RS57846B1

RS57846B1 - Dobijanje (s,s)-sekoizolaricirezinol diglukozida i (r,r)-sekoizolaricirezinol diglukozida

Info

Publication number: RS57846B1
Application number: RS20181236A
Authority: RS
Inventors: Melpo Christofidou-Solomidou; Kyriacos C Nicolaou; Roman A Valiulin; Nicholas Simmons; Philipp M Heretsch
Original assignee: Univ Pennsylvania; Scripps Research Inst
Priority date: 2013-06-10
Filing date: 2014-06-10
Publication date: 2018-12-31
Also published as: US20160137682A1; AU2014278362A1; SI3007557T1; JP2019147803A; TR201815423T4; KR20160023770A; SMT201800575T1; IL269622A; JP6513853B2; US10870670B2; ES2691845T3; WO2014200964A1; CN107955046A; CY1120759T1; CA2920346A1; DK3007557T3; KR102270124B1; CN105705018B; EP3488697A1; HUE040022T2

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Pronalazak se odnosi na postupke za dobijanje (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozida i (R,R)-sekoizolaricirezinol diglukozida, kao i supstanci koje sadrže iste.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Jonizujuće zračenje proizvodi širok spektar štetnih efekata u živim organizmima. Ljudi su izloženi zračenju tokom dijagnostičkih i terapijskih radiografskih postupaka, prilikom upotrebe elektronskih uređaja, od pozadinskog zračenja kod nuklearnih udesa, kao i prilikom letenja i putovanja u kosmos. Aktuelna globalna kretanja dodatno su identifikovala terorizam kao opasno sredstvo pomoću kojeg potencijalno veliki broj ljudi može biti izložen smrtonosnim količinama zračenja. Zato je od velikog značaja da se identifikuju sredstva za zaštitu koja se mogu primeniti i pre izlaganja zračenju i kao tretman nakon izlaganja radioaktivnom zračenju.

[0003] Prirodni proizvodi i njihovi analozi sve više se smatraju obećavajućim potencijalima za otkrivanje i razvoj sredstava za zaštitu od zračenja. U biljkama su detektovani (2R, 3R) i (2S, 3S)] enantiomeri sekoizolaricirezinola i mezo-sekoizolaricirezinola, ali se samo (2R, 3R)-[(-)sekoizolaricirezinol] izomer može naći u dovoljnim količinama. Iako je ovo jedinjenje dostupno ekstrakcijom iz semena lana, neophodno naknadno prečišćavanje je nimalo jednostavan i zametan proces. Shodno tome, postoji potreba da se razvije kratka i enantioselektivna sinteza kako bi se čist enantiomerni sekoizolaricirezinol dobio iz lako dostupnih komercijalnih materijala.

[0004] Sadiq, et al. (Mol. Cell Biochem.2013, 373, 179-187) ocenjuje in vitro i in vivo ameliorativni antioksidantni potencijal sekoizolaricirezinol diglukozida. Ford, et al. (J. Nat. Prod.2001, 64, 1388-1397) istražuje biosintetički put ka kancer-hemopreventivnim sekoizolaricirezinol diglukozidhidroksimetil glutaril estrom vezanim ligninskim oligomerima u semenu lana. EP 2514426 A1 odnosi se na jedinjenja za lečenje inflamatornih procesa koji su deo brojnih bolesti kao što su bolesti zapaljenja creva. Schmidt, et al. (J. Carbohydrate Chem.1985, 4(2), 141-169) bavi se O-(α-D-glukopiranozil)trihloroacetimidatom kao donorom glukozila.

KRATAK PREGLED PRONALASKA

[0005] Predmetni pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje jedinjenja formule ((S,S) -SDG-1) ((S,S) -sekoizo-laricirezinol diglukozidi-1)

ili jedinjenja formule (R,R)-SDG-2

pri čemu se postupak sastoji od:

(a) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (4)

sa vanilinom putem Stobbe-ove reakcije kondenzacije, posle čega sledi reakcija esterifikacije u svrhu dobijanja jedinjenja formule (5)

(b) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (5) sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S1)

gde je, opciono, pomenuto redukciono sredstvo H2i Pd/C;

(c) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S1) sa benzilacionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (

gde je, opciono, pomenuto benzilaciono sredstvo BnBr i NaH;

(d) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S2) sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (6)

gde je, opciono, pomenuto redukciono sredstvo litijum aluminijum hidrid (LAH) u THF-u;

(e) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (6)

sa jedinjenjem formule (7)

u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-S3)

ili jedinjenja formule (R,R)-S4), prema opisanom redosledu,

(f) rastvaranja benzil etara jedinjenja formule ((S,S)-S3) i benzil etara jedinjenja formule ((R,R)-S4), posle čega sledi postupak razdvajanja u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-8)

ili jedinjenja formule ((R,R)-9), respektivno,

(g) otklanjanje zaštite iz jedinjenja formule ((S,S)-8) ili jedinjenja formule ((R,R)-9) u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-SDG-1) ili jedinjenja formule ((R,R)-SDG-2), prema opisanom redosledu.

[0006] U jednom izvođenju, dovođenje u reakciju iz koraka (e) izvodi se u prisustvu Lewis-ove kiseline, kao što je TMSOTf.

[0007] U jednom izvođenju, dovođenje u reakciju iz koraka (e) izvodi se u prisustvu aktiviranih molekularnih sita.

[0008] U jednom izvođenju, rastvaranje se izvodi u MeOH u prisustvu H2 i Pd/C.

[0009] U jednom izvođenju, postupak razdvajanja izvodi se korišćenjem preparativne tankoslojne hromatografije.

[0010] U jednom izvođenju, otklanjanje zaštite iz koraka (g) izvodi se u rastvoru NaOMe i MeOH.

[0011] U jednom izvođenju, Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi se u MeOH i u prisustvu litijuma. Litijum može biti u obliku litijumskih žica.

[0012] U jednom izvođenju, jedinjenje formule (4) dobija se postupkom koji se sastoji od dovođenja u reakciju vanilina i metil sukcinata posredstvom Stobbe-ove reakcije kondenzacije, posle čega sledi reakcija esterifikacije. U jednom izvođenju, Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi se u MeOH i u prisustvu litijumskih žica.

[0013] Ostale karakteristike i prednosti predloženog pronalaska postaju očigledne iz detaljnog opisa, primera i slika u nastavku.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0014]

Slika 1 predstavlja ORTEP prikaz dihidroksi jedinjenja 6.

Slika 2 ilustruje snagu redukcije sintetičkog (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2. Povećanje apsorpcije pri 700 nm ukazuje na povećanje snage redukcije. Rezultati su prikazani kao srednje ± standardno odstupanje (n = 3). *p < 0,05 značajno niže nego prirodni (S,S)-SDG-1, sintetički (R,R)-SDG-2, i sintetički (S,S)-SDG-1; **p < 0,05 značajno veće nego sintetički (R,R)-SDG-2, sintetički (S,S)-SDG-1, askorbinska kiselina i α-tokoferol.

Slika 3 ilustruje snagu redukcije sintetičkog (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2. Brzina reakcije je linearna u opsegu koncentracije od 1-100 µM. Jednačina linearne regresije je korišćena da bi se odredio EC50. Rezultati su prikazani kao srednje ± standardno odstupanje (n = 3). Prirodni (S,S)-SDG-1, sintetički (R,R)-SDG-2, i sintetički (S,S)-SDG-1 nisu se značajno međusobno razlikovali. *p < 0,05 značajno više nego prirodni (S,S)-SDG-1, sintetički (R,R)-SDG-2, i sintetički (S,S)-SDG-1.

Slika 4 prikazuje DPPH aktivnost "čišćenja" slobodnih radikala kod prirodnog (S,S)-SDG-1, sintetičkog (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2, askorbinske kiseline, i α-tokoferola. Aktivnost "čišćenja" radikala izmerena je kao smanjenje apsorpcije DPPH pri 517 nm. Rezultati su prikazani kao srednje ± standardno odstupanje (n = 3). *p < 0,05 značajno niže nego sva druga jedinjenja, **p < 0,05 značajno niže nego prirodni (S,S)-SDG-1.

Slika 5 prikazuje DPPH aktivnost "čišćenja" slobodnih radikala kod prirodnog (S,S)-SDG-1, sintetičkog (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2, askorbinske kiseline, i α-tokoferola. Jednačina linearne regresije je korišćena da bi se odredio EC50. Brzina reakcije je linearna u opsegu koncentracije od 1-100 µM. Rezultati su prikazani kao srednje ± standardno odstupanje (n = 3). Prirodni (S,S)-SDG-1, sintetički (R,R)-SDG-2, sintetički (S,S)-SDG-1, i α-tokoferol nisu bili značajno različiti. *p < 0,05 značajno više nego prirodni (S,S)-SDG-1, sintetički (R,R)-SDG-2, sintetički (S,S)-SDG-1, i α-tokoferol.

Slika 6 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar jedinjenja 4. Slika 7 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar jedinjenja 5. Slika 8 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar jedinjenja S1. Slika 9 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar jedinjenja S2. Slika 10 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar jedinjenja 6. Slika 11 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar 1:1 (S,S)-S3/(R,R)-S4..

Slika 12 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar jedinjenja (S,S)-8.

Slika 13 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) i<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) spektar jedinjenja (R,R)-9.

Slika 14 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CD3OD) i<13>C NMR (150 MHz, CD3OD) spektar jedinjenja (S,S)-SDG-1.

Slika 15 prikazuje<1>H NMR (600 MHz, CD3OD) i<13>C NMR (150 MHz, CD3OD) spektar jedinjenja (R,R)-SDG-2.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0015] Ovaj pronalazak obezbeđuje postupak za dobijanje jedinjenja formule ((S,S) -SDG-1)

pri čemu se finalni koraci postupka sastoje od:

(e) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (6)

sa jedinjenjem formule (7)

u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-S3)

(f) rastvaranja benzil etara jedinjenja formule ((S,S)-S3), posle čega sledi postupak razdvajanja u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-8)

(g) otklanjanje zaštite jedinjenja formule ((S,S)-8) u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-SDG-1).

[0016] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi u prisustvu Lewis-ove kiseline. U određenim izvođenjima, pomenuta Lewis-ova kiselina je TMSOTf. U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi u prisustvu aktiviranih molekularnih sita.

[0017] U nekim izvođenjima, pomenuto rastvaranje se izvodi u MeOH u prisustvu H2 i Pd/C.

[0018] U nekim izvođenjima, pomenuti postupak razdvajanja se izvodi korišćenjem preparativne tankoslojne hromatografije.

[0019] U nekim izvođenjima, pomenuto otklanjanje izvodi se u rastvoru NaOMe i MeOH.

[0020] U ovom pronalasku, postupak osim toga obuhvata prethodni korak (d) dobijanja pomenutog jedinjenja formule (6) putem dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S2)

sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (6). U nekim izvođenjima, pomenuto redukciono sredstvo je litijum aluminijum hidrid (LAH) u THF-u;

[0021] U ovom pronalasku, postupak osim toga obuhvata i prethodni korak (c) dobijanja pomenutog jedinjenja formule (S2) dovođenjem u reakciju jedinjenja formule (S1)

sa benzilacionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S2). U nekim izvođenjima, pomenuto benzilaciono sredstvo je BnBr i NaH.

[0022] U ovom pronalasku, postupak osim toga obuhvata još i prethodni korak (b) dobijanja

pomenutog jedinjenja formule (S1) dovođenjem u reakciju jedinjenja formule (5)

sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S1). U nekim izvođenjima, pomenuto redukciono sredstvo je H2i Pd/C;

[0023] U ovom pronalasku, postupak takođe obuhvata prethodni korak (a) dobijanja pomenutog jedinjenja formule (5) dovođenjem u reakciju jedinjenja formule (4)

sa vanilinom putem Stobbe-ove reakcije kondenzacije, posle čega sledi reakcija esterifikacije u svrhu dobijanja jedinjenja formule (5). U nekim izvođenjima, Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi se u MeOH i u prisustvu litijuma (npr. litijumskih žica). U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija esterifikacije se izvodi sa MeOH u prisustvu H2SO4.

[0024] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje formule (4) dobija se postupkom koji se sastoji od dovođenja u reakciju vanilina i metil sukcinata posredstvom Stobbe-ove reakcije kondenzacije, posle čega sledi reakcija esterifikacije. U nekim izvođenjima, pomenuta Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi se u MeOH i u prisustvu litijumskih žica. U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija esterifikacije se izvodi sa MeOH u prisustvu H2SO4.

[0025] Ovaj pronalazak shodno tome obezbeđuje postupak za dobijanje jedinjenja formule ((S,S) -SDG-1)

pri čemu se postupak sastoji od:

(a) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (4)

sa vanilinom putem Stobbe-ove reakcije kondenzacije, posle čega sledi reakcija esterifikacije u svrhu dobijanja jedinjenja formule (5).

(c) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S1)

sa benzilacionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S2)

(e) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (6) sa jedinjenjem formule (7)

u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-S3)

i

(g) otklanjanja zaštite jedinjenja formule ((S,S)-8) u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-SDG-1).

[0026] Ovaj pronalazak dodatno obezbeđuje postupak za dobijanje jedinjenja formule ((S,S) -SDG-2)

pri čemu se finalni koraci postupka sastoje od:

(e) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (6)

sa jedinjenjem formule (7)

u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((R,R)-S4)

(f) rastvaranja benzil etara jedinjenja formule ((R,R)-S4), posle čega sledi postupak razdvajanja u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((R,R)-9)

i

(g) otklanjanja zaštite jedinjenja formule ((S,S)-9) u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((R,R)-SDG-2).

[0027] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi u prisustvu Lewis-ove kiseline. U određenim izvođenjima, pomenuta Lewis-ova kiselina je TMSOTf.

[0028] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija se izvodi u prisustvu aktiviranih molekularnih sita.

[0029] U jednom izvođenju, pomenuto rastvaranje se izvodi u prisustvu H2i Pd/C u MeOH. U nekim izvođenjima se pomenuti postupak razdvajanja izvodi korišćenjem preparativne tankoslojne hromatografije.

[0030] U nekim izvođenjima, pomenuto otklanjanje zaštite se izvodi u rastvoru NaOMe i MeOH.

[0031] U ovom pronalasku, postupak osim toga obuhvata prethodni korak (d) dobijanja pomenutog jedinjenja formule (6) putem dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S2)

sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (6).

[0032] U nekim izvođenjima, pomenuto redukciono sredstvo je litijum aluminijum hidrid (LAH) u THF-u;

[0033] U ovom pronalasku, postupak osim toga obuhvata i prethodni korak (c) dobijanja pomenutog jedinjenja formule (S2) dovođenjem u reakciju jedinjenja formule (S1)

[0034] U ovom pronalasku, postupak osim toga obuhvata još i prethodni korak (b) dobijanja pomenutog jedinjenja formule (S1) dovođenjem u reakciju jedinjenja formule (5)

[0035] U ovom pronalasku, postupak takođe obuhvata prethodni korak (a) dobijanja pomenutog jedinjenja formule (5) dovođenjem u reakciju jedinjenja formule (4)

[0036] U nekim izvođenjima, Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi se u MeOH i u prisustvu litijuma (npr. litijumskih žica).

[0037] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija esterifikacije se izvodi sa MeOH u prisustvu H2SO4.

[0038] U nekim izvođenjima, pomenuto jedinjenje formule (4) dobija se postupkom koji se sastoji od dovođenja u reakciju vanilina i metil sukcinata posredstvom Stobbe-ove reakcije kondenzacije, posle čega sledi reakcija esterifikacije.

[0039] U nekim izvođenjima, Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi se u MeOH i u prisustvu litijumskih žica.

[0040] U nekim izvođenjima, pomenuta reakcija esterifikacije se izvodi sa MeOH u prisustvu H2SO4.

[0041] Ovaj pronalazak shodno tome obezbeđuje postupak za dobijanje jedinjenja formule ((R, R)-SDG-2)

pri čemu se postupak sastoji od:

(a) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (4)

(b) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (5)

sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S1)

(c) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S1)

sa benzilacionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S2)

(e) dovođenjem u reakciju jedinjenja formule (6) sa jedinjenjem formule (7)

u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((R,R)-S4)

(f) rastvaranjem benzil etara jedinjenja formule ((R,R)-S4), posle čega sledi postupak razdvajanja u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((R,R)-9)

i

(f) uklanjanja zaštite jedinjenja formule ((R,R)-9) u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((R,R)-SDG-2).

[0042] Izraz "dovođenje u reakciju" treba da označi spajanje navedenih reagenasa na takav način da se omogući njihova molekularna interakcija i hemijska transformacija u skladu sa termodinamikom i kinetikom hemijskog sistema. Dovođenje u reakciju može biti olakšano, posebno za čvrste reagense, korišćenjem odgovarajućeg rastvarača ili mešavine rastvarača u kojima je bar jedan od reagenasa barem delimično rastvorljiv. Dovođenje u reakciju se obično vrši u odgovarajućem vremenu i pod uslovima pogodnim za postizanje željene hemijske transformacije.

[0043] Ovde opisani postupci mogu da uključuju druge pogodne početne materijale putem prethodno opisanih postupaka sinteze. U nekim izvođenjima, ovde opisani postupci mogu uključivati i dodatne korake pre ili posle prethodno opisanih koraka, da bi se dodale ili uklonile odgovarajuće zaštitne grupe. Pored toga, moguće je različite sintetičke korake izvesti u alternativnoj sekvenci ili redu kako bi se dobila željena jedinjenja.

[0044] Shodno tome, ovaj pronalazak obezbeđuje sažet postupak za dobijanje (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozida ((S,S)-SDG-1) i (R,R)-sekoizolariciresinol diglukozida ((R,R)-SDG-2) počinjući od komercijalno dostupnih jedinjenja, npr. vanilina. Jedinjenja ((S,S)-SDG-1) i ((R,R)-SDG-2) su bioaktivni sastojci semena lana. Oba jedinjenja poseduju veliku snagu redukcije i visoku aktivnost čiščćenja slobodnih radikala za hidroksilne, peroksilne, i DPPH (2,2-difenil-1-pikrilhidrazil) slobodne radikale.

[0045] Postupcima iz ovog pronalaska može se dobiti veoma čisto jedinjenje (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozid ((S,S)-SDG-1) i jedinjenje (R,R)-sekoizolaricirezinol diglukozid ((R,R)-SDG-2). Za ((S,S)-SDG-1), "veoma čisto" znači da je jedinjenje ((S,S)-SDG-1) makar suštinski odvojeno od okruženja u kom je napravljeno ili detektovano. Značajna čistoća može da obuhvata jedinjenja koja sadrže najmanje oko 80.0%, ili najmanje oko 85,0%, ili najmanje oko 90,0%, ili najmanje oko 95,0%, ili najmanje oko 97,0%, ili najmanje oko 98,0%, ili najmanje oko 99,0%, ili najmanje oko 99,2%, ili najmanje oko 99,4%, ili najmanje oko 99,6%, ili najmanje oko 99,8%, ili najmanje oko 99,9%, ili najmanje oko 100% težine jedinjenja. Za ((R,R)-SDG-2), "veoma čisto" znači da je jedinjenje ((R,R)-SDG-2) makar suštinski odvojeno od okruženja u kom je napravljeno ili detektovano. Značajna čistoća može da obuhvata jedinjenja koja sadrže najmanje oko 80,0%, ili najmanje oko 85,0%, ili najmanje oko 90,0%, ili najmanje oko 95,0%, ili najmanje oko 97,0%, ili najmanje oko 98,0%, ili najmanje oko 99,0%, ili najmanje oko 99,2%, ili najmanje oko 99,4%, ili najmanje oko 99,6%, ili najmanje oko 99,8%, ili najmanje oko 99,9%, ili najmanje oko 100% težine jedinjenja.

[0046] "Farmaceutska supstanca" je formulacija koja obuhvata jedinjenja u obliku pogodnom za administriranje subjektu. U nekim izvođenjima, farmaceutska supstanca je u rinfuznom obliku ili u obliku jedinične doze. Oblik jedinične doze je bilo koji od mnoštva oblika, uključujući, na primer, kapsulu, IV kesu, tabletu, jednostruku pumpu na inhalatoru aerosola, ili bočiču. Količina aktivnog sastojka (npr. formulacije jedinjenja prema ovom pronalasku ili njegove soli, solvata, polimorfa, ili proleka) u jediničnoj dozi supstance je efektivna količina i menja se zavisno od odgovarajućeg konkretnog tretmana. Stručnjak će razumeti da je ponekad neophodno izvršiti rutinske varijacije u doziranju u zavisnosti od uzrasta i stanja pacijenta. Doziranje će takođe zavisiti od načina isporuke leka. Razmatrani su različiti načini, uključujući oralni, plućni, rektalni, parenteralni, transdermalni, subkutani, intravenozni, intramuskularni, intraperitonealni, inhalacioni, bukalni, sublingvalni, intrapleuralni, intratekalni, intranazalni i drugi. Oblici doziranja za topikalno ili transdermalno administriranje jedinjenja prema ovom pronalasku uključuju praškove, sprejeve, masti, paste, kreme, losione, gelove, rastvore, flastere i inhalante. U nekim izvođenjima, aktivno jedinjenje se u sterilnim uslovima meša sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, i sa konzervansima, puferima, ili pospešivačima koji su eventualno potrebni.

[0047] "Subjekat" obuhvata sisare, npr. ljude, kućne ljubimce (npr., pse, mačke, ptice i slično), domaće životinje (npr. krave, ovce, svinje, konje, živinu i slično) i laboratorijske životinje (npr. pacove, miševe, zamorčiće, ptice i slično). U nekim izvođenjima, subjekat je čovek.

[0048] Kao što se ovde koristi, izraz "farmaceutski prihvatljiv" odnosi se na ona jedinjenja, materijale, supstance, nosače, i/ili oblike doziranja koji su, u granicama normalne medicinske procene, pogodni za upotrebu u dodiru sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijske reakcije, ili drugih problema ili komplikacija, uz srazmerno razuman odnos koristi i rizika.

[0049] "Farmaceutski prihvatljiv ekscipijent" označava ekscipijent koji je koristan za dobijanje farmaceutske kompozicije koja je uopšteno gledano bezbedna, netoksična i nije ni biološki ni na neki drugi način nepoželjna i sadrži ekscipijent koji je prihvatljiv za veterinarsku upotrebu kao i za ljudsku farmaceutsku upotrebu. Izraz "Farmaceutski prihvatljiv ekscipijent" kako se ovde koristi, obuhvata jedan ili više takvih ekscipijenata.

[0050] Ovde su takođe opisana jedinjenja koja sadrže (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozid ((S,S)-SDG-1). Ta jedinjenja su poželjno farmaceutske supstance koje sadrže (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozid ((S,S)-SDG-1) i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent. U nekim izvođenjima, supstance i farmaceutske supstance mogu se dobiti sa veoma čistim (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozidom ((S,S)-SDG- 1). U nekim izvođenjima, supstance i farmaceutske supstance imaju diastereomeski višak (DE) od najmanje 90% DE, poželjno najmanje 95% DE, još poželjnije najmanje 98% DE, i čak još poželjnije najmanje 99% DE i najpoželjnije oko 100% DE. Supstance i farmaceutske supstance se takođe mogu dobiti kao smeša diastereomernih oblika jedinjenja (npr. kao racemska smeša ili kao smeša u odnosu 60:40, 70:30, 80:20 ili 90:10 ((S,S)-SDG-1) prema ((R,R)-SDG-2)).

[0051] Ovde su takođe opisane supstance koje sadrže (R,R)-sekoizolaricirezinol diglukozid ((R,R)-SDG-2). Ta jedinjenja su poželjno farmaceutske supstance koje sadrže (R,R)-sekoizolaricirezinol diglukozid ((R,R)-SDG-2) i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijent. U nekim izvođenjima, supstance i farmaceutske supstance mogu se dobiti pomoću veoma čistog (R,R)-sekoizolaricirezinol diglukozida ((R,R)-SDG- 2). U nekim izvođenjima, supstance i farmaceutske supstance imaju diastereomeski višak (DE) od najmanje 90% DE, poželjno najmanje 95% DE, još poželjnije najmanje 98% DE, i čak još poželjnije najmanje 99% DE i najpoželjnije oko 100% DE. Supstance i farmaceutske supstance se takođe mogu dobiti kao smeša diastereomernih oblika jedinjenja (npr. kao racemska smeša ili kao smeša u odnosu 60:40, 70:30, 80:20 u 90:10 ((R,R)-SDG-2) prema ((S,S)-SDG-1)).

[0052] Kroz ceo opis, gde su supstance opisane da imaju, obuhvataju ili sadrže specifične komponente, smatra se da se supstance takođe uglavnom sastoje od, ili sastoje od, navedenih komponenata. Analogno tome, tamo gde su postupci opisani da imaju, uključuju ili sadrže specifične korake postupka, postupci se takođe uglavnom sastoje od, ili sastoje od, navedenih koraka postupka. Štaviše, moguće je istovremeno izvoditi dva ili više koraka ili radnji.

[0053] Sledeći primeri su prikazani da bi se bolje ilustrovala poželjna izvođenja ovog pronalaska. Međutim, ni u kom slučaju ih ne treba smatrati ograničavajućim u pogledu oblasti pronalaska.

PRIMERI

Opšti postupci za hemijske reakcije

[0054] Sve reakcije su izvođene u atmosferi argona sa suvim rastvaračima u bezvodnim uslovima, osim ako nije drugačije navedeno. Suvi tetrahidrofuran (THF), dimetilformamid (DMF) i metilen hlorid (CH2CI2) dobijeni su propuštanjem komercijalno dostupnih prethodno osušenih formulacija bez kiseonika kroz aktivirane kolone glinice (bezvdni aluminijum oksid). Prinos se odnosi na hromatografski i spektroskopski (<1>H NMR) homogene materijale, osim ako nije drugačije naznačeno. Nabavljeni su reagensi najvišeg komercijalnog kvaliteta i korišćeni su bez dodatnog prečišćavanja, osim ako nije drugačije naznačeno. Reakcije su nadzirane tankoslojnom hromatografijom (TLC) izvedenom na E. Merck silika gel pločama (60F-254) od 0,25 mm koristeći UV svetlost kao vizuelizujuće sredstvo i etanolni rastvor fosfomolibdenske kiseline i cerijum sulfata i zagrevanje kao sredstva za pospešivanje. E. Merck silika gel (60, veličina čestica 0,040-0,063 mm) korišćen je za fleš hromatografiju na stubu. Razdvajanja preparativnom tankoslojnom hromatografijom (PTLC) su izvedene na E. Merck silika gel pločama (60F-254) od 0,25 ili 0,50 mm osim ako nije drugačije naznačeno. NMR spektri su snimljeni na instrumentu Bruker DRKS-600 i kalibrisani korišćenjem rezidualnog nedeuterisanog rastvarača kao interne reference. Sledeće skraćenice su korišćene radi pojašnjavanja višestrukosti: s = singlet, d = dublet, t = triplet, m = multiplet. Snimljeni su IR spektri na spektrometru Perkin-Elmer Spectrum 100 FT-IR. Maseni spektri visoke rezolucije (HR-MS) snimljeni su na masenom spektrometru VG ZAB-ZSE koristeći ESI (elektrosprej jonizacija).

[0055] Shema 1 prikazuje putanju reakcije koja je korišćena u sintezi jedinjenja (6), intermedijarnog jedinjenja za dobijanje (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozida i (R,R)-sekoizolaricirezinol diglukozida.

Primer 1: Sinteza fenola 4

[0056]

[0057] Rastvoru vanilina 3 (14,0 g, 92,1 mmol, 1 ekviv.) i dimetil sukcinata (12,13 mL, 92,1 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (450 mL), polako, komadić po komadić, uz pomoć ledenog kupatila radi upravljanja egzotermom, dodavana je litijumska žica (1,79 g, 257,9 mmol, 2,8 ekviv.). Pošto se početni litijum potpuno rastvorio, polako je, komadić po komadić, dodato još litijuma (1,98 g, 285,5 mmol, 3,1 ekviv.) i mešano je dok se nije potpuno rastvorio. Zatim je reakciona smeša pri povratnom toku zagrevana 48 h. Posle hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, većina metanola je uklonjena koncentrovanjem na rotacionom isparivaču. Dodat je EtOAc (1000 mL) i smeša je isprana sa 2 M vod. rastvora HCl (700 mL), H2O (3 X 1000 mL), a zatim slanim rastvorom (200 mL). Organski sloj je zatim osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan. Sirov materijal je rastvoren u MeOH (230 ml), dodat je H2SO4(1 mL), i rastvor je preko noći zagrevan uz povratni protok. Posle hlađenja sledećeg jutra, dodato je NaHCO3(3,0 g) da bi se H2SO4ugasila i rastvor je uglavnom koncentrovan pomoću rotacionog isparivača. Dodat je EtOAc (500 ml) i rastvor je ispran sa H2O (2 X 200 mL), zatim slanim rastvorom (100 mL). Organski sloj je zatim osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan do oblika smeđeg ulja. Rastvaranjem u maloj kolilčini CH2Cl2i zatim fleš hromatografijom na stubovima (silika gel, 1:9 → 2:8 → 3:7 → 4:6 → 5:5 etar: heksan) dobijeno je 4 (18,0 g, 64,2 mmol, prinos 70%, neoznačena geometrija olefina) u obliku beličaste čvrste materije. 4: Rf= 0,17 (silika gel, etar: heksani 1:1); IR (film): vmaks= 3422, 1702, 1514, 1434, 1258, 11951159, 1093, 1030, 924, 821770, 729 cm-1;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 7.79 (s, 1 H), 6.90-6.85 (m, 3 H), 6.19 (s, 1 H), 3.82 (s, 3 H), 3.78 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.57 (s, 2H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 171.94, 168.13, 146.80, 146.61, 142.38, 126.96, 123.39, 123.31, 114.76, 111.80, 55.85, 52.24, 52.20, 33.61 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C14H16O6[M H<+>]: 280.102, pronađeno 281.1022.

Primer 2: Sinteza diestra 5

[0058]

[0059] Rastvoru diestra 4 (15,00 g, 53,52 mmol, 1 ekviv.) i vanilina 3 (8,14 g, 53,52 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (200 mL), polako, komadić po komadić, uz pomoć ledenog kupatila radi upravljanja egzotermom, dodavana je litijumska žica (2,6 g, 374,6 mmol, 7 ekviv.) i mešana dok se nije potpuno rastvorila. Zatim je reakciona smeša pri povratnom toku zagrevana 48 h. Posle hlađenja rastvora na sobnu temperaturu, većina metanola je uklonjena koncentrovanjem na rotacionom isparivaču. Dodat je EtOAc (200 mL) i smeša je zakišeljena sa 2 M vod. rastvora HCl (500 mL), i zatim izdvojena sa EtOAc (2 X 200 mL). Kombinovane organske supstance su zatim isprane sa H2O (2 X 200 mL), zatim slanim rastvorom (1 X 200 mL), i sušene (MgSO4), filtrirane i koncentrovane. Ostatak je rastvoren u MeOH (300 ml), dodat je konc. H2SO4(1 mL), i rastvor je preko noći zagrevan uz povratni protok. Posle hlađenja sledećeg jutra, dodato je NaHCO3(3,0 g) da bi se H2SO4ugasila i rastvor je uglavnom koncentrovan pomoću rotacio0nog isparivača. Dodat je EtOAc (400 ml) i rastvor je ispran sa H2O (2 X 200 mL), zatim slanim rastvorom (100 mL). Organski sloj je zatim osušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan. Rastvaranjem u maloj količini CH2Cl2i zatim fleš hromatografijom na stubu (silika gel, 2:1:7 → 3:1:6 → 4:1:5 EtOAc: CH2Cl2: heksani) dobijeno je 5 (13,6 g, 32,8 mmol, prinos 61%, neoznačena geometrija olefina) u obliku žuto-narandžaste čvrste materije.5: Rf = 0,28 (silika gel, EtOAc: heksani 1:1); IR (film): vmaks= 3388, 1696, 1588, 1509, 1431, 1209, 1157, 1029, 817, 733 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 7.86 (s, 2 H), 7.11 (d, J = 1.64 Hz, 2 H), 7.04 (dd, J = 8.48, 1.72 Hz, 2 H), 6.82 (d, J = 8.38 Hz, 2 H), 6.08 (s, 2 H), 3.7 (s, 6 H), 3.69 (s, 6 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 168.00, 147.59, 146.54, 142.64, 127.10, 125.38, 124.06, 114.71, 111.52, 55.77, 52.51 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C22H22O8[M H<+>]: 415.1387, pronađeno 415.1378.

Primer 3: Sinteza diestra S1

[0060]

[0061] Rastvor 5 (5,00 g, 12,07 mmol, 1 ekviv.) u MeOH (120 mL) zasićen je sa argonskom atmosferom kratkim izlaganjem vakuumu i ponovnim punjenjem argonom više puta. Paladijum na ugljeniku (10% Pd po težini, 0,500 g) je dodat i rastvor je zasićen atmosferom H2putem vakuuma/povratnog punjenja H2. Rastvor je mešan preko noći.

Sledećeg jutra je rastvor podvrgnut atmosferi argona, dodat je CH2Cl2(400 mL), i omogućeno je mešanje rastvora u trajanju od 1 sat. Smeša je zatim filtrirana kroz uložak od celita (3,81 cm (1,5 inča), ispiranje sa MeOH i CH2Cl2), i filtrat je koncentrovan. Dobijena čvrsta materija je rastvorena u maloj količini CH2Cl2i prečišćena putem fleš hromatografije na stubu (2:8:1 → 3:7:1 → 4:6:1 EtOAc: heksani: CH2Cl2) i dobijen je S1 (4.24 g, 10,1 mmol, prinos 84%) u obliku bele čvrste materije. S1: Rf= 0,24 (silika gel, EtOAc: heksani: CH2Cl24:6:1); IR (film): vmaks= 3440, 2951, 1726, 1514, 1432, 1267, 1198, 1151, 1121, 1029, 817, 797 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 6.78 (d, J = 8.09 Hz, 2 H), 6.58 (d, J = 8.09 Hz, 2 H), 6.45 (s, 2 H), 5.65 (s, 2 H), 3.75 (s, 6 H), 3.64 (s, 6 H), 3.00-2.94 (m, 2 H), 2.92-2.82 (m, 4 H) ppm;<13>C NMR (1 MHz, CDCl3) δ= 174.03, 146.49, 144.21, 130.41, 121.88, 114.18, 111.26, 55.73, 51.86, 47.67, 35.38 ppm; HRMS (ESI- TOF): izračunato za C22H26O8[M H<+>]: 419.17, pronađeno 419.1700.

Primer 4: Sinteza benzil etra S2

[0062]

[0063] Rastvor S1 (1,00 g, 2,39 mmol, 1 ekviv.) u DMF-u (24 mL) ohlađen je na 0 °C sa ledenom kupkom, NaH (0,201 g, 5,02 mmol, disperzija od 60%, 2,1 ekviv.) je polako dodato i rastvor je mešan na 0 °C u toku 1 sat. BnBr (910 µL, 7,65 mmol, 3,2 ekviv.) je dodat u toku 1 min, i rastvor je mešan na 0 °C u toku 4 sata. Reakciona smeša je zatim sipana u H2O (300 mL) i EtOAc (100 mL). Organski sloj je ispran sa H2O (3 X 200 mL) i slanim rastvorom (1 X 50 mL), sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan. Dobijena čvrsta materija je rastvorena u maloj količini CH2Cl2i prečišćena putem fleš hromatografije na stubu (silika gel, 9:1:1 → 8:2:1 heksani:

EtOAc: CH2Cl2) i dobijen je S2 (1,36 g, 0,527 mmol, prinos 95%) u obliku bele čvrste materije.

S2: Rf= 0,23 (silika gel, EtOAc: heksani 3:7); IR (film): vmaks= 2949, 1730, 1512, 1453, 1253, 1225, 1138, 1023, 733 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 7.45-7.40 (m, 4 H), 7.38-7.33 (m, 4H), 7.31-7.27 (m, 2H), 6.74 (d, J = 8.12 Hz, 2 H), 6.59 (d, J = 1.69 Hz, 2 H), 6.53 (dd, J = 8.12, 1.69 Hz, 2 H), 5.12 (s, 4H), 3.80 (s, 6 H), 3.61 (s, 6 H), 3.03-2.85 (m, 6 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 174.00, 149.58, 146.87, 137.37, 131.74, 128.65, 127.93, 127.37, 121.09, 114.05, 112.73, 71.14, 56.00, 51.91, 47.91, 35.32 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C36H38O8[M H<+>]: 599.2639, pronađeno 599.2651.

Primer 5: Sinteza diola 6

[0064]

[0065] Rastvoru S2 (0,341 g, 0,570 mmol, 1 ekviv.) u THF-u (6 mL) na 0 °C, kapanjem je dodat litijum aluminijum hidrid (1 M rastvora u THF-u, 1,14 mL, 1,14 mmol, 2 ekviv.). Rastvoru je pušten da se zagreje na 25 °C preko noći. Dobijena smeša je sipana u bočicu koja sadrži H2O (200 mL) i EtOAc (100 mL). Zatim je dodato 50 mL zas. vod. rastvora Rochelle-ove soli i smeša je mešana dok slojevi nisu postali spremni za razdvajanje. Organski sloj je zatim ispran sa H2O (2 X 100 mL) i slanim rastvorom (1 X 50 mL), pa sušen (MgSO4), filtriran i koncentrovan. Dobijena čvrsta materija je rastvorena u maloj količini CH2Cl2i isprana putem fleš hromatografije na stubu (silika gel, 5:5:1 → 7:3:1 → 8:2:1 EtOAc: heksani: CH2Cl2) i dobijen je diol 6 (0,286 g, 0,527 mmol, prinos 93%) u obliku bele čvrste materije.6: Rf= 0,2 (silika gel, 6:4 EtOAc: heksani); IR (film): vmaks= 3287, 2933, 1510, 1453, 1259, 1223, 1137, 1009, 733, 695 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 7.47-7.42 (m, 4 H), 7.40-7.34 (m, 4 H), 7.33-7.28 (m, 2 H), 6.78 (d, J = 8.15 Hz, 2 H), 6.69 (s, 2 H), 6.62 (d, J = 8.15 Hz, 2 H), 5.11 (s, 4 H), 4.09 (s, 2 H), 3.82 (s, 6 H), 3.78 (d, J = 11.07 Hz, 2 H), 3.49 (d, J = 11.07 Hz, 2 H), 2.80-2.72 (m, 2 H), 2.69-2.62 (m, 2 H), 1.86 (s, 2 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ149.47, 146.38, 137.29, 133.87, 128.51, 127.80, 127.28, 121.02, 114.02, 112.79, 71.12, 60.19, 55.96, 43.79, 35.81 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C34H38O6[M H<+>]: 543.2741, pronađeno 543.2741.

[0066] Na shemi 2 je prikazan put reakcije koja je korišćena u sintezi (S,S)-sekoizolaricirezinol diglukozida i (R,R)-sekoizolaricirezinol diglukozida, počinjući sa jedinjenjem (6).

Šema 2: Sinteza ((S, S)-SDG-1) i (R,R)-SDG-2) iz jedinjenja (6)

Primer 6: Sinteza glikozilisanih izomera (S,S)-S3 i (R,R)-S4

[0067]

[0068] Bočica je napunjena diolom 6 (0,408 g, 0,751 mmol, 1 ekviv.) i trihloroacetimidatom 73 (1,67 g, 2,25 mmol, 3 ekviv.) i osušena azeotropom benzena (3 X 10 mL). Aktivirana molekularna sita od 4 Å (0,800 g) i CH2Cl2(7,5 mL) su dodati i smeša je mešana 1 sat. Posle hlađenja na -40 °C, TMSOTf (54 µL, 0,300 mmol, 0,4 ekviv.) je dodat kapanjem i reakcionoj smeši je dozvoljeno da se preko noći zagreje na 25 °C. Sledećeg jutra, dodat je NEt3(200 mL) i smeša je filtrirana kroz pločicu od silika gela (2,5 cm (1 inč), ispiraa sa EtOAc) i koncentrovana. Dobijeni sirov proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na stubu (silika gel, 9:1:1 → 8:2:1 → 7:2:2 heksani: EtOAc: CH2Cl2) i dobijena je 1:1 nerazdvojiva mešavina diastereomera (S,S)-S3 i (R,R)-S4 (1,128 g, 0,664 mmol, prinos 88%). (S,S)-S3/(R,R)-S4: Rf= 0.22 (silika gel, 7:2:1 heksani: EtOAc: CH2Cl2); IR (film): vmaks= 2941, 1727, 1601, 1511, 1451, 1262, 1092, 1026, 708 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 8.04 (d, J = 7.70 Hz, 4H), 8.01 (d, J = 7.62 Hz, 4 H), 7.98-7.91 (m, 12 H), 7.87-7.81 (m, 12 H), 7.57-7.26 (m, 68 H), 6.61 (d, J = 8.26 Hz, 2 H), 6.49 (s, 2 H), 6.44 (d, J = 8.0 Hz, 2 H), 6.42-6.38 (m, 4 H), 6.23 (d, J = 8.14 Hz, 2 H), 5.93 (t, J = 10.07 Hz, 2 H), 5.81 (t, J = 9.68 Hz, 2 H), 5.72 (t, J = 10.07 Hz, 2 H), 5.67 (t, J = 9.68 Hz, 2 H), 5.56 (t, J = 7.72 Hz, 2 H), 5.45 (t, J = 8.24 Hz, 2 H), 5.08 (s, 8 H), 4.72 (dd, J = 12.19, 2.70 Hz, 2 H), 4.66 (d, J = 8.22 Hz, 2 H), 4.61 (dd, J = 12.19, 3.08 Hz, 2 H), 4.49-4.42 (m, 4 H), 4.39 (d, J = 7.70 Hz, 2 H), 4.14-4.08 (m, 2 H), 3.98-3.93 (m, 2 H), 3.92-3.87 (m, 2 H), 3.74 (s, 6 H), 3.70 (s, 6 H), 3.65-3.61 (m, 2 H), 3.40-3.34 (m, 2 H), 3.24-3.18 (m, 2 H), 2.56-2.45 (m, 6 H), 2.41-2.34 (m, 2 H), 1.85 (s, 2 H), 1.73 (s, 2 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 166.20, 166.19, 165.93, 165.90, 165.29, 165.16, 164.98, 149.38, 149.35, 146.32, 146.20, 137.56, 133.73, 133.66, 133.56, 133.53, 133.45, 133.37, 133.34, 133.28, 129.93, 129.91, 129.86, 129.84, 129.76, 129.66, 129.64, 129.38, 129.30, 128.95, 128.92, 128.91, 128.60, 128.58, 128.55, 128.53, 128.42, 127.83, 127.81, 127.39, 127.32, 121.38, 121.19, 113.61, 112.70, 112.51, 101.31, 101.23, 73.06, 72.93, 72.12, 72.10, 72.06, 71.99, 71.05, 71.00, 69.89, 69.81, 69.61, 69.32, 63.07, 62.98, 55.94, 55.93, 41.00, 40.78, 35.35, 35.14 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C102H90O24[M H<+>]: 1699.5895, pronađeno 1699.5917.

Primer 7: Fenoli (S,S)-8 i (R,R)-9

[0069]

[0070] 1:1 smeša (S,S)-S3 i (R,R)-S4 (0,612 g, 0,360 mmol, 1 ekviv.) u EtOAc (3,6 mL) zasićeno je sa argonskom atmosferom kratkim izlaganjem vakuumu i ponovnim punjenjem argonom više puta. Paladijum na ugljeniku (10% Pd po težini, 0,120 g) je dodat i rastvor je zasićen sa H2putem vakuuma/povratnog punjenja H2. Posle mešanja na 25 °C u trajanju od 36 sati, rastvor je stavljen u atmosferu argona, filtriran kroz celitni uložak ( 3,81 cm (1,5 inča), ispiranje sa EtOAc i CH2Cl2), i filtrat je koncentrovan. Dobijena čvrsta materija je rastvorena u maloj količini CH2Cl2i prečišćena fleš hromatografijom na stubu (silika, 3:7 → 4:6 → 5:5 EtOAc: heksani) i dobija se debenzilovani glikozid (0,470 g, 0,309 mmol, prinos 86%) kao 1:1 smeša diastereomera. Bilo je moguće razdvojiti diastereomere putem preparativne tankoslojne hromatografije (silika, 2 mm, više ploča, 7:20 EtOAc:heksani, >10 prolaza eluiranja) čime se dobija (S,S)-8 i (R,R)-9 u obliku beličaste čvrste materije. (S,S)-8: Rf= 0.10 (4:6 EtOAc: heksani); [α]D<32>= 1.2 (EtOAc, c = 4.3); IR (film): vmaks= 3460, 2938, 1729, 1514, 1451, 1265, 1023, 1061, 1027, 709 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ = 8.03 (d, J = 8.42 Hz, 4 H), 7.92 (d, J = 8.22 Hz, 4 H), 7.83 (d, J = 7.48 Hz, 8 H), 7.58-7.46 (m, 6 H), 7.45-7.27 (m, 18 H), 6.62 (d, J = 7.90 Hz, 2 H), 6.43 (dd, J = 7.90, 1.16 Hz, 2 H), 6.38 (d, J = 1.16 Hz, 2 H), 5.80 (t, J = 9.57 Hz, 2 H), 5.64 (t, J = 9.57 Hz, 2 H), 5.44 (t, J = 9.74 Hz, 2 H), 5.40 (s, 2 H), 4.62 (dd, J = 12.09, 2.98 Hz, 2 H), 4.44 (dd, J = 12.09, 5.17 Hz, 2 H), 4.41 (d, J = 8.03 Hz, 2 H), 3.96 (m, 2 H), 3.69 (s, 6 H), 3.64 (dd, J = 9.38, 2.82 Hz, 2 H), 3.21 (dd, J = 9.43, 4.13 Hz, 2 H), 2.48 (d, J = 6.8 Hz, 4 H), 1.71 (s, 2 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 166.26, 165.92, 165.35, 165.05, 146.27, 143.64, 133.60, 133.49, 133.38, 133.37, 132.41, 129.95, 129.88, 129.85, 129.78, 129.67, 129.30, 128.94, 128.60, 128.57, 128.45, 122.01, 113.83, 111.49, 101.37, 72.96, 72.15, 72.00, 69.89, 69.54, 63.16, 55.82, 40.87, 35.26 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C88H78O24[M H<+>]: 1519.4956, pronađeno 1519.4937. (R,R)-9: Rf= 0.10 (4:6 EtOAc: heksani); [α]D<32>= 4.8 (EtOAc, c = 4.1); IR (film): vmaks= 3457, 2942, 1726, 1262, 1026, 707 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 8.00 (d, J = 7.62 Hz, 4 H), 7.97 (d, J = 7.71 Hz, 4 H), 7.93 (d, J = 7.98 Hz, 4 H), 7.62 (d, J = 7.71 Hz, 4 H), 7.56-7.27 (m, 24 H), 6.45 (d, J = 7.95 Hz, 2 H), 6.29 (s, 2 H), 6.24 (d, J = 7.95 Hz, 2 H), 5.91 (t, J = 9.82 Hz, 2 H), 5.70 (t, J = 9.67 Hz, 2 H), 5.54 (t, J = 9.23 Hz, 2 H), 5.40 (s, 2 H), 4.71 (dd, J = 11.87, 3.29 Hz, 2 H), 4.62 (d, J = 7.92 Hz, 2 H), 4.42 (dd, J = 12.14, 4.72 Hz, 2 H), 4.11-4.06 (m, 2 H), 3.85 (dd, J = 9.53, 3.46 Hz, 2 H), 3.65 (s, 6 H), 3.34 (dd, J = 9.70, 4.68 Hz, 2 H), 2.47-2.40 (m, 2 H), 2.37-2.30 (m, 2 H), 1.82 (s, 2 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 166.23, 165.95, 165.34, 165.21, 146.33, 143.54, 133.56, 133.50, 133.36, 133.30, 132.44, 129.96, 129.92, 129.87, 129.65, 129.42, 128.98, 128.66, 128.55, 128.44, 121.98, 113.66, 111.12, 101.25, 73.07, 72.15, 72.08, 69.88, 69.78, 62.97, 55.78, 40.67, 35.50 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C36H38O8[M H<+>]: 1519.4956, pronađeno 1519.4947.

Primer 8: Sinteza sekoizolaricirezinol diglukozida (S,S)-SDG-1

[0071]

[0072] U bočicu koja sadrži suvi (S,S)-8 (0,043 g, 0,028 mmol, 1 ekviv.), dodat je sveže pripremljen rastvor NaOMe u MeOH (0,4 M, 2 mL, 28 ekviv.) i rastvor je mešan 60 sati na 25 °C. Rastvor je zatim filtriran kroz uložak od silike (1,27 cm (0,5 inča), ispiran je sa MeOH) a filtrat je koncentrovan. Dobijena čvrsta materija je prečišćena putem preparativne tankoslojne hromatografije (silika gel, 2 mm, 9:1 → 7:3 CH2Cl2:MeOH, zatim 5:5 CH2Cl2:MeOH na pola dužine ploče) i zatim propuštena kroz mali čep od silika gela obrnute faze (100 Å, C18) i dobijen je (S,S)-SDG-1 (0,017 g, 0,025 mmol, prinos 88%) u obliku beličaste čvrste materije. (S,S)-SDG-1: Rf = 0.57 (silika gel, 1:1 CH2Cl2:MeOH); [α]D<32>= -0.3 (MeOH, c = 1.2); IR (film): vmaks= 3340, 2950, 1601, 1515, 1372, 1270, 1070, 1015, 798 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 6.65 (d, J = 8.05 Hz, 2 H), 6.59 (d, J = 1.31 Hz, 2 H), 6.56 (dd, J = 8.05, 1.31 Hz, 2 H), 4.24 (d, J = 7.42 Hz, 2 H), 4.08 (dd, J = 10.09, 5.58 Hz, 2 H), 3.85 (dd, J = 12.00, 2.43 Hz, 2 H), 3.73 (s, 6 H), 3.69 (dd, J = 11.85, 5.55 Hz, 2 H), 3.50-3.45 (m, 2 H), 3.38-3.28 (m, 4 H), 3.27-3.19 (m, 4 H), 2.69 (dd, J = 13.82, 6.72 Hz, 2 H), 2.61 (dd, J = 13.82, 7.98 Hz, 2 H), 2.12 (m, 2 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 148.69, 145.35, 133.93, 122.89, 115.63, 113.51, 104.77, 78.16, 77.89, 75.25, 71.69, 71.18, 62.79, 56.25, 41.20, 35.60 ppm; HRMS (ESI-TOF): izračunato za C32H46O16[M H<+>]: 687.2858, pronađeno 687.2856.

Primer 9: Sinteza sekoizolaricirezinol diglukozida (R,R)-SDG-2

[0073]

[0074] U bočicu koja sadrži suvi (R,R)-9 (0,041 g, 0,027 mmol, 1 ekviv.), dodat je sveže pripremljen rastvor NaOMe u MeOH (0,4 M, 2 mL, 28 ekviv.) i rastvor je mešan 60 sati na 25 °C. Rastvor je zatim filtriran kroz uložak od silika gela (1,27 cm (0,5 inča), ispiranje sa MeOH) a filtrat koncentrovan. Dobijena čvrsta materija je prečišćena putem preparativne tankoslojne hromatografije (silika gel, 2 mm, 9:1 → 7:3 CH2Cl2:MeOH, zatim 5:5 CH2Cl2:MeOH na pola dužine ploče) i zatim propuštena kroz mali čep od silika gela obrnute faze (100 Å, C18, ispiranje sa MeOH) i dobijen je (R,R)-SDG-2 (0,015 g, 0,022 mmol, prinos 81%) u obliku beličaste čvrste materije. (R,R)-SDG-2: Rf= 0.50 (silika gel, 1:1 CH2Cl2:MeOH); [α]D<32>= -22.2 (MeOH, c = 1.0); IR (film): vmaks= 3336, 2949, 1651, 1409, 1014 cm<-1>;<1>H NMR (600 MHz, CDCl3) δ= 6.66 (d, J = 8.06 Hz, 2 H), 6.64 (d, J = 1.63 Hz, 2 H), 6.59 (dd, J = 8.06, 1.63 Hz, 2 H), 4.21 (d, J = 7.82 Hz, 2 H), 3.91 (dd, J = 10.11, 5.69 Hz, 2 H), 3.87 (dd, J = 12.01, 2.01 Hz, 2 H), 3.75 (s, 6 H), 3.67 (dd, J = 12.02, 5.47 Hz, 2 H), 3.58 (dd, J = 9.90, 5.36 Hz, 2 H), 3.38-3.18 (m, 8 H), 2.76-2.62 (m, 4 H), 2.14-2.07 (m, 2 H) ppm;<13>C NMR (150 MHz, CDCl3) δ= 148.77, 145.37, 134.05, 122.83, 115.70, 113.56, 104.59, 78.19, 77.93, 75.19, 71.70, 70.62, 62.79, 56.32, 41.63, 35.62 ppm; HRMS (ESI- TOF): izračunato za C32H46O16[M H<+>]: 687.2858, pronađeno 687.2856.

Postupci bioloških ispitivanja

Testovi

[0075] HORAC test (#TA30) je kupljen kod Oxford Biomedical Research. ORAC test (#STA345) je nabavljen kod Cell Biolab, San Diego, CA. Standardni SDG je kupljen kod Chromadex Inc., San Diego, CA.

Tekst aktivnosti snage redukcije

[0076] Određivanje snage redukcije izvedeno je kao što je opisano kod Yen and Der (J. Am. Oil Chem. Soc. 1993, 70, 383). Test snage redukcije određuje redukcioni potencijal test jedinjenja koje reaguje sa kalijum fericijanidom (Fe<+3>) i stvara kalijum ferocijanid (Fe<+2>), koji zatim reaguje sa gvožđe(III)hloridom kako bi se dobio kompleks gvožđa(III)-gvožđa/(II) koji ima maksimalnu apsorpciju pri 700 nm. Različite koncentracije (1-500 µM) test jedinjenja napravljene su u puferu natrijum fosfata (0,1 M, pH 6,6) na mikropločama sa 96 udubljenja i mešana sa kalijum fericijanidom (1%). Uzorci su inkubirani na 50 °C i dodata je jednaka zapremina 10% trihlorsirćetne kiseline. Gornji sloj je pomešan sa dejonizovanom vodom (1: 1: 2) i gvožđe(III) hloridom (0,1%). Apsorpcija je očitana na 700 nm na čitaču mikroploča Bio-Rad (Bio-Rad, Hercules, CA). Povećanje apsorpcije ukazuje na povećanje snage redukcije.

Potencijal za "čišćenje" hidroksilnih radikala (HORAC test)

[0077] Sposobnost SDG-ova za "čišćenje" hidroksilnih radikala u hemijskom sistemu ocenjena je pomoću HORAC testa (# TA30) nabavljenog kod Oxford Biomedical Research. Hidroksilni radikali su generisani iz vodonik peroksida putem Fentonove reakcije. Oksidacija fluoresceina merena je na fluorescentnom čitaču mikroploče. Antioksidanti inhibiraju oksidaciju fluoresceina. Kao standard za krivu kalibracije korišćena je galna kiselina. U izračunavanjima je korišćena koncentracija SDG koja je odgovarale linearnom delu kalibracione krive. Koncentracije SDG su korišćene u rasponu od 8µM-1mM. Kapacitet antioksidansa protiv hidroksilnih radikala izražen je kao ekvivalent galne kiseline (GAE).

Potencijal za "čišćenje" hidroksilnih radikala (ORAC TEST)

[0078] Sposobnost SDG-ova da uklone peroksilne radikale u hemijskom sistemu ocenjena je pomoću ORAC testa (# STA345) mabavljenog kod Cell Biolab (San Diego, CA). Peroksilni radikali su generisani putem AAPH (2,2’-azobis(2-amidinopropandihidrohlorid). Oksidacija fluoresceina je merena pomoću fluorescentnog čitača mikroploča. Antioksidanti inhibiraju oksidacije. Trolox je korišćen kao standard za kalibracionu krivu. U izračunavanjima su korišćene koncentracije SDG koje su odgovarale linearnom delu kalibracione krive. Koncentracije SDG su korišćene u opsegu od 8µM-1mM. Antioksidant kapacitet protiv peroksilnih radikala izražen je kao Trolox ekvivalent (TE).

Test "čišćenja" DPPH radikala.

[0079] Sposobnost SDG za "čišćenje" DPPH radikala utvrđena je kao što je opisano kod Moree et al. (Free Rad. Antiox.2011, 1, 31) uz minimalne modifikacije za upotrebu u mikropločama. Ukratko, različite koncentracije SDG izomera i drugih test jedinjenja su inkubirane sa 200 µL medijuma na mikropločama sa 96 udubljenja koje sadrže 0,1 M Tris pufera (pH 7,4) i 250 mM DPPH rastvora i držane u mraku 20 min. Apsorpcija je pri 517 nm očitana na čitaču mikroploča Bio-Rad. Askorbinska kiselina i α-tokoferol su kao poznati antioksidanti korišćeni za poređenje. Aktivnost "čišćenja" radikala izmerena je kao smanjenje apsorpcije DPPH i izračunata koristeći sledeću jednačinu: Procentualna inhibicija = [O.D.kontrola-O.D.tretirano/O.D.kontrola] X 100.

Primer 10: Snage redukcije (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2

[0080] Snage redukcije sintetičkog (S,S)-SDG-1, sintetčkog (R,R)-SDG-2, prirodnog (S,S)-SDG-1, askorbinske kiseline, i α-tokoferola utvrđene su redukcijom K3FeCN6u prisustvu FeCl3, kao što je izmereno apsorpcijom rezultujećeg kompleksa gvožda(III)-gvožđa(II) (slika 2). Snaga redukcije sintetičkog (S,S)-SDG-1, sintetičkog (R,R)-SDG- 2, i prorodnog (S,S)- SDG-1 su značajno zavisile od koncentracije pri višim koncentracijama; međutim, pri svim testiranim koncetracijama, SDG-ovi su imali sličnu ili veću snagu redukcije nego poznati antioksidanti askorbiska kiselina i αtokoferol, uz primetno povećanje potencije u opsegu 200-500 µM. Linearni odnos između snage redukcije i koncentracije supstrata primećena je pri nižim koncentracijama (1-100 µM), što je omogućilo uspostavljanje jednačina krive regresije za pet jedinjenja. Ovo je omogućilo izračunavanje polumaksimalne efektivne koncentracije (EC50) za snagu redukcije (slika 3). Vrednosti EC50(srednje ± stand. odst.) za (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2 bile su 292,17 ± 27,71 µM i 331,94 ± 21,21 µM, prema opisanom redosledu. Ove vrednosti su bile uporedive sa vrednostima prirodnog (S,S)-SDG-1 (EC50= 275.24 ± 13,15 µM), ali otprilike tri puta veće od onih kod askorbinske kiseline (EC50= 1129,32 ± 88,79 µM) i α-tokoferola EC50= 944,62 ± 148,00 µM).

Primer 11: Sposobnost "čišćenja" hidroksilnih i peroksilnih radikala

[0081] Sposobnost sintetičkog (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2 za "čišćenje" hidroksilnih i peroksilnih radikala koje se pokazuje njihovim inhibiranjem oksidacije fluoresceina određena je testovima kapaciteta odbijanja hidroksilnih radikala (HORAC, standardna žučna kiselina) i testom kapaciteta apsorpcije peroksilnih radikala (ORAC, troloks standard), respectively (Table 1). Oksidacija fluoresceina putem hidroksilnih radikala smanjena je putem sintetičkog (S,S)-SDG-1 i sintetičkog (R,R)-SDG-2 na način zavisan od koncentracije i utvrđeno je da je dvostruko veći od žučne kiseline. Međutim, aktivnost sintetičkog (S,S)-SDG-1 razlikovala se od aktivnosti prirodnog (S,S)-SDG-1, najverovatnije zbog tragova nečistoće. Oksidacija fluoresceina putem peroksilnih radikala generisanih korišćenjem 2,2’-azobis(2-amidinopropan) dihidrohlorida (AAPH) uveliko je smanjena u prisustvu sintetičkog (S,S)-SDG-1, (R,R)-SDG-2 i prirodnog (S,S)-SDG-1, sa dvostrukim porastom potencije u odnosu na troloks standard (tabela 1).

Tabela 1: Antioksidantni kapacitet sintetičkog i prirodnog SDG

R.br. Antioksidant Protiv hidroksil<a>radikala (GAE)<c>Protiv preoksil<b>radikala (TE)<d>1. prirodni (S,S)-SDG-1 3,68±0,27

2,55±0,11

2. sintetički (R,R)-SDG-2 1,96±0,27 2,20±0,10

3. sintetički (S,S)-SDG-1 2,09±0,16 3,03±0,04

<a>Utvrđeno HORAC testom;<b>Utvrđeno ORAC testom;<c>Ekvivalent žučne kiseline;<d>Troloks ekvivalenti.

[0082] U tabeli 1, hidroksilni radikali su generisani od vodonik peroksida putem Fentonove reakcije. Peroksilni radikali su generisani putem AAPH (2,2’-azobis(2-amidinopropan) dihidrohlorid). Izmerena je oksidacija fluorosceina. U izračunavanjima su korišćene koncentracije SDG koje su odgovarale linearnom delu kalibracione krive. Rezultati su prikazani kao srednje ± standardno odstupanje (n = 3).

Primer 12: Aktivnosti "čišćenja" slobodnih radikala (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2

[0083] Aktivnosti "čišćenja" slobodnih radikala sintetičkog (S,S)-SDG-1 i (R,R)-SDG-2 su utvrđene korišćenjem 2,2- difenil-1-pikrilhidrazil (DPPH) testa za "čišćenje" slobodnih radikala i upoređene su sa onima kod prirodnog (S,S)-SDG-1, askorbinska kiselina, i α-tokoferol (slika 4). U opsegu niske (5-25 µM) i srednje koncentracije (50-100 µM), SDG-ovi su pokazivali slične mogućnosti "čišćenja"; ali je pri višim koncentracijama (250-500 µM), inhibicija sintetičkog (S,S)-SDG-1 bila značajno manja od onih koje proizvode (R,R)-SDG-2 i prirodni (S,S)-SDG-1. Pravljenje krivih regresije za potencijale u opsegu niske i srednje koncentracije (5-100 µM) omogućavalo je aktivnost "čišćenja" slobodnog radikala EC50tih jedinjenja koja treba da se utvrde. Kao što je prikazano na slici 5, sintetički (R,R)-SDG-2 (123,63 ± 8,67 µM) i sintetički (S,S)-SDG-1 (157,54 ± 21,3 µM) nisu bili značajno različiti. Ove vrednosti su bile slične onima za prirodan (S,S)-SDG-1 (83,946 ± 2,80 µM) i α-tokoferol (132,81 ± 12,57 µM) ali značajno manje od onih za askorbinsku kiselinu (439,56 ± 11,81 µM). Rezultati su uporedivi sa onima objavljenim za SDG (Moree, S.; Khanum, S.A.; Rajesha, J. Free Rad. Antiox.2011, 1, 31).

[0084] Stručnjaci u ovoj oblasti će znati da procene da je prethodno opisana izvođenja bilo moguće modifikovati ne odstupajući od oblasti pronalaska, kao što je definisano patentnim zahtevima priloženim u nastavku.

Claims

Patentni zahtevi 1. Postupak za pripremu jedinjenja formule ((S,S)-SDG-1) ili jedinjenja formule (R,R)-SDG-2

pri čemu se postupak sastoji od: (a) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (4)

sa vanilinom putem Stobbe-ove reakcije kondenzacije, posle čega sledi reakcija esterifikacije u svrhu dobijanja jedinjenja formule (5)

(b) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (5) sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S1)

gde je, opciono, pomenuto redukciono sredstvo H2i Pd/C; (c) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S1) sa benzilacionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (S2)

gde je, opciono, pomenuto benzilaciono sredstvo BnBr i NaH; (d) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (S2) sa redukcionim sredstvom u svrhu dobijanja jedinjenja formule (6)

gde je, opciono, pomenuto redukciono sredstvo litijum aluminijum hidrid (LAH) u THF-u; (e) dovođenja u reakciju jedinjenja formule (6) sa jedinjenjem formule (7)

u svrhu dobijanja jedinjenja ((S,S)-S3) ili jedinjenja formule ((R,R)-S4), prema opisanom redosledu,

(f) rastvaranja benzil etara jedinjenja formule ((S,S)-S3) i benzil etara jedinjenja formule ((R,R)-S4), posle čega sledi postupak razdvajanja u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-8) ili jedinjenja formule ((R,R)-9), prema opisanom redosledu,

i (g) otklanjanje zaštite iz jedinjenja formule ((S,S)-8) ili jedinjenja formule ((R,R)-9) u svrhu dobijanja jedinjenja formule ((S,S)-SDG-1) ili jedinjenja formule ((R,R)-SDG-2), prema opisanom redosledu.
2. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što se pomenuta reakcija iz koraka (e) izvodi u prisustvu Lewis-ove kiseline, kao što je TMSOTf.
3. Postupak prema bilo kom od zahteva 1-2, naznačen time, što se pomenuta reakcija iz koraka (e) izvodi u prisustvu aktiviranih molekularnih sita.
4. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što se pomenuto rastvaranje izvodi u MeOH u prisustvu H2i Pd/C.
5. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što se pomenuti postupak razdvajanja izvodi korišćenjem preparativne tankoslojne hromatografije.
6. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što se pomenuto otklanjanje zaštite iz koraka (g) izvodi u rastvoru NaOMe i MeOH.
7. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što se pomenuta Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi u MeOH i u prisustvu litijuma.
8. Postupak prema zahtevu 7, naznačen time, što je pomenuti litijum u obliku litijumskih žica.
9. Postupak prema zahtevu 1, naznačen time, što se pomenuto jedinjenje formule (4) dobija procesom koji se sastoji od dovođenja u reakciju vanilina i metil sukcinata posredstvom Stobbeove reakcije kondenzacije, posle čega je sledila reakcija esterifikacije.
10. Postupak prema zahtevu 9, naznačen time, što se pomenuta Stobbe-ova reakcija kondenzacije izvodi u MeOH i u prisustvu litijumskih žica.