RS57977B1 - Tetrahidropirazolopirimidinska jedinjenja - Google Patents

Description

Opis

TEHNIČKA POZADINA

Tehnička oblast opisa

[0001] Izvedbe ovoga opisa se odnose na tetrahidropirazolopirimidinska ("THPP") jedinjenja i na farmaceutske agense koji sadrže jedno ili više od pomenutih jedinjenja kao aktivne sastojke. Naročito, izvedbe ovoga opisa se odnose na THPP jedinjenje koje deluje kao antagonist ili inhibitor toličnih-receptora (TLR) 7 i 8, i na njegovu upotrebu u farmaceutskoj kompoziciji koja je efektivna kod tretmana sistemskog lupus erythematosus (SLE) i lupus nefritis.

Opis prethodnog stanja tehnike

[0002] Sistemski lupus erythematosus (SLE) i lupus nefritis su autoimune bolesti koje su karakterizovane upalom i oštećenjem tkiva. Na primer, SLE može da uzrokuje oštećenje kože, jetra, bubrega, zglobova, pluća, i centralnog nervnog sistema. Pacijenti koji pate od SLE doživljavaju opšte simptome poput snažnog umora, bolnih i natečenih zglobova, neobjašnjive groznice, osipa kože, i poremećaja bubrega. Zbog toga šta kod pojedinih pacijenata stradaju različiti organi, simptomi mogu da variraju. SLE je predominantno bolest mlađih žena, a najčešće se pojavljuje u dobi između 15-40 godina, a zastupljenost je približno 10-puta češća kod žena nego kod muškaraca.

[0003] Trenutni tretmani za SLE tipično podrazumevaju imunomodulatorne lekove poput hidroksihlorohina, prednizona, i ciklofosfamida. Svi pomenuti lekovi mogu da uzrokuju dozno-ograničavajuće nus-pojave.

KRATKI REZIME OVOGA OPISA

[0004] Izvedbe ovoga opisa obezbeđuju jedinjenja i postupke za primenu sa ciljem sprečavanja ili tretiranja bolesti ili stanja koja su karakterizovana sa aktivisanjem toličnihreceptora 7 ili 8 pacijenta. Jedna izvedba obezbeđuje jedinjenje sa formulom (I):

ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili neki njegov stereoizomer ili smešu stereoizomera, pri čemu

R1je opciono supstituisani piperidinil, opciono supstituisani piridil, opciono supstituisani pirolil, opciono supstituisani piroldinil, 1,4-dimetiltiazolil, 2-etil-4-metiltiazolil, 2-izopropiltiazol-5-il, tiazolil, 3-etiltiazol-5-il, 1-metilsulfonilpiperidin-4-il, ili

R1je -C(O)Z, gde Z je piperazinil, piperidinil propil, (S)-2-(3-etilpiperazin-1-il), opciono supstituisani pirolopirolil, piperidin-3-ilamino, ili,

R1ili

gde R13je H, metilpirazolil, metilimidazolil, benzil, 3-hidroksibutil, 3-(dimetilamino)-2,2-dimetilpropil, etilamid, metilpiridil, metilsulfonil, (1-metilimidazol-2-il)metil, (1,5-dimetilimidazol-4-il)metil, (1-metilpirol-2-il)metil, ili gde R13je C(O)W, gde W je -N(CH3)2, piperidinil, piperazinil, ili morfolinil, ili,

gde R14je -C(O)CH3, H, ili (1-metilpirol-2-il)metil, ili,

ili

gde A, B, i D mogu da budu ugljenik, ili gde dva od A, B, i D su ugljenici, a treći je azot, ili gde jedan od A, B, i D je ugljenik, a preostala dva su azot; a kada A je azot R4je odsutan, kada B je azot R2je odsutan, i kada D je azot R3je odsutan; i pri čemu R2je H, -CH3, ili F, ili, pri čemu R3i atomi na pozicijama a i b formiraju opciono supstituisani piridin ili pirazol; i pri čemu

ili, pri čemu R4i atomi na pozicijama b i c formiraju opciono supstituisani benzen, opciono supstituisani imidazol, opciono supstituisani pirazol, opciono supstituisani pirazolidin, opciono supstituisani imidazolidin, opciono supstituisani izotiazol,

ili, pri čemu R2i atomi na pozicijama a i b formiraju opciono supstituisani piridin ili opciono supstituisani pirazol; i pri čemu

R4je F, -CN, -OCH3, -OEt, H, Cl, Br, -NH-C(O)-CH-(CH3)2, -N(CH3)2, -CH3, -CH2OH,

opciono supstituisani piperazinil, 4-hidroksipiperizin-1-il, opciono supstituisani piperidinil koji nije spojen na fenilnu grupu preko azota, ili, pri čemu R3i atomi na pozicijama b i c formiraju opciono supstituisani pirazolni prsten ili

ili, pri čemu R5i atomi na pozicijama c i d formiraju opciono supstituisani pirazolni prsten ili opciono supstituisani pirolni prsten, ili,

R4je -(q)-C(O)X, gde q je veza, je -NH-, ili je -CH2-, i

gde X je -NR11R12,

gde R11i R12su oba H, oba -CH2CH3, ili oba -CH3, ili gde jedan od R11i R12je H, a drugi je 1,1-dimetiletil, ciklobutil, ciklopropil, ravnolančani, razgranati ili ciklički zasićeni ugljovodonik koji sadrži između jednog i četiri atoma ugljenika, metil alkohol, etil alkohol, propil alkohol, ciklobutilmetil; 2,3-dihidroksipropil, benzil, opciono supstituisani azetidinil, pirolidinil, piperidinil, metilazetidinil, opciono supstituisani pirolil, -CH2-NH-CH3, pirazolil, piperazinil, alkohol, -OCH3, ili

ili

gde X je opciono supstituisani pirolidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani piperidinil koji nije spojen preko azota na karbonilnu grupa iz R4, opciono supstituisani piperazinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani azetidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4ili opciono supstituisani morfolinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4,

ili, pri čemu R4i atomi na pozicijama c i d formiraju opciono supstituisani benzen, opciono supstituisani pirazol, ili opciono supstituisani pirol, ili, pri čemu R6i atomi na pozicijama d i e formiraju opciono supstituisani piridin, ili R5je C(O)Y, gde Y je -NH2, -N(CH3)2, opciono supstituisani piperazinil, opciono supstituisani piperidinil,

i pri čemu

R6je H, F, -CH3, -CF3, ili, pri čemu R5i atomi na pozicijama c i d, formiraju opciono supstituisani benzen ili opciono supstituisani pirazol; i pri čemu

R7je -CF3ili -CHF2; i pri čemu

i pri čemu

R9je Br, Cl, F, I, ili H;

uz sledeće uslove:

kada R4je F: R2nije -CH3ili F; R3nije -CH3, -CN, F, Cl, ili -OCH3; R5nije -CH3, F, Cl, ili -OCH3; a R6nije -CH3ili F;

kada R4je Cl: R2nije F; R3nije F ili -CN; R5nije F, -CN, ili -C(O)N(CH3)2, R6nije -CF3ili F; D nije azot; i R5je ili -C(O)NH2ili jedan od R2, R3, R5, a R6je -CH3; kada R4je -CH3: R3nije F; R5nije F; a R5i R6ne formiraju pirimidin zajedno sa atomima na pozicijama d i e;

kada R4je -OCH3: R2nije F; R3nije Cl ili -OCH3, R5nije Cl ili -OCH3; a R6nije F ili -CF3;

kada R4je -CN: R2nije F; R3nije Cl, F, ili -OCH3, R5nije Cl, F, ili -OCH3; a R6nije F;

kada R4je -OCH2CH3: R3nije Cl ili F; R5nije Cl ili F; a R6nije -CF3;

kada R4je

R3nije H ili F; a R5nije H ili F;

kada R4je

najmanje jedan od R2, R3, R5, i R6nije H;

kada R4je

R3nije F; a R5nije F;

kada R2je F: R3nije -OCH3ili F; R5nije -CN; a najmanje jedan od R3, R4, R5, i R6nije H;

kada R2je Cl: R3nije F;

kada R2je -CH3: R3nije Cl; najmanje jedan od R3, R4, R5, i R6nije -CH3; a R4i R5ne formiraju pirazolil sa atomima na poziciji c i d;

kada R3je -OCH3: R2nije F; a R6nije F;

kada R3je F: R2nije -OCH3; a X nije

kada R3je Cl: R5nije Cl; R11nije benzil; a R12nije benzil;

kada R5je Cl, R6nije -CH3; R11nije benzil; a R12nije benzil;

kada R5je F ili -OCH3: R6nije F;

kada R6je F: najmanje jedan od R2, R3, R4, i R5nije H;

kada R3i R5su H: R11nije ciklopropil; a R12nije ciklopropil;

kada R9je Cl, R1nije amidna grupa;

kada B je azot, a A i D su ugljenici: R4ne mora da bude -CN ili

je

tada R4ne poseduje apsolutnu stereohemiju

pri čemu, kada R8je

tada važe sledeći uslovi:

kada R4je F: najmanje jedan od R2, R3, R5, i R6nije H; R3nije C(O)N(CH3)2; a R5nije C(O)N(CH3)2;

kada R4je Cl: najmanje jedan od R2, R3, R5, i R6nije H;

kada R3je F: R4nije C(O)NHCH2CH2CH2CH3, C(O)N(CH3)2, C(O)NHCH2CH2CH3, ili C(O)NHC(CH3)3;

R4nije C(O)NHCH2CH2CH2OH, C(O)NHCH(CH3)2, -CN, ili

kada R2je F: R5nije -C(O)NH2;

kada R2je -CH3, R4i R5ne formiraju pirazol sa atomima na pozicijama c i d; i kada B je azot, R3i R4ne formiraju opciono supstituisani imidazol sa atomima na pozicijama b i c; i

pri čemu, kada R8je

tada važe sledeći uslovi:

R4nije -CH3, -C(O)NHCH2CH2OH, -NHC(O)CH(CH3)2, ili

kada R4je C(O)NHCH3, najmanje jedan od R2, R3, R5, i R6nije H;

kada R4je -OCH3: R3nije F ili -CH3; a R5nije F ili -CH3;

kada R4je

R3nije Cl; a R5nije Cl;

kada R4je -C(O)NHCH(CH3)2ili -C(O)N(CH2CH3)2: najmanje jedan od R3i R5nije H;

R5nije -C(O)NH2; a

R6nije -CF3,

pri čemu termin opciono supstituisani označava da predmetna struktura može da uključuje, ali i ne mora, jedan ili više supstituenata nezavisno izabranih iz ravnolančanih, razgranatih ili cikličkih zasićenih ugljovodonika koji sadrže između jednog i četiri atoma ugljenika, metoksi-, -OH, -NH2, -CH2-NH-CH3, -OCH2CH2CH3ili OCH(CH3)2, a ako je opciono supstituisani ostatak ciklički tada opciona supstitucija može da uključuje metilni most između dva atoma u prstenu.

[0005] U nekim izvedbama ovoga opisa su prnamenjena jedan ili više uslova. Pomenuti uslovi tipično isključuju jedno ili više jedinjenja koja inače mogu da budu uključena u navedenoj grupi. Kod opisa uslova će biti jasno da je i obrnuto takođe moguće. For primer, ako neki uslov kaže da kada R4je F: tada R2nije CH3ili F, tada je takođe moguće da kada R2je izabran da bude -CH3ili F, tada R4nije F. Takođe se podrazumeva da kada je uslov predstavljen kroz seriju navoda, poslednji navodi nisu povezani osim ako nije direktno navedeno na drugom mestu u dokumentu. Na primer, ako uslov kaže da kada R4je F: R2nije -CH3ili F; a R3nije -CH3, tada samo iz tog navoda ne treba da se podrazumeva da kada R3je -CH3, tada R2nije -CH3ili F.

[0006] U dodatnoj izvedbi, jedinjenje sa formulom (I) ima apsolutnu stereohemiju koja je prikazana u formuli (II):

važe sledeći uslovi:

kada R3je F, R4nije

kada R5je F, R4nije

kada R5je -CH3, R3i R4, sa atomima na pozicijama b i c, ne formiraju

i

kada R3je -CH3, R4i R5, sa atomima na pozicijama c i d, ne formiraju

[0007] U dodatnoj izvedbi, jedinjenje sa formulom (I) poseduje apsolutnu stereohemiju koja je prikazana u formuli (III):

R4nije

je

tada važe sledeći uslovi:

kada R2je -CH3: R3i R4ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama b i c;

kada R2je -CH3: R4i R5ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama c i d;

kada R2je F: R4nije C(O)NH2;

R3i R4, sa atomima na pozicijama b i c, ne formiraju

kada R3je Cl: R4nije -C(O)NHCH3ili -C(O)NH2;

R3nije pirazolil;

kada R3je F: R4nije

i R5ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na

CH2CH2OH;

kada R5je -CH3, R3i R4ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama b i c;

kada R5je Cl: R4nije -C(O)NH2;

kada R5je F: R4nije C(O)NH2;

R5nije pirazolil;

kada R6je -CH3: R4i R5ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama c i d; i

kada B je azot, R4nije -C(O)NHCH3.

[0008] U jednoj izvedbi, R1je piperidinil ili piridil; R7je -CF3; R8je

a R9je F, Cl, Br, ili I.

[0009] U drugoj izvedbi, R1je -C(O)Z, pri čemu Z je piperazinil, piperidinil, pirolopirolil, ili piperidinil propil; R7je -CF3; R8je

a R9je H.

[0011] U drugoj izvedbi, R1je

R3je H ili, sa R2, formira

a R9je H.

[0012] U drugoj izvedbi R1je

R2je H, F, ili -CH3, R3je H ili F; R4je -(q)-C(O)X, pri čemu q je veza ili -CH2-, a X je piperazinil spojen preko azota na karbonilnu grupa iz R4, pirolidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, pirolopirolil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, azetidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, ili

ili X je -NR11R12, pri čemu jedan od R11i R12je II, a drugi je opciono supstituisani pirolidinil, opciono supstituisani piperidinil, opciono supstituisani piperazinil, ili opciono supstituisani azetidinil; R5je H ili C(O)Y, pri čemu Y je, -NH(CH3)2, opciono supstituisani piperazinil, opciono supstituisani piperidinil,

a R9je H.

[0013] U dodatnoj izvedbi, R1je

gde A, B, i D mogu da budu ugljenici, ili gde dva od A, B, i D su ugljenici, a treći je azot, a kada A je azot, R4je odsutan, kada B je azot, R2je odsutan, a kada D je azot, R3je odsutan; R2je H; R3je H ili -CH3; R4je -C(O)X, gde X je opciono supstituisani piperazinil, ili X je -NR11R12, gde R11i R12su H, ili gde jedan od R11ili R12je H, a ostali je piperidinil, pirolidinil, ili -CH3; R5je -OCH3, H, ili Cl; R6je H, R7je -CF3, R8je

gde A, B, i D su ugljenici;

R2je H, -CH3, ili F, ili, sa R3i sa atomima na pozicijama a i b formira opciono supstituisani pirazol;

R3je H, F, Cl, -CN, -CH3,

ili, sa R4i sa atomima na pozicijama b i c, formira opciono supstituisani pirazol ili

opciono supstituisani piperazinil, ili, sa R3i sa atomima na pozicijama b i c formira opciono supstituisani pirazolni prsten ili

ili, sa R5i sa atomima na pozicijama c i d formira opciono supstituisani pirazolni prsten, ili R4je -(q)-C(O)X, gde q je veza, i

gde X je -NR11R12,

pri čemu R11i R12su oba H, ili gde jedan od R11i R12je H, a drugi je 1,1-dimetiletil, ciklobutil, ciklopropil, niži alkil, C1-3alkohol, ciklobutilmetil; 2,3-dihidroksipropil, benzil, azetidinil, pirolidinil, piperidinil, metilazetidinil, pirazolil, piperazinil, alkohol, -OCH3, ili

ili

gde X je opciono supstituisani piperidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani piperazinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani pirolidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4, ili opciono supstituisani azetidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R4,

a

R5je H, ili, sa R4i sa atomima na pozicijama c i d formira opciono supstituisani benzen, opciono supstituisani pirazol, ili, sa R6i sa atomima na pozicijama d i e formira opciono supstituisani piridin, ili R5je C(O)Y, gde Y je -NH2, -NH(CH3)2, opciono supstituisani piperazinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R5, opciono supstituisani piperidinil spojen preko azota na karbonilnu grupu iz R5,

a

R6je H, F, -CH3, ili, sa R5i sa atomima na pozicijama c i d formira opciono supstituisani pirazol;

R7je -CF3;

R8je

a R9je H.

[0015] Druga izvedba uključuje jedinjenje sa formulom (IV)

ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili neki njegov stereoizomer ili smeša stereoizomera, pri čemu: R7aje H ili F; i pri čemu

Prsten A je:

gde Y1i Y2su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH2- i -CH2CH2-, i pri čemu svaki Y1i Y2je opciono supstituisan sa C1-3alkilom;

gde X1, X2, i X3su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH- i N;

gde X1, X2, i X3su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH- i N;

gde X je N ili -CH- opciono supstituisan sa -CH3, F, ili Cl, i

pri čemu R9je -C(O)Z, gde Z je 2, 3-dihidroksipropilamin; pet- do sedam-člani ciklički diamin koji je opciono premošćen ili je opciono supstituisan na atomu ugljenika sa nekim nižim alkilom; sedam- do deset-člani biciklodiamin; sedam- do jedanaest-člani spirodiamin; -NH supstituisani sa četiri- do sedam-članog cikličkog amina opciono supstituisanog sa -NH2; -OH; -CH2NHR, pri čemu R je H ili niži alkil; -NH supstituisani sa sedam- do jedanaestčlanog spiroalkana opciono supstituisanog sa -NH2; ili

R9je CH3NHC(O)-, a atom ugljenika u arilnom prstenu na kojeg je spojen R9je supstituisan sa jednim od -CH3, F, ili Cl; R9je (CH3)2CHNHC(O)-, a atom ugljenika na arilnom prstenu na kojem je spojen R9je supstituisan sa jednim od -CH3, F, ili Cl; ili R9je (CH3)3CNHC(O)- i atom ugljenika na arilnom prstenu na kojeg je spojen R9je supstituisan sa jednim od -CH3, F, ili Cl; ili

pri čemu piperazin je opciono premošćen ili supstituisan sa nižim alkilom, a R10je H ili -CH3; ili

pri čemu n je 1-4; ili

R9je -NHC(O)NH2, -CH2C(O)NH- pri čemu azot je supstituisan sa četiri- do sedam-članog cikličkog amina; -CH2-C(O)- pri čemu karbonil je supstituisan sa sedam- do deset-članog biciklodiamina; i četiri- do sedam-članog cikličkog amina supstituisanog sa -CH2C(O)NH2; ili

pri čemu X je N ili -CH- gde C je opciono supstituisan sa -CH3, F, ili Cl, i pri čemu

R10je -C(O)NH- gde azot je supstituisan sa četiri- do sedam-članog cikličkog amina; -C(O)-supstituisani sa sedam- do deset-članog biciklodiamina; -C(O)-supstituisan sa sedam- do jedanaest-članog spirodiamina; pirazol; [1,2,4]oksadiazol opciono supstituisani sa -CH3na atomu ugljenika iz oksadiazola; -NHC(O)CH3; -CH2- supstituisan sa piperazinom; -CH2-supstituisan sa piperazinom uključujući metilni supstituent; -C(O)- supstituisan sa pet- do sedam-članog cikličkog diamina; -C(O)NHCH2- gde -CH2- je supstituisan sa azetidinom; ili -C(O)- supstituisan sa pet- do sedam-članog cikličkog amina gde pomenuti amin uključuje -NH2-supstituent; ili

cijanofenil; izohinolin; cikloheksen supstituisan sa -NH2na poziciji 4'; 1,4-dimetilindazol-5-il; 1,6-dimetilindazol-5-il; cikloheksen supstituisan sa spiropiperidinom na poziciji 4'; 1-piperidinopirazol; ili o-metoksipiridin.

[0016] U dodatnoj izvedbi, jedinjenje ili farmaceutski efektivna so iz prethodnog paragrafa iz ovoga opisa poseduje IC50koji je manji ili je jednaki sa 100 nM protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji. U dodatnoj izvedbi, C50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji je izmeren uz pomoć (1) uzgajanja ćelija iz HEK-293 ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju TLR7 u Dulbecco-modifikovanom Eagle-medijumu koji sadrži 10% fetalni kravlji serum u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml u pločici sa 384-komorica uz inkubaciju tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2; (2) dodavanja jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli uz inkubaciju ćelija tokom 30 min; (3) dodavanja CL097 (InvivoGen) 3 μg/ml uz inkubaciju ćelija tokom približno 20 h; i (4) kvantifikovanja NF-kapaB zavisnog aktivisanja reportera uz merenje luminiscencije.

[0017] Dodatna izvedba uključuje jedinjenje sa formulom IV, ili neku njegovu farmaceutski efektivnu so, pri čemu Prsten A je:

gde X4je -CH- ili N; a pri čemu Z je piperazin, opciono premošćen ili supstituisan na ugljeniku uz pomoć -CH3; heksahidroirolo[3,4]pirol; četiri- do sedam-člani ciklički amin supstituisan sa -OH ili -NH2; ili -NH- supstituisan sa četiri- do sedam-članog cikličkog amina;

gde X5je -CH- ili N; i pri čemu R je pirazol; [1,2,4]oksadiazol opciono supstituisan sa -CH3na ugljeniku iz oksadiazola; ili - C(O)NH- supstituisan na svojem azotu uz pomoć četirido sedam-članog cikličkog amina;

1,4-dimetilindazol-5-il; 1,6-dimetilindazol-5-il; 1-piperidinopirazol; cikloheksen supstituisan sa -NH2na poziciji 4'; cikloheksen supstituisan sa spiropiperidinom na poziciji 4'; ili 2-metoksipiridin-4-il.

[0018] U dodatnoj izvedbi, jedinjenje ili neka njegova farmaceutski efektivna so iz prethodnog paragrafa ovog opisa poseduje IC50koji je manji ili jednak sa 20 nM protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji. U dodatnoj izvedbi, jedinjenje ili neka njegova farmaceutski efektivna so iz prethodnog paragrafa ovoga opisa poseduje IC50koji je manji ili jednak sa 100 nM protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji. U dodatnoj izvedbi, IC50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji je izmeren uz pomoć (1) uzgajanja ćelija iz HEK-293 ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju TLR7 u Dulbecco-modifikovanom Eaglemedijumu koji sadrži 10% fetalni kravlji serum u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml na pločici sa 384-komorica uz inkubaciju tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2; (2) dodavanja jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli uz inkubaciju ćelija tokom 30 min; (3) dodavanja CL097 (InvivoGen) u koncentraciji od 3 μg/ml uz inkubaciju ćelija tokom približno 20 h; i (4) kvantifikovanja NF-kapaB zavisnog aktivisanja reportera uz merenje luminiscencije.

[0019] Dodatna izvedba uključuje jedinjenje koje poseduje apsolutnu stereohemiju koja je prikazana u formuli (V):

ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so, pri čemu: R7aje H ili F; pri čemu Prsten A je:

gde X1, X2, i X3su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH- i N;

gde X4je -CH- ili N; i pri čemu Z je piperazin, opciono premošćen ili supstituisan na ugljeniku uz pomoć -CH3; heksahidroirolo[3,4]pirol; četiri- do sedam-člani ciklički amin supstituisan sa -OH ili -NH2; ili -NH- supstituisan sa četiri- do sedam-članog cikličkog amina;

gde X5je -CH- ili N; i pri čemu R je pirazol; [1,2,4]oksadiazol opciono supstituisan sa -CH3na ugljeniku iz oksadiazola; ili - C(O)NH- supstituisan na svojem azotu uz pomoć četirido sedam-članog cikličkog amina;

1,4-dimetilindazol-5-il; 1,6-dimetilindazol-5-il;

1-piperidinopirazol; cikloheksen supstituisan sa -NH2na poziciji 4'; cikloheksen supstituisan sa spiropiperidinom na poziciji 4'; ili 2-metoksipiridin-4-il.

[0020] U dodatnoj izvedbi, jedinjenje ili neka njegova farmaceutski efektivna so iz prethodnog paragrafa poseduje IC50koji je manji ili jednak sa 20 nM protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji. U dodatnoj izvedbi, jedinjenje ili neka njegova farmaceutski efektivna so iz prethodnog paragrafa ovoga opisa poseduje IC50koji je manji ili jednak sa 100 nM protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji. U dodatnoj izvedbi, IC50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji je izmeren uz pomoć (1) uzgajanja ćelija iz HEK-293 ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju TLR7 u Dulbecco-modifikovanom Eagle-medijumu koji sadrži 10% fetalni kravlji serum u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml na pločici sa 384-komorica uz inkubaciju tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2; (2) dodavanja jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli uz inkubaciju ćelija tokom 30 min; (3) dodavanja CL097 (InvivoGen) u koncentraciji 3 μg/ml uz inkubaciju ćelija tokom približno 20 h; i (4) kvantifikovanja NF-kapaB zavisnog aktivisanja reportera merenjem luminiscencije.

[0021] U dodatnim izvedbama ovoga opisa, jedinjenja poseduju IC50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj linija koji je manji ili jednak sa 200 nM, manji ili jednak sa 180 nM, manji ili jednak sa 160 nM, manji ili jednak sa 140 nM, manji ili jednak sa 120 nM, manji ili jednak sa 100 nM, manji ili jednak sa 80 nM, manji ili jednak sa 60 nM, manji ili jednak sa 40 nM, ili manji ili jednak sa 20 nM. U dodatnim izvedbama ovoga opisa, jedinjenja poseduju IC50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji koji se kreće od 10 nM do 30 nM, od 10 nM do 50 nM, od 10 nM do 100 nM, od 30 nM do 50 nM, od 30 nM do 100 nM, ili od 50 nM do 100 nM. U dodatnim izvedbama, pomenuti IC50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji je izmeren iz pomoć (1) uzgajanja ćelija HEK-293 ćelijske linije koja stabilno eksprimira TLR7 u Dulbecco-modifikovanom Eagle-medijumu koji sadrži 10% fetalni kravlji serum u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml na pločici sa 384-komorica uz inkubaciju tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2; (2) dodavanja jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli uz inkubaciju ćelija tokom 30 min; (3) dodavanja CL097 (InvivoGen) u koncentraciji od 3 µg/ml uz inkubaciju ćelija tokom približno 20 h; i (4) kvantifikovanja NF-kapaB zavisnog aktivisanja reportera merenjem luminiscencije.

[0022] Dodatne izvedbe obezbeđuju jedinjenja namenjena tretmanu sistemskog lupus erythematosus ili lupusa uključujući administriranje neke farmaceutski efektivne količine jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli iz ovoga opisa.

[0023] Dodatne izvedbe obezbeđuju jedinjenja namenjena upotrebi kod antagonizovanja TLR7, uključujući administriranje neke farmaceutski efektivne količine jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli iz ovoga opisa.

[0024] Dodatne izvedbe obezbeđuju jedinjenja namenjena kod antagonizovanja TLR8, uključujući administriranje neke farmaceutski efektivne količine jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0025] Dodatne izvedbe obezbeđuju farmaceutske kompozicije koja sadrže najmanje jedno jedinjenje ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so iz ovoga opisa i najmanje jedan farmaceutski prihvatljivi nosilac.

[0026] Termin "opciono supstituisani", kao šta se ovde koristi, označava da predmetna struktura može da uključuje, ali i ne mora, jedan ili više supstituenata nezavisno izabranih iz nižih alkila, metoksi-, -OH, -NH2, -CH2-NH-CH3, -OCH2CH2CH3, ili -OCH(CH3)2. Ako je opciono supstituisani ostatak ciklički, tada pomenuta opciona supstitucija može da predstavlja metilni most između dva atoma u prstenu.

[0027] Simbol "C(O)", kao šta se ovde koristi, se odnosi na neku karbonilnu grupu sa formulom C=O.

[0028] Osim ako je drugačije specifikovano, jednine koje se koriste u ovom opisu, uključujući i zahteve, označavaju "jedan ili više".

[0029] Kao šta se ovde koristi, "niži alkil" se odnosi na ravnolančane, ili, u slučaju grupa sa tri i četiri ugljenika, se odnosi na ravnolančane, razgranate, ili ciklički zasićene ugljovodonike koji poseduju između jednog i četiri atoma ugljenika.

[0030] Kao šta se ovde koristi, termin "spojen preko azota" kada se odnosi na heterociklički ostatak uključujući azot, označava da se tačku spajanja ostatka na drugu strukturu odvija preko azota koji je deo heterocikla.

[0031] Kao šta se ovde koristi, termin "TLR7/8" označava "TLR7 i TLR8" ili "TLR7 ili TLR8" ili "TLR7 i/ili TLR8". Naročito značenje će biti očito stručnjaku iz konteksta u kojem se termin "TLR7/8" pojavljuje.

[0032] Heterociklički ostaci koji su ovde navedeni uključuju azetidinil, pirolidinil, piperidinil, metilazetidinil, pirazolil, piperazinil, morfolinil, tiazolil, pirolopirolil, imidazolidinil, i izotiazolil. Kada se pominje neka heterociklička grupa, osim ako je drugačije navedeno, podrazumeva se da heterociklički atom(i) u pomenutoj grupi mogu da se nalaze u bilo kojoj poziciji u samoj grupi. Dodatno se podrazumeva da imidazolil, pirazolil, tiazolil, i pirolil mogu da budu nezasićeni ili delomično nezasićeni. Izvedba iz ovoga opisa može da uključuje neku farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedno ili više jedinjenja iz ovoga opisa uz neki farmaceutski prihvatljivi ekscipijent. Pomenute farmaceutske kompozicije mogu da se koriste sa ciljem tretiranja ili sprečavanja neke bolesti ili stanja karakterizovanih sa aktivisanjem TLR7/8 u telu pacijenta, tipično ljudskog pacijenta, koji boluje od ili pokazuje predispozicije prema razvijanju takvog stanja ili bolesti. Primeri za bolesti ili stanja karakterizovanih sa aktivisanjem TLR7/8 uključuju sistemski lupus erythematosus (SLE) i lupus nefritis.

[0033] Kao šta se ovde koristi, "efektivna količina" nekog jedinjenja iz neke izvedbe ovoga opisa je efektivna količina iznad-identifikovanih jedinjenja u količini koja je dovoljna da se tretira ili spreči SLE i lupus nefritis.

[0034] Izvedbe koje su ovde prikazane, mogu da uključuju asimetrične ili hiralne centre. Izvedbe uključuju brojne stereoizomere i njihove smeše. Individualni stereoizomeri jedinjenja iz izvedbi ovoga opisa mogu da se pripreme sintetizovanjem iz komercijalno dostupnih početnih materijala koji sadrže asimetrične ili hiralne centre, ili uz pomoć pripreme smeša enantiomernih jedinjenja nakon njihove rezolucije. Prikladni postupci za rezoluciju uključuju spajanja racemskih smeša enantiomera, označenih (+/-), na neki hiralni pomoćni produkt, razdvajanje nastalog diastereomera primenom hromatografije ili ponovnog kristalizovanja i razdvajanje optički čistog produkt od pomenutog pomoćnog; ili direktno razdvajanje smeše optičkih enantiomera na koloni za hiralnu hromatografiju.

[0035] Izvedbe ovoga opisa takođe uključuju farmaceutsku kompoziciju koja sadrži bilo koje jedinjenje iz ovoga opisa kao i neki farmaceutski prihvatljivi ekscipijent. Pomenute farmaceutske kompozicije mogu da se koriste za tretiranje ili prevenciju SLE i lupus nefritis. Prema tome, izvedbe ovoga opisa mogu takođe podrazumevaju postupak za tretiranje ili sprečavanje SLE ili lupus nefritis u ljudskom pacijentu koji boluje od ili pokazuje predispoziciju da razvije lupus nefritis ili SLE.

[0036] Izvedbe iz ovoga opisa uključuju farmaceutski prihvatljive soli ovde opisnih jedinjenja. Termin "farmaceutski prihvatljiva so" se odnosi na soli koje su, na osnovu zdrave medicinske procene, prikladne za primenu u kontaktu sa tkivima ljudi i životinja bez da uzrokuju nepoželjni toksičnost, iritaciju, ili alergijski odgovor. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate stanju tehnike. Na primer, S. M. Berge, et al., opisuju farmaceutski prihvatljive soli detaljno u J. Pharmaceutical Sciences 66:1-19, 1977. Soli mogu da se pripreme in situ tokom finalne izolacija i prečišćavanja jedinjenja ili odvojeno uz pomoć reagovanja slobodne baze sa nekom prikladnom organskom kiselina. Reprezentativne kisele adicione soli uključuju acetat, adipat, alginat, askorbat, aspartat, benzensulfonat, benzoat, bisulfat, borat, butirat, kamforat, kamfersulfonat, citrat, ciklopentanpropionat, diglukonat, dodecilsulfat, etansulfonat, fumarat, glukoheptonat, glicerofosfat, hemisulfat, heptonat, heksanoat, hidrobromid, hidrohlorid, hidrojodid, 2-hidroksi-etansulfonat, laktobionat, laktat, laurat, lauril sulfat, malat, maleat, monomaleat, malonat, metansulfonat, 2-naftalensulfonat, nikotinat, nitrat, oleat, oksalat, palmitat, pamoat, pektinat, persulfat, 3-fenilpropionat, fosfat, pikrat, pivalat, propionat, stearat, sukcinat, sulfat, tartrat, tiocijanat, toluensulfonat, trifluoroacetat, undekanoat, valerat, i slično. Reprezentativni alkalo- ili alkalo-zemno-metalne soli uključuju natrijum, litijum, kalijum, kalcijum, magnezijum i slično, kao i ne-toksični amonijum, kvaternarni amonijum, i aminski katjon, uključujući, ali bez ograničenja, amonijum, tetrametilamonijum, tetraetilamonijum, metilamin, dimetilamin, trimetilamin, trietilamin, etilamin, i slično. Termin "farmaceutski prihvatljivi ester", kao šta se ovde koristi, predstavlja estere koji hidrolizuju in vivo i uključuju one koji se lako raspadaju u ljudskom telu kako bi oslobodile parentno jedinjenje ili njegovu so. Prikladne esterske grupe uključuju, na primer, one koje su izvedene iz farmaceutski prihvatljivih alifatskih karboksilnih kiselina, naročito alkanoidna, alkenoidna, cikloalkanoidna, i alkandioidna kiselina, u kojima svaka alkilna ili alkenilna grupa tipično sadrži više od 6 atoma ugljenika. Primeri za estere uključuju format, acetate, propionate, butirate, akrilate, i etilsukcinate.

[0037] U ovoj aplikaciji, enantiomeri su označeni sa simbolima "R" ili "S" ili su nacrtani sa konvencionalnim označavanjem uz pomoć masne linije koja definiše supstituent iznad ravnine u tri-dimenzionalnom prostoru i uz pomoć skraćene ili isprekidane linije koja definiše supstituent ispod ravnine u tri-dimenzionalnom prostoru. Ako nije navedena stereohemijska oznaka, tada definicija strukture uključuje obe stereohemijske opcije.

KRATKI OPIS SLIKA

[0038]

Slika 1 prikazuje kratkotrajni in vivo potencijal protiv TLR7-puta kod miša za jedinjenje ER-892887 (pod hemijskim imenom (4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon). Objašnjenje: Ženke BALB/c miševa su dozirane uz pomoć oralne gavaže (cevčice) samo sa prenosnikom (0.5% vodena metil-celuloza) ili sa jedinjenjem ER-892887 formulisanim u prenosniku u koncentraciji od 100 mg/kg ili 300 mg/kg. 13 ili 24 h nakon oralnog doziranja, miševi su injektirani potkožno sa 15 µg R848 sa ciljem stimulisanja TLR7. Krvna plazma je skupljena uz pomoć kardijalne punkture, a nivo IL-6 1.5 h nakon TLR7-stimulacije je tada procenjen primenom standardne ELISA-procedure. Procenat supresije zavisi o IL-6 indukciji nakon doziranja kontrole sa prenosnikom. Statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa.

Slika 2 prikazuje rezultate testiranja jedinjenja ER-892887 na BXSB-Yaa soju koji je model za lupus. Objašnjenje: Dvanaest sedmica stari BXSB-Yaa miševi su nasumično raspoređeni u grupe as podjednakim medijanama anti-dsDNA titara pa su jednom dnevno tretirani oralno samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 300 mg/kg ER-892887 tokom 14 sedmica ukupno. (A) Svi miševi su žrtvovani u starosti od 26 sedmica, a finalni anti-dsDNA, anti-Sm/nRNP, i anti-RiboP titari su procenjeni primenom ELISA uz upoređivanje sa titarima koji su primećeni kod miševa koji su umrli u starosti od 6 sedmica. (B) Približno jedna sedmica pre žrtvovanja (25 sedmica starosti, 13 sedmica tretmana), miševi su smešteni 1-2 po kavezu u metaboličkim kavezima tokom 18 h sa ciljem skupljanja urina, a urinarni omer albumin-kreatinin (Urinary Albumin Creatinine Ratio, UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju kao indirektnu meru funkcioniranja bubrega. (C) U momentu žrtvovanja, bubrezi su skupljeni iz individualnih miševa, fiksirani u 10% formalinu tokom 24 h, uklopljeni u parafin, a H&E obojeni preseci su pripremljeni sa ciljem histopatološke procene primenom slepog testa. (D) Rezime primećene smrtnosti u SLE-8 studiji. Statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa kod (A).

Slika 3 prikazuje rezultate testiranja jedinjenja ER-892887 na NZBxNZW soju koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke NZBWF1/J miševa su bile stare 6 sedmica, provedeno je osnovno krvarenje, a životinje su posmatrane sa ciljem praćenja napredovanja bolesti tako da su analizirani anti-dsDNA titari. U starosti od 20 sedmica, miševi su nasumično raspoređeni u grupe sa podjednakim medijanama antidsDNA titara pa su tretirani kada su dosegli starost od 23 sedmica kada im je dan samo prenosnik (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili 33, 100, ili 300 mg/kg ER-892887, oralno, jednom dnevno (QD PO). Svi miševi su žrtvovani u starosti od 45 sedmica (22 sedmice ukupnog tretmana), a anti-dsDNA titari iz krvne plazme su određeni primenom ELISA. (A) Uticaj ER-892887 tretmana tokom vremena na anti-dsDNA titare. (B) Podaci za tretman u trajanju od 22 sedmica za ER-892887 koji je izveden iz podataka koji su prikazani u (A). (C) Neposredno pre terminacije u starosti od 45 sedmica (nakon tretmana od 22 sedmice), urina je skupljena iz individualnih miševa, a urinarni omer albumin-kreatinin (UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju kao indirektna mera za funkcioniranje bubrega. (D) Rezime smrtnosti koja je primećena u ovoj studiji. (E) U momentu žrtvovanja, bubrezi su skupljeni iz individualnih miševa, fiksirani u 10% formalinu tokom 24 h, uklopljeni in parafin, a II&E obojeni preseci su pripremljeni sa ciljem histopatološke procene primenom slepog testa. Statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa kod (C).

Slika 4 prikazuje rezultate dodatnog testiranja jedinjenja ER-892887 u NZBxNZW soju koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke NZBWF1/J miševa su bile stare 8 sedmica, provedeno je osnovno krvarenje, a miševi su posmatrani sa ciljem analize napredovanja bolesti preko anti-dsDNA titara. U starosti od 24 sedmica, miševi su nasumično raspoređeni u grupe sa podjednakim medijanama anti-dsDNA titara, a tretirani su u starosti od 25 sedmica (QD PO) i to samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 33, 100, ili 300 mg/kg ER-892887. Anti-dsDNA titari su određeni primenom ELISA na primercima krvne plazme u navedenim vremenskim tačkama. (A) Uticaj tretmana sa jedinjenjem na medijanu anti-dsDNA titara tokom vremena u periodu do 17 sedmica tretmana. (B) Uticaj tretmana sa jedinjenjem na medijanu anti-dsDNA u vremenskim tačkama tokom 13 sedmica tretmana, ali samo na osnovu podataka prikazanih u (A). (C) Nakon 13 sedmica (gornji grafikon) ili 17 sedmica (donji grafikon) tretmana sa jedinjenjem, urina je bila skupljena iz individualnih miševa, a urinarni omer albumin-kreatinin (UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju kao indirektna mera funkcioniranja bubrega. Zaokruženi miševi sa visokim UACR su on životinje koje su umrle između 13 i 17 sedmica tretmana (statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa). (D) Azot u urei iz krvi (BUN) izmeren u plazmi izabranih grupa nakon 13 sedmica tretmana. (E) Krive smrtnosti za miševe koji su tretirani sa prenosnikom odnosno sa jedinjenjem tokom najviše 17 sedmica tretmana. Analize kriva smrtnosti do 17 sedmica tretmana otkriva da doze od 33 mg/kg i 100 mg/kg ER-892887 pokazuju statistički značajno preživljenje upoređeno sa prenosnikom kao šta je određeno uz pomoć Log-rank (Mantel-Cox) testa. (F) Rezime primećen smrtnosti u ovoj studiji.

Slika 5 prikazuje rezultate testiranja jedinjenja ER-892887 u pristanu: DBA/1 soj koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke DBA/1 miševa u starosti od 10-11 sedmica su primile intraperitonealnu injekciju 0.5 ml pristana ili PBS. Oralno doziranje (jednom dnevno) sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 300 mg/kg ER-892887 je započelo 3.5 meseci nakon injekcije sa pristanom tokom ukupnog tretmana od 3 meseca. (A) Miševi su eutanazirani nakon 3 meseca tretmana sa jedinjenjem, a antidsDNA i anti-RiboP titari su izmereni u primercima krvne plazme primenom ELISA (statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa). (B) Razvoj artritisa je procenjen mesečno uz pomoć vizualnog bodovanja. (C) Ekspresija IFN-regulisanih gena u ukupnoj krvi je izmerena primenom qPCR-panela nakon 3 meseca tretmana, a tada je izračunat potpis rezultata za IFN-gen (vidi deo Farmakološki materijali i postupci za detalje o izračunu IFN-rezultata). (D) Puna lista od 21 gena značajno pozitivno regulisanih uz pomoć pomenutog tretmana u odnosu na PBS-kontrole i pojedinačni geni koji su bili značajno redukovani uz pomoć ER-892887 (Studentov ttest).

Slika 6 prikazuje rezultate dodatnog testiranja jedinjenja ER-892887 u pristanu: DBA/1 soj koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke DBA/1 miševa u starosti od 11-12 sedmica su primile intraperitonealnu injekciju 0.5 ml pristana ili PBS. Oralno doziranje (jednom dnevno) sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 33, 100, ili 300 mg/kg ER-892887 je započelo 2 meseca nakon injekcije pristana tokom ukupno 3 meseca tretmana. Miševi su eutanazirani nakon 3 meseca tretmana sa jedinjenjem, a anti-dsDNA (A), -RiboP (B), -Sm/nRNP (C), i -histon (D) titari su izmereni u primercima krvne plazme primenom ELISA (statistički značaj određen je primenom Mann-Whitney testa). (E) Rezime primećene smrtnosti u studiji tokom 3 meseca tretmana sa jedinjenjem. (F) Ekspresija IFN-regulisanih gena u ukupnoj krvi je izmerena primenom qPCR-panela kod zadnje vremenske tačke tretmana miševa sa prenosnikom i sa 300 mg/kg ER-892887, a tada je izračunat potpis rezultata IFN-gena (vidi deo Farmakološki materijali i postupci za detalje o izračunu IFN-rezultata). (G) Puna lista od 22 gena koji su značajno pozitivno regulisani primenom tretmana sa pristanom u odnosu na PBS-kontrola i pojedinačni geni koji su bili značajno reducirani sa ER-892887 (Studentov t-test).

Slika 7 prikazuje rezultate testiranja jedinjenja ER-885454 u BXSB-Yaa soju koji je model za lupus. Objašnjenje: Devet sedmica stari mužjaci BXSB-Yaa miševa su tretirani oralno (jednom dnevno) samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 100 mg/kg ili 300 mg/kg ER-885454 tokom ukupno 15 sedmica. Svi miševi su žrtvovani u starosti od 24 sedmica, a finalni anti-dsDNA (A) i anti-Sm/RNP (B) titari su procenjeni primenom ELISA. (C) Približno jedne sedmice pre žrtvovanja, miševi su držani 1-2 po kavezu u metaboličkim kavezima tokom 18 h sa ciljem sakupljanja urine, a urinarni omer albumin-kreatinin (UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju kao indirektna mera funkcije bubrega. (D) U momentu žrtvovanja, bubrezi su skupljeni iz individualnih miševa, fiksirani u 10% formalinu tokom 24 h, uklopljeni u parafin, a H&E obojeni preseci su pripremljeni sa ciljem histopatološke procene primenom slepog testa. Statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa kod (A), (B), i (C) iznad.

Slika 8 prikazuje rezultate dodatnog testiranja jedinjenja ER-885454 u BXSB-Yaa soju koji je model za lupus. Objašnjenje: Sedamnaest sedmica stari BXSB-Yaa miševi su nasumično raspoređeni u dve grupe sa podjednakim medijanama antidsDNA titara pa su tretirani jednom dnevno (oralno) samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 300 mg/kg ER-885454 tokom ukupno 13 sedmica. Svi miševi su žrtvovani u starosti od 30 sedmica, a finalni anti-dsDNA (A) i anti-Sm/RNP (B) titari su procenjeni primenom ELISA na osnovu uporedbe sa titarima primećenim kod miševa koji su umrli u 7 sedmici. (C) Približno jedne sedmice pre žrtvovanja, miševi su držani 1-2 po kavezu u metaboličkim kavezima tokom 18 h sa ciljem sakupljanja urine, a urinarni omer albumin-kreatinin (UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju kao indirektna mera funkcije bubrega. (D) U momentu žrtvovanja, bubrezi su skupljeni iz individualnih miševa, fiksirani u 10% formalinu tokom 24 h, uklopljeni u parafinu, a H&E obojeni preseci su pripremljeni sa ciljem histopatološke procene na naučan način. Statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa kod (A), (B), i (C) iznad.

Slika 9 prikazuje rezultate testiranja jedinjenja ER-885454 u NZBxNZW soju koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke NZBWF1/J miševa su bile stare 6 sedmica, provedeno je osnovno krvarenje, a miševi su posmatrani sa ciljem praćenja razvoja bolesti na osnovu anti-dsDNA titara. U starosti od 24 sedmica, miševi su nasumično raspoređeni u grupe sa podjednakim medijanama anti-dsDNA titara pa su tretirani samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 300 mg/kg ER-885454 jednom dnevno, oralno (QD PO). Svi miševi su žrtvovani u starosti od 47 sedmica (23 sedmica ukupnog tretmana), a anti-dsDNA titari iz krvne plazme su određeni primenom ELISA (A). (B) Neposredno pre terminacije u starosti od 47 sedmica, urina je skupljena iz pojedinačnih miševa, a urinarni omer albumin-keatinin (UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju kao indirektna mera funkcije bubrega. (C) U momentu žrtvovanja, bubrezi su skupljeni iz individualnih miševa, fiksirani u 10% formalinu tokom 24 h, uklopljeni u parafinu, a H&E obojeni preseci su pripremljeni sa ciljem histopatološke procene primenom slepog testa. Statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney test kod (A) iznad.

Slika 10 prikazuje ORTEP-reprezentaciju strukture (X-zrake) jedinjenja ER-887006.

Slike 11A-11NN prikazuju strukture odgovarajućih hemijskih imena u skladu sa brojnim izvedbama koje su ovde predstavljene. "ER-broj" je referentan broj koji je pripisan svakom jedinjenju. Kada je prikladno prikazane su i aktivnost protiv HEK ćelijske linije koja stabilno eksprimira humani TLR7, aktivnost protiv HEK ćelijske linija koja stabilno eksprimira humani TLR9,<1>H NMR podaci, i podaci masene spektrometrije.

Slika 12 prikazuje efekt ER-892887 i dva uobičajeno korišćena tretmana lupusa kod ljudi u NZBxNZW soju koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke NZBWF1/J miševa su bile stare 4 sedmice, provedeno je osnovno krvarenje tokom 10. i 26.

sedmice, a miševi su posmatrani sa ciljem analize napredovanja bolesti uz pomoć praćenja anti-dsDNA titara i proteinurije. U starosti od 26 sedmica, miševi su nasumično raspoređeni u grupe sa podjednakim medijanama anti-dsDNA titara pa su tretirani samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 100 mg/kg ER-892887, 100 mg/kg hidroksihlorohina, 0.1 mg/kg prednizolona ili 0.5 mg/kg prednizolona, sami za sebe ili u navedenim kombinacijama, jednom dnevno, oralno (QD PO). Svi miševi su žrtvovani u starosti od 45 sedmica (19 sedmica tretmana sa lekom), a anti-dsDNA titari iz krvne plazme su određeni primenom ELISA. (A) Uticaj ER-892887 tretmana na anti-dsDNA titare kod terminacije. (B) U starosti od 41 sedmice (nakon 15 sedmica tretmana) urina je skupljena iz pojedinačnih miševa, a urinarni omer albumin-kreatinin (UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju kao indirektna mera funkcije bubrega. (C) Urina je kasnije skupljena iz individualnih miševa neposredno pre terminacije tokom 45 sedmica starosti, nakon 19 sedmica tretmana, a urinarni omer albumin-keatinin (UACR, proteinurija) je određen za svaku životinju. (D, E, F) Krive preživljenja dobivene u ovoj studiji tokom tretmana sa E6887, za svaki komparator standardnog tretmana (D, hidroksihlorohin; E, 0.1 mg/kg prednizolon; F, 0.5 mg/kg prednizolon), ili za kombinaciju E6887 i jednog od komparatora. Tretirane grupe su upoređene sa prenosnikom primenom Mantel-Cox testa.

Slika 13 prikazuje rezultate testiranja jedinjenja ER-892887 i tri uobičajeno korišćenih tretman lupusa kod ljudi u pristanu: DBA/1 soj koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke DBA/1 miševa stare 11 sedmica su primile intraperitonealnu injekciju 0.5 ml pristana ili PBS. Oralno doziranje (jednom dnevno) samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 300 mg/kg ER-892887, 100 mg/kg hidroksihlorohina, 1 mg/kg prednizolona ili 100 mg/kg mikofenolata je započelo 2 meseca nakon injekcije sa pristanom pa je nastavljeno tokom 3 meseca tretmana. (A) Na kraju 3. meseca tretmana, razvoj artritisa je procenjen uz pomoć vizualnog bodovanja oticanja i zapaljenja. (B) Miševi su eutanazirani nakon 3 meseca tretmana sa jedinjenjem, a antidsDNA, anti-histon, anti-Sm/RNP i anti-RiboP titari su izmereni u primercima krvne plazme primenom ELISA (statistički značaj je primenom Mann-Whitney testa). Vrednostima ELISA koje grupiraju iznad ili ispod raspona standardne krive je pripisana vrednost koja je jednaka najvećem ili najmanjem validnom merenju, kako je već bilo prikladno. (C) Ekspresija IFN-regulisanih gena u ukupnoj krvi je izmerena primenom qPCR-panela nakon 3 meseca tretmana. Prikazana je puna lista interferonom-regulisanih gena koji su značajno pozitivno regulisani u tretmanu sa pristanom u odnosu na PBS-kontrole, a individualni geni koji su značajno reducirani sa ER-892887 (Studentov t-test) su masno otisnuti i označeni sa zvezdom. (D) Prikazani su IFN-rezultati za gene koji su regulisani uz pomoć pristana u ovom eksperimentu.

Slika 14 prikazuje efekt jedinjenja ER-892887 na artritis i auto-antitela u pristanu: DBA/1 soj koji je model za lupus. Objašnjenje: Ženke DBA/1 miševa starih 10 sedmica su primili intraperitonealnu injekciju 0.5 ml pristana ili PBS. U starosti od 22 sedmica, miševi su nasumično raspoređeni u grupe sa podjednakim medijanama antidsDNA titara pa su tretirani samo sa prenosnikom (pren.: 0.5% metil-celuloza) ili sa 300 mg/kg ER-892887 jednom dnevno, oralno (QD PO). Simptomi artritisa (oticanja i upala) su snimani mesečno primenom slepog testa. Svi miševi su žrtvovani u starosti od 34 sedmica (12 sedmica tretmana), a titari auto-antitela iz krvne plazme su određeni uz pomoć ELISA. Pre terminacije, šape su bile snimljene (x-zrake) sa ciljem analize oštećenja kostiju i erozije primenom slepog testa (dve slepe analize). (A) Gore – rezultati za artritis su izračunavani mesečno u grupama koje su bile dozirane sa prenosnikom odnosno sa jedinjenjem. (A) Dolje – rezultati sa x-zrakama su izračunati nakon tri meseca tretmana. (B) Titari auto-antitela su izmereni u terminalnim primercima krvne plazme primenom ELISA (statistički značaj je određen primenom Mann-Whitney testa).

DETALJAN OPIS OVOGA PRONALASKA

[0039] Osim kao imuno-receptori urođenog imuniteta koji su sposobni da detektuju egzogene ("non-self") molekularne obrasce koji su povezani sa patogenima (PAMP – tj., detektovanje bakterijske LPS uz pomoć TLR4), tolični-receptori sisara (TLR) su takođe sposobni da prepoznaju endogene stimuluse (DAMP) koji se oslobađaju nakon oštećenja tkiva ili stresa (Kono, H. & K.L. Rock, How dying cells alert the immune system to danger. Nat Rev Immunol, 2008. 8(4): p. 279-89). U poslednjoj dekadi je otkrivena veza između TLR-aktivisanja uz pomoć endogenih ("self") molekularnih obrazaca koji su povezani sa nekom opasnošću (DAMP) i etiologije autoimunih poremećaja. Specifično, TLR7 može da se aktiviše uz pomoć jedno-lančane RNA (ssRNA) koja dolazi iz sisara, ali i iz virusa, dok TLR9 može da se aktiviše uz pomoć DNA iz sisara, virusa, i bakterija.

[0040] Lupus je karakterizovan sa auto-antitelima koja su reaktivna protiv same dvo-lančane DNA (dsDNA) i belančevina povezanih s njom (histoni) kao i protiv širokog raspona RNA-povezanih belančevina poput Ro, La, Smith (Sm), i U1 snRNP (Kirou, K.A., et al., Activation of the interferon-alpha pathway identifies a subgroup of systemic lupus erythematosus patients with distinct serologic features and active disease. Arthritis Rheum, 2005. 52(5): str.

1491-503). Druga uobičajena karakteristika lupusa, za koju se zna da direktno korelira sa ozbiljnošću bolesti, je narušena ekspresija interferona tipa-1 (IFN), a naročito IFNα, i odgovarajući porast velikog panela IFNα-regulisanih gena u PBMC-u pacijenata sa lupusom (takozvani "potpis gena tipa-1 IFN") (Kirou, K.A., et al., supra.). Glavni izvor IFN u krvi je specializovani imunocit koji je nazvan plazmacitoidni dendrocit (pDC), koji konstitutivno eksprimira oba receptora, TLR7 i TLR9.

[0041] Uzajaman odnos između karakteristika ove dve bolesti, auto-antitela i IFN-nivoi, je primećen kada su brojne istraživačke grupe zajednički pokazale da su antitelo-kompleksi izolovani iz pacijenata sa lupusom, ali ne i iz zdravih donora, sposobni da potaknu proizvodnju IFN uz pomoć pDC na TLR7/9- i RNA/DNA-zavisan način (Means, T.K., et al., Human lupus autoantibody-DNA complexes activate DCs through cooperation of CD32 and TLR9. J Clin Invest, 2005. 115(2): str. 407-17; Vollmer, J., et al., Immune stimulation mediated by autoantigen binding sites within small nuclear RNAs involves Toll-like receptors 7 and 8. J Exp Med, 2005. 202(11): str. 1575-85; Savarese, E., et al., U1 small nuclear ribonucleoprotein immune complexes induce type I interferon in plasmacytoid dendritic cells through TLR7. Blood, 2006. 107(8): str. 3229-34). Štaviše, IFN stimuliše povećanu ekspresiju TLR7/9 na B-ćelijama čime pojačava aktivisanje TLR/BCR (receptor B-ćelija) iz auto-reaktivnih B-ćelija kako bi se razlikovale ćelije iz plazme koje proizvode antitelo. (Banchereau, J. & V. Pascual, Type I interferon in systemic lupus erythematosus and other autoimmune diseases. Immunity, 2006. 25(3): str. 383-92). U tom svetlu, nivoi auto-antitelokomplekasa koji sadrže nukleinsku kiselinu za TLR7/9-ligande uzrokuju pro-upalni ciklus i napredovanje lupusa. IFN Tipa-1 sam za sebe može da indukuje simptome slične lupusu kod ljudi (Ho, V., et al., Severe systemic lupus erythematosus induced by antiviral treatment for hepatitis C. J. Clin Rheumatol, 2008. 14(3): 166-8. Ronnblom L.E., et al. Possible induction of systemic lupus erythematosus by interferon-alpha treatment in a patient with a malignant carcinoid tumor. J. Internal Med.1990. 227:207-10). Mi verujemo da je moguće da se zamisli da će farmakološki antagonizam TLR7/8 omogućiti terapeutsku korist pacijentima koji pate od lupusa tako šta će da onemogući pomenuti pro-upalni ciklus, smanjujući IFN-nivoe, i onemogućavajući proces autoimune bolesti koji je posredovan sa pDC i B-ćelijama.

[0042] Nekoliko drugih linija naznaka sugeriše ulogu TLR7 u etiologiji ljudskog lupusa i podupire pretpostavku da su TLR-receptori validne mete za intervenciju sa ciljem tretiranja pomenute bolesti. Specifični polimorfizmi u 3' UTR iz TLR7 su identifikovani i pokazuju da korelišu sa povećanom ekspresijom TLR7 i pojačanim potpisom IFN-gena (Shen, N., et al., Sex-specific association of X-linked Toll-like receptor 7 (TLR7) with male systemic lupus erythematosus. Proc Natl Acad Sci U S A, 2010. 107(36): str. 15838-43.). Osim toga, lekovi protiv malarije tipa standard-of-care (SOC) poput hlorohina razaraju TLR7/9 signaliziranje i inhibiraju PBMC i/ili proizvodnju IFNα od strane pDC koja je indukovana sa kompleksima ssRNA-ribonukleobelančevina ili sa serumom pacijenta sa lupusom. Štaviše, mijeloidni DC i monociti proizvode IL-12p40, TNFα, i IL-6 nakon self-RNA/TLR8 signaliziranja, koje sugeriše dodatni doprinos TLR8-zavisnih pro-upalnih citokina u etiologiji ljudskog lupusa kao dodatak TLR7-proizvedenom IFN od strane pDC (Vollmer, supra; Gorden, K.B., et al., Synthetic TLR agonists reveal functional differences between human TLR7 and TLR8. J Immunol, 2005. 174(3): str.1259-68.).

[0043] Nalazi iz mišjih modela takođe ukazuju na ulogu TLR kod razvijanja lupusa. Objavljene studije zajednički pokazuju da delecija samo TLR7 ili oba TLR7/9 gena ili farmakološka inhibicija oba TLR7/9 gena smanjuje ozbiljnost bolesti u četiri odvojena modela za lupus (Nickerson, K.M., et al., TLR9 regulates TLR7- and MyD88-dependent autoantibody production and disease in a murine model of lupus. J Immunol, 2010. 184(4): str. 1840-8; Fairhurst, A.M., et al., Yaa autoimmune phenotypes are conferred by overexpression of TLR7. Eur J Immunol, 2008.38(7): str.1971-8; Deane, J.A., et al., Control of toll-like receptor 7 expression is essential to restrict autoimmunity and dendritic cell proliferation. Immunity, 2007. 27(5): str. 801-10; Savarese, E., et al., Requirement of Tolllike receptor 7 for pristane-induced production of autoantibodies and development of murine lupus nephritis. Arthritis Rheum, 2008. 58(4): str. 1107-15.). U svetlu razjašnjavanja uloge TLR7 kao kritičnog uzroka autoimunosti, vredi navesti da transgena prekomerna ekspresija samo TLR7 dovodi do spontane anti-RNA auto-reaktivnosti i do nefritisa kod normalnog soja C57BL/6 koji je otporan na bolest. Deane, supra.

[0044] Iz bezbednosne perspektive, ne postoje nalazi da su miševi, kojima nedostaju pojedinačni TLR7, 8, ili 9 geni ili im nedostaju oba 7/8 i 7/9 gena, imuno-kompromitirani do stepena da je primećena infekcija sa oportunističkim patogenima. Slično, anti-malarični lekovi tipa SOC se veruje da su uglavnom bezbedni i efektivni kod dugotrajne upotrebe kod ljudi sa ciljem kontrole izbijanja lupusa kod doza koje su predviđene da barem delomično inhibiraju TLR7/9 signaliziranje (Lafyatis, R., M. York, & A. Marshak-Rothstein, Antimalarial agents: closing the gate on Toll-like receptors? Arthritis Rheum, 2006. 54(10): str. 3068-70; Costedoat-Chalumeau, N., et al., Low blood concentration of hydroxychloroquine is a marker for and predictor of disease exacerbations in patients with systemic lupus erythematosus. Arthritis Rheum, 2006. 54(10): str. 3284-90.). U stvari, bezbedni od povećane osetljivosti na infekcije sa Gram-pozitivnim bakterijama tokom detinjstva i u manjem omeru tokom odrasle dobi, ljudi sa izrazito kompromitiranim TLR i IL-1R signalnim putevima (MyD88- ili IRAK-4-deficijencija) su svejedno zdravi i poseduju dovoljno mehanizama za obranu (Casanova, J.L., L. Abel, & L. Quintana-Murci, Human TLRs and IL-1Rs in Host Defense: Natural Insights from Evolutionary, Epidemiological, and Clinical Genetics. Annu Rev Immunol, 2010.).

[0045] Na bazi rečenog i na bazi drugih informacija, mi verujemo da je TLR7 naročito validna meta u kontekstu mišjih pre-kliničkih SLE modela. Genetičke i funkcionalne studije na ljudima podupiru hipotezu da antagonizam TLR7 i/ili TLR8 puteva donosi terapeutsku korist pacijentima sa lupusom. Štaviše, studije delecije TLR-gena kod miševa i dugotrajna upotreba lekova protiv malarije kod ljudi sugerišu da farmakološka supresija TLR7, 8 i/ili 9 može da se provede bez značajnog kompromitiranja imuno-obrane domaćina.

[0046] Za jedinjenje koje suprimira TLR7, TLR8, ili oba TLR7 i TLR8 je, prema tome, očekivano da deluje kao terapeutski ili profilaktički agens za SLE ili lupus nefritis.

[0047] Ovi pronalazači su pronašli jedinjenja koja suprimiraju TLR 7 i/ili 8 i, prema tome, očekuju da pomenuta uzrokuju profilaktički ili terapeutski efekt kod SLE ili lupus nefritisa. Jedinjenja i jedinjenja koja se upotrebljavaju u tretmanu iz ovoga opisa su ovde opisana.

[0048] Dokument WO 2009/076512 A1 opisuje karboksamidna jedinjenja za navodni terapeutski tretman brojnih indikacija, uključujući upalu, i druge poremećaje uključujući i one koje su povezane sa akumulacijom limfocita ili monocita poput ateroskleroze, reumatoidnog artritisa, lupusa, bolesti transplant-naspram-domaćina i/ili odbacivanje transplanta. Jedinjenja iz ovoga pronalazak se razlikuju od onih koja su opisana u dokumentu WO 2009/076512 u tome da pripadaju drugačijoj familiji heterocikličkih jedinjenja; ona su derivati tetrahidropirazolopirimidina.

II. Terapeutska upotreba

[0049] Dozni nivoi aktivnih sastojaka u farmaceutskim kompozicijama iz ovoga opis mogu da variraju sa ciljem da se postigne količina aktivnog jedinjenja (ili više njih) koja postiže željeni terapeutski odgovor kod nekog pacijenta, kod upotrebljene kompozicije, i modusa administriranja. Izabrani dozni nivo zavisi o aktivnost pojedinog jedinjenja, rute administriranja, ozbiljnosti stanja koje se tretira, i stanja i prethodne medicinske istorije pacijenta koji se tretira. Doze se određuju za svaki posebni slučaj primenom standardnih postupaka u skladu sa faktorima koji su posebni za svakog pacijenta, uključujući dob, težinu, opšte zdravstveno stanje, i druge faktore koji utiču na efikasnost jedinjenja (ili više njih) iz ovoga opisa. Opšte uzeto, u slučaju oralnog administriranja, THPP-jedinjenje u skladu sa ovim opisom ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so se administrira u dozi od približno 30 µg do 100 µg, dozi od 30 µg do 500 µg, dozi od 30 µg do 10 g, dozi od 100 µg do 5 g, ili dozi od 100 µg do 1 g po odraslom čoveku po danu. U slučaju administriranja uz pomoć injekcije, pomenuta se administriraju u dozi od približno 30 µg do 1 g, dozi od 100 µg do 500 mg, ili dozi od 100 µg do 300 mg po odraslom čoveku po danu. U oba slučaja, doza se administrira jednom ili se deli u nekoliko pod-doza. Doziranje može da bude simulirano, na primer, primenom programa Simcyp<®>.

[0050] Nije predviđeno da administriranje jedinjenja iz ovoga opisa nekom sisaru, uključujući ljude, bude limitirano na neki posebni modus za administriranje, na dozu, ili na frekvenciju za doziranje. Ovaj opis predviđa sve moduse administriranja, uključujući oralnu, intraperitonealnu, intramišićnu, intravenznu, intraartikularnu, intralezionalnu, supkutanu, ili bilo koju drugu rutu koja može da obezbedi dostavljanje adekvatne doze koja može da spreči ili da tretira SLE ili lupus nefritis. Jedno ili više jedinjenja iz ovoga opisa može da se administrira nekom sisaru kao pojedinačna doza ili u formi više doza. Kada se administrira više doza, pomenute doze mogu da se vremenski odvoje jedna od druge, na primer, na nekoliko časova, na jedan dan, jednu sedmicu, jedan mesec, ili jednu godinu. Podrazumeva se da se, za bilo koji subjekt, specifični dozni režimi trebaju prilagoditi tokom vremena u skladu sa individualnim potrebama i profesionalnoj proceni osobe koja prepisuje administriranje ili koja nadgleda administriranje neke farmaceutske kompozicije koja uključuje neko jedinjenje iz ovoga opisa.

[0051] Za kliničku primenu, jedinjenje iz ovoga opisa, opšte uzeto, može da se administrira intravenozno, potkožno, intramišićno, u debelo crevo, nazalno, intraperitonealno, rektalno, bukalno, ili oralno. Kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje iz ovoga opisa i koje su prikladne za upotrebu u medicini ili u veterinarnoj medicini mogu da se primenjuju u formama koje omogućavaju administriranje preko neke prikladne rute. Ove kompozicije mogu da se pripreme u skladu sa uobičajenim postupcima, uz korišćenje jednog ili više farmaceutski prihvatljivih dodataka ili ekscipijenata. Pomenuti dodaci obuhvataju, inter alia, razređivaće, voden sterilne medijume, i brojne ne-toksične organske rastvarače. Prihvatljivi nosioci ili razređivaći za terapeutsku upotrebu su dobro poznati u farmaceutici, a opisani su, na primer, u Remington: The Science and Practice of Pharmacy (20. izd.), ur. A. R. Gennaro, Lippincott Williams & Wilkins, 2000, Philadelphia, i Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, ur. J. Swarbrick & J. C. Boylan, 1988, 1999, Marcel Dekker, New York. Pomenute kompozicije mogu da dolaze u formi tableta, pilula, granula, prahova, vodenih rastvora ili suspenzija, rastvora za injektiranje, eliksira, ili sirupa, a kompozicije mogu opciono da sadrže jedan ili više agenasa izabranih iz grupe koja obuhvata zaslađivaće, agense za ukus, kolorante, i stabilizere sa ciljem proizvodnje farmaceutski prihvatljivih preparata.

[0052] Izbor prenosnika i udeo aktivne supstance u prenosniku se generalno određuju u skladu sa rastvorljivosti i hemijskim karakteristikama produkta, samog modusa administriranja, i od uslova uobičajene farmaceutske prakse. Na primer, za pripremu tableta mogu da se koriste ekscipijenti poput laktoze, natrijum citrata, kalcijum karbonata, i dikalcijum fosfata i agenasa za rahljenje poput skroba, alginskih kiselina, određenih kompleksnih silikata koji su pomešani sa lubrikantima (tj., magnezijum stearat, natrijum lauril sulfat, i talka). Za pripremu kapsula, poželjno je da se koriste laktoza i polietilen glikoli visoke molekularne mase. Kada se koriste vodene suspenzije, pomenute mogu da sadrže agense za emulziju koji ubrzavaju suspenziju. Takođe mogu da se koriste i razređivaći poput saharoze, etanola, polietilen glikola, propilen glikola, glicerola, hloroforma, ili njihovih smeša.

[0053] Kod parenteralnog administriranja se koriste emulzije, suspenzije, ili rastvori kompozicija iz ovoga opisa u biljnom ulju (tj., ulje od susama, ulje od kikirikija, ili maslinovo ulje), vodenim-organskim rastvorima (tj., voda i propilen glikol), organskim esterima koji mogu da se injektiraju (tj., etil oleat), ili u sterilnim vodenim rastvorima farmaceutski prihvatljivih soli. Pomenuti rastvori soli iz kompozicija iz ovoga opisa su posebno korisni kod administriranja uz pomoć intramišićne ili supkutane injekcije. Vodeni rastvori koji obuhvataju rastvore soli u čistoj destilovanoj vodi mogu da se koriste kod intravenoznog administriranja pod uslovom (i) da je njihov pH prikladno podešen, (ii) da su prikladno puferovani i da zadržavaju izotoničnost uz dovoljne količine glikoze ili natrijum hlorida, i (iii) da su sterilizovani uz pomoć grejanja, zračenja, ili mikrofiltracije. Prikladne kompozicije koje sadrže jedinjenje iz ovog opisa mogu da se rastvore ili da se suspenduju u nekom prikladnom nosiocu sa ciljem upotrebe u nekom nebulizeru ili u suspenziji ili rastvoru za aerosol, ili mogu da budu apsorbovani ili adsorbovani na neki prikladni čvrsti nosilac sa ciljem upotrebe kao inhaleri sa suvim prahom. Čvrste kompozicije za rektalno administriranje uključuju čepiće koji su formulisane primenom poznatih postupaka i sadrže najmanje jedno jedinjenje iz ovoga opisa.

[0054] Dozne formulacije jedinjenja iz ovoga opisa koje si namenjene da se koriste kod terapeutskog administriranja treba da budu sterilne. Sterilnost se uobičajeno postiže uz pomoć filtracije kroz sterilnih membrana (tj., 0.2 µm) ili uz pomoć drugih konvencionalnih postupaka. Formulacije se tipično skladište u liofilizovanoj formi ili kao vodeni rastvor. pH kompozicija iz ovoga opisa u nekim izvedbama, na primer, može da se kreće iznosi 3 i 11, između 5 i 9, ili između 7 i 8 uključujući krajnje vrednosti.

[0055] Mada je jedna ruta za administriranje oralno doziranje, takođe mogu da se koriste i drugi postupci administriranja. Na primer, kompozicije mogu da se administriraju potkožno, intravenozno, intramišićno, u debelo crevo, rektalno, nazalno, ili intraperitonealno preko brojnih doznih forma poput čepića, usađenog peleta ili malih cilindara, raznih tipova aerosola, oralnih doznih formulacija, i topikalnih formulacija poput masti, kapi, i dermalnih nalepnica.

Jedinjenja iz izvedbi ovoga opisa mogu da se uklope u oblikovane kalupe poput implanata, uključujući, ali bez ograničenja, zaliske, stentove, tube, i proteze, koji koriste inertne materijale poput sintetičkih polimera ili silikona, (tj., kompozicije Silastic<®>, silikonska guma, ili drugi komercijalno dostupni polimeri). Takvi polimeri mogu da uključuju polivinilpirolidon, piran kopolimer, polihidroksi-propil-metakrilamid-fenol, polihidroksietilaspartamid-fenol, ili polietilenoksid-polilizin supstituisan sa palmitoilnim ostacima. Dodatno, jedinjenje iz ovoga opisa može da se spoji sa klasom bio-raspadljivih polimera koji su korisni za postizanje kontrolisanog oslobađanja leka, na primer polimlečna kiselina, poliglikolna kiselina, kopolimeri polimlečne i poliglikolne kiseline, poliepsilon kaprolakton, polihidroksi buterna kiselina, poliortoesteri, poliacetali, polidihidropirani, policijanoakrilati, i ukršteni ili amfipatični blok-kopolimeri za hidrogelove.

[0056] Jedinjenje iz ovoga opisa može takođe da se administrira u formi sistema za dostavu, poput malih unilamelarnih vezikula, velikih unilamelarnih vezikula, i multilamelarnih vezikula. Liposomi mogu da se formiraju iz raznih lipida, poput holesterola, stearilamina, ili fosfatidilholina. Jedinjenje iz ovoga opisa može takođe da se dostavi uz pomoć antitela, fragmenata antitela, faktora rasta, hormona, ili drugih ostataka za ciljanje na koje su spojeni molekuli samog jedinjenja (na primer, vidi Remington: The Science and Practice of Pharmacy, vide supra), uključujući in vivo konjugaciju na krvne komponente jedinjenja iz jedne od izvedaba ovoga opisa.

III. Sinteza

[0057] Obezbeđene su rute za opštu i specifičnu sintezu za koje smatramo da su korisne kod pripreme izvedaba ovoga opisa. Stručnjaci mogu da prepoznaju da određene varijacije ili modifikacije pomenutih procedura takođe mogu da omoguće sintezu jedinjenja u skladu sa ovim opisom. U nekim situacijama, fraza "poput" se koristi sa ciljem da se nabroje brojne alternative generičkih jedinjenja ili struktura. Podrazumeva se da "poput" ne treba da se shvata kao da ograničava, i da je njeno značenje u skladu sa frazom "uključujući, na primer, ali bez ograničenja".

[0058] Određeni uslovi su zajednički za specifične primere koji su prezentirani ispod. Grejanje u mikrotalasnoj peći je provedeno u aparatu Biotage<®>Emrys Liberator ili Initiator microwave reactor. Kolonska hromatografija je provedena na aparatu Biotage<®>SP4 flash chromatography system. Odstranjivanje rastvarača je provedeno uz pomoć rotacionog evaporatora Büchii ili centrifugalnog evaporatora Genvac<®>. NMR spektari su snimljeni na 400 MHz na aparatu Varian Unity<®>spectrometer uz korišćenje deuteriranih rastvarača. Hemijski pomaci su izraženi relativno u odnosu na rezidualni protonovani rastvarač.

[0059] Tanko-slojna hromatografija je provedena na staklenim pločicama od Whatman<®>koje su bile prekriven sa slojem od silika-gela (0.25 mm) uz korišćenje raznih omera jednog ili više od sledećih rastvarača: etil acetat, heptan, dihlorometan ili metanol.

[0060] Analitički LC/MS je proveden na sistemu Waters Acquity™ uz korišćenje kolone XBridge™ C18 1.7 µm 2.1×50 mm. Rastvarači A i B su voda w/0.1% mravlja kiselina i acetonitril w/0.1% mravlja kiselina. Vreme ukupnog postupka je bilo 5 min uz 5% B do 99% B tokom 4 min uz stopu protoka od 0.3 ml/min. Podaci masene spektroskopije su dobiveni na aparatu Waters SQD od 100-2000 amu u pozitivnom modusu elektrospreja. Ovi uslovi su ispod označeni kao "Uslovi I".

[0061] Alternativno, potvrda čistoće i mase su provedeni na aparatu Waters Autopurification system na koloni XBridge™ C83.5 µm 4.6×50 mm. Rastvarači A i B su voda w/0.1% mravlja kiselina i acetonitril w/0.1% mravlja kiselina. Ukupno vreme postupka je 6 min uz 10% B do 95% B tokom 5 min kod stope protoka od 2.5 ml/min. Podaci masene spektroskopije su dobijeni na aparatu Micromass ZQ™ od 130-1000 amu u pozitivnom modusu elektrospreja. Ovi uslovi su označeni kao "Uslovi II".

[0062] Preparativna LC/MS reverzne faze je provedena na aparatu Waters Autopurification system uz korišćenje kolon XBridge™ C8 5 µm, 19×100 mm. Rastvarači A i B su voda w/0.1% mravlja kiselina i acetonitril w/0.1% mravlja kiselina. Ukupno vreme postupka je 12 min uz 30% B do 95% B tokom 10 min kod stope protoka od 20 ml/min. Podaci masene spektroskopije su dobiveni na aparatu Micromass ZQ™ od 130-1000 amu u pozitivnom modusu elektrospreja. Ova stanja su označena kao "Stanja III".

[0063] Rezolucija racemskih jedinjenja primenom preparativne HPLC je provedena uz korišćenje jedne od sledećih hiralnih kolona: Chiralpak<®>IA (5 cm × 50 cm ili 2 cm × 25 cm), Chiralpak<®>AD (2 cm × 25 cm) ili Chiralcel<®>OD (2 cm × 25 cm). Omer enantiomera kod prečišćenih jedinjenja je određen primenom IIPLC-analize na koloni (0.45 cm × 25 cm) koja je sadržavala istu stacionarnu fazu (TA, AD ili OD).

[0064] Opšti postupci i eksperimenti za pripremu jedinjenja iz ovoga opisa su prikazani ispod. U nekim slučajevima, neko jedinjenje je opisano putem primera. Međutim, podrazumeva se da je serija jedinjenja iz ovoga opisa uvek pripremljena u skladu sa shemama i eksperimentima koji su opisani ispod. Za ona jedinjenja za koja su dostupni podaci za NMR i/ili za masenu spektrometriju, pomenuti podaci su predstavljeni odmah nakon opisa sinteze samog jedinjenja ili u Tabeli 11.

[0065] Sledeće skraćenice su korišćene u ovom opisu:

Definicije: sledeće skraćenice imaju navedena značenja:

HATU: N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronijum heksafluorofosfat DIEA: N,N-diizopropiletilamin

DMAP: 4-dimetilaminopiridin

TEA: trietilamin

DMF: N,N-dimetilformamid

NMP: N-metilpirolidin

THF: tetrahidrofuran

DCM: dihlorometan

MTBE: metil tert-butil etar

TFA: trifluorosirćetna kiselina

EDC: 1-(3-dimetilaminopropil)-3-etilkarbodiimid hidrohlorid

NaOH: natrijum hidroksid

NaBH4: natrijum borohidrid

IPA: izopropil alkohol ili izopropanol

EtOH: etanol

EtOAc: etil acetat

TLR: tolični-receptor

DAMP: molekularni obrazac povezan sa opasnošću (Danger-Associated Molecular Pattern)

PAMP: molekularni obrazac povezan sa patogenom (Patogen-Associated Molecular Pattern)

IFN: interferon

pDC: plazmacitoidni dendrocit

PBMC: mononuklearna ćelija periferne krvi

qPCR: kvantitativna lančana reakcija polimerazom

TLDA: Taqman<®>Low Density Array (mikročip niske gustine)

PBS: slanica puferovana fosfatom

ssRNA: jedno-lančana RNA

dsDNA: dvo-lančana DNA

SOC: standard-of-care

R848: rezikuimod

HCQ: hidroksihlorohin

HCl: hlorovodonična kiselina

vod.: vodeno

AcOH: sirćetna kiselina

PhNTf2: N-feniltrifluorometansulfonimid

Tf: trifluorometansulfonat

MeOH: metanol

ee: enantiomerni višak

HEPES: 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonska kiselina

NH4Cl: amonijum hlorid

Primer 1

Opšti sintetički postupci

[0066] Jedinjenja iz ovoga opisa su pripremljena u skladu sa opštom sintetičkom shemom koja je prikazana ispod:

Shema 1.

[0067] Priprema nekoliko primera primenjuje rutu koja je prikazana u Shemi 1. Tipično, komercijalno dostupni nitril, poput aromatskog, heterocikličkog, alifatskog ili heteroalifatskog nitrila (I) je podvrgnut acetonitrilu u prisutnosti jake protičke organske baze poput kalijum tamilata u neutralnom rastvaraču poput toluena na 0° C ili na sobnoj temperaturi sa ciljem da se dobije cijanoimin (II). Nastao imin je tada reagovan sa hidrazinom u prisutnosti organske kiseline poput sirćetne kiseline koje daje ključni intermedijar ili 3-supstituisani 5-amino pirazol (III). Desna polovina ovih primera je pripremljena primenom Claisen-ove kondenzacije uz korišćenje aromatskog ili heteroaromatskog acilketona (V) sa supstituisanim acetilesterom poput trifluoro, difluoro ili ne-supstituisanim acetil esterom (IV) sa ciljem da se dobije diketon (VI).

[0068] Kondenzacija oba intermedijara, III i VI, obezbeđuje 2,3-b-pirazolopirimidin u prisutnosti blage organske kiseline poput sirćetne kiseline. U nekim slučajevima, 5-supstituisani 3-amino pirazoli (III) su komercijalno dostupni, a u ovu reakciju se koriste direktno. Redukcija sa ciljem da se formira racemski 5,7-cis tetrahidropirazolopirimidin (VIII) je provedena uz pomoć izvora hidrida ili primenom katalitičkog hidrogenovanja. Rezolucija uz pomoć hiralne tečne hromatografije visoke performanse ili primena diastereomernog kristalizovanje obezbeđuje željene finalne produkte, IX i X. U mnogim primerima, racemska smeša jedinjenja VIII je procenjena biološki bez dodatnog prečišćavanja pomoću hiralne rezolucije.

[0069] Shema 2 prikazuje alternativnu rutu prema raznim jedinjenjima iz ovoga opisa započinjući sa komercijalno dostupnim 3-hidroksi-5-aminopirazolom koji je kondenzovan sa diketonom VI sa ciljem da se obezbedi 2-hidroksipirazolopirimidin X kao ključni intermedijar. Tretman X sa prikladnim trifluorometilsulfonilationskim reagensom obezbeđuje triflatni intermedijar XI. Redukcija triflata XI, praćena Suzuki-jevim unakrsnim kuplovanjem sa raznim boronatima, gde R<1>je aromatski, heteroaromatski, alilni, heteroalilni ili alifatski daje finalni racemski produkt VIII. Alternativno, triflat XI je najpre podvrgnut Suzuki-jevom unakrsnom kuplovanju, a intermedijarno jedinjenje XIV je tada reducirano u racemski finalni produkt VIII. Kao u Shemi 1, racemsko jedinjenje VIII je razrešeno u njegove konstituentne enantiomere uz pomoć hiralne hromatografije ili uz pomoć diastereomernog kristalizovanja.

Shema 3

[0070] Ruta koja je korišćena u Shemi 3 je modifikacija Sheme 2 u kojoj bromid menja triflat, tj. triflatna grupa u jedinjenju XI je zamenjena sa bromidom kao šta je prikazano kod XVI. 3-bromo-5-aminopirazol je sintetizovan u skladu sa postupcima iz literature (Moy, et al. J. Med. Chem. 2010, 53, 1238). Uslovi za Suzuki-jevo unakrsno kuplovanje su esencijalno isti kao i oni u Shemi 2.

[0071] Ruta u Shemi 4 vraća nazad početne materijale unakrsnog-kuplovanja po Suzuki-ju uz pomoć generisanja boronat estera na ključnom pirazolopirimidinu nakon kondenzacije prikladnog elektrofila (XIX, X = OTf, Cl, Br, I) koje daje VIII nakon redukcije.

[0072] Shema 5 prikazuje finalne korake u sintezi nekoliko primera sa opštom strukturom XV koji su ovde opisani. U skladu sa tim, zajednički intermedijar koji se koristi je benzonitril XX, tipično supstituisan na poziciji 3- ili 4- u odnosu na pirazolopirimidinski ostatak, koji je konvertovan u benzojevu kiselinu XXI uz pomoć kisele ili bazne hidrolize. Kuplovanje XXI sa prikladnim aminom (R<4>R<5>NH) obezbeđuje racemski amid XXI, koji je razrešen u svoj čisti enantiomer XV. Alternativno, hiralna rezolucija može da se provede u fazi benzonitrila (XX → XXIII) ili u fazi benzojeve kiseline (XXI → XXIV), a enantio-čisti materijali mogu da se transformišu na sličan način u finalni produkt XV.

Primeri sinteze - Deo A

Primer 1 (Sinteza ER-892887)

[0073]

Jedinjenje 2:

[0074]

[0075] U bocu od 5 L u kojoj se nalazi tereftalonitril (300.0 g, 2.34 mol) je dodan toluen (1.80 L), a nakon toga i acetonitril (245 ml) na sobnoj temperaturi. Dodano je 24.2 wt% kalijum-t-amilata (1.672 L, 1.338 kg, 2.58 mol) uz održavanje temperature do <30° C tokom perioda od 1 h.

[0076] Smeša (žuta gusta pasta) je ostavljena da se ohladi do 20° C pa je mešana tokom 16 h, nakon čega je dodana voda (0.9 L) u smešu koja je snažno mešana do tačke kada su žute čvrste materije postale svetlo-tamne. Smeša je filtrirana kroz stakleni filter, a nastala čvrsta materija je isprana sa vodom (1.8 L), a tada i sa IPA (1.8 L), skupljena i osušena u vakuumu na 40° C tokom 46 h. Dobiveno je 374.1 g Jedinjenja A-2 (2.21 mol, prinos: 94%) u formi svetlo-tamnog praha.

[0077]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 4.26 (s, 1 H) 7.72 - 7.77 (m, 2 H) 7.77 -7.82 (m, 2 H).

[0078] MS (M+H<+>) 170.1.

Jedinjenje 6

[0079]

[0080] U bocu od 5 L koja je sadržavala 1-(3,4-dimetoksifenil)etanon (487 g, 2.70 mol) je dodan THF (487 mL), a nakon toga i MTBE (1.46 L). Dodan je etil trifluoroacetat (516 mL, 4.33 mol), a tada i 25 wt% rastvor natrijum metoksida (701 g, 3.24 mol) u metanolu na sobnoj temperaturi. Nastala smeša je ugrejana do 40° C pa je mešana na 40-43° C tokom 16 h nakon čega je reakciona smeša ohlađena do 10° C pa je izlivena u prethodno ohlađenu (10° C) smešu MTBE (2.44 L) i 20 wt% limunske kiseline (1.217 g, 1.279 mol) uz održavanje interne temperature <20° C. Nakon 30 min snažnog mešanja, organski sloj je odvojen i postupno ispran (dva puta) sa 20 wt% natrijum hloridom (1.46 L) pa je koncentrovan do volumena od približno 1/3.

[0081] Nastao talog je razređen sa MTBE (3.90 L), ispran sa vodom (1.95 L) i koncentrovan do približno 1/3 volumena nakon čega je značajna količina produkta (čvrsta materija) precipitirana iz rastvora. Nastala smeša je azeotropovana dva puta do suvoće sa n-heptanom (1.95 L). Dodani su n-heptan (877 mL) i MTBE (97 mL), a nastala smeša je grejana do 50° C, ostavljena da se ohladi do 15° C tokom perioda od 2 h, a precipitat je filtriran. Nastala tamna čvrsta materija je osušena u vakuum-pećnici (40° C tokom 16 h, a tada na 20° C tokom 48 h) koje obezbeđuje 714.3 g Jedinjenja A-6 (2.59 mol, prinos: 96%).

[0082]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 3.97 (s, 3 H) 3.98 (s, 3 H) 6.53 (s, 1 H) 6.94 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 7.48 (d, J=2.10 Hz, 1 H) 7.60 (dd, J=8.51, 2.10 Hz, 1 H).

[0083] MS (M+H<+>) 277.2.

Jedinjenje A-3 & A-7

[0084]

[0085] Jedinjenje A-2 (250 g, 1.478 mol) je suspendovano u sirćetnoj kiselini (1.0 L) uz mešanje na sobnoj temperaturi nakon čega je dodan hidrazin (72.5 mL, 1.478 mol) u vodi (75 mL) uz interno povećanje temperature do 42° C. Nastala suspenzija je grejana do 70° C i održavana na istoj temperaturi tokom 5 min kada suspenzija postaje prozirna smeša, a nakon toga ponovo postaje mutna koje daje jedinjenje A-3 in situ.

[0086] Toluen (1.50 L) je naglo dodan u gornju smešu (temperatura je pala do 48° C), a tada je dodano i jedinjenje A-6 (408 g, 1.478 mol). Nastala smeša je grejana do 80° C nakon čega se akumulisala značajna količina žute čvrste materije proizvodeći veoma gustu pastu. Nakon održavanja temperature na 80° C tokom 30 min, smeša je ohlađena do 50° C pa je dodana ledena voda (1.50 L) uz snažno mešanje. Žuti precipitat je skupljen uz pomoć filtracije pa je ispran sa vodom (3.75 L), opet sa vodom (2.5 L), pa sa IPA (2.50 L). Nastala žuta čvrsta materija je osušena u vakuumu (40° C) tokom 3 dana koje obezbeđuje 464 g Jedinjenja A-7 (1.09 mol, prinos: 74%).

[0087]<1>R NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 3.90 (s, 4 H) 3.95 (s, 4 H) 7.10 (d, J=8.54 Hz, 1 H) 7.30 (s, 1 H) 7.83 (d, J=8.01 Hz, 2 H) 7.89 (d, J=2.02 Hz, 1 H) 7.92 (s, 1 H) 8.23 (d, J=8.66 Hz, 2 H).

[0088] MS (M+H<+>) 425.4.

Jedinjenje 9

[0089]

[0090] Jedinjenje A-7 (326 g, 768.2 mmol) je suspendovano u etanolu (3.26 L) i vodi (815 ml), a tada je sve grejano do 68-70° C. Dodan je natrijum borohidrid stok-rastvor [prethodno pripremljen odvojeno uz pomoć dodavanja natrijum borohidrida (96 g, 2.54 mol) u vodeni rastvor 0.1 M natrijum hidroksida (815 ml, 81.50 mmol) na sobnoj temperaturi uz mešanje tokom 30 min] na sobnoj temperaturi tokom 1.5 h nakon čega je reakciona temperatura porasla do 68-71° C. Nakon završetka dodavanja, smeša je grejana na 68-71° C tokom 4 h, a tada je smeša ohlađena do 40° C pa je dodan aceton (564 mL) tokom 30 min (interna temperatura je bila 40-42° C) dok je mešanje produženo za dodatnih 30 min na 40-42° C koje obezbeđuje jedinjenje A-8 in situ.

[0091]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 2.33 - 2.44 (m, 1 H) 2.51 (d, J=6.09 Hz, 1 H) 3.91 (s, 3 H) 3.93 (s, 3 H) 4.33 (s, 1 H) 4.45 (dd, J=11.80, 2.08 Hz, 1 H) 4.87 - 4.97 (m, 1 H) 5.81 (s, 1 H) 6.87 - 6.91 (m, 1 H) 6.96 - 7.01 (m, 2 H) 7.64 - 7.68 (m, 2 H) 7.85 -7.90 (m, 2 H).

[0092] MS (M+H<+>) 428.9.

[0093] Natrijum hidroksid (461 g, 11.52 mol) je dodan u gornju smešu nakon čega je egzotermna reakcija grejana do 70-73° C pa je mešana tokom 16 h. Nakon hlađenja do sobne temperature je dodana ledena voda (3.260 L) sa ciljem da se smeša ohladi do 10° C, a nakon toga je dodana 10% vodena HCl (4.75 L) uz održavanje temperature do <25° C uz snažno mešanje. Snažno mešanje je nastavljeno tokom 30 min. Finalna reakciona smeša je dekantirana kroz stakleni filter sa ciljem da se obnovi smeđi sirovi produkt iz rastvarača.

[0094] Čvrsta materija koja je preostala u reakcionoj posudi je suspendovana u vodi (3.26 L) pa je snažno mešana tokom 30 min nakon čega je dekantirana kao šta je opisano iznad. Ovaj proces je ponovljen još jednom. Finalno obnovljena čvrsta materija je isprana sa vodom (3.26 L) pa sa IPA (2.61 L), a tada je osušena na vazduhu i u vakuum tokom 1 h, a tada u vakuumu na 45° C tokom 20 h koje daje 226.7 g Jedinjenja A-9 (0.507 mol, prinos: 66%) u formi svetlo tamne čvrste materije.

[0095]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 3.76 (s, 3 H) 3.79 (s, 3 H) 5.86 (s, 1 H) 6.84 (s, 1 H) 6.92 - 7.04 (m, 2 H) 7.08 (d, J=1.50 Hz, 1 H) 7.84 (m, J=8.33 Hz, 2 H) 7.95 (m, J=8.23 Hz, 2 H).

[0096] MS (M+H<+>) 448.4.

Jedinjenje 12

[0097]

[0098] Jedinjenje A-9 (333.8 g, 746.1 mmol) je rastvoreno u DMF (1.335 L), a tada je razređeno sa DCM (1.00 L) uz mešanje na sobnoj temperaturi. Dodan je tert-butil piperazin-1-karboksilat (139 g, 746.1 mmol), a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dodatnih 20 min. Dodan je EDC (143 g, 746.1 mmol), a nastala smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Dodan je n-heptan (4.01 L) u snažno mešanu smeša, a tada i voda (5.34 L) uz održavanje temperature ispod 25° C. Nastala bifazna smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom dodatnih 30 min nakon čega je čvrsta materija filtrirana, isprana sa vodom (4.0 L) pa sa n-heptanom (2.0 L). Čvrsta materija je osušena u vakuumu na 50° C tokom 18 h koje obezbeđuje 478.5 g sirovog jedinjenja A-12.

[0099] 473 g sirovog Jedinjenja A-12 je suspendovano u smeši rastvarača, n-heptana (1.0 L) i IPA (1.0 L), a tada je sve grejano do 50° C pa je mešano na 50° C tokom dodatnih 10 min. Suspenzija je ohlađena do 20° C tokom perioda od 30 min nakon čega je usledilo mešanje tokom dodatnih 30 min. Čvrsta materija je filtrirana, isprana sa smešom rastvarača, IPA (500 mL) i n-heptana (500 mL), pa je osušena u vakuumu na 50° C tokom 5 h. Ova suspenzija i proces filtracije su ponovljeni još jednom. Dobiveno je 403 g Jedinjenja A-12 (0.655 mol, prinos: 88%) u formi tamnog praha.

[0100]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 0.94 - 1.14 (m, 1 H) 1.45 - 1.51 (m, 9 H) 1.57 - 1.75 (m, 1 H) 2.17 - 2.29 (m, 1 H) 2.49 - 2.58 (m, 1 H) 3.84 (s, 3 H) 3.87 (s, 3 H) 4.45 (d, J=11.44 Hz, 1 H) 5.03 - 5.15 (m, 1 H) 6.96 - 7.01 (m, 1 H) 7.03 - 7.08 (m, 1 H) 7.11 (d, J=1.79 Hz, 1 H) 7.40 - 7.52 (m, 1 H) 7.85 (d, J=8.09 Hz, 2 H) 7.99 - 8.08 (m, 1 H).

[0101] MS (M+H<+>) 616.3

Jedinjenje ER-890044

[0102]

[0103] Jedinjenje A-12 (340 g, 0.552 mol) je suspendovano u DCM (510 ml, 7.926 mol), a TFA (510 ml, 6.619 mol) je dodavana u suspenziju tokom 10 min. Smeša je mešana na 23-27° C tokom 3 h, nakon čega je ohlađena do 15° C pa je razređena sa vodom (1700 ml, 9.436 mol) uz održavanje interne temperature ispod 20° C. Smeša je razređena sa n-heptanom (3.4 L, 23.209 mol) pa je ohlađena do 15° C. Dodavan je natrijum hidroksid (2.872 kg, 7.179 mol) tokom 30 min uz održavanje interne temperature <25° C. Nastala smeša je mešana na 20-25° C tokom 20 min, a tada je filtrirana sa ciljem sakupljanja svetlo-tamnog precipitata. Precipitat je najpre ispran sa vodom (3.4 L), a tada sa smešom n-heptana (1.36 L) i DCM (204 ml). Kolač je prenesen u plitki sud pa je osušen u vakuum-pećnici na 50° C (preko noći) koje daje 248.8 g (0.483 mol, prinos: 87%) ER-890044 u formi svetlo-tamne čvrste materije.

[0104] ER-890044 (30.3 g, 58.8 mmol) je rastvoren u smeši dihlorometan/metanol (1:1, 120 mL), a mutan rastvor je filtriran kroz porozni medijum Buchner-levka. Proziran filtrat je korišćen direktno za hiralno HPLC-prečišćavanje. 4 mL ovog rastvora je nabijeno u kolonu Chiralpak IA (5 cm × 50 cm), a smeša je eluirana uz pomoć mobilne faze koja je sadržavala heptan, metanol i etanol (omer: 4:3:3; modifikovan sa 0.06% dietilaminom) kod stope protoka od 75 mL/min. ER-892887 je skupljen između 18.5 min i 23.2 min, dok ER-892924 između 24.2 min i 32 min. Provedeno je 30 takvih injekcija, a spojene frakcije su koncentrovane pod smanjenim pritiskom koje obezbeđuje čiste enantiomerine produkte, ER-892887 (10.5 g, 20.3 mmol, >95% ee) i ER-892924 (9.8 g, 19.0 mmol, >95% ee).

[0105] U rastvor ER-892887 (8.50 g, 16.5 mmol) u suvom etil acetatu (500 mL) je dodana 4 M HCl u dioksanu (4.53 mL, 18.1 mmol), kap po kap tokom 10 min. Nastao je beli precipitat. Nastala suspenzija je mešana na ambijentalnoj temperaturi tokom 15 min, a tada je filtrirana pod smanjenim pritiskom. Skupljena čvrsta materija je isprana sa etil acetatom (2×100 mL) i etrom (2×100 mL) pa je osušena u vakuumu koje daje 8.29 g hidrohloridne soli ER-892887 (15.0 mmol, prinos: 91%) u formi bele čvrste materije.

ER-892930

[0106] U reakcionu tubu od 5 mL sa navojnim čepom su dodani jedinjenje A-9, 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (21.7 mg, 0.049 mmol), 3-amino-1,2-propandiol (13.2 mg, 0.145 mmol), HATU (1.10 ekv., 24.8 mg, 0.065 mmol), NMP (0.500 ml), i Hünig-ova baza (6.00 ul, 0.044 mmol). Reakciona smeša je mešana na 30° C, preko noći. Materijal je prečišćen primenom LC/MS (HPLC uslovi III). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i koncentrovane in vacuo koje daje jedinjenje ER-892930 u formi prljavo-bele čvrste materije (13.3 mg, prinos: 53%).

ER-894463

[0107] U reakcionu tubu od 5 mL sa navojnim čepom su dodani jedinjenje A-9, 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (30.0 mg, 0.067 mmol), tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilat (74.9 mg, 0.402 mmol), HATU (50.9 mg, 0.134 mmol), NMP (0.500 ml), i Hünig-ova baza (6.00 ul, 0.044 mmol). Reakciona smeša je mešana na 30° C, preko noći. Materijal je prečišćen primenom LC/MS (HPLC uslovi III). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i koncentrovane in vacuo. Nastao materijal je tada rastvoren u etanolu (1.0 ml) i 4.0 M HCl u dioksanu (1.0 ml, 4.00 mmol), a smeša je mešana na ST tokom 1 h. Smeša je tada koncentrovana in vacuo koje daje jedinjenje ER-894463 u formi žute čvrste materije (22.1 mg, prinos: 60%).

ER-895080

[0108] U reakcionu tubu od 5 mL sa navojnim čepom su dodani jedinjenje A-9, 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (20.0 mg, 0.045 mmol), tert-butil 2,6-diazaspiro[3.4]oktan-6-karboksilat (18.98 mg, 0.089 mmol), HATU (18.7 mg, 0.049 mmol), NMP (0.500 ml), i Hünig-ova baza (6.00 ul, 0.044 mmol). Reakciona smeša je mešana na 30° C, preko noći. Materijal je prečišćen primenom LC/MS (HPLC uslovi III). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i koncentrovane in vacuo. Nastao materijal je tada rastvoren u etanolu (1.0 ml) i 50% trifluorosirćetnoj kiselini u DCM (1.0 ml, 4.00 mmol) a smeša je mešana na ST tokom 1 h. Smeša je tada koncentrovana in vacuo koje daje jedinjenje ER-895080 u formi žute čvrste materije (2.40 mg, prinos: 8%).

[0109] Primer ER-894462-00 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) i komercijalno dostupnog azetidin-3-ol (29.4 mg, 0.402 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-895080. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (8.1 mg, 24%).

[0110] Primer ER-894465-00 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) i komercijalno dostupnog pirolidin-3-ol (35.0 mg, 0.402 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-895080. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (18.5 mg, 53%).

[0111] Primer ER-894464-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil pirolidin-3-ilkarbamata (74.9 mg, 0.402 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (32.6 mg, 88%).

[0112] Primer ER-895077-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 3-aminoazetidin-1-karboksilata (69.3 mg, 0.402 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463, Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (8.6 mg, 24%).

[0113] Primer ER-895078-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (30.0 mg, 0.067 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil azetidin-3-ilkarbamata (69.3 mg, 0.402 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (29.7 mg, 82%).

[0114] Primer ER-895746-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (7.8 mg, 0.062 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilata (37.0 mg, 0.174 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (27.5 mg, 77%).

[0115] Primer ER-895748-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (35.5 mg, 0.177 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (31.3 mg, 99%).

[0116] Primer ER-895749-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (36.6 mg, 0.183 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (29.5 mg, 93%).

[0117] Primer ER-895750-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (31.7 mg, 0.158 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (30.6 mg, 97%).

[0118] Primer ER-895751-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (43.5 mg, 0.217 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (31.2 mg, 98%).

[0119] Primer ER-895752-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (2S,5R)-tert-butil 2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (30.3 mg, 0.141 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (30.6 mg, 94%).

[0120] Primer ER-895753-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (2R,5R)-tert-butil 2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (37.6 mg, 0.175 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (19.5 mg, 60%).

[0121] Primer ER-895754-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (1S,4S)-tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (33.5 mg, 0.169 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-894463. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (26.7 mg, 85%).

[0122] Primer ER-895083-15 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (24.5 mg, 0.055 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil (azetidin-3-ilmetil)(metil)karbamata (22.4 mg, 0.112 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-895080. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (0.6 mg, 2%).

[0123] Primer ER-895081-15 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (20.6 mg, 0.046 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil (6-aminospiro[3.3]heptan-2-il)karbamata (23.4 mg, 0.103 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-895080. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (13.3 mg, 43%).

[0124] Primer ER-895082-15 je pripremljen iz jedinjenja ER-886619 (23.5 mg, 0.053 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-karboksilata (25.1 mg, 0.111 mmol) na sličan način kao šta je opisano u primeru ER-895080. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC stanje III) daje željeni produkt (5.3 mg, 15%).

[0125] Primer ER-898416 je pripremljen.3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina je pripremljena iz (3-cijanofenil)boronske kiseline (93 mg, 0.631 mmol) i 5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il trifluorometansulfonata (100.0 mg, 0.21 mmol) na način koji je sličan pripremi 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (deo G, priprema ER893393) koje daje 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzonitril (46 mg, prinos: 51%). Hidroliza materijala (75 mg, 0.175 mmol) koji je pripremljen na način koji je sličan pripremi jedinjenja A-9 daje željeno jedinjenje (42 mg, prinos: 54%).

[0126] Primer ER-895811 je pripremljen u dva koraka iz 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeve kiseline (24 mg, 0.054 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (40 mg, 0.215 mmol) na način koji je sličan pripremi iz primera D-6 koje daje intermedijar (3S)-tertbutil 3-(3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamido)pirolidin-1-karboksilat (7 mg, 0.011 mmol, prinos: 21%). Tada je ovaj intermedijar (6 mg, 0.0097 mmol) tretiran sa HCl na način koji je sličan onom iz primera ER-897560 koje daje željeni produkt, ER-895811 (4.4 mg, prinos: 82%).

[0127] Primer ER-896386 je pripremljen u dva koraka iz 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeve kiseline (119 mg, 0.266 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilata (226 mg, 1.06 mmol) na način koji je sličan onom iz primera D-6 koje daje intermedijar, tert-butil 5-(3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilat (94 mg, 0.146 mmol, prinos: 55%). Tada je ovaj intermedijar razrešen u svoje konstituentne enantiomere na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje tertbutil 5-(3-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilat (33 mg, 0.051 mmol) i tert-butil 5-(3-((5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilat (33 mg, 0.051 mmol). Tada je ovaj intermedijar, tert-butil 5-(3-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilat (22 mg, 0.034 mmol), tretiran sa HCl na način koji je sličan onom kod pripreme ER-897560 koje daje željeni produkt, ER-896386 (19 mg, prinos: 96%).

[0128] Primer ER-896387 je pripremljen iz intermedijara, tert-butil 5-(3-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilat, koji je dobiven kod pripreme ER896386. Tada je ovaj intermedijar (16 mg, 0.025 mmol) tretiran sa HCl na način koji je sličan onom kod pripreme ER-897560 koje daje željeni produkt, ER-896387 (14 mg, prinos: 99%).

[0129] Primer ER-896388 je pripremljen u dva koraka iz 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeve kiseline (25 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil piperazin-1-karboksilata (42 mg, 0.224 mmol) na način koji je sličan onom iz primera D-6 koje daje intermedijar, tert-butil 4-(3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)piperazin-1-karboksilat (18 mg, 0.029 mmol, prinos: 52%). Tada je ovaj intermedijar (16 mg, 0.026 mmol) tretiran sa HCl na način koji je sličan onom kod pripreme ER-897560 koje daje željeni produkt, ER-896388 (14 mg, prinos: 98%).

[0130] Primer ER-896389 je pripremljen u dva koraka iz jedinjenja 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil ((3R,5S)-5-metilpiperidin-3-il)karbamata (48 mg, 0.224 mmol) na način koji je sličan onom iz primera D-6 koje daje intermedijar, tert-butil ((3R,5S)-1-(3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)-5-metilpiperidin-3-il)karbamat (22 mg, 0.034 mmol, prinos: 61%). Tada je ovaj intermedijar (20 mg, 0.031 mmol) tretiran sa HCl na način koji je sličan onom kod pripreme ER-897560 koje daje željeni produkt, ER-896389 (17.5 mg, prinos: 97%).

Primeri sinteze - Deo B

Primer 2 (Priprema ER-885681)

[0131]

[0132] Jedinjenje B-1 je pripremljeno iz komercijalno dostupnog tert-butil 4-cijanopiperidin-1-karboksilata na način koji je sličan onom kod pripreme jedinjenja A-8 (56 g, prinos u finalnom koraku: 70%).

[0133]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 1.44 - 1.49 (m, 10 H) 1.50 - 1.62 (m, 6 H) 1.89 (d, J=12.05 Hz, 2 H) 2.31 (dt, J=13.69, 11.51 Hz, 1 H) 2.41 - 2.49 (m, 1 H) 2.69 -2.88 (m, 3 H) 3.89 (s, 3 H) 3.91 (s, 3 H) 4.06 - 4.21 (m, 3 H) 4.38 (dd, J=11.71, 1.95 Hz, 1 H) 4.81 (dt, J=11.29, 5.80 Hz, 1 H) 5.28 (s, 1 H) 6.84 - 6.89 (m, 1 H) 6.93 - 6.98 (m, 2 H).

[0134] MS (M+H<+>) 511.0.

[0135] Trifluorosirćetna kiselina (15 mL) je dodana u rastvor jedinjenja B-1 (7.86 g, 15.4 mmol) u metilen hloridu (15 mL), a smeša je mešana na st. Nakon 15 min, reakciona smeša je koncentrovana pod smanjenim pritiskom, a talog je podeljen između MTBE i zas. NaHCO3. Slojevi su odvojeni, a vod. rastvor je dodatno ekstrahovan sa dihlorometanom (2x). Spojeni ekstrakti su isprani sa slanicom, osušeni (Na2SO4) i koncentrovani pod smanjenim pritiskom koje daje ER-887084 u formi bele čvrste materije (4.28 g.68%).

[0136]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 1.52 - 1.64 (m, 3 H) 1.84 (br. s., 1 H) 2.06 - 2.17 (m, 1 H) 2.40 - 2.47 (m, 1 H) 2.59 - 2.70 (m, 5 H) 3.01 - 3.09 (m, 3 H) 3.79 (s, 3 H) 3.82 (s, 3 H) 4.33 (dd, J=11.59, 2.25 Hz, 1 H) 4.87 - 4.95 (m, 1 H) 5.30 (s, 1 H) 6.93 (d, J=8.31 Hz, 1 H) 6.96 - 7.00 (m, 1 H) 7.04 (d, J=1.90 Hz, 1 H).

[0137] MS (M+H<+>) 411.5.

Jedinjenja ER-885681 i ER-885682

[0138] Jedinjenje ER-887084 (1.19 g, 2.91 mmol) je rastvoreno u metanolu (11 mL), a rastvor je dodatno razređen sa 19 mL smeše etanol/heptan (1:1) modifikovanom sa 0.05% dietilaminom. 1 mL ovog rastvora je nabijen u kolonu Chiralcel OD (2 cm × 25 cm) pa je eluiran uz pomoć mobilne faze koja je sadržavala smešu heptan/etanol (1:1; koja je sadržavala 0.05% dietilamin) kod stope protoka od 15 mL/min. Jedinjenje ER-885681 je skupljeno između 7.3 min i 9.6 min, dok jedinjenje ER-885682 između 9.8 min i 14.5 min. Provedene su 33 takve injekcije, a spojene frakcije su koncentrovane pod smanjenim pritiskom koje obezbeđuje čiste enantiomerne produkte, jedinjenje ER-885681 (571 mg, prinos: 96%, >95% ee) i jedinjenje ER-885682 (ER-887275) (574 mg, prinos: 96%, >95% ee).

Primeri ER-885454 i ER-885455

[0139] Jedinjenje ER-880894 je pripremljeno iz komercijalno dostupnog 4-cijanopiridina (450 g, 4.32 mol) primenom opšte sekvence prikazane u Shemi I koja je korišćena kod pripreme jedinjenja A-8 (ER-890044) koje daje: ER-880894 (205 g, mmol, ukupan prinos: 12%).

[0140]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 2.29 - 2.46 (m, 2 H) 2.47 - 2.60 (m, 2 H) 3.91 (s, 3 H) 3.93 (s, 3 H) 4.36 (s, 1 H) 4.45 (d, J=9.96 Hz, 1 H) 4.93 (dt, J=11.28, 5.79 Hz, 2 H) 5.85 (s, 1 H) 6.85 - 6.93 (m, 1 H) 6.93 - 7.04 (m, 2 H) 7.59 - 7.70 (m, 2 H) 8.56 -8.66 (m, 2 H).

[0141] MS (M+H<+>) 405.2.

[0142] Rezolucija ER-880894 (200 mg, 0.495 mmol) uz pomoć hiralne HPLC na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890044 (osim šta je kao mobilna faza korišćena smeša etanol/heptan u omeru 1:1) koje daje ER-885454 (96 mg, prinos: 48%) i ER-885455 (91.2 mg, prinos: 46%).

Primeri ER-886622 i ER-886623

[0143] Primer ER-886434 je pripremljen iz komercijalno dostupnog 4-cijano-2-metoksipiridina (mg, mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme jedinjenja ER-880894 koje daje ER-886434 (127 mg, prinos: 62%) .

[0144] MS (M+H+) 435.6.

[0145] Rezolucija primenom hiralne HPLC na način koji je sličan onom kod pripreme ER-880894 daje ER-886622 (21.5 mg, prinos: 44%, >95% ee) i ER-886623 (20.2 mg, prinos: 41%, >95% ee).

Primeri sinteze - Deo C

Priprema ER-890035

[0146]

Jedinjenje C-3

[0147] Rastvor jedinjenja C-1 (9.91 g, 100 mmol) i jedinjenja C-2 (27.6 g, 100 mmol) u sirćetnoj kiselini (60 mL) je grejan na 80° C. Prozirna tamno-narandžasta reakciona smeša postepeno je postala svetla kada se počeo formirati žuti precipitat. Tokom 30 min, reakciona smeša se pretvorila u gusta žutu smešu. Smeša je održavana na 80° C tokom dodatnih 15 min. Smeša je ohlađena do st, pa je dodan IPA. Suspenzija je grejana do približno 75° C, a tada je ohlađena do sobne temperature. Žuti precipitat je filtriran, a čvrsta materija je isprana sa dodatnom količinom IPA, pa je osušena pod smanjenim pritiskom. Jedinjenje C-3 je dobiveno u formi svetlo-žute čvrste materije (30.9 g, prinos: 91%).

[0148]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) d ppm 3.92 - 3.92 (m, 3 H) 3.96 (s, 3 H) 7.10 (d, J=8.51 Hz, 1 H) 7.67 (s, 1 H) 7.75 (dd, J=8.47, 2.21 Hz, 1 H) 7.83 - 7.86 (m, 1 H) (glavni tautomer).

[0149] MS (M+H<+>) 340.5.

Jedinjenje C-4

[0150] Jedinjenje C-3 (9.9 g, 29.2 mmol) je rastvoreno u N,N-diizopropiletilaminu (25.4 mL) i 1,2-dihloroetanu (100 mL), a smeša je mešana na st. U ovaj rastvor je dodan N-fenilbi(trifluorometansulfonimid) (20.8 g, 58.2 mmol), a smeša je grejana na temperaturi refluksa. Nakon 45 min, reakciona smeša je ohlađena do st pa je koncentrovana pod smanjenim pritiskom koje daje narandžasto-smeđi talog. Talog je prečišćen primenom hromatografije na silika-gelu uz korišćenje elucionog gradijenta (10 do 40% EtOAc u heptanu) koje daje jedinjenje C-4 u formi žute čvrste materije (7.10 g, prinos: 52%). U reakciji se pojavila mala količina N-sulfonilovanog regioizomera koji nije izolovan.

[0151]<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 3.87 (s, 3 H) 3.90 (s, 3 H) 7.15 (d, J=8.65 Hz, 1 H) 7.20 (s, 1 H) 7.85 (d, J=2.14 Hz, 1 H) 8.00 (dd, J=8.55, 2.14 Hz, 1 H) 8.35 (s, 1 H).

[0152] MS (M+H<+>) 472.3.

Jedinjenje C-5

[0153] U rastvor jedinjenja C-4 (2.24 g, 0.00475 mol) u etanolu (29.9 mL) je dodan natrijum borohidrid (360 mg, 9.50 mol), a smeša je mešana na st. Nakon 30 min, reakciona smeša je pažljivo izlivena u smešu zasićenog rastvora NH4Cl i vode (1:1). Vodeni rastvor je ekstrahovan sa dihlorometanom (3x); spojeni ekstrakti su isprani sa slanicom, osušeni i koncentrovani pod smanjenim pritiskom. Sirovi produkt je prečišćen primenom hromatografije na silika-gelu u elucionom gradijentu (0 do 50% EtOAc u heptanu) koje daje jedinjenje C-5 u formi bele čvrste materije (1.94 g, prinos: 86%).

[0154]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 2.18 (dt, J=13.35, 11.43 Hz, 1 H) 2.47 (ddd, J=13.43, 5.95, 2.59 Hz, 1 H) 3.80 (s, 3 H) 3.82 (s, 3 H) 4.44 (dd, J=11.63, 2.44 Hz, 1 H) 4.92 - 5.03 (m, 1 H) 5.32 (s, 1 H) 6.94 (d, J=8.28 Hz, 1 H) 6.99 (dd, J=8.41, 1.89 Hz, 1 H) 7.04 (d, J=1.95 Hz, 1 H).MS (M+H<+>) 472.3.

Jedinjenja C-6 i C-7

[0155] Jedinjenje C-5 (900 mg, 1.91 mmol) je rastvoreno u metanolu (10 mL), a rastvor je dodatno razređen sa etanolom (5 mL) i heptanom (5 mL). 1 mL ovog rastvora je nabijen u kolonu Chiralcel<®>OD (2 cm × 25 cm) pa je eluiran uz pomoć mobilne faze koja je sadržavala smešu heptan/etanol (1:1) kod stope protoka od 15 mL/min. Jedinjenje C-6 (ER-887274) je skupljeno između 6.0 min i 7.7 min, dok jedinjenje C-7 (ER-887275) između 8.75 min i 11.5 min. Provedeno je 17 takvih injekcija, a spojene frakcije su koncentrovane pod smanjenim pritiskom koje obezbeđuje čiste enantiomerne produkte, jedinjenje C-6 (ER-887274) (683 mg, 1.44 mmol, >95% ee) i jedinjenje C-7 (ER-887275) (671 mg, 1.41 mmol, >95% ee).

[0156] Primer ER-890035. U tubu sa navojnim čepom (15 mm × 75 mm) su dodani (3-(5-metil-l,2,4-oksadiazol-3-il)fenil)boronska kiselina (36.1 mg, 0.177 mmol), 0.0750 M tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) u 1,4-dioksanu (80.0 μL, 0.006 mmol), 0.150 M 5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il trifluorometansulfonat (C-5) u 1,4-dioksanu (420.0 μL, 0.0631 mmol), i 2.00 M natrijum karbonat u vodi (60.0 μL, 120 mmol). Reakciona posuda je očišćena sa azotom pa je zapečaćena. Bočica je potresena i grejana u aluminijumskom bloku na 85° C, preko noći. U smešu je dodan 1.0 mL zasićenog vodenog natrijum bikarbonata, a smeša je tada ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 2.0 mL). Spojeni organski slojevi su koncentrovani in vacuo. Preostao talog je rastvoren u 500 µL DMSO. Materijal je prečišćen primenom LC/MS na koloni XTerra C8 (19 x 100 mm) u gradijentu acetonitril:voda (mravlja kiselina). Frakcije koje sadrže produkt su spojene i koncentrovane in vacuo koje daje jedinjenje ER-890035 u formi žute čvrste materije (2.9 mg, prinos: 9.5%).

[0157] Primer ER-893972 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (250 mg, 0.526 mmol) i komercijalno dostupne (1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)boronske kiseline (200 mg, 1.05 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (159 mg, prinos: 64%).

[0158] Primer ER-892893 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (250 mg, 0.526 mmol) i komercijalno dostupne (4-((3-hidroksipropil)karbamoil)fenil)boronske kiseline (235 mg, 1.05 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (166 mg, prinos: 63%).

[0159] Primer ER-892892 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (250 mg, 0.526 mmol) i komercijalno dostupne (4-karbamoil-2-fluorofenil)boronske kiseline (192 mg, 1.05 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (179 mg, prinos: 73%).

[0160] Primer ER-892892 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (250 mg, 0.526 mmol) i komercijalno dostupne (4-karbamoil-2-fluorofenil)boronske kiseline (192 mg, 1.05 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (179 mg, prinos: 73%). Primer ER-894680 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (250 mg, 0.526 mmol) i komercijalno dostupne (4-metil-1H-indazol-5-il)boronske kiseline (185 mg, 1.05 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (90 mg, prinos: 37%).

[0161] Primer ER-887734 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (20 mg, 0.042 mmol) i komercijalno dostupne (3-acetamidofenil)boronske kiseline (22.6 mg, 0.126 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (vreme zadržavanja: 7.45 min, uslovi II) daje željeni produkt (9.7 mg, prinos: 50%).

[0162] Primer ER-887738 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (20 mg, 0.042 mmol) i komercijalno dostupne (3-acetamidofenil)boronske kiseline (20.3 mg, 0.126 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (vreme zadržavanja: 8.58 min, uslovi II) daje željeni produkt (6.5 mg, prinos: 35%).

[0163] Primer ER-892889 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (200 mg, 0.421 mmol) i komercijalno dostupne (3-hloro-4-(metilkarbamoil)fenil)boronske kiseline (180 mg, 0.843 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (88 mg, prinos: 42%).

[0164] Primer ER-892890 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (250 mg, 0.526 mmol) i komercijalno dostupne (4-karbamoil-3-hlorofenil)boronske kiseline (210 mg, 1.05 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (138 mg, prinos: 55%).

[0165] Primer ER-893961 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (40 mg, 0.084 mmol) i komercijalno dostupne (1,6-dimetil-1H-indazol-5-il)boronske kiseline (51 mg, 0.268 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS daje željeni produkt (8.9 mg, prinos: 22%).

[0166] Primer ER-893961 je pripremljen iz jedinjenja C-6 (40 mg, 0.084 mmol) i komercijalno dostupnog 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-benzo[d]imidazol2(3H)-on (80.55 mg, 0.309 mmol) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS daje željeni produkt (4.3 mg, prinos: 11%).

[0167] Primer ER-889871 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (50.0 mg, 0.105 mmol) i komercijalno dostupne (4-karbamoilfenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (12.8 mg, 27%).

[0168] Primer ER-889874 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (50.0 mg, 0.105 mmol) i komercijalno dostupne (4-(hidroksimetil)fenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (7.8 mg, 17 %).

[0169] Primer ER-890017 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-karbamoil-2-fluorofenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (13.4 mg, 46%).

[0170] Primer ER-890019 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-karbamoil-3-fluorofenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (11.7 mg, 40%).

[0171] Primer ER-890020 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-karbamoil-3-hlorofenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (14 mg, 46%).

[0172] Primer ER-890024 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-((3-hidroksipropil)karbamoil)fenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (11.5 mg, 36%).

[0173] Primer ER-890027 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-(benzilkarbamoil)-3-hlorofenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (12.3 mg, 34%).

[0174] Primer ER-890028 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (3-hloro-4-(izopropilkarbamoil)fenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (18.1 mg, 55%).

[0175] Primer ER-890029 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (3-hloro-4-(metilkarbamoil)fenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (15.4 mg, 49 %).

[0176] Primer ER-890035 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (3-(5-metil-1,2,4-oksadiazol-3-il)fenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (2.9 mg, 9%).

[0177] Primer ER-890043 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (2-okso-2,3-dihidro-1H-benzo[d]imidazol-5-il)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (5.6 mg, 19%).

[0178] Primer ER-890044 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-(piperazin-1-karbonil)fenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (13.7 mg, 42%).

[0179] Primer ER-890050-00 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (3-(1H-pirazol-1-il)fenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (15.4 mg, 52%).

[0180] Primer ER-891029-00 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (6-(metilkarbamoil)piridin-3-il)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (9 mg, 31%).

[0181] Primer ER-891043 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (1,7-dimetil-1H-indazol-5-il)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (18 mg, 61%).

[0182] Primer ER-891044 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (14.3 mg, 48%).

[0183] Primer ER-891047 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (1,6-dimetil-1H-indazol-5-il)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (18.1 mg, 61%).

[0184] Primer ER-891058 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-(ciklopropilkarbamoil)-3-fluorofenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (13.8 mg, 43%).

[0185] Primer ER-892908 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (30.0 mg, 0.063 mmol) i komercijalno dostupne (4-(tert-butilcarbamoy1)-3-fluorofenil)boronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (7 mg, 21%).

[0186] Primer ER-892931 je pripremljen iz jedinjenja C-5 (32.6 mg, 0.069 mmol) i komercijalno dostupne (1H-indazol-4-il)boronske kiseline (2.70 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (5.5 mg, 18%).

Deo C.1 (Jedinjenja pripremljena primenom unakrsnog-kuplovanja iz bromida)

[0187]

Jedinjenje C-9

[0188] Smeša 3-amino-5-bromopirazola C-8 (3.24 g, 20 mmol) i diketona C-2 (5.52 g, 20 mmol) u sirćetnoj kiselini (20 mL) je grejana do 80° C. Nakon 1 h, reakciona smeša je ohlađena do st, pa je razređena sa IPA. U smeši se formirao žuti precipitat, koji je skupljen uz pomoć filtracije. Nakon stajanja se formirao dodatni precipitat u matičnici (mother liquor). Prinosi su spojeni i osušeni u vakuumu koje daje 3.89 g jedinjenja C-9 u formi žute čvrste materije (9.67 mmol, prinos: 48%).

[0189]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 3.99 (s, 3 H) 4.05 (s, 3 H) 6.85 (s, 1 H) 7.00 (d, J=8.47 Hz, 1 H) 7.57 (s, 1 H) 7.62 (dd, J=8.45, 2.16 Hz, 1 H) 7.80 (d, J=2.14 Hz, 1 H)

[0190] MS (M+H<+>) 402.2

Jedinjenje C-10

[0191] Jedinjenje C-9 (1.1 g, 2.74 mmol) je suspendovano u etanolu (5 mL) pa je dodan natrijum borohidrid (155 mg, 4.1 mmol). Smeša je mešana na st tokom 1.5 h. Tada je dodano još natrijum borohidrida (155 mg), a smeša je mešana na st tokom dodatna 2 h. Sirćetna kiselina (1.56 mL) je dodana sa ciljem gašenja reakcije, a nastao vod. rastvor je izliven u zas. rastvor NaHCO3. Precipitirana bela čvrsta materija je skupljena filtracijom, isprana sa vodom, i osušena pod smanjenim pritiskom koje daje 667 mg jedinjenja C-10 u formi prljavo-bele čvrste materije (1.64 g, prinos: 60%).

[0192]<1>H NMR (400 MHz, HLOROFORM-d) δ ppm 2.34 - 2.37 (m, 1 H) 2.49 (m, 1 H) 3.86 (s, 1 H) 3.91 (s, 3 H) 3.92 (s, 3 H) 4.40 (dd, J=11.75, 2.44 Hz, 1 H) 4.82 (dt, J=11.32, 5.73 Hz, 1 H) 5.51 (s, 1 H) 6.80 - 6.91 (m, 2 H) 6.93 - 7.00 (m, 1 H)

[0193] MS (M+H<+>) 406.4

[0194] Primer ER-889925 je pripremljen iz jedinjenja C-10 (37.0 mg, 0.091 mmol) i komercijalno dostupne izohinolin-5-ilboronske kiseline (2.50 ekv.) na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890035. Prečišćavanje primenom LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (9.9 mg, 24%).

Primeri za sintezu - Deo D

[0195]

5-(5-3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinonitril (D-3)

[0196] U bočicu su dodani 5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pikolinonitril (1.95 g, 8.48 mmol), dicikloheksil(2',6'-dimetoksi-[1,1'-bifenil]-2-il)fosfin (0.261 g, 0.636 mmol), 5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il trifluorometansulfonat (2.00 g, 4.24 mmol), kalijum acetat (0.833 g, 8.49 mmol) i paladijum(II) acetat (0.095 g, 0.424 mmol). Nakon ispiranja bočice i sadržaja sa azotom je dodana degazirana smeša toluen/etanol (1:1, 20 mL), bočica je zapečaćena i grejana do 80° C tokom 2 dana. U nastao svetlo-žuti precipitat je dodan etil acetat, talog je skupljen filtracijom pa je osušen u visokom vakuumu (1.13 g, 63%). Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

[0197]<1>H NMR (400 MHz CDCl3) δ ppm 4.00 (3 H), 4.06 (3 H), 7.02 (2 H), 7.21 (1 H), 7.66 (2 H), 7.84 (2 H), 8.5 (1 H), 9.33 (1 H).

[0198] MS (M+H<+>) 426.0.

5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinonitril (D-4)

[0199] U smešu 5-(5-3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinonitrila (1.03 g, 2.43 mmol) u etanolu (23.0 mL) je dodan natrijum borohidrid (0.276 g, 7.29 mmol); reakciona smeša je grejana do temperature refluksa tokom 2 h nakon čega je reakciona smeša ostavljena da se ohladi do sobne temperature pa je mešana preko noći. Dodana je sirćetna kiselina (1.40 mL), a tada i 1.0 N rastvor hlorovodonične kiseline (48.6 mL), a smeša je koncentrovana primenom rotacione evaporacije. U talog je dodan dihlorometan pa je sve filtrirano. Koncentrovanje filtrata rotacionom evaporacijom daje sirovi produkt u formi svetlo-smeđe pene (0.694 g, 66%). Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

[0200]<1>H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ ppm 2.13 (1 H), 2.46 (1 H), 3.77 (6 H), 4.48 (1 H), 5.36 (1 H), 5.97 (1 H), 6.98 (3 H), 7.08 (1 H), 8.08 (1 H), 8.28 (1 H), 9.05 (1 H).

[0201] MS (M+H<+>) 430.0.

5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinska kiselina (D-5)

[0202] U suspenziju 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinonitrila (0.694 g, 1.62 mmol) je dodan 4.00 M rastvor natrijum hidroksida u vodi (2.02 mL). Nastala smeša je grejana na temperaturi refluksa tokom 3 h. Dodan je 1.0 N rastvor hlorovodonične kiseline (11.3 mL), a svetlo-smeđi precipitat je filtriran, ispran sa obilnim količinama vode, osušen (vazduh/vakuum) tokom 30 min, a tada u visokom vakuumu tokom 48 h koje daje svetlo-smeđu čvrstu materiju (0.535 g, 74%). Ovaj materijal je korišćen u sledećem koraku bez dodatnog prečišćavanja.

[0203]<1>H NMR (400 MHz DMSO-d6) δ ppm 2.13 (1 II), 2.46 (1 H), 3.76 (3 H), 3.79 (3 H), 4.48 (1 H), 5.35 (1 H), 6.00 (1 H), 6.99 (3 H), 7.08 (1 H), 8.11 (1 H), 8.32 (1 H), 9.04 (1 H).

[0204] MS (M+H<+>) 449.01

tert-butil 4-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinoil)piperazin-1-karboksilat (D-6)

[0205] U rastvor 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinske kiseline (458 mg, 1.02 mmol) u DMF (4.0 mL) su dodani N,N-diizopropiletilamin (535 µl, 3.06 mmol) i HATU (427 mg, 1.12 mmol). Nakon mešanja tokom 1 h na st je dodan tert-butil piperazin-1-karboksilat (209 mg, 1.12 mmol), a reakciona smeša je mešana preko noći na sobnoj temperaturi. Dodana je voda, a nastao svetlo-smeđi precipitat je skupljena uz pomoć filtracije (0.5385 g). Prečišćavanje uz pomoć kolonske hromatografije (15% do 100% etil acetat/heptan) daje tert-butil 4-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinoil)piperazin-1-karboksilat (332 mg, 54%) u formi svetlo-žute čvrste materije.

[0206]<1>H NMR (400 MHz CD3OD) δ ppm 1.46 (9 H), 2.2 (1 H), 2.5 (1 H), 3.50 (8 H), 3.73 (1 H), 3.82 (6 H), 4.45 (1 H), 5.08 (1 H), 5.91 (1 H), 7.02 (3 H), 7.62 (1 H), 8.23 (1 H), 8.92 (1 H).

[0207] MS (M+H<+>) 617.2.

(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)piridin-2-il)(piperazin-1-il)metanon (ER-897560)

[0208] Jedinjenje D-6 (66 mg, 0.107 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje tert-butil 4-(5-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinoil)piperazin-1-karboksilat (9.2 mg, prinos: 14%) i tert-butil 4-(5-((5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinoil)piperazin-1-karboksilat (9.2 mg, prinos: 14%).

[0209] U rastvor tert-butil 4-(5-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinoil)piperazin-1-karboksilata (90.0 mg, 0.146 mmol) u etanolu (4 mL) je dodana 4.0 M HCl u 1,4-dioksanu (1.84 mL). Reakciona smeša je grejana do 40° C tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana primenom rotacione evaporacije pa je azeotropovana sa toluenom koje daje ER-897560 u formi bledo-žute čvrste materije (91 mg, prinos: 106%).

[0210] Primer ER-897097 jer pripremljen iz jedinjenja C-9 (500 mg, 1.243 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilata (461 mg, 1.492 mmol) na način koji je sličan onom koji je opisan kod pripreme primera D-4. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje Boc-zaštićeni ER-897097 (460 mg, prinos: 73%). Otklanjanje zaštite sa ovog Boc-zaštićenog produkta (100 mg, 0.197 mmol) je provedeno na način koji je sličan onom koji je opisan kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897097 (80 mg, prinos: 99%). (LC-MS: retenciono vreme: 1.49 min, (M+1)<+>409.08 uz korišćenje uslova II)

Primer ER-897269

[0211] Jedinjenje ER-897097 (94 mg, 0.229 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje jedan od izomera ER-897269 (15 mg, prinos: 16%, >95% ee).

[0212] Primer ER-897105 je pripremljen iz jedinjenja C-9 (500 mg, 1.243 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-(4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazol-1-il)piperidin-1-karboksilata (563 mg, 1.492 mmol) na način koji je sličan onom koji je opisan u primeru D-4. Prečišćavanje primenom hromatografije na silika-gelu daje Boczaštićeni ER-897105 (312 mg, prinos: 44%). Otklanjanje zaštite sa Boc-zaštićenog produkta (100 mg, 0.173 mmol) je provedeno na način koji je sličan onom koji je opisan kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897105 (71 mg, prinos: 86%).

[0213] LC-MS: retenciono vreme: 1.48 min, (M+1)<+>477.09 uz korišćenje uslova II.

Primeri ER-897214 i ER-897215

[0214] Jedinjenje ER-897105 (50 mg, 0.105 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje ER-897214 (19 mg, prinos: 39%, >95% ee) i ER-897215 (19 mg, prinos: 39%, >95% ee).

[0215] Primer ER-897381 je pripremljen iz jedinjenja C-4 (500 mg, 1.061 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)pirimidin-2-il)piperazin-1-karboksilata (621 mg, 1.591 mmol) na način koji je sličan onom iz primera D-4. Prečišćavanje primenom hromatografije na (silika-gelu) daje Boc-zaštićeni ER-897381 (311 mg, prinos: 50%). Otklanjanje zaštite sa Boc-zaštićenog produkta (100 mg, 0.17 mmol) je provedeno na način koji je sličan onom kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897381 (75 mg, prinos: 90%). LC-MS: retenciono vreme: 1.52 min, (M+1)<+>489.21 uz primenu uslova II).

Primeri ER-897714 i ER-897715

[0216] Jedinjenje ER-897381 (71 mg, 0.134 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere na način koji je sličan onom kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje ER-897714 (27 mg, prinos: 38%, >95% ee) i ER-897716 (30 mg, prinos: 42%, >95% ee).

[0217] Primer ER-897405 je pripremljen iz jedinjenja C-4 (500 mg, 1.061 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperazin-1-karboksilata (619 mg, 1.591 mmol) na način koji je sličan onom iz primera D-4. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje Boc-zaštićeni ER-897405 (311 mg, prinos: 65%). Otklanjanje zaštite sa Boc-zaštićenog produkta (100 mg, 0.17 mmol) je provedeno slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897405 (72 mg, prinos: 87%). LC-MS: retenciono vreme: 1.45 min, (M+1)<+>489.04 uz primenu uslova II.

Primeri ER-897716 i ER-897717

[0218] Jedinjenje ER-897405 (70 mg, 0.143 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere slično kao i kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje ER-897716 (23 mg, prinos: 33%) i ER-897717 (23 mg, prinos: 33%).

[0219] Primer ER-897765 je pripremljen iz jedinjenja C-4 (438 mg, 0.93 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil (1-(5-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)piridin-2-il)piperidin-4-il)karbamata (250 mg, 0.62 mmol) slično kao i kod pripreme primera D-4. Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje Boc-zaštićeni ER-897765 (161 mg, prinos: 43%). Otklanjanje zaštite sa Boc-zaštićenog produkta (161 mg, 0.267 mmol) je provedeno slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897765 (131 mg, prinos: 98%).

[0220] Primer ER-895809 je pripremljen procedurom od dva koraka iz jedinjenja D-5 (19 mg, 0.042 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (32 mg, 0.169 mmol) slično kao i kod pripreme primera D-6 koje daje intermedijar (3S)-tert-butil 3-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)picolinamido)pirolidin-1-karboksilat (19 mg, 0.031 mmol, prinos: 72%). Tada je ovaj intermedijar (17 mg, 0.028 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod pripreme primera ER-897560 koje daje željeni produkt, ER-895809 (16 mg, prinos: 98%).

[0221] Primer ER-895810 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz jedinjenja D-5 (19 mg, 0.042 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (32 mg, 0.169 mmol) slično kao i kod primera D-6 koje daje intermedijar (3R)-tert-butil 3-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)picolinamido)pirolidin-1-karboksilat (24 mg, 0.039 mmol, prinos: 92%). Tada je ovaj intermedijar (22 mg, 0.036 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-895810 (21 mg, prinos: 100%). Tačna izračunata masa: 516.21. Primećena: 517.5.

[0222] Primer ER-896133 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz jedinjenja D-5 (15 mg, 0.033 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil piperazin-1-karboksilata (25 mg, 0.134 mmol) slično kao i kod primera D-6 koje daje intermedijar tert-butil 4-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinoil)piperazin-1-karboksilat (6 mg, 0.009 mmol, 29% prinos:). Tada je ovaj intermedijar (6 mg, 0.009 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-896133 (5.3 mg, prinos: 92%).

[0223] Primer ER-896134 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz jedinjenja D-5 (15 mg, 0.033 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata (27 mg, 0.134 mmol) slično kao i kod primera D-6 to koje daje intermedijar tert-butil 4-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)picolinamido)piperidin-1-karboksilat (7 mg, 0.011 mmol, 33% prinos:). Tada je ovaj intermedijar (7 mg, 0.011 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-896134 (5.8 mg, prinos: 87%).

[0224] Primer ER-896135 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz jedinjenja D-5 (15 mg, 0.033 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (27 mg, 0.134 mmol) slično kao i kod primera D-6 to koje daje intermedijar (3S)-tert-butil 3-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)picolinamido)piperidin-1-karboksilat (7 mg, 0.011 mmol, 33% prinos:). Tada je ovaj intermedijar (7 mg, 0.011 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-896135 (6.5 mg, prinos: 97%).

[0225] Primer ER-896136 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz jedinjenja D-5 (15 mg, 0.033 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (27 mg, 0.134 mmol) slično kao i kod primera D-6 koje daje intermedijar (3R)-tert-butil 3-(5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)picolinamido)piperidin-1-karboksilat (7 mg, 0.011 mmol, 33% prinos:). Tada je ovaj intermedijar (7 mg, 0.011 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-896136 (6.1 mg, prinos: 91%).

[0226] Primer ER-896137 je pripremljen iz jedinjenja D-5 (15 mg, 0.033 mmol) i komercijalno dostupnog propan-2-amina (8 mg, 0.134 mmol) slično kao i kod primera D-6 koje daje željeni produkt ER-896137 (5 mg, prinos: 31%).

[0227] 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinska kiselina je pripremljena slično kao i kod primera D-5 (101 mg, prinos: 29%).

[0228] Primer ER-897034 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinske kiseline (25 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil piperazin-1-karboksilata (31 mg, 0.167 mmol) slično kao i kod primera D-6 koje daje intermedijar tert-butil 4-(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinoil)piperazin-1-karboksilat (15 mg, 0.024 mmol, prinos: 44%). Tada je ovaj intermedijar (13 mg, 0.021 mmol) tretirani sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-897034 (12.2 mg, prinos: 98%).

[0229] Primer ER-897036 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinske kiseline (25 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (33 mg, 0.167 mmol) slično kao i kod primera D-6 koje daje intermedijar (3S)-tert-butil 3-(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)picolinamido)piperidin-1-karboksilat (15 mg, 0.024 mmol, prinos: 43%). Tada je ovaj intermedijar (13 mg, 0.021 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-897036 (12 mg, prinos: 96%).

[0230] Primer ER-897037 je pripremljen u proceduri od dva koraka iz 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)pikolinske kiseline (25 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata (33 mg, 0.167 mmol) slično kao i kod primera D-6 koje daje intermedijar tertbutil 4-(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)picolinamido)piperidin-1-karboksilat (14 mg, 0.022 mmol, prinos: 40%). Tada je ovaj intermedijar (13 mg, 0.021 mmol) tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-897560 koje daje željeni produkt ER-897037 (11 mg, prinos: 90%).

Primeri za sintezu - Deo F

[0231]

[0232] 4-(5-amino-1H-pirazol-3-il)benzonitril (jedinjenje A-2; 5.31 g, 31.4 mmol) i komercijalno dostupni 1-(3,4-dimetoksifenil)-4,4-difluorobutan-1,3-dion (8.1 g, 31.4 mmol) slično kao i kod pripreme jedinjenja A-7 daju jedinjenje F-1 (9.84 g, prinos: 77%). MS (M+H<+>) 407.3.

[0233] Jedinjenje F-2 (9.8 g, prinos: 99%) je dobiveno NaBH4-redukcijom F-1 (9.8 g, 24.1 mmol) slično kao i kod jedinjenja A-8.

[0234]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 2.17 - 2.39 (m, 2 H) 3.83 - 3.85 (m, 3 H) 3.85 - 3.88 (m, 3 H) 4.47 (dd, J=10.87, 2.29 Hz, 1 H) 4.66 - 4.81 (m, 1 H) 5.86 (s, 1 H) 6.60 (t, J=55.00 Hz, 1 H) 6.97 (d, J=7.97 Hz, 1 H) 7.01 - 7.07 (m, 1 H) 7.10 (s, 1 H) 7.66 - 7.76 (m, 2 H) 7.91 (d, J=8.13 Hz, 2 H). MS (M+H<+>) 411.7.

[0235] Jedinjenje F-3 (9.4 g, prinos: 100%) je dobiveno hidrolizom F-1 (8.94 g, 21.8 mmol) uz korišćenje vod. NaOH slično kao i kod jedinjenja A-9.

[0236]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 2.21 - 2.37 (m, 2 H) 3.80 - 3.82 (m, 4 H) 3.84 (s, 3 H) 4.46 (dd, J=10.83, 2.56 Hz, 1 H) 6.60 (t, J=55.00 Hz, 1 H) 6.95 (d, J=8.28 Hz, 1 H) 7.00 - 7.04 (m, 1 H) 7.08 (d, J=1.91 Hz, 1 H) 7.81 (m, J=8.35 Hz, 2 H) 8.00 (m, J=8.39 Hz, 2 H). MS (M+H<+>) 431.4.

[0237] U reakcionu tubu od 5 mL sa navojnim čepom su dodani jedinjenje F-3, 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (1.99 g, 4.64 mmol), tert-butil piperazin-1-karboksilat (1.05 g, 5.61 mmol), HATU (2.14 g, 5.62 mmol), DMF (10.0 ml), i Hünig-ova baza (0.815 ml, 4.67 mmol). Reakciona smeša je mešana na 30° C, preko noći. Smeša je razređen sa etil acetatom, isprana sa vodom, isprana sa 0.1 N vodenom hlorovodoničnom kiselinom, isprana sa vodenim natrijum bikarbonatom, isprana sa slanicom, osušena preko bezvodnog magnezijum sulfata, filtrirana, i koncentrovana in vacuo koje daje smeđu čvrstu materiju. Materijal je prečišćen uz pomoć fleš-hromatografije uz pomoć gradijenta heptan:etil acetat (0-90%). Frakcije koje su sadržavale produkt su spojene i koncentrovane in vacuo koje daje prljavo-belu čvrstu materiju. Nastala čvrsta materija je tada rastvorena u etanolu (10.0 ml) i 4.0 M HCl u dioksanu (10.0 ml, 40.00 mmol), a smeša je mešana na ST tokom 1 h. Smeša je tada koncentrovana in vacuo koje daje jedinjenje ER-894466 u formi žute čvrste materije (1.91 g, prinos:

[0238] Hiralna rezolucija ER-894466 (1.91 g, 3.59 mmol) uz pomoć HPLC slično kao i kod ER-890044 obezbeđuje ER-895302 (538 mg, prinos: 56%, >95% ee) i ER-895303 (671 mg, prinos: 70%, >95% ee).

[0239] 5-amino-1H-pirazol-3-ol (9.91 g, 100 mmol) i 1-(3,4-dimetoksifenil)-4,4-difluorobutan-1,3-dion (25.8 g, 100 mmol) slično kao i kod jedinjenja A-14 daju jedinjenje F-4, 7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ol (30.6 g, 95 mmol, prinos: 95%).

[0240]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 3.87 - 3.90 (m, 3 H) 3.90 - 3.93 (m, 3 H) 5.94 (s, 1 H) 7.06 (d, J=8.39 Hz, 1 H) 7.29 (t, J=53.00 Hz, 1 H) 7.47 (s, 1 H) 7.67 (dd, J=8.43, 1.45 Hz, 1 H) 7.77 (d, J=1.75 Hz, 1 H). MS (M+H<+>) 323.3.

[0241] U suspenziju jedinjenja F-4, 7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-ol (3.21 g, 9.99 mmol) u DMF (5.00 ml) i THF (25.0 ml) na 0° C je dodan natrijum hidrid (0.480 g, 11.99 mmol) u malim porcijama. Smeša je mešana na 0° C tokom 30 min. Dodan je 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometil)sulfonil metansulfonamid (4.28 g, 11.99 mmol) u malim porcijama, a smeša je ostavljena do dosegne st. Nakon 1 h, reakciona smeša je izlivena u 0.1 N rastvor HCl koje dovodi do pojave belog precipitata, koji je filtriran i ispran sa vodom. Sirovi produkt je suspendovan u IPA, grejan do ∼70° C pa je ohlađen do st. Dobiveni beli precipitat je ispran sa dodatnom količinom IPA, pa je osušen pod smanjenim pritiskom koje daje jedinjenje F-5, 7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il trifluorometansulfonat, u formi bele čvrste materije (2.85 g, 6.29 mmol, prinos: 62.9%).

[0242]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 3.89 (s, 3 H) 3.92 (s, 3 H) 6.70 (s, 1 H) 7.07 (d, J=8.50 Hz, 1 H) 7.17 - 7.27 (m, 2 H) 7.29 - 7.38 (m, 1 H) 7.78 (dd, J=8.51, 2.14 Hz, 1 H) 7.82 - 7.89 (m, 2 H). MS (M+H<+>) 454.4.

[0243] Jedinjenje F-6 (27.2 g, prinos: 77%) je dobiveno primenom NaBH4-redukcije jedinjenja F-5 (35.0 g, 77.2 mmol) slično kao i kod jedinjenja A-16.

[0244]<1>H NMR (400 MHz, METANOL-d4) δ ppm 2.14 - 2.32 (m, 2 H) 3.79 (s, 3 H) 3.81 (s, 3 H) 4.44 (dd, J=11.06, 2.67 Hz, 1 H) 4.53 - 4.66 (m, 1 H) 5.28 (s, 1 H) 6.40 (t, J=2.49 Hz, 1 H) 6.91 - 6.94 (m, 1 H) 6.96 - 7.00 (m, 1 H) 7.03 (d, J=1.94 Hz, 1 H). MS (M+H<+>) 458.1.

[0245] Primer ER-895088-01 je pripremljen iz jedinjenja ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (35.2 mg, 0.177 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (9.3 mg, 29%).

[0246] Primer ER-895116 je pripremljen iz jedinjenja ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil pirolidin-3-ilkarbamata (36.5 mg, 0.196 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (16 mg, 52%).

[0247] Primer ER-895089 je pripremljen iz jedinjenja ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil pirolidin-3-ilkarbamata (36.7 mg, 0.197 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463 Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (7.1 mg, 23%).

[0248] Primer ER-895090 je pripremljen iz jedinjenja ER-895305 (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (1S,4S)-tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (38.6 mg, 0.196 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (18.1 mg, 57%).

[0249] Primer ER-895115 je pripremljen iz jedinjenja ER-895305 (25.6 mg, 0.060 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (31.5 mg, 0.169 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (3.5 mg, 11%).

[0250] Primer ER-895745 je pripremljen iz jedinjenja ER-895305 (26.2 mg, 0.061 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilata (32.9 mg, 0.155 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (18.1 mg, 53%).

[0251] Primer ER-895091-01 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil piperazin-1-karboksilata (21.0 mg, 0.113 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (2.5 mg, 8%).

[0252] Primer ER-895092 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata (22.0 mg, 0.110 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (5.2 mg, 16%).

[0253] Primer ER-895093 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (22.0 mg, 0.110 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (10.3 mg, 32%).

[0254] Primer ER-895094 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (22.0 mg, 0.110 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (7.4 mg, 23%).

[0255] Primer ER-895096 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (2S,5R)-tert-butil 2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (24.0 mg, 0.113 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (13.9 mg, 43%).

[0256] Primer ER-895097 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (21.0 mg, 0.113 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (17.3 mg, 56%).

[0257] Primer ER-895098 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (21.0 mg, 0.113 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (18.5 mg, 60%).

[0258] Primer ER-895101 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (1S,4S)-tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (22.0 mg, 0.112 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (9 mg, 28%).

[0259] Primer ER-895099 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 3-aminoazetidin-1-karboksilata (19.0 mg, 0.110 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-895080. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (14.1 mg, 41%).

[0260] Primer ER-895102 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil piperazin-1-karboksilata (21.0 mg, 0.113 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (17.2 mg, 56%).

[0261] Primer ER-895104 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (22.0 mg, 0.110 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (17.1 mg, 54%).

[0262] Primer ER-89510 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (22.0 mg, 0.110 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (15.8 mg, 50%).

[0263] Primer ER-895106 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (22.0 mg, 0.110 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (14.9 mg, 47%).

[0264] Primer ER-895107 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (2S,5R)-tert-butil 2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (24.0 mg, 0.112 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (14.2 mg, 44%).

[0265] Primer ER-895109 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (21.0 mg, 0.113 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (17.7 mg, 57%).

[0266] Primer ER-895112 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (1S,4S)-tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (22.0 mg, 0.111 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (14.4 mg, 46%).

[0267] Primer ER-895111 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-karboksilata (22.0 mg, 0.111 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-895080. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (22.7 mg, 63%).

[0268] Primer ER-895731 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil piperazin-1-karboksilata (32.8 mg, 0.176 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (22.1 mg, 70%).

[0269] Primer ER-895732 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata (31.0 mg, 0.155 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (22 mg, 70%).

[0270] Primer ER-895733 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (34.0 mg, 0.170 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (26.5 mg, 85%).

[0271] Primer ER-895734 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (36.3 mg, 0.181 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (23.4 mg, 75%).

[0272] Primer ER-895739 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (37.7 mg, 0.202 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (22.9 mg, 73%).

[0273] Primer ER-895740 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (34.8 mg, 0.187 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (23.1 mg, 73%).

[0274] Primer ER-895744 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilata (26.9 mg, 0.127 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (26.5 mg, 82%).

[0275] Primer ER-895741 je pripremljen iz jedinjenja 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,74etrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzojeva kiselina (25.0 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 3-aminoazetidin-1-karboksilata (30.1 mg, 0.175 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-895080. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (5.5 mg, 16%).

[0276] Primer ER-895718 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata (45.4 mg, 0.227 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (21.4 mg, 68%).

[0277] Primer ER-895719 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluoromcthil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (29.8 mg, 0.149 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (21.6 mg, 69%).

[0278] Primer ER-895720 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (28.6 mg, 0.143 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (21.7 mg, 69%).

[0279] Primer ER-895721 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (31.1 mg, 0.155 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (20.2 mg, 64%).

[0280] Primer ER-895722 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (41.2 mg, 0.206 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (21 mg, 67%).

[0281] Primer ER-895723 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (2S,5R)-tert-butil 2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (34.1 mg, 0.159 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (20.5 mg, 64%).

[0282] Primer ER-895725 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (43.7 mg, 0.235 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (19.8 mg, 65%).

[0283] Primer ER-895726 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopirolidin-1-karboksilata (31.0 mg, 0.167 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (20.6 mg, 67%).

[0284] Primer ER-895729 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (1S,4S)-tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (29.9 mg, 0.151 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (19.6 mg, 62%).

[0285] Primer ER-895730 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-karboksilata (28.9 mg, 0.136 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (23.9 mg, 74%).

[0286] Primer ER-895755 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.5 mg, 0.058 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil piperazin-1-karboksilata (27.9 mg, 0.150 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (28.3 mg, 89%).

[0287] Primer ER-895727 je pripremljen iz jedinjenja 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzojeva kiselina (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 3-aminoazetidin-1-karboksilata (37.0 mg, 0.215 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-895080. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (22.3 mg, 65%).

[0288] Primer ER-896059 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (10.0 mg, 0.023 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-aminopiperidin-1-karboksilata (17.8 mg, 0.089 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (11.2 mg, 87%).

[0289] Primer ER-896060 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (19.3 mg, 0.096 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (12.3 mg, 95%).

[0290] Primer ER-896061 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (16.9 mg, 0.084 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (12.2 mg, 94%).

[0291] Primer ER-896062 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (23.9 mg, 0.119 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (10.7 mg, 83%).

[0292] Primer ER-896063 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (R)-tert-butil 3-metilpiperazin-1-karboksilata (20.5 mg, 0.102 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (10.9 mg, 84%).

[0293] Primer ER-896064 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (2S,5R)-tert-butil 2,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (17.2 mg, 0.080 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (10.3 mg, 78%).

[0294] Primer ER-896067 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog (1S,4S)-tert-butil 2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-karboksilata (15.2 mg, 0.077 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (9.9 mg, 77%).

[0295] Primer ER-896068 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.0 mg, 0.056 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H-karboksilata (17.3 mg, 0.081 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-894463. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (12.3 mg, 93%).

[0296] Primer ER-896071 je pripremljen iz jedinjenja ER-895435 (25.9 mg, 0.060 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 3-(aminometil)azetidin-1-karboksilata (30.4 mg, 0.163 mmol) slično kao i kod pripreme primera ER-895080. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC uslovi III) daje željeni produkt (18.6 mg, 51%).

Primeri za sintezu – Deo G

Priprema ER-893993

[0297]

[0298] Boca od 500 mL je nabijena sa 4,4,4',4',5,5,5',5'-oktametil-2,2'-bi(1,3,2-dioksaborolan) (10.78 g, 42 mmol), 5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il trifluorometansulfonatom (10.0 g, 21 mmol), kalijum acetatom (10.41 g, 106 mmol), i 1,4-dioksanom (100 ml). Reakciona smeša je degazirana sa azotom tokom 15 min. Dodan je kompleks 1,1'-bi(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II) dihlorid dihlorometan (4.33 g, 5.3 mmol), a smeša je zapečaćena i mešana tokom 3 h na 80° C. Reakciona smeša je ohlađena na sobnoj temperaturi pa je podeljena između EtOAc (1000 mL) i zas. rastvora NaHCO3(200 mL). Faze su razdvojene, a vodena faza je ponovo ekstrahovana (2x) sa EtOAc (200 mL). Spojeni organski slojevi su isprani sa slanicom (200 mL). Organski sloj je osušen sa bezvodnim natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Sirovi materijal je rastvoren u EtOAc (500 mL), dodan je heptan (500 mL), a crna čvrsta kontaminacija je odstranjena uz pomoć filtracije. Filtrat koji je sadržavao željeni produkt je koncentrovan pod smanjenim pritiskom, suspendovan u 150 mL IPA, grejan na 70° C tokom 30 min, a tada je ohlađen do sobne temperature. Zeleni precipitat je odstranjen filtracijom, ispran sa IPA i osušen u vakuumskoj pumpi koje daje 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(t

[0299] U bocu od 25 mL u atmosferi azota u rastvor tert-butil 2-metil-4-oksopiperidin-1-karboksilata (558 mg, 2.6 mmol) i 1,1,1-trifluoro-N-fenil-N-(trifluorometil)sulfonil metansulfonamida (1869 mg, 5.2 mmol) u bezvodnom THF (5 mL) na -78° C je dodan 1.0 M LiHMDS u THF (5.23 mL, 5.2 mmol). Smeša je mešana preko noći pa je ostavljena da se polako ugreje do sobne temperature. Reakcija je ugašena sa zasićenim NaHCO3. Tada je smeša ekstrahovana (3x) sa MTBE. Spojeni organski slojevi su osušeni sa natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani. Smeša regioizomera (tert-butil 6-metil-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat i tert-butil 2-metil-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat) je dobivena u formi bledo-žutog ulja (397 mg, prinos: 44%).

[0300] Bočica od 5-10 mL za mikrotalasnu peć je nabijena sa 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidinom (650 mg, 1.45 mmol), tert-butil 2-metil-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilatom (smeša sa tert-butil 6-metil-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilatom, ukupno: 396 mg, 1.15 mmol), kalijum karbonatom (792 mg, 5.7 mmol), vodom (2.0 ml) i THF (4.5 ml). Reakciona smeša je degazirana sa azotom tokom 15 min. Dodan je kompleks 1,1'-bi(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II) dihlorid dihlorometan (234 mg, 0.29 mmol), a smeša je umanjena i mešana preko noći na 90° C. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature pa je koncentrovana. Sirovi produkt je prečišćenih na silika-gelu (kolona Interchim 40 g, 30 µM) uz eluciju sa 12-100% smešom EtOAc/heptan. Smeša regioizomera (tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat i tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-6-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat) je dobivena u formi žute čvrste materije (142 mg, prinos: 24%).

Sinteza ER-896993

[0301]

[0302] Natrijum tetrahidroborat (10.94 mg, .29 mmol) je polako dodan u suspenziju tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilata (smeša sa regioizomerom tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-6-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat, ukupno: 50 mg, 0.096 mmol) u etanolu (1.0 ml) na sobnoj temperaturi. Smeša je grejana do 80° C tokom 60 min. Dodan je etil acetat. Smeša je postupno isprana sa vodenim zasićenim rastvorom NH4Cl, a tada sa slanicom.

[0303] Organski sloj je osušen sa bezvodnim natrijum sulfatom, filtriran i koncentrovan. Sirovi produkt je prečišćen na silika-gelu (kolona Interchim 25 g, 30 µM) uz eluciju sa 12-100% smešom EtOAc/heptan. Smeša regioizomera (tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat i tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-,a]pirimidin-2-il)-6-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat) je dobivena u formi bele čvrste materije (38 mg, prinos: 75%).

[0304] tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat (smeša sa regioizomerom tertbutil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-totrahidropirazolo[t,5-a]pirimidin-2-il)-6-metil-5,6-dihidropiridin-t(2H)-karboksilat, ukupno: 34 mg, 0.065 mmol) je rastvoren u etanolu (0.5 ml) i 4.00 M HCl u dioksanu (0.5 ml), a smeša je mešana na 40° C tokom 1 h. Dodan je 1 mL toluena. Reakciona smeša je koncentrovana.

[0305] Produkt je osušen u vakuum pumpi koje daje 29 mg finalnog produkta u formi HCl soli (smeša regioizomera 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-metil-1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin hidrohlorid i 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-metil-1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin hidrohlorid) (ER-896993).

Sinteza ER-896994

[0306]

[0307] tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat (smeša sa regioizomerom tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-6-metil-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilat, ukupno: 60 mg, 0.116 mmol) je rastvoren u metanolu (2.5 ml). Rastvor je tretiran sa vodonikom tokom 2.5 h na sobnoj temperaturi uz pomoć H-Cube (Full H2, 1 mL/min, mala veličina (30 mm) 10% paladijum na ugljeniku CatCart). Dodan je 1 mL toluena. Rastvarač je koncentrovan. Sirovi produkt je prečišćen na silika-gelu (kolona Interchim 25 g, 30 µM) uz eluciju sa 12-100% smešom EtOAc/heptan koje daje tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-metilpiperidin-1-karboksilat (36 mg, 0.069 mmol, prinos: 59%) u formi bele čvrste materije.

[0308] tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-metilpiperidin-1-karboksilat (29 mg, 0.055 mmol) je rastvoren u etanolu (0.5 ml) i 4.00 M HCl u dioksanu (0.5 ml), a smeša je mešana na 40° C tokom 1 h. Dodan je 1 mL toluena. Reakciona smeša je koncentrovana. Produkt je osušen u vakuum pumpi koje daje 25 mg finalnog produkta u formi HCl soli, (5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-metilpiperidin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin hidrohlorid, ER-896994).

Primer ER-897090

[0309] Primer ER-897090 je pripremljen iz 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a] pirimidina (507 mg, 1.129 mmol) i tertbutil 4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,3,6,7-tetrahidro-1H-azepin-1-karboksilata (300 mg, 0.869 mmol) koji je pripremljen iz komercijalno dostupnog tert-butil 4-oksoazepan-1-karboksilata slično kao i kod pripreme ER-896993 (Deo G) osim šta je otklanjanje zaštite provedeno slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897090 (96 mg, prinos: 26%). LC-MS: retenciono vreme: 1.49 min, (M+1)<+>423.06 (uz korišćenje uslova II).

[0310] Jedinjenje ER-897090 (94 mg, 0.224 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere slično kao i kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje jedan od izomera ER-897212. (17 mg, prinos: 18%).

[0311] Primer ER-897130 je pripremljen iz 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (493 mg, 1.097 mmol) i tertbutil 3-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-2,5-dihidro-1H-pirol-1-karboksilata (174 mg, 0.548 mmol) koji je pripremljen iz komercijalno dostupnog tert-butil 3-oksopirolidin-1-karboksilata slično kao i kod pripreme ER-896993 (Deo G) osim šta je korak otklanjanja zaštite proveden slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897130 (68 mg, prinos: 31%).

[0312] Primer ER-897142 je pripremljen iz 5-(3,4-dimcthoksiphcnil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (489 mg, 1.089 mmol) i 4-((tert-butoksikarbonil)amino)cikloheks-1-en-1-il trifluorometansulfonata (188 mg, 0.544 mmol) koji je pripremljen iz komercijalno dostupnog tert-butil (4-oksocikloheksil)karbamata slično kao i kod pripreme ER-896993 (Deo G) osim šta je korak otklanjanja zaštite proveden slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897142 (111 mg, prinos: 48%). (LC-MS: retenciono vreme: 1.57 min, (M+1)<+>423.06 (uz korišćenje uslova II).

Primer ER-897364 i ER-897365

[0313] Jedinjenje ER-897090 (100 mg, 0.237 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere slično kao i kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje ER-897364 (4 mg, prinos: 4%, >95% ee) i ER-897365 (6.4 mg, prinos: 6%, >95% ee).

Primer ER-897547

Priprema tert-butil 3-metil-4-oksopiperidin-1-karboksilata

[0314] Rastvor 1-benzil-3-metilpiperidin-4-on (1.63 g, 8.018 mmol) i di-tert-butil dikarbonata (1.925 g, 8.82 mmol) u 50 ml metanola je hidrogenovan uz pomoć H-Cube (kontrolisani H2na 50 bar, stopa protoka: 1.0 ml/min) primenom Pd-C punjenja. Reakciona smeša je re-cirkulirana tokom 12 h. Nakon temeljitog ispiranja H-Cube sa metanolom, rastvarač je isparen, a nastalo ulje je prečišćeno uz pomoć hromatografije na silika-gelu koje daje jedinjenje iz naslova (1.5 g, 88%).

[0315] Primer ER-897547 je pripremljen iz 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (488 mg, 1.086 mmol) i tertbutil 5-metil-4-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-5,6-dihidroiridin-1(2H)-karboksilata (250 mg, 0.724 mmol) koji je pripremljen iz tert-butil 3-metil-4-oksopiperidin-1-karboksilata slično kao i kod pripreme ER-896993 (Deo G) osim šta je korak otklanjanja zaštite proveden slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897547 (68 mg, prinos: 31%).

[0316] Primer ER-897597 je pripremljen iz 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (475 mg, 1.058 mmol) i komercijalno dostupnog tert-butil 4-(4-bromofenil)piperidin-1-karboksilata (240 mg, 0.705 mmol) slično kao i kod pripreme ER-896993 (Deo G) osim šta je korak otklanjanja zaštite proveden slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897597 (32 mg, prinos: 9%). LC-MS: retenciono vreme 1.72 min, (M+1)<+>486.95 (uz korišćenje uslova II).

Primer ER-897814 i ER-897815

[0317] Jedinjenje ER-897597 (20 mg, 0.041 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere slično kao i kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje ER-897814 (7 mg, prinos: 35%, >95% ee) i ER-897815 (3 mg, prinos: 15%, >95% ee).

[0318] Primer ER-897728

Priprema benzil 9-okso-3-azaspiro[5.5]undek-7-en-3-karboksilata

[0319] Benzil 4-formilpiperidin-1-karboksilat (5.17 g, 20.907 mmol) i p-toluensulfonska kiselina monohidrat (0.398 g, 2.091 mmol) su mešani u benzenu (30.0 ml, 334.136 mmol) na 70° C. Dodan je but-3-en-2-on (3.76 ml, 41.813 mmol), a reakciona smeša je refluksovana o/n uz odstranjivanje vode uz pomoć Dean-Stark-ovog aparata. Nakon hlađenja reakcione smeše do st je dodan zas. rastvor NaHCO3, a organski sloj je osušen preko Na2SO4pa je isparen. Nastalo ulje je prečišćeno uz pomoć Biotage (SiO2, 250 g, EtOAc/hep. 10% do 50%) koje daje jedinjenje iz naslova (3.58 g, 11.96 mmol, prinos: 57.2%).

Priprema tert-butil 9-okso-3-azaspiro[5.5]undekan-3-karboksilata

[0320] Rastvor benzil 9-okso-3-azaspiro[5.5]undek-7-en-3-karboksilata (1.26 g, 4.209 mmol), di-tert-butil dikarbonata (1.01 g, 4.63 mmol) i TEA (1.47 ml, 10.522 mmol) u 50 ml metanola je hidrogenovan uz pomoć H-Cube (Full H2, stopa protoka: 1.0 ml/min) uz korišćenje Pd-C punjenja. Reakciona smeša je re-cirkulirana tokom 5 h. Nakon temeljitog ispiranja H-Cube sa metanolom, rastvarač je isparen, a nastalo ulje je prečišćeno primenom hromatografije na silika-gelu koje daje jedinjenje iz naslova (681 mg, 61%).

[0321] Primer ER-897728 je pripremljen iz 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (489 mg, 1.089 mmol) i tertbutil 9-(((trifluorometil)sulfonil)oksi)-3-azaspiro[5.5]undek-8-en-3-karboksilata (290 mg, 0.726 mmol) koji je pripremljen iz tert-butil 9-okso-3-azaspiro[5.5]undekan-3-karboksilata slično kao i kod pripreme ER-896993 (Deo G) osim šta je korak otklanjanja zaštite proveden slično kao i kod pripreme ER-887084 (Deo B) koje daje ER-897728 (91 mg, prinos: 26%). LC-MS: retenciono vreme: 1.67 min, (M+1)<+>477.13 (uz korišćenje uslova II).

Primer ER-897851

[0322] Jedinjenje ER-897728 (85 mg, 0.178 mmol) je razrešeno u svoje konstituentne enantiomere slično kao i kod pripreme ER-890044 (Deo A) koje daje jedan od izomera ER-897851. (28 mg, prinos: 33%).

[0323] Primer ER-890978 je pripremljen iz jedinjenja G2 (600 mg, 1.34 mmol) i komercijalno dostupnog 4-bromo-2-hloropiridina slično kao i kod primera ER-896993 koje daje 2-(2-hloropiridin-4-il)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin (311 mg, prinos: 54%), nakon čega sledi NaBH4-redukcija (provedeno na 300 mg ovog materijala). Prečišćavanje uz pomoć hromatografije na silika-gelu daje željeni produkt (277 mg, prinos: 92%).

Primeri za sintezu – Deo H

Priprema 1: 1-metil-2-(propan-2-iliden)hidrazin

[0324]

[0325] Aceton (100 mL) je tretiran (kap po kap; pumpa sa špricom) tokom 45 min sa N-metilhidrazinom (20 mL), a reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 45 min. Reakcioni rastvor je tada grejan na 55° C tokom dodatnih 15 min, ohlađen do sobne temperature, osušen preko natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan uz pomoć rotacionog evaporatora na 40° C ili manje. Sirovi produkt je tada prečišćen uz pomoć destilacije na 110-122° C koje daje jedinjenje iz naslova u formi bezbojnog ulja (14.2 g, 43.9%).

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.58 (s, 3H), 1.72, (s, 3H), 2.63, (s, 3H), 5.21, (br s, 1H).

Priprema 2: 3-(etoksimetilen)pentan-2,4-dion

[0326]

[0327] Rastvor acetilacetona (40 mL), etil ortoformata (95.4 mL) i sirćetnog anhidrida (54.2 mL) je grejan do temperature refluksa (150° C) tokom 1 h. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature pa je direktno podvrgnut fleš-kolonskoj hromatografiji (silika-gel od E. Merck-a, (∼120 g); eluent: 100% EtOAc, a tada 5% EtOH u EtOAc). Koncentrovanje frakcija koje sadrže čisti produkt uz pomoć rotacionog evaporatora na 40° C daje jedinjenje iz naslova u formi tamno-crvenog viskoznog ulja (10.4 g, 17.0%).

[0328]<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 1.36, (t, 3H), 2.28, (s, 3H), 2.35, (s, 3H), 4.22, (q, 2H), 7.67, s, 1H).

Priprema 3: 3-((1-metil-2-(propan-2-iliden)hidrazinil)metilen)pentan-2,4-dion [0329]

[0330] 3-(etoksimetilen)pentan-2,4-dion (Priprema 2, 8.6 g) je rastvoren u etru (30 mL) pa je ohlađen do 0° C. Reakcioni rastvor je tada polako tretiran sa 1-metil-2-(propan-2-iliden)hidrazinom (Priprema 1, 4.8 g), kap po kap tokom 5 min, a tada je ugrejan i mešan na sobnoj temperaturi preko noći. Reakcioni rastvor je prečišćen direktno uz pomoć fleškolonske hromatografije (Biotage Quad 25; eluent: 20% EtOH u EtOAc) koje daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-crvene čvrste materije. (9.1 g, 84.0%).

[0331]<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 1.82, (s, 3H), 1.89, (s, 3H), 2.05, (s, 6H), 3.07, (s, 3H), 7.40, (s, III).

Priprema 4: 1-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)etanona

[0332]

[0333] 3-((1-metil-2-(propan-2-iliden)hidrazinil)metilen)pentan-2,4-dion (Priprema 3, 9.1 g) je rastvoren u etanolu (20 mL) pa je tretiran sa 1 M hlorovodonikom u vodi (20 mL). Reakcioni rastvor je mešan na sobnoj temperaturi tokom 15 min. Reakcioni rastvor je tada koncentrovan u vakuumu uz pomoć rotacionog evaporatora do ukupnog volumena od približno 20 mL. Reakcioni rastvor je tada tretiran sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (45 mL) pa je ekstrahovan sa metilen hloridom (4 x 50 mL). Spojeni organski ekstrakti su osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo koje daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-narandžaste čvrste materije (6.2 g, 97%).

[0334]<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.37, (s, 3H), 2.45, (s, 3H), 3.84, (s, 3H), 7.75, (s, 1H)

Priprema 5: 1-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-4,4,4-trifluoro-3-hidroksibut-2-en-1-on [0335]

[0336] 1-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)etanon (Priprema 4, 4.46 g) je rastvoren u metanolu (21 mL) pa je dodan 25% natrijum metoksid u metanolu (11.07 mL). Smeša je mešana tokom 5 min, pa su dodani sirćetna kiselina i trifluoro-etil ester (7.701 mL). Smeša je grejana do refluksa na 75° C pa je mešana tokom 19 h. Reakcioni rastvor je prečišćen direktno uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (Biotage Quad 25; eluent: 100% EtOAc, tada 5% EtOH u EtOAc, a na kraju 20% EtOH u EtOAc) koje daje jedinjenje iz naslova (tautomer) u formi svetlo-crvene penaste čvrste materije (7.0 g, 92.3%).

[0337]<1>HNMR (400 MHz, CDCl3) δ: 2.33 (s, 3H), 3.76, (s, 3H), 6.10, (s, 1H), 7.84, (s, 1H)

Priprema 6: 3-bromo-1H-pirazol-5-amin

[0338]

[0339] U rastvor 3,4,5-tribromopirazola (60 g) u sirćetnoj kiselini (900 mL) na 10° C je dodana azotna kiselina (21 mL) (90%, dimeća). Tada je dodavan sirćetni anhidrid (300 mL) tokom perioda od 20 min. Reakcioni rastvor je ugrejan do sobne temperature pa je mešan tokom 3 h. Reakciona smeša je tada izlivena u led koje rezultuje u beli precipitat. Ovaj precipitat je odstranjen filtriranjem pa je ispran sa vodom (200 mL). Filtrirani precipitat je tada rastvoren u toluenu (750 mL), ispran sa vodom (200 mL) i slanicom (100 mL), osušen preko natrijum sulfata, i filtriran. U toluenski rastvor je tada dodan 1H-pirazol, 3,5-dimetil-(20 g), a rastvor je grejan na temperaturi refluksa tokom 20 min. Reakcioni rastvor je ohlađen i koncentrovan in vacuo. Sirovi produkt je smrvljen sa heptanom, a nastao precipitat, koji je sadržavao najveću količinu produkta (određeno uz pomoć TLC), je filtriran i osušen in vacuo. Sirovo jedinjenje iz naslova je korišćeno bez dodatnog prečišćavanja (71.7 mg, 67.6%).

[0340] Pomenuti intermedijar, 3,4-dibromo-5-nitro-1H-pirazol (69 g), je redukovan uz pomoć refluksovanja sa kalaj(II) hlorodom (dihidrat, 135 g) u etil acetatu (600 mL) i etanolu (300 mL) na 110° C tokom 45 min. Žuti homogeni reakcioni rastvor je ohlađen so sobne temperature pa je polako izliven u snažno mešani rastvor natrijum bikarbonata (33 g) u vodi (200 mL) i etil acetatu (800 mL). Nastala gusta smeša je dodana u smešu Celite (30 g) pa je filtrirana kroz pločicu Celite. Filterski kolač je ispran sa dodatnom količinom etil acetata (600 mL). Organski rastvor je tada ispran sa slanicom (200 mL), osušen preko natrijum sulfata, filtriran, i koncentrovan in vacuo koje daje sirovi produkt u formi narandžastog ulja. Sirovi produkt je tada prečišćen uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (Biotage, Quad 25; eluent: 6% EtOH u metilen hloridu). Ovo daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-bež čvrste materije (13.2 g, 32%).<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 5.20, (m, 3H), 11.60, (br s, 1H).

Priprema 7: 2-bromo-5-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin

[0341]

[0342] 1-(1H-pirazol-4-il)-4,4,4-trifluoro-3-hidroksibut-2-en-1-on (Priprema 5, 1.7 g) i 3-bromo-1H-pirazol-5-amin (Priprema 6, 1.18 g) u sirćetnoj kiselini (52.61 mL) su grejani na 120° C u zapečaćenoj tubi preko noći. Reakcioni rastvor je ohlađen do sobne temperature pa je izliven u led/vodu (500 mL) koje rezultuje u beli precipitat. Ovaj precipitat je filtriran i ispran sa obilnim količinama vode. Precipitat je tada skupljen i osušen in vacuo koje daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (1.9 g, 73.1%).<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 2.47 (s, 3H), 3.79, (s, 3H), 6.95, (s, 1H), 7.73, (s, 1H), 8.67, (s, 1H).

Priprema 8: 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin

[0343]

[0344] Natrijum tetrahidroborat (472 mg) je polako dodan u suspenziju 2-bromo-5-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidina (Priprema 7, 1.8 g) u etanolu (20 mL). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcioni rastvor je tada veoma polako dodan u ohlađenu (led) 1 N HCl do postizanja pH = 2.0 sa ciljem da se ugasi preostao natrijum tetrahidroborat. Rastvor je tada koncentrovan u visokom vakuumu sa ciljem odstranjivanja glavnine etanola. Zasićeni vodeni rastvor natrijum bikarbonata je tada polako dodavan u zakiseljeni rastvor do postizanja neutralne pH prednosti (7.0) nakon čega se pojavio beli precipitat. Ovaj precipitat je odstranjen filtriranjem pa je ispran sa vodom (200 mL) i etrom (20 mL). Beli precipitat je skupljen i osušen in vacuo koje daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (1.36 g, 74.7%).<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ: 2.00, (m, 1H), 2.09, (s, 3H), 2.30, (m, 1H), 3.67, (s, 3H), 4.34, (m, 1H), 5.15, (m, 1H), 5.31, (s, 1H), 6.69, (s, 1H), 7.63, (s, 1H).

Priprema 9: (5S,7R)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin

[0345]

[0346] Racemski 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin (1.5 g, 4.1 mmol, Priprema 8) je rastvoren u metanolu (35 mL), a mutan rastvor je pažljivo ugrejan koje rezultuje u prozirni rastvor. Ovaj rastvor je tada filtriran kroz porozan medijum Buchner-ovog levka. Proziran filtrat je direktno korišćen za hiralno HPLC-prečišćavanje. 1 mL ovog rastvora je nabijen u kolonu Chiralcel OD (2.1 cm × 25 cm) pa je eluiran sa mobilnom fazom koja je sadržavala izopropil alkohol i metanol (omer: 1:1) kod stope protoka od 15 mL/min. Enantiomeri (R i S) su skupljeni odvojeno. Provedeno je 27 takvih injekcija, a spojene frakcije čistih enantiomera (R i S) su koncentrovane pod smanjenim pritiskom. Jedinjenje iz naslova je izolovano u formi belog praha (0.71 g, 1.95 mmol, >95% ee).

Priprema 10: (5R,7S)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin

[0347]

[0348] Racemski 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin (1.5 g, 4.1 mmol, Priprema 8) je rastvoren u metanolu (35 mL), a mutan rastvor je pažljivo ugrejan koje rezultuje u prozirni rastvor. Ovaj rastvor je tada filtrirana kroz porozni medijum Buchner-ovog levka. Prozirni filtrat je direktno korišćen za hiralno HPLC-prečišćavanje. 1 mL ovog rastvora je nabijen u kolonu Chiralcel OD (2.1 cm × 25 cm) pa je eluiran sa mobilnom fazom koja sadrži izopropil alkohol i metanol (omer: 1:1) kod stope protoka stopa od 15 mL/min. Enantiomeri (R i S) su skupljeni odvojeno. Provedeno je 27 takvih injekcija, a spojene frakcije čistih enantiomera (R i S) su koncentrovane pod smanjenim pritiskom. Jedinjenje iz naslova je izolovano u formi belog praha (0.71 g, 1.95 mmol, >95% ee).

Primer ER-889996:

[0349] U bočicu od 5 mL sa navojnim-čepom su dodani 4-(piperazin-1-karbonil)fenilboronska kiselina, pinakol ester (51.0 mg, 0.161 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) u 1,4-dioksanu (0.075 M, 90 μL), rastvor 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (25.0 mg, 0.069 mmol, Priprema 8) u 1,4-dioksanu (450 μL) i 2 M natrijum karbonat u vodi (70 μL). Reaktorska posuda je očišćena sa azotom pa je zapečaćena. Bočica je potresena i grejana u aluminijumskom bloku na 85° C tokom 40 h. U smešu je dodan 1.0 mL zasićenog vodenog rastvora natrijum bikarbonata, a smeša je tada ekstrahovana sa etil acetatom (2 x 2.0 mL). Spojeni organski slojevi su koncentrovani in vacuo. Preostao talog je prečišćen uz pomoć LC/MS u skladu sa postupkom. Ovo daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (7.8 mg, 24.0%).

[0350] Primer ER-889862 je pripremljen iz 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (40.1 mg, 0.11 mmol, Priprema 8) i komercijalno dostupne izohinolin-5-il boronske kiseline (2.5 ekv.) slično kao i kod primera ER-889996. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC-uslovi III) daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (7.5 mg, 17%).

[0351] Primer ER-890007 je pripremljen iz 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (25.0 mg, 0.069 mmol, Preparat 8) i komercijalno dostupne 8-metilhinolin-5-il boronske kiseline (2.5 ekv.) slično kao i kod primera ER-889996. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC-uslovi III) daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (12.2 mg, 42%).

[0352] Primer ER-892900 je pripremljen iz 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (23.0 mg, 0.063 mmol, Preparat 8) i komercijalno dostupne 1,4-dimetil-1H-indazol-5-il boronske kiseline (2.5 ekv.) slično kao i kod primera ER-889996. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC-uslovi III) daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (7.7 mg, 28%).

[0353] Primer ER-890066 je pripremljen iz 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (25.0 mg, 0.069 mmol, Preparat 8) i komercijalno dostupne h 2-metil-2H-indazol-5-il boronske kiseline (2.5 ekv.) slično kao i kod primera ER-889996. Prečišćavanje uz pomoć LCMS (HPLC-uslovi III) daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (0.2 mg, 1%).

Primer ER-889550

[0354] Zapečaćena tuba je nabijena sa 2-bromo-5-(1-etil-3-metil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidinom (40 mg, 0.11 mmol, Priprema 7), 4-(Netilaminokarbonil)fenilboronskom kiselinom (73.2 mg, 0.38 mmol), kalijum karbonatom (76.8 mg, 0.56 mmol), vodom (0.559 mL), i tetrahidrofuranom (0.838 mL). Reakciona smeša je mešana i ujedno degazirana sa azotom tokom 15 min. Dodan je kompleks [1,1'-bi(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) sa dihlorometanom (1:1) (22.7 mg, 0.03 mmol), a reakciona smeša je zapečaćena i grejana na 95° C tokom 16 h. Sirova reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, a tada je prečišćena direktno uz pomoć fleškolonske hromatografije (Biotage Quad 25; eluent: 100% EtOAc). To daje 4-(5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-etilbenzamid u formi svetlo-žute čvrste materije (41.1 mg, 86.4%).

[0355] Natrijum tetrahidroborat (6.62 mg) je dodan u suspenziju 4-(5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-etilbenzamida (30 mg, 0.07 mmol) u etanolu (1 mL), a smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 3 h. Reakcioni rastvor je koncentrovan u mlazu azota. Tada je veoma polako dodana 1 N HCl do potpune konzumacije borohidrida (∼2 mL) koje rezultuje pojavom smeđeg precipitata. Vodeni rastvor je odstranjen dekantiranjem pa je polako neutralizovan sa zasićenim natrijum bikarbonatom do postizanja pH vrijednosti od 7. Neutralizovani rastvor je tada ekstrahovan sa EtOAc (2 x 5 mL). Organski ekstrakti su spojeni i isprani sa slanicom (2 mL), osušeni preko natrijum sulfata, filtrirani i koncentrovani in vacuo. To daje jedinjenje iz naslova u formi belog praha (18.8 mg, 62.1%).

Primer ER-893888

[0356] Zapečaćena tuba je nabijena sa 2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidinom (30 mg, 0.08 mmol, Priprema 8), 4-(ureido)fenilboronskom kiselinom, pinakol esterom (73.8 mg, 0.28 mmol), kalijum karbonatom (56.9 mg, 0.41 mmol), vodom (0.414 mL), i tetrahidrofuranom (0.621 mL). Reakciona smeša je mešana uz istovremeno degaziranje sa azotom tokom 15 min. Dodan je kompleks [1,1'-bi(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) sa dihlorometanom (1:1) (16.8 mg, 0.02 mmol), a reakciona smeša je zapečaćena i grejana na 95° C tokom 16 h. Sirova reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, a tada je prečišćena direktno uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (Biotage Quad 25; eluent: 10% EtOH u EtOAc). To daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-žutog praha (31.1 mg, 90.0%).

[0357] Primer ER-894595 je pripremljen iz (5S,7R)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (150.0 mg, 0.41 mmol, Priprema 9) i komercijalno dostupnih 4-(ureido)fenilboronska kiselina i pinakol estera (368.8 mg, 1.4 mmol) slično kao i kod primera ER-893888. Prečišćavanje sa fleš-kolonskom hromatografijom (Biotage Quad 25; eluent: 10% EtOH u EtOAc) daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-žutog praha (141.6 mg, 82.0%).

[0358] Primer ER-894596 je pripremljen iz (5R,7S)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin (150.0 mg, 0.41 mmol, Priprema 10) i komercijalno dostupnih 4-(ureido)fenilboronska kiselina i pinakol estera (368.8 mg, 1.4 mmol) slično kao i kod primera ER-893888. Prečišćavanje sa fleš-kolonskom hromatografijom (Biotage Quad 25; eluent: 10% EtOH u EtOAc) daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-žutog praha (144.6 mg, 83.7%).

[0359] Primer ER-893986 je pripremljen iz (5S,7R)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (50.0 mg, 0.14 mmol, Priprema 9) i komercijalno dostupne 1,4-dimetil-1H-indazol-5-boronske kiseline (89.1 mg, 0.47 mmol) slično kao i kod primera ER-893888. Prečišćavanje sa fleš-kolonskom hromatografijom (Biotage Quad 25; eluent: 10% EtOH u EtOAc) daje jedinjenje iz naslova u formi svetložutog praha (42.7 mg, 72.4%).

[0360] Primer ER-893987 je pripremljen iz (5R,7S)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (150.0 mg, 0.41 mmol, Priprema 10) i komercijalno dostupne 1,4-dimetil-1H-indazol-5-boronske kiseline (267.3 mg, 1.41 mmol) slično kao i kod primera ER-893888. Prečišćavanje uz pomoć fleš-kolonske hromatografije (Biotage Quad 25; eluent: 10% EtOH u EtOAc) daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-žutog praha (155.7 mg, 88.0%).

[0361] Primer ER-893990 je pripremljen iz (5S,7R)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (40.0 mg, 0.11 mmol, Priprema 9) i komercijalno dostupnih 2-metilindazol-5-boronska kiselina i pinakol estera (96.8 mg, 0.38 mmol) slično kao i kod primera ER-893888. Prečišćavanje sa fleš-kolonskom hromatografijom (Biotage Quad 25; eluent: 10% EtOH u EtOAc) daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-žutog praha (36.9 mg, 80.9%).

[0362] Primer ER-893991 je pripremljen iz (SR,7S)-2-bromo-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidina (30.0 mg, 0.082 mmol, Priprema 10) i komercijalno dostupnih 2-metilindazol-5-boronska kiselina i pinakol estera (72.6 mg, 0.28 mmol) slično kao i kod primera ER-893888. Prečišćavanje sa fleš-kolonskom hromatografijom (Biotage Quad 25; eluent: 10% EtOH u EtOAc) daje jedinjenje iz naslova u formi svetlo-žutog praha (22.0 mg, 64.3%).

Primeri za sintezu – Deo J

[0364] Suspenzija metil 5-amino-1H-pirazol-3-karboksilata (1.00 g, 7.086 mmol) i 1-(3,4-dimetoksifenil)-4,4,4-trifluorobutan-1,3-diona (2.153 g, 7.794 mmol) u sirćetnoj kiselini (10 ml, 174.682 mmol) je grejana do temperature refluksa (na 100° C) tokom 5 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature, voda je dodana, a precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispran sa vodom i osušen u vakuumu koje daje J1 u formi zelene čvrste materije (2.33 g; prinos: 86%).

[0365] Natrijum borohidrid (0.446 g, 11.802 mmol) je polako dodan u suspenziju metil 5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)pirazolo[1,5-a]pirimidin-2-karboksilata (1.00 g, 2.623 mmol) u etanolu (25 ml, 428.167 mmol) na sobnoj temperaturi. Smeša je grejana do temperature refluksa (80° C) tokom 60 min, a napredovanje reakcije je praćeno uz pomoć UPLC/MS. Smeša je ohlađena do sobne temperature. Višak natrijum borohidrida je razgrađen sa sirćetnom kiselinom (1.501 ml, 26.226 mmol). Reakciona smeša je izlivena u 1.00 M HCl u vodi (52.5 ml, 52.451 mmol) pa je mešana tokom 5 min. Precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispran sa vodom pa je osušen na vazduhu. Materijal je prečišćen uz pomoć flešhromatografije na koloni od silike (25 g) u gradijentu heptan:etil acetat koje daje J2 u formi bele čvrste materije (507 mg; prinos: 48%).

[0366] U suspenziju etil 5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-karboksilata (503 mg, 1.26 mmol) u etanolu (5.0 mL, 85.633 mmol) je dodan 4.00 M natrijum hidroksid u vodi (1.574 mL, 6.298 mmol). Smeša je grejana na 50° C tokom 1 h. Smeša je ohlađena do sobne temperature pa je zakiseljena sa 1.00 M HCl u vodi (12.60 mL, 12.595 mmol), voda je dodana, a precipitat je skupljen uz pomoć filtracije, ispran sa vodom i osušen u vakuumu koje daje J3 u formi bele čvrste materije (422 mg; prinos: 95%).

[0367] Bočica od 5 mL za mikrotalasnu peć je nabijena sa 5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-karboksilnom kiselinom (50 mg, 0.135 mmol), tert-butil piperazin-1-karboksilatom (75 mg, 0.404 mmol), HATU (205 mg, 0.539 mmol), N,N-diizopropiletilaminom (0.059 mL, 0.337 mmol) i DMF (1.0 mL, 12.915 mmol). Bočica je začepljena, a smeša je mešana tokom 6 h na 40° C. Smeša je razređena sa etil acetatom (5 mL), isprana (2x) sa vodom (2 mL), isprana sa 0.1 N vodenom HCl (2 mL), isprana sa zasićenim vodenim natrijum bikarbonatom (2 mL), isprana sa slanicom (2 mL), osušena preko natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana. Jedinjenje je prečišćeno uz pomoć hromatografije (Biotage SP4, kolona: Interchim 25 g, 30 µM) uz eluciju sa 12-100% smešom EtOAc/heptan koje daje intermedijar, tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-karbonil)piperazin-1-karboksilat (38 mg, 0.070 mmol, prinos: 52.3%).

[0368] Intermedijar tert-butil 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-karbonil)piperazin-1-karboksilat (36 mg, 0.067 mmol) je rastvoren u etanolu (0.5 mL, 8.563 mmol) i 4.00 M HCl u dioksanu (0.5 mL, 2.00 mmol), a smeša je mešana na 40° C tokom 1 h. Reakciona smeša je koncentrovana, a produkt je osušen u vakuum-pumpi koje daje ER-896452 u formi HCl soli (31.0 mg, 0.065 mmol, prinos: 98%).

ER-896453

[0369] Primer ER-896453 je pripremljen u dva koraka iz kiseline J3 (50 mg, 0.135 mmol) i komercijalno dostupnog (S)-tert-butil 3-aminopiperidin-1-karboksilata (81 mg, 0.404 mmol) slično kao i kod primera ER-896452 koje daje intermedijar, (3S)-tert-butil 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-karboksamido)piperidin-1-karboksilat (67 mg, 0.121 mmol, prinos: 90%). Ovaj intermedijar (49 mg, 0.089 mmol) je tretiran sa HCl slično kao i kod primera ER-896452 koje daje željeni produkt ER-896453 (42 mg, prinos: 97%).

[0370] Određivanje apsolutne konfiguracije ER-885454 i njegov odnos sa ER-892887

[0371] Apsolutna konfiguracija ER-885454 je određena uz pomoć njegovog konvertovanja u 3-jodo derivata ER-887006 kao šta je prikazano iznad. Struktura ER-887006 je određena uz pomoć difrakcije X-zraka na pojedinačnom kristalu. Rezultati su prikazani na Slici 10. Zbog toga šta ova transformacija ne utiče na hiralne centre molekula, apsolutna konfiguracija ER-885454 je onakva kao šta je prikazano. Štaviše, apsolutna konfiguracija ER-892887 je određena na osnovu njegove korelacije sa jedinjenjem C-6, koje je sa svoje strane bilo korelisano sa ER-885454.

Opšti analitički ogledi i farmakološka strategija.

[0372] Sa ciljem da se identifikuju potentna jedinjenja koja deluju selektivno na TLR7/8, analozi su inicijalno ispitani duž celog panela ljudskih TLR4, TLR7, i TLR9 reporterskih ćelijskih linija (za detalje vidi poglavlje Materijali i postupci). Podgrupa jedinjenja koja su bila potentna i selektivna prema TLR7 je takođe testirana na aktivnost protiv TLR8 (vidi Tabelu 2 ispod) i na potencijal za TLR7/8 uz pomoć primarnog humanog PBMC-ogleda (za detalje vidi poglavlje Materijali i postupci). Određena jedinjenja su prešla u drugu fazi ispitivanja preko kratkotrajnog in vivo (STIV) ogleda sa ciljem da se odredi dozno-zavisna aktivnost i trajanje-delovanja protiv mišjeg TLR7 (za detalje vidi poglavlje Materijali i postupci). Impakti izabranih jedinjenja su tada procenjeni u jednom ili više sledećih mišjih modela za lupus: BXSB-Yaa, NZBxNZW, i Pristan:DBA/1.

[0373] Mnoga jedinjenja, koja su ovde opisana kao posebne izvedbe, su pokazala nanomolarni potencijal protiv obe belančevine, humanog i mišjeg TLR7 i humanog TLR8 kada su ovi receptori, eksprimirani u bilo kojoj ćelijskoj liniji ili u primarnim ćelijama, stimulisani uz pomoć sintetičkih liganada, malih molekula (CL097, R848) ili nukleinskih kiselina (RNA). Obratno, najveći deo jedinjenja, ovde opisanih kao posebne izvedbe, su inaktivna protiv TLR9-puta.

[0374] Sadašnji SOC-lekovi protiv lupusa uključuju lekove protiv malarije poput hlorohina i hidroksihlorohina (HCQ) za koje se zna da inhibiraju TLR7/9 signaliziranje u uslovima in vitro. Ovo može da barem delomično objasni njihovu efikasnost u kontrolisanju izbijanja lupusa. Izvedbe iz ovoga opisa, međutim, nude značajno snažniju inhibiciju. Na primer, jedinjenje ER-892887 (prikazano i opisano iznad) je približno 100-puta potentnije protiv RNA-Ig TLR7/8 stimulusa nego protiv HCQ (ER-892887 IC50= 0.015 µM, HCQ IC50∼1.5 µM). Ovo sugeriše da ER-892887 nudi značajno efektivniju inhibiciju TLR7/8-puta u odnosu na postojeće tretmane lupusa. Ovo je potkrepljeno sa rezultatima koji su prikazani u Tabeli 1 ispod.

TABELA 1. Potencijal i selektivnost jedinjenja ER-892887 upoređeno sa hidroksihlorohinom

(Plaquenil<®>).

TABELA 2. Potencijal izabranih jedinjenja protiv humanog TLR8 u formatu HEK-293 ogleda (za detalje vidi poglavlje Materijali i postupci).

[0375] Kratkotrajni in vivo (STIV) ogled: Sa ciljem da se proceni potencijal nekog jedinjenja protiv mišjeg TLR7 u uslovima in vivo, korišćen je kratkotrajni in vivo (STIV) ogled. Ukratko, miševi su oralno dozirani sa jedinjenjima, a tada su tokom više vremenskih tačaka potkožno injektirani sa agonistom R848 sa ciljem da se stimuliše TLR7. Tada je izmeren IL-6 nivo u plazmi nakon R848-stimulacije uz pomoć ELISA sa ciljem da se proceni potencijal jedinjenja i trajanje-delovanja. Važno, proizvodnja citokina nakon in vitro ili in vivo stimulacije sa R848 je pokazala da je potpuno zavisna o TLR7 kada se koriste TLR7-dificijentni miševi. Prema tome, aktivnost jedinjenja u STIV-ogledu može pouzdano da se pripiše njihovoj modulaciji TLR7-puta. Pojedinačna oralna doza ER-892887 od 300 mg/kg suprimira R848/TLR7/IL-6 put in vivo za 80-90% tokom najmanje 24 h (vidi Sliku 1). Rezime potencijala u STIV-ogledu za panel jedinjenja je prikazan u Tabeli 3 ispod.

[0376] Mišji modeli za lupus. Tri posebna modela za lupus (BXSB-Yaa, NZBxNZW, i Pristan) su izabrana za POC-evaluaciju jedinjenja zbog toga šta (1) sojevi BXSB-Yaa i NZB/W spontano razvijaju bolest preko poligene etiologije, ukazujući na mnoge karakteristike ljudskog lupusa poput DNA- i RNA-povezane autoreaktivnosti, proteinurije, i nefritisa posredovanih preko imuno-kompleksa, i (2) šta su rezultati pozitivne potvrde meta, TLR7 i/ili TLR9, objavljeni za sva tri modela.

[0377] Ključni nalazi za ER-892887 u SLE-modelima su kako sledi (vidi Slike 1-6 i 12-14):

1) ER-892887 značajno smanjuje anti-dsDNA titare u TLR7-pokretanom BXSB-Yaa modelu, koje odgovara trendu smanjivanja proteinurije i potpune prevencije pojave nefritisa faze 3/4.

2) ER-892887 smanjuje anti-dsDNA titare u NZB/W modelu. Niže doze (33-100 mg/kg) ER-892887 omogućavaju bolje preživljenje u ovom modelu, koje odgovara smanjivanju proteinurije i histoloških signala glomerulonfritisa. ER-892887 usporava razvoj proteinurije u NZB/W modelu bolje od dva uobičajeno korišćena leka za tretman ljudskog lupusa, i je efikasan zajedno sa hidroksihlorohinom i prednizolonom.

3) ER-892887 suprimira razna auto-antitela u pristan-modelu, uz naročito robustan impakt na RNA-povezanu reaktivnost poput anti-RiboP titara. Ove promene odgovaraju redukciji genske ekspresije u krvi koja je potaknuta interferonom i rezultata IFN-potpisa uz pomoć ER-892887 u ovom modelu. ER-892887 smanjuje snagu artritisa u pristan-modelu, i značajno suprimira rezultat potpisa interferonskog gena, dok tri uobičajeno korišćena lupus tretmana ne mogu to. ER-892887 takođe bolje suprimira auto-antitela u odnosu na hidroksihlorohin ili prednizolon kod testiranih doza.

[0378] Ključni nalazi za ER-885454 u SLE-modelima su kako sledi (vidi Slike 7-9):

1) ER-885454 značajno smanjuje anti-dsDNA i anti-Sm/nRNP titare u TLR7-pokretanom BXSB-Yaa modelu, koje odgovara značajnom smanjenju proteinurije i potpunoj prevenciji pojave nefritisa faze 3/4.

2) ER-885454 smanjuje anti-dsDNA, proteinuriju, i histološke znakove glomerulonfritisa u NZB/W modelu.

[0379] Rezime nalaza: Ovi podaci pokazuju efekt moduliranja kojeg opisana jedinjenja uspostavljaju na procese uključene u važnim aspektima ljudskog lupusa. Imuno-kompleksi koji sadrže nukleinske kiseline mogu da pokrenu proizvodnju interferona tipa 1 u dendrocitima, a "interferonski potpis", koji ukazuje na prisutnost interferona i naknadnu ekspresiju gena koji su regulisani interferonom, je povezan sa snagom bolesti. ER-892887 blokira citokinske odgovore na RNA-Ig komplekse in vitro, i suprimira pozitivnu regulaciju interferonom-pokrenutih gena u pristan-modelu. Oba, ER-892887 i ER-885454, su limitirala proizvodnju nekoliko specifičnosti povezanih sa auto-antitelom, i suprimirala bolest bubrega koje se manifestuje preko proteinurije i histoloških promena. Tretman sa ER-892887 značajno pojačava preživljenje u studijama dugotrajnog doziranja u spontanom NZB/W-modelu.

Rezultati pokazuju da ova jedinjenja imaju potencijal da kontrolišu simptome lupusa i napredovanje bolesti kod ljudskih pacijenata.

FARMAKOLOŠKI MATERIJALI & POSTUPCI:

[0380] In vitro farmakologija: ćelije (ATCC) su konstruirane tako da stabilno eksprimiraju E-selektin (ELAM-1) luciferazni reporter, koji može da se inducira uz pomoć transkripcijskog faktora NF-kapaB, koji je izveden iz plazmida pGL3 (Promega) koji sadrži bazne parove -2241 bp do -254 bp iz promotora ljudskog gena za E-selektin (Pristupni br. NM_000450). Ove ćelije su naknadno manipulirane da stabilno i pojedinačno eksprimiraju cDNA ORF-ova pune dužine ljudskih TLR4, TLR7 ili TLR9. cDNA za ljudski TLR4 (Pristupni br. NM_138554) je klonirana u ekspresioni vektor pcDNA 3.0 (Invitrogen). TLR4-transfektovane ćelije su takođe manipulirane da eksprimiraju humani MD-2 ko-receptor [MD-2 cDNA (Pristupni br. NM_015364) je klonirana u vektor pEF-BOS] pa su obogaćene sa 10 nM rastvorljivim CD14 (R&D Systems) u medijumu sa ciljem optimizovanja mogućnost odgovora na LPS. cDNA ljudskog TLR9 (Pristupni br. NM_017442) je klonirana u vektor pBluescript II KS (Agilent). cDNA ljudskog TLR7 (Pristupni br. NM_016562) je dobivena iz OriGene. HEK-293 ćelije koje stabilno eksprimiraju ljudski TLR8 (Pristupni br. NM_138636) ili mišji TLR7 (Pristupni br. NM_133211) su nabavljene kod InvivoGen, a tada su stabilno transfektovane sa plazmidom koji sadrži pNiFty2(NF-kapaB)-luciferazni reporter (InvivoGen). Svaki tip ćelija je uzgajan u Dulbecco-ovom modifikovanom Eagle-medijumu (DMEM) koji je sadržavao 10% fetalni kravlji serum (FBS) u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml na pločicama sa 384-komorica, a ćelije su inkubirane tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2. Tada su dodana antagonistička jedinjenja u raznim koncentracijama. Ćelije su tada inkubirane tokom dodatnih 30 min pre dodavanja odgovarajućeg TLR-agonista kako sledi (navedene su finalne koncentracije): lipopolisaharid (LPS; Sigma) u koncentraciji od 10 ng/ml za TLR4, CL097 (InvivoGen) u koncentraciji od 3 µg/ml za ljudski TLR7 i TLR8 i mišji TLR7, i CpG-2006-2A [sekvenca: TCGTCGTTAAGTCGTTAAGTCGTT (SEKV. ID BR: 1) sa fosforotioatnom osi, sintetizovan u Sigma-Aldrich] u koncentraciji od 0.6 µM za TLR9. Ćelije su tada inkubirane preko noći, a NF-kapaB-zavisno aktivisanje luciferaznogreportera je kvantifikovano uz pomoć merenja luminiscencije uz pomoć reagenasa SteadyGlo<®>(Promega) ili Steadilite™ (Perkin Elmer) prema instrukcijama proizvođača.

[0381] Ogled na bazi humanih PBMC-ćelija. Mononuklarane ćelije iz ljudske periferne krvi (PBMC) su izolovane iz krvi sveže heparinizovanog (10 USP jedinica/ml, Hospira, Lakeforest, IL) zdravog donora primenom gradijenta gustine (Histopaque<®>1077, Sigma, Inc., St. Louis, MO). Ukratko, 25 ml krv je razređeno sa 15 ml PBS (bez Ca<2+>, Mg<2+>) u konusnoj tubi od 50 ml, a 12 ml Histopaque je dodan uz pomoć spinalne igle. Tube su centrifugovane tokom 45 min na 1200 rpm (350 x g), a PBMC su skupljene iz trombocitno-leukocitnog međusloja. Ćelije su tada dva puta isprane u PBS, a crvene krvne ćelije su lizirane suspendovanjem u 5 ml rastvora amonijum hlorida (1x Red Blood Cell Lysis Buffer, eBioscience) tokom 5 min na sobnoj temperaturi. Nakon finalnog ispiranja u PBS, PBMC su resuspendovane u finalnoj koncentraciji od 2x10<6>/ml u medijumu RPMI-1640 sa L-glutaminom (Invitrogen) koji je bio obogaćen sa 25 mM HEPES (Mediatech, Inc, Manassas VA), 10% fetalnim kravljim serumom (HyClon, Logan, UT), i dodatkom penicilinstreptomicilin-glutamin (Mediatech), pa su uzgajane u volumenu 100 μl/komorici (2x10<5>ćelija/komorica) na pločicama za kulturu tkiva sa 96-komorica (Falcon).

[0382] Solubilizovana antagonistička jedinjenja serijski razređena u 100% DMSO su dodana u triplikatu u ćelije sa ciljem postizanja finalne koncentracije od 0.1% DMSO (v/v). Solubilizovani hidroksihlorohin (Acros Organics), serijski razređen u PBS je dodan u triplikatu u ćelije. PBMC su inkubirane zajedno sa antagonističkim jedinjenjima ili sa HCQ tokom 30 min na 37° C, uz 5% CO2pre dodavanja raznih TLR-agonističkih reagenasa u 100 μl kompletnog medijuma po komorici kako sledi (navedene finalne koncentracije): R848 (Resiquimod; GLSynthesis, Worcester, MA) u koncentraciji od 1 μM za TLR7 i TLR8, Pam3CSK4 (InvivoGen) u koncentraciji od 50 ng/ml za TLR1/2, LPS (Sigma) u koncentraciji od 10 ng/ml za TLR4, i CpG-2216 (InvivoGen) u koncentraciji od 5 μg/ml za TLR9. Sa ciljem da se pripremi agonist TLR7/8 koji oponaša RNA-koje sadrže auto-antitelo imunokomplekse kod pacijenata sa lupusom, sintetizovana je 26-merna RNA sa sekvencom koja je izvedena iz ljudske U1 snRNA stem loop IV [(sekvenca: GGGGGACUGCGU-UCGCGCUUUCCC (SEKV. ID BR: 2) sa fosforotioatnom okosnicom] (Dharmacon, Inc., Lafayette, CO), za koju se unapred zna da je potentan agonist TLR7 i TLR8. Ovaj RNA molekul je razređen do 2.5 µM u RPMI bez seruma, pa je dodano mišje anti-humano jednolančano monoklonsko antitelo protiv DNA (MAB3034, Millipore, Inc., Billerica, MA), koje takođe unakrsno-reaguje sa RNA, pri čemu je pomenuto razređeno 1:25 ili 1 μg/ml. Nastao "RNA-Ig" stimulus je inkubiran na sobnoj temperaturi tokom 15-30 min pre dodavanja ćelijama. PBMC su inkubirane sa raznim agonistima TLR tokom 20 h na 37° C, uz 5% CO2. Supernatanti ćelijskih kultura su skupljeni, a nivoi raznih ljudskih citokina su procenjeni kao šta je opisano u standardnoj ELISA-proceduri u skladu sa instrukcijama proizvođača (BD Biosciences, Inc., San Diego, CA). Tabela 4 prikazuje rezultate ispitivanja inhibicije IL-6 iz ljudskih PBMC uz pomoć izabranih jedinjenja.

TABELA 4. Inhibicija IL-6 iz ljudskih PBMC (Ligand SL4-Ig)

[0383] Ogled na bazi mišjih ćelija slezine. Slezine su uzete od ženki mišjeg soja BALB/c (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) koje su bile eutanazirane uz pomoć CO2. Suspenzija pojedinačnih ćelija je dobivena propuštanjem tkiva slezina kroz najlonsko ćelijsko sito (poroznost: 40 µm). Ćelije su isprane dva puta sa 50 ml PBS (Mediatech, Inc., Manassas, VA), a crvene krvne ćelije su lizirane u 5 ml RBC pufera za lizu (eBioscience, Inc., San Diego, CA) tokom 5 min na sobnoj temperaturi. Ćelije su isprane još dva puta u PBS, a na kraju su resuspendovane u obogaćenom RPMI-1640 u koncentraciji 2.5x10<6>ćelija/ml. Ćelije su uzgajane u volumenu od 100 µl/komorici (2.5x10<5>ćelija/komorica) u pločicama za kulturu tkiva sa 96-komorica (Falcon). Serijski razređena jedinjenja solubilizovana u 100% DMSO su dodana u triplikatu u ćelije sa ciljem postizanja finalne koncentracije od 0.1% DMSO. Ćelije su inkubirane sa jedinjenjem tokom 30 min na 37° C, uz 5% CO2, pre dodavanja 740 nM R848 (100 µl/komorica; Resiquimod; GLSynthesis, Worcester, MA) u kompletan medijum za finalnu koncentraciju od 370 nM R848. Ćelije su inkubirane tokom 20 h na 37° C, uz 5% CO2. Supernatanti kultura su skupljeni, a nivoi IL-6 su procenjeni uz pomoć standardne ELISA-procedure u skladu sa instrukcijama proizvođača (BD Biosciences, Inc., San Diego, CA). Rezultati ispitivanja za izabrana jedinjenja su prikazani u Tabeli 5.

TABELA 5. Inhibicija IL-6 u ćelijama mišje slezine (Ligand R848)

[0384] In vivo farmakologija:

Kratkotrajni in vivo (STIV) ogled. Šest do osam sedmica stare ženke mišjeg soja BALB/c (Jackson Labs, Bar Harbor, ME) su dozirane (uz pomoć oralne gavaže sa volumenom od 200 μl) sa antagonističkim jedinjenjima koja su bila formulisana u 0.5% vodenoj metil-celulozi (Sigma, St. Louis, MO). Nakon toga, u raznim vremenskim tačkama, miševi su potkožno injektirani (s.c.; u ukupnom volumenu od 100 μl) sa 15 μg R848 (Resiquimod; GLSynthesis, Worcester, MA) sa ciljem stimulisanja TLR7. Krvna plazma je skupljena preko kardijalne punkture, a nivoi IL-6 1.5 h nakon TLR7-stimulacije su procenjeni uz pomoć standardne ELISA-procedure u skladu sa instrukcijama proizvođača (R&D Systems).

[0385] Mišji sojevi-modeli za lupus. Mužjaci mišjeg soja BXSB-Yaa i ženke mišjeg soja NZBWF1/J su nabavljeni kod Jackson Labs (Bar Harbor, ME), pri čemu oba soja mogu spontano da razviju lupus. Ženke mišjeg soja DBA/1 su nabavljene kod Harlan Laboratories (Indianapolis, IN), a u navedenoj starosnoj dobi su primile intraperitonealnu injekciju sa 0.5 ml pristana (2,6,10,14-tetrametilpentadekan; Sigma, St. Louis, MO) kako bi se hemijski indukovao lupus ili 0.5 ml PBS sa ciljem da se proizvedu kontrolni miševi koji su zdravi i spadaju u istu starosnu grupu. Uz pomoć oralnog administriranja, miševi su dnevno dozirani sa jedinjenjem ili sa lekom u 0.5% metilcelulozi, koristeći navedeni vremenski period.

[0386] Procena titara auto-antitela uz pomoć ELISA. Titari anti-dsDNA, -Sm/nRNP, -RiboP, i histona su procenjeni primenom standardnog ELISA-pristupa. Ukratko, EIA/RIA ELISA pločice sa 96-komorica (Corning) su prekrivene sa 100 μl razređenog antigena u PBS tokom 90 min na sobnoj temperaturi kako sledi (navedene su finalne koncentracije): 10 U/ml kompleksa Sm/nRNP (Imunovision), 10 μg/ml dsDNA iz telećeg timusa (Sigma), 5 U/ml RiboP (Imunovision), i 5 μg/ml histona (Imunovision). Pločice su isprane sa PBS/0.05% Tween20 (pufer za ispiranje) pa su preko noći blokirane sa PBS/1% BSA (pufer za blokiranje) na 4° C. Pločice su isprane, primerci mišje plazme razređeni sa puferom za blokiranje (raspon od 1:25 – 1:10,000 u zavisnosti o modelu i antigenu) su dodani u komorice u volumenu od 100 μl po komorici, a pločice su inkubirane tokom 90 min na sobnoj temperaturi. Pločice su tada isprane, u svaku komoricu je dodano 100 μl anti-mišjeg-IgG-HRPO (Southern Biotech; razređen 1:50,000 u PBS/1%BSA/0.05%Tween) i sve je inkubirano tokom 90 min na sobnoj temperaturi. Pločice su isprane, pa je u komorice dodano 100 μl smeše (1:1) sa komponentama supstrata (OptEIA TMB substrate kit; BD Biosciences). Pločice su inkubirane na sobnoj temperaturi, a nakon razvijanja boje reakcija je zaustavljena uz pomoć dodavanja 100 μl 0.18 M rastvora sumporne kiseline. Pločice su očitane uz pomoć spektrofotometrije kod 450 nm.

[0387] Procena proteinurije. Urina je ručno skupljena od svakog pojedinačnog miša ili tako da je 1-2 miša čuvano u metaboličkom kavezu tokom 18 h, a tada je određen urinarni omer albumin-kreatinin (Urinary Albumin Creatinine Ratio, UACR) za svaku životinju kao indirektna mera rada bubrega (UACR je izračunat kao omer mg albumina / g kreatinina u dL mokraće). Nivoi albumina u primercima mokraće su određeni uz pomoć standardnog sendvič ELISA-protokola uz korišćenje kompleta sa anti-mišjim antitelom protiv albumina (Bethyl Labs), koji obuhvata antitelo za prekrivanje i sekundarno antitelo koje sadrži privesak sa IIRP-konjugatom za detektovanje. Nivoi kreatinina su određeni uz pomoć komercijalnih kompleta hemikalija za kreatinin (Cayman).

[0388] Histološka procena nefritisa. Bubrezi su skupljeni od pojedinačnih miševa, fiksirani u 10% formalinu tokom 24 h, uklopljeni u parafinu, a H&E obojeni preseci su proizvedeni sa ciljem histopatološke procene primenom slepog testa. Karakteristike (mere) rezultata za nefritis su kako sledi: Klasa 0 – u granici normale; Klasa 1 – stanjivanje kapilarnog zida slično gumi; Klasa 2 – hipercelularnost, segmentiranje, formiranje kreste; Klasa 3 – vidi Klasu 2, povećana snaga i opseg (% zahvaćenih glomerula) glomerularnih lezija; Klasa 4 – skleroza; snažna glomerularna bolest (ne-funkcionalan organ).

[0389] Statistika: Razlike titrara UACR, citokina ili antitela između lekom-tretiranih i prenosnikom-tretiranih grupa su izračunate primenom vrednosti dobivenih kod svih pojedinačnih životinja iz grupe. Testirane su primenom testa one-way ANOVA uz Dunn-ov post-test kako bi se uporedila svaka eksperimentalna grupa sa grupom koja je primila samo prenosnik. P-vrednosti su navedene u slikama, ili prema konvenciji pojedinačna zvezda ukazuje na p<0.05, dve zvezde p<0.01, a tri zvezde p<0.001. Setovi kriva mortaliteta su upoređeni primenom Mantel-Cox testa, a gde je pronađen značajan uticaj, parovi kriva su testirani sa ciljem otkrivanja razlika primenom Wilcoxon-ove analize.

[0390] Procena ekspresije gena za interferon u celokupnoj krvi. Ekspresija IFN-regulisanih gena u celokupnoj krvi je izmerena uz pomoć qPCR. Ukratko, miševi su eutanazirani, krv je skupljena preko vena cava, a 100 μl je sačuvano u tubama koje sadrže RNAlater (Ambion, Austin TX). Totalna RNA je izolovana primenom kompleta hemikalija Mouse RiboPure Blood RNA Isolation Kit (Ambion). Koncentracije RNA su određene primenom spektrofotometra NanoDrop ND-1000 (Thermo Scientific, Waltham MA). Prvi lanac cDNA je sintetizovan iz 100 μg ukupne RNA primenom kompleta hemikalija High Capacity RNA-to-cDNA Master Mix (Applied Biosystems, Foster City CA). Nakon reverzne transkripcije, cDNA je razređena sa vodom bez nukleaze pa je pomešana sa smešom Gene Expression Master Mix (Applied Biosystems). Smeša je tada nanesena u standardni TaqMan® Low Density Array (TLDA) koji je proizveden u Applied Biosystems, a qPCR je proveden na aparatu ABI 7900HT Fast Real-time PCR System (Applied Biosystems). Sirovi podaci su skupljeni primenom RQ Manager 1.2.1 (Applied Biosystems) i analizirani uz pomoć programa GenData Analyst 2.2 (GeneDala).

[0391] TLDA-panel sadrži 45 ciljanih gena izabranih iz Tabele 6 ispod, i 3 housekeepinggena za normalizovanje. Housekeeping-gen Hprt1 je izabran radi normalizovanja na bazi koeficijenta-varijacije. Relativni kvantiteti su određeni za ciljane gene pa su korišćeni da se izračuna količina promene za svakog obolelog miša u odnosu na ne-obolelu kontrolnu grupu koja je primila intraperitonealnu injekciju samo sa PBS. Standardni Studentov t-test je proveden sa ciljem da se odredi koji se ciljani geni značajno razlikuju u odnosu na ne-obolelu grupu (PBS-tretiran) i na obolelu grupu koja je tretirana sa prenosnikom (tretiran sa pristanom), pri čemu bi pomenuti geni trebali da predstavljaju set gena koji su regulisani bolešću. "IFN-rezultat" je naknadno izračunat za svakog miša kao medijana količine promene svih gena koji su regulisani bolešću i na koje ukazuje t-test.

TABELA 6.

Usp18 Mm00449455_m1 Ubikvitin-specifična pep Xaf1 Mm01248390_m1 XIAP-povezan faktor 1

Claims (48)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje, naznačeno time, što ima formulu (I)

   ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili neki njegov stereoizomer ili smeša stereoizomera, pri čemu R1je opciono supstituisani piperidinil, opciono supstituisani piridil, opciono supstituisani pirolil, opciono supstituisani piroldinil, 1,4-dimetiltiazolil, 2-etil-4-metiltiazolil, 2-izopropiltiazol-5-il, tiazolil, 3-etiltiazol-5-il, 1-metilsulfonilpiperidin-4-il, ili R1je -C(O)Z, gde Z je piperazinil, piperidinil propil, (S)-2-(3-etilpiperazin-1-il), opciono supstituisani pirolopirolil, piperidin-3-ilamino, ili, R1je

   gde R13je H, metilpirazolil, metilimidazolil, benzil, 3-hidroksibutil, 3-(dimetilamino)-2,2-dimetilpropil, etilamid, metilpiridil, metilsulfonil, (1-metilimidazol-2-il)metil, (1,5-dimetilimidazol-4-il)metil, (1-metilpiro1-2-il)metil, ili gde R13je C(O)W, pri čemu W je -N(CH3)2, piperidinil, piperazinil, ili morfolinil, ili, R1je

   gde R14je -C(O)CH3, H, ili (1-metilpirol-2-il)metil, ili, R1je

   ili R1je

   gde A, B, i D mogu svi da budu atomi ugljenika, ili gde dva od A, B, i D su atomi ugljenika, a drugi je azot, ili gde jedan od A, B, i D je ugljenik, a preostala dva su atomi azota; a kada A je azot R4je odsutan, kada B je azot R2je odsutan, a kada D je azot R3je odsutan; i pri čemu R2je H, -CH3, ili F, ili, pri čemu R3i atomi na pozicijama a i b formiraju opciono supstituisani piridin ili pirazol; i pri čemu

   ili, pri čemu R4i atomi na pozicijama b i c formiraju opciono supstituisani benzen, opciono supstituisani imidazol, opciono supstituisani pirazol, opciono supstituisani pirazolidin, opciono supstituisani imidazolidin, opciono supstituisani izotiazol,

   ili, pri čemu R2i ostali atomi na pozicijama a i b formiraju opciono supstituisani piridin ili opciono supstituisani pirazol; i pri čemu R4je F, -CN, -OCH3, -OEt, H, Cl, Br, -NH-C(O)-CH-(CH3)2, -N(CH3)2, -CH3, -CH2OH,

   opciono supstituisani piperazinil, 4-hidroksipiperizin-1-il, opciono supstituisani piperidinil koji nije spojen na fenilnu grupa preko atoma azota, ili, pri čemu R3i atomi na pozicijama b i c formiraju opciono supstituisani pirazolni prsten ili

   ili, pri čemu R5i atomi na pozicijama c i d formiraju opciono supstituisani pirazolni prsten ili opciono supstituisani pirolni prsten, ili, R4je -(q)-C(O)X, gde q je veza, je -NH-, ili je -CH2-, i gde X je -NR11R12, gde R11i R12su oba H, oba -CH2CH3, ili oba -CH3, ili gde jedan od R11i R12je H, a drugi je 1,1-dimetiletil, ciklobutil, ciklopropil, ravnolančani, razgranati ili ciklički zasićeni ugljovodonik koji sadrži između jednog i četiri atoma ugljenika, metil alkohol, etil alkohol, propil alkohol, ciklobutilmetil; 2,3-dihidroksipropil, benzil, opciono supstituisani azetidinil, pirolidinil, piperidinil, metilazetidinil, opciono supstituisani pirolil, -CH2-NH-CH3, pirazolil, piperazinil, alkohol, -OCH3, ili

   ili gde X je opciono supstituisani pirolidinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani piperidinil koji nije spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani piperazinil spojen preko atoma na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani azetidinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4ili opciono supstituisani morfolinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4,

   ili

   i pri čemu R5je H, F, Cl, -CH3, -OCH3, pirolil, -CH2OH, -NH2, -OH,

   ili, pri čemu R4i atomi na poziciji c i d formiraju opciono supstituisani benzen, opciono supstituisani pirazol, ili opciono supstituisani pirol, ili, pri čemu R6i atomi na pozicijama d i e formiraju opciono supstituisani piridin, ili R5je C(O)Y, gde Y je -NH2, -N(CH3)2, opciono supstituisani piperazinil, opciono supstituisani piperidinil,

   i pri čemu R6je H, F, -CH3, -CF3, ili, pri čemu R5i ostali atomi na pozicijama c i d formiraju opciono supstituisani benzen ili opciono supstituisani pirazol; i pri čemu R7je -CF3ili -CHF2; i pri čemu R8je

   i pri čemu R9je Br, Cl, F, I, ili H; pod sledećim uslovima: kada R4je F: R2nije -CH3ili F; R3nije -CH3, -CN, F, Cl, ili -OCH3; R5nije -CH3, F, Cl, ili -OCH3; a R6nije -CH3ili F; kada R4je Cl: R2nije F; R3nije F ili -CN; R5nije F, -CN, ili -C(O)N(CH3)2; R6nije -CF3ili F; D nije azot; a R5je ili -C(O)NH2ili jedan od R2, R3, R5, i R6je -CH3; kada R4je -CH3: R3nije F; R5nije F; a R5i R6ne formiraju pirimidin zajedno sa atomima na pozicijama d i e; kada R4je -OCH3: R2nije F; R3nije Cl ili -OCH3, R5nije Cl ili -OCH3; a R6nije F ili -CF3; kada R4je -CN: R2nije F; R3nije Cl, F, ili -OCH3, R5nije Cl, F, ili -OCH3; a R6nije F; kada R4je -OCH2CH3: R3nije Cl ili F; R5nije Cl ili F; a R6nije -CF3; kada R4je

   R3nije H ili F; a R5nije H ili F; kada R4je

   barem jedna od R2, R3, R5, i R6nije H; kada R4je

   R3nije F; a R5nije F; kada R2je F: R3nije -OCH3ili F; R5nije -CN; a barem jedan od R3, R4, R5, i R6nije H; kada R2je Cl: R3nije F; kada R2je -CH3: R3nije Cl; barem jedan od R3, R4, R5, i R6nije -CH3; a R4i R5ne formiraju pirazolil sa atomima na pozicijama c i d; kada R3je -OCH3: R2nije F; a R6nije F; kada R3je F: R2nije -OCH3; a X nije

   kada R3je Cl: R5nije Cl; R11nije benzil; a R12nije benzil; kada R5je Cl, R6nije -CH3; R11nije benzil; a R12nije benzil; kada R5je F ili -OCH3: R6nije F; kada R6je F: barem jedan od R2, R3, R4, i R5nije H; kada R3i R5su H: R11nije ciklopropil; a R12nije ciklopropil; kada R9je Cl, R1nije amidna grupa; kada B je azot, a A i D su atomi ugljenika: R4ne mora da bude -CN ili

   kada R7je -CHF2, a R4je

   tada R4ne poseduje apsolutnu stereohemiju

   i pri čemu, kada R8je

   tada vrede sledeći uslovi: kada R4je F: barem jedan od R2, R3, R5, i R6nije H; R3nije C(O)N(CH3)2; a R5nije C(O)N(CH3)2; kada R4je Cl: barem jedan od R2, R3, R5, i R6nije H; kada R3je F: R4nije C(O)NHCH2CH2CH2CH3, C(O)N(CH3)2, C(O)NHCH2CH2CH3, ili C(O)NHC(CH3)3; R4nije ili R1nije

   R5nije

   R3nije

   kada R2je F: R5nije -C(O)NH2; kada R2je -CH3, R4i R5ne formiraju pirazol sa atomima na pozicijama c i d; i kada B je azot, R3i R4ne formiraju opciono supstituisani imidazol sa atomima na pozicijama b i c; i pri čemu, kada R8je

   tada vrede sledeći uslovi: R4nije - ili kada R4je C(O)NHCH3, barem jedan od R2, R3, R5, i R6nije H; kada R4je -OCH3: R3nije F ili -CH3; a R5nije F ili -CH3; kada R4je

   R3nije Cl; a R5nije Cl; kada R4je -C(O)NHCH(CH3)2ili -C(O)N(CH2CH3)2: barem jedan od R3i R5nije H; R5nije -C(O)NH2; a R6nije -CF3, pri čemu termin „opciono supstituisani“ označava da struktura subjekta može da uključuje, ali ne mora, jedan ili više supstituenata nezavisno izabranih iz ravnolančanih, razgranatih ili cikličkih zasićenih ugljovodonika koji sadrže između jedan i četiri atoma ugljenika, metoksi-, -OH, -NH2, -CH2-NH-CH3, -OCH2CH2CH3ili OCH(CH3)2, a ako je jedan opciono supstituisani ostatak ciklički tada opciona supstitucija može da podrazumeva postojanje metilnog mosta između dva atoma u prstenu.
2. 2. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što poseduje apsolutnu stereohemiju koja je prikazana u Formuli (II):

   pod uslovom da, kada R8je

   tada vrede sledeći uslovi: kada R3je F, R4nije

   kada R5je F, R4nije

   kada R5je -CH3, R3i R4, sa atomima na pozicijama b i c, ne formiraju

   kada R3je -CH3, R4i R5sa atomima na pozicijama c i d ne formiraju
3. 3. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što poseduje apsolutnu stereohemiju koja je prikazana u Formuli (III):

   pod uslovom da kada R8je

   R4nije

   i pod uslovom da kada R8je

   tada vrede sledeći uslovi: kada R2je -CH3: R3i R4ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama b i c; kada R2je -CH3: R4i R5ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama c i d; kada R2je F: R4nije C(O)NH2; R3i R4, sa atomima na pozicijama b i c, ne formiraju

   kada R3je Cl: R4nije -C(O)NHCH3ili -C(O)NH2; R3nije pirazolil; kada R3je F: R4nije

   ili -C(O)NH2; kada R3je -CH3: R4i R5ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama c i d; R4nije -C(O)NHCH2CH2CH2OH; R4nije -CN ili

   kada R5je -CH3, R3i R4ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na b i c; kada R5je Cl: R4nije -C(O)NH2; kada R5je F: R4nije C(O)NH2; R5nije pirazolil; kada R6je -CH3: R4i R5ne formiraju opciono supstituisani pirazolil sa atomima na pozicijama c i d; i kada B je azot, R4nije -C(O)NHCH3.
4. 4. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što R1je piperidinil ili piridil; R7je -CF3;R8je

   a R9je F, Cl, Br, ili I.
5. 5. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što R1je -C(O)Z, pri čemu Z je piperazinil, pirolopirolil, ili piperidinil propil; R7je -CF3;R8je

   a R9je H.
6. 6. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što R1je

   R7je -CF3, R8je

   a R9je H.
7. 7. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što R1je

   R2je H, -CH3, ili, pri čemu R3, formira

   R3je H ili, pri čemu R2, formira

   ili, pri čemu R4, formira

   a R9je H.
8. 8. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što R1je

   R2je H, F, ili -CH3, R3je H ili F; R4je -(q)-C(O)X, pri čemu q je veza ili -CH2-, a X je piperazinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, pirolidinil spojen preko atoma azot na karbonilnu grupu iz R4, pirolopirolil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, azetidinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, ili

   ili X je -NR11R12, pri čemu jedan od R11i R12je H, a drugi je opciono supstituisani pirolidinil, opciono supstituisani piperidinil, opciono supstituisani piperazinil, ili opciono supstituisani azetidinil; R5je H ili C(O)Y, gde Y je, -NH(CH3)2, opciono supstituisani piperazinil, opciono supstituisani piperidinil,

   R6je H, R7je -CHF2, R8je

   a R9je H.
9. 9. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što R1je

   gde A, B, i D mogu da budu atomi ugljenika, ili gde dva od A, B, i D su atomi ugljenika, a drugi je atom azota, ili gde jedan od A, B, i D je ugljenik, a preostala dva su atomi azota; i kada A je azot R4je odsutan, kada B je azot R2je odsutan, i kada D je azot R3je odsutan; R2je H; R3je H ili -CH3; R4je -C(O)X, gde X je opciono supstituisani piperazinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, ili X je NR11R12, gde R11i R12su H, ili gde jedan od R11ili R12je H, a drugi je piperidinil, pirolidinil, ili -CH3; R5je -OMe, H, ili Cl; R6je H, R7je -CF3, R8je

   a R9je H.
10. 10. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što R1je

    gde A, B, i D su atomi ugljenika; R2je H, -CH3, ili F, ili, pri čemu R3i atomi na pozicijama a i b formiraju opciono supstituisani pirazol;

    ili, pri čemu R4i atomi na pozicijama b i c formiraju opciono supstituisani pirazol ili

    ili, pri čemu R2i atomi na pozicijama a i b formiraju opciono supstituisani pirazol; R4je -CN, -CH2OH, H,

    opciono supstituisani piperazinil, ili, pri čemu R3i atomi na pozicijama b i c formiraju opciono supstituisani pirazol ili

    ili, pri čemu R5i atomi na pozicijama c i d formiraju opciono supstituisani pirazol, ili R4je -(q)-C(O)X, gde q je veza, i gde X je -NR11R12, pri čemu R11i R12su oba H, ili gde jedan od R11i R12je H, a drugi je 1,1-dimetiletil, ciklobutil, ciklopropil, ravnolančani, razgranati ili ciklički zasićeni ugljovodonik koji sadrži između jednog i četiri atoma ugljenika, C1-3alkohol, ciklobutilmetil; 2,3-dihidroksipropil, benzil, azetidinil, pirolidinil, piperidinil, metilazetidinil, pirazolil, piperazinil, alkohol, OMe, ili

    ili gde X je opciono supstituisani piperidinil koji nije spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani piperazinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, opciono supstituisani pirolidinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4, ili opciono supstituisani azetidinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R4,

    ili

    i R5je H, ili, pri čemu R4i atomi na pozicijama c i d formiraju opciono supstituisani benzen, opciono supstituisani pirazol, ili, pri čemu R6i atomi na pozicijama d i e formiraju opciono supstituisani piridin, ili R5je C(O)Y, gde Y je -NH2, -NH(CH3)2, opciono supstituisani piperazinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R5, opciono supstituisani piperidinil spojen preko atoma azota na karbonilnu grupu iz R5,

    i R6je H, F, -CH3, ili, pri čemu R5i atomi na pozicijama c i d formiraju opciono supstituisani pirazol; R7je -CF3; R8je

    a R9je H.
11. 11. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je pomenuto jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata: (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; (4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; (3-aminopirolidin-1-il)(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(3-hidroksipirolidin-1-il)metanon; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 4-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)piperazin-1-ijum hlorid; (3-aminoazetidin-1-il)(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 1-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)pirolidin-3-aminijum hlorid; 3-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamido)azetidin-1-ijum hlorid; (S)-3-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamido)pirolidin-1-ijum hlorid; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; (1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; N-(2,3-dihidroksipropil)-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid; 1-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)azetidin-3-aminijum hlorid; (R)-3-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamido)pirolidin-1-ijum hlorid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((R)-2-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; (3-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; (3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1 -il)metanon hidrohlorid; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((S)-2-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-(3-hidroksipropil)benzamid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-(pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; N-(azetidin-3-il)-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid hidrohlorid; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(2,6-diazaspiro[3.4]oktan-2-il)metanon 2,2,2-trifluoroacetat; N-(6-aminospiro[3.3]heptan-2-il)-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid 2,2,2-trifluoroacetat; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(3-hidroksiazetidin-1-il)metanon; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(2,7-diazaspiro[4.4]nonan-2-il)metanon 2,2,2-trifluoroacetat; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(3-((metilamino)metil)azetidin-1-il)metanon 2,2,2-trifluoroacetat; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((2R,5R)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; (3-((5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; ((3R,5S)-3-amino-5-metilpiperidin-1-il)(3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzonitril; 3-(3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-5-metil-1,2,4-oksadiazol; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,7-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 2-(3-(1H-pirazol-1-il)fenil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,6-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-on; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzamid; 2-hloro-4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-metilbenzamid; 5-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-on; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)izohinolin; 2-hloro-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid; N-benzil-2-hloro-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid; 2-hloro-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-izopropilbenzamid; 2-hloro-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-metilbenzamid; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-metil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 2-hloro-4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid; 4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzamid; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1H-indazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,6-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4-metil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; N-ciklopropil-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzamid; N-(tert-butil)-4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzamid; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(5-metil-1H-indazol-6-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanol; 3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzonitril; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorobenzamid; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1H-indol-6-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; N-(3-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)acetamid; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4-((4-metilpiperazin-1-il)metil)fenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin dihidrohlorid; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(3-(piperazin-1-ilmetil)fenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin dihidrohlorid; 4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-(piperidin-4-il)benzamid dihidrohlorid; (4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorofenil)(piperazin-1-il)metanon dihidrohlorid; (3-((5S,7R)-7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon; i 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4-(piperidin-4-il)fenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin.
12. 12. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je pomenuto jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata: (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-metoksipiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(piridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-metoksipiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-metilpicolinamid; (5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)piridin-2-il)(piperazin-1-il)metanon dihidrohlorid; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-(piperidin-4-il)picolinamid dihidrohlorid; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-pirolidin-3-il)picolinamid hidrohlorid; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-pirolidin-3-il)picolinamid hidrohlorid; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)picolinamid dihidrohlorid; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-piperidin-3-il)picolinamid dihidrohlorid; 2-(2-hloropiridin-4-il)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)piridin-2-il)(piperazin-1-il)metanon; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)picolinamid dihidrohlorid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-(piperidin-4-il)picolinamid dihidrohlorid; (5-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)piridin-2-il)(piperazin-1-il)metanon dihidrohlorid; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)piridin-2-il)(piperazin-1-il)metanon dihidrohlorid; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; i (5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-(piperazin-l-il)piridin-3-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin.
13. 13. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje je (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(piperidin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin.
14. 14. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje je (4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon.
15. 15. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je pomenuto jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata: (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; (lS,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-(piperidin-4-il)benzamid hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((S)-2-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; ((S)-3-aminopirolidin-1-il)(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorofenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; (4-((5S,7R)-7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-1-(piperazin-1-il)etanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilfenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-(piperidin-4-il)benzamid hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-((R)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorofenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; N-(azetidin-3-il)-4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzamid 2,2,2-trifluoroacetat; (1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorofenil)metanon hidrohlorid; ((R)-3-aminopirolidin-1-il)(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; (4-((5R,7S)-7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metil-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metil-N-((R)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilfenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metil-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metil-N-((R)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; N-(azetidin-3-il)-4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilbenzamid 2,2,2-trifluoroacetat; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-N-((S)-piperidin-3-il)acetamid hidrohlorid; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-N-((R)-piperidin-3-il)acetamid hidrohlorid; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-1-((S)-2-metilpiperazin-1-il)etanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metil-N-(piperidin-4-il)benzamid hidrohlorid; (1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilfenil)metanon hidrohlorid; (3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilfenil)(piperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 1-((1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il)-2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)etanon hidrohlorid; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-1-(heksabykapirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)etanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-((R)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorofenil)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilfenil)((S)-2-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-1-((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)etanon hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorofenil)((S)-2-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; (3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 1-(3-aminoazetidin-1-il)-2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)etanon hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilfenil)((R)-2-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; N-(azetidin-3-il)-3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid 2,2,2-trifluoroacetat; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-1-((R)-2-metilpiperazin-1-il)etanon hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorofenil)(piperazin-1-il)metanon hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorofenil)(piperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluoro-N-((R)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; N-(azetidin-3-il)-2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)acetamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluoro-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorofenil)(2,6-diazaspiro[3.3]heptan-2-il)metanon 2,2,2-trifluoroacetat; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-N-(piperidin-4-il)acetamid hidrohlorid; N-(azetidin-3-ilmetil)-3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid 2,2,2-trifluoroacetat; i 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluoro-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid.
16. 16. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je pomenuto jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata: 1-(4-(5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)urea; 5-(5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)izohinolin; 5-(5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-8-metilhinolin; 1-(4-((5S,7R)-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)urea; (5S,7R)-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-2-(2-metil-2H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5R,7S)-2-(1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; i 2-(1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)-5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin.
17. 17. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je pomenuto jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata: 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(piperidin-4-iletinil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2,3,6,7-tetrahidro-1H-azepin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 2-(2,5-dihidro-1H-pirol-3-il)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)cikloheks-3-enamin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(3-azaspiro[5.5]undek-8-en-9-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4-(piperidin-4-il)fenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2,3,6,7-tetrahidro-1H-azepin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)cikloheks-3-enamin; 4-((5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)cikloheks-3-enamin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-izopropil-1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin hidrohlorid; (5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(3-metil-1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-fenil-1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin hidrohlorid; (5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2,3,6,7-tetrahidro-1H-azepin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; i 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-metil-1,2,3,6-tetrahidroiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin hidrohlorid.
18. 18. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je pomenuto jedinjenje izabrano iz grupe koja obuhvata: (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(6-(piperazin-1-il)piridin-3-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)cikloheks-3-enamin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)picolinamid dihidrohlorid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-(piperidin-4-il)picolinamid dihidrohlorid; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1-(piperidin-4-il)-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(3-azaspiro[5.5]undek-8-en-9-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(4-(piperidin-4-il)fenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-(piperazin-1-il)pirimidin-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 3-(3-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-5-metil-1,2,4-oksadiazol; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,7-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 2-(3-(1H-pirazol-1-il)fenil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; (4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; (3-aminopirolidin-1-il)(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,6-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(3-hidroksipirolidin-1-il)metanon; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 5-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-on; 5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 4-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)piperazin-1-ijum hlorid; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(1,4-dimetil-1H-indazol-5-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamid; 4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluorobenzamid; 2-hloro-4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-metilbenzamid; 5-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-1H-benzo[d]imidazol-2(3H)-on; (3-aminoazetidin-1-il)(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 1-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzoil)pirolidin-3-aminijum hlorid; 3-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamido)azetidin-1-ijum hlorid; (S)-3-(4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)benzamido)pirolidin-1-ijum hlorid; (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; (1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il(4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(2-metoksipiridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; (1S,4S)-2,5-diazabiciklo[2.2.1]heptan-2-il(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-(piperidin-4-il)benzamid hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)((S)-2-metilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; ((S)-3-aminopirolidin-1-il)(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)metanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-2-fluoro-N-((S)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-fluorofenil)((2R,5S)-2,5-dimetilpiperazin-1-il)metanon hidrohlorid; (4-((5S,7R)-7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon; 2-(4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)-1-(piperazin-1-il)etanon hidrohlorid; 4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((S)-piperidin-3-il)benzamid hidrohlorid; (4-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-3-metilfenil)(heksahidroirolo[3,4-c]pirol-2(1H)-il)metanon hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-(piperidin-4-il)benzamid hidrohlorid; 3-(7-(difluorometil)-5-(3,4-dimetoksifenil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)-N-((R)-pirolidin-3-il)benzamid hidrohlorid; i 1-(4-(5-(1,3-dimetil-1H-pirazol-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)urea.
19. 19. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje je (5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-2-(piridin-4-il)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin.
20. 20. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je namenjeno za tretman sistemskog lupus erythematosus ili lupusa.
21. 21. Farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačena time, što je namenjena za tretman sistemskog lupus erythematosus ili lupusa.
22. 22. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je namenjeno za upotrebu u terapiji koja antagonizuje TLR7.
23. 23. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 1, naznačeno time, što je namenjeno za upotrebu u terapiji koja antagonizuje TLR8.
24. 24. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što sadrži barem jedno jedinjenje ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so iz zahteva 1 i barem jedan farmaceutski prihvatljivi nosilac.
25. 25. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje je (4-((5S,7R)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so.
26. 26. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje je (4-((5R,7S)-5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so.
27. 27. Racemska smeša jedinjenja iz zahteva 1, naznačena time, što pomenuto jedinjenje je (4-(5-(3,4-dimetoksifenil)-7-(trifluorometil)-4,5,6,7-tetrahidropirazolo[1,5-a]pirimidin-2-il)fenil)(piperazin-1-il)metanon ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so.
28. 28. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 25-27, naznačeno time, što je namenjeno za upotrebu u terapiji koja antagonizuje TLR7.
29. 29. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 25-27, naznačeno time, što je namenjena za upotrebu u tretmanu sistemskog lupus erythematosus ili lupusa.
30. 30. Farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 25-27, naznačena time, što je namenjena za upotrebu u tretmanu sistemskog lupus erythematosus ili lupusa.
31. 31. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 25-27, naznačeno time, što je namenjeno za upotrebu u terapiji koja antagonizuje TLR8.
32. 32. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što sadrži barem jedno jedinjenje ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so iz zahteva 25-27 i barem jedan farmaceutski prihvatljivi nosilac.
33. 33. Jedinjenje iz zahteva 1, naznačeno time, što ima formulu (IV)

    ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili neki njegov stereoizomer ili smeša stereoizomera, pri čemu: R7aje H ili F; i pri čemu Prsten A je:

    pri čemu Y1i Y2su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH2- i -CH2CH2-, i pri čemu svaki od Y1i Y2je opciono supstituisan sa C1-3alkilom;

    pri čemu X1, X2, i X3su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH- i N;

    pri čemu X1, X2, i X3su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH- i N;

    pri čemu X je N ili -CH- su opciono supstituisani sa -CH3, F, ili Cl, i pri čemu R9je -C(O)Z, pri čemu Z je 2,3-dihidroksipropilamin; pet- do sedam-člani ciklički diamin koji je opciono premošćen ili opciono supstituisan na atomu ugljenika sa nižim alkilom koji je ravnolančani, razgranati ili ciklički zasićeni ugljovodonik koji sadrži između jednog i četiri atoma ugljenika; sedam- do deset-člani biciklodiamin; sedam- do jedanaesto-člani spirodiamin; -NH supstituisani sa četiri- do sedam-članog cikličkog amina koji je opciono supstituisan sa -NH2; -OH; -CH2NHR, pri čemu R je H ili niži alkil koji je ravnolančani, razgranati ili ciklički zasićeni ugljovodonik koji sadrži između jednog i četiri atoma ugljenika; -NH supstituisani sa sedam- do jedanaest-članim spiroalkanom koji je opciono supstituisan sa -NH2; ili R9je CH3NHC(O)-, a atom ugljenika u arilnom prstenu na kojeg je R9spojen je supstituisan sa jednim od -CH3, F, ili Cl; R9je (CH3)2CHNHC(O)-, a atom ugljenika u arilnom prstenu na kojeg je R9spojen je supstituisan sa jednim od -CH3, F, ili Cl; ili R9je (CH3)3CNHC(O)-, a atom ugljenika u arilnom prstenu na kojeg je R9spojen je supstituisan sa jednim od -CH3, F, ili Cl; ili R9je

    pri čemu piperazin je opciono premošćen ili supstituisan sa nižim alkilom koji je ravnolančani, razgranati ili ciklički zasićeni ugljovodonik koji sadrži između jednog ili četiri atoma ugljenika, a R10je H ili -CH3; ili R9je

    pri čemu n je 1-3, a pomenuti ciklički diamin je opciono premošćen ili supstituisan sa nižim alkilom koji je ravnolančani, razgranati ili ciklički zasićeni ugljovodonik koji sadrži između jednog i četiri atoma ugljenika; ili R9je

    pri čemu n je 1-4; ili R9je -NHC(O)NH2, -CH2C(O)NH- pri čemu atom azota je supstituisan sa četiri- do sedam-članog cikličkog amina; -CH2-C(O)- pri čemu pomenuti karbonil je supstituisan sa sedam- do deset-članim biciklodiaminom; i četiri- do sedam-članim cikličkim aminom koji je supstituisan sa -CH2C(O)NH2; ili

    ili

    pri čemu X je N ili -CH- gde C je opciono supstituisan sa -CH3, F, ili Cl, i pri čemu R10je -C(O)NH- gde azot je supstituisan sa četiri- do sedam-članim cikličkim aminom; -C(O)- supstituisan sa sedam- do deset-članim biciklodiaminom; -C(O)-supstituisan sa sedam- do jedanaesto-članim spirodiaminom; pirazol; [1,2,4]oksadiazol opciono supstituisan sa -CH3na atomu ugljenika iz oksadiazola; -NHC(O)CH3; -CH2-supstituisan sa piperazinom; -CH2- supstituisan sa piperazinom uključujući metilni supstituent; -C(O)- supstituisan sa pet- do sedam-članim cikličkim diaminom; -C(O)NHCH2- gde -CH2- je supstituisan sa azetidinom; ili -C(O)- supstituisan sa petdo sedam-članim cikličkim aminom pri čemu pomenuti amin uključuje -NH2-supstituent; ili cijanofenil; izohinolin; cikloheksen supstituisan sa -NH2na poziciji 4'; 1,4-dimetilindazol-5-il; 1,6-dimetilindazol-5-il; cikloheksen supstituisan sa spiropiperidinom na poziciji 4'; 1-piperidinopirazol; ili o-metoksipiridin.
34. 34. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 33, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so poseduju IC50koji je manji ili jednak 100 nM protiv ljudskih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji.
35. 35. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 34, naznačeno time, što je IC50protiv ljudskih TLR7 receptor eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji izmeren uz pomoć (1) uzgajanja ćelija HEK-293 ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju TLR7 u Dulbecco-modifikovanom Eagle-medijumu koji sadrži 10% fetalni kravlji serum u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml na pločicama sa 384-komorica uz inkubaciju tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2; (2) dodavanja pomenutog jedinjenja ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli i inkubacije ćelija tokom 30 min; (3) dodavanja CL097 (InvivoGen) u koncentraciji od 3 µg/ml i inkubacije ćelija tokom približno 20 h; i (4) kvantifikovanja NF-kapaB-zavisnog aktivisanja reportera uz pomoć merenja luminiscencije.
36. 36. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 33, naznačeno time, što Prsten A je:

    pri čemu X1, X2, i X3su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH- i N;

    pri čemu X4je -CH- ili N; i pri čemu Z je piperazin, opciono premošćen ili supstituisan na atomu ugljenika uz pomoć -CH3; heksahidroirolo[3,4]pirol; pet- do sedam-člani ciklički diamin; ili -NH- supstituisani sa četiri- do sedam-članim cikličkim aminom;

    pri čemu X5je -CH- ili N; i pri čemu R je pirazol; [1,2,4]oksadiazol opciono supstituisan sa -CH3na atomu ugljenika iz oksadiazola; ili -C(O)NH- supstituisan na svojem azotu sa četiri- do sedam-članim cikličkim aminom;

    1,4-dimetilindazol-5-il; 1,6-dimetilindazol-5-il; 1-piperidinopirazol; cikloheksen supstituisan sa -NH2na poziciji 4'; cikloheksen supstituisan sa spiropiperidinom na poziciji 4'; ili 2-metoksipiridin-4-il.
37. 37. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 36, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje ili neka njegova farmaceutski efektivna so poseduju IC50koji je manji ili jednak sa 100 nM protiv humanih TLR7 receptora.
38. 38. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 36, naznačena time, što pomenuto jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so poseduju IC50koji je manji ili jednak sa 20 nM protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji.
39. 39. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 37 ili zahteva 38, naznačeno time, što je pomenuti IC50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji izmeren uz pomoć (1) uzgajanja ćelija HEK-293 ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju TLR7 u Dulbecco-modifikovanom Eagle-medijumu koji sadrži 10% fetalni kravlji serum u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml na pločicama sa 384-komorica i inkubacije tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2; (2) dodavanja pomenutog jedinjenja ili farmaceutski prihvatljive soli i inkubacije ćelija tokom 30 min; (3) dodavanja CL097 (InvivoGen) u koncentraciji od 3 µg/ml i inkubacije ćelija tokom približno 20 h; i (4) kvantifikovanja NF-kapaB-zavisnog aktivisanja reportera uz pomoć merenja luminiscencije.
40. 40. Jedinjenje iz zahteva 33, naznačeno time, što poseduje apsolutnu stereohemiju koja je prikazana u formuli (V):

    ili neke njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu: R7aje H ili F; pri čemu Prsten A je:

    gde X1, X2, i X3su nezavisno izabrani iz grupe koja obuhvata -CH- i N;

    gde X4je -CH- ili N; i pri čemu Z je piperazin, opciono premošćen ili supstituisan na atomu ugljenika uz pomoć -CH3; heksahidroirolo[3,4]pirol; pet- do sedam-člani ciklički diamin; ili -NH- supstituisan sa četiri- do sedam-članim cikličkim aminom;

    gde X5je -CH- ili N; i pri čemu R je pirazol; [1,2,4]oksadiazol opciono supstituisan sa -CH3na atomu ugljenika iz oksadiazola; ili -C(O)NH- supstituisan na svojem atomu azota sa četiri- do sedam-članim cikličkim aminom; 1,4-dimetilindazol-5-il; 1,6-dimetilindazol-5-il;

    1-piperidinopirazol; cikloheksen supstituisan sa -NH2na poziciji 4'; cikloheksen supstituisan sa spiropiperidinom na poziciji 4'; ili 2-metoksipiridin-4-il.
41. 41. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski efektivna so iz zahteva 40, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so poseduju IC50koji je manji ili jednak sa 100 nM protiv humanih TLR7 receptora u HEK-293 ćelijskoj liniji.
42. 42. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 40, naznačeno time, što pomenuto jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so poseduju IC50koji je manju ili jednak sa 20 nM protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji.
43. 43. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz zahteva 41 ili zahteva 42, naznačena time, što je pomenuti IC50protiv humanih TLR7 receptora eksprimiranih u HEK-293 ćelijskoj liniji izmeren uz pomoć (1) uzgajanja ćelija HEK-293 ćelijske linije koje stabilno eksprimiraju TLR7 u Dulbecco-modifikovanom Eagle-medijumu koji sadrži 10% fetalni kravlji serum u koncentraciji od 2.22x10<5>ćelija/ml na pločicama sa 384-komorica i inkubacije tokom 2 dana na 37° C, uz 5% CO2; (2) dodavanja pomenutog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i inkubacije ćelija tokom 30 min; (3) dodavanja CL097 (InvivoGen) u koncentraciji od 3 µg/ml i inkubacije ćelija tokom približno 20 h; i (4) kvantifikovanja NF-kapaB-zavisnog aktivisanja reportera uz pomoć merenja luminiscencije.
44. 44. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kojeg od zahteva od 33-43, naznačeno time, što je namenjeno za upotrebu u tretmanu sistemskog lupus erythematosus ili lupusa.
45. 45. Farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kojeg od zahteva od 33-43, naznačena time, što je namenjena za upotrebu u tretmanu sistemskog lupus erythematosus ili lupusa.
46. 46. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kojeg od zahteva od 33-34, naznačeno time, što je namenjeno za upotrebu u terapiji koja antagonizuje TLR7.
47. 47. Jedinjenje ili neka njegova farmaceutski prihvatljiva so iz bilo kojeg od zahteva od 33-43, naznačeno time, što je namenjeno za upotrebu u terapiji koja antagonizuje TLR8.
48. 48. Farmaceutska kompozicija, naznačena time, što obuhvata barem jedno jedinjenje ili neku njegovu farmaceutski prihvatljivu so iz bilo kojeg od zahteva od 33-43 i barem jednog farmaceutski prihvatljivog nosioca.