RS59243B1

RS59243B1 - Hemostatski sastavi

Info

Publication number: RS59243B1
Authority: RS
Inventors: Christian Gagnieu; Patricia Forest; Sylvain Picot
Original assignee: Biomup
Priority date: 2011-04-27
Filing date: 2012-04-26
Publication date: 2019-10-31
Also published as: AU2016277573B2; CN103635202A; AU2016277573A1; JP6050320B2; EP3513803A1; CA2830659A1; CA2830659C; BR112013027567B1; AU2021200468A1; BR112013027567A2; US9662374B2; CY1122251T1; AU2012247480A1; AU2018274924A1; JP2017066150A; WO2012146655A1; BR122021017027B1; CN103635202B; EP3922261A1; US10342856B2

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Predmetni pronalazak se odnosi na oblast hemostatskih sastava, na upotrebu specifičnih jedinjenja ili sastava kao hemostatiskih agenasa, na metod za dobijanje hemostatskih sastava i na hemostatskih metoda.

STANJE TEHNIKE

[0002] Rane, bilo spoljne bilo unutrašnje, traumatske ili hirurške, često dovode do krvarenja. Takvo krvarenje može biti maje ili više značajno. Krvarenje se sprečava i zaustavlja skupom fizioloških fenomena pod nazivom "hemostaza". Hemostaza pomaže da se popravi vaskularni prekid i, uopšteno, osigurava održavanje integriteta krvnih sudova i tkiva.

[0003] Kad je krvni sud povređen, uključuje se prirodni mehanizam koji obuhvata različite stadijume da zaustavi isticanje krvi. Prvo, vazokonstrikcija, koja usporava krvarenje, traje 15 do 60 sekundi i indukuje složenu kaskadu reakcija. Fibrozna mreža, sastavljena od fibrinskih formi oko čepa od trombocita: konačni tromb je formiran i zaštićen od prevremenog rastvaranja pomoću faktora XIII, koji stabilizuje fibrin. Konačno, fibrinska mreža se zateže (retrakcija) i ivice rane se spajaju: rana se skuplja. Unutar stabilnog, unakrsno povezanog fibrina, fibroblasti mogu da rastu i da se organizuju u konjunktivni matriks unutar tromba i da konačno zatvore ranu.

[0004] U cirkulišućoj krvi nema čvrstog fibrina; da ga ima, trenutno bi opstruisao vitalne sudove. Međutim, prisutan je fibrinov prekursor, fibrinogen. Pod dejstvom trombina, čija sinteza se aktivira faktorima koagulacije, fibrinogen se transformiše u nerastvorljiv fibrin.

[0005] Konačno, nekoliko dana ili nedelja posle uspešnog zarastanja rane, fibrinski klaster se uništava tokom fibrinolize.

[0006] Uprkos ovom biohemijskom fenomenu, često je neophodno, naročito u slučaju rana koje su suviše velike ili u slučaju difuznog krvarenja, da se "veštački" izvede hemostaza.

[0007] Postoje "mehanička" rešenja da se pomogne u dostizanju hemostaze, kao što je pritisak, ligatura i elektrokoagulacija, koja se koriste kao tretmani prve linije. Međutim, ova rešenja imaju malu ili nikakvu efektivnost u određenom broju slučajeva, kao što su "cureće" kapilarne hemoragije, hemoragije hipervaskularizovanih organa kao što su slezina ili jetra, hemoragije koje dovode do difuznog krvarenja, na primer, u kostima i/ili u neurohirurgiji.

[0008] Postoje i "hemijska" rešenja, naročito implementirana u određenim tekućim hemostatskim proizvodima. Komponente navedenih hemijskih rešenja su uopšteno ili tipa "apsorbera" ili "aktivnog" tipa.

[0009] Apsorbujući hemostatski proizvodi, pogotovo oni koji sadrže polisaharide, kao što su regenerisana oksidovana celuloza ili alginati, funkcionišu uglavnom putem mehaničkog dejstva i proste apsorpcije. Kod njih se često javlja problem preteranog bubrenja. Ako navedeno bubrenje dovodi do brze apsorpcije tečnosti, naročito krvi, ono može da dovede i do neželjenog pritiska kad se koristi u "zatvorenoj" okolini, na primer, u kontaktu sa tvrdom moždanicom ili u urologiji.

[0010] Pored toga, određeni proizvodi, pogotovo oni koji sadrže biljne polisaharide, kao što su celuloza ili alginati, mogu dalje da izazovu inflamatorne reakcije tokom resorpcije i/ili mogu da dovedu do proizvoda degradacije koje domaćin ne prepoznaje. Posledica toga je da je poželjno ukloniti takve proizvode, tako da oni ne ostanu u telu i tako ne proizvode ove neželjene efekte.

[0011] Aktivni hemostatski proizvodi, kao što su proizvodi koji sadrže trombin ili fibrin, su često proizvodi izvedeni iz krvi. Takvi proizvodi uključuju rizike od alergija i prenosa bolesti, naročito u slučaju kad vektor bolesti ne bi bio deaktiviran klasično primenjenim tretmanima. Pored toga, navedeni nishodni tretmani su uopšteno složeni i/ili skupi. Konačno, u opštem slučaju, oni mogu da zahtevaju pripremu pre upotrebe, koja može biti ograničenje, i prava muka, u hitnim slučajevima.

[0012] Štaviše, proizvodi koji sadrže i fibrin i trombin zasnivaju svoj način delovanja na interakciji ova dva proizvoda izvedena iz krvi koji sadrže proizvod. Reakcija može ponekad da se desi bez interakcije sa krvlju, u kom slučaju se za proizvode kaže da plutaju. Drugim rečima, proizvod biva odguran pomoću krvi koja nastavlja da teče, što može da izazove da proizvod postane razblažen ili da koaguliše i formira gel iznad krvi, situacija u kojoj protok krvi nije blokiran. Tako se ne može postići hemostaza.

[0013] Proizvodi koji su danas dostupni na tržištu mogu biti u vidu:

- sunđera ili matriksa: ovaj fizički oblik olakšava rukovanje, ali može biti problematičan tokom upotrebe u složenim oblastima ili u laparoskopskim operacijama,

- vlakana: ovaj oblik se može lako postaviti u deo koji se tretira, ako je taj deo dostupan i može da smanji količinu proizvoda koji se implantiraju; s druge strane, on je jako kontraindikovan na sudovima, naročito da bi se izbegao prolaz vlakana u cirkulaciju, jer takva situacija predstavlja rizike od embolije, kao i rizike lepljenja za instrumente, - tečnosti koja očvršćava, kao što su biološki adhezivi: takvi sastavi se često sastoje od bar dva proizvoda, koji su pomešani tokom pripreme da bi reagovali i da bi polimerizovali. Navedeni proizvodi se uopšteno moraju pripremati neposredno pre upotrebe, naročito u operacionoj sali, što njihovu pripremu čini zamornom i zahteva da se njihova upotreba anticipira,

- sprejeva: adhezivi mogu biti u vidu spreja zahtevajući upotrebu određenog uređaja za povezivanje šprica sa aparatom koji obezbeđuje vazduh neophodan da pogura proizvod. Teško je ili nemoguće regulisati dozu, homogenost raspodele i/ili gustinu nanesenog sloja. - praha: neki prahovi napravljeni od skroba su dostupni na tržištu. Do hemostatskog praha se dolazi zahvaljujući apsorpciji krvi na prahu. Skrob nema nikakve biološke osobine prema krvi. Gustina i granulometrija (gradacijia veličine) ovog praha je vrlo niska i prah se ne može špricati a da ne formira oblak koji nije pogodan za laparoskopsku primenu. Na primer, prah opisan u WO 2005/072700 nije pogodan za homogen i precizan sprej za ranu, naročito u laparoskopiji.

[0014] Sastavi iz stanja tehnike su najčešće obezbeđeni u vidu sunđera, vlakana ili viskoznih tečnosti, kao što su fibrinski adhezivi, koji se mogu prskati. Međutim, u ovom trenutku nije dostupan nijedan prah pogodan za nanošenje prskanjem.

[0015] Predmetni pronalazak, dakle, ima za cilj dobijanje sastava koji rešava sve ili neke od problema pomenutih gore, a naročito sastav koji je zadovoljavajući u odnosu na bezbednost, efektivnost, lakoću primene i/ili cenu. Konkretno, proizvod ili sastav može da dobije odobrenje nadležnog organa u skladu sa važećim propisima u svakoj zemlji.

[0016] Preciznije, pronalazak ima za cilj dobijanje sastava sa zadovoljavajućim kapacitetom apsorpcije, dobrim hemostatskim kapacitetom, minimalnim neželjenim efektima (ili bez neželjenih efekata), dobrom sposobnošću da se zadrži na ivici rane i mogućnošću da se prska, zadovoljavajućom penetracijom u tok krvi kad se poprska i/ili ograničenim bubrenjem.

[0017] Naročito, sastav ima za cilj da može da se administrira u većini hirurških procedura, kao što su laparotomije, laparoskopije, celioskopije i robotičke hirurške tehnike i/ili da može da se prska. Sastav i njegovi metaboliti mogu poželjno da imaju zadovoljavajuću neškodljivost, da imaju poboljšanu bezbednost, da izazivaju slab ili nikakav imunogeni odgovor, da ne budu karcinogeni i/ili da se mogu resorbovati. Naročito, resorpcija je kompatibilna sa fenomenom hemostaze i isceljenja da bi mogla da se ostavi na mestu posle procedure.

[0018] Sastav može da ima za cilj i da bude obezbeđen u formi koja se može nanositi prskanjem (sprej).

[0019] Pored rešavanja svih ili nekih od problema pomenutih gore, predmetni pronalazak može da ima za cilj i dobijanje sastava:

- koji omogućava da se dobije proizvod, naročito suv, prah koji može da se prska koji sadrži sve komponente korisne za hemostatsko dejstvo, naročito naročito tokom skladištenja, drugim rečima, proizvod koji može čuvati u formi spremnoj za upotrebu i koji ne zahteva mešanje neposredno pred upotrebu i/ili

- čija glavna komponenta ili čije komponente ne apsorbuju toliko krvi da postoji rizik od neželjenog pritiska i/ili

- čije komponente simultano imaju hemostatsko, mehaničko i biohemijsko, ili biološko dejstvo i/ili

- koji se može koristiti odmah, bez pripreme, bez rukovanja hemostatskim proizvodom i koji može biti, na primer, za upotrebu u laparoskopiji, kao i u laparotomiji.

KRATAK PRIKAZ PRONALASKA

[0020] Prema prvom aspektu, pronalazak se, dakle, odnosi na hemostatski sastav kao što je definisan u zahtevu 1 i odgovarajućim zavisnim zahtevima.

[0021] Predmetni pronalazak naročito može da omogući dobijanje sastava sa naročito dobrim hemostatskim osobinama, posebno zahvaljujući karakteristikama veličine i/ili gustine čestica navedenog sastava i njegovih komponenata, dok proizvodi ograničeno bubrenje.

[0022] Prema jednoj varijanti, sastav ne sdrži komponente dobijene direktno ili indirektno iz krvi. Kad je prisutan trombin, na primer, on može biti ekstrahovan iz krvi ili rekombinantni trombin. Posebno, sastav se sastoji od jedinjenja koja se brzo raspadaju u telu i/ili su biokompatibilna, drugim rečima, koja ne indukuju neželjen odgovor.

[0023] Poželjan, ali neograničavajući aspekt sastava, koji se uzima sam ili u kombinaciji, je sledeći:

- sastav sadrži težinski odnos kolagen/monosaharid u opsegu od 10 do 50, a poželjno 19. - kolagen sadrži količinu fibroznog kolagena i/ili fibrilarnog kolagena u opsegu od 85% do 95 težinskih % ukupne težine kolagena.

- sastav dalje sadrži težinski odnos kolagen/ukupna ugljovodonična jedinjenja u opsegu od 2 do 40, gde je težina ukupnih ugljovodoničnih jedinjenja suma težine monosaharida i težine glikozaminoglikana.

- sastav još sadrži faktor koagulacije, naročito trombin, u količini u opsegu od 0,01 lU/mg do 20 lU/mg sastava.

- sastav ima sabijenu gustinu veću od 0,4 g/mL.

- sastav sadrži bar 50 težinskih % čestica čija je veličina između 200 µm i 400 µm.

- sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 10, koji sadrži:

○ kolagen u količini od 86,36 težinskih % ukupne težine sastava,

○ glukozu, u količini od 4,54 težinska % ukupne težine sastava,

○ hondroitin sulfat, u količini od 9,09 težinskih % ukupne težine sastava.

- sastav još sadrži trombin, u količini od 0,2 lU/mg do 2 lU/mg sastava.

[0024] Prema još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na metod dobijanja hemostatskog sastava kao što je definisan u zahtevu 12 i odgovarajućim zavisnim zahtevima.

[0025] Pronalazak se dalje odnosi na komplet koji sadrži gore opisani sastav i uređaj za prskanje prilagođen da sadrži i istiskuje takav sastav.

KRATAK OPIS CRTEŽA

[0026] Ostale karakteristike i prednosti ovog pronalaska će biti jasne iz opisa koji sledi, koji je dat samo u ilustrativne svrhe i ni na koji način nije ograničavajući i koji treba posmatrati u odnosu na pridruženi nacrt, u kome je na Slici 1 prikazan primer rezultata elektroforeze kao što je opisano u primeru 13.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0027] U opisu koji sledi, ukoliko nije drugačije rečeno, težinski procenti su dati u odnosu na ukupnu težinu suvog sastava.

[0028] U kontekstu predmetnog pronalaska, "ukupna težina suvog sastava" se odnosi na ukupnu težinu sastava bez rastvarača, naročito vode, tako da je ukupna težina u odnosu na anhidrovan proizvod.

[0029] Pored toga, težine komponenata i dobijeni procenti mogu da odgovaraju anhidrovanoj težini ovih komponenata, drugim rečima, težini komponenata koja ne uključuje vodu koju može da sadrži. To se može primeniti i na dobijene procente.

[0030] Sastav može da sadrži kolagen u količini većoj od ili jednakoj 70 težinskih % ukupne težine sastava, naročito većoj od ili jednakoj 75 težinskih %, naročito većoj od ili jednakoj 77 težinskih %, a posebno većoj od ili jednakoj 80 težinskih %.

[0031] Pored toga, sastav može da sadrži količinu kolagena manju od ili jednaku 99 težinskih % ukupne težine sastava, naročito manju od ili jednaku 96 težinskih %, naročito manju od ili jednaku 93 težinskih %, a posebno manju od ili jednaku 90 težinskih %.

[0032] Dakle, sastav može da sadrži količinu kolagena u opsegu od 70% do 99 težinskih % ukupne težine sastava, konkretno prema pronalasku u opsegu od 75% do 96 težinskih %, naročito u opsegu od 77% do 93 težinskih %, a posebno u opsegu od 80% do 90 težinskih %. Poželjno je da sadržaj kolagena bude oko 86 težinskih % ukupne težine sastava.

[0033] Kolagen je glavna struktura proteina u sisarima. Kolagen se sastoji od molekula tropokolagena (TC) koji imaju dužinu oko 280-300 nm i prečnik oko 1,5 nm.

[0034] Termin "fibrozni kolagen" se odnosi na kolagen u vidu vlakna, koje odgovara skupu fibrila. Vlakna uopšteno imaju prečnik u opsegu od 1 µm do 10 µm. Termin "fibrilarni kolagen" se odnosi na kolagen u vidu fibrila. Preciznije, fibrile uopšteno imaju prečnik od 10 nm do 1 µm. Prema tome, fibrile se formiraju od stepenasto naslojenih nizova molekula tropokolagena i ove fibrile mogu da budu uređene tako da formiraju kolagenska vlakna. Fibrozni i/ili fibrilarni kolagen uopšteno nije rastvorljiv, dok je nefibrilarni kolagen jako rastvorljiv.

[0035] Definicija fibroznog kolagena i fibrilarnog kolagena može da buda konkretno ona koju je dao Markus Buehler u "Nature designs tough collagen: explaining the nanostructure of collagen fibrils", PNAS, August 15, 2006, vol.103, br.33, pp.12285-12290.

[0036] Više od 28 različitih kolagena je otkriveno i klasifikovano u 3 glavne kategorije: kolageni fibrilarnog tipa, kolageni nefibrilarnog tipa i FACIT kolageni.

[0037] Kolageni fibrilarnog tipa su kolageni koji uglavnom sadrže fibrilarne i/ili fibrozne kolagene i jedva uopšte nefibrilarne kolagene (na primer, kolagen tipa I). Slično, kolageni nefibrilarnog tipa su kolageni koji uglavnom sadrže nefibrilarne kolagene. Neki kolageni nefibrilarnog tipa se mogu sastojati samo od nefibrilarnih kolagena (na primer, kolagen tipa IV ili V).

[0038] Industrijska ekstrakcija i prečišćavanje kolagena se uopšteno sastoji od destrukturacije početnih tkiva da se 1) uklone svi ili većina kontaminirajućih proteina i 2) dobije zahtevani nivo strukturacije u zavisnosti od konačne upotrebe proizvoda. Ekstrakcija kolagena se uopšteno izvodi u kiselim ili baznim uslovima koji dozvoljavaju rastvorljivost monomolekulskog rastvorljivog kolagena koji nije fibrilaran. Finalni kolagen prirodno sadrži mešavinu fibrilarnog/fibroznog kolagena i nefibrilarnog kolagena. Proporcija fibrilarnog/fibroznog kolagena i nefibrilarnog kolagena zavisi od tkiva koje izabrano za ekstrakciju i od postupka ekstrakcije.

[0039] Finalni proizvod je različit od kolagena koji je dobijen veštačkom mešavinom samo fibrilarnog kolagena i samo nefibrilarnog kolagena. U članku pod naslovom "Extraction of collagen from connective tissue by neutral salt solutions" (Proceedings of the NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES Volume 41 Number I January 15, 1955 by Jérôme Gross, John H. Highberger i Francis O. Schmitt), su pokazane razlike između fibrilarnih i nefibrilarnih kolagena dobijenih posle specifičnog postupka ekstrakcije koji dovodi do – kao što je prethodno opisano – mešavine ova dva kolagena.

[0040] U predmetnom sastavu, kolagen je fibrilarnog tipa i sadrži fibrozni i/ili fibrilarni kolagen u količini od bar 60 težinskih %, naročito prema pronalasku bar 70 težinskih %, naročito bar 75 težinskih %, a posebno bar 80 težinskih % ukupne težine kolagena.

[0041] Konkretnije, kolagen sadrži bar 85%, naročito bar 90%, naročito bar 95%, a posebno bar 98 težinskih % fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena u ukupnoj težini kolagena u sastavu.

[0042] Poželjno je da sastav sadrži količinu fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena u opsegu od 85% do 95 težinskih % ukupne težine kolagena u sastavu, a najpoželjnije od 85% do 90 težinskih %.

[0043] To znači da u poželjnom rešenju, sastav, dakle, sadrži količinu nefibrilarnog kolagena u opsegu od 5% do 15 težinskih % ukupne težine kolagena u sastavu, a najpoželjnije od 10% do 15 težinskih %.

[0044] Vrlo je poželjno da sastav ima takav odnos fibrilarnog/fibroznog kolagena i nefibrilarnog kolagena, naročito za upotrebu kao hemostatski prah. Zaista, fibrilarni/fibrozni kolagen bi trebalo da bude prisutan u dovoljnoj meri da napravi hemostazu, a nefibrilarni kolagen bi takođe trebalo da bude prisutan u dovoljnoj meri za koheziju proizvoda, a ne u prevelikoj meri, da bi se izbeglo suvišno bubrenje.

[0045] Kolagen može da se izabere među kolagenima tipa I ili kolagenima tipa I i III. Kolagen se može ekstrahovati iz različitih izvornih tkiva, naročito kože i/ili tetiva, iz svih vrsta, konkretnije svinja, goveda ili konja.

[0046] Kolagen može uglavnom biti napravljen od fibroznog kolagena svinjskog porekla ekstrahovanog iz kože i/ili tetiva. U slučaju kolagena ekstrahovanog iz tetiva, ekstrakcija može biti takva kao što je opisano u međunarodnoj prijavi 2010/125086.

[0047] Navedeni kolagen, naročito fibrozni i/ili fibrilarni kolagen, može da se dobije kiselom ili baznom ekstrakcijom. Prema jednom posebnom rešenju, navedeni kolagen se dobija baznom ekstrakcijom. Prema jednom posebnom rešenju, kolagen može biti takav kakav je opisan u patentnoj prijavi FR2944706.

[0048] Poželjno je da kolagen potiče iz bazne ekstrakcije koja omogućava maksimiziranje sadržaja fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena u ekstraktu kolagena. Dalje, takva bazna ekstrakcija se može optimizovati za kontrolisanje proporcije fibrilarnog/fibroznog kolagena i nefibrilarnog kolagena unutar ekstrahovanog kolagena. Za razliku od kisele ekstrakcije, bazna ekstrakcija omogućava hidrolizu proteoglikanas. Ovo dejstvo dovodi do destrukturacije tkiva i razdvajanja vlakana a bez modifikacije njihovog oblika. U kiselim uslovima, bubrenje molekula unutrašnjeg kolagena u vlaknima dovodi do njihove delimične destrukturacije tokom procesa uz oslobađanje veće količine nefibrilarnog rastvorljivog kolagena.

[0049] Kolagen se može unakrsno vezati, naročito klasičnim načinima unakrsnog vezivanja kao što je termička dehidratacija, upotrebom agensa za premošćavanje, na primer, formaldehida i/ili glutaraldehida; pomoću oksidovanih polisaharida, na primer, prema metodu opisanom u međunarodnoj prijavi WO 2010/125086; i/ili pomoću oksidovanih amilopekctina ili glikogena.

[0050] Sastav sadrži bar jedan monosaharid, sam ili u smesi sa drugim monosaharidima. Navedeni monosaharidi mogu biti izabrani iz riboze, saharoze, fruktoze, glukoze i njihovih smesa. Monosaharid prisutan u sastavu iz pronalaska, sam ili u smesi sa monosaharidima, je naročito glukoza.

[0051] Sastav sadrži količinu monosaharida u opsegu od 1% do 12,5 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 1,5% do 10 težinskih %, naročito u opsegu od 2% do 8 težinskih %, a posebno u opsegu od 2,5% do 7,5 težinskih %. Najpoželjnije je da količina monosaharida bude oko 5 težinskih % ukupne težine sastava.

[0052] Sastav može da sadrži težinski odnos kolagen/monosaharid u opsegu od 5 do 100, naročito od 7 do 65, konkretnije od 10 do 50, a još konkretnije od 11 do 40. Najpoželjnije, sastav sadrži težinski odnos kolagen/monosaharid od oko 19.

[0053] Monosaharid, naročito riboza, saharoza, fruktoza, glukoza i njihove smese, a naročito glukoza, mogu pogotovo da omoguće dobijanje čestica koje sadrže pretežno fibrozni i/ili fibrilarni kolagen i monosaharide sa željenim karakteristikama, pogotovo veličinom i gustinom. Ugrađivanje monosaharida u smesu kolagena dalje omogućava smanjenje naelektrisanja unutar sastava, što omogućuje formiranje praha prilagođenog smeštanju u kontejner kakav su cevčice, uređaj za izduvavanje, raspršivač spreja.

[0054] Posebno, prisustvo monosaharida može da olakša i/ili pojeftini dobijanje čestica željene gustine i/ili veličine, naročito u terminima poboljšanja hemostatskih osobina praha sastava.

[0055] Mlevenje kolagenskih vlakana bez ikakvih dodataka dovodi do smanjenja veličine vlakana i smanjuje gustinu praha. Dalje, konačna priprema sadrži važnu količinu naelektrisanja koja sprečava manipulaciju konačnog proizvoda. Zato je predloženo da se doda monosaharid pre mlevenja kolagena, što dovodi do očvršćavanja preparata koji se meša, omogućavajući brzo mlevenje (ograničavanje denaturacije), time omogućavajući pripremu praha sa smanjenim naelektrisanjem (pogodno za stavljanje praha u kontejnere, kao što je raspršivač spreja) i konačnu gustinu pogodnu za sastav u spreju.

[0056] Nije se moglo očekivati da takav dodatak monosaharida nema nikakav efekat na konačnu aktivnost proizvoda. Konkretno, on ne modifikuje bioaktivnost konačnog proizvoda. Monosaharid nema nikakve hemostatske efekte.

[0057] Dalje, takav dodatak monosaharida ga ne čini agensom za penjenje, kao što je slučaj u WO 01/97873. U WO 01/97873, zagrevanje razblaženog rastvora dovodi do formiranja želatina. Visoka koncentracija želatina se može napraviti da se dobije vrlo koncentrovan rastvor, ali konačan proizvod sadrži želatin, a ne kolagen. Poznato je da je želatin manje hemostatčan nego kolagen, jer agregiranje pločica zahteva prisustvo kolagenskih fibrila i strukturu nativnog kolagena koja je odsutna u želatinu.

[0058] Prema jednom rešenju, sastav sadrži, odnosno sastoji se od čestica koje sadrže kolagen i monosaharid, posebno odabran od riboze, saharoze, fruktoze, glukoze i njihovih smesa, naročito glukoze.

[0059] Sastav može da sadrži bar jedan, posebno jedan, faktor koagulacije. Takvi faktori koagulacije su dobro poznati stručnjacima u ovoj oblasti. Prvenstveno, faktor koagulacije je trombin.

[0060] Navedeni faktor koagulacije, naročito trombin, može da potiče iz životinjskih izvora (ekstrahovan iz životinjskih tkiva i fluida) ili iz rekombinantnih izvora (proizveden pomoću kultura genetički modifikovanih ćelija). Faktor koagulacije može, na primer, da bude trombin ekstrahovan iz humanih tkiva.

[0061] Kad je faktor koagulacije, naročito trombin, prisutan, njegov sadržaj može biti manji od 0,1 težinskih % ukupne težine sastava.

[0062] U slučaju trombina, uopšteno se koriste internacionalne jedinice (IU). Dakle, sastav može da sadrži količinu trombina u opsegu od 0,01 lU/mg do 20 lU/mg sastava, naročito od 0,05 lU/mg do 10 lU/mg, naročito od 0,1 lU/mg do 5 IU/mg, a posebno od 0,2 lU/mg do 2 lU/mg. Najpoželjnija količina trombina – ako uopšte – je oko 0,83 lU/mg sastava.

[0063] Pored dodatka monosaharida, sastav može da sadrži bar još jedno drugo ugljovodonično jedinjenje, koje može biti glikozaminoglikan. Takvo ugljovodonično jedinjenje može biti deo sastava, sa ili bez faktora koagulacije kakav je trombin.

[0064] Navedeni glikozaminoglikan može biti odabran od hondroitin sulfata, dermatan sulfata, hijaluronske kiseline i njihovih smesa, naročito hondroitin sulfata.

[0065] Glikozaminoglikani mogu da omoguće poboljšanje brzine kojom se krv apsorbuje na prahu. Konkretnije, glikozaminoglikani mogu da ubrzaju kontakt između krvi i hemostatskih proizvoda, naročito kolagena i trombina.

[0066] Sastav sadrži količinu glikozaminoglikana u opsegu od 2% do 25 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 3% do 20 težinskih %, naročito u opsegu od 4% do 15 težinskih %, a posebno u opsegu od 5% do 12,5 težinskih %. Najpoželjnija količina glikozaminoglikana - ako uopšte – je oko 9 težinskih % ukupne težine sastava.

[0067] Sastav može da sadrži težinski odnos kolagen/glikozaminoglikan u opsegu od 2,5 do 50, naročito od 3,5 do 35, konkretnije, od 5 do 25, a još konkretnije od 6,5 do 20.

[0068] Prema jednom rešenju, sastav sadrži bar jedan, naročito jedan, monosaharid i bar jedan, naročito jedan, glikozaminoglikan, posebno takav kakav je definisan gore, a naročito u količinama definisanim gore.

[0069] Ugljovodonična jedinjenja su posebno monosaharidi i glikozaminoglikani.

[0070] Sastav može da sadrži količinu ugljovodonika u opsegu od 2% do 25 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 5% do 23 težinskih %, naročito u opsegu od 7% do 21 težinskih %, a posebno u opsegu od 10% do 18 težinskih %.

[0071] Sastav može da sadrži težinski odnos kolagen/ugljovodonično jedinjenje u opsegu od 2 do 40, naročito od 2,5 do 30, posebno od 3 do 20, a posebno od 3,5 do 15.

[0072] Izraz "ukupna težina ugljovodoničnih jedinjenja" se odnosi na sumu težina monosaharida definisanih gore i težina ostalih ugljovodoničnih jedinjenja pomenutih gore.

[0073] Prema jednom primeru, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

<->kolagena koji sadrži uglavnom količinu fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena od bar 50 težinskih % ukupne težine kolagena, i

<->bar jednog, naročito jednog, monosaharida.

[0074] Posebno, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

<->kolagena, naročito u količini u opsegu od 70% do 99 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 75% do 96 težinskih %, naročito u opsegu od 77% do 93 težinskih %, posebno u opsegu od 80% do 90 težinskih %, pri čemu navedeni kolagen sadrži količinu fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena of bar 50 težinskih % ukupne težine kolagena i

<->bar jedan monosaharid, naročito glukozu, u količini u opsegu od 1% do 12,5 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 1,5% do 10 težinskih %, naročito u opsegu od 2% do 8 težinskih %, a posebno u opsegu od 2,5% do 7,5 težinskih %.

[0075] Prema jednom drugom primeru, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

<->kolagena koji sadrži uglavnom količinu fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena od bar 50 težinskih % ukupne težine kolagena,

<->bar jednog, naročito jednog, monosaharida,

<->bar jednog, naročito jednog, faktora koagulacije.

[0076] Posebno, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

<->kolagena, naročito u količini u opsegu od 70% do 99 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 75% do 96 težinskih %, naročito u opsegu od 77% do 93 težinskih %, a posebno u opsegu od 80% do 90 težinskih %, gde navedena količina kolagena sadrži količinu fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena od bar 50 težinskih % ukupne težine kolagena,

<->bar jednog monosaharida, naročito glukoze, u količini u opsegu od 1% do 12,5 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 1,5% do 10 težinskih %, naročito u opsegu od 2% do 8 težinskih %, a posebno u opsegu od 2,5% do 7,5 težinskih % i

<->bar jednog, naročito jednog, faktora koagulacije, naročito trombina, u količini u opsegu od 0,01 lU/mg do 20 lU/mg sastava, naročito od 0,05 lU/mg to 10 IU/mg, naročito od 0,1 lU/mg do 5 lU/mg, a posebno od 0,2 lU/mg do 2 lU/mg.

[0077] Prema jednom drugom primeru, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

<->bar jednog, naročito jednog, monosaharida i

<->bar jednog, naročito jednog, glikozaminoglikana.

[0078] Posebno, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

<->bar jednog monosaharida, naročito glukoze, u količini u opsegu od 1% do 10 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 1% do 12,5 težinskih %, naročito u opsegu od 1,5% do 10 težinskih %, naročito u opsegu od 2% do 8 težinskih %, a posebno u opsegu od 2,5% do 7,5 težinskih % i

<->bar jednog glikozaminoglikana, naročito hondroitin sulfata, u količini u opsegu od 2% do 25 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 3% do 20 težinskih %, naročito u opsegu od 4% do 15 težinskih %, a posebno u opsegu od 5% do 12,5 težinskih %.

[0079] Prema još jednom primeru, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

<->kolagena koji sadrži količinu fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena od bar 50 težinskih % ukupne težine kolagena,

<->bar jednog, naročito jednog, monosaharida,

<->bar jednog, naročito jednog, faktor koagulacije i

<->bar jednog, naročito jednog, glikozaminoglikana.

[0080] Posebno, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

- kolagena, naročito u količini u opsegu od 70% do 99 težinskih %, naročito u opsegu od 75% do 96 težinskih %, naročito u opsegu od 77% do 93 težinskih %, a posebno u opsegu od 80% do 90 težinskih % ukupne težine, naročito suve težine, sastava, gde navedeni kolagen sadrži količinu fibroznog i/ili fibrilarnog kolagena od bar 50 težinskih % ukupne težine kolagena,

- bar jednog monosaharida, naročito glukoze, u količini u opsegu od 1% do 10 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 1% do 12,5 težinskih %, naročito u opsegu od 1,5% do 10 težinskih %, naročito u opsegu od 2% do 8 težinskih %, a posebno u opsegu od 2,5% do 7,5 težinskih %,

- bar jednog faktora koagulacije, naročito trombina, u količini u opsegu od 0,01 IU/mg do 20 IU/mg sastava, naročito od 0,05 IU/mg do 10 IU/mg, naročito od 0,1 IU/mg do 5 IU/mg, a posebno od 0,2 IU/mg do 2 IU/mg i

- bar jednog glikozaminoglikana, naročito hondroitin sulfata, u količini u opsegu od 2% do 25 težinskih % ukupne težine sastava, naročito u opsegu od 3% do 20 težinskih %, naročito u opsegu od 4% do 15 težinskih %, a posebno u opsegu od 5% do 12,5 težinskih %.

[0081] Prema jednom posebnom primeru, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

- kolagena fibrilarnog tipa, koji uglavnom sadrži fibrozni i/ili fibrilarni kolagen, gde je navedeni kolagen fibrilarnog tipa, na primer, dobijen ekstrakcijom u baznom medijumu i u količini od oko 85 težinskih % ukupne težine sastava,

- glukoze, u količini od oko 4,9 težinskih % ukupne težine sastava,

- trombina, u količini od 0,2 IU/mg do 2 IU/mg sastava i

- hondroitin sulfata, u količini od oko 10 težinskih % ukupne težine sastava.

[0082] Prema jednom drugom posebnom primeru, sastav sadrži, odnosno sastoji se od:

- glukoze, u količini od 5 težinskih % ukupne težine sastava

- i hondroitin sulfata, u količini od 10 težinskih % ukupne težine sastava.

[0083] U kontekstu predmetnog pronalaska, izraz "količina od oko X%" se odnosi na varijaciju od plus ili minus 20%, drugim rečima, količina od oko 10% znači od 8% do 12%, naročito varijaciju od plus ili minus 10%, a posebno plus ili minus 5%.

[0084] Kad se doda trombin, prah trombina se meša sa prahom već pripremljene homogene molekulske smese kolagena/monosaharida. Kad se doda hondroitin sulfat, prvo se doda trombin u prah hondroitin sulfata i ova smesa se doda u prethodnu smesu kolagena/monosaharida (koja je već samlevena u prah). Trombin nije stabilizovan ni ugljovodonikom, ni kolagenom. Trombin nikad nije u kontaktu sa rastvorom monosaharida (suprotno od WO 98/57678), što sprečava bilo kakvu denaturaciju proteina i rehidrataciju praha, što bi dovelo do nemogućnosti da se on opet pravilno osuši.

[0085] Sastav može da bude obezbeđen u nekoliko formi čvrstog praha, naročito praha koji može da se prska. Sastav iz pronalaska je poželjno prah koji može da se prska.

[0086] Sastav u vidu praha naročito može da sadrži, odnosno da se sastoji od:

- čestica koje sadrže, ili se sastoje od, kolagena fibrilarnog tipa i bar jednog monosaharida, naročito glukoze, gde konkretno navedene čestice imaju veličinu, granulometriju i/ili gustinu takvu kakva je definisana u predmetnom opisu i

- opciono, čestice koje sadrže, ili se sastoje od, bar jedan glikozaminoglikana, naročito hondroitin sulfata, i/ili bar jednog faktora koagulacije, naročito trombina, gde naročito navedene čestice imaju veličinu, granulometry i/ili granulometriju i/ili gustinu takvu kakva je definisana u predmetnom opisu.

[0087] Predmetni sastav u vidu praha, posebno praha koji može da se prska, može poželjno da ima sabijenu gustinu veću od 0,4 g/L, posebno veću od ili jednaku 0,41 g/L. Zaista, kad se koristi prah kao hemostatskiski agens, gustina treba da bude dovoljna da spreči bilo kakvo razblaženje i odbacivanje proizvoda od strane krvotoka. Obezbeđivanje sastava u prahu sa gustinom većom od 0,4 g/L sprečava da krv spere prah.

[0088] Kad se primenjuje manuelno, hirurzi treba da komprimuju prah gazom, bez uklanjanja proizvoda na kraju kompresije.

[0089] Kad se želi da se sastav u prahu isprska na ranu koja krvari, poželjno je da takav sastav ima mnogo veću gustinu da omogući granule praha da postignu određenu kinetičku energiju kad izađu iz raspršivača. Zaista, vazduh ne može savršeno da pomera prah niske gustine da bi on stigao do rane bez formiranja oblaka, što nije kompatibilno sa preciznom administracijom potrebnom u većini slučajeva. Velika gustina omogućava i brizgalici da dâ prahu dovoljnu kinetičku energiju za dobro utiskivanje praha na ranu. Dakle, sastav u prahu poželjno ima sabijenu gustinu veću od 0,4 g/mL. Čak još poželjnije, sastav u prahu ima sabijenu gustinu manju od ili jednaku 0,6 g/mL.

[0090] Način da se dobije sastav u prahu sa takvim osobinama gustine se sastoji od mlevenja kolača suvog kolagena, gde je takav kolač tvrd i gust preparat kolagena. Zahtevana gustina se ne može postići mlevenjem liofilizovanog preparata kolagena, zato što bi finalne čestice bile pljosnate tako da se ne bi mogle raspršivati, sa važnim elektrostatičkim nabojem. Na primer, proizvod kao što je dobijen u WO 01/97873 se ne može redukovati do praha koji ima takvu gustinu i takve karakteristike raspršivanja.

[0091] Prah opisan u WO 2005/072700 ima vrlo malu gustinu i tako da se ovaj prah ne može raspršivati da stigne do ciljanog organa, naročito u laparoskopiji. Konkretno, neće stići do rane sa zahtevanim impaktom koji sprečava odbijanje od strane krvotoka.

[0092] Predmetni sastav, naročito u vidu praha, koji je posebno pogodan za raspršivanje, može poželjno da ima sabijenu gustinu veću od 0,4 g/L, naročito veću od 0,41 g/L.

[0093] Još vište poželjno, sabijena gustina sastava u prahu je veća od 0,4 g/mL, a najpoželjnije je manja od ili jednaka 0,6 g/mL.

[0094] Rastresita gustina je uopšteno veća od ili jednaka 0,3 g/L, as posebno veća od ili jednaka 0,31 g/L.

[0095] Rastresita gustina je prvenstveno veća od 0,3 g/L, a posebno veća od 0,31 g/L.

[0096] Ove gustine su merene prema protokolima opisanim u primerima.

[0097] Sastav prema pronalasku prvenstveno ima hemostatski kapacitet u opsegu od 1 sekunde do 600 sekundi, naročito od 1 sekunde do 200 sekundi, poželjno od 1 sekunde do 60 sekundi, a posebno od 1 sekunde do 40 sekundi. Hemostatski kapacitet je meren prema protokolu predstavljenom u primerima.

[0098] Sastav prema pronalasku prvenstveno sadrži bar 50 težinskih % čestica čija je veličina između 200 µm i 400 µm.

[0099] Čestice koje čine prah prvenstveno imaju srednju granulometriju u opsegu od 10 µm do 500 µm, naročito od 50 µm do 400 µm.

[0100] Prvenstveno, bar 90 težinskih %, naročito 100 težinskih %, čestica koje čine navedeni prah može da prođe kroz zaklon čija je mreža 500 µm, naročito 400 µm.

[0101] Bar 90 težinskih %, a naročito bar 95 težinskih %, čestica koje čine navedeni prah može da bude zadržano zaklonom čija je mreža 10 µm, naročito 20 µm, u stvari 30 µm, u stvari 50 µm.

[0102] Ova ponovna raspodela je izabrana da omogući da se prah raspršuje. Sa česticama čija je veličina suviše mala, prah je suviše sitan da bi pravilno stigao do mete, a sa česticama čija je veličina suviše velika, prah se ne može raspršivati.

[0103] Većina jedinjenja iz sastava, naročito kolagen, može da ima odnos bubrenja na 20 minuta u opsegu od 0,7 do 1, kao što je mereno prema protokolu opisanom u primerima (videti primer 4).

[0104] Sastav, naročito kad navedeni sastav sadrži bar jedan glikozaminoglikan, a naročito kad navedeni sastav sadrži hondroitin sulfat, može da ima odnos bubrenja na 20 minuta u opsegu od 5 do 15, naročito od 8 do 12, a posebno od 10 do 12, kao što je mereno prema protokolu opisanom u primerima (videti primer 5).

[0105] Prema poželjnom rešenju, sastav je obezbeđen u vidu raspršljivog suvog praha.

[0106] Sastav u vidu praha sadrži naročito:

- čestice koje sadrže kolagen i monosaharid i

- opciono, bar glikozaminoglikan i/ili trombin.

[0107] Sastav može da sadrži:

- čestice koje sadrže kolagen, monosaharid i opciono bar jedan glikozaminoglikan i/ili faktor koagulacije,

- čestice koje sadrže kolagen, monosaharid i opciono faktor koagulacije i opciono čestice glikozaminoglikana,

- čestice koje sadrže kolagen i monosaharid i čestice koje sadrže bar jedan glikozaminoglikan i/ili faktor koagulacije.

[0108] U kontekstu predmetnog pronalaska, izraz "suvi prah" znači da sastav sadrži ograničen sadržaj rastvarača, naročito vode. Navedeni ograničen sadržaj može biti manji od 20 težinskih %, naročito manji od 15 težinskih %, naročito manji od 10%, a posebno manji od 5 težinskih % ukupne težine sastava.

[0109] Navedeni suvi oblik se može dobiti prostim isparavanjem korišćenog rastvarača, dehidratacijom organskih rastvarača.

[0110] Sastav u vidu suvog praha se naročito može administrirati raspršivanjem.

[0111] Pronalazak se posebno odnosi na komplet koji sadrži:

- sastav prema pronalasku i

- uređaj za raspršivanje.

[0112] Predmetni sastav je takav kako je definisan u ovom opisu. Stručnjaci u ovoj oblasti su upoznati sa raznim uređajima za raspršivanje farmaceutskih sastava u vidu praha.

[0113] Uređaj posebno može da sadrži rezervoar gasa pod pritiskom, gde se navedeni pritisak oslobađa aktiviranjem sredstva za aktiviranje, naročito trigerom.

[0114] Uređaj može da sadrži:

- sredstva za aktiviranje,

- rezervoar praha, naročito koji sadrži prah prema pronalasku,

- rezervoar gasa, spojen sa rezervoarom praha,

- raspršivač spojen sa rezervoarom praha,

- ventil A povezan sa sredstvom za aktiviranje, gde je navedeni ventil A zatvoren kad sredstva za aktiviranje miruju i time blokira tok gasa između rezervoar gasa i rezervoar praha i gde je navedeni ventil otvoren kad su sredstva za aktiviranje aktivirana da bi se dostavila injekcija gasa da bi se raspršio bar deo praha.

[0115] Rezervoar gasa može biti spojen sa sredstvom koje dostavlja gas pod pritiskom, na primer, sistem komprimovanog gasa ili rezervoar komprimovanog gasa, naročito da bi se napravio autonoman sistem.

[0116] Uređaj može da sadrži, između rezervoara gasa i sredstva za snabdevanje, ventil B, gde je navedeni ventil B spojen sa sredstvom za aktiviranje.

[0117] Ventil B je u osnovnom stanju u otvorenom položaju, osim kad su sredstva za aktiviranje aktivirana, u kom slučaju je on zatvoren.

[0118] Dakle, kad je ventil A otvoren, ventil B je zatvoren i obrnuto. To omogućava dostavljanje prethodno određene količine komprimovanog gasa da bi se dostavila doza praha dok se sprečava da zagađivači dođu u dodir sa unutrašnjošću uređaja.

[0119] Kad uređaj nije spojen sa sredstvima dostave gasa, poželjno je da ventil B bude zatvoren. To može da pomogne da se ograniči rizik od kontaminacije unutrašnjosti uređaja.

[0120] Posebno, rezervoar praha je u vidu cilindra koji sadrži nekoliko doza praha. Navedeni cilindar može da bude spojen sa propelerom koji aktivira protok gasa, omogućavajući da se prah raspršuje i time okreće cilindar i menja dozu praha posle aktiviranja sredstva za aktiviranje.

[0121] Doze prisutne u cilindru mogu da budu zapečaćene da bi bile sterilne, naročito sa komponentom koja izađe kad protok gasa pređe prethodno navedenu dozu. Time se omogućava čuvanje doza u sterilnoj sredini.

[0122] Zapremina doze može biti oko 0,2 cm<3>do 1 cm<3>, naročito oko 0,3 cm<3>.

[0123] Gas koji se koristi može biti vazduh, ugljen dioksid ili bilo koji inertan gas.

[0124] Posebno, uređaj je takav kakav je opisan u Evropskom patentu EP11163820.1 i US privremenoj prijavi br.61/479,805, oba podneta 27. aprila, 2011.

[0125] Predmetni pronalazak se odnosi i na metod dobijanja hemostatskog sastava, naročito takvog kakav je definisan gore, koji sadrži bar sledeće korake:

a) formiranje vodene suspenzije koja sadrži, odnosno sastoji se od kolagena fibrilarnog tipa - koji uglavnom sadrži fibrozni i/ili fibrilarni kolagen - i monosaharida, kao što je glukoza,

b) povraćaj proizvoda u vidu precipitata, paste ili gela, naročito centrifugiranjem ili dekantovanjem,

c) sušenje proizvoda, na primer, uparavanjem.

d) mlevenje proizvoda do željene granulometrije, naročito čekićarom i

e) opciono, dodavanje trombina i/ili hondroitin sulfata, naročito u čvrstom obliku, naročito u obliku praha.

[0126] Formiranje u koraku a) vodene suspenzije koja sadrži fibrozni/fibrilarni kolagen i monosaharid dovodi do homogene reparticije monosaharida oko molekula kolagena. Dalje, blizak kontakt među molekulskim vrstama kolagena i monosaharida dovodi do, posle dehidratacije, čvrstog kolača pogodnog za dobijanje - mlevenjem - praha zahtevane velike gustine. Nasuprot tome, mešanje kolagena u prahu i glukoze u prahu ne dovodi do homogenog praha koji se može raspršivati, naročito zbog gustine i naelektrisanja.

[0127] U koraku a) kolagen može biti prisutan u koncentraciji u opsegu od 30 g/L do 150 g/L.

[0128] Monosaharid se može dodati u suspenziju ili u homogenu pastu od kolagena u količini koja je kao što je definisana u opisu, a posebno od oko 2% do 5 težinskih % težine kolagena.

[0129] U koraku a) monosaharid može biti prisutan u koncentraciji u opsegu od 0,3 g/L do 10 g/L.

[0130] Vodena suspenzija kolagena iz koraka a) može biti kisela, a naročito da sadrži kiselinu kao što je hlorovodonična kiselina. Navedena kiselina može biti prisutna u koncentraciji u opsegu od 0,01 M do 0,5 M, a naročito od 0,02 M do 0,1 M, posebno oko 0,05 M. Navedena suspenzija može biti u vidu homogene paste.

[0131] Korak b) može da obuhvata sipanje suspenzije u kalup.

[0132] Korak c) se vrši tako da se dobije kolač što je moguće deblji (više nego što zahteva konačna granulometrija), vrlo vlike gustine i sa što je moguće manje vazdušnih mehurića (manje od 5%) unutar kolača.

[0133] Iza koraka d) može slediti korak pretraživanja praha, naročito da bi se dobila željena granulometrija.

[0134] Prema jednom poželjnom rešenju, korak a) se sastoji od formiranja smese koja sadrži 95 težinskih % kolagena fibrilarnog tipa i 5 težinskih % glukoze. Posle sušenja (korak b)) i mlevenja (korak c)) ove smese, dodaje se hondroitin sulfat u količini od 10 težinskih % ukupne težine smese, tako da konačni sastav sadrži:

- kolagen: 86,36 težinskih % ukupne težine sastava;

- glukoza: 4,54 težinskih % ukupne težine sastava;

- hondroitin sulfat: 9,09 težinskih % ukupne težine sastava;

[0135] Kad se doda i trombin, on predstavlja konačnu količinu manju od 0,01 težinskih % ukupne težine sastava. U gornjoj smesi, trombin može biti u količini od 0,083 lU/mg sastava.

[0136] Prema jednom drugom rešenju, pronalazak se odnosi i na prahove koji se mogu dobiti metodom prema ovom pronalasku.

[0137] Za sve ranije pomenute praškaste proizvode, očigledno je da je moguće primeniti manje ili više temeljno mlevenje da bi se dobio prah promenljive granulometrije prema tipu mlevenja i trajanja.

[0138] Prema još jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na upotrebu sastava, kako je definisan u prethodnom tekstu, kao hemostatskog agensa.

[0139] Prema još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na farmaceutski sastav ili lek koji sadrži, odnosno sastoji se od sastava kakav je definisan u prethodnom tekstu, naročito kao hemostatskog agensa.

[0140] Prema još jednom aspektu, pronalazak se odnosi na upotrebu sastava, kakav je definisan u prethodnom tekstu, za dobijanje leka ili farmaceutskog sastava, naročito hemostatskog leka ili farmaceutskog sastava.

[0141] Prema još jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na hemostatski metod koji obuhvata deponovanje i/ili raspršivanje sastava, kakav je definisan u prethodnom tekstu, na deo tela životinje koji krvari. Naročito, sastav se može koristiti u hirurškim procedurama, naročito laparotomijama, laparoskopijama, celioskopijama i robotičkim procedurama.

[0142] Pronalazak se odnosi i na hemostatski metod koji sadrži korak raspršivanja sastava iz ovog pronalaska.

[0143] Prema još jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na upotrebu sastava, kakav je definisan u prethodnom tekstu, kao biološkog adheziva.

[0144] A prema još jednom aspektu, predmetni pronalazak se odnosi na upotrebu sastava, kakav je definisan u prethodnom tekstu, kao agensa za stvaranje ožiljaka kod unutrašnjih i spoljašnjih rana. Izraz "agens za stvaranje ožiljaka" se odnosi na proizvod koji omogućava dobijanje klinički zadovoljavajućeg ožiljčanog tkiva sa kojim je u kontaktu.

Primeri:

Primer 1: Protokol za merenje gustine

[0145] Testirani proizvod (600 mg), naročito u vidu praha, se uvodi u graduisani cilindar od 5 mL. Meri se visina proizvoda i beleži se odgovarajuća zapremina. Merenje se ponavlja tri puta. Proizvod se zatim sabija tri puta lupkanjem epruvete 100 puta o tvrdu površinu. Visina proizvoda i odgovarajuća zapremina se ponovo meri. Tako se dobijaju gustine proizvoda pre i posle sabijanja, koje se zovu rastresita gustina i sabijena gustina, respektivno.

Primer 2: Protokol za merenje hemostatskog kapaciteta in vitro

[0146] Humana krv u citratu (oko 0,1 M) se održava na 37°C u vodenom kupatilu kroz celo merenje. Testirani proizvod (10 mg) je stavljen u polipropilensku epruvetu od 5 mL sa poklopcem, a zaitm je dodata sveža krv (2 mL) u citratu. Zaitm je dodat CaCl2, tako da konačna koncentracija CaCl2u krvi bude 15 mM, a zaitm se testirana epruveta zatvori. Sadržaj se zatim potpuno izmeša energičnim prevrtanjem (10 puta), a zaitm se testirana epruveta uroni u vodeno kupatilo; testirana epruveta se vrati u vertikalan položaj na svakih 10 sekundi. Vreme potrebno da se formira ugrušak se zabeleži i to odgovara hemostatskom kapacitetu.

Primer 3: Protokol za merenje veličine čestica

[0147] Poznata količina proizvoda, konkretno praha, se prosejava kroz sita od 50 µm, 100 µm, 200 µm, 300 µm i 400 µm tokom 2 minuta (po situ). Meri se težina frakcija sa svakog sita. Određuje se proporcija svakog opsega granulometrije.

Primer 4: Protokol za merenje bubrenja glavnog jedinjenja sastava

[0148] Meri se težina jedinjenja, naročito kolagena (40 mg do 70 mg) u čančetu za merenje. U drugo čanče se sipa 6 mL 0,15 M NaCl. Testirano jedinjenje se sipa u 0,15 M NaCl (t=0). Posle 20 minuta, višak tečnosti se ukloni i nabubreli proizvod se meri. Odnos bubrenja odgovara količini apsorbovane vode u odnosu na težinu suvog početnog proizvoda.

Primer 5: Protokol za merenje bubrenja sastava

[0149] Balon od 15 mL se izmeri (m0u mg), a zaitm se doda X mg praha suvog sastava (m0+Xu mg). 0,15 M vodeni rastvor NaCl (2 mL) se doda i sastav se ostavi da bubri 20 minuta; balon se zatim centrifugira na 1000 rpm.

[0150] Višak NaCl se ukloni Pasterovom pipetom i kapi se eliminišu okretanjem balona naopako na filter papir; zatim se meri balon sa mokrim prahom (m1u mg).

[0151] Odnos bubrenja se računa na sledeći način: ((m1-m0)/(m0+X-m0)).

Primer 6: Dobijanje kolagena fibrilarnog tipa baznom ekstrakcijom

[0152] Komadi prasećeg dermisa (30 kg), obezmašćeni acetonom, se ostave da bubre 3 sata u 100 kg 0,05 M rastvora NaOH. Dermisi se fino iseku na mlinu za sečenje i dobijena pasta se razblaži pomoću 50 litara 0,05 M NaOH. Smesa se zatim procedi pod pritiskom kroz sito od 1 mm. Dobijena pasta se zatim dovede do pH 6-7,5 pomoću HCI i tdobijeni precipitat se sakupi centrifugiranjem ili filtracijom kroz sito od 1 mm.

[0153] Retentat se dehidrira acetonom metodima poznatim stručnjacima u ovoj oblasti. Ovaj dehidrirani retentat se, dakle, sastoji od kolagena fibrilarnog tipa, sa visokim sadržajem fibrilarnog/fibroznog kolagena u odnosu na nefibrilarni kolagen. Generalno, takav ekstrahovan kolagen sadrži od 85% do 95 težinskih % fibrilarnog/fibroznog kolagena u odnosu na ukupnu težinu kolagena i od 5% do 15 težinskih % nefibrilarnog kolagena u odnosu na ukupnu težinu kolagena.

Primer 7: Dobijanje hemostatskog praha #1

[0154] 30 g kolagena fibrilarnog tipa, dobijenog u Primeru 6, se doda u 1 L 0,02 M vodenog rastvora HCl i smesa se zatim meša 5 sata. Dalje, u dobijenu homogenu pastu se doda fruktoza u prahu, u količini od 2 težinska % (0,6 g) težine kolagena.

[0155] Smesa se homogenizuje 1 sat, a zatim se izlije i dehidrira. Posle sušenja, suv proizvod se samelje brzinom od 25 g/min pomoću Fitzpatrick-ovog čekićara na 7000 rpm uz kontrolisano zagrevanje. Proizvod se zatim sortira mehaničkim prosejavanjem da bi se eliminisale čestice čija je veličina veća od 400 µm.

[0156] Dermatan sulfat se zatim doda u prah u količini od 2 težinska % suve materije praha (0,612 g).

[0157] Smesa se zatim homogenizuje pomoću mlina sa lopticama, liofilizovani trombin se dodaje u smesu u količini od 15 lU/mg praha i konačno se smesa homogenizuje pomoću mlina sa lopticama.

Primer 8: Dobijanje hemostatskog praha #2

[0158] 7,5 kg kolagena fibrilarnog tipa, dobijenog u Primeru 6, se doda u 50 L 0,05 M vodenog rastvora HCl i smesa se zatim meša 16 sati. Dalje, u dobijenu homogenu pastu se doda fruktoza u prahu, u količini od 5 % (375 g) težine kolagena.

[0159] Smesa se homogenizuje 3 sata, a zatim se raspodeli na ploče i dehidrira. Posle sušenja, suv proizvod se samelje u frakcijama brzinom od 5 g/min pomoću čekićara na 12000 rpm uz kontrolisano zagrevanje. Proizvod se zatim sortira mehaničkim prosejavanjem da bi se eliminisale čestice čija je veličina veća od 400 µm i one manje od 50 µm.

[0160] Granulometrija se meri da bi se potvrdilo da je raspodela takva da 60 težinskih % uzorka ima granulometriju veću od 200 µm.

[0161] Prečišćeni hondroitin sulfati se zatim dodaju u prah u količini od 20 težinskih % suve materije praha (1,575 kg). Smesa se homogenizuje pomoću mlina sa lopticama.

[0162] Konačno, liofilizovani trombin se dodaje u smesu u količini od 10 lU/mg praha. Kao pre, smesa se homogenizuje pomoću mlina sa lopticama.

Primer 9: Dobijanje hemostatskog praha #3

[0163] 1000 g kolagena fibrilarnog tipa, kao što je dobijen u Primeru 6, se doda u 60 mL 0,02 M vodenog rastvora HCl i smesa se zatim meša 5 sati. Dalje, u dobijenu homogenu pastu se doda glukoza u prahu, u količini od 5 % (50 g) težine kolagena.

[0164] Smesa se homogenizuje 1 sat, a zatim se izlije i dehidrira. Posle sušenja, suv proizvod se samelje brzinom od 25 g/min pomoću Fitzpatrick-ovog čekićara na 7000 rpm uz kontrolisano zagrevanje. Proizvod se zatim sortira mehaničkim prosejavanjem da bi se eliminisale čestice čija je veličina veća od 400 µm i manja od 50 µm.

[0165] Hondroitin sulfat se zatim doda u prah u količini od 10 težinskih % suve materije praha (105 g). Smesa se zatim homogenizuje pomoću mlina sa lopticama.

[0166] Takav praškast sastav ima sabijenu gustinu od oko 0,408 g/mL.

Primer 10: Dobijanje hemostatskog praha #4

[0167] 500 g kolagena fibrilarnog tipa, kao što je dobijen u Primeru 6, se doda u 30 mL 0,02 M vodenog rastvora HCl i smesa se zatim meša 5 sati. Dalje, u dobijenu homogenu pastu se doda glukoza u prahu, u količini od 5 % (25 g) težine kolagena.

[0168] Smesa se homogenizuje 1 sat, a zatim izlije i dehidrira. Posle sušenja, suv proizvod se samelje brzinom od 25 g/min pomoću Fitzpatrick-ovog čekićara na 7000 rpm uz kontrolisano zagrevanje. Proizvod se zatim sortira mehaničkim prosejavanjem da bi se eliminisale čestice čija je veličina veća od 400 µm i manja od 50 µm.

[0169] Hondroitin sulfat, pomešan sa trombinom u prahu, se zatim dodaje u prah u količini od 10 težinskih % suve materije praha (52,5g). Trombin se dodaje u smesu u konačnoj količini od 0,85U/mg. Smesa se zatim homogenizuje pomoću mlina sa lopticama.

[0170] Takav praškast sastav ima sabijenu gustinu od oko 0,425 g/mL.

Primer 11: Karakterizacija hemostatskog praha na bazi kolagena #3

[0171] Prah na bazi kolagena #3, kao što je dobijen u Primeru 9, koji sadrži kolagen, glukozu, hondroitin sulfat, bez trombina, je testiran tokom in vivo eksperimenta.

[0172] Protokol eksperimentacije je bio sledeći:

- Rane su napravljene na površini levog paramedijalnog lobusa jetre, veličine oko 10*10*1-3 mm<3>.

- Testirani proizvod je zatim primenjen tokom 30 sekundi. Primenjeno je dovoljno proizvoda da se pokrije rana; testirani materijal je držan na mestu rane blagom kompresijom pomoću gaze.

- Zatim je određen stepen krvarenja da bi se procenio procenat dostignute hemostaze. Ako je dostignuta klinički prihvatljiva hemostaza, ekperiment je tada zaustavljen. Ukoliko nije, još jednom je urađena kompresija-procena, do 5 turnusa. Proizvod u eksperimentu je obnovljen u svakom turnusu.

[0173] Eksperiment je izveden sa sledećim proizvodima: gaza bez bilo kakvog hemostatskog sastava (nazvana "kontrola"), gaza pokrivena hemostatskim prahom #3 (nazvana "GHP #3"), hemostatska gaza "Avitene" od Davola (nazvana "Avitene", sastavljena od kolagenskih vlakana), hemostatska gaza "Surgicel" od Ethicon-a (nazvan "Surgicel", sastavljena od oksidovane celuloze).

[0174] Rezultati su sumirani u sledećoj tabeli br.1 i pokazuju procenat dostignute hemostaze za svaki proizvod:

Tabela br.1

[0175] Ovaj eksperiment pokazuje da predložen hemostatski prah postaje vrlo efikasan vrlo brzo, jer je hemostaza potpuna posle samo dva turnusa, sa efikasnošću većom od 80% posle samo prvog turnusa.

[0176] Za "Avitene", smanjenje procenta hemostaze između 2. turnusa i 3. turnusa je zbog činjenice da je rana opet prokrvarila.

Primer 12: Karakterizacija hemostatskog praha na bazi kolagena #4

[0177] Prah na bazi kolagena #4, kao što je dobijen u Primeru 10, koji sadrži kolagen, glukozu, hondroitin sulfat i trombin, je testiran tokom in vivo eksperimentacije.

[0178] Protokol eksperimentacije je bio sledeći:

- Životinjski model: Heparinizovane svinje

- Abdominalna hirurgija:

○ Laparoskopija po srednjoj liniji; izlaganje jetre; skalpelom, tangencijalne rane na jetri od oko 10*10*1-3mm<3>;

○ Testirani proizvod je zatim primenjen tako da je rana bila dobro pokrivena;

kompresija tokom 2 min;

○ Gradacija krvarenja (skala od 0 do 4); ako je uspešno, onda staje u 1. turnusu; ako ne, novi turnusi kompresije i procene krvarenja; dozvoljeno do 5 turnusa.

Hirurgija ilijačne kreste:

○ Incizije dorsalne lateralne kože i mišića da bi se izložile ilijačne kreste;

kortikotomija sa izlaganjem sunđeraste kosti (defekti od oko 12*12*3 mm<3>);

○ Testirani proizvod je primenjen tako da je rana dobro pokrivena; kompresija tokom 2 min;

○ Procena početnog krvarenja i daljeg krvarenja (skala od 0 do 4); ako je uspešno, onda se zaustavlja u 1. turnusu; ako ne, novi turnusi kompresije i procene krvarenja; dozvoljeno do 5 turnusa.

[0179] Eksperiment je izveden sa sledećim proizvodima: gaza bez bilo kakvog hemostatskog sastava (nazvana "kontrola"), gaza pokrivena hemostatskim prahom #4 (nazvana "GHP #4"), hemostatska gaza "Floseal" od Baxter-a (nazvana "Floseal", sastavljena od matriksnog gela od želatina trombin), hemostatska gaza "Surgicel" od Ethicon-a (nazvana "Surgicel", sastavljena od oksidovane celuloze).

- Rezultati su bili sledeći: abdominalna hirurgija (n=8 do 10 ponavljanja) - rezultati dati posle 10 min kompresije (= 5 turnusa od po 2 min svaki)

○ Kontrola: 10/10 neuspeh

○ GHP #4: 11/11 uspeh

○ Floseal: 9/9 uspeh

○ Surgicel: 8/10 uspeh; 2/10 neuspeh

- Ortopedski (n=4 ponavljanja) - rezultati dati posle 10 min kompresije (= 5 turnusa od po 2 min svaki)

○ Kontrola: 1/4 uspeh; 3/4 neuspeh

○ GHP #4: 4/4 uspeh

○ Floseal: 3/4 uspeh; 1/4: neuspeh

○ Surgicel: 4/4 uspeh

[0180] Ovaj eksperiment pokazuje da je predložen hemostatski prah 100% efikasan za bilo koju vrstu rane, za razliku od proizvoda na tržištu koji su specifičniji za tip rane.

Primer 13: Karakterizacija kolagena → prisustvo rastvorljivog kolagena u kolagenu, određivanje odnosa fibrilarnog/fibroznog kolagena i nefibrilarnog kolagena.

[0181] Cilj eksperimenta je bio da se odredi proporcija fibrilarnog/fibroznog kolagena i nefibrilarnog kolagena u kolagenu (ekstrahovanom kolagenu ili kolagenu samlevenom u prah). Ta proporcija se može odrediti proučavanjem proporcije nerastvorljivog (koji odgovara fibrilarnom/fibroznom kolagenu) i rastvorljivog kolagena (koji odgovara nefibrilarnom kolagenu) u kolagenu.

[0182] Eksperiment se sastoji od rastvaranja oko 2,5 g testiranog kolagena u 166 mL vode na pH 13 tokom 16 sati. Rastvor se zatim centrifugira (10000 rpm tokom 10 minuta). Supernatant (koji odgovara nefibrilarnom kolagenu) i ostatak (koji odgovara fibrilarnom/fibroznom kolagenu) se zatim razdvoje. Ostatak se direktno suši u sukcesivnim acetonskim kupatilima i uz kontrolisan protok vazduha. pH supernatanta se podesi na pH 3 sirćetnom kiselinom i hlorovodoničnom kiselinom na 6M. Čvrst kolagen iz supernatanta se dobija dodavanjem 0,6M NaCl i pomoću centrifugiranja. Zatim se suši u sukcesivnim acetonskim kupatilima i uz kontrolisan protok vazduha.

[0183] Računaju se težine kolagena iz ostatka (M ostatka) i iz supernatanta (M supernatanta) i formula M ostatka /(M ostatka M supernatanta) x 100 daje procenat fibroznog kolagena u ukupnoj količini kolagena.

[0184] U ovom pronalasku, odnos M ostatka /(M ostatka M supernatanta) mora da bude veći od 80% i za kolagen korišćen za dobijanje praha i za konačni kolagen u prahu. Poželjno je da odnos bude veći od 85%.

[0185] Na primer, gornji eksperiment, urađen na tri partije kolagena dobijenih kao u Primeru 6, daje vrlo slične odnose od 92,67%, 94,60% i 91,51%, respektivno. Posle mlevenja kolagena iz te tri partije, odnosi ostaju vrlo slični, 91,63%, 88,02%, i 88,69%, respektivno.

[0186] Još jedan način da se pokaže prisustvo i fibroznog/fibrilarnog kolagena i rastvorljivog kolagena je da se izvede SDS-poliakrilamidna gel elektroforeza.

[0187] Slika 1 ilustruje takvu elektroforezu, sa uzorkom S1 koji odgovara supernatantu prve partije (koji se sastoji od kolagena ekstrahovanog kao u Primeru 6), uzorkom S2 koji odgovara ostatku ove prve partije, sa uzorkom S3 koji odgovara supernatantu druge partije (koji se takođe sastoji od kolagena ekstrahovanog kao u Primeru 6) i sa uzorkom S2 koji odgovara ostatku ove druge partije.

[0188] Rezultati prikazuju da za kolagen iz ostatka, veća količina vlakana ne može da migrira kroz akrilamidni gel i ona se boji na stopu gela. Dobijanje uzorka ne dozvoljava izdvajanje svakog lanca iz kolagena. Prema tome, alfa lanci su prisutni u vrlo maloj količini. Kolagen iz supernatanta je u stanju da potpuno migrira u gel, nema vlakana blokiranih na vrhu, lanci iz kolagena su pravilno razdvojeni tokom procesa elektroforeze.

BIBLIOGRAFSKI PODACI

- WO 2005/072700

- "Nature designs tough collagen: explaining the nanostructure of collagen fibrils", Markus Buehler (PNAS, 15. avgust 2006., sveska 103, br.33, pp.12285-12290)

- "Extraction of collagen from connective tissue by neutral salt solutions", Jérôme Gross, John H. Highberger i Francis O. Schmitt (Proceedings of the NATIONAL ACADEMY OF SCIENCES sveska 41, broj I, 15. januar 1955.)

- WO 2010/125086

- FR2944706

- WO 01/97873

Claims

PATENTNI ZAHTEVI

1. Hemostatski sastav u vidu praha koji sadrži:

- kolagen fibrilarnog tipa koji sadrži količinu fibroznog kolagena i/ili fibrilarnog kolagena od bar 70 težinskih % ukupne težine kolagena, gde je navedeni kolagen u količini u opsegu od 75% do 96 težinskih % ukupne težine sastava,

- bar jedan monosaharid u količini u opsegu od 1% do 12,5 težinskih % ukupne težine sastava, i

- bar jedan glikozaminoglikan u količini u opsegu od 2% do 25 težinskih % ukupne težine sastava.

2. Sastav iz zahteva 1, gde navedeni sastav sadrži težinski odnos kolagen/monosaharid u opsegu od 10 do 50, a poželjno 19.

3. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 2, gde kolagen sadrži količinu fibroznog kolagena i/ili fibrilarnog kolagena u opsegu od 85% do 95 težinskih % ukupne težine kolagena.

4. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 3, gde navedeni sastav dalje sadrži težinski odnos kolagen/sva ugljovodonična jedinjenja u opsegu od 2 do 40, gde je težina svih ugljovodoničnih jedinjenja suma težina monosaharida i težina glikozaminoglikana.

5. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 4, gde navedeni sastav dalje sadrži faktor koagulacije, naročito trombin, u količini u opsegu od 0,01 lU/mg do 20 lU/mg sastava.

6. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 5, gde navedeni sastav ima sabijenu gustinu veću od 0,4 g/mL.

7. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 6, gde navedeni sastav sadrži bar 50 težinskih % čestica čija je veličina između 200 µm i 400 µm.

8. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 7, gde je glikozaminoglikan odabran od hondroitin sulfata, dermatan sulfata, hijaluronske kiseline i njihovih smesa.

9. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 8, gde je

- kolagen u količini u opsegu od 80% do 90 težinskih % ukupne težine sastava,

- bar jedan monosaharid u količini u opsegu od 2,5% do 7,5 težinskih % ukupne težine sastava, i

- bar jedan glikozaminoglikan u količini u opsegu od 5% do 12,5 težinskih % ukupne težine sastava.

10. Sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 8, koji sadrži:

- kolagen u količini od 86,36 težinskih % ukupne težine sastava,

- glukozu, u količini od 4,54 težinskih % ukupne težine sastava,

- hondroitin sulfat, u količini od 9,09 težinskih % ukupne težine sastava.

11. Sastav iz bilo kog od zahteva 9 ili 10, koji još sadrži trombin, u količini od 0,2 lU/mg do 2 lU/mg sastava.

12. Metod za dobijanje hemostatskog sastava koji sadrži bar sledeće korake:

a) formiranje vodene suspenzije koja sadrži kolagen fibrilarnog tipa koji ima sadržaj fibroznog kolagena i/ili fibrilarnog kolagena od bar 70 težinskih % ukupne težine kolagena i bar jedan monosaharid, sa količinom kolagena u opsegu od 75% do 96 težinskih % ukupne težine sastava i sadržaj monosaharida u opsegu od 1% do 12,5 težinskih % ukupne težine sastava,

c) sušenje proizvoda,

d) mlevenje proizvoda do željene granulometrije,

e) dodavanje bar jednog glikozaminoglikana u kolčini u opsegu od 2% do 25 težinskih % ukupne težine sastava.

13. Metod iz zahteva 12, gde je kolagen korišćen u koraku a) dobijen baznom ekstrakcijom.

14. Metod iz bilo kog od zahteva 12 ili 13, gde je u koraku e) još dodat bar jedan faktor koagulacije, naročito trombin.

15. Sastav kao što je definisan u bilo kom od zahteva 1 do 11 ili kao što je dobijen metodom definisanim u zahtevu 12, za upotrebu istog kao hemostatski agent.

16. Komplet koji sadrži:

- sastav iz bilo kog od zahteva 1 do 11 i

- uređaj za raspršivanje.