RS64265B1

RS64265B1 - Peptidi za lečenje i prevenciju dijabetesa i povezanih poremećaja

Info

Publication number: RS64265B1
Application number: RS20230465A
Authority: RS
Inventors: Vincent Marion
Original assignee: Univ Strasbourg; Inst Nat Sante Rech Med
Priority date: 2018-12-21
Filing date: 2019-12-20
Publication date: 2023-07-31
Also published as: IL284029A; HRP20230591T1; JP7635319B2; EP3897697B1; CN116196399A; CA3124260A1; EA202191758A1; PL3897697T3; KR102555817B1; AU2019408382A1; JP2023159268A; IL284029B2; EP4233890A2; US20220133860A1; SI3897697T1; JP2022516012A; SMT202300177T1; LT3897697T; EP3897697A1; WO2020127904A1

Description

Opis

OBLAST PRONALASKA

[0001] Ovaj pronalazak odnosi se na oblast medicine. Određenije, odnosi se na lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja.

POZADINA PRONALASKA

[0002] Diabetes mellitus ili dijabetes predstavlja grupu metaboličkih bolesti u kojima osoba ima visok nivo šećera u krvi, bilo zato što pankreas ne proizvodi dovoljno insulina ili zato što ćelije ne odgovaraju na proizvedeni insulin.

[0003] Postoje tri glavna tipa dijabetesa:

- Tip 1 je posledica nemogućnosti tela da proizvede insulin i trenutno zahteva od osobe da ubrizgava insulin ili da nosi insulinsku pumpu.

- Tip 2 je posledica insulinske rezistencije, stanja u kom ćelije ne mogu pravilno da koriste insulin.

- Treći tip naziva se gestacijskim dijabetesom i javlja se kod trudnica.

[0004] Stope dijabetesa tipa 2 izrazito su porasle od 1960. uporedo sa gojaznošću: Od 2010, ima približno 285 miliona ljudi sa tom bolešću u poređenju sa oko 30 miliona u 1985. Dugoročne komplikacije od visokog nivoa šećera u krvi mogu uključivati srčane bolesti, moždane udare, dijabetesnu retinopatiju, hroničnu bubrežnu insuficijenciju koja može zahtevati dijalizu te slabu cirkulaciju u udovima koja može dovesti do amputacija. Može doći i do hiperosmolarne neketonske kome.

[0005] Izveštaji, tj., teorija toksičnosti glukoze, ukazuju na to da hiperglikemija učestvuje u pojavi i progresivnom pogoršanju diabetes mellitus-a. Naime, hronična hiperglikemija dovodi do smanjenja lučenja insulina i dalje do smanjenja osetljivosti na insulin pa se kao posledica toga povećava koncentracija glukoze u krvi tako da se diabetes mellitus samopogoršava. Prema tome, lečenjem hiperglikemije se prekida gorepomenuti ciklus samopogoršavanja pa se time omogućava profilaksa ili lečenje diabetes mellitus-a.

[0006] Nažalost, postojeća lečenja ne uspevaju da dugoročno povrate normoglikemiju jer funkcija beta ćelija opada tokom vremenom. Štaviše, trenutno ne postoji nijedan lek koji može da poništi sve aspekte te bolesti.

[0007] Progresivna priroda dijabetesa tipa 2 ukazuje na to da će mnogim pacijentima naposletku biti potrebna kombinacija oralnog hipoglikemijskog leka, verovatno zajedno sa injekcijama insulina i/ili eksenatida. Agensi protiv dijabetesa razvijeni su kako bi se neutralisali glavni mehanizmi uključeni u dijabetes tipa 2: insulinska rezistencija (biguanidi i tiazolidindioni) i lučenje insulina (sulfoniluree, glinidi, inhibitori dipeptidilne peptidaze-4, agonisti receptora glukagonu sličnog peptida 1), agensi koji odlažu apsorpciju glukoze od strane gastrointestinalnog trakta ili podstiču mršavljenje i noviji agensi koji podstiču bubrežno izlučivanje glukoze. Međutim, pokazalo se da većina tih lekova ima štetne nuspojave kao što su gojenje, periferni edem ili kongestivna srčana insuficijencija, a tu je i glavni problem sa gubitkom efikasnosti tih agensa u dugoročnoj upotrebi. Prema tome, uprkos sve većem broju terapijskih opcija za kontrolu glikemije, i dalje postoji potreba za alternativnim i poboljšanim lekovima za lečenje dijabetesa i povezanih stanja.

KRATAK SADRŽAJ PRONALASKA

[0008] Pronalazači su iznenađujuće obezbedili peptide iz kinaznog domena PKCα i njihove derivate koji posebno poboljšavaju toleranciju glukoze kod miševa čija je gojaznost prouzrokovana ishranom. Ti peptidi mogu da smanje ekspresiju nosača rastopljenih materija, porodica 27, član 2 (SLC27A2) opšte poznatog kao FATP2 (Transportni protein za masne kiseline 2) u adipoznom tkivu. Peptidi mogu da smanje glikovani albumin u plazmi životinjskog modela, pri čemu je glikovani albumin dobro poznat biomarker dijabetesa.

[0009] Stoga se ovaj pronalazak odnosi na peptid za upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja, pri čemu

- peptid može da posebno smanji ekspresiju FATP2 u adipoznom tkivu, određenije kod sisara, naročito humanom adipoznom tkivu;

- peptid ne obuhvata istovremeno jedan metionin, jedan prolin i jedan arginin;

- peptid usvaja sekundarnu strukturu koja predstavlja spiralu, poželjno alfa-spiralu; i

- peptid obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od sekvence iz segmenta od najmanje 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ili 25 uzastopnih ostataka kinaznog domena PKC-a (proteinske kinaze C) ili segmenta od 5 do 40 uzastopnih ostataka kinaznog domena PKC-a (proteinske kinaze C);

- dužina peptida iznosi od 5 do 80 aminokiselina ili od 5 do 60 aminokiselina ili od 5 do 40 aminokiselina i

- peptidna sekvenca može obuhvatati 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija unutar pomenute sekvence segmenta kinaznog domena PKC-a.

[0010] Peptid je poželjno modifikovan postupkom za hemijsko umrežavanje kao što je spajanje.

[0011] Dužina peptida poželjno iznosi najmanje 5 aminokiselina i manje od 40 aminokiselina, poželjno iznosi najmanje 5 aminokiselina i manje od 30 aminokiselina, poželjnije najmanje 5 aminokiselina i manje od 25 aminokiselina.

[0012] Peptid poželjno može da smanji ili spreči interakciju između ALMS1 i αPKC-a.

[0013] Peptidna sekvenca opciono obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LDN;

SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWW A YGVLL YEXLA (SEQ ID NO: 13) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVXWWAYGLLYEMLA (SEQ ID NO: 52) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVRE (SEQ ID NO: 8) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVRE (SEQ ID NO: 15) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVXE (SEQ ID NO: 16) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVXE (SEQ ID NO: 17) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LDN; AFF; PDY; XDY; PEII (SEQ ID NO: 5); XEII (SEQ ID NO: 18); PAK; XAK; gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. Peptidna sekvenca opciono obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWWAYGVLLYEXLA (SEQ ID NO: 13) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVRE (SEQ ID NO: 8) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVRE (SEQ ID NO: 15) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVXE (SEQ ID NO: 16) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVXE (SEQ ID NO: 17) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R.

[0014] Peptidna sekvenca opciono obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od najmanje jedne od sledećih sekvenci:

a) VECTXVEKXVLALLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 20) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, poželjno, aminokiselinu pogodnu za α-spiralnu sekundarnu strukturu, poželjnije odabranu iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, još poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

b) VECTMVEKRVLALLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 21) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, poželjno, aminokiselinu pogodnu za α-spiralnu sekundarnu strukturu, poželjnije odabranu iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, još poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

c) VECTXVEKRVLALLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 22) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, poželjno, aminokiselinu pogodnu za α-spiralnu sekundarnu strukturu, poželjnije odabranu iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, još poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

d) VECTMVEKXVLALLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 23) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, poželjno, aminokiselinu pogodnu za α-spiralnu sekundarnu strukturu, poželjnije odabranu iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, još poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

i sekvence bilo kog segmenta od najmanje 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ili 25 uzastopnih ostataka bilo koje sekvence a) do d).

[0015] Peptidna sekvenca opciono obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od najmanje jedne od sledećih sekvenci:

VECTMXEKRVLAX (SEQ ID NO: 24)

VECTXXEKRVLAX (SEQ ID NO: 25)

VECTMXEKXVLAX (SEQ ID NO: 26)

VECTXXEKXVLAX (SEQ ID NO: 27)

VECTXXEKXVLAXLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 28)

VECTMXEKRVLAXLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 29)

VECTXXEKRVLAXLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 30)

VECTMXEKXVLAXLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 31)

VECTTXEKEVLAXLDKAAFLTQHS (SEQ ID NO: 53)

VECTTXEKEVLAXLDKAAF (SEQ ID NO: 54)

VEGTTXEKEVLAXLDKAAF (SEQ ID NO: 55) i

ECTTXEKEVLAXL (SEQ ID NO 56)

ECTMXEKKVLAXL (SEQ ID NO 57)

gde ostaci koji su podebljani i podvučeni X nose spajanje i predstavljaju bilo koji aminokiselinski derivat prikladan za spajanje; i

gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R,

pri čemu sekvenca opciono ima 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija.

[0016] Pomenuti PKC je poželjno odabran iz grupe koju čine alfa-PKC (αPKC), beta-PKC (βPKC) uključujući βI i βII PKC, delta-PKC, teta-PKC, eta-PKC i epsilon-PKC. Pomenuti PKC poželjnije predstavlja αPKC sa SEQ ID NO: 1.

[0017] U određenom načinu ostvarivanja, peptidna sekvenca obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od

VECTTREKEVLASLDKAAFLTQLHS (SEQ ID NO: 32)

gde R i S nose spajanje, pri čemu poželjno predstavljaju 2-(7-oktenil)arginin i 2-(4-pentenil)serin, tim redom;

[0018] Ovaj pronalazak se odnosi i na farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata peptid prema ovom otkrivanju za upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja. Dalje se odnosi na upotrebu peptida prema ovom otkrivanju za proizvodnju leka za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja.

[0019] Dijabetes i povezani poremećaji opciono su odabrani iz grupe koju čine dijabetes tipa I, dijabetes tipa II, insulinska rezistencija, dijabetesna retinopatija, dijabetesna neuropatija, dijabetesna nefropatija, hiperglikemija, gojaznost, hiperinsulinemija i Barde-Bidlov sindrom. Peptid se opciono koristi u kombinaciji sa jednim dodatnim aktivnim lekom ili više njih poželjno odabranih iz grupe koju čine antidijabetesni lek, hipolidemijski agens, agens protiv gojaznosti, agens protiv hipertenzije, antisteatozni lek, agens protiv zapaljenja i agonist receptora aktiviranih proliferatorima peroksizoma.

KRATAK OPIS NACRTA

[0020]

Fig.1. PKC kinazna aktivnost u humanim adipocitima izazvana peptidima iz alfa PKC-a. Primarni humani adipociti kultivisani su preko noći bez insulina i sledećeg dana su korišćeni različiti uslovi za svaki peptid 25 ug peptida ECTMVEKKVLALL ili 25ug peptida SVEWWAYGLLYEMLA dodato je u svaki bazenčić i inkubirano tokom 30 minuta pre merenja PKC aktivnosti. Nosilac, koji predstavlja fiziološki rastvor, bio je negativna kontrola, a korišćena pozitivna kontrola bila je insulin od 10 mM.

Fig.2. Nivo ekspresije izoformi FATP-a humanih adipocita tretiranih peptidima izvedenih iz humanog alfa PKC-a. Nakon 48 sati inkubacije sa različitim peptidima izvedenim iz alfa PKC-a (i to ECTMVEKKVLALL i SVEWWAYGLLYEMLA), izmereni su nivoi ekspresije šest izoformi FATP-a pomoću PCR-a u realnom vremenu. Normalizovani nivoi ekspresije za šest FATP izoformi (Fatp1-6) u humanom adipocitu. Kao referentni gen korišćen je GAPDH.

Fig.3. PATAS in vitro dozni odgovor za izazivanje PKC aktivnosti u humanim adipocitima. PATAS in vitro dozni odgovor za izazivanje PKC aktivnosti u humanim adipocitima nakon 30 minuta inkubacije humanog primarnog adipocita sa PATAS-om dodatim u podlogu za kulturu. n = 5 po grupi a količine PATAS-a su izražene kao µg po bazenčiću.

Fig.4: Unos glukoze u humani primarni zreo adipocit. N= 8 po grupi. ADPIF peptid je podjednako efikasan kao Insulin u izazivanju apsorpcije glukoze u primarnim humanim zrelim adipocitima.

Fig.5. ADPIF peptid je aktivniji od PATAD peptida u poboljšavanju netolerancije glukoze kod miševa

(A) Tolerancija glukoze: Miševima je ubrizgan bilo nosilac (fiziološki rastvor) ili nosilac PATAD 417 ili nosilac ADPIF (CPC peptid A-MRO) na dan 0.6 dana kasnije (D6), miševi su gladovali tokom 4 sata i u 0 minutu primili potkožnu injekciju glukoze kako bi se izveo ipGTT. Nivoi glukoze mereni su iz krvi iz repa svakih 30 minuta. Osim kontrolnih miševa koji su bili na standardnoj ishrani (CTL Standardna ishrana), svi ostali miševi bili su na ishrani bogatoj mastima/bogatoj glukozom.

(B) Odgovarajuća oblast ispod krive (AUC) za test opterećenja glukozom prikazana u (A) koja pokazuje pad AUC-a kao odgovor na injekciju PATAD-a (PATAD417) i ADPIF-a (PATAD417-MRP) što pokazuje da je ADPIF efikasniji od PATAD-a u smanjivanju AUC-a. To znači da je ADPIF efikasniji u poboljšavanju netolerancije glukoze od PATAD-a.

Fig.6. PATAS deluje protiv dijabetesa u mišjem modelu utvrđenih bolesti (db/db;BKS iz Jax lab) povezanih sa redukcijom nivoa ekspresije FATP2 u adipoznom tkivu.

(FIG 6A) Kriva odstupanja glukoze u krvi tokom ipGTT-a, 4 dana posle potkožne injekcije PATAS-a (2mg/kg TT doziranje PATAS-a) 6 nedelja starim db/db mužjacima miševa na standardnoj ishrani nakon 8 sati gladovanja. Bolus glukoze (2g/kg telesne težine) dat potkožno u T=0min i pridruženi AUC histogram (n = 10 miševa po grupi Značaj je podešen na *p-vrednost ≤ 0,05, *p-vrednost ≤ 0,01).

(FIG 6B) Nakon 4 nedeljne injekcije PATAS-a i još 4 nedelje bez tretiranja, db/db miševi sWAT. Utvrđeni su normalizovani nivoi ekspresije za šest izoformi FATP-a (FATP 1-6) u potkožnom belom adipoznom tkivu (sWAT). n = 6 po grupi sa GAPDH kao referentnim genom.

Fig.7. PATAS je efikasan u poboljšavanju netolerancije glukoze u genetskom mišjem modelu za retku bolest povezanu sa gojaznošću i dijabetesom tipa 2, Barde-Bidlov sindrom (BBS). BBS miševi bili su na standardnoj ishrani, hranjeni ad libitum. n = 4 miša sa ukrštenom postavkom eksperimenta uz ipGTT izveden pre injekcije i 3 dana nakon injekcije. Stvoren je nokaut mišji model za BBS 10 gen (Bbs10<-/->) i on je spontano postao gojazan kao što je opisano u literaturi. Sa 4 meseca starosti, izveden je intraperitonealni test opterećenja glukozom (ipGTT) na Bbs10<-/->pre davanja PATAS-a i otkriveno je da su Bbs10<-/->miševi bili netolerantni na glukozu (Fig.7A) sa odgovarajućom oblasti ispod krive (AUC) od ~ 30000 mg/dL.min (Fig.7B). Isti miševi primili su 2mg/kg telesne težine PATAS-a u potkožno adipozno tkivo pa je 3 dana kasnije izveden ipGTT i otkriveno je da su Bbs10<-/->miševi ispoljili poboljšanu toleranciju glukoze (Fig.7A) koja odgovara padu AUC-a na ~16000 mg/dL.min (Fig.7B).

Fig.8. Efekat ADPIF-a na glikovani albumin u plazmi u STAM mišjem modelu. Plazma tretiranih miševa iz japanskog STAMT modela korišćena je za merenje nivoa cirkulišućeg glikovanog albumina pomoću komercijalno dostupnog kompleta. Rezultati su prikazani na ovom crtežu kao srednja vrednost od 6 miševa po grupi prikazana sa standardnom greškom srednje vrednosti za graničnike odstupanja. Nakon 5 nedeljnih injekcija ADPIF-a odgovarajućim miševima, izmeren je značajan pad nivoa glikovanog albumina u poređenju sa grupom miševa kojima je ubrizgan nosilac.

DETALJAN OPIS PRONALASKA

[0021] Pronalazači su iznenađujuće obezbedili peptide iz kinaznog domena PKCα i njihove derivate koji posebno smanjuju ekspresiju FATP2 (Transportnog proteina za masne kiseline 2) u adipoznom tkivu. Najzad, peptidi mogu da smanje glikovani albumin u plazmi, koji predstavlja biomarker dijabetesa.

[0022] Stoga su peptidi kao što su ovde opisani korisni za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja.

[0023] Diabetes mellitus odlikuje hiperglikemija. Određenije, dijabetes tipa 2 odlikuje hiperglikemija i insulinska rezistencija. Smatra se da je gojaznost primarni uzrok dijabetesa tipa 2 kod ljudi koji imaju genetsku predispoziciju za tu bolest. Dijabetesna retinopatija, dijabetesna neuropatija, dijabetesna nefropatija predstavljaju dobro poznate poremećaje povezane sa dijabetesom i insulinskom rezistencijom. Zatim, smanjivanje glikemije povećavanjem unosa glukoze moglo bi da tretira te bolesti ili da odloži njihovo napredovanje ili pojavu.

[0024] Stoga se ovaj pronalazak odnosi na

- peptid kao što je ovde definisan za upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja; - farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata peptid kao što je ovde definisan za upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja;

- upotrebu peptida ili farmaceutske kompozicije kao što su ovde definisani za proizvodnju leka za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja;

- postupak za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja kod subjekta, koji obuhvata davanje terapijski efektivne količine peptida kao što je ovde definisan.

1

Definicije

[0025] ALMS1, protein Alstromovog sindroma 1, predstavlja protein koji kodira ALMS1 gen. Utvrđeno je da su mutacije u ALMS1 genu uzročnik Alstromovog sindroma. On je opisan u nekoliko baza podataka, i to UniProt ID No Q8TCU4; Gene ID No 7840, HGNG ID No 428. Referentne sekvence otkrivene su u Genbank pod NM_015120.4 za iRNK i NP_055935.4 za protein.

[0026] Izrazi „proteinska kinaza Cˮ i „PKCˮ (EC 2.7.11.13) su ekvivalentni i odnose se na porodicu enzima proteinskih kinaza koji su uključeni u kontrolu funkcije drugih proteina preko fosforilacije hidroksilnih grupa serinskih i treoninskih aminokiselinskih ostataka na tim proteinima. PKC se tipično aktiviraju signalima kao što su povećanja koncentracije diacilglicerola (DAG) ili jona kalcijuma (Ca2+). PKC igraju značajne uloge u nekoliko kaskada prenosa signala.

[0027] PKC porodica obuhvata najmanje petnaest izoenzima kod ljudi, podeljenih u tri glavne potporodice, konvencionalne (ili klasične) PKC-ove, nove PKC-ove i atipične PKC-ove. Konvencionalni (c)PKC-ovi obuhvataju izoforme α, βI, βII i γ. Ti PKC-ovi zahtevaju Ca<2+>, DAG i fosfolipid kao što je fosfatidilserin za aktivaciju.

[0028] Novi (n)PKC-ovi uključuju δ, ε, η i θ izoforme. Ti PKC-ovi zahtevaju DAG, ali ne zahtevaju Ca2<+>za aktivaciju.

[0029] Atipični (a)PKC-ovi uključuju ζ, I i λ izoforme. Ti PKC-ovi ne zahtevaju ni Ca2+ niti diacilglicerol za aktivaciju.

[0030] Proteinska kinaza C alfa tipa, koja se takođe naziva αPKC, PKC-A ili PKC-alfa, pripada porodici serin- i treonin-specifičnih proteinskih kinaza koje se mogu aktivirati kalcijumom i sekundarnim glasnikom diacilglicerolom. Ona je opisana u nekoliko baza podataka, i to UniProt ID No P17252, Gene ID No 9393, HGNG ID No 5578. Referentne sekvence su otkrivene u Genbank pod NM_02737.2 za iRNK i NP_002728.1 za protein. Proteinska sekvenca humanog αPKC-a otkrivena je u SEQ ID NO: 1.

[0031] Kinazni domen αPKC-a je od položaja 339 do položaja 595 kao što je otkriveno u SEQ ID NO: 1 i prikazano u SEQ ID No 2.

„Sastoji se odˮ, „suštinski se sastoji odˮ ili „suštinski obuhvataˮ: Ovaj opis bilo kog aspekta ili načina ostvarivanja ovog pronalaska pomoću izraza uz pozivanje na element ili elemente namenjen je da obezbedi podlogu za sličan aspekt ili način ostvarivanja ovog pronalaska koji „se sastoji odˮ, „suštinski se sastoji odˮ ili „suštinski obuhvataˮ taj određeni element ili elemente, osim ukoliko je drugačije navedeno ili jasno u suprotnosti sa kontekstom. Na primer, peptid ili protein koji je ovde opisan kao onaj koji obuhvata određenu sekvencu trebalo bi shvatati i kao onog koji opisuje peptid ili protein koji se sastoji od te sekvence, osim ukoliko je drugačije navedeno ili jasno u suprotnosti sa kontekstom. Pod „suštinski se sastoji odˮ podrazumeva se da se peptid ili protein sastoji od te sekvence, ali može uključivati i 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 supstitucija, dodavanja, brisanja ili njihovu kombinaciju, poželjno 1, 2, 3, 4 ili 5 supstitucija, dodavanja, brisanja ili njihovu kombinaciju. Određenije, pod „suštinski se sastoji odˮ, može se podrazumevati da peptid može uključivati 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 dodatnih aminokiselina na N i/ili C-terminalnom kraju, poželjno 1, 2, 3, 4 ili 5 dodatnih aminokiselina, i/ili 1, 2 ili 3 supstitucije, brisanja, dodavanja ili njihovu kombinaciju. Broj supstitucija, dodavanja, brisanja ili njihova kombinacija poželjno zavisi od dužine sekvence. Na primer, procenat supstitucija, brisanja, dodavanja ili njihove kombinacije može biti ne veći od 30%, poželjno ne veći od 25%.

[0032] Kako se ovde koristi, pojam „supstitucijaˮ odnosi se na zamenu jedne aminokiseline u peptidnoj sekvenci drugom.

[0033] Kako se ovde koristi, pojam „brisanjeˮ odnosi se na uklanjanje jedne aminokiseline iz peptidne sekvence.

[0034] Kako se ovde koriste, pojmovi „umetanjeˮ ili „dodavanjeˮ su ekvivalentni i odnose se na dodavanje jedne aminokiseline u peptidnu sekvencu.

[0035] Pod „supstitucijama, dodavanjima, brisanjimaˮ podrazumevaju se supstitucija, dodavanje, brisanje jedne aminokiseline. Zatim, kada se poziva na „1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 supstitucija, dodavanja, brisanja ili njihovu kombinacijuˮ, „1, 2, 3, 4 ili 5 supstitucija, dodavanja, brisanja ili njihovu kombinacijuˮ ili „1, 2 ili 3 supstitucije, brisanja, dodavanja ili njihovu kombinacijuˮ, to redom označava „1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucije, dodavanja, brisanja i njihova kombinacija, „1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucije, dodavanja, brisanja ili njihova kombinacijaˮ ili „1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucije, brisanja, dodavanja ili njihova kombinacijaˮ. „1, 2, 3, 4 ili 5 supstitucija, dodavanja, brisanja ili njihova kombinacijaˮ takođe označava „od 1 do 5 supstitucija, dodavanja, brisanja ili njihovu kombinacijuˮ. „1, 2 ili 3 supstitucije, dodavanja, brisanja ili njihova kombinacijaˮ takođe označava „od 1 do 3 supstitucije, dodavanja, brisanja ili njihovu kombinacijuˮ.

[0036] U ovde otkrivenim peptidnim sekvencama, aminokiseline su predstavljene njihovim jednoslovnim kodom u skladu sa sledećom nomenklaturom: A: alanin; C: cistein; D: asparaginska kiselina; E: glutaminska kiselina; F: fenilalanin; G: glicin; H: histidin; I: izoleucin; K: lizin; L: leucin; M: metionin; N: asparagin; P: prolin; Q: glutamin; R: arginin; S: serin; T: treonin; V: valin; W: triptofan i Y: tirozin.

[0037] Kako se ovde koriste, pojmovi „identičnost sekvenciˮ ili „identičnostˮ odnose se na tačno podudaranje aminokiselina dvaju peptida. Procenat identičnosti može se utvrditi direktnim upoređivanjem informacija o sekvenci između dvaju molekula poravnavanjem sekvenci, računanjem tačnog broja podudaranja između dveju poravnatih sekvenci, deljenjem sa dužinom kraće sekvence i množenjem rezultata sa 100.

[0038] Identičnost sekvenci može se utvrditi poravnavanjem dveju peptidnih sekvenci pomoću algoritama za globalno ili lokalno poravnavanje, u zavisnosti od dužine dveju sekvenci. Sekvence sličnih dužina poželjno se poravnavaju pomoću algoritama za globalno poravnavanje (npr. Nidlman-Vanšov) koji optimalno poravnava sekvence preko čitave dužine, dok se sekvence suštinski različitih dužina poželjno poravnavaju pomoću algoritma za lokalno poravnavanje (npr. Smit-Votermanov). Sekvence se tada mogu nazivati „suštinski identičimaˮ ili „suštinski sličnimaˮ ukoliko one (kada su optimalno poravnate na primer programima GAP ili BESTFIT uz primenu podrazumevanih parametara) dele najmanje određeni minimalni procenat identičnosti sekvenci. GAP koristi Nidlman-Vanšov algoritam za globalno poravnavanje kako bi poravnao dve sekvence preko njihove čitave dužine (pune dužine), čime se broj podudaranja dovodi na maksimum, a broj razmaka svodi na minimum. Globalno poravnavanje se prikladno koristi za utvrđivanje identičnosti sekvenci kada dve sekvence imaju slične dužine.

[0039] Pod „povećanimˮ, „povećavaˮ ili „poboljšavaˮ podrazumeva se pozivanje na merenje povećano za najmanje 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ili 90 % u poređenju sa merenjem izvedenim u odsustvu ispitivanog molekula u istim uslovima. Pod „smanjenimˮ ili „smanjujeˮ podrazumeva se pozivanje na merenje smanjeno za najmanje 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ili 90 % u poređenju sa merenjem izvedenim u odustvu ispitivanog molekula u istim uslovima.

[0040] Kako se ovde koristi, pojam „lečenjeˮ, „lečiˮ ili „tretiranjeˮ odnosi si se na bilo koji čin sa ciljem da poboljša zdravstveni status pacijenata, kao što je izlečenje, ublažavanje ili odlaganje bolesti. On uključuje preventivno kao i terapijsko lečenje.

[0041] Pojam lečenje određenije označava ispravljanje, usporavanje ili smanjivanje oštećene homeostaze glukoze. Pojam „lečenjeˮ označava i poboljšanje unosa glukoze (npr., hvatanje glukoze od strane adipocita). U kontekstu ovog pronalaska, izrazi „kontrolisanje nivoa glukoze u krviˮ ili „kontrola nivoa glukoze u krviˮ odnose se na normalizaciju ili regulaciju nivoa glukoze u krvi ili plazmi kod subjekta sisara sa abnormalnim nivoima (tj., nivoima koji su ispod ili iznad poznate referentne, srednje ili prosečne vrednosti za odgovarajućeg subjekta sisara sa normalnom homeostazom glukoze).

[0042] Kako se ovde koristi, izraz „efektivna količinaˮ odnosi se na količinu peptida ovog otkrivanja ili farmaceutske kompozicije ovog otkrivanja koja leči ili odlaže napredovanje ili pojavu dijabetesa ili povezanog poremećaja. Može se odnositi i na količinu peptida ovog otkrivanja ili farmaceutske kompozicije ovog otkrivanja koja leči ili odlaže dijabetes ili povezani poremećaj.

[0043] Kako se ovde koriste, izrazi „aktivna supstancaˮ, „aktivni sastojakˮ i „aktivni farmaceutski sastojakˮ su ekvivalentni i odnose se na komponentu farmaceutske kompozicije sa terapijskim efektom.

[0044] Kako se ovde koristi, pojam „terapijski efekatˮ odnosi se na efekat koji izaziva aktivni sastojak, kao što je peptid ovog otkrivanja ili farmaceutska kompozicija prema ovom otkrivanju, koji može da leči ili da odloži napredovanje ili pojavu dijabetesa ili povezanog poremećaja.

[0045] Kako se ovde koristi, izraz „ekscipijens ili farmaceutski prihvatljiv nosačˮ odnosi se na svaki sastojak, osim aktivnih sastojaka, koji je prisutan u farmaceutskoj kompoziciji. Cilj njegovog dodavanja može biti davanje određene konzistencije ili drugih fizičkih ili gustatornih karakteristika krajnjem proizvodu. Ekscipijens ili farmaceutski prihvatljiv nosač ne sme imati bilo kakve interakcije, određenije

1

hemijske, sa aktivnim sastojcima.

[0046] Kako se ovde koriste, pojmovi „subjekatˮ, „pojedinacˮ ili „pacijentˮ mogu se koristiti jedan umesto drugog a odnose se na životinju, poželjno na sisara, još poželjnije na čoveka, uključujući odraslu osobu, dete, novorođenče i čoveka u prenatalnoj fazi.

[0047] U ovom dokumentu, pojam „okoˮ odnosi se na opseg vrednosti od ± 10% od naznačene vrednosti. Na primer, „oko 50ˮ obuhvata vrednosti od ± 10% od 50, tj. vrednosti u opsegu između 45 i 55. Pojam „okoˮ poželjno se odnosi na opseg vrednosti od ± 5% od naznačene vrednosti.

Peptidi

[0048] Peptid(i) prema ovom otkrivanju ima(ju) sledeće karakteristike:

- ne obuhvata istovremeno jedan metionin, jedan prolin i jedan arginin;

- poželjno usvaja sekundarnu strukturu koja predstavlja spiralu, poželjno alfa-spiralu;

- obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od sekvence iz segmenta kinaznog domena PKC-a (proteinske kinaze C), poželjno segmenta od najmanje 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ili 25 uzastopnih ostataka kinaznog domena PKC-a (proteinske kinaze C) ili segmenta od 5 do 40 uzastopnih ostataka kinaznog domena PKC-a (proteinske kinaze C); i

- peptidna sekvenca može obuhvatati 1, 2, 3, 4 ili 5 aminokiselinskih modifikacija odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija unutar pomenute sekvence segmenta kinaznog domena PKC-a.

[0049] Peptid(i) može(gu) dalje imati jednu ili nekoliko od sledećih karakteristika:

- njegova dužina iznosi manje od 80 aminokiselina, poželjnije manje od 60 aminokiselina, dalje poželjnije manje od 40 aminokiselina i još poželjnije manje od 30 aminokiselina;

- njegova dužina iznosi najmanje 5 aminokiselina i manje od 40 aminokiselina, poželjno iznosi najmanje 5, 6, 7, 8 ili 9 aminokiselina i manje od 30 aminokiselina, poželjnije najmanje 5, 6, 7, 8 ili 9 aminokiselina i manje od 25 aminokiselina;

- modifikovan je umrežavanjem;

- može da utiče na ALMS1-PKC interakciju, tačnije da smanji ili spreči interakciju između ALMS1 i αPKC-a; ili ne može da utiče na ALMS1-PKC interakciju, tačnije da smanji ili spreči interakciju između ALMS 1 i αPKC-a;

- modifikuje nivoe ekspresije FATP-ova u adipoznom tkivu, poželjno smanjuje ekspresiju FATP2 u adipoznom tkivu.

[0050] Peptid(i) može(gu) dalje imati jednu ili nekoliko od sledećih karakteristika:

- njegova dužina iznosi najmanje 5, 6, 7, 8 ili 9 aminokiselina i manje od 40 aminokiselina, poželjno iznosi najmanje 5, 6, 7, 8 ili 9 aminokiselina i manje od 30 aminokiselina, poželjnije najmanje 5, 6, 7, 8 ili 9 aminokiselina i manje od 25 aminokiselina;

- modifikovan je umrežavanjem;

- ne može da utiče na ALMS 1-PKC interakciju, tačnije da smanji ili spreči interakciju između ALMS1 i αPKC-a.

[0051] U jednom aspektu, peptid ovog otkrivanja obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od sekvence iz segmenta kinaznog domena PKC-a (proteinske kinaze C). PKC može biti izabran od konvencionalnog PKC-a, novog PKC-a i atipičnog PKC-a. PKC određenije može biti izabran od konvencionalnog PKC-a. PKC poželjno može biti odabran iz grupe koju čine α, βI, βII i γ PKC-ovi. PKC poželjnije može biti odabran iz grupe koju čine α, βI i βII PKC-ovi. Još poželjnije, PKC predstavlja α PKC, poželjno humani α PKC, poželjnije humani αPKC sa SEQ ID NO: 1. Kinazni domen humanog αPKC-a otkriven je u SEQ ID NO: 2.

[0052] Segment kinaznog domena PKC-a ima najmanje 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ili 25 uzastopnih ostataka kinaznog domena PKC-a. U jednom aspektu, segment kinaznog domena PKC-a ima od 5 do 40 uzastopnih ostataka kinaznog domena PKC-a (opciono, od 5 do 30 ili od 5 do 25 ili od 7 do 25 ili od 8 do 25 ili od 9 do 25 ili od 10 do 25 ili od 11 do 25 ili od 12 do 25).

[0053] Kinazni domen PKC-a iz kog se bira segment poželjno je najmanje 40 % identičan sekvenci SEQ ID NO: 2, poželjnije najmanje 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ili 95 % identičan sekvenci SEQ ID NO: 2.

[0054] Pomenuta sekvenca segmenta kinaznog domena PKC-a poželjno se podudara sa najmanje 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 99% sekvence peptida. U određenom načinu ostvarivanja, peptidna sekvenca prema ovom otkrivanju sastoji se od sekvence segmenta SEQ ID NO: 1.

[0055] Ukoliko segment kinaznog domena PKC-a obuhvata jedan metionin i/ili jedan prolin i/ili jedan arginin, onda se sekvenca može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se uklonili svi prolinski ostaci i/ili svi metioninski ostaci i/ili svi argininski ostaci. Na primer, sekvenca se može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se uklonili svi prolinski ostaci. Sekvenca se alternativno može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se uklonili svi metioninski ostaci. Inače, sekvenca se može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se uklonili svi argininski ostaci. U jednom aspektu, sekvenca se može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se

1

uklonili svi prolinski i metioninski ostaci. U drugom aspektu, sekvenca se može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se uklonili svi prolinski i argininski ostaci. U dodatnom aspektu, sekvenca se može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se uklonili svi metioninski i argininski ostaci. Sekvenca se poželjnije može modifikovati (tj., uvođenjem supstitucije(a)) kako bi se uklonili svi prolinski ostaci, svi metioninski ostaci i svi argininski ostaci.

[0056] Peptid poželjno ne obuhvata više od 20, poželjno ne više od 15, poželjnije ne više od 10, aminokiselinskih modifikacija odabranih iz grupe koju čine supstitucije, brisanja, dodavanja i njihova kombinacija. U naročito poželjnom načinu ostvarivanja, peptid može obuhvatati 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 aminokiselinskih modifikacija odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjno 1, 2, 3, 4 ili 5, poželjnije 1, 2 ili 3.

[0057] Na primer, peptid je najmanje 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% identičan sekvenci segmenta kinaznog domena PKC, poželjno SEQ ID No 2. U jednom načinu ostvarivanja, deo sekvence peptida koji odgovara SEQ ID No 2 je najmanje 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95% identičan sekvenci segmenta SEQ ID No 2.

[0058] U određenom aspektu, peptid ima najmanje jednu aminokiselinu koja je supstituisana, izbrisana ili dodata u poređenju sa sekvencom segmenta kinaznog domena PKC-a, poželjno SEQ ID No 2.

[0059] Na primer, sekvenca segmenta kinaznog domena PKC-a može pripadati sekvencama između položaja 339 i 432 SEQ ID NO: 1, između položaja 434 i 544 SEQ ID NO: 1, između položaja 546 i 561 SEQ ID NO: 1, između položaja 563 i 565 SEQ ID NO: 1 ili između položaja 568 i 595 SEQ ID NO: 1.

[0060] U jednom načinu ostvarivanja, sekvenca segmenta kinaznog domena PKC-a ne može uključivati sledeće ostatke: G433, E545, S562, S566 SEQ ID NO: 1.

[0061] U jednom aspektu, peptid ovog otkrivanja ima alfa-spiralnu strukturu. Kako se ovde koriste, pojmovi „alfa-spiralaˮ „α-spiralaˮ, „klasična Poling-Kori-Branson α-spiralaˮ i „3,613-spiralaˮ su ekvivalentni i upućuju jedni na druge. Pojam „alfa-spiralaˮ odnosi se na čest motiv u sekundarnoj strukturi proteina koji predstavlja udesno zavijenu ili spiralnu konformaciju (heliks) u kojoj okosnička N-H grupa daje vodoničnu vezu okosničkoj C=O grupi aminokiseline smeštene tri ili četiri ostatka ranije duž proteinske sekvence. Alfa-spirala ima prosečan broj ostataka po zavoju spirale od oko 3,6 ostataka a 13 atoma je uključeno u prsten obrazovan vodoničnom vezom.

[0062] U određenom načinu ostvarivanja, peptid ovog otkrivanja ima alfa-spiralnu strukturu i/ili ima sekvencu koja predviđa alfa-spiralnu strukturu. Postupci za utvrđivanje strukture peptida su dobro poznati od stručnjaka iz ove oblasti, kao što su Circular Dichroism ili NMR. Isto tako su dobro poznati postupci za predviđanje alfa-spiralne strukture peptida od stručnjaka iz ove oblasti kao što su STRIDE (Frishman D., Argos P., Proteins, vol.23, no 4, 1995, p.566-579); DEFINE (Richards F. M., Kundrot C. E., Proteins, vol.3, no 2, 1988, p.71-84); DSSP (Touw et al. Nucleic Acids Research 2015; 43: D364-D368; Kabsch & Sander. Biopolymers.1983, 22, 2577-2637).

1

[0063] Alfa spirale su smeštene u kinaznom domenu na sledećim lokacijama: 372-377; 381-392; 425-432; 437-456; 466-468; 502-504; 507-510; 518-533; 543-552; 563-572; 577-579; 587-593 i 595-597 SEQ ID NO: 1.

[0064] Shodno tome, peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci:

- VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3);

- LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4);

- LDN;

- PDY;

- PEII (SEQ ID NO: 5);

- SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6);

- EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7);

- PAK;

- GERDVRE (SEQ ID NO: 8);

- AFF.

[0065] U određenom načinu ostvarivanja, peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci:

- VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3); i

- GERDVRE (SEQ ID NO: 8).

[0066] Peptid opciono može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3); VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9); VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10); VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11); LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4); LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12); LDN; SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6); SVDWW A YGVLL YEXLA (SEQ ID NO: 13); SVXWWAYGLLYEMLA (SEQ ID NO: 52); EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7); EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14); GERDVRE (SEQ ID NO: 8); GEXDVRE (SEQ ID NO: 15); GERDVXE (SEQ ID NO: 16); GEXDVXE (SEQ ID NO: 17); LDN; AFF; PDY; XDY; PEII (SEQ ID NO: 5); XEII (SEQ ID NO: 18); PAK; XAK; gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. X je poželjno aminokiselina pogodna za α-spiralnu sekundarnu strukturu. Na primer, X može biti odabrano iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y.

[0067] U jednom aspektu, peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3); VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9);

1

VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10); VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11); LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4); LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12); SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6); SVDWW A YGVLL YEXLA (SEQ ID NO: 13);

SVXWWAYGLLYEMLA (SEQ ID NO: 52); EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7); EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14); GERDVRE (SEQ ID NO: 8); GEXDVRE (SEQ ID NO: 15); GERDVXE (SEQ ID NO: 16); GEXDVXE (SEQ ID NO: 17); gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. U određenom aspektu, peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10), pri čemu X predstavlja K. U drugom određenom aspektu, peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od SVXWW A YGLL YEMLA (SEQ ID NO: 52) pri čemu X predstavlja E.

[0068] Peptid određenije može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3); VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9); VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10); VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11); LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12); SVDWW A YGVLL YEXLA (SEQ ID NO: 13); EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14); GERDVRE (SEQ ID NO: 8); GEXDVRE (SEQ ID NO: 15); GERDVXE (SEQ ID NO: 16); GEXDVXE (SEQ ID NO: 17); gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. Na primer, peptid može obuhvatati najmanje jednu od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA ili VECTTVEKEVLA (SEQ ID NO: 19). Peptid opciono obuhvata 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 supstitucija, brisanja, dodavanja ili njihovu kombinaciju, poželjno, 1, 2, 3, 4 ili 5 supstitucija, brisanja, dodavanja ili njihovu kombinaciju, poželjnije, 1, 2 ili 3 supstitucije.

[0069] Peptid opciono može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9) sa opcionim modifikacijama aminokiseline odabranim iz grupe koju čine 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LDN; SVDWW A YGVLL YEMLA (SEQ ID NO: 6) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija

1

aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWW A YGVLL YEXLA (SEQ ID NO: 13) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVXWW A YGLL YEMLA (SEQ ID NO: 52) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14) sa opciono 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVRE (SEQ ID NO: 8) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVRE (SEQ ID NO: 15) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVXE (SEQ ID NO: 16) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVXE (SEQ ID NO: 17) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LDN; AFF; PDY; XDY; PEII (SEQ ID NO: 5); XEII (SEQ ID NO: 18); PAK; XAK; gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. X je poželjno aminokiselina pogodna za α-spiralnu sekundarnu strukturu. Na primer, X može biti odabrano iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y.

[0070] U jednom aspektu, peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9) sa opcionim modifikacijama aminokiseline odabranim iz grupe koju čine 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i

1

njihova kombinacija; LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWW A YGVLL YEXLA (SEQ ID NO: 13) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVXWW A YGLL YEMLA (SEQ ID NO: 52) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVRE (SEQ ID NO: 8) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVRE (SEQ ID NO: 15) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVXE (SEQ ID NO: 16) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVXE (SEQ ID NO: 17) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. X je poželjno aminokiselina pogodna za α-spiralnu sekundarnu strukturu. Na primer, X može biti odabrano iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y.

[0071] Peptid određenije može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9) sa opcionim modifikacijama aminokiseline odabranim iz grupe koju čine 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVRE (SEQ ID NO: 8) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVRE (SEQ ID NO: 15) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVXE (SEQ ID NO: 16) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVXE (SEQ ID NO: 17) sa opciono 1, 2 ili 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija;

2

gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. X je poželjno aminokiselina pogodna za αspiralnu sekundarnu strukturu. Na primer, X može biti odabrano iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y.

[0072] Na primer, peptid može obuhvatati najmanje jednu od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA ili VECTTVEKEVLA (SEQ ID NO: 19).

[0073] U jednom aspektu, peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od najmanje jedne od sledećih sekvenci:

[0074] U drugom određenom načinu ostvarivanja, peptid prema ovom otkrivanju je dizajniran ili modifikovan kako bi se održao u alfa-spiralnoj konformaciji. Kao što je poznato u tehnici, to se može postići pomoću raznih postupaka, uključujući modifikaciju aminokiselinske sekvence supstitucijom aminokiselina koje nisu kritične za biološke efekte, upotrebu neprirodnih aminokiselina, peptidnu ciklizaciju i modifikacije peptidne okosnice ili dodavanje hemijskih veza između aminokiselina u peptidnom lancu. Takve modifikacije mogu se izvesti na peptidima, na primer, kako bi se povećala njihova termička i stabilnost proteaze.

[0075] Određenije, peptid ovog otkrivanja modifikovan je hemijskim umrežavanjem. Na primer, peptid može biti spojeni peptid. U jednom načinu ostvarivanja, peptid ovog otkrivanja je spojen. Pojam „spojeni peptidˮ ili „vezani peptidˮ, kako se ovde koristi, odnosi se na veštački modifikovan peptid u kom je sekundarna struktura peptida stabilizovana jednim veštačkim molekulskim umrežavanjem (mostom) koji spaja susedne zavoje α-spirala u peptidu ili sa više njih. Postupci za pripremu spojenih peptida dobro su poznati u tehnici, na primer u Verdine & Hilinski (2012, Methods Enzymol, 503, 3-33), WO10033617 i WO10011313.

[0076] U jednom načinu ostvarivanja, umrežavanja spojenog peptida ovog otkrivanja su i+3 i/ili i+4 i/ili i+7 umrežavanja. U peptidu, „i+3 umrežavanjeˮ predstavlja umrežavanje između aminokiseline, „iˮ aminokiseline, i druge aminokiseline prisutne na udaljenosti od 3 aminokiselinska ostatka od i aminokiseline. U peptidu, „i+4 umrežavanjeˮ predstavlja umrežavanje između aminokiseline, „iˮ aminokiseline, i druge aminokiseline prisutne na udaljenosti od 4 aminokiselinska ostatka od i aminokiseline. U peptidu, „i+7 umrežavanjeˮ predstavlja umrežavanje između aminokiseline, „iˮ aminokiseline, i druge aminokiseline prisutne na udaljenosti od 7 aminokiselinskih ostataka od i aminokiseline. U poželjnom aspektu, peptid ima „i+7 umrežavanjeˮ.

[0077] Za najkraće sekvence, određenije sekvence koje uključuju tri do četiri ostatka, umrežavanje je i+3 i i+4 a uvodi se između ostataka koji su izvan te sekvence. Kada su sekvence dovoljno dugačke, poželjno je umrežavanje i+7.

[0078] Kako bi se prikazao taj aspekt na jednom određenom peptidu, taj peptid može obuhvatati, suštinski se sastojati od ili se sastojati od jedne od sledećih sekvenci:

VECTMXEKRVLAX (SEQ ID NO: 24)

VECTXXEKRVLAX (SEQ ID NO: 25)

VECTMXEKXVLAX (SEQ ID NO: 26)

VECTXXEKXVLAX (SEQ ID NO: 27)

VECTXXEKXVLAXLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 28)

VECTMXEKRVLAXLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 29)

VECTXXEKRVLAXLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 30)

VECTMXEKXVLAXLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 31)

VECTTXEKEVLAXLDKAAFLTQHS (SEQ ID NO: 53)

VECTTXEKEVLAXLDKAAF (SEQ ID NO: 54)

VEGTTXEKEVLAXLDKAAF (SEQ ID NO: 55) i

ECTTXEKEVLAXL (SEQ ID NO 56)

ECTMXEKKVLAXL (SEQ ID NO 57)

gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, poželjno, aminokiselinu pogodnu za αspiralnu sekundarnu strukturu, poželjnije odabranu iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, još poželjnije A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y, i

[0079] Na primer, u kontekstu i+7 spajanja, prvo X predstavlja 2-(7-oktenil)aminokiselinu (na primer 2-(7-oktenil)alanin ili 2-(7-oktenil)arginin), a drugo X predstavlja 2-(4-pentenil)aminokiselinu (na primer 2-(4-pentenil)alanin ili 2-(4-pentenil)serin). Posebne kombinacije mogu biti 2-(7-oktenil)alanin i 2-(4-pentenil)alanin; 2-(7-oktenil)alanin i 2-(4-pentenil)serin; 2-(7-oktenil)arginin i 2-(4-pentenil)alanin; ili 2-(7-oktenil)arginin i 2-(4-pentenil)serin.

[0080] U određenom načinu ostvarivanja, peptid može biti

VECTTREKEVLASLDKAAFLTQLHS (SEQ ID NO: 32)

pri čemu sekvenca opciono ima 1, 2, 3, 4 ili 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, poželjnije, 1, 2 ili 3

2

modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija.

[0081] U određenom načinu ostvarivanja, peptid prema ovom otkrivanju je ciklični peptid. Kako se ovde koriste, izrazi „ciklični peptidˮ ili „cirkularni peptidˮ su ekvivalentni i odnose se na peptid u kom su N-terminus i C-terminus ili N-terminus i bočni lanac druge aminokiseline, poželjno C-terminalna aminokiselina ili C-terminus i bočni lanac druge aminokiseline, poželjno N-terminalna aminokiselina ili bočni lanac aminokiseline i bočni lanac druge aminokiseline, poželjno N-terminalna aminokiselina i C-terminalna aminokiselina, povezani kovalentnom vezom koja stvara prstenastu strukturu. Kako se ovde koriste, pojmovi „N-terminusˮ, „amino-terminusˮ, „NH2-terminusˮ, „N-terminalni krajˮ i „aminskiterminusˮ su ekvivalentni i odnose se na slobodnu aminsku grupu (-NH2) prisutnu na prvoj aminokiselini peptida. Kako se ovde koriste, pojmovi „C-terminusˮ, „karboksilni-terminusˮ, „karboksi-terminusˮ, „C-terminalni krajˮ i „COOH-terminusˮ su ekvivalentni i odnose se na slobodnu karboksilnu grupu (-COOH) prisutnu na poslednjoj aminokiselini peptida.

[0082] U jednom načinu ostvarivanja, dužina peptida prema ovom otkrivanju iznosi manje od 80 aminokiselina, poželjnije manje od 60 aminokiselina, dalje poželjnije manje od 40 aminokiselina i još poželjnije manje od 30 aminokiselina. U određenom načinu ostvarivanja, dužina peptida prema ovom otkrivanju iznosi manje od 25 aminokiselina. U drugom određenom načinu ostvarivanja, dužina peptida prema ovom otkrivanju iznosi manje od 20 aminokiselina, poželjno manje od 15 aminokiselina.

Minimalna dužina peptida poželjno iznosi više od 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19 ili 20 aminokiselina. Na primer, dužina peptida iznosi najmanje 4 aminokiseline i manje od 40 aminokiselina, poželjno iznosi najmanje 4 aminokiseline i manje od 30 aminokiselina; poželjnije najmanje 6 aminokiselina i manje od 25 aminokiselina.

[0083] U jednom načinu ostvarivanja, peptid prema ovom otkrivanju može da utiče na ALMS1-PKC interakciju, tačnije da smanji ili spreči interakciju između ALMS 1 i αPKC-a. Drugim rečima, peptid prema ovom otkrivanju može da blokira interakciju između ALMS1 i αPKC-a. Peptid prema ovom otkrivanju alternativno ne može da utiče na ALMS1-PKC interakciju, tačnije da smanji ili spreči interakciju između ALMS 1 i αPKC-a. Drugim rečima, peptid prema ovom otkrivanju ne može da blokira interakciju između ALMS1 i αPKC-a.

[0084] Kako bi se utvrdio efekat peptida na vezivanje αPKC-a za ALMS1, može se primeniti bilo koja tehnologija poznata stručnjaku iz ove oblasti, određenije bilo koji postupak prikladan za utvrđivanje proteinskih interakcija. Na primer, rekombinantni ili prečišćeni nativni ALMS1 ili αPKC može se vezivati za čip rezonancije površinskog plazmona i drugi molekul koji protiče preko čipa kako bi se procenio afinitet vezivanja, na primer u Biacore (General Electric, SAD) uređaju.

[0085] Efekat jednog peptida ili više njih na vezivanje αPKC-a za ALMS1 utvrđuje se merenjem vezivanja αPKC-a za ALMS1 u odustvu i u prisustvu ispitanog(ih) peptida i poređenjem vezivanja αPKC-a za ALMS 1.

[0086] Određenije, može se izvesti test imunoprecipitacije pomoću ALMS1 kao mamca. Test se može izvesti sa ćelijama, određenije adipocitima, kultivisanim u odsustvu i/ili prisustvu insulina, poželjno u odsustvu insulina. Peptidi koje treba testirati dodaju se u podlogu za kulturu. Zatim se imunodetektuje αPKC.

[0087] Pod „smanjenimˮ, „smanjujeˮ ili „sprečavaˮ podrazumeva se pozivanje na vezivanje smanjeno za najmanje 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ili 90 % u poređenju sa vezivanjem izmerenim u odsustvu ispitivanog molekula u istim uslovima.

[0088] U jednom načinu ostvarivanja, peptid prema ovom otkrivanju može da smanjuje ekspresiju FATP2 u adipoznom tkivu.

[0089] FATP2 se naziva i nosačem rastopljenih materija, porodica 27, član 2 (SLC27A2). Taj je protein otkriven u bazi podataka UniProtKB pod 014975. Gen je opisan u UniGene bazi podataka pod Hs.11729. Sekvence reference mogu se pronaći u NCBI pod NP_003636.2 i NM 003645.3 za izoform 1 i pod NP_001153101.1 i NM_001159629.1. za izoform 2.

[0090] Pod „smanjenimˮ ili „smanjujeˮ podrazumeva se pozivanje na ekspresiju smanjenu za najmanje 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80 ili 90 % u poređenju sa ekspresijom izmerenom u odsustvu peptida u istim uslovima. Ekspresija se može meriti bilo na proteinskom nivou (npr., antitelima) ili na iRNK nivou.

[0091] Ekspresija se može meriti na proteinskom nivou bilo kojim dostupnim postupkom kao što je imunohistohemija, polukvantitativno Vestern blotovanje ili proteinskom ili mrežom antitela. Antitela usmerena na FATP2 su komercijalno dostupna, na primer od Origene, ref TA350424 ili TA333990; ili Santa Cruz Biotechnology, ref sc-393906.

[0092] Ekspresija se takođe može meriti na iRNK nivou bilo kojim dostupnim postupkom. Nivo ekspresije FATP2 poželjno se utvrđuje merenjem količine iRNK transkripata kvantitativnim RT-PCR-om, kvantitativnim RT-PCR-om u realnom vremenu, PCR-om Nanostring tehnologije ili tehnologijom visokopropusnog sekvenciranja kao što je RNK-Seq ili tehnologije sekvenciranja koje koriste mikrofluidne sisteme. Tačnije, ekspresija se meri postupkom naznačenim u odeljku sa Primerima.

[0093] U određenom načinu ostvarivanja, efekat na ekspresiju FATP2 izazvan peptidom u adipoznom tkivu poželjno je poseban za FATP2. U tom načinu ostvarivanja, peptid može imati nikakav ili manji efekat na ekspresiju drugih FATP-ova, tj. FATP1, FATP3, FATP4, FATP5 i FATP6, u adipoznom tkivu, određenije sisara.

[0094] U određenom načinu ostvarivanja, peptid prema ovom otkrivanju ima sledeće karakteristike

- ne obuhvata istovremeno jedan metionin, jedan prolin i jedan arginin;

- usvaja sekundarnu strukturu koja predstavlja spiralu, poželjno alfa-spiralu; i

2

- obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od sekvence iz segmenta kinaznog domena PKC-a (proteinske kinaze C).

i dalje ima jednu, dve, tri, četiri ili sve sledeće karakteristike:

- modifikuje nivoe ekspresije FATP-ova u adipoznom tkivu, poželjno smanjuje ekspresiju FATP2 u adipoznom tkivu;

- njegova dužina iznosi najmanje 4 aminokiseline i manje od 40 aminokiselina, poželjno iznosi najmanje 4 aminokiseline i manje od 30 aminokiselina, poželjnije najmanje 4 aminokiseline i manje od 25 aminokiselina;

- usvaja sekundarnu strukturu koja predstavlja spiralu, poželjno alfa-spiralu;

- modifikovan je umrežavanjem.

[0095] U posebnijem načinu ostvarivanja, peptid prema ovom otkrivanju ima sledeće karakteristike:

- ne obuhvata istovremeno jedan metionin, jedan prolin i jedan arginin;

- usvaja sekundarnu strukturu koja predstavlja spiralu, poželjno alfa-spiralu.

[0096] U drugom posebnijem načinu ostvarivanja, peptid prema ovom otkrivanju ima sledeće karakteristike:

- smanjuje ekspresiju FATP2 u adipoznom tkivu;

- ne obuhvata istovremeno jedan metionin, jedan prolin i jedan arginin;

- usvaja sekundarnu strukturu koja predstavlja spiralu, poželjno alfa-spiralu.

[0097] Peptid prema ovom otkrivanju može dalje obuhvati grupu koja olakšava njegovu apsorpciju od strane ćelije ili ulazak u nju, određenije PTD (proteinski transdukcioni domen). PTD obično obuhvata određenu aminokiselinsku sekvencu od 10 do 20 aminokiselina (Matsushita i Matsui, (2005), J Mol Med 83, 324-328; Vivès et al, Biochimic et Biophysica Acta, 2008, 1786, 126-138). PTD se uglavnom sastoji od baznih aminokiselina kao što su arginin ili lizin a reprezentativni primeri PTD-a uključuju peptide bogate argininom kao što su poli R-ovi (RRRRRRRR (SEQ ID NO: 33)) ili (RRPRRPRRPRRPRRP (SEQ ID NO: 34)),

2

peptid antennapedia-e ili penetratina kao što je (RQIKIWFQNRRMKWKK (SEQ ID NO: 35)) ili HIV-Tat (YGRKKRRQRRR (SEQ ID NO: 36)).

[0098] Peptid prema ovom otkrivanju može se izraditi od prirodnih aminokiselina i/ili neprirodnih aminokiselina. Izraz „neprirodne aminokiselineˮ definisan je kao analog ili derivat prirodne aminokiseline (tj., Alanin, Valin, Glicin, Leucin, Izoleucin, Lizin, Arginin, Glutaminska kiselina, Glutamin, Asparaginska kiselina, Asparagin, Histidin, Tirozin, Fenilalanin, Triptofan, Serin, Prolin, Treonin, Cistein, Metionin). One imaju modifikovani bočni lanac, npr. kraći, duži ili sa različitim funkcionalnim grupama. Razmatraju se i izomeri D i L, određenije zato što izomeri D nisu osetljivi na proteaze. Uz to, razmatraju se i modifikacije u nekim ili svim peptidnim vezama kako bi se povećala otpornost na proteolizu, određenije pomoću (-CO-NH-) pomoću (-CH2-NH-), (-NH-CO-), (-CH2-O-), (-CH2-S-), (-CH2-CH2-), (-CO-CH2-), (-CHOH-CH2-), (-N=N-) i/ili (-CH=CH-). Peptid može predstavljati karboksilni C terminalni kraj (-COO-) i amidni (-CONH2). Peptid takođe može biti D-retro-inverso sekvenca peptida kao što je ovde otkriveno. N terminal može se modifikovati, naročito acetilradikalom.

[0099] Peptid opciono može biti PEGilovan kako bi se povećala njegova stabilnost. Peptid se dalje može opciono formulisati u nevodenim rastvorima protičkih rastvarača kao što su propilenglikol i polietilenglikol. Peptid može biti spakovan i u depo formulaciju mikrosfera polilaktid-koglikolne kiseline. Postoje mnogi sistemi isporuke sa produženim oslobađanjem i mnogi od njih su prikladni za upotrebu u ovom otkrivanju. Na primer, prikladne su kompozicije sa sporim oslobađanjem na bazi polimera zasnovane na razgradivim polimerima kao što su PLGA, polilaktat ili poliglikolat, kao i depo kompozicije na bazi lipida, kao što su kompozicije opisane u WO2005/117830 i/ili WO2006/075124. Formulacija aktivnih supstanci u depo formulacije biorazgradivih polimera dobro je utvrđena i poznata u tehnici pa se samim tim peptidi ovog otkrivanja mogu formulisati pomoću njih uz primenu poznatih postupaka.

Kompozicija ovog otkrivanja poželjno može da oslobađa peptid na funkcionalnoj koncentraciji tokom najmanje 1 meseca.

[0100] Pod „peptidomˮ se podrazumeva pozivanje na peptid kao što je gore otkriveni ili kombinaciju različitih peptida kao što su gore otkriveni. Na primer, može se koristiti 2, 3, 4, 5 ili 6 različitih peptida, poželjno 2 ili 3, poželjnije 2.

Kombinacije

[0101] Peptid(i) prema ovom otkrivanju mogu se koristiti u kombinaciji sa jednim dodatnim aktivnim lekom ili više njih, na primer antidijabetesnim lekom, hipolidemijskim agensom, agensom protiv gojaznosti, agensom protiv hipertenzije, antisteatoznim lekom, agensom protiv zapaljenja i agonistom receptora aktiviranih proliferatorima peroksizoma.

[0102] Stoga se ovaj pronalazak odnosi na:

2

- peptid ili farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata peptid kao što je ovde otkriveni za upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja, u kombinaciji sa jednim dodatnim aktivnim lekom ili više njih, određenije kao što su ovde otkriveni;

- farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata peptid kao što je ovde otkriveni i jedan dodatni aktivni lek ili više njih za upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja;

- proizvod, kombinovani preparat ili komplet koji obuhvata peptid prema ovom otkrivanju i jedan dodatni aktivni lek ili više njih, određenije kao što su ovde otkriveni, za istovremenu, odvojenu ili uzastopnu upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja;

- upotrebu peptida za proizvodnju leka za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja u kombinaciji sa jednim dodatnim aktivnim lekom ili više njih;

- upotrebu peptida kao što je ovde otkriveni i jedan dodatni aktivni lek ili više njih, određenije kao što su ovde otkriveni, za proizvodnju leka za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja;

- postupak za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja kod subjekta, koji obuhvata davanje terapijski efektivne količine peptida kao što je ovde otkriveni i terapijski efektivne količine jednog dodatnog aktivnog leka ili više njih;

- postupak za lečenje dijabetesa i povezanih poremećaja kod subjekta, koji obuhvata davanje terapijski efektivne količine farmaceutske kompozicije koja obuhvata peptid kao što je ovde otkriveni i jedan dodatni aktivni lek ili više njih, određenije kao što su ovde otkriveni.

[0103] Određenije, može se koristiti terapijska ili supterapijska efektivna količina jednog dodatnog aktivnog leka ili više njih. Pod „supterapijskimˮ se podrazumeva pozivanje na količinu koja može na primer iznositi 90, 80, 70, 60, 50, 40, 30, 20 ili 10 % konvencionalne terapijske doze (određenije za istu indikaciju i/ili isti način davanja i/ili frekvenciju davanja).

[0104] Antidijabetesni lek može na primer predstavljati insulin, derivate i mimetike insulina; insulinske sekretagoge kao što su sulfoniluree (npr., hlorpropamid, tolazamid, acetoheksamid, tolbutamid, gliburid, glimepirid, glipizid); gliflozine kao što su emplagliflozin i dapagliflozin; gliburid i Amaril; liraglutid (NN2211); ligande insulinotropnih receptora sulfoniluree kao što su meglitinidi, npr. nateglinid i repaglinid; tiazolidindione (npr., rosiglitazon (AVANDIA), troglitazon (REZULIN), pioglitazon (ACTOS), balaglitazon, rivoglitazon, netoglitazon, troglitazon, englitazon, ciglitazon, adaglitazon, darglitazon koji poboljšavaju dejstvo insulina (npr., insulinskom senzibilizacijom) čime podstiču iskorišćavanje glukoze u perifernim tkivima; inhibitore proteinske tirozinske fosfataze- IB (PTP-1B) kao što je PTP-112; inhibitore holesteril-estar transportnih proteina (CETP) kao što je torcetrapib, inhibitore GSK3 (kinaze glikogen sintaze-3) kao što su SB-517955, SB-4195052, SB- 216763, NN-57-05441 i NN-57-05445; ligande RXR-a kao što su GW-0791 i AGN-194204; inhibitore kotransportera glukoze zavisnih od natrijuma kao što su T-

2

1095 ili kanagliflozin; inhibitore glikogenske fosforilaze A kao što je BAY R3401; biguanide kao što su metformin i drugi agensi koji deluju podsticanjem iskorišćavanja glukoze, smanjivanjem proizvodnje glukoze u jetri i/ili umanjenjem izlaza glukoze iz creva; inhibitore alfa-glukozidaze kao što su akarboza i migiitoi) i druge agense koji usporavaju digestiju ugljenih hidrata a samim tim i apsorpciju iz creva i smanjuju postprandijalnu hiperglikemiju; GLP-1 (glukagonu sličan peptid- 1), GLP-1 analoge kao što su mimetici Eksendina-4 i GLP-1; i inhibitore DPPIV (dipeptidilne peptidaze IV) kao što je vildagliptin. Takođe može biti antidijabetesni lek opisan u Expert Opin Investig Drugs 2003, 12(4): 623-633, crteži 1 do 7. Antidijabetesni lek može uključivati i molekul koji sprečava vezivanje αPKC-a i ALMS 1 kao što su molekuli otkriveni u WO 2015/114062.

[0105] Hipolidemijski agens može na primer predstavljati inhibitore 3-hidroksi-3-metil-glutaril koenzim A (HMG- CoA) reduktaze, npr. lovastatin, pitavastatin, simvastatin, pravastatin, cerivastatin, mevastatin, velostatin, fluvastatin, dalvastatin, atorvastatin, rosuvastatin i rivastatin; inhibitore skvalenskih sintaza; ligande FXR-a (farnezoid X receptora) i LXR-a (jetrenog X receptora) kao što je obetiholna kiselina; sekvestrante žučne kiseline, kao što su holestiramin i kolesevelam; fibrate; nikotinsku kiselinu i aspirin; aramhol, agonist transmembranskih G protein spregnutih receptora (TGR) 5.

[0106] Agens protiv gojaznosti može na primer biti orlistat, rimonabant, fentermin, topiramat, kuneksa i lokaserin.

[0107] Agens protiv hipertenzije može na primer predstavljati diuretike Henleove petlje kao što su etakrinska kiselina, furosemid i torsemid; inhibitore angiotenzin konvertujućeg enzima (ACE) kao što su benazepril, kaptopril, enalapril, fosinopril, lisinopril, moeksipril, perinodopril, kvinapril, ramipril i trandolapril; inhibitore Na-K-ATPazne membranske pumpe kao što je digoksin; inhibitore neutralne endopeptidaze (NEP) kao što je sakubitril; ACE/NEP inhibitore kao što su omapatrilat, sampatrilat i fasidotril; antagoniste angiotenzina II kao što su kandesartan, eprosartan, irbesartan, losartan, telmisartan i valsartan, određenije valsartan; kombinacije NEP inhibitora i antagonista angiotenzina II kao što su sakubitril i valsartan (tj. Entresto); reninske inhibitore kao što su ditekiren, zankiren, terlakiren, aliskiren, RO 66-1132 i RO-66-1168; blokatore beta-adrenergičkih receptora kao što su acebutolol, atenolol, betaksolol, bizoprolol, metoprolol, nadolol, propranolol, sotalol i timolol; inotropne agense kao što su digoksin, dobutamin i milrinon; blokatore kalcijumovih kanala kao što su amlodipin, bepridil, diltiazem, felodipin, nikardipin, nimodipin, nifedipin, nisoldipin i verapamil; antagoniste aldosteronskih receptora; i inhibitore aldosteronske sintaze.

[0108] Agonist receptora aktiviranih proliferatorima peroksizoma može na primer predstavljati fenofibrat, pioglitazon, rosiglitazon, tesaglitazar, BMS-298585, L-796449, jedinjenja posebno opisana u patentnoj prijavi WO 2004/103995 tj. jedinjenja primera 1 do 35 ili jedinjenja posebno navedena u patentnom zahtevu 21 ili jedinjenja posebno opisana u patentnoj prijavi WO 03/043985 tj. jedinjenja primera 1 do 7 ili jedinjenja posebno navedena u patentnom zahtevu 19 a naročito (R)-1-{4-[5-metil-2-(4-

2

trifluorometil-fenil)-oksazol-4- ilmetoksi]-benzensulfonil}-2,3-dihdro-lH-indol-2-karboksilna ili njena so.

[0109] Drugi lekovi od interesa mogu na primer biti cenikrivirok, simtuzumab, selonsertib, emrikasan. U određenom načinu ostvarivanja, jedan dodatni aktivni lek korišćen u kombinaciji sa peptidom ili više njih mogu biti izabrani između: GLP-1 analoga kao što je liraglutid, obetiholna kiselina, gliflozin, simtuzumab (GS 6624), cenikrivirok, aramhol, inhibitora Galektina 3 kao što je GR-MD-02, TGR5 agonist i dualnog FXR/TGR5 agonista kao što je INT-777 ili INT-767 i emrikasana.

[0110] Agens protiv zapaljenja može biti bilo koji lek poznat stručnjaku iz ove oblasti kao što su nesteroidni antiinflamatorni agensi (NSAIL-i), uključujući salicilnu kiselinu, ibuprofen u svojim raznim oblicima i naproksen u svojim raznim oblicima, steroidni antiinflamatorni kao što su kortikosteroidi, antiinflamatorno antiTNF alfa antitelo i njihove kombinacije. Oblik farmaceutskih kompozicija, način davanja, doziranje i režim prirodno zavise od stanja kog treba lečiti, ozbiljnosti bolesti, starosti, težine i pola pacijenta, itd.

[0111] Farmaceutske ili terapijske kompozicije ovog otkrivanja mogu se formulisati za topikalno, oralno, parenteralno, intranazalno, intravensko, intramuskularno, potkožno ili intraokularno davanje i slično.

[0112] Peptid korišćen u farmaceutskoj kompoziciji ovog otkrivanja prisutan je u terapijski efektivnoj količini.

[0113] Farmaceutska kompozicija koja obuhvata peptid formulisana je u skladu sa standardnom farmaceutskom praksom (Lippincott Williams & Wilkins, 2000 i Encyclopedia of Pharmaceutical Technology, eds. J. Swarbrick i J. C. Boylan, 1988-1999, Marcel Dekker, New York) koja je poznata stručnjaku iz ove oblasti.

[0114] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje stabilnu formulaciju za parenteralnu injekciju farmaceutske kompozicije prema ovom otkrivanju koja obuhvata peptid ili njegovu so, pri čemu je peptid osušen i potom rekonstituisan u rastvaraču pre upotrebe. Peptid (ili, u načinima ostvarivanja u kojima formulacija obuhvata dva peptida ili više njih, svaki od peptida) se meša sa neisparljivim puferom i suši do suvog peptidnog praha. Prikladni puferi uključuju, ali nisu ograničeni na, glicinske pufere, citratne pufere, fosfatne pufere i njihove mešavine. U jednom načinu ostvarivanja, pufer predstavlja glicinski pufer. U drugom načinu ostvarivanja, pufer predstavlja mešavinu citratnog pufera i fosfatnog pufera. U nekim načinima ostvarivanja, u kojima formulacija obuhvata dva peptida ili više njih, prvi i drugi pufer su isti. U nekim načinima ostvarivanja, u kojima formulacija obuhvata dva peptida ili više njih, prvi i drugi pufer su različiti. Farmaceutska kompozicija prema ovom otkrivanju alternativno se može skladištiti u vodenom stanju. Rastvor može, po želji, sadržati dalje aditive ili ekscipijense, koji moraju biti kompatibilni sa aktivnim sastojkom i, ukoliko se ne uklanjaju tokom faze sušenja zamrzavanjem, moraju biti kompatibilni i sa načinom davanja. Za parenteralno davanje, kompozicija se može ubrizgavati intradermalno, potkožno, intramuskularno ili intravenski. Kompozicija ili peptid se poželjno ubrizgava ili se treba ubrizgavati potkožno, određenije u masno tkivo.

[0115] Poželjno se može postaviti sa mini-osmotskom pumpom ili drugim uređajem za kontrolisanu isporuku implantiranim u telo. Poželjno se može pomešati sa drugim jedinjenjima kako bi se dobila depo formulacija sa sporim oslobađanjem. Poželjni način davanja predstavlja potkožnu injekciju, na primer primenom jednokratnog ili višejediničnog uređaja za doziranje, sličnog insulinskoj penkali. Peptid se može davati i uređajem koji omogućava potkožno davanje bez ikakve igle, neinvazivnim sistemom.

[0116] Uz to, peptid se može davati pomoću bilo kog dostupnog sistema isporuke leka. Određenije, razmatra se upotreba enzima rekombinantne humane hijaluronidaze, rHuPH20, kako bi se omogućila i optimizovala potkožna dostava leka za odgovarajuće istovremeno date terapije.

[0117] Pomoću tehnologije, neki biološki lekovi i jedinjenja koji se daju intravenski mogu se umesto toga isporučivati supkutano, ili pod kožu, čime potencijalno obezbeđuju bolje iskustvo za pacijente i povećavaju efikasnost zdravstvenog sistema smanjivanjem vremena davanja, bola od injekcije i reakcija na mestu primene infuzije.

[0118] U jednom načinu ostvarivanja, peptid ovog otkrivanja može se mešati sa drugim jedinjenjima kako bi se dobila depo formulacija sa sporim oslobađanjem. Ona se potom može potkožno ubrizgati kako bi se obrazovao depo sa sporim oslobađanjem.

[0119] Za oralno davanje, kompozicija se može formulisati u konvencionalne oralne dozne oblike kao što su tablete, kapsule, praškovi, granule i tečni preparati kao što su sirupi, eliksiri i koncentrovane kapi. Mogu se koristiti netoksični čvrsti nosači ili razblaživači koji uključuju, na primer, farmaceutske klase kvaliteta manitola, laktoze, skroba, magnezijumstearata, natrijumsaharina, talka, celuloze, glukoze, saharoze, magnezijuma, karbonata i sličnih. Za komprimovane tablete neophodna su i veziva, koja predstavljaju agense koji daju kohezivne kvalitete praškastim materijalima. Na primer, kao veziva se mogu koristiti skrob, želatin, šećeri kao što su laktoza ili dekstroza i prirodne ili sintetičke gume. Agensi za razgradnju su takođe neophodni u tabletama kako bi se olakšalo raspadanje tablete. Agensi za razgradnju uključuju skrobove, gline, celuloze, algine, gume i umrežene polimere. Osim toga, u tablete su takođe uključeni lubrikanti i agensi za klizanje radi sprečavanja adhezije materijala tablete za površine u proizvodnom postupku i radi poboljšavanja karakteristika tečenja praškastog materijala tokom proizvodnje. Kao agens za klizanje najčešće se koristi koloidni silicijumdioksid dok se jedinjenja kao što su talk i stearinske kiseline najčešće koriste kao lubrikanti.

[0120] Za transdermalno davanje, kompozicija se može formulisati u oblik masti, kreme ili gela dok se za olakšavanje propusnosti mogu koristiti prikladni agensi za omekšavanje ili deterdženti kao što su dimetilsulfoksid, dimetilacetamid i dimetilformamid.

[0121] Za transmukozno davanje mogu se koristiti nazalni sprejovi, intrapulmnonalna inhalacija, rektalne ili vaginalne supozitorije. U jednom načinu ostvarivanja, ovaj pronalazak može se davati intrapulmonarnim putem uz korišćenje bilo suvog praška ili tečne formulacije koja se daje pomoću uređaja za isporuku intrapulmonarnog leka prema postupcima poznatim u tehnici. Aktivno jedinjenje

1

može se inkorporisati u bio koju od poznatih baza za supozitorije postupcima poznatim u tehnici. Primeri takvih baza uključuju kakao puter, polietilenglikole (carbowax-ove), polietilensorbitanmonostearat i njihovu mešavinu sa drugim kompatibilnim materijalima radi modifikacije tačke topljenja ili brzine rastvaranja.

[0122] Farmaceutske kompozicije prema ovom otkrivanju mogu se formulisati da suštinski oslobađaju aktivni lek neposredno nakon davanja ili u bilo kom prethodno određenom vremenu ili vremenskom periodu nakon davanja.

[0123] Farmaceutske kompozicije prema ovom otkrivanju mogu obuhvatati jedan peptid ovog otkrivanja povezan sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensima i/ili nosačima ili više njih. Ti se ekscipijensi i/ili nosači biraju u skladu sa oblikom davanja kao što je gore opisano.

[0124] U određenom načinu ostvarivanja, farmaceutska kompozicija prema ovom otkrivanju obuhvata između 0,01 ng i 10 g peptida ovog otkrivanja. U jednom načinu ostvarivanja, farmaceutska kompozicija prema ovom otkrivanju obuhvata između 0,1 ng i 1 g peptida ovog otkrivanja.

[0125] Iako imaju različita značenja, izrazi „koji obuhvataˮ, „koji imaˮ, „koji se sastoji odˮ i „koji sadržiˮ mogu zamenjivati jedan drugog u čitavoj prijavi.

[0126] Dalji aspekti i prednosti ovog otkrivanja biće opisani u sledećim primerima, koje treba smatrati ilustrativnim, a ne ograničavajućim.

PRIMERI

Primer 1: Efekat ADPIF/PATAS peptida na apsorpciju glukoze u primarnom humanom zrelom adipocitu

[0127] Humani primarni preadipociti kultivisani su u ploči sa 96 bazenčića i diferencirani u zrele humane adipocite. Nakon 3 nedelje kultivisanja posle adipogeneze, adipociti su inkubirani u podlozi za kulturu bez insulina tokom 2 sata. Nakon ta 2 sata insulinskog gladovanja, podloge su zamenjene bilo podlogom bez insulina (-INS) ili podlogom sa insulinom (+INS) ili podlogom sa ADPIF-om (PATAS) tokom 30 minuta zajedno sa 2-DG-om, analogom glukoze koji se koristi za utvrđivanje unosa glukoze u Abcam kompletu. Potom je, po protokolu proizvođača, izmeren unos glukoze u 8 bunarčića po stanju i izračunata srednja vrednost koja je zatim ucrtana u histogram sa standardnom greškom srednje vrednosti za graničnike odstupanja prikazane na Fig.4.

Primer 2: ADPIF/PATAS peptid je aktivniji od PATAD peptida u prevenciji hiperglikemije.

[0128] Miševima je ubrizgana jedna doza (25 mikrograma po mišu) bilo kodiranog peptida ili PATAD-a ili

2

ADPIF/PATAS-a. Ovo su rezultati dobijeni iz niza testova opterećenja glukozom (ipGTT) u DIO mužjacima miševa koji su netolerantni na glukozu (Fig.5 A i B).

Primer 3: ADPIF/PATAS peptid povećava PKC kinaznu aktivnost u humanom adipocitu sa efektom doznog odgovora

[0129] Kao što je prikazano na Fig.3, može se primetiti povećanje PKC aktivnosti sa povećavanjem količine ADPIF/PATAS-a za dostizanje sličnih nivoa PKC aktivnosti na 25ug PATAS-a po bazenčiću u poređenju sa Insulinom.

[0130] Ispitan je i efekat drugih dvaju peptida od PKC alfa, i to ECTMVEKKVLALL i SVEWW A YGLL YEMLA na PKC kinaznu aktivnost. Kao što je prikazano na Fig.1, oba peptida mogu da povećaju PKC kinaznu aktivnost u humanom adipocitu.

[0131] Pored toga, utvrđena su dva peptida na ekspresiji FATP1-6 i oba peptida smanjuju ekspresiju FATP2 u adipocitima (Fig.2).

Primer 4: Efekat ADPIF/PATAS peptida u utvrđenom dijabetesnom mišjem modelu (db/db; BKS mužjaci miševa)

[0132] Kao što je prikazano na Fig.6A, ADPIF/PATAS peptid može da spreči hiperglikemiju.

[0133] Uz to je u ovom modelu utvrđen efekat ADPIF/PATAS peptida na ekspresiju FATP1-6 u adipocitima. ADPIF/PATAS peptid može da smanji ekspresiju FATP2 (Fig.6B).

[0134] Ispitana je aktivnost PATAS/ADPIF-a u db/db na BKS genetičkoj pozadini, dijabetesnim mišjim modelima. Šest nedelja stari miševi na standardnoj ishrani primili su bilo potkožnu injekciju fiziološkog rastvora kao nosioca ili 2mg/kg telesne težine PATAS injekcije i četiri dana kasnije, ipGTT je pokazao značajno poboljšanje netolerancije glukoze kao odgovor na davanje PATAS/ADPIF-a (Fig.6A). Miševi su primali nedeljne injekcije PATAS/ADPIF-a ili nosioca tokom još 3 nedelje nakon čega su usledile 4 nedelje bez ikakvog tretiranja uz stalno praćenje. Db/db miševi su potom eutanazirani i izmereni su nivoi ekspresije izoformi transportnih proteina za masne kiseline izoformi (Fatp-ova) u adipoznom tkivu koji pokazuju poseban i značajan pad u nivoima ekspresije Fatp2 za miševe tretirane PATAS-om (Fig.6B) u poređenju sa kontrolnim miševima.

Primer 5: Efekat ADPIF/PATAS peptida u modelu Barde-Bidlovog sindroma (BBS)

[0135] Stvoren je nokaut mišji model za BBS10 gen (Bbs10<-/->) i on je spontano postao gojazan kao što je opisano u literaturi. Sa 4 meseca starosti, izveden je intraperitonealni test opterećenja glukozom (ipGTT) na Bbs10<-/->pre davanja PATAS/ADPIF-a i otkriveno je da su Bbs10<-/->miševi bili netolerantni na glukozu (Fig.7) sa odgovarajućom oblasti ispod krive (AUC) od ~ 30000 mg/dL.min. Isti miševi primili su 2mg/kg telesne težine PATAS-a u potkožno adipozno tkivo a 3 dana kasnije izveden je ipGTT i otkriveno je da su Bbs10<-/->miševi ispoljili poboljšanu toleranciju glukoze (Fig.7) koja odgovara padu AUC-a na ~16000 mg/dL.min.

Primer 6: ADPIF/PATAS je efikasan u smanjivanju glikovanog albumina u STAMT mišjem modelu nakon 5 nedelja sedmičnih injekcija od 25ug ADPIF/PATAS-a po mišu

[0136] Glikovani albumin je dobro prepoznat i robustan parametar za utvrđivanje epizoda hiperglikemije in vivo. Stoga je korišćena plazma iz STAMT miševa koji su tretirani tokom 5 nedelja sedmičnim injekcijama ADPIF/PATAS-a od 25 ug svaka u poređenju sa kontrolnim grupama kojima je ubrizgavan fiziološki rastvor. Izmeren je značajan pad glikovanog albumina u miševima tretiranim ADPIF/PATAS-om što pokazuje da ADPIF/PATAS može da poboljša hiperglikemiju (Fig.8).

Materijali i postupci

Peptidne sekvence, sinteza i priprema rastvora

[0137]

PATAD-om spojena peptidna sekvenca: VE CTM -[2 - (4-pentenil) alanin]-EK RVL A-[2 - (4-pentenil) alanin]-L DKP PFL TQL HS (SEQ ID NO: 49)

ADPIF/PATAS-om Spojena peptidna sekvenca: VECTTREKEVLASLDKAAFLTQLHS (SEQ ID NO: 32) gde R i S nose spajanje, pri čemu poželjno predstavljaju 2-(7-oktenil)arginin i 2-(4-pentenil)serin, tim redom.

ECTMVEKKVLALL (SEQ ID NO 50) pri čemu M i A nose spajanje.

SVEWWAYGLLYEMLA (SEQ ID NO 51) pri čemu A i M nose spajanje.

[0138] Spojeni peptidi korišćeni su sa čistoćom od 95%.

Svi peptidi su rastvoreni i razblaženi u sterilnom fiziološkom rastvoru

4

Test unosa glukoze u humanim zrelim adipocitima

[0139] Kupljeni su humani beli visceralni preadipociti (Kataloški #: C-12732; PromoCell). Preadipociti su zasađeni prema protokolu proizvođača i kultivisani u Podlozi za rast preadipocita (Kataloški #: C-27410; PromoCell) do konfluencije. Adipogena diferencijacija izazvana je zamenom podloge Podlogom za diferencijaciju preadipocita (Kataloški #: C-27436; PromoCell) tokom 2 dana. Nakon faze diferencijacije, podloga je najzad zamenjena Podlogom za ishranu adipocita (Kataloški #: C-27438; PromoCell). Za kultivisanje bez insulina, Bazalna podloga za adipocite (Kataloški #: C-2431; PromoCell) bez insulina dopunjena je sa 5g/L dezoksiglukoze, 8µg/mL d-Biotina, 400ng/mL Deksametazona.3 nedelje posle adipogene diferencijacije, kultivisani zreli adipociti kultivisani su tokom 2 sata bez insulina. Nakon ta 2 sata, podloga za kulturu zamenjena je svežom podlogom za kulturu koja sadrži analog glukoze (2-DG) bilo bez insulina (-INS) ili sa insulinom (+INS) ili bez insulina 2,5 µL ispitivanog peptida pri koncentraciji od 10µg/µL u ukupnoj krajnjoj zapremini od 200µL. Nakon 30 minuta inkubacije, ćelije su obrađene kao što je navedeno u standardnom protokolu iz komercijalno dostupnog kompleta Testa unosa glukoze od Abeam: Komplet za testiranje unosa glukoze (Kolorimetrijski) (Kataloški#: ab136955).

[0140] Za testove PKC kinazne aktivnosti, korišćeni zreli primarni humani adipociti spremni za upotrebu koji potiču iz omentalnog adipoznog tkiva kupljeni su od Zenbio bilo u formatu sa 96 bazenčića ili sa 6 bazenčića (Kataloški #: OA-1096-3 ili OA-1006-3). Komplet za testiranje PKC kinazne aktivnosti (Kataloški #: 139437) i procedure korišćeni su prema protokolu proizvođača.

In vivo ispitivanja miševa

[0141] Za gojazni mišji model sa miševima koji imaju očiti dijabetes tipa 2, BKS (D)-Leprdb/J, Leglo br.: 010803 |kupljeni su od Jax Labs. Bbs10 nokaut miševe generisao je Institute Mouse Clinic (ICS) u Strazburu i oni su prethodno opisani u literaturi. Svi miševi bili su na C57/BL6 genetičkoj pozadini. Sve životinje su smeštene u objekat sa kontrolisanom temperaturom i vlažnošću, uz ciklus od 12 h svetlosti/12 h mraka. BKS (D)-Leprdb/J miševi bili su na standardnoj ishrani (LM-485; Harlan Teklad Premier Laboratory Diets), dok su Bbs nokaut miševi bili na ishrani bogatom mastima/glukozom i vodi iz vodovoda ad libitum. Za ipGTT i ipITT, miševi su gladovali tokom 6 sati pre početka eksperimenta. Insulin 0,75U/kg je ubrizgan i.v. preko repne vene. Glukoza u krvi i uzorci uzeti su iz repa. Miševi su žrtvovani cervikalnom dislokacijom.

[0142] Za ispitivanje negojaznog STAM mišjeg modela, C57BL/6 miševa (14 dana trudne ženke) dobijene su od Japan SLC, Inc. (Japan). Sve životinje korišćene u ispitivanju smeštene su i negovane u skladu sa Smernicama Japanskog farmakološkog društva za ispitivanje na životinjama. Životinje su držane u SPF objektu u kontrolisanim uslovima temperature (23 ± 2°C), vlažnosti (45 ± 10%), osvetljenja (veštački ciklusi svetlosti i mraka od 12 sati; svetlo od 8:00 do 20:00) i razmene vazduha. Životinje su smeštene u TPX kaveze (CLEA Japan) uz minimalno 3 miša po kavezu. Sterilizovani čisti papir (Japan SLC) korišćen je kao posteljina i menjan jednom nedeljno. Sterilizovani čvrsti 60% HFD obezbeđen je ad libitum, pri čemu je postavljen u metalni poklopac na vrhu kaveza. Čista voda obezbeđena je ad libitum iz flaše vode opremljene gumenim zatvaračem i sisaljkom. Flaše vode menjane su jednom nedeljno, čišćene pa sterilisane u autoklavu i ponovno korišćene.

[0143] Miševi su identifikovani pomoću oznake na uhu. Svaki kavez obeležen je posebnim identifikacionim kodom. NASH je izazvan kod 12 mužjaka miševa jednom potkožnom injekcijom od 200 µg rastvora streptozotocina (STZ, Sigma-Aldrich, SAD) 2 dana nakon rođenja i hranjenja ishranom bogatom mastima (HFD, 57 kcal% mast, Kat# HFD32, CLEA Japan, Inc., Japan) posle 4 nedelje starosti.

Režim doziranja peptida za BKS (D)-Leprdb/J, Leglo br.: 010803 i Bbs10 nokaut miševe

[0144] Na dan 0: svi miševi su gladovali tokom 4 sata ujutru. U 1:00 posle podne, kontrolni miševi su primili jednu injekciju od (telesna težina u gramima) x 10 mililitara 22% rastvora glukoze (injekcija u retroperitonealnu mast/pod kožu). Tretiranim miševima ubrizgano je 25 ug (2,5uL matičnog rastvora) ispitivanog peptida rastvorenog u (telesna težina u gramima) x 1022% rastvora glukoze. Nivoi glukoze u krvi mereni su iz krvi repne vene u intervalima na svakih 30 minuta i ucrtavani kako bi se utvrdio efekat različitih tretiranja na oblast ispod krive.

Režim doziranja peptida za STAM mišji model.

[0145] Ispitivani peptid bio je ADPIF/PATAS peptid kao što je gore opisani.

Način davanja leka

[0146] Peptid je davan potkožno u adipozno tkivo u zapremini od 100 mL po mišu.

Dizajn eksperimenta i tretiranje

Ispitivane grupe

Grupa 1: ADPIF/PATAS peptid

[0147] Šestoroma NASH miševima potkožno je davan nosilac dopunjen ADPIF/PATAS peptidom u adipozno tkivo pri dozi od 25 mg po mišu jednom nedeljno od 4 do 9 nedelja starosti.

Grupa 2: Nosilac

[0148] Šestoroma NASH miševima potkožno je davan nosilac [DMSO u fiziološkom rastvoru] u adipozno tkivo u zapremini od 100 mL po mišu jednom nedeljno od 4 do 9 nedelja starosti.

[0149] Tabela u nastavku rezimira režim tretiranja:

Nivoi ekspresije FATP-a

[0150] Ukupan RNK pripremljen je iz različitih tkiva i ćelija pomoću RiboPure<™>kompleta (Kataloški #: AM1924; Ambion) nakon čega je usledilo DNKzno tretiranje TURBO DNA-free<™>-om (Kataloški #: AM 1907; Ambion). Integritet RNK procenjen je pomoću gel elektroforeze, a koncentracija RNK pomoću Eppendorf Biophotometer Plus-a sa Hellma<®>Tray Cell-om (Kataloški #: 105.810-uvs; Hellma). Reverzna transkripcija 1 µg ukupne RNK do cDNK izvedena je pomoću BioRadiScript<™>kompleta za sintezu cDNK (Kataloški #: 170-8891; BioRad). Amplifikacija kvantitativne reakcije lančane polimeraze u realnom vremenu izvedena je u BioRad CFX96 TM Sistemu u realnom vremenu pomoću iQ<™>SYBR<®>Zelenog supermiksa (Kataloški #: 170-8886; BioRAd) i setova prajmera optimizovanih za ispitivane ciljeve za PCR u realnom vremenu koji je zasnovan na SYBR zelenom za PRC u realnom vremenu. Za humane prajmere, svi korišćeni qPCR prajmeri kupljeni su od Biorad validiranih MIQE setova prajmera.

Claims

Merenje biohemije plazme Uzimanje uzoraka [0151] Uzorci plazme uzeti su i skladišteni na -80°C radi analize. Plazma iz tih miševa korišćena je potom za merenje nivoa glikovanog albumina pomoću komercijalno dostupnog LS Bio: ELISA kompleta za mišji glikovani albumin (Sendvič ELISA) - LS-F28697 u Strazburu. Statistički testovi [0152] Statističke analize izvedene su pomoću Studentovog t-testa na GraphPad Prism 6 (GraphPad Software Inc., SAD). P vrednosti <0,05 smatraju se statistički značajnim. Kada jednosmerni t-test vrati P vrednosti <0,1, pretpostavlja se težnja ili tendencija. Rezultati su izraženi kao srednja vrednost ± SD. Patentni zahtevi 1. Peptid za upotrebu u lečenju dijabetesa i povezanih poremećaja odabranih iz grupe koju čine dijabetes tipa I, dijabetes tipa II, insulinska rezistencija, dijabetesna retinopatija, dijabetesna neuropatija, dijabetesna nefropatija, hiperglikemija, gojaznost, hiperinsulinemija i Barde-Bidlov sindrom, pri čemu - peptid može da smanji ekspresiju FATP2 u adipoznom tkivu; - peptid ne obuhvata istovremeno jedan metionin, jedan prolin i jedan arginin; - peptid usvaja sekundarnu strukturu koja predstavlja spiralu, poželjno alfa-spiralu; i - peptid obuhvata najmanje 5 uzastopnih ostataka kinaznog domena αPKC-a (alfa proteinske kinaze C); - dužina peptida iznosi od 5 do 60 aminokiselina i - peptidna sekvenca može obuhvatati od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija unutar pomenute sekvence segmenta kinaznog domena PKC-a.
2. Peptid za upotrebu prema zahtevu 1, pri čemu je taj peptid modifikovan hemijskim umrežavanjem.
3. Peptid za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, pri čemu dužina tog peptida iznosi najmanje 5 aminokiselina i manje od 40 aminokiselina, poželjno iznosi najmanje 5 aminokiselina i manje od 30 aminokiselina, poželjnije najmanje 5 aminokiselina i manje od 25 aminokiselina.
4. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 3, pri čemu taj peptid može da smanji ili spreči interakciju između ALMS 1 i αPKC-a.
5. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-4, pri čemu peptidna sekvenca obuhvata jednu od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4) koja opciono obuhvata od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12) koja opciono obuhvata od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) ili njihova kombinacija; LDN; SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWWAYGVLLYEXLA (SEQ ID NO: 13) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVXWWAYGLLYEMLA (SEQ ID NO: 52) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GERDVRE (SEQ ID NO: 8) koja opciono obuhvata od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVRE (SEQ ID NO: 15) koja opciono obuhvata od 1 do 3 supstitucije brisanja, dodavanja i njihovu kombinaciju; GERDVXE (SEQ ID NO: 16) koja opciono obuhvata od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; GEXDVXE (SEQ ID NO: 17) koja opciono obuhvata od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e) brisanje(a), dodavanje(a) ili njihova kombinacija; LDN; AFF; PDY; XDY; PEII (SEQ ID NO: 5); XEII (SEQ ID NO: 18); PAK; XAK; gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R.
6. Peptid za upotrebu prema zahtevu 5, pri čemu peptidna sekvenca obuhvata jednu od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; SVDWWAYGVLLYEXLA (SEQ ID NO: 13) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; ili SVXWWAYGLLYEMLA (SEQ ID NO: 52) koja opciono obuhvata od 1 do 5 modifikacija aminokiseline odabranih iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija, gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R.
7. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-4, pri čemu peptidna sekvenca obuhvata jednu od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3); VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9); VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10); VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11); LMYHIQQV (SEQ ID NO: 4); LXYHIQQV (SEQ ID NO: 12); SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6); SVDWWAYGVLLYEXLA (SEQ ID NO: 13); EDEDELFQSIME (SEQ ID NO: 7); EDEDELFQSIXE (SEQ ID NO: 14); GERDVRE (SEQ ID NO: 8); GEXDVRE (SEQ ID NO: 15); GERDVXE (SEQ ID NO: 16); GEXDVXE (SEQ ID NO: 17); gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R. 4
8. Peptid za upotrebu prema zahtevu 7, pri čemu peptidna sekvenca obuhvata jednu od sledećih sekvenci: VECTMVEKRVLA (SEQ ID NO: 3); VECTXVEKRVLA (SEQ ID NO: 9); VECTMVEKXVLA (SEQ ID NO: 10); VECTXVEKXVLA (SEQ ID NO: 11); SVDWWAYGVLLYEMLA (SEQ ID NO: 6); SVDWWAYGVLLYEXLA (SEQ ID NO: 13); ili SVXWWAYGLLYEMLA (SEQ ID NO: 52), gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R.
9. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-4, pri čemu peptidna sekvenca obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od najmanje jedne od sledećih sekvenci: a) VECTXVEKXVLALLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 20) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, koja opciono obuhvata od 1 do 5 ili od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; b) VECTMVEKRVLALLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 21) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, koja opciono obuhvata od 1 do 5 ili od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; c) VECTXVEKRVLALLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 22) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, koja opciono obuhvata od 1 do 5 ili od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; d) VECTMVEKXVLALLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 23) gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, koja opciono obuhvata od 1 do 5 ili od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija; i e) peptid koji obuhvata sekvencu bilo kog segmenta od najmanje 5 do 25 uzastopnih ostataka od bilo koje sekvence a) do d).
10. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-7, pri čemu peptidna sekvenca obuhvata, suštinski se sastoji od ili se sastoji od jedne od sledećih sekvenci: VECTMXEKRVLAX (SEQ ID NO: 24) VECTXXEKRVLAX (SEQ ID NO: 25) VECTMXEKXVLAX (SEQ ID NO: 26) VECTXXEKXVLAX (SEQ ID NO: 27) VECTXXEKXVLAXLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 28) VECTMXEKRVLAXLDKXXFLTQLHS (SEQ ID NO: 29) VECTXXEKRVLAXLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 30) VECTMXEKXVLAXLDKPPFLTQLHS (SEQ ID NO: 31) VECTTXEKEVLAXLDKAAFLTQHS (SEQ ID NO: 53) VECTTXEKEVLAXLDKAAF (SEQ ID NO: 54) VEGTTXEKEVLAXLDKAAF (SEQ ID NO: 55) i ECTTXEKEVLAXL (SEQ ID NO 56) ECTMXEKKVLAXL (SEQ ID NO 57) gde ostaci koji su podebljani i podvučeni X nose spajanje i predstavljaju bilo koji aminokiselinski derivat prikladan za spajanje; i gde X predstavlja bilo koju aminokiselinu osim M, P i R, pri čemu sekvenca opciono ima od 1 do 5 ili od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija.
11. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 5-8, pri čemu X predstavlja aminokiselinu pogodnu za α-spiralnu sekundarnu strukturu ili aminokiselinu odabranu iz grupe koju čine A, D, N, C, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y ili aminokiselinu odabranu iz grupe koju čine A, D, N, G, Q, E, H, L, K, F, S, W i Y.
12. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-11, pri čemu pomenuti PKC predstavlja αPKC sa SEQ ID NO: 1.
13. Peptid za upotrebu prema zahtevu 10, pri čemu prvo podebljano i podvučeno X predstavlja R, a drugo podebljano i podvučeno X predstavlja S i pomenuti R i S nose spajanje.
14. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-13, pri čemu peptidna sekvenca obuhvata VECTTREKEVLASLDKAAFLTQLHS (SEQ ID NO: 32) gde R i S nose spajanje; pri čemu peptid opciono dalje obuhvata od 1 do 5 ili od 1 do 3 modifikacije aminokiseline odabrane iz grupe koju čine supstitucija(e), brisanje(a), dodavanje(a) i njihova kombinacija.
15. Peptid za upotrebu prema zahtevu 13 ili 14, koji obuhvata 2-(7-oktenil)arginin i 2-(4-pentenil)serin.
16. Peptid za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1-15, pri čemu se taj peptid koristi u kombinaciji sa jednim dodatnim aktivnim lekom ili više njih poželjno odabranih iz grupe koju čine antidijabetesni lek, hipolidemijski agens, agens protiv gojaznosti, agens protiv hipertenzije, antisteatozni lek, agens protiv zapaljenja i agonist receptora aktiviranih proliferatorima peroksizoma.