Deprecated: The each() function is deprecated. This message will be suppressed on further calls in /home/zhenxiangba/zhenxiangba.com/public_html/phproxy-improved-master/index.php on line 456
RS66103B1 - Humanizovani specifični membranski antigen prostate (psma) i konjugati lekova antitela - Google Patents
[go: Go Back, main page]

RS66103B1 - Humanizovani specifični membranski antigen prostate (psma) i konjugati lekova antitela - Google Patents

Humanizovani specifični membranski antigen prostate (psma) i konjugati lekova antitela

Info

Publication number
RS66103B1
RS66103B1 RS20241125A RSP20241125A RS66103B1 RS 66103 B1 RS66103 B1 RS 66103B1 RS 20241125 A RS20241125 A RS 20241125A RS P20241125 A RSP20241125 A RS P20241125A RS 66103 B1 RS66103 B1 RS 66103B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
antibody
psma
amino acid
agent
cancer
Prior art date
Application number
RS20241125A
Other languages
English (en)
Inventor
Shivarupam Bhowmik
Jianing Wang
Jinming Xia
William Brady
Feng Tian
Original Assignee
Ambrx Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Ambrx Inc filed Critical Ambrx Inc
Publication of RS66103B1 publication Critical patent/RS66103B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/30—Immunoglobulins [IG], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
    • C07K16/3069—Reproductive system, e.g. ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/4164—1,3-Diazoles
    • A61K31/4166—1,3-Diazoles having oxo groups directly attached to the heterocyclic ring, e.g. phenytoin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/05—Dipeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/395—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum
    • A61K39/39533—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals
    • A61K39/39558—Antibodies; Immunoglobulins; Immune serum, e.g. antilymphocytic serum against materials from animals against tumor tissues, cells, antigens
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6801—Drug-antibody or immunoglobulin conjugates defined by the pharmacologically or therapeutically active agent
    • A61K47/6803—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates
    • A61K47/68031—Drugs conjugated to an antibody or immunoglobulin, e.g. cisplatin-antibody conjugates the drug being an auristatin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6835—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site
    • A61K47/6851—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell
    • A61K47/6869—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment the modifying agent being an antibody or an immunoglobulin bearing at least one antigen-binding site the antibody targeting a determinant of a tumour cell the tumour determinant being from a cell of the reproductive system: ovaria, uterus, testes, prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/68—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. an Fc-fragment
    • A61K47/6889—Conjugates wherein the antibody being the modifying agent and wherein the linker, binder or spacer confers particular properties to the conjugates, e.g. peptidic enzyme-labile linkers or acid-labile linkers, providing for an acid-labile immuno conjugate wherein the drug may be released from its antibody conjugated part in an acidic, e.g. tumoural or environment
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/08—Drugs for disorders of the urinary system of the prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/80—Vaccine for a specifically defined cancer
    • A61K2039/884—Vaccine for a specifically defined cancer prostate
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2300/00—Mixtures or combinations of active ingredients, wherein at least one active ingredient is fully defined in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
    • A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Reproductive Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gynecology & Obstetrics (AREA)
  • Pregnancy & Childbirth (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Pronalazak se odnosi na nova antitela za prostatu-specifični membranski antigen (anti-PSMA) i konjugate lekova antitela. Tačnije, pronalazak se odnosi na postupke i kompozicije za korišć ́enje konjugata lekova protiv PSMA antitela u inhibiciji, prevenciji ili lečenju bolesti ili karcinoma povezanih sa PSMA.
POZADINA PRONALASKA
[0002] Rak prostate je najčešće dijagnostikovan malignitet koji nije povezan sa kožom kod muškaraca u razvijenim zemljama. Procenjuje se da će kod jednog od šest muškaraca biti dijagnostikovan rak prostate. Dijagnoza raka prostate je poboljšana nakon upotrebe markera na bazi seruma, kao što je antigen specifičan za prostatu (PSA). Pored toga, antigeni povezani sa tumorom prostate daju mete za snimanje tumora, dijagnozu i ciljane terapije. Prostata specifični membranski antigen (PSMA), marker povezan sa tumorom prostate, je takva meta. PSMA je značajno prekomerno izražen kod raka prostate nezavisnog od androgena. Prekomerna ekspresija PSMA je povezana sa visokim stepenom tumora, visokim rizikom od progresije bolesti i recidiva (Perner et al, Human Pathology, 2007). Visoka ekspresija PSMA je povezana sa negativnom kliničkom prognozom i značajno kraćim preživljavanjem. Ekspresija PSMA se primećuje i na primarnom mestu bolesti i na metastatskim mestima kao što su kosti i limfni čvorovi (Olson i Izrael, Frontiers in Bioscience, 2014).
[0003] Iako je tokom godina korišćeno nekoliko ciljanih terapija, one koje uključuju radioterapije su najviše napredovale ka kliničkom razvoju pošto su pokazale i efikasnost i prihvatljivu podnošljivost. Drugi klinički razvoj modaliteta koji uključuje ciljanu isporuku neradioaktivnih citotoksičnih agenasa imao je ograničen uspeh.
[0004] Imajući u vidu fizička svojstva PSMA i njegov obrazac ekspresije u odnosu na progresiju raka prostate, PSMA je odlična meta u razvoju konjugata antitelo-lek. Konjugati antitelo-lek (ADC) su moćna klasa terapeutskih konstrukata koji omogućavaju ciljanu isporuku citotoksičnih agenasa u ciljne ćelije, kao što su ćelije raka. Zbog funkcije ciljanja, ova jedinjenja pokazuju mnogo veći terapeutski indeks u poređenju sa istim sistemski isporučenim agensima. ADC su razvijeni kao intaktna antitela ili fragmenti antitela, kao što su scFv. Antitelo ili fragment je povezan sa jednom ili više kopija leka preko linkera koji je stabilan u fiziološkim uslovima, ali koji se može odcepiti jednom unutar ciljne ćelije. Do danas je samo nekoliko ADC-ova odobreno za terapijsku upotrebu, uključujući gemtuzumab ozogamicin za AML (naknadno povučen s tržišta), brentuximab vedotin za ALCL i Hodgkinov limfom i trastuzumab emtansin za HER2-pozitivni metastatski rak dojke (Verma et al, N Engl J Med 367:1783-91, 2012; Bross i sur., Clin Cancer Res 7:1490-96, 2001; Brojni ADC-ovi koji ciljaju na različite supstance su u kliničkim ispitivanjima. Međutim, ADC-ovi koji ciljaju PSMA suočavaju se s izazovima zbog nedostatka terapeutskog indeksa i toksičnosti. WO 2017/212250 i WO 2018/033749 daju humanizirana konjugirana antitela dobijena iz J591.
[0005] Prema tome, postoji potreba za boljim ili poboljšanim terapeuticima koji ciljaju PSMA antigen i srodne karcinome. Da bi se prevazišao ovaj nedostatak u stanju tehnike, saznanja iz ovog pronalaska obezbeđuju nova anti-PSMA antitela, varijante i kompozicije konjugata leka za antitela, opisanih ovde.
REZIME PRONALASKA
[0006] U jednoj realizaciji, ovaj pronalazak obezbeđuje konjugat leka za antitelo koji sadrži antitelo antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA antitelo) konjugovano sa linkerom leka, pri čemu se konjugacija dešava preko para-acetil fenilalanina ugrađenog u sekvencu teškog lanca, pri čemu anti-PSMA antitelo sadrži sekvencu teškog lanca SEK ID BR: 8 i sekvencu lakog lanca SEK ID BR: 9, u kojoj je para-acetil fenilalanin ugrađen na poziciji teškog lanca A114 prema Kabat šema numerisanja, i pri čemu je lek-linker necepabilni monometil auristatin F koji ima strukturu:
[0007] U sledećoj varijanti, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži konjugat leka antitela prema pronalasku i najmanje jedno farmaceutski prihvatljivo pomoćno sredstvo, vezivo, pufer, nosač, razblaživač ili ekscipijent.
[0008] U sledećoj varijanti, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju pronalaska, koja dalje sadrži hemoterapeutsko sredstvo, hormonsko sredstvo, antitumorsko sredstvo, imunostimulaciono sredstvo, imunomodulator, kortikosteroid ili njihovu kombinaciju.
[0009] U daljoj realizaciji, ovaj pronalazak obezbeđuje konjugat leka antitela ili farmaceutsku kompoziciju pronalaska za upotrebu u postupku smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora u ćeliji raka ili kancera koja eksprimira PSMA, pri čemu navedeni postupak obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koje eksprimiraju PSMA sa efikasnom količinom konjugata leka antitela ili farmaceutske kompozicije.
[0010] U sledećoj varijanti, ovaj pronalazak obezbeđuje konjugat leka antitela ili farmaceutsku kompoziciju pronalaska i dodatni terapeutski agens, za upotrebu u postupku smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora kod kancera koji eksprimira PSMA ili ćelija raka, navedeni postupak koji obuhvata dovođenje u kontakt raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom konjugata antitelolek ili farmaceutske kompozicije, i dalje obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom dodatnog terapeutskog agensa, pri čemu je dodatni terapeutski agens hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija.
[0011] U sledećoj varijanti, ovaj pronalazak obezbeđuje konjugat leka antitela ili farmaceutsku kompoziciju pronalaska za upotrebu sa dodatnim terapeutskim agensom u metodu smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora kod kancera ili kancera koji eksprimira PSMA, navedeni postupak obuhvata dovođenje u kontakt PSMA-ekspresirajuće ćelije raka ili ćelije raka sa efikasnom količinom konjugata antitelo-lek ili farmaceutske kompozicije, i dalje obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom dodatnog terapeutskog agensa, pri čemu je dodatni terapeutski agens hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija.
[0012] U daljem izvođenju, ovaj pronalazak obezbeđuje dodatni terapeutski agens, za upotrebu sa konjugatom leka antitela ili farmaceutskom kompozicijom pronalaska u metodu smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora u ćelijama raka ili kancera koji eksprimiraju PSMA, navedeni postupak koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom dodatnog terapeutskog agensa, i dalje obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom konjugata antitelo-lek ili farmaceutske kompozicije, pri čemu je dodatni terapeutski agens hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija.
[0013] U sledećoj varijanti, ovaj pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju, konjugat leka antitela ili farmaceutsku kompoziciju i dodatni terapeutski agens, konjugat leka antitela ili farmaceutsku kompoziciju; ili dodatni terapeutski agens za upotrebu u skladu sa ovim pronalaskom, pri čemu je dodatni terapeutski agens hormonski agens, i pri čemu je hormonski agens enzalutamid.
REZIME BUDUĆEG PRONALASKA
[0014] Ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA antitela, varijante antitela i kompozicije konjugata antitela za lek. U daljim aspektima, pronalazak obezbeđuje konjugate leka antitela (ADC) koji sadrže takva anti-PSMA antitela.
[0015] Ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA antitela, varijante antitela i kompoziciju antitela koja sadrže SEK ID BR: od 1 do 17. U nekim aspektima, pronalazak obezbeđuje konjugate leka antitela (ADC) koji sadrže SEK ID BR: od 1 do 17.
[0016] Ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA antitela, varijanti antitela i kompozicije antitela koja se sastoji od SEK ID BR: od 1 do 17. U nekim aspektima, pronalazak obezbeđuje konjugate leka antitela (ADC) koji se sastoje od SEK ID BR: od 1 do 17.
[0017] Ovaj pronalazak obezbeđuje varijantu antitela antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA) koja sadrži teški lanac i laki lanac pri čemu je sekvenca teškog lanca izabrana iz grupe SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16, a sekvenca lakog lanca je izabrana iz grupe SEK ID BR: 9, 11, 13, 15 ili 17. U nekim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje antitelo antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA) varijanta koja sadrži sekvencu teškog lanca SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16. U nekim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje varijantu antitela antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA) koja se sastoji od sekvence lakog lanca SEK ID BR: 9, 11, 13, 15 ili 17 .
[0018] U drugim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje varijantu antitela antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA) koja se sastoji od sekvence teškog lanca SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16. U drugim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje varijantu antitela antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA) koja se sastoji od sekvence lakog lanca SEK ID BR: 9, 11, 13, 15 ili 17.
[0019] U drugom aspektu, varijanta anti-PSMA antitela sadrži teški lanac koji sadrži varijabilnu sekvencu regiona izabranu iz grupe SEK ID BR: 1 ili 6. U još jednom aspektu, varijanta anti-PSMA antitela sadrži sekvencu lakog lanca koja sadrži varijabilni region izabran iz grupe SEK ID BR: 2-5 ili 7. U još jednom aspektu, varijanta teškog lanca anti-PSMA antitela se sastoji od sekvence varijabilnog regiona SEK ID BR: 1 ili 6. U još jednom aspektu, varijanta lakog lanca anti-PSMA antitela se sastoji od varijabilnog regiona izabranog iz grupe SEK ID BR: od 2 do 5 ili 7.
[0020] U daljem aspektu, varijanta anti-PSMA antitela sadrži neprirodnu amino kiselinu ugrađenu u sekvencu teškog ili lakog lanca antitela. U drugom aspektu ovog pronalaska, antitelo sadrži varijantu anti-PSMA antitela sa jednom ili više neprirodno kodiranih amino kiselina supstituisanih na jednoj ili više pozicija u teškom ili lakom lancu antitela. U nekim aspektima teški ili laki lanac u varijanti PSMA antitela sadrži 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 neprirodno kodiranih amino kiselina. U drugim aspektima, sekvenca teškog ili lakog lanca u varijanti PSMA antitela sadrži 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 neprirodno kodiranih amino kiselina na jednoj ili više pozicija u teškom ili lakom lancu antitela. U jednom aspektu, sekvenca teškog lanca anti-PSMA antitela sadrži neprirodno kodiranu amino kiselinu. U drugom aspektu ovog pronalaska, varijanta anti-PSMA antitela sadrži sekvencu teškog ili lakog lanca kao što je predstavljeno u Tabeli 4.
[0021] U daljim aspektima ovog pronalaska, antitelo je varijanta anti-PSMA antitela koja sadrži sekvencu lakog lanca sekvenci SEK ID BR: 9, 11, 13, 15 ili 17 sa neprirodno kodiranom amino kiselinom supstituisanom na položaju sa visokom dostupnošću površine i/ili mesta koje će biti neutralno naelektrisano za antitelo. U još daljim aspektima ovog pronalaska, antitelo je varijanta anti-PSMA antitela koja sadrži sekvencu teškog lanca sekvence SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16 sa neprirodno kodiranom amino kiselinom supstituisanom na poziciji sa velikom dostupnošću površine i/ili mestom koje će biti neutralno naelektrisano za antitelo.
[0022] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje konjugat leka anti-PSMA antitela (ADC ili anti-PSMA ADC) pri čemu je antitelo anti-PSMA koje sadrži sekvencu lakog i teškog lanca. U daljim aspektima ovog pronalaska, anti-PSMA ADC sadrži laki lanac SEK ID BR: 9, 11, 13, 15 ili 17 i teški lanac sekvence SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16. U jednom aspektu ovog pronalaska, anti-PSMA ADC se sastoji od jedne ili više neprirodno kodiranih amino kiselina supstituisanih na jednoj ili više pozicija u teškom ili lakom lancu antitela.
[0023] U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA ADC koji sadrži sekvencu teškog lanca SEK ID BR: 8 i lakog SEK ID BR: 9. U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA ADC koji sadrži SEK ID BR: 12 i SEK ID BR: 13. U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA ADC koji sadrži SEK ID BR: 14 i SEK ID BR: 15. U drugom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA ADC koji sadrži SEK ID BR: 16 i SEK ID BR: 17.
[0024] U nekim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija ovog pronalaska mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja se vezuje za PSMA receptor. U drugim aspektima ovog pronalaska, antitelo, varijanta ili kompozicija mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja se vezuje za ekstracelularnu površinu PSMA receptora. U drugom aspektu ovog pronalaska, opisano antitelo, varijanta ili kompozicija mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja se vezuje za PSMA dimer. U nekim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija ovog pronalaska mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja ima CDR-ove iz J591 kalemljene na okvirni region varijabilnog regiona. U drugim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija ovog pronalaska mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja ima neprirodno kodiranu amino kiselinu. U nekim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja je opisana sa više od jednog od aspekata na drugim mestima u ovom pronalasku. U nekim aspektima, antitelo, varijanta antitela ili kompozicija(e) antitela koji su ovde opisani mogu biti potpuno humanizovani. U drugim aspektima, ovde opisano antitelo, varijanta antitela ili kompozicija(e) antitela mogu biti himerne. U nekim aspektima ovog pronalaska, antitelo može biti antitelo koje je antitelo pune dužine (varijabilni Fc regioni), Fab, bispecifično, Fab-dimeri, Fab-bispecifično, Fab-trispecifično, bispecifično T-ćelijsko angažovanje, dvostruki afinitet ponovo ciljanog antitela, IgG1/IgG3 bispecifično antitelo, dijatelo, bispecifično dijatelo, scFv-Fc, minitelo.
[0025] U drugim aspektima, anti-PSMA antitelo, varijanta antitela ili kompozicija antitela uključuje neprirodnu kodiranu amino kiselinu koja sadrži karbonil grupu, aminooksi grupu, hidrazinsku grupu, hidrazidnu grupu, polukarbazidnu grupu, azidnu grupu ili alkin grupu. U jednom aspektu pronalaska, neprirodno kodirana amino kiselina sadrži aminooksi grupu. U još nekim aspektima, neprirodno kodirana amino kiselina je paraacetil fenilalanin, p-nitrofenilalanin, p-sulfotirozin, p-karboksifenilalanin, onitrofenilalanin, m-nitrofenilalanin, p-boronil fenil-boronilfenilalanin, m-boronilfenilalanin, paminofenilalanin, o-aminofenilalanin, m-aminofenilalanin, p-acilfenilalanin, o-acilfenilalanin, macilfenilalanin, a-OM fenilalanin, fenilalanin, m-OMe fenilalanin, p-sulfofenilalanin, o-sulfofenilalanin, msulfofenilalanin, 5-nitro His, 3-nitro Tyr, 2-nitro Tyr, nitro supstituisani Leu, a nitro supstituisani His, nitro supstituisani De, nitro supstituisani Trp, 2-nitro Trp, 4-nitro Trp, 5-nitro Trp, 6-nitro Trp, 7-nitro Trp, 3-aminotirozin, 2-aminotirozin, O-sulfotirozin, 2-sulfooksifenilalanin, 3-sulfooksifenilalanin, okarboksifenilalanin, m-karboksifenilalanin, p-acetil-L-fenilalanin, p-propargil-fenilalanin, L-L-tirosetil an-L-3-O-(2-naftil)alanin, 3-metil-fenilalanin, O-4-alil-L-tirozin, 4-propil-L-tirozin, tri-O-acetil-GlcNAcb-serin, L-Dopa, fluorovani fenilalanin, izopropil-L-fenilalanin, p-azido-L-fenilalanin, p-acil-L-fenilalanin, pbenzoil-L-fenilalanin, L-fosfoserin, fosfonoserin, fosfonotirozin, p-jodo-fenilalanin, p-bromfenilalanin, pamino-L-fenilalanin, izopropil-L-fenilalanin ili p-propargiloksi-fenilalanin. U drugom aspektu ovog pronalaska, neprirodna amino kiselina je paraacetil fenilalanin.
[0026] U drugim aspektima ovog pronalaska, varijanta anti-PSMA antitela je monoklonsko antitelo, humanizovano antitelo ili himerno antitelo. U jednom aspektu, varijanta humanizovanog antitela anti PSMA sadrži sekvencu teškog lanca izabranu iz grupe SEK ID BR: 8, 10, 12 ili 14 i sekvencu lakog lanca izabranu iz grupe SEK ID BR: 9, 11, 13, ili 15. U drugom aspektu, varijanta anti-PSMA himernog antitela sadrži sekvencu teškog lanca SEK ID BR: 16 i sekvencu lakog lanca SEK ID BR: 17.
[0027] U drugim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje kompoziciju konjugata leka antitela koji sadrži varijantu anti-PSMA antitela kovalentno konjugovanu sa toksinom, korisnim opterećenjem ili linkerom za lek. U jednom aspektu toksin, korisno opterećenje ili linker za lek sadrži citotoksični agens. U jednom aspektu, citotoksični agens je dolastatin, derivat dolastatina ili njegov analog. U drugim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje kompoziciju konjugata leka antitela koji sadrži varijantu anti-PSMA antitela kovalentno konjugovanu sa linkerom leka, pri č emu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u antitelu. U drugim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje kompoziciju konjugata leka antitela koji sadrži varijantu anti-PSMA antitela bilo koje od SEK ID BR: od 1 do 17 kovalentno konjugovanu sa jednim ili više dolastatina pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u antitelu. U drugom aspektu ovog pronalaska je obezbeđena kompozicija konjugata leka antitela koji sadrži varijantu anti-PSMA antitela bilo kojeg od SEK ID BR: od 8 do 17 kovalentno konjugovanu sa jednim ili više dolastatina pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane aminokiseline u antitelu. U jednom aspektu ovog pronalaska je obezbeđena kompozicija konjugata leka antitela koji sadrži varijantu sekvence teškog lanca anti-PSMA antitela SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16 kovalentno konjugovanu sa jednim ili više dolastatina pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u antitelu. U jednom drugom aspektu ovog pronalaska je obezbeđena kompozicija konjugata leka antitela koji sadrži varijantu lakog lanca anti-PSMA antitela SEK ID BR: 9, 11, 13, 15 ili 17 kovalentno konjugovanu sa jednim ili više dolastatina pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u antitelu. U drugom aspektu, antitelo je kovalentno konjugovano sa najmanje 2 dolastatina. U jednom aspektu, kompozicija sadrži 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10 ili više derivata ili analoga dolastatina. U jednom aspektu, kompozicija sadrži derivat dolastatina ili je analog dolastatina. U drugom aspektu, derivat ili analog dolastatina je monometil auristatin, monometil auristatin je monometil auristatin F (MMAF) ili monometil auristatin E (MMAE). U drugim aspektima, jedan ili više dolastatina je MMAF koji se ne cepa ili ili MMAF koji se može cepiti ili MMAE koji se ne cepa ili ili MMAE koji se može cepiti. U daljem aspektu pronalaska, antitelo je povezano sa linkerom, polimerom ili biološki aktivnim molekulom. U nekim aspektima, linker je polietilen glikol (PEG). U drugim aspektima, linker je razgranati ili linearni polietilen glikol. U daljim aspektima ovog pronalaska, anti-PSMA varijante mogu biti PEGilirane. U još daljim aspektima ovog pronalaska, varijante anti-PSMA mogu biti PEGilirane na neprirodno kodiranoj aminokiselini. Anti-PSMA antitelo prema ovom pronalasku može biti PEGilirano sa oko 5 kDa PEG, oko 10 kDa PEG, oko 20 kDa PEG, oko 30 kDa PEG, oko 40 kDa PEG ili više. Molekul poli(etilen glikola) može imati molekulsku težinu između oko 0.1 kDa i oko 100 kDa. Molekul poli(etilen glikola) može imati molekulsku težinu između 0.1 kDa i 50 kDa, 20 kDa i 40 kDa, i bilo koju celobrojnu vrednost između 25 kDa i 35 kDa. Molekul poli(etilen glikola) može imati molekulsku težinu od oko 30 kDa. Molekul poli(etilen glikola) može biti linearni molekul koji ima molekulsku težinu između 0.1 kDa i 50 kDa, 20 kDa i 40 kDa, i bilo koju celobrojnu vrednost između 25 kDa i 35 kDa. Molekul poli(etilen glikola) može biti linearni molekul koji ima molekulsku težinu od 30 kDa. Molekul poli(etilen glikola) može imati aminooksi grupu sposobnu da reaguje sa acetil grupom na sintetičkoj amino kiselini. Molekul poli(etilen glikola) može biti 30 kDa aminooksi aktiviran linearni PEG sa mogućnosću formiranja oksimske veze sa acetilnim bočnim lancem neprirodno kodirane amino kiseline kao što je, ali nije ograničeno na, paraacetil fenilalanin.
[0028] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje konjugat leka antitela koji sadrži humanizovano anti-PSMA antitelo koje sadrži sekvencu teškog lanca izabranu od SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16 i sekvencu lakog lanca izabranu od SEK ID BR: 9, 11, 13, 15, konjugovan sa najmanje jednim linkerom za lek izabranim iz Tabela od 1 do 3, pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline ugrađene u sekvencu teškog lanca. U nekim aspektima, lek-linker sadrži citotoksični agens. Citotoksični agens je dolastatin, derivat dolastatina ili njegov analog. U jednom aspektu, dolastatin, derivat ili analog dolastatina je monometil auristatin izabran od monometil auristatina F (MMAF) ili monometil auristatina E (MMAE). U drugom aspektu, monometil auristatin je MMAE ili MMAF koji se može cepati ili MMAE ili MMAF koji se ne cepa.
[0029] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje metod za smanjenje ili inhibiciju rasta ili progresije tumora u ćeliji raka ili kanceru koji eksprimira PSMA, koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom konjugata antitelo-lek. Konjugat leka antitela koji sadrži humanizovano anti-PSMA antitelo koje sadrži sekvencu teškog lanca izabranu od SEK ID BR: 8, 10, 12, 14 ili 16 i sekvencu lakog lanca izabranu od SEK ID BR: 9, 11, 13, 15, konjugovan sa najmanje jednim lek-linkerom izabranim iz Tabela od 1 do 3, pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane aminokiseline ugrađene u sekvencu teškog lanca. U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje metod koji dalje obuhvata dovođenje u kontakt kancera ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom terapeutskog agensa. U drugom aspektu, terapeutski agens je hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija. U jednom aspektu, hormonski agens je enzalutamid.
[0030] U drugim aspektima, anti-PSMA ADC-ovi iz ovog pronalaska mogu se davati sa jednim ili više imunostimulatornih agenasa da bi se indukovao ili pojačao imuni odgovor. Takvi imunostimulatorni agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, IL-2, imunostimulatorne oligonukleotide (na primer, CpG uzorke), interferone, faktor nekroze tumora alfa. U drugim aspektima, anti-PSMA ADC-ovi pronalaska mogu se davati sa jednim ili više imunomodulatora uključujući, ali bez ograničenja na, citokine, hemokine, pomoćna sredstva ili njihovu kombinaciju.
[0031] U daljim aspektima, ovaj pronalazak obezbeđuje metod inhibicije rasta ili progresije tumora kod subjekta koji obuhvata obezbeđivanje subjektu terapeutski efikasne količine konjugata leka protiv PSMA antitela prema pronalasku. U još jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje metod lečenja subjekta koji ima rak prostate koji obuhvata davanje subjektu terapeutski efikasne količine kompozicije iz pronalaska.
[0032] U jednom aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje metod lečenja subjekta koji ima ćeliju raka koja eksprimira PSMA ili kancer koji obuhvata: davanje subjektu efikasne količine konjugata antitelo-lek za lečenje kancera ili ćelije raka koji eksprimiraju PSMA pri čemu konjugat antitelo-lek sadrži PSMA antitelo koje sadrži sekvencu teškog i lakog lanca, koja je ovde opisana, konjugovanu sa linkerom leka preko neprirodno kodirane amino kiseline ugrađene u antitelo; i pri čemu je lek-linker izabran iz Tabela od 1 do 3. U drugom aspektu, postupak lečenja subjekta koji ima bolest ili rak povezanu sa PSMA, koji se sastoji od obezbeđivanja subjektu terapeutski efikasne količine konjugata leka protiv PSMA antitela i terapeutskog agensa. Terapeutski agens je hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija. Terapeutski agens se može obezbediti pre, posle ili u kombinaciji sa anti-PSMA ADC-om prema pronalasku.
[0033] U drugom aspektu, pronalazak obezbeđuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži varijantu anti-PSMA antitela i najmanje jedan farmaceutski prihvatljivo pomoćno sredstvo, vezivo, pufer, nosač, razblaživač ili ekscipijent. Farmaceutska kompozicija koja sadrži konjugat leka antitela prema pronalasku i najmanje jedno farmaceutski prihvatljivo pomoćno sredstvo, vezivo, pufer, nosač, razblaživač ili ekscipijent. Farmaceutska kompozicija koja dalje sadrži terapeutsko sredstvo. U jednom aspektu ovaj pronalazak obezbeđuje lek za proizvodnju i za lečenje raka kod subjekta kome je to potrebno.
[0034] U daljem aspektu, ovaj pronalazak obezbeđuje nukleinsku kiselinu koja kodira bilo koju od SEK ID BR: od 1 do 17. U jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje vektor koji sadrži nukleinsku kiselinu od SEK ID BR: od 1 do 17.
[0035] Podrazumeva se da metodi i kompozicije opisane ovde nisu ograničene na određenu metodologiju, protokole, ćelijske linije, konstrukte i reagense opisane ovde i kao takvi mogu da variraju. Takođe treba razumeti da je terminologija korišćena ovde samo u svrhu opisivanja određenih aspekata i nije namenjena da ograniči obim ovde opisanih metoda i kompozicija, koji će biti ograničeni samo priloženim patentnim zahtevima.
[0036] Kako se ovde koristi i u priloženim patentnim zahtevima, oblici jednine "a", "an" i "the" uključuju referencu u množini osim ako kontekst jasno ne ukazuje na drugačije.
[0037] Osim ako nije drugačije definisano, svi tehnički i naučni termini korišćeni ovde imaju isto značenje kao što je uobičajeno za prosečnog stručnjaka u struci kojoj pripadaju pronalasci koji su ovde opisani. Različiti postupci, materijali i slično, slični ili ekvivalentni onima koji su ovde opisani, mogu se koristiti u praksi ili testiranju ovde opisanih pronalazaka.
[0038] U aspektima ovog pronalaska date su nove anti-PSMA aminokiselinske sekvence. Termin "amino kiselina" se odnosi na prirodne ili neprirodne aminokiseline, kao i analoge amino kiselina i mimetike aminokiselina koji funkcionišu na način sličan prirodnim amino kiselinama. Prirodno kodirane aminokiseline su 20 uobičajenih aminokiselina (alanin, arginin, asparagin, asparaginska kiselina, cistein, glutamin, glutaminska kiselina, glicin, histidin, izoleucin, leucin, lizin, metionin, fenilalanin, prolin, serin, triplin i valin) i pirolizin i selenocistein. Analozi aminokiselina odnose se na jedinjenja koja imaju istu osnovnu hemijsku strukturu kao aminokiselina koja se javlja u prirodi, samo kao primer, α-ugljenik koji je vezan za vodonik, karboksilnu grupu, amino grupu i funkcionalnu R grupu. Takvi analozi mogu imati modifikovane R grupe (na primer, norleucin) ili mogu imati modifikovane peptidne okosnice dok i dalje zadržavaju istu osnovnu hemijsku strukturu kao amino kiselina koja se javlja u prirodi. Neograničavajući primeri analoga amino kiselina uključuju homoserin, norleucin, metionin sulfoksid, metionin metil sulfonijum. Aminokiseline se ovde mogu navoditi ili njihovim imenom, njihovim opšte poznatim simbolima od tri slova ili simbolima od jednog slova koje preporučuje Komisija za biohemijsku nomenklaturu IUPAC-IUB. Pored toga, nukleotidi se mogu označavati njihovim opšteprihvaćenim jednoslovnim kodovima.
[0039] "Grupa za modifikaciju amino ili karboksi završetaka" se odnosi na bilo koji molekul koji može biti vezan za terminalnu amin grupu ili terminalnu karboksi grupu respektivno. Kao primer, takve terminalne aminske grupe ili terminalne karboksi grupe mogu biti na kraju polimernih molekula, pri čemu takvi polimerni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na, polipeptide, polinukleotide i polisaharide. Grupe za modifikaciju terminusa uključuju, ali nisu ograničene na, različite polimere, peptide ili proteine rastvorljive u vodi. Samo kao primer, grupe za modifikaciju završetaka uključuju polietilen glikol ili serumski albumin. Grupe za modifikaciju terminala mogu se koristiti za modifikaciju terapeutskih karakteristika polimernog molekula, uključujući, ali ne ograničavajući se na povećanje poluživota peptida, polipeptida ili proteina u serumu.
[0040] U nekim aspektima, pruža nova anti-PSMA antitela i varijante antitela. Termin "antitelo" ovde se odnosi na protein koji se sastoji od jednog ili više polipeptida koji su u suštini kodirani svim ili delom gena antitela. Geni imunoglobulina uključuju, ali nisu ograničeni na, gene kapa, lambda, alfa, gama (IgG1, IgG2, IgG3 i IgG4), delta, epsilon i njihovog konstantnog regiona, kao i bezbroj gena varijabilnog regiona imunoglobulina. Ovde je takođe predviđeno da antitelo uključuje antitela pune dužine i fragmente antitela, i uključuje antitela koja postoje prirodno u bilo kom organizmu, varijante antitela, projektovana antitela i fragmente antitela. Ovde je takođe predviđeno da antitelo uključuje intaktna antitela, monoklonska ili poliklonska antitela. Antitelo ovde takođe obuhvata multispecifična antitela i/ili bispecifična antitela. Antitela prema ovom pronalasku uključuju ljudska antitela. Ljudska antitela su obično napravljena od dva laka lanca i dva teška lanca od kojih svaki sadrži varijabilne regione i konstantne regione. Varijabilni region lakog lanca sadrži 3 CDR-a, koji su ovde identifikovani kao CDRL1, CDRL2 i CDRL3 okruženi okvirnim regionima. Varijabilni region teškog lanca obuhvata 3 CDR-a, koji su ovde identifikovani kao CDRH1, CDRH2 i CDRH3, okruženi okvirnim regionima.
[0041] Termin "fragment antitela" ovde se odnosi na bilo koji oblik antitela koji nije oblik pune dužine. Fragmenti antitela ovde uključuju antitela koja su manje komponente koje postoje unutar antitela pune dužine i antitela koja su projektovana, kao što su varijante antitela. Fragmenti antitela uključuju, ali nisu ograničeni na Fv, Fc, Fab i (Fab')2, jednolančani Fv (scFv), dijatela, trijatela, tetratela, bifunkcionalna hibridna antitela, CDR1, CDR2, CDR3, kombinacije CDR-a, varijabilni regioni, okvirni regioni, konstantni regioni, teški lanci, laki lanci i varijabilni regioni, i alternativne skele molekula neantitela, bispecifična antitela i slično (Maynard & Geor- giou, Annu. Rev. Biomed. Eng. 2:339-76, 2000; Hudson, Curr. Opin. Biotechnol. 9:395-402, 1998). Druga funkcionalna podstruktura je jednolančani Fv (scFv), koji se sastoji od varijabilnih regiona teškog i lakog lanca imunoglobulina, kovalentno povezanih peptidnim linkerom (Hu et al., Cancer Research, 56, 3055-3061, 1996). Ovi mali (Mr 25.000) proteini generalno zadržavaju specifičnost i afinitet za antigen u jednom polipeptidu i mogu da obezbede pogodan gradivni blok za veće molekule specifične za antigen. Osim ako nije drugačije naznačeno, navodi i zahtevi koje koriste termin "antitelo" ili "antitela" posebno uključuju "fragment antitela" i "fragmente antitela".
[0042] U realizacijama ovog pronalaska su otkriveni novi konjugati leka protiv PSMA antitela (ADC). Termin "konjugat antitelo-lek, ili "ADC", kako se ovde koristi, odnosi se na molekul antitela, ili njegov fragment, koji je kovalentno vezan za jedan ili više biološki aktivnih molekula. Biološki aktivni molekul može biti konjugovan sa antitelom preko linkera, polimera ili druge kovalentne veze koje su moćna klasa terapeutskih konstrukata koji omogućavaju ciljanu isporuku citotoksičnih agenasa u ciljne ćelije, kao što su ćelije raka koji ima indeks u poređenju sa istim sistemski isporučenim agensima koji su razvijeni kao intaktna antitela ili fragmenti antitela, kao što su scFvs i koji može biti ubrizgan jednom unutar ciljne ćelije.
[0043] Termin "fragment koji se vezuje za antigen", kako se ovde koristi, odnosi se na jedan ili više fragmenata antitela koji zadržavaju sposobnost vezivanja za antigen. Pokazalo se da se funkcija vezivanja antigena antitela može izvršiti fragmentima intaktnog antitela. Primeri vezujućih fragmenata obuhvaćenih terminom "fragment koji se vezuje za antigen" antitela uključuju (i) Fab fragment, monovalentni fragment koji se sastoji od VL, VH, CLi CH1domena; (ii) F(ab’)2fragment, bivalentni fragment koji sadrži dva Fab fragmenta povezana disulfidnim mostom u zglobnom regionu; (iii) Fd fragment koji se sastoji od VHi CH1domena; (iv) Fv fragment koji se sastoji od VLi VHdomena jednog kraka antitela, (v) dAb fragment (Ward et al., Nature 341:544-546, 1989), koji se sastoji od VHdomena; (vi) izolovani region koji određuje komplementarnost (CDR), npr. VHCDR3 koji sadrži ili ne sadrži dodatnu sekvencu (linker, okvirni region(i) itd.) i (v) kombinacija od dva do šest izolovanih CDR-a koji sadrže ili ne sadrže dodatnu sekvencu (linker, okvirni region(i) itd.). Štaviše, iako su dva domena Fv fragmenta, VLi VH, kodirani odvojenim genima, oni se mogu spojiti, korišćenjem rekombinantnih metoda, pomoću sintetičkog linkera koji im omogućava da budu napravljeni kao jedan polipeptidni lanac u kome se VLi VHregioni uparuju da formiraju monovalentne molekule (poznate kao jednolančane Fv (scFv); videti npr. Bird et al., Science 242:423-426, 1988); i (Huston et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 85:5879-5883, 1988). Ovakva jednolančana antitela takođe treba da budu obuhvaćena terminom "fragment koji se vezuje za antigen" antitela. Štaviše, fragmenti koji se vezuju za antigen uključuju fuzione proteine imunoglobulina domena vezivanja koji sadrže (i) polipeptid domena vezivanja (kao što je varijabilni region teškog lanca, varijabilni region lakog lanca ili varijabilni region teškog lanca fuzionisan sa varijabilnim regionom lakog lanca preko linker peptida) koji je fuzionisan za polipeptid zglobnog regiona imunoglobulina, (ii) konstantni region teškog lanca imunoglobulina CH2 fuzionisan za zglobni region, i (iii) konstantni region teškog lanca imunoglobulina CH3 fuzionisan za CH2 konstantni region. Region zgloba se može modifikovati zamenom jednog ili više cisteinskih ostataka sa serinskim ostacima da bi se sprečila dimerizacija. Takvi fuzioni proteini imunoglobulina sa domenom vezivanja su dalje otkriveni u US 2003/0118592 i US 2003/0133939. Ovi fragmenti antitela se dobijaju korišćenjem konvencionalnih tehnika poznatih onima koji su stručnjaci u ovoj oblasti, a fragmenti se pregledaju za upotrebljivost na isti način kao i intaktna antitela.
[0044] Tipično mesto vezivanja antigena se sastoji od varijabilnih regiona formiranih uparivanjem imunoglobulina lakog lanca i imunoglobulina teškog lanca. Struktura varijabilnih regiona antitela je veoma konzistentna i pokazuje veoma slične strukture. Ovi varijabilni regioni se obično sastoje od relativno homolognih okvirnih regiona (FR) raspoređenih sa tri hipervarijabilna regiona koja se nazivaju regioni koji određuju komplementarnost (CDR). Ukupna aktivnost vezivanja fragmenta koji se vezuje za antigen često je diktirana sekvencom CDR-ova. FR č esto igraju ulogu u pravilnom pozicioniranju i poravnanju u tri dimenzije CDR-a za optimalno vezivanje antigena. U stvari, pošto su CDR sekvence odgovorne za većinu interakcija antitelo-antigen, moguće je eksprimirati rekombinantna antitela koja pokazuju svojstva specifičnih prirodnih antitela konstruisanjem vektora ekspresije koji uključuju CDR sekvence iz specifičnog prirodnog antitela kalemljenog na okvirne sekvence iz različitog antitela sa različitim svojstvima (see, e.g., Riechmann, L. et al., Nature 332:323-327, 1998; Jones, P. et al., Nature 321:522-525, 1986; and Queen, C. et al., Proc. Natl. Acad. USA 86:10029-10033, 1989). Takve okvirne sekvence mogu se dobiti iz javnih baza podataka DNK koje uključuju sekvence gena antitela zametne linije. Ove sekvence zametne linije će se razlikovati od sekvenci gena zrelih antitela jer neće uključivati potpuno sastavljene varijabilne gene, koji se formiraju spajanjem V(D)J tokom sazrevanja B ćelija. Sekvence gena zametne linije će se takođe razlikovati od sekvenci sekundarnog repertoarnog antitela visokog afiniteta koje sadrži mutacije u promenljivom genu, ali su tipično grupisane u CDR-ovima. Na primer, somatske mutacije su relativno retke u amino terminalnom delu okvirnog regiona 1 i u karboksi-terminalnom delu okvirnog regiona 4. Štaviše, mnoge somatske mutacije ne menjaju značajno svojstva vezivanja antitela. Iz tog razloga, nije neophodno da se dobije cela DNK sekvenca određenog antitela da bi se ponovo stvorilo intaktno rekombinantno antitelo koje ima svojstva vezivanja slična onima originalnog antitela. Delimična sekvenca teškog i lakog lanca koja obuhvata CDR regione je tipično dovoljna za ovu svrhu. Delimična sekvenca se koristi da se odredi koja varijabla zametne linije i spojni genski segmenti su doprineli rekombinovanim genima varijabli antitela. Sekvenca zametne linije se zatim koristi za popunjavanje nedostajućih delova varijabilnih regiona. Vodeće sekvence teškog i lakog lanca se cepaju tokom sazrevanja proteina i ne doprinose svojstvima konačnog antitela. Da bi se dodale sekvence koje nedostaju, klonirane cDNK sekvence se mogu kombinovati sa sintetičkim oligonukleotidima ligacijom ili PCR amplifikacijom. Alternativno, ceo varijabilni region se može sintetizovati da bi se stvorio potpuno sintetički klon varijabilnog regiona. Ovaj proces ima određene prednosti kao što su eliminacija ili uključivanje određenih restrikcijskih mesta, ili optimizacija određenih kodona. Naravno, celina ili delovi okvirnog regiona antitela opisanog ovde mogu da se koriste zajedno sa CDR-ovima da bi se optimizovao afinitet, specifičnost ili bilo koja druga željena svojstva antitela.
[0045] U nekim aspektima, pronalazak se odnosi na polimere kao š to je bifunkcionalni polimer. "Bifunkcionalni polimer", takođe nazvan "bifunkcionalni linker", odnosi se na polimer koji sadrži dve funkcionalne grupe koje su sposobne da specifično reaguju sa drugim delovima da bi formirale kovalentne ili nekovalentne veze. Takvi ostaci mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, bočne grupe na prirodnim ili neprirodnim amino kiselinama ili peptidima koji sadrže takve prirodne ili neprirodne aminokiseline. Drugi delovi koji mogu biti vezani za bifunkcionalni linker ili bifunkcionalni polimer mogu biti isti ili različiti ostaci. Samo kao primer, bifunkcionalni linker može imati funkcionalnu grupu koja reaguje sa grupom na prvom peptidu, i drugu funkcionalnu grupu koja je reaktivna sa grupom na drugom peptidu, pri čemu formira konjugat koji uključuje prvi peptid, bifunkcionalni linker i drugi peptid. Poznati su mnogi postupci i molekuli linkeri za vezivanje različitih jedinjenja za peptide. Videti, na primer, Evropsku patentnu prijavu br. 0188256; U.S. patent br. 4,659,839; 4,414,148; 4,699,784; 4,680,338; i 4,569,789. "Multifunkcionalni polimer" koji se takođe naziva "multifunkcionalni linker", odnosi se na polimer koji sadrži dve ili više funkcionalnih grupa koje su sposobne da reaguju sa drugim delovima. Takvi delovi mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, bočne grupe na prirodnim ili neprirodnim amino kiselinama ili peptidima koji sadrže takve prirodne ili neprirodne aminokiseline, (uključujući, ali ne ograničavajući se na, bočne grupe amino kiselina) da formiraju kovalentne ili nekovalentne veze. Bifunkcionalni polimer ili multifunkcionalni polimer može biti bilo koje željene dužine ili molekulske težine i može biti izabran da obezbedi određeni željeni razmak ili konformaciju između jednog ili više molekula povezanih sa jedinjenjem i molekul za koje se vezuje ili za jedinjenje.
[0046] Termin "bioraspoloživost", kako se ovde koristi, odnosi se na brzinu i obim do kojeg se supstanca ili njen aktivni deo oslobađaju iz farmaceutskog doznog oblika i postaju dostupni na mestu delovanja ili u opštoj cirkulaciji. Povećanje bioraspoloživosti se odnosi na povećanje brzine i obima supstanca ili njen aktivni deo se isporučuje iz farmaceutskog doznog oblika i postaje dostupan na mestu delovanja ili u opštoj cirkulaciji. Na primer, povećanje bioraspoloživosti može biti naznačeno kao povećanje koncentracije supstance ili njenog aktivnog dela u krvi u poređenju sa drugim supstancama ili aktivnim delovima.
[0047] Termin "biološki aktivan molekul", "biološki aktivni deo" ili "biološki aktivan agens" kada se ovde koristi označava bilo koju supstancu koja može uticati na bilo koje fizičke ili biohemijske osobine biološkog sistema, puta, molekula ili interakcije koja se odnosi na organizam, uključujući ali ne ograničavajući se na viruse, bakterije, bakteriofage, transpozon, prion, insekte, gljive, biljke, životinje i ljude. Konkretno, kako se ovde koristi, biološki aktivni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na bilo koju supstancu namenjenu za dijagnostiku, lečenje, ublažavanje, lečenje ili prevenciju bolesti kod ljudi ili drugih životinja, ili da na drugi način poboljšaju fizičko ili mentalno blagostanje ljudi ili životinja. Primeri za biološki aktivni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na, peptide, proteine, enzime, lekove sa malim molekulima, teške lekove, meke lekove, prolekove, ugljene hidrate, neorganske atome ili molekule, boje, lipide, nukleozide, radionuklide, oligonukleotide, ćelije, toksine, viruse, lipozome, mikročestice i micele. Klase biološki aktivnih agenasa koje su pogodne za upotrebu sa metodama i kompozicijama opisanim ovde uključuju, ali nisu ograničene na, lekove, prolekove, radionuklide, agense za snimanje, polimere, antibiotike, fungicide, antivirusna sredstva, antiinflamatorna sredstva, anti-tumorske agense, kardiovaskularne agense, agense protiv anksioznosti, hormone, faktore rasta, steroidne i nesteroidne agense, toksine dobijene iz mikroba i slično.
[0048] Pod "modulacijom biološke aktivnosti" se podrazumeva povećanje ili smanjenje reaktivnosti polipeptida, menjanje selektivnosti polipeptida, povećanje ili smanjenje selektivnosti supstrata polipeptida. Analiza modifikovane biološke aktivnosti može se izvršiti upoređivanjem biološke aktivnosti neprirodnog polipeptida sa onom prirodnog polipeptida.
[0049] U nekim aspektima, pronalazak se odnosi na aminokiseline koje su biosintetički ugrađene u antitelo. Termin "biosintetički", kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koji metod koji koristi sistem translacije (ćelijski ili nećelijski), uključujući upotrebu najmanje jedne od sledećih komponenti: polinukleotida, kodona, tRNK i ribozoma. Kao primer, neprirodne amino kiseline mogu biti "biosintetički ugrađene" u polipeptide neprirodnih aminokiselina korišćenjem metoda i tehnika koje su ovde opisane i kao što je dobro poznato u stanju tehnike. Videti na primer, WO2010/011735 i WO2005/074650.
[0050] Termin "konzervativno modifikovane varijante" primenjuje se i na prirodne i neprirodne aminokiselinske i prirodne i neprirodne sekvence nukleinskih kiselina, i njihove kombinacije. Što se tiče određenih sekvenci nukleinskih kiselina, "konzervativno modifikovane varijante" se odnose na one prirodne i neprirodne nukleinske kiseline koje kodiraju identične ili suštinski identične prirodne i neprirodne aminokiselinske sekvence, ili pri čemu prirodna i neprirodna nukleinska kiselina ne kodira prirodnu i neprirodnu sekvencu aminokiselina, u suštinski identičnu sekvencu. Na primer, zbog degeneracije genetskog koda, veliki broj funkcionalno identičnih nukleinskih kiselina kodira bilo koji dati protein. Na primer, kodoni GCA, GCC, GCG i GCU kodiraju aminokiselinu alanin. Dakle, na svakoj poziciji gde je alanin određen kodonom, kodon može biti izmenjen u bilo koji od odgovarajućih opisanih kodona bez promene kodiranog polipeptida. Takve varijacije nukleinske kiseline su "tihe varijacije", koje su jedna vrsta konzervativno modifikovanih varijacija. Tako, kao primer, svaka prirodna ili neprirodna sekvenca nukleinske kiseline ovde koja kodira prirodni ili neprirodni polipeptid takođe opisuje svaku moguću tihu varijaciju prirodne ili neprirodne nukleinske kiseline. Stručnjak u ovoj oblasti će prepoznati da svaki kodon u prirodnoj ili neprirodnoj nukleinskoj kiselini (osim AUG, koji je obično jedini kodon za metionin, i TGG, koji je obično jedini kodon za triptofan) može biti modifikovan da daje funkcionalno identičan molekul. Shodno tome, svaka tiha varijacija prirodne i neprirodne nukleinske kiseline koja kodira prirodni i neprirodni polipeptid je implicitna u svakoj opisanoj sekvenci. Što se tiče sekvenci aminokiselina, pojedinačne supstitucije, delecije ili dodaci nukleinskoj kiselini, peptidu, polipeptidu ili proteinskoj sekvenci koja menja, dodaje ili briše jednu prirodnu i neprirodnu amino kiselinu ili mali procenat prirodnih i neprirodnih aminokiselina kiseline u kodiranoj sekvenci je "konzervativno modifikovana varijanta" pri čemu promena rezultira brisanjem aminokiseline, dodavanjem amino kiseline ili supstitucijom prirodne i neprirodne amino kiseline sa hemijski sličnom amino kiselinom. Tabele konzervativnih supstitucija koje obezbeđuju funkcionalno slične prirodne amino kiseline su dobro poznate u stanju tehnike. Stručnjacima su poznate tabele konzervativnih supstitucija koje obezbeđuju funkcionalno slične aminokiseline. Svaka od sledećih osam grupa sadrži aminokiseline koje su konzervativne zamene jedna za drugu: 1) Alanin (A), Glicin (G); 2) asparaginska kiselina (D), glutaminska kiselina (E); 3) Asparagin (N), Glutamin (Q); 4) arginin (R), lizin (K); 5) Izoleucin (I), Leucin (L), Metionin (M), Valin (V); 6) fenilalanin (F), tirozin (Y), triptofan (W); 7) Serin (S), Treonin (T); i 8) Cistein (C), Metionin (M) (videti, npr., Creighton, Proteins: Structures and Molecular Properties (W H Freeman & Co.; 2. izdanje, 1993). Takve konzervativno modifikovane varijante su dodatak i ne isključuju polimorfne varijante, homologe među vrstama i alele kompozicija opisanih ovde.
[0051] Termin "lek", kako se ovde koristi, odnosi se na bilo koju supstancu koja se koristi u prevenciji, dijagnozi, ublažavanju, lečenju ili tretiranju bolesti ili stanja kao što je rak, uključujući rak prostate.
[0052] Termin "efikasna količina", kako se ovde koristi, odnosi se na dovoljnu količinu agensa, jedinjenja ili kompozicije koja se primenjuje, a koja će u izvesnoj meri ublažiti jedan ili više simptoma bolesti ili stanja koje se leči. Rezultat može biti smanjenje i/ili ublažavanje znakova, simptoma ili uzroka bolesti, ili bilo koju drugu željenu promenu biološkog sistema. Na primer, agens, jedinjenje ili kompozicija koja se primenjuje uključuje, ali nije ograničena na, polipeptid prirodne amino kiseline, polipeptid neprirodne amino kiseline, modifikovani polipeptid prirodne amino kiseline, modifikovani polipeptid koji nije amino kiselina, ili antitelo ili njena varijanta. Kompozicije koje sadrže takve polipeptide prirodnih amino kiselina, polipeptide neprirodnih amino kiselina, modifikovane polipeptide prirodnih amino kiselina, modifikovane polipeptide neprirodnih aminokiselina, ili antitelo ili njihovu varijantu mogu se davati za profilaktičke, poboljšane i/ili terapeutske tretmane. Odgovarajuća "efikasna" količina u svakom pojedinačnom slučaju može se odrediti korišćenjem tehnika, kao što je studija eskalacije doze.
[0053] Izrazi "pojačati" ili "poboljšati" označavaju povećanje ili produženje ili potenciju ili trajanje željenog efekta. Na primer, "pojačavanje" efekta terapeutskih agenasa odnosi se na sposobnost povećanja ili produženja, bilo u potenciju ili trajanje, efekta terapeutskih agenasa tokom lečenja bolesti, poremećaja ili stanja. "Količina koja je efikasna za poboljšanje", kako se ovde koristi, odnosi se na količinu adekvatnu da pojača efekat terapeutskog agensa u lečenju bolesti, poremećaja ili stanja. Kada se koriste kod pacijenata, količine efikasne za ovu upotrebu će zavisiti od težine i toka bolesti, poremećaja ili stanja, prethodne terapije, zdravstvenog statusa pacijenta i odgovora na lekove, kao i od procene lekara koji leči.
[0054] Termin "humanizovano ili himerično antitelo" odnosi se na molekul, uglavnom pripremljen korišćenjem rekombinantnih tehnika, koji ima mesto vezivanja antigena izvedeno iz imunoglobulina neljudske vrste (npr. mišjeg) i preostalog imunoglobulina gde je struktura molekula zasnovana na strukturi i/ili sekvenci humanog imunoglobulina. Uopšteno govoreći, humanizovano antitelo će sadržati suštinski sve od najmanje jednog, a tipično dva, varijabilna domena, u kojima sve ili suštinski sve hipervarijabilne petlje odgovaraju onima nehumanog imunoglobulina i sve ili suštinski sve ostatke okvira/regije (FR) su one sekvence humanog imunoglobulina. Humanizovano antitelo opciono će takođe sadržati u najmanjem deo konstantnog regiona imunoglobulina (Fc), obično onaj humanog imunoglobulina. Humanizovani oblici antitela glodara će u suštini sadržati iste CDR sekvence roditeljskih antitela glodara, iako određene aminokiselinske supstitucije mogu biti uključene da bi se povećao afinitet, povećala stabilnost humanizovanog antitela ili iz drugih razloga. Međutim, pošto razmene CDR petlje ne rezultiraju jednolično antitelom sa istim svojstvima vezivanja kao antitelo porekla, promene u ostacima okvira (FR), ostaci uključeni u podršku CDR petlje, takođe mogu biti uvedeni u humanizovana antitela da bi se očuvao afinitet vezivanje antigena. Mesto za vezivanje antigena može da sadrži ili kompletne varijabilne domene fuzionisane na konstantne domene ili samo regione koji određuju komplementarnost (CDR) kalemljene na odgovarajuće okvirne regione u varijabilnim domenima. Mesta vezivanja antigena mogu biti divljeg tipa ili modifikovana jednom ili više supstitucija amino kiselina. Ovo eliminiše konstantni region kao imunogen kod ljudskih pojedinaca, ali ostaje mogućnost imunog odgovora na strani varijabilni region (LoBuglio, A. F. et al., "Mouse/Human Chimeric Monoclonal Antibody In Man: Kinetics And Immune Response," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 86:4220-4224, 1989). Drugi pristup se fokusira ne samo na obezbeđivanje konstantnih regiona izvedenih od ljudi, već i na modifikovanje varijabilnih regiona kako bi ih preoblikovali što je bliže ljudskom obliku. Poznato je da varijabilni regioni i teških i lakih lanaca sadrže tri regiona koji određuju komplementarnost (CDR) koji variraju u zavisnosti od antigena u pitanju i određuju sposobnost vezivanja, uz četiri okvira regiona (FR) koji su relativno konzervirani u date vrste i koji navodno obezbeđuju skelu za CDR-ove. Kada se nehumana antitela pripremaju u odnosu na određeni antigen, varijabilni regioni se mogu "humanizovati" kalemljenjem CDR-ova izvedenih iz nehumanih antitela na FR prisutne u humanom antitelu koje treba modifikovati. O primeni ovog pristupa na različita antitela pisali su Kettleborough, C. A. et al., "Humanization Of A Mouse Monoclonal Antibody By CDR-Grafting: The Importance Of Framework Residues On Loop Conformation," Protein Engineering 4:773-3783,1991; Co, M. S. et al., "Humanized Antibodies For Antiviral Ther- apy," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 88:2869-2873,1991; Carter, P. et al., "Humanization Of An Anti-p185her2 Antibody For Human Cancer Therapy," Proc. Natl. Acad. Sci. (USA) 89:4285-4289,1992; and Co, M. S. et al., "Chimeric And Humanized Antibodies With Specificity For The CD33 Antigen," J. Immunol. 148:1149-1154,1992. U nekim aspektima, humanizovana antitela čuvaju sve CDR sekvence (na primer, humanizovano mišje antitelo koje sadrži svih šest CDR-ova mišjih antitela). U drugim aspektima, humanizovana antitela imaju jedan ili više CDR-ova (jedan, dva, tri, četiri, pet, šest) koji su izmenjeni u odnosu na originalno antitelo, koji se takođe nazivaju jedan ili više CDR-ova „proisteklih iz” jednog ili više CDR-ova od originalnog antitela.
[0055] Termin "identičan", kako se ovde koristi, odnosi se na dve ili više sekvenci ili podsekvenci koje su iste. Pored toga, termin "suštinski identičan", kako se ovde koristi, odnosi se na dve ili više sekvenci koje imaju procenat uzastopnih jedinica koje su iste kada se uporede i poravnaju za maksimalnu korespondenciju u okviru prozora za upoređivanje, ili označeni region izmeren korišćenjem poređenja algoritama ili ručnim poravnanjem i vizuelnom inspekcijom. Samo kao primer, dve ili više sekvenci mogu biti "suštinski identične" ako su sekvencijalne jedinice oko 60 % identične, oko 65 % identične, oko 70 % identične, oko 75 % identične, oko 80 % identične, oko 85 % identične, oko 90% identične, ili oko 95 % identične u određenom regionu. Takvi procenti opisuju "procentualni identitet" dve ili više sekvenci. Identitet sekvence može postojati u regionu koji ima najmanje oko 75-100 uzastopnih jedinica u dužini, u regionu koji je dužine oko 50 sekvencijalnih jedinica, ili, tamo gde nije navedeno, u celoj sekvenci. Ova definicija se takođe odnosi na dopunu test sekvence. Kao primer samo, dve ili više polipeptidnih sekvenci su identične kada su aminokiselinski ostaci isti, dok su dve ili više polipeptidnih sekvenci "suštinski identične" ako su aminokiselinski ostaci oko 60 % identični, oko 65 % identični, oko 70 % identični, oko 75 % identični, oko 80 % identični, oko 85 % identični, oko 90 % identični, ili oko 95 % identični u određenom regionu. Identitet može postojati u regionu koji ima najmanje oko 75 do oko 100 aminokiselina u dužini, u regionu koji ima dužinu od oko 50 amino kiselina, ili, tamo gde nije specificirano, u celoj sekvenci polipeptidne sekvence. Pored toga, samo kao primer, dve ili više polinukleotidnih sekvenci su identične kada su ostaci nukleinske kiseline isti, dok su dve ili više polinukleotidnih sekvenci „suštinski identične“ ako su ostaci nukleinske kiseline oko 60 % identični, oko 65 % identični, oko 70 % identični, oko 75 % identični, oko 80 % identični, oko 85 % identični, oko 90 % identični, ili oko 95 % identični u određenom regionu. Identitet može postojati preko regiona koji je najmanje od oko 75 do oko 100 nukleinskih kiselina u dužini, preko regiona koji je dužine od oko 50 nukleinskih kiselina, ili, tamo gde nije specificirano, preko cele sekvence polinukleotidne sekvence.
[0056] Termin "imunogenost", kako se ovde koristi, odnosi se na odgovor antitela na primenu terapeutskog leka. Imunogenost prema terapeutskim polipeptidima neprirodnih amino kiselina može se dobiti korišćenjem kvantitativnih i kvalitativnih testova za detekciju antitela na polipeptide anti-neprirodnih amino kiselina u biološkim tečnostima. Takvi testovi uključuju, ali nisu ograničeni na, radioimunoesej (RIA), enzimski imunoesej (ELISA), luminescentni imunoesej (LIA) i fluorescentni imunoesej (FIA). Analiza imunogenosti prema terapijskim polipeptidima neprirodnih aminokiselina uključuje poređenje odgovora antitela nakon primene terapeutskih polipeptida neprirodnih amino kiselina sa odgovorom antitela nakon primene terapeutskih polipeptida prirodnih amino kiselina.
[0057] Termin "izolovan", kako se ovde koristi, odnosi se na odvajanje i uklanjanje komponente od značaja od komponenti koje nisu od značaja. Izolovane supstance mogu biti u suvom ili polusuvom stanju, ili u rastvoru, uključujući, ali ne ograničavajući se na vodeni rastvor. Izolovana komponenta može biti u homogenom stanju ili izolovana komponenta može biti deo farmaceutske kompozicije koja sadrži dodatne farmaceutski prihvatljive nosače i/ili ekscipijente. Čistoća i homogenost se mogu odrediti korišćenjem tehnika analitičke hemije uključujući, ali bez ograničenja, elektroforezu u poliakrilamidnom gelu ili tečnu hromatografiju visokih performansi. Pored toga, kada je komponenta od značaja izolovana i koja je dominantna vrsta prisutna u preparatu, komponenta kako je ovde opisana je suštinski prečišćena. Termin "prečišćen", kako se ovde koristi, može se odnositi na komponentu od značaja koja je čista najmanje 85 %, čista najmanje 90 %, č ista najmanje 95 %, č ista najmanje 99 % ili više. Samo kao primer, nukleinske kiseline ili proteini su "izolovani" kada su takve nukleinske kiseline ili proteini oslobođeni u najmanjem nekih ćelijskih komponenti sa kojima su povezani u prirodnom stanju, ili kada su nukleinska kiselina ili protein koncentrisani do nivoa većeg od njegove koncentracije in vivo ili in vitro proizvodnje. Takođe, kao primer, gen se izoluje kada se odvoji od otvorenih okvira za čitanje koji okružuju gen i kodiraju protein koji nije gen od značaja.
[0058] Termin "veza", kako se ovde koristi da se odnosi na veze ili hemijski deo formiran hemijskom reakcijom između funkcionalne grupe linkera i drugog molekula. Takve veze mogu uključivati, ali nisu ograničene na, kovalentne veze i nekovalentne veze, dok takvi hemijski ostaci mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, estre, karbonate, imin fosfatne estre, hidrazone, acetale, ortoestre, peptidne veze i oligonukleotidne veze. Hidrolitički stabilne veze znače da su veze suštinski stabilne u vodi i da ne reaguju sa vodom pri korisnim pH vrednostima, uključujući ali ne ograničavajući se na, u fiziološkim uslovima tokom dužeg vremenskog perioda, možda čak i neograničeno. Hidrolitički nestabilne ili razgradive veze znače da su veze razgradive u vodi ili u vodenim rastvorima, uključujući, na primer, krv. Enzimski nestabilne ili razgradive veze znače da vezu može razgraditi jedan ili više enzima. Samo kao primer, PEG i srodni polimeri mogu uključiti razgradive veze u polimernoj kičmi ili u grupi linkera između polimerne kičme i jedne ili više terminalnih funkcionalnih grupa molekula polimera. Takve razgradive veze uključuju, ali nisu ograničene na estarske veze nastale reakcijom PEG karboksilnih kiselina ili aktiviranih PEG karboksilnih kiselina sa alkoholnim grupama na biološki aktivnom agensu, pri čemu takve estarske grupe generalno hidrolizuju pod fiziološkim uslovima da bi oslobodile biološki aktivni agens. Druge hidrolitički razgradive veze uključuju, ali nisu ograničene na karbonatne veze; iminske veze su rezultat reakcije amina i aldehida; fosfatne estarske veze nastale reakcijom alkohola sa fosfatnom grupom; hidrazonske veze koje su produkt reakcije hidrazida i aldehida; acetalne veze koje su proizvod reakcije aldehida i alkohola; ortoestarske veze koje su proizvod reakcije formata i alkohola; peptidne veze formirane od aminske grupe, uključujući, ali bez ograničenja, na kraju polimere kao što je PEG, i karboksilnu grupu peptida; i oligonukleotidne veze formirane od fosforamiditne grupe, uključujući, ali bez ograničenja, na kraju polimera i 5' hidroksilnu grupu oligonukleotida.
[0059] Termin "metabolit", kako se ovde koristi, odnosi se na derivat jedinjenja, kao primer polipeptida prirodne amino kiseline, polipeptida neprirodne amino kiseline, modifikovani polipeptid prirodne amino kiseline, ili modifikovani polipeptid neprirodne amino kiseline, koji se formira kada jedinjenje, na primer polipeptid prirodne amino kiseline, polipeptid neprirodne amino kiseline, modifikovani polipeptid prirodne amino kiseline, ili modifikovani neprirodni aminokiselinski polipeptid se metaboliše. Termin "farmaceutski aktivan metabolit" ili "aktivni metabolit" odnosi se na biološki aktivni derivat jedinjenja, kao primer polipeptid prirodne amino kiseline, polipeptid neprirodne amino kiseline, modifikovani polipeptid prirodne amino kiseline ili modifikovani polipeptid amino kiseline, polipeptid prirodne amino kiseline, koji se formira kada se takvo jedinjenje, na primer polipeptid prirodne amino kiseline, polipeptid neprirodne amino kiseline, modifikovani polipeptid prirodne amino kiseline, ili modifikovani polipeptid neprirodne amino kiseline, se metaboliše.
[0060] Termin "metabolizovan", kako se ovde koristi, odnosi se na zbir procesa kojima se određena supstanca menja od strane organizma. Takvi procesi uključuju, ali nisu ograničeni na, reakcije hidrolize i reakcije katalizovane enzimima. Dodatne informacije o metabolizmu mogu se dobiti u The Pharmacological Basis of Therapeutics, 9th Edition, McGraw-Hill (1996). Samo kao primer, metaboliti polipeptida prirodnih amino kiselina, polipeptida neprirodnih amino kiselina, modifikovanih polipeptida prirodnih amino kiselina ili modifikovanih polipeptida neprirodnih amino kiselina mogu se identifikovati bilo primenom polipeptida prirodnih amino kiselina, polipeptida neprirodnih aminokiselina, modifikovanih polipeptida prirodnih amino kiselina, ili modifikovanih polipeptida neprirodnih amino kiselina za domaćina i analizom uzoraka tkiva domaćina, ili inkubacijom polipeptida prirodnih amino kiselina, polipeptida neprirodnih amino kiselina, modifikovanih polipeptida prirodnih amino kiselina ili modifikovanih polipetida neprirodnih aminokiselina sa ćelijama jetre in vitro i analiza dobijenih jedinjenja.
[0061] Termin "modifikovan", kako se ovde koristi, odnosi se na prisustvo promene prirodne amino kiseline, neprirodne amino kiseline, polipeptida prirodne amino kiseline ili polipeptida neprirodne amino kiseline. Takve promene ili modifikacije se mogu dobiti postsintetskim modifikacijama prirodnih amino kiselina, neprirodnih amino kiselina, polipeptida prirodnih amino kiselina ili polipeptida neprirodnih aminokiselina, ili kotranslacionom, ili post-translacionom modifikacijom prirodnih aminokiseline, neprirodnih aminokiselina, polipeptida prirodnih amino kiselina ili polipeptida neprirodnih amino kiselina.
[0062] "Neprirodna amino kiselina" se odnosi na aminokiselinu koja nije jedna od 20 uobičajenih amino kiselina ili pirolizin ili selenocistein. Drugi termini koji se mogu koristiti kao sinonim za termin "neprirodna aminokiselina" su "neprirodno kodirana aminokiselina", "neprirodna aminokiselina", "aminokiselina koja se ne pojavljuje u prirodi" i se obeležavaju na različite načine i stavljaju crtice. Termin "neprirodna amino kiselina" uključuje, ali nije ograničen na, aminokiseline koje se javljaju prirodno modifikacijom prirodno kodirane aminokiseline (uključujući, ali ne ograničavajući se na, 20 uobičajenih amino kiselina ili pirolizin i selenocistein), ali nisu same inkorporisane u rastući polipeptidni lanac pomoću kompleksa za translaciju. Primeri aminokiselina koje se javljaju u prirodi koje nisu prirodno kodirane uključuju, ali nisu ograničeni na, N-acetilglukozaminil-L-serin, N-acetilglukozaminil-L-treonin i O-fosfotirozin. Dodatno, termin "neprirodna amino kiselina" uključuje, ali nije ograničen na, aminokiseline koje se ne javljaju u prirodi i koje se mogu dobiti sintetički ili se mogu dobiti modifikacijom neprirodnih amino kiselina.
[0063] Termin "nukleinska kiselina", kako se ovde koristi, odnosi se na deoksiribonukleotide, deoksiribonukleozide, ribonukleozide ili ribonukleotide i njihove polimere u jednolančanom ili dvolančanom obliku. Samo kao primer, takve nukleinske kiseline i polimeri nukleinskih kiselina uključuju, ali nisu ograničeni na, (i) analoge prirodnih nukleotida koji imaju slična svojstva vezivanja kao referentna nukleinska kiselina i metabolišu se na način sličan nukleotidima koji se javljaju u prirodi; (ii) analozi oligonukleotida uključujući, ali nisu ograničeni na, PNA (peptidonukleinsku kiselinu), analoge DNK koji se koriste u antisenzitivnoj tehnologiji (fosforotioati, fosforoamidati i slično); (iii) njihove konzervativno modifikovane varijante (uključujući, ali ne ograničavajući se na, degenerisane supstitucije kodona) i eksplicitno naznačene komplementarne sekvence i sekvence. Na primer, degenerisane supstitucije kodona mogu se postići generisanjem sekvenci u kojima je treća pozicija jednog ili više odabranih (ili svih) kodona supstituisana ostacima mešane baze i/ili deoksiinozina (Batzer et al., Nucleic Acid Res. 19:5081, 1991; Ohtsuka et al., J. Biol. Chem. 260:2605-2608, 1985; and Rossolini et al., Mol. Cell. Probes 8:91-98, 1994).
[0064] Termin "farmaceutski prihvatljiv", kako se ovde koristi, odnosi se na materijal, uključujući, ali ne ograničavajući se, na so, vezivo, pomoćno sredstvo, ekscipijent, nosač ili razblaživač, koji ne poništava biološku aktivnost ili svojstva jedinjenja, i relativno je netoksičan, tj. materijal se može primeniti na pojedinca bez izazivanja neželjenih bioloških efekata ili interakcije na štetan način sa bilo kojom komponentom kompozicije u kojoj je sadržan.
[0065] U nekim aspektima, pronalazak se odnosi na polimere. Termin "polimer", kako se ovde koristi, odnosi se na molekul sastavljen od ponovljenih podjedinica. Takvi molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na, polipeptide, polinukleotide, ili polisaharide ili polialkilen glikole. Polimeri prema pronalasku mogu biti linearni ili razgranati polimerni polietar polioli uključujući, ali nisu ograničeni na, polietilen glikol, polipropilen glikol, polibutilen glikol i njihove derivate. Drugi primerni aspekti su navedeni, na primer, u komercijalnim katalozima dobavljača, kao što je katalog kompanije Shearwater Corporation’s catalog "Polyethylene Glycol and Derivatives for Biomedical Applications" (2001). Samo kao primer, takvi polimeri imaju prosečnu molekulsku težinu između oko 0,1 kDa do oko 100 kDa. Takvi polimeri uključuju, ali nisu ograničeni na, između oko 100 Da i oko 100.000 Da ili više. Molekularna težina polimera može biti između oko 100 Da i oko 100.000 Da, uključujući, ali ne ograničavajući se na, oko 100.000 Da, oko 95.000 Da, oko 90.000 Da, oko 85.000 Da, oko 80.000 Da, oko 75.000 Da, oko 75.000 Da, oko 65.000 Da, oko 60.000 Da, oko 55.000 Da, oko 50.000 Da, oko 45.000 Da, oko 40.000 Da, oko 35.000 Da, oko 30.000 Da, oko 25.000 Da, oko 20.000 Da, oko 15.000 Da, oko 10.000 Da, oko 9.000 Da, oko 8.000 Da, oko 7.000 Da, oko 6.000 Da oko 5.000 Da, oko 4.000 Da, oko 3.000 Da, oko 2.000 Da, oko 1.000 Da, oko 900 Da, oko 800 Da, oko 700 Da, oko 600 Da, oko 500 Da, oko 400 Da, oko 300 Da, oko 300 Da i oko 100 Da. U nekim aspektima molekulska težina polimera je između oko 100 Da i oko 50.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina polimera je između oko 100 Da i oko 40.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina polimera je između oko 1.000 Da i oko 40.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina polimera je između oko 2.000 do oko 50.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina polimera je između oko 5.000 Da i oko 40.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina polimera je između oko 10.000 Da i oko 40.000 Da. U nekim aspektima, molekul poli(etilen glikola) je razgranati polimer. Molekularna težina PEG razgranatog lanca može biti između oko 1.000 Da i oko 100.000 Da, uključujući, ali ne ograničavajući se na, oko 100.000 Da, oko 95.000 Da, oko 90.000 Da, oko 85.000 Da, oko 80.000 Da, oko 75.000 Da. 70.000 Da, oko 65.000 Da, oko 60.000 Da, oko 55.000 Da, oko 50.000 Da, oko 45.000 Da, oko 40.000 Da, oko 35.000 Da, oko 30.000 Da, oko 25.000 Da, oko 20.000 Da, oko 15.000 Da, oko 10.000 Da, oko 9.000 Da, oko 8.000 Da, oko 7.000 Da, oko 6.000 Da, oko 5.000 Da, oko 4.000 Da, oko 3.000 Da, oko 2.000 Da i oko 1.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 1.000 Da i oko 50.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 1.000 Da i oko 40.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina PEG razgranatog lanca je između oko 5.000 Da i oko 40.000 Da. U nekim aspektima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 5.000 Da i oko 20.000 Da. U drugim aspektima, molekulska težina razgranatog lanca PEG je između oko 2.000 do oko 50.000 Da. Termin "PEGilacija" ili "PEGilacija" se odnosi na kovalentno vezivanje određene sintetičke amino kiseline za molekul polietilen glikola (PEG). Postupak može da obuhvata dovođenje u kontakt izolovanog a-PSMA ADCs polipeptida koji sadrži sintetičku amino kiselinu sa polimerom rastvorljivim u vodi koji sadrži deo koji reaguje sa sintetičkom amino kiselinom.
[0066] Termini "polipeptid", "peptid" i "protein" se ovde koriste naizmenično za označavanje polimera aminokiselinskih ostataka. To jest, opis usmeren na polipeptid se podjednako primenjuje na opis peptida i opis proteina, i obrnuto. Termini se odnose na polimere aminokiselina koje se javljaju u prirodi, kao i na polimere aminokiselina u kojima je jedan ili više aminokiselinskih ostataka neprirodna amino kiselina. Dodatno, takvi "polipeptidi", "peptidi" i "proteini" uključuju lance aminokiselina bilo koje dužine, uključujući proteine pune dužine, pri čemu su aminokiselinski ostaci povezani kovalentnim peptidnim vezama.
[0067] Termin "post-translaciono modifikovan" se odnosi na bilo koju modifikaciju prirodne ili neprirodne amino kiseline koja se javlja nakon što je takva amino kiselina translativno ugrađena u polipeptidni lanac. Takve modifikacije uključuju, ali nisu ograničene na, ko-translacione in vivo modifikacije, kotranslacione in vitro modifikacije (kao što je u sistemu prevođenja bez ćelija), post-translacione in vivo modifikacije i post-translacione in vitro modifikacije.
[0068] Termini "prolek" ili "farmaceutski prihvatljiv prolek", kako se ovde koriste, odnose se na agens koji se konvertuje u osnovni lek in vivo ili in vitro, koji ne poništava biološku aktivnost ili svojstva leka, i relativno je netoksičan, tj. materijal se može primeniti na pojedinca bez izazivanja neželjenih bioloških efekata ili interakcije na štetan način sa bilo kojom komponentom kompozicije u kojoj je sadržan. Prolekovi su generalno prekursori leka koji se, nakon primene subjektu i naknadne apsorpcije, konvertuju u aktivnu ili aktivniju vrstu putem nekog procesa, kao što je konverzija metaboličkim putem. Neki prolekovi imaju hemijsku grupu prisutnu na proleku koja ga čini manje aktivnim i/ili daje leku rastvorljivost ili neko drugo svojstvo. Kada je hemijska grupa odvojena i/ili modifikovana od proleka, stvara se aktivni lek. Prolekovi se u telu pretvaraju u aktivni lek putem enzimskih ili neenzimskih reakcija. Prolekovi mogu da obezbede poboljšana fizičkohemijska svojstva kao što su bolja rastvorljivost, poboljšane karakteristike isporuke, kao što je specifično ciljanje na određenu ćeliju, tkivo, organ ili ligand, i poboljšanu terapeutsku vrednost leka. Prednosti takvih prolekova uključuju, ali nisu ograničene na, (i) jednostavnost primene u poređenju sa matičnim lekom; (ii) prolek može biti biodostupan oralnom primenom, dok matični lek nije; i (iii) prolek može takođe imati poboljšanu rastvorljivost u farmaceutskim kompozicijama u poređenju sa matičnim lekom. Prolek uključuje farmakološki neaktivan ili smanjenu aktivnost derivata aktivnog leka. Prolekovi mogu biti dizajnirani da modulišu količinu leka ili biološki aktivnog molekula koji dostigne željeno mesto delovanja kroz manipulaciju svojstvima leka, kao što su fizičkohemijska, biofarmaceutska ili farmakokinetička svojstva. Primer, bez ograničenja, proleka bi bio polipeptid neprirodne aminokiseline koji se primenjuje kao estar („prolek“) da bi se olakšao prenos preko ćelijske membrane gde je rastvorljivost u vodi štetna za pokretljivost i koja se zatim metabolički hidrolizira u karboksilnu kiselinu, aktivni entitet, u ćeliji gde je rastvorljivost u vodi korisna. Prolekovi mogu biti dizajnirani kao reverzibilni derivati lekova, za upotrebu kao modifikatori za poboljšanje transporta leka do tkiva specifičnih za mesto.
[0069] Termin "profilaktički efikasna količina", kako se ovde koristi, odnosi se na količinu kompozicije koja sadrži najmanje jedan polipeptid neprirodne amino kiseline ili najmanje jedan modifikovani polipeptid neprirodne amino kiseline profilaktički primenjen na pacijenta koji će donekle ublažiti jedan ili više simptoma bolesti, stanja ili poremećaja koji se leče. U takve profilaktičke primene, takve količine mogu zavisiti od pacijentovog zdravstvenog stanja, težine i slično. Smatra se da je u okviru procene sručnjaka da se takve profilaktički efikasne količine odrede rutinskim eksperimentisanjem, uključujući, ali ne ograničavajući se na, kliničko ispitivanje eskalacije doze.
[0070] Termin "rekombinantna ćelija domaćin", koja se takođe naziva "ćelija domaćin", odnosi se na ćeliju koja uključuje egzogeni polinukleotid, pri č emu metode koje se koriste za umetanje egzogenog polinukleotida u ćeliju uključuju, ali nisu ograničene na, direktno uzimanje, transdukciju, f-sparivanje ili druge metode poznate u stanju tehnike za stvaranje rekombinantnih ćelija domaćina. Samo kao primer, takav egzogeni polinukleotid može biti neintegrisani vektor, uključujući ali bez ograničenja na plazmid, ili može biti integrisan u genom domaćina.
[0071] Termin "subjekat" kako se ovde koristi, odnosi se na životinju koja je predmet lečenja, posmatranja ili eksperimenta. Samo kao primer, subjekt može biti, ali nije ograničen na, sisara uključujući, ali bez ograničenja, čoveka.
[0072] Termin "suštinski prečišćen", kako se ovde koristi, odnosi se na komponentu od značaja koja može biti suštinski ili u osnovi bez drugih komponenti koje normalno prate ili deluju sa komponentom od značaja pre prečišćavanja. Samo kao primer, komponenta od značaja može biti "značajno prečišćena" kada priprema komponente od značaja sadrži manje od oko 30 %, manje od oko 25 %, manje od oko 20 %, manje od oko 15 %, manje od oko 10 %, manje od oko 5 %, manje od oko 4 %, manje od oko 3 %, manje od oko 2 % ili manje od oko 1 % (prema suvoj težini) kontaminirajućih komponenti. Dakle, "znatno prečišćena" komponenta od značaja može imati nivo čistoće od oko 70 %, oko 75 %, oko 80 %, oko 85 %, oko 90 %, oko 95 %, oko 96 %, oko 97 %, oko 98 %, oko 99 % ili više. Samo kao primer, polipeptid prirodne amino kiseline ili polipeptid neprirodne amino kiseline može se prečistiti iz nativne ćelije ili ćelije domaćina u slučaju rekombinantno proizvedenih polipeptida prirodnih amino kiselina ili polipeptida neprirodnih amino kiselina. Kao primer, preparat polipeptida prirodne amino kiseline ili polipeptida neprirodne amino kiseline može biti "u suštini prečišćen" kada preparat sadrži manje od oko 30 %, manje od oko 25 %, manje od oko 20 %, manje od oko 15 %, manje od oko 10 %, manje od oko 5 %, manje od oko 4 %, manje od oko 3 %, manje od oko 2 %, ili manje od oko 1 % (prema suvoj težini) kontaminirajućeg materijala. Kao primer, kada se prirodni polipeptid amino kiseline ili polipeptid neprirodne amino kiseline rekombinantno proizvodi od strane ćelija domaćina, polipeptid prirodne amino kiseline ili polipeptid neprirodne amino kiseline može biti prisutan u oko 30 %, oko 25 % oko 20 %, oko 15 %, oko 10 %, oko 5 %, oko 4 %, oko 3 %, oko 2 %, ili oko 1 % ili manje suve težine ćelija. Kao primer, kada se prirodni polipeptid amino kiseline ili polipeptid neprirodne amino kiseline rekombinantno proizvodi od strane ćelija domaćina, polipeptid prirodne amino kiseline ili polipeptid neprirodne amino kiseline može biti prisutan u medijumu kulture na oko 5 g/L, oko 4g/L, oko 3g/L, oko 2g/L, oko 1g/L, oko 750mg/L, oko 500mg/L, oko 250mg/L, oko 100mg/L, oko 50mg/L, oko 10mg/L, ili oko 1 mg/L ili manje suve težine ćelija. Na primer, „značajno prečišćeni“ polipeptidi prirodnih amino kiselina ili polipeptidi neprirodnih amino kiselina mogu imati nivo čistoće od oko 3 0%, oko 35 %, oko 40 %, oko 45 %, oko 50 %, oko 55 %, oko 60 %, oko 65 %, oko 70 %, oko 75 %, oko 80 %, oko 85 %, oko 90 %, oko 95 %, oko 99 % ili više kako je određeno odgovarajućim metodima, uključujući, ali ne ograničavajući se na, SDS/PAGE analizu, RP-HPLC, SEC i kapilarnu elektroforezu.
[0073] Termin "terapeutski efikasna količina", kako se ovde koristi, odnosi se na količinu kompozicije koja sadrži najmanje jedan polipeptid neprirodne amino kiseline i/ili najmanje jedan modifikovani polipeptid neprirodne amino kiseline koji se primenjuje na pacijenta koji već pati od bolesti, stanja ili poremećaja, dovoljnog da izleči ili u najmanjem delimično zaustavi, ili donekle ublaži jedan ili više simptoma bolesti, poremećaja ili stanja koje se leči. Efikasnost takvih kompozicija zavisi od stanja uključujući, ali ne ograničavajući se na, ozbiljnost i tok bolesti, poremećaja ili stanja, prethodnu terapiju, zdravstveno stanje pacijenta i odgovor na lekove, i procenu lekara koji leči. Samo kao primer, terapeutski efikasne količine se mogu odrediti rutinskim eksperimentisanjem, uključujući, ali ne ograničavajući se na kliničko ispitivanje eskalacije doze.
[0074] Termin "toksični", ili "toksični deo" ili "toksična grupa" ili "citotoksični" ili "citotoksični teret" ili "korisni teret" kako se ovde koristi, odnosi se na jedinjenje koje može izazvati štetu, poremećaje ili smrt. Toksični delovi uključuju, ali nisu ograničeni na, auristatin, agens za vezivanje manjih žlebova DNK, agens za alkilaciju malih ž lebova DNK, enedijn, leksitropsin, duokarmicin, taksan, puromicin, dolastatin, majtansinoid, vinka alkaloid, AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, auristatin E, paklitaksel, docetaksel, CC-1065, SN-38, topotekan, morfolino-doksorubicin, rizoksin, cijanomorfolino-doksorubicin, dolastatin-10, ehinomicin, kombihalihestatin, podmetacin 1, u (npr. etopozid, tenipozid, itd.), bakatin i njegove derivate, antitubulinske agense, kriptofizin, kombretastatin, vinkristin, vinblastin, vindezin, vinorelbin, VP-16, kamptotecin, epotilon A, epotilon B, nokodazol, kolhicini, kolcimid, estramustin, cemadotin, diskodermolid, majtanzin, eleuterobin, mehloretamin, ciklofosfamid, melfalan, karmustin, lomuscin u hlorotocinu, hlorotozil, mošt hine, ifosfamid , hlorambucil, pipobroman, trietilenmelamin, trietilentiofosforamin, busulfan, dakarbazin i temozolomid, itarabin, citozin arabinosid, fluorouracil, floksuridin, 6-tioguanin, fluorotreks, 6-merkapmetin 0-propargil-5,8-dideazafolat, 5,8-dideazatetrahidrofolnu kiselinu, leukovorin, fludarabin fosfat, pentostatin, gemcitabin, Ara-C, deoksikoformicin, mitomicin-C, L-asparaginaza, azatioprin, brekincin, telavancin, daptomicin, azitromicin, eritromicin, rocitromicin, furazolidon, amoksicilin, ampicilin, karbenicilin, flukloksacilin, meticilin, penicilin, ciprofloksacin, moksifloksacin, doksiciklin, ofloksacin, teciklin, ofloksacin cin, rifabutin, etambutol, rifaksimin itd.), antivirusne lekove (npr. abakavir, aciklovir, ampligen, cidofovir, delavirdin, didanozin, efavirenz, entekavir, fosfonet, ganciklovir, ibacitabin, imunovir, idoksuridin, inozin, lopinavir, metisazon, metizacilovir, nevudicilovir trifluridin, truvada, valaciklovir, zanamivir, itd.), daunorubicin hidrohlorid, daunomicin, rubidomicin, cerubidin, idarubicin, doksorubicin, epirubicin i morfolino derivate, fenoksizon bisciklopeptidi hinon glikozide (npr, plikamicin, mitramicin), antracendione (npr. mitoksantron), azirinopirolo indoledione (npr. mitomicin), makrociklične imunosupresive (npr. ciklosporin, FK-506, takrolimus, proporomicin, itd.), navelben, CPT-11, anastrazol, letrazol, kapecitabin, reloksafin, ciklofosfamid, ifosamid, droloksafin, alokolhicin, halihondrin B, kolhicin, derivate kolhicina, maitanzin, rizoksin, rizoksin, paklitasn, tritil cisterin, vinblastin sulfat, vinkristin sulfat, cisplatin, karboplatin, hidroksiurea, N-metilhidrazin, epidofilotoksin, prokarbazin, mitoksantron, leukovorin i tegafur. "Taksani" uključuju paklitaksel, kao i bilo koji aktivni derivat taksana ili prolek.
[0075] Termini "lečenje", "tretiranje" ili "tretman", kako se ovde koriste, uključuju ublažavanje, prevenciju, ublažavanje ili smanjenje simptoma bolesti ili stanja, sprečavanje dodatnih simptoma, poboljšanje ili sprečavanje osnovnog metaboličkog uzroka simptoma, inhibiranje bolesti ili stanja, npr.
zaustavljanje razvoja bolesti ili stanja, ublažavanje bolesti ili stanja, izazivanje regresije bolesti ili stanja, ublažavanje stanja uzrokovanog bolešću ili stanjem, ili zaustavljanje simptoma bolest ili stanje. Termini "lečenje", "tretiranje" ili "lečenje" uključuju, ali nisu ograničeni na, profilaktičke i/ili terapeutske tretmane. Izraz "lečenje", "tretiranje" ili "lečenje" može se odnositi na smanjenje, ublažavanje ili poboljšanje jednog ili više simptoma povezanih sa rakom prostate.
[0076] Kako se ovde koristi, izraz "polimer rastvorljiv u vodi" odnosi se na bilo koji polimer koji je rastvorljiv u vodenim rastvaračima. Takvi polimeri rastvorljivi u vodi obuhvataju, ali nisu ograničeni na, polietilen glikol, polietilen glikol propionaldehid, mono C1-C10alkoksi ili ariloksi njihove derivate (opisane u patentu US 5,252,714), monometoksi-polietilen glikol, polietilen glikopil kiseline, divinil etar maleinski anhidrid, N-(2-hidroksipropil)-metakrilamid, dekstran, derivate dekstrana uključujući dekstran sulfat, polipropilen glikol, kopolimer polipropilen oksida/etilen oksida, polioksietilizovani poliol, polioksietilirani poliol, glikane, celulozu i derivate celuloze, uključujući, ali ne ograničavajući se na metilcelulozu i karboksimetil celulozu, serumski albumin, skrob i derivate skroba, polipeptide, polialkilen glikol i njihove derivate, kopolimere polialkilen glikola i njihove derivate polibetilen glikola, derivate terabetil-etil poli[(2-hidroksietil)-DL-aspartamida i slično, ili njihove smeše. Samo kao primer, spajanje takvih polimera rastvorljivih u vodi sa polipeptidima prirodnih aminokiselina ili neprirodnim polipeptidima može dovesti do promena uključujući, ali ne ograničavajući se na, povećanu rastvorljivost u vodi, produženi ili modulisani poluživot u serumu, povećanu ili modulisanu terapijski poluživot u odnosu na nemodifikovani oblik, povećanu biodostupnost, modulisanu biološku aktivnost, produženo vreme cirkulacije, modulisanu imunogenost, modulisane karakteristike fizičke asocijacije uključujući, ali ne ograničavajući se na, agregaciju i formiranje multimera, izmenjeno vezivanje receptora, izmenjeno vezivanje za jednog ili više partnera za vezivanje i izmenjenu dimerizaciju ili multimerizaciju receptora. Pored toga, takvi polimeri rastvorljivi u vodi mogu ili ne moraju imati sopstvenu biološku aktivnost.
[0077] Kako se ovde koristi, termin "modulisani poluživot seruma" odnosi se na pozitivne ili negativne promene u cirkulišućem poluživotu modifikovanog biološki aktivnog molekula u odnosu na njegov nemodifikovani oblik. Kao primer, modifikovani biološki aktivni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na, prirodnu amino kiselinu, neprirodnu amino kiselinu, polipeptid prirodne amino kiseline ili polipeptid neprirodne amino kiseline. Na primer, poluživot seruma se meri uzimanjem uzoraka krvi u različitim vremenskim tačkama nakon primene biološki aktivnog molekula ili modifikovanog biološki aktivnog molekula i određivanjem koncentracije tog molekula u svakom uzorku. Korelacija koncentracije u serumu sa vremenom omogućava izračunavanje poluživota u serumu. Na primer, modulisani poluživot u serumu može biti povećanje poluživota u serumu, što može omogućiti poboljšani režim doziranja ili izbeći toksične efekte. Takva povećanja seruma mogu biti najmanje oko dva puta, najmanje oko tri puta, najmanje oko pet puta, ili najmanje oko deset puta. Metodi za procenu poluživota u serumu su poznati u stanju tehnike i mogu se koristiti za procenu serumskog poluživota antitela i konjugata antitela leka prema ovom pronalasku.
[0078] Termin "modulisani terapeutski poluživot", kako se ovde koristi, odnosi se na pozitivnu ili negativnu promenu u poluživotu terapeutski efikasne količine modifikovanog biološki aktivnog molekula, u odnosu na njegov nemodifikovani oblik. Kao primer, modifikovani biološki aktivni molekuli uključuju, ali nisu ograničeni na, prirodnu amino kiselinu, neprirodnu amino kiselinu, polipeptid prirodne amino kiseline ili polipeptid neprirodne amino kiseline. Na primer, terapeutski poluživot se meri merenjem farmakokinetičkih i/ili farmakodinamičkih svojstava molekula u različitim vremenskim tačkama nakon primene. Povećani terapijski poluživot može omogućiti određeni korisni režim doziranja, određenu korisnu ukupnu dozu ili izbeći neželjeni efekat. Na primer, produženi terapeutski poluživot može biti rezultat povećane potencije, povećanog ili smanjenog vezivanja modifikovanog molekula za njegovu metu, povećanja ili smanjenja drugog parametra ili mehanizma delovanja nemodifikovanog molekula, ili povećanog ili smanjeno razlaganje molekula enzimima kao što su, samo kao primer, proteaze. Metodi za procenu terapeutskog poluživota su poznati u stanju tehnike i mogu se koristiti za procenu terapeutskog poluživota antitela i antitela konjugata lekova iz ovog pronalaska.
KRATAK OPIS SLIKA
[0079] Nove karakteristike pronalaska su posebno izložene u priloženim patentnim zahtevima. Bolje razumevanje karakteristika i prednosti pronalaska ovog pronalaska biće dobijeno pozivanjem na sledeći detaljan opis koji predstavlja ilustrativna ostvarenja, u kojima su korišćeni principi pronalaska, i date prateće slike.
Slika 1 prikazuje farmakokinetičke studije sprovedene na miševima sa konjugatima leka protiv PSMA antitela (ADC) korišćenjem necepabilnog MMAF-a, kratkog MMAF-a koji se može cepiti, MMAF-a koji se može cepati i kratkog MMAE-a koji se može cepati. F1 predstavlja detekciju konjugata antitela leka u serumu pomoću antitela. F3 predstavlja detekciju konjugata leka antitela u serumu pomoću linkera leka.
Slika 2 prikazuje farmakokinetičke studije sprovedene na pacovima sa anti-PSMA ADC koje pokazuju necepabilni MMAF u različitim koncentracijama.
Slika 3 prikazuje farmakokinetičko poređenje nekonjugovanog anti-PSMA antitela (golo antitelo) u poređenju sa ADC koji koriste MMAF koji se ne može cepati.
Slike 4A-4B prikazuju odgovor na pojedinačnu dozu u modelu prostate ksenotransplantata C4-2 na rast tumora (Slika 4A) i promenu telesne težine (Slika 4B) korišćenjem anti-PSMA ADC MMAF koji se ne cepa u različitim dozama.
Slike 5A-5B prikazuju odgovor na pojedinačnu dozu u modelu prostate ksenotransplantata C4-2 na rast tumora (Slika 5A) i promenu telesne težine (Slika 5B) korišćenjem kratko cepajućeg anti-PSMA ADC MMAF-a u različitim dozama.
Slike 6A-6B prikazuju farmakokinetičke studije kod miševa koji nose tumor i netumorske (Slika 6A) i Cinomolgus majmuna (Slika 6B) nakon pojedinačne doze anti-PSMA ADC koristeći MMAF koji se ne može cepati.
Slike 7A-7B prikazuju odgovor na ponavljanje doze u modelu prostate ksenotransplantata C4-2 na rast tumora (Slika 7A) i promenu telesne težine (Slika 7B) korišćenjem anti-PSMA ADC MMAF koji se ne cepa i anti-PSMA ADC necepajućeg MMAF plus enzalutamida u raznim dozama.
Slike 8A-8B prikazuju odgovor na ponavljanje doze u PDX modelu prostate na rast tumora (Slika 8A) i promenu telesne težine (Slika 8B) korišćenjem anti-PSMA ADC MMAF koji se ne cepa i anti-PSMA ADC MMAF koji se ne cepa i enzalutamida u različitim dozama.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0080] Pre nego što se ovaj pronalazak detaljno opiše, treba razumeti da ovaj pronalazak nije ograničen na određene metodologije, ili kompozicije, ili biološke sisteme, koji, naravno, mogu da variraju. Takođe treba razumeti da je terminologija korišćena ovde samo u svrhu opisivanja određenih realizacija i nije namenjena da bude ograničavajuća. Kao što se koristi u ovoj specifikaciji i priloženim patentnim zahtevima, oblici jednine "a", "an" i "the" uključuju množine reference osim ako sadržaj jasno ne nalaže drugačije. Tako, na primer, referenca na "ćeliju" uključuje kombinaciju dve ili više ćelija i slično.
[0081] Namera je da sledeći patentni zahtevi definišu obim pronalaska i da metodi i strukture u okviru ovih patentnih zahteva budu obuhvaćeni time.
[0082] Osim ako je drugačije definisano ovde ili u nastavku u ostatku specifikacije, svi tehnički i naučni termini koji se ovde koriste imaju isto značenje koje obično imaju u struci kojoj pronalazak pripada.
[0083] Terapeutici zasnovani na antitelima su se pojavili kao važne komponente terapija za sve veći broj humanih maligniteta u oblastima kao što su onkologija, inflamatorne i infektivne bolesti. U većini slučajeva, osnova terapijske funkcije je visok stepen specifičnosti i afiniteta koji lek na bazi antitela ima za svoj ciljni antigen. Naoružavanje monoklonskih antitela lekovima, toksinima ili radionuklidima je još jedna strategija pomoću koje monoklonska antitela mogu da izazovu terapeutski efekat. Kombinovanjem izuzetne ciljane specifičnosti antitela sa sposobnošću ubijanja tumora toksičnih efektorskih molekula, imunokonjugati dozvoljavaju osetljivu diskriminaciju između ciljnog i normalnog tkiva, što dovodi do manje neželjenih efekata od većine konvencionalnih hemoterapeutskih lekova. Upotrebljeni toksini mogu specifično, stabilno i nepovratno da se konjuguju na jedinstvena mesta u antitelu. Ovaj jedinstveni proces konjugacije omogućava preciznu kontrolu lokacije toksina na antitelu, kao i broja toksina konjugovanih za svako antitelo. Obe ove karakteristike su kritične za kontrolu biofizičkih karakteristika i toksičnosti povezanih sa ADC. (Videti na primer Jackson et al., 2014, Tian et al., 2014).
[0084] Konjugati leka protiv PSMA antitela obezbeđeni u ovom pronalasku obuhvataju humanizovana ili himerna monoklonalna antitela i varijante koje se vezuju za ekstracelularni domen membranskog antigena specifičnog za prostatu. Antigen membrane specifičan za prostatu je membranski protein tipa II koji je visoko eksprimiran, na primer, kod intraepitelne neoplazije prostate (PIN), primarnih karcinoma prostate i metastatskog karcinoma prostate. Anti-PSMA antitelo koje je ovde otkriveno može biti bilo koje poznato PSMA antitelo sa najmanje jednom neprirodnom ili neprirodno kodiranom amino kiselinom.
[0085] Ovaj pronalazak obezbeđuje anti-PSMA antitela i njihove varijante koje imaju neprirodno kodiranu amino kiselinu koja olakšava konjugaciju antitela sa lekom (npr. lekom, molekulom toksina). U jednom aspektu, ADC sadrži anti-PSMA antitelo konjugovano sa lekom pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u antitelu. U jednom aspektu, ADC sadrži anti-PSMA antitelo konjugovano sa lekom pri čemu se konjugacija dešava preko ne-prirodno kodirane amino kiseline u teškom lancu antitela. U jednom aspektu, ADC sadrži anti-PSMA antitelo konjugovano sa lekom pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u lakom lancu antitela. U jednom aspektu, ADC sadrži antitelo pune dužine konjugovano sa lekom pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane aminokiseline u antitelo. U jednom aspektu, ADC sadrži antitelo pune dužine konjugovano sa lekom pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u teškom lancu antitela. U jednom aspektu, ADC sadrži antitelo pune dužine konjugovano sa lekom pri čemu se konjugacija dešava preko neprirodno kodirane amino kiseline u lakom lancu antitela. U pronalasku, konjugat leka antitela sadrži antitelo antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA antitelo) konjugovano sa linkerom leka, pri čemu se konjugacija dešava preko para-acetil fenilalanina ugrađenog u sekvencu teškog lanca, pri čemu anti-PSMA antitelo sadrži sekvencu teškog lanca SEK ID BR: 8 i sekvencu lakog lanca SEK ID BR: 9, u kojoj je para-acetil fenilalanin ugrađen na poziciji teškog lanca A114 prema Kabat šemi numerisanja.
[0086] U nekim aspektima, lek ADC je citotoksični lek ili agens. U nekim aspektima pronalaska, citotoksični lek je izabran iz grupe koju čine auristatin, agens za vezivanje malih žlebova DNK, agens za alkilaciju malih žlebova DNK, endiin, leksitropsin, duokarmicin, taksan, puromicin, dolastatin, majtansinoid i vinka alkaloid. U nekim aspektima pronalaska, citotoksični lek je AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, auristatin E, paklitaksel, docetaksel, CC-1065, SN-38, topotekan, morfolino-doksorubicin, rizoksin, cijanomorfolino-doksorubicin, dolastatin-10, ehinomicin, kombretastatin, haliheamicin, majtanzin, DM-1 ili netropsin, ali ne ograničavajući se na njih. U pronalasku kako se zahteva, linker leka je necepabilni monometil auristatin F koji ima strukturu:
[0087] U nekim aspektima pronalaska, citotoksični lek je sredstvo protiv tubulina. U nekim aspektima, sredstvo protiv tubulina je auristatin, vinka alkaloid, podofilotoksin, taksan, derivat bakatina, kriptofizin, majtanzinoid, kombretastatin ili dolastatin. U drugim aspektima pronalaska, antitubulinski agens je AFP, MMAF, MMAE, AEB, AEVB, auristatin E, vinkristin, vinblastin, vindezin, vinorelbin, VP-16, kamptotecin, paklitaksel, docetaksel, epotilon A, epotilon B, nokodazol, kolhicini, kolcimid, estramustin, cemadotin, diskodenolid, majtanzin, DM-1 ili eleuterobin, ali ne ograničavajući se na njih.
[0088] U ostalim aspektima pronalaska, citotoksični lek ADC je ganciklovir, etanercept, ciklosporin, takrolimus, rapamicin, ciklofosfamid, azatioprin, mikofenolat mofetil, metotreksat, kortizol, aldosteron, deksametazon, inhibitor ciklooksigenaze, inhibitor 5-ipoksigenaze ili antagonist leukotrienskih receptora.
[0089] U nekim aspektima pronalaska, antitelo ADC-a sadrži antitelo pune dužine ili njegov fragment koji: (a) se vezuje za PSMA, i (b) je konjugovan sa citotoksičnim agensom ili imunosupresivnim agensom, pri čemu konjugat antitela leka ispoljava: (a) citotoksični ili citostatski efekat na ćelijsku liniju raka koja eksprimira PSMA, ili (b) citotoksični, citostatski ili imunosupresivni efekat na imunske ćelije koje eksprimiraju PSMA, pri čemu se konjugacija javlja kod neprirodno kodirane amino kiseline u antitelu.
[0090] U nekim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija ovog pronalaska mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja se vezuje za PSMA receptor. U drugim aspektima pronalaska, antitelo, varijanta ili kompozicija mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja se vezuje za ekstracelularnu površinu PSMA receptora. U drugom aspektu pronalaska, opisano antitelo, varijanta ili kompozicija mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja se vezuje za PSMA dimer. U nekim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija ovog pronalaska mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja ima CDR-ove iz J591 kalemljene na okvirni region varijabilnog regiona. U drugim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija ovog pronalaska mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja ima neprirodno kodiranu amino kiselinu. U nekim aspektima, antitelo, varijanta ili kompozicija mogu biti antitelo, varijanta ili kompozicija koja je opisana sa više od jednog od aspekata na drugim mestima u ovom pronalasku. U nekim aspektima, antitelo, varijanta antitela ili kompozicija(e) antitela koji su ovde opisani mogu biti potpuno humanizovani. U drugim aspektima, ovde opisano antitelo, varijanta antitela ili kompozicija(e) antitela mogu biti himerne. U nekim aspektima ovog pronalaska, antitelo može biti antitelo koje je antitelo pune dužine (varijabilni Fc regioni), Fab, bispecifično, Fab-dimeri, Fab-bispecifično, Fab-trispecifično, bispecifično T-ćelijsko angažovanje, dvostruki afinitet ciljanog antitela, IgG1/IgG3 bispecifično antitelo, dijatelo, bispecifično dijatelo, scFv-Fc, minitelo.
[0091] Metodi, kompozicije i tehnike za stvaranje i korišćenje derivata ili analoga dolastatin linkera koji sadrže najmanje jedan karbonil, dikarbonil, oksim, hidroksilamin, aldehid, zaštićeni aldehid, keton, zaštićeni keton, tioestar, estar, dikarbonil, azihid, amidin, imin, diamin, keto-amin, keto-alkin, alkin, cikloalkin ili enedion su dobro poznati prosečnom stručnjaku (videti, na primer, WO2013/185117). Metodi, kompozicije i tehnike za stvaranje i korišćenje derivata ili analoga dolastatin linkera koji sadrže najmanje jednu neprirodnu amino kiselinu ili modifikovanu neprirodnu amino kiselinu sa oksimom, aromatičnim aminom, heterociklom (npr. indol, kinoksalin, fenazin, pirazol, triazola, itd.) su takođe dobro poznati stručnjacima i opisani u, na primer, WO2013/185117. Takvi derivati dolastatin linkera koji sadrže neprirodne aminokiseline mogu sadržati dalju funkcionalnost, uključujući, ali bez ograničenja, polimer; polimer rastvorljiv u vodi; derivat polietilen glikola; drugi protein ili polipeptid ili polipeptidni analog; antitelo ili fragment antitela; i bilo koju njihovu kombinacija. Treba napomenuti da različite napred navedene funkcionalnosti ne podrazumevaju da se članovi jedne funkcionalnosti ne mogu klasifikovati kao članovi druge funkcionalnosti. Zaista, biće preklapanja u zavisnosti od konkretnih okolnosti. Samo kao primer, polimer rastvorljiv u vodi se preklapa u obimu sa derivatom polietilen glikola, međutim preklapanje nije potpuno i stoga su obe funkcionalnosti navedene napred.
[0092] Ovde je u nekim aspektima obezbeđen derivat toksične grupe koji sadrži karbonil, dikarbonil, oksim, hidroksilamin, aldehid, zaštićeni aldehid, keton, zaštićeni keton, tioestar, estar, dikarbonil, hidrazin, azidin, diamin, keto-amin, keto-alkin, alkin, cikloalkin ili enedion. U nekim aspektima, derivat toksične grupe obuhvata bilo koji od linkera koji su ovde opisani. Metodi, kompozicije i tehnike za stvaranje i korišćenje derivata ili analoga toksičnih grupa koji sadrže najmanje jednu neprirodnu amino kiselinu ili modifikovanu neprirodnu amino kiselinu sa oksimom, aromatičnim aminom, heterociklom (npr. indol, hinoksalin, fenazin, pirazol, triazol, itd.) opisani su u WO2013/185117. U nekim aspektima, takvi toksični derivati koji sadrže neprirodne amino kiseline mogu sadržati dalju funkcionalnost, uključujući, ali ne ograničavajući se na, polimer; polimer rastvorljiv u vodi; derivat polietilen glikola; drugi protein ili polipeptid ili polipeptidni analog; antitelo ili fragment antitela; i bilo koju njihovu kombinaciju. U specifičnim aspektima, toksična grupa je inhibitor tubulina. U određenim specifičnim aspektima, toksična grupa je dolastatin ili auristatin. U drugim specifičnim aspektima, toksična grupa je dolastatin ili derivat auristatina. Imajte na umu da različite napred navedene funkcionalnosti ne podrazumevaju da se članovi jedne funkcionalnosti ne mogu klasifikovati kao članovi druge funkcionalnosti. Zaista, biće preklapanja u zavisnosti od konkretnih okolnosti. Samo kao primer, polimer rastvorljiv u vodi preklapa se u obimu sa derivatom polietilen glikola, međutim preklapanje nije potpuno i stoga su obe funkcionalnosti navedene napred.
[0093] Određeni aspekti ovog pronalaska opisuju preparate određenih toksičnih grupa sa linkerima koji smanjuju toksičnost dela in vivo dok toksični deo zadržava farmakološku aktivnost. U nekim aspektima, toksičnost povezane toksične grupe, kada se daje životinji ili ljudima, je smanjena ili eliminisana u poređenju sa derivatima slobodne toksične grupe ili toksične grupe koji sadrže labilne veze, uz zadržavanje farmakološke aktivnosti. U nekim aspektima, povećane doze povezane toksične grupe (npr. derivati dolastatin linkera, derivati dolastatina koji nisu povezani sa prirodnim amino kiselinama) mogu se davati životinjama ili ljudima sa većom bezbednošću. U određenim aspektima, polipeptidi neprirodnih amino kiselina vezani za toksični deo (npr. derivat dolastatina) obezbeđuju in vitro i in vivo stabilnost. U nekim aspektima, polipeptidi neprirodnih aminokiselina vezani za toksični deo (npr. inhibitor tubulina, derivat dolastatina-10) su efikasni i manje toksični u poređenju sa slobodnim toksičnim delom (npr. inhibitor tubulina, dolastatin-10).
Metodologija i tehnike
[0094] Ovaj pronalazak obuhvata metodologije i tehnologije dobro poznate u stanju tehnike. Ovo uključuje konvencionalne metode masene spektroskopije, NMR, HPLC, hemiju proteina, biohemiju, tehnike rekombinantne DNK i farmakologiju, u okviru stanja tehnike. Jedinjenja ovog pronalaska mogu se sintetizovati korišćenjem nekoliko procesa ili šema koje se koriste u stanju tehnike. Videti na primer, Dubowchik et al., Bioconjugate Chem. 13: 855-869, 2002; Doronina et al., Nature Biotechnology 21(7): 778-784, 2003; WO2012/166560; WO2013/185117. Mnoge metodologije i tehnike za sintezu farmaceutskih, dijagnostičkih ili terapeutskih jedinjenja su dobro poznate prosečnom stručnjaku u ovoj oblasti.
[0095] Ovaj pronalazak, osim ako nije drugačije naznačeno, takođe obuhvata konvencionalne tehnike molekularne biologije (uključujući rekombinantne tehnike), ćelijsku biologiju, biohemiju i imunologiju, sve u okviru stanja tehnike. Takve tehnike su u potpunosti objašnjene u literaturi, kao što je, Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Third Edition, Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY (Sambrook et al. Eds., 2001); Oligonucleotide Synthesis: Methods And Applications (Methods in Molecular Biology), Herdewijn, P., Ed., Humana Press, Totowa, NJ; Oligonucleotide Synthesis (Gait, M. J., Ed., 1984); Methods In Molecular Biology, Humana Press, Totowa, NJ; Cell Biology: A Laboratory Notebook Academic Press, New York, NY (Cellis, J. E., Ed., 1998); Animal Cell Culture (Freshney, R. I., Ed., 1987); Introduction To Cell And Tissue Culture Plenum Press, New York, NY, (Mather, J. P. and Roberts, P. E., Eds., 1998); Cell And Tissue Culture: Laboratory Procedures John Wiley and Sons, Hoboken, NJ, (Doyle, A. et al., Eds., 1993-8); Methods In Enzy- mology (Academic Press, Inc.) New York, NY; Weir’s Handbook Of Experimental Immunology Wiley-Blackwell Publish- ers, New York, NY, (Herzenberg, L. A. et al. Eds., 1997); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells Cold Spring Harbor Press, Cold Spring Harbor, NY, (Miller, J. M. et al. Eds., 1987); Current Protocols In Molecular Biology, Greene Pub. Associates, New York, NY, (Ausubel, F. M. et al., Eds., 1987); PCR: The Polymerase Chain Reaction, Birkhauser, Boston, MA, (Mullis, K. et al., Eds., 1994); Current Protocols In Immunology, John Wiley and Sons, Hoboken, NJ, (Coligan, J. E. et al., eds., 1991); Short Protocols In Molecular Biology, Hoboken, NJ, (John Wiley and Sons, 1999); Immunobiology 7 Garland Science, London, UK, (Janeway, C. A. et al., 2007); Antibodies. Stride Publications, Devoran, UK, (P. Finch, 1997); Antibodies: A Practical Approach Oxford University Press, USA, New York, NY, (D. Catty., ed., 1989); Monoclonal Antibodies: A Practical Approach Oxford University Press, USA, New York NY, (Shepherd, P. et al. Eds., 2000); Using Antibodies: A Laboratory Manual Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, (Harlow, E. et al. Eds., 1998); The Antibodies Harwood Academic Publishers, London, UK, (Zanetti, M. et al. Eds. 1995).
Derivati dolastatin linkera
[0096] U aspektima ovog pronalaska, derivati ili analozi dolastatin linkera koji sadrže najmanje jednu neprirodnu amino kiselinu ili modifikovanu neprirodnu amino kiselinu sa karbonil, dikarbonil, oksim ili hidroksilamin grupom mogu se koristiti. Metodi za odabir i dizajniranje derivata dolastatin linkera koji se modifikuju korišćenjem metoda, kompozicija i tehnika su dobro poznati u stanju tehnike, videti na primer WO2013/185117. Derivat dolastatin linkera može biti dizajniran de novo, uključujući samo kao primer, kao deo procesa skrininga visoke propusnosti (u kom slučaju brojni polipeptidi mogu biti dizajnirani, sintetizovani, karakterisani i/ili testirani) ili na osnovu interesa istraživača. Novi derivat dolastatin linkera takođe može biti dizajniran na osnovu strukture poznatog ili delimično karakterisanog polipeptida. Principi odabira koje aminokiseline(e) da se zamene i/ili modifikuju i izbor č ije modifikacije će se primeniti su opisani u WO2013/185117, na primer. Derivat dolastatin linkera može biti dizajniran da zadovolji potrebe eksperimentatora ili krajnjeg korisnika. Takve potrebe mogu uključivati, ali nisu ograničene na, manipulisanje terapijskom efikasnošću polipeptida, poboljšanje bezbednosnog profila polipeptida, prilagođavanje farmakokinetike, farmakologije i/ili farmakodinamike polipeptida, kao što je, samo kao primer, povećanje rastvorljivosti u vodi, bioraspoloživost, povećanje poluživota u serumu, povećanje terapeutskog poluživota, modulacija imunogenosti, modulacija biološke aktivnosti ili produženje vremena cirkulacije. Pored toga, takve modifikacije uključuju, samo kao primer, obezbeđivanje dodatne funkcionalnosti polipeptidu, ugradnju antitela i bilo koju kombinaciju napred navedenih modifikacija. Takvi derivati linkera dolastatina mogu biti modifikovani da sadrže oksim, karbonil, dikarbonil ili hidroksilamin grupu. Derivat dolastatin linkera može sadržati najmanje jedan, najmanje dva, najmanje tri, najmanje četiri, najmanje pet, najmanje šest, najmanje sedam, najmanje osam, najmanje devet, ili deset ili više karbonila ili dikarbonil grupa, oksim grupa, hidroksilamin grupa ili njihovih zaštićenih oblika. Derivat dolastatin linkera može biti isti ili različit, na primer, može biti 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17 , 18, 19, 20 ili više različitih lokacija u derivatu koji se sastoje od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20 ili više različitih reaktivnih grupa.
[0097] Na primer, derivati dolastatina sa linkerima koji sadrže hidroksilamin (takođe nazvanu aminooksi) grupu omogućavaju reakciju sa različitim elektrofilnim grupama da bi se formirali konjugati, uključujući, ali ne ograničavajući se na, PEG ili druge polimere rastvorljive u vodi. Kao hidrazini, hidrazidi i semikarbazidi, poboljšana nukleofilnost aminooksi grupe omogućava joj da reaguje efikasno i selektivno sa različitim molekulima koji sadrže karbonil- ili dikarbonil grupe, uključujući, ali ne ograničavajući se na, ketone, aldehide ili druge funkcionalne grupe sa sličnom hemijskom reaktivnošću. (Vidi, na primer, Shao, J. and Tam, J., J. Am. Chem. Soc. 117:3893-3899, 1995; H. Hang and C. Bertozzi, Acc. Chem. Res. 34(9): 727-736, 2001). Dok je rezultat reakcije sa hidrazinskom grupom odgovarajući hidrazon, oksim, međutim, generalno nastaje iz reakcije aminooksi grupe sa grupom koja sadrži karbonil ili dikarbonil, kao što su, na primer, ketoni, aldehidi ili druge funkcionalne grupe sa sličnom hemijskom reaktivnošću. U nekim aspektima, derivati dolastatina sa linkerima koji sadrže azid, alkin ili cikloalkin omogućavaju povezivanje molekula putem reakcija cikloadicije (npr., 1,3-dipolarna cikloadicija, azid-alkin Huisgen cikloadicija, itd., opisano u US 7,807,619).
[0098] Prema tome, u određenim aspektima opisanim ovde su derivati dolastatina sa linkerima koji sadrže hidroksilamin, aldehid, zaštićeni aldehid, keton, zaštićeni keton, tioestar, estar, dikarbonil, hidrazin, amidin, imin, diamin, keto-aminki i enedion hidroksilamin grupu, hidroksilaminsku grupu (koja ima reaktivnost sličnu hidroksilamin grupi i strukturno je slična hidroksilamin grupi), maskiranu hidroksilaminsku grupu (koja se lako može pretvoriti u hidroksilaminsku grupu) ili zaštićenu hidroksilamin grupu (koja ima reaktivnost sličnu hidroksilamin grupi nakon uklanjanja zaštite). U nekim aspektima, derivati dolastatina sa linkerima obuhvataju azide, alkine ili cikloalkine. Primeri takvih derivata dolastatin linkera su uključeni na drugom mestu ovde i u WO2013/185117 i WO2005/074650.
Neprirodne aminokiseline
[0099] Selekcija neprirodno kodiranih aminokiselinskih mesta zasnivala se na površinskoj izloženosti/pristupačnosti mesta unutar antitela, a hidrofobna ili neutralna aminokiselinska mesta su odabrana da bi se održao naboj na antitelu. Metodi za uvođenje neprirodnih aminokiselina umetnutih u mesta u proteinu opisane su na primer u WO2010/011735 i WO2005/074650. Ovaj pronalazak koristi takve metodologije i tehnike. Neprirodne amino kiseline koje se koriste u metodima i kompozicijama opisanim ovde imaju najmanje jedno od sledeća četiri svojstva: (1) najmanje jedna funkcionalna grupa na bočnom lancu neprirodne amino kiseline ima najmanje jednu karakteristiku i/ili aktivnost i/ili reaktivnost ortogonalnu hemijskoj reaktivnosti 20 uobičajenih, genetski kodiranih amino kiselina (tj, alanin, arginin, asparagin, asparaginska kiselina, cistein, glutamin, glutaminska kiselina, glicin, histidin, izoleucin, leucin, methion, fenilalanin, prolin, serin, treonin, triptofan, tirozin i valin), ili u najmanjem ortogonalnu hemijskoj reaktivnosti amino kiselina koje se nalaze u prirodi prisutne u polipeptidu koji uključuje neprirodnu amino kiselinu; (2) uvedene neprirodne aminokiseline su suštinski hemijski inertne prema 20 uobičajenih, genetski kodiranih amino kiselina; (3) neprirodna amino kiselina može biti stabilno ugrađena u polipeptid, poželjno sa stabilnosti srazmernoj prirodnim amino kiselinama ili pod tipičnim fiziološkim uslovima, i dalje poželjno da se takva inkorporacija može desiti preko in vivo sistema; i (4) neprirodna amino kiselina uključuje oksimsku funkcionalnu grupu ili funkcionalnu grupu koja se može transformisati u oksim grupu reakcijom sa reagensom, poželjno pod uslovima koji ne uništavaju biološka svojstva polipeptida koji uključuje neprirodna aminokiselina (osim ako takvo uništavanje bioloških svojstava nije svrha modifikacije/transformacije), ili pri čemu se transformacija može desiti u vodenim uslovima pri pH između oko 4 i oko 8, ili pri čemu je reaktivno mesto na neprirodnoj amino kiselini je elektrofilno mesto. Bilo koji broj neprirodnih amino kiselina može se uvesti u polipeptid. Neprirodne amino kiseline mogu takođe uključiti zaštićene ili maskirane oksime ili zaštićene ili maskirane grupe koje se mogu transformisati u oksim grupu nakon uklanjanja zaštite zaštićene grupe ili demaskiranja maskirane grupe. Neprirodne aminokiseline takođe mogu uključivati zaštićene ili maskirane karbonilne ili dikarbonilne grupe, koje se mogu transformisati u karbonilnu ili dikarbonilnu grupu nakon uklanjanja zaštite zaštićene grupe ili demaskiranja maskirane grupe i na taj način su dostupne da reaguju sa hidroksilaminima ili oksimima da bi se formirale oksimske grupe. Neprirodne amino kiseline na bazi oksima mogu se sintetizovati metodima dobro poznatim u stanju tehnike (videti na primer WO2013/185117 i WO2005/074650), uključujući: (a) reakciju neprirodne amino kiseline koja sadrži hidroksilamin sa reagensom koji sadrži karbonil ili dikarbonil; (b) reakcija neprirodne amino kiseline koja sadrži karbonil ili dikarbonil sa reagensom koji sadrži hidroksilamin; ili (c) reakcija neprirodne amino kiseline koja sadrži oksim sa određenim reagensima koji sadrže karbonil ili dikarbonil.
[0100] Neprirodne amino kiseline koje se mogu koristiti u metodima i kompozicijama opisanim ovde uključuju, ali nisu ograničene na, aminokiseline koje sadrže aminokiseline sa novim funkcionalnim grupama, aminokiseline koje kovalentno ili nekovalentno reaguju sa drugim molekulima, glikozilovane aminokiseline kao što su serin supstituisan šećerom, druge aminokiseline modifikovane ugljenim hidratima, aminokiseline koje sadrže keto, aminokiseline koje sadrže aldehid, aminokiseline koje sadrže polietilen glikol ili druge polietre, aminokiseline supstituisane teškim atomima, ili hemijski dostupne fotocepabilne aminokiseline, aminokiseline sa izduženim bočnim lancima u poređenju sa prirodnim amino kiselinama, uključujući, ali ne ograničavajući se na, polietre ili ugljovodonike dugog lanca, uključujući, ali ne ograničavajući se na, više od oko 5 ili više od oko 10 ugljenika, vezanih za ugljenik aminokiseline koje sadrže šećer, redoks-aktivne aminokiseline, aminokiseline koje sadrže amino tiokiseline i amino kiseline koje sadrže jedan ili više toksičnih delova.
[0101] U nekim aspektima, neprirodne aminokiseline sadrže saharidni deo. Primeri takvih amino kiselina uključuju N-acetil-L-glukozaminil-L-serin, N-acetil-L-galaktozaminil-L-serin, N-acetil-L-glukozaminil-L-treonin, N-acetil-L-glukozaminil- L-asparagin i O-manosaminil-L-serin. Primeri takvih aminokiselina takođe uključuju primere pri čemu je prirodna N- ili O- veza između amino kiseline i saharida zamenjena kovalentnom vezom koja se obično ne nalazi u prirodi, uključujući, ali ne ograničavajući se na, alken, oksim, tioetar, amid i slično. Primeri takvih aminokiselina takođe uključuju saharide koji se obično ne nalaze u prirodnim proteinima kao što su 2-deoksi-glukoza, 2-deoksigalaktoza i slično.
[0102] Hemijski delovi ugrađeni u polipeptide putem inkorporacije neprirodnih amino kiselina u takve polipeptide nude niz prednosti i manipulacije polipeptidima. Na primer, jedinstvena reaktivnost karbonil ili dikarbonil funkcionalne grupe (uključujući keto- ili aldehidnu funkcionalnu grupu) omogućava selektivnu modifikaciju proteina sa bilo kojim od brojnih reagenasa koji sadrže hidrazin ili hidroksilamin in vivo i in vitro. Teški atom neprirodne aminokiseline, na primer, može biti korisan za fazne podatke o rendgenskoj strukturi. Lokalno specifično uvođenje teških atoma korišćenjem neprirodnih aminokiselina takođe obezbeđuje selektivnost i fleksibilnost u izboru položaja za teške atome. Fotoreaktivne neprirodne aminokiseline (uključujući, ali ne ograničavajući se na, aminokiseline sa benzofenonom i arilazidima (uključujući ali ne ograničavajući se na bočne lance fenilazida), na primer, omogućavaju efikasno in vivo i in vitro fotoukrštanje polipeptida. Primeri fotoreaktivnih neprirodnih aminokiselina uključuju, ali nisu ograničene na, p-azido-fenilalanin i p-benzoil-fenilalanin. U neograničavajućem primeru, metil grupa neprirodnih amino kiselina može biti supstituisana sa izotopski obeleženom, uključujući, ali ne ograničavajući se na, metil grupom, kao sonda lokalne strukture i dinamike, uključujući, ali ne ograničavajući se na, uz upotrebu nuklearne magnetne rezonance i vibracione spektroskopije.
Derivati dolastatina vezani za neprirodne aminokiseline
[0103] U drugim aspektima predmetnog pronalaska opisanog ovde su metodi, strategije i tehnike za ugrađivanje najmanje jednog derivata dolastatin linkera u neprirodnu amino kiselinu. Ovaj pronalazak koje je ovde opisan uključuje postupke za proizvodnju, prečišćavanje, karakterizaciju i korišćenje derivata dolastatin linkera koji sadrže najmanje jednu takvu neprirodnu amino kiselinu. U ovaj aspekt su takođe uključene kompozicije i metodi za proizvodnju, prečišćavanje, karakterizaciju i korišćenje oligonukleotida (uključujući DNK i RNK) koji se mogu koristiti za proizvodnju, u najmanjem delimično, derivata dolastatin linkera koji sadrži najmanje jednu neprirodnu amino kiselinu. U ovaj aspekt su takođe uključene kompozicije i metodi za proizvodnju, prečišćavanje, karakterizaciju i korišćenje ćelija koje mogu da eksprimiraju takve oligonukleotide koji se mogu koristiti za proizvodnju, u najmanjem delimično, derivata dolastatin linkera koji sadrži najmanje jednu neprirodnu amino kiselinu.
[0104] Dakle, ovde su obezbeđeni i opisani derivati dolastatin linkera koji sadrže najmanje jednu neprirodnu amino kiselinu ili modifikovanu neprirodnu amino kiselinu sa karbonil, dikarbonil, alkin, cikloalkin, azid, oksim ili hidroksilamin. U određenim aspektima, derivati dolastatin linkera sa najmanje jednom neprirodnom amino kiselinom ili modifikovanom neprirodnom amino kiselinom sa karbonil, dikarbonil, alkin, cikloalkin, azid, oksim ili hidroksilamin grupom uključuju najmanje jednu posttranslacionu modifikaciju na nekoj poziciji na polipeptidu. U nekim aspektima, kotranslaciona ili posttranslaciona modifikacija se dešava putem ćelijskog metabolizma (npr. glikozilacija, acetilacija, acilacija, modifikacija lipida, palmitoilacija, dodavanje palmitata, fosforilacija, modifikacija glikolipidne veze i slično), u mnogim slučajevima, takve kotranslacione ili posttranslacione modifikacije zasnovane na ćelijskim mašinama se javljaju na prirodnim mestima aminokiselina na polipeptidu, međutim, u određenim aspektima, kotranslaciona ili posttranslaciona zasnovana na ćelijskim metabolizmima modifikacije se dešavaju na neprirodnim amino kiselinskim mestima na polipeptidu.
[0105] U drugim aspektima, posttranslaciona modifikacija ne koristi ćelijski metabolizam, već je funkcionalnost umesto toga obezbeđena vezivanjem molekula (polimera; polimera rastvorljivog u vodi; derivata polietilen glikola; drugog proteina ili polipeptida ili analoga polipeptida i bilo koja njihova kombinacija) koji sadrži drugu reaktivnu grupu na najmanje jednu neprirodnu aminokiselinu koja sadrži prvu reaktivnu grupu (uključujući, ali ne ograničavajući se na, neprirodnu amino kiselinu; keton, aldehid, acetal, hemiacetal, alkin, cikloalkin, azidna, oksimsku ili hidroksilaminsku funkcionalnu grupa) koristeći hemijsku metodologiju opisanu ovde, ili druge pogodne za određene reaktivne grupe. U određenim aspektima, kotranslaciona ili posttranslaciona modifikacija se vrši in vivo u eukariotskoj ćeliji ili u neeukariotskoj ćeliji. U određenim aspektima, posttranslaciona modifikacija je napravljena in vitro bez korišćenja ćelijskog metabolizma. U ovaj aspekt su takođe uključeni postupci za proizvodnju, prečišćavanje, karakterizaciju i upotrebu takvih derivata dolastatin linkera koji sadrže najmanje jednu takvu kotranslaciono ili posttranslaciono modifikovanu neprirodnu aminokiselinu.
[0106] Takođe su uključeni u obim metoda, kompozicija, strategija i tehnika opisanih ovde su reagensi koji mogu da reaguju sa derivatom dolastatin linkera (koji sadrži karbonil ili dikarbonil grupu, oksim grupu, alkin, cikloalkin, azid, hidroksilamin grupu ili su maskirani ili zaštićeni oblici) koji je deo polipeptida tako da proizvede bilo koju od napred navedenih posttranslacionih modifikacija. U određenim aspektima, rezultujući posttranslaciono modifikovani derivat dolastatin linkera će sadržati najmanje jednu oksim grupu; rezultujući modifikovani derivat dolastatin linkera koji sadrži oksim može biti podvrgnut naknadnim reakcijama modifikacije. U ovaj aspekt su takođe uključeni metodi za proizvodnju, prečišćavanje, karakterizaciju i korišćenje takvih reagenasa koji su sposobni za bilo koju takvu posttranslacionu modifikaciju takvog derivate dolastatin linkera.
[0107] U određenim aspektima, polipeptid ili derivat dolastatina povezan sa neprirodnim aminokiselinama uključuje najmanje jednu kotranslacionu ili posttranslacionu modifikaciju koju in vivo pravi jedna ćelija domaćina, pri čemu se posttranslaciona modifikacija normalno ne vrši u drugim tipom ćelije domaćina. U određenim aspektima, polipeptid uključuje najmanje jednu kotranslacionu ili posttranslacionu modifikaciju koju in vivo pravi eukariotska ćelija, pri čemu kotranslacionu ili posttranslacionu modifikaciju normalno ne pravi neeukariotska ćelija. Primeri takvih kotranslacionih ili posttranslacionih modifikacija uključuju, ali nisu ograničeni na, glikozilaciju, acetilaciju, acilaciju, modifikaciju lipida, palmitoilaciju, dodavanje palmitata, fosforilaciju, modifikaciju glikolipidne veze i slično. U jednom aspektu, kotranslaciona ili posttranslaciona modifikacija obuhvata vezivanje oligosaharida za asparagin pomoću veze GlcNAc-asparagin (uključujući, ali ne ograničavajući se na, gde oligosaharid sadrži (GlcNAc-Man)2-Man-GlcNAc-GlcNAc i slično). U drugom aspektu, kotranslaciona ili posttranslaciona modifikacija obuhvata vezivanje oligosaharida (uključujući, ali ne ograničavajući se na, Gal-GalNAc, Gal-GlcNAc, itd.) za serin ili treonin pomoću GalNAc-serina, GalNAc-treonin, GlcNAc-serin ili GlcNAc-treonin veza. U određenim aspektima, protein ili polipeptid može da sadrži sekvencu sekrecije ili lokalizacije, oznaku epitopa, oznaku FLAG, polihistidinsku oznaku, GST fuziju i/ili slično. U ovaj aspekt su takođe uključeni metodi za proizvodnju, prečišćavanje, karakterizaciju i korišćenje takvih polipeptida koji sadrže najmanje jednu takvu kotranslacionu ili posttranslacionu modifikaciju. U drugim aspektima, glikozilovani polipeptid neprirodne amino kiseline se proizvodi u neglikozilovanom obliku. Takav neglikozilovani oblik glikozilovane neprirodne amino kiseline može se proizvesti metodima koji uključuju hemijsko ili enzimsko uklanjanje oligosaharidnih grupa iz izolovanog ili suštinski prečišćenog ili neprečišćenog glikozilovanog polipeptida neprirodne aminokiseline; proizvodnja neprirodne aminokiseline u domaćinu koji ne glikozilira takav polipeptid neprirodne aminokiseline (takav domaćin uključujući prokariote ili eukariote projektovane ili mutirane da ne glikozilišu takav polipeptid), uvođenje inhibitora glikozilacije u medijum ćelijske kulture u kome se takav polipeptid neprirodne aminokiseline proizvodi od strane eukariota koji bi normalno glikozilovao takav polipeptid, ili kombinaciju bilo kojeg takvog metoda. Ovde su takođe opisani takvi neglikozilovani oblici normalno glikozilovanih polipeptida neprirodnih aminokiselina (pod normalno glikozilovanim se podrazumeva polipeptid koji bi bio glikoziliran kada bi se proizveo pod uslovima u kojima su prirodno prisutni polipeptidi glikozilovani). Naravno, takvi neglikozilovani oblici normalno glikozilovanih polipeptida neprirodne aminokiseline (ili zaista bilo koji polipeptid koji je ovde opisan) mogu biti u neprečišćenom obliku, suštinski prečišćenom obliku ili u izolovanom obliku.
Povezani derivati dolastatina koji sadrže oksim
[0108] Derivati dolastatina vezani za neprirodne aminokiseline koji sadrže oksim grupu omogućavaju reakciju sa različitim reagensima koji sadrže određene reaktivne karbonil- ili dikarbonil- grupe (uključujući, ali ne ograničavajući se na, ketone, aldehide ili druge grupe sa sličnom reaktivnošću) da se formiraju nove neprirodne aminokiseline koje sadrže novu oksim grupu. Takva reakcija razmene oksima omogućava dalju funkcionalizaciju derivata povezanih sa dolastatinom. Dalje, originalni derivat vezan za dolastatin koji sadrži oksimsku grupu može biti koristan sam po sebi sve dok je oksimska veza stabilna pod uslovima neophodnim da se amino kiselina ugradi u polipeptid (npr. in vivo, in vitro i hemijske sintetičke metode kako je opisano ovde i u WO2013/185117 i WO2005/074650).
[0109] Dakle, u određenim aspektima koji su ovde opisani su derivati neprirodne aminokiseline povezani sa dolastatinom sa bočnim lancima koji sadrže oksim grupu, grupu sličnu oksimu (koja ima reaktivnost sličnu oksim grupi i strukturno je slična oksim grupi), maskirana oksim grupa (koja se lako može konvertovati u oksim grupu) ili zaštićena oksim grupa (koja ima reaktivnost sličnu oksim grupi nakon uklanjanja zaštite).
[0110] Postupci i kompozicije za inkorporaciju jedne ili više neprirodnih amino kiselina u derivat dolastatin linkera su dobro poznati u stanju tehnike (videti na primer WO2013/185117 i WO2005/074650). Jedna ili više neprirodnih amino kiselina mogu biti ugrađene na jednom ili više određenih pozicija koje ne remete aktivnost derivata dolastatin linkera. Ovo se može postići pravljenjem „konzervativnih“ supstitucija, uključujući, ali ne ograničavajući se na, supstituciju hidrofobnih amino kiselina neprirodnim ili prirodnim hidrofobnim amino kiselinama, glomaznih amino kiselina neprirodnim ili prirodnim masivnim amino kiselinama, hidrofilnih amino kiselina sa neprirodnim ili prirodnim hidrofilnim aminokiselinama) i/ili ubacivanje neprirodne amino kiseline na lokaciju koja nije potrebna za aktivnost.
[0111] Različiti biohemijski i strukturni pristupi se mogu koristiti da se izaberu željena mesta za supstituciju sa neprirodnom amino kiselinom unutar derivata dolastatin linkera. U nekim aspektima, neprirodna amino kiselina je povezana na C-završetku derivata dolastatina. U drugim aspektima, neprirodna amino kiselina je vezana na N-završetku derivata dolastatina. Bilo koja pozicija derivata dolastatin linkera je pogodna za selekciju da bi se inkorporisala neprirodna aminokiselina, a selekcija može biti zasnovana na racionalnom dizajnu ili nasumičnim odabirom za bilo koju ili nikakvu posebnu željenu svrhu. Odabir ž eljenih mesta može se zasnivati na proizvodnji polipeptida neprirodne amino kiseline (koji može biti dalje modifikovan ili ostati nemodifikovan) koji ima bilo koje željeno svojstvo ili aktivnost, uključujući ali ne ograničavajući se na modulatore vezivanja receptora, modulatore aktivnosti receptora, modulatore vezivanja za vezujuće partnere, modulatore aktivnosti partnera vezivanja, modulatore konformacije vezujućih partnera, formiranje dimera ili multimera, bez promene aktivnosti ili svojstva u poređenju sa prirodnim molekulom, ili manipulisanja bilo kojim fizičkim ili hemijskim svojstvima polipeptida kao š to je rastvorljivost, agregacija ili stabilnost. Alternativno, mesta identifikovana kao kritična za biološku aktivnost mogu takođe biti dobri kandidati za supstituciju sa neprirodnom amino kiselinom, opet u zavisnosti od željene aktivnosti za polipeptid. Druga alternativa bi bila jednostavno napraviti serijske supstitucije na svakoj poziciji u polipeptidnom lancu sa neprirodnom amino kiselinom i posmatrati efekat na aktivnosti polipeptida. Bilo koji način, tehnika ili metod za izbor pozicije za supstituciju sa neprirodnom amino kiselinom u bilo kom polipeptidu je pogodan za upotrebu u metodima, tehnikama i kompozicijama opisanim ovde.
[0112] Struktura i aktivnost prirodno prisutnih mutanata polipeptida koji sadrže delecije se takođe mogu ispitati da bi se odredili regioni proteina koji će verovatno biti tolerantni na supstituciju sa neprirodnom amino kiselinom. Kada se eliminišu ostaci za koje postoji verovatnoća da su netolerantni na supstituciju sa neprirodnim amino kiselinama, uticaj predloženih supstitucija na svakoj od preostalih pozicija može se ispitati korišćenjem metoda uključujući, ali ne ograničavajući se na, trodimenzionalnu strukturu relevantnog polipeptida, i svih povezanih liganda ili vezujućih proteina. Kristalografske rendgenske i NMR strukture mnogih polipeptida dostupne su u Protein Data Bank (PDB, pogledajte svetsku mrežu za rcsb.org), centralizovanoj bazi podataka koja sadrži trodimenzionalne strukturne podatke velikih molekula proteina i nukleinskih kiselina, koje se mogu koristiti za identifikaciju položaja aminokiselina koje se mogu zameniti neprirodnim amino kiselinama. Pored toga, mogu se napraviti modeli koji istražuju sekundarnu i tercijarnu strukturu polipeptida, ako trodimenzionalni strukturni podaci nisu dostupni. Dakle, ide lako se može dobiti broj pozicija aminokiselina koje se mogu zameniti neprirodnim amino kiselinama.
[0113] Primeri mesta inkorporacije neprirodne amino kiseline uključuju, ali nisu ograničeni na, one koji su isključeni iz potencijalnih regiona za vezivanje receptora, ili regioni za vezivanje za vezujuće proteine ili ligande mogu biti potpuno ili delimično izloženi rastvaraču, i imaju minimalne ili nikakve interakcije vodoničnih veza sa obližnjim ostacima, mogu biti minimalno izložene obližnjim reaktivnim ostacima i/ili mogu biti u regionima koji su veoma fleksibilni kao što je predviđeno trodimenzionalnom kristalnom strukturom određenog polipeptida sa njegovim povezanim receptorom, ligandom ili vezujućim proteinom.
[0114] Širok spektar neprirodnih amino kiselina može biti supstituisan za, ili ugrađen u datu poziciju u polipeptidu. Kao primer, određena neprirodna amino kiselina može biti izabrana za ugradnju na osnovu ispitivanja trodimenzionalne kristalne strukture polipeptida sa njegovim povezanim ligandom, receptorom i/ili vezujućim proteinima, prednost za konzervativne supstitucije.
[0115] U jednom aspektu, metodi opisani ovde uključuju ugrađivanje u derivat dolastatin linkera, pri čemu derivat dolastatin linkera sadrži prvu reaktivnu grupu; i dovođenje u kontakt derivata dolastatin linkera sa molekulom (uključujući ali bez ograničenja na drugi protein ili polipeptid ili polipeptidni analog; antitelo ili fragment antitela; i bilo koju njihovu kombinaciju) koji sadrži drugu reaktivnu grupu. U određenim aspektima, prva reaktivna grupa je hidroksilaminski deo, a druga reaktivna grupa je karbonilni ili dikarbonilni deo, pri čemu se formira oksimska veza. U određenim aspektima, prva reaktivna grupa je karbonilna ili dikarbonilna grupa, a druga reaktivna grupa je hidroksilaminski deo, pri čemu se formira oksimska veza. U određenim aspektima, prva reaktivna grupa je karbonilna ili dikarbonilna grupa, a druga reaktivna grupa je oksimna grupa, pri čemu dolazi do reakcije razmene oksima. U određenim aspektima, prva reaktivna grupa je oksimna grupa, a druga reaktivna grupa je karbonilna ili dikarbonilna grupa, pri čemu dolazi do reakcije razmene oksima.
[0116] U nekim slučajevima, inkorporacija(e) derivata dolastatin linkera će biti kombinovane sa drugim dodacima, supstitucijama ili brisanjem unutar polipeptida da bi se uticalo na druge hemijske, fizičke, farmakološke i/ili biološke osobine. U nekim slučajevima, drugi dodaci, supstitucije ili delecije mogu povećati stabilnost (uključujući, ali ne ograničavajući se na, otpornost na proteolitičku degradaciju) polipeptida ili povećati afinitet polipeptida za odgovarajući receptor, ligand i/ili vezujuće proteine. U nekim slučajevima, drugi dodaci, supstitucije ili delecije mogu povećati rastvorljivost (uključujući, ali ne ograničavajući se na, kada se eksprimiraju u E. coli ili drugim ćelijama domaćinima) polipeptida. U nekim aspektima, mesta se biraju za supstituciju sa prirodno kodiranom ili neprirodnom amino kiselinom pored drugog mesta za inkorporaciju neprirodne amino kiseline u svrhu povećanja rastvorljivosti polipeptida nakon ekspresije u E. coli, ili drugom rekombinantnom ćelije domaćina. U nekim aspektima, polipeptidi sadrže još jedan dodatak, supstituciju ili deleciju koja modulira afinitet za povezani ligand, vezujuće proteine i/ili receptor, modulira (uključujući, ali ne ograničavajući se na, povećava ili smanjuje) dimerizaciju receptora, stabilizuje dimere receptora, modulira poluživot u cirkulaciji, modulira oslobađanje ili biodostupnost, olakšava prečišćavanje, ili poboljšava ili menja određeni put primene. Slično, polipeptid neprirodne amino kiseline može sadržati hemijske ili enzimske sekvence cepanja, sekvence cepanja proteaze, reaktivne grupe, domene za vezivanje antitela (uključujući, ali ne ograničavajući se na, FLAG ili poli-His) ili druge sekvence zasnovane na afinitetu (uključujući ali ne ograničavajući se na, FLAG, poli-His, GST, itd.) ili povezane molekule (uključujući ali ne ograničavajući se na biotin) koji poboljšavaju detekciju (uključujući, ali ne ograničavajući se na, GFP), prečišćavanje, transport kroz tkiva ili ćelijske membrane, oslobađanje ili aktivacija proleka, smanjenje veličine ili druge osobine polipeptida.
[0117] U nekim aspektima, korisno opterećenje ili deo toksina se koristi u konjugatima leka protiv PSMA antitela prema ovom pronalasku. Primeri korisnih opterećenja mogu uključivati na neograničavajući način: inhibitore replikacije DNK, inhibitore DNK transkripcije, inhibitore translacije RNK, inhibitore ćelijske deobe, inhibitore ćelijske signalizacije, inhibitore kinaze, inhibitore tubulinske polimeraze, agense za depolimerizaciju tubulina, agense za cepanje DNK, agense za vezivanje DNK, inhibitore RNK polimeraze, auristatine, dolastatine, MMAF, MMAE, MMAD, analoze duokarmicina, analoze pirolobenzodiazepina (PBD), analoze tubulizina, analoze majtanzina, analoze amanitina, analoze kriptoficina, analoze epotilona, analoze kaliheamicina, analoze doksorubicina, analoze kamptotecina.
[0118] U drugim aspektima ovog pronalaska su obezbeđeni linkeri korisnog opterećenja leka. Inhibitori anti-tubulina su izabrani kao nosivo opterećenje u kombinaciji sa cepljivim, kratko cepljivim i necepljivim linkerima. Na primer, kombinacija linkera korisnog opterećenja prema ovom pronalasku može uključivati, ali nije ograničena na, cepljive, kratko cepljive i necepljive linkere korisnog opterećenja. Cepljivi linkeri korisnog opterećenja mogu uključivati dipeptide koji se mogu cepati (uključujući, ali ne ograničavajući se na Val-Cit, Val-Ala, Val-Lys i Ala-Ala), hidrazinsku vezu, disulfidnu vezu ili pirofosfatnu vezu. Primer linkera korisnog opterećenja koji se koristi u konjugatu leka protiv PSMA antitela iz ovog pronalaska uključuje necepljivi MMAE, necepljivi MMAF, val-citrulin-acetil MMAF, kratki val-citrulin-acetil MMAF ili kratki val-citrulin-acetil MMAE. U studiji su korišćeni i MMAE i MMAF. Neograničavajući primeri derivata dolastatin linkera uključuju sledeće:
MMAF koji se ne može cepati i ima strukturu:
MMAE koji se ne može cepati koji ima strukturu:
Cepljivi ili Val-citrulin-acetil (Val-Cit) MMAF koji ima strukturu:
Kratko cepljivi ili kratki Val-citrulin-acetil (Val-Cit) MMAF koji ima strukturu:
Kratko cepljivi ili kratki Val-citrulin-acetil (Val-Cit) MMAE koji ima strukturu:
[0119] Tabela 1 daje jedinjenja vezana za lekove koja se mogu koristiti sa antitelom protiv PSMA ili konjugatima leka antitela prema ovom pronalasku. Sinteza takvih linkera korisnog opterec ́enja je dobro poznata stručnjaku. Videti na primer. Videti na primer Dubowchik et al., Bioconjugate Chem. 13: 855-869, (2002); Doronina et al., Nature Biotech- nology 21(7): 778-784, (2003); WO2012/166560; WO2013/185117.
Generisanje anti-PSMA ADC konjugovanog sa PSMA ciljanim ligandom
[0120] U drugim aspektima pronalaska su uključeni ciljani ligandi. Takvi ligandi uključuju one koji se vezuju za aktivno mesto PSMA receptora, ligande koji su inhibitori enzimske aktivnosti glutamat karboksipeptidaze PSMA receptora i ligande koji se koriste za snimanje. Pronalazak takođe uključuje one ligande sa sub-piko do sub-nano molarnim opsegom afiniteta vezivanja.
[0121] Anti-PSMA ADC konjugovani sa PSMA ciljanim ligandom mogu se generisati kao što je ovde opisano. Jedan metod generisanja uključuje sekvencijalnu konjugaciju gde se toksin-linker konjuguje sa antitelom metodom konjugacije cistein-maleimid, nakon čega sledi konjugacija PSMA-ciljanog liganda na specifičnim mestima na antitelu na osnovu zaštićene metode ligacije oksima. Konjugacija maleimida se izvodi redukcijom disulfidnih mostova između teških i lakih lanaca antitela, š to je olakšano dodavanjem relevantnih redukcionih agenasa. Disulfidne veze antitela mogu da se redukuju inkubacijom reakcione smeše formulisane u pH u rasponu od 6 do 7,4 koja se sastoji od antitela i 3 do 9 molarno višeg redukcionog sredstva. Reakciona smeša se može inkubirati na 37°C tokom 2 sata da bi se dobio odnos lek:antitelo od 3 do 4. Antitelo konjugovano sa toksinom je zatim zamenjeno puferom u reakcionu smešu sa pH u rasponu između 4 i 5 koja sadrži 10 molarno veći PSMA ciljani ligand. Reakcija antitela konjugovanog toksinom sa ciljanim ligandom PSMA može se izvesti inkubacijom na sobnoj temperaturi uz lagano mućkanje tokom 8 do 16 sati. Obično se količina PSMA ciljanog liganda prema antitelu kreće između 1, 8 i 2 generisanog ovom metodom. Nekonjugovane komponente iz reakcione smeše se uklanjaju propuštanjem kroz kolonu za izmenjivanje katjona, a pufer se zamenjuje u pufer za vlasničke formulacije koji je izotoničan sa telesnim tečnostima miša i čoveka. U drugom metodu, PSMA ciljani ligand i toksin mogu biti konjugovani na specifičnim mestima na antitelu u jednom koraku pomoću hemije konjugacije zasnovane na oksimu. Ova konjugacija u jednom koraku može biti olakšana dizajniranjem razgranatog linkera koji sadrži i PSMA ciljani ligand i toksin. Konjugacija u jednom koraku može da se izvede pomoću zaštićene klik hemije zasnovane na oksimu i ciklooktinu. Nekonjugovane komponente se mogu ukloniti iz reakcione smeše propuštanjem kroz kolonu za prečišćavanje izmenom katjona. Prečišćeni materijal se zatim formuliše u izotoničnom puferu. U primernim aspektima PSMA ciljanih liganda, (L predstavlja linker), uključuju, ali nisu ograničeni na, sledeće:
[0122] U primernim aspektima, PSMA ligandi iz ovog pronalaska mogu uključiti ona jedinjenja koja imaju ciljani ligand N-završetka i deo ili deo konjugacije C-završetka. U drugim primerima aspekta ovog pronalaska, PSMA ciljani ligandi mogu uključivati sledeće (Tabela 2), ali nisu ograničeni na:
Tabela 2. Ciljani ligandi
37
[0123] U drugim primerima aspekta, ovaj pronalazak obuhvata PSMA ciljane ligande i linkere pri čemu veza između ciljnog liganda i linkera može biti, na neograničavajući način:
i linker može biti supstituisan vodonikom.
[0124] U drugim aspektima predmetnog pronalaska, linker može biti, na neograničavajući način, polietilen glikol (PEG), alkil, alken, alkin, amin, aril ili amino kiseline. Hemija, metodologija i tehnike za povezivanje linkera su dobro poznate u stanju tehnike.
[0125] U drugom aspektu primera, ovaj pronalazak uključuje PSMA ciljane ligande sa toksinima (Tabela 3) uključujući, ali ne ograničavajući se na:
Tabela 3: Ligandi sa toksinima
Ċ
[0126] U nekim aspektima pronalaska anti-PSMA antitelo, varijanta ili konjugat leka sa povećanjem poluživota u serumu, rastvorljivosti u vodi, biodostupnosti, terapeutskog poluživota ili vremena cirkulacije, ili da se modulira imunogenost, ili biološka aktivnost, poželjna je. Jedan metod za postizanje tako željenih karakteristika anti-PSMA kompozicije koja je ovde opisana je kovalentno vezivanje polimera polietilen glikola (PEG). Da bi se maksimizirale željene osobine polietilen glikola, ukupna molekulska težina i stanje hidratacije polimera ili polimera vezanih za biološki aktivni molekul moraju biti dovoljno visoki da daju prednosti koje su tipično povezane sa takvim vezivanjem polimera, kao što su povećana rastvorljivost u vodi i cirkulišući poluživot, dok ne utiče negativno na bioaktivnost molekula za koji je vezan polietilen glikol.
[0127] Derivati polietilen glikola su često povezani sa biološki aktivnim molekulima preko reaktivnih hemijskih funkcionalnosti, kao što su aminokiselinski ostaci, N-završetak i/ili delovi ugljenih hidrata. WO99/67291 opisuje proces za konjugaciju proteina sa polietilen glikolom, pri čemu je najmanje jedan aminokiselinski ostatak na proteinu supstituisan sintetičkom amino kiselinom i protein je u kontaktu sa polietilen glikolom pod uslovima dovoljnim da se postigne konjugacija sa proteinom .
[0128] Proteini i drugi molekuli često imaju ograničen broj reaktivnih mesta dostupnih za vezivanje polimera. Mesta najpogodnija za modifikaciju putem vezivanja polimera mogu igrati značajnu ulogu u vezivanju receptora, a takva mesta mogu biti neophodna za zadržavanje biološke aktivnosti molekula, što ih čini neprikladnim za vezivanje polimera. Kao rezultat toga, neselektivno vezivanje polimernih lanaca za takva reaktivna mesta na biološki aktivnom molekulu često dovodi do značajnog smanjenja ili čak potpunog gubitka biološke aktivnosti polimer-modifikovanog molekula, veza polietilen glikola može biti usmerena na određenu poziciju unutar protein takav da deo polietilen glikola ne ometa funkciju tog proteina. Jedan metod usmeravanja vezivanja polietilen glikola je uvođenje sintetičke amino kiseline u sekvencu proteina. Biosintetička mašina za proteine prokariota Escherichia coli (E. coli) može se promeniti kako bi se sintetičke amino kiseline efikasno i sa visokom vernošću inkorporirale u proteine kao odgovor na ćilibarski kodon, UAG. Videti, npr., J. W. Chin et al., J. Amer. Chem. Soc. 124: 9026-9027, 2002; J. W. Chin, & P. G. Schultz, ChemBioChem 3(11): 1135-1137, 2002; J. W. Chin, et al., PNAS USA 99: 11020-11024, 2002; and, L. Wang, & P. G. Schultz, Chem. Comm., 1: 1-11, 2002. Sličan metod se može postići sa eukariotom, Saccharomices cerevisiae (S. cerevisiae) (npr. J. Chin et al., Science 301: 964-7, 2003). Korišćenjem ovog postupka, neprirodno kodirana amino kiselina može biti ugrađena u anti-PSMA antitelo, varijantu ili konjugat leka prema ovom pronalasku, obezbeđujući mesto vezivanja za polietilen glikol.
Videti, na primer, WO2010/011735 i WO2005/074650.
Farmaceutske kompozicije
[0129] U drugim aspektima ovog pronalaska, varijante PSMA antitela ili konjugati leka protiv PSMA antitela dalje obuhvataju farmaceutsku kompoziciju ili formulaciju. Takav farmaceutska kompozicija može koristiti različite farmaceutski prihvatljive ekscipijente, stabilizatore, pufere i druge komponente za davanje životinjama. Videti, na primer, Remington, The Science and Practice of Pharmacy, 19th ed., Gennaro, ed., Mack Publishing Co., Easton, PA, 1995. Identifikovanje odgovarajuće kompozicije ili formulacije za stabilnost, administraciju subjektu i aktivnost varira sa svakim jedinjenjem kao određenim brojem komponenti, (na primer, komponente za prečišćavanje, stabilizaciju), što treba uzeti u obzir. Pogodne soli za uključivanje u kompoziciju ili formulaciju mogu uključivati, ali ne ograničavajući se na, natrijum hlorid, kalijum hlorid ili kalcijum hlorid. Mogu se koristiti puferski i/ili stabilizujući agensi kao što je natrijum acetat. Pogodni puferi mogu uključivati fosfatno-citratni pufer, fosfatni pufer, citratni pufer, L-histidin, L-arginin hidrohlorid, bikarbonatni pufer, sukcinatni pufer, citratni pufer i TRIS pufer, bilo sam ili u kombinaciji. Surfaktanti se takođe mogu koristiti, uključujući polisorbate (npr. polisorbat 80), dodecil sulfat (SDS), lecitin, sam ili u kombinaciji.
[0130] U nekim aspektima predmetnog pronalaska, farmaceutska kompozicija ili formulacija može biti vodena kompozicija ili u obliku rekonstituisane tečne kompozicije ili kao prah. Kompozicija ili formulacija može imati pH opseg od oko 4,0 do oko 7,0 ili od oko 4,5 do oko 6,5 kada je formulacija u tečnom obliku. Međutim, pH se može podesiti da bi se obezbedila prihvatljiva stabilnost i administracija od strane kvalifikovanog lekara.
[0131] Kompozicija se može čuvati u bočici ili kertridžu, uređaju za isporuku u obliku olovke, špricu, cevi za intravensku primenu ili kesici za intravensku primenu, ali nije ograničena na njih. U drugim aspektima, farmaceutska kompozicija prema pronalasku može biti primenjena kao pojedinačna doza ili praćena jednom ili više narednih doza tokom minuta, dana ili nedelja nakon prve doze. Dalje primene se mogu razmotriti po potrebi za lečenje, uključujuči smanjenje ili prevenciju raka, uključujući rak prostate.
[0132] U nekim slučajevima, PSMA antitela, varijante ili anti-PSMA ADC kompozicije iz ovog pronalaska mogu se koristiti zajedno sa dodatnom terapijom ili tretmanom uključujući, ali ne ograničavajući se na operaciju, zračenje, kriohirurgiju, termoterapiju, hormonski tretman, hemoterapije, vakcine i druge imunoterapije. U nekim aspektima takav dodatni tretman može uključiti terapeutsko sredstvo kao što je hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihovu kombinaciju. U jednom aspektu, hormonski agens je enzalutamid.
[0133] U drugim aspektima, anti-PSMA ADC-ovi iz ovog pronalaska mogu se davati sa jednim ili više imunostimulatornih agenasa da bi se indukovao ili pojačao imuni odgovor. Imunostimulišući agensi koji mogu da stimulišu specifične delove imunog sistema, kao što su prirodne ćelije ubice (NK) koje posreduju u ćelijskoj citotoksičnosti zavisnoj od antitela (ADCC). Takvi imunostimulatorni agensi uključuju, ali nisu ograničeni na, IL-2, imunostimulatorne oligonukleotide (na primer, CpG motivi), α-interferon, γinterferon, faktor nekroze tumora alfa (TNFα). U drugim aspektima, anti-PSMA ADC-ovi iz pronalaska mogu se davati sa jednim ili više imunomodulatora uključujući, ali ne ograničavajući se na, citokine, hemokine (uključujući, ali nisu ograničeni na, SLC5 ELC, MIP3α, MIP3β, IP-IO, MIG i njihove kombinacije). Drugi terapeutski agensi mogu biti vakcina koja imunizuje subjekta protiv PSMA. Takve vakcine, u nekim aspektima, uključuju antigene, kao što su PSMA dimeri, sa, opciono, jednim ili više pomoćna sredstva za indukovanje ili poboljšanje imunološkog odgovora. Pomoćna sredstva mnogih vrsta su dobro poznata u stanju tehnike.
[0134] Hemoterapeutski agens ili bilo koji agens uključen u lečenje, smanjenje ili prevenciju bolesti, stanja ili raka kod subjekta kome je to potrebno, takođe se može primeniti u kombinaciji sa i anti-PSMA ADC iz pronalaska. Hemoterapeutski agensi mogu uključivati, ali nisu ograničeni na, erlotinib (TARCEVA<®,>Genentech/OSI Pharm.), bortezomib (VELCADE<®>, Millennium Pharm.), fulvestrant (FASLODEX<®>, AstraZeneca), sutent (SU11248, Pfizer), letrozol (FEMARA<®>, Novartis), imatinib mezilat (GLEEVEC<®>, Novartis), PTK787/ZK 222584 (Novartis), oksaliplatin (Eloxatin<®>, Sanofi), 5-FU (5-fluorouracil), leukovorin, Rapamicin (Sirolimus, RAPAMUNE<®>, Wyeth), lapatinib (TYKERB®, GSK572016, GlaxoSmithKline), lonafamib (SCH 66336), sorafenib (BAI43-9006, Baier Labs.) i gefitinib (IRESSA<®>, AstraZeneca, AstraZeneca, AG17715, AG1715; ), agensi za alkilovanje kao što su tiotepa i CYTOXAN<®>ciklosfosfamid; alkil sulfonati kao što su busulfan, improsulfan i piposulfan; antifolatni antineoplastični lek kao š to je pemetreksed (ALIMTA<®>, Eli Lilli), aziridini kao što su benzodopa, karbokon, meturedopa i uredopa; etilenimini i metilamelamini uključujući altretamin, trietilenmelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilomelamin; acetogenini (naročito bulatacin i bulatacinon); kamptotecin (uključujući sintetički analog topotekan); briostatin; kalistatin; CC-1065 (uključujući njegove sintetičke analoge adozelesina, karzelesina i bizelesina); kriptoficini (posebno kriptofikin 1 i kriptofikin 8); dolastatin; duokarmicin (uključujući sintetičke analoge, KW-2189 i CB1-TM1); eleuterobin; pancratistatin; a sarkodiktin; spongistatin; azotni senfovi kao š to su hlorambucil, hlonafazin, holofosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembihin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil senf; nitrozouree kao što su karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin i ranimnustin; antibiotici kao što su enediinski antibiotici, kaliheamicin, kaliheamicin gama1I i kaliheamicin omegaI1; dinamicin, uključujući dinamicin A; bi-sfosfonati, kao što je klodronat; esperamicin; kao i neokarzinostatin hromofor i srodni hromoprotein enediini antibiotski hromofori, aklacinomizini, aktinomicin, antramicin, azaserin, bleomicini, kaktinomicin, karabicin, kaminomicin, karzinofilin, hromomicin, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, ADRIAMYCIN<®>doksorubicin, (uključujući morfolino-doksorubicin, cijanomorfolino-doksorubicin, 2-pirolino-doksorubicin i deoksidoksorubicin), epirubicin, esorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicin kao što su mitomicin C, mikofenolna kiselina, nogalamicin, olivomicini, peplomicin, potfiromicin, puromicin, kuelamicin, strepzonim, strepzonim, zinostatin, zorubicin ; antimetaboliti kao što su metotreksat i 5-fluorouracil (5-FU); analozi folne kiseline kao što su denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; analozi purina kao što su fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamiprin, tioguanin; analozi pirimidina kao što su ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin; androgeni kao što su kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; antiandrogeni (na primer, enzalutamid) ili terapija deprivacije androgena; anti-nadbubrežni lekovi kao što su aminoglutetimid, mitotan, trilostan; sredstvo za dopunu folne kiseline kao š to je frolinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolevulinska kiselina; eniluracil; amsacrine; bestrabucil; bisantrene; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikuone; elformitin; eliptinijum acetat; epotilon; etoglucid; galijum nitrat; hidrok-iurea; lentinan; lonidainine; maitansinoidi kao što su maitanzin i ansamitocini; mitoguazon; mitoksantron; mopidanmol; nitraerin; pentostatin; phenamet; pirarubicin; losoksantron; podofilinska kiselina; 2-etilhidrazid; prokarbazin; PSK® polisaharidni kompleks (JHS Natural Products, Eugene, OR); razoksan; rizoksin; sizofuran; spirogermanijum; tenuazonska kiselina; triazikuone; 2,2',2"-trihlorotrietilamin; trihoteceni (posebno T-2 toksin, verakurin A, roridin A i anguidin); uretan; vindezin; dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; ara-bino- C"); ciklofosfamid; tiotepa; taksoidi, npr.paklitaksel (TAXOL<®>, Bristol-Miers Squibb Oncology, Princeton, N.J.), ABRAXANE<TM>bez kremofora, albumin, formulacija nanočestica paklitaksela (American Pharmaceutical Partners, Schaumberg, Ill.) i TAXOTERE<®>doksetaksela (Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Francuska); hloranbucil; GEMZAR<®>gemcitabin; 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; analozi platine kao što su cisplatin i karboplatin; vinblastin; platina; etopozid (VP-16); ifosfamid; mitoksantron; vinkristin; NAVELBINE<®>vinorelbin; novantron; tenipozid; edatreksat; daunomicin; aminopterin; keloda; ibandronat; CPT-11; inhibitor topoizomeraze RFS 2000; difluorometilornitin (DMFO); retinoidi kao što je retinoična kiselina; kapecitabin; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivati bilo kojeg od napred navedenih.
[0135] Termin "oko" će razumeti osobe sa uobičajenim veštinama u ovoj oblasti i variraće u izvesnoj meri u zavisnosti od konteksta u kome se koristi.
Primeri
[0136] Primer 1: Prolazna transfekcija. CHO-S kultura je zasejana pri 0,75X10<6>/mL približno 16 sati pre transfekcije u FreeStile CHO medijumu. C ́elije su transfektovane sledećeg dana kada je broj ćelija dostigao 1,4 - 1,6X10<6>/mL. Na ciljnom broju ćelija, 400 mM para-acetil fenilalanina (pAF) zaliha je dodato u konačnu koncentraciju kulture od 1,4 mM.
<6>[0137] Kompleks polietilenimin/DNK (PEI/DNK) je pripremljen kako je opisano: DNK (1,42 ug/1x10 ćelija) je rastvorena u RPMI medijumu (5 % (tež/tež) ukupne zapremine kulture), mešavina DNK/RPMI je inkubirana na sobnoj temperaturi 2 minuta, PEI zaliha (1 mg/mL) je dodata u DNK rastvor u odnosu 3:1 (PEI/DNK (ug/ug)), i smeša je inkubirana na sobnoj temperaturi 5 min.
[0138] Smeša je polako dodata u ćelijsku kulturu i mešana. Bočice su prebačene u inkubator na 32°C. Dana 6 nakon transfekcije, izvršena je Western blot analiza. Dana 7 nakon transfekcije, supernatant je sakupljen.
[0139] Primer 2: Humanizacija antitela - J591 roditeljskog miša (Liu et al., Cancer Research, 57, 3629-36354, 1997) antitelo je humanizovano izborom humanih okvira na osnovu identičnosti sekvence sa sekvencom okvira miša. CDR-ovi lakog i teškog lanca iz mišjeg antitela su kalemljeni na humane okvire, respektivno, i analizirani na vezivanje za PSMA antigen. Humanizovane varijante su generisane uparivanjem četiri humana okvira teškog lanca sa šest okvira lakih lanaca. Varijante su prolazno eksprimirane u HEK293 ćelijama i supernatanti su testirani na vezivanje za PSMA antigen eksprimiran u LnCap ćelijama pomoću FACS. Tabela 4 opisuje odabranu sekvencu varijabilnog regiona teškog lanca i 4 sekvence varijabilnog regiona lakog lanca koje se koriste za dalje studije. Analiza vezivanja je pokazala četiri humanizovane varijante pune dužine, prikazane kao humanizovani anti-PSMA varijante 1, 2, 3 i 4 (Tabela 4), koja je zadržala uporedivi afinitet vezivanja kao himera, (Tabela 4), pokazujući afinitet vezivanja u nanomolarnom opsegu. Kao što je otkriveno u Tabeli 4, humanizovana anti-PSMA varijanta 1 sadrži sekvencu teškog lanca SEK. ID BR: 8 i sekvencu lakog lanca SEK. ID BR: 9; humanizovana anti-PSMA varijanta 2 sadrži sekvencu teškog lanca SEK. ID BR: 10 i sekvencu lakog lanca SEK. ID BR: 11; humanizovana anti-PSMA varijanta 3 obuhvata sekvencu teškog lanca SEK. ID BR: 12 i sekvencu lakog lanca SEK. ID BR: 13; i humanizovana anti-PSMA varijanta 4 sadrži sekvencu teškog lanca SEK. ID BR: 14 i sekvencu lakog lanca SEK. ID BR: 15.
Tabela 4. Varijante anti-PSMA antitela sekvenci aminokiselina
Ċ
[0140] Primer 3: Rekombinantna ekspresija anti-PSMA antitela - olovna humanizovana anti-PSMA antitela su odabrana i rekombinantno eksprimirana u CHO ćelijama kako prolaznom transfekcijom, (opisano u Primeru 1), tako i metodom stabilnog skupa za ispitivanje ekspresije humanizovane sekvence. U pristupima prolazne transfekcije i stabilnog masovnog skupa, vlasnička tehnologija je ugrađena u vektor ekspresije i ćelije domaćina CHO, respektivno (videti na primer WO2018/223108). Neprirodna aminokiselina para acetil fenilalanin (pAF) je ugrađena na poziciju A114, (Kabat šema numerisanja, (videti Kabat et al., NIH publikacija br. 369-847, 1993); pozicija naznačena u Tabeli 4 sa A), u PSMA antitelu, koje je prvi aminokiselinski ostatak konstantnog regiona teškog lanca.
[0141] Primer 4: Proizvodnja konjugata antitela sa lekovima (ADC) - Antitela se mogu prečistiti korišćenjem metoda zasnovanih na hromatografiji, dobro poznatih prosečnom stručnjaku, koji uključuju hvatanje afiniteta za protein A i poliranje izmenom katjona. Antitelo sakupljeno u medijumu ćelijske kulture je uhvaćeno na afinitetnoj koloni za protein A i eluirano u kiselim uslovima. Preparat antitela se titrira do pH 5 i polira propuštanjem kroz kolonu za izmenu katjona. Korišćenjem post katjonske razmene, antitelo se može zameniti puferom u pufer za konjugaciju.
[0142] U ovom pronalasku, humanizovano anti-PSMA antitelo je konjugovano sa toksinom, (MMAE ili MMAF), preko malog hidrofilnog linkera. Linker-korisno opterećenje leka kovalentno konjuguje sa pAF u teškom lancu anti-PSMA, što dovodi do formiranja anti-PSMA-ADC(ova). PSMA antitelo je konjugovano sa linkerom lek-korisno opterećenje inkubacijom na 28°C u prisustvu 135 mM sirćetnog hidrazida, koji deluje kao katalizator. Nekonjugovana antitela, nekonjugovani lek-linker, agregati i nečistoće su uklonjeni propuštanjem reakcione smeše kroz kolonu za hromatografiju za katjone pre razmene anti-PSMA ADC u pufer za formulaciju (50 mM histidin, 150 mM natrijum hlorid, 2,5 % trehaloza, pH 6). ). Konjugat leka antitela je eluiran iz kolone pod gradijentom soli koji stvara monodisperzni pik.
[0143] Analitička karakterizacija monodisperznog pika iz hromatografije izmene katjona pokazuje da su glavne vrste anti-PSMA ADC sa odnosom leka prema antitelu (DAR) u rasponu između 1,8 i 2, primećeno je u roku od 8 sati. Procene kontrole kvaliteta izvršene na antitelima i ADC prema pronalasku pokazuju da su svi preparati generisani ovom strategijom rezultirali materijalima vrhunskog kvaliteta koji sadrže < 3 % agregata i < 5 EU/mg nivoa endotoksina.
[0144] Petnaest (15) anti-PSMA ADC-ova je generisano sa dve humanizovane varijante olova i himernim antitelima koristeći 5 linkera korisnog opterećenja - MMAE koji se ne cepa, MMAF koji se ne cepa, MMAF koji se može cepati, MMAF koji se može cepati, i MMAE koji se može cepati, opisano ovde. Anti-PSMA ADC generisani sa humanizovanim varijantama 1 i 2, otkrivenim u Tabeli 4, odabrani su za dalje studije u sledećim Primerima.
[0145] Primer 5: In vitro studije potencije - In vitro potencija anti-PSMA ADC je određena korišćenjem reprezentativne ćelijske linije raka prostate otpornog na metastatsku kastraciju (mCRPC), C4-2. C ́elijska kultura je inkubirana sa konjugatima leka antitela tokom 96 sati na 37°C. Vijabilnost ćelija je analiziranakorišc ́enjem Cell Titer Glo<®>(Promega, SAD). Antiproliferativna aktivnost je predstavljena potencijom, IC50, koncentracijom pri kojoj se postiže 50 % maksimalne aktivnosti i ubijanjem ćelija, i Emax, maksimalnim nivoom inhibicije rasta. Tabela 5 sumira ubijanje ćelija i in vitro potenciju anti-PSMA ADC-a.
Tabela 5. In vitro aktivnost ubijanja ćelija u ćelijskim linijama C4-2
[0146] Test aktivnosti ubijanja ćelija sugeriše da je kombinacija korisnog opterećenja i linkera kritična za razvoj moćnih konjugata leka antitela. Snažni konjugati lekova antitela su pokazali sub-nanomolarnu moć sa >75 % ubijanja ćelija. Konjugati lekova antitela sa MMAF korisnim opterećenjem otkrili su veće ubijanje ćelija i potenciju nego konjugati lekova antitela sa MMAE korisnim opterećenjem. In vitro studija ubijanja ćelija sugeriše da su anti-PSMA ADC-ovi sa MMAF korisnim opterećenjem pokazali za red veličine veću potenciju od anti-PSMA ADC-a sa MMAE korisnim opterećenjem.
[0147] Ova studija takođe pokazuje da aktivnost konjugata leka antitela takođe utiče na tip linkera. Konjugati lekova antitela sa linkerima koji se mogu cepati su pokazali veće ubijanje ćelija i potenciju u poređenju sa konjugatima lekova antitela sa necepabilnim linkerom za isti tip korisnog opterećenja. Kao što je prikazano u Tabeli 5, in vitro studija ubijanja ćelija pokazuje da anti-PSMA ADC-ovi sa bilo MMAE ili MMAF korisnim opterećenjem pokazuju red veličine veću potenciju za linkere koji se mogu cepati nego linkere koji se ne cepaju. Ovo sugeriše da se moćni anti-PSMA ADC mogu generisati odgovarajućom kombinacijom citotoksičnog opterećenja sa linkerima. Kombinacija korisnog tereta MMAE sa nedeljivim linkerom otkrila je slabu potenciju i ubijanje. Štaviše, ubijanje ciljnih ćelija pomoću ADC-a anti-PSMA antitela se postiže ciljanom isporukom citotoksičnih agenasa od strane anti-PSMA antitela. Ciljana isporuka citotoksičnih agenasa je olakšana vezivanjem komponente anti-PSMA antitela konjugata leka antitela za receptor ili antigen, PSMA, eksprimiran na površini ćelije, koji se internalizuje u ćeliju od strane receptora. Studije sa ćelijskim linijama raka prostate koje ne izražavaju PSMA, kao što je PC-3, sugerišu da moćni anti-PSMA ADC ne ispoljavaju nikakvu aktivnost ubijanja ćelija. PC-3 ćelijske linije inkubirane sa moćnim anti-PSMA ADC-ima tokom 96 sati nisu ubijene. Ovo sugeriše da su izmišljeni anti-PSMA ADC specifični za metu. Nije zabeležen efekat ubijanja posmatrača konjugata antitela sa lekom. Nedostatak efekta ubijanja kod konjugata leka antitelima iz pronalaska je kritičan za eliminisanje nespecifične toksičnosti van cilja zbog komponente toksina, koja se često primećuje u konjugatima antitela koji sadrže MMAE kao citotoksično opterećenje. Štaviše, ciljna specifična aktivnost anti-PSMA iz pronalaska ADC-a čini ove ADC-e korisnim za lečenje metastatskog raka prostate. Opažanja iz ovih studija sugerišu da se bilo koja kancerogena lezija izvan primarnog kanceroznog tkiva prostate koje eksprimira PSMA može lečiti anti-PSMA ADC-ovima iz pronalaska.
[0148] Štaviše, aktivnost ubijanja ćelija anti-PSMA ADC zavisi od broja receptora eksprimiranih na površini ćelije. C ́elijske linije raka prostate sa brojem kopija receptora > 60000 mogu se efikasno ubiti anti-PSMA ADC-ovima iz pronalaska. Na primer, in vitro studija ubijanja ćelija sprovedena sa anti-PSMA ADC-ovima koji sadrže MMAF sa nedeljivim linkerom pokazala je ubijanje ćelijskih linija sa brojem kopija receptora >60000, Tabela 6, imunohistohemijskom (IHC) i kvantitativnom indirektnom imunofluorescencijom (QiFi) analizom.
Tabela 6. Ekspresija PSMA i in vitro citotoksična aktivnost anti-PSMA-ADC u ćelijskim linijama humanog raka prostate
[0149] Zavisnost aktivnosti ubijanja ćelija izumljenih anti-PSMA ADC-a od broja kopija receptora PSMA ukazuje na terapeutsku korist za lečenje raka prostate. Broj kopija receptora PSMA je obično visok u kanceroznom tkivu prostate u poređenju sa ekspresijom PSMA u tkivima bez raka. Ova diferencijalna ekspresija u broju kopija PSMA receptora između kanceroznog tkiva prostate i normalnih tkiva može olakšati smanjenje i/ili eliminisanje toksičnosti koja nije vezana za ciljno tkivo prostate. Ova analiza sugeriše da anti-PSMA ADC mogu da ispolje nisku aktivnost u tkivima koja eksprimiraju nizak broj kopija PSMA receptora nego u kanceroznom tkivu prostate sa visokim brojem kopija receptora PSMA. Dakle, pozadinska toksičnost konjugata leka antitela može biti značajno smanjena.
[0150] Primer 6: Farmakokinetički (PK) profil sa linkerom opterećenja leka - Sistemska stabilnost antiPSMA ADC-a ovde, može se proceniti izvođenjem farmakokinetičkih studija na miševima i pacovima gde se konjugati leka antitela primenjuju kao intravenski (i.v) bolus. Farmakokinetička procena sugeriše da stabilnost konjugata leka intaktnog antitela zavisi od stabilnosti linkera. Studije sprovedene na miševima u jednoj dozi od 1 mg/kg sugerišu da anti-PSMA ADC-ovi sa MMAF korisnim opterećenjem povezanim ili nedeljivim ili kratko deljivim (Val-Citrulin-Acetil) linkerom ostaju netaknuti tokom trajanja studije. Poluživot netaknutih anti-PSMA ADC-ova sa MMAF korisnim opterećenjem povezanih bilo nedeljivim ili kratko deljivim je 10 dana, Slika 1, (gornja 2 panela). Sistemska stabilnost kratkog deljivog linkera je nezavisna od korisnog opterećenja. Linker u anti-PSMA ADC sa MMAE korisnim opterećenjem povezanim kratkim cepljivim linkerom takođe ostaje netaknut tokom trajanja studije sa poluživotom konjugata intaktnog leka antitela čak 10 dana, Slika 1, (donji desni panel). Međutim, nasuprot tome, linker u anti-PSMA ADC-u sa MMAF korisnim opterećenjem povezanim deljivim (Val-Citruline-PEG1) linkerom se rano cepa, smanjujući poluživot konjugata leka intaktnog antitela na približno 4 dana, Slika 1, (donji levi panel). F1 predstavlja detekciju konjugata leka antitela u serumu pomoću antitela. F3 predstavlja detekciju konjugata leka antitela u serumu pomoću linkera toksin-korisnog opterećenja.
[0151] Sistemska stabilnost anti-PSMA ADC sa nedeljivim MMAF je takođe procenjena kod pacova u dozama od 1 mg/kg i 5 mg/kg. Studija je otkrila da je konjugat leka antitela stabilan, pri čemu su linker i citotoksični agens ostali netaknuti tokom trajanja studije, Slika 2.
[0152] Studije su sprovedene na pacovima da bi se uporedio farmakokinetički profil anti-PSMA ADC sa nedeljivim MMAF i anti-PSMA antitelom, (označeno kao golo antitelo), bez citotoksičnog sredstva. Procena farmakokinetičkog profila sugeriše da je klirens anti-PSMA ADC sa nedeljivim MMAF-om sličan anti-PSMA antitelu, Slika 3. Ovo sugeriše da na inherentnu stabilnost antitela ne utiče konjugacija bazirana na pacetil fenilalaninu specifična za mesto i opterećenje lekom.
[0153] Stabilnost konjugata leka antitela je od suštinskog značaja za smanjenje toksičnosti zbog citotoksičnog agensa. Sprečavanje cepanja citotoksičnog agensa iz konjugata antitela leka dok je u sistemskoj cirkulaciji kritičan je način za smanjenje toksičnosti. Otkriveni anti-PSMA ADC sa linkerima koji se ne dele i kratko dele su značajno stabilni u sistemskoj cirkulaciji sa citotoksičnim agensom koji ostaje vezan za antitelo. Ovo je značajno pošto je većina konjugata leka antitela nestabilna sa opterećenjem leka koji pada sa linkera i/ili mesta konjugacije i na taj način dovodi do značajne toksičnosti koja nije vezana za cilj zbog citotoksičnog agensa. Terapeutska primena konjugata antitela leka je trenutno ograničena zbog takve toksičnosti. Većina konjugata antitela u kliničkim ispitivanjima otkrila je toksičnost koja ograničava dozu koja se može pripisati citotoksičnom agensu. Zbog takve toksičnosti, terapeutska primena konjugata leka antitela je ograničena i do danas su samo četiri konjugata leka antitela odobrena za terapijske primene. Lečenje raka prostate konjugatima antitela koji ciljaju na PSMA pokazalo se izazovnim u ovoj oblasti do danas zbog teške toksičnosti i nedostatka terapeutskog indeksa. Farmakokinetički podaci sugerišu da anti-PSMA ADC iz pronalaska mogu da prevaziđu ograničenja nespecifične toksičnosti usled citotoksičnog agensa sprečavanjem cepanja opterećenja leka od linkera i/ili mesta konjugacije jedinstvenom kombinacijom hemije stabilne konjugacije sa stabilnim linkerom. Hemija stabilne konjugacije koja se koristi u stvaranju novih anti-PSMA ADC-ova iz pronalaska može se postići formiranjem ketoksimske veze između neprirodne/neprirodne amino kiseline, na primer p-acetil fenilalanina, ugrađene u antitelo na određenim lokacijama i linker lek-korisnim opterećenjem derivatizovanim sa hidroksilamin grupom.
[0154] Primer 7: Studije efikasnosti in vivo - Anti-tumorska efikasnost anti-PSMA ADC-a, sa MMAF-om koji se ne može deliti i koji je kratko deljiv, testirana je na modelu tumorskog ksenografta kod miševa koji su usađeni sa ćelijskom linijom raka prostate. Relevantna ćelijska linija raka prostate otpornog na metastatsku kastraciju (mCRPC), C4-2, dobijena je od ATCC i proširena in vitro prateći uputstva ATCC. C4-2 ksenotransplantati humanog karcinoma su uzgajani na muškim imunokompromitovanim miševima sa ćelijama implantiranim subkutano. Miševi su izmereni i izmereni za zapreminu tumora korišćenjem elektronske čeljusti. Individualni volumen tumora je izračunat kao dužina x širina x širina/2. Miševi sa vaskularizovanim tumorima (određenim izgledom) sa prosečnom zapreminom od 500 mm<3 su>randomizovani u grupe za lečenje i dozirani su intravenozno po individualnoj telesnoj težini. Anti-PSMA ADC su davani u dozama od 0.1, 1, 5 i 10 mg/kg.
[0155] Studije sugerišu da su anti-PSMA ADC-ovi sa MMAF-om koji se ne može deliti i sa MMAF-om koji se može deliti bili efikasni u sprečavanju rasta tumora. Sa 5 mg/kg i 10 mg/kg anti-PSMA ADC su bili efikasni u inhibiciji rasta tumora tokom 37 dana nakon doziranja. Pri dozi od 1 mg/kg anti-PSMA ADC-ovi su bili efikasni u stazi tumora sve dok se ponovni rast nije primetio nakon 35 dana nakon doziranja. Pri dozi od 0,1 mg/kg nije primećena značajna diferencijacija u odnosu na kontrolu. Analiza telesne težine pokazuje da su tretirane životinje takođe dobijale na težini kao normalni, zdravi miševi, što implicira da nema očigledne toksičnosti povezane sa anti-PSMA ADC. Slike 4A i 4B prikazuju rezultate zapremine tumora i telesne težine reprezentativne za anti-PSMA ADC prema pronalasku koji sadrže MMAF koji se ne može deliti. Slike 5A i 5B prikazuju rezultate zapremine tumora i telesne težine koji su reprezentativni za anti-PSMA ADC prema pronalasku koji sadrže MMAF koji je kratko deljiv.
[0156] Primer 8: Farmakokinetičke studije sa MMAF-om koji se ne deli - Farmakokinetika (PK) je procenjena kod miševa koji nemaju tumor nakon pojedinačne doze anti-PSMA ADC korišćenjem MMAF-a koji se ne može deliti. Miševi su ubrizgani putem bolusne intravenske injekcije sa 1 mg/kg ili 5 mg/kg MMAF ADC koji se ne može deliti. Serum je sakupljen i analiziran na prisustvo nedeljivog MMAF ADC. Na oba procenjena nivoa doze, 1 mg/kg i 5 mg/kg, uočeni su slični PK profili za koncentracije anti-PSMA ADC kod miševa bez tumora i miševa koji nose tumor (Slika 6A).
[0157] Farmakokinetika (PK) je takođe procenjena kod Cinomolgus majmuna nakon primene pojedinačne doze anti-PSMA ADC koristeći nedeljivi MMAF u različitim koncentracijama od 1.17 mg/kg, 3.86 mg/kg, 9.36 mg/kg, 11.7 mg/ kg, 23.3 mg/kg i 35.0 mg/kg (Slika 6B). Anti-PSMA ADC su davani kao intravenska infuzija, (predviđeni način primene u klinici), 15 do 20 minuta. Nakon doziranja, uzorci su sakupljani tokom 28 dana. Bioanaliza za intaktni anti-PSMA ADC izvedena je korišćenjem kvalifikovane metode otkrivanja mezo skale. Uočeni su preklapajući PK profili za intaktni ADC i ukupna antitela što potvrđuje da su anti-PSMA ADC-ovi ovog pronalaska izuzetno stabilni u sistemskoj cirkulaciji. Nelinearno povećanje u izloženosti je primećeno pri nižim dozama (1.17 mg/kg do 3.86 mg/kg), što se može pripisati mogućoj ciljnoj eliminaciji. Dalje povećanje doze rezultiralo je relativno linearnim povećanjem izloženosti sa povećanjem doze. Klirens je bio spor, u rasponu od 0.118 mL/h/kg do 0.304 mL/h/kg, a zapremina distribucije je bila mala, u rasponu od 44.2 mL/kg do 58.2 mL/kg. Dobijeno poluvreme eliminacije bilo je dugo u rasponu od 129 sati do 346 sati, sa opštim trendom povećanja poluvremena sa povećanjem doze. Primećeno je da ekstremna stabilnost anti-PSMA ADC-a u sistemskoj cirkulaciji minimizira toksičnost van cilja koja se odnosi na oslobađanje slobodnog opterećenja iz ADC-a, promovišući dugi poluživot, čime se omogućava režim doziranja koji je usklađen sa pacijentom od jednom na svake 3 ili 4. nedelje.
[0158] Primer 9: Kombinovana terapija protiv PSMA ADC - Anti-PSMA ADC iz ovog pronalaska može se koristiti u kombinaciji sa bilo kojim agensom uključenim u lečenje, smanjenje, poboljšanje ili prevenciju raka prostate kod subjekta kome je to potrebno, uključujući, ali ne ograničavajući se na hormonsku terapiju ili hemoterapiju. Na primer, pokazalo se da hormonska terapija enzalutamidom, in vitro, povećava ekspresiju ekspresije PSMA na površini ćelije približno 3 puta (Murga et al., Prostate 15;75(3):242-54,2015). Pored toga, miševi tretirani enzalutamidom koji nose humane PDX tumore prostate pokazali su povećanu inhibiciju rasta tumora kada se kombinuju sa PSMA ADC sa auristatinom, MMAE (DiPippo et al., Prostate 15;76(3):325-34, 2016). Na osnovu povećanja ekspresije PSMA zabeleženog u stanju tehnike, pronalazači su proučavali in vivo efekat kombinovane terapije korišćenjem anti-PSMA ADC-a iz pronalaska sa MMAF korisnim opterećenjem i enzalutamidom.
[0159] Anti-tumorska efikasnost anti-PSMA ADC-a iz pronalaska u kombinaciji sa hormonskom terapijom enzalutamidom je testirana na modelu tumorskog ksenotransplantata kod miševa usađenih ćelijskom linijom raka prostate. Relevantna ćelijska linija raka prostate otpornog na metastatsku kastraciju (mCRPC), C4-2, dobijena je od ATCC i proširena in vitro prateći uputstva ATCC. C4-2 ksenotransplantati humanog karcinoma su uzgajani na muškim imunokompromitovanim miševima sa ćelijama implantiranim subkutano. Drugi model koji je koristio muške imunokompromitovane miševe koji su nosili ksenograft (PDX) TM00298 (Jackson Laboratories, Kalifornija) tumore prostate takođe je proučavan.
[0160] Miševi su izmereni i izmereni za zapreminu tumora korišćenjem elektronske kalipere. Individualni volumen tumora je izračunat kao dužina x širina x širina/2. Miševi sa vaskularizovanim tumorima (određenim izgledom) sa prosečnom zapreminom od 500 mm<3>su randomizovani u grupe za lečenje i dozirani su intravenozno po individualnoj telesnoj težini. Anti-PSMA ADC su davani intravenozno u dozama od 0.5, 1 i 3 mg/kg nedeljno tokom 4 nedelje u modelu C4-2 i u dozama od 1 i 3 mg/kg nedeljno tokom 4 nedelje u PDX modelu. U oba modela prostate, enzalutamid je davan oralno dnevno u dozi od 10 mg/kg, tokom 28 dana. U oba modela prostate, jednoj grupi miševa je primenjena kombinovana terapija od 1 mg/kg anti-PSMA ADC plus 10 mg/kg enzalutamida, Slike 7 i 8. Za PDX model miševima je takođe primenjena kombinovana terapija od 3 mg/kg anti-PSMA ADC plus 10 mg/kg enzalutamida, Slika 8.
[0161] Anti-PSMA ADC u dozi od 3 mg/kg i 1 mg/kg pokazali su da inhibicija tumora zavisi od doze u modelu otpornom na enzalutamid. Potpuna inhibicija je postignuta pri 3 mg/kg sa 80 % TGI (procenat inhibicije rasta tumora). Delimičan odgovor je primećen pri dozi od 1 mg/kg sa 37 % TGI. Analiza telesne težine sugeriše da su tretirane životinje takođe dobijale na težini kao normalni, zdravi miševi, što implicira da nema očigledne toksičnosti povezane sa anti-PSMA ADC. Slike 7A i 8A prikazuju zapreminu tumora i telesnu težinu (Slike 7B i 8B) reprezentativne rezultate za anti-PSMA ADC iz pronalaska koji sadrže MMAF koji se ne može deliti.
[0162] Ova studija je pokazala poboljšanu efikasnost sa anti-PSMA ADC-ovima iz ovog pronalaska u kombinaciji sa enzalutamidom. Enzalutamid, kao pojedinačni agens, povećava nivo PSMA na površini ćelije u ćelijama raka prostate. Kombinacija anti-PSMA ADC sa enzalutamidom pokazala je veći % TGI od monoterapije. Ove studije sugerišu da su anti-PSMA ADC-ovi sa MMAF-om koji se ne deli i sa MMAF-om koji se može deliti bili efikasni u sprečavanju rasta tumora sa sinergističkim efektom u prisustvu enzalutamida.
Primer 10: Kliničko ispitivanje kod ljudi o bezbednosti i/ili efikasnosti konjugata leka protiv PSMA antitela (ADC) za terapiju raka prostate
[0163] Cilj: Uporediti bezbednost i farmakokinetiku primenjene kompozicije koja sadrži anti-PSMA ADC iz ovog pronalaska.
[0164] Dizajn studije: Ova studija će biti Faza I, jedno- ili višecentrična, otvorena, randomizovana studija eskalacije doze praćena Fazom II studije kod pacijenata sa rakom prostate. Pacijenti nisu trebali biti izloženi derivatima PSMA pre ulaska u studiju. Pacijenti ne smeju da primaju terapiju za rak u roku od 2 nedelje od početka ispitivanja. Tretmani uključuju upotrebu hemoterapije, hematopoetskih faktora rasta i biološke terapije kao što su monoklonska antitela. Pacijenti se moraju oporaviti od svih toksičnosti (do stepena 0 ili 1) povezanih sa prethodnim tretmanom. Bezbednost svih subjekata se procenjuje i sve krvne kolekcije za farmakokinetičku analizu se prikupljaju prema rasporedu. Sve studije se izvode uz odobrenje institucionalne etičke komisije i saglasnost pacijenata.
[0165] Faza I: Pacijenti primaju intravenozno anti-PSMA ADC u ciklusima doziranja jednom u 3 nedelje. Doze anti-PSMA ADC se mogu zadržati ili modifikovati zbog toksičnosti na osnovu procena kao što je navedeno u nastavku. Tretman se ponavlja svake 3 nedelje u odsustvu neprihvatljive toksičnosti. Kohorte od 3-6 pacijenata primaju rastuće doze anti-PSMA ADC dok se ne odredi maksimalna tolerantna doza (MTD) za anti-PSMA ADC. MTD se definiše kao doza koja prethodi onoj pri kojoj 2 od 3 ili 2 od 6 pacijenata dožive toksičnost koja ograničava dozu. Toksičnost koja ograničava dozu je određena u skladu sa definicijama i standardima koje je postavio Nacionalni institut za rak (NCI) Zajednička terminologija za neželjene događaje (CTCAE) verzija 3.0 (9. avgust 2006).
[0166] Faza II: Pacijenti dobijaju anti-PSMA ADC kao u fazi I na MTD određenoj u fazi I. Tretman se ponavlja svake 3 nedelje tokom nekoliko ciklusa u odsustvu progresije bolesti ili neprihvatljive toksičnosti. Nakon završetka kursa studijske terapije, pacijenti koji postignu potpun ili delimičan odgovor mogu dobiti dodatne doze. Pacijenti koji održavaju stabilnu bolest duže od 2 meseca nakon završetka 6 kurseva studijske terapije mogu dobiti dodatnih 6 kurseva u vreme progresije bolesti, pod uslovom da ispunjavaju originalne kriterijume podobnosti.
[0167] Uzimanje uzoraka krvi Serijska krv se uzima direktnom punkcijom vene pre i posle primene anti-PSMA ADC. Uzorci venske krvi (5 mL) za određivanje serumskih koncentracija se uzimaju oko 10 minuta pre doziranja i otprilike u sledećim vremenima nakon doziranja: 0.5 i 4 sata, 1, 2, 4, 7, 14 i 21. dan. Uzorak seruma se deli na dva alikvota. Svi uzorci seruma se čuvaju na -20°C. Uzorci seruma se šalju na suvom ledu.
[0168] Farmakokinetika: Pacijenti se podvrgavaju prikupljanju uzoraka plazme/seruma radi farmakokinetičke evaluacije pre i na početku lečenja i nakon primene ispitivanog leka na 0.5 i 4 sata, 1, 2, 4, 7, 14 i 21. dan. Farmakokinetički parametri se izračunavaju metodom nezavisnim od modela korišćenjem najnovije verzije softvera Phoenix WinNonlin. Određuju se sledeći farmakokinetički parametri: vršna koncentracija u serumu (Cmax); vreme do vršne koncentracije u serumu (tmax); površina ispod krive koncentracija-vreme (AUC) od vremena nula do poslednjeg vremena uzorkovanja krvi (AUClast) izračunato korišćenjem pravila linearnog trapeza; i terminalno poluvreme eliminacije (t1/2), izračunato iz konstante brzine eliminacije. Konstanta brzine eliminacije je procenjena linearnom regresijom uzastopnih tačaka podataka u terminalnom linearnom regionu logaritamske linearne grafike koncentracija-vreme. Srednja vrednost, standardna devijacija (SD) i koeficijent varijacije (CV) farmakokinetičkih parametara se izračunavaju za svaki tretman. Izračunava se odnos parametarske sredine (očuvana formulacija/nekonzervisana formulacija).
[0169] Odgovor pacijenta na kombinovanu terapiju: Odgovor pacijenta se procenjuje putem snimanja pomoću rendgenskih snimaka, CT skeniranja i MRI, a snimanje se izvodi pre početka studije i na kraju prvog ciklusa, sa dodatnim snimanjem koje se obavlja svaka četiri nedeljama ili na kraju narednih ciklusa. Modaliteti snimanja se biraju na osnovu tipa raka i izvodljivosti/dostupnosti, a isti modalitet snimanja se koristi za slične tipove raka, kao i tokom studija svakog pacijenta. Stope odgovora se određuju korišćenjem kriterijuma RECIST. (Therasse et al, J. Natl. Cancer Inst. 92(3):205-16, 2000; na svetskoj mreži na http://ctep.cancer.gov/forms/TherasseRECISTJNCI.pdf). Pacijenti se takođe podvrgavaju biopsiji raka/tumora da bi se procenile promene u fenotipu ćelija progenitornog raka i klonogenom rastu pomoću protočne citometrije, Western blotinga i IHC-a, kao i za promene u citogenetici pomoću FISH-a. Nakon završetka studijskog tretmana, pacijenti se periodično prate tokom 4 nedelje.

Claims (9)

  1. Patentni zahtevi 1. Konjugat leka antitela koji sadrži antitelo antigena membrane specifičnog za prostatu (anti-PSMA antitelo) konjugovano sa linkerom leka, pri čemu se konjugacija dešava preko para-acetil fenilalanina ugrađenog u sekvencu teškog lanca, pri čemu anti-PSMA antitelo sadrži sekvencu teškog lanca SEK ID BR: 8 i sekvencu lakog lanca SEK ID BR: 9, u kojoj je para-acetil fenilalanin ugrađen na poziciji teškog lanca A114 prema Kabat šemi numeracije, i pri čemu je lek-linker je nedeljivii monometil auristatin F koji ima strukturu:
  2. 2. Farmaceutska kompozicija koja sadrži konjugat leka antitela prema patentnom zahtevu 1 i najmanje jedan farmaceutski prihvatljivo pomoćno sredstvo, vezivo, pufer, nosač, razblaživač ili ekscipijens.
  3. 3. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2, koja dalje sadrži hemoterapeutsko sredstvo, hormonsko sredstvo, antitumorsko sredstvo, imunostimulatorno sredstvo, imunomodulator, kortikosteroid ili njihovu kombinaciju.
  4. 4. Konjugat leka antitela prema patentnom zahtevu 1 ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2 za upotrebu u postupku smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora u kanceru ili ćeliji raka koji eksprimira PSMA, pri čemu navedeni postupak obuhvata kontakt sa rakom ili kancerom koji eksprimira PSMA ćelija sa efikasnom količinom konjugata leka antitela ili farmaceutske kompozicije.
  5. 5. Farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 3, za upotrebu u postupku smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora u kanceru ili ćeliji raka koja eksprimira PSMA, pri čemu navedeni postupak obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom farmaceutske kompozicije.
  6. 6. Konjugat leka antitela prema patentnom zahtevu 1 ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2, i dodatni terapeutski agens, za upotrebu u postupku smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora u ćelijama raka ili kancera koji eksprimiraju PSMA, navedeni postupak obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom konjugata antitelo-lek ili farmaceutske kompozicije, i dalje obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimira PSMA sa efikasnom količinom dodatnog terapeutskog agensa, pri čemu dodatni terapeutski agens je hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija.
  7. 7. Konjugat leka antitela prema patentnom zahtevu 1 ili farmaceutska kompozicija prema patentnom zahtevu 2, za upotrebu sa dodatnim terapeutskim agensom u postupku smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora u ćelijama raka ili kancera koji eksprimiraju PSMA, pri čemu navedeni postupak obuhvata kontakt sa ćelijama raka ili kancera koji eksprimiraju PSMA sa efikasnom količinom konjugata antitelo-lek ili farmaceutske kompozicije, i dalje obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koje eksprimiraju PSMA sa efikasnom količinom dodatnog terapeutskog agensa, pri č emu je dodatni terapeutski agens hemoterapeutsko sredstvo, hormonsko sredstvo, antitumorsko sredstvo, imunostimulatorno sredstvo, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija.
  8. 8. Dodatni terapeutski agens, za upotrebu sa konjugatom leka antitela prema patentnom zahtevu 1 ili farmaceutskom kompozicijom prema patentnom zahtevu 2 u postupku smanjenja ili inhibicije rasta ili progresije tumora u ćelijama raka ili kancera koji eksprimiraju PSMA, navedeni postupak koji obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimiraju PSMA sa efikasnom količinom dodatnog terapeutskog agensa, i dalje obuhvata dovođenje u kontakt ćelije raka ili ćelije raka koja eksprimiraju PSMA sa efikasnom količinom konjugata antitelo-lek prema patentnom zahtevu 1 ili farmaceutskom kompozicijom prema patentnom zahtevu 2, pri čemu je dodatni terapeutski agens hemoterapeutski agens, hormonski agens, antitumorski agens, imunostimulatorni agens, imunomodulator, kortikosteroid ili njihova kombinacija.
  9. 9. Farmaceutska kompozicija; konjugat leka antitela ili farmaceutska kompozicija i dodatni terapeutski agens; konjugat leka antitela ili farmaceutska kompozicija; ili dodatni terapeutski agens; za upotrebu prema bilo kojem od patentnih zahteva od 5 do 8, pri čemu je dodatni terapeutski agens hormonski agens, I pri čemu je hormonski agens enzalutamid.
RS20241125A 2018-03-29 2019-03-29 Humanizovani specifični membranski antigen prostate (psma) i konjugati lekova antitela RS66103B1 (sr)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201862650277P 2018-03-29 2018-03-29
PCT/US2019/025057 WO2019191728A1 (en) 2018-03-29 2019-03-29 Humanized anti-prostate-specific membrane antigen (psma) antibody drug conjugates
EP19717173.9A EP3773910B1 (en) 2018-03-29 2019-03-29 Humanized anti-prostate-specific membrane antigen (psma) antibody drug conjugates

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS66103B1 true RS66103B1 (sr) 2024-11-29

Family

ID=66103056

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20241125A RS66103B1 (sr) 2018-03-29 2019-03-29 Humanizovani specifični membranski antigen prostate (psma) i konjugati lekova antitela

Country Status (23)

Country Link
US (2) US12059473B2 (sr)
EP (2) EP3773910B1 (sr)
JP (2) JP7512202B2 (sr)
KR (2) KR102864931B1 (sr)
CN (2) CN117924503A (sr)
AU (2) AU2019245444B2 (sr)
BR (1) BR112020019611A2 (sr)
CA (2) CA3282900A1 (sr)
DK (1) DK3773910T3 (sr)
ES (1) ES2988767T3 (sr)
FI (1) FI3773910T3 (sr)
HR (1) HRP20241082T1 (sr)
HU (1) HUE068337T2 (sr)
IL (2) IL277357B2 (sr)
LT (1) LT3773910T (sr)
MX (2) MX2020010104A (sr)
PL (1) PL3773910T3 (sr)
PT (1) PT3773910T (sr)
RS (1) RS66103B1 (sr)
SG (1) SG11202009670RA (sr)
SI (1) SI3773910T1 (sr)
SM (1) SMT202400364T1 (sr)
WO (1) WO2019191728A1 (sr)

Families Citing this family (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA3155519A1 (en) * 2019-10-29 2021-05-06 Steve Shih-Lin Huang Psma-targeting imaging agents
EP4087855A1 (en) * 2020-01-06 2022-11-16 CytomX Therapeutics, Inc. Auristatin-related compounds, conjugated auristatin-related compounds, and methods of use thereof
JP2023547998A (ja) * 2020-10-01 2023-11-15 コーネル ユニバーシティー 低分子リガンドの取り込み、内在化、及び／または保持を増加させるための方法及び組成物
WO2022081443A2 (en) * 2020-10-12 2022-04-21 Memorial Sloan Kettering Cancer Center Anti-psma antibodies and uses thereof
CA3198230A1 (en) * 2021-01-28 2022-08-04 Jian Chen Conjugate and use thereof
WO2024077277A1 (en) 2022-10-07 2024-04-11 Ambrx, Inc. Drug linkers and antibody conjugates thereof
WO2024178310A1 (en) 2023-02-23 2024-08-29 Ambrx, Inc. Trop2-directed antibody-drug conjugates and uses thereof
CN120813607A (zh) * 2023-02-28 2025-10-17 卫材R&D管理有限公司 抗psma抗体、缀合物和使用方法
IL322949A (en) 2023-03-03 2025-10-01 Arsenal Biosciences Inc Systems targeting PSMA and CA9
CN116196428B (zh) * 2023-04-04 2025-04-04 上海愿智生物技术有限公司 一种药物组合物及其应用
CN120835792A (zh) * 2023-05-24 2025-10-24 杭州禧鹤生物科技有限公司 抗体-药物偶联物靶向治疗前列腺癌和其他肿瘤
AU2024319528A1 (en) * 2023-08-04 2026-02-12 Jiangsu Hengrui Pharmaceuticals Co., Ltd. Anti-psma antibody-drug conjugate and pharmaceutical use thereof
AU2024329469A1 (en) * 2023-08-22 2026-04-09 Ambrx, Inc. Anti-psma adc conjugate compositions and methods of use thereof
WO2025149667A1 (en) 2024-01-12 2025-07-17 Pheon Therapeutics Ltd Antibody drug conjugates and uses thereof
WO2025184427A1 (en) * 2024-02-27 2025-09-04 Osteologic Therapeutics, Inc. Bone-targeted antibodies and methods of use thereof
CN118754934B (zh) * 2024-06-05 2025-02-07 浙江新码生物医药有限公司 一种用于制备药物偶联物的毒素衍生物

Family Cites Families (22)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR2504010B1 (fr) 1981-04-15 1985-10-25 Sanofi Sa Medicaments anticancereux contenant la chaine a de la ricine associee a un anticorps antimelanome et procede pour leur preparation
US4542225A (en) 1984-08-29 1985-09-17 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Acid-cleavable compound
US4659839A (en) 1984-10-10 1987-04-21 Mallinckrodt, Inc. Coupling agents for radiolabeled antibody fragments
ATE66469T1 (de) 1985-01-14 1991-09-15 Neorx Corp Metall-radionuklid markiertes protein fuer diagnose und therapie.
US4680338A (en) 1985-10-17 1987-07-14 Immunomedics, Inc. Bifunctional linker
US4699784A (en) 1986-02-25 1987-10-13 Center For Molecular Medicine & Immunology Tumoricidal methotrexate-antibody conjugate
US5252714A (en) 1990-11-28 1993-10-12 The University Of Alabama In Huntsville Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde
US6107090A (en) * 1996-05-06 2000-08-22 Cornell Research Foundation, Inc. Treatment and diagnosis of prostate cancer with antibodies to extracellur PSMA domains
US6451986B1 (en) 1998-06-22 2002-09-17 Immunex Corporation Site specific protein modification
US7754208B2 (en) 2001-01-17 2010-07-13 Trubion Pharmaceuticals, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
US20030133939A1 (en) 2001-01-17 2003-07-17 Genecraft, Inc. Binding domain-immunoglobulin fusion proteins
BRPI0507169A (pt) 2004-02-02 2007-06-26 Ambrx Inc polipeptìdeos do hormÈnio de crescimento humano modificados e seu usos
US7807619B2 (en) 2004-11-01 2010-10-05 The Regents Of The University Of California Compositions and methods for modification of biomolecules
AU2015203742B2 (en) * 2007-06-26 2016-12-01 The Johns Hopkins University Labeled inhibitors of prostate specific membrane antigen (psma), biological evaluation, and use as imaging agents
CN102159230A (zh) 2008-07-23 2011-08-17 Ambrx公司 经修饰的牛g-csf多肽和其用途
KR102356286B1 (ko) 2011-05-27 2022-02-08 암브룩스, 인코포레이티드 비-천연 아미노산 연결된 돌라스타틴 유도체를 함유하는 조성물, 이를 수반하는 방법, 및 용도
CN108727466B (zh) * 2012-06-07 2023-04-28 Ambrx公司 前列腺特异性膜抗原抗体药物结合物
CN104619350A (zh) * 2012-06-14 2015-05-13 Ambrx公司 结合到核受体配体多肽的抗psma抗体
WO2015051199A2 (en) * 2013-10-06 2015-04-09 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Modified pseudomonas exotoxin a
EP3464379B1 (en) * 2016-06-06 2023-09-27 Abzena (UK) Limited Antibodies, uses thereof and conjugates thereof
GB201614162D0 (en) * 2016-08-18 2016-10-05 Polytherics Ltd Antibodies, uses thereof and conjugates thereof
PL3630977T3 (pl) 2017-06-02 2024-06-24 Ambrx, Inc. Sposoby i kompozycje promujące produkcję białek zawierających nienaturalne aminokwasy

Also Published As

Publication number Publication date
CN111989138A (zh) 2020-11-24
AU2019245444B2 (en) 2025-03-27
SMT202400364T1 (it) 2024-11-15
CN117924503A (zh) 2024-04-26
HRP20241082T1 (hr) 2024-11-08
MX2020010104A (es) 2020-11-06
FI3773910T3 (fi) 2024-08-29
IL320375A (en) 2025-06-01
US20240350835A1 (en) 2024-10-24
KR20250141858A (ko) 2025-09-29
SG11202009670RA (en) 2020-10-29
SI3773910T1 (sl) 2024-10-30
NZ767804A (en) 2025-09-26
KR20200138759A (ko) 2020-12-10
AU2019245444A1 (en) 2020-10-01
CA3094985A1 (en) 2019-10-03
ES2988767T3 (es) 2024-11-21
MX2024007724A (es) 2025-04-02
IL277357B2 (en) 2025-09-01
CA3282900A1 (en) 2026-03-02
DK3773910T3 (da) 2024-08-19
EP3773910A1 (en) 2021-02-17
PL3773910T3 (pl) 2024-11-12
IL277357B1 (en) 2025-05-01
IL277357A (en) 2020-11-30
JP7512202B2 (ja) 2024-07-08
BR112020019611A2 (pt) 2021-01-05
AU2025204809A1 (en) 2025-07-17
JP2021519076A (ja) 2021-08-10
EP4461318A3 (en) 2025-03-19
US12059473B2 (en) 2024-08-13
EP3773910B1 (en) 2024-07-24
PT3773910T (pt) 2024-10-22
WO2019191728A1 (en) 2019-10-03
US20210015940A1 (en) 2021-01-21
JP2024123231A (ja) 2024-09-10
KR102864931B1 (ko) 2025-09-29
EP4461318A2 (en) 2024-11-13
CA3094985C (en) 2025-11-25
CN111989138B (zh) 2024-02-09
LT3773910T (lt) 2024-09-25
HUE068337T2 (hu) 2024-12-28

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20240350835A1 (en) Humanized anti-prostate -specific membrane antigen (psma) antibody drug conjugates
TWI804499B (zh) Ror1抗體免疫接合物
CN111655726B (zh) 抗叶酸受体α抗体偶联物和其用途
KR20230026983A (ko) 알파-엔올라아제 항체들을 포함하는 약물 접합체 및 그의 이용
KR20250134670A (ko) 항-cd70 항체-약물 접합체
JP2022500454A (ja) 抗葉酸受容体抗体コンジュゲートによる併用療法
HK40118165A (en) Novel anti-prostate-specific membrane antigen (psma) antibody drug conjugates
HK40044903A (en) Humanized anti-prostate-specific membrane antigen (psma) antibody drug conjugates
HK40044903B (en) Humanized anti-prostate-specific membrane antigen (psma) antibody drug conjugates
WO2025041055A1 (en) Anti-psma adc conjugate compositions and methods of use thereof
KR20260058842A (ko) 항-psma adc 접합체 조성물 및 이의 사용 방법
WO2024178360A2 (en) Auristatin analogs and antibody conjugates thereof
WO2024215515A1 (en) Drug linkers and antibody conjugates thereof