RS61752B1

RS61752B1 - 7-supstituisana jedinjenja sulfonimidoil purinona za lečenje i profilaksu virusne infekcije

Info

Publication number: RS61752B1
Application number: RS20210489A
Authority: RS
Inventors: Lu Gao; Chungen Liang; Hongying Yun; Xiufang Zheng; Jianping Wang; Kun Miao; Bo Zhang
Original assignee: Hoffmann La Roche
Priority date: 2016-08-29
Filing date: 2017-08-28
Publication date: 2021-05-31
Also published as: RU2019107957A; MX383500B; PE20190476A1; CN109641904A; SI3504210T1; DK3504210T3; PH12019500432A1; WO2018041763A1; EP3504210A1; NZ750604A; MX2019002129A; JP7013467B2; AU2021204303A1; CA3034148A1; CR20190087A; JP2022050632A; PL3504210T3; SG10202010520SA; CL2019000512A1; PT3504210T

Description

OPIS

Predmetni pronalazak se odnosi na nove derivate sulfonimidoil purinona koji imaju in vivo agonističku aktivnost toličnog receptora, kao i na njihovu proizvodnju, farmaceutske kompozicije koje ih sadrže i njihovu moguću upotrebu kao lekova.

OBLAST PRONALASKA

Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenja formule (I),

pri čemu su R<1>do R<3>opisani u nastavku, ili na njihovu farmaceutski prihvatljivu so, enantiomer ili dijastereomer.

Tolični receptori (TLR) otkrivaju širok opseg očuvanih molekulskih obrazaca povezanih sa patogenima (PAMP). Oni igraju važnu ulogu u otkrivanju invazivnih patogena i naknadnom pokretanju urođenog imunološkog odgovora. Kod čoveka postoji 10 poznatih članova porodice receptora TLR, koji su transmembranski proteini tipa I koji sadrže ekstracelularni domen bogat leucinom i citoplazmatski rep koji sadrži sačuvani domen toličnog/interleukinskog (IL)-1 receptora (TIR). U okviru ove porodice, TLR3, TLR7, TLR8 i TLR9 se nalaze u endozomima. TLR7 se može aktivirati vezivanjem za specifični ligand malog molekula (tj. agonist TLR7) ili njegov nativni ligand (tj. jednolančana RNA, ssRNA). Nakon vezivanja ssRNA za TLR7, smatra se da receptor u svom dimerizovanom obliku prolazi strukturnu promenu koja dovodi do naknadnog regrutovanja adapterskih proteina u njegovom citoplazmatskom domenu, uključujući gen 88 primarnog odgovora mijeloidne diferencijacije (MyD88). Nakon pokretanja signalne kaskade receptora pomoću puta MyD88, aktiviraju se faktori citoplazmatske transkripcije poput regulatornog faktora interferona 7 (IRF-7) i nuklearnog faktora kapa B (NF-κB). Ti faktori transkripcije se tada translociraju u jezgro i pokreću transkripciju različitih gena, npr. IFN-α i drugih antivirusnih gena citokina. TLR7 se pretežno eksprimira na ćelijama plazmacitoida, a takođe i na B-ćelijama. Izmenjena responsivnost imunih ćelija može doprineti smanjenom urođenom imunološkom odgovoru tokom hroničnih virusnih infekcija. Agonistom indukovana aktivacija TLR7 može zbog toga predstavljati novi pristup u lečenju hroničnih virusnih infekcija. (D. J Connolly and L. AJ O’Neill, Current Opinion in Pharmacology 2012, 12:510-518, P. A. Roethle et al, J. Med. Chem. 2013, 56, 7324-7333).

Trenutna terapija hronične infekcije HBV-om zasniva se na dve različite vrste lekova: tradicionalnim antivirusnim analozima nukleozida/nukleotida i novijim pegilovanim IFN-α (PEG-IFN-α). Oralni analozi nukleozida/nukleotida deluju potiskivanjem replikacije HBV. Ovo je doživotno lečenje, tokom kojeg često dolazi do otpornosti na lekove. Kao alternativna opcija, koristi se pegilovani IFN-α (PEG-IFN-α) za lečenje nekih pacijenata sa hroničnom infekcijom HBV-om u okviru ograničenog trajanja terapije. Iako postiže serokonverziju u HBeAg barem kod malog procenta pacijenata sa HBV-om, neželjena dejstva ga čine slabo podnošljivim. Značajno je da je funkcionalno izlečenje definisano kao serokonverzija HBsAg veoma retko sa obe trenutne terapije. Zbog toga je hitno potrebna nova terapeutska opcija za lečenje pacijenata sa HBV-om radi funkcionalnog izlečenja. Lečenje oralnim agonistom TLR7 je rešenje koje obećava veću efikasnost i bolju podnošljivost. Pegilovani IFN-α (PEG-IFN-α) se trenutno koristi za lečenje hroničnog HBV-a, i predstavlja alternativu potencijalno doživotnom lečenju antivirusnim analozima nukleozida/nukleotida. Kod jedne grupe pacijenata sa hroničnim HBV-om, terapija sa PEG-IFN-α uspeva da izazove održivu imunološku kontrolu virusa nakon ograničenog trajanja terapije. Međutim, procenat pacijenata sa HBV-om koji postižu serokonverziju pri terapiji interferonom je nizak (do 27 % kod pacijenata pozitivnih na HBeAg) i lečenje se tipično slabo podnosi. Nadalje, funkcionalno izlečenje (definisano kao gubitak HBsAg i serokonverzija) je takođe vrlo retko i kod PEG-IFN-α i kod lečenja nukleozidima/nukleotidima. Uzevši u obzir ta ograničenja, postoji hitna potreba za poboljšanim terapeutskim opcijama za lečenje i indukovanje funkcionalnog izlečenja za hronični HBV. Lečenje oralnim agonistom TLR7 malih molekula je pristup koji obećava i ima potencijal za veću efikasnost i podnošljivost (T. Asselah et al, Clin Liver Dis 2007, 11, 839-849).

Zapravo, do sada se razmatrala upotreba u terapeutske svrhe nekoliko identifikovanih agonista TLR7. Do sada je odobren, od strane američke Uprave za hranu i lekove, imikvimod (ALDARA™) agonist TLR7 za topikalnu primenu u lečenju kožnih lezija izazvanih humanim papiloma virusom. TLR7/8 dvojni agonist rezikvimod (R-848) i agonist TLR7 852A su procenjivani za lečenje humanog genitalnog herpesa, odnosno metastatskog melanoma refraktornog na hemoterapiju. ANA773 je oralni agonist TLR7 prolek, razvijen za lečenje pacijenata sa hroničnom infekcijom virusom hepatitisa C (HCV) i hroničnom infekcijom hepatitisa B. GS-9620 je oralno dostupan agonist TLR7. Studija faze Ib pokazala je da je lečenje sa GS-9620 bezbedno, dobro se podnosi i dovodi do indukcije iRNK zavisne od doze ISG15 kod pacijenata sa hroničnim hepatitisom B (E. J. Gane i sar. Annu Meet Am Assoc Study Liver Dis (novembar 1-5, Washington, D.C.) 2013, Abst 946). US2010/0143301 i WO2009/005687 otkrivaju derivate purina kao modulatore TLR-a. Zbog toga postoji velika nezadovoljena klinička potreba za razvojem snažnih i bezbednih agonista TLR7 kao vida novog lečenja za HBV kojim bi se ponudilo više terapeutskih rešenja ili zamenilo postojeće delimično efikasno lečenje.

SAŽETAK PRONALASKA

Predmetni pronalazak obezbeđuje seriju novih 6-amino-2-sulfonimidoil-9-supstituisanih-7-supstituisanih-purin-8-on jedinjenja koja imaju agonističku aktivnost toličnog receptora; pronalazak takođe obezbeđuje bioaktivnost takvih jedinjenja za indukovanje porasta nivoa SEAP aktiviranjem toličnih receptora, kao što je TLR7 receptor, metaboličku konverziju prolekova u matična jedinjenja u prisustvu humanih hepatocita, i terapeutsku ili profilaktičku primenu takvih jedinjenja i njihovih farmaceutskih kompozicija koje sadrže ova jedinjenja za lečenje ili prevenciju zaraznih bolesti poput HBV ili HCV. Predmetni pronalazak takođe obezbeđuje jedinjenja koja imaju bolju aktivnost. Pored toga, jedinjenja formule (I) takođe pokazuju dobru rastvorljivost i PK profil.

Predmetni pronalazak se odnosi na nova jedinjenja formule (I),

pri čemu

R<1>je C1-6alkil;

R<2>je benzil, pri čemu je pomenuti benzil nesupstituisan ili supstituisan jednim, dva ili tri supstituenta nezavisno odabrana od halogena i C1-6alkila;

R<3>je −NR<4>R<5>, pri čemu

R<4>je C1−6alkil ili C1−6alkoksiC1−6alkil;

R<5>je (C1-6alkil)2NCOOC1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(C1-

6alkil)aminoC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(fenil)C1-6alkil, C1-6alkoksikarbonilC1-6alkil, C1-

6alkoksikarboniloksiC1-6alkil, C1-6alkil, C1-6alkilkarbonil(C1-6alkil)aminoC1- 6alkil ili pirolidinilkarbamoiloksiC1-6alkil; ili

R<4>i R<5>zajedno sa azotom su vezani da formiraju heterociklil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer;

pod uslovom da

6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(piperidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(morfolin-4-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(3,3-dimetilpirolidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

etil 1-[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]pirolidin-2-karboksilat;

6-amino-7-(2-azaspiro[3,3]heptan-2-karbonil)-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(2-oksa-6-azaspiro[3,3]heptan-6-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(3,3-difluorpirolidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(3-fluor-3-metil-pirolidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

i njihovi enantiomeri ili dijastereomeri su isključeni.

Pronalazak se takođe odnosi na njihovu proizvodnju, lekove na bazi jedinjenja prema pronalasku i njihovu proizvodnju, kao i na upotrebu jedinjenja formule (I), kao agonista TLR7. Shodno tome, jedinjenja formule (I) su korisna za lečenje ili profilaksu HBV i/ili HCV infekcije sa agonizmom toličnih receptora.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

Ukoliko nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni izrazi koji se ovde koriste imaju isto značenje koje je poznato stručnom licu u oblasti kojoj pripada ovaj pronalazak. Osim toga, navedene definicije u nastavku služe da ilustruju i definišu značenje i opseg različitih termina koji se koriste za opis pronalaska.

DEFINICIJE

Termin „C1−6alkil“ označava alkil grupu sa zasićenim, ravnim ili razgranatim nizom koji sadrži od 1 do 6 atoma ugljenika, konkretno 1 do 4, na primer, metil, etil, n-propil, izopropil, n-butil, izobutil, terc-butil, i slično. Konkretne „CC1−6alkil“ grupe su metil, etil i npropil.

Termin „C1-6alkoksi“ označava grupu formule C1-6alkil-O-. U primere za C1-6alkoksi grupu spadaju, ali bez ograničenja, metoksi, etoksi, n-propoksi, izopropoksi, n-butoksi, izobutoksi i terc-butoksi. Konkretne „C1-6alkoksi“ grupe su metoksi, etoksi i izopropoksi. Konkretnija C1-6alkoksi grupa je etoksi.

Termini „halogen“ i „halo“ ovde se koriste ravnopravno, i odnose se na fluor, hlor, brom ili jod.

Termin „heterociklil“ označava sistem jednovalentnog zasićenog ili delimično nezasićenog mono- ili bicikličnog prstena koji sadrži od 3 do 10 atoma prstena, a sastoji se od 1 do 5 heteroatoma prstena odabranih od N, O i S, dok su preostali atomi prstena ugljenik. U konkretnim realizacijama, heterociklil je sistem zasićenog jednovalentnog monocikličnog prstena koji sadrži od 4 do 7 atoma prstena, a sastoji se od 1, 2 ili 3 heteroatoma prstena izabrana od N, O i S, dok su preostali atomi prstena ugljenik. Primeri za monociklični zasićeni heterociklil su aziridinil, oksiranil, azetidinil, oksetanil, pirolidinil, dimetilpirolidinil, etoksikarbonilpirolidinil, tetrahidrofuranil, tetrahidro-tienil, pirazolidinil, imidazolidinil, oksazolidinil, izoksazolidinil, tiazolidinil, piperidinil, tetrahidropiranil, tetrahidrotiopiranil, piperazinil, morfolinil, tiomorfolinil, dioksotiomorfolinil, azepanil, diazepanil, homopiperazinil ili oksazepanil. Monociklični zasićeni heterociklil može nadalje biti supstituisan jednim do tri supstituenta nezavisno odabrana od halogena, C1-6alkila i C1−6alkoksikarbonila. Primeri za supstituisani monociklični zasićeni heterociklil su 4-metilpiperazinil, dimetilpirolidinil, etoksikarbonilpirolidinil, difluorpirolidinil, fluor(metil)pirolidinil. Primeri za biciklični zasićeni heterociklil su azabiciklo[3,2,1]oktil, kinuklidinil, oksaazabiciklo[3,2,1]oktil, azabiciklo[3,3,1]nonil, oksaazabiciklo[3,3,1]nonil, tiaazabiciklo[3,3,1]nonil, azaspiro[3,3]heptanil i oksaazaspiro[3,3]heptanil. Primeri delimično nezasićenih heterociklila su dihidrofuril, imidazolinil, dihidrooksazolil, tetrahidropiridinil i dihidropiranil.

Termin „karbonil“, samostalno ili u kombinaciji, označava −C(O)- grupu.

Termin „C1-6alkilkarbonil“ se odnosi na grupu C1-6alkil-C(O)-, naznačene time što je „C1-6alkil“ kao što je prethodno definisan. Konkretna „C1-6alkilkarbonil“ grupa je acetil. Termin „enantiomer“ označava dva stereoizomera jedinjenja koja nisu međusobno identično preklopiva kao likovi u ogledalu.

Termin „dijastereomer“ označava stereoizomer sa dva ili više hiralnih centara i čiji molekuli nisu međusobno identični kao likovi u ogledalu. Dijastereomeri imaju različita fizička svojstva, npr. tačke topljenja, tačke ključanja, spektralne osobine i reaktivnosti.

Termin „farmaceutski prihvatljive soli” označava soli koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne. Farmaceutski prihvatljive soli obuhvataju kisele i bazne adicione soli.

Termin „farmaceutski prihvatljiva kisela adiciona so“ označava one farmaceutski prihvatljive soli koje su formirane sa neorganskim kiselinama, kao što su hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, ugljena kiselina, fosforna kiselina, i sa organskim kiselinama odabranim od alifatičnih, cikloalifatičnih, aromatičnih, aralifatičnih, heterocikličnih, karboksilnih i sulfonskih organskih kiselina, kao što su mravlja kiselina, sirćetna kiselina, propionska kiselina, glikolna kiselina, glukonska kiselina, mlečna kiselina, piruvinska kiselina, oksalna kiselina, jabučna kiselina, maleinska kiselina, malonska kiselina, ćilibarna kiselina, fumarna kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, asparaginska kiselina, askorbinska kiselina, glutaminska kiselina, antranilna kiselina, benzojeva kiselina, cimetna kiselina, bademova kiselina, embonska kiselina, fenilsirćetna kiselina, metansulfonska kiselina, etan sulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina i salicilna kiselina.

Termin „farmaceutski prihvatljiva bazna adiciona so” označava one farmaceutski prihvatljive soli koje su formirane sa organskom ili neorganskom bazom. Primeri za prihvatljive neorganske baze obuhvataju soli natrijuma, kalijuma, amonijaka, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, cinka, bakra, mangana i aluminijuma. Soli izvedene iz farmaceutski prihvatljivih organskih netoksičnih baza obuhvataju soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, supstituisanih amina, uključujući i supstituisane amine koji se nalaze u prirodi, cikličnih amina i baznih jonoizmenjivačkih smola, kao što su izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin, etanolamin, 2-dietilaminoetanol, trimetamin, dicikloheksilamin, lizin, arginin, histidin, kafein, prokain, hidrabamin, holin, betain, etilendiamin, glukozamin, metilglukamin, teobromin, purini, piperazin, piperidin, N-etilpiperidin, i poliaminske smole.

Jedinjenja opšte formule (I) koja sadrže jedan ili više hiralnih centara mogu biti prisutna kao racemati, dijastereomerne smeše ili optički aktivni pojedinačni izomeri. Racemati se mogu podeliti prema poznatim postupcima u enantiomere. Konkretno, dijastereomerne soli koje se mogu odvojiti putem kristalizacije formiraju se iz racemskih smeša reakcijom sa optički aktivnom kiselinom, kao što je npr. D- ili L-vinska kiselina, bademova kiselina, jabučna kiselina, mlečna kiselina ili kamforsulfonska kiselina.

Termin „prolek“ označava oblik ili derivat jedinjenja koji se metaboliše in vivo, npr. pomoću bioloških tečnosti ili enzima od strane ispitanika nakon primene, u farmakološki aktivni oblik jedinjenja kako bi se proizvelo željeno farmakološko dejstvo. Prolekovi su opisani npr. u „The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action” Richard B. Silverman, Academic Press, San Diego, 2004, Poglavlje 8 Prodrugs and Drug Delivery Systems, str. 497-558.

„Farmaceutski aktivni metabolit“ označava farmakološki aktivni proizvod koji nastaje metabolizmom naznačenog jedinjenja ili njegove soli u organizmu. Nakon unosa u organizam, većina lekova su supstrati za hemijske reakcije koje mogu promeniti njihova fizička svojstva i biološka dejstva. Ove metaboličke konverzije, koje tipično utiču na polaritet jedinjenja predmetnog pronalaska, menjaju način distribucije lekova u organizmu i njihovog izlučivanja. Međutim, u nekim slučajevima, metabolizam leka je potreban za terapeutsko dejstvo.

Termin „terapeutski efikasna količina” označava količinu jedinjenja ili molekula predmetnog pronalaska koja, kada se primeni na ispitaniku, (i) leči ili sprečava pojavu određene bolesti, stanja ili poremećaja, (ii) ublažava, poboljšava ili eliminiše jedan simptom ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja ili (iii) sprečava ili odlaže pojavu jednog ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja koji su ovde opisani. Terapeutski efikasna količina će varirati u zavisnosti od jedinjenja, stanja bolesti koja se leči, ozbiljnosti bolesti koja se leči, godina i opšteg zdravlja ispitanika, načina i oblika primene leka, procene ordinirajućeg lekara ili veterinara, kao i od drugih faktora.

Termin „farmaceutska kompozicija“ označava smešu ili rastvor koji sadrži terapeutski efikasnu količinu aktivnog farmaceutskog sastojka zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima koji se daju sisaru, npr. čoveku kome je to potrebno.

TLR7 AGONIST I PROLEK

Predmetni pronalazak se odnosi na jedinjenje formule (I),

pri čemu

R<1>je C1-6alkil;

R<2>je benzil, pri čemu je pomenuti benzil nesupstituisan ili supstituisan jednim do tri supstituenta nezavisno odabrana od halogena i C1-6alkila;

R<3>je −NR<4>R<5>, pri čemu

R<4>je C1−6alkil ili C1−6alkoksiC1−6alkil;

R<5>je (C1-6alkil)2NCOOC1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(C1-6alkil)aminoC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(fenil)C1-6alkil, C1-6alkoksikarbonilC1-6alkil, C1-

pod uslovom da

6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(piperidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-7-(morfolin-4-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

i njihovi enantiomeri ili dijastereomeri su isključeni.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (ii) jedinjenje formule (I), naznačene time što

R<1>je C1-6alkil;

R<2>je benzil, pri čemu je pomenuti benzil nesupstituisan ili supstituisan halogenom ili C1-6alkilom;

R<3>je azetidinil;

piperazinil supstituisan pomoću C1-6alkila;

piperidinil supstituisan piperidinilom;

pirolidinil; ili

−NR<4>R<5>, pri čemu

R<4>je C1−6alkil ili C1−6alkoksiC1−6alkil;

6alkoksikarboniloksiC1-6alkil, C1-6alkil, C1-6alkilkarbonil(C1-6alkil)aminoC1- 6alkil ili pirolidinilkarbamoiloksiC1-6alkil;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (iii) jedinjenje formule (I), pri čemu

R<1>je etil ili propil;

R<2>je benzil, brombenzil, hlorbenzil, fluorbenzil ili metilbenzil;

R<3>je azetidinil;

4-metilpiperazinil;

piperidinilpiperidinil;

pirolidinil; ili

−NR<4>R<5>, pri čemu

R<4>je metil, etil, propil ili metoksietil;

R<5>je acetil(metil)aminoetil, butil, butil(metil)karbamoiloksietil, dietilkarbamoiloksietil, etoksikarbonil(metil)aminoetil, etoksikarboniletil, etoksikarbonilizobutil, etoksikarbonilizopentil, etoksikarbonilmetil, etoksikarboniloksietil, etoksikarbonil(fenil)etil, etil, izobutil, izopropoksikarbonilizopentil, izopropoksikarbonil(fenil)etil, izopropil, metoksikarbonil(metil)aminoetil, metoksietil, metoksipropil, propil, propil(metil)karbamoiloksietil, pirolidinilkarbamoiloksietil, tercbutoksikarbonil(metil)aminoetil, terc-butoksikarboniletil, terc-butoksikarbonilizopentil ili terc-butoksikarbonil(fenil)etil;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (iii-1) jedinjenje formule (I), naznačene time što

R<1>je etil ili propil;

R<2>je benzil, hlorbenzil, fluorbenzil ili metilbenzil;

R<3>je azetidinil;

4-metilpiperazinil;

piperidinilpiperidinil;

pirolidinil; ili

−NR<4>R<5>, pri čemu

R<4>je metil, etil, propil ili metoksietil;

R<5>je acetil(metil)aminoetil, butil, butil(metil)karbamoiloksietil,

1

dietilkarbamoiloksietil, etoksikarbonil(metil)aminoetil, etoksikarboniletil, etoksikarbonilizobutil, etoksikarbonilizopentil, etoksikarbonilmetil, etoksikarboniloksietil, etoksikarbonil(fenil)etil, etil, izobutil, izopropoksikarbonilizopentil, izopropoksikarbonil(fenil)etil, izopropil, metoksikarbonil(metil)aminoetil, metoksietil, metoksipropil, propil, propil(metil)karbamoiloksietil, pirolidinilkarbamoiloksietil, tercbutoksikarbonil(metil)aminoetil, terc-butoksikarboniletil, terc-butoksikarbonilizopentil ili terc-butoksikarbonil(fenil)etil;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (iv) jedinjenje formule (I), pri čemu R<3>je azetidinil, 4-metilpiperazinil, piperidinilpiperidinil, pirolidinil, acetil(metil)aminoetil(metil)amino, bis(metoksietil)amino, butil(etil)amino, butil(metil)amino, butil(metil)karbamoiloksietil(metil)amino, dietilkarbamoiloksietil(metil)amino, etoksikarbonil(metil)aminoetil(metil)amino, etoksikarboniletil(metil)amino, etoksikarbonilizobutil(metil)amino, etoksikarbonilizopentil(metil)amino, etoksikarbonilmetil(metil)amino, etoksikarboniloksietil(metil)amino, etoksikarbonil(fenil)etil(metil)amino, etil(metil)amino, izobutil(metil)amino, izopropoksikarbonilizopentil(metil)amino, izopropoksikarbonil(fenil)etil(metil)amino, izopropil(metil)amino, metoksikarbonil(metil)aminoetil(metil)amino, metoksietil(etil)amino, metoksietil(metil)amino, metoksietil(propil)amino, metoksipropil(metil)amino, propil(etil)amino, propil(metil)amino, propil(metil)karbamoiloksietil(metil)amino, pirolidinilkarbamoiloksietil(metil)amino, terc-butoksikarbonil(metil)aminoetil(metil)amino, terc-butoksikarboniletil(metil)amino, terc-butoksikarbonilizopentil(metil)amino ili tercbutoksikarbonil(fenil)etil(metil)amino; ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (v) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<1>je etil.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (vi) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<2>je benzil supstituisan halogenom ili C1−6alkilom.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (vii) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<2>je brombenzil, hlorbenzil, fluorbenzil ili metilbenzil.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (vii-1) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<2>je hlorbenzil, fluorbenzil ili metilbenzil.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (viii) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<2>je brombenzil, hlorbenzil ili fluorbenzil.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (viii-1) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<2>je hlorbenzil ili fluorbenzil.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (ix) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<2>je −NR<4>R<5>, pri čemu, R<4>je C1-6alkil, R<5>je C1-6alkil.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (x) jedinjenje formule (I), pri čemu, R<2>je propil(metil)amino ili etil(metil)amino.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (xi) jedinjenje formule (I), pri čemu

R<1>je C1-6alkil;

R<2>je benzil, pri čemu je pomenuti benzil supstituisan halogenom ili C1-6alkilom;

R<3>je −NR<4>R<5>, pri čemu, R<4>je C1-6alkil, R<5>je C1-6alkil;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (xii) jedinjenje formule (I), pri čemu

R<1>je etil;

R<2>je metilbenzil, brombenzil, hlorbenzil ili fluorbenzil;

R<3>je propil(metil)amino ili etil(metil)amino;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Još jedna realizacija predmetnog pronalaska predstavlja (xii-1) jedinjenje formule (I), pri čemu

R<1>je etil;

R<2>je metilbenzil, hlorbenzil ili fluorbenzil;

R<3>je propil(metil)amino ili etil(metil)amino;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Druga realizacija predmetnog pronalaska predstavlja to da su (xiii) konkretna jedinjenja formule (I) sledeća:

6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-9-benzil-N-etil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-7-[4-(1-piperidil)piperidin-1-karbonil]-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-N-etil-N-(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-9-benzil-N-butil-N-etil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-9-benzil-N,N-bis(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-7-(azetidin-1-karbonil)-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on;

6-amino-9-benzil-N-izopropil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-9-benzil-7-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-N-(3-metoksipropil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-9-benzil-N-izobutil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

Etil 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]acetat;

Etil 3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]propanoat;

terc-butil 3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]propanoat;

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]propanoat;

terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat;

Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat;

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]-3-metil-butanoat;

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]-4-metil-pentanoat;

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]-3-fenil-propanoat;

Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-

1

metil-amino]-3-fenil-propanoat;

terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenil-propanoat;

N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

Metil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil]-N-metil-karbamat;

terc-butil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil]-N-metil-karbamat;

Etil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil]-N-metil-karbamat;

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N-butil-N-metil-karbamat;

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil pirolidin-1-karboksilat;

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N-metil-N-propil-karbamat;

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N,N-dietilkarbamat;

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil etil karbonat;

6-amino-N-butil-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]purin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid;

6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-2-[S(S)-propilsulfomimidoil]-9-(p-tolilmetil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on;

6-amino-2-[S(R)-propilsulfomimidoil]-9-(p-tolilmetil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin8-on;

6-amino-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-N-butil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid;

6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-N-etil-2[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid;

6-amino-2-[S(S)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid;

6-amino-2-[S(R)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid;

6-amino-N-etil-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid;

6-amino-N-etil-2-[S(S)-(etilsulfonimidoil)]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid;

6-amino-N-etil-2-[S(R)-(etilsulfonimidoil)]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-

1

purin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid;

6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-9-[(4-bromfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid;

6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-9-[(4-bromfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid;

6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-[S(S)-(etilsulfonimidoil)]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid; i

6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-(etilsulfonimidoil)]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid;

ili njihovafarmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

Druga realizacija predmetnog pronalaska predstavlja to da su (xiv) konkretnija jedinjenja formule (I) sledeća:

1

6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid;

6-amino-N-etil-2-[S(R)-(etilsulfonimidoil)]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid;

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.

U nekim realizacijama, jedinjenja predmetnog pronalaska su ispitana i upoređena sa sledećim referentnim jedinjenjima. Kao najuspešnija biofarmaceutska kompanija koja se fokusira na otkriće i razvoj TLR7 agonista za lečenje bolesti jetre, Gilead ima najnapredniju liniju agonista TLR7 sa vodećim jedinjenjima poput GS-9620 koji je ušao u studije II faze. Gilead jedinjenje GS-9620 opisano u US20100143301 kao primer 49, jedinjenje S-2 i jedinjenje S-3 opisani u JP1999193282, odabrana su kao referentna jedinjenja u ovoj prijavi:

1

SINTEZA

Jedinjenja predmetnog pronalaska se mogu pripremati na bilo koji uobičajeni način. Pogodni procesi za sintezu ovih jedinjenja, kao i njihovih polaznih materijala, dati su u šemama u nastavku i u primerima. Svi supstituenti, naročito, R<1>do R<14>, su u skladu sa gore navedenim definicijama, osim ako nije drugačije naznačeno. Pored toga, i ako se eksplicitno drugačije ne tvrdi, sve reakcije, uslovi reakcija, skraćenice i simboli imaju značenja koja su dobro poznata stručnim licima iz oblasti organske hemije.

1

Šema 1

Jedinjenje formule VI priprema se ciklizacijom izocijanata VII sa aminomalononitril p-toluensulfonatom. Zatim se biciklično jedinjenje V sintetiše reakcijom jedinjenja formule VI sa benzoil izotiocijanatom u prisustvu neorganske baze, kao što je NaOH ili KOH. Alkilovanje bicikličnog jedinjenja V sa alkilhalidom u prisustvu baze, kao što je K2CO3, NaH ili CS2CO3, daje jedinjenje formule IV. Jedinjenje formule III je pripremljeno oksidacijom jedinjenja formule IV sa oksidansom, kao što je meto-hlorperoksibenzoeva kiselina, produkt reakcije adicije vodonik peroksid-ureja i HIO4. Jedinjenje formule II se dobija iminacijom jedinjenja formule III sa reagensom za iminaciju, kao što je natrijum azid u kiselini, pri čemu je pomenuta kiselina, na primer, Itonov reagens ili PPA. Jedinjenje formule I se dobija reakcijom jedinjenja formule II sa karbamoil hloridom u prisustvu mešane baze, kao što su piridin i trietilamin, piridin i DIPEA, DMAP i trietilamin ili DMAP i DIPEA.

1

Šema 2

Jedinjenje formule II se takođe može pripremiti kao šema 2.

Jedinjenje formule X je pripremljeno reakcijom jedinjenja formule XI sa R<2>NH2. Redukcija jedinjenja X reagensom za redukciju, kao što je cink ili gvožđe u prahu u AcOH, daje jedinjenje formule IX. Ciklizacija jedinjenja formule IX reagensima za ciklizaciju, kao što su fozgen, karbonil diimidazol, dietil karbonat i trifozgen, daje jedinjenje formule VIII. Jedinjenje formule IVa je pripremljeno tretiranjem jedinjenja formule VIII sa PMBNH2. Jedinjenje formule III je pripremljeno uklanjanjem zaštite jedinjenja formule IVa kiselinom, kao što je CF3COOH, nakon čega je sledila oksidacija oksidansom, kao što je metahlorperoksibenzoeva kiselina, produkt reakcije adicije vodonik peroksid-ureja i HIO4. Jedinjenje formule II se dobija iminacijom jedinjenja formule III reagensom za iminaciju, kao što je natrijum azid u kiselini, pri čemu je pomenuta kiselina, na primer, Itonov reagens ili PPA.

Ovaj pronalazak se takođe odnosi na postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) koji obuhvata reakciju:

reakcija jedinjenja formule (II),

2

sa karbamoil hloridom u prisustvu mešane baze;

pri čemu, R<1>i R<2>su prethodno definisani.

U gornjem koraku, smeša baza može biti, na primer, piridin i trietilamin, piridin i DIPEA, DMAP i trietilamin, ili DMAP i DIPEA.

Jedinjenje formule (I), kada je proizvedeno prema gore navedenom postupku, takođe je predmet ovog pronalaska.

FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE I PRIMENA

Još jedna realizacija obezbeđuje farmaceutske kompozicije ili lekove, koji sadrže jedinjenja ovog pronalaska i terapeutski inertan nosač, razblaživač ili ekscipijens, kao i postupke za korišćenje jedinjenja ovog pronalaska za pripremanje takvih kompozicija i lekova. U jednom primeru, jedinjenja formule (I) se mogu formulisati mešanjem na sobnoj temperaturi na odgovarajućem pH, i sa željenim stepenom čistoće, sa fiziološki prihvatljivim nosačima, tj. nosačima koji su netoksični za primaoca u dozama i koncentracijama primenjenim u datom galenskom obliku. pH vrednost formulacije zavisi uglavnom od konkretne upotrebe i koncentracije jedinjenja, ali se poželjno nalazi u opsegu od oko 3 do oko 8. U jednom primeru, jedinjenje formule (I) je formulisano u acetatnom puferu, na pH 5. U drugoj realizaciji, jedinjenja formule (I) su sterilna. Jedinjenje može da se čuva, na primer, kao čvrsta ili amorfna kompozicija, kao liofilizovana formulacija ili kao vodeni rastvor.

Kompozicije se formulišu, doziraju i primenjuju na način koji je u skladu sa dobrom medicinskom praksom. U ovom kontekstu se mogu razmatrati faktori kao što su konkretni poremećaj koji se leči, konkretni sisar koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto na koje se agens daje, postupak davanja, raspored davanja i drugi faktori poznati lekarima. „Efikasna količina“ jedinjenja koje se primenjuje će zavisiti od takvih razmatranja, i to je minimalna količina neophodna za aktiviranje TLR7 receptora koja će dovesti do stvaranja INF-a i drugih citokina, koji se mogu koristiti, ali bez ograničenja, za lečenje ili prevenciju infekcije virusom hepatitisa B i/ili C.

U jednom primeru, farmaceutski efikasna količina jedinjenja ovog pronalaska, koja se daje parenteralno po dozama, biće u opsegu od oko 0,1 do 50 mg/kg, alternativno oko 0,1 do 30 mg/kg telesne težine pacijenta dnevno, sa tipičnim početnim opsegom upotrebljenog jedinjenja od 0,3 do 15 mg/kg/dan. U drugoj realizaciji, oralni oblici jedinične doze, kao što su tablete i kapsule, poželjno sadrže od oko 20 do oko 1000 mg jedinjenja ovog pronalaska.

Jedinjenja pronalaska se mogu primeniti na bilo koji pogodan način, uključujući oralnu, topikalnu (uključujući bukalnu i sublingvalnu), rektalnu, vaginalnu, transdermalnu, parenteralnu, supkutanu, intraperitonealnu, intrapulmonarnu, intradermalnu, intratekalnu i epiduralnu i intranazalnu, i, ako se želi lokalni tretman, intralezionu primenu. Parenteralne infuzije uključuju intramuskularnu, intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu ili supkutanu primenu.

Jedinjenja predmetnog pronalaska mogu se davati u svakom pogodnom obliku primene, npr. tablete, praškovi, kapsule, rastvori, disperzije, suspenzije, sirupi, sprejevi, supozitorije, gelovi, emulzije, flasteri itd. Takve kompozicije mogu sadržati komponente koje su uobičajene u farmaceutskim preparatima, npr. razblaživače, nosače, pH modifikatore, zaslađivače, balastne materije, i druge aktivne agense.

Tipična formulacija se priprema mešanjem jedinjenja predmetnog pronalaska i nosača ili ekscipijensa. Pogodni nosači i ekscipijensi su dobro poznati stručnim licima za ovu oblast, i opisani su npr. u Ansel, Howard C., et al., Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; and Rowe, Raymond C. Handbook of Pharmaceutical Excipients. Chicago, Pharmaceutical Press, 2005. Formulacije takođe mogu sadržavati jedan ili više pufera, stabilizatora, surfaktanasa, kvašljivaca, lubrikanasa, emulgatora, sredstava za suspendovanje, konzervanasa, antioksidanasa, sredstava za zamućenje, glidanasa, pomoćnih agenasa za obradu, boja, zaslađivača, mirisa, aroma, diluenata i drugih poznatih aditiva, kako bi se dobio lep izgled leka (tj. jedinjenja predmetnog pronalaska ili njihove farmaceutske kompozicije) ili kako bi se olakšala proizvodnja farmaceutskog proizvoda (tj. leka).

Primer odgovarajućeg oralnog doznog oblika predstavlja tableta koja sadrži oko 20 do 1000 mg jedinjenja ovog pronalaska u kombinaciji sa oko 30 do 90 mg anhidrovane laktoze, oko 5 do 40 mg natrijum kroskarmeloze, oko 5 do 30 mg polivinilpirolidona (PVP) K30, i oko 1 do 10 mg magnezijum stearata. Praškasti sastojci se prvo izmešaju, a zatim mešaju sa rastvorom PVP. Dobijena kompozicija se može osušiti, granulisati, pomešati sa magnezijum stearatom i komprimovati u oblik tablete, pomoću konvencionalne opreme. Primer aerosolne formulacije može da se dobije rastvaranjem jedinjenja, na primer, 20 do 1000 mg ovog pronalaska u pogodnom puferskom rastvoru, npr. fosfatnom puferu, dodavanjem tonifikatora, npr. soli poput natrijum hlorida, ako je potrebno. Rastvor se može filtrirati, npr. pomoću filtera od 0,2 mikrona, da bi se uklonile nečistoće i zagađivači.

Realizacija, prema tome, uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njihovea farmaceutski prihvatljive soli ili enantiomere ili dijastereomere.

Još jedna realizacija uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli ili enantiomere ili dijastereomere, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim nosačem ili ekscipijensom.

Druga realizacija uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži jedinjenje formule (I) ili njihovefarmaceutski prihvatljive soli ili enantiomere ili dijastereomere za upotrebu u lečenju infekcije virusom hepatitisa B.

Postupci

Predmetni pronalazak obezbeđuje postupke za lečenje ili prevenciju infekcije virusom hepatitisa B i/ili infekcije virusom hepatitisa C kod pacijenta kome je to potrebno.

Predmetni pronalazak dalje predviđapostupke za uvođenje terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I) ili drugih jedinjenja ovog pronalaska u krvotok pacijenta radi lečenja i/ili prevencije infekcije virusom hepatitisa B i/ili C.

Postupci predmetnog pronalaska su posebno pogodni za ljudske pacijente. Konkretno, postupci i doze predmetnog pronalaska mogu biti korisni, ali bez ograničenja, za pacijente zaražene virusom HBV i/ili HCV. Postupci i doze predmetnog pronalaska su takođe korisni za pacijente koji su podvrgnuti drugim antivirusnim tretmanima. Postupci prevencije predmetnog pronalaska su naročito korisni za pacijente kod kojih postoji rizik od virusne infekcije. U ove pacijente spadaju, bez ograničenja, zdravstveni radnici, npr. lekari, medicinske sestre, pružaoci zdravstvenih usluga; vojno osoblje; nastavnici; osobe koje se staraju o deci; pacijenti koji putuju ili žive u stranim podnebljima, posebno zemljama trećeg sveta, uključujući radnike socijalne pomoći, misionare i strane diplomate. Konačno, postupci i kompozicije se odnose i na lečenje refraktornih pacijenata ili pacijenata otpornih na lečenje poput otpornosti na inhibitore reverzne transkriptaze, inhibitore proteaze, itd.

Druga realizacija uključuje postupak lečenja ili prevencije infekcije virusom hepatitisa B i/ili infekcije virusom hepatitisa C kod sisara kojem je potrebno takvo lečenje, pri čemu postupak uključuje davanje navedenom sisaru terapeutski efikasne količine jedinjenja formule (I) ili enantiomera, dijastereomera, prolekova ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli.

KRATAK OPIS SLIKA

Slika 1 Rendgenska difrakcija na monokristalu Primera 41-B.

2

Slika 2 Rendgenska difrakcija na monokristalu Primera 42-A.

Slika 3 Rendgenska difrakcija na monokristalu Primera 43-B.

Slika 4 prikazuje nivo DNK HBV, HBsAg i anti-HBs antitela kod miševa zaraženih AAV-HBV koji se leče vehikulumom, Primer 43-A u dozi od 10 mg/kg QOD i QW tokom 42 dana. Rezultati su predstavljeni kao prosečna vrednost ± SEM. LLQQ: donja granica kvantifikacije.

Slika 5 prikazuje nivo DNK HBV, HBsAg i anti-HBs antitela kod miševa zaraženih AAV-HBV koji se leče vehikulumom, Primer 41-A u dozi od 1, 3, 10 mg/kg QOD i 10 mg/kg QW tokom 42 dana. Rezultati su predstavljeni kao prosečna vrednost ± SEM. LLQQ: donja granica kvantifikacije.

Slika 6 prikazuje nivoe DNK HBV, HBsAg i anti-HBs antitela kod miševa zaraženih AAV-HBV koji se leče vehikulumom, Primer 42-A u dozi od 1, 3 i 10 mg/kg QOD tokom 42 dana. Rezultati su predstavljeni kao prosečna vrednost ± SEM. LLQQ: donja granica kvantifikacije.

Slika 7 prikazuje nivoe DNK HBV, HBsAg i anti-HBs antitela kod miševa zaraženih AAV-HBV koji se leče vehikulumom, Primer 41-B u dozi od 1, 3 i 10 mg/kg QOD tokom 42 dana. Rezultati su predstavljeni kao prosečna vrednost ± SEM. LLQQ: donja granica kvantifikacije.

PRIMERI

Pronalazak će se u potpunosti bolje shvatiti kroz primere koji slede. Oni, međutim, ne treba da se tumače kao ograničenje obima pronalaska.

SKRAĆENICE

vod.vodeni

BSA: N, O-bis(trimetilsilil)acetamid

CDI: N, N’-karbonil diimidazol

DIEPA: N, N-dietilpropilamin

DBU: 1,8-diazabicikloundek-7-en

DPPA: difenilfosforil azid

EC50: molarna koncentracija agonista, koja daje 50 % maksimalnog mogućeg odgovora na taj agonist.

EDC: N1-((etilimino)metilen)-N3, N3-dimetilpropan-1,3-diamin EtOAc ili EA: etil acetat

HATU: (1-[bis(dimetilamino)metilen]-1H-1,2,3-triazolo[4,5-b]piridinijum 3-oksid heksafluorfosfat)

hr(s): sat(i)

HPLC: tečna hromatografija visokih performansi

HOBt: N-hidroksibenzotriazol

MS (ESI): masena spektroskopija (elektrosprej jonizacija)

m-CPBA: 3-hlorperbenzoeva kiselina

MTEB: metil terc-butil etar

NMP: N-metilpirolidon

izm. izmereno

PE: petrol etar

PMB: p-metoksibenzil

PPA: polifosforna kiselina

QOD svaki drugi dan

QW jednom nedeljno

ST ili st: sobna temperatura

zas. zasićen

TFA: trifluorsirćetna kiselina

TEA: trietilamin

V/V opseg zapremine

OPŠTI EKSPERIMENTALNI USLOVI

Intermedijeri i finalna jedinjenja su prečišćena fleš hromatografijom, upotrebom jednog od sledećih instrumenata: i) Biotage SP1 sistem i modul kertridža Quad 12/25, ii) ISCO instrument kombinovane fleš hromatografije. Robna marka silikagela i veličina pora: i) KP-SIL60 Å, veličina čestica: 40-60 μm; ii) CAS registarski br: Silikagel: 63231-67-4, veličina čestica: silikagel 47-60 mikrona; iii) ZCX kompanije „Qingdao Haiyang Chemical Co, Ltd“, pora: 200-300 ili 300-400.

Intermedijeri i finalna jedinjenja su prečišćeni preparativnim HPLC-om na koloni sa reversnim fazama, uz korišćenje kolone X Bridge™ Perp C18(5 µm, OBD™ 30 x 100 mm) ili kolone SunFire™ Perp C18(5 µm, OBD™ 30 x 100 mm).

LC/MS spektri dobijeni su korišćenjem Waters UPLC-SQD masenog detektora. Standardni LC/MS uslovi su bili sledeći (vreme rada 3 minuta):

Kiseli uslovi: A: 0,1% mravlja kiselina i 1% acetonitril u H2O; B: 0,1% mravlja kiselina u acetonitrilu;

Bazni uslovi: A: 0,05% NH3· H2O u H2O; B: acetonitril.

Maseni spektri (MS): tipično se prikazuju samo joni koji ukazuju na osnovnu masu, i

2

osim ako nije drugačije naznačeno, navedeni maseni jon je pozitivan maseni jon (M+H)<+>. NMR spektri su dobijeni upotrebom Bruker Avance 400MHz.

Sve reakcije koje su uključivale reagense osetljive na vazduh, izvedene su u atmosferi argona. Reagensi su korišćeni kao što su dobijeni od komercijalnih dobavljača bez daljeg prečišćavanja, osim ako nije drugačije naznačeno.

PRIMERI PRIPREME

Priprema intermedijera

Intermedijer AA

N-metil-N-propil-karbamoil hlorid

Smeši N-metilpropan-1-amina (5 g, 68,4 mmol) i natrijum hidrogenkarbonata (11,5 g, 137 mmol) u DCM-u (70 ml) na 0°C dodat je kap po kap bis(trihlormetil) karbonat (8,11 g, 27,3 mmol) u DCM-u (30 ml). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi 2 h, i filtrirana. Filtrat je koncentrovan u vakuumu. Dobijeni N-metil-N-propil-karbamoil hlorid (7,2 g, Intermedijer AA) je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AB

N-(2-metoksietil)-N-metil-karbamoil hlorid

Intermedijer AB je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom 2-metoksi-N-metil-etanamina umesto N-metilpropan-1-amina. Dobijen je N-(2-metoksietil)-N-metilkarbamoil hlorid (8 g, Intermedijer AB) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AC

N-etil-N-propil-karbamoil hlorid

2

Intermedijer AC je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom N-etilpropan-1-amina umesto N-metilpropan-1-amina. N-etil-N-propil-karbamoil hlorid (12,6 g, Intermedijer AC) je dobijen kao žuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AD

N-etil-N-(2-metoksietil)karbamoil hlorid

Intermedijer AD je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom N-etil-2-metoksietanamina umesto N-metilpropan-1-amina. Sirovi N-etil-N-(2-metoksietil)karbamoil hlorid (2,5 g, Intermedijer AD) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AE

N-butil-N-etil-karbamoil hlorid

Intermedijer AE je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom N-etilbutan-1-amina (5 g) umesto N-metilpropan-1-amina. Sirovi N-butil-N-etil-karbamoil hlorid (6,3 g, Intermedijer AE) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AF

N-(2-metoksietil)-N-propil-karbamoil hlorid

2

Intermedijer AF je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom N-(2-metoksietil)propan-1-amina (2 g, 17,1 mmol) umesto N-metilpropan-1-amina. Sirovi N-(2-metoksietil)-2V-propil-karbamoil hlorid (2,5 g, Intermedijer AF) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AG

N,N-bis(2-metoksietil)karbamoil hlorid

Intermedijer AG je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom bis(2-metoksietil)amina (2 g, 15 mmol) umesto N-metilpropan-1-amina. Sirovi proizvod, N,N-bis(2-metoksietil)karbamoil hlorid (2,6 g, Intermedijer AG) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AH

Azetidin-1-karbonil hlorid

Intermedijer AH je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom azetidin hidrohlorida (10,7 g, 107 mmol) i natrijum bikarbonata (3 ekvivalenta) umesto N-metilpropan-1-amina i natrijum bikarbonata (2 ekvivalenta). Sirovi azetidin-1-karbonil hlorid (1,5 g, Intermedijer AH) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

2

Intermedijer AI

N-izopropil-N-nietil-karbamoil hlorid

Intermedijer Al je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom N-metilpropan-2-amina (5 g, 19,4 mmol) umesto N-metilpropan-1-amina. Sirovi N-izopropil-N-metil-karbamoil hlorid (8,6 g, Intermedijer Al) je dobijen kao žuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AL

N-izobutil-N-metil-karbamoil hlorid

Intermedijer AL je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom N-2-dimetilpropan-1-amina (4,8 g) umesto N-metilpropan-1-amina. Sirovi N-izobutil-N-metilkarbamoil hlorid (8,1 g, Intermedijer AL) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AP

Etil 2-[hlorokarbonil(metil)amino]acetat

U rastvor trifosgena (728 mg, 2,45 mmol) u DCM-u (5 ml) dodat je kap po kap rastvor etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida (1,3 g, 8,46 mmol) i piridina (1 ml) u DCM-u (5 ml) na 0°C. Reakciona smeša je postala narandžasta uz pojavu žutog taloga, a zatim je ostavljena da se zagreje na sobnu temperaturu. Nakon mešanja 1 sat, vodeni rastvor HCl (0,1N, 25 ml) je dodat u reakcionu smešu, organski sloj je odvojen, ispran sa 0,1 N HCl (10

2

ml) dva puta, slanim rastvorom (10 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu dajući sirovi etil 2-[hlorkarbonil(metil)amino]acetat (2,0 g, Intermedijer AP) kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AR

terc-butil 3-[hlorkarbonil(metil)amino]propanoat

Korak 1: Priprema terc-butil 3-(metilamino)propanoata (Jedinjenje AR-1)

U rastvor terc-butil akrilata (3 g) u DMF-u (40 ml) dodat je metilamin hidrohlorid (4,74 g, 70 mmol) i DBU (21,4 g, 140 mmol) na -45°C. Zatim je reakciona smeša ostavljena da se zagreje na -10°C. Reakciona smeša je mešana na istoj temperaturi 2,5 sata. Dodat je Et2O (200 ml) i dobijena smeša je isprana slanim rastvorom (50 ml) četiri puta. Odvojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio terc-butil 3-(metilamino)propanoat (3,5 g, Jedinjenje AR-1) kao svetložuto ulje.

Korak 2: Priprema terc-butil 3-[hlorkarbonil(metil)amino]propanoata (Intermedijer AR)

Intermedijer AR je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom terc-butil 3-(metilamino)propanoata (3,4 g, Jedinjenje AR-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi terc-butil 3-[hlorkarbonil(metil)amino]propanoat (3,5 g, Intermedijer AR) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. Intermedijer AS

Etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]propanoat

Korak 1: Priprema etil (2S)-2-(metilamino)propanoat hidrohlorida (Jedinjenje AS-1)

U rastvor (2S)-2-(metilamino)propanske kiseline (1 g, 9,70 mmol) u EtOH (10 ml) je dodat kap po kap SOCl2(1,50 g, 12,61 mmol) na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 15,5 sati, zatim razblažena pomoću EA (20 ml), isprana sa H2O (5 ml) i slanim rastvorom (5 ml). Organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Etil (2S)-2-(metilamino)propanoat hidrohlorid (1,8 g, Jedinjenje AS-1) je dobijen kao žuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2: Priprema etil (2S)-2-(metilamino)propanoata (Jedinjenje AS-2)

Rastvor etil (2S)-2-(metilamino)propanoat hidrohlorida (1,8 g, Jedinjenje AS-1) u EA (10 ml) je prilagođen na pH = 8 sa 10 mas. % vodenog rastvora NaHCO3. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 0,5 sata. Organski sloj je ispran slanim rastvorom (5 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Etil (2S)-2-(metilamino)propanoat (620 mg, Jedinjenje AS-2) je dobijen kao žuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak 3: Priprema etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]propanoata

1

(Intermedijer AS)

Intermedijer AS je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom etil (2S)-2-(metilamino)propanoata (260 mg, Jedinjenje AS-2) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]propanoat (200 mg, Intermedijer AS) je dobijen kao žuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AT

terc-butil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metil-pentanoat

Korak 1: Priprema terc-butil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoala (Jedinjenje AT-1)

2-metilpropen (25 g, 446 mmol) je ubačen u DCM (50 ml) na -78°C. Zatim je rastvor 2-metilpropena dodat u rastvor (S)-4-metil-2-(metilamino)pentanske kiseline hidrohlorida (500 mg, 2,75 mmol) i H2SO4(3,68 g, 2 ml, 37,5 mmol) u dioksanu (20 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati u zatvorenoj epruveti. Reakcioni rastvor je sipan u ledeno hladni vodeni rastvor KOH (8,4 g u vodi (30 ml)) i dobijena smeša je dva puta ekstrahovana pomoću DCM-a (50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml) dva puta, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio sirovi proizvod terc-butil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoat (Jedinjenje AT-1) kao svetložuto ulje.

2

Korak 2: Priprema terc-butil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metilpentanoata (Intermedijer AT)

Intermedijer AT je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom terc-butil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoata (300 mg, Jedinjenje AT-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi terc-butil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metilpentanoat (350 mg, Intermedijer AT) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AU

Izopropil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metil-pentanoat

Korak 1: Priprema izopropil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoat hidrohlorida (Jedinjenje AU-1)

U rastvor (S)-4-metil-2-(metilamino)pentanske kiseline hidrohlorida (0,5 g) u i-PrOH (7,8 g, 10 ml) je dodat kap po kap tionil hlorid (655 mg, 402 µL) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana i refluksovana tokom 16 sata, a zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je bazifikovan zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 ml) i ekstrahovan pomoću DCM-a (50 ml). Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je salifikovan sa HCl/EtOAc (10 ml, 1 mmol/ml) i koncentrovan da bi se dobio izopropil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoat hidrohlorid (510 mg, Jedinjenje AU-1) kao bela čvrsta supstanca.

Korak 2: Priprema izopropil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metilpentanoata (Intermedijer AU)

Intermedijer AU je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom izopropil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoat hidrohlorida (500 mg, Jedinjenje AU-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi izopropil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metilpentanoat (650 mg, Intermedijer AU) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AV

Etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-metil-butanoat

Korak 1: Priprema etil (2S)-3-metil-2-(metilamino)butanoat hidrohlorida (Jedinjenje AV-1)

U rastvor (2S)-3-metil-2-(metilamino)buterne kiseline (1,0 g, 7,6 mmol) u EtOH (10 ml) je dodat kap po kap tionil hlorid (2,45 g, 21 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana i refluksovana tokom 16 sata, a zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je

4

bazifikovan zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 ml) i dva puta ekstrahovan pomoću DCM-a (50 ml). Kombinovani organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je rastvoren u HCl/EtOAc (10 ml, 1 M) i koncentrovan da bi se dobio etil (2S)-3-metil-2-(metilamino)butanoat hidrohlorid (1,9 g, Jedinjenje AV-1) kao bela čvrsta supstanca.

Korak 2: Priprema etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-metil-butanoata (Intermedijer AV)

Intermedijer AV je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom etil (2S)-3-metil-2-(metilamino)butanoat hidrohlorida (500 mg, Jedinjenje AV-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-metilbutanoat (600 mg, Intermedijer AV) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AW

Etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metil-pentanoat

Korak 1: Priprema etil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoat hidrohlorida (Jedinjenje AW-1)

U rastvor (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanske kiseline (1 g, 6,9 mmol) u EtOH (10 ml) je dodat kap po kap tionil hlorid (1,07 g, 8,3 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijena smeša je mešana uz refluks tokom 16 sata, a zatim koncentrovana u vakuumu. Ostatak je bazifikovan zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(30 ml) i ekstrahovan pomoću DCM-a (50 ml). Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je salifikovan sa HCl/EtOAc (10 ml, 1 mmol/ml) i koncentrovan da bi se dobio etil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoat hidrohlorid (1,8 g, Jedinjenje AW-1) kao bela čvrsta supstanca.

Korak 2: Priprema etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metil-pentanoata (Intermedijer AW)

Intermedijer AW je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom etil (2S)-4-metil-2-(metilamino)pentanoat hidrohlorida (610 mg, AW-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-4-metilpentanoat (280 mg, Intermedijer AW) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AX

Etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-fenil-propanoat

Intermedijer AX je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom (S)-etil-2-(metilamino)-3-fenilpropanoata umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi etil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-fenil-propanoat (200 mg, Intermedijer AX) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja

Intermedijer AY

Izopropil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-fenil-propanoat

Intermedijer AY je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom izopropil (2S)-2-(metilamino)-3-fenil-propanoata (190 mg) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi izopropil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-fenil-propanoat (220 mg, Intermedijer AY) je dobijen kao svetlobraon ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer AZ

(S)-terc-butil 2-((hlorkarbonil)(metil)amino)-3-fenilpropanoat

Korak 1: Priprema terc-butil (2S)-2-(metilamino)-3-fenil-propanoata (Jedinjenje AZ-1)

2-metilpropen (25 g, 446 mmol) je ubačen u DCM (50 ml) na -78°C. Zatim je rastvor 2-metilpropena dodat u rastvor (S)-2-(metilamino)-3-fenilpropanske kiseline (500 mg) i H2SO4(3,68 g, 2 ml) u dioksanu (20 ml) na 0°C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati u zatvorenoj epruveti. Reakciona smeša je sipana u ledeno hladni vodeni rastvor KOH (8,4 g u vodi (30 ml)) i dobijena smeša je dva puta ekstrahovana pomoću DCMa (50 ml). Organski sloj je ispran slanim rastvorom (30 ml) 2 puta, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio terc-butil (2S)-2-(metilamino)-3-fenil-propanoat (710 mg, Jedinjenje AZ-1) kao svetložuto ulje.

Korak 2: Priprema (S)-terc-butil 2-((hlorkarbonil)(metil)amino)-3-fenilpropanoata (Intermedijer AZ)

Intermedijer AZ je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom terc-butil (2S)-2-(metilamino)-3-fenil-propanoata (Jedinjenje AZ-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Sirovi terc-butil (2S)-2-[hlorkarbonil(metil)amino]-3-fenil-propanoat (360 mg, Intermedijer AZ) je dobijen kao svetložuto ulje i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja

Intermedijer BA

N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamoil hlorid

Korak 1: Priprema terc-butil N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamata (Jedinjenje BA-1)

U rastvor terc-butil metil(2-(metilamino)etil)karbamata (1,13 g, 6 mmol) u piridinu (10 ml) je dodat kap po kap anhidrid sirćetne kiseline (3,06 g, 30 mmol) na 0°C. Zatim je rastvor mešan na sobnoj temperaturi 0,5 sata. Rastvarač je uklonjen u vakuumu, a ostatak je podeljen između EtOAc (50 ml) i zasićenog vodenog rastvora NaHCO3(25 ml). Organski sloj je odvojen, ispran slanim rastvorom (20 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu da bi se dobio terc-butil N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamat (1,28 g, Jedinjenje BA-1) kao žuto ulje.

Korak 2: Priprema N-metil-N-(2-(metilamino)etil)acetamid hidrohlorida (Jedinjenje BA-2)

Smeša terc-butil N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamata (1,1 g, Jedinjenje BA-1) u HCl/EtOAc (10 ml, 1N HCl u EtOAc) je mešana na sobnoj temperaturi 2 sata, a zatim je smeša filtrirana. Sakupljena čvrsta supstanca je tri puta isprana sa EtOAc (5 ml) i osušena u vakuumu da bi se dobio sirovi N-metil-N-(2-(metilamino)etil)acetamid hidrohlorid (460 mg, Jedinjenje BA-2) kao bela čvrsta supstanca.

Korak 3: Priprema N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamoil hlorida (Intermedijer BA)

Intermedijer BA je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom N-metil-N-(2-(metilamino)etil)acetamid hidrohlorida (200 mg, Jedinjenje BA-2) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-N-metil karbamoil hlorid (300 mg, Intermedijer BA) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BB

Metil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamat

Korak 1: Priprema metil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamata (Jedinjenje BB-1)

U rastvor N,N'-dimetiletan-1,2-diamina (10 g) u THF-u (40 ml) je dodat kap po kap metil hlorformat (1,92 g) na -70°C tokom 1 sata. Smeša je mešana na 25°C 15 sati, a zatim filtrirana i isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen i koncentrovan da bi se dobio žut ostatak, koji je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio metil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamat (2 g, Jedinjenje BB-1) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Priprema metil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metilkarbamata (Intermedijer BB)

Intermedijer BB je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom metil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamata (2,0 g, Jedinjenje BB-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi metil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamat (2,2 g, Intermedijer BB) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BC

terc-butil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamat

4

Korak 1: Priprema terc-butil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamata (Jedinjenje BC-1)

U rastvor N,N'-dimetiletan-1,2-diamina (40,4 g) u DCM-u (300 ml) je dodat kap po kap rastvor Boc2O (10 g, 10,6 ml, 45,8 mmol) u DCM-u (100 ml) na 0°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 18 sati. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom NaHCO3(50 ml), slanim rastvorom (50 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio terc-butil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamat (6,8 g, Jedinjenje BC-1) kao žuto ulje.<1>H NMR (400MHz, CDCl3) δ ppm: 3,34 (br. s., 2H), 2,89 (s, 3H), 2,74 (t, J = 6,7 Hz, 2H), 2,46 (s, 3H), 1,47 (s, 9H).

Korak 2: Priprema terc-butil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metilkarbamata (Intermedijer BC)

Intermedijer BC je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom terc-butil Nmetil-N-[2-(metilamino)etil]karbamata (1,15 g, Jedinjenje BC-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi terc-butil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamat (1,3 g, Intermedijer BC) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BD

Etil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamat

Korak 1: Priprema etil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamata (Jedinjenje BD-1)

U rastvor N,N'-dimetiletan-1,2-diamina (10 g) u DCM-u (40 ml) je dodat kap po kap etil hlorformat (2,58 g) na -70°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je mešana na 25°C 15 sati, a zatim filtrirana i isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen i koncentrovan u vakuumu. Žuti ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio etil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamat (2 g, Jedinjenje BD-1) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Priprema etil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamata (Intermedijer BD)

Intermedijer BD je pripremljen analogno intermedijeru AA upotrebom etil N-metil-N-[2-(metilamino)etil]karbamata (Jedinjenje BD-1) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi etil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamat (2,2 g, Intermedijer BD) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BE

2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N-butil-N-metil-karbamat

Korak 1: Priprema terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (Jedinjenje BE-1)

U rastvor 2-(metilamino)etanola (10 g, 133,14 mmol) u DCM-u (10 ml) je dodat Boc2O (34,87 g, 159,77 mmol) na 25°C. Smeša je mešana na 25°C 16 sati, a zatim koncentrovana. Ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamat (20 g, Jedinjenje BE-1) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Priprema 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil N-butil-N-metilkarbamata (Jedinjenje BE-2)

U rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (880 mg, Jedinjenje BE-1) i Et3N (1 g, 10,08 mmol) u DCM-u (10 ml) je dodat kap po kap N-butil-N-metil-karbamoil hlorid (903 mg, 7,04 mmol) na -10°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je mešana na 25°C 15 sati, a zatim filtrirana i isprana vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen i koncentrovan da bi se dobio 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil N-butil-N-metilkarbamat (2 g, Jedinjenje BE-2) kao bezbojno ulje.

Korak 3: Priprema 2-(metilamino)etil N-butil-N-metil-karbamat hidrohlorida

4

(Jedinjenje BE-3)

U rastvor 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil N-butil-N-metil-karbamata (1 g, Jedinjenje BE-2) je dodat HCl/EA (40 ml, 1M). Reakciona smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata, zagrejana na 25°C i mešana još 15,5 sati. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-(metilamino)etil-N-butil-N-metil-karbamat hidrohlorid (400 mg, Jedinjenje BE-3) kao bezbojno ulje.

Korak 4: Priprema 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N-butil-N-metil-karbamat (Intermedijer BE)

Intermedijer BE je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom 2-(metilamino)etil N-butil-N-metil-karbamat hidrohlorida (374 mg, Jedinjenje BE-3) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N-butil-N-metil-karbamat (330 mg, Intermedijer BE) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BF

2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil pirolidin-1-karboksilat

Korak 1: Priprema terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (Jedinjenje BF-1)

U rastvor 2-(metilamino)etanola (10 g, 133,14 mmol) u DCM-u (10 ml) je dodat Boc2O (34,87 g, 159,77 mmol) na 25°C. Smeša je mešana na 25°C 16 sati. Reakciona smeša je koncentrovana dajući ostatak, koji je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil karbamat (20 g, Jedinjenje BF-1) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Priprema 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil pirolidin-1-karboksilata (Jedinjenje BF-2)

U rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (300 mg, 1,71 mmol, Jedinjenje BF-1) i Et3N (578 mg, 5,71 mmol) u DCM-u (5 ml) je dodat kap po kap pirolidin-1-karbonil hlorid (458 mg, 3,4 mmol) na 0°C tokom 0,5 sata, a zatim mešan na 25°C tokom 15,5 sati. Nakon filtracije, filtrat je ispran vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen i koncentrovan da bi se dobio 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil pirolidin-1-karboksilat (335 mg, Jedinjenje BF-2) kao bezbojno ulje.

Korak 3: Priprema 2-(metilamino)etil pirolidin-1-karboksilat hidrohlorida (Jedinjenje BF-3)

2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil pirolidin-1-karboksilat (335 mg, Jedinjenje BF-2) je dodat u HCl u EA (12,3 ml, 1M) i smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata, a zatim na 25°C još 15,5 sati. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio 2-(metilamino)etil pirolidin-1-karboksilat hidrohlorid (300 mg, Jedinjenje BF-3) kao bezbojno ulje.

4

Korak 4: Priprema 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil pirolidin-1-karboksilat (Intermedijer BF)

Intermedijer BF je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom 2-(metilamino)etil pirolidin-1-karboksilat hidrohlorida (299 mg, Jedinjenje BF-3) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil pirolidin-1-karboksilat (230 mg, Intermedijer BF) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BG

2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N-metil-N-propil-karbamat

Korak 1: Priprema terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (Jedinjenje BG-1)

U rastvor 2-(metilamino)etanola (10 g, 133,14 mmol) u DCM-u (10 ml) je dodat Boc2O (34,87 g, 159,77 mmol) na 25°C. Smeša je mešana na 25°C 16 sati, a zatim koncentrovana dajući ostatak, koji je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil karbamat (20 g, Jedinjenje BG-1) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Priprema terc-butil-N-metil-N-[2-[metil(propil)karbainoil]oksietil] karbamata (Jedinjenje BG-2)

4

U rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (265 mg, Jedinjenje BG-1) i Et3N (1 ml, 5,71 mmol) u DCM-u (5 ml) je dodat kap po kap N-metil-N-propil-karbamoil hlorid (410 mg, 1,83 mmol) na 0°C tokom 0,5 sata. Reakciona smeša je mešana na 25°C 15,5 sati, a zatim filtrirana i filtrat ispran vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen i koncentrovan da bi se dobio terc-butil N-metil-N-[2-[metil(propil)karbamoil]oksietil]karbamat (380 mg, Jedinjenje BG-2) kao bezbojno ulje.

Korak 3: Priprema 2-(metilamino)etil N-metil-N-propil-karbamat hidrohlorida (Jedinjenje BG-3)

terc-butil N-metil-N-[2-[metil(propil)karbamoil]oksietil]karbamat (380 mg, Jedinjenje BG-2) je dodat u HCl u EA (13,7 ml, 1M). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Zatim je smeša mešana na 25°C još 15,5 sati i koncentrovana da bi se dobio 2-(metilamino)etil N-metil-N-propil-karbamat hidrohlorid (300 mg, Jedinjenje BG-3) kao bezbojno ulje.

Korak 4: Priprema 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N-metil-N-propil-karbamat (Intermedijer BG)

Intermedijer BG je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom 2-(metilamino)etil N-metil-N-propil-karbamat hidrohlorida (330 mg, Jedinjenje BG-3) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil-N-metil-

4

N-propil-karbamat (300 mg, Intermedijer BG) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BH

2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N,N-dietilkarbamat

Korak 1: Priprema terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-inetil-karbaniata (Jedinjenje BH-1)

U rastvor 2-(metilamino)etanola (10 g, 133,14 mmol) u DCM-u (10 ml) je dodat Boc2O (34,87 g, 159,77 mmol) na 25°C. Smeša je mešana na 25°C 16 sati, a zatim koncentrovana, taj ostatak je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil karbamat (20 g, Jedinjenje BH-1) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Priprema 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil N,N-dietilkarbamata (Jedinjenje BH-2)

U rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (200 mg, 1,14 mmol, Jedinjenje BH-1) i Et3N (578 mg, 5,71 mmol) u DCM-u (5 ml) je dodat kap po kap N,N-dietilkarbamoil hlorid (248 mg, 1,83 mmol) na 0°C tokom 0,5 sata i mešan na 25°C tokom 15,5 sati. Nakon filtracije, filtrat je ispran vodom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen i koncentrovan da bi se dobio 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil N,N-dietilkarbamat (313 mg, Jedinjenje BH-2) kao bezbojno ulje.

4

Korak 3: Priprema 2-(metilamino)etil N,N-dietilkarbamat hidrohlorida (Jedinjenje BH-3)

2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil N,N-dietilkarbamat (436 mg, 1,77 mmol, Jedinjenje BH-2) je dodat u HCl u EA (17 ml, 1M). Smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata. Zatim je smeša mešana na 25°C još 15,5 sati i koncentrovana da bi se dobio 2-(metilamino)etil N,N-dietilkarbamat hidrohlorid (230 mg, Jedinjenje BH-3) kao bezbojno ulje.

Korak 4: Priprema 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N,N-dietilkarbamata (Intermedijer BH)

Intermedijer BH je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom 2-(metilamino)etil N,N-dietilkarbamat hidrohlorida (274 mg, Jedinjenje BH-3) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N,N-dietilkarbamat (250 mg, Intermedijer BH) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Intermedijer BI

2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil etil karbonat

Korak 1: Priprema terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (Jedinjenje BI-1)

4

U rastvor 2-(metilamino)etanola (1 g, 13,31 mmol) u DCM-u (10 ml) je dodat Boc2O (3,49 g, 15,98 mmol) na 25°C. Reakciona smeša je mešana na 25°C 16 sati, a zatim koncentrovana dajući sirovi proizvod, koji je prečišćen kolonskom hromatografijom da bi se dobio terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil karbamat (1,6 g, Jedinjenje BI-1) kao bezbojno ulje.

Korak 2: Priprema 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil metil karbonata (Jedinjenje BI-2)

U rastvor terc-butil N-(2-hidroksietil)-N-metil-karbamata (1 g, Jedinjenje BI-1), DMAP (0,1 g) i piridina (1,15 g, 11,41 mmol) u EA (20 ml) je dodat kap po kap metil hlorformat (1,21 g, 11,15 mmol) na -10°C. Smeša je mešana na -10°C 1 sat. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je ispran 5%-tnom limunskom kiselinom i slanim rastvorom. Organski sloj je osušen i koncentrovan da bi se dobio 2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil metil karbonat (1,22 g, Jedinjenje BI-2) kao bezbojno ulje.

Korak 3: Priprema etil 2-(metilamino)etil karbonat hidrohlorida (Jedinjenje BI-3)

2-[terc-butoksikarbonil(metil)amino]etil metil karbonat (1,22 g, 4,94 mmol, Jedinjenje BI-2) je dodat u HCl u EA (10 ml, 40 mmol) i smeša je mešana na 0°C tokom 0,5 sata, a zatim na 25°C još 15,5 sati. Reakciona smeša je koncentrovana da bi se dobio etil 2-(metilamino)etil karbonat hidrohlorid (1,06 g, Jedinjenje BI-3).

Korak 4: Priprema 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil etil karbonata (Intermedijer BI)

Intermedijer BI je pripremljen analogno intermedijeru AP upotrebom etil 2-(metilamino)etil karbonat hidrohlorida (150 mg, Intermedijer BI-3) umesto etil 2-(metilamino)acetat hidrohlorida. Dobijen je sirovi 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil etil karbonat (145 mg, Intermedijer BI) i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

PRIMERI PRIPREME

Primer 1

6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Postupak A:

Korak 1: Priprema 4-amino-3-benzil-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 1a)

U rastvor aminomalononitril p-toluensulfonata (25 g, 98,5 mmol, TCI, kataloški broj: A1119-25G) u suvom THF-u (100 ml) dodat je benzil izocijanat (13,2 g, 98,5 mmol) i TEA (10,2 g, 79,0 mmol) na sobnoj temperaturi. Nakon mešanja na sobnoj temperaturi tokom 24

1

sata, reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu i ostatak je podeljen između EtOAc (500 ml) i vode (250 ml). Odvojeni organski sloj je dva puta ispran slanim rastvorom (50 ml) i dva puta ekstrahovan rastvorom natrijum hidroksida (50 ml, 1N). Kombinovani sloj rastvora natrijum hidroksida je neutralisan sa 10 mas.% rastvorom natrijum hidrogen sulfata i ekstrahovan pomoću EtOAc. Odvojeni organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je trituriran u 2-izopropoksipropanu, a zatim je suspenzija filtrirana dajući 4-amino-3-benzil-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitril (15 g, Jedinjenje 1a), kao žutu čvrstu supstancu. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 215.

Korak 2: Priprema 6-amino-9-benzil-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1b)

U rastvor 4-amino-3-benzil-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (15,0 g, 70,0 mmol, Jedinjenje 1a) u THF-u (700 ml) je dodat kap po kap benzoilizotiocijanat (28,6 g, 175,1 mmol, TCI, kataloški broj: A11596-100G). Nakon 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je trituriran u dietil etru (100 ml), i dobijeni talog je sakupljen filtracijom.

U rastvor dobijenog taloga u THF-u (700 ml) dodat je natrijum hidroksid (70 ml, 2 N). Smeša je refluksovana tokom 50 sati, a zatim zakiseljena do pH=3 sa 10 mas.% vodenim rastvorom natrijum hidrogen sulfata. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom, dajući sirovi 6-amino-9-benzil-2-sulfanil-7H-purin-8-on (8,1 g, Jedinjenje 1b) kao žutu čvrstu supstancu. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 274.

Korak 3: Priprema 6-amino-9-benzil-2-(2-propilsulfanil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c)

2

U rastvor 6-amino-9-benzil-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (5,46 g, 20,0 mmol, Jedinjenje 1b) u DMF-u dodat je kalijum karbonat (2,76 g, 20,0 mmol). A zatim je 1-bromopropan (2,44 g, 20,0 mmol, TCI, kataloški broj: B0638-500G) u DMF-u (5,0 ml) polako dodat prethodnom rastvoru. Nakon 12 sati mešanja na sobnoj temperaturi, reakciona smeša je sipana u vodu (200 ml), zatim zakiseljena sa 10 mas.% vodenim rastvorom natrijum hidrogen sulfata i ekstrahovana dva puta pomoću EtOAc (100 ml). Organski sloj je ispran slanim rastvorom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu dajući sirovi proizvod, koji je prečišćen fleš hromatografijom na koloni silikagela dajući 6-amino-9-benzil-2-(2-propilsulfanil)-7H-purin-8-on (4,8 g, Jedinjenje 1c) kao belu čvrstu supstancu. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 316.

Korak 4: Priprema 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d)

U suspenziju jedinjenja 6-amino-9-benzil-2-(2-propilsulfanil)-7H-purin-8-on (2,7 g, 8,7 mmol, Jedinjenje 1c) u DCM/MeOH (500 ml, V/V = 1:1) dodata je 3-hlorperbenzoeva kiselina (2,15 g, 8,7 mmol, 70% čistoće, Aldrich, kataloški broj: 273031-100G). Nakon 2 sata mešanja reakcione smeše, zapremina reakcione smeše je redukovana u vakuumu do oko 50 ml. Dobijeni talog je sakupljen filtracijom, ispran metanolom i osušen, dajući 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-on (1,0 g, Jedinjenje 1d) kao belu čvrstu supstancu. Proizvod je korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 332.

Korak 5: Priprema 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e)

U rastvor 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-ona (1,52 g, 4,6 mmol, Jedinjenje 1d) u Itonovom reagensu (40 ml, fosfor pentoksid, 7,5 mas.% u metansulfonskoj kiselini, Aldrich, kataloški broj: 380814-100ML) dodat je natrijum azid (360 mg, 5,5 mmol) na 50°C. Nakon mešanja na toj temperaturi tokom 30 minuta, reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i sipana u zas. vodeni rastvor natrijum bikarbonata. Reakciona smeša je dva puta ekstrahovana sa n-BuOH (100 ml), a organska faza je koncentrovana u vakuumu. Ostatak je podvrgnut prečišćavanju putem preparativnog HPLC-a, dajući 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-on (1,2 g, Jedinjenje 1e) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6)δppm: 10,65 (br. s., 1H), 7,26-7,37 (m, 5H), 6,98 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 4,02 (s, 1H), 3,33 (t, J = 7,53 Hz, 2H), 1,55-1,74 (m, 2H), 0,92 (t, J = 7,53 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M<+>H)<+>]: 347.

Razdvajanje jedinjenja 1e hiralnom HPLC dalo je Jedinjenje 1e-A (sporije eluiranje, 500 mg) i Jedinjenje 1e-B (brže eluiranje, 490 mg) kao belu čvrstu supstancu. (Uslovi razdvajanja: metanol 5%-40% (0,05% DEA)/CO2na koloni ChiralPak AS-3.)

Jedinjenje 1e-A:<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm: 10,56 (s, 1H), 7,21 - 7,46 (m, 5H), 7,03 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,04 (s, 1H), 3,25 - 3,33 (m, 2H), 1,59 - 1,67 (m, 2H), 0,92 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

Jedinjenje 1e-B:<1>H NMR (DMSO-d6, 400 MHz) δ ppm: 10,57 (s, 1H), 7,23 - 7,39 (m, 5H), 6,97 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,05 (s, 1H), 3,31 - 3,30 (m, 2H), 1,49 - 1,74 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

Korak 6: Priprema 6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamida (Primer 1)

4

U rastvor 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (300 mg, Jedinjenje 1e), piridina (329 mg, 4,2 mmol) i DIPEA (538 mg, 4,2 mmol ) u NMP-u (5 ml) dodat je N-metil-N-propil-karbamoil hlorid (564 mg, 4,2 mmol, Intermedijer AA) na sobnoj temperaturi. Smeša je 10 sati mešana na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je koncentrovana, a ostatak je prečišćen putem preparativnog HPLC-a, dajući 6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (108 mg, Primer 1) kao belu čvrstu supstancu.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,45 - 7,24 (m, 5H), 6,89 (s, 2H), 5,01 (s, 2H), 4,17 (s, 1H), 3,44 - 3,34 (m, 2H), 3,36 - 3,34 (m, 2H), 3,10 - 3,00 (m, 3H), 1,74 - 1,52 (m, 4H), 1,01 - 0,72 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 446.

Razdvajanje jedinjenja iz Primera 1 hiralnom HPLC dalo je Primer 1-A (sporije eluiranje, 50 mg) i Primer 1-B (brže eluiranje, 40 mg) kao belu čvrstu supstancu sa izopropanolom 5% -40% (0,05% DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3.

Primer 1-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,44-7,24 (m, 5H), 6,89 (s, 2H), 5,01 (s, 2H), 4,17 (s, 1H), 3,44-3,37 (m, 2H), 3,37-3,35 (m, 2H), 3,10-3,00 (m, 3H), 1,74-1,52 (m, 4H), 1,00-0,72 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 446.

Primer 1-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,45-7,26 (m, 5H), 6,88 (s, 2H), 5,01 (s, 2H), 4,15 (s, 1H), 3,44-3,36 (m, 2H), 3,34 (s, 2H), 3,10-3,01 (m, 3H), 1,77-1,52 (m, 4H), 1,02-0,67 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 446.

Postupak B: Alternativni postupak za pripremu 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e)

Korak 1: Priprema N-benzil-6-hlor-5-nitro-2-propilsulfanil-pirimidin-4-amina (Jedinjenje 1f)

U rastvor 4,6-dihlor-5-nitro-2-propilsulfanilpirimidina (150,0 g, 559,5 mmol) i DIPEA (108,5 g, 839,2 mmol) u THF-u (1,5 L) polako je dodat fenilmetanamin (60,0 g, 559,5 mmol) u THF (200 ml) na -78°C. Nakon dodavanja, smeša je zagrejana na 25°C i mešana na toj temperaturi 16 sati. Dobijena smeša je razblažena sa EA (1 L), tri puta isprana vodom (400 ml) i slanim rastvorom (500 ml). Odvojena organska faza je osušena iznad Na2SO4, filtrirana i koncentrovana u vakuumu dajući N-benzil-6-hlor-5-nitro-2-propilsulfanilpirimidin-4-amin (180,0 g, Jedinjenje 1f) kao žutu čvrstu supstancu i upotrebljenu za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 339,1.

Korak 2: Priprema N4-benzil-6-hlor-2-propilsulfanil-pirimidin-4,5-diamina (Jedinjenje 1g)

U rastvor N-benzil-6-hlor-5-nitro-2-propilsulfanil-pirimidin-4-amina (180 g, Jedinjenje 1f) i HOAc (319 g, 5,31 mol) u THF-u (3,0 L) polako je dodat Zn (174 g, 2,66 mol) na 25°C. Nakon dodavanja, smeša je mešana na 25°C tokom 16 sati. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je bazifikovan zasićenim vod. rastvorom NaHCO3(800 ml), ekstrahovan tri puta pomoću EA (400 ml), osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silikagela da bi se dobio N4-benzil-6-hlor-2-propilsulfanil-pirimidin-4,5-diamin (125 g, Jedinjenje 1g) kao braon čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 309,1.

Korak 3: Priprema 9-benzil-6-hlor-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1h)

Rastvor N-benzil-6-hlor-2-(propilsulfanil)pirimidin-4,5-diamina (72,0 g, 233,1 mmol, Jedinjenje 1g ) i CDI (75,2 g, 233,1 mmol) u THF-u (800 ml) je mešan na 80°C tokom 16 sati. Dobijena smeša je razblažena sa EA (400 ml), isprana dva puta vodom (200 ml) i slanim rastvorom (200 ml). Odvojeni organski sloj je osušen iznad Na2SO4i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je ispran sa MTBE (200 ml) da bi se dobio 9-benzil-6-hlor-2-propilsulfanil-7H-purin-8-on (58,0 g, Jedinjenje 1h) kao bela čvrsta supstanca i upotrebljen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 335,1.

Korak 4: Priprema 9-benzil-6-[(4-metoksifenil)metilamino]-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1i)

Rastvor 9-benzil-6-hlor-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (58,0 g, Jedinjenje 1h) i PMBNH2(54,7 g, 398,42 mmol) u n-BuOH (600 ml) je mešan na 120°C tokom 20 sati. Reakciona smeša je koncentrovana, a ostatak je ispran sa MTBE (400 ml) da bi se dobio 9-benzil-6-[(4-metoksifenil)metilamino]-2-propilsulfanil-7H-purin-8-on (75 g, Jedinjenje 1i) kao bela čvrsta supstanca i upotrebljen je u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 436,2.

Korak 5: Priprema 6-amino-9-benzil-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c)

9-benzil-6-[(4-metoksifenil)metilamino]-2-propilsulfanil-7H-purin-8-on (87,0 g, Jedinjenje 1i) u TFA (200 ml) je mešan na 80°C tokom 16 sati. Dobijena reakciona smeša je koncentrovana, bazifikovana zasićenim vod. rastvorom NaHCO3(600 ml). Dobijeni talog je sakupljen filtracijom i ispran sa (PE/DCM = 2:1, 400ml), dajući 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-on (38,0 g, Jedinjenje 1c) kao belu čvrstu supstancu. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 316,1.

Korak 6: Priprema 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d)

U suspenziju m-CPBA (22,98 g, 113,2 mmol) u THF-u (50 ml) je dodata kap po kap suspenziji 6-amino-9-benzil-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (35,0 g, jedinjenje 1c) u THF-u (200 ml) na 0°C. Nakon dodavanja, reakciona smeša je mešana na 25°C tokom 0,5 sata. Smeša je filtrirana i isprana sa MeCN (400 ml), MTBE (500 ml), dajući 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-on (35,1 g, Jedinjenje 1d) kao belu čvrstu supstancu, što je upotrebljeno za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 332,1.

Korak 7: Priprema 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e)

U rastvor 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-ona (34,0 g, Jedinjenje 1d) u Itonovom reagensu (170,0 ml, 7,5 mas.% u metansulfonskoj kiselini) polako je dodat NaN3(15,34 g, 253,97 mmol) na 60°C. Smeša je zatim mešana na 60°C tokom 30 minuta. Dobijena reakciona smeša je ohlađena do 25°C, sipana u ledeno hladni NH3H2O (500 ml, 1 mol/L), ekstrahovana četiri puta pomoću n-BuOH (100 ml) i koncentrovana u vakuumu. Ostatak je prečišćen putem preparativnog HPLC-a, dajući 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-on (10 g, Jedinjenje 1e).<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,65 (br. s., 1H), 7,26-7,37 (m, 5H), 6,98 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 4,02 (s, 1H), 3,33 (t, J = 7,53 Hz, 2H), 1,55-1,74 (m, 2H), 0,92 (t, J = 7,53 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M<+>H)<+>]: 347.

Primer 2

6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-(2-metoksietil)-N-metil-karbamoil hlorida (Intermedijer AB) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (120 mg, Primer 2) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27-7,39 (m, 5H), 6,89 (br. s., 1H), 6,78 (br. s., 1H), 5,00 (s, 2H), 4,16 (br. d, J = 4 Hz, 1H), 3,62 (br. dd, J = 4, 12 Hz, 2H), 3,28-3,42 (m, 6H), 3,12 (d, J = 12 Hz, 3H), 3,05 (s, 1H), 1,58-1,72 (m, 2H), 0,93 (t, J = 8 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 462.

Razdvajanje jedinjenja iz Primera 2 hiralnom HPLC dalo je Primer 2-A (brže eluiranje, 33 mg) i Primer 2-B (sporije eluiranje, 46 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak OJ-3.

Primer 2-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27-7,39 (m, 5H), 6,89 (br. s., 1H), 6,78 (br. s., 1H), 5,00 (s, 2H), 4,16 (br. d, J = 4 Hz, 1H), 3,62 (br. dd, J = 4, 12 Hz, 2H), 3,28-3,42 (m, 6H), 3,12 (d, J = 12 Hz, 3H), 3,05 (s, 1H), 1,58-1,72 (m, 2H), 0,93 (t, J = 8Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 462.

Primer 2-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27-7,39 (m, 5H), 6,89 (br. s., 1H), 6,78 (br. s., 1H), 5,00 (s, 2H), 4,16 (br. d, J = 4 Hz, 1H), 3,62 (br. dd, J = 4, 12 Hz, 2H), 3,28-3,42 (m, 6H), 3,12 (d, J = 12 Hz, 3H), 3,05 (s, 1H), 1,58-1,72 (m, 2H), 0,93 (t, J = 8Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 462.

Primer 3

6-amino-9-benzil-N-etil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-etil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AC) umesto N-metil-N-propilkarbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N-etil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (51 mg, Primer 3) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27-7,39 (m, 5H), 6,85 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,20 (br. d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,13-3,54 (m, 4H), 1,46-1,72 (m, 4H), 1,30-1,39 (m, 1H), 1,00-1,26 (m, 6H), 0,81-0,95 (m, 5H), 0,73 (t, J = 8 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 474.

Primer 4

6-amino-9-benzil-7-[4-(1-piperidil)piperidin-1-karbonil]-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem (1,4'-bipiperidin)-1'-karbonil hlorida umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-7-[4-(1-piperidil)piperidin-1-karbonil]-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on (55 mg, Primer 4) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,39 - 7,27 (m, 5H), 6,97 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,20 (br. s., 2H), 3,85 (d, J = 12,5 Hz, 1H), 3,43 - 3,15 (m, 3H), 2,96 (t, J = 12,3 Hz, 2H), 2,56 (m, 4H), 1,83 (m, 1H), 1,79 - 1,54 (m, 4H), 1,50 (br. s., 4H), 1,45 - 1,33 (m, 3H), 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 541,2.

Primer 5

6-amino-9-benzil-N-etil-N-(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-etil-N-(2-metoksietil)karbamoil hlorida (Intermedijer AD) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N-etil-N-(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (34 mg, Primer 5) je dobijen kao beli prah.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,39 - 7,28 (m, 5H), 6,89 (br. s., 1H), 6,74 (br. s., 1H), 4,99 (s, 2H), 4,17 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 3,67 (br. s., 2H), 3,63 - 3,51 (m, 2H), 3,50 - 3,34 (m, 4H), 3,29 (s, 1H), 3,11 (s, 2H), 1,73 - 1,59 (m, 2H), 1,23 - 1,07 (m, 3H), 0,93 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 476,3.

1

Primer 6

6-amino-9-benzil-N-butil-N-etil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-butil-N-etil-karbamoil hlorida (Intermedijer AE) umesto N-metil-N-propilkarbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N- butil-N-etil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (51 mg, Primer 6) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27-7,39 (m, 5H), 6,85 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,20 (br. d, J = 8,0 Hz, 1H), 3,13-3,54 (m, 4H), 1,46-1,72 (m, 4H), 1,30-1,39 (m, 1H), 1,00-1,26 (m, 6H), 0,81-0,95 (m, 5H), 0,73 (t, J = 8 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 474.

Primer 7

6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-etil-N-(2-metoksietil)karbamoil hlorida (Intermedijer AF) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (35 mg, Primer 7) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,40 - 7,28 (m, 5H), 6,89 (br. s., 1H), 6,75 (br.

2

s., 1H), 5,00 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 4,24 - 4,16 (m, 1H), 3,77 (br. s., 1H), 3,67 (br. s., 1H), 3,62 -3,53 (m, 1H), 3,42 - 3,27 (m, 5H), 3,23 - 3,02 (m, 3H), 1,66-1,38 (m, 4H), 0,96 - 0,70 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 490,5.

Primer 8

6-amino-9-benzil-N,N-bis(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem bis(2-metoksietil)karbamik hlorida (Intermedijer AG) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N,N-bis(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (35 mg, Primer 8) je dobijen kao beli prah.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,40 - 7,28 (m, 5H), 6,83 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 3,71 (br. s., 3H), 3,52 - 3,27 (m, 11H), 3,09 (s, 3H), 1,73 - 1,59 (m, 2H), 0,93 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 506.

Primer 9

6-amino-7-(azetidin-1-karbonil)-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem azetidin-1-karbonil hlorida (Intermedijer AH) umesto N-metil-N-propilkarbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-7-(azetidin-1-karbonil)-9-benzil-2-propilsulfonimidoil)purin-8-on (120 mg, Primer 9) je dobijen kao beli prah.<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,02 - 7,43 (m, 7H), 4,99 (s, 2H), 4,31 (t, J = 7,65 Hz, 2H), 4,08 -4,23 (m, 3H), 3,34 - 3,41 (m, 2H), 2,28 (m, 2H), 1,56 - 1,73 (m, 2H), 0,93 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 430.

Primer 10

6-amino-9-benzil-N-izopropil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-izopropil-N-metil-karbamoil hlorida (Intermedijer AI) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N-izopropil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (97 mg, Primer 10) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27-7,39 (m, 5H), 6,87 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,38-4,45 (m, 1H), 4,09-4,21 (m, 1H), 3,29-3,43 (m, 2H), 2,89-2,95 (m, 3H), 1,58-1,73 (m, 2H), 1,21 (br d, J = 8 Hz, 6H), 0,93 (t, J = 8 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 446.

Primer 11

6-amino-9-benzil-7-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 4-metilpiperazin-1-karbonil hlorida umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-7-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on (59,5 mg, Primer 11) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.

4

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,39 - 7,31 (m, 5H), 6,99 (s, 2H), 4,98 (s, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,58 - 3,49 (m, 6H), 2,42 (m, 4H), 2,22 (s, 3H), 1,66 - 1,61 (m, 2H), 0,95 - 0,91 (t, J = 7,2 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 473.

Primer 12

6-amino-9-benzil-N-(3-metoksipropil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-(3-metoksipropil)-N-metil-karbamoil hlorida umesto N-metil-N-propilkarbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N-(3-metoksipropil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (92,2 mg, Primer 12) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,23 - 7,45 (m, 5H), 6,94 (s, 2H), 4,93-5,08 (m, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,30 - 3,62 (m, 6H), 3,25 (s, 3H), 3,02 - 3,10 (m, 3H), 1,74 -1,90 (m, 2H), 1,55 - 1,77 (m, 2H), 0,98 - 0,82 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 476,3.

Primer 13

6-amino-9-benzil-N-izobutil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-izobutil-N-metil-karbamoil hlorida (Intermedijer AL) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-benzil-N-izobutil-N-metil-8-okso-2(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (64 mg, Primer 13) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27-7,40 (m, 5H), 6,89 (br. S., 2H), 5,00 (s, 2H), 4,16 (br. s., 1H), 3,25-3,44 (m, 4H), 3,07 (s, 2H), 3,03 (s, 1H), 1,87-2,09 (m, 1H), 1,57-1,74 (m, 2H), 0,75-0,99 (m, 9H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 460.

Primer 14

Etil 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]acetat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem etil 2-((hlorkarbonil)(metil)amino)acetata (Intermedijer AP) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Etil-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]acetat (38 mg, Primer 14) je dobijen kao svetložuti prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,41 - 7,27 (m, 5H), 6,82 (br. s., 1H), 5,04 - 4,95 (m, 2H), 4,35 (br. s., 1H), 4,28 (br. s., 1H), 4,23 - 4,16 (m, 2H), 4,08 (q, J = 7,2 Hz, 1H), 3,43 - 3,28 (m, 3H), 3,15 (s, 2H), 3,08 (s, 1H), 1,71 - 1,58 (m, 2H), 1,24 (t, J = 7,0 Hz, 2H), 1,12 (t, J = 7,0 Hz, 1H), 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 490.

Primer 15

Etil 3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]propanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem etil 3-((hlorkarbonil)(metil)amino)propanoata umesto N-metil-N-propilkarbamoil hlorida (Intermedijer AA). Etil-3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]propanoata (35 mg, Primer 15) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,26 (m, 5H), 6,93 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,16 (s, 1H), 4,08 (q, J = 7,1 Hz, 1H), 3,99 (d, J = 7,0 Hz, 1H), 3,67 (br. s., 2H), 3,40 - 3,29 (m, 2H), 3,08 (s, 2H), 2,99 (s, 1H), 2,71 (t, J = 6,4 Hz, 2H), 1,74 - 1,56 (m, 2H), 1,27 - 1,05 (m, 3H), 0,93 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 504.

Primer 16

terc-butil 3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]propanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem terc-butil 3-((hlorkarbonil)(metil)amino)propanoata (Intermedijer AR) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). terc-butil 3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]propanoat (60 mg, Primer 16) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,41 - 7,27 (m, 5H), 6,93 (br.

s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,15 (s, 1H), 3,64 (br. s., 2H), 3,51 - 3,33 (m, 2H), 3,08 (s, 2H), 2,98 (s, 1H), 2,62 (t, J = 6,9 Hz, 2H), 1,71 - 1,57 (m, 2H), 1,41 (s, 6H), 1,34 (s, 3H), 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 532.

Primer 17

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]propanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem etil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]propanoata (Intermedijer AP) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]propanoat (34,1 mg, Primer 17) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,22 - 7,49 (m, 5 H), 6,78 (br. s., 2H), 4,93 - 5,08 (m, 2H), 4,75 (br. s., 1H), 3,96 - 4,29 (m, 3H), 3,30 - 3,46 (m, 2H), 3,09 (s, 2H), 2,93 (br. s., 1H), 1,55 - 1,77 (m, 2H), 1,48 (d, J = 7,16 Hz, 3H), 1,09 -1,29 (m , 3H), 0,94 (t, J = 7,44 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 504,2.

Primer 18

terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem terc-butil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]-4-metil-pentanoat (Intermedijer AT) umesto N-metil-Npropil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metilpentanoat (22 mg, Primer 18) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,42 - 7,27 (m, 5H), 6,78 (br. s., 2H), 5,05 - 4,96 (m, 2H), 4,78 (br. s., 1H), 4,33 (br. s., 1H), 3,51 - 3,37 (m, 2H), 3,01 (s, 3H), 1,75 - 1,54 (m, 4H), 1,44 (s, 8H), 1,33 - 1,11 (m, 2H), 0,99 - 0,82 (m, 9H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 574,3.

Primer 19

Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem izopropil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]-4-metil-pentanoata (Intermedijer AU) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metilpentanoat (43 mg, Primer 19) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,27 (m, 5H), 6,75 (br. s., 2H), 5,05 - 4,94 (m, 3H), 4,88 (br. s., 1H), 4,19 (br. s., 1H), 3,43 - 3,34 (m, 2H), 3,01 (s, 3H), 1,91 (br. s., 1H), 1,77 - 1,56 (m, 4H), 1,25 - 1,16 (m, 6H), 0,99 - 0,83 (m, 9H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 560,3.

Primer 20

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-metil-butanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem etil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]-3-metil-butanoata (Intermedijer AV) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-metil-butanoat (51,5 mg, Primer 20) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,23 - 7,51 (m, 5H), 6,76 (br. s., 2H), 5,01 (br. s., 2H), 4,42 (br. s., 1H), 3,97 - 4,26 (m, 3H), 3,34 - 3,45 (m, 2H), 3,12 (br. s., 3H), 2,24 (br. s., 1H), 1,65 (br. s., 2H), 1,13 - 1,29 (m, 3H), 0,88 - 1,10 (m, 9H). MS izm. (ESI<+>) [M+H<+>]: 532,2.

Primer 21

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem etil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]-4-metil-pentanoata (Intermedijer AW) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat (17,3 mg, Primer 21) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,26 - 7,45 (m, 5H), 6,73 (br. s., 2H), 4,91 - 5,09 (m, 3H), 4,06 - 4,25 (m, 3H), 3,34 - 3,45 (m, 2H), 3,04 (br. s., 3H), 1,93 (br. s., 1H), 1,54 - 1,78 (m, 4H), 1,22 (t, J = 7,09 Hz, 3H), 0,77 - 1,01 (m, 9H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 546,3.

Primer 22

Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenil-propanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem etil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]-3-fenil-propanoata (Intermedijer AX) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenil-propanoat (30 mg, Primer 22) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,42 - 7,16 (m, 10H), 4,97 (s, 3H), 4,19 (q, J = 7,1 Hz, 2H), 3,35 - 3,15 (m, 6H), 3,10 - 2,90 (m, 3H), 1,71 - 1,46 (m, 2H), 1,28 - 1,18 (m, 4H), 0,97 - 0,85 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 580.

Primer 23

Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenil-propanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6,

1

korišćenjem izopropil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]-3-fenil-propanoata (Intermedijer AY) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenilpropanoat (22 mg, Primer 23) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,35 - 7,01 (m, 10H), 5,02-4,89 (m, 3H), 3,37-3,17 (m, 3H), 3,02 - 3,09 (m, 3H), 3,10 -2,90 (m, 3H), 1,66 - 1,62 (m, 2H), 1,22 - 1,11 (m, 8H), 0,92 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 594.

Primer 24

terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenil-propanoat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem terc-butil (2S)-2-[hlorkarbonil)(metil)amino]-3-fenil-propanoata (Intermedijer AZ) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenilpropanoat (34 mg, Primer 24) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,42 - 7,16 (m, 10H), 5,03 - 4,90 (m, 3H), 3,68 - 3,24 (m, 5H), 3,24 - 3,09 (m, 2H), 3,01 (s, 3H), 1,68 - 1,57 (m, 2H), 1,43 (s, 9H), 0,99 - 0,85 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 608,3.

Primer 25

N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

2

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamoil hlorida (Intermedijer BA) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (26,1 mg, Primer 25) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,27 (m, 5H), 7,02 (br, 2H), 5,04 - 4,97 (m, 2H), 4,19 - 4,13 (m, 1H), 3,57 (d, J = 5,5 Hz, 2H), 3,49 - 3,34 (m, 2H), 3,14 (s, 1H), 3,12 - 3,02 (m, 4H), 2,86 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 2,69 - 2,64 (m, 1H), 2,05 (s, 1H), 1,99 (s, 1H), 1,91 - 1,83 (m, 1H), 1,70 - 1,59 (m, 2H), 0,97 - 0,90 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 503,2.

Primer 26

Metil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil]-N-metil-karbamat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamata (Intermedijer BB) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Metil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil]-N-metil-karbamat (65 mg, Primer 26) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,29 - 7,49 (m, 5H), 5,63 - 5,92 (m, 2H), 5,03 - 5,17 (m, 2H), 3,43 - 3,69 (m, 8H), 3,13 - 3,27 (m, 3H), 2,96 - 3,05 (m, 2H), 2,72 (br. s., 1H), 1,05 (t, J = 7,40 Hz, 3H), 1,87 (dd, J = 14,12, 6,96 Hz, 2H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 519,2.

Primer 27

terc-butil N-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil]-N-metil-karbamat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem terc-butil- N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamata (Intermedijer BC) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). tercbutil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil]-N-metil-karbamat (32 mg, Primer 27) je dobijen kao beli prah.<1>H NMR (400MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,26 (m, 5H), 6,89 (br. s., 2H), 4,99 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 4,16 (s, 1H), 3,55 (br. s., 2H), 3,48 - 3,34 (m, 2H), 3,10 (s, 2H), 3,07 (s, 1H), 2,86 (d, J = 12,8 Hz, 2H), 2,74 (d, J = 9,5 Hz, 1H), 2,70 - 2,60 (m , 1H), 1,72 - 1,54 (m, 2H), 1,39 (s, 6H), 1,23 (s, 2H), 1,13 (s, 2H), 0,93 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 562.

Primer 28

Etil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil]-N-metil-karbamat

4

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem etil N-[2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil]-N-metil-karbamata (Intermedijer BD) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). Etil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil]-N-metil-karbamat (87 mg, Primer 28) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm: 7,29 - 7,53 (m, 5H), 5,65 - 5,90 (m, 2H), 5,02 - 5,14 (m, 2H), 3,38 - 4,21 (m, 9H), 3,14 - 3,26 (m, 3H), 3,00 (br. s., 2H), 2,73 (s, 1H), 1,76 - 1,99 (m, 2H), 1,22 - 1,31 (m, 3H), 1,05 (s, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 533,2.

Primer 29

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N-butil-N-metil-karbamat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N-butil-N-metil-karbamata (Intermedijer BE) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil N-butil-N-metil-karbamat (19 mg, Jedinjenje 29) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,25 - 7,48 (m, 5H), 6,96 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,06 - 4,36 (m, 3H), 3,59 - 3,83 (m, 1H), 3,33 - 3,49 (m, 3H), 3,07 - 3,21 (m, 4H), 2,79 (s, 2H), 1,65 (br. s., 2H), 1,05 - 1,47 (m, 6H), 0,93 (t, J = 7,40 Hz, 3H), 0,70 - 0,87 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 561,2.

Primer 30

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etilpirolidin-1-karboksilat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 2-[hlorkarbonil)(metil)amino]etil pirolidin-1-karboksilata (Intermedijer BF) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil pirolidin-1-karboksilat (10,0 mg, Primer 30) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,26 - 7,41 (m, 5H), 6,96 (br.s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,01 - 4,35 (m, 4H), 3,29 - 3,47 (m, 3H), 3,23 (br. s., 3H), 3,03 - 3,17 (m, 4H), 1,52 - 1,84 (m, 6H), 0,90 - 0,96 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 545,2.

Primer 31

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N-metil-N-propil-karbamat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 2-[hlorkarbonil(metil)amino]etil N-metil-N-propil-karbamata (Intermedijer BG) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino] etil N-metil-N-propil-karbamat (3,7 mg, Primer 31) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ ppm: 7,22 - 7,48 (m, 5H), 5,09 - 5,22 (b, 4H), 4,55 (s, 2H), 3,38 - 3,57 (m, 4H), 3,13 (s, 3H), 1,61 - 1,85 (m, 4H), 1,22 - 1,41 (m, 3H), 0,88 - 1,13 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 547,2.

Primer 32

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N,N-dietilkarbamat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 2-[hlorkarbonil(metil) amino]etil N,N-dietilkarbamat (Intermedijer BH) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil N,N-dietilkarbamat (21,7 mg, Primer 32) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,25 -7,41 (m, 5H), 6,96 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,08 - 4,36 (m, 3H), 3,70 (br, 1H), 3,33 - 3,46 (m, 3H), 3,01 - 3,24 (m, 7H), 1,55 - 1,74 (m, 2H), 0,86 - 1,05 (m, 9H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 547,2.

Primer 33

2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil etil karbamat

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 2-[hlorkarbonil(metil)amino)etil etil karbonata (Intermedijer BI) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil etil karbonat (46 mg, Primer 33) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 0,82 - 0,99 (m, 3H), 1,02 - 1,28 (m, 3H), 1,56 - 1,76 (m, 2H), 3,05 - 3,18 (m, 3H), 3,35 - 3,48 (m, 3H), 3,73 (t, J = 5,08 Hz, 2H), 4,08 - 4,27 (m, 3H), 4,37 (br. s., 1H), 5,00 (s, 2H), 6,76 - 7,11 (m, 2H), 7,22 - 7,45 (m, 5H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 520.

Primer 34-A i Primer 34-B

6-amino-N-butil-9-[(4-hlorfenil)inetil]-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]purin-7-karboksamid i 6-amino-N-butil-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]purin-7-karboksamid

Korak 1: Priprema 4-amino-3-[(4-hlorfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 34a)

Jedinjenje 34a je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 1, upotrebom 4-hlorbenzil izocijanata umesto benzil izocijanata.4-amino-3-[(4-hlorfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitril (8,0 g, Jedinjenje 34a) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 249.

Korak 2: Priprema 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34b)

Jedinjenje 34b je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 2, korišćenjem 4-amino-3-[(4-hlorfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 34a) umesto 4-amino-3-fenilmetil-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 1a). 6amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-on (6,4 g, Jedinjenje 34b) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca i upotrebljen je za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 308.

Korak 3: Priprema 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34c)

Jedinjenje 34c je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 3, korišćenjem 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34b) umesto 6-amino-9-fenilmetil-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1b). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-propilsulfanil-7H-purin-8-on (800 mg, Jedinjenje 34c) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 350.

Korak 4: Priprema 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-propilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34d)

Jedinjenje 34d je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 4, korišćenjem 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34c) umesto 6-amino-9-benzil-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-propilsulfinil-7H-purin-8-on (150 mg, Jedinjenje 34d) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 366.

Korak 5: Priprema 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (jedinjenje 34e), 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-on i 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)-propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-on (Jedinjenje 34e-A i Jedinjenje 34e-B)

Jedinjenje 34e je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 5, korišćenjem 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34d) umesto 6-amino-9-benzil-2-(2-propilsulfinil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-on (250 mg, jedinjenje 34e) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,60 (br. s, 1H), 7,32-7,42 (m, 4H), 6,98 (br. s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,25-3,41 (m, 2H), 1,56-1,68 (m, 2H), 0,91 (t, J = 8 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 381.

Razdvajanje jedinjenja Jedinjenje 34e hiralnom HPLC dalo je Jedinjenje 34e-A (brže eluiranje, 110 mg) i Jedinjenje 34e-B (sporije eluiranje, 100 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/C02na koloni ChiralPak OJ-3.

Jedinjenje 34e-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,63 (br. s, 1H), 7,33-7,42 (m, 4H), 6,99 (br. s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,05 (br. s, 1H), 3,26-3,39 (m, 2H), 1,53-1,69 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 381.

Jedinjenje 34e-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,63 (br. s, 1H), 7,33-7,42 (m, 4H), 6,99 (br. s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,05 (br. s, 1H), 3,26-3,40 (m, 2H), 1,54-1,69 (m, 2H), 0,91 (t, J = 7,5 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 381.

1

Korak 6: 6-amino-N-butil-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]purin-7-karboksamid i 6-amino-N-butil-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]purin-7-karboksamid (Primer 34-A i Primer 34-B)

Primer 34-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 34e-A i N-butil-N-metil-karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA).

Primer 34-A (160 mg):<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,37-7,45 (m, 4H), 6,91 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,17 (s, 1H), 3,28-3,40 (m, 4H), 3,05 (s, 2H), 3,02 (s, 1H), 1,49-1,70 (m, 4H), 1,15-1,37 (m, 2H), 0,89-0,94 (m, 5H), 0,76 (t, J = 8 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 494.

Primer 34-B (167 mg) je pripremljen analogno Primeru 34-A korišćenjem Jedinjenja 34e-B umesto Jedinjenja 34e-A.

Primer 34-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,36-7,45 (m, 4H), 6,91 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,17 (s, 1H), 3,28-3,41 (m, 4H), 3,05 (s, 2H), 3,02 (s, 1H), 1,50-1,71 (m, 4H), 1,15-1,37 (m, 2H), 0,89-0,94 (m, 5H), 0,76 (t, J = 7,4 Hz, 1H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 494.

Primer 35

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid

2

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34e) i N-etil-N-metil-karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid (60 mg, Primer 35) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,40 (s, 4H), 6,91 (br s, 2H), 4,99 (s, 2H), 4,16 (s, 1H), 3,34-3,44 (m, 4H), 3,05 (s, 2H), 3,01 (s, 1H), 1,58-1,67 (m, 2H), 1,18 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 0,92 (t, J = 8,0 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 466.

Primer 36-A i Primer 36-B

6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid i 6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid

Korak 1: Priprema 6-hlor-5-nitro-2-propilsulfanil-N-(p-tolimetil)pirimidin-4-amina (Jedinjenje 36a)

Jedinjenje 36a je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 1, upotrebom p-tolilmetilamina umesto fenilmetanamina. 6-hlor-5-nitro-2-propilsulfanil-N-(ptolilmetil)pirimidin-4-amin (3,9 g, Jedinjenje 36a) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 353.

Korak 2: Priprema 6-hlor-2-propilsulfanil-N4-(p-tolilmetil)pirimidin-4,5-diamina (Jedinjenje 36b)

Jedinjenje 36b je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 2, korišćenjem 6-hlor-5-nitro-2-propilsulfanil-N-(p-tolilmetil)pirimidin-4-amina (Jedinjenje 36a) umesto N-benzil-6-hlor-5-nitro-2-propilsulfanil-pirimidin-4-amina(Jedinjenje 1f). 6-hlor-2-propilsulfanil-N4-(p-tolilmetil)pirimidin-4,5-diamin (2,2 g, Jedinjenje 36b) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 323.

Korak 3: Priprema 6-hlor-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36c)

Jedinjenje 36c je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 3,

4

korišćenjem 6-hlor-2-propilsulfanil-N4-(p-tolilmetil)pirimidin-4,5-diamina (Jedinjenje 36b) umesto N-benzil-6-hlor-2-(propilsulfanil)pirimidin-4,5-diamina (Jedinjenje 1g). 6-hlor-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on (2,2 g, Jedinjenje 36c) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 349.

Korak 4: Priprema 6-[(4-metoksifenil)metilamino]-2-propilsulfanil-9-(ptolilinetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36d)

Jedinjenje 36d je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 4, korišćenjem 6-hlor-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36c) umesto 9-benzil-6-hlor-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1h). 6-[(4-metoksifenil)metilamino]-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on (2,0 g, Jedinjenje 36d) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 450.

Korak 5: Priprema 6-amino-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36e)

Jedinjenje 36e je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 5, korišćenjem 6-[(4-metoksifenil)metilamino]-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36d) umesto 6-amino-9-benzil-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1i).

6-amino-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on (1,0 g, Jedinjenje 36e) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 330.

Korak 6: Priprema 6-amino-2-propilsulfinil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36f)

Jedinjenje 36f je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 6, korišćenjem 6-amino-2-propilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36e) umesto 6-amino-9-benzil-2-(2-propilsulfanil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c). 6-amino-2-propilsulfinil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on (220 mg, Jedinjenje 36f) je dobijen kao bela čvrsta supstanca MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 345.

Korak 7: Priprema 6-amino-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36g)

Jedinjenje 36g je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 7, korišćenjem 6-amino-2-propilsulfinil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36f) umesto 6-amino-9-benzil-2-propilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d). 6-amino-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on (127 mg, Jedinjenje 36g) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,67 (br. s., 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,98 (br. s., 2H), 4,91 (s, 2H), 4,05 (s, 1H), 3,34-3,27 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,67-1,62 (m, 2H), 0,92 (t, J = 8,0 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 361.

Razdvajanje Jedinjenja 36g hiralnom HPLC dalo je Jedinjenje 36g-A (brže eluiranje, 50 mg) i Jedinjenje 36g-B (sporije eluiranje, 49 mg) kao belu čvrstu supstancu sa 30% izopropanolom (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3.

Jedinjenje 36g-A:<1>H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,51 (s, 1 H), 7,22 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,12 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,00 (s, 2 H), 4,91 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,35 - 3,31 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,70 - 1,58 (m, 2H), 0,93 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 361.

Jedinjenje 36g-B:<1>H NMR: (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,54 (s, 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,97 (s, 2H), 4,91 (s, 2H), 4,04 (s, 1H), 3,34 - 3,30 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,72 - 1,57 (m, 2H), 0,93 (t, J = 7,40 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 361.

Korak 8: Priprema 6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamida i 6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamida (Primer 36-A i Primer 36-B)

Primer 36-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 36g-A umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). Primer 36-A (108 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8 Hz, 2H), 6,87 (br. s., 2H), 4,95 (s, 2H), 4,15 (s, 1H), 3,33-3,57 (m, 4H), 3,05 (s, 2H), 3,02 (s, 1H), 2,26 (s, 3H), 1,52-1,73 (m, 4H), 0,75 - 0,97 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 460.

Primer 36-B je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 36g-B umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). Primer 36-B (125 mg):<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,27 (d, J = 8 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 8 Hz, 2H), 6,87 (br. s., 2H), 4,95 (s, 2H), 4,15 (s, 1H), 3,33-3,57 (m, 4H), 3,05 (s, 2H), 3,02 (s, 1H), 2,26 (s, 3H), 1,52-1,73 (m, 4H), 0,75-0,97 (m, 5H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 460.

Primer 37-A i Primer 37-B

6-amino-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on i 6-amino-2-[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on

Primer 37-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 36g-A i pirolidin-1-karbonil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA).

Primer 37-A (390 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,31 - 7,11 (m, 4H), 7,04 (s, 2H), 4,95 (s, 2H), 4,15 (s, 1H), 3,65 - 3,47 (m, 4H), 3,37 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,97 - 1,81 (m, 4H), 1,71 - 1,59 (m, 2H), 0,94 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 458,2.

Primer 37-B (125 mg) je pripremljen analogno Primeru 37-A korišćenjem Jedinjenja 36g-B umesto Jedinjenja 36g-A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,28 -7,14 (m, 4H), 7,04 (s, 2H), 4,95 (s, 2H), 4,15 (s, 1H), 3,65 - 3,47 (m, 4H), 3,37 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,93 - 1,84 (m, 4H), 1,65 - 1,60 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 458,3.

Primer 38-A i Primer 38-B

6-amino-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid i 6-amino-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid

Primer 38-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 36g-A i N-(2-metoksietil)-N-metil-karbamoil hlorida (Intermedijer AB) umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propilkarbamoil hlorida (Intermedijer AA).

Primer 38-A (57,8 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,26 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,89 - 6,78 (m, 2H), 4,95 (s, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,62 -3,58 (m, 2H), 3,43 - 3,37 (m, 2H), 3,30 - 3,10 (m, 3H), 3,09 -3,08 (m, 3H), 3,08 - 3,05 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,77 - 1,54 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 476,3.

Primer 38-B (46,6 mg) je pripremljen analogno Primeru 38-A korišćenjem Jedinjenja 36g-B umesto Jedinjenja 36g-A.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,26 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 7,14 (d, J = 7,6 Hz, 2H), 6,89 - 6,78 (m, 2H), 4,95 (s, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,62 -3,58 (m, 2H), 3,43 - 3,37 (m, 2H), 3,30 - 3,10 (m, 3H), 3,09 - 3,08 (m, 3H), 3,08 - 3,05 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,77 - 1,54 (m, 2H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 476,3.

Primer 39

6-amino-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem N-etil-N-metil-karbamoil-hlorida i 6-amino-2-(propilsulfonimidoil)-9-(ptolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36g) umesto N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA) i 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). 6-amino-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (141,8 mg, Primer 39) je dobijen kao svetložuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,26 (d, J= 7,9 Hz, 2H), 7,15 (d, J= 7,9 Hz, 2H), 6,89 (s, 2H), 4,95 (s, 2H), 4,24 - 4,07 (m, 1H), 3,52 - 3,35 (m, 4H), 3,10 - 2,95 (m, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,77 - 1,55 (m, 2H), 1,24 - 1,10 (m, 3H), 0,95 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 446,1.

Primer 40

6-amino-N-butil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid

Naslovno jedinjenje je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 6-amino-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 36g) i N-butil-N-metil-karbamoil-hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-N-butil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (32 mg, Primer 40) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,28 - 7,14 (m, 4H), 6,88 (s, 2H), 4,95 (s, 2H), 4,16 (s, 1H), 3,41 - 3,36 (m, 2H), 3,10 -2,99 (m, 3H), 2,53 - 2,51 (m, 2H), 2,27 (s, 3H), 1,71 - 1,63 (m, 2H), 1,62 - 1,51 (m, 2H), 1,42 - 1,26 (m, 2H), 0,97 - 0,74 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 474,3

Primer 41-A i Primer 41-B

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid (Primer 41-A) i 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (Primer 41-B)

Korak 1: Priprema 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-etilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 41a)

Jedinjenje 41a je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 3, korišćenjem jodetana i 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 34b) umesto brompropana i 6-amino-9-fenilmetil-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1b).

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-etilsulfanil-7H-purin-8-on (2,5 g, Jedinjenje 41a) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 336.

Korak 2: Priprema 6-amino-9-(4-hlorbenzil)-2-etilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 41b)

Jedinjenje 41b je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 4, korišćenjem 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-etilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 41a) umesto 6-amino-9-benzil-2-propilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c). 6-amino-9-(4-hlorbenzil)-2-etilsulfinil-7H-purin-8-on (1,94 g, Jedinjenje 41b) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 352.

Korak 3: Priprema 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 41c)

Jedinjenje 41c je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 5, korišćenjem 6-amino-9-(4-hlorbenzil)-2-etilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 41b) umesto 6-amino-9-benzil-2-(2-metilsulfinil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d). 6-amino-9-[(4-

1

hlorfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-7H-purin-8-on (217 mg, Primer 41c) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,61 (s, 1H), 7,42 - 7,35 (m, 4H), 6,98 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,05 (s, 1H), 3,42 - 3,37 (m, 2H), 1,16 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 367,0.

Razdvajanje jedinjenja iz Jedinjenja 41c hiralnom HPLC dalo je Jedinjenje 41c-A (brže eluiranje, 31,8 mg) i Jedinjenje 41c-B (sporije eluiranje, 10 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak IC-3.

Jedinjenje 41c-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,76 (s, 1H), 7,45 - 7,33 (m, 4H), 7,01 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,40 - 3,34 (m, 2H), 1,17 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 367,0.

Jedinjenje 41c-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,70 (s, 1H), 7,46 -7,28 (m, 4H), 7,01 (s, 2H), 4,96 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,44 - 3,36 (m, 2H), 1,17 (t, J= 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 367,0.

Korak 4: 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (Primer 41-A) i 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (Primer 41-B)

2

Primer 41-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 41c-B umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (Primer 41-A, 78 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,41 (m, 4H), 6,90 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,46-3,39 (m, 2H), 3,39 - 3,38 (m, 2H), 3,09-2,99 (m, 3H), 1,69 - 1,52 (m, 2H), 1,19 (t, J = 7,28 Hz, 3H), 0,95 - 0,66 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 466,1.

Primer 41-B (125 mg) je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 41c-A umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (Primer 41-B, 38 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,41 (m, 4H), 6,90 (s, 2H), 5,00 (s, 2H), 4,20 (s, 1H), 3,46 - 3,41 (m, 2H), 3,40 - 3,39 (m, 2H), 3,10 - 3,00 (m, 3H), 1,69 - 1,50 (m, 2H), 1,24 - 1,12 (m, 3H), 0,93 - 0,73 (m, 3H). (MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 466,2.

Stereohemija Primera 41-B je određena rendgenskom difrakcijom na monokristalu, što je prikazano na Slici 1.

Primer 42-A i Primer 42-B

6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid (Primer 42-A) i 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (Primer 42-B)

Primer 42-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 41c-A i N-etil-N-metil-karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (Primer 42-A, 40 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,41 (m, 4H), 6,90 (s, 2H), 4,99 (s, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,48 - 3,40 (m, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,05 - 3,01 (m, 3H), 1,20 - 1,14 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 452,2.

Primer 42-B je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 41c-B i N-etil-N-metil-karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (Primer 42-B, 38 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,43 - 7,41 (m, 4H), 6,91 (s, 2H), 4,98 (s, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,48 - 3,40 (m, 2H), 3,39 (s, 2H), 3,09 - 2,97 (m, 3H), 1,23 - 1,11 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 452,2.

Stereohemija Primera 42-A je određena rendgenskom difrakcijom na monokristalu, što je prikazano na Slici 2.

Primer 43-A i Primer 43-B

6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 43-A) i 6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 43-B)

4

Korak 1: Priprema 4-amino-2-okso-3-(p-tolilmetil)-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 43a)

Jedinjenje 43a je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 1, upotrebom 4-metilbenzil izocijanata umesto benzil izocijanata. 4-amino-2-okso-3-(ptolilmetil)-1H-imidazol-5-karbonitril (26,6 g, Jedinjenje 43a) je dobijen kao siva čvrsta supstanca i koristi se direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 229,2.

Korak 2: Priprema 6-amino-9-(p-tolilmetil)-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 43b)

Jedinjenje 43b je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 2, korišćenjem 4-amino-2-okso-3-(p-tolilmetil)-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 43a) umesto 4-amino-3-benzil-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 1a). 6-amino-9-(ptolilmetil)-2-sulfanil-7H-purin-8-on (20,0 g, Jedinjenje 43b) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 288.

Korak 3: Priprema 6-amino-2-etilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 43c)

Jedinjenje 43c je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 3 korišćenjem 6-amino-9-(p-tolilmetil)-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 43b) i jodetana umesto 6-amino-9-benzil-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1b) i brompropana. 6-amino-2-etilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on (13 g, Jedinjenje 43c) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 316.

Korak 4: Priprema 6-amino-2-etilsulfinil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 43d)

Jedinjenje 43d je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 4, korišćenjem 6-amino-2-etilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 43c) umesto 6-amino-9-benzil-2-metilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c). 6-amino-2-etilsulfinil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on6 (3,5 g, Jedinjenje 43d) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 332.

Korak 5: Priprema 6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 43e)

Jedinjenje 43e je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 5, korišćenjem 6-amino-2-etilsulfanil-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 43d) umesto 6-amino-9-benzil-2-metilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d). 6-amino-2(etilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)-7H-purin-8-on (530 mg, Jedinjenje 43e) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,53 (s, 1H), 7,24 (d, J = 8,03 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,03 Hz, 2H), 6,94 (br. s., 2H), 4,91 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,36 - 3,41 (m, 2H), 2,26 (s, 3H), 1,18 (t, J = 7,28 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 347.

Razdvajanje jedinjenja iz Jedinjenja 43e hiralnom HPLC dalo je Jedinjenje 43e-A (brže eluiranje, 56,8 mg) i Jedinjenje 43e-B (sporije eluiranje, 56,7 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3.

Jedinjenje 43e-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,52 (br. s., 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,94 (br. s., 2H), 4,90 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,42 -3,33 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,17 (t, J = 7,3 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 347.

Jedinjenje 43e-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,56 (br. s., 1H), 7,23 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,13 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,95 (br. s., 2H), 4,90 (s, 2H), 4,03 (s, 1H), 3,44 -3,29 (m, 2H), 2,25 (s, 3H), 1,17 (t, J = 7,3 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 347.

Korak 6: Priprema 6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 43-A) i 6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 43-B)

Primer 43-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 43e-A umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). 6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 43-A, 58,1 mg, brže eluiranje, izopropanol od 5% do 40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,28 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 6,88 (br. s., 2H), 5,03 - 4,87 (m, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,61 - 3,36 (m, 4H), 3,11-2,96 (m, 3H), 2,26 (s, 3H), 1,72 - 1,45 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,97 - 0,65 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 446.

Primer 43-B je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 43e-B umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). 6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 43-B, 40,1 mg, sporije eluiranje, izopropanol od 5% do 40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3) je dobijen kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,28 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,5 Hz, 2H), 6,89 (br. s., 2H), 5,03 - 4,86 (m, 2H), 4,19 (s, 1H), 3,49 - 3,37 (m, 4H), 3,08 - 3,00 (m, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,70 - 1,48 (m, 2H), 1,20 (t, J = 7,2 Hz, 3H), 0,95 - 0,71 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 446,3.

Stereohemija Primera 43-B je određena rendgenskom difrakcijom na monokristalu, što je prikazano na Slici 3.

Primer 44-A i Primer 44-B

6-amino-N-etil-2[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 44-A) i 6-amino-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 44-B)

Primer 44-A je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 43e-B i Netil-N-metil-karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-N-etil-2[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 44-A, 73,1 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,28 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,8 Hz, 2H), 6,90 (br. s., 2H), 4,95 (s, 2H), 4,19 (br. s., 1H), 3,48 - 3,39 (m, 4H), 3,06 - 3,00 (m, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,29 - 1,04 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 432.

Primer 44-B je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem Jedinjenja 43e-A i N-etil-N-metil-karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-N-etil-2 -[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid (Primer 44-B, 46,7 mg) je dobijen kao bela čvrsta supstanca:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,28 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 7,15 (d, J = 7,9 Hz, 2H), 6,90 (br. s., 2H), 4,95 (s, 2H), 4,19 (br. s., 1H), 3,50 - 3,39 (m, 4H), 3,10 - 2,96 (m, 3H), 2,27 (s, 3H), 1,27 - 1,10 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 432.

Primer 45-A i Primer 45-B

6-amino-2-[S(R)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid i 6-amino-2-[S(S)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid

Korak 1: Priprema 4-amino-3-[(4-fluorfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 45a)

Jedinjenje 45a je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 1, upotrebom 4-fluorbenzil izocijanata umesto benzil izocijanata. 4-amino-3-[(4-fluorfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitril (48 g, Jedinjenje 45a) je dobijen kao svetložuta čvrsta supstanca i koristi se direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 233.

Korak 2: Priprema 6-amino-9-[(4-fluorfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45b)

Jedinjenje 45b je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 2, korišćenjem 4-amino-3-[(4-fluorfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 45a) umesto 4-amino-3-fenilmetil-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 1a). 6-amino-9-[(4-fluorfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-on (32,0 g, Jedinjenje 45b) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 292.

Korak 3: Priprema 6-amino-2-etilsulfanil-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45c)

Jedinjenje 45c je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 3, korišćenjem 6-amino-9-[(4-fluorfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45b) i jodetana umesto 6-amino-9-benzil-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1b) i brompropana.

6-amino-2-etilsulfanil-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-on (5,6 g, Jedinjenje 45c) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 320.

Korak 5: Priprema 6-amino-2-etilsulfinil-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45d)

1

Jedinjenje 45d je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 4, korišćenjem 6-amino-2-etilsulfanil-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45c) umesto 6-amino-9-benzil-2-metilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c). 6-amino-2-etilsulfinil-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-on (4,8 g, Jedinjenje 45d) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 332.

Korak 6: Priprema 6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45e)

Jedinjenje 45e je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 5, korišćenjem 6-amino-2-etilsulfanil-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45d) umesto 6-amino-9-benzil-2-metilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d). 6-amino-2-etilsulfonimidoil-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-on (2,9 g, Jedinjenje 45e) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,57 (br. s., 1H), 7,40 (dd, J = 8,5, 5,5 Hz, 2H), 7,16 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 6,97 (br. s., 2H), 4,94 (s, 2H), 4,07 (s, 1H), 3,43 -3,36 (m, 2H), 1,17 (t, J = 7,4 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 351.

Razdvajanje jedinjenja iz Jedinjenja 45e hiralnom HPLC dalo je Jedinjenje 45e-A (brže eluiranje, 85,4 mg) i Jedinjenje 45e-B (sporije eluiranje, 36,4 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3.

Jedinjenje 45e-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,53 (br. s., 1H), 7,41 (dd, 7= 8,5, 5,5 Hz, 2H), 7,17 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 6,98 (br. s., 2H), 4,95 (s, 2H), 4,07 (s, 1H), 3,45 - 3,36 (m, 2H), 1,17 (t, J = 7,3 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 351.

Jedinjenje 45e-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,53 (br. s., 1H), 7,41 (dd, J = 8,5, 5,5 Hz, 2H), 7,17 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 6,98 (br. s., 2H), 4,95 (s, 2H), 4,07 (s, 1H),

1 1

3,44 - 3,37 (m, 2H) 1,17 (t, J = 7,3 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 351.

Korak 7: Priprema 6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorofenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamida (Primer 45), 6-amino-2-[S(R)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid i 6-amino-2-[S(S)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (Primer 45-A i Primer 45-B).

(Primer 45-A i primer 45-B)

Primer 45 je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45e) umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). 6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (162,4 mg, Primer 45) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.

Razdvajanje jedinjenja iz Primera 45 hiralnom HPLC dalo je Primer 45-A (brže eluiranje, 85,3 mg) i Primer 45-B (sporije eluiranje, 52 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3

Primer 45-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,53 - 7,38 (m, 2H), 7,18 (t, J = 8,9 Hz, 2H), 6,90 (br. s., 2H), 4,99 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 3,48 - 3,37 (m, 4H), 3,10 - 3,01 (m, 3H), 1,69 - 1,49 (m, 2H), 1,25 - 1,14 (m, 3H), 0,94 - 0,72 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 450.

Primer 45-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,54 - 7,38 (m, 2H), 7,18 (t, J =

1 2

8,9 Hz, 2H), 7,01 - 6,72 (m, 2H), 4,99 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 3,46 - 3,38 (m, 4H), 3,10 - 3,01 (m, 3H), 1,76 - 1,50 (m, 2H), 1,25 - 1,16 (m, 3H), 0,99 - 0,69 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 450.

Primer 46-A i Primer 46-B

6-amino-N-etil-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (Primer 46), 6-amino-N-etil-2-[S(S)-(etilsulfonimidoil)]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid i 6-amino-N-etil-2-[S(R)-(etilsulfonimidoil)]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (Primer 46-A i Primer 46-B).

(Primer 46-A i primer 46-B)

Primer 46 je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-7H-purin-8-on (Jedinjenje 45e) i N-etil-N-metil karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-N-etil-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (51 mg, Primer 46) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,46 - 7,43 (m, 2H), 7,20-7,15 (m, 2H), 6,90 (br. s., 2H), 4,98 (s, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,47 -3,32 (m, 4H), 3,05 - 3,01 (m, 3H), 1,21 - 1,14 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 436.

Razdvajanje jedinjenja iz Primera 46 hiralnom HPLC dalo je Primer 46-A (brže eluiranje, 72 mg) i Primer 46-B (sporije eluiranje, 45 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3

1

Primer 46-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,46 - 7,43 (m, 2H), 7,20-7,16 (m, 2H), 6,90 (br. s., 2H), 4,98 (s, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,47 - 3,32 (m, 4H), 3,05 - 3,01 (m, 3H), 1,21 - 1,14 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 436.

Primer 46-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,46 - 7,43 (m, 2H), 7,20-7,14 (m, 2H), 6,92 (br. s., 2H), 4,98 (s, 2H), 4,20 (br. s., 1H), 3,47 - 3,32 (m, 4H), 3,05 - 3,01 (m, 3H), 1,23 - 1,19 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 436.

Primer 47-A i Primer 47-B

6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid (Primer 47), 6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-9-[(4-bromfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid i 6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-9-[(4-bromfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid

(Primer 47-A i primer 47-B)

Korak 1: Priprema 4-amino-3-[(4-bromfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 47a)

1 4

Jedinjenje 47a je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 1, upotrebom 4-brombenzil izocijanata umesto benzil izocijanata. 4-amino-3-[(4-bromfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitril (500 mg, Jedinjenje 47a) je dobijen kao svetložuta čvrsta supstanca i koristi se direktno u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 9,94 (S, 1H), 7,55-7,53 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,20-7,18 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,52 (br. s., 2H), 4,74 (s, 2H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 293.

Korak 2: Priprema 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47b)

Jedinjenje 47b je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 2, korišćenjem 4-amino-3-[(4-bromfenil)metil]-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 47a) umesto 4-amino-3-fenilmetil-2-okso-1H-imidazol-5-karbonitrila (Jedinjenje 1a). 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-on (300 mg, Jedinjenje 47b) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 352.

Korak 3: Priprema 6-amino-2-etilsulfanil-9-[(4-bromfenil)metil]-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47c)

Jedinjenje 47c je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak A, korak 3, korišćenjem 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 45b) i jodetana umesto 6-amino-9-benzil-2-sulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1b) i brompropana.

6-amino-2-etilsulfanil-9-[(4-bromfenil)metil]-7H-purin-8-on (5,6 g, Jedinjenje 47c) je dobijen kao žuta čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 380.

Korak 4: Priprema 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-etilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47d)

1

Jedinjenje 47d je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 6, korišćenjem 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-etilsulfanil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47c) umesto 6-amino-9-benzil-2-(2-propilsulfanil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1c). 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-etilsulfinil-7H-purin-8-on (3,2 g, Jedinjenje 47d) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 396.

Korak 5: Priprema 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47e)

Jedinjenje 47e je pripremljeno analogno Primeru 1, postupak B, korak 7, korišćenjem 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-etilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47d) umesto 6-amino-9-benzil-2-metilsulfinil-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1d). 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-7H-purin-8-on (4,0 g, Jedinjenje 47e) je dobijen kao bela čvrsta supstanca. MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 411.

Jedinjenje 47e-A i Jedinjenje 47e-B

Razdvajanje jedinjenja iz Jedinjenja 47e hiralnom HPLC dalo je Jedinjenje 47e-A (brže eluiranje, 112 mg) i Jedinjenje 47e-B (sporije eluiranje, 99 mg) kao belu čvrstu

1

supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3. Jedinjenje 47e-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,58 (br. s., 1H), 7,52-7,54 (d, J = 8,0, 2H), 7,31-7,29 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 6,54 (br. s., 2H), 4,93 (s, 2H), 4,05 (s, 1H), 3,42 - 3,31 (m, 2H), 1,15 (t, J = 7,3 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 411.

Jedinjenje 47e-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 10,58 (br. s., 1H), 7,54-7,52 (d, J = 8,0, 2H), 7,31-7,29 (t, J = 8,0 Hz, 2H), 6,98 (br. s., 2H), 4,93 (s, 2H), 4,06 (s, 1H), 3,40 - 3,37 (m, 2H), 1,15 (t, J = 7,3 Hz, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 411.

Korak 6: Priprema 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamida (Primer 47), 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamida i 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamida (Primer 47-A i Primer 47-B).

(Primer 47-A i primer 47-B)

Primer 47 je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47e) umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e). 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (570 mg, Primer 47) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,56 - 7,53 (m, 2H), 7,36-7,34 (m, 2H), 6,92 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 4,18 (s, 1H), 3,45 -3,38 (m, 4H), 3,05 - 3,02 (m, 3H), 1,65-1,56 (m, 2H), 1,19 (t, J = 8,0 Hz, 3H), 0,93-0,75 (m,

1

3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 510.

Razdvajanje jedinjenja iz Primera 47 hiralnom HPLC dalo je Primer 47-A (brže eluiranje, 260 mg) i Primer 47-B (sporije eluiranje, 266 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3

Primer 47-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,56 - 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,36-7,33 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,90 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 3,46 - 3,41 (m, 4H), 3,05 - 3,02 (m, 3H),1,65-1,54 (m, 2H), 1,24-1,16 (m, 3H), 0,93-0,75 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 510.

Primer 47-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,54 - 7,53 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,36-7,33 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,90 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 4,21 (s, 1H), 3,46 - 3,41 (m, 4H), 3,06 - 3,02 (m, 3H), 1,65-1,54 (m, 2H), 1,20-1,16 (m, 3H), 0,93-0,75 (m, 3H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 510.

Primer 48-A i Primer 48-B

6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (Primer 48), 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-[S(S)-(etilsulfonimidoil)]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid i 6-amino-9-[(4-bromofenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-(etilsulfonimidoil)]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid (Primer 48-A i Primer 48-B).

(Primer 48-A i primer 48-B)

Primer 48 je pripremljen analogno Primeru 1, postupak A, korak 6, korišćenjem 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 47e) i N-etil-

1

N-metil karbamoil hlorida umesto 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7H-purin-8-ona (Jedinjenje 1e) i N-metil-N-propil-karbamoil hlorida (Intermedijer AA). 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid (469 mg, Primer 48) je dobijen kao bela čvrsta supstanca.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,56 - 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,36-7,34 (d, 7= 8,0 Hz, 2H), 6,98 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 3,53 - 3,46 (m, 4H), 3,05 - 3,01 (m, 3H), 1,22-1,16 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 496.

Razdvajanje jedinjenja iz Primera 48 hiralnom HPLC dalo je Primer 48-A (brže eluiranje, 198 mg) i Primer 48-B (sporije eluiranje, 202 mg) kao belu čvrstu supstancu sa metanolom 5%-40% (0,05%DEA)/CO2na koloni ChiralPak AD-3.

Primer 48-A:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,56 - 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,36-7,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,92 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 4,19 - 4,18 (m, 1H), 3,46 - 3,41 (m, 4H), 3,05 - 3,01 (m, 3H), 1,20-1,14 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 496.

Primer 48-B:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm: 7,56 - 7,54 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 7,36-7,34 (d, J = 8,0 Hz, 2H), 6,92 (br. s., 2H), 4,97 (s, 2H), 4,24 (br. s., 1H), 3,58 - 3,41 (m, 4H), 3,05 - 3,01 (m, 3H), 1,26-1,01 (m, 6H). MS izm. (ESI<+>) [(M+H)<+>]: 496.

Primer 49

Aktivnost Jedinjenja i Primera u testu HEK293-hTLR-7

Test za ćelije HEK293-Blue-hTLR-7:

Stabilna ćelijska linija HEK293-Blue-hTLR-7 kupljena je od kompanije „InvivoGen“ (kat. br: hkb-htlr7, San Diego, California, SAD). Ove ćelije su projektovana za ispitivanje stimulacije humanih receptora TLR7 praćenjem aktivacije NF-κB. SEAP (sekretovana embrionalna alkalna fosfataza) reporterski gen je stavljen pod kontrolu IFN-β minimalnog promotera sjedinjenog sa pet NF-κB i AP-1 mesta vezivanja. SEAP je indukovan aktiviranjem NF-κB i AP-1 putem stimulacije ćelija HEK-Blue hTLR7 ligandima TLR7. Stoga je ekspresija reportera regulisana NF-κB promoterom nakon stimulacije humanog TLR7 u trajanju od 20 sati. Aktivnost supernatanta reportera ćelijske kulture SEAP određena je upotrebom QUANTI-Blue™ kompleta (kat. br: rep-qb1, Invivogen, San Diego, Ca, SAD) pri talasnoj dužini od 640 nm, sredstvo za detekciju koje postaje ljubičasto ili plavo u prisustvu alkalne fosfataze.

HEK293-Blue-hTLR7 ćelije su inkubirane pri gustini od 250.000~450.000 ćelija/ml u zapremini od 180 µl na ploči sa 96 bunarčića u Dulbeko modifikaciji Iglovog medijuma (DMEM) koji sadrži 4,5 g/l glukoze, 50 U/ml penicilina, 50 mg/ml streptomicina, 100 mg/ml normocina, 2 mM L-glutamina, 10% (V/V) termički inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma, tokom 24 sata. Zatim su ćelije HEK293-Blue-hTLR-7 inkubirane sa dodatkom 20 µl

1

ispitivanog jedinjenja u serijskom razblaženju u prisustvu finalnog DMSO na 1%, i izvršena je inkubacija na 37°C u CO2inkubatoru tokom 20 sati. Zatim je 20 µl supernatanta iz svakog bunarčića inkubirano 2 sata sa 180 µl rastvora supstrata Quanti-blue na 37°C i očitana je apsorbanca na 620~655 nm koristeći spektrofotometar. Signalni put koji TLR7 aktivacija vodi do nishodne aktivacije NF-κB je opšte prihvaćen, i zbog toga je slična analiza reportera takođe široko korišćena i za procenu agonista TLR7 (Tsuneyasu Kaisho i Takashi Tanaka, Trends in Immunology, Volume 29, izdanje 7, juli 2008., strane 329.sci; Hiroaki Hemmi i sar. , Nature Immunology 3, 196 - 200 (2002)).

Jedinjenja i Primeri predmetnog pronalaska su testirani u testu HEK293-hTLR-7 na aktivnost njihovog agonizma prema TLR7 kako je ovde opisano, a rezultati su navedeni u Tabeli 1. Za Primere prolekova je utvrđeno da imaju EC50od oko 2,1 μM do oko 1000 μM, za Jedinjenja aktivnih oblika je utvrđeno da imaju EC50manje od 0,2 μM. Izračunati odnos EC50(prolek)/ EC50(aktivni oblik)je bio u rasponu od 32 do oko 7600.

Tabela 1. Aktivnost Primera i Jedinjenja predmetnog pronalaska u testu HEK293-hTLR-7

11

Primer 50

Metabolizam prolekova jedinjenja formule (I)

Sprovedena je studija za procenu metaboličke konverzije prolekova, jedinjenja formule (I), u njegov odgovarajući aktivni oblik. Jedinjenja formule (I), ako služe kao prolekovi, mogu se u telu metabolisati u aktivno jedinjenje ili druga jedinjenja pronalaska. Mikrozomi jetre čoveka se često koriste za procenu stepena metaboličke konverzije prolekova u telu životinje ili čoveka.

Materijali

NADPH sistem kofaktora koji uključuje β-nikotinamid adenin dinukleotid fosfat (NADP), izolimunsku kiselinu i izolimunsku dehidrogenazu kupljeni su od kompanije „Sigma-Aldrich (St. Louis, MO, SAD). Mikrozomi jetre čoveka (kat. br. 452117, serija br. 38290) dobijeni su od kompanije Corning (Woburn, MA, SAD). Mikrozomi jetre miša (kat. br. M1000, serija br.1310028) dobijeni su od kompanije Xenotech.

Radni rastvor jedinjenja i drugi rastvor

Jedinjenja su rastvorena u DMSO da bi se dobili osnovni rastvori od 10 mM. 10 µl osnovnog rastvora je razblaženo sa acetonitrilom (990 µl) da bi se dobilo 100 µM radnog rastvora.

Inkubacija

Mikrozomi su prethodno inkubirani testiranim jedinjenjem tokom 10 minuta na 37°C u 100 mM kalijum fosfatnog pufera vrednosti pH 7,4. Reakcije su započete dodavanjem sistema za regeneraciju NADPH da bi se dobila konačna zapremina inkubacije od 200 µl i mućkana u vodenoj kupki na 37°C. Smeše za inkubaciju se sastoje od mikrozoma jetre (0,5 mg mikrozomalnog proteina/ml), supstrata (1,0 µM) i NADP (1 mM), izolimunske dehidrogenaze (l jedinica/ml), izolimunske kiseline (6 mM).

Priprema uzoraka za analizu

11

Nakon 30 minuta reakcija je ugašena dodavanjem 600 µl hladnog acetonitrila (uključujući 100 ng/ml tolbutamida i 100 ng/ml labetalola kao interni standard). Uzorci su centrifugirani na 4000 o/min tokom 20 minuta, a dobijeni supernatanti su podvrgnuti LC-MS/MS analizi.

Uzorci za kalibracionu krivu su pripremljeni na sledeći način. Na ploču sa 96 bunarčića podelite 100 µl mikrozoma jetre po bunarčiću i 98 µl/bunarčiću rastvora NADPH sistema za regeneraciju. Prvo dodajte 600 µl rastvora za gašenje, a zatim 2 µl standardne krive i QC radnog rastvora.

Bioanaliza

Jedinjenja su kvantifikovana na API4000 LC-MC/MC instrumentu u ESI-pozitivnom MRM načinu.

Sprovedena je studija za procenu metaboličke konverzije prolekova (1µM), Primer 1, Primer 1-A, Primer 1-B, Primer 2, Primer 2-A, Primer 2-B, Primer 3, Primer 4, Primer 5, Primer 6, Primer 7, Primer 8, Primer 9, Primer 10, Primer 11, Primer 12, Primer 13, Primer 14, Primer 15, Primer 16, Primer 17, Primer 21, Primer 22, Primer 23, Primer 25, Primer 26 , Primer 27, Primer 28, Primer 29, Primer 30, Primer 31, Primer 32, Primer 33, Primer 34-A, Primer 34-B, Primer 36-A, Primer 36-B, Primer 37-A, Primer 37-B, Primer 38-A, Primer 38-B, Primer 39, Primer 40, Primer 41, Primer 41-A, Primer 41-B, Primer 42, Primer 42-A, Primer 42-B, Primer 43, Primer 43-A, Primer 43-B, Primer 44, Primer 44-A, Primer 44-BiPrimer 45-A, Primer 46-A, Primer 46-B, Primer 47-A, Primer 47-B, Primer 48-A, Primer 48 -B u odgovarajuće aktivne oblike, Jedinjenje 1e, Jedinjenje 1e-A, Jedinjenje 1e-B, Jedinjenje 34e-A, Jedinjenje 34e-B, Jedinjenje 36g-A, Jedinjenje 36g-B, Jedinjenje 36g, Jedinjenje 41c, Jedinjenje 41c-B, Jedinjenje 41c-A, Jedinjenje 43e, Jedinjenje 43e-A, Jedinjenje 43e-B, Jedinjenje 45e-A, Jedinjenje 45e-B, Jedinjenje 47e-A i Jedinjenje 47e-B u prisustvu mikrozoma jetre čoveka. Rezultati su sažeti i prikazani u Tabeli 2.

Tabela 2. Metabolička konverzija prolekova u mikrozomima jetre čoveka

11

Primer 51

In vivo antivirusna efikasnost Primera 43-A na AAV-HBV modelu miša

Životinjski model

Mužjaci C57BL/6 miševa starosti 4-6 nedelja, bez specifičnih patogena, kupljeni su od Šangajskog laboratorijskog centra za životinje Kineske akademije nauka (Shanghai Laboratory Animal Center of Chinese Academy of Sciences, SLAC) i smešteni u ustanovu za negu životinja u zasebno ventiliranim kavezima na kontrolisanoj temperaturi i svetlosti prema institucionalnim Smernicama za negu životinja. AAV-HBV virus je kupljen od Pekinškog instituta za molekularnu medicinu FivePlus (Beijing FivePlus Molecular Medicine Institute, Peking, Kina). Rekombinantni virus nosi 1,3 kopije genoma HBV koji je upakovan u AAV serotip 8 (AAV8) kapside. C57BL/6 miševima je injektovano 200 μl rekombinantnog virusa,

11

razblaženog u fiziološkom puferu, kroz repnu venu 14. dana, miševima je uzeta krv za merenje HBV površinskog antigena (HBsAg) i HBV genomske DNK u serumu, a životinje su zatim randomizirane u grupe prema tim HBV biomarkerima.

Merenje HBV biomarkera

HBsAg i HBeAg u serumu su izmereni pomoću CLIA kompleta (Autobio Diagnostics Co., Ltd, Zhengzhou, Kina) prema uputstvu proizvođača. Donja granica detekcije za HBsAg bila je 0,05 IU/ml. Razblaživanje seruma od 500 puta je korišćeno za dobijanje vrednosti u linearnom rasponu standardne krive.

DNK HBV iz seruma ekstrahovana je pomoću kompleta MagNA Pure 96 DNK i Viral NA Small Volume Kit (Roche) prema uputstvu proizvođača. Uzorci DNK su analizirani pomoću kvantitativnog PCR (qPCR) u stvarnom vremenu pomoću HBV-specifičnog prajmera i kompleta sondi za specifično pojačavanje i detekciju regiona genoma od 128bp HBV od nukleotida 2969 do 3096. Sekvence prajmera i sonde su sledeće:

Prednji prajmer:

Obrnuti prajmer:

HBV-sonda:

Anti-HBs u serumu su testirani upotrebom Anti-HBs CLIA kompleta (Autobio Diagnostics Co., Ltd., Zhengzhou, Kina) i mišjeg anti-IgG konjugovanog sa biotinom (0,5 mg/ml) iz Mabtech B Elispot kompleta. Anti-IgG biotin je razređen u PBS-u sa konačnom koncentracijom od 1 µg/ml. 25 µl mišjeg anti-IgG je pomešano sa uzorcima seruma u bunarčićima ploče u Anti-HBs CLIA kompletu za 1-satnu inkubaciju. Zatim isperite ploču i dodajte Streptavidin-HRP za 1-satnu inkubaciju na sobnoj temperaturi. Nakon ponavljanja koraka ispiranja, pomešajte supstrat A i B iz CLIA kompleta i dodajte 50 µl smeše u svaki bunarčić. Nakon 5-minutne inkubacije na sobnoj temperaturi, ploča je očitana na čitaču ploča Envision (PerkinElmer) za merenje luminiscencije.

Dizajn i rezultati studije

Mišji model sa visokim nivoom ekspresije DNK HBV i HBsAg generisan je injektovanjem C57BL/6 miševa rekombinantnim adeno-asociranim virusom (AAV) koji nosi HBV genom (AAV-HBV) koji može da se replikuje. Sa dugotrajnom HBV viremijom i potpuno kompetentnim imunim sistemom, model miša AAV-HBV je korišćen za procenu antivirusne efikasnosti TLR7 agonista prateći dizajn studije, kao što je prikazano u Tabeli 3.

Tabela 3. In vivo test efikasnosti Primera 43-A na AAV-HBV modelu miša

11

Konkretno, grupama 2 i 3 je oralnim putem doziran Primer 43-A u dozi od 10 mg/kg svaki drugi dan (QOD), odnosno jednom nedeljno (QW), a kontrolna grupa 1 je dobila samo vehikulum. Pri zapremini doziranja od 10 ml/kg, Primer 43-A (1 mg/ml) je formulisan kao inkluzioni kompleks sa 2% Klucel LF, 0,5% TPGS, 0,09% metilparabena, 0,01% propilparabena u vodi. Životinje su tretirane ukupno 42 dana, a tokom cele studije dva puta nedeljno im je vađena submandibularna krv radi sakupljanja seruma. Uzorci seruma su podvrgnuti analizi HBV biomarkerima.

Kao što je prikazano na Slici 4, tretman Primerom 43-A u dozi od 10 mg/kg QOD rezultirao je dramatičnim smanjenjem DNK HBV (> 3 log) i HBsAg (> 2,8 log). Na kraju 42-dnevnog tretmana, nivoi ovih virusnih markera su postali neotkrivljivi i ispod donje granice kvantifikacije (LLOQ). Čak i uz ređe doziranje QW, Primer 43-A je značajno smanjio i DNK HBV (> 2 log) i HBsAg (> 2,8 log). Štaviše, tretman Primerom 43-A u dozi od 10 mg/kg, bez obzira na QOD i QW doziranje, indukovao je značajan nivo anti-HBsAg antitela. Zaključno, Primer 43-A je pokazao dobru in vivo anti-HBV aktivnost smanjenjem virusnih markera HBV i promovisanjem proizvodnje antitela specifičnih za HBV.

Primer 52

In vivo antivirusna efikasnost Primera 41-A na AAV-HBV modelu miša Antivirusna efikasnost Primera 41-A je procenjena na istom AAV-HBV modelu prateći dizajn studije u Tabeli 4, istim postupcima za merenje HBV biomarkera kao što je opisano u Primeru 51.

Tabela 4. In vivo test efikasnosti Primera 41-A na AAV-HBV modelu miša

11

Konkretno, grupama 2, 3 i 4 je oralnim putem doziran Primer 41-A u dozi od 1, 3, odnosno 10 mg/kg QOD. Grupa 5 je tretirana sa 10 mg/kg QW, dok je grupi 1 davan samo vehikulum. Pri zapremini doziranja od 10 ml/kg, Primer 41-A (0,1, 0,3 i 1 mg/ml) je formulisan kao inkluzioni kompleks sa 2% Klucel LF, 0,5% TPGS, 0,09% metilparabena, 0,01% propilparabena u vodi. Životinje su tretirane ukupno 42 dana, a tokom cele studije dva puta nedeljno im je vađena submandibularna krv radi sakupljanja seruma. Uzorci seruma su podvrgnuti analizi HBV biomarkerima.

Kao što je prikazano na Slici 5, tretman Primerom 41-A u dozi od 1, 3, 10 mg/kg QOD smanjuje DNK HBV i HBsAg. Sve tri doze su uspele smanjiti ove virusne markere ispod ili blizu LLOQ na kraju 42-dnevnog tretmana. Čak i uz ređe doziranje QW, Primer 41-A u dozi od 10 mg/kg je takođe smanjio DNK HBV i HBsAg na nivoe koji se ne mogu otkriti na kraju tretmana. Štaviše, Primer 41-A je indukovao znatno više nivoe antitela protiv HbsAg nego posle tretmana vehikulumom. Zaključno, Primer 41-A je pokazao dobru in vivo anti-HBV aktivnost smanjenjem virusnih markera HBV i promovisanjem proizvodnje antitela specifičnih za HBV.

Primer 53

In vivo antivirusna efikasnost Primera 42-A na AAV-HBV modelu miša

Antivirusna efikasnost Primera 42-A je procenjena na istom AAV-HBV modelu prateći dizajn studije u Tabeli 5, istim postupcima za merenje HBV biomarkera kao što je opisano u Primeru 51.

Tabela 5. In vivo test efikasnosti Primera 42-A na AAV-HBV modelu miša

Konkretno, grupama 2, 3 i 4 je oralnim putem doziran Primer 42-A u dozi od 1, 3, odnosno 10 mg/kg QOD, dok je grupi 1 davan samo vehikulum. Pri zapremini doziranja od

12

10 ml/kg, Primer 42-A (0,1, 0,3 i 1 mg/ml) je formulisan kao inkluzioni kompleks sa 2% Klucel LF, 0,5% TPGS, 0,09% metilparabena, 0,01% propilparabena u vodi. Životinje su tretirane ukupno 42 dana, a tokom cele studije dva puta nedeljno im je vađena submandibularna krv radi sakupljanja seruma. Uzorci seruma su podvrgnuti analizi HBV biomarkerima.

Kao što je prikazano na Slici 6, tretman Primerom 42-A u dozi od 1, 3, 10 mg/kg QOD bio je efikasan u smanjenju DNK HBV i HBsAg. Iako su veće doze dovele do bržeg uklanjanja DNK HBV i HBsAg, sve tri doze su uspele smanjiti ove virusne markere ispod ili blizu LLOQ na kraju 42-dnevnog tretmana. Sve grupe tretirane Primerom 42-A su razvile značajno više nivoe anti-HBsAg antitela. Zaključno, Primer 42-A je pokazao dobru in vivo anti-HBV aktivnost smanjenjem virusnih markera HBV i promovisanjem proizvodnje antitela specifičnih za HBV.

Primer 54

In vivo antivirusna efikasnost Primera 41-B na AAV-HBV modelu miša Antivirusna efikasnost Primera 41-B je procenjena na istom AAV-HBV modelu prateći dizajn studije u Tabeli 6, istim postupcima za merenje HBV biomarkera kao što je opisano u Primeru 51.

Tabela 6. In vivo test efikasnosti Primera 41-B na AAV-HBV modelu miša

Konkretno, grupama 2, 3 i 4 je oralnim putem doziran Primer 41-B u dozi od 1, 3, odnosno 10 mg/kg QOD, dok je grupi 1 davan samo vehikulum. Pri zapremini doziranja od 10 ml/kg, Primer 41-B (0,1, 0,3 i 1 mg/ml) je formulisan kao inkluzioni kompleks sa 2% Klucel LF, 0,5% TPGS, 0,09% metilparabena, 0,01% propilparabena u vodi. Životinje su tretirane ukupno 42 dana, a tokom cele studije dva puta nedeljno im je vađena submandibularna krv radi sakupljanja seruma. Uzorci seruma su podvrgnuti analizi HBV biomarkerima.

Kao što je prikazano na Slici 7, tretman Primerom 41-B u dozi od 1, 3, 10 mg/kg QOD bio je efikasan u smanjenju DNK HBV i HBsAg. Sve tri doze su uspele smanjiti ove virusne markere ispod LLOQ na kraju 42-dnevnog tretmana. Sve grupe tretirane Primerom 41-B su takođe razvile više nivoe anti-HBsAg antitela od vehikulum grupe. Zaključno, Primer 41-B je pokazao in vivo anti-HBV aktivnost smanjenjem virusnih markera HBV i promovisanjem proizvodnje antitela specifičnih za HBV.

Primer 55

FK studija sa jednom dozom na mužjacima Wister-Han pacova

Jedna FK doza kod mužjaka Wister-Han pacova izvršena je za procenu farmakokinetičkih svojstava ispitivanih jedinjenja. Dve grupe životinja su dozirane oralnom intubacijom putem sonde (POE) odgovarajućim jedinjenjem. Uzorci krvi (oko 20 µl) su prikupljeni putem jugularne vene ili alternativnog mesta na 15 min, 30 min, 1 h, 2 h, 4 h, 7 h i 24 h nakon doze za grupu. Uzorci krvi su stavljeni u epruvete koje sadrže antikoagulans EDTA-K2 i centrifugirani su 6 minuta na 5000 o/min na 4°C kako bi se plazma odvojila od uzoraka. Nakon centrifugiranja, dobijena plazma je preneta u čiste epruvete radi bioanalize i proleka i aktivnog oblika na LC/MS/MS. U grupama kojima su dozirani prolekovi, koncentracija prolekova u uzorcima plazme je bila ispod granice detekcije. „Ispitivano jedinjenje“ u tabeli 8 korišćeno je kao interni standard za ispitivanje metabolita (aktivnog oblika) „doznog jedinjenja“ in vivo. Farmakokinetički parametri su izračunati korišćenjem nekompartmentalnog modula WinNonlin® Professional 6.2. Vršna koncentracija (Cmax) je zabeležena direktno iz eksperimentalnih opažanja. Površina ispod krive koncentracije u plazmi i vremena (AUC0-t) izračunata je primenom linearno trapezoidnog pravila do poslednje koncentracije koja se može detektovati.

Cmaxi AUC0-poslednjasu dva kritična FK parametra koja se odnose na in vivo efikasnost ispitivanog jedinjenja. Jedinjenja sa višim Cmaxi AUC0-poslednjadovešće do bolje in vivo efikasnosti. Rezultati FK parametara nakon oralne primene aktivnih oblika i konkurentskih jedinjenja dati su u Tabeli 7. FK parametri prolekova prikazani su u Tabeli 8.

Nakon oralne primene prolekova, aktivni oblici su uočeni u plazmi i stoga su ispitivani. Primeri prolekova predmetnog pronalaska (Primer 41-B, 42-A, 42-B, 43-A, 45-A i 45-B) iznenađujuće su pokazali znatno poboljšani Cmax(porast od 5-175 puta) i AUC0-

poslednja(porast od 2,5-56 puta) u poređenju sa referentnim jedinjenjima (GS9620, S-2 i S-3) i jedinjenjima navedenim u predmetnom pronalasku (Jedinjenje 41c-A, 41c-B i 43e-A) koji svi predstavljaju aktivne oblike. Rezultati su jasno pokazali neočekivanu superiornost prolekova nad aktivnim oblicima u odnosu na FK parametre, što je dovelo do bolje efikasnosti in vivo.

Tabela 7. Prosečna koncentracija u plazmi i FK parametri aktivnih oblika nakon oralnog doziranja od 5 mg/kg

* 7 sati za Jedinjenje 41c-A, Jedinjenje 41c-B i Jedinjenje 43e-A Tabela 8. FK parametri prolekova nakon oralnog doziranja od 5 mg/kg

12

Primer 56

LYSA studija rastvorljivosti

LYSA studija za određivanje rastvorljivosti ispitivanih jedinjenja u vodi. Uzorci su pripremljeni u duplikatu od 10 mM osnovnog rastvora DMSO. Nakon isparavanja DMSO pomoću centrifugalnog vakuum uparivača, jedinjenja su rastvorena u 0,05 M fosfatnom puferu (pH 6,5), mešana jedan sat i mućkana dva sata. Posle jedne noći, rastvori su filtrirani pomoću mikrotitracione filter ploče. Zatim su filtrat i njegova razblaženja 1/10 analizirani pomoću HPLC-UV. Pored toga, kalibraciona kriva sa četiri tačke je pripremljena od 10 mM osnovnog rastvora i korišćena za određivanje rastvorljivosti jedinjenja. Rezultati su izraženi u μg/ml. U slučaju da je procenat uzorka izmeren u rastvoru nakon isparavanja podeljen sa izračunatim maksimalnom količinom uzorka iznosio preko 80%, rastvorljivost je prijavljena kao veća od ove vrednosti.

Rezultati LYSA dati su u Tabeli 9. Bilo je jasno da se rastvorljivost aktivnih oblika iznenađujuće poboljšala za 10 do preko 200 puta kada se konvertuju u razne prolekove.

Tabela 9. Podaci o rastvorljivosti određenih jedinjenja

12

Primer 57

Studija portalne vene

Cilj ove studije je bio razumeti da li prolek ostaje nepromenjen dok se apsorbuje kroz crevo u portalnu cirkulaciju i pokazati primarno mesto konverzije.

Hirurški postupak za kanulaciju portalne vene (PVC) i kanulaciju karotidne arterije (CAC)

Operacija je izvedena u anesteziji pentobarbitalom/izofluranom. Ukratko, nakon

12

dezinfekcije trbušnog područja betadinom i 70%-tnim izopropil alkoholom, napravljen je mali rez na srednjoj liniji abdomena. Slepo crevo je izvučeno, a mezenterična vena je identifikovana i izolovana za krvni sud od oko 5 mm. Labava ligatura je postavljena proksimalno, a distalni kraj vene podvezan. Napravite mali rez (tek toliko da omogući umetanje katetera) na izolovanoj veni i umetnite PU kateter prema jetri u odgovarajućoj dužini. Kateter je osiguran na mestu vezivanjem labave ligature oko kanuliranog krvnog suda. Slepo crevo je vraćeno u trbušnu šupljinu. U desnom trbušnom zidu je napravljen otvor kako bi kraj katetera slobodno prolazio. Kateter je osiguran šavom na trbušnom zidu. Rez trbušnog mišića je zatvoren šavom. Napravljen je mali rez u predelu lopatice koji će služiti kao izlazno mesto katetera. Kateter je potkožno tuneliran i eksterioriziran kroz rez lopatice. Fiksni šav je postavljen u predelu lopatice. Proverena je prohodnost katetera, a zatim je eksterioriziran iz potkožnog prostora u leđni deo vrata. Nakon nežnog brisanja područja, trbušna šupljina je zašivena. Leva karotidna arterija je zatim kanulirana umetanjem PE50 katetera. Oba eksteriorizirana katetera su čvrsto vezana za leđni deo vrata i fiksirana. Životinjama je zatim dozvoljeno da se oporave u kavezu i koriste za studiju najmanje 3 dana nakon operacije. Svi kateteri su jednom dnevno ispirani heparinizovanim fiziološkim rastvorom kako bi se održala prohodnost.

Oralna FK studija na dvostruko kanuliranom PVC/CAC pacovu

Životinje nisu dobijali hranu preko noći (n=3) i davane su im ampule oralnom intubacijom (10 mg/kg, 10 ml/kg). Uzorci krvi (60 µl) su sakupljani istovremeno iz katetera portalne i karotidne arterije na 0,083, 0,25, 0,5, 1, 2, 4, 7, 24h. Svi uzorci krvi će se preneti u mikro epruvete za centrifugiranje koje sadrže 2 µl K2EDTA (0,5 M) kao antikoagulanta i staviti na mokri led. Zatim će se uzorci krvi obraditi za plazmu centrifugiranjem na približno 4°C, 3000 g u roku od pola sata od sakupljanja. Uzorci plazme će se čuvati u polipropilenskim epruvetama, brzo zamrznuti na suvom ledu i čuvati na -70±10°C do LC/MS/MS analize.

Otkriveni su i analizirani farmakokinetički parametri (prosečna vrednost ± SD, n= 3) prolekova i aktivnih oblika u portalnim i karotidnim uzorcima nakon oralne primene prolekova (10 mg/kg) kod pacova sa kanuliranom portalnom venom. Rezultati ispitivanja Primera 1-B, 41-A, 41-B, 42-A i 43-A su sažeti u nastavku.

Tabela 10. Farmakokinetički parametri Primera 41-A i odgovarajućeg aktivnog oblika Jedinjenja 41c-B u portalnim i karotidnim uzorcima nakon oralne primene Primera 41-A (10 mg/kg) kod pacova sa kanuliranom portalnom venom

12

Tabela 11. Farmakokinetički parametri Primera 43-A i odgovarajućeg aktivnog oblika Jedinjenja 43e-A u portalnim i karotidnim uzorcima nakon oralne primene Primera 43-A (10 mg/kg) kod pacova sa kanuliranom portalnom venom

Tabela 12. Farmakokinetički parametri Primera 1-B i odgovarajućeg aktivnog oblika Jedinjenja 1e-A u portalnim i sistemskim uzorcima nakon oralne primene Primera 1-B (10 mg/kg) kod pacova sa kanuliranom portalnom venom

12

Tabela 13. Farmakokinetički parametri Primera 42-A i odgovarajućeg aktivnog oblika Jedinjenja 41c-A u portalnim i karotidnim uzorcima nakon oralne primene Primera 42-A (10 mg/kg) kod pacova sa kanuliranom portalnom venom

Tabela 14. Farmakokinetički parametri Primera 41-B i odgovarajućeg aktivnog oblika Jedinjenja 41c-A u portalnim i karotidnim uzorcima nakon oralne primene Primera 41-B (10 mg/kg) kod pacova sa kanuliranom portalnom venom

Na osnovu gornjih rezultata, zaključeno je da je primarno mesto konverzije proleka bila jetra, a ne creva, jer je AUCaktivan/AUCukupanbio veći u uzorkovanju iz karotidne arterije u odnosu na AUCaktivan/AUCukupanu uzorkovanju iz portalne vene.

12

1

11

Claims

PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje formule (I),

pri čemu R<1>je C1-6alkil; R<2>je benzil, pri čemu je pomenuti benzil nesupstituisan ili supstituisan jednim, dva ili tri supstituenta nezavisno odabrana od halogena i C1-6alkila; R<3>je −NR<4>R<5>, pri čemu R<4>je C1−6alkil ili C1−6alkoksiC1−6alkil; R<5>je (C1-6alkil)2NCOOC1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(C1- 6alkil)aminoC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(fenil)C1-6alkil, C1-6alkoksikarbonilC1-6alkil, C1- 6alkoksikarboniloksiC1-6alkil, C1-6alkil, C1-6alkilkarbonil(C1-6alkil)aminoC1- 6alkil ili pirolidinilkarbamoiloksiC1-6alkil; ili R<4>i R<5>zajedno sa azotom su vezani da formiraju heterociklil; ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer; pod uslovom da 6-amino-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-7-(piperidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-7-(morfolin-4-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-7-(3,3-dimetilpirolidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; etil 1-[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]pirolidin-2-karboksilat; 6-amino-7-(2-azaspiro[3,3]heptan-2-karbonil)-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-7-(2-oksa-6-azaspiro[3,3]heptan-6-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-7-(3,3-difluorpirolidin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-7-(3-fluor-3-metil-pirolidin-1-karbonil)-2 (propilsulfonimidoil)purin-8-on; i njihovi enantiomeri ili dijastereomeri su isključeni.
2. Jedinjenje prema zahtevu 1, pri čemu R<1>je C1-6alkil; R<2>je benzil, pri čemu je pomenuti benzil nesupstituisan ili supstituisan halogenom ili C1-6alkilom; R<3>je azetidinil; piperazinil supstituisan pomoću C1-6alkila; piperidinil supstituisan piperidinilom; pirolidinil; ili −NR<4>R<5>, pri čemu R<4>je C1−6alkil ili C1−6alkoksiC1−6alkil; R<5>je (C1-6alkil)2NCOOC1-6alkil, C1-6alkoksiC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(C1- 6alkil)aminoC1-6alkil, C1-6alkoksikarbonil(fenil)C1-6alkil, C1-6alkoksikarbonilC1-6alkil, C1- 6alkoksikarboniloksiC1-6alkil, C1-6alkil, C1-6alkilkarbonil(C1-6alkil)aminoC1- 6alkil ili pirolidinilkarbamoiloksiC1-6alkil.
3. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2, pri čemu R<1>je etil ili propil; R<2>je benzil, brombenzil, hlorbenzil, fluorbenzil ili metilbenzil; R<3>je azetidinil; 4-metilpiperazinil; piperidinilpiperidinil; pirolidinil; ili −NR<4>R<5>, pri čemu R<4>je metil, etil, propil ili metoksietil; R<5>je acetil(metil)aminoetil, butil, butil(metil)karbamoiloksietil, dietilkarbamoiloksietil, etoksikarbonil(metil)aminoetil, etoksikarboniletil, etoksikarbonilizobutil, etoksikarbonilizopentil, etoksikarbonilmetil, etoksikarboniloksietil, etoksikarbonil(fenil)etil, etil, izobutil, izopropoksikarbonilizopentil, izopropoksikarbonil(fenil)etil, izopropil, metoksikarbonil(metil)aminoetil, metoksietil, metoksipropil, propil, propil(metil)karbamoiloksietil, pirolidinilkarbamoiloksietil, tercbutoksikarbonil(metil)aminoetil, terc-butoksikarboniletil, terc-butoksikarbonilizopentil ili terc-butoksikarbonil(fenil)etil.
4. Jedinjenje prema zahtevu 3, pri čemu R<3>je azetidinil, 4-metilpiperazinil, 1 piperidinilpiperidinil, pirolidinil, acetil(metil)aminoetil(metil)amino, bis(metoksietil)amino, butil(etil)amino, butil(metil)amino, butil(metil)karbamoiloksietil(metil)amino, dietilkarbamoiloksietil(metil)amino, etoksikarbonil(metil)aminoetil(metil)amino, etoksikarboniletil(metil)amino, etoksikarbonilizobutil(metil)amino, etoksikarbonilizopentil(metil)amino, etoksikarbonilmetil(metil)amino, etoksikarboniloksietil(metil)amino, etoksikarbonil(fenil)etil(metil)amino, etil(metil)amino, izobutil(metil)amino, izopropoksikarbonilizopentil(metil)amino, izopropoksikarbonil(fenil)etil(metil)amino, izopropil(metil)amino, metoksikarbonil(metil)aminoetil(metil)amino, metoksietil(etil)amino, metoksietil(metil)amino, metoksietil(propil)amino, metoksipropil(metil)amino, propil(etil)amino, propil(metil)amino, propil(metil)karbamoiloksietil(metil)amino, pirolidinilkarbamoiloksietil(metil)amino, terc-butoksikarbonil(metil)aminoetil(metil)amino, terc-butoksikarboniletil(metil)amino, terc-butoksikarbonilizopentil(metil)amino ili tercbutoksikarbonil(fenil)etil(metil)amino.
5. Jedinjenje prema bilo kojem od zahteva 1 do 4, pri čemu R<1>je etil.
6. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2, pri čemu R<2>je benzil supstituisan halogenom ili C1−6alkilom.
7. Jedinjenje prema bilo kojem od zahteva 2 do 6, pri čemu R<2>je brombenzil, hlorbenzil, fluorbenzil ili metilbenzil.
8. Jedinjenje prema zahtevu 7, pri čemu R<2>je brombenzil, hlorbenzil ili fluorbenzil.
9. Jedinjenje prema zahtevu 1 ili 2, pri čemu R<3>je −NR<4>R<5>, pri čemu R<4>je C1-6alkil, R<5>je C1-6alkil.
10. Jedinjenje prema zahtevu 9, pri čemu R<3>je propil(metil)amino ili etil(metil)amino.
11. Jedinjenje prema zahtevu 1, odabrano od: 6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-N-etil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-7-[4-(1-piperidil)piperidin-1-karbonil]-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-N-etil-N-(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-N-butil-N-etil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 1 4 6-amino-9-benzil-N-(2-metoksietil)-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-N,N-bis(2-metoksietil)-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-7-(azetidin-1-karbonil)-9-benzil-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-N-izopropil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-7-(4-metilpiperazin-1-karbonil)-2-(propilsulfonimidoil)purin-8-on; 6-amino-9-benzil-N-(3-metoksipropil)-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-benzil-N-izobutil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; Etil 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]acetat; Etil 3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]propanoat; terc-butil 3-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]propanoat; Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]propanoat; terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat; Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-4-metil-pentanoat; Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]-3-metil-butanoat; Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]-4-metil-pentanoat; Etil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]-3-fenil-propanoat; Izopropil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenil-propanoat; terc-butil (2S)-2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]-3-fenil-propanoat; 1 N-[2-[acetil(metil)amino]etil]-6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; Metil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil]-N-metil-karbamat; terc-butil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metil-amino]etil]-N-metil-karbamat; Etil N-[2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil]-N-metil-karbamat; 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N-butil-N-metil-karbamat; 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil pirolidin-1-karboksilat; 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N-metil-N-propil-karbamat; 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil N,N-dietilkarbamat; 2-[[6-amino-9-benzil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karbonil]-metilamino]etil etil karbonat; 6-amino-N-butil-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]purin-7-karboksamid; 6-amino-N-butil-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]purin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-metil-8-okso-N-propil-2[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(S)-propilsulfomimidoil]-9-(p-tolilmetil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on; 6-amino-2-[S(R)-propilsulfomimidoil]-9-(p-tolilmetil)-7-(pirolidin-1-karbonil)purin-8-on; 6-amino-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-[S(S)-propilsulfonimidoil]-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid; 1 6-amino-N-(2-metoksietil)-N-metil-8-okso-2-[S(R)-propilsulfonimidoil]-9-(ptolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-butil-N-metil-8-okso-2-(propilsulfonimidoil)-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-2[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(S)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(R)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-2-[S(S)-(etilsulfonimidoil)]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-2-[S(R)-(etilsulfonimidoil)]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid; 1 6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-9-[(4-bromfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-9-[(4-bromfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-(etilsulfonimidoil)-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-[S(S)-(etilsulfonimidoil)]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid; i 6-amino-9-[(4-bromfenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-(etilsulfonimidoil)]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid; ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, enantiomera ili dijastereomera.
12. Jedinjenje prema zahtevu 11, odabrano od: 6-amino-9-benzil-N-metil-8-okso-N-propil-2-(propilsulfonimidoil)purin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-purin-7-karboksamid; 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-N-propil-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-2[S(S)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-okso-9-(p-tolilmetil)purin-7-karboksamid; 6-amino-2-(etilsulfonimidoil)-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propil-purin-7-karboksamid; 6-amino-2-[S(S)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; i 1 6-amino-2-[S(R)etilsulfonimidoil]-9-[(4-fluorfenil)metil]-N-metil-8-okso-N-propilpurin-7-karboksamid; Ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, enantiomera ili dijastereomera.
13. Jedinjenje prema bilo kom od zahteva 11 i 12, pri čemu jedinjenje je: 6-amino-9-[(4-hlorfenil)metil]-N-etil-2-[S(R)-etilsulfonimidoil]-N-metil-8-oksopurin-7-karboksamid ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer.
14. Postupak za pripremu jedinjenja prema bilo kom od zahteva 1 do 13, koji obuhvata sledeći korak: reakcija jedinjenja formule (II),

sa karbamoil hloridom u prisustvu smeše baza; pri čemu smeša baza je piridin i trietilamin, piridin i DIPEA, DMAP i trietilamin, ili DMAP i DIPEA; R<1>i R<2>su definisani kao u bilo kojem od zahteva 1 do 13.
15. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer prema bilo kom od zahteva 1 do 13, za primenu kao terapeutski aktivna supstanca.
16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje prema bilo kom od zahteva 1 do 13, i terapeutski inertan nosač.
17. Jedinjenje ili farmaceutski prihvatljiva so, enantiomer ili dijastereomer prema bilo kom od zahteva 1 do 13 za lečenje ili profilaksu infekcije virusom hepatitisa B. 1