RS61559B1

RS61559B1 - Anti-lag3 antitela i antigen-vezujući fragmenti

Info

Publication number: RS61559B1
Application number: RS20210287A
Authority: RS
Inventors: Linda Liang; Laurence Fayadat-Dilman; Rene De Waal Malefyt; Gopalan Raghunathan
Original assignee: Merck Sharp & Dohme
Priority date: 2014-08-19
Filing date: 2015-08-17
Publication date: 2021-04-29
Also published as: IL250566A0; US20220257762A1; AU2020230256A1; MX2017002230A; TW201938589A; MD4716B1; IL297053A; UA119571C2; TW201920284A; EP3182999A1; TW201613979A; IL250566B2; TWI673286B; NI201700018A; PE20170288A1; MX2019005426A; CA3082655A1; CN107001470B; AU2015305770A1; CA2957275A1

Description

OBLAST PRONALASKA

Predmetni pronalazak se odnosi na anti-LAG3 antitela kao i na upotrebu antitela prema predmetnom pronalasku u lečenju bolesti kao što su kancer i infekcija.

OSNOVA PRONALASKA

LAG3 (CD223) je molekul na ćelijskoj površini eksprimiran na akriviranim T ćelijama (Huard et al. Immunogenetics 39:213-217, 1994), NK ćelijama (Triebel et al. J Exp Med 171:1393-1405, 1990), B ćelijama (Kisielow et al. Eur J Immunol 35:2081-2088, 2005) i plazmacitoidnim dendritskim ćelijama (Workman et al. J Immunol 182:1885-1891, 2009) koje igraju važnu ulogu u funkciji ovih limfocitnih subsetova. Pored toga, interakcija između LAG3 i njegovog glavnog liganda, klase II MHC, veruje se da ima ulogu u modulaciji funkcije dendritskih ćelija (Andreae et al. J Immunol 168:3874-3880, 2002). Novije prekliničke studije su dokumentovale ulogu za LAG-3 u iscrpljivanju CD8 T-ćelija (Blackburn et al. Nat Immunol 10:29-37, 2009).

Kao sa hroničnom virusnom infekcijom, tumor antigen-specifične CD4<+>i CD8<+>T ćelije ispoljavaju umanjenu efektorsku funkciju i iscrpljeni fenotip okarakterisan smanjenom proizvodnjom proinflamatornih citokina i hiporesponsivnošću na antigenu re-stimulaciju. Ovo je posredovano preko ćelijskih ekstrinzičkih mehanizama, kao što su regulatorne T-ćelije (Treg), i ćelijski intrinzički mehanizmi, kao što su inhibitorni mehanizmi koji su ushodno regulisani na iscrpljenim, tumor-infiltrirajućim limfocitima (TIL). Ovi inhibitorni mehanizmi predstavljaju veliku barijeru efikasnom antitumorskom imunitetu.

LAG je eksprimiran na tolerisanim TIL, što sugeriše da oni doprinose tumorskiposredovanoj supresiji imunog sistema. Inhibicija LAG3 može dovesti do pojačane aktivacije antigen-specifičnih T ćelija od kojih se može dobiti terapeutska korist. U stanju tehnike postoji potreba za visoko efikasnim terapeutskim antitelima koji antagonizuju aktivnost LAG3 koja se mogu koristiti za generisanje snažnog imunog odgovora na tumore.

KRATAK OPIS PRONALASKA

Predmetni pronalazak daje antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., antitelo, antigen-vezujući fragment, monoklonska antitela, poliklonska antitela, multispecifično antitelo, humanizovano antitelo, izolovano antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, humanizovano antagonističko antitelo, potpuno humano antitelo, himerno antitelo i kamelizovano antitelo sa jednim domenom) koje sadrži varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u aminokiselinama 21-131 prema SEQ ID NO: 126 i varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u aminokiselinima 1-119 prema SEQ ID NO: 116.

U nekim primerima izvođenja, antitelo ili antigen-vezujući fragment sadrži imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 116.

U nekim primerima izvođenja, antitelo se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu se svaki imunoglobulin lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126, i pri čemu se svaki imunoglobulin teškog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence varijabilnog domena teškog lanca navedene u aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 116 i humanog IgG4 konstantnog regiona. U nekim primerima izvođenja, konstantni region humanog IgG4 sadrži S228P mutaciju prema EU sistemu.

U nekim primerima izvođenja, antitelo se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu svaki imunoglobulin lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i svaki imunoglobulin teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 116.

U nekim primerima izvođenja, antitelo se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu se svaki imunoglobulin lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i svaki imoglobulin teškog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 116.

U nekim primerima izvođenja, antitelo se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu se svaki imunoglobulin lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i svaki imunoglobilin teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 116.

U nekim primerima izvođenja, antitelo ili antigen-vezujući fragment je eksprimiran iz ćelije jajnika kineskog hrčka.

U nekim primerima izvođenja, antitelo ili antigen-vezujući fragment je glikozilovan sa jednim ili više od CHO N-vezanih glikana koji su G0-F, G1-F, G2-F, G0, G1, G2 ili Man5. Predmetni pronalazak takođe daje kompoziciju koja sadrži antitelo ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač. U nekim primerima izvođenja, kompozicija dodatno sadrži anti-PD-1 antitelo. U nekim primerima izvođenja, anti-PD-1 antitelo je pembrolizumab.

Predmetni pronalazak takođe daje injekcioni uređaj koji sadrži antitelo ili antigenvezujući fragment ili kompoziciju prema pronalasku.

Predmetni pronalazak takođe daje polinukleotid koji kodira: varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca ili imunoglobulin lakog lanca i imunoglobulin teškog lanca antitela ili antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku.

Predmetni pronalazak takođe daje vektor koji sadrži polinukleotid prema pronalasku. Predmetni pronalazak takođe daje ćeliju domaćina koja sadrži antitelo ili antigenvezujući fragment, polinukleotid ili vektor prema pronalasku.

Predmetni pronalazak takođe daje postupak za proizvodnju antitela ili njegov antigenvezujući fragment prema pronalasku koji sadrži:

a. kultivisanje ćelije domaćina koja sadrži polinukleotid koji kodira imunoglobulin lakog lanca i imunoglobulin teškog lanca antitela, ili varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca antigen-vezujućeg fragmenta u medijumu kulture pod uslovima povoljnim za ekspresiju polinukleotida; i

b. izborno, izolovanje antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta iz ćelije domaćina i/ili medijuma kulture.

U nekim primerima izvođenja, ćelija domaćin je ćelija jajnika kineskog hrčka.

Predmetni pronalazak takođe daje antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji specifično vezuje za humani LAG3 koji je proizvod gore navedenog postupka.

Predmetni pronalazak takođe daje antitelo ili antigen-vezujući fragment ili kompoziciju prema pronalasku, za upotrebu u lečenju humanog tela terapijom.

Predmetni pronalazak takođe daje antitelo ili antigen-vezujući fragment ili kompoziciju prema pronalasku, za upotrebu u lečenju kancera.

Ovde je takođe otkriveno antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji se specifično vezuje za LAG3 (npr., humani i/ili Macaqa fascicularis, npr., SEQ ID NOs: 443 ili 445) koje sadrži: varijabilni region imunoglobulina teškog lanca koji ima najmanje 78.99% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinima 1-119 prema SEQ ID NO: 106; i/ili varijabilni region imunoglobulina lakog lanca koji ima identičnost aminokiselinske sekvence najmanje 78.38% sa aminokiselinama 1-111 prema SEQ ID NO: 224.

Anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment mogu da sadrže imunoglobulin lakog i teškog lanca (npr., varijabilne domene teškog i lakog lanca ili CDR regione teškog i lakog lanca) antitela Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9 kao što je prikazano ovde.

Ovde je takođe otkriveno antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koje se specifično vezuje za LAG3 (npr., humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna) koje sadrži (a) CDR1, CDR2 i CDR3 VLdomena imunoglobulinskog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 7, 17, 27, 37, 57, 59, 61, 63, 65, 101, 126, 130, 132, 136, 138, 208, 210, 224, 226, 228, 230, 232, 241, 257, 259, 261, 263, 351, 369, 371, 373, 375, 401, 403, 405, 426, 427, 450-453 ili 459-461; i/ili (b) CDR1, CDR2 i CDR3 VHdomena imunoglobulinskog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 2, 12, 22, 32, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 128, 134, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 234, 235, 237, 239, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 406-419, 434-442, 448, 449, 462, 463 ili 464.

Ovde je takođe otkriveno antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koje se specifično vezuje za LAG3 (npr., humani ili od makaki majmuna) koje sadrži (1) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 458); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (2) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 456); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (3) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži: CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 457); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (4) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 455); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (5) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNGGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 454); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35).

Antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji se spcifično vezuju za LAG3 (npr., humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna) može da sadrži CDR regione različitih varijabilnih regiona lakog i/ili teškog lanca i može da ima najmanje 90% ukupne identičnosti aminokiselinske sekvence sa varijabilnim regionom, tj., varijabilnost u lancu se javlja izvan CDR regiona, npr., (1) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njegove aminokiseline 21-131, i koji ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131 i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 106 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 106 ili njenim aminokiselinama 1-119; (2) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njene aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 108 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 108 ili njenim aminokiselinama 1-119; (3) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njene aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 110 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 110 ili njenim aminokiselinama 1-119; (4) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njegove aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njegove aminokiseline 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 112 ili njene aminokiseline 1-119 i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 112 ili njenim aminokiselinama 1-119; (5) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njene aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 114 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 114 ili njenim aminokiselinama 1-119; (6) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njene aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDRH1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 116 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 116 ili njenim aminokiselinama 1-119; (7) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njene aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 118 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 118 ili njenim aminokiselinama 1-119; (8) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njene aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 120 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 120 ili njenim aminokiselinama 1-119; i/ili (9) imunoglobulin lakog lanca koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 126 ili njene aminokiseline 21-131, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 126 ili njenim aminokiselinama 21-131, i/ili imunoglobulin teškog lanca koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 122 ili njene aminokiseline 1-119, i koja ima najmanje 90% identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinskom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 122 ili njenim aminokiselinama 1-119. Antitelo ili antigen-vezujući fragment može da sadrži različite varijabilne regione zrelog lakog i/ili zrelog teškog lanca imunoglobulina i može da ima najmanje 90% ukupne identičnosti aminokiselinske sekvence sa neobrađenim varijabilni regionom imunoglobulina (uključujući signalnu sekvencu), tj., varijabilnost se javlja izvan sekvenci zrelog imunoglobulinskog lanca.

Ovde je takođe otkriveno antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji se specifično vezuju za LAG3 (npr., humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna) koje sadrži zreli ili neobrađeni VLdomen ili imoglobulin lakog lanca prema SEQ ID NO: 7, 17, 27, 37, 57, 59, 61, 63, 65, 101, 126, 130, 132, 136, 138, 208, 210, 224, 226, 228, 230, 232, 241, 257, 259, 261, 263, 351, 369, 371, 373, 375, 401, 403, 405, 426, 427, 451-453 ili 459-461; i/ili zreo ili neobrađeni VHdomen imunoglobulin teškog lanca prema SEQ ID NO: 2, 12, 22, 32, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 128, 134, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 234, 235, 237, 239, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 406-419, 434-442, 448, 449, 462, 463 ili 464. Antitelo ili njegov antigenvezujući fragment može da sadrži: (1) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži: CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 458); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (2) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži: CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 456); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (3) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži: CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 457); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (4) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži: CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 455); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35); ili (5) varijabilni domen lakog lanca koji sadrži: CDR-L1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38); CDR-L2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: GASNLES (SEQ ID NO: 39); i CDR-L3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40); i/ili varijabilni domen teškog lanca koji sadrži: CDR-H1 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DYNVD (SEQ ID NO: 33); CDR-H2 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: DINPNGGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 454); i CDR-H3 koji sadrži aminokiselinsku sekvencu: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35). U primeru izvođenja prema pronalasku, antitelo ili fragment je glikozilovano sa konstruisanim kvaščevim N-vezanim glikanima ili CHO N-vezanim glikanima. Izborno, bilo koje od anti-LAG3 antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata prema pronalasku okarakterisani su jednom ili više sledećih osobina: Inhibira vezivanje LAG3 za molekule MHC klase II; u kompeticiji je sa molekulima MHC klase II za vezivanje za LAG3; vezuje se za ekstra-petlju LAG3; Vezuje se za LAG3 sa KDod oko 10-9M do oko 2 X 10-12M; Vezuje se za nativni LAG3 na površini aktiviranih CD4+ i/ili CD8+ T-ćelija; Vezuje se za humani LAG3 i/ili LAG3 makaki majmuna; Inhibira homodimerizaciju LAG3; Stimuliše antigen-specifičnu T-ćelijsku proizvodnju IL-2; obeležava tkivo krajnika; ne obeležava mozak, srce, bubreg, jetru, pluća, pankreasa i/ili tkivo hipofize; Vezuje se za humani LAG3 dovođenjem u kontakt sa ostacima QEGAPAQL (aminokiseline 35-42 prema SEQ ID NO: 443) i RPARRADAGEYRAAVH (aminokiseline 137-152 prema SEQ ID NO: 443) i, izborno, ostacima DERGRQRGDFSLW (aminokiseline 123-135 prema SEQ ID NO: 443) LAG3; ili ostacima SPTIPLQDL (aminokiseline 45-53 prema SEQ ID NO: 443) i, izborno DERGRQRGDFSL (aminokiseline 123-134 prema SEQ ID NO: 443) od LAG3; ili ostacima HPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVL (aminokiseline 78-102 prema SEQ ID NO: 443) od LAG3; i/ili zaštitom vodonika na amidnom osnovnom lancu takvih ostataka iz razmene sa deuterijumom. Predmetni pronalazak takođe daje bilo koje takvo antitelo ili fragment u farmaceutski prihvatljivom nosaču ili razblaživaču. U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili fragment je imobilizovano za čvrsti supstrat. Anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment može biti Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9 (kao što je ovde prikazano).

Ovde je takođe otkriven kompleks koji sadrži anti-LAG3 antitelo ili fragment razmatran ovde (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) kompleksiran sa LAG3 (npr., humani ili od makaki majmuna) ili njegov fragment ili sa sekundarnim antitelom (npr., detektabilno obeleženo sekundarno antitelo) koje se specifično

1

vezuje za anti-LAG3 antitelo ili fragment. U primeru izvođenja prema pronalasku, antitelo ili fragment je in vitro (npr., je imobilizovano za čvrsti supstrat) ili je u telu subjekta. U primeru izvođenja prema pronalasku, LAG3 je in vitro (npr., je imobilizovan za čvrsti supstrat) ili je na površini ćelije ili je u telu subjekta.

Predmetni pronalazak dalje daje kompoziciju koja sadrži množinu anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata prema predmetnom pronalasku koji su izolovani, monoklonska antitela ili njihove antigen-vezujuće fragmente, npr., koji su humanizovani, npr., humanizovana antagonistična antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente.

Predmetni pronalazak takođe daje kompoziciju koja sadrži anti-LAG3 antitela ili antigenvezujuće fragmente prema pronalasku zajedno sa dodatnim terapeutskim sredstvom (npr., monoklonskim antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom ili organskim malim molekulom) kao što je inhibitor imunomodulatornog receptora, anti-emetik, inhibitor MTOR (sisarskog ciljnog mesta rapamicina), citotoksično sredstvo, sredstvo platine, inhibitor EGFR (receptor epidermalnog faktora rasta), inhibitor VEGF (vaskularnog epidermalnog faktora rasta), stabilizator mikrotubula, taksan, inhibitor CD20, inhibitor CD52, inhibitor CD30, inhibitor RANK (Receptor aktivator jedarnog faktora kapa-B), inhibitor RANKL (Receptor aktivator jedarnog faktora kapa-B ligand), inhibitor ERK, inhibitor MAP kinaze, inhibitor AKT, inhibitor MEK, inhibitor PI3K, inhibitor HER1, inhibitor HER2, inhibitor HER3, inhibitor HER4, inhibitor Bcl2, inhibitor CD22, inhibitor CD79b, inhibitor ErbB2, i/ili inhibitor farnezil protein transferaze. U primeru izvođenja prema pronalasku, dodatno terapeutsko sredstvo je anti-PDl antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, pembrolizumab, nivolumab, CT-011, anti-CTLA4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-TIM3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-CS1 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, elotuzumab, anti-KIR2DL1/2/3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, lirilumab, anti-CD137 antitelo ili njegov antigenvezujući fragment, urelumab, anti-GITR antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, TRX518, anti-PD-L1 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, BMS-936559, MSB0010718C, MPDL3280A, anti-PD-L2 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT1 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT2 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT5 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT6 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT7 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-ILT8 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-CD40 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-OX40 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-CD137 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR2DL1 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR2DL2/3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR2DL4 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR2DL5A antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR2DL5B antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR3DL1 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR3DL2 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-KIR3DL3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, anti-NKG2A antitelo ili njegov antigenvezujući fragment, anti-NKG2C antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, i/ili anti-NKG2E antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment, ili inhibitor bilo kog malog organskog molekula takvih ciljnih mesta; IL-10, anti-IL10, anti-TSLP i/ili PEGilovani IL-10. U primeru izvođenja prema pronalasku, dodatno terapeutsko sredstvo je 13-cis-retinoična kiselina, 3-[5-(metilsulfonilpiperadinmetil)-indolil]-hinolon, 4-hidroksitamoksifen, 5-deooksiuridin, 5'-deoksi-5-fluorouridin, 5-fluorouracil, 6-mekaptopurin, 7-hidroksistaurosporin, A-443654, abirateronacetat, abraksan, ABT-578, acolbifen, ADS-100380, aflibercept, ALT-110, altretamin, amifostin, aminoglutetimid, amrubicin, amsakrin, anagrelid, anastrozol, angiostatin, AP-23573, ARQ-197, arzoksifen, AS-252424, AS-605240, asparaginaza, AT-9263, ATI3387, atrasentan, aksitinib, AZD1152, Bacillus Calmette-Guerin (BCG) vakcina, batabulin, BC-210, BGJ398, besodutoks, bevacizumab, bikalutamid, Bio111, BIO140, BKM120, bleomicin, BMS-214662, BMS-247550, BMS-275291, BMS-310705, bortezimib, buserelin, busulfan, kalcitriol, kamptotecin, kanertinib, kapecitabin, karboplatin, karmustin, CC8490, cediranib, CG-1521, CG-781, hlamidocin, hlorambucil, hlorotoksin, cilengitid, cimitidin, cisplatin, kladribin, klodronat, cobimetnib, COL-3, CP-724714, ciklofosfamid, ciproteron, ciproteronacetat, citarabin, citozinarabinozid, dabrafenib, dakarbazin, dacinostat, daktinomicin, dalotuzumab, danusertib, dasatanib, daunorubicin, decatanib, deguelin, denileukin, deoksikoformicin, depsipeptid, diarilpropionitril, dietilstilbestrol, diftitoks, DNE03, docetaksel, dovitinib, doksorubicin, droloksifen, edotekarin, edotreotid obeležen itrijumom-90, edotreotid, EKB-569, EMD121974, enkorafenib, endostatin, enzalutamid, enzastaurin, epirubicin, epitilon B, ERA-923, erbituks, erlotinib, estradiol, estramustin, etoposid, everolimus, eksemestan, fiklatuzumab, finasterid, flavopiridol, floksuridin, fludarabin, fludrokortizon, fluoksimesteron, flutamid, FOLFOX režim, fulvestrant, galeteron, ganetespib, gefitinib, gemcitabin, gimatekan, goserelin, goserelin acetat, gosipol, GSK461364, GSK690693, HMR-3339, hidroksiprogesteronkaproat, hidroksiurea, IC87114, idarubicin, idoksifen, ifosfamid, IM862, imatinib, IMC-1C11, INCB24360, INC280, INO1001, interferon, interleukin-12, ipilimumab, irinotekan, JNJ-16241199, ketokonazol, KRX-0402, lapatinib, lasofoksifen, LEE011, letrozol, leukovorin, leuprolid, leuprolid acetat, levamisol, paklitaksel obuhvaćen u lipozomu, lomustin, lonafarnib, lukanton, LY292223, LY292696, LY293646, LY293684, LY294002, LY3009120, LY317615, marimastat, mehloretamin, medroksiprogesteronacetat, megestrolacetat, MEK162, melfalan, merkaptopurin, mesna, metotreksat, mitramicin, mitomicin, mitotan, mitoksantron, tozasertib, MLN8054, natitoklaks, neovastat, neratinib, neuradiab, nilotinib, nilutimid, nolatreksed, NVP-BEZ235, oblimersen, oktreotid, ofatumumab, oregovomab, ornatuzumab, orteronel, oksaliplatin, paklitaksel, palbociklib, pamidronat, panitumumab, pazopanib, PD0325901, PD184352, PEG-interferon, pemetreksed, pentostatin, perifosin, fenilalanin iperit, PI-103, pictilisib, PIK-75, ipendoksifen, PKI-166, plikamicin, PLX8394, porfimer, prednizon, prokarbazin, progestini, PX-866, R-763, raloksifen, raltitreksed, razoksin, ridaforolimus, rituksimab, romidepsin, RTA744, rubitekan, skriptaid, Sdxl02, seliciklib, selumetinib, semaksanib, SF1126, sirolimus, SN36093, sorafenib, spironolakton, skvalamin, SR13668, streptozocin, SU6668, suberoilanalid hidroksamska kiselina, sunitinib, sintetički estrogen, talampanel, talimogen laherparepvek, tamoksifen, temozolomid, temsirolimus, teniposid, tesmilifen, testosteron, tetrandrin, TGX-221, talidomid, 6-tioguanin, tiotep, ticilimumab, tipifarnib, tivozanib, TKI-258, TLK286, topotekan, toremifen citrat, trabektedin, trametinib, trastuzumab, tretinoin, trihostatin A, triciribinfosfat monohidrat, triptorelin pamoat, TSE-424, uracil iperit, valprionska kiselina, valrubicin, vandetanib, vatalanib, VEGF zamka, vemurafenib, vinblastin, vinkristin, vindezin, vinorelbin, vitaksin, vitespan, vorinostat, VX-745, vortmanin, Xr311, zanolimumab, ZK186619, ZK-304709, ZM336372, ZSTK474, kasopitant, netupitant, palonosetron, aprepitant, difenhidramin, hidroksizin, metoklopramid, lorazepam, alprazolam, haloperidol, droperidol, dronabinol, deksametazon, metilprednizolon, prohlorperazin, granisetron, ondansetron, dolasetron, tropisetron, GCSF, PEG-GCSF, eritropoietin, epoetin alfa i darbepoetin alfa. U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je u vezi sa pembrolizumabom. U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je u vezi sa novolumabom. U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je u vezi sa CT-011. U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je u vezi sa BMS-936559.

Ovde je takođe otkriven polipeptid koji sadrži aminoksielinsku sekvencu izabrranu iz grupe koja se sastoji od 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30, 32, 33, 34, 35, 37, 38, 39, 40, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234,

1

235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 426, 427, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 446, 448, 449, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463 i 464 na primer, SEQ ID NOs: 2, 7, 12, 17, 22, 27, 32 i 37; ili njegovog zrelog fragmenta. Ovde je takođe otkriven polinukleotid koji kodira bilo koji od takvih polipeptida, npr., koji sadrži nukleotidnu sekvencu izabranu iz grupe koja se sastoji SEQ ID NOs: 1, 6, 11, 16, 21, 26, 31, 36, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 236, 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 268, 270, 272, 274, 276, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 384, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 402 i 404; ili njegovog zrelog fragmenta. Takođe uključen u predmetni pronalazak je vektor (npr., plazmid) koji sadrži polinukleotid. Ćelija domaćin (npr., sisarska, bakterijska, od jajnika kineskog hrčka (CHO), od nižeg eukariota, gljivična, kvaščeva, Pichia, Pichia pastoris) takođe je deo prema predmetnom pronalasku gde ćelija domaćin sadrži antitelo, fragment, polipeptid, polinukleotid i/ili vektor prikazan ovde.

Predmetni pronalazak takođe daje vakcine koje sadrže antitelo ili fragment prikazan ovde, antigen (npr., virusni peptidni antigen, čestica slična virusu, tumorski peptidni antigen) i farmaceutski prihvatljiv nosač.

Predmetni pronalazak takođe daje posudu (npr., plastičnu ili staklenu bočicu) ili injekcioni uređaj (npr., špric kao što je prethodno napunjeni špric ili autoinjektor) koji sadrže bilo koje antitelo, fragment, polipeptid, polinukleotid, vektor, kompoziciju ili vakcinu koji su ovde razmatrani.

Predmetni pronalazak takođe daje postupak za lečenje kancera (npr., osteosarkom, rabdomiosarkom, neuroblastom, kancer bubrega, leukemija, kancer bubrežnih prelaznih ćelija, kancer bešike, Wilm-ov kancer, kancer jajnika, kancer pankreasa, kancer dojke, kancer prostate, kancer kostiju, kancer pluća, kancer želudca, kolorektalni kancer, cervikalni kancer, sinovijalni sarkom, kancer glave i vrata, karcinom skvamoznih ćelija, multipli mijelom, kancer bubrežnih ćelija, retinoblastom, hepatoblastom, hepatocelularni karcinom, melanom, rabdoidni tumor bubrega, Ewing-ov sarkom, hondrosarkom, kancer mozga, glioblastom, meningiom, adenom hipofize, vestibularni švanom, primitivni neuroektodermalni tumor, meduloblastom, astrocitom, anaplastični astrocitom, oligodendrogliom, ependimom, papilom horoidnog pleksusa, policitemija vera, tromboctemija, idiopatska mijelofibroza, sarkom mekog tkiva, tiroidni kancer, endometrijalni kancer, karcinoidni kancer ili kancer jetre, kancer dojke ili kancer želudca) kod subjekta, koji sadrži primenu na subjekta efikasne količine anti-LAG3 antitela ili antigenvezujućeg fragmenta ili vakcine razmatrane ovde izborno, zajedno sa dodatnim terapeutskim sredstvom ili terapeutskim postupkom (npr., hirurška tumorektomija ili anti-kancerska terapija zračenjem).

Predmetni pronalazak takođe daje postupak primene anti-LAG3 antitela, fragmenta, kompozicije, polipeptida, vakcine ili polinukleotida razmatranog ovde ili njegove farmaceutske kompozicije, na subjkekta koji sadrži injektiranje antitela, fragmenta, polipeptida, vakcine ili polinukleotida u telo subjekta upotrebom injekcionog uređaja; i, izborno, takođe primenom dodatnog terapeutskog sredstva na subjekta.

Predmetni pronalazak takođe daje postupak za proizvodnju anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta ili polipeptida razmatranog ovde koji sadrži: a. kultivisanje ćelije domaćina koja sadrži polinukleotid koji kodira polipeptid ili imunoglobulinski lanac antitela ili fragmenta u medijumu kulture pod uslovima koji su povoljni za ekspresiju polinukleotida; i b. izborno, izolovanje antitela, fragmenta ili polipeptida iz ćelije domaćina i/ili medijuma kulture. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak sadrži postupak koji sadrži korak uvođenja polinukleotida u ćeliju domaćina, npr., transformacijom ili transfekcijom.

Predmetni pronalazak takođe daje postupak detekciju prisustva LAG3 peptida ili njegovog fragmenta u uzorku koji sadrži dovođenje ukontakt uzorka sa anti-LAG3 antitelom ili fragmentom razmatranim ovde i detekciju prisustva kompleksa između antitela ili fragmenta i peptida; gde detekcija kompleksa označava prisustvo LAG3 peptida.

KRATAK OPIS SLIKA

Slika 1. Vezivanje anti-humanih LAG3 klonova za humani LAG3 i LAG3 makaki koji eksprimiraju CHO-K1 ćelije.

Slika 2. Vezivanje LAG3 klonova za primarne T ćelije makaki majmuna i čoveka.

1

Slika 3. Trodimenzionalna struktura humanog LAG3. Naznačena je lokacija epitopa antitela 22D2, 11C9 i 4A10.

Slika 4 (a-c). Toplotna mapa koja prikazuje regione u humanom LAG3 koji su snažno ili slabo zaštićeni od deuteracije vezivanjem antitela. (a) toplotna mapa razlike humanog LAG3 / 22D2; (b) toplotna mapa razlike humanog LAG3 / 11C9; (c) toplotna mapa razlike humanog LAG3 / 4A10.

Slika 5 (a-b). Kombinovane toplotne mape koje prikazuju (a) regione na humanom LAG3 koji su zaštićeni od deuteracije preko vezivanja 22D2, 11C9 i 4A10 i (b) lokacija u humanom LAG3 koja posreduje u vezivanju MHC2.

Slika 6. Predominantni N-vezani glikani za monoklonska antitela proizvedena u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO N-vezani glikani) i u konstruisanim kvaščevim ćelijama (konstruisani kvaščevi N-vezani glikani): kvadrati: N-acetilglukozamin (GlcNac); krugovi: manoza (Man); rombovi: galaktoza (Gal); trouglovi: fukoza (Fuc).

Slika 7. Efekat tretmana anti-humanim LAG-3 antitelom /- tretmana anti-PD-1 na proizvodnju IL-2 u SEB stimulisanim humanim PBMC. PBMC su aktivirane sa SEB u trajanju od 3 dana i koncentracija IL-2 u supernatantima kulture je određena pomoću MSD. Donor 090 : SEB 60 ng/mL, Donor 089 : SEB 30 ng/mL. Anti-PDl je korišćen u 10 µg/mL.

Slika 8. Efekat tretmana hu22D2 /- tretmana anti-PD-1 na proizvodnju IFN-γ i TNFα u MLR stimulisanim humanim PBMC. PBMC su aktivirane sa alogeneičkim DC poreklom od monocita u trajanju od 7 dana i koncentracija IFN-γ i TNF-α u supernatantima kulture je određivana pomoću MSD. Anti-PD-1 je korišćen u 3 µg/mL. Izotip je korišćen u 200nM.

Slika 9. Analiza koncentracije nevezanog i delimično vezanog anti-LAG3 antitela Ab6 kod subjekata makaki majmuna tokom vremena u različitim dozama (0.03 mg/kg; 0.3 mg/kg; 1 mg/kg; 10 mg/kg; 30 mg/kg) sa testom hvatanja antigena.

Slika 10. Univerzalna analiza testa koncentracije ukupnog anti-LAG3 antitela Ab6 kod subjekata makaki majmuna tokom vremena u različitim dozama (0.03 mg/kg; 0.3 mg/kg; 1 mg/kg; 10 mg/kg; 30 mg/kg).

Slika 11. Dozom-normalizovani podaci o koncentraciji Ab6 tokom vremena kod subjekata makaki majmuna u različitim dozama (0.03 mg/kg; 0.3 mg/kg; 1 mg/kg; 10 mg/kg; 30 mg/kg).

Slika 12. Procena klirensa vezanog za ciljno mesto (Vmax, Km) različitih doza anti-LAG3 antitela Ab6 u različitim dozama.

DETALJAN OPIS

1

Predmetni pronalazak daje antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente koji imaju izuzetno visok afinitet za humani LAG3 i LAG3 makaki majmuna, kao i njihove upotrebe i postupke za pripremu istih kao što je ovde razmatrano. Na primer, afinitet (KD) za humani LAG3 pomoću KinExA analize je meren tako da je visok kao 2 pM i afinitet za LAG3 makaki majmuna je u niskom dvocifrenom pM opsegu. Naročito niska izoelektrična tačka (npr., oko 6.3) čini neka od ovih antitela jedinstvenim. Pored toga, iako se neka antitela vezuju za LAG3 primarno izvan regiona ekstra petlje, ona ispoljavaju sposobnost za blokiranje vezivanja LAG3/MCH klase II. Pored toga, anti-LAG3 antitela prema predmetnom pronalasku imaju visok stepen specifičnosti za vezivanje za LAG3 u odnosu na druge srodne proteine. Takva antitela i fragmenti prikazani ovde mogu biti korisni, na primer, za lečenje različitih kancera i infektivnih bolesti.

Skraćenice

U detaljnom opisu i primerima prema pronalasku biće korišćene sledeće skraćenice: ADCC Ćelijska citotoksičnost zavisna od antitela

CDC Citotoksičnost zavisna od komplementa

CDR Region koji određuje komplementarnost u varijabilnim regionima imunoglobulina, definisana upotrebom Kabat sistema numeracije

CHO jajnik kineskog hrčka

EC50 koncentracija koja ima za rezultat 50% efikasnosti ili vezivanja

ELISA enzimski-vezani imunosorbent test

FR Okvirni region antitela: varijabilni regioni imunoglobulina isključujući CDR regione. HRP renova peroksidaza

IC50 koncentracija koja ima za rezultat 50% inhibicije

IgG Imunoglobulin G

Kabat sistem poravnanja i numeracije imunoglobulina razvijen od strane Elvin A. Kabat ((1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.)

mAb ili Mab ili MAb Monoklonsko antitelo

PCR lančana reakcija polimeraze

V region Segment IgG lanaca koji je varijabilan u sekvenci između različitih antitela. On se pruža do Kabat ostatka 109 u lakom lancu i 113 u teškom lancu.

VH Varijabilni region teškog lanca imunoglobulina

VK varijabilni region kapa lakog lanca imunoglobulina

1

Definicije

Kako bi pronalazak bio lakše shvaćen, određeni tehnički i naučni termini su specifično definisani u daljem tekstu. Osim ukoliko je specifično definisano na drugom mestu u ovom dokumentu, svi drugi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju značenje koje se uobičajeno razume od strane stručnjaka iz date oblasti tehnike kojoj ovaj pronalazak pripada.

Kao što je ovde razmatrano, uključujući priložene patentne zahteve, oblici u jednini reči na engleskom jeziku označene sa "a," "an," i "the," obuhvataju njihovu odgovarajuću množinu osim ukoliko kontekst jasno ne nalaže drugačije.

LAG3

Termin "LAG3", u vezi sa polipeptidom za koji se vezuju antitela i antigen-vezujući fragmenti prema predmetnom pronalasku, označava humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta kao i njegove fragmente kao što je njegov zreo fragment kome nedostaje signalni peptid.

U primeru izvođenja prema pronalasku, aminokiselinska sekvenca humanog LAG3 (limfocit aktivacioni gen-3) sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 443); videti takođe Uniprot pristupni br. P18627.

U primeru izvođenja prema pronalasku, aminokiselinska sekvenca mišjeg LAG3 sadrži aminokiselinsku sekvencu:

1

(SEQ ID NO: 444); Videti takođe Uniprot pristupni br. Q61790

U primeru izvođenja prema pronalasku, aminokiselinska sekvenca LAG3 makaki majmuna sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 445); Videti takođe NCBI referentni broj XP_005570011.1

Zrela sekvenca humanog LAG3, mišjeg LAG3 i LAG3 makaki majmuna, tj. sekvenca posle uklanjanja signalnog peptida, sadrži aminokiseline 1-28 prema SEQ ID NO: 443, 444 ili 445.

LAG3 sekvence mogu da se razlikuju, na primer, po tome što imaju, na primer, konzervativne mutacije ili mutacije u nekonzervativnim regionima, npr., gde LAG3 ima značajno istu biološku funkciju kao LAG3 prema SEQ ID NOs: 443 ili 445. Na primer, biološke funkcije LAG3 su vezivanje molekula glavnog komopleksa histokompatibilnosti (MHC) klase II i formiranje homodimera.

Određena LAG3 sekvenca će generalno biti najmanje 90% identična u aminokiselinskoj sekvenci sa LAG3 prema SEQ ID NOs: 443 ili 445 ili drugim izoformama. U određenim slučajevima, LAG3 može biti najmanje 95%, ili čak najmanje 96%, 97%, 98% ili 99% identičan sa LAG3 prema SEQ ID NOs: 443 ili 445, ili drugim izoformama ili varijantama. U određenim primerima izvođenja, LAG3 sekvenca će ispoljavati ne više od 10 aminokiselinskih razlika od LAG3 bilo koje prema SEQ ID NOs: 443 ili 445, ili drugim izoformama ili varijantama. U određenim primerima izvođenja, LAG3 može ispoljavati ne više od 5, ili čak ne više od 4, 3, 2, ili 1 aminokiselinsku razliku od LAG3 prema SEQ ID NOs: 443 ili 445, ili drugim izoformama ili varijantama. Procenat identičnosti može biti određen kao što je ovde opisano.

Anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti

Predmetni pronalazak daje antitela ili njihove antigen-vezujuće fragmente koji specifično vezuju LAG3 (npr., humani LAG3 i/ili LAG3 makaki majmuna, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta), i upotrebe takvih antitela ili fragmenata. Antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment prema pronalasku sadrži varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku

1

sekvencu navedenu u aminokiselinama 21-131 prema SEQ ID NO: 126 i varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 116.

Takođe su otkrivena antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti koji specifično vezuju LAG3, kao što su 4A10, 19E8, 11C9, 22D2, npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9, i upotrebe takvih antitela ili fragmenata.

U primeru izvođenja prema pronalasku, antitelo ili fragment je antitelo.

Kao što je ovde korišćeno, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment označava antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji se specifično vezuje za humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna. Antitelo se specifično vezuje za polipeptid koji sadrži datu sekvencu (u ovom slučaju epitop humanog LAG3 ili LAG3 makaki majmuna) ako se vezuje za polipeptide koji sadrže LAG3 sekvencu sa KDod oko 1 nM ili viši afinitet (npr., 1 nM-2 pM, 1 nM, 100 pM, 10 pM ili 2 pM), ali se ne vezuje za proteine kojima nedostaje sekvenca. Na primer, antitelo ili antigen-vezujući fragment koji se specifično vezuje za polipeptid koji sadrži humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna može da se veže za FLAG®-obeleženi oblik humanog ili LAG3 makaki majmuna, ali se neće vezati za druge FLAG®-obeležene proteine kojima nedostaju LAG3 epitopi.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela i njihovu upotrebu. Kao što je ovde korišćen, termin "antitelo" označava bilo koji oblik antitela koji ispoljava željenu biološku aktivnost. Na taj način, korišćen je u najširem smislu i specifično pokriva, ali bez ograničenja na, monoklonska antitela (uključujući monoklonska antitela pune dužine), poliklonska antitela, multispecifična antitela (npr., bispecifična antitela), humanizovana antitela, potpuno humana antitela, himerna antitela i kamelizovana antitela sa jednim domenom.

Predmetni pronalazak obuhvata roditeljska anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente i njihovu upotrebu. "Roditeljska antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti" su antitela i fragmenti koji mogu biti modifikovani za nameravanu upotrebu, kao što je humanizacija antitela za upotrebu kao humano terapeutsko antitelo ili fragment.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antigen-vezujuće fragmente i njihovu upotrebu. Kao što je ovde korišćen, osim ukoliko je drugačije naznačeno, "fragment antitela" ili "antigen-vezujući fragment" označava antigen-vezujuće fragmente antitela, tj. fragmente antitela koji zadržavaju sposobnost da se specifično vezuju za antigen vezan antitelom pune dužine, npr. fragmentima koji zadržavaju jedan ili više CDR regiona. Primeri antigen-vezujućih fragmenata obuhvataju, ali bez ograničenjka na, Fab, Fab', F(ab')2, i Fv fragmente; diatela; molekule

2

jednolančanog antitela, npr., sc-Fv; nanotela i multispecifična antitela formirana od fragmenata antitela.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 Fab fragmente i njihovu upotrebu. "Fab fragment" se sastoji od jednog lakog lanca i CH1 i varijabilnih regiona jednog teškog lanca. Težak lanac Fab molekula ne može da formira disulfidnu vezu sa drugim molekulom teškog lanca. "Fab fragment" može biti proizvod cepanja anatitela papainom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente koji sadrže Fc region i njihovu upotrebu. "Fc" region sadrži dva fragmenta teškog lanca koji sadrže CH1 i CH2 domene antitela. Dva fragmenta teškog lanca se drže zajedno preko dve ili više disulfidnih veza i preko hidrofobnih interakcija CH3 domena.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 Fab' fragmente i njihovu upotrebu. "Fab' fragment" sadrži jedan lak lanac i deo ili fragment jednog teškog lanca koji sadrži VHdomen i CH1 domen i takođe region između CH1 i CH2 domena, tako da interlančana disulfidma veza može biti formirana između dva teška lanca dva Fab' fragmenta tako da se formira F(ab')2molekul.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 F(ab')2fragmente i njihovu upotrebu. "F(ab')2fragment" sadrži dva laka lanca i dva teška lanca koji sadrže deo konstantnog regiona između CH1i CH2domena, tako da je interlančana disulfidna veza formirana između dva teška lanca. F(ab')2fragment se na taj način sastoji od dva Fab' fragmenta koji se drže zajedno preko disulfidne veze između dva teška lanca. "F(ab')2fragment" može biti proizvod cepanja antitela pepsinom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 Fv fragmente i njihovu upotrebu. "Fv region" sadrži varijabilne regione iz teških i lakih lanaca, ali nema konstantne regione.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 scFv fragmente i njihovu upotrebu. Termin "jednolančani Fv" ili "scFv" antitelo označava fragmente antitela koji sadrže VHi VLdomene antitela, pri čemu su ovi domeni prisutni u jednom polipeptidnom lancu. Generalno, Fv polipeptid dalje sadrži polipeptidni linker između VHi VLdomena koji omogućavaju da scFv formira željenu strukturu za vezivanje antigena. Za prikaz scFv, videti Pluckthun (1994) THE PHARMACOLOGY OF MONOCLONAL ANTIBODIES, vol. 113, Rosenburg and Moore eds. Springer-Verlag, New York, pp. 269-315. Videti takođe, objavu međunarodne patentne prijave br. WO88/01649 i U.S. Pat. br.4,946, 778 i 5,260,203.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 domen antitela i njihovu upotrebu. "Domen antitela" je imunološki funkcionalni imunoglobulinski fragment koji sadrži samo varijabilni region teškog lanca ili varijabilni region lakog lanca. U nekim slučajevima, dva ili više VHregiona su kovalentno spojeni sa peptidnim linkerom tako da stvaraju antitelo sa bivalentnim domenom. Dva VHregiona antitela sa bivalentnim domenom mogu ciljno da budu usmereni na iste ili različite antigene.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 bivalentna antitela i njihovu upotrebu. "Bivalentno antitelo" sadrži dva antigen-vezujuća mesta. U nekim slučajevima, dva vezujuća mesta imaju iste antigen specifičnosti. Međutim, bivalentna antitela mogu biti bispecifična (videti u daljem tekstu).

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 kamelizovana antitela sa jednim domenom i njihovu upotrebu. U određenim primerima izvođenja, antitela koja su ovde data takođe obuhvataju kamelizovana antitela sa jednim domenom. Videti, npr., Muyldermans et al. (2001) Trends Biochem. Sci. 26:230; Reichmann et al. (1999) J. Immunol. Methods 231:25; WO 94/04678; WO 94/25591; U.S. Pat. br. 6,005,079). U jednom primeru izvođenja, predmetni pronalazak daje antitela sa jednim domenom koja sadrže dva VHdomena sa modifikacijama tako da su formirana antitela sa jednim domenom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 diatela i njihovu upotrebu. Kao što je ovde korišćen, termin "diatela" označava male fragmente antitela sa dva antigen-vezujuća mesta, pri čemu ti fragmenti sadrži varijabilni domen teškog lanca (VH) vezan za varijabilni domen lakog lanca (VL) u istom polipeptidnom lancu (VH-VLili VL-VH). Upotrebom linkera koji je prekratak da omogući sparivanje između dva domena na istom lancu, domeni su prisiljeni da se sparuju sa komplementarnim domenima drugog lanca i stvaraju dva antigen-vezujuća mesta. Diatela su potpunije opisana u, npr., EP 404,097; WO 93/11161; i Holliger et al. (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 6444-6448. Za prikaz konstruisanih varijanti antitela generalno videti Holliger and Hudson (2005) Nat. Biotechnol. 23:1126-1136.

Tipično, antitelo ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku koji je modifikovan na neki način zadržava najmanje 10% njegove aktivnosti vezivanja LAG3 (npr., humanog i/ili od makaki majmuna, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta LAG3) (u poređenju sa roditeljskim antitelom) kada je ta aktivnost eksprimirana na molarnoj osnovi. Poželjno, antitelo ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku zadržava najmanje 20%, 50%, 70%, 80%, 90%, 95% ili 100% ili više vezujućeg afinuteta za LAG3 (npr., humani LAG3 i/ili LAG3 makaki majmuna, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta) kao roditeljsko antitelo. Takođe je određeno da antitelo ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku može da obuhvata konzervativne ili nekonzervativne aminokiselinske supstitucije (označene kao "konzervativne varijante" ili "varijante sa konzervativnom funkcijom" antitela) koje ne menjaju značajno njegovu biološku aktivnost.

Predmetni pronalazak obuhvata izolovana anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente i njihovu upotrebu kao i njihove izolovane polipeptidne imunoglobulinske lance i izolovane polinukleotide koji kodiraju takve polipeptide i izolovane vektore uključujući takve polinukleotide. "Izolovana" antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti, polipeptidi, polinukleotidi i vektori, su najmanje delimično bez drugih bioloških molekula iz ćelija ili ćelijske kulture iz kojih su proizvedeni. Takvi biološki molekuli obuhvataju nukleinske kiseline, proteine, lipide, ugljene hidrate, ili drugi materijal kao što su ćelijski ostaci i medijum za rast. Izolovano antitelo ili antigen-vezujući fragment mogu biti dalje najmanje delimično bez komponenti ekspresionog sistema kao što su biološki molekuli iz ćelije domaćina ili njegovog medijuma za rast. Generalno, termin "izolovan" nije određen tako da označava potpuno odsustvo takvih bioloških molekula ili odsustvo vode, pufera ili soli ili komponenti farmaceutske formulacije koja sadrži antitela ili fragmente.

Predmetni pronalazak obuhvata monoklonska anti-LAG3 antitela i njihove antigenvezujuće fragmente kao i monoklonske kompozicije koje sadrže množinu izolovanih monoklonskih antitela. Termin "monoklonsko antitelo", kao što je ovde korišćen, označava populaciju značajno homogenih antitela, tj., molekuli antitela koje populacija sadrži su identični u aminokiselinskoj sekvenci osim mogućih prirodnih mutacija koje mogu biti prisutne u manjim količinama. "Množina" takvih monoklonskih antitela i fragmenata u kompoziciji označava koncentraciju identičnih (tj., kao što je razmatrana u prethodnom tekstu, u aminokiselinskoj sekvenci osim mogućih prirodnih mutacija koje mogu biti prisutne u manjim količinama) antitela i fragmenata koja je iznad one koja bi se normalno javila u prirodi, npr., u krvi organizma domaćina kao što je miš ili čovek. Nasuprot tome, preparati konvencionalnih (poliklonskih) antitela tipično uključuju mnoštvo različitih antitela koja imaju različite aminokiselinske sekvence u svojim varijabilnim domenima, posebno svojim CDR, koji su često specifični za različite epitope. Modifikator "monoklonski" označava karakter antitela dobijenog iz suštinski homogene populacije antitela i ne treba ga vezivati za proizvodnju antitela nekim posebnim metodom. Na primer, monoklonska antitela koja će se upotrebiti u skladu sa predmetnim pronalaskom mogu biti napravljena metodom hibridoma koji su prvi opisali Kohler et al. (1975) Nature 256: 495, ili se može napraviti metodima rekombinantne DNK (vidi, npr., U.S. pat. br.

4,816,567). "Monoklonska antitela" mogu se izolovati i iz biblioteka antitela na fagima, korišćenjem tehnika opisanih u Clackson et al. (1991) Nature 352: 624-628 i Marks et al. (1991) J. Mol. Biol.222: 581-597, na primer. Vidi i Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol.116:731.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 himerna antitela (npr., humani konstantni domen/mišji varijabilni domen) i njihovu upotrebu. Kao što je ovde korišćeno, "himerno

2

antitelo" je antitelo koje ima varijabilni domen iz prvog antitela i konstantni domen iz drugog antitela, gde su prvo i drugo antitelo iz različitih vrsta. (U.S. Pat. br.4,816,567; i Morrison et al., (1984) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-6855). Tipično, varijabilni domeni su dobijeni od antitela iz eksperimentalne životinje ("roditeljsko antitelo"), kao što je glodar i sekvence konstantnog domena su dobijene od humanih antitela, tako da će biti manja verovatnoća da rezultujuće himerno antitelo izazove štetni imuni odgovor kod humanog subjekta od roditeljskog (npr., mišjeg) antitela.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 humanizovana antitela i njihove antigenvezujuće fragmente (npr., mišja antitela koja su humanizovana) i njihovu upotrebu. Kao što je ovde korišćen, termin "humanizovano antitelo" označava oblike antitela koji sadrže sekvence od humanih i nehumanih (npr., mišjih ili pacovskih) antitela. Uopšteno, humanizovano antitelo će sadržati značajno sve od najmanje jednog, i tipično dva, varijabilna domena, u kojima sve ili uglavnom sve od hipervarijabilnih petlji odgovaraju onima od nehumanog imunoglobulina, i svi ili uglavnom svi od okvirnih (FR) regiona su oni od humane imunoglobulinske sekvence. Humanizovano antitelo može izborno da sadrži najmanje deo konstantnog regiona humanog imunoglobulina (Fc).

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 potpuno humana antitela i njihove antigenvezujuće fragmente i njihovu upotrebu. Termin "potpuno humano antitelo" označava antitelo koje sadrži samo proteinske sekvence gumanog imunoglobulina. Potpuno humano antitelo može da sadrži mišje ugljovodonične lance ako su proizvedeni u mišu, u mišjoj ćeliji ili u hibridomu poreklom od mišje ćelije. Slično, "mišje antitelo" označava antitelo koje sadrži samo mišje imunoglobulinske sekvence. Alternativno, potpuno humano antitelo može da sadrži pacovske ugljovodonične lance ako je proizvedeno u pacovu, u ćeliji pacova, ili u hibridomu poreklom od ćelije pacova. Slično, "pacovsko antitelo" označava antitelo koje sadrži samo pacovske imunoglobulinske sekvence. U primeru izvođenja prema pronalasku, potpuno humano anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je proizvod izolacije iz transgene životinje, npr., miša (npr., HUMAB miša, videti npr., SAD Pat. br. 5,545,806; 5,569,825; 5,625,126; 5,633,425; 5,661,016; 5,770,429; 5,789,650; 5,814,318; 5,874,299 i 5,877,397; i Harding, et al., (1995) Ann. NY Acad. Sci. 764:536 546; ili XENOMOUSE, videti npr., Green et al., 1999, J. Immunol. Methods 231:11-23), koji je genetički modifikovan tako da ima potpuno humane imunoglobulinske gene; ili proizvod izolacije iz faga ili virusa koji eksprimira imunoglobulinske lance anti-LAG3 potpuno humanog antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta.

Uopšteno, osnovna strukturna jedinica antitela uključuje tetramer. Svaki tetramer sadrži dva identična para polipeptidnih lanaca, svaki par ima jedan "laki" (oko 25 kDa) i jedan "teški" lanac (oko 50-70 kDa). Aminoterminalni deo svakog lanca sadrži varijabilni region od oko 100 do 110 ili više aminokiselina, prvenstveno odgovornih za prepoznavanje antigena. Karboksiterminalni deo teškog lanca može definisati konstantni region prvenstveno odgovoran za efektorsku funkciju. Tipično, humani laki lanci klasifikuju se kao kapa i lambda laki lanci. Pored toga, humani teški lanci se tipično klasifikuju kao mi, delta, gama, alfa, ili epsilon, i definišu izotip antitela kao IgM, IgD, IgG, IgA, odnosno IgE. U okviru lakih i teških lanaca, varijabilni i konstantni regioni spojeni su "J" regionom od oko 12 ili više amino-kiselina, s tim što teški lanac uključuje i "D" region od oko još 10 aminokiselina. Vidi, uopšteno, Fundamental Immunology Ch. 7 (Paul, W., ed., 2nd ed. Raven Press, N.Y. (1989).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitela prema predmetnom pronalasku sadrže potpuno tetramernu strukturu koja ima dva laka lanca i dva teška lanca, uključujući konstantne regione.

Varijabilni regioni svakog para lakog i teškog lanca formiraju vezujuće mesto antitela. Prema tome, uopšteno, intaktno antitelo ima dva vezujuća mesta. Osim u bifunkcionalnim ili bispecifičnim antitelima, dva vezujuća mesta su uglavnom ista.

Tipično, varijabilni domeni teškog i lakog lanca uključuju tri hipervarijabilna regiona, nazvana i regioni koji određuju komplementarnost (CDR), locirana u relativno konzerviranim regionima okvira (FR). CDR se obično poravnavaju regionima okvira, što omogućava vezivanje za specifični epitop. Uopšteno, od N-terminusa do C-terminusa, varijabilni domeni lakog i teškog lanca uključuju FR1, CDR1, FR2 , CDR2, FR3, CDR3 i FR4. Pripisivanje aminokiselina svakom domenu obično je u skladu sa definicijama Sequences of Proteins of Immunological Interest, Kabat, et al.; National Institutes of Health, Bethesda, Md.; 5th ed.; NIH publ. br. 91-3242 (1991); Kabat (1978) Adv. Prot. Chem. 32:1-75; Kabat, et al., (1977) J. Biol. Chem.

252:6609-6616; Chothia, et al., (1987) J Mol. Biol.196:901-917 ili Chothia, et al., (1989) Nature 342:878-883.

Kao što je ovde korišćen, termin "hipervarijablni region" označava aminokiselinske ostatke antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji su odgovorni za vezivanje antigena. Hipervarijabilni region sadrži aminokiselinske ostatke iz "regiona koji određuje komplementarnost" ili "CDR" (tj. CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 u varijabilnom domenu lakog lanca i CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 u varijabilnom domenu teškog lanca). Videti Kabat et al. (1991) Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md.; Johnson et al.(2001) Nucleic Acids Res. 2001; 29(1): 205-206 (koji definišu CDR regione antitela preko sekvence); videti takođe Chothia and Lesk (1987) J. Mol. Biol. 196: 901-917; Chothia et al. Nature 342, 877 (1989) i Tramontano et al. J. Mol.

2

Biol. 215, 175 (1990) (koji definišu CDR regione antitela preko strukture); videti takođe Macallum et al. J Mol Biol. 1996 Oct. 11; 262(5):732-45. kao što je ovde korišćen, termin "okvirni" ili "FR" ostaci označava one ostatke varijabilnog domena osim ostataka hipervarijabilnog regiona koji su ovde definisani kao CDR ostaci.

Ovde su otkrivena anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti koji se specifično vezuju za LAG3, koji imaju bilo koju kombinaciju CDR regiona iz lakih lanaca imunoglobulina prema SEQ ID NOs: 7, 17, 27 i/ili 37 i/ili koji imaju bilo koju kombinaciju CDR regiona iz teških lanaca imunoglobulina prema SEQ ID NOs: 2, 12, 22 i 32 gde su CDR regioni kao što su definisani od strane Kabat i Chothia (videti u prethodnom tekstu).

"Homologni" označava sekvencionu sličnost između dve sekvence polinukleotida ili između dve sekvence polipeptida, kada se optimalno poravnaju. Kada se na poziciji u obe poravnate sekvence nalazi ista bazna ili aminokiselinska monomerna subjedinica, npr., ako se na poziciji u svakom od dva molekula DNK nalazi adenin, onda su molekuli homologni za tu poziciju. Procenat homologije je broj homolognih pozicija za dve sekvence podeljen ukupnim brojem upoređivanih pozicija × 100. Na primer, ako se 6 od 10 pozicija u dve sekvence poklapa ili su homologne kada se sekvence optimalno poravnaju, onda homologija sekvenci iznosi 60%. Upoređivanje se obično vrši kada su dve skevence poravnate da bi dale maksimalan procenat homologije.

"Izolovani molekuli nukelinske kiseline" ili "izolovani polinukleotidi" (npr., DNK ili RNK) takođe nisu udruženi sa svim ili delom polinukleotida u kojem se izolovani polinukleotid nalazi u prirodi, ili su povezani sa polinukleotidom sa kojim nisu prirodno povezane. Za potrebe ove objave, treba razumeti da "molekul nukleinske kiseline koji uključuje" određenu nukleotidnu sekvencu ne obuhvata intaktne hromozome. Izolovani molekuli nukleinske kiseline "koji uključuju" specifikovane sekvence nukleinske kiseline mogu sadržati, pored specifikovanih sekvenci, kodirajuće sekvence za najviše deset ili čak za najviše dvadeset ili više drugih proteina ili njihovih delova ili fragmenata, ili mogu sadržati operabilno povezane regulatorne sekvence koje kontrolišu ekspresiju kodirajućeg regiona navedenih sekvenci nukleinske kiseline, i/ili mogu sadržati vektorske sekvence. Kao što je razmatrano u daljem tekstu, predmetni pronalazak obuhvata izolovane polinukleotide koji kodiraju bilo koji od imunoglobulinskih lanaca razmatranih ovde.

Izraz "kontrolne sekvence" odnosi se na DNK sekvence neophodne za ekspresiju operabilno povezane kodirajuće sekvence u određenom organizmu-domaćinu. Kontrolne sekvence pogodne za prokariote, na primer, uključuju promotor, opciono operatorsku sekvencu i

2

mesto za vezivanje ribozoma. Poznato je da eukariotske ćelije koriste promotore, poliadenilacione signale i pojačivače.

Nukleinska kiselina ili polinukleotid je "operabilno povezana" kada se nalazi u funkcionalnom odnosu sa drugom sekvencom nukleinske kiseline. Na primer, DNK za presekvencu ili sekretorni lider, operabilno je povezana sa DNK za polipeptid ako se eksprimira kao preprotein koji učestvuje u sekreciji polipeptida; promotor ili pojačivač je operabilno povezan sa kodirajućom sekvencom ako utiče na transkripciju sekvence; ili mesto za vezivanje ribozoma operabilno je povezano sa kodirajućom sekvencom ako je smešteno tako da olakšava translaciju. Obično, ali ne uvek, "operabilno povezan" označava da su povezane DNK sekvence u kontinuitetu i, u slučaju sekretornog lidera, u kontinuitetu i u fazi čitanja. Međutim, pojačivač ne mora biti postavljen u kontinuitetu. Povezivanje se obavlja ligacijom na pogodnim restrikcionim mestima. Ako takva mesta ne postoje, sintetski oligonukleotidni adaptori ili linkeri koriste se u skladu sa uobičajenom praksom.

Kako se koristi u ovom tekstu, izrazi "ćelija" i "ćelijska linija" koriste se naizmenično, a sva takva imenovanja uključuju i potomstvo. Prema tome, reči "transformanti" i "transformisane ćelije" obuhvataju primarnu subjekatsku ćeliju i iz nje izvedene kulture, bez obzira na broj transfera. Isto tako, podrazumeva se da, zbog namernih ili nehotičnih mutacija, svo potomstvo neće imati potpuno identičan sadržaj DNK. Obuhvaćeno je i mutantno potomstvo koje ima istu funkciju ili biološku aktivnost prema kojima je odabrana originalna transformisana ćelija. Ako postoji potreba za različitim imenovanjima, razumeće se iz konteksta.

Kako se koristi u ovom tekstu, "lančana reakcija polimeraze" ili "PCR" odnosi se na postupak ili tehniku u kojoj se specifične sekvence nukleinske kiseline, RNK i/ili DNK, amplifikuju kako je opisano npr., u SAD pat. br.4,683,195. Uopšteno, informacije o sekvenci sa krajeva regiona od interesa ili dalje od toga, koriste se za dizajniranje oligonukleotidnih prajmera. Ovi prajmeri će biti identični ili slični po sekvenci sa naspramnim lancima obrazaca koji će se amplifikovati. 5' terminalni nukleotidi dva prajmera mogu se poklapati sa krajevima amplifikovanog materijala. PCR se može koristiti za amplifikovanje specifičnih RNK sekvenci, specifičnih DNK sekvenci iz ukupne genomske DNK i cDNK transkribovane sa ukupne ćelijske RNK, bakteriofagnih ili plazmidnih sekvenci, itd. Vidi uopšteno Mullis et al. (1987) Cold Spring Harbor Symp. Quant. Biol. 51:263; Erlich, ed., (1989) PCR TECHNOLOGY (Stockton Press, N.Y.) Kako se koristi u ovom tekstu, PCR se smatra za jedan, ali ne jedini primer metoda reakcije polimeraze nukleinskih kiselina za amplifikovanje testnog uzorka nukleinske kiseline, koji uključuje upotrebu poznate nukleinske kiseline kao prajmera i polimeraze nukleinske kiseline, za amplifikovanje ili generisanje specifičnog dela nukleinske kiseline.

2

Kako se koristi u ovom tekstu, "sekvenca klicine linije" odnosi se na sekvencu nerearanžiranih imunoglobulinskih DNK sekvenci. Može se koristiti svaki pogodan izvor nerearanžiranih imunoglobulinskih sekvenci. Humane sekvence klicine linije mogu se dobiti, na primer, iz JOINSOLVER® baze podataka klicine linije na veb-stranici Nacionalnog instituta za artritis i mišićno-skeletna i kožna oboljenja Nacionalnih instituta za zdravlje Sjedinjenih Američkih Država. Mišje sekvence germinativne linije mogu se dobiti, na primer, kao što je opisano u Giudicelli et al. (2005) Nucleic Acids Res.33:D256-D261.

Fizičke i funkcionalne osobine ilustrativnih anti-LAG3 antitela

Predmetni pronalazak daje anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) koji sadrže varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u aminokiselinama 21-131 prema SEQ ID NO: 126 i varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu navedenu u aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 116; i upotrebu antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata u lečenju ili prevenciji bolesti. U jednom primeru izvođenja, pronalazak daje mišja ili humanizovana anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente i njiihovu upotrebu u lečenju ili prevenciji bolesti. U jednom primeru izvođenja, pronalazak daje antagonistička anti-LAG3 antitela i njihovu upotrebu u lečenju ili prevenciji bolesti.

Ovde, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži određeni laki lanac i naročito težak lanac može biti označen kao "laki lanac/težak lanac"; na primer, antitelo koje sadrži 45AGX_22D2_VL3 laki lanac i humanizovano x [LAG3_H] mAb.22D2 VH6 N54D težak lanac može biti označen kao "45AGX_22D2_VL3/humanizovano x [LAG3 H] mAb.22D2 VH6 N54D".

"Anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment' obuhvata bilo koje antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji je ovde razmatran (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) koje se specifično vezuje za LAG3 (npr., humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna). Takva antitela i fragmenti obuhvataju humanizovana antitela i fragmente koji imaju bilo koju kombinaciju mišjih ili humanizovanih lakih i teških lanaca koji su ovde prikazani ili varijanti takvih lanaca koji specifično vezuju LAG3. Takva antitela ili fragmenti obuhvataju bilo koje antitelo ili fragment koji sadrži bilo koji ili više od CDR regiona (npr., CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3) mišjih ili humanizovanih lanaca prikazanih ovde ili varijanti takvih CDR regiona koje se

2

specifično vezuju za LAG3. Pored toga, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment obuhvata bilo koje antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji se vezuje za isti epitop u LAG3 za koji se vezuju antitela i fragmenti razmatrani ovde i bilo koje antitelo ili antigenvezujući fragment koji unakrsno blokira (delimično ili potpuno) ili je unakrsno blokiran (delimično ili potpuno) antitelom ili njegovim fragmentom koji je razmatran ovde za vezivanje za LAG3; kao i bilo koju njihovu varijantu. Određeni primer izvođenja prema pronalasku obuhvata antitela i fragmente koji sadrže samo mišje imunoglobulinske lance ili samo humanizovane imunoglobulinske lance i/ili gde su imunoglobulinski lanci ili CDR regioni svi poreklom, direktno ili indirektno, iz istog originalnog mišjeg klona, tj., humanizovanih 4A10 lakih lanaca sparenih sa humanizovanim 4A10 teškim lancima; humanizovanih 19E8 lakih lanaca sparenih sa humanizovanim 19E8 teškim lancima; humanizovanih 11C9 lakih lanaca sparenih sa humanizovanim 11C9 teškim lancima; ili humanizovanih 22D2 lakih lanaca sparenih sa humanizovanim 22D2 teškim lancima; ili mišjih 4A10 lakih lanaca sparenih sa mišjim 4A10 teškim lancima; mišjih 19E8 lakih lanaca sparenih sa mišjim 19E8 teškim lancima; mišjih 11C9 lakih lanaca sparenih sa mišjim 11C9 teškim lancima; ili mišjih 22D2 lakih lanaca sparenih sa mišjim 22D2 teškim lancima. Ova antitela i fragmenti su deo prema predmetnom pronalasku zajedno sa njihovim upotrebama, npr., kao što je ovde prikazano.

Unakrsno blokirajuća antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti razmatrani ovde mogu biti identifikovani na osnovu njihove sposobnosti da blokiraju bilo koje od antitela ili fragmenata specifično prikazanih ovde, npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2, od vezivanja za LAG3, u analizama vezivanja (npr., interferometrija bio-sloja (BLI; na primer FORTEBIO OCTET analiza vezivanja; Pall ForteBio Corp; Menlo Park, CA), površinska plazmon rezonanca (SPR), BIACore, ELISA, protočna citometrija). Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, kada se koristi BLI, vrh fiber-optičke sonde je obložen ligandom (npr., LAG3) i deluje kao biosenzor, pri čemu vezivanje anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta za LAG3 menja obrazac interference bele svetlosti reflektovane sa sloja sonde vezanog za LAG3 i unutrašnjeg referentnog sloja. Pomeranje je indikativno za vezivanje LAG3/anti-LAG3. U primeru izvođenja prema pronalasku, vrh obložen sa LAG3 je potopljen u rastvor analita koi sadrži antitelo ili antigen-vezujući fragment, npr., u komorici 96-ili 384-komorne ploče. U primeru izvođenja prema pronalasku, ploča je mućkana u toku očitavanja da bi se stvorio orbitalni protok. Da bi očitavali analizu, bela svetlost je usmerena niz dužinu vlakna. Kao što je navedeno u prethodnom tekstu, interferencija između svetlosti koja se reflektuje sa referentnog sloja i imobilizovanih površina koje sadrže LAG3 vrha stvara distinktivan obrazac svetlosti koja se vraća uz vlakno. Kako se molekuli vezuju za imobilizovanu

2

senzornu površinu, taj obrazac se menja u proporciji u meri vezivanja. Na primer, mogu biti korišćene analize u kojima je LAG3 (npr., humani LAG3) protein imobilizovan na BLI sondi ili ploči, referentno anti-LAG3 antitelo ili fragment se vezuje za LAG3 (npr., na koncentraciji zasićenja) i dodaje se test anti-LAG3 antitelo ili fragment. Zatim je određena sposobnost test antitela da je u kompeticiji sa referentnim antitelom za vezivanje za LAG3. U BLI formatu, interferencija svetlosti LAG3 kompleksa je praćena da bi se odredilo da li je test antitelo u efikasnoj kompeticiji sa referentnim antitelom, npr., praćeno je pomeranje nanometara talasne dužine svetlosti u toku vremena, pri čemu pomeranje označava dodatno vezivanje test antitela i nedostatak unakrsnog blokiranja. U primeru izvođenja prema pronalasku, u BLI formatu, unakrsno blokiranje se kvalitativno smatra da se javilo između antitela ako nije zabeleženo dodatno vezivanje test antitela. U primeru izvođenja prema pronalasku, kao kontrola, unakrsno blokiranje referentnog antitela sa samim sobom je potvrđeno; pri čemu je analiza određena tako ispravno funkcioniše ako nereferentno antitelo može unakrsno da blokira samog sebe od vezivanja za LAG3. Sposobnost test antitela da inhibira vezivanje, na primer, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2, za LAG3 (npr., humani LAG3) pokazuje da test antitelo može unakrsno da blokira Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2 za vezivanje za LAG3 (npr., humani LAG3) i na taj način, može, u nekim slučajevima, da se veže za isti epitop na LAG3 (npr., humani LAG3) kao Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8, Ab9, 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2. Kao što je navedeno u prethodnom tekstu, antitela i fragmenti koji se vezuju za isti epitop kao bilo koje od anti-LAG3 antitela ili fragmenata prema predmetnom pronalasku takođe formiraju deo predmetnog pronalaska. U primeru izvođenja prema pronalasku, BLI je izvedena u sendvič formatu gde je referentno anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment imobilizovan za sondu i zatim vezan sa LAG3. Test anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment je zatim testiran za sposobnost da blokira vezivanje referentnog antitela ili fragmenta.

"4A10", "19E8", "11C9" i "22D2" anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti navedeni ovde sadrže CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 lakih lanaca mišjeg imunoglobulina 4A10, 19E8, 11C9 ili 22D2 i njihove varijante, respektivno; kao i CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 teških lanaca mišjeg imunoglobulina 4A10, 19E8, 11C9 ili 22D2, i njihove varijante, respektivno. Takva "4A10", "19E8", "11C9" i "22D2" antitela i fragmenti mogu biti humanizovana antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti kao što su Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9.

Primeri imunoglobulinskih lanaca anti-LAG3 antitela kao i njihovi CDR regioni obuhvataju, ali bez ograničenja na:

4A10- VHsekvencu

(SEQ ID NO: 1; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu)

(SEQ ID NO: 2; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu) CDR-H1: GFNIEDYYMH (SEQ ID NO: 3)

CDR-H2: WIDPVNGDTEYAPKFQG (SEQ ID NO: 4)

CDR-H3: YDGYLFAF (SEQ ID NO: 5)

4A10- VLsekvenca

(SEQ ID NO: 6; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu)

(SEQ ID NO: 7; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu) CDR-L1: RSSKSLLHSDGNTYLY (SEQ ID NO: 8)

CDR-L2: YRMSNLAS (SEQ ID NO: 9)

CDR-L3: MQHLEYPFT (SEQ ID NO: 10)

19E8- VHsekvenca

(SEQ ID NO: 11; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu)

(SEQ ID NO: 12; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu) CDR-H1: GSSFTDYYIN (SEQ ID NO: 13)

CDR-H2: WIYPGSGNSIYNENFKA (SEQ ID NO: 14)

CDR-H3: EADYDDALDY (SEQ ID NO: 15)

1

19E8- VLsekvenca

(SEQ ID NO: 27; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu) CDR-L1: RASQDISNYLN (SEQ ID NO: 28)

CDR-L2: YTSRLHS (SEQ ID NO: 29)

CDR-L3: QQGDTLPPWT (SEQ ID NO: 30)

2

22D2- VHsekvenca

(SEQ ID NO: 36; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu)

(SEQ ID NO: 37; gde su CDR regioni podvučeni i gde je signalna sekvenca u bold fontu) CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38)

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39)

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40)

22D2 mišji roditeljski teški ili laki lanci mogu biti označeni ovde kao LB145.22D2.E1.1D1. 19E8 mišji roditeljski teški ili laki lanci mogu biti označeni ovde kao LB148.19E8.G1.1A1. 4A10 mišji roditeljski teški ili laki lanci mogu biti označeni ovde kao LB148.4A10.1H1. 11C9 mišji roditeljski teški ili laki lanci mogu biti označeni ovde kao LB148.11C9.1C1.

Predmetni pronalazak takođe obuhvata bilo koje anti-LAG3 antitelo ili njegov antigenvezujući fragment (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) koji sadrže jedan ili više teških i/ili lakih lanaca (ili njihovih varijanti) ili CDR regiona (ili njihovih varijanti) ili zrele fragmente takvih lanaca (ili njihove varijante) ili njihove varijabilne domene takvih lanaca (ili njihove varijante) koji su prikazani u daljem tekstu. Laki lanci mogu biti označeni sa "VL" ili "VK" i teški lanci mogu biti označeni sa "VH".

Mišji imunoglobulinski lanci

Lanci prikazani u daljem tekstu koji imaju oznaku "4A10", "19E8", "11C9" ili "22D2" mogu biti označeni kao takvi ovde. Kao što je ovde razmatrano, obim predmetnog pronalaska obuhvata anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su humanizovana antagonistička antitela) i njihove antigen-vezujućei fragmente koji sadrže bilo koji ili više (npr., 3) CDR regiona lakog lanca i/ili bilo koji ili više (npr., 3) CDR regiona teškog lanca iz imunoglobulinskih lanaca prikazanih u daljem tekstu; ili bilo koji zreo varijabilni domen lakog imunoglobulinskog lanca i/ili zreo varijabilni domen teškog imunoglobulinskog lanca prikazan u SEQ ID NOs: 45-104.

Humanizovani lanci

U primeru izvođenja prema pronalasku, humanizovano (npr., humanizovano antagonističko) anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku sadrži bilo koju kombinaciju zrelih varijabilnih domena teškog i lakog lanca sledećih imunoglobulinskih lanaca. U primeru izvođenja prema pronalasku, 11C9 humanizovani laki lanci su spareni sa 11C9 humanizovanim teškim lancima; 19E8 humanizovani laki lanci su spareni sa 19E8 humanizovanim teškim lancima; 4A10 humanizovani laki lanci su spareni sa 4A10 humanizovanim teškim lancima; i 22D2 humanizovani laki lanci su spareni sa 22D2 humanizovanim teškim lancima. U primeru izvođenja prema pronalasku, humanizovano anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment sadrže "45AGX_22D2_VL3" varijabilni domen lakog lanca imunoglobulina, npr., koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 274 ili njen zreo fragment (npr., aminokiseline 21-131 prema SEQ ID NO: 274); i "humanizovano x [LAG3_H] mAb.22D2 VH6 N54D" ili "humanizovano x [LAG3_H] mAb.22D2 VH6 N54G" varijabilni domen teškog lanca imunoglobulina koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 426 ili SEQ ID NO: 427, respektivno.

Lanci prikazani u daljem tekstu koji imaju oznaku "4A10", "19E8", "11C9" ili "22D2" mogu biti označeni kao takvi ovde. Kao što je ovde razmatrano, obim predmetnog pronalaska obuhvata anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su humanizovana antagonistička antitela) i njihove antigen-vezujuće fragmente koji sadrže bilo koji ili više (npr., 3) CDR regiona lakog lanca i/ili bilo koji ili više (npr., 3) CDR regiona teškog lanca iz imunoglobulinskih lanaca prikazanih ovde; ili bilo koji zreo ili neobrađen VLdomen ili laki

4

lanac imunoglobulina i/ili zreo ili neobrađen VHdomen ili težak lanac imunoglobulina koji je ovde prikazan. Obim predmetnog pronalaska takođe obuhvata bilo koji od humanizovanih polipeptida ili polinukleotida ili njihovih varijabilnih domena koji imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija ili tačkastih delecija.

Otkriće obuhvata bilo koja humanizovana anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente koji sadrže lake i teške lance imunoglobulina prikazane u daljem tekstu ili bilo koje antitelo ili fragment koji ima njihove CDR regione lakog i teškog lanca (npr., IgG1 ili IgG4). Takva antitela i fragmenti mogu biti označeni kao bilo koje od Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9 kao što sledi:

● Ab1: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 (VL3)) kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 53AHH humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 VH6) IgG1 / kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126); i

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 106); ili

varijabilni domen imunoglobulina lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-131 prema SEQ ID NO: 126 (podvučeni CDR regioni)); i varijabilni domen imunoglobulina teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 106 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrže CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 458); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

● Ab2: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 (VL3)) kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 56AHH humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 VH6 N55S) IgG1 / Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer: koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126); i

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 108); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 108 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrži CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 456); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

● Ab3: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 (VL3)) Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 54AHH humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 VH6 N55D) IgG1 / Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126)

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 110); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 110 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrži CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 457); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

● Ab4: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 (VL3)) Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 52AHH humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 VH6 N55Q) IgG1 / Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126); i

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 112); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 112 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrže CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 455); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

● Ab5: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 (VL3)) Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 57AHH humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 VH6) IgG4 S228P (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 114); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 114 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrži CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNNGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 458); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

● Ab6: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 (VL3)) kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 73AHD humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 VH6 N55D / VL3) IgG4 S228P / Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126); i

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 116); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 116 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrže CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQIDNO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNDGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 457); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

● Ab7: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 (VL3)) kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovan težak lanac 21AHG humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 VH6 N55S / VL3) IgG4 S228P / Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126); i

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 118); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 118 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrži CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

4

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNSGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 456); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

● Ab8: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 (VL3)) kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 80AHG humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 VH6 N55Q / VL3) IgG4 S228P / Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126); i

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 120); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 120 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrži CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNQGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 455); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

ili

● Ab9: humanizovani laki lanac 45AGX humanizovano x [LAG3_H] mAb (LBI45.22D2.E1.D1 (VL3)) Kapa (PX) (ili njegov varijabilni domen) i humanizovani težak lanac 72AHD humanizovano x [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 VH6 N55G / VL3) IgG4 S228P / Kapa (PX)) (ili njegov varijabilni domen); na primer koji sadrži:

imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(aminokiseline 21-238 prema SEQ ID NO: 126); i

imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

(SEQ ID NO: 122); ili

(aminokiseline 1-119 prema SEQ ID NO: 122 (podvučeni CDR regioni));

ili koji sadrži CDR regione:

CDR-L1: KASQSLDYEGDSDMN (SEQ ID NO: 38);

CDR-L2: GASNLES (SEQ ID NO: 39);

CDR-L3: QQSTEDPRT (SEQ ID NO: 40);

CDR-H1: DYNVD (SEQ ID NO: 33);

CDR-H2: DINPNGGGTIYAQKFQE (SEQ ID NO: 454); i

CDR-H3: NYRWFGAMDH (SEQ ID NO: 35)

CDR-H2 bilo kog anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta otkrivenog ovde može da sadrže aminokiselinsku sekvencu:

DINPNX1GGTIYX2QKFX3X4(SEQ ID NO: 446)

gde,

X1= D,N,S ili Q

X2= A ili S

X3= Q ili K

X4= E ili G

Humanizovani teški imunoglobulinski lanci su prikazani u SEQ ID NOs: 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 124, 128, 134, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 234, 235, 237, 239, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 406-419, 448, 449, 462 i 463. DNK koje kodiraju humanizovane teške imunoglobulinske lance su prikazane u SEQ ID NOs: 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 127, 133, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 233, 236, 238, 242, 244, 246, 248, 250, 252, 254, 264, 266, 268, 270, 272, 274, 276, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 376, 378, 380, 382, 384, 386, 388, 390, 392, 394, 396 i 398.

Humanizovani laki imunoglobulinski lanci su prikazani u SEQ ID NOs: 126, 130, 132, 136, 138, 208, 210, 224, 226, 228, 230, 232, 241, 257, 259, 261, 263, 351, 369, 371, 373, 375, 401, 403, 405, 450-453, 426, 427 i 459-461. DNk koje kodiraju humanizovane lake imunoglobulinske lance su prikazane u SEQ ID NOs: 125, 129, 131, 135, 137, 207, 209, 223, 225, 227, 229, 231, 240, 256, 258, 260, 262, 350, 368, 370, 372, 374, 400, 402 i 404.

"Varijanta" polipeptida, kao što je imunoglobulinski lanac, označava polipeptid koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je najmanje oko 70-99.9% (npr., 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 99.9%) identična ili slična referentnoj aminokiselinskoj sekvenci koja je prikazana ovde; kada je poređenje izvedeno pomoću BLAST algoritma gde su parameteri algoritma izabrani tako da imaju najveće poklapanje između odgovarajućih sekvenci celom dužinom odgovarajućih referentnih sekvenci (npr., očekivani prag vrednosti: 10; veličina reči: 3; maksimalna poklapanja u traženom opsegu: 0; BLOSUM 62 matrix; troškovi praznice: postojanje 11, ekstenzija 1; uslovno podešavanje matrice kompozicionih rezultata).

"Varijanta" polinukleotida označava polinukleotid koji sadrži nukleotidnu sekvencu koja je najmanje oko 70-99.9% (npr., 70, 72, 74, 75, 76, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90,

4

91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99, 99.5, 99.9%) identična sa referentnom nukleotidnom sekvencom koja je ovde prikazana; kada je poređenje izvedeno pomoću BLAST algoritma gde su parametri algoritma izabrani tako da daju najveće poklapanje između odgovarajućih sekvenci celom dužinom odgovarajućih referentnih sekvenci (npr., očekivani prag vrednosti: 10; veličina reči: 28; maksimalna poklapanja u traženom opsegu: 0; skorovi poklapanja/nepoklapanja: 1, -2; troškovi praznine: linearni).

Polipeptidi i anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti (npr., humanizovana antitela) otkriveni ovde obuhvataju varijabilni region teškog lanca imunoglobulina koji ima najmanje 78.99% (npr., 79%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%) identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 106; i/ili varijabilni region lakog lanca imunoglobulina koji ima najmanje 78.38% (npr., 79%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99%) identičnosti aminokiselinske sekvence sa aminokiselinama 1-111 prema SEQ ID NO: 224.

Pored toga, varijanta može biti polipeptid koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je prikazana ovde osim jedne ili više (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10) mutacija kao što su, na primer, misens mutacije (npr., konzervativne supstitucije), ne-sens mutacije, delecije ili insercije. Takav polipeptid može biti laki lanac imunoglobulina, težak lanac imunoglobulina i/ili CDR (npr., bilo koji ili više od CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 i/ili CDR-H3).

Kao što je ovde razmatrano, predmetno otkriće obuhvata anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente koji obuhvataju jednu ili više varijanti okvirnih sekvenci (npr., bilo koji ili više od FR-L1, FR-L2, FR-L3, FR-L4, FR-H1, FR-H2, FR-H3 i/ili FR-H4), CDR regiona (npr., 1, 2 ili 3 varijante CDR-L i/ili 1, 2, ili 3 varijante CDR-H) i/ili imunoglobulinske lance (npr., 1 ili 2 varijante VLs i/ili 1 ili 2 varijante VHs) čije sekvence su specifično ovde prikazane. Takva antitela i antigen-vezujući fragmenti mogu, sami po sebi, biti označeni kao varijante. Jednostavni polipeptidni lanci, koji obuhvataju jednu ili više varijanti FR, CDR-L, CDR-H i/ili imunoglobulinskih lanaca, sami po sebi su takođe otkriveni. Takođe su otkriveni polinukleotidi koji kodiraju takve varijante polipeptidnih lanaca. Na primer, ovde su otkrivena anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti koji sadrže aminokiselinsku sekvencu VHi VLantitela Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9, koji su prikazani ovde, kao i njihove varijante koje sadrže CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 navedenog Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9, ali koji sadrže 70% ili više (npr., 80%, 85%, 90%, 95%, 97% ili 99%) ukupne identičnosti aminokiselinske sekvence ili sličnosti sa navedenim VHi VLod Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9. Na taj način, u takvim primerima izvođenja, CDR regioni antitela i fragmenata su identični onima od VHi VLod Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9, ali bilo koje razlike od takvih VHi VLse javljaju u okvirnim regionima i/ili imunoglobulinskim konstantnim domenima.

Ovde su takođe otkrivene varijante anti-LAG3 antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) koje sadrže jednu ili više varijanti CDR regiona (npr., bilo koji ili više od CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 i/ili CDR-H3) i/ili okvirnih regiona (npr., bilo koji ili više od FR1, FR2, FR3 i/ili FR4) koji su prikazani ovde; i/ili jednu ili više varijanti VLdomena i/ili jednu ili više varijanti VHdomena takvih antitela ili fragmenata koji su prikazani ovde, na primer, sa najmanje 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 99% ili 99.9% identičnosti ili sličnosti sekvence sa, npr., SEQ ID NO: 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30, 32, 33, 34, 35, 37, 38, 39, 40, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 426, 427, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 446, 448, 449, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463 ili 464; koji se specifično vezuju za LAG3.

Kao što je razmatrano u prethodnom tekstu, otkriće obuhvata varijante anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata koje sadrže jednu ili više varijanti CDR regiona (npr., 1, 2 ili 3 varijante CDR-L i/ili 1, 2 ili 3 varijante CDR-H); i/ili okvirne regione (npr., bilo koji ili više od FR1, FR2, FR3 i/ili FR4) i/ili varijante VLi/ili varijante VHdomena (sa ili bez signalne sekvence) koji imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili više mutacija. Mutacije mogu da obuhvataju tačkaste mutacije koje su konzervativne ili nekonzervativne aminokiselinske supstitucije ili tačkaste delecije, na primer u okvirnom regionu i/ili u CDR. Kao što je razmatrano u prethodnom tekstu, otkriće obezbeđuje anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente koji sadrže CDR-L1, CDR-L2, CDR-L3, CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9, ali koji imaju mutacije u njihovim okvirnim regionima.

4

Konzervativno modifikovane varijante anti-LAG3 antitela i njihovih antigen-vezujućih fragmenata su takođe deo prema predmetnom pronalasku. "Konzervativno modifikovana varijanta" ili "konzervativna supstitucija" označava varijantu gde postoji jedna ili više supstitucija aminokiselina u polipeptidu sa drugim aminokiselinama koje imaju slične karakteristike (npr. naelektrisanje, veličinu bočnog lanca, hidrofobnost/hidrofilnost, konformaciju i rigidnost osnovnog lanca, itd.). Takve promene mogu često biti napravljene bez značajnog prekida biološke aktivnosti antitela ili fragmenta. Stručnjaci iz date oblasti tehnike razumeju da, generalno, pojedinačne aminokiselinske supstitucije u neesencijalnim regionima polipeptida ne menjaju značajno biološku aktivnost (videti, npr., Watson et al. (1987) Molecular Biology of the Gene, The Benjamin/Cummings Pub. Co., p.224 (4th Ed.)). Pored toga, manja je verovatnoća da supstitucije strukturno ili funkcionalno sličnih aminokiselina značajno prekidaju biološku aktivnost. Varijante anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata razmatrane ovde sadrže jedan ili više CDR regiona (npr., 1, 2 ili 3 varijante CDR-L i/ili 1, 2 ili 3 varijante CDR-H); okvirnih regiona (npr., bilo koji ili više od FR1, FR2, FR3 i/ili FR4); i/ili imunoglobulinskih lanaca koji imaju jednu ili više konzervativnih supstitucija. Na primer, takva antitela i fragmenti mogu da sadrže aminokiselinske sekvence otkrivene ovde, npr. SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30, 32, 33, 34, 35, 37, 38, 39, 40, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 426, 427, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 446, 448, 449, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463 ili 464; pri čemu takve aminokiselinske sekvence mogu da sadrže 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 15, 20 ili više njihovih konzervativnih aminokiselinskih supstitucija. Primeri konzrvativnih supstitucija su navedeni u Tabeli 1.

TABELA 1. Primeri konzervativnih aminokiselinskih supstitucija

Originalni ostatak Konzervativna supstitucija

4

Takođe su otkrivene varijante konzervativne za funkciju anti-LAG3 antitela i njihovih antigen-vezujućih fragmenata. Bilo koja od varijanti anti-LAG3 antitela i njihovih antigenvezujućih fragmenata (kao što su ovde razmatrani) mogu biti "varijante konzervativne za funkciju". Takve varijante sa konzervativnom funkcijom mogu, u nekim slučajevima, takođe biti okarakterisane kao konzervativno modifikovane varijante. "Varijante sa konzervativnom funkcijom," kao što su ovde korišćene, označavaju varijante anti-LAG3 antitela ili njihove antigen-vezujuće fragmente u kojima su jedan ili više aminokiselinskih ostataka (npr., od 1, 2, 3,

4

4, 5 ili 6 CDR regiona i/ili od VLi/ili od VH) promenjeni bez značajne promene jedne ili više funkcionalnih osobina antitela ili fragmenta. Varijanta sa konzervativnom funkcijom anti-LAG3 antitela i njegovih antigen-vezujućih fragmenata (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) može da sadrži varijantu imunoglobulinskog lanca (npr., jednu ili dve varijente VHs i/ili jednu ili više varijanti VLs) i/ili od CDR (npr., 1, 2 ili 3 varijante CDR-L i/ili 1, 2 ili 3 varijante CDR-H) bilo koje od ovde prikazanih, npr., bilo koje prema SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30, 32, 33, 34, 35, 37, 38, 39, 40, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 426, 427, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 446, 448, 449, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463 ili 464; koje ispoljavaju jednu ili više od sledećih funkcionalnih osobina:

● Inhibira vezivanje LAG3 za MHC klasu II molekula, npr., na Daudi ćelijama; na primer inhibira vezivanje humanog LAG3/MHC klase II na Daudi ćelijama sa IC50od oko 1.9-2.9 nM, npr., 2.1 nM, 2.8 nM, 2.0 nM, 1.9 nM, 2.5 nM, 2.6 nM, 2.1 nM, 2.4 nM ili 2.5 nM. (npr., oko 2.1-2.6 nM).

● U kompeticiji je sa molekulima MHC klase II za vezivanje LAG3 npr., na Daudi ćelijama;

● Vezuje se za ekstra petlju LAG3;

● Vezuje LAG3 sa K -9

Dod oko 10 M do oko 2 X 10-12M afinitetom (npr., kao što je mereno pomoću površinske plazmon rezonance ili KinExA); na primer vezuje humani LAG3 sa KD od oko 2, 3, 6, 10 ili 11 pM (npr., 2-11 pM) i/ili vezuje LAG3 makaki majmuna sa KD od oko 11, 12, 16 ili 25 pM (npr., 11-25 pM), npr., pomoću KinExA;

● Vezuje se za nativni LAG3 na površini aktiviranih CD4+ i/ili CD8+ T-ćelija; na primer, vezuje humane CD4+ T-ćelije koje eksprimiraju humani LAG3 sa EC50od oko 39, 41 ili 57 pM (npr., oko 39-57 pM); vezuje humane CD8+ T-ćelije koje eksprimiraju humani LAG3 sa

4

EC50od oko 33, 35 ili 49 pM (npr., oko 33-49 pM); vezuje CD4+ T-ćelije makaki majmuna koje eksprimiraju LAG3 makaki majmuna sa EC50od oko 27, 30 ili 35 pM (npr., oko 27-35 pM); vezuje CD8+ T-ćelije makaki majmuna koje eksprimiraju LAG3 makaki majmuna sa EC50od oko 30, 31 ili 41 pM (npr., oko 30-41 pM); na primer gde su T-ćelije izolovane iz krvi;

● Vezuje se za humani LAG3 i/ili LAG3 makaki majmuna, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta;

● Inhibira homodimerizaciju LAG3;

● Stimuliše proizvodnju IL-2 od strane antigen-specifičnih T-ćelija, npr., proozvodnju IL2 iz 3A9 mišjih T-ćelijskih hibridoma koji eksprimiraju humani LAG3 sa EC50od oko 1.06-1.65 nM, 1.74-1.83 nM, 3.56-4.06 nM, 2.83-2.96 nM, 0.57-1.07 nM, 0.45-1.27 nM, 0.47-1.01 nM ili 0.72-1.08 nM;

● Obeležava tkivo krajnika; i/ili

● Pojačava T-ćelijsku aktivaciju pomoću anti-PDl antitela kao što je pembrolizumab, npr., povećava proizvodnju IL-2 od strane T-ćelija;

● Ne obeležava tkivo mozga, srca, bubrega, jetre, pluća, pankreasa i/ili hipofize. ● Vezuje se za humani LAG3 dovođenjem u kontakt sa ostacima QEGAPAQL (aminokiseline 35-42 prema SEQ ID NO: 443) i RPARRADAGEYRAAVH (aminokiseline 137-152 prema SEQ ID NO: 443) i, izborno, ostacima DERGRQRGDFSLW (aminokiseline 123-135 prema SEQ ID NO: 443) od LAG3; ili ostacima SPTIPLQDL (aminokiseline 45-53 prema SEQ ID NO: 443) i, izborno DERGRQRGDFSL (aminokiseline 123-134 prema SEQ ID NO: 443) od LAG3; ili ostacima HPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVL (aminokiseline 78-102 prema SEQ ID NO: 443) od LAG3; i/ili zaštitom vodonika na osnovnom lancu amida takvih ostataka iz razmene sa deuterijumom (npr., iz D2O).

Predmetni pronalazak daje postupak za pripremu antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta koji se specifično vezuje za LAG3 koji sadrži primenu, na nehumanu životinju domaćina (npr., miša, zeca, kamilu, lamu ili pacova), efikasne količine jednog ili više peptida koji sadrže, sastoje se ili se esencijalno sastoje od aminokiselinske sekvence izabrane iz grupe koja se sastoji od QEGAPAQL (aminokiseline 35-42 prema SEQ ID NO: 443); RPARRADAGEYRAAVH (aminokiseline 137-152 prema SEQ ID NO: 443); DERGRQRGDFSLW (aminokiseline 123-135 prema SEQ ID NO: 443); SPTIPLQDL (aminokiseline 45-53 prema SEQ ID NO: 443); DERGRQRGDFSL (aminokiseline 123-134 prema SEQ ID NO: 443); i HPLAPGPHPAAPSSWGPRPRRYTVL (aminokiseline 78-102 prema SEQ ID NO: 443), npr., gde je peptid formulisan sa farmaceutski prihvatljivim nosačem. Izborno, antitelo ili fragment je izolovan iz ćelije domaćina, npr., iz seruma ili krvi životinje

4

domaćina. Izborno, životinja domaćin je primala više od jedne doze peptida. Takvi izolovani peptidi su deo predmetnog pronalaska, npr., fuzionisani za imunogen kao što je hemocijanin prilepka (KLH), humani serum albumin ili goveđi serum albumin.

Identičnost sekvenci označava stepen do koga su aminokiseline dva polipeptida iste na ekvivalentnim položajima kada su dve sekvence optimalno poravnate. Sličnost sekvenci obuhvata identične ostatke i neidentične, biohemijski srodne aminokiseline. Biohemijski srodne aminokiseline koje dele slične osobine i mogu biti međusobno razmenjivane su razmatrane u prethodnom tekstu.

Sledeće reference se odnose na BLAST algoritme često korišćene za analizu sekvenci: BLAST ALGORITHMS: Altschul et al. (2005) FEBS J. 272(20): 5101-5109; Altschul, S.F., et al., (1990) J. Mol. Biol.215:403-410; Gish, W., et al., (1993) Nature Genet.3:266-272; Madden, T.L., et al., (1996) Meth. Enzymol. 266:131-141; Altschul, S.F., et al., (1997) Nucleic Acids Res. 25:3389-3402; Zhang, J., et al., (1997) Genome Res. 7:649-656; Wootton, J.C., et al., (1993) Comput. Chem. 17:149-163; Hancock, J.M. et al., (1994) Comput. Appl. Biosci. 10:67-70; ALIGNMENT SCORING SYSTEMS: Dayhoff, M.O., et al., "A model of evolutionary change in proteins." u Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3. M.O. Dayhoff (ed.), pp. 345-352, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Schwartz, R.M., et al., "Matrices for detecting distant relationships." u Atlas of Protein Sequence and Structure, (1978) vol. 5, suppl. 3." M.O. Dayhoff (ed.), pp.353-358, Natl. Biomed. Res. Found., Washington, DC; Altschul, S.F., (1991) J. Mol. Biol. 219:555-565; States, D.J., et al., (1991) Methods 3:66-70; Henikoff, S., et al., (1992) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 89:10915-10919; Altschul, S.F., et al., (1993) J. Mol. Evol. 36:290-300; ALIGNMENT STATISTICS: Karlin, S., et al., (1990) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87:2264-2268; Karlin, S., et al., (1993) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:5873-5877; Dembo, A., et al., (1994) Ann. Prob. 22:2022-2039; i Altschul, S.F. "Evaluating the statistical significance of multiple distinct local alignments." u Theoretical and Computational Methods in Genome Research (S. Suhai, ed.), (1997) pp. 1-14, Plenum, New York.

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) mogu da sadrže jedan, dva, tri, četiri, pet ili šest regiona koji određuju komplementarnost (CDR) imunoglobulinskih lanaca otkrivenih ovde (gde su 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 CDR regiona, izborno, varijante onih prikazanih ovde). Jedan, dva, tri, četiri, pet ili šest CDR regiona mogu biti nezavisno izabrani od CDR sekvenci različitih imunoglobulinskih lanaca koji su ovde otkriveni. Alternativno, jedan, dva, tri, četiri, pet ili šest CDR regiona mogu biti izabrani od CDR sekvenci jednog opisanog antitela.

Na primer, ovde su otkrivena anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti kao i imunoglobulinski polipeptidni lanci koji sadrže:

● 4A10 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3;

● 4A10 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3;

● 11C9 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3;

● 11C9 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3;

● 19E8 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3;

● 19E8 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3;

● 22D2 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3; i/ili

● 22D2 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3; gde 4A10, 11C9, 19E8 i 22D2 CDR regioni mogu biti poreklom od mišjih ili humanizovanih 4A10, 11C9, 19E8 i 22D2 imunoglobulinskih lanaca, respektivno, koji su opvde prikazani (npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9).

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-H1, CDR-H2 ili CDR-H3 od 4A10 VH(npr., SEQ ID NO: 2); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NOs: 3 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 4 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 5 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 4A10 VL(npr., SEQ ID NO: 7); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NOs: 8 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 9 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 10 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-H1, CDR-H2 ili CDR-H3 od 19E8 VH(npr., SEQ ID NO: 12); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NOs: 13 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 14 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 15 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

1

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 19E8 VL(npr., SEQ ID NO: 17); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NOs: 18 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 19 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 20 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-H1, CDR-H2 ili CDR-H3 od 11C9 VH(npr., SEQ ID NO: 22); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NOs: 23 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 24 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 25 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 11C9 VL(npr., SEQ ID NO: 27); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NOs: 28 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 29 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 30 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-H1, CDR-H2 ili CDR-H3 od 22D2 VH(npr., SEQ ID NO: 32, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 ili 122); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NOs: 33 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 34, 446, 454, 455, 456, 457 ili 458 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 35 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

Anti-LAG3 antitela ili njihovi antigen-vezujući fragmenti mogu da sadrže najmanje jedan varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži jedan ili više (npr., 3) od CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 22D2 VL(npr., SEQ ID NO: 37 ili 126); npr., gde CDR regioni sadrže aminokiselinske sekvence navedene u SEQ ID NOs: 38 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 39 (ili njihove varijante koje imaju

2

1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 40 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), respektivno.

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži:

● 4A10 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3; i 4A10 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3;

● 11C9 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3; i 11C9 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3;

● 19E8 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3; i 19E8 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3; ili ● 22D2 CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3; i 22D2 CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3; gde 4A10, 11C9, 19E8 i 22D2 CDR regioni mogu biti poreklom od mišjih ili humanizovanih 4A10, 11C9, 19E8 i 22D2 imunoglobulinskih lanaca, respektivno, prikazanih ovde, i gde, izborno, 1, 2, 3, 4, 5 ili 6 CDR regiona su varijante onih koji su prikazani ovde.

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 4A10 VL(npr., SEQ ID NOs: 8 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 9 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 10 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)); i varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 4A10 VH(npr., SEQ ID NOs: 3 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 4 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 5 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)).

Anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment može da sadrži varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 19E8 VL(npr., SEQ ID NOs: 18 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 19 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 20 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)); i varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 19E8 VH(npr., SEQ ID NOs: 13 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 14 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 15 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)).

Anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment može da sadrži varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 11C9 VL(npr., SEQ ID NOs: 28 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 29 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 30 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)); i varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 11C9 VH(npr., SEQ ID NOs: 23 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 24 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 25 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)).

Anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment može da sadrži varijabilni (VL) domen lakog lanca antitela koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 22D2 VL(npr., SEQ ID NOs: 38 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 39 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 40 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)); i varijabilni (VH) domen teškog lanca antitela koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 22D2 VH(npr., SEQ ID NOs: 33 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija), 34, 446, 454, 455, 456, 457 ili 458 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija) i 35 (ili njihove varijante koje imaju 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 tačkastih mutacija i/ili tačkastih delecija)).

U dodatnom primeru izvođenja, antitelo je humanizovano antagonističko anti-LAG3 antitelo. Primeri takvih humanizovanih anti-LAG3 antitela obuhvataju, ali bez ograničenja na, ona koja sadrže CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 4A10; i CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 4A10.

U dodatnom primeru izvođenja, antitelo je humanizovano antagonističko anti-LAG3 antitelo. Primeri takvih humanizovanih anti-LAG3 antitela obuhvataju, ali bez ograničenja na, ona koja sadrže CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 19E8; i CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 19E8.

U dodatnom primeru izvođenja, antitelo je humanizovano antagonističko anti-LAG3 antitelo. Primeri takvih humanizovanih anti-LAG3 antitela obuhvataju, ali bez ograničenja na, ona koja sadrže CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 11C9; i CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 11C9.

4

U dodatnom primeru izvođenja, antitelo je humanizovano antagonističko anti-LAG3 antitelo. Primeri takvih humanizovanih anti-LAG3 antitela obuhvataju, ali bez ograničenja na, ona koja sadrže CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 od 22D2; i CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 od 22D2; na primer, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9.

Predmetni pronalazak daje anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment ili imunoglobulinski polipeptid koji sadrži:

● zreo 4A10 VLimunoglobulinski domen i/ili zreo 4A10 VHdomen;

● zreo 19E8 VLimunoglobulinski domen i/ili zreo 19E8 VHdomen;

● zreo 11C9 VLimunoglobulinski domen i/ili zreo 11C9 VHdomen; i/ili

● zreo 22D2 VLimunoglobulinski domen i/ili zreo 22D2 VHdomen; gde je 4A10, 19E8, 11C9 i 22D2 VLili VHdomen – mišji ili humanizovani 4A10, 19E8, 11C9 i 22D2 VLili VHdomen prikazan ovde, i gde, izborno, VLi/ili VHje varijanta VLili VHprikazana ovde (npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9).

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži zreo VLdomen 4A10, 19E8, 11C9 ili 22D2 pri čemu VLdomen sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 7, 17, 27, 37, 57, 59, 61, 63, 65, 101, 126, 130, 132, 136, 138, 208, 210, 224, 226, 228, 230, 232, 241, 257, 259, 261, 263, 351, 369, 371, 373, 375, 401, 403, 405, 426, 427, 450-453 ili 459-461 ili njenu varijantu.

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži zreo VHdomen 4A10, 19E8, 11C9 ili 22D2 gde VHdomen sadrži aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NO: 2, 12, 22, 32, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 128, 134, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 234, 235, 237, 239, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 406-419, 434-442, 448, 449, 462, 463 ili 464; ili njenu varijantu.

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži zreo VLdomen 4A10 (npr., aminokiseline 21-132 prema SEQ ID NO: 7 ili njenu varijantu) i zreo VHdomen 4A10 (npr., aminokiseline 20-136 prema SEQ ID NO: 2 ili njenu varijantu).

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži zreo VLdomen 19E8 (npr., aminokiseline 21-128 prema SEQ ID NO: 17 ili njenu varijantu) i zreo VHdomen 19E8 (npr., aminokiseline 20-138 prema SEQ ID NO: 12 ili njenu varijantu).

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži zreo VLdomen 11C9 (npr., aminokiseline 21-128 prema SEQ ID NO: 27 ili njenu varijantu) i zreo VHdomen 11C9 (npr., aminokiseline 20-142 prema SEQ ID NO: 22 ili njenu varijantu).

Ovde je takođe otkriveno anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koji sadrži zreo VLdomen 22D2 (npr., aminokiseline 21-131 prema SEQ ID NO: 37 ili 126 ili njenu varijantu) i zreo VHdomen 22D2 (npr., aminokiseline 21-138 ili 21-131 prema SEQ ID NO: 32, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 ili 122 ili njenu varijantu).

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 2 ili njene aminokiseline 20-136 ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 7 ili njene aminokiseline 21-132 ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 12 ili njene aminokiseline 20-138 ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 17 ili njene aminokiseline 21-128 ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 22 ili njene aminokiseline 20-142 ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 27 ili njene aminokiseline 21-128 ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 32, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 ili 122 ili njen zreo fragment, npr., koji sadrži njene aminokiseline 20-138 ili 20-131; ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi koji sadrže aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 37 ili 126 ili njen zreo fragment, npr., koji sadrži njene aminokiseline 21-131 ili njenu varijantu; ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 VHdomena koji sadrži SEQ ID NO: 2 (npr., SEQ ID NOs: 3-5); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 VLdomena koji sadrži SEQ ID NO: 7 (npr., SEQ ID NOs: 8-10); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 VHdomena koji sadrži SEQ ID NO: 12 (npr., SEQ ID NOs: 13-15); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 VLdomena koji sadrži SEQ ID NO: 17 (npr., SEQ ID NOs: 18-20); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 VHdomena koji sadrži SEQ ID NO: 22 (npr., SEQ ID NOs: 23-25); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 VLdomena koji sadrži SEQ ID NO: 27 (npr., SEQ ID NOs: 28-30); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 VHdomena koji sadrži SEQ ID NO: 32, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 ili 122 (npr., SEQ ID NOs: 33, 34 (ili 446, 454, 455, 456, 457 ili 458) ili 35); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Ovde su takođe otkriveni polipeptidi (npr., humanizovani imunoglobulinski lanac) koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 VLdomena koji sadrži SEQ ID NO: 37 ili 126 (npr., SEQ ID NOs: 38-40); ili bilo koji polinukleotid koji kodira takav polipeptid. Izborno, 1, 2 ili 3 takvih CDR regiona su varijante sekvence koja je ovde prikazana.

Predmetni pronalazak obuhvata kristalne kompozicije anti-LAG3 antitela i njihovih antigen-vezujućih fragmenata prema predmetnom pronalasku.

Polinukleotidi

Ovde su takođe otkriveni polinukleotidi koji kodiraju bilo koji od polipeptida ili imunoglobulinskih lanaca anti-LAG3 antitela i njihovih antigen-vezujućih fragmenata otkrivenih ovde (uključujući varijante aminokiselinskih lanaca specifično prikazane ovde). Na primer, predmetni pronalazak obuhvata polinukleotide opisane u SEQ ID NOs: 1, 6, 11, 16, 21, 26, 31, 36, 46, 48, 50, 52, 54, 56, 56, 58, 60, 62, 64, 66, 68, 70, 72, 74, 76, 78, 80, 82, 84, 86, 88, 90, 92, 94, 96, 98, 100, 102, 104, 105, 107, 109, 111, 113, 115, 117, 119, 121, 123, 125, 127, 129, 131, 133, 135, 137, 139, 141, 143, 145, 147, 149, 151, 153, 155, 157, 159, 161, 163, 165, 167, 169, 171, 173, 175, 177, 179, 181, 183, 185, 187, 189, 191, 193, 195, 197, 199, 201, 203, 205, 207, 209, 211, 213, 215, 217, 219, 221, 223, 225, 227, 229, 231, 233, 236, 238, 240, 242, 244, 246, 248, 250, 252, 254, 256, 258, 260, 262, 264, 266, 268, 270, 272, 274, 276, 278, 280, 282, 284, 286, 288, 290, 292, 294, 296, 298, 300, 302, 304, 306, 308, 310, 312, 314, 316, 318, 320, 322, 324, 326, 328, 330, 332, 334, 336, 338, 340, 342, 344, 346, 348, 350, 352, 354, 356, 358, 360, 362, 364, 366, 368, 370, 372, 374, 376, 378, 380, 382, 384, 386, 388, 390, 392, 394, 396, 398, 400, 402 ili 404 i njihove varijante (npr., koje sadrže nukleotidne sekvence koje imaju najmanje 70%, 80%, 90%, 95% ili 99% BLAST identičnosti sekvenci sa takvim nukleotidnim sekvencama (kao što je razmatrano u prethodnom tekstu)); i polinukleotide koji kodiraju aminokiseline opisane ovde, npr., u SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 12, 13, 14, 15, 17, 18, 19, 20, 22, 23, 24, 25, 27, 28, 29, 30, 32, 33, 34, 35, 37, 38, 39, 40, 45, 47, 49, 51, 53, 55, 57, 59, 61, 63, 65, 67, 69, 71, 73, 75, 77, 79, 81, 83, 85, 87, 89, 91, 93, 95, 97, 99, 101, 103, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120, 122, 124, 126, 128, 130, 132, 134, 136, 138, 140, 142, 144, 146, 148, 150, 152, 154, 156, 158, 160, 162, 164, 166, 168, 170, 172, 174, 176, 178, 180, 182, 184, 186, 188, 190, 192, 194, 196, 198, 200, 202, 204, 206, 208, 210, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 224, 226, 228, 230, 232, 234, 235, 237, 239, 241, 243, 245, 247, 249, 251, 253, 255, 257, 259, 261, 263, 265, 267, 269, 271, 273, 275, 277, 279, 281, 283, 285, 287, 289, 291, 293, 295, 297, 299, 301, 303, 305, 307, 309, 311, 313, 315, 317, 319, 321, 323, 325, 327, 329, 331, 333, 335, 337, 339, 341, 343, 345, 347, 349, 351, 353, 355, 357, 359, 361, 363, 365, 367, 369, 371, 373, 375, 377, 379, 381, 383, 385, 387, 389, 391, 393, 395, 397, 399, 401, 403, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 413, 414, 415, 416, 417, 418, 419, 426, 427, 434, 435, 436, 437, 438, 439, 440, 441, 442, 446, 448, 449, 451, 452, 453, 454, 455, 456, 457, 458, 459, 460, 461, 462, 463 ili 464. Otkriće takođe obuhvata varijante polinukleotida koje hibridizuju za bilo koji od takvih polinukleotida.

Pored toga, otkriće obuhvata anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente koji sadrže imunoglobulinske teške i lake lance (npr., njihove varijabilne regione) i/ili CDR regione teškog i lakog lanca kodirane polinukleotidima koji su ovde prikazani.

Na primer, ovde su otkrivena anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti koji sadrže težak lanac imunoglobulina kodiran polinukleotidom koji sadrži nukleotidnu sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 107 (ili kodira njegov varijabilni domen) i laki lanac imunoglobulina kodiran nukleotidnom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 125 (ili koja kodira njegov varijabilni domen). Na primer, ovde su otkrivena anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti koji sadrže težak lanac imunoglobulina kodiran polinukleotidom koji sadrži nukleotidnu sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 115 (ili koja kodira njegov varijabilni domen) i laki lanac imunoglobulina kodiran nukleotidnom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 125 (ili koja kodira njegov varijabilni domen).

Ovde je takođe otkriven polinukleotid koji kodira

● 4A10 VLili njegov zreo fragment;

● 4A10 VHili njegov zreo fragment;

● 19E8 VLili njegov zreo fragment;

● 19E8 VHili njegov zreo fragment;

● 11C9 VLili njegov zreo fragment;

● 11C9 VHili njegov zreo fragment;

● 22D2 VLili njegov zreo fragment; i/ili

● 22D2 VHili njegov zreo fragment; gde je 4A10, 19E8, 11C9 i 22D2 VLili VHdomen mišji ili humanizovani 4A10, 19E8, 11C9 i 22D2 VLili VHdomen prikazan ovde i gde, izborno, VLi/ili VHje varijanta VLili VHprikazana ovde.

Ovde je takođe otkriven polinukleotid koji sadrži nukleotidnu sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 1 ili njene nukleotide 58-408; ili njenu varijantu.

Ovde je takođe otkriven polinukleotid koji sadrži nukleotidnu sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 6 ili njene nukleotide 61-396; ili njenu varijantu.

Ovde je takođe otkriven polinukleotid koji sadrži nukleotidnu sekvencu prikazanu u SEQ ID NO:11 ili njene nukleotide 58-414; ili njenu varijantu.

Ovde su takođe otkriveni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 16 ili njene nukleotide 61-384; ili njenu varijantu.

Ovde su takođe otkriveni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 21 ili njene nukleotide 58-426; ili njenu varijantu.

Ovde su takođe otkriveni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 26 ili njene nukleotide 61-384; ili njenu varijantu.

Ovde su takođe otkriveni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 31 ili njene nukleotide 61-447; ili njenu varijantu.

Ovde su takođe otkriveni polinukleotidi koji sadrže nukleotidnu sekvencu navedenu u SEQ ID NO: 36 ili njene nukleotide 61-547; ili njenu varijantu.

Varijante polinukleotida prikazane ovde obuhvataju one koje hibridizuju pod niskim, umerenim ili visokim stringentnim uslovima za polinukleotide prikazane ovde ili za polinukleotide koji kodiraju polipeptide prikazane ovde i koji kodiraju imunoglobulinske lance anti-LAG3 antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata koji održavaju sposobnost da se specifično vezuju za LAG3 (humani LAG3 i/ili LAG3 makaki majmuna, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta). Prvi polinukleotidni molekul je "hibridizabilan" za drugi polinukleotidni molekul kada prvi lanačni oblik prvog molekula polinukleotida može da se spoji sa drugim polinukleotidnim molekulom pod odgovarajućim uslovima temperature i jonske snage rastvora (videti Sambrook, et al., supra). Uslovi temperature i jonske snage određuju "stringentnost" hibridizacije. Tipični uslovi niske stringentnosti hibridizacije obuhvataju 55°C, 5X SSC, 0.1% SDS i bez formamida; ili 30% formamid, 5X SSC, 0.5% SDS na 42°C. Tipični uslovi umerene stringentosti hibridizacije su 40% formamid, sa 5X ili 6X SSC i 0.1% SDS na 42°C. Uslovi visoke stringentnosti hibridizacije su 50% formamid, 5X ili 6X SSC na 42°C ili, izborno, na višoj temperaturi (npr., 57°C, 59°C, 60°C, 62°C, 63°C, 65°C ili 68°C). Uopšteno, SSC je 0.15M NaCl i 0.015M Na-citrat. Hibridizacija zahteva da dva polinukleotida sadrže komplementarne sekvence, iako, u zavisnosti od stringentnosti hibridizacije, moguća su nepoklapanja između baza. Odgovarajuća stringentnost za hibridizaciju polinukleotida zavisi od dužine polinukleotida i stepena komplementacije, promenljivih dobro poznatih u stanju tehnike. Što je veći stepen sličnosti ili homologije između dve nukleotidne sekvence, to je veća stringentnost pod kojima nukleinske kiseline mogu da hibridizuju. Za hibride veće od 100 nukleotida u dužinu, izvedene su jednačine za izračunavanje temperature topljenja (videti Sambrook, et al., supra, 9.50-9.51). Za hibridizaciju sa kraćim polinukleotidima, npr., oligonukleotidima, položaj nepoklapanja postaje važniji, i dužina oligonukleotida određuje njegovu specifičnost (videti Sambrook, et al., supra, 11.7-11.8).

U sledećem primeru izvođenja prema pronalasku, polinukleotid, na primer DNK, koji kodira imunoglobulinski polipeptidni lanac anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujućih fragmenata prikakaznih ovde formira deo predmetnog pronalaska. U jednom primeru izvođenja, polinukleotid kodira najmanje jedan varijabilni (VL) domen zrelog imunoglobulinskog polipeptidnog lakog lanca i najmanje jedan varijabilni (VH) domen zrelog imunoglobulinskog polipeptidnog lanca, pri čemu VLdomen sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 koji imaju sekvencu izabranu od SEQ ID NOs: 8-10, 18-20 28-30 i 38-40, i VHdomen sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 koji ima sekvencu izabranu od SEQ ID NOs: 3-5, 13-15, 23-25 i 33-35. U jednom primeru izvođenja, nukleinska kiselina kodira varijabilni region zrelog lakog lanca 4A10, 11C9, 19E8 ili 22D2 i/ili sekvence varijabilnog regiona zrelog teškog lanca 4A10, 11C9, 19E8 ili 22D2. U nekim primerima izvođenja prema pronalasku, polinukleotid kodira oba, laki lanac i težak lanac jednog polinukleotidnog molekula, i, u drugim primerima izvođenja prema pronalasku, laki i težak lanac su kodirani na posebnim polinukleotidnim molekulima, npr., u posebnim ili zajedničkim ćelijama domaćinima. U sledećem primeru izvođenja polinukleotidi dalje kodiraju signalnu sekvencu.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VL) domen lakog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 prema SEQ ID NO: 7. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VL) domen lakog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 prema SEQ ID NO: 17. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VL) domen lakog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 prema SEQ ID NO: 27. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VL) domen lakog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3 prema SEQ ID NO: 37 ili 126. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VH) domen teškog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 prema SEQ ID NO: 2. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VH) domen teškog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 prema SEQ ID NO: 12. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VH) domen teškog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 prema SEQ ID NO: 22. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

1

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VH) domen teškog lanca zrelog imunoglobulina koji sadrži CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3 prema SEQ ID NO: 32, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 ili 122. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VL) domen lakog lanca zrelog imunoglobulina prema SEQ ID NO: 7, 17, 27 i/ili 37. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Polinukleotid može da kodira varijabilni (VH) domen teškog lanca imunoglobulina prema SEQ ID NO: 2, 12, 22, 32, 106, 108, 110, 112, 114, 116, 118, 120 i/ili 122. Varijante takvih polinukleotida su takođe otkrivene.

Ovaj predmetni pronalazak takođe daje vektore, npr., ekspresione veketore, kao što su plazmidi, koji sadrže polinukleotide prema pronalasku, gde je polinukleotid operabilno vezan za kontrolne sekvence koje prepoznaje ćelija domaćin kada je ćelija domaćin transficirana vektorom. Takođe su obezbeđene ćelije domaćini koje sadrže polinukleotid (npr., integrisan u genom, npr., hromozom, ćelije domaćina) ili vektor prema predmetnom pronalasku i postupke za prozvodnju antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta ili polipeptida otkrivenog ovde koji sadrže kultivisanje ćelije domaćina koja sadrži ekspresioni vektor ili polinukleotid koji kodira imunoglobulinske lance antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta u medijumu kulture i izolaciju izolaciju antigena ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta iz ćelije domaćina ili medijuma kulture.

Vezujući afinitet

Radi primera, a ne ograničenja, anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde vezuju se za humani LAG3 i/ili LAG3 makaki majmuna, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta, npr., sa KDvrednošću od najmanje oko 100 nM (1x10-7M); najmanje oko 10nM; ili najmanje oko InM. U dodatnim primerima izvođenja, antitela imaju KDvrednosti od najmanje oko 200 pM (2x10-10M), 100 pM, 50 pM, 20 pM, 10 pM, 5pM ili čak 2 pM. Na primer, KDje oko 2.77 X 10-12 M, 1.47 X 10-11 M, 1.47 X 10-09 M ili 9.03 X 10-11 M; ili viši afinitet. U primeru izvođenja prema pronalasku, KDje kao što je meren u KinExA analizi ili sličnoj kinetičkoj ekskluzionoj analizi. Videti npr., Darling et al. Assay and Drug Dev. Tech.

2(6): 647-657 (2004).

Postupci za pripremu antitela i njihovih antigen-vezujućih fragmenata

Ćelije hibridoma, koje proizvode roditeljska (npr. mišja) monoklonska anti-LAG3 antitela ili njihovi anhtigen-vezujući fragmenti razmatrani ovde mogu se proizvesti postupcima opštepoznatim u struci. Takvi izolovani hibirdomi su deo predmetnog pronalaska. Ovi postupci

2

uključuju, ali se ne ograničavaju na tehnike hibridoma koje su originalno razvili Kohler, et al., (1975) (Nature 256:495-497), kao i tehnike trioma (Hering, et al., (1988) Biomed. Biochim. Acta. 47:211-216 i Hagiwara, et al., (1993) Hum. Antibod. Hybridomas 4:15), tehnike hibridoma humanih B-ćelija (Kozbor, et al., (1983) Immunology Today 4:72 i Cote, et al., (1983) Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A 80:2026-2030), tehnike EBV-hibridoma (Cole, et al., u: Monoclonal Antibodies and Cancer Therapy, Alan R. Liss, Inc., str.77-96, 1985), i elektrofuziju baziranu na električnom polju uz korišćenje Cyto Pulse fuzionog elektroporatora sa velikom komorom (Cyto Pulse Sciences, Inc., Glen Burnie, MD). Poželjno, mišji splenociti se izoluju i fuzionišu pomoću PEG ili elektrofuzije, sa ćelijskom linijom mišjeg mijeloma, u skladu sa standardnim protokolima. Dobijeni hibridomi mogu zatim da se pretraže u pogledu proizvodnje antigenspecifičnih antitela. Na primer, suspenzije pojedinačnih ćelija slezinskih limfocita iz imunizovanih miševa mogu se spojiti sa jednom šestinom broja P3X63-Ag8.653 nesekretujućih mijeloma ćelija miša (ATCC, CRL 1580) uz 50% PEG. Ćelije mogu da se zaseju pri gustini od približno 2 x 10<5>ćelija/mL, na ploči za mikrotitraciju sa ravnim dnom, posle čega sledi inkubacija u trajanju od dve nedelje, u selektivnom medijumu koji sadrži 20% fetalni Clone serum, 18% "653" kondicionirani medijum, 5% origen (IGEN), 4 mM L-glutamin, 1 mM L-glutamin, 1 mM natrijum piruvat, 5 mM HEPES, 0.055 mM 2-merkaptoetanol, 50 jedinica/ml penicilina, 50 mg/ml streptomicina, 50 mg/ml gentamicina i 1X HAT (Sigma; HAT se dodaje 24 sata posle spajanja). Posle dve nedelje, ćelije mogu da se kultivišu u medijumu koji umesto HAT sadrži HT. Pojedinačni bunarčići mogu da se pretražuju pomoću ELISA na anti-LAG3 monoklonska IgG antitela. Kada dođe do ekstenzivnog rasta hibridoma, medijum se zapaža obično posle 10-14 dana. Hibridomi koji sekretuju antitelo mogu se ponovo zasejati, ponovo pretražiti i, ako su i dalje pozitivni na humana IgG anti-LAG3 monoklonska antitela, mogu se subklonirati najmanje dva puta, ograničavanjem razblaženja.

Na taj način, predmetni pronalazak obuhvata postupke za pripremu anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku koji sadrži kultivaciju hibridoma ćelije koja eksprimira antitelo ili fragment pod uslovima povoljnim za takvu ekspresiju i, izborno, izolaciju antitela ili fragmenta iz hibridoma.

Anti-LAG3 antitela otkrivena ovde takođe mogu biti proizvedena rekombinantno (npr., u E. coli/T7 ekspresionom sistemu). U ovom primeru izvođenja, nukleinske kiseline koje kodiraju molekule imunoglobulina anti-LAG3 antitela prema pronalasku mogu biti inserirane u plazmid na bazi pET i eksprimirane u E. coli/T7 sistemu. Na primer, predmetni pronalazak obuhvata postupke za ekspresiju antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta ili njegovog imunoglobulinskog lanca u ćeliji domaćinu (npr., bakterijska ćelija domaćin kao što je E.coli kao što su BL21 ili BL21DE3) koja sadrži eksprimirajuću T7 RNAK polimerazu u ćeliji u kojoj takođe obuhvata polinukleotid koji kodira imunoglobulinski lanac koji je operativno vezan za T7 promotor. Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, bakterijska ćelija domaćin, kao što je E. coli, obuhvata polinukleotid koji kodira gen T7 RNK polimeraze operativno vezan za lac promotor i ekspresija polimeraze i lanca je indukovana inkubacijom ćelije domaćina sa IPTG (izopropil-beta-D-tiogalaktopiranozidom).

Postoji nekoliko u struci poznatih metoda kojima se proizvode rekombinantna antitela. Jedan primer metoda rekombinantne proizvodnje antitela objavljen je u SAD patentu br.

4,816,567. Transformacija može da se izvrši bilo kojim poznatim postupkom introdukcije polinukleotida u ćeliju-domaćina. Postupci introdukcije heterolognih polinukleotida u sisarske ćelije dobro su poznati u struci i uključuju transfekciju posredovanu dekstranom, precipitaciju kalcijum-fosfatom, transfekciju posredovanu polibrenom, fuziju protoplasta, elektroporaciju, inkapsulaciju polinukleotida u lipozome, biolističko injektiranje i direktno mikroinjektiranje DNK u nukleus. Pored toga, molekuli nukleinske kiseline mogu da se introdukuju u sisarske ćelije virusnim vektorima. Postupci transformisanja ćelija dobro su poznati u struci. Vidi, na primer, SAD patente br.4,399,216; 4,912,040; 4,740,461 i 4,959,455.

Na taj način, predmetni pronalazak obuhvata rekombinantne postupke za pripremu anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku, ili njegovog imunoglobulinskog lanca, koji sadrži (i) uvođenje polinukleotida koji kodira jedan ili više imunoglobulinskih lanaca antitela ili fragmenta, na primer, gde je polinukleotid u vektoru i/ili je operativno vezan za promotor; (ii) kultivisanje ćelije domaćina (npr., CHO ili Pichia ili Pichia pastoris) pod uslovima povoljnim za ekspresiju polinukleotida i, (iii) izborno, izolaciju antitela ili fragmenta ili lanca iz ćelije domaćina i/ili medijuma u kome je ćelija gajena. Kada priprema antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta sadrži više od jednog imunoglobulinskog lanca, npr., antitelo koje sadrži dva teška imunoglobulinska lanca i dva laka imunoglobulinska lanca, koekspresija lanaca u jednoj ćeliji domaćinu dovodi do vezivanja lanaca, npr., u ćeliji ili na ćelijskoj površini ili izvan ćelije ako su takvi lanci izlučeni, tako da se formira molekul antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta. Postupci obuhvataju one u kojima je eksprimiran samo težak imunoglobulinski lanac ili samo laki imunoglobulinski lanac (npr., bilo koji od onih razmatranih ovde uključujući zrele fragmente i/ili njihove varijabilne domene). Takvi lanci su korisni, na primer, kao intermedijeri u ekspresiji antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta koji obuhvata takav lanac. Na primer, ovde su otkrivena anti-LAG3 antitela i njihovi antigenvezujući fragmenti koji sadrže težak lanac imunoglobulina (ili njihov varijabilni domen ili koji sadrži njihove CDR regione) kodiran polinukleotidom koji sadrži nukleotidnu sekvencu

4

navedenu u SEQ ID NO: 115 (ili koja kodira njegov varijabilni domen) i laki lanac imunoglobulina (ili njegov varijabilni domen ili koji sadrži njihove CDR regione) kodiran nukleotidnom sekvencom prikazanom u SEQ ID NO: 125 (ili koja kodira njegov varijabilni domen) koji su proizvod takvih postupaka proizvodnje, i, izborno, postupaka prečišćavanja prikazanih ovde.

Anti-LAG3 antitela takođe mogu biti sintetisana pomoću bilo kog od postupaka prikazanih u SAD Patentu br.6,331,415.

Eukariotske i prokariotske ćelije domaćini, uključujući sisarske ćelije kao domaćine za ekspresiju anti-LAG3 antitela ili fragmenata ili imunoglobulinskih lanaca otkrivenih ovde su dobro poznate u stanju tehnike i obuhvataju mnoge imortalizovane ćelijske linije dostupne iz American Type Culture Collection (ATCC). One obuhvataju, pored ostalih, ćelije jajnika kineskog hrčka (CHO), NSO, SP2 ćelije, HeLa ćelije, ćelije bubrega mladunčeta hrčka (BHK), ćelije bubrega majmuna (COS), ćelije humanog hepatocelularnog karcinoma (npr., Hep G2), A549 ćelije, 3T3 ćelije, HEK-293 ćelije i bodređeni broj drugih ćelijskih linija. Sisarske ćelije domaćini obuhvataju humane, mišje, pacovske, pseće, majmunske, svinjske, kozje, goveđe, konjske i hrčkove ćelije. Ćelijske linije od posebne preferencije su izabrane preko određivanja koje ćelijske linije imaju visoke ekspresione nivoe. Ostale ćelijske linije koje mogu biti korišćene su insekatske ćelijske linije (npr., Spodoptera frugiperda ili Trichoplusia ni), ćelije vodozemaca, bakterijske ćelije, biljne ćelije i gljivične ćelije. Gljivične ćelije obuhvataju kvaščeve i ćelije filamentoznih gljiva uključujući, na primer, Pichia pastoris, Pichia finlandica, Pichia trehalophila, Pichia koclamae, Pichia membranaefaciens, Pichia minuta (Ogataea minuta, Pichia lindneri), Pichia opuntiae, Pichia thermotolerans, Pichia salictaria, Pichia guercuum, Pichia pijperi, Pichia stiptis, Pichia methanolica, Pichia sp., Saccharomyces cerevisiae, Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, Kluyveromyces sp., Kluyveromyces lactis, Candida albicans, Aspergillus nidulans, Aspergillus niger, Aspergillus oryzae, Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense, Fusarium sp., Fusarium gramineum, Fusarium venenatum, Physcomitrella patens i Neurospora crassa. Pichia sp., bilo koje Saccharomyces sp., Hansenula polymorpha, bilo koje Kluyveromyces sp., Candida albicans, bilo koje Aspergillus sp., Trichoderma reesei, Chrysosporium lucknowense i Fusarium sp., Yarrowia lipolytica,i Neurospora crassa.

Pored toga, ekspresija antitela i njihovih antigen-vezujućih fragmenata i imunoglobulinskih lanaca prema pronalasku (ili drugih njihovih grupa) iz proizvodnih ćelijskih linija može biti pojačana upotrebom određenog broja poznatih tehnika. Na primer, sistema sza ekspresiju gena glutamin sinttaze (GS sistema) je uobičajeni pristup za pojačanje ekspresije pod određenim uslovima. GS sistem je razmtran u celini ili delimično u vezi sa evropskim patentima br. 0 216 846, 0256 055, i 0 323 997 i evropskom patentnom prijavom br. 89303964.4. Na taj način, u primeru izvođenja prema pronalasku, sisarskim ćelijama domaćinima (npr., CHO) nedostaje gen za glutamin sintetazu i gajene su u odsustvu glutamina u medijumu gde, međutim, polinukleotid koji kodira imunoglobulinski lanac sadrži gen za glutamin sintetazu koji dopunjuje nedostatak gena u ćeliji domaćinu.

Predmetni pronalazak obuhvata postupke za prečišćavanje anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku koji sadrži uvođenje uzorka (npr., medijuma kulture, ćelijskog lizata ili frakcije ćelijskog lizata, npr., rastvorljive frakcije lizata) koji sadrži antitelo ili fragment u medijum za prečišćavanje (npr., katjonizmenjivački medijum, anjonsko-izmenjivački medijum, hidrofobni izmenjivački medijum, medijum za afinitetno prečišćavanje (npr., protein-A, protein-G, protein-A/G, protein-L)) i sakupljanje prečišćenog antitela ili fragmenta iz protočne frakcije navedenog uzorka kioji se ne vezuje za medijum; ili, odbacivanje protočne frakcije i eluiranje vezanog antitela ili fragmenta iz medijuma i sakupljanje eluata. U primeru izvođenja prema pronalasku, medijum je u koloni na koju je nanet uzorak. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak prečišćavanja je izveden posle rekombinantne ekspresije antitela ili fragmenta u ćeliji domaćinu, npr., gde je ćelija domaćin prvo lizirana i, izborno, lizat je prečišćen od nerastvorljivih materijala pre prečišćavanja na medijumu; ili gde je antitelo ili fragment izlučen u medijum kulture od strane ćelije domaćina i medijum ili njegova frakcija je naneta na medijum za prečišćavanje.

Uopšteno, glikoproteini proizvedeni u određenoj ćelijskoj liniji ili transgenoj životinji imaće glikozilacioni obrazac koji je karakterističan za glikoproteine proizvedene u ćelijskoj liniji ili transgenoj životinji. Prema tome, određeni glikozilacioni obrazac antitela će zavisiti od određene ćelijske linije ili transgene životinje korišćene za proizvodnju antitela. Međutim, sva antitela kodirana molekulima nukleinskih kiselina koji su ovde obezbeđeni, ili koja sadrže aminokiselinske sekvence obezbeđene ovde, sadrže ovaj pronalazak, nezavisno od glikozilacionog obrasca koji antitela mogu da imaju. Slično, u posebnim primerima izvođenja, antitela sa glikozilacionim obrascem koja sadrže samo nefukozilovane N-glikane mogu biti korisna, zbog toga što je pokazano da ova antitela tipično ispoljavaju potentniju efikasnost od njihovih fukozilovanih parnjaka kako in vitro tako i in vivo (Videti na primer, Shinkawa et al., J. Biol. Chem. 278: 3466-3473 (2003); U.S. Patenti br. 6,946,292 i 7,214,775). Ova antitela sa nefukozilovanim N-glikanima verovatno neće biti imunogena zbog toga što su njihove ugljenohidratne strukture normalna komponenta populacije koja postoji u humanom serum IgG.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela i antigen-vezujuće fragmente prema pronalasku koji sadrže N-vezane glikane koji su tipično dodati imunoglobulinima proizvedenim u ćelijama jajnika kineskog hrčka (CHO N-vezani glikani) ili konstruisanim ćelijama kvasca (konstruisani N-vezani glikani kvasca), kao što je, na primer, Pichia pastoris. Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, antitelo ili antigen-vezujući fragment sadrži jedan ili više "konstruisanih N-vezanih glikana kvasca" ili "CHO N-vezanih glikana" koji su prikazani na Slici 6 (npr., G0 i/ili G0-F i/ili G1 i/ili G1-F i/ili i/ili G2-F i/ili Man5). U primeru izvođenja prema pronalasku, antitelo ili antigen-vezujući fragment sadrži konstruisane N-vezane glikane kvasca, tj., G0 i/ili G1 i/ili G2, izborno, dodatno uključuje Man5. U primeru izvođenja prema pronalasku, antitelo ili antigen-vezujući fragment sadrže CHO N-vezane glikane, tj., GO-F, G1-F i G2-F, izborno, dodatno uključuje G0 i/ili G1 i/ili G2 i/ili Man5. U primeru izvođenja prema pronalasku, oko 80% do oko 95% (npr., oko 80-90%, oko 85%, oko 90% ili oko 95%) svih N-vezanih glikana na antitelu ili antigen-vezujućem fragmentu imunoglobulinskih lanaca su konstruisani N-vezani glikani kvasca ili CHO N-vezani glikani. Videti Nett et al. Yeast. 28(3): 237-252 (2011); Hamilton et al. Science. 313(5792): 1441-1443 (2006); Hamilton et al. Curr Opin Biotechnol. 18(5): 387-392 (2007). Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, konstruisana ćelija kvasca je GFI5.0 ili YGLY8316 ili sojevi prikazani u SAD Patentu br.

7,795,002 ili Zha et al. Methods Mol Biol.988:31-43 (2013). Videti takođe objavu međunarodne patentne prijave br. WO2013/066765.

Predmetni pronalazak obuhvata poliklonska anti-LAG3 antitela i njihove antigenvezujuće fragmente, npr., kompoziciju koja sadrži množinu anti-LAG3 antitela i fragmenata, koji obuhvataju jedno ili više anti-LAG3 antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata prema predmetnom pronalasku i njihovu upotrebu. Poliklonsko antitelo je antitelo koje je proizvedeno među ili u prisustvu jednog ili više drugih, neidentičnih antitela. Uopšteno, poliklonska antitela su proizvedena iz kolekcija različitih B-limfocita, npr., B-limfocita životinje tretirane imunogenom od interesa, koji proizvode populaciju različitih antitela, ali koji su svi usmereni na imunogen. Obično, poliklonska antitela su dobijena direktno od imunizovane životinje, npr., slezine, seruma ili tečnosti ascita.

Predmetni pronalazak obuhvata "antagonistička" anti-LAG3 antitela i njihove antigenvezujuće fragmente i postupke za njihovu upotrebu, npr., humanizovana, antagonistička anti-LAG3 antitela i fragmente. Antagonističko anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment antagonizuje aktivnost LAG3 (npr., humanog LAG3) kao što je inhibicijom LAG3 koji se vezuje za molekule MHC klase II; kompeticijom molekula MHC klase II za vezivanje za LAG3; ili kada je ćelija ili subjekat doveden u kontakt sa antitelom ili fragmentom, proizveden je biološki fenotip povezan sa antagonizmom LAG3, kao što je stimulacija antigen-specifične T-ćelijske proizvodnje IL-2.

Predmetni pronalazak obuhvata bispecifična i bifunkcionalna antitela i antigen-vezujuće fragmente koji imaju specifičnost vezivanja za LAG3 i drugi antigen kao što je, na primer, PD-1 ili PD-L1, i njihovu upotrebu. U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-PDl lanci sadrže aminokiselinsku sekvencu prema SEQ ID NOs: 41 i 42 ili prema SEQ ID NOs: 43 i 44. Bispecifično ili bifunkcionalno antitelo je veštačko hibridno antitelo koje ima dva različita para teškog/lakog lanca i dva različita vezujuća mesta. Bispecifična antitela mogu biti proizvedena različitim postupcima uključujući fuziju hibridoma ili vezivanje Fab' fragmenata. Videti, npr., Songsivilai, et al., (1990) Clin. Exp. Immunol. 79: 315-321, Kostelny, et al., (1992) J Immunol.

148:1547- 1553. Pored toga, bispecifična antitela mogu biti formirana kao "diatela" (Holliger, et al., (1993) PNAS USA 90:6444-6448) ili kao "Janusins" (Traunecker, et al., (1991) EMBO J.

10:3655-3659 i Traunecker, et al., (1992) Int. J. Cancer Suppl.7:51-52).

Predmetni pronalazak dalje obuhvata anti-LAG3 antigen-vezujuće fragmente anti-LAG3 antitela otkrivene ovde. Fragmenti antitela obuhvataju F(ab)2fragmente, koji mogu biti proizvedeni enzimatskim razlaganjem IgG pomoću, na primer, pepsina. Fab fragmenti mogu biti proizvedeni pomoću, na primer, redukcije F(ab)2sa ditiotreitolom ili merkaptoetilaminom. Fab fragment je VL-CLlanac spojen sa VH-CH1lancem preko disulfidnog mosta. F(ab)2fragment je dva Fab fragmenta koja, su zatim spojena sa dva disulfidna mosta. Fab deo F(ab)2molekula obuhvata deo Fcregiona između kojih se nalaze disulfidni mostovi. FVfragment je VLili VHregion.

Imunoglobulini mogu biti podeljeni u različite klase u zavisnosti od aminokiselinskih sekvenci konstantnog domena njihovih teških lanaca. Postoji najmanje pet glavnih klasa imunoglobulina: IgA, IgD, IgE, IgG i IgM, i nekoliko od njih mogu biti dalje podeljene u podklase (izotipove), npr. IgG-1, IgG-2, IgG-3 i IgG-4; IgA-1 i IgA-2. Pronalazak sadrži anti-LAG3 antitela i antigen-vezujuće fragmente bilo koje od ovih klasa ili podklasa antitela.

U jednom primeru izvođenja, anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment sadrži konstantni region teškog lanca, npr. humani konstantni region, kao što je γ1, γ2, γ3 ili y4 konstantni region humanog teškog lanca ili njegova varijanta. U drugom primeru izvođenja, anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment sadrži konstantni region lakog lanca, npr. konstantni region humanog teškog lanca, kao što je lambda ili kapa region humanog lakog lanca ili njegova varijanta. Radi primera, a ne ograničenja, konstantni region humanog teškog lanca može biti y4 i konstantni region humanog lakog lanca može biti kapa. U alternativnom primeru izvođenja, Fc region antitela je y4 sa Ser228Pro mutacijom (Schuurman, J et. al., Mol. Immunol. 38: 1-8, 2001).

U nekim primerima izvođenja, različiti konstantni domeni mogu biti vezani za humanizovane VLi VHregione poreklom od CDR regiona koji su ovde dati. Na primer, ako je određena namervana upotreba antitela (ili fragmenta) prema predmetnom pronalasku bila traženje promenjenih efektorskih funkcija, može se koristiti konstantni domen teškog lanca osim huamnog IgG1, ili se može koristiti hibridni IgG1/IgG4.

Iako humana IgG1 antitela obezbeđuju dugačak polu-život i efektorske funkcije, kao što je aktivacija komplementa i ćelijska citotoksičnost zavisna od komplementa, takvi aktivnosti ne moraju biti poželjne za sve upotrebe antitela. U takvim slučajevima može biti korišćen na prikmer konstantni domen humanog IgG4. Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela i njihove antigen-vezujuće fragmente koji sadrže konstantni domen IgG4, npr., antagonistička, humanizovana anti-LAG3 antitela i fragmente, i njihovu upotrebu. U jednom primeru izvođenja, konstantni domen IgG4 može da se razlikuje od konstantnog domena humanog IgG4 (Swiss-Prot pristupni br. P01861.1) na položaju koji odgovara položaju 228 u EU sistemu i položaju 241 u KABAT sistemu, gde je taivni Ser108 zamenjen sa Pro, u cilju prevencije potencijalne interlančane disulfidne veze između Cys106 i Cys109 (koji odgovaraju položajima Cys 226 i Cys 229 u EU sistemu i položajima Cys 239 i Cys 242 u KABAT sistemu) koji bi mogli da utiču na ispravno formiranje intra-lančane disulfidne veze. Videti Angal et al. (1993) Mol. Imunol.

30:105. U drugim slučajevima, može se koristiti modifikovani konstantni domen IgG1 koji je modifikovan tako da poveća polu-život ili smanji efektornu funkciju.

Konstrukcija antitela

Dalje su uključeni primeri izvođenja u kojima su anti-LAG3 antitela i njihovi antigenvezujući fragmenti konstruisana antitela tako da obuhvataju modifikacije okvirnih ostataka unutar varijabilnih domena roditeljskog (npr., mišjeg) monoklonskog antitela, npr. da bi se poboljšale osobine antitela ili fragmenta. Tipično, takve okvirne modifikacije su napravljene tako da smanjuju imunogenost antitela ili fragmenta. Ovo je obično postignuto zamenom ne-CDR ostataka u varijabilnim domenima (tj. okvirnim ostacima) u parentalnom (npr. glodarskom) antitelu ili fragmentu sa analognim ostacima iz imunog repertoara vrste u kojoj se antitelo koristi, npr. humanim ostatacima u slučaju humanih lekova. Takvo antitelo ili fragment je označeno kao "humanizovano" antitelo ili fragment. U nekim slučajevima poželjno je povećati afinitet, ili promeniti specifičnost konstruisanog (npr. humanizovanog) antitela. Jedan pristup je "povratna mutacija" jednog ili više okvirnih ostataka odgovarajuće sekvence klicine linije.

Specifičnije, antitelo ili fragment koji je podvrgnut somatskoj mutaciji može da sadrži okvirne ostatke koji se razlikuju od sekvence klicine linije od koje je izvedene antitelo. Takvi ostaci mogu biti identifikovani poređenjem okvirnih sekvenci antitela ili fragmenta sa sekvencama klicine linije od koje je izvedeno antitelo ili fragment. Sledeći pristup je vraćanje na originalni roditeljski (npr., glodarski) ostatak na jednom ili više položaja konstruisanog (npr. humanizovanog) antitela, npr. da bi se ponovo uspostavio vezujući afinitet koji može biti izgubljen u postupku zamene okvirnih ostataka. (videti, npr., SAD Patent br. 5,693,762, SAD Patent br.5,585,089 i SAD Patent br.5,530,101.)

Na primer, Tabela 2, u daljem tekstu, prikazuje regione gde se aminokiselinski položaj okvirnog regiona (upotrebom Kabat sistema numeracije) razlikuje od klicine linije i kako ovaj položaj može biti povratno mutiran do klicine linije sa naznačenim supstitucijama:

Drugi tip okvirne modifikacije obuhvata mutaciju jednog ili više ostataka unutar okvirnog regiona, ili čak unutar jednog ili više CDR regiona, da bi se uklonili T ćelijski epitopi da bi se na taj način smanila potencijalna imunogenost antitela. Ovaj pristup je takođe označen kao "deimunizacija" i detaljno je opisan u SAD Patentu br.7,125,689.

U posebnim primerima izvođenja, biće poželjno promeniti određene aminokiseline koje sadrže izložene bočne lance u drugi aminokiselinski ostatak u cilju obezbeđivanja veće hemijske stabilnosti finalnog antitela, kao što sledi. Takve promene u antigen-vezujućem regionu mogu da promene vezivanje za antigen. Deamidacija asparagina može da se javi na N-G ili D-G sekvencama i rezultuje u stvaranju ostatka izoasparaginske kiseline koji uvodi problem u polipeptidni lanac i smanjuje njegovu stabilnost (efekat izoasparaginske kiseline). U određenim primerima izvođenja, antitela predmetnog otkrića ne sadrže mesta asparaginskog izomerizma.

Na primer, asparaginski (Asn) ostatak može biti promenjen u Gln ili Ala da bi se smanjio potencijal za formiranje izoaspartata na bilo kojim Asn-Gly sekvencama, naročito unutar CDR. Sličan problem može da se javi na Asp-Gly sekvenci. Reissner and Aswad (2003) Cell. Mol. Life Sci.60:1281. Formiranje izoaspartata može da oslabi ili potpuno ukine vezivanje antitela za njegov ciljni antigen. Videti, Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731 at 734. U jednom primeru izvođenja, asparagin je promenjen u glutamin (Gln). Takođe može biti poželjno promeniti aminokiselinu susednu asparaginskom (Asn) ili glutaminskom (Gln) ostatku da bi se smanjila verovatnoća deamidacije, koja se javlja u višim stopama kada se male aminokiseline javljaju pored asparagina ili glutamina. Videti, Bischoff & Kolbe (1994) J. Chromatog. 662:261. Pored toga, bilo koji metioninski ostaci (tipično Met izložen rastvaraču) u CDR regionima mogu btii promenjeni u Lys, Leu, Ala ili Phe ili druge aminokiseline u cilju redukcije mogućnosti da bi se metioninski sumpor oksidovao, što bi moglo da smanji antigen-vezujući afinitet i takođe doprinose molekulskoj heterogenosti u finalnom preparatu antitela. Id. U jednom primeru izvođenja prema pronalasku, metionin je promenjen u alanin (Ala). Dodatno, u cilju prevencije ili minimalizacije potencijalnih enzimski cepajućih Asn-Pro peptidnih veza, može biti poželjno promeniti bilo koje Asn-Pro kombinacije koje se nalaze u CDR u Gln-Pro, Ala-Pro ili Asn-Ala. Antitela sa takvim supstitucijama su zatim ispitivana da bi se osiguralo da supstitucije ne smanjuju afinitet ili specifičnost antitela za LAG3, ili drugu željenu biološku aktivnost do neprihvatljivih nivoa.

TABELA 3. Primeri stabilizujućih CDR varijanti

Imunoglobulinski lanci prikazani u prethodnom tekstu 4A10, 19E8, 11C9 i 22D2 sadrže ostatke koji su dvostruko podvučeni. Obim prema predmetnom pronalasku obuhvata antitela,

1

antigen-vezujuće fragmente, polipeptide i polinukleotide kao što je ovde razmatrano gde su bilo koji ili više takvih ostataka mutirani do bilo kog drugog ostatka uključujući, na primer, one od stabilizujućih varijanti sekvenci prikazanih u prethodnom tekstu u Tabeli 3.

Mišja anti-LAG3 antitela i antigen-vezujući fragmenti mogu biti humanizovani različitim postupcima poznatim u stanju tehnike (videti npr., postupke humanizacije prikazane u WO2005/047326 ili US7846443.). Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, mišja anti-LAG3 antitela i fragmenti su humanizovani pomoću postupka gde je kompjuterski potpomognuto molekularno modeliranje korišćeno za identifikaciju CDR petlji u nehumanim imunoglobulinskim lancima. Ova identifikacija je napravljena na osnovu trodimenzionalne strukture imunoglobulinskog lanca i položaja petlji u lancu.

Humani okviri (dobijeni iz IMGD baze podataka), u koje će nehumane petlje biti uvedene, su izabrani na osnovu najboljih poklapanja (pomoću poređenja aminokiselinskih sekvenci) sa nehumanom sekvencom kako u okvirima tako i u CDR regionima. Što se tiče FR4 u VHdomenu, VJ regioni, za humane klicine linije, su upoređivani sa odgovarajućim nehumanim VJ regionima; i, što se tiče FR4 u VLdomenu, J-kapa i J-Lambda regioni, sekvenci humane klicine linije, su upoređivani sa odgovarajućim nehumanim J-kapa i J-lambda regionima.

Ispravna trodimenzionalna orijentacija CDR regiona, koja je kritična za održavanje vezivanja za antigen, zavisi, delimično, od ispravnog interfejsa između VHi VL. Na taj način, molekularni modeli su konstruisani i korišćeni za identifikaciju ostataka u VL- VHinterfejsu kao i za identifikaciju ostataka koji mogu potencijalno da promene CDR konformacije i stoga vezivanje za antigen. Ako je neophodno, mutacije u imunoglobulinskom lancu mogu biti uvedene tako da se postignu željene osobine npr., vezivanje za antigen.

Filteri za razvoj su ustanovljeni preko upotrebe tehnika molekularnog modelovanja. Filteri za razvoj su kriterijumi korišćeni za filtriranje karakteristika izvan finalnog imunoglobulinskog lanca tako da se izbegnu neželjeni efekti. Molekularni modeli su dalje korišćeni za identifikaciju aminokiseline izložene rastvaraču koja može da rezultuje u neželjenim efektima kao što su glikozilacija, deamidacija i oksidacija. Takvi efekti na antitelo mogu da dovedu do promena u konformaciji antitela i stoga funkciji. Takvi problemi mogu da se jave, na primer, u toku srazmernog povećanja ili tokom produženog vremenskog perioda kada su izloženi ekstremnim hemijskim/fizičkim sredinama. Ponovo, ako je neophodno, mutacije u lancima mogu biti uvedene tako da se postignu željene osobine.

Filteri za razvoj su tipično uvedeni rano u stadijumu dizajna humanizovanih lanaca da bi se eleminisali/minimalizovali ovi potencijalni problemi. Humanizovana antitela su dalje

2

podvrgnuta kriterijumima dozajna, kao što su dobra ekspresibilnost i poželjne izoelektrične tačke.

Konstruisanje Fc regiona antitela

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku takođe mogu biti konstruisani tako da obuhvataju modifikacije unutar Fc regiona, tipično tako da se promeni jedna ili više funkcionalnih osobina antitela, kao što su polu-život u serumu, fiksacija komplementa, vezivanje Fc receptora i/ili efektorska funkcija (npr., antigen-zavisna ćelijska citotoksičnost). Pored toga, antitela i antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku mogu biti hemijski modifikovani (npr., jedna ili više hemijskih grupa mogu biti vezane za antitelo) ili mogu biti modifikovane tako da menjaju njegovu glikozilaciju, ponovo da bi se promenila jedna ili više funkcionalnih osobina antitela ili fragmenta. Svaki od ovih primera izvođenja je opisan detaljnije u donjem tekstu. Numeracija ostataka u Fc regionu je ona prema EU indeksu Kabata. Bilo koje anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku koji imaju modifikacije (npr., Fc modifikacije) i/ili promene razmatrane ovde kao deo predmetnog pronalaska.

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku takođe obuhvataju antitela i fragmente sa modifikovanim (ili blokiranim) Fc regionima da bi se obezbedile promenjene efektorne funkcije. Videti, npr., SAD Pat. br. 5,624,821; WO2003/086310; WO2005/120571; WO2006/0057702. Takve modifikacije mogu biti korišćene za pojačanje ili supresiju različitih reakcija imunog sistema, sa mogućim korisnim efektima u dijagnozi i terapiji. Promene u Fc regionu obuhvataju aminokiselinske promene (supstitucije, delecije i insercije), glikozilaciju ili deglikozilaciju, i dodavanje višestrukih Fc. Promene Fc takođe mogu da promene polu-život antitela u terapeutskim antitelima, omogućavajući ređe doziranje i na taj način povećanu udobnost i smanjenu upotrebu materijala. Videti Presta (2005) J. Allergy Clin. Immunol. 116:731 at 734-35.

U jednom primeru izvođenja, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment je antitelo izotipa IgG4 ili fragment koji sadrži mutaciju serina u prolin na položaju koji odgovara položaju 228 (S228P; EU indeks) u zglobnom regionu konstantnog regiona teškog lanca. Objavljeno je da ova mutacija poništava heterogenost disulfidnih mostova između teških lanaca u zglobnom regionu (Angal et al. supra; položaj 241 je zasnovan na Kabat sistemu numeracije).

U jednom primeru izvođenja prema pronalasku, zglobni region CH1 je modifikovan tako da je broj cisteinskih ostataka u zglobnom regionu je povećan ili smanjen. Ovaj pristup je dodatno opisan u SAD Patentu br.5,677,425. Broj cisteinskih ostataka u zglobnom regionu CHI je promenjen, na primer, tako da olakša sklapanje lakih i teških lanaca ili tako da poveća ili smanji stabilnost antitela.

U sledećem primeru izvođenja, Fc zglobni region anti-LAG3 antitela ili antigenvezujućeg fragmenta je mutiran tako da se smanji biološki polo-život antitela ili fragmenta. Specifičnije, jedna ili više aminokiselinskih mutacija su uvedene u interfejs region CH2-CH3 domena i Fc-zglobnog fragmenta tako da je antitelo ili fragment oštetilo vezivanje Staphylococcyl proteina A (SpA) u odnosu na vezivanje nativnog Fc-zglobnog domena SpA. Ovaj pristup je opisan detaljnije u SAD Patentu br.6,165,745.

U sledećem primeru izvođenja, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment je modifikovan tako da poveća svoj biološki polu-život. Mogući su različiti pristupi. Na primer, mogu biti uvedene jedna ili više od sledećih mutacija: T252L, T254S, T256F, kao što je opisano u SAD Patentu br.

6,277,375. Alternativno, da bi se povećao biološki polu-život, antitelo može biti promenjeno unutar CHI ili CL regiona tako da sadrže spašavajući epitop koji se vezuje za receptor uzet iz dve petlje CH2 domena Fc regiona IgG, kao što je opisano u SAD Patentima br. 5,869,046 i 6,121,022.

U drugim primerima izvođenja, Fc region je promenjen zamenom najmanje jednog aminokiselinskog ostatka sa rzličitim aminokiselinskim ostatkom tako da se promeni efektorna funkcija (funkcije) anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta. Na primer, jedna ili više aminokiselina izabranih od aminokiselinskih ostataka 234, 235, 236, 237, 297, 318, 320 i 322 mogu iti zamenjene različitim aminokiselinskim ostatkom tako da antitelo ima promenjeni afinitet za efektorni ligand, ali zadržava antigen-vezujuću sposobnost matičnog antitela. Efektorni ligand za koji je afinitet promenjen može biti, na primer, Fc receptor C1 komponente komplementa. Ovaj pristup je opisan detaljnije u SAD Patentima br.5,624,821 i 5,648,260.

U sledećem primeru, jedna ili više aminokiselina izabranih od aminokiselinskih ostataka 329, 331 i 322 mogu biti zamenjene različitim aminokiselinskim ostatkom tako da anti-LAG3 antitelo ima promenjeno vezivanje C1q i/ili smanjenu ili poništenu citotoksičnost zavisnu od klomplementa (CDC). Ovaj pristup je opisan detaljnije u SAD Patentu br.6,194,551.

U sledećem primeru, jedan ili više aminokiselinskih ostataka unutar aminokiselinskih položaja 231 i 239 su promenjeni tako da se promeni sposobnost anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta za fiksiranje komplementa. Ovaj pristup je opisan dodatno u PCT objavi WO 94/29351.

4

U sledećem primeru, Fc region je modifikovan tako da se smanji sposobnost anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujućeg fragmenta da posreduje ćelijsku citotoksičnost zavisnu od antitela (ADCC) i/ili da smanji afinitet antitela ili fragmenta za Fcγ receptor modifikacijom jedne ili više aminokiselina na sledećim položajima: 238, 239, 243, 248, 249, 252, 254, 255, 256, 258, 264, 265, 267, 268, 269, 270, 272, 276, 278, 280, 283, 285, 286, 289, 290, 292, 293, 294, 295, 296, 298, 301, 303, 305, 307, 309, 312, 315, 320, 322, 324, 326, 327, 329, 330, 331, 333, 334, 335, 337, 338, 340, 360, 373, 376, 378, 382, 388, 389, 398, 414, 416, 419, 430, 434, 435, 437, 438 ili 439. Ovaj pristup je dodatno opisan u PCT objavi WO 00/42072. Pored toga, mapirana su vezujuća mesta na humanom IgG1 za FcγR1, FcyRII, FcyRIII i FcRn i opisane su varijante sa poboljšanim vezivanjem su (videti Shields et al. (2001) J. Biol. Chem.276:6591-6604).

U jednom primeru izvođenja prema pronalasku, Fc region je modifikovan tako da se smanji sposobnost anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujućeg fragmenta da posreduje efektornu funkciju i/ili da poveća anti-inflamatorne osobine modifikacijom ostataka 243 i 264. U jednom primeru izvođenja, Fc region antitela ili fragmenta je modifikovan promenom ostataka na položajima 243 i 264 u alanin. U jednom primeru izvođenja, Fc region je modifikovan tako da se smanji sposobnost antitela ili fragmenta da posreduje efektornu funkciju i/ili da poveća antiinflamatorne osobine modifikacijom ostataka 243, 264, 267 i 328.

Usledećem primeru izvođenja, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment sadrži određeni glikozilacioni obrazac. Na primer, aglikozilovano antitelo ili fragment može biti pripremljeno (tj., antitelo kome nedostaje glikozilacija). Glikozilacioni obrazac antitela ili fragment može biti promenjen tako da se, na primer, poveća afinitet ili aviditet antitela ili fragmenta za LAG3 antigen. Takve modifikacije mogu biti postignute preko, na primer, promene jednog ili više glikozilacionih mesta unutar sekvence antitela ili fragmenta. Na primer, jedna ili više aminokiselinskih supstitucija može biti napravljena tako da rezultuje u uklanjanju jednog ili više glikozilacionih mesta okvira varijabilnog regiona kako bi se na taj način eliminisala glikozilacija na tom mestu. Takva aglikozilacija može povećati afinitet ili aviditet ili aviditet antitela ili fragmenta za antigen. Videti, npr., SAD Patente br.5,714,350 i 6,350,861.

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku obuhvataju ona proizvedena u ćelijama domaćinima nižih eukariota, naročito gljivičnim ćelijama domaćinima kao što je kvasac (npr., Pichia pastoris) i filamentozne gljive, koji su genetički konstruisani tako da proizvode glikoproteine koji imaju glikozilacione obrasce slične sisarskim ili humanim (Videti na primer, Choi et al, (2003) Proc. Natl. Acad. Sci. 100: 5022-5027; Hamilton et al., (2003) Science 301: 1244-1246; Hamilton et al., (2006) Science 313: 1441-1443). Naročita prednost ovih genetički modifikovanih ćelija domaćina u odnosu na trenutno korišćene sisarske ćelijske linije je sposobnost da kontrolišu glikozilacioni profil glikoproteina koji su proizvedeni u ćelijama tako da mogu biti proizvedene kompozicije glikoproteina u kojima određena struktura N-glikana dominira (videti, npr., SAD Patent br. 7,029,872 i U.S. Patent br. 7,449,308). Ove genetički modifikovane ćelije domaćini su korišćene za proizvodnju antitela koji su pretežno određen strukture N-glikana (videti na primer, Li et al., (2006) Nat. Biotechnol.24: 210-215).

U određenim primerima izvođenja, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku dodatno obuhvataju one proizvedene u ćelijama domaćinima nižih eukariota i koja sadrže fukozilovane i nefukozilovane hibridne i složene N-glikane, uključujući bisekovane i multiantenalne vrste, uključujući, ali bez ograničenja na N-glikane kao što su GlcNAc(1-

4)Man3GlcNAc2; Gal(1-4)GlcNAc(1-4)Man3GlcNAc2; NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(1-

4)Man3GlcNAc2.

U određenim primerima izvođenja, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku mogu da sadrže antitela ili fragmenti koji imaju najmanje jedan hibridni N-glikan izabran iz grupe koja se sastoji od GlcNAcMan5GlcNAc2; GalGlcNAcMan5GlcNAc2; i NANAGalGlcNAcMansGlcNAc2. U posebnim aspektima, hibridni N-glikan je dominantna vrsta N-glikana u kompoziciji. U dodatnim aspektima, hibridni N-glikan je određena vrsta N-glikana koja sadrži oko 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ili 100% hibridnih N-glikana u kompoziciji.

U određenim primerima izvođenja, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti obezbeđeni ovde sadrže antitela i fragmente koji imaju najmanje jedan složeni N-glikan izabran iz grupe koja se sastoji od GlcNAcMan3GlcNAc2; GalGlcNAcMan3GlcNAc2; NANAGalGlcNAcMan3GlcNAc2; GlcNAc2Man3GlcNAc2; GalGlcNAc2Man3GlcNAc2; Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; i NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2. U određenim aspektima, složeni N-glikan je dominantna vrsta N-glikana u kompoziciji. U dodatnim aspektima, složeni N-glikan je određena vrsta N-glikana koja sadrži oko 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 97%, 98%, 99% ili 100% složenih N-glikana u kompoziciji.

U određenim primerima izvođenja, N-glikan anti-LAG3 antitela i antigen-vezujućeg fragmenta je fukozilovan. Uopšteno, fukoza je α1,3-veza sa GlcNAc na redukcionom kraju N-glikana, α1,6-veza sa GlcNAc na redukcionom kraju N-glikana, α1,2-veza sa Gal na neredukcionom kraju N-glikana, α1,3-veza sa GlcNac na redukcionom kraju N-glikana, ili α1,4-veza sa GlcNAc na neredukcionom kraju N-glikana.

Prema tome, u određenim aspektima gore navedenih kompozicija glikoproteina, glikoforma je u α1,3-vezi ili α1,6-vezi fukoze da bi se proizvela glikoforma izabrana iz grupe koja se sastoji od Man5GlcNAc2(Fuc), GlcNAcMan5GlcNAc2(Fuc), Man3GlcNAc2(Fuc), GlcNAcMan3GlcNAc2(Fuc), GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), GalGlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc), NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc) i NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2(Fuc); u α1,3-vezi ili α1,4-vezi fukoze da bi se proizvela glikoforma izabrana iz grupe koja se sastoji od GlcNAc(Fuc)Man5GlcNAc2, GlcNAc(Fuc)Man3GlcNAc2, GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, GalGlcNAc2(Fuc1-

2)Man3GlcNAc2, Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2, NANAGal2GlcNAc2(Fuc1-

2)Man3GlcNAc2i NANA2Gal2GlcNAc2(Fuc1-2)Man3GlcNAc2; ili u α1,2-vezi fukoze da bi se proizvela glikoforma izabrana iz grupe koja se sastoji od Gal(Fuc)GlcNAc2Man3GlcNAc2, Gal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2, NANAGal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2i NANA2Gal2(Fuc1-2)GlcNAc2Man3GlcNAc2.

U dodatnim aspektima, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njihovi antigen-vezujući fragmenti sadrže visok sadržaj manoznih N-glikana, uključujući, ali bez ograničenja na, Man8GlcNAc2, Man7GlcNAc2, Man6GlcNAc2, Man5GlcNAc2, Man4GlcNAc2ili N-glikane koji se sastoje od Man3GlcNAc2N-glikan strukture.

U dodatnim aspektima iz prethodnog teksta, složeni N-glikani dodatno obuhvataju fukozilovane i nefukozilovane bisekovane i multiantenalne vrste.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 ili Ab9) sadrži Fc domen imunoglobulina koji sadrži glikane koji sadrže sialinsku kiselinu (npr., N-Acetilneuraminsku kiselinu), npr., terminalnu a2,3-sialinsku kiselinu ili terminalnu α2,6-sialinsku kiselinu. U primeru izvođenja prema pronalasku, glikani na Fc su 5, 10, 20, 50, 90% ili više sialilovanih vrsta. U primeru izvođenja prema pronalasku, Fc sadrže mutacije na položajima 297, 264 i/ili 243.

Kao što su ovde korišćeni, termini "N-glikan" i "glikoforma" su korišćeni naizmenično i označavaju N-vezani oligosaharid, na primer, onaj koji je vezan asparagin-N-acetilglukozamin vezom za asparaginski ostatak polipeptida. N-vezani glikoproteini sadrže N-acetilglukozamin ostatak vezan za azot amida asparaginskog ostatka u proteinu. Dominantni šećeri nađeni na glikoproteinima su glukoza, galaktoza, manoza, fukoza, N-acetilgalaktozamin (GalNAc), N-acetilglukozamin (GlcNAc) i sialinska kiselina (npr., N-acetilneuraminska kiselina (NANA)). Obrada šećernih g rupa se javlja ko-translaciono u lumenu ER i nastavlja post-translaciono u Goldžijev aparat za N-vezane glikoproteine.

N-glikani imaju uobičajeno pentasaharidno jezgro od Man3GlcNAc2("Man" označava manozu; "Glc" označava glukozu; i "NAc" označava N-acetil; GlcNAc označava N-acetilglucozamin). Obično, strukture N-gliikana su predstavljene sa neredukcionim krajem na levo i redukcionim krajem na desno. Redukcioni kraj N-glikana je kraj koji je vezan za Asn ostatak koji sadrži glikozilaciono mesto na proteinu. N-glikani se razlikuju u odnosu na broj grana (antena) koje sadrže periferne šećere (npr., GlcNAc, galaktoza, fukoza i sialinska kiselina) koji su dodati strukturi jezgra Man3GlcNAc2("Man3 ") koji je takođe označen kao "trimanozno jezgro", "pentasaharidno jezgro" ili "paucimanozno jezgro". N-glikani su klasifikovani prema njihovim granatim gradivnim elementima (npr., visok sadržaj manoze, kompleks ili hibrid). N-glikan tipa "sa visokim sadržajem manoze" ima pet ili voše manoznih ostataka. "Složeni" tip N-glikana tipično ima najmanje jedan GlcNAc vezan za 1,3 manoznu granu i najmanje jedan GlcNAc vezan za 1,6 manoznu granu "trimanoznog" jezgra. Složeni N-glikani mogu takođe da imaju galaktozne ("Gal") ili N-acetilgalaktozamne ("GalNAc") ostatke koji su izborno modifikovani sa sialinskom kiselinom ili derivatima (npr., "NANA" ili "NeuAc", gde "Neu" označava neuramininsku kiselinu i "Ac" označava acetil). Složeni N-glikani mogu takođe da imaju intralančane supstitucije koje sadrže "bisekujući" GlcNAc i fukozu jezgra ("Fuc"). Složeni N-glikani mogu takođe da imaju višestruke antene na "trimanoznom jezgru," često označeni kao "multipli antenalni glikani." "Hibridni" N-glikan ima najmanje jedan GlcNAc na kraju 1,3 manozne grane trimanoznog jezgra i nula ili više manoza na 1,6 manoznoj grani trimanoznog jezgra. Različiti N-glikani su takođe označeni kao "glikoforme."

U vezi sa složenim N-glikanima, termini "G-2", "G-1", "G0", "G1", "G2", "A1" i "A2" označavaju sledeće. "G-2" označava strukturu N-glikana koja može biti okarakterisana kao Man3GlcNAc2; termin "G-1" označava strukturu N-glikana koja može biti okarakterisana kao GlcNAcMan3GlcNAc2; termin "G0" označava strukturu N-glikana koja može biti okarakterisana kao GlcNAc2Man3GlcNAc2; termin "G1" označava strukturu N-glikana koja može biti okarakterisana kao GalGlcNAc2Man3GlcNAc2; termin "G2" označava strukturu N-glikana koja može biti okarakterisana kao Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; termin "A1" označava strukturu N-glikana koja može biti okarakterisana kao NANAGal2GlcNAc2Man3GlcNAc2; i, termin "A2" označava strukturu N-glikana koja može biti okarakterisana kao NANA2Gal2GlcNAc2Man3GlcNAc2. Osim ukoliko je drugačije naznačeno, termini G-2", "G-1", "G0", "G1", "G2", "A1" i "A2" označavaju vrste N-glikana kojima nedostaje fukoza vezana za GlcNAc ostatak na redukcionom kraju N-glijana. Kada termin obuhvata "F", "F" označava da N-glikan vrste sadrže fukozni ostatak na GlcNAc ostatku na redukcionom kraju N-glikana. Na primer, G0F, G1F, G2F, A1F i A2F svi označavaju da N-glikan dalje obuhvata fukozni ostatak vezan za GlcNAc ostatak na redukcionom kraju N-glikana. Niži eukarioti kao što su kvasac i flametozne gljive normalno ne proizvode N-glikane koji proizvode fukozu.

U vezi sa multiantenarnim N-glikanima, termin "multiantenalni N-glikan" označava N-glikane koji dodatno sadrže GlcNAc ostatak na manoznom ostatku koji sadrži neredukcioni kraj 1,6 grane ili 1,3 grane N-glikana ili GlcNAc ostatak na svakom od manoznih ostataka koji sadrže neredukcioni kraj 1,6 grane i 1,3 grane N-glikana. Na taj način, multiantenalni N-glikani mogu biti okarakterisani pomoću formula GleNAc(2-4)Man3GlcNAc2, Gal(1-4)GlcNAc(2-

4)Man3GlcNAc2, ili NANA(1-4)Gal(1-4)GlcNAc(2-4)Man3GlcNAc2. Termin "1-4" označava 1, 2, 3, ili 4 ostatka.

U vezi sa bisekovanim N-glikanima, termin "bisekovani N-glikan" označava N-glikane u kojima je GlcNAc ostatak vezan za manozni ostatak na redukcionom kraju N-glikana. Bisekovani N-glikan može biti okarakterisan formulom GlcNAc3Man3GlcNAc2gde je svaki manozni ostatak vezan na svom neredukcionom kraju za GlcNAc ostatak. Nasuprot tome, kada je multiantenalni N-glikan okarakterisan kao GlcNAc3Man3GlcNAc2, formula označava da su dva GlcNAc ostatka vezana za manozni ostatak na neredukcionom kraju jedne od dve grane N-glikana i jedan GlcNAc ostatak je vezan za manozni ostatak na neredukcionom kraju druge grane N-glikana.

Fizičke osobine antitela

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) mogu dodatno da sadrže jedno ili više glikozilacionih mesta u varijabilnom regionu lakog ili teškog lanca imunoglobulina. Takva glikozilaciona mesta mogu da rezultuju u povećanoj imunogenosti antitela ili fragmenta ili promeni pK antitela kao posledica promenjenog vezivanja antigena (Marshall et al. (1972) Annu Rev Biochem 41:673-702; Gala and Morrison (2004) J Immunol 172:5489-94; Wallick et al (1988) J Exp Med 168:1099-109; Spiro (2002) Glycobiology 12:43R-56R; Parekh et al (1985) Nature 316:452-7; Mimura et al. (2000) Mol Immunol 37:697-706). Poznato je da se glikozilacija javlja na motivima koji sadrže N-X-S/T sekvencu.

Svako anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) imaće jednistvenu izoelektričnu tačku (pI). Na primer, neka antitela, kao što je Ab6, imaju pI od oko 6.3.

Svako anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) imaće karakterističnu temperaturu topljenja, sa višom temperaturom topljenja koja označava veću ukupnu stabilnost in vivo (Krishnamurthy R and Manning MC (2002) Curr Pharm Biotechnol 3:361-71). Uopšteno, TM1(temperatura početnog savijanja) može biti veća od 60°C, veća od 65°C ili veća od 70°C. Tačka topljenja antitela ili fragmenta može biti merena upotrebom diferencijalne skenirajuće kalorimetrije (Chen et al (2003) Pharm Res 20:1952-60; Ghirlando et al (1999) Immunol Lett 68:47-52) ili cirkularnog dihroizma (Murray et al. (2002) J. Chromatogr Sci 40:343-9).

U jednom primeru izvođenja, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku su izabrani koji se ne razlažu brzo. Razlaganje antitela ili fragmenta može biti mereno upotrebom kapilarne elektroforeze (CE) i MALDI-MS (Alexander AJ and Hughes DE (1995) Anal Chem 67:3626-32).

U dodatnom primeru izvođenja, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti prema pronalasku su izabrani tako da imaju minimalne agregacione efekte, koji mogu dovesti do pokretanja neželjenog imunog odgovora i/ili promenjenih ili nepovoljnih farmakokinetičkih osobina. Generalno, antitela i fragmenti su prihvatljivi sa agregacijom od 25% ili manje, 20% ili manje, 15% ili manje, 10% ili manje, ili 5% ili manje. Agregacija može biti merena pomoću nekoliko tehnika, uključujući ekskluzioni kolonu (SEC), tečnu hromatografiju visokog učinka (HPLC) i rasipanje svetlosti.

Konjugati antitela

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) mogu takođe biti konjugovani za hemijsku grupu. Takva konjugovana antitela i fragmenti su deo prema predmetnom pronalasku.

Hemijska grupa može biti, između ostalog, polimer, radionuklid ili citotoksični faktor. U posebnim primerima izvođenja, hemijska grupa je polimer koji povećava polu-život antitela ili fragmenta u telu subjekta. Pogodni polimeri obuhvataju, ali bez ograničenja na, hidrofilne polimere koji obuhvataju, ali bez ograničenja na polietilen glikol (PEG) (npr., PEG sa molekulskom težinom od 2kDa, 5 kDa, 10 kDa, 12kDa, 20 kDa, 30kDa ili 40kDa), dekstran i monometoksipolietilen glikol (mPEG). Lee, et al., (1999) (Bioconj. Chem. 10:973-981) otkriva PEG konjugovana jednolančana antitela. Wen, et al., (2001) (Bioconj. Chem. 12:545-553) otkrivaju konjugovana antitela sa PEG koji je vezan za radiometalni helator (dietilentriaminpentasirćetna kiselina (DTPA)).

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) takođe mogu biti konjugovani sa obeleživačima kao što su<99>Tc,<90>Y,<111>In,<32>P,<14>C,<125>I,<3>H,<131>I,<11>C,<15>O,<13>N,<18>F,<35>S,<51>Cr,<57>To, 226Ra, 60Co, 59Fe, 57Se, 152Eu, 67CU, 217Ci, 211At, 212Pb, 47Sc, 109Pd, 234Th, i 40K, 157Gd, 55Mn, 52Tr, i 56Fe.

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) takođe mogu biti PEGilovani, na primer da bi se povećao njihov biološki (npr., u serumu) polu-život. Da bi se antitelo ili fragment PEGilovalo, antitelo ili fragment, tipično reaguje sa reaktivnim oblikom polietilen glikola (PEG), kao što je reaktivni estar ili aldehidni derivat PEG, pod uslovima u kojima su jedna ili više PEG grupa postale vezane za antitelo ili fragment antitela. U posebnim primerima izvođenja, PEGilacija se izvodi preko reakcije acilacije ili reakcije alkilacije sa reaktivnim molekulom PEG (ili analognim reaktivnim polimerom koji je rastvorljiv u vodi). Kao što je ovde korišćen, termin "polietilen glikol" je određen tako da obuhvata bilo koji od oblika PEG koji je korišćen za derivatizaciju ostalih proteina, kao što je mono (C1-C10) alkoksi- ili ariloksi-polietilen glikol ili polietilen glikol-maleimid. U određenim primerima izvođenja, antitelo ili fragment koje će biti PEGilovano je aglikozilovano antitelo ili fragment. Postupci za PEGilaciju proteina su poznati u stanju tehnike i mogu biti primenjeni na antitela prema pronalasku. Videti, npr., EP 0 154 316 i EP 0401 384.

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) takođe mogu biti konjugovani sa fluorescentnim ili hemiluminiscentnim obeleživačima, uključujući fluorofore kao što su retki

1

zemljini helati, fluorescein i njegovi derivati, rodamin i njegovi derivati, izotiocijanat, fikoeritrin, fikocijanin, alofikocijanin, o-ftaladehid, fluorescamin, 152Eu, dansil, umbeliferon, luciferin, luminalni obeleživač, izoluminalni obeleživač, aromatični akridinijum estarski obeleživač, imidazol obeleživač, akridimijum so obeleživač, oksalat estar obeleživač, ekvorin obeleživač, 2,3-dihidroftalazindione, biotin/avidin, spin obeleživače i stabilne slobodne radikale.

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti takođe mogu biti konjugovani za citotoksični faktor kao što je toksin difterije, A lanac egzotoksin Pseudomonas aeruginosa, ricin A lanac, abrin A lanac, modecin A lanac, alfa-sarcin, proteini i jedinjenja Aleurites fordii (npr., masne kiseline), diantin proteini, Phytoiacca americana proteini PAPI, PAPII i PAP-S, inhibitor momordica charantia, kurcin, krotin, inhibitor saponaria officinalis, mitogelin, restrictocin, fenomicin i enomicin.

Može se koristiti bilo koji postupak poznat u stanju tehnike za konjugaciju anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9) za različite grupe, uključujući one postupke opisane od strane Hunter, et al., (1962) Nature 144:945; David, et al., (1974) Biochemistry 13:1014; Pain, et al., (1981) J. Immunol. Meth. 40:219; i Nygren, J., (1982) Histochem. and Cytochem. 30:407. Postupci za konjugaciju antitela i fragmenata su konvencionalni i veoma dobro pozanti u stanju tehnike.

Terapeutske upotrebe anti-LAG3 antitela

Dodatno su obezbeđena anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujući fragmenti prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera kod subjekata, kao što su humani subejkti. U primeru izvođenja prema pronalasku, takav subjekat pati od i lečen je od kancera, npr., solidnog tumora koji obuhvata, pored tumorskih ćelija, tumor infiltrirajuće limfocite (TILs), kao što su T-ćelije, koje eksprimiraju LAG3, npr., osteosarkom, rabdomiosarkom, neuroblastom, kancer bubrega, leukemija, kancer bubrežnih prelaznih ćelija, kancer bešike, Wilm-ov kancer, kancer jajnika, kancer pankreasa, kancer dojke (npr., okarakterisan mutacijom u BRCA1 i/ili BRCA2), kancer prostate, kancer kostiju, kancer pluća (npr., nesitnoćelijski kancer pluća), kancer želudca, kolorektalni kancer, cervikalni kancer, sinovijalni sarkom, kancer glave i vrata, karcinom skvamoznih ćelija, multipli mijelom, kancer bubrežnih ćelija, retinoblastom, hepatoblastom, hepatocelularni karcinom, melanom, rabdoidni tumor bubrega, Ewing-ov sarkom, hondrosarkom, kancer mozga, glioblastom, meningiom, adenom hipofize, vestibularni švanom, primitivni neuroektodermalni tumor, meduloblastom,

2

astrocitom, anaplastični astrocitom, oligodendrogliom, ependimom, horoidni pleksus papilom, policitemija vera, trombocitemija, idiopatska mijelfibroza, sarkom mekog tkiva, tiroidni kancer, endometrijalni kancer, karcinoidni kancer ili kancer jetre, kancer dojke ili kancer želudca. U primeru izvođenja prema pronalasku, kancer je metastatski kancer, npr., vrsta opisanih u prethodnom tekstu.

Predmetni pronalazak takođe daje anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infektivne bolesti kod subjekta. U primeru izvođenja prema pronalasku, infektivna bolest je virusna infekcija. U primeru izvođenja prema pronalasku, infektivna bolest je bakterijska infekcija. U primeru izvođenja prema pronalasku, infektivna bolest je parazitska infekcija. U primeru izvođenja prema pronalasku, infektivna bolest je gljivična infekcija.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u postupcima za lečenje bilo kog od kancera ili infektivnih bolesti razmatranih ovde primenom antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta izborno zajedno sa bilo kojim od dodatnih hemoterapeutskih sredstava ili terapeutskih postupaka razmatranih ovde kao i kompozicije koje obuhvataju takvo antitelo ili fragment zajedno sa takvim dodatnim hemoterapeutskim sredstvom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, virusna infekcija je infekcija virusom izabranim iz grupe koja se sastoji od virusa humane imunodeficijencije (HIV), virusa ebole, virusa hepatitisa (A, B ili C), herpes virusa (npr., VZV, HSV-I, HAV-6, HSV-II i CMV, Epstein Barr virusa), adenovirusa, virusa influence, flavivirusa, ehovirusa, rinovirusa, koksaki virusa, koronavirusa, respiratornog scincicijalnog virusa, virusa zauški, rotavirusa, virusa malih boginja, rubeola virusa, parvovirusa, vakcinija virusa, HTLV virusa, denga virusa, papilomavirusa, molluscum virusa, poliovirusa, virusa besnila, JC virusa ili virusa arbovirusnog encefalitisa.

U primeru izvođenja prema pronalasku, bakterijska infekcija je infekcija bakterijom izabranom iz grupe koja se sastoji od Chlamydia, rikecijalne bakterije, mikobakterije, stafilokoka, streptokoka, pneumokoka, meningokoka i gonokoka, klebsiele, proteusa, seracije, pseudomonasa, Legionella, Corynebacterium diphtheriae, Salmonella, bacila, Vibrio cholerae, Clostridium tetan, Clostridium botulinum, Bacillus anthricis, Yersinia pestis, Mycobacterium leprae, Mycobacterium lepromatosis, i Borriella.

U primeru izvođenja prema pronalasku, gljivična infekcija je infekcija gljivom izabranom iz grupe koja se sastoji od Candida (albicans, krusei, glabrata, tropicalis, itd.), Cryptococcus neoformans, Aspergillus (fumigatus, niger, itd.), Genus Mucorales (mucor, absidia, rhizopus), Sporothrix schenkii, Blastomyces dermatitidis, Paracoccidioides brasiliensis, Coccidioides immitis i Histoplasma capsulatum.

U primeru izvođenja prema pronalasku, parazitska infekcija je infekcija parazitom izabranim iz grupe koja se sastoji od Entamoeba histolytica, Balantidium coli, Naegleria fowleri, Acanthamoeba, Giardia lambia, Cryptosporidium, Pneumocystis carinii, Plasmodium vivax, Babesia microti, Trypanosoma brucei, Trypanosoma cruzi, Leishmania donovani, Toxoplasma gondii, Nippostrongylus brasiliensis.

Ovde je takođe otkriven postupak za prevenciju ili inhibiciju vezivanja LAG3 za MHC klasu II, pojačanje antigen-specifične T-ćelijske aktivacije ili stimulacije T-ćelijske proizvodnje interleukina-2 kod subjekta (npr., čoveka), na primer, gde subjekat pati od kancera ili infektivne bolesti (npr., kao što je ovde razmatrana) koji sadrži primenu efikasne količine anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta (npr., 4A10, 19E8, 11C9, 22D2, Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9, na subjekta, izborno, zajedno sa dodatnim hemoterapeutskim sredstvom, npr., pembrolizumabom ili nivolumabom.

Ovde su takođe oktirvene upotrebe anti-LAG3 antitela ili njihovih antigen-vezujućih fragmenata otkrivenih ovde u proizvodnji leka za lečenje kancera ili infektivne bolesti kod subjekta.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji osteosarkoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji rabdomiosarkoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji neuroblastoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera bubrega, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

4

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji leukemije, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancer renalne prelazne ćelije, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigenvezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera bešike, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji Wilm-ovog kancera, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancer jajnika, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera pankreasa, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera dojke, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak za lečenje ili prevenciju kancera dojke sadrži primenu antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku zajedno sa antraciklinom (npr., doksorubicinom i/ili epirubicinom) i/ili taksanom (npr., paklitakselom i/ili docetakselom). Izborno, antraciklin i taksan je u vezi sa 5-fluorouracilom (5-FU), ciklofosfamidom i karboplatinom. U primeru izvođenja prema pronalasku, gde je kancer dojke HER2 pozitivan, anti-LAG3 antitelo ili fragment se primenjuje zajedno sa trastuzumabom, izborno sa taksanom i/ili pertuzumabom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera prostate, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera kostiju, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera pluća, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak za lečenje ili prevenciju kancera pluća sadrži primenu antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku zajedno sa bevacizumabom i/ili cetuksimabom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji nesitnoćelijskog kancera pluća, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigenvezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak za lečenje ili prevenciju nesitnoćelijskog kancera pluća sadrži primenu antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku zajedno sa cisplatinom, karboplatinom, paklitakselom, albumin-vezanim paklitakselom, docetakselom, gemcitabinom, vinorelbinom, irinotekanom, etoposidom, vinblastinom i/ili pemetreksedom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera želudca, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kolorektalnog kancera, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak za lečenje ili prevenciju kolorektalnog kancera sadrži primenu antitela ili njegovog antigenvezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku zajedno sa 5-Fluorouracilom (5-FU), kapecitabinom, irinotekanom i/ili oksaliplatinom (npr., FOLFOX, FOLFIRI, FOLFOXIRI ili CapeOx).

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji cervikalnog kancera, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji sinovijalnog sarkoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera glave i vrata, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji karcinoma skvamoznih ćelija, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigenvezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji multiplog mijeloma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera renalnih ćelija, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji retinoblastoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji hepatoblastoma, koji sadrži primenu (izborno zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji hepatocelularnog karcinoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigenvezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji melanoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji rabdoidnog tumora bubrega, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigenvezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji Ewing-ovog sarkoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji hondrosarkoma, koji sadrži primenu (izborno zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera mozga, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji glioblastoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak za lečenje ili prevenciju glioblastoma multiforme sadrži primenu antitela ili njegovog antigenvezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku zajedno sa temozolomidom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji meningioma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji adenoma hipofize, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji vestibularog švanoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji primitivnog neuroektodermalnog tumora, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji meduloblastoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji astrocitoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji anaplastičnog astrocitoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigenvezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak za lečenje ili prevenciju refraktornog anaplastičnog astrocitoma sadrži primenu antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku zajedno sa temozolomidom.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji oligodendroglioma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji ependimoma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji horoidnog pleksus papiloma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigenvezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji policitemije vere, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji trombocitemije, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji idiopatske mijelofibroze, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji sarkoma mekog tkiva, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji tiroidnog kancera, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera endometrijuma, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji karcinoidnog kancera, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera jetre, koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera dojke (npr., okarakterisan mutacijom u BRCA1 i/ili BRCA2), koji sadrži primenu (izborno, zajedno sa pembrolizumabom ili nivolumabom) antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom humane imunodeficijencije (HIV), kod subjekta koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta je primenjen anti-virusno terapeutsko sredstvo kao što je inhibitor proteaze, nukleozidni/nukleotidni inhibitor reverzne transkriptaze, nenukleozidne inhibitore reverzne transkriptaze, inhibitor ulaska, inhibitor fuzije ili inhibitore integraze.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije Bundibugyo virusom (BDBV), Sudan virusom (SUDV), Taï Forest virusom (TAFV) i/ili ebola virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo, kao što su jedno ili više antitela koja se specifično vezuju za BDBV, SUDV, TAFV ili virus ebole ili nukleozidni inhibitor RNK polimeraze; ili vakcina.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom hepatitisa A, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom hepatitisa B, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom hepatitisa C, koji

1

sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo kao što je interferon i/ili ribavirin.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije herpes virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom vezikularnog stomatitisa, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije herpes simpleks virusom-I, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije HAV-6 virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije herpes simpleks virusom-II, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije citomegalovirusom (CMV), koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije epstein Barr virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije adenovirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

2

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom influence, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije flavivirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije ehovirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije rinovirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije koksaki virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije koronavirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije respiratornim sincicijalnim virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom zauški, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije rotavirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom malih boginja, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom rubeole, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije parvovirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije vakcinija virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije humanim T-limfotropnim virusom (HTLV), koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije denga virusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije papilomavirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom molluscum, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

4

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije poliovirusom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom besnila, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije John Cunningham virusom (JC virus), koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije virusom arboviralnog encefalitisa, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-virusno terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije Chlamydia trachomatis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije bakterijom rickettsia, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije mikobakterijom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije stafilokokama, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije streptokokama, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije pneumokokama, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije meningokokama, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije gonokokama, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije klebsijelom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije proteusom (npr., P. vulgaris, P. mirabilis, ili P. penneri), koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije seracijom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije pseudomonasom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije legionelom, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Corynebacterium diphtheriae, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Salmonella (npr., Salmonella bongori ili Salmonella enterica), koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije bacilima, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Vibrio cholerae, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Clostridium tetani, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Clostridium botulinum, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Bacillus anthracis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Yersinia pestis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Leptospira, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Borrelia, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-bakterijski antibiotik.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Candida albicans, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Candida krusei, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Candida glabrata, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Candida tropicalis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Cryptococcus neoformans, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Aspergillus fumigatus, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Aspergillus niger, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Mucorales mucor, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Mucorales absidia, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Mucorales rhizopus, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Sporothrix schenkii, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Blastomyces dermatitidis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Paracoccidioides brasiliensis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Coccidioides immitis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Histoplasma capsulatum, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek. Izborno, na subjekta se primenjuje anti-gljivično terapeutsko sredstvo.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Entamoeba histolytica, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Balantidium coli, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Naegleria fowleri, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Acanthamoeba sp., koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Giardia lambia, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Cryptosporidium sp., koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Pneumocystis carinii,koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Plasmodium vivax, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Babesia microti, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Trypanosoma brucei, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

1

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Trypanosoma cruz, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Leishmania donovani, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Toxoplasma gondii, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

Predmetni pronalazak obuhvata anti-LAG3 antitela ili antigen-vezujuće fragmente prema predmetnom pronalasku za upotrebu u lečenju ili prevenciji infekcije sa Nippostrongylus brasiliensis, koji sadrži primenu antitela ili antigen-vezujućeg fragmenta na subjekta, kao što je čovek.

"Subjekat" je sisar kao što je, na primer, čovek, pas, mačka, konj, krava, miš, pacov, majmun (npr., makaki majmun, npr., Macaca fascicularis ili Macaca mulatta) ili zec.

U određenim primerima izvođenja, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njihovi antigen-vezujući fragmenti prema predmetnom pronalasku mogu biti korišćeni pojedinačno, ili zajedno sa drugim, dodatnim terapeutskim sredstvima i/ili terapeutskim postupcima, za lečenje ili prevenciju bilo koje bolesti kao što je kancer, npr., kao što je razmatrano ovde, kod subjekta kod koga postoji potreba zatakvim tretmanom ili prevencijom. Kompozicije ili kompleti, npr., farmaceutske kompozicije koje sadrže farmaceutski prihvatljiv nosač, koje sadrže takva antitela i fragmente zajedno sa dodatnim terapeutskim sredstvima su takođe deo prema predmetnom pronalasku.

U određenim primerima izvođenja, anti-LAG3 antitela (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njihovi antigen-vezujući fragmenti prema predmetnom pronalasku mogu biti korišćeni zajedno sa anti-kancerskim terapeutskim sredstvom ili imunomodulatornim lekom kao što je imunomodulatorni inhibitor receptora, npr., antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koje se specifično vezuje za receptor.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku je u vezi sa jednim ili više inhibitora (npr., mali organski molekul ili antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment) kao što su: inhibitor MTOR (sisarskog ciljnog mesta rapamicina), citotoksično sredstvo, sredstvo platine inhibitor BRAF, inhibitor CDK4/6 inhibitor EGFR, inhibitor VEGF, stabilizator mikrotubula, taksan, inhibitor CD20, inhibitor

1 1

CD52, inhibitor CD30, inhibitor RANK (Receptor aktivator jedarnog faktora kapa-B), inhibitor RANKL (ligand Receptora aktivatora jedarnog faktora kapa-B ligand), inhibitor ERK, inhibitor MAP kinaze, inhibitor AKT, inhibitor MEK, inhibitor PI3K, inhibitor HER1, inhibitor HER2, inhibitor HER3, inhibitor HER4, inhibitor Bcl2, inhibitor CD22, inhibitor CD79b, inhibitor ErbB2, ili inhibitor farnezil protein transferaze.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku je u vezi sa jednim ili više od: anti-PDl (npr., pembrolizumab, nivolumab, CT-011), anti-PDLl, anti-CTLA4, anti-TIM3, anti-CSl, (npr., elotuzumab), anti-KIR2DL1/2/3 (npr., lirilumab), anti-CD27, anti-CD137 (npr., urelumab), anti-GITR (npr., TRX518), anti-PD-Ll (npr., BMS-936559, MSB0010718C ili MPDL3280A), anti-PD-L2, anti-ILT1, anti-ILT2, anti-ILT3, anti-ILT4, anti-ILT5, anti-ILT6, anti-ILT7, anti-ILT8, anti-CD40, anti-OX40, anti-CD137, anti-KIR2DL1, anti-KIR2DL2/3, anti-KIR2DL4, anti-KIR2DL5A, anti-KIR2DL5B, anti-KIR3DL1, anti-KIR3DL2, anti-KIR3DL3, anti-NKG2A, anti-NKG2C, anti-NKG2E, ili bilo koji mali organski molekul inhibitor takvih ciljnih mesta; IL-10, anti-IL10, anti-TSLP (timusni stromalni limfopoietin) ili PEGilovani IL-10.

U primeru izvođenja prema pronalasku, molekulska težina grupe polietilen glikola (PEG), na molekulu PEGilovanog IL-10, je oko 12,000 daltona ili oko 20,000 daltona. U primeru izvođenja prema pronalasku, PEGilovani IL-10 (npr., PEGilovani humani IL-10) sadrži jedan ili više molekula polietilen glikola kovalentno vezanih preko linkera (npr., C2-12alkil kao što je -CH2CH2CH2--) za jedan aminokiselinski ostatak jedne podjedinice IL-10, pri čemu je navedeni aminokiselinski ostatak alfa amino grupa N-terminalnog aminokiselinskog ostatka ili epsilon amino grupa lizinskog ostatka. U primeru izvođenja prema pronalasku PEGilovani IL-10 je: (PEG)b-L-NH-IL-10; gde b je 1-9 i L je C2-12alkil linker grupa kovalentno vezana za azot (N) jednog aminokiselinskog ostatka IL-10. U primeru izvođenja prema pronalasku, IL-10 PEGilovanog IL-10 ima formulu: [X--O(CH2CH2O)n]b-L-NH-IL-10, gde X je H ili C1-4alkil; n je 20 do 2300; b je 1 do 9; i L je C1-11alkil linker grupa koja je kovalentno vezana za azot (N) alfa amino grupe na amino terminusu jedne IL-10 podjedinice; uz uslov da kada je b veće od 1, ukupno n ne prelazi 2300. Videti US 7,052,686.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-IL-10 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo) sadrži CDR regione prikazane u donjem tekstu:

CDR-L1: KTSQNIFENLA (SEQ ID NO: 465)

CDR-L2: NASPLQA (SEQ ID NO: 466)

CDR-L3: HQYYSGYT (SEQ ID NO: 467)

1 2

CDR-H1: GFTFSDYHMA (SEQ ID NO: 468)

CDR-H2: SITLDATYTYYRDSVRG (SEQ ID NO: 469)

CDR-H3: HRGFSVWLDY (SEQ ID NO: 470)

(videti US7,662,379)

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-TSLP antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo) sadrži CDR regione prikazane u donjem tekstu:

CDR-H1: GYIFTDYAMH (SEQ ID NO: 428);

CDR-H2: TFIPLLDTSDYNQNFK (SEQ ID NO: 429);

CDR-H3: MGVTHSYVMDA (SEQ ID NO: 430);

CDR-L1: RASQPISISVH (SEQ ID NO: 431);

CDR-L2: FASQSIS (SEQ ID NO: 432);

CDR-L3: QQTFSLPYT (SEQ ID NO: 433);

(videti WO2008/76321)

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-CD27 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo) sadrži CDR regione prikazane u donjem tekstu:

CDR-H1: GFIIKATYMH (SEQ ID NO: 420);

CDR-H2: RIDPANGETKYDPKFQV (SEQ ID NO: 421);

CDR-H3: YAWYFDV (SEQ ID NO: 422);

CDR-L1: RASENIYSFLA (SEQ ID NO: 423);

CDR-L2: HAKTLAE (SEQ ID NO: 424);

CDR-L3: QHYYGSPLT (SEQ ID NO: 425);

(Videti WO2012/04367).

Na taj način, predmetni pronalazak obuhvata kompozicije koje sadrže anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku zajedno sa pembrolizumabom; kao i antitelo ili antigen-vezujući fragment za upotrebu u lečenju ili prevenciji kancera, koji sadrži primenu anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta zajedno sa pembrolizumabom (npr., pembrolizumab doziran u u 200 mg jednom svake tri nedelje) na subjekta. Izborno, na subjekta se vrši primena zajedno sa drugim dodatnim terapeutskim sredstvom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku je u vezi sa pembrolizumab antitelom koje sadrži težak lanac imunoglobulina (ili njegov CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

1

i laki lanac imunoglobulina (ili njegov CDR-L1, CDR-L2 i CDR-L3) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalaskuje u vezi sa antiteloom koje sadrži težak lanac imunoglobulina (ili njegov CDR-H1, CDR-H2 i CDR-H3) koji sadrži aminokiselinsku sekvencu:

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku je u vezi sa bilo kojim ili više od sledećih: 13-cis-retinoična kiselina, 3-[5-(metilsulfonilpiperadinmetil)-indolil]-hinolon, 4-hidroksitamoksifen, 5-deooksiuridin, 5'-deoksi-5-fluorouridin, 5-fluorouracil, 6-mekaptopurin, 7-hidroksistaurosporin, A-443654, abirateronacetat, abraksan, ABT-578, acolbifen, ADS-100380, aflibercept, ALT-110, altretamin, amifostin, aminoglutetimid, amrubicin, amsakrin, anagrelid, anastrozol, angiostatin, AP-23573, ARQ-197, arzoksifen, AS-252424, AS-605240, asparaginaza, ATI3387, AT-9263, atrasentan, aksitinib, AZD1152, Bacillus Calmette-Guerin (BCG) vakcina, batabulin, BC-210, besodutoks, bevacizumab, BGJ398, bicalutamid, Bio111, BIO140, BKM120, bleomicin, BMS-214662,

1 4

BMS-247550, BMS-275291, BMS-310705, bortezimib, buserelin, busulfan, kalcitriol, kamptotecin, kanertinib, kapecitabin, karboplatin, karmustin, CC8490, CEA (vakcina rekombinantnog vkcinija-karcinoembrionalnog antigena), cediranib, CG-1521, CG-781, hlamidocin, hlorambucil, hlorotoksin, cilengitid, cimitidin, cisplatin, kladribin, klodronat, cobimetnib, COL-3, CP-724714, ciklofosfamid, ciproteron, ciproteronacetat, citarabin, citosinearabinozid, dabrafenib, dakarbazin, dacinostat, daktinomicin, dalotuzumab, danusertib, dasatanib, daunorubicin, dekatanib, deguelin, denileukin, deoksikoformicin, depsipeptid, diarilpropionitril, dietilstilbestrol, diftitoks, DNE03, docetaksel, dovitinib, doksorubicin, droloksifen, edotekarin, edotreotid obeležen itrijumom-90, edotreotid, EKB-569, EMD121974, enkorafenib, endostatin, enzalutamid, enzastaurin, epirubicin, epitilon B, ERA-923, erbituks, erlotinib, estradiol, estramustin, etoposid, everolimus, eksemestan, fiklatuzumab, finasterid, flavopiridol, floksuridin, fludarabin, fludrokortizon, fluoksimesteron, flutamid, FOLFOX režim, fulvestrant, galeteron, ganetespib, gefitinib, gemcitabin, gimatekan, glukopiranozil lipid A, goserelin, goserelin acetat, gosipol, GSK461364, GSK690693, HMR-3339, hidroksiprogesteronkaproat, hidroksiurea, IC87114, idarubicin, idoksifene, ifosfamid, IM862, imatinib, IMC-1C11, imikvimod, INC280, INCB24360, INO1001, interferon, interleukin-2, interleukin-12, ipilimumab, irinotekan, JNJ-16241199, ketokonazol, KRX-0402, lapatinib, lasofoksifen, LEE011, letrozol, leukovorin, leuprolid, leuprolid acetat, levamisol, paklitaksel obuhvaćen u lipozomu, lomustin, lonafarnib, lukanton, LY292223, LY292696, LY293646, LY293684, LY294002, LY317615, LY3009120, marimastat, mehloretamin, medroksiprogesteronacetat, megestrolacetat, MEK162, melfalan, merkaptopurin, mesna, metotreksat, mitramicin, mitomicin, mitotan, mitoksantron, suspenzija toplotom ubijene Mycobacterium obuense, tozasertib, MLN8054, natitoklaks, neovastat, Neratinib, neuradiab, nilotinib, nilutimid, nolatreksed, NVP-BEZ235, oblimersen, oktreotid, ofatumumab, oregovomab, ornatuzumab, orteronel, oksaliplatin, paklitaksel, palbociklib, pamidronat, panitumumab, pazopanib, PD0325901, PD184352, PEG-interferon, pemetreksed, pentostatin, perifosin, fenilalanin iperit, PI-103, pictilisib, PIK-75, pipendoksifen, PKI-166, plikamicin, poli-ICLC, porfimer, prednizon, prokarbazin, progestini, PSK protein vezani polisaharid (poreklom od Basidiomycete coriolus versicolor), PLX8394, PX-866, R-763, raloksifen, raltitreksed, razoksin, ridaforolimus, rituksimab, romidepsin, RTA744, rubitekan, skriptaid, Sdx102, seliciklib, selumetinib, semaksanib, SF1126, sirolimus, SN36093, sorafenib, spironolakton, skvalamin, SR13668, streptozocin, SU6668, suberoilanalid hidroksamska kiselina, sunitinib, sintetički estrogen, talampanel, talimogene laherparepvek, tamoksifen, temozolomid, temsirolimus, teniposid, tesmilifen, testosteron, tetrandrin, TGX-221, talidomid, 6-tioguanin,

1

tiotepa, ticilimumab, tipifarnib, tivozanib, TKI-258, TLK286, TNFα (faktor alfa nekroze tumora), topotekan, toremifen citrat, trabektedin, trametinib, trastuzumab, tretinoin, trihostatin A, triciribinefosfat monohidrat, triptorelin pamoat, TSE-424, uracil iperit, valproinska kiselina, valrubicin, vandetanib, vatalanib, VEGF zamka, vemurafenib, vinblastin, vinkristin, vindezin, vinorelbin, vitaksin, vitespan, vorinostat, VX-745, vortmanin, Xr311, Z-100 ekstrakt vrele vode Bacillus tuberculosis, zanolimumab, ZK186619, ZK-304709, ZM336372 ili ZSTK474.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku je u vezi sa jednim ili više antiemetika uključujući, ali bez ograničenja na: kasopitant (GlaxoSmithKline), Netupitant (MGI-Helsinn) i drugi antagonisti NK-1 receptora, palonosetron (koji se prodaje kao Aloxi od strane MGI Pharma), aprepitant (koji se prodaje kao Emend od strane Merck and Co.; Rahway, NJ), difeenhidramin (koji se prodaje kao Benadryl® od strane Pfizer; New York, NY), hidroksizin (koji se prodaje kao Atarax® od strane Pfizer; New York, NY), metoklopramid (koji se prodaje kao Reglan® od strane AH Robins Co; Richmond, VA), lorazepam (koji se prodaje kao Ativan® od strane Wyeth; Madison, NJ), alprazolam (koji se prodaje kao Xanax® od strane Pfizer; New York, NY), haloperidol (koji se prodaje kao Haldol® od strane Ortho-McNeil; Raritan, NJ), droperidol (Inapsine®), dronabinol (koji se prodaje kao Marinol® od strane Solvay Pharmaceuticals, Inc.; Marietta, GA), deksametazon (koji se prodaje kao Decadron® od strane Merck and Co.; Rahway, NJ), metilprednizolon (koji se prodaje kao Medrol® od strane Pfizer; New York, NY), prohlorperazin (koji se prodaje kao Compazine® od strane Glaxosmithkline; Research Triangle Park, NC), granisetron (koji se prodaje kao Kytril® od strane Hoffmann-La Roche Inc.; Nutley, NJ), ondansetron ( koji se prodaje kao Zofran® od strane Glaxosmithkline; Research Triangle Park, NC), dolasetron (koji se prodaje kao Anzemet® od strane Sanofi-Aventis; New York, NY), tropisetron (koji se prodaje kao Navoban® od strane Novartis; East Hanover, NJ).

Ostali sporedni efekti lečenja kancera obuhvataju deficijencije crvenih i belih krvnih zrnaca. Prema tome, u primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigenvezujući fragment prema predmetnom pronalasku je u vezi sredstvom koje leči ili sprečava takvu deficijenciju, kao što je, npr., filgrastim, PEG-filgrastim, eritropoietin, epoetin alfa ili darbepoetin alfa.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vakcinom. U primeru izvođenja prema pronalasku, vakcina

1

je anti-kancerska vakcina, peptidna vakcina ili DNK vakcina. Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, vakcina je tumorska ćelija (npr., zračena tumorska ćelija) ili dendritska ćelija (npr., dendritska ćelija pulsirana tumorskim peptidom).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku primenjuje se zajedno sa terapeutskim postupkom. Terapeutski postupak je jedan ili više koraka koje izvode lekar ili kliničar u lečenju subjekta koji je namenjen za ublažavanje jednog ili više simptoma (npr., kancera i/ili infektivne bolesti) kod lečenog subjekta, bilo uvođenjem regresije ili eliminacije takvih simptoma ili putem inhibicije napredovanja takvog jednog ili više simptoma, npr., simptoma kancera kao što su rast tumora ili metastaza, za bilo koji klinički merljiv stepen.

U primeru izvođenja prema pronalasku, terapeutski postupak je anti-kancerska terapija zračenjem. Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, terapija zračenjem je terapija spoljašnjim zrakom (EBT): postupak za isporuku X zraka visoke energije do lokacije tumora. Zrak je generisan izvan pacijenta (npr., linearnim akceleratorom) i usmeren je na mesto tumora. Ovi X zraci mogu da unište ćelije kancera i pažljivo planiranje lečenja omogućava da okolna normalna tkiva budu pošteđena. Nikakvi izvori radioaktivnosti nisu postavljeni unutar tela pacijenta. U primeru izvođenja prema pronalasku, terapija zračenjem je terapija protonskim zracima: tip konformne terapije koji bombarduje obolelo tkivo protonima umesto X zracima. U primeru izvođenja prema pronalasku, trapija zračenjem je konformna terapija zračenjem spoljašnjim zracima: postupak koji koristi naprednu tehnologiju kako bi se skrojila terapija zračenjem prema individualnim strukturama tela.

U primeru izvođenja prema pronalasku, terapija zračenjem je brahiterapija: privremeno postavljanje radioaktivnih materijala unutar tela, koji se obično koriste da bi se dobila ekstra doza- ili buster-zračenja na površinu.

U primeru izvođenja prema pronalasku, hirurški postupak primenjivan zajedno sa anti-LAG3 antitelom (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom prema predmetnom pronalasku je hirurška tumorektomija.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitirom MTOR (sisarsko ciljno mesto rapamicina).

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa citotoksičnim sredstvom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa sredstvom platine.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom EGFR.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom VEGF.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa stabilizatorom mikrotubula.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa taksanom inhibitorom CD20.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom CD52.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom CD30.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom RANK (Receptor aktivator jedarnog faktora kapa-B).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom RANKL (Receptor aktivator jedarnog faktora kapa-B ligand).

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom BRAF, npr., za lečenje melanoma.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom CDK4/6, npr., za lečenje melanoma.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom ERK.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom MAP kinaze.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom AKT.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom MEK, npr., za lečenje melanoma.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom PI3K.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom HER1.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom HER2.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom HER3.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom HER4.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom Bcl2.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom CD22.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom CD79b.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom ErbB2.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa inhibitorom farnezil protein transferaze.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-PD1.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa nivolumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa CT-011.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-PDLl.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-CTLA4.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-TIM3.

11

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-CS1.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa elotuzumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR2DL1/2/3.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa lirilumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-CD137 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom, npr., agonistom anti-CD137 antitela ili fragmenta.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa urelumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-GITR.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa TRX518.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-PD-Ll.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BMS-936559.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa MSB0010718C.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa MPDL3280A.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-PD-L2.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT1.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT2.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT3.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT4.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT5.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT6.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT7.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-ILT8.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-CD40.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-OX40.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-CD137.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR2DL1.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR2DL2/3.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR2DL4.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR2DL5A.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR2DL5B.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR3DL1.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR3DL2.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-KIR3DL3.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-NKG2A.

11

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-NKG2C.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-NKG2E.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa IL-10.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-IL10.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anti-TSLP (timusnim stromalnim limfopoietinom).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PEGilovanim IL-10. U primeru izvođenja prema pronalasku, PEGilovani-IL-10 se primenjuje na subjekta u dozi do 20 mikrograma/kg (npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 mikrograma/kg). Na primer, do 20 mikrograma/kg na dan, npr., tokom do četiri (npr., 1, 2, 3 ili 4) 28 –dnevna ciklusa -npr., 20 mikrograma/kg/dan tokom četiri 28-dnevna ciklusa.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 13-cis-retinoičnom kiselinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 3-[5-(metilsulfonilpiperadinmetil)-indolil]-hinolonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 4-hidroksitamoksifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 5-deooksiuridinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 5'-deoksi-5-fluorouridinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 5-fluorouracilom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 6-mekaptopurinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 7-hidroksistaurosporinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa A-443654.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa abirateronacetatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa abraksanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ABT-578.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa acolbifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ADS-100380.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ALT-110.

11

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa altretaminom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa amifostinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa aminoglutetimidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa amrubicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa amsakrinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anagrelidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa anastrozolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa angiostatinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa AP-23573.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ARQ-197.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa arzoksifenom.

11

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa AS-252424.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa AS-605240.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa asparaginazom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa AT-9263.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa atrasentanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa aksitinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa AZD1152.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vakcinom Bacillus Calmette-Guerin (BCG).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa batabulinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BC-210.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa besodutoksom.

11

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa bevacizumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa bicalutamidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa Bio111.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BIO140.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa bleomicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BMS-214662.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BMS-247550.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BMS-275291.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BMS-310705.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa bortezimibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa buserelinom.

11

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa busulfanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa kalcitriolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa kamptotecinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa kanertinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa kapecitabinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa karboplatinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa karmustinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa CC8490.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa CEA (rekombinantna vakcinija-karcinoembrionalna antigenska vakcina).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa cediranibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa CG-1521.

11

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa CG-781.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa hlamidocinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa hlorambucilom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa hlorotoksinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa cilengitidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa cimitidinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa cisplatinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa kladribinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa klodronat.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa COL-3.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa CP-724714.

12

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ciklofosfamidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ciproteronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ciproteronacetatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa citarabinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa citozinarabinozidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dakarbazinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dacinostatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa daktinomicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dalotuzumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa danusertibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dasatanibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa daunorubicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa decatanibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa deguelinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa denileukinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa deoksikoformicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa depsipeptidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa diarilpropionitrilom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dietilstilbestrolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa diftitoksom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa docetakselom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dovitinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa doksorubicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa droloksifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa edotekarinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi edotreotidom obeleženim sa itrijumom-90.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa edotreotidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa EKB-569.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa EMD121974.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa endostatinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa enzalutamidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa enzastaurinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa epirubicinom.

12

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa epitilonom B.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ERA-923.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa cetuksimabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa erlotinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa estradiolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa estramustinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa etoposidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa everolimusom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa eksemestanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ficlatuzumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa finasteridom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa flavopiridolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa floksuridinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa fludarabinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa fludrokortizonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa fluoksimesteronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa flutamidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa FOLFOX režimom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa fulvestrantom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa galeteronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa gefitinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa gemcitabinom.

12

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa gimatekanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa glikopiranozil lipidom A.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa goserelinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa goserelin acetatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa gosipolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa GSK461364.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa GSK690693.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa HMR-3339.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa hidroksiprogesteronkaproatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa hidroksiureom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa IC87114.

12

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa idarubicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa idoksifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ifosfamidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa IM862.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa imatinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa imikvimodom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa IMC-1C11.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa INCB24360.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa INO1001.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa interferonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa interleukinom-2 (IL-2).

12

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa interleukinom-12 (IL-12).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ipilimumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa irinotekanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa JNJ-16241199.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ketokonazolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa KRX-0402.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa lapatinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa lasofoksifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa letrozolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa leukovorinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku je u vezi sa leuprolidom.

12

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa leuprolid acetatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa levamisolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa paklitakselom sadržanim u lipozom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa lomustinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa lonafarnibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa lukantonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LY292223.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LY292696.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LY293646.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LY293684.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LY294002.

12

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LY317615.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa marimastatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa mehloretaminom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa medroksiprogesteronacetatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa megestrolacetatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa melfalanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa merkaptopurinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa mesnom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa metotreksatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa mitramicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa mitomicinom.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa mitotanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa mitoksantronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tozasertibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa suspenzijom toplotom ubijene Mycobacterium obuense.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa MLN8054.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa neovastatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa Neratinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa neuradiabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa nilotinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa nilutimidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa nolatreksom.

1 1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa NVP-BEZ235.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa oblimersenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa oktreotidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ofatumumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa oregovomabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa orteronelom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa oksaliplatinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa paklitakselom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa palbociklibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa pamidronatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa panitumumabom.

1 2

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa pazopanibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PD0325901.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PD184352.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PEG-interferonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa pemetreksedom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa pentostatinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa perifosinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa fenilalanin iperitom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PI-103.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa piktilisibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PIK-75.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa pipendoksifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PKI-166.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa plikamicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa poli-ICLC.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa porfimerom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa prednizonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa prokarbazinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa progestinima.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa polisaharidom vezanim za PSK protein (poreklom od Basidiomycete coriolus versicolor).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PX-866.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa R-763.

1 4

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa raloksifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa raltitreksedom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa razoksinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ridaforolimusom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa rituksimabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa romidepsinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa RTA744.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa rubitekanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa skriptaidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa Sdx102.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa seliciklibom.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa selumetinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa semaksanibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa SF1126.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa sirolimusom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa SN36093.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa sorafenibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa spironolaktonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa skvalaminom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa SR13668.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa streptozocinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa SU6668.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa suberoilanalid hidroksamskom kiselinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa sunitinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa sintetičkim estrogenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa talampanelom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa talimogen laherparepvekom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tamoksifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa temozolomidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa temsirolimusom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa teniposidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tesmilifenom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa testosteronom.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tetrandrinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa TGX-221.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa talidomidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa 6-tioguaninom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tiotepa.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ticilimumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tipifarnibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tivozanibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa TKI-258.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa TLK286.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa topotekanom.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa toremifen citratom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa trabektedinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa trastuzumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tretinoinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa trihostatinom A.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa triciribinfosfat monohidratom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa triptorelin pamoatom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa TSE-424.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa faktorom alfa nekroze tumora (TNFα).

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa uracil iperitom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vaproinskom kiselinom.

1

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa valrubicinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vandetanibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vatalanibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa VEGF zamkom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vinblastinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vinkristinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vindesinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vinorelbinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vitaksinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vitespanom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vorinostatom.

14

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa VX-745.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vortmaninom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa Xr311.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa zanolimumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ekstraktom Bacillus tuberculosis vrele vode Z-100.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ZK186619.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ZK-304709.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ZM336372.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ZSTK474.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa kasopitantom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa netupitantom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa antagonistom NK-1 receptora.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa palonosetronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa aprepitantom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa difenhidraminom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa hidroksizinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa metoklopramidom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa lorazepamom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa alprazolamom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa haloperidolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa droperidolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dronabinolom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa deksametazonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa metilprednizolonom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa prohlorperazinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa granisetronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ondansetronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dolasetronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa tropisetronom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa filgrastimom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PEG-filgrastimom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa eritropoietinom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa epoetinom alfa.

14

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa darbepoetinom alfa.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa dabrafenibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa trametinibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa vemurafenibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa kobimetnibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LY3009120.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa DNE03.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ATI13387.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ganetespibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa enkorafenibom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa MEK162.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BKM120.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa LEE011.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa BGJ398.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa INC280.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa PLX8394.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa ornatuzumabom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa natitoklaksom.

U primeru izvođenja prema pronalasku, anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment (npr., humanizovano antitelo kao što je antagonističko humanizovano antitelo) prema predmetnom pronalasku je u vezi sa afliberceptom.

Termin "u vezi sa" označava da komponente, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku zajedno sa drugim sredstvom kao što je pembrolizumab ili nivolumab, mogu biti formulisani u jednoj kompoziciji, npr., za istovremenu isporuku ili formulisani posebno u dve ili više kompozicija (npr., komplet). Svaka komponenta može biti primenjivana na subjekta u različito vreme od onoga kada se druga komponenta primenjuje; na primer, svaka primena može biti davana neistovremeno (npr., posebno ili uzastopno) u intervalima tokom datog vremenskog perioda. Pored toga, posebne komponente mogu biti primenjivane na subjekta istim ili različitim putem (npr., gde se anti-LAG3 antitelo (npr.,

14

humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigenvezujući fragment primenjuju parenteralno i paklitaksel se primenjuje oralno.

Analize i eksperimentalne i dijagnostičke upotrebe

Predmetni pronalazak obuhvata bilo koji postupak za formiranje kompleksa između anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku i LAG3 (npr., humani LAG3 ili LAG3 makaki majmuna) koji sadrži dovođenje u kontakt LAG3 polipeptida sa anti-LAG3 antitelom ili fragmentom pod uslovima pogodnim za vezivanje i formiranje kompleksa.

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde mogu biti korišćeni kao sredstva za afinitetno prečišćavanje. U ovom postupku, anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti su imobilizovani kao čvrsta faza kao što je sefadeks, staklo ili agarozna smola ili filter papir, upotrebom postupaka koji su dobro poznati u stanju tehnike. Imobilizovano antitelo ili fragment je doveden u kontakt sa uzorkom koji sadrži LAG3 protein (ili njegov fragment) koji se prečišćava, i, zatim, podloga je isprana pogodnim rastvaračem koji će ukloniti uglavnom sav materijal u uzorku osim LAG3 proteina koji je vezan za imobilizovano antitelo ili fragment. Konačno, podloga je isprana rastvaračem koji eluira vezani LAG3 (npr., protein A). Takva imobilizovana antitela i njihovi fragmenti formiraju deo predmetnog pronalaska.

Predmetni pronalazak daje postupke za upotrebu anti-LAG3 antitela i njihovih antigenvezujućih fragmenata prema predmetnom pronalasku da bi se odredio stepen T-ćelijske aktivacije koji određeni subjekat ima ili bi mogao da ima u prisustvu antitela ili fragmenta. Na primer, primeri izvođenja prema pronalasku obuhvataju postupke uključujući (i) dovođenje u kontakt T-ćelija (npr., CD4+ T-ćelija) iz subjekta sa superantigenom (npr., bilo kojim ili više stafilokoknih superantigena kao što su SEA, SEB (enterotoksin B Staphylococcus-a), SEC2, SEC3, SED, SEH i/ili TSST; i/ili bilo koji ili više od streptokokalnih superantigena kao što su SPE-A, SPE-C, SPE-H i/ili SMEZ-2), npr., u koncentraciji od 500 pg/ml ili više, kao što je oko 10 ng/ml ili 100 ng/ml, u prisustvu anti-LAG3 antitela ili fragmenta (izborno, T-ćelije su preinkubirane sa superantigenom (npr., SEB) i antitelom ili fragmentom u trajanju od oko 48 ili 72 časa) i (ii) određivanje nivoa proizvodnje citokina (npr., TNF-alfa, GM-CSF, IFN-gama i/ili IL-2) proizvodnje navedenih T-ćelija; gde nivo proizvodnje navedenog jednog ili više citokina ukazuje na nivo T-ćelijske aktivacije u prisustvu antitela ili fragmenta. Subjekti koji poseduju T-ćelije koje ispoljavaju proizvodnju citokina (npr., visoki nivoi proizvodnje citokina kao što je njegovo povećanje zavisno od anti-LAG3) u prisustvu superantigena i antitela smatraju se boljim

14

kandidatima za primanje antitela ili fragmenta kao terapije, npr., za lečenje kancera ili infekcije. U primeru izvođenja prema pronalasku, takvi bolji kandidati su izabrani za primanje antitela ili fragmenta. U primeru izvođenja prema pronalasku, takvi bolji kandidati su primali efikasnu količinu antitela ili fragmenta. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak obuhvata korak izolacije T-ćelija iz krvi subjekta. U primeru izvođenja prema pronalasku, T-ćelije su dovedene u konakt sa anti-LAG3 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom prema predmetnom pronalasku i pembrolizumabom.

Dodatno su obezbeđeni antigeni za generisanje sekundarnih antitela koja su korisna, na primer, za izvođenje Western blota i drugih imunoloških analiza koje su ovde razmtrane. Naročito, otkriveni su polipeptidi koji sadrže varijabilne regione i/ili CDR sekvence anti-LAG3 antitela ili fragmenta otkivenog ovde i koji se mogu koristiti za generisanje anti-idiotipskih antitela za upotrebu u specifičnoj detekciji prisustva antitela, npr., u terapeutskom kontekstu.

Predmetni pronalazak obuhvata ELISA postupke na bazi ćelija upotrebom anti-LAG3 antitela i njihovih antigen-vezujućih fragmenata prema predmetnom pronalasku. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak obuhvata korake: (i) dovođenja u kontakt ćelija (npr., ćelija ili tkiva uzetih iz tumora, npr., koji obuhvataju limfocite za koje se sumnja da eksprimiraju LAG3) imobilizovanih na čvrstu površinu (npr., mikroploču) koje će se testirati za prirustvo LAG3 sa anti-LAG3 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom prema predmetnom pronalasku, (ii) izborno ispiranje smeše da bi se uklonilo nevezano anti-LAG3 antitelo ili fragment, (iii) dovođenje u kontakt anti-LAG3 antitela ili fragmenta sa obeleženim sekundarnim antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom koji se vezuje za anti-LAG3 antitelo ili fragment, (iv) izborno ispiranje kompleksa da bi se uklonila nevezana antitela ili fragmenti i (v) detekciju prisustva obeleživača na sekundarnom antitelu ili fragmentu; pri čemu detekcija obeleživača ukazuje na to da ćelije sadrže LAG3. Na primer, predmetni pronalazak obuhvata takve ELISA postupke na bazi ćelija za identifikaciju LAG3+ ćelija u uzorku tumora.

Predmetni pronalazak obuhvata ELISA analize (enzimski-vezana imunosorbent analiza) koje obuhvataju upotrebu anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njihov antigen-vezujući fragment koji su ovde otkriveni.

Na primer, takav postupak sadrži sledeće korake:

(a) oblaganje supstrata (npr., površine komore mikrotitarske ploče, npr., plastične ploče) anti-LAG3 antitelom (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom;

14

(b) naneti uzorak koji će se testirati za prisustvo LAG3 na supstrat (npr., ćelije uzete iz tumora, npr., koje obuhvataju limfocite za koje sumnja da eksprimiraju LAG3);

(c) ispiranje ploče, tako da se nevezani materijal u uzorku uklanja;

(d) nanošenje detektabilno obeleženih antitela (npr., enzimski-vezanih antitela) koja su takođe specifična za LAG3 antigen;

(e) ispiranje supstrata, tako da se uklanjaju nevezana, obeležena antitela;

(f) ako su obeležena antitela enzimski vezana, naneti hemikaliju koja je prevedena pomoću enzima u fluorescentni signal; i

(g) detekciju prisustva obeleženog antitela.

Detekcija obeleživača povezanog sa supstratom ukazuje na prisustvo LAG3 proteina. ELISA postupci mogu takođe biti korišćeni za identifikaciju LAG3+ ćelija u uzorku tumora.

U dodatnom primeru izvođenja, obeleženo antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je obeleženo perioksidazom koja reaguje sa ABTS (npr., 2,2'-azino-bis(3-etilbenztiazolin-6-sulfonskom kiselinom)) ili 3,3',5,5'-tetrametilbenzidinom da bi se proizvela promena boje koja je detektabilna. Alternativno, obeleženo antitelo ili fragment je obeležen detektabilnim radioizotopom (npr., 3H) koji može biti detektovan scintilacionim brojačem u prisustvu scintilanta.

Anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema pronalasku mogu biti korišćeni u postupku Western blota ili blota imunog-proteina. Takav postupak formira deo predmetnog pronalaska i obuhvata npr.:

(1) obezbeđivanje membrane ili drugog čvrstog supstrata koji sadrži uzorak koji će se testirati za prisustvo LAG3, npr., izborno uključujući korak prebacivanja proteina iz uzorka koji će se testirati za prisustvo LAG3 (npr., iz PAGE ili SDS-PAGE elektroforetskog odvajanja proteina u uzorku) na membranu ili drugi čvrsti supstrat upotrebom postupka poznatog u stanju tehnike (npr., polu-suvi bloting ili bloting rezervoara); i dovođenje u kontakt membrane ili drugog čvrstog supstrata koji će se testirati za prisustvo vezanog LAG3 ili njegovog fragmenta sa anti-LAG3 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom prema pronalasku.

Takva membrana može imati oblik, na primer, nitrocelulozne membrane ili membrane na bazi vinila (npr., poliviniliden fluorid (PVDF)) u koju su proteini koji će biti testirani za prisustvo LAG3 u nedanaturišućem PAGE (elektroforeza na poliakrilamidnom gelu) gelu ili SDS-PAGE (elektroforeza na natrijum dodecil sulfat poliakrilamidnom gelu) gelu biti prebačeni (npr., posle elektroforetičkog odvajanja u gelu). Pre dovođenja u kontakt membrane sa anti-

14

LAG3 antitelom ili fragmentom, membrana je izborno blokirana, npr., sa nemasnim suvim mlekom ili slično tako da se veže za nespecifična mesta vezivanja proteina na membrani.

(2) ispiranje membrane jednom ili više puta da bi se uklonilo nevezano anti-LAG3 antitelo ili fragment i druge nevezane supstance; i

(3) detekciju vezanog anti-LAG3 antitela ili fragmenta.

Detekcija vezanog antitela ili fragmenta ukazuje na to da je LAG3 protein prisutan na membrani ili supstratu i u uzorku. Detekcija vezanog antitela ili fragmenta može biti preko vezivanja antitela ili fragmenta sa sekundarnim antitelom (anti-imunoglobulinsko antitelo) koje je detektabilno obeleženo i, zatim, detekcija prisustva obeleživača sekundarnog antitela.

Anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde takođe mogu biti korišćeni za imunohistohemiju. Takav postupak formira deo pronalaska i sadrži, npr.,

(1) dovođenje u kontakt tkiva koje sadrži TIL i ćelije tumora (npr., tumora melanoma) koji će se testirati za prirutvo LAG3 proteina sa anti-LAG3 antitelom ili njegovim antigenvezujućim fragmentom prema pronalasku; i

(2) detekciju antitelao ili fragmenta na ili u TIL.

Ako je antitelo ili fragment sam po sebi detektabilno obeležen, on može biti detektovan direktno. Alternativno, antitelo ili fragment mogu biti vezani pomoću detektabilno obeleženog sekundarnog antitela gde je obeleživač zatim detektovan.

Određena anti-LAG3 antitela i njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde takođe mogu biti korišćeni za in vivo imadžing tumora. Takav postupak može da obuhvata injekciju detektabilno obeleženog, npr., radioaktivno obeleženog, anti-LAG3 antitela ili njegovog antigenvezujućeg fragmenta (kao što je ovde razmatrano) u telo pacijenta koji će se testirati za prisustvo tumora povezanog sa ekspresijom LAG3 (npr., koji eksprimira LAG3, na primer, na tumor infiltracionim limfocitima (TILs)) posle čega sledi imadžing, npr., nuklearni imadžing, tela pacijenta za detekciju prisustva obeleženog antitela ili fragmenta npr., na lokusima koji sadrže visoku koncentraciju antitela ili fragmenta koji su vezani za ili povezani sa tumorom. Detekcija lokusa ukazuje na prisustvo LAG3+ TIL u tumoru.

Tehnike imadžinga obuhvataju SPECT imadžing (kompjuterizovanu tomografiju sa emiisijom jednog fotona) ili PET imadžing (pozitron emisionu tomografiju). Obeleživači obuhvataju npr., jod-123 (123I) i tehnecijum-99m (99mTc), npr., zajedno sa SPECT imadžingom ili 11C, 13N, 15O ili 18F, npr., zajedno sa PET imadžingom ili indijumom-111 (videti npr., Gordon et al., (2005) International Rev. Neurobiol.67:385-440).

14

Predmetni pronalazak daje postupak za određivanje da li je tumor u subjektu osetljiv na lečenje anti-LAG3 antitelom ili njegovim antigen-vezujućim fragmentom prema predmetnom pronalasku koji sadrži određivanje da li je LAG3 eksprimiran u ili na tumor infiltrirajućim limfocitima (TILs) i, ako je navedena ekspresija identifikovana, određivanje da li je tumor osetljiv na navedeni tretman. Može biti određivano da li TILs eksprimiraju LAG3 upotrebom bilo kog od postupaka prikazanih ovde, npr., ELISA ili in vivo imadžing. U primeru izvođenja prema pronalasku, postupak sadrži korak dobijanja uzorka navedenog tumorskog tkiva pre određivanja ekspresije LAG3. Na primer, u primeru izvođenja prema pronalasku, uzorak je dobijen hirurški, npr., biopsijom, na primer, biopsijom pomoću igle ili delimičnom tumorektomijom. U primeru izvođenja prema pronalasku, ekspresija LAG3 je određena dovođenjem u kontakt TIL sa antitelom ili fragmentom i detekcijom prisustva antitela ili fragmenta vezanog za tumorsko tkivo ili fragment.

Farmaceutske kompozicije i primena

Da bi se pripremile farmaceutske ili sterilne kompozicije anti-LAG3 antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) i njihovi antigenvezujući fragmenti (npr., 4A10, 19E8, 11C9 i/ili 22D2; npr., Ab1, Ab2, Ab3, Ab4, Ab5, Ab6, Ab7, Ab8 i/ili Ab9), antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment je mešano sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom. Videti, npr., Remington's Pharmaceutical Sciences and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA (1984). Takve kompozicije su deo prema predmetnom pronalasku.

Obim prema predmetnom pronalasku obuhvata desikovane, npr., zamrzavanjem osušene, kompozicije koje sadrže anti-LAG3 antitelo ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku ili njegovu farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata farmaceutski prihvatljiv nosač, ali mu značajno nedostaje voda.

Formulacije terapeutskih i dijagnostičkih sredstava mogu biti pripremljene mešanjem sa prihvatljivim nosačima, ekscipijensima ili stabilizatorima u obliku, npr., liofilizovanih praškova, suspenzija, vodenih rastvora ili suspenzija (videti, npr., Hardman, et al. (2001) Goodman and Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw-Hill, New York, NY; Gennaro (2000) Remington: The Science and Practice of Pharmacy, Lippincott, Williams, and Wilkins, New York, NY; Avis, et al. (eds.) (1993) Pharmaceutical Dosage Forms: Parenteral Medications, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Tablets, Marcel Dekker, NY; Lieberman, et al. (eds.) (1990) Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse

1

Systems, Marcel Dekker, NY; Weiner and Kotkoskie (2000) Excipient Toxicity and Safety, Marcel Dekker, Inc., New York, NY).

Predmetni pronalazak obuhvata bilo koju farmaceutsku formulaciju koja sadrži anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku, i PO 2-4, na primer, natrijum fosfat ili kalijum fosfat (npr., oko 10 mM), NaCl (npr., oko 7.5 mM) i saharozu (npr., oko 3%), npr., koja ima pH od oko 7.4 ili oko 7.3; ili NaOAc (npr., oko 20 mM) i saharozu (oko 7 ili oko 9%), npr., koja ima pH od oko 5.0.

Toksičnost i terapeutska efikasnost kompozicija antitela ili fragmenta, primenjenih pojedinačno ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim sredstvom, mogu biti određeni pomoću standardnih farmaceutskih postupaka u ćelijskim kulturama ili eksperimentalnim životinjama, npr., za određivanje LD50(doza letalna za 50% populacije) i ED50(doza efikasna kod 50% populacije). Odnos doza između toksičnih i terapeutskih efekata je terapeutski indeks (LD50/ ED50). U posebnim aspektima, poželjna su antitela koja ispoljavaju visoke terapeutske indekse. Podaci dobijeni iz ovih analiza ćelijske kulture i studija na životinjama mogu se koristiti u formulaciji opsega doza za upotrebu kod čoveka. Doza takvih jedinjenja leži poželjno unutar opsega koncentracija u cirkulaciji koji obuhvata ED50sa malo ili bez toksičnosti. Doza može da varira unutar ovog opsega u zavisnosti od korišćenog oblika doze i puta primene.

U dodatnom primeru izvođenja, dodatno terapeutsko sredstvo koje je primenjeno na subjekta zajedno sa anti-LAG3 antitelom (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment prema pronalasku je primenjeno na subjekta u skladu sa Physicians' Desk Reference 2003 (Thomson Healthcare; 57th edition (November 1, 2002)).

Način primene može da varira. Putevi primene obuhvataju oralni, rektalni, transmukozalni, intestinalni, parenteralni; intramuskularni, subkutani, intradermalni, intramedularni, intratekalni, direktni intraventrikularni, intravenski, intraperitonealni, intranazalni, intraokularni, inhalaciju, insuflaciju, topikalni, kutani, transdermalni ili intraarterijski.

Ovde su takođe otkriveni postupci za primenu anti-LAG3 antitela ili njegovog antigenvezujućeg fragmenta koji sadrži uvođenje antitela ili fragmenta u telo subjekta. Na primer, postupak sadrži ubadanje tela subjekta iglom šprica i injektiranje antitela ili fragmenta u telo subjekta, npr., u venu, ateriju, tumor, mišićno tkivo ili ispod kože subjekta.

Predmetni pronalazak daje posudu (npr., plastičnu ili staklenu bočicu, npr., sa poklopcem ili hromatografskom kolonom, šuplju iglu ili cilindar šprica) koja sadrži bilo koje od anttitela ili

1 1

antigen-vezujućih fragmenata, polipeptida ili polinukleotida prema pronalasku, ili njihovu farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmaceutski prihvatljiv nosač.

Predmetni pronalazak takođe daje uređaj za injektiranje koji sadrži bilo koje od antitela ili antigen-vezujućih fragmenata, polipeptida ili polinukleotida prema pronalasku ili njihovu farmaceutsku kompoziciju. Uređaj za injektiranje je uređaj koji uvodi supstancu u telo pacijenta preko parenteralnog puta, npr., intramuskularnog, subkutanog ili intravenskog. Na primer, uređaj za injektiranje može biti špric (npr., prethodno napunjen farmaceutskom kompozicijom, kao što je auto-injektor) koji, na primer, obuhvata cilindar ili burence za držanje tečnosti koja se injektira (npr., koja sadrži antitelo ili fragment ili njegovu farmaceutsku kompoziciju), iglu za bušenje kože i/ili krvnih sudova za injekciju tečnosti; i klip za pritiskanje tečnosti izvan cilindra i kroz otvor igle. U primeru izvođenja prema pronalasku, uređaj za injektiranje koji sadrži antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku ili njihovu farmaceutsku kompoziciju je intravenski (IV) uređaj za injektiranje. Takav uređaj obuhvata antitelo ili fragment ili njegovu farmaceutsku kompoziciju u kanili ili trokaru/igli koja može biti spojena za cev koja može biti vezana za kesu ili rezervoar za držanje tečnosti (npr., fiziološki rastvor; ili laktatni Ringer-ov rastvor koji sadrži NaCl, natrijum laktat, KCl, CaCl2i izborno uključujući glukozu) uvedenu u telo pacijenta preko kanile ili trokara/igle. Antitelo ili fragment ili njegova farmaceutska kompozicija, u primeru izvođenja prema pronalasku, može biti uvedena u uređaj pošto su trokar i kanila ubačeni u venu subjekta i trokar je uklonjen iz ubačene kanile. IV uređaj može, na primer, biti umetnut u perifernu venu (npr., u šaku ili ruku); gornju venu kavu ili donju venu kavu, ili unutar desne pretkomore srca (npr., centralna IV); ili u subklaviju, internu jugularnu ili femoralnu venu i, na primer, da ide do srca dok ne stigne do gornje vene kave ili desne pretkomore (npr., centralna venska linija). U primeru izvođenja prema pronalasku, uređaj za injektiranje je autoinjektor; mlazni injektor ili spoljašnja infuziona pumpa. Mlazni inejktor koristi uski mlaz tečnosti pod visokim pritiskom koji prodire kroz epidermis tako da uvodi antitelo ili fragment ili njegovu farmaceutsku kompoziciju u telo pacijenta. Spoljašnje infuzione pumpe su medicinski uređaji koji isporučuju antitelo ili fragment ili njegovu farmaceutsku kompoziciju u telo pacijenta u kontrolisanim količinama. Spoljašnje infuzione pumpe mogu biti na električni ili mehanički pogon. Različite pumpe funkcionišu na različite načine, na primer, špric pumpa drži tečnost u rezervoaru šprica, i pokretni klip kontroliše isporuku tečnosti, elastomerna pumpa drži tečnost u rezervoaru u obliku rastegljivog balona i pritisak iz elastičnih zidova baloda pokreće isporuku tečnosti. U peristaltičkoj pumpi, grupa valjaka stiska na dole dužinu fleksibilne cevi, gurajući tečnost napred. U više-kanalnoj pumpi, tečnost može biti isporučena iz višestrukih rezervoara pri višestrukim stopama.

1 2

Farmaceutske kompozicije otkrivene ovde mogu takođe biti primenjivane sa hipodermnim uređajem za injektiranje bez igle; kao što su uređaji otkriveni u SAD Patentima br.

6,620,135; 6,096,002; 5,399,163; 5,383,851; 5,312,335; 5,064,413; 4,941,880; 4,790,824 ili 4,596,556. Takvi uređaji bez igle koji sadrže farmaceutsku kompoziciju su takođe deo predmetnog pronalaska.

Farmacetske kompozicije otkrivene ovde takođe mogu biti primenjivane infuzijom. Primeri dobro poznatih implanata i modula za primenu farmaceutskih kompozicija obuhvataju one otkrivene u: SAD Patentu br. 4,487,603, koji otkriva implantabilnu mikro-infuzionu pumpu za dispergovanje leka pri kontrolisanoj stopi; SAD Patent br. 4,447,233, koji otkriva infuzionu pumpu za lekove za isporuku leka na preciznoj infuzionoj stopi; SAD Patent br.4,447,224, koji otkriva implantabilni infuzioni parat sa varijabilnim protokom za kontinuiranu isporuku leka; SAD Patent. br.4,439,196, koji otkriva osmotski sistem za isporuku leka koji ima više-komorne odeljke. Mnogi drugi takvih implanti, sistemi isporuke i moduli su dobro poznati stručnjacima iz date oblasti tehnike i oni koji sadrže farmaceutske kompozicije prema predmetnom pronalasku su unutar obima predmetnog pronalaska.

Alternativno, moguće je primenjivati anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment pre na lokalni nego na sistemski način, na primer, preko injekcije antitela ili fragmenta direktno u tumor, npr., LAG3+ tumor. Pored toga, moguće je primenjivati antitelo ili fragment u ciljanom sistemu za isporuku leka, na primer, u lipozomu obloženom tkivno-specifičnim antitelom, koje ciljno deluje na, na primer, tumor npr., LAG3+ tumor, npr., okarakterisan imunopatologijom. Lipozomi će biti ciljani i preuzeti od strane pogođenog tkiva. Takvi postupci i lipozomi su deo prema predmetnom pronalasku.

"Lečenje" ili "tretman" označava primenu anti-LAG3 antitela ili njihovih antigenvezujući fragmenata prema predmetnom pronalasku, na subjekta koji ima jedan ili više simptoma bolesti za koju su anti-LAG3 antitela i antigen-vezujući fragmenti efikasni, npr., u lečenju subjekta koji ima kancera ili infektivne bolesti, ili za koje se sumnja da imaju kancer ili infektivnu bolest, za koju sredstvo ima terapeutsku aktivnost. Tipično, antitelo ili fragment je primenjen u "efikasnoj količini" ili "efikasnoj dozi" koji će ublažiti jedan ili više simptoma (npr., kancera ili infektivne bolesti) kod tretiranog subjekta ili populacije, bilo uvođenjem regresije ili eliminacije takvih simptoma ili inhibicijom napredovanja takvog simtoma (jednog ili više), npr., simptoma kancera kao što su rast tumora ili metastaza, za bilo koji klinički merljivi stepen. Efikasna količina antitela ili fragmenta može da varira prema faktorima kao što su stanje bolesti, starost i telesna težina pacijenta, i sposobnost leka da izazove željeni odgovor kod subjekta.

1

Antitela (npr., humanizovana antitela kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njihovi antigen-vezujući fragmenti otkriveni ovde mogu biti obezbeđeni kontinuiranom infuzijom ili primenjenim dozama, npr., dnevno, 1-7 puta nedeljno, nedeljno, na dve nedelje, mesečno, na dva meseca, na tri meseca, na pola godine, godišnje itd. Doze mogu biti obezbeđene, npr., intravenski, subkutano, topikalno, oralno, nazalno, rektalno, intramuskularno, intracerebralno, intraspinalno ili inhalacijom. Efikasna doza anti-LAG3 antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema predmetnom pronalasku, je od oko 0.1 mg/kg (telesne težine) do oko 100 mg/kg (telesne težine), npr., za lečenje ili prevenciju kancera ili infektivne bolesti. U primeru izvođenja prema pronalasku, efikasna doza za lečenje medicinskog stanja, gde se javlja prekomerna ekspresija LAG3, je doza pri kojoj se javlja potpuna saturacija LAG3 antigena u telu subjekta, npr., na T-ćelijama unutar tumora subjekta ili gde ima oko 10% saturacije ili više od oko 10%.

Određivanje odgovarajuće doze vrši kliničar, npr., upotrebom parametara ili faktora poznatih ili suspektnih u stanju tehnike za delovanje na tretman. Generalno, u određivanju doze, doza počinje sa količinom koja je donekle manja od optimalne doze i zatim je povećavana malim povećanjima sve dok se ne postigne željeni ili optimalni efekat u odnosu na bilo koje negativne sporedne efekte. Važne dijagnostičke mere obuhvataju one za simptome, npr., inflamacije ili proizvedeni nivo inflamatornih citokina. Uopšteno, poželjno je da je biološko sredstvo koje će biti korišćeno poreklom od iste vrste kao životinja na kojoj se vrši tretman, na taj način minimizujući bilo koji imuni odgovor na reagens. U slučaju humanih subjekata, na primer, himerna, humanizovana i potpuno humana antitela mogu biti poželjna. Dostupan je vodič za izbor odgovarajućih doza anti-LAG3 antitela ili fragmenata (videti, npr., Wawrzynczak (1996) Antitelo Therapy, Bios Scientific Pub. Ltd, Oxfordshire, UK; Kresina (ed.) (1991) Monoclonal Antibodies, Cytokines and Arthritis, Marcel Dekker, New York, NY; Bach (ed.) (1993) Monoclonal Antibodies and Peptide Therapy in Autoimmune Diseases, Marcel Dekker, New York, NY; Baert et al. (2003) New Engl. J. Med.348:601-608; Milgrom et al. (1999) New Engl. J. Med.341:1966-1973; Slamon et al. (2001) New Engl. J. Med.344:783-792; Beniaminovitz et al. (2000) New Engl. J. Med. 342:613-619; Ghosh et al. (2003) New Engl. J. Med. 348:24-32; Lipsky et al. (2000) New Engl. J. Med. 343: 1594-1602).

Da li je simptom bolesti ublažen može biti procenjeno bilo kojim kliničkim merenjem tipično korišćenim od strane lekara ili drugih iskusnih osoba u obezbeđivanju zdravstvene zaštite za procenu težine ili statusa napredovanja tog simptoma. Dok primer izvođenja prema predmetnom pronalasku (npr., postupak lečenja ili proizvodni artikl) ne mora biti efikasan u ublažavanju ciljnog simptoma (jednog ili više) bolesti kod svakog subjekta, trebalo bi ublažiti

1 4

ciljni simptom (jedan ili više) bolesti kod statički značajnog broja subjekata kao što je određeno pomoću bilo kog statističkog testa poznatog u stanju tehnike kao što je Student-ov t-test, hi<2>-test, U-test prema Mann i Whitney, Kruskal-Wallis test (H-test), Jonckheere-Terpstra-test i Wilcoxon-test.

Kompleti

Salje su obezbeđeni kompleti koji sadrže jednu ili više komponenti koje obuhvataju, ali bez ograničenja na, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili antigen-vezujući fragment, kao što je razmatrano ovde zajedno sa jednom ili više dodatnih komponenti uključujući, ali bez ograničenja na, dodatno terapeutsko sredstvo, kao što je razmatrano ovde. Antitelo ili fragment i/ili terapeutsko sredstvo može biti formulisano kao čista kompozicija ili u kombinaciji sa farmaceutski prihvatljivim nosačem, u farmaceutskoj kompoziciji.

U jednom primeru izvođenja, komplet obuhvata anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema pronalasku ili njegovu farmaceutsku kompoziciju u jednom spremniku (npr., u sterilnoj staklenoj ili plastičnoj bočici) i dodatno terapeutsko sredstvo u drugom spremniku (npr., u sterilnoj staklenoj ili plastičnoj bočici).

U sledećem primeru izvođenja, komplet sadrži kombinaciju prema pronalasku, uključujući anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema pronalasku ili njihova farmaceutska kompozicija u kombinaciji sa jednim ili više terapeutskih sredstava formulisanih zajedno, izborno, u farmaceutskoj kompoziciji, u jednom, zajedničkom spremniku.

Ako komplet sadrži farmaceutsku kompoziciju za parenteralnu primenu na subjekta, komplet može da obuhvata uređaj za izvođenje takve primene. Na primer, komplet može da obuhvata jednu ili više hipodermnih igala ili drugih uređaja za injektiranje kao što je razmatrano u prethodnom tekstu. Na taj način, predmetni pronalazak obuhvata komplet koji sadrži uređaj za injektiranje i anti-LAG3 antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment prema predmetnom pronalasku, npr., gde uređaj za injektiranje obuhvata antitelo ili fragment ili gde je antitelo ili fragment u posebnoj posudi.

Komplet može da obuhvata umetak u pakovanje koji uključuje infrmaciju u vezi sa farmaceutskim kompozicijama i oblicima doze u kompletu. Generalno, takve infromacije pomažu pacijentima i lekarima u efikasnoj i bezbednoj upotrebi priloženih farmaceutskih kompozicija i oblika doze. Na primer, sledeće informacije u vezi sa kombinacijom prema

1

pronalasku mogu biti dopremljene u umetku: farmakokinetičke, farmakodinamičke, kliničke studije, parametri efikasnosti, indikacije i upotreba, kontraindikacija, upozorenja, mere predostrožnosti, neželjene reakcije, prekomerno doziranje, ispravno doziranje i primena, kako je dopremljen, ispravni uslovi čuvanja, reference, informacije o proizvođaču/distributeru i informacije za pacijenta.

Detekcioni kompleti i terapeutski kompleti

Iz praktičnih razloga, anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment prema pronalasku mogu se obezbediti kao komplet, tj., pakovanje kombinacije reagenasa u unapred određenim količinama, sa uputstvima za izvođenje dijagnostičkog ili detekcionog testa. Kada je antitelo ili fragment obeleženo enzimom, komplet će sadržati supstrate i kofaktore koje enzim zahteva (npr., prekursor supstrata koji obezbeđuje detektabilnu hromoforu ili fluoroforu). Pored toga, mogu biti prisutni i drugi aditivi kao što su stabilizeri, puferi (npr., blokirajući pufer ili litički pufer) i slično. Relativne količine različitih reagenasa mogu široko varirati, kako bi se obezbedile koncentracije reagenasa koje suštinski optimizuju senzitivnost testa. Posebno, reagensi se mogu obezbediti u vidu suvih, obično liofilizovanih, praškova koji uključuju ekscipijente, koji će posle rastvaranja dati rastvor reagensa odgovarajuće koncentracije.

Obezbeđeni su i dijagnostički ili detekcioni reagensi i kompleti koji sadrže jedan ili više takvih reagenasa za upotrebu u različitim detekcionim testovima uključujući, na primer, imunotestove kao što je ELISA (sendvič-tip ili kompetitivni format). Komponente kompleta mogu biti unapred prikačene za čvrstu podlogu, ili se mogu naneti na površinu čvrste podloge prilikom korišćenja kompleta. U nekim primerima izvođenja prema pronalasku, sredstvo koje proizvodi signal može biti unapred udruženo sa antitelom ili fragmentom pronalaska ili može zahtevati kombinovanje sa jednom ili više komponenti, npr., puferima, konjugatima antiteloenzim, enzimskim supstratima, ili slično, pre upotrebe. Kompleti mogu uključivati i dodatne reagense, npr., blokirajuće reagense za smanjenje nespecifičnog vezivanja za površinu čvrste faze, reagense za ispiranje, supstrate enzima i slično. Površina čvrste faze može biti u vidu epruvete, perlice, mikrotitarske ploče, mikrosfere ili drugih materijala pogodnih za imobilisanje proteina, peptida, ili polipeptida. U posebnim aspektima, enzim koji katališe formiranje hemiluminiscentnog ili hromogenog proizvoda ili redukciju hemiluminiscentnog ili hromogenog supstrata komponenta je sredstva za stvaranje signala. Takvi enzimi dobro su poznati u struci. Kompleti mogu uključivati neko od imobilišućih sredstava i detekcionih reagenasa opisanih u ovom tekstu. Opciono, komplet može sadržati i uputstva za izvođenje metoda pronalaska.

1

Takođe je obezbeđen komplet koji sadrži anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment pakovan u spremnik, kao što je bočica ili boca i dodatno sadrži etiketu vezanu za ili pakovanu sa spremnikom, pri čemu etiketa opisuje sadržaj spremnika i obezbeđuje indikacije i/ili uputstva za upotrebu sadržaja spremnika za lečenje jednog ili više stanja bolesti kao što su ovde opisani.

U jednom aspektu, komplet je za lečenje kancera i sadrži anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigenvezujući fragment i dodatno terapeutsko sredstvo ili vakcinu. Komplet može izborno dodatno da sadrži špric za parenteralnu, npr., intravensku, primenu. U sledećem aspektu, komplet sadrži anti-LAG3 antitelo (npr., humanizovano antitelo kao što su antagonistička humanizovana antitela) ili njegov antigen-vezujući fragment i etiketu vezanu za ili pakovanu sa spremnikom koja opisuje upotrebu antitela ili fragmenta sa vakcinom ili dodatnim terapeutskim sredstvom. U sledećem aspektu, komplet sadrži vakcinu ili dodatno terapeutsko sredstvo i etiketu vezanu za ili pakovanu sa spremnikom koja opisuje upotrebu vakcine ili dodatnog terapeutskog sredstva sa anti-LAG3 antitelom ili fragmentom. U određenim primerima izvođenja, anti-LAG3 antitelo i vakcina ili dodatno terapeutsko sredstvo su u posebnim bočicama ili su kombinovani zajedno sa istom farmaceutskom kompozicijom.

Kao što je razmatrano u prethodnom tekstu u delu o kombinovanoj terapiji, istovremena primena dva terapeutska sredstva ne zahteva da se sredstva primenjuju u isto vreme ili istim putem, sve dok postoji preklapanje u vremenskom periodu u toku koga sredstva ispoljavaju njihov terapeutski efekat. Razmatrana je istovremena ili uzastopna primena, kao što je primena na različite dane ili nedelje.

Takođe mogu biti pripremljeni terapeutski i detekcioni kompleti otkriveni ovde koji sadrže najmanje jedan od antitela, peptida, antigen-vezujućeg fragmenta ili polinukleotida otkrivenih ovde i uputstva za upotrebu kompozicije kao detekcionog reagensa ili terapeutskog sredstva. Spremnici za upotrebu u takvim kompletima mogu tipično da sadrže najmanje jednu bočicu, test epruvetu, posuda, boca, špric ili drugi pogodan spremnik, u koji mogu biti sipane jedana ili više detekcionih i/ili terapeutskih kompozicija, i poželjno pogodno alikvotirana. Tamo gde je takođe obezbeđeno drugo terapeutsko sredstvo, komplet takođe može da sadrži drugi poseban spremnik u koji može biti postavljena druga detekciona i/ili terapeutska kompozicija. Alternativno, množina jedinjenja može biti pripremljena u jednoj farmaceutskoj kompoziciji, i može biti pakovana u jedan spremnik, kao što je bočica, posuda, špric, boca ili drugi pogodan jedan spremnik. Kompleti objavljeni u ovom tekstu tipično će uključivati bočicu/bočice u zatvorenom pakovanju za komercijalnu prodaju, kao što su, npr., injekcije ili plastični spremici

1

modelovani duvanjem, sa željenom bočicom/bočicama. Kada komplet sadrži radioaktivno obeleženi, hromogeni, fluorogeni, ili drugi tip detektabilnog obeleživača ili detektujućeg sredstva, obeležavajuće sredstvo može biti dato u istom spremniku kao i sama detekciona ili terapeutska kompozicija, ili se alternativno može staviti u drugi zasebni spremnik u koji se može staviti i pogodno alikvotirati ova druga kompozicija. Alternativno, detekcioni reagens i obeleživač može se pripremiti u jednom spremniku, a u većini slučajeva, komplet će uključivati i sredstvo za držanje bočice/bočica u zatvorenom pakovanju za komercijalnu prodaju i/ili odgovarajuće pakovanje i dostavu.

Uređaj ili aparat za izvođenje detekcije ili praćenje postupaka opisanih u ovom tekstu takođe je ovde opisan. Takav aparat može uključiti komoru ili epruvetu u koju se može staviti uzorak, sistem za rad sa tečnošću opciono uključuje ventile ili pumpe za usmeravanje proticanja uzorka kroz uređaj, opciono filtere za razdvajanje plazme ili seruma iz krvi, komore za mešanje za dodavanje imobilizacionih sredstava ili detekcionih reagenasa i, opciono, detekcioni uređaj za detektovanje količine detektabilnog obeleživača vezanog za imobilizaciono sredstvoimunokompleks. Protok uzorka može biti pasivan (npr., kapilarnim, hidrostatičkim ili drugim silama koje ne zahtevaju dodatno upravljanje uređajem kada se uzorak unese u njega) ili aktivno (npr., primenom sile generisane mehaničkim pumpama, elektroosmotskim pumpama, centrifugalnom silom, ili povećanim vazdušnim pritiskom), ili kombinacijom aktivnih i pasivnih sila.

U dodatnim primerima izvođenja, takođe je obezbeđen i procesor, kompjuterski čitljiva memorija, i rutinski uskladištena na kompjuteru čitljiva memorija i prilagođena da se implementira na procesoru, za obavljanje nekog od metoda opisanih u ovom tekstu. Primeri pogodnih kompjuterskih sistema, okruženja i/ili konfiguracija uključuju personalne kompjutere, servere, ručne uređaje ili laptop uređaje, multiprocesorske sisteme, sisteme bazirane na mikroprocesorima, set top boksove, programabilnu potrošačku elektroniku, mrežne PC, minikompjutere, mejnfrejm kompjutere, distributivna kompjuterska okruženja koja uključuju bilo koji od gornjih sistema ili uređaja, ili bilo koji drugi sistem poznat u struci.

OPŠTI POSTUPCI

Standardni postupci u molekularnoj biologiji opisani su u Sambrook, Fritsch and Maniatis (1982 & 1989 2nd Edition, 2001 3rd Edition) Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Sambrook and Russell (2001) Molecular Cloning, 3rd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Wu (1993) Recombinant DNA, Vol. 217, Academic Press, San Diego, CA). Standardni

1

postupci takođe se pojavljuju u Ausbel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vols.1-4, John Wiley and Sons, Inc. New York, NY, gde se opisuju kloniranje u bakterijskim ćelijama i DNK mutageneza (Vol. 1), kloniranje u sisarskim ćelijama i kvascu (Vol. 2), glikokonjugati i ekspresija proteina (Vol.3), i bioinformatika (Vol.4).

Postupci prečišćavanja proteina koji uključuju imunoprecipitaciju, hromatografiju, elektroforezu, centrifugiranje i kristalizaciju opisani su u (Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York). Opisane su hemijska analiza, hemijska modifikacija, posttranslaciona modifikacija, proizvodnja fuzionih proteina, glikozilacija proteina (vidi, npr., Coligan, et al. (2000) Current Protocols in Protein Science, Vol.2, John Wiley and Sons, Inc., New York; Ausubel, et al. (2001) Current Protocols in Molecular Biology, Vol.3, John Wiley and Sons, Inc., NY, NY, pp. 16.0.5-16.22.17; Sigma-Aldrich, Co. (2001) Products for Life Science Research, St. Louis, MO; str. 45-89; Amersham Pharmacia Biotech (2001) BioDirectory, Piscataway, N.J., str.384-391). Opisani su proizvodnja, prečišćavanje i fragmentacija poliklonskih i monoklonskih antitela (Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol. 1, John Wiley and Sons, Inc., New York; Harlow and Lane (1999) Using Antibodies, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Harlow and Lane, gore). Dostupne su standardne tehnike karakterizacije interakcija ligand/receptor (vidi, npr., Coligan, et al. (2001) Current Protocols in Immunology, Vol.4, John Wiley, Inc., New York).

Mogu se pripremiti monoklonska, poliklonska i humanizovana antitela (vidi, npr., Sheperd and Dean (eds.) (2000) Monoclonal Antibodies, Oxford Univ. Press, New York, NY; Kontermann and Dubel (eds.) (2001) Antitelo Engineering, Springer-Verlag, New York; Harlow and Lane (1988) Antibodies A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, str. 139-243; Carpenter, et al. (2000) J. Immunol. 165:6205; He, et al. (1998) J. Immunol. 160:1029; Tang et al. (1999) J. Biol. Chem. 274:27371-27378; Baca et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:10678-10684; Chothia et al. (1989) Nature 342:877-883; Foote and Winter (1992) J. Mol. Biol.224:487-499; U.S. pat. br.6,329,511).

Alternativa humanizaciji je upotreba biblioteka humanih antitela prikazanih na fagima ili biblioteka humanih antitela u transgenim miševima (Vaughan et al. (1996) Nature Biotechnol.

14:309-314; Barbas (1995) Nature Medicine 1:837-839; Mendez et al. (1997) Nature Genetics 15:146-156; Hoogenboom and Chames (2000) Immunol. Today 21:371-377; Barbas et al. (2001) Phage Display: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, New York; Kay et al. (1996) Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual, Academic Press, San Diego, CA; de Bruin et al. (1999) Nature Biotechnol.17:397-399).

1

Opisana su jednolančana antitela i diatela (videti, npr., Malecki et al. (2002) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 99:213-218; Conrath et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:7346-7350; Desmyter et al. (2001) J. Biol. Chem. 276:26285-26290; Hudson and Kortt (1999) J. Immunol. Methods 231:177-189; i SAD Pat. br. 4,946,778). Obezbeđena su bifunkcionalna antitela (videti, npr., Mack, et al. (1995) Proc. Natl. Acad. Sci. USA 92:7021-7025; Carter (2001) J. Immunol. Methods 248:7-15; Volkel, et al. (2001) Protein Engineering 14:815-823; Segal, et al. (2001) J. Immunol. Methods 248:1-6; Brennan, et al. (1985) Science 229:81-83; Raso, et al. (1997) J. Biol. Chem. 272:27623; Morrison (1985) Science 229:1202-1207; Traunecker, et al. (1991) EMBO J.10:3655-3659; i SAD Pat. br.5,932,448, 5,532,210 i 6,129,914).

Takođe su obezbeđena bispecifična antitela (videti, npr., Azzoni et al. (1998) J. Immunol.

161:3493; Kita et al. (1999) J. Immunol. 162:6901; Merchant et al. (2000) J. Biol. Chem.

74:9115; Pandey et al. (2000) J. Biol. Chem. 275:38633; Zheng et al. (2001) J. Biol Chem.

276:12999; Propst et al. (2000) J. Immunol. 165:2214; Long (1999) Ann. Rev. Immunol.

17:875).

Prečišćavanje antigena nije neophodno za generisanje antitela. Životinje se mogu imunizovati ćelijama koje nose antigen od interesa. Splenociti se zatim mogu izolovati iz imunizovanih životinja i fuzionisati sa ćelijskom linijom mijeloma da bi se proizveo hibridom (vidi, npr., Meyaard et al. (1997) Immunity 7:283-290; Wright et al. (2000) Immunity 13:233-242; Preston et al., gore; Kaithamana et al. (1999) J. Immunol. 163:5157-5164).

Antitela se mogu konjugovati, npr., sa lekovima sa malim molekulima, enzimima, lipozomima, polietilen glikolom (polyetilene glycol, PEG). Antitela su korisna za upotrebu u terapiji, dijagnostici, kitovima ili za druge namene, i obuhvataju antitela kuplovana, npr., za boje, radioizotope, enzime, ili metale, npr., koloidno zlato (vidi, npr., Le Doussal et al. (1991) J. Immunol. 146:169-175; Gibellini et al. (1998) J. Immunol. 160:3891-3898; Hsing and Bishop (1999) J. Immunol.162:2804-2811; Everts et al. (2002) J. Immunol.168:883-889).

Na raspolaganju su postupci protočne citometrije, koji uključuju sortiranje ćelija aktiviranih fluorescencijom (fluorescence activated cell sorting, FACS) (vidi, npr., Owens, et al. (1994) Flow Cytometry Principles for Clinical Laboratory Practice, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ; Givan (2001) Flow Cytometry, 2nd ed.; Wiley-Liss, Hoboken, NJ; Shapiro (2003) Practical Flow Cytometry, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ). Na raspolaganju su fluorescenti reagensi pogodni za modifikovanje nukleinskih kiselina, uključujući nukleinskokiselinske prajmere i probe, polipeptide i antitela, za upotrebu, npr., u vidu dijagnostičkih reagenasa, (Molecular Probes (2003) Catalogue, Molecular Probes, Inc., Eugene, OR; Sigma-Aldrich (2003) Catalogue, St. Louis, MO).

1

Opisani su standardni postupci histologije imunskog sistema (vidi, npr., Muller-Harmelink (ed.) (1986) Human Thymus: Histopathology and Pathology, Springer Verlag, New York, NY; Hiatt, et al. (2000) Color Atlas of Histology, Lippincott, Williams, and Wilkins, Phila, PA; Louis, et al. (2002) Basic Histology: Text and Atlas, McGraw-Hill, New York, NY).

Na raspolaganju su softverski paketi i baze podataka za određivanje, npr., antigenskih fragmenata, liderskih sekvenci, nabiranja proteina, funkcionalnih domena, mesta glikozilacije i poravnavanja sekvenci (vidi, npr., GenBank, Vector NTI® Suite (Informax, Inc, Bethesda, MD); GCG Wisconsin Package (Accelrys, Inc., San Diego, CA); DeCypher® (TimeLogic Corp., Crystal Bay, Nevada); Menne, et al. (2000) Bioinformatics 16: 741-742; Menne, et al. (2000) Bioinformatics Applications Note 16:741-742; Wren, et al. (2002) Comput. Methods Programs Biomed. 68:177-181; von Heijne (1983) Eur. J. Biochem. 133:17-21; von Heijne (1986) Nucleic Acids Res. 14:4683-4690).

PRIMERI

Ovi primeri namenjeni za ilustrovanje predmetnog pronalaska nisu njegovo ograničenje. Kompozicije i postupci navedeni u Primerima formiraju deo predmetnog pronalaska.

Primer 1. Generisanje antitela protiv humanog LAG3.

Da bi se generisala antitela na humani LAG3, Balb/C miševi su imunizovani sa 5ug humanog LAG3-hFc obeleženog rekombinantnog proteina upotrebom RIBI ađuvansa i injekcije u stopalo po režimu jednom u dve nedelje. Imunizovanim miševima je uzimana krv i određivani su titri seruma za vezivanje za humane CHOK1 ćelije transficirane sa LAG3 upotrebom ELISA na bazi ćelija (opisano u daljem tekstu). Miševi sa najvišim titrima su dobijali konačni buster sa rekombinantnim proteinom i drenirajući poplitealni limfni čvorovi su izolovani četiri dana kasnije. Hibridomi su generisani elektrofuzijom izolovanih limfocita sa mijeloma fuzionim parnerom P3X63-AG8.653 upotrebom Cytopulse Hybrimmune elektrofuzionog sistema. Fuzionisane ćelije su postavljene u 96-komorne ploče u DMEM/F12, 15% BCS, HAT, IL-6, OPI suplementu, i gentamicinu.

Supernatanti hibridoma su analizirani za vezivanje za CHOK1 ćelije koje eksprimiraju humani LAG3 i unakrsnu-reaktivnost za CHO ćelije koje eksprimiraju LAG3 makaki majmuna upotrebom ELISA formata na bazi ćelija. CHO-K1 ćelije koje eksprimiraju humani LAG3 i LAG3 makaki majmuna su postavljene u 96-komorne ploče za kulturu tkiva u 50ul DMEM/F12, 10% BCS i gentamicin (CHO-K1 medijum). Ćelije su postavljene u 2x10<4>ćelija/komorici dva dana pre analize ili 4x104 ćelija/komorici jedan dan pre analize. Medijum je uklonjen iz

1 1

komorica pre analize i dodato je 50ul supernatanta hibridoma. Supernatanti hibridoma su inkubirani 30-60 minuta na 37°C i isprani 3 puta sa PBS/0.05% Tween 20 upotrebom protokola ispiranja ćelijske ELISA na Biotek EL405x Select CW uređaju za ispiranje ploča. Pedeset mikrolitara detekcionog antitela, HRP-konjugovanog kozjeg anti-mišjeg IgG (Southern Biotech kat.# 1031-05), dodato je u razblaženju od 1:2000 u CHO-K1 medijum i inkubirano na 37°C u trajanju od 30-60 minuta. Ploče za analizu su isprane kao što je u gore objašnjeno i razvijene su sa TMB i zaustavljene sa TMB stop rastvorom (KPL kat.# 50-85-06). Određivana je apsorbanca na 450nm-620nm.

Pozitivni hibridomi su subklonirani ograničavajućim razblaženjem ili subklonirani postavljanjem hibridoma na ploču u polu-čvrstom medijumu i klonova sakupljenih na ClonePix (Genetix). Finalni subklonovi su gajeni u kulturama u malim razmerama u medijumu za proizvodnju hibridoma bez seruma i prečišćeni spin kolona proteina G da bi se generisalo prečišćeno antitelo za dodatnu karakterizaciju. Prečišćena antitela iz klonova LB145.22D2.E1.1D1 (22D2), LB148.19E8.G1.1A1 (19E8), LB148.4A10.1H1 (4A10) i LB148.11C9.1C1 (11C9) su dodatno okarakterisana i izvedeno je sekvenciranje VHi VL.

Primer 2. Vezivanje mišjih anti-LAG3 antitela za humani LAG3 i LAG3 makaki majmuna na površini ćelija jajnika kineskog hrčka.

Mišja anti-humana LAG3 antitela su testirana za vezivanje za humani LAG3 i LAG3 makaki majmuna koji eksprimiraju CHO-K1 ćelije upotrebom ELISA na bazi ćelija. CHO-K1 ćelije su postavljene na ploču kao što je opisano u prethodnom tekstu i medijum je uklonjen pre dodavanja test uzoraka. Prečišćeno antitelo iz klonova LB145.22D2.E1.1D1 (22D2), LB148.19E8.G1.1A1 (19E8), LB148.4A10.1H1 (4A10) i LB148.11C9.1C1 (11C9) je serijski razblaženo u DMEM/F12, 10%BCS (CHOK1 medijum) i dodato u CHO-K1 ploče. Uzorci su inkubirani na 37°C u trajanju od 30-60 minuta i ploče su isprane tri puta sa PBS/0.05% Tween-20 upotrebom programa ispiranja ćelija na Biotek uređaju za ispiranje kao što je opisano u prethodnom tekstu. Vezivanje je detektovano upotrebom HRP-konjugovanog kozjeg anti-mišjeg IgG (Southern Biotech kat.# 1031-05) sekundarnog antitela dodatog u 1:2000 razblaženju u CHO-K1 medijum i inkubirano na 37°C u trajanju od 30-60 minuta. Ploče za analizu su isprane kao što je opisano u prethodnom tekstu i razvijene sa TMB i zaustavljene sa TMB stop rastvorom (KPL kat.# 50-85-06). Određena je apsorbanca na 450nm-620nm. Reprezentativne krive vezivanja za vezivanje za CHO-K1 ćelije transficirane humanim LAG3 i LAG3 makaki majmuna su na Slici 1.

1 2

Primer 3. Određivanje afiniteta za vezivanje mišjih anti-LAG3 antitela za humani LAG3 rekombinantni protein.

Kinetička vezujuća aktivnost mišjih anti-humanih LAG3 klonova LB148.19E8.G1.1A1, LB148.4A10.1H1, LB148.11C9.1Cl i LB145.22D2.E1.1D1 upotrebom humanog LAG3-His obeleženog rekombinantnog proteina merena je pomoću površinske plazmon rezonance upotrebom Biacore T200 sistema (Biacore, GE Healthcare, Piscataway, NJ). Približno 4000 RU kozjeg anti-mišjeg IgG Fc gama, specifičnog fragmenta (Jackson ImmunoResearch Catalog #115-006-071, Lot 81313) je imobilizovano preko amin kuplujuće hemije na Series S CM4 senzorni čip, kataloški broj BR-1005-34. Mišji anti-humani LAG3 klonovi navedeni u prethodnom tekstu su injektirani preko imobilizovanih kozjih anti-mišjih površina u 1 ug/mL za nivo hvatanja od 40 RU. HBS-EP+ pufer (BR-1006-69) je korišćen kao pufer za razdvajanje sa stopom protoka od 30µL/min.

Različite koncentracije humanog LAG3-His proteina u opsegu od 0.15 nM do 18.8 nM, na stopi protoka od 40µL/min injektirane su preko površina antitela. Posle svakog ciklusa injektiranja, površina Series S CM4 čipa je regenerisana upotrebom jedne injekcije od šest sekundi od 10mM rastvora glicina pH 1.5, a zatim injekcije od 12.5 mM rastvora NaOH na stopi protoka od 60µL/min.

Senzogrami vezivanja sa oduzimanjem pozadine su korišćeni za analiziranje konstante stope asocijacije (ka) i disocijacije (kd), i ravnotežne konstante disocijacije KD. Dobijene grupe podaka su aproksimirane sa 1:1 Langmuir vezujućim modelom upotrebom Biacore T200 softvera za procenu (verzija 2.0). Tabela 4 rezimira afinitete za mišja anti-humana LAG3 antitela za rekombinantni humani LAG3.

Tabela 4: Merenje afiniteta za mišja anti-humana LAG3 antitela za rekombinantni humani LAG3.

1

Pored toga, vezivanje Ab6 za humani CD4, koji je strukturno sličan LAG3, pri čemu oba imaju četiri ekstracelularna domena slična Ig, nije detektovano pomoću BiaCore preko FACS kada je CD4 izložen na transficiranim L-ćelijama.

Primer 4. Efekat anti-LAG3 antitela na mišje T-ćelijske hibridoma 3A9 ćelije koje eksprimiraju humani LAG3.

Sposobnost anti-LAG3 antitela da pojačaju antigen-specifičnu T ćelijsku aktivaciju testirana je u modifikovanoj verziji prethodno opisane analize T ćelijske aktivacije (Workman et al., (2002) Eur. J. Immunol. 32:2255-2263).

HEL peptid48-63-specifični mišji T ćelijski hibridom (3A9) je stimulisan sa haplotippoklopljenom, MHCII+ , HEL peptid48-63-pulsiranom B ćelijskom linijom (LK35.2) i oslobađanje IL-2 je procenjivano kao očitavanje za antigen-specifičnu T ćelijsku aktivaciju. 3A9 T ćelijski odgovor na HEL peptid48-63-pulsirane LK35.2 ćelije bio je zavisan od doze.

3A9 T ćelijske linije stabilno prekomerno eksprimiraju mišji ili humani LAG3 generisane su pomoću retrovirusne transdukcije. Pokazali smo da mišji MHC2 na LK35.2 ćelijama može da se veže za oba, humani i mišji LAG3, rezultujući u snažnoj redukciji antigen-specifične proizvodnje IL-2, u suboptimalnim koncentracijama T ćelijske aktivacije. Maksimalni efekat LAG3 aktivnosti je zabeležen kada je HEL peptid48-63titriran u koncentraciji od 31.2 nM. Inhibitorni efekat prekomerne ekspresije LAG3 nije zabeležen kada se koriste LK35.2 B ćelije pulsirane sa višim dozama peptida (što odgovara >100nM). Tretman sa 10 ug/ml komercijalno dostupnog mišjeg LAG3 antitela, C9B7W, bili smo sposobni da spasimo IL-2 do nivoa vektorskih 3A9 ćelijama.

Da bi se procenio efekat anti-LAG3 antitela u ovoj analizi, 3A9 T ćelije koje prekomerno eksprimiraju mišji ili humani (100,000 po komorici) su prethodno tretirane anti-LAG3 antitelima (serijski razblaženi u 3-strukim razblaženjima od 10ug/ml) u trajanju od 30 minuta na 37°C i stimulisane sa LK35.2 ćelijama (33,333 po komorici) pulsiranim 30 minuta pre ko-kulture sa 31.2 nM HEL peptidom48-63. Posle stimulacije u trajanju od 24h na 37°C i 5.0% CO2, izlučivanje IL-2 je procenjivano u supernatantima kulture pomoću mezoskale. Inhibicija LAG3 sa antagonističkim antitelom obnovila je T-ćelijsku funkciju rezultujući u spasavanju proizvodnje IL-2 na način zavisan od doze. Proizvodnja IL-2 nije spasena kada su 3A9 ćelije prethodno tretirane izotip kontrolnim antitelima. Sposobnost prekomerne ekspresije LAG3 da suprimira izlučivanje IL-2 zajedno sa spasavanjem IL-2 posle tretmana sa anti-LAG3 antitelom potvrđuje ovu analizu kao snažan skrining alat. Tabela 5 navodi EC50 za spasavanje IL-2 upotrebom hLAG3-3A9 sistema za mišja anti-humana LAG3 antitela.

1 4

Tabela 5: Mišja anti-humana LAG3 antitela stimulišu proizvodnju IL-2 u hLAG3-3A9 T ćelijskom sistemu

Primer 5. Blokiranje vezivanja LAG3/MHC klase II na Daudi ćelijama.

Mišji anti-humani LAG3 klonovi su testiranji za njihovu sposobnost da blokiraju interakciju hLAG3 sa humanim MHC klase II. Daudi ćelije (ATCC #CCL-213) su korišćene kao ćelijska linija pozitivna za ekspresiju humanog MHC klase II. Daudi ćelije su blokirane sa 10ug/ml kozjeg IgG u HBSS i 2% BCS na ledu u trajanju od 30 minuta i 0.5x106 ćelija/uzorku je alikvotirano u 96-komornoj ploči sa dnom oblika slova V i uklonjen je blokirajući pufer. Klonovi LB145.22D2.E1.1D1, LB148.19E8.G1.1A1, LB148.4A10.1H1 i LB148.11C9.1C1 su serijski razblaženi počevši na 20ug/ml u HBSS/2% BCS i prethodno inkubirani sa 2ug/ml humanog LAG3-huFc u 96-komornim polipropilenskim pločama sa dnom oblika slova u finalnoj zapremini od 100ul i inkubirani na ledu 30 minuta. Posle pre-inkubacije, smeše supernatanta humanog LAG3-Fc/ hibridoma dodate su u blokirane Daudi ćelije i inkubirane 45 minuta na ledu. Ćelije su peletirane centrifugiranjem na 1200rpm i isprane dva puta sa HBSS/2% BCS. Vezivanje humanog LAG3-Fc za Daudi ćelije detektovano je upotrebom konjugata F(ab)'2kozjeg anti-humanog IgG-PE (Southern Biotech Cat#) u razblaženju 1:200 u 100ul zapremine bojenja i inkubirano na ledu 20 minuta. Ćelije su isprane dva puta kao što je opisano u prethodnom tekstu, resuspendovane u HBSS/2% BCS i očitavane na FACSCalibur. Tabela 6 rezimira IC50 za blokadu MHC klase II za mišje anti-humane LAG3 klonove.

Tabela 6: Mišja anti-humana LAG3 antitela blokiraju interakciju humanog MHC klase II sa humanim LAG3-Fc rekombinantni proteinom.

1

Primer 6. Procena četiri anti-humana LAG3 roditeljska antitela za tkivnu unakrsnu-reaktivnost u fokusiranom setu normalnih humanih tkiva pomoću imunohistohemije.

Zamrznuti isečci subseta normalnih humanih tkiva (mozak, srce, bubreg, jetra, pluća, pankreas, hipofiza) su bojeni upotrebom četiri klona anti-humanog LAG3 antitela (LB148.4A10.1H1 (4A10), LB148.11C9.1C1 (11C9), LB148.19E8.G1.1A1 (19E8), LB145.22D2. E1.1D1 (22D2)) kao imunohistohemijska reagensa, u cilju skrininga za potencijalnu neočekivanu tkivnu reaktivnost. Humani krajnik je korišćen kao pozitivna obojena kontrola. Mišji IgG2a, IgG1 i IgG2b, ovde u daljem tekstu "kontrola izotipa" antitela, su korišćena istovremeno sa odgovarajućim anti-humanim LAG3 klonovima na svim tkivima kao komparatori za procenu nespecifičnog obeležavanja.

Testiranje imunohistohemijske unakrsne-reaktivnosti antitela 4A10, 11C9 i 19E8 i 22D2 izvedeno je u posebnim testovima.

Sve pločice je pregledao patolog i imunohistohemijski signal je ocenjen na skali od 0-3 (0 = negativan, 1 = nizak, 2 = umereni, 3 = visoki). Intenziteti i obrasci bojenja su upoređivani između test artikla i reagenasa kontrole izotipa. Bojenje test artikla se smatra značajnim kada je intenzitet značajno premašio intenzitet kontrole izotipa ili je imao izrazitu, reproducibilnu razliku u obrascu raspodele unutar tkiva.

Tabela 7. Lag3 klon 4A10 (5 ug/mL)

1

Tabela 8. Lag3 klon 11C9

1

Tabela 9. Lag3 klon 19E8 (

P

L

u

L

u

L

u

L

u

L

u

L

u

L

u

P

1

Tabela 10. Lag3 klon 22D2

1

U zaključku, klon 19E8 je ispoljio relativno istaknuto sarkoplazmatično obeleževanje vaskularnog glatkog mišića u svim ispitivanim tkivima osim pluća. Klon 4A10 je ispoljio citoplazmatičnu imunohistohemijsku reaktivnost kod približno 20% egzokrinih glandularnih ćelija pankreasa. Klonovi 11C9 i 22D2 nisu pokazali obeleževanje preko onog zabeleženog a kontrolom izotipa.

Primer 7: Vezivanje Lag3 klonova za T ćelije izolovane iz krvi čoveka i makaki majmuna.

Vezivanje Lag3 mAb klonova za primarne T-ćelije je procenjivano upotrebom mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMC) čoveka i makaki majmuna (makaki). Humana krv je dobijena od lokalnih donora; krv makaki majmuna je dobijena od Bioreclamation. PBMC su izolovane iz cele krvi upotrebom centrifugiranja sa Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare, Cat# 17-1440-03) gradijentom gustine u 524 x g u trajanju od 40 minuta. PBMC su sakupljene iz interfejsa medijuma:plazme i isprane 2 puta fosfatno puferisanim fiziološkim rastvorom (PBS). Rezidualna crvena krvna zrnca su lizirana upotrebom rastvora amonijum-hlorida-kalijuma za liziranje crvenih krvnih zrnaca (ACK, GIBCO, cat# A10492-010). PBMC makaki majmuna ili čoveka (3 x10<6>/ml) su stimulisane sa 4 µg/ml PHA (Sigma, L2769) u trajanju od 48h i 20 h, respektivno. Za protočnu citometrijsku analizu, 1x10<6>PHA-aktiviranih PBMC je korišćeno po bojenju u 50 µl FACS puferu za bojenje (BD, cat# 554657). Lag3 mAb klonovi ili odgovarajuće kontrole izotipa (Tabela 11) su inkubirani sa PBMS čoveka ili makaki majmuna, što je praćeno detekcijom upotrebom kozjeg anti-mišjeg IgG-PE (BD 550589). Mišje anti-humano CD3-pacifičko plavo (BD 558124, klon SP34-2), mišje anti-humano CD4-PerCP (BD 550631, klon L200) i mišje anti-humano CD8-APC-Cy7 (BD 557834, klon SKI) su korišćeni kao fenotipski markeri. Sakupljanje uzoraka je izvedeno na LSR II protočnom citometru i podaci su analizirani upotrebom FlowJo softvera verzije 10.0.6 (Tree Star, Inc.).

Protočna citometrijska analiza je otkrila vezivanje za sve analizirane Lag3 klonove za primarne humane i makaki T ćelije (reprezentativni podaci prikazani na Slici 2).

Tabela 11: Lag 3 klonovi i kontrole izotipa korišćeni u studiji

1

Primer 8: Mapiranje epitopa hLAG3 antitela pomoću masene spektrometrije sa razmenom vodonika i deuterijuma.

Kontakti između anti-LAG3 antitela i humanog LAG3 određivani su preko upotrebe analize masene spektrometrije sa razmenom vodonika i deuterijuma.

Matrijali

● Humani LAG3 -His: [VEGF lider] -LAG3_H-[His9G]

●

● (SEQ ID NO: 447)

● Anti-hLAG3 klon 22D2 (himerno antitelo koje sadrži [LAG3_H] mAb (LB145.22D2.E1.D1 (VH0/VL0) Geneart) IgG4 S228P / kapa (PX) i humani IgG4 okvir koji sadrži zglobnu stabilizujuću S228P mutaciju)

● Anti-hLAG3 klon 11C9 (mišje x [LAG3_H] mAb (LB148.11C9.1C1) IgG1 / kapa (HY) / mišji IgG1)

● Anti-hLAG3 klon 4A10 (mišje x [LAG3_H] mAb (LB148.4A10.1H1) IgG2a / kapa (HY) / mišji IgG2a)

Tečna hromatografija - masena spektrometrija

Maseni spektrometar je Thermo Scientific Orbitrap-Velos. Za merenje uzoraka obeleženih deuterijumom, maseni spektrometar je podešen za dobijanje jednog potpunog skena MS podataka u orbitrap na snazi od 60,000, ciljnom broju jona od 1E6 i maksimalnom vremenu jonske injekcije od 500 milisekundi. Za dobijanje MS/MS podataka za indetifikacije peptida, maseni spektrometar je podešen tako da se dobije jedan puni skenirajući spektar na snazi od 60,000, što je praćeno sa deset-zavisnih MS/MS spektara u jonskoj zamki.

1 1

Sistem tečne hromatografije je Waters nanoAcquity za gradijent analitičke kolone i Waters 515 izokratska pumpa za digestiju i punjenje uzorka. Za digestiju u punjenje uzorka, korišćeni pufer je bio 2% acetonitril i 0.05% trifluorosirćetna kiselina na stopi protoka od 80 ul/min. Za analitički gradijent, puferi su bili pufer A) 0.1% mravlja kiselina u vodi i pufer B) 0.1% mravlja kiselina u acetonitrilu.

Gradijent je bio na 40ul/min od 2% B do 36% B za 10 minuta, što je praćeno ispiranjem sa 80% B u trajanju od 1.5 minute i reekvilibracijom na 2% B u trajanju od 3 minuta. Kolona je zatim isprana ciklusima gradijenta između 2% i 80% B, tri puta sa 1 minutom u svakom koraku, što je praćeno finalnom ekvilibracijom na 2% B u trajanju od 5 minuta. Kolona za hvatanje bila je Waters Vanguard C18 BEH 1.7um Guard kolona i analitička kolona je bila Waters C18 BEH300, 1.7um 1x50mm kolona.

Rukovanje uzorkom za obeležavanje deuterijumom izvedeno je pomoću Leaptec H/D-X PAL sistema. Podloga za obeležavanje uzorka je podešena do temperature od 25°C, podloga za gašenje je podešena do 1.5°C i zamka i komora analitičke kolone je je podešena do 1.5°C. Imobilizovana pepsin kolona (Porosyme Immobilized Pepsin 2.1 x 30mmm, Life Technologies) je držana izvan komore kolone na sobnoj temperaturi.

Obeležavanje deuterijom

Za klonove antitela 22D2 i 11C9, hLAG3-His (113 pmol/ul) je mešan sa istom zapreminom antitela (55 pmol/ul) ili, kao nevezana kontrola, PBS pH 7.6. Uzorci vezani za antitelo i nevezana kontrola su inkubirani na sobnoj temperaturi u trajanju od 1 časa pre početka eksperimenta obeležavanja. Za 4A10, antitelo (30 pmol/ul) je mešano sa hLAG3-His u odnosu 2:1 zapr./zapr. Kasniji koraci su bili identični za sve uzorke.

Da bi se uzorci obeležili deuterijumom, 2ul uzorka je mešano sa 25ul PBS u deuterijum oksidu pD 7.6. Vremenske tačke obeležavanja su bile 30, 300, 3000 ili 9000 sekundi. Posle podešenog vremena, 25ul obeležavajuće smeše dodato je u 40ul hladnog pufera za hlađenje (8M Urea, 100mM TCEP, 0.02% dodecilmaltozid). Ugašeni uzorak je inkubiran na 1.5°C u trajanju od 2 minuta. 55ul je zatim injektirano u komoru za hlađenje kolone gde je uzorak propušten preko pepsin kolone i dobijeni peptidi su sipani na kolonu za hvatanje. Posle tri minuta, pokrenuti su analitički gradijent i maseni spektrometar.

Potpuno deuterisani uzorak je generisan inkubacijom 2ul hLAG3 sa 108ul deuterisanog denaturišućeg pufera (4M Urea, 100mM TCEP, 0.01% DDM u 99.5% deuterijum oksidu). Uzorak je inkubiran na 37°C preko noći. 55 ul je zatim direktno injektirano u komoru kolone i podaci su dobijeni kao prethodno.

1 2

Analiza podataka

Dobijeni su LC-MS/MS podaci neobeleženog uzorka i pretraživani su pre obeležavanja deuterijumom da bi se verifikovala uspešna digestija proteina i da bi se generisao spisak peptida. Podaci su pretraživani kroz bazu podataka upotrebom Proteome Discoverer 1.4 i SEQUEST HT algoritma za pretragu (ThermoFisher Scientific). Baza podataka proteina bila je humana LAG3-His sekvenca spojena sa bazom podataka kvasca Saccharomyces cerevisiae.

MS podaci za iskustvo obeležavanja deuterijumom su obrađeni pomoću HDExaminer (Sierra Analytics). Masa i vreme zadržavanja izabrani pomoću softvera za svaki peptid su ručno potvrđeni.

Rezultati

Ostaci humanog LAG3 zaštićeni sa 22D2, 4A10 i 11C9 antitelima, kada su vezani za LAG3 protein, ilustrovani su na slikama 3, 4(a-c) i 5 (a-b).

Primer 9: KinExA na bazi ćelija

Afiniteti LAG3 antitela za LAG3 određivani su upotrebom kinetičke ekskluzione analize na bazi ćelija (KinExA). KinExA na bazi ćelija može biti korišćena za merenje afiniteta molekula za vezujućeg partnera na ćelijskoj površini (Rathanaswami et al. Analylitical Biochemistry 373(1): 52-60 (2008); Xie et al. J. Immunol. Methods 304 (1-2): 1-14 (2005)). U ovom slučaju, BaF/3 ćelije su stabilno transficirane sa humanim ili od makaki majmuna LAG3 proteinima. Transficirane ćelije ili roditeljska BaF/3 kontrolna ćelijska linija su gajene do gustine od 1.7 x 106 do 3.2 x 106 ćelija po ml na 37°C, 120 RPM, 5% CO2, u IX RPMI 1640 medijumu sa 10% FBS, 10 ng / ml IL-3, 5 µg / ml puromicina. Ćelije su koncentrovane, mešane sa 15 pM ili 150 pM antitela u medijumu ćelijske kulture i inkubirane 24 do 48 časova na sobnoj temperaturi uz rotaciju na 20 do 30 RPM. Ćelije su bile prisutne na vršnoj koncentraciji od 2 x 107 ćelija po ml (roditeljski BaF/3 ili makaki LAG3 transfektanti) ili 1 X 10<7>ćelija po ml (humani LAG3 transfektanti) i razbležene 2-puta, u seriji od 18 članova. Ćelije su peletirane i slobodno antitelo u supernatantu je mereno upotrebom KinExA 3200 instrumenta (Sapidyne, Idaho, USA). Instrument je vezao slobodno antitelo za polimetil metakrilatne kuglice (Sapidyne) koje su obložene kozjim F(ab')2anti-humanim Fcγ (Jackson ImmunoResearch Laboratories, Pennsylvania, USA). Antitelo na kuglicama je obeleženo sa 1.5 µg / ml Alexa Fluor® 647 konjugovanog kozjeg anti-humanog (Fab')2(Jackson ImmunoResearch Laboratories), isprano i fluorescentni signal je očitavan sav upotrebom KinExA™ 3200. Podaci za koncentracije 15 pM i 150 pM svakog antitela su aproksimirani istovremeno upotrebom KinExA™ Pro n-Curve Analysis softvera verzije 4.0.11 (Sapidyne).

1

Tabela 12. Merenja afiniteta KinExA.

Primer 10. Efekat anti-LAG3 antitela na mišje T-ćelijske hibridoma 3A9 ćelije koje eksprimiraju humani LAG3.

Sposobnost anti-LAG3 antitela da pojačaju antigen-specifičnu T ćelijsku aktivaciju testirana je u modifikovanoj verziji prethodno opisane analize T ćelijske aktivacije (Workman et al., Eur. J. Immunol. 32:2255-2263 (2002)).

HEL peptid48-63-specifični mišji T ćelijski hibridom (3A9) je stimulisan MHCII+ , HEL peptid48-63-pulsiranom B ćelijskom linijom (LK35.2) sa poklapajućim haplotipom i oslobađanje IL-2 je procenjivano kao očitavanje za antigen-specifičnu T ćelijsku aktivaciju. 3A9 T ćelijski odgovor na HEL peptid48-63-pulsirane LK35.2 ćelije bio je zavisan od doze.

3A9 T ćelijske linije koje stabilno prekomerno eksprimiraju mišji ili humani LAG3 su generisane retrovirusnom transdukcijom. Pokazano je da mišji MHC2 na LK35.2 ćelijama može da se veže za oba, humani i mišji LAG3, rezultujući u snažnoj redukciji proizvodnje antigenspecifičnog IL-2, u suboptimalnim koncentracijama T ćelijske aktivacije. Maksimalni efekat LAG3 aktivnosti je zabeležen kada je titrirajući HEL peptid48-63u koncentraciji od 31.2 nM. Inhibitorni efekat prekomerne ekspresije LAG3 nije zabeležen kada se koriste LK35.2 B ćelije pulsirane vipim dozama peptida (što odgovara >100nM). Tretman sa 10 ug/ml komercijalno dostupnog mišjeg LAG3 antitela, C9B7W, nivoi IL-2 su spašeni do onog nivoa kod vektorskih 3A9 ćelija.

Da bi se procenio efekat anti-LAG3 antitela u ovoj analizi, 3A9 T ćelije koje prekomerno eksprimiraju mišji ili humani LAG3 (100,000 po komorici) su prethodno tretirane anti-LAG3 antitelima (serijski razblažena u 3-strukim razblaženjima od 10ug/ml) u trajanju od 30 minuta na 37°C, i stimulisane sa LK35.2 ćelijama (33,333 po komorici) pulsiranim 30 minuta pre ko-

1 4

kulture sa 31.2 nM HEL peptidom48-63. Posle stimulacije u trajanju od 24h na 37°C i 5.0% CO2, izlučivanje IL-2 je procenjeno u supernatantima kulture pomoću mezoskale. Inhibicija LAG3 sa antagonističkim antitelom obnovila je T-ćelijsku funkciju rezultujući u spašavanju proizvodnje IL-2 na način zavisan od doze. Proizvodnja IL-2 nije spašena kada su 3A9 ćelije prethodno tretirane antitelima kontrolnim za izotip. Sposobnost prekomerne ekspresije LAG3 da suprimira izlučivanje IL-2 zajedno sa spašavanjem IL-2 posle tretmana sa anti-LAG3 antitelom potvrdila je ovu analizu kao snažan skrining analt. Tabela 13 navodi EC50za spašavanje IL-2 upotrebom hLAG3-3A9 sistema za mišja anti-humana i humanizovana anti-LAG3 antitela.

Tabela 13: Mišja anti-humana LAG3 antitela stimulišu proizvodnju IL-2 u hLAG3-3A9 T ćelijskom sistemu

Primer 11: Blokiranje veziavnja LAG3/MHC klase II na Daudi ćelijama.

Mišji anti-humani LAG3 i humanizovani anti-LAG3 klonovi su testirani za njihovu sposobnost da blokiraju interakciju hLAG3 sa humanim MHC klase II. Daudi ćelije (ATCC #CCL-213) su korišćene kao ćelijska linija pozitvna za ekspresiju humanog MHC klase II. Daudi ćelije su blokirane sa 10ug/ml kozjeg IgG u HBSS i 2% BCS na ledu u trajanju od 30 minuta i 0.5x106 ćelija/uzorku je alikvotirano u 96-komornoj ploči sa dnom oblika slova V i uklonjen je blokirajući pufer. Klonovi LB145.22D2.E1.1D1, LB148.19E8.G1.1A1, LB148.4A10.1H1 i LB148.11C9.1C1 i hu22D2 VH6/VL3, hu22D2 VH6/VL3 N55Q, hu22D2 VH6/VL3 N55S, hu22D2 VH6/VL3 N55D, i himerni 22D2 su serijski razblaženi počevši na 20ug/ml u HBSS/2%

1

BCS i prethodno inkubirani sa 2ug/ml humanog LAG3-huFc ili biotinilovanog humanog LAG3-huFc u 96-komornim polipropilenskim pločaama sa snom oblika slova U u finalnoj zapremini od 100ul i inkubirani na ledu u trajanju od 30 minuta. Posle pre-inkubacije, smeše humanog LAG3-Fc/antitela su dodate u blokirane Daudi ćelije i inkubirane 45 minuta na ledu. Ćelije su peletirane centrifugiranjem na 1200rpm i isprane dva puta sa HBSS/2% BCS. Vezivanje humanog LAG3-Fc za Daudi ćelije je detektovano upotrebom konjugata F(ab)'2kozjeg anti-humanog IgG-PE (Southern Biotech Cat#) na 1:200 za nekonjugovani huLAG3-huFc ili 1:500 razblaženja streptavidina-PE za biotinilovani huLAG3-huFc u 100ul zapremini bojenja i inkubirano na ledu 20 minutaĆelije su isprane dva puta kao što je opisano u prethodnom tekstu, resuspendovane u HBSS/2% BCS i očitavane na FACSCalibur. Tabela 14 rezimira IC50 za blokadu MHC klase II za mišje anti-humane LAG3 klonove.

Humanizovana anti-humana LAG3 antitela (VH6/VL3, VH6/VL3 N55D, VH6/VL3 N55Q, VH6/VL3 N55S, i himerni 22D2) su testirana za njihovu sposobnost da blokiraju interakciju hLAG3 sa humanim MHC klase II kao što je opisano u prethodnom tekstu. Biotinilovani humani LAG3-huFc je korišćen i kod detekcije je korišćen streptavidin-PE.

Tabela 14: Mišja anti-humana LAG3 antitela blokiraju interakciju humanog MHC klase II sa humanim LAG3-Fc rekombinantnim proteinom.

Primer 12: Vezivanje Lag3 klonova za T ćelije izolovane iz humane krvi i krvi makaki majmuna.

1

Vezivanje LAG-3 mAb klonova za primarne T-ćelije je procenjivano upotrebom mononuklearnih ćelija periferne krvi (PBMC) čoveka i makaki majmuna (makaki). Humana krv je dobijena od lokalnih donora; krv makaki majmuna je dobijena od Bioreclamation. PBMC su izolovane iz cele krvi upotrebom Ficoll-Paque Plus (GE Healthcare, Cat# 17-1440-03) centrifugiranja na gradijentu gustine na 524 x g u trajanju od 40 minuta. PBMC su sakupljene iz interfejsa medijuma:plazme i isprane 2 puta fosfatno puferisanim fiziološkim rastvorom (PBS). Rezidualna crvena krvna zrnca su lizirana upotrebom rastvora amonijum-hlorida-kalijuma za liziranje crvenih krvnih zrnaca (ACK, GIBCO, cat# A10492-010). PBMC makaki majmuna ili čoveka (3 x10<6>/ml) su stimulisane sa 4 µg/ml PHA (Sigma, L2769) u trajanju od 48 h i 20 h, respektivno. Za protočnu citometrijsku analizu, 1x10<6>PHA-aktiviranih PBMC je korišćeno po bojenju u 50 µl FACS pufera za bojenje (BD, cat# 554657). LAG-3 mAb klonovi ili odgovarajuće kontrole izotipa su inkubirani sa humanim ili makaki PBMS, što je praćeno detekcijom upotrebom kozjeg anti-mišjeg IgG-PE (BD 550589). Mišje anti-humano CD3-pacifičko plavo (BD 558124, klon SP34-2), mišji anti-humani CD4-PerCP (BD 550631, klon L200), i mišji anti-humani CD8-APC-Cy7 (BD 557834, klon SKI) korišćeni su kao fenotipski markeri. Uzimanje uzoraka je izvedeno na LSR II protočnom citometru i podaci su analizirani upotrebom FlowJo softvera verzije 10.0.6 (Tree Star, Inc.).

Protočna citometrijska analiza je otkrila vezivanje svih analiziranih anti-LAG3 antitela za primarne humane i makaki T ćelije. EC50za vezivanje za humane i makaki CD4+ i CD8+ T ćelije je određivana za humanizovana 22D2 antitela i rezimirana je u Tabeli 15. Podaci predstavljaju 3 humana i 3 makaki donora posle stimulacije sa 4ug/ml PHA tokom 40 časova pre bojenja.

Tabela 15. EC50za vezivanje za humane i makaki CD4+ i CD8+ T ćelije.

Primer 13: Efekat tretmana anti-humanim LAG-3 antitelom /- tretmana sa anti-PD-1 na proizvodnju IL-2 u SEB stimulisanim humanim PBMC.

1

Analize humane primarne T ćelije – Prva analiza je testirala funkciju samo blokiranja LAG3 ili u kombinaciji sa anti-PD-1 za povećanje proizvodnje IL-2 pomoću T ćelija posle SEB aktivacije humanih PBMC (Slika 7). Neutralizacija aktivnosti LAG3, pojedinačno ili u prisustvu anti-PD-1, rezultovala je u pojačanoj proizvodnji IL-2. Prikazani su primeri vrednosti IL-2 mezoskale od 2 donora duž titracije doza anti-LAG3 antitela. Hu22D2-pojačana proizvodnja IL-2 pomoću SEB-stimulisanih PBMC 1.54-puta (opseg 1.15-2.36-puta, n=8) u poređenju sa kontrolom izotipa i u kombinaciji sa anti-PDl 1.45 puta (opseg 1.15-2.36 -puta, n=4 u 10 ili 0.3µg/ml anti-PD-1) u poređenju sa anti-PD-1 pojedinačno plus kontrolom izotipa. Hu22D2 pojedinačno ili u kombinaciji sa anti-PD-1, pokazao je sličnu aktivnost sa referentnim anti-LAG3 antitelom. Hu2D2 je Ab6. α-PD-1 je potpuno humano IgG4 anti-humano PD1 monoklonsko antitelo. Referentno anti-LAG3 je potpuno humano IgG4 anti-humano LAG3 monoklonsko antitelo koje se vezuje za humanu LAG3 petlju.

Primer 14: Efekat tretmana hu22D2 /- tretmana anti-PD-1 na proizvodnju IFN-gama i TNFα u MLR stimulisanim humanim PBMC.

MLR sistem je takođe korišćen za testiranje aktivnosti hu22D2 u primarnim T ćelijama. Humane PBMC su stimulisane dendritskim ćelijama poreklom od monocita iz različitog donora, što dovodi do aktivacije T ćelije kao posledica nepoklapanja MHC. U ovoj analizi je zabeležen visok stepen varijabilnosti u odgovorima donora. Međutim, preliminarni podaci su pokazali da je neutralizacija aktivnosti LAG3, pojedinačno i u prisustvu anti-PD-1 pojačala aktivaciju T ćelija kod dva od tri donora, kao što je procenjeno preko proizvodnje IFN-γ i TNF-α (Slika 8). Hu2D2 je Ab6.

Primer 15: Farmakokinetička i farmakodinamička analiza anti-LAG3 kod makaki majmuna.

Procenjivan je farmakokinetički i farmakodinamički profil Ab6 kod makaki majmuna. Postupci koji uključuju negu i upotrebu životinja u studiji su pregledane i odobrene. U toku studije, nega i upotreba životinja su izvedene u skladu sa principima navedenim u vodiču Asocijacije za procenu i akreditaciju nege laboratorijskih životinja (AAALAC), Zakonu za dobrobit životinja, Panelu o eutanaziji Američke veterinarske medicinske asocijacije (AVMA) i Vodiču za negu i upotrebu laboratorijskih životinja Instituta za laboratorijsko istraživanje životinja (ILAR).

Korišćeno je 25 naivnih mužjaka makaki majmuna kineskog porekla (4.0 - 7.0 kg u vreme doziranja). Životinje su posmatrane dva puta na dan. Pored toga, životinje su posmatrane

1

na svakoj vremenskoj tački sakupljanja krvi. Telesne težine su beležene jednom pre dvakog doziranja.

U studiji, pet mužjaka je dodeljeno u svaku od 5 grupa. Životinje u svim grupama su primale 5 doze test ili kontrolnih artikala IV preko cefalične vene tokom 10 minuta. Doze za grupe su bile 0.03 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg i 30 mg/kg. Farmakokinetički uzorci su uzimani za sve životinje na dan 1: prethodna doza i 15 minuta i 1, 4, 8, 24 (dan 2), 48 (dan 3) i 96 (dan 5) časova posle doze. Uzorci su takođe sakupljani na dan 8: prethodna doza i 1, 8, 24 (dan 9), 48, (dan 10), 120 (dan 13) i 168 (dan 15) časova posle doze. Svi uzorci su obrađeni u plazmu, čuvani zamrznuti na -70°C ± 10°C do analiziranja. Farmakodinamički uzorci su uzeti za sve životinje na dan 1: prethodna doza i 15 minuta i 1, 4, 8, 24 (dan 2), 48 (dan 3) i 96 (dan 5) časova posle doze. Uzorci su takođe sakupljeni na dan 8: prethodna doza i 1, 8, 24 (dan 9), 48 (dan 10), 120 (dan 13) i 168 (dan 15) časova posle doze. Svi uzorci su obrađeni do plazme, čuvani zamrznuti na -70°C ± 10°C do analiziranja.

Ukupno antitelo i slobodno antitelo (nevezano antitelo i delimično vezano) su procenjivani pomoću dve različite analize, univerzalne analize i analize hvatanja antigena, respektivno. Podaci iz ovih procena su prikazani na Slici 9 (Rezultati analize hvatanja Ag) i Slici 10 (rezultati univerzalne analize). Klirens i zapremina raspodele u stanju mirovanja za svaki nivo doze su procenjivani i prikazani u Tabelama 16 (analiza hvatanja antigena) i 17 (univerzalna analiza). Razlike između klirensa antitela i zapremine raspodele parametara pokazale su da se deo Ab6 antitela vezao za svoje ciljno mesto u subjektima makaki majmunima.

Tabela 16. Analiza hvatanja LAG3 antigena-klirensa Ab6 i zapremine raspodele u stanju mirovanja (Vss) u različitim dozama.

1

Podaci hvatanja antigena detektovali su slobodno antitelo u uzorku. Ovi podaci hvatanja antigena (podaci nisu prikazani) pokazali su 23-struku razliku u klirensu u odnosu na ispitivani opseg doza (0.003 mg/kg - 30 mg/kg) (Tabela 16).

Tabela 17. Analiza ukupnog antitela-Klirens Ab6 i zapremina raspodele u stanju mirovanja (Vss) u različitim dozama.

Podaci o ukupnom antitelu detektovali su ukupno antitelo u uzorku. Ovi podaci o ukupnom antitelu (Slika 9) pokazali su 3.6-struku razliku u klirensu u odnosu na ispitivani opseg doza (0.003 mg/kg - 30 mg/kg) (Tabela 17).

Procenjivana je ukupna koncentracija Ab6 kod makaki majmuna u dozama od 0.03 mg/kg, 0.3 mg/kg, 1 mg/kg, 10 mg/kg i 30 mg/kg u vremenu. Podaci iz ove procene su prikazani na Slici 10. Kako se doza povećava, klirens antitela iz subjekata se smanjio. Podaci o koncentraciji Ab6 normalizovani za dozu tokom vremena prikazani su na Slici. U kasnijim vremenskim tačkama, posle primene drugog IV bolusa Ab6, postojao je gubitak izlaganja što ukazuje na potencijalnu imunogenost protiv antitela.

LAG3 ciljno-posredovani klirens Ab6 antitela je zabeležen kada su koncentracije antitela beležene u subjektima majmunima tokom vremena. PK model sa dva odeljka sa linearnim i nelinearnim (Vmax, Km) parametrima klirensa razvijen je za opisivanje profila koncentracijevremena za Ab6. Ovi podaci su prikazani na Slici 12.

Predmetni pronalazak nije ograničen u obimu specifičnim primerima izvođenja koji su ovde opisani. Zaista, različite modifikacije pronalaska pored onih opisanih ovde postaće očigledne stručnjacima iz date oblasti tehnike iz gore navedenog opisa i pratećih slika.

1

Claims

PATENTNI ZAHTEVI

1. Antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koje se specifično vezuje za humani LAG3 i sadrži varijabilni domen lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u aminokiselinama 21-131 prema SEQ ID NO: 126 i varijabilni domen teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 116.

2. Antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment prema patentnom zahtevu 1 koje sadrži imunoglobulin lakog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i imunoglobulin teškog lanca koji sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 116.

3. Antitelo prema patentnom zahtevu 1 koje se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu se svaki imunoglobulin lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i svaki imunoglobulin teškog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence varijabilnog domena teškog lanca prikazane u aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 116 i konstantnog regiona humanog IgG4.

4. Antitelo prema patentnom zahtevu 3, naznačeno time što konstantni region humanog IgG4 sadrži S228P mutaciju prema EU sistemu.

5. Antitelo prema patentnom zahtevu 1 koje se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu svaki imunoglobulin lakog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i svaki imunoglobulin teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu u SEQ ID NO: 116.

6. Antitelo prema patentnom zahtevu 1 koje se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu se svaki imunoglobulin lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i svaki imunoglobulin teškog lanca se sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u SEQ ID NO: 116.

7. Antitelo prema patentnom zahtevu 1, koje se sastoji od dva imunoglobulina lakog lanca i dva imunoglobulina teškog lanca, pri čemu se svaki imunoglobulin lakog lanca sastoji od aminokiselinske sekvence prikazane u aminokiselinama 21-238 prema SEQ ID NO: 126 i svaki imunoglobulin teškog lanca sadrži aminokiselinsku sekvencu prikazanu aminokiselinama 1-119 prema SEQ ID NO: 116.

8. Antitelo ili antigen-vezujući fragment prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7 koje je eksprimirano iz ćelije jajnika kineskog hrčka.

9. Antitelo ili antigen-vezujući fragment prema bilo kom od patentnih zahteva 1-7 koje je glikozilovano sa jednim ili više CHO N-vezanih glikana koji su G0-F, G1 -F, G2-F, G0, G1, G2 ili Man5.

10. Kompozicija koja sadrži antitelo ili antigen-vezujući fragment prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 9 i farmaceutski prihvatljiv nosač ili razblaživač.

11. Kompozicija prema patentnom zahtevu 10 koja dodatno sadrži anti-PD-1 antitelo.

12. Kompozicija prema patentnom zahtevu 11, naznačena time što, anti-PD-1 antitelo je pembrolizumab.

13. Uređaj za injektiranje koji sadrži antitelo ili antigen-vezujući fragment prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 ili kompoziciju prema bilo kom od patentnih zahteva 10-12.

14. Polinukleotid koji kodira: varijabilni domen lakog lanca i varijabilni domen teškog lanca ili imunoglobulin lakog lanca i imunoglobulin teškog lanca antitela ili antigenvezujućih fragmenata prma bilo kom od patentnih zahteva 1-9.

15. Vektor koji sadrži polinukleotid prema patentnom zahtevu 14.

16. Ćelija domaćin koja sadrži antitelo ili antigen-vezujući fragment prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9, polinukleotid prema patentnom zahtevu 14 ili vektor prema patentnom zahtevu 15.

17. Postupak za proizvodnju antitela ili njegovog antigen-vezujućeg fragmenta prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 koji sadrži:

18. Postupak prema patentnom zahtevu 17 naznačen time što ćelija domaćin je ćelija jajnika kineskog hrčka.

19. Antitelo ili njegov antigen-vezujući fragment koje se specifično vezuje za humani LAG3 koje je proizvod postupka prema patentnom zahtevu 17 ili 18.

20. Antitelo ili antigen-vezujući fragment prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 ili kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 10-12, za upotrebu u lečenju ljudskog tela terapijom.

21. Antitelo ili antigen-vezujući fragment prema bilo kom od patentnih zahteva 1-9 ili kompozicija prema bilo kom od patentnih zahteva 10-12, za upotrebu u lečenju kancera.