RS57221B2 - Jedinjenja supstituisanog pirazolo[1,5-]pirimidina kao inhibitori trk kinaze - Google Patents

Description

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na novo jedinjenje i na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedinjenje. Još preciznije, odnosi se na određeno jedinjenje supstituisanog pirazolo[1,5-a]pirimidina koje može da inhibira proteinske tirozin kinaze iz Trk-porodice, i koje je korisno u lečenju boli, upale, raka, i nekih infektivnih bolesti.

[0002] Postojeći režimi za tretman boli primenjuju nekoliko klasa jedinjenja. Opioidi (poput morfina) imaju nekoliko nedostataka uključujući povraćanje, zatvor i negativne respiratorne efekte, kao i to da mogu da uzrokuju zavisnost. Ne-steroidni anti-upalni analgetici (razni NSAID, poput COX-1 ili COX-2) takođe imaju nedostatke uključujući nedovoljnu efikasnost u tretmanu snažne boli. Osim toga, COX-1 inhibitori mogu da uzrokuju čireve sluzokože. Prema tome, postoji stalna potreba za novim i efektivnijim tretmanima koji omogućavaju oslobađanje od boli, naročito hronične boli.

[0003] Kinaze iz porodice Trk su visoko-afinitetne receptorske tirozin kinaze koje se aktivišu uz pomoć grupa rastvorljivih faktora rasta koji se zovu neurotrofini (NT). Porodica Trk receptora ima tri člana: TrkA, TrkB i TrkC. Među neurotrofinima su (i) nervni faktor rasta (NGF) koji aktiviše TrkA, (ii) moždani neurotrofički faktor (BDNF) i NT-4/5 koji aktiviše TrkB i (iii) NT3 koji aktiviše TrkC. Članovi Trk porodice su široko eksprimirani u neuronskom tkivu, a važni su za održavanje, signaliziranje i preživljenje neuronskih ćelija (Patapoutian, A. et al., Current Opinion in Neurobiology, 2001, 11, 272-280).

[0004] Inhibitori Trk/neurotrofinskog puta su efektivni kod brojnih pre-kliničkih životinjskih modela za istraživanje boli. Na primer, antitela antagonisti NGF i TrkA (na primer, RN-624) su efikasna u modelima upalne i neuropatske boli i u kliničkim istraživanjima na ljudima (Woolf, C.J. et al. (1994) Neuroscience 62,327-331; Zahn, P.K. et al. (2004) J. Pain 5, 157-163; McMahon, S. B. et al., (1995) Nat. Med. 1, 774-780; Ma, Q. P. & Woolf, C. J. (1997) Neuroreport 8, 807-810; Shelton, D. L. et al. (2005) Bol 116, 8-16; Delafoy, L. et al. (2003) Bol 105, 489-497; Lamb, K. et al. (2003) Neurogastroenterol. Motil.15, 355-361; Jaggar, S. I.

et al. (1999) Br. J. Anaesth. 83, 442-448). Dodatno, novija literatura pokazuje da su nivoi BDNF i TrkB signaliziranje nakon upale povećani u dorzalnom gagngionu korena (Cho, L. et al. Brain Research 1997, 749, 358), a nekoliko studija je pokazalo da antitela koja smanjuju signaliziranje preko BDNF/TrkB pata inhibiraju neuronsku hipersenzitizaciju i bol povezanu sa time (Chang-Qi, L et al. Molecular Pain 2008, 4:27).

[0005] Osim toga, pokazano je da makrofagi koji napadaju tumor, a koje šalju tumorske ćelije, direktno stimulišu TrkA locirane na vlaknima za perifernu bol. Uz pomoć brojnih tumorskih modela u miševima i pacovima je pokazano da neutralizovanje NGF uz pomoć monoklonskog antitela inhibira bol povezanu sa rakom do stepena koji je sličan ili bolji od onog kojeg može da uzrokuje najveća doza morfina koja može da se toleriše. Osim toga, aktivisanje BDNF/TrkB puta u brojnim studijama se pokazalo kao modulator brojnih tipova boli uključujući upalnu bol (Matayoshi, S., J. Physiol.2005, 569:685-95), neuropatsku bol (Thompson, S.W., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1999, 96:7714-18) i hiruršku bol (Li, C.-Q. et al., Molecular Pain, 2008, 4(28), 1-11). Zbog toga šta TrkA i TrkB kinaze mogu da služe kao medijator NGF-pokrenutih bioloških odgovora, inhibitori TrkA i/ili drugih Trk kinaza mogu da obezbede efektivan tretman za stanja hronične boli.

[0006] Nedavna literatura takođe pokazuje da su prekomerna ekspresija, aktivisanje, amplifikacija i/ili mutacija članova porodice Trk povezani sa brojnim tumorima uključujući neuroblastom (Brodeur, G. M., Nat. Rev. Cancer 2003, 3, 203-216), rak jajnika (Davidson. B., et al., Clin. Cancer Res.2003, 9, 2248-2259), rak dojke (Kruettgen et al, Brain Pathology 2006, 16: 304-310), rak prostate (Dionne et al, Clin. Cancer Res. 1998, 4(8): 1887-1898), rak pankreasa (Dang et al, Journal of Gastroenterology and Hepatology 2006, 21(5): 850-858), multipli mijelom (Hu et al, Cancer Genetics and Cytogenetics 2007, 178: 1-10), astrocitom i meduloblastom (Kruettgen et al, Brain Pathology 2006, 16: 304-310) gliom (Hansen et al, Journal of Neurochemistry 2007, 103: 259-275), melanom (Truzzi et al, Journal of Investigative Dermatology 2008, 128(8): 2031-2040), karcinom štitaste žlezde (Brzezianska et al, Neuroendocrinology Letters 2007, 28(3), 221-229.), adenokarcinom pluća (Perez-Pinera et al, Molecular and Cellular Biochemistry 2007, 295(1&2), 19-26), neuroendokrine tumore velikih ćelija (Marchetti et al, Human Mutation 2008, 29(5), 609-616), i kolorektalni rak (Bardelli, A., Science 2003, 300, 949). U prekliničkim modelima raka, Trk-inhibitori su efikasni kod inhibiranja rasta tumora i stopiranja tumorskih metastaza. Naročito, inhibitori sa ne-selektivnim malim molekulima Trk A, B i C i Trk/Fc himera su efikasni kod inhibiranja rasta tumora i stopiranja tumorskih metastaza (Nakagawara, A. (2001) Cancer Letters 169:107-114; Meyer, J. et al. (2007) Leukemia, 1-10; Pierottia, M.A. & Greco A., (2006) Cancer Letters 232:90-98; Eric Adriaenssens, E. et al. Cancer Res (2008) 68:(2) 346-351) (Truzzi et al, Journal of Investigative Dermatology 2008, 128(8): 2031-2040. Prema tome, očekivano je da inhibitor Trk-porodice kinaza poseduje potencijal za primenu u tretmanu raka.

[0007] Osim toga, za inhibiciju neurotrofin/Trk puta je pokazano da je efektivna kod tretmana pre-kliničkih modela za upalne bolesti. Na primer, inhibicija neurotrofin/Trk puta je važna i kod pre-kliničkih modela upalnih bolesti pluća uključujući astmu (Freund-Michel, V; Frossard, N.; Pharmacology & Terapeutskis (2008), 117(1), 52-76), intersticijalni cistitis (Hu Vivian Y; et. al. The Journal of Urology (2005), 173(3), 1016-21), upalnih bolesti creva uključujući ulcerativni kolitis i Crohn-ovu bolest (Di Mola, F. F, et. al., Gut (2000), 46(5), 670-678) i upalnih bolesti kože poput atopijskog dermatitisa (Dou, Y.-C.; et. al. Archives of Dermatological Research (2006), 298(1), 31-37), ekcema i psorijaze (Raychaudhuri, S. P.; et. al. Journal of Investigative Dermatology (2004), 122(3), 812-819).

[0008] Put neurotrofin/Trk, naročito BDNF/TrkB, je takođe važan i kod etiologije neurodegenerativnih bolesti uključujući multiplu sklerozu, Parkinson-ovu bolest i Alzheimerovu bolest (Sohrabji, Farida; Lewis, Danielle K. Frontiers in Neuroendocrinology (2006), 27(4), 404-414). Modulacija puta neutrofin/Trk može da nađe primenu u tretmanu ovih i sličnih bolesti.

[0009] Za TrkA receptor se takođe veruje da je kritičan za proces infekcije ljudi sa parazitom Typanosoma cruzi (Chagas-ova bolest) (de Melo-Jorge, M. et al. Cell Host & Microbe (2007), 1(4), 251-261). Tako, inhibicija TrkA može da nađe svoju primenu kod tretmana Chagas-ove bolesti i sličnih infekcija sa protozoama.

[0010] Inhibitor Trk-a takođe može da nađe svoju primenu kod tretmana bolesti koja je povezana sa poremećenim balansom regulisanja koštanog remodeliranja, poput osteoporoze, reumatoidnog artritisa, i metastaza kostiju. Metastaze kostiju su česte komplikacije usled raka, koje se javljaju kod 70% pacijenata sa naprednim tumorima dojke i prostate (1) i kod približno 15 do 30% pacijenata sa karcinom pluća, debelog creva, želuca, bešike, materice, rektuma, štitaste žlezde, ili bubrega. Osteolitičke metastaze mogu da uzrokuju snažnu bol, patološke frakture, hiperkalcemiju koja je opasna po život, kompresiju kičmene moždine, i druge nervnokompresivne sindrome. Zbog toga, metastaza kostiju je ozbiljna i skupa komplikacija usled raka. Prema tome, agensi koji mogu da indukuju apoptozu proliferirajućih osteoblasta su veoma korisni. Ekspresija TrkA i TrkC receptora je primećena kod formiranja kostiju kod mišjih modela za prelom kostiju (K. Asaumi, et al., Bone (2000) 26(6) 625-633). Osim toga, lokalizovanje NGF je primećeno kod gotovo svih ćelija koje formiraju kost (K. Asaumi, et al.). Nedavno je bilo pokazano da pan-Trk inhibitor inhibira tirozinsko signaliziranje koje je aktivisano uz pomoć neurotrofina koji se vežu na sva tri Trk-receptora u humanim hFOB osteoblastima (J. Pinski, et al., (2002) 62, 986-989). Ovi podaci podupiru ideju da Trk inhibitori mogu da se koriste za tretman bolesti povezanih sa remodeliranjem kostiju, poput metastaza kostiju kod pacijenata sa rakom.

[0011] Poznato je nekoliko klasa inhibitora (malih molekula) Trk-kinaza za koje se zna da su korisni kod tretmana boli ili raka (Expert Opin. Ther. Patents (2009) 19(3)).

[0012] Internacionalne patentne publikacije WO 2006/115452 i WO 2006/087538 opisuju nekoliko klasa malih molekula za koje se zna da su inhibitori Trk-kinaza i koji bi mogli da budu korisni u tretmanu boli ili raka.

[0013] Poznata su pirazolo[1,5-a]pirimidinska jedinjenja. Na primer, Internacionalna patentna publikacija WO 2008/037477 opisuje pirazolo[1,5-a]pirimidinska jedinjenja koja sadrže alkil, aril ili heterocikličku grupu na poziciji 3. Veruje se da su ova jedinjenja inhibitori PI3K i/ili mTOR lipidne kinaze.

[0014] Internacionalna patentna publikacija WO 2008/058126 opisuje pirazolo[1,5-a]pirimidinska jedinjenja koja sadrže fenilnu grupu na poziciji 3. Smatra se da su ova jedinjenja inhibitori Pim-kinaze.

[0015] Američka publikacija US 2006/0094699 opisuje pirazolo[1,5-a]pirimidinska jedinjenja koja sadrže -C(=O)NH-fenil, -C(=O)(4-metilpiperidinil) ili -C(=O)NMe(CH2-trimetilpirazolil) na poziciji 3, a namenjena su primeni u kombinovanoj terapiji sa agonistom glikokortikoidnog receptora.

[0016] Određena jedinjenja koja su dvojni inhibitori TrkA i TrkB mogu da budu korisna u tretmanu multiplih tipova boli uključujući upalnu bol, neuropatsku bol, hiruršku bol, i bol povezanu sa rakom, hirurškom operacijom i prelomom kosti. Selektivnost prema TrkA i/ili TrkB je posebno poželjna kod jedinjenja koja se koriste kod tretmana boli. Osim toga, jedinjenje iz ovoga pronalaska može da bude korisno za lečenje raka, upale, neurodegenerativih bolesti i određenih infektivnih bolesti.

[0017] Prema tome, jedna realizacija ovoga pronalaska obezbeđuje jedinjenje koje je (S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-yl)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0018] U strukturama koje su ovde prikazane, a u kojima stereohemija bilo kojeg hiralnog atoma nije specifikovana, tada su predviđeni svi stereoizomeri i uključeni kao jedinjenja iz ovoga pronalaska. Kada je stereohemija specifikovana uz pomoć pune ili isprekidane linije koja predstavlja neku naročitu konfiguraciju, tada je taj stereoizomer tako specifikovan i definisan.

[0019] Jedinjenje prema pronalasku obuhvata njegove farmaceutski prihvatljive soli. Primeri takvih soli uključuju soli hidrogen sulfata, hidrohloridne soli i soli trifluoroacetata.

[0020] Dodatno treba da se podrazumeva da Jedinjenje prema pronalasku i njegove soli mogu da budu izolovana u formi solvata, pa prema tome bilo koji takav solvat je uključen u obim ovoga pronalaska.

[0021] Jedinjenje prema pronalasku takođe obuhvata jedinjenja koja se razlikuju samo time šta poseduju jedan ili više izotopno obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenje iz ovoga pronalaska uključuje jedinjenja u kojima je jedan ili više atoma vodonika zamenjeno sa deuterijumom ili tricijumom, ili jedan ili više atoma ugljenika je zamenjeno sa<13>C- ili<14>C-obogaćenim ugljenikom i sva takva jedinjenja su uključena u obim ovoga pronalaska.

[0022] Ovde je nadalje opisan proces za pripremu jedinjenja prema pronalasku ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0023] Sposobnost jedinjenja da deluju kao TrkA-inhibitori može da se demonstrira uz pomoć ogleda koji su opisani u Primerima A i B. Sposobnost jedinjenja da deluju kao TrkB-inhibitori može da se demonstrira uz pomoć ogleda koji je opisan u Primeru B.

[0024] Jedinjenje iz ovoga pronalaska je korisno za lečenje hronične i akutne boli, uključujući bol koja je povezana sa rakom, hirurškom operacijom, i prelomom kostiju. Određena jedinjenja koja su inhibitori TrkA i/ili TrkB mogu da budu korisna u tretmanu multiplih tipova boli uključujući upalnu bol, neuropatsku bol, i bol povezanu sa rakom, hirurškom operacijom, i prelomom kosti.

[0025] Jedinjenje iz ovoga pronalaska je takođe korisno za lečenje tumora uključujući neuroblastom, rak jajnika, pankreasa i kolorektalni rak.

[0026] Jedinjenje iz ovoga pronalaska je takođe korisno za lečenje upale i određenih infektivnih bolesti.

[0027] Osim toga, jedinjenje iz ovoga pronalaska može takođe da bude korisno za lečenje intersticijalnog cistitisa (IC), sindroma bolne mokraćne bešike (PBS), urinarne inkontinencije, astme, anoreksije, atopijskog dermatitisa, i psorijaze.

[0028] Jedinjenje iz ovoga pronalaska može takođe da bude korisno u tretmanu demijelinacije i dismijelinacije uz pomoć promovisanja mijelinacije, preživljenja neurona, i oligodendrocitne diferencijacije preko blokiranja Sp35-TrkA interakcije.

[0029] Jedinjenje iz ovoga pronalaska može da ima terapeutsku vrednost kod upotrebe u lečenju bolesti povezanih sa kostima (poput onih koji uključuju resorpciju kosti). Primeri za bolesti koje su povezane sa kostima uključuju metastaze na kostima, gubitak koštane mase usled tretmana, osteoporozu, reumatoidni artritis, ankilozirajući spondilitis, Paget-ovu bolest, i periodontalnu bolest. Osteoporoza može da se pripiše (1) menopauzi kod žena, (2) starenju kod muškaraca i žena, (3) sup-optimalnom rastu kostiju tokom detinjstva i adolescencije koje rezultuje nemogućnošću da se razvije potrebna koštana masa, i/ili (4) gubitku kostiju kao sekundarnoj posledici drugih bolesti, poremećaja hranjenja, uzimanju lekova i/ili medicinskim tretmanima.

[0030] Jedinjenje iz ovoga pronalaska može da se koristi za lečenje drugih osteolitičkih bolesti koje su više lokalizovane. Naročiti primer je osteoliza koja je indukovana metastatskim tumorom. U ovom stanju, tumori kostiju ili metastaze kostiju indukuju lokalizovanu osteolizu koja uzrokuje bol, slabljenje i prelome kostiju. Takva lokalizovana osteoliza takođe omogućava tumorima da se povećavaju stvarajući više prostora za sebe unutar kosti i oslobađajući faktore rasta koštane matrice. Tumori za koje se trenutno zna da uzrokuju tumor-indukovanu osteolizu uključuju hematološka maligna stanja (na primer, mijelom i limfom) i čvrste tumore (na primer, rak dojke, prostate, pluća, bubrega i štitaste žlezde), a za koje ovaj pronalazak predviđa lečenje.

[0031] Kao šta se ovde koristi, termin tretman uključuje profilaksu kao i tretman postojećeg stanja.

[0032] Ovde je opisano jedinjenje prema pronalasku namenjeno za upotrebu u tretiranju bolesti ili medicinskih stanja kod sisara, pri čemu pomenuta bolest ili stanje može da se tretira uz pomoć inhibitora TrkA i/ili TrkB. U jednoj naročitoj realizaciji, obezbeđeno je jedinjenje prema pronalasku koje je namenjeno za tretiranje boli, raka, upale, neurodegenerativne bolesti ili infekcije sa Typanosoma cruzi kod sisara, koje podrazumeva administriranje jedinjenja pomenutom sisaru.

[0033] Ovde je opisano jedinjenje prema pronalasku za upotrebu u lečenju osteolitičke bolesti kod sisara.

[0034] Jedinjenje iz ovoga pronalaska može da se koristi zajedno sa jednim ili više dodatnih lekova koji deluju uz pomoć istog ili različitog mehanizma. Takav kombinovani tretman može da se postigne uz pomoć simultanog, uzastopnog ili odvojenog administriranja pojedinačnih komponenta tretmana. Primeri uključuju anti-upalna jedinjenja, steroide (na primer, deksametazon, kortizon i flutikazon), analgetike poput raznih NSAID (na primer, aspirin, ibuprofen, indometacin, i ketoprofen), i opioide (poput morfina), i hemoterapeutske agense.

[0035] U tehničkoj oblasti medicinske onkologije je normalna praksa da se kombinuju različite forme tretmana sa ciljem da se tretira svaki pacijent sa rakom. U medicinskoj onkologiji druga komponenta(e) takvog kombinovanog tretmana osim dodavanja kompozicija iz ovoga pronalaska može da bude, na primer, hirurška operacija, radioterapija, hemoterapija, primena inhibitora prenosa signala i/ili primena monoklonskih antitela.

[0036] Prema tome, jedinjenje prema pronalasku može da se administrira u kombinaciji sa jednim ili više agenasa izabranih iz mitotskih inhibitora, alkilirajućih agenasa, antimetabolita, antisense-DNA ili -RNA, interkalirajućih antibiotika, inhibitora faktora rasta, inhibitora prenosa signala, inhibitora ćelijskog ciklusa, encimskih inhibitora, modulatora retinoidnih receptora, inhibitora proteasoma, inhibitora topoizomeraze, modifikatora biološkog odgovora, anti-hormona, inhibitora angiogeneze, citostatskih agenasa anti-androgena, ciljanih antitela, inhibitora HMG-CoA reduktaze, i inhibitora prenil-protein transferaze.

[0037] Fraza "efektivna količina" označava onu količinu jedinjenja koja je, kada se administrira nekom sisaru u potrebi, dovoljna da (i) tretira ili spreči neku određenu bolest, stanje, ili poremećaj koji može da se tretira sa nekim inhibitorom TrkA i/ili TrkB, (ii) uspori, ublaži, ili eliminiše jedan ili više simptoma neke određene bolesti, stanja, ili poremećaja, ili (iii) spreči ili uspori pojavu jednog ili više simptoma neke određene bolesti, stanja, ili poremećaja koji su ovde opisani.

[0038] Količina jedinjenja prema pronalasku koja će odgovarati malopre pomenutoj količini varira u zavisnosti o faktorima poput primenjivanog jedinjenja, bolesnog stanja i njegove ozbiljnosti, identitetu (na primer, težini) sisara u potrebi, ali bez obzira na to može da se rutinski odredi od strane stručnjaka.

[0039] Kao šta se ovde koristi, termin "sisar" se odnosi na toplo-krvnu životinju koja pokazuje rizik od razvijanja neke od ovde opisnih bolesti i uključuje, ali bez ograničenja, zamorce, pse, mačke, pacove, miševe, hrčke, i primate, uključujući ljude.

[0040] Jedinjenje iz ovoga pronalaska može da se administrira preko bilo koje prikladne rute, na primer, u gastrointestinalni trakt (na primer, rektalno ili oralno), u nos, pluća, muskulaturu ili vaskulaturu, ili transdermalno ili dermalno. Jedinjenja mogu da se administriraju uz pomoć bilo koje prikladne forme, na primer, kao tablete, razne prahove, kapsule, razne rastvore, disperzije, suspenzije, sirupe, sprejove, čepiće, razne gelove, emulzije, nalepnice i sl. Takve kompozicije mogu da sadrže komponente koje su konvencionalne u farmaceutskim preparatima, na primer razređivači, nosioci, pH-modifikatori, zaslađivaći, agensi za povećanje volumena, i druge aktivne agense. Ako je poželjno parenteralno administriranje, pomenute kompozicije će biti sterilne i u rastvoru ili suspenziji koja je prikladna za injekciju ili infuziju. Takve kompozicije formiraju dodatni aspekt ovoga pronalaska.

[0041] U skladu sa drugim aspektom, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, koja sadrži jedinjenje prema pronalasku ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, kao šta je definisano iznad. U jednoj izvedbi, farmaceutska kompozicija uključuje jedinjenje prema pronalasku zajedno sa farmaceutski prihvatljivim razređivačem ili nosačem.

[0042] Ovde je opisano jedinjenje prema pronalasku ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u terapiji, poput lečenja nekog stanja koje može da se tretira sa inhibitorom TrkA i/ili TrkB, poput stanja koje je posredovano sa TrkA i/ili TrkA, na primer jedno ili više od stanja koja su opisana iznad.

[0043] Ovde je opisano jedinjenje sa Formulom I ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u lečenju stanja koje može da se tretira uz pomoć inhibitora TrkA i/ili TrkB, poput stanja koje je posredovano sa TrkA i/ili TrkB, na primer neko od iznad definisanih stanja. U jednoj izvedbi, ovde je opisano jedinjenje sa Formulom I, ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u tretmanu boli, raka, upale, neurodegenerativne bolesti ili infekcije sa Typanosoma cruzi.

[0044] Jedinjenje iz ovoga pronalaska je (S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

1

[0045] Naročiti primeri za soli iznad navedenih jedinjenja uključuju hidrogen sulfatne soli, hidrohloridne soli i trifluoroacetatne soli.

Primeri

[0046] Sledeći primeri ilustruju pronalazak. U primerima koji su opisani ispod, osim ako je drugačije navedeno, sve temperature su navedene u stepenima po Celzijusu. Reagensi su nabavljeni iz komercijalnih dobavljača poput Aldrich Chemical Company, Lancaster, TCI ili Maybridge, a korišćeni su bez dodatnog prečišćavanja osim ako je drugačije navedeno. Tetrahidrofuran (THF), dihlorometan (DCM, metilen hlorid), toluen, i dioksan su nabavljeni od Aldrich u bocama Sure/Seal™ pa su korišćeni kao takvi.

[0047] Reakcije koje su opisane ispod generalno su provedene pod pozitivnim pritiskom azota ili argona ili u tubi za sušenje (osima ako je drugačije navedeno) u bezvodnim rastvaračima, a reakcione boce su bile tipično opremljene sa gumenim septumom sa ciljem da se supstrati i reagensi uvode uz pomoć šprica. Stakleno posuđe je bilo osušeno i/ili grejano da se osuši.

[0048] Kolonska hromatografija je provedena u pomoć sistema Biotage (Proizvođač: Dyax Corporation) na kolonama od silika-gela ili C-18 (reverzna faza), ili na punjenju od silike SepPak (Waters).

[0049] Skraćenice koje se pojavljuju u primerima imaju sledeća značenja:

Primer A

Ogled ELISA sa TrkA

[0050] ELISA ogled (encim-linked immunosorbant assay) je korišćen sa ciljem da se ispita aktivnost TrkA-kinaze u prisutnosti inhibitora. Mikrotitarske pločice Immulon 4HBX sa 384 komorica (Thermo deo #8755) su prekrivene sa 0.025 mg/mL rastvora poli (Glu, Ala, Tyr; 6:3:1; Sigma P3899). Razne koncentracije testiranog jedinjenja, 2.5 nM TrkA (Invitrogen Corp., histidin-označena rekombinantna humana TrkA, citoplazmatski domen), i 500 µM ATP je inkubirano tokom 25 min na ambijentalnoj temperaturi u prekrivenim pločicama uz drmanje. Ogledni pufer se sastojao od 25 mM MOPS pH 7.5, 0.005% (v/v) Triton X-100 i 5 mM MgCl2. Reakciona smeša je odstranjena sa pločice uz pomoć ispiranja sa PBS koji je sadržavao 0.1% (v/v) Tween 20. Fosforilisani produkt reakcije je detektovan uz pomoć 0.2 µg/mL monoklonskog antitela (klon PY20) specifičnog za fosfotirozina koje je bilo konjugirano sa peroksidazom iz hrena uz korišćenje supstrata za TMB peroksidazu (KPL). Nakon dodavanja 1 M fosforne kiseline, intenzitet boje hromogenog supstrata je kvantifikovan uz pomoć apsorbancije kod 450 nm. IC50vrednosti su izračunate uz pomoć 4 ili 5-parametarskog logističkog podešavanja kriva.

[0051] Tabela 1 daje specifične IC50vrednosti za jedinjenje prema pronalasku kada se testira u ovom ogledu. Jedinjenja označena sa zvezdicom (*) su uključena za referencu.

Tabela 1

Primer B

Omnia ogled sa TrkA i TrkB

[0052] Trk encimska selektivnost je ispitana uz pomoć reagenasa iz Omnia™ ogleda sa kinazom od Invitrogen Corp. Encim (TrkA ili TrkB od Invitrogen Corp.) i testirano jedinjenje (razne koncentracije) su inkubirani tokom 10 min na ambijentalnoj temperaturi u beloj polipropilenskoj pločici sa 384-komorica (Nunc katalog# 267462). Omnia Tyr peptid #4 (za

1

TrkA) ili #5 (za TrkB), kao i ATP, su tada dodani u pločicu. Finalne koncentracije su kako sledi: 20 nM encim, 500 µM ATP za TrkA-ogled ili 1 mM ATP za TrkB-ogled, 10 µM peptidni supstrat. Ogledni pufer je sadržavao 25 mM MOPS pH 7.5, 0.005% (v/v) Triton X-100 i 5 mM MgCl2. Proizvodnja fosforilisanog peptida je praćena kontinuirano tokom 70 min uz pomoć čitača mikropločica Molecular Devices FlexStation II<384>(eksitacija = 360 nm; emisija = 485 nm). Inicijalne stope su izračunate iz progresivnih kriva. IC50vrednosti su tada izračunate iz pomenutih stopa uz korišćenje 4 ili 5-parametarskog logističkog podešavanja krive.

[0053] U ovom ogledu, jedinjenja iz ovoga pronalaska imaju prosečan IC50ispod 1000 nM. Određena jedinjenja imala su prosečan IC50ispod 100 nM.

Priprema A

[0054]

Priprema (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina

[0055]

Korak A: Priprema (R)-tert-butil 2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-karboksilata: rastvor tertbutilpirolidin-1-karboksilata (20 g, 116.8 mmol) i (-)sparteina (32.9, 140 mmol) u MTBE (360 mL) je ohlađen do -78° C, pa je dodan sec-BuLi (100 mL, 140 mmol, 1.4 M u cikloheksanu) kap po kap uz pomoć kanile, uz održavanje interne temperature ispod -70° C. Nastao rastvor je mešan tokom 3 h na -78° C, nakon čega je dodan rastvor ZnCl2(93.4 mL, 93.4 mmol, 1 M u Et2O), kap po kap uz snažno mešanje i održavanje interne temperature ispod -65° C. Nastala svetla suspenzija je mešana na -78° C tokom 30 min, a tada je ugrejana do ambijentalne temperature. Nastala smeša je nabijena sa 2-bromo-1,4-difluorobenzenom (14.5 mL, 128 mmol), nakon čega su dodani Pd(OAc)2(1.31 g, 5.8 mmol) i t-Bu3P-HBF4(2.03 g, 7.0 mmol) u jednoj porciji. Nakon mešanja preko noći na ambijentalnoj temperaturi, dodano je 10.5 mL rastvora NH4OH, a reakciona smeša je mešana tokom jednog časa. Nastala gusta masa je filtrirana kroz CELITE pa je isprana sa Et2O (1 L). Filtrat je ispran sa HCl (0.5 L, 1 M vod.) i slanicom. Organski sloj je filtriran i koncentrovan, a sirovi produkt je prečišćen uz pomoć kolonske hromatografije (silika), uz eluiranje sa smešom 5-10% EtOAc/heksani koje daje produkt (R)-tert-butil 2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-karboksilat u formi žutog ulja (23.9 g, prinos: 72%).

Korak B: Priprema (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina: u (R)-tert-butil 2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-karboksilat (23.9 g, 84.4 mmol) je dodano 56.2 mL 4 N HCl (dioksan). Nakon mešanja na ambijentalnoj temperaturi tokom 2 h, dodano je još po 200 mL svakog, a smeša je mešana tokom 10 min. Nastala gusta masa je filtrirana koje daje hidrohloridnu so produkta u formi bele čvrste materije (17.2 g). Sa ciljem da se dobije slobodna baza, HCl so produkta je dispergovana u smeši EtOAc (200 mL) i rastvora NaOH (100 mL, 2 N vod.) Slojevi su razdvojeni, a vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc. Spojeni organski ekstrakti su filtrirani i koncentrovani koje daje željeni produkt u formi tečnosti (13.2 g, prinos: 85%).

Korak C: Određivanje enantiomernog viška (ee%) (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina: u rastvor (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u etanolu je dodan višak N-(2,4-dinitro-5-fluorofenil)-L-alanin amida (FDAA, Marfey-ev reagens). Smeša je ugrejana do temperature refluksa tokom približno dva minuta. Nakon hlađenja do ambijentalne temperature, reakciona smeša je razređena sa acetonitrilom pa je injektirana u HPLC (kolona: YMC ODS-VOD 4.6×50 mm 3 µm 120 Å; mobilna faza: 5-95% rastvarač B u A; rastvarač A: H2O/1% IPA/10 mM amonijum acetat, i rastvarač B: ACN/1% IPA/10 mM amonijum acetat; stopa protoka: 2 mL/min) sa ciljem da se odredi enantiomerni višak produkta uz pomoć izračunavanja površina šiljaka oba nastala diastereomerna derivata. Racemski primerak (1:1) je pripremljen u skladu sa procedurom koja je ovde opisana, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina sa (rac)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidinom. ee% produkta, koji je dobiven kako je opisano iznad, je iznosio > 93%.

Priprema B

[0056]

Priprema (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina [0057]

1

Korak A: Priprema (R)-5-(2-(2.5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidina: u reakcionu tubu pod pritiskom su dodani 5-hloropirazolo[1,5-a]pirimidin (4.2 g, 27 mmol), (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin (Priprema A; 5.3 g, 29 mmol), bezvodni n-butanol (5 ml, 55 mmol), i DIEA (9.5 ml, 55 mmol). Žućkasta suspenzija je zatvorena i grejana u uljanoj banji (160° C) preko noći. Reakciona smeša je ohlađena do ambijentalne temperature, razređena sa EtOAc (250 mL), i filtrirana, uz sakupljanje čvrste materije sa EtOAc. Filtrat (330 mL) je ispran sa vodom (2×150 mL), slanicom (100 mL), koncentrovan, i prečišćen uz pomoć hromatografije (silika), uz eluiranje sa smešom EtOAc/heksani (2:1) koje daje produkt u formi svetlo-žućkaste čvrste materije (5.6 g, prinos: 68%).

Korak B: Priprema (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)-3-nitropirazolo[1,5-a]pirimidina: (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin (3.3 g, 10.99 mmol) je rastvoren u 25 mL TFA na ambijentalnoj temperaturi koje daje bistri žućkasti rastvor, a tada je dodana azotna kiselina (3.434 mL, 54.94 mmol), kao po kap uz snažno mešanje. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana tokom dodatnih 15 min na ambijentalnoj temperaturi, a tada je ugašena tako da je izlivena u led uz snažno mešanje. Nastala žućkasta suspenzija je filtrirana, sakupljena sa vodom, a tada su čvrste materije smrvljene sa MeOH (50 mL, uz kratko sonifikovanje) i vakuum-filtrirane koje daje čisti produkt u formi finog prljavo-belog praha (2.2 g, prinos: 58%).

Korak C: Priprema (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amin: u žućkasti rastvor (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)-3-nitropirazolo[1,5-a]pirimidina (2.3 g, 6.66 mmol), u smeši MeOH/DCM (1:1; 30 mL/30 mL) je dodan Zn u prahu (4.36 g, 66.6 mmol) [<10 μm, Aldrich] uz mešanje. U ovu suspenziju je dodan zasićeni NH4Cl vodeni rastvor (30 mL), kap po kap uz snažno mešanje. Nakon završetka dodavanja NH4Cl, reakciona smeša je ostavljena da se ohladi do ambijentalne temperature pa je mešana tokom dodatnih 15 min. Reakciona smeša je razređena sa DCM (50 mL) pa je filtrirana kroz GF/F-hartiju, uz ispiranje vlažnog kolača sa DCM. Organski sloj filtrata je razdvojen, a vodeni sloj je ekstrahovan sa DCM (2×50 mL). Organski slojevi su spojeni, isprani sa slanicom (100 mL), osušeni preko Na2SO4, i koncentrovani koje, u osnovi, daje čisti produkt u formi smeđastopenaste čvrste materije (2.08 g, prinos: 99%), koja je korišćena bez dodatnog prečišćavanja.

Referentni Primer 8

1

(R)-N-(5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksiazetidin-1-karboksamid

[0059]

Korak A: Priprema (R)-5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina: pripremljen je u skladu sa postupkom iz Pripreme B, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u Koraku 1 sa (R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidinom.

Korak B: Priprema (R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidina: pripremljen je primenom postupka iz Pripreme A, uz zamenu 2-bromo-1,4-difluorobenzena sa 2-bromo-1-hloro-4-fluorobenzenom u Koraku A.

Korak C: Priprema (R)-N-(5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksiazetidin-1-karboksamida: u rastvor (R)-5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (30 mg, 0.090 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (29 mg, 0.18 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan azetidin-3-ol hidrohlorid (20 mg, 0.18 mmol) u jednoj porciji, nakon čega je dodan DIEA (0.047 mL, 0.27 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 5% do 50% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (33 mg, prinos: 85%). MS (apci) m/z = 431.1 (M+H).

Referentni Primer 9

[0060]

1

(R)-N-(5-(2-(3-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)morfolin-4-karboksamid

[0061]

Korak A: Priprema (R)-5-(2-(3-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina: pripremljen je u skladu sa postupkom iz Pripreme B, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u Koraku A sa (R)-2-(3-fluorofenil)pirolidinom.

Korak B: Priprema (R)-N-(5-(2-(3-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)morfolin-4-karboksamida: u rastvor (R)-5-(2-(3-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (50 mg, 0.17 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (41 mg, 0.25 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan morfolin (22 mg, 0.25 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 5% do 54% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (69 mg, prinos: 100%). MS (apci) m/z = 411.2 (M+H).

Referentni Primer 11

[0062]

(R)-N-5-(2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksiazetidin-1-karboksamid

[0063]

Korak A: Priprema (R)-5-(2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina: pripremljen je u skladu sa postupkom iz Pripreme B, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u Koraku A sa (R)-2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidinom.

1

Korak B: Priprema (R)-2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidina: pripremljen je primenom postupka iz Pripreme A, uz zamenu 2-bromo-1,4-difluorobenzena sa 1-bromo-3-hloro-5-fluorobenzenom u koraku A.

Korak C: Priprema (R)-N-(5-(2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksiazetidin-1-karboksamida: u rastvor (R)-5-(2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (20 mg, 0.06 mmol, pripremljen kao šta je opisano u sledećem paragrafu) u DCM (0.7 mL) je dodan CDI (20 mg, 0.12 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan azetidin-3-ol hidrohlorid (20 mg, 0.18 mmol) u jednoj porciji, nakon čega je dodan DIEA (0.032 mL, 0.18 mmol). Reakciona smeša je mešana preko noći pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 60% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (29 mg, prinos: 74%). MS (apci) m/z = 431.2 (M+H).

1

Referentni Primer 13

[0064]

(R)-N-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)morfolin-4-karboksamid

[0065] U rastvor (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Priprema B; 30 mg, 0.095 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (31 mg, 0.19 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan morfolin (17 mg, 0.19 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 5% do 55% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (37 mg, prinos: 91%). MS (apci) m/z = 429.2 (M+H).

Primer 14

[0066]

(S)-N-(5-((R)-2-(2.5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1.5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0067] U rastvor (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Priprema B; 30 mg, 0.095 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (31 mg, 0.19 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (17 mg, 0.19 mmol) [nabavljen kod Suven Life Sciences] u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena uz pomoć kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 50% smešom

2

acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (30 mg, prinos: 74%). MS (apci) m/z = 429.2 (M+H).

Primer 14A

[0068]

(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)-pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid sulfat

[0069] U rastvor (S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamida (4.5 mg, 0.011 mmol) u metanolu (1 mL) na ambijentalnoj temperaturi je dodana sumporna kiselina u MeOH (105 µL, 0.011 mmol). Nastao rastvor je mešan tokom 30 min, a tada je koncentrovan koje daje (S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid sulfat (5.2 mg, 0.0099 mmol, prinos: 94%) u formi žute čvrste materije.

Referentni Primer 15

[0070]

(3R,4R)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1.5-a]pirimidin-3-il)-3,4-dihidroksipirolidin-1-karboksamid

[0071] U rastvor (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Priprema B; 26 mg, 0.08 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (27 mg, 0.16 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (3R,4R)-pirolidin-3,4-diol (17.3 mg, 0.16 mmol) [dobiven uz pomoć otklanjanja zaštite sa benzila iz komercijalno dostupnog (3R,4R)-1-benzilpirolidin-3,4-diola] u jednoj porciji. Nekoliko kapi DMSO je dodano sa ciljem da se dobije bistri reakcioni rastvor. Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 45% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (27 mg, prinos: 74%). MS (apci) m/z = 445.2 (M+H).

Referentni primer 22

[0072]

(R)-N-(5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksi-3-metilazetidin-1-karboksamid

[0073] U rastvor (R)-5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Referentni Primer 8, Korak A; 22 mg, 0.066 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (22 mg, 0.13 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan 3-metoksiazetidin 3-metilazetidin-3-ol hidrohlorid (18 mg, 0.13 mmol) u jednoj porciji, nakon čega je dodan DIEA (0.035 mL, 0.20 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 5% do 50% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (21 mg, prinos: 71%). MS (apci) m/z = 445.2 (M+H).

Referentni Primer 23

[0074]

(R)-N-(5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)morfolin-4-karboksamid

[0075] Pripremljen je u skladu sa postupkom iz Referentnog Primera 22, uz zamenu (R)-5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina sa morfolinom koje daje produkt u formi žućkastog penastog praha (26 mg, prinos: 76%). MS (apci) m/z = 445.1 (M+H).

Referentni Primer 24

[0076]

(S)-tert-butil 4-(5-((R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-ilkarbamoil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat

[0077] Pripremljen je u skladu sa postupkom iz Referentnog Primera 22, uz zamenu (R)-5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina sa (S)-tert-butil 2-metilpiperazin-1-karboksilatom koje daje produkt u formi žućkastog penastog praha (47 mg, prinos: 80%). MS (apci) m/z = 558.1 (M+H).

Referentni Primer 25

[0078]

(S)-N-(5-((R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1.5-a]pirimidin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksamid hidrohlorid

[0079] U (S)-tert-butil 4-(5-((R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-ilkarbamoil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat (Primer 24; 47 mg, 0.084 mmol), je dodan 1 mL 4 N HCl (dioksan), a smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 10 min.

2

Reakciona smeša je koncentrovana, tretirana sa etrom pa je i filtrirana, koje daje finalni produkt u formi HCl soli kao fini bež prah. MS (apci) m/z = 458.1 (M+H).

Referentni Primer 26

[0080]

(R)-N-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-izopropilpiperazin-1-karboksamid

[0081] U rastvor (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Priprema B; 30 mg, 0.095 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (31 mg, 0.19 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan 1-izopropilpiperazin (24 mg, 0.19 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 5% do 45% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (40 mg, prinos: 90%). MS (apci) m/z = 470.1 (M+H).

Referentni Primer 27

[0082]

(R)-N-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-etilpiperazin-1-karboksamid

[0083] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 26, uz zamenu 1-izopropilpiperazina sa 1-etilpiperazinom, koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (40 mg, 92%). MS (apci) m/z = 456.1 (M+H).

Referentni Primer 28

[0084]

(R)-N-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)yrazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-metilpiperazin-1-karboksamid

[0085] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 26, uz zamenu 1-izopropilpiperazina sa 1-metilpiperazinom, koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (38 mg, 90%). MS (apci) m/z = 442.2 (M+H).

Referentni Primer 28A

[0086]

(R)-N-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-metilpiperazin-1-karboksamid hidrohlorid

[0087] U rastvor (R)-N-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-metilpiperazin-1-karboksamida u metanolu (1 mL) je dodana HCl u formi rastvora u dioksanu (30 µL). Nakon 30 min, reakciona smeša je koncentrovana koje daje (R)-N-(5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-metilpiperazin-1-karboksamid hidrohlorid u formi žute čvrste materije.

Referentni Primer 29

[0088]

2

N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3.5-dimetilpiperazin-1-karboksamid

[0089] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 26, uz zamenu 1-izopropilpiperazina sa 2,6-dimetilpiperazinom [predominantno cis, Aldrich], koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (34 mg, 78%). MS (apci) m/z = 456.2 (M+H).

Referentni Primer 30

[0090]

(S)-tert-butil 4-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-ilkarbamoil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat

[0091] Pripremljen primenom postupka koji je opisan u Primeru 26, uz zamenu 1-izopropilpiperazina sa (S)-tert-butil 2-metilpiperazin-1-karboksilatom, koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (47 mg, 90%). MS (apci) m/z = 542.2 (M+H).

Referentni Primer 31

[0092]

2

(S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-metilpiperazin-1-karboksamid hidrohlorid

[0093] U (S)-tert-butil 4-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-ilkarbamoil)-2-metilpiperazin-1-karboksilat (Primer 30; 47 mg, 0.087 mmol) je dodan 1 mL 4 N HCl (dioksan), a smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 1 časa. Reakciona smeša je koncentrovana, tretirana sa etrom, i filtrirana koje daje finalni produkt u formi HCl soli kao fini žućkasti prah. MS (apci) m/z = 442.2 (M+H).

Referentni Primer 35

[0094]

(S)-N-(5-((R)-2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0095] U rastvor (R)-5-(2-(3-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Referentni Primer 11, Korak A; 20 mg, 0.06 mmol) u DCM (0.6 mL) je dodan CDI (20 mg, 0.12 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (16 mg, 0.18 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana preko noći pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 60% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (50 mg, prinos: 83%). MS (apci) m/z = 445.2 (M+H).

Referentni Primer 36

[0096]

2

(R)-N-(5-((R)-2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0097]

Korak A: Priprema (R)-S-(2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina: pripremljen je u skladu sa postupkom iz Pripreme B, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u Koraku 1 sa (R)-2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidinom.

Korak B: Priprema (R)-N-(5-((R)-2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamida: u rastvor (R)-5-(2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (10 mg, 0.028 mmol, pripremljen kao šta je opisano u sledećem paragrafu) u DCM (0.6 mL) je dodan CDI (9 mg, 0.056 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (8 mg, 0.084 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana preko noći, a tada je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 50% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (9 mg, 69%). MS (apci) m/z = 461.2 (M+H).

Referentni Primer 37

[0098]

(S)-N-(5-((R)-2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0099] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 36, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol sa (R)-pirolidin-3-ol, koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (12 mg, 89%). MS (apci) m/z = 461.2 (M+H).

2

Referentni Primer 38

[0100]

(R)-N-(5-(2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0101] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 36, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol sa piperidin-4-ol, koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (11 mg, 80%). MS (apci) m/z = 475.2 (M+H).

Referentni Primer 39

[0102]

(R)-N-(5-((R)-2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)-pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0103] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 36, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol sa (R)-piperidin-3-ol hidrohloridom (nakon čega su dodana 3 ekvivalenta DIEA), koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (10 mg, 74%). MS (apci) m/z = 475.2 (M+H).

2

Referentni Primer 40

[0104]

(S)-N-(5-((R)-2-(2-(difluorometil)-5-fluorofenil)pirolidin-1il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0105] Pripremljen primenom postupka koji je opisan u Primeru 36, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol sa (S)-piperidin-3-ol hidrohloridom (nakon čega su dodana 3 ekvivalenta DIEA), koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (11 mg, 80%). MS (apci) m/z = 475.2 (M+H).

Referentni Primer 41

[0106]

(R)-N-(5-((R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0107] U rastvor (R)-5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (10 mg, 0.030 mmol, pripremljen kao šta je opisano u Primeru 8) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (10 mg, 0.06 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (5 mg, 0.06 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 20 h pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 5% do 50% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (9 mg, prinos: 67%). MS (apci) m/z = 445.2 (M+H).

Referentni Primer 42

[0108]

(R)-N-(5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-4-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0109] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 41, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol sa piperidin-4-ol, koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (8 mg, 60%). MS (apci) m/z = 459.2 (M+H).

Referentni Primer 43

[0110]

(R)-N-(5-((R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0111] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 41, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol sa (R)-piperidin-3-ol hidrohloridom (nakon čega su dodana 3 ekvivalenta DIEA), koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (9.4 mg, 69%). MS (apci) m/z = 459.1 (M+H).

1

Referentni Primer 44

[0112]

(S)-N-(5-((R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0113] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 41, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol sa (S)-piperidin-3-ol hidrohloridom (nakon čega su dodana 3 ekvivalenta DIEA), koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (9.3 mg, 68%). MS (apci) m/z = 459.2 (M+H).

Referentni Primer 81

[0114]

(S)-N-(5-((R)-2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0115] U rastvor (R)-5-(2-(2-hloro-5-fluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Referentni Primer 8, Korak A; 30 mg, 0.09 mmol) u DCM (0.8 mL) je dodan CDI (29 mg, 0.18 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (15.8 mg, 0.181 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 5% do 53% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkastog penastog praha (33 mg, prinos: 81%). MS (apci) m/z = 445.2 (M+H).

2

Referentni Primer 84

[0116]

(S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0117]

Korak A: Priprema (R)-5-(2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina: pripremljen je u skladu sa Pripremom B, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u Koraku 1 sa (R)-2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil) pirolidinom.

Korak B: Priprema (R)-2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidina: pripremljen je primenom postupka iz Pripreme A, uz zamenu 2-bromo-1,4-difluorobenzena sa 2-bromo-4-fluoro-1-(trifluorometil)benzenom u Koraku A.

Korak C: Priprema (S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamida: U rastvor (R)-5-(2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (25 mg, 0.068 mmol) u DCM (1 mL) je dodan CDI (22 mg, 0.14 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (18 mg, 0.21 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana preko noći pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 60% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (28 mg, prinos: 86%). MS (apci) m/z = 479.2 (M+H).

Referentni Primer 85

[0118]

(R)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0119] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 84, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol u Koraku C sa (R)-pirolidin-3-ol, koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (26 mg, 79%). MS (apci) m/z = 479.2 (M+H).

Referentni Primer 86

[0120]

(R)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0121] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 84, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol u Koraku C sa (R)-piperidin-3-ol, koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (37 mg, 91%). MS (apci) m/z = 493.2 (M+H).

4

Referentni Primer 87

[0122]

(S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-(trifluorometil)fenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[0123] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 84, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol u Koraku C sa (S)-piperidin-3-ol, koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (39 mg, 97%). MS (apci) m/z = 493.2 (M+H).

Referentni Primer 88

[0124]

[0125]

(S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoropiridin-3-il)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

Korak A: Priprema (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina: pripremljen je u skladu sa Pripremom B, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u Koraku 1 sa (R)-3-fluoro-5-(pirolidin-2-il)piridinom.

Korak B: Priprema (R)-3-fluoro-5-(pirolidin-2-il)piridina: Pripremljen je primenom postupka iz Pripreme A, uz zamenu 2-bromo-1,4-difluorobenzena sa 3-bromo-5-fluoropiridinom u Koraku A.

Korak C: Priprema (S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoropiridin-3-il)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamida: u rastvoru (R)-5-(2-(5-fluoropiridin-3-il)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (25 mg, 0.084 mmol) u DCM (1 mL) je dodan CDI (27 mg, 0.17 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom dva časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (15 mg, 0.17 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana preko noći pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 40% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (27 mg, prinos: 78%). MS (apci) m/z = 412.2 (M+H).

Referentni Primer 89

[0126]

(R)-N-(5-((R)-2-(5-fluoropiridin-3-il)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0127] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Primeru 88, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol u Koraku C sa (R)-pirolidin-3-ol, koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (28 mg, 81%). MS (apci) m/z = 412.2 (M+H).

Referentni Primer 90

(S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-metoksiohenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0128]

Korak A: Priprema (R)-5-(2-(5-fluoro-2-metoksifenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina: pripremljen je u skladu sa Pripremom B, uz zamenu (R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidina u Koraku 1 sa (R)-2-(5-fluoro-2-metoksifenil)pirolidinom.

Korak B: Priprema (R)-2-(5-fluoro-2-metoksifenil)pirolidina: pripremljen je primenom postupka iz Pripreme A, uz zamenu 2-bromo-1,4-difluorobenzena sa 2-bromo-4-fluoro-1-metoksibenzenom u Koraku A.

Korak C: Priprema (S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-metoksifenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamida: u rastvor (R)-5-(2-(5-fluoro-2-metoksifenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (25 mg, 0.076 mmol) u DCM (5 mL) i DIEA (0.04 mL, 0.23 mmol) je dodan CDI (25 mg, 0.15 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom jednog časa je dodan (S)-pirolidin-3-ol (20 mg, 0.23 mmol) u jednoj porciji. Reakciona smeša je mešana preko noći pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 60% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije (28 mg, prinos: 83%). MS (apci) m/z = 441.2 (M+H).

Referentni Primer 91

[0130]

(S)-N-(5-((R)-2-(5-fluoro-2-metoksifenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipiperidin-1-karboksamid

[131] Pripremljen je u skladu sa postupkom koji je opisan u Primeru 90, uz zamenu (S)-pirolidin-3-ol u Koraku C sa (S)-piperidin-3-ol, koje daje finalni produkt u formi žućkaste čvrste materije. MS (apci) m/z = 455.2 (M+H).

Referentni primer 92

[0132]

(1S,4S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan-5-karboksamid

[0133] U rastvor (R)-5-(2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-amina (Priprema B; 50 mg, 0.16 mmol) u DCM (1.0 mL) je dodan CDI (51 mg, 0.32 mmol) na ambijentalnoj temperaturi u jednoj porciji. Nakon mešanja tokom 90 min je dodan (1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan hidrohlorid (43 mg, 0.32 mmol) u jednoj porciji, nakon čega je dodana DIEA (0.083 mL, 0.48 mmol). Reakciona smeša je mešana tokom 5 min pre no je koncentrovana i direktno prečišćena primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza), uz eluiranje sa 0% do 60% smešom acetonitril/voda koje daje finalni produkt u formi bledožućkastog praha (60 mg, prinos: 86%). MS (apci) m/z = 441.2 (M+H).

Referentni Primer 93

[0134]

(R)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid

[0135] Pripremljen je primenom postupka koji je opisan u Referentnom Primeru 92, uz zamenu (1S,4S)-2-oksa-5-azabiciklo[2.2.1]heptan hidrohlorida sa (R)-pirolidin-3-ol. Sirovi materijal je prečišćen primenom kolonske hromatografije (reverzna-faza) sa 5% do 50% smešom acetonitril/voda (eluent), koje daje finalni produkt u formi čvrste materije (89 mg, prinos: 66%). MS (apci) m/z = 429.2 (M+H).

Claims (4)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje naznačeno time što je:

   (S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time što je spoj trifluoracetatna so, so hidrogen sulfata ili hidrokloridna so.
3. 3. Jedinjenje prema zahtevu 1, naznačeno time što je jedinjenje:

   (S)-N-(5-((R)-2-(2,5-difluorofenil)pirolidin-1-il)pirazolo[1,5-a]pirimidin-3-il)-3-hidroksipirolidin-1-karboksamid sulfat.
4. 4. Farmaceutska kompozicija naznačena time što sadrži jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, i farmaceutski prihvatljiv razblaživač ili nosač. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5