RS63966B1 - Industrijski postupak za pripremu estetrola visoke čistoće - Google Patents

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Pronalazak se odnosi na pripremu estetrola (estra-1,3,5(10)-trien-3,15α,16α,17β-tetrol) formule (I), njegovih derivata zaštićenih na položajima 3,15α,16α,17β opšte formule (III), i njegovih 3-hidroksi derivata zaštićenih na položajima 15α,16α,17β opšte formule (IV), i na međuproizvode opštih formula (III) i (IV) primenjenih u postupku.

STANJE TEHNIKE PRONALASKA

[0002] Estetrol (estra-1,3,5(10)-trien-3,15α,16α,17β-tetrol) formule (I) je jedinjenje koje ima slabu estrogenu aktivnost koju endogeno proizvodi fetalna jetra tokom trudnoće kod ljudi.

[0003] Utvrđeno je da je estetrol efikasan u hormonskoj supstitucionoj terapiji, postupku lečenja vaginalne suvoće, postupku lečenja simptoma perimenopauze (na primer talasi vrućine, noćno znojenje) , postupku kontracepcije, postupku za poboljšanje libida, postupku lečenja kože i podsticanje zarastanje rana, postupku lečenja ili sprečavanja autoimunih poremećaja, tumora dojke, raka prostate i kolorektalnih tumora , i postupku neuroprotekcije (na primer neonatalne encefalopatije) ) (WO 02/094275 A1, WO 02/094276 A1, WO 02/094278 A1, WO 02/094279 A1, WO 03/041718 A1, WO 03/103684 A1, WO 03/103685 A1, WO 2004/006936 A1, WO 2004/037269 A1, WO 2007/081206 A1, WO 2008/085038 A2, WO 2013/021025 A1, WO 2013/156329 A1, WO 2018/024912 A1, WO 2018/065076 A1, WO 2019/025031 A1; Estetrol poslednji put ažuriran 14 Maj 2019-https://adisinsight.springer.com/drugs/800044874; Gaspard i drugi, Maturitas 124 (2019) p. 153 Abstract P09; Apter et al. Eur J Contracept Reprod HC (2017) 22(4):260-267; Tskitishvili et al., J Endocrinol. (2017) 232(1):85-95; Coelingh Bennick et al., Climacteric (2008) 11 (Suppl1):47-58).

[0004] Sintezu estetrola prikazanu u Reakcionoj Šemi 1 prvi put je opisao Fisherman i drugi (Fishman, J i Guzik, H., Tetrahedron Letters, 1967, 30:2929-2932). Redukcija početnog 15-en-17-keto jedinjenja sa litijum tetrahidroaluminatom dala je jedinjenje vrste alil alkohola iz kojeg je formiran diacetat. Oksidacijom diacetata sa osmijum-tetraoksidom u piridinu dobija se estetrol diacetat, koji se zagreva do ključanja u metanolu sa kalijum acetatom kako bi se dobio estetrol. Publikacija ne uključuje podatke o prinosu i čistoći, tačka topljenja (230-235<o>C), specifična rotacija

( (EtOH)) i NMR (60MHz) podaci su dati kao dokaz o podacima o identitetu.

Reakciona šema 1

[0005] U sintezi koju su opisali Suzuki i drugi (Suzuki, E., Namba, S., Kuruhara, H., Goto, J., Matsuki, Y., Nambara, T., Steroids, 1995, 60, 277-284) prikazanoj u Reakcionoj Šemi 215-en-17-acetoksi jedinjenje je oksidovano u benzenu sa ekvivalentom osmijum tetraoksida u prisustvu piridina. Dobijeni izomeri diacetata su odvojeni hromatografijom na koloni , da bi se dobio 15α,16α,17β-diacetat sa prinosom od 46% i izomer 15β,16β,17β-diacetata sa prinosom od 12%.

[0006] Odnos izomera izračunat iz datih količina dobijenih proizvoda je 78.9/21.1 (15α,16α/15β,16β).

[0007] Alkalna hidroliza 15α,16α,17β-diacetata da je estetrol u prinosu od 67%. Podaci o čistoći nisu obezbeđeni, 233-235°C data je kao tačka topljenja proizvoda.

Reakciona šema 2

[0008] U patentnoj prijavi WO 2004/041839 A2 (Pantarhei) – Reakciona šema 3- počevši od estrona koji je zaštićen kao 3-benzil etar, Δ<15>-estradiol-benzil etar 17-acetat se formira u nekoliko poznatih koraka koji su oksidacija sa osmijum tetraoksidom vezanim za polimer postupkom sa smešom rastvarača heptan-etil acetata kako bi se dobio sirov proizvod koji se zatim kristališe u smeši tri rastvarača (heptan-etil acetat-etanol) da bi se dobio estretol-benzil etar-17-acetat u prinosu od 43% sa čistoćom 98.7% (izomerna čistoća: 99.5%). Uklanjanje zaštite katalitičkom hidrogenizacijom (92% prinos) i alkalnom hidrolizom (92.5% prinos) priuštilo je jedinjenje estetrol. Podaci o čistoći proizvoda su dati kao 99.5%. Takođe, isto rešenje je otkriveno i u patentnoj prijavi WO 2013/012328 A1 (Donesta) .

[0009] Prema opisu čist međuproizvod se daje sa velikim gubicima dok se kristalizacija izvodi u tehnološki nepovoljnim smešama tri rastvarača. Ovo rešenje takođe postavlja i ekonomsko pitanje.

Reakciona šema 3

[0010] J. Org. Chem. Vol 33(8) pp 3133 - 3135 (1968) otkriva postupak za pripremu estetrola, ali gde OH grupe 15,16-vicinalnog diola nikada nisu esterifikovane i 3-OH grupa je zaštićena acetil grupom, ne benzil grupom.

[0011] Patentna prijava WO 2013/050553 A1 (Estetra) – Reakciona šema 4 – takođe opisuje kalijum permanganat kao oksidaciono sredstvo, ali ne daje podatke o odnosu izomera, čistoće i prinosa.

Reakciona šema 4

[0012] U primerima patentne prijave WO 2013/034780 A2 (Crystal Pharma) – Reakciona šema 5 – osmijum tetraoksid vezan za poli(4-vinilpiridin) (PVP) se koristi kao oksidaciono sredstvo za cishidroksilaciju na temperaturi 55-60<o>C. U slučaju oksidacije osmijum tetraoksidom Δ<15>-17-acetoksi derivata 15α,16α/15β,16β izomerni odnos 80/20 je meren u reakcionoj smeši, proizvod je dobijen u prinosu od 88%, ali nisu dati podaci o čistoći.

Reakciona šema 5

[0013] U slučaju Δ<15>-17β-hidroksi jedinjenja, obezbeđen je prinos od 62% i izomerni odnos 15α,16α/15β,16β od 90/10, ali nisu sapšteni podaci o čistoći.

Reakciona šema 6

[0014] U slučaju benzil etra dobija se 15α,16α/15β,16β smeša izomera sa odnosom 90/10 u prinosu od 99%, ali nisu dati podaci o čistoći:

Reakciona šema 7

[0015] U slučaju 3-benzoil jedinjenja dobija se 15α,16α/15β,16β smeša izomera sa odnosom 90/10 u prinosu 92%, ali nisu dati podaci o čistoći.

Reakciona šema 8

[0016] U slučaju t-butil-dimetil-silil etarskog jedinjenja dobija se 15α,16α/15β,16β smeša izomera sa odnosom 90/10 u prinosu od 101%, ali nisu dati podaci o čistoći:

Reakciona šema 9

[0017] U slučaju (1-butoksietil)-etarskog jedinjenja dobija se 15α,16α/15β,16β smeša izomera sa odnosom 90/10 u prinosu od 95.5%, ali nisu dati podaci o čistoći:

Reakciona šema 10

[0018] WO 2013/034780 A2 (Crystal Pharma) ne obezbeđuje informacije o čistoći 3-OH zaštićenih derivata estetrola formule (I) koji su u njemu otkriveni, ne otkriva pripremu estetrola iz njih, i njegovo i na osnovu njega nije moguće ostvariti dobijanje estetrola čistoće aktivne supstance.

[0019] Patentna prijava WO 2015/040051 A1 (Crystal Pharma) pokazuje cis-hidroksilaciju preko derivata Δ<15>-3,17β-dihidroksi koje imaju identične ili različite zaštitne grupe. Opisana je izuzetno niska (1-9%) konvezija sa oksidacionim sredstvima kalijum permanganata. Korišćenjem osmijum tetraoksida-PVP kao oksidacionog sredstva, dobijeni su derivati estetrola zaštićeni na hidroksilnim grupama na položajima 3 i 17 sa dobrom konverzijom. Uklanjanje zaštite pojedinačno daje estetrol kao 15α,16α/15β,16β izomernu smešu sa odnosom 98/2-99/1. Podaci o čistoći nisu dati u opisu. Pored toga, opis ne sadrži nikakve informacije o tome kako pripremiti estetrol kao čistu aktivnu supstancu iz dobijenih međuproizvoda.

[0020] Iz svega navedenog, može se zaključiti da nije rešen ili način pripreme estetrola čistoće leka ili se proizvodnja čiste aktivne supstance može rešiti sa nepovoljnim prinosom i niskom ekonomičnošću.

[0021] Farmakopejski zahtevi iz stanja tehnike sada propisuju brojne postupke ispitivanja, kao što su postupci ispitivanja čistoće tečnom hromatografijom visokih performansi, takođe one i diktiraju i ograničavaju broj i količinu neželjenih supstanci . U slučaju steroidnih aktivnih supstanci, opšti zahtev je da se primeni granica od 0.5% ukupnih nečistoća i pojedinačna granična nečistoća od 0.10%. Da bi se ispunili zahtevi kvaliteta ciljanog proizvoda, svrsishodno je pripremiti ključni međuproizvod(e) prikladne čistoće, što posebno važi za jedinjenje sa nepovoljnim svojstvima kristalizacije i prečišćavanja, kao što je npr. estetrol.

[0022] Imajući u vidu gore navedeno, i dalje postoji neispunjena potreba da se obezbedi alternativan industrijski postupak za dobijanje estetrola koji omogućava njegovo dobijanje u visokoj čistoći i koji se može izvesti preko međuproizvoda sa povoljnim svojstvima (npr. kristalizacija, prečišćavanje, izolacija, prinos).

KRATAK OPIS PRONALASKA

[0023] Pronalazak se odnosi na postupak pripreme estetrola formule (I), njegovih derivata zaštićenih na mestima 3,15α,16α,17β opšte formule (III), i njegovih 3-hidroksi derivata zaštićenih na mestima 15α,16α,17β opšte formule (IV), i na međuproizvode opštih formula (III) i (IV) primenjenih u postupku.

[0024] Industrijski postupak pronalaska je priprema estetrola formule (I) počevši od jedinjenja formule (II).

[0025] Derivati triola zaštićeni na položaju 3 formule (II) mogu se pripremiti prema postupku opisanom u patentnoj prijavi WO 2013/034780 A2 (Crystal Pharma) – Reakciona šema 7 – počevši od 3-benziloksi-estar 1,3,5(10),15-tetraen-17-ola.

[0026] Jedinjenja opšte formule (II) se dobijaju acilovanjem jedinjenja formule (II) i njegovim prečišćavanjem.

[0027] Jedinjenja opšte formule (IV) se dobijaju debenzilacijom jedinjenja opšte formule (III).

[0028] Estetrol formule (I) se priprema baznom hidrolizom jedinjenja opšte formule (IV).

[0029] Pronalazak se takođe odnosi na međuproizvode opštih formula (III) i (IV) gore opisanog postupka.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0030] Pronalazak se odnosi na postupak pripreme estetrola formule (I), njegovih derivata zaštićenih na položajima 3,15α,16α,17β opšte formule (III), i njegovih 3-hidroksi derivata zaštićenih na položajima 15α,16α,17β opšte formule (IV), i na međuproizvode opštih formula (III) i (IV) primenjenih u postupku.

[0031] Industrijski postupak pronalaska je priprema estetrola formule (I) počevši od jedinjenja formule (II) prema sledećoj reakcionoj šemi, pri čemu R označava metil-grupu ili vodonik:

[0032] Derivati triola zaštićeni na položaju 3 formule (II) mogu se pripremiti prema postupku opisanom u patentnoj prijavi WO 2013/034780 A2 (Crystal Pharma) tj. kao primer jedinjenje 7 koje je tamo otkriveno, 3-benziloksi-estra-1,3,5(10),15-tetraen-17-ol je oksidovano oksidacionim sredstvom kao što je kalijum osmat ili osmijum-tetraoksid, po potrebi u prisustvu ko-oksidansa kao što je trialkilamin N-oksid, kao što je trimetil- ili trietil-amin N-oksid, u rastvaraču koji se meša sa vodom kao što je 2-butanon, aceton, tetrahidrofuran, terc-butanol, poželjno u 2-butanonu.

korak (a) acilovanje derivata 15,16,17-triola

[0033] U koraku a) postupka prema pronalasku dobija se derivat estetrola zaštićen na položajima 3,15α,16α,17β predstavljen opštom formulom (III) , sa ili bez izolacije, acilovanjem derivata 15,16,17-triola zaštićenog na položaju 3 formule (II) u odgovarajućem rastvaraču, koristeći pogodan reaktant.

[0034] Rastvarač koji se koristi u acilovanju je rastvarač izabran iz grupe koju čine alifatični i aromatični ugljovodonici, halogenovani ugljovodnici, estri, i etri, poželjno rastvarači koji se ne mešaju sa vodom, kao što su toluen, dihlorometan ili etil acetat.

[0035] U jednom izvođenju, reaktant koji se koristi za acilovanje gde je R = metil (acetilacija), poželjan je anhidrid sirćetne kiseline, acetil hlorid, ili –bromid.

[0036] U drugom izvođenju, reaktant koji se koristi za acilovanje gde je R = vodonik (formilacija), poželjan je mešovit anhidrid sirćetne kiseline i mravlje kiseline.

[0037] Acilovanje se izvodi u prisustvu amino baze, poželjno piridina ili 4-dimetilaminopiridina.

[0038] Acilovanje se izvodi u inertnoj atmosferi, poželjno u atmosferi N2.

[0039] U jednom izvođenju, dalji korak acilovanja obuhvata kristalizaciju rezultujućeg jedinjenja formule (III) iz C1-3alkohola, poželjno metanola.

[0040] U drugom izvođenju, korak (a) se može izvesti uzastopno sa gore pomenutom dihidroksilacijom koja je praćena acilovanjem bez prečišćavanja i/ili izolacijom međuproizvoda -jedinjenja formule (II) – dok se i dalje dobija krajnji proizvod visoke čistoće sa dobrim prinosom. Ovo je posebno korisno u industrijskim primenama, gde smanjenje broja koraka postupka dovodi do ekonomske prednosti i pojednostavljenja postupka, jer koraci kao što su prečišćavanje i/ili izolacija između 2 koraka neće više biti potrebni.

[0041] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje opšte formule (III) pri čemu je R metil ili vodonik, tj. (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triacetat (Primer 1) i (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijat (Primer 3).

korak (b) debenzilacija 3,15,16,17-zaštićenog derivata

[0042] U koraku b) postupka prema pronalasku derivat 3-hidroksi estetrola zaštićenog na položajima 15α,16α,17β opšte formule (IV) dobija se uklanjanjem benzil zaštitne grupe na položaju 3 derivata predstavljenog opštom formulom (III) transferom ili katalitičkom hidrogenizacijom.

[0043] U jednom izvođenju, debenzilacija se izvodi katalitičkom hidrogenizacijom sa gasovitim vodonikom, pri čemu je katalizator izabran iz grupe koju čine paladijum ili paladijum na nosaču (ugljenik, aluminijum-oksid, itd.). Katalizator je poželjno Pd/C. Rastvarač koji se koristi u katalitičkoj hidrogenizaciji je izabran iz grupe koju čine alkoholi, estri i ketoni, poželjno etil acetat.

[0044] U drugom izvođenju, debenzilacija se izvodi transfer hidrogenizacijom korišćenjem cikloheksanskog reagensa. Rastvarač koji se koristi za transfer hidrogenizaciju je alkohol, poželjno etanol.

[0045] Korak debenzilacije dalje obuhvata kristalizaciju dobijenog jedinjenja opšte formule (IV) iz estara, ugljovodonika, ili njihovih smeša, poželjno iz smeše etil acetat/n-heptan.

[0046] Predmetni pronalazak obezbeđuje jedinjenje opšte formule (IV) pri čemu je R vodonik, tj. (15α,16α,17β)3-hidroksiestra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijat (Primer 4).

korak (c) hidroliza 15,16,17-acil zaštićenog derivata

[0047] U koraku c) postupka prema pronalasku estetrol formule (I) se priprema uklanjanje zaštite derivata opšte formule (IV) u alkalnoj sredini sa alkalnim karbonatom ili alkalnim hidroksidima u odgovarajućem rastvaraču.

[0048] Rastvarač koji se koristi u hidrolizi je izabran iz grupe koju čine, voda, rastvarač alkoholnog tipa, ili njihova smeša, poželjno C1-3alkoholi, još poželjnije smeša metanola i vode.

[0049] U jednom izvođenju, hidroliza se odvija u prisustvu alkalnog karbonata ili alkalnog ugljovodonika, poželjno kalijum karbonata.

[0050] U drugom izvođenju, hidroliza se odvija u prisustvu alkalnog alkoholata ili alkalnog hidroksida, poželjno natrijum ili litijum hidroksida.

[0051] Na osnovu gore navedenog, stručnjak u ovoj oblasti može lako da izabere reagense, rastvarače, temperature, pritiske i druge reakcione uslove. Početne supstance, reagensi i rastvarači koji se koriste u postupku pronalaska su komercijalno dostupni i/ili ih stručnjak u ovoj oblasti može lako pripremiti. Čistoća proizvoda otkrivena u primerima određena je tehnikama razdvajanja tečnom hromatografijom visoke performanse koja je poznata stručnjacima iz ove oblasti, korišćenjem najrasprostranjenijih silikagelova (npr. Ascentis, Kintex) kao stacionarne faze i višekomponentne smeše uobičajenih korišćenih eluenata (npr. vode, metanola, acetonitrila) sa postavljenim linearnim gradijentom.

[0052] Dok jedinjenje formule (I) i 15α,16α,17β-trioli zaštićeni na položaju 3 formule (II) opisani u literaturi imaju nepovoljna svojstva kristalizacije, neočekivano jedinjenja opštih formula (III) i (IV) dobro kristališu, i mogu se prečistiti u visokim prinosima i mogu se odvojiti od izomernog neželjenog proizvoda sa visokom selektivnošću.

[0053] U smislu sprovođenja pronalaska, koraci (a) do (c) su mnogo poželjniji kada R označava metil grupu.

REFERENTNI PRIMERI

Priprema smeše izomera estetrola ((15ξ,16ξ,17β)-estra-1,3,5(10)-trien-3,15,16,17-tetrol) prema WO 2013/034780 A2 (Crystal Pharma)

a) Cis-hidroksilacija

(15α,16α,17β)-, i (15β,16β,17β)-3-(benziloksi)estra-1 ,3,5( 10)-trien-15, 16, 17-triol

[0054] 20.0g (55.5 mmol) 3-benziloksi-estra-1,3,5(10),15-tetraen-17-ola (WO 2004/041839 (Pantarhei), Primer 7) je rastvoreno u 1400 mL tetrahidrofurana na 20-25<o>C u atmosferi N2, zatim se rastvor od 14 mL 2 mas/v% osmijum tetraoksida (OsO4) u terc-butanolu (sadržaj OsO4280 mg ) i 11 g N-metilmorfolin N-oksida i 150 mL vode dodato je u reakcionu smešu, i mešano tokom 24 sata u atmosferi N2na 20-25<o>C . Reakcija je praćena pomoću TLC (n-heptan:aceton 1:1).

[0055] Obrada: 140 ml 5% rastvora Na2S2O5je dodato u kapima u rastvor kao i 100 mg aktivnog uglja, smeša je mešana 30 minuta, smeša je filtrirana kroz sloj celita. Organski rastvarači su uklonjeni destilovanjem iz filtrata i dodato je 400 mL dihlorometana. Faze su razdvojene. Organska faza je isprana sa 200 mL 10% hlorovodonične kiseline, i sa 200 mL rastvorom zasićenog natrijum hlorida, zatim osušena, i koncentrovana. Koncentrovani ostatak je rastvoren u 200 mL metanola i dodat u kapima u 2 L vode na 0-5<o>C, mešan tokom 1 sata, filtriran i kristali su isprani sa 20 mL vode na filteru. Materijal je osušen pod vakuumom na 40<o>C do konstantne mase. Dobijeno je 16.68 g (89.86%) žućkasto-belih kristala.

Čistoća (HPLC): 85.18% ααβ-izomer, 5.43% βββ-izomer (površina) (odnos 94.0 : 6.0)

[0056] (15ξ,16ξ,17β)-estra-1,3,5(10)-trien-3,15,16,17-tetrol cementiran (kristali se lepe zajedno, sprečavajući tako da se materijal filtrira i povrati i samim tim da se prečisti) tokom rekristalizacije u organskom rastvaraču, obično u ugljenimhidratima, etrima, estrima, alkoholima i njihovim smešama. Obično, jedinjenje se jedino može kristalizovati iz vode ili iz smeše voda-rastvarač koji se meša sa vodom (obično alkoholi), ali u ovom slučaju se ne može postići značajna promena u pogledu poboljšanja odnosa izomera.

b) Hidrogenizacija

(15α,16α,17β)-, i (15β,16β,17β)- estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triol

[0057] 19.5 g 15ξ,16ξ,17β-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triola je rastvoreno u 400 mL metanola na 20-25<o>C u atmosferi N2.2.0 g 10% katalizatora Pd/C je suspendovano u 100 mL dubokosmrznutog metanola, a zatim je dodato u rastvor. Atmosfera N2je promenjena u atmosferu H2i reakciona smeša je mešana na 20-25<o>C tokom 6 sati pod atmosferskim pritiskom.

[0058] Obrada: Katalizator je uklonjen filtriranjem i reakciona smeša je koncentrovana do 45 mL pod smanjenim pritiskom, 45 mL vode je dodato i smeša je mešana na 0-5<o>C tokom 1 sata, zatim filtrirana i isprana dva puta sa 20 mL vode na filteru, osušena do konstantne mase, tako da se dobija 14.5 g (96.67%) belog kristalog proizvoda.

Čistoća (HPLC): 87.53% ααβ-izomer, 5,46% βββ-izomer (površina). (odnos 94.13 : 5.87)

[0059] Pronalazak je dalje ilustrovan sledećim neograničavajućim primerima.

PRIMERI

Primer 1

(15α, 16α, 17β)-3-(benziloksi)estra-1 ,3,5(10)-trien-15, 16, 17-tril triacetat

Postupak A (izolovan)

a) Cis-hidroksilacija

(15α,16α,17β)-, i (15β,16β,17β)-3-(benziloksi)estra-1 ,3,5(10)-trien-15, 16, 17-triol

[0060] 40 mg kalijum osmat dihidrata (K2OsO4<.>2H2O) je suspendovano u 100 mL 2-butanona (metil etil keton) na 20-25<o>C u atmosferi N2i 7.7 mL prečišćene vode i 1.1 g trimetil-amin N-oksid dihidrata je dodato tome. 2.0 g (5.5 mmol) 3-benziloksi-estra-1,3,5(10),15-tetraena-17-ol (WO 2004/041839 (Pantarhei), Primer 7) rastvoreno je u 40 mL 2-butanona i dodato u kapima u reakcionu smešu. Reakciona smeša je zatim mešana na 20-25<o>C tokom 28 sati u atmosferi N2. Reakcija je praćena pomoću TPLC (n-heptan: aceton 1:1).

[0061] Obrada: 25 mL 10% rastvora Na2S2O5je dodato u smešu praćeno dodatkom 100 mg aktivnog uglja, zatim mešano tokom 1 sata. Filtriran kroz sloj celita, zatim su dodati EtOAc i 10% HCl kiselina. Faze su razdvojene, vodena faza je ekstrahovana sa EtOAc. Kombinovane organske faze su isprane sa zasićenim rastvorom NaCl i 10% rastvorom Na2S2O5.Osušen preko Na2SO4, filtriran, zatim koncentrovan. Tako je dobijeno 1.8 g (81.8%) proizvoda.

Čistoća (HPLC): 85.0% ααβ-izomer, 9.9% βββ-izomer (površina) (odnos 89.6 : 10.4)

b) Acilovanje

(15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1 ,3,5(10)-trien-15, 16, 17-triol triacetat

[0062] 1.0 g (2.53 mmol) (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triola je rastvoreno u 15 mL dihlormetana u atmosferi N2.1.5 mL trietil-amina, 6.0 mL sirćetne kiseline i 72 mg 4-dimetilaminopiridina je dodato i mešano tokom 2 sata. Reakcija je praćena pomoću TLC (toluen:aceton 4:1).

[0063] Obrada: 3 mL etanola je dodato u kapima u smešu i mešano 30 minuta, zatim je 10% rastvor NaHCO3dodat i mešano još 30 minuta. Faze su razdvojene i organska faza je isprana dva puta sa 10% rastovorom NaHCO3,zatim sa zasićenim rastvorom soli. Osušena preko Na2SO4,filtrirana i rastvarač je promenjen u MeOH i iz njega kristalizovan. Nakon filtracije i sušenja dobijeno je 1.2 g supstance. Da bi se dobio prihvatljiv odnos izomera proizvod je rekristalizovan još dva puta iz metanola, tako da je dobijeno 1.1 g (84.46%) proizvoda.

[0064] Čistoća (HPLC): 99.2% ααβ-izomer, 0.14% βββ-izomer (površina).

Postupak B (bez izolacije)

a) Cis-hidroksilacija

(15α,16α,17β), (15β,16β,17β) smeša izomera 3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-triena-15,16,17-triola [0065] 30.03 g (83.3 mmol) 3-benziloksi-estra-1,3,5(10),15-tetraen-17-ola (WO 2004/041839 (Pantarhei), Primer 7) rastvoreno je u 480 mL 2-butanona (metil etil keton) na 20-25<o>C u atmosferi N2, zatim je dodato 600 mg kalijum osmat dihidrata (K2OsO4<.>2H2O) , 48.0 mL prečišćene vode i 16.5 g

1

trimetilamin N-oksid dihidrata. Reakciona smeša je zatim mešana na 40-45<o>C tokom 7 sati u atmosferi N2. Reakcija je praćena pomoću TLC (n-heptan: aceton 1:1).

[0066] Obrada: 300 mL 10%(mas./v) rastvora natrijum metabisulfita (natrijum pirosulfita) je dodato u kapima u smešu na 40-45<o>C i mešana je tokom 1 sata. Suspenzija je zatim filtrirana kroz sloj celita i filter je ispiran sa 2-butanonom. 2-butanon je zatim uklonjen iz filtrata destilacijom. 600.0 mL etil acetata i 300 mL 10% (mas/v) rastvora natrijum hidrogen karbonata (30 g NaHCO3) je dodato u ostatak, nakon snažnog mešanja nekoliko minuta i zatim taloženja, faze su razdvojene. Vodena faza je dva puta isprana sa etil acetatom. Kombinovana organska faza je isprana sa smešom 1% (mas/v) rastvora soli EDTA-tetraNa i zasićenog rastvora soli. Nakon razdvajanja faza, etil acetatna organska faza je koncentrovana do krajnje zapremine od 450 mL, pri čemu je takođe dehidrirana. Proizvod nije izolovan, već je dalje prenet u reakciju acilovanja.

b) Acilovanje

(15α, 16α, 17β)-3-(benziloksi)estra-1 ,3,5(10)-trien-15, 16,17-triil triacetat

[0067] 72.0 mL anhidrida sirćetne kiseline, 48 mL trietilamina i 1.8 g 4-dimetilaminopiridina je dodato u rastvor etil acetata dobijenog u koraku a), nakon čega je mešano na 35-40<o>C tokom 3 sata u atmosferi N2. Reakcija je praćena pomoću TLC (toluen:aceton 4:1).

[0068] Obrada: 24 mL etanola je dodato u kapima u smešu, mešano 30 minuta, zatim ohlađeno do 20-25<o>C, nakon čega sledi dodavanje 240 mL prečišćene vode i 60 mL 10% rastvora (mas./v, d=1.047, 17.88 g cc. HCl) hlorovodonične kiseline i nakon nekoliko minuta snažnog mešanja i zatim taloženja, faze su razdvojene. Tečna faza je ekstrahovana sa etil acetatom. Kombinovana organska faza je isprana smešom 10% (mas./v) rastvora natrijum hidrogen karbonata i zasićenog rastvora soli, i faze su razdvojene. Organska faza je sušena preko Na2SO4, izbistrena sa aluminijumom, silika gelom i aktivnim ugljem i mešana na 20-25<o>C tokom 1 sat. Sredstva za bistrenje su zatim otklonjena filtriranjem i filter je ispran etil acetatom.

[0069] Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom, zatim je rastvarač koncentrovan i destilovan da bi se rastvarač promenio u metanol, i na kraju je materijal kristalizovao iz čistog metanola. Dobijen sirovi proizvod je rekristalizovan bez sušenja.

c) Rekristalizacija

[0070] Sirovi proizvod dobijen u koraku b) rastvoren je u dihlormetanu, metanol je uklonjen destilacijom i na kraju je kristalizovan iz čistog metanola. Postupak je ponovljen još jednom. Tako je dobijeno 30.4 g (69.8%) belih kristala.

[0071] Čistoća (HPLC): 99.2% ααβ-izomer, 0.14% βββ-izomer (površina).

[0072] Mp.: 156.5-157.5°C.

[0073] EI-HRMS: Izračunato za C31H36O7[M<+>]: 520.24555; ustanovljen: 520.24459; delta = -1.86ppm.

[0074]<1>H NMR (499.9 MHz, CDCl3) δ = 5.39 (1H, dd, J = 8.4 Hz, J = 6.6 Hz, H-16), 5.16 (1H, dd, J = 10.4 Hz, J = 8.4 Hz, H-15), 5.01 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-17), 2.08 (3H, s, 17-acetil), 2.06 (3H, s, 15-acetil), 2.04 (3H, s, 16-acetil), 0.94 (3H, s, H-18)

[0075]<13>C NMR (125.7 MHz, CDCl3) δ = 169.8 (17-acetil CO C-20), 169.0 (15-acetil CO), 168.7 (16-acetil CO), 83.1 (C-17), 72.5 (C-16), 69.8 (C-15), 51.4 (C-14), 39.2 (C-13), 19.9 (17-acetil-CH3), 19.7 (15-acetil-CH3), 19.6 (16-acetil-CH3), 13.5 (C-18)

Primer 2

(15α,16α,17β)-3-hidroksiestra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triacetat

Postupak A

[0076] 25.7 g (49.36 mmol) (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triacetata (Primer 1) je rastvoreno u 315 mL etil acetata na 20-25<o>C u atmosferi N2. 770 mg 10% katalizatora paladijuma na ugljeniku je suspendovano u 19 mL duboko-smrznutog etil acetata, i zatim dodato u rastvor. Atmosfera N2je promenjena u atmosferu H2i reakciona smeša je mešana na 20-25<o>C tokom 3 sata pod atmosferskim pritiskom.

[0077] Obrada: Katalizator je uklonjen filtracijom, ispran sa etil acetatom i koncentrovan do krajnje zapremine pod smanjenim pritiskom, n-heptan je dodat i suspenzija je držana na 0-5°C tokom 1 sata, zatim je filtrirana i kristalni proizvod je ispran na filteru sa n-heptanom, i osušen na 40°C u vakuumu do konstantne mase. Tako je dobijeno 19.88 g (93.55%) belog kristalnog proizvoda.

[0078] Čistoća (HPLC): 99.42% ααβ-izomer, 0.04% βββ-izomer (površina).

Postupak B

[0079] 0.5 g (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triacetata (Primer 1) je suspendovano u 14 mL etanola na 20-25°C, zatim je dodato 0.5 mL cikloheksena i 38 mg 10% katalizatora Pd/C, praćeno mešanjem na temperaturi refluksa tokom 1 sata. Reakcija je praćena pomoću TLC (toluen:aceton 4:1).

[0080] Obrada: Katalizator je uklonjen filtracijom iz reakcione smeše i smeša je koncentrovana do suvog. Tako je dobijeno 0.41 g (99.17%) belog kristalnog proizvoda.

[0081] Čistoća (HPLC): 97.99% ααβ-izomer, 0.14% βββ-izomer (površina).

[0082] Mp.: 181.5-185.5°C

[0083] EI-HRMS: Izračunato za C24H30O7[M<+>]: 430.19860; ustanovljen: 430.19927; delta = 1.55 ppm.

[0084]<1>H NMR (499.9 MHz, CDCl3) δ = 5.41 (1H, dd, J = 8.4 Hz, J = 6.6 Hz, H-16), 5.18 (1H, dd, J = 10.5 Hz, J = 8.4 Hz, H-15), 5.03 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-17), (3H, s, 17-acetil), 2.10 (3H, s, 15-acetil), 2.07 (3H, s, 16-acetil), 1.77 (1H, t, J = 11.1 Hz, H-14), 0.95 (3H, s, H-18)

[0085]<13>C NMR (125.7 MHz, CDCl3) δ = 170.9 (17-acetil CO), 170.1 (15-acetyl CO), 169.8 (16-acetil CO),

84.1 (C17), 73.5 (C-16), 70.8 (C-15), 52.4 (C-14), 40.2 (C-13), 20.9 (17-acetil-CH3), 20.7 (15-acetil-CH3),

20.6 (16-acetil-CH3), 14.5 (C-18)

Primer 3

(15α, 16α, 17β)-3-(benziloksi)estra-1 ,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijat

[0086] 5.00 g (15α,16a,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triola (Primer 1, Postupak "A", korak a)) je rastvoreno u 73 mL piridina, i ohlađeno na 0°C, zatim je smeša mešovitog anhidrida napravljena od 49 mL mravlje kiseline i 18.3 mL sirćetnog anhidrida ohlađena na 0°C dodata preko kapalice na između 0-10°C približno 25 minuta. Nakon 1 sata mešanja dodato je 305 mL vode u reakcionu smešu, a rezultujući beli talog je uklonjen filtracijom i ispran vodom. Masa suvog sirovog proizvoda je 5.65 g (93.23%).

[0087] Sirov proizvod – prema Primeru 1 Postupak B korak c) – je rekristalizovan iz metanola da bi se dobilo 3.92 g (69.4%) čistog proizvoda iz naslova kao beli kristal.

[0088] Čistoća (HPLC): 99.2% ααβ-izomer, 0.05% βββ-izomer (površina).

[0089] Mp.: 153.5-154.3°C

[0090] EI HRMS: M=478.19866; delta=0.06ppm; C<28>H<30>O<7>

[0091]<1>H NMR (499.9 MHz, CDCl3) δ = 5.41 (1H, dd, J = 8.4 Hz, J = 6.6 Hz, H-16), 5.18 (1H, dd, J = 10.5 Hz, J = 8.4Hz, H-15), 5.03 (1H, d, J = 6.6 Hz, H-17), (3H, s, 17-acetil), 2.10 (3H, s, 15-acetil), 2.07 (3H, s, 16-acetil), 1.77 (1H, t, J = 11.1 Hz, H-14), 0.95 (3H, s, H-18)

[0092]<13>C NMR (125.7 MHz, CDCl3) δ = 170.9 (17-acetil CO), 170.1 (15-acetil CO), 169.8 (16-acetil CO), 84.1 (C17), 73.5 (C-16), 70.8 (C-15), 52.4 (C-14), 40.2 (C-13), 20.9 (17-acetil-CH3), 20.7 (15-acetil-CH3), 20.6 (16-acetil-CH3), 14.5 (C-18)

Primer 4

(15α,16α,17β)-3-hidroksiestra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijat

[0093] 5.0 g (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijata (Primer 3) je rastvoreno u 150 mL etil acetata na 20-25°C u atmosferi N2. 380 mg 10% katalizatora Pd/C je suspendovano u 5 mL duboko smrznutog etil acetata i dodato u rastvor.

[0094] Atmosfera N2je promenjena u atmosferu H2i reakciona smeša je mešana na 20-25°C tokom 4 sata pod atmosferskim pritiskom.

[0095] Obrada: Katalizator je uklonjen filtracijom i reakciona smeša je koncentrovana do četvrtine (38 mL) pod sniženim pritiskom, zatim je dodato 52 mL n-heptana. Nakon mešanja na 0-5°C tokom 1 sata, filtrirana je i isprana na filteru dva puta sa 16 mL n-heptanom, osušena do konstantne mase, tako da je dobijeno 3.51 g (94%) belog kristalnog proizvoda.

[0096] Čistoća (HPLC): 99.42% ααβ-izomer, 0.04% βββ-izomer (površina).

[0097] Mp.: 234-235°C

[0098] MS: M-H=387 (ESI)

[0099]<1>H NMR (499.9 MHz, DMSO-de) δ = 8.17 (1H, s, 17-formil-H), 8.09 (1H, s, 15-formil-H), 8.04 (1H, s, 16-formil-H), 5.52 (1H, t, J = 7.4 Hz, H-16), 5.24 (1H, dd, J = 10.1 Hz, J = 8.6 Hz, H-15), 5.11 (1H, d, J = 6.5 Hz, H-17), 0.99 (3H, s, H-18)

[0100]<13>C NMR (125.7 MHz, DMSO-de) δ = 159.5 (17-formil-C), 159.3 (15-formil-C), 158.8 (16-formil-C), 82.4 (C-17), 71.7 (C-16), 69.2 (C-15), 51.3 (C-14), 39.6 (C-13), 13.5 (C-18)

Primer 5

Estetrol ((15α,16α,17β)-estra-1,3,5(10)-trien-3,15,16,17-tetrol)

Postupak A

[0101] 19.88 g (46.18 mmol) (15α,16α,17β)-3-hidroksiestra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triacetata (Primer 2) je suspendovano iz 596 mL metanola na 20-25°C u atmosferi N2, zatim je dodato 19.88 g

1

kalijum karbonata u porcijama i mešano tokom 3 sata. Reakcija je praćena pomoću TLC (nheptan:aceton 1:1).

[0102] Obrada: 14.91 mL cc. sirćetne kiseline je dodato u smešu i mešano tokom 30 minuta, nakon dodavanja 298 mL vode metanol je uklonjen destilacijom, zatim su istaloženi kristali na 0-5°C tokom 1 sata, filtrirani i isprani sa vodom na filteru. Zatim je osušen na 40°C pod vakuumom do konstantne mase. Tako da je dobijeno 13.66 g (97.22%) belog kristalnog proizvoda.

Čistoća (HPLC): 99.67% ααβ-izomer, 0.04% βββ izomer (površina), sve neželjne supstance < 0.10%

Postupak B

[0103] 5 g (12.87 mmol) (15α,16α,17β)-3-hidroksiestra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijata (Primer 4) je suspendovano u 150 mL metanola na 20-25°C u atmosferi N2, zatim je dodato 5.34 g (38.6 mmol) kalijum karbonata u porcijama i mešano tokom 3 sata. Reakcija je praćena pomoću TLC (nheptan:aceton 1:1).

[0104] Obrada: 4 mL sirćetne kiseline je dodato u smešu i mešano 30 minuta, nakon dodavanja 75 mL vode metanol je uklonjen iz smeše destilacijom, istaloženi kristali su držani na 0-5°C tokom 1 sata, zatim filtrirani i ispirani na filteru dva puta sa 5 mL 0-5°C vode. Zatim su osušeni na 40°C pod vakuumom do konstantne mase . Tako je dobijeno 3.80 g (97%) belog kristalnog proizvoda.

[0105] Čistoća (HPLC): 99.67% ααβ-izomer, 0.04% βββ izomer (površina), sve neželjene supstance < 0.10%

[0106] Mp.: 240-243°C

[0107] EI-HRMS: Izračunato za C18H24O4[M<+>]: 304.16691; ustanovljeno: 304.16716; delta = 0.82 ppm.

[0108]<1>H NMR (499.9 MHz, DMSO-d6) δ = 4.86 (1H, d, J=4.8 Hz, OH (17)), 4.61 (1H, br s, OH (16)), 4.26 (1H, br d, J=3.3 Hz, OH (15)), 3.55 - 3.78 (2H, m, H-16, 15), 3.25 (1H, dd, J = 5.7, 4.7 Hz, H-17), 1.05 (1H, dd, J = 10.9 Hz, J = 9.4 Hz, H-14), 0.67 (3H, s, H-18)

[0109]<13>C NMR (125.7 MHz, DMSO-d6) δ = 86.3 (C-17), 75.0 (C-16), 69.2 (C-15), 55.5 (C-14), 39.5 (C-13), 14.0 (C-18)

Claims (19)

1. Patentni zahtevi 1. Postupak za pripremu estetrola formule (I),

   polazeći od jedinjenja formule (II)

   naznačen time, što (a) jedinjenje formule (II) je acilovano u pogodnom rastvaraču korišćenjem pogodnog reaktanta da bi se dobilo jedinjenje opšte formule (III)

   pri čemu je R = metil grupa ili vodonik (b) uklanjanje benzil zaštitne grupe na položaju 3 transfer ili katalitičkom hidrogenizacijom da bi se dobilo jedinjenje opšte formule (IV)

   pri čemu je R = metil grupa ili vodonik (c) uklanjanje zaštite u alkalnoj sredini sa karbonatom alkalnog metala, hidrogen karbonatom alkalnog metala ili hidroksidima alkalnog metala u odgovarajućem rastvaraču.
2. 2. Postupak prema zahtevu 1, pri čemu je rastvarač korišćen u koraku (a) izabran iz grupe koju čine alifatični i aromatični ugljovodonici, halogenovani ugljovodonici, estri, i etri.
3. 3. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 2, pri čemu je reaktant korišćen u koraku (a) anhidrid sirćetne kiseline, acetil hlorid ili bromid.
4. 4. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 3, pri čemu je reaktant korišćen u koraku (a) mešovit anhidrid sirćetne kiseline i mravlje kiseline.
5. 5. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 4, pri čemu se korak (a) izvodi u prisustvu tercijarne aminske baze.
6. 6. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 5, pri čemu korak (a) dalje obuhvata kristalizaciju rezultujućeg jedinjenja opšte formule (III) iz C1-3alkohola.
7. 7. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 5, pri čemu se korak (a) izvodi bez prečišćavanja i/ili izolovanja jedinjenja formule (III).
8. 8. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 7, pri čemu se korak (b) izvodi katalitičkom hidrogenizacijom, sa gasovitim vodonikom, pri čemu je katalizator izabran iz grupe koju čine paladijum ili paladijum na nosaču.
9. 9. Postupak prema zahtevima 8, pri čemu je rastvarač koji se koristi za katalitičku hidrogenizaciju izabran iz grupe koju čine alkoholi, estri i ketoni.
10. 10. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 7, pri čemu se korak (b) izvodi transfer hidrogenizacijom korišćenjem cikloheksenskog reagensa.
11. 11. Postupak prema zahtevu 10, pri čemu je rastvarač koji se koristi za transfer hidrogenizaciju alkohol. 1
12. 12. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 11, pri čemu korak (b) dalje obuhvata kristalizaciju rezultirajućeg jedinjenja opšte formule (IV) iz estara, ugljovodonika, alkohola, ili njihovih smeša.
13. 13. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 12, pri čemu je rastvarač korišćen u koraku (c) izabran iz grupe koju čine voda, alkoholni rastvarač, ili njihova smeša.
14. 14. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 13, pri čemu se korak (c) izvodi u prisustvu karbonata alkalnog metala ili hidrogen karbonata alkalnog metala.
15. 15. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 13, pri čemu se korak (c) izvodi u prisustvu alkoholata alkalnog metala ili hidroksida alkalnog metala.
16. 16. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 15, pri čemu je R metil grupa.
17. 17. Postupak prema bilo kom od zahteva 1 do 15, pri čemu je R vodonik.
18. 18. Jedinjenje opšte formule (III), pri čemu je jedinjenje izabrano iz grupe koju čine (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triacetat i (15α,16α,17β)-3-(benziloksi)estra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijat.
19. 19. Jedinjenje opšte formule (IV), pri čemu je jedinjenje (15α,16α,17β)-3-hidroksiestra-1,3,5(10)-trien-15,16,17-triil triformijat. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 1