RS61657B1 - Derivati 3-metil-pirolidin-2,5-diona korisni kao antagonisti cgrp receptora - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na neka nova jedinjenja antagoniste kalcitonin genpovezanog peptida (CGRP) receptora, na farmaceutske kompozicije koje uključuju jedinjenja, na postupke za upotrebu jedinjenja u prevenciji ili lečenju nekih fizioloških poremećaja kao što je migrena i na međuproizvode i procese korisne u sintezi jedinjenja.

[0002] Ovaj pronalazak je iz oblasti prevencije i tretmana migrene i drugih neuroloških oboljenja i poremećaja za koje se veruje da su posredovani sa CGRP (videti na primer, S. Benemei, i saradnici, Current Opinion in Pharmacology, 9, 9-14 (2009)). Migrena je iscrpljujuće oboljenje od koga pate milioni ljudi širom sveta. Mogućnosti tretmana migrene uključuju triptane, kao što su sumatriptan i zolmitriptan. Nažalost, savremena odobrena sredstva raspoloživa za pacijente ne obezbeđuju uvek efikasan tretman, i ova sredstva mogu da budu povezana sa različitim neprijatnim neželjenim efektima kao što su vrtoglavica, parestezija i neprijatnost u grudima. Pored toga, triptani dovode do nekih kardiovaskularnih problema čime postaju kontraindikovani za pacijente koji u osnovi boluju od kardiovaskularnih bolesti ili nekontrolisane hipertenzije (videti T.W. Ho i saradnici, Lancet, 372, 2115-2123 (2008)). Prema tome, postoji značajna nezadovoljena potreba u prevenciji i tretmanu migrene. Poželjni su novi antagonisti CGRP receptora da obezbede tretman ili prevenciju nekih neuroloških oboljenja, kao što je migrena.

[0003] United States publikacije brojevi 2017/0044138 A1 i 2017/0044163 otkrivaju neka jedinjenja antagoniste CGRP receptora korisna u tretmanu ili prevenciji migrene. United States Patent broj 6,680,387 otkriva neke 5-benzil- ili 5-benziliden-tiazolidin-2,4-dione za tretman dijabetes melitusa tip-II, ateroskleroze, hiperholesterolemije i hiperlipidemije.

[0004] Ovaj pronalazak obezbeđuje neka nova jedinjenja koja su antagonisti CGRP receptora. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje antagoniste CGRP receptora koji centralno penetriraju.

[0005] U skladu sa tim, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule I:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov hidrat.

[0006] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje jedinjenje Formule II:

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegov hidrat.

[0007] Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak za prevenciju migrene kod pacijenta, uključujući primenu efektivne količine jedinjenja Formule I ili Formule II ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na pacijentu kome je to potrebno.

[0008] Ovaj pronalazak dalje obezbeđuje postupak za lečenje migrene kod pacijenta, uključujući primenu efektivne količine jedinjenja Formule I ili Formule II ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na pacijentu kome je to potrebno. Ovaj pronalazak takođe obezbeđuje postupak za antagoniziranje CGRP receptora kod pacijenta, uključujući primenu efektivne količine jedinjenja Formule I ili Formule II ili njegove farmaceutski prihvatljive soli na pacijentu kome je to potrebno

[0009] Osim toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule I ili Formule II ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u terapiji, posebno za tretman migrene. Pored toga, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje Formule I ili Formule II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u prevenciji migrene. Isto tako, ovaj pronalazak obezbeđuje upotrebu jedinjenja Formule I ili Formule II ili njegove farmaceutski prihvatljive soli za proizvodnju medikamenta za tretman migrene ili za prevenciju migrene.

[0010] Pronalazak dalje obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja uključuje jedinjenje Formule I ili Formule II, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. Pronalazak dalje obezbeđuje proces za izradu farmaceutske kompozicije koji uključuje mešanje jedinjenja Formule I ili Formule II ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. Ovaj pronalazak takođe obuhvata nove međuproizvode i procese za sintezu jedinjenja Formule I i Formule II. Na primer, pronalazak dalje obezbeđuje sledeći međuproizvod:

gde je PG odgovarajuća zaštitna grupa. Primeri odgovarajućih zaštitnih grupa su trifenilmetil, p-metoksibenzil, i slično.

[0011] Kako se ovde koriste, nazivi "tretiranje", "tretman", ili "lečiti" uključuju sprečavanje, usporavanje, zaustavljanje ili povlačenje progresije ili ozbiljnosti postojećeg simptoma ili poremećaja.

[0012] Kako se ovde koristi, naziv "prevencija" ili "sprečavanje" se odnosi na zaštitu pacijenta koji je podložan nekim bolestima ili poremećajima, kao što je migrena, ali koji trenutno ne pati od simptoma bolesti ili poremećaja kao što su simptomi migrene. .

[0013] Kako se ovde koristi, naziv "pacijent" se odnosi na sisara, posebno na ljude.

[0014] Kako se ovde koristi, naziv "efektivna količina" se odnosi na količinu ili dozu jedinjenja iz pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koja, nakon primene jedne ili više doza na pacijentu, dovodi do željenog efekta kod pacijenta sa odgovarajućom dijagnozom ili tretmanom.

[0015] Stručnjak sa iskustvom u tehnici može lako da odredi efektivnu količinu korišćenjem poznatih tehnika i pregledom rezultata dobijenih pod analognim okolnostima. Za određivanje efektivne količine za pacijenta, ordinirajući dijagnostičar razmatra brojne faktore, uključujući ali bez ograničenja na: vrstu pacijenta, njegovu veličinu, starost i opšte stanje; uključene specifične bolesti ili poremećaje; stepen ili učešće ili ozbiljnost bolesti ili poremećaja; odgovor pojedinačnog pacijenta; primenu određenog jedinjenja; način primene; karakteristike bioraspoloživosti preparata koji se primenjuje; izabrani režim doziranja; upotrebu pratećih lekova; i druge relevantne okolnosti.

[0016] Jedinjenja iz ovog pronalaska su efikasna u dnevnoj dozi koja je u rasponu od približno 0.01 do približno 20 mg/kg telesne težine. U nekim slučajevima vrednosti doze ispod donje granice prethodno pomenutog opsega mogu da budu više nego adekvatne, dok u drugim slučajevima mogu da se primene čak i veće doze sa prihvatljivim neželjenim efektima, pa zbog toga prethodno dati raspon doza ne treba da ograniči okvir pronalaska na bilo koji način.

[0017] Jedinjenja iz ovog pronalaska su formulisana kao farmaceutske kompozicije koje se primenjuju bilo kojim načinom primene koji čine jedinjenje bioraspoložvim, uključujući oralni i transdermalni način. Još poželjnije, ove kompozicije su za oralnu primenu. Ovakve farmaceutske kompozicije i procesi za njihovu izradu su dobro poznati u tehnici (videti, na primer, Remington: Science and Practice of Pharmacy, L.V. Allen, Editor, 22nd Edition, Pharmaceutical Press, 2012).

[0018] Jedinjenja Formule I i Formule II, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli su su posebno korisna u postupcima iz pronalaska za prevenciju ili lečenje, ali neke konfiguracije imaju prednost. Niže dati paragrafi opisuju ove konfiguracije koje imaju prednost. Mada ovaj pronalazak razmatra sve pojedinačne enantiomere i diastereomere kao i smeše enantiomera ovih jedinjenja, uključujući racemate, jedinjenja sa apsolutnom konfiguracijom kako je niže navedeno su posebno poželjna. Jasno je da su ove preference primenljive i na postupke prevencije i na postupke tretmana i na nova jedinjenja iz pronalaska.

[0019] Preferirana su niže data jedinjenja:

i njihove farmaceutski prihvatljive soli i hidrati.

[0020] Posebno je preferirano sledeće jedinjenje:

i njegove farmaceutski prihvatljive soli.

[0021] Naredna jedinjenja su posebno preferirana:

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion;

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrohlorid;

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrobromid;

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrobromid monohidrat; i

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrohlorid monohidrat.

[0022] Neki međuproizvodi opisani u niže datim izradama mogu da sadrže jednu ili više zaštitnih grupa azota. Podrazumeva se da zaštitne grupe mogu da budu različite što je jasno stručnjaku sa iskustvom u tehnici, u zavisnosti od određenih uslova reakcije i određenih transformacija koje se vrše. Uslovi zaštite i oslobađanja su dobro poznati stručnjaku sa iskustvom i opisani su u literaturi (videti na primer "Greene’s Protective Groups in Organic Synthesis", Fourth Edition, by Peter G.M. Wuts and Theodora W. Greene, John Wiley and Sons, Inc.2007).

[0023] Stručnjak sa iskustvom u tehnici može u bilo kojoj pogodnoj tački u postupku sinteze jedinjenja iz pronalaska da izdvoji ili razdvoji pojedinačne izomere, enantiomere i diastereomere, postupcima kao što su tehnike selektivne kristalizacije ili asimetrična hromatografija (videti, na primer, J. Jacques i saradnici, "Enantiomers, Racemates, and Resolutions", John Wiley and Sons, Inc., 1981, and E.L. Eliel and S.H. Wilen," Stereochemistry of Organic Compounds", Wiley- Interscience, 1994).

[0024] Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja iz pronalaska može da se formira, na primer, reakcijom odgovarajuće slobodne baze jedinjenja iz pronalaska i odgovarajuće farmaceutski prihvatljive kiseline, u odgovarajućem rastvaraču kao što je dietil etar, pod standardnim uslovima dobro poznatim u tehnici. Pored toga, formiranje ovakvih soli može da se vrši neposredno nakon deprotekcije zaštitne grupe azota. Formiranje ovakvih soli je dobro poznato i prihvaćeno u tehnici. Videti, na primer, Gould, P.L., "Salt selection for basic drugs," International Journal of Pharmaceutics, 33: 201-217 (1986); Bastin, R.J. i saradnici "Salt Selection and Optimization Procedures for Pharmaceutical New Chemical Entities," Organic Process Research and Development, 4: 427-435 (2000); i Berge, S.M. i saradnici, "Pharmaceutical Salts," Journal of Pharmaceutical Sciences, 66: 1-19, (1977).

[0025] Neke skraćenice su definisane kako sledi: "ACN" se odnosi na acetonitril; "c-Pr" se odnosi na ciklopropil; "DCM" se odnosi na DCM ili metilen hlorid; "DMEA" se odnosi na N,N-dimetiletilamin; "DIPEA" se odnosi na N,N-diizopropiletilamin; "DMF" se odnosi na N,N-dimetilformamid; "DMSO" se odnosi na dimetilsulfoksid; "Et" se odnosi na etil; "Et2O" se odnosi na dietil etar; "EtOAc" se odnosi na etil acetat; "EtOH" se odnosi na etanol; "g" kada se koristi u odnosu na centrifugiranje, odnosi se na relativnu centrifugalnu silu; "HPLC" se odnosi na visoko efikasnu tečnu hromatografiju; "HOBt" se odnosi na hidroksibenzotriazol; "hr" se odnosi na sat ili h; "HATU" se odnosi na 1-[Bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorofosfat ili N-[(dimetilamino)-1H-1,2,3-triazolo-[4,5-b]piridin-1-ilmetilen]-N-metilmetanaminijum heksafluorofosfat N-oksid; "HTRF" se odnosi na vremenski razloženu homogenu fluorescenciju; " IC50" se odnosi na koncentraciju sredstva koje produkuje 50% od mogućeg maksimalnog inhibitornog odgovora za to sredstvo; "kPa" se odnosi na kilopaskal ili kilopaskale; "kV" se odnosi na kilovolte; "LAH" se odnosi na litijum aluminijum hidrid; "LC-ES/MS" se odnosi na tečnnu hromatografiju elektrosprej masenu spektrometriju; "LDA" se odnosi na litijum diizopropilamid; "mA" se odnosi na miliamper ili miliampere; "MDCK" se odnosi na Madin-Darby epitelijalne ćelije bubrega pasa; "min" se odnosi na minut ili minute; "Me" se odnosi na metil; "MeOH" se odnosi na metanol ili metil alkohol; "MTBE" se odnosi na metil-terc/butil etar; "NaHMDS" se odnosi na natrijum bis(trimetilsilil)amid; "n-BuLi" se odnosi na n-butillitijum; "psi" se odnosi na funte po kvadratnom inču; "rpm" se odnosi na obrte po minutu; "RT" se odnosi na sobnu temperaturu; "SEM" se odnosi na standardnu grešku srednje vrednosti; "SFC" se odnosi na superkritičnu tečnu hromatografiju; "T3P" se odnosi na 2,4,6-tripropil-1,3,5,2,4,6-trioksatrifosforinan-2,4,6-trioksid rastvor; "t-BuOH" se odnosi na terc/butanol; "TEA" se odnosi na trietilamin; "TFA" se odnosi na trifluorosirćetnu kiselinu; "THF" se odnosi na tetrahidrofuran; "TMEDA" se odnosi na tetrametiletilendiamin; "tR" se odnosi na vreme zadržavanja; "U/mL" se odnosi na jedinicu po mililitru.

[0026] Jedinjenja iz ovog pronalaska ili njihove soli mogu da se izrade različitim procedurama poznatim stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici, od kojih su neke ilustrovane u niže datim šemama, izradama i primerima. Stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici će znati da specifične faze sinteze za svaki od opisanih načina mogu da se kombinuju na različite načine, ili u konjukciji sa fazama iz različitih šema za izradu jedinjenja iz pronalaska ili njihovih soli. Produkti svake faze u niže datim šemama mogu da se povrate uobičajenim postupcima dobro poznatim u tehnici, uključujući ekstrakciju, evaporaciju, precipitaciju, hromatografiju, filtraciju, trituraciju i kristalizaciju. U niže datim šemama, svi supstituenti su kako je prethodno definisano, ukoliko nije drugačije navedeno. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi stručnjaku sa uobičajenim iskustvom u tehnici. Niže date šeme izrade, primeri i ispitivanja dalje ilustruju pronalazak.

Šema 1

[0027] Šema 1 opisuje sintezu (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-diona. U Šemi 1, faza A, asimetrična arilacija izopropil (E)-but-2-enoata može da se izvrši pod uslovima udvajanja upotrebom prolaznog metal katalizatora, kao što je rodijum, kako je dobro opisano u tehnici. Generalno, aril boratna kiselina može da se udvoji sa izopropil (E)-but-2-enoatom, da se dobije rodijum katalizovani produkt izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat sa visokom enantioselektivnošću. Na primer, približno 1.05-1.1 ekvivalenta 4-bromofenil boratne kiseline može da se tretira sa približno 0.01 ekvivalenta rodijum katalizatora, preciznije, bis(norbornadien)rodijum(I) tetrafluoroborata, a nakon toga dodavanjem odgovarajućeg asimetričnog liganda kao što je 0.01-0.015 ekvivalenata (R)-(+)-2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftila, približno 1 ekvivalent TEA, i približno 1 ekvivalent izopropil (E)-but-2-enoata u odgovarajućoj smeši rastvarača kao što su vlažni 1,4-dioksan ili THF i voda (približno 8:1). Dobijena reaktivna smeša može da se zagreje na približno 40 °C u toku približno 18 h. Produkt može nakon toga da se izdvoji i prečisti koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografija. Na primer, reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom i ekstrahuje sa odgovarajućim nepolarnim organskim rastvaračem kao što su MTBE ili DCM. Organski ekstrakti mogu da se kombinuju, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt iz faze A. Sirovi produkt može nakon toga da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu sa odgovarajućim eluentom, kao što je gradijent heksani/EtOAc, da se dobije prečišćen produkt iz faze A, izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat u velikom enantiomernom višku.

[0028] U Šemi 1, faza B, hidroliza Produkta iz Šeme 1, faza A, može da se izvrši pod uslovima saponifikacije dobro poznatim u tehnici. Na primer, izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat može da se rastvori u odgovarajućem alkoholnom rastvaraču kao što je MeOH i tretira sa vodenim rastvorom mineralne baze u višku kao što je NaOH. Nakon zagrevanja u toku približno 1 h, produkt može zatim da se izdvoji i prečisti koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije, trituracije i evaporacije. Na primer, reaktivna smeša može da se ekstrahuje sa odgovarajućim organskim rastvaračem kao što je DCM a dobijeni izdvojeni vodeni sloj može da se tretira sa mineralnom kiselinom u višku kao što je conc. HCl do pH ~ 4. Zakiseljeni vodeni slojevi mogu nakon toga da se ekstrahuju sa odgovarajućim organskim rastvaračem kao što je DCM. Organski ekstrakti mogu da se kombinuju, suše preko anhidrovanog Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirovi produkt iz faze B. Sirovi produkt može da se triturira sa nepolarnim organskim rastvaračem kao što su heptani, dobijeni precipitati mogu da se izdvoje filtriranjem, a filtrat može da se koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije produkt iz faze B, (3S)-3-(4-bromofenil)butanoatna kiselina, u veoma velikom enantiomernom višku.

[0029] U Šemi 1, faza C, esterifikacija Produkta iz Šeme 1 faza B, može da se izvede pod širokim spektrom postupaka esterifikacije kiselina/baza dobro poznatim u tehnici, ili direktnom esterifikacijom sa diazometanom. Na primer, (3S)-3-(4-bromofenil)butanoatna kiselina rastvorena u odgovarajućem alkoholnom rastvaraču kao što je MeOH može da se tretira sa mineralnom kiselinom u višku, kao što je conc. H2SO4. Dobijena smeša može da se zagreje u toku približno 2 h, produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći postupke dobro

1

poznate u tehnici, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se koncentruje pod sniženim pritiskom, dobijeni ostatak može da se podeli između vode i odgovarajućeg organskog rastvarača kao što je MTBE. Organski ekstrakti mogu da se kombinuju, isperu sa vodom, suše preko anhidrovanog MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt iz faze C, metil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat, pogodan za upotrebu bez naknadnog prečišćavanja.

[0030] U Šemi 1, faza D, alkilacija produkta iz šeme 1 faza C, može da se izvede koristeći različite uslove za alkilaciju koji su dobro poznati u literaturi. Na primer, metilacija metil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoata može da se izvrši tretmanom sa približno 1.5-1.75 ekvivalenta ne-nukleofilne baze kao što je n-BuLi u odgovarajućem rastvaraču kao što je anhidrovani THF na niskoj temperaturi a nakon toga neutralisanjem dobijenog anjona sa približno 1.5-1.6 ekvivalenta CH3I. Produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se podeli između vode i odgovarajućeg organskog rastvarača kao što je MTBE. Kombinovani organski ekstrakti mogu po redu da se isperu sa vodom, zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt iz faze D, (3S, 2R/S)-metil 3-(4-bromofenil)-2-metil-butanoat, kao smeša diastereomera pogodnih za upotrebu bez naknadnog prečišćavanja.

[0031] U Šemi 1, faza E, Produkt iz Šeme 1 faza D, (3S, 2R/S)-metil 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoat kao smeša diastereomera, može da se tretira sa približno 1 ekvivalentom organske baze kao što je n-butillitijum, u odgovarajućem organskom rastvaraču kao što je anhidrovani THF, na niskoj temperaturi. Dobijena smeša može nakon toga da se tretira sa rastvorom od približno 0.9 ekvivalenata terc-butil 2-bromoacetata. Produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se podeli između vode i odgovarajućeg organskog rastvarača kao što je MTBE a kombinovani organski ekstrakti mogu da se po redu isperu sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Organski ekstrakti mogu da se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt iz faze E, 4-(terc/butil) 1-metil (S/R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat, kao smeša diastereomera pogodnih za upotrebu bez naknadnog prečišćavanja.

[0032] U Šemi 1, faza F, smeša diastereomernih estara iz Produkta Šeme 1 faza E, mogu da se hidrolizuju pod uslovima dobro poznatim u tehnici. Na primer, 4-(terc/butil) 1-metil (S/R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat može da se rastvori u odgovarajućem organskom rastvaraču kao što je DCM i tretira u višku sa organskom kiselinom kao što je TFA. Dobijena smeša može da se meša na RT u toku približno 18 h, produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se ispere po redu sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, organski ekstrakti mogu da se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt iz faze F, (3S/R,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoksikarbonil)-3-pentanoatna kiselina, kao smeša diastereomera pogodnih za upotrebu bez naknadnog prečišćavanja.

[0033] U Šemi 1, faza G, smeša diastereomera iz Šeme 1 faza F, (3S/R,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoksikarbonil)-3-pentanoatna kiselina, može da se rastvori u odgovarajućem polarnom organskom rastvaraču kao što je anhidrovani DMF i tretira po redu sa ne-nukleofilnom bazom kao što je približno 3 ekvivalenta TEA ili DIPEA, približno 1.2 ekvivalenta reagensa za udvajanje amida kao što je HATU i rastvorom metanolnog amonijuma u višku. Dobijena smeša može da se meša na RT u toku približno 2-12 h, produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što je ekstrakcija. Reaktivna smeša može da se podeli između vode i odgovarajućeg organskog rastvarača kao što je DCM, slojevi mogu da se razdvoje a kombinovani organski ekstrakti se po redu isperu sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl. Ekstrakti mogu nakon toga da se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije produkt iz faze G, metil (2S/R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat, kao smeša diastereomera pogodnih za upotrebu bez naknadnog prečišćavanja.

[0034] U Šemi 1, faza H, smeša diastereomernog produkta iz Šeme 1 faza G može da se ciklizuje zagrevanjem u prisustvu ne-nukleofilne baze a nakon toga razdvajanjem diastereomera pod uslovima asimetrične hromatografije. Na primer, metil (2S/R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat može da se rastvori u smeši THF/voda (približno 1:1), tretira sa približno 2.5 ekvivalenta ne-nukleofilne baze kao što je natrijum karbonat i dobijena smeša može da se zagreva na približno 60 °C u toku približno 2 h.

Produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što je ekstrakcija a nakon toga razdvajanjem diastereomera pod uslovima asimetrične hromatografije. Na primer, reaktivna smeša se ekstrahuje sa EtOAc, kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirova smeša diastereomera. Diastereomeri mogu da se razdvoje tehnologijom asimetrične SFC, koristeći izokratični sistem rastvarača EtOH koji sadrži malu količinu ne-nukleofilnog amina kao što je N,N-dietilmetilamin/CO2(približno 1:9) da se dobiju razdvojeni produkti iz faze H, (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion i (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion.

[0035] U Šemi 1, faza I, Produkt iz faze H može da se karbonizuje pod uslovima koji su dobro opisani u tehnici. Na primer, približno 1 ekvivalent (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-diona može da se zagreje sa približno 0.03-0.04 ekvivalenta prolaznog metalnog reagensa kao što je paladijum(II) acetat, približno 0.10-0.15 ekvivalenata odgovarajućeg fosfin ligand reagensa kao što je butil-di-1-adamantil-fosfin i ne-nukleofilne baze u malom višku, kao što je TMEDA, u odgovarajućem ne-polarnom organskom rastvaraču kao što je toluen, u zatvorenoj reaktivnoj boci pod pritiskom od približno 75 psi u atmosferi ugljen monoksid/vodonik. Dobijena smeša može da se zagreva u toku približno 16 h na približno 95 °C, nakon toga ohladi na RT, filtrira preko perlica diatomejske zemlje i koncentruje pod sniženim pritiskom. Produkt može nakon toga da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što je hromatografija. Na primer, sirovi ostatak dobijen nakon uparavanja rastvarača može da se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa pogodnom smešom organskih rastvarača, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije produkt iz faze I, 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil- 2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzaldehid.

[0036] Azot sukcinimida u 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzaldehidu može da se zaštiti sa odgovarajućom zaštitnom grupom "PG" pod uslovima dobro poznatim u tehnici, kako je pokazano u Šemi 1, faza J. Na primer, za PG = tritil, približno 1 ekvivalent 4-[(1R)-1-[(3 S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]-benzaldehida, Produkt iz Šeme 1, faza I, može da se tretira sa približno 1.5 ekvivalenata odgovarajuće baze, kao što je Cs2CO3i približno 1.2 ekvivalenta trifenilmetil hlorida, u odgovarajućem polarnom organskom rastvaraču kao što je DMF na RT u toku približno 4-6 h. Produkt može da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografija. Na primer, sirova reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom, ekstrahuje sa pogodnim organskim rastvaračem, kao što su DCM ili EtOAc, dobijeni slojevi mogu da se razdvoje i organski ekstrakti mogu da se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi produkt može da se prečisti flash hromatografijom preko silika gela, uz eluiranje sa smešom odgovarajućih organskih rastvarača, kao što su heksani/etil acetat, da se dobije produkt iz faze J, 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]benzaldehid.

[0037] U Šemi 1, faza K, N-zaštićeni benzaldehid produkt iz Šeme 1, faza J, može da se redukuje pod širokim spektrom uslova dobro opisanim u tehnici. Na primer, približno 1

1

ekvivalent 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]-benzaldehida, Produkt iz Šeme 1, faza J, može da se suspenduje u odgovarajućem alkoholnom rastvaraču, kao što je EtOH, ili rastvori u pogodnom organskom rastvaraču, kao što su THF ili 1,4-dioksan i tretira sa približno 1.5 ekvivalenata natrijum borhidrida, ili sve u jednoj porciji, ili se dodaje u više porcija, na približno 0 °C u toku približno 30-60 min. Produkt može da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografija. Sirova reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom, ekstrahuje sa pogodnim polarnim organskim rastvaračem, kao što je EtOAc, dobijeni slojevi mogu da se razdvoje i organski ekstrakti mogu da se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi produkt može da se prečisti flash hromatografijom preko silika gela, uz eluiranje sa smešom odgovarajućih organskih rastvarača, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije produkt iz faze K, (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroksimetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-dion.

[0038] U Šemi 1, faza L, alkohol produkt iz Šeme 1, faza K može da se konvertuje u odgovarajuću odlazeću grupu, kao što su alkil halid, alkil mesilat ili alkil tosilat, pod širokim spektrom uslova dobro poznatim u tehnici. Na primer, približno 1 ekvivalent (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroksimetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-diona, Produkt iz Šeme 1, faza K, može da se rastvori u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je DCM, ohladi na približno 0 °C i tretira po redu sa približno 1.5 ekvivalenata odgovarajuće ne-nukleofilne baze, kao što je TEA i približno 1.2 ekvivalenta metan sulfonil hlorida. Produkt može da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije. Reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom i DCM, dobijeni slojevi razdvoje, a organski ekstrakt može da se ispere po redu sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom, da se dobije sirovi produkt iz faze L, [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]fenil]metil metansulfonat, dovoljne čistoće za narednu upotrebu bez dodatnog prečišćavanja.

[0039] Produkt iz Šeme 1, faza L, može da se tretira sa različitim nukleofilima pod širokim spektrom uslova dobro opisanih u tehnici. Na primer, u Šemi 1, faza M, rastvor od približno 1 ekvivalenta (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2- ciklopropil-6-metil-4-piridil)-oksimetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-diona u odgovarajućem polarnom organskom rastvaraču, kao što je DMF, može da se doda u suspenziju približno 0.75-0.95 ekvivalenata 2-ciklopropil-6-metil-piridin-4-ola i približno 0.75-0.95 ekvivalenata NaH ili NaHMDS, u pogodnom organskom rastvaraču, kao što su DMF ili ACN, na približno 0°C do RT. Dobijena smeša može da se meša u toku približno 16 h, produkt može da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografija. Reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom, ekstrahuje sa pogodnim polarnim organskim rastvaračem, kao što je EtOAc, slojevi razdvoje i organski ekstrakt može da se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi produkt može da se prečisti flash hromatografijom preko silika gela, uz eluiranje sa smešom odgovarajućih organskih rastvarača, kao što je heksani/etil acetat, da se dobije produkt iz faze M, (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4- piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-dion.

[0040] Šema 1, faza N opisuje deprotekciju azota u sukcinimidu, koja može da se izvede pod širokim spektrom uslova navedenih za zaštitnu grupu, kako je dobro poznato u tehnici. Na primer, kada je PG = tritil, približno 1 ekvivalent (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-diona, Produkt iz Šeme 1, faza M, može da se rastvori u pogodnom organskom rastvaraču, kao što je DCM i tretira sa TFA u višku u toku približno 12-24 h. Reaktivna smeša može da se podesi na pH ~ 6 sa 1N vodenim rastvorom NaOH. Produkt može da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što su postupci ekstrakcije i hromatografija. Reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom, ekstrahuje sa DCM, slojevi razdvoje i organski ekstrakt može da se ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni sirovi produkt može da se prečisti flash hromatografijom preko silika gela, uz eluiranje sa smešom odgovarajućih organskih rastvarača, kao što je MeOH u DCM, da se dobije produkt iz faze N, (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil- 6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion.

Šema 2

[0041] Šema 2 opisuje sintezu 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]benzaldehida. U Šemi 2, faza A, azot sukcinimida u (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dionu, koji je Produkt iz Šeme 1, faza H, može da se zaštiti tritilacijom na način koji je u suštini analogan sa postupkom opisanim u Šemi 1, faza J. Na primer,

1

približno 1 ekvivalent (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-diona može da se tretira sa približno 1.5 ekvivalenata odgovarajuće baze, kao što je Cs2CO3i približno 1.2 ekvivalenta trifenilmetil hlorida, u pogodnom polarnom organskom rastvaraču kao što je DMF na RT u toku približno 4 h. Produkt može da se izdvoji koristeći postupke dobro poznate u tehnici, kao što je filtriranje. Na primer, reaktivna smeša može da se razblaži sa vodom i ohladi na približno 0 °C. Dobijeni precipitat može da se sakupi filtriranjem, rekonstituiše u vrućem MeOH, ohladi na RT i dobijeni precipitat sakupi filtriranjem da se dobije produkt iz faze A, (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-dion. U Šemi 2, faza B, ovaj materijal može da se karbonizuje na način koji je u suštini analogan sa postupkom opisanim u Šemi 1, faza I, da se dobije 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]benzaldehid. Nakon toga se redukcijom, konverzijom u mesilat, eterifikacijom sa 2-ciklopropil-6-metil-piridin-4-olom i deprotekcijom, sve kako je opisano u Šemi 1, faze K-N može da se dobije (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion.

Izrade i Primeri

[0042] Naredne Izrade i Primeri dalje ilustruju pronalazak i predstavljaju tipične sinteze jedinjenja iz pronalaska. Reagensi i početni materijali su lako raspoloživi ili stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može jednostavno da ih sintetiše. Razumljivo je da su izrade i primeri dati kao ilustracija a ne kao ograničenje i da stručnjak sa uobičajenim iskustvom u tehnici može da izvrši različite modifikacije.

[0043] R- ili S- konfiguracija jedinjenja iz pronalaska može da se odredi standardnim tehnikama kao što su analize X-zraka i korelacija sa vremenom zadržavanja kod asimetrične HPLC.

[0044] LC-ES/MS se izvodi na sistemu AGILENT® HP1100 tečne hromatografije. Merenja elektrosprej masene spektrometrije (podešena na pozitivni i/ili negativni mod) se vrše na Mass Selective Detector kvadropolnom masenom spektrometru povezanom sa HP1100 HPLC. LC-MS uslovi (nizak pH): kolona: PHENOMENEX® GEMINI® NX C182.1 x 50 mm 3.0 µm; gradijent: 5-100% B za 3 min, nakon toga 100% B za 0.75 min temperatura kolone: 50 °C /-10 °C; brzina protoka: 1.2 mL/min; rastvarač A: dejonizovana voda sa 0.1% HCOOH; rastvarač B: ACN sa 0.1% mravlje kiseline; talasna dužina 214 nm. Alternativni LC-MS uslovi (visoki pH): kolona: XTERRA® MS C18 kolone 2.1x50 mm, 3.5 µm;

1

gradijent: 5% rastvarača A za 0.25 min, gradijent od 5% do 100% rastvarača B za 3 min i 100% rastvarača B za 0.5 min ili 10% do 100% rastvarača B za 3 min i za 100% rastvarača B za 0.75 min; temperatura kolone: 50 °C /-10 °C; brzina protoka: 1.2 mL/min; rastvarač A: 10 mM NH4HCO3pH 9; rastvarač B: ACN ; talasna dužina: 214 nm.

[0045] Preparativna reverzno fazna hromatografija se izvodi na AGILENT® 1200 LC-ES/MS opremljenom sa Mass Selective Detector masenim spektrometrom i LEAP® automatskim sakupljačem uzoraka/kolektorom frakcije. Postupci pri visokom pH se izvode na 75 x 30 mm PHENOMENEX® GEMINI®-NX, kolonama sa veličinom čestica od 5 µ sa promerom 10 x 20 mm. Brzina protoka od 85 mL/min. Eluent je 10 mM amonijum bikarbonata (pH 10) u acetonitrilu.

[0046] NMR spektar se beleži na Bruker AVIII HD 400 MHz NMR spektrometru, i dobija se kao CDCl3ili (CD3)2SO rastvori izraženi u ppm, koristeći rezidualni rastvarač [CDCl3, 7.26 ppm; (CD3)2SO, 2.05 ppm] kao referentni standard. Kada su zabeleženi višestruki pikovi, mogu da se koriste sledeće skraćenice: s (singlet), d (dablet), t (triplet), q (kvartet), m (multiplet), br-s (široki singlet), dd (dvostruki dablet), dt (dvostruki triplet). Kada je zabeležena konstanta udvajanja (J), izražava se u hercima (Hz).

Izrada 1

Izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat

[0047]

[0048] Šema 1, faza A: u deoksigenovani rastvor (4-bromofenil)borne kiseline (110 g, 547.73 mmol) u 1,4-dioksanu (750 mL) se u atmosferi N2doda bis(norbornadien)rodijum(I) tetrafluoroborat (2 g, 5.13 mmol) a nakon toga (R)-(+)-2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftil (4.5 g, 7.2 mmol). Smeša se ostavi 1 h na sobnoj temperaturi a nakon toga se dodaju H2O (100 mL), TEA (70 mL, 502 mmol) i izopropil (E)-but-2-enoat (65 g, 507.14 mmol). Dobijeni crveni rastvor se zagreva 18 h na 40 °C. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom do polovine zapremine i razblaži sa 500 mL MTBE. Organski rastvor se ispere sa

1

500 mL vode, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksanima/EtOAc (gradijent od 1:0 do 9:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (144 g, 94.6% prinos, 94.5% ee). Glavni enantiomer tR= 2.20 min; sporedni enantiomer tR= 2.69 min (asimetrična SFC Lux Amylose-2, 5% MeOH/CO2, 5 mL/min, 225 nm).<1>H NMR (DMSO-d6): δ 1.05 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.10 (d, J= 6.2 Hz, 3H), 1.19 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 2.48-2.59 (m, 2H), 3.08-3.19 (m, 1H), 4.74-4.84 (m, 1H), 7.20-7.24 (m, 2H), 7.44-7.48 (m, 2H).

Izrada 2

(3S)-3-(4-bromofenil)butanoatna kiselina

[0049]

[0050] Šema 1, faza B: u rastvor izopropil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoata (1042 g, 3471.0 mmol) u MeOH (8 L) se uz mešanje na RT doda 5 M vodeni rastvor NaOH (2 L). Reakcija se zagreva 40 min na 50 °C u atmosferi N2. Nakon hlađenja na 30 °C, reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom a ostatak se razblaži sa 2 L vode. Dobijena vodena smeša se jedanput ekstrahuje sa DCM (~2 L). Vodeni sloj se tretira sa ~1 kg leda i zakiseli do pH ~ 4 sa conc. HCl (1 L) uz sporo dodavanje u toku 20 min. Mutni vodeni sloj se nakon toga ekstrahuje sa DCM (~4 L). Organski sloj se suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom do bistrog žutomrkog ulja koje očvrsne u beličastu čvrstu supstancu. U čvrstu supstancu se doda heptan (~4 L) i dobijena smeša se zagreva 2 h na 45 °C, nakon čega čvrsta susptanca precipitira. Čvrste supstance se sakupe filtriranjem i isperu sa heptanom (200-250 mL). Filtrat se nakon toga koncentruje do sušenja pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao beličasta čvrsta supstanca (771 g, 91.4% prinos, 99% ee). ES/MS (m/z): 241.0 (M-H). Glavni enantiomer tR= 2.35 min; sporedni enantiomer tR= 2.82 min (asimetrična SFC Lux Amylose-2, 5% MeOH/CO2, 5 mL/min, 225 nm).<1>H NMR (DMSO-d6): δ 1.19 (d, J= 7.0 Hz, 3H), 2.48-2.52 (m, 2H), 3.07-3.17 (m, 1H), 7.20-7.25 (m,

1

2H), 7.44-7.49 (m, 2H), 12.08 (s, 1H). [α]D<25>+25.0 ° (c = 1, MeOH).

Izrada 3

Metil (3S)-3-(4-bromofenil)butanoat

[0051]

[0052] Šema 1, faza C: koncentrovana H2SO4(45 mL, 802 mmol) se doda u rastvor (3S)-3-(4-bromofenil)butanoatne kiseline (450 g, 1851.1 mmol) u MeOH (4.5 L). Smeša se zagreva 2 h na 65 °C, ohladi na RT i koncentruje pod sniženim pritiskom do suvog ostatka. Čvrsta supstanca se razblaži sa MTBE (2.5 L) i H2O (2.5 L) a dobijena smeša se ekstrahuje sa MTBE (2 x 2.5 L). Kombinovani ekstrakti se isperu sa H2O (2.5 L), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao svetlo žuto ulje (469.8 g, >99% prinos) koje može da se koristi bez naknadnog prečišćavanja. ES/MS (m/z): 274.0 (M+NH4<+>).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.27 (d, J= 7.043 Hz, 3H), 2.50-2.62 (m, 2H), 3.20-3.30 (m, 1H), 3.61 (s, 3H), 7.07-7.12 (m, 2H), 7.39-7.43 (m, 2H).

Izrada 4

(3S, 2R)-metil 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoat i (3S, 2S)-metil 3-(4-bromofenil)-2-metilbutanoat

[0053]

Glavni diastereomerSporedni diastereomer

1

[0054] Šema 1, faza D: 2.5 M rastvor n-BuLi u heksanima (1250 mL) se u kapima na -40 °C u toku 30 min dodaje u rastvor DIPEA (444 mL, 3150 mmol) u anhidrovanom THF (2.3 L). Nakon 30 min se u toku 40 min dodaje rastvor metil (3S)-3-(4- bromofenil)butanoata (468.90 g, 1750.7 mmol) u anhidrovanom THF (3.3 L) i reaktivna smeša se ostavi 40 min na -40 °C. U toku 30 minuta se dodaje CH3I (176 mL, 2798 mmol) i smeša se meša 15 min na -40 °C. Reaktivna smeša se polako neutrališe na -40 °C sa MeOH (283 mL) a nakon toga sa H2O (2.5 L) i smeša se ostavi da se zagreje na RT. Reaktivna smeša se razblaži sa H2O (2.5 L) i dobijeni slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se dodatno ekstrahuje sa MTBE (7.5 L) a kombinovani organski ekstrakti se po redu isperu sa H2O (3 L) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (2.5 L). Organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera (7:3) kao svetlo braon ulje (489 g, 93% prinos) koje može da se koristi bez naknadnog prečišćavanja. Glavni diastereomer tR= 1.29 min; sporedni diastereomer tR= 1.32 min (XBRIDGE® C18 kolona, 3.5 µ, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3(pH 10) u ACN). ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 288.0, 290.0 (M+NH4<+>).

Izrada 5

4-(terc/butil) 1-metil (S)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat i 4-(terc/butil) 1-metil (R)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinat

[0055]

Glavni diastereomer Sporedni diastereomer

[0056] Šema 1, faza E: 2.5 M rastvor n-BuLi u heksanima (1150 mL, 2900 mmol) se u toku 20 min na -40 °C dodaje u rastvor DIPEA (410 mL, 2910 mmol) u anhidrovanom THF (3 L). Dobijena smeša se meša 30 min na -40 °C i u toku 1h se dodaje rastvor smeše diastereomera metil (2R/S,3S)-3-(4-bromofenil)-2-metil-butanoata (488.00 g, 1619.8 mmol) u anhidrovanom THF (3 L). Reaktivna smeša se ostavi 45 min na -40°C i u toku 30 min se dodaje rastvor

2

terc/butil 2-bromoacetata (391 mL, 2596 mmol) u anhidrovanom THF (250 mL). Dobijena smeša se meša još 30 min na -40 °C. Doda se MeOH (250 mL) a nakon toga H2O (2.5 L) i dobijena smeša se ostavi da se zagreje na RT. Smeša se razblaži sa H2O (2.5 L) i dobijeni slojevi se razdvoje. Vodeni sloj se ekstrahuje sa MTBE (5 L) a organski ekstrakt se ispere po redu sa H2O (5 L), nakon toga sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl (2.5 L), suši preko MgSO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera kao gusto braon ulje (786 g, 87% prinos) koje može da se koristi bez naknadnog prečišćavanja. Glavni diastereomer tR= 1.51 min; sporedni diastereomer tR= 1.53 min (XBRIDGE® C18 kolona, 3.5 µ, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3(pH 10) u ACN). ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 328.8, 330.8 (M-tBu+H).

Izrada 6

(3S,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoksikarbonil)-3-pentanoatna kiselina i (3R,4R)-4-(4-bromofenil)-3-(metoksi- karbonil)-3-pentanoatna kiselina

[0057]

Glavni diastereomer Sporedni diastereomer

[0058] Šema 1, faza F: rastvor smeše diastereomera 4-(terc/butil) 1-metil (R/S)-2-((R)-1-(4-bromofenil)etil)-2-metilsukcinata (785 g, 1406 mmol) u DCM (6 L) se tretira sa TFA (1.06 L) i meša 18 h na RT. Reaktivna smeša se po redu ispere sa H2O (2 x 5 L) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (5 L). Organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera (8:2), kao tamno braon guma (604 g, 91% prinos) koja može da se koristi bez naknadnog prečišćavanja. ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 329.0, 331.0 (M+H).

Izrada 7

metil (2S)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat i metil (2R)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoat

[0059]

Glavni diastereomer Sporedni diastereomer

[0060] Šema 1, faza G: u smešu diastereomera (3R/S,4R)-4-(4-bromofenil)-3-metoksikarbonil-3-metilpentanoatne kiseline (603g, 1282 mmol) i TEA (550 mL, 3870 mmol) u anhidrovanom DMF (4 L) se u toku 15min na 0 °C dodaje HATU (597 g, 1538.69 mmol). Reaktivna smeša se ostavi 2 h na RT. U toku 30 min se na 10 °C dodaje 7 M rastvor NH3/MeOH (1.83 L) i dobijena smeša se zagreva na RT i meša 1h. Reaktivna smeša se ohladi na 10°C, nakon toga polako razblaži sa DCM (5 L) a nakon toga sa H2O (5 L). Dobijeni slojevi se razdvoje i vodeni sloj se dodatno ekstrahuje sa DCM (2.5L). Kombinovani ekstrakti se po redu isperu sa H2O (5L) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (5 L), suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje kao smeša diastereomera (8:2), kao tamna guma (520 g, 87% prinos) koja može da se koristi bez naknadnog prečišćavanja. Glavni diastereomer tR= 0.97 min; sporedni diastereomer tR= 0.99 min (XBRIDGE® C18 kolona, 3.5 µ, 2.1 x 50 mm, 1.2 mL/min, 50 °C, 10-95% 10 mM NH4CO3(pH 10) u ACN). ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br) 328.0/330.0 (M+H/M+H+2).

Izrada 8

(3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion i (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion

[0061]

Glavni diastereomer Sporedni diastereomer

[0062] Šema 1, faza H: u smešu diastereomera metil (2R/S)-4-amino-2-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-2-metil-4-okso-butanoata (519g, 1107 mmol) rastvorenog u THF (4.2 L) i H2O (4.2 L) se doda Na2CO3(293 g, 2764.46 mmol) i smeša se zagreva 2h na 60 °C. Reakcija se ohladi na RT i ekstrahuje sa EtOAc (2.5 L). Organski sloj se ispere sa H2O (3 L). Dobijeni vodeni ekstrakt se ekstrahuje sa EtOAc (5 L) a kombinovani organski ekstrakti se suše preko MgSO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije sirova smeša dva diastereomera koji se razdvoje pomoću SFC [kolona: AS-H, 150 x 50mm; 10% EtOH (0.2% DEMA), 340 g/min; BPR 150 bar; zapremina injektiranja: 4 ml; 220 nm]. (3R)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion: prvo eluirano jedinjenje (43.8g, 11%).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.33 (d, J= 7.2 Hz, 3H), 1.40 (s, 3H), 2.34 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 2.80 (, J= 18.4 Hz, 1H), 3.23 (q, J= 7.2 Hz, 1H), 7.07 (d, 2H), 7.40 (d, 2H), 7.54 (br-s, 1H). ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 313.0, 315.0 (M+H). (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion: drugo eluirano jedinjenje (241.8 g, 55%).<1>H NMR (CDCl3): δ 1.23 (s, 3H), 1.30 (d, J= 7.1 Hz, 3H), 2.21 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 2.96 (d, J= 18.4 Hz, 1H), 3.14 (q, J= 7.1 Hz, 1H), 7.04-7.09 (m, 2H), 7.42-7.48 (m, 2H), 8.09 (br-s, 1H). ES/MS (m/z za<79>Br/<81>Br): 313.0, 315.0 (M+H).

Izrada 9

2-ciklopropil-6-metil-piridin-4-ol

[0063]

[0064] Suspenzija NaH (60% u ulju, 11.6 g, 289 mmol) u 1,2-dimetoksietanu (150 mL) se

2

zagreva na 110 °C u uljanom kupatilu. U kapima se u toku 40 min dodaje rastvor acetilacetona (6.0 mL, 57.8 mmol), metil ciklopropankarboksilata (9.0 mL, 86.8 mmol) i 1,2-dimetoksietana (75 mL). Nakon još 4 h zagrevanja, suspenzija se ohladi na RT i DME se ukloni pod sniženim pritiskom. Dobijena suspenzija se razblaži sa Et2O (200 mL), ohladi u kupatilu led/voda na približno 5 °C i pažljivo neutrališe sa ledenom vodom (200 mL). Slojevi se razdvoje i organski sloj se ispere sa vodom (100 ml) i vodenim 0.25M rastvorom NaOH (100 mL). Kombinovani vodeni slojevi se ohlade u kupatilu led/voda i pažljivo tretiraju sa conc. HCl (40 mL). Kisela vodena smeša se ekstrahuje sa Et2O (4 x 200 mL) a organski ekstrakti se suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije svetlo ulje boje ćilibara. Dobijeni ostatak se tretira sa 28% NH4OH (180 mL, 4.6 mol) i dobijena smeša se zagreva 3 h pod refluksom, a nakon toga koncentruje pod sniženim pritiskom. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa (2N NH3/ MeOH) / DCM (gradijent od 1:99 do 1:9). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (8.0 g, 90% prinos). ES/MS (m/z): 150.0 (M+H<+>).

Izrada 10

4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-pirolidin-3-il]etil]benzaldehid

[0065]

[0066] Šema 1, faza I: u Parr autoklav zapremine 100ml se sipaju (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion (2.47 g, 8.34 mmol), paladijum(II) acetat (75 mg, 0.334 mmol), butildi-1-adamantilfosfin (CataCXium A®) (360 mg, 0.954 mmol), anhidrovani toluen (70 ml) i TMEDA (1.3 ml, 8.6 mmol). Autoklav se zatvori. Reaktivna smeša se ostavi u atmosferi gasa za sintezu (H2/ CO (1:1)) (75 psi), zagreje na 95 °C i ostavi da se meša 16 h. Smeša se ostavi da se ohladi a suspenzija se filtrira preko ploče diatomejske zemlje. Filter pogača se ispere sa EtOAc i sakupljeni filtrati se koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije ulje boje ćilibara. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani/EtOAc (gradijent od 9:1 do 2:3). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.27 g, 62% prinos). ES/MS (m/z): 263.0 (M+NH4<+>).

Izrada 11

4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]benzaldehid

[0067]

[0068] Šema 1, faza J: cezijum karbonat (2.24 g, 6.87 mmol) i trifenilmetil hlorid (1.56 g, 5.50 mmol) se uz mešanje na RT dodaju u rastvor 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-dioksopirolidin-3-il]etil]benzaldehida (1.12 g, 4.58 mmol) i DMF (25 ml). Nakon 4.5 h mešanja, smeša se sipa u vodu (100 ml) i ekstrahuje sa EtOAc (2 x 75 ml). Kombinovani ekstrakti se isperu sa vodom (50 ml) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom, da se dobije žuta pena. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani / EtOAc (gradijent od 49:1 do 7:3). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (2.28 g, 100% prinos). ES/MS (m/z): 510.2 (M+Na<+>).

Izrada 12

(3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroksimetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-dion

[0069]

2

[0070] Šema 1, faza K: natrijum borhidrid (147 mg, 3.81 mmol) se u jednoj porciji doda u suspenziju 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]benzaldehida (1.24 g, 2.54 mmol) u EtOH (50 ml) i ohladi u kupatilu led/voda. Nakon 40 minuta, reakcija se neutrališe sa vodom (10 ml) i koncentruje pod sniženim pritiskom da se ukloni EtOH.

Dobijeni koncentrat se razblaži sa vodom (50 ml) i ekstrahuje sa EtOAc (2 x 50 ml).

Kombinovani ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije bela pena. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani / EtOAc (gradijent od 19:1 do 1:19). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (1.19 g, 95% prinos). ES/MS (m/z): 507.2 (M+NH4<+>).

Alternativni postupak za Izradu 12

[0071] Natrijum borhidrid (10 g, 264.3 mmol) se u porciji od 2 g doda u rastvor 4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5- diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]benzaldehida (160.7g, 329.6 mmol) rastvorenog u anhidrovanom THF (1.6 L) u bocu okruglog dna sa 3 grla opremljenoj sa stubnoom mešalicom. Reaktivna smeša se meša 3 h na RT, razblaži sa EtAOc (2 L) i vodom (1.5 L) i dobijeni slojevi se razdvoje. Organski ekstrakt se po redu ispere sa vodom (1 L) i zasićenim vodenim rastvorom NaCl (500 mL), suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se rastvori u EtOAc (1 L) i MTBE (1 L), dodaju se voda (500 mL) i 1N vodeni rastvor HCl (250 mL) i dvofazna smeša se meša u toku približno 15 min. Organski sloj se izdvoji i ispere sa zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom a dobijeni ostatak se suši u vakuumskoj pećnici na 40-50 °C u toku noći, da se dobije naslovljeno jedinjenje (164.5 g, 96% prinos) kao žutomrka čvrsta supstanca.

Izrada 13

2

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritilpirolidin-2,5-dion

[0072]

[0073] Šema 1, faza L: rastvor (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroksimetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritilpirolidin-2,5-diona (636 mg, 1.30 mmol) u DCM (15 mL), ohlađen na približno 5 °C u kupatilu led/voda, se tretira sa TEA (274 µL,1.95 mmol) i metansulfonil hloridom (122 mL, 1.56 µmol). Nakon 2 h mešanja u hladnom kupatilu, smeša se razblaži sa DCM (25 mL) i vodom (25 mL). Slojevi se razdvoje i vodeni sloj ekstrahuje sa DCM (25 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom, da se dobije sirovi [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil- pirolidin-3-il]etil]fenil]metil metansulfonat kao ulje.

[0074] Šema 1, faza M: u posebnoj boci, natrijum hidrid (60% u ulju, 78 mg, 1.95 mmol) se doda u rastvor 2-ciklopropil-6-metil-piridin-4-ola (291 mg, 1.95 mmol) u DMF (5 mL).

Nakon 40 min mešanja na RT, u smešu natrijum hidrida se doda rastvor sirovog mesilata u DMF (5 ml) i meša 16 h na RT. Reaktivna smeša se neutrališe sa vodom (50 mL) i ekstrahuje sa EtOAc (2 x 50 mL). Kombinovani organski slojevi se isperu sa vodom i zasićenim vodenim rastvorom NaCl, suše preko Na2SO4, filtriraju i koncentruju pod sniženim pritiskom, da se dobije ulje. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani / EtOAc (gradijent od 19:1 do 1:3). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (597 mg, 74% prinos). ES/MS (m/z): 621.3 (M+H<+>).

Alternativni postupak za Izradu 13

2

[0075] Rastvor (3S)-3-[(1R)-1-[4-(hidroksimetil)fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-diona (121.3 g, 247.8 mmol) u DCM (1.2 L), ohlađen na približno 5 °C u kupatilu led/voda, se tretira sa TEA (52 mL, 373 mmol) i u kapima se u toku približno 10 min dodaje metansulfonil hlorid (23 mL, 297 mmol). Reaktivna smeša se meša na približno 5 °C u toku približno 1 h i doda se voda (1.2 L). Organski sloj se izdvoji i ispere sa vodom (500 mL), suši preko Na2SO4, filtrira, koncentruje pod sniženim pritiskom, azeotropira sa heksanom (500 mL), koncentruje pod sniženim pritiskom a dobijeni ostatak se podvrgne visokom vakuumu da se dobije [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]fenil]metil metansulfonat (143.6 g, kvantitativni prinos, produkt koji sadrži heksan) kao žuta čvrsta supstanca.

[0076] 2-Ciklopropil-6-metil-piridin-4-ol (56 g, 375.4 mmol) se rastvori u ACN (1.3 L) i u kapima se u toku 20 min dodaje 2M rastvor NaH-MDS u THF. Nakon završenog dodavanja, reaktivna smeša se zagreje na 55 °C i u kapima se u toku 45 min na 55 °C dodaje rastvor [4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]fenil]metil metansulfonata (133.8 g, 235.7 mmol) rastvoren u ACN (670 mL). Reaktivna smeša se zagreva 1 h na 55°C i ohladi na RT, sipa u smešu MTBE (2 L) i vode (2 L) i organski sloj se izdvoji, ispere sa vodom (500 mL), suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se rastvori u DCM (300 mL), suši preko MgSO4i filtrira preko ploče diatomejske zemlje. Filter pogača se ispere sa još DCM a filtrat se redukuje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa heksani / aceton (gradijent od 9:1 do 7:3). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (62.7 g, 43% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca.

Izrada 14

(3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-dion

[0077]

[0078] Šema 2, faza A: u boci okruglog dna zapremine 4L sa mehaničkom mešalicom se u

2

atmosferi azota (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion (201 g, 678.6 mmol) rastvori u DMF (1500 mL). U toku približno 5 min se dodaje Cs2CO3(330 g, 1012.8 mmol) i smeša se zagreje na RT i meša još 3 h. Reaktivna smeša se razblaži sa vodom (1500 mL) uz održavanje unutrašnje temperature ispod 20 °C. Dobijeni precipitat se sakupi filtriranjem pod vakuumom; filter pogača se ispere sa vodom (2 x 500 mL) i suši u struji azota. Filter pogača se prenese u bocu sa 3 grla zapremine 12L sa mehaničkom mešalicom. Doda se MeOH (4 L) i smeša se zagreva pod refluksom u toku približno 5 min. Metanolni rastvor se ohladi na približno 0 °C, dobijeni precipitat se sakupi filtriranjem pod vakuumom i čvrste supstance suše na približno 50 °C pod vakuumom da se dobije naslovljeno jedinjenje (350.9 g, 96% prinos) kao bela čvrsta supstanca. ES/MS (m/z,<79>Br/<81>Br): 538.1/540.1 (M+H<+>).

Izrada 15

4-[(1R)-1-[(3S)-3-metil-2,5-diokso-1-tritil-pirolidin-3-il]etil]benzaldehid

[0079]

[0080] Šema 2, faza B: (3S)-3-[(1R)-1-(4-bromofenil)etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion (185.5 g, 0.35 mol) se podeli u 3 jednake porcije i svaka se stavi u Parr autoklav posudu, svaka sadrži paladijum(II) acetat (0.77 g, 3.4 mmol), butildi-1-adamantilfosfin (CataCXium A®) (5.0 g, 0.014 mol), anhidrovani toluen (500 ml) i TMEDA (17.5 ml, 0.12 mol). Svaka posuda se izdvoji i napuni do približno 75 psi sa atmosferom CO / H2. Posude se zagrevaju 16 h na 95 °C i ohlade na RT. Svaka reakcija se filtrira preko ploče diatomejske zemlje i filtrati se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se rastvori u toluenu (~ 1 L), prenese u bocu sa 3 grla zapremine 2L, doda se aktivirani ugalj (200 g(200 g of) i smeša se meša na RT u toku noći. Reaktivna smeša se filtrira preko ploče diatomejske zemlje, filter pogača se ispere sa MTBE (1 L) a filtrat se koncentruje pod sniženim pritiskom. Dobijeni ostatak se suspenduje u EtOH (1.3 L), zagreje na 75 °C i u kapima se u toku ~ 20 min dodaje voda (640 mL). Smeša se ohladi na RT i čvrste supstance sakupe filtriranjem, isperu sa

2

vodom (500 mL) i suše pod pritiskom azota, da se dobije naslovljeno jedinjenje (160.7 g, 87% prinos) kao žuta čvrsta supstanca. ES/MS (m/z): 488.1 (M+H<+>).

Primer 1

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion

[0081]

[0082] Šema 1, faza N: u rastvor (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritil-pirolidin-2,5-diona (597 mg, 0.961 mmol) u DCM (5 ml) se doda TFA (3 ml, 38.6 mmol) i smeša se meša 17 h. Nakon koncentrovanja pod sniženim pritiskom, u koncentrat se dodaju DCM (20 ml) i voda (20 ml) i pH podesi na 6 sa 1N vodenim rastvorom NaOH. Ekstrahuje sa DCM (2 x 50 ml), suši preko Na2SO4, filtrira i koncentruje pod sniženim pritiskom, da se dobije ulje. Sirovi produkt se prečisti flash hromatografijom na silika gelu, uz eluiranje sa DCM / MeOH (gradijent od 1:0 do 9:1). Čiste frakcije hromatografije se kombinuju i koncentruju pod sniženim pritiskom da se dobije naslovljeno jedinjenje (332 mg, 91% prinos). ES/MS (m/z): 379.0 (M+H<+>). [α]D<20>= -42.142° (C=0.2, MeOH)

Alternativni postupak za Primer 1

[0083] (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-1-tritilpirolidin-2,5-dion (61.7 g, 99.4 mmol) se rastvori u DCM (230 mL) i ohladi na približno 5 °C. Polako se u toku približno 10 min dodaje TFA (310 mL), reaktivna smeša se zagreje na RT i meša u toku noći. Reaktivna smeša se koncentruje pod sniženim pritiskom a dobijeni ostatak se podeli između MTBE (620 mL) i vode (620 mL). Smeša se ohladi na približno 5 °C, doda se 5N vodeni rastvor NaOH (pH ~ 14) i slojevi se razdvoje. Vodeni ekstrakt se zakiseli sa conc. HCl (pH ~ 5) i ekstrahuju sa EtOAc (1.2 L). Slojevi se razdvoje, organski ekstrakti se isperu sa zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(2 x 500 mL), suše preko MgSO4, filtriraju, koncentruju pod sniženim pritiskom i podvrgnu visokom vakuumu u toku približno 2 h da se dobije naslovljeno jedinjenje (31.4 g, 83.5% prinos) kao beličasta čvrsta supstanca. ES/MS (m/z): 379.0 (M+H<+>).

Primer 1A

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrobromid monohidrat

[0084]

[0085] (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metilpirolidin-2,5-dion (401 mg, 1.06 mmol) se suspenduje u EtOAc (8 mL) na 60 °C. Doda se rastvor 48% bromovodonične kiseline rastvorene u EtOAc (2 mL) i smeša se meša 1 h na 60 °C. Dobijena bela čvrsta supstanca se sakupi filtriranjem, ispere sa EtOAc i suši na vazduhu, da se dobije naslovljeno jedinjenje (385 mg, 79% prinos) kao bela kristalna čvrsta supstanca.

Primer 1B

(3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrohlorid monohidrat

[0086]

1

[0087] (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metilpirolidin-2,5-dion (250 mg, 0.7 mmol) se uz mešanje na 60 °C rastvori u smeši EtOAc/EtOH (4:1). Doda se 1 M rastvor HCl u EtOAc (0.7 mL) i dobijena smeša se meša 1 h na 60 °C, ohladi na RT, svetlo žuti precipitat se sakupi filtriranjem, ispere sa EtOAc i suši na vazduhu da se dobije naslovljeno jedinjenje (151 mg, 55% prinos) kao svetlo žuta kristalna čvrsta supstanca.

Difrakcija X-zraka praška (XRPD)

[0088] XRPD profili kristalnih čvrstih supstanci su dobijeni na Bruker D4 Endeavor difraktometru X-zraka praška, opremljenom sa izvorom CuKa (λ = 1.54060 Å) i Vantec detektorom, koji radi na 35 kV i 50 mA. Uzorak se skenira između 4 i 40° u 2θ, sa veličinom faze od 0.009° u 2θ i brzinom snimka od 0.5 sekundi/faza i sa 0.6 mm divergencije, 5.28 fiksnog anti-skatera i 9.5 mm detektora proreza. Suvi prašak se stavi na kvarcni držač uzorka a ravna površina se dobija pomoću staklene ljuspice. Oblici profila difrakcije kristala se sakupljaju na sobnoj temperaturi i pri relativnoj vlažnosti vazduha. U tehnici kristalografije je dobro poznato da, za bilo koji dati kristalni oblik, relativni intenziteti pikova difrakcije mogu da variraju zbog preferirane orijentacije koja je rezultat faktora kao što su morfologija i osobine kristala. Kada su prisutni efekti preferirane orijentacije, intenziteti pikova su izmenjeni, ali su pozicije karakterističnih pikova polimorfa neizmenjene. Videti, na primer, United States Pharmacopeia #23, National Formulary #18, stranice 1843-1844, 1995. Osim toga, u tehnici kristalografije je takođe dobro poznato da za bilo koji dati kristalni oblik pozicije ugaonog pika mogu malo da variraju. Na primer, pozicije pika mogu da se menjaju zbog promena u temperaturi ili vlažnosti na kojima se ispituje uzorak, pomeranja uzorka ili prisustva ili odsustva unutrašnjeg standarda. U našem slučaju, promenljivost pozicije pika od ± 0.2 u 2θ je uzeta u obzir kao potencijalna varijacija bez ometanja nedvosmislene identifikacije navedenog kristalnog oblika. Potvrda kristalnog oblika može da se izvrši na osnovu bilo koje jedinstvene kombinacije razlikovanja pikova (u jedinicama od ° 2θ), obično

2

najistaknutijih pikova. Profili difrakcije kristalnog oblika, dobijeni na sobnoj temperaturi i relativnoj vlažnosti, su podešeni na osnovu NIST 675 standardnih pikova za 8.85 i 26.77 stepeni 2θ.

[0089] Uzorak jedinjenja iz Primera 1A se karakteriše XRD profilom koristeći CuKa zračenje tako što ima pikove difrakcije (2θ vrednosti) kako je opisano u niže datoj Tabeli 1. Specifični profili sadrže pik na 26.1° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 13.9°, 22.1°, 8.7°, 19.5° i 18.8° sa tolerancijom za uglove difrakcije od ±0.2 stepena.

Tabela 1. Pikovi difrakcije X-zraka praška kristalnog jedinjenja iz Primera 1A; (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2- ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrobromid monohidrata

[0090] Uzorak jedinjenja iz Primera 1A se karakteriše XRD profilom koristeći CuKa zračenje tako što ima pikove difrakcije (2θ vrednosti) kako je opisano u niže datoj Tabeli 2. Specifični profili sadrže pik na 26.3° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 13.8°, 22.2°, 19.7°, 21.3°, 14.1° i 25.4° sa tolerancijom za uglove difrakcije od ±0.2 stepena.

Table 2. Pikovi difrakcije X-zraka praška kristalnog jedinjenja iz Primera 1B; (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrohlorid monohidrata.

Inhibicija produkcije cAMP antagonistima CGRP receptora

[0091] hCGRP (humani kalcitonin genom povezani peptid) receptor je funkcionalno udvojen sa Gas proteinima. Stimulacija hCGRP dovodi do povećane sinteze intracelularnog cAMP a može da se blokira dodavanjem antagonista receptora. Aktivnost receptora je prema tome odraz prisutne količine cAMP u ćelijama koja može da se detektuje upotrebom standardne in vitro tehnologije.

[0092] Ćelijska kultura: zasejane SK-N-MC ćelije neuroblastoma koje endogeno ekspresuju hCGRP receptor (ATCC) se uzgajaju u Eagle-ovom minimum esencijalnom medijumu (HYCLONE™) obogaćenom sa 10% serumom fetusa govečeta inaktiviranog toplotom (FBS; GIBCO®), ne-esencijalnim amino kiselinama (GIBCO®), 1 mM natrijum piruvijatom, 2 mM L-glutaminom, 100 U/mL penicilina i 10 µg/mL streptomicina do približno 70% ispunjenosti. Nakon dodavanja svežeg medijuma, ćelije se inkubiraju na 37 °C u toku noći. Na dan ispitivanja, ćelije se odvoje pomoću ACCUTASE® (MP Biomedicals), resuspenduju u puferu za analizu [Hank-ov uravnoteženi rastvor soli/Dulbecco-v pufer fosfatnih soli svaki sa 100 mg/mL CaCl2i MgCl2u smeši 1:2, 3.3 mM 4-(2-hidroksietil)-1-piperazinetansulfonske kiseline, 0.03% albumina seruma govečeta i 0.5 mM 1-metil-3-izobutilksantina (kao inhibitor cAMP)] i zaseju u količini od 3-5K/udubljenje u poli-D-lizinom obložene bele ploče sa 384

4

udubljenja (BD Biosciences).

[0093] Inhibicija produkcije cAMP: za studije odgovora na dozu, jedinjenja se serijski razblaže u odnosu 1:3 u dimetil sulfoksidu a nakon toga 1:10 u puferu za analizu. Humani CGRP (0.8 nM; Bachem), kao receptor-specifični agonist za hCGRP receptor, se izmeša sa razblaženim jedinjenjem i doda u ćelije kao stimulans pobuđivanja u koncentracijama njihovih EC80.

[0094] Analiza rezultata: količina intracelularnog cAMP se kvantifikuje pomoću HTRF tehnologije (Cisbio) po uputstvima dobavljača. Ukratko, cAMP-d2 konjugat i anti-cAMP-kriptat konjugat u puferu za lizu se inkubiraju 90 min sa tretiranim ćelijama na RT. HTRF signal se odmah detektuje koristeći ENVISION® čitač ploča (Perkin-Elmer) za izračunavanje odnosa fluorescencije od 665 do 620 nM. Dobijeni podaci se konvertuju u količinu cAMP (pmol/udubljenje) koristeći cAMP standardnu krivu generisanu za svaki eksperiment.

Relativne EC50vrednosti se izračunavaju iz najveće vrednosti odnosa iz krive odgovora na koncentraciju koristeći program izrade četvoroparametarske logističke krive (ACTIVITYBASE® v5.3.1.22 ili GENEDATA SCREENER® v12.0.4) a Kbvrednosti su procenjene kao IC50vrednosti korigovane agonistom koristeći jednačinu:

Kb= (IC50) / [1+([agonist] / EC50)]

Procenjene Kbvrednosti su označene kao srednje vrednosti ± SEM, prosek iz broja pokušaja (n).

[0095] Po proceduri u osnovi kako je prethodno opisano, jedinjenje iz Primera 1 ima Kbmerenje za humani CGRP od 0.576 0.25 nM (n = 11). Ovo pokazuje da je jedinjenje iz Primera 1 antagonist humanog CGRP receptora in vitro.

In vitro određivanje gubitka sa ABCB1, humanog P-glikoproteina (Pgp)

[0096] Kultura ćelije: MDCKII ćelije koje stabilno ekspresuju humani izvorni tip ABCB1 (Pgp) su dobijene od Netherlands Cancer Institute (Amsterdam, Netherlands). MDCK ćelije se održavaju kako je prethodno opisano (Desai i saradnici, Mol Pharm 10:1249-1261, 2013).

[0097] Dvosmerni transport kroz MDCK ćelije: ispitivanje se u osnovi izvodi kako je prethodno opisano (Desai i saradnici, Mol Pharm 10:1249-1261, 2013). Transport se meri u oba smera kroz neinhibirane i inhibirane monoslojne ćelije koristeći koncentraciju substrata od 5 µM razblaženog sa 10 mM DMSO osnovnim rastvorom (finalna koncentracija DMSO od 0.05%) i pojedinačni vremenski interval od 60 min.2.5 µM jedinjenja iz Primera 1 se koristi da selektivno inhibira Pgp. Koeficijenti vidljive permeabilnosti (Papp) se procenjuju kao pad mase transportovane za 60 min u odnosu na ukupnu povraćenu masu. Bazalno-doapikala (B-A)/apikal-do-bazalnog (A-B) Papp odnosi se izračunavaju bez prisustva ili u prisustvu inhibitora u svakoj ćelijskoj liniji za neto odnos gubitka (NER). Za jedinjenje iz Primera 1 je određeno da je NER za gubitak sa Pgp 1.7.

In vivo određivanje nezavisnog plazma-moždanog koeficijenta razdvajanja (Kp,uu,mozak) kod pacova

[0098] Nezavisni plazma-moždani koeficijent razdvajanja (Kp,uu,mozak) je jedan od ključnih farmakokinetičkih parametara za procenu sposobnosti jedinjenja da prođe kroz krvnomoždanu barijeru (BBB) (Hammarlund-Udenaes, M.; Friden, M.; Syvanen, S.; Gupta, A. On Rate i Extent of Drug Delivery do Brain. Pharm. Res.2008, 25 (8), 1737-1750). Kp,uu,mozakse obično meri u pre-kliničkim ispitivanjima koristeći niže datu metodologiju, a Kp,uu,mozakvrednosti koje prelaze 0.3 ukazuju da više od 30% nevezanog jedinjenja u plazmi prolazi BBB.

[0099] Studija populacije: studije na životinjama se izvode po protokolima odobrenim od strane Covance Institutional Animal Care and Use Committee. Mužjaci Sprague-Dawley pacova težine 250-350 g su nabavljeni od Harlan Sprague Dawley Inc. (Indianapolis, IN). Životinje su imale slobodan pristup hrani i vodi ad libitum pre i u toku studije.

[0100] Primena doze: svaka životinja je primila 10 mg/kg antagonista CGRP receptora, jedinjenja iz Primera 1, primenjenog oralno u 10 ml/kg hidroksietilceluloze, 1% m/v/polisorbata 80, 0.25% v/v/anti-penećeg sredstva, 1510-US 0.05% v/v/ u prečišćenoj vodi (sonicirana proba).

[0101] Farmakokinetičko uzorkovanje: korišćene su po tri životinje u svakoj vremenskoj tački. Uzorci krvi (kardijačnom punkturom) i mozga su sakupljani u 0.5 i 2 h nakon doze. Uzorci krvi su tretirani sa K3-EDTA antikoagulansom a plazma je dobijena centrifugiranjem 10 min na 1600 g. Uzorci mozga su izmereni i homogenizovani, bez perfuzije. Svi uzorci su čuvani na -70 °C do ispitivanja sa LC-MS/MS da se u svakoj vremenskoj tački odredi koncentracija jedinjenja iz Primera 1 u plazmi i mozgu.

[0102] Određivanje vezivanja proteina u plazmi i mozgu: In vitro vezivanje proteina plazme i homogenata mozga pacova je određeno pomoću uravnoteženih dijaliza, kako je već opisano [Zamek-Gliszczynski i saradnici, J Pharm Sci, 101:1932-1940, 2012]. Rezultati su izraženi kao nevezana frakcija u plazmi (fu,plazma) i mozgu (fu,mozak), koji se nakon toga koriste za izračunavanje Kp,uu,mozak, kako je opisano u Tabeli 1. Određeno je da su fu,plazma i fu,mozak jedinjenja iz Primera 1 kod pacova 0.071 i 0.043, tim redom.

Analize i rezultati:

[0103] Kp,uu,mozakje izračunat za svaku vremensku tačku iz niže date ekspresije gde su pojedinačne komponente dobijene od kombinacije in vitro i in vivo merenja izvršenih kako je prethodno opisano:

Cu,mozakCukupno,mozakfu,mozak

Kp,uu,mozak= = •

Cu,plazmaCukupno,plazmafu,plazma

gde su Cukupno,mozak, Cu,mozak, Ctotal,plazmai Cu,plazmaukupne koncentracije i koncentracije nevezanog jedinjenja u mozgu i plazmi a fu,mozaki fu,plazmasu nevezane frakcije u mozgu i plazmi, tim redom.

[0104] Koncentracije u plazmi i mozgu jedinjenja iz Primera 1 su date u Tabeli 3. Rezultati su izraženi kao prosečna vrednost ± standardna devijacija.

Tabela 3. Koncentracije jedinjenja iz Primera 1 u plazmi i mozgu nakon 10 mg/kg oralne doze kod mužjaka Sprague- Dawley pacova. Rezultati su iskazani kao prosečna vrednost ± standardna devijacija.

[0105] Utvrđeno je da su koncentracije nevezanog Primera 1 u mozgu za 1 i 3 sata nakon oralne doze od 10 mpk kod mužjaka Sprague-Dawley pacova 41 ± 15 nM i 22 ± 5 nM, tim redom. Pored toga, uztvrđeno je da je Kp,uu,mozakPrimera 1 za 1 i 3 sata za 10 mpk kod mužjaka Sprague-Dawley pacova 0.89 ± 0.17 i 0.93 ± 0.43, tim redom.

Ukupno uzevši, ovi rezultati ukazuju da je jedinjenje iz Primera 1 centralno-penetratno jedinjenje.

Claims (17)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule:
2. ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili hidrat. 2. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to jedinjenje formule:
3. ili njegov hidrat. 3. Jedinjenje ili so u skladu ili sa patentnim zahtevom 1 ili sa patentnim zahtevom 2, naznačeno time što je to jedinjenje formule:
4. ili njegov hidrat. 4. Jedinjenje ili so u skladu sa patentnim zahtevom 3, naznačeno time što je to:
5. 5. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 4, naznačeno time što je to:
6. 6. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrohlorid, ili njegov hidrat.
7. 7. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 6, naznačeno time što je to (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrohlorid monohidrat.
8. 8. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 7, naznačeno time što je jedinjenje kristalno.
9. 9. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 8, naznačeno time se karakteriše pikom u spektru difrakcije X-zraka praška za ugao difrakcije 2-teta za 26.3° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 13.8°, 22.2°, 19.7°, 21.3°, 14.1° i 25.4°, sa tolerancijom za uglove difrakcije od 0.2 stepena.
10. 10. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 1, naznačeno time što je to (3S)-3-[(1R)-1-[4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil] -3 -metil-pirolidin-2,5-dion hidrobromid, ili njegov hidrat.
11. 11. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 10, naznačeno time što je to (3S)-3-[(1R)-1- 4 [4-[(2-ciklopropil-6-metil-4-piridil)oksimetil]fenil]etil]-3-metil-pirolidin-2,5-dion hidrobromid monohidrat.
12. 12. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 11, naznačeno time što je jedinjenje kristalno.
13. 13. Jedinjenje u skladu sa patentnim zahtevom 12, naznačeno time se karakteriše pikom u spektru difrakcije X-zraka praška za ugao difrakcije 2-teta od 26.1° u kombinaciji sa jednim ili više pikova izabranih iz grupe koja se sastoji od 13.9°, 22.1°, 8.7°, 19.5°, 18.8°, sa tolerancijom za uglove difrakcije od 0.2 stepena.
14. 14. Jedinjenje ili njegova so, ili hidrat, u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time što je za upotrebu u terapiji.
15. 15. Jedinjenje ili njegova so, ili hidrat, u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, naznačeno time što je za upotrebu u tretmanu migrene.
16. 16. Farmaceutska kompozicija, naznačena time što uključuje jedinjenje ili njegovu so, ili hidrat, u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga.
17. 17. Postupak za izradu farmaceutske kompozicije, naznačen time što uključuje mešanje jedinjenja ili njegove soli, ili hidrata, u skladu sa bilo kojim od patentnih zahteva 1-13, sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača, razblaživača ili podloga. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5