Deprecated: The each() function is deprecated. This message will be suppressed on further calls in /home/zhenxiangba/zhenxiangba.com/public_html/phproxy-improved-master/index.php on line 456
RS60410B1 - Kompozicije za upotrebu u metodama za tretman rana, poremećaja i bolesti kože - Google Patents
[go: Go Back, main page]

RS60410B1 - Kompozicije za upotrebu u metodama za tretman rana, poremećaja i bolesti kože - Google Patents

Kompozicije za upotrebu u metodama za tretman rana, poremećaja i bolesti kože

Info

Publication number
RS60410B1
RS60410B1 RS20200669A RSP20200669A RS60410B1 RS 60410 B1 RS60410 B1 RS 60410B1 RS 20200669 A RS20200669 A RS 20200669A RS P20200669 A RSP20200669 A RS P20200669A RS 60410 B1 RS60410 B1 RS 60410B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
polypeptide
herpes simplex
simplex virus
seq
vii
Prior art date
Application number
RS20200669A
Other languages
English (en)
Inventor
Suma Krishnan
Pooja Agarwal
Original Assignee
Krystal Biotech Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=57822104&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RS60410(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Krystal Biotech Inc filed Critical Krystal Biotech Inc
Publication of RS60410B1 publication Critical patent/RS60410B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
    • A61K48/005—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy characterised by an aspect of the 'active' part of the composition delivered, i.e. the nucleic acid delivered
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/0012—Galenical forms characterised by the site of application
    • A61K9/0014—Skin, i.e. galenical aspects of topical compositions
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1748—Keratin; Cytokeratin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/39—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin, cold insoluble globulin [CIG]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/43—Enzymes; Proenzymes; Derivatives thereof
    • A61K38/44—Oxidoreductases (1)
    • A61K38/443—Oxidoreductases (1) acting on CH-OH groups as donors, e.g. glucose oxidase, lactate dehydrogenase (1.1)
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/02—Drugs for dermatological disorders for treating wounds, ulcers, burns, scars, keloids, or the like
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/04—Antipruritics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/16—Emollients or protectives, e.g. against radiation
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/78—Connective tissue peptides, e.g. collagen, elastin, laminin, fibronectin, vitronectin or cold insoluble globulin [CIG]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
    • C12N9/0071—Oxidoreductases (1.) acting on paired donors with incorporation of molecular oxygen (1.14)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Y—ENZYMES
    • C12Y114/00—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14)
    • C12Y114/11—Oxidoreductases acting on paired donors, with incorporation or reduction of molecular oxygen (1.14) with 2-oxoglutarate as one donor, and incorporation of one atom each of oxygen into both donors (1.14.11)
    • C12Y114/11004—Procollagen-lysine 5-dioxygenase (1.14.11.4), i.e. lysine-hydroxylase
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K35/66—Microorganisms or materials therefrom
    • A61K35/76—Viruses; Subviral particles; Bacteriophages
    • A61K35/763—Herpes virus
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
    • A61K9/06—Ointments; Bases therefor; Other semi-solid forms, e.g. creams, sticks, gels
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
    • C12N2710/00011—Details
    • C12N2710/16011—Herpesviridae
    • C12N2710/16611—Simplexvirus, e.g. human herpesvirus 1, 2
    • C12N2710/16641—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
    • C12N2710/16643—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Dermatology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Predmetno otkriće se delom odnosi na farmaceutske kompozicije i metode upotrebe za obezbeđenje profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta, uključujući subjekt koji ima ili postoji rizik od razvijanja, jednog ili više simptoma bulozne epidermolize.
POZADINA
[0002] Brojna ozbiljna stanja kože su povezana sa jednim ili više genetskih poremećaja kod pacijenata koji pate od ovih bolesti. Jedna takva bolest, bulozna epidermoliza (EB), je grupa genetskih poremećaja koji uzrokuju da se membrane kože i sluzokože zahvaćene jedinke pretvore u plikove i erodiraju kao odgovor na manje povrede ili trenje, kao što je struganje, trljanje ili grebanje. Distrofična bulozna epidermoliza (DEB) je jedan od glavnih oblika EB. Znakovi i simptomi ovog stanja se jako razlikuju kod pogođenih osoba, u rasponu od blagih (plikovi mogu zahvatiti samo ruke, stopala, kolena i laktove) do teških (rašireni plikovi i ožiljci, što može dovesti do gubitka vida, unakaženosti i drugih ozbiljnih i ponekad fatalnih medicinskih stanja).
[0003] Distrofična bulozna epidermoliza je klasifikovana u tri glavna tipa. Autozomno dominantna distrofična bulozna epidermoliza (koja se naziva dominantna distrofična bulozna epidermoliza ili DDEB) je obično najblaži oblik, sa plikovima koji su često ograničeni na ruke, noge, kolena i laktove. Ostala dva tipa distrofične bulozne epidermolize, tzv. "Hallopeau-Siemens" tip recesivne distrofične bulozne epidermolize i tzv. "ne-Hallopeau-Siemens" tip recesivne bulozne epidermolize (koji se zajedno nazivaju recesivna distrofična bulozna epidermoliza ili RDEB) su teži. RDEB je najčešće karakterisan obilnim plikovima i ožiljcima na membranama kože i sluzokože. Plikovi su redovno prisutni po celom telu, uključujući i membrane sluzokože (kao što je sluzokoža usta i digestivnog trakta), a zarastanje ovih plikova rezultira velikim ožiljcima. Oštećenje usta i jednjaka može otežati žvakanje i gutanje hrane, dovodeći do hronične neuhranjenosti i sporog rasta. Komplikacije od obimnih ožiljaka mogu uključiti fuziju prstiju na rukama i nožnih prstiju, deformacije zglobova i inflamaciju oka dovodeći do gubitka vida. Pored toga, pacijenti okoji pate od RDEB imaju veliki rizik od razvoja karcinoma pločastih ćelija, koji u ovoj populaciji bolesnika može biti neuobičajeno agresivan, često postajući opasan po život. Iako se tri vrste distrofične bulozne epidermolize razlikuju po ozbiljnosti, imaju mnogo zajedničkih karakteristika i uzrokovane su istim genetskim mutacijama.
[0004] Distrofična bulozna epidermoliza je uzrokovana mutacijama gena na Col7a1 genu, koji kodira lanac proteina Kolagen alfa-1 (VII) (Kolagen 7). Više od 240 različitih mutacija ovog gena je identifikovano kod DEB pacijenata. Pored toga, značajno smanjenje u ekspresiji gena PLOD3, koji kodira Lizil hidroksilazu 3 enzim (LH3) modifikujući kolagen, je takođe primećeno kod pacijenata sa distrofičnom epidermolizom. Lanac proteina Kolagen alfa-1 (VII) deluje na jačanje i stabilizaciju kože, dok Lizil hidroksilaza 3 igra kritičnu ulogu u sintezi i sekreciji funkcionalnog lanca proteina Kolagen alfa-1 (VII). Ukratko, prevedeni su transkripti Col7a1, i dobijeni peptidi su post-translaciono modifikovani hidroksilacijom njihovih prolinskih ostataka (prolil hidroksilazama) i njihovih lizinskih ostataka (lizil hidroksilazama, kao što je LH3). Ostaci hidroksilizina mogu zatim biti glikozilirani, i naknadno tri glikozilirana peptida formiraju trostruku spiralu poznatu kao pro-kolagen i izlučuju se iz ćelije. Izlučeni prokolagen se može zatim pridružiti strukturama višeg reda, formirajući učvršćivajuće fibrile. Učvršćivajuće fibrile su zatim dostupne za pomoć organizaciji, stabilizaciji i pomaganju u prianjanju epitelialne bazalne membrane. Epitelialna bazalna membrana je odgovorna je za učvršćivanje epitela na donjem labavom vezivnom tkivu, i od suštinskog je značaja za dermalnoepidermalnu stabilnost (integritet dermoepidermalnog spajanja). Mutacije u Col7a1 genu i smanjeni nivoi ekspresije PLOD3, slabi sposobnost lanca proteina Kolagen alfa-1 (VII) da pravilno poveže epidermis sa dermisom kod pacijenata sa distrofičnom buloznom epidermolizom, dovodeći do fragilne kože.
[0005] Opcije tretmana pacijenata sa buloznom epidermolizom su ograničene, i trenutna nega se fokusira na upravljanje simptomima bolesti, uključujući obezbeđenje leka za kontrolu bola i svraba, primenu oralnih antibiotika da suzbiju infekcije proizašle iz otvorenih rana na koži i sluzokoži, i hirurške strategije za rešavanje ožiljaka i deformiteta. Istraživačke metode za lečenje osnovnih uzroka bulozne epidermolize uključuju primenjivanje prečišćenog Kolagena 7, fibroblasta koji sadrže Kolagen 7 ili virusnih vektora koji kodiraju Kolagen 7, intradermalnom injekcijom. Zato što mnogi pacijenti sa DEB-om imaju višestruke rane koje obuhvataju mesta velikih područja sklonih traumi (kao što je sakralna kost, kukovi, stopala, donji dio leđa i ruke), bilo koji tretman koji uključuje intradermalnu injekciju bio bi krajnje invazivan, jer bi sva ta velika područja rane trebala biti injektirana, verovatno više puta, iako su vremenski intervali injekcije nejasni.
[0006] Tako postoji jasna potreba za manje invazivnim/minimalno invazivnim/ neinvazivnim opcijama tretmana pacijenata sa buloznom epidermolizom koji mogu rešiti nedostatke u lancu proteina Kolagen alfa-1 (VII), kao i nedostatke u proteinu Lizil hidroksilazi 3, uočene u ovoj populaciji pacijenta.
[0007] WO 00/040734 razmatra rekombinantne herpes simpleks viruse i njihovu upotrebu u tretiranju neoplastične bolesti. Salmon-Her et al. razmatra o implikaciji interleukina-4 u isceljivanju rana. Weiss et al. razmatra o ulozi interleukina 10 u patogenezi i potencijalnom tretmanu kožnih bolesti. Goto et al. razmatra da fibroblasti pokazuju više potencijala kao ciljne ćelije od keratinocita u COL7A1 genskoj terapiji distrofične bulozne epidermolize. Georgiadi et al. razmatra da lentivirusni modifikovani fibroblasti izražavajući COL7A1 optimiziran kodonom obnavljaju učvršćivanje fibrila u RDEB. Siprashvili et al. razmatra o dugoročnoj obnovi kolagena tipa VII u kožnom tkivu humane bulozne epidermolize. Lu et al. razmatra topikalnu primenu virusnih vektora za transfer gena. Heikkinen et al. razmatra da je dimerizacija humane lizil hidroksilaze 3 (LH3) posredovana sa aminokiselinama 541-547. WO2013/121202 razmatra o tretmanu kožnih poremećaja. Sankar et al. razmatra o novoj ulozi keratina 17 u koordinaciji onkogene transformacije i ćelijske adhezije u Juingovom sarkomu.
REZIME PRONALASKA
[0008] Pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži:
a) herpes simplex virus (HSV) sa defektnom replikacijom sadržavajući rekombinantni genom herpes simpleks virusa, pri čemu rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena kodirajući polipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I; i
b) farmaceutski prihvatljiv nosač,
pri čemu je rekombinantni genom herpes simpleks virusa konstruisan da smanji ili eliminiše ekspresiju jednog ili više toksičnih HSV gena.
KRATAK REZIME
[0009] Da bi se zadovoljile ove potrebe, predmetno otkriće se delom odnosi na farmaceutske kompozicije i metode upotrebe za obezbeđenje profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta, posebno kod subjekta koji ima ili postoji rizik od razvijanja, jednog ili više simptoma bulozne epidermolize. Konkretno, predmetno otkriće se delom odnosi na metod tretiranja pojedinca primenjivanjem (npr. topikalnim ili transdermalnim primenjivanjem) farmaceutske kompozicije koja sadrži jedan ili više polinukleotida kodirajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, I polipeptid citoskeletni 17 Keratintip I i/ili himerni polipeptid od njih.
[0010] Prema tome, određeni aspekti ovog otkrića se odnose na farmaceutsku kompoziciju sadržavajući virus koji sadrži vektor, pri čemu vektor obuhvata jedan ili više transgena kodirajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, ili himerni polipeptid od njih, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim aspektima virus je adenovirus, adeno-asocirani virus, retrovirus, lentivirus, sendai virus, herpes simpleks virus, vakcinija virus ili bilo koji hibridni virus od njih. U pronalasku virus je herpes simpleks virus sa defektnom replikacijom (HSV). U nekim izvođenjima, herpes simpleks virus je herpes simpleks virus tip 1, herpes simpleks virus tip 2, ili bilo koji derivat od njih. U nekim izvođenjima, herpes simpleks virus sadrži modifikovanu ovojnicu. U nekim izvođenjima, modifikovana ovojnica menja tkivni tropizam herpes simpleks virusa u odnosu na divlji-tip herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, modifikovana ovojnica sadrži glikoprotein herpes simpleks virusa. U nekim aspektima, vektor je HSV-1 amplikon ili HSV-1 hibridni amplikon. U nekim aspektima, HSV-1 hibridni amplikon je HSV/AAV hibridni amplikon, HSV/EBV hibridni amplikon, i HSV/EBV/RV hibridni amplikon, ili tzv. "HSV/Sleeping Beauty" hibridni amplikon. U pronalasku, vektor je rekombinantni genom herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivat od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa obuhvata inaktivirajuću mutaciju u neposrednom genu ranog herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, gen herpes simpleks virusa je ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 ili UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u genima ICP4, ICP27 i UL55 je brisanje kodirajuće sekvence gena ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 i ICP22 genima. U nekom izvođenju, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICPO i ICP4 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4 i ICP22. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima inaktivirajuća mutacija je brisanje kodirajuće sekvence gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju gena ICP47, inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu ili inaktivirajuću mutaciju u genima ICP47 i UL41. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više ICP4 virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar UL41 virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je pogodan za topikalnu ili transdermalnu primenu. U nekim izvođenjima, jedan ili više transgena sadrži mesto vezivanja miRNA. U nekim izvođenjima, jedan ili više transgena su operativno povezani na jedan ili više heterolognih promotera. U nekim izvođenjima, jedan ili više heterolognih promotera su jedan ili više neposredan rani promoter humanog citomegalovirusa (HCMV), promoter faktora-1 (EF1) izduživanja i/ili bilo koje kombinacije od njih. U nekom izvođenju, vektor sadrži transgen koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekom izvođenju, vektor sadrži transgen koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži dva transgena, pri čemu svaki transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih amino kiselina od SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima polipeptid Lizil hidroksilaza 3 ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 4. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih aminokiselina od SEK ID BR: 4. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil-hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje formaciju hidroksilizinskih ostataka na jednom ili više kolagenih polipeptida subjekta kada je polipeptid Lizil hidroksilaza 3 eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 pojačava-poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje prvi transgen i drugi transgen. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži transgen koji je policistronski. U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, prvi i drugi ORFi su razdvojeni unutrašnjim mestom za ulazak u ribozom (IRES). U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilaza 3 su približno na ekvimolarnom odnosu kada su polipeptidi eksprimirani u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilaza 3 pojačavaju, povećavaju, proširuju i/ili dopunjuju učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada su polipeptidi eksprimirani u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid sadrži linker polipeptid između lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptida Lizil hidroksilaze 3. U nekim izvođenjima, linker polipeptid je T2A, P2A, E2A ili F2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima, linker polipeptid ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom od SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10 ili SEK ID BR: 12. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24, SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR: 28. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta.
[0011] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na metod obezbeđenja profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta, metod koji obuhvata topikalno ili transdermalno primenjivanje farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 u jednoj ili više ćelija subjekta. U nekim aspektima, farmaceutska kompozicija sadrži virus koji obuhvata vektor, pri čemu vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil droksilazu 3 ili himerni polipeptid od njih, i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim aspektima, virus je adenovirus, adeno-pridruženi virus, retrovirus, lentivirus, virus sendai, herpes simpleks virus, vakcinia virus ili bilo koji hibridni virus od njih. U pronalasku virus je herpes simpleks virus sa defektnom replikacijom (HSV). U nekim izvođenjima herpes simpleks virus je herpes simpleks virus tipa 1, herpes simpleks virus tipa 2 ili bilo koji derivat od njih. U nekim izvođenjima herpes simpleks virus sadrži modifikovanu ovojnicu. U nekim izvođenjima, modifikovana ovojnica menja tkivni tropizam herpes simpleks virusa u odnosu na divlji tip herpes simpleks virusa. U nekimi zvođenjima, modifikovana ovojnica sadrži glikoprotein mutant herpes simpleks virusa. U nekim aspektima, vektor je HSV-1 amplikon ili HSV-1 hibridni amplikon. U nekim aspektima, vektor je HSV-1 amplikon ili HSV-1 hibridni amplikon. U nekim aspektima, HSV-1 hibridni amplikon je HSV/AAV hibridni amplikon, HSV/EBV hibridni amplikon, i HSV/EBV/RV hibridni amplikon, ili tzv. "HSV/Sleeping Beauty " hibridni amplikon. U pronalasku, vektor je rekombinantni genom herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivat od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u neposrednom genu ranog herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, gen herpes simpleks virusa je ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 ili UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u genima ICP4, ICP27 i UL55 je brisanje kodirajuće sekvence gena ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4 i ICP22. U nekom izvođenju, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0 i ICP4. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4 i ICP22. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija je brisanje kodirajuće sekvence gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje obuhvata inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu, inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu ili inaktivirajuću mutaciju u ICP47 i UL41 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više ICP4 virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar UL41 virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je pogodan za topikalnu ili transdermalnu primenu. U nekim izvođenjima, jedan ili više transgena sadrži mesto vezivanja miRNK. U nekim izvođenjima, jedan ili više transgena su operativno povezani na jedan ili više heterolognih promotera. U nekim izvođenjima, jedan ili više heterolognih promotera su jedan ili više neposredni rani promoter humanog citomegalovirusa (HCMV), promoter faktora-1 (EF1) produženja i/ili bilo koja kombinacija od njih. U nekim izvođenjima, vektor sadrži transgen koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži dva transgena, pri čemu svaki transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR:2. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih amino kiselina od SEK ID BR:2. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima polipeptid Lizil hidroksilaza 3 ima najmanje 80% identičnositi sekvence sa sekvencom SEK ID BR:4. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil-hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje formaciju hidroksilizinskih ostataka na jednom ili više polipeptida kolagena subjekta kada je polipeptid Lizil hidroksilaza 3 eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje jedan prvi transgen i drugi transgen. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži transgen koji je policistronski. U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, prvi i drugi ORFi su razdvojeni unutrašnjim mestom za ulazak u ribozom (IRES). U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilaza 3 su približno u ekvimolarnom odnosu kada su polipeptidi eksprimirani u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada su polipeptidi eksprimirani u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid sadrži linker polipeptida između polipeptidnog lanca Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptida Lizil hidroksilaze 3. U nekim izvođenjima, linker polipeptida je T2A, P2A, E2A ili F2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, linker polipeptida ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10 ili SEK ID BR: 12. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid ima najmanje 80% identiičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24, SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR: 28. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana jedan, dva tri, četiri, pet ili više puta dnevno. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana na jedno ili više zahvaćenih i/ili nezahvaćenih područja subjekta. U nekim izvođenjima, bolest ili poremećaj kože je jedan ili više od bulozne epidermolize, raka kože, psorijaze, lihen planusa, lupusa, rozacee, ekcema, kožne kandidijaze, celulitisa, impetiga, dekubitusnog ulcera, erizipela, ihtioze vulgaris, dermatomiozitisa, akrodermatitisa, staznog dermatitisa, Nethertonovog sindroma, bulozne epidermolize simpleks (gen LAMB3), autozomalne recesivne kongenitalne ihtioze, kseroderme pigmentozum i pemfigoida.
[0012] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovani himerni polipeptid, pri čemu izolovani himerni polipeptid sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i linker polipeptida, pri čemu su lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilaza 3 razdvojeni linkerom polipeptida, na polinukleotide kodirajući iste, na vektore koji sadrže polinukleotide, i na ćelije domaćina koje sadrže vektore. U nekim aspektima, vektor je HSV-1 amplikon ili HSV-1 hibridni amplikon. U nekim aspektima, HSV-1 hibridni amplikon je HSV/AAV hibridni amplikon, HSV/EBV hibridni amplikon, i HSV/EBV/RV hibridni amplikon, ili tzv. "HSV/Sleeping Beauty" hibridni amplikon. U pronalasku, vektor je rekombinantni genom herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivat od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u neposrednom genu ranog herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, gen herpes simpleks virusa je ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 ili UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u genima ICP4, ICP27 i UL55 je brisanje kodirajuće sekvence ICP4, ICP27 i UL55 gena. U nekimi zvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 i ICP22 genima. U nekom izvođenju, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0 i ICP4. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4 i ICP22. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija je brisanje kodirajuće sekvence gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu, inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu, ili inaktivacionu mutaciju u ICP47 i UL41 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži polinukleotid unutar jednog ili više virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži polinukleotid unutar jednog ili više ICP4 virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži polinukleotid unutar virusnog genskog lokusa UL41.
[0013] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na vektor koji sadrži jedan ili više polinukleotida koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I, ili bilo koje kombinacije od njih, pri čemu je vektor rekombinantni genom herpes simpleksa virusa, i ćelije domaćina koje sadrže vektor. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivat od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u neposrednom genu ranog herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, gen herpes simpleks virusa je ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 ili UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP4, ICP27 I UL55 genima je brisanje kodirajuće sekvence gena ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 i ICP22 genima. U nekom izvođenju, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0 i ICP4. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4 i ICP22. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija je brisanje kodirajuće sekvence gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu, inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu ili inaktivacionu mutaciju u genima ICP47 i UL41. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida unutar jednog ili više virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida unutar jednog ili više ICP4 virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida unutar virusnog genskog lokusa UL41. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži dva polinukleotida koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII).
[0014] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na metode prikupljanja herpes simpleks virusa, pri čemu se vektor od interesa pakuje unutar navedenog herpes simpleks virusa. U nekim aspektima metod uključuje korake kontaktiranja ćelije domaćina sa vektorom koji kodira pomoćni virus, kontaktirajući pomenutu ćeliju domaćina sa HSV-1 amplikonom ili HSV-1 hibridnim amplikonom sadržavajući jedan ili više ovde opisanih polinukleotida, i prikupljajući Herpes simpleks virus generisan od pomenute ćelije domaćina. U nekim aspektima, metod obuhvata korake kontaktiranja komplementirajuće ćelije domaćina sa vektorom rekombinantnog genoma herpes simpleks virusa koji sadrži jedan ili više ovde opisanih polinukleotida i prikupljajući herpes simpleks virus generisan od pomenute komplementirajuće ćelije domaćina. U nekim aspektima, sakupljeni herpes simpleks virus je virus herpes simpleksa tipa 1, virus herpes simpleksa tipa 2 ili bilo koji derivat od njih.
[0015] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na komplet koji sadrži ovde opisanu farmaceutsku kompoziciju i instrukcije za primenjivanje farmaceutske kompozicije.
[0016] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na farmaceutsku kompoziciju sadržavajući virus koji sadrži vektor, pri čemu vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagena alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I, ili himerni polipeptid od njih i farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim aspektima, virus je adenovirus, adeno-pridruženi virus, retrovirus, lentivirus, sendai virus, herpes simpleks virus, virus vakcinije ili bilo koji hibridni virus od njih. U pronalasku virus je herpes simpleks virus sa defektnom replikacijom (HSV). U nekim izvođenjima, herpes simpleks virus je virus herpes simpleks tip 1, virus herpes simpleks tip 2, ili bilo koji derivat od njih. U nekim aspektima, vektor je HSV- amplikon ili HSV-1 hibridni amplikon. U nekim aspektima, HSV-1 hibridni amplikon je HSV/AAV hibridni amplikon, HSV/EBV hibridni amplikon, i HSV/EBV/RV hibridni amplikon, ili tzv. "HSV/Sleeping Beauty" hibridni amplikon. U pronalasku, vektor je rekombinantni genom herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivat od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u neposrednom genu ranog herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, gen herpes simpleks virusa je ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 ili UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u genima ICP4, ICP27 i UL55 je brisanje kodirajuće sekvence gena ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 i ICP22 genima. U nekom izvođenju rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP0 i ICP4 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4 i ICP22. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija je brisanje kodirajuće sekvence gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu, inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu ili inaktivirajuću mutaciju u genima ICP47 i UL41. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više ICP4 virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar UL41 virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je pogodan za topikalnu ili transdermalnu primenu. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je pogodan za supkutanu ili intradermalnu primenu. U nekim izvođenjima, jedan ili više transgena sadrži mesto vezivanja miRNK. U nekom izvođenju, vektor sadrži transgen kodirajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekom izvođenju, vektor sadrži transgen kodirajući polipeptid Lizilhidroksilazu 3. U nekom izvođenju, vektor sadrži transgen kodirajući polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži dva transgena, pri čemu svaki transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima lanac polipeotida Kolagen alfa- 1 (VII) ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih aminokiselina SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelije subjekta. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 4. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih aminokiselina SEK ID BR: 4. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje formaciju hidroksilizinskih ostataka na jednom ili više polipeptida kolagena subjekta kada je polipeptid Lizil hidroksilaza 3 eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 30. U nekim izvođenjima polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih aminokiselina od SEK ID BR: 30. U nekim izvođenjima, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje zarastanje rana kod subjekta. U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje prvi transgen i drugi transgen. U nekim izvođenjima, prvi transgen i drugi transgen, svaki kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira polipeptid Lizil-hidroksilazu 3, i drugi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje prvi transgen, drugi transgen i treći transgen. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i treći transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I.
[0017] Drugi aspekti ovog otkrića se odnose se na metod obezbeđenja profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta, metod koji obuhvata primenjivanje na subjektu farmaceutske kompozicije koja sadrži vektor, pri čemu je vektor rekombinantni genom herpes simpleks virusa, i pri čemu je farmaceutska kompozicija sposobna poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija subjekta. U nekim izvođenima, farmaceutska kompozicija sadrži virus koji sadrži vektor, pri čemu vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptiidni lanac Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, polipeptid citoskeletni Keratin 17 tip I ili himerni polipeptid i od njih, I farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim aspektima, virus je adenovirus, adeno-pridruženi virus, retrovirus, lentivirus, sendai virus, virus herpes simpleksa, virus vakcinije ili bilo koji hibridni virus od njih. U pronalasku, virus je herpes simpleks virusa sa defektnom replikacijom (HSV). U nekim izvođenjima, herpes simpleks virus je herpes simpleks virus tip 1, herpes simpleks virus tip 2, ili bilo koji derivati od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivati od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u neposrednom genu ranog herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, gen herpes simpleks virusa je ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 ili UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u genima ICP4, ICP27 i UL55 je brisanje kodirajuće sekvence gena ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4 i ICP22. U nekom izvođenju, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0 i ICP4. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4 i ICP22. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija je brisanje kodirajuće sekvence gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu, inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu, ili inaktivirajuću mutaciju u genima ICP47 i UL41. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više ICP4 virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar UL41 virusnog genskog lokusa. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je pogodan za topikalnu ili transdermalnu primenu. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je pogodan za supkutanu ili intradermalnu primenu. U nekim izvođenjima, jedan ili više transgena sadrži mesto vezivanja miRNK. U nekim izvođenjima, vektor sadrži transgen koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži transgen koji kodira polipeptid Lizil-hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži transgen koji kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih aminokiselina SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 4. U nekim izvođenjima polipeptid Lizil hidroksilaza 3 je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih aminokiselina SEK ID BR: 4. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje formaciju hidroksilizinskih ostataka na jednom ili više kolagenskih polipeptida subjekta kada je polipeptid Lizil hidroksilaza 3 eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid Lizil-hidroksilaza 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila, organizaciju epotelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta kada je polipeptid eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I ima najmanje 80% identičnosti sekvence sa sekvencom SEK ID BR: 30. U nekim izvođenjima, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I je fragment, pri čemu fragment ima najmanje 100 uzastopnih aminokiselina od SEK ID BR: 30. U nekim izvođenjima, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I je fragment koji poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje zarastanje rana kod subjekta. U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje prvi transgen i drugi transgen. U nekim izvođenjima, prvi transgen i drugi transgen svaki kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira polipeptid Lizil-hidroksilazu 3, i drugi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje prvi transgen, drugi transgen i treći transgen. U nekim izvođenjima, prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i treći transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana topikalno ili transdermalno na subjektu. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana supkutano ili intradermalno na subjektu. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana jedan, dva tri, četiri, pet ili više puta dnevno. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana na jedno ili više zahvaćenih i/ili pogođenih područja subjekta. U nekim izvođenjima bolest ili poremećaj kože je jedan ili više od bulozne epidermolize, raka kože, psorijaze, lihen planusa, lupusa, rozacee, ekcema, kožne kandidijaze, celulitisa, impetiga, dekubitusnih ulcera, erizipela, ihtioze vulgaris, dermatomiozitisa, akrodermatitisa, staznog dermatitisa, Nethertonovog sindroma, bulozne epidermolize simpleks (gen LAMB3), autozomne recesivne kongenitalne ihtioze, kseroderme pigmentoze i pemfigoida.
KRATAK OPIS SLIKA
[0018]
SLIKE 1A-F prikazuje šeme divljeg-tipa i modifikovane genome herpes simpleks virusa. SL. 1A prikazuje genom divljeg-tipa herpes simpleks virusa. SL. 1B prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži transgen koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). SL. 1C prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži dva transgena, od kojih jedan kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, sa transgenima kodiranim na istom lancu DNK. SL.1D prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži dva transgena, jedan koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, sa transgenima kodiranim na suprotnim lancima DNK u antisens orijentaciji. SL. 1E prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa, koji sadrži transgen koji je policistronski, kodirajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 odvojene unutrašnjim mestom ulaska u ribozom (IRES). SL.1F prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži transgen koji kodira himerni polipeptid sadržavajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptida i polipeptid Lizil hidroksilazu 3.
SL. 2A-G prikazuje dodatne šeme divljeg-tipa i modifikovanih genoma herpes simpleks virusa. SL. 2A prikazuje genom herpes simpleks virusa divljeg-tipa. SL. 2B pokazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži brisanje kodirajućih sekvenci ICP4 (obe kopije), ICP27 i UL55 i brisanje sekvenci promotera ICP22 i ICP47, sa dva transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) integrisan u ICP4 lokusima. SL. 2C prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži brisanje kodirajućih sekvenci ICP4 (obe kopije) i ICP22, sa dva transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) integrisan u ICP4 lokusima.. SL. 2D prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži brisanje kodirajućih sekvenci ICP0 i ICP4 (obe kopije), sa dva transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) integrisan u ICP4 lokusima. SL. 2E prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži brisanje kodirajućih sekvenci ICP0, ICP4 (obe kopije) i ICP22, sa dva transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) integrisan u ICP4 lokusima. SL. 2F prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži brisanje kodirajućih sekvenci ICP0, ICP4 (obe kopije), ICP22 i ICP27, sa dva transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) integrisan u ICP4 lokusima. SL. 2G prikazuje modifikovani genom herpes simpleks virusa koji sadrži brisanje kodirajućih sekvenci ICP0, ICP4 (obe kopije), ICP22, ICP27 i UL55, sa dva transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) integrisan u ICP4 lokusima.
SL. 3 prikazuje šemu "KB 103", defektnu replikaciju herpes simpleks virusa tipa 1 (HSV-1) koji nosi ekspresionu kasetu humanog kolagena 7 (COL7A1).
SLIKE 4A-4B pokazuju porast nivoa transkripta COL7 zavisnih od doze iz humanih dermalnih keratinocita inficiranih KB103 (SL.4A) i humanih dermalnih fibroblasta RDEB (SL.4B). Transkripti su kvantifikovani u odnosu na nivoe β-aktina i normalizovani u ekspresiji u neinficiranim ćelijama.
SLIKE 5A-5B pokazuju ekspresiju humanog proteina Col7 otkrivenu u ćelijama inficiranim KB103. SL 5A. prikazuje ekspresiju humanog proteina Col7 u neinficiranim normalnim i RDEB fibroblastima, kao i fibroblastima inficiranim KB 103 pri naznačenoj mnogostrukosti infekcije (MOI). SL. 5B prikazuje ekspresiju humanog proteina Col7 u neinficiranim normalnim i RDEB keratinocitima, kao i keratinocitima inficiranim sa KB103 pri naznačenoj mnogostrukosti infekcije (MOI). Ekspresija proteina humanog GAPDH je prikazana kao kontrola opterećenja. SL. 5B prikazuje ekspresiju humanog proteina Col7 u neinficiranim normalnim i RDEB keratinocitima, kao i keratinocitima inficiranim sa KB103 pri naznačenoj mnogostrukosti infekcije (MOI). Ekspresija proteina humanog GAPDH je prikazana kao kontrola učitavanja.
SL. 6 prikazuje ekspresiju humanog proteina COL7A1 u neinficiranim (kontrola) ili KB103 inficiranim (C7, MOI 3) RDEB humanim dermalnim fibroblastima (EB HDF), normalnim humanim dermalnim keratinocitima (normalni HDK) i RDEB humanim dermalnim keratinocitima (RDEB HDK), kao što je procenjeno imunofluorescencijom.
SL. 7 prikazuje ekspresiju humanog Col7 i LH3 proteina u neinficiranim normalnim i RDEB humanim dermalnim keratinocitima, kao i keratinocitima inficiranim sa KB103 na navedenoj MOI. Ekspresija humanog proteina GAPDH je prikazana kao kontrola učitavanja.
SL. 8 prikazuje ekspresiju proteina humanog TSP-1 u neinficiranim normalnim i RDEB humanim dermalnim fibroblastima, kao i fibroblastima inficiranim KB 103 na naznačenoj MOI. Ekspresija proteina humanog GAPDH proteina je prikazana kao kontrola učitavanja.
SL. 9A-9B pokazuju ćelijsku adheziju neinficiranih (kontrolnih) RDEB humanih dermalnih keratinocita i keratinocita inficiranim KB 103 na naznačenim MOIa, na jažicama tretiranim sa povećanom koncentracijom kolagena 1 pacova (SL.
9A) i humanog Fibronektina (SL.9B).
SL.10 prikazuje taloženje Col7 u zoni bazalne membrane (BMZ) u organotipskim kulturama ekvivalentnim KB103 inficirane kože imunofluorescencijom.
SL.11 prikazuje kvantifikaciju broja kopija virusnog genoma i nivoa transkripta humanog Col7 u tkivu izolovanom iz KB 103- inficiranih miševa.
SL. 12 prikazuje ekspresiju humanog Col7 proteina u dermalnom tkivu iz KB103- inficiranih miševa imunofluorescencijom, uključujući pokretanje taloženja humanog Col7 u zoni bazalne membrane (BMZ).
DETALJAN OPIS
[0019] Ovo otkriće se odnosi, delom, na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedan ili više polinukleotida koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I i/ili himerni polipeptid od njih. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompzicija sadrži vektor, pri čemu vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, polipeptid citoskeletni Keratin 17 tip I , i/ili himerni polipeptid od njih. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena pogodnih za poboljšanje, povećanje, proširenje i/ili dopunjavanje nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratin tipa I u jednoj ili više ćelija subjekta. Predmetno otkriće se takođe odnosi, delom, na metode obezbeđenja profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože (npr. distrofične bulozne epidermolize) kod subjekta primenjivanjem (npr. topikalnim ili transdermalnim primenjivanjem) farmaceutske kompozicije opisane ovde.
[0020] Sledeći opis postavlja primerne metode, parametre i slično. Treba, međutim, prepoznati da takav opis nije namenjen kao ograničenje na obim predmetnog otkrića, već je pružen kao opis primera izvođenja.
Opšte tehnike
[0021] Ovde opisane ili upućene tehnike ili postupci su generalno dobro razumljivi i uobičajeno su upotrebljeni koršćenjem konvencionalne metodologije stručnjaka sa ovog područja tehnike, kao što su, na primer, široko korišćene metodologije opisane u Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual 3d edition (2001) Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y.; Current Protocols in Molecular Biology (F.M. Ausubel, et al. eds., (2003)); the series Methods in Enzymology (Academic Press, Inc.); PCR 2: A Practical Approach (M.J. MacPherson, B.D. Hames and G.R. Taylor eds. (1995)), Harlow and Lane, eds. (1988); Oligonucleotide Synthesis (M.J. Gait, ed., 1984); Methods in Molecular Biology, Humana Press; Cell Biology: A Laboratory Notebook (J.E. Cellis, ed., 1998) Academic Press; Animal Cell Culture (R.I. Freshney), ed., 1987); Introduction to Cell and Tissue Culture (J.P. Mather and P.E. Roberts, 1998) Plenum Press; Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle, J.B. Griffiths, and D.G. Newell, eds., 1993-8) J. Wiley and Sons; Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J.M. Miller and M.P. Calos, eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, (Mullis et al., eds., 1994); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley and Sons, 1999).
Definicije
[0022] Pre detaljnog opisivanja pronalaska, treba razumeti da ovaj pronalazak nije ograničen na posebne biološke sisteme, koji mogu, naravno, varirati. Takođe treba razumeti da je ovde korištćena terminologija za svrhu opisivanja samo određenih izvođenja, i nije namenjena ograničavanju.
[0023] Kao štosu ovde korišćeni, oblici jednine "a", "an" i "the" uključuju reference množine, osim ako sadržaj jasno ne diktira drugačije. Tako, na primer, referenca za "molekul" opciono uključuje kombinaciju dva ili više takvih molekula i slično.
[0024] Kao što je ovde korišćen, termin "oko" se odnosi na uobičajeni raspon grešake za odgovarajuću vrednost lako poznatu stručnjaku u ovom tehničkom području. Referenca na "oko" vrednosti ili parametra ovde uključuje (i opisuje) izvođenja koja su sama po sebi usmerena na tu vrednost ili parametar.
[0025] Kao što su ovde korišćeni, termini "polinukleotid", "sekvenca nukleinske kiseline", "nukleinska kiselina" i varijacije od njih moraju biti generički za polideoksiribonukleotide (koji sadrže 2-deoksi-D-ribozu), za poliribonukleotide (koji sadrže D-ribozu), za bilo koji drugi tip polinukleotida koji je N-glikozid purina ili pirimidinske baze i za druge polimere koji sadrže ne-nukleotidne okosnice, pod uslovom da polimeri sadrže nukleobaze u konfiguraciji koja omogućuje uparivanje baze i slaganje baze, kao što je pronađeno u DNK i RNK. Prema tome, ovi termini uključuju poznate tipove modifikacija sekvenci nukleinske kiseline, na primer, supstituciju jednog ili više nukleotida koji se javljaju u prirodi sa analogom i modifikacije internukleotida.
[0026] Kao što je ovde korišćena, nukleinska kiselina je "operativno povezana" ili "operativno vezana" kada je stavljena u funkcionalni odnos sa drugom sekvencom nukleinske kiseline. Na primer, promoter ili pojačivač je operativno povezan sa kodirajućom sekvencom ako utiče na transkripciju sekvence; ili je mesto vezivanja ribozoma operativno povezano sa kodirajućom sekvencom ako je postavljeno tako da olakšava translaciju. Generalno, "operativno povezano" znači da su DNK sekvence koje su povezane susedne.
[0027] Kao što je ovde korišćen, termin "vektor" se odnosi na diskretne elemente koji se koriste za uvođenje heterolognih nukleinskih kiselina u ćelije, bilo za njihovu ekspresiju ili replikaciju. Ekspresioni vektor uključuje vektore sposobne eksprimiranju nukleinske kiseline koji su operativno povezani sa regulatornim sekvencama, kao što su regije promotera, koje su sposobne izvršenju ekspresije takvih nukleinskih kiselina. Prema tome, ekspresioni vektor se može odnositi na konstrukciju DNK ili RNK, kao što je plazmid, fag, rekombinantni virus ili drugi vektor koji, nakon uvođenja u odgovarajuću ćeliju domaćina, rezultira u ekspresiji nukleinskih kiselina. Odgovarajući vektori ekspresije su dobro poznati stručnjacima sa ovog područja tehnike i uključuju one koji se mogu replicirati u eukariotskim ćelijama i one koji ostaju epizomalni ili one koji se integrišu u genom ćelije domaćina.
[0028] Kao što je ovde korišćen, "otvoreni okvir čitanja" ili "ORF" se odnosi na neprekidne zategnute nukleinske kiseline, bilo DNK ili RNK, koje kodiraju protein ili polipeptid. Tipično, nukleinske kiseline sadrže početni signal translacije ili inicijaciju kodona, kao što je ATG ili AUG, i kodon terminacije.
[0029] Kao što je ovde korišćen, "unutarašnje mesto ulaska u ribozom" ili "IRES" se odnosi se na nukleotidnu sekvencu koja omogućuje inicijaciju translacije u sredini, npr. posle prvog startnog kodona, mRNA sekvence.
[0030] Kao što je ovde korišćena, "netranslatovana regija" ili "UTR" se odnosi na netranslatovane nukleinske kiseline na 5 'i/ili 3' krajevima otvorenog okvira čitanja. Inkluzija jedne ili više UTRa u polinukleotid može uticati na posttranskripcionu regulaciju, stabilnost mRNK i/ili translaciju polinukleotida.
[0031] Kao što je ovde korišćen, termin "transgen" se odnosi na polinukleotid koji je sposoban da se transkribuje u RNK i prenese-translatuje i/ili eksprimira pod odgovarajućim uslovima, nakon što se unese u ćeliju. U nekim aspektima to daje željeno svojstvo ćeliji u koju je uveden ili na neki drugi način dovodi do željenog terapijskog ili dijagnostičkog ishoda.
[0032] Kao što su ovde korišćeni, termini "polipeptid", "protein" i "peptid" su korišćeni naizmenično i mogu se odnositi na polimer dve ili više aminokiselina.
[0033] Kako je ovde korišćen, "subjekt", "domaćin" ili "pojedinac" se odnosi na bilo koju životinju klasifkovanu kao sisar, uključujući ljude, domaće i životinje sa farme, i zooloških vrtova, sportske, ili kućne ljubimce, kao što su psi, konji, mačke, krave, kao i životinje koje se koriste u istraživanu, kao što su miševi i pacovi itd. U nekim izvođenjima sisar je čovek.
[0034] Kao što je ovde korišćena, "topikalna primena" ili "topikalno primenjivanje" se odnosi na isporuku kompozicije na subjektu kontaktiranjem, direktno ili na drugi način, formulaciju koja sadrži kompoziciju na celoj ili delu kože subjekta. Termin obuhvata nekoliko načina primene, uključujući, ali ne ograničavajući se na njih, topikalnu i transdermalnu. Topikalna primena je korišćena kao način za dostavu kompozicije u epideris ili dermis subjekta, ili specifične slojeve od njih.
[0035] Kao što je ovde korišćena, "efikasna količina" je najmanje minimalni iznos potreban za postizanje merljivog poboljšanja ili prevencije jednog ili više simptoma određenog poremećaja. Efikasna količina je takođe ona u kojoj su bilo koji toksični ili štetni efekti tretmana nadmašeni od strane terapijski povoljnih efekata. Za profilaktičku upotrebu korisni ili željeni rezultati uključuju rezultate kao što su uklanjanje ili smanjenje rizika, smanjenja ozbiljnosti ili odlaganje početka bolesti, njenih komplikacija i intermedijarnih patoloških fenotipova koji su prisutni tokom razvoja bolesti. Za terapijsku upotrebu, povoljni ili željeni rezultati uključuju kliničke rezultate kao što su smanjenje jednog ili više simptoma koji su posledica bolesti, povećanje kvaliteta života obolelih, odlaganje napredovanja bolesti i/ili produženje preživljavanja. Efikasna količina može biti primenjena u jednoj ili više primena.
Farmaceutske kompozicije
Polinukeotidi
[0036] Farmaceutska kompozicija sadrži vektor sa defektnom replikacijom herpes simpleks virusa, kao što je definisano u patentnim zahtevima. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I, i/ili himerni polipeptid od njih. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid Lizil-hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju himerni polipeptid. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid Lizil-hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagena alfa-1 (VII) i jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid Lizil-hidroksilazu 3 i jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid Lizilhidroksilazu 3, i jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I.
Kolagen alfa-1 (VII) lanac
[0037] U nekim aspektima, polinukleotid predmetnog otkrića kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). Primer polinukleotida koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je SEK ID BR: 1. Polinukleotidi predmetnog otkrića takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 1.
[0038] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je polinukleotid koji kodira n-terminalno skraćivanje, C-terminalo skraćivanje ili fragment lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). Polinukleotidi koji kodiraju N-terminalno skraćivanje, C-terminalno skraćivanje ili fragment lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 25, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 125, najmanje 150, najmanje 175, najmanje 200, najmanje 250, najmanje 300, najmanje 350, najmanje 500, najmanje 1000, najmanje 2500, najmanje 5000, najmanje 7500, ali manje od 8835, uzastopnih nukleotida od SEK ID BR: 1.
[0039] U nekim izvođenjima polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII ) je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu koja ima najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99% ili 100% identičnost sekvence SEK ID BR: 2. U nekim izvođenjima ovo otkriće se odnosi na polinukleotide koji kodiraju polipeptide koji su homolozi lanca polipeptida lanca H. sapiens Kolagen alfa-1 (VII). Metode identifikovanja polipeptida koji su homolozi polipeptida od interesa su dobro poznati stručnjacima sa ovog područja tehnike.
[0040] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je polinukleotid koji kodira n-terminalna skraćivanja, C-terminalna skraćivanja ili fragmente amino kiseline sekvence SEK ID BR: 2. N-terminalna skraćivanja, C-terminala skraćivanja ili fragmenti mogu sadržavati najmanje 10, najmanje 12, najmanje 14, najmanje 16, najmanje 18, najmanje 20, najmanje 30, najmanje 40, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 250, najmanje 500, najmanje 750, najmanje 1000, najmanje 1500, najmanje 2000, ili najmanje 2500, ali manje od 2944, uzastopnih amino kiselina od SEK ID BR: 2.
[0041] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) eksprimira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) kada je polinukleotid dostavljen u jednu ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje nivoe lanca polipeptida Kolagen alfa-1 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje funkciju lanca polipeptida Kolagen alfa-1 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija lanca polipeptida Kolagena alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje aktivnost lanca polipeptida Kolagen alfa-1 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija lanca polipeptida Kolagena alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje fiksiranje formacije fibrila subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje integritet dermoepidermalnog spajanja subjekta.
Lizil hidroksilaza 3
[0042] U nekim aspektima, polinukleotid predmetnog otkrića kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. Primer polinukleotida koji kodira polipeptid lizil hidroksilazu 3 je SEK ID BR:3. Polinukleotidi predmetnog otkrića takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 3.
[0043] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 je polinukleotid koji kodira nterminalno skraćivanje, C- terminalno skraćivanje ili fragment polipeptida Lizil hidroksilaze 3. Polinukleotidi koji kodiraju N-terminalo skraćivanje, C-terminalno skraćivanje ili fragment polipeptida Lizil hidroksilaze 3 uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 25, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 125, najmanje 150, najmanje 175, najmanje 200, najmanje 250, najmanje 300, najmanje 350, najmanje 500, najmanje 750, najmanje 1000, najmanje 1500, ili najmanje 2000, ali manje od 2217, uzastopnih nukleotida od SEK ID BR: 3.
[0044] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 4. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu koja ima najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90% , najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR:4. U nekim izvođenjima, predmetno otkriće se odnosi na polinukleotide koji kodiraju polipeptide koji su homolozi polipeptida H. sapiens Lizil hidroksilaze 3. Metode identifikovanja polipeptida koji su homolozi polipeptida od interesa su dobro poznati stručnjacima sa ovog područja tehnike.
[0045] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 je polinukleotid koji kodira N-terminalna skraćivanja, C-terminalna skraćivanja ili fragmente aminokiselinske sekvence SEK ID BR: 4. N-terminalna skraćivanja, C-terminalna skraćivanja, ili fragmenti mogu sadržavati najmanje 10, najmanje 12, najmanje 14, najmanje 16, najmanje 18, najmanje 20, najmanje 30, najmanje 40, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 200, najmanje 300, najmanje 400, najmanje 500, najmanje 600, ili najmanje 700, ali manje od 738, uzastopnih aminokiselina SEK ID BR: 4.
[0046] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 eksprimira polipeptid Lizilhidroksilazu 3 kada je polinukleotid dostavljen u jednu ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida Lizil-hidroksilaze 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje nivoe polipeptida Lizil hidroksilaze 3 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima ekspresija polipeptida Lizil hidroksilaze 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje funkciju polipeptida Lizil-hidroksilaza 3 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida Lizil-hidroksilaze 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje aktivnost polipeptida Lizil hiidroksilaze 3 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida Lizil hidroksilaze 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ ili dopunjuje formaciju hidroksilizinskih ostataka na jednom ili više kolagen polipeptida subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida Lizil hidroksilaze 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje fiksiranje formacije fibrila subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida Lizil hidroksilaze 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje organizaciju epitelialnih bazalnih membrana epitela i/ili prianjanje baze epitela subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida Lizil hidroksilaze 3 poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje integritet dermoepidermalnog spajanja subjekta.
[0047] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 su dostavljeni istoj ćeliji subjekta. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 eksprimiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 kada su polinukleotidi dostavljeni u istu ćeliju subjekta. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 eksprimiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil-hidroksilazu 3 u ekvimolarnim odnosima.
Citoskeletni 17 Keratin tip I
[0048] U nekim aspektima, polinukleotid predmetnog otkrića kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. Primer polinukleotida da kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I je SEK ID BR : 29. Polinukleotidi predmetnog otkrića takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identitičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 29.
[0049] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid citoskeletni Keratin 17 tip I je polinukleotid koji kodira n-terminalno skraćivanje, C- terminalno skraćivanje ili fragment polipeptida citoskeletni Keratin 17 tip I. Polinukleotidi koji kodiraju N- terminalno skraćivanje, C- terminalno skraćivanje ili fragment lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 25, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 125, najmanje 150, najmanje 175, najmanje 200, najmanje 250, najmanje 300, ili najmanje 350, najmanje 500, najmanje 1000, najmanje 1250, ali manje od 1299, uzastopnih nukleotida od SEK ID BR : 29.
[0050] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR:30. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid citoskeletni Keratin 17 tip I je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu koja ima najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 30. U nekim izvođenjima, ovo otkriće se odnosi na polinukleotide koji kodiraju polipeptide koji su homolozi polipeptida citoskeletni Keratin 17 tip I H. sapiens. Metode identifikovanja polipeptida da su homolozi polipeptida od interesa dobro poznati stručnjacima sa ovog područja tehnike.
[0051] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I je polinukleotid koji kodira N- terminalna skraćivanja, C-terminalna skraćivanja ili fragmente aminokiselinske sekvence od SEK ID BR: 30. N- terminalna skraćivanja, C- terminalna skraćivanja ili fragmenti mogu sadržavati najmanje 10, najmanje 12, najmanje 14, najmanje 16, najmanje 18, najmanje 20, najmanje 30, najmanje 40, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100 , najmanje 150, najmanje 200, najmanje 250, najmanje 300, najmanje 350, najmanje 400, najmanje 425, ali manje od 432, uzastopnih aminokiselina od SEK ID BR: 30.
[0052] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I eksprimira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I kada je polinukleotid dostavljen u jednu ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I, poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje nivoe polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida citoskeletni 17 Keratin tip I poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje funkciju polipeptida citoskeletni 17 Keratin tip I u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida citoskeletni 17 Keratin tip I poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje aktivnost polipeptida citoskeletni Keratin 17 tip I u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija polipeptida citoskeletni 17 Keratin tip I poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje zarastanje rana kod subjekta.
Himerni polipeptid koji sadrži linker
[0053] U nekim izvođenjima, polinukleotid predmetnog otkrića kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid dalje sadrži polinukleotid koji kodira linker polipeptid. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira linker polipeptid koji se može odcepiti. Primeri polinukleotida koji kodiraju linker polipeptide koji se mogu odcepiti, mogu uključiti, ali nisu ograničeni na, polinukleotide koji kodiraju T2A, P2A, E2A ili F2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira T2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira P2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira E2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira E2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira F2A linker polipeptid.
[0054] U nekim aspektima, polinukleotid predmetnog otkrića kodira linker polipeptid. Primeri polinukleotida koji kodiraju linker polipeptide su SEK ID BR: 5, SE ID BR: 7, SEK ID BR: 9 i SEK ID BR: 11. Polinukleotidi predmetnog otkrića takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55 %, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 5, SEK ID BR : 7, SEK ID BR: 9 ili SEK ID BR: 11.
[0055] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira N-terminalno skraćivanje, C-terminalno skraćivanje ili fragment linker polipeptid. Polinukleotidi koji kodiraju N- terminalno skraćivanje, C- terminalno skraćivanje ili fragment linker polipeptida uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 5, najmanje 10, najmanje 15, najmanje 20, najmanje 25, najmanje 30, najmanje 35, najmanje 40, najmanje 45, najmanje 50, najmanje 55, ili najmanje 60, ali manje od 66, uzastopnih nukleotida od SEK ID BR: 5, SEK ID BR: 7, SEK ID BR: 9, ili SEK ID BR: 11.
[0056] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10 ili SEK ID BR: 12. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima sekvencu aminokiseline imajući najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10 ili SEK ID BR: 12.
[0057] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid je polinukleotid koji kodira N-terminalna skraćivanja, C-terminalna skraćivnja ili fragmente aminokiselinske sekvence SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10, ili SEK ID BR: 12. N-terminalna skraćivanja, C-terminalna skraćivanja ili fragmenti mogu sadržavati najmanje 4, najmanje 6, najmanje 8, najmanje 10, najmanje 12, najmanje 14, najmanje 16, najmanje 18, ili najmanje 20, ali manje od 22, uzastopnih aminokiselina od SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10 ili SEK ID BR: 12.
[0058] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid dalje sadrži polinukleotid koji kodira jedno ili više mesta cepanja furina. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira jedno ili više mesta cepanja furina kodira aminokiselinsku sekvencu koja je ista ili suštinski slična sekvenci mesta kanonskog mesta cepanja furina (Arg-X-(Arg/Lys)-Arg). U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od T2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od T2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od P2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od P2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od E2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od E2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od F2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od F2A linker polipeptida.
[0059] U nekim izvođenjima, polinukleotid kodirajući himerni polipeptid kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptid, i polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid sadrži, od 5’ do 3’, polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polinukleotid koji kodira linker polipeptid i polinukleotid koji kodira polipeptid Lizili hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid sadrži, od 5’ do 3’, polinukleotid koji kodira polipeptid Lizilhidroksilazu 3, polinukleotid koji kodira linker polipeptid, i polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII).
[0060] Primeri polinukleotida koji kodiraju himerne polipeptide koji sadrže lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptid, i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 su SEK ID BR: 13, SEK ID BR: 15, SEK ID BR: 17, SEK ID BR: 19, SEK ID BR: 21, SEK ID BR: 23, SEK ID BR: 25 i SEK ID BR: 27. Polinukleotidi predmetnog otkrića takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, na najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 13, SEK ID BR: 15, SEK ID BR: 17, SEK ID BR: 19, SEK ID BR: 19, SEK ID BR: 21, SEK ID BR: 23, SEK ID BR: 25, ili SEK ID BR: 27.
[0061] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid je polinukleotid koji kodira n-terminalno skraćivanje, C-terminalno skraćivanje ili fragment himernog polipeptida. Polinukleotidi koji kodiraju N-terminalno skraćivanje, C-terminalno skraćivanje ili fragment himernog polipeptida uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 25, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 125, najmanje 150, najmanje 175, najmanje 200, najmanje 250, najmanje 300, najmanje 350, najmanje 400, najmanje 450, najmanje 500, najmanje 550, najmanje 600, najmanje 650, najmanje 700, najmanje 750, najmanje 800, najmanje 850, najmanje 900, najmanje 950, najmanje 1000, najmanje 2000, najmanje 3000, najmanje 4000, najmanje 5000, najmanje 6000, najmanje 7000, najmanje 8000, najmanje 9000, ili najmanje 10000, ali manje od 11121, uzastopnih nukleotida od SEK ID BR: 13, SEK ID BR: 15, SEK ID BR: 17, SEK ID BR: 19, SEK ID BR: 21, SEK ID BR: 23, SEK ID BR: 25, ili SEK ID BR: 27.
[0062] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptid i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu od SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24, SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR: 28. U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid sadržavajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptid i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 je polinukleotid koji kodira polipeptid koji ima aminokiselinsku sekvencu koja ima najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosi sa sekvencom SEK ID BR : 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24, SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR: 28.
[0063] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptid i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 je polinukleotid koji kodira N-terminalno skraćivanje, C-terminalno skraćivanje ili fragmente aminokiselinske sekvence SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24 , SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR: 28. N-terminalno skraćivanje, C-terminalno skraćivanje ili fragmenti mogu sadržavati najmanje 25, najmanje 50, najmanje 75, najmanje 100, najmanje 125, najmanje 150, najmanje 175, najmanje 200, najmanje 250, najmanje 300, pri najmanje 350, najmanje 400, najmanje 450, najmanje 500, najmanje 550, najmanje 600, najmanje 650, najmanje 700, najmanje 750, najmanje 800, najmanje 850, najmanje 900, najmanje 950 , najmanje 1000, najmanje 1250, najmanje 1500, najmanje 1750, najmanje 2000, najmanje 2250, najmanje 2500, najmanje 2750, najmanje 3000, najmanje 3250, ili najmanje 3500, ali manje od 3706, uzastopne aminokiseline od SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24, SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR : 28.
[0064] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira himerni polipeptid eksprimira himerni polipeptid kada je polinukleotid dostavljen u jednu ili više ciljnih ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid je otcepljen nakon što je eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid je otcepljen unutar linker polipeptida kada je eksprimiran u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, himerni polipeptid je otcepljen na dva polipeptida, od kojih jedan sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i drugi koji sadrži polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, ekspresija himernog polipeptida poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje nivoe lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija himernog polipeptida poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje funkciju lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija himernog polipeptida poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje aktivnost lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 u jednoj ili više ciljnih ćelija. U nekim izvođenjima, ekspresija himernog polipeptida poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje formaciju hidroksilinskih ostataka na jednom ili više kolagenih polipeptida subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija himernog polipeptida poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija himernog polipeptida poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje organizaciju epitelialne bazalne membrane i/ili prianjanje baze epitela subjekta. U nekim izvođenjima, ekspresija himernog polipeptida poboljšava, povećava, proširuje i/ili dopunjuje integritet dermoepidermalnog spajanja subjekta.
[0065] Polinukleotidi iz predmetnog otkrića mogu biti optimizovani kodonom. U nekim izvođenjima polinukleotidi predmetnog otkrića su optimiziovani za kodon humanih ćelija. U nekim izvođenjima polinukleotidi ovog otkrića su optimizovani za kodon ćelija miša. U nekim izvođenjima, polinukleotidi ovog otkrića su optimizovani za kodon ćelija pacova. U nekim izvođenjima polinukleotidi predmetnog otkrića su optimizovani za kodon ćelija hrčaka. U nekim izvođenjima polinukleotidi ovog otkrića su optimizovani za kodon ćelija psa. U nekim izvođenjima polinukleotidi ovog otkrića su optimizovani su kodon ćelija kvasca. U nekim izvođenjima polinukleotidi ovog otkrića su optimizovani za kodon bakterijskih ćelija. Polinukleotidi predmetnog otkrića mogu biti DNK polinukleotidi, RNK polinukleotidi ili kombinacija jednog ili više DNK polinukleotida i jednog ili više RNK polinukleotida.
Vektori
[0066] U nekim aspektima, predmetno otkriće se odnosi na vektore, poželjno ekspresione vektore, koji sadrže jedan ili više polinukleotida opisanih ovde. U nekim aspektima, vektori su DNK vektori. Generalno, vektori pogodni za održavanje, razmnožavanje ili eksprimiranje polinukleotida za proizvodnju jednog ili više polipeptida kod subjekta mogu biti korišćeni. Primeri pogodnih vektora uključuju, ali nisu ograničeni na, plazmide, kozmide, epizome, transpozone i virusne vektore (npr. adenovirus, vakcinija virus, Sindbis-virus, morbili, herpes virus, lentivirus, retrovirus, adeno-asocirani virusni vektori, itd.) U nekim aspektima, vektor je sposoban za autonomnu replikaciju u ćeliji domaćina. U nekim aspektima, vektor nije sposoban za autonomnu replikaciju u ćelji domaćina. U nekim aspektima, vektor je sposoban integrisanju u DNK domaćina. Metode za izradu vektora koji sadrže jedan ili više polinukleotida od interesa su dobro su poznati stručnjaku sa ovog područja tehnike.
[0067] U pronalasku, vektor je vektor herpes simpleks virusa sa defektnom replikacijom.
[0068] U pronalasku, vektor herpes simpleks virusa je rekombinantni genom herpes simpleks virusa koji je konstruisan da smanji ili eliminiše ekspresiju jednog ili više toksičnih gena herpes simpleks virusa. Metode konstruisanja rekombinantnih genoma herpes simpleks virusa su generalno opisane u WO2015/009952. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju. Primeri inaktivirajućih mutacija mogu uključiti, ali nisu bili ograničeni na, brisanja, umetanja, genske-tačkaste mutacije i preuređenja. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u najmanje jednoj, najmanje dve, najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet, najmanje šest, najmanje sedam, ili svih osam ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 i UL55 gena herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP0 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 (jedna ili obe kopije) genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP22 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP27 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u UL55 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivati od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-2 genom.
[0069] U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP27, i UL55 genima.
U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, ICP27, ICP47, UL55 genima. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP27, i/ili UL55 genima je brisanje kodirajuće sekvence ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP27, i/ili UL55 genima. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 gena (npr. kodirajuće sekvence ICP22 i ICP47 su netaknute, ali nisu transkripciono aktivne). U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP22 i ICP47 genima je brisanje u promoterskoj regiji ICP22 i ICP47 genima (npr. kodirajuće sekvence ICP22 i ICP47 su netaknute, ali nisu transkripciono aktivne).
U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži brisanje u kodirajućoj sekvenci ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP27 i UL55 gena i brisanje u promoterskoj regiji gena ICP22 i ICP47. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks viruas je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivati od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-2 genom.
[0070] U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 (jedna ili obe kopije) i ICP22 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP0 i ICP4 (jedna ili obe kopije) genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP0 i ICP4 (jedna ili obe kopije) i ICP22 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP0, ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, i ICP27 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP0, ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, ICP27 genima i UL55 genima. U nekim izvođenjima, inaktivirajuća mutacija u ICP0, ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, ICP27 i/ili UL55 genima sadrži brisanje kodirajuće sekvence ICP0, ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, ICP27 i/ili UL55 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži brisanje u kodirajućoj sekvenci ICP0, ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, ICP27, i UL55 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u UL41 genu.
U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa dalje sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP47 genu i UL41 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivati od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-2 genom.
[0071] U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, i ICP27 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, ICP27, ICP47, i UL55 genima. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP0, ICP4 (jedna ili obe kopije), ICP22, i ICP27 genima. U nekim izvođenjima, genom rekombinantnog herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivati od njih. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-2 genom.
[0072] U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar jednog, dva, tri, četiri, pet, šest, sedam ili više virusnih genskih lokusa. Primeri pogodnih virusnih lokusa mogu uključiti, bez ograničenja, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 i UL55 herpes simpleks virusnih genskih lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar jednog ili više virusnih ICP4 genskih lokusa (npr. rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa, i rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom od ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u drugim ICP4 lokusima, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom od ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira LH3 u drugim ICP4 lokusima, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom od ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u drugim ICP4 lokusima itd.). U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar virusnog genskog lokusa UL41. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar virusnog ICP47 genskog lokusa. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar jednog ili više virusnih ICP4 genskih lokusa, i jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar virusnog UL41 genskog lokusa (npr. rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira LH3 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira Col7 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira LH3 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira Col7 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira LH3 u lokusu UL41, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira Col7 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u UL41 lokusu itd.).
[0073] Vektor može uključiti polinukleotid predmetnog otkrića u obliku pogodnom za ekspresiju polinukleotida u ćeliji domaćina. Ekspresioni vektori mogu uključiti jednu ili više regulatornih sekvenci operativno povezanih sa polinukleotidom koji treba biti eksprimiran. Termin "regulatorna sekvenca" uključuje promotere, pojačivače i druge elemente za kontrolu ekspresije (npr. signale poliadenilacije). Primeri pogodnih pojačivača mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, pojačivače sekvenci iz gena sisara (kao što su globin, elastaza, albumin, ɑ -fetoprotein, insulin i slično), i pojačivače sekvenci iz eukariotske ćelje virusa (kao što je pojačivač SV40 na potonjoj strani porekla replikacije (bp 100-270), pojačivač citomegalovirusnog ranog promotera, pojačivač polioma na potonjoj strani porekla replikacije, pojačivač adenovirusa islično). Primeri promotera pogodnih za transkripciju u ćelijama sisara domaćina mogu uključti, ali nisu ograničeni na, promotore dobijene iz genoma virusa (kao što je polioma virusa, virusa ptica-tzv."fowlpox virusa", adenovirusa (kao što je Adenovirus 2), goveđeg papiloma virusa, virusa ptičjeg sarkoma, citomegalovirusa, retrovirusa, virusa hepatitisa B, simijan virusa 40 (SV40) i slično) ili od heterolognih promotera sisara (kao što je aktinski promoter, promoter imunoglobulina, iz promotera toplotnog udara i slično), pod uslovom da su takvi promoteri kompatibilni sa ćelijama domaćina. U nekim izvođenjima, polinukleotidi predmetnog otkrića su operativno povezani sa jednim ili više heterolognih promotera. U nekim izvođenjima, jedan ili više heterolognih promotera su jedan ili više neposrednih ranih promotera humanog citomegalovirusa (HCMV), promoter faktora izduživanja-1 (EF) i/ili bilo koja kombinacija od njih. U nekim izvođenjima, jedan ili više heterologih promotera su jedan ili više konstitutivnih promotera, tkivno specifičnih promotera, vremenskih promotera, prostornih promotera, inducibilnih promotera i represivnih promotera. Regulatorne sekvence mogu uključiti one koje usmeravaju konstitutivni izraz nukleotidne sekvence, kao i tkivno specifične regulatorne i/ili inducibilne sekvence. Dizajn vektora ekspresije može zavisiti od faktora kao što su ćelija domaćina koja treba biti u kontaktu sa polinukleotidom predmetnog otkrića, nivo željene ekspresije proteina, i slično. Ekspresioni vektori predmetnog otkrića mogu biti uvedeni u ćelije domaćina kako bi se proizveli proteini ili polipeptidi (npr. lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptidi Lizil hidroksilaze 3, polipeptidi citoskeletni 17 Keratin tip I, himerni polipeptidi i slično) kodirani sa polinukleotidima kao što je ovde opisano.
[0074] U nekim izvođenjima, vektor ovog otkrića sadrži jedan ili više transgena koji sadrže jedan ili više polinukleotida opisanih ovde. Jedan ili više transgena mogu biti umetnuti u bilo kojoj orijentaciji u vektor. Ako vektor sadrži dva ili više transgena (npr. dva ili više, tri ili više, itd.), transgeni se mogu umetnuti u istoj orijentaciji ili suprotnim orijentacijama jedan prema drugom. Bez da se želi vezati za teoriju, uključivanje dva transgena u vektor u antisenskoj orijentaciji može pomoći da se izbegne očitavanje i osigura odgovarajuća ekspresija svakog transgena. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptida Lizil hidroksilaze 3, polipeptida citoskeletnog 17 Keratin tipa I i/ili himernih polipeptida od njih. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan transgen koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži dva transgena od kojih svaki kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži tri transgena od kojih svaki kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan transgen koji kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži dva transgena od kojih svaki kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži tri transgena od kojih svaki kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan transgen koji kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži dva transgena od kojih svaki kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži tri transgena od kojih svaki kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan transgen koji kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3 i/ili polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I.
[0075] U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje dva transgena (npr. dva, tri, četiri, pet, šest, sedam ili više transgena). U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i najmanje drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i najmanje drugi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i najmanje drugi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I i najmanje drugi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i najmanje drugi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I, i najmanje drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3. U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), i najmanje drugi transgen kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i/ili polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I. U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i najmanje drugi transgen kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagena alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3 i/ili polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I.
[0076] U nekim izvođenjima, vektor sadrži najmanje tri transgena (npr. tri, četiri, pet, šest, sedam ili više transgena). U nekim izvođenjima, najmanje prvi transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), najmanje drugi transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i najmanje treći transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I.
[0077] U nekim izvođenjima, vektor sadrži transgen koji je policistronski. U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, polihcstronski transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, polististronski transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF).
[0078] U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3 i/ili polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil hidroksilazu 3, i/ili polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF) i himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptid Lizil-hidroksilazu 3 i/ili polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, prvi i drugi ORFi su razdvojeni unutrašnjim mestom ulaska u ribozom (IRES).
[0079] U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF), polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF), i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na trećem otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF), polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF), i polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I
na trećem otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF), polipeptid Kolagen alfa-1 (VII) na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF), i polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na trećem otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF), polipeptid citoskeletni Keratin 17 tip I na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF), i lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na trećem otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF), polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF), i lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na trećem otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, policistronski transgen kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I na prvom otvorenom okviru čitanja (ORF), lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) na drugom otvorenom okviru čitanja (ORF), i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 na trećem otvorenom okviru čitanja (ORF). U nekim izvođenjima, prvi, drugi i treći ORFi su razdvojeni unutrašnjim mestom ulaska u ribozom (IRES).
[0080] Primeri pogodnih IRES-a mogu uključiti, ali nisu ograničeni na, virusno izvedenim IRES (npr. IRES izveden iz poliovirusa, rinovirusa, encefalomiokarditisa, virusa slinavke i šapa, virusa hepatitisa C, virusa klasične svinjske groznice, rous sarkom virusa, virusa humane imunodeficijencije, virusa paralize kriketa, herpesvirusa povezanog sa Kapošijevim sarkomom, itd.) i IRES-a izvedenog iz ćelijske mRNA (npr. IRES izvedenog iz mRNKa faktora rasta, kao što je faktor rasta fibroblasta 2, faktor rasta B izveden iz trombocita i faktor rasta vaskularnog endotela, IRES izveden iz mRNK faktora transkripcije, kao što je antenapedia, tzv. "ultrapithoraxm" i NF-KB represivni faktor, IRES izveden iz onkogenih mRNKa, kao što je c-myc, pim-1, i protein kinaza p58<PITSLRE>, itd.).
[0081] Vektori predmetnog otkrića mogu dalje kodirati dodatne kodirajuće i nekodirajuće sekvence. Primeri dodatnih kodirajućih i ne-kodirajućih sekvenci mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, sekvence koje kodiraju dodatne polipeptidne tagove, intron, 5 ' i 3' UTR i slično. Primeri pogodnih polipeptidnih tagova mogu uključivati, ali nisu ograničeni, na bilo koju kombinaciju tagova za prečišćavanje, kao što su his-tagovi, flag-tagovi, proteini koji se vežu na maltozu i glutation-S-transferaze tagovi, detekcioni tagovi, kao što su tagovi koji mogu biti detektovani fotometrijski (npr. crveni fluorescentni protein, itd.) i tagovi koji imaju detektujuću enzimsku aktivnost (npr. alkalna fosfataza itd.), tagovi koji sadrže sekretorne sekvence, vođe sekvenci i/ili stabilizirajuće sekvence, mesta cepanja proteaze (npr. mesta cepanja furina, mesta cepanja TEV-a, mesta cepanja Trombina) i slično. U nekim izvođenjima, 5' i/ili 3' UTRs povećavaju stabilnost, lokalizaciju i/ili translacionu efikasnost polinukleotida. U nekim izvođenjima, 5' i/ili 3' UTRs su modifikovani da povećaju stabilnost, lokalizaciju i /ili translacionu efikasnost jednog ili više polinukleotida. U nekim izvođenjima, 5' i/ili 3' UTRs poboljšavaju nivo i/ili trajanje ekspresije proteina. U nekim izvođenjima, 5' i/ili 3'UTRs uključuju elemente (npr. jedno ili više miRNK mesta vezivanja itd.) koji mogu blokirati ili smanjiti ekspresiju transgena van cilja (npr., inhibiranjem ekspresije u specifičnim ćelijskim tipovima (npr. neuronskim ćelijama), u određeno vreme ćelijskog ciklusa, u određenim fazama razvoja itd.). U nekim izvođenjima, 5' i/ili 3' UTRs uključuju elemente (npr. jedno ili više mesta vezivanja miRNK itd.) koja mogu pojačati ekspresiju transgena u specifičnim tipovima ćelija.
Dostava Nosača
[0082] Određeni aspekti predmetnog otkrića se odnose na farmaceutsku kompoziciju sadržavajući dostavu nosača koji sadrži jedan ili više ovde opisanih polinukleotida. U nekim izvođenjima, nosač je pogodan za dostavu jednog ili više polinukleotida u jednu ili više ciljnih ćelija.
[0083] U pronalasku, nosač za dostavu virusa je herpes simpleks virus sa defektnom replikacijom. Nosači za dostavu herpes simpleks virusa mogu biti proizvedeni otkrivenim postupkom, na primer, u WO2015/009952. U nekim izvođenjima herpes simpleks virus sadrži modifikovanu ovojnicu. U nekim izvođenjima, modifikovana ovojnica sadrži jedan ili više (npr. jedan, dva, tri, četiri ili više) mutantnih glikoproteina herpes simpleks virusa. Primeri glikoproteina herpes simpleks virusa mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, glikoproteine gB, gD, gH i gL. U nekim izvođenjima, modifikovana ovojnica menja tropizam tkiva virusa herpes simpleks virusa u odnosu na divlji tip herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, herpes simpleks virus je virus herpes simpleksa tipa 1, virus herpes simpleksa tipa 2, od bilo kojih derivata od njih. U nekim izvođenjima virus je herpes simpleks virus tip 1. U nekim izvođenjima virus je virus herpes simpleks virus tip 2.
Farmaceutski prihvatljiv nosač
[0084] Određeni aspekti predmetnog otkrića se odnose na farmaceutsku kpmpoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je nosač dovoljan za topikalnu i/ili transdermalnu primenu/aplikaciju. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je nosač dovoljan za supkutanu i/ili intradermalnu primenu/aplikaciju. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je minimalno invazivan ili neinvazivan. Farmaceutski prihvatljivi nosači su generalno netoksični za primaoce u uptrebljenim dozama i koncentracijama i mogu uključivati, ali nisu ograničeni na: pufere kao što je fosfat, citrat i druge organske kiseline; antioksidante uključujući askorbinsku kiselinu i metionin; konzervanse (kao što je oktadecildimetilbenzil amonijum hlorid; heksametonijum hlorid; benzalkonijum hlorid; benzetonijum hlorid; fenol, butil ili benzil alkohol; alkil parabene kao što su metil ili propil paraben; katehol; resorcinol; cikloheksanol; 3-pentanol; i m-krezol); polipeptide male molekularne težine (manje od oko 10 ostataka); proteine, kao što su serum albumin, želatin, ili imunoglobulini; hidrofilne polimere, kao što je polivinilpirolidon; aminokiseline kao što su glicin, glutamin, asparagin, histidin, arginin ili lizin; monosaharide, disaharide i druge ugljene hidrate, uključujući glukozu, manozu ili dekstrine; helirajuće agense kao što je EDTA; šećere kao što su saharoza, manitol, trehaloza ili sorbitol; poliole kao što je glicerol (npr. formulacije koje uključuju 10% glicerola); kontra-jone koji formiraju so kao što je natrijum; metalne komplekse (npr. Zn-proteinski kompleksi); i/ili nejonske surfaktante kao što je polietilen glikol (PEG). Rasprava o farmaceutski prihvatljivim nosačima je dostupna u REMINGTON’S PHARMACEUTICAL SCIENCES (Mack Pub. Co., N.J. 1991).
[0085] U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač je pogodan za topikalne ili transdermalne aplikacije/primene. Primeri pogodnih nosača za upotrebu i u topikalnoj ili transdermalnoj aplikaciji/primeni uključuju, ali nisu ograničeni na, masti, paste, kreme, suspenzije, emulzije, pomade, gelove, praškove, losione, rastvore, sprejeve, flastere, nizove mikroigle i inhalante. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži jednu ili više masti, pastu, kremu, suspenziju, emulziju, masnu mast, gel, prah, losion, rastvor, sprej, i inhalant. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži mast. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži pastu. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži kremu. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži suspenziju. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži emulziju. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži gel. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži prah. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži losion. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži rastvor. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži sprej. U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži inhalant. U nekim izvođenjima, farmaceutski nosač sadrži flaster (npr. flaster koji se lepi za kožu). U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži nizove mikroigle. Metode za izradu i upotrebu mikroelemenata pogodnih za isporuku farmaceutskih kompozicija su generalno poznate u tehnici (Kim Y. i dr. "Microneedles for drug and vaccine delivery". Advanced Drug Delivery Reviews 2012, 64 (14): 1547-68).
[0086] U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži kombinaciju dva, tri, četiri, pet ili više različitih farmaceutski prihvatljivih nosača pogodnih za topikalne ili transdermalne aplikacije/primene.
[0087] U nekim izvođenjima, farmaceutski prihvatljiv nosač dalje sadrži jednu ili više dodatnih komponenti. Primeri dodatnih komponenti mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, vezivne agense (npr. preželatinizovani kukuruzni skrob, polivinilpirolidon ili hidroksipropil metilcelulozu itd.); punila-tzv. filere (npr. laktozu i druge šećere, mikrokristalnu celulozu, pektin, želatin, kalcijum sulfat, etil celulozu, poliakrilate ili kalcijum vodonik fosfat itd.); maziva (npr. magnezijum stearat, talk, silika, koloidni silicijum dioksid, stearinsku kiselinu, metalne stearate, hidrogenizovana biljna ulja, kukuruzni skrob, polietilen glikole, natrijum benzoat, natrijum acetat itd.); dezintegranse (npr. skrob, natrijum skrobni glikolat itd.); agense za vlaženje (npr. natrijum lauril sulfat itd.); rastvore soli; alkohole; polietilen glikole; želatin; laktozu; amilazu; magnezijum stearat; talk; silicijumsku kiselinu; viskozni parafin; hidroksimetilcelulozu; polivinilpirolidon; zaslađivače; arome; parfemske agense; bojila; ovlaživače; kreme za sunčanje; antibakterijske agense; agense koji mogu stabilizovati polinukleotide ili sprečiti njihovu razgradnju i slično.
[0088] Farmaceutske kompozicije i formulacije kao što je ovde opisano mogu biti pripremljene mešanjem nosača za dostavu sadržavajući jedan ili više polinukleotida opisanih ovde sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača.
Formulacije koje se koriste za in vivo primenu su generalno sterilne. Sterilnost se može lako postići, npr. filtracijom kroz sterilne filtracione membrane.
Metode tretmana
[0089] Predmetno otkriće se delom odnosi na farmaceutske kompozicije i metode upotrebe za obezbeđenje profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta. Primeri bolesti ili poremećaja na koži mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, buloznu epidermolizu, kancer kože, psorijazu, lihen planus, lupus, rozaceu, ekcem, kandidijazu kože, celulitis, impetigo, dekubitusne ulcere, erizipel, ihtiozu vulgaris, dermatomiozitis, akrodermatitis, stazni dermatitis, Nethertonov sindrom, buloznu epidermolizu simpleks (gen LAMB3), autozomnu recesivnu kongenitalnu ihtiozu, kserodermu pigmentozu i pemfigoid. U nekim izvođenjima bolest ili poremećaj kože je bulozna epidermoliza. U nekim izvođenjima, subjekt ima, ili ima rizik da se razvije jedan ili više simptoma bulozne epidermolize.
[0090] Ovde opisani polinukleotidi i farmaceutske kompozicije su korisni za obezbeđenje profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta, uključujući tretman jednog ili više simptoma bulozne epidermolize (npr. recesivne distrofične bulozne epidermolize, dominantne distrofične bulozne epidermolize itd.). Farmaceutske kompozicije predmetnog otkrića mogu biti primenjivane bilo kojom pogodnom metodom poznatim u tehnici, uključujući, bez ograničenja, oralnu primenu, sublingvalu primenu, bukalnu primenu, topikalnu primenu, rektalu primenu, inhalaciju, transdermalnu primenu, subkutanu injekciju, intradermalnu injekciju, intravensku (IV) injekciju, intraarterijsku injekciju, intramuskularnu injekciju, intrakardijalnu injekciju, intraosealnu injekciju, intraperitonealnu injekciju, transmukoznu primenu, vaginalnu primenu, intravitrealnu primenu, intraartikularnu primenu, peri-artikularnu primenu, lokalnu primenu, epikutanu primenu ili bilo koje kombinacije od njih. Farmaceutske kompozicije mogu biti isporučene pojedincu različitim putevima, uključujući, ali bez ograničenja na, subkutane, intradermalne, topikalne, transdermalne i transmukozne primene. Predmetno otkriće tako takođe obuhvata i metode dostavljanja bilo kojeg od polinukleotida ili farmaceutskih kompozicija opisanih ovde na pojedincu (kao što je pojedinac koja ima ili kod koga postoji rizik od razvoja bulozne epidermolize).
[0091] U nekim izvođenjima, obezbeđeno je profilaktičko, palijativno ili terapijsko ublažavanje rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta koje obuhvata primenu efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida i Lizil hidroksilaze 3 i ili polipeptida citoskeletnog 17 keratina tipa I u jednoj ili više ćelija subjekta. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana intradermalno i/ili supkutano. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjivana topikalno i/ili transdermalno. U nekim izvođenjima obezbeđeno je profilaktičko, palijativno ili terapijsko ublažavanje rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta koji obuhvata topikalno primenjivanje efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija subjekta. Farmaceutska kompozicija može biti bilo koja farmaceutska kompozicija opisana ovde. U nekim izvođenjima, pojedinac pati od bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac pati od distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac pati od dominantne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima, pojedinac pati od recesivne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se primenjuje jedan, dva, tri, četiri, pet ili više puta dnevno. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se primenjuje na jedno ili više zahvaćenih područja pojedinca. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompoziciija se primenjuje na jedno ili više područja pojedinca koja nisu pogođena.
[0092] U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija opisana ovde može biti korišćena za tretman ili ublažavanje jednog ili više simptoma bulozne epidermolize. Simptomi bulozne epidermolize (npr. recesivne distrofične bulozne epidermolize, dominantne distrofične bulozne epidermolize itd.) mogu uključiti, ali nisu ograničeni na plikove na koži (posebno plikove na rukama, stopalima, kolenima i laktovima), plikove na sluzokoži, ožiljke na koži, ožiljke na sluzokoži, eroziju kože, deformitet noktiju na prstima ruke i/ili noge, unutrašnje plikove (uključujući glasnice, jednjak i gornji disajni put), zadebljanje kože (posebno zadebljanje kože na dlanovima i stopalima), plikove na vlasištu, ožiljke na vlasištu, gubitak kose (alopeciju sa ožiljcima), pojavu tanke kože, atrofične ožiljke, milia-male ciste ispod epidermisa u ustima, zubna stanja (kao što je propadanje zuba i slabo formirana gleđ), deformacije zglobova, fuziju prstiju na rukama i nogama i disfagiju.
[0093] U nekim aspektima, obezbeđen je metod terapijskog tretiranja pojedinca koji boluje od bulozne epidermolize koja obuhvata primenjivanje efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjena intradermalno i/ili supkutano. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjena topikalno i/ili transdermalno. U nekim aspektima, obezbeđen je metod terapijskog tretiranja pojedinca koji boluje od bulozne epidermolize koji obuhvata topikalno primenjivanje efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. Farmaceutska kompozicija može biti bilo koja farmaceutska kompozicija opisana ovde. U nekim izvođenjima pojedinac boluje od distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac boluje od dominantne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac boluje od recesivne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje jedan, dva, tri, četiri, pet ili više puta dnevno. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje na jedno ili više zahvaćenih područja pojedinca. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje na jedno ili više područja pojedinca koja nisu pogođena.
[0094] U nekim aspektima, obezbeđen je metod profilaktičkog tretiranja pojedinca koji boluje od bulozne epidermolize, koji obuhvata primenjivanje efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjena intradermalno i/ili supkutano. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjena topikalno i/ili transdermalno. U nekim aspektima, obezbeđen je metod profilasktičkog tretiranja pojedinca koji boluje od bulozne epidermolize koji uobuhvata topikalno primenjivanje efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. Farmaceutska kompozicija može biti bilo koja farmaceutska kompozicija opisana ovde. U nekim izvođenjima pojedinac boluje od distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac boluje od dominantne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac boluje od recesivne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje jedan, dva, tri, četiri, pet ili više puta dnevno. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje na jedno ili više zahvaćenih područja pojedinca. U nekim izvođenjima,, farmaceutska kompozicija se daje na jedno ili više područja pojedinca koja nisu zahvaćena.
[0095] U nekim aspektima, obezbeđen je metod profilaktičkog tretiranja pojedinca kod kojeg postoji rizik od razvoja bulozne epidermolize, koji obuhvata
primenjivanje efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju /ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjena intradermalno i/ili supkutano. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija je primenjena topikalno i/ili transdermalno. U nekim aspektima, obezbeđen je metod profilaktičkog tretiranja pojedinca u riziku od bulozne epidermolize koji uobuhvata topikalno primenjivanje efikasne količine farmaceutske kompozicije sposobne poboljšanju, povećanju, proširenju i/ili dopunjavanju nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. Farmaceutska kompozicija može biti bilo koja farmaceutska kompozicija opisana ovde. U nekim izvođenjima pojedinac je u riziku od razvijanja distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac je u riziku od razvijanja dominantne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima pojedinac je u riziku od razvijanja recesivne distrofične bulozne epidermolize. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje jedan, dva, tri, četiri, pet ili više puta dnevno. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje na jedno ili više zahvaćenih područja pojedinca. U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija se daje na jedno ili više područja pojedinca koja nisu zahvaćena.
[0096] U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i /ili dopunjuje nivoe lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i/ili dopunjuje funkciju lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca. U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i/ili dopunjuje aktivnost lanca polipeptida Kolagen alfa-1 i/ili polipeptida, Lizil hidroksilaze 3 i/ili polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa I u jednoj ili više ćelija pojedinca.
[0097] U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i/ili dopunjuje učvršćivanje formacije fibrila pojedinca. U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i/ili dopunjuje organizaciju epitelialne bazalne membrane pojedinca. U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i/ili dopunjuje prianjanje baze epitela pojedinca. U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i/ili dopunjuje integritet dermoepidermalnog spajanja pojedinca. U nekim izvođenjima, pimenjivanje na pojedincu efikasne količine bilo koje od farmaceutskih kompozicija opisanih ovde poboljšava, povećava, proširuje, i/ili dopunjuje zarastanje rana kod pojedinca. Bez želje da se veže teorijom, veruje se da će pojaćanje, proširenje i/ili dopunjavanje nivoa lanca polipeptida Kolagena alfa-1 (VII) u jednoj ili više ćelija pojedinca, primenjivanjem jedne ili više farmaceutskih kompozicija opisanih ovde omogućiti povećanu proizvodnju i lučenje funkcionalnog lanca proteina Kolagen alfa-1 (VII) kod pojedinca. Bez želje da se veže teorijom, veruje se da će pojaćanje, proširenje i/ili dopunjavanje nivoa polipeptida Lizil hidroksilaze 3 u jednoj ili više ćelija pojedinca, primenjivanje jedne ili više farmaceutskih kompozicija opisanih ovde, povećati post-translacionu modifikaciju lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), nakon translacije, poboljšavajući proizvodnju i/ili lučenje funkcionalnog lanca proteina Kolagen alfa-1 (VII) kod pojedinca. Bez želje da se veže teorijom, dalje se vjeruje da će pojačanje, proširenje i/ili dopunjavanje nivoa lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), polipeptida Lizili hidroksilaze 3 u istoj ćeliji pojedinca, primenjivanje jedne ili više farmaceutskih kompozicija opisanih ovde (bilo da je kontaktiranje ćelije sa dva odvojena polinukleotida eksprimirajući polipeptide, kontaktiranje ćelije sa jednim susednim polinukleotidom odvojeno eksprimirajući dva polipeptida, ili kontaktiranje ćelije sa jednim susednim polinukleotidom eksprimirajući himerni polipeptid) imati aditivan efekat na pojačavanje proizvodnje i lučenje funkcionalnog lanca proteina Kolagen alfa-1 (VII). Bez želje da se veže teorijom, veruje se da će povećana proizvodnja i lučenje funkcionalnog lanca polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), omogućiti poboljšano učvrršćivanje formacije fibrila, pomažući organizaciji, stabilizaciji i pomoći u prianjanju epitelialne bazalne membrane kod pojedinca. Bez želje da se veže teorijom, veruje se da će na kraju to dovesti do povećane dermalno-epidermalne stabilnosti za one koji boluju od bulozne epidermolize, tretirnjem postojećih rana i sprečavajući ili odlagajući reformaciju rana na tretiranim područjima.
Izolovani Polinukleotidi i Polipeptidi
[0098] Određeni aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane polinukleotide koji sadrže polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane polinukleotide koji sadrže polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil-hidroksilazu 3. Ostali aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane polinukleotide koji sadrže polinukleotid koji kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I.
[0099] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane polinukleotide koji sadrže polinukleotid koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polinukleotid koji kodira polipeptid Lizil-hidroksilazu 3 odvojeno sa polinukleotidom koji kodira linker polipeptid. U nekim izvođenjima, izolovani polinukleotid kodira himerni polipeptid koji sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptid, i polipeptid Lizil-hidroksilazu 3.
[0100] U nekim izvođenjima, polinukleotid koji kodira linker polipeptid dalje sadrži polinukleotid koji kodira jedno ili više mesta cepanja furina. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina je kodirano uzvodno od linker polipeptida T2A. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od T2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od linker polipeptida P2A. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od P2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od linker polipeptida E2A. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od linker polipeptida E2A. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana uzvodno od F2A linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su kodirana nizvodno od F2A linker polipeptida.
[0101] Primer polinukleotida koji kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) je SEK ID BR: 1. Polinukleotidi koji kodiraju lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII)
takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom polipeptida citoskeletni 17 Keratin tip I.
[0102] Primer polinukleotida koji kodira polipeptid Lizil-hidroksilazu je 3 SEK ID BR: 3. Polinukleotidi koji kodiraju polipeptid Lizil-hidroksilazu 3 takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, na najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 3.
[0103] Primer polinukleotida koji kodira polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I je SEK ID BR: 29. Polinukleotidi koji kodiraju polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 29.
[0104] Primeri polinukleotida koji kodiraju linker polipeptid su SEK ID BR: 5, SEK ID BR: 7, SEK ID BR: 9, i SEK ID BR: 11. Polinukleotidi koji kodiraju linker polipeptid takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 5, SEK ID BR: 7, SEK ID BR: 9, ili SEK ID BR: 11.
[0105] Primeri polinukleotida koji kodiraju himerne polipeptide sadržavajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker polipeptid, i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 su SEK ID BR: 13, SEK ID BR: 15, SEK ID BR: 17, SEK ID BR: 19, SEK ID BR: 21, SEK ID BR: 23, SEK ID BR: 25, i SEK ID BR: 27. Polinukleotidi koji kodiraju himerne polipeptide takođe uključuju polinukleotide koji imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 13, SEK ID BR: 15, SEK ID BR: 17, SEK ID BR: 19, SEK ID BR: 21, SEK ID BR: 23, SEK ID BR: 25, ili SEK ID BR: 27.
[0106] Dalji aspekti predmetnog otkrića se odnose na jedan ili više (npr. jedan ili više, dva ili više, tri ili više itd.) izolovanih polinukleotida opisanih ovde sadržanih unutar vektora. U pronalasku, vektor je vektor herpes simpleks virusa sa defektnom replikacijom. U nekim izvođenjima, vektor sadrži jedan ili više (npr. jedan ili više, dva ili više, tri ili više, četiri ili više, pet ili više, itd.) transgena. Dalji aspekti predmetnog otkrića se odnose na metod proizvodnje nosača za dostavu virusa koji sadrži jedan ili više polinukleotida opisanih ovde. U nekim aspektima, metod sadrži kontaktiranje ćelije domaćina sa jednim ili više virusnih vektora sadržavajući jedan ili više izolovanih polinukleotida opisanih ovde, i prikupljanje nosača za dostavu virusa generisanih od strane ćelije domaćina. Metode kultivisanja ćelija i kontaktiranje ćelija sa jednim ili više virusnih vektora od interesa (npr. transdukcijom ili transfekcijom) su dobro poznati stručnjacima sa ovog područja tehnike.
[0107] U pronalasku, vektor herpes simpleks virusa je rekombinantni genom herpes simpleks virusa koji je konstruisan da smanji ili eliminiše ekspresiju jednog ili više toksičnih gena herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima rekombinantni genom herpes simpleks vurusa sadrži inaktivirajuću mutaciju. Primeri inaktivirajućih mutacija mogu uključiti, ali nisu ograničeni na, brisanja (npr. brisanje kodirajuće sekvence gena ili brisanje jednog ili više regulatornih elemenata gena za transkripciju), umetanje, točkaste-genske mutacije i preuređenja. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u jednom ili više neposrednih ranih gena. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u najmanje jednom, najmanje dva, najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet, najmanje šest, najmanje sedam, ili svih osam od ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 i UL55 gena herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genu ICP0. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u ICP4 genu. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genu ICP22. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genu ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP27 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP4, ICP22, ICP27, ICP47 i UL55. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju u genima ICP0, ICP4, ICP22 i ICP27. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom, rekombinantni HSV-2 genom, ili bilo koji derivati od njih. U nekim izvođenjima rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-1 genom. U nekim izvođenjima, rekombinantni genom herpes simpleks virusa je rekombinantni HSV-2 genom.
[0108] U nekim izvođenjima, izolovani rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više (npr. jedan ili više, dva ili više, tri ili više, četiri ili više, pet ili više, itd.) polinukleotida (npr. transgena) predmetnog otkrića unutar jednog, dva, tri, četiri, pet, šest, sedam ili više virusnih genskih lokusa. Primeri pogodnih virusnih lokusa mogu uključiti, bez ograničenja, ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 i UL55 genskog lokusa herpes simpleks virusa. U nekim izvođenjima, izolovani rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar jednog ili više virusnih ICP4 genskih lokusa (npr. rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom od ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u drugim ICP4 lokusima, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom od ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira LH3 u drugim ICP4 lokusima, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom od ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u drugim ICP4 lokusima itd.). U nekim izvođenjima, izolovani rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar virusnog UL41 genskog lokusa. U nekim izvođenjima, izolovani rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar virusnog ICP47 genskog lokusa. U nekim izvođenjima, izolovani rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar jednog ili više virusnih ICP4 genskih lokusa, i jedan ili više polinukleotida predmetnog otkrića unutar virusnog genskog lokusa UL41 (npr. rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira LH3 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira Col7 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira Col7 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira LH3 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira Col7 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira LH3 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa i i polinukleotid koji kodira LH3 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira Col7 u UL41 lokusu, rekombinantni virus koji nosi polinukleotid koji kodira KRT17 u jednom ili oba ICP4 lokusa i polinukleotid koji kodira KRT17 u UL41 lokusu itd.).
[0109] Određeni aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane polipeptide koji sadrže lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII). Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane polipeptide koji sadrže polipeotid Lizil hidroksilazu 3. Ostali aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane polipeptide koji sadrže polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I.
[0110] Drugi aspekti predmetnog otkrića se odnose na izolovane himerne polipeptide koji sadrže lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 izdvojene linker polipeptidom.
[0111] U nekim izvođenjima, linker polipeptid dalje sadrži jedno ili više mesta cepanja furina. U nekim izvođenjima, aminokiselinska sekvenca mesta cepanja furina je ista ili suštinski slična sa sekvencom mesta kanonskog cepanja furina (Arg-X-(Arg/Lys)-Arg). U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina se nalaze na N-terminusu linker polipeptida. U nekim izvođenjima, jedno ili više mesta cepanja furina su na C-terminusu linker polipeptida. U nekim izvođenjima, linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, jedno ili više mesta cepanja furina i T2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima, linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, T2A linker polipeptid i jedno ili više mesta cepanja furina. U nekim izvođenjima, linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, jedno ili više mesta cepanja furina i P2A linker polipeptid. U nekim izvođenjima, linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, P2A-linker polipeptid i jedno ili više mesta cepanja furina. U nekim izvođenjima, linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, jedno ili više mesta cepanja furina i E2A-linker polipeptid. U nekim izvođenjima linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, E2A-linker polipeptid i jedno ili više mesta cepanja furina. U nekim izvođenjima, linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, jedno ili više mesta cepanja furina i F2A-linker polipeptid. U nekim izvođenjima, linker polipeptid sadrži, od N-terminusa do C-terminusa, F2A-linker polipeptid i jedno ili više mesta cepanja furina.
[0112] U nekim aspektima, izoliovani polipeptid sadržavajući lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 2. Izolovani polipeptidi mogu takođe sadržavati lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu imajući najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 2.
[0113] U nekim aspektima, izolovani polipeptid sadržavajući polipeptid Lizil hiidroksilazu 3 sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 4. Izolovani polipeptidi mogu takođe sadržavati polipeptid Lizili hidroksiksilazu 3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu imajući najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnost sa sekvencom SEK ID BR: 4.
[0114] U nekim aspektima, izolovani polipeptid sadržavajući polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I sadrži aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 30. Izolovani polipeptidi mogu takođe sadržavati polipeptid citoskeletni 17 Keratin tip I koji sadrži aminokiselinsku sekvencu imajući najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 30.
[0115] U nekim aspektima, himerni polipeptid sadrži lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) sadržavajući aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 2. Himerni polipeptidi mogu takođe sadržavati lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu imajući najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 2.
[0116] U nekim aspektima, himerni polipeptid sadrži polipeptid Lizil hidroksilazu 3 sadržavajući aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 4. Himerni polipeptidi mogu takođe sadržavati polipeptid Lizil hidroksilazu 3 sadržavajući aminokiselinsku sekvencu koja ima najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 4.
[0117] U nekim aspektima, himerni polipeptid sadrži linker polipeptid sadržavajući aminokiselinsku sekvencu SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10 ili SEK ID BR: 12. Himerni polipeptidi mogu takođe sadržavati linker polipeptid sadržavajući aminokiselinsku sekvencu koja ima najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 6, SEK ID BR: 8, SEK ID BR: 10 ili SEK ID BR: 12.
[0118] U nekim aspektima, himerni polipeptid sadrži aminokiselinsku sekvencu
SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24, SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR: 28. Himerni polipeptidi mogu takođe
biti aminokiselinske sekvence koje imaju najmanje 50%, najmanje 55%, najmanje 60%, najmanje 65%, najmanje 70%, najmanje 75%, najmanje 80%, najmanje 85%, najmanje 90%, najmanje 91%, najmanje 92%, najmanje 93%, najmanje 94%, najmanje 95%, najmanje 96%, najmanje 97%, najmanje 98%, najmanje 99%, ili 100% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 14, SEK ID BR: 16, SEK ID BR: 18, SEK ID BR: 20, SEK ID BR: 22, SEK ID BR: 24, SEK ID BR: 26 ili SEK ID BR: 28.
Ćelije domaćina
[0119] Određeni aspekti predmetnog otkrića se odnose na jednu ili više ćelija domaćina sadržavajući vektor koji sadrži polinukleotid opisan ovde. U nekim aspektima, vektor je bilo koji od ovde opisanih izolovanih rekombinantnh vektora herpes simpleks virusa. U nekim aspektima, ćelije domaćina su bakterijske ćelije (npr. ćelije E. koli, itd.). U nekim aspektima, ćelije domaćina su gljivične ćelije (npr. S. cerevisiae ćelije itd.). U nekim aspektima, ćelije domaćina su ćelije insekata (npr. S2 ćelije itd.). U nekim izvođenjima ćelije domaćina su ćelije sisara. U nekim izvođenjima ćelije domaćine su ćelije iz ćelijske linije. Primeri pogodnih ćelija domaćina ili ćelijskih linija mogu uključiti, ali nisu ograničeni na, 293, HeLa, SH-Sy5y, Hep G2, CACO-2, A549, L929, 3T3, K562, CHO-K1, MDCK, HUVEC, Vero, N20, COS-7, PSN1, VCaP, CHO ćelije. U pronalasku, vektor je vektor herpes simpleks virusa sa defektnom replikacijom. U nekim aspektima, ćelija domaćina je komplementirajuća ćelija domaćina. U nekim aspektima, komplementirajuća ćelija domaćina eksprimira jedan ili više gena koji su inaktivirani u bilo kojem od ovde opisanih virusnih vektora. U nekim aspektima, komplementirajuća ćelija domaćina je kontaktirana sa rekombinantnim genomom herpes simpleks virusa opisanim ovde. U nekim aspektima, kontaktiranje komplementirajuće ćelije domaćina sa rekombinantnim genomom herpes simpleks virusa opisanim ovde rezultira proizvodnjom virusa koji sadrži jedan ili više ovde opisanih vektora. U nekim aspektima, virus je prikupljen iz supernatanta kontaktirane ćelije domaćina. Metode generisanja virusa kontaktiranjem komplementirajuće ćelije domaćina sa rekombinantnim herpes simpleks virusom su generalno opisane u WO2015/009952.
Proizvodi za proizvodnju ili setovi
[0120] Određeni aspekti predmetnog otkrića se odnose na proizvode za proizvodnju ili komplet koji sadrži farmaceutsku kompoziciju opisanu ovde. U nekim aspektima, proizvod za proizvodnju ili komplet sadrži uložak za pakovanje obuhvatajući uputstva za primenjivanje farmaceutske kompoizicije radi obezbeđenja profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože kod subjekta.
[0121] U nekim aspektima, nosač za dostavu koji sadrži jedan ili više polinukleotida opisanih ovde i farmaceutski prihvatljiv nosač su u istom spremniku ili zasebnom spremniku. Pogodni spremnici uključuju, na primer, boce, posude, kesice i špriceve. Spremnik može biti formiran od različitih materijala, kao što su staklo, plastika (kao što je polivinil hlorid ili poliolefin) ili metalne legure (kao što je nerđajući čelik ili tzv. "hastelloy"). U nekim aspektima, spremnik sadrži oznaku na ili je povezana sa spremnikom, pri čemu nalepnica pokazuje uputszvo za upotrebu. Proizvodni proizvod ili komplet može dalje uključiti druge materijale poželjne iz komercijalnog i korisničkog stanovišta, uključujući ostale pufere, razblaživače, filtere i slično.
[0122] Specifikacija se smatra dovoljnom da omogući stručnjaku sa ovog područja tehnike da primeni pronalazak. Različite modifikacije pronalaska, pored ovde prikazanih i opisanih, postaće očigledne stručnjacima sa ovog područja tehnike iz prethodnog opisa i spadaju u obim priloženih zahteva.
PRIMERI
[0123] Predmetno otkriće će biti u potpunosti razumljivo pozivanjem na sledeći primer. Međutim, to ne bi trebalo tumačiti kao ograničenje obima predmetnog otkrića. Podrazumeva se da su ovde opisani primeri i izvođenja samo za ilustrativne svrhe i da će se razne modifikacije ili promene u njihovom svetlu predložiti stručnjacima sa ovog područja tehnike i treba da budu obuhvaćeni u okviru primene ove prijave i obima priloženih zahteva.
Primer 1: Generisanje modifikovanih vektora herpes simpleks virusa i prouzvodnja/izolovanje virusa koji sadrže vektore
[0124] Da bi se napravili modifikovani vektori genoma herpes simpleks virusa sposobni eksprimiranju jednog ili više transgena u ciljnoj ćeliji sisara, genom herpes simpleksa virusa (SL.1A) je modifikovan tako da inaktivira neposredne rane gene ICP0, ICP4 i ICP27, dok je neposredni rani gen ICP22 modifikovan tako da uključuje heterologni, inducibilni promoter. Ovo smanjuje toksičnost genoma u ćelijama sisara. Zatim se u modifikovani genom herpes virusa ubacuje kaseta restriktivnim kloniranjem. Kaseta sadrži heterologni promoter sposoban eksprimiranju transgena u ciljnoj ćeliji sisara. Promoter je operativno povezan sa sekvencom nukleinske kiseline koja kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), kao i nizvodnim regulatornim elementima (SL. 1B) osiguravajući pravilnu proizvodnju mRNK. Alternativno, kaseta uključuje dva transgena, od kojih svaki ima svoj heterologni promoter koji je operativno povezan sa nukleinskom kiselinom koja kodira ili polipeptid lanca Kolagen alfa-1 (VII) ili polipeptid Lizil hidroksilazu 3. Alternativno, kaseta uključuje dva transgena, od kojih svaki ima svoj heterologni promoter koji je operativno povezan na nukleinsku kiselinu koja kodira ili lanac polipeptida Kolagena alfa-1 (VII) ili polipeptid Lizil hidroksilazu 3. Transgeni su kodirani bilo na istom lancu DNK (SL.1C), ili na suprotnim lancima DNK u antisenskoj orijentaciji (SL. 1D). Povezivanje svakog transgena sa vlastitim promoterom i regulatornim elementima omogućava nezavisnost ekspresije svake kodirajuće sekvence na zasebnim mRNK transkriptima. Eksprimiranje transgena iz različitih promotera omogućava sposobnost operativnog povezivanja kodirajućih sekvenci na različitim tipovima promotera, što može podstaći ekspresiju transgena na različitim nivoima, u različito vreme ćelijskog ciklusa, u različitim tipovima ćelija ili pod kontrolom različitih induktora ili represora.
[0125] Takođe je konstruisan modifikovani genom virusa herpesa koji uključuje kasetu koja eksprimira jednu mRNK koja kodira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 odvojene unutrašnjim mestom ulaskau ribozom (Sl. 1E). Ovo omogućava približno ekvimolarnu proizvodnju svakog polipeptida kada je eksprimiran u ciljnoj ćeliji. Konačno, konstruisan je modifikovani genom virusa herpesa koji uključuje kasetu koja eksprimira himerni polipeptid. Ovaj himerni polipeptid uključuje, od N-terminusa do C-terminusa, lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), linker peptid koji se može odcepiti i polipeptid Lizil hidroksilazu 3 (SL.1F).
[0126] Konstruisani su dodatni modifikovani genomi virusa herpesa koji uključuju dve kasete, od kojih svaka eksprimira lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII), gde je svaka kaseta umetnuta u kopiju lokusa gena ICP4 (SL. 2B-2G) od divljeg tipa genoma herpes simpleks virusa (SL. 2A). Ovi dodatni rekombinantni genomi virusa herpesa su konstruisani sa raznim kombinacijama brisanja/modifikacija gena virusa herpesa.
[0127] Konstruisan je genom rekombinantnog herpes virusa koji sadrži brisanje kodirajućih sekvenci obe kopije gena ICP4, kao i brisanje kodirajućih sekvenci gena ICP27 i UL55. Ovi rekombinantni virusi su dalje modifikovani da sadrže inaktivirajuće mutacije u promoterskim regijama gena ICP22 i ICP47 tako da ICP22 i ICP47geni nisu eksprimirani normalnom kinetikom (SL.2B).
[0128] Konstruisani su dalji rekombinantni herpes simpleks virusi koji uključuju ekspresione kasete za lanac polipeptida Kolagen alfa-1 (VII) u oba lokusa herpes ICP4 gena. Ovi rekombinantni virusi uključuju: viruse koji sadrže brisanje kodirajućih sekvenci gena ICP22 i obe kopije gena ICP4 (SL.2C); brisanje kodirajućih sekvenci gena ICP0 i obe kopije gena ICP4 (SL. 2D); brisanje kodirajućih sekvenci gena ICP0 i ICP22 i obe kopije gena ICP4 (SL.2E); brisanje kodirajućih sekvenci gena ICP0, ICP22 i ICP27, i obe kopije gena ICP4 (SL.2F); i brisanje kodirajućih sekvenci gena ICP0, ICP22, ICP27 i UL55 i obe kopije gena ICP4 (SL. 2G). Dodatni vektori su konstrusani na osnovu vektora prikazanih na Sl.2C-2G koji dalje sadrže jedan ili više transgena koji kodiraju jedan ili više dodatnih efektora (npr. LH3, KRT17) u ICP0 i/ili UL41 lokusima.
[0129] Ovi modifikovani vektori genoma herpes simpleks virusa su transfektovani u konstruisane Vero ćelije koje su modifikovane da eksprimiraju gen herpes virusa. Ove konstruisane Vero ćelije izlučuju herpes simpleks virus sa defektnom replikacijom, sa modifikovanim genomima upakovanim u supernatant. Supernatant je zatim sakupljen, koncentrovan i sterilno filtriran kroz 5 µm filter.
Primer 2: Spašavanje ekspresije Col7 sa defektnom replikacijom HSV-1
[0130] Sledeći primer opisuje kopnstrukciju herpes simpleks virusa tipa 1 sa defektnom replikacijom, modifikovanog da eksprimira humani gen COL7A1, i upotrebu takvog virusnog vektora za spašavanje nekoliko oštećenja opaženih u ćelijama izolovanim od RDEB pacijenata.
Metode
Ćelije i ćelijske kulture
[0131] Izolovani su normalni i RDEB humani dermalni fibroblasti i keratinociti kao što je prethodno opisano (NG, Y. Z. et al. (2012) Cancer Res. 72: 3522-3534; Rheinwald, J. G. and Green, H. (1975) Cell 6: 331-42). Ćelije su kultivisane standardnim tehnikama.
Konstrukcija KB103
[0132] Vektor KB103 je generisan iz D3GFP, okosnice vektora HSV-1 sa defektnom replikacijom koja nosi GFP umesto virusnog ICP4. Sekvenca GFP-a u D3GFP je zamenjena sa kodirajućom sekvencom humaog COL7A1 korišćenjem transfer plazmida kloniranjem COL7A1 u EcoRI mesto ICP4 rekombinacionog plazmida pSASB3. Mešovita transfekcija/infekcija COL7A1 koja sadrži transfer plazmid i D3GFP vektor je izvedena na VeroD ćelijama. Dobijeni plakovi koji nisu eksprimirali GFP su izolovani i testirani od strane Vestern blot-a za ekspresiju Col7 proteina.
Prečišćavanje virusa
[0133] KB103 virus je prečišćen prema standardnim tehnikama (Videti Diefenbach, R. and Fraefel, C. Herpes Simplex Virus. New York: Humana Press, 2014).
Virusne infekcije
[0134] Ćelije su zasejane u duplikatima ili triplikatima u pločicama sa šest jažica pri približno 50% prekrivenosti površine posude za kulturu koja je prekrivena adhezivnim ćelijama jedan dan pre virusne infekcije. Dodatna jažica je postavljena paralelno za brojanje ćelije i određivanje MOI. 24 sata posle zasejavanja ćelije, ćelije iz jedne jažice su tripsinizirane i prebrojene da bi se izračunao MOI, i virusne zalihe su odmrznute i razblažene u medijumu za ćelijsku kulturu da bi se postigao željeni MOI. Medijum za kulturu je aspiriran iz svake jažice koja je bila inficirana i u svaku jažicu je dodato 500 µL medijuma (ili kontrolnog medijuma) koji sadrži KB 103. Ploče su inkubirane na 37°C sa 5-7.5% CO2tokom 1.5-2 sata sa povremenim ljuljanjem, svakih 15-20 minuta, zatim je dodato 1.5-2 mL kompletnog medijuma za ćelijsku kulturu u svaku jažicu, i ploče su inkubirane tokom 24 -72 sata na 37°C. Posle inkubacije, ćelije i supernatanti su sakupljeni i obrađeni za analizu.
mRNK kvantifikacija
[0135] Col7 transkripti su amplicifirani iz RNK izolovane iz primarnih RDEB keratinocita posle infekcije korišćenjem SYBR PCR test (Sybr Select Master Mix, Life Technologies) prema protokolu proizvođača. Nivoi transkripta Col7 su normalizovani na nivoima β -aktin transkripta.
Vestern blot analiza
[0136] Ćelijski lizati su generisani iz ćelija 48 sati nakon infekcije, i zapadni blotovi su izvedeni prema standardnim tehnikama koristeći sedeća antitela: zečje anti-humano poliklonalno antitelo Col7 (Sigma, Cat. # HPA042420), mišje anti-humano GAPDH antitelo (Santa Cruz Biotechnology, Cat. # sc-365062), zečje anti-LH3 antitelo (Protein Tech, Cat. # 11027-1-AP), i mišje anti-TSPl antitelo (Santa Cruz Biotechnology, Cat. # sc-59887).
Imunofluorescencija
[0137] Ćelje su posađene na poklopce pre infekcije, fiksirane 48 sati nakon infekcije i obojene sa primarnim zečjim anti-humanim poliklonalnim antitelom Col7 (Sigma, Cat. # HPA042420), isprane i dalje obojene sa fluorescentno obeleženim anti-zečjim sekundarnim antitelom (Invitrogen, Cat. 3 A11012). Ćelijski nukleusi su obojeni sa DAPI korišćenjem standardnih tehnika.
Ćelijska adhezija
[0138] Ploče sa 96 jažica su obložene sa 10, 20 ili 50 µg/mL Kolagena 1 repa pacova (Marathon Laboratory Supply) ili huimanim fibronektinom (Sigma-Aldrich) u reakcijskoj zapremini od 100 µl na 4°C preko noći, zatim isprane sa PBS-om i blokirane sa PBS-om 0.1% BSA tokom 1 sata na 37°C. Na ploče su dodati tzv."mock" (kontrolni) inficirani ili KB 103 inficirani RDEB keratinociti (2.4<∗>10<4>ćelija u 100 µL DMEM/HamF12 0.1% BSA) i inkubirani na 37°C tokom 40-90 minuta. Jažice su isprane tri puta sa PBS-om da bi se uklonile sve nepovezane ćelije, i adhezivne ćelije su fiksirane sa PFE tokom 20 minuta. Fiksirane ćelije su zatim tretirane sa 70% -tnim etanolom, obojene sa kristal violet, rastvorene u 100% -tnom etanolu i kvantifikovane merenjem apsorbancije na 630 nm.
Kožne ekvivalentne (SE) organotipske kulture
[0139] Kožna ekvivalentna organotipska kultura sastavljena od RDEB fibroblasta i keratinocita je korišćena za procenu ekspresije Col7 u zoni bazalne membrane (BMZ). Ukratko, RDEB fibroblasti (2<∗>10<5>ćelija po jažici) su ugrađeni u matriks fibrinskog gela u ploče sa šest jažica i inkubirani u DMEM 10% serumu koji sadrži askorbinsku kiselinu i aprotinin tokom 24 sata na 37°C i 5% CO2Zatim su zasejani RDEB keratinociti (1<∗>10<6>ćelija po jažici) na matriksu, gajeni do ušća u DMEM/F-12 keratinocitni medijum koji sadrži 50 mg/La skorbinske kiseline i uzgajani na vazdušnoj tečnosti. Dva dana nakon uzimanja, KB 103 virus je dodat u kulture (na MOI od 3) i inkubiran tokom 1.5 sata. Nakon inkubacije, kulture su isprane i inkubirane tokom 5-14 dana da se favorizuje stratifikacija i diferencijacija u epitel. Kožni ekvivalenti (SEs) su ručno odvojeni od ploča i ugrađeni u jedinjenje optimalne temperature sečenja, smrznuti u tečnom azotu i isečeni na 6 mm odsečke za imunofluorescentno bojenje sa monoklonalnim anti-Col7 antitelom.
Rezultati
KB103 farmakologija u normalnim i RDEB ćelijama
[0140] Preduzeti su brojni ex vivo pristupi radi dostave humanog gena COL7A1 u primarne ćelije izolovane od RDEB pacijenata u pokušaju da isprave nedostatke Col7 (Ortiz-Urda, S. et al. (2003) J. Clin. Invest. 111(2) 251-5; Woodley, D.T. et al. (2003) J Invest. Dematol. 121 (5) 1021-8). Iako je uspešna u postizanju trajne korekcije glavnih karakteristika bolesti, ex vivo strategija za dostavu gena za lečenje bulozne epidermolize ima niz ključnih nedostataka, uključujući visoke troškove, loše uzimanje transplantata, hirurško čišćenje rane, kompleksno vezivanje i negu rane i veliki potencijal za posthiruršku infekciju. Atraktivni alternativni način genske terapije je upotreba virusnih ili nevirusnih vektora za dostavu genskih proizvoda. Međutim, ne-virusni vektori koji koriste plazmid DNK trpe vrlo nisku efikasnost transfera-prenošenja gena kada se ubrizgavaju ili lokalno-topikalno primenjuju, dok najčešće korišćeni virusni vektori u ispitivanjima humane genske terapije (retrovirusni vektori) ne inficiraju ćelije koje se ne dele. Ovo je problematično za dostavu gena na kožu jer bi za retrovirusnu gensku terapiju bila potrebna manipulacija tkivom (kao što je ranjavanje) radi stvaranja odgovarajuće populacije deljenja ćelija. Adenovirusni vektori velikog kapaciteta mogu dostaviti transkripcione jedinice veličine genoma i preživeti u transduciranim ćelijama kroz dugo vreme, ali toksičnost i imunogenost adenovirusnih čestica, kao i zahtevi za pomoćnim virusom tokom proizvodnje vektora, ostaju značajne prepreke za njihovu upotrebu u strategijama humane genske terapije. Iako su HSV vektori sa defektnom replikacijom u brojnim predkliničkim studijama korišćeni kao penosni nosači, ne postoje pretklinički dokazi koji podržavaju upotrebu virusnih vektora zasnovanih na HSV-u za buloznu epidermolizu ili druge dermatološke aplikacije.
[0141] U tu svrhu razvijen je herpes simpleks virus tip-1 (HSV-1) sa defektnom replikacijom kodirajući humani gen COL7A1 razvijen kao novi vektor koristan za tretman genskom terapijom DEB bolesnika. Virus HSV-1 je modifikovan tako da prenosi kompletne delecije virusnih gena ICP4, ICP27 i UL55, pri čemu je brisanje ICP4 rezultiralo uklanjanjem uzlaznih sekvenci promotera koji pokreću transkripciju neposrednih ranih virusnih gena ICP22 i ICP47. Virus je dalje modifikovan tako da uključuje humani citomegalovirus (HCMV), neposrednu ranu promotersku kasetu COL7A1, vođenu promoterom, kodiran unutar obe kopije izbrisanih ICP4 lokusa, što je rezultiralo vektorom HSV-1 sa defektnom replikacijom, nazvanim KB103, pogodnim za dostavu humanog COL7A1 na ciljne ćelije (SL.3).
[0142] Da bi se testirala sposobnosti KB 103 za dostavu i ekspresiju Col7 u humanim ćelijama i da se reši nedostatak Col7 kod RDEB pacijenata, izolovani su humani dermalni fibroblasti i keratinociti dobijeni od zdravih pojedinaca, kao i pojedinaca koji su oboleli od RDEB i ove primarne ćelije su bile zaražene sa KB103 na raznim MOIAs. 24-72 sata nakon infekcije, ekspresija gena COL7A1 je izmerena PCR-om u stvarnom vremenu u transduciranim ćelijama, dok je ekspresija Col7 proteina analizirana paralelno i analizom vestern blota i imunofluorescencijom.
[0143] Utvrđene su povećana ekspresija gena COL7A1 zavisna od doze u RDEB keratinocitima (SL. 4A) i fibroblastima (SL. 4B) inficiranih sa KB103. KB103 infekcija je povećala ekspresiju gena COL7A1 za približno 7.5 savijanja, 12.5 savijanja i 25 savijanja u RDEB keratinocitima inficiranim na MOI od 0.3, 1, i 3, respktivno (Sl. 4A). Iznenađujuće, primećene su još drastičnije promene u ekspresiji gena COL7A1 kod zaraženih RDEB fibroblastima. Dok su infekcije sa MOI od 0.1 i 0.3 pokazale umereno povećanje ekspresije gena COL7A1, izmereno je povećanje oko 30 savijanja ekspresije gena COL7A1 za RDEB fibroblaste inficirane sa MOI od 1, dok je primećeno povećanje 60 savijanja kod ovog tipa inficirane ćelije sa MOI od 3. Ovi podaci su pokazali da se ekspresija gena COL7A1 masovno povećala u primarnim ćelijama RDEB posle infekcije sa KB103.
[0144] Shodno tome, snažna ekspresija proteina Col7 takođe je primećena u ćelijama inficiranim sa KB103. Otkrivena je ekspresija proteina Col7 i u normalnim i u RDEB keratinocitima (SL. 5A) i fibroblastima (SL. 5B) 48 sati nakon infekcije sa KB 103 sa MOI od 0.3, 1 i 3, sa očiglednim povećanjem ekspresije proteina Col7 zavisne od doze primećene na višim titrima virusa. Ekspresija Col7 je primećena i u supernatantima i u ćelijskim lizatima iz inficiranih ćelija. Iznenađujuće, RDEB fibroblasti inficirani na MOI od 0.3 su pokazali više nivoe Col7 nego što je uočeno kod neinficiranih normalnih fibroblasta (SL. 5B), sugerišući potpuno spašavanje ekspresije Col7 u RDEB fibroblastima korišćenjem KB 103, čak i kod niskih titra virusa. Nisu primećeni očigledni efekti na ćelijsku morfologiju primenom visokih virusnih doza (MOI od 3). Pored toga, u ovim eksperimentima su utvrđeni negativni uticaji na proliferaciju ćelija fibroblasta ili keratinocita korišćenjem visokih doza KB 103, kao što je određeno ekspresijom GAPDH.
[0145] U skladu sa eksperimentima opisanim iznad, potvrđeno je snažno i od doze zavisno povećanje ekspresije proteina Col7 u normalnim i RDEB ćelijama inficiranim sa KB103, kao što je dokazano imunofluorescentnom detekcijom ekspresije proteina Col7 (SL.6). Kao što se očekivalo, nije otkriven protein Col7 u neinficiranim humanim dermalnim fibroblastima ili keratinocitima; otkriven je ograničen protein Col7 u neinficiranim normalnim keratinocitima i fibroblastima. Međutim, infekcija sa KB 103 je sposobna spasavanju i ekspresiji proteina Col7 u RDEB fibroblastima i keratinocitima na ili iznad nivoa posmatranih u neinficiranim normalnim ćelijama. Pored toga, izračunato je da je efikasnost infekcije KB103 (pri MOI od 3) bila ≥ 95% na osnovu procene tri ili više nezavisnih ploča za svaku inficiranu replikaciju, pokazujući da je KB103 efikasno dostavio i eksprimirao ekspresionu kasetu COL7A1. Uzeti zajedno, ovi podaci sugerišu da je KB103 mogao dostaviti i eksprimirati COL7A1 u normalnim i RDEB primarnim ćelijama i da KB103 dobro podnosi i humane dermalne fibroblaste i keratinocite.
Funkcionalna procena KB103 u RDEB ćelijama
[0146] Funkcionalnost humanog proteina Col7 eksprimiranog iz KB 103 je sledeća ispitivana u humanim dermalnim fibroblastima i keratinocitima. Prvo, efekat ekspresije Col7 na nivoima Lizil hidroksilaze 3 je testiran u KB 103-inficirane ćelije. LH3 je potreban za taloženje i organizaciju ekstracelularnog matriksa, i objavljeno je da su nivoi LH3 smanjeni u koži RDEB (Watt, S. A. et al. (2015) PLoS One 10(9): p. e0137639). Nije opažen LH3 kod neinficiranih RDEB keratinocita u odnosu na normalne keratinocite (SL.7, redovi 1 do 5), u skladu sa prethodnom studijom. Međutim, neočekivano, opaženo je povećanje nivoa LH3 zavisnih od doze, istovremeno sa pojačanom ekspresijom Col7 proteina kod RDEB keratinocita inficiranih sa KB103 (SL. 7), sugerišući da je KB 103 sposoban spasavanju ne samo ekspresije Col7 proteina, već i LH3 ekspresije u RDEB ćelijama.
[0147] Zatim je ispitivan efekat ekspresije Col7 na nivoima TSP-1. TSP-1 je negativni regulator angiogeneze, i za njega se navodi da je povećan u RDEB fibroblastima (Ng, Y. Z. et al. (2012) Cancer Res. 72(14): p. 3522-34). U skladu sa prethodnim studijama, primećeni su viši nivoi TSP-1 kod neinficiranih RDEB nasuprot normalnim humanim dermalnim fibroblastima (SL. 8, redovi 1 i 4). Iznenađujuće, ekspresija proteina TSP-1 je snažno inhibirana nakon infekcije normalnim ili RDEB fibroblastima inficiranim sa KB103 (SL. 8). Ovi podaci sugerišu da KB103 ne samo da može povećati nivoe Col7 i LH3 u inficiranim ćelijama, nego takođe može promovisati angiogenezu inhibiranjem negativnog regulatora TSP-1.
[0148] Konačno, testirana je sposobnost KB 103 da povećava ćelijsku adheziju RDEB keratinocita na kolagen 1 ili Fibronektin. Primećeno je povećanje ćelijske adhezije u zavisnosti od doze na Kolagen 1 i Fibronektin kod RDEB keratinocita inficiranih sa KB103 na raznim MOIs (SL. 9 i 9B). Infekcija RDEB keratinocita kod svih ispitivanih MOI je pokazala veću adheziju na jažice tretirane sa svim koncentracijama oba supstrata u odnosu na neinficirane (kontrolne) ćelije. Uzeti zajedno, ovi podaci pokazuju da je humani Col7 protein eksprimiran iz KB103 funkcionalan u transduciranim ćelijama. Funkcionalnost ovog proteina je naznačena njegovom sposobnošću da poveća nivoe proteina LH3, smanji nivoe proteina TSP-1 i poboljša ćelijsku adheziju i na Kolagenu 1 i Fibronektinu u odnosu na uzorke inficirane od tzv. "mock"-a.
KB103 farmakologija i toksičnost u RDEB organotipskim kulturama
[0149] Organotipska kultura ekvivalenta kože (SE) koja se sastoji od RDEB fibroblasta i keratinocita je koriščena za procenu ekspresije proteina Col7 izraženog iz KB103 u zoni bazalne membrane (BMZ). RDEB fibroblasti i keratinociti su bili lažno inficirani ili inficirani sa KB 103 na MOI od 3 i inkubirani 5 dana da bi se favorizovala stratifikacijaraslojavanje i diferencijacija u epitelu. Dobijeni kožni ekvivalenti (SEs) su izolovani, presečeni i obojeni radi imunofluorescencije za otkrivanje ekspresije proteina Col7. Ekspresija Col7 je otkrivena ovim organotipskim kulturama iz ćelija inficiranih sa KB 103, i iniciacija depozicije proteina Col7 na BMZ je uočena u odnosu na kontrolne tzv."mock" inficirane kontrole (SL. 10). Ovi podaci sugerišu da ne samo KB 103 može efikasno dostaviti COL7A1 i eksprimirati Col7 protein, već se Col7 protein počeo organizovati u organotipske kulture slične obrascu organizacije koji se očekuje za Col7 protein in vivo.
[0150] U celini, ovi eksperimenti su otkrili, po prvi put, da se vektor HSV-1 sa defektnom replikacijom može upotrebiti kao nosač za dostavu ekspresione kasete COL7A1 u primarne ćelije izolovane od pacijenata sa buloznom epidermolizom. Štaviše, ovi podaci su otkrili da protein Col7 može biti eksprimiran na visokim nivoima iz ove ekspresione kasete u dva različita tipa humanih ćelija kod zdravih pojedinaca, kao i kod osoba koje pate od dermatološkog poremećaja. Konačno, pokazalo se da je protein Col7 funkcionalan, jer je bio sposoban da poveća ekspresiju LH3, smanjujući ekspresiju TSP-1, povećavajući ćelijsku adheziju Kolagena 1 i Fibronektina i može da se organizuje u organotipskim kulturama u obrascu sličnom organizaciji Col7 in vivo. Bez želje da se vežu za teoriju, ovde prikazani podaci sugerišu da KB 103 i drugi HSV-1 vektori mogu biti korisni kao nove in vivo strategije lečenja bulozne epidermolize i/ili drugih dermatoloških aplikacija.
Primer 3: In vivo ekspresija Col7 korišćenjem HSV-1 sa defektnom replikacijom
[0151] Sledeći primer opisuje upotrebu herpes simpleks virusa tipa 1, sa defektnom replikacijom (modifikovanog da sadrži humani transgen COL7A1) kao prenosnog nosača za ekspresiju humanog proteina Col7 in vivo.
Metode
Konstrukcija i prečišćavanje KB103
[0152] KB103 virus je konstruisan i prečišćen kao što je opisano u Primeru 2 iznad.
Virusne infekcije
[0153] KB103 virus je dostavljen u divlj tip tzv." Balb/c ili skh1-elite" miša intradermalnom injekcijom na sledeći način: svakoj životinji je ubrizgano jednom na 2-4 mesta u bočnoj regiji životinje sa 1x10<8>jedinica koje formiraju plak (PFU) virus/mesto u zapremini od 50µL. Životinje su žrtvovane 48 sati posle primene KB 103, i mesta ubrizgavanja su sakupljena i obrađena ili za qPCR u realnom vremenu ili analizom imunofluorescencije.
[0154] Za qPCR analizu, kožno tkivo je secirano do fascije korišćenjem alata za biopsiju probijanja od 6 mm. Biopsija je podeljena na dva dela, i svaki komad je zamrznut tečnim azotom. Izolovana je ukupna RNK i DNK od polovine biopsije korišćenjem tzv. "Qiagen AllPrep DNA/RNA" kompleta.
[0155] Za imunofluorescentnu analizu, kružno područje promera približno jednog cm je izrezano od kože na mestu ubrizgavanja, prepolovljeno i postavljeno u OCT tako da je centralni deo kružnog područja bio okrenut prema gore. Pripremljeni uzorci su zamrznuti uronjeni u izopentan ohlađen tečnim azotom i čuvani na -80°C.
mRNK kvantifikacija
[0156] Col7 transkripti su amplifikovani iz RNK izolovani iz mišjeg dermalnog tkiva posle ubrizgavanja KB 103 korišćenjem protokola u 2 koraka: 1) sinteza cDNK je izvedena korišćenjem superskripta III kompleta za prvu sintezu lanca (Thermofisher, Cat. # 18-080-051), i 2) QPCR amplifikacija je izvedena korišćenjem tzv." Quantitect Probe PCR kit (Qiagen, Cat. # 204345)" prema protokolu proizvođača. U svakoj reakciji je korišćeno 100ng cDNK. Nivoi transkripta Col7 su normalizovani na nivoima GAPDH transkripta.
Kvantifikacija kopije genoma
[0157] Broj kopije KB103 virusnih genoma u KB103 injektiranih miševa je bio kvantifikovan sa qPCR amplifikacijom korišćenjem tzv. "Quantitect Probe PCR kit (Qiagen Cat. # 204345)". U svakoj reakciji je korišćeno 100 ng mišje genomske DNK, i mišji genomski GAPDH je korišćen kao konrola.
Imunofluorescencija
[0158] Odseci tkiva sa miševa injektiranih sa KB103 su fiksirani i naknadno obojeni sa primarnim zečjim antihumanim poliklonalnim antitelom Col7 (Sigma, Cat. # HPA042420), isprani i dalje obojeni sa fluorescentno obeleženim sekundarnim anti-zečijim antitelom (Invitrogen, Cat. 3 A11012). Ćelijska jedra su obojena sa DAPI korišćenjem standardnih tehnika.
Rezultati
[0159] Da bi se testirala sposobnost KB 103 da uspešno dostavi i eksprimira humani Col7 protein in vivo, miševima su intradermalno davani virusi KB103. Procenjen je broj kopija virusnog genoma u inficiranom mišjem tkivu i primećena je dostava visokih nivoa (> 1.000.000 kopija virusnog genoma/100ng mišje DNK) od KB103 virusnog genoma kod miševa (SL. 11). Zatim je ispitivana sposobnost virusa da eksprimira humani Col7 in vivo. Kvantifikacija humanih Col7 transkripata kod KB 103 inficiranih miševa je izmerena i procenjena u poređenju sa ekspresijom kontrolnog gena domaćeg miša. Primećeni su visoki nivoi transkripta humanog Col7 u inficiranom mišjem tkivu (SL. 11), sugerišući da su dostavljeni virusni genomi sposobni da uspešno eksprimiraju svoj humani genski teret. Konačno, sposobnost KB103 da eksprimira Col7 protein je testirana kod inficiranih miševa. Dermalno tkivo miša je izrezano od mišića nakon infekcije, i ekspresija proteina Col7 je procenjena imunohistohemijskim bojenjem mišjeg tkiva. Nakon bojenja tkiva otkriveni su visoki nivoi humanog proteina Col7 (SL. 12). Iznenađujuće, ne samo da je humani Col7 protein eksprimiran iz virusa KB 103 u mišjem dermisu, već je primećena i depozicija humanog Col7 u zoni bazalne membrane kod miševa inficiranim KB 103 (SL. 12). Bez želje da se veže za teoriju, ovi podaci sugerišu da: 1) virus KB 103 može uspešno zaraziti relevantno tkivo in vivo, isporučujući velik broj kopija genoma ovim tkivima; 2) dostava virusa KB 103 relevantnom tkivu rezultira u značajnoj ekspresiji kodiranih humanih gena na ovom virusu i 3) KB 103 ne samo da uspešno eksprimira humani Col7 protein in vivo, već je ovaj protein osposobljen za početak organizacije (npr. u zoni bazalne membrane) na način koji sugeriše njegovu sposobnost spašavanja endogenih oštećenja Col7 kod obolelih pojedinaca.

Claims (14)

Patentni zahtevi
1. Farmaceutska kompozicija koja sadrži:
a) herpes simpleks virus (HSV) sa defektnom replikacijom sadržavajući rekombinantni genom herpes simpleks virusa, pri čemu rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena koji kodiraju polipeptid izabran iz grupe koja se sastoji od lanca polipeptida Kolagen alfa-1(VII), polipeptida Lizil hidroksilaze 3 i polipeptida citoskeletnog 17 Keratina tipa 1; i
b) farmaceutski prihvatljiv nosač,
pri čemu je rekombinantni genom herpes simpleks virusa konstruisan da smanji ili eliminiše ekspresiju jednog ili više toksičnih HSV gena.
2. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojem od patentnog zahteva 1, pri čemu je herpes simpleks virus (HSV) virus herpes simpleksa tipa 1.
3. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva 1 ili 2, pri čemu rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži inaktivirajuću mutaciju.
4. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 3, pri čemu je inaktivirajuća mutacija u jednom ili više neposrednih ranih HSV gena.
5. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 3, pri čemu je inaktivirajuća mutacija u najmanje jednom genu herpes simpleks virusa izabranom iz grupe koja se sastoji od ICP0, ICP4, ICP22, ICP27, ICP47, tk, UL41 i UL55.
6. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 5, pri čemu rekombinantni genom herpes simpleks virusa sadrži jedan ili više transgena unutar jednog ili više virusnih genskih lokusa, opciono pri čemu jedan ili više virusnih genskih lokusa su jedan ili više od virusnih genskih lokusa ICP4.
7. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 6, pri čemu je farmaceutski prihvatljiv nosač pogodan za topikalnu primenu, transdermalnu primenu, supkutanu injekciju, intradermalnu injekciju, transmukoznu primenu ili bilo koju kombinaciju od njih.
8. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojim od patentnih zahteva od 1 do 7, pri čemu lanac polipeptida Kolagena alfa-1 (VII) ima najmanje 80% identičnosti sa sekvencom SEK ID BR: 2.
9. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 8, pri čemu farmaceutski prihvatljiv nosač sadrži fosfatni pufer.
10. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojem od patentnih zahteva od 1 do 9, za upotrebu u metodi pružanja profilaktičkog, palijativnog ili terapijskog ublažavanja rane, poremećaja ili bolesti kože subjekta.
11. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 10, pri čemu je farmaceutska kompozicija pogodna za topikalnu primenu, transdermalnu primenu, subkutanu injekciju, intradermalnu injekciju, transmukoznu primenu ili bilo koju kombinaciju od njih na subjektu.
12. Farmaceutska kompozicija prema bilo kojem od patentnog zahteva 10 ili zahteva 11, pri čemu je bolest ili poremećaj kože jedan ili više od, bulozne epidermolize, karcinoma kože, psorijaze, lihen planusa, lupusa, rozacee, ekcema, kožne kandidijaze, celulitisa, impetiga, dekubitusnog ulcera, erizipela, ihtioze vulgaris, dermatomiozitisa, akrodermatitisa, staznog dermatitisa, Nethertonovog sindroma, bulozne epidermolize simpleks (gen LAMB3), autozomne recesivne kongenitalne ihtioze, kseroderm pigmentozuma i pemfigoida.
13. Kompozicija za upotrebu prema patentnom zahtevu 10 ili zahtevu 11, pri čemu je bolest ili poremećaj kože bulozna epidermoliza (EB).
14. Kompozicija za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 10 do 13 pri čemu je subjekt čovek.
RS20200669A 2016-04-08 2016-12-28 Kompozicije za upotrebu u metodama za tretman rana, poremećaja i bolesti kože RS60410B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662320316P 2016-04-08 2016-04-08
EP16826873.8A EP3377637B1 (en) 2016-04-08 2016-12-28 Compositions for use in methods for the treatment of wounds, disorders, and diseases of the skin
PCT/US2016/068974 WO2017176336A1 (en) 2016-04-08 2016-12-28 Compositions and methods for the treatment of wounds, disorders, and diseases of the skin

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS60410B1 true RS60410B1 (sr) 2020-07-31

Family

ID=57822104

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20200669A RS60410B1 (sr) 2016-04-08 2016-12-28 Kompozicije za upotrebu u metodama za tretman rana, poremećaja i bolesti kože

Country Status (22)

Country Link
US (7) US9877990B2 (sr)
EP (2) EP3712273A1 (sr)
JP (4) JP6970086B2 (sr)
KR (2) KR20250133993A (sr)
CN (1) CN109072255A (sr)
AU (5) AU2016401692B2 (sr)
CA (1) CA3017487A1 (sr)
CL (3) CL2018002814A1 (sr)
CY (1) CY1123024T1 (sr)
DK (1) DK3377637T3 (sr)
ES (1) ES2796488T3 (sr)
HR (1) HRP20200853T1 (sr)
HU (1) HUE049237T2 (sr)
LT (1) LT3377637T (sr)
MX (2) MX394867B (sr)
PL (1) PL3377637T3 (sr)
PT (1) PT3377637T (sr)
RS (1) RS60410B1 (sr)
SG (1) SG11201808314QA (sr)
SI (1) SI3377637T1 (sr)
SM (1) SMT202000305T1 (sr)
WO (1) WO2017176336A1 (sr)

Families Citing this family (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP7381190B2 (ja) 2014-12-26 2023-11-15 エモリー・ユニバーシテイ Ｎ４－ヒドロキシシチジン及び誘導体並びにそれに関連する抗ウイルス用途
RS60410B1 (sr) 2016-04-08 2020-07-31 Krystal Biotech Inc Kompozicije za upotrebu u metodama za tretman rana, poremećaja i bolesti kože
CN110312506A (zh) * 2016-11-14 2019-10-08 密歇根大学董事会 用于阻挡紫外线辐射的组合物和方法
EP3568474A1 (en) 2017-01-10 2019-11-20 Intrexon Corporation Modulating expression of polypeptides via new gene switch expression systems
PT3706762T (pt) 2017-12-07 2024-12-05 Univ Emory N4-hidroxicitidina e derivados e utilizações antivirais relacionadas com os mesmos
EP3775236A1 (en) 2018-04-12 2021-02-17 Krystal Biotech, LLC Compositions and methods for the treatment of autosomal recessive congenital ichthyosis
US10786438B2 (en) * 2018-04-27 2020-09-29 Krystal Biotech, Inc. Recombinant nucleic acids encoding cosmetic protein(s) for aesthetic applications
CA3103374A1 (en) * 2018-06-29 2020-01-02 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for antibody delivery
AU2019346549B2 (en) * 2018-09-24 2024-09-12 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for the treatment of Netherton Syndrome
CA3266235A1 (en) * 2018-09-26 2025-11-29 Krystal Biotech, Inc. COMPOSITIONS AND METHODS FOR THE TREATMENT OF SKIN DISEASES
KR20210116531A (ko) * 2019-01-18 2021-09-27 고꾸리쯔 다이가꾸 호우징 오사까 다이가꾸 영양 장애형 표피 수포증 치료약
EP3921334A1 (en) * 2019-02-08 2021-12-15 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for delivering cftr polypeptides
CN114401769A (zh) * 2019-03-27 2022-04-26 菲尼克斯组织修复公司 生产胶原蛋白7组合物的系统和方法
CA3149164A1 (en) 2019-09-03 2021-03-11 Suma Krishnan Compositions and methods for the treatment of congenital ichthyoses
CN112724225B (zh) * 2019-10-28 2023-09-26 中国医学科学院药物研究所 一种角蛋白bd-6、制法和其药物组合物与用途
CA3160199A1 (en) 2019-12-20 2021-06-24 Suma Krishnan Compositions and methods for gene delivery to the airways and/or lungs
BR112023020209A2 (pt) 2021-04-02 2023-12-19 Krystal Biotech Inc Genoma do vírus do herpes recombinante, vírus do herpes, composição farmacêutica, uso do vírus do herpes ou da composição farmacêutica, método para expressar, realçar, aumentar, ampliar e/ou suplementar os níveis de um polipeptídeo imunomodulatório, método para prover alívio profilático, paliativo ou terapêutico, e, método para tratar câncer
MX2024004434A (es) 2021-10-12 2024-07-09 Phoenix Tissue Repair Inc Terapia de reemplazo de proteínas con colágeno 7.
CN117143223B (zh) * 2022-08-23 2024-03-08 山西锦波生物医药股份有限公司 一种生物合成人体结构性材料的制备方法
WO2024214081A1 (en) 2023-04-13 2024-10-17 Krystal Biotech, Inc. Methods and compositions for the treatment of conditions involving the eye
WO2025193129A1 (ru) * 2024-03-15 2025-09-18 Общество С Ограниченной Ответственностью "Валента-Интеллект" Средство для лечения буллезных генодерматозов
CN119751645B (zh) * 2024-12-31 2026-02-13 北京华熙荣熙生物技术研究有限公司 一种重组ⅶ型胶原蛋白及其制备方法和应用
CN119685407A (zh) * 2025-02-25 2025-03-25 北京唯源立康生物科技股份有限公司 工程化单纯疱疹病毒载体及其用途

Family Cites Families (50)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5672344A (en) * 1987-12-30 1997-09-30 The Regents Of The University Of Michigan Viral-mediated gene transfer system
US5658724A (en) 1992-07-31 1997-08-19 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Herpes simplex virus strains deficient for the essential immediate early genes ICP4 and ICP27 and methods for their production, growth and use
WO1998044938A1 (en) * 1997-04-10 1998-10-15 University Of Southern California Modified proteins which bind extracellular matrix components
US5998174A (en) 1997-05-12 1999-12-07 University Of Pittsburgh Of The Commonwealth System Of Higher Education Multigene vectors
GB9715085D0 (en) * 1997-07-18 1997-09-24 Jahoda Amanda J Gene therapy vehicle
US6106826A (en) * 1997-12-17 2000-08-22 Wisconsin Alumni Research Foundation Replication competent, avirulent Herpes simplex virus as a vector for neural and ocular gene therapy
GB9801930D0 (en) * 1998-01-29 1998-03-25 Univ London Mutant herpes simplex viruses and uses thereof
AU4680699A (en) * 1998-06-12 1999-12-30 Aradigm Corporation Methods of delivering aerosolized polynucleotides to the respiratory tract
WO2000040734A1 (en) * 1998-12-31 2000-07-13 Arch Development Corporation Recombinant herpes simplex virus useful for treating neoplastic disease
US20040214783A1 (en) * 2002-05-08 2004-10-28 Terman David S. Compositions and methods for treatment of neoplastic disease
GB9930418D0 (en) * 1999-12-22 2000-02-16 Neurovex Ltd Replication incompetent herpes virus vectors
AU2001235829A1 (en) * 2000-03-02 2001-09-12 Isis Innovation Limited Mutations in spink5 responsible for netherton's syndrome and atopic diseases
AU1788502A (en) * 2000-11-28 2002-06-11 Univ Chicago Genetically engineered herpes virus for the treatment of cardiovascular disease
EP1381280B1 (en) * 2001-03-27 2011-05-11 Catherex, Inc. Viral vectors and their use in therapeutic methods
CA2476724A1 (en) * 2002-03-01 2003-09-12 Sloan-Kettering Institute For Cancer Research Prevention of recurrence and metastasis of cancer
US20040253606A1 (en) 2002-11-26 2004-12-16 Protein Design Labs, Inc. Methods of detecting soft tissue sarcoma, compositions and methods of screening for soft tissue sarcoma modulators
WO2006002394A2 (en) * 2004-06-24 2006-01-05 New York University Avirulent oncolytic herpes simplex virus strains engineered to counter the innate host response
AU2005302408B2 (en) * 2004-10-28 2012-08-09 The Government of the United States of America as represented by the Department of Veterans Affairs Peripherally delivered glutamic acid decarboxylase gene therapy for spinal cord injury pain
SG158153A1 (en) * 2004-12-21 2010-01-29 Musc Found For Res Dev Compositions and methods for promoting wound healing and tissue regeneration
US20070066552A1 (en) * 2005-01-21 2007-03-22 Introgen Therapeutics, Inc. Topical administration permitting prolonged exposure of target cells to therapeutic and prophylactic nucleic acids
CA2609142C (en) * 2005-05-27 2016-02-09 Fondazione Centro San Raffaele Del Monte Tabor Therapeutic gene vectors comprising mirna target sequences
EP1885186B1 (en) * 2005-06-01 2015-09-02 California Institute Of Technology Method of targeted gene delivery using viral vectors
US8703703B2 (en) * 2006-12-20 2014-04-22 University Of Central Flordia Research Foundation, Inc. MCPIP as wound therapy
WO2008106646A2 (en) * 2007-03-01 2008-09-04 Introgen Therapeutics, Inc Methods and formulations for topical gene therapy
WO2008143875A1 (en) * 2007-05-14 2008-11-27 University Of Pittsburgh - Of The Commonwealth System Of Higher Education Targeted delivery of glycine receptors to excitable cells
US20100081707A1 (en) * 2008-02-21 2010-04-01 Ali Robin R Devices and methods for delivering polynucleotides into retinal cells of the macula and fovea
EP3756684A1 (en) * 2009-05-22 2020-12-30 Genocea Biosciences, Inc. Vaccines against herpes simplex virus type 2: compositions and methods for eliciting an immune response
CN102212559B (zh) 2011-04-14 2014-04-09 郑州威瑞生物技术有限公司 一种重组的hsv扩增子载体及其用途
ES2670495T3 (es) * 2011-10-11 2018-05-30 Inserm - Institut National De La Santé Et De La Recherche Médicale Tratamiento de salto de exones para epidermólisis ampollosa distrófica
GB201202561D0 (en) 2012-02-15 2012-03-28 Univ Dundee Treatment of skin disorders
JP2015520754A (ja) * 2012-05-18 2015-07-23 オタゴ イノベーション リミテッド 創傷治癒のための組合せ治療および組成物
WO2014134412A1 (en) * 2013-03-01 2014-09-04 Regents Of The University Of Minnesota Talen-based gene correction
RS57739B1 (sr) * 2013-03-14 2018-12-31 Translate Bio Inc Kompozicije cftr irnk i postupci i upotrebe u vezi sa njima
JP6726824B2 (ja) 2013-07-17 2020-07-22 ユニヴァーシティ オヴ ピッツバーグ オヴ ザ コモンウェルス システム オヴ ハイアー エデュケーション 効率的な遺伝子送達用途のための非毒性ｈｓｖベクター及びその製造のための補完細胞
BR112016009465A8 (pt) * 2013-10-28 2018-01-30 Univ Pittsburgh Commonwealth Sys Higher Education vetor de hsv oncolítico.
EP3099801B1 (en) * 2014-01-31 2020-03-18 Factor Bioscience Inc. Synthetic rna for use in the treatment of dystrophic epidermolysis bullosa
GB2526339A (en) * 2014-05-21 2015-11-25 Imp Innovations Ltd Lentiviral vectors
ES2833425T3 (es) * 2014-07-16 2021-06-15 Roussy Inst Gustave Combinación de virus oncolítico con moduladores de punto de control inmunitario
WO2016049183A1 (en) * 2014-09-24 2016-03-31 Aerpio Therapeutics, Inc. Ve-ptp extracellular domain antibodies delivered by a gene therapy vector
RU2718062C2 (ru) * 2014-10-31 2020-03-30 Сэндзю Фармасьютикал Ко., Лтд. Новое лечение роговицы с применением ламинина
CA2976376A1 (en) * 2015-02-13 2016-08-18 Factor Bioscience Inc. Nucleic acid products and methods of administration thereof
WO2016191684A1 (en) * 2015-05-28 2016-12-01 Finer Mitchell H Genome editing vectors
CA3008264A1 (en) * 2015-12-14 2017-06-22 The Trustees Of The University Of Pennsylvania Gene therapy for ocular disorders
KR20180136435A (ko) * 2016-01-27 2018-12-24 온코루스, 인크. 종양 살상형 바이러스 벡터 및 그의 용도
WO2017165806A1 (en) * 2016-03-25 2017-09-28 Periphagen, Inc. Hsv vectors for delivery of nt3 and treatment of cipn
WO2017165813A1 (en) * 2016-03-25 2017-09-28 Periphagen, Inc. High-transducing hsv vectors
RS60410B1 (sr) 2016-04-08 2020-07-31 Krystal Biotech Inc Kompozicije za upotrebu u metodama za tretman rana, poremećaja i bolesti kože
EP3775236A1 (en) 2018-04-12 2021-02-17 Krystal Biotech, LLC Compositions and methods for the treatment of autosomal recessive congenital ichthyosis
US10786438B2 (en) 2018-04-27 2020-09-29 Krystal Biotech, Inc. Recombinant nucleic acids encoding cosmetic protein(s) for aesthetic applications
CA3103374A1 (en) 2018-06-29 2020-01-02 Krystal Biotech, Inc. Compositions and methods for antibody delivery

Also Published As

Publication number Publication date
US20190160122A1 (en) 2019-05-30
CL2023000743A1 (es) 2023-09-29
JP6970086B2 (ja) 2021-11-24
NZ778381A (en) 2025-07-25
AU2016401692B2 (en) 2019-10-03
US9877990B2 (en) 2018-01-30
EP3377637A1 (en) 2018-09-26
JP7480105B2 (ja) 2024-05-09
HUE049237T2 (hu) 2020-09-28
MX2018012135A (es) 2019-03-28
CL2018002814A1 (es) 2019-02-15
PT3377637T (pt) 2020-06-17
US20180169160A1 (en) 2018-06-21
CY1123024T1 (el) 2021-10-29
US12582684B2 (en) 2026-03-24
US20170290866A1 (en) 2017-10-12
JP2022023174A (ja) 2022-02-07
US20220273737A1 (en) 2022-09-01
SG11201808314QA (en) 2018-10-30
MX394867B (es) 2025-03-24
CN109072255A (zh) 2018-12-21
AU2025200334B2 (en) 2025-04-17
US11865148B2 (en) 2024-01-09
US11185564B2 (en) 2021-11-30
AU2025200334A1 (en) 2025-02-20
KR20250133993A (ko) 2025-09-09
MX2022006072A (es) 2022-06-14
AU2016401692A1 (en) 2018-09-27
NZ746213A (en) 2021-08-27
AU2025204575B2 (en) 2026-03-26
US20230149486A1 (en) 2023-05-18
PL3377637T3 (pl) 2020-09-07
US10441614B2 (en) 2019-10-15
AU2025204575A1 (en) 2025-07-10
SMT202000305T1 (it) 2020-07-08
AU2019280069A1 (en) 2020-01-16
KR20180128016A (ko) 2018-11-30
JP2025185268A (ja) 2025-12-19
WO2017176336A1 (en) 2017-10-12
EP3377637B1 (en) 2020-03-18
EP3712273A1 (en) 2020-09-23
ES2796488T3 (es) 2020-11-27
JP7815178B2 (ja) 2026-02-17
JP2023118838A (ja) 2023-08-25
LT3377637T (lt) 2020-07-10
AU2022204729B2 (en) 2025-02-06
HRP20200853T1 (hr) 2020-08-21
JP2019513689A (ja) 2019-05-30
CL2021000881A1 (es) 2021-09-10
AU2022204729A1 (en) 2022-07-21
US20200101123A1 (en) 2020-04-02
US10155016B2 (en) 2018-12-18
AU2019280069B2 (en) 2022-04-07
SI3377637T1 (sl) 2020-08-31
US20230414686A1 (en) 2023-12-28
CA3017487A1 (en) 2017-10-12
DK3377637T3 (da) 2020-05-18

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11865148B2 (en) Methods of delivering transgenes to the eye
JP7602999B2 (ja) 審美的用途のための美容用タンパク質をコードする組換え核酸
US20250277237A1 (en) Compositions and Methods for the Treatment of Congenital Ichthyoses
AU2019346461B2 (en) Compositions and methods for the treatment of skin diseases
NZ746213B2 (en) Compositions and methods for the treatment of wounds, disorders, and diseases of the skin