RS57138B1 - Kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve - Google Patents

Description

Opis pronalaska

OBLAST TEHNIKE NA KOJU SE PRONALAZAK ODNOSI

[0001] Predmetni pronalazak je iz oblasti tehnike koja se odnosi na kompozicije koje sadrže bakterijske sojeve izolovane iz digestivnog trakta sisara i upotrebu navedenih kompozicija u lečenju bolesti.

STANJE TEHNIKE

[0002] Smatra se da je humano crevo sterilno in utero, ali i da je izloženo velikoj raznolikosti materinskih i mikroba sredine neposredno nakon rođenja. Potom, nastupa dinamičan period mikrobijalne kolonizacije i smene populacija na koje utiču faktori poput načina isporuke, sredinskih faktora, načina ishrane i genotipa; svi navedeni faktori utiču na sastav crevne mikrobiote, pre svega tokom ranog životnog doba. Mikrobiota se zatim stabilizuje i postaje sličan mikrobioti odrasle osobe [1]. Humana crevna mikrobiota sadrži više od 500-1000 različitih filotipova koji se suštinski mogu klasifikovati u dva glavna razdela bakterija, Bacteroidetes i Firmicutes *2+. Uspešni simbiotski odnosi koji proističu iz kolonizacije humanih creva bakterijama dovode do širokog spektra metaboličkih, strukturnih, protektivnih i drugih korisnih funkcija. Poboljšane metaboličke aktivnosti kolonizovanog creva obezbeđuju da se inače nesvarljive komponente hrane razlože uz oslobađanje sporednih proizvoda koji predstavljaju važan izvor hranljivih materija za domadina. Slično navedenom, imunološki značaj crevne mikrobiote je dobro poznat i može se uočiti kod životinja koje su oslobođene mikroba i sa poremedenim imunim sistemom („germ-free” životinje), kod kojih dolazi do funcionalne rekonstitucije nakon uvođenja komensalnih bakterija *3-5].

[0003] Dramatične promene u sastavu mikrobiote su dokumentovane kod gastrointestinalnih poremedaja poput inflamatorne bolesti creva (IBD od engl. inflammatory bowel disease). Na primer, nivoi bakterija Clostridium klastera XIVa su smanjeni kod IBD pacijenata dok je broj E. coli povedan, što ukazuje na promenu ravnoteže simbionata i patobionata unutar creva *6-9]. Interesantno je da je navedena mikrobijalna disbioza takođe asocirana sa disbalansima u populacijama T-efektorskih delija.

[0004] U cilju prepoznavanja potencijalno pozitivnog efekta koji određeni bakterijski sojevi mogu imati na creva životinja, predložena je upotreba raznih sojeva u lečenju raznih oboljenja (pogledati, na primer, [10-13+). Takođe, određeni sojevi su, uključujudi uglavnom sojeve bakterija Lactobacillus i Bifidobacterium, predloženi za upotrebu u lečenju raznih inflamatornih i autoimunih oboljenja koja nisu direktno povezana sa crevima (pogledati revijske publikacije *14+ i *15+). Međutim, odnos između različitih oboljenja i različitih bakterijskih sojeva, kao i precizni efekti određenih bakterijskih sojeva na creva, sistemski nivo ili pak na bilo koji određen tip oboljenja su slabo okarakterisani. Na primer, za određene Enterococcus vrste se pretpostavlja da mogu biti uzrok kancera [16].

[0005] JP H08-259450 opisuje upotrebu toplotom inaktiviranih Enterococcus spp. u modulaciji proizvodnje interferona.

[0006] JP 2007-116991 opisuje upotrebu toplotom inaktivirane E. faecalis u prehrambenim proizvodima.

[0007] U stanju tehnike postoji potreba za novim postupcima lečenja bolesti. Postoji takođe potreba da se okarakterišu potecijalni efekti crevnih bakterija da bi se razvile nove terapije zasnovane na upotrebi crevnih bakterija.

IZLAGANJE SUŠTINE PRONALASKA

[0008] Pronalazači su razvili nove terapije za lečenje i prevenciju bolesti. Preciznije, pronalazači su razvili nove terapije za lečenje i prevenciju kancera. Još preciznije, pronalazači su identifikovali da bakterijski sojevi vrste Enterococcus gallinarum mogu biti efikasni za lečenje i prevenciju kancera. Kao što je opisano u primerima, oralna primena kompozicija koje sadrže Enterococcus gallinarum može dovesti do smanjenja veličine tumora u mišijim modelima kancera.

[0009] U prioritetnim primerima primene, predmetni pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Enterococcus gallinarum za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera kao što je kancer dojke, pluda ili jetre. Pronalazači su identifikovali da tretman kompozicijama koje sadrže bakterijski soj vrste Enterococcus gallinarum može smanjiti rast tumora u mišijim modelima kancera dojke, pluda i jetre. U određenim primerima primene, kompozicija je za upotrebu u postupku smanjenja veličine tumora ili prevencije rasta tumora prilikom lečenja kancera. Kompozicije koje sadrže Enterococcus gallinarum mogu biti posebno efikasne za smanjenje veličine tumora ili za prevenciju rasta tumora prilikom lečenja kancera.

[0010] Bakterijski soj u kompoziciji predmetnog pronalaska je soj Enterococcus gallinarum. Prioritetno, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži 16s rRNK sekvencu koja je predstavljena kao SEQ ID NO: 2.

[0011] U određenim primerima primene, kompozicija pronalaska je za oralnu primenu. Oralna primena sojeva predmetnog pronalaska može biti efikasna za lečenje kancera. Takođe, oralna primena je pogodna za pacijente i ordinirajude lekare i omogudava isporuku i/ili delimičnu ili potpunu kolonizaciju creva.

[0012] U određenim primerima primene, kompozicija pronalaska sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijensa ili nosača.

[0013] U određenim primerima primene, kompozicija pronalaska sadrži bakterijski soj koji je liofilizovan. Liofilizacija je efikasna i pogodna tehnika za pripremu stabilnih kompozicija koji omogudavaju isporuku bakterija.

[0014] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prehrambeni proizvod koji sadrži kompoziciju, kao što je prethodno opisano.

[0015] U izvesnim primerima primene, pronalazak obezbeđuje kompoziciju tipa vakcine koja sadrži kompoziciju, kao što je prethodno opisano.

[0016] Pored navedenog, ovde je opisan postupak lečenja ili prevencije kancera koji podrazumeva primenu kompozicije koja sadrži bakterijski soj vrste Enterococcus gallinarum.

[0017] Prilikom razvoja navedenog pronalaska, pronalazači su identifikovali i okarakterisali bakterijski soj koji je posebno koristan za terapiju. Soj Enterococcus gallinarum pronalaska se pokazao efikasnim za lečenje kancera. Prema tome, drugi aspekt pronalaska obezbeđuje deliju Enterococcus gallinarum soja koji je deponovan sa pristupnim brojem NCIMB 42488, ili njen derivat. Pronalazak takođe obezbeđuje kompozicije koji sadrže navedene delije ili biološki čiste kulture navedenih delija. Pronalazak obezbeđuje i deliju Enterococcus gallinarum soja koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488 za upotrebu u terapiji, pre svega kancera.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0018]

Slika 1: Mišiji model kancera dojke - zapremina tumora.

Slika 2: Mišiji model karcinoma pluda - zapremina tumora.

Slika 3: Mišiji model kancera jetre - težina jetre.

Slika 4A: Nivoi citokina (pg/ml) u nezrelim dendritskim delijama (bez bakterija).

Slika 4B: Nivoi citokina (pg/ml) u nezrelim dendritskim delijama nakon dodavanja LPS-a.

Slika 4C: Nivoi citokina (pg/ml) u nezrelim dendritskim delijama nakon dodavanja MRX518.

Slika 4D: Nivoi citokina (pg/ml) u nezrelim dendritskim delijama nakon dodavanja MRX518 i LPS-a.

Slika 5A: Nivoi citokina u THP-1 delijama (bez bakterija).

Slika 5B: Nivoi citokina u THP-1 delijama nakon dodavanja bakterijskog sedimenta.

Slika 5C: Nivoi citokina u THP-1 delijama nakon dodavanja MRX518, samostalno ili u kombinaciji sa LPS-om.

OPIS PRONALASKA

Bakterijski sojevi

[0019] Kompozicije pronalaska sadrže bakterijski soj vrste Enterococcus gallinarum. Primeri pokazuju da su bakterije navedene vrste korisne za lečenje ili prevenciju kancera.

[0020] Kao što je ovde opisano, kompozicije koje sadrže bakterijski soj sa 16s rRNK sekvencom koja je najmanje 95% identična 16s rRNK sekvenci bakterijskog soja Enterococcus gallinarum su za upotrebu u terapiji, na primer, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera. Preciznije, prijava takođe obezbeđuje kompozicije koji sadrže bakterijski soj koji sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 95% identična SEQ ID NO: 2 za upotrebu u terapiji, na primer, za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera. U pojedinim primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji ne predstavlja Enterococcus gallinarum ved blisko srodan soj.

[0021] Pronalazak obezbeđuje Enterococcus gallinarum za upotrebu u terapiji, na primer, za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera. Slično navedenom, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Enterococcus gallinarum za upotrebu u terapiji, na primer, za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera. U određenim primerima primene, kompozicije koje su ovde opisane sadrže bakterijski soj koji sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 2, na primer, soj koji je Enterococcus gallinarum, i ne sadrže druge rodove bakterija. U određenim primerima primene, kompozicije predmetne prijave sadrže jedan soj bakterija koje sadrže 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 2, na primer, soj Enterococcus gallinarum, i ne sadrže bilo koji drugi bakterijski soj ili vrstu.

[0022] Enterococcus gallinarum obrazuje kokoidne delije, uglavnom u parovima ili kratkim lancima. One su nepokretne, a kolonije na krvnom ili hranljivom agaru su kružne i glatke. Enterococcus gallinarum reaguje sa antiserumom grupe D Lancefield-ove klasifikacije. Tip soja Enterococcus gallinarum je F87/276 = PB21 = ATCC 49573 = CCUG 18658 = CIP 103013 = JCM 8728 = LMG 13129 = NBRC 100675 = NCIMB 702313 (prethodno NCDO 2313) = NCTC 12359 [17]. Pristupni broj u okviru GenBank baze podataka za gensku sekvencu 16S rRNK Enterococcus gallinarum je AF039900 (ovde je navedena kao SEQ ID NO: 1). Soj Enterococcus gallinarum koji može poslužiti kao primer je opisan u [17].

[0023] Bakterija Enterococcus gallinarum, deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42488, je ispitana u okviru Primera pronalaska, a ovde je označena i kao soj MRX518. U tekstu se oznake MRX518 i MRx0518 koriste naizmenično. Sekvenca 16S rRNK za soj MRX518 koji je ispitivan, je navedena kao SEQ ID NO: 2. Soj MRX518 je deponovan kao "Enterococcus sp" odlukom Međunarodne komisije za deponovanje NCIMB, Ltd. (Ferguson Building, Aberdeen, AB21 9YA, Škotska) od strane firme 4D Pharma Research Ltd. (Life Sciences Innovation Building, Aberdeen, AB25 2ZS, Škotska), 16. novembra 2015. godine, i dodeljen mu je pristupni broj NCIMB 42488.

[0024] Genom soja MRX518 sadrži hromozom i plazmid. Hromozomska sekvenca za soj MRX518 je navedena kao SEQ ID NO: 3 u listi sekvenci objavljenoj u WO 2017/085520. Plazmidna sekvenca za soj MRX518 je navedena kao SEQ ID NO: 4 u listi sekvenci objavljenoj u WO 2017/085520. Navedene sekvence su generisane upotrebom PacBio RS II platforme.

[0025] Očekuje se da bakterijski sojevi koji su blisko srodni soju koji je ispitivan u primerima pronalaska budu takođe efikasni za lečenje ili prevenciju kancera. U određenim primerima primene, bakterijski soj koji je ovde opisan sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična 16s rRNK sekvenci bakterijskog soja Enterococcus gallinarum. Prioritetno, bakterijski soj za upotrebu u predmetnoj prijavi sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična sa SEQ ID NO: 1 ili 2. Prioritetno, sekvenca je identična SEQ ID NO: 2. Prioritetno je i da bakterijski soj za upotrebu u predmetnom pronalasku sadrži 16s rRNK sekvencu koja je predstavljena kao SEQ ID NO: 2.

[0026] Očekuje se i da bakterijski sojevi koji predstavljaju biotipove bakterije deponovane pod pristupnim brojem 42488, budu efikasni za lečenje ili prevenciju kancera. Biotip označava blisko srodan soj, sa istim ili vrlo sličnim fiziološkim i biohemijskim karakteristikama.

[0027] Sojevi koji su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42488, a koji su pogodni za upotrebu u predmetnom pronalasku, mogu biti identifikovani sekvenciranjem drugih nukleotidnih sekvenci bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42488. Na primer, suštinski celokupan genom može biti sekvenciran, a biotip soja za upotrebu u pronalasku može karakterisati identičnost sekvence od najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% u okviru najmanje 80% od čitavog njegovog genoma (npr. preko najmanje 85%, 90%, 95% ili 99%, ili duž čitavog njegovog genoma). Na primer, u pojedinim primerima primene, biotipni soj karakteriše identičnosti sekvence od najmanje 98% u preko najmanje 98% njegovog genoma ili identičnosti sekvence od najmanje 99% u preko 99% njegovog genoma. Druge pogodne sekvence za upotrebu u identifikaciji biotipnih sojeva mogu biti sekvence hsp60 ili ponavljajude sekvence poput BOX, ERIC, GTG sekvenci ili REP ili pak *18+. Biotipne sojeve može karakterisati identičnost sekvence od najmanje 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% sa odgovarajudom sekvencom bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42488. U pojedinim primerima primene, biotipni soj sadrži sekvencu koja je 95%, 96%, 97%, 98%, 99%, 99,5% ili 99,9% identična odgovarajudoj sekvenci soja MRX518 koji je deponovan kao NCIMB 42488 i sadrži 16S rRNK sekvencu navedenu kao SEQ ID NO: 2.

[0028] U određenim primerima primene, bakterijski soj koji je ovde opisan sadrži hromozom sa sekvencom koja je identična SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520. U prioritetnim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u predmetnoj prijavi sadrži hromozom sa sekvencom koja je najmanje 90% identična (npr. najmanje 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100%) sa SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko najmanje 60% (npr. najmanje 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100%) od SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520. Na primer, bakterijski soj za upotrebu u predmetnoj prijavi može sadržavati hromozom sa sekvencom koja je najmanje 90% identična SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 70% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 90% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 80% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 90% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 90% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 90% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 100% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 70% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 80% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 90% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 100% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 70% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 80% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 90% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 95% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 100% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 99,5% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 90% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 99,5% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 95% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 99,5% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 98% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, ili najmanje 99,5% identična sekvenci SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko 100% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520.

[0029] U određenim primerima primene, bakterijski soj koji je ovde opisan sadrži plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520. U prioritetnim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u predmetnoj prijavi sadrži plazmid sa sekvencom koja je najmanje 90% identična (npr. najmanje 92%, 94%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100% identična) sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko najmanje 60% (npr. najmanje 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 95%, 96%, 97%, 98%, 99% ili 100%) SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520. Na primer, bakterijski soj za upotrebu u predmetnoj prijavi može sadržavati plazmid sa sekvencom koja je najmanje 90% identična SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 70% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 90% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 80% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 90% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 90% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 90% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 100% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 70% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 80% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 90% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 95% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 100% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 70% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 80% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 90% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, ili najmanje 98% identična sekvenci SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520 u preko 100% SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520.

[0030] U određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži hromozom sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, kao i plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520.

[0031] U određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u predmetnom pronalasku sadrži hromozom sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, na primer, kao što je prethodno opisano, kao i 16S rRNK sekvencu koja je identična bilo kojoj od SEQ ID NO: 1 ili 2, na primer, kao što je prethodno opisano, pri čemu soj prioritetno sadrži 16S rRNK sekvencu navedenu kao SEQ ID NO: 2, a opciono sadrži i plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, kao što je prethodno opisano.

[0032] U određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži hromozom sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, na primer, kao što je prethodno opisano, a opciono sadrži plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, kao što je prethodno opisano, i efikasan je za lečenje ili prevenciju kancera.

[0033] U određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži hromozom sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, na primer, kao što je prethodno opisano, i 16S rRNK sekvencu koja je identična bilo kojoj od SEQ ID NO: 1 ili 2, na primer, kao što je prethodno opisano, a opciono sadrži plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, kao što je prethodno opisano, i efikasan je za lečenje ili prevenciju kancera.

[0034] U određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u predmetnoj prijavi sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 99%, 99,5% ili 99,9% identična 16s rRNK sekvenci koja je navedena kao SEQ ID NO: 2 (na primer, koja sadrži 16S rRNK sekvencu SEQ ID NO: 2), kao i hromozom sa sekvencom koja je najmanje 95% identična SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko najmanje 90% SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, a opciono soj sadrži plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, kao što je prethodno opisano, i efikasan je za lečenje ili prevenciju kancera.

[0035] U određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u prijavi sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 99%, 99,5% ili 99,9% identična 16s rRNK sekvenci predstavljenoj kao SEQ ID NO: 2 (na primer, koja sadrži 16S rRNK sekvencu SEQ ID NO: 2), kao i hromozom sa sekvencom koja je najmanje 98% identična (npr. najmanje 99% ili najmanje 99,5%) sa sekvencom SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko najmanje 98% (npr. najmanje 99% ili najmanje 99,5%) SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, a soj opciono sadrži plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, kao što je prethodno opisano, i efikasan je za lečenje ili prevenciju kancera.

[0036] U određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku predstavlja Enterococcus gallinarum i sadrži 16s rRNK sekvencu koja je najmanje 99%, 99,5% ili 99,9% identična sa 16s rRNK sekvencom koja je navedena kao SEQ ID NO: 2 (na primer, sadrži 16S rRNK sekvencu SEQ ID NO: 2), kao i hromozom sa sekvencom koja je najmanje 98% identična (npr. najmanje 99% ili najmanje 99,5%) sa SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520 u preko najmanje 98% (npr. najmanje 99% ili najmanje 99,5%) SEQ ID NO: 3 iz WO 2017/085520, a soj opciono sadrži i plazmid sa sekvencom identičnom SEQ ID NO: 4 iz WO 2017/085520, kao što je prethodno opisano, i efikasan je za lečenje ili prevenciju kancera.

[0037] Alternativno, sojevi koji predstavljaju biotipove bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42488, a koji su pogodni za upotrebu u pronalasku, se mogu identifikovati upotrebom deponovanih podataka za soj sa pristupnim brojem NCIMB 42488 i analize restrikcionih fragmenta i/ili PCR analize, na primer, upotrebom polimorfizma dužine fluorescentno obeleženih amplifikovanih fragmenta (FAFLP) i obrazaca PCR analize ponavljajudih DNK elementa („rep-PCR fingerprinting‟), kao i upotrebom proteinskog profila ili parcijalnog sekvenciranja 16S ili 23s rDNK. U prioritetnim primerima primene, navedene tehnike se mogu upotrebiti za identifikaciju drugih sojeva Enterococcus gallinarum.

[0038] U određenim primerima primene, sojevi koji predstavljaju biotipove bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42488, a koji su pogodni za upotrebu u pronalasku, označavaju sojeve koji obezbeđuju isti obrazac prilikom restrikcione analize amlifikovane ribozomalne DNK (ARDRA) kao i bakterija deponovana pod pristupnim brojem NCIMB 42488, na primer, prilikom upotrebe Sau3AI restrikcionog enzima (za detaljan pregled postupaka i uputstva koji mogu poslužiti kao primer, pogledati, na primer, *19+). Alternativno, sojevi biotipa se identifikuju kao sojevi koje karakteriše isti obrazac fermentacije ugljenih hidrata kao bakteriju deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 42488. U pojedinim primerima primene, obrazac fermentacije ugljenih hidrata se određuje upotrebom API 50 CHL panela (bioMerieux). U pojedinim primerima primene, bakterijski soj upotrebljen u pronalasku karakteriše:

(i) pozitivna reakcija fermentacije najmanje jednog (npr. najmanje 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 ili svih) od slededih šedera: L-arabinoze, D-riboze, D-ksiloze, D-galaktoze, D-glukoze, D-fruktoze, D-manoze, N-acetilglukozamina, amigdalina, arbutina, salicina, D-celobioze, D-maltoze, saharoze, D-trehaloze, gentiobioze, D-tagatoze i kalijum glukonata; i/ili

(ii) intermedijerno pozitivna reakcija fermentacije najmanje jednog (npr. najmanje 2, 3, 4 ili svih) od slededih šedera: D-manitola, metil-aD-glikopiranozida, D-laktoze, skroba i L-fukoze; prioritetno određeno API 50 CHL analizom (poželjna je upotreba API 50 CHL panela firme bioMerieux).

[0039] Drugi sojevi Enterococcus gallinarum koji su korisni u kompozicijama i postupcima predmetnog pronalaska, kao što su biotipovi bakterije deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42488, mogu se identifikovati upotrebom bilo kog odgovarajudeg postupka ili strategije, uključujudi testove koji su opisani u primerima. Na primer, sojevi za upotrebu u pronalasku se mogu identifikovati kultivacijom u anaerobnom YCFA medijumu i/ili primenom bakterije u mišiji model artritisa izazvan kolagenom tipa II i potom određivanjem nivoa citokina. Preciznije, za pronalazak mogu biti od koristi bakterijski sojevi koje karakteriše sličan obrazac rasta, metabolički tip i/ili površinski antigeni kao i bakteriju deponovanu pod pristupnim brojem NCIMB 42488. Koristan soj de karakterisati imunološka modulatorna aktivnost koja se može uporediti sa aktivnošdu NCIMB 42488 soja. Preciznije, biotipni soj de dovesti do efekata u modelima kancera koji se mogu uporediti sa efektima koji su prikazani u Primerima i koji se mogu identifikovati upotrebom protokola kultivacije delija i primene koji su opisani u Primerima.

[0040] U pojedinim primerima primene, bakterijski soj koji se upotrebljava u pronalasku karakteriše:

(i) Pozitivna reakcija u najmanje jednom (npr. u najmanje 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili u svim) od testova: fermentacija manoze, aktivnost dekarboksilaze glutaminske kiseline, arginin arilamidaze, fenilalanin arilamidaze, arilamidaze piroglutaminske kiseline, tirozin arilamidaze, histidin arilamidaze i serin arilamidaze; i/ili

(ii) Intermedijerno pozitivna rekacija u najmanje jednom (npr. u najmanje 2 ili u svim) od testova aktivnosti: β-galaktozidaza-6-fosfata, β-glukozidaze i N-acetil-β-glukozaminidaze; i/ili

(iii) Negativna reakcija u najmanje jednom (npr. u najmanje 2, 3, 4, 5, 6 ili u svim) od testova aktivnosti: fermentacija rafinoze, aktivnost prolin arilamidaze, leucil glicin arilamidaze, leucin arilamidaze, alanin arilamidaze, glicin arilamidaze i arilamidaza glutamil glutaminske kiseline,

a što se prioritetno utvrđuje testom ugljenohidratnog, aminokiselinskog i nitratnog metabolizma, a opciono testom aktivnosti alkalne fosfataze, i još prioritetnije, Rapid ID 32A analizom (prioritetno upotrebom Rapid ID 32A sistema firme bioMerieux).

[0041] U pojedinim primerima primene, bakterijski soj koji se upotrebljava u pronalasku karakteriše:

(i) Negativna reakcija u najmanje jednom (npr. u najmanje 2, 3 ili u sva 4) od testova poput testa aktivnosti glicin arilamidaze, fermentacije rafinoze, aktivnosti prolin arilamidaze i leucin arilamidaze, na primer, kao što je utvrđeno testom metabolizma ugljenih hidrata, aminokiselina i nitrata, prioritetno upotrebom Rapid ID 32A analize (poželjno upotrebom Rapid ID 32A sistema firme bioMerieux); i/ili

(ii) Intermedijerno pozitivna rekacija fermentacije L-fruktoze, prioritetno utvrđena upotrebom API 50 CHL analize (poželjno upotrebom API 50 CHL panela firme bioMerieux).

[0042] U pojedinim primerima primene, bakterijski soj upotrebljen u pronalasku predstavlja proizvođača vandelijskog ATP-a, na primer, proizvodi 6-6,7 ng/μl (na primer, 6,1-6,6 ng/μl ili 6,2-6,5 ng/μl ili 6,33 ± 0,10 ng/μl) ATP-a, što je utvrđeno upotrebom komercijalnog pakovanja za ATP test (Sigma-Aldrich, MAK190). Vandelijski ATP bakterije može imati plejotropne efekte, uključujudi aktivaciju signalizacije podredovane T-delijskim receptorima (Schenk i saradnici, 2011), podsticanje intestinalne Th17 delijske diferencijacije (Atarashi i saradnici, 2008) i indukciju sekrecije proinflamatornog medijatora IL-1β aktivacijom NLRP3 inflamazoma (Karmarkar i saradnici, 2016). Shodno navedenom, bakterijski soj koji poizvodi vandelijski ATP je koristan za lečenje ili prevenciju kancera.

[0043] U pojedinim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži jedan ili više od slededa tri gena: protein mobilnog elementa; ABC transporter ksiloze, komponentu permeaze; kao i FIG00632333: hipotetički protein. Na primer, u određenim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku sadrži gene koje kodiraju protein mobilnog elementa i ABC transporter ksiloze, komponentu permeaze; protein mobilnog elementa i FIG00632333: hipotetički protein; ABC transporter ksiloze, komponentu permeaze i FIG00632333: hipotetički protein; ili protein mobilnog elementa, ABC transporter ksiloze, komponentu permeaze i FIG00632333: hipotetički protein.

[0044] Posebno prioritetan soj predmetnog pronalaska je soj Enterococcus gallinarum deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488. Navedeni soj je primer MRX518 soja koji je ispitivan u primerima i za koji je pokazano da je efikasan za lečenje bolesti. Stoga, pronalazak obezbeđuje deliju, kao što je izolovana delija soja Enterococcus gallinarum koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488. Pronalazak takođe obezbeđuje kompoziciju koja sadrži deliju soja Enterococcus gallinarum koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488. Pronalazak obezbeđuje i biološki čistu kulturu delija soja Enterococcus gallinarum koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488. Pronalazak takođe obezbeđuje deliju soja Enterococcus gallinarum koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488, za upotrebu u terapiji, pre svega za lečenje oboljenja koja su ovde opisana. Derivat soja koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488 može biti tipa derkesoja (potomak) ili soja koji je kultivisan (subkloniran) iz originalnog soja.

[0045] Derivat soja predmetnog pronalaska se može modifikovati, na primer, na genetskom nivou, bez ukidanja biološke aktivnosti. Preciznije, derivatni soj pronalaska je terapijski aktivan. Derivatni soj de karakterisati imunološka modulatorna aktivnost koja je uporediva sa aktivnošdu originalnog NCIMB 42488 soja. Preciznije, derivatni soj de ispoljiti efekte u modelima kancerskih oboljenja koji se mogu uporediti sa efektima prikazanim u Primerima, a koji se mogu identifikovati upotrebom protokola za kultivaciju delija i primenu koji su opisani u Primerima. Derivat NCIMB 42488 soja de u principu predstavljati biotip NCIMB 42488 soja.

[0046] Navođenje delija soja Enterococcus gallinarum koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488 se odnosi na bilo koje delije koje karakteriše ista bezbedonosna i terapijska efikasnost

1

kao i sojeve koji su deponovani pod pristupnim brojem NCIMB 42488, a navedene delije pripadaju području prijave. Prema tome, u pojedinim primerima primene, navođenje delija soja Enterococcus gallinarum koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488 se odnosi samo na soj MRX518 deponovan kao NCIMB 42488, a ne odnosi se na bakterijski soj koji nije deponovan kao NCIMB 42488. U pojedinim primerima primene, navođenje delija soja Enterococcus gallinarum koji je deponovan pod pristupnim brojem NCIMB 42488 se odnosi na delije koje karakteriše ista bezbedonosna i terapijska efikasnost kao i sojeve deponovane pod pristupnim brojem NCIMB 42488, a koje ne predstavljaju soj deponovan kao NCIMB 42488.

[0047] U prioritetnim primerima primene, bakterijski sojevi u kompozicijama predmetnog pronalaska su vijabilni i sposobni da delimično ili potpuno kolonizuju creva.

Lečenje kancera

[0048] U prioritetnim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se upotrebljavaju za lečenje ili prevenciju kancera. Primeri pokazuju da primena kompozicija pronalaska može dovesti do smanjenja rasta tumora u brojnim modelima tumora.

[0049] U određenim primerima primene, tretman kompozicijama predmetnog pronalaska rezultira smanjenjem veličine tumora ili smanjenjem rasta tumora. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se upotrebljavaju za smanjenje veličine tumora ili smanjenje rasta tumora. Kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti efikasne u smanjenju veličine ili rasta tumora. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu kod pacijenata sa solidnim tumorima. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se upotrebljavaju za smanjenja ili prevenciju angiogeneze prilikom lečenja kancera. Kompozicije predmetnog pronalaska mogu ispoljiti efekat na imunske ili inflamatorne sisteme koji imaju centralne uloge u angiogenezi. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u prevenciji metastaze.

[0050] U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u tretmanu ili prevenciji kancera dojke. Primeri pokazuju da kompozicije pronalaska mogu biti efikasne za lečenje kancera dojke. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se upotrebljavaju za smanjenje veličine tumora, smanjenje rasta tumora ili smanjenje angiogeneze prilikom lečenja kancera dojke. U prioritetnim primerima primene, kancer označava mamilarni karcinom. U prioritetnim primerima primene, kancer označava kancer dojke IV stadijuma.

[0051] U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u tretmanu ili prevenciji kancera pluda. Primeri pokazuju da kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti efikasne za lečenje kancera pluda. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se upotrebljavaju za smanjenje veličine tumora, smanjenje rasta tumora ili smanjenje angiogeneze prilikom lečenja kancera pluda. U prioritetnim primerima primene, kancer označava karcinom pluda.

[0052] U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u tretmanu ili prevenciji kancera jetre. Primeri pokazuju da kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti efikasne za lečenje kancera jetre. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se upotrebljavaju za smanjenje veličine tumora, smanjenje rasta tumora ili smanjenje angiogeneze prilikom lečenja kancera jetre. U prioritetnim primerima primene, kancer označava hepatom (hepatocelularni karcinom).

[0053] U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u tretmanu ili prevenciji kancera debelog creva. Primeri pokazuju da kompozicije predmetnog pronalaska ispoljavaju efekat na delije kancera debelog creva i da mogu biti efikasne u lečenju kancera debelog creva. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska se upotrebljavaju za smanjenje veličine tumora, smanjenje rasta tumora ili smanjenje angiogeneze prilikom lečenja kancera debelog creva. U prioritetnim primerima primene, kancer označava kolorektalni adenokarcinom.

[0054] U pojedinim primerima primene, kancer označava kancer creva. U pojedinim primerima primene, kancer označava kancer dela tela koji nije crevo. U pojedinim primerima primene, kancer ne predstavlja kancer creva. U pojedinim primerima primene, kancer nije kolorektalni kancer. U pojedinim primerima primene, kancer nije kancer tankog creva. U pojedinim primerima primene, lečenje ili prevencija se odvijaju na mestu drugačijem od creva. U pojedinim primerima primene, lečenje ili prevencija se odvijaju u crevima i na mestu koje je drugačije od creva.

[0055] U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji karcinoma. Primeri pokazuju da kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti efikasne za lečenje brojnih tipova karcinoma. U određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u tretmanu ili prevenciji neimunogenog kancera. Primeri pokazuju da kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti efikasne za lečenje neimunogenih kancera.

[0056] Terapijski efekti kompozicija pronalaska na kancer mogu biti posredovani proinflamatornim mehanizmom. Primeri 2, 4 i 5 pokazuju da se ekspresija brojnih proinflamatornih citokina može povedati nakon primene MRX518. Inflamacija može dovesti do efekta supresije kancera [20], a proinflamatorni citokini poput TNFα su ispitivni kao terapije kancera *21+. Povedana ekspresija gena poput TNF-a, koja je prikazana u primerima, ukazuje da kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti korisne za lečenje kancera putem sličnog mehanizma. Povedana ekspresija CXCR3 liganda (CXCL9, CXCL10) i gena koje indukuje IFNγ (IL-32) može ukazati da kompozicije pronalaska dovode do odgovora IFNγ-tipa. IFNγ je snažan faktor aktivacije makrofaga koji može stimulisati tumorocidnu aktivnost [22], dok CXCL9 i CXCL10, na primer, takođe karkterišu antikancerski efekti *23-25]. Prema tome, u određenim primerima primene, kompozicije predmetnog pronalaska su za upotrebu u podsticanju inflamacije prilikom lečenja kancera. U prioritetnim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u podsticanju Th1 inflamacije prilikom lečenja kancera. Th1 delije proizvode IFNγ i ispoljavaju snažna antikancerska dejstva *20+. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenje kancera u ranom stadijumu poput kancera koji nije metastazirao ili je u stadijumu 0 ili 1. Promocija inflamacije može biti efikasnija kod kancera u ranom stadijumu *20+. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska se upotrebljavaju za podsticanje inflamacije da bi se pospešio efekat drugog agensa za lečenje kancera. U određenim primerima primene, lečenje ili prevencija kancera podrazumeva povedanje nivoa ekspresije jednog ili više citokina. Na primer, u pojedinim primerima primene, lečenje ili prevencija kancera podrazumeva povedanje nivoa ekspresije jednog ili više citokina od IL-1β, IL-6 i TNF-α, na primer, IL-Iβ i IL-6, IL-1β i TNF-α, IL-6 i TNF-α ili sva tri citokina: IL-1β, IL-6 i TNF-α. Za povedanje nivoa ekspresije bilo kog citokina od IL-1β, IL-6 i TNF-α je poznato da predstavlja parametar koji ukazuje na efikasnost lečenja kancera.

[0057] Primeri 4 i 5 pokazuju da je, kada se bakterijski soj koji je ovde opisan upotrebljava u kombinaciji sa lipopolisaharidom (LPS), prisutan sinergistički porast IL-1β. Poznato je da LPS ispoljava proinflamatorni efekat. Prema tome, u određenim primerima primene, lečenje ili prevencija podrazumevaju upotrebu bakterijskog soja koji je ovde opisan u kombinaciji sa agensom koji dovodi do povedanja ekspresije IL-1β. U određenim primerima primene, lečenje ili prevencija podrazumevaju upotrebu bakterijskog soja koji je ovde opisan u kombinaciji sa LPS-om. U skladu sa navedenim, kompozicija pronalaska može dodatno sadržavati agens koji dovodi do povedanja ekspresije IL-1β. Prema tome, kompozicija pronalaska može dodatno sadržavati LPS.

[0058] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju pacijenta koji je prethodno primio hemioterapiju. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju pacijenta koji nije dobro podneo hemioterapijsko lečenje. Kompozicije pronalaska mogu biti posebno pogodne za navedene pacijente.

[0059] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za prevenciju recidiva. Kompozicije pronalaska mogu biti pogodne za dugotrajnu primenu. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u prevenciji progresije kancera.

[0060] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju nesitnodelijskog karcinoma pluda. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju sitnodelijskog karcinoma pluda. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju karcinomom skvamoznih delija. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju adenokarcinoma. U izvesnim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju glandularnih tumora, karcinoidnih tumora ili nediferenciranih karcinoma.

[0061] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju hepatoblastoma, holangiokarcinoma, holangiocelularnih cistadenokarcinoma ili kancera jetre koji je nastao usled virusne infekcije.

[0062] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju invazivnog duktalnog karcinoma, duktalnog karcinoma in situ ili invazivnog lobularnog karcinoma.

[0063] U daljim primerima primene, kompozicije pronalaska su za upotrebu u lečenju ili prevenciji akutne limfoblasne leukemije (ALL), akutne mijeloidne leukemije, adrenokortikalnog karcinoma, karcinoma bazalnih delija, karcinoma žučnih kanala, kancera bešike, tumora kostiju, osteosarkoma/malignog fibroznog histiocitoma, glioma moždanog stabla, tumora mozga, cerebelarnog astrocitoma, cerebralnog astrocitoma/malignog glioma, ependimoma, meduloblastoma, supratentorijalnih primitivnih neuroektodermalnih tumora, kancera dojke, bronhijalnih adenoma/karcinoida, Burkitovog limfoma, karcinoidnog tumora, kancera grlida materice, hronične limfocitne leukemije, hronične mijelogene leukemije, hroničnih mijeloproliferativnih oboljenja, kancera debelog creva, kožnih T-delijskih limfoma, kancera endometrijuma, ependimoma, kancera ezofagusa, Juingovog sarkoma, intraokularnog melanoma, retinoblastoma, kancera žučne

1

kese, kancera želuca, gastrointestinalnog karcinoidnog tumora, gastrointestinalnog stromalnog tumora (GIST), tumora germinativnih delija, glioma, dečijeg kancera vizuelnog puta i hipotalamusa, Hočkinovog limfoma, melanoma, karcinoma delija pankreasnih ostrvaca, Kapoši sarkoma, karcinoma renalnih delija, laringealnog kancera, leukemija, limfoma, mezotelioma, neuroblastoma, ne-Hočkinovog limfoma, orofaringealnog kancera, osteosarkoma, kancera jajnika, kancera pankreasa, kancera paratiroidne žlezde, faringelanog kancera, adenoma hipofize, neoplazije plazma delija, kancera prostate, karcinoma bubrežnih delija, retinoblastoma, sarkoma, kancera testisa, kancera štitne žlezde ili kancera materice.

[0064] Kompozicije predmetnog pronalaska mogu biti posebno efikasne kada se koriste u kombinaciji sa drugim terapijskim agensima. Modulatorni efekti kompozicija pronalaska na imuni sistem mogu biti efikasni u kombinaciji sa direktnijim agensima za lečenje kancera. Stoga, u određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži bakterijski soj vrste Enterococcus gallinarum i agens za lečenje kancera. U prioritetnim primerima primene, agens za lečenje kancera označava inhibitor imunog kontrolnog punkta, antitelo ciljne imunoterapije, CAR-T delijske terapije, onkolitični virus ili citostatski lek. U prioritetnim primerima primene, kompozicija sadrži agens za lečenje kancera izabran iz grupe koju čine: Jervoj (ipilimumab, BMS); Kejtruda (pembrolizumab, Merck); Opdivo (nivolumab, BMS); MEDI4736 (AZ/MedImmune); MPDL3280A (Roche/Genentech); Tremelimumab (AZ/MedImmune); CT-011 (pidilizumab, CureTech); BMS-986015 (lirilumab, BMS); MEDI0680 (AZ/MedImmune); MSB-0010718C (Merck); PF-05082566 (Pfizer); MEDI6469 (AZ/MedImmune); BMS-986016 (BMS); BMS-663513 (urelumab, BMS); IMP321 (Prima Biomed); LAG525 (Novartis); ARGX-110 (arGEN-X); PF-05082466 (Pfizer); CDX-1127 (varlilumab; CellDex Therapeutics); TRX-518 (GITR Inc.); MK-4166 (Merck); JTX-2011 (Jounce Therapeutics); ARGX-115 (arGEN-X); NLG-9189 (indoksimod, NewLink Genetics); INCB024360 (Incyte); IPH2201 (Innate Immotherapeutics/AZ); NLG-919 (NewLink Genetics); anti-VISTA (JnJ); Epakadostat (INCB24360, Incyte); F001287 (Flexus/BMS); CP 870893 (Univerzitet Pensilvanije); MGA271 (Macrogenix); Emaktuzumab (Roche/Genentech); Galunisertib (Eli Lilly); Ulokuplumab (BMS); BKT140/BL8040 (Biokine Therapeutics); Bavituksimab (Peregrine Pharmaceuticals); CC 90002 (Celgene); 852A (Pfizer); VTX-2337 (VentiRx Pharmaceuticals); IMO-2055 (Hybridon, Idera Pharmaceuticals); LY2157299 (Eli Lilly); EW-7197 (Ewha ženski univerzitet, Koreja); Vemurafenib (Plexxikon); Dabrafenib (Genentech/GSK); BMS-777607 (BMS); BLZ945 (Memorial Sloan-Kettering centar za kancer); Unituksin (dinutuksimab, United Therapeutics Corporation); Blincito (blinatumomab, Amgen); Ciramza (ramucirumab, Eli Lilly); Gaziva (obinutuzumab, Roche/Biogen); Kadcila (ado-trastuzumab emtanzin, Roche/Genentech); Perjeta (pertuzumab, Roche/Genentech); Adcetris (brentuksimab vedotin, Takeda/Millennium); Arzera (ofatumumab, GSK); Vektibiks (panitumumab, Amgen); Avastin (bevacizumab, Roche/Genentech); Erbituks (cetuksimab, BMS/Merck); Beksar (tozitumomab-I131, GSK); Zevalin (ibritumomab tiuksetan, Biogen); Kampat (alemtuzumab, Bayer); Milotarg (gemtuzumab ozogamicin, Pfizer); Herceptin (trastuzumab, Roche/Genentech); Rituksan (rituksimab, Genentech/Biogen); volociksimab (Abbvie); Enavatuzumab (Abbvie); ABT-414 (Abbvie); Elotuzumab (Abbvie/BMS); ALX-0141 (Ablynx); Ozaralizumab (Ablynx); Aktimab-C (Actinium); Aktimab-P (Actinium); Milatuzumab-doks (Actinium); Emab-SN-38 (Actinium); Naptumonmab estafenatoks (Active Biotech); AFM13 (Affimed); AFM11 (Affimed); AGS-16C3F (Agensys); AGS16M8F (Agensys); AGS-22ME (Agensys); AGS-15ME (Agensys); GS-67E (Agensys); ALXN6000 (samalizumab, Alexion); ALT-836 (Altor Bioscience); ALT-801 (Altor Bioscience); ALT-803 (Altor Bioscience); AMG780 (Amgen); AMG 228 (Amgen); AMG820 (Amgen); AMG172 (Amgen); AMG595 (Amgen); AMG110 (Amgen); AMG232 (adekatumumab, Amgen); AMG211 (Amgen/MedImmune); BAY20-10112 (Amgen/Bayer); Rilotumumab (Amgen); Denozumab (Amgen); AMP-514 (Amgen); MEDI575 (AZ/MedImmune); MEDI3617 (AZ/MedImmune); MEDI6383 (AZ/MedImmune); MEDI551 (AZ/MedImmune); Moksetumomab pasudotoks (AZ/MedImmune); MEDI565 (AZ/MedImmune); MEDI0639 (AZ/MedImmune); MEDI0680 (AZ/MedImmune); MEDI562 (AZ/MedImmune); AV-380 (AVEO); AV203 (AVEO); AV299 (AVEO); BAY79-4620 (Bayer); Anetumab ravtanzin (Bayer); vantiktumab (Bayer); BAY94-9343 (Bayer); Sibrotuzumab (Boehringer Ingleheim); BI-836845 (Boehringer Ingleheim); β-701 (BioClin); BIIB015 (Biogen); Obinutuzumab (Biogen/Genentech); BI-505 (Bioinvent); BI-1206 (Bioinvent); TB-403 (Bioinvent); BT-062 (Biotest); BIL-010t (Biosceptre); MDX1203 (BMS); MDX-1204 (BMS); Necitumumab (BMS); CAN-4 (Cantargia AB); CDX-011 (Celldex); CDX1401 (Celldex); CDX301 (Celldex); U3-1565 (Daiichi Sankyo); patritumab (Daiichi Sankyo); tigatuzumab (Daiichi Sankyo); nimotuzumab (Daiichi Sankyo); DS-8895 (Daiichi Sankyo); DS-8873 (Daiichi Sankyo); DS-5573 (Daiichi Sankyo); MORab-004 (Eisai); MORab-009 (Eisai); MORab-003 (Eisai); MORab-066 (Eisai); LY3012207 (Eli Lilly); LY2875358 (Eli Lilly); LY2812176 (Eli Lilly); LY3012217(Eli Lilly); LY2495655 (Eli Lilly); LY3012212 (Eli Lilly); LY3012211 (Eli Lilly); LY3009806 (Eli Lilly); ciksutumumab (Eli Lilly); Flanvotumab (Eli Lilly); IMC-TR1 (Eli Lilly); Ramucirumab (Eli Lilly); Tabalumab (Eli Lilly); Zanolimumab (Emergent Biosolution); FG-3019 (FibroGen); FPA008 (Five Prime Therapeutics); FP-1039 (Five Prime Therapeutics); FPA144 (Five Prime Therapeutics); katumaksomab (Fresenius Biotech); IMAB362 (Ganymed); IMAB027 (Ganymed); HuMaks-CD74 (Genmab); HuMaks-TFADC (Genmab); GS-5745 (Gilead); GS-6624 (Gilead); OMP-21M18 (demcizumab, GSK); mapatumumab (GSK); IMGN289 (ImmunoGen); IMGN901 (ImmunoGen); IMGN853 (ImmunoGen); IMGN529 (ImmunoGen); IMMU-130 (Immunomedics); milatuzumab-doks (Immunomedics); IMMU-115 (Immunomedics); IMMU-132 (Immunomedics); IMMU-106 (Immunomedics); IMMU-102 (Immunomedics); Epratuzumab (Immunomedics); Klivatuzumab (Immunomedics); IPH41 (Innate Immunotherapeutics); Daratumumab (Janssen/Genmab); CNTO-95 (Intetumumab, Janssen); CNTO-328 (siltuksimab, Janssen); KB004 (KaloBios); mogamulizumab (Kyowa Hakko Kirrin); KW-2871 (ekromeksimab, Life Science); Sonepcizumab (Lpath); Margetuksimab (Macrogenics); Enoblituzumab (Macrogenics); MGD006 (Macrogenics); MGF007 (Macrogenics); MK-0646 (dalotuzumab, Merck); MK-3475 (Merck); Sym004 (Symphogen/Merck Serono); DI17E6 (Merck Serono); MOR208 (Morphosys); MOR202 (Morphosys); Xmab5574 (Morphosys); BPC-1C (enzituksimab, Precision Biologics); TAS266 (Novartis); LFA102 (Novartis); BHQ880 (Novartis/Morphosys); QGE031 (Novartis); HCD122 (lukatumumab, Novartis); LJM716 (Novartis); AT355 (Novartis); OMP-21M18 (Demcizumab, OncoMed); OMP52M51 (Oncomed/GSK); OMP-59R5 (Oncomed/GSK); vantiktumab (Oncomed/Bayer); CMC-544 (inotuzumab ozogamicin, Pfizer); PF-03446962 (Pfizer); PF-04856884 (Pfizer); PSMA-ADC (Progenics); REGN1400 (Regeneron); REGN910 (nesvakumab, Regeneron/Sanofi); REGN421 (enotikumab, Regeneron/Sanofi); RG7221, RG7356, RG7155, RG7444, RG7116, RG7458, RG7598, RG7599, RG7600, RG7636, RG7450, RG7593, RG7596, DCDS3410A, RG7414 (parsatuzumab), RG7160 (imgatuzumab), RG7159 (obintuzumab), RG7686, RG3638 (onartuzumab), RG7597 (Roche/Genentech); SAR307746 (Sanofi); SAR566658 (Sanofi); SAR650984 (Sanofi); SAR153192 (Sanofi); SAR3419 (Sanofi); SAR256212 (Sanofi), SGN-LIV1A (lintuzumab, Seattle Genetics); SGN-CD33A (Seattle Genetics); SGN-75 (vorsetuzumab mafodotin, Seattle Genetics); SGN-19A (Seattle Genetics) SGN-CD70A (Seattle Genetics); SEA-CD40 (Seattle Genetics); ibritumomab tiuksetan (Spectrum); MLN0264 (Takeda); ganitumab (Takeda/Amgen); CEP-37250 (Teva); TB-403 (Thrombogenic); VB4-845 (Viventia); Xmab2512 (Xencor); Xmab5574 (Xencor); nimotuzumab (YM Biosciences); Karlumab (Janssen); NY-ESO TCR (Adaptimmune); MAGE-A-10 TCR (Adaptimmune); CTL019 (Novartis); JCAR015 (Juno Therapeutics); KTE-C19 CAR (Kite Pharma); UCART19 (Cellectis);

1

BPX401 (Bellicum Pharmaceuticals); BPX-601 (Bellicum Pharmaceuticals); ATTCK20 (Unum Therapeutics); CAR-NKG2D (Celyad); Oniks-015 (Onyx Pharmaceuticals); H101 (Shanghai Sunwaybio); DNX-2401 (DNKtrix); VCN-01 (VCN Biosciences); Kolo-Adl (PsiOxus Therapeutics); ProstAtak (Advantagene); Onkos-102 (Oncos Therapeutics); CG0070 (Cold Genesys); Peksa-vak (JX-594, Jennerex Biotherapeutics); GL-ONC1 (Genelux); T-VEC (Amgen); G207 (Medigene); HF10 (Takara Bio); SEPREVIR (HSV1716, Virttu Biologics); OrienX010 (OrienGene Biotechnology); Reolisin (Oncolytics Biotech); SVV-001 (Neotropix); Kakatak (CVA21, Viralytics); Alimta (Eli Lilly), cisplatina, oksaliplatina, irinotekan, folna kisleina, metotreksat, ciklofosfamid, 5-fluorouracil, Zikadia (Novartis), Tafinlar (GSK), Ksalkori (Pfizer), Iresa (AZ), Gilotrif (Boehringer Ingelheim), Tarceva (Astellas Pharma), Halaven (Eisai Pharma), Veliparib (Abbvie), AZD9291 (AZ), Alektinib (Chugai), LDK378 (Novartis), Genetespib (Synta Pharma), Tergenpumatucel-L (NewLink Genetics), GV1001 (Kael-GemVax), Tivantinib (ArQule); Citoksan (BMS); Onkovin (Eli Lilly); Adriamicin (Pfizer); Gemzar (Eli Lilly); Kseloda (Roche); Iksempra (BMS); Abraksan (Celgene); Trelstar (Debiopharm); Taksotera (Sanofi); Neksavar (Bayer); IMMU-132 (Immunomedics); E7449 (Eisai); Termodoks (Celsion); Kometrik (Exellxis); Lonsurf (Taiho Pharmaceuticals); Kamptosar (Pfizer); UFT (Taiho Pharmaceuticals); i TS-1 (Taiho Pharmaceuticals).

[0065] U pojedinim primerima primene, jedan ili više bakterijskih sojeva Enterococcus gallinarum, predstavlja(ju) jedini terapijski aktivan agens(e) u sastavu kompozicije predmetnog pronalaska. U pojedinim primerima primene, bakterijski soj(evi) u kompoziciji je/su jedini terapijski aktivni agens(i) u kompoziciji pronalaska.

Načini primene

[0066] Prioritetno, kompozicije pronalaska se primenjuju u gastrointestinalni trakt da bi se omogudila isporuka i/ili parcijalna ili potpuna kolonizacija creva sa bakterijskim sojem pronalaska. U principu, kompozicije pronalaska se primenjuju oralno, ali se iste mogu primeniti i rektalno, intranazalno ili putem bukalne ili sublingvalne sluzokože.

[0067] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska se mogu primeniti u vidu pene, spreja ili gela.

[0068] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska se mogu primeniti u vidu supozitorije, kao što je rektalna supozitorija koja, na primer, sadrži penu ulja kakaovca (kakao maslaca), sintetske čvrste masti (npr. supocire, vitepsola), glicero-želatin, polietilen glikol ili sapunifikovan glicerin.

[0069] U određenim primerima primene, kompozicija pronalaska se primenjuje u gastrointestinalni trakt putem cevi (tubusa) kao što je nazogastrična cev, orogastrična cev, gastrična cev, jejunostomalna cev (J cev), perkutana endoskopska gastrostomna cev (PEG) ili kroz otvor poput otvora u grudnom zidu koji obezbeđuje pristup želucu, jejunumu, kao i kroz druge otvore koji olakšavaju pristup.

[0070] Kompozicije predmetnog pronalaska se mogu primeniti jednokratno ili se mogu primeniti sekvencijalno kao deo režima lečenja. U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska je potrebno primenjivati svakodnevno.

1

[0071] U određenim primerima primene pronalaska, lečenje u skladu sa pronalaskom je pradeno procenom crevne mikrobiote pacijenta. Tretman se može ponoviti ukoliko isporuka i/ili parcijalna ili potpuna kolonizacija sa sojem pronalaska nije postignuta na efikasan način ili se tretman može prekinuti ukoliko je isporuka i/ili delimična ili potpuna kolonizacija uspešna i uočena je efikasnost.

[0072] U određenim primerima primene, kompozicija pronalaska se može primeniti kod životinja tokom trudnode, na primer, kod sisara poput čoveka, da bi se smanjila verovatnoda razvoja kancera kod potomka in utero i/ili nakon rođenja.

[0073] Kompozicije predmetnog pronalaska se mogu primeniti pacijentu kome je dijagnostifikovan kancer ili za koga je utvrđeno da je pod rizikom za razvoj kancera. Kompozicije se takođe mogu primeniti kao profilaktička mera za prevenciju razvoja kancera kod zdravog pacijenta.

[0074] Kompozicije pronalaska se mogu primeniti pacijentu kod koga je utvrđeno da je prisutna abnormalna mikrobiota creva. Na primer, kod pacijenta može biti prisutna smanjena ili u potpunosti odsutna kolonizacija sa Enterococcus gallinarum.

[0075] Kompozicije pronalaska se mogu primeniti u vidu prehrambenog proizvoda, kao što je nutritivni dodatak.

[0076] U principu, kompozicije pronalaska su namenjene za lečenje ljudi, iako se mogu upotrebiti i za lečenje životinja uključujudi monogastrične sisare poput živine, svinja, mačaka, pasa, konja ili zečeva. Kompozicije pronalaska mogu biti korisne za poboljšanje rasta i performanse životinja. Ukoliko se kompozicije primenjuju životinjama, može se upotrebiti oralna gavaža.

Kompozicije

[0077] U principu, kompozicija pronalaska sadrži bakterije. U prioritetnim primerima primene pronalaska, kompozicija je formulisana kao liofilizovan oblik. Na primer, kompozicija pronalaska može sadržavati granule ili želatinske kapsule, na primer tvrde želatinske kapsule koje sadrže bakterijski soj predmetnog pronalaska.

[0078] Prioritetno, kompozicija pronalaska sadrži liofilizovane bakterije. Liofilizacija bakterija je dobro uspostavljena procedura, a relevantna uputstva su dostupna, na primer, u referencama [26-28].

[0079] Alternativno, kompozicija pronalaska može sadržavati žive, aktivne bakterijske kulture.

[0080] U pojedinim primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio inaktiviran, na primer, nije bio inaktiviran toplotom. U pojedinim primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio ubijen, na primer, nije bio ubijen toplotom. U pojedinim primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio oslabljen, na primer, nije bio oslabljen toplotom. Na primer, u pojedinim primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska nije bio ubijen, inaktiviran i/ili oslabljen. Na primer, u pojedinim primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska predstavlja živi soj. Na primer, u pojedinim primerima primene, bakterijski soj kompozicije pronalaska je vijabilan. Na primer, u pojedinim primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska je sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva. Na primer, u pojedinim

1

primerima primene, bakterijski soj u kompoziciji pronalaska je vijabilan i sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje crevo.

[0081] U pojedinim primerima primene, kompozicija sadrži smešu živih bakterijskih sojeva i bakterijskih sojeva koji nisu živi.

[0082] U prioritetnim primerima primene, kompozicija pronalaska je inkapsulirana da bi se omogudila isporuka bakterijskog soja u crevo. Inkapsulacija štiti kompoziciju od degradacije do isporuke na ciljnoj lokaciji, a degradacija može biti, na primer, tipe rupture hemijskim ili fizičkim stimulusima poput pritiska, enzimske aktivnosti ili fizičke dezintegracije, što može biti izazvano promenama u pH. Može se upotrebiti bilo koji odgovarajudi postupak inkapsulacije. Tehnike inkapsulacije za primer uključuju zadržavanje bakterija unutar poroznog matriksa, njihovo vezivanje ili apsorpciju za površine čvrstog nosača, agregaciju bakterija flokulacijom ili upotrebom agenasa za unakrsno povezivanje, kao i mehaničko zadržavanje bakterija iza mikroporozne membrane ili mikrokapsule. Uputstva za inkapsulaciju koja može biti od koristi u pripremi kompozicija pronalaska su dostupna, na primer, u referencama [29] i [30].

[0083] Kompozicija se može primeniti oralno i može biti u vidu tablete, kapsule ili praha. Prioritentni su inkapsulirani proizvodi obzirom da su Enterococcus gallinarum anaerobne bakterije. Drugi sastojci (na primer, vitamin C) mogu biti uključeni u kompoziciju kao sastojci koji prikupljaju višak kiseonika, dok se prebiotički supstrati upotrebljavaju za poboljšanje isporuke i/ili delimične ili potpune kolonizacije i preživljavanja in vivo. Alternativno, probiotička kompozicija predmetnog pronalaska se može primeniti oralno u vidu hrane ili prehrambenog proizvoda kao što je fermentisan proizvod na bazi mleka ili surutke, ili pak u vidu farmaceutskog proizvoda.

[0084] Kompozicija može biti formulisana kao probiotik.

[0085] Kompozicija pronalaska sadrži terapijski efikasnu količinu bakterijskog soja predmetnog pronalaska. Terapijski efikasna količina bakterijskog soja je dovoljna da ispolji pozitivno dejstvo kod pacijenta. Terapijski efikasna količina bakterijskog soja može biti dovoljna da dovede do isporuke i/ili delimične ili potpune kolonizacije creva pacijenta.

[0086] Odgovarajuda dnevna doza bakterija, na primer, za odraslog čoveka, može biti od približno 1 x 10<3>do približno 1 x 10<11>jedinica formiranja kolonija (CFU od engl. colony forming units); na primer, od približno 1 x 10<7>do približno 1 x 10<10>CFU; u drugom primeru, doza iznosi od približno 1 x 10<6>do približno 1 x 10<10>CFU.

[0087] U određenim primerima primene, kompozicija sadrži bakterijski soj u količini od približno 1 x 10<6>do približno 1 x 10<11>CFU/g u odnosu na težinu kompozicije; na primer, sadrži od približno 1 x 10<8>do približno 1 x 10<10>CFU/g. Doza može biti, na primer, 1 g, 3 g, 5 g i 10 g.

[0088] Uobičajeno je da se probiotik, poput kompozicije pronalaska, opciono kombinuje sa najmanje jednim pogodnim prebiotskim jedinjenjem. Prebiotsko jedinjenje obično predstavlja ugljeni hidrat koji se ne može svariti, kao što je oligo- ili polisaharid, ili pak šederni alkohol, a koji se ne razlaže ili apsorbuje u gornjem digestivnom traktu. Poznati prebiotici uključuju komercijalne proizvode poput inulina i transgalakto-oligosaharida.

1

[0089] U određenim primerima primene, probiotska kompozicija predmetnog pronalaska sadrži prebiotsko jedinjenje u količini od približno 1 do približno 30 težinskih % u odnosu na ukupnu masu kompozicije (npr. od 5 do 20 težinskih %). Ugljeni hidrati mogu biti izabrani iz grupe koju čine: fruktooligosaharidi (ili FOS), frukto-oligosaharidi kratkog lanca, inulin, izomalt-oligosaharidi, pektini, ksilooligosaharidi (ili XOS), hitozan-oligosaharidi (ili COS), beta-glukani, modifikovani i otporni skrobovi gume arabike, polidekstroza, D-tagatoza, vlakna akacije, rogača, ovsa i citrusa. Prema jednom aspektu, prebiotici označavaju frukto-oligosaharide kratkog lanca (zarad jednostavnosti u nastavku tekta označene kao FOSs-c.c); navedeni FOSs-c.c. ne predstavljaju ugljene hidrate koji se mogu svariti, a uglavnom se dobijaju prevođenjem iz šedera šederne repe i predstavljaju molekule saharoze za koje su vezna tri molekula glukoze.

[0090] Kompozicije pronalaska mogu sadržavati farmaceutski prihvatljive ekscipijense ili nosače. Primeri navedenih pogodnih ekscipijenasa se mogu nadi u referenci *31+. Prihvatljivi nosači ili razblaživači za terapijsku upotrebu su dobro poznati u farmaceutskoj praksi i opisani su, na primer, u referenci *32+. Primeri pogodnih nosača uključuju laktozu, skrob, glukozu, metil celulozu, magnezijum stearat, manitol, sorbitol i slične. Primeri pogodnih diluenata uključuju etanol, glicerol i vodu. Izbor odgovarajudeg farmaceutskog nosača, ekscipijensa ili diluenta de zavisiti od načina primene koji se planira, kao i od standarda farmaceutske prakse. Farmaceutske kompozicije mogu sadržavati kao nosač, ekscipijens ili diluent ili kao njihov dodatak, bilo koji pogodni agans (pogodne agense) za vezivanje, lubrikaciju, resuspendovanje, prevlačenje ili solubilizaciju. Primeri pogodnih agenasa za vezivanje uključuju skrob, želatin, prirodne šedere kao što su glukoza, bezvodna laktoza, laktoza slobodnog protoka („free-flow latose‟), beta-laktoza, zaslađivači iz kukuruza, prirodne i sintetičke gume kao što su guma akacije, tragakant ili natrijum alginat, kao i karboksimetil celulozu i polietilen glikol. Primeri pogodnih lubrikanata uključuju natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat, natrijum hlorid i slične. U farmaceutskoj kompoziciji mogu biti obezbeđeni i konzervansi, stabilizatori, agensi za boju, pa čak i agensi za ukus. Primeri konzervanasa su natrijum benzoat, sorbinska kiselina i estri p-hidroksibenzoeve kiseline. Mogu se upotrebiti i antioksidansi i sredstva za resuspendovanje.

[0091] Kompozicije pronalaska mogu biti formulisane kao prehrambeni proizvod. Na primer, prehrambeni proizvod može obezbediti nutritivnu korist pored terapijskog efekta pronalaska, a kao što to obezbeđuje nutritivni suplement. Slično tome, prehrambeni proizvod se može formulisati tako da se poboljša ukus kompozicije pronalaska ili tako da kompozicija bude privlačnija za konzumiranje time što je sličnija uobičajenom prehrambenom proizvodu nego farmaceutskoj kompoziciji. U određenim primerima primene, kompozicija pronalaska se formuliše kao proizvod u čijoj je osnovi mleko. Termin "proizvod na bazi mleka" označava bilo koji tečni ili polučvrsti proizvod na bazi mleka ili surutke koga karakteriše različit sadržaj masti. Proizvod na bazi mleka može biti npr. kravlje mleko, kozje mleko, ovčije mleko, nemasno mleko, punomasno mleko, mleko rekombinovano od mleka u prahu i surutke bez ikakve prerade, ili pak proizvod može biti u vidu prerađenog proizvoda poput jogurta, zgrušanog mleka, vurde, kiselog mleka, punomasnog kiselog mleka, obranog mleka ili drugih proizvoda od mleka. Druga važna grupa podrazumeva mlečne napitke kao što su pida na bazi surutke, fermentisana mleka, kondenzovana mleka, mlečni proizvodi za odojčad ili bebe; aromatizovana mleka, sladoled; kao i hranu koja sadrži mleko poput slatkiša.

[0092] U određenim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže jedan bakterijski soj ili vrstu i ne sadrže bilo koje druge bakterijske sojeve ili vrste. Navedene kompozicije mogu sadržavati samo de

1

minimis ili biološki irelevantne količine drugih bakterijskih sojeva ili vrsta. Navedene kompozicije mogu predstavljati kulturu delija koja je suštinski oslobođena drugih vrsta organizma. Stoga, u pojedinim primerima primene, pronalazak obezbeđuje kompoziciju koja sadrži jedan ili više sojeva vrste Enterococcus gallinarum i ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste, ili pak kompoziciju koja sadrži samo de minimis ili biološki irelevantnu količinu bakterija druge vrste za upotrebu u terapiji.

[0093] U pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže više od jednog bakterijskog soja ili vrste. Na primer, u pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže više od jednog soja unutar iste vrste (npr. više od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ili 45 sojeva) i, opciono, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. U pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže manje od 50 sojeva unutar iste vrste (npr. manje od 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 9, 8, 7, 6, 5, 4 ili 3 soja) i, opciono, ne sadrže bakterije bilo koje druge vrste. U pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže 1-40, 1-30, 1-20, 1-19, 1-18, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2-30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6-30, 6-15, 16-25 ili 31-50 sojeva unutar iste vrste i, opciono, ne sadrže bakterije iz bilo koje druge vrste. U pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže više od jedne vrste unutar istog roda (npr. više od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 17, 20 , 23, 25, 30, 35 ili 40 vrsta) i, opciono, ne sadrže bakterije iz bilo kog drugog roda. U pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže manje od 50 vrsta unutar istog roda (npr. manje od 50, 45, 40, 35, 30, 25, 20, 15, 12, 10, 8, 7, 6, 5, 4 ili 3 vrsta) i, opciono, ne sadrže bakterije iz bilo kog drugog roda. U pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska sadrže 1-50, 1-40, 1-30, 1-20, 1-15, 1-10, 1-9, 1-8, 1-7, 1-6, 1-5, 1-4, 1-3, 1-2, 2-50, 2-40, 2-30, 2-20, 2-15, 2-10, 2-5, 6-30, 6-15, 16-25 ili 31-50 vrsta unutar istog roda i, opciono, ne sadrže bakterije iz bilo kog drugog roda. Pronalazak obuhvata bilo koju kombinaciju prethodno navedenog.

[0094] U pojedinim primerima primene, kompozicija sadrži konzorcijum mikroba. Na primer, u pojedinim primerima primene, kompozicija sadrži Enterococcus gallinarum kao deo mikrobijalnog konzorcijuma. Na primer, u pojedinim primerima primene, bakterijski soj je prisutan u kombinaciji sa jednim ili sa više (npr. najmanje 2, 3, 4, 5, 10, 15 ili 20) drugih bakterijskih sojeva iz drugih rodova sa kojima može živeti u simbiozi u crevima in vivo. Na primer, u pojedinim primerima primene, kompozicija sadrži Enterococcus gallinarum u kombinaciji sa bakterijskim sojem iz različitog roda. U pojedinim primerima primene, mikrobijalni konzorcijum sadrži dva ili više bakterijska soja dobijena iz uzorka fecesa jednog organizma, npr. čoveka. U pojedinim primerima primene, mikrobijalni konzorcijum se ne može nadi kao takav u prirodi. Na primer, u pojedinim primerima primene, mikrobijalni konzorcijum sadrži bakterijske sojeve koji su dobijeni iz uzoraka fecesa najmanje dva različita organizma. U pojedinim primerima primene, dva različita organizma su iz iste vrste, npr. označavaju dva različita čoveka, odnosno dva različita odojčeta. U pojedinim primerima primene, dva različita organizma označavaju odojče i odraslog čoveka. U pojedinim primerima primene, dva različita organizma označavaju čoveka i sisara koji nije čovek.

[0095] U pojedinim primerima primene, kompozicija pronalaska dodatno sadrži bakterijski soj koji karakterišu ista bezbedonosna i terapijska efikasnost kao soj MRX518, ali koji ne predstavlja soj MRX518 deponovan kao NCIMB 42488 ili koji nije Enterococcus gallinarum.

[0096] U pojedinim primerima primene u kojima kompozicija pronalaska sadrži više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda, pojedinačni bakterijski sojevi, vrste ili rodovi se mogu primenjivati odvojeno, istovremeno ili sekvencijalno. Na primer, kompozicija može istovremeno sadržavati više od

2

jednog bakterijskog soja, vrste ili roda, ili se bakterijski sojevi, vrste ili rodovi mogu odvojeno skladištiti i primenjivati odvojeno, istovremeno ili jedan za drugim. U pojedinim primerima primene, više od jednog bakterijskog soja, vrste ili roda se skladišti odvojeno, ali se isti mešaju zajedno pre upotrebe.

[0097] U pojedinim primerima primene, bakterijski soj za upotrebu u pronalasku se dobija iz fecesa odojčeta. U pojedinim primerima primene u kojima kompozicija pronalaska sadrži više od jednog bakterijskog soja, svi bakterijski sojevi se dobijaju iz fecesa odojčeta ili, ukoliko su prisutni drugi bakterijski sojevi, isti su prisutni samo u de minimis količinama. Bakterije mogu biti kultivisane nakon izdvajanja iz fecesa odojčeta, a potom upotrebljene u kompoziciji pronalaska.

[0098] Kao što je prethodno navedeno, u pojedinim primerima primene, jedan ili više bakterijskih sojeva Enterococcus gallinarum, predstavlja(ju) jedini terapijski aktivan agens(e) u kompoziciji pronalaska. U pojedinim primerima primene, bakterijski soj(evi) kompozicije predstavlja(ju) jedini terapijski aktivni agens(e) u kompoziciji pronalaska.

[0099] Kompozicije za upotrebu u skladu sa pronalaskom mogu, ali i ne moraju zahtevati odobrenje licence.

[0100] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju u kojoj je navedeni bakterijski soj liofilizovan. U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju u kojoj je navedeni bakterijski soj liofiliziovan ili osušen raspršivanjem u spreju i predstavlja kulturu živih delija. U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju u kojoj je bakterijski soj liofilizovan ili osušen raspršivanjem u spreju i gde soj predstavlja kulturu vijabilnih delija. U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju u kojoj je bakterijski soj liofilizovan ili osušen raspršivanjem u spreju, pri čemu je soj sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje crevo. U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju u kojoj je bakterijski soj liofiliziran ili osušen raspršivanjem u spreju i predstavlja kulturu vijabilnih delija sposobanih da delimično ili u potpunosti kolonizuju crevo.

[0101] U pojedinim slučajevima, liofilizovan ili raspršivanjem osušen bakterijski soj se rekonstituiše pre primene. U pojedinim slučajevima, rekonstitucija se vrši upotrebom diluenta koji je ovde opisan.

[0102] Kompozicije pronalaska mogu sadržavati farmaceutski prihvatljive ekscipijense, diluente ili nosače.

[0103] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj koji se upotrebljava u pronalasku; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde poremedaj označava kancer dojke. U prioritetnim primerima primene, kancer označava mamilani karcinom. U prioritetnim primerima primene, kancer označava kancer dojke IV stadijuma.

[0104] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj koji se upotrebljava u pronalasku; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde poremedaj označava kancer pluda. U prioritetnim primerima primene, kancer označava karcinom pluda.

[0105] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj koji se upotrebljava u pronalasku; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde poremedaj označava kancer jetre. U prioritetnim primerima primene, kancer označava hepatom (hepatocelularni karcinom).

[0106] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde poremedaj označava kancer debelog creva. U prioritetnim primerima primene, kancer označava kolorektalni adenokarcinom.

[0107] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj predmetnog pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde poremedaj označava karcinom.

[0108] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj predmetnog pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde poremedaj označava neimunogeni kancer.

[0109] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj predmetnog pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde je poremedaj izabran iz grupe koju čine nesitnodelijski karcinom pluda, sitnodelijski karcinom pluda, karcinom skvamoznih delija, adenokarcinom, glandularni tumori, karcinoidni tumori nediferencirani karcinomi.

[0110] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj predmetnog pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde je poremedaj izabran iz grupe koju čine hepatoblastom, holangiokarcinom, holangiocelularni cistadenokarcinom ili kancer jetre koji je nastao usled virusne infekcije.

[0111] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj predmetnog pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde je poremedaj izabran iz grupe koju čine invazivni duktalni karcinom, duktalni karcinom in situ ili invazivni lobularni karcinom.

[0112] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži: bakterijski soj predmetnog pronalaska; i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens, nosač ili diluent; pri čemu je bakterijski soj prisutan u količini koja je dovoljna za lečenje poremedaja kada se primenjuje subjektu kojem je lečenje potrebno; i gde je poremedaj izabran iz grupe koju čine akutna limfoblasna leukemija (ALL), akutna mijeloidna leukemija, adrenokortikalni karcinom, karcinom bazalnih delija, karcinom žučnih kanala, kancer bešike, tumor kostiju, osteosarkom/maligni fibrozni histiocitom, gliom moždanog stabla, tumor mozga, cerebelarni astrocitom, cerebralni astrocitom/maligni gliom, ependimom, meduloblastom, supratentorijalni primitivni neuroektodermalni tumori, kancer dojke, bronhijalni adenomi/karcinoidi, Burkitov limfom, karcinoidni tumor, kancer grlida materice, hronična limfocitna leukemija, hronična mijelogena leukemija, hronični mijeloproliferativni poremedaji, kancer debelog creva, kožni T-delijski limfom, kancer endometrijuma, ependimom, kancer jednjaka, Juvingov sarkom, intraokularni melanom, retinoblastom, kancer žučne kese, kancer želuca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST), tumor germinativnih delija, dečiji gliom vizualnih puteva i hipotalamusa, Hočkinov limfom, melanom, kancer delija ostrvaca pankrasa, Karpoši sarkom, kancer bubrežnih delija, kancer laringsa, leukemije, limfomi, mezoteliom, neuroblastom, ne-Hočkinov limfom, orofaringealni kancer, osteosarkom, kancer jajnika, kancer pankreasa, kancer paratiroidne žlezde, kancer faringsa, adenom hipofize, neoplazija plazma delija, kancer prostate, karcinom bubrežnih delija, retinoblastom, sarkom, kancer testisa, kancer štitne žležde ili kancer materice.

[0113] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju u kojoj je količina bakterijskog soja od približno 1 x 10<3>do približno 1 × 10<11>jedinice formiranja kolonija po gramu, a u odnosu na težinu kompozicije.

[0114] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje u dozi od 1 g, 3 g, 5 g ili 10 g.

[0115] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija primenjuje postupkom izabranim iz grupe koju čine oralna, rektalna, subkutana, nazalna, bukalna i sublingvalna primena.

[0116] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži nosač izabran iz grupe koju čine laktoza, skrob, glukoza, metil celuloza, magnezijum stearat, manitol i sorbitol.

[0117] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži razblaživač izabran iz grupe koju čine etanol, glicerol i voda.

[0118] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži ekscipijens izabran iz grupe koju čine skrob, želatin, glukoza, bezvodna laktoza, laktoza slobodnog protoka, beta-laktoza, zaslađivač iz kukuruza, guma akacije, tragakant, natrijum alginat, karboksimetil celuloza, polietilen glikol, natrijum oleat, natrijum stearat, magnezijum stearat, natrijum benzoat, natrijum acetat i natrijum hlorid.

[0119] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju koja dalje sadrži najmanje jedan od sastojaka iz grupe koju čine konzervans, antioksidans i stabilizator.

2

[0120] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži konzervans izabran iz grupe koju čine natrijum benzoat, sorbinska kiselina i estri p-hidroksibenzoeve kiseline.

[0121] U određenim primerima primene, pronalazak obezbeđuje prethodno navedenu farmaceutsku kompoziciju, pri čemu se kompozicija skladišti u zaptivenoj posudi na približno 4 °C ili približno 25 °C i u atmosferi sa relativnom vlažnošdu od 50%, čime najmanje 80% bakterijskog soja, izmereno u jedinicama formiranja kolonija, ostaje u posudi nakon perioda od najmanje: 1 mesec, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine.

[0122] U pojedinim primerima primene, kompozicija pronalaska je obezbeđena u zaptivenoj posudi koja sadrži kompoziciju, kao što je ovde opisano. U pojedinim primerima primene zatvorena posuda podrazumeva vredicu ili bočicu. U pojedinim primerima primene, kompozicija pronalaska je obezbeđena u špricu koji sadrži kompoziciju, kao što je ovde opisano.

[0123] Kompozicija predmetnog pronalaska može, u pojedinim primerima primene, biti obezbeđena kao farmaceutska formulacija. Na primer, kompozicija može biti obezbeđena kao tableta ili kapsula. U pojedinim primerima primene, kapsula označava želatinsku kapsulu („gel-kapsulu‟).

[0124] U pojedinim primerima primene, kompozicije pronalaska se primenjuju oralno. Oralna primena može podrazumevati gutanje kao način da jedinjenje uđe u gastrointestinalni trakt i/ili podrazumeva bukalnu, lingvalnu ili sublingvalnu primenu kojom jedinjenje ulazi u krvotok direktno iz usta.

[0125] Farmaceutske formulacije koje su pogodne za oralnu primenu obuhvataju čvrste oblike, čvrste mikropartikulate, polučvrste i tečne formulacije (uključujudi višefazne ili dispergovane sisteme) poput tableta; mekih ili tvrdih kapsula koje sadrže multiple- ili nano-čestice, tečnosti (npr. vodeni rastvori), emulzija ili prahova; pastila (uključujudi i patile ispunjenje tečnošdu); tableta za žvakanje; gelova; brzodispergujudih doznih oblika; filmova; ovula; sprejeva; i bukalnih/mukoadhezivnih premaza.

[0126] U pojedinim primerima primene, farmaceutska formulacija predstavlja enteričku formulaciju, tj. formulaciju koja je otporna na razlaganje u gastrointestinalnom traktu (npr. otpornu na pH želudačnog soka), što je dalje pogodno za isporuku kompozicije pronalaska u crevo nakon oralne primene. Enteričke formulacije mogu biti naročito korisne kada su bakterije ili druge komponente kompozicije osetljive na kiselinu, odnosno kada su podložne degradaciji u uslovima koji su prisutni u želucu.

[0127] U pojedinim primerima primene, enterička formulacija sadrži enterički omotač. U pojedinim primerima primene, formulacija podrazumeva dozni oblik sa enteričkim omotačem. Na primer, formulacija može biti tableta ili kapsula sa enteričkim omotačem ili slično. Enterički omotač može biti konvencionalan enterički omotač, na primer, konvencionalan premaz za tablete, kapsule ili slično, za oralnu isporuku. Formulacija može da sadržavati sloj filma, na primer, tanki sloj enteričkog polimera, npr. polimera koji se ne rastvara u kiselini.

[0128] U pojedinim primerima primene, enterička formulacija je suštinski otporna na enteričko dejstvo, na primer, otporna je na dejstvo uslova u želucu i nije potreban enterički premaz. Prema tome, u pojedinim primerima primene, formulacija označava enteričku formulaciju koja ne sadrži enterički omotač. U pojedinim primerima primene, formulacija označava kapsulu pripremljenu od termogelirajudeg materijala. U pojedinim primerima primene, materijal za termogeliranje podrazumeva celulozni materijal poput metilceluloze, hidroksimetilceluloze ili hidroksipropilmetilceluloze (HPMC). U pojedinim primerima primene, kapsula sadrži omotač koji ne sadrži bilo kakav polimer koji obrazuje film. U pojedinim primerima primene, kapsula sadrži omotač, a omotač sadrži hidroksipropilmetilcelulozu i ne sadrži bilo koji polimer koji obrazuje film (npr. pogledati [33]). U pojedinim primerima primene, formulacija suštinski predstavlja enteričku kapsulu (na primer, Vcaps® firme Capsugel).

[0129] U pojedinim primerima primene, formulacija je meka kapsula. Meke kapsule su kapsule koje mogu, zahvaljujudi dodatku omekšivača, kao što su, na primer, glicerol, sorbitol, maltitol i polietilen glikoli koji su prisutni u omotaču kapsule, imati određenu elastičnost i mekodu. Meke kapsule se mogu proizvoditi, na primer, na bazi želatina ili skroba. Meke kapsule na bazi želatina su komercijalno dostupne od različitih dobavljača. U zavisnosti od načina primene, kao što su, na primer, oralna ili rektalna primena, meke kapsule mogu imati različite oblike, mogu biti, na primer, okrugle, ovalne, duguljaste ili u obliku torpeda. Meke kapsule se mogu proizvoditi konvencionalnim procesima, kao što su, na primer, Šererov proces, Accogel proces ili procesima zasnovanim na principu kapljice ili uduvavanja.

Postupci kultivacije ćelija

[0130] Bakterijski sojevi za upotrebu u predmetnom pronalasku se mogu gajiti u kulturi delija upotrebom standardnih mikrobioloških tehnika koje su detaljno opisane, na primer, u referencama [34-36].

[0131] Čvrst ili tečan medijum koji se koristi za kulturu delija može biti YCFA agar ili YCFA medijum. YCFA medijum može sadržavati (na 100 ml, približne vrednosti): Kaziton (1,0 g), ekstrakt kvasca (0,25 g), NaHCO3(0,4 g), cistein (0,1 g), K2HPO4(0,045 g), KH2PO4(0,045 g), NaCI (0,09 g), (NH4)2SO4(0,09 g), MgSO4·7H2O (0,009 g), CaCI2(0,009 g), rezazurin (0,1 mg), hemin (1 mg), biotin (1 μg), kobalamin (1 μg), p-aminobenzoevu kiselinu (3 μg), folnu kiselinu (5 μg) i piridoksamin (15 μg).

Bakterijski sojevi za upotrebu u kompozicijama tipa vakcina

[0132] Pronalazači su identifikovali da su bakterijski sojevi pronalaska korisni za lečenje ili prevenciju kancera. Navedeno je verovatno rezultat efekta koji bakterijski sojevi pronalaska ispoljavaju na imuni sistem domadina. Prema tome, kompozicije predmetnog pronalaska takođe mogu biti korisne za prevenciju kancera kada se primenjuju kao kompozicije tipa vakcina. U određenim navedenim primerima primene, bakterijski sojevi pronalaska su vijabilni. U određenim navedenim primerima primene, bakterijski sojevi pronalaska su sposobni da delimično ili u potpunosti kolonizuju crevno. U određenim navedenim primerima primene, bakterijski sojevi pronalaska su vijabilni i sposobni da delimično ili potpuno kolonizuju crevo. U drugim određenim navedenim primerima primene, bakterijski sojevi pronalaska mogu biti ubijeni, inaktivirani ili oslabljeni. U određenim navedenim primerima primene, kompozicije mogu sadržavati adjuvans za vakcine. U određenim primerima primene, namena kompozicija je za primenu putem injekcije kao što je subkutana injekcija.

2

Opšte napomene

[0133] Praksa predmetnog pronalaska de podrazumevati upotrebu, ukoliko nije drugačije naznačeno, konvencionalnih postupaka hemije, biohemije, molekularne biologije, imunologije i farmakologije, a u okviru postupaka poznatih u stanju tehnike. Navedene tehnike su u potpunosti objašnjene u literaturi. Pogledati, npr. reference [37] i [38-44], itd.

[0134] Termin "koji sadrži" podrazumeva "uključuje", kao i "sastoji se"; npr. kompozicija "koja sadrži" X se može sastojati isključivo od X ili može sadržavati nešto dodatno, npr. X Y.

[0135] Izraz "približno" u odnosu na numeričku vrednost x je opcion i označava, na primer, x±10%.

[0136] Reč "suštinski" ne isključuje "potpuno", npr. kompozicija koja je "suštinski oslobođena" od Y može biti u potpunosti oslobođena od Y. Kada je to potrebno, reč "suštinski" može biti izostavljena iz definicije pronalaska.

[0137] Navođenje procenta identičnosti sekvenci između dve nukleotidne sekvence označava koji je procenat nukleotida isti prilikom poređenja dve sekvence, a kada su one poravnate. Navedeno poravnanje i procenat homologije ili identičnosti sekvenci se može odrediti upotrebom kompjuterskih programa poznatih u stanju tehnike, na primer, kompjuterskih programa opisanih u poglavlju 7.7.18 reference [45]. Prioritetno, poravnanje se određuje u skladu sa Smith-Waterman-ovim algoritmom za pretraživanje homologije, upotrebom pretraživanja sa afinskom prazninom, uz vrednost otvorenog okvira čitanja praznine od 12 i sa ekstenzijom okvira čitanja praznine od 2, BLOSUM matrica od 62. Smith-Waterman-ov algoritam za pretraživanje homologije je opisan u referenci [46].

[0138] Ukoliko nije izričito navedeno, proces ili postupak koji sadrži brojne korake, može sadržavati i dodatne korake na početku ili na kraju postupka, ili pak može sadržavati dodatne korake intervenisanja. Takođe, koraci se mogu kombinovati, izostaviti ili izvesti po alternativnom redosledu, ukoliko je to odgovarajude.

[0139] Ovde su opisane razne varijante primera primene pronalaska. Važno je napomenuti da se karakteristike koje su specifično navedene u svakom primeru primene mogu kombinovati sa drugim specifičnim karakteristikama, a da bi se obezbedili dalji primeri primene. Preciznije, primeri primene koja su ovde naznačeni kao odgovarajudi, uobičajeni ili prioritetni se mogu kombinovati jedan sa drugim (osim kada se međusobno isključuju).

NAČINI IZVOĐENjA PRONALASKA

Primer 1 - Efikasnost bakterijskih inokuluma u mišijim modelima kancera

Rezime

[0140] Studija je ispitivala efikasnost kompozicija koji sadrže bakterijske sojeve predmetnog pronalaska u četiri modela tumora.

2

Materijali

[0141] Ispitivana supstanca - Bakterijski soj #MRX518.

[0142] Referentna supstanca – Anti-CTLA-4 antitelo (klon: 9H10, kataloški broj: BE0131, izotip: IgG1 sirijskog hrčka, Bioxcell).

[0143] Nosači ispitivane i referentne supstance - Medijum za bakterijsku kulturu (ekstrakt kvasca, Kaziton, medijum sa masnom kiselinom (YCFA)). Svakog dana, prilikom injeciranja miševima, antitelo je razblaživano sa PBS puferom (ref: BE14-516F, Lonza, Francuska).

[0144] Doze tretmana - Bakterija: 2x10<8>u 200 μL. α-CTLA-4 je injeciran u koncentraciji od 10 mg/kg/inj. Anti-CTLA-4 je primenjen u zapremini doze od 10 mL/kg/primeni (odnosno, za jednog miša telesne težine 20 g primenide se 200 μL ispitivane supstance), u skladu sa najkasnije izmerenom telesnom težinom miševa.

[0145] Način primene - Bakterijski inokulum je primenjen oralnim gavažom (per os, PO) upotrebom kanile. Kanile su dekontaminirane svakog dana. Anti-CTLA-4 antitelo je injecirano u peritonealnu šupljinu miševa (intraperitonealna primena, IP).

[0146] Uslovi kultivacije bakterijskog soja – Uslovi kultivacije bakterijskog soja su bili slededi:

● Ispipetirano je 10 ml YCFA (iz prethodno pripremljenih laboratorijskih bočica od 10 ml firme E&O) u Hungatove epruvete

● Epruvete su zaptivene i produvane sa CO2upotrebom sistema za ubacivanje i izbacivanje iz šprica

● Hungatove epruvete su autoklavirane

● Nakon hlađenja, Hungatove epruvete su inokulirane sa 1 ml koncentrovanog glicerola

● Eptuvete su inkubirane u statičnom inkubatoru na 37 °C približno 16 sati.

● Slededeg dana, uzet je 1 mL ovakve subkulture i inokulirano je 10 ml YCFA (isprane Hungatove epruvete su ponovo zagrejane, sve u duplikatu)

● Epruvete su inkubirane u statičnom inkubatoru na 37 °C tokom 5 do 6h

Linije kancerskih ćelija i uslovi kultivacije -

[0147] Delijske linije koje su upotrebljene su detaljno opisane u tabeli koja sledi:

2

[0148] Delijska linija EMT-6 je uspostavljena iz transplantabilnog mamilarnog karcinoma miša koji se javio kod BALB/cCRGL miša nakon implantacije hiperplastičnog mamilarnog alveolarnog čvora [47].

[0149] Delijska linija LL/2 (LLC1) je uspostavljena iz pluda C57BL miša sa tumorom koji je nastao nakon implantacije primarnog Luisovog karcinoma pluda *48+.

[0150] Delijska linija Hepa 1-6 je derivat hepatoma miša BV7756 koji se javlja kod C57/L miša [49].

[0151] Uslovi ćelijske kulture - Sve delijske linije su gajane u monosloju, na 37 °C i u vlažnoj atmosferi (5% CO2, 95% vazduh). Medijum za kulturu delija i suplementi su naznačeni u tabeli koja sledi:

[0152] Za potrebe eksperimenta, adherentne tumorske delije su odvojene od dna flaska za kulturu tretmanom u trajanju od 5 minuta sa tripsin-versenom (ref: BE17-161E, Lonza), u Hankovom medijumu bez kalcijuma ili magnezijuma (ref: BE10-543F, Lonza); zatim je medijum neutralizovan dodavanjem kompletnog medijuma za kulturu. Delije su prebrojane upotrebom hemocitometra, a njihova vijabilnost je procenjena na osnovu testa isključenja, bojenjem sa 0.25% tripan plavim.

2

Upotreba životinja -

[0153] Zdrave ženke Balb/C (BALB/cByJ) miševa, odgovarajude težine i starosti, su nabavljene od firme CHARLES RIVER (L'Arbresles) za eksperimente sa EMT6 modelom.

[0154] Zdrave ženke C57BL/6 (C57BL16J) miševa odgovarajude težine i starosti, su nabavljene od firme CHARLES RIVER (L'Arbresles) za eksperimente sa LL/2 (LLC1) i Hepa1-6 modelom.

[0155] Životinje su gajene u uslovima SPF zdravstvenog statusa, u skladu sa uputstvima FELASA, a čuvanje životinja i eksperimentalne procedure su bile u skladu sa Francuskim i Evropskim pravilnikom i NRC Vodičem za brigu i upotrebu laboratorijskih životinja *50,51+. Životinje su gajene u prostorijama vivarijuma pod kontrolisanim sredinskim uslovima: temperatura: 22 ± 2 °C , vlažnost 55 ± 10%, standardan fotoperiod (12h svetlost/12h tama), HEPA filtriran vazduh, 15 izmena vazduha po satu, bez recirkulacije. Životinje su boravile u sterilnim kavezima adekvatne veličine, sa šuškom, hranom i vodom, u uslovima sredinski i socijalno obogadene sredine (gajenje u grupama) kao što je opisano: kavezi veličine 900 cm<2>(referenca: Green, Tecniplast) na policama sa ventilacijom, šuška firme Epicea (SAFE), hrana sterilisana zračenjem od 10kGy (A04-10, SAFE), kompletna hrana za imunološki kompetentne glodare - R/M-H ekstrudat, voda iz boca za vodu.

Eksperimentalni dizajn i tretmani

Antitumorska aktivnost, EMT6 model

[0156] Raspored tretmana - Početak tremena primenom prve doze je uzet kao dan (D) nula. Na D0, miševi bez transplantata su, po principu slučajnosti i shodno njihovoj individualnoj telesnoj težini, podeljeni u grupe od po 9/8 životinja upotrebom kompjuterskog programa Vivo manager® (Biosystemes, Couternon, Francuska). Na D0, miševi su primili nosač (medijum za kulturu) ili bakterijski soj. Na D14, svim miševima su injecirane EMT-6 tumorske delije kao što je opisano u nastavku teksta. Na D24, miševi iz grupe pozitivnih kontrola su primili CTLA-4 antitelo kao tretman.

[0157] Raspored tretmana je sažet u tabeli koja sledi:

Pradenje životinja je sprovedeno kao što je opisano u nastavku teksta.

2

[0158] Indukcija EMT6 tumora kod životinja - Na D14, tumori su indukovani potkožnom injekcijom 1x10<6>EMT-6 delija u 200 μL RPMI 1640, u desnu polovinu tela miševa.

[0159] Eutanazija - Svaki miš je bio podvrgnut eutanaziji kada je dostignuta krajnja tačka humanosti, kao što je opisano u nastavku teksta ili maksimalno nakon 6 nedelja od početka doziranja.

Antitumorska aktivnost, model LL/2 (LLC1)

[0160] Raspored tretmana - Početak tremena primenom prve doze je uzet kao D0. Na D0, miševi bez transplantata su, po principu slučajnosti i shodno njihovoj individualnoj telesnoj težini, podeljeni u 7 grupa od po 9/8 životinja upotrebom kompjuterskog programa Vivo manager® (Biosystemes, Couternon, Francuska). Na D0, miševi su primali nosač (medijum za kulturu) ili bakterijski soj. Na D14, svim miševima su injecirane LL/2 tumorske delije kao što je opisano u nastavku teksta. Na D27, miševi iz grupe pozitivnih kontrola su primili anti-CTLA-4 antitelo kao tretman.

[0161] Raspored tretmana je sažet u tabeli koja sledi:

Pradenje životinja je sprovedeno kao što je opisano u nastavku teksta.

[0162] Indukcija tumora LL/2 (LLC1) kod životinja - Na D14, tumori su indukovani subkutanom injekcijom 1x10<6>LL/2 (LLC1) delija u 200 μL RPMI 1640, u desnu polovinu tela miševa.

[0163] Eutanazija - Svaki miš je bio podvrgnut eutanaziji kada je dostignuta krajnja tačka humanosti, kao što je opisano u nastavku teksta ili maksimalno nakon 6 nedelja od početka doziranja.

Antitumorska aktivnost, Hepa1-6 model

[0164] Raspored tretmana - Početak tremena primenom prve doze je uzet kao D0. Na D0, miševi bez translantata su, po principu slučajnosti i shodno njihovoj individualnoj telesnoj težini, podeljeni u 7 grupa od po 9 životinja upotrebom kompjuterskog programa Vivo manager® (Biosystemes, Couternon, Francuska). Na D0, miševi su primali nosač (medijum za kulturu) ili bakterijski soj. Na D14, svim miševima su injecirane Hepa 1-6 tumorske delije kao što je opisano u nastavku teksta. Na D16, miševi iz grupe pozitivnih kontrola su primili anti-CTLA-4 antitelo kao tretman.

[0165] Raspored tretmana je sažet u tabeli koja sledi:

Pradenje životinja je sprovedeno kao što je opisano u nastavku teksta.

[0166] Ortotopička indukcija Hepa 1-6 tumorskih delija kod životinja injeciranjem unutar slezine - Na D14, injeciranjem u slezinu u miševe je transplantirano milion (1x10<6>) Hepa 1-6 tumorskih delija u 50 μL RPMI 1640 medijima. Ukratko, napravljen je mali rez ispod rebra na levoj polovini tela i slezina je izvađena napolje. Slezina je zatim stavljena na jastuče od sterilne gaze i, uz vizuelnu kontrolu, suspenzija delija je injecirana upotrebom igle og 27 G. Nakon inokulacije delija, slezina je hirurški odstranjena.

[0167] Eutanazija - Svaki miš je bio podvrgnut eutanaziji kada je dostignuta krajnja tačka humanosti, kao što je opisano u nastavku teksta ili maksimalno nakon 6 nedelja od početka doziranja.

[0168] Procena opteredenja tumorom prilikom eutanazije - U vrijeme završetka eksperimenta, jetre su prikupljene i izmerene.

Praćenje životinja

[0169] Kliničko pradenje - Dužina i širina tumora je merena dva puta nedeljno upotrebom nonijusa, a zapremina tumora je procenjena upotrebom formule [52]:

[0170] Krajnje tačke humanosti [53]: Znaci bolova, patnje ili stresa: bolan položaj tela, bolan izraz lica, ponašanje; Tumor koji prelazi 10% normalne telesne težine, ali ne prelazi 2000 mm<3>; Tumori koji ometaju kretanje ili ishranu; Ulcerisani tumor ili erozija tkiva; 20% gubitka telesne težine tokom 3 uzastopna dana; Slabo telesno stanje, emacijacija, kaheksija, dehidracija; Produženo odsustvo voljnih odgovora na spoljne stimuluse; Brzo stomačno disanje, anemija, značajno krvarenje; Neurološki znaci: kruženje, konvulzija, paraliza; Stalan pad telesne temperature; Abdominalna distenzija.

1

[0171] Anestezija - Gasna anestezija izofluranom je upotrebljena za sve procedure: hirurgiju ili inokulaciju tumora, i.v. injeciranje, uzimanje uzorka krvi. Anestezija ketaminom i ksilazinom je upotrebljena za stereotaksičnu hiruršku proceduru.

[0172] Analgezija – Protokol analgezije sa karprofenom ili multimodalni protokol sa karprofenom/buprenorfinom je prilagođen shodno ozbiljnosti hirurške procedure. Nefarmakološka nega je obezbeđenja za sve bolne procedure. Pored toga, obezbeđena je i farmakološka nega koja nije uticala na tok studije (topikalni tretman), a shodno preporuci ordinirajudeg veterinara.

[0173] Eutanazija - Eutanazija životinja je sprovedena prekomernom dozom gasnog anestetika (Izoflurana) i dalje cervikalnom dislokacijom ili eksangvinacijom.

Rezultati

Antitumorska aktivnost, EMT6 model

[0174] Rezultati su prikazani na Slici 1. Tretman bakterijskim sojem predmetnog pronalaska je doveo do jasnog smanjenja zapremine tumora u odnosu na grupu negativnih kontrola. Pozitivne kontrole je takođe karakterisalo smanjenje zapremine tumora, kao što je i očekivano.

Antitumorska aktivnost, model LL/2 (LLC1)

[0175] Rezultati su prikazani na Slici 2. Tretman bakterijskim sojem pronalaska je doveo do jasnog smanjenja zapremine tumora u odnosu na negativne kontrole.

Antitumorska aktivnost, Hepa1-6 model

[0176] Rezultati su prikazani na Slici 3. Netretirane negativne kontrole se nisu ponašale u skladu sa očekivanim, obzirom da su težine jetre u ovoj grupi bile niže nego u drugim grupama. Ipak, i grupa negativnih kontrola koja je bila tretirana nosačem i grupa pozitivnih kontrola se ponašala u skladu sa očekivanim, obzirom da su miševi koji su bili tretirani samo nosačem imali vede jetre od miševa tretiranih anti-CTLA4 antitelima što odražava vede opteredenje tumorom u grupi negativnih kontrola tretiranih nosačem. Lečenje bakterijskim sojem predmetnog pronalaska je dovelo do očiglednog smanjenja težine jetre (a samim tim i opteredenja tumorom) u odnosu na miševe u grupi negativnih kontrola koje su bile tretirane nosačem.

[0177] Navedeni podaci ukazuju da soj MRX518 može biti koristan za lečenje ili prevenciju kancera, a naročito za smanjenje zapremine tumora kod kancera dojke, pluda i jetre.

Primer 2 - PCR genska analiza

[0178] Čista kultura bakterija MRX518 je ispitna i PCR genskom analizom. Urađene su dva seta eksperimenata: 1) MRX518 soj je bio kultivisan zajedno sa delijama humanog kolona (CaCo2) da bi se ispitali efekti bakterija kod domadina, i 2) MRX518 soj je bio kultivisan zajedno sa CaCo2 delijama koje su bile stimulisane sa IL1 da bi se imitirali efekti bakterija u uslovima inflamacije. Efekti oba scenarija su procenjeni upotrebom analize genske ekspresije. Rezultati su prikazani u tabeli koja sledi:

2

[0179] Izgleda da navedeni podaci ukazuju na dva obrasca genske ekspresije - CXCR1/2 liganada (CXCL3, CXCL2, CXCL1, IL-8), koja su povezana sa pro-inflamatornom delijskom migracijom, kao i CXCR3 liganada (CXCL9, CXCL10), što specifičnije ukazuje na IFN-γ tip odgovora, što takođe podržava IL-32 koga indukuje IPN-γ.

4

Primer 3 – Ispitivanje stabilnosti

[0180] Kompozicija koja je ovde opisana i koja sadži najmanje jedan bakterijski soj koji je ovde opisan, se čuva u zaptivenoj posudi na 25 °C ili 4 °C, pri čemu se posuda skladišti u atmosferi sa relativnom vlažnošdu od 30%, 40%, 50%, 60%, 70% 75%, 80%, 90% ili 95%. Nakon 1 meseca, 2 meseca, 3 meseca, 6 meseci, 1 godine, 1,5 godine, 2 godine, 2,5 godine ili 3 godine, najmanje 50%, 60%, 70%, 80% ili 90% bakterijskog soja bi trebalo da preostane, što se meri u jedinicama formiranja kolonija koje se utvrđuju standardnim protokolima.

Primer 4 – Poređenje proizvodnje citokina u nezrelim dendritskim ćelijama indukovanim sa MRX518 i MRX518 LPS

Rezime

[0181] Ova studija je ispitivala efekat bakterijskog soja MRX518, samog i u kombinaciji sa lipopolisaharidom (LPS), na produkciju citokina u nezrelim dendritskim delijama.

[0182] Populacija monocita je izolovana od mononuklearnih delija periferne krvi (PBMCs). Delije monocita su potom diferencirane u nezrele dendritske delije. Nezrele dendritske delije su zasejane u gustini od 200.000 delija po bunaridu i inkubirane sa MRX518 u konačnoj koncentraciji od 10<7>/ml, uz opciono dodavanje LPS-a u finalnoj koncentraciji od 100ng/ml. Negativna kontrola je podrazumevala inkubiranje delija samo sa RPMI medijumom, dok je pozitivna kontrola podrazumevala inkubiranje delija sa LPS-om u finalnoj koncentraciji od 100ng/ml. Potom je analiziran sadržaj citokina u delijama.

Rezultati

[0183] Rezultati navedenih eksperimenata se mogu pogledati na Slikama 4a-d. Dodavanje samog MRX518 dovodi do značajnog povedanja nivoa citokina IL-6 i TNF-α u odnosu na nivo utvrđen kod negativnih kontrola (Slika 4a i c). Dodavanje LPS-a (pozitivna kontrola) je dovelo do porasta nivoa IL-6 i TNF-α u odnosu na negativne kontrole, ali ne i dodavanje IL-1β (Slika 4b). Kombinacija MRX518 i LPS-a je dovela do sinergističkog povedanja nivoa proizvedenog IL-1β (Slika 4d).

Zaključak

[0184] MRX518 karakteriše sposobnost indukcije vede proizvodnje citokina IL-6 i TNF-α u nezrelim dendritskim delijama. Kombinacija LPS-a i MRX518 može povedati nivoe citokina IL-1β u nezrelim dendritskim delijama. Navedeni podaci ukazuju da MRX518, samostalno ili u kombinaciji sa LPS-om, može povedati inflamatorne citokine IL-1β, IL-6 i TNF-α, što dalje podstiče inflamaciju koja može suprimirati razvoj kancera. Tretman sa MRX518 sojem, samostalno ili u kombinaciji, može dovesti do produkcije citokina koji mogu ograničiti rast tumora.

Primer 5 – Poređenje proizvodnje citokina u THP-1 ćelijama indukovanim sa MRX518 i MRX518 LPS

Rezime

[0185] Navedena studija je ispitivala efekat bakterijskog soja MRX518, samog i u kombinaciji sa LPS-om, na proizvodnju citokina u THP-1 delijama, delijskoj liniji koja predstavlja model monocita i makrofaga.

[0186] Delije THF-1 su diferencirane u M0 medijumu tokom 48 h sa 5 ng/ml forbol-12-miristat-13-acetata (PMA). Navedene delije su potom inkubirane sa MRX518 u konačnoj koncentraciji od 10<8>/ml, sa ili bez dodavanja LPS-a u finalnoj koncentraciji od 100ng/ml. Bakterije su zatim isprane, a delijama je dozvoljena inkubacija u normalnim uslovima rasta tokom 24 časa. Delije su zatim centrifugirane, pa je dobijeni supernatant analiziran na sadržaj citokina.

Rezultati

[0187] Rezultati navednih eksperimenata se mogu pogledati na Slikama 5a-c. Dodavanje MRX518 bez LPS-a je dovelo do porasta nivoa citokina IL-1β, IL-6 i TNF-α u odnosu na nivo prisutan kod kontrola bez bakterija i sa sedimentom bakterija. Dodavanje LPS-a i MRX518 dovodi do sinergističkog povedanja proizvodnje citokina.

Zaključak

[0188] MRX518 karakteriše sposobnost indukcije proizvodnje citokina u THP-1 delijama, što može biti sinergistički povedano usled dodavanja LPS-a. Navedeni podaci ukazuju da MRX518 soj, samostalno ili u kombinaciji sa LPS-om, može povedati inflamatorne citokine IL-1β, IL-6 i TNF-α, a što podstiče inflamaciju koja može suprimirati rast kancera. Tretman MRX518 sojem, samostalno ili u kombinaciji, može dovesti do produkcije citokine koji mogu ograničiti rast tumora.

Sekvence

[0189]

SEQ ID NO: 1 (Enterococcus gallinarum 16S rRNK gen - AF039900)

SEQ ID NO: 2 (konsenzus 16S rRNK sekvenca za soj Enterococcus gallinarum MRX518)

REFERENCE

[0190]

[1] Spor i saradnici (2011) Nat Rev Microbiol.9(4):279-90.

[2] Eckburg i saradnici (2005) Science.10; 308(5728):1635-8.

[3] Macpherson i saradnici (2001) Microbes Infect.3(12):1021-35

[4] Macpherson i saradnici (2002) Cell Mol Life Sci.59(12):2088-96.

[5] Mazmanian i saradnici (2005) Cell 15; 122(1):107-18.

[6] Frank i saradnici (2007) PNAS 104(34):13780-5.

[7] Scanlan i saradnici (2006) J Clin Microbiol.44(11):3980-8.

[8] Kang i saradnici (2010) Inflamm Bowel Dis.16(12):2034-42.

[9] Machiels i saradnici (2013) Gut.63(8): 1275-83.

[10] WO 2013/050792

[11] WO 03/046580

[12] WO 2013/008039

[13] WO 2014/167338

[14] Goldin i Gorbach (2008) Clin Infect Dis.46, sup.2:S96-100.

[15] Azad i saradnici (2013) BMJ.347:f6471.

[16] Strickertsson i saradnici (2014) Gene.5(3):726-738.

[17] Collins i saradnici (1984) lnt J Sist Evol Microbiol.34:220-223.

[18] Masco i saradnici (2003) Systematic and Applied Microbiology, 26:557-563.

[19] Srutkova i saradnici (2011) J. Mikrobiol. Methods, 87(1):10-6.

[20] Haabeth i saradnici (2012) OnkoImmunology 1(1):1146-1152.

[21] Lejeune i saradnici (2006) Cancer Immun.6:6

[22] Pace i saradnici (1983) PNAS.80:8782-6.

[23] Sgadari i saradnici (1996) PNAS.93:13791-6.

[24] Arenberg i saradnici (1996) J. Exp. Med.184:981-92.

[25] Sgadari i saradnici (1997) Blood.89:2635-43.

[26] Miyamoto-Shinohara i saradnici (2008) J. Gen. Appl. Microbiol., 54, 9-24.

[27] Protokoli za krioprezervaciju i sušenje zamrzavanjem, izd. Dan i McLellan, Humana Press.

[28] Leslie i saradnici (1995) Appl. Environ. Microbiol.61, 3592-3597.

[29] Mitropoulou i saradnici (2013) J Nutr Metab. (2013) 716861.

[30] Kailasapathy i saradnici (2002) Curr Issues Intest Microbiol.3(2):39-48.

*31+ Priručnik o farmaceutskim pomodnim supstancama, 2. izdanje, (1994), urednici A Wade i PJ Weller

[32] Remingtonova farmaceutska nauka, Mack Publishing Co. (urednik A. R. Gennaro.1985) [33] US 2016/0067188

*34+ Priručnik o mikrobiološkim medijumima, četvrto izdanje (2010) Ronald Atlas, CRC Press. *35+ Održavanje kultura za biotehnologiju i industriju (1996) Jennie C. Hunter-Cevera, Academic Press

[36] Strobel (2009) Methods Mol Biol.581:247-61.

[37] Gennaro (2000) Remington: Nauka i praksa farmacije.20. izdanje, ISBN: 0683306472.

[38] Tehnike molekularne biologije: intenzivni laboratorijski kurs (Ream i saradnici, 1998, izd. Academic Press).

[39] Metode u enzimologiji (S. Colowick i N. Kaplan, izd. Academic Press, Inc.)

[40] Priručnik eksperimentalne imunologije, Vol. I-IV (D. M. Weir i C. C. Blackwell, izd, 1986, Blackwell Scientific Publications)

[41] Sambrook i saradnici (2001) Molekularno kloniranje: laboratorijski priručnik, 3. izdanje (Cold Spring Harbor Laboratory Press).

[42] Priručnik za površinsku i koloidnu hemiju (Birdi, K.S. izd., CRC Press, 1997)

[43] Ausubel i saradnici (izd) (2002) Kratki protokoli u molekularnoj biologiji, 5. izdanje (Current Protocols).

[44] PCR (Introduction to Biotechniques Series), 2. izd. (izd. Nevton & Graham, 1997, Springer Verlag)

[45] Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel i saradnici, izd., 1987) Sup.30

[46] Smith & Waterman (1981) Adv. Appl. Math.2:482-489.

[47] Rockwell i saradnici, (1972) J Natl Cancer Inst.49:735-49.

[48] Bertram i Janik (1980) Cancer Lett.11:63-73.

[49] Darlington (1987) Meth Enzymol.151:19-38.

[50] Etički principi za eksperimentalne životinje, Direktiva br. 2010/63 CEE 22. septembar 2010, Dekret n°2013-118, 1. februar 2013.

*51+ Vodič za brigu i upotrebu laboratorijskih životinja: osmo izdanje. The National Academies Press; 2011

[52] Simpson-Herren i Lloyd (1970) Cancer Chemother Rep.54:143-74.

[53] Workman i saradnici (2010) Br. J. Cancer.102:1555-77.

LISTA SEKVENCI [0191]

4

Claims (14)

Patentni zahtevi

1. Kompozicija koja sadrži bakterijski soj vrste Enterococcus gallinarum za upotrebu u terapiji.

2. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1 za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera.

3. Kompozicija prema patentnom zahtevu 1 ili 2 koja ne sadrži bakterije bilo koje druge vrste, ili koja sadrži samo de minimis ili biološki irelevantne količine bakterija druge vrste.

4. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je kompozicija za upotrebu u postupku lečenja ili prevencije kancera pluda, kancera dojke, kancera jetre ili kancera debelog creva.

5. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je kompozicija za upotrebu u postupku smanjenja veličine tumora, smanjenja rasta tumora, prevencije metastaza ili prevencije angiogeneze.

6. Kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 1-5, gde bakterijski soj sadrži 16s rRNK sekvencu koja je predstavljena kao SEQ ID NO: 2.

7. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, pri čemu je kompozicija za oralnu primenu i sadrži jedan ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa ili nosača, i/ili gde je bakterijski soj liofiliziran.

8. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je bakterijski soj sposoban da delimično ili u potpunosti kolonizuje creva.

9. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde kompozicija sadrži jedan soj Enterococcus gallinarum.

10. Kompozicija prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, koja sadrži: bakterijski soj Enterococcus gallinarum kao deo mikrobijalnog konzorcijuma.

11. Prehrambeni proizvod ili kompozicija u vidu vakcine koji sadrže kompoziciju prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, za upotrebu prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva.

12. Delija ili biološki čista kultura soja Enterococcus gallinarum deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42488.

13. Kompozicija koji sadrži deliju prema patentnom zahtevu 12, a opciono sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač ili ekscipijens.

14. Delija soja Enterococcus gallinarum deponovanog pod pristupnim brojem NCIMB 42488 za upotrebu u terapiji, opciono, gde je delija za upotrebu u postupku definisanom u bilo kom od patentnih zahteva 1-5.

4