RS62769B1 - Postupci za lečenje hiperlipidemije inhibitorom angptl8 i inhibitorom angptl3 - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Prikazani pronalazak se odnosi na oblast terapeutskog lečenja bolesti i poremećaja, koji su u vezi sa povećanim nivoima lipida i lipoproteina. Određenije, pronalazak se odnosi na upotrebu inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8) u kombinaciji sa inhibitorom proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3) za lečenje pacijenata sa hiperholesterolemijom i srodnim stanjima.

STANJE TEHNIKE

[0002] Hiperlipidemija je opšti izraz koji obuhvata bolesti i poremećaje koji su krakterisani sa ili u vezi sa povišenim nivoima lipida i/ili proteina u krv. Hiperlipidemija uključuje hiperholesterolemiju, hipertrigliceridemiju, kombinovanu hiperlipidemiju, i povišeni lipoprotein a (Lp(a)). Određeni oblik hiperlipidemije koji preovlađuje u mnogim populacijama je hiperholesterolemija.

[0003] Hiperholesterolemija, naročito porast u nivoima holesterola lipoproteina niske gustine (LDL) (LDL-C), koji predstavlja glavni rizik za razvijanje ateroskleroze i koronarne srčane bolesti (CHD) (Sharrett et al., 2001, Circulation 104:1108-1113). Holesterol lipoproteina niske gustine je identifikovan kao primarna meta za sniženje holesterola i prihvaćen je kao priznat surogat krajnje tačke lečenja. Brojna ispitivanja su pokazala da snižavanje nivoa LDL-C smanjuje rizik od CHD sa jakom direktnom vezom između LDL-C nivoa i CHD slučaja; za svako smanjenje 1 mmol/L (-40 mg/dL) u LDL-C, snižava smrt od kardiovaskularne bolesti (CVD) i morbiditet za 22%. Veća samanjenja u LDL-C daju veće smanjenje u javljanju, i uporedni podaci intenzivnog lečenja statinima u odosu na standardne sugerišu da što je niži LDL-C nivo, veća je korist za pacijente naspram veoma visokog kardiovaskualrnog (CV) rizika.

[0004] Porodična hiperholesterolemija (FH) je nasledni poremećaj metabolizma lipida koji daje predispoziciju osobi za prevremenu ozbiljnu kardiovaskularnu bolest (CVD) (Kolansky et al., (2008), Am J Cardiology,102(11):1438-1443). FH može biti ili autozomalno dominantna ili autozomalno recesivna bolest koja proističe od mutacija u receptoru lipoproteina niske gustine (LDLR), ili FH mogu izazvati bar 3 različita gena koja kodiraju proteine uključene u hepatički klirans LDL-C. Primeri takvih nedostataka uključuju mutacije u genu koji kodira LDL receptor (LDLR) koji uklanja LDL-C iz cirkulacije, i u genu za apolipoprotein (Apo) B, koji je glavni protein LDL čestice. U svim slučajevima, FH je karakterisan akumulacijom LDL-C u plazmi od rođenja i naknadnim razvojem ksantoma tetiva, ksantelazma, ateromata, i CVD. FH može biti klasifikovan kao ili heterozigotni FH (heFH) ili homozigotni FH (hoFH) u zavisnosti da li pojedinac ima genetski nedostatak u jednoj (heterozigotni) ili obe (homozigotne) kopije umešanog gena.

[0005] Sadašnji lekovi koji snižavaju LDL-C obuhvataju statine, inhibitore apsorcije holesterola, fibrate, niacin, i sekvestrante žučnih kiselina. Statini su uobičajeno prepisivani za lečenje za snižavanje LDL-C. Međutim, uprkos dostupnisti takvih terapija koje snižavaju lipide, mnogo pacijenata u visokom riziku ne uspeva da dostigne ciljani nivo LDL-C (Gitt et al., 2010, Clin Res Cardiol 99(11):723-733). Za pacijente koji još uvek nisu u stanju da dostignu ciljani nivo LDL-C, uprkos dostupnosti terapije za modifikovanje lipida (eng.lipid-modifying therapy-LMT), ponekad se prepisuje mehaničko uklanjanje LDL-C aferezom lipoproteina (npr., LDL afereza).

[0006] Međutim, pacijenti koji nisu postigli ciljani LDL-C uprkos primanju optimizovanog LMT režima, imali bi velike koristi od alternativnih terapija za snižvanje LDL-C, ili kroz upotrebu kombinacije terapeutskih sredstava, kao što su ovde opisana sredstva i režimi.

[0007] Fu et al (2015) Scientific Reports, 5, 1-9 opisuje stvaranje pet monoklonskih antitela na lipazin, među kojima je jedan snizio nivo triglicerida u serumu kada se injektuje miševima. Zhang (2016) Open Biology, 6, 150272 daje pregled ANGPTL3-4-8 modela kao molekulskog mehanizma za transport triglicerida.

SUŠTINA PRONALASKA

[0008] Prikazani pronalazak obezbeđuje terapeutski efikasnu količinu inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8) za upotrebu u postupku lečenja pacijenta sa hiperlipidemijom u kombinaciji sa terapeutski efikasnom količinom inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3). Prikazani pronalazak takođe obezbeđuje terapeutski efikasnu količinu inhibitora ANGPTL3 za upotrebu u postupku lečenja pacijenta sa hiperlipidemijom u kombinaciji sa terapeutski efikasnom količinom ANGPTL8.

[0009] U drugom izvođenju, hiperlidemija je porodična hiperlipidemija ili stečena hiperlipidemija.

[0010] U jednom izvođenju, hiperlipidiemija je izabrana iz grupe koju čine hiperlipoproteinemija, hiperholesterolemija, hipertrigliciridemija, ili hiperhilomikronemija.

[0011] U jednom izvođenju, porodična hiperlipidemija je hiperholesterolemija izabrana iz grupe koja se sastoji od heterozigotne porodične hiperholesterolemije (HeFH) i homozigotne porodične hiperholesterolemije (HoFH).

[0012] U jednom izvođenju, stečena hiperlipidemija je rezultat prekomernog pijenja alkohola, gojaznosti, sporednog dejstva lekova (npr. hormona ili steroida), dijabetesa, bolesti bubrega, nedovoljno aktivne tiroidne žlezde ili trudnoće.

[0013] U pronalasku inhibitor ANGPTL8 inhibitor je antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, koji se veže specifično za ANGPTL8.

[0014] U jednom aspektu opisa, antitelo, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koje se specifično vezuje za ANGPTL8 koje sadrži regione koje određuju komplementarnost (CDRs) promenjivog dela teškog lanca (HCVR) koji imaju amininokiselinske sekvence SEQ ID NO: 1 i CDRs promenjivog regiona lakog lanca (LCVR) SEQ ID NO: 5.

[0015] U pronalasku, antitelo, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifilno veže za ANGPTL8 sadrži CDR1 teškog lanca (HCDR1) koji imaju aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2, HCDR2 koji imaju aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8.

[0016] U jednom izvođenju, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL8 sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5.

[0017] U jednom izvođenju, ANGPTL8 antitelo je davano pacijentu subkutanozno ili intravenski.

[0018] U pronalasku, inhibitor ANGPTL3 je antitielo, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, koji se specifično veže za ANGPTL3.

[0019] U jednom izvođenju, ANGPTL3 antitelo je evinacumab.

[0020] U jednom aspektu opisa, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL3 sadrži regione koji određuju komplementarnost (CDRs) promenjivog dela teškog lanca (HCVR) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 i CDRs promenjivog regiona lakog lanca(LCVR) SEQ ID NO: 14.

[0021] U pronalasku, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGTL3 sadrži CDR1 teškog lanca (HCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13, CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 16, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 17.

[0022] U jednom izvođenju, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL3 sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14.

[0023] U jednom izvođenju, ANGPTL3 antitelo je davano pacijentu subkutanozno ili intravenski.

[0024] Opis takođe obezbeđuje postupke za snižavanje nivoa bar jednog lipidnog parametra kod pacijenta koji pati od poremećeja ili stanja karakterisanog delom povećanim nivoima lipida ili lipoproteina, postupak obuhvata davanje pacijentu terapeutski efikasne količine kombinacije inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8) i inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3).

[0025] U jednom aspektu, poremećaj ili stanje je hiperlipidemija izabrana iz grupe koju čine porodična hiperlipidemija i stečena hiperlipidemija.

[0026] U jednom aspektu, poremećaj ili stanje je hiperlipidemija izabrana iz grupe koju čine hiperlipoproteinemija, hiperholesterolemija, hipertrigliciridemija, ili hiperhilomikronemija.

[0027] U jenom aspektu, porodična hiperlipidemija je hiperholesterolemija izabrana iz grupe koju čine heterozigotna porodična hiperholesterolemija (HeFH) i homozigotna porodična hiperholesterolemija (HoFH).

[0028] U jednom aspektu, stečena hiperlipidemija je rezultat prekomernog pijenja alkohola, gojaznosti, sporednog dejstva lekova (npr. hormona ili stereoida), dijabetesa, bolesti bubrega, nedovoljno aktivne tiroidne žledzde ili trudnoće.

[0029] U jednom aspektu, hipertrigliciridemija koja se može lečiti uključuje porodičnu kombinovanu hiperlipidemiju, porodičnu disbetalipoproteinemiju, porodičnu hipertrigliciridemiju, ozbiljnu cilomikronemiju i porodični nedostatak lipoproteinske lipaze.

[0030] U jednom aspektu, ANGPTL8 inhibitor je antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, koji se specifično veže za ANGPTL8.

[0031] U jednom aspektu, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL8 sadrži regione koji određuju komplementarnost(CDRs) promenjive teškog lanca(HCVR) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1 i CDRs promenjivog regiona lakog lanca(LCVR) SEQ ID NO: 5.

[0032] U jednom aspektu, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL8 sadrži CDR1 teškog lanca (HCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8.

[0033] U jednom aspektu, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL8 sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5.

[0034] U jednom aspektu, ANGPTL8 antitelo je davano pacijentu subkutanozno ili intravenski.

[0035] U jednom aspektu, ANGPTL3 inhibitor je antitelo, ili njegov fragment koji se vezuje za antigen, koji se specifično veže za ANGPTL3.

[0036] U jednom aspektu, ANGPTL3 antitelo je evinacumab.

[0037] U jednom aspektu, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL3 sadrži regione koji određuju komplementarnost(CDRs) promenjivog dela teškog lanca (HCVR) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 i CDRs promenjivog regiona lakog lanca(LCVR) SEQ ID NO: 14.

[0038] U jednom aspektu, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGTL3 sadrži CDR1 teškog lanca (HCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13, CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 16, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 17.

[0039] U jednom aspektu, antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen koji se specifično veže za ANGPTL3 sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:10 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14.

[0040] U jednom aspektu, ANGPTL3 antitelo je davano pacijentu subkutanozno ili intravenski.

[0041] U jednom izvođenju pronalaska, ANGPTL8 inhibitor i ANGPTL3 inhibitor su davani konkurento ili sekvencionalno.

[0042] U jednom izvođenju pronalaska, ANGPTL8 inhibitor i ANGPTL3 inhibitor su davani u terapeutski efikasnim koncentracijama u odvojenim kompozicijama ili zajedno formulisani u jednoj farmaceutskoj kompoziciji.

[0043] U nekim izvođenjima pronalazak se odnosi na lečenje hiperlipidemije kod pacijenta koji ne reaguju na, neadekvatno su kontrolisani, ili su netolerantni na lečenje standarnim terapijama za modifikovanje lipida. Terapeutski postupci dovode do snižavanja nivoa lipoproteina u serumu na normalni i prihavatljivi opseg i kao takvi , mogu delovati na smanjenje rizika od razvijanja ateroskleroze ili koronarne bolesti srca.

[0044] U jednom izvođenju, pronalazak se odnosi na postupak lečenja pacijenta koji pati od hiperholesterolemije, pri čemu pacijent ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan, ili je netolarantan na lečenje sa standardnom terapijom modifikovanja lipida, postupak obuhvata lečenje pacijenta sa kombinacijom inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8) ili inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3).

[0045] U jednom izvođenju, pronalazak obezbeđuje davanje jedne ili više doza inhibitora ANGPTL8 u kominaciji sa jednom ili više doza inhibitora ANGPTL3 pacijentu koji se leči, ili je bio lečen standarnom terapijom za modifikovanje lipida, ali koji ne reaguju na takvu terapiju. Davanje kombinacije inhibitora ANGPTL8 sa inihibitorom ANGPTL3 pacijentu daje snižavanje nivoa bar jednog lipoproteina u serumu pacijenta i posledično smanjuje ili eliminiše potrebu za lečenjem standarnoom terapijom za sniženje lipida pacijenta.

[0046] Pronalazak može sadržati odabir pacijenta sa hiperholesterolemijom koji se leči, ili je lečen standardnom terapijom za snižavanje lipida i koji ne regauje na, ili neadekvano odgovara na, ili je netolerantan na takvu terapiji i davanje jedne ili više doza ANGPTL8 antitela u kombinaciji sa jednom ili više doza ANGPTL3 antitela pacijentu, tako snižava nivo bar jednog lipoproteina u serumu pacijenta i prema tome zamenjuje upotrebu standardne terapije za modifikovanje lipida kombinovanom terapijom ANGPTL8 antitela plus ANGPTL3 antitela da bi se postigao ciljani nivo lipoproteina.

[0047] Pacijenti koji su lečeni ili koji se mogu lečiti pronalaskom uključuju, npr., pacijente sa hiperholesterolemijom, uključujući pacijente sa porodičnom hiperholesterolemijom (FH). U izvesnim izvođenjima, pacijenti koji su lečeni ili koji se mogu lečiti ovim postupcima su pacijentu kod kojih je dijagoniziran (ili je na drugi način poznato da ima), homozigotna FH (hoFH) ili heterozigitna FH (heFH), ili u riziku od razvoja abnormalno visokih nivoa lipida i/ili lipoproteina u vezi sa homozigotnim FH (hoFH) ili heterozigotnim FH (heFH).

[0048] Prikazani pronalazak takođe obezbeđuje farmaceutske kompozicije koje sadrže ANGPTL8 inhibitor i ANGPTL3 inhibitor za upotrebu u lečenja pacijenta koji ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan sa, ili netolerantan je na lečenjenje standardnom terapijom za modifikovanje lipida, kao što je statin. Statin može biti izabran iz grupe koju čine atorvastatin (LIPITOR®), pitavastatin (LIVALO®), lovastatin (MEVACOR®), simvastatin (ZOCOR®), pravastatin (PRAVACHOL®) fluvastatin (LESCOL®) i rosuvastatin (CRESTOR®). Druga standardna sredstva za snižavanje lipida koja mogu biti korišćena kod pacijenta koji pate od hiperholesterolemije, uključuju, ali nisu ograničeni na fibrate, niacin, sekvestrante žučnih kiselina, ezetimib (ZETIA®), lomitapid (JUXTAPID®), fitosterole, orlistat (XENICAL®).

[0049] Primeri inhibitora ANGPTL8, ili inhibitora ANGPTL3 koji mogu biti korišćeni u kontekstu postupaka prikazanog opisa uključuju, npr., anti-ANGPTL8 ili anti-ANGPTL3 antitela, male molekule inhibitore, i na bazi skele, tj. molekule koji vezuju ANGPTL8, ili molekule koji vezuju ANGPTL3.

[0050] U izvesnim izvođenjima, predviđeno je da upotreba kombinacije inhibitora ANGPTL8 sa inhibitorom ANGPTL3 može biti efikasna u snižavanju nivoa lipida i lipoproteina u serumu, tako da doza standarne terapije za modifikaciju lipida može biti smanjena da se eliminiše nepoželjan efekat, ili mogu biti svezajedno eliminisani.

[0051] U pronalasku, davanje ANGPTL8 antitela u kombinaciji sa ANGPTL3 antitelom dovodi do aditivnog efekta na snižavanje nivoa triglicerida i ukupnog holeasterola u krivi.

[0052] U jednom aspektu opisa, davanje ANGPTL8 antitela u kombinaciji sa ANGPTL3 antitelom dovodi do sinergijskog efekta na snižavanje nivoa triglicerida i ukupnog holesterola u krvi.

[0053] Davanje ANGPTL8 antitela u kombinaciji sa ANGPTL3 antitelom mogu dovesti do snižavanja jednog ili više sledećih parametara:

(a) smanjenje ukunog holesterola (TC) u serumu; ili

(b) smanjenje trigliderida (TG) u serumu;

gde smanjenja (a), i/ili (b) su određena u odnosu na nivo TC u serumu pacijenta, ili nivoe triglicerida u serumu pre, ili u vreme početka lečenja kombinacijom ANGPTL8 inhibitora i ANGPTL3 inhibitora.

[0054] U jednom izvođenju, pronalazak se odnosi na farmaceutsku kompoziciju za lečenje pacijenta koji pati od hiperlipidemije, pri čemu kompozicija sadrži terapeutski efikasnu količinu kombinacije inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8) kako je definisan u patentnim zahtevima i inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3) kako je definisano u patentim zahtevima. Druga izvođenja prema prikazanom pronalasku će biti očigledna iz pregleda detaljnog opisa koji sledi.

KRATAK OPIS SLIKA NACRTA

[0055]

Slika 1 pokazuje efekat H4H1276S (koji se takođe naziva evinacumab), anti-ANGPTL3 antitela, na nivoe triglicerida kod miševa sa utišanim ANGPTL8 („knockout“-KO) ili kod prirodnog tipa (eng.wild type -WT) miševa 2 ili 8 dana posle davanja.

Slika 2 prikazuje efekat H4H1276S na nivoe ukupnog holesterola kod miševa sa utišanim ANGPTL8 ili kod prirodnog tipa miševa 2 ili 8 dana posle davanja.

Slika 3 pokazuje efekat H4H1276S i H4H15341P (koji se takođe nazivaju "H4H15341", anti-ANGPTL8 antitelo) na nivoe triglicerida u humanizovanim ANGPTL8 miševima 1, 4, 7 i 14 dana posle davanja.

Slika 4 pokazuje efekat H4H1276S i H4H15341P (anti-ANGPTL8 antitelo) na nivo ukupnog holesterola u humanizovanim ANGPTL8 miševima 1, 4, 7 i 14 dana posle davanja.

Slika 5 pokazuje rezultate mapiranja epitopa anti-ANGPTL8 monoklonska tela: PEPSCAN ELISA je izvedena da se ispita vezivanje anti-ANGPTL8 antitela za peptide dužine 15-aminokiselina sa preklapanjem od 14 aminokiselina, obuhvatajući zrele ANGPTL8.

Slike 6a, 6b, 6c, 6d, 6e, i 6f prikazuju da ANGPTL8 antitelo preokreće inhibiciju LPL posredovanu ANGPTL3:ANGPTL8-sternim ometanjem LPL sa ANGPTL8 inhibitornim motivom. (Slika 6a) ANGPTL8 aminokiselinska sekvenca (SEQ ID NO:19) pokazuje epitope osam monoklonskih antitela razvijenih protiv humanog ANGPTL8. (Slika 6b) Triglicerdi u serumu humanizovanih ANGPTL8 miševa, 7 dana pre (pre krvarenja) i 2 dana posle jedne injekcije 10 mg/ml osam monoklonskih anitela sa epitopima prikazanim na (Slici 6a). (Slika 6c) LPL aktivnost merena u ćelijskom mediju iz HEK283T ćelija kontransfektovanim sa ANGPTL3 i ANGPTL8 koji su tretirani sa povećanom koncentracijom anti-ANGPTL8 blokirajućih antitela (mAb7) ili kontrolnih antitela. (Slika 6d) AlfaLISA test da se odredi međusobno dejstvo između ANGPTL3 i ANGPTL8 koekspimovanih u CHO-K1 ćelijama bez ili sa rastućim koncentracijama ili anti-ANGPTL8 blokirajućih antitela (mAb7) ili kontrolnih antitela. (Slika 6e) Šema TR-FRET testa sa sa donorskom bojom na N-kraju ANGPTL8, blizu njegovom inhibitornom motivu, i blokirajuća i neblokirajuća antitela obeležena sa akceptorskom bojom. (Slika 6f) Energetski transfer meren TR-FRET testom između N-kraja obeleženog ANGPTL8 i kontrolnim antitelom, anti-ANGPTL8 blokirajuće antitelo (mAb7), ili neblokirajuće anti-ANGPTL8 (mAb4) (n=3; *p<0.0001). Eksperiment je ponovljen 3 puta sa sličnim rezultatom. Skraćenica: Bio, biotin; SA, streptavidin, mAb, monoklonsko antitelo; D, donorska boja; A, akceptorska boja. ;;DETALJNI OPIS ;;[0056] Pre opisivanja prikazanog pronalaska, treba znati da ovaj pronalazak nije ograničen na određene opisane postupke i ekperimentalne uslove, jer takvi postupci i uslovi mogu varirati. Treba razumeti da je ovde korišćena terminologija samo za svrhe opisivanja posebnih izvođenja i nije namera da ograničava, jer obim prikazanog pronalaska će biti ograničen samo priloženim patetnim zahtevima . ;;[0057] Osim ako nije drugačije definisano, svi ovde korišćeni tehnički i naučni izrazi imaju isto značenje koje razumeju stručnjaci iz ove oblasti u koju spada pronalazak . Kako je ovde korišćeno, izraz "oko," kada je korišćen u vezi sa određenim navedenim numeričkim opsegom, označava da vrednost može variriati od navedene vrednosti, ali ne više od 1%. Na primer, kako je ovde korišćeno, izraz "oko 100" obuhvata 99 i 101 i sve vrednosti između (npr., 99.1, 99.2, 99.3, 99.4, itd.). ;;[0058] Mada bilo koji postupci i materijali koji su slični ili ekvivalenti onima ovde opisanim mogu biti korišćeni u realizaciji prikazanog pronalaska, ovde su opisani poželjni postupci i materijali. ;;Postupaci za lečenje hiperlipidemija ;;[0059] Prikazani pronalazak se odnosi generalano na postupke i kompozicije za smanjenje nivoa lipoproteina, naročito triglicerida i ukupnog holesterola, kod pacijenata koji pate od hiperlipidemije, davanjem kombinacije inhibitora ANGPTL8 sa inhibitorom ANGPTL3 pacijentu kome je potrebno takvo lečenje . U izvesnim aspektima, korišćena je kombinacija inhibitora za lečenje hiperholesterolemije, ili hipertrigliciridemije, kod pacijenta koji ne reaguju na, ili neadekvatno su kontrolisani sa ili su netoleratni na standardne terapije za modifikovanje lipida (npr. statin). U izvesnim aspektima opisa, lečenje inhibitorom ANGPTL8 u kombinaciji sa an inhibitorom ANGPTL3 može služiti da snizi nivoe lipoproteina kod ovih pacijenata do prihvatljivog opsega, tako snižavajući njihov rizik za razvoj ateroskleroze, moždanog udara i drugih kardiovaskularnih bolesti. U izvesnim izvođenjima, mogu biti opisani postupci za lečenje pacijenata koji pate od hiperholesterolemije, uključujući heterozigotnu porodičnu hiperholesterolemiju (heFH) i/ili homozigotnu porodičnu hiperholesterolemiju (hoFH), u slučaju da ovi pacijeni ne reaguju na, neadekvatno su kontrolisni, ili su netoleratni na standardne terapije modifikovanaj lipida. U izvesnim izvođenjima, mogu biti korišćeni opisani postupci za lečenje pacijenata koji pate od, ili su u riziku od razvijanja ateroskleroze, bolesti koronarne arterije, dijabetesa, gojaznosti, pankreatitisa, ili metaboličkog sindroma. ;;[0060] Kako je ovde korišćeno, izraz "lipoprotein" označava biomolekulsku česticu koja sadrži oba i protein i lipid. Primeri lipoproteina uključuju, npr. lipoprotein niske gustine (LDL), lipoprotein visoke gustine (HDL), lipoprotein veoma niske gustine (VLDL), lipoprotein srednje gustine (IDL), i lipoprotein (a) (Lp(a)). ;;[0061] Prikazani pronalazak, prema izvesnim izvođenjima, odnosi se na postupke za lečenje pacijenata koji ne odgovaraju na, neadekvatno su kontrolisani ili su netoleratni na standarne terapije modifikovanja lipida. Kako je ovde korišćeno, određeni pacijent koji "ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan, ili je netolerantan, na standardnu terapiju modifikovanja lipida" je određen od strane lekara, pomoćnika lekara, dijagnostičara ili drugog medicinskog profesionalca na osnovu nivoa jednog ili više lipoproteina (npr., LDL-C i/ili non-HDL-C) merenih ili drugačije detektovanih u serumu pacijenta posle lečenja sa standarnim sredstvom za modifikovanje lipida. Lekar, pomoćnik lekara, diagnostičar, ili drugi medicinski profesionalac može takođe odrediti da li je pacijent netolerantan na standardne terapije za modifikovanje lipida na osnovu profila neželjenog dejstva standarnih terapija za modifikovane lipida, koji pacijenti mogu osetiti, uključujući, ali bez ogranićenja samo na njih, bol u mišićima, nežnost ili slabost (mijalgiju), glavobolju, crvenilo kože, teškoće u spavanju, grčeve u stomaku, nadimanje, diareju, konstipaciju, osip, nauzeju, ili povraćanje. Pacijent koji ne odgovara na, neadekvatno je kontrolsian sa, ili je netolerantan na standardnu terapiju za modifikovanje lipida može takođe biti određen ili pod uticajem drugih faktora kao što su istorija familije pacijenta, medicinska stanja, tekući status terapeutskih tretmana, kao i generalno prihvaćene ili preovlađujuće mete lipoproteina prihvaćene od nacionalnim medicinskih udruženja i lekarskih grupa . Na primer, u izvesnim kontekstima, ukoliko je pacijent pod terapijom sa standarnim sredstvom za modifikaciju lipida , i pokazuje nivo LDL-C veći od ili jedan oko 70 mg/dL, ovo ukazuje da pacijent "ne odgovara na, ili je neadekvatno kontrolisan ili netolerantan na standardnu terapiju za modifikovanje lipida " i može imati koristi od lečenja pomoću ovde opisanih terapija . U drugim kontekstima, ukoliko je pacijent podvrgnut terapji sa standardnim sredstvom za modifikovanje lipida , i pokazuje nivo LDL-C veći od ili jednak oko 100 mg/dL, ovo ukazuje da pacijent "ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan, ili netolerantn je na standardnu terapiju za modifikovanje lipida " i može imati koristi od lečenja pomoću ovde opisanih terapija. U izvesnim kontekstima, ukoliko je pacijent pod terapijom sa standardnim sredstvom za modifikovanje lipida, i pokazuje nivo LDL-C veći od ili jedan oko 150 mg/dL, 200 mg/dL, 250 mg/dL, 300 mg/dL, 400 mg/dL ili viši, ovo ukazuje da pacijent "ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan, ili je netolerantan na standardnu terapiju za modifikovanje lipida " i može imati koristi od tretmana koji koristi ovde opisane terapije. U još jednom kontekstu, bez obzira da li je ili nije postignut određeni procenat smanjenja u nivou LDL-C ili non-HDL-C , u odnosu na pacijentov nivo LDL-C ili non-HDL-C na određenoj početnoj tački ("početne vrednosti") može biti korišćen za određivanje da li pacijent reaguje na standardnu terapiju za modifikovanje lipida ili da li je tom pacijentu potrebno dalje lečenje sa postupcima i sredstvima prema prikazanom pronalasku . Na primer, smanjenje u LDL-C ili non-HDL-C manje od 50% (npr., manje od 40%, manje od 35%, manje od 30%, manje od 25%, itd.) od osnovne vrednosti može zanačiti potrebu za terapijom pomoću postupaka i sredstava. ;;[0062] Na primer, u izvesnim kontekstima, ukoliko je pacijent podvrgnut terapiji sa standardnim sredstvom za modifikovanje lipida, i pokazuje nivo triglicerida (TG) veći od ili jednak oko 150 mg/dL, ovo ukazuje da pacijent "ne reaguje na, ili ne neadekvatno kontrolisan, ili je netolerantan na standardnu terapiju modifikovanja lipida" i može imati koristi od tretmana pomoću ovde opisanih terapija. U drugim kontekstima, ukoliko je pacijent pod tekućom terapijom sa standardnim sredstvom za modifikovanje lipida, i pokazuje nivo TG veći od ili jednak oko 200 mg/dL, ovo ukazuje da pacijent "ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan, ili je netolerantan na standardnu terapiju za modifikovanje lipida" i može imati koristi od lečenja pomoću ovde opisanih terapija. U izvesnim kontekstima, ukolikoje pacijent pod tekućom terapijom sa standardnim sredstvom za modifikovanje lipida, i pokazuje nivo TG veći od ili jednak oko 300 mg/dL, 400 mg/dL, 500 mg/dL, 750 mg/dL, 1000 mg/dL ili viši, ovo ukazuje da pacijent "ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan, ili je netolerantan na standardnu terapiju za modifikovanje lipida " i može imati koristi od lečenja pomoću ovde opisanih terapija. ;;[0063] U još jednom kontekstu, bez obzira da li je ili nije postignuto određeno smanjenje u nivou TG, TC, LDL-C ili non-HDL-C , u odnosu na nivo TG, TC, LDL-C ili non-HDL-C pacijenta u određenoj početnoj tački ("početnoj vrednosti") može biti korišćeno da odredi da li pacijent reaguje na standardnu terapiju za modifikovanje lipida ili da li je tom pacijentu potreban drugi tretman postupcima i sredstvima prema prikazanom pronalasku . Na primer, smanjenje u TG, TC, LDL-C ili non-HDL-C ili manje od 50% (npr., manje od 40%, manje od 35%, manje od 30%, manje od 25%, itd.) od početne vrednost može značiti potrebu za terapijom postupcima i sredstvima . ;;[0064] Prikazani pronalazak, prema tome, odnosi se na postupke za lečenje koji obuhvataju davanje jedne ili više doza inhibitora ANGPTL8 kombinovanih sa jednom ili više doza inhibitora ANGPTL3 pacijentu, pri ćemu su posle tretmana pacijenta nivoi ukupnog holesterola , TG, LDL-C, i/ili non-HDL-C značajno smanjenih vrednosti. Na primer, prikazani pronalazak se odnosi na postupke koji obuhvataju davanje jedne ili više doza inhibitora ANGPTL8 i jedne ili više doza inhibitora ANGPTL3 pacijentu koji je podvrgnut standardnoj terapiji za modifikovanje lipida, ali ne reaguje na takvu terapiju, ili je netolerantan na takvu terapiju, gde posle primanja jedne ili više doza inhibitora ANGPTL8 i jedne ili više doza inhibitora ANGPTL3, pacijent je u stanju da se postignu normalni nivoi ukupnog holesterola, TG, LDL-C, ili ne-LDL-C. U izvesnim slučajevima, pacijent može biti skinut sa standarne terapije za modifikovanje lipida, ili standardna terapija za modifikovanje lipdida može biti nastavljena, ali može biti davana u manjim dozama i može biti korišćena u kombinaciji sa inhibitorom ANGPTL8 i inhibitorom ANGPTL3, da se postigne i/ili održi određeni nivo ciljanog lipoproteina. Alternativno, pacijentu može biti davana standardna terapija za modifikovanje lipida pri normalnoj opisanoj dozi, ali učestalost davanja terapije za modifikovanje lipida može biti smanjena ukoliko je standardna terapija za modifikovanje lipida davana zajedno sa kombinacijom inhibitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3. U nekim slučajevima, potreba za lečenjem standarnom terapijom koja modifikuje lipide pacijenta da bi se postigao i/ili održao određeni ciljani nivo može biti eliminisana zajedno sa sledećim davanjem jedne ili više doza inhibitora ANGPTL8 zajedno sa inhibitorom ANGPTL3. ;;[0065] Prema izvesnim izvođenjima, prikazani pronalazak se odnosi na smanjenje ili eliminisanje potrebe za standarnom terapijom za modifikovanje lipida, gde postupci obuhvataju odabir pacijenta ;;;1 ;sa hiperlipidemijom (npr., hiperholesterolemijom, ili hipertrigliciridemijom) koji je lečen terapijom za modifikovanje lipida u toku poslednjeg meseca, poslednja 2 meseca, poslednja 3 meseca, poslednja 4 meseca, poslednjih 5 meseci, poslednjih 6 meseci, ili u dužem periodu i davanje jedne ili više doza inhibitora ANGPTL8 u kombinaciji sa inhibitorom ANGPTL3 pacijentu. Postupci prema ovom aspektu dovode do snižavanja nivoa bar jednog lipoproteina u serumu pacijenta i sledstveno tome dozvoljavaju smanjenje ili eliminaciju potrebe za lečenjem standardnom terapijom za modifikovanje lipida kod pacijenta . Na primer, u izvesnim izvođenjima prema prikazanom pronalasku, posle davanja jedne ili više doza inhibitora ANGPTL8 u kombinaciji sa inhibitorom ANGPTL3, nivo LDL-C u serumu pacijenta je smanjen na manje od definisanog nivoa (npr., manji od 100 mg/dL ili manji od 70 mg/dL), ili je ukupni holesterol snižen na definisan nivo (npr. manji od 200 mg/dL, ili manji od 150 mg/dL), ili nivo TG je smanjen na definisani nivo (npr. manji od 200 mg/dL, ili manji od 150 mg/dL). ;;[0066] Prema izvesnim izvođenjima, pacijent koji se leči postupcima ima hiperholesterolemiju (npr., koncentraciju LDL-C u serumu veću ili jednaku 70 mg/dL, ili koncentraciju LDL-C u serumu veću od ili jednaku 100 mg/dL). Prema izvezsnim izvođenjima, pacijent koji se leči postupcima prema prikazanom pronalasku ima hipertrigliciridemiju (npr., koncentraciju TG u serumu veću od ili jednaku 150 mg/dL, ili koncentraciju TG u serumu veću od ili jednaku 200 mg/dL). U izvesnim izvođenjima, hiperholesterolemija pacijenta je neadekvatno kontrolisana standarnom terapijom modifikovanja lipida, npr. terapijom statina. Na primer, prikazani pronalazak se odnosi na postupke za lečenje pacijenta koji ne reaguju, neadekvatno su kontrolsiani, ili su netoleranti na, terapiju sa standardnom terapijom za modifikovanje lipida, kao što su statini, ili ko ima hiperholesterolemiju koja je neadekvatno kontrolisana sa dnevnom dozom statina izabranim iz grupe koju čine atorvastatin (uključujući atorvastatin ezetimib), rosuvastatin, cerivastatin, pitavastatin, fluvastatin, lovastatin, simvastatin (uključujući simvastatin ezetimibe), pravastatin, i njihove kombinacije. Prikazani pronalazak se odnosi na postupke za smanjenje holesterola , TG, LDL-C, ili non-LDL-C kod pacijenta koji ima hiperholesterolemiju, ili hipertrigliciridemiju i koji pokazuje netolerancu prema statinima ili koji je na drugi način imao nepoželjna dejstva ili neželjene reakcije na terapiju statinima (npr., bol skeletnih mišića, bolovi, slabosti ili grčevi [npr., mijalgija, miopatija, rhabdomioliza, itd.]). ;;Odabir pacijenata ;;[0067] Prikazani pronalazak se odnosi na postupke i kompozicije korisne za lečenje pacijenata koji pate od hiperlipidemije, koji ne reaguju na, neadekvatno su kontrolisani, ili su netolerantni na standardnu terapiju za modifikovanje lipida. Pacijenti koji se leče postupcima mogu takođe pokazati jedan ili više dodatnih kriterijuma za selekciju. Na primer, pacijent može biti izabran za lečenje ukoliko je kod pacijenta dijagnoziran ili identifikovan rizik od razvijanja stanja hiperholesterolemije kao što je, npr., heterozigotna porodična hiperholesterolemija (heFH), homozigotna porodična hiperholesterolemija (hoFH), autozomalna dominantna hiperholesterolemija, autozomalna recesivna hiperholesterolemija (ARH, npr., ARH u vezi sa mutacijama u LDLRAP1), kao učestalost hiperholesterolemije koje su različite od porodične hiperholesterolemije (neFH). Dijagnoza porodične hiperholesterolemije (npr., heFH ili hoFH) može biti izvedena genotipizacijom i/ili kliničkim kriterijumima. Za pacijente koji nisu genotipizirani, klinička dijagnoza može biti zasnovana na ili Simon Broome-ovom kriteriju za nedvosmislenu FH, ili WHO/Dutch Lipid Network kriterijum sa rezultatom > 8 bodova. ;;[0068] Prema izvesnim izvođenjima, pacijent može biti izabran na osnovu istorije koronarne bolesti srca (CHD). Kako je ovde korišćeno "istorija CHD" (ili "dokumentovane istorije CHD") obuhvata jedan ili više: (i) akutnih infarkta miokarda (MI); (ii) tihi MI; (iii) nestabilne angine; (iv) postupke koronarne revaskularizacije (npr., per-kutanozne koronarne intervencije [PCI] ili bajpas operacije koronarne arterije [eng.coronary artery bypass graft surgery CABG]); i/ili (v) dijagnozirane klinički značajne CHD sa invazivnim ili neinvazivnim testiranjem (kao što je koronarna angiografija, test opterećenja na pokretnoj traci, ehokardiografski test ili nuklearno snimanje). ;;[0069] Prema izvednim izvođenjima, pacijent može biti izabran na osnovu kardiovaskularne bolesti nekoronarne bolesti srca ("non-CHD CVD"). Kako je ovde korišćeno, "non-CHD CVD" obuhvata jedan ili više: (i) dokumentovanih ranijih ishemijskih možadanih udara sa fokalnim ishemijskim neurološkim deficitom koji je trajao više od 24 sata, koji se smatra da je aterotrombotičkog porekla; (ii) perifernu arterijsku bolest; (iii) aneurizmu abdominalne aorte; (iv) aterosklerotičnu stenozu bubrežne arterije; i/ili (v) bolest karotidne arterije (prolazni ishemijski napadi >50% obstrukcije karotidne arterije). ;;[0070] Prema izvesnim izvođenjima, pacijent može biti izabran na osnovu toga što ima jedan ili više dodatnih faktora rizika, kao što su, npr., (i) dokumentovana umerana hronična bolest bubrega (CKD) što je definisano sa 30 ≤eGFR <60 mL/min/1.73 m2 u toku 3 meseca ili više; (ii) šećerne bolesti tipa 1 ili tipa 2 sa ili bez oštećena ciljanog organa (npr., retinopatija, nefropatija, mikroalbuminurija); (iii) REZULTAT izračunatog 10-godišnjeg fatalnog rizika od CVD ≥5% (ESC/EAS Guidelines for the management of dyslipidemias, Conroy et al., 2003, Eur. Heart J.24:987-1003). ;;[0071] Prema izvesnim izvođenjima, pacijent može biti izabran na osnovu toga što ima jedan ili više dodatnih faktora rizika izabranih iz grupe koja se sastoji od godina (npr., stariji od 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, ili 80 godina), rase, nacionalnog porekla, pola (muškog ili ženskog), navika vežbanja (npr., redovan vežbač, nevežbač), drugih prethodno postojećih medicinskih stanja (npr., šećerna bolest tipa -II, visoki krvni pritisak, itd.), i trenutni status lekova (npr., trenutno uzimanje beta blokatora, niacin, ezetimib, fibrati, omega-3 masne kiseline, smole žučnih kiselina, itd.). ;;[0072] Prema izvesnim izvođenjima prikazanog pronalaska, subjekat koji je lečen postupcima pokazuje povećani nivo jednog ili više inflamatornih markera. Bilo koji marker sistemske inflamacije može biti korišćen za svrhe prema prikazanom pronalasku. Pogodni inflamatorni markeri uključuju, ali bez ograničenja, C-reaktivan protein, citokine (npr., II-6, IL-8, i/ili IL-17), i ćelijske adhezione molekule (npr., ICAM-1, ICAM-3, BL-CAM, LFA-2, VCAM-1, NCAM, i PECAM). ;;[0073] Prema prikazanom pronalasku, pacijenti mogu biti izabrani na osnovu kombinacije jednog ili više gore navedenih kriterijuma ili terapijskih karakteristika. Na primer, prema izvesnim izvođenjima, pacijent pogodan za lečenje postupcima, može dalje biti izabran na osnovu toga što ima heFH ili non-FH u kombinaciji sa: (i) dokumentovanom istorijom CHD, (ii) non-CHD CVD, i/ili (iii) šećernu bolest sa ošećenjem ciljanog organa; takvi pacijenti mogu takođe biti izabrani na osnovu toga što imaju koncentraciju LDL-C u serumu veću od ili jednaku 70 mg/dL. ;;[0074] Prema izvesnim drugim izvođenjima, pacijent pogodan za lečenje, pored toga što ima hiperholesterolemiju koja nije adekvatno kontrolisana sa režimom terapije dnevne umerene doze statina, može dalje biti izabrana na osnovu toga što ima heFH ili non-FH bez CHD, ili non-CHD CVD, koji ima ili (i) REZULTAT izračunatog 10-godišnjeg fatalnog rizika od CVD ≥5%; ili (ii) šećernu bolest bez oštećenja ciljanog organa; takvi pacijenti mogu takođe biti izabrani na osnovu toga što imaju koncentraciju LDL-C u serumu veću od ili jednaku 100 mg/dL. ;[0075] Prema izvesnim izvođenjima prikazanog pronalaska, subjekat koji se leči je subjekat koji ima sindrom porodične hilomikronemije (FCS; takođe poznat kao nedostatak lipoproteinske lipaze). ;;[0076] Prema izvesnim izvođenjima prema prikazanom pronalasku, subjekt koji se leči je subjekt koji je podvrgnut, ili je nedavno podvrgnut, aferezi lipoproteina (npr., u toku poslednjih šest meseci, u toku prošlih 12 nedelja, u toku poslednjih 8 nedelja, u toku poslednjih 6 nedelja, u toku poslednje 4 nedelje, u toku poslednje 2 nedelje, itd.). ;;Davanje inhibitora ANGPTL8 plus inhibitora ANGPTL3 kao dodatne terapije ;;[0077] Prikazani pronalazak se odnosi na postupke lečenja u kojima pacijent koji je podvrgnut, ili je nedavno podvrgnut, standardnoj terapiji za modifikovanje lipida (npr. statinima) je davan inhibitor ANGPTL8 plus inhibitor ANGPTL3 prema određenoj doznoj količini i učestalosti, i gde inhibitor ANGPTL8 i inhibitor ANGPTL3 su davani kao dodatna terapija pacijentima sa postojećnom terapijom za modifikovanje lipida (ako je primenjivo), kao dodatna terapija pacijentima sa postojećim dnevnim terapeutskim režimom statinima. ;;[0078] Na primer, postupci obuhvataju dodatne terapeutske režime u kojima su inhibitor ANGPTL8 i inhibitor ANGPTL3 davani kao dodatna terapija na isti stabilni dnevni terapeutski režim statina (tj., istu doznu količinu statina) da pacijent je prethodno primao inhibitore ANGPTL8 i ANGPTL3. U drugim izvođenjima, inhibitori ANGPTL8 i ANGPTL3 su davani kao dodatna terapija terapeutskom režimu sa statinima koji obuhvata statin u količini koja je viša od ili manja od doze statina na kojoj je pacijent bio pre primanja inhibitora ANGPTL8 i ANGPTL3. Na primer, posle započinjanja terapeutskog režima koji obuhvata inhibitor ANGPTL8 i ANGPTL3 inhibitor davane u određenim doznim frekvencama i količinama, dnevna doza davanog statina ili prepisanog pacijentu može (a) ostati ista, (b) biti povećana, ili (c) biti smanjena (npr., titrirana na više ili na niže) u poređenju sa dnevnom dozom statina koji je pacijent uzimao pre početka terapeutskog režima sa inhibitorima ANGPTL8 i ANGPTL3, u zavisnosti od terapeutskih potreba pacijenta. ;;Terapeutska efikasnost ;;[0079] Postupci mogu dovesti do smanjenja u nivoima seruma jedne ili više komponenti izabranih iz grupe koju čine ukupni holesterol, LDL-C, non-HDL-C, ApoB100, VLDL-C, trigliceridi (TG), Lp(a) i zaostali holesterol. Na primer, prema izvesnim izvođenjima prikazanog pronalaska, davanje inhibitora ANGPTL8 u kombinaciji sa inhibitorom ANGPTL3 pogodnom subjektu će dovesti do srednje vrednosti procentnog smanjenja početne vrednosti lipoproteina niske gustine holesterola u serumu (LDL-C) od bar oko 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, ili više; srednje vrednosti procentnog smanjenja od početne vrednosti u ApoB100 od bar oko 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, ili više; srednje vrednosti procentnog smanjenja od početne vrednosti u non-HDL-C od bar oko 25%, 30%, 40%, 50%, 60%, ili više; srednje vrednosti procentnog smanjenja od početne vrednosti u ukupnom holesteroli od bar oko 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, ili više; srednje vrednosti procentnog smanjenja od početne vrednosti u VLDL-C od bar oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, ili veća; srednje vrednosti procenta smanjenja od početne vrednosti u trigliceridima od bar oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35% ili viša; i/ili srednje vrednosti procenta smanjenje od početne vrednosti u Lp(a) od bar oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, ili veće. ;;;1 ;Inhibitori ANGPTL8 i inhibitori ANGPTL3 ;;[0080] Postupci obuhvataju davanje pacijentu terapeutske kompozicije koja sadrži inhibitor ANGPTL8 i inhibitor ANGPTL3. ;;Inhibitori ANGPTL8 ;;[0081] Kako je ovde korišćeno, "ANGPTL8 inhibitor" je bilo koje sredstvo, koje se vezuje za ili međusobno deluje sa humanim ANGPTL8 i inhibira normalnu biološku funkciju ANGPTL8 in vitro ili in vivo. Neograničavajući primeri kategorija inhibitora ANGPTL8 uključuju male molekule antagoniste ANGPTL8, inhibitore na bazi nukleinskih kiselina, ekspresije ili aktivnosti ANGPTL8 (npr., siRNA ili antisens), molekuli na bazi peptida koji specifično međusobno deluju sa ANGPTL8 (npr., peptitela), molekuli receptora koji specifčno reaguju sa ANGPTL8, proteini koji sadrže deo za vezivanje liganda LDL receptora, molekulske skele koji vezuju ANGPTL8- (npr., DARPins, proteini sa ponavljanjem HEAT domena, proteini sa ponavljanjem ARM domena, proteini sa ponavljanjem tetrakopeptidnog domena, konstrukti skela na bazi fibronektina, i druge skele zasnovane na proteinima sa ponovcima koji se javljaju u prirodi, itd., [videti, npr., Boersma and Pluckthun, 2011, Curr. Opin. Biotechnol.22:849-857, and references cited therein]), i anti-ANGPTL8 aptameri ili njihovi delovi. U prikazanom pronalasku, inhibitor ANGPTL8 je anti-ANGPTL8 antitelo ili fragment koji vezuje antigen antitela koje specifično vezuje humani ANGPTL8 kako je definisano u patentnim zahtevima. ;;[0082] Izraz "protein sličan humanom angiopoietinu 8" ili "humani ANGPTL8" ili "hANGPTL8", ili "ANGPTL8", se takođe pominje kao "lipasin", "RIFL", ili "betatrofin". Humani ANGPTL8 takođe se odnosi na ANGPTL8 koji ima proteinsku sekvencu koja je pokazana aminokiselinama 1-177 SEQ ID NO: 9, ili njenom biološki aktivnom fragmentu, kao i tome prikazanom u GenBank sa pristupnim brojem NP_061157.3 (SEQ ID NO:19)). Aktivnost ANGPTL8 koja može biti neutralizovana, inhibirana, blokirana, ukinuta, smanjena ili ometana sa, antitelom ili njegovim fragmentom koji vezuje antigen, obuhvata, ali nije ograničena na, inhibiciju LPL aktivnosti, ili snižavanje nivoa triglicerida in vivo i slično. ;;Inhibitori ANGPTL3 ;;[0083] Kako je ovde korišćeno "inhibitor ANGPTL3 " je bilo koje sredstvo, koje se vezuje za ili međusobno deluje sa humanim ANGPTL3 i inhibira normalno biološko funkcionisanje ANGPTL3 in vitro ili in vivo. Neograničavajući primeri kategorija inhibitora ANGPTL3 uključuju male molekule antagoniste ANGPTL3, inhibitore na bazi nukleinskih kiselina, ekspresije i aktivnosti ANGPTL3 (npr., siRNA ili antisens), molekule na bazi pepetida koji specifično međusobno deluju sa ANGPTL3 (npr., peptitela), receptorski molekuli koji specifično međusobno deluju sa ANGPTL3, molekulske skele koje vezuju ANGPTL3 (npr., DARPins, proteini sa ponavljajućim HEAT domena, proteini sa ponavljajućim ARM domenom, proteini sa ponavljajućim tetratrikopeptidnim domenom, konstrukti skela na bazi fibronektina, i drugim skelama zasnovanim na proteinima sa ponovcima koji se javljaju u prirodi, itd., [videti, npr., Boersma and Pluckthun, 2011, Curr. Opin. Biotechnol. 22:849-857, i ovde citirane reference]), i anti-ANGPTL3 aptameri ili njihovi delovi. U pronalasku, ANGPTL3 inhibitori su anti-ANGPTL3 antitela ili njhovi fragmenti koji vezuju antigen-antitela koja se specifično vežu za humani ANGPTL3 kao što je definisano u patentnim zahtevima. ;[0084] Izraz " protein sličan humanom angiopoietinu 3" ili "humani ANGPTL3" ili"hANGPTL3", kako je ovde korišćeno, odnosi se na ANGPTL3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 18 (videti takođe NCBI Accession NP_055310), ili njen biološki aktivan fragment. ;;[0085] Izraz "antitelo", kako je ovde korišćen, odnosi se na imunoglobulinske molekule koji sadrže četiri polipeptidna lanca, dva teška (H) lanca i dva laka (L) lanca međusobno povezana disulfidnim vezama, kao i njihovi multimerni oblici (npr., IgM). Svaki teški lanac sadrži promenjivi region teškog lanca (skraćeno ovde HCVR ili VH) i konstantni region teškog lanca. Konstanti region teškog lanca sadrži tri domena , CH1, CH2 i CH3. Svaki laki lanac sadrži promenjivi region lakog lanca (skraćeno ovde kao LCVR ili VL) i konstantan region lakog lanca. Konstantan region lakog lanca sadrži jedan domen (CL1). Regioni VHi VLmogu biti dalje podeljeni u regione hipervarjabilnosti, koji se nazivaju regioni koji određuju komplementarnost (CDRs), ispresecani regionima koji su konzerviraniji, koji se nazvivaju regioni okvira (FR). Svaki VHi VLsu sastavljeni od tri CDRs i četiri FRs, raspoređenih od amino-kraja do karboksi-kraja sledećim redosledom: FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3, FR4. U različitim izvođenjima, FRs anti-ANGPTL8 antitela (ili njegovog dela koji vezuje antigen) mogu biti identične humanim sekvencama germinativne linije, ili mogu biti prirodno ili veštački modifikovane. Aminokiselinska konsezusna sekvenca može biti definisana na osnovu uporedne analize dva ili više CDRs. ;;[0086] Izraz "antitelo," kako je ovde korišćen, takođe uključuje fragmente koji se vezuju za antigen kompletnih molekula antitela. Izrazi "deo koji se vezuje za antigen" antitela, "fragemant koji se vezuje za antigen" antitela, i slično, kako je ovde korišćen, uključuje bilo koji polipeptid koji se javlja u prirodi, enzimski dobijen, sintetični ili genetski konstruisan ili glikoprotein koji se specifično veće za antigen da bi se dobio kompleks. Fragmenti koji se vezuju za antigen antitela mogu biti izvedeni, npr., iz celih molekula antitela pomoću bilo koje pogodne standardne tehnike kao što je proteolitička digestija ili tehnika rekombinantnog genetskog inžinjeringa uključujući manipulaciju i ekspresiju DNK koja kodira promenjivi deo antitela i opciono konstantne domene. Takva DNK je poznata i/ili je lako dostupno iz, npr., komercijalnih izvora, DNK biblioteka (uključujući, npr., biblioteke faga antitela), ili mogu biti sintetizovane. DNK može biti sekvencirana i manipulisana hemijski ili pomoću tehnika molekularne biologije, na primer, da se rasporedi jedan ili više promenjivh i/ili konstantih domena u pogodnu konfiguraciju, ili da se unesu kodoni, stvore cisteinski ostaci, modifikuju, dodaju ili izbrišu aminokiseline, itd. ;;[0087] Neograničavajući primeri fragmenata koji se vezuju za antigen uključuju: (i) Fab fragmente; (ii) F(ab’)2 fragmente; (iii) Fd fragmente; (iv) Fv fragmente; (v) jednolančane molekule Fv (scFv); (vi) dAb fragmente; i (vii) minimalne jedinice prepoznavanja koje se sastoje od aminokiselinskih ostataka koji podražavaju hiperpromenjivi region antitela (npr., izolovani region određivanja komplementarnosti (CDR) kao što je CDR3 peptid), ili ograničeni peptid FR3-CDR3-FR4. Drugi genetski modifikovani molekuli, kao što su antitela specifična za domen, antitela sa jednim domenom, antitela sa izbrisanim domenom, himerna antiela, CDR-graftovana antitela, diatela, triatela, tetratela, minitela, nanotela (npr. monovalentna nanotela, bivalentna nanotela, itd.), mali modularni imunofarmaceutici (SMIPs), i ajkulini promenjivi IgNAR domeni, su takođe obuhvaćeni ekspresijom "fragmenta koji vezuje antigen," kako je ovde korišćeno. ;;[0088] Fragment koji se vezuje za antigen antitela će tipično sadržati bar jedan promenjivi domen. Promenjivi domen može biti bilo koje veličine ili aminokiselinski sastav i generalno će sadržati bar jedan CDR, koji je susedan ili u okviru sa jednim ili više sekvenci okvira. U fragmentima koji se vezuju za ;;;1 ;antigen koji imaju VHdomen u vezi sa VLdomenom, domeni VHi VLmogu biti smešteni jedan u odnosu na drugu u bilo kom rasporedu. Na primer, promenjivi region može biti dimeran i sadržati VH-VH, VH-VLili VL-VLdimere. Alternativno, fragment koji se vezuje za antigen antitela može sadržati monomerni VHili VLdomen. ;;[0089] Fragment koji vezuje antigen antitela može sadžati bar jedan promenjivi domen kovalento vezan za bar jedan konstanti domen. Neograničavajući, primeri konfiguracije promenjivih i konstantih domena koji se mogu naći u okviru fragmenta koji vezuje antigen antitela uključuju: (i) VH-CH1; (ii) VH-CH2; (iii) VH-CH3; (iv) VH-CH1-CH2; (v) VH-CH1-CH2-CH3; (vi) VH-CH2-CH3; (vii) VH-CL; (viii) VL-CH1; (ix) VL-CH2; (x) VL-CH3; (xi) VL-CH1-CH2; (xii) VL-CH1CH2-CH3; (xiii) VL-CH2-CH3; i (xiv) VL-CL. U bilo kojoj konfiguraciji promenjihih i konstantnih domena, uključujući bilo koji od gore navedenih primera konfiguracija, promenjivi i konstanti domenti mogu biti ili direktno povezani za jedan drugi ili mogu biti vezani punom ili parcijalnom reginom šarke (engl.hinge) ili povezujućim regionom. Region šarke se može sastojati od bar 2 (npr., 5, 10, 15, 20, 40, 60 ili više) aminokiselina, koji su posledica fleksibilnih ili polufleksibilnih veza između susednih promenjivh i/ili konstantnih domena u pojedinačnom polipeptidnom molekulu. Pored toga, fragment koji vezuje antigen antitela može sadržati homo-dimer ili hetero-dimer (ili drugi multimer) bilo koje promenjivog i konstantnog domena gore navedenih konfiguracija u nekovalentnoj vezi jedne sa drugom i/ili sa jednom ili više monomera VHili VLdomena (npr., disulfidnom vezom(ama)). ;;[0090] Kao kompletni molekuli antitela, fragmenti koji vezuju antigen mogu biti monospecifični ili multispecifični (npr., bispecifični). Multispecifični fragment koji vezuje antigen antitela će tipično sadržati bar dva različita promenjiva domena, u kome je svaki promenjivi domen u stanju da se specifično veže za posebni antigen ili za različite epitope na istom antigenu. Bilo koji mutispecifični format antitela, uključujući ovde opisane primere formata bispecifičnog antitela, moraju biti adaptirani za upotrebu u kontekstu fragmenta koji vezuje antigen antitela pomoću rutinskih tehnika dostupnih u stanju tehnike. ;;[0091] Konstantni region antitela je važan u sposobnosti antitela da fiksira komplement i posreduje u ćelijski zavisnoj citotoksičnosti. Prema tome, izotip antitela može biti izabran na osnovu da li je poželjan za antitelo da posreduju u citotoksičnosti. ;;[0092] Izraz "humano antitelo", kako je ovde korišćen, ima nameru da obuhvati antitela koja imaju promenjive i konstantne regione koji potiču od humane imunoglobulinske sekvence germinativne linije. Humana antitela mogu pored toga uključivati aminokiselinske ostatke koji nisu kodirani imunoglobulinskim sekvencama germinativne linije (npr., mutacije unete nasumičnim mutagenezama ili mutagenezama specifičnim za mesto in vitro ili somatskim mutacijama in vivo), na primer u CDRs i posebno u CDR3. Međutim, izraz "humano antitelo", kako je ovde korišćen, nema nameru da uključuje antitela u kojima sekvence CDR potiču iz germinativne linije drugog sisara, kao što je miš, su graftovane na humane sekvence okvira. Izraz uključuje antitela rekombinantno proizvedena u nehumanom sisaru, ili u ćelijama nehumanog sisara. Izraz nema nameru da obuhvati antitela izolovana ili stvorena u humanom subjektu. ;;[0093] Izraz "rekombinanto humano antitelo ", kako je ovde korišćeno, ima nameru da obuhvati sva humana antitela koja su dobijena, eksprimovana, stvorena ili izolovana rekombinantnim sredstvima, kao što su antitela eksprimovana pomoću rekombinantnog ekspresionog vektora transfektovanog u ćeliju domaćina (opisano dole u nastavku), antitela izolovana iz rekombinantne, kombinatorne biblioteke ljudskih antitela (opisane dole u nastavku), antitela izolovana iz životinje (npr., miša) koji je ;;;1 ;transgeni za humane imunoglobulinske gene (videti npr., Taylor et al. (1992) Nucl. Acids Res.20:6287-6295) ili pripremljena antitela, eksprimovana, stvorena ili izolovana bilo kojim drugim koja uključuju spajanje humanih sekvenci gena humanog imunoglobulina za druge DNK sekvence. Takva rekombinantna humana antitela imaju promenjive i konstantne regione koji potiču iz humanih sekvenci imunoglobulina germinativne linije. U izvesnim izvođenjima, međutim, takva rekombinanta humana antiela su podvrgnuta in vitro mutagenezi (ili, kada je korišćena životinja transgena za humanu Ig sekvencu, in vivo somatska mutageneza) i prema tome aminokiselinske sekvence VHi VLregiona rekombinantih antitela su sekvence koje, koje potiču iz i u vezi su sa humanim sekvencama VHi VLgerminativne linije, ne moraju u prirodi postojati u okviru repertoara germinativne linije humanog antitela in vivo. ;;[0094] Humana antitela mogu postojati u dva oblika koja su u vezi sa heterogenosti šarke. U jednom obliku, imunoglobulinski molekul sadrži stabilni konstrukt od četiri lanaca od približno 150-160 kDa u kom se dimeri drže zajedno sa disulfidnom vezom između teških lanaca. U drugom obliku, dimeri nisu povezani pomoću disulfidnih veze između lanaca i molekula od oko 75-80 kDa je obrazovan kovalento kuplovanim lakim i teškim lancem (poluantitelo). Ovi oblici su ekstremno teški za odvajanje, čak posle afinitetnog prečišćavanja. ;;[0095] Učestalost javljanja drugog oblika u različitim intaktnim izotipovima IgG je usled, ali bez ograničenja samo na njih, strukturnih razlikama u vezi sa regionom šarke izotipa antitela. Jedna aminokiselinska supstitucija u regionu šarke humanog IgG4 šarke može značajno smanjiti javljanje drugog oblika (Angal et al. (1993) Molecular Immunology 30:105) do nivoa koji se tipično primećuju pomoću humane IgG1 šarke. Trenutni pronalazak obuhvata antitela koja imaju jednu ili više mutacija u šarki, regionu CH2 ili CH3 koji mogu biti poželjni, na primer, u proizvodnji, da se poboljša prinos željenog oblika antitela. ;;[0096] "Izolovano antitelo," kako je ovde korišćeno, označava antitelo koje je bilo identifikovano i odvojeno i/ili regenerisano od bar jedne komponente njegove prirodne okoline. Na primer, antitelo koje je bilo odvojeno ili uklonjeno iz bar jedne komponente organizma, ili iz tkiva ili ćelije u kome antitelo prirodno postoji ili je prirodno proizvedeno, je "izolovano antitelo" za svrhe prikazanog pronalaska. Izolovano antitelo takođe uključuje antitelo in situ u okviru rekombinantne ćelije. Izolovana antitela su antitela koja su podvrgnuta bar jednom pročišćavanju ili izolacionom koraku. Prema izvednim izvođenjima, izolovano antitelo može biti suštinski bez drugog ćelijskog materijala i/ili hemikalija. ;;[0097] Izraz "specifično vezuje," ili slično, označava da antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen obrazuju kompleks sa antigenom koji je relativno stabilan pod fiziološkim uslovima. Postupci za određivanje da li se antitelo specifično veže za antigen su dobro pozanati u stanju tehnike i uključuju, na primer, ravnotežnu dijalizu, površinsku plazmon rezonancu, i slično. Na primer, antitelo koje "specifično veže" ANGPTL8, ili koje "specifično veže" ANGPTL3, kako je korišćeno u kontekstu prikazanog pronalaska, obuhvata antitela koja vezuju ANGPTL8, ili ANGPTL3, ili njihov deo sa KDmanjim od oko 1000 nM, manjim od oko 500 nM, manjim od oko 300 nM, manjim od oko 200 nM, manjim od oko 100 nM, manjim od oko 90 nM, manjim od oko 80 nM, manjim od oko 70 nM, manjim od oko 60 nM, manjim od oko 50 nM, manjim od oko 40 nM, manjim od oko 30 nM, manjim od oko 20 nM, manjim od oko 10 nM, manjim od oko 5 nM, manjim od oko 4 nM, manjim od oko 3 nM, manjim od oko 2 nM, manjim od oko 1 nM ili manjim od oko 0.5 nM, kada je mereno testom površinske plazmon ;;;1 ;rezonanace. Izolovano antitelo koje se specifično veže za humani ANGPTL8, ili humani ANGPTL3, međutim, ima unakrsnu reaktivnost za druge antigene, kao što su ANGPTL8 molekuli, ili ANGPTL3 molekuli od drugih (nehumanih) vrsta. ;;[0098] Anti-ANGPTL8 i anti-ANGPTL3 antitela korisna za postupke prema prikazanom opisu mogu sadržati jednu ili više aminokiselinskih supstitucija, insercija i/ili delecija u okviru i/ili regiona CDR promenjivih domena teškog i lakog lanca u poređenju sa odgovarajućim sekvencama germinativne linije iz kojih antitela potiču . Takve mutacije mogu biti lako utvrđene upoređivanjem aminokiselinskih sekvenci ovde opisanih sa sekvencama germinativne linije dostupnim kod, na primer, javnim bazama podataka sekvenci antitela. Prikazani opis obuhvata postupke koje uključuju upotrebu antitela, i njegovih fragmenata koji vezuju antigen, koji potiču od bilo kojih ovde opisanih aminokiselinskih sekvenci, gde jedna ili više aminokiselinska sa jednim ili više okvira i/ili regiona CDR su mutirane u odnosu na odgovarajuće ostatke sekvence germinativne linije iz koje potiče antitelo, ili odgovarajućih ostataka druge humane sekvence germinativne linije, ili konzervativne aminokiselinske supstitucije odgovarajućih ostataka germinativne linije (takve promene u sekvenci se ove nazivaju kolektivno kao "mutacije germinativne linije"). Stručnjak iz ove oblasti tehnike, polazeći od ovde opisanih sekvenci promenjivog regiona teškog i lakog lanca, može lako proizvesti brojna antitela i fragmente koji se vezuju za antigen koji sadrže jednu ili više pojedinačnih mutacija germinativne linije ili njihovih kombinacija. U izvesnim aspektima opisa, svi okviri i/ili ostaci CDR u okviru domena VHi/ili VLsu mutirani nazad u ostatke koji se nalaze u originalnoj sekvenci germinativne linije iz koje je antitelo izvedeno. U drugim aspektima, samo izvesni ostaci su mutirani nazad u originalnu sekvencu germinativne linije, npr., samo mutirani ostaci nađeni u okviru prvih 8 aminokiselina FR1 ili između poslednjih 8 aminokiselina FR4, ili samo mutirani ostaci nađeni u okviru CDR1, CDR2 ili CDR3. U drugim aspektima, jedan ili više okvira i/ili CDR ostataka je mutirano do odgovarajućih ostataka raličite sekvence germinativne linije (tj., sekvenca germinativne linije koja je različita od sekvence germinativne linije iz koje je antitelo originalno izvedeno). Pored toga, antitela prema prikazanom opisu mogu sadržati bilo koju kombinaciju dve ili više mutacija germinativne linije u okviru okvira i/ili regiona CDR, npr., gde izvedni pojedinačni ostaci su mutirani do odgovarajućeg ostatka određene sekvence germinativne linije dok izvesni drugi ostaci koji su različiti od originalne sekvence germinativne linije su održavani ili su mutirani do odgovarajućeg ostataka različite sekvence germinativne linije. Jednom dobijena, antitela i fragmenti koji vezuju antitela koji sadrže jednu ili više mutacija mogu biti lako testirane na jednu ili više željenih osobina kao što su, poboljšana specifičnost vezivanja, povećani afinitet vezivanja, poboljšane ili pospešene antagonističke ili agonističke biološke aktivnosti (u zavisnosti od slučaja), smanjena imunogenost, itd. ;;[0099] Prikazani opis takođe uključuje postupke koji obuhvataju upotrebu anti-ANGPTL8, i anti-ANGPTL3 antitela koja čine varjantne bilo koje od HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinskih sekvenci ovde opisanih koje imaju jednu ili više konzervativnih supstitucija. Na primer, prikazani opis obuhvata upotrebu anti-ANGPTL8, i anti-ANGPTL3 antitela koja imaju HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinske sekvence sa, npr., 10 ili manje, 8 ili manje, 6 ili manje, 4 ili manje, itd. konzervativnih aminokiselinskih supstitucija relativno prema bilo kojim ovde opisanim HCVR, LCVR, i/ili CDR aminokiselinskim sekvencama. ;;[0100] Izraz "površinska plazmon rezonanca", kako je ovde koriščeno, odnosi se na optički fenomen koji dozvoljava analizu međusobnog delovanja u relanom vremenu detekcijom promena u ;;;1 ;koncentracijama proteina u okviru matriksa biosenzora, na primer korišćenjem sistema BIAcore™ (Biacore Life Sciences division of GE Healthcare, Piscataway, NJ). ;;[0101] Izraz "KD", kako je ovde korišćen, namera je da se odnosi na ravnotežnu konstantu disocijacije određene međusobnog dejstva antitelo-antigen. ;;[0102] Izraz "epitop" odnosi se na atigensku determinantu koja međusobno deluje sa specifičnim mestom vezivanja antigena u promenjivom regionu molekula antitela poznatim kao paratop. Pojedinačni antigen može imati više od jednog epitopa. Prema tome, različita antitela mogu se vezati za različite površine na antigenu i mogu imati različite biološke efekte. Epitopi mogu biti ili konformacioni ili linearni. Konfomracioni epitop je dobijen od prostorno suprotstavljanih aminokiselina iz različitih segmenata linernog polipeptidnog lanca. Linearni epitop je jednom dobijen susednim aminokiselinskim ostacima u polipeptidnom lancu. U izvesnim slučajevima, epitop može uključivati delove saharida, fosforil grupa ili sulfonil grupa na antigenu . ;;[0103] Anti-ANGPTL8 i anti-ANGPTL3 antitela korišćena u postupcima mogu biti antitela sa pH-zavisnim karakteristikama vezivanja . Kako je ovde korišćeno, izraz "pH-zavisno vezivanje" označava da antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen pokazuje "smanjeno vezivanje za ANGPTL8 na kiselom pH u odnosu na neutralni pH" (za svrhe prikazanog opisa, oba izraza mogu biti korišćena zamenjivo ), ili da antitelo ili njegov fragment koji vezuje antigen pokazuju "smanjeno vezivanje za ANGPTL3 na kiselom pH u poređenju sa neutralnim pH" (za svrhe prikazanog opisa, oba izraza mogu biti korišćenja zamenjivo). Na primer, antitela "sa pH-zavisnim karakteristikama vezivanja" uključuju antitela i njihove fragmente koji se vezuju za antigen koji se vežu za ANGPTL8, ili za ANGPTL3 sa većim afinitetom na neutralnom pH nego na kiselom pH. U izvesnim aspektima, antitela i fragmenti koji vezuju antigen vezuju ANGPTL8, ili ANGPTL3 sa bar 3, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90, 95, 100, ili puta višim afinitetom na neutralnom pH nego na kiselom pH. ;;[0104] Anti-ANGPTL8 antitela, ili ANGPTL3 antitela sa pH-zavisnim karakteristikama vezivanja mogu sadržati jednu ili više aminokiselinskih varijacija relativno u odnosu na roditeljsko anti-ANGPTL8 antitelo, ili roditeljsko anti-ANGPTL3 antitelo. Na primer, anti-ANGPTL8 antitelo, ili anti-ANGPTL3 antitelo sa pH-zavisnim karakteristikama vezivanja može sadržati jedan ili više supstitucija ili insercija histidina, npr., u jednom ili više CDRs roditeljskog anti-ANGPTL8, ili roditeljskog anti-ANGPTL3 antitela. Prema tome, prema izvesnim aspektima opisa, obezbeđeni su postupci koji obuhvataju davanje anti-ANGPTL8 antitela i anti-ANGPTL3 antitela koje sadrži CDR aminokiselinske sekvence (npr., teškog i lakog lanca CDRs) koje su identične sa CDR aminokiselinskim sekvencama roditeljskih anti-ANGPTL8 antitela, ili roditeljskih ANGPTL3 antitela osim za supstituciju jedne ili više aminokiselina jednog ili više CDRs roditeljskog antitela sa histidinskim ostatkom. Anti-ANGPTL8 antitela, ili anti-ANGPTL3 antitela sa pH-zavisnim vezivanjem mogu posedovati , npr., 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, ili više histidinskih supstitucija, ili u okviru pojedinalnog CDR roditeljskog antitela ili raspoređenog kroz višestruke (npr., 2, 3, 4, 5, ili 6) CDRs roditeljskog anti-ANGPTL8 antitela, ili roditeljskog anti-ANGPTL3 antitela. Na primer, prikazani opis obuhvata upotrebu anti-ANGPTL8 antitela i anti-ANGPTL3 antitela sa pH-zavisnim vezivanjem koje obuhvata jedan ili više histidinskih supstitucija u HCDR1, jednu ili više histidinskih supstitucija u HCDR2, jednu ili više histidinskih susptitucija u HCDR3, jednu ili više histidinskih supstitucija u LCDR1, jednu ili više histidinskih supstitucija u LCDR2, i/ili jednu ili više histidinskih supstitucija u LCDR3, roditeljskog anti-ANGPTL8 antitela, ili roditeljnog anti-ANGPTL3 antitela. ;;;1 ;[0105] Kako je ovde korišćeno, izraz "kisela pH" označava pH od 6.0 ili niži (npr., manji od oko 6.0, manji od oko 5.5, manji od oko 5.0, itd.). Izraz "kisela pH" obuhvata pH vrednosti od oko 6.0, 5.95, 5.90, 5.85, 5.8, 5.75, 5.7, 5.65, 5.6, 5.55, 5.5, 5.45, 5.4, 5.35, 5.3, 5.25, 5.2, 5.15, 5.1, 5.05, 5.0, ili niže. Kao je ovde korišćeno, izraz "neutralni pH" označava pH od oko 7.0 do oko 7.4. Izraz "neutralni pH" uključuje pH vrednosti od oko 7.0, 7.05, 7.1, 7.15, 7.2, 7.25, 7.3, 7.35, i 7.4. ;;[0106] Anti-ANGPTL8 antitelo korišćeno u kontekstu prikazanog opisa obuhvata anti-ANGPTL8 antitelo koje se sastoji od tri regiona teškog lanca koji određuju komplementarnost (HCDRs) koji se nalaze u promenjivom regionu teškog lanca (HCVR) SEQ ID NO: 1 i tri regiona lakog lanca koji određuju komplementarnost( LCDRs) koja se nalaze u promenjivom regionu lakog lanca (LCVR) SEQ ID NO: 5. U prikazanom pronalasku, anti-ANGPTL8 antitelo sadrži HCDR1 SEQ ID NO: 2, HCDR2 SEQ ID NO: 3, HCDR3 SEQ ID NO: 4, LCDR1 SEQ ID NO: 6, LCDR2 izSEQ ID NO: 7, i LCDR3 iz SEQ ID NO: 8. U jednom izvođenju, anti-ANGPTL8 antitelo koje može biti korišćeno u kontekstu prema prikazanom pronalasku obuhvata anti-ANGPTL8 antitelo koje sadrži par HCVR/LCVR aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs: 1/5. ;;[0107] Anti-ANGPTL3 antitelo korišeno u kontekstu prikazanog pronalaska uključuje evinacumab, koji obuhvata tri regiona teškog lanca koji određuju komplementarnost (HCDRs) koja se nalaze u regionu teškog lanca (HCVR) SEQ ID NO: 10 i tri regiona lakog lanca koji određuju komplementarnost (LCDRs) koji se nalaze u promenjivom regionu lakog lanca (LCVR) iz SEQ ID NO: 14. Evinacumab sadrži HCDR1 iz SEQ ID NO: 11, HCDR2 iz SEQ ID NO: 12, HCDR3 iz SEQ ID NO: 13, LCDR1 iz SEQ ID NO: 15, LCDR2 iz SEQ ID NO: 16, i LCDR3 iz SEQ ID NO: 17. Evinacumab sadrži HCVR/LCVR par aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs: 10/14. ;;Dobijanje humanih antitela ;;[0108] Anti-ANGPTL8 antitela i anti-ANGPTL3 antitela mogu biti napravljena prema bilo kom postupku za dobijanje/izolovanje antitela poznatom u stanju tehnike. Na primer, antitela za upotrebu u postupcima prema prikazanom pronalasku mogu biti napravljena tehnologijama hibridoma, pomoću displeja faga, displejom kvasca, itd. Antitela za upotrebu u postupcima prema prikazanom pronalasku mogu biti , npr., himerna antitela, humanizovana antitela, ili potopuno humana antitela . ;;[0109] Postupci za dobijanje humanih antitela u transgenim miševima su poznati u stanju tehnike. Bilo koji tako poznati postupci mogu biti korišćeni u kontekstu prikazanog pronalaska da se naprave humana antitela koja specifično vezuju ANGPTL8, ili ANGPTL3. ;;[0110] Na primer, korišćenjem VELOCIMMUNE™ tehnologije (videti, na primer, US 6,596,541, Regeneron Pharmaceuticals) ili bilo kog drugog poznatog postupaka za dobijanje monoklonskih antitela, su početno izolovana visokoafinitetna himerna antitela na ANGPTL8, ili na ANGPTL3 koja imaju humani promenjivi region i mišji konstatni region. VELOCIMMUNE® tehnologija uključuje dobijanje transgenog miša koji ima genom koji sadrži promenjive regione humanog teškog i lakog lanca operativno vezan za lokus endogenog mišjeg konstantnog regiona tako da miš proizvodi antitelo koje se sastoji od humanog promenjivog regiona i mišjeg konstantnog regiona kao odgovor na stimulaciju antigena. DNK koja kodira promenjive regione teških i lakih lanaca antitela može biti izolovan i operativno vezanza DNK koji kodira konstantne regione humanog teškog i lakog lanca. DNK je zatim eksprimovan u ćelijama koje su u stanju da eksprimuju celo humano antitelo. ;;;2 ;[0111] Generalno, VELOCIMMUNE® miš je izazvan sa anitegnom od interesa, i limfne ćelije (kao što su B-ćelije) su regenerisane iz mišjih koje eksprimuju antitela. Limfne ćelije mogu biti spojene sa ćelijskom linijom mijeloma da se dobiju besmrtne ćelijske linije hibridoma, i takve ćelije linije hibridoma su odabirane i selektovane da identifikuju ćelijske linije hibridoma koje proizvode antitela specifična za antigen od interesa . DNK koja kodira promenjive regione teškog lanca i lakog lanca može biti izolovana i povezana sa željenim izotipskim konstantnim regionima teškog i lakog lanca. Takav protein antitela može biti dobijen u ćeliji, kao što je CHO ćelija. Alternativno, DNK koji kodira antigenspecifična himerna antitela ili promenjive domene lakog i teškog lanca može biti izolovana direktno iz limfocita specifičnih za taj antigen antigen. ;;[0112] Početna, himerna antitela visokog afiniteta su izolovana koja imaju humani promenjivi region i mišji konstantni region. Antitela su karakterisana i odabrana za željene karakteristike, uključujući afinitet, selektivnost, epitop , itd., pomoću standardnih postupaka poznatih stručnjaku iz ove oblasti. Mišji konstanti regioni su zamenjeni sa željenim humanim konstantnim regionom da dobiju celo humano antitelo prema pronalasku, na primer prirodnog tipa ili modifikovani IgG1 ili IgG4. Dok izabrani konstantni region može varirati prema specifičnoj upotrebi, visoki afinitet vezivanja antigena i specifične karakteristike za metu potiču od promenjivog regiona. ;;[0113] Generalno, antitela koja mogu biti korišćena u postupcima prema prikazanom pronalasku poseduju visoke afinitete, kako je gore opisano, kada je mereno vezivanjem antigena ili imobiliziranjem na čvrstoj fazi ili rastvorenoj fazi. Konstantni mišji regioni su zamenjeni sa željenim humanim konstantnim regionima da se dobiju cela humana antitela prema pronalasku. Dok odabrani konstantni region može varirati prema specifičnoj upotrebi, vezivanje antigena viskog afiniteta i karakteristike specifičnosti za metu se nalaze u promenjivom regionu . ;;[0114] Specifični primeri humanih antitela ili fragmenata koji vezuju antigen antitela koja specifično vezuju ANGPTL8, koji mogu bii korišćeni u kontekstu postupaka prema prikazanom opisu uključuju antitela ili proteine koji vezuju antigen koji sadrže šest CDRs (HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3) iz promenjivih regiona teškog i lakog lanca para (HCVR/LCVR) aminokiselinske sekvence koja sadrži SEQ ID NOs: 1/5. ;;[0115] U prikazanom pronalasku, anti-ANGPTL8 antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, sadrži regione teškog i lakog lanca koji određuju komplementarnost (HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3) koji sadrže aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs: 2, 3, 4, 6, 7 i 8. ;;[0116] U izvesnim izvođenjima prikazanog pronalaska, anti-ANGPTL8 antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, koji može biti korišćen u postupcima sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:1 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:5. ;;[0117] Specifični primeri antitela ili fragmenata koji vezuju antigen antitela koja specifično vežu ANGPTL3, koja mogu biti korišćeni u kontekstu postupaka prema prikazanom opisu uključuju antitela ili proteine koji vezuju antigen koji sadrže šest CDRs (HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 i LCDR3) iz promenjivog regiona teškog i lakog lanca para (HCVR/LCVR) aminokiselinske sekvence koja sadrži SEQ ID NOs: 10/14. ;[0118] U prikazanom pronalasku, anti-ANGPTL3 antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, sadrži regione koji određuju komplementarnost teškog i lakog lanca (HCDR1-HCDR2-HCDR3/LCDR1-LCDR2-LCDR3) koji sadrže aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs:11, 12, 13, 15, 16 i 17. ;;[0119] U izvesnim izvođenjima prikazanog pronalaska, anti-ANGPTL3 antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, koji može biti korišćen u postupcima sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:10 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO:14. ;;Farmaceutske kompozicije i postupci davanja ;;[0120] Prikazani pronalazak se odnosi na postupke, koji obuhvataju davanje inhibitora ANGPTL8 pacijentu u kombinaciji sa inhibitorom ANGPTL3 , gde se inhibitor ANGPTL8 i inhibitor ANGPTL3 nalaze u okviru iste, ili u različitim farmaceutskim kompozicijama. Farmaceutske kompozicije mogu biti formulisane sa pogodnim nosačima, ekscipientima i drugim sredstvima koja obezbeđuju pogodan transfer, dostavljanje, tolerancu, i slično. Mnoštvo odgovarajućih formulacija može se naći u formulatoru poznatom svim farmaceutskim hemičarima : Remington’s Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, PA. Ove formulacije uključuju, na primer, prahove, paste, masti, žele, voskove, ulja, lipide, vezikule koje sadrže lipide (katjonske i anjodnske) (kao što je LIPOFECTIN™), DNK konjugate, anhidrovane apsorpcione paste, emulzije ulje u vodi i voda u ulju, emulzije carbowax-a (polietilen glikoli različitih molekulskim masa ), polu-čvrste gelove, i polu-čvrste smeše koje sadrže carbowax. Videti takođe Powell et al. "Compendium of excipients for parenteral formulations" PDA (1998) J Pharm Sci Technol 52:238-311. ;;[0121] Primeri farmaceutskih formulacija koje sadrže anti-ANGPTL8 antitela, i/ili ANGPTL3 antitela koja mogu biti korišćena u kontekstu prikazanog pronalaska uključuju bilo koju od formulacija datih u US 8,795,669, ili u WO2013/166448, ili WO2012/168491. ;;[0122] Različiti sistemi za davanje su poznati i mogu biti korišćeni za davanje farmaceutske kompozicije, npr., inkapsulacija u lipozome, mikročestice, mikrokapsule, rekombinantne ćelije u stanju da eksprimuju mutirane viruse, receptorom posredovana endocitoza (videti, npr., Wu et al., 1987, J. Biol. Chem.262:4429-4432). Postupci za davanje uključuju, ali bez ograničenja samo na njih, intradermalni, intramuskularni, intraperitonealni, intravenski, subkutanozni, intranazalni, epiduralni, i oralni put. Kompozicija može biti davana na bilo koji konvencionalni način, na primer infuzijom ili bolus injekcijom, apsorbovanjem preko epitelne ili mukokutanozne sluzokože (npr., oralne mukoze, rektalne i intestinalne mukoze , itd.) i može biti davana zajedno sa drugim biološki aktivnim sredstvima . ;;[0123] Farmaceutska kompozicija može biti davana subkutanozno ili intravenski standardnom iglom i špricom . Pored toga, u odnosu na subkutanozno davanje, uređaj u obliku olovke za davanje ima laku primenu u davanju farmaceutske kompozicije. Takav uređaj u obliku olovke za davanje može se koristiti više puta ili jednokratno. U uređaju za višekratno davanje u obliku olovke koriste se zamenjivi kartridži koji sadrže farmaceutsku kompoziciju . Kada se cela farmaceutska kompozicija unutar kertridža primeni i kertridž je prazan, prazan kertridž se može lako odbaciti i zameniti novim kertridžom koji sadrži farmaceutsku kompoziciju. Uređaj za davanje u obliku olovke može zatim biti ponovo korišćen. U uređaju za davanje u obliku olovke koji je za jednokratno korišćenje ne postoje kertridži koji se mogu zameniti. Umesto toga uređaj za davanje u obliku olovke dolazi unapred napunjen sa farmaceutskom kompozicijom koja se nalazi u rezervoaru unutar uređaja. Jednom kada je rezervoar ispražnjen od farmaceutske kompozcije, celokuni uređaj se baca . ;[0124] Brojni uređaji u obliku olovke i autoinjektori ima primenu u subkutanoznom davanju farmaceutske kompozicije. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na AUTOPEN™ (Owen Mumford, Inc., Woodstock, UK), DlSETRONlC™ olovku (Disetronic Medical Systems, Bergdorf, Switzerland), HUMALOG MIX 75/25™ olovku, HUMALOG™ olovku, HUMALIN 70/30™ olovku (Eli Lilly and Co., Indianapolis, IN), NOVOPEN™ I, II i III (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), NOVOPEN JUNIOR™ (Novo Nordisk, Copenhagen, Denmark), BD™ olovku (Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ), OPTIPEN™, OPTIPEN PRO™, OPTIPEN STARLET™, i OPTICLIK™ (Sanofi-Aventis, Frankfurt, Germany), da navedeno samo nekoliko. Primeri jednokratnih uređaja za davanje u obliku olovke koji imaju primenu u subkutanoznom davanju farmaceutske kompozicije prema prikazanom pronalasku uključuju, ali bez ograničenja samo na njih, SOLOSTAR™ olovku (Sanofi-Aventis), FLEXPEN™ (Novo Nordisk), i KWIKPEN™ (Eli Lilly), SURECLICK™ Autoinjektor (Amgen, Thousand Oaks, CA), PENLET™ (Haselmeier, Stuttgart, Germany), EPIPEN (Dey, L.P.), i HUMIRA™ olovku (Abbott Labs, Abbott Park IL), da navedenom samo nekoliko. ;;[0125] U izvesnim situacijama, farmaceutska kompozicija može biti davana u kontrolisanom sistemu za davanje. U jednom izvođenju, može biti korišćena pumpa (videti Langer, supra; Sefton, 1987, CRC Crit. Ref. Biomed. Eng.14:201). U još jednom izvođenju, polimerni materijali mogu biti korišćeni; videti, Medical Applications of Controlled Release, Langer and Wise (eds.), 1974, CRC Pres., Boca Raton, Florida. U još jednom izvođenju, sistem za kontrolisano oslobađanje može biti smešten u blizinu mete kompozicije, prema tome zahtevajući samo frakciju sistemske doze (videti, npr., Goodson, 1984, u Medical Applications of Controlled Release, supra, vol.2, pp.115-138). Drugo sistemi za kontrolisano oslobađanje su diskutovani u pregledu by Langer, 1990, Science 249:1527-1533. ;;[0126] Injektibilni preparati mogu uključivati dozne oblike za intravensku, subkutanoznu, intrakutanoznu i intramuskularnju injekciju, infuzije kap po kap, itd. Ovi injektibilni preparati mogu biti dobijeni poznatim postupcima. Na primer, injektibilni preparati mogu biti dobijeni, npr., rastvaranjem, suspendovanjem ili emulgovajem gore opisanog antitela ili njegove soli u sterilnom vodenom medijumu ili uljanom medijumu konvencionalno korišćenom za injekcije. Kao vodeni medijum za injekcije, postoji na primer, fiziološki rastvor soli, izotonični rastvor koji sadrži glukozu i druga pomoćna sredstva , itd., koja mogu biti korišćena u kombinaciji sa odgovarajućim sredstvom za rastvaranje kao što je alkohol (npr., etanol), polialkohol (npr., propilen glikol, polietilen glikol), nejonsko površinski aktivno sredstvo [npr., polisorbat 80, HCO-50 (polioksietilenski (50 mol) adukt hidrogenizovanog ricinusovog ulja )], itd. Kao uljani medijum, korišćeno je na primer, npr., susamovo ulje, sojino ulje, itd., koji može biti korišćen u kombinaciji sa sredstvom za rastvaranje kao što je benzil benzoat, benzil alkohol, itd. Tako pripremljena injekcije je poželjno napunjena u odgovarajuću ampulu . ;;[0127] Pogodno, gore opisane farmaceutske kompozicije za oralnu ili parenteralnu upotrebu su dobijene u doznim oblicima u jediničnoj dozi pogodnoj za uklapanje u dozu aktivnih sastojaka . Takvi dozni oblici u jediničnoj dozi uključuju, na primer, tablete, pilule, kapsule, injekcije (ampule), supozitorije, itd. ;;Doza ;;[0128] Količina ANGPTL8 inhibitora (npr., anti-ANGPTL8 antitela), ili ANGPTL3 inhibitora (npr., anti-ANGPTL3 antitela) davana subjektu je generalno, terapeutski efikansa količina . Kako je ovde korišćeno, fraza "terapeutski efikansa količina inhibitora ANGPTL8 " označava dozu inhibitora ANGPTL8 , kada se daje u kombinaciji sa inhibitorom ANGPTL3 , što dovodi do detektabilnog smanjenja (bar oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, ili više od početne vrednosti) u ;;;2 ;jednom ili više parametara izabranih iz grupe koju čine ukupni holesterol , LDL-C, ApoB100, non-HDL-C, VLDL-C, trigliceridi, Lp(a) i zaostali holesterol, ili količina koja smanjuje ili eliminiše pacijentovu potrebu za drugim terapeutskim intervencijama, kao što je, afereza lipoproteina, ili koja smanjuje pacijentovu normalizovanu brzinu afereze . ;;[0129] U slučaju anti-ANGPTL8 antitela, terapeutska fiksna količina može biti od oko 0.05 mg do oko 600 mg, npr., oko 0.05 mg, oko 0.1 mg, oko 1.0 mg, oko 1.5 mg, oko 2.0 mg, oko 10 mg, oko 20 mg, oko 30 mg, oko 40 mg, oko 50 mg, oko 60 mg, oko 70 mg, oko 80 mg, oko 90 mg, oko 100 mg, oko 110 mg, oko 120 mg, oko 130 mg, oko 140 mg, oko 160 mg, oko 170 mg, oko 180 mg, oko 190 mg, oko 200 mg, oko 210 mg, oko 220 mg, oko 230 mg, oko 240 mg, oko 250 mg, oko 260 mg, oko 270 mg, oko 280 mg, oko 290 mg, oko 300 mg, oko 310 mg, oko 320 mg, oko 330 mg, oko 340 mg, oko 350 mg, oko 360 mg, oko 370 mg, oko 380 mg, oko 390 mg, oko 400 mg, oko 410 mg, oko 420 mg, oko 430 mg, oko 440 mg, oko 450 mg, oko 460 mg, oko 470 mg, oko 480 mg, oko 490 mg, oko 500 mg, oko 510 mg, oko 520 mg, oko 530 mg, oko 540 mg, oko 550 mg, oko 560 mg, oko 570 mg, oko 580 mg, oko 590 mg, ili oko 600 mg, anti-ANGPTL8 antitela. Prema izvesnim primerima izvođenja prikazanog pronalaska, terapeutski efikasna količina anti-ANGPTL8 antitela je 75 mg, 150 mg ili 300 mg (npr., u slučaju alirocumaba), ili 140 mg ili 420 mg (npr., u slučaju evolocumaba). Druge dozne količine inhibitora ANGPTL8 će biti očigledne stručnjaku iz ove oblasti. ;;[0130] Količina anti-ANGPTL8 antitela koja se nalazi u pojedinačnim dozama može biti izražena u miligramima antitela po kilogramu pacijentove telesne mase (tj., mg/kg). Na primer, anti-ANGPTL8 antitela mogu biti davana pacijentu u dozi od oko 0.0001 do oko 10 mg/kg pacijentove telesne mase. ;;[0131] Količina inhibitora ANGPTL3 (npr., anti-ANGPTL3 antitela) davana subjektu je , generalno, terapeutski efikasna količina. Kako je ovde korišćeno, fraza "terapeutski efikasna količina inhibitora ANGPTL3 " označava dozu inhibitora ANGPTL3 , kada je kombinovana sa inhibitorom ANGPTL8 , dovodi do detektabilnog smanjenja (bar oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, ili više u odnosu na početnu vrednost ) u jednom ili više parametara izabranih iz grupe koju čine ukupni holesterol , LDL-C, ApoB100, non-HDL-C, VLDLC, trigliceridi, Lp(a) i zaostali holesterol, ili količina koja sprečava ili ublažava aterosklerozu kod subjekta (kako je opisano ovde na drugim mestima ). ;;[0132] U slučaju anti-ANGPTL3 antitela, terapeutski efikasna količina može biti od oko 0.05 mg do oko 600 mg, npr., oko 0.05 mg, oko 0.1 mg, oko 1.0 mg, oko 1.5 mg, oko 2.0 mg, oko 10 mg, oko 20 mg, oko 30 mg, oko 40 mg, oko 50 mg, oko 60 mg, oko 70 mg, oko 80 mg, oko 90 mg, oko 100 mg, oko 110 mg, oko 120 mg, oko 130 mg, oko 140 mg, oko 160 mg, oko 170 mg, oko 180 mg, oko 190 mg, oko 200 mg, oko 210 mg, oko 220 mg, oko 230 mg, oko 240 mg, oko 250 mg, oko 260 mg, oko 270 mg, oko 280 mg, oko 290 mg, oko 300 mg, oko 310 mg, oko 320 mg, oko 330 mg, oko 340 mg, oko 350 mg, oko 360 mg, oko 370 mg, oko 380 mg, oko 390 mg, oko 400 mg, oko 410 mg, oko 420 mg, oko 430 mg, oko 440 mg, oko 450 mg, oko 460 mg, oko 470 mg, oko 480 mg, oko 490 mg, oko 500 mg, oko 510 mg, oko 520 mg, oko 530 mg, oko 540 mg, oko 550 mg, oko 560 mg, oko 570 mg, oko 580 mg, oko 590 mg, ili oko 600 mg, anti-ANGPTL3 antitela. Druge dozirajuće količine inhibitora ANGPTL3 će biti očigledne stručnjacima iz ove oblasti. ;;[0133] Količina anti-ANGPTL3 antitela koja se nalazi u okviru pojedinačnih doza može biti izražena u miligramima antitela po kliogramu pacijentove telesne mase (tj., mg/kg). Na primer, anti-ANGPTL3 antitelo može biti davano pacijentu u dozi od oko 0.0001 do oko 10 mg/kg pacijentove telesne mase. ;Kombinovane terapije ;;[0134] Kao što je napisano na drugom mestu ovde, postupci mogu obuhvatati davanje inhibitora ANGPTL8 u kombinaciji sa inhibitorom ANGPTL3 pacijentu koji ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan, ili je netolerantan na standardnu terapiju za smanjenje lipida. U izvesnim izvođenjima, potreba za daljim davanjem terapije za snižavanje lipda može biti potpuno eliminisana. U izvesnim izvođenjima, kombinovana upotreba inhibitora ANGPTL8 sa inhibitorom ANGPTL3 može biti korišćena u kombinaciji sa ("povrh") prethodno prepisanom pacijentovom terapijom za snižavanje lipida. Na primer, u kontekstu snižavanja bar jednog parametra za lipid/lipoprotein kod pacijenta koji pati od hiperlipidemije (npr. hiperholesterolemije, ili hipertrigliciridemije), gde pacijent ne reaguje na, neadekvatno je kontrolisan sa, ili je netolerantan na standardnu terapiju za snižavanje lipida, kombinacija inhibitora ANGPTL8 sa inhibitorom ANGPTL3 može biti davana pacijentu u kombinaciji sa stabilnim dnevnim terapeutskim režimom statinima. Primeri dnevnih terapeutskih režima statinima sa kojima može biti davana kombinacija inhibitora ANGPTL8 plus inhibitora ANGPTL3 u kontekstu prikazanog pronalaska uključuje, npr., atorvastatin (10, 20, 40 ili 80 mg dnevno), (atorvastatin/ezetimib 10/10 ili 40/10 mg dnevno), rosuvastatin (5, 10 ili 20 mg dnevno), cerivastatin (0.4 ili 0.8 mg dnevno), pitavastatin (1, 2 or 4 mg dnevno), fluvastatin (20, 40 or 80 mg dnevno), simvastatin (5, 10, 20, 40 ili 80 mg dnevno), simvastatin/ezetimib (10/10, 20/10, 40/10 ili 80/10 mg dnevno), lovastatin (10, 20, 40 ili 80 mg dnevno), pravastatin (10, 20, 40 ili 80 mg dnevno), i njihove kombinacije. Druge terapije koje modifikuju lipide sa kojima se inhibitor ANGPTL8 plus inhibitor ANGPTL3 mogu davati u kombinaciji u kontekstu prikazanog pronalaska uključuju, npr., (1) sredstvo koje inhibira unos holesterola i ili resorpciju žučnih kiselina (npr., ezetimib); (2) sredstvo koje povećava katabolizam lipoproteina (kao što je niacin); i/ili (3) aktivatore LXR transkripcionog faktora koji igraju ulogu u eliminaciji holesterola kao što je 22-hidroksiholesterol. ;;[0135] Neograničavajući primer anti-ANGPTL8 antitela koja mogu biti korišćena u kontekstu prikazanog pronalaska uključuju antitelo koje sadrži par HCVR/LCVR aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs: 1/5, ili njegov deo koji se vezuje za antigen. ;;[0136] Neograničavajući primer ANGPTL3 antitela koje se koristi u kontekstu prikazanog pronalaska uključuje evinacumab, koji sadrži par HCVR/LCVR aminokiselinske sekvence SEQ ID NOs: 10/14, ili njegovog dela koji se vezuje za antigen. ;;Režimi davanja ;;[0137] Prema izvesnim izvođenjima prikazanog pronalaska, višestruke doze inhibitora ANGPTL8 (tj., farmaceutske kompozicije koja sadrži inhibitor ANGPTL8) i inhibitora ANGPTL3 (tj., farmaceutske kompozicije ANGPTL3 inhibitor) mogu biti davane subjektu u toku određenog vremenskog toka (npr., povrh dnevnog terapeutskog režima statinima ili druge pozadinske terapije za modifikovanje lipida). Postupci prema ovom aspektu pronalaska obuhvataju sekvencionalno davanje subjektu višestrukih doza inhibitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3. Kako je ovde korišćeno, "sekvencionalno davanje" označava da svaka doza inhibitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3 je davana subjektu u različitim vremenskim tačkama , npr., različitim danima odvojenim prethodno određenim intervalima (npr., sati, dani, nedelje ili meseci). Prikazani pronalazak uključuje sekvencionalno davanje pacijentu pojedinačne početne doze inhibitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3, preaćeno sa jednom ili više sekundarnih doza inhhbitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3, i opciono praćenjem jedne ili više tercijarnih doza inhibitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3. ;;;2 ;[0138] Izrazi "početna doza", "sekundarne doze," i "tercijarne doze," odnosi se na vremensku sekvencu davanja pojedinačnih doza farmaceutske kompozicije koja sadrži inhibitor ANGPTL8 i inhibitor ANGPTL3. Prema tome, "početna doza" je doza koja je davana na početku režima lečenja (koja se takođe ovde naziva "početna doza"); "sekundarne doze" su doze koje su davane posle početne doze; i "tercijarne doze" su doze koje su davanje posle sekundarnih doza. Početne, sekundarne, i tercijarne doze mogu sve sadržati istu količinu inhibitora ANGPTL8 i inhhibitora ANGPTL3, ali generalno mogu se razlikovati jedna od druge u pogledu učestalosti davanja. U izvesnim izvođenjima, međutim, količina inhibitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3 koja se nalazi u početnim, sekundarnim i/ili tercijarnim dozama varira jedna od druge (npr., podešena je prema potrebi na više ili manje) u toku lečenja. U izvesnim izvođenjima, dve ili više (npr., 2, 3,4, ili 5) doza je davano na početku režima lečenja kao "početna doza" praćene sa naknadnim dozama koje su davane manje učestalo (npr., "doze za održavanje"). ;;[0139] Prema primerima izvođenja prikazanog pronalaska, svaka sekundarna i/ili tercijarna doza je davana 1 do 26 (npr., 1, 1 1⁄2, 2, 21⁄2, 3, 31⁄2, 4, 41⁄2, 5, 51⁄2, 6, 61⁄2, 7, 71⁄2, 8, 81⁄2, 9, 91⁄2, 10, 101⁄2, 11, 111⁄2, 12, 121⁄2, 13, 131⁄2, 14, 141⁄2, 15, 151⁄2, 16, 161⁄2, 17, 171⁄2, 18, 181⁄2, 19, 191⁄2, 20, 201⁄2, 21, 211⁄2, 22, 221⁄2, 23, 231⁄2, 24, 241⁄2, 25, 251⁄2, 26, 261⁄2, ili više) nedelja neposredno posle prethodne doze. Fraza "neposredno nakon prethodne doze," kako je ovde korišćeno, označava, sekvencu višestrukog davanja, doze molekula koji se vezuje za antigen, koja je davana pacijentu pre davanja sledeće doze u sekvenci bez interventih doza. ;;[0140] Postupci prema ovom aspektu pronalaska mogu obuhvatati davanje pacijentu bilo kog broja sekundarnih i/ili tercijarnih doza inhibitora ANGPTL8 i inhibitora ANGPTL3. Na primer, u izvesnim izvođenjima, samo pojedinačna sekundarna doza je davana pacijentu. U drugim izvođenjima, dve ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ili više) sekundarnih doza je davano pacijentu. Slično, u izvesnim izvođenjima, samo pojedinačna tercijarna doza je davana pacijentu. U drugim izvođenjima, dve ili više (npr., 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, ili više) tercijarnih doza je davano pacijentu. ;;[0141] U izvođenjima koji obuhvataju višestruke sekundarne doze, svaka sekundarna doza može biti davana istom učestalošću kao druge sekundatne doze. Na primer, svaka sekundarna doze može biti davana pacijentu 1 do 2, 4, 6, 8 ili više nedelja neposreno nakon prethodne doze. Slično, u izvođenjima koji uključuju višestruke tercijarne doze, svaka tercijarna doza može biti davana istom učestalošću kao ostale tercijarne doze. Na primer, svaka tercijarna doza može biti davana pacijentu 1 do 2, 4, 6, 8 ili više nedelja neposredno nakon prethodne doze. Alternativno, učestalost kojom sekundarne i/ili tercijarne doze su davane pacijentu može varirati u odnosu na tok režima lečenja. Učestalost davanja može biti podešena u toku lečenja od strane lekara u zavisnosti od potreba pojedinačnog pacijenta nakon kliničkog pregleda. ;;PRIMERI ;;[0142] Sledeći primeri su dati tako da obezbede stručnjacima iz ove oblesti kompletno otkrivanje i opis kako pripremiti i koristiti postupke i kompozicije prema pronalasku, i nije namera da se ograniči obim onoga što su pronalazači smatrali ovim pronalaskom. Učinjeni su napori da se obezbedi preciznost u odnosu na korišćene brojeve (npr., količine, temperature, itd.) ali neke eksperimentalne greške i devijacije treba uzeti u obzir. Osim ako nije drugačije navedeno, delovi su u odnosu na masu, molekulska masa je srednja molekulska masa, temperatura je stepeni Celzijusa, i pritisak je ili nije atmosferski. ;;;2 ;Primer 1. Dobijanje humanih antitela na humani ANGPTL8 ;;[0143] Anti-ANGPTL8 antitela mogu biti dobijena imunizacijom VELOCIMMUNE® miša (tj., genetski izmenjenog miša koji sadrži DNK koja kodira promenjive regione humanog imunoglobulinskog teškog i kapa lanca) sa imunogenom koji sadrži rekombinantni humani ANGPTL8 eksprimovan sa C-terminalnom mišjom IgG2a Fc oznakom (videti SEQ ID NO: 9). Imuni odgovor antitela je praćen imunim testom specifičnim za ANGPTL8. Kada je postignut željeni imuni odgovor, nekoliko celih humanih anti-ANGPTL8 antitela je dobijeno iz antigen-pozitivnih B ćelija kao što je opisano u US 2007/0280945A1. ;;[0144] Primer inhibitora ANGPTL8 korišćen u sledećem primeru je humano anti-ANGPTL8 antitelo označano kao "H4H15341P". Promenjivi region teškog lanca (HCVR) koji sadrži SEQ ID NO:1 i promenjivi domen lakog lanca (LCVR) sadrži SEQ ID NO:5; region određivanja komplementarnosti teškog lanca 1 (HCDR1) koji sadrži SEQ ID NO:2, HCDR2 koji sadrži SEQ ID NO:3, HCDR3 koji sadrži SEQ ID NO:4, region određivanja komplementarnosti lakog lanca 1 (LCDR1) koji sadrži SEQ ID NO:6, LCDR2 koji sadrži SEQ ID NO:7 i LCDR3 koji sadrži SEQ ID NO:8. ;;Primer 2. Dobijanje humanog antitela na humani ANGPTL3 ;;[0145] Humana anti-ANGPTL3 antitela su dobijena kao što je opisano u US Patent No. 9,018,356. Primer inhibitora ANGPTL3 korišćenog u sledećem primeru je humano anti-ANGPTL3 antitelo obeleženo kao "H4H1276S," takođe poznato kao "evinacumab." H4H1276S ima sledeće karakteristike aminokiselinska sekvence: promenjivi region teškog lanca (HCVR) koji sadrži SEQ ID NO:10 i promenjivi region lakog lanca (LCVR) koji sadrži SEQ ID NO:14; region određivanja komplementarnosti teškog lanca 1 (HCDR1) koji sadrži SEQ ID NO:11, HCDR2 koji sadrži SEQ ID NO:12, HCDR3 koji sadrži SEQ ID NO:13, region koji određuje komplementarnost lakog lanca 1 (LCDR1) koji sadrži SEQ ID NO:15, LCDR2 koji sadrži SEQ ID NO:16 i LCDR3 koji sadrži SEQ ID NO:17. ;;Primer 3: In Vivo efekat anti-ANGPTL3 antitela na nivoe trigliderida i holesterola u krvotoku kod miševa sa utišanim ANGPTL8 (Knockout - KO) i prirodnog tipa (Wild Type - WT) ;;[0146] Efekti ANGPTL3 antitela H4H1276S na trigliceride (TG) i ukupni holesterolu u serumu su procenjivani kod miševa sa utišanim Angptl8 i prirodnog tipa. Miševima je prethodno uzeta krv natašte (posle noćnog gladovanja od 6 sati) 5 dana pre eksperimenta. Miševi su raspoređeni u grupe (5 miševa svaka prema antitelu i prema genotipu) na osnovu njihovih početnih vrednosti TG i ukupnog holesterola. Antitela, kontrola koja odgovara izotipu (hlgG4) sa odgovarajućom specifičnošću i H4H1276S (anti-ANGPTL3), su davani jednom dozom subkutanozne injekcije dana 0 ispitivanja po 10mg/kg. Miševima je uzeta krv dana 2 i 8 u uslovima natašte i određeni su nivoi TG i ukupnog holesterola u serumu pomoću ADVIA® 1800 Chemistry System (Siemens). Srednje vrednosti su izračunate za svaku vremensku tačku. Rezultati, izraženi kao (srednje vrednosti ± SEM) su prikazani na slikama 1 i 2. Slika 1 pokazuje rezultate nivoa triglicerida u oba miša ANGPTL8 KO i WT. Slika 2 pokazuje rezultate nivoa ukupnog holesterola na oba miša ANGPTL8 KO i WT. ;;Kratak prikaz rezultata: ;;[0147] Efekat ANGPTL3 antitela H4H1276S na nivoe TG i ukupnog holeasterola u krvotoku je procenjivan na miševima sa utišanim Angptl8 i prirodnom tipu. Tretman sa H4H1276S je vodio značajnom smanjenju u nivoima TG i ukupnog holesterola u krvotoku miševa prirodnog tipa, što je konzistento sa ranije zabeleženim (Gusarova et al, 2015, J. Lipid Res. (2015), Jul;56(7):1308-17). ;;;2 ;H4H1276S je takođe izazvao značajno smanjenje u nivoima TG kod miševa sa utišanim Angptl8, što je već smanjilo nivo početne vrednosti TG usled brisanja Angptl8. Ukupni holesterol je takođe bio značajno smanjen tretmanom sa H4H1276S miševa sa utišanim Angptl8. Ovi podaci sugerišu da inhibicija oba ANGPTL3 i ANGPTL8 može imati aditivan efekat na nivoe TG u krvotoku. ;;Primer 4: In Vivo efekat anti-ANGPTL8 i anti-ANGPTL3 i njihove kombinacije na trigliceride (TG) i ukupni holesterol (TC) u krvotoku kod humanizovanih ANGPTL8 miševa ;;[0148] Efekti kombinovanog tretmana anti-ANGPTL8 i anti-ANGPTL3 antitelima na nivoe triglicerida (TG) i ukupnog holesterola u serumu su procenjivani kod humanizovanih ANGPTL8 miševa. Miševima je uzeta krv 6 dana pre eksperimenta u uslovima bez gladovanja. Miševi su raspoređeni u grupe (pet u svakoj za svako testirano antitelo ili kombinaciju antitela) na osnovu njihove početne vrednosti TG vrednosti telesne mase. Antitela su davana kao pojedinačna doza subkutanoznom injekcijom dana 0 ispitivanja: kontrola koja odgovara izotipu (hlgG4) bez obzira na specifičnost, H4H15341P i H4H1276S su davani u dozi 3mg/kg i kombinacija H4H15341P i H4H1276S je davana u 2 doze -1.5mg/kg ili 3mg/kg svaka. Miševima je uzeta krv (bez gladovanja) dana 1, 4, 8 i 14 posle injekcije antitela, određeni su nivoi TG i ukupnog holesterola u serumu pomoću ADVIA® 1800 Chemistry System (Siemens). Srednje vrednosti su izračunate za svaku vremensku tačku. Rezultati, izraženi kao (srednja vrednost ± SEM) su prikazani na slikama 3 i 4. Slika 3 pokazuje efekat na trigliceride kada su korišćena sama ANGPTL3 ili ANGPTL8 antitela, ili kada su korišćena u kombinaciji. Merenja su obavljena danima 1, 4, 7 i 14 posle davanja. Slika 4 pokazuje efekat na ukupni nivo holesterola kada su korišćena samo ANGPTL3 ili ANGPTL8 antitela, ili kada su korišćena u kombinaciji. Merenja su obavljena dana 1, 4, 7 i 14 posle davanja ;;Kratak prikaz rezultata: ;;[0149] Uticaj kombinovanog tretmana H4H15341P (anti-hANGPTL8) i H4H1276S (anti-ANGPTL3) na nivoe TG u krvotoku je testiran kod humanizovanih ANGPTL8 miševa. Davanje pojedinačnog mAb ili kombinacije je vodilo do značajnog smanjenja nivoa TG u krvotoku dok je kombinovani tretman pokazao aditivan efekat na nivoe TG u serumu u odnosu na pojedinačne efekte mAb. ;;Primer 5: Ispitivanja u vezi sa međusobnim delovanjem AngPTL3 i AngPTL8 ;;[0150] Protein sličan angiopoietinu 3 (ANGPTL3) i ANGPTL8 su izlučeni proteini i inhibitori kliranasa triglicerida u plazmi posredovanog lipazom lipoproteina (LPL). Ispitivano je kako ovi ANGPTL proteini međusobno deluju da regulišu LPL aktivnost da se obezbede odgovarajuće količine masnih kiselina za skladištenje ili oksidaciju. ANGPTL3 inhibira LPL aktivnost i povećava trigliceride (TG) u serumu miševa u zavisnosti od ANGPTL8. Efektni na LPL aktivnost i TG u serumu treba da budu preokrenuti sa blokirajućim ANGPTL3 antitelom. Takođe je nađeno da ANGPTL8 ima funkcionalni LPL inhibitorni motiv ali ne zahteva ANGPTL3 da inhibira LPL i poveća TG u serumu miševa. Mutageneza usmerena na mesto je otkrila da sposobnost ANGPTL8 da blokira aktivnost LPL i poveća serumski TG ne zahteva ANGPTL3 sa funkcionalnim LPL inhibitornim motivom. Antitelo na C-kraj ANGPTL8 (videti primer 6) preokreće LPL inhibiciju sa ANGPTL8 u prisustvu ANGPTL3. Antitelo nije poremetilo kompleks ANGPTL8:ANGPTL3 ali dolazi u neposrednu blizinu LPL inhibitornog motiva na N-kraju ANGPTL8. Kolektivno, ovi podaci ne pokazuju da ANGPTL8 ima funkcionalni LPL inhibitorni motiv, ali mogu samo inhibirati LPL u prisustvu ANGPTL3 (Haller, J. et al. Nature Scientific Reports, submitted 2017). ;;;2 ;Primer 6: Anti-ANGPTL8 blokirajuće antitela preokreće inhibiciju izazvanu ANGPTL8 LPL bez ometanja međusobnog delovanja sa ANGPTL3 ;;[0151] Biblioteka peptida od 15 aminokiselina u dužini i pomeranjem od jednog ostatka je korišćena da identifikuje epitope za 8 monoklonskih antitela koja se vezuju za humani ANGPTL8 sa visokim afinitetom (Kd= 2.4x10<-10>do 5.8x10<-9>M; Slika 5). Epitopi su prikazani na sl. 6a. Antitela ne reaguju unakrsno na mišji ANGPTL8 i testirani su na in vivo efikasnost na humanizovanim ANGPTL8 miševima (Gusarova et al., Submitted 2017). Iznenađujuće, samo jedno antitelo (mAb 7 ili H4H15341P) proizvodi značajno smanjenje TG u serumu (Sl.6b). Ovo antitelo se vezuje za epitop (aminokiseline 171-180) u C-krajnjem regionu ANGPTL8 (Sl.6a). Mi smo nedavno zabeležili da ovo antitelo takođe snižava TG u krvotoku 65% kod cinomolgus majmuna (Gusarova et al., Submitted 2017). Sl.6c pokazuje da je zavisno od doze antitela (EC50=0.47 nM) preokrenut inhibitorni efekat ANGPTL8 na LPL. Ovo ispitivanje je izvedeno na HEK293 ćelijama koje zajedno eksprimuju ANGPTL3. ;;[0152] S obzirom da se anti-ANGPTL8 blokirajuće antitelo veže za C-terminalni kraj i LPL inhibitorni motiv je smešten na N-krajnjem regionu, želeli smo da testiramo da li posreduje u svom dejstvu ometanjem međusobnog dejstva ANGPTL3 i ANGPTL8. U tom cilju, koristili smo test blizine AlphaLISA gde je signal detektovan kada su ANGPTL3 i ANGPTL8 zajedno eksprimovani (sl.6d, levo). AlphaLISA signal je ostao jak čak kada su korišćene visoke koncentracije antitela. Ovi podaci ukazuju da anti-ANGPTL8 blokirajuće antitelo ne obnavlja LPL aktivnost ometanjem međusobnog dejstva ANGPTL8:ANGPTL3. ;;[0153] Strukturno modelovanje je nedavno predvidelo da se ANGPTL8 savija na način da N-i C-krajnji domeni su u blizini (Siddiqa et al. (2016) Comput Biol Chem, 61, 210-220). Prema tome, naša hipoteza je da ANGPTL8 blokirajuće antitelo može sterno zaseniti inhibitorni motiv u ANGPTL8 da bi sprečio LPL inhibiciju. Da bi testirali ovu hipotezu, mi smo obeležili ANGPTL8 blokirajuće antitelo i neblokirajuće antitelo na ANGPTL8 (mAb4 (H4H15347P)), koje se vezuje za srednji region ANGPTL8 proteinske sekvence, sa FRET akceptorskom bojom. Pore toga, mi smo obeležili ANGPTL8 na njegovom N-krajnjem mestu sa donorskom bojom kako je prikazano na sl. 6e. Kada je obeleženi ANGPTL8 zajedno eksprimovan sa ANGPTL3 u HEK293 ćelijama i testiran obeleženim antitelima, detektovali smo mnogo jači TR-FRET signal sa ANGPTL8 blokirajućim antitelom koje je usmereno na C-terminalni fragment u poređenju sa onim neblokirajućeg antitela (Sl.6f). Ovi rezultati ukazuju da N-i C-krajevi ANGPTL8 su smešteni u blizini i da ANGPTL8 blokirajuće antitelo može sterno sprečiti vezivanje ANGPTL8 inhibitornog motiva za LPL. ;;Materijali i postupci: ;;[0154] Mapiranje epitopa. Mapiranje epitopa je izvedeno pomoću PEPSCAN PRESTO BE. Ukratko, standardna Fmoc-peptidna sinteza je korišćena za sintetizovanje peptida dužine 15 aminokiselina sa preklapanjem 14 aminokiselina. Vezivanje antitela za svaki peptid je testirano u PEPSCAN-zasnovano ELISA: primarno antitelo je inkubirano pri 1 μg/ml (preko noći na 4°C) praćeno inkubacijom sa kozjim anti-humannim HRP konjugatom (1 h na 25°C). Posle ispiranja, dodati su peroksidazni supstrat 2,2’-azino-di-3-etilbenztiazolin sulfonat (ABTS) i 10 μl/ml 3% H2O2i mereno je razvijanje boje pomoću CCD kamere (eng. charge couple device -CCD). ;;[0155] AlfaLISA test. Test je izveden na ploči veličine 384 bunarčića na sobnoj temperaturi. CHO-K1 ćelijski medijum (2.5 μl) iz ćelija transfektovanim sa vektorom koji sadrži ANGPTL3-myc i ANGPTL8-V5 ;;;2 ;ili praznim vektorom su inkubirane sa navedenim količinama antitela u toku 1h u krajnjoj zapremini od 20 μl. Zatim anti-V5 Alfa akceptorska zrnca (PerkinElmer) su dodata i inkubirana u roku dodatnih 30 min, praćeno inkubacijom od 1 h sa biotinilovanim anti-myc antitelom (dobijenim „u kući“) i streptavidin Alpha donorskim zrncima (PerkinElmer). Sva razblaženja su izvedena u Hi-Block puferu (PerkinElmer), krajnja koncentracija je bila 10 ng/ml za zrnca i 10 nM za biotinilovana antitela u ukupnoj zapremini od 50 μl. AlphaLISA signal je meren u Envision® Multilabel čitaču (PerkinElmer) pomoću instrukcija proizvođača. ;;[0156] Eksperiment TR-FRET antitela. HEK293T ćelije su zajedno transfektovane sa plazmidom koji kodira ANGPTL3 i plazmidom koji kodira N-terminal Avi-obeleženi ANGPTL8 pomoću TranslT-LT1 transfekcionog sredstva. Ćelijski medijum je sakupljen posle 72 h, koncentrovan 20x pomoću Centriprep (Millipore) filterske jedinice sa 10 kDa molekularnom granicom i biotinilovanjem usmerenim na mesto pomoću biotin-protein ligaze BirA (Avidity) (Fairhead & Howarth, 2015) pomoću instrukcija proizvođača, zatim dijalizovan naspram PBS. Biotinilovani Avi-ANGPTL8 je potvrđen sa Western blotom pomoću streptavidin-HRP za detekciju. Antitela su obeležena korišćenjem Alexa FluorTM 647 Kita za obeležavanje antitela (Invitrogen). Koncentracije antitela i boje su određene spektrofotometrijski i odnosi leka prema antitelu 5:2 su korišćeni za sve eksperimente. TR-FRET je izveden na ploči formata 384 bunarčića. Krajnja koncentracija je bila 31.3 nM Europijum-streptavidin, 25 nM obeleženo antitelo, 50% BiotinAvi-ANGPTL8 u TR-FRET puferu za razblaživanje (PerkinElmer). TR-FRET je meren pomoću Envision® Multilabel Reader (PerkinElmer), ekscitacionog filtera 340/30 nm, emisionog filtera 1 -615/8.5 nm, emisionog filtera 2 -665/7.5 nm, dihroičnog ogledala D400/D630, merenog sa zakašnjenjem od 100 ms i vremenskim prozorom od 2 ms. ; ; 1 ; ; 2 ; ; ; 4 ; ; ; ; ; ; ; 4 ; ; ; ; 4 ; *

Claims (10)

Patentni zahtevi

1. Inhibitor proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8) za upotrebu u postupku lečenja pacijenta koji pati od hiperlipidemije u kombinaciji sa inhibitorom proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3), gde je inhibitor ANGPTL8 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično veže za ANGPTL8 i sadrži CDR1 teškog lanca (HCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8; i inhibitor ANGPTL3 je antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično veže za ANGPTL3 i sadrži HCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13, LCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 16, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 17.

2. Inhibitor proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3) za upotrebu u postupku lečenja pacijenta koji pati od hiperlipidemije u kombinaciji sa inhibitorom proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8), gde je inhibitor ANGPTL3 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično veže za ANGPTL3 i sadrži CDR1 (HCDR1) teškog lanca koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13, CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 16, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 17; i inhibitor ANGPTL8 je antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično veže za ANGPTL8 i sadrži HCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, LCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8.

3. Farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku lečenja pacijenta koji pati od hiperlipidemije, gde se kompozicija sastoji od terapeutski efikasne količine kombinacije inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 8 (ANGPTL8) i inhibitora proteina sličnog angiopoietinu 3 (ANGPTL3), gde je inhibitor ANGPTL8 antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično veže za ANGPTL8 i sadrži CDR1 teškog lanca (HCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 2, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 3, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 4, CDR1 lakog lanca (LCDR1) koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 6, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 7, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 8; i inhibitor ANGPTL3 je antitelo ili njegov fragment koji se vezuje za antigen koji se specifično veže za ANGPTL3 i sadrži HCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 11, HCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 12, HCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 13, LCDR1 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 15, LCDR2 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 16, i LCDR3 koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 17.

4

4. Inhibitor ANGPTL8 za upotrebu u postupku prema zahtevu 1, inhibitor ANGPTL3 za upotrebu u postupku prema prema zahtevu 2, ili farmaceutska kompozicija za upotebu u postupku prema zahtevu 3, pri čemu:

(a) hiperlipidemija je porodična hiperlipidemija ili stečena hiperlipidemija, opciono gde je (i) porodična hiperlipidemija hiperholesterolemija izabrana iz grupe koju čine heterozigotna porodična hiperholesterolemija (HeFH) i homogena porodična hiperholesterolemija (HoFH) ili je (ii) stečena hiperlipidemija rezultat prekomernog pijenja alkohola, gojaznosti, sporednog dejstva lekova (npr. hormona ili steroida), dijabetesa, bolesti bubrega, nedovoljno aktivne tiroidne železde, ili trudnoće; ili

(b) hiperlipidemija je izabrana iz grupe koju čine hiperlipoproteinemija, hiperholesterolemija, hipertrigliciridemija, i hiperhilomikronemija.

5. Inhibitor ANGPTL8 za upotrebu u postupku prema zahtevu 1, inhibitor ANGPTL3 za upotrebu u postupku prema zahtevu 2, ili farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku prema zahtevu 3, pri čemu antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, koji se specifično veže za ANGPTL8 sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 1 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 5.

6. Inhibitor ANGPTL8 za upotrebu u postupku prema zahtevu 1, ili inhibitor ANGPTL3 za upotrebu u postupku prema zahtevu 2, gde je inhibitor ANGPTL8 davan pacijentu subkutanozno ili intravenski.

7. Inhibitor ANGPTL8 za upotrebu u postupku prema zahtevu 1, inhibitor ANGPTL3 za upotrebu u postupku prema zahtevu 2, ili farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku prema zahtevu 3, pri čemu:

(a) antitelo, ili njegov fragment koji vezuje antigen, koji se specifično veže za ANGPTL3 sadrži HCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 10 i LCVR koji ima aminokiselinsku sekvencu SEQ ID NO: 14; i/ili

(b) ANGPTL3 antitelo je evinacumab.

8. Inhibitor ANGPTL8 za upotrebu u postupku prema zahtevu 1, ili inhibitor ANGPTL3 za upotrebu u postupku prema zahtevu 2, u kome je inhibitor ANGPTL3 davan pacijentu subkutanozno ili intravenski.

9. Inhibitor ANGPTL8 za upotrebu u postupku prema zahtevu 1, ili inhibitor ANGPTL3 za upotrebu u postupku prema zahtevu 2, gde

(a) inhibitor ANGPTL8 i inhibitor ANGPTL3 su davani istovremeno ili uzastopno; ili

(b) inhibitor ANGPTL8 i inhibitor ANGPTL3 su davani pri terapeutski efikasnim koncentracijama u odvojenim farmaceutskim kompozicijama ili su zajedno formulisani u jednu farmaceutsku kompoziciju.

10. Farmaceutska kompozicija za upotrebu u postupku prema zahtevu 3, pri čemu je farmaceutska kompozicija davana pacijentu subkutanozno ili intravenski.

4