RS58361B1

RS58361B1 - Piridini, pirimidini i pirazini, kao inhibitori btk i njihova upotreba

Info

Publication number: RS58361B1
Application number: RS20190061A
Authority: RS
Inventors: Lesley Liu-Bujalski; Ngan Nguyen; Hui Qiu; Reinaldo Jones; Igor Mochalkin; richard d Caldwell
Original assignee: Merck Patent Gmbh
Priority date: 2013-07-31
Filing date: 2014-07-30
Publication date: 2019-03-29
Also published as: HRP20190054T1; JP6612751B2; MX367085B; HUE042111T2; RU2016106760A; SG11201600159TA; AU2014296261B2; EP3049417A1; US20170226113A1; SG10201900025UA; PT3049417T; WO2015017502A1; US20160159804A1; ES2706150T3; IL243844B; BR112016001600A2; IL243844A0; NZ715838A; MX2016001146A; BR112016001600A8

Description

PIRIDINI, PIRIMIDINI, I PIRAZINI, KAO INHIBITORI BTK

I NJIHOVA UPOTREBA

P<OLJE TEHNIKE>

[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na jedinjenja piridina, pirimidine i pirazina koji su korisni kao inhibitori Brutonove Tirozin Kinaze (BTK). Ovaj pronalazak daje i farmaceutski prihvatljive sastave koji uključuju jedinjenja sadašnjeg pronalaska i metode za upotrebu pomenutih sastava u terapiji različitih poremećaja.

STANJE TEHNIKE

[0002] Protein kinaze predstavljaju jednu od najvećih porodica humanih enzima i regulišu mnoge različite signalne procese tako što dodaju fosfatne grupe na proteine (T. Hunter, Ćelija 1987 50:823-829). Specifično, tirozin kinaze fosforilišu proteine na fenolnom delu tirozinskih ostataka. Porodica tirozin kinaze uključuje članove koji kontrolišu rast ćelija, njihovu migraciju, i diferencijaciju. Abnormalna aktivnost kinaze implicirana je u različitim bolestima kod ljudi, uključujući maligne (kancere), autoimune i inflamatorne bolesti. Budući da su protein kinaze među ključnim regulatorima ćelijske signalizacije, oni obezbeđuju metu (target) koja će da modulira ćeljsku funkciju sa malim molekularnim inhibitorima kinaze i tako čine dobre mete za lek. Uz terapiju procesa bolesti koji su posredovani kinazom, selektivni i efikasni inhibitori aktivnosti kinaze su korisni i za ispitivanje signalnih procesa u ćeliji, i identifikaciju drugih ćelijskih meta za koje postoji terapijski interes.

[0003] Postoje dobri dokazi da B-ćelije igraju ključnu ulogu u patogenezi autoimunih i/ili inflamatornih bolesti. Lekovi na bazi proteina koji vrše depleciju B ćelija kao što je Rituxan delotvorni su proiv autoantitelom pokretanih inflamatornih bolesti poput reumatoidnog artritisa (Rastetter et al. Annu Rev Med 2004 55:477). Prema tome, inhibitori protein kinaza koji igraju ulogu u aktivaciji B ćelija treba da budu korisni terapijski preparati za B-ćelijski posredovane bolesti i patologije, kao što je produkcija autoantitela.

[0004] Signalizacija preko B-ćelijskih receptora (BCR) kontroliše čitav spektar B-ćelijskih odgovora uključujući proliferaciju i diferencijaciju u zrele ćelije koje proizvode antitelo. BCR je ključna regulatorna tačka za B-ćelijsku aktivnost, a aberantna signalizacija može da izazove deregulisanu proliferaciju B-ćelija i formiranje patogennih autoantitela koja dovode do brojnih autoimunih i/ili inflamatornih bolesti. Brutonova Tirozin Kinaza (BTK) je ne-BCR povezana kinaza koja je proksimalna u odnosu na membranu i neposredno nishodno od BCR. Pokazano je da nedostatak BTK blokira signalizaciju BCR i na taj način bi inhibicija BTK mogla da bude koristan terapijski pristup da se blokiraju procesi bolesti koji se odvijaju posredstvom B-ćelija. Isto tako, pokazano je da BTK igraju ulogu u apoptozi (Islam and Smith Imunol. Rev. 2000 178:49,) i tako bi inhibitori BTK bili korisni u lečenju nekih B-ćelijskih limfoma i leukemija (Feldhahn et al. J. Exp. Med.2005 201:1837).

[0005] BTK je član porodice Tec tirozin kinaza, i pokazano je da je kritični regulator ranog razvoja B-ćelija i aktivacije zrelih B-ćelija i njihovog preživljavanja (Khan et al. Imunity 1995 3:283; Ellmeier et al. J. Exp. Med. 2000 192:1611). Mutacije BTK kod ljudi dovode do stanja X-povezane gamaglobulinemije (XLA) (prikazano u Rosen et al. New Eng. J. Med. 1995333:431 i Lindvall et al. Imunol. Rev. 2005 203:200). Ovi pacijenti su imunološki kompromitovani, i pokazuju oslabljeno sazrevanje B-ćelija, smanjene nivoe imunoglobulina i perifernih B-ćelija, oslabljeni imuni odgovor nezavisan od T-ćelija kao i oslabljenu mobilizaciju kalcijuma po stimulaciji BCR.

[0006] Dokaz uloge BTK u autoimunim i inflamatornim bolestima daje i model miša sa BTK-deficijencijom. U pretkliničkim modelima mišjeg sistemskog lupus eritematozusa (SLE), miš sa BTK-deficijencijom pokazuje izrazito ublažavanje progresije bolesti. Uz to, BTK-deficijentni miševi su rezistentni na kolagenom izazvani artritis (Jansson i Holmdahl Clin. Exp. Imunol. 1993 94:459). Jedan selektivni inhibitor BTK je pokazao dozno zavisnu efiukasnost na mišjem modelu artritisa (Z. Pan et al., Chem. Med Chem.2007 2:58-61).

[0007] BTK eksprimiraju i druge ćelije, a ne samo B-ćelije koje mogu da budu uključene u procese bolesti. BTK je ključna komponenta Fc-gama signalizacije u mijeloidnim ćelijama. Na primer, BTK eksprimiraju mastocite pa BTK-deficijentne mast ćelije (mastociti) izvedene iz koštane srži pokazuju oslabljenu degranulaciju izazvanu antigenima (Iwaki et al. J. Biol. Chem. 2005280:40261). Ovo pokazuje da bi BTK mogla da bude korisna za lečenje patoloških odgovora mastocita kao što su alergija i astma. Isto tako, i monociti pacijenata XLA, kod kojih je BTK aktivnost odsutna, pokazuju smanjenu podukciju TNF alfa po stimulaciji (Horwood et al. J Exp Med 197:1603, 2003). Prema tome, inflamacija posredovana preko TNF alfa mogla bi da bude modulisana malim molekulima inhibitorima BTK.

K<RATKI PRIKAZ PRONALASKA>

[0008] Sada je utvrđeno da su jedinjenja ovog pronalaska, i njegovi farmaceutski prihvatljivi sastavi efikasni kao inhibitori BTK. Takva jedinjenja imaju opštu formulu I:

I

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da svaki od X, X<1>, X<2>, Y, L, i R<1>, bude ono kako je definisano i opisano u ovom tekstu.

[0009] Jedinjenja sadašnjeg pronalaska, i njegovi farmaceutski prihvatljivi sastavi su korisni za lečenje različitih bolesti, poremećaja ili stanja povezanih sa BTK. Takve bolesti, poremećaji ili stanja uključuju one opisane u ovom tekstu.

DETALJNI OPISI NEKIH OD OBLIKA

1. Opšti opis jedinjenja pronalaska

[0010] U nekim aspektima, sadašnji pronalazak obezbeđuje inhibitore BTK. U nekim oblicima, takva jedinjenja uključuju ona čije formule su ovde opisane, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da je svaka promenljiva onakva kako je ovde definisana i opisana.

2. Jedinjenja i definicije

[0011] Jedinjenja ovog pronalaska uključuju ona koja su u opštim crtama opisana gore, i dalje ilustrovana po klasama, pod-klasama, i vrstama koje se ovde otkrivaju. Kako se ovde koriste, važiće sledeće definicije, izuzev ako drugačije nije posebno naglašeno. Za svrhe ovog pronalaska, hemijski elementi se identifikuju u skladu sa Periodnim sistemom elemenata, verzija CAS, Handbook of Chemistry and Physics, 75<th>Ed. Uz to, opšti principi organske hemije opisani su u knjigama “Organic Chemistry”, Thomas Sorrell, University Science Books, Sausalito: 1999, i “March’s Advanced Organic Chemistry”, 5<th>Ed., Ed.: Smith, M.B. and March, J., John Wiley & Sons, New York: 2001, koji ovim pominjanjem postaju integralni deo samog teksta.

[0012] Izraz “alifatski” ili “alifatska grupa”, kako se koristi ovde, označava jedan pravi lanac (t.j., nerazgranat) ili razgranat, supstituisani ili nesupstituisani ugljovodonični lanac koji je potpuno zasićen ili koji sadrži jednu ili više jedinica nezasićenosti, ili jedan monociklični ugljovodonik ili biciklični ugljovodonik koji je potpuno zasićen ili koji sadrži sadrži jednu ili više jedinica nezasićenosti, ali koji nije aromatičan (ovde se naziva i “karbociklični” “cikloalifatski” ili “cikloalkilni”), koji ima samo jednu tačku spajanja za ostatak molekula. Ako nije drugačije naglašeno, alifatske grupe sadrže 1-6 alifatskih atoma ugljenika. U nekim oblicima, alifatske grupe sadrže 1-5 alifatskih atoma ugljenika. U drugim oblicima, alifatske grupe sadrže 1-4 alifatskih atoma ugljenika. U dodatnim drugim oblicima, alifatske grupe sadrže 1-3 alifatskih atoma ugljenika, a u nekim, drugim oblicima, alifatske grupe sadrže 1-2 alifatskih atoma ugljenika. U nekim oblicima, “cikloalifatski” (ili “karbociklični” ili “cikloalkil”) odnosi se na jedan monociklični C3-C6ugljovodonik koji je potpuno zasićen ili koji sadrži jednu ili više jedinica nezasićenosti, ali koji nije aromatičan, koji ima samo jednu tačku spajanja za ostatak molekula. Egzemplarne alifatske grupe su linearne ili razgranate, supstituisani ili nesupstituisani C1-C8alkil, C2-C8alkenil, C2-C8alkinil grupe i njihovi hibridi kao što su (cikloalkil)alkil, (cikloalkenil)alkil ili (cikloalkil)alkenil.

[0013] Izraz “niži alkil” odnosi se na C1-4pravu ili razgranatu alkilnu grupu. Egzemplarne niže alkilne grupe su metil, etil, propil, isopropil, butil, isobutil, i terc-butil.

[0014] Izraz “niži haloalkil” odnosi se na a C1-4pravu ili razgranatu alkilnu grupu koja je supstituisana jednim ili više halogenih atoma.

[0015] Izraz “heteroatom” označava jedan ili više od sledećeg kiseonik, sumpor, azot, ili fosfor (uključujući, svaku oksidizovanu formu azota, sumpora, ili fosfora; kvaternizovanu formu bilo kog osnovnog azota ili; azot koji se može supstituisati u heterocikličnom prstenu, na primer N (kao u 3,4-dihidro-2H-pirolil), NH (kao u pirolidinilu) ili NR<+>(kao u N-supstituisanom pirolidinilu)).

[0016] Izraz “nezasićeni”, kako se koristi ovde, znači da taj deo ima jednu ili više jedinica nezasićenosti.

[0017] Kako se koristi ovde, izraz “bivalentni C1-8(ili C1-6) zasićeni ili nezasićeni, prav ili razgranat, ugljovodonični lanac”, odnosi se na bivalentne alkilenske, alkenilenske, i alkinilenske lance koji su pravi ili razgranati kako je ovde definisano.

[0018] Izraz “alkilen” odnosi se na bivalentnu alkilnu grupu. “Alkilenski lanac” je jedna polimetilenska grupa, t.j., –(CH2)n–, naznačeno time da n bude pozitivni broj, po mogućstvu od 1 do 6, od 1 do 4, od 1 do 3, od 1 do 2, ili od 2 do 3. Supstituisani alkilenski lanac je jedna polimetilenska grupa u kojoj jedan ili više metilenskih atoma vodonika biva zamenjeno supstituentom. Odgovarajući supstituenti uključuju one opisane dole za supstituisanu alifatsku grupu.

[0019] Izraz “alkenilen” odnosi se na bivalentnu alkenilsku grupu. Supstituisani alkenilenski lanac je polimetilenska grupa koja sadrži najmanje jednu dvostruku vezu u kojoj su jedan ili više atoma vodonika zamenjeni supstituentom. Odgovarajući supstituenti uključuju one dole opisane za supstituisanu alifatsku grupu.

[0020] Izraz “halogen” označava F, Cl, Br, ili I.

[0021] Izraz “aril” kada se koristi sam ili kao deo većeg dela kao u “aralkil”, “aralkoksi”, ili “ariloksialkil”, odnosi se na monociklične i biciklične prstenaste sisteme koje imaju ukupno pet do 14 članova u prstenu, naznačeno time da najmanje jedan prsten u sistemu bude aromatični i naznačeno time da svaki prsten u sistemu ima tri do sedam članova prstena. Izraz “aril” koristi se u istom značenju kao i izraz “arilni prsten”. U nekim oblicima sadašnjeg pronalaska, “aril” se odnosi na aromatični prstenasti sistem. Egzemplarne arilne grupe su fenil, bifenil, naftil, antracil i slične, koje opciono uključuju jedan ili više supstituenata. Takođe uključuje se u okvire izraza “aril”, u značenju u kome se koristi ovde, i grupa u kojoj je jedan aromatični prsten fuzijom spojen za jedan ili više nearomatičnih prstenova, kao što su danil, ftalimidil, naftimidil, fenantridinil, ili tetrahidronaftil, i slično.

[0022] Izrazi “heteroaril” i “heteroar–”, kada se koriste sami ili kao deo većeg dela, npr., “heteroaralkil”, ili “heteroaralkoksi”, odnose se na grupe koje imaju 5 do 10 atoma u prstenu, po mogućstvu 5, 6, ili 9 atoma u prstenu; imaju 6, 10, ili 14 π elektrona zajedničkih u cikličnom nizu; i koji imaju, uz to i atome ugljenika, od jednog do pet heteroatoma. Izraz “heteroatom” odnosi se na azot, kiseonik ili sumpor, i uključuje bilo koju oksidizovanu formu azota ili sumpora, i bilo koju kvaternizovnu formu osnovnog azota. Heteroarilne grupe uključuju, bez ograničenja, tienil, furanil, pirolil, imidazolil, pirazolil, triazolil, tetrazolil, oksazolil, isoksazolil, oksadiazolil, tijazolil, isotijazolil, tijadiazolil, piridil, piridazinil, pirimidinil, pirazinil, indolizinil, purinil, naftiridinil, i pteridinil. Izrazi “heteroaril” i “heteroar–”, kako se koriste ovde, takođe uključuju grupe u kojima heteroaromatični prsten biva spojen za jedan ili više arilnih, cikloalifatskih, ili heterociklilskih prstenova, gde je radikal ili tačka spajanja na heteroaromatičnom prstenu. Primeri kojima se ovo ne ograničava uključuju indolil, isoindolil, benzotienil, benzofuranil, dibenzofuranil, indazolil, benzimidazolil, benztijazolil, kvinolil, isokvinolil, cinolinil, ftalazinil, kvinazolinil, kvinoksalinil, 4H– kvinolizinil, karbazolil, akridinil, fenazinil, fenotijazinil, fenoksazinil, tetrahidrokvinolinil, tetrahidroisokvinolinil, i pirido[2,3–b]–1,4–oksazin–3(4H)–on. Jedna heteroarilna grupa opciono može da bude mono– ili biciklična. Izraz “heteroaril” u istom značenju kao i izrazi “heteroarilni prsten”, “heteroarilna grupa”, ili “heteroaromatik”, a svi ovi izrazi uključuju prstenove koji su opciono supstituisani. Izraz “heteroaralkil” odnosi se na jednu alkilnu grupu supstituisanu heteroarilom, naznačeno time da su alkilni i heteroarilni delovi nezavisno opciono supstituisani.

[0023] Kako se koriste ovde, izrazi “heterociklični”, “heterociklil”, “heterociklični radikal”, i “heterociklični prsten” se koriste u istom značenju i odnose se na stabilni 5– do 7–člani monociklični ili 7–10–člani biciklični heterociklični deo koji je ili zasićen ili delimično nezasićen, i koji uz to ima i atome ugljenika, jedan ili više, po mogućstvu jedan do četiri, heteroatoma, kako je gore definisano. Kada se koristi u vezi sa atomom u heterocikličnom prstenu, izraz “azot” uključuje i supstituisani azot. Kao primer, u jednom zasićenom ili delimično nezasićenom prstenu koji ima 0–3 heteroatoma odabranih između kiseonika, sumpora ili azota, azot je N (kao u 3,4–dihidro–2H–pirolil), NH (kao u pirolidinil), ili<+>NR (kao u N– supstituisani pirolidinil).

[0024] Jedan heterociklični prsten može da se zakači za svoju pridruženu grupu na svaki heteroatom ili atom ugljenika što daje stabilnu strukturu, i svaki od atoma u prstenu može opciono da bude supstituisan. Primeri takvih zasićenih ili delimično nezasićenih heterocikličnih radikala uključuju, bez ograničenja, tetrahidrofuranil, tetrahidrotiofenil pirolidinil, piperidinil, pirolinil, tetrahidrokvinolinil, tetrahidroisokvinolinil, dekahidrokvinolinil, oksazolidinil, piperazinil, dioksanil, dioksolanil, diazepinil, oksazepinil, tijazepinil, morpholinil, i kvinuklidinil. Izrazi “heterociklični”, “heterociklil”, “heterociklilni prsten”, “heterociklična grupa”, “heterociklični deo”, i “heterociklični radikal”, ovde se koriste u istom značenju, i takođe uključuju grupe u kojima je jedan heterociklilni prsten spojen fuzijom za jedan ili više ili arila, heteroarila, ili cikloalifatskih prstenova, kao na primer dolinil, 3H–indolil, hromanil, fenantridinil, ili tetrahidrokvinolinil, gde je radikal ili tačka spajanja na heterociklilnom prstenu. Heterociklilna grupa je opciono mono– ili biciklična. Izraz “heterociklilalkil” odnosi se na alkilnu grupu supstituisanu heterociklilom, naznačeno time da alkilni i heterociklilni delovi nezavisno budu opciono supstituisani.

[0025] Kako se koristi ovde, izraz “delimično nezasićeni” odnosi se na prstenastu sredinu koja uključuje najmanje jednu dvostruku ili trostruku vezu. Izraz “delimično nezasićeni” ima za cilj da obuhvati prstenove koji imaju multipla mesta nezasićenosti, ali ne uključuje arilne ili heteroarilne delove kako su oni ovde definisani.

[0026] Kako je ovde opisano, neka jedinjenja ovog pronalaska sadrže “opciono supstituisane” delove. Po pravilu, izraz “supstituisani”, bilo da mu prethoi izraz “opciono” ili da mu ne prethodi, znači da su jedan ili više vodonika iz određenog dela zamenjeni odgovarajućim supstituentom. “Supstituisani” se primenjuje na jedan

ili više vodonika koji su ili eksplicitni ili implicitni u strukturi (npr., odnosi

“opciono supstituisana” grupa ima odgovarajući supstituent na svakom položaju koji se može supstituisati u grupi, i kada je više od jednog položaja u ma kojoj datoj strukturi supstituisano sa više od jednog supstituenta izabranog iz naznačene grupe, taj supstituent je ili isti ili različit na svakom položaju. Kombinacije supstituenata koje predviđa ovaj pronalazak su po mogućstvu one koje za rezultat daju formiranje stabilnih ili hemijski izvodljivih jedinjenja. Izraz “stabilni”, kako se koristi ovde, odnosi se na jedinjenja koja se suštinski ne menjaju kada se podvrgavaju uslovima koji omogućavaju njihovu proizvodnju, detekciju i, u nekim oblicima, njihovu regeneraciju, prečišćavanje, u upotrebu za jednu ili više namena koje se ovde otkrivaju.

[0027] Odgovarajući monovalentni supstituenti na atomu ugljenika koji se može supstituisati u “opciono supstituisanoj” grupi su nezavisno deuterijum; halogen; –(CH2)0–4R º; –(CH2)0–4OR º; -O(CH2)0-4R<o>, –O–(CH2)0–4C(O)OR°; –(CH2)0–

4CH(OR º)2; –(CH2)0–4SR º; –(CH2)0–4Ph, koji su opciono supstituisani sledećim: R°; – (CH2)0–4O(CH2)0–1Ph koji su opciono supstituisani sa R°; –CH=CHPh, koji je opciono supstituisan sa R°; –(CH2)0–4O(CH2)0–1-piridil koji je opciono supstituisan sa R°; – NO2; –CN; –N3; -(CH2)0–4N(R º)2; –(CH2)0–4N(R º)C(O)R º; –N(R º)C(S)R º; –(CH2)0–

4N(R º)C(O)NR º2; -N(R º)C(S)NR º2; –(CH2)0–4N(R º)C(O)OR º; –N(R º)N(R º)C(O)R º; -N(R º)N(R º)C(O)NR º2; -N(R º)N(R º)C(O)OR º; –(CH2)0–4C(O)R º; –C(S)R º; –(CH2)0–

4C(O)OR º; –(CH2)0–4C(O)SR º; -(CH2)0–4C(O)OSiR º3; –(CH2)0–4OC(O)R º; – OC(O)(CH2)0–4SR º, SC(S)SR°; –(CH2)0–4SC(O)R º; –(CH2)0–4C(O)NR º2; –C(S)NR º2; –C(S)SR°; –SC(S)SR°, -(CH2)0–4OC(O)NR º2; -C(O)N(OR º)R º; –C(O)C(O)R º; – C(O)CH2C(O)R º; –C(NOR º)R º; -(CH2)0–4SSR º; –(CH2)0–4S(O)2R º; –(CH2)0–

4S(O)2OR º; –(CH2)0–4OS(O)2R º; –S(O)2NR º2; -(CH2)0–4S(O)R º; -N(R º)S(O)2NR º2; – N(R º)S(O)2R º; –N(OR º)R º; –C(NH)NR º2; –P(O)2R º; -P(O)R º2; -OP(O)R º2; – OP(O)(OR º)2; SiR º3; –(C1–4prav ili razgranat alkilen)O–N(R º)2; ili –(C1–4prav ili razgranat alkilen)C(O)O–N(R º)2, naznačeno time da je R º opciono supstituisan kako je definisano dole i da je nezavisno vodonik, C1–6alifatski, –CH2Ph, –O(CH2)0–1Ph, -CH2-(5-6-člani heteroarilni prsten), ili 5–6–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili arilni prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor ili, nezavisno od definicije date gore, dve nezavisne pojave R º, izete skupa sa atomom(atomima) umetnutim između koji čine jedan 3–12–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili aril mono– ili biciklični prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, koji je opciono supstituisan kako je definisano dole.

[0028] Odgovarajući monovalentni supstituenti na R º (ili prsten koji se formira tako što uzima dve nezavisne pojave R º zajedno sa atomima koji se nalaze između njih), nezavisno su deuterijum, halogen, –(CH2)0–2R<�>, –(haloR<�>), –(CH2)0–

2OH, –(CH2)0–2OR<�>, –(CH2)0–2CH(OR<�>)2; -O(haloR<�>), –CN, –N3, –(CH2)0–2C(O)R<�>, – (CH2)0–2C(O)OH, –(CH2)0–2C(O)OR<�>, –(CH2)0–2SR<�>, –(CH2)0–2SH, –(CH2)0–2NH2, – (CH2)0–2NHR<�>, –(CH2)0–2NR<�>2, –NO2, –SiR<�>3, –OSiR<�>3, -C(O)SR<�>,–(C1–4prav ili razgranat alkilen)C(O)OR<�>, ili –SSR<�>naznačeno time da je svaki R<�>nesupstituisan ili tamo gde mu pretodi “halo” je supstituisan samo jednim ili većim brojem halogena, i nezavisno se odabira između sledećih C1–4alifatski, –CH2Ph, –O(CH2)0–1Ph, ili jedan 5–6–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili arilni prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor. Odgovarajući divalentni supstituenti na zasićenom atomu ugljenika na R º uključuju =O i =S.

[0029] Odgovarajući divalentni supstituenti na zasićenom atomu ugljenika “opciono supstituisane” grupe uključuju sledeće: =O, =S, =NNR<*>2, =NNHC(O)R<*>, =NNHC(O)OR<*>, =NNHS(O)2R<*>, =NR<*>, =NOR<*>, –O(C(R<*>2))2–3O–, ili –S(C(R<*>2))2–3S–, naznačeno time da svaka nezavisna pojava R<*>se odabira između vodonika, C1–

6alifatski koji je supstituisan kako je definisano dole, ili jednog nesupstituisanog 5–6– članog zasićenog, delimično nezasićenog, ili arilnog prstena koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor. Odgovarajući divalentni supstituenti koji su vezani za vicinalne ugljenike koji se mogu supstituisati iz “opciono supstituisane” grupe uključuju: –O(CR<*>2)2–3O–, naznačeno time da svaka nezavisna pojava R<*>se odabira iz sledećeg: vodonik, C1–6alifatski koji je opciono supstituisan kako je definisano dole, ili nesupstituisani 5–6–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili arilni prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor.

[0030] Odgovarajući supstituenti na alifatskoj grupi R<*>uključuju halogen, –R<�>, -(haloR<�>), -OH, –OR<�>, –O(haloR<�>), –CN, –C(O)OH, –C(O)OR<�>, –NH2, –NHR<�>, –NR<�>2, ili –NO2, naznačeno time da je svaki R<�>nesupstituisan ili gde mu pretodi “halo” je supstituisan samo jednim ili većim brojem halogena, i nezavisno je C1–

4alifatski, –CH2Ph, –O(CH2)0–1Ph, ili jedan 5–6–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili arilni prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor.

[0031] Odgovarajući supstituenti na azotu koji se može supstituisati u “opciono supstituisanoj” grupi uključuju –R<†>, –NR<†>2, –C(O)R<†>, –C(O)OR<†>, – C(O)C(O)R<†>, –C(O)CH2C(O)R<†>, –S(O)2R<†>, -S(O)2NR<†>2, –C(S)NR<†>2, –C(NH)NR<†>2, ili –N(R<†>)S(O)2R<†>; naznačeno time da svaki R<†>nezavisno bude azot, C1–6alifatski koji je opciono supstituisan kako je definisano dole, nesupstituisani –OPh, ili jedan nesupstituisani 5–6–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili arilni prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, ili, bez obzira na gore datu definiciju, dve nezavisne pojave R<†>, uzete skupa sa atomomom (atomima) koji se između njih formiraju jedan nesupstituisani 3–12–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili arilni mono– ili biciklični prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor.

[0032] Odgovarajući supstituenti na alifatskoj grupi R<†>su nezavisno halogen, –R<�>, -(haloR<�>), –OH, –OR<�>, –O(haloR<�>), –CN, –C(O)OH, –C(O)OR<�>, –NH2, –NHR<�>, –NR<�>2, ili -NO2, naznačeno time da svaki R<�>bude nesupstituisani ili tamo gde mu pretodi “halo” bude supstituisan samo jednim ili većim brojem halogena, i bude nezavisno C1–4alifatski, –CH2Ph, –O(CH2)0–1Ph, ili jedan 5–6–člani zasićeni, delimično nezasićeni, ili arilni prsten koji ima 0–4 heteroatoma nezavisno izabranih iz sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor.

[0033] U nekim oblicima izrazi “opciono supstituisani”, “opciono supstituisani alkil,” “opciono supstituisani “opciono supstituisani alkenil,” “opciono supstituisani alkinil”, “opciono supstituisani karbociklični,” “opciono supstituisani aril”, " opciono supstituisani heteroaril," “opciono supstituisani heterociklični,” i svaka druga opciono supstituisana grupa kako se koristi ovde, odnose se na grupe koje su supstituisane ili nesupstituisane nezavisnom zamenom jednog, dva ili tri ili više atoma vodonika, sa tri tipična supstituenta uključujući, ali ne ograničavajući se na sledeće:

-F, -Cl, -Br, -I, deuterijum,

-OH, zaštićeni hidroksi, alkoksi, okso, tiookso,

-NO2, -CN, CF3, N3,

-NH2, zaštićeni amino, -NH alkil, -NH alkenil, -NH alkinil, -NH cikloalkil, -NH -aril, -NH -heteroaril, -NH -heterociklični, -dialkilamino, -diarilamino, -diheteroarilamino,

-O- alkil, -O- alkenil, -O- alkinil, -O- cikloalkil, -O-aril, -O-heteroaril, -O-heterociklični,

-C(O)- alkil, -C(O)- alkenil, -C(O)- alkinil, -C(O)- karbociklil, -C(O)-aril, -C(O)-heteroaril, -C(O)-heterociklil,

-CONH2, -CONH- alkil, -CONH- alkenil, -CONH- alkinil, -CONH-karbociklil, -CONH-aril, -CONH-heteroaril, -CONH-heterociklil,

-OCO2- alkil, -OCO2- alkenil, -OCO2- alkinil, -OCO2- karbociklil, -OCO2-aril, -OCO2-heteroaril, -OCO2-heterociklil, -OCONH2, -OCONH- alkil, -OCONH- alkenil, -OCONH- alkinil, -OCONH- karbociklil, -OCONH- aril, -OCONH- heteroaril, -OCONH- heterociklil,

-NHC(O)- alkil, -NHC(O)- alkenil, -NHC(O)- alkinil, -NHC(O)- karbociklil, -NHC(O)-aril, -NHC(O)-heteroaril, -NHC(O)-heterociklil, -NHCO2- alkil, -NHCO2-alkenil, -NHCO2- alkinil, -NHCO2- karbociklil, -NHCO2- aril, -NHCO2- heteroaril, -NHCO2- heterociklil, -NHC(O)NH2, -NHC(O)NH- alkil, -NHC(O)NH- alkenil, -NHC(O)NH- alkenil, -NHC(O)NH- karbociklil, -NHC(O)NH-aril, -NHC(O)NH-heteroaril, -NHC(O)NH-heterociklil, NHC(S)NH2, -NHC(S)NH- alkil, -NHC(S)NH-alkenil, -NHC(S)NH- alkinil, -NHC(S)NH- karbociklil, -NHC(S)NH-aril, -NHC(S)NH-heteroaril, -NHC(S)NH-heterociklil, -NHC(NH)NH2, -NHC(NH)NH-alkil, -NHC(NH)NH- -alkenil, -NHC(NH)NH- alkenil, -NHC(NH)NH- karbociklil, -NHC(NH)NH-aril, -NHC(NH)NH-heteroaril, -NHC(NH)NH-heterociklil, -NHC(NH)-alkil, -NHC(NH)- alkenil, -NHC(NH)- alkenil, -NHC(NH)- karbociklil, -NHC(NH)-aril, -NHC(NH)-heteroaril, -NHC(NH)-heterociklil,

-C(NH)NH- alkil, -C(NH)NH- alkenil, -C(NH)NH- alkinil, -C(NH)NH-karbociklil, -C(NH)NH-aril, -C(NH)NH-heteroaril, -C(NH)NH-heterociklil,

-S(O)- alkil, - S(O)- alkenil, - S(O)- alkinil, - S(O)- karbociklil, - S(O)-aril, -S(O)-heteroaril, - S(O)-heterociklil -SO2NH2, -SO2NH- alkil, -SO2NH- alkenil, -SO2NH- alkinil, -SO2NH- karbociklil, -SO2NH- aril, -SO2NH- heteroaril, -SO2NH-heterociklil,

-NHSO2- alkil, -NHSO2- alkenil, - NHSO2- alkinil, -NHSO2- karbociklil, -NHSO2-aril, -NHSO2-heteroaril, -NHSO2-heterociklil,

-CH2NH2, -CH2SO2CH3,

-mono-, di-, ili tri-alkil silil,

-alkil, -alkenil, -alkinil, -aril, -arilalkil, -heteroaril, -heteroarilalkil, -heterocikloalkil, -cikloalkil, -karbociklični, -heterociklični, polialkoksialkil, polialkoksi, -metoksimetoksi, -metoksietoksi, -SH, -S- alkil, -S- alkenil, -S- alkinil, -S-karbociklil, -S-aril, -S-heteroaril, -S-heterociklil, ili metiltiometil.

[0034] Kako se koristi ovde, izraz “farmaceutski prihvatljiva so” odnosi se na one soli koje su, po osnovanoj medicinskoj proceni, odgovarajuće za upotrebu u kontaktu sa tkivima ljudi i nižih životinja, bez nepotrebne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora i slično, i imaju razuman odnos koristi i rizika. Farmaceutski prihvatljive soli su dobro poznate u struci. Na primer, S. M. Berge et al., detaljno opisuju farmaceutski prihvatljivi soli u J. Farmaceutski Sciences, 1977, 66, 1–19, čiji se tekst smatra integralnim delom ove patentne prijave. Farmaceutski prihvatljive soli jedinjenja ovog pronalaska uključuju one koje se izvode iz odgovarajućih neorganskih i organskih kiselina i baza. Primeri farmaceutski prihvatljivih, netoksičnih kiselih dodataka soli su soli amino grupe formirane sa neorganskim kiselinama kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, fosforna kiselina, sumporna kiselina i perhlorna kiselina ili sa organskim kiselinama kao što su sirćetna kiselina, oksalna kiselina, maleinska kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, ćilibarska kiselina ili malonska kiselina ili korišćenjem drugih metoda koje se koriste u struci kao što je jonska izmena. Ostale farmaceutski prihvatljivi soli uključuju soli adipata, alginata, askorbata, aspartata, benzenesulfonata, benzoata, bisulfata, borata, butirata, kamforata, kamforsulfonata, citrata, ciklopentanepropionata, diglukonata, dodecilsulfata, etanesulfonata, formata, fumarata, glukoheptonata, glicerofosfata, glukonata, hemisulfata, heptanoata, heksanoata, hidroiodida, 2–hidroksi– etanesulfonata, laktobionata, laktata, laurata, lauril sulfata, malata, maleata, malonata, metanesulfonata, 2–naftalenesulfonata, nikotinata, nitrata, oleata, oksalata, palmitata, pamoata, pektinata, persulfata, 3–fenilpropionata, fosfata, pivalata, propionata, stearata, sukcinata, sulfata, tartrata, tiocijanata, p–toluenesulfonata, undekanoataa, valerata, i slično.

[0035] Soli izvedene iz odgovarajućih baza uključuju soli alkalnih metala, alkalnih zemljanih metala, amonijumove i N<+>(C1–4alkil)4. Reprezentativne soli alkalnih ili alkalnih zemljanih metala uključuju natrijumove, litijumske, kalijumove, kalcijumove, magnezijumove, i slično. Dodatne farmaceutski prihvatljivi soli uključuju, kada je primereno, netoksični amonijum, kvaternarni amonijum, i aminske katjone formirane korišćenjem kontrajona kao što su halid, hidroksid, karboksilat, sulfat, fosfat, nitrat, niži alkil sulfonat i aril sulfonat.

[0036] Ako nije drugačije navedeno, strukture opisane u ovom tekstu takođe imju za cilj da uključuju sve izomerne (npr., enantiomerne, diastereomerne, i geometrijske (ili konformacijske)) forme te strukture; na primer, R i S konfiguracije za svaki asimetrični centar, Z i E izomere sa dvostrukom vezom, i Z i E konformacijske izomere. Prema tome, pojedinačni stereohemijski izomeri kao i enantiomerne, diastereomerne, i geometrijske (ili konformacijske) mešavine predstavljenih jedinjenja spadaju u okvire ovog pronalaska. Ako nije drugačije navedeno, sve tautomerne forme jedinjenja ovog pronalaska spadaju u okvire ovog pronalaska.

[0037] Uz to, ako nije drugačije navedeno, strukture opisane u ovom tekstu takođe imaju za cilj da uključuju jedinjenja koja se razlikuju samo u prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Na primer, jedinjenja koja imaju sadašnje strukture uključujući zamenu vodonika deuterijumom ili tricijumom, ili zamenu ugljenika sa<13>C- ili<14>C-obogaćenim ugljenikom spada u okvire ovog pronalaska. U nekim oblicima, grupa uključuje jedan ili više atoma deuterijuma.

[0038] Štaviše, namera je da jedinjenje formule I uključuje i njegove obeležene izotope. Jedan izotopom obeleženi oblik jedinjenja formule I je identičan ovom jedinjenju izuzev činjenice da je jedan ili više atoma ovog jedinjenja zamenjen atomom ili atomima koji imaju atomsku masu ili maseni broj koji se razlikuje od atomske mase ili masenog broja atoma koji obično prirodno nastaje. Primeri izotopa koji su već komercijalno dostupni i koji mogu da se inkorporiraju u jedinjenje formule I dobro poznatim metodama uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, koseonika, fosfora, fluora i hlora, na primer<2>H,<3>H,<13>C,<14>C,<15>N,<18>O,<17>O,<31>P,<32>P,<35>S,<18>F i<36>CI, istim redosledom. Jedno jedinjenje formule I, njegov prolek, ili farmaceutski prihvatljiva so bilo koga od njih, koja sadrži jedan ili više od gore pomenutih izotopa i/ili druge izotope drugih atoma takođe je predviđeno da bude deo predstavljenog pronalaska. Izotopom obeleženo jedinjenje formule I može da se upotrebljava na više korisnih načina. Na primer, izotopom obeleženo jedinjenje formule I u koje je, na primer, inkorporisan radioizotop, kao što su<3>H ili<14>C, je odgovarajući za neki lek i/ili test za distribuciju supstrata u tkivima. Ovi radioizotopi, t.j. tricijum (<3>H) i ugljenik-14 (<14>C), su posebno pogodni zbog jednostavne pripreme i odlične detektabilnosti. Inkorporisanje težih izotopa, na primer deuterijuma (<2>H), u jedinjenje formule I ima terapijskih prednosti zbog veće metaboličke stabilnosti ovog izotopom obeleženog jedinjenja. Veća metabolička stabilnost se diretkno prevodi u povećani polu-život in vivo ili niže doze, što bi u većini okolnosti predstavljalo preporučeni oblik za predstavljeni pronalazak. Izotopom obeleženo jedinjenje formule I može obično da se pripremi sprovođenjem postupaka otkrivenih u shemama sinteze i povezanim opisima, u delu sa primerima, i u delu pripreme u predstavljenom tekstu, zamenjujući reaktant koji nije obeležen izotopom odmah dostupnim reaktantom koji je obeležen izotopom.

[0039] Deuterijum (<2>H) takođe može da bude inkorporisan u jedinjenje formule I za ove namene da bi se manipulisao oksidativni metabolizam ovog jedinjenja uz pomoć primarnog dejstva kinetičkog izotopa. Primarno dejstvo kinetičkog izotopa je promena brzine hemijske reakcije koja je rezultat izmene izotopskih jezgara, što je za uzvrat uzrokovano promenom u energijama osnovnog stanja neophodnim za formiranje kovalentne veze posle ove izotopske izmene. Izmena težeg izotopa ima za rezultat smanjivanje energije osnovnog stanja za hemijsku vezu, i tako uzrokuje smanjenje brzine pucanja veza koje su ograničene brzinom. Ako do pucanja veze dođe u regionu sedla ili njegovoj blizini duž koordinate multi-produktne reakcije, koeficijenti distribucije proizvoda mogu se značajno promeniti. U cilju objašnjenja: ako je deuterijum vezan za atom ugljenika na nepromenljivom položaju, tipične su razlike u brzini kM/kD= 2-7. Ako se ova razlika u brzini uspešno primeni na jedinjenje formule I koje je podložno oksidaciji, profil ovog jedinjenja in vivo može se drastično promeniti i imati unapređena farmakokinetička svojstva.

[0040] Kada se otkriva i razvija neki terapijski agens, stručnjak za ovu oblast može da optimizuje farmakokinetičke parametre zadržavajući istovremeno poželjna svojstva in vitro. Osnovano je pretpostaviti da mnoga jedinjenja sa slabim farmakokinetičkim profilima podležu oksidativnom metabolizmu. Testovi mikrosoma jetre in vitro koji su trenutno dostupni daju vredne informacije o toku oksidativnog metabolizma ovog tipa, što za uzvrat dozvoljava racionalno osmišljavanje deuterisanih jedinjenja formule I sa unapređenom stabilnošću koja se postiže rezistencijom na takav oksidativni metabolizam. Tako su postignuta značajna poboljšanja farmakokinetičkih profila jedinjenja formule I, i mogu se kvaltitativno izraziti u smislu produženja poluživota in vivo (t/2), koncentracije pri maksimalnom terapijskom dejstvu (Cmax), površini ispod krive odgovora na dozu (AUC), i F; i u smislu smanjenog klirensa, doze i cene materijala.

[0041] Sledeće ima za cilj da ilustruje gore navedeno: jedno jedinjenje formule I koje ima multipla potencijalna mesta koja može da napadne oksidativni metabolizam, na primer benzilični atomi vodonika i atomi vodonika vezani za atom azota, priprema se kao serija analoga u kojoj su različite kombinacije atoma vodonika zamenjene atomima deuterijuma, tako da neki, većina ili svi ovi atomi vodonika budu zamenjeni atomima deuterijuma. Određivanja polu-života omogućavaju povoljno i tačno određivanje mere u kojoj se poboljšava rezistencija na oksidativni metabolizam. Na taj način određuje se da polu-život osnovnog jedinjenja može da se produži za do 100% kao rezultat izmena ovog tipa deuterijum-vodonik.

[0042] Izmena deuterijum-vodonik u jedinjenju formule I može takođe da se koristi da se postigne povoljna modifikacija spektra metabolita početnog jedinjenja sa ciljem da se smanje ili eliminišu neželjeni toksični metaboliti. Na primer, ako neki toksični metabolit nastane oksidativnim cepanjem veze ugljenik-vodonik (C-H), može se osnovano pretpostaviti da će deutersani analog da u mnogome smanji ili eliminiše produkciju neželjenog metabolita, čak i ako ta oksidacija nije korak koji određuje brzinu. Dodatne informacije o stanju tehnike kada se radi o izmeni deuterijum-vodonik mogu se naći, na primer u Hanzlik et al., J. Org. Chem.55, 3992-3997, 1990, Reider et al., J. Org. Chem. 52, 3326-3334, 1987, Foster, Adv. Drug Res. 14, 1-40, 1985, Gillette et al, Biochemistry 33(10) 2927-2937, 1994, i Jarman et al. Carcinogenesis 16(4), 683-688, 1993.

[0043] Kako se koristi ovde, izraz “modulator” se definiše kao jedinjenje koje se vezuje za metu i/ili inhibira metu merljivim afinitetom. U nekim oblicima, modulator ima IC50i/ili konstantu vezivanja manju od 50 μM, manju od oko 1 μM, manju od oko 500 nM, manju od oko 100 nM, ili manju od oko 10 nM.

[0044] Izrazi “merljivi afinitet” i “merljivo inhibira,” kako se koriste ovde, označavaju merljivu promenu aktivnosti BTK između uzorka koji sadrži jedinjenje prikazanog pronalaska, ili njegov sastav, i BTK, i ekvivalentnog uzorka koji uključuje BTK, u odsustvu pomenutog jedinjenja, ili njegovog sastava.

[0045] Kombinacije supstituenata i promenljivih koje prdviđa ovaj pronalazak su samo one koje su rezultat u formiranju stabilnih jedinjenja. Izraz “stabilan”, kako se koristi ovde, odnosi se na jedinjenja koja poseduju stabilnost dovoljnu da se omogući proizvodnja i koja održava integritet ovog jedinjenja dovoljan period vremena da bi moglo da bude korisno za svrhe ovde detaljno opisane (npr., terapijska ili profilaktička primena kod ljudi).

[0046] Navođenje spiska hemijskih grupa u svakoj definiciji promenljivih koje se navode ovde uključuje i definicije te promenljive kao bilo koje pojedinačne grupe ili kombinacije navedenih grupa. Navođenje oblika promenljivih u ovom tekstu uključuje i oblik kao bilo koji pojedinačni oblik ili u kombinaciji sa bilo kojim drugim oblikom ili njegovim delom.

3. Opis egzemplarnih jedinjenja

[0047] Po jednom aspektu, sadašnji pronalazak daje jedinjenje formule I,

I

ili / i njegovu farmaceutski prihvatljivu so, naznačeno time da:

X je N ili CR<2>;

X<1>je N ili CR<2>;

X<2>je N ili CR<2>;

svaki R<2>se nezavisno odabira iz sledećih: –R, halogen, -haloalkil, –OR, –SR, –CN, – NO2, -SO2R, -SOR, -C(O)R, -CO2R, -C(O)N(R)2, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)2, -NRSO2R, ili –N(R)2;

svaki R je nezavisno vodonik, C1–6alifatski, C3–10aril, a 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7-člani heterocilic prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, ili 5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabrana od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan; ili

dve R grupe na istom atomu uzete zajedno sa atomom za koji su spojene da formiraju C3–

10aril, 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, ili 5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabrana od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan;

L je divalentna grupa izabrana od sledećih: C3–10aril, 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, i 5-6 člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan; ili L je divalentna grupa izabrana od sledećih: C1–6alifatski-C3–10aril, C1–6alifatski-3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, C1–6alifatski-3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, i C1–6alifatski-5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan;

Y je O, S, SO2, SO, C(O), CO2, C(O)N(R), -NRC(O), -NRC(O)N(R), -NRSO2, ili N(R);

ili Y je odsutan;

R<1>je C2–6alkenil ili C2–6alkinil, koji je opciono supstituisan; ili R<1>je CN.

[0048] U nekim oblicima, X je N. U nekim oblicima, X je CR<2>.

[0049] U nekim oblicima, X<1>je N. U nekim oblicima, X<1>je CR<2>.

[0050] U nekim oblicima, X<2>je N. U nekim oblicima, X<2>je CR<2>.

[0051] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno H.

[0052] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –R.

[0053] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno C3–10aril, 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, ili 5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan.

[0054] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno fenil, naftil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, adamantil, ciklooctil, [3.3.0]biciklooktanil, [4.3.0]biciklononanil, [4.4.0]biciklodekanil, [2.2.2]biciklooktanil, fluorenil, indanil, tetrahidronaftil, akridinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benztijazolil, benztriazolil, benztetrazolil, benzisoksazolil, benzisotijazolil, benzimidazolinil, karbazolil, NH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, dekahidrokvinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditijazinil, dihidrofuro [2,3-b] tetrahidrofuran, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, isoindolinil, isoindolenil, isobenzofuranil, isohromanil, isoindazolil, isoindolinil, isoindolil, isokvinolinil, isotijazolil, isoksazolil, morpholinil, naftiridinil, oktahidroisokvinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil;- 1,2,5oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolidinil, pirimidinil, fenantridinil, fenanthrolinil, fenazinil, fenotijazinil, fenoksathiinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazole, piridoimidazole, piridotijazole, piridinil, piridil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2H-pirolil, pirolil, kvinazolinil, kvinolinil, 4H-kvinolizinil, kvinoksalinil, kvinuklidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidroisokvinolinil, tetrahidrokvinolinil, 6H-1,2,5-tijadiazinil, 1,2,3-tijadiazolil, 1,2,4-tijadiazolil, 1,2,5-tijadiazolil, 1,3,4-tijadiazolil, tijanthrenil, tijazolil, tienil, tijenotijazolil, tijenooksazolil, tijenoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil, oksetanil, azetidinil, ili ksantenil; od kojih je svaki opciono supstituisani.

[0055] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno fenil, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, indolenil, isoksazolil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil;- 1,2,5oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolidinil, pirimidinil, piperazinil, piperidinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, piridinil, piridil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2H-pirolil, pirolil, tetrahidrofuranil, tijazolil, tienil, tiofenil, oksetanil, ili azetidinil, od kojih je svaki opciono supstituisan.

[0056] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno fenil ili pirazolil, od kojih je svaki opciono supstituisan.

[0057] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno halogen, -haloalkil, –OR,

–SR, –CN, –NO2, -SO2R, -SOR, -C(O)R, -CO2R, -C(O)N(R)2, -NRC(O)R,

-NRC(O)N(R)2, -NRSO2R, ili –N(R)2.

[0058] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –OR, –SR, -SO2R, -SOR, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)2, -NRSO2R, ili –N(R)2. U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –OR, –SR, -SO2R, ili –SOR. U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)2, -NRSO2R, ili –N(R)2.

[0059] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –OR, –SR, -SO2R, -SOR, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)2, -NRSO2R, ili –N(R)2, i svaki R je nezavisno vodonik, C3–

10aril, 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, ili 5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sulmpor; od kojih je svaki opciono supstituisan.

[0060] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –OR ili –N(R)2, i svaki R je nezavisno vodonik ili C3–10aril, koji je opciono supstituisani. U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –OR ili –N(R)2, i svaki R je nezavisno vodonik ili 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –OR ili –N(R)2, i svaki R je nezavisno vodonik ili 3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno –OR ili –N(R)2, i svaki R je nezavisno vodonik ili 5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, koji je opciono supstituisan.

[0061] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno vodonik,

[0062] U nekim oblicima, svaki R<2>je nezavisno vodonik,

.

[0063] U nekim oblicima, L je divalentni alifatski C1–6koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, L je divalentni C3–10aril koji je opciono supstituisani. U nekim oblicima, L je divalentni 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, L je divalentni 3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, L je divalentni 5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, koji je opciono supstituisan.

[0064] U nekim oblicima, L je divalentni C1–6alifatski-C3–10aril, koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, L je divalentni C1–6alifatski-3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, L je divalentni C1–6alifatski-3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, L je divalentni C1–6alifatski-5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor koji je opciono supstituisan.

[0065] U nekim oblicima, L je divalentni C1–6alifatski izabran od sledećih: metilen, etilen, propilen, i-propilen, butilen, s-butilen, t-butilen, prav ili razgranat pentilen, ili prav ili razgranat heksilen; od kojih je svaki opciono supstituisan.

[0066] U nekim oblicima, L je divalentni fenil, naftil, ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, adamantil, ciklooktil, [3.3.0]biciklooktanil, [4.3.0]biciklononanil, [4.4.0]biciklodekanil, [2.2.2]biciklooktanil, fluorenil, indanil, tetrahidronaftil, akridinil, azocinil, benzimidazolil, benzofuranil, benzotiofuranil, benzotiofenil, benzoksazolil, benztijazolil, benztriazolil, benztetrazolil, benzizoksazolil, benzizotijazolil, benzimidazolinil, karbazolil, NH-karbazolil, karbolinil, hromanil, hromenil, cinolinil, dekahidrokvinolinil, 2H,6H-1,5,2-ditijazinil, dihidrofuro [2,3-b] tetrahidrofuran, furanil, furazanil, imidazolidinil, imidazolinil, imidazolil, 1H-indazolil, indolenil, indolinil, indolizinil, indolil, 3H-indolil, izoindolinil, izoindolenil, izobenzofuranil, izohromanil, izoindazolil, izoindolinil, izoindolil, izokvinolinil, izotijazolil, izoksazolil, morpholinil, naftiridinil, oktahidroizokvinolinil, oksadiazolil, 1,2,3-oksadiazolil, 1,2,4-oksadiazolil;- 1,2,5oksadiazolil, 1,3,4-oksadiazolil, oksazolidinil, oksazolil, oksazolidinil, pirimidinil, fenantridinil, fenanthrolinil, fenazinil, fenotijazinil, fenoksathiinil, fenoksazinil, ftalazinil, piperazinil, piperidinil, pteridinil, purinil, piranil, pirazinil, pirazolidinil, pirazolinil, pirazolil, piridazinil, piridooksazole, piridoimidazole, piridotijazole, piridinil, piridil, pirimidinil, pirolidinil, pirolinil, 2H-pirolil, pirolil, kvinazolinil, kvinolinil, 4H-kvinolizinil, kvinoksalinil, kvinuklidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidroisokvinolinil, tetrahidrokvinolinil, 6H-1,2,5-tijadiazinil, 1,2,3-tijadiazolil, 1,2,4-tijadiazolil, 1,2,5-tijadiazolil, 1,3,4-tijadiazolil, tijanthrenil, tijazolil, tienil, tijenotijazolil, tijenooksazolil, tijenoimidazolil, tiofenil, triazinil, 1,2,3-triazolil, 1,2,4-triazolil, 1,2,5-triazolil, 1,3,4-triazolil, oksetanil, azetidinil, ili ksantenil; od kojih je svaki opciono supstituisani.

[0067] U nekim oblicima, L je

.

[0069] U nekim oblicima, Y je -NRC(O), -NRC(O)N(R), -NRSO2, ili N(R).

[0070] U nekim oblicima, Y je O, S, SO2, SO, C(O), CO2, ili C(O)N(R).

[0071] U nekim oblicima, Y je odsutan.

[0072] U nekim oblicima, Y je N(R),

.

[0073] U nekim oblicima, R<1>je opciono supstituisani C1–6alifatski. U nekim oblicima, R<1>je opciono supstituisani C3–10aril. U nekim oblicima, R<1>je opciono supstituisani 3-8-člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten. U nekim oblicima, R<1>je opciono supstituisani 3-7-člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor. U nekim oblicima, R<1>je opciono supstituisani 5-6-člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabran od sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor.

[0074] U nekim oblicima, R<1>je C1–6alifatski. U nekim oblicima, R<1>je metil, etil, propil, i-propil, butil, s-butil, t-butil, prav ili razgranat pentil, ili prav ili razgranat heksil; od kojih je svaki opciono supstituisan.

[0075] U nekim oblicima, R<1>je C2–6alkenil, koji je opciono supstituisan. U nekim oblicima, R<1>je C2–6alkinil, koji je opciono supstituisani.

.

[0077] U nekim oblicima, svaki od X, X<1>, X<2>, R, R<1>, R<2>, L, i Y je kako je gore definisano i opisano u oblicima, klasama i podklasama, gore i dalje u tekstu, pojedinačno ili u kombinaciji.

[0078] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje jedinjenje formule I-a,

I-a;

ili / i njegovu farmaceutski prihvatljivu so, naznačeno time da svaki od X<2>, R<1>, R<2>, L i Y bude kako je gore definisano i opisano u oblicima, klasama i podklasama, gore i dalje u tekstu, pojedinačno ili u kombinaciji.

[0079] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje jedinjenje formule I-a1,

I-a1;

ili / i njegovu farmaceutski prihvatljivu so, naznačeno time da svaki od R<1>, R<2>, L i Y bude kako je gore definisano i opisano u oblicima, klasama i podklasama, gore i dalje u tekstu, pojedinačno ili u kombinaciji.

[0080] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje jedinjenje formule I-a2,

I-a2;

[0081] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje jedinjenje formule I-b,

I-b;

[0082] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje jedinjenje formule I-b1,

I-b1;

[0083] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje jedinjenje formule I-b2,

I-b2;

[0084] U nekim oblicima, ovo jedinjenje ima formulu I-c:

I-c;

ili / i njihovu farmaceutski prihvatljivu so, naznačeno time da svaki od X<2>, R<1>, R<2>, L i Y bude kako je gore definisano i opisano u oblicima, klasama i podklasama, gore i dalje u tekstu, pojedinačno ili u kombinaciji.

[0085] U nekim oblicima, ovo jedinjenje ima formulu I-c1:

I-c1;

ili / i njihovu farmaceutski prihvatljivu so, naznačeno time da svaki od R<1>, R<2>, L i Y bude kako je gore definisano i opisano u oblicima, klasama i podklasama, gore i dalje u tekstu, pojedinačno ili u kombinaciji.

[0086] U nekim oblicima, ovo jedinjenje ima formulu I-c2:

I-c2;

ili / i njihova farmaceutski prihvatljiva so, naznačeno time da svaki od R<1>, R<2>, L i Y bude kako je gore definisano i opisano u oblicima, klasama i podklasama, gore i dalje u tekstu, pojedinačno ili u kombinaciji.

[0087] U nekim oblicima, ovaj pronalazak daje jedinjenje izabrano od sledećih: Tabela 1:

Tabela 1

[0088] Kako je uopšteno definisano gore, grupa “L-R<1>” je „ubojita“ (warhead) grupa. Bez želje da se vezujemo za bilo koju posebnu teoriju, smatra se da su takve ubojite (warhead) grupe posebno odgovarajuće za kovalentno vezivanje za ključni cisteinski ostatak u domenu vezivanja nekih protein kinaza. Protein kinaze koje imaju cisteinski ostatak u domenu vezivanja poznate su stručnjacima za ovu oblast i uključuju BTK, ili njegov mutant. Prema tome, u nekim oblicima, L-R<1>se odlikuje time da je deo L-R<1>u stanju da se kovalentno vezuje za cisteinski ostatak i tako ireverzibilno inhibira ovaj enzim. U nekim oblicima, cisteinski ostatak u domenu kinaze na mestu vezivanja ATP. U nekim oblicima, ovaj cisteinski ostatak je Cistein-481.

[0089] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje jedinjenje izabrano od sledećih: onih koja su gore opisana, ili / i njihovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0090] Različiti strukturni opisi mogu da pokažu jedan heteroatom bez pripojene grupe, radikala, naelektrisanja ili kontrajona. Stručnjaci za ovu oblast znaju da ovakvi opisi imaju za cilj da pokažu da je taj heteroatom pripojen za vodonik (npr.,

[0091] U nekim oblicima, jedinjenja ovog pronalaska su bila sintetizovana u skladu sa Shemom A dole. Konkretniji primeri jedinjenja napravljenih primenom Sheme A dati su u Primerima, dole.

Schma A

4. Upotrebe, formulacije i primena

Farmaceutski prihvatljivi sastavi

[0092] U skladu sa jednim drugim oblikom, ovaj pronalazak daje sastav koji uključuje jedinjenje ovog pronalaska ili njegov farmaceutski prihvatljivi derivat i farmaceutski prihvatljivi nosač, adjuvant, ili vehikulum. Količina jedinjenja i sastavima ovog pronalaska je takva da je delotvorno merljivo inhibirati BTK, ili njegov mutant, u biološkom uzorku, ili kod pacijenta. U nekim oblicima, količina jedinjenja u sastavima ovog pronalaska je takva da je delotvorno merljivo inhibirati BTK, ili njegov mutant, u biološkom uzorku, ili kod pacijenta. U nekim oblicima, sastav ovog pronalaska je formulisan za primenu kod pacijenta koje je takav sastav potreban.

[0093] Izraz “pacijent” ili “ispitanik”, kako se koristi ovde, označava životinju, po mogućstvu sisara, a najbolje čoveka.

[0094] Izraz “farmaceutski prihvatljivi nosač, adjuvant, ili vehikulum” odnosi se na ne-toksični nosač, adjuvant, ili vehikulum koji ne uništava farmakološku aktivnost ovog jedinjenja sa kojim je formulisano. Farmaceutski prihvatljivi nosači, adjuvanti ili vehikulumi koji se koriste u sastavima ovog pronalaska uključuju, ali se ne ograničavaju na sledeće: jonski izmenjivači, alumina, aluminijum stearat, lecitin, serumski proteini, kao što su humani serumski albumin, puferske supstance kao što su fosfati, glicin, sorbinska kiselina, kalijum sorbat, parcijalne gliceridne mešavine zasićenih biljnih masnih kiselina, voda, soli ili elektroliti, kao što su protamin sulfat, dinatrijum vodonik fosfat, kalijum vodonik fosfat, natrijum hlorid, cinkove soli, koloidni silicijum dioksid, magnezijum trisilikat, polivinil pirolidon, supstance na bazi celuloze, polietilen glikol, natrijum karboksimetilceluloza, poliakrilati, voskovi, polietilen-polioksipropilen-blok polimeri, polietilen glikol i vunena mast (lanolin).

[0095] “Farmaceutski prihvatljivi derivat” označava svaku ne-toksičnu so, ester, so estera ili druge derivate jedinjenja ovog pronalaska koji, pošto se da primaocu, u stanju je da obezbedi, bilo direktno ili indirektno, jedinjenje ovog pronalaska ili inhibitorno aktivni metabolit ili njihov ostatak.

[0096] Sastavi prikazanog pronalaska se daju oralno, parenteralno, u spreju za inhalaciju, topički, rektalno, nazalno, bukalno, vaginalno ili preko implantiranog rezervoara. Izraz "parenteralni" kako se koristi ovde uključuje supkutano, intravenski, intramuskularno, intra-artikularno, intra-sinovijalno, intrasternalno, intratekalno, intrahepatički, intralezionalno i intrakranijalno davanje tehnikom ubrizgavanja ili infuzije. Po mogućstvu, ovi sastavi se daju oralno, intraperitonealno ili intravenski. Sterilne injektabilne forme sastava ovog pronalaska uključuju vodene ili uljne suspenzije. Ove suspenzije se formulišu u skladu sa tehnikama koje su poznate u struci, korišćenjem odgovarajućih agenasa za vlaženje, disperziju ili suspenziju. Sterilni injektabilni preparati mogu takođe da budu sterilni injektabilni rastvor ili suspenzija u ne-toksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer kao rastvor u 1,3-butanediolu. U prihvatljive vehikulume i rastvarače koji se koriste spadaju voda, Ringerov rastvor i izotoni rastvor natrijum hlorida. Uz to, sterilna, fiksna ulja se zgodno koriste kao rastvarač ili podloga za suspenziju.

[0097] Za ove namene, bilo koje neutralno fiksno ulje koje može da se koristi uključuje sintetske mono- ili di-gliceride. Masne kiseline, kao što su oleinska kiselina i njeni gliceridni derivati su korisni za pripremu injektabilnih sastava, kao što su i prirodna farmaceutski prihvatljiva ulja, kao što su maslinovo ulje ili ricinusovo ulje, a posebno u njihovim polioksietiliranim verzijama. Ovi uljani rastvori ili suspenzije takođe sadrže dugo-lančani alkoholni razblaživač ili disperzant, kao što su karboksimetil celuloza ili slični agensi za disperziju koji se uobičajeno koriste u formulacijama farmaceutski prihvatljivih oblika doziranja, uključujući emulzije i suspenzije. I drugi uobičajeno korišćeni surfaktanti, kao što su Tweens, Spans i drugi agensi za pravljenje emulzija ili pojačivači biološke raspoloživosti koji se često koriste u proizvodnji farmaceutski prihvatljivih čvrstih, tečnih ili drugih oblika doziranja mogu takođe da se koriste u svrhe pravljenja formulacije.

[0098] Farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska se oralno primenjuju u svakom oralno prihvatljivom obliku doziranja. Egzemplarni oblici za oralno doziranje su kapsule, tablete, vodene suspenzije ili rastvori. U slučaju tableta za oralnu upotrebu, najčešće primenjivani nosači uključuju laktozu i kukuruzni skrob.

Tipično se dodaju i lubrikanti, kao što je magnezijum stearat. Za oralnu primenu u obliku kapsule, korisni razblaživači uključuju laktozu i sušeni kukuruzni skrob. Kada su za oralnu upotrebu potrebne oralne suspenzije, aktivni sastojak se kombinuje da agensima za emulzifikaciju i suspenzije. Po želji, opciono takođe mogu se dodavati i zaslađivači, agensi za poboljšanje ukusa ili boje.

[0099] Alternativeno, farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska daju se u obliku supozitorija za rektalnu primenu. One se mogu pripremiti mešanjem agensa sa odgovarajućim ne-iritirajućim neaktivnim sastojkom (ekscipijensom) koji je čvrst na sobnoj temperaturi ali tečan na rektalnoj temperaturi pa će se stoga istopiti u rektumu i osloboditi lek. Ovi materijali uključuju kakao buter, pčelinji vosak i polietilen glikole.

[00100] Farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska se takođe primenjuju topički, posebno kada ciljno mesto terapije uključuje površine ili organe koji su lako dostupni za topičku primenu, uključujući bolesti oka, kože, ili donji intestinal trakt. Odgovarajuće topičke formulacije se lako pripremaju za svaku od ovih površina ili organa.

[00101] Topička primena za donji intestinalni trakt može se dati u vidu formulacije za rektalnu supozitoriju (videti gore) ili u odgovarajućoj formulaciji za enemu. Topički-transdermalni flasteri se takođe koriste.

[00102] Za topičku primenu, odgovarajući farmaceutski prihvatljivi sastavi se formulišu u odgovarajućim mastima koje sadrže aktivnu komponentu u suspenziji ili rastvoru u jednom ili više nosača. Egzemplarni nosači za topičku primenu jedinjenja ovog pronalaska su mineralno ulje, tečni vazelin, beli vazelin, propilen glikol, polioksietilen, polioksipropilensko jedinjenje, vosak i voda u emulziji. Alternativno, opisani farmaceutski prihvatljivi sastavi mogu da se formulišu u odgovarajući losion ili krem koji sadrže aktivne komponente u suspenziji ili rastvoru u jednom ili više farmaceutski prihvatljivih nosača. Odgovarajući nosači uključuju, ali nisu ograničeni samo na njih, mineralno ulje, sorbitan monostearat, polisorbat 60, cetil esterski vosak, cetearil alkohol, 2-oktildodekanol, benzil alkohol i vodu.

[00103] Farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska se opciono primenjuju kao nazalni aerosol ili inhalacijom. Ovakvi sastavi se pripremaju u skladu sa tehnikama poznatim u struci i pripremaju se kao rastvori u fiziološkom rastvoru, korišćenjem benzil alkohola ili drugih odgovarajućih konzervansa, pojačivačima apsorpcije da se podstakne biološka raspoloživost, fluorokarboni, i/ili drugi konvencionalni agensi za rastvaranje ili disperziju.

[00104] Najbolje je da se farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska formulišu za oralnu primenu, ovakve formulacije mogu da se daju sa hranom ili bez nje. U nekim oblicima, farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska se daju bez hrane. U drugim oblicima, farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska se daju sa hranom.

[00105] Količina jedinjenja predstavljenog pronalaska koji se opciono kombinuje sa materijalima nosača da se dobije saastav u jedinici oblika doziranja zaviviće od toga ko se leči (ko je domaćin) i od konkretnog načina primene. Po mogućstvu, pripremljeni sastavi bi trebalo da budu formulisani tako da jedinica doziranja između 0,01 - 100 mg/kg telesne težine/dan ovog jedinjenja može da se da pacijentu koji treba da primi ovaj sastav.

[00106] Potrebno je takođe razumeti da će konkretno doziranje i terapijski režim za svakog pojedinog pacijenta zavisiti od niza faktora, uključujući aktivnost konkertno primenjenog jedinjenja, godine starosti, telesnu težinu, opšte zdravstveno stanje, pol, način ishrane, vreme primene, brzinu izlučivanja, kombinaciju lekova, mišljenje ordinirajućeg lekara, i težinu konkretne bolesti koja se leči. Količina jedinjenja prikazanog pronalaska u sastavu takođe će zavisiti od konkretnog jedinjenja u sastavu.

Upotrebe jedinjenja i farmaceutski prihvatljivi sastavi

[00107] U nekim oblicima, ovaj pronalazak opisuje metod za inhibiciju BTK, ili njenog mutanta, kod pacijenta ili na biološkom uzorku i uključuje korak primene na pomenutom pacijentu ili kontakt biološkog uzorka sa jedinjenjem u skladu sa ovim pronalaskom.

[00108] U nekim oblicima, ovaj pronalazak je usmeren na upotrebu jedinjenja ovog pronalaska i/ili njegovih fiziološki prihvatljivih soli, za moduliranje ili inhibiranje BTK enzima. Izraz “modulacija” označava svaku promenu u BTK-posredovanom prenošenju signala, koje se zasniva na dejstvu ovog specifičnog inventivnog jedinjenja koje je u stanju da uđe u interakciju sa ciljnom BTK na takav način da omogućava prepoznavanje, vezhivanje i aktivaciju. Ova jedinjenja se odlikuju tako visokim afinitetom za BTK, što obezbeđuje pouzdano vezivanje BTK. U nekim oblicima, ove supstance su visoko selektivne za BTK i daju joj prednost u odnosu na mnoge kinaze da bi se garantovalo ekskluzivno i usmereno prepoznavanje sa jedinom metom BTK. U kontekstu predstavljenog pronalaska, izraz “prepoznavanje” – bez ograničavanja značenja – odnosi se na svaku vrstu interakcije između specifičnog jedinjenja i mete (cilja), posebno kovalentno ili ne-kovalentno vezivanje ili asocijaciju, kao što su kovalentna veza, hidrofobne/ hidrofilne interakcije, van der Waals-ove sile, jonski parovi, vodonične veze, interakcije ligand-receptor (enzim-inhibitor), i slično. Takve veze mogu da uključe i prisustvo drugih molekula kao što su peptidi, proteinske ili nukleotidne sekvence. Predstavljene interakcije protein/ligand(enzim-inhibitor)-odlikuju se visokim afinitetom, visokom selektivnošću i minimalnom ili potpuno odsutnom unakrsnom reaktivnošću sa drugim ciljnim molekulima da se isključe nezdravi i štetni uticaji na lečenog ispitanika.

[00109] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za inhibiciju BTK enzima, sa najmanje jednim jedinjenjem formule (I) u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njegovom fiziološki prihvatljivom soli, pod uslovim da se pomenuti BTK enzim inhibira. U nekim oblicima, ovaj sistem je celularni sistem. U drugim oblicima, ovaj sistem je jedna in-vitro translacija koja je bazirana na sintezi proteina bez živih ćelija. Ovaj celularni sistem se definiše kao svaki ispitanik pod uslovom da taj ispitanik uključuje ćelije. Otuda takav celularni sistem može da bude izabran od sledećih: grupa pojedinačnih ćelija, ćelijske kulture, tkiva, organi i životinje. U nekim oblicima, metod za moduliranje BTK enzima realizuje se in-vitro. Prethodno stanje tehnike za sadašnju specifikaciju koja se odnosi na jedinjenja formule (I), uključujući sve njegove oblike, ostaje vredno i primenljivo bez ograničenja na jedinjenja u skladu sa formulom (I) i njihove soli kada se koriste u metodi za inhibiciju BTK. Prethodno stanje tehnike za sadašnju specifikaciju koja se odnosi na jedinjenja formule (I), uključujući sve njegove oblike, ostaje vredno i primenljivo bez ograničenja na jedinjenja u skladu sa formulom (I) i njihove soli kada se koriste u metodi za inhibiciju BTK.

[00110] Pacijenti sa mutacijama u BTK imaju duboki blok (zastoj) u razvoju B ćelija, što ima za rezultat skoro potpuno odsustvo zrelih B limfocija i ćelija plazme, ozbiljno snižene nivoe Ig i duboku inhibiciju humoralnog odgovora na antigene „prisećanja“ (recall) (pregled dat u Vihinen et al Frontiers in Bioscience 5: d917-928). Miševi sa nedostatkom BTK takođe imaju smanjeni broj perifernih B ćelija i značajno smanjene nivoe IgM i IgG3 u serumu. Delecija BTK kod miševa ima duboko dejstvo na proliferaciju B ćelija indukovanu anti-IgM, i inhibira imune odgovore na tip II antigene nezavisne od timusa (Ellmeier et al, J Exp Med 192: 1611-1623 (2000)). BTK takođe igra ključnu ulogu u aktivaciji mastocita pre visokog afiniteta IgE receptora (Fc epsilon RI). BTK deficijentni mišji mastociti imaju smanjenu degranulaciju i smanjenu produkciju proinflamatornih citokina po unakrsnom povezivanju Fc epsilon RI (Kawakami et al. Journal of Leukocyte Biology 65: 286-290).

[00111] Ako prihvatimo da su jedinjenja inhibitori BTK ona su stoga korisna za terapiju jednog ili više poremećaja povezanih sa aktivnošću BTK. Prema tome, u nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju poremećaja posredovanih preko BTK i uključuje korak davanja jedinjenja predstavljenog pronalaska, ili njegovog farmaceutski prihvatljivog sastava pacijentu kome je to potrebno.

[00112] Izraz poremećaji ili stanja "posredovani preko BTK" kako se koristi ovde označava svaku bolest ili drugo štetno stanje za koje se zna da u njemu BTK, ili njegov mutant igraju ulogu. Prema tome, još jedan oblik predstavljenog pronalaska odnosi se na terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti za koje se zna da u njemu BTK, ili njegov mutant igraju ulogu. Konkretno, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine bolesti ili stanja izabranih od sledećih: proliferativni poremećaj ili autoimuni poremećaj, naznačeno time pomenuti metod uključuje davanje jedinjenja ili sastava u skladu sa predstavljenim pronalaskom pacijentu kome je to potrebno.

[00113] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti povezanih sa BTK. U nekim oblicima, ta bolest ili stanje je autoimuna bolest, npr., inflamatorna bolest creva, artritis, sistemski lupus eritematozus (SLE ili lupus), lupus nefritis, vaskulitis, idiopatska trombocitopenijska purpura (ITP), reumatoidni artritis, psorijatični artritis, osteoartritis, Stilova bolest, juvenilni artritis, dijabetes, mijastenija gravis, Hašimotov tiroiditis, Ordov tiroiditis, Grejvsova bolest, autoimuni tiroiditis, Sjogren-ov sindrom, multipla skleroza, sistemska skleroza, Lajmska neuroborelioza, Giljan-Bareov sindrom, akutni diseminovani encefalomijelitis, Adisonova bolest, opsoklonusmioklonus sindrom, ankilozirajuća spondiloza, sindrom antifosfolipidno antitelo, aplastična anemija, autoimuni hepatitis, autoimuni gastritis, perniciozna anemija, celijačna bolest, Gudpasturov sindrom, idiopatska trombocitopenijska purpura, optički neuritis, skleroderma, primarna bilijarna cirrhosis, Rajterov sindrom, Takajašijev arteritis, temporalni arteritis, topla autoimuna hemolitička anemija, Vegenerova granulomatoza, psorijaza, alopecia universalis, Behčetova bolest, hronični zamor, disautonomija, membranozna glomerulonefropatija, endometrioza, intersticijalni cistitis, pemphigus vulgaris, bulozni pemfigoid, neuromiotonija, scleroderma, ili vulvodinija. U nekim oblicima, bolest ili stanje is sistem ic lupus erythematosus (SLE ili lupus) ili lupus nephritis.

[00114] U nekim oblicima, ta bolest ili stanje je hiperproliferativna bolest ili imunološki-posredovana bolest uključujući odbacivanje transplantiranih organa ili tkiva i sindrom stečene imunodeficijencije (AIDS, SIDA, takođe poznato i kao HIV).

[00115] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti i stanja povezanih sa BTK, naznačeno time da ta bolest ili stanje budu izabrani od sledećih: heteroimuna stanja ili bolesti, koja uključuju, ali se ne ograničavaju na bolest kalem protiv domaćina, transplantaciju, transfuziju, anafilaksu, alergije (npr., alergije na biljne polene, lateks, lekove, hranu, otrove insekata, životinjsku dlaku, životinjsku perut, prašinu, ili bubašvabe), preosetljivost tipa I, alergijski konjunktivitis, alergijski rinitis, i atopijski dermatitis.

[00116] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti i stanja povezanih sa BTK, naznačeno time da ta bolest ili stanje budu izabrani od sledećih: zapaljenska bolest, npr., astma, apendicitis, atopijski dermatitis, astma, alergija, blefaritis, bronhiolitis, bronhitis, burzitis, cervicitis, holangitis, holecistitis, hronično odbacivanje grafta, kolitis, konjunktivitis, Kronova bolest, cistitis, dakrioadenitis, dermatitis, dermatomiositis, encefalitis, endokarditis, endometritis, enteritis, enterokolitis, epikondilitis, epididimitis, fasciitis, fibrozitis, gastritis, gastroenteritis, Henoh-Šonlajnova purpura, hepatitis, hidradenitis suppurativa, imunoglobulin A nefropatija, intersticijalna bolest pluća, laringitis, mastitis, meningitis, mijelitis miokarditis, miositis, nefritis, ooforitis, orhitis, osteitis, otitis, pankreatitis, parotitis, perikarditis, peritonitis, faringitis, pleuritis, flebitis, pneumonitis, pneumonija, polimiozitis, proktitis, prostatitis, pijelonefritis, rinitis, salpingitis, sinuzitis, stomatitis, sinovitis, tendonitis, tonzilitis, ulcerozni kolitis, uveitis, vaginitis, vaskulitis, ili vulvitis.

[00117] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti i stanja povezanih sa BTK, naznačeno time da ta bolest ili stanje budu izabrani od sledećih: kancer. U jednom obliku kancer je B-ćelijski proliferativni poremećaj, npr., difuzni B krupnoćelijski limfom, folikularni limfom, hronični limfocitni limfom, hronična limfocitna leukemija, akutna limfocitna leukemija, B-ćelijska prolimfocitna leukemija, limfoplazmacitni limfom/Waldenstromova makroglobulinemija, limfoma marginalne zone slezine, multipli mijelom (takođe poznat kao plasma ćelijski mijelom), ne-Hodžkinov limfom, Hodžkinov limfom, plasmacitom, ekstranodalni B ćelijski limfom marginalne zone, nodalni B ćelijski limfom marginalne zone, mantle ćelijski limfom, medijastinalni (timusni) B krupnoćelijski limfom, intravaskularni B krupnoćelijski limfom, primarni efuzioni limfom, Burkitov limfom/leukemija, ili limfomatoidna granulomatoza. U nekim oblicima, kancer je kancer dojke, kancer prostate, ili kancer mast ćelija (npr., mastocitom, leukemija mast ćelija, sarkom mast ćelija, sistemska mastocitoza). U jednom obliku ovaj kancer je kancer kosti. U drugom obliku, ovaj kancer je drugog primarnog porekla i metastasizira u kosti. U nekim oblicima, kancer is kolorektalni kancer ili kancer pankreasa.

[00118] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti ili stanja povezanih sa BTK uključujući bolesti kostiju i zglobova uključujući, bez ograničenja, reumatoidni artritis, seronegativne spondiloartropatije (uključujući ankilozirajući spondilitis, psorijatični artritis i Reiterovu bolest), Behčetovu bolest, Sjogrenov sindrom, sistemsku sklerozu, osteoporozu, rak kostiju i koštane metastaze.

[00119] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti i stanja povezanih sa BTK, naznačeno time da ta bolest ili stanje budu izabrani od sledećih: tromboembolijski poremećaj ili kardiovaskularni poremećaj, npr., infarkt miokarda, angina pektoris, ponovna okluzija posle angioplastike, restenoza posle angioplastike, ponovna okluzija posle aortokoronarnog bajpasa, restenoza posle aortokoronarnog bajpasa, šlog, tranzitorna ishemija, periferni arteririjski okluzivni poremećaj, plućna embolija, ili duboka venska tromboza. U nekim oblicima, sadašnji pronalazak daje anti-trombotični agens budući da je BTK takođe uključena u aktivaciju trombocita.

[00120] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti i stanja povezanih sa BTK, uključujući infektivne i ne-infektivne inflamatorne događaje, kao i autoimune i druge inflamatorne bolesti. Te autoimune i inflamatorne bolesti, poremećaji, i sindromi uključuju inflamatornu bolest karlice, uretritis, opekotine od sunca, sinuzitis, pneumonitis, encefalitis, meningitis, miokarditis, nefritis, osteomijelitis, miositis, hepatitis, gastritis, enteritis, dermatitis, gingivitis, apendicitis, pankreatitis, holocistitus, agamaglobulinemiju, psorijazu, alergiju, Kronovu bolest, sindrom iritabilnog creva, ulcerozni kolitis, Sjogrenovu bolest, odbacivanje tkivnog grafta, hiperakutno odbacivanje transplantiranog organa, astmu, alergijski rinitis, hroničnu opstruktivnu bolest pluća (HOBP), autoimunu poliglandularnu bolest (takođe poznatu kao autoimuni poliglandularni sindrom), autoimunu alopeciju, pernicioznu anemiju, glomerulonefritis, dermatomiositis, multiplu sklerozu, sklerodermu, vaskulitis, autoimuna hemolitička i trombocitopenijska stanja, Gudpasturov sindrom, aterosklerozu, Adisonovu bolest, Parkinsonovu bolest, Alchajmerovu bolest, dijabetes, septički šock, sistemski lupus eritematozus (SLE), reumatoidni artritis, psorijatični artritis, juvenilni artritis, osteoartritis, hroničnu idiopatsku trombocitopenijsku purpuru, Waldenstromovu makroglobulinemiju, mijastheniju gravis, Hašimotov tiroiditis, atopijski dermatitis, degenerativnu bolest zglobova, vitiligo, autoimuni hipopituitarizam, Giljan-Bareov sindrom, Behčetovu bolest, sklerodermu, mikozis fungoides, akutne inflamatorne odgovore (kao što su akutni respiratorni distres sindrom i ishemija/reperfuzioni poremećaj), i Grejvsova bolest. U nekim oblicima, dijabetes is dijabetes tipa I.

[00121] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za terapiju ili ublažavanje težine jedne ili više bolesti i stanja povezanih sa BTK, izabranih od sledećih: reumatoidni artritis, multipla skleroza, B-ćelijska hronična limfocitna leukemija, akutna limfocitna leukemija, leukemija vlasastih ćelija, ne-Hodžkinov limfom, Hodžkinov limfom, multipli mijelom, kancer kosti, koštane metastaze, osteoporoza, dijabetes (npr. dijabetes tipa I), sindrom iritabilnog creva, Kronova bolest, lupus i transplantirani bubreg.

[00122] Drugi je cilj ovog pronalaska da opiše metod za terapiju bolesti koje su uzrokovane aktivnošću BTK, njome posredovane i/ili ih ona podstiče, naznačeno time da se najmanje jedno jedinjenje formule (I) u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njegove fiziološki prihvatljive soli daju sisaru kome je takva terapija potrebna. U nekim oblicima, ovaj pronalazak opisuje metod za terapiju lupusa, naznačeno time da se najmanje jedno jedinjenje formule (I) u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njegove fiziološki prihvatljive soli daju sisaru kome je takva terapija potrebna. U nekim oblicima, ovo jedinjenje se daje u delotvornoj količini kako je gore definisano. U nekim oblicima, ova terapija podrazumeva oralno davanje.

[00123] Opisani metod ovog pronalaska može da se primenjuje ili in-vitro ili in-vivo. Podložnost određenih ćelija na terapiju jedinjenjima u skladu sa ovim pronalaskom može posebno da se utvrdi in-vitro testovinma, bilo tokom istraživanja ili kliničke primene. Tipično se kultura ćelija kombinuje sa jedinjenjem u skladu sa ovim pronalaskom u različitim koncentracijama tokom perioda vremena koje je dovoljno da se omogući da aktivni agens inhibira aktivnost BTK, obično između jednog sata i nedelju dana. In-vitro terapija može da se sprovede korišćenjem gajenih ćelija iz uzorka biopsije ili ćelijske linije.

[00124] Domaćin ili pacijent može da pripada bilo kojoj vrsti sisara, na primer vrsti primata, posebno ljudi; glodara, uključujući miševe, zamorce i hrčke; zečeve; konje; krave; pse; mačke, itd. Životinjski modeli su od interesa za eksperimentalna istraživanja, jer obezbeđuju model za lečenje bolesti kod ljudi.

[00125] Za identifikaciju puta prenošenja signala i za otkrivanje interakcija između različitih puteva prenošenja signala, razni naučnici su razvili odgovarajuće modele ili sisteme modela, na primer modele ćelija kulture i modele transgenih životinja. Za određivanje određenih stadijuma u kaskadi prenošenja signala, jedinjenja u interakciji mogu da se koriste sa siljem da se modulira signal. Jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom takođe mogu da se koriste kao reagensi za testiranje puteva prenošenja signala zavisnih od BTK i to kod životinja i/ili na modelima ćelija kulture ili kod kliničkih bolesti pomenutih u ovoj patentnoj prijavi.

[00126] Štaviše, naknadna pouka ove prikazane specifikacije koja se odnosi na upotrebu jedinjenja u skladu sa formulom (I) i njenih derivata za proizvodnju medikmenta za profilaktički ili terapijski tretman i/ili monitoring smatra se validnom i primenljivom bez ograničenja za upotrebu ovog jedinjenja za inhibiciju BTK aktivnosti kao metode rada.

[00127] Ovaj pronalazak se takođe odnosi na upotrebu jedinjenja u skladu sa formulom (I) i/ili njegovom fiziološki prihvatljivom soli za profilaktički ili terapijski tretman i/ili monitoring bolesti koje su uzrokovane aktivnošću BTK, ili njome posredovane, ili ih ona podstiče. Štaviše, ovaj pronalazak odnosi se na upotrebu jedinjenja u skladu sa formulom (I) i/ili njegovom fiziološki prihvatljivom soli za profilaktički ili terapijski tretman i/ili monitoring bolesti koje su uzrokovane aktivnošću BTK, ili njome posredovane, ili ih ona podstiče. U nekim oblicima, ovaj pronalazak opisuje upotrebu jedinjenja u skladu sa formulom I ili njegovom fiziološki prihvatljivom soli za proizvodnju medikamenta profilaktički ili terapijski tretman poremećaja posredovanog preko BTK.

[00128] Jedinjenja formule (I) i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli mogu štaviše da se koriste kao međuproizvodi za pripremu dodatnih aktivnih sastojaka za medikament. Ovaj medikament se po mogućstvu priprema na ne-hemijski način, npr. kombinovanjem aktivnog sastojka sa najmanje jednim čvrstim, tečnim ili polu-tečnim nosačem ili ekscipijensom, i opciono u kombinaciji sa jednom ili više drugih aktivnih supstanci u odgovarajućem obliku doziranja.

[00129] Drugi predmet prikazanog pronalaska su jedinjenja formule (I) u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli za upotrebu za profilaktički ili terapijski tretman i/ili monitoring bolesti koje su uzrokovane ili posredovane aktivnošću BTK ili koje ona podstiče. Drugi preporučeni cilj ovog pronalaska odnosi se na jedinjenja formule (I) u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njihove fiziološki prihvatljive soli za upotrebu za profilaktički ili terapijski tretman i/ili monitoring lupusa. Pretodno stanje tehnike za sadašnju specifikaciju koja se odnosi na jedinjenja formule (I), uključujući sve njegove preporučene oblike, ostaje vredno i primenljivo bez ograničenja na jedinjenja u skladu sa formulom (I) i njihove soli kada se koriste za profilaktički ili terapijski tretman i/ili monitoring lupusa.

[00130] Jedinjenja formule (I) u skladu sa ovim pronalaskom mogu se davati pre ili po početku bolesti jednom ili više puta da deluju kao terapija. Gore pomenuta jedinjenja i medicinski proizvodi za inventivnu upotrebu posebno se koriste za terapijski tretman. Terapijski relevantno dejstvo ublažava u određenoj meri jedan ili više simptoma poremećaja, ili vraća na normalu, bilo delimično ili potpuno, jedan ili više fizioloških ili biohemijskih parametara povezanih ili sa uzročnikom bolesti ili patološkim stanjem. Monitoring se smatra vrstom tretmana pod uslovom da se ova jedinjenja daju u određenim intervalima, npr. da se pojača odgovor i potpuno iskorene patogeni i/ili simptomi bolesti. Mogu se primenjivati bilo identično jedinjenje ili različita jedinjenja. Metode ovog pronalaska mogu takođe mogu da se koriste da se smanji verovatnoća razvoja poremećaja ili čak unapred spreči započinjanje poremećaja povezanih sa aktivnošću BTK ili za terapiju simptoma koji su se već javljali i koji traju.

[00131] U smislu ovog pronalaska, profilaktički tretman se savetuje ako ispitanik ima ma kakve preduslove za gore navedena fiziološka ili patološka stanja, kao što su porodična predispozicija, genetski poremećaj, ili već ranije stečena bolest.

[00132] Štaviše ovaj pronalazak se odnosi na medikament koji uključuje najmanje jedno jedinjenje u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njegove farmaceutski upotrebljive derivate, soli, solvate i stereoizomere, uključujući njihove mešavine u svim odnosima. U nekim oblicima, ovaj pronalazak se odnosi na medikament koji uključuje najmanje jedno jedinjenje u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njegove fiziološki prihvatljive soli.

[00133] “Medikament” u značenju ovog pronalaska je svaki agens na polju medicine, koji uključuje jedno ili više jedinjenja formule (I) ili njegovih preparata (npr. farmaceutski sastav ili farmaceutsku formulaciju) i može da se koristi u profilaksi, terapiji, praćenju ili naknadnoj nezi pacijenaka koji pate od bolesti, povezanih sa aktivnošću BTK, na takav način da patogena modifikacija njihovog sveukupnog stanja ili stanja određenih regiona tela može da se utvrdi barem privremeno.

[00134] U različitim oblicima, aktivni sastojak može da se daje sam ili u kombinaciji sa drugim tretmanima. Sinergističko dejstvo može da se postigne korišćenjem više od jednog jedinjenja u farmaceutskom sastavu, t.j. jedinjenje formule (I) se kombinuje sa najmanje još jednim agensom kao aktivnim sastojkom, koji je ili drugo jedinjenje formule (I) ili jedinjenje drugačije strukturne formule. Ovi aktivni sastojci mogu da se koriste ili istovremeno ili sekvencijalno.

[00135] Ovde su opisane metode tretmana u kojima se najmanje jedan hemijski entitet ovde opisan daje u kombinaciji sa jednim anti-inflamatornim agensom. Anti-inflamatorni agensi uključuju ali se ne ograničavaju na NSAIL, nespecifične i COX-2 specifične inhibitore enzima ciklooksigenaze, jedinjenja zlata, kortikosteroide, metotreksat, antagoniste faktora tumorske nekroze (TNF), imunosupresive i metotreksat.

[00136] Primeri NSAIL uključuju, ali se ne ograničavaju na, ibuprofen, flurbiprofen, naproksen i naproksen natrijum, diklofenak, kombinacije diklofenak natrijuma i misoprostola, sulindak, oksaprozin, diflunisal, piroksikam, indometacin, etodolak, fenoprofen kalcijum, ketoprofen, natrijum nabumeton, sulfasalazin, tolmetin natrijum, i hidroksihlorokvin. Primeri NSAIL takođe uključuju COX-2 specifične inhibitore kao što su celekoksib, valdekoksib, lumirakoksib i/ili etorikoksib.

[00137] U nekim oblicima, ovaj anti-inflamatorni agens je salicilat. Salicilati uključuju ali se ne ograničavaju samo na acetilsalicilnu kiselinu ili aspirin, natrijum salicilat, i holin i magnezijum salicilate.

[00138] Ovaj anti-inflamatorni agens može takođe da bude i kortikosteroid. Na primer, taj kortikosteroid može da bude kortizon, deksametazon, metilprednizolon, prednizolon, prednizolon natrijum fosfat, ili prednizon.

[00139] U dodatnim oblicima ovaj anti-inflamatorni agens je jedinjenje zlata kao što su zlato natrijum tiomalat ili auranofin.

[00140] Ovaj pronalazak takođe uključuje oblike u kojima je antiinflamatorni agens metabolički inhibitor kao što su inhibitor dihidrofolate reduktaze, kao što je metotreksat ili inhibitor dihidroorotat devodonikaze, kao što je leflunomid.

[00141] Ostali oblici ovog pronalaska odnose se na kombinacije u kojima je najmanje jedno anti-inflamatorno jedinjenje anti-monoklonski antitelo (kao što su eculizumab ili pekselizumab), TNF antagonist, kao što su entanercept, ili infliksimab, koji je anti-TNF alfa monoklonsko antitelo.

[00142] Još neki drugi oblici ovog pronalaska odnose se na kombinacije u kojima je najmanje jedan aktivni agens imunosupresivno jedinjenje kao što je imunosupresivno jedinjenje odabrano između sledećih: metotreksat, leflunomid, ciklosporine, takrolimus, azatioprin, i mikofenolat mofetil.

[00143] B-ćelije i prekursori B-ćelija koji eksprimiraju BTK implicirani su u patologiji B-ćelijskih maligniteta, uključujući, ali ne ograničavajući se na, B-ćelijski limfom, limfom (uključujući Hodžkinov i ne-Hodžkinov limfom), limfom vlasastih ćelija, multipli mijelom, hroničnu i akutnu mijelogenu leukemiju i hroničnu i akutnu limfocitnu leukemiju.

[00144] Pokazano je da je BTK inhibitor Fas/APO-1 (CD-95) smrti jer indukuje signalni kompleks (DISC) u B-liniji limfoidnih ćelija. Sudbina leukemiijkih/limfomskih ćelija može da bude u ravnoteži između suprotstavljenih proapoptotičnih dejstava kaspaza aktiviranih od strane DISC i ushodnog antiapoptotičnog regulatornog mehanizma koji uključuje BTK i/ili njegove supstrate (Vassilev et al., J. Biol. Chem. 1998, 274, 1646-1656).

[00145] Otkriveno je i da su inhibitori BTK korisni kao agensi za hemosensitizaciju, i, tako su korisni u kombinaciji sa drugim hemoterapijskim lekovima, posebno lekovima koji indukuju apoptozu. Primeri drugih hemoterapijskih lekova koji mogu da se koriste u kombinaciji sa hemosensitizirajućim inhibitorima BTK uključuju inhibitore topoizomeraze I (kamptotecin ili topotekan), inhibitore topoizomeraze II i (npr. daunomicin i etoposid), alkilirajuće agense (npr. ciklofosfamid, melfalan i BCNU), agense usmerene na tubulin (npr. taksol i vinblastin), i biološke agense (npr. antitela kao što su anti CD20 antitelo, IDEC 8, imunotoksini, i citokini).

[00146] U jednom drugom aspektu, ovaj pronalazak daje i komplet koji se sastoji od posebnih pakovanja delotvorne količine jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli, derivata, solvata i stereoizomera, uključujući njihove mešavine u svim odnosima, i opciono, delotvornu količinu dodatnog aktivnog sastojka. Ovaj komplet uključuje odgovarajuće posude, kao što su kutije, pojedinačne bočice, kese ili ampule. Ovaj komplet može, na primer, da uključi odvojene ampule, gde svaka delotvorna količina jedinjenja u skladu sa ovim pronalaskom i/ili njegove farmaceutski prihvatljivi soli, derivate, solvate i stereoizomere, uključujući njihove mešavine u svim odnosima, uključuje i delotvornu količinu dodatnog aktivnog sastojka u rastvorenoj ili liofilizovanoj formi.

[00147] Kako se koriste ovde, izrazi “tretman,” “tretirati,” i “tretiranje” odnose se na zaustavljanje, ublažavanje, odlaganje početka ili inhibiranje napredovanja bolesti ili poremećaja, ili njihovog jednog ili više simptoma, kako je ovde opisano. U nekim oblicima, tretman se daje pošto se razviju jedan ili više simptoma. U drugim oblicima, tretman se daje u odsustvu simptoma. Na primer, tretman se primenjuje na podložnom pojedincu pre pojave simptoma (npr., u svetlu istorije simptoma i/ili u svetlu genetskih ili drugih faktora podložnosti). Tretman se takođe nastavlja i pošto se simptomi povuku, na primer da se spreči ili odloži njihova ponovna pojava.

[00148] Ova jedinjenja i sastavi, u skladu sa opisanim metodom prikazanog pronalaska, se daju korišćenjem bilo koje količine i bilo kog načina primene koji su delotvorni za terapiju ili ublažavanje težine poremećaja opisanih gore. Tačno potrebna količina će se razlikovati od ispitanika do ispitanika, zavisno od vrste, godina starosti, i opšteg stanja ispitanika, težine infekcije, konkretnog agensa, načina primene, i slično. Jedinjenja ovog pronalaska se po mogućstvu formulišu u jedinicama doziranja da se olakša primena i ujednačenost doza. Izraz "oblik jedinice doziranja" kako se koristi ovde odnosi se na fizički odvojenu jedinicu agensa primerenu za pacijenta koji će se lečiti. Međutim, podrazumeva se da će se ukupnu dnevnu upotrebu jedinjenja i sastava prikazanog pronalaska propisivati ordinirajući lekar na osnovu svog medicinskog znanja. Konkretni delotvorni nivo doze za svakog pojedinog pacijenta ili organizam zavisiće od niza faktora uključujući poremećaj koji se tretira i težinu tog poremećaja; aktivnost konkretno korišćenog jedinjenja; konkretno korišćenog sastava; godina starosti, telesne težine, opšteg zdravstvenog stanja, pola, i načina ishrane pacijenta; vremena primene, načina primene; i brzine izlučivanja konkretno korišćenog jedinjenja; trajanja tretmana; lekova koji se koriste u kombinaciji ili istovremeno sa konkretno korišćenim jedinjenjem, i sličnih faktgora koji su dobro poznati u medicinskoj struci.

[00149] Farmaceutski prihvatljivi sastavi ovog pronalaska mogu se davati ljudima i drugim životinjama oralno, rektalno, parenteralno, intracisternalno, intravaginalno, intraperitonealno, topički (u vidu praškova, pomada ili kapi), bukalno, kao oralni ili nazalni sprej, ili slično, zavisno od težine infkecije koja se leči. U nekim oblicima, jedinjenja ovog pronalaska se daju oralno ili parenteralno u nivoima doziranja od oko 0,01 mg/kg do oko 100 mg/kg i po mogućstvu od oko 1 mg/kg do oko 50 mg/kg telesne težine ispitanika, jednom ili više puta na dan, da se postigne željeni terapijski efekat.

[00150] Tečni oblici doziranja za oralnu primenu uključuju, ali se ne ograničavaju na, farmaceutski prihvatljive emulzije, mikroemulzije, rastvore, suspenzije, sirupe i eliksire. Uz aktivna jedinjenja, tečni oblici doziranja opciono sadrže i inertne razblaživače koji se uobičajeno koriste u struci kao što su, na primer, voda ili other rastvarači, agensi za rastvaranje i emilzifikaciju kao što su etil alkohol, isopropil alkohol, etil karbonat, etil acetat, benzil alkohol, benzil benzoat, propilen glikol, 1,3-butilen glikol, dimetilformamid, ulja (posebno, od semena pamuka, mlevenih koštunica, kukuruza, klica, maslina, ricinusa, i susama), glicerol, tetrahidrofurfuril alkohol, polietilen glikoli i estri masne kiseline sorbitan, i njihove mešavine. Uz inertne razblaživače, oralni sastavi mogu takođe da uključuju adjuvanse kao što su agensi za vlaženje, emulzifikasiju i pravljenje suspenzije, zaslađivače, agense za poboljšanje ukusa, i mirisa.

[00151] Injektabilni preparati, na primer, sterilne injektabilne vodene ili uljne suspenzije se formulišu u skladu sa poznatim metodama korišćenjem odgovarajućih agenasa za disperziju ili vlaženje, i pravljenje suspenzije. Sterilni injektabilni preparati su takođe sterilni injektabilni rastvor, suspenzija ili emulzija u netoksičnom parenteralno prihvatljivom razblaživaču ili rastvaraču, na primer, kao rastvor u 1,3-butanediolu. U prihvatljive vehikulume i rastvarače koji mogu da se koriste spadaju voda, Ringerov rastvor, U.S.P. i izotoni rastvor natrijum hlorida. Uz to, sterilna, fiksna ulja se konvencionalno koriste kao rastvarač ili podloga za suspenziju. Za ove namene može da se koristi svako neutralno ulje uključujući sintetske mono- ili digliceride. Uz to, masne kiseline kao što su oleinska kiselina koriste se za pripremu injektabilnih preparata.

[00152] Injektabilne formulacije mogu da se sterilizuju, na primer, filtracijom kroz filter koji zadržava bakterije, ili tako što će uključiti sterilizujuće agense u obliku sterilnih čvrstih sastava koji mogu da se rastvore ili disperguju u sterilnoj vodi ili drugim sterilnim injektabilnim podlogama pre upotrebe.

[00153] Da se produži dejstvo jedinjenja prikazanog pronalaska, često je poželjno da se uspori apsorpcija ovog jedinjenja iz supkutano ili intramuskularno date injekcije. Ovo se postiže upotrebom tečne suspenzije kristalnog ili amorfnog materijala koji se loše rastvara u vodi. Brzina apsorpcije ovog jedinjenja onda zavisi od brzine rastvaranja koja, za uzvrat, može da zavisi od veličine kristala i oblika kristala. Alternativno, usporena apsorpcija parenteralno datog jedinjenja postiže se rastvaranjem ili suspenzijom jedinjenja u uljnom vehikulumu. Injektabilne depo forme prave se formiranjem mikroenkapsuliranih matrica ovog jedinjenja u biorazgradljive polimere kao što su polilaktid-poliglikolid. Zavisno od odnosa jedinjenja i polimera i prirode posebno korišćenih polimera, brzina oslobađanja jedinjenje može da se kontroliše. Primeri drugih biorazgradljivih polimera uključuju poli(ortoestri) i poli(anhidridi). Depo injektabilne formulacije se takođe pripremaju tako što se jedinjenje unosi u liposome ili mikroemulzije koje su kompatibilne sa telesnim tkivima.

[00154] Sastavi za rektalnu ili vaginalnu primenu su po mogućstvu supozitorije koje se mogu pripremiti mešanjem jedinjenja ovog pronalaska sa odgovarajućim ne-iritantnim inertnim sastojcima ili nosačima kao što su kakao buter, polietilen glikol ili supozitorijski vosak koji su čvrsti na sobnoj temperaturi ali tečni na telesnoj temperaturi pa se stoga tope u rektumu i vaginalnoj šupljini, i oslobađaju aktivno jedinjenje.

[00155] Čvrsti oblici doziranja za oralnu primenu uključuju kapsule, tablete, pilule, praškove, i granule. U takvim čvrstim oblicima doziranja, aktivno jedinjenje se meša sa najmanje jednim inertnim, farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom ili nosačem kao što su natrijum citrat ili dikalcijum fosfat i/ili a) fileri ili ekstenderi kao što su skrobovi, laktoza, saharoza, glukoza, manitol, i silicijumova kiselina, b) vezivne supstance kao što su, na primer, karboksimetilceluloza, alginati, želatin, polivinilpirolidinon, saharoza, i akacija, c) humektanti kao što je glicerol, d) agensi za dezintegrisanje kao što su agar--agar, kalcijum karbonat, krompirni skrob ili tapioka, algininska kiselina, neki silikati, i natrijum karbonat, e) agensi za usporavanje rastvaranja kao što je parafin, f) apsorpcija akceleratora kao što su kvaterna amonijumova jedinjenja, g) agensi za vlaženje kao što su, na primer, cetil alkohol i glicerol monostearat, h) apsorbenti kao što su kaolin i bentonitna glina, i i) lubrikanti kao što su talk, kalcijum stearat, magnezijum stearat, čvrtsti polietilen glikoli, natrijum lauril sulfat, i njihove mešavine. U slučaju kapsula, tableta i pilula, oblik doziranja takođe opciono uključuje i pufere.

[00156] Čvrsti sastavi sličnog tipa takođe se opciono koriste kao fileri (punioci) u meko i čvrsto punjenim želatinskim kapsulama korišćenjem ekscipijenasa kao što su laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikoli velike molekulske težine i slično. Čvrsti oblici doziranja kao što su tablete, dražeje, kapsule, pilule, i granule mogu se pripremati sa premazom (filmom) i ljušturom kao što su enterički premazi i drugi premazi koji su dobro poznati u struci farmaceutskih formulacija. Oni opciono sadrže agense za opacifikaciju i mogu takođe biti tako komponovani da oslobađaju samo aktivni sastojak(sastojke), ili preferencijalno u nekim delovima intestinalnog trakta, opciono, na usporeni način. Primeri ovakvih supstanci koje se unose u sastave uključuju polimerne supstance i voskove. Čvrsti sastavi sličnog tipa takođe se koriste kao fileri u meko i čvrsto punjenim želatinskim kapsulama korišćenjem ekscipijenasa kao što su laktoza ili mlečni šećer, kao i polietilen glikoli velike molekulske težine i slično.

[00157] Aktivna jedinjenja takođe mogu da budu u mikro-enkapsuliranoj formi sa jednim ili više inertnih sastojaka kako je navedeno gore. Ovi čvrsti oblici doziranja kao tablete, dražeje, kapsule, pilule, i granule mogu se pripremati sa premazom (filmom) i ljušturom kao što su enterički premazi i oslobađati taj kontolni premaz i druge premaze, i ovo je takođe dobro poznato u struci farmaceutskih formulacija. U takvim čvrstim oblicima doziranja aktivno jedinjenje može da se meša sa najmanje jednim inertnim razblaživačem kao što su saharoza, laktoza ili skrob. Ovakvi oblici doziranja takođe uključuju, što je normalna praksa, dodatne supstance uz ove inertne razblaživače, npr., lubrikante za tabletiranje i druga sredstva koja pomažu tabletiranje kao što je magnezijum stearat i mikrokristalna celuloza. U slučaju kapsula, tableta i pilula, ovi oblici doziranja opciono takođe uključuju puferske agense. Oni opciono sadrže agense za opacifikaciju i mogu takođe da budu takvog sastava da oslobađaju samo aktivni sastojak(sastojke), ili preferentcijalno, u nekim delovima intestinalnog trakta, opciono, na usporeni način. U primere sastava u koje se ugrađuje aktivno jedinjenje koji mogu da se koriste spadaju polimerne supstance i voskovi.

[00158] Oblici doziranja za topičku ili transdermalnu primenu jedinjenja ovog pronalaska uključuju pomade, paste, kreme, losione, gelove, praškove, rastvore, sprejove, inhalante ili flastere. Aktivna komponenta se meša u sterilnim uslovima sa farmaceutski prihvatljivim nosačem i po potrebi konzervansima ili puferima.

Formulacije za oči, kapi za uši, i kapi za oči se takođe uključuju u okvire ovog pronalaska. Uz to, sadašnji pronalazak uključuje i upotebu transdermalnih flastera, koji imaju dodatnu prednost da obezbeđuju kontrolisano oslobađanje jedinjenja u telo. Ovakvi oblici doziranja mogu se napraviri rastvaranjem ili disperzijom jedinjenja u odgovarajućoj podlozi (medijumu). Pojačivači apsorpcije takođe mogu da se koriste da pojačaju fluks ovog jedinjenja kroz kožu. Brzina se može kontrolisati bilo obezbeđivanjem membrane za kontrolu brzine ili dispergovanjem ovog jedinjenja u polimernoj matrici ili gelu.

[00159] U skladu sa jednim oblikom, ovaj pronalazak se odnosi na metod inhibicije aktivnosti BTK u biološkom uzorku koji uključuje korak kontakta pomenutog biološkog uzorka sa jedinjenjem ovog pronalaska, ili sastavom koji uključuje ovo jedinjenje.

[00160] U skladu sa drugim oblikom, ovaj pronalazak se odnosi na metod inhibiranja BTK, ili njenog mutanta, aktivnost u biološkom uzorku na pozitivni način, koji uključuje korak kontakta pomenutog biološkog uzorka sa jedinjenjem ovog pronalaska, ili sastavom koji uključuje ovo jedinjenje.

[00161] Jedinjenja ovog pronalaska su korisna in-vitro kao jedinstveni instrumenti za razumevanje biološke uloge BTK, uključujući procenu mnogo faktora za koje se smatra da imaju uticaja, ili da su pod uticajem produkcije BTK i interakcije sa BTK. Predstavljena jedinjenja su takođe korisna za razvoj drugih jedinjenja koja su u interkaciji sa BTK budući da predstavljena jedinjenja daju važne informacije o odnosu strukture i aktivnosti (SAR) koje olakšavaju taj razvoj. Jedinjenja prikazanog pronalaska koja se vezuju za BTK mogu da se koriste kao reagensi za detekciju BTK u živim ćelijama, fiksnim ćelijama, u biološkim tečnostima, u homogenatima tkiva, u prečišćenim, prirodnim biološkim materijalima, itd. Na primer, obeležavanjem takvog jedinjenja, mogu se identifikovati ćelije koje eksprimiraju BTK. Uz to, na osnovu njihove sposobnosti da vezuju BTK, jedinjenja prikazanog pronalaska mogu da se koriste u in-situ prebojavanju, FACS (fluorescencijom aktivirano sortiranje ćelija), natrijum dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforezi (SDS-PAGE), ELISA (enzimski povezanim imunoadsorptivnom testu), itd., enzimskom prečišćavanju, ili u prečišćavanju ćelija koje eksprimiraju BTK unutar permeabilizovane ćelije. Jedinjenja ovog pronalaska takođe mogu da se koriste kao komercijalni reagensi za istraživanja za različita medicinska istraživanja i za dijagnostičke svrhe. Te upotrebe mogu da uključuju ali se ne ograničavaju na: upotrebu kao kalibracijski standard za kvantifikaciju aktivnosti kandidata za inhibitore BTK u različitim funkcionalnim testovima; upotreba kao reagensi za blokiranje u nasumičnom skriningu jedinjenja, t.j. kada se traže nove porodice BTK liganda, ova jedinjenja mogu da se koriste da se blokira oporavak prikazanih jedinjenja BTK; upotreba u ko-kristalizaciji sa BTK enzimom, t.j. jedinjenja prikazanog pronalaska će omogućiti formiranje kristala ovog jedinjenja vezanih za BTK, čime se omogućava određivanje strukture enzim/jedinjenje rentgenskom kristalografijom; ostale istraživačke i dijagnostičke primene, naznačeno time da se BTK po mogućstvu aktivira ili da se ta aktivacija pogodno kalibriše u odnosu na poznatu količinu nekog BTK inhibitora, itd.; upotreba u testovima kao probe za određivanje ekspresije BTK u ćelijama; i razvoj testova za detekciju jedinjenja koja se vezuju za isto mesto kao i BTK vezujući ligandi.

[00162] Jedinjenja ovog pronalaska mogu da se primene ili samostalno i/ili u kombinaciji sa fizičkim merenjima za dijagnostikovanje efikasnosti tretmana. Farmaceutski sastavi koji sadrže pomenuta jedinjenja i upotreba pomenutih jedinjenja za terapiju stanja posredovanih preko BTK predstavljaju obećavajući, novi pristup za široki spektar terapija jer dovodi do neposrednog i momentalnog poboljšanja zdravstvenog stanja i kod ljudi i kod životinja. Ovi oralno biološki dostupni i aktivni novi hemijski entiteti ovog pronalaska poboljšavaju konfor za pacijente i uredno uzimanje terapije za lekare.

[00163] Jedinjenja formule (I), njihove soli, izomeri, tautomeri, enantiomerne forme, diastereomeri, racemati, derivati, prolekovi i/ili metaboliti odlikuju se visokom specifičnošću i stabilnošću, niskom cenom proizvodnje, i pogodnim rukovanjem. Ove osobine prdstavljaju osnovu za reproducibilno dejstvo, naznačeno time da je odsustvo unakrsne reaktivnosti važno za pouzdanu i bezbednu interakciju sa ciljnom strukturom.

[00164] Izraz “biološki uzorak”, kako se koristi ovde, uključuje, bez ograničenja, ćelije kulture ili njihove ekstrakte; bioptirani materijal dobijen od sisara ili njihove ekstrakte; i krv, pljuvačku, urin, feces, spermu, suze, ili druge telesne tečnosti ili njihove ekstrakte.

[00165] Modulacija BTK, ili njihovih mutanata, aktivnost u biološkom uzorku je korisna za niz namena koje su poznate stručnjacima za ovu oblast. Primeri takvih namena uključuju, ali se ne ograničavaju na, transfuziju krvi, transplanciju organa, čuvanje bioloških uzoraka i biološke eseje.

5. Probe jedinjenja

[00166] U nekim aspektima, jedinjenje prikazanog pronalaska se ograničava na detektabilne delove da se formira jedinjenje probe. U jednom aspektu, jedinjenje probe ovog pronalaska uključuje ireverzibilni inhibitor protein kinaze bilo koje formule kako je ovde opisano, detektabilne delove, i ograničavajući deo u kome se inhibitor kači za taj detektabilni deo.

[00167] U nekim oblicima, ovakva jedinjenja probe prikazanog pronalaska uključuju pripremljeno jedinjenje bilo koje formule kako je ovde opisano, ograničeno na detektabilni deo, R<t>, bivalentnim ograničavajućim delom, -T<1>-. Ovaj ograničavjući deo je spojen za jedinjenje ovog pronalaska via R<1>. Stručnjak za ovu oblast će shvatiti da kada se ograničavajući deo spoji za R<1>, R<1>je bivalentna „ubojita“ grupa označena sa R<1’>. U nekim oblicima, obezbeđeno jedinjenje probe je izabrano od sledećih: formula I-t:

I-t

naznačeno time da je svaki od X, X<1>, X<2>, L, i Y, kako je gore definisano, i opisano u ovim klasama i podklasama, R<1’>je bivalentni R<1>; T<1>je bivalentni ograničavajući deo; i R<t>is a detektabilni deo.

[00168] U nekim oblicima, ovakva jedinjenja probe prikazanog pronalaska uključuju pripremljeno jedinjenje bilo koje formule kako je ovde opisano, ograničeno na detektabilni deo, R<t>, bivalentni ograničavajući deo, -T<1>-. U nekim oblicima, obezbeđeno jedinjenje probe je izabrano od sledećih: formula I-s:

I-s

naznačeno time da je svaki od X, X<1>, R<1>, L, i Y, kako je gore definisano, i opisano u ovim klasama i podklasama, T<1>je bivalentni ograničavajući deo; i R<t>je detektabilni deo.

[00169] U nekim oblicima, R<t>je detektabilni deo izabran od sledećih: primarno obeležavanje ili sekundarno obeležavanje. U nekim oblicima, R<t>je detektabilni deo izabran od sledećih: fluorescentno obeležavanje (npr., fluorescentna boja ili fluorofor), oznake mase, hemiluminescentne grupe, hromofora, grupa gustih elektrona, ili agensa za transfer energije. U nekim oblicima, R<t>je biotin, biotin sulfoksid, radioizotop, ili fluorescentni obeleživač.

[00170] Kako se koristi ovde, izraz “detektabilni deo” koristi se u istom značenju kao i izraz “obeležavanje” i “reporter/izveštavanje” i odnosi se na svaki deo koji se može detektovati, npr., primarno obeležavanje i sekundarno obeležavanje. Prisustvo detektabilnog dela može se meriti korišćenjem metode za kvantifikaciju (u apsolutnom, aproksimativnom ili relativnom smislu) detektabilnog dela u sistemu koji se proučava. U nekim oblicima, ovakve metode su dobro poznate stručnjacima za ovu oblast i uključuju sve metode koje kvantifikuju reporterski/izveštajni deo (npr., obeležavanje, boja, fotounakrsna veza, citotoksično jedinjenje, lek, obeležavanje afiniteta, obeležavanje fotoafiniteta, reaktivno jedinjenje, antitelo ili fragment antitela, biomaterijal, nanočestica, spin obeležavanje, fluorofor, deo koji sadrži metal, radioaktivni deo, kvantna tačka (tačke), nova funkcionalna grupa, grupa koja je u kovalentnoj ili ne-kovalentnoj interakciji sa drugim molekulima, deo koji se može aktivirati svetlom (fotocaged), deo koji se može ekscitirati aktiničnim zračenjem, ligand, deo koji se može fotoizomerizovati, biotin, analog biotina (npr., biotin sulfoksid), deo koji uključuje jedan težak atom, grupa koja se može hemijski cepati, grupa koja se može cepati pomoću svetlosti, redox-aktivni agens, izotopski obeleženi deo, biofizička proba, fosforescentna grupa, hemiluminescentna grupa, grupa gustih elektrona, magnetna grupa, interkalirajuća grupa, hromophor, agens za transfer energije, biološki aktivni agens, detektabilno obeležavanje, i sve kombinacije gore navedenog).

[00171] Primarna obeležavanja, kao što su radioizotopi (npr., tricijum,<32>P,<33>P,<35>S,<14>C,<123>I,<124>I,<125>I, ili<131>I), oznake mase su stabilni izotopi (npr.,<13>C,<2>H,<17>O,<18>O,<15>N,<19>F, i<127>I), pozitron emitujući izotopi (npr.,<11>C,<18>F,<13>N,<124>I, i<15>O), i fluorescentna obeležavanja, što su reporter/izveštajne grupe koje generišu signal i koje se mogu detektovati i bez daljih izmena. Detektabilni delovi se analiziraju odgovarajućim metodama. Egzemplarne metode su fluorescencija, pozitronska emisiona tomografija, SPECT medicinsko snimanje, hemiluminescencija, elektronspin rezonanca, ultravioletna/vidljiva apsorbantna spektroskopija, masena spektrometrija, nuklearna magnetna rezonanca, magnetna rezonanca, protočna citometrija, autoradiografija, scintilaiono brojanje, fosfoimidžing, i elektrohemijske metode.

[00172] Izraz “sekundarno obeležavanje” kako se koristi ovde odnosi se na delove kao što su biotin i razni proteinski antigeni koji iziskuju prisustvo drugog intermedijarnog proizvod/jedinjenja da se dobije detektabilni signal. Za biotin, sekundarni intermedijarni proizvod uključuje konjugate streptavidin-enzim ili strepavidin-antitelo. Za obeležavanja antigena, sekundarni intermedijarni proizvodi uključuju konjugate antitelo-enzim. Neke fluorescentne grupe deluju kao sekundarni obeleživači je prenose energiju do druge grupe u procesu ne-radiativnog transfry energije fluorescentnom rezonancom (FRET), a druga grupa proizvodi detektovani signal.

[00173] Izrazi “fluorescentno obeležavanje”, “fluorescentna boja”, i “fluorofor” kako se koriste ovde odnose se na delove koji apsorbuju svetlosnu energiju na definisanoj talasnoj dužini ekscitacije i emituju svetlosnu energiju na različitoj talasnoj dužini. Primeri fluorescentih obeleživača uključuju, ali se ne ograničavaju na: Alexa Fluor boje (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660 i Alexa Fluor 680), AMCA, AMCA-S, BODIPY boje (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TR, BODIPY 493/503, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665), Karbooksirodamin 6G, karboksi-X-rodamin (ROX), Cascade Plavo, Cascade Žuto, Kumarin 343, cijaninske boje (Cy3, Cy5, Cy3.5, Cy5.5), Dansyl, Dapoksil, Dialkilaminokumarin, 4',5'-Dihloro-2',7'-dimetoksi-fluorescein, DM-NERF, Eozin, Eritrozin, Fluorescein, FAM, Hidroksikumarin, IRDyes (IRD40, IRD 700, IRD 800), JOE, Lisamin rodamin B, Marina Plavo, Metooksikumarin, Naftofluorescein, Oregon Zeleno 488, Oregon Zeleno 500, Oregon Zeleno 514, Pacific Plavo, PyMPO, Piren, Rodamin B, Rodamin 6G, Rodamin Zeleno, Rodamin Crveno, Rodol Zeleno, 2',4',5',7'-Tetra-bromosulfone-fluorescein, Tetrametil-rodamin (TMR), Karboksitetrametil-rodamin (TAMRA), Teksas Crveno, Teksas Crveno-X, 5(6)-Karboksifluorescein, 2,7-Dihlorofluorescein, N,N-Bis(2,4,6-trimetilfenil)-3,4:9,10-perilenebis (dikarboksimid), HPTS, Etil Eozin, DY-490XL MegaStokes, DY-485XL MegaStokes, Adirondack Zeleno 520, ATTO 465, ATTO 488, ATTO 495, YOYO-1,5-FAM, BCECF, dihlorofluorescein, rodamin 110, rodamin 123, YO-PRO-1, SYTOX Zeleno, Natijum Zeleno, SYBR Zeleno I, Alexa Fluor 500, FITC, Fluo-3, Fluo-4, fluoro-emerald, YoYo-1 ssDNA, YoYo-1 dsDNA, YoYo-1, SYTO RNASelect, Diversa Zeleno-FP, Dragon Zeleno, EvaZeleno, Surf Zeleno EX, Spectrum Zeleno, NeuroTrace 500525, NBD-X, MitoTracker Zeleno FM, LysoTracker Zeleno DND-26, CBQCA, PA-GFP (post-aktivacioni), WEGFP (postaktivacioni), FlASH-CCXXCC, Azami Zeleno monomerni, Azami Zeleno, Zeleno fluorescentni protein (GFP), EGFP (Campbell Tsien 2003), EGFP (Patterson 2001), Kaede Zeleno, 7-Benzilamino-4-Nitrobenz-2-Oksa-1,3-Diazol, Bexl, Doksorubicin, Lumio Zeleno, i SuperGlo GFP.

[00174] Izraz “oznaka mase” kako se koristi ovde odnosi se na svaki deo koji je u stanju da se jedinstveno detektuje pomoću svoje mase korišćenjem tehnike detekcije masenom spektrometrijom (MS). Primere oznaka mase uključuju oznake koje oslobađaju elektrofore kao što su N-[3-[4’-[(pmetoksitetrafluorobenzil)oksi]fenil]-3-metilgliceronil]izonipekotična kiselina, 4’-[2,3,5,6-tetrafluoro-4-(pentafluorofenoksil)]metil acetofenon, i njihovi derivati. Sinteza i korisnost ovih oznaka mase opisani su u SAD Patentima 4,650,750, 4,709,016, 5,360,8191, 5,516,931, 5,602,273, 5,604,104, 5,610,020, i 5,650,270. Drugi primeri oznaka mase uključuju, ali se ne ograničavaju na, nukleotide, didezoksinukleotide, oligonukleotide različite dužine i sastava baze, oligopeptide, oligosaharide, i druge sintetske polimere rszličite dužine i sastava monomera. Široki spektar organskih molekula, i neutranih i naelektrisanih (biomolekuli ili sintetska jedinjenja) odgovarajućeg raspona mase (100-2000 Daltona) takođe se koriste kao oznake mase. Stabilni izotopi (npr.,<13>C,<2>H,<17>O,<18>O, i<15>N) takođe se koriste kao oznake mase.

[00175] Izraz “hemiluminescentna grupa,” kako se koristi ovde, odnosi se na grupu koja emituje svetlost kao rezultat hemijske reakcije bez dodavanja toplote. Kao primer, luminol (5-amino-2,3-dihidro-1,4-ftalazinedion) reaguje sa oksidantima kao vodonik peroksid (H2O2) u prisustvu baze i metalnog katalizatora da se dobije proizvod u ekscitiranom stanju (3-aminoftalat, 3-APA).

[00176] Izraz “hromofor,” kako se koristi ovde, odnosi se na molekul koji apsorbuje svelost iz vidljivih talasnih dužina, UV talasnih dužina ili IR talasnih dužina.

[00177] Izraz “boja,” kako se koristi ovde, odnosi se na rastvorljivu supstancu koja služi za bojenje i sadrži jedan hromofor.

[00178] Izraz “grupa gustih elektrona,” kako se koristi ovde, odnosi se na grupu koja rasipa elektrone kada se zrači elektronskim snopom. Ovakve grupe uključuju, ali se ne ograničavaju na, amonijum molibdat, bismut subnitrat, kadmium jodid, karbohidrazid, gvožđe hlorid heksahidrat, heksametilen tetramin, indijum trihlorid anhidrovani, lantan nitrat, olovo acetat trihidrate, olovo citrat trihidrat, olovo nitrat, periodična kiselina, fosfomolibdična kiselina, fosfovolframska kiselina, kalijum fericijanid, kalijum ferocijanid, rutenijum crveno, srebro nitrat, srebro proteinat (Ag esej: 8.0-8.5%) “Snažni”, srebro tetrafenilporfin (S-TPPS), natrijum hloroaurat, natrijum tungstat, talijum nitrat, tiosemikarbazid (TSC), uranil acetat, uranil nitrat, i vanadil sulfat.

[00179] Izraz “agens za prenos energije,” kako se koristi ovde, odnosi se na molekul koji ili daje (donor) ili prima energiju iz drugog molekula. Samo kao primer, transfer energije fluorescentnom rezonancom (FRET) je dipol-dipol process kupliranja kojim se energija ekscitiranog stanja fluorescentnog donorskog molekula neradijacijski prenosi na neekscitorani molekul primaoca koji onda fluorescentno emituje doniranu energu na većoj talasnoj dužini.

[00180] Izraz “deo koji inkorporira težak atom,” kako se koristi ovde, odnosi se na grupu koja inkorporira jedan jon ili atom koji je koji je obično teži od ugljenika. U nekim oblicima, takvi joni ili atomi uključuju, ali se ne ograničavaju na, silicijum, volfram, zlato, olovo, i uranijum.

[00181] Izraz “fotoafinitetno obeležavanje,” kako se koristi ovde, odnosi se na obeležavanje grupom, koja po izlaganju svetlosti formira kovalentnu vezu sa molekulom za koji ovo obeležavanje ima afinitet.

[00182] Izraz “ deo koji se aktivira svetlom (fotocaged),” kako se koristi ovde, odnosi se na grupu koja pošto se osvetli na određenoj talasnoj dužini, kovalentno ili ne-kovalentno vezuje druge jone ili molekule.

[00183] Izraz “deo koji se fotoizomerizuje,” kako se koristi ovde, odnosi se na grupu, naznačeno time da pošto se osvetli menja se iz jednog oblika izomera u drugi.

[00184] Izraz “radioaktivni deo,” kako se koristi ovde, odnosi se na grupu čija jezgra spontano odaju nuklearno zračenje, kao što su alfa, beta, ili gama čestice; naznačeno time da su alfa čestice jezgra helijuma, beta čestice su elektroni, i gama čestice su visoko energetski fotoni.

[00185] Izraz “spin obeležavanje,” kako se koristi ovde, odnosi se na molekule koji sadrže jedan atom ili grupu atoma koji ispoljavaju spin nesparenih elektrona (t.j. stabilna paramagnetna grupa) koji se u nekim oblicima detektuju elektronskom spin rezonantnom spektroskopijom, a u drugim oblicima se spajaju za drugi molekul. Ovakvo spin-obeležavanje molekula uključuje, ali se ne ograničava na, nitril radikale i nitrokside, i u nekim oblicima to su pojedinačna spin-obeležavanja ili dvostruka spin-obeležavanja.

[00186] Izraz “kvantne tačke,” kako se koristi ovde, odnosi se na koloidne poluprovodničke nanokristale koji se u nekim oblicima detektuju u bliskoinfracrvenom i i imaju ekstremno visok kvantni prinos (t.j., veoma su svetli po skromnom osvetljavanju).

[00187] Stručnjak za ovu oblast će prepoznati da je detektabilni deo spojen za dato jedinjenje preko odgovarajućeg supstituenta. Kako se koristi ovde, izraz “odgovarajući supstituent” odnosi se na deo koji je u stanju da se kovalentno spoji za detektabilni deo. Takvi delovi su dobro poznati stručnjacima za ovu oblast, i uključuju grupe koje sadrže, npr., karboksilatni deo, amino deo, tiolni deo, ili hidroksilni deo, da pomenemo samo nekolicinu. Jasno je da su takvi delovi direktno spojeni za dato jedinjenje ili preko ograničavajućeg dela, kao što su bivalentni zasićeni ili nezasićeni ugljovodonični lanac.

[00188] U nekim oblicima, detektabilni delovi su spojeni za dato jedinjenje preko klik hemije. U nekim oblicima, ovakvi delovi se spajaju preko 1,3-ciklododatka azida sa alkinom, opciono u prisustvu bakra kao katalizatora. Metode koje koriste klik hemiju dobro su poznate u struci i uključuju one koje su opisali Rostovtsev et al., Angew. Chem. Int. Ed.2002, 41, 2596-99 i Sun et al., Bioconjugate Chem., 2006, 17, 52-57. U nekim oblicima, klik spremni inhibitorski deo pripremljen i reaguje sa klik spremnim–T-R<t>delom. Kako se koristi ovde, “klik spreman” odnosi se na deo koji sadrži azid ili alkin za upotrebu u klik hemijskoj reakciji. U nekim oblicima, klik spremni inhibitorski deo uključuje jedan azid. U nekim oblicima, ovaj klik spremni – T-R<t>deo uključuje napregnuti ciklooktin za upotebu u klik hemijskoj reakciji bez bakra (na primer, primenom metode opisane u Baskin et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 2007, 104, 16793-16797).

[00189] U nekim oblicima, detektabilni deo, R<t>, je izabran od sledećih: obeleživač, boja, fotokroslinker, citotoksično jedinjenje, lek, afinitetno obeležavanje, fotoafinitetno obeležavanje, reaktivno jedinjenje, antitelo ili fragment antitela, biomaterijal, nanočestica, spin obeležavanje, fluorofor, deo koji sadrži metal, radioaktivni deo, kvantna tačka(tačke), nova funkcionalna grupa, grupa koja je u kovalentnoj ili ne-kovalentnoj interakciji sa drugim molekulima, deo koji se aktivira svetlošću (fotocaged), deo koji se ekscitira aktiničnim zračenjem, ligand, deo koji se može fotoizomerizovati, biotin, analog biotina (npr., biotin sulfokside), deo koji inkorporiše jedan težak atom, grupa koja se može hemijski cepati, grupa koja se može cepati svetlošću, redox-aktivni agens, deo izotopski obeležen, bioizička proba, fosforescentna grupa, hemiluminescentna grupa, grupa gustih elektrona, magnetna grupa, interkalirajuća grupa, hromofor, agens za prenos energije, biološki aktivni agens, detektabilno obeležavanje, ili kombinecije navedenog.

[00190] U nekim oblicima, R<t>je biotin ili njegov analog. U nekim oblicima, R<t>je biotin. nekim drugim oblicima, R<t>je biotin sulfokside.

[00191] U drugom obliku, R<t>je fluorofor. U dodatnom obliku, fluorofor se izabira od sledećih: Alexa Fluor boje (Alexa Fluor 350, Alexa Fluor 488, Alexa Fluor 532, Alexa Fluor 546, Alexa Fluor 568, Alexa Fluor 594, Alexa Fluor 633, Alexa Fluor 660 i Alexa Fluor 680), AMCA, AMCA-S, BODIPY boje (BODIPY FL, BODIPY R6G, BODIPY TMR, BODIPY TR, BODIPY 493/503, BODIPY 530/550, BODIPY 558/568, BODIPY 564/570, BODIPY 576/589, BODIPY 581/591, BODIPY 630/650, BODIPY 650/665), Karboksirodamin 6G, karboksi-X-rodamin (ROX), Cascade Plavo, Cascade Žuto, Kumarin 343, Cijanine dyes (Cy3, Cy5, Cy3.5, Cy5.5), Dansil, Dapoksil, Dialkilaminokumarin, 4',5'-Dihloro-2',7'-dimetoksifluorescein, DM-NERF, Eozin, Eritrozin, Fluorescein, FAM, Hidroksikumarin, IRDyes (IRD40, IRD 700, IRD 800), JOE, Lissamine rodamin B, Marina Plavo, Metoksikumarin, Naftofluorescein, Oregon Zeleno 488, Oregon Zeleno 500, Oregon Zeleno 514, Pacific Plavo, PyMPO, Piren, Rodamin B, Rodamin 6G, Rodamin Zeleno, Rodamin Crveno, Rodol Zeleno, 2',4',5',7'-Tetra-bromosulfone-fluorescein, Tetrametil-rodamin (TMR), Karboksitetrametilrodamin (TAMRA), Texas Crveno, Texas Crveno-X, 5(6)-Karboksifluorescein, 2,7-Dihlorofluorescein, N,N-Bis(2,4,6-trimetilfenil)-3,4:9,10-perilenebis(dikarboksimide), HPTS, Etil Eosin, DY-490XL MegaStokes, DY-485XL MegaStokes, Adirondack Zeleno 520, ATTO 465, ATTO 488, ATTO 495, YOYO-1,5-FAM, BCECF, dihlorofluorescein, rodamin 110, rodamin 123, YO-PRO-1, SYTOX Zeleno, Natrijum Zeleno, SYBR Zeleno I, Alexa Fluor 500, FITC, Fluo-3, Fluo-4, fluoro-emerald, YoYo-1 ssDNA, YoYo-1 dsDNA, YoYo-1, SYTO RNASelect, Diversa Zeleno-FP, Dragon Zeleno, EvaZeleno, Surf Zeleno EX, Spectrum Zeleno, NeuroTrace 500525, NBD-X, MitoTracker Zeleno FM, LysoTracker Zeleno DND-26, CBQCA, PA-GFP (post-aktivaciono), WEGFP (postaktivaciono), FlASH-CCXXCC, Azami Zeleno monomerno, Azami Zeleno, zeleno fluorescentni protein (GFP), EGFP (Campbell Tsien 2003), EGFP (Patterson 2001), Kaede Zeleno, 7-Benzilamino-4-Nitrobenz-2-Oksa-1,3-Diazol, Bexl, Doksorubicin, Lumio Zeleno, ili SuperGlo GFP.

[00192] Kao što je gore uopšteno i opisano, dato jedinjenje probe uključuje jedan ograničavajući deo, -T<1>-, koji spaja ireverzibilni inhibitor za detektabilni deo. Kako se koristi ovde, izraz “ograničava” ili “ograničavajući deo” odnosi se na svaki bivalentni hemijski spejser. Egzemplarni ograničavajući entiteti su kovalentna veza, polimer, polimer rastvorljiv u vodi, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani heteroalkil, opciono supstituisani heterocikloalkil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterociklil, opciono supstituisani heterocikloalkilalkil, opciono supstituisani heterocikloalkilalkenil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heteroaril, opciono supstituisani heterocikloalkilalkenilalkil, opciono supstituisani deo amida, eterski deo, ketonski deo, esterski deo, opciono supstituisani deo karbamata, opciono supstituisani deo hidrazonska, opciono supstituisani deo hidrazina, opciono supstituisani deo oksima, disulfidni deo, opciono supstituisani deo imina, opciono supstituisani deo sulfonamida, deo sulfona, deo sulfoksida sredina, deo tioetera, ili sve kombinacije gore navedenog.

[00193] U nekim oblicima, ovaj ograničavajući deo, - T<1>-, izabran je od sledećih: kovalentna veza, polimer, polimer rastvorljiv u vodi, opciono supstituisani alkil, opciono supstituisani heteroalkil, opciono supstituisani heterocikloalkil, opciono supstituisani cikloalkil, opciono supstituisani heterocikloalkilalkil, opciono supstituisani heterocikloalkilalkenil, opciono supstituisani aril, opciono supstituisani heteroaril, i opciono supstituisani heterocikloalkilalkenilalkil. U nekim oblicima, ovaj ograničavajući deo je opciono supstituisani heterociklični. U drugim oblicima, ovaj heterociklični je izabran od sledećih: aziridin, oksiran, episulfid, azetidin, oksetan, pirolin, tetrahidrofuran, tetrahidrotiofen, pirolidin, pirazol, pirol, imidazol, triazol, tetrazol, oksazol, isoksazol, oksiren, tijazol, izotijazol, ditiolan, furan, tiofen, piperidin, tetrahidropiran, tijan, piridin, piran, tijapiran, piridazin, pirimidin, pirazin, piperazin, oksazin, tijazin, ditijan, i dioksan. U nekim oblicima, ovaj heterociklični je piperazin. U dodatnim oblicima ograničavajući deo opciono supstituisani halogenom, -CN, -OH, -NO2, alkil, S(O), i S(O)2. U drugim oblicima, polimer rastvorljiv u vodi je PEG grupa.

[00194] U drugim oblicima, ograničavajući deo obezbeđuje dovoljnu prostornu razdvojenost između detektabilnog dela i dela inhibitora protein kinaze. U dodatnim oblicima, ovaj ograničavajući deo je stabilan. U još nekim oblicima, ograničavajući deo ne utiče značajno na odgovor detektabilnog dela. U drugim oblicima, ovaj ograničavajući deo obezbeđuje hemijsku stabilnost za jedinjenje probe. U dodatnim oblicima, taj ograničavajući deo obezbeđuje dovoljno rastvorljivosti za jedinjenje probe.

[00195] U nekim oblicima, ograničavajući deo, - T<1>-, kao što je polimer rastvorljiv u vodi kuplira se (spaja) sa datim ireverzibilnim inhibitorom i za detektabilni deo, R<t>, sa drugog kraja. U drugim oblicima, polimer rastvorljiv u vodi se kuplira (spaja) preko funkcionalne grupe ili supstituenta datog ireverzibilnog inhibitora. U dodatnim oblicima polimer rastvorljiv u vodi se kuplira (spaja) preko funkcionalne grupe ili supstituenta reporterskog/izveštajnog dela.

[00196] U nekim oblicima, primeri hidrofilnih polimera, za upotrebu u ograničavajućem delu – T<1>-, uključuju, ali se ne ograničavaju na: polialkil eteres i njihove analoge sa alkoksi dodatkom (npr., polioksietilen glikol, polioksietilen/propilen glikol, i metoksi ili njihovi analozi sa etoksi dodatkom, polioksietilen glikol, a ovaj poslednji je poznat i kao polietilen glikol ili PEG); polivinilpirolidoni; polivinilalkil etri; polioksazolini, polialkil oksazolini i polihidroksialkil oksazolini; poliakrilamidi, polialkil akrilamidi, i polihidroksialkil akrilamidi (npr., polihidroksipropilmetakrilamid i njegovi derivati); polihidroksialkil akrilati; polisijalnske kiseline i njihovi analozi, hidrofilne peptidne sekvence; polisaharidi i njihovi derivati, uključujući dekstran i derivate dekstrana, npr., karboksimetildekstran, dekstran sulfati, aminodekstran; celuloza i njeni derivati, npr., karboksimetil celuloza, hidroksialkil celuloze; hitin i njegovi derivati, npr., hitosan, sukcinil hitosan, karboksimetilhitin, karboksimetilhitosan; hijaluronska kiselina i njeni derivati; skrobovi; alginati; hondroitin sulfat; albumin; pululan i karboksimetil pululan; poliaminokiseline i njihovi derivati, npr., poliglutaminske kiseline, polilisini, poliaspartanske kiseline, poliaspartamidi; maleinski anhidridni kopolimeri kao što su: stirenski maleinski anhidridni, diviniletil eter maleinski anhidridni kopolimer; polivinil alkoholi; njihovi kopolimeri, njihovi terpolimeri, njihove mešavine, i derivati svega navedenog. U drugim oblicima, polimer rastvorljiv u vodi je ma koje strukturne fore. Egzemplarne formse su linearne, račvaste ili razgranate. U dodatnim oblicima, multifunkcionalni polimerni derivati uključuju, ali se ne ograničavaju na, linearne polimere koji imaju dva kraja, svaki terminus se vezuje za funkcionalnu grupa koja je ista ili drugačija.

[00197] U nekim oblicima, vodeni polimer uključuje i deo poli(etilen glikola). U dodatnim oblicima, molekulska težina polimera može da se kreće u širokom spektru. Egzemplarni raspčoni su između oko 100 Da i oko 100,000 Da ili više. U još nekim oblicima, molekulska težina polimera je između oko 100 Da i oko 100,000 Da, oko 100,000 Da, oko 95,000 Da, oko 90,000 Da, oko 85,000 Da, oko 80,000 Da, oko 75,000 Da, oko 70,000 Da, oko 65,000 Da, oko 60,000 Da, oko 55,000 Da, oko 50,000 Da, oko 45,000 Da, oko 40,000 Da, oko 35,000 Da, 30,000 Da, oko 25,000 Da, oko 20,000 Da, oko 15,000 Da, oko 10,000 Da, oko 9,000 Da, oko 8,000 Da, oko 7,000 Da, oko 6,000 Da, oko 5,000 Da, oko 4,000 Da, oko 3,000 Da, oko 2,000 Da, oko 1,000 Da, oko 900 Da, oko 800 Da, oko 700 Da, oko 600 Da, oko 500 Da, oko 400 Da, oko 300 Da, oko 200 Da, i oko 100 Da. U nekim oblicima, molekulska težina polimera je između oko 100 Da i 50,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina polimera je između oko 100 Da i 40,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina polimera je između oko 1,000 Da i 40,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina polimera je između oko 5,000 Da i 40,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina polimera je između oko 10,000 Da i 40,000 Da. U nekim oblicima, molekul poli(etilenglikola) je razgranati polimer. U dodatnim oblicima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 1,000 Da i oko 100,000 Da. Egzemplarni rasponi su oko 100,000 Da, oko 95,000 Da, oko 90,000 Da, oko 85,000 Da, oko 80,000 Da, oko 75,000 Da, oko 70,000 Da, oko 65,000 Da, oko 60,000 Da, oko 55,000 Da, oko 50,000 Da, oko 45,000 Da, oko 40,000 Da, oko 35,000 Da, oko 30,000 Da, oko 25,000 Da, oko 20,000 Da, oko 15,000 Da, oko 10,000 Da, oko 9,000 Da, oko 8,000 Da, oko 7,000 Da, oko 6,000 Da, oko 5,000 Da, oko 4,000 Da, oko 3,000 Da, oko 2,000 Da, i oko 1,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 1,000 Da i oko 50,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 1,000 Da i oko 40,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 5,000 Da i oko 40,000 Da. U nekim oblicima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 5,000 Da i oko 20,000 Da. Gore navedena lista supstancijalno vodorastvorljivih kostura ni u kom smislu nije iscrpna, i služi samo za ilustraciju, i u nekim oblicima, polimerni materijali koji imaju gore opisane kvalitete su odgovarajući za upotrebu metode i sastava koji su ovde opisani.

[00198] U nekim oblicima, ograničavajući deo, - T<1>-, ima sledeću strukturu:

.

[00199] U nekim oblicima, the ograničavajući deo, - T<1>-, ima sledeću strukturu:

naznačeno time da je m 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, ili 7.

[00200] U nekim oblicima, -R<t>is kinin, fenilalanin, tirozin, trptophan, NADH, FMN, EDANS, Lucifer žuto, piren, 4-MU, AMC, DAPI, Hoechst33342, NBD, biman, Cascade žuto, fluorescein, RH110, TMR, SRh101, naftofluorescein, SNARF-1, propidijum, BODIPY-FL, BODIPY-TR, Cy3, Cy5, Cy7, IRDye 700DX, ili resorufin.

[00201] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

.

[00202] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

[00203] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

.

[00204] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

.

[00205] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

[00206] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

.

[00207] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

.

[00208] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

.

[00209] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

[00210] U nekim oblicima, - T<1>-R<t>ima sledeću strukturu:

.

[00211] U nekim oblicima, jedinjenje probe formule I-t ili formule I-s izvodi se iz ma kog ovde opisanog jedinjenja.

[00212] U nekim oblicima, jedinjenje probe je izabrano od sledećih: jedinjenja 31, 32, 53, 54, 73, ili 74. U nekim oblicima, jedinjenje probe je jedinjenje 31. U nekim oblicima, jedinjenje probe je jedinjenje 32. U nekim oblicima, jedinjenje probe je jedinjenje 53. U nekim oblicima, jedinjenje probe is jedinjenje 54. U nekim oblicima, jedinjenje probe is 73. U nekim oblicima, jedinjenje probe is jedinjenje 74.

[00213] Uzima se u obzir da su mnogi– T<1>-R<t>reagensi komercijalno dostupni.

[00214] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak obezbeđuje metod za određivanje zauzetosti protein kinaze datim ireverzibilnim inhibitorom (t.j., jedinjenje ma koje od formula koje su ovde prikazane) kod pacijenta, ukljujučući jedno ili više tkiva, vrsta ćelija, ili njihovih lizata, koji se dobijaju od pacijenta kome je data najmanje jedna doza jedinjenja pomenutog ireverzibilnog inhibitora, kontakt sa pomenutim tkivima, vrsta ćelija ili njihovih lizata sa jedinjenjem probe (t.j., jedinjenjem formule I-t ili formule I-s) da kovalentno modifikuje najmanje jednu protein kinazu prisutnu u pomenutom lizatu, i meri se količina pomenute protein kinaze kovalentno modifikovane jedinjenjem probe da se odredi zauzetost pomenute protein kinaze pomenutim inhibitorom u poređenju sa zauzetošću pomenute protein kinaze pomenutim jedinjenjem probe. U nekim oblicima, ovaj metod dodatno uključuje korak podešavanja doze ovog jedinjenja formule koja je ovde prikazana da se poveća zauzetost protein kinaze. U nekim drugim oblicima, ovaj metod dalje uključuje korak podešavanja doze ovog jedinjenja formule koja je ovde prikazana da se smanji zauzetost protein kinaze.

[00215] Kako se koriste ovde, izrazi “zauzetost” ili “zauzima” odnose se na meru u kojoj se protein kinaza modifikuje obezbeđenim kovalentnim inhibitornim jedinjenjem. Stručnjaku za ovu oblast je jasno da je poželjno da se daje najniža moguća doza da se postigne efikasna zauzetost protein kinaze.

[00216] U nekim oblicima, protein kinaza koja se modifikuje je BTK.

[00217] U nekim oblicima, jedinjenje probe uključuje ireverzibilni inhibitor za koji se određuje zauzetost.

[00218] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak obezbeđuje metod za procenu efikasnosti datog ireverzibilnog inhibitora kod sisara, uključujući i davanje tog ireverzibilnog inhibitora sisaru, davanje prikazanog jedinjenja probe tkivima ili ćelijama izolovanim od sisara, ili njihovim lizatima, merenje aktivnosti detektabilnog dela jedinjenja probe, i poređenje aktivnosti detektabilnog dela sa standardom.

[00219] U drugim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za procenu farmakodinamike datog ireverzibilnog inhibitora kod sisara, uključujući i davanje tog ireverzibilnog inhibitora sisaru, primenu prikazanog jedinjenja probe na jednoj ili više vrsta ćelija ili njihovih lizata, izolovanim od sisara, ili njihovim lizatima, merenje aktivnosti detektabilnog dela jedinjenja probe u različitim vremenskim tačkama po primeni ovog inhibitora.

[00220] U još nekim od oblika, sadašnji pronalazak opisuje metod za in vitro obeležavanje protein kinaze uključujući kontakt pomenute protein kinaze sa jedinjenjem probe koje je ovde opisano. U jednom obliku, korak kontakta uključuje inkubiranje protein kinaze sa jedinjenjem probe koje je ovde opisano.

[00221] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za in vitro obeležavanje protein kinaze uključujući kontakt sa jednom ili više ćelija ili tkiva ili njihovim lizatima, koji eksprimiraju protein kinaze sa jedinjenjem probe koje je ovde opisano.

[00222] U još nekim od oblika, sadašnji pronalazak opisuje metod za detekciju obeležene protein kinaze koji uključuje razdvajanje proteina, proteine koji uključuju protein kinaze obeležene jedinjenjem probe koje je ovde opisano, pomoću elektroforeze i detekciju jedinjenja probe fluorescencijom.

[00223] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za procenu farmakodinamike datog ireverzibilnog inhibitora in vitro, što uključuje inkubaciju datog ireverzibilnog inhibitora ciljnom protein kinazom, dodavanje jedinjenja probe koje je ovde opisano u ciljne protein kinaze, i određivanje količine te mete (cilja) modifikovane jedinjenjem probe.

[00224] U nekim oblicima, proba se detektuje natrijum dodecil sulfat poliakrilamid gel elektroforezom (SDS-PAGE). U drugim oblicima, proba se detektuje ELISA testom. U nekim oblicima, proba se detektuje protočnom citometrijom.

[00225] U drugim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za testiranje kinoma sa ireverzibilnim inhibitorima što uključuje inkubiranje jedne ili više vrsta ćelija ili njihovih lizata biotiniliranim jedinjenjem probe da se generišu proteini modifikovani delom biotina, koji digestiraju proteine, pomoću avidina ili njegovih analoga, i obavljaju multi-dimenzionalni LC-MS-MS da identifikuju protein kinaze modifikovane jedinjenjem probe i mesta adukcije (skupljanja) pomenutih kinaza.

[00226] U nekim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za merenje sinteze proteina u ćelijama, što uključuje inkubiranje ćelija ireverzibilnim inhibitorom ciljnog proteina, formiranje lizata ćelija u određenim vrmeneskim tačkama, i inkubiranje pomenutih lizata ćelija inventivnim jedinjenjem probe da se izmeri pojava slobodnog proteina tokom produženog perioda vremena.

[00227] U drugim oblicima, sadašnji pronalazak opisuje metod za određivanje sheme doziranja kod sisara da se maksimalno poveća zauzetost ciljne protein kinaze što uključuje određivanje jedne ili više vrsta ćelija ili njihovih lizata, izolovanih iz sisara, (izvedenih iz, npr., splenocita, perifernih B ćelija, cele krvi, limfnih čvorova, intestinalnog tkiva ili drugih tkiva) dobijenih od sisara kome je dat ireverzibilni inhibitor ma koje od formula koje su ovde prikazane, naznačeno time da korak određivanja uključuje kontakt pomenute jedne ili više vrsta tkiva ili ćelija ili njihovih lizata sa opisanim jedinjenjem probe i merenje količine protein kinaze kovalentno modifikovane tim jedinjenjem probe.

P<RIMERI>

[00228] Kao što je opisano u Primerima dole, u nekim egzemplarnim oblicima, jedinjenja se pripremaju u skladu sa sledećim opštim procedurama. Jasno je da, iako opšte metode opisuju sintezu nekih jedinjenja prikazanog pronalaska, sledeće opšte metode, i druge metode poznate stručnjacima za ovu oblast, mogu se primeniti na sva jedinjenja i podklase i vrste svakog od ovih jedinjenja, kako je ovde opisano.

[00229] Brojevi jedinjenja koji se koriste u Primerima dole odgovaraju brojevima jedinjenja kako su navedenai gore.

[00230]<1>H NMR je zabeležen na Bruker 400 MHz spektrometru, korišćenjem rezidualnog signala deuterizovanog rastvarača kao interne reference. Hemijski pomaci (δ) se izražavaju u ppm u odnosu na signal rezidualnog rastvarača (δ = 2.49 ppm za 1H NMR u DMSO-d6). Podaci 1H NMR prikazani su na sledeći način: hemijski pomak (multiplicitet, konstante kupliranja, i broj vodonika). Multiplicitet se skraćuje na sledeći način: s (singlet), d (dublet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet), br (širina).

[00234] 4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (Metod A)

U bočicu od 20-mL stavljaju se 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (250.00 mg; 1.63 mmol), (4-fenoksifenil)borna kiselina (522.64 mg: 2.44 mmol), paladijum acetat (18.27 mg; 0.08 mmol), 2-dicikloheksilfosfino-2',6'-dimetoksibifenil (66.83 mg; 0.16 mmol), kalijum karbonat (674.97 mg; 0.16 mmol) suspendovan u dioksanu (3.00 ml) i voda (0.30 ml). Reakciona mešavina se zagreva na 150 °C tokom 3 sata. Reakciona mešavina se ostavlja da se hladi do sobne temperature (rt). Sirova mešavina se prečišćava korišćenjem fleš hromatografije u koloni. Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i koncentrišu pod sniženim pritiskom. Proizvod je tada liofilizovan preko noći da bi se dobio 4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (422.40 mg, 90% prinosa) kao čvrsta supstanca žute boje. MS: m/z = 288 [M+H]<+>.

Primer 2

[00235] 4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (Metod B) U bočicu od 20 mL stavlja se 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (500.00 mg; 3.26 mmol), cezijum karbonat (3.18 g: 9.77 mmol), i 4-fenoksifenol (909.40 mg; 4.88 mmol) suspendovan u DMF (6.00 ml). Reakciona mešavina se zagreva na 160 °C tokom 3 sata. Reakciona mešavina se ostavlja da se hladi do sobne temperature (rt). Ova mešavina se prečišćava korišćenjem fleš hromatografije u koloni. Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i koncentrišu pod sniženim pritiskom. Proizvod je tada liofilizovan preko noći da bi se dobio 4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (611.4 mg, 62% prinosa) kao čvrsta supstanca žute boje. MS: m/z = 288 [M+H]<+>.

Primer 3

[00236] terc-butil 3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-karboksilat (Metod C)

U bočicu od 20 mL stavlja se 4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (200.00 mg; 0.66 mmol.), terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilat (456.85 mg; 2.64 mmol), trifenilfosfin (1.04 g; 3.96 mmol), i diisopropil azodikarboksilat (800.00 mg; 3.96 mmol) suspendovan u THF (4.00 ml). Reakciona mešavina se zagreva na 40 °C preko noći. Reakciona mešavina se ostavlja da se hladi do sobne temperature (rt). Sirova mešavina se prečišćava korišćenjem fleš hromatografije u koloni. Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i koncentrišu pod sniženim pritiskom. Ova mešavina se potom prečišćava korišćenjem preparativne HPLC. Frakcije koje sadrže željeni proizvod kombinuju se i liofilizuju preko noći da bi se dobio terc-butil 3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-karboksilat (TFA so, 188.00 mg, 50% prinosa) kao čvrsta supstanca žute boje. MS: m/z = 459 [M+H]<+>.

Primer 4

[00237] terc-butil 3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-karboksilat (Metod D)

U bočicu od 20 mL stavlja se 4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (600.00 mg; 1.98 mmol), terc-butil 3-bromoazetidin-1-karboksilat (934.10 mg, 3.96 mmol), i natrijum terc-butoksid (760.42 mg, 7.91 mmol) suspendovan u DMF (8.00 ml). Reakciona mešavina se zagreva do 100<o>C 2 dana. Reakciona mešavina se prečišćava korišćenjem fleš hromatografije u koloni. Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i koncentrišu pod sniženim pritiskomd. Proizvod je tada liofilizovan preko noći da bi se dobio terc-butil 3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-karboksilat (918.00 mg, 100% prinosa) u obliku žute viskozne tečnosti. MS: m/z = 459 [M+H]<+>.

Primer 5

[00238] 5-(azetidin-3-il)-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (Metod E)

U bočicu od 20 mL stavlja se terc-butil 3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-karboksilat (910.00 mg; 1.98 mmol) rastvoren u metanolu (5.00 ml). Vodonik hlorid (2.0 M rastvor in Et2O) (4.96 ml) je dodat u ovu mešavinu. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) preko noći. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom i potom liofilizovana preko noći da bi se dobio 5-(azetidin-3-il)-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin kao sirova čvrsta supstanca žute boje. MS: m/z = 359 [M+H]<+>.

Primer 6

[00239] 1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (3) (Metod F)

U bočicu od 20 mL dodat je 5-(azetidin-3-il)-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (15.00 mg; 0.04 mmol), natrijum bikarbonat (10.55 mg; 0.13 mmol) suspendovan u THF (2.00 ml) i voda (0.20 ml). Dodat je i akriloil hlorid (0.01 ml; 0.06 mmol). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) preko noći. Sirova mešavina se prečišćava korišćenjem fleš hromatografije u koloni. Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i koncentrišu pod sniženim pritiskom. Ovaj materijal je onda prečišćen korišćenjem preparativne HPLC. Frakcije sa sadržajem željenog proizvoda su kombinovane i liofilizovane preko noći da bi se dobio 1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (TFA so, 12.00 mg, 55 % prinosa) kao čvrsta supstanca bele boje. HPLC: 85 %, RT= 3.749 min. MS: m/z = 413 [M+H]<+>, RT= 2.553 min.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.38 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.42 (t, 2H), 7.34 (d, 2H), 7.15 (t, 1H), 7.09 (d, 2H), 7.05 (d, 2H), 6.74 (d, 1H), 6.32 (dd, 1H), 6.06 (d, 1H), 5.79 (m, 1H), 5.65(d, 1H), 4.78 (t, 1H), 4.08 (m, 1H), 4.50-4.40 (m, 2H).

Primer 7

[00240] (E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on (19) (Metod G)

U bočicu od 20 mL dodata je (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoična kiselina (78.50 mg; 0.61 mmol), i bis(2-okso-3-oksazolidinil)fosfino hlorid (232.09 mg; 0.91 mmol), i N,N-diisopropiletilamin (0.21 ml; 1.22 mmol) suspendovan u dioksanu (3.00 ml). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) jedan sat.5-(azetidin-3-il)-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidine (120.00 mg; 0.30 mmol) was then added. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) preko noći. Sirova mešavina se prečišćava korišćenjem fleš hromatografije u koloni. Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i koncentrišu pod sniženim pritiskom. Ostatak je onda prečišćen korišćenjem preparativne HPLC. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i liofilizovane preko noći da bi se dobio (E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on (69.00 mg, 48% prinosa) kao čvrsta supstanca bele boje. HPLC: 95%, RT= 2.879 min. MS: m/z = 470 [M+H]<+>, RT= 2.016 min.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.37 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.43 (t, 2H), 7.34 (d, 2H), 7.19-7.04 (m, 5H), 6.74 (d, 1H), 6.54 (doublet of triplet, 1H), 6.11 (d, 1H), 5.78 (m, 1H), 4.79-4.66 (m, 2H), 4.49-4.38 (m, 2H), 2.98 (d, 2H), 2.12 (s, 6H).

[00241] 2-metil-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (51) (Metod H)

U bočicu od 20 mL dodat je 5-(azetidin-3-il)-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (70.00 mg, 0.18 mmol), metakrilna kiselina (30.52 mg, 0.35 mmol), 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (338.44 mg, 0.53 mmol), N,N-diizopropiletilamin (0.09 ml, 0.53mmol) suspendovan u DCM (3 mL). Ova mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) tokom 3 sata. Sirova mešavina se prečišćava korišćenjem fleš hromatografije u koloni. Frakcije koje sadrže željeni proizvod se kombinuju i koncentrišu pod sniženim pritiskom. Materijal je onda prečišćen korišćenjem preparativne HPLC. Frakcije koje sadrže željeni proizvod su kombinovane i liofilizovane preko noći da bi se dobio 2-metil-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (20.00 mg, 26% prinosa) kao čvrsta supstanca bele boje. HPLC: 93%, RT= 3.838 min. MS: m/z = 427 [M+H]<+>, RT= 2.732 min.

Primer 9

[00242] N-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin (Metod I) U bočicu od 20 mL stavlja se 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (250.00 mg; 1.63 mmol), i 4-fenoksianilin (452.29 mg: 2.44 mmol) suspendovan u acetonitrilu (3.00 ml). Reakciona mešavina se zagreva na 100 °C preko noći. Gusta tamna reakciona mešavina se ostavlja da se hladi do sobne temperature (rt). Čvrsta supstanca se filtrira i pere acetonitrilom. Čvrsta supstanca se se suši pod vakuumom da bi se dobio N-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-amin (580.00 mg, 100% prinosa) kao čvrsta supstanca žute boje. MS: m/z = 303 [M+H]<+>.

Primer 10

[00243] 1-(4-((4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (47)

1-(4-((4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, (4-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 4-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E i F. HPLC: 96 %. MS: m/z = 439 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.91 (s, 1H), 8.00 (d, 1H), 7.70 (d, 2H), 7.48 (t, 2H), 7.25-7.19 (m, 3H), 7.11 (d, 1H), 6.77-6.69 (m, 2H), 6.04 (d, 1H), 5.62 (d, 1H), 4.25 (d, 1H), 3.93-3.87 (m, 3H), 2.68 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 1.34 (m, 1H), 0.92-0.75 (m, 4H).

Primer 11

[00244] 1-(3-((4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on (46)

1-(3-((4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, (4-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 3-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E, i F. HPLC: 96 %. MS: m/z = 425 [M+H]<+>.

Primer 12

[00245] 1-(3-((4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (48)

1-(3-((4-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, (4-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E i F. HPLC: 94 %. MS: m/z = 439 [M+H]<+>.

Primer 13

[00246] 1-(4-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (37)

1-(4-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, tercbutil 4-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E i F. HPLC: 99 %. MS: m/z = 455 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.40 (s, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.44 (t, 2H), 7.36 (d, 2H), 7.22-7.07 (m, 5H), 6.78 (dd, 1H), 6.67 (d, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.64 (d, 1H), 4.43-4.36 (m, 3H), 4.05 (d, 1H), 3.00 (t, 1H), 2.59 (t, 1H), 2.21 (m, 1H), 1.59-1.47 (m, 2H), 1.26-1.09 (m, 2H).

Primer 14

[00247] 1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on (29)

1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, tercbutil 3-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E i F. HPLC: 94 %. MS: m/z = 441 [M+H]<+>.

Primer 15

[00248] 1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (15)

1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, tercbutil 3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 86 %. MS: m/z = 455 [M+H]<+>.

Primer 16

[00249] 1-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (2)

1-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil 4-hidroksipiperidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 98 %. MS: m/z = 441 [M+H]<+>.

Primer 17

[00250] 1-(4-((4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (45)

1-(4-((4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, (3-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 4-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E, i F. HPLC: 98 %. MS: m/z = 439 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.92 (s, 1H), 8.03 (d, 1H), 7.61 (t, 1H), 7.47-7.42 (m, 3H), 7.27-7.24 (m, 2H), 7.20 (t, 1H), 7.09 (d, 2H), 6.78 (d, 1H), 6.72 (dd, 1H), 6.05 (d, 1H), 5.63 (d, 1H), 4.26 (d, 1H), 3.95-3.85 (m, 3H), 2.70 (m, 1H), 2.30 (m, 1H), 1.40 (m, 1H), 0.94-0.75 (m, 4H).

Primer 18

[00251] 1-(3-((4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on (40)

1-(3-((4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidine, (3-fenoksifenil)borna kiselina, terc-butil 3-(hidroksimetil)pirolidine-1-karboksilate, i akriloil hlorid korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E, i F. HPLC: 90 %. MS: m/z = 425 [M+H]<+>.

Primer 19

[00252] 1-(4-(4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (50)

1-(4-(4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, (3-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 4-hidroksipiperidin-1-karboksilata, i akriloilhlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 425 [M+H]<+>.

Primer 20

[00253] 1-(3-((4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (44)

1-(3-((4-(3-fenoksifenil)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, (3-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E, i F. HPLC: 98 %. MS: m/z = 439 [M+H]<+>.

Primer 21

[00254] 1-(6-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)prop-2-en-1-on (28)

1-(6-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)-2-azaspiro[3.3]heptan-2-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil 6-hidroksi-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 92 %. MS: m/z = 453 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.35 (s, 1H), 8.09 (d, 1H), 7.44 (t, 2H), 7.36 (d, 2H), 7.19-7.07 (m, 5H), 6.69 (d, 1H), 6.33-6.23 (m, 1H), 6.08 (d, 1H), 5.66 (d, 1H), 5.27 (m, 1H), 4.38 (s, 1H), 4.22 (s, 1H), 4.08 (s, 1H), 3.92 (s, 1H), 2.90-2.77 (m, 4H).

Primer 22

[00255] (S)-1-(2-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (25)

(S)-1-(2-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, (S)-terc-butil 2-(hidroksimetil)azetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 80 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.

Primer 23

[00256] (R)-1-(2-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (9)

(R)-1-(2-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, (R)-terc-butil 2-(hidroksimetil)azetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 84 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.

Primer 24

[00257] (E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-on (1)

(E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil 4-hidroksipiperidin-1-karboksilata, i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i G. HPLC: 99 %. MS: m/z = 498 [M+H]<+>.

Primer 25

[00258] N-(cis-3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)ciklobutil)akrilamid (10)

N-(cis-3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)ciklobutil)akrilamid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil (trans-3-hidroksiciklobutil)karbamata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 99 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.

Primer 26

[00259] (E)-4-(dimetilamino)-1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)piperidin-1-il)but-2-en-1-on (30)

(E)-4-(dimetilamino)-1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil) piperidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil 3-(hidroksimetil)piperidin-1-karboksilata, i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i G. HPLC: 100 %. MS: m/z = 512 [M+H]<+>.

Primer 27

[00260] 1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (20)

1-(3-((4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)metil)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, tercbutil 3-(hidroksimetil) azetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 74 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.

Primer 28

[00261] N-(trans-3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)ciklobutil)akrilamid (8)

N-(trans-3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)ciklobutil)akrilamid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil (cis-3-hidroksiciklobutil)karbamata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 97 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.66 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.21 (d, 1H), 7.43 (t, 2H), 7.35 (d, 2H), 7.19-7.06 (m, 5H), 6.72 (d, 1H), 6.23 (dd, 1H), 6.10 (d, 1H), 5.62-5.56 (m, 2H), 4.39 (m, 1H), 2.97-2.90 (m, 2H), 2.64-2.56 (m, 2H).

Primer 29

[00262] N-(trans-4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)cikloheksil)akrilamida (39)

N-(trans-4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)cikloheksil)akrilamid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil (cis-4-hidroksicikloheksil)karbamata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 99 %. MS: m/z = 455 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.35 (s, 1H), 8.04-7.99 (m, 2H), 7.43 (t, 2H), 7.37 (d, 2H), 7.19-7.06 (m, 5H), 6.68 (d, 1H), 6.21-6.06 (m, 2H), 5.58 (d, 1H), 4.83 (m, 1H), 3.77 (m, 1H), 2.22-2.14 (m, 2H), 2.05-1.96 (m, 4H), 1.50-1.38 (m, 2H).

Primer 30

[00263] (R)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on (34)

(R)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, (S)-terc-butil 3-hidroksipirolidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.

Primer 31

[00264] 1-(3-(4-(4-(4-fluorofenoksi)fenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (27)

1-(3-(4-(4-(4-fluorofenoksi)fenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-(4-fluorofenoksi)fenola, terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 98 %. MS: m/z = 431 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.37 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.35-7.24 (m, 4H), 7.14-7.06 (m, 4H), 6.74 (d, 1H), 6.32 (dd, 1H), 6.07 (d, 1H), 5.79 (m, 1H), 5.66 (d, 1H), 4.78 (t, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.51-4.41 (m, 2H).

Primer 32

[00265] (S)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on (5)

(S)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)pirolidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, (R)-terc-butil 3-hidroksipirolidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.

Primer 33

[00266] 1-(3-(6-(4-fenoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-b]pirazin-1-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (23)

1-(3-(6-(4-fenoksifenil)-1H-pirazolo[3,4-b]pirazin-1-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 6-hloro-1H-pirazolo[3,4-b]pirazina, (4-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, C, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 398 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 9.32 (s, 1H), 8.60 (s, 1H), 8.32 (d, 2H), 7.47 (t, 2H), 7.26-7.12 (m, 5H), 6.43 (dd, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.91 (m, 1H), 5.74 (d, 1H), 4.86 (t, 1H), 4.73 (m, 1H), 4.55 (t, 1H), 4.46 (m, 1H).

Primer 34

[00267] 1-(3-(4-((4-fenoksifenil)amino)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (6)

1-(3-(4-((4-fenoksifenil)amino)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksianilina, terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama I, D, E, i F . HPLC: 87 %. MS: m/z = 412 [M+H]<+>.

Primer 35

[00268] (E)-4-(dimetilamino)-N-(trans-3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)ciklobutil)but-2-enamid (33)

(E)-4-(dimetilamino)-N-(trans-3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)ciklobutil) but-2-enamid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin, 4-fenoksifenol, terc-butil (cis-3-hidroksiciklobutil)karbamata, i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i G. HPLC: 100 %. MS: m/z = 484 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.57 (d, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.43 (t, 2H), 7.34 (d, 2H), 7.19-7.06 (m, 5H), 6.70 (d, 1H), 6.57 (doublet of triplet, 1H), 6.06 (d, 1H), 5.57 (pentet, 1H), 4.37 (m, 1H), 3.08-2.99 (m, 2H), 2.97-2.87 (m, 2H), 2.63-2.55 (m.2H), 2.17 (s, 6H).

Primer 36

[00269] 1-(3-(4-(4-benzilfenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (17)

1-(3-(4-(4-benzilfenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-benzilfenola, terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 411 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.32 (s, 1H), 8.19 (d, 1H), 7.33-7.28 (m, 6H), 7.23-7.20 (m, 3H), 6.73 (d, 1H), 6.31 (dd, 1H), 6.05 (d, 1H), 5.78 (m, 1H), 5.63 (d, 1H), 4.77 (m, 1H), 4.67 (m, 1H), 4.50-4.38 (m, 2H), 3.99 (s, 2H).

Primer 37

[00270] 1-(3-(4-(4-(benziloksi)fenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (16)

1-(3-(4-(4-(benziloksi)fenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-(benziloksi)fenola, tercbutil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.33 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.51-7.32 (m, 5H), 7.24 (d, 2H), 7.08 (d, 2H), 6.73 (d, 1H), 6.32 (dd, 1H), 6.06 (d, 1H), 5.79 (m, 1H), 5.65 (d, 1H), 5.15 (s, 2H), 4.78 (t, 1H), 4.68 (m, 1H), 4.52-4.38 (m, 2H).

Primer 38

[00271] 1-(3-(3-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (7)

1-(3-(3-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 3-bromo-5H-pirolo[2,3-b]pirazina, (4-fenoksifenil)borne kiseline, tercbutil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, D, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 397 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 9.08 (s, 1H), 8.22-8.16 (m, 3H), 7.45 (t, 2H), 7.21 (t, 1H), 7.13-7.07 (m, 4H), 6.76 (d, 1H), 6.43 (dd, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.76-5.63 (m, 2H), 4.81 (d, 2H), 4.51 (d, 2H).

Primer 39

[00272] N-(4-((5-(1-akriloilazetidin-3-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-il)oksi)fenil)benzamid (35)

N-(4-((5-(1-akriloilazetidin-3-il)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-4-il)oksi)fenil)benzamid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, N-(4-hidroksifenil)benzamida, terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, D, E, i F. HPLC: 94 %. MS: m/z = 440 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 10.34 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.20 (d, 1H), 7.99 (d, 2H), 7.85 (d, 2H), 7.65-7.52 (m, 3H), 7.31 (d, 2H), 6.75 (d, 1H), 6.34 (dd, 1H), 6.08 (d, 1H), 5.81 (m, 1H), 5.67 (d, 1H), 4.85-4.66 (m, 2H), 4.55-4.40 (m, 2H).

Primer 40

[00273] 1-(3-(4-(4-(fenilamino)fenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (22)

1-(3-(4-(4-(fenilamino)fenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-(fenilamino)fenola, tercbutil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 412 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.35 (s, 1H), 8.20-8.16 (m, 2H), 7.28-7.05 (m, 8H), 6.83 (t, 1H), 6.73 (d, 1H), 6.34 (dd, 1H), 6.08 (d, 1H), 5.80 (m, 1H), 5.67 (d, 1H), 4.79 (t, 1H), 4.69 (m, 1H), 4.54-4.38 (m, 2H).

Primer 41

[00274] 1-(3-(6-(4-fenoksifenil)-1H-pirolo[3,2-b]piridin-1-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (4)

1-(3-(6-(4-fenoksifenil)-1H-pirolo[3,2-b]piridin-1-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 6-hloro-1H-pirolo[3,2-b]piridina, (4-fenoksifenil)borne kiseline, tercbutil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, D, E, i F. HPLC: 98 %. MS: m/z = 396 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.69 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 8.11 (d, 1H), 7.79 (d, 2H), 7.43 (t, 3H), 7.21-7.05 (m, 5H), 6.72 (d, 1H), 6.42 (dd, 1H), 6.19 (d, 1H), 5.78-5.62 (m, 2H), 4.81 (t, 1H), 4.66-4.49 (m, 2H), 4.32 (m, 1H).

Primer 42

[00275] (E)-5,5-difluoro-1,3-dimetil-7-(3-okso-3-((2-(4-(4-okso-4-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)amino)propil)-5H-dipirolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]diazaborinin-4-ium-5-uid (32)

(E)-5,5-difluoro-1,3-dimetil-7-(3-okso-3-((2-(4-(4-okso-4-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)amino)propil)-5H-dipirolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]diazaborinin-4-ium-5-uid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilata, (E)-4-(4-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)piperazin-1-il)but-2-enoične kiseline, i 7-(2-karboksietil)-5,5-difluoro-1,3-dimetil-5H-dipirolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]diazaborinin-4-ium-5-uida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, G, E, i G. HPLC: 95 %. MS: m/z = 829 [M+H]<+>.

[00276] (E)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oksadiazol-4-il)amino)-N-(2-(4-(4-okso-4-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)heksanamid (31)

(E)-6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oksadiazol-4-il)amino)-N-(2-(4-(4-okso-4-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)heksanamid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, (E)-4-(4-(2-((tercbutoksikarbonil)amino)etil)piperazin-1-il)but-2-enoične kiseline, i 6-((7-nitrobenzo[c][1,2,5]oksadiazol-4-il)amino)heksanoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, D, E, G, E, i H. HPLC: 95 %. MS: m/z = 830 [M+H]<+>.

Primer 44

[00277] 3-metil-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on (49)

3-metil-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenol, tercbutil 3-bromoazetidin-1-karboksilata, i 3-metilbut-2-enoil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, D, E, i F. HPLC: 100 %. MS: m/z = 441 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.36 (s, 1H), 8.16 (d, 1H), 7.43 (t, 2H), 7.33 (d, 2H), 7.20-7.04 (m, 5H), 6.73 (d, 1H), 5.78-5.67 (m, 2H), 4.70-4.55 (m, 2H), 4.45-4.31 (m, 2H), 2.00 (s, 3H), 1.81 (s, 3H).

Primer 45

[00278] (E)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on (38)

(E)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil 3-bromoazetidin-1-karboksilata, i (E)-but-2-enoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, D, E, i H. HPLC: 98 %. MS: m/z = 427 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.37 (s, 1H), 8.18 (d, 1H), 7.43 (t, 2H), 7.34 (d, 2H), 7.17 (t, 1H), 7.12-7.04 (m, 4H), 6.74 (d, 1H), 6.61 (m, 1H), 6.02 (d, 1H), 5.78 (m, 1H), 4.78-4.61 (m, 2H), 4.50-4.34 (m, 2H), 1.81 (d, 3H).

Primer 46

[00279] N-(2-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)etil)akrilamid (42)

N-(2-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)etil)akrilamid je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil (2-jodoetil)karbamata, i akrilične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, D, E, i H. HPLC: 99 %. MS: m/z = 401 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 8.19 (t, 1H), 7.74 (d, 1H), 7.43 (t, 2H), 7.34 (d, 2H), 7.20-7.04 (m, 5H), 6.62 (d, 1H), 6.13 (dd, 1H), 6.02 (d, 1H), 5.56 (d, 1H), 4.54 (t, 2H), 3.65 (q, 2H).

Primer 47

[00280] N-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)propil)akrilamid (26)

N-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)propil)akrilamide je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil (3-jodopropil)karbamata, akrilične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, D, E, i H. HPLC: 97 %. MS: m/z = 415 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H), 8.14 (t, 1H), 7.89 (d, 1H), 7.43 (t, 2H), 7.34 (d, 2H), 7.21-7.04 (m, 5H), 6.63 (d, 1H), 6.19-6.00 (m, 2H), 5.54 (d, 1H), 4.48 (t, 2H), 3.20-3.09 (m, 2H), 2.05 (pentet, 2H).

Primer 48

[00281] 1-(3-(4-((1-benzil-1H-pirazol-4-il)oksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (43)

1-(3-(4-((1-benzil-1H-pirazol-4-il)oksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 1-benzil-1H-pirazol-4-ola, terc-butil 3-bromoazetidin-1-karboksilata, akrilične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, D, E, i H. HPLC: 88 %. MS: m/z = 401 [M+H]<+>.

Primer 49

[00282] (E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(6-(4-fenoksifenil)-1H-pirolo[3,2-b]piridin-1-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on (13)

(E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(6-(4-fenoksifenil)-1H-pirolo[3,2-b]piridin-1-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 6-hloro-1H-pirolo[3,2-b]piridin, (4-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, D, E, i H. HPLC: 98 %. MS: m/z = 453 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.69 (s, 1H), 8.16 (s, 1H), 8.10 (d, 1H), 7.78 (pentet, 1H), 4.79 (t, 1H), 4.64-4.47 (m, 2H), 4.29 (m, 1H), 3.19 (d, 2H), 2.25 (s, 6H).

Primer 50

[00283] (E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(3-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on (24)

(E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(3-(4-fenoksifenil)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-5-il)azetidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 3-bromo-5H-pirolo[2,3-b]pirazina, (4-fenoksifenil)borne kiseline, terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, D, E, i H. HPLC: 95 %. MS: m/z = 454 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 9.07 (s, 1H), 8.23-8.13 (m, 3H), 7.45 (t, 2H), 7.21 (t, 1H), 7.10 (t, 4H), 6.78-6.62 (m, 2H), 6.23 (d, 1H), 5.64 (pentet, 1H), 4.79 (d, 2H), 4.48 (d, 2H), 3.08 (d, 2H), 2.16 (s, 6H).

Primer 51

[00284] (S,E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)pirolidin-1-il)but-2-en-1-on (18)

(S,E)-4-(dimetilamino)-1-(3-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)pirolidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 4-hloro-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, (R)-terc-butil 3-hidroksipirolidin-1-karboksilata, i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama B, C, E, i H. HPLC: 100 %. MS: m/z = 484 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 10.20 (s, 1H), 8.20 (s, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.75-7.29 (m, 8H), 6.93-6.58 (m, 3H), 6.42 (dd, 1H), 6.25 (d, 1H), 5.77 (d, 1H), 5.49 (s, 2H).

Primer 52

[00285] 1-(3-(3-(1-benzil-1H-pirazol-4-il)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on (52)

1-(3-(3-(1-benzil-1H-pirazol-4-il)-5H-pirolo[2,3-b]pirazin-5-il)azetidin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljen od 3-bromo-5H-pirolo[2,3-b]pirazina, 1-benzil-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1H-pirazola, terc-butil 3-jodoazetidin-1-karboksilata, i akriloil hlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama A, D, E, i F. HPLC: 98 %. MS: m/z = 385 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-d6) δ 8.83 (s, 1H), 8.48 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.40-7.29 (m, 5H), 6.70 (d, 1H), 6.42 (dd, 1H), 6.20 (d, 1H), 5.72 (d, 1H), 5.61 (kvintet, 1H), 5.40 (s, 2H), 4.81-4.70 (m, 2H), 4.49 (d, 2H).

Primer 53

[00286] 7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin (Metod J) U bočicu od 10mL za primenu u mikrotalasnoj pećnici u kojoj su 7-hloro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin (1.00 g; 6.47 mmol; 1.00 eq.), 4-fenoksi-fenol (1807.17 mg; 9.71 mmol; 1.50 eq.), cezijum karbonat (4216.18 mg; 12.94 mmol; 2.00 eq.) dodat je DMF (15.00 ml; 194.54 mmol; 30.07 eq.). Ova mešavina se lagano meša na 50<o>C 16 sati pre nego što je je koncentrovana i prečišćena kolonom 50 g KPNH (gradijent 65-100% EtOAc in EOAc/Heksan) da bi se dobio željeni proizvod kao čvrsta supstanca žute boje ( 830.7mg, 42%).<1>H NMR (CD3OD) δ 8.49 (s, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.27-7.46 (m, 4H), 7.04-7.23 (m, 5H). HPLC: 98%. MS: m/z = 305 [M+H]+

[00287] terc-butil 4-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)piperidine-1-karboksilat (Metod K)

U bočicu od 10mL za primenu u mikrotalasnoj pećnici u kojoj su 7-(4-Fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin (20.00 mg; 0.07 mmol; 1.00 eq.), trifenilfosfin (51.72 mg; 0.20 mmol; 3.00 eq.) i 4-Hidroksi-piperidin-1-karboksilna kiselina tercbutil ester (26.46 mg; 0.13 mmol; 2.00 eq.) dodat je THF (1.00 ml; 37.03 mmol; 563.40 eq.) a potom i diisopropil (E)-diazen-1,2-dikarboksilat (0.04 ml; 0.20 mmol; 3.00 eq.). Ovaj rastvor je mešan na sobnoj temperaturi (rt) jedan sat pre nego što je koncentrovan i prenet u naredni korak bez prečišćavanja.

[00288] 7-(4-fenoksifenoksi)-1-(piperidin-4-il)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin hidrohlorid (Metod L)

U bočicu od 10mL za primenu u mikrotalasnoj pećnici u kojoj su 4-[7-(4-Fenoksifenoksi)-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il]-piperidin-1-karboksilna kiselina terc-butil ester (1360.26 mg; 2.79 mmol; 1.00 eq.) u metanolu (5.00 ml) dodat je vodonik hlorid (4.0N u dioksanu, 3.00 ml; 13.95 mmol; 5.00 eq.). Ovaj rastvor je mešan na sobnoj temperaturi (rt) jedan sat pre nego što je koncentrovan i prenet u naredni korak bez prečišćavanja.

[00289] 1-(4-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)prop-2-en-1-on (12) (Metod M)

U reakcionu bočicu od 10mL dodat je 7-(4-fenoksi-fenoksi)-1-piperidin-4-il-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidine hidrohlorid (80.00 mg; 0.19 mmol; 1.00 eq.), acrilična kiselina (12.04 µl; 0.19 mmol; 1.00 eq.), etil-diisopropil-amine (0.16 ml; 0.94 mmol; 5.00 eq.) i 1,2-dihloroetan (2.00 ml; 25.26 mmol; 133.86 eq.). Ova mešavina je mešana 5 min pre nego što je polako dodat 2,4,6-tripropil-[1,3,5,2,4,6]trioksatrifosfinan 2,4,6-trioksid (75.00 µl; 0.19 mmol; 1.00 eq.). Dobijena mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) jedan sat pre nego što je koncentrovana i prečišćena primenom prep-HPLC (elucija od 50-80 % CH3CN u 0.1% NH4OH/H2O) da bi se dobio željeni proizvod kao čvrsta supstanca bele boje posle liofilizacije (2.8 mg, 3.2%). HPLC: 96%. MS: m/z = 442[M+H]<+>.<1>H-NMR (MeOH-d4) δ 8.31 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.25 (m, 4H), 7.0 (m, 5H), 6.76 (d, 1H), 6.12 (d, 1H), 5.64 (d, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.61 (d, 1H), 4.23 (d, 1H), 3.28 (m, 1H), 2.99 (t, 1H), 2.19 (m, 4H).

Primer 54

[00290] N-((1s,3s)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)akrilamid (11) (relativna konfiguracijha)

N-((1s,3s)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)akrilamid je pripremljen od 7-hloro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil ((1s,3s)-3-aminociklobutil)karbamata i akrilične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama J, K, L i M. HPLC: 99%. MS: m/z = 428 [M+H]<+>.<1>H NMR (CDCl3) δ 8.56 (s, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.11-7.41 (m, 11H), 6.36 (d, 1H), 6.08 (m, 2H), 5.73 (m, 1H), 5.47 (m, 1H), 4.56 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 2.79 (m, 2H).

Primer 55

[00291] (E)-4-(dimetilamino)-N-((1s,3s)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)but-2-enamid (36)

(relativna konfiguracija)

(E)-4-(dimetilamino)-N-((1s,3s)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)but-2-enamid je pripremljen od 7-hloro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil ((1s,3s)-3-aminociklobutil)karbamata i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoićne kiseline hidrohlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama J, K, L i M. HPLC: 93%. MS: m/z = 485[M+H]<+>.<1>H NMR (CDCl3) δ 8.56 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 7.11-7.41 (m, 11H), 6.40 (m, 1H), 5.48 (m, 1H), 5.02 (m, 2H), 4.47 (m, 1H), 3.86 (m, 1H), 3.17 (m, 2H), 2.94 (m, 8H).

Primer 56

[00292] N-((1r,3r)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)akrilamid (21)

(relativna konfiguracija)

N-((1r,3r)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)-3-(piperidin-1-il)propanamid je pripremljen od 7-hloro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil ((1r,3r)-3-aminociklobutil)karbamata i akrilične kiseline korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama J, K, L, i M. HPLC: 99%. MS: m/z = 428 [M+H]<+>.<1>H NMR (CDCl3) δ 8.54 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.11-7.41 (m, 11H), 6.33 (d, 1H), 6.15 (m, 1H), 5.92 (m, 1H), 5.72 (m, 1H), 3.27 (m, 2H), 2.80 (m, 2H).

Primer 57

[00293] (E)-4-(dimetilamino)-N-((1r,3r)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)but-2-enamid (41)

(relativna konfiguracija)

(E)-4-(dimetilamino)-N-((1r,3r)-3-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)ciklobutil)but-2-enamid je pripremljen od 7-hloro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidina, 4-fenoksifenola, terc-butil ((1r,3r)-3-aminociklobutil)karbamata i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline hidrohlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama J, K, L, i M. HPLC: 99%. MS: m/z = 485 [M+H]<+>.<1>H NMR (CDCl3) δ 8.55 (s, 1H), 8.29 (s, 1H), 7.11-7.41 (m, 11H), 6.79 (d, 1H), 6.43 (m, 2H), 5.81 (m, 1H), 5.00 (m, 1H), 4.75(m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.19 (m, 2H), 2.89 (s, 6H).

Primer 58

[00294] (E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-on (14)

(E)-4-(dimetilamino)-1-(4-(7-(4-fenoksifenoksi)-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidin-1-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-on je pripremljen od 7-hloro-1H-pirazolo[4,3-d]pirimidine, 4-fenoksifenol, terc-butil 4-hidroksipiperidin-1-karboksilata i (E)-4-(dimetilamino)but-2-enoične kiseline hidrohlorida korišćenjem procedura sličnih onima opisanim u metodama J, K, L, i M. HPLC: 95%. MS: m/z = 499 [M+H]<+>.<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.50 (s, 1H), 8.43 (s, 1H), 7.46 (m, 4H), 7.11 (m, 5H), 6.79 (m, 1H), 6.59 (m, 1H), 5.23 (m, 1H), 4.52 (m, 1H), 4.25 (m,1H), 2.96 (t, 1H), 2.47 (s, 6H), 2.22 (m, 2H), 2.04 (m, 2H).

Primer 59

[00295] 3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]azetidine-1-karbonitril (68)

U rastvor (3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]azetidina (700 mg, 1.95 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 10 mL) dodat je natrijum bikarbonat (657 mg, 7.82 mmol, 4.00 ekviv) na sobnoj temperaturi (RT). Ovo je praćeno dodavanjem karbononitrid bromida (249 mg, 2.35 mmol, 1.20 ekviv).

Dobijeni rastvor je mešan preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena pomoću 10 mL vode i ekstrahovana sa 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, sušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 40.0% do 50.0% gradijenta tokom 11 min.3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]azetidin-1-karbonitril dobijen je kao čvrsta supstanca žute boje (30 mg, 10% za 3 koraka). HPLC: 99.0 %, RT = 1.805 min. MS: m/z = 384.3 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.37 (s, 1H), 8.25 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.36-7.45 (m, 4H), 7.05-7.18 (m, 5H), 6.77 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.79-5.87 (m, 1H), 4.65-4.72 (m, 4H).

Primer 60

[00296] 3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]pirolidine-1-karbonitril (58)

Na RT, u rastvor 3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]pirolidina (780 mg, 2.02 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (10:4, 14 mL) dodaje se natrijum bikarbonat (679 mg, 8.08 mmol, 4.00 ekviv) i karbononitridni bromid (254 mg, 2.40 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor je mešan preko noći na RT. Reakciona mešavina je ekstrahovana pomoću 3 x 10 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 35.0% do 70.0% gradijentom tokom 10 min.3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]pirolidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca skoro bele boje (230 mg, 28%). HPLC: 97.3%, RT = 2.027 min. MS: m/z = 412.4 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.33(s, 1H),7.90(d, J=4Hz,1H), 7.45-7.35(m, 4H), 7.18-7.06(m, 5H), 6.67-6.66(d, J=4Hz,1H), 4.53-4.42(m, 2H), 3.52-3.49(m, 1H), 3.48-3.37(m, 2H), 3.35-3.18(m, 1H), 2.91-2.84(m, 1H), 1.91-1.83(m, 1H), 1.72-1.65(m, 1H).

Primer 61

[00297] 2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]pirolidine-1-karbonitril (61)

U rastvor 2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]pirolidina (382 mg, 0.99 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 8 mL) dodat je natrijum bikarbonat (333 mg, 3.96 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (126 mg, 1.19 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovani natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 40% do 65% gradijentom tokom 10 min.2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]pirolidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca žute boje (34 mg, 10% u 3 koraka). HPLC: 99.4%, RT = 2.009 min. MS: m/z = 412.2 [M+H]+.1H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.33 (s, 1H), 7.88 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 2H), 7.36-7.33 (m, 2H), 7.19-7.06 (m, 5H), 6.68 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.59-4.53 (m, 1H), 4.49-4.43 (m, 1H), 4.16-4.13.

Primer 62

[00298] 4-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidine-1- karbonitril (59)

U rastvor 4-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidina (80 mg, 0.20 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (10:4, 5 mL) dodat je natrijum bikarbonat (67 mg, 0.80 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (25 mg, 0.24 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Dobijena mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 35.0% do 70.0% gradijentom tokom 10 min.4-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca bele boje (30 mg, 35%). HPLC: 97.7%, RT = 2.028 min. MS: m/z = 426.1 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.32 (s, 1H) 7.85 (d, J=3.2Hz, 1H), 7.45-7.41 (m, 2H), 7.19-7.06 (m, 5H), 6.64 (s, 1H) , 4.35 (d, J=7.2Hz, 2H), 3.37-3.30 ( m, 2H), 2.96 (m, 2H), 2.10-2.05 (m, 1H), 1.46-1.37 (m, 4H).

Primer 63

[00299] 3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidin-1-karbonitril (60)

U rastvor 3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidine (74 mg, 0.20 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (10:4, 3 mL) dodat je natrijum bikarbonat (67 mg, 0.80 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (25 mg, 0.24 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom.

Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 35.0% do 70.0% gradijentom tokom 10 min.3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca bele boje (30 mg, 38%). HPLC: 98.9%, RT = 1.922 min. MS: m/z = 398.1 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.35 ( s, 1H), 7.96 (d, J = 3.2Hz, 1H), 7.45-7.35 (m, 4H), 7.18-7.05(m, 5H), 6.70 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.63 (t, J = 5.2 Hz, 1H), 3.94-3.83 (m, 2H) 3.68-3.60 ( m, 2H), 3.32-3.30 ( m, 2H).

Primer 64

[00300] (3R)-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidine-1-karbonitril (71)

U rastvor (3R)-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidina (340 mg, 0.91 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (10:4, 3 mL) dodat je natrijum bikarbonat (368 mg, 4.38 mmol, 4.80 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (116 mg, 1.10 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 30.0% do 65.0% gradijentom tokom 10 min.3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca bele boje (300 mg, 46% u 3 koraka). HPLC: 95.0%, RT = 3.061 min. MS: m/z = 398.1 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.60-8.40 (s, 1H), 7.60-7.45 (s, 1H), 7.40-7.30 (m, 2H), 7.20-7.00 (m, 7H), 6.90-6.75 (s, 1H), 5.85-5.60 (m, 1H), 4.10-3.95 (m, 1H), 3.90-3.75 (m, 1H), 3.75-3.55 (m, 2H), 2.70-2.50 (m, 1H), 2.50-2.30 (m, 1H).

Primer 65

[00301] (3S)-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidin-1-karbonitril (72)

U rastvor (3S)-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidina (340 mg, 0.91 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi(3:1, 10 mL) dodat je natrijum bikarbonat (368 mg, 4.38 mmol, 4.80 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (116 mg, 1.10 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (with 10 mM NH4HCO3), 30.0% do 65.0% gradijentom tokom 10 min.3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]pirolidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca bele boje (80mg, 13% u 3 koraka). HPLC: 95.0%, RT = 2.835 min. MS: m/z = 398.1 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.65-8.55 (s, 1H), 7.75-7.55 (s, 1H), 7.45-7.30 (m, 2H), 7.25-7.00 (m, 7H), 6.95-6.80 (s, 1H), 5.85-5.70 (m, 1H), 4.10-3.98 (m, 1H), 3.90-3.80 (m, 1H), 3.80-3.55 (m, 2H), 2.70-2.55 (m, 1H), 2.55-2.30 (m, 1H).

Primer 66

[00302] 2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidin-1-karbonitril (62)

U rastvor 2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil] pirolidin (382 mg, 0.99 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi(3:1, 8 mL) dodat je natrijum bikarbonat (333 mg, 3.96 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (126 mg, 1.19 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovani natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 40% do 65% gradijentom tokom 10 min.2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca žute boje (34 mg, 10% u 3 koraka). HPLC: 96.8 %, RT = 1.515 min. MS: m/z = 426.2 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.34 (s, 1H), 7.87 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 2H), 7.39-7.34 (m, 2H), 7.19-7.06 (m, 5H), 6.68 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 4.78-4.72(m, 1H), 4.61-4.55 (m, 1H), 3.76-3.73 (m, 1H), 3.45-3.40 (m, 1H), 3.13-3.08 (m, 1H), 1.72-1.70 (m, 1H), 1.61-1.54 (m, 3H), 1.48-1.41 (m, 2H).

Primer 67

[00303] 3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidin-1-karbonitril (63)

U rastvor 3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidina (380 mg, 0.99 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi(3:1, 8 mL) dodat je natrijum bikarbonat (333 mg, 3.96 mmol, 4.00 ekviv). Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (126 mg, 1.19 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 35% do 70% gradijentom tokom 12 min. 3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]piperidin-1-karbonitril je dobijen (32 mg, 12% u 3 koraka). HPLC: 99.2 %, RT = 2.116 min. MS: m/z = 426.2 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.33 (s, 1H), 7.85 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.45-7.40 (m, 2H), 7.37-7.33 (m, 2H), 7.19-7.06 (m, 5H), 6.66 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 4.40-4.35 (m, 2H), 3.34-3.16 (m, 2H), 3.03-2.91(m, 1H), 2.89-2.86 (m, 1H), 2.27-2.23 (m, 1H), 1.71-1.46 (m, 3H), 1.28-1.18 (m, 1H).

Primer 68

[00304] 3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]piperidin-1-karbonitril (64)

U rastvor 3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]piperidina (275 mg, 0.71 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 8 mL) dodat je natrijum bikarbonat (239 mg, 2.85 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (91 mg, 0.86 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je razblažena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod (100 mg) se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 30% do 75% gradijentom tokom 8 min. 3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]piperidin-1-karbonitril je dobijen (31 mg, 15% u 3 koraka). HPLC: 98.9 %, RT = 2.251 min. MS: m/z = 412.1 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.34 (s, 1H), 7.98 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.45-7.35 (m, 4H), 7.18-7.06 (m, 5H), 6.70 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.05-5.01 (m, 1H), 3.86-3.81 (m, 1H), 3.42-3.362 (m, 2H), 3.13-3.06 (m, 1H), 2.23-2.11 (m, 2H), 1.91-1.88 (m, 2H).

Primer 69

[00305] 6-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karbonitril (69)

U rastvor (6-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-2-azaspiro[3.3]heptana (382 mg, 0.96 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 10 mL) dodat je natrijum bikarbonat (322.6 mg, 3.84 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid(122 mg, 1.15 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 0.1% TFA), 40.0% do 50.0% gradijentom tokom 11 min.6-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-2-azaspiro[3.3]heptan-2-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca žute boje (30 mg, 15% u 3 koraka). HPLC: 98.2%, RT = 1.802 min. MS: m/z = 424.4 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.31 (s, 1H), 8.05 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 7.41-7.45 (m, 2H), 7.32-7.34 (m, 2H), 7.14-7.18 (m, 1H), 7.06-7.12 (m, 4H), 6.67 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 5.17-5.26 (m, 1H), 4.3 (s, 2H), 4.15 (s, 2H), 2.84-2.89 (m, 2H), 2.74-2.80 (m, 2H).

[00306] 2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]azetidin-1-karbonitril (65)

U rastvor 2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil] azetidina (491 mg, 1.32 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 8 mL) dodat je natrijum bikarbonat (443.5 mg, 5.28 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (168 mg, 1.59 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 46.0% do 48.0% gradijentom tokom 10 min.2-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]azetidin-1-karbonitril je dobijen (31 mg, 8% u 3 koraka). HPLC: 98.6 %, RT = 1.255 min. MS: m/z = 398.1 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.34 (s, 1H), 7.88 (d, J=3.2 Hz, 1H), 7.45-7.35 (m, 4H), 7.18-7.05 (m, 5H), 6.68 (d, J=3.2 Hz, 1H), 4.91-4.87 (m, 1H), 4.72 (d, J=6 Hz, 2H), 4.08-4.01 (m, 1H), 3.85-3.79 (m, 1H), 2.37-2.29 (m, 1H), 2.18-2.15 (m, 1H).

Primer 71

[00307] 3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]azetidin-1-karbonitril (66)

At RT, u rastvor 3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]azetidina (510 mg, 1.37 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 10 mL) dodat je natrijum bikarbonat (460 mg, 5.48 mmol, 4.00 ekviv). Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (173 mg, 1.63 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 30% do 70% gradijentom tokom 10 min.3-[[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]metil]azetidin-1-karbonitril je dobijen kao čvrsta supstanca bele boje (30 mg, 15% u 3 koraka). HPLC: 99.5%, RT = 1.917 min. MS: m/z = 398.3 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.33 (s, 1H), 7.91 (d, J = 4 Hz, 1H), 7.45-7.35 (m, 4H), 7.18-7.06 (m, 5H), 6.67 (d, J = 4 Hz, 1H), 4.53-4.42 (m, 2H), 3.52-3.49 (m, 1H), 3.48-3.37 (m, 2H), 3.35-3.18 (m, 1H), 2.91-2.84 (m, 1H), 1.91-1.83 (m, 1H), 1.72-1.65 (m, 1H).

Primer 72

[00308] terc-butil N-[(1R,3R)-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il] ciklobutil] karbamat

Na 0<o>C, u rastvor 4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (607.0 mg, 2.00 mmol, 1.00 ekviv) u THF (20 mL) dodat je terc-butil N-[(1S,3S)-3-hidroksiciklobutil]karbamat (374.70 mg, 2.00 mmol, 1.00 ekviv) i PPh3(524.89 mg, 2.00 mmol, 1.00 ekviv). Posle ovoga je polako dodavan DIAD (404.66 mg, 2.00 mmol, 1.00 ekviv) na 0<o>C. Dobijeni rastvor mešan je preko noći na 50<o>C u uljnom kupatilu. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava in elucijom u kolini silica gela sa gradijentom od 10-40% EtOAC u heksanu da se dobije terc-butil N-[(1R,3R)-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]ciklobutil]karbamat kao bezbojni sirup (1.3g).

[00309] (1R,3R)-N-metil-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]ciklobutan-1-amin

Na RT, terc-butil N-[(1R,3R)-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il] ciklobutil] karbamat (940 mg, 1.99 mmol, 1.00 ekviv) rastvoren je u THF (15 mL). Posle ovoga se dodaje LiAlH4(150 mg, 3.95 mmol, 2.00 ekviv) po malo tokom perioda od 1 min. Dobijeni rastvor mešan je 3 sata na 60<o>C. Reakcija je potom ugašena sa 20 mL vode. Vrednost pH ove mešavina podešena je na 3 rastvorom HCl (2 M). Potom je ova mešavina ekstrahovana pomoću 3 x 50 mL etil acetata. Vrednost pH vodene faze podešena je i vraćena na 10 rastvorom natrijum hidroksida (2 M). Potom je vodeni rastvor ekstrahovan pomoću 2 x 30 mL DCM/MeOH=30:1. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom da se dobije (1R,3R)-N-metil-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]ciklobutan-1-amin u vidu narandžastog sirupa (280 mg, 36% za dva koraka).

[00310] (1R,3R)-N-cijano-N-metil-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]ciklobutan-1-amin (67)

U rastvor (1R,3R)-N-metil-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]ciklobutan-1-amina (250.00 mg, 0.65 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 10 mL) dodat je natrijum bikarbonat (217.38 mg, 2.59 mmol, 4.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (82.23 mg, 0.78 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod (250 mg) se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 10 mM NH4HCO3), 25% do 75% gradijentom tokom 12min. (1R,3R)-Ncijano-N-metil-3-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]ciklobutan-1-amin je dobijen kao čvrsta supstanca žute boje (40 mg, 15%). HPLC: 99.0 %, RT = 1.948 min. MS: m/z = 412.3 [M+H]<+>.<1>H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.51 ( s, 1H), 7.58 (d, J=3.2Hz, 1H), 7.58 (d, J=3.2Hz, 1H), 7.38 (t, J=8.0Hz, 2H), 7.28-7.21 (m, 2H), 7.17-7.09 (m, 5H), 6.75 (d, J=3.2Hz, 1H), 5.65-5.57 (m, 1H), 3.84-3.78 (m, 1H), 2.97-2.85(m, 7H).

Primer 73

[00311] 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ol

Na RT, 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-one (5.00 g, 32.01 mmol, 1.00 ekviv) je rastvoren u THF (50 mL). Posle ovoga se dodaje LiAlH4(1.22 g, 32.14 mmol, 1.00 ekviv) malo po malo na 0<o>C tokom perioda od 5 min. Ova mešavina se potom meša 2 sata na 0<o>C. Reakcija se potom gasi dodavanjem 10 mL vode. Vrednost pH ove mešavina podešena je na 1.0 rastvorom HCl (2 M), koji je ekstrahovan pomoću 3 x 100 mL etil acetata. Organske faze su kombinovane i oprane sa 2 x 50 mL salamure, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom da se dobije 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ol u obliku bezbojnog ulja (3.2 g, 63%).

[00312] 5-[1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il]-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin

Na 0<o>C, u rastvor 4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (607.0 mg, 2.0 mmol, 1.0 ekviv) u THF (25 mL) dodaje se 1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-ol (949.75 mg, 6.00 mmol, 3.00 ekviv) i PPh3(1.57 mg, 6.00 mmol, 3.00 ekviv). Posle ovoga se kap po kap dodaje DIAD (1.21g, 6.00 mmol, 3.00 ekviv) u tetrahidrofuran (5 mL) na 0<o>C. Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom da se dobije 5-[1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il]-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin kao čvrsta supstanca bele boje (1.7g, sirovo).

[00313] 4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]cikloheksan-1-on

Na RT, u rastvor 5-[1,4-dioksaspiro[4.5]dekan-8-il]-4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d] pirimidina (1.4 g, 3.16 mmol, 1.00 ekviv) u THF/vodi (1:1, 30 mL) dodat je rastvor vodonik hlorida (2 mL, 12 N). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na 50<o>C. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen sa 10 mL H2O, a vrednost pH je podešena na 10 korišženjem rastvora natrijum hidroksida (2 M). Ova mešavina je ekstrahovana pomoću 2 x 30 mL dihlorometana, a organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava elucijom u koloni silika gela sa gradijentom od 5% - 30% EtOAC i heksanu da se dobije 4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]cikloheksan-1-on kao čvrsta supstanca bele boje (1.5 g).

[00314] N-metil-4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]cikloheksan-1-amin

Na RT, u rastvor 4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]cikloheksan-1-ona (400.00 mg, 1.00 mmol, 1.00 ekviv) u metanolu (10 mL) dodat je AcOH (30 mg, 0.50 mmol, 0.50 ekviv), posle čega se dodaje metanamin (124 mg, 3.99 mmol, 4.00 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je 4 h na RT. Potom je dodat NaBH4(75.77 mg, 2.00 mmol, 2.00 ekviv) i ova mešavina je ostavljhena u stireru da se meša preko noći na RT. Reakciona mešavina je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava elucijom u koloni silika gela sa gradijentom od 5% - 35% metanola u dihlorometanu da se dobije N-metil-4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]cikloheksan-1-amin kao čvrsta supstanca bele boje (300 mg, 36% u 3 koraka).

[00315] (1R,4R)-N-cijano-N-metil-4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]cikloheksan-1-amin (70): U rastvor (N-metil-4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]cikloheksan-1-amina (290.00 mg, 0.70 mmol, 1.00 ekviv) u dihlorometanu/vodi (3:1, 8 mL) dodat je natrijum bikarbonat (117.55 mg, 1.40 mmol, 2.00 ekviv) na RT. Posle ovoga se dodaje karbononitridni bromid (88.93 mg, 0.84 mmol, 1.20 ekviv). Dobijeni rastvor mešan je preko noći na RT. Reakciona mešavina je ugašena sa 10 mL vode i ekstrahovana pomoću 3 x 20 mL dihlorometana. Organske faze su kombinovane, osušene nad anhidrovanim natrijum sulfatom i koncentrovane pod sniženim pritiskom. Ostatak se prečišćava pomoću Prep HPLC u sledećim uslovima: XBridge Prep C18 OBD Kolona, 19 x 150 mm, 5 um; MeCN u vodi (sa 0.05% TFA), 30% do 70% gradijentom tokom 10 min. Dobijen je sirovi proizvod (120 mg) koji se ponovo prečišćava pomoću hiralne-Prep HPLC u sledećim uslovima: Fenomenex Lux 5u Celuloza-4AXIA Packed kolona, 250 x 21.2 mm, 5 um; etanol u heksanu (50.0% izokratski tokom 30 min). Dobija se (1R,4R)-N-cijano-N-metil-4-[4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il] cikloheksan -1-amin (14 mg, 5%). HPLC: 99.5%, RT = 3.382 min. MS: m/z = 440.1 [M+H]<+>.<1>HNMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.37 (br, 1H), 7.93 (d, J = 2.4Hz, 1H), 7.36-7.40 (m, 2H), 7.05-7.16 (m, 5H), 6.69 (s, 1H), 4.99-4.92 (m, 1H), 3.34-3.31 (m, 1H), 2.90 (s, 3H), 2.29-2.21 (m, 4H), 2.13-2.11 (m, 2H), 1.93-1.85 (m, 2H).

Primer 74

[00316] 4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-karbonitril (56) (Metod N)

U bočicu za mikrotalasnu pećnicu koja sadrži 4-(4-Fenoksi-fenoksi)-5-piperidin-4-il-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin (110.00 mg; 0.28 mmol; 1.00 eq.), cijanogen bromid (83.58 µl; 1.14 mmol; 4.00 eq.) u DCM (5.00 ml; 78.00 mmol; 274.04 eq.) dodaje se DIPEA (0.28 ml; 1.71 mmol; 6.00 eq.). Ova reakcija je mešana na sobnoj temperaturi (rt) 16h pre nego što je koncentrovana, razblažena sa 5mL EtOH i filtrirana. Dobijeni kolač (pogačica) je osušen da bi se dobio 4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidine-1-karbonitril ( 80.0 mg, 68.3%) kao čvrsta supstanca skoro bele boje. HPLC: 100 %. MS: m/z = 412 [M+H]<+>.<1>H-NMR (DMSO-D6) δ 8.34 (s, 1H), 8.08 (d, 1H), 7.30-7.44 (m, 4H), 7.07-7.22 (m, 5H), 6.69 (d, 1H), 4.95 (m, 1H), 3.54 (d, 2H), 3.25 (m, 2H), 2.20 (m, 4H).

[00317] 3-okso-3-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)propanenitril

Naslovno jedinjenje je dobijeno korišćenjem 4-(4-Fenoksi-fenoksi)-5-piperidin-4-il-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina, cijano-sirćetne kiseline, Trietil amina i 2,4,6-Tripropil-[1,3,5,2,4,6]trioksatrifosfinana u uslovima sličnim kao onim koji su korišćeni za metode A, C, E, i G i opisani gore. MS: m/z = 454[M+H]<+>.

Primer 76

[00318] (E)-2-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-karbonil)heks-2-enenitril (55)

U mešani rastvor 3-okso-3-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-propionitrila (0.50 g; 0.57 mmol; 1.00 eq.) in dry DCM (6.65 g; 5.00 ml; 10.00 V) dodat je utiraldehid (0.06 g; 0.86 mmol; 1.50 eq.) a potom i piperazin (0.00 g; 0.06 mmol; 0.10 eq.) na RT. Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) 8 h. Reakcija ne nadzirana pomoću TLC. Kada je bila gotova, reakciona mešavina je razblažena vodo, organski sloj je opran salamurom, i osušen nad anhidrovanim natrijum sulfatom. Sirovi proizvod se prečišćava hromatographijom u koloni (60-120 silika) koristeći pet eter i etil acetat kao eluent (50-60%) da bi se dobio (E)-2-{4-[4-(4-Fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidine-1-karbonil}-heks-2-enenitril (70.00 mg; 0.10 mmol; 16.6 %; bledožućkasti gumasti proizvod; Prečišćeni proizvod). MS: m/z = 508[M+H]<+>.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): 8.52 (s, 1H), 7.55-7.54 (m, 1H), 7.40-7.36 (m, 2H), 7.27-7.20 (m, 3H), 7.19-7.13 (m, 4H), 6.80 (t, J = 8.00 Hz, 1H), 5.13 (t, J = 4.00 Hz, 1H), 5.90-5.80 (m, 1H), 4.20-4.10 (m, 1H), 3.30-3.10 (m, 1H), 2.90-2.80 (m, 1H), 2.55-2.50 (m, 2H), 2.38-2.31 (m, 2H), 2.11-2.08 (m, 2H), 1.64-1.55 (m, 2H), 1.03-0.92 (m, 3H).

Primer 77

[00319] (E)-4-(4-(2-((terc-butoksikarbonil)amino)etil)piperazin-1-il)but-2-enoična kiselina

U mešani rastvor 1-2-N-Boc-(aminoetil)-Piperazina (2.00 g; 8.63 mmol; 1.00 eq.) i Trietil-amina (2.65 g; 3.65 ml; 25.90 mmol; 3.00 eq.) u suvom THF (17.80 g; 20.00 ml; 10.00 V) dodata je (E)-4-Bromo-but-2-enoična kiselina (1.74 g; 10.36 mmol; 1.20 eq.) na 0<o>C u atmosferi azota. Posle dodavanja, reakciona mešavina se lagano meša na istoj temperaturi još 2h. Reakciona mešavina se pušta da se polako zagreva do sobne temperature (rt) tokom 18h. Pošto se to završi, čvrsti precipitat se filtrira, i pere sa THF (25 mL) a filtrate se uparava pod snažnim vacumom. Sirovi proizvod se direkno unosi u kolonu (60-120 silika gel) koristeći DCM i metanol kao eluent (12-15%) da bi se dobila (E)-4-[4-(2-terc-Butoksikarbonilamino-etil)-piperazin-1-il]-but-2-enoična kiselina (1.20 g; 3.48 mmol; 40.4 %). MS: m/z = 314[M+H]<+>(TIC).

[00320] terc-butil (E)-(2-(4-(4-okso-4-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)karbamat

U mešani rastvor 4-(4-Fenoksi-fenoksi)-5-piperidin-4-il-5H-pirolo[3,2-d]pirimidina (0.80 g; 1.80 mmol; 1.00 eq.) u suvom DCM (10.64 g; 8.00 ml; 10.00 V) dodata je (E)-4-[4-(2-terc-Butoksikarbonilamino-etil)-piperazin-1-il]-but-2-enoična kiselina (0.67 g; 1.98 mmol; 1.10 eq.) a posle nje i Trietil-amin (0.55 g; 5.40 mmol; 3.00 eq.) na RT. Reakciona mešavina je ohlađena na 0<o>C i dodat je T3P (50% u Etil acetatu) (1.72 g; 1.70 ml; 2.70 mmol; 1.50 eq.) u azotnoj atmosferi. Reakciona mešavina je ostavljena da se polako zagreva do sobne temperature (rt) i meša se 6h. Reakcija se nadzire pomoću TLC. Pošto se ovo završi, reakciona mešavina se razblaži 10%NaHCO3rastvorom. Organski sloj je odvojen i opran vodom, salamurom i osušen nad anhidrovanim natrijum sulfatom da bi se dobio {2-[4-((E)-4-Okso-4-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-enil)-piperazin-1-il]-etil}-karbamična kiselina terc-butil ester (1.47 g; 1.47 mmol; 81.4 %; bezbojna pena; sirovi proizvod). MS: m/z = 682[M+H]<+>.

[00321] (E)-4-(4-(2-aminoetil)piperazin-1-il)-1-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-on

Mešavina 4N HCl u 1,4-dioksanu i {2-[4-((E)-4-Okso-4-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-enil)-piperazin-1-il]-etil}-karbamičnoj kiselini terc-butil esteru (1.00 g; 0.00 mol; 1.00 eq.) mešana je na sobnoj temperaturi (rt) 2h. Ova reakcija je nadzirana pomoću TLC. Pošto je završena, reakciona mešavina je koncentrovana pod snažnim vakuumom. Ostatak je rastvoren vodom (25 mL) i ovaj vodeni sloj je opran etil acetatom (25 mL X 3). Vodeni sloj je potom bazifikovan (~PH = 8), sa NaHCO3 (čvrsti) i ekstrahovan pomoću etil acetata (25 mL X 3). Kombinovani organski sloj je opran salamurom i uparen pod jakim vakuumom da bi se dobio (E)-4-[4-(2-Amino-etil)-piperazin-1-il]-1-{4-[4-(4-fenoksifenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-en-1-on (0.60 g; 0.77 mmol; 79.9 %) MS: m/z = 582[M+H]<+>.

[00322] terc-butil (E)-(15-okso-18-(4-(4-okso-4-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)-3,6,9,12-tetraoksa-16-azaoktadecil)karbamat

U mešani rastvor (E)-4-[4-(2-Amino-etil)-piperazin-1-il]-1-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-en-1-ona (1.00 g; 1.29 mmol; 1.00 eq.) u suvom DCM (13.30 g; 10.00 ml; 10.00 V) dodata je 3-(2-{2-[2-(2-terc-Butoksikarbonilamino-etoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-propionska kiselina (0.58 g; 1.55 mmol; 1.20 eq.) a posle nje i Trietil amin (0.40 g; 0.55 ml; 3.87 mmol; 3.00 eq.) na RT. Reakciona mešavina je ohlađena na 0-5<o>C i dodat je T3P (50% u Etil acetatu) (1.23 g; 1.22 ml; 1.93 mmol; 1.50 eq.). Reakciona mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) 6h. Ova reakcija je nadzirana pomoćuj TLC. Reakciona mešavina je razblažena 10% rastvorom NaHCO3i ekstrahovana pomoću DCM. Organski sloj je opran vodom (25mL), salamurom (25 mL) i osušen nad anhidrovanim natrijum sulfatom. Sirovi proizvod je prečišćen hromatograijom u koloni (60-120 silika) korišćenjem hloroforma i metanola kao eluenta (2-5%) da bi se dobio [2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-((E)-4-Okso-4-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-enil)-piperazin-1-il]-etilkarbamoil}-etoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-etil]-karbamična kiselina terc-butil ester (0.43 g; 0.43 mmol; 33.4 %; bezbojna guma). MS: m/z = 930[M+H]<+>.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):8.31 (s, 1H), 8.02 (d, J = 4.00 Hz, 1H), 7.74 (t, J = 4.00 Hz, 1H), 7.39-7.35 (m, 2H), 7.34-7.33 (m, 2H), 7.17-7.10 (m, 1H), 7.10-7.04 (m, 4H), 6.75-6.70 (m, 1H), 6.66-6.55 (m, 3H), 5.04-5.00 (m, 1H), 4.55-4.53 (m, 1H), 4.30-4.20 (m, 1H), 3.58-3.50 (m, 2H), 3.48-3.47 (m, 12H), 3.46-3.37 (m, 2H), 3.35-3.32 (m, 1H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.15-3.12 (m, 4H), 2.55-2.50 (m, 1H), 2.49-2.48 (m, 10H), 2.28-2.20 (m, 2H), 1.98-1.90 (m, 2H), 1.35 (s, 9H).

[00323] (E)-1-amino-N-(2-(4-(4-okso-4-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)-3,6,9,12-tetraoksapentadekan-15-amid (73)

[2-(2-{2-[2-(2-{2-[4-((E)-4-Okso-4-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-enil)-piperazin-1-il]-etilkarbamoil}-etoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-etil]-karbamična kiselina terc-butil ester (0.38 mmol; 1.00 eq.; 350.00 mg) je kombinovan sa 4N HCl u Dioksanu (10.00 ml) i metanolu (74.06 mmol; 196.60 eq.; 2373.00 mg; 3.00 ml). Ova mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) 1 hr.

Savrastvarač je uklonjen a sirovi proizvod je osušen pod visokim vakuumom preko noći da se dobije 3-(2-{2-[2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-N-{2-[4-((E)-4-okso-4-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-enil)-piperazin-1-il]-etil}-propionamid (314.00 mg; 0.38 mmol) koji je korišćen bez prečišćavanja. MS: m/z = 830[M+H]<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.45 (s, 1H), 8.22 (s, 2H), 8.15 – 8.04 (m, 2H), 7.88 (s, 4H), 7.58 – 7.30 (m, 1H), 7.30 – 6.93 (m, 2H), 6.80 – 6.51 (m, 2H), 5.12 (s, 2H), 4.65 (d, J = 13.8 Hz, 2H), 4.28 (s, 1H), 4.00 – 3.15 (m, 16H), 3.07 – 2.71 (m, 6H), 2.44 – 2.15 (m, 5H), 2.02 (d, J = 13.4 Hz, 1H).

Primer 78

[00324] (E)-1-((4-(5,5-difluoro-1,3,7,9-tetrametil-5H-4l4,5l4-dipirolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]diazaborinin-10-il)fenil)amino)-N-(2-(4-(4-okso-4-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)-1-tiokso-5,8,11,14-tetraoksa-2-azaheptadekan-17-amid (74)

3-(2-{2-[2-(2-Amino-etoksi)-etoksi]-etoksi}-etoksi)-N-{2-[4-((E)-4-okso-4-{4-[4-(4-fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidin-1-il}-but-2-enil)-piperazin-1-il]-etil}-propionamid (0.07 mmol; 1.00 eq.; 59.00 mg) je kombinovan sa 5,5-difluoro-10-(4-isotiocijanatofenil)-1,3,7,9-tetrametil-5H-4l4,5l4-dipirolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]diazaborininom (0.08 mmol; 1.10 eq.; 29.85 mg), N-Etildiisopropilaminom (0.21 mmol; 3.00 eq.; 27.60 mg; 0.04 ml) i MeCN (38.29 mmol; 538.03 eq.; 1572.00 mg; 2.00 ml). Ova mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) 2 hrs. Sirova reakcija se prečišćava direktno na prep koloni reverzne faze korišćenjem gradijenta 20-80% CH3CN/H20 (mravlja kiselina 0.1%) da se dobije (E)-1-((4-(5,5-difluoro-1,3,7,9-tetrametil-5H-4l4,5l4-dipirolo[1,2-c:2',1'-f][1,3,2]diazaborinin-10-il)fenil)amino)-N-(2-(4-(4-okso-4-(4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-il)but-2-en-1-il)piperazin-1-il)etil)-1-tiokso-5,8,11,14-tetraoksa-2-azaheptadekan-17-amid (22.10 mg, 0.02 mmol, 23.8%) kao čvrsta supstanca žute boje. MS: m/z = 605[M+H/2]<+>.1H NMR (400 MHz, DMSO-d6):8.31 (s, 1H), 8.02 (d, J = 4.00 Hz, 1H), 7.74 (t, J = 4.00 Hz, 1H), 7.39-7.35 (m, 4H), 7.34-7.33 (m, 6H), 7.17-7.10 (m, 1H), 7.10-7.04 (m, 4H), 6.75-6.70 (m, 1H), 6.66-6.55 (m, 3H), 5.04-5.00 (m, 1H), 4.55-4.53 (m, 1H), 4.30-4.20 (m, 1H), 3.58-3.50 (m, 2H), 3.48-3.47 (m, 12H), 3.46-3.37 (m, 2H), 3.35-3.32 (m, 1H), 3.32-3.30 (m, 2H), 3.15-3.12 (m, 4H), 2.55-2.50 (m, 1H), 2.49-2.48 (m, 23H), 2.28-2.20 (m, 2H), 1.98-1.90 (m, 2H).

Primer 79

[00325] N-cijano-4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidine-1-karboksamid (57)

Cijanamid (0.69 mmol; 2.10 eq.; 28.81 mg) je rastvoren u THF a onda ohlađen na 0<o>C u ledenom kupatilu. Potom je odjednom dodat NaH (60%) (0.82 mmol; 2.50 eq.; 32.63 mg) i ova mešavina je mešan u vodenom kupatilu pod azotom 30 minuta. Onda je dodat 4-[4-(4-Fenoksi-fenoksi)-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il]-piperidine-1-karboksilina kiselina 4-nitro-fenil ester (0.33 mmol; 1.00 eq.; 179.98 mg) u mešani rastvor a ledeno kuipatilo je uklonjeno. Ova mešavina je mešana na sobnoj temperaturi (rt) preko noći. Suva reakcija je potom ugašena zasićenim bikarbonatom i ekstrahovana tri puta pomoću EtOAC. Zasićeni NaCl rastvor dodat je i ekstrahovan još 3 puta sa EtOAC. Organske komponente su kombinovane i potom koncentrovane do suvog i prečišćene via hromatografijom reverzne faze korišćenjem 10-100% CH3CN/H2O (0.1% amonijum hidroksid) da se dobije N-cijano-4-(4-(4-fenoksifenoksi)-5H-pirolo[3,2-d]pirimidin-5-il)piperidin-1-karboksamid. MS: m/z = 455[M+H]<+>.<1>H-NMR (MeOH-d4) δ 8.31 (s, 1H), 8.13 (s, 1H), 7.25 (m, 5H), 7.0 (m, 5H), 6.76 (d, 1H), 6.12 (d, 1H), 5.64 (d, 1H), 5.25 (s, 1H), 4.61 (d, 1H), 4.23 (d, 1H), 3.28 (m, 1H), 2.99 (t, 1H), 2.19 (m, 4H).

Primer 80

[00326] BTK IC50 Enzimski esej (esej A)

Dole se opisuje mikrofluidni test sa čipom (off-chip mobility shift kinaze assay) koji se koristi da se izmeri inherentna jačina jedinjenja protiv BTK enzima.

[00327] 2.5X punjenja humane BTK pune dužine(08-080) dobijene od CarnaBio USA, Inc., Natick, MA, 1.6X ATP i odgovarajući kinKDR peptidni supstrat (FITC-AHA-EEPLYWSFPAKKK10 NH2) pripremljeni su u reakcionom puferu za kinaze koji se sastoji od 25 mM MgCl2, 0.015% Brij-35 (30%), 100 mM Hepes, pH 7.5, i 10 mM DTT.

[00328] 5 uL enzimskog pufera i 7.5 uL ATP/kinKDR peptidne supstratne mešavine dodato je u Matrix (#115304) sterilne, polipropilenske ploče sa 384 udubljenja, (Thermo Fisher Scientific,

15 Hudson, NH) sa 125 nL serijski razblaženih jedinjenja pripremljenih u 100% DMSO, i

Inkubiranih tokom 90 min. na 27<o>C. Posle perioda inkubacije, reakcije su zaustavljenje dodavanjem 60 uL zaustavnog pufera koji se sastoji od 100 mM Hepes, pH 7.5, 0.015% Brij-35 (30%), 0.277% Coating Reagensa #3 (Caliper Life Sciences, Mountain View, CA), 5% DMSO.

Zaustavljene reakcije suposmatrane na -2 PSI, -3000 V/-700 V u LabChip 3000 čitaču ploče 20 koji proizvodi Caliper Life Sciences, PerkinElmer Company (Hopkinton, MA), a

aktivnost je merena posebnim esejem (off-chip mobility shift assay) koji meri razliku naelektrisanja / mase između supstratea i proizvoda koji se dobije fosforilacijom peptida. IC50

i efikasnost su određeni ucrtavanjem u grafikon [Inhibitor] vs. % Aktivnost u skrineru za genetske podatke – GeneData Screener (Basel, Switzerland).

[00329] Esej B: BTK je kritična za posredovanje signalizacije B ćelijskih antigenskih receptora (BCR) posle stimulacije anti-IgM. Na osnovu ovog principa, uspostavljen je funkcionalni esej baziran na ćelijama da se utvrdi jačina jedinjenja da se inhibira anti-IgM-indukovana ekspresija CD69, nishodni BCR signalni događaj, u sveže izolovanim mononuklearnim ćelijama periferne krvi ljudi (PBMCs). U ovom eseju suspenzija 90 µl PBMC sa sadržajem 2.5x 10<5>ćelije prethodno je testirana sa 10 µl test jedinjenja u različitim koncentracijama jedan sat, a onda inkubirana preko noći (približno 16-18 sati) sa 5 µl 420 µg/ml affiniPure F(ab ́)2fragmentnog kozjeg antihumanog IgM Fc fragment po udubljenju (Dianova, Cat.No.: 109-006-129). Posle inkubacije, ćelije su oprane i imunološki prebojene sa APC obeleženim mišjim antihumanim CD69 (BD Biosciences; klon: FN50), PerCP-Cy5.5 obeleženim mišjim antihumanim CD19 (BD Biosciences; klon: SJ25C1) i FITC-obeleženim mišjim antihumanim CD3 (BD Biosciences; klon: HIT3a), i fiksirani za analizu ekspresije CD69 na CD19 pozitivnim ćelijama (B ćelije)protočnom citometrijom. Procenat CD19 pozitivnih ćelija koje eksprimiraju CD69 grafički upoređen sa koncentracijom test jedinjenja da se dobije kriva odgovora u koncentraciji, i i da se izračuna vrednost IC50kao mera jačine test jedinjenja u ovom eseju.

[00330] Ovi podaci se tumače u skladu sa sledećim:

> 5 μM;

+ >1-5 μM;

++ > 0.1-1 μM;

+++ < 0.1 μM.

Primer 81 Farmaceutski preparati

[00331] (A) Bočice za injekcije: Rastvor od 100 g aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom i 5 g dinatrijum vodonik fosfata u 3 l dva puta destilovanoj vodi podešava se na pH 6.5 korišćenjem 2 N hlorovodonične kiseline, sterilno filtrirane, prenete u bočice za injekcije, i liofilizuje se pod sterilnim ujslovima i zapriva u sterilnim uslovima. Svaka bočica za injekcije sadrži 5 mg aktivnog sastojka.

[00332] (B) Supozitorije: Mešavina 20 g aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom se topi 100 g sojinog lecitina i 1400 g kakao butera, uliva se u kalupe i tu ostavlja da se ohladi. Svaka supozitorija sadrži 20 mg aktivnog sastojka.

[00333] (C) Rastvor: Rastvor se priprema od 1 g aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom, 9.38 g NaH2PO4∙ 2 H2O, 28.48 g Na2HPO4∙ 12 H2O i 0.1 g benzalkonium hlorida u 940 ml dva puta destilovane vode. Vrednost pH se podešava na 6.8, a rastvor se dopunjava do 1 l i sterilizuje zračenjem. Ovaj rastvor bi mogao da se koristi u obliku kapi za oči.

[00334] (D) Pomada: 500 mg aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom meša se sa 99.5 g Vazelina u aseptičnim uslovima.

[00335] (E) Tablete: Mešavina 1 kg aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom, 4 kg laktoze, 1.2 kg krompirovog skroba, 0.2 kg talka i 0.1 kg magnezijum stearata se stavlja u presu da se dobiju tablete na konvencionalan način tako da svaka tableta sadrži 10 mg aktivnog sastojka.

[00336] (F) Film tablete: Tablet se prave isto kao u Primeru E a potom se premazuju/ oblažu na konvencionalni način premazom od saharoze, krompirovog skroba, talka, tragacant (biljne gume) i boje.

[00337] (G) Kapsule: 2 kg aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom se puni u tvrde želatinske kapsule na konvencionalan način tako da svaka kapsula sadrži 20 mg aktivnog sastojka.

[00338] (H) Ampule: Rastvor od 1 kg aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom u 60 l dva puta destilovane vode sterilno se filtrira, prenosi u ampule, i liofilizuje pod sterilnim uslovima, i zaptiva u sterilnim uslovima. Svaka ampula sadrži 10 mg aktivnog sastojka.

[00339] (I) Sprej za inhalaciju: 14 g aktivnog sastojka u skladu sa ovim pronalaskom se rastvara u 10 l izotonog NaCl rastvora, i the rastvor se prenosi u komercijalno dostupneposude za sprej sa mehanizmom pumpice. Ovaj rastvor bi mogao da se u vidu spreja unosi u usta ili nos. Jedno prskanje sprejom (oko 0.1 ml) odgovara dozi od oko 0.14 mg.

[00340] Iako je ovde opisan priličan broj oblika ovog pronalaska, očigledno je da osnovni primeri mogu da se menjaju da se obezbede drugi oblici koji koriste jedinjenja i metode ovog pronalaska. Prema tome, treba da bude jasno da će obim ovog pronalaska da se definiše zahtevima koji su dati u prilogu, a ne konkretnim oblicima koji su predstavljeni pomoću primera.

Claims

ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule I,

I Ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, naznačeno time da: X bude N ili CR<2>; X<1>bude N ili CR<2>; X<2>bude N ili CR<2>; svaki R<2>se nezavisno odabira između sledećih: –R, halogen, -haloalkil, –OR, –SR, –CN, – NO2, -SO2R, -SOR, -C(O)R, -CO2R, -C(O)N(R)2, -NRC(O)R, -NRC(O)N(R)2, -NRSO2R, ili –N(R)2; svaki R je nezavisno vodonik, C1–6alifatik, C3–10aril, a 3-8 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7 -člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, ili 5-6 -člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan; ili dve R grupe na istom atomu su uzete zajedno sa atomom za koji su spojene da formiraju C3–10aril, 3-8 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7 -člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, ili 5-6 -člani monociklični heteroarilni prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan; L je divalentna grupa između sledećih: C3–10aril, 3-8 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, 3-7 -člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoms nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, i 5-6 -člani monociklični heteroarinil prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan; ili L je divalentna grupa izabrana između sledećih: alifatik-C3–10aril, C1–6alifatik-38 -člani zasićeni ili delimično nezasićeni karbociklični prsten, C1–6alifatik-3-7 -člani heterociklični prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor, i C1–6alifatik-5-6 -člani monociklični heteroaril prsten koji ima 1-4 heteroatoma nezavisno izabranih između sledećih: azot, kiseonik, ili sumpor; od kojih je svaki opciono supstituisan; Y je O, S, SO2, SO, C(O), CO2, C(O)N(R), -NRC(O), -NRC(O)N(R), -NRSO2, ili N(R); ili Y bude odsutno; R<1>je C2–6alkenil ili C2–6alkinil, koji je opciono supstituisan ; ili R<1>je CN.
2. Jedinjenje iz zahteva br. 1, naznačeno time da je svaki R<2>nezavisno fenil ili pirazolil.
3. Jedinjenje iz zahteva br. 1, naznačeno time da je svaki R<2>nezavisno –OR ili – N(R)2.
4. Jedinjenje iz zahteva br.1, naznačeno time da je svaki R<2>nezavisno vodonik,

.
5. Jedinjenje iz zahteva br.1, naznačeno time da je L
6. Jedinjenje iz zahteva br.1, naznačeno time da Y bude NR,

.
7. Jedinjenje iz zahteva br.1, naznačeno time da Y bude odsutno.
8. Jedinjenje iz zahteva br.1, naznačeno time da R<1>bude –CN, -CH2CN,

.
9. Jedinjenje iz zahteva br.1, formule I-a1,

I-a1; ili a njegova farmaceutski prihvatljiva so.
10. Jedinjenje iz zahteva br.1, formule I-a2,

I-a2; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
11. Jedinjenje iz zahteva br.1, formule I-b1,

I-b1; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
12. Jedinjenje iz zahteva br.1, formule I-b2,

I-b2; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
13. Jedinjenje iz zahteva br.1, formule I-c1:

I-c1; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
14. Jedinjenje iz zahteva br.1, formule I-c2:

I-c2; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
15. Jedinjenje iz zahteva br.1, odabrano između sledećih:
16. Farmaceutiski sastav koji uključuje jedinjenje iz zahteva br.1, i farmaceutiski prihvatljivi adjuvans, nosač, ili vehikulum.
17. Jedinjenje u skladu sa ma kojim od zahteva od br.1 do br.15 i/ili njegova fiziološki prihvatljiva so za upotrebu u terapiji BTK-posredovanog poremećaja , naznačeno time da ta BTK-posredovani događaj bude inflamatorna bolest creva, artritis, sistemski lupus eritematozus (SLE ili lupus), lupus nefritis, vaskulitis, idiopatska trombocitopenijska purpura (ITP), reumatoidni artritis, psorijatični artritis, osteoartritis, Stilova bolest, juvenilni artritis, dijabetes, mijastenia gravis, Hašimotov tiroiditis, Ordov tiroiditis, Grejvsova bolest, autoimuni tiroiditis, Sjogrenov sindrom, multipla skleroza, sistemska skleroza, Lajmska neuroborelioza, Giljan-Bareov sindrom, akutni diseminovani encefalomijelitis, Adisonova bolest, opsoklonusmioklonus sindrom, ankilozirajuća spondiloza, antifosfolipidni antitelo sindrom, aplastična anemija, autoimuni hepatitis, autoimuni gastritis, perniciozna anemija, celijačna bolest, Gudpasturov sindrom, idiopatska trombocitopenijska purpura, optički neuritis, skleroderma, primarna bilijarna cirosza, Raiterov sindrom, Takajašijev arteritis, temporalni arteritis, topla autoimuna hemolitička anemija, Vegenerova granulomatoza, psorijaza, alopecia universalis, Behčetova bolest, hronični zamor, disautonomija, membranozna glomerulonefropatija, endometrioza, intersticijalni cistitis, pemfigus vulgaris, bulozni pemfigoid, neuromiotonija, skleroderma, ili vulvodinija.
18. Proces za proizvodnju jedinjenja formule I u skladu sa zahtevom br.1, koji uključuje sledeće korake: Reagovanje jedinjenja formule (II-a)

naznačeno time da X, X<1>, i X<2>, budu kako su definisani u zahtevu br.1; sa jednim jedinjenjem da se donije jednjenje formule I:

naznačeno time da X, X<1>, X<2>, R<1>, L i Y budu onako kako su definisani u zahtevu br. 1. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5