RS66090B1 - Kombinovana terapija sa sorafenibom ili regorafenibom i fosforamidatnim prolekom troksacitabina - Google Patents

Description

Opis

Oblast pronalaska

[0001] Pronalazak se odnosi na kombinovanu terapiju za kancer, i konkretnije, na kombinovanu terapiju sorafenibom-fosforamidatnim prolekom troksacitabina i kombinovanu terapiju regorafenibom-fosforamidatnim prolekom troksacitabina, za kancer jetre i metastaze jetre.

Osnov pronalaska

[0002] Kancer jetre (ili hepatični kancer) je kancer koji nastaje u jetri. Primarni kancer jetre je peti globalno najčešće dijagnostifikovan kancer i drugi najčešći uzrok smrti od kancera. Kanceri jetre su maligni tumori koji rastu na površini ili unutar jetre. Formiraju ili od same jetre ili od struktura unutar jetre, uključujući krvne sudove ili žučni kanal.

[0003] Najčešći uzrok kancera jetre je virusna infekcija virusom hepatitisa B ili virusom hepatitisa C. Kancer se obično formira sekundarno usled ciroze koju izazivaju ovi virusi. Iz tog razloga, najviše stope kancera jetre javljaju se tamo gde su ovi virusi endemični, uključujući istočnu Aziju i podsaharsku Afriku. Kancere jetre ne treba mešati sa metastazama jetre, koje su takođe poznate kao sekundarni kancer jetre, a koje predstavljaju kancer koji nastaje u organima u drugim delovima tela i migrira u jetru.

[0004] Najčešći kancer jetre, koji čini oko 75% svih primarnih kancera jetre, je hepatocelularni karcinom (HCC). HCC je kancer koga formiraju ćelije jetre, poznate kao hepatociti, koji postaju maligni. Drugi tip kancera koga formiraju ćelije jetre je hepatoblastom, koga specifično formiraju nezrele ćelije jetre. Reč je o retkom malignom tumoru koji se prvenstveno razvija kod dece, a čini oko 1% svih kancera kod dece i 79% svih primarnih kancera jetre kod osoba mlađih od 15 godina.

[0005] Kancer jetre takođe može da se formira od drugih struktura unutar jetre, kao što su žučni kanal, krvni sudovi i imune ćelije. Kancer žučnog kanala (holangiokarcinom i holangiocelularni cistadenokarcinom) čini približno 6% primarnih kancera jetre. Postoji i varijanta HCC kancera koji se sastoji i od HCC i od holangiokarcinoma. Tumori krvnih sudova jetre uključuju angiosarkom i hemangioendoteliom. Embrionalni sarkom i fibrosarkom se produkuju od tipa vezivnog tkiva poznatog kao mezenhim. Kanceri koji nastaju od mišića u jetri su lejomiosarkom i rabdomiosarkom. Drugi manje uobičajeni karcinomi jetre uključuju karcinosarkome, teratome, tumore žumančane kese, karcinoidne tumore i limfome. Limfomi obično imaju difuznu infiltraciju u jetru, ali takođe mogu da formiraju masu u jetri u retkim prilikama.

[0006] Hirurška resekcija je često lečenje izbora za necirotičnu jetru. Povećan rizik od komplikacija kao što je otkazivanje jetre može da se javi kod resekcije cirotične jetre. Petogodišnje stope preživljavanja nakon resekcije su se značajno poboljšale tokom poslednjih nekoliko decenija i sada mogu da premaše 50%. Stope recidiva nakon resekcije usled širenja inicijalnog tumora ili formiranja novih tumora premašuju 70%. Transplantacija jetre takođe može da se koristi u slučajevima HCC karcinoma gde ovaj oblik lečenja može da se toleriše i tumor se uklapa u specifične kriterijume (npr. Milanski kriterijumi). Manje od 30-40% osoba sa HCC karcinomom su kandidati za operaciju i transplantaciju, jer se kancer često otkriva u kasnom stadijumu. Takođe, HCC može da napreduje tokom vremena čekanja na transplantaciju jetre, što na kraju može da spreči transplantaciju.

[0007] Perkutana ablacija je jedini nehirurški tretman koji može da dovede do izlečenja. Postoje mnogi oblici perkutane ablacije, koji se sastoje ili od ubrizgavanja hemikalija u jetru (etanol ili sirćetna kiselina) ili od proizvodnje ekstremne temperature pomoću radio frekventne ablacije, mikrotalasa, lasera ili krioterapije. Od toga, radio frekventna ablacija ima jednu od najboljih reputacija kod HCC karcinoma, ali ograničenja uključuju nemogućnost lečenja tumora koji su blizu drugih organa i krvnih sudova zbog toga što dolazi stvaranja toplote i efekta sinhronizacije toplote.

[0008] Sistemski hemioterapeutski lekovi se ne koriste rutinski kod HCC karcinoma, mada lokalna hemioterapija može da se koristi u postupku poznatom kao transarterijska hemoembolizacija (TACE). U ovom postupku se primenjuju citotoksični lekovi kao što su doksorubicin ili cisplatin sa lipidolom, a arterije koje snabdevaju jetru blokiraju se želatinskim sunđerom ili drugim česticama. Budući da većina sistemskih lekova nema efikasnost u lečenju HCC karcinoma, istraživanje molekularnih puteva uključenih u produkovanje kancera jetre proizvelo je sorafenib, lek za ciljanu terapiju koji sprečava proliferaciju ćelija i rast krvnih ćelija u nekim okolnostima. U daljim istraživanjima proizveden je fluoro analog sorafeniba, regorafeniba. Regorafenib je lek za ciljanu terapiju koji je oralni inhibitor receptora tirozin kinaze koji blokira važan put koji promoviše deobu ćelija.

[0009] Radioterapija se ne koristi često kod HCC karcinoma jer jetra nije tolerantna na zračenje. Čak i sa savremenom tehnologijom koja obezbeđuje zračenje koje je dobro usmereno na određene oblasti jetre, kolateralno oštećenje okolnog tkiva jetre je problem, što naglašava potrebu za boljim režimima koji "štede jetru". Dvostruki tretmani radioterapije plus hemoembolizacija, lokalna hemioterapija, sistemska hemioterapija ili lekovi za ciljanu terapiju mogu da pokažu prednost u odnosu na radioterapiju kada se primenjuje sama.

[0010] Sorafenib (prodaje se kao NEXAVAR<®>), je lek odobren od strane FDA za pacijente sa uznapredovalim primarnim kancerom jetre. To je mali molekul koji interaguje sa više intracelularnih kinaza i kinaza na površini ćelija, uključujući Raf/Mek/Erk put. Inhibicijom ovih kinaza, inhibira se genska transkripcija koja uključuje proliferaciju ćelija i angiogenezu, uz zanimljivo zapažanje da hipoksija u čvrstim tumorskim tkivima može da se poveća usled tretmana koji smanjuje dotok krvi u tumor.

[0011] Međutim, čak i sa razvojem lekova kao što je sorafenib, aktuelne opcije za lečenje kancera jetre su nedovoljne zbog njegove ograničene efikasnosti i teške toksičnosti.

[0012] Regorafenib (koji se prodaje kao STIVARGA<®>), je lek odobren od strane FDA za pacijente sa metastatskim kolorektalnim karcinomom kod kojih standardni tretmani nisu funkcionisali, i za pacijente sa uznapredovalim gastrointestinalnim stromalnim tumorima (GIST) koji ne mogu da se uklone hirurški i više nisu responsivni na druge tretmane za ovu bolest odobrene od strane FDA. Regorafenib je takođe pokazao pozitivne rezultate u pogledu vremena do progresije (TTP) i ukupnog preživljavanja (OS) u kliničkom ispitivanju faze II, kao lek druge linije za pacijente sa kancerom jetre kod kojih dolazi do progresije nakon lečenja sorafenibom.

[0013] Troksacitabin, (beta-L-dioksolan citidin) je citotoksični analog dezoksicitidina sa neprirodnom L-konfiguracijom koja je pokazala široku aktivnost protiv, kako čvrstih, tako i hematopoetičkih maligniteta in vitro i in vivo. Konkretno, uočena je upadljiva aktivnost protiv humanih ćelijskih linija kancera i ksenografta poreklom od ćelija jetre, od prostate i bubrega (Cancer Res., 55, 3008-3011, 1995 ). Pokazalo se da tretman troksacitabinom dovodi do mutacije rezistencije kinaze dezoksicitidin kinaze (dCK) koja je normalno odgovorna za prvi korak fosforilacije nukleozida, što dovodi do odsustva ili do veoma niskih nivoa troksacitabin monofosfata.

[0014] Troksacitabin je ušao u fazu III kliničkih ispitivanja 2008. godine u okviru indikacije akutne miologene leukemije, ali nije dospeo do registracije. Prekinuta ispitivanja troksacitabina, faze II, uključuju kancer dojke, kolorektalni kancer, kancer pankreasa, melanom, NSCLC, tumore bubrega, prostate i jajnika. Troksacitabin je generalno primenjivan kao intravenska infuzija, čime su brojna tkiva izložena leku, bez obzira na mesto gde se kancer nalazi. Smatra se da je klinički razvoj troksacitabina napušten.

[0015]U WO200509961: jedinjenje formule (I): (I) njihove soli, njihovi prolekovi, njihovi metaboliti, farmaceutske kompozicije koje sadrže ovo jedinjenje i upotreba ovog jedinjenja i kompozicija za lečenje bolesti posredovanih sa raf, VEGFR, PDGFR, p38 i flt-3.

[0016] WO2016030335 obezbeđuje jedinjenja formule (I), pri čemu: R<1>je OR<11>ili NR<5>R<5'>; R<2>je H ili F; R<5>je H, C1-C6alkil, OH, C(=O)R<6>, O(C=O)R<6>ili O(C=O)OR<6>; R<5'>je H ili C1-C6alkil; R<6>je C1-C6alkil ili C3-C7cikloalkil; R<13>je H, fenil, piridil, benzil, indolil ili naftil, pri čemu je fenil, piridil, indolil i naftil opciono supstituisan sa 1, 2 ili 3 R<22>; i druge promenljive su kao što je definisano u patentnim zahtevima, a koja su od koristi za lečenje kancera, i srodne aspekte.

[0017] Llovet J. M. et al, N Engl J Med 2008; 359:378-390, DOI: 10.1056/NEJMoa0708857 se odnosi na sorafenib kod uznapredovalog hepatocelularnog karcinoma.

[0018] Carlson R. H. , Oncology Times 38(16):p 27, August 25, 2016, DOI: 10.1097/01.COT.0000494623.19371.ce se odnosi na regorafenib kod neoperabilnog kancera jetre.

Kratak opis pronalaska

[0019] Pronalazak se zasniva, najmanje delom, na otkriću da su određene kombinacije sorafeniba i specifičnih fosforamidatnih prolekova troksacitabina posebno efikasne u inhibiciji i sprečavanju proliferacije ćelija kancera jetre. Ovo otkriće može da se opiše kao sinergija, ili efekat veći od aditivnog, koji je specifičan za sorafenib i ove fosforamidatne prolekove troksacitabina, unutar oblasti kancera jetre (npr. HCC). Postavljamo hipotezu da ova korisna interakcija može da se proširi čak i na lečenje metastaza jetre.

[0020] Svako upućivanje u opisu na postupak za lečenje ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu), na upotrebu u lečenju, na terapiju, treba tumačiti kao upućivanje na jedinjenja, farmaceutske kompozicije ili kombinacije prema predmetnom pronalasku, za upotrebu u tom postupku.

[0021] Bez želje da budemo ograničeni teorijom, dalje postavljamo hipotezu da bi neočekivano intenzivna anti-onkogena aktivnost kombinacije sorafeniba i specifičnih fosforamidatnih prolekova troksacitabina mogla dodatno da se poboljša jer bi lokalna hipoksija u tkivima jetre, koju generiše sorafenib pojačala metaboličku aktivaciju proleka troksacitabina do njegovog citotoksičnog trifosfata.

[0022] Dodatni aspekt ponalaska se zasniva, najmanje delom, na otkriću da su određene kombinacije regorafeniba i specifičnih fosforamidatnih prolekova troksacitabina posebno efikasne u inhibiciji i sprečavanju proliferacije ćelija kancera jetre. Ovo otkriće može da se opiše kao sinergija, ili efekat veći od aditivnog, koji je specifičan za regorafenib i ove fosforamidatne prolekove troksacitabina, unutar oblasti kancera jetre (npr. HCC). Postavljamo hipotezu da ova korisna interakcija može da se proširi čak i na lečenje metastaza jetre.

[0023] Bez želje da budemo ograničeni teorijom, dalje postavljamo hipotezu da bi neočekivano intenzivna anti-onkogena aktivnost kombinacije regorafeniba i specifičnih fosforamidatnih prolekova troksacitabina mogla dodatno da se poboljša jer bi lokalna hipoksija u tkivima jetre, koju generiše regorafenib pojačala metaboličku aktivaciju proleka troksacitabina do njegovog citotoksičnog trifosfata.

[0024] Shodno tome, pronalazak pruža kompozicije za upotrebu u lečenju kancera jetre i metastaza jetre, pri čemu se sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina, kako je ovde definisano, primenjuju u kombinaciji kod ljudskih ili sisarskih jedinki.

[0025] Dodatno, pronalazak obezbeđuje kompozicije za upotrebu u lečenju kancera jetre i metastaza jetre, pri čemu se regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina, kako je ovde definisano, primenjuju u kombinaciji kod ljudskih ili sisarskih jedinki.

Sorafenib

[0026] Pronalazak, u različitim aspektima i primerima izvođenja, uključuje upotrebu sorafeniba (tj. sorafenib tozilata, kao i drugih farmaceutski prihvatljivih oblika, soli i estara sorafeniba). Sorafenib je komercijalno dostupan kao NEXAVAR<®>, koji predstavlja tozilatnu so sorafeniba. Sorafenib tozilat ima hemijsko ime 4-(4-{3-[4-hloro-3(trifluorometil)fenil]ureido} fenoksi) N-metilpiridin-2-karboksamid 4- metilbenzensulfonat i njegova strukturna formula je:

[0027] Sorafenib tozilat je bela do žućkasta ili braonkasta čvrsta supstanca sa molekulskom formulom C21H16ClF3N4O3x C7H8O3S i molekulskom težinom od 637,0 g/mol. Sorafenib tozilat je praktično nerastvoran u vodenim medijumima, slabo rastvorljiv u etanolu i rastvorljiv u PEG 400. Sorafenib je takođe opisan u SAD patentima br.7,235,576, 7,897,623 i 8,124,630.

[0028] Doziranje i primena sorafeniba su odobreni za 400 mg (2 tablete) oralno dva puta dnevno bez hrane. Međutim, prekid lečenja i/ili smanjenje doze mogu da budu neophodni kako bi se rešio problem kada postoji sumnja na neželjene reakcije na lek. U takvim slučajevima, doza može da se smanji na 400 mg jednom dnevno ili na 400 mg svaki drugi dan (videti, npr. FDA oznaku za NEXAVAR<®>tablete, oralne, Inicijalno SAD odobrenje: 2005). Prosečan stručnjak u oblasti razume da doziranje i primena sorafeniba mogu da prate medicinski odobrene smernice, kao i medicinski prihvaćena odstupanja ili izmene ovih smernica. Dalji opis i detalji o doziranju i primeni sorafeniba dati su u odeljku Kombinovana hemioterapija u nastavku teksta.

[0029] Ovaj pronalazak takođe uključuje jedinjenja gde je jedan ili više atoma zamenjeno izotopom tog/tih atoma, tj. atomom koji ima isti atomski broj ali atomsku masu različitu od one(ih) koja se obično nalazi u prirodi. Primeri izotopa koji mogu da budu inkorporirani u jedinjenja prema pronalasku uključuju, ali nisu ograničeni na, izotope vodonika, kao što su<2>H i<3>H (takođe obeleženi i kao D za deuterijum i T za tricijum, redom), ugljenika, kao što su<11>C,<13>C i<14>C, azota, kao što su<13>N i<15>N, kiseonika, kao što su<15>O,<17>O i<18>O, fosfora, kao što su<31>P i<32>P, fluora, kao što je<18>F, hlora, kao što je<36>Cl i broma, kao što su<75>Br,<76>Br,<77>Br i<82>Br. Izotopski obeležena jedinjenja obuhvataju, na primer, ona u kojima su prisutni radioaktivni izotopi, kao što su<3>H i<14>C, ili ona u kojima su prisutni neradioaktivni izotopi, kao što su<2>H i<13>C.

[0030] Izbor izotopa uključenog u jedinjenje koje sadrži izotop zavisiće od specifične primene tog jedinjenja. Na primer, u principu će biti najkorisniji za testove distribucije leka ili supstrata u tkivima ili u metaboličkim studijama jedinjenja u koja je inkoroporiran radioaktivni izotop kao što je<3>H ili<14>C. Za primene snimanja pomoću radioizotopa, na primer pozitronske emisione tomografije (PET) biće od koristi izotop koji emituje pozitron, kao što je<11>C,<18>F,<13>N ili<15>O. Ugradnja težeg izotopa, kao što je deuterijum, tj.<2>H, može da obezbedi određene terapeutske prednosti koje proizilaze iz veće metaboličke stabilnosti jedinjenja pronalaska, što može da dovede do, na primer, povećanog in vivo poluživota jedinjenja, smanjenih potreba za doziranjem ili poboljšanja terapijskog indeksa.

[0031] Izotopski obeležena jedinjenja formule I ili bilo koje podgrupe formule I mogu se pripremiti konvencionalnim tehnikama koje su poznate stručnjacima u oblasti, ili procesima koji su analogni procesima opisanim u šemama i/ili primerima u ovom tekstu, koristeći odgovarajuće izotopski obeležene reagense ili polazni materijal umesto odgovarajućeg neizotopski obeleženog reagensa ili polaznog materijala.

[0032] U jednom primeru izvođenja, pronalazak uključuje deuterisanu omega difenilureu ili njene soli, i konkretnije, donafenib, 4-(4-(3-(4-hloro-3-(trifluorometil)fenil)ureido)fenoksi)-N-1',1',1'-trideuterometilpikolinamid ili njegove soli, tj. jedinjenje koje ima strukturnu formulu:

[0033] Donafenib i njegova sinteza su detaljno opisani u npr. WO2011/113367 i WO2014/012480.

Regorafenib

[0034] Pronalazak, u različitim aspektima i primerima izvođenja, uključuje upotrebu regorafeniba (tj. regorafenib tozilata, kao i drugih farmaceutski prihvatljivih oblika, soli i estara regorafeniba). Regorafenib je komercijalno dostupan kao STIVARGA<®>, što je monohidrat regorafeniba. Regorafenib monohidrat ima hemijski naziv 4-[4-({[4-hloro-3-(trifluorometil) fenil] karbamoil} amino)-3-fluorofenoksi]-N-metilpiridin-2-karboksamid monohidrat i njegova strukturna formula je:

[0035] Regorafenib monohidrat je čvrsta supstanca sa molekulskom formulom C21H15ClF4N4O3x H2O i molekulskom težinom od 500,83 g/mol. Regorafenib monohidrat je praktično nerastvoran u vodenim medijumima, slabo rastvorljiv u acetonitrilu, metanolu, etanolu i etil acetatu i slabo rastvorljiv u acetonu. Regorafenib je takođe opisan, između ostalog, u WO2004/113274, WO2005/000284 i WO2005009961.

Fosforamidatni prolekovi troksacitabina za koje se traži zaštita

[0036] U pronalasku se traži zaštita za fosforamidatni prolek troksacitabina sa formulom:

pri čemu

a) X je H, Y je 2-propilpentil i Z je H;

b) X je H, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H;

c) X je Br, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H;

d) X je H, Y je (R)-sek-butil i Z je H;

e) X je H, Y je 2-etilbutil i Z je H;

f) X je ciklopropil, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H; ili

g) X je t-butil, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H

ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u kombinaciji sa ciljanim terapeutskim agensom koji je izabran od sorafeniba i regorafeniba, u lečenju kancera jetre ili metastaza jetre.

[0037] U nekim primerima izvođenja fosforamidatni prolek troksacitabina ima stereohemiju:

gde su X, Y i Z definisani prethodno u tekstu.

[0038] U alternativnim primerima izvođenja fosforamidatni prolek troksacitabina ima stereohemiju:

gde su X, Y i Z definisani prethodno u tekstu.

[0039] U nekim primerima izvođenja fosforamidatni prolek troksacitabina je izabran od jedinjenja prikazanih u nastavku teksta:

[0040] U tipičnom primeru izvođenja fosforamidatni prolek troksacitabina je izabran od jedinjenja prikazanih u nastavku teksta:

[0041] Metodologija sinteze fosforamidatnog proleka troksacitabina je opsežno opisana i primeri su dati u PCT/EP2015/069370.

Kancer jetre

[0042] Pronalazak je, u različitim aspektima i primerima izvođenja, primenljiv na prethodno u tekstu definisanu upotrebu fosforamiditnog proleka troksacitabina u lečenju kancera jetre kod subjekta. koji može da bude primat, kao što je čovek. Subjekat može da bude sisar, kao što je sisar koji nije miš. Subjekt može da bude odrastao čovek (tj. 18 godina ili stariji), ili nezreo čovek (tj. star manje od 18 godina).

[0043] U različitim primerima izvođenja, kancer jetre (npr. HCC) nije rezistantan na sorafenib. Alternativno, kancer jetre (npr. HCC) može da ima primarnu ili sekundarnu rezistenciju na sorafenib. Subjekt može da pokazuje odgovor na sorafenib u odsustvu fosforamidatnog proleka troksacitabina. Subjekt može da ne pokazuje odgovor na sorafenib u odsustvu fosforamidatnog proleka troksacitabina. U nekim primerima izvođenja, subjekat je prethodno bio podvrgnut tretmanu sorafenibom u trajanju od najmanje 2, 4, 6, 8, 10 meseci ili duže. U drugim primerima izvođenja, subjekti su pacijenti koji su doživeli jedan ili više značajnih neželjenih efekata na sorafenib i stoga im je neophodno smanjenje doze.

[0044] U različitim primerima izvođenja, kancer jetre (npr. HCC) nije rezistentan na regorafenib. Alternativno, kancer jetre (npr. HCC) može da ima primarnu ili sekundarnu rezistenciju na regorafenib. Subjekat može da pokazuje odgovor na regorafenib u odsustvu fosforamidatnog proleka troksacitabina. Subjekat može da ne pokazuje odgovor na regorafenib u odsustvu fosforamidatnog proleka troksacitabina. U nekim primerima izvođenja, subjekat je prethodno bio podvrgnut tretmanu regorafenibom u trajanju od najmanje 2, 4, 6, 8, 10 meseci ili duže. U drugim primerima izvođenja, subjekti su pacijenti koji su doživeli jedan ili više značajnih neželjenih efekata regorafeniba i stoga im je neophodno smanjenje doze.

[0045] U različitim primerima izvođenja, kancer jetre (npr. HCC) je u intermedijarnom, uznapredovalom ili terminalnom stadijumu. Kancer jetre (npr. HCC) može da bude metastatski ili nemetastatski. Kancer jetre (npr. HCC) može da bude operabilan ili neoperabilan. Kancer jetre (npr. HCC) može da sadrži jedan tumor, više tumora ili slabo definisani tumor sa infiltracionim obrascem rasta (u vene porte ili hepatične vene). Kancer jetre (npr. HCC) može da sadrži fibrolamelarni, pseudoglandularni (adenoidni), plejomorfni (džinovske ćelije) ili jasnoćelijski obrazac. Kancer jetre (npr. HCC) može da sadrži dobro diferenciranu formu, i tumorske ćelije liče na hepatocite, formiraju trabekule, trake i gnezda, i/ili sadrže žučni pigment u citoplazmi. Karcinom jetre (npr. HCC) može da sadrži slabo diferenciranu formu, i maligne epitelne ćelije su diskohezivne, plejomorfne, anaplastične i/ili džinovske. U nekim primerima izvođenja, kancer jetre (npr. HCC) je povezan sa hepatitisom B, hepatitisom C, cirozom ili dijabetesom tipa 2.

[0046] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji ima status učinka Istočne kooperativne grupe za onkologiju (ECOG) < 2.

[0047] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek sa prihvatljivom funkcijom jetre definisanom kao (i) ukupni bilirubin < 1,5 puta veći od gornje granice normale (ULN); za pacijente koji imaju samo hepatocelularni karcinom, ukupni bilirubin < 3 mg/dL (tj., Child-Pugh skor za bilirubin nije veći od 2); (ii) aspartat aminotransferaza (AST), alanin aminotransferaza (ALT) i alkalna fosfataza (ALP) < 5 x ULN; ili (iii) prihvatljiva bubrežna funkcija: serumski kreatinin < 1,5 puta ULN, ili izračunati klirens kreatinina > 60 m / min > 6L/min/min/1,73 m<2>m za pacijente sa nivoom kreatinina iznad 1,5 puta preko institucionalne normale.

[0048] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek sa prihvatljivim hematološkim statusom definisanim kao (i) apsolutni broj neutrofila (ANC) > 1500 ćelija/mm<3>, (ii) broj trombocita > 100000 jama/mm<3>(bez transfuzije); > 75000 jama/mm<3>za pacijente koji imaju samo hepatocelularni karcinom; ili (iii) hemoglobin > 9 g/dL.

[0049] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek sa protrombinskim vremenom (PT) ili međunarodnim normalizovanim odnosom (INR) < 1,25 × ULN; INR <1,7 ili protrombinsko vreme (PT) ili < 4 sekunde iznad ULN (tj., Child-Pugh skor nije veći od 1 za parametar koagulacije); ili serumski albumin > 2,8 g/dL (tj. Child-Pugh skor za albumin nije veći od 2).

[0050] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji ima protrombinsku bolest Child-Pugh klase A (skor 5-6). Skor za hepatičnu encefalopatiju mora da bude 1; skor za ascites ne sme da bude veći od 2 i klinički irelevantan; za određivanje Child-Pugh klase.

[0051] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji nema srčanu bolest klase III ili IV prema Njujorškoj asocijaciji za srce (NIHA), infarkt miokarda u poslednjih 6 meseci, nestabilnu i/ili simptomatsku aritmiju ili dokaze o ishemiji na EKG nalazu.

[0052] U nekim primerima izvođenja, subjekat nema aktivnu, nekontrolisanu bakterijsku, virusnu ili gljivičnu infekciju koja zahteva sistemsku terapiju.

[0053] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji nije trudnica ili dojilja.

[0054] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji nema poznatu infekciju virusom humane imunodeficijencije (HIV).

[0055] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji nema ozbiljnu nemalignu bolest (npr. hidronefrozu, otkazivanje jetre ili druga stanja) koja bi mogla da ugrozi terapiju.

[0056] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji nema noviju istoriju krvarenja i pacijenti sa predispozicijom za krvarenje usled koagulopatija ili strukturnih anomalija.

[0057] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek kome nije potrebno lečenje terapijskim dozama antikoagulansa tipa kumarina.

[0058] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji nema cirozu klasifikovanu kao Child-Pugh B ili C.

[0059] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek pri čemu subjekat ima alfafetoprotein (AFP) > 10, 50, 100, 200, 300, 400 ili 500 ng/mL.

[0060] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek pri čemu subjekat ima povišen (>10%) nivo AFP-L3.

[0061] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji ima des-gama-karboksi (abnormalni) protrombin (DCP) > 5, 7,5, 10, 25, 50, 75 ili 100 ng/mL.

[0062] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji ima abnormalni nivo receptora za epidermalni faktor rasta (EGFR) (erbB-1), c-erb-2 (Her-2/neu), c-erb-3 (HER-3), c- erb-4 (HER-4), ili njihovu kombinaciju. [00100] U nekim primerima izvođenja, subjekat je čovek koji ima abnormalni nivo alfa-fetoproteina (AFP); glipikana-3 (GPC3); des-gama-karboksi (abnormalnog) protrombina (DCP); serumske gama-glutamil transferaze (GGT); alfa-I-fukozidaze (AFU); humane karbonil reduktaza 2; Goldži fosfoproteina 2 (GOLPH2); transformišućeg faktora rasta-beta (TGF-beta); tumor-specifičnog faktora rasta (TSGF); faktora rasta hepatocita/faktora rasipanja (HGF/SF); osnovnog faktora rasta fibroblasta; iRNK za alfa-fetoprotein (AFP iRNK); iRNK za gama-glutamil transferazu (GGT iRNA); iRNK za insulinu sličan faktor rasta II (IGF-II); iRNK za albumin; DK 1; Goldži proteina 73 (GP73); proteina indukovanog odsustvom vitamina K ili antagonistom II (PIVKA-II); miR-122, miR-192, miR-21, miR-223, miR-26a, miR-27a i miR-801, ili njihove kombinacije.

[0063] U različitim primerima izvođenja, bilo koji od aspekata i primera izvođenja može da se kombinuje sa bilo kojom jednom ili više od sledećih karakteristika. Na primer:

U nekim primerima izvođenja, kancer jetre je primarni kancer jetre.

[0064] U nekim primerima izvođenja, kancer jetre je hepatocelularni karcinom (HCC).

[0065] U nekim primerima izvođenja, kancer jetre je intrahepatični holangiokarcinom.

[0066] U nekim primerima izvođenja metastaza jetre potiče od kolorektalnog kancera, ali i kancera dojke, kancera jednjaka, kancera pluća, melanoma, kancera pankreasa i kancera želuca.

Kombinovana hemioterapija

[0067] Kako se ovde koristi, termin "primena u kombinaciji" nije ograničen na situaciju u kojoj se i sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina ili regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina istovremeno primenjuju kod čoveka ili sisara u zajedničkoj jedinici za doziranje, kao što je tableta ili oralna suspenzija, mada takve zajedničke jedinice za doziranje mogu da imaju prednosti u pogledu pogodnosti doziranja, komplijanse pacijenta i tačnosti doze.

[0068] Tipičnije sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina ili regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina u odgovarajućim doznim jedinicama, što omogućava lekaru koji prepisuje lek veću slobodu pri kalibrisanju doze. U slučaju sorafeniba, komercijalno dostupni proizvodi trenutno uključuju Nexavar<®>film tablete od 200 mg. U slučaju regorafeniba, komercijalno dostupni proizvodi trenutno uključuju Stivarga<®>film tablete od 40 mg.

[0069] Količina i/ili raspored doziranja sorafeniba mogu da prate klinički odobrene ili eksperimentalne smernice. U različitim primerima izvođenja, doza sorafeniba je 800, 600, 400 ili 200 mg/dan. Doza od 200 mg/dan može da se primenjuje kao doza od 400 mg svakog drugog dana. Pojedinci sa malom telesnom težinom kao što su juvenilne i starije individue generalno će dobijati doze u vidu delova tableta.

[0070] Količina i/ili raspored doziranja regorafeniba mogu da prate klinički odobrene ili eksperimentalne smernice. U različitim primerima izvođenja, doza regorafeniba je 640, 480, 320 ili 160 mg/dan. Doza od 160 mg/dan može da se primenjuje kao doza od 320 mg svakog drugog dana. Pojedinci sa malom telesnom težinom kao što su juvenilne i starije individue generalno će dobijati doze u vidu delova tableta.

[0071] Fosforamidatni prolek troksacitabina u principu se primenjuje oralno, najčešće u obliku jedne ili nekoliko tableta ili kapsula, od kojih svaka sadrži između 10 mg do 600 mg aktivnog farmaceutskog sastojka. Reprezentativne tablete ili kapsule mogu da sadrže između 25 mg i 500 mg, ili između 50 mg i 450 mg, ili između 100 mg i 400 mg, recimo između 150 mg i 400 mg, između 200 mg i 500 mg ili između 250 mg i 500 mg.

[0072] U različitim primerima izvođenja fosforamidatni prolek troksacitabina se primenjuje kod subjekta u 1, 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 dnevnih doza tokom jedne nedelje (7 dana). Fosforamidatni prolek troksacitabina može da se primenjuje kod subjekta u 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13 ili 14 dnevnih doza tokom 14 dana. Fosforamidatni prolek troksacitabina može da se primenjuje kod subjekta u 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ili u 21 dnevnoj dozi tokom 21 dana. Fosforamidatni prolek troksacitabina može da se primenjuje kod subjekta u 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27 ili 28 dnevnih doza tokom 28 dana.

[0073] U različitim primerima izvođenja fosforamidatni prolek troksacitabina se primenjuje tokom: 2 nedelje (ukupno 14 dana); 1 nedelje sa 1 nedeljom prekida (ukupno 14 dana); 3 uzastopne nedelje (ukupno 21 dan); 2 nedelje sa 1 nedeljom prekida (ukupno 21 dan); 1 nedelje sa 2 nedelje prekida (ukupno 21 dan); 4 uzastopne nedelje (ukupno 28 dana); 3 uzastopne nedelje sa 1 nedeljom prekida (ukupno 28 dana); 2 nedelje sa 2 nedelje prekida (ukupno 28 dana); 1 nedelje sa 3 uzastopne nedelje prekida (ukupno 28 dana).

[0074] U raznim primerima izvođenja fosforamidatni prolek troksacitabina se primenjuje 1. dana ciklusa od 7,14, 21 ili 28 dana; primenjuje se 1. i 15. dana ciklusa od 21 ili 28 dana; primenjuje se 1, 8. i 15. dana ciklusa od 21 ili 28 dana; ili se primenjuje 1, 2, 8. i 15. dana ciklusa od 21 ili 28 dana. Fosforamidatni prolek troksacitabina može da se primenjuje jednom u 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 nedelja.

[0075] Sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina mogu da se primenjuju u osnovi istovremeno, kao zajednička jedinica za doziranje ili respektivna jedinica za doziranje, ili primena u kombinaciji može da se odvija postepeno ili naizmenično, to jest sa odvojenim ciklusima za sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina. Na primer, u serijske cikluse ukojima se po nedelju dana svakodnevno primenjuje sorafenib, mogu da budu ubačeni ciklusi u kojima se po jedan, dva, tri, pet ili sedam dana svakodnevno primenjuje fosforamidatni prolek troksacitabina.

[0076] Alternativno, može da se započne sa jačom dozom jednog agensa, na primer komponente sorafeniba, da bi se, na primer, izgradila lokalna hipoksija u jetri, nakon čega sledi početak kodoziranja sa fosforamidatnim prolekom troksacitabina.

[0077] Može da bude pogodno da se kombinovana primena po stepenima prati imajući u vidu ciljni odnos između sorafeniba i fosforamidatnog proleka troksacitabina. U različitim primerima izvođenja, odnos (npr. molarni odnos sorafenib: fosforamidatni prolek troksacitabina) je između 20:1 i 1:20, kao što je 5:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:5 ili 1:10.

[0078] Molarni odnos sorafenib: fosforamidatni prolek troksacitabina može da se meri tokom različitih vremenskih perioda. Na primer, molarni odnos može da bude količina sorafeniba: fosforamidatni prolek troksacitabina koji se primenjuje kod subjekta u jednom danu, jednoj nedelji, 14 dana, 21 dan ili 28 dana.

[0079] Prema nekim primerima izvođenja, i sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina se primenjuju svakodnevno (kao QB, BID ili TID) istog dana.

[0080] U takvom primeru izvođenja sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina mogu istovremeno da se isporuče u zajedničkoj, oralno primenjenoj jedinici za doziranje, kao što je kapsula, meka gel-kapsula ili tableta

[0081] U drugim primerima izvođenja sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina se primenjuju kao zasebne, oralno primenjene jedinice za doziranje.

[0082] U reprezentativnom primeru izvođenja iz prethodno navedenog paragrafa, jedinica(e) za doziranje sorafeniba i jedinica(e) za doziranje fosforamidatnog proleka troksacitabina primenjuju se u razmaku od najmanje 6 sati bilo kog dana, poželjno najmanje 8 sati i obično u razmaku od oko 12 sati, radi komfora pacijenta.

[0083] U nekim primerima izvođenja sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina se naizmenično primenjuju u monoterapijskim ciklusima lečenja od 1-28 dana, u koje se opciono ubacuju periodi bez lečenja od 1-28 dana.

[0084] Kao što se ovde koristi "monoterapija" sorafenibom ili fosforamidatnim prolekom troksacitabina znači da se sorafenib ne primenjuje tokom ciklusa fosforamidatnog proleka troksacitabina i obrnuto. Monoterapija ne isključuje istovremenu primenu drugih terapeutskih lekova (uključujući druge antikancerske agense ili palijative), a sve onako kako je prepisao nadležni lekara.

[0085] Regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina mogu da se primenjuju u osnovi istovremeno, kao zajednička jedinica za doziranje ili respektivna jedinica za doziranje, ili primena u kombinaciji može da se odvija u koracima ili naizmenično, to jest sa odvojenim ciklusima za sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina. Na primer, u serijske cikluse u kojima se po nedelju dana svakodnevno primenjuje regorafenib, mogu da budu ubačeni ciklusi u kojima se po jedan, dva, tri, pet ili sedam dana svakodnevno primenjuje fosforamidatni prolek troksacitabina.

[0086] Alternativno, može da se započne sa jačom dozom jednog agensa, na primer komponente regorafeniba, da bi se, na primer, izgradila lokalna hipoksija u jetri, nakon čega sledi početak kodoziranja sa fosforamidatnim prolekom troksacitabina.

[0087] Može da bude pogodno da se kombinovana primena u koracima prati imajući u vidu ciljni odnos između regorafeniba i fosforamidatnog proleka troksacitabina. U različitim primerima izvođenja, odnos (npr. molarni odnos regorafenib: fosforamidatni prolek troksacitabina) je između 20:1 i 1:20, kao što je 5:1, 2:1, 1:1, 1:2, 1:5 ili 1:10.

[0088] Molarni odnos regorafenib: fosforamidatni prolek troksacitabina može da se meri tokom različitih vremenskih perioda. Na primer, molarni odnos može da bude količina regorafenib: fosforamidatni prolek troksacitabina koji se primenjuje kod subjekta u jednom danu, jednoj nedelji, 14 dana, 21 dan ili 28 dana.

[0089] Prema nekim primerima izvođenja, i regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina se primenjuju svakodnevno (kao QB, BID ili TID) istog dana.

[0090] U takvom primeru izvođenja regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina mogu istovremeno da se isporuče u zajedničkoj, oralno primenjenoj jedinici za doziranje, kao što je kapsula, meka gel-kapsula ili tableta

[0091] U drugim primerima izvođenja regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina se primenjuju kao zasebne, oralno primenjene jedinice za doziranje.

[0092] U reprezentativnom primeru izvođenja iz prethodno navedenog paragrafa, jedinica(e) za doziranje regorafeniba i jedinica(e) za doziranje fosforamidatnog proleka troksacitabina primenjuju se u razmaku od najmanje 6 sati bilo kog dana, poželjno najmanje 8 sati i obično u razmaku od oko 12 sati, radi komfora pacijenta.

[0093] U nekim primerima izvođenja regorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina se naizmenično primenjuju u monoterapijskim ciklusima lečenja od 1-28 dana, u koje se opciono ubacuju periodi bez lečenja od 1-28 dana.

[0094] Kao što se ovde koristi "monoterapija" regorafenibom ili fosforamidatnim prolekom troksacitabina znači da se regorafenib ne primenjuje tokom ciklusa fosforamidatnog proleka troksacitabina i obrnuto. Monoterapija ne isključuje istovremenu primenu drugih terapeutskih lekova (uključujući druge antikancerske agense ili palijative), a sve onako kako je prepisao nadležni lekar.

[0095] Kako se ovde koristi za opisivanje opsega, npr. odnosa, doza, vremena i slično, termin "oko" obuhvata varijacije koje se nalaze unutar relevantne margine greške, koje su u suštini iste (npr. unutar intervala poverenja prihvaćenog u stanju tehnike kao što je 95% za fenomene koji prate normalnu ili Gausovu raspodelu), ili na drugi način ne menjaju materijalno efekat stvari koja se kvantifikuje.

[0096] Tok terapije sorafenibom-fosforamidatnim prolekom troksacitabina ili regorafenibomfosforamidatnim prolekom troksacitabina može da prepiše lekar. Fosforamidatni prolek troksacitabina (a samim tim i kombinovana terapija) može da se primenjuje tokom 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 ili 12 ciklusa.

[0097] Tok terapije sorafenibom-fosforamidatnim prolekom troksacitabina ili regorafenibomfosforamidatnim prolekom troksacitabina može da se nastaviti dok se ne postigne klinička krajnja tačka. U nekim primerima izvođenja terapija se nastavlja sve dok ne dođe do progresije bolesti ili pojave neprihvatljive toksičnosti. U nekim primerima izvođenja terapija se nastavlja sve dok se ne postigne stopa patološkog kompletnog odgovora (pCR) koja je definisana kao odsustvo kancera jetre (npr. HCC). U nekim primerima izvođenja terapija se nastavlja sve do delimične ili potpune remisije kancera jetre. Primena fosforamidatnog proleka troksacitabina i regorafeniba na veliki broj subjekata koji imaju HCC povećava ukupno preživljavanje (OS), preživljavanje bez progresije (PFS), preživljavanje bez bolesti (DFS), stopu odgovora (RR), kvalitet života (QoL) ili njihovu kombinaciju.

[0098] U različitim primerima izvođenja, tretman smanjuje veličinu i/ili broj kanceroznog(ih) tumora(a) jetre. Tretman može da spreči povećanje veličine i/ili broja kanceroznog(ih) tumora(a) jetre. Tretman može da spreči metastaziranje kanceroznog(ih) tumora(a) jetre.

[0099] U postupcima pronalaska, primena nije ograničena na bilo koji poseban sistem isporuke i može da uključuje, bez ograničenja, parenteralni (uključujući subkutanu, intravensku, intramedularnu, intraartikularnu, intramuskularnu ili intraperitonealnu injekciju), rektalni, topikalni, transdermalni ili poželjno oralni (na primer, u kapsulama, suspenzijama ili tabletama).

[0100] Primena kod pojedinca može da se odvija u jednoj dozi ili u ponovljenim primenama, i u bilo kom od niza različitih fiziološki prihvatljivih oblika soli, i/ili sa prihvatljivim farmaceutskim nosačem i/ili aditivom kao delom farmaceutske kompozicije.

[0101] Fiziološki prihvatljivi oblici soli i standardne tehnike farmaceutskog formulisanja, doze i ekscipijensi, dobro su poznati stručnjacima u oblasti (videti, npr. Physicians' Desk Reference (PDR®) 2005, 59th ed., Medical Economics Company, 2004; i Remington: The Science and Practice of Pharmacy, eds. Gennado et al. 21th ed., Lippincott, Williams & Wilkins, 2005).

[0102] Dodatno, efektivne doze postignute kod jedne životinje mogu da se ekstrapoliraju za upotrebu kod druge životinje, uključujući i ljude, koristeći faktore konverzije poznate u stanju tehnike. Pogledati, npr. Freireich et al., Cancer Chemother Reports 50(4):219-244 (1966 ) i tabelu u nastavku teksta za faktore doziranja za ekvivalentne površine).

Faktori doziranja za ekvivalentne površine

[0103]

[0104] Kombinovane terapije nisu specifično ograničene na neki određeni tok ili režim i mogu da se primenjuju odvojeno ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim modalitetima (npr. hemioterapija ili radioterapija).

[0105] Kombinovana terapija može da uključuje dodatne terapije (npr. farmaceutske, radijacione i slične) osim sorafeniba i fosforamidatnog proleka troksacitabina ili regorafeniba i fosforamidatnog proleka troksacitabina. Slično tome, predmetni pronalazak može da se koristi kao adjuvansna terapija (npr. kada se kombinuje sa operacijom). U različitim primerima izvođenja, subjekat se takođe leči hirurškom resekcijom, injekcijom perkutanog etanola ili sirćetne kiseline, transarterijskom hemoembolizacijom, radiofrekventnom ablacijom, laserskom ablacijom, krioablacijom, stereotaktičnom radioterapijom fokusiranog spoljašnjeg zračenja, selektivnom unutrašnjom radijacionom terapijom, intraarterijskom primenom jod- 131-lipiodola i/ili fokusiranim ultrazvukom visokog intenziteta.

[0106] Kombinacija fosforamidatnog proleka troksacitabina i sorafeniba može da se koristi kao adjuvansna, neoadjuvansna, prateća, istovremena ili palijativna terapija. Kombinacija fosforamidatnog proleka troksacitabina i sorafeniba može da se koristi kao terapija prve linije, terapija druge linije ili unakrsna terapija.

[0107] Kombinacija fosforamidatnog proleka troksacitabina i regorafeniba može da se koristi kao adjuvansna, neoadjuvansna, prateća, istovremena ili palijativna terapija. Kombinacija fosforamidatnog proleka troksacitabina i regorafeniba može da se koristi kao terapija prve linije, terapija druge linije ili unakrsna terapija.

[0108] U nekim primerima izvođenja, terapeutski efikasna doza sorafeniba se smanjuje putem kombinovanja sa fosforamidatnim prolekom troksacitabinom. Na primer, nedeljna ili mesečna doza sorafeniba može da se smanji za najmanje 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili više, u odnosu na maksimalnu preporučenu dozu ili maksimalnu tolerisanu dozu. U drugim primerima izvođenja, sorafenib se primenjuje u efektivnoj dozi koja je najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili više niža od doze koja je potrebna da bi bila efikasna u odsustvu primene fosforamidatnog proleka troksacitabina. U nekim primerima izvođenja, IC50sorafeniba se smanjuje najmanje 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50 ili 100 puta u odnosu na IC50u odsustvu fosforamidatnog proleka troksacitabina.

[0109] U nekim primerima izvođenja, terapeutski efikasna doza regorafeniba se smanjuje putem kombinovanja sa fosforamidatnim prolekom troksacitabinom. Na primer, nedeljna ili mesečna doza sorafeniba može da se smanji za najmanje 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili više, u odnosu na maksimalnu preporučenu dozu ili maksimalnu tolerisanu dozu. U drugim primerima izvođenja, regorafenib se primenjuje u efektivnoj dozi koja je najmanje 50%, 60%, 70%, 80%, 90% ili više niža od doze koja je potrebna da bi bila efikasna u odsustvu primene fosforamidatnog proleka troksacitabina. U nekim primerima izvođenja, IC50regorafeniba se smanjuje najmanje 4, 5, 10, 20, 30, 40, 50 ili 100 puta u odnosu na IC50u odsustvu fosforamidatnog proleka troksacitabina.

[0110] Dalji opis i primeri izvođenja kombinovanih terapija dati su u odeljku Primeri u nastavku teksta.

Detaljan opis reprezentativnih primera izvođenja

[0111] Ilustrativni primeri izvođenja pronalaska opisani su u sledećim Primerima, sa osvrtom na prateće crteže na kojima

[0112] Slika 1A predstavlja niz koncentracija/aktivnost leka za kombinaciju sorafeniba i samo jednog fosfornog stereoizomera fosforamidatnog proleka troksacitabina označenog kao (2S)-2-propilpentil 2-(((((2S,4S)-4-(4-amino-2-oksopirimidin-1(2H)-il)-1,3-dioksolan-2-il)metoksi)-(fenoksi)fosforil)amino)propanoat.

[0113] Slika 1B predstavlja 3D-sinergijski grafikon izveden iz podataka sa slike 1A.

[0114] Slika 2A predstavlja niz koncentracija/aktivnost leka za kombinaciju sorafeniba i samo jednog fosfornog stereoizomera fosforamidatnog proleka troksacitabina označenog kao (2S)-2-propilpentil 2-(((((2S,4S)-4-(4-amino-2-oksopirimidin-1(2H)-il)-1,3-dioksolan-2-il)metoksi)-(fenoksi)fosforil)amino)propanoat.

[0115] Slika 2B predstavlja 3D-sinergijski grafikon izveden iz podataka sa slike 2A.

[0116] Slika 3A predstavlja niz koncentracija/aktivnost leka za kombinaciju sorafeniba i samo jednog fosfornog stereoizomera fosforamidatnog proleka troksacitabina označenog kao (2S)-(S)-pentan-2-il 2-(((((2S,4S)-4-(4-amino-2-oksopirimidin-1(2H)-il)-1,3-dioksolan-2-il)metoksi)(4-bromofenoksi)fosforil)amino)propanoat.

[0117] Slika 3B predstavlja 3D-sinergijski grafikon izveden iz podataka sa slike 3A.

[0118] Slika 4A predstavlja niz koncentracija/aktivnost leka za kombinaciju sorafeniba i samo jednog fosfornog stereoizomera fosforamidatnog proleka troksacitabina označenog kao (2S)-(R)-sek-butil 2-(((((2S,4S)-4-(4-amino-2-oksopirimidin-1(2H)-il)-1,3-dioksolan-2-il)metoksi)(fenoksi)fosforil)amino)-3-metilbutanoat.

[0119] Slika 4B predstavlja i3D-sinergijski grafikon izveden iz podataka sa slike 4A.

[0120] Primeri ni na koji način ne ograničavaju pronalazak.

Opšti postupak za evaluaciju kombinacija u ćelijskoj kulturi

Pasažiranje:

[0121] Za analizu humanog hepatocelularnog karcinoma korišćena je ćelijska linija Hep3B, iz DSMZ (ACC 93). Hep3B ćelije su gajene kao ćelije slične epitelnim ćelijama, u monoslojevima u 90% MEM (sa Erlovim solima) medijumu 10% t.i. FBS 2 mM L-glutamin 50u/ml penicilina/ 0,05 mg/ml streptomicina kao medijum za gajenje. Konfluentne kulture su podeljene 1:4 do 1:10 svakih 3-5 dana koristeći tripsin/EDTA, i ponovo zasejavane sa 0,5-1 × 10<6>ćelija/80 cm<2>.

Materijali:

[0122] Korišćen je kompletan ćelijski medijum bez fenol crveno boje:

DMEM bez fenol crvenog

10% FCS

50u/ml penicilina/ 0,05 mg/ml streptomicina

Tripsin-EDTA PAA kat. br. L11-004 firme Fisher Scientific

Ploča za ćelijske testove za adherentne ćelije, 96 bunarčića, kat. br.128009296 firme Fisher Scientific

Zaptivna traka, Nunc kat. br.732 610 firme VWR

Test jedinjenja:

[0123] Jedinjenja rastvorena do 10mM stok rastvora u DMSO (Carlo Erba Reactifs - SDS, kat. br. 03502T16)

Analiza proliferacije ćelija:

[0124] Komplet-8 za brojanje ćelija CK04 firme Dojindo

Instrument:

[0125]

Echo 550 Akustični manipulator tečnošću, Labcyte

Tecan sunrise, spektrofotometar

Softver (deljeni softver)

[0126]

MacSynergy II je preuzet sa sajta https://www.uab.edu/medicine/peds/macsynergy (Prichard, M.N. and C. Shipman, Jr.1990. (Review) A three-dimensional model to analyze drug-drug interactions. Antiviral Res.14:181-206.)

Procedura testiranja:

Dan 1. Zasejavanje ćelija:

[0127] Flask za ćelijsku kulturu se opere 2 puta sa 5 ml PBS i PBS odbaci. Doda se 1,5 ml tripsina i flask se stavi u inkubator na 3-4 minuta. Flask se promućka i doda se 10 ml DMEM medijuma, 10% FCS, 50 µ/ml penicilina/ 0,05 mg/ml streptomicina, bez fenol crvenog. Ćelije su brojane pomoću brojača ćelija Scepter, Hep3B ćelije su razblažene do 20 ×10<3>ćelija/ml u kompletnom ćelijskom medijumu bez fenol crvenog. 100 µl ćelijske suspenzije/bunarčiću je zasejano u ploče za ćelijske testove sa 96 bunarčića. Dva replikata ploče za svaku kombinaciju.

2. dan, dodavanje test jedinjenja:

[0128] Test jedinjenja su ispitivana u devet koncentracija, ili 5 µM do 0,00076 µM ili 10 µM do 0,0015 µM, u seriji razblaženja 1:3. Sorafenib je testiran u sedam koncentracija, 20 µM do 0,3 1 µM, u seriji razblaženja 1:2. Četiri ploče za razblaživanje pripremljene su sa Eho instrumentom.

[0129] Razblaženja jedinjenja su bila 2 puta veća od željenih finalnih koncentracija. Zapremina u pločama za razblaživanje u svakom bunarčiću je 125 µl medijuma sa jedinjenjima.

[0130] 100 µl iz ploče za razblaživanje sa jedinjenjima u različitim koncentracijama prebačeno je u odgovarajuću bunarčić ploče za ćelijske testove sa 100 µl, (200 µl/bunarčiću u ukupnoj zapremini). Inkubiranje ploča tokom 6 dana, na 37 °C, 5% CO2.

7. dan, očitavanje ploča:

[0131] 10µl CCK kompleta-8 je dodato u svaki bunarčić pomoću višekanalne pipete (potapanjem vrhova ispod površine u svaki bunarčić). Ploče su inkubirane 4 sata na 37 °C, 5% CO2.

[0132] Traka za zaptivanje je stavljena preko ploče i sadržaj ploče je pažljivo promešan.

[0133] Ploča je očitana u spektrofotometru na talasnoj dužini od 450 nm, sa referentnim filterom od 650 nm. Prosečna apsorbancija je bila >1 do <3 za ćelijske kontrole tretirane vehikulumom.

[0134] Sirovi podaci za dve ploče svake kombinacije uneti su u deljeni softver Mac Synergy II gde se kombinovani efekat izračunava i crta kao 3D grafikon površine doznog odgovora. Teorijske interakcije aditiva se izračunavaju iz krivih doznog odgovora, za svaki lek pojedinačno. Izračunata površina aditiva se oduzima od eksperimentalno određenih površina doznog odgovora, kako bi se otkrile oblasti neaditivne aktivnosti. Konačni rezultati su dati kao sinergističke ili antagonističke zapremine (µM<2>%) prema uputstvima datim u priručniku za MacSynergy II:

Sinergističke zapremine:

[0135]

1. Vrednosti sinergije ili antagonizma niže od 25 µM<2>% (log zapremine <2) sa 95% pouzdanosti treba smatrati beznačajnim i verovatno nisu važne.

2. Vrednosti između 25 µM<2>% i 50 µM<2>% (log zapremine >2 i <5) treba smatrati manjom, ali značajnom količinom sinergije.

3. Vrednosti između 50 µM<2>% i 100 µM<2>% (log zapremine >5 i <9) ukazuju na umerenu sinergiju ili antagonizam. Ova interakcija može da bude važna in vivo.

4. Vrednosti preko 100 µM<2>% (log zapremine >9) ukazuju na jaku sinergiju i verovatno su važne in vivo.

Opšta procedura za in vivo evaluaciju kombinacija sorafeniba i troksacitabin fosforamidatnog proleka

[0136] Efekti lečenja troksacitabin fosforamidatnim prolekom u kombinaciji sa sorafenibom mogu da se procenjuju in vivo na modelima subkutanog ksenografta hepatocelularnog karcinoma (HCC). Modeli se baziraju na inokulaciji HCC ćelija (npr. Hep3B, Huh-7 ili HepG2) u levi bok imunokompromitovanih miševa. Zapremina tumora se procenjuje pribl. tri puta nedeljno i tretman sa jedinjenjem se obično inicira pri veličini tumora od 100-200 mm<3>. Tipična studija se sastoji od 4 grupe (n = 10 miševa/grupi);

1) vehikulum (kontrola),

2) troksacitabin fosforamidatni prolek,

3) sorafenib sam i

4) troksacitabin fosforamidatni prolek u kombinaciji sa sorafenibom.

[0137] Troksacitabin fosforamidatni prolek se daje putem oralne gavaže u dozama od 25-100 mg/kg jednom ili dva puta dnevno u periodu od 5-21 dan. Alternativno za prolekove sa brzim metabolizmom u krvi glodara, sinergija se može modelovati primenom troksacitabina intraperitonealno (i.p.) u dozama od 2,5-25 mg/kg jednom ili dva puta dnevno. Sorafenib se daje putem oralne gavaže jednom dnevno u dozama od 10-50 mg/kg tokom celog perioda od 21 dana. Rast tumora se procenjuje tokom perioda lečenja i nakon prestanka lečenja, ako je moguće. Izračunava se inhibicija rasta tumora i kašnjenje rasta tumora i vrši se statistička analiza da bi se procenili značajni efekti lečenja u poređenju sa kontrolnom grupom.

Primer 1

[0138] Sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina sa formulom:

koji je jedinstveni stereoizomer na atomu fosfora,

su testirani u prethodno opisanom testiranju kombinacija na ćelijskoj kulturi. Slika 1A prikazuje citotoksične aktivnosti merene za svaku permutaciju koncentracija ova dva jedinjenja. Slika 1B predstavlja 3D sinergijski grafik koji je izračunat pomoču MacSynergy II, i zaključno sa log zapremine 76 pri 95% pouzdanosti, što odgovara jakoj anti-proliferativnoj sinergiji.

Primer 2

[0139] Sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina sa formulom:

koji je jedinstveni stereoizomer na atomu fosfora,

su testirani u prethodno opisanom testiranju kombinacija na ćelijskoj kulturi. Slika 2A prikazuje citotoksične aktivnosti merene za svaku permutaciju koncentracija ova dva jedinjenja. Slika 2B predstavlja 3D sinergijski grafik koji je izračunat pomoću MacSynergy II, i zaključno sa log zapremine 32 pri 95% pouzdanosti, što odgovara jakoj anti-proliferativnoj sinergiji.

Primer 3

[0140] Sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina sa formulom:

koji je jedinstveni stereoizomer na atomu fosfora,

su testirani u prethodno opisanom testiranju kombinacija na ćelijskoj kulturi. Slika 3A prikazuje citotoksične aktivnosti merene za svaku permutaciju koncentracija ova dva jedinjenja. Slika 3B predstavlja 3D sinergijski grafik koji je izračunat pomoću MacSynergy II, i zaključno sa log zapremine 40 pri 95% pouzdanosti, što odgovara jakoj anti-proliferativnoj sinergiji.

Primer 4

[0141] Sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina sa formulom:

koji je jedinstveni stereoizomer na atomu fosfora, su testirani u prethodno opisanom testiranju kombinacija na ćelijskoj kulturi. Slika 4A prikazuje citotoksične aktivnosti merene za svaku permutaciju koncentracija ova dva jedinjenja. Slika 4B predstavlja 3D sinergijski grafik koji je izračunat pomoću MacSynergy II, i zaključno sa log zapremine 46 pri 95% pouzdanosti, što odgovara jakoj anti-proliferativnoj sinergiji.

Claims (13)

1. Patentni zahtevi 1. Fosforamidatni prolek troksacitabina sa formulom:

   naznačen time što, a) X je H, Y je 2-propilpentil i Z je H; b) X je H, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H; c) X je Br, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H; d) X je H, Y je (R)-sek-butil i Z je H; e) X je H, Y je 2-etilbutil i Z je H; f) X je ciklopropil, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H; ili g) X je t-butil, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H. ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u kombinaciji sa ciljanim terapeutskim agensom koji je izabran od sorafeniba i regorafeniba, u lečenju kancera jetre ili metastaza jetre.
2. 2. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema patentnom zahtevu 1, naznačen time što je ciljani terapeutski agens sorafenib.
3. 3. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačen time što fosforamidatni prolek troksacitabina ima stereohemiju:
4. 4. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema patentnom zahtevu 1 ili 2, naznačen time što, X je Br, Y je (S)-pentan-2-il i Z je H.
5. 5. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema bilo kom prethodnom patentnom zahtevu, naznačen time što se i sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina primenjuju svakodnevno (kao QD, BID ili TID), istog dana.
6. 6. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, naznačen time što se sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina isporučuju zajedno, u zajedničkoj, oralno primenjenoj, jedinici za doziranje.
7. 7. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema patentnom zahtevu 5, naznačen time što se sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina primenjuju kao odvojene oralno primenjene jedinice za doziranje.
8. 8. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema patentnom zahtevu 7, naznačen time što se jedinica(e) za doziranje sorafeniba i jedinica(e) za doziranje fosforamidatnog proleka troksacitabina primenjuju u razmaku od najmanje 6 sati bilo kog dana.
9. 9. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-4, naznačen time što se sorafenib i fosforamidatni prolek troksacitabina naizmenično primenjuju u monoterapijskim ciklusima lečenja od 1-28 dana, između kojih su opciono ubačeni periodi bez tretmana od 1-28 dana.
10. 10. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema patentnom zahtevu 9, naznačen time što lečenje počinje ciklusom sorafeniba.
11. 11. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema bilo kom prethodnom patentnom zahtevu, naznačen time što je kancer jetre HCC ili intrahepatični holangiokarcinom.
12. 12. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-10, naznačen time što je metastaza jetre poreklom od kolorektalnog kancera.
13. 13. Fosforamidatni prolek troksacitabina za upotrebu prema bilo kom od patentnih zahteva 1-10, naznačen time što je metastaza jetre poreklom od kancera dojke, kancera jednjaka, kancera pluća, melanoma, kancera pankreasa ili kancera želuca.