RS62656B1 - Etinilska jedinjenja, njihova priprema i njihova terapijska upotreba za lečenje malarije - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ovaj pronalazak se odnosi na nova jedinjenja i na njihovu terapeutsku upotrebu, na primer za upotrebu u lečenju malarije.

UVOD

[0002] Malarija i dalje ostaje veliki zdravstveni izazov u zemljama u razvoju. Prema Svetskom izveštaju o malariji (WHO) (Svetska zdravstvena organizacija) za 2016. godinu, i uprkos napretku na tom polju, procenjeno je da je malarija pogodila 212 miliona ljudi i ubila 429000 pacijenata u 2015. Približno 70% smrtnih slučajeva dogodilo se kod dece uzrasta ispod pet godina koji žive u podsaharskoj Africi. Malariju uzrokuju protozojski paraziti iz roda Plasmodium koji se prenose na ljude ujedom zaraženih ženki komaraca Anopheles. Plasmodium inficira i uništava crvena krvna zrnca, što dovodi do groznice, teške anemije, cerebralne malarije i, ako se ne leči, do smrti. Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium ovale i Plasmodium malariae su četiri glavne vrste Plasmodium-a odgovorne za prenos malarije. Plasmodium falciparum je dominantna vrsta u podsaharskoj Africi i najsmrtonosnija.

[0003] Od sredine dvadesetog veka, razvijen je širok spektar lekova koji su pokazali kliničku efikasnost u lečenju nekomplikovane falciparum malarije. Da bi se odložio razvoj rezistencije, SZO preporučuje od 2006. tretmane zasnovane na kombinaciji artemisinina sa kratkim poluvremenom poluživota ili njegovih derivata (dihidroartemisinin, artemeter, artesunat) sa dugotrajnim lekom-partnerom uključujući, ali bez ograničenja, lumefantrin, meflokin, amodiakin, sulfadoksin, pirimetamin ili piperakin. Ove kombinovane terapije povezuju brzi početak delovanja i sposobnost ciljanja eritrocitnog životnog ciklusa parazita koji je odgovoran za simptome malarije. Nažalost, uprkos efikasnosti ove kombinovane terapije zasnovane na artemisininu (ACT), pojava rezistencije je primećena u pet zemalja podregije Veliki Mekong, što je dovelo do odloženog uklanjanja parazita povezanog sa polimorfizmom elise Kelch 13. U Kambodži su otkrivene visoke stope neuspeha nakon lečenja za četiri različita ACT -a. *

[0004] Prema tome, pronalazak efikasnih i pristupačnih lekova protiv malarije sa novim mehanizmom delovanja je imperativna potreba za suzbijanje rezistencije na malariju. Osim toga, trenutni ACT se primenjuju oralno jednom ili dva puta dnevno tokom tri dana, ali zbog slabog pridržavanja pacijenata, primećuje se niža efikasnost ACT-a i smatra se da je glavni faktor rizika za razvoj rezistencije na lekove. Tretman sa jednom dozom za nekomplikovanu malariju imao bi potencijal za rešavanje više operativnih izazova trenutnih terapija lečenja. Jedinjenja sa farmakokinetičkim svojstvima koja podržavaju upotrebu u kombinacijama pojedinačnih doza bila bi dragocena u borbi protiv malarije.

[0005] Shodno tome, ovaj pronalazak pruža nove potente lekove protiv malarije koji se mogu pokazati efikasnim u lečenju protiv malarije od jedne doze do više doza.

SAŽETAK PRONALASKA

[0006] Ovaj pronalazak se odnosi na nova jedinjenja koja su korisna u lečenju i/ili profilaksiji nekomplikovane malarije izazvane Plasmodium falciparum i/ili Plasmodium vivax.

[0007] Dakle, pronalazak je usmeren na jedinjenje formule (I) kao takvo ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so kako je dole definisano u detaljnom opisu:

[0008] Pronalazak se dalje odnosi na farmaceutski sastav koji sadrži najmanje jedno jedinjenje formule (I) prema pronalasku

* Opisana su neka jedinjenja koja se bave problemom otpornosti na utvrđene tretmane malarije (EP 2727911).

ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i najmanje jedan njegov farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili pomoćnu supstancu.

[0009] Farmaceutske kompozicije prema pronalasku mogu sadržati jedno ili više jedinjenja prema pronalasku u bilo kom obliku koji je ovde opisan.

[0010] Farmaceutske kompozicije ovog pronalaska mogu dalje sadržati jedan ili više farmaceutski prihvatljivih dodatnih sastojaka, kao što su stipsa, stabilizatori, antimikrobna sredstva, puferi, sredstva za bojenje, sredstva za aromu, pomoćna sredstva i slično.

[0010] Pronalazak se dalje odnosi na postupke za dobijanje jedinjenja formule (I) prema pronalasku ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, pri čemu su navedeni postupci dole detaljno objašnjeni.

[0011] Pronalazak se dalje odnosi na jedinjenje formule (I) prema pronalasku ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu kao lek, kao što je za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju malarije.

[0012] Pronalazak e ́ se dalje odnosi na jedinjenje formule (I) prema pronalasku ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u lečenju i/ili sprečavanju infekcija krvnih ćelija inficiranih sa Plasmodium falciparum i/ili Plasmodium vivax.

[0014] Prema posebnom izvođenju, infekcija je malarija.

[0015] Druge karakteristike i prednosti pronalaska biće očigledne iz sledećeg detaljnog opisa.

[0016] U kontekstu pronalaska, primenjuju se sledeće definicije:

Izraz "malarija" uključuje bolesti i stanja povezana sa infekcijom Plasmodium.

[0017] Kako se ovde koristi, izrazi "tretman" i "lečenje" i slično generalno znače postizanje željenog farmakološkog i fiziološkog efekta. Efekat može biti profilaktički u smislu sprečavanja ili delimičnog sprečavanja malarije ili njenog stanja i/ili može biti terapeutski u smislu delimičnog ili potpunog izlečenja bolesti, stanja, simptoma ili neželjenog efekta koji se pripisuje bolesti. Izraz "lečenje" koji se ovde koristi obuhvata bilo koji tretman malarije kod sisara, posebno čoveka, i uključuje: (a) sprečavanje pojavljivanja malarije kod subjekta koji bi mogao biti predisponiran za malariju, ali za koji još nije dijagnostikovana bolest; (b) inhibiranje bolesti, odnosno zaustavljanje njenog razvoja; ili ublažavanje bolesti, odnosno izazivanje regresije bolesti i/ili njenih simptoma ili stanja.

[0018] Izraz "efikasna količina" uključuje "efikasnu količinu za profilaksu", kao i "efikasnu količinu za lečenje".

[0019] Izraz "efikasna količina za profilaksu" odnosi se na koncentraciju jedinjenja prema ovom pronalasku koja je efikasna u inhibiranju, smanjenju verovatnoće bolesti od malarijskih parazita, ili sprečavanje infekcije malarijom ili sprečavanje odloženog početka bolesti malarijskim parazitima , kada se daju pre infekcije, odnosno pre, tokom i/ili malo posle perioda izlaganja malarijskim parazitima.

[0020] Izraz "profilaksa" uključuje uzročnu profilaksu, tj. antimalarijsku aktivnost koja se sastoji u sprečavanju preeritrocitnog razvoja parazita, supresivnu profilaksu, tj. antimalarijsku aktivnost koja uključuje suzbijanje razvoja infekcije u krvnom stadijumu i terminalnu profilaksu, tj. antimalarijsku aktivnost koja uključuje suzbijanje razvoja intrahepatične faze infekcije. Ovaj izraz uključuje primarnu profilaksu (tj. sprečavanje početne infekcije) gde se antimalarijsko jedinjenje primenjuje pre, tokom i/ili nakon perioda izloženosti malarijskim parazitima i terminalna profilaksa (tj. radi sprečavanja recidiva ili odloženog početka kliničkih simptoma malarije) kada se antimalarijsko jedinjenje daje pred kraj i/ili malo posle perioda izlaganja malarijskim parazitima, ali pre kliničkih simptoma. Obično se protiv infekcija P. falciparum koristi supresivna fofilaksa, dok se protiv P. vivax koristi terminalna profilaksa.

[0021] Slično, izraz "efikasna količina za lečenje" odnosi se na koncentraciju jedinjenja koja je efikasna u lečenju infekcije malarijom, npr. dovodi do smanjenja broja parazita u krvi nakon mikroskopskog pregleda kada se daje nakon infekcije.

[0022] Termin "subjekat" koji se ovde koristi odnosi se na sisare. Na primer, sisari obuhvaćeni ovim pronalaskom uključuju ljude i slično.

DETALJAN OPIS TRENUTNOG PRONALASKA

JEDINJENJA PRONALASKA

[0023] Ovaj pronalazak se odnosi na nova jedinjenja formule (I) kao takva:

pri čemu:

- R1 označava atom fluora ili perhalogeno linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, poput trifluorometil radikala,

- R2 označava atom hlora; linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika opciono supstituisan sa najmanje jednim atomom fluora, kao što je metil radikal; ili perhalogeni linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika kao što je trifluorometil radikal, i

- R označava atom vodonika ili radikal formule (Ia)

gde R3 označava atom vodonika; hidroksi radikal; ili linearni ili razgranati alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, kao što je metil radikal, a R3 je u položaju 5 ili u položaju 6 navedenog radikala formule (la), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0024] U kontekstu pronalaska, primenjuju se sledeće definicije: «njegova farmaceutski prihvatljiva so» odnosi se na soli koje se formiraju od kiselih adicionih soli formiranih sa kiselinom (takođe navedena kao AH u ovom pronalasku ), pomenuta kiselina može biti neorganska kiselina (npr. hlorovodonična kiselina, bromovodična kiselina, sumporna kiselina, fosforna kiselina, azotna kiselina i slično), ili organska kiselina kao što su sirćetna kiselina, fumarna kiselina, oksalna kiselina, vinska kiselina, sukcinska kiselina, jabučna kiselina, malonska kiselina kiselina, fumarna kiselina, maleinska kiselina, askorbinska kiselina, mlečna kiselina, mandelinska kiselina, benzoeva kiselina, taninska kiselina, palmitinska kiselina, algininska kiselina, poliglutaminska kiselina, para-toluen sulfonska kiselina, benzen sulfonska kiselina, metan sulfonska kiselina, naftalen sulfonska kiselina, naftalen disulfonska kiselina i poli-galakturonska kiselina.

[0025] Farmaceutski prihvatljive soli za trenutni pronalazak mogu se izabrati između soli nastalih sa kiselinama kao što su hlorovodonična kiselina, fumarna kiselina, jantarna kiselina i malonska kiselina.

[0026] "Atom halogena" se odnosi na atom fluora, hlora, broma ili joda. Atom fluora ili hlora može se izabrati kao atom halogena.

- "alkil radikal" se odnosi na lanac na bazi ugljenika sa 1 do 3 atoma ugljenika, kao što su metil, etil, propil, izopropil radikali.

-izraz "R3je u položaju 5 ili u položaju 6 navedenog radikala formule (la)" (to jest u položaju 5 ili u položaju 6 piridin-2-il prstena) znači da je R3vezan za piridin-2-il prsten prema dve alternative kako je dole prikazano:

[0027] Prema jednom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R1označava atom fluora ili trifluorometil radikal.

[0028] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R2označava atom hlora, metil radikal ili perhalogeno linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, poput trifluorometil radikala.

[0029] Prema jednom aspektu, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava radikal formule (la) kako je gore definisano.

[0030] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava atom vodonika.

[0031] Prema još jednomizvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava radikal formule (la) kako je gore definisano i R3je u položaju 5 ili 6 navedenog radikala formule (la).

[0032] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava radikal formule (la) kako je gore definisano i R3označava atom vodonika, hidroksi radikal ili linearni ili razgranati alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika.

[0033] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava radikal formule (la) kako je gore definisano i R3označava atom vodonika, hidroksi radikal ili metil radikal.

[0034] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava radikal formule (la) kako je gore definisano i R3označava hidroksi radikal na položaju 5 navedenog radikala formule (la).

[0035] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava radikal formule (la) kako je gore definisano i R3označava linearni ili razgranati alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika na položaju 6 navedenog radikala formule (la).

[0036] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R označava radikal formule (la) kako je gore definisano i R3označava metil radikal na položaju 6 navedenog radikala formule (la).

[0037] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde najmanje jedan od R1i R2označava perfluorometilni radikal.

[0038] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) u kojoj najmanje jedan od R1i R2označava perfluorometil radikal, a R označava radikal formule (la) kako je gore definisano.

[0039] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde najmanje jedan od R1i R2označava perfluorometil radikal, R označava radikal formule (Ia) i R3je u položaju 5 ili 6 navedenog radikala formule (Ia).

[0040] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde i R1i R2označavaju perfluorometil radikal.

[0041] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde i R1i R2označavaju perfluorometil radikal, a R označava radikal formule (la) kako je gore definisano.

[0042] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde i R1i R2označavaju perfluorometil radikal, R označava radikal formule (Ia) kako je gore definisano i R3je u položaju 5 ili 6 navedenog radikala formule (Ia).

[0043] Prema drugom izvođenju, izdvojena jedinjenja su ona formule (I) gde R1označava atom fluora ili trifluorometil radikal, R2znači trifluorometil radikal, metil radikal ili atom hlora, R označava atom vodonika ili radikal formule (la) kako je gore definisano i R3je u položaju 5 ili 6 navedenog radikala formule (la) i označava atom vodonika, metil radikal ili hidroksi radikal.

[0044] Izvođenja i različite kombinacije koje iz njih proizilaze jasno su ilustrovane donjim jedinjenjima i primerima.

[0045] Među jedinjenjima formule (I) i oblika soli (II) koja su predmet ovog pronalaska, mogu se pomenuti jedinjenja odabrana sa sledeće liste:

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid,

• 5-((3-((diaminometilen) karbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -2-metil-N- (6-metilpiridin-2-il) benzamid,

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-fluorofenil) etinil) -N- (6-metilpiridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-trifluorometil) fenil) etinil) -2-metil-N- (piridin-2-il) benzamid,

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (5-hidroksipiridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid, • 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -2-hloro-N- (piridin-2-il) benzamid,

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-fluorofenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid,

• N-karbamimidoil-3-((3-karbamoil-4- (trifluorometil) fenil) etinil) -5-trifluorometil) benzamid, I

njihove farmaceutski prihvatljive soli.

[0046] U ovom pronalasku, farmaceutski prihvatljiva so može da se formira od adicione soli kiseline koja je nastala sa kiselinom, pri čemu je pomenuta kiselina neorganska kiselina, poželjno izabrane između hlorovodonične kiseline, bromovodonične kiseline, sumporne kiseline, fosforne kiseline i azotne kiseline, poželjnije hlorovodonične kiseline, ili organske kiselina, poželjno izabrane između sirćetne kiseline, fumarne kiseline, oksalne kiseline, vinske kiseline, sukcinske kiseline, jabučne kiseline, malonske kiseline, fumarne kiseline, maleinske kiseline, askorbinske kiseline, mlečne kiseline, mandelinske kiseline, benzoeve kiseline, taninske kiseline, palmitinske kiseline, algininske kiseline, poliglutaminske kiseline, para-toluen sulfonske kiseline, benzen sulfonske kiseline, metan sulfonske kiseline, naftalen sulfonske kiseline, naftalen disulfonske kiseline i poli-galakturonske kiseline, poželjnije odabrana između fumarne kiseline, sukcinske kiseline i malonske kiseline.

[0047] Među njihovim solima mogu se posebno pomenuti soli odabrane sa sledeće liste:

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid hidrohlorid, • 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid malonska kiselina,

• 5-((3-((diaminometilen) karbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -2-metil-N- (6-metilpiridin-2-il) benzamid hidrohlorid, • 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-fluorofenil) etinil) -N- (6-metilpiridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid hidrohlorid, • 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-trifluorometil) fenil) etinil) -2-metil-N- (piridin-2-il) benzamid hidrohlorid,

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (5-hidroksipiridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid hidrohlorid,

• 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -2-hloro-N- (piridin-2-il) benzamid hidrohlorid, I

5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-fluorofenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid hidrohlorid.

[0048] Prethodna detaljno opisana jedinjenja su navedena u Tabeli 1 ispod. Treba napomenuti da su gore navedena jedinjenja imenovana prema IUPAC nomenklaturi koristeći softver Perkin Elmer ChemLabNoteBook.

[0049] Među prethodnim jedinjenjima u Tabeli 1 mogu se pomenuti jedinjenja N ° 1a, 1b, 1c, 2, 3, 4, 5, 6, 7 i 8.

[0050] Među prethodno pomenutim jedinjenjima, mogu se napraviti jedinjenja n ° 1a, 1b, 1c i 4.

METODA PRIPREME

[0051] Jedinjenja formule (I) mogu se pripremiti od lako dostupnih početnih materijala primenom metoda i postupaka poznatih stručnjacima. Biće uvaženo da se tamo gde su dati tipični ili preferirani eksperimentalni uslovi (tj. reakcione temperature, vreme, molovi reagensa, rastvarači itd.) Mogu koristiti i drugi eksperimentalni uslovi, osim ako nije drugačije naznačeno.

[0052] Optimalni reakcioni uslovi mogu varirati u zavisnosti od konkretnih reaktanata ili rastvarača koji se koriste, ali takve uslove može odrediti stručnjak, koristeći rutinske postupke optimizacije.

[0053] Kao što je ovde dole detaljno objašnjeno, jedinjenja formule (I) mogu se dobiti iz jedinjenja formule (V) kako je ovde definisano, koje se može dobiti na dva različita načina.

[0054] I opšti i sintetički pristupi za dobijanje jedinjenja u obliku soli (II) i jedinjena formule (I) prikazani su u Šemi 1 i Šemi 4 ispod.

[0055] U prethodnom tekstu, početna jedinjenja i reagensi, kada njihov postupak pripreme nije opisan, komercijalno su dostupni ili opisani u literaturi, ili se mogu pripremiti prema metodama koje su u njima opisane ili su poznate stručnjacima.

Šema 1

[0056] Dakle, ovaj pronalazak je takođe usmeren na postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema pronalasku koji obuhvata najmanje sledeći korak koji se sastoji od:

katalitičko kuplovanje, posebno sa paladijumskim katalizatorom, između intermedijernog jedinjenja formule (III) gde:

- PG1je konvencionalna zaštitna aminо grupa, naručito kako je definisano u daljem tekstu, a R1 označava atom fluora ili perhalogeno linearni alkilni radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, poput trifluorometil radikala;

i intermedijerno jedinjenje formule (IV)

pri čemu su R1, R2, R3i PG1kao što je gore definisano, pri čemu se pomenuto jedinjenje formule (V) dalje uklanja sa zaštite i opciono salifikuje da se dobije očekivano jedinjenje formule (I) prema pronalasku ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0057] Što se tiče koraka kuplovanja jedinjenja sa formulama (III) i (IV), ono je takođe poznato kao Sonogashira-ino kuplovanje. Obično uključuje kao katalizator paladijum katalizator, kao što je bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid, [1,1'-bis (difenilfosfino) ferocen] dihloro-paladijum (II), bis (dibenzilidenaceton) paladijum, paladijum (II) diacetat ili tetrakistrifenilfosfin paladijum, opciono u prisustvu bakar (I) kokatalizatora kao što je bakarni jodid ili bromid u prisustvu paladijumovog katalizatora kao što je bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid ili tetrakistrifenilfosfin paladijum (bakar) jodid ili bromid. Konkretno, takvo katalitičko spajanje može se realizovati u anhidrovanom organskom rastvaraču kao što je dimetilformamid, etilacetat, dimetilacetamid, toluen, tetrahidrofuran ili acetonitril, i u prisustvu aminske baze kao što je trietilamin, diizopropilamin, morfolin ili piperidin i dodatni ligand kao što je trifenilfosfin ili tri-terc-butilfosfin. Konkretno, takvo katalitičko kuplovanje može se realizovati u anhidrovanom organskom rastvaraču kao što je dimetilformamid, etilacetat, dimetilacetamid, toluen, tetrahidrofuran ili acetonitril, i u prisustvu baze tj. amina kao što je trietilamin, diizopropilamin, morfolin ili piperidin i dodatnog liganda kao što je trifenilfosfin ili tri-terc-butilfosfin. Reakcija se može izvesti, na primer u zatvorenoj epruveti. Tako formirana reakciona smeša može se degazirati i zagrevati na 40 °C do 70 °C do postizanja reakcije. Završetak reakcije može se kontrolisati pomoću TLC (tankoslojna hromatografija). Za prinos jedinjenja (V), reakciona smeša može poželjno da se ohladi na sobnu temperaturu, razblaži i filtrira kroz sloj celita. Tako dobijeni filtrat može se zatim koncentrovati u vakuumu i po potrebi prečistiti pre izvođenja sledećih koraka. Jedinjenje (V) se takođe može direktno kristalizovati iz reakcione smeše i oporaviti filtriranjem.

[0058] Grupa PG1jedinjenja formule (III) i tako dobijenog jedinjenja formule (V) je konvencionalna zaštitna amino grupa koja prvo štiti reaktivnu funkciju amina koja se zatim regeneriše u drugom koraku hemijske sinteze jedinjenja (I).

[0059] Primeri zaštitnih grupa, kao i metode zaštite i uklanjanja zaštite dati su u Protective Groups in Organic Sinthesis, Greene et al., 4th Edition (John Wiley & Sons, Inc., New York), 2007. Na primer, PG1 odgovara terc-butoksi karbonilnom radikalu (Boc) ili benzil karbonilnom radikalu (Cbz).

[0060] Korak uklanjanja zaštite tako dobijenog jedinjenja formule (V) može se izvesti pogodnim putem koji poznaje stručnjak. Na primer, može se realizovati u prisustvu kiseline kao što je koncentrovani hidrohlorid ili hidrohlorid u dietil etru uz hlađenje ledom, ili u prisustvu kiseline kao što je trifluorosirćetna kiselina ili paratoluensulfonska kiselina u rastvaraču kao što je etil acetat (AcOet) ili dihlormetan da bi se dobilo jedinjenje formule (I) kako je prethodno definisano ili njegova farmaceutski prihvatljiva so koja je jedinjenje formule (II).

pri čemu:

- R1i R2su gore definisani;

- R označava atom vodonika ili radikal formule (Ia)

R3je gore definisan; i

- AH je kiselina

[0061] Kada je PG1konvencionalna zaštitna grupa kako je gore definisano, kao što je terc-butoksi karbonil radikal (Boc), korak uklanjanja zaštite acilgvanidina formule derivata (V) može se izvesti u prisustvu kiseline kao što je koncentrovani hidrohlorid ili hidroklorid u dietil etru uz hlađenje ledom. Istaložena čvrsta supstanca se zatim može izolovati, isprati vodom i osušiti da se dobije jedinjenje (II) kao hidrohloridna so jedinjenja (I).

[0062] Korak uklanjanja zaštite acilguanidina derivata formule (V) može se postići sa trifluorosirćetnom kiselinom ili para toluen sulfonskom kiselinom u rastvaraču kao što je etil acetat (AcOEt) ili dihlormetan uz zagrevanje do 70 °C. Kada se postigne korak uklanjanja zaštite, medijum se tada može alkalizovati bazom kao što je amonijum hidroksid ili natrijum hidroksid pri hlađenju i do pH = 9-10. Nakon ispiranja organske faze, na primer vodom, zatim, na primer, vodenim rastvorom natrijum metabisulfita i tretiranjem aktivnim ugljem, organski rastvor jedinjenja je delimično koncentrovan.

[0063] Kada se dobije jedinjenje na kraju koraka uklanjanja zaštite, dobije se jedinjenje formule (I), po potrebi se može izvršiti salifikacija dodavanjem rastvora kiseline kao što je malonska kiselina, fumarna kiselina ili sukcinska kiselina u organski rastvarač kao što je etilacetat ili tetrahidrofuran tako dobijenog jedinjenja (I) iz koraka (2) da bi se dobila farmaceutski prihvatljiva so formule (II) gde su R1, R2, R3, R i AH kao što je gore definisano.

[0064] Salifikacija se može izvesti dodavanjem rastvora kiseline kao što je malonska kiselina ili sukcinska kiselina u organski rastvarač kao što je etilacetat ili tetrahidrofuran da bi se formiralo jedinjenje (II) kao malonatna so jedinjenja (I).

[0065] Što se tiče polaznih materijala (III) i (IV), oni mogu biti lako proizvedeni od strane stručnjaka u ovoj oblasti, posebno prema postupcima pripreme predstavljenim u sledećim primerima.

[0066] Konkretno, početni materijal (III) sa R1, kako je prethodno definisano, može se pripremiti prema sledećoj šemi 2.

Šema 2

[0067] U prvom koraku, vrši se Sonogashira-ino kuplovanje između jedinjenja (IX) i zaštićenog acetilena (PG2-acetilen) gde je R1kao što je prethodno definisano i PG2je konvencionalna zaštitna grupa koja se razlikuje od zaštitne grupe PG1. Na primer, PG2odgovara trimetilsilil radikalu (TMS) ili trietilsilil radikalu (TES). Ova reakcija kuplovanja može se izvesti kao što je detaljno opisano za prethodno kuplovanje jedinjenja (III) i (IV).

[0068] Kada je PG2TMS, korak uklanjanja zaštite acetilena sa formulom derivata (X) izvodi se u prisustvu baze kao što je kalijum karbonat, litijum hidroksid ili kalijum hidroksid u rastvaraču kao što je metanol ili tetra-nbutil amonijum fluorid u dihlormetanu od 0 °C do sobne temperature. Ako se koristi PG2koji nije TMS, korak deprotekcije je prema tome prilagođen

1

(vidi: Protective Groups in Organic Sinthesis, Greene et al., 4th Edition (John Vilei & Sons, Inc., Nev Iork), 2007. Nakon koncentrovanja i obrade, sirovo jedinjenje (VI) se može direktno koristiti za dobijanje jedinjenja (XI).

[0069] Formiranje jedinjenja (VI) se postiže sa bazom kao što je litijum hidroksid ili natrijum hidroksid u rastvaraču kao što je metanol ili tetrahidrofuran u vodi. Posle koncentrisanja i zakiseljavanja kiselinom kao što je 1N hidrohlorid u vodi ili rastvorom limunske kiseline u vodi, dobijeni talog se sakupi i ispere vodom i osuši da se dobije jedinjenje (XI).

[0070] Aktivacija kisele grupe jedinjenja (XI) može se postići primenom reagensa za kuplovanje, kao što je dicikloheksilkarbodiimid ili benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat u prisustvu pentafluorofenola u rastvaraču kao što je tetrahidrofuran ili dimetilformamid od 0 °C do 50 °C. Posle hlađenja i uklanjanja istaložene uree, filtrat se koncentriše i prečisti dajući jedinjenje (XII).

[0071] Poslednji korak za dobijanje jedinjenja (III) može se izvesti dodavanjem zaštićenog gvanidina sa, na primer tercbutoksikarbonilnom grupom, jedinjenju (XII) u rastvaraču kao što je tetrahidrofuran ili dimetilformamid od 0 °C do 50 °C. Nakon završetka reakcije i obrade, sirovi ostatak se prečisti da se dobije jedinjenje (III).

[0072] Pronalazak dalje opisuje intermedijerno jedinjenje formule (III) kao takvo

pri čemu

- PG1je konvencionalna zaštitna grupa za amine koja prvo štiti reaktivnu funkciju amina koja se zatim regeneriše u reaktivnu funkciju amina u drugom koraku hemijske sinteze jedinjenja (I). Kao što je gore pomenuto, primeri zaštitnih grupa, kao i metode zaštite i uklanjanja zaštite dati su u Protective Groups in Organic Synthesis, Greene et al., 4th Edition (John Wiley & Sons, Inc., New York), 2007. PG1 odgovara terc. -butoksi karbonil radikal (Boc) ili benzil karbonil radikal (Cbz); i

- R1označava atom fluora ili perhalogeno linearni alkilni radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, poput trifluorometil radikala.

[0073] Među jedinjenjima formule (III) mogu se navesti sledeća specifična jedinjenja:

-terc-butil N- [N- [3-etinil-5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat, i

-N- [N- (3-etinil-5-fluoro-benzoil) karbamimidoil] karbamat.

[0074] Što se tiče polaznog materijala (IV), mogu se razmotriti različiti načini pripreme prema mogućim definicijama za R2, R3i X.

[0075] Dakle, kada je R2= CF3 ili Cl i X = Br, ovaj polazni materijal (IV) bi se mogao sintetizovati prema sledećoj šemi 3.

Šema 3

[0076] Formiranje jedinjenja (XIII) se postiže kao što je ranije opisano za jedinjenje (XI) da bi se dobilo jedinjenje (XIV).

[0077] Kisela grupa jedinjenja (XIV) se pretvara u acil hlorid sa tionilhloridom, fosfornim oksihloridom ili oksalil hloridom u inertnom rastvaraču kao što je toluen ili dihlormetan od 0 °C do 50 °C. Nakon završetka reakcije i koncentrovanja, sirovo jedinjenje (XIV) se razblaži rastvaračem kao što je etilacetat ili dihlormetan i dodaje se 2-aminopiridin (XV) u prisustvu baze kao što je trimetilamin, piridin ili diizopropiletilamin od 0 °C do sobne temperature. Reakciona smeša se može mešati do postizanja reakcije. Nakon obrade, sirovi ostatak se prečisti da se dobije jedinjenje (IV).

[0078] Pronalazak dalje opisuje intermedijerno jedinjenje formule (IV) kao takvo

pri čemu

- R2označava atom hlora; linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika opciono supstituisan sa najmanje jednim atomom fluora, kao što je metil radikal; ili perhalogeno linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, poput trifluorometil radikala,

- R3označava atom vodonika; hidroksi radikal; ili linearni ili razgranati alkilni radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, kao što je metil radikal, R3je u položaju 5 ili u položaju 6 piridin-2-il prstena, i

- X je atom broma ili atom joda.

[0079] Među jedinjenjima formule (IV) mogu se navesti sledeća specifična jedinjenja:

-5-bromo-N-piridin-2-il-2-trifluorometil-benzamid,

-5-bromo-2-metil-N- (6-metilpiridin-2-il) benzamid,

-5-bromo-N- (6-metilpiridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid,

-5-jod-2-metil-N- (piridin-2-il) benzamid,

-5-bromo-N- (5-hidroksi-piridin-2-il) -2-trifluorometil-benzamid, i

-5-bromo-2-hloro-N- (piridin-2-il) benzamid.

[0080] Konkretno, polazni materijal (XIII) gde R2označava radikal CF3, sintetiše se prema sledećoj šemi a.

Šema a

[0081] Esterifikacija 5-bromo-2-jodobenzoeve kiseline može se izvršiti korišćenjem kiseline kao što je sumporna kiselina u prisustvu metanola.

[0082] Zatim se sledeći korak može sastojati u uvođenju trifluorometil grupe pomoću metil 2,2-difluoro-2- (fluorosulfonil) acetata u prisustvu bakar-jodida ili bakar-bromida u N-metilpirolidinonu ili dimetilformamidu. Reakciona smeša se može zagrejati od 80 °C do 120 °C. Kada se postigne završetak i nakon obrade, sirovi ostatak se prečišćava da bi se dobilo jedinjenje (Xllla).

[0083] Što se tiče polaznog materijala (IV) koji ima R3= OH u položaju 5 piridin-2-il grupe i X = Br, može se sintetisati prema sledećoj šemi b.

Šema b

[0084] Jedinjenje (XVb) u kome je R2kao što je prethodno definisano, nastaje primenom iste procedure kao i za jedinjenje (IV).

[0085] Jedinjenje (IVb) u kome je R2kao što je prethodno definisano, nastaje primenom iste procedure kao i za jedinjenje (XI).

[0086] Kada je R2= Me i x = I, ovaj polazni materijal (IV) se može sintetisati prema sledećoj šemi c.

Šema c

[0087] Jodiranje 2-metilbenzoeve kiseline postiže se upotrebom, na primer, N-jodosukcinimida ili joda u koncentrovanoj sumpornoj kiselini na temperaturi od 0 °C do sobne temperature, dajući 5-jod-2-metilbenzoevu kiselinu.

[0088] Sledeći korak se izvodi istim postupkom kao i za jedinjenje (IV).

[0089] Drugi sintetički pristup za dobijanje jedinjenja Formule (I) i/ili na njihovom salinisanom obliku (II) prikazan je na sledećoj šemi 4.

1

Šema 4

[0090] Prema tome, ovaj pronalazak je takođe usmeren na drugi postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koji obuhvata najmanje sledeće korake koji se sastoje od:

(1) izvođenja katalitičkog kuplovanja, naročito sa paladijumskim katalizatorom, između intermedijernih jedinjenja formule (IV)

pri čemu

- R2i R3su kako je definisano u formuli (I) i

- X je atom broma ili atom joda i poluproizvod jedinjenja formule (VI)

pri čemu:

- R1označava atom fluora ili perhalogeno linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, poput trifluorometil radikala;

tako da se dobije jedinjenje formule (VII)

pri čemu su R1, R2i R3kao što je gore definisano;

(2) nakon što je navedeno jedinjenje formule (VII) u kontaktu sa bazom kao što je litijum hidroksid ili natrijum hidroksid da bi se dobilo jedinjenje formule (VIII)

pri čemu su R1, R2i R3kao što je gore definisano;

(3) dovođenje u kontakt tako dobijenog jedinjenja formule (VIII) iz koraka (2) sa najmanje jednim reagensom za formiranje amida, kao što je dicikloheksilkarbodiimid ili benzotriazol-1-iloksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat, i pentafluorofenolom u prisustvu PG1gvanidina, kao što je N-Bondovan ili N-Cbz gvanidin da se dobije jedinjenje formule (V).

pri čemu su R1, R2i R3kao što je gore definisano;

1

navedeno jedinjenje formule (V) se dalje uklanja sa zaštite i opciono salifikuje da se dobije očekivano jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

[0091] Prema ovom drugom putu, različiti polazni materijali se razmatraju za izvođenje intermedijernog proizvoda (V) gde su R2i R3kao što je prethodno definisano, a X označava atom joda ili atom broma. Preciznije, jedinjenje (IV) u kome je R3kao što je prethodno definisano je u ovom slučaju, kuplovano sa jedinjenjem (VI) sa sličnim uslovima kao što je navedeno u šemi 1.

[0092] Zatim, baza kao što je litijum hidroksid ili natrijum hidroksid može se dodati u rastvor intermedijernog jedinjenja (VII) ohlađen ledom, koji je u vodenom organskom rastvaraču, i smeša se može mešati na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakciona smeša se tada može koncentrovati i zakiseliti radi taloženja jedinjenja (VIII). Jedinjenje (III) se može izdvojiti i prečistiti pre sledećeg koraka.

[0093] Dalje, rastvor pomenutog jedinjenja (III) sa reagensima za formiranje amida, kao što je dicikloheksilkarbodiimid ili benzotriazol-1-il-oksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat i pentafluorofenol, može se mešati na sobnoj temperaturi tokom 3 sata u rastvaraču kao što je tetrahidrofuran. Nakon završetka reakcije i uklanjanja taloga, na primer, filtriranjem, filtrat se može izdvojiti i prečistiti da bi se dobilo jedinjenje (V) u obliku čvrstog materijala.

[0094] Jedinjenje (V) se zatim može rastvoriti u rastvaraču poput tetrahidrofurana ili dihlormetana u prisustvu PG1gvanidina, poput N-Boc gvanidina ili N-Cbz gvanidina, i mešati na sobnoj temperaturi. Nakon završetka reakcije, očekivano jedinjenje (I) je dobijeno. Kao što je otkriveno u prethodnoj šemi 1, iz njih se mogu sintetisati druga jedinjenja formule (I), poput jedinjenja formule (II), koja odgovaraju oblicima soli jedinjenja (I).

[0095] Obe metode, koje su detaljno opisane u šemama 1 i 4, mogu takođe poželjno da sadrže sledeće korake prečišćavanja i/ili izolacije dobijenih međuproizvoda ili krajnjih proizvoda. Pogodni načini prečišćavanja su detaljno opisani u sledećim primerima. Prečišćavanje jedinjenja se pogotovo može izvesti preparativnom tečnom hromatografijom visokih performansi (HPLC).

[0096] Trenutni pronalazak će se bolje razumeti iz sledećih primera, od kojih su svi namenjeni samo za ilustraciju i ni na koji način ne ograničavaju obim trenutnog pronalaska.

[0097] Primeri koji slede ilustruju pripremu određenih jedinjenja u skladu sa pronalaskom, bez ograničenja, međutim. Brojevi ilustrovanih jedinjenja odnose se na one date u Tabeli 1 gore, koja ilustruje hemijske strukture i fizička svojstva brojnih jedinjenja prema pronalasku.

PRIMERI – JEDINJENJA

MATERIJALI I METODE.

[0098]<1>H NMR i<13>C NMR podaci su snimljeni na Bruker 400 MHz AVANCE seriji ili Bruker 300 MHz DPKS spektrometru sa CDCI3ili DMSO-d6ili CD3OD kao rastvaračem.<1>H hemijski pomaci su referencirani na 7,26 ppm za CDCI3, 2,5 ppm za DMSO-d6i 3,3 ppm za CD3OD. Hemijski pomaci<13>C su referencirani na 77 ppm za CDCI3, 39 ppm za DMSO- d6i 44 ppm za CD3OD, i dobijeni su<1>H razdvajanjem. Multipleti se skraćuju na sledeći način: singlet (i), dublet (d), triplet (t), kvartet (k), dublet-dublet (dd), kvintet (kvinta), sekstet (sekstet), septet (septet), multiplet ( m), i širina (br).

[0098] MS je meren na LC/MSD masenom spektrometru serije Agilent 1200/1260. Kolona: Zorbax XDB C18 (50 x 4,6) mm, 5 mm ili Acquity BEH C18 (50 x 2,1 mm; 1,7 mm). Mobilna faza: Rastvarač A: 0,1% mravlja kiselina u Milli-Q vodi (ili) 0,1% Trifluorosirćetna kiselina u Milli-Q-vodi. Rastvarač B: Acetonitril. Brzina protoka: 1,5 mL/min. Zapremina injektovanja: 2 mL. Talasna dužina: Maksimum hromatograma (210-400nm). Trajanje: 6,0 min. Izvor jonizacije: Multi-mode (ESI i APCI).

[0100] Čistoća je merena na HPLC spektrometru serije Agilent 1200/1260. Kolona: C18 (250 X 4.6) mm, 5 mm (ili) C18 (150 X 4.6) mm, 5 mm. Mobilna faza: Rastvarač A: 10 mM amonijum acetat u Milli-Q vodi (ili) 0,1% Trifluorosirćetna kiselina u Milli-Q-vodi. Rastvarač B: Acetonitril. Brzina protoka: 1,0 ml/min. Zapremina injektovanja: 2 mL. Talasna dužina: Maksimum hromatograma (210-400 nm). Trajanje: 30 min.

[0101] Za jedinjenje 1 c, MS je meren sa UPLC-SKD (Simple Quad, proizvođač Waters). Kolona: Acquity BEH C18 (50 x 2,1 mm; 1,7 mm). Mobilna faza: rastvarač A: H2O 0,05% TFA rastvarač B: CH3CN 0,035% TFA. Protok; 1 mL / min. UV detekcija: I = 220 nm. MS detekcija (Simple Quad) Jonizacija: ESI elektrosprej Prva / Poslednja masa (uma) FS: 160 / 1200 uma Kapilarni napon (KV): 3,5. Konus (V): 20. Temperatura izvora (°C): 150 Temperatura desolvacije(°C): 500. Protok desolvacionog gasa (L/sat): 1200. Protok konusnog gasa (L/sat): 100. Rezolucija LM 1: 13.00. Rezolucija HM1: 13.00. Jonska energija1: 0,20.

[0102] Za jedinjenje dobijeno na kraju koraka 1 u pripremi intermedijera 2, LC-MS je meren sledećom metodom: Kolona: XBridge C18,4,6*50 mm, 3,5 mm Mobilna faza: H2O (10 mmol NH4HCO3) (A) / ACN (B) Program elucije: Gradijent od 5 do 95 % B za 1,6 min pri 1,8 ml / min Temperatura: 50 °C Detekcija: UV (214,4 nm) i MS (ESI, Pos režim, 110 do 1000 amu).

[0103] Reakcije koje zahtevaju anhidrovane uslove izvedene su u inertnoj atmosferi (azot ili argon) sa anhidrovanim rastvaračima (sa ili bez molekularnih sita).

[0104] Svi R1, R2, R3u sledećim šemama su gore definisani, kada nisu navedeni.

PRIMER 1

[0105]

1

Jedinjenje 1a (kao baza)

[0106] Korak 1: U degazirani rastvor 5-Bromo-N-piridin-2-il-2-trifluorometil-benzamid intermedijera 2 (25,0 g, 72,46 mmol) i terc-butil N- [N- [3-etinil -5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat intermedijer 1 (28,29 g, 79,71 mmol) u suvom etil acetatu (250 ml) u zatvorenoj epruveti dodat je bakar-jodid (0,68 g, 3,62 mmol), trietil amin (31,41 ml, 217,35 mmol) i bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid (5,08 g, 7,24 mmol). Reakciona smeša je ponovo degazirana 10 minuta i zagrevana na 65 °C tokom 4 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) pomoću etil acetata u naftnom etru da bi se dobio terc-butil N- [N- [3-[2- [3- (2-piridilkarbamoil) -4- (trifluorometil) fenil] etinil] -5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat (18,0 g, 40 %) u obliku bele čvrste materije.

[0107] Korak 2: U rastvor ohlađen ledom terc-butil N- [N- [3- [2- [3- (2-piridilkarbamoil) -4- (trifluorometil) fenil] etinil] -5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamata (18.0 g, 29.07 mmol) u suvom dihlorometanu (150 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (66.3 g, 581.58 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi 12 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je uparena pod sniženim pritiskom. Sirovi materijal je triturisan sa dietil etrom, a nastala čvrsta supstanca je filtrirana da se dobije so kao beličasta čvrsta supstanca. Ovo je pomešano sa ledom i bazom korišćenjem 10% rastvora NaHCO3. Nastala čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom, heksanom i osušena pod vakuumom da bi se dobilo 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5 (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) ) benzamidno jedinjenje 1a (14,6 g, 96%) kao bela čvrsta supstanca.

LC-MS APCI: Preračunato na C24H15F6N5O2519.41; Posmatrane m/z [M+H]<+>520.41. Čistoća pomoću LC-MS: 98.04 %. RT: 3.09. Čistoća pomoću HPLC: 99.38%. RT: 12.79.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.21 (s, 1H), 8.52 (s, 1H), 8.38-8.40 (m, 2H), 8.17 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 8.11 (s, 2H), 7.99 (s, 1H), 7.86-7.92 (m, 3H), 7.20 (t, J = 6.40 Hz, 1H), 6.88 (bs, 2H).

Jedinjenje 1b (kao hidrohloridna so)

[0108] Korak 1: U degazirani rastvor 5-Bromo-N-piridin-2-il-2-trifluorometil-benzamid intermedijera 2 (9,0 g, 26,09 mmol) i terc-butil N- [N- [3-etinil -5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat intermedijer 1 (11,11 g, 31,30

1

mmol) u suvom etil acetatu (100 ml) u zatvorenoj epruveti dodat je bakar-jodid (0,25 g, 1,30 mmol), trietil amin (10,90 ml, 78,26 mmol) i bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid (1,83 g, 2,61 mmol). Reakciona smeša je ponovo degazirana 10 minuta i zagrevana na 65 °C 5 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je ostavljena na sobnoj temperaturi i razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) pomoću etil acetata u naftnom etru da bi se dobio terc-butil N- [N- [3-[2- [3- (2-piridilkarbamoil) -4- (trifluorometil) fenil] etinil] -5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat (8,5 g, 53 %) u obliku žute čvrste supstance.

[0109] Korak 2: Koncentrovana HCl (200 mL) se polako dodaje u terc-butil N- [N- [3- [2- [3- (2-piridilkarbamoil) -4-(trifluorometil) fenil] etinil] -5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat (8,5 g, 13,73 mmol) uz hlađenje ledom. Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi 6 sati. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena. Ovaj materijal je dalje osušen korišćenjem liofilizatora 36 sati da bi se dobilo jedinjenje 1b 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid hidrohlorid (6,1 g, 80%) kao sivo bela čvrsta supstanca.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.39 (s, 1H), 11.29 (s, 1H), 8.66 (s, 4H), 8.61 (s, 1H), 8.50 (s, 1H), 8.38 (s, 2H), 8.15 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 8.00 (s, 1H), 7.88-7.96 (m, 3H), 7.20-7.88 (m, 1H)

LC-MS APCI: Preračunato na C24H15F6N5O2519.41; Posmatrane m/z [M+H]<+>520.41.

Čistoća pomoću LC-MS: 99.81 %. RT: 2.55.

Čistoća pomoću HPLC: 98.57%. RT: 11.99

Jedinjenje 1c (kao so malonata)

[0110] Korak 1: U reaktor pod azotom napunjen je 5-brom-N-piridin-2-il-2-trifluorometil-benzamid intermedijer 2 (0,690 kg, 2 mol., 1 ekv.), bakarni jodid (0,019 kg, 0,1 mol., 0,05 ekv.), Pd (PPh3) 2Cl2(0,140 kg, 0,2 mol., 0,1 ekv.) i acetonitril (6,6 L, 9,5 vol). Terc-butil N- [N- [3-etinil-5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamata jedinjenje intermedijera 1 (0,924 kg, 2,6 mol., 1,3 ekv.) je dodato u petom minutu u suspenziju uz mešanje na 25 °C. Ovaj dodatak je blago endoterman. Suspenzija je degasirana u struji azota tokom 30 minuta uz mešanje. Zatim je dodat trietilamin (0,605 kg, 5,98 mol., 3 ekv.) u 17. minutu na 25 °C. Uočava se egzotermna reakcija od 6 °C. Levak za dodavanje je ispran acetonitrilom (0,5 L, 0,7 vol). Reakciona smeša je zagrevana na 45 °C i održavana 2 sata dok ne bude prisutno manje od 1% (to jest sve do manje od 9,24 g, do manje od 0,026 mola) intermedijera 1. Suspenzija je zatim ohlađena na 10 °C (na -20 °C / sat) i održavana 1 sat. Intermedijer terc-butil N- [N- [3- [2- [3- (2-piridilkarbamoil) -4- (trifluorometil) fenil] etinil] -5-(trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat je filtriran i filter papir je ispran acetonitrilom (1.4 L, 2 vol), zatim vodom (0.7 L, 1 vol). Posle sušenja u struji azota (1 noć, 0,3 bara) 0,745 kg terc-butil N- [N- [3- [2- [3- (2-piridilkarbamoil) -4-(trifluorometil) fenil] etinil] -5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat je izolovan sa prinosom od 60%.

[0111] Korak 2: Suspenzija terc-butil N- [N- [3- [2- [3- (2-piridilkarbamoil) -4- (trifluorometil) fenil] etinil] -5-trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamata (1,5 kg, 2,42 mol) u etil acetatu (14,5 L) zagrevana je na 70 °C uz mešanje. Trifluorosirćetna kiselina (2,2 kg, 8 ekv.) je dodata na 30. minutu na 70 °C. Levak za dodavanje je ispran etil acetatom (0.75 L, 0.5 vol). Reakciona smeša je održavana 22 sata na 70 °C do manje od 1% (to jest do manje od 15 g, do manje od 0.0242 mola) terc-butil N- [N- [3- [2- [3 -(2-piridilkarbamoil) -4- (trifluorometil) fenil] etinil] -5-trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat. Posle hlađenja na 20 °C, nakon jednog sata u smešu je dodat 28% rastvor baze NH4OH do postizanja pH = 9-10. Posle dodatnih 15 minuta mešanja, dodata je voda (11,3 L, 7,5 vol). Faze su razdvojene. Organski sloj je razblažen etil acetatom (45 L, 30 vol) i ispran sukcesivno vodenim rastvorom natrijum metabisulfita (Na2S2050,15 kg u 15 L vode) i vodom (15 L, 10 vol). Izveden je dodatni tretman ugljem (Darco S51). Rastvor etil acetata (56,37 kg) je uključen u sledeći korak salifikovanja.

[0112] Deo prethodnog rastvora 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin2-il) -2-(trifluorometil) benzamida procenjene čistoće 0,958 kg, 1,844 mol, 1 ekv.) koncentriše se pod sniženim pritiskom (100 mbar, 50 °C) do 10 zapremina etil acetata. Dodatno azeotropno sušenje je izvedeno sa 15 zapremina etil acetata. Dobijeni rastvor (10 zapremina) se zagreva na 50 °C, a zatim se dodaje 2% 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil)-5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il)- 2 (trifluorometil) benzamid malonska kiselina. Rastvor malonske kiseline (0,192 kg, 1,144 mol, 1 ekv.) u etil acetatu (2,8 L, 2,9 vol) dodat je nakon 30 minuta na 50 °C. Levak za dodavanje se ispere sa 0,4 L etil acetata. Kristalizacija je praćena tokom dodavanja kiseline. Mešanje je održavano 1 sat na 50 °C i ohlađeno na 10 °C (-20 °C/sat). Brza filtracija je izolovala malonsku kiselinu 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2-(trifluorometil) benzamid i filter papir je dva puta ispran sa 1 L etil acetata. Proizvod je osušen u struji azota tokom jedne noći da bi se dobilo 1.096 kg jedinjenja 1c 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -N- (piridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamida malonske kiseline sa prinosom od 95,3%.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): 12.82 (bs, 1H), 11.19 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.38 (m, 1H), 8.17 (d, J = 10.3 Hz, 1H), 8.12 (s, 1H), 7.98 (s, 1H), 7.91 (s, 2H), 7.87 (ddd, J = 8.0, 7.8.

LC-MS APCI: Preračunato na C24H15F6N5O2519.41; Posmatrane m/z [M+H]<+>520.02.

Čistoća pomoću LC-MS: 99.1 %. RT: 2.67

Čistoća pomoću HPLC: 98.5%. RT: 9.57.

1

INTERMEDIJER 1

[0113]

Korak 1: U degasirani rastvor metil 3-bromo-5- (trifluorometil) benzoata (20,0 g, 70,67 mmol) i trimetilsililacetilena (17,4 g, 176,67 mmol) u acetonitrilu (100 ml) u zatvorenoj epruveti dodat je Pd (PPh3) 2Cl2(4.96 g, 7.07 mmol) i bakar -jodid (1.34 g, 7.06 mmol). Epruveta je ponovo degasirana i zagrevana 2 sata na 70 °C. Reakciona smeša je ohlađena i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću petrol etra da bi se dobio metil estar 3-trifluorometil5-trimetilsilaniletinil-benzoeve kiseline (14 g, 66 %) u obliku žute tečnosti.

Korak 2: U rastvor metil estara 3-trifluorometil-5-trimetilsilaniletinil-benzoeve kiseline (14,0 g, 46,60 mmol) u metanolu (50 ml) dodat je kalijum karbonat (0,58 g, 4,2 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 20 minuta. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen etil acetatom (100 mL), ispran vodom, slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio metil estar 3-etinil-5-trifluorometilbenzoeve kiseline 1-1 (11 g, 61%) kao smeđa tečnost.

Korak 3: U ohlađeni rastvor metil estara 3-etinil-5-trifluorometil-benzoeve kiseline (11,0 g, 48,03 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) i vodi (25 ml) dodat je litijum hidroksid (6,0 g, 144,10 mmol) ) i mešana na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana i zakiseljena vodenim rastvorom limunske kiseline. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena da se dobije 3-etinil-5-trifluorometil-benzoeva kiselina (9.2 g, 78%) kao bledo smeđa čvrsta supstanca. Korak 4: U rastvor 3-etinil-5-trifluorometil-benzoeve kiseline (9,2 g, 42,99 mmol), mešan je dicikloheksilkarbodiimid (13,28 g, 64,48 mmol) i pentafluorofenol (11,8 g, 64,48 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) na sobnoj temperaturi 3 sata. Po završetku reakcije, smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i uklonjena iticikloheksilurea uklonjena filtriranjem. Filtrat je koncentrovan i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću etil acetata u naftnom etru da bi se dobio pentafluorofenil estar 3-etinil-5-trifluorometilbenzoeve kiseline (13,6 g, 83%) u obliku prljavo bele supstance.

Korak 5: U rastvor 3-etinil-5-trifluorometil-benzoeve kiseline pentafluorofenil estar (13,6 g, 35,78 mmol) u tetrahidrofuranu dodat je monobogvanidin (6,82 g, 42,94 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 4 sata. Po završetku reakcije, reakciona smeša je uparena i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću etil acetata u naftnom etru da bi se dobio terc-butil N- [N- [3-etinil-5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat intermedijer 1 (8,2 g, 64 %) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

INTERMEDIJER 2

[0114]

1

Korak 1: Koncentrovana H2SO4(10 mL) je dodata kap po kap u rastvor 5-brom-2-jodobenzoeve kiseline (100 g, 305.89 mmol) u MeOH (800 mL). Smeša je refluksovana 16 sati i zatim koncentrovana. Ostatak je rastvoren u etil acetatu (1 L). Organski sloj je ispran zasićenim NaHCO3i rastvorom soli (3 x 200 mL), osušen iznad Na2SO4, filtriran i koncentrovan da bi se dobio ciljni proizvod metil estar 5-bromo-2-jodo-benzoeve kiseline (101,4 g, prinos 90%) kao žuta čvrsta supstanca. LC čistoća: 98,91 % (254 nm); Masa: pronađen pik 341 (M H) na 2.214 min

Korak 2: U rastvor metil estara 5-bromo-2-jod-benzoeve kiseline (24 g, 70,4 mmol) i metil 2,2-difluoro-2- (fluorosulfonil) acetata (13,5 ml, 105,6 mmol) u N- metil-2-pirolidinon (80 mL) dodat je bakar (I) bromid (1.21 g, 8.45 mmol). Reakciona smeša je mešana na 100 °C tokom 5 sati. Reakcija je filtrirana i podeljena između etil acetata i rastvora soli. Vodeni sloj je ekstrahovan etil acetatom, a organski slojevi su spojeni i osušeni iznad Na2SO4. Nakon filtriranja, rastvarač je uklonjen u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (0-4% etil acetat u naftnom etru) da bi se dobio metil estar 5-bromo-2-trifluorometil-benzoeve kiseline (119,2 g, prinos 96%) u obliku žutog ulja.

Korak 3: U ohlađeni rastvor metil estara 5-bromo-2-trifluorometil-benzoeve kiseline (9,1 g, 35,68 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) i vodi (10 ml) dodat je litijum hidroksid (4,4 g, 104,76 mmol) ) i mešan je na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana i zakišeljena vodenim rastvorom limunske kiseline. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena da se dobije 5-bromo-2-trifluorometil-benzoeva kiselina (8 g, 95 %) u obliku bledo žute čvrste supstance.

Korak 4: Rastvor 5-bromo-2-trifluorometil-benzoeve kiseline (8,0 g, 29,74 mmol) u tionil hloridu (40 ml) je zagrevan do refluksa tokom 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC (pretvaranjem acil hlorida u metil estar). Tionil hlorid je uparen i ostatak je sipan u reakcionu smešu koja je sadržala 2-amino piridin (3,2 g, 32,71 mmol), trietil amin (12,44 ml, 89,21 mmol) u suvom etil acetatu (80 ml) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na RT (sobna temperatura) 12 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je preneta u vodu (200 mL), ekstrahovana etil acetatom (2 x 200 mL). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2 k 100 mL), slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i uparen. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem etil acetata u petrol eteru da bi se dobio 5-brom-N-piridin-2-il-2-trifluorometil-benzamid Intermedijer 2 (5,1 g, 49%) u obliku bele čvrste supstance.

PRIMER 2

[0115]

2

Korak 1:

(trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamata intermedijera 1 (1,5 g, 4,22 mmol) i 5-bromo-2-metil-N -(6-metilpiridin-2-il) benzamid intermedijer 3 (0,89 g, 2,92 mmol) u suvom etil acetatu (20 ml) u balonu sa okruglim dnom je dodat bakar-jodid (0,04 g, 0,211 mmol), trietil amin (1,42 g) , 14,08 mmol) i bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid (0,3 g, 0,42 mmol). Reakciona smeša je ponovo degasirana 10 minuta i zagrevana na 60 °C, 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je ohlađena, razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) pomoću etil acetata u naftnom etru da se dobije 5- [2- [3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil] etinil] -2-metil-N- (2-piridil) benzamid (0,93 g, 37%) u obliku bledo braon čvrste supstance.

Korak 2: U ohlađen rastvor 5- [2- [3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil] etinil] -2-metilN- (2-piridil) benzamida (0,93 g, 1,60 mmol) je dodat HCI u dioksanu (10 mL) i mešano 12 sati. Reakciona smeša je filtrirana, čvrsta supstanca isprana heksanom i osušena pod vakuumom. Proizvod je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC metode. Dobijena čvrsta supstanca je mešana sa HCl u dietil etru 1 sat da bi se dobilo jedinjenje 2 5-((3-((diaminometilen) karbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -2-metil-N- (6-metilpiridin-2) -il) benzamid hidrohlorid (0,075 g, 9 %) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

<1>HNMR (400 MHz, DMSO-d6): d 12.38 (s, 1H), 11.03 (s, 1H), 8.67 (m, 4H), 8.54 (s, 1H), 8.45 (s, 1H), 8.00 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 7.83 (t, J = 8.00 Hz, 1H), 7.62 (s, 1H), 7.63 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.00 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 7.60 Hz, 1H), 2.46 (s, 3H), 2.46 (s, 3H).

LC-MS APCI: Preračunato na C24H15F6N5O2479.46;; Posmatrane m/z [M+H]<+>480.4.

Čistoća pomoću LC-MS: 99.38 %.

Čistoća pomoću HPLC: 98.64%.

INTERMEDIJER 3:

[0116]

Intermedijer 3

[0117] Rastvor 5-bromo-2-metilbenzoeve kiseline (5.0 g, 23.25 mmol) u tionil hloridu (15 mL) je zagrevan na refluksu 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Tionil hlorid je uparen i ostatak je sipan u reakcionu smešu koja je sadržala 6-metilpiridin-2-amin (2.5 g, 23.14 mmol), trietil amin (5.8 g, 57.34 mmol) u suvom etil acetatu (50 mL) na 0 °C . Reakciona smeša je mešana na RT (sobna temperatura) 12 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je preneta u vodu (200 mL), ekstrahovana etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2 x 100 mL), slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem etil acetata u petrol eteru da bi se dobio 5-brom-2-metil-N- (6-metil-2-piridil) benzamid intermedijer 3 (4 g, 57%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

PRIMER 3

[0118]

Korak 1: U degasirani rastvor terc-butil N- [N- (3-etinil-5-fluorobenzoil) karbamimidoil] karbamata intermedijera 4 (2 g, 6,55 mmol) i 5-bromo-N- (6-metilpiridin-2 -il) -2- (trifluorometil) benzamid intermedijera 5 (1,6 g, 4,45 mmol) u suvom etil acetatu (15 ml) u balon sa okruglim dnom dodati su bakar-jodid (0,05 g, 0,26 mmol), trietil amin (1,4 g, 13,83 mmol) i bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid (0,46 g, 0,65 mmol). Reakciona smeša je ponovo degasirana 10 minuta i zagrevana na 60 °C tokom 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je ohlađena, razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) pomoću etil acetata u petroleteru da bi se dobio terc-butil N- [N- [3-fluoro-5- [2- [ 3-[(6-metil2-piridil) karbamoil] -4- (trifluorometil) fenil] etinil] benzoil] karbamimidoil] karbamat (0,8 g, 21%) u obliku žute čvrste supstance.

Korak 2: U ohlađeni rastvor terc-butil N- [N- [3-fluoro-5- [2- [3-[(6-metil-2-piridil) karbamoil] -4- (trifluorometil) fenil] etinil] benzoil] karbamimidoil] karbamat (0,8 g, 1,37 mmol) u dioksanu je dodat HCI u dioksanu (10 ml) i mešan 4 sata. Reakciona smeša je filtrirana, čvrsta supstanca isprana heksanom i osušena pod vakuumom. Proizvod je dalje prečišćen pomoću preparativne HPLC metode. Dobijena čvrsta supstanca se meša 1 sat sa HCl u dietil etru da bi se dobilo jedinjenje 3 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-fluorofenil) etinil) -N- (6-metilpiridin-2-il)-2- (trifluorometil) benzamid hidrohlorid (0,14 g, 25 %) u obliku beličaste čvrste supstance.

HNMR (400 MHz, DMSO-d6): d 12.31 (s, 1H), 11.21 (s, 1H), 8.67-8.72 (m, 4H), 8.22 (s, 1H), 8.11 (dd, J = 1.60, 9.20 Hz, 1H), 7.86-7.97 (m, 5H), 7.76-7.79 (m, 1H), 7.08 (d, J = 7.20 Hz, 1H), 2.43 (s, 3H).

LC-MS APCI: Preračunato na C24H15F6N5O2479.46;; Posmatrane m/z [M+H]<+>484.0

Čistoća pomoću LC-MS: 98.13 %.

Čistoća pomoću HPLC: 98.62%.

INTERMEDIJER 4:

[0119]

Korak 1: U degasirani rastvor metil 3-bromo-5-fluorobenzoata (14 g, 60,0 mmol) i trimetil silil acetilena (14,7 g, 150,21 mmol) i trietil amina (14,7 g, 145,27 mmol) u acetonitrilu (100 ml) u zatvorenoj epruveti dodat je Pd (PPh3) 2Cl2(4,2 g, 5,98 mmol) i bakarni jodid (1,14 g, 5,97 mmol). Zatvorena epruveta je ponovo degasirana i zagrevana 2 sata na 60 °C. Reakciona smeša je ohlađena i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću petroletra da bi se dobio metil 3-fluoro-5- (2-trimetilsililetinil) benzoat (14.4 g, 96%) kao žuta tečnost.

Korak 2: U rastvor metil 3-fluoro-5- (2-trimetilsililetinil) benzoata (14,4 g, 57,53 mmol) u metanolu (50 ml) dodat je kalijum karbonat (0,7 g 5,14 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 20 minuta. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je razblažen etil acetatom (100 mL), ispran vodom, slanim rastvorom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da se dobije metil 3-etinil-5-fluoro-benzoat intermedijer 4-1 (8.9 g, 87%) kao smeđa tečnost.

Korak 3: U rastvor metil 3-etinil-5-fluoro-benzoata (8,9 g, 50 mmol) u tetrahidrofuranu (30 ml) i vodi (15 ml) dodat je litijum hidroksid (3,1 g, 73,8 mmol) i mešan na sobne temperature 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana i zakišeljena

2

vodenim rastvorom limunske kiseline. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena da se dobije 3-etinil-5-fluoro-benzoeva kiselina (7.66 g, 92 %) u obliku bele bele čvrste supstance.

Korak 4: Rastvor -etinil-5-fluoro-benzoeva kiselina (7,6 g, 46,34 mmol), dicikloheksilkarbodiimida (14,4 g, 69,9 mmol) i pentafluorofenola (12,9 g, 70,49 mmol) se meša u tetrahidrofuranu (50 ml) na sobnoj temperaturi 3 sata. Po završetku reakcije, smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i istaložena dicikloheksilurea je uklonjena filtriranjem. Filtrat je koncentrovan i korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja.

Korak 5: Rastvoru PFP estra (13,9 g, 42,31 mmol) u tetrahidrofuranu dodat je monobok gvanidin (16,3 g, 102,51 mmol) i mešan je na sobnoj temperaturi 4 sata. Po završetku reakcije, reakciona smeša je uparena i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću etil acetata u naftnom etru da bi se dobio terc-butil N- [N- (3-etinil-5-fluorobenzoil) karbamimidoil ] karbamat intermedijer 4 (9,5 g, 75%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

INTERMEDIJER 5:

[0120]

Intermedijer 5

[0121] Rastvor 5-bromo-2- (trifluorometil) benzoeve kiseline (1,5 g, 7,01 mmol) u tionil hloridu (10 mL) je zagrevan do refluksa tokom 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Tionil hlorid je uparen i ostatak je sipan u reakcionu smešu koja je sadržala 6-metilpiridin-2-amin (0.75 g, 6.93 mmol), trietil amin (1.7 g, 16.83 mmol) u suvom etil acetatu (25 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na RT (sobna temperatura) 12 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je preneta u vodu (200 mL), ekstrahovana etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2 x 100 mL), slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i uparen. Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem etil acetata u petrol eteru da bi se dobio 5-brom-N- (6-metilpiridin-2-il) -2- (trifluorometil) benzamid intermedijer 5 (1,1 g, 44 %) u obliku žute čvrste supstance.

PRIMER 4

Korak 1: U degasiran rastvor terc-butil N- [N- [3-etinil-5- (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamata intermedijara 1 (25 g, 82.84 mmol) i 5-jod-2-metil-N -(piridin-2-il) benzamid intermedijer 6 (32,34 g, 91,12 mmol) u suvom etil acetatu (500 ml) u zatvorenoj epruveti dodat je bakar-jodid (0,78 g, 4,14 mmol), trietil amin (35,92 ml, 248,52 mmol) ) i bis (trifenilfosfin) paladijum (II) dihlorid (5.81 g, 8.284 mmol). Reakciona smeša je ponovo degasirana 10 minuta i zagrevana na 65 °C tokom 5 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature i razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) pomoću etil acetata u naftnom etru da se dobije 5- [2- [3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-(trifluorometil) fenil] etinil]- 2-hloro-N- (2-piridil) benzamid (20,0 g, 49%) kao bledo žuta čvrsta supstanca.

Korak 2: Koncentrovana HCl (200 mL) je polako dodavana u-[2- [3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil] etinil] -2-hloro-N- (2-piridil) benzamid (19,0 g, 75,39 mmol) uz hlađenje ledom. Dobijena suspenzija je mešana na sobnoj temperaturi 6 sati. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana sukcesivno vodom, acetonitrilom i etil acetatom. Ovaj materijal je dalje osušen korišćenjem liofilizatora 36 sati da bi se dobilo jedinjenje 4 (15.0-5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5-trifluorometil) fenil) etinil) -2-metil-N- (piridin-2-il) benzamid hidrohlorida) g, 89%) kao sivo bela čvrsta supstanca.

HNMR (400 MHz, DMSO-d6): d 12.32 (s, 1H), 11.12 (s, 1H), 8.65-0.00 (m, 4H), 8.53 (s, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.40 (d, J = 4.20 Hz, 1H), 8.31 (s, 1H), 8.16 (d, J = 8.36 Hz, 1H), 7.91-7.95 (m, 1H), 7.78 (s, 1H), 7.66 (d, J = 7.80 Hz, 1H), 7.43 (d, J = 8.16 Hz, 1H), 7.25-7.22 (m, 1H), 2.45 (s, 3H).

LC-MS APCI: Preračunato na C24H15F6N5O2465.44; Posmatrane m/z [M+H]<+>466.0

Čistoća pomoću LC-MS: 99.92 %.

Čistoća pomoću HPLC: 96.58%.

INTERMEDIJER 6

[0123]

2

Korak 1: Rastvoru 2-metilbenzoeve kiseline (50,0 g, 367,6 mmol) koji se meša u koncentrovanoj H2S04(500 ml) dodat je polako N-jodosukcinimid (78,6 g, 349,2 mmol) na 0 °C. Reakcija je mešana na 0 °C tokom 5 sati. Po završetku reakcije, brzo je ohlađena ledom. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena pod vakuumom da bi se dobila 5-jod-2-metilbenzoeva kiselina (70.0 g, 74%) u obliku bledo braon čvrste supstance.

Korak 2: Rastvor 5-jod-2-metilbenzoeve kiseline (50.0 g, 190.0 mmol) u tionil hloridu (250 mL) zagrevan je na refluksu 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC (pretvaranjem acil hlorida u metil estar). Tionil hlorid je uparen i ostatak je sipan u reakcionu smešu koja je sadržala 2-amino piridin (19.72 g, 209.8 mmol), trietil amin (82.75 mL, 572.5 mmol) u suvom etil acetatu (500 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na RT (sobna temperatura) 12 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je preneta u vodu (2000 mL), ekstrahovana etil acetatom (2x 1000 mL). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2 x 1000 mL), slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i uparen. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem etil acetata u petrol eteru da bi se dobio 5-jodo-2-metil-N- (piridin2-il) benzamid intermedijer 6 (30,0 g, 48 %) u obliku bledo žute čvrste supstance.

PRIMER 5

[0124]

Korak 1: U degasirani rastvor intermedijera 5-bromo-N- (5-hidroksi-piridin-2-il) -2 trifluorometil-benzamida 7 (1,0 g, 2,77 mmol) i terc-butil N- [N- [3-etinil-5 (trifluorometil benzoil] karbam midoil] karbamata intermedijera 1 (0,93 g, 3,04 mmol) u suvom etil acetatu (15 ml) u posudu sa okruglim dnom dodati su bakar -jodid (26 mg, 0,14 mmol), trietil amin (1,2 mL, 8,31 mmol) i bis (trifenilfofin) paladijum (II) dihlorid (194 mg, 0,27 mmol). Reakciona smeša je ponovo degasirana 10 minuta i zagrevana na 65 °C 5 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je ohlađena, razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom i sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) koristeći 70-80% etil acetat u petroleteru da bi se dobio 5- [2- [3 (karbamimidoilkarbamoil) -5 (trifluorometil fenil) ] etinil] N- (5-hidroksi-2-piridil) -2 (trifluorometil benzamid (600.0 mg, 36%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

Korak 2: Čvrsto jedinjenje 5- [2- [3 (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil] etinil] N- (5-hidroksi-2-piridil) -2 (trifluorometil) benzamid hidrohlorid (600,0 mg, 0,79 mmol ) je dodato u koncentrovanu HCl (5 mL) i mešano preko noći na sobnoj temperaturi. Nastale čvrste supstance su filtrirane, isprane vodom, heksanom i osušene pod vakuumom da bi se dobilo 5-((3 (karbamimidoilkarbamoil) -5 (trifluorometil fenil) etinil) N- (5 hidroksipiridin 2- il) -2 (trifluorometil benzamid hidrohlorid jedinjenje 5) (450 mg, 83%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

<1>H NMR 400 MHz, DMSO-d6: δ 12,44 (s, 1H), 11,09 (s, 1H), 8,68 (s, 5H), 8,51 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 7,89-7,96 (m , 5H), 7.34 (dd, J = 2.40, 8.80 Hz, IH).

LC-MS APCI: Izračunato za C24H15F6N5O3535,41; Posmatrano m/z [M+ H]<+>536.

Čistoća pomoću LC-MS: 95,65 %.

Čistoća pomoću HPLC: 93,96%.

2

INTERMEDIJER 7

[0125]

Korak 1: U rastvor 5-bromo-2 trifluorometil-benzoeve kiseline (10,0 g, 37,17 mmol) u suvom dihlormetanu dodat je tionil hlorid (22,11 g, 185,85 mmol) na 0 °C. Smeša je zatim zagrevana 3 sata na 80 °C. Po završetku reakcije koncentrovana je pod sniženim pritiskom. Ohlađenom rastvoru acil hlorida u etil acetatu u atmosferi azota dodat je trietilamin (16,11 ml, 111,51 mmol) i 2-amino 5-hidroksi piridin (2,04 g, 18,58 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 sati. Reakciona smeša je koncentrovana, razblažena etil acetatom, isprana vodom, osušena iznad Na2SO4i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću 8-12% etil acetata u petroleteru da bi se dobio 5-bromo-2 trifluorometil-benzoeva kiselina 6 (5-bromo-2-trifluorometil-benzoilamino) -piridin -3-il estar (6,0 g, 26%).

Korak 2: U ohlađeni rastvor 5-bromo-2-trifluorometil-benzoeve kiseline 6- (5-bromo-2-trifluorometil-benzoilamino) -piridin-3-il estara (6,0 g, 9,85 mmol) u tetrahidrofuranu (25 mL) i vode (12.5 mL), dodat je litijumhidroksid (0,5 g, 11,82 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je odvojen, ispran vodom, osušen iznad Na2SO4i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću 70-80% etil acetata u petroleteru da bi se dobio 5-brom-N- (5-hidroksi-piridin-2-il) -2-trifluorometil-benzamid intermedijer 7 (3,0 g, 88%) kao bela čvrsta supstanca.

PRIMER 6

2

Korak 1: U degasirani rastvor metil 3-etinil-5- (trifluorometil) benzoat intermedijera 1-1 (0,8 g, 3,53 mmol), 5 bromo-2-hloro-N- (piridin-2-il) benzamid intermedijera 8 (1.1 g, 3.53 mmol) i trietilamin (1.5 mL, 10.6 mmol) u etil acetatu (20 mL) u zatvorenoj epruveti dodat je Pd (PPh3)2Cl2(0.25 g, 0.35 mmol) i bakarni jodid (0.033 g, 0.18 mmol ). Reakciona smeša je ponovo degasirana i zagrevana na 60 °C, 5 sati. Reakciona smeša je ohlađena, razblažena etil acetatom i filtrirana kroz celit. Filtrat je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću 20-35% etil acetata u petroleteru da bi se dobio metil 3- [2- [4-hloro-3- (2 piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5 (trifluorometil) benzoat (0,55 g, 31%).

Korak 2: U ohlađen rastvor metil 3- [2 [4-hloro-3- (2 piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5- (trifluorometil) benzoata (0,55 g, 1,2 mmol) u tetrahidrofuranu (8 ml) i vode (4 mL), dodat je litijum hidroksid monohidrat (0.15 g, 3.6 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 4 sata. Reakciona smeša je koncentrovana i zakiseljena vodenim rastvorom limunske kiseline. Istaložena čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena da se dobije 3- [2- [4-hloro-3- (2-piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5 (trifluorometil) benzoeva kiselina (0,4 g, 75%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

Korak 3: Smeša 3- [2- [4-hloro-3- (2-piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5 (trifluorometil) benzoeve kiseline (0,4 g, 0,79 mmol), dicikloheksilkarbodimid (0,24 g, 1,18 mmol) i pentafluorofenol (0,21 g, 1,18 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (5 ml) meša se na sobnoj temperaturi 3 sata. Nakon završetka reakcije, smeša je ohlađena u ledenom kupatilu i istaložena diocikloheksilurea uklonjena je filtriranjem. Filtrat je koncentrovan. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) pomoću 20-35% etil acetata u petroleteru da bi se dobio (2,3,4,5,6-pentafluorofenil) 3- [2- [4-hloro- 3-(2-piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5 (trifluorometil) benzoat (0,4 g, 72%).

Korak 4: U rastvor (2,3,4,5,6-pentafluorofenil) 3- [2- [4-hloro-3- (2-piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5- (trifluorometil) benzoata (0,4 g, 0.65 mmol) u anhidrovanom tetrahidrofuranu (5 mL) dodat je monobok gvanidin (0.16 g, 0.98 mmol) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 8 sati. Po završetku reakcije, reakciona smeša je uparena i prečišćena hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) pomoću 30-40% etil acetata u petroletru da bi se dobio terc-butil N-[N- [3- [2 [4-hloro-3- (2-piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5 (trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamat (0,2 g, 52%) kao bela čvrsta materija.

Korak 5: Trifluoro sirćetna kiselina (0,8 g, 6,83 mmol) je dodata u ohlađen rastvor terc-butil N- [N- [3- [2- [4 hloro3- (2 piridilkarbamoil) fenil] etinil] -5- ( trifluorometil) benzoil] karbamimidoil] karbamata (0,2 g, 0,34 mmol) u dihlorometanu (5 ml) i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 6 sati. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je uparena. Ostatak je mešan u 10% rastvoru NaHCO3sve dok se nije postigao pH bazne sredine. Čvrsta materija je filtrirana i isperana vodom i heksanom, osušena pod vakuumom. Čvrsta supstanca je preneta u dietil etar (5 mL), dodat je HCI u dietil etru (3 mL) i

2

rastvor je mešan na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakciona smeša je uparena pod vakuumom. Nastala čvrsta supstanca je triturisana dietil etrom i filtrirana da bi se dobilo 5-((3- (karbamimidoilkarbamoil) -5- (trifluorometil) fenil) etinil) -2-hloro-N-(piridin-2-il) benzamid hidrohlorid jedinjenje 6 (0,11g, 67%) kao prljavo bela čvrsta supstanca (hlorovodonična so).

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.30 (d, J = 2.80 Hz, 1H), 11.20 (s, 1H), 8.63 (s, 4H), 8.54 (s, 1H), 8.45 (s, 1H) ), 8,38 (d, J = 3,60 Hz, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,17 (d, J = 6,80 Hz, 1H), 7,87-7,91 (m, 2H), 7,71-7,74 (m, 1H) , 7,56-7,67 (m, IH), 7,21 (t, J = 7,20 Hz, IH).

LC-MS APCI: Izračunato za C23H15ClF3N5O2485,85; Posmatrano m/z [M H] 486.

Čistoća pomoću LC-MS: 95,22 %.

Čistoća pomoću HPLC: 97,05%. RT: 12,60.

INTERMEDIJER 8

[0127]

[0128] Rastvor 5-bromo-2-hlorobenzoeve kiseline (5.0 g, 21.23 mmol) u tionil hloridu (15 mL) je zagrevan na refluksu 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Tionil hlorid je uparen, a ostatak je prenet u reakcionu smešu koja sadrži 2-amino piridin (2.20 g, 23.35 mmol), trietil amin (9.2 mL, 63.69 mmol) u suvom etil acetatu (30 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi 12 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je preneta u vodu (100 mL), ekstrahovana etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2x100 mL), slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i uparen. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni korišćenjem etil acetata u petroletru da bi se dobio 5-brom-2-hloro-N- (piridin-2-il) benzamid intermedijer 8 (3,0 g, 46%) u obliku smeđe čvrste supstance.

PRIMER 7

2

Korak 1: U degasirani rastvor metil 3-etinil-5-fluorobenzoata intermedijera 4-1 (0,4 g, 1,159 mmol) i 4-bromo-N-(piridin-2 il)-2-(trifluorometil)benzamida intermedijera 2 ( 0,2 g, 1,122 mmol) u suvom etil acetatu (15 mL) u zatvorenoj epruveti je dodat bakar jodid (0,01 g, 0,057 mmol), trietilamin (0,29 mL, 2,87 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladidijum(II) 0,084 g, 0,116 mmol). Reakciona smeša je ponovo degasirana 10 min i zagrevana na 60°C tokom 2 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) pomoću etil acetata u petroletru da se dobije 3-fluoro-5- [3- (piridin-2-ilkarbamoil) -4 trifluorometilfeniletilmil-benzoik kiseli metil estar (0,4 g, 74%) kao sivobela čvrsta supstanca.

Korak 2: U ohlađen rastvor metil estra 3-fluoro-5-[3-(piridin-2-ilkarbamoil)-4-trifluorometil-feniletinil]-benzoeve kiseline (0,4 g, 0,904 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) i vode (5 mL), dodat je litijum hidroksid (0,11 g, 2,738 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 3 sata. Reakciona smeša je koncentrovana i zakiseljena vodenim rastvorom limunske kiseline i ekstrahovana etil acetatom (50 mL). Kombinovani organski sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen preko anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobila 3-fluoro-5-[3-(piridin2-ilkarbamoil)-4-trifluorometil-feniletinil]-benzojeva kiselina (0,19 g, 50% ) kao bledo smeđa čvrsta supstanca.

Korak 3: Rastvor 3-fluoro-5- [3- (piridin-2-ilkarbamoil) -4-trifluorometilfeniletinil] -benzoeve kiseline (0,19 g, 0,445 mmol), dicikloheksilkarbodiimida (0,14 g, 0,68 mmol) i pentafluorofenola (0,12) g, 0.68 mmol) u tetrahidrofuranu (10 mL) se meša na sobnoj temperaturi 2 sata. Nakon završetka reakcije, smeša je ohlađena korišćenjem ledenog kupatila i istaložena dicikloheksilurea je uklonjena filtracijom. Dobijeni filtrat je koncentrovan i korišćen za sledeći korak bez daljeg prečišćavanja da bi se dobio (2,3,4,5,6 pentafluorofenil) 3-fluoro5-[2-[3 (2-piridilkarbamoil)-4 (trifluorometil)fenil]etinil ]benzoat.

Korak 4: U rastvor (2,3,4,5,6-pentafluorofenil)3-fluoro-5-[2-[3-(2-piridilkarbamoil)-4 (trifluorometil)fenil]etinil]benzoata (0,13 g 0,218 mmol) u tetrahidrofuranu je dodat monobok gvanidin (0,053 g, 0,33 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 6 sati. Nakon završetka reakcije, reakciona smeša je uparena, a ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60120 mesh) korišćenjem etil acetata u petroletru da bi se dobio terc-butilN-[N-[3-[2-[3-(2-piridilkarbamoil)-4(trifluorometil)fenil]etinil]-5 fluorobenzoil]karbamimidoil]karbamat (0,05 g, 41%) kao prljavo bela čvrsta supstanca.

Korak 5: U ohlađen rastvor terc-butil N-[N-[3-[2-[3-(2 piridilkarbamoil)-4 (trifluorometil)fenil]etinil]-5-fluorobenzoil]karbamimidoil]karbamata (0,05 g, 0,23 mmol) u suvom dihlorometanu (10 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (0,25 g, 2,196 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi 6 sati. Završetak reakcije je praćen sa TLC. Reakciona smeša je uparena i triturisana sa dietiletrom, dobijena čvrsta supstanca je filtrirana i isprana dietiletrom da bi se dobila so kao bela čvrsta supstanca. Čvrsta supstanca je preneta u 10% rastvor NaHCO3i rastvor je mešan na sobnoj temperaturi sve dok se nije postigao pH bazne sredine. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana vodom i osušena pod vakuumom. Čvrsta supstanca je preneta u dietil etar (10 mL), dodat je HCl u dietil etar (5 mL) i rastvor je mešan 1 sat. Čvrsta supstanca je filtrirana, isprana heksanom i osušena pod vakuumom da bi se dobilo 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-fluorofenil)etinil)-N-(piridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid hidrohlorid jedinjenje 7 (0,04 g, 75 %) kao prljavo bela čvrsta supstanca

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 11.99 (s, 1H), 11.22 (s, 1H), 8.52 (m, 4H), 8.38 (s, 1H), 8.14-8.17 (m, 2H), 7.99-7.86 (m, 5H), 7.21 (t, J = 6.00 Hz, 1H).

LC-MS APCI: Izračunato za C23H15F4N5O2469,40; Uočeno m/z [M+H]<+>470,0.

Čistoća prema LC-MS: 98,90 %.

Čistoća prema HPLC: 97,9%.

PRIMER 8

[0130]

Korak 1: Rastvor 5-bromo-2- (trifluorometil) benzoeve kiseline (2,0 g, 7,43 mmol) u tionil hloridu (4,42 g, 37,17 mmol) zagrevan je na refluksu 3 sata. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC (pretvaranjem acil hlorida u metil estar). Tionil hlorid je uparen, a ostatak je prebačen u etil acetat, pročišćen u struji azota tokom 15 minuta na 0°C. Zatim je reakcija mešana na sobnoj temperaturi 1 sat. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je prebačena u vodu (50 mL) i ekstrahovana etil acetatom (2 x 100 mL). Kombinovani organski sloj je ispran vodom (2 x 50 mL), slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i uparen da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi materijal je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (60-120 mesh) korišćenjem etil acetata u petroletru da bi se dobio 5-bromo-2 (trifluorometil)benzamid (1,5 g, 75%) kao bela čvrsta supstanca.

Korak 2: U degasirani rastvor 5-bromo-2 (trifluorometil)benzamida (0,5 g, 1,86 mmol) i terc-butil N-[N-[3-etinil-5 (trifluorometil)benzoil]karbamimidoil]karbamata intermedijera 1 ( 0,65 g, 1,86 mmol) u suvom etil acetatu (10 mL) dodat je bakar-jodid (0,018 g, 0,09 mmol), trietilamin (0,78 mL, 5,59 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II)06glorid, 0.06 g. mmol). Reakciona smeša je ponovo degasirana 10 min i zagrevana na 65°C tokom 5 sati. Završetak reakcije je praćen

1

pomoću TLC. Reakciona smeša je ohlađena do sobne temperature, razblažena etil acetatom i filtrirana kroz sloj celita. Filtrat je koncentrovan u vakuumu i prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) korišćenjem etil acetata u petroletru da bi se dobio terc-butil N-[N-[3-[2-[3-karbamoil-4 (trifluorometil )fenil]etinil]-5 (trifluorometil)benzoil]karbamimidoil]karbamat (0,3 g, 30%) kao sivobela čvrsta supstanca.

Korak 3: U ohlađen rastvor terc-butil N-[N-[3-[2-[3-karbamoil-4-(trifluorometil)fenil]etinil]-5-(trifluorometil)benzoil]karbamimidoil]karbamata (0,3 g, 0.55 mmol) u suvom dihlorometanu (5 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (1.26 g, 11.07 mmol) i mešana na sobnoj temperaturi 16 sati. Završetak reakcije je praćen pomoću TLC. Reakciona smeša je uparena i dodata je beza, ohlađeni 10% rastvor NaHCO3. Jedinjenje je ekstrahovano etil acetatom. Kombinovani organski sloj je ispran vodom, slanim rastvorom, osušen iznad natrijum sulfata i uparen da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela (230-400 mesh) korišćenjem etil acetata u petroletru, da bi se dobio čisti N-karbamimidoil-3-((3-karbamoil-4 (trifluorometil)fenil)etinil)-5-trifluorometil) benzamid jedinjenje 8 (0,09 g, 37%) kao bela čvrsta supstanca.

NMR: 400 MHz, DMSO-d6: δ 8,51 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 8,07 (s, 1H), 7,86 (s, 2H), 7,80 (s, 1H ), 7,72 (s, IH), 6,88 (s, IH).

LC-MS APCI: Izračunato za C19H12F6N4O2442,32; Posmatrano m/z [M H] 443.0.

Čistoća prema LC-MS: 95,93 %.

Čistoća prema HPLC: 98,41%.

ANALIZE BIOLOŠKE AKTIVNOSTI JEDINJENJA PREMA PRONALASKU

1) In vitro aktivnosti jedinjenja br.1 (uključujući jedinjenja 1a, 1b i 1c) do 8 (P. falciparum)

[0131] Biološka aktivnost jedinjenja formule (I) prema pronalasku je testirana na osnovu procene IC50protiv soja NF54 P. Falciparum.

a) Parazitska kultura:

[0132] Za ispitivanje hipoksantina, kulture parazita su uzgajane u Petrijevim šoljama od 100 mm u medijumima za rast sa 5% hematokrita u inkubatoru sa tri gasa (Cat#3131, Thermo Scientific Forma Series II inkubator sa vodenim omotačem, prodata od strane Thermofisher-a) sa kontrolisanim mešavinama gasova 4% CO2i 3% O2na temperaturi 37°C.

[0133] Rast i morfologija parazita posmatrani su svakodnevno korišćenjem tankih briseva pri uvećanju od 100X (ulje za uranjanje) nakon bojenja Giemsa bojom.

[0134] Paraziti koriste hipoksantin uključen u medijum za rast kao prekursor u sintezi nukleinske kiseline. Shodno tome, zamenom hipoksantina u medijumu radioaktivnim hipoksantinom, kao što je 3H-hipoksantin kao što je navedeno u nastavku, može se meriti brzina replikacije DNK i brzina rasta parazita, posebno u prisustvu testiranih jedinjenja pronalaska. b) Materijali i Metode:

(i) Medijumi za rast

[0135] Medijum za rast koji se koristi za gore navedene parazite sadrži 1 l RPMI-1640 (prodaje Invitrogen), 5 mg Albumax II (prodaje Invitrogen), 5 mg hipoksantina (prodaje Sigma), 25 mM Hepes (prodato od Invitrogena) i 2,5 mg gentamicina (prodaje Sigma).

(ii) Medijumi za skrining

[0136] Korišćeni medijum za skrining sadrži 1L RPMI-1640 (prodaje Invitrogen), 5 mg Albumaksa II (prodaje Invitrogen), 25 mM Hepesa (prodaje Invitrogen) i 2,5 mg Gentamicina (prodaje Sigma).

(iii) Reagensi za ispitivanje

[0137] Za ovaj test je korišćen gore opisani medijum za skrining, kao i 20 Ci/mmol radioaktivnog hipoksantina (ligand 3H-hipoksantin (20 Ci/mmol, 1mCi/mL) koji prodaje American Radiolabeled Chemicals (ARC) ) iz St Louisa, MO), neke Top Seal A (prodaje Perkin Elmer), 96 Well Cell Culture ploča (CellStar® prodaje Greiner Bio-One GmbH), MicroScint® 20 (prodaje Perkin Elmer) i GFB ploče ( prodaje Perkin Elmer).

[0138] Na svakoj ploči sa 96 bunarića, 3 jedinjenja formule (I) prema pronalasku, kao i jedno standardno jedinjenje (pozitivna kontrola) su testirani u 12 bunarića u duplikatu.

[0139] Navedeno standardno jedinjenje je mešavina artesunata i hlorokina, dva dobro poznata jedinjenja protiv malarije.

[0140] Maksimalna vrednost aktivnosti parazita je određena kao pozitivna kontrola posmatranjem parazita u prisustvu eritrocita, dok je minimalna vrednost aktivnosti parazita određena u negativnoj kontroli posmatranjem eritrocita u odsustvu parazita.

2

[0141] Ispitana jedinjenja prema pronalasku su ispitana u konačnoj koncentraciji od 10 µM.

[0142] Da bi se to uradilo, osnovni rastvori u koncentraciji od 40 µM jedinjenja koje se testiraju su dostupni u bočicama sa visokim stepenom regeneracije u koncentraciji od 10 mM. Iz ovoga se priprema 20 µM zaliha u medijumu za skrining (0,4 µl 10 mM jedinjenja 996 µl medijuma za skrining) da bi se održao % DMSO na 0,4.

[0143] Počevši od 20 µM osnovnog rastvora, 100 µl se dodaje u ploču za analizu koja već sadrži 100 µl medijuma za skrining i 1:2 puta serijska razblaženja u 12 tačaka se prave u ploči (10 µM do 4,8 nM) (100 µl jedinjenje se pomeša sa 100 µl medijuma za skrining koji je već prisutan u pločama, i tako dalje).

c) Postupak ispitivanja

[0144] Kultura P. falciparum razblažena do 0,3% p i 1,25% h-sinhronog prstena. Test je izveden u sterilnom obliku, u ploči sa 96 bunarića.

[0145] Jedinjenja su razblažena do konačne potrebne koncentracije tako da koncentracija DMSO u bazenu ne prelazi 0,1%.

[0146] Dodato je 100 µL kulture P. falciparum po bunariću i zatim inkubirano na 37 °C tokom 48 sati. Zatim su rađeni brisevi da se proveri rast kontrole kulture nakon 48 sati inkubacije.

[0147] Kada je potvrđeno da je kultura porasla u % p, 50 µL 3H-hipoksantina (0,5 mCi/bunariću) je dodato u svaki bunarić, a ploča za ispitivanje je dalje inkubirana 24 sata.

[0148] Posle 72 sata, ploče za analizu su sakupljene na GFB ploče. Da bi se uklonilo nespecifično vezivanje, ploče su isprane sa 2,5 ml ohlađene destilovane vode i GFB ploče su držane da se suše na 37°C preko noći ili 60°C tokom 1 sata.

[0149] 50 µL Microscint®-20 je dodato u svaki bunarić.

[0150] Ploče se zatim očitavaju u Top Count (45sec/bunariću).

[0151] Podaci testa su analizirani korišćenjem Graph pad prizme ver.5 softvera. Promenljiva kriva sigmoidnog odgovora na dozu je ucrtana zadržavajući log koncentracije na X-osi i % inhibicije na Y-osi.

d) Rezultati

[0152]

Tabela 2

[0153] Vrednost IC50označava koncentraciju jedinjenja koja uzrokuje 50 % inhibiciju rasta parazita u poređenju sa pozitivnom kontrolom.

[0154] Sva testirana jedinjenja formule (I) prema pronalasku su zaista sposobna da inhibiraju aktivnost parazita i pokažu inhibitornu aktivnost protiv P. falciparum.

[0155] Dobri rezultati se naročito dobijaju sa jedinjenjima n ° 1-7, posebno sa jedinjenjima n ° 1 (1a, 1b, 1c), 4, 5 i 6. Najpoželjnija jedinjenja su 1 (1a, 1b, 1c) i 4.

2) in vitro aktivnost na terenskim kliničkim izolatima (P. vivax i P. falciparum)

[0156] Biološka aktivnost jedinjenja 1b prema pronalasku je testirana na osnovu procene IC50 protiv soja P. vivax. a) Kultura parazita: lokacija na terenu i sakupljanje uzoraka

[0157] Izolati plazmodijuma su sakupljeni od pacijenata koji su pohađali klinike za malariju u Timiki (Papua, Indonezija), regionu endemskom za sojeve P. vivax i P. falciparum otporne na više lekova. Pacijenti sa simptomatskom malarijom koji se javljaju u ambulantu su regrutovani u studiju ako su pojedinačno inficirani P. falciparum ili P. vivax, sa parazitemijom između 2.000 ml i 80.000 ml i većinom (>60%) parazita u stadijumu prstena razvoja. Venska krv (5 mL) je sakupljena venepunkcijom i nakon uklanjanja belih krvnih zrnaca domaćina korišćenjem Plasmodipur filtera (EuroProxima B.V., Holandija), upakovane inficirane crvene krvne ćelije (iRBC) su korišćene za ex vivo test osetljivosti na lek.

b) Ex vivo test osetljivosti na lek

(i) Materijali i metode:

[0158] Standardni lekovi protiv malarije hlorokin (CQ), piperakin (PIP), meflohin (MFQ) i artesunat (AS) (WWARN QA/QC Referentni materijal Program) i eksperimentalno jedinjenje 1b pripremljeni su kao 1 mg/mL zaliha rastvora u H2O ili dimetil sulfoksidu (DMSO) prema uputstvima proizvođača. Ploče sa lekovima su prethodno dozirane razblaživanjem jedinjenja u 50% metanolu, nakon čega je usledila liofilizacija i čuvani su na 4°C.

(ii) Postupak analize

[0159] Osetljivost na lekove izolata P. vivax i P. falciparum je merena korišćenjem protokola modifikovanog iz mikrotesta SZO (videti na primer u Marfurt J. et al., Antimicrob Agents Chemother. 2011 Sep;55(9):4461).

[0160] Dve stotine µL mešavine krvnog medijuma od 2% hematokrita (BMM), koja se sastoji od RPMI 1640 medijuma plus 10% AB+ humanog seruma (P. falciparum) ili McCoy-ovog 5A medijuma plus 20% AB+ humanog seruma (P. vivax) je dodato u svaki bunarić prethodno doziranih ploča sa lekovima koje sadrže 11 serijskih koncentracija (dvostruka razblaženja) anti-malarika (maksimalna koncentracija prikazana u zagradama) CQ (2,993 nM), PIP (1,029 nM), MFQ (338 nM), AS (49 nM), i jedinjenje 1b (237 nM). Tegla sa svećama je korišćena za sazrevanje parazita na 37 °C tokom 35-56 sati. Inkubacija je zaustavljena kada je >40% parazita u prstenastom stadijumu dostiglo zrelu fazu šizonta u kontrolnim bunarićima bez lekova, što je utvrđeno svetlosnom mikroskopijom.

[0161] Rast parazita je kvantifikovan bojenjem nukleinske kiseline i prikupljanjem podataka pomoću protočne citometrije kao što je detaljno opisano na drugom mestu6. Rast parazita je kvantifikovan za svaku koncentraciju leka i normalizovan na kontrolni bunarić.

[0162] Podaci o dozi-odgovoru su analizirani korišćenjem nelinearne regresione analize i polumaksimalne vrednosti inhibicije rasta (IC50) dobijene korišćenjem inhibitornog sigmoidnog Emax modela (In Vitro Analysis and Reporting Tool; IVART7). Ex vivo IC50podaci su korišćeni samo iz predviđenih kriva gde su Emaxi E0bili unutar 15% od 100 i 1, tim redom. (iii) Procedure kontrole kvaliteta (QC).

[0163] Kvalitet pločice sa lekom je obezbeđen izvođenjem testova sazrevanja šizonta sa sojem K1 otpornim na hlorokin i sojem FC27 osetljivim na hlorokin.

(iv) Rezultati su sažeti u tabeli 3.

[0164]

Tabela 3

[0165] Osetljivost na lekove se nije značajno razlikovala među vrstama za standardne antimalarijalne lekove piperakin, meflokin i artesunat i jedinjenje 1b. Stoga se čini da je jedinjenje 1b efikasan kandidat za lečenje malarije.

INDIKACIJE

[0166] Kao što je ilustrovano u primerima, jedinjenja formule (I) prema pronalasku su u stanju da značajno inhibiraju aktivnost Plasmodium falciparum i/ili Plasmodium vivax.

4

[0167] Jedinjenja prema pronalasku se stoga mogu koristiti za pripremu lekova, posebno lekova koji inhibiraju aktivnost Plasmodium falciparum i/ili Plasmodium vivax.

[0168] Prema tome, u drugom od svojih aspekata, pronalazak obezbeđuje lekove koji sadrže jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so.

[0169] Ovi lekovi se koriste u terapiji, posebno u lečenju i/ili profilaksi malarije.

FARMACEUTSKE KOMPOZICIJE

[0170] Prema drugom aspektu, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni princip, jedinjenje formule (I) prema pronalasku. Preciznije, ove farmaceutske kompozicije sadrže efikasnu dozu od najmanje jednog jedinjenja formule (I) prema pronalasku i takođe najmanje jednog farmaceutski prihvatljivog nosača, razblaživača ili pomoćne supstance.

[0171] Prema tome, prema jednom izvođenju, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže jedno jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema pronalasku, i najmanje jedan njegov farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili pomoćnu supstancu.

[0172] Prema drugom izvođenju, ovaj pronalazak se odnosi na farmaceutske kompozicije koje sadrže najmanje jedno jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema pronalasku, i najmanje jedan njegov farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili pomoćnu supstancu.

[0173] Navedene pomoćne supstance su odabrane, u skladu sa željenim farmaceutskim oblikom i metodom primene, od uobičajenih pomoćnih supstanci, koji su poznati stručnjacima u ovoj oblasti.

[0174] U farmaceutskim kompozicijama ovog pronalaska za oralnu, sublingvalnu, subkutanu, intramuskularnu, intravensku, topikalnu, lokalnu, intratrahealnu, intranazalnu, transdermalnu ili rektalnu primenu, aktivni princip formule (I) predstavljene iznad, ili njegova so, mogu se davati u obliku jedinične primene, u smeši sa konvencionalnim farmaceutskim pomoćnim supstancama, životinjama i ljudima za proksilaksu ili lečenje malarije.

PRIMENA JEDINICE

[0175] Odgovarajući oblici jedinične primene uključuju oralne oblike kao što su tablete, meke ili tvrde gel kapsule, praškovi, granule i oralni rastvori ili suspenzije, sublingvalni, bukalni, intratrahealni, intraokularni i intranazalni oblici za davanje, oblici za inhalaciju, lokalnu, transdermalnu, potkožnu, intra-mišićnu ili intravenoznu primenu, rektalni oblici i implantati. Za lokalnu primenu moguće je koristiti jedinjenja prema pronalasku u kremama, gelovima, mastima ili losionima.

[0176] Kao primer, oblik jedinične primene jedinjenja prema pronalasku u obliku tableta može da sadrži sledeće komponente:

Jedinjenje formule (I) prema pronalasku 50.0 mg

Manitol 223.75 mg

Natrijum kroskarmeloza 6.0 mg

Kukuruzni skrob 15.0 mg

Hidroksipropilmetilceluloza 2.25 mg

Magnezijum stearat 3.0 mg

DOZIRANJE

[0177] Mogu postojati posebni slučajevi u kojima su visoke ili niske doze prikladne; takve doze ne odstupaju od obima pronalaska. Prema uobičajenoj praksi, dozu koja je odgovarajuća za svakog pacijenta određuje lekar prema načinu primene i težini i odgovoru navedenog pacijenta.

[0178] Na primer, doza koja se daje - kao pojedinačna ili višestruka doza - pojedincu će varirati u zavisnosti od niza faktora, uključujući farmakokinetička svojstva, stanja i karakteristike pacijenta (pol, starost, telesna težina, zdravlje, veličina), stepen simptoma, istovremenih tretmana, učestalosti tretmana i željenog efekta.

KOMBINACIJE

[0179] Za lečenje malarije i sprečavanje rezistencije - preporučuje Svetska zdravstvena organizacija - kako je navedeno u 'Smernicama za lečenje malarije, treće izdanje, ISBN 9789241549127- da se koristi kombinacija sa najmanje dva efikasna antimalarijska jedinjenja sa različitim mehanizam dejstva.

[0180] Prema tome, u drugom od svojih aspekata, jedinjenja formule (I) prema pronalasku će biti deo kombinovanih tretmana koji obuhvataju davanje dva ili više antimalarijskih jedinjenja sa nepovezanim mehanizmom delovanja. Takva kombinacija najmanje jednog jedinjenja (I) prema pronalasku i najmanje jednog drugog aktivnog principa (i) protiv malarije (različit od jedinjenja formule (I)) mogu biti sadržani ili u istoj galenskoj formulaciji, na primer, kao što je prethodno otkriveno , ili u različitim galenskim formulacijama.

[0181] Prema jednom izvođenju, kada je ova kombinacija sadržana u istoj galenskoj formulaciji, kombinacija je poželjno kombinacija fiksne doze u kojoj najmanje jedno jedinjenje (I) i najmanje jedno drugo jedinjenje protiv malarije formule (I) prema pronalasku 50,0 mg manitola 223,75 mg natrijum kroskarmeloze 6,0 mg kukuruznog skroba 15,0 mg hidroksipropilmetilceluloze 2,25 mg magnezijum stearata 3,0 mg aktivnog sastojka (za razliku od jedinjenja (I)) može se formulisati zajedno, na primer u istoj tableti, kapsuli, prahu, suspenziji ili granulama.

[0182] Prema drugom izvođenju, kada je ova kombinacija sadržana u različitim galenskim formulacijama, primena svakog od ovih aktivnih principa može biti simultana ili uzastopna.

[0183] Prema tome, prema drugom aspektu, pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju najmanje jednog jedinjenja formule (I) prema pronalasku ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i najmanje jednog drugog aktivnog principa protiv malarije različitog od jedinjenja formule (I) kako je definisano u ovom pronalasku.

[0184] Pronalazak se dalje odnosi na farmaceutsku kompoziciju koja sadrži najmanje jednu kombinaciju u skladu sa pronalaskom i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent.

[0185] Pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju prema pronalasku za upotrebu kao lek, kao što je za upotrebu u prevenciji i/ili lečenju malarije.

[0186] Pronalazak se dalje odnosi na kombinaciju prema pronalasku za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji infekcija krvnih ćelija inficiranih sa Plasmodium falciparum i/ili Plasmodium vivax. Prema posebnom izvođenju, infekcija je malarija.

Claims (19)

1. Patentni zahtevi 1. Jedinjenje formule (I):

   pri čemu -R1označava atom fluora ili perhalogen linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, -R2označava atom hlora; linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, opciono supstituisan sa najmanje jednim atomom fluora; ili perhalogen linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, I -R označava atom vodonika ili radikal formule (Ia)

   pri čemu R3označava atom vodonika; hidroksi radikal; ili linearni ili razgranati alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, i R3je na poziciji 5 ili na poziciji 6 pomenutog radikala formule (Ia), ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
2. 2. Jedinjenje formule (I) prema patentnom zahtevu 1, pri čemu R1označava atom fluora ili trifluorometil radikal.
3. 3. Jedinjenje formule (I) prema patentnom zahtevu 1 ili 2, pri čemu R2označava atom hlora, metil radikal ili perhalogen linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika, kao što je trifluorometil radikal.
4. 4. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva od 1 do 3, pri čemu R označava radikal formule (Ia) kako je definisano u patentnom zahtevu 1.
5. 5. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva pri čemu R označava radikal formule (Ia) kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, a R3je na poziciji 5 ili 6 pomenutog radikala formule (Ia).
6. 6. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva gde R označava radikal formule (Ia) kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, a R3označava atom vodonika, hidroksi radikal ili metil radikal.
7. 7. Jedinjenje formule (I) prema patentnom zahtevu 5, pri čemu R označava radikal formule (Ia) kao što je definisano u patentnom zahtevu 1, a R3označava hidroksi radikal na poziciji 5 pomenutog radikala formule (Ia).
8. 8. Jedinjenje formule (I) prema patentnom zahtevu 5 pri čemu R označava radikal formule (Ia) kako je definisano u patentnom zahtevu 1, a R3označava linearni ili razgranati alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika kao što je metil radikal na položaju 6 pomenutog radikala formule (Ia).
9. 9. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva pri čemu najmanje jedan od R1i R2označava perfluorometil radikal.
10. 10. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva pri čemu R1i R2oba označavaju perfluorometil radikal.
11. 11. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva izabrano sa sledeće liste: • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-N-(piridin-2-il)-2 (trifluorometil)benzamid, • 5-((3-((diaminometilen)karbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-2-metil-N-(6-metilpiridin-2-il)benzamid, • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-fluorofenil)etinil)-N-(6-metilpiridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid, • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-trifluorometil)fenil)etinil)-2-metil-N-(piridin-2-il)benzamid, • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-N-(5-hidroksipiridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid, • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-2-hloro-N-(piridin-2-il)benzamid, • 5-((3 (karbamimidoilkarbamoil)-5-fluorofenil)etinil)-N-(piridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid, • N-karbamimidoil-3-((3-karbamoil-4 (trifluorometil)fenil)etinil)-5-trifluorometil)benzamid, i njihove farmaceutski prihvatljive soli.
12. 12. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva izabrano sa sledeće liste: • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-N-(piridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid hidrohlorid, •5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-N-(piridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid malonska kiselina, •5-((3-((diaminometilen)karbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-2-metil-N-(6-metilpiridin-2-il)benzamid hidrohlorid, • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-fluorofenil)etinil)-N-(6-metilpiridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid hidrohlorid, • 5-((3 (karbamimidoilkarbamoil)-5-trifluorometil)fenil)etinil)-2-metil-N-(piridin-2-il)benzamid hidrohlorid, •5-((3 (karbamimidoilkarbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-N-(5-hidroksipiridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid hidrohlorid, • 5-((3 (karbamimidoilkarbamoil)-5-(trifluorometil)fenil)etinil)-2-hloro-N-(piridin-2-il)benzamid hidrohlorid, i • 5-((3-(karbamimidoilkarbamoil)-5-fluorofenil)etinil)-N-(piridin-2-il)-2-(trifluorometil)benzamid hidrohlorid.
13. 13. Kombinacija najmanje jednog jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 12 i najmanje jednog drugog aktivnog principa protiv malarije različitog od jedinjenja formule (I) kao što je definisano u bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 12.
14. 14. Farmaceutska kompozicija koja sadrži najmanje jedno jedinjenje formule (I) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 12, ili najmanje jednu kombinaciju prema patentnom zahtevu 13, i najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv nosač, razblaživač ili ekscipijent od toga.
15. 15. Postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 12, sadržavajući najmanje sledeći korak koji se sastoji od: katalitičkog kuplovanja, posebno sa paladijumskim katalizatorom, između intermedijarnog jedinjenja formule (III)

    pri čemu: - PG1je konvencionalna zaštitna grupa za amin i R1 označava atom fluora ili perhalogen linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika kao što je trifluorometil radikal; i intermedijerno jedinjenje formule (IV)

    pri čemu: - R2i R3su kao što su definisani u formuli (I) prema patentnim zahtevima 1, 3 i 5 do 10, a X je atom broma ili atom joda; tako da se dobije jedinjenje formule (V)

    pri čemu su R1, R2, R3i PG1kao što je gore definisano, a sa navedenog jedinjenja formule (V) se dalje uklanja zaštita i opciono se pretvara u soli da bi se formiralo očekivano jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
16. 16. Postupak za dobijanje jedinjenja formule (I) ili njegove farmaceutski prihvatljive soli prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 12, ksadržavajući najmanje sledeće korake koji se sastoje od: (1) izvođenje katalitičkog kuplovanja, posebno sa paladijumskim katalizatorom, između intermedijarnog jedinjenja formule (IV)

    pri čemu - R2i R3su kao što je definisano u formuli (I) prema patentnim zahtevima 1, 3 i 5 do 10 i - X je atom broma ili atom joda, i intermedijerno jedinjenje formule (VI)

    pri čemu: - R1označava atom fluora ili perhalogen linearni alkil radikal koji sadrži 1, 2 ili 3 atoma ugljenika kao što je trifluorometil radikal; tako da se dobije jedinjenje formule (VII)

    pri čemu su R1, R2i R3kao što je gore definisano; (2) nakon što je navedeno jedinjenje formule (VII) u kontaktu sa bazom kao što je litijum hidroksid ili natrijum hidroksid da bi se dobilo jedinjenje formule (VIII)

    pri čemu su R1, R2i R3kao što je gore definisano; (3) dovođenje u kontakt tako dobijenog jedinjenja formule (VIII) iz koraka (2) sa najmanje jednim reagensom za formiranje amida kao što je dicikloheksilkarbodiimid ili benzotriazol-1-iloksitripirolidinofosfonijum heksafluorofosfat, i pentafluorofenolom u prisustvu PG1guanidina kao što je N-Boc ili N-Cbz gvanidin da bi se dobilo jedinjenje formule (V)

    pri čemu su R1, R2i R3kao što je gore definisano i PG1je konvencionalna zaštitna grupa za amin; sa navedenog jedinjenja formule (V) se dalje uklanja zaštita i opciono se salifikuje da bi se dobilo očekivano jedinjenje formule (I) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.
17. 17. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od zahteva patentnih od 1 do 12 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili kombinacija prema patentnom zahtevu 13, za upotrebu kao lek.
18. 18. Jedinjenje formule (I) prema bilo kom od patentnih zahteva od 1 do 12 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili kombinacija prema patentnom zahtevu 13, za upotrebu u lečenju i/ili prevenciji infekcija krvnih ćelija inficiranih Plasmodium falciparum-om i/ili Plasmodium vivax-om.
19. 19. Jedinjenje za upotrebu prema patentnom zahtevu 18 ili kombinacija za upotrebu prema patentnom zahtevu 18, pri čemu je infekcija malarija. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5