeno kao referenca.

[0109] Pored toga, jedinjenja sa formulom I mogu da imaju forme proleka. Bilo koje jedinjenje koje će biti pretvoreno in vivo da obezbedi bioaktivni agens (t.j., jedinjenje sa formulom I) je prolek. Različite forme prolekova su dobro poznate u oblasti. Za primere derivata takvog proleka, videti:

a) Bundgaard, H., ed., Design of Prodrugs, Elsevier (1985), i Widder, K. i ostali, eds., Metodes in Enzimology, 112:309-396, Academic Press (1985);

b) Bundgaard, H., Poglavlje 5, "Design and Application of Prodrugs", A Textbook of Drug Design and Development, str. 113-191, Krosgaard-Larsen, P. i ostali, eds., Harwood Academic Publishers (1991);

c) Bundgaard, H., Adv. Drug Deliv. Rev., 8:1-38 (1992);

d) Bundgaard, H. i ostali, J. Pharm. Sci., 77:285 (1988); i

e) Kakeia, N. i ostali, Chem. Pharm. Bull., 32:692 (1984).

[0110] Jedinjenja koja sadrže karboksi grupu mogu da formiraju fiziološki hidrolizabilne estre koji služe kao prolekovi tako što bivaju hidrolizovani u telu do jedinjenja formule I per se. Poželjno je da se ovi prolekovi primenjuju oralno pošto se hidroliza u mnogim slučajevima javlja uglavnom pod uticajem digestivnih enzima. Parenteralna administracija se može upotrebiti kada je estar per se aktivan, ili u onim slučajevima gde se hidroliza javlja u krvi. Primeri fiziološki hidrolizabilnih estara jedinjenja sa formulom I uključuju C1-6alkil, C1-

6alkilbenzil, 4-metoksibenzil, indanil, ftalil, metoksimetil, C1-6alkanoiloksi-C1-6alkil (npr., acetoksimetil, pivaloiloksimetil ili propioniloksimetil), C1-6alkoksikarboniloksi-C1-6alkil (npr., metoksikarbonil-oksimetil ili etoksikarboniloksimetil, gliciloksimetil, fenilgliciloksimetil, (5-metil-2-okso-1,3-dioksolen-4-il)-metil), i druge dobro poznate fiziološki hidrolizabilne estre korišćene, na primer, u penicilinskim i cefalosporinskim oblastima. Ovakvi estri mogu biti pripremljeni konvencionalnim tehnikama poznatim u oblasti.

[0111] Priprema prolekova je dobro poznata u oblasti i opisana u, na primer, King, F.D., ed., Medicinal Chemistry: Principles and Practice, The Royal Society of Chemistry, Kembridž, UK (1994); Testa, B. i ostali, Hydrolysis in Drug and Prodrug Metabolism. Chemistry, Biochemistry and Enzimology, VCHA and Wiley-VCH, Cirih, Švajcarska (2003); Wermuth, C.G., ed., The Practise of Medicinal Chemistry, Academic Press, San Diego, CA (1999).

[0112] Predmetni pronalazak je namenjen da obuhvati sve izotope atoma koji se pojavljuju u predmetnim jedinjenjima. Izotopi obuhvataju one atome koji imaju isti atomski broj ali različite masene brojeve. Putem opšteg primera ali bez ograničenja, izotopi vodonika obuhvataju deuterijum i tricijum. Deuterijum ima jedan proton i jedan neutron u svom nukleusu i tako ima dvostruku masu običnog vodonika. Deuterijum može biti predstavljen simbolima kao što su "<2>H" ili "D". Termin "deuterirani", sam po sebi ili korišćen da

2

modifikuje jedinjenje ili grupu, odnosi se na zamenu jednog ili više atoma vodonika, koji je vezan za ugljenik(e), atomom deuterijuma. Izotopi uglenika obuhvataju<13>C i<14>C.

[0113] Izotopski-obeležena jedinjenja predmetnog pronalaska mogu uopšteno biti pripremljena konvencionalnim tehnikama poznatim prosečnim poznavaocima oblasti ili procesima analognim onima koji su ovde opisani, korišćenjem odgovarajućeg izotopskiobeleženog reagensa na mestu neobeleženog reagensa koji se inače upotrebljava. Ovakva jedinjenja imaju različite potencijalne primene, npr., kao standardi i reagensi u određivanju sposobnosti potencijalnog farmaceutskog jedinjenja da se veže za ciljne proteine ili receptore, ili za snimanje jedinjenja ovog predmetnog pronalaska vezanih za biološke receptore in vivo ili in vitro.

[0114] "Stabilno jedinjenje" i "stabilna struktura" treba da ukazuju na jedinjenje koje je dovoljno robusno da opstane tokom izolacije iz reakcione smeše do određenog stepena čistoće, i formulacije u efikasni terapijski agens. Poželjno je da jedinjenja predmetnog pronalaska ne sadrže N-halo, S(O)2H, ili S(O)H grupu.

[0115] Termin "solvat" znači fizičku vezu jedinjenja ovog predmetnog pronalaska sa jednim ili više molekula rastvarača, bilo organskog ili neorganskog. Ova fizička veza uključuje vodonično vezivnje. U određenim slučajevima solvat će biti sposoban za izolaciju, na primer, kada je jedan ili više molekul(a) rastvarača inkorporiran(o) u kristalnu rešetku kristalne čvrste supstance. Molekuli rastvarača u solvatu mogu biti prisutni u regularnom rasporedu i/ili neuređenom rasporedu. Solvat može sadržati ili stehiometrijsku ili nestehiometrijsku količinu molekula rastvarača. "Solvat" obuhvata i solvate u fazi rastvora i solvate koji mogu da se izoluju. Reprezentativni primeri solvata uključuju, ali nisu ograničeni na, hidrate, etanolate, metanolate, i izopropanolate. Metode rastvaranja su opšte poznate u oblasti.

[0116] Skraćenice kao što je ovde korišćeno, su definisane na sledeći način: "1 x" za jednom, "2 x" za dva puta, "3 x" za tri puta, "°C" za stepene Celzijusa, "eq" za ekvivalentan ili ekvivalentni, "g" za gram ili grame, "mg" za miligram ili miligrame, "L" za litar ili litre, "mL" za mililitar ili mililitre, "µL" za mikrolitar ili mikrolitre, "N" za normalan, "M" za molaran, "mmol" za milimol ili milimole, "min" za minut ili minute, "h" – hour(s) za sat ili sate, "rt" -room temperature za sobnu temperaturu, "RT" - retention time za vreme zadržavanja, "RBF" - round bottom flask za posuda sa okruglim dnom, "atm" za atmosfera, "psi" - pounds per square inch za funte po kvadratnom inču, "conc." za koncentrat , "RCM" -ring-closing metathesis za prsten-zatvarajuću metatezu, "sat" ili "sat'd" – saturated za zasićen, "SFC" - supercritical fluid chromatography za superkritična tečna hromatografija, "MW" -molecular weight za molekularna masa, "mp" - melting point za tačka topljenja, "ee" -enantiomeric excess za enantiomerni višak , "MS" ili "Mass Spec" - mass spectrometry za masena spektrometrija , "ESI" - electrospray ionization mass spectroscopy za elektrosprej jonizacionu masenu spektroskopiju, "HR" - high resolution za visoka rezolucija, "HRMS" -high resolution mass spectrometry za masenu spektrometriju visoke rezolucije, "LCMS" -liquid chromatography mass spectrometry za tečnu hromatografiju masenu spektrometriju, "HPLC" - high pressure liquid chromatography za tečnu hromatografiju pod visokim pritiskom, "RP HPLC" - reverse phase HPLC za HPLC reverznih faza, "TLC" ili "tlc" - thin layer chromatography za tankoslojnu hromatografiju, "NMR" - nuclear magnetic resonance spectroscopy za nuklearnu magnetnu rezonantnu spektroskopiju, "nOe" - nuclear Overhauser effect spectroscopy za spektroskopiju nuklearnog Overhauser-ovog efekta, "<1>H" za proton, "δ" za delta, "s" za singlet, "d" za dublet, "t" za triplet, "q" – quartet za kvartet, "m" za multiplet, "br" – broad za širok signal, "Hz" za herc, i "α", "β", "R", "S", "E", i "Z" su stereohemijske oznake poznate prosečnim poznavaocima oblasti.

Me metil

Et etil

Pr propil

i-Pr izopropil

Bu butil

i-Bu izobutil

t-Bu terc-butil

Ph fenil

Bn benzil

Boc ili BOC terc-butiloksikarbonil

Boc2O di-terc-butil dikarbonat

AcOH ili HOAc sirćetna kiselina

AlCl3aluminijum hlorid

AIBN Azobisizobutironitril

BBr3boron tribromid

2

BCl3boron trihlorid

BEMP 2-terc-butilimino-2-dietilamino-1,3-dimetilperhidro-1,3,2-diazafosforin

BOP reagens benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfat

Burgess reagens 1-metoksi-N-trietilamonijumsulfonil-metanimidat Cbz karbobenziloksi

DCM ili CH2Cl2dihlorometan

CH3CN ili ACN acetonitril

CDCl3deutero-hloroform

CHCl3hloroform

mCPBA ili m-CPBA meta-hloroperbenzoeva kiselina

Cs2CO3cezijum karbonat

Cu(OAc)2bakar (II) acetat

CuI bakar (I) jodid

CuSO4bakar (II) sulfat

Ci2NMe N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamin

DBU 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en

DCE 1,2 dihloroetan

DEA dietilamin

Dess-Martin 1,1,1-tris(acetiloksi)-1,1-dihidro-1,2-beniziodoksol-3-(1H)-on

DIC ili DIPCDI diizopropilkarbodiimid

DIEA, DIPEA ili Hunig-ova baza diizopropiletilamin

DMAP 4-dimetilaminopiridin

DME 1,2-dimetoksietan

DMF dimetil formamid

2

DMSO dimetil sulfoksid

cDNA komplementarna DNA

Dppp (R)-(+)-1,2-bis(difenilfosfino)propan

DuPhos (+)-1,2-bis((2S,5S)-2,5-dietilfosfolano)benzen EDC N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid EDCI N-(3-dimetilaminopropil)-N'-etilkarbodiimid hidrohlorid

EDTA etilendiamintetrasirćetna kiselina

(S,S)-EtDuPhosRh(I) (+)-1,2-bis((2S,5S)-2,5-dietilfosfolano)benzen(1,5-ciklooktadien)rodium(I) trifluorometansulfonat Et3N ili TEA trietilamin

EtOAc etil acetat

Et2O dietil etar

EtOH etanol

GMF stakleni mikrofiber filter

Grubbs II (1,3-bis(2,4,6-trimetilfenil)-2-imidazolidiniliden)dihloro (fenilmetilen)(triicikloheksilfosfin)rutenijum

HCl hlorovodonična kiselina

HAUT O-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorofosfat

HEPES 4-(2-hidroksietil)piperaksin-1-etansulfonska kiselina Hex heksan

HOBt ili HOBT 1-hidroksibenzotriazol

H2O2hidrogen peroksid

H2SO4sumporna kiselina

IBX 2-jodoksibenzoeva kiselina

InCl3Indijum(III) hlorid

2

Jones reagent CrO3u vodenoj H2SO4, 2 M K2CO3kalijum karbonat

K2HPO4dvobazni kalijum fosfat K3PO4trobazni kalijum fosfat KOAc kalijum acetat

K3PO4kalijum fosfat

LAH litijum aluminijum hidrid

LG odlazeća grupa

LiOH litijum hidroksid

MeOH metanol

MgSO4magnezijum sulfat

MsOH ili MSA metilsulfonska kiselina NaCl natrijum hlorid

NaH natrijum hidrid

NaHCO3natrijum bikarbonat Na2CO3natrijum karbonat

NaOH natrijum hidroksid

Na2SO3natrijum sulfit

Na2SO4natrijum sulfat

NBS N-bromosukcinimid

NCS N-hlorosukcinimid

NH3amonijak

NH4Cl amonijum hlorid

NH4OH amonijum hidroksid NH4COOH amonijum format

NMM N-metilmorfolin

OTf triflat ili trifluorometansulfonat

2

Pd2(dba)3tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)

Pd(OAc)2paladijum (II) acetat

Pd/C paladijum na ugljeniku

Pd(dppf)Cl2[1,1'-bis(difenilfosfino)-ferocen]dihloropaladijum(II) Ph3PCl2trifenilfosfin dihlorid

PG zaštitna grupa

POCl3fosfor oksihlorid

i-PrOH or IPA izopropanol

PS Polistiren

rt sobna temperatura

SEM-Cl 2-(trimetisilil)etoksimetil hlorid

SiO2silicijum oksid

SnCl2kalaj(II) hlorid

TBAI tetra-n-butilamonijum jodid

TFA trifluorosirćetna kiselina

THF tetrahidrofuran

TMSCHN2trimetilsilildiazometan

T3P® anhidrid propan fosforaste kiseline

TRIS tris (hidroksimetil) aminometan

pTsOH p-toluensulfonska kiselina

[0117] Jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu pripremiti na više načina koji su poznati prosečnim poznavaocima oblasti organske sinteze, koji su opisani detaljnije u Odeljku VI. IV. BIOLOGIJA

[0118] Iako je koagulacija krvi esencijalna za regulaciju hemostaze organizma, ona je takođe uključena u mnoga patološka stanja. Pri trombozi, može se formirati krvni ugrušak, ili tromb, i lokalno izazvati opstrukciju krvotoka, čime se izaziva ishemija i oštećenje organa. Alternativno, u procesu poznatom kao embolija, ugrušak se može osloboditi i kasnije biti zarobljen u distalnom krvnom sudu, gde ponovo izaziva ishemiju i oštećenje organa. Bolesti

2

koje nastaju usled patološkog formiranja tromba su sveukupno naznačene kao tromboembolijski poremećaji i obuhvataju akutni koronarni sindrom, nestabilnu anginu, infarkt miokarda, trombozu u srčanoj šupljini, ishemični moždani udar, trombozu dubokih vena, periferne okluzivne arterijske bolesti, prolazni ishemijski napad, i plućnu emboliju. Dodatno, tromboza se javlja na veštačkim površinama u kontaktu sa krvlju, uključujući katetere, stentove, veštačke srčane zalistke, i membrane za hemodijalizu.

[0119] Neki uslovi doprinose riziku za razvoj tromboze. Na primer, promene na zidu krvnog suda, promene u protoku krvi, i izmene u kompoziciji vaskularnog odeljka. Ovi faktori rizika su kolektivno poznati kao Virchow-ljeva trijada. (Colman, R.W. i ostali, eds., Hemostasis and Thrombosis, Basic Principles and Clinical Practice, Peto izdanje, p.853, Lippincott Williams & Wilkins (2006)).

[0120] Antitrombotički agensi se često daju pacijentima koji su u riziku od razvoja tromboembolijske bolesti zbog prisustva jednog ili više predisponirajućih faktora rizika iz Virchow-ljeve trijade da bi se sprečilo formiranje okluzivnog tromba (primarna prevencija). Na primer, u slučaju ortopedske operacije (npr., zamena kuka ili kolena), antitrombotički agens se često administrira pre hirurške procedure. Antitrombotički agens izjednačava protrombotički stimulus izvršen promenama vaskularnog toka (staza), potencijalnom hirurškom povredom zida krvnog suda, kao i promenama u sastavu krvi usled akutne faze odgovora koji se odnosi na operaciju. Drugi primer upotrebe antitrombotičkog agensa za primarnu prevenciju je doziranje aspirinom, inhibitorom aktivacije trombocita, kod pacijenata koji su u riziku od razvoja trombotičke kardiovaskularne bolesti. Dobro prepoznati faktori rizika u ovom slučaju uključuju starost, muški pol, hipertenziju, dijabetes melitus, promene lipidnog statusa, i gojaznost.

[0121] Antitrombotički agensi su takođe indikovani za sekundarnu prevenciju, nakon inicijalne trombotičke epizode. Na primer, pacijenti koji imaju mutacije faktora V (takođe poznat kao faktor V Leiden) i dodatne faktore rizika (npr., trudnoća), su dozirani sa antikoagulansima da bi se sprečio recidiv venske tromboze. Drugi primer podrazumeva sekundarnu prevenciju kardiovaskularnih događaja kod pacijenata sa istorijom akutnog infarkta miokarda ili akutnog koronarnog sindroma. U kliničkim uslovima, kombinacija aspirina i klopidogrela (ili drugog tienopiridina) se može upotrebiti za prevenciju drugog trombotičkog događaja.

[0122] Antitrombotični agensi se takođe daju za lečenje stanja bolesti (t.j., zaustavljanjem njenog razvoja) nakon što je ona već nastupila. Na primer, pacijenti sa trombozom dubokih vena se leče antikoagulansima (t.j., heparinom, varfarinom, ili LMWH-om) da bi se sprečio dalji rast venske okluzije. Tokom vremena, ovi agensi takođe izazivaju regresiju stanja bolesti jer se menja odnos između protrombotičkih faktora i antikoagulantno/profibrinolitičkih puteva u korist poslednjeg. Primeri kod arterijskog vaskularnog sistema uključuju lečenje pacijenata sa akutnim infarktom miokarda ili akutnim koronarnim sindromom aspirinom ili klopidogrelom da bi se sprečio dalji rast vaskularnih okluzija i konačno vodi do regresije trombotičkih okluzija.

[0123] Stoga, antitrombotički agensi se široko primenjuju u primarnoj i sekundarnoj prevenciji (t.j., profilaksi ili redukciji rizika) tromboembolijskih poremećaja, kao i u lečenju već postojećeg trombotičkog procesa. Lekovi koji inhibiraju koagulaciju krvi, ili antikoagulansi, su “esencijalni agensi za prevenciju i lečenje tromboembolijskih poremećaja" (Hirsh, J. i ostali., Blood, 105:453-463 (2005)).

[0124] Alternativni put započinjanja koagulacije se aktivira kada je krv izložena veštačkim površinama (npr., tokom hemodijalize, tokom “on-pump” kardiovaskularne operacije, kod graftova krvnih sudova, u stanju bakterijske sepse), na ćelijskim površinama, ćelijskim receptorima, ćelijskim ostacima, DNA, RNA, i ekstracelularnim matricama. Ovaj proces je takođe nazvan kontaktna aktivacija. Površinska absorpcija faktora XII dovodi do konformacione promene u molekulu faktora XII, čime se olakšava aktivacija molekula proteolitički aktivnog faktora XII (faktor XIIa i faktor XIIf). Faktor XIIa (ili XIIf) ima brojne ciljne proteine, uključujući plazma prekalikrein i faktor XI. Aktivni plazma kalikrein dalje aktivira faktor XII, vodeći do amplifikacije kontaktne aktivacije. Alternativno, serin proteaza prolilkarboksilpeptidaza može aktivirati plazma kalikrein kompleksiran sa kininogenom velike molekulske mase u multiproteinski kompleks formiran na površini ćelija i matrica (Shariat-Madar et al., Blood, 108:192-199 (2006)). Kontaktna aktivacija je površinski posredovan proces delimično odgovoran za regulaciju tromboze i inflamacije, i posredovan je, barem delimično, fibrinolitičkim, komplementarnim, kininogen/kinin-, i drugim humoralnim i ćelijskim putevima (za pregled, Coleman, R., "Contact Activation Pathway", Hemostasis and Thrombosis, str. 103-122, Lippincott Williams & Wilkins (2001); Schmaier, A.H., "Contact Activation", Thrombosis and Hemorrhage, str. 105-128 (1998)). Biološka relevantnost sistema kontaktne aktivacije za tromboembolijske bolesti je podržana fenotipom

1

faktor XII deficijentnih miševa. Specifičnije, faktora XII deficijentni miševi su bili zaštićeni od trombotičke vaskularne okluzije u nekoliko modela tromboze kao i u modelima moždanog udara i fenotip XII deficijentnih miševa je bio identičan fenotipu XI deficijentnih miševa (Renne i ostali., J. Exp. Med., 202:271-281 (2005); Kleinschmitz i ostali., J. Exp. Med., 203:513-518 (2006)). Činjenica da je faktor XI niže u kaskadi od faktora XIIa, kombinovan sa identičnim fenotipom XII i XI deficijentnih miševa sugeriše da sistem kontaktne aktivacije može imati glavnu ulogu u faktor XI aktivaciji in vivo.

[0125] Faktor XI je zimogen tripsinu-slične serin proteaze i prisutan je u plazmi u relativno niskoj koncentraciji. Proteolitička aktivacija na internoj R369-I370 vezi rezultira teškim lancem (369 amino kiselina) i lakim lancem (238 amino kiselina). Poslednji sadrži tipičnu tripsinu-sličnu katalitičku trijadu (H413, D464, i S557). Veruje se da se aktivacija faktora XI trombinom dešava na negativno naelektrisanim površinama, najverovatnije na površini aktiviranih trombocita. Trombociti sadrže specifična mesta (130-500/trombocit) visokog afiniteta (0.8 nM) za aktivirani faktor XI. Nakon aktivacije, faktor XIa ostaje površinski vezan i prepoznaje faktor IX kao svoj normalni makromolekularni supstrat. (Galiani, D., Trends Cardiovasc. Med., 10:198-204 (2000)).

[0126] Dodatno povratnim mehanizmima aktivacije koji su gore opisani, trombin aktivira trombinom aktivirani inhibitor fibrinolize (thrombin activated fibrinolisis inhibitor - TAFI), plazma karboksipeptidazu koja cepa C-terminalne lizin i arginin ostatke na fibrinu, redukujući sposobnost fibrina da poboljša plazminogen aktivaciju koja zavisi od tkivnog-tipa aktivatora plazminogena (tissue-tipe plasminogen activator - tPA). U prisustvu antitela na FXIa, liza ugruška se primećuje brže nezavisno od koncentracije TAFI u plazmi. (Bouma, B.N. i ostali, Thromb. Res., 101:329-354 (2001).) Tako se očekuje da inhibitori faktora XIa budu antikoagulantni i profibrinolitički.

[0127] Dodatni dokaz za anti-tromboembolijske efekte ciljanja faktora XI je dobijen kod miševa deficijentnih u faktoru XI. Demonstrirano je da je kompletna fXI deficijencija zaštitila miševe od gvožđe-hloridom (FeCl3)-indukovane tromboze karotidne arterije (Rosen I ostali, Thromb. Haemost., 87:774-777 (2002); Wang i ostali., J. Thromb. Haemost., 3:695-702 (2005)). Takođe, faktor XI deficijencija spašava perinatalni letalni fenotip od potpune deficijencije C proteina (Chan i ostali, Amer. J. Pathology, 158:469-479 (2001)). Osim toga, ukršteno-reaktivna antitela babuna, sa funkcijom blokiranja humanog faktora XI štite babune od tromboze arterijsko-venskog šanta (Gruber i ostali, Blood, 102:953-955 (2003)). Dokaz za

2

antitrombotički efekat malih molekula inhibitora faktora XIa je takođe stavljen na uvid javnosti u objavljenoj američkoj Patentnoj Publikaciji sa brojem objave 2004/0180855 A1. Uzevši sve u obzir, ove studije predlažu da će ciljanje faktora XI redukovati sklonost ka trombotskim i tromboembolijskim bolestima.

[0128] Genetski dokaz ukazuje da faktor XI nije potreban za normalnu homeostazu, čime se nagoveštava superiorni sigurnosni profil faktor XI mehanizma u poređenju sa kompetitivnim antitrombotskim mehanizmima. Nasuprot hemofiliji A (faktor VIII deficijencija) ili hemofiliji B (faktor IX deficijencija), mutacije gena za faktor XI koje izazivaju deficijenciju faktora XI (hemofilija C) rezultiraju samo blagom do umerenom tendencijom ka krvarenju prvenstveno naznačenom kao postoperativna ili posttraumatska, ali retko spontana hemoragija. Postoperativno krvarenje se pojavljuje većinom u tkivu sa visokim koncentracijama endogene fibrinolitičke aktivnosti (npr., usna duplja, i urogenitalni sistem). Većina slučajeva je slučajno identifikovana putem preoperativnog produžavanja aPTT – aktiviranog parcijalnog tromboplastinskog vremena (intrinzični sistem) bez prethodne istorije krvarenja.

[0129] Povećana bezbednost inhibicije XIa kao antikoagulantne terapije je nadalje podržana činjenicom da Faktor XI “knock out” miševi, koji nemaju uočen faktor XI protein, imaju normalan razvoj i normalan životni vek. Nije zabeležen dokaz o spontanom krvarenju. Aktivirano parcijalno tromboplastinsko vreme - aPTT (intrinzični sistem) je produženo na gen dozno zavisan način. Interesantno, čak i posle ozbiljne stimulacije koagulacionog sistema (transekcija repa), vreme krvarenja nije značajno produženo u poređenju sa divljim tipom i heterozigotnim leglom. wild-tipe and heterozigous litter mates. (Gailani, D., Frontiers in Bioscience, 6:201-207 (2001); Gailani, D. i ostali., Blood Coagulation and Fibrinolysis, 8:134-144 (1997).) Uzevši sve u obzir, ova zapažanja predlažu da visoki nivoi inhibicije faktora XIa treba da budu dobro tolerisani. Ovo je u suprotnosti sa gen ciljajućim eksperimentima sa drugim faktorima koagulacije, isključujući faktor XII.

[0130] In vivo aktivacija faktora XI može biti određena formiranjem kompleksa ili sa C1 inhibitorom ili alfa 1 antitripsinom. U studiji od 50 pacijenata sa akutnim infarktom miokarda (acute myocardial infarction - AMI), približno 25% pacijenata je imalo vrednosti kompleksa ELISA preko gornjeg normalnog opsega. Ova studija se može smatrati kao dokaz da bar u subpopulaciji pacijenata sa AMI, faktor XI aktivacija doprinosi formiranju trombina (Minnema, M.C. i ostali, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 20:2489-2493 (2000)). Druga studija uspostavlja pozitivnu koralaciju između stepena koronarne arterioskleroze i faktora XIa u kompleksu sa alfa 1 antitripsinom (Murakami, T. i ostali, Arterioscler. Thromb. Vasc. Biol., 15:1107-1113 (1995)). U drugoj studiji, nivoi Faktora XI preko 90-og procenta su kod pacijenata bili povezani sa 2.2 puta povećanim rizikom od venske tromboze (Meijers, J.C.M. i ostali, N. Engl. J. Med., 342:696-701 (2000)).

[0131] Takođe, poželjno je da se pronađu nova jedinjenja sa povećanom aktivnošću u in vitro koagulacionim testovima, u poređenju sa poznatim serin proteaza inhibitorima, kao što je test aktiviranog parcijalnog tromboplastinskog vremena (aPTT) ili protrombinskog vremena (prothrombin time - PT). (za opis aPTT i PT testova pogledati, Goodnight, S.H. i ostali, "Screening Tests of Hemostasis", Disorders of Thrombosis and Hemostasis: A Clinical Guide, Drugo Izdanje, str. 41-51, McGraw-Hill, Nju Jork (2001)).

[0132] Takođe je preporučljivo i poželjno da se nađu jedinjenja sa povoljnim i poboljšanim karakteristikama u poređenju sa poznatim serin proteaza inhibitorima, u jednoj ili više od navedenih kategorija koje su date kao primeri, i bez namere da budu ograničavajuće : (a) farmakokinetička svojstva, uključujući oralnu biološku raspoloživost, poluživot, i klirens; (b) farmaceutske karakteristike; (c) doziranje; (d) faktori koji smanjuju koncentraciju u krvi u opsegu od najviše do najniže; (e) faktori koji povećavaju koncentraciju aktivnog leka na receptoru; (f) faktori koji smanjuju odgovornost za kliničke lek-lek interakcije; (g) faktori koji smanjuju potencijal za neželjene sporedne-efekte, uključujući selektivnost naspram ostalih bioloških ciljeva; i (h) faktori koji poboljšavaju proizvođačke troškove ili izvodljivost.

[0133] Pre-kliničke studije su pokazale značajne antitrombotske efekte inhibitora malih molekula faktora XIa u modelu arterijske tromboze kod zečeva i pacova, pri dozama koje su očuvale hemostazu. (Wong P.C. i ostali, American Heart Association Scientific Sessions, Abstract No. 6118, November 12-15, 2006; Schumacher, W. i ostali, J. Thromb. Haemost., 3(Suppl. 1):P1228 (2005); Schumacher, W.A. i ostali, Eur. J. Pharmacol., 167-174 (2007)). Pored toga, uočeno je da je in vitro produžavanje aPTT-a specifičnim XIa inhibitorima dobar prognozer efikasnosti u našim modelima tromboze. Prema tome, in vitro aPTT test se može upotrebiti kao zamena za efikasnost in vivo.

[0134] Kao što je ovde korišćeno, termin"pacijent" obuhvata sve vrste sisara.

[0135] Kao što je ovde korišćeno, "lečenje" ili "tretman" pokriva lečenje stanja bolesti kod sisara, naročito kod ljudi, i uključuje: (a) inhibiciju stanja bolesti, t.j., zaustavljanje njegovog razvoja; i/ili (b) ublažavanje stanja bolesti, t.j., izazivanje regresije stanja bolesti.

4

[0136] Kao što je ovde korišćeno, "profilaksa" je zaštitni tretman stanja bolesti kojim se redukuje i/ili minimizira rizik i/ili smanjenje rizika od recidiva stanja bolesti administracijom pacijentu terapeutski efikasne količine najmanje jednog jedinjenja predmetnog pronalaska ili njegovog stereoizomera, tautomera, farmaceutski prihvatljive soli, ili solvata. Za profilaktičku terapiju pacijenti mogu biti izabrani na osnovu faktora za koje je poznato da povećavaju rizik od nastanka kliničkog stanja bolesti u poređenju sa opštom populacijom. Za profilaktički tretman, znaci kliničkog stanja bolesti mogu ili još uvek ne moraju biti ispoljeni. "Profilaksa" lečenje može se podeliti na (a) primarnu profilaksu i (b) sekundarnu profilaksu. Primarna profilaksa se definiše kao tretman kojim se redukuje ili minimizira rizik od stanja bolesti kod pacijenta kod koga još uvek nije ispoljeno kliničko stanje bolesti, dok se sekundarna profilaksa definiše kao minimiziranje ili smanjenje rizika od recidiva ili sekundarne pojave istog ili sličnog kliničkog stanja bolesti.

[0137] Kao što je ovde korišćeno, "smanjenje rizika" obuhvata terapije koje smanjuju incidencu razvoja kliničkog stanja bolesti. Kao takve, primarne i sekundarne preventivne terapije su primeri smanjenja rizika.

[0138] "Terapijski efikasna količina" nameravano je da uključi količinu jedinjenja predmetnog pronalaska koja je efikasna kada se primeni samostalno ili u kombinaciji za inhibiciju faktora XIa i/ili plazma kalikreina i/ili za prevenciju ili lečenje poremećaja koji su ovde navedeni. Kada se primenjuje kod kombinacije, termin se odnosi na kombinovane količine aktivnih sastojaka koje rezultiraju preventivnim ili terapijskim efektom, bilo da se primenjuju u kombinaciji, serijski ili istovremeno.

[0139] Termin "tromboza", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na formiranje ili prisustvo tromba (trombova); zgrušnjavanje u krvnom sudu koje može izazvati ishemiju ili infarkt tkiva koji se snabdevaju tim krvnim sudom. Termin "embolija", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na iznenadnu blokadu arterije ugruškom ili stranim materijalom koji je dopremljen na mesto nagomilavanja krvnom strujom. Termin "tromboembolija", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na opstrukciju krvnog suda sa trombotskim materijalom nošenim krvotokom od mesta nastanka koji će zapušiti drugi krvni sud. Termin "tromboembolijski poremećaji" obuhvata i "trombotske" i "embolijske" poremećaje (definisane iznad).

[0140] Termin "tromboembolijski premećaji" kao što je ovde korišćeno uključuje arterijske kardiovaskularne tromboembolijske poremećaje, venske kardiovaskularne ili cerebrovaskularne tromboembolijske poremećaje, i tromboembolijske poremećaje u srčanim komorama ili u perifernoj cirkulaciji. Termin "tromboembolijski poremećaji" kao što je ovde korišćeno takođe uključuje specifične poremećaje odabrane od, ali ne ograničene na, nestabilnu anginu ili druge akutne koronarne sindrome, atrijalnu fibrilaciju, prvi ili ponovljen infarkt miokarda, ishemjku iznenadnu smrt, prolazni ishemijski napad, moždani udar, aterosklerozu, perifernu okluzivnu arterijsku bolest, vensku trombozu, trombozu dubokih vena, tromboflebitis, arterijski embolizam, koronarnu arterijsku trombozu, cerebralnu arterijsku trombozu, cerebralni embolizam, bubrežnu emboliju, plućnu emboliju, i trombozu nastalu usled primene medicinskih implantata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja promovišu trombozu. Medicinski implantati i uređaji uključuju, ali nisu ograničeni na: protetske zaliske, veštačke zaliske, trajne katetere, stentove, oksigenatore krvi, šantove, vaskularne pristupne portove, ventrikularne pomoćne uređaje i veštačka srca ili srčane komore, i graftove krvnih sudova. Procedure uključuju, ali nisu ograničene na: kardiopulmonalni bajpas, perkutanu koronarnu intervenciju, i hemodijalizu. U drugom tehničkom rešenju, termin "tromboembolijski poremećaji" uključuje akutni koronarni sindrom, moždani udar, trombozu dubokih vena, i plućnu emboliju.

[0141] U drugom tehničkom rešenju, stavljanje na uvid javnosti predmetnog pronalaska obezbeđuje metod za lečenje tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od nestabile angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, infarkta miokarda, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, tromboze dubokih vena, tromboflebitisa, arterijskog embolizma, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralnog embolizma, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze nastale usled primene medicinskih implantata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja promoviše trombozu. U drugom tehničkom rešenju, stavljanje na uvid javnosti predmetnog pronalaska obezbeđuje metod za lečenje tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, venske tromboze, atrijalne fibrilacije, i tromboze nastale usled primene medicinskih implantata i uređaja.

[0142] U drugom tehničkom rešenju, stavljanje na uvid javnosti predmetnog pronalaska obezbeđuje metod za primarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, infarkta miokarda, ishemijske iznenadne smrti, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, tromboze dubokih vena, tromboflebitisa, arterijskog embolizma, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralnog embolizma, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze nastale usled primene medicinskih implantata, uređaja ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja promoviše trombozu. U drugom rešenju, stavljanje na uvid javnosti predmetnog pronalaska obezbeđuje metod za primarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, venske tromboze, i tromboze nastale usled primene medicinskih implantata i uređaja.

[0143] U drugom tehničkom rešenju, stavljanje na uvid javnosti predmetnog pronalaska obezbeđuje metod za sekundarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, ponovljenog infarkta miokarda, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, tromboze dubokih vena, tromboflebitisa, arterijskog embolizma, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralnog embolizma, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja nastaje usled primene medicinskih implantata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja promoviše trombozu. U drugom rešenju, stavljanje na uvid javnosti predmetnog pronalaska obezbeđuje metod za sekundarnu profilaksu tromboembolijskog poremećaja, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od akutnog koronarnog sindroma, moždanog udara, atrijalne fibrilacije i venske tromboze.

[0144] Termin "moždani udar", kao što je ovde korišćeno, odnosi se na embolijski moždani udar ili aterotrombotski moždani udar koji potiče od okluzivne tromboze u zajedničkoj karotidnoj, unutrašnjoj karotidnoj, ili intracerebralnim arterijama.

[0145] Primećeno je da tromboza uključuje okluziju krvnog suda (npr., nakon bajpasa) i ponovnu okluziju (npr., tokom ili nakon perkutane transluminalne koronarne angioplastike). Tromboembolijski poremećaji mogu nastati iz stanja koja uključuju ali nisu ograničena na aterosklerozu, operaciju ili operativne komplikacije, prolongiranu imobilizaciju, arterijsku fibrilaciju, kongenitalnu trombofiliju, kancer, dijabetes, efekte lekova ili hormona, i komplikacije trudnoće.

[0146] Tromboembolijski poremećaji su često udruženi sa aterosklerozom kod pacijenata. Faktori rizika za aterosklerozu uključuju ali nisu ograničeni na muški pol, uzrast, hipertenziju, lipidne poremećaje, i diabetes mellitus. Faktori rizika za aterosklerozu su u isto vreme faktori rizika za komplikacije ateroskleroze, t.j., tromboembolijske poremećaje.

[0147] Slično, arterijska fibrilacija je često udružena sa tromboembolijskim poremećajima. Faktori rizika za arterijsku fibrilaciju i naknadne tromboembolijske poremećaje uključuju kardiovaskularnu bolest, reumatsku bolest srca, nereumatsku bolest mitralnog zaliska, hipertenzivnu kardiovaskularnu bolest, hroničnu bolest pluća, i ostale različite srčane abnormalnosti kao što je tireotoksikoza.

[0148] Diabetes mellitus je često udružen sa aterosklerozom i tromboembolijskim poremećajima. Faktori rizika za češći tip 2 uključuju ali nisu ograničeni na porodičnu istoriju, gojaznost, fizičku neaktivnost, rasu/etničku pripadnost, prethodno poremećenu vrednost glikemije našte ili u testu toleracije glukoze, istoriju gastacionog diabetes mellitus-a ili rođenje "velike bebe", hipertenziju, nizak HDL holesterol, i sindrom policističnih jajnika.

[0149] Faktori rizika za kongenitalnu trombofiliju uključuju nastanak funkcionalnih mutacija faktora koagulacije ili gubitak funkcionalnih mutacija u antikoagulantnim ili fibrinolitičkim putevima.

[0150] Tromboza je udružena sa različitim tipovima tumora, npr., kancer pankreasa, kancer dojke, kanceri mozga, kancer pluća, kancer ovarijuma, kancer prostate, gastrointestinalni maligniteti, i Hodgkin ili non-Hodgkin limfomi. Skorašnje studije nagoveštavaju da frekvenca kancera kod pacijenata sa trombozom odražava frekvencu posebnog tipa kancera u opštoj populaciji (Levitan, N. i ostali, Medicine (Baltimor), 78(5):285-291 (1999); Levine M. i ostali, N. Engl. J. Med., 334(11):677-681 (1996); Blom, J.W. i ostali, JAMA, 293(6):715-722 (2005)). Dakle, najčešći konceri udruženi sa trombozom kod muškaraca su kancer prostate, kolorektalni, kancer mozga, i pluća, i kod žena su kancer dojke, ovarijuma, i pluća. Primećeni je značajan stepen venske tromboembolije (VTE) kod pacijenata sa kancerom. Različite stope venske tromboembolije VTE između različitih tipova tumora se najverovatnije odnose na selekciju populacije pacijenata. Pacijenti koji boluju od kancera i koji su u riziku za nastanak tromboze mogu imati neki ili sve od sledećih faktora rizika: (i) stadijum kancera (t.j., prisustvo metastaza), (ii) prisustvo centralnih venskih katetera, (iii) operacija i antikancer terapije uključujući hemoterapiju, i (iv) hormonske i antiangiogene lekove. Tako, uobičajena je klinička praksa da se pacijenti koji imaju uznapredovale tumore doziraju sa heparinom ili niskomolekularnim heparinom kako bi se sprečili tromboembolijski poremećaji. Brojni preparati niskomolekularnog heparina su odobreni od strane FDA za ove indikacije.

[0151] Postoje tri glavne kliničke situacije kada se razmatra prevencija od VTE kod pacijenta sa kancerom: (i) kada je pacijent ležeći u produženom vremenskom periodu; (ii) kada ambulantni pacijent prima hemoterapiju ili radijaciju; i (iii) kada pacijent ima trajne centralne venske katetere. Nefrakcionisani heparin (unfractionated heparin - UFH) i heparin niske molekulske mase (low molecular weight heparin - LMWH) su efikasni antitrombotski agensi kod pacijenata sa kancerom koji su podvrgnuti operaciji. (Mismetti, P. i ostali, Br. J. Surg., 88:913-930 (2001).)

A. In Vitro Testovi

[0152] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao inhibitora koagulacionih Faktora XIa, VIIa, IXa, Xa, XIIa, plazma kalikreina ili trombina, može se odrediti korišćenjem relevantne prečišćene serin proteaze, redom, i odgovarajućeg sintetskog supstrata. Stepen hidrolize hromogenog ili fluorogenog supstrata relevantnom serin proteazom je meren i u odsustvu i prisustvu jedinjenja predmetnog pronalaska. Hidroliza supstrata je dovela do oslobađanja pNA (para nitroanilina), koji je praćen spektrofotometrijski merenjem povećanja absorbance na 405 nm, ili oslobađanja AMC (amino metilkumarina), koji je praćen spektrofotometrijski merenjem povećanja emisije na 460 nm sa ekscitacijom na 380 nm. Smanjenje stepena promene absorbance ili fluorescencije u prisustvu inhibitora ukazuje na enzimsku inhibiciju. Ovakve metode su poznate prosečnom poznavaocu oblasti. Rezultati ovog testa su izraženi kao inhibitorna konstanta, Ki.

[0153] Određivanja faktora XIa su vršena u 50 mM HEPES pufera pri pH 7.4 koji sadrži 145 mM NaCl, 5 mM KCl, i 0.1% PEG 8000 (polietilen glikola; JT Baker or Fisher Scientific). Odrednice su utvrđene korišćenjem prečišćenog humanog Faktora XIa u konačnoj koncentraciji od 25-200 pM (Haematologic Technologies) i sintetskog supstrata S-2366 (pyroGlu-Pro-Arg-pNA; CHROMOGENIX® ili AnaSpec) pri koncentraciji od 0.0002-0.001 M.

[0154] Određivanja Faktora VIIa su vršena u 0.005 M kalcijum hloridu, 0.15 M natrijum hloridu, 0.05 M HEPES puferu koji sadrži 0.1% PEG 8000 pri pH od 7.5. Odrednice su utvrđene korišćenjem prečišćenog humanog Faktora VIIa (Haematologic Technologies) ili rekombinantnog humanog Faktora VIIa (Novo Nordisk) pri konačnoj test koncentraciji od 0.5-10 nM, rekombinantnog rastvorljivog tkivnog faktora pri koncentraciji od 10-40 nM I sintetskog supstrata H-D-Ile-Pro-Arg-pNA (S-2288; CHROMOGENIX® ili BMPM-2; AnaSpec) pri koncentraciji od 0.001-0.0075 M.

[0155] Određivanja Faktora IXa su vršena u 0.005 M kalcijum hloridu, 0.1 M natrijum hloridu, 0.0000001 M Refludan-u (Berlex-u), 0.05 M TRIS bazi i 0.5% PEG 8000 pri pH od 7.4. Refludan je dodat da inhibira male količine trombina u komecijalnim preparatima humanog Faktora IXa. Određivanja su vršena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora IXa (Haematologic Technologies) pri konačnoj test koncentraciji od 20-100 nM i sintetskog supstrata PCIXA2100-B (CenterChem) ili Pefafluor IXa 3688 (H-D-Leu-Ph'Gly-Arg-AMC; CenterChem) pri koncentraciji od 0.0004-0.0005 M.

[0156] Određivanja Faktora Xa su vršena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu pri pH od 7.5 koji sadrži 0.2 M natrijum hlorid i 0.5% PEG 8000. Određivanja su vršena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora Xa (Haematologic Technologies) pri konačnoj test koncentraciji od 150-1000 pM i sintetskog supstrata S-2222 (Bz-Ile-Glu (gama-OMe, 50%)-Gly-Arg-pNA; CHROMOGENIX®) pri koncentarciji od 0.0002-0.00035 M.

[0157] Određivanja Faktora XIIa su vršena u 0.05 M HEPES puferu pri pH 7.4 koji sadrži 0.145 M NaCl, 0.05 M KCl, i 0.1% PEG 8000. Određivanja su vršena korišćenjem prečišćenog humanog Faktora XIIa pri konačnoj koncentraciji od 4 nM (American Diagnostica) i sintetskog supstrata SPECTROZIME® #312 (H-D-CHT-Gly-L-ArgpNA.2AcOH; American Diagnostica) pri koncentraciji od 0.00015 M.

[0158] Određivanja plazma kalikreina su vršena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu pri pH od 7.5 koji sadrži 0.1-0.2 M natrijum hlorid i 0.5% PEG 8000. Određivanja su vršena korišćenjem prečišćenog humanog plazma kalikreina (Enzime Research Laboratories) pri konačnoj test koncentraciji od 200 pM i sintetskog supstrata S-2302 (H-(D)-Pro-Phe-ArgpNA; CHROMOGENIX®) pri koncentraciji od 0.00008-0.0004 M.

[0159] Određivanja trombina su vršena u 0.1 M natrijum fosfatnom puferu pri pH od 7.5 koji sadrži 0.2 M natrijum hlorid i 0.5% PEG 8000. Određivanja su vršena korišćenjem pečišćenog humanog alfa trombina (Haematologic Technologies or Enzyme Research Laboratories) pri konačnoj koncentraciji od 200-250 pM i sintetskog supstrata S-2366 (pyroGlu-Pro-Arg-pNA; CHROMOGENIX® ili AnaSpec) pri koncentraciji od 0.0002-0.0004 M.

4

[0160] Michaelis-ova konstanta, Km, za hidrolizu supstrata svakom proteazom, je određena na 25°C ili 37°C u odsustvu inhibitora. Vrednosti Kisu određene dozvoljavanjem reakcije proteaze sa supstratom u prisustvu inhibitora. Dozvoljeno je da reakcije traju u periodu od 20-180 minuta (zavisno od proteaze) i brzine (stepen promene absorbancije ili fluorescencije u odnosu na vreme) su merene. Sledeći odnosi su korišćeni za izračunavanje Kivrednosti :

za kompetitivni inhibitor sa jednim vezujućim mestom; ili

za kompetitivni inhibitor gde:

voje brzina kontrole u odsustvu inhibitora;

vsje brzina u prisustvu inhibitora;

Vmaxje maksimalna brzina reakcije;

I je koncentracija inhibitora;

A je minimum preostale aktivnosti (obično nula);

B je maksimum preostale aktivnosti (obično 1.0);

n je Hill-ov koeficijent, mera broja i kooperativnosti potencijalnih inhibitor vezujućih mesta;

IC50je koncentracija inhibitora koja izaziva 50% inhibicije pod test uslovima;

Kije konstanta disocijacije enzima: inhibitor kompleks;

S je koncentracija supstrata; i

Kmje Michaelis-ova konstanta za supstrat.

[0161] Selektivnost jedinjenja može biti procenjena uzimajući odnos vrednosti Kiza datu proteazu i vrednosti Kiza proteazu koja je od interesa (t.j., selektivnost za FXIa naspram proteaze P = Kiza proteazu P/ Kiza FXIa). Jedinjenja sa odnosima selektivnosti >20 se smatraju selektivnim.

[0162] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao inhibitora koagulacije se može odrediti korišćenjem standardnog ili modifikovanog testa zgrušavanja. Povećanje vremena zgrušavanja plazme u prisustvu inhibitora ukazuje na antikoagulaciju. Relativno vreme zgrušavanja je vreme zgrušavanja u prisustvu inhibitora podeljeno vremenom zgrušavanja u odsustvu inhibitora. Rezultati ovog testa mogu biti iskazani kao IC1.5x ili IC2x, koncentracija inhibitora potrebna za povećanje vremena zgrušavanja za 50 do 100 posto, redom. IC1.5x ili IC2x se dobija linearnom interpolacijom iz grafikona zavisnosti relativnog vremena zgrušnjavanja naspram koncentracije inhibitora korišćenjem koncentracije inhibitora koja obuhvata IC1.5x ili IC2x.

[0163] Vremena zgrušnjavanja se određuju korišćenjem citrirane normalne humane plazme kao i plazme dobijene iz brojnih vrsta laboratorijskih životinja (npr., pacova, ili zečeva). Jedinjenje je razblaženo u plazmi počevši sa 10 mM DMSO polaznog rastvora. Konačna DMSO koncentracija je manja od 2%. Testovi zgrušnjavanja plazme su izvedeni u automatskom koagulacionom analizatoru (SYSMEX®, Dade-Behring, Ilinois). Slično, vremena zgrušnjavanja se mogu odrediti kod laboratorijskih životinjskih vrsta ili ljudi kojima su dozirana jedinjenja predmetnog pronalaska.

[0164] Aktivirano Parcijalno Tromboplastinsko Vreme (aPTT) je određeno korišćenjem ACTIN® FSL (Dade-Behprsten, Ilinois) prateći smernice u uputstvu za korišćenje. Plazma (0.05 mL) je zagrevana na 37 °C tokom 1 minuta. ACTIN® FSL (0.05 mL) je dodat plazmi i inkubiran dodatnih 2 do 5 minuta. Kalcijum hlorid (25 mM, 0.05 mL) je dodat u reakciju da bi započeo koagulaciju. Vreme zgrušnjavanja je vreme u sekundama od momenta dodavanja kalcijum hlorida do momenta detekcije ugruška.

[0165] Protrombinsko Vreme (PT) je određeno korišćenjem tromboplastina (Tromboplastin C Plus ili INNOVIN®, Dade-Behprsten, Ilinois) prateći uputstva za korišćenje. Plazma (0.05 mL) je zagrevana na 37 °C tokom 1 minuta. Tromboplastin (0.1 mL) je dodat u plazmu da bi započeo koagulaciju. Vreme zgrušavanja je vreme u sekundama od momenta dodavanja tromboplastina do momenta detekcije ugruška.

[0166] Ravnotežne rastvorljivosti su određene u raznim vodenim rastvorima puferovanim na specifičnu pH. Približno 1 mg jedinjenja je upotrebljeno za uspostavljanje ravnoteže u 100 do 300 µL rastvarača. Uzorci su mešani pri 300 RPM na sobnoj temperaturi-st (20 ± 2 °C) tokom 24 sata. Ukoliko se primeti solubilizacija celokupne čvrste supstance, dodatno jedinjenje se dodaje da bi se održala čvrsta supstanca u višku tokom trajanja studije. Nakon 24 sata, koristi se mikroskop da se odredi da li je bilo promene u morfologiji viška čvrste supstance. Supernatanti se tada filtriraju kroz 0.22 µm PVDF filter ploču i razblažuju acetonitrilom za HPLC analizu. Takođe se obezbeđuje kalibracija uzoraka za HPLC analizu.

[0167] Stepen do kog se jedinjenja predmetnog pronalaska vezuju za humane serumske proteine može biti određen korišćenjem metoda dijalize i analitičkih tehnika dobro poznatih prosečnom poznavaocu stanja tehniket i opisanim u, na primer, Plise, E.G. i ostali, "Semiautomated protein binding metodology using equilibrium dialysis and a novel mixed-matrix cassette approach", J. Pharm. Sci., 99(12):5070-5078 (2010); Vodas, N.J. i ostali, "Validation of a rapid equilibrium dialysis approach for the measurement of plasma protein binding", J. Pharm. Sci., 97(10):4586-4595 (2008); Van Liempd, S. i ostali, "Development and Validation of a Higher-Throughput Equilibrium Dialysis Assay for Plasma Protein Binding", J. Lab. Autom., 16:56-67 (2011); Di, L. i ostali, "Impact of Recovery on Fraction Unbound Using Equilibrium Dialysis", J. Pharm. Sci., 101(3):1327-1335 (2011).

[0168] Jedinjenja predmetnog pronalaska su testirana u triplikatu kombinovanjem sa humanim serumom da bi se postigla konačna koncentracija od 10 µM. Dijaliza se izvodi tokom 5 sati na 37 °C, u atmosferi sa 10% CO2naspram 0.133 M natrijum fosfatnog pufera podešenog na pH 7.4 korišćenjem dvo-komornih test ploča brze ravnotežne dijalize (Rapid Equilibrium Dialisis) od Thermo Fisher-a (Voltam, Masačusets). Test uzorci iz pufer- i serum- komora se skupljaju pri vremenu nula (T0[Serum]i T0[Pufer]) i 5-og sata posle inkubacije (T5h[Serum]i T5h[Pufer]). Pre analize, dijalizirani uzorci seruma su razblaženi sa 0.133 M natrijum fosfatnim puferom podešenim na pH 7.4 i dijalizirani uzorci pufera su razblaženi humanim serumom da bi se dobila ista konačna koncentracija u svakom uzorku. Naknadno, ovi uzorci se ekstrahuju precipitacijom proteina u acetonitrilu koji sadrži dva analitička interna standarda (200 nM alprenolola i 600 nM tolbutamida). Precipitirani proteini i supernatanti su razdvojeni centrifugom pri 4000×g za 10 minuta. Supernatanti uzoraka su analizirani pomoću LC-MS/MS i odnosi površina ispod pika jedinjenja i internog standarda su određeni za uzorke pri početnom vremenu nula (T0[Serum]i T0[Pufer]) i za uzorke nakon ravnoteže (T5h[Serum]i T5h[Pufer]). Rezultati procenta slobodnog (procenta slobodne frakcije), procenta vezanog (procenta vezane frakcije), i procenta prečišćavanja su računati na sledeći način:

4

[0169] Interferencija matriksa je procenjena merenjem LC-MS/MS odnosa površine analit/interni standard za testiranje slepe probe matriksa (50:50 serum:pufer). Analitički uslovi smatrani su prihvatljivim za procenu slobodnog procenta kada je odnos površine analit/interni standard za testiranje slobodne probe matriksa (50:50 serum:pufer) bio manji od 20% odnosa površine za T5h[Pufer] uzorak.

[0170] Reprezentativni Primeri niže stavljeni na uvid javnosti su testirani u Faktor XIa testu opisanom gore i uočena je Faktor XIa inhibitorna aktivnost Primećen je opseg Faktor XIa inhibitorne aktivnosti (Ki vrednosti) od ≤ 10 µM (10000 nM). U Tabeli 1 niže prikazanoj navode se Faktor XIa Ki vrednosti merene na 37 °C za sledeće Primere.

Tabela 1

[0171] Reprezentativni Primeri niže stavljeni na uvid javnosti su testirani u Plazma Kalikrein testu opisanom gore i uočena je Plazma Kalikrein inhibitorna aktivnost. Primećen je opseg Plazma Kalikrein inhibitorne aktivnosti (Ki vrednosti) od ≤ 10 µM (10000 nM). U Tabeli 2 niže prikazanoj navode se Plazma Kalikrein Ki vrednosti merene na 37 °C za sledeće Primere.

Tabela 2

[0172] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao antitrombotskih agenasa je takođe procenjena u drugim testovima kao što su test aPTT-a, rastvorljivosti, i test humanog protein vezujućeg afiniteta koji su opisani iznad. U poređenju sa fenil P2' makrociklima stavljenim na uvid javnosti u WO 2013/022814 i WO 2014/022766, pirazolil P2' makrocikli predmetne prijave prikazuju iznenađujuće farmakološke aktivnosti. Kao što je prikazano u Tabeli 3, jedinjenja predmetnog pronalaska poseduju superiornu antikoagulantnu aktivnost, rastvorljivost i biološku raspoloživost u poređenju sa referentnim jedinjenjima.

Tabela 3

4

B. In Vivo Testovi

[0173] Efikasnost jedinjenja predmetnog pronalaska kao antitrombotskih agenasa se može odrediti korišćenjem relevantnih in vivo modela tromboze, uključujući In Vivo Električnoindukovane Modele Tromboze Karotidne Arterije i In Vivo Modele Tromboze Arteriovenskog Šanta kod zečeva.

a. In Vivo Electrčno-indukovani Model Tromboze Karotidne Arterije (Electricallyinduced Carotid Artery Thrombosis - ECAT)

[0174] ECAT model kod zečeva, opisan od strane Wong-a i ostalih. (J. Pharmacol. Exp. Ther., 295:212-218 (2000)), se može koristiti u ovoj studiji. Mužjaci belih zečeva sa Novog Zelanda se anaesteziraju ketaminom (50 mg/kg 50 mg/kg/h IM) i ksilazinom (10 mg/kg 10 mg/kg/h IM). Ovi anestatici se dodaju ukoliko je potrebno. Elektromagnetna sonda se postavlja na segment izolovane karotidne arterije da bi se pratio protok krvi. Test agensi ili

4

nosač će se primeniti (i.v., i.p., s.c., ili oralno) pre ili nakon započinjanja tromboze. Primena leka pre započinjanja tromboze se upotrebljava da se podesi sposobnost test agenasa da spreče i redukuju rizik od formiranja tromba, doki se doziranje nakon započinjanja upotrebljava da se podesi sposobnost da leče postojeću trombotičku bolest. Stvaranje tromba je indukovano električnom stimulacijom karotidne arterije tokom 3 min pri 4 mA upotrebom spoljne bipolarne elektrode od nerđajućeg čelika. Karotidni protok krvi je meren kontinuirano tokom perioda od 90-min da bi se ispartila tromb-indukovana okluzija. Ukupni karotidni protok krvi tokom 90 min je računat trapezoidalnim pravilom. Prosečni karotidni protok tokom 90 min je tada određen konvertovanjem ukupnog karotidnog protoka krvi tokom 90 min u procenat ukupnog kontrolnog karotidnog protoka krvi, što bi rezultiralo ukoliko bi kontrolni protok krvi bio održavan kontinuiranim tokom 90 min. Doza jedinjenja koja povećava prosečni karotidni protok krvi tokom 90 min na 50% od kontrolnog - ED50je procenjena nelinearnim regresionim programom najmanjih kvadrata korišćenjem Hill-ove sigmoidne Emaxjednačine (DeltaGraph; SPSS Inc., Čikago, IL).

b. In vivo Model Tromboze Arterio-venskog (AV) Šanta kod zečeva

[0175] AV šant model kod zečeva, koji su opisali Wong i ostali. (Wong, P.C. i ostali, J. Pharmacol. Exp. Ther. 292:351-357 (2000)), se može koristiti u ovoj studiji. Mužjaci belih zečeva sa Novog Zelanda su anestezirani ketaminom (50 mg/kg 50 mg/kg/h IM) i ksilazinom (10 mg/kg 10 mg/kg/h IM). Ovi anestetici se dodaju ukoliko je potrebno. Femoralna arterija, jugularna vena i femoralna vena su izolovane i kateterizovane. AV šant uređaj ispunjen fiziološkim rastvorom je priključen između femoralne arterijske i femoralne venske kanile. AV šant uređaj se sastoji od spoljnog dela tygon cevi (dužina = 8 cm; unutrašnji promer = 7.9 mm) i unutrašnjeg dela cevi (dužina = 2.5 cm; unutrašnji promer = 4.8 mm). AV šant takođe sadrži 8-cm-dugu 2-0 svilenu nit (Ethicon, Somerville, NJ). Krv teče iz femoralne arterije preko AV-šanta u femoralnu venu. Izlaganje krvotoka svilenoj niti indukuje stvaranje značajnog tromba. Četrdeset minuta kasnije, šant se razdvaja i svilena nit prekrivena trombom se meri. Test agensi ili nosač će se dati (i.v., i.p., s.c., ili oralno) pre otvaranja AV šanta. Procenat inhibicije stvaranja tromba se određuje za svaku tretiranu grupu. ID50vrednosti (doza koja proizvodi 50% inhibicije formiraja tromba) su procenjene nelinearnim regresionim programom najmanjih kvadrata korišćenjem Hill-ove sigmoidne Emaxjednačine (DeltaGraph; SPSS Inc., Čikago, IL).

4

[0176] Anti-inflamatorni efekat ovih jedinjenja može biti predstavljen u testu ekstravazacije boje Evans Blue korišćenjem C1-esteraza inhibitor deficientnih miševa. U ovom modelu, miševi su dozirani jedinjenjem pedmetnog pronalaska, Evans Blue boja je injektirana preko repne vene, i ekstravazacija plave boje se određuje pomoću spektrofotometrijskih metoda iz tkivnih ekstrakata.

[0177] Sposobnost jedinjenja predmetnog pronalaska da smanjuju ili sprečavaju sindrom sistemskog inflamatornog odgovora, na primer, kao što je primećeno tokom “on-pump” kardiovaskularnih procedura, može biti testirana u in vitro perfuzionim sistemima, ili pomoću “on-pump” hirurških procedura kod većih sisara, uključujući pse i babune. Očitani podaci za procenu koristi jedinjenja predmetnog pronalaska uključuju na primer, smanjeni gubitak trombocita, redukovane trombocit/bela krvna zrnca komplekse, redukovani nivoi neutrofil elastaze u plazmi, redukovanu aktivaciju komplementarnih faktora, i redukovanu aktivaciju i/ili upotrebu proteina kontaktne aktivacije (plazma kalikreina, faktora XII, faktora XI, kininogena velike molekulske mase, C1-esteraza inhibitora).

[0178] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti korisna kao inhibitori dodatnih serin proteaza, naročito humanog trombina, humanog plazma kalikreina i humanog plazmina. Zbog njihovog inhibitornog dejstva, ova jedinjenja su indikovana za upotrebu u prevenciji ili lečenju fizioloških reakcija, uključujući koagulaciju krvi, fibrinolizu, regulaciju krvnog pritiska i inflamaciju, i zarastanje rana katalizovano prethodno navedenom klasom enzima. Posebno, jedinjenja se koriste kao lekovi za lečenje bolesti koje nastaju usled povećane aktivnosti trombina prethodno pomenutih serin proteaza, kao što su infarkt miokarda, i kao reagensi koji se koriste kao antikoagulansi u obradi krvi do plazme za dijagnostičke i druge komercijalne svrhe.

V. FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE, FORMULACIJE I KOMBINACIJE

[0179] Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti administrirana u oralnim doznim oblicima kao što su tablete, kapsule (od kojih svaka uključuje formulacije sa produženim oslobađanjem ili formulacije sa odloženim oslobađanjem), pilule, praškovi, granule, eliksiri, tinkture, suspenzije, sirupi, i emulzije. Ona takođe mogu biti administrirana u intravenskoj (bolus ili infuzija), intraperitonealnoj, subkutanoj, ili intramuskularnoj formi, korišćenjem doznih oblika dobro poznatih prosečnom poznavaocu farmaceztske oblasti. Mogu biti administrirana samostalno, ali obično će biti administrirana sa farmaceutskim nosačem odabranim na osnovu izabranog puta administracije i standardne farmaceutske prakse.

4

[0180] Termin"farmaceutska kompozicija" podrazumeva kompoziciju koja sadrži jedinjenje predmetnog pronalaska u kombinaciji sa najmanje jednim dodatnim farmaceutski prihvatljivim nosačem. "Farmaceutski prihvatljiv nosač" odnosi se na medije opšte prihvaćene u oblasti za dostavu biološki aktivnih agenasa životinjama, naročito, sisarima, uključujući, t.j., pomoćno sredstvo, ekscipijens ili transporter, kao što su razblaživači, konzervansi, punioci, agensi regulacije protoka, sredstva za raspadanje, vlažeća sredstva, sredstva za emulzifikaciju, suspendujuća sredstva, zaslađivači, sredstva za aromatizaciju, sredstva za parfemisanje, antibakterijska sredstva, antimikotična sredstva, lubrikantna sredstva i agensi za dispenziju, zavisno od prirode i načina administracije i doznih fomi. Farmaceutski-prihvatljivi nosači se formulišu u skladu sa brojnim faktorima koji su poznati prosečnom poznavaocu oblasti. Ovo uključuje, bez ograničenja: tip i prirodu formulisanog aktivnog sredstva; subjekt kome će se administrirati kompozicija koja sadrži agens; nameravani put administracije kompozicije; i ciljanu terapijsku indikaciju. Farmaceutskiprihvatljivi nosači uključuju i vodene i nevodene tečne medije, kao i raznovrsne čvrste i polučvrste dozne forme. Takvi nosači mogu sadržati brojne različite sastojke i hemijske dodatke aktivnom sredstvu, kao dodatne sastojke koji se dodaju formulaciji iz raznih razloga, npr., za stabilizaciju aktivnog sredstva, kao vezujuća sredstva, itd., dobro poznate prosečnim poznavaocima oblasti. Opisi pogodnih farmaceutski prihvatljivih nosača, i faktora koji utiču na njihov odabir, se mogu naći u raznim dostupnim izvorima kao što je, na primer, Remington's Pharmaceutical Sciences, 18-to Izdanje (1990).

[0181] Dozni režim za jedinjenja predmetnog pronalaska će, naravno, varirati zavisno od poznatih faktora, kao što su farmakodinamske karakteristike posebnog sredstva i način i put njegove administracije; vrsta, starost, pol, zdravlje, medicinsko stanje, i težina po masi primaoca; priroda i stepen simptoma; vrsta istovremenog lečenja; učestalost lečenja; put administarcije, bubrežna i funkcija jetre pacijenta, i željeni efekat. Lekar ili veterinar mogu odrediti i propisati efikasnu količinu leka koja je potrebna za prevenciju, tretiranje, ili zaustavljanje progresije tromboembolijskog poremećaja.

[0182] Po opštem principu, dnevna oralna doza bilo kog aktivnog sastojka, kada se koristi za naznačene efekte, će se kretati između oko 0.001 do oko 1000 mg/kg telesne mase, poželjnije između oko 0.01 do oko 100 mg/kg telesne mase dnevno, i najpoželjnije između oko 0.1 do oko 20 mg/kg/dan. Intravenski, najpoželjnije doze će se kretati od oko 0.001 do oko 10 mg/kg/minut tokom konstantne brzine infuzije. Jedinjenja ovog pronalaska mogu biti

4

administrirana u pojedinačnoj dnevnoj dozi, ili ukupna dnevna doza može biti administrirana u podeljenim dozama dva, tri,ili četiri puta dnevno.

[0183] Jedinjenja ovog pronalaska mogu takođe biti administrirana parenteralnom primenom npr., intra-venski, intra-arterijalno, intramuskularno, ili subkutano. Kada se administrira intra-venski ili intra-arterijalno, doza može biti data kontinuirano ili povremeno. Pored toga, formulacija može biti razvijena za intramuskularnu i subkutanu primenu koja obezbeđuje postepeno oslobađanje aktivnog farmaceutskog sastojka. U jednom tehničkom rešenju, farmaceutska kompozicija je formulacija čvrste supstance, npr., raspršivanjem osušena kompozicija, koja možeda se koristi kakva jeste, ili u koju lekar ili pacijent dodaju rastvarače, i/ili razblaživače pre upotrebe.

[0184] Jedinjenja ovog pronalaska mogu se administrirati u intranazalnom obliku putem topikalne primene pogodnih intranazalnih nosača, ili transdermalnim putevima, korišćenjem transdermalnih flastera za kožu. Kada se administrira u formi transdermalnog sistema, administracija doze će, naravno, biti kontinuirana pre nego povremena tokom režima doziranja.

[0185] Jedinjenja se tipično administriraju u smeši sa pogodnim farmaceutskim razblaživačima, ekscipijensima, ili nosačima (ovde zajedno navedeni kao farmaceutski nosači) odabranih na odgovarajući način u skladu sa nameravanom formom administracije, npr., oralne tablete, kapsule, eliksiri, i sirupi, i u skladu sa konvencionalnim farmaceutskim praksama.

[0186] Na primer, za oralnu administraciju u formi tablete ili kapsule, aktivna komponenta leka može se kombinovati sa oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim, inertnim nosačem kao što je laktoza, skrob, sukroza, glukoza, metil celuloza, magnezijum stearat, dikalcjium fosfat, kalcijum sulfat, manitol, sorbitol i slično; za oralnu administraciju u tečnoj formi, komponente oralnog leka se mogu kombinovati sa bilo kojim oralnim, netoksičnim, farmaceutski prihvatljivim inertnim nosačem kao što je etanol, glicerol, voda, i slično. Takođe, kada je poželjno ili neophodno, pogodna vezujuća sredstva, lubrikanti, sredstva za raspadanje, i sredstva za bojenje mogu takođe biti inkorporirani u smešu. Pogodna vezujuća sredstva obuhvataju skrob, želatin, prirodne šećere kao što je glukoza ili beta-laktoza, kukuruzni zaslađivači, prirodne i sintetske gume kao što je akacija, tragakant, ili natrijum alginat, karboksimetilceluloza, polietilen glikol, voskovi, i slično. Lubrikanti korišćeni u ovim doznim formama obuhvataju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid, i slično. Sredstva za raspadanje obuhvataju, bez ograničenja, skrob, metil celulozu, agar, bentonit, ksantan gumu, i slično.

[0187] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti administrirana u formi lipozomalnog sistema isporuke, kao male unilamelarne vezikule, velike unilamelarne vezikule, i multilamelarne vezikule. Lipozomi se mogu formirati od raznovrsnih fosfolipida, kao što je holesterol, stearilamin, ili fosfatidilholini.

[0188] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu takođe biti povezana sa rastvorljivim polimerima kao nosačima leka koji mogu biti mete. Takvi polimeri uključuju polivinilpirolidon, piran kopolimer, polihidroksipropilmetakrilamid-fenol, polihidroksietilaspartamidfenol, ili polietilenoksid-polilizin supstituisan palmitoil ostacima. Pored toga, jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti povezana na klasu biorazgradljivih polimera korisnih u postizanju kontrolisanog otpuštanja leka, na primer, polilaktatna kiselina, poliglikolna kiselina, kopolimeri polilaktatne i poliglikolne kiseline, poliepsilon kaprolakton, polihidroksi buterna kiselina, poliortoestri, poliacetali, polidihidropirani, policijanoacilati, i unakrsno povezani ili amfipatički blok-kopolimeri hidrogelova. Disperzije čvrste supstance se takođe nazivaju disperzije čvrstog stanja. U nekim tehničkim rešenjima, bilo koje jedinjenje opisano ovde je formulisano kao sprejem osušena disperzija (spray dried dispersion - SDD). SDD je monofazna disperzija amorfnih molekula leka u polimer matriksu. To je rastvor čvrste supstance pripremljen rastvaranjem leka i polimera u rastvaraču (npr., acetonu, metanolu ili slično) i sprej sušenjem rastvora. Rastvarač brzo isparava iz kapljica što brzo očvršćuje smešu polimera i leka zarobljavajući lek u amorfnu formu kao amorfnu molekulsku disperziju.

[0189] Dozni oblici (farmaceutske kompozicije) pogodni za administraciju mogu sadržati od oko 1 miligram do oko 1000 miligrama aktivnog sastojka po doznoj jedinici. U ovim farmaceutskim kompozicijama aktivni sastojak će obično biti prisutan u količini od oko 0.1-95% mase u odnosu na ukupnu masu kompozicije.

[0190] Gel kapsule mogu sadržati aktivni sastojak i praškaste nosače, kao što su laktoza, skrob, celulozni derivati, magnezijum stearat, stearinska kiselina, i slično. Slični razblaživači mogu se koristiti za pravljenje komprimovanih tableta. I tablete i kapsule se mogu proizvesti kao proizvodi sa produženim oslobađanjem čime se obezbeđuje kontinuirano otpuštanje leka tokom određenog vremenskog perioda. Komprimovane tablete mogu biti obložene šećerom ili filmom da bi se maskirao bilo kakav neprijatan ukus i da bi se tableta zaštitila od uticaja

1

okoline, ili enteričkom oblogom da se obezbedi selektivna razgradnja u gastrointestinalnom traktu.

[0191] Tečne dozne forme za oralnu administraciju mogu sadržati boje i arome čime se povećava prihvatanje od strane pacijenta.

[0192] Generalno, voda, pogodno ulje, fiziološki rastvor, vodeni dekstrozni (glukozni), i odgovarajući rastvori šećera i glikoli kao što je propilen glikol ili polietilen glikoli su pogodni nosači za parenteralne rastvore. Rastvori za parenteralnu administraciju poželjno sadrže u vodi rastvornu so aktivnog sastojka, pogodna sredstva za stabilizaciju, i ukoliko je potrebno pufer supstance. Antioksidansi kao što su natrijum bisulfit, natrijum sulfit, ili askorbinska kiselina, bilo zasebno ili u kombinaciji, su pogodna sredstva za stabilizaciju. Takođe su korišćeni limunska kiselina i njene soli i natrijum EDTA. Dodatno, parenteralni rastvori mogu sadržati konzervanse, kao što su benzalkonijum hlorid, metil-ili propil-paraben, i hlorobutanol.

[0193] Pogodni farmaceutski nosači su opisani u Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Izdavačka Kompanija, standardnom referentnom tekstu u ovoj oblasti.

[0194] Kada se jedinjenja ovog pronalaska kombinuju sa ostalim antikoagulantnim sredstvima, na primer, dnevna doza može biti oko 0.1 do oko 100 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 0.1 do oko 100 miligrama po kilogramu telesne mase pacijenta. Za tabletnu doznu formu, jedinjenja ovog pronalaska uopšteno mogu biti prisutna u količini od oko 5 do oko 300 miligrama po doznoj jedinici, i drugi anti-koagulant u količini od oko 1 do oko 500 miligrama po doznoj jedinici.

[0195] Kada se jedinjenja predmetnog pronalaska administriraju u kombinaciji sa antitrombocitnim agensom, po opštem principu, tipično dnevna doza može biti oko 0.01 do oko 300 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 50 do oko 150 miligrama antitrombocitnog agensa, poželjno oko 0.1 do oko 4 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska i oko 1 do oko 3 miligrama antitrombocitnih agenasa, po kilogramu telesne mase pacijenta.

[0196] Kada se jedinjenja predmetnog pronalaska administriraju u kombinaciji sa trombolitičkim agensom, tipično dnevna doza može biti oko 0.1 do oko 100 miligrama jedinjenja predmetnog pronalaska, po kilogramu telesne mase pacijenta i, u slučaju trombolitičkih agenasa, uobičajena doza trombolitičkog agensa kada je administriran

2

samostalno može se smanjiti za oko 50-80% kada se administrira sa jedinjenjem predmetnog pronalaska.

[0197] Naročito kada je obezbeđena pojedinačna dozna jedinica, postoji potencijal za hemijsku intereakciju između kombinovanih aktivnih sastojaka. Iz ovog razloga, kada se jedinjenje predmetnog pronalaska i drugi terapijski agens kombinuju u pojedinačnoj doznoj jedinici oni su formulisani tako da iako su aktivni sastojci kombinovani u pojedinačnoj doznoj jedinici, fizički kontakt između aktivnih sastojaka je minimiziran (to jest, smanjen). Na primer, jedan aktivni sastojak može biti enterički obložen. Enteričkim oblaganjem jednog od aktivnih sastojaka, je moguće ne samo minimalizovati kontakt između kombinovanih aktivnih sastojaka, nego takođe, moguće je kontrolisati oslobađanje jedne od ovih komponenti u gastrointestinalnom traktu tako da se jedna od ovih komponenti ne oslobađa u želucu već se oslobađa u crevima. Jedan od aktivnih sastojaka može takođe biti obložen materijalom koji utiče na produženo oslobađanje tokom prolaska kroz gastrointestinalni trakt i takođe služi da se minimalizuje fizički kontakt između kombinovanih aktivnih sastojaka. Pored toga, komponenta sa produženim oslobađanjem može dodatno biti enterički obložena tako da se oslobađanje ove komponente primećuje samo u crevu. Još jedan pristup bi uključio formulaciju kombinovanog proizvoda u kome je jedna komponenta obložena polimerom produženog i/ili enteričkog oslobađanja, i druga komponenta je takođe obložena polimerom kao što je hidroksipropil metilceluloza (HPMC) niskog stepena viskoziteta ili drugim odgovarajućim materijalima poznatim u stanju tehnike, kako bi se dalje razdvojile aktivne komponente. Polimerna obloga služi kao dodatna barijera za interakciju sa drugom komponentom.

[0198] Ovi kao i ostali načini za minimiziraje kontakta između komponenti kombinovanih proizvoda predmetnog pronalaska, bilo da su administrirani u pojedinačnoj doznoj formi ili administrirani u posebnim formama ali u isto vreme na isti način, će biti očigledni prosečnim poznavaocima oblasti, onda kada budu upoznati sa sadržajem predmetne objave.

[0199] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabran od navedenih: otvarač kalijumovih kanala, blokator kalijumovih kanala, blokator kalcijumovih kanala, inhibitor natrijum-vodoničnih antiportera, antiaritmički agensi, antiaterosklerotski agensi, antikoagulansi, antitrombotski agensi, protrombolitički agensi, antagonisti fibrinogena, diuretici, antihipertenzivni agensi, inhibitor ATPaze, antagonist mineralokortikoidnih receptora, inhibitor fosfodiesteraze, antidijabetični agensi, anti-inflamatorni agensi, antioksidansi, modulatori angiogeneze, antiosteoporotski agensi, terapije zamene hormona, modulator hormonskih receptora, oralni kontraceptivi, agensi protiv gojaznosti, antidepresivi, antianksiozni agensi, antipsihotični agensi, antiproliferativni agensi, antitumorski agensi, antiulkusni i agensi bolesti gastroezofagealnog refluksa, agensi hormona rasta i/ili sekretagozi hormona rasta, tiroidni mimetici, anti-infektivni agensi, antiviralni agensi, antibakterijski agensi, antifungalni agensi, agensi za spuštanje holesterola/lipida i terapije za lipidni profil, i agensi koji imitiraju ishemijsko predstanje i/ili srčani zastoj, ili njihova kombinacija.

[0200] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabran od navedenih: antiaritmijski agens, anti-hipertenzivni agens, anti-koagulantni agens, anti-trombocitni agens, trombin inhibitorni agens, trombolitički agens, fibrinolitički agens, blokator kalcijum kanala, blokator kalijum kanala, agens za spuštanje holesterola/lipida, ili njihova kombinacija.

[0201] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži dodatni terapijski agens(e) odabran od navedenih: varfarin, nefrakcionisani heparin, heparin niske molekulske mase, sintetski pentasaharid, hirudin, argatrob, aspirin, ibuprofen, naproksen, sulindak, indometacin, mefenamat, dipiridamol, droksikam, diklofenak, sulfinpirazon, piroksikam, tiklopidin, klopidogrel, tirofiban, eptifibatid, abciksimab, melagatran, ksimelagatran, disulfatohirudin, tkivni aktivator plazminogena, modifikovani tkivni aktivator plazminogena, anistreplaza, urokinaza, i streptokinaza, ili njihova kombinacija.

[0202] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju gde je dodatni terapijski agens antihipertenzivni agens odabran od navedenih: ACE inhibitori, AT-1 receptor antagonisti, antagonisti beta-adrenergičkih receptora, antagonisti ETA receptora, antagonisti dvostrukog ETA/AT-1 receptora, inhibitori renina (aliskiren) i inhibitori vazopepsidaze, antiaritmijski agens odabran od IKurinhibitora, antikoagulant odabran od navedenih: inhibitori trombina, antitrombin-III activatori, heparin ko-faktor II activatori, drugi inhibitori faktora XIa, drugi kalikrein inhibitori, antagonisti inhibitora aktivacije plazminogena (plasminogen activator inhibitor - PAI-1), inhibitori trombinom aktiviranog fibrinoliznog inhibitora (trombin activatable fibrinolisis inhibitor -TAFI), faktor VIIa inhibitori, faktor IXa inhibitori, i faktor Xa inhibitori, ili antitrombocitni

4

agens odabran od navedenih: GPIIb/IIIa blokatori, GP Ib/IX blokatori, antagonisti proteazom aktiviranog receptora 1 (1 - PAR-1), antagonisti proteazom aktiviranog receptora 4 (PAR-4), prostaglandin E2 receptor EP3 antagonisti, kolagen receptor antagonisti, fosfodiesteraza-III inhibitori, P2I1receptor antagonisti, P2I12antagonisti, antagonisti tromboksanskih receptora, ciklooksigenza-1 inhibitori, i aspirin, ili njihova kombinacija.

[0203] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde je dodatni terapijski agens(i) anti-trombocitni agens ili njihova kombinacija.

[0204] U drugom tehničkom rešenju, predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, gde je dodatni terapijski agens anti-trombocitni agens klopidogrel.

[0205] Jedinjenja predmetnog pronalaska moge biti administrirana samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više dodatnih terapijskih agenasa. Pod "administracija u kombinaciji" ili "kombinovana terapija" smatra se da se jedinjenje predmetnog pronalaska i jedan ili više dodatnih terapijskih agenasa administriraju istovremeno sisaru koji se tretira. Kada se administriraju u kombinaciji, svaka komponenta može biti administrirana u isto vreme ili sekvencijalno bilo kojim redosledom u različitim vremenskim tačkama. Tako, svaka komponenta može biti administrirana zasebno ali u dovoljno bliskom vremenskom razmaku kako bi se obezbedio željeni terapijski efekat.

[0206] Jedinjenja koja mogu biti administrirana u kombinaciji sa jedinjenjem predmetnog pronalaska uključuju, ali nisu ograničena na, antikoagulante, anti-trombin agense, antitrombocitne agense, fibrinolitike, hipolipidemične agense, antihipertenzivne agense, i antiishemijske agense.

[0207] Drugi antikoagulantni agensi (ili agensi inhibicije koagulacije) koji mogu biti upotrebljeni u kombinaciji sa jedinjenjima ovog pronalaska uklučuju varfarin, heparin (bilo nefrakcionisani heparin ili bilo koji komercijalno dostupan heparin niske molekulske mase, na primer, LOVENOX®), sintetski pentasaharid, direktno delujuće trombin inhibitore uklučujući hirudin i argatroban, kao i druge faktor VIIa inhibitore, faktor IXa inhibitore, faktor Xa inhibitore (npr., ARIXTRA®, apiksaban, rivaroksaban, LI-517717, DU-176b, DX-9065a, i one stavljene na uvid javnosti u WO 98/57951, WO 03/026652, WO 01/047919, i WO 00/076970), faktor XIa inhibitore, i inhibitore aktiviranog TAFI i PAI-1 poznate prosečnom poznavaocu u oblasti.

[0208] Termin anti-trombocitni agensi (ili agensi inhibicije trombocita), kao što je ovde korišćeno, označava agense koji inhibiraju funkciju trombocita, na primer, inhibicijom agregacije, adhezije ili sekrecije trombocita u granulama. Takvi agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, razne poznate ne-steroidne anti-inflamatorne lekove (non-steroidal antiinflammatory drugs - NSAIDs) kao što su acetaminofen, aspirin, kodein, diklofenak, droksikam, fentanil, ibuprofen, indometacin, ketorolak, mefenamat, morfin, naproksen, fenacetin, piroksikam, sufentanil, sulfinpirazon, sulindak, i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili njihove prolekove. Od NSAIDs, aspirin (acetilsalicilna kiselina ili ASA) i piroksikam su poželjni. Drugi pogodni inhibitorni agensi trombocita uključuju glikoprotein IIb/IIIa antagoniste (npr., tirofiban, eptifibatid, abciksimab, i integrelin), tromboksan-A2-receptor antagoniste (npr., ifetroban), tromboksan-A-sintetaza inhibitore, fosfodiesteraza-III (PDE-III) inhibitore (npr., dipiridamol, cilostazol), i PDE-V inhibitore (kao što je sildenafil), antagoniste proteazom-aktiviranog receptora 1 (PAR-1) (npr., E-5555, SCH-530348, SCH-203099, SCH-529153 i SCH-205831), i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili njihove prolekove.

[0209] Drugi primeri pogodnih anti-trombocitnih agenasa za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska, sa ili bez aspirina, su ADP (adenozin difosfat) receptor antagonisti, poželjno antagonisti purinergičkih receptora P2I1i P2I12,sa P2I12koji je još poželjniji. Poželjni antagonisti P2I12receptora uključuju klopidogrel, tiklopidin, prasugrel, tikagrelor, i kangrelor, i njihove farmaceutski prihvatljive soli ili njihove prolekove. Tiklopidin i klopidogrel su takođe poželjna jedinjenja s'obzirom da je poznato da su blaža od aspirina za gastrointestinalni trakt. Klopidogrel je još poželjniji agens.

[0210] Željeni primer je trostruka kombinacija jedinjenja predmetnog pronalaska, aspirina, i drugog anti-trombocitnog agensa. Poželjno je da, anti-trombocitni agens bude klopidogrel ili prasugrel, poželjnije klopidogrel.

[0211] Termin trombin inhibitori (ili anti-trombin agensi), kao što je ovde korišćeno, označava inhibitore serin proteaze trombina. Inhibicijom trombina, razni trombinposredovani procesi, kao što su trombin-poredovana aktivacija trombocita (to je, na primer, agregacija trombocita, i/ili sekrecija sadržaja trombocitnih granula uključujući serotonin) i/ili formiranje fibrina se prekidaju. Brojni inhibitori trombina su poznati prosečnom poznavaocu oblasi i predviđeni su za upotrebu u kombinaciji sa predmetnim jedinjenjima. Takvi inhibitori uključuju, ali nisu ograničeni na, boroarginin derivate, boropeptide, heparine, hirudin, argatroban, dabigatran, AZD-0837, i one stavljene na uvid javnosti u WO 98/37075 i WO 02/044145, i njihove farmaceutski prihvatljive soli i njihove prolekove. Boroarginin derivati i boropeptidi uključuju N-acetil i peptid derivate boronske kiseline, kao C-terminalne aaminoboronsko kiselinske derivate lizina, ornitin, arginin, homoarginin i njihove odgovarajuće izotiouronijum analoge. Termin hirudin, kao što je ovde korišćeno, uključuje pogodne derivate ili analoge hirudina, ovde navedene kao hiruloge, kao što je disulfatohirudin.

[0212] Termin trombolički (ili fibrinolitički) agensi (ili trombolitici ili fibrinolitici), kao što je ovde korišćeno, označavaju agense koji liziraju krvne ugruške (trombe). Takvi agensi uključuju tkivni aktivator plazminogena (tissue plasminogen activator - TPA, prirodni ili rekombinantni) i njegove modifikovane forme, anistreplazu, urokinazu, streptokinazu, tenekteplazu (TNK), lanoteplazu (nPA), faktor VIIa inhibitore, trombin inhibitore, inhibitore faktora IXa, Xa, i XIa, PAI-I inhibitore (t.j., inaktivatore inhibitora tkivnog aktivatora plazminogena), inhibitore aktiviranog TAFI, alfa-2-antiplazmin inhibitore, i anizoilovani plazminogen streptokinaza aktivirajući kompleks, uključujući njihove farmaceutski prihvatljive soli ili njihove prolekove. Termin anistreplaza, kao što je ovde korišćeno, odnosi se na anizoilovani plazminogen streptokinaza aktivirajući kompleks, kao što je opisano, na primer, u Evropskoj Patentoj Prijavi Br. 028489, čija objava je ovde inkorporirana putem referenci koje su ovde navedene. Termin urokinaza, kao što je ovde korišćeno, ima za cilj da označi obe, dvolančanu i jednolančanu urokinazu, i takođe je kasnije ovde naznačen kao prourokinaza.

[0213] Primeri odgovarajućih agenasa za smanjenje nivoa holesterola/lipida i terapija lipidnog profila za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima predmetnog pronalaska uključuju HMG-CoA reduktaza inhibitore (npr., pravastatin, lovastatin, simvastatin, fluvastatin, atorvastatin, rosuvastatin, i druge statine), modulatore aktivnosti receptora nisko-denzitnog lipoproteina (low-density lipoprotein - LDL) (npr., HOE-402, PCSK9 inhibitori), sekvestrante žučne kiseline (npr., holestiramin i holestipol), nikotinsku kiselinu i njene derivate (npr., NIASPAN®), GPR109B (receptor nikotinske kiseline) modulatore, derivate fenofibrične kiseline (npr., gemfibrozil, klofibrat, fenofibrat i benzafibrat) i ostale modulatore peroksizom proliferator-aktiviranog receptora (peroxisome proliferator-activated receptors -PPAR) alfa, PPARdelta modulatore (npr., GW-501516), PPARgama modulatore (npr., rosiglitazon), jedinjenja koja imaju višestruku funkciju podešavanja aktivnosti raznih kombinacija PPARalfa, PPARgama i PPARdelta, probukola ili njihovih derivata (npr., AGI-1067), inhibitore apsorbcije holesterola i/ili inhibitore Niemann-Pick C1-like transportera (npr., ezetimib), inhibitore transfernih proteina holesterol estara (npr., CP-529414), skvalen sintaza inhibitore i/ili skvalen epoksidaza inhibitore ili njihove smeše, acil koenzim A: holesteril aciltransferaza (cholesteryl acyltransferase - ACAT) 1 inhibitore, ACAT2 inhibitore, dvostruke ACAT1/2 inhibitore, inhibitore transporta žučne kiseline u ileumu (ili inhibitore apikalnog natrijum zavisnog transporta žučne kiseline), inhibitore mikrozomalnog proteina za transfer triglicerida, modulatore jetrenog-X-receptora (liver-X-receptor - LXR) alfa, LXRbeta modulatore, LXR dvostruke alfa/beta modulatore, FXR modulatore, omega 3 masne kiseline (npr., 3-PUFA), biljne stanole i/ili estri masnih kiselina i biljnih stanola (npr., sitostanol estar korišćen u BENECOL® margarinu), inhibitore endotelijske lipaze, i HDL functionalni mimetici koji aktiviraju reverzni transport holesterola (npr., apoAI derivati ili mimetici apoAI peptida).

[0214] Jedinjenja predmetnog pronalaska su takođe u upotrebi kao standardna ili referentna jedinjenja, na primer, kao standard kvaliteta ili kontrola, u testovima ili analizama koja uključuju inhibiciju trombina, Faktora VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili plazma kalikreina. Takva jedinjenja mogu biti obezbeđena u komercijalnom kitu, na primer, za upotrebu u farmaceutskom istraživanju koje uključuje trombin, Faktor VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili plazma kalikrein. XIa. Na primer, jedinjenje predmetnog pronalaska može biti upotrebljeno kao referenca u testu za poređenje njegove poznate aktivnosti sa jedinjenjem nepoznate aktivnosti. Ovo bi dalo sigurnost da je test izveden pravilno i obezbedilo osnovu za poređenje, naročito ukoliko je testirano jedinjenje derivat referentnog jedinjenja. Kada se razvijaju novi testovi i protokoli, jedinjenja koja su u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti upotrebljena za testiranje njihove efikasnosti.

[0215] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se takođe koristiti u dijagnostičkim testovima koji uključuju trombin, Faktor VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili plazma kalikrein. Na primer, prisustvo trombina, Faktora VIIa, IXa, Xa XIa, i/ili plazma kalikreina u nepoznatom uzorku može biti određeno dodatkom relevantnog hromogenog supstrata, na primer, S2366 za Faktor XIa, serijama rastvora koji sadrže test uzorak i po izboru jedno od jedinjenja predmetnog pronalaska. Ukoliko je stvaranje pNA uočeno u rastvorima koji sadrže test uzorak, ali ne i u prisustvu jedinjenja predmetnog pronalaska, onda se zaključuje da je prisutan Faktor XIa.

[0216] Ekstremno potentna i selektivna jedinjenja predmetnog pronalaska, ona koja imaju Kivrednosti manje od ili jednake 0.001 µM u odnosu na ciljanu proteazu i veće od ili jednake 0.1 µM u odnosu na druge proteaze, mogu takođe biti upotrebljena u dijagnostičkim testovima koji uključuju kvantifikaciju trombina, Faktora VIIa, IXa, Xa, XIa, i/ili plazma kalikreina u uzorcima seruma. Na primer, količina Faktora XIa u uzorcima seruma bi se mogla odrediti pažljivom titracijom aktivnosti proteaze u prisustvu relevantnog hromogenog supstrata, S2366, potentnim Faktor XIa inhibitorom predmetnog pronalaska.

[0217] Predmetni pronalazak takođe obuhvata proizvod izrade. Kao što je ovde korišćeno, proizvod izrade treba da obuhvati, ali nije ograničen na, kitove i pakovanja. Proizvod izrade premetnog pronalaska, obuhvata: (a) primarno pakovanje; (b) farmaceutsku kompoziciju koja koja se nalazi unutar primarnog pakovanja, gde kompozicija, sadrži: prvi terapijski agens, koji sadrži: jedinjenje predmetnog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu formu soli; i, (c) uputstvo za upotrebu u kome se navodi da se farmaceutska kompozicija može koristiti za lečenje tromboembolijskog i/ili inflamatornog poremećaja (kao što je prethodno definisano). U drugom rešenju, u uputstvu za primenu se navodi da se farmaceutska kompozicija može koristiti u kombinaciji (kao što je prethodno definisano) sa drugim terapijskim agensom za lečenje tromboembolijskog i/ili inflamatornog poremećaja. Proizvod izrade može dodatno sadržati: (d) sekundarno pakovanje, gde su komponente (a) i (b) smeštene unutar sekundarnog pakovanja i komponenta (c) je smeštena unutar ili van sekundarnog pakovanja. Smešten unutar primarnog i sekundarnog pakovanja znači da se stavka nalazi unutar granica odgovarajućeg pakovanja.

[0218] Primarno pakovanje je posuda koja se koristi za držanje farmaceutske kompozicije. Ovo pakovanje može služiti za proizvodnju, skladištenje, dostavu, i/ili individualnu/grupnu prodaju. Primarno pakovanje obuhvata bocu, teglu, bočicu, posudu, špric, tubu (npr., za pripremu kreme), ili bilo koje drugo pakovanje koje se koristi da se proizvede, drži, skladišti, ili distribuira farmaceutski proizvod.

[0219] Sekundarno pakovanje je ono koje se upotrebljava za držanje primarnog pakovanja i, po izboru, uputstvo za upotrebu. Primeri sekundarnog pakovanja uključuju, ali nisu ograničeni na, kutije (npr., kartonske ili plastične), kolete, tetrapake, kese (npr., papirne ili plastične kese), kesice, i vreće. Uputstvo za upotrebu može biti fizički pričvršćeno za spoljašnju stranu primarnog pakovanja pomoću lepljive trake, lepka, spajalice, ili nekim drugim načinom vezivanja, ili biti priloženo unutar sekundarnog pakovanja bez bilo kakvog fizičkog načina vezivanja za primarno pakovanje. Alternativno, uputstvo za upotrebu se nalazi na spoljnoj strani sekundarnog pakovanja. Kada se nalazi na spoljnoj strani sekundarnog pakovanja, poželjno je da je uputstvo za upotrebu fizički pričvršćeno pomoću lepljive trake, lepka, spajalice ili nekim drugim načinom vezivanja. Alternativno, može biti u blizini ili dodirivati spoljašnost sekundarnog pakovanja bez fizičkog vezivanja.

[0220] Uputstvo za upotrebu je nalepnica, etiketa, oznaka, itd. koja iznosi informaciju koja se odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja se nalazi unutar primarnog pakovanja. Informacije koje se navode će uobičajeno biti određene od strane regulatorne agencije koja reguliše oblast u kojoj se proizvot izrade treba prodati (npr., the United States Food and Drug Administration – Američka uprava za hranu i lekove). Poželjno, uputstvo za upotrebu posebno navodi indikacije za koje je farmaceutska kompozicija odobrena. Uputstvo za upotrebu može biti napravljeno od bilo kog materijala na kome se može pročitati informacija sadržana u njemu ili na njemu. Poželjno, uputstvo za upotrebu je materijal koji se može štampati (npr., papir, plastika, karton, folija, samolepljivi papir ili plastika, itd.) na kome su željene informacije dostupne (npr., štampane ili nanete).

[0221] Druge karakteristike predmetnog pronalaska će postati očigledne tokom narednih opisa reprezentativnih tehničkih rešenja koja su data za ilustraciju predmetnog pronalaska i bez namere da ih ograničavaju. Naredni primeri su pripremljeni, izolovani i opisani upotrebom metoda koje su ovde stavljene na uvid javnosti.

VI. OPŠTA SINTEZA UKLJUČUJUĆI SHEME

[0222] Jedinjenja predmetnog pronalaska može biti sintetizovano putem mnogih metoda dostupnih prosečnim poznavaocima oblasti organske hemije (Maffrand, J.P. i ostali., Heterocycles, 16(1):35-37 (1981)). Opšte sintetske sheme za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska su opisane niže. Ove sheme su ilustrativne i bez namere da ograniče moguće tehnike koje prosečni poznavalac oblasti može koristiti da pripremi jedinjenja stavljena ovde na uvid javnosti. Različite metode za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska će biti očigledne prosečnim poznavaocima oblasti. Dodatno, razni koraci u sintezi se mogu izvesti izmenjenim redosledom da bi se dobilo željeno jedinjenje ili jedinjenja.

[0223] Primeri jedinjenja predmetnog pronalaska pripremljenih metodama opisanim u opštim shemama su dati u odeljku za intermedijere i primere koji je niže naveden. Priprema homohiralnih primera može biti izvedena tehnikama koje su poznate prosečnom poznavaocu u oblasti. Na primer, homohiralna jedinjenja mogu biti pripremljena separacijom racemskih proizvoda pomoću hiralne faze preparativne HPLC. Alternativno, primerna jedinjenja mogu biti pripremljena metodama za koje je poznato da daju enantiomerno obogaćene proizvode. Ovo uključuje, ali nije ograničeno na, inkorporaciju hiralnih pomoćnih funkcija u racemske intermedijere koje služe za kontrolu diastereoselektivnosti transformacija, obezbeđujući enantio-obogaćene proizvode nakon cepanja hiralnog pomoćnog sredstva.

[0224] Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti pripremljena na brojne načine koji su poznati prosečnom poznavaocu oblasti organske sinteze. Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu biti sintetisana upotrebom metoda koje su niže opisane, zajedno sa metodama sinteze poznatim prosečnom poznavaocu u oblasti sintetske organske hemije, ili njihovim varijacijama kao što je shvaćeno od strane prosečnih poznavaoca oblasti. Poželjne metode obuhvataju, ali nisu ograničene na, one koje su niže opisane. Reakcije su izvedene u rastvaraču ili smeši rastvarača odgovarajućim za upotrebljene reagense i materijale i pogodnim za transformacije koje su izvedene. Prosečni poznavaoci oblasti organske sinteze će shvatiti da funkcionalnost prisutna na molekulu treba da bude u skladu sa predloženim transformacijama. Ovo će nekada zahtevati odluku da se modifikuje redosled koraka sinteze ili da se odabere jedna posebna shema procesa od ostalih da bi se dobilo željeno jedinjenje predmetnog pronalaska.

[0225] Takođe će biti prepoznato da je drugo glavno razmatranje u planiranju bilo kog puta sinteze u ovoj oblasti razuman izbor zaštitne grupe korišćene za zaštitu reaktivnih funkcionalnih grupa prisutnih u jedinjenjima opisanim u ovom pronalasku. Merodavan izveštaj koji opisuje mnoge alternative obučenom praktičaru je Greene i ostali. (Protective Groups in Organic Synthesis, Četvrto izdanje, Wiley-Interscience (2006)).

[0226] Reprezentativna pirimidinon jedinjenja 1a ovog pronalaska mogu biti pripremljena kao što je opisano u Shemi 1. Korišćenjem modifikovane procedure koju je opisao Xiao (Org. Lett., 11:1421 (2009)), pogodni supstituisani pirimidin-4-ol derivati 1b mogu biti kuplovani sa prikladno supstituisanim makrociklom amin 1c u prisustvu HATU id DBU u rastvaraču kao što je CH3CN da se obezbede pirimidinon jedinjenja 1a. Kada je prsten A SEM-zaštićen imidazol prsten, dodatni korak uklanjanja zaštite upotrebom 4M HCl u dioksanu ili TFA u DCM je potreban da bi se dobila jedinjenja ovog pronalaska.

1

[0227] Shema 2 opisuje sintezu pogodnih supstituisanih pirimidin-4-ol derivata 1b. Suzuki-Miiaura kuplovanje između 6-hloropirimidin-4-ola (2a) i pogodno supstituisane aril ili heteroaril boronske kiseline ili estra 2c u prisustvu baze kao što je Hunig-ova baza ili trobaznog kalijum fosfata, u smeši rastvarača, kao što su toluen i etanol, ili THF, korišćenjem prekatalizatora kao što je Pd(PPh3)4ili 2-ge generacije XFos obezbeđuje 1b. Alternativno, kada se koristi 4-hloro-6-metoksipirimidin 2b, dodatni korak uklanjanja zaštite, korišćenjem vodenog HBr pri povišenim temperaturama, je potreban da se obezbede pirimidin-4-ol derivati 1b.

[0228] Intermedijeri za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska gde je prsten A 6-očlani heterocikl (primer - piridin) mogu biti dobijeni pogodno supstituisanih aldehida 3a u skladu

2

sa opštom metodom prikazanom u Shemi 3. Kondenzacija aldehida 3a (X = N) pripremljenih u skladu sa modifikovanom procedurom koju je opisao Negi (Sinthesis, 991 (1996)), sa (S)-2-metilpropan-2-sulfinamidom u prisustvu anhidrovanog bakar sulfata ili cezijum karbonata u rastvaraču kao što je DCM daje sulfinimin 3b (Ellman, J., J. Org. Chem., 64:1278 (1999)). Korišćenjem modifikovane procedure koju je opisao Kuduk (Tetrahedron Letters, 45:6641 (2004)), pogodno supstituisani Grignardovi reagensi, na primer, alilmagnezijum bromid, mogu biti dodati sulfiniminu 3b da se dobije sulfinamid 3c, kao smeša diastereomera koji se mogu razdvojiti pri različitim fazama u redosledu. Diastereoselektivnost za dodatak alil magnezijum bromida sulfiniminu 3b može biti povećana korišćenjam indijum(III) hlorida u skladu sa Xu-ovom modifikovanom procedurom (Xu, M.-H., Org. Lett., 10(6):1259 (2008)). Interkonverzija zaštitne grupe može biti postignuta u dva koraka čime se dobija 3d. Kritično podjedinično kuplovanje se postiže putem metodologije koju je razvio Sames (J. Am. Chem. Soc., 131:3042 (2009)). Tretman hloropiridina 3d sa N-zaštićenim nitropirazolom 3e u prisustvu katalitičkih Pd(OAc)2i P(nBu)Ad2stvara željenu arilpirazol vezu, formirajući 3f. Redukcija ovog nitropirazola daje 3g. Ovaj aminopirazol onda može biti kuplovan sa pogodno supstituisanom karboksilnom kiselinom 3h korišćenjem T3P® i baze, kao što je piridin, da se dobije amid 3i. Dien može biti ciklizovan putem prsten-zatvarajuće metateze upotrebom katalizatora, kao što je Grubsov katalizator klase II, u pogodnom rastvaraču, kao što je EtOAc na povišenoj temperaturi, da se dobije makrocikl 3j koji sadrži piridin. Alken može biti redukovan vodonikom preko ili paladijuma na ugljeniku ili paladijum oksida. Druga reakcija kuplovanja je onda sprovedena kao što je opisano u Shemi 1 sa pirimidinolom 3k da se dobije pirimidinon 3l. Naknadno uklanjanje zaštite pirazola sa TFA u DCM ili 4M HCl u dioksanu obezbeđuje nakon Ulmanovog kuplovanja sa aril jodidom daje 3m kao glavni regioizomer. Ukoliko se 3n formira, to je minorna komponenta smeše proizoda.

[0229] Jedinjenja kao 3n se mogu dobiti kao ekskluzivni proizvodi prateći procedure sinteze u Shemi 4. Sve operacije su analogne onima u Shemi 3 sve do reakcije kuplovanja pirazola. Odgovarajuće supstituisani nitropirazoli 4a daju prikazane regioizomerne pirazole 4b pod istim uslovima opisanim u Shemi 3. Redukcija do 4c, amidacija sa 3h za formiranje 4d, i metateza zatvaranja prstena za formiranje makrocikla 4e se uočavaju takođe na sličan način. Redukcijan olefina i oslobađanje zaštite su praćeni pirimidinol kuplovanjem, kao što je opisano u Shemama 1 i 3.

4

[0230] Metode za sintezu velikog broja supstituisanih jedinjenja piridina koja su korisna kao polazni materijali za pripremu jedinjenja predmetnog pronalaska su dobro poznate prosečnom poznavaocu oblasti i opširno su pregledane. (Za primere metoda korisnih za pripremu piridin startnih materijala videti: Kroehnke, F., Synthesis, 1 (1976); Abramovitch, R.A., ed., "Pyridine and Its Derivatives", The Chemistry of Heterocyclic Compounds, 14(Suppl. 1-4), John Wiley & Sons, Nju Jork (1974); Boulton, A.J. i ostali, eds., Comprehensive Heterocyclic Chemistry, 2:165-524, Pergamon Press, Nju Jork (1984); McKillop, A., ed., Comprehensive Heterocyclic Chemistry, 5:1-300, Pergamon Press, Nju Jork (1996)).

[0231] Prečišćavanja intermedijernih i finalnih proizvoda je sprovedena pomoću hromatografije ili normalnih ili reverznih faza. Hromatografija normalnih faza je sprovedena korišćenjem prethodno pripremljenih SiO2kolona eluiranih sa ili gradijentima heksana i EtOAc ili DCM i MeOH ukoliko nije drugačije naznačeno. Preparativna HPLC reverznih faza je sprovedena upotrebom C18 kolona eluiranih sa gradijentima Rastvarača A (90% voda, 10% MeOH, 0.1% TFA) i Rastvarača B (10% voda, 90% MeOH, 0.1% TFA, UV 220 nm) ili sa gradijentima Rastvarača Solvent A (90% voda, 10% ACN, 0.1 % TFA) i Rastvarača B (10% voda, 90% ACN, 0.1% TFA, UV 220 nm) ili sa gradijentima Rastvarača A (98% voda, 2% ACN, 0.05% TFA) i Rastvarača B (98% ACN, 2% voda, 0.05% TFA, UV 220 nm) (ili) SunFire Prep C18 OBD 5µ 30x100mm, 25 min gradjient od 0-100% B. A = H2O/ACN/TFA 90:10:0.1. B=ACN/H2O/TFA 90:10:0.1.

[0232] Ukoliko nije drugačije utvrđeno, analiza finalnih proizvoda je sprovedena pomoću analitičke HPLC reverznih faza.

[0233] Metoda A: Waters SunFire kolona (3.5 µm C18, 3.0 x 150 mm). Korišćena je gradijent elucija (0.5 mL/min) Rastvaračem B od 10-100% tokom 12 min i onda 100%-tnim Rastvaračem B tokom 3 min. Rastvarač A je (95% voda, 5% acetonitril, 0.05% TFA) i Rastvarač B je (5% voda, 95% acetonitril, 0.05% TFA, UV 254 nm).

[0234] Metoda B: Waters Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 10 mM amonijum acetata; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, potom 0.75-minutno održavanje na 100% B; Protok: 1.11 mL/min.

[0235] Metoda C: Wathers Acquity UPLC BEH C18, 2.1 x 50 mm, 1.7-µm čestice; Mobilna Faza A: 5:95 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Mobilna Faza B: 95:5 acetonitril:voda sa 0.1% TFA; Temperatura: 50 °C; Gradijent: 0-100% B tokom 3 minuta, potom 0.75-minutno održavanje na 100% B; Protok: 1.11 mL/min.

[0236] Metod X: ZORBAX® SB C18 kolona (4.6x75mm). Korišćena je gradijent elucija (2.5 mL/min) Rastvaračem B od 0-100% tokom 8 min i potom 100%-tnim Rastvaračem B tokom 2 min. Rastvarač A je (90% voda, 10% MeOH, 0.02% H3PO4) i Rastvarač B je (10% voda, 90% MeOH, 0.02% H3PO4, UV 220 nm).

PRIMERI

[0237] Primer 1. Priprema (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15 tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

1A. Priprema 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazola

[0238] Cs2CO3(14.41 g, 44.2 mmol) je suspendovano u rastvoru 4-nitro-1H-pirazola (5.00 g, 44.2 mmol) i DMF (40 mL). Nakon zagrevanja na 120 °C tokom 5 min, čvrst natrijum 2-hloro-2,2-difluoroacetat (13.48 g, 88 mmol) je dodat u 10 jednakih porcija u toku 20 min. Reakcija je završena nakon 10 min dodatnog zagrevanja. Smeša je dodata u levak za razdvajanje koji sadrži 100 mL vode i ekstrahovana pomoću Et2O (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi su koncentrisani. Prečišćavanje pomoću hromatografije normalnih faza eluacijom sa gradijentom heksana/EtOAc je dala 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol (6.99 g, 42.9 mmol, 97%-tni prinos) kao čisto, bezbojno ulje.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.58 (s, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.39 - 7.05 (t, J = 60 Hz, 1H).

1B. Priprema (S)-terc-butil (1-(4-(1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0239] U bocu sa okruglim dnom (round bottom flask – RBF) od 500ml koja je isprana pomoću N2je dodat (S)-terc-butil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat, pripremljen kao što je opisano u Primeru 3, (10 g, 35.4 mmol), 1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol (6.34 g, 38.9 mmol) i dioksan (100 mL). U rastvor je uvođen N2u mehurićima tokom 5 min. Potom su dodati Pd(OAc)2(0.40 g, 1.7 mmol), di(adamantan-1-il)(butil)fosfin (1.27 g, 3.5 mmol), K2CO3(14.7 g, 106 mmol) i PvOH (1.08 g, 10.61 mmol). U reeakcionu smešu je uvođen N2u mehurićima tokom 5 min potom je reakciona smeša zagrevana na 100 °C tokom 3 h. Nakon ovog perioda, rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu i dodata je voda (200 mL). Reakciona smeša je potom ekstrahovana sa EtOAc (2 x 200 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa vodom (200 mL), slanim rastvorom (200 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje pomoću hromatografije normalnih faza eluiranjem sa gradijentom heksana/EtOAc dalo je (S)-terc-butil (1-(4-(1-(difluorometil)-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (12.91 g, 31.5 mmol, 89% prinos) kao ulje blago žute boje. MS(ESI) m/z: 410.4 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.80 (dd, J=5.1, 0.7 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.31 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.27 - 6.91 (t, J=58 Hz, 1H), 5.79 - 5.63 (m, 1H), 5.16 - 5.03 (m, 2H), 4.92 (d, J=5.9 Hz, 1H), 2.67 (t, J=6.4 Hz, 2H), 1.46 (br. s., 9H).

1C. Priprema (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-(difluoromctil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0240] U RBF od 100 ml sa tri grla je dodat rastvor (S)-terc-butil (1-(4-(1-(difluorometil)-4-nitro-1H pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (0.78 g, 1.90 mmol) u MeOH (12 mL) i rastvor NH4Cl (1.02 g, 19 mmol) u vodi (3 mL). U rastvor je dodato Fe (0.53 g, 9.49 mmol). Reakciona smeša je zagrevana na 65 °C tokom 3 h. Dodata je voda (50 mL). Nakon hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je filtrirana kroz CELITE® podlogu i ispran sa MeOH (200 mL). Filtrat je koncentrovan in vacuo. Ostatak je podeljen između EtOAC (100 mL) i vode (100 mL). Organska faza je izdvojena, isprana sa vodom (100 mL), slanim rastvorom (100 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana i koncentrovana in vacuo. Prečišćavanje pomoću hromatografije normalnih faza ispiranjem sa gradijentom DCM/MeOH je dalo (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-(difluorometil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (0.585 g, 1.54 mmol, 81%-tni prinos) kao ulje. MS(ESI) m/z: 380.1 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.70 (dd, J=5.0, 0.7 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.36 (s, 1H), 7.32 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.28 - 6.97 (t, J=58 Hz, 1H), 5.80 - 5.66 (m, 1H), 5.65 - 5.53 (m, 1H), 5.13 - 5.03 (m, 2H), 4.87 (br. s., 1H), 3.22 (br. s., 2H), 2.65 (t, J=6.5 Hz, 2H), 1.52 - 1.37 (m, 9H).

1D. Priprema terc-butil ((S)-1-(4-(1-(difluorometil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0241] U ispranu sa N2, RBF od 250 mL sa 3 grla, je dodat rastvor (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-(difluorometil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (5 g, 13.18 mmol) i EtOAc (50 ml). Rastvor je ohlađen na -10 °C i (R)-2-metilbut-3-enoična kiselina, kao što je pripremljeno u Primeru 2, (1.72 g, 17.13 mmol), piridin (4.26 ml, 52.7 mmol) i T3P® (23.54 ml, 39.5 mmol) su dodati. Hladno kupatilo je uklonjeno i dozvoljeno je da se rastvor zagreje na sobnu temperaturu i potom se meša tokom perioda od 20 h. Voda (30 mL) i EtOAc (30 mL) se dodaju i smeša se meša tokom 30 min. Oganska faza se izdvaja i vodeni sloj se ekstrahuje sa EtOAc (30 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom (50 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje pomoću hromatografije normalnih faza eluiranjem gradijentom heksana/EtOAc je dalo tercbutil ((S)-1-(4-(1-(difluorometil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2il)but-3-en-1-il)karbamat (5.69 g, 12.33 mmol, 94%-tni prinos). MS(ESI) m/z: 462.2 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.75 (dd, J=5.0, 0.6 Hz, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.32 (t, J=59 Hz, 1H), 7.28 (br. s., 1H), 7.20 (s, 1H), 5.97 - 5.85 (m, 1H), 5.78 - 5.65 (m, 1H), 5.56 - 5.44 (m, 1H), 5.28 - 5.19 (m, 2H), 5.12 (d, J=2.0 Hz, 2H), 4.91 - 4.82 (m, 1H), 3.20 - 3.11 (m, 1H), 2.72 - 2.62 (m, 2H), 1.48 - 1.43 (s, 9H), 1.33 (d, J=6.8 Hz, 3H).

1E. Priprema terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0242] U ispranu sa N2, bocu sa okruglim dnom (RBF) sa 3 grla, od 2L, je dodat rastvor tercbutil ((S)-1-(4-(1-(difluorometil)-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (3 g, 6.50 mmol) u EtOAc (1300 ml). Rastvor je ispran gasom argonom koji se u vidu mehurova uvodi tokom 15 min. Grubbs II (1.38 g, 1.63 mmol) se dodaje u jednoj porciji. Reakciona smeša je zagrevana do refluksa tokom 24 h. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza eluiranjem sa gradijentom DCM/MeOH i dao je terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (2.13 g, 4.91 mmol, 76%-tni prinos) kao tamno žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 434.4 [M+H]<+>.

<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.71 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.44 - 7.40 (m, 1H), 7.36 (br. s., 1H), 7.27 (t, J=58 Hz, 1H), 6.87 (s, 1H), 6.49 - 6.39 (m, 1H), 5.78 (s, 1H), 4.80 (br. s., 2H), 3.18 - 3.08 (m, 1H), 3.08 - 2.98 (m, 1H), 2.06 - 1.93 (m, 1H), 1.51 (s, 9H), 1.19 (d, J=6.6 Hz, 3H).

1F. Priprema terc-butil N-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0243] Pd/C (0.60 g, 0.570 mmol) se dodaje u bocu od 250 ml za Parr hidrogenaciju koja sadrži rastvor terc-butil N-[(9R,10E,13S-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (2.46 g, 5.68 mmol) u EtOH (100 mL). Posuda je očišćena pomoću N2i tokom izlaganja pritisku vodonika od 55 psi - pound per square inch (sila po kvadratnom inču) dozvoljeno je da se meša tokom 18 h. Reakcija je filtrirana kroz CELITE® i koncentrovana čime daje terc-butil N-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (2.17 g, 88%-tni prinos) kao tamno žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 436.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.32 (s, 1H), 8.71 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.96 (t, J=58 Hz, 1H), 7.43 (s, 1H), 7.32 (d, J=4.8 Hz, 1H), 7.22 (d, J=7.3 Hz, 1H), 4.66 (d, J=8.3 Hz, 1H), 2.62 (br. s., 1H), 1.88 (d, J=12.8 Hz, 1H), 1.77 - 1.59 (m, 2H), 1.42 - 1.28 (m, 9H), 1.15 (d, J=18.2 Hz, 2H), 0.83 (d, J=7.0 Hz, 3H).

1G. Priprema (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0244] 4 N HCl u dioksanu (3.88 mL, 15.5 mmol) je dodata u rastvor terc-butil N-[(9R,13S)-3-(difluorometil)-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (2.25 g, 5.2 mmol) u MeOH (10 mL). Dozvoljeno je da se reakcija meša na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je ohlađena u ledenom kupatilu, i dodat je 7 N NH3u MeOH (13.3 mL, 93.0 mmol). Nakon 5 min, reakcija je razblažena sa CH2Cl2(80 mL) i čvrsta supstanca koja je formirana se filtrira. Filtrat je koncentrovan čime je dao (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (1.3 g, 3.88 mmol, 75%-tni prinos). MS(ESI) m/z: 336.3 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ 9.33 (s, 1H), 8.71 (d, J=5.0 Hz, 1H), 7.94 (t, J=58 Hz, 1H), 7.85 (s, 1H), 7.40 (s, 1H), 7.32 (d, J=5.0 Hz, 1H), 4.01 (dd, J=10.2, 5.1 Hz, 1H), 2.63 - 2.53 (m, 1H), 1.90 - 1.69 (m, 2H), 1.53 - 1.36 (m, 2H), 1.16 - 1.00 (m, 1H), 0.85 (d, J=7.0 Hz, 3H).

1H. Priprema (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il} -3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona.

[0245] U bocu od 100 mL koja sadrži belu suspenziju 6-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)pirimidin-4-ola (0.83 g, 2.7 mmol), kao što je pripremljeno u Primeru 4 u ACN-u (36 mL) je dodat HATU (1.12 g, 3.0 mmol) i DBU (0.53 mL, 3.5 mmol). Dobijeni bistar, žut rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 5 min, (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.9 g, 2.68 mmol) je dodat i dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcija je nakon toga koncentrovana i prečišćena pomoću silika gel hromatografije normalnih faza, eluiranjem sa gradijentom od 0% do 100% EtOAc u heksanima čime se dobija (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.87 g, 50% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 626.2 [M+H]<+>.<1>H NMR (500MHz, CD3OD) δ 8.91 - 8.83 (m, 1H), 8.78 - 8.71 (m, 1H), 8.33 (s, 1H), 7.88 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.74 (s, 2H), 7.69 - 7.67 (m, 1H), 7.65 (s, 1H), 7.63 (t, J=58 Hz, 1H), 7.52 - 7.50 (m, 1H), 6.36 (d, J=0.8 Hz, 1H), 6.06 - 5.95 (m, 1H), 2.76 - 2.65 (m, 1H), 2.36 - 2.21 (m, 1H), 2.08 - 1.93 (m, 2H), 1.63 - 1.53 (m, 1H), 1.53 - 1.42 (m, 1H), 0.99 (d, J=6.9 Hz, 3H). Analitical HPLC (Metod A): RT = 8.87 min, čistoća = 99.7%.

[0246] Primer 2. Priprema (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-4-(piridin-3-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

2A. Priprema 4-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazola

[0247] U rastvor 4-nitro-1H-pirazola (5.0 g, 44.2 mmol) u THF (100 mL) na 0 °C je dodat N-cikloheksil-N-metilcikloheksanamin (0.948 mL, 4.43 mmol) nakon čega je u kapima dodat SEM-Cl (12.55 mL, 70.7 mmol). Temperaturi reakcione smeše je nakon toga dozvoljeno da postepeno raste do sobne temperature na kojoj je reakciona smeša mešana tokom noći. Reakciona smeša je potom koncentrovana, nakon čega je prečišćena upotrebom hromatografije normalnih faza što je dalo 4-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol kao bistro ulje (2.4 g, 21%-tni prinos).<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.31 (s, 1H), 8.10 (s, 1H), 5.46 (s, 2H), 3.67 - 3.55 (m, 2H), 0.99 - 0.90 (m, 2H), 0.05 - 0.03 (m, 9H).

2B. Priprema (S)-benzil (1-(4-(4-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0248] U ispranu sa N2bočicu pod pritiskom je dodat (S)-benzil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat, pripremljen kao što je opisano u Primeru 5, (1.9 g, 6.00 mmol), 4-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol (1.6 g, 6.60 mmol), di(adamant-1-il)(butil)fosfin (0.323 g, 0.90 mmol), PvOH (0.209 mL, 1.80 mmol) i K2CO3(2.48 g, 17.9 mmol). U navedenu smešu je potom dodat DMA (45 mL) i bočica je prečišćena sa N2tokom 5 min. U ovu smešu je potom dodat Pd(OAc)2(0.135 g, 0.600 mmol). Reakciona smeša je ponovo brzo

1

prečišćena sa N2. Bočica je zatvorena i zagrevana u mikrotalasnoj na 120 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je ohlađena na sobnu temperaturu i podeljena između 10%-tnog vodenog LiCl (15 mL) i EtOAc (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani slanim rastvorom (15 mL) i osušeni preko MgSO4. Sirov proizvod je potom prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza čime je dobijen (S)-benzil (1-(4-(4-nitro-1-((2-(trimetilsilil) etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (1.92 g, 58%-tni prinos) kao braon ulje. MS(ESI) m/z: 524.2 (M+H)<+>.

2C. Priprema (S)-benzil (1-(4-(4-amino-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0249] Rastvor (S)-benzil (1-(4-(4-nitro-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (1.92 g, 3.68 mmol), pripremljen kao što je opisano u Primeru 2B, u MeOH (20 mL) i AcOH (2 mL) je zagrevan u uljanom kupatilu na 40 °C. U navedeni bistri rastvor je potom polako dodat Zn (0.481 g, 7.35 mmol, u 3 dela (50:25:25%)) i mešan na istoj temperaturi tokom 5 min. Dodatni Zn je dodat u reakciju. Reakciona smeša je praćena pomoću tečne hromatografije-masene spektrometrije (LCMS-liquid chromatographymass spectrometry) i kada je završena, reakciona smeša je ohlađena i potom je dodato 2.0 g K2CO3(1 g za 1 mL AcOH) i 2.0 mL vode. Reakciona smeša je mešana tokom 5 min. Reakciona smeša je potom filtrirana preko CELITE® podloge i koncentrovana in vacuo čime je dobijen sirov proizvod. Sirov proizvod je potom podeljen između EtOAc (30 mL) i zasićenog rastvora NaHCO3(15 mL). Organski slojevi su odvojeni, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirov proizvod je potom prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza čime je dobijen (S)-benzil (1-(4-(4-amino-1-((2-(trimetilsilil)etoksi) metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (1.15 g, 63%-tni prinos) kao bledo žuto ulje. MS(ESI) m/z: 494.4 (M+H)<+>.

2D. Priprema benzil ((S)-1-(4-(4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0250] U ispranu sa N2, bocu sa okruglim dnom (RBF) sa 3 grla, od 250 ml, je dodat rastvor (S)-benzil (1-(4-(4-amino-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (1.15 g, 2.33 mmol) i EtOAc (15 mL). Rastvor je ohlađen na -10 °C i (R)-2-metilbut-3-enoična kiselina (350 mg, 3.49 mmol), piridin (0.564 mL, 6.99 mmol) i T3P® (2.77 mL, 4.66 mmol) su dodati. Hladno kupatilo je uklonjeno i rastvor je zagrejan na sobnu temperaturu i potom mešan tokom perioda od 20 h. Voda (20 mL) i EtOAc (20 mL) su dodati

2

i smeša je mešana tokom 30 min. Organska faza je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (20 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani slanim rastvorom (15 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje pomoću hromatografije normalnih faza eluiranjem gradijentom heksana/EtOAc ja dalo benzil ((S)-1-(4-(4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (1.12 g, 79%-tni prinos). MS(ESI) m/z: 576.4 [M+H]<+>.

2E. Priprema benzil N-[(9R,10E,13S)-9-metil-8-okso-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi] metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0251] U ispranu sa N2, RBF od 250 mL, sa tri grla je dodat rastvor benzil ((S)-1-(4-(4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1-((2-(trimetilsilil)etoksi)metil)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (1.12 g, 1.945 mmol) u DCE (18 mL). Rastvor ispran gasom argonom koji se u vidu mehurova uvodi tokom 15 min. Grubbs II (662 mg, 0.778 mmol) je dodat jednokratno. Reakciona smeša ja zagrevana na 120 °C u mikrotalasnoj peći tokom 30 min. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvarač je uklonjen i ostatak je prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza eluiranjem gradijentom DCM/MeOH čime je dobijen benzil N-[(9R,10E,13S)-9-metil-8-okso-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (477 mg, 42%-tni prinos) kao čvrsta supstanca tamno žute boje. MS(ESI) m/z: 548.3 [M+H]<+>.

2F. Priprema benzil N-[(9R,13S)-9-metil-8-okso-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi] metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0252] Pd/C (0.93 g, 0.871 mmol) je dodat u bocu od 250 mL za Parr hidrogenaciju koja sadrži rastvor benzil N-[(9R,10E,13S)-9-metil-8-okso-3-{[2-(trimetilsilil) etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (477 mg, 0.871 mmol) u EtOH (20 mL). Posuda je očišćena sa N2i izložena pritisku H2do 55 psi i mešana tokom 4 h. Reakcija je filtrirana kroz CELITE® podlogu i koncentrovana čime je dobijen benzil N-[(9R,13S)-9-metil-8-okso-3- {[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (245 mg, 64% prinos) kao čvrsta supstanca tamno žute boje. MS(ESI) m/z: 416.4 [M+H]<+>. 2G. Priprema (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0253] U bočicu od 100 mL koja sadrži belu suspenziju 6-(5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil)pirimidin-4-ola (0.580 g, 1.88 mmol), pripremljeno kao što je opisano u Primeru 4 u ACN (25.0 ml) je dodat HATU (0.785 g, 2.06 mmol) i DBU (0.370 ml, 2.44 mmol). Dobijen bistar, žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi. Nakon 5 min, benzil N-[(9R,13S)-9-metil-8-okso-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (0.780 g, 1.88 mmol) je dodat i dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcija je koncentrovana i sirov materijal je prečišćen pomoću silika gel hromatografije normalnih faza čime je dobijen (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-3-{[2-(trimetilsilil)etoksi] metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (0.65 g, 0.92 mmol, 49.0% prinos) izolovan kao ljubičasta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 706.7 [M+H]<+>.

2H. Priprema (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-one trifluoroacetata

[0254] U rastvor (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il} -9-metil-3- {[2-(trimetilsilil)etoksi] metil}-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (12 mg, 0.017 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodat TFA (0.2 mL, 2.60 mmol) i reakcija je mešana na st tokom 30 min. Reakcioan smeša je potom koncentrovana i ostatak je prečišćen preparativnom HPLC purifikacijom čime je dobijen (9R,13S-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-one trifluoroacetat (5.3 mg, 43% prinos) kao bledo roza čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.72 - 8.57 (m, 2H), 8.37 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.91 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.82 - 7.72 (m, 2H), 7.70 - 7.63 (m, 2H), 6.41 (s, 1H), 6.11 - 5.95 (m, 1H), 2.81 (td, J=6.8, 3.4 Hz, 1H), 2.44 - 2.17 (m, 2H), 2.15 - 2.01 (m, 1H), 1.80 - 1.65 (m, 1H), 1.62 - 1.46 (m, 1H), 1.11 (d, J=7.0 Hz, 3H), 1.01 (br. s., 1H). MS(ESI) m/z: 576.4 [M+H]<+>. Analitička HPLC (Metod A): RT = 6.98 min, čistoća = >95.0%.

2I. Priprema (9R,13S)-13-{ 4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-4-(piridin-3-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on; trifluoroacetata

4

[0255] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on mono trifluoroacetat (0.09 g, 0.16 mmol), (1R,2R)-N1,N2-dimetilcikloheksan-1,2-diamin (0.022 g, 0.16 mmol), 3-jodopiridin (0.032 g, 0.16 mmol), CuI (2 mg, 10.5 µmol), Cs2CO3(0.10 g, 0.31 mmol), i DMF (2 mL) su dodati u bočicu sa Teflon membranom. Smeša je pražnjena i ponovo-punjena sa Ar tri puta i nakon toga je zagrevana na 100 °C tokom 3 h. Reakcija je ohlađena i razblažena sa 2 mL rasvora 9:1 ACN-H2O. Nakon filtracije kroz špric-filter, proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC čime je dobijen (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-9-metil-4-(piridin-3-il)-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2,5,14,16-pentaen-8-on; trifluoroacetat (52 mg, 42%) kao čvrsta supstanca tamno žute boje. MS(ESI) m/z: 653.6 [M+H]<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 9.31 - 9.24 (m, 1H), 8.80 -8.73 (m, 1H), 8.71 - 8.64 (m, 2H), 8.60 (s, 2H), 8.37 (s, 1H), 8.01 - 7.96 (m, 1H), 7.95 - 7.90 (m, 1H), 7.86 - 7.80 (m, 1H), 7.79 - 7.73 (m, 2H), 7.71 - 7.64 (m, 1H), 6.44 - 6.36 (m, 1H), 6.17 - 6.04 (m, 1H), 2.97 - 2.80 (m, 1H), 2.40 - 2.22 (m, 2H), 2.15 - 2.00 (m, 1H), 1.82 - 1.69 (m, 1H), 1.69 - 1.52 (m, 1H), 1.41 - 1.26 (m, 1H), 1.11 (d, J=7.0 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metod A): RT = 6.69 min, čistoća = 97.5%.

[0256] Primer 3. Priprema terc-butil N-[(1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]karbamata

3A. Priprema 4-hloro-2-[(E)-2-[(S)-2-metilpropan-2-sulfinil]etenil]piridina

[0257] U rastvor S-(-)-t-butil-sulfinamida (0.856 g, 7.06 mmol) u DCM-u (14.13 mL) su dodati redom CuSO4(2.481 g, 15.54 mmol) i 4-hloropikolinaldehid [1.0 g, 7.06 mmol, pripremljen u skladu sa modifikovanim koje je opisao Negi (Sinthesis, 991 (1996))]. Bela suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi. Nakon 3 h, braon suspenzija je filtrirana kroz CELITE®, eluirana sa DCM, čime je dobijen bistar braon filtrat. Koncentracija je dala sirov proizvod kao braon ulje mase 1.85 g. Prečišćavanje putem hromatografije normalnih faza je dalo terc-butil N-[(1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]karbamat (1.31 g) kao bistro, žuto ulje. MS(ESI) m/z: 245.0 (M+H)<+>.

3B. Priprema (R)-N-[(1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamida

[0258] U ohlađenu (0-5 °C) smešu InCl3(13.56 g, 61.3 mmol) u THF-u (170 mL) je u kapima dodavan, tokom 30 min, alilmagnezijum bromid (1 M u Et2O) (62 mL, 61.3 mmol). Reakcija je zagrevana do sobne temperature. Nakon 1 h na sobnoj temperaturi, rastvor 4-hloro-2-[(E)-2-[(S)-2-metilpropan-2-sulfinil]etenil]piridina (10 g, 40.9 mmol) u EtOH (170 mL) je dodat u reakcionu smešu. Nakon 2-3 h, reakcija je koncentrovana pod vakuumom na 50-55 °C. Sirov materijal je podeljen između EtOAc (200ml) i vode (1 x 50 ml) i slojevi su razdvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 ml). Organski slojevi su kombinovani i isprani slanim rastvorom (1 x 100 ml), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani čime se dobija (R)-N-[(1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfamid (13.5 g, 106%) kao ulje žute boje. MS(ESI) m/z: 287.2 (M+H)<+>. Ovaj materijal je korišćen u narednom koraku bez daljeg prečišćavanja.

3C. Priprema (1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-amina

[0259] (R)-N-[(1S)-1-(4-Hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamid (75 g, 261 mmol) je rastvoren u MeOH (1500 mL).6N HCl (750 ml, 4.5 mol) je dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2-3 h i potom je koncentrovana. Ostatak je razblažen sa vodom (2 L), ispran sa EtOAc (500 ml). Vodeni sloj je baziran zasićenim rastvorom Na2CO3, potom ekstrahovan u EtOAc (3 x 1L). Kombinovani organski slojevi su isprani sa vodom (1 x 1 L) i slanim rastvorom (1 x 1 L), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani pod vakuumom na 50-55 °C čime je dobijen (1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-amin (43g, 90%) koji nije dalje prečišćavan. MS(ESI) m/z: 183.2 (M+H)<+>.

3D. Priprema terc-butil N-[(1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]karbamata

[0260] (1S)-1-(4-Hloropiridin-2-il)but-3-en-1-amin (42g, 230 mmol) je rastvoren u DCM-u (420 mL). Et3N (32.1 mL, 230 mmol) je dodat nakon čega je u kapima dodavan BOC2O (53.4 mL, 230 mmol). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 2-3 h. Reakcija je razblažena sa viškom DCM-a (1 L), isprana vodom (1 x 500 ml) i slanim rastvorom (1 x 500 ml). Organski sloj je osušen preko Na2SO4, filtriran, i koncentrovan. Sirov proizvod je potom prečišćen upotrebom silika gel hromatografije čime je dobijen terc-butil N-[(1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il]karbamat (61 g, 86%) kao čvrsta supstanca bledo žute boje. MS(ESI) m/z: 283.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 8.44 (d, 1H), 7.26-7.16 (dd, 2H), 5.69-5.61 (m, 1H), 5.59 (bs, 1H), 5.07-5.03 (m, 2H), 4.76 (bs, 1H), 2.62-2.55 (m, 2H), 1.42 (s, 9H).

Primer 4. Priprema 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil] pirimidin-4-ola [0261]

4A. Priprema 4-hloro-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilina

[0262]

[0263] U bočicu od 20 mL za mikrotalasnu je dodat 2-bromo-4-hloroanilin (3 g, 14.53 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolan (5.53 g, 21.80 mmol), KOAc (3.66 g, 37.3 mmol), Pd(dpp)Cl2-CH2Cl2proizvod (0.32 g, 0.44 mmol) i DMSO (9 mL). Dobijena suspenzija je prečišćena sa N2, pokrivena i zagrevana na 80 °C tokom 22 h. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu. Voda je dodata da rastvori soli, a potom je reakcija filtrirana. Preostala čvrsta supstanca je suspendovana u DCM-u i nerastvorna čvrsta supstanca je filtrirana. Filtrat je koncentrovan i potom prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza čime je dobijen 4-hloro-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin (3.15 g, 86% prinos) kao čvrsta supstanca bele boje. MS(ESI) m/z:172.3 (M-C6H10+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.54 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.13 (dd, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 6.52 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.72 (br. s., 2H), 1.34 (s, 12H).

4B. Priprema 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilina

[0264]

[0265] RBF koja sadrži 4-hloro-6-metoksipirimidin (3.13 g, 21.62 mmol), 4-hloro-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin (7.31 g, 21.62 mmol), Na2CO3(2.29 g, 21.62 mmol), DME (86 ml), EtOH (10.81 ml) i vodu (10.81 ml) je opremljena sa kondenzatorom. Smeša je pročišćena sa argonom tokom nekoliko min, potom je dodat Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2proizvod (1.77 g, 2.16 mmol). Reakcija je zagrevana na 90 °C tokom 5 h. Reakcija je ohlađena na sobnoj temperaturi, razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, koncentrovan i prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza čime je dobijen 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilin (2.86 g, 56.1% prinos) kao čvrsta supstanca žute boje. MS(ESI) m/z: 236.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.78 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.49 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J=1.1 Hz, 1H), 6.67 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.89 (br. s., 2H), 4.03 (s, 3H).

4C. Priprema 4-{5-hloro-2-[4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidina [0266]

[0267] U rastvor 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilina (1.5 g, 6.36 mmol) u ACN (90 ml) na 0 °C je dodat 3-metilbutil nitrit (1.28 ml, 9.55 mmol), nakon čega je u kapima dodat azidotrimetilsilan (1.26 ml, 9.55 mmol). Uočeno je stvaranje gasa. Nakon 10 min, ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakcija je zagrejana do sobne temperature (upozorenje, aril azidi su potencijalno eksplozivni.) Nakon 1 h, etiniltrimetilsilan (2.72 ml, 19.09 mmol) i Cu2O (0.09 g, 0.64 mmol) su dodati i reakcija je mešana dodatnih 1 h. Reakcija je podeljena u EtOAc i zasićeni NH4Cl, i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje hromatografijom normalnih faza je dalo 4-{5-hloro-2-[4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidin (2.13 g, 5.92 mmol, 93% prinos) kao čvrstu supstancu žute boje. MS(ESI) m/z: 360.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.71 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.82 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.61 - 7.56 (m, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 6.20 (d, J=1.1 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 0.32 - 0.28 (m, 9H).

4D. Priprema 4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-metoksipirimidina

[0268]

[0269] U rastvor 4-{5-hloro-2-[4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidina (1.56 g, 4.33 mmol) u ACN (28.9 ml) je dodat NCS (2.03 g, 15.17 mmol) i silika gel (6.51 g, 108 mmol). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 1 h. Potom, reakcija je filtrirana da se ukloni silika gel i prikupljen silika gel je ispran sa EtOAc. Filtrat je ispran sa vodom (2x), slanim rastvorom i koncentrovan. Prečišćavanje pomoću hromatografije normalnih faza je dalo 4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-metoksipirimidin (0.90 g, 64.5% prinos) kao penu žute boje. MS(ESI) m/z: 322.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.70 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.75 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.50 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.52 (d, J=0.9 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H).

4E. Priprema 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]pirimidin-4-ola

[0270]

[0271] U rastvor 4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-metoksipirimidina (900 mg, 2.79 mmol) u AcOH (6 ml) je dodata 48% HBr u vodi (3 ml, 26.5 mmol). Smeša je mešana na 85 °C tokom 1 h. Reakcija je koncentrovana do suva i potom podeljena između EtOAc i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3. Smeša je podeljena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi su kombinovani, koncentrovani, i potom je ostatak prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza čime je dobijena čvrsta supstanca bele boje. Čvrsta supstanca je suspendovana u Et2O, filtrirana i isprana sa Et2O čime je dobijen 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil] pirimidin-4-ol (610 mg, 70.9% prinos) kao čvrsta supstanca bele boje. MS(ESI) m/z: 308.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.96 (s, 1H), 7.74 - 7.67 (m, 2H), 7.62 (dd, J=8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.44 (d, J=0.9 Hz, 1H).

Primer 5. Priprema (S)-benzil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0272]

[0273] U rastvor (1S)-1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-amina (15.37 g, 60.1 mmol) u THF-u (150 mL) je dodat NaHCO3(15.16 g, 180 mmol) u H2O (150 mL) na 0 °C, zatim CBz-Cl (12.88 mL, 90 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je razblažena sa EtOAc (150 mL). Organska faza je izdvojena, isprana slanim rastvorom (50 mL), osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirov meterijal je prečišćen upotrebom silika gel hromatografije normalnih faza, eluiran sa gradijentom od 0-20% EtOAc/petroleum etara) da se dobije (S)-benzil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (16 g, 84%-tni prinos) kao tečnost bledo žute boje. MS(ESI) m/z: 317.5 (M+H)<+>.

<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.44 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.41 - 7.12 (m, 7H), 5.77 (d, J=7.0 Hz, 1H), 5.72 - 5.57 (m, 1H), 5.16 - 5.00 (m, 4H), 4.86 (q, J=6.7 Hz, 1H), 2.60 (t, J=6.2 Hz, 2H). Primer 6. Priprema 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil] pirimidin-4-ola [0274]

6A. Priprema 4-hloro-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilina

[0275]

[0276] U bočicu od 20 mL za mikrotalasnu su dodati 2-bromo-4-hloroanilin (3 g, 14.53 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolan (5.53 g, 21.80 mmol), KOAc (3.66 g, 37.3 mmol), Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2proizvod (0.32 g, 0.44 mmol) i DMSO (9 mL). Dobijena suspenzija je pročišćena sa N2, poklopljena i zagrevana na 80 °C tokom 22 h. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu. Voda je dodata da rastvori soli, a potom je reakcija filtrirana. Preostala čvrsta supstanca je suspendovana u DCM-u i nerastvorna čvrsta supstanca je filtrirana. Filtrat je koncentrovan i potom prečišćen pomoću hromatografije normalnih faza čime je dobijen 4-hloro-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan- 2-il)anilin (3.15 g, 86% prinos) kao čvrsta supstanca bele boje. MS(ESI) m/z:172.3 (M-C6H10+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.54 (d, J=2.6 Hz, 1H), 7.13 (dd, J=8.8, 2.6 Hz, 1H), 6.52 (d, J=8.6 Hz, 1H), 4.72 (br. s., 2H), 1.34 (s, 12H).

6B. Priprema 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilina

[0277]

[0278] Posuda sa okruglim dnom koja sadrži 4-hloro-6-metoksipirimidin (3.13 g, 21.62 mmol), 4-hloro-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)anilin (7.31 g, 21.62 mmol), Na2CO3(2.29 g, 21.62 mmol), DME (86 ml), EtOH (10.81 ml) i vodu (10.81 ml) je opremljena sa kondenzatorom. Smeša je pročišćena sa argonom za nekoliko minuta zatim je Pd(dppf)Cl2-CH2Cl2proizvod (1.77 g, 2.16 mmol) dodat. Reakcija je zagrevana na 90 °C tokom 5 sati. Reakcija je ohlađena do sobne temperature, razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, koncentrovan i prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilin (2.86 g, 56.1% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 236.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.78 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.49 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.15 (dd, J=8.8, 2.5 Hz, 1H), 6.99 (d, J=1.1 Hz, 1H), 6.67 (d, J=8.8 Hz, 1H), 5.89 (br. s., 2H), 4.03 (s, 3H).

6C. Pripremanje 4-{5-hloro-2-[4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidina

[0279]

1

[0280] Rastvoru 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilina (1.5 g, 6.36 mmol) u ACN (90 ml) na 0 °C je dodat 3-metilbutil nitrit (1.28 ml, 9.55 mmol), što je praćeno dodavanjem azidotrimetilsilana u vidu kapi (1.26 ml, 9.55 mmol). Primećeno je oslobađanje gasa. Posle 10 min, ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakciji je dozvoljeno da se zagreje do sobne temperature (pažnja, azidi arila su potencijalno eksplozivni.) Posle 1 sata, etiniltrimetilsilan (2.72 ml, 19.09 mmol) i Cu2O (0.09 g, 0.64 mmol) su dodati i reakcija je mešana 1 dodatni sat. Reakcija je podeljena u EtOAc i zasićeni vodeni NH4Cl, i slojevi su razdvojeni. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi daje 4- {5-hloro-2-[4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidin (2.13 g, 5.92 mmol, 93% prinos) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 360.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.71 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.82 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.61 - 7.56 (m, 1H), 7.54 - 7.48 (m, 2H), 6.20 (d, J=1.1 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 0.32 - 0.28 (m, 9H).

6D. Pripremanje 4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-metoksipirimidina [0281]

[0282] Rastvoru 4-{5-hloro-2-[4-(trimetilsilil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidina (1.56 g, 4.33 mmol) u ACN (28.9 ml) je dodat NCS (2.03 g, 15.17 mmol) i silika gel (6.51 g, 108 mmol). Reakcija je mešana na 80 °C tokom 1 sata. Zatim, reakcija je filtrirana da se ukloni silika gel i sakupljeni silika gel je ispran sa EtOAc. Filtrat je ispran sa vodom (2x), slanim rastvorom i koncentrovan. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi daje 4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-metoksipirimidin (0.90 g, 64.5% prinos) kao žutu penu. MS(ESI) m/z: 322.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.70 (d,

2

J=1.1 Hz, 1H), 7.75 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.66 - 7.55 (m, 2H), 7.50 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.52 (d, J=0.9 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H).

6E. Pripremanje 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]pirimidin-4-ola

[0283]

[0284] Rastvoru 4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-metoksipirimidina (900 mg, 2.79 mmol) u AcOH (6 ml) je dodat 48% HBr u vodi (3 ml, 26.5 mmol). Smeša je mešana na 85 °C tokom 1 sata. Reakcija je koncentrovana do suva i zatim podeljena između EtOAc i zasićenog vodenog NaHCO3. Smeša je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi su kombinovani, koncentrovani, i zatim je ostatak prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je suspendovana u Et2O, filtrirana i isprana sa Et2O da se dobije 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]pirimidin-4-ol (610 mg, 70.9% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 308.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 7.96 (s, 1H), 7.74 - 7.67 (m, 2H), 7.62 (dd, J=8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.47 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.44 (d, J=0.9 Hz, 1H).

Primer 7. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il] karbamata [0285]

7A. Pripremanje (R)-N-[(1E)-(2-bromopiridin-4-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamida [0286]

[0287] U mešanu suspenziju (R)-2-metilpropan-2-sulfinamida (13.03 g, 108 mmol) i Cs2CO3(52.5 g, 161 mmol) u DCM-u (400 ml) je dodat 2-bromopiridin-4-karbaldehid (20 g, 108 mmol) tokom 10 min. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 18.5 sati na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je razblažen sa EtOAc (50 ml) i ispran sa slanim rastvorom (3 x 20 ml). Organski sloj je osušen preko MgSO4i filtriran i zatim je filtrat koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije (27.2 g, 87%) od (R)-N-[(1E)-(2-bromopiridin-4-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamida kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 289-291.0 (M+H)<+>.

7B. Pripremanje (R)-N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfonamida

[0288]

[0289] U rastvor (R)-N-[(1E)-(2-bromopiridin-4-il)metiliden]-2-metilpropan-2-sulfinamida (0.73 g, 2.52 mmol) i indijuma (0.435 g, 3.79 mmol) u THF (6 ml) je polako dodat 3-bromoprop-1-en (0.458 g, 3.79 mmol) i dobijeni rastvor je zagrevan na 60 °C tokom 18 sati. Reakciona smeša je ohlađena, filtrirana kroz CELITE® i filtrat je koncentrovan. Ostatku je dodat EtOAc (100 ml) i 5% NaHCO3(vod) (1000 ml) i odmah je formirana emulzija. Suspenzija je filtrirana kroz papir. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen preko Na2SO4filtriran, i koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije (0.62 g, 74%) od (R)-N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfonamida kao žuta tečnost. MS(ESI) m/z: 331-333.0 (M+H)<+>.

7C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamata

[0290]

[0291] Rastvoru (R)-N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]-2-metilpropan-2-sulfinamida (1.38 g, 4.17 mmol) u MeOH (10 ml) je dodat 4 N HCl u dioksanu (5.21 mL, 20.83 mmol). Reakciona smeša je mešana 1.5 sat na sobnoj temperaturi, zatim je

4

koncentrovana. Dobijenom ostatku je dodat ACN (10 ml), TEA (5.81 ml, 41.7 mmol) i Boc2O (1.818 g, 8.33 mmol). Posle 18 sati, reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je stavljen u EtOAc, ispran sa vodom, slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Dobijeni ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije (0.80 g, 58.7%) od terc-butil N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamata kao bledo žuto ulje. MS(ESI) m/z: 324-326.1 (M+H)<+>.

Primer 8. Pripremanje (R)-2-metilbut-3-enoinske kiseline

[0292]

8A. Pripremanje (R)-4-benzil-3-((R)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-ona

[0293] Rastvoru 2-metilbut-3-enoinske kiseline (5.59 g, 55.9 mmol) i NMM (6.14 mL, 55.9 mmol) u THF (62 mL) na 0 °C je dodat pivaloil hlorid (6.87 mL, 55.9 mmol) u vidu kapi. Reakciona smeša je ohlađena do -78 °C, i mešana tokom približno 2 sata. U odvojenoj posudi: Rastvoru (R)-4-benziloksazolidin-2-ona (8.25 g, 46.6 mmol) u THF-u (126 mL) na -78 °C je dodat N-butillitijum (2.5 M u heksanu) (20.49 mL, 51.2 mmol) u vidu kapi. Posle 35 min, ova reakcija je prenešena pomoću kanile do prve reakcije. Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 2 sata, zatim je hladno kupatilo uklonjeno, i reakcija je kvenčovana sa zasićenim NH4Cl. Reakcija je razblažena sa vodom i ekstrahovana sa EtOAc (3x). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko Na2SO4, filtrirani, i koncentrovani da se dobije žuto ulje (15 g). Prečišćavanje hromatografijom na silika gelu obezbeđuje (R)-4-benzil-3-((R)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-on (6.59 g, 55%) kao bezbojno ulje. MS(ESI) m/z: 282.1 (M+Na)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 7.36 - 7.19 (m, 5H), 6.03 - 5.93 (m, 1H), 5.23 - 5.10 (m, 2H), 4.69 - 4.63 (m, 1H), 4.51 - 4.43 (m, 1H), 4.23 - 4.15 (m, 2H), 3.29 (dd, J = 13.5, 3.3 Hz, 1H), 2.79 (dd, J = 13.5, 9.6 Hz, 1H), 1.35 (d, J = 6.9 Hz, 3H) ppm. Drugi diastereomer (R)-4-benzil-3-((S)-2-metilbut-3-enoil)oksazolidin-2-on (4.6 g, 38%) takođe je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 260.1 (M+H)<+>.

8B. Pripremanje (R)-2-metilbut-3-enoinske kiseline

[0294] Čistom bezbojnom rastvoru (R)-4-benzil-3-((R)-2-metilbut-3-enoil) oksazolidin-2-ona (6.05 g, 23.33 mmol) u THF-u (146 mL) na 0 °C je dodato u vidu kapi 30% vodenog H2O2(9.53 mL, 93 mmol) što je praćeno sa 2 N LiOH (23.33 mL, 46.7 mmol). Posle 30 min, reakcija je kvenčovana sa 25 mL zasićenog Na2SO3i 25 mL zasićenog NaHCO3. Reakcija je zatim koncentrovana da se ukloni THF. Ostatak je razblažen sa vodom i ekstrahovan sa CHCl3(3x). Vodeni sloj je zakišeljen sa konc. HCl do pH približno 3 i zatim je ekstrahovan sa EtOAc (3x). EtOAc slojevi su kombinovani, isprani sa slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani da se dobije (R)-2-metilbut-3-enoinska kiselina (2.15 g, 92%) kao bezbojno ulje.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3) δ 10.84 (br. s., 1H), 5.94 (ddd, J = 17.4, 10.1, 7.4 Hz, 1H), 5.22 - 5.13 (m, 2H), 3.23 - 3.15 (m, 1H), 1.31 (d, J = 7.2 Hz, 3H) ppm.

Primer 9. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0295]

9A. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-[2-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamata

[0296] U veliku bočicu za mikrotalasnu je dodat terc-butil N-[(1S)-1-(2-bromopiridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamat (1.0 g, 3.06 mmol), pripremljen kao što je opisano u primeru 2, 1-metil-4-nitro-1H-pirazol (0.427 g, 3.36 mmol), dioksan (10 ml), di(adamantan-1-il)(butil)fosfin (0.164 g, 0.458 mmol), K2CO3(1.267 g, 9.17 mmol) i pivalinska kiselina (0.106 ml, 0.917 mmol). Reakcija je degasirana sa Ar. Potom, Pd(OAc)2(0.069 g, 0.306 mmol) je dodat i reakcija je mešana na 100 °C. Posle 4 sata, zagrevanje je zaustavljeno i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi tokom 72 sata. Reakcija je kvenčovana sa vodom (20 ml) i ekstrahovana sa EtOAc (3 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (20 ml), osušeni (MgSO4), i filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heptana i EtOAc kao eluenata da se dobije terc-butil N-[(1S)-1-[2-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamat (0.62 g, 54%) kao bela pena. MS(ESI) m/z: 374.08 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.73 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.28 - 8.15 (m, 1H), 7.66 - 7.54 (m, 1H), 7.43 - 7.34 (m, 1H), 5.76 5.63 (m, 1H), 5.26 - 5.16 (m, 2H), 4.99 (br. s., 1H), 4.83 (br. s., 1H), 3.97 - 3.85 (m, 3H), 2.66 - 2.46 (m, 2H), 1.45 (br. s., 9H).

9B. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-[2-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamata

[0297] U ohlađeni (0 °C) aceton (40 ml)/voda (12 ml) rastvor terc-butil N-[(1S)-1-[2-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamata (0.62 g, 1.660 mmol) je dodat NH4Cl (0.444 g, 8.30 mmol) i Zn (1.086 g, 16.60 mmol). Ledeno kupatilo je uklonjeno i reakcija je mešana 18 sati. Reakcija je filtrirana kroz papir i podeljena sa vodom (20 ml) i EtOAc (75 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (25 ml) i osušeni (MgSO4). Smeša je filtrirana, koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem DCM i 0-10% MeOH kao eluenata da se dobije terc-butil N-[(1S)-1-[2-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamat (0.46 g, 60%). MS(ESI) m/z: 344.5 (M+H)<+>.

9C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-(2-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamata

[0298] Terc-butil N-[(1S)-1-[2-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamatu (0.6 g, 1.747 mmol) je dodata (R)-2-metilbut-3-enoinska kiselina (0.189 g, 1.893 mmol), pripremljena kao što je opisano u Primeru 8, u EtOAc (5.8 ml), koji je ohlađen do 0 °C, je dodat piridin (0. 0.424 ml, 5.24 mmol) i 50% EtOAc rastvor T3P® (2.1 ml, 3.49 mmol). Posle 24 sata, reakcija je podeljena između zasićenog vodenog NaHCO3(10 ml) i EtOAc (20 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (10 ml) i osušeni (MgSO4). Smeša je filtrirana i koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem heksana i EtOAc kao eluenata da se dobije terc-butil N-[(1S)-1-(2-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamat (0.35 g, 47%). MS(ESI) m/z: 426.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 10.23 (br. s., 1H), 8.70 - 8.56 (m, 1H), 8.35 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.56 - 7.44 (m, 1H), 7.25 - 7.14 (m, 1H), 6.03 (ddd, J=17.2, 10.2, 8.0 Hz, 1H), 5.39 - 5.17 (m, 3H), 5.03 - 4.63 (m, 2H), 4.14 - 4.08 (m, 3H), 3.22 (quin, J=7.2 Hz, 1H), 2.66 - 2.49 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 1H), 1.50 - 1.40 (m, 9H), 1.42 - 1.37 (m, 3H), 1.06 - 0.93 (m, 1H).

9D. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata

[0299] U degasirani DCE (20 ml) rastvor terc-butil N-[(1S)-1-(2-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamata (0.160 g, 0.376 mmol) je dodat Grubbs II (0.096 g, 0.113 mmol) i reakciona smeša je zagrejana do 120 °C tokom 30 min u mikrotalasnoj. Reakciona smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi korišćenjem DCM i MeOH kao eluenata da se dobije željeni proizvod (29 mg, 19%) kao zeleni film. MS(ESI) m/z: 398.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.71 (d, J=4.7 Hz, 1H), 7.58 (s, 1H), 7.23 (d, J=13.8 Hz, 1H), 7.03 - 6.94 (m, 1H), 6.61 (s, 1H), 5.82 - 5.71 (m, 1H), 5.19 - 5.09 (m, 2H), 4.75 (br. s., 1H), 4.15 - 4.09 (m, 3H), 3.19 - 3.10 (m, 1H), 2.67 (br. s., 1H), 2.28 - 2.15 (m, 2H), 1.54 - 1.39 (m, 9H), 1.34 -1.28 (m, 3H).

9E. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0300]

[0301] EtOH (3 mL) rastvoru terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (29 mg, 0.073 mmol) je dodat PtO2(4 mg). Reakciona smeša je prečišćena sa vodonikom, zatim je hidrogenizovana na 55 psi. Posle 3 h, reakciona smeša je filtrirana kroz 0.45 µM filter i koncentrovana da se dobije tamna čvrsta supstanca (MS(ESI) m/z: 400.3 (M+H)<+>). Ostatak tamne čvrste supstance je rastvoren u 4N HCl u dioksanu (1 ml) i MeOH (1 ml). Posle 3 h, smeša je koncentrovana i dobijena so HCl je rastvorena u DCM/MeOH i prošla je kroz osnovni kertridž da se dobije (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16 - pentaen-8-on kao tamna čvrsta supstanca (21 mg, 96%), koja je korišćena u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 300.2 (M+H)<+>.

Primer 10. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0302]

[0303] Rastvoru 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]pirimidin-4-ola (0.019 g, 0.060 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 6, u CH3CN (0.4 ml) je dodat HATU (0.030 g, 0.078 mmol) i DBU (0.014 mL, 0.090 mmol). Posle 30 min, (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, pripremljen kao što je opisano u Primeru 9, je dodat sa DMF (0.2 ml). Posle 18 h, reakcija je razblažena sa DMF, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen reverzno faznom hromatografijom korišćenjem PHENOMENEX® Luna 5U 30x100mm (10:90 ACN/H2O do 90:10 ACN/H2O, 0.1% TFA) (20% B start, 14 min gradijent). Željene frakcije su koncentrovane i osušene zamrzavanjem da se dobije (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (11.9 mg, 27%) kao prljavo bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 590.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.78 - 8.70 (m, 1H), 8.41 - 8.33 (m, 2H), 7.92 - 7.85 (m, 2H), 7.80 - 7.73 (m, 1H), 7.71 - 7.65 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.21 (dd, J=5.3, 1.8 Hz, 1H), 6.50 - 6.42 (m, 1H), 5.77 (dd, J=12.5, 3.1 Hz, 1H), 4.23 - 4.16 (m, 3H), 2.69 - 2.58 (m, 1H), 2.41 (dd, J=7.5, 4.2 Hz, 1H), 2.22 - 2.09 (m, 1H), 2.07 - 1.96 (m, 1H), 1.74 - 1.60 (m, 1H), 1.38 (d, J=7.7 Hz, 2H), 1.15 (d, J=7.0 Hz, 3H). Analitička hromatografija (Metoda A) sobna temperatura = 7.38 min, čistoća = 96%. Primer 11. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata

[0304]

11A. Pripremanje 1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazola

[0305]

[0306] 4-Nitro-1H-pirazol (10.3g, 91mmol) je rastvoren u THF-u (200 ml) i ohlađen do 0 °C. Ovom rastvoru je dodat u delovima NaH (60%, 4.37g, 109 mmol) i mešan je dodatnih 0.5 h hladan. Ovom hladnom mlečnom rastvoru je zatim dodat CD3I (6.23 ml, 100 mmol) u vidu kapi i reakciona smeša je mešana hladna tokom 3 h, zatim je zagrejana do sobne temperature i mešana na ovoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je kvenčovana sa hladnom vodom (200 ml), ekstrahovana sa EtOAc (2 x 200 ml) i osušena sa MgSO4. Rastvor je filtriran i koncentrovan dajući žutu čvrstu supstancu. Rekristalizacija materijala iz heksan/etil acetata dala je željeno jedinjenje kao žutu čvrstu supstancu (11.5g, 97%).<1>H NMR (CDCl3)δ 8.85 (s, 1H), 8.82 (s, 1H).

11B. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{2-[1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0307]

[0308] terc-Butil N-[(1S)-1-{2-[1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il}but-3-en-1-il]karbamat (0.80 g, 70%), bela pena, pripremljena je na isti način kao terc-butil N-[(1S)-1-[2-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il) piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamat, kao što je opisano u primeru 9A, zamenom 1-metil-4-nitro-1H-pirazola sa 1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazolom. MS(ESI) m/z: 377.5 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.73 (d, J=5.2 Hz, 1H), 8.28 8.15 (m, 1H), 7.59 (s, 1H), 7.43 - 7.34 (m, 1H), 5.73 - 5.63 (m, 1H), 5.24 - 5.18 (m, 2H), 4.99 (br. s., 1H), 4.83 (br. s., 1H), 2.69 - 2.42 (m, 2H), 1.45 (br. s., 9H).

11C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{2-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0309]

[0310] terc-Butil N-[(1S)-1-{2-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il}but-3-en-1-il]karbamat (0.56 g, 76%), tamna čvrsta supstanca, je pripremljena na isti način kao tercbutil N-[(1S)-1-[2-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamat, kao što je opisano u primeru 9B, zamenom terc-butil N-[(1S)-1-[2-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il] but-3-en-1-il]karbamata, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 9A sa terc-butil N-[(1S)-1-{2-[1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il] piridin-4-il}but-3-en-1-il]karbamat. MS(ESI) m/z: 347.3 (M+H)<+>.

11D. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{2-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il[but-3-en-1-il]karbamata

[0311]

[0312] terc-Butil N-[(1S)-1-{2-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il}but-3-en-1-il]karbamat (0.49 g, 72%), žuta čvrsta supstanca, pripremljena je na isti način kao terc-butil N-[(1S)-1-(2-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamat, kao što je opisano u Primeru 9C, zamenom terc-butil N-[(1S)-1-[2-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-4-il]but-3-en-1-il]karbamata, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 9B, sa terc-butil N-[(1S)-1-{2-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il[but-3-en-1-il]karbamatom. MS(ESI) m/z: 429.08 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 10.13 (br. s., 1H), 8.56 - 8.50 (m, 1H), 8.25 (s, 1H),

1

7.42 - 7.35 (m, 1H), 7.15 - 7.08 (m, 1H), 5.92 (ddd, J=17.1, 10.1, 8.0 Hz, 1H), 5.68 - 5.56 (m, 1H), 5.26 - 5.19 (m, 3H), 5.16 - 5.11 (m, 2H), 4.88 (br. s., 1H), 4.70 (br. s., 1H), 3.12 (quin, J=7.2 Hz, 1H), 2.57 - 2.39 (m, 1H), 1.36 (br. s., 9H), 1.30 (d, J=6.9 Hz, 3H).

11E. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0313]

[0314] terc-Butil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (64 mg, 33%), zelena čvrsta supstanca, pripremljena je na isti način kao terc-butil N-[(9R,10E,13S )-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat kao što je opisano u Primeru 9D, zamenom terc-butil N-[(1S)-1-(2-{1-metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il}piridin-4-il)but-3-en-1-il]karbamat, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 9C, sa terc-butil N[(1S)-1-{2-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-4-il}but-3-en-1-il]karbamatom.

MS(ESI) m/z: 401.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (500MHz, CDCl3) δ 8.67 (br. s., 1H), 7.55 (s, 1H), 7.20 (br. s., 1H), 6.97 (s, 1H), 6.75 (br. s., 1H), 5.74 (br. s., 1H), 5.14 (br. s., 2H), 4.76 (br. s., 1H), 3.13 (br. s., 1H), 2.66 (br. s., 1H), 2.20 (s, 1H), 1.47 (br. s., 9H), 1.28 (br. s., 3H).

11F. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0315]

[0316] (9R,13S)-13-Amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (48 mgs), braon čvrsta supstanca, je

2

pripremljena na isti način kao (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, kao što je opisano u Primeru 9E, zamenom terc-butil N-[(9R,10E,13,S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 9D, sa terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamatom. MS(ESI) m/z: 303.3 (M+H)<+>.

11G. Pripremanje (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat

[0317]

[0318] (9R,13S)-13-{4-[5-Hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il}-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat, (10.8 mg, 18%), bela čvrsta supstanca, pripremljena je na isti način kao (9R,13S)-13-{4-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il} -3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, kao što je opisano u Primeru 10, zamenom (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 9E sa (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-onom, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 11F. MS(ESI) m/z: 593.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.78 - 8.69 (m, 1H), 8.42 - 8.33 (m, 2H), 7.92 - 7.86 (m, 2H), 7.80 - 7.74 (m, 1H), 7.69 - 7.64 (m, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.21 (dd, J=5.3, 1.5 Hz, 1H), 6.51 - 6.43 (m, 1H), 5.77 (dd, J=12.5, 3.3 Hz, 1H), 2.62 (ddd, J=9.5, 6.7, 3.4 Hz, 1H), 2.48 - 2.38 (m, 1H), 2.22 - 2.11 (m, 1H), 2.06 - 1.97 (m, 1H), 1.69 - 1.59 (m, 1H), 1.42 - 1.33 (m, 2H), 1.15 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A) sobna temperatura = 7.26 min, čistoća = 96%.

Primer 12. Pripremanje 6-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}pirimidin-4-ola

[0319]

12A. Pripremanje 4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidina

[0320]

[0321] Rastvoru 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilina (1.0 g, 4.24 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 6B, u ACN (60.6 ml) na 0 °C je dodat 3-metilbutil nitrit (0.86 ml, 6.36 mmol) što je praćeno dodavanjem azidotrimetilsilana u vidu kapi (0.84 ml, 6.36 mmol). Oslobađanje gasa je primećeno. Posle 10 min, ledeno kupatilo je uklonjeno, i reakciji je dozvoljeno da se zagreje do sobne temperature (pažnja, azidi arila su potencijalno eksplozivni.) Posle 2 h, Cu2O (61 mg, 0.42 mmol) je dodat što je praćeno laganim ključanjem 3,3,3-trifluoroprop-1-in gasa tokom perioda od 5 min. Posle dodatnih 10 min, reakcija je podeljena između DCM i zasićenog vodenog NH4Cl i zatim su slojevi odvojeni. Organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi daje 4-{5-hloro-2-[4-(trifluoromcthyl)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidin (1.46 g, 97% prinos) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 356.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.62 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.00 (d, J=0.7 Hz, 1H), 7.75 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.66 - 7.60 (m, 1H), 7.52 (d, J=8.6 Hz, 1H), 6.60 (d, J=1.1 Hz, 1H), 3.98 (s, 3H).<19>F NMR (376MHz, CDCl3) δ -61.10 (s).

4

12B. Pripremanje 6-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil} pirimidin-4-ola [0322]

[0323] Rastvoru 4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-metoksipirimidina (1.46 g, 4.10 mmol) u AcOH (10ml) je dodato 48% HBr u vodi (5 ml, 44.2 mmol). Smeša je mešana na 85 °C tokom 1 h. Reakcija je koncentrovana do suva i zatim podeljena između EtOAc i zasićenog vodenog NaHCO3rastvora. Slojevi su razdvojeni i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2x). Organski slojevi su kombinovani i isprani sa zasićenim vodenim NaHCO3, slanim rastvorom, osušeni preko MgSO4, filtrirani i rastvarač je smanjen pod vakuumom dok nije počelo da se formira malo čvrste supstance. Dobijena suspenzija je triturisana sa Et2O. Čvrsta supstanca je filtrirana i isprana sa Et2O da se dobije 6-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}pirimidin-4-ol (1 g, 71.3% prinos) kao bledo žuta čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 342.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.83 (d, J=0.7 Hz, 1H), 7.99 (d, J=0.9 Hz, 1H), 7.87 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.79 - 7.72 (m, 1H), 7.70 - 7.62 (m, 1H), 6.45 (d, J=0.9 Hz, 1H).<19>F NMR (376MHz, CD3OD) δ -62.61 (s).

Primer 13. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0324]

13A. Pripremanje 1-metil-4-nitro-1H-pirazol

[0325] Rastvoru 4-nitro-1H-pirazola (2.5 g, 22.11 mmol) u THF-u (50 mL) je dodat NaH (0.973 g, 24.32 mmol) i smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 5 min. Ovoj suspenziji je zatim dodat CH3I (1.382 mL, 22.11 mmol) i mešana je na sobnoj temperaturi preko noći. Reakciona smeša je zatim razblažena sa EtOAc (2 x 25 mL) i isprana sa slanim rastvorom (25 mL). Organski sloj je koncentrovan, što je praćeno prečišćavanjem korišćenjem hromatogarfije na normalnoj fazi da se dobije 1-metil-4-nitro-1H-pirazol kao bela čvrsta supstanca (1.9 g, 80% prinos).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 8.12 (s, 1H), 8.06 (s, 1H), 3.97 (s, 3H).

13B. Pripremanje (S)-terc-butil (1-(4-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0326] U bočicu pod pritiskom koja je isprana sa N2je dodat (S)-terc-butil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (3.0 g, 10.61 mmol), 1-metil-4-nitro-1H-pirazol (1.348 g, 10.61 mmol), di(adamant-1-il)(butil)fosfin (1.141 g, 3.18 mmol), PvOH (0.369 ml, 3.18 mmol) i K2CO3(4.40 g, 31.8 mmol). U smešu iznad je zatim dodat DMF (21 mL) i bočica je pročišćena sa N2za 5 min. Ovoj smeši je zatim dodat Pd(OAc)2(0.476 g, 2.122 mmol). Reakciona smeša je zatim kratko pročišćena sa N2. Bočica je zatvorena i zagrevana na uljanom kupatilu na 120 °C tokom 4 h. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i podeljena između 10% vodenog LiCl (15 mL) i EtOAc (30 mL). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 20 mL) i kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (15 mL), osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je zatim prečiščen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije (S)-terc-butil (1-(4-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (1.2 g, 29% prinos) kao braon ulje. MS(ESI) m/z: 374.4 (M+H)<+>.

13C. Pripremanje (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0327] Rastvor (S)-terc-butil (1-(4-(1-metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (1.2 g, 3.21 mmol) u MeOH (10 mL) i AcOH (1 mL) zagrevan je u uljanom kupatilu do 40 °C. U čist rastvor iznad polako je dodat Zn (0.420 g, 6.43 mmol, u 3 dela (50:25:25%) i omogućeno je da se meša na istoj temperaturi tokom 5 min. Reakciona smeša je praćena pomoću LCMS i jednom kada je reakcija završena, ohlađenoj reakcionoj smeši je zatim dodat 1 g K2CO3(1 g za 1 mL AcOH) i 1 mL vode. Reakciona smeša je zatim mešana tokom 5 min. Reakciona smeša je zatim filtrirana preko CELITE® podloge i koncentrovana in vacuo da se dobije sirovi proizvod. Sirovi proizvod je zatim podeljen između EtOAc (30 mL) i zasićenog vodenog NaHCO3(15 mL) rastvora. Organski slojevi su odvojeni, osušeni preko MgSO4, filtrirani i koncentrovani. Sirovi proizvod je zatim prečišćen korišćenjem hromatografije na normalnoj fazi da se dobije (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-metil-1Hpirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (0.88 g, 76% prinos) kao bledo braon ulje. MS(ESI) m/z: 344.4 (M+H)<+>.

13D. Pripremanje terc-butil ((S)-1-(4-(1-metil-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata

[0328] U posudu od 250 mL sa okruglim dnom sa tri grla koja je isprana sa N2je dodat rastvor (S)-terc-butil (1-(4-(4-amino-1-metil-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (620 mg, 1.805 mmol) i EtOAc (15 mL). Rastvor je ohlađen do -10 °C i (R)-2-metilbut-3-enoinska kiselina, kao što je pripremljena u Primeru 2, (271 mg, 2.71 mmol), piridin (0.437 mL, 5.42 mmol) i T3P® (2.149 mL, 3.61 mmol) su dodati. Kupatilo za hlađenje je uklonjeno i rastvoru je dozvoljeno da se ohladi do sobne temperature i zatim je mešan tokom perioda od 20 h. Voda (15 mL) i EtOAc (15 mL) su dodati i smeša je mešana tokom 30 min. Organska faza je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (15 mL). Kombinovani organski ekstrakti su isprani sa slanim rastvorom (15 mL), osušeni preko Na2SO4, filtrirani i koncentrovani in vacuo. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom heksana/EtOAc daje terc-butil ((S)-1-(4-(1-metil-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (0.26 g, 34% prinos). MS(ESI) m/z: 426.5 [M+H]<+>.

13E. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0329] U posudu od 250 mL sa okruglim dnom sa tri grla koja je isprana sa N2, je dodat rastvor terc-butil ((S)-1-(4-(1-metil-4-((R)-2-metilbut-3-enamido)-1H-pirazol-5-il)piridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamata (266 mg, 0.625 mmol) u DCE (18 mL). Rastvor je ispran argonom koji se u vidu mehurova uvodi tokom 15 min. Grubbs II (213 mg, 0.250 mmol) je dodat u jednom delu. Reakciona smeša je zagrevana do 120 °C u mikrotalasanoj tokom 30 min. Nakon hlađenja do sobne temperature, rastvarač je uklonjen i ostatak je pročišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom DCM/MeOH da se dobije tercbutil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamat (60 mg, 23% prinos) kao tamna čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 398.4 [M+H]<+>.

13F. Pripremanje terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata

[0330] Pd/C (0.016 g, 0.015 mmol) je dodat u Parr posudu za hidrogenizaciju od 100 mL koja sadrži rastvor terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (60 mg, 0.151 mmol) u EtOH (6 mL). Posuda je prečišćena sa N2i pod pritiskom H2do 55 psi ostavljena da se meša tokom 5 h. Reakcija je filtrirana kroz CELITE® podlogu i koncentrovana da se dobije terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat (48 mg, 76% prinos) kao tamna čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 400.5 [M+H]<+>.

13G. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0331] Rastvoru terc-butil N-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (48 mg, 0.120 mmol) u DCM (2.5 mL) je dodata TFA (0.6 mL, 7.79 mmol) i reakcija je onda mešana na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h. Reakciona smeša je zatim koncentrovana da se dobije (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on bis trifluoroacetat (63 mg, 94% prinos) kao braon čvrsta supstanca koja je zatim rastvorena u MeOH (1 mL) da se dobije čist, braon rastvor. Rastvor je dodat u unapred ispran AGILENT® StratoSpheres SPE PL-HCO3MP Resin kartridž. Gravitacijsko filtriranje, eluiranje sa MeOH, daju čist, blago žuti filtrat. Koncentracija je obezbedila (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on (25 mg, 93%) kao bledo žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 300.4 [M+H]<+>.

Primer 14. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0332]

14A. Pripremanje1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazola

[0333] DIAD (5.59 mL, 28.7 mmol) je dodat rastvoru 4-nitro-1H-pirazola (2.5 g, 22.11 mmol), CD3OD (0.898 mL, 22.11 mmol), i Ph3P (vezan za smolu) (8.84 g, 26.5 mmol) u THF (40 ml) i mešan je preko noći. Reakcija je kvenčovana sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc, isprana sa slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Sirovi proizvod je pročišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom DCM/MeOH da se dobije željeni proizvod (1.92 g, 14.76 mmol, 66.7% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 131.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.13 (d, J=0.4 Hz, 1H), 8.05 (s, 1H).

14B. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)mctil-4-nitro-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0334] U veliku bočicu za mikrotalasnu su dodati (S)-terc-butil (1-(4-hloropiridin-2-il)but-3-en-1-il)karbamat (2.61 g, 9.22 mmol), 1-(<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol (1.0 g, 7.69 mmol), di(adamantanil)(butil)fosfin (0.413 g, 1.15 mmol), K2CO3(3.19 g, 23.06 mmol) i pivalinska kiselina(0.268 ml, 2.306 mmol) i DMF (15.37 ml). Reakcija je pročišćena sa argonom tokom 10 min, Pd(OAc)2(0.173 g, 0.769 mmol) je dodat, bočica je zatvorena, i mešana na 115 °C preko noći. Reakcija je zatim podeljena između EtOAc i H2O. Vodeni sloj je ekstrahovan sa dodatnim EtOAc (2x). Kombinovani organski sloj je ispran sa slanim rastvorom, osušen preko MgSO4, filtriran i koncentrovan. Ostatak je pročišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom heksana/EtOAc da se dobije željeni proizvod (1.49 g, 3.96 mmol, 51.5% prinos) kao ljubičasta pena. MS(ESI) m/z: 377.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.77 (d, J=4.8 Hz, 1H), 8.21 (s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.23 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 5.78 - 5.65 (m, 1H), 5.55 (d, J=6.8 Hz, 1H), 5.14 - 5.03 (m, 2H), 4.89 (d, J=6.8 Hz, 1H), 2.66 (t, J=6.6 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).

14C. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{4-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0335] terc-Butil N-[(1S)-1-{4-[1-<2>H3)metil-4-nitro-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (1.45 g, 3.85 mmol) je rastvoren u acetonu (15ml)/ vodi (3 ml), ohlađen do 0 °C, i dodat je NH4Cl (1.030 g, 19.26 mmol) i cink (2.52 g, 38.5 mmol) što je praćeno uklanjanjem ledenog kupatila. Nakon 1h, reakcija je filtrirana i filtrat je podeljen sa vodom (30 ml) i EtOAc(50 ml). Vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc (2 x 50 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (20 ml), osušeni (MgSO4), filtrirani, i koncentrovani. Ostatak je pročišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom DCM/MeOH da se dobije željeni proizvod (0.62 g, 46.5%). MS(ESI) m/z: 347.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.67 (dd, J=5.1, 0.7 Hz, 1H), 7.26 - 7.23 (m, 2H), 7.21 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 5.79 - 5.66 (m, 1H), 5.58 (d, J=7.3 Hz, 1H), 5.11 - 5.05 (m, 2H), 4.86 (q, J=6.6 Hz, 1H), 2.64 (t, J=6.7 Hz, 2H), 1.44 (s, 9H).

14D. Pripremanje terc-butil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamata

[0336] (R)-2-Metilbut-3-enoinska kiselina (233 mg, 2.327 mmol), terc-butil N-[(1S)-1-{4-[4-amino-1-(<2>H3)metil-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (620 mg, 1.79 mmol), piridin (0.433 ml, 5.37 mmol) u EtOAc (17.900 ml) je ohlađen do -10 °C pod Ar što je praćeno dodavanem u vidu kapi T3P® (50%mase u EtOAc) (2.131 ml, 3.58 mmol) je dodato u vidu kapi i zatim je postepeno zagrevano do sobne temperature. Nakon 3.5 h, reakciona smeša je razblažena sa EtOAc, isprana sa 1.5 M K2HPO4što je praćeno slanim rastvorom, osušena preko Na2SO4, filtrirana, i koncentrovana. Sirovi proizvod je zatim prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom heksana/EtOAc do željenog proizvoda (529 mg, 1.234 mmol, 69.0% prinos) kao žuta pena. MS(ESI) m/z: 429.2 (M+H)<+>.

14E. Pripremanje terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata [0337] 5 velikih bočica za mikrotalasnu su napunjene jednakim količinama sa sledećim: tercbutil N-[(1S)-1-{4-[1-(<2>H3)metil-4-[(2R)-2-metilbut-3-enamido]-1H-pirazol-5-il]piridin-2-il}but-3-en-1-il]karbamat (0.51 g, 1.190 mmol) u degasiranom DCE (90 ml) je ozračen sa 120°C tokom 30 minuta u prisustvu Grubbs II (0.404 g, 0.476 mmol). Reakcije su kombinovane, koncentrovane, i ostatak je pročišćen kolonskom hromatografijom na normalnoj fazi eluiranjem sa gradijentom heksana/EtOAc da se dobije željeni proizvod (0.124 g, 26.0%) kao braon čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 401.2 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ 8.66 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.19 (d, J=4.8 Hz, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.37 (d, J=7.5 Hz, 1H), 5.68 (t, J=11.2 Hz, 1H), 4.82 - 4.63 (m, 2H), 3.12 - 2.93 (m, 2H), 1.93 (q, J=11.1 Hz, 1H), 1.48 (s, 9H), 1.15 (d, J=5.9 Hz, 3H).

14F. Pripremanje terc-butil N-[(9R,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamat

[0338] PtO2(6.80 mg, 0.030 mmol) je dodat mešanom rastvoru terc-butil N-[(9R,10E,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-

1

1(18),2(6),4,10,14,16-heksaen-13-il]karbamata (0.120 g, 0.300 mmol) u EtOH (10 ml). Suspenzija je podvrgnuta atmosferi vodonika (55 psi) tokom 1 h. Katalizator je filtriran kroz čep sa CELITE® punjenjem i filtrat je koncentrovan. Proizvod (0.104 g, 86%) je prenet do sledeće reakcije bez daljeg prečišćavanja. MS(ESI) m/z: 403.2 (M+H)<+>.

14G. Pripremanje (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona

[0339] Rastvor 4.0 M HCl u dioksanu (1.621 ml) je dodat mešanom rastvoru terc-butil N-[(9R,13S)-3-(<2>H3)metil-9-metil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]karbamata (0.100 g, 0.248 mmol) u MeOH (3 ml) i mešan je preko noći. Reakciona smeša je koncentrovana do suva i smeštena pod visokim vakuumom. So vodonik hlorida je oslobođena od baze rastvaranjem u MeOH, prošla je kroz smolom vezan NaHCO3kartridž (StratoSpheres SPE; 500 mg, 0.90 mmol punjenje) i filtrat je koncentrovan. Materijal je prenet dalje do sledeće reakcije. MS(ESI) m/z: 303.4 (M+H)<+>. Primer 15. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil} -6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0340]

[0341] U scintilacionu bočicu koja sadrži 6-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}pirimidin-4-ol (22.8 mg, 0.067 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 12, HATU (33.0 mg, 0.087 mmol) u anhidrovanom ACN (0.5 mL) je dodat DBU (15 mL, 0.100 mmol). Posle 30 min, rastvor (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (20 mg, 0.067 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 13, u 0.5ml CH3CN i DMF (0.1 ml) je dodat. Dobijeni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h zatim je prečišćen

1 1

hromatografijom na reverznoj fazi da se dobije, nakon koncentracije i liofilizacije, (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (26.98 mg, 53.1% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 624.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) d 8.81 (d, J=0.7 Hz, 1H), 8.75 (s, 1H), 8.70 (d, J=5.3 Hz, 1H), 7.89 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.77 - 7.72 (m, 1H), 7.72 - 7.66 (m, 2H), 7.53 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.43 (s, 1H), 6.02 - 5.93 (m, 1H), 4.04 (s, 3H), 2.70 (td, J=6.7, 3.3 Hz, 1H), 2.27 (tt, J=12.7, 4.4 Hz, 1H), 2.12 - 1.94 (m, 2H), 1.66 - 1.52 (m, 1H), 1.45 (ddd, J=15.0, 9.8, 5.0 Hz, 1H), 1.00 (d, J=7.0 Hz, 3H), 0.69 (br. s., 1H).<19>F NMR (376MHz, CD3OD) d -62.54 (s), -77.44 (s). Analitička HPLC (Metoda A): sobna temperatura = 11.02 min, čistoća = 96.7%.

Primer 16. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0342]

[0343] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetat (11 mg, 30% prinos) pripremljen je na sličan način kao procedura opisana u Primeru 15, zamenom (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona sa (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-onom (15 mg, 0.050 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 14. MS(ESI) m/z: 627.3 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.81 (s, 1H), 8.77 - 8.66 (m, 2H), 7.89 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.79 - 7.64 (m, 3H), 7.59 - 7.51 (m, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.44 (s, 1H), 5.97 (dd, J=12.4, 3.9 Hz, 1H), 2.76 - 2.62 (m, J=6.5, 3.4, 3.4 Hz, 1H), 2.34 - 2.21 (m, 1H), 2.12 - 1.94 (m, 2H), 1.68 - 1.53 (m, 1H), 1.51 - 1.39 (m, 1H), 1.00

1 2

(d, J=6.8 Hz, 3H), 0.78 - 0.63 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): sobna temperatura = 8.64 min, čistoća = 99.4%.

Primer 17. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0344]

[0345] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil} -6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, trifluoroacetat (20 mg, 50% prinos) je pripremljen na sličan način kao što procedura opisuje u primeru 15, zamenom (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, sa (9R,13S)-13-amino-3-(difluorometil)-9-metil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-onom (17 mg, 0.051 mmol). MS(ESI) m/z: 660.3 (M+H).<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.81 (d, J=3.7 Hz, 2H), 8.71 (d, J=5.1 Hz, 1H), 7.89 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.81 - 7.62 (m, 5H), 7.56 - 7.46 (m, 1H), 6.44 (s, 1H), 6.00 (dd, J=12.7, 4.5 Hz, 1H), 2.70 (td, J=6.5, 3.0 Hz, 1H), 2.32 - 2.20 (m, 1H), 2.10 - 1.91 (m, 2H), 1.65 - 1.51 (m, 1H), 1.51 - 1.39 (m, 1H), 0.99 (d, J=6.8 Hz, 3H), 0.70 - 0.51 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A): sobna temperatura = 9.74 min, čistoća = 97.8%. Primer 18. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0346]

1

[0347] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil} -6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, TFA so (9 mg, 20%), prljavo bela čvrsta supstanca, pripremljena je na isti način kao Primer 10, zamenom 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]pirimidin-4-ol, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 6, sa 6-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-pirazol-1-il]fenil}pirimidin-4-ol, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 12B. MS(ESI) m/z: 624.3(M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.84 (d, J=0.7 Hz, 1H), 8.71 (d, J=5.1 Hz, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.91 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.80 -7.75 (m, 1H), 7.72 (s, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.17 (dd, J=5.3, 1.8 Hz, 1H), 6.52 (d, J=0.7 Hz, 1H), 5.77 (dd, J=12.4, 3.2 Hz, 1H), 4.18 (s, 3H), 2.64 - 2.56 (m, 1H), 2.38 δ (br. s., 1H), 2.11 (dd, J=13.1, 3.6 Hz, 1H), 2.02 - 1.95 (m, 1H), 1.64 (d, J=6.8 Hz, 1H), 1.39 (dd, J=16.9, 8.1 Hz, 2H), 1.14 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A) sobna temperatura = 8.05 min, čistoća = 95%.

Primer 19. Pripremanje (9R,13S)-13-(4-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil}-6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata [0348]

[0349] (9R,13S)-13-(4-{5-Hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-1,2,3-triazol-1-il]fenil} -6-okso-1,6-dihidropirimidin-1-il)-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo [12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on trifluoroacetata (11.7 mg, 23%), prljavo bela čvrsta

1 4

supstanca, pripremljena je na isti način kao Primer 10, zamenom 6-[5-hloro-2-(4-hloro-1H-1,2,3-triazol-1-il)fenil]pirimidin-4-ol, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 6, sa 6-{5-hloro-2-[4-(trifluorometil)-1H-pirazol-1-il]fenil}pirimidin-4-ol, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 12B. Takođe, (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-on, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 9 je zamenjen sa (9R,13S)-13-amino-3-(<2>H3)metil-9-metil-3,4,7,17-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-onom, koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 6F. MS(ESI) m/z: 627.3(M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CD3OD) δ 8.86 - 8.82 (m, 1H), 8.75 - 8.69 (m, 1H), 8.28 (s, 1H), 7.94 - 7.87 (m, 1H), 7.86 (s, 1H), 7.80 - 7.76 (m, 1H), 7.74 - 7.69 (m, 1H), 7.51 (s, 1H), 7.20 - 7.09 (m, 1H), 6.56 - 6.51 (m, 1H), 5.77 (dd, J=12.5, 3.3 Hz, 1H), 2.67 - 2.58 (m, 1H), 2.47 - 2.37 (m, 2H), 2.19 - 2.06 (m, 1H), 2.03 - 1.96 (m, 1H), 1.73 - 1.60 (m, 1H), 1.48 - 1.31 (m, 2H), 1.14 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitčka HPLC (Metoda A) sobna temmperatura = 8.02 min, čistoća = 96%.

Primer 20. Pripremanje trifluoroacetata 1-(4-hloro-2-(1-((5R,9S)-21,5-dimetil-4-okso-21H-3-aza-1(2,4)-piridina-2(5,4)-pirazolaciklononafan-9-il)-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il)fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilne kiseline

[0350]

20A. Pripremanje N-(4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida [0351]

[0352] TEA (0.371 ml, 2.66 mmol) je dodat rastvoru 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilina (0.523 g, 2.219 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 6B, i

1

trifluorosirćetni anhidrid (0.376 ml, 2.66 mmol) u DCM-u (17.47 ml). Posle 1 h, reakciona smeša je koncentrovana i prečišćena hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije N-(4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)fenil)-2,2,2-trifluoroacetamid (0.684 g, 93% prinos) kao bela čvrsta supstanca. MS(ESI) m/z: 332.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400MHz, CDCl3-d) δ 13.95 (br. s., 1H), 8.83 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.59 (d, J=9.0 Hz, 1H), 7.76 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.49 (dd, J=9.0, 2.4 Hz, 1H), 7.16 (d, J=0.9 Hz, 1H), 4.09 (s, 3H).

20B. Pripremanje N-(4-hloro-2-(6-hidroksipirimidin-4-il)fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida [0353]

[0354] 48% HBr u H2O (1.693 ml, 14.97 mmol) je dodato u mešani rastvor N-(4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida (0.68 g, 2.05 mmol) u THF-u (13.67 ml) na 60 °C. Posle 3 h, reakciona smeša je koncentrovana, kvenčovana sa zasićenim NaHCO3(40 ml), i ekstrahovana sa EtOAc (3 x30 ml). Kombinovani organski slojevi su isprani sa slanim rastvorom (15 mL) i osušeni (MgSO4) Ostatak je pročišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije željeni proizvod (0.195 g, 30%). MS(ESI) m/z: 318.1 (M+H)<+>.<1>H NMR: (400MHz, CDCl3-d) δ 8.50 (d, J=9.0 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.66 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.57 - 7.49 (m, 1H), 6.89 (s, 1H).

20C. Pripremanje (5R,9S)-9-(4-(2-amino-5-hlorofenil)-6-oksopirimidin-1(6H)-il)-21,5-dimetil-21H-3-aza-1(2,4)-piridina-2(5,4)-pirazolaciklononafan-4-ona

[0355]

[0356] U bočicu od 1 drama koja sadrži belu suspenziju N-(4-hloro-2-(6-hidroksipirimidin-4-il)fenil)-2,2,2-trifluoroacetamida (0.035 g, 0.110 mmol) i HATU (0.054 g, 0.143 mmol) u

1

ACN (1.10 ml) je dodat DBU (0.025 ml, 0.165 mmol). Posle 10 min, ljubičasti rastvor Primera 9 (0.033 g, 0.110 mmol) u DMF-u (1.102 ml) je dodat. Nakon mešanja preko noći, reakcija je razblažena sa vodom, ekstrahovana sa EtOAc (3x), organske materije su isprane sa slanim rastvorom, osušene preko Na2SO4, filtrirane i koncentrovane. Sirovi proizvod je pročišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije željeni intermedijer kao žuti film (30% neželjenog izomera takođe je primećeno u<1>H NMR). Materijal je prenet do sledećih reakcija. Trifluoroacetamid grupa je uklonjena rastvaranjem jedinjenja u MeOH (2 ml), tretiranjem sa HCl (1 ml), i zagrevanjem na 75 °C. Nakon 2 h, organske materije su uklonjene i vodeni sloj je osušen zamrzavanjem. HCl so je neutralizovana rastvaranjem ostatka u MeOH i prolazeći kroz dva sukcesivna NaHCO3kertridža (500mg) i filtrat je koncentrovan da se dobije željeni proizvod (0.040 g, 0.079 mmol, 72.0% prinos) kao žuti film. MS(ESI) m/z: 504.3 (M+H)<+>.

20D. Pripremanje trifluoroacetata 1-(4-hloro-2-(1-((SR,9S)-21,5-dimetil-4-okso-21H-3-aza-1(2,4)-piridina-2(5,4)-pirazolaciklononafan-9-il)-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il)fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilne kiseline

[0357]

[0358] Žutom rastvoru od 20C (0.040 g, 0.079 mmol) u ACN (1.134 ml) na 0 °C je dodat izoamil nitrit (0.032 ml, 0.238 mmol) u ACN (0.25 ml), što je praćeno azidotrimetilsilanom (0.031 ml, 0.238 mmol) ACN (0.25 ml), u vidu kapi. Nakon 10 min, hladno kupatilo je uklonjeno, i reakciji je dozvoljeno da se zagreje do sobne temperature. Nakon 1 sata, tercbutil propiolat (0.050 g, 0.397 mmol) ACN (0.25 ml), i Cu2O (1.136 mg, 7.94 µmol) su dodati na sobnoj temperaturi. Nakon 6 h, reakcija je razblažena sa DCM i isprana sa zasićenim NH4Cl, slanim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije žuto ulje. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na normalnoj fazi da se dobije željeni intermedijer kao žuti film. t-butil estar je hidrolizovan tretiranjem sa 50%/TFA/DCM. Posle 1 h, reakciona smeša je koncentrovana, pročišćena hromatografijom na reverznoj fazi, i

1

osušena zamrzavanjem da se dobije željeni proizvod (15 mg, 25%). Ovaj materijal je podvrgnut hiralnom prečišćavanju da se ukloni bilo koji preostali neželjeni izomer. Jedinjenje iz naslova je rano eluirani izomer nakon odvajanja hiralnom HPLC korišćenjem CHIRALPAK® IC, 21 x 250mm ID, 5 µ, korišćenjem 40% MeOH:ACN:FA / 60% CO2at 45.0 mL/min, 100 bar, i 40 °C. MS(ESI) m/z: 600.3(M+H)<+>.<1>H NMR: (400MHz, ACN-d3) d 8.66 (d, J=5.1 Hz, 1H), 8.41 (s, 1H), 8.07 (s, 1H), 7.83 - 7.77 (m, 2H), 7.73 - 7.66 (m, 2H), 7.65 - 7.61 (m, 1H), 7.37 (s, 1H), 6.99 (d, J=4.2 Hz, 1H), 6.39 (s, 1H), 5.66 - 5.61 (m, 1H), 4.12 (s, 3H), 2.52 (br. s., 1H), 2.25 - 2.19 (m, 1H), 2.07 - 2.01 (m, 1H), 1.54 (dd, J=13.4, 5.5 Hz, 1H), 1.31 (d, J=7.9 Hz, 1H), 1.19 - 1.14 (m, 1H), 1.05 (d, J=6.8 Hz, 3H). Analitička HPLC (Metoda A) sobna temperatura = 5.31 min, čistoća > 95%.

Primer 21. Pripremanje trifluoroacetata 1-(4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il}fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilne kiseline

[0359]

21A. Pripremanje etil 1-[4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)fenil]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilata

[0360]

[0361] Ohlađenom (0 °C) bistrom, žutom rastvoru 4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)anilina (0.400 g, 1.70 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 4B, u CH3CN (24.2 mL) je dodat izoamil nitrit (0.34 mL, 2.55 mmol), što je praćeno dodavanjem

1

azidotrimetilsilana u vidu kapi (0.34 mL, 2.55 mmol). Oslobađanje gasa je primećeno. Nakon 10 min, hladno kupatilo je uklonjeno i reakciji je dozvoljeno da se zagreje do sobne temperature i da se meša na sobnoj temperaturi tokom 1 sata. Formirana je žuta suspenzija. Sledeće, etil propiolat (0.500 g, 5.09 mmol) i Cu2O (0.024 g, 0.17 mmol) su dodati. Nakon 1 h, zamućenu zelenkasta reakcija je razblažena sa DCM-om i isprana sa zasićenim vodenim NH4Cl, slanim rastvorom, osušena preko MgSO4, filtrirana i koncentrovana da se dobije žuto ulje. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi daje etil 1-[4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)fenil]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat (0.507 g, 83% prinos) kao žutu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 360.0 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65 (d, J=1.1 Hz, 1H), 8.19 (s, 1H), 7.75 (d, J=2.4 Hz, 1H), 7.62 (dd, J=8.4, 2.4 Hz, 1H), 7.50 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.56 (d, J=1.1 Hz, 1H), 4.44 (q, J=7.3 Hz, 2H), 3.96 (s, 3H), 1.42 (t, J=7.2 Hz, 3H).

21B. Pripremanje etil 1-[4-hloro-2-(6-hidroksipirimidin-4-il)fenil]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilata

[0362]

[0363] Suspenziji etil 1-[4-hloro-2-(6-metoksipirimidin-4-il)fenil]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilata (0.200 g, 0.56 mmol) u CH3CN (3 mL) je dodat TMS-I (0.38 mL, 2.78 mmol). Dobijeni čisto žuti rastvor je zagrevan na 50 °C preko noći. Reakcija je ohlađena do sobne temperature i zatim je sipana u smešu od 10% natrijum tiosulfata i zasićenog vodenog NaHCO3. Reakcija je ekstrahovana sa DCM (3x). Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani. Prečišćavanje hromatografijom na normalnoj fazi daje etil 1-[4-hloro-2-(6-hidroksipirimidin-4-il)fenil]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat (0.098 g, 51% prinos) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 345.9 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.30 (s, 1H), 7.97 (d, J=1.1 Hz, 1H), 7.73 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.62 (dd, J=8.5, 2.3 Hz, 1H), 7.49 (d, J=8.4 Hz, 1H), 6.46 (d, J=0.9 Hz, 1H), 4.44 (q, J=7.3 Hz, 2H), 1.42 (t, J=7.2 Hz, 3H).

21C. Pripremanje etil 1-(4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il}fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat trifluoroacetata

1

[0365] U bočicu od 1 drama koja sadrži belu suspenziju etil 1-[4-hloro-2-(6-hidroksipirimidin- 4-il)fenil]-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilata (0.035 g, 0.10 mmol) i HATU (0.050 g, 0.13 mmol) u CH3CN (1.0 mL) je dodat DBU (0.023 mL, 0.15 mmol). Dobijeni čist, žuti rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 20 min. Zatim je čist, ljubičasti rastvor (9R,13S)-13-amino-3,9-dimetil-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>] oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-8-ona (0.030 g, 0.10 mmol), koji je pripremljen kao što je opisano u Primeru 13, u DMF-u (1.0 mL) dodat. Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi. Posle 3 h, reakcija je zaustavljena prečišćena direktno hromatografijom na reverznoj fazi koja je dala, posle koncentracije i liofilizacije, etil 1-(4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il}fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat, trifluoroacetat (0.0292 g, 39% prinos) kao prljavo belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 628.4 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.81 (s, 1H), 8.78 (s, 1H), 8.70 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J=2.5 Hz, 1H), 7.74 (dd, J=8.5, 2.5 Hz, 1H), 7.70 - 7.65 (m, 2H), 7.52 (dd, J=5.0, 1.7 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.39 (s, 1H), 5.99 - 5.93 (m, 1H), 4.40 (q, J=7.2 Hz, 2H), 4.05 (s, 3H), 2.74 - 2.66 (m, 1H), 2.32 -2.23 (m, 1H), 2.11 - 1.93 (m, 2H), 1.64 - 1.54 (m, 1H), 1.50 - 1.41 (m, 1H), 1.38 (t, J=7.2 Hz, 3H), 1.00 (d, J=6.9 Hz, 3H), 0.73 - 0.61 (m, 1H). Analitička HPLC (Metoda A) sobna temperatura = 4.90 min, čistoća = 98.8%.

21D. Pripremanje trifluoroacetata 1-(4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il}fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilne kiseline

[0366] Bistar, bezbojni rastvor etil 1-(4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il}fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilat trifluoroacetata (0.020 g, 0.027 mmol) u MeOH (0.54 mL) i 1.0 M NaOH (0.14 mL, 0.14 mmol) je mešan na sobnoj

11

temperaturi. Nakon 2 h reakcija je zaustavljena, neutralizovana sa 1.0 M HCl i zatim je reakcija koncentrovana da se dobije bela čvrsta supstanca. Prečišćavanje reverzno faznom hromatografijom daje, posle koncentracije i liofilizacije, 1-(4-hloro-2-{1-[(9R,13S)-3,9-dimetil-8-okso-3,4,7,15-tetraazatriciklo[12.3.1.0<2,6>]oktadeka-1(18),2(6),4,14,16-pentaen-13-il]-6-okso-1,6-dihidropirimidin-4-il}fenil)-1H-1,2,3-triazol-4-karboksilnu kiselinu, trifluoroacetat (0.0126 g, 64% prinos) kao belu čvrstu supstancu. MS(ESI) m/z: 600.3 (M+H)<+>.<1>H NMR (500 MHz, CD3OD) δ 8.78 (s, 1H), 8.73 (s, 1H), 8.71 (d, J=5.2 Hz, 1H), 7.89 (d, J=2.2 Hz, 1H), 7.76 - 7.73 (m, 1H), 7.70 - 7.66 (m, 2H), 7.50 (dd, J=5.1, 1.5 Hz, 1H), 7.49 (s, 1H), 6.40 (s, 1H), 6.00 - 5.94 (m, 1H), 4.05 (s, 3H), 2.74 - 2.66 (m, 1H), 2.32 -2.23 (m, 1H),2.11 - 1.93 (m, 2H), 1.64 - 1.54 (m, 1H), 1.51 - 1.40 (m, 1H), 1.00 (d, J=6.9 Hz, 3H), 0.73 - 0.61 (m, 1H). Analitička HPLC (Metod A) RT = 3.37 min, čistoća = 100%.

Claims (15)

1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje sa formulom (I):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: prsten A je nezavisno odabran od

   prsten B je nezavisno odabran od

   R<1>je nezavisno odabran od H i C1-4alkil; R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, CHF2, i COOH; R<3>je nezavisno odabran od H, CHF2, CD3, CH3, i

   R<4>je nezavisno odabran od H i F; i R<5>je nezavisno odabran od H, F, Cl, CH3, i OCH3.
2. 2. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, gde R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, i CHF2.
3. 3. Jedinjenje bilo kog od patentnih zahteva 1 do 2, koje ima formulu (II):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: R<1>je C1-4alkil; R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, i CHF2; R<3>je nezavisno odabran od CHF2, CD3, i CH3; R<4>je H; i R<5>je nezavisno odabran od F i Cl.
4. 4. Jedinjenje bilo kog od patentnih zahteva 1 do 3, koje ima Formulu (III):

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: R<1>je C1-4alkil; R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, i CHF2; R<3>je nezavisno odabran od CHF2, CD3, i CH3; R<4>je H; i R<5>je nezavisno odabran od F i Cl.
5. 5. Jedinjenje bilo kog od patentnih zahteva 1 do 4, koje ima formulu (IV): 11

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so, gde: R<2>je nezavisno odabran od F, Cl, CF3, i CHF2; i R<3>je nezavisno odabran od CHF2, CD3, i CH3.
6. 6. Jedinjenje bilo kog od patentnih zahteva 1 do 5, odabrano od grupe koja se sastoji od:

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so.
7. 7. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 koje ima strukturu:

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so.
8. 8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 koje ima strukturu:

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so.
9. 9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1 koje ima strukturu: 11

   ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so.
10. 10. Jedinjenje u skladu sa patentim zahtevom 1 koje ima strukturu:

    ili stereoizomer, tautomer, njegova farmaceutski prihvatljiva so.
11. 11. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedno ili više jedinjenja u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-10 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili diluent.
12. 12. Jedinjenje ili kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-11, ili stereoizomer, tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu kao lek.
13. 13. Jedinjenje ili kompozicija u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-11, ili stereoizomer, tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so za primenu u lečenju tromboembolijskog poremećaja.
14. 14. Jedinjenje ili stereoizomer, tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kompozicija za primenu u skladu sa patentnim zahtevom 13, gde je tromboembolijski poremećaj odabran od arterijskih kardiovaskularnih tromboembolijskih poremećaja, venskih kardiovaskularnih tromboembolijskih poremećaja, i tromboembolijskih poremećaja u srčanim komorama ili u perifernoj cirkulaciji.
15. 15. Jedinjenje ili stereoizomer, tautomer, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili kompozicija za primenu u skladu sa patentnim zahtevom 14 gde je tromboembolijski poremećaj odabran od nestabilne angine, akutnog koronarnog sindroma, atrijalne fibrilacije, 11 infarkta miokarda, prolaznog ishemijskog napada, moždanog udara, ateroskleroze, periferne okluzivne arterijske bolesti, venske tromboze, tromboze dubokih vena, tromboflebitisa, arterijske embolije, koronarne arterijske tromboze, cerebralne arterijske tromboze, cerebralne embolije, bubrežne embolije, plućne embolije, i tromboze koja je posledica medicinskih implanata, uređaja, ili procedura u kojima je krv izložena veštačkoj površini koja podstiče trombozu. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 11