RS66280B1 - Jedinjenja sa kondenzovanim prstenovima - Google Patents

Description

OPIS

OBLAST PRONALASKA

Ovaj pronalazak se odnosi na jedinjenja sa kondenzovanim prstenovima, kao što je ovde detaljnije opisano, koja se koriste za inhibiciju proteina Ras, kao što su K-Ras, H-Ras i N-Ras, kao i na kompozicije koje se sastoje od ovih jedinjenja i na postupke lečenja njihovom primenom.

OSNOVA PRONALASKA

Ras je mali GTP-vezujući protein koji funkcioniše kao nukleotid-zavisni prekidač za centralne signalne puteve rasta. Kao odgovor na vanćelijske signale, Ras se konvertuje iz stanja u kome je vezan za GDP (Ras<GDP>) u stanje u kome je vezan za GTP (Ras<GTP>), kao što je katalizovano faktorima razmene guaninskih nukleotida (GEF), posebno proteinom SOS1. Aktivni Ras<GTP>posreduje u njegovim različitim funkcijama stimulacije rasta kroz direktne interakcije sa efektorima, uključujući Raf, PI3K i Ral guanin nukleotidni stimulator disocijacije. Svojstvena aktivnost GTPaze proteina Ras zatim hidrolizuje GTP u GDP da bi se prekinula signalizacija proteina Ras. Aktivnost GTPaze proteina Ras može se dodatno ubrzati njenim interakcijama sa proteinima koji aktiviraju GTPazu (GAP), uključujući neurofibromin 1 tumorski supresor.

Mutirani protein Ras ima smanjenu aktivnost GTPaze, što produžava njenu aktiviranu konformaciju, čime se promoviše signalizacija zavisna od proteina Ras i preživljavanje ili rast ćelija kancera. Mutacija u proteinu Ras koja utiče na njegovu sposobnost da komunicira sa GAP-om ili da povratno pretvori GTP u GDP dovešće do produžene aktivacije proteina i posledično produženog signala koji ćeliji govori da nastavi da raste i deli se. Pošto ovi signali za posledicu imaju rast i deobu ćelija, prekomerna RAS signalizacija može na kraju dovesti do kancera. Mutacije u bilo kom od tri glavna izooblika gena RAS (H-Ras, N-Ras ili K-Ras) često se javljaju u ljudskoj tumorogenezi. Od tri izooblika RAS (K, N i H), K-Ras je najčešće mutiran.

Najčešće mutacije K-Ras se nalaze na ostatku G12 i G13 u P-petlji i na ostatku Q61. G12C je česta mutacija gena K-Ras (glicin-12 u cistein). G12D i G13D su druge česte mutacije. Mutacije Ras kod kancera su povezane sa lošom prognozom. Inaktivacija onkogenog Ras kod miševa dovodi do smanjenja tumora. Stoga se opšteprihvaćeno Ras smatra onkološkom metom od izuzetnog značaja.

WO 2015/054572 opisuje jedinjenja koja su inhibitori G12C mutiranog proteina KRAS.

SAŽETAK PRONALASKA

U jednom aspektu, predmetno otkriće je usmereno na jedinjenje koje ima formulu (IVa), (IVb), (IVd) ili (IVg):

ili njegov stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so;

pri čemu,

Y je ;

U je C(R6a);

V je C(R6b);

W je C(R6c);

R6aje H;

R6bje vodonik, halo ili haloalkil; i

R6cje vodonik ili halo.

Ovde je takođe navedena farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens.

Još jedan aspekt uključuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata jedinjenje iz pronalaska, za upotrebu u terapiji.

Još jedan aspekt uključuje in vitro postupak za regulisanje aktivnosti mutiranog proteina K-Ras G12C, pri čemu taj postupak obuhvata reakciju mutiranog proteina sa jedinjenjem iz pronalaska, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.

Još jedan aspekt uključuje in vitro postupak za inhibiciju proliferacije ćelijske populacije, pri čemu se postupak sastoji od dovođenja ćelijske populacije u kontakt sa jedinjenjem iz pronalaska ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.

Još jedan aspekt uključuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, ili farmaceutsku kompoziciju koja obuhvata jedinjenje iz pronalaska, za upotrebu u postupku za lečenje kancera posredovanog mutacijom K-Ras G12C kod pojedinca kome je to potrebno, pri čemu taj postupak opciono obuhvata: utvrđivanje da li pojedinac ima mutaciju; i, ako je utvrđeno da pojedinac ima mutaciju, onda se na pojedincu primenjuje terapeutski delotvorna količina farmaceutske kompozicije iz pronalaska.

Još jedan aspekt uključuje in vitro postupak za pripremu obeleženog mutiranog proteina K-Ras G12C, pri čemu taj postupak obuhvata reakciju mutiranog proteina K-Ras G12C sa obeleženim jedinjenjem iz pronalaska ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, kako bi se dobio obeleženi mutirani protein K-Ras G12C.

DETALJAN OPIS PRONALASKA DEFINICIJE

Termin „halogen“ ili „halo“ se odnosi na F, Cl, Br ili I. Pored toga, termini kao što su „haloalkil“ imaju za cilj da uključe monohaloalkil i polihaloalkil.

Termin „alkil“ se odnosi na zasićeni linearni ili razgranati jednovalentni ugljovodonični radikal. U jednom primeru, alkil radikal ima jedan do osamnaest atoma ugljenika (C1−18). U drugim primerima, alkil radikal je C1−12, C1−10, C1−8, C1−6, C1−5, C1−4ili C1−3. Primeri za alkil grupe uključuju metil (Me, −CH3), etil (Et, −CH2CH3), 1-propil (n-Pr, n-propil, −CH2CH2CH3), 2-propil (i-Pr, i-propil, −CH(CH3)2), 1-butil (n-Bu, n-butil, −CH2CH2CH2CH3), 2-metil-1-propil (i-Bu, i-butil, −CH2CH(CH3)2), 2-butil (s-Bu, s-butil, −CH(CH3)CH2CH3), 2-metil-2-propil (t-Bu, t-butil, −C(CH3)3), 1-pentil (n-pentil, −CH2CH2CH2CH2CH3), 2-pentil (−CH(CH3)CH2CH2CH3), 3-pentil (−CH(CH2CH3)2), 2-metil-2-butil (−C(CH3)2CH2CH3), 3-metil-2-butil (−CH(CH3)CH(CH3)2), 3-metil-1-butil (−CH2CH2CH(CH3)2), 2-metil-1-butil (−CH2CH(CH3)CH2CH3), 1-heksil (−CH2CH2CH2CH2CH2CH3), 2-heksil (−CH(CH3)CH2CH2CH2CH3), 3-heksil (−CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3)), 2-metil-2-pentil (−C(CH3)2CH2CH2CH3), 3-metil-2-pentil (−CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3), 4-metil-2-pentil (−CH(CH3)CH2CH(CH3)2), 3-metil-3-pentil (−C(CH3)(CH2CH3)2), 2-metil-3-pentil (−CH(CH2CH3)CH(CH3)2), 2,3-dimetil-2-butil (−C(CH3)2CH(CH3)2), 3,3-dimetil-2-butil (−CH(CH3)C(CH3)3, 1-heptil i 1-oktil.

Termin „amino“ se odnosi na −NH2.

Termin „alkilamino“ se odnosi na −NH-alkil.

Termin „dialkilamino“ se odnosi na −N(alkil)2.

Termin „okso“ se odnosi na =O.

Termin „karboksi“ se odnosi na −C(=O)OH.

Termin „karbamoil“ se odnosi na −C(=O)NH2.

Termin „alkanoil“ se odnosi na −C(=O)-alkil.

Termin „hidroksialkanoil“ se odnosi na −C(=O)-hidroksialkil.

Termin „alkanoilamino“ se odnosi na −NH-C(=O)-alkil.

Termin „alkoksi“ se odnosi na −O-alkil.

Termin „alkoksialkil“ se odnosi na alkil supstituisan jednim alkoksi supstituentom. Termin „dialkilamino ciklopropil“ se odnosi na ciklopropil supstituisan jednim dialkilamino supstituentom.

Termin „alkilsulfanil“ se odnosi na −S(=O)-alkil.

Termin „alkilsulfonil“ se odnosi na −S(=O)2-alkil.

Termin „alkilsulfonilamino“ se odnosi na −NH-S(=O)2-alkil.

Termin „alkiltio“ se odnosi na −S-alkil.

Termin „haloalkiltio“ se odnosi na −S-haloalkil.

Termin „aminoalkil“ se odnosi na alkil supstituisan jednim amino supstituentom. Termin „karbamoilalkil“ se odnosi na alkil supstituisan jednim karbamoil supstituentom.

Termin „karboksialkil“ se odnosi na alkil supstituisan jednim karboksi supstituentom. Termini „cijano“ ili „nitril“ se odnose na −C ≡N ili −CN.

Termin „cijanoalkil“ se odnosi na alkil supstituisan jednim cijano supstituentom. Termin „haloalkoksi“ se odnosi na −O-haloalkil.

Termin „heterociklilamino“ se odnosi na −NH-heterociklil.

Termin „hidroksi“ se odnosi na −OH.

Termin „hidroksialkil“ se odnosi na alkil supstituisan jednim hidroksi supstituentom. Termin „alkenil“ se odnosi na linearni ili razgranati jednovalentni ugljovodonični radikal sa najmanje jednom dvostrukom vezom ugljenik-ugljenik, i uključuje radikale koji imaju „cis“ i „trans“ orijentacije, ili alternativno, „E“ i „Z“ orijentacije. U jednom primeru, alkenil radikal ima dva do osamnaest atoma ugljenika (C2−18). U drugim primerima, alkenil radikal je C2−12, C2−10, C2−8, ili C2−3. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, etenil ili vinil (−CH=CH2), prop-1-enil (−CH=CHCH3), prop-2-enil (−CH2CH=CH2), 2-metilprop-1-enil, but-1-enil, but-2-enil, but-3-enil, buta-1,3-dienil, 2-metilbuta-1,3-dien, heks-1-enil, heks-2-enil, heks-3-enil, heks-4-enil i heksa-1,3-dienil.

Termin „alkinil“ se odnosi na linearni ili razgranati jednovalentni ugljovodonični radikal sa najmanje jednom trostrukom vezom ugljenik-ugljenik. U jednom primeru, alkinil radikal ima dva do osamnaest atoma ugljenika (C2−18). U drugim primerima, alkinil radikal je C2−12, C2−10, C2−8, C2−6ili C2−3. Primeri uključuju, ali nisu ograničeni na, etinil (−C ≡CH), prop-1-inil (−C ≡CCH3), prop-2-inil (propargil, −CH2C ≡CH), but-1-inil, but-2-inil i but-3-inil.

Termin „alkilen“ se odnosi na zasićenu, razgranatu ili ravnu ugljovodoničnu grupu koja ima dva jednovalentna radikalna centra dobijena uklanjanjem dva atoma vodonika iz istog ili dva različita atoma ugljenika matičnog alkana. U jednom primeru, dvovalentna alkilen grupa ima jedan do osamnaest atoma ugljenika (C1−18). U drugim primerima, dvovalentna alkilen grupa je C1−12, C1−10, C1−8, C1−6, C1−5, C1−4ili C1−3. Primer za alkilen grupe uključuje metilen (−CH2−), 1,1-etil (−CH(CH3)−), (1,2-etil (−CH2CH2−), 1,1-propil (−CH(CH2CH3)−), 2,2-propil (−C(CH3)2−), 1,2-propil (−CH(CH3)CH2−), 1,3-propil (−CH2CH2CH2−), 1,1-dimetilet-1,2-il (−C(CH3)2CH2−) i 1,4-butil (−CH2CH2CH2CH2−).

Termin „aril“ se odnosi na karbocikličnu aromatičnu grupu, bez obzira na to da li je kondenzovana sa jednom ili više grupa, sa naznačenim brojem atoma ugljenika, ili, ako broj nije naznačen, do 14 atoma ugljenika. Jedan primer uključuje aril grupe koje imaju 6-14 atoma ugljenika. Drugi primer uključuje aril grupe koje imaju 6-10 atoma ugljenika. Primeri za aril grupe uključuju fenil, naftil, bifenil, fenantrenil, naftacenil, 1,2,3,4-tetrahidronaftalenil, 1H-indenil i 2,3-dihidro-1H-indenil (pogledajte, npr. Lang’s Handbook of Chemistry (Dean, J. A., ed.) 13. izd. tabela 7-2 [1985]). Konkretan aril je fenil.

Termin „cikloalkil“ se odnosi na zasićenu grupu ugljovodoničnog prstena. Cikloalkil obuhvata mono-, bi-, triciklične, spiro i premošćene, zasićene sisteme prstenova. U jednom primeru, cikloalkil grupa ima 3 do 12 atoma ugljenika (C3−12). U drugim primerima, cikloalkil je C3−7, C3−8, C3−10ili C5−10. U drugim primerima, cikloalkil grupa, kao što je monociklil, je C3−8, C3−6ili C5−6. U drugom primeru, cikloalkil grupa, kao što je biciklil, je C7-C12. U drugom primeru, cikloalkil grupa, kao spiro sistem, je C5−12. Primeri za monociklični cikloalkil uključuju ciklopropil, ciklobutil, ciklopentil, cikloheksil, cikloheptil, ciklooktil, ciklononil, ciklodecil, cikloundecil i ciklodocil. Primer rasporeda bicikličkih cikloalkila koji imaju 7 do 12 atoma prstena uključuju, ali nisu ograničeni na [4,4], [4,5], [5,5], [5,6] ili [6,6] sisteme prstenova. Primeri za premošćene biciklične cikloalkile uključuju, ali nisu ograničeni na biciklo[2.2.1]heptan, biciklo[2.2.2]oktan i biciklo[3.2.2]nonan. Primeri za spirocikloalkil uključuju spiro[2.2]pentan, spiro[2.3]heksan, spiro[2.4]heptan, spiro[2.5]oktan i spiro[4.5]dekan.

Termin „cikloalkenil“ se odnosi na nearomatičnu, ugljovodoničnu prstenastu grupu sa najmanje jednom dvostrukom vezom ugljenik-ugljenik. Cikloalkenil obuhvata mono-, bi-, triciklične, spiro ili premošćene, zasićene sisteme prstenova. Primeri za monociklični cikloalkenil uključuju 1-ciklopent-1-enil, 1-ciklopent-2-enil, 1-ciklopent-3-enil, 1-cikloheks-1-enil, 1-cikloheks-2-enil, 1-cikloheks-3-enil i cikloheksadienil. Primer rasporeda bicikličkih cikloalkenila koji imaju 7 do 12 atoma prstena uključuju, ali nisu ograničeni na [4,4], [4,5], [5,5], [5,6] ili [6,6] sisteme prstenova. Primeri za premošćene biciklične cikloalkenile uključuju, ali nisu ograničeni na biciklo[2.2.1]hepten, biciklo[2.2.2]okten i biciklo[3.2.2]nonen. Primeri za spirocikloalkil uključuju, spiro[2.2]penten, spiro[2.3]heksen, spiro[2.4]hepten, spiro[2.5]okten i spiro[4.5]decen.

Termini „heterociklična grupa“, „heterociklični“, „heterocikl“, „heterociklil“ ili „heterociklo“ se koriste naizmenično i odnose se na bilo koji mono-, bi-, triciklični, spiro ili premošćeni, zasićeni, delimično zasićeni ili nezasićeni, nearomatični sistem prstenova, koji ima 3 do 20 atoma prstena, pri čemu su atomi prstena ugljenik, a najmanje jedan atom u prstenu ili sistemu prstenova je heteroatom izabran od azota, sumpora ili kiseonika. Ako je bilo koji atom prstena cikličnog sistema heteroatom, taj sistem je heterocikl, bez obzira na tačku vezivanja cikličnog sistema za ostatak molekula. U jednom primeru, heterociklil uključuje 3-11 atoma prstenova („članova“) i uključuje monocikle, bicikle, tricikle, spiro i premošćene sisteme prstenova, pri čemu su atomi prstena ugljenik, pri čemu je najmanje jedan atom u prstenu ili sistemu prstenova heteroatom izabran od azota, sumpora ili kiseonika. U drugim primerima, heterociklil uključuje 4-10 ili 5-10 atoma prstena. U jednom primeru, heterociklil uključuje 1 do 4 heteroatoma. U jednom primeru, heterociklil uključuje 1 do 3 heteroatoma. U drugom primeru, heterociklil uključuje 3-člane do 7-člane monocikle koji imaju 1-2, 1-3 ili 1-4 heteroatoma izabrana od azota, sumpora ili kiseonika. U drugom primeru, heterociklil uključuje 4-člane do 6-člane monocikle koji imaju 1-2, 1-3 ili 1-4 heteroatoma izabrana od azota, sumpora ili kiseonika. U drugom primeru, heterociklil uključuje 3-člane monocikle. U drugom primeru, heterociklil uključuje 4-člane monocikle. U drugom primeru, heterociklil uključuje 5-6-člane monocikle. U nekim otelotvorenjima, heterocikloalkil uključuje najmanje jedan azot. U jednom primeru, heterociklil grupa uključuje 0 do 3 dvostruke veze. Svaki heteroatom azota ili sumpora može opciono biti oksidovan (npr. NO, SO, SO2), a svaki heteroatom azota može opciono biti kvaternizovan (npr. [NR4]<+>Cl-, [NR4]<+>OH-). Primeri za heterocikle su oksiranil, aziridinil, tiiranil, azetidinil, oksetanil, tietanil, 1,2-ditietanil, 1,3-ditietanil, pirolidinil, dihidro-1H-pirolil, dihidrofuranil, tetrahidrofuranil, dihidrotienil, tetrahidrotienil, imidazolidinil, piperidinil, piperazinil, izohinolinil, tetrahidroizohinolinil, morfolinil, tiomorfolinil, 1,1-dioksotiomorfolinil, dihidropiranil, tetrahidropiranil, heksahidrotiopiranil, heksahidropirimidinil, oksazinanil, tiazinanil, tioksanil, homopiperazinil, homopiperidinil, azepanil, oksepanil, tiepanil, oksazepinil, oksazepanil, diazepanil, 1,4-diazepanil, diazepinil, tiazepinil, tiazepanil, tetrahidrotiopiranil, oksazolidinil, tiazolidinil, izotiazolidinil, 1,1-dioksoizotiazolidinonil, 1,1-dioksoizotiazolil, oksazolidinonil, imidazolidinonil, 4,5,6,7-tetrahidro[2H]indazolil, tetrahidrobenzoimidazolil, 4,5,6,7-tetrahidrobenzo[d]imidazolil, tiazinil, oksazinil, tiadiazinil, oksadiazinil, ditiazinil, dioksazinil, oksatiazinil, tiatriazinil, oksatriazinil, ditiadiazinil, imidazolinil, dihidropirimidil, tetrahidropirimidil, 1-pirolinil, 2-pirolinil, 3-pirolinil, indolinil, tiapiranil, 2H-piranil, 4H-piranil, dioksanil, 1,3-dioksolanil, pirazolinil, pirazolidinil, ditianil, ditiolanil, pirimidinonil, pirimidindionil, pirimidin-2,4-dionil, piperazinonil, piperazindionil, pirazolidinilimidazolinil, 3-azabiciklo[3.1.0]heksanil, 3,6-diazabiciklo[3.1.1]heptanil, 6-azabiciklo[3.1.1]heptanil, 3-azabiciklo[3.1.1]heptanil, 3-azabiciklo[4.1.0]heptanil, azabiciklo[2.2.2]heksanil, 2-azabiciklo[3.2.1]oktanil, 8-azabiciklo[3.2.1]oktanil, 2-azabiciklo[2.2.2]oktanil, 8-azabiciklo[2.2.2]oktanil, 7-oksabiciklo[2.2.1]heptan, azaspiro[3.5]nonanil, azaspiro[2,5]oktanil, azaspiro[4.5]dekanil, 1-azaspiro[4.5]dekan-2-onil, azaspiro[5.5]undekanil, tetrahidroindolil, oktahidroindolil, tetrahidroizoindolil, tetrahidroindazolil, 1,1-dioksoheksahidrotiopiranil.

Termin „metilheterociklil“ se odnosi na heterociklil supstituisan metiln grupom.

Termin „heteroaril“ se odnosi na bilo koji mono-, bi- ili triciklični aromatični sistem prstenova koji sadrži od 1 do 4 heteroatoma izabrana od azota, kiseonika i sumpora, a u reprezentativnom otelotvorenju, najmanje jedan heteroatom je azot. Pogledajte, na primer, Lang’s Handbook of Chemistry (Dean, J. A., ed.) 13. izd. tabela 7-2 [1985]. Definicijom su obuhvaćene bilo koje biciklične grupe u kojima je bilo koji od gore navedenih heteroarilnih prstenova kondenzovan sa arilnim prstenom, pri čemu je arilni prsten ili heteroarilni prsten spojen sa ostatkom molekula. U jednom otelotvorenju, heteroaril uključuje 5-6-člane monociklične aromatične grupe gde je jedan ili više atoma prstena azot, sumpor ili kiseonik. Primer za heteroaril grupe uključuje tienil, furil, imidazolil, pirazolil, tiazolil, izotiazolil, oksazolil, izoksazolil, triazolil, tiadiazolil, oksadiazolil, tetrazolil, tiatriazolil, oksatriazolil, piridil, pirimidil, pirazinil, piridazinil, triazinil, tetrazinil, tetrazolo[1,5-b]piridazinil, imidazol[1,2-a]pirimidinil i purinil, kao i benzokondenzovane derivate, na primer benzooksazolil, benzofuril, benzotiazolil, benzotiadiazolil, benzotriazolil, benzoimidazolil, indazolil i indolil.

U konkretnim otelotvorenjima, heterociklil grupa ili heteroaril grupa je vezana preko atoma ugljenika heterociklil grupe ili heteroaril grupe. Na primer, heterociklil grupe povezane preko ugljenika uključuju vezivanje na poziciji 2, 3, 4, 5 ili 6 prstena piridina, poziciji 3, 4, 5 ili 6 prstena piridazina, poziciji 2, 4, 5 ili 6 prstena pirimidina, poziciji 2, 3, 5 ili 6 prstena pirazina, poziciji 2, 3, 4 ili 5 prstena furana, tetrahidrofurana, tiofurana, tiofena, pirola ili tetrahidropirola, poziciji 2, 4 ili 5 prstena oksazola, imidazola ili tiazola, poziciji 3, 4 ili 5 prstena izoksazola, pirazola ili izotiazola, poziciji 2 ili 3 prstena aziridina, poziciji 2, 3 ili 4 prstena azetidina, poziciji 2, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 prstena hinolina, ili poziciji 1, 3, 4, 5, 6, 7 ili 8 prstena izohinolina.

U određenim otelotvorenjima, heterociklil grupa ili heteroaril grupa je N-vezana. Na primer, heterociklil ili heteroaril grupe povezane preko azota uključuju vezivanje na poziciji 1 aziridina, azetidina, pirola, pirolidina, 2-pirolina, 3-pirolina, imidazola, imidazolidina, 2-imidazolina, 3-imidazolina, pirazola, pirazolina, 2-pirazolina, 3-pirazolina, piperidina, piperazina, indola, indolina, 1H-indazola, poziciji 2 izoindola ili izoindolina, poziciji 4 morfolina i poziciji 9 karbazola ili β-karbolina.

„Kondenzovana“ se odnosi na bilo koju ovde opisanu strukturu prstenova koja deli jedan ili više atoma (npr. atoma ugljenika ili azota) sa postojećom strukturom prstenova u jedinjenjima iz pronalaska.

Termin „acil“ se odnosi na karbonil koji obuhvata supstituent predstavljen formulom −C(=O)-R u kojoj je R supstituent kao što je vodonik, alkil, cikloalkil, aril ili heterociklil, pri čemu su alkil, cikloalkil, aril i heterociklil kao što je ovde definisano. Acil grupe uključuju alkanoil (npr. acetil), aroil (npr. benzoil) i heteroaroil (npr. piridinoil).

Termin „haloalkil“ se odnosi na alkil lanac u kojem je jedan ili više vodonika zamenjeno halogenom. Primeri za haloalkil su trifluormetil, difluormetil i fluormetil.

Termini „jedinjenje(a) iz pronalaska“ i „jedinjenje(a) iz predmetnog pronalaska“, osim ako nije drugačije naznačeno, uključuju jedinjenja koje ima formulu (IVa), (IVb), (IVd) ili (IVg) i jedinjenja navedena u tabelama u ovom tekstu, uključujući njihove stereoizomere (uključujući atropizomere), geometrijske izomere, tautomere, izotope i soli (npr. farmaceutski prihvatljive soli).

Termin „opciono supstituisana“, osim ako nije drugačije navedeno, znači da grupa može biti nesupstituisana ili supstituisana sa jednim ili više (npr.0, 1, 2, 3, 4 ili 5 ili više, ili bilo kojim opsegom koji se u njima može izvesti) supstituenata navedenih za tu grupu, pri čemu navedeni supstituenti mogu biti isti ili različiti. U jednom otelotvorenju, opciono supstituisana grupa ima 1 supstituent. U drugom otelotvorenju, opciono supstituisana grupa ima 2 supstituenta. U drugom otelotvorenju, opciono supstituisana grupa ima 3 supstituenta. U drugom otelotvorenju, opciono supstituisana grupa ima 4 supstituenta. U drugom otelotvorenju, opciono supstituisana grupa ima 5 supstituenta.

Kao što se ovde koristi, talasasta linija „ “ koja preseca vezu u hemijskoj strukturi ukazuje na tačku vezivanja atoma sa kojim je talasasta veza povezana u hemijskoj strukturi sa ostatkom molekula, ili sa ostatkom fragmenta molekula.

U određenim otelotvorenjima, dvovalentne grupe su opisane generički bez specifičnih konfiguracija vezivanja. Podrazumeva se da bi generički opis trebalo da uključi obe konfiguracije vezivanja, osim ako nije drugačije navedeno. Na primer, u grupi R<1>-R<2>-R<3>, ako je grupa R<2>opisana kao −CH2C(O)−, onda se podrazumeva da se ova grupa može vezati i kao R<1>-CH2C(O)-R<3>i kao R<1>-C(O)CH2-R<3>, osim ako nije drugačije navedeno.

Termin „farmaceutski prihvatljivo“ odnosi se na molekulske entitete i kompozicije koji ne dovode do neželjenih, alergijskih i drugih nepovoljnih reakcija kada se primene na životinji, kao što je, na primer, čovek, kada je to potrebno.

Jedinjenja iz pronalaska mogu biti u obliku soli, kao što je farmaceutski prihvatljiva so. „Farmaceutski prihvatljive soli“ obuhvataju kisele i bazne adicione soli. „Farmaceutski prihvatljiva kisela adiciona so“ odnosi se na one soli koje zadržavaju biološku efikasnost i svojstva slobodnih baza, i koje nisu biološki ili na drugi način nepoželjne, formirane sa neorganskim kiselinama, kao što je hlorovodonična kiselina, bromovodonična kiselina, sumporna kiselina, azotna kiselina, ugljena kiselina i fosforna kiselina, i organskim kiselinama koje se mogu odabrati od klase alifatičnih, cikloalifatičnih, aromatičnih, aralifatičnih, heterocikličnih, karboksilnih i sulfonskih organskih kiselina, kao što je mravlja kiselina, sirćetna kiselina, propionska kiselina, glikolna kiselina, glukonska kiselina, mlečna kiselina, piruvinska kiselina, oksalna kiselina, jabučna kiselina, maleinska kiselina, malonska kiselina, ćilibarna kiselina, fumarna kiselina, vinska kiselina, limunska kiselina, asparaginska kiselina, askorbinska kiselina, glutaminska kiselina, antranilna kiselina, benzojeva kiselina, cimetna kiselina, bademova kiselina, embonska kiselina, fenilsirćetna kiselina, metansulfonska kiselina, etansulfonska kiselina, benzensulfonska kiselina, p-toluensulfonska kiselina i salicilna kiselina.

Termin „farmaceutski prihvatljive bazne adicione soli“ uključuju soli izvedene iz neorganskih baza, kao što su soli natrijuma, kalijuma, litijuma, amonijuma, kalcijuma, magnezijuma, gvožđa, cinka, bakra, mangana i aluminijuma. Posebne bazne adicione soli su

1

soli amonijuma, kalijuma, natrijuma, kalcijuma i magnezijuma. Soli izvedene iz farmaceutski prihvatljivih organskih netoksičnih baza obuhvataju soli primarnih, sekundarnih i tercijarnih amina, supstituisanih amina, uključujući i supstituisane amine koji se nalaze u prirodi, cikličnih amina i baznih jonoizmenjivačkih smola, kao što su izopropilamin, trimetilamin, dietilamin, trietilamin, tripropilamin, etanolamin, 2-dietiaminoetanol, trometamin, dicikloheksilamin, lizin, arginin, histidin, kafein, prokain, hidrabamin, holin, betain, etilendiamin, glukozamin, metilglukamin, teobromin, purini, piperazin, piperidin, N-etilpiperidin i poliaminskih smola. Posebne organske netoksične baze uključuju izopropilamin, dietilamin, etanolamin, trometamin, dicikloheksilamin, holin i kofein.

U nekim otelotvorenjima, so je odabrana od hidrohlorida, hidrobromida, trifluoracetata, sulfata, fosfata, acetata, fumarata, maleata, tartarata, laktata, citrata, piruvata, sukcinata, oksalata, metansulfonata, p-toluensulfonata, bisulfata, benzensulfonata, etansulfonata, malonata, ksinafoata, askorbata, oleata, nikotinata, saharinata, adipata, formata, glikolata, palmitata, L-laktata, D-laktata, aspartata, malata, L-tartarata, D-tartarata, stearata, furoata (npr.

2-furoata ili 3-furoata), napadisilata (naftalen-1,5-disulfonata ili naftalen-1-(sulfonska kiselina)-5-sulfonata), edisilata (etan-1,2-disulfonata ili etan-1-(sulfonska kiselina)-2-sulfonata), izotionata (2-hidroksietilsulfonata), 2-mezitilensulfonata, 2-naftalensulfonata, 2,5-dihlorbenzensulfonata, D-mandelata, L-mandelata, cinamata, benzoata, adipata, ezilata, malonata, mezitilata (2-mezitilensulfonata), napsilata (2-naftalensulfonata), kamsilata (kamfor-10-sulfonata, na primer soli (1S)-(+)-10-kamforsulfonske kiseline), glutamata, glutarata, hipurata (2-(benzoilamino)acetata), orotata, ksilata (p-ksilen-2-sulfonata), i pamoinskog (2,2'-dihidroksi-1,1'-dinaftilmetan-3,3'-dikarboksilata).

„Sterilna“ formulacija je aseptična ili oslobođena prisustva svih živih mikroorganizama i njihovih spora.

Termin „stereoizomeri” se odnosi na jedinjenja koja imaju identičan hemijski sastav, ali se razlikuju u pogledu rasporeda atoma ili grupa u prostoru. Stereoizomeri uključuju dijastereomere, enantiomere i konformere.

Termin „hiralni“ se odnosi na molekule koji imaju svojstvo nemogućnosti preklapanja sa odrazom u ogledalu partnera, dok se termin „ahiralni“ odnosi na molekule koji mogu da se preklope sa odrazom u ogledalu partnera.

Termin „dijastereomer“ se odnosi na stereoizomer sa dva ili više hiralnih centara i čiji molekuli nisu međusobno identični kao likovi u ogledalu. Dijastereomeri imaju različita fizička svojstva, npr. tačke topljenja, tačke ključanja, spektralne osobine ili biološke aktivnosti. Smeše dijastereomera se mogu odvojiti u analitičkim postupcima visoke rezolucije, kao što su elektroforeza i hromatografija, kao što je HPLC.

Termin „enantiomeri“ se odnosi na dva stereoizomera jedinjenja koja se odnose kao predmet i lik u ogledalu i ujedno se ne mogu međusobno preklopiti.

Ovde korišćene stereohemijske definicije i konvencije uopšteno slede S. P. Parker, izd., McGraw-Hill Dictionary of Chemical Terms (1984) McGraw-Hill Book Company, New York; i Eliel, E. i Wilen, S., “Stereochemistry of Organic Compounds”, John Wiley & Sons, Inc., New York, 1994. Mnoga organska jedinjenja postoje u optički aktivnim oblicima, tj. imaju sposobnost rotacije ravni svetlosti polarizovane u ravni. Kod opisivanja optički aktivnog jedinjenja, prefiksi D i L ili R i S, koriste se za označavanje apsolutne konfiguracije molekula oko njegovog hiralnog centra (ili centara). Prefiksi d i 1 ili (+) i (-) koriste se da označe znak rotacije u ravni polarizovane svetlosti od strane jedinjenja, pri čemu (-) ili 1 označavaju da je jedinjenje levorotatorno. Jedinjenje sa prefiksom (+) ili d je dekstrorotatorno. Za datu hemijsku strukturu, ovi stereoizomeri su identični osim što su likovi u ogledalu jedan drugog. Specifični stereoizomer se takođe može nazvati enantiomerom, a smeša takvih izomera često se naziva enantiomerna smeša. Smeša enantiomera od 50:50 naziva se racemska smeša ili racemat, a može se pojaviti tamo gde nije bilo stereoselekcije ili stereospecifičnosti u hemijskoj reakciji ili procesu. Izrazi „racemska smeša“ i „racemat“ se odnose na ekvimolarnu smešu dve enantiomerne vrste lišene optičke aktivnosti.

Termin „tautomer“ ili „tautomerni oblik“ se odnosi na strukturne izomere različitih energija koji mogu da prelaze jedni u druge putem niske energetske barijere. Na primer, protonski tautomeri (takođe poznati i kao prototropni tautomeri) uključuju interkonverzije preko migracije protona, kao što su keto-enolne i imin-enamin izomerizacije. Valentni tautomeri uključuju interkonverzije preko reorganizacije nekih od vezujućih elektrona.

„Atropizomeri“ su stereoizomeri koji nastaju zbog otežane rotacije oko jedne veze, gde razlike u energiji usled sternog naprezanja ili drugih doprinosa stvaraju barijeru rotaciji koja je dovoljno visoka da omogući izolaciju pojedinačnih konformera.

Određena jedinjenja iz pronalaska mogu postojati u nesolvatisanim oblicima, kao i solvatisanim oblicima uključujući hidratne oblike. „Solvat” se odnosi na udruživanje ili kompleks jednog ili više molekula rastvarača i jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Primeri za rastvarače koji formiraju solvate uključuju vodu, izopropanol, etanol, metanol, DMSO, etilacetat, sirćetnu kiselinu i etanolamin. Određena jedinjenja iz pronalaska mogu postojati u višestrukim kristalnim ili amorfnim oblicima. Generalno, svi fizički oblici treba da budu u okviru predmetnog pronalaska. Termin „hidrat” se odnosi na kompleks gde je molekul rastvarača voda.

„Metabolit“ se odnosi na proizvod koji nastaje metabolizmom određenog jedinjenja ili njegove soli u organizmu. Takvi proizvodi mogu da nastanu, na primer, oksidacijom, redukcijom, hidrolizom, amidacijom, deamidacijom, esterifikacijom, deesterifikacijom, enzimatski i cepanjem primenjenog jedinjenja.

Produkti metabolizma tipično se identifikuju pripremom radioaktivno obeleženog (npr<14>C ili<3>H) izotopa jedinjenja iz pronalaska, primenom u dozi koja se može detektovati (npr. veća od oko 0,5 mg/kg) na životinje, kao što su pacov, miš, zamorac, majmun ili čovek, omogućavajući dovoljno vremena da dođe do metabolizma (tipično oko 30 sekundi do 30 sati) i izolujući njegove proizvode konverzije iz urina, krvi ili drugih bioloških uzoraka. Ovi proizvodi se lako izoluju jer su obeleženi (drugi su izolovani upotrebom antitela sposobnih za vezivanje epitopa koji prežive u metabolitu). Strukture metabolita se određuju na konvencionalan način, npr. pomoću MS, LC/MS ili NMR analize. Generalno, analiza metabolita se vrši na isti način kao i konvencionalne studije metabolizma lekova, dobro poznat stručnjacima. Produkti metabolizma, sve dok se inače ne nalaze in vivo, korisni su u dijagnostičkim testovima za terapijsko doziranje jedinjenja pronalaska.

Pronalazak koji je ovde opisan takođe obuhvata izotopski obeležena jedinjenja iz predmetnog pronalaska, koja su identična onima ovde navedenim, osim činjenice da je jedan ili više atoma zamenjeno atomom koji ima atomsku masu ili maseni broj različit od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalaze u prirodi. Svi izotopi svakog konkretnog atoma ili elementa kako su navedeni razmatraju se u okviru jedinjenja iz pronalaska i njihove primene. Primeri izotopa koji mogu biti ugrađeni u jedinjenja iz pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora, hlora i joda, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<32>P,<33>P,<35>S,<18>F,<36>Cl,<123>I i<125>I. Pojedina izotopski obeležena jedinjenja iz predmetnog pronalaska (npr. ona označena sa<3>H ili<14>C) korisna su u testovima raspodele jedinjenja i/ili supstrata u tkivima. Izotopi sa tricijumom (<3>H) i ugljenikom-14 (<14>C) su korisni zbog lakoće pripreme i detektovanja. Dalja supstitucija težim izotopima, kao što je deuterijum (tj.<2>H) može pružiti neke terapijske prednosti koje potiču od veće metaboličke stabilnosti (npr. povećan poluživot in vivo ili smanjenje potrebne doze) i stoga može biti poželjna u nekim uslovima. Izotopi koji emituju pozitrone, kao što je<15>O,<13>N,<11>C i<18>F, korisni su za studije sa pozitronskom emisionom tomografijom (PET) za ispitivanje zauzetosti receptora supstrata. Izotopski obeležena jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu generalno da se dobiju postupcima analognim onima objavljenim u Primerima u nastavku, supstitucijom reagensa obeleženog izotopom reagensom koji nije obeležen izotopom.

Termin „amino-zaštitna grupa“ koji se ovde koristi odnosi se na derivat grupa koje se

1

obično koriste za blokiranje ili zaštitu amino grupe dok se reakcije sprovode na drugim funkcionalnim grupama na jedinjenju. Primeri takvih zaštitnih grupa uključuju karbamate, amide, alkil i aril grupe i imine, kao i mnoge derivate N-heteroatoma koji se mogu ukloniti kako bi se željena amino grupa regenerisala. Konkretne amino zaštitne grupe su Pmb (pmetoksibenzil), Boc (terc-butiloksikarbonil), Fmoc (9-fluorenilmetiloksikarbonil) i Cbz (karbobenziloksi). Dalji primeri ovih grupa nalaze se u T. W. Greene i P. G. M. Wuts, “Protecting Groups in Organic Synthesis, 3. izd., John Wiley & Sons, Inc., 1999. Termin „zaštićeni amino“ se odnosi na amino grupu koja je supstituisana jednom od gore navedenih amino-zaštitnih grupa.

Termin „karboksi-zaštitna grupa“ koji se ovde koristi odnosi se na one grupe koje su stabilne u uslovima jedne ili više naknadnih reakcija na drugim pozicijama molekula, koje se mogu ukloniti u odgovarajućem terminu bez narušavanja ostatka molekula, kako bi se dobila nezaštićena karboksi-grupa. Primeri za karboksi zaštitne grupe uključuju estarske grupe i heterociklil grupe. Estarski derivati grupe karboksilne kiseline mogu se koristiti za blokiranje ili zaštitu grupe karboksilne kiseline dok se reakcije sprovode na drugim funkcionalnim grupama na jedinjenju. Primeri za takve estarske grupe uključuju supstituisani arilalkil, uključujući supstituisane benzile, kao što su 4-nitrobenzil, 4-metoksibenzil, 3,4-dimetoksibenzil, 2,4-dimetoksibenzil, 2,4,6-trimetoksibenzil, 2,4,6-trimetilbenzil, pentametilbenzil, 3,4-metilendioksibenzil, benzhidril, 4,4’-dimetoksibenzhidril, 2,2’, 4,4’-tetrametoksibenzhidril, alkil ili supstituisane alkil estre kao što su metil, etil, t-butil alil ili tamil, trifenilmetil (tritil), 4-metoksitritil, 4,4’ -dimetoksitril, 4,4’,4”-trimetoksitritil, 2-fenilprop-2-il, tioestre kao što su t-butil tioestar, silil estre kao što su trimetilsilil, tbutildimetilsilil estri, fenacil, 2,2,2-trihloretil, beta-(trimetilsilil)etil, beta-(di(nbutil)metilsilil)etil, p-toluensulfoniletil, 4-nitrobenzilsulfoniletil, alil, cinamil, 1-(trimetilsililmetil)prop-1-en-3-il, i slične ostatke. Drugi primer za karboksi-zaštitne grupe su heterociklil grupe kao što je 1,3-oksazolinil. Dalji primeri ovih grupa nalaze se u T. W. Greene i P. G. M. Wuts, “Protecting Groups in Organic Synthesis, 3. izd., John Wiley & Sons, Inc., 1999. Termin „zaštićeni karboksi“ se odnosi na karboksi grupu koja je supstituisana jednom od gore navedenih karboksi-zaštitnih grupa.

Jedinjenja iz pronalaska mogu sadržati jedan ili više asimetričnih atoma ugljenika. Shodno tome, jedinjenja mogu postojati kao dijastereomeri, enantiomeri ili njihove smeše. Sinteze jedinjenja mogu koristiti racemate, dijastereomere ili enantiomere kao početne supstance ili kao intermedijere. Smeše određenih dijastereomernih jedinjenja mogu biti razdvojene ili obogaćene sa jednim ili više određenih dijastereomera hromatografskim ili kristalizacionim metodama. Slično tome, enantiomerne smeše mogu biti razdvojene ili enantiomerno obogaćene koristeći iste tehnike ili druge tehnike poznate u ovoj struci. Svaki od asimetričnih atoma ugljenika ili azota može biti u R ili S konfiguraciji i obe ove konfiguracije su obuhvaćene pronalaskom.

U strukturama koje su ovde prikazane, gde stereohemija bilo kog određenog hiralnog atoma nije navedena, tada se svi stereoizomeri razmatraju i uključuju kao jedinjenja ovog pronalaska. Ako je stereohemija određena čvrstim klinom ili isprekidanom linijom koja predstavlja određenu konfiguraciju, tada je taj stereoizomer tako određen i definiran. Ukoliko nije drugačije navedeno, ako se koriste puni klinovi ili isprekidane linije, predviđena je relativna stereohemija.

Drugi aspekt uključuje prolekove jedinjenja iz pronalaska, uključujući poznate aminozaštitne i karboksi-zaštitne grupe koje se oslobađaju, na primer hidrolizuju, da bi se dobilo jedinjenje iz predmetnog pronalaska pod fiziološkim uslovima.

Termin „prolek“ se odnosi na prekursorski ili derivatni oblik farmaceutski aktivne supstance koji je manje efikasan za pacijenta u poređenju sa matičnim lekom i sposoban je da se enzimski ili hidrolitički aktivira ili pretvori u aktivniji matični oblik. Pogledajte, npr. Wilman, “Prodrugs in Cancer Chemotherapy” Biochemical Society Transactions, 14, str.375-382, 615th Meeting Belfast (1986) i Stella et al., “Prodrugs: A Chemical Approach to Targeted Drug Delivery,” Directed Drug Delivery, Borchardt et al., (ed.), str. 247-267, Humana Press (1985). Prolekovi uključuju, ali nisu ograničeni na, prolekove koji sadrže fosfate, prolekove koji sadrže tiofosfat, prolekove koji sadrže sulfate, prolekove koji sadrže peptide, prolekove modifikovane D-amino kiselinom, glikozilovane prolekove, prolekove koji sadrže β-laktam, opciono supstituisane prolekove koji sadrže fenoksiacetamid ili opciono supstituisane prolekove koji sadrže fenilacetamid i prolekove koji sadrže 5-fluorocitozin i 5-fluorouridin.

Posebna klasa prolekova su jedinjenja u kojima je atom azota u amino, amidino, aminoalkilenamino, iminoalkilenamino ili gvanidino grupi zamenjen hidroksi grupom, −CO-R, −CO-OR ili −CO-O-R-O-CO-R, gde je R jednovalentna ili dvovalentna grupa, na primer alkil, alkilen ili aril, ili grupa koja ima formulu −C(O)-O-CP1P2-haloalkil, gde su P1 i P2 isti ili različiti i predstavljaju vodonik, alkil, alkoksi, cijano, halogen, alkil ili aril. U određenom otelotvorenju, atom azota je jedan od atoma azota amidino grupe jedinjenja iz pronalaska. Prolekovi se mogu pripremiti reakcijom jedinjenja iz predmetnog pronalaska sa aktiviranom grupom, kao što su acil grupe, da bi se vezao, na primer, atom azota u jedinjenju za reprezentativni karbonil aktivirane acil grupe. Primeri za aktivirana karbonilna jedinjenja su ona koja sadrže odlazeću grupu vezanu za karbonilnu grupu i uključuju, na primer, acil halide,

1

acil amine, acil piridinijumske soli, acil alkokside, acil fenokside kao što su p-nitrofenoksi acil, dinitrofenoksi acil, fluorfenoksi acil i difluorfenoksi acil. Reakcije se uglavnom sprovode u inertnim rastvaračima na temperaturi od oko -78 do oko 50 °C. Reakcije se takođe mogu sprovoditi u prisustvu neorganske baze, na primer kalijum karbonata ili natrijum bikarbonata, ili organske baze kao što je amin, uključujući piridin, trimetilamin, trietilamin ili trietanolamin.

Takođe su obuhvaćeni dodatni tipovi prolekova. Na primer, slobodna karboksilna grupa jedinjenja pronalaska može biti derivatizovana kao amid ili alkil-estar. Kao još jedan primer, jedinjenja iz ovog pronalaska koja sadrže slobodne hidroksi grupe mogu biti derivatizovana kao prolekovi pretvaranjem hidroksi grupe u grupu kao što je, bez ograničenja, fosfatni estar, hemisukcinat, dimetilaminoacetat ili fosforiloksimetiloksikarbonil grupa, kao što je navedeno u Fleisher, D. et al., (1996) Improved oral drug delivery: solubility limitations overcome by the use of prodrugs Advanced Drug Delivery Reviews, 19:115. Karbamatni prolekovi hidroksi i amino grupa su takođe uključeni, kao i karbonatni prolekovi, sulfonatni estri i sulfatni estari hidroksi grupa. Derivatizacija hidroksi grupa kao (aciloksi)metil i (aciloksi)etil etri, pri čemu acil grupa može biti alkil-estar opciono supstituisan grupama koje uključuju, bez ograničenja, etarske, amino i karboksilne grupe, ili kada je acil grupa aminokiselinski estar kao što je gore opisano, takođe su obuhvaćeni. Prolekovi ovog tipa opisani su u J. Med. Chem., (1996), 39:10. Konkretniji primeri uključuju zamenu atoma vodonika alkoholne grupe grupom kao što je (C1−6)alkanoiloksimetil, 1-((C1−6)alkanoiloksi)etil, 1-metil-1-((C1−6)alkanoiloksi)etil, (C1−6)alkoksikarboniloksimetil, N-(C1−6)alkoksikarbonilaminometil, sukcinoil, (C1−6)alkanoil, alfa-amino(C1−4)alkanoil, arilacil i alfa-aminoacil, ili alfa-aminoacil-alfa-aminoacil, gde je svaka alfa-aminoacil grupa nezavisno odabrana od prirodnih L-aminokiselina, P(O)(OH)2, −P(O)(O(C1−6)alkil)2ili glikozila (radikal koji nastaje uklanjanjem hidroksilne grupe hemiacetalnog oblika ugljenog hidrata).

Termin „odlazeća grupa“ se odnosi na deo prvog reaktanta u hemijskoj reakciji koji je istisnut iz prvog reaktanta u hemijskoj reakciji. Primeri za odlazeće grupe uključuju, ali nisu ograničeni na atome halogena, alkoksi i sulfoniloksi grupe. Primer za sulfoniloksi grupu uključuje, ali nije ograničen na, alkilsulfoniloksi grupe (na primer metil sulfoniloksi (mezilatna grupa) i trifluormetilsulfoniloksi (triflatna grupa)) i arilsulfoniloksi grupe (na primer ptoluensulfoniloksi (tozilatna grupa) i p-nitrosulfoniloksi (nozilatna grupa)).

„Ispitanik“, „pojedinac“ ili „pacijent“ je kičmenjak. U određenim otelotvorenjima, kičmenjak je sisar. Sisari uključuju, bez ograničenja, domaće životinje (kao što su krave), životinje za sport, kućne ljubimce (kao što su zamorci, mačke, psi, zečevi i konji), primate, miševe i pacove. U određenim otelotvorenjima, sisar je čovek. U otelotvorenjima koja

1

obuhvataju primenu jedinjenja na pacijentu, pacijentu je to obično potrebno.

Termini „inhibiranje“ i „smanjenje“, ili bilo koja varijacija ovih termina, uključuju svako merljivo smanjenje ili potpunu inhibiciju kako bi se postigao željeni rezultat. Na primer, može doći do smanjenja aktivnosti od oko, najviše oko, ili najmanje oko 5%, 10%, 15%, 20%, 25%, 30%, 35%, 40%, 45%, 50%, 55%, 60%, 65%, 70%, 75%, 80%, 85%, 90%, 95%, 99% ili više, ili u bilo kom rasponu koji se iz toga može izvesti, u poređenju sa normalnom.

Termin „terapeutski efikasna količina“ označava količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska, kao što je jedinjenje koje ima formulu (I), formulu (II), formulu (III) ili formulu (IV), ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koja (i) leči ili sprečava određenu bolest, stanje ili poremećaj, ili (ii) ublažava, poboljšava ili eliminiše jedan ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja, i opciono (iii) sprečava ili odlaže početak jednog ili više simptoma određene bolesti, stanja ili poremećaja opisanog ovde. U slučaju kancera, terapeutski efikasna količina leka može redukovati broj ćelija kancera; smanjiti veličinu tumora; inhibirati (tj. usporiti do izvesnog stepena i poželjno zaustaviti) infiltraciju ćelija kancera u periferne organe; sprečiti (tj. usporiti do izvesnog stepena i poželjno zaustaviti) metastaze tumora; inhibirati, do određenog stepena, tumorski rast; ili ublažiti do izvesnog stepena jedan ili više simptoma kancera. Prema stepenu do koga lek može da spreči rast ili da ubije postojeće ćelije kancera, on može biti citostatični ili citotoksični lek. Za terapiju kancera, efikasnost se može meriti, na primer, procenom vremena do progresije bolesti (TTP) ili određivanjem stope odgovora (RR).

„Tretman” (i oblici kao što je „tretirati”, „tretiranje”) odnosi se na kliničku intervenciju u pokušaju da se izmeni prirodni tok bolesti kod pojedinca ili ćelije koja se tretira, i može se primenjivati radi profilakse ili tokom kliničke patologije. Poželjni efekti lečenja uključuju sprečavanje pojave ili recidiva bolesti, ublažavanje simptoma, smanjenje bilo kakvih direktnih ili indirektnih patoloških posledica bolesti, stabilizovano stanje bolesti (tj. bez pogoršanja), smanjenje stope progresije bolesti, ublažavanje ili poboljšavanje stanja bolesti, produžavanje preživljavanja u poređenju sa očekivanim preživljavanjem ako se ne prima lečenje, i remisiju ili poboljšanu prognozu. U nekim otelotvorenjima, jedinjenja iz pronalaska se primenjuju da odlože razvoj bolesti ili poremećaja, ili da uspore napredovanje bolesti ili poremećaja. Oni kojima je lečenje neophodno obuhvataju one koji već imaju stanje ili poremećaj, kao i one koji su skloni tome da imaju stanje ili poremećaj (na primer, kroz genetske mutacije) ili one kod kojih stanje ili poremećaj treba sprečiti.

„Terapeutsko dejstvo“, kao što se taj termin ovde koristi, obuhvata terapeutsku korist i/ili profilaktičku korist kao što je gore opisano. Profilaktičko dejstvo uključuje odlaganje ili eliminisanje pojave bolesti ili stanja, odlaganje ili eliminisanje pojave simptoma bolesti ili

1

stanja, usporavanje, zaustavljanje ili preokretanje progresije bolesti ili stanja, ili bilo koju kombinaciju prethodnog.

Termin „zajednička primena“, „primena u kombinaciji sa“, i njihovi gramatički ekvivalenti, kao što se ovde koriste, obuhvata primenu dva ili više agensa na životinji, uključujući ljude, tako da su oba agensa i/ili njihovi metaboliti prisutni u ispitaniku istovremeno. Zajednička primena uključuje istovremenu primenu u odvojenim kompozicijama, primenu u različito vreme u odvojenim kompozicijama ili primenu u kompoziciji u kojoj su prisutna oba agensa.

Termini „antagonist“ i „inhibitor“ se koriste naizmenično i odnose se na jedinjenje koje ima sposobnost da inhibira biološku funkciju ciljnog proteina, putem inhibicije aktivnosti ili ekspresije proteina, kao što su K-Ras, H-Ras ili N-Ras G12C. Shodno tome, termini „antagonist“ i „inhibitori“ su definisani u kontekstu biološke uloge ciljnog proteina. Mada poželjni antagonisti ovde specifično interaguju sa ciljem (npr. vezuju se za njega), jedinjenja koja inhibiraju biološku aktivnost ciljnog proteina putem interakcije sa drugim članovima puta transdukcije signala, čiji je član ciljni protein, takođe su specifično obuhvaćena ovom definicijom. Poželjna biološka aktivnost koja je inhibirana antagonistom povezana je sa razvojem, rastom ili širenjem tumora.

Termin „agonist“, kao što se ovde koristi, odnosi se na jedinjenje koje ima sposobnost da inicira ili poboljša biološku funkciju ciljnog proteina, putem inhibiranja aktivnosti ili ekspresije ciljnog proteina. Shodno tome, termin „agonist“ je definisan u kontekstu biološke uloge ciljnog polipeptida. Mada poželjni agonisti ovde specifično interaguju sa ciljem (npr. vezuju se za njega), jedinjenja koja iniciraju ili poboljšavaju biološku aktivnost ciljnog polipeptida putem interakcije sa drugim članovima puta transdukcije signala, čiji je član ciljni polipeptid, takođe su specifično obuhvaćena ovom definicijom.

Termini „kancer“ i „kancerogeni“, „neoplazma” i „tumor” i srodni termini odnose se na fiziološko stanje kod sisara koje tipično karakteriše neregulisani rast ćelija, ili ga opisuju. „Tumor“ sadrži jednu ili više ćelija kancera. Primeri za kancer uključuju karcinom, blastom, sarkom, seminom, glioblastom, melanom, leukemiju i mijeloidne ili limfoidne maligne bolesti. Konkretniji primeri za takve kancere uključuju kancer skvamoznih ćelija (npr. epitelni kancer skvamoznih ćelija) i kkancer pluća, uključujući mikrocelularni kancer pluća, nemikrocelularni kancer pluća („NSCLC“), adenokarcinom pluća i skvamozni karcinom pluća. Drugi kanceri uključuju kancer kože, keratoakantom, folikularni karcinom, leukemiju vlasastih ćelija, bukalne šupljine, ždrela (oralni), usana, jezika, usta, pljuvačne žlezde, jednjaka, grkljana, hepatocelularni kancer, kancer želuca, gastrointestinalni, kancer tankog creva, debelog creva,

1

pankreasa, grlića materice, jajnika, jetre, bešike, hepatoma, dojke, debelog creva, rektalni, kolorektalni, genitourinarni, žučnih kanala, štitne žlezde, papilarni, hepatički, endometrijuma, materice, pljuvačne žlezde, bubrega ili renalni, prostate, testisa, vulve, peritoneuma, analni, penisa, kostiju, multipli mijelom, B-ćelijski limfom, difuzni B-krupnoćelijski limfom (DLBCL), centralnog nervnog sistema, mozga, glave i vrata, Hodžkinov limfom i povezane metastaze. Primeri za neoplastične poremećaje uključuju mijeloproliferativne poremećaje, kao što su policitemija vera, esencijalna trombocitoza, mijelofibroza, kao što je primarna mijelofibroza, i hronična mijelogena leukemija (CML).

„Hemoterapeutski agens“ je agens koji je koristan u lečenju datog poremećaja, na primer, kancera ili inflamatornih poremećaja. Primeri za hemoterapeutske agense su dobro poznati u ovoj oblasti i uključuju primere kao što su oni objavljeni u U.S. publikaciji prijave br. 2010/0048557. Dodatno, hemoterapeutski agensi obuhvataju farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivate bilo kog od hemoterapeutskih agensa, kao i kombinacije dva ili više njih.

Ukoliko nije drugačije naznačeno, ovde prikazane strukture takođe uključuju jedinjenja koja se razlikuju samo po prisustvu jednog ili više izotopski obogaćenih atoma. Primeri za izotope koji mogu biti ugrađeni u jedinjenja iz pronalaska uključuju izotope vodonika, ugljenika, azota, kiseonika, fosfora, sumpora, fluora, hlora i joda, kao što su<2>H,<3>H,<11>C,<13>C,<14>C,<13>N,<15>N,<15>O,<17>O,<18>O,<32>P,<33>P,<35>S,<18>F,<36>Cl,<123>I i<125>I. Izotopski obeležena jedinjenja (npr. ona obeležena sa<3>H i<14>C) mogu biti korisna u testovima distribucije jedinjenja ili supstrata u tkivu. Izotopi sa tricijumom (npr.<3>H) i ugljenikom-14 (npr.<14>C) mogu biti korisni zbog lakoće pripreme i detektovanja. Dalje, supstitucija težim izotopima, kao što je deuterijum (tj.<2>H), može pružiti neke terapijske prednosti koje proističu iz veće metaboličke stabilnosti, (npr. povećan poluživot in vivo, ili smanjenje potrebne doze). U nekim otelotvorenjima, u jedinjenjima iz pronalaska, jedan ili više atoma ugljenika se zamenjuju<13>C- ili<14>C-obogaćenim ugljenikom. Izotopi koji emituju pozitrone, kao što je<15>O,<13>N,<11>C i<18>F, korisni su za studije sa pozitronskom emisionom tomografijom (PET) za ispitivanje zauzetosti receptora supstrata. Izotopski obeležena jedinjenja mogu generalno da se dobiju po postupcima analognim onima objavljenim u Šemama ili Primerima, supstitucijom reagensa obeleženog izotopom reagensom koji nije obeležen izotopom.

Posebno se razmatra da se svako ograničenje o kojem se govori u vezi sa jednim otelotvorenjem pronalaska može primeniti na bilo koje drugo otelotvorenje pronalaska. Štaviše, bilo koje jedinjenje ili kompozicija iz pronalaska može se koristiti u bilo kom postupku iz pronalaska, a bilo koji postupak iz pronalaska može se koristiti za proizvodnju ili korišćenje bilo kog jedinjenja ili kompozicije iz pronalaska.

1

Upotreba termina „ili“ se koristi sa značenjem „i/ili“, osim ako nije izričito naznačeno da se odnosi samo na alternative ili su alternative međusobno isključive, iako otkriće podržava definiciju koja se odnosi samo na alternative i „i/ili“.

U ovoj prijavi, termin „oko“ se koristi da označi da vrednost uključuje standardno odstupanje greške za uređaj ili postupak koji se koristi za određivanje vrednosti.

Kako se ovde koristi, oblik za jedninu znači jedan ili više, osim ako nije drugačije naznačeno. Kako se ovde koristi, „drugi“ znači najmanje drugi ili više.

Naslovi koji se ovde koriste namenjeni su samo u organizacione svrhe.

INHIBITORI RAS PROTEINA

U jednom aspektu, pronalazak obezbeđuje jedinjenja koja su sposobna da se selektivno vezuju za G12C, G12D ili G13D mutirani K-Ras, H-Ras ili N-Ras protein i/ili da ga moduliraju.

Tabela 1. Reprezentativna jedinjenja predmetnog otkrića. Razmatraju se i soli takvih jedinjenja. Za pripremu takvih jedinjenja, pogledajte odeljak Primeri. Jedinjenja čiji podaci za pripremu nisu izričito opisani u Primerima mogu da se pripreme modifikacijom podataka o pripremi za druga jedinjenja koja su ovde data, koristeći postupke koji su opšte poznati u ovoj oblasti.

2

n/a = nije primenljivo

Pronalazak uključuje jedinjenje koje ima formulu (IVa), (IVb), (IVd) ili (IVg):

ili njegov stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so;

pri čemu,

;

U je C(R6a);

V je C(R6b);

W je C(R6c);

R6aje H;

R6bje vodonik, halo ili haloalkil; i

R6cje vodonik ili halo.

U jednom otelotvorenju jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli

Y je . U drugom otelotvorenju jedinjenja ili njegove farmaceutski

prihvatljive soli, Y je . U još jednom otelotvorenju jedinjenja ili njegove

farmaceutski prihvatljive soli, još jednom otelotvorenju jedinjenja

ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, Y je .

Prema nekim otelotvorenjima jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, W je C(R6c), a R6cje halo.

Prema nekim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od jedinjenja koje ima formulu (IVa) ili (IVb), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Prema nekim otelotvorenjima, jedinjenje se sastoji od jedinjenja koje ima formulu (IVd) ili (IVg), ili njihove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom otelotvorenju, jedinjenje je jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so kako je navedeno u Tabeli 1 u ovom dokumentu.

U drugom otelotvorenju, jedinjenje je jedinjenje koje odgovara jedinjenju 17a, jedinjenju 17b, jedinjenju 83b, jedinjenju 83d ili jedinjenju 69, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

U jednom otelotvorenju, jedinjenje je jedinjenje 17a. U jednom otelotvorenju,

2

jedinjenje je jedinjenje 17b. U jednom otelotvorenju, jedinjenje je jedinjenje 83b. U jednom otelotvorenju, jedinjenje je jedinjenje 83d. U jednom otelotvorenju, jedinjenje je jedinjenje 69.

Jedinjenja iz pronalaska (npr. jedinjenja koje ima formulu (IVa), (IVb), (IVd) ili (IVg)) ili njihove farmaceutski prihvatljive soli mogu sadržati jedan ili više asimetričnih centara i stoga mogu dovesti do enantiomera, dijastereomera i drugih stereoizomernih oblika koji su definisani, u smislu apsolutne stereohemije, kao (R)- ili (S)- ili kao (D)- ili (L)- za aminokiseline. Otelotvorenja tako obuhvataju sve takve moguće izomere, kao i njihove racemske i optički čiste oblike. Optički aktivni (+) i (-), (R)- i (S)-, ili (D)- i (L)- izomeri mogu biti pripremljeni korišćenjem hiralnih sintona ili hiralnih reagenasa, ili razloženi korišćenjem konvencionalnih tehnika, na primer, hromatografije i frakcione kristalizacije. Konvencionalne tehnike za pripremu/izolaciju pojedinačnih enantiomera uključuju hiralnu sintezu iz odgovarajućeg optički čistog prekursora ili razlaganje racemata (ili racemata soli ili derivata) korišćenjem, na primer, hiralne tečne hromatografije pod visokim pritiskom (HPLC). Kada ovde opisana jedinjenja sadrže olefinske dvostruke veze ili druge centre geometrijske asimetrije, i ako nije drugačije navedeno, predviđeno je da jedinjenja uključuju E kao i Z geometrijske izomere. Takođe je predviđeno da budu obuhvaćeni i svi tautomerni oblici.

Otelotvorenja predmetnog pronalaska uključuju sve vrste rotamera i konformaciono ograničena stanja jedinjenja iz pronalaska. Uključeni su i atropizomeri, koji su stereoizomeri koji nastaju zbog otežane rotacije oko jedne veze, gde razlike u energiji usled sternog naprezanja ili drugih faktora stvaraju barijeru rotaciji koja je dovoljno visoka da omogući izolaciju pojedinačnih konformera. Na primer, određena jedinjenja iz pronalaska mogu postojati kao smeše atropizomera ili prečišćena ili obogaćena za prisustvo jednog atropizomera.

SINTEZA INHIBITORA RAS PROTEINA

Jedinjenja iz predmetnog otkrića mogu da se naprave različitim postupcima prikazanim u ilustrativnim šemama sintetičkih reakcija prikazanim i opisanim u nastavku. Polazne supstance i reagensi koji se koriste u pripremi ovih jedinjenja uglavnom su dostupni kod komercijalnih dobavljača, kao što je Aldrich Chemical Co., ili se pripremaju prema postupcima poznatim stručnjacima utvrđenim u referentnoj literaturi, kao što su: Fieser and Fieser’s Reagents for Organic Synthesis; Wiley & Sons: New York, sveska 1-21; R. C. LaRock, Comprehensive Organic Transformations, 2. izdanje Wiley-VCH, New York 1999; Comprehensive Organic Synthesis, B. Trost i I. Fleming (Eds.) sveska 1-9 Pergamon, Oxford, 1991; Comprehensive Heterocyclic Chemistry, A. R. Katritzky i C. W. Rees (Eds.) Pergamon, Oxford 1984, sveska 1-9; Comprehensive Heterocyclic Chemistry II, A. R. Katritzky i C. W.

Rees (Eds) Pergamon, Oxford 1996, sveska 1-11; i Organic Reactions, Wiley & Sons: New York, 1991, sveska 1-40. Sledeće šeme sintetičkih reakcija su samo ilustracija nekih postupaka kojima se mogu sintetisati jedinjenja iz predmetnog pronalaska, i mogu se napraviti i biti predložene stručnjacima različite modifikacije ovih sintetskih reakcionih šema, pozivajući se na sadržaj objavljen ovde.

U ilustrativne svrhe, reakcione šeme u nastavku pružaju puteve za sintezu jedinjenja iz pronalaska, kao i ključnih intermedijera. Za detaljniji opis pojedinačnih koraka reakcije, videti odeljak Primeri u daljem tekstu. Stručnjaci će razumeti da se mogu koristiti drugi postupci sinteze. Iako se u šemama opisuju i u daljem tekstu razmatraju specifične polazne supstance i reagensi, druge polazne supstance i reagensi se mogu zameniti, kako bi se obezbedili razni derivati ili reakcioni uslovi. Pored toga, mnoga jedinjenja koja su pripremljena postupcima opisanim u daljem tekstu mogu se dalje modifikovati u svetlu ovog pronalaska, koristeći konvencionalnu hemiju dobro poznatu stručnjacima iz ove oblasti.

Polazne supstance i intermedijeri sintetskih reakcionih šema mogu se izolovati i prečistiti po želji koristeći konvencionalne tehnike, uključujući, bez ograničenja, filtraciju, destilaciju, kristalizaciju i hromatografiju. Takve supstance se mogu okarakterisati konvencionalnim sredstvima, uključujući fizičke konstante i spektralne podatke.

Ukoliko nije drugačije naznačeno, ovde opisane reakcije su poželjno sprovedene u inertnoj atmosferi pod atmosferskim pritiskom na reakcionoj temperaturi od oko -78° C do oko 150° C, poželjnije od oko 0° C do oko 125° C i najpoželjnije i pogodno na sobnoj (ili ambijentalnoj) temperaturi, ili oko 20° C.

Neka jedinjenja u sledećim šemama prikazana su sa generalizovanim supstituentima; međutim, stručnjaci će odmah shvatiti da priroda supstituenata može da varira kako bi se obezbedila različita jedinjenja razmatrana u ovom pronalasku. Štaviše, uslovi reakcije su dati kao primer i alternativni uslovi su dobro poznati. Reakcione sekvence u sledećim primerima ne predstavljaju ograničenje obima pronalaska kako je navedeno u patentnim zahtevima.

Stručnjaci će prepoznati da se opisane hemijske reakcije mogu lako prilagoditi za pripremu drugih jedinjenja iz predmetnog pronalaska. Na primer, sinteza neilustrovanih jedinjenja shodno pronalasku može se uspešno izvršiti modifikacijama koje su jasne stručnjacima iz ove oblasti, na primer, odgovarajućom zaštitom interferentnih grupa, korišćenjem drugih pogodnih reagensa poznatih u ovoj oblasti osim onih koji su navedeni, ili rutinskim modifikacijama uslova reakcije. Alternativno, druge reakcije koje su ovde otkrivene ili poznate u ovoj oblasti biće priznate kao primenljive za pripremu drugih jedinjenja iz pronalaska.

2

POSTUPCI LEČENJA I UPOTREBE INHIBITORA RAS PROTEINA Sva upućivanja na postupke lečenja u narednim paragrafima ovog opisa treba tumačiti kao reference na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove iz predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenje ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu).

Jedinjenja iz predmetnog otkrića su korisna kao inhibitori Ras proteina. U jednom aspektu, jedinjenja iz predmetnog otkrića su korisna kao inhibitori K-Ras proteina. U drugom aspektu, jedinjenja iz predmetnog otkrića su korisna kao inhibitori N-Ras proteina. U drugom aspektu, jedinjenja iz predmetnog otkrića su korisna kao inhibitori H-Ras proteina. Shodno tome, u jednom otelotvorenju obezbeđeno je jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u postupku za dovođenje u kontakt ćelije, kao što je ex vivo ćelija, sa jedinjenjem iz predmetnog pronalaska, ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, za inhibiciju aktivnosti Ras proteina (npr. aktivnosti K-Ras, H-Ras i/ili N-Ras proteina) u ćeliji. Podrazumeva se da terapeutski postupci opisani u ovom dokumentu mogu dalje da uključuju, u određenim otelotvorenjima, određivanje prisustva ili odsustva mutacije G12 Ras proteina pre primene jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane u ovom dokumentu.

Dalje je obezbeđeno jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u postupku sprečavanja, lečenja ili smanjenja težine bolesti ili stanja koje reaguje na inhibiciju Ras proteina (npr. K-Ras, H-Ras i/ili N-Ras) kod pacijenta, koji se sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom aspektu, predmetno otkriće je usmereno na jedinjenje iz pronalaska ili na njegovu farmaceutski prihvatljivu so za upotrebu u postupku sprečavanja, lečenja ili smanjenja težine bolesti ili stanja koje reaguje na inhibiciju K-Ras proteina kod pacijenta, koji se sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom aspektu, predmetno otkriće je usmereno na jedinjenje iz pronalaska ili na njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku sprečavanja, lečenja ili smanjenja težine bolesti ili stanja koje reaguje na inhibiciju H-Ras proteina kod pacijenta, koji se sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom aspektu, predmetno otkriće je usmereno na jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku sprečavanja, lečenja ili smanjenja težine bolesti ili stanja koje reaguje na inhibiciju N-Ras proteina kod pacijenta, koji se sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili

2

njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Takođe je obezbeđeno jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja se sastoji od jedinjenja iz pronalaska, za upotrebu u postupku za lečenje kancera kod pacijenta, pri čemu se postupak sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Takođe je obezbeđeno jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u postupku inhibicije Ras proteina (npr. K-Ras, H-Ras i/ili N-Ras) kod pacijenta kome je terapija potrebna, pri čemu se postupak sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom aspektu, predmetno otkriće je usmereno na jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku inhibicije K-Ras proteina kod pacijenta kome je terapija potrebna, pri čemu se postupak sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom aspektu, predmetno otkriće je usmereno na jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku inhibicije H-Ras proteina kod pacijenta kome je terapija potrebna, pri čemu se postupak sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

U jednom aspektu, predmetno otkriće je usmereno na jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku inhibicije N-Ras proteina kod pacijenta kome je terapija potrebna, pri čemu se postupak sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

Takođe je obezbeđena farmaceutska kompozicija koja se sastoji od terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i farmaceutski prihvatljive pomoćne supstance. Jedinjenja iz pronalaska, uključujući farmaceutske kompozicije koje se sastoje od takvih jedinjenja, mogu se koristiti u ovde opisanim postupcima.

Otelotvorenja predmetnog otkrića obezbeđuju jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku inhibicije ćelijske signalizacije posredovane Ras proteinom koji se sastoji od dovođenja ćelije u kontakt sa terapeutski

2

efikasnom količinom jednog ili više jedinjenja otkrivenih ovde ili njihove farmaceutski prihvatljive soli. Inhibicija transdukcije signala posredovane Ras proteinom može se proceniti i demonstrirati na širok spektar načina poznatih u ovoj oblasti. Neograničavajući primeri uključuju uočljivo (a) smanjenje aktivnosti GTPaze Ras proteina; (b) smanjenje afiniteta vezivanja GTP-a ili povećanje afiniteta vezivanja GDP-a; (c) povećanje K off GTP-a ili smanjenje K off GDP-a; (d) smanjenje nivoa molekula signalne transdukcije nishodno u Ras putu, kao što je smanjenje nivoa pMEK-a; i/ili (e) smanjenje vezivanja Ras kompleksa za nishodne signalne molekule, uključujući, ali ne ograničavajući se na Raf. Kompleti i komercijalno dostupni testovi mogu da se koriste za određivanje jednog ili više od gore navedenog.

Otelotvorenja takođe obezbeđuju jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima korišćenja jedinjenja ili farmaceutskih kompozicija iz predmetnog pronalaska za lečenje stanja bolesti, uključujući, ali ne ograničavajući se na stanja povezana sa mutacijom G12C K-Ras, mutacijom G12C H-Ras i/ili mutacijom G12C N-Ras proteina (npr. kancer).

U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku lečenja poremećaja kod ispitanika kome je to potrebno, pri čemu pomenuti postupak obuhvata utvrđivanje da li ispitanik ima G12C mutaciju K-Ras, H-Ras ili N-Ras proteina i, ako je utvrđeno da ispitanik ima G12C mutaciju K-Ras, H-Ras ili N-Ras proteina, primenu na ispitaniku terapeutski efikasne količine najmanje jednog jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

G12C mutacije K-Ras, H-Ras ili N-Ras proteina su takođe otkrivene kod hematoloških maligniteta (npr. kancera koji zahvataju krv, koštanu srž i/ili limfne čvorove). Shodno tome, određena otelotvorenja su usmerena na primenu otkrivenog jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (npr. u obliku farmaceutske kompozicije) na pacijenta kome je potrebno lečenje hematološke maligne bolesti. Takve maligne bolesti uključuju, ali nisu ograničene na leukemije i limfome. Na primer, predmetno otkrivena jedinjenja mogu da se koriste za lečenje bolesti kao što su akutna limfoblastna leukemija (ALL), akutna mijelogena leukemija (AML), hronična limfocitna leukemija (CLL), mali limfocitni limfom (SLL), hronična mijelogena leukemija (CML), akutna monocitna leukemija (AMoL) i/ili druge leukemije. U drugim otelotvorenjima, jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njihova farmaceutski prihvatljiva so korisna su za lečenje limfoma kao što su svi podtipovi Hodžkinovog limfoma ili non-Hodžkinovog limfoma.

Utvrđivanje da li tumor ili kancer obuhvata mutaciju G12C K-Ras, H-Ras ili N-Ras

2

proteina može se obaviti procenom nukleotidne sekvence koja kodira K-Ras, H-Ras ili N-Ras protein, procenom aminokiselinske sekvence K-Ras, H-Ras ili N-Ras proteina, ili procenom karakteristika pretpostavljenog K-Ras, H-Ras ili N-Ras mutantnog proteina. Sekvence ljudskog K-Ras proteina divljeg tipa (npr. pristupni br. NP203524), H-Ras proteina (npr. pristupni br. NP001123914) i N-Ras proteina (npr. pristupni br. NP002515) poznati su u ovoj oblasti.

Postupci za otkrivanje mutacije u nukleotidnoj sekvenci K-Ras, H-Ras ili N-Ras proteina poznati su stručnjacima. Ovi postupci uključuju, ali nisu ograničeni na, testove lančane reakcije polimeraze-polimorfizma dužine restrikcionih fragmenata (PCR-RFLP), testove lančane reakcije polimeraze-polimorfizma konformacije pojedinačnih lanaca (PCR-SSCP), PCR testove u realnom vremenu, PCR sekvenciranje, testove PCR amplifikacije specifične za mutantni alel (MASA), direktno sekvenciranje, reakcije produžetka prajmera, elektroforezu, testove ligacije oligonukleotida, testove hibridizacije, TaqMan testove, SNP testove genotipizacije, testove topljenja velike rezolucije i mikročip analize. U nekim otelotvorenjima, uzorci se procenjuju na G12C K-Ras, H-Ras ili N-Ras mutacije putem PCR u realnom vremenu. Kod PCR u realnom vremenu koriste se fluorescentne sonde specifične za G12C mutaciju K-Ras, H-Ras ili N-Ras. Kada je prisutna mutacija, sonda se vezuje i detektuje se fluorescencija. U nekim otelotvorenjima, G12C mutacija K-Ras, H-Ras ili N-Ras proteina se identifikuje metodom direktnog sekvenciranja specifičnih regiona (npr. egzon 2 i/ili egzon 3) u genu K-Ras, H-Ras ili N-Ras. Ova tehnika će identifikovati sve moguće mutacije u sekvenciranom regionu.

Postupci za otkrivanje mutacije u proteinu K-Ras, H-Ras ili N-Ras poznate su stručnjacima. Ovi postupci uključuju, ali nisu ograničeni na detekciju K-Ras, H-Ras ili N-Ras mutanta korišćenjem agensa za vezivanje (npr. antitela) specifičnog za mutirani protein, proteinsku elektroforezu i vestern blot i direktno sekvenciranje peptida. U postupcima za određivanje da li tumor ili kancer obuhvataju G12C mutaciju K-Ras, H-Ras ili N-Ras mogu se koristiti različiti uzorci. U nekim otelotvorenjima, uzorak se uzima od ispitanika koji ima tumor ili kancer. U nekim otelotvorenjima, uzorak je svež uzorak tumora/kancera. U nekim otelotvorenjima, uzorak je smrznuti uzorak tumora/kancera. U nekim otelotvorenjima, uzorak je uzorak fiksiran u formalinu i ugrađen u parafin. U nekim otelotvorenjima, uzorak je obrađen u ćelijski lizat. U nekim otelotvorenjima, uzorak je obrađen u DNK ili RNK.

Otelotvorenja se takođe odnose na jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupku lečenja hiperproliferativnog poremećaja kod sisara koji se sastoji od primene na navedenom sisaru terapeutski efikasne količine jedinjenja iz

2

predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. U nekim otelotvorenjima, pomenuti postupak se odnosi na lečenje kancera kao što su akutna mijeloidna leukemija, kancer kod adolescenata, adrenokortikalni karcinom kod dece, kanceri povezani sa AIDS-om (npr. limfom i Kapošijev sarkom), kancer anusa, kancer slepog creva, astrocitomi, atipični teratoidni rabdoidni tumor, karcinom bazalnih ćelija, kancer žučnih kanala, kancer bešike, kancer kostiju, gliom moždanog stabla, tumor na mozgu, kancer dojke, bronhijalni tumori, Burkitov limfom, karcinoidni tumor, embrionalni tumori, tumor germinativnih ćelija, primarni limfom, kancer grlića materice, kanceri kod dece, hordom, srčani tumori, hronična limfocitna leukemija (CLL), hronična mijeloidna leukemija (CML), hronična mijeloproliferativna oboljenja, kancer debelog creva, kolorektalni kancer, kraniofaringiom, kožni T-ćelijski limfom, ekstrahepatični duktalni karcinom in situ (DCIS), embrionalni tumori, kancer CNS, endometrijalni kancer, ependimom, kancer jednjaka, estezioneuroblastom, Juingov sarkom, ekstrakranijalni tumor germinativnih ćelija, ekstragonadni tumor germinativnih ćelija, kancer oka, fibrozni histiocitom kosti, kancer žučne kese, kancer želuca, gastrointestinalni karcinoidni tumor, gastrointestinalni stromalni tumori (GIST), tumor germinativnih ćelija, gestacioni trofoblastni tumor, leukemija vlasastih ćelija, kancer glave i vrata, kancer srca, kancer jetre, Hodžkinov limfom, hipofaringealni kancer, intraokularni melanom, tumori ćelijskih ostrvaca, neuroendokrini tumori pankreasa, kancer bubrega, kancer grkljana, kancer usana i usne duplje, lobularni karcinom in situ (LCIS), kancer pluća, limfom, metastatski skvamozni kancer vrata sa okultnim primarnim tumorom, karcinom srednje linije, kancer usta, sindromi višestrukih endokrinih neoplazmi, multipli mijelom/neoplazma plazma ćelija, mikozis fungoidi, mijelodisplastični sindromi, mijelodisplastične/mijeloproliferativne neoplazme, multipli mijelom, Merkelov karcinom, maligni mezoteliom, maligni fibrozni histiocitom kostiju i osteosarkom, kancer nosne šupljine i paranazalnih sinusa, nazofaringealni kancer, neuroblastom, non-Hodžkinov limfom, nemikrocelularni kancer pluća (NSCLC), kancer usne duplje, orofaringealni kancer, kancer jajnika, kancer pankreasa, papilomatoza, paragangliom, kancer paratireoidne žlezde, kancer penisa, kancer ždrela, pleuropulmonalni blastom, primarni limfom centralnog nervnog sistema (CNS), kancer prostate, kancer rektuma, kancer prelaznih ćelija, retinoblastom, rabdomiosarkom, kancer pljuvačnih žlezda, kancer kože, mikrocelularni kancer pluća, kancer tankog creva, sarkom mekog tkiva, T-ćelijski limfom, kancer testisa, kancer grla, timom i timični karcinom, karcinom štitne žlezde, kancer prelaznih ćelija bubrežne karlice i uretera, trofoblastični tumor, neuobičajeni kanceri kod dece, kancer uretre, uterini sarkom, vaginalni kancer, kancer vulve ili virusom izazvan kancer. U nekim otelotvorenjima, pomenuti postupak se odnosi na lečenje nekanceroznog hiperproliferativnog poremećaja kao što je benigna hiperplazija kože (npr. psorijaza), restenoza ili benigna hiperplazija prostate (BPH).

U određenimkonkretnim otelotvorenjima, pronalazak se odnosi na jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima za lečenje kancera pluća, pri čemu ti postupci obuhvataju primenu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (ili farmaceutske kompozicije koja se sastoji od prethodnog) na ispitaniku kojem je to potrebno. U određenim otelotvorenjima, kancer pluća je nemikrocelularni karcinom pluća (NSCLC), na primer adenokarcinom, karcinom skvamoznih ćelija pluća ili karcinom krupnih ćelija pluća. U drugim otelotvorenjima, kancer pluća je mikrocelularni karcinom pluća. Drugi kanceri pluća koji mogu da se leče otkrivenim jedinjenjima uključuju, ali nisu ograničeni na, tumore žlezda, karcinoidne tumore i nediferencirane karcinome.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima inhibicije G12C aktivnosti K-Ras, H-Ras ili N-Ras u ćeliji putem dovođenja navedene ćelije u kontakt sa određenom količinom jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koja je dovoljna da inhibira G12C aktivnost K-Ras, H-Ras ili N-Ras u navedenoj ćeliji. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima inhibicije G12C aktivnosti K-Ras, H-Ras ili N-Ras u tkivu putem dovođenja navedenog tkiva u kontakt sa određenom količinom jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koja je dovoljna da inhibira G12C aktivnost K-Ras, H-Ras ili N-Ras u navedenom tkivu. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima inhibicije G12C aktivnosti K-Ras, H-Ras ili N-Ras u organizmu putem dovođenja navedenog organizma u kontakt sa određenom količinom jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koja je dovoljna da inhibira G12C aktivnost K-Ras, H-Ras ili N-Ras u navedenom organizmu. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima inhibicije G12C aktivnosti K-Ras, H-Ras ili N-Ras kod životinje putem dovođenja navedene životinje u kontakt sa određenom količinom jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koja je dovoljna da inhibira G12C aktivnost K-Ras, H-Ras ili N-Ras kod navedene životinje. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima inhibicije G12C aktivnosti K-Ras, H-Ras ili N-Ras kod sisara kputem dovođenja navedenog sisara u kontakt sa određenom količinom jedinjenja iz predmetnog

1

pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koja je dovoljna da inhibira G12C aktivnost K-Ras, H-Ras ili N-Ras kod navedenog sisara. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima inhibicije G12C aktivnosti K-Ras, H-Ras ili N-Ras kod čoveka putem dovođenja navedenog čoveka u kontakt sa određenom količinom jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli koja je dovoljna da inhibira G12C aktivnost K-Ras, H-Ras ili N-Ras kod navedenog čoveka. U drugim otelotvorenjima, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinjenje pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u metodama lečenja bolesti posredovane aktivnošću K-Ras, H-Ras ili N-Ras G12C kod subjekta kojem je potreban takav tretman.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima lečenja kancera koji se sastoje od primene terapeutski efikasne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska na pojedincu kome je to potrebno. U nekim otelotvorenjima, pojedinac je čovek. U nekim otelotvorenjima, primena se vrši oralnim putem. U nekim otelotvorenjima, primena se vrši ubrizgavanjem. U nekim otelotvorenjima, kancer je posredovan K-Ras G12C, H-Ras G12C ili N-Ras G12C mutacijom. U nekim otelotvorenjima, kancer je posredovan K-Ras G12C mutacijom. U nekim otelotvorenjima, kancer je hematološki kancer, kancer pankreasa, polipoza povezana sa MYH, kolorektalni kancer ili kancer pluća. U jednom otelotvorenju, kancer je kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer slepog creva ili kancer pankreasa. U jednom otelotvorenju, kancer je kolorektalni kancer. U jednom otelotvorenju, kancer je kancer pankreasa. U nekim otelotvorenjima, kancer je adenokarcinom pluća.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak pruža in vitro metode za regulisanje aktivnosti mutiranog proteina izabranog iz grupe koja se sastoji od K-Ras G12C, H-Ras G12C i N-Ras G12C, koje se sastoje od reakcije mutiranog proteina sa jedinjenjem iz ovog pronalaska ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak pruža in vitro metode za inhibiciju proliferacije ćelijske populacije, koje se sastoje od dovođenja u kontakt ćelijske populacije sa jedinjenjem iz ovog pronalaska ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju. U nekim otelotvorenjima, inhibicija proliferacije se meri kao smanjenje ćelijske vijabilnosti ćelijske populacije.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima za lečenje poremećaja posredovanog mutacijom izabranom iz grupe koja se sastoji od K-Ras G12C, H-Ras G12C i N-Ras G12C kod

2

pojedinca kome je to potrebno, koje se sastoje od: utvrđivanja da li pojedinac ima mutaciju; i ako se odredi da pojedinac ima mutaciju, davanja pojedincu terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutske kompozicije iz ovog pronalaska. U nekim otelotvorenjima, poremećaj je posredovan K-Ras G12C mutacijom. U nekim otelotvorenjima, poremećaj je karcinom. U nekim otelotvorenjima, kancer je hematološki kancer, kancer pankreasa, polipoza povezana sa MYH, kolorektalni kancer ili kancer pluća. U jednom otelotvorenju, kancer je kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer slepog creva ili kancer pankreasa. U jednom otelotvorenju, kancer je kolorektalni kancer. U jednom otelotvorenju, kancer je kancer pankreasa. U nekim otelotvorenjima, kancer je adenokarcinom pluća.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje in vitro metode za pripremu označenog mutiranog proteina K-Ras G12C, H-Ras G12C ili N-Ras G12C, koje se sastoje od reakcije mutiranog proteina K-Ras G12C, H-Ras G12C ili N-Ras G12C sa jedinjenjem iz ovog pronalaska ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, da bi se dobio označeni mutirani protein K-Ras G12C, H-Ras G12C ili N-Ras G12C.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, za upotrebu u postupcima za inhibiciju tumorskih metastaza koje se sastoje od primene terapeutski efikasne količine jedinjenja iz ovog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutske kompozicije iz ovog pronalaska na ispitanika kojem je to potrebno.

Ovde su otkrivene upotrebe jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji leka za lečenje kancera. Lek može biti formulisan za oralnu primenu. Lek može biti formulisan za injekciju. Karcinom može biti posredovan mutacijom K-Ras G12C, H-Ras G12C ili N-Ras G12C. Kancer može biti posredovan mutacijom K-Ras G12C. Kancer može biti posredovan mutacijom H-Ras G12C. Kancer može biti posredovan mutacijom N-Ras G12C. Kancer može biti hematološki kancer, kancer pankreasa, polipoza povezana sa MYH, kolorektalni kancer ili kancer pluća. Kancer može biti kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer slepog creva ili kancer pankreasa. Kancer može biti kolorektalni kancer. Kancer može biti kancer pankreasa. Kancer može biti adenokarcinom pluća. Ovde su takođe otkrivene upotrebe jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli u proizvodnji leka za inhibiciju tumorskih metastaza.

U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska, za upotrebu u postupku lečenja ljudskog ili životinjskog tela terapijom. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska, za upotrebu u postupku lečenja kancera. U nekim otelotvorenjima, kancer je posredovan K-Ras G12C, H-Ras G12C ili N-Ras G12C mutacijom. U nekim otelotvorenjima, kancer je posredovan K-Ras G12C mutacijom. U nekim otelotvorenjima, kancer je posredovan mutacijom H-Ras G12C. U nekim otelotvorenjima, kancer je posredovan mutacijom N-Ras G12C. U nekim otelotvorenjima, kancer je hematološki kancer, kancer pankreasa, polipoza povezana sa MYH, kolorektalni kancer ili kancer pluća. U jednom otelotvorenju, kancer je kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer slepog creva ili kancer pankreasa. U jednom otelotvorenju, kancer je kolorektalni kancer. U jednom otelotvorenju, kancer je kancer pankreasa. U nekim otelotvorenjima, kancer je adenokarcinom pluća. U nekim otelotvorenjima, pronalazak obezbeđuje jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili farmaceutsku kompoziciju iz predmetnog pronalaska, za upotrebu u postupku inhibicije tumorskih metastaza.

Ovde je dalje obezbeđeno jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u postupcima lečenja kancera pluća kod pacijenta koji ima kancer pluća, koji se sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli (ili farmaceutske kompozicije koja se sastoji od prethodnog) opisane ovde. U jednom otelotvorenju, kancer pluća je nemikrocelularni karcinom pluća (NSCLC). NSCLC može biti, na primer, adenokarcinom, karcinom skvamoznih ćelija pluća ili krupnoćelijski karcinom pluća. U drugom otelotvorenju, kancer pluća je mikrocelularni karcinom pluća. U još jednom otelotvorenju, kancer pluća su tumori žlezda, karcinoidni tumori ili nediferencirani karcinomi. Kancer pluća može biti kancer I ili II stadijuma. U jednom otelotvorenju, kancer pluća je kancer pluća III ili IV stadijuma. Ovde obezbeđeni postupci uključuju primenu jedinjenja u vidu IL terapije. U jednom otelotvorenju, kancer pluća obuhvata mutaciju G12C KRas.

Ovde je dalje obezbeđeno jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u postupcima lečenja kancera pankreasa kod pacijenta koji ima kancer pankreasa, pri čemu se postupak sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde. U jednom otelotvorenju, pacijent je prethodno lečen zračenjem i sa jednim ili više hemoterapeutskih agensa. U jednom otelotvorenju, kancer pankreasa je u 0, I ili II stadijumu. U drugom otelotvorenju, kancer pankreasa je u III ili IV stadijumu. U jednom otelotvorenju, kancer pankreasa obuhvata mutaciju G12C KRas.

4

Ovde je dalje obezbeđeno jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, za upotrebu u postupcima lečenja kancera debelog creva kod pacijenta koji ima kancer debelog creva, pri čemu se postupak sastoji od primene na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde. U jednom otelotvorenju, kancer debelog creva je u I ili II stadijumu. U drugom otelotvorenju, kancer debelog creva je u III ili IV stadijumu. U jednom otelotvorenju, kancer debelog creva obuhvata mutaciju G12C KRas.

Ovde je dalje obezbeđeno jedinjenje iz pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija koja se sastoji od jedinjenja iz pronalaska, za upotrebu u postupcima lečenja kancera posredovanog agnostičkim G12C mutantom KRas. U jednom otelotvorenju takvih postupaka, postupak obuhvata:

a. utvrđivanje odsustva ili prisustva G12C mutacije KRas u uzorku uzetom od pacijenta za koga se sumnja da ima kancer; i

b. primenu na pacijentu terapeutski efikasne količine jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane u ovom dokumentu.

U jednom otelotvorenju, pacijentu je dijagnostikovan kancer opisan u ovom dokumentu. U drugom otelotvorenju, uzorak je uzorak tumora uzet od ispitanika. U jednom takvom otelotvorenju, uzorak je uzet pre primene bilo koje terapije. U drugom takvom otelotvorenju, uzorak je uzet pre primene jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane u ovom dokumentu i nakon primene drugog hemoterapeutskog agensa. U drugom otelotvorenju, jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so opisana u ovom dokumentu se primenjuje kako je ovde predviđeno (npr. oralno).

DOZIRANJE I PRIMENA

Predmetni pronalazak obezbeđuje farmaceutske kompozicije ili lekove koji sadrže terapeutski delotvornu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i najmanje jednu terapijski inertnu pomoćnu supstancu, kao i postupke korišćenja jedinjenja iz pronalaska za pripremu takvih kompozicija i lekova.

Jedno otelotvorenje, prema tome, uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapeutski delotvornu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Dalje otelotvorenje uključuje farmaceutsku kompoziciju koja sadrži terapeutski delotvornu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, zajedno sa farmaceutski prihvatljivim ekscipijensom.

U jednom primeru, terapeutski delotvorna količina jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa željenim stepenom čistoće može se formulisati mešanjem sa fiziološki prihvatljivim ekscipijensima, tj. ekscipijensima koji nisu toksični za primaoce u dozama i koncentracijama primenjenim u obliku doziranja na sobnoj temperaturi i pri odgovarajućoj pH vrednosti. pH vrednost formulacije zavisi prvenstveno od konkretne upotrebe i koncentracije jedinjenja, ali se obično nalazi u opsegu od oko 3 do oko 8. U jednom primeru, jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so formulisani su u acetatnom puferu, na pH 5. U drugom otelotvorenju, jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so su sterilni. Jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so mogu da se čuvaju, na primer, kao čvrsta ili amorfna kompozicija, kao liofilizovana formulacija ili kao vodeni rastvor.

Sastavi se formulišu, doziraju i primenjuju na način koji je u skladu sa dobrom medicinskom praksom. U ovom kontekstu se mogu razmatrati faktori kao što su konkretni poremećaj koji se leči, ozbiljnost poremećaja, konkretni pacijent koji se leči, kliničko stanje pojedinačnog pacijenta, uzrok poremećaja, mesto isporuke agensa, postupak primene, raspored primene, i drugi faktori poznati lekarima. „Terapeutski delotvorna količina“ jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, koja će se primenjivati, biće regulisana takvim razmatranjima i predstavlja minimalnu količinu koja je potrebna za inhibiciju aktivnosti K-Ras, H-Ras i/ili N-Ras. Takva količina obično može biti manja od količine koja je toksična za normalne ćelije ili pacijenta u celini.

Farmaceutska kompozicija (ili formulacija) za primenu može biti spakovana na razne načine, u zavisnosti od postupka primene leka. Generalno, artikal za distribuciju uključuje pakovanje u kom se nalazi farmaceutska formulacija u odgovarajućem obliku. Pogodna ambalaža je dobro poznata stručnjacima, i uključuje materijale kao što su boce (plastične i staklene), kesice, ampule, plastične kese i metalni cilindri. Pakovanje takođe može da sadrži neprobojnu zaštitu da se spreči neželjeni pristup sadržaju pakovanja. Pored toga, pakovanje može na sebi da ima etiketu koja opisuje sadržaj pakovanja. Etiketa takođe može da sadrži odgovarajuća upozorenja.

Mogu se pripremiti preparati sa produženim oslobađanjem. Prikladni primeri preparata sa produženim oslobađanjem uključuju polupropusne matrice čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže terapeutski delotvornu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, gde su te matrice u formi oblikovanih proizvoda, npr. filmova ili mikrokapsula. Primeri matrica sa produženim oslobađanjem uključuju poliestre, hidrogelove (na primer, poli(2-hidroksietil-metakrilat) ili poli(vinilalkohol)), polilaktide, kopolimere 1-glutaminske kiseline i gama-etil-1-glutamata, nerazgradivi etilen-vinil acetat, razgradive kopolimere mlečne kiseline i glikolne kiseline, kao što su LUPRON DEPOT™ (injektabilne mikrosfere sastavljene od kopolimera mlečne kiseline, glikolne kiseline i leuprolid acetata) i poli-D-(-)-3-hidroksibuternu kiselinu.

Doza za lečenje ljudskih pacijenata može biti u rasponu od oko 0,01 mg do oko 1000 mg jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Na primer, kod lečenja odraslih ljudi, doze od 0,01 do 1000 mg, od 0,5 do 100 mg, od 1 do 50 mg dnevno i od 5 do 40 mg dnevno su primeri doza koje se koriste u nekim otelotvorenjima. Reprezentativna doza je 10 do 30 mg dnevno. Tačna doza će zavisiti od načina primene, oblika u kome se jedinjenje primenjuje, ispitanika koji će se lečiti, telesne težine ispitanika koji će se lečiti i nahođenja i iskustva lekara. Doza se može primenjivati jednom dnevno (QD), dva puta dnevno (BID) ili češće, u zavisnosti od farmakokinetičkih i farmakodinamičkih svojstvava, uključujući apsorpciju, distribuciju, metabolizam i izlučivanje određenog jedinjenja. Osim toga, faktori toksičnosti mogu uticati na režim doziranja i primene. Ako se primenjuje oralno, pilula, kapsula ili tableta mogu se uzimati svakodnevno ili ređe tokom određenog vremenskog perioda. Režim se može ponavljati tokom više ciklusa terapije.

Terapeutski delotvorna količina jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može da se primeni na bilo koji pogodan način, uključujući oralnu, topikalnu (uključujući bukalnu i sublingvalnu), rektalnu, vaginalnu, transdermalnu, parenteralnu, supkutanu, intraperitonealnu, intrapulmonarnu, intradermalnu, intratekalnu, epiduralnu i intranazalnu, i, ako se želi lokalno lečenje, intralezionu primenu. Parenteralne infuzije uključuju intramuskularnu, intravensku, intraarterijsku, intraperitonealnu ili supkutanu primenu.

Terapeutski delotvorna količina jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli može da se primeni u bilo kom pogodnom obliku za primenu, npr. tablete, praškovi, kapsule, rastvori, disperzije, suspenzije, sirupi, sprejevi, supozitorije, gelovi, emulzije, flasteri, itd. Takve kompozicije mogu da sadrže komponente uobičajene u farmaceutskim preparatima, npr. razblaživače, nosače, pH modifikatore, zaslađivače, punioce, i druge aktivne agense.

Tipična formulacija se priprema mešanjem terapeutski delotvorne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i ekscipijensa. Pogodni ekscipijensi uključuju nosače (na primer, mikrokristalnu celulozu, laktozu, manitol), rastvarače (na primer, tečne polietilen glikole), emulgatore i dispergente ili kvašljivce (na primer, natrijum dodecil sulfat, polioksisorbitan oleat), vezivače (na primer, polivinilpirolidon), sintetičke i prirodne polimere (na primer, albumin), stabilizatore (na primer, antioksidanse, na primer askorbinsku kiselinu), boje (na primer, neorganske pigmente, na primer okside gvožđa) i sredstva za ispravljanje ukusa i/ili mirisa, i dobro su poznati stručnjacima u ovoj oblasti i detaljno su ih opisali, npr. Ansel, H. C., et al., Ansel’s Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2004; Gennaro, Alfonso R., et al. Remington: The Science and Practice of Pharmacy. Philadelphia: Lippincott, Williams & Wilkins, 2000; i Rowe, R. C., Handbook of Pharmaceutical Excipients, Chicago, Pharmaceutical Press, 2005. Formulacije takođe mogu da uključuju jedan ili više pufera, surfaktanata, lubrikanasa, suspendujućih agensa, konzervanasa, sredstava za zamućenje, glidansa, pomoćnih sredstava za obradu, zaslađivača, mirisa, aroma, razblaživača i drugih poznatih aditiva koji obezbeđuju elegantnu prezentaciju leka (tj. jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutske kompozicije) ili pomoć u proizvodnji farmaceutskog proizvoda (tj. leka).

U određenim otelotvorenjima, farmaceutski preparati za oralnu upotrebu se dobijaju mešanjem jednog ili više čvrstih ekscipijenasa sa jednim ili više ovde opisanih jedinjenja, opciono mlevenjem dobijene smeše i preradom smeše granula, nakon dodavanja odgovarajućih pomoćnih sredstava, po želji, za dobijanje tableta ili jezgara dražeja. Pogodni ekscipijensi su, posebno, punioci kao što su šećeri, uključujući laktozu, saharozu, manitol ili sorbitol; preparati celuloze kao što su na primer, kukuruzni skrob, pšenični skrob, pirinčani skrob, krompirov skrob, želatin, tragakant guma, metilceluloza, mikrokristalna celuloza, hidroksipropilmetil celuloza, natrijum karboksimetilceluloza; ili drugi kao što su: polivinilpirolidon (PVP ili povidon) ili kalcijum fosfat. U specifičnim otelotvorenjima, agensi za dezintegraciju se dodaju opciono. Agensi za dezintegraciju uključuju, samo kao primer, unakrsno vezani kroskarmeloza natrijum, polivinilpirolidon, agar ili alginsku kiselinu ili njihovu so, kao što je natrijum alginat.

U jednom otelotvorenju, oblici doziranja, kao što su jezgra dražeja i tablete, imaju jednu ili više odgovarajućih obloga. U specifičnim otelotvorenjima, koncentrovani rastvori šećera se koriste za oblaganje oblika doziranja. Rastvori šećera, opciono, sadrže dodatne komponente, kao što su, samo kao primer, arapska guma, talk, polivinil pirolidon, karbopol gel, polietilen glikol i/ili titanijum dioksid, rastvori laka i pogodni organski rastvarači ili smeše rastvarača. Boje i/ili pigmenti se takođe opciono dodaju oblogama u svrhu identifikacije. Pored toga, boje i/ili pigmenti se opciono koriste za karakterizaciju različitih kombinacija doza aktivnih jedinjenja.

U određenim otelotvorenjima, terapeutski delotvorne količine najmanje jednog od ovde opisanih jedinjenja formulisane su u druge oralne dozne oblike. Oralni dozni oblici uključuju tvrde kapsule od želatina, kao i meke, zapečaćene kapsule od želatina i plastifikatora, kao što su glicerol ili sorbitol. U specifičnim otelotvorenjima, tvrde želatinske kapsule sadrže aktivne sastojke pomešane sa jednim ili više punilaca. Punioci uključuju, samo kao primer, laktozu, vezivače kao što su skrobovi i/ili lubrikanse kao što su talk ili magnezijum stearat i, opciono, stabilizatore. U drugim otelotvorenjima, meke kapsule sadrže jedno ili više aktivnih jedinjenja koja su rastvorena ili suspendovana u odgovarajućoj tečnosti. Odgovarajuće tečnosti uključuju, samo kao primer, jedno ili više masnih ulja, tečni parafin ili tečni polietilen glikol. Pored toga, opciono se dodaju stabilizatori.

U drugim otelotvorenjima, terapeutski delotvorne količine najmanje jednog od ovde opisanih jedinjenja formulisane su za bukalnu ili sublingvalnu primenu. Formulacije pogodne za bukalnu ili sublingvalnu primenu uključuju, samo kao primer, tablete, pastile ili gelove. U drugim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja su formulisana za parenteralnu injekciju, uključujući formulacije pogodne za bolusnu injekciju ili kontinuiranu infuziju. U specifičnim otelotvorenjima, formulacije za injekciju su predstavljene u obliku jedinične doze (npr. u ampulama) ili u višedoznim pakovanjima. Konzervansi se, opciono, dodaju u formulacije za ubrizgavanje. U drugim otelotvorenjima, farmaceutske kompozicije su formulisane u obliku pogodnom za parenteralnu injekciju kao što su sterilne suspenzije, rastvori ili emulzije u uljanim ili vodenim nosačima. Formulacije za parenteralnu injekciju opciono sadrže agense za formulisanje, kao što su agensi za suspendovanje, stabilizaciju i/ili dispergovanje. U specifičnim otelotvorenjima, farmaceutske formulacije za parenteralnu primenu uključuju vodene rastvore aktivnih jedinjenja u obliku rastvorljivom u vodi. U dodatnim otelotvorenjima, suspenzije jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli pripremaju se kao odgovarajuće uljane suspenzije za ubrizgavanje. Pogodni lipofilni rastvarači ili vehikulumi za upotrebu u ovde opisanim farmaceutskim kompozicijama uključuju, samo kao primer, masna ulja kao što je susamovo ulje, ili sintetičke estre masnih kiselina, kao što su etil oleat ili trigliceridi, ili lipozome. U određenim specifičnim otelotvorenjima, vodene injekcione suspenzije sadrže supstance koje povećavaju viskoznost suspenzije, kao što su natrijum karboksimetil celuloza, sorbitol ili dekstran. Po potrebi, suspenzija sadrži i odgovarajuće stabilizatore ili agense koji povećavaju rastvorljivost jedinjenja i omogućavaju pripremu visoko koncentrovanih rastvora. Alternativno, u drugim otelotvorenjima, aktivni sastojak je u obliku praha za mešanje sa odgovarajućim nosačem, npr. sterilnom nepirogenom vodom, pre upotrebe.

U određenim otelotvorenjima, farmaceutske kompozicije su formulisane na bilo koji konvencionalan način koristeći jedan ili više fiziološki prihvatljivih ekscipijenasa i pomoćnih sredstava koja olakšavaju preradu aktivnih jedinjenja u preparate koji se mogu farmaceutski koristiti. Pravilna formulacija zavisi od izabranog načina primene. Sve farmaceutski prihvatljive tehnike i ekscipijensi se opciono koriste kao odgovarajuće. Farmaceutske kompozicije koje obuhvataju terapeutski delotvornu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli proizvode se na konvencionalan način, kao,na primer, konvencionalnim procesima mešanja, rastvaranja, granulisanja, pravljenja dražeja, sprašivanja, emulgovanja, kapsuliranja, hvatanja ili kompresije.

Farmaceutske kompozicije uključuju najmanje jedan farmaceutski prihvatljiv ekscipijens i terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde kao aktivni sastojak. Aktivni sastojak je u obliku slobodne kiseline ili slobodne baze, ili u obliku farmaceutski prihvatljive soli. Pored toga, ovde opisani postupci i farmaceutske kompozicije uključuju upotrebu N-oksida, kristalnih oblika (takođe poznatih kao polimorfi), kao i aktivnih metabolita ovih jedinjenja koja imaju istu vrstu aktivnosti. Svi tautomeri ovde opisanih jedinjenja uključeni su u opseg ovde predstavljenih jedinjenja. Pored toga, ovde opisana jedinjenja obuhvataju nesolvatisane kao i solvatisane oblike sa farmaceutski prihvatljivim rastvaračima kao što su voda i etanol. Smatra se da su ovde otkriveni i solvatisani oblici ovde predstavljenih jedinjenja. Pored toga, farmaceutske kompozicije opciono uključuju druge lekovite ili farmaceutske agense, ekscipijense, kao što su agensi za konzerviranje, stabilizaciju, kvašenje ili emulgovanje, promoteri rastvora, soli za regulaciju osmotskog pritiska, pufere i/ili druge terapeutski korisne supstance.

Postupci za pripremu kompozicija koje obuhvataju terapeutski delotvorne količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli opisane ovde, uključuju formulisanje jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli sa jednim ili više inertnih, farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa za formiranje čvrste, polučvrste ili tečne supstance. Čvrste kompozicije uključuju, bez ograničenja, praškove, tablete, disperzibilne granule, kapsule, skrobne kapsule i supozitorije. Tečne kompozicije uključuju rastvore u kojima se jedinjenje rastvara, emulzije koje se sastoje od jedinjenja ili rastvor koji sadrži lipozome, micele ili nanočestice koje se sastoje od jedinjenja kako je ovde otkriveno. Polučvrste kompozicije uključuju, ali nisu ograničene na gelove, suspenzije i kreme. Oblik farmaceutskih kompozicija koji je opisan ovde uključuje tečne rastvore ili suspenzije, čvrste oblike pogodne za rastvor ili suspenziju u tečnosti pre upotrebe, ili kao emulzije. Ove kompozicije takođe opciono sadrže manje količine netoksičnih, pomoćnih supstanci, kao što su agensi za kvašenje ili emulgovanje, pH puferujući agensi, i tako dalje.

U nekim otelotvorenjima, farmaceutska kompozicija koja obuhvata terapeutski efikasnu količinu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ilustrativno poprima oblik tečnosti u kojoj su agensi prisutni u rastvoru, u suspenziji, ili oba.

4

Obično, kada se kompozicija primenjuje kao rastvor ili suspenzija, prvi deo agensa je prisutan u rastvoru, a drugi deo agensa je prisutan u obliku čestica, u suspenziji u tečnoj matrici. U nekim otelotvorenjima, tečna kompozicija uključuje formulaciju gela. U drugim otelotvorenjima, tečna kompozicija je vodena.

U određenim otelotvorenjima, korisne vodene suspenzije sadrže jedan ili više polimera kao suspenzione agense. Korisni polimeri uključuju polimere rastvorljive u vodi, kao što su celulozni polimeri, npr. hidroksipropil metilceluloza, i polimere nerastvorljive u vodi, kao što su unakrsno povezani polimeri koji sadrže karboksil. Određene farmaceutske kompozicije koje su ovde opisane obuhvataju mukoadhezivni polimer, na primer izabran od karboksimetil celuloze, karbomera (polimera akrilne kiseline), poli(metilmetakrilata), poliakrilamida, polikarbofila, kopolimera akrilna kiselina/butil akrilat, natrijum alginata i dekstrana.

Korisne farmaceutske kompozicije takođe opciono uključuju agense za solubilizaciju koji povećavaju rastvorljivost jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Termin „agens za solubilizaciju“ generalno uključuje agense koji dovode do stvaranja micelarnog rastvora ili pravog rastvora agensa. Određeni prihvatljivi nejonski surfaktanti, na primer polisorbat 80, korisni su kao agensi za solubilizaciju, kao i oftalmički prihvatljivi glikoli, poliglikoli, npr. polietilen glikol 400, i glikol eteri.

Pored toga, korisne farmaceutske kompozicije opciono uključuju jedan ili više agensa za podešavanje pH ili puferujućih agensa, uključujući kiseline kao što su sirćetna, borna, limunska, mlečna, fosforna i hlorovodonična kiselina; baze kao što su natrijum hidroksid, natrijum fosfat, natrijum borat, natrijum citrat, natrijum acetat, natrijum laktat i trishidroksimetil aminometan; i pufere kao što su citrat/dekstroza, natrijum bikarbonat i amonijum hlorid. Takve kiseline, baze i puferi su uključeni u količini potrebnoj za održavanje pH kompozicije u prihvatljivom opsegu.

Pored toga, korisne kompozicije takođe opciono uključuju jednu ili više soli u količini potrebnoj da se osmolalnost kompozicije dovede u prihvatljiv opseg. Takve soli uključuju one koje imaju katjone natrijum, kalijum ili amonijum i anjone hlorid, citrat, askorbat, borat, fosfat, bikarbonat, sulfat, tiosulfat ili bisulfia; odgovarajuće soli uključuju natrijum hlorid, kalijum hlorid, natrijum tiosulfat, natrijum bisulfit i amonijum sulfat.

Druge korisne farmaceutske kompozicije opciono uključuju jedan ili više konzervanasa za inhibiciju mikrobne aktivnosti. Pogodni konzervansi uključuju supstance koje sadrže živu, kao što su merfen i tiomersal; stabilizovani hlor dioksid; i jedinjenja kvaternernog amonijaka kao što su benzalkonijum hlorid, cetil trimetil amonijum bromid i cetilpiridinijum hlorid.

Još neke korisne kompozicije uključuju jednu ili više površinski aktivnih supstanci za poboljšanje fizičke stabilnosti ili u druge svrhe. Pogodni nejonski surfaktanti uključuju polioksietilenske gliceride masnih kiselina i biljna ulja, npr. polioksietilen (60) hidrogenizovano ricinusovo ulje; i polioksietilenske alkiletre i alkilfenil etre, npr. oktoksinol 10, oktoksinol 40.

Još neke korisne kompozicije uključuju jedan ili više antioksidanasa za poboljšanje hemijske stabilnosti kada je to potrebno. Pogodni antioksidansi uključuju, samo kao primer, askorbinsku kiselinu i natrijum metabisulfit.

U određenim otelotvorenjima, kompozicije vodene suspenzije se pakuju u jednodozne posude koje se ne mogu ponovo zatvoriti. Alternativno, koriste se višedozne posude koje se mogu ponovo zatvoriti, u kom slučaju je konzervans tipično uključen u kompoziciju.

U alternativnim otelotvorenjima, koriste se drugi sistemi isporuke za hidrofobna farmaceutska jedinjenja. Lipozomi i emulzije su primeri ovde korisnih vehikuluma za isporučivanje ili ekscipijenasa. U određenim otelotvorenjima koriste se i organski rastvarači kao što je N-metilpirolidon. U dodatnim otelotvorenjima, ovde opisana jedinjenja se isporučuju korišćenjem sistema sa produženim oslobađanjem, kao što su polupropusne matrice čvrstih hidrofobnih polimera koji sadrže terapeutski agens. Ovde su korisni različiti materijali sa produženim oslobađanjem. U nekim otelotvorenjima, kapsule sa produženim oslobađanjem oslobađaju jedinjenja tokom nekoliko nedelja pa do preko 100 dana.

Pronalazak dalje obezbeđuje veterinarske kompozicije koje sadrže najmanje jedan aktivni sastojak kako je gore definisano zajedno sa veterinarskim ekscipijensom. Veterinarski ekscipijensi su materijali korisni za primenu kompozicije i mogu biti čvrste, tečne ili gasovite supstance, koje su inače inertne ili prihvatljive u veterinarskoj struci, i kompatibilni su sa aktivnom supstancom. Ove veterinarske kompozicije se mogu primeniti parenteralno, oralno ili bilo kojim drugim željenim putem.

KOMBINOVANA TERAPIJA

Sva upućivanja na postupke lečenja u narednim paragrafima ovog opisa treba tumačiti kao reference na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove iz predmetnog pronalaska za upotrebu u postupku za lečenje ljudskog (ili životinjskog) tela terapijom (ili za dijagnozu).

Jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili njihova farmaceutski prihvatljiva so, mogu se koristiti samostalno ili u kombinaciji sa drugim terapeutskim agensima za lečenje bolesti ili poremećaja opisanih u ovom dokumentu. Drugo jedinjenje farmaceutski kombinovane formulacije ili režima doziranja poželjno ima komplementarne aktivnosti sa jedinjenjem iz predmetnog pronalaska ili njegovom farmaceutski prihvatljivom sollu, tako da ne deluju štetno jedni na druge. Kombinovana terapija može da obezbedi „sinergiju“ i da se pokaže kao „sinergijska“, tj. efekat postignut kada se aktivni sastojci zajedno koriste je veći od zbira efekata koji se dobijaju od odvojene primene komponenata.

Kombinovana terapija se može primeniti kao simultani ili sekvencijalni režim. Kada se primenjuje sekvencijalno, kombinacija se može primenjivati u dve ili više primena. Kombinovana primena obuhvata istovremenu primenu, koristeći posebne formulacije ili jednu farmaceutsku formulaciju, ili sekvencijalnu primenu po bilo kom redosledu, pri čemu je poželjno da postoji vremenski period dok oba aktivna agensa (ili svi) istovremeno vrše svoje biološke aktivnosti.

Kombinovane terapije prema predmetnom pronalasku tako obuhvataju primenu jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i upotrebu bar još jednog postupka lečenja. Količine jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i drugog farmaceutski aktivnog agensa i relativno vreme primene biće odabrani da bi se postigao željeni kombinovani terapeutski efekat.

U različitim otelotvorenjima postupka, dodatni terapeutski agens je inhibitor receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), inhibitor fosfatidil inozitol kinaze (PI3K), inhibitor receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF1R), inhibitor Janus kinaze (JAK), inhibitor Met kinaze, inhibitor SRC familije kinaze, inhibitor mitogen-aktivirane proteinske kinaze (MEK), inhibitor kinaze regulisane ekstracelularnim signalom (ERK), inhibitor topoizomeraze (kao što je irinotekan ili kao što je etopozid ili kao što je doksorubicin), taksan (kao što su antimikrotubulni agensi uključujući paklitaksel i docetaksel), antimetabolitni agens (kao što je 5-FU ili kao što je gemcitabin), alkilujući agens (kao što je cisplatin ili kao što je ciklofosfamid) ili taksan.

U nekim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor receptora epidermalnog faktora rasta (EGFR), kao što je erlotinib ili kao što je afatinib. U nekim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je Iressa. U nekim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je monoklonsko antitelo kao što je cetuksimab (Erbitux) ili panitumumab (Vectibix). U nekim otelotvorenjima, inhibitor GFR je dvostruki ili pan-HER inhibitor. U drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor fosfatidil inozitol-3-kinaze (PI3K), kao što je GDC-0941, MLN1117, BYL719 (Alpelisib) ili BKM120 (Buparlisib). GDC-0941 se odnosi na 2-(1H-indazol-4-il)-6-(4-metansulfonil-piperazin-1-ilmetil)-4-morfolin-4-il-tieno[3,2-d]pirimidin ili njegovu so (npr. so bimezilata).

U još nekim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF1R). Na primer, u nekim otelotvorenjima, inhibitor receptora insulinu sličnog faktora rasta (IGF1R) je NVP-AEW541. U drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski

4

agens je IGOSI-906 (Linsitinib), BMS-754807, ili, u drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je neutrališuće monoklonsko antitelo specifično za IGF1R kao što je AMG-479 (ganitumab), CP-751.871 (figitumumab), IMC-A12 (ciksutumumab), MK-0646 (dalotuzumab) ili R-1507 (robatumumab).

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor Janus kinaze (JAK). U nekim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je CYT387, GLPG0634, Baricitinib, Lestaurtinib, momelotinib, Pakritinib, Ruksolitinib ili TG101348.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je antiglipikansko 3 antitelo. U nekim otelotvorenjima, antiglipikansko 3 antitelo je kodrituzumab.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je konjugat antitela i leka (ADC). U nekim otelotvorenjima, ADC je polatuzumab vedotin, RG7986, RG7882, RG6109 ili RO7172369.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je antagonist MDM2. U nekim otelotvorenjima, antagonist MDM2 je idasanutlin.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je agonističko antitelo na CD40. U nekim otelotvorenjima, agonističko antitelo na CD40 je selikrelumab (RG7876).

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je bispecifično antitelo. U nekim otelotvorenjima, bispecifično antitelo je RG7828 (BTCT4465A), RG7802, RG7386 (FAP-DR5), RG6160, RG6026, ERY974 ili anti-HER2/CD3.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je ciljani imunocitokin. U nekim otelotvorenjima, ciljani imunocitokin je RG7813 ili RG7461.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je antitelo koje cilja receptor faktora stimulacije kolonija-1 (CSF-1R). U nekim otelotvorenjima, CSF-1R antitelo je emaktuzumab.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je personalizovana vakcina protiv kancera. U nekim otelotvorenjima, personalizovana vakcina protiv kancera je RG6180.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor BET (bromdomena i ekstraterminalne porodice) proteina (BRD2/3/4/T). U nekim otelotvorenjima, inhibitor BET je RG6146.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je antitelo konstruisano da se veže za TIGIT. U nekim otelotvorenjima, anti-TIGIT antitelo je RG6058 (MTIG7192A).

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je selektivni razgrađivač receptora estrogena (SERD). U nekim drugim otelotvorenjima, SERD je RG6047 (GDC-0927) ili RG6171 (GDC-9545).

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor MET kinaze, kao što su krizotinib, tivantinib, AMG337, kabozantinib ili foretinib. U drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je neutrališuće monoklonsko antitelo za MET kao što je onartuzumab.

U više otelotvorenja, dodatni terapeutski agens je inhibitor nereceptorske tirozin kinaze iz porodice SRC. Na primer, u nekim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor podfamilije nereceptorskih tirozin kinaza iz porodice SRC. Reprezentativni inhibitori u tom pogledu uključuju Dasatinib. Drugi primeri u tom pogledu uključuju Ponatinib, saracatinib i bosutinib.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor proteinske kinaze aktivirane mitogenom (MEK). U nekim od ovih otelotvorenja, inhibitor proteinske kinaze aktivirane mitogenom (MEK) je trametinib, selumetinib, COTELLIC® (kobimetinib), PD0325901 ili RO5126766. U drugim otelotvorenjima, inhibitor MEK je GSK-1120212, takođe poznat kao trametinib.

U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor kinaze regulisane ekstracelularnim signalom (ERK). U nekim od ovih otelotvorenja, inhibitor proteinske kinaze aktivirane mitogenom (MEK) je SCH722984 ili GDC-0994.

U drugim otelotvorenjima, inhibitor proteinske kinaze je taselisib, ipatasertib, GDC-0575, GDC-5573 (HM95573), RG6114 (GDC-0077), CKI27, afatinib, aksitinib, atezolizumab, bevacizumab, bostutinib, cetuksimab, krizotinib, dasatinib, erlotinib, fostamatinib, gefitinib, imatinib, lapatinib, lenvatinib, ibrutinib, nilotinib, panitumumab, pazopanib, pegaptanib, ranibizumab, ruksolitinib, sorafenib, sunitinib, SU6656, trastuzumab, tofacitinib, vandetanib ili vemurafenib. U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je inhibitor topoizomeraze. U nekim od ovih otelotvorenja, inhibitor topoizomeraze je irinotekan. U nekim drugim otelotvorenjima, dodatni terapeutski agens je taksan. Primeri za taksane uključuju taksol i docetaksel.

Pored gore navedenog dodatnog terapeutskog agensa, drugi hemoterapeutski agensi su trenutno poznati u ovoj oblasti i mogu se koristiti u kombinaciji sa jedinjenjima iz pronalaska. U nekim otelotvorenjima, hemoterapeutski agens se bira iz grupe koja se sastoji od mitotskih inhibitora, alkilujućih agensa, antimetabolita, interkalirajućih antibiotika, inhibitora faktora rasta, inhibitora ćelijskog ciklusa, enzima, inhibitora topoizomeraze, modifikatora biološkog odgovora, antihormona, inhibitora angiogeneze i antiandrogena.

Neograničavajući primeri su hemoterapeutski agensi, citotoksični agensi i nepeptidni mali molekuli kao što su Gleevec® (imatinib mezilat), Velcade® (bortezomib), Casodex

4

(bikalutamid), Iressa® (gefitinib) i adriamicin, kao i niz hemoterapeutskih agensa. Neograničavajući primeri za hemoterapeutske agense uključuju alkilujuće agense kao što su tiotepa i ciklofosfamid (CYTOXAN™); alkil sulfonate kao što su busulfan, improsulfan i piposulfan; aziridine kao što su benzodopa, karbokvon, meturedopa i uredopa; etilenimini i metil melamini, uključujući altretamin, trietilenmelamin, trietilenfosforamid, trietilentiofosforamid i trimetilol melamin; azotne iperite kao što su hlorambucil, hlornafazine, ciklofosfamid, estramustin, ifosfamid, mehloretamin, mehloretamin oksid hidrohlorid, melfalan, novembihin, fenesterin, prednimustin, trofosfamid, uracil iperit; nitrozouree kao što su karmustin, hlorozotocin, fotemustin, lomustin, nimustin, ranimustin; antibiotici kao što su aklacinomicini, aktinomicin, autramicin, azaserin, bleomicini, kaktinomicin, kaliheamicin, karabicin, karminomicin, karzinofilin, Casodex™, hromomicini, daktinomicin, daunorubicin, detorubicin, 6-diazo-5-okso-L-norleucin, doksorubicin, epirubicin, ezorubicin, idarubicin, marcelomicin, mitomicini, mikofenolna kiselina, nogalomicin, olivomicini, peplomicin, potfiromicin, puromicin, kelamicin, rodorubicin, streptonigrin, streptozocin, tubercidin, ubenimeks, zinostatin, zorubicin; anti-metaboliti kao što su metotreksat i 5-fluoruracil (5-FU); analozi folne kiseline kao što su denopterin, metotreksat, pteropterin, trimetreksat; analozi purina kao što su fludarabin, 6-merkaptopurin, tiamioprin, tioguanin; analozi pirimidina kao što su ancitabin, azacitidin, 6-azauridin, karmofur, citarabin, dideoksiuridin, doksifluridin, enocitabin, floksuridin; androgeni kao što su kalusteron, dromostanolon propionat, epitiostanol, mepitiostan, testolakton; anti-adrenali kao što su aminoglutetimid, mitotan, trilostan; obnavljači folne kiseline kao što je folinska kiselina; aceglaton; aldofosfamid glikozid; aminolevulinska kiselina; amsakrin; bestrabucil; bisantren; edatraksat; defofamin; demekolcin; diazikvon; eflomitin; elitinijum acetat; etoglucid; galijum nitrat; hidroksiurea; lentinan; lonidamin; mitoguazon; mitoksantron; mopidamol; nitrakrin; pentostatin; fenamet; pirarubicin; podofilinska kiselina; 2-etilhidrazid; prokarbazin; polisaharid K; razoksan; sizofiran; spirogermanijum; tenuazonska kiselina; triazikvon; 2,2',2"-trihlortrietilamin; urethan; vindesin; dakarbazin; manomustin; mitobronitol; mitolaktol; pipobroman; gacitozin; arabinozid („Ara-C“); ciklofosfamid; tiotepa; taksani, npr. paklitaksel (TAXOL™, Bristol-Myers Squibb Oncology, Princeton, N.J.) i docetaksel (TAXOTERE™, Rhone-Poulenc Rorer, Antony, Francuska); retinoična kiselina; esperamicini; kapecitabin; i farmaceutski prihvatljive soli, kiseline ili derivati bilo čega od gore navedenog. Takođe, kao odgovarajući hemoterapeutski agensi za kondicioniranje ćelija uključeni su anti-hormonski agensi koji regulišu ili inhibiraju dejstva hormona na tumore, kao što su anti-estrogeni, uključujući, na primer, tamoksifen (Nolvadex™), raloksifen, imidazole inhibitore aromataze 4(5), 4-

4

hidroksitamoksifen, trioksifen, keoksifen, LY 117018, onapriston i toremifen (Fareston); antiandrogeni kao što su flutamid, nilutamid, bikalutamid, leuprolid i goserelin; hlorambucil; gemcitabin; 6-tioguanin; merkaptopurin; metotreksat; analozi platine kao što su cisplatin i karboplatin; vinblastin; platina; etopozid (VP-16); ifosfamid; mitomicin C; mitoksantron; vinkristin; vinorelbin; navelbin; novantron; tenipozid; daunomicin; aminopterin; Xeloda®; ibandronat; kamptotecin-11 (CPT-11); inhibitor topoizomeraze RFS 2000; i difluormetilornitin (DMFO). Po potrebi, jedinjenja ili farmaceutske kompozicije iz predmetnog pronalaska mogu se koristiti u kombinaciji sa uobičajeno propisivanim lekovima protiv kancera kao što su Herceptin®, Avastin®, Gazyva®, Tecentriq®, Alecensa®, Perjeta®, Venclexta™, Erbitux®, Rituxan®, Taxol®, Arimidex®, Taxotere®, ABVD, AVICINE, abagovomab, akridin karboksamid, adekatumumab, 17-N-alilamino-17-demetoksigeldanamicin, alfaradin, alvocidib, 3-aminopiridin-2-karboksaldehid tiosemikarbazon, amonafid, antracendion, anti-CD22 imunotoksini, antineoplastični agens, antitumorski biljni preparati, apazikvon, atiprimod, azatioprin, belotekan, bendamustin, BIBW 2992, birkodar, brostalicin, brijostatin, butionin sulfoksimin, CBV (hemoterapija), kalikulin, antineoplastični agensi koji nisu specifični za ćelijski ciklus, dihlorsirćetna kiselina, diskodermolid, elsamitrucin, enocitabin, epotilon, eribulin, everolimus, ekstatekan, eksisulind, feruginol, forodesin, fosfestrol, ICE hemoterapeutski režim, IT-101, imekson, imikvimod, indolokarbazol, irofulven, lanikvidar, larotaksel, lenalidomid, lukanton, lurtotekan, mafosfamid, mitozolomid, nafoksidin, nedaplatin, olaparib, ortataksel, PAC-1, Pawpaw, piksantron, inhibitor proteazoma, rebekamicin, resikvimod, rubitekan, SN-38, salinosporamid A, sapacitabin, Stanford V, svainsonin, talaporfin, tarikvidar, tegafur-uracil, temodar, tesetaksel, triplatin tetranitrat, tris(2-hloretil)amin, troksacitabin, uramustin, vadimezan, vinflunin, ZD6126 ili zosukvidar.

Tačan postupak za primenu jedinjenja i dodatnog terapeutskog agensa biće očigledan osobi sa uobičajenim veštinama u ovoj oblasti. U nekim reprezentativnim otelotvorenjima, jedinjenje i dodatni terapeutski agens se primenjuju istovremeno. U drugim otelotvorenjima, jedinjenje i dodatni terapeutski agens se primenjuju odvojeno.

U nekim otelotvorenjima, jedinjenje i dodatni terapeutski agens se primenjuje sa drugim agensom istovremeno ili odvojeno. Ova primena u kombinaciji može uključivati istovremenu primenu dva agensa u istom doznom obliku, istovremenu primenu u odvojenim doznim oblicima i odvojenu primenu. To jest, jedinjenje i bilo koji od dodatnih terapeutskih agensa opisanih u ovom dokumentu mogu se formulisati zajedno u istom doznom obliku i primeniti istovremeno. Alternativno, jedinjenje i bilo koji od dodatnih terapeutskih agensa opisanih u ovom dokumentu mogu se primeniti istovremeno, pri čemu su oba agensa prisutna u odvojenim

4

formulacijama. U drugoj alternativi, jedinjenje se može primeniti samo nakon čega sledi bilo koji od dodatnih terapeutskihijskih agensa opisanih u ovom dokumentu, ili obrnuto. U nekim otelotvorenjima protokola odvojene primene, jedinjenje i bilo koji od dodatnih terapeutskih agensa opisanih u ovom dokumentu primenjuju se u razmaku od nekoliko minuta, ili u razmaku od nekoliko sati, ili u razmaku od nekoliko dana.

PROIZVODI

U drugom otelotvorenju predmetnog pronalaska, obezbeđen je proizvod, ili „komplet”, koji sadrži materijale korisne za lečenje gore opisanih bolesti i poremećaja. U jednom otelotvorenju, komplet se sastoji od pakovanja koje se sastoji od jedinjenja iz predmetnog pronalaska, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Komplet može dalje da sadrži etiketu ili uputstvo u pakovanju, na ambalaži ili povezano sa njom. Termin „uputstvo za lek“ koristi se da se ukaže na uputstvo koje se uobičajeno nalazi u komercijalnim pakovanjima terapeutskog proizvoda, koje sadrži informacije o indikacijama, upotrebi, doziranju, primeni, kontraindikacijama i/ili upozorenjima u vezi sa upotrebom takvog terapeutskog proizvoda. Pogodna pakovanja uključuju, na primer, boce, bočice, špriceve, blister pakovanje, itd. Pakovanje može biti izrađeno od različitih materijala, kao što je staklo ili plastika. Ambalaža može da sadrži jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so ili njegovu formulaciju koja je efikasna za lečenje stanja i može imati priključak za sterilni pristup (na primer, ambalaža može da bude vrećica za intravenski rastvor ili bočica koja ima čep koji se može probiti pomoću potkožne injekcione igle). Najmanje jedan aktivni agens u kompoziciji je jedinjenje iz predmetnog pronalaska ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. Umesto toga, ili pored toga, proizvod može dalje da sadrži drugu ambalažu koja sadrži farmaceutski razblaživač, kao što je bakteriostatska voda za injekcije (BWFI), fiziološki rastvor sa fosfatnim puferom, Ringerov rastvor ili rastvor dekstroze. Proizvod može dodatno da sadrži druge materijale poželjne sa komercijalnog aspekta i sa aspekta upotrebe, uključujući druge pufere, razblaživače, filtere, igle i špriceve.

U drugom otelotvorenju, kompleti su pogodni za isporuku čvrstih oralnih oblika jedinjenja iz predmetnog pronalaska ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, poput tableta ili kapsula. Takav komplet može uključivati određeni broj jediničnih doza. Primer takvog kompleta je „blister pakovanje”. Blister pakovanja su dobro poznata u industriji ambalaže i naširoko se koriste za pakovanje farmaceutskih jediničnih oblika doziranja.

PRIMERI

Sledeći primeri ilustruju pripremu i biološku procenu jedinjenja u okviru pronalaska. Ovi primeri i preparati koji slede su dati kako bi se stručnjacima omogućilo da bolje razumeju

4

i primene ovaj pronalazak. Ne treba ih smatrati ograničenjima obima predmetnog pronalaska, već služe isključivo kao ilustrativni primeri.

U primerima se koriste sledeće skraćenice:

ACN - acetonitril

Ac2O - acetil acetat

BINAP - (+/-)-2,2’-bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftil

Boc2O - di-terc-butil dikarbonat

BOP - (benzotriazol-1-iloksi)tris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorfosfat CH3Ti(Oi-Pr)3- metiltitanijum(IV) triizopropoksid

DBU - 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en

DCE - 1,2-dihloretan

DCM - dihlormetan

DIEA ili DIPEA - N,N-diizopropiletilamin

DMA - N,N-dimetilacetamid

DMAc - N,N-dimetilacetamid

DMAP - 4-dimetilaminopiridin

DMF - N,N-dimetilformamid

DMSO - dimetil sulfoksid

EA - etil acetat

EtOAc - etil acetat

EtOH - etanol

HATU -2-(7-azabenzotriazol-1-il)-N,N,N',N'-tetrametiluronijum heksafluorfosfat HFIP - heksafluorizopropanol

HOAc - sirćetna kiselina

iPrOAc - izopropil acetat

KF - kalijum fluorid

KOAc - kalijum acetat

LDA - litijum diizopropilamid

LiHMDS - litijum bis(trimetilsilil)amid

LCMS - a

mCPBA - 3-hlorperoksibenzojeva kiselina

MeCN - acetonitril

MeI - jodmetan

MeOH - metanol

4

MeONa - natrijum metoksid ili natrijum metanolat

MTBE - metil terc-butil etar

MW - mikrotalasna pećnica

NaBH(OAc)3- natrijum triacetoksiborhidrid

NIS - N-jodsukcinimid

P(Cy)3ili PCy3- tricikloheksilfosfin

P(t-Bu)3HBF4- tri-terc-butilfosfonijum tetrafluorborat

Pd/C - paladijum na ugljeniku

Pd2(dba)3- Tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0)

Pd2(dba)3CHCl3- tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum(0) hloroform Pd(dppf)Cl2.CH2Cl2-[1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II) ili dihlor[1,1-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijum(II), kompleksiran sa dihlormetanom

Pd(PPh3)4- tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0)

Pd(PPh3)2Cl2- bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorid

PE - petrol etar

PMBCl - 4-metoksibenzilhlorid

pTsA - p-toluensulfonska kiselina

rt - sobna temperatura

Sn2(n-Bu)6- heksabutil dikalaj

TBSCl - terc-butildimetilsilil hlorid ili terc-butildimetilhlorsilan

[Rh(COD)Cl]2- hlor(1,5-ciklooktadien)rodijum(I) dimer

TEA - trietilamin

TFA - trifluorsirćetna kiselina ili 2,2,2-trifluorsirćetna kiselina

THF - tetrahidrofuran

THP - tetrahidropiran

TsOH - p-toluensulfonska kiselina

Primeri jedinjenja

Intermedijer 1: terc-butil 4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-carboksilat Intermedijer terc-butil 4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat je pripremljen prema sledećoj sintetičkoj šemi:

Korak 1: 7-brom-4,6-dihlorhinazolin

U rastvor 7-brom-6-hlor-3,4-dihidrohinazolin-4-ona (330 g, 1,28 mol) u tionil hloridu (4,0 l) dodat je N,N-dimetilformamid (4 ml). Smeša je mešana tokom 12 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, što je dalo 7-brom-4,6-dihlorhinazolin (350 g, sirovi) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 277,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor 7-brom-4,6-dihlorhinazolina (330 g; 1,20 mol), terc-butil piperazin-1-karboksilata (340 g; 1,80 mol; 1,50 ekv.) i DIPEA (586 ml; 3,60 mol) u 1,4-dioksanu (3,0 l) mešan je 60 minuta na 110 °C. Nakon završetka, čvrste supstance su sakupljene filtracijom, isprane sa PE (500 ml) i vodom (500 ml), a zatim osušene, što je dalo terc-butil 4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (446 g; 87,4%) u vidu svetložute čvrste supstance.

<1>H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8,71 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,95 (s, 1H), 3,76 (dd, J = 6,2, 3,7 Hz, 4H), 3,65 (dd, J = 6,4, 3,8 Hz, 4H), 1,50 (s, 9H). LCMS (ESI, m/z): 429,2 [M+H]<+>.

Intermedijer 2: 2((2R)-5-metilpiperizin-2-il)acetonitril

Intermedijerno jedinjenje 2((2R)-5-metilpiperizin-2-il)acetonitril je pripremljeno prema sledećoj reakcionoj šemi:

1

Korak 1: terc-butil (2-((4-metoksibenzil)amino)propil)karbamat

U rastvor terc-butil N-(2-aminopropil)karbamata (8,3 g; 47,6 mmol) i p-anisaldehida (5,8 ml; 47,6 mmol) u 1,2-dihloretanu (175 ml) dodat je natrijum triacetoksiborhidrid (15 g; 71,5 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakcija je razblažena DCM-om, a zatim isprana zas. rastvorom Na2CO3. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa iPrOAc/Hep), što je dalo tercbutil (2-((4-metoksibenzil)amino)propil)karbamat (10,2 g; 71%). LCMS (ESI, m/z): 295,5 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil (E)-(2-((3-cijanoalil)(4-metoksibenzil)amino)propil)karbamat

Rastvor terc-butil (2-((4-metoksibenzil)amino)propil)karbamata (2,9 g; 9,8 mmol), (E)-4-brombut-2-ennitrila (1,2 mg; 8,22 mmol) i natrijum karbonata (2,8 g; 26,3 mmol) u etanolu (30 ml) mešan je na 50 °C tokom 18 sati. Reakcija je koncentrovana, zatim razblažena u EtOAc. Organski sloj je ispran vodom. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa iPrOAc/Hep), zatim (uz eluiranje sa MeOH/DCM)), dšto je dalo terc-butil (E)-(2-((3-cijanoalil)(4-metoksibenzil)amino)propil)karbamat. LCMS (ESI, m/z): 360,6 [M+H]<+>.

2

Korak 3: 2-((2R)-4-(4-metoksibenzil)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitril i 2-((2S)-4-(4-metoksibenzil)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitril

Rastvor terc-butil (E)-(2-((3-cijanoalil)(4-metoksibenzil)amino)propil)karbamata (2,3 g; 6,4 mmol) u 5% trifluorsirćetnoj kiselini u heksafluor-2-propanolu (75 ml; 49,3 mmol) mešan je na rt tokom 18 sati. Reakcija je koncentrovana, zatim je dodat 1,4-dioksan (80 ml) i trietilamin (5,75 ml; 41,1 mmol). Reakciona smeša je mešana na rt tokom 60 minuta. Sirovi proizvod je koncentrovan i prečišćen pomoću HPLC-a (NH4OH 5-50%), što je dalo 2-((2R)-4-(4-metoksibenzil)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitril kao HPLC pik 1 (1,05 g; 49%) i 2-((2S)-4-(4-metoksibenzil)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitril kao HPLC pik 2 (0,76 g; 35%). Stereohemija je proizvoljno dodeljena. LCMS (ESI, m/z): 260,1 [M+H]<+>.

Korak 4: 2-((2R)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitril i 2-((2S)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitril

U rastvor 2-((2R)-4-(4-metoksibenzil)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitrila (600 mg, 2,313 mmol) u dihlormetanu (10 ml) dodata je trifluorsirćetna kiselina (17,5 ml, 231,3 mmol). Reakciona smeša je mešana na 50 °C tokom 48 h. Reakcija je koncentrovana i sirovi proizvod je prenet u sledeći korak. LCMS (ESI, m/z): 140,1 [M+H]<+>.

Intermedijer 3: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat Jedinjenje terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat je pripremljeno prema sledećoj sintetičkoj šemi:

Korak 1: 2-amino-4-brom-5-hlor-benzamid

Rastvor 2-amino-4-brom-5-hlorbenzojeve kiseline (10,0 g; 39,92 mmol), N,N-diizopropiletilamina (15,45 g; 119,77 mmol) i amonijum hlorida (6,41 g; 119,77 mmol) u N,N-dimetilformamidu (50 ml) mešan je na sobnoj temperaturi 5 minuta. Zatim je dodat HATU (18,22 g, 47,91 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 sata. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana dodatkom vode. Reakciona smeša je filtrirana, a filter pogača je sakupljena i osušena pod vakuumom, što je dalo 2-amino-4-brom-5-hlor-benzamid (8 g; 32,0 mmol; prinos 80,3%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z) 248,9 [M+H]<+>.

Korak 2: 7-brom-2, 6-dihlor-hinazolin-4-ol

U rastvor 2-amino-4-brom-5-hlor-benzamida (20,0 g; 80,16 mmol) u 1,4-dioksanu (100 ml) dodavan je tiofosgen (20,3 g; 176,52 mmol) ukapavanjem uz mešanje. Dobijeni rastvor je mešan 1 h na sobnoj temperaturi, a zatim mešan 1 h na 105 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Organski sloj je ispran dietil etrom, što je dalo 7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-ol (20 g; 68,043 mmol; prinos 84,9%) u vidu smeđe čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 292,9 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-(7-brom-2, 6-dihior-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

4

Rastvor 7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-ola (15,0 g; 51,03 mmol), anhidrida metansulfonske kiseline (35,6 g; 204,11 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (26,3 g; 203,88 mmol) u dihlormetanu (200 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil 1-piperazin karboksilat (14,2 g; 76,24 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (13,2 g; 102,33 mmol) i mešan na 25 °C tokom 2 h. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom i ispran vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/6), da bi se dobio terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (13 g, 28,13 mmol, prinos 55,1%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z).461,0 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-fluor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (15,6 g; 33,75 mmol) i KF (40,0 g; 688,47 mmol) u dimetil sulfoksidu (100 ml) mešan je na 140 °C tokom 4 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je ohlađen na sobnu temperaturu, razblažen vodom i ekstrahovan etil acetatom. Zatim su organski slojevi kombinovani, isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (3/1), da bi se dobio terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-fluor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (10 g, 22,44 mmol, prinos 66,5%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 445,0 [M+H]<+>.

Korak 5: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-fluor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (50,0 g; 104,66 mmol), (6-(bis(4-metoksifenil)amino)piridin-2-il)boronske kiseline (90,0 g; 229,44 mmol), kalijum fosfata (45,0 g; 212,26 mmol) i 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorida (11,5 g; 15,73 mmol) u tetrahidrofuranu (1,5 l) i vodi (300 ml) mešan je na 65 °C tokom 3 h. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom i ispran vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/6), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat. (52 g; 69,77 mmol; prinos 66,7%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 713,3 [M+H]<+>.

Korak 6: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jodpiridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (9,61 g; 12,9 mmol), N-jodsukcinimida (14,45 g; 64,49 mmol) i p-toluensulfonske kiseline (0,09 g; 0,52 mmol) u acetonitrilu (180 ml) mešan je na 25 °C tokom 24 h. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/7), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jodpiridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (7,71 g, 8,85 mmol, prinos 68,6%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 839,2 [M+H]<+>.

Korak 7: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jodpiridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (15,35 g; 17,62 mmol) i bakar(I) jodida (40,17 g; 211,44 mmol) uN,N-dimetilacetamidu (380 ml) dodat je metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetat (84,63 g; 440,51 mmol) i mešan na 90 °C tokom 6 h. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/5), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (11,8 g; 14,51 mmol; prinos 82,3%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 781,3 [M+H]<+>.

Intermedijer 4: terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat Jedinjenje terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat je pripremljeno prema sledećoj sintetičkoj šemi:

Korak 1: 7-brom-6-hlor-1,2,3,4-tetrahidrohinazolin-2,4-dion

U balon od 3000 ml sa okruglim dnom stavljene su 2-amino-4-brom-5-hlorbenzojeva kiselina (200 g; 0,8 mol) i urea (720 g; 12 mol). Dobijeni rastvor je mešan na 160 °C tokom 12 h. Smeša je ohlađena na 80 °C i deaktivirana vodom, a zatim refluktovana 5-10 minuta. Smeša je ohlađena do sobne temperature da bi se formirao talog. Čvrste supstance su sakupljene filtracijom i isprane sa H2O i osušene u pećnici, što je dalo 200 g (90%) sirovog 7-brom-6-hlor1,2,3,4-tetrahidrohinazolin-2,4-diona u vidu žute čvrste supstance. Sirova supstanca je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak 2: 7-brom-2,4,6-trihlorhinazolin

Rastvor 7-brom-6-hlor-1,2,3,4-tetrahidrohinazolin-2,4-diona (200 g; 0,72 mol) i N,N-dimetilanilina (264 g; 2,16 mol) u POCI3(750 ml) mešan je na 120 °C tokom 8 h i koncentrovan pod vakuumom i prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

Korak 3: terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 4)

Rastvor 7-brom-2,4,6-trihlorhinazolina (200 g; 0,64 mol), terc-butil piperazin-1-karboksilata (178 g; 0,92 mol) i DIEA (3 ekv.) u 1,4-dioksanu (2000 ml) mešan je na 25 °C tokom 8 h. Dobijeni rastvor je razblažen sa 2000 ml vode, a zatim ekstrahovan sa 3 x 3000 ml etil acetata. Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (1x100 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1:10), što je dalo 126 g (43%) terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance.

<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,20-8,14 (m, 1H), 8,16-8,10 (m, 1H), 3,95-3,87 (m, 4H), 3,60-3,52 (m, 4H), 1,44 (s, 9H). LCMS (ESI, m/z): 461,1 [M+H]<+>.

Intermedijer 5: terc-butil (S)-4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Jedinjenje terc-butil (S)-4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (Intermedijer 5) pripremljeno je u skladu sa protokolom utvrđenim za Intermedijer 4, osim što je u koraku 3 terc-butil (S)-3-metilpiperazin-1-karboksilat korišćen umesto terc-butil piperazin-1-karboksilata.

Referentni primer 1: 1-[4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Jedinjenje 1-[4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on je pripremljeno prema sledećoj sintetičkoj šemi:

Korak 1: terc-butil 4-(6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (550 mg, 1,29 mmol) i bis(pinakolato)dibora (733 mg, 2,83 mmol) u 1,4-dioksanu (25,0 ml) dodat je kalijum acetat (189,3 mg, 0,121 ml, 1,929 mmol) i [1,1'bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II) (95,0 mg, 0,129 mmol). Reakciona smeša je degasirana, a zatim zagrevana na 85 °C tokom 18 h. Reakcija je filtrirana kroz celit, koncentrovana je i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil 4-(6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (514 mg; 84%). LCMS pokazuje masu boronske kiseline. LCMS (ESI, m/z): 393,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor 1-bromizohinolin-3-amina (196 mg; 0,85 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (270 mg; 0,57 mmol), cezijum karbonata (371 mg; 1,14 mmol) i adukta [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II) dihlormetan (47 mg; 0,057 mmol) u acetonitrilu (6 ml) i vodi (3 ml; 157,8 mmol) je degasiran. Reakciona smeša je zagrevana 5 h na 90 °C. Reakcija je filtrirana kroz celit i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo 235 mg terc-butil 4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 491,2 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amin

U rastvor terc-butil 4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (235 mg, 0,48 mmol) u 1,4-dioksanu (2,0 ml) dodata je hlorovodonična kiselina (4 mol/l) u 1,4-dioksanu (1,2 ml, 4,8 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je koncentrovana da bi se dobilo 136 mg sirovog 1-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amina. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS (ESI, m/z): 391,1 [M+H]<+>.

Korak 4: 1-[4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 1-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amina (136 mg; 0,35 mmol) i akrilne kiseline (0,026 ml; 0,383 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3,5 ml), dodat je N-diizopropiletilamin (0,30 ml; 1,74 mmol) i HATU (203 mg; 0,52 mmol). Reakciona smeša je mešana 15 min na RT. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), a zatim podvrgnut reversno faznoj HPLC, što je dalo 8 mg 1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 1:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 1H), 8,21 (s, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,63 (dd, J = 8,5, 1,0 Hz, 1H), 7,47 (ddd, J = 8,3, 6,6, 1,2 Hz, 1H), 7,25 (dq, J = 8,5, 0,9 Hz, 1H), 7,07 (ddd, J = 8,5, 6,7, 1,2 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,75 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 6,10 (s, 2H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,01-3,73 (m, 8H). LCMS (ESI, m/z): 445,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 2: 1-[4-[6-hlor-7-(3-metil-2-piridil)hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

1

Postupak je isti kao za referentni primer 1, osim što je u koraku 2 referentnog primera 2 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 2-brom-3-metilpiridin umesto 1-bromizohinolin-3-amina

Referentni primer 2:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.69 (s, 1H), 8,51 (ddd, J = 4,8, 1,6, 0,7 Hz, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,81 (ddd, J = 7,8, 1,7, 0,8 Hz, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,42 (dd, J = 7,7, 4,7 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,95-3,75 (m, 8H), 2,14 (d, J = 0,8 Hz, 3H). LCMS (ESI, m/z): 394,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 3: 1-[4-[7-(6-amino-1,7-naftiridin-8-il)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Postupak je isti kao za referentni primer 1, osim što je u koraku 2 referentnog primera 3 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 8-brom-1,7-naftiridin-6-amin umesto 1-bromizohinolin-3-amina

Referentni primer 3:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,69 (s, 1H), 8,44 (dd, J = 4,0, 1,6 Hz, 1H), 8,14 (s, 1H), 8,07 (dd, J = 8,6, 1,6 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 7,44 (dd, J = 8,5, 4,0 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,75 (s, 1H), 6,32 (s, 2H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,5, 2,3 Hz, 1H), 3,85 (d, J = 43,6 Hz, 8H). LCMS (ESI, m/z): 446,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 4: 1-[4-[7-(3-amino-2,6-naftiridin-1-il)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

2

Postupak je isti kao za referentni primer 1, osim što je u koraku 2 referentnog primera 4 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 1-brom-2,6-naftiridin-3-amin umesto 1-bromizohinolin-3-amina

Referentni primer 4:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 9,13 (d, J = 1,1 Hz, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 8,09 (d, J = 5,9 Hz, 1H), 7,89 (s, 1H), 7,09 (dt, J = 5,9, 1,1 Hz, 1H), 6,88 (t, J = 1,1 Hz, 1H), 6,87-6,79 (m, 1H), 6,49 (s, 2H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,99-3,74 (m, 8H). LCMS (ESI, m/z): 446,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 5: 1-[4-[7-(3-amino-5-hlor-1-izohinolil)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Postupak je isti kao za referentni primer 1, osim što je u koraku 2 referentnog primera 5 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 1-brom-5-hlor-izohinolin-3-amin umesto 1-bromizohinolin-3-amina

Referentni primer 5:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,88 (s, 1H), 7,67 (dd, J = 7,4, 1,1 Hz, 1H), 7,25 (dt, J = 8,5, 1,0 Hz, 1H), 7,03 (dd, J = 8,5, 7,3 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 1,0 Hz, 1H), 6,85 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,49 (s, 2H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,5, 2,4 Hz, 1H), 3,99-3,75 (m, 8H). LCMS (ESI, m/z): 479,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 6: 1-[4-[7-(3-amino-6-metoksi-1-izohinolil)-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Postupak je isti kao za referentni primer 1, osim što je u koraku 2 referentnog primera 6 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 1-brom-6-metoksi izohinolin-3-amin umesto 1-bromizohinolin-3-amina

Referentni primer 6:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,69 (s, 1H), 8,19 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,14 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 6,98 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,74-6,63 (m, 2H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 6,03 (s, 2H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,78-3,99 (m, 11H). LCMS (ESI, m/z): 475,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 7: (S)-1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Jedinjenje (S)-1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljeno prema sledećoj sintetičkoj šemi

Korak 1: 1-(tributilstanil)izohinolin-3-amin

Rastvor 1-bromizohinolin-3-amina (500 mg; 2,17 mmol), bis(tributilkalaja) (1,21 ml;

4

2,39 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma(0) (205 mg; 0,217 mmol), tricikloheksilfosfina (122 mg; 0,435 mmol) i litijum hlorida (460 mg; 10,9 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) je degasiran. Reakciona smeša je mešana na 115 °C tokom 18 h. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku. LCMS (ESI, m/z): 434,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor 1-tributilstanillizohinolin-3-amina (300 mg; 0,693 mmol), terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (617 mg; 1,39 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (80,0 mg; 0,069 mmol), kupro jodida (39,6 mg; 0,21 mmol) i litijum hlorida (124 mg; 2,77 mmol) u N,N-dimetilformamidu (14 ml) je degasiran. Reakciona smeša je zagrevana na 150 °C tokom 15 minuta u mikrotalasnoj pećnici. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit i koncentrovana. Sirovi proizvod je koncentrovan i prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil 4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (94 mg; 27%). LCMS (ESI, m/z): 444,9 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-(6-hlor-8-fluor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amin

U rastvor terc-butil 4-[7-(3-amino-1-izohinolil)-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (410 mg, 0,806 mmol) u 1,4-dioksanu (3,0 ml) dodata je hlorovodonična kiselina (4 mol/l) u 1,4-dioksanu (2,0 ml, 8,1 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je koncentrovana, što je dalo 329 mg sirovog 1-(6-hlor-8-fluor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amina. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS (ESI, m/z): 409,1 [M+H]<+>.

Korak 4: (S)-1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

U rastvor 1-(6-hlor-8-fluor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)izohinolin-3-amina (329 mg; 0,805 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,70 ml; 4,02 mmol) u dihlormetanu (8,0 ml) dodata je akrilna kiselina (0,061 ml; 0,885 mmol) i HATU (468,3 mg; 1,21 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo 1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on, zatim je podvrgnut hiralnom SFC prečišćavanju da bi se dobilo 30,6 mg (S)-1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance (prinos 8,2%).

Referentni primer 7:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,73 (s, 1H), 8,08 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,65 (dt, J = 8,7, 0,9 Hz, 1H), 7,49 (ddd, J = 8,3, 6,7, 1,2 Hz, 1H), 7,25 (dt, J = 8,6, 1,0 Hz, 1H), 7,09 (ddd, J = 8,5, 6,7, 1,1 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,79 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 6,24-6,08 (m, 3H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,04-3,90 (m, 4H), 3,90-3,74 (m, 4H). LCMS (ESI, m/z): 463,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 8: (R)-1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Hiralno odvajanje 1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona dalo je referentni primer 8

Referentni primer 8:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,73 (s, 1H), 8,08 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,65 (dt, J = 8,5, 0,9 Hz, 1H), 7,49 (ddd, J = 8,3, 6,7, 1,2 Hz, 1H), 7,25 (dt, J = 8,6, 1,0 Hz, 1H), 7,09 (ddd, J = 8,5, 6,7, 1,2 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,80-6,76 (m, 1H), 6,23-6,10 (m, 3H), 5,75 (dd, J = 10,5, 2,4 Hz, 1H), 4,05-3,90 (m, 4H), 3,82 (d, J = 29,0 Hz, 4H). LCMS (ESI, m/z): 463,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 9: (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormet74iridindin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Postupak je isti kao za referentni primer 7, osim što je u koraku 1 referentnog primera 9 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-amin umesto 1-bromizohinolin-3-amina

Referentni primer 9:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 1H), 8,01 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,00 (s, 2H), 6,82 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,69-6,61 (m, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,92 (t, J = 5,2 Hz, 4H), 3,84 (s, 2H), 3,77 (s, 2H). LCMS (ESI, m/z): 481,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 10: (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Postupak je isti kao za referentni primer 7, osim što je u koraku 1 referentnog primera 10 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-amin umesto 1-bromizohinolin-3-amina.

Referentni primer 10:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,70 (s, 1H), 8,01 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 7,84 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,00 (s, 2H), 6,82 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,69-6,61 (m, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,91 (dd, J = 6,5, 4,0 Hz, 4H), 3,84 (s, 2H), 3,77 (s, 2H). LCMS (ESI, m/z): 481,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 11: 1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Jedinjenje 1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljeno prema sledećoj sintetičkoj šemi:

Korak 1: 2-(5-fluor-4-metilpiridin-2-il)izoindolin-1,3-dion

Rastvor 2-amino-5-fluor-4-pikolina (500 mg; 3,77 mmol) i anhidrida ftalne kiseline (836 mg; 5,65 mmol) u sirćetnoj kiselini (9,5 ml) zagrevan je na 90 °C tokom 18 h. Reakcija je prekinuta zas. rastvorom natrijum bikarbonata, a zatim ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa iPrOAc/Hep), što je dalo 2-(5-fluor-4-metilpiridin-2-il)izoindolin-1,3-dion (834 mg; 86,5%). LCMS (ESI, m/z): 257,1 [M+H]<+>.

Korak 2: 2-(6-hlor-5-fluor-4-metilpiridin-2-il)izoindolin-1,3-dion

U rastvor 2-(5-fluor-4-metilpiridin-2-il)izoindolin-1,3-diona (964 mg, 3,76 mmol) u dihlormetanu (37 ml) dodata je 3-hlorperoksibenzojeva kiselina (1,30 g, 7,53 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je prekinuta zasićenim vodenim rastvorom Na2S2O3i ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani pomoću rotacionog uparivača, što je dalo 2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-5-fluor-4-metilpiridin 1-oksid (945 mg; 92,3%).

Rastvor 2-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-5-fluor-4-metilpiridin 1-oksida (550 mg; 2,02 mmol) u fosfor oksihloridu (5,0 ml; 50,51 mmol) zagrevan je na 80 °C tokom 2 h. Reakcija je prekinuta ledenom vodom i zas. rastvorom NaHCO3zatim ekstrahovana sa EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa iPrOAc/Hep), što je dalo 2-(6-hlor-5-fluor-4-metilpiridin-2-il)izoindolin-1,3-dion (234 mg; 39,8%). LCMS (ESI, m/z): 290,9 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-hlor-5-fluor-N,N-bis(4-metoksibenzil)-4-metilpiridin-2-amin

Rastvor 2-(6-hlor-5-fluor-4-metilpiridin-2-il)izoindolin-1,3-diona (633 mg; 2,18 mmol) u amonijaku (7 mol/l) u metanolu 3,1 ml) mešan je na 45 °C tokom 5 h. Čvrsta supstanca je filtrirana da bi se dobilo 136 mg sirovog 6-hlor-5-fluor-4-metilpiridin-2-amina. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS (ESI, m/z): 161,1 [M+H]<+>.

U rastvor 6-hlor-5-fluor-4-metil-piridin-2-amina (250 mg; 1,56 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (6,0 ml) na 0 °C dodat je natrijum hidrid (60 mas. %) u ulju (75,0 mg; 1,87 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C tokom 30 minuta, a zatim je ukapavanjem dodat 4-metoksibenzil hlorid (0,24 ml; 1,71 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa iPrOAc/Hep), što je dalo 6-hlor-5-fluor-N,N-bis(4-metoksibenzil)-4-metilpiridin-2-amin (521 mg; 83,4%). LCMS (ESI, m/z): 401,9 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Suspenzija terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (250 mg; 0,527 mmol), 6-hlor-5-fluor-N,N-bis(4-metoksibenzil)-4-metilpiridin-2-amina (190,0 mg; 0,474 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(ii) dihlorida (37,3 mg; 0,053 mmol) i kalijum fluorida (92 mg; 1,58 mmol) u acetonitrilu (5,0 ml) i vodi (1,0 ml) je degasirana. Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici na 125 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (145 mg; 38,6%). LCMS (ESI, m/z): 657,1 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-fluor-4-metilpiridin-2-amin

U rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (200 mg; 0,280 mmol) u dihlormetanu (3,0 ml) dodata je trifluorsirćetna kiselina (0,106 ml; 1,40 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je koncentrovana i razblažena u EtOAc. Rastvor je ispran zas. rastvorom NaHCO3. Organski slojevi su osušeni natrijum sulfatom, filtrirani i koncentrovani pomoću rotacionog uparivača, što je dalo 105 mg sirovog 6-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-fluor-4-metilpiridin-2-amina. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS (ESI, m/z): 373,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

U rastvor 6-(6-hlor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-5-fluor-4-metil-piridin-2-amina (210 mg; 0,563 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,50 ml; 2,82 mmol) u dihlormetanu (5,5 ml) dodata je akrilna kiselina 0,042 ml; 0,620 mmol) i HATU (328 mg; 0,845 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), a zatim podvrgnut reversno faznoj HPLC, što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (54,1 mg; 20,7%).

Referentni primer 11:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,67 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,81 (s, 1H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,4 Hz, 1H), 6,45 (dd, J =4,7, 1,0 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,93 (s, 2H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,91-3,73 (m, 8H), 2,21 (dd, J = 1,7, 0,9 Hz, 3H). LCMS (ESI, m/z): 427,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 12: (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Jedinjenje (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2-((2-fluor-3-

1

hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on je pripremljeno prema sledećoj sintetičkoj šemi:

Korak 1: terc-butil (R)-4-(7-brom-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (Intermedijer 4) (500 mg; 1,08 mmol) i (3R)-4-amino-3-fluor-2-metil-butan-2-ol hidrohlorida (375 mg; 2,38 mmol) u 2-propanolu (10,0 ml) dodat je N,N-diizopropiletilamin (1,90 ml; 10,8 mmol). Reakciona smeša je mešana na 65 °C tokom 18 h. Reakcija je koncentrovana i sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil (R)-4-(7-brom-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (558 mg; 94,3%). LCMS (ESI, m/z): 548,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil (R)-4-(6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)-7-

2

(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor terc-butil (R)-4-(7-brom-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (100 mg; 0,183 mmol) i bis(pinakolato)dibora (142 mg; 0,549 mmol) u 1,4-dioksanu (3,5 ml) dodat je kalijum acetat (54 mg; 0,548 mmol) i kompleks 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlorometan (9,0 mg; 0,0091 mmol). Reakciona smeša je degasirana, zatim mešana na 125 °C tokom 1 h. Reakcija je filtrirana kroz celit i koncentrovana, što je dalo 108 mg sirovog terc-butil (R)-4-(6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata. Sirova supstanca je korišćena u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS (ESI, m/z): 595,1 [M+H]<+>.

Korak 3: (R)-2-((6-(4-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-7-il)-5-fluor-4-metilpiridin-2-il)karbamoil)benzojeva kiselina

Rastvor terc-butil (R)-4-(6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (108 mg; 0,182 mmol), 2-(6-hlor-5-fluor-4-metil-2-piridil)izoindolin-1,3-diona (74,0 mg; 0,255 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida (13,0 mg; 0,0182 mmol) i kalijum fluorida (42,0 mg; 0,727 mmol) u acetonitrilu (2,0 ml) i vodi (0,5 ml) je degasiran. Reakciona smeša je zagrevana u mikrotalasnoj pećnici na 125 °C tokom 30 min. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo (R)-2-((6-(4-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-7-il)-5-fluor-4-metilpiridin-2-il)karbamoil)benzojevu kiselinu (38 mg, 28,2%). LCMS (ESI, m/z): 741,1 [M+H]<+>.

Korak 4: (R)-4-((7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-2-il)amino)-3-fluor-2-metilbutan-2-ol

U rastvor (R)-2-((6-(4-(4-(terc-butoksikarbonil)piperazin-1-il)-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-7-il)-5-fluor-4-metilpiridin-2-il)karbamoil)benzojeve kiseline (270 mg; 0,365 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,32 ml; 1,80 mmol) u dihlormetanu (3,5 ml) dodat je HATU (212,0 mg; 0,547 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil 4-[6-hlor-7-[6-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-3-fluor-4-metil-2-piridil]-2-[[(2R)-2-fluor-3-hidroksi-3-metil-butil]amino]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (151 mg; 57,3%). LCMS (ESI, m/z): 723,1 [M+H]<+>.

Rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-[6-(1,3-dioksoizoindolin-2-il)-3-fluor-4-metil-2-piridil]-2-[[(2R)-2-fluor-3-hidroksi-3-metil-butil]amino]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (190 mg; 0,263 mmol) u amonijaku (7 mol/l) u metanolu (1,90 ml; 13,2 mmol) mešan je na 45 °C tokom 2 h. Filtrat je koncentrovan i sirovi proizvod je prenet u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja.

U rastvor terc-butil 4-[7-(6-amino-3-fluor-4-metil-2-piridil)-6-hlor-2-[[(2R)-2-fluor-3-hidroksi-3-metil-butil]amino]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (156 mg; 0,263 mmol) u 1,4-dioksanu (1,0 ml) dodata je hlorovodonična kiselina (4 mol/l) u 1,4-dioksanu (0,65 ml;

4

2,63 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 h. Reakcija je koncentrovana, što je dalo 129 mg sirovog (R)-4-((7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-2-il)amino)-3-fluor-2-metilbutan-2-ola. Sirovi proizvod je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LCMS (ESI, m/z): 493,1 [M+H]<+>.

Korak 5: (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

U rastvor (R)-4-((7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-2-il)amino)-3-fluor-2-metilbutan-2-ola (129 mg; 0,262 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,23 ml; 1,31 mmol) u dihlormetanu 2,5 ml) dodata je akrilna kiselina (0,020 ml; 0,290 mmol) i HATU (153 mg; 0,393 mmol) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na 0 °C tokom 10 min. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), a podvrgnut reversno faznoj HPLC, što je dalo (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-fluor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2-((2-fluor-3-hidroksi-3-metilbutil)amino)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (25 mg; 17,3%).

Referentni primer 12:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 7,84 (s, 1H), 7,25 (d, J = 58,3 Hz, 2H), 6,84 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,41 (dd, J = 4,7, 1,0 Hz, 1H), 6,16 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,88 (s, 2H), 5,73 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,77 (s, 1H), 4,36 (s, 1H), 3,90-3,59 (m, 10H), 2,19 (dd, J = 1,7, 0,8 Hz, 3H), 1,20-1,09 (m, 6H). LCMS (ESI, m/z): 526,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 13: 1-(4-(7-(6-amino-3,4-dimetilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Postupak je isti kao za referentni primer 11, osim što je u koraku 1 referentnog primera 12 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 4,5-dimetilpiridin-2-amin umesto 2-amino-5-fluor-4-pikolina.

Referentni primer 13:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,66 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,64 (s, 1H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,40-6,36 (m, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,79-5,69 (m, 3H), 3,90-3,74 (m, 8H), 2,18 (d, J = 0,8 Hz, 3H), 1,83 (s, 3H). LCMS (ESI, m/z): 423,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 14: 1-(4-(7-(6-amino-3-hlor-4-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Postupak je isti kao za referentni primer 11, osim što je u koraku 1 referentnog primera 13 kao alternativni reagens korišćen komercijalno dostupan 2-amino-5-hlor-4-pikolin umesto 2-amino-5-fluor-4-pikolina.

Referentni primer 14:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,67 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,83 (dd, J = 16,7, 10,5 Hz, 1H), 6,51 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 6,23-6,14 (m, 3H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,83 (dd, J = 39,2, 5,3 Hz, 8H), 2,28 (d, J = 0,7 Hz, 3H). LCMS (ESI, m/z): 443,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 15: 1-(4-(7-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-(7-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U atmsferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (2,5 g; 5,2 mmol), 6-brom-5-metilpiridin-2-amina (1 g; 5,3 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlorid dihlorometan (432 mg; 0,52 mmol), natrijum hidroksida (430 mg; 10,75 mmol) u 1,4-dioksanu (15 ml) i vodi (2 ml) mešan je tokom 2 h na 100 °C. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 1,6 g (67%) terc-butil 4-[7-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1,6 g; 3,5 mmol; prinos 67%) u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 455,2 [M+H]<+>.

Korak 2: 6-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-metilpiridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1,5 g; 3,29 mmol) i trifluorsirćetne kiseline (1,12 g; 9,82 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešan je tokom 3 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, što je dalo 1,8 g (sirovog) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-metilpiridin-2-amina kao smeđe ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS (ESI, m/z): 355,1 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-[4-[7-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-metilpiridin-2-amina (600 mg; 1,69 mmol), prop-2-enske kiseline (140 mg; 1,94 mmol), HATU (1,3 g; 3,41 mmol), N,N-diizopropiletilamina (877 mg; 6,78 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešan je tokom 2 h na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (5 ml), razblažen dihlormetanom (50 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (3x10 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je dalje izolovan pomoću prep-HPLC pri sledećim uslovima: kolona: CHIRALPAK IE, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza A:MTBE(10 mM NH3- metanol)--HPLC, mobilna faza B: metanol --HPLCprotok: 20 ml/min; gradijent: 15 B do 15 B za 27 min; 220/254 nm; RT1: 17,672; RT2: 23,294, što je dalo 1-[4-[7-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (20,2 mg; 0,048 mmol; prinos 3%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 409,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 15:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,23 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 7,48 (dd, J = 8,4, 0,4 Hz, 1H), 6,88-6,81 (m, 1H), 6,66 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,83 (dd, J = 10,8, 2,0 Hz, 1H), 4,02 (s, 4H), 3,94 (s, 4H), 2,00 (s, 3H).

Referentni primer 16: N-(6-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]-5-etilpiridin-2-il)acetamid

Korak 1: N-(6-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]-5-metilpiridin-2-il)acetamid

Rastvor 1-[4-[7-(6-amino-3-metilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona (300 mg; 0,73 mmol), acetil acetata (112 mg; 1,09 mmol), trietilamina (221 mg; 2,18 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešan je tokom 9 h na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (5 ml), razblažen dihlormetanom (50 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (3x10 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je dalje izolovan pomoću prep-HPLC pri sledećim uslovima: kolona: CHIRALPAK IE, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza A:MTBE(10 mM NH3-metanol)--HPLC, mobilna faza B: metanol --HPLCprotok: 20 ml/min; gradijent: 15 B do 15 B za 27 min; 220/254 nm; RT1: 17,672; RT2: 23,294, što je dalo N-(6-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]-5-metilpiridin-2-il)acetamid (10,2 mg; 0,023 mmol; prinos 3%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 451,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 16:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 8,13-8,08 (m, 1H), 7,76-7,74 (m, 2H), 6,86-6,79 (m, 1H), 6,27 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,80 (dd, J = 14,4, 2,0 Hz, 1H), 4,00 (s, 4H), 3,92 (s, 4H), 2,16 (s, 3H), 2,13 (s, 3H).

Primeri 17a i 17b: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 17a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 17b)

17a17b

Sintetički postupak

Korak 1: 6-brom-N,N-bis(4-metoksifenil)-4-metilpiridin-2-amin

U rastvor 6-brom-4-metilpiridin-2-amina (30,0 g; 160 mmol) u N,N-dimetilformamidu (500 ml) polako je dodavan natrijum hidrid (19,0 g; 792 mmol) na 0 °C i rastvor je mešan na 25 °C tokom 1 h. U reakcioni sistem je zatim dodat 4-metoksibenzilhlorid (56,0 g, 359 mmol) i mešan na 25 °C tokom 2 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je deaktiviran zasićenim rastvorom amonijum hlorida (500 ml) i razblažen etil acetatom (2,5 l). Smeša je isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (5x500 ml) i organski slojevi su kombinovani, osušeni iznad Na2SO4, upareni pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (15%), što je dalo 6-brom-N,N-bis(4-metoksibenzil)-4-metilpiridin-2-amin (60 g; 140 mmol; prinos 87,5%) u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 427,1 [M+H]<+>.

Korak 2: N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-4-metil-6-tributilstanil-piridin-2-amin

U atmosferi azota, rastvor 6-brom-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-4-metil-piridin-2-amina (35,0 g; 82 mmol), heksabutildikalaja (143,0 g; 247 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (7,53 g; 8,2 mmol), tricikloheksil fosfina (4,6 g; 16,4 mmol) i litijum hlorida (17,3 g; 412 mmol) u 1,4-dioksanu (220 ml) mešan je na 110 °C tokom

1

5 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (10/1), što je dalo N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-4-metil-6-tributilstanil-piridin-2-amin (45 g; 71 mmol; prinos 86,2%) u vidu crvenog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 639,3 [M+H]<+>.

Korak 3: 2-amino-4-brom-5-hlor-3-fluor-benzojeva kiselina

Rastvor 2-amino-4-brom-3-fluor-benzojeve kiseline (100,0 g; 427 mmol) i N-hlorsukcinimida (66,0 g; 494 mmol) u N,N-dimetilformamidu (1 l) mešan je na 80 °C tokom 2 h. Nakon završetka, sistem je sipan u vodu (2,0 l), istaložila se velika količina čvrstih supstanci. Čvrste supstance su zatim sakupljene nakon filtracije. Čvrste supstance su isprane toplom vodom (1 l). Čvrste supstance su zatim osušene pod infracrvenom lampom, što je dalo 2-amino-4-brom-5-hlor-3-fluor-benzojevu kiselinu (100 g; 373 mmol; prinos 87,2%) u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 265,9 [M-H]<+>.

Korak 4: 7-brom-6-hlor-8-fluorhinazolin-2,4(1H,3H)-dion

Rastvor 2-amino-4-brom-5-hlor-3-fluor-benzojeve kiseline (120,0 g; 447 mmol) u urei (806,0 g; 13,4 mol) mešan je na 200 °C tokom 1,5 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je ohlađen na 80 °C, a u sistem je dodata voda (1,5 l) uz mešanje 20 minuta. Nakon filtracije, čvrste supstance su sakupljene i isprane toplom vodom (1 l). Čvrste supstance su zatim osušene pod infracrvenom lampom, što je dalo 7-brom-6-hlor-8-fluorhinazolin-2,4(1H,3H)-dion (120 g; 409 mmol; prinos 91,5%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 290,9 [M-H]<+>.

Korak 5: terc-butil (3S)-4-(7-brom-2,6-dihlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

2

Rastvor 7-brom-6-hlor-8-fluor-hinazolin-2,4-diola (65,0 g; 222 mmol) i DMF-a (500,0 mg; 6,85 mmol) u POCl3(1,0 l) mešan je na 110 °C tokom 60 h. Nakon što je polazna supstanca potpuno potrošena, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Zatim su 1,4-dioksan (1,0 l), N,N-diizopropiletilamin (286,0 g; 2217 mmol) i terc-butil (3S)-3-metil-1-piperazin karboksilat (90,0 g; 449 mmol) dodati u reakcioni sistem i mešani na 25 °C tokom 1 h. Nakon završetka, rastvarač je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (20%), što je dalo tercbutil (3S)-4-(7-brom-2,6-dihlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (65 g; 132 mmol; prinos 59,4%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 493,0 [M+H]<+>.

Korak 6: terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Smeša terc-butil (3S)-4-(7-brom-2,6-dihlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (30,0 g; 61 mmol) i kalijum fluorida (71,0 g; 1224 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (300 ml) mešana je na 120 °C tokom 18 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je ohlađen na sobnu temperaturu. Zatim je u sistem dodat etil acetat (1,5 l) i smeša je isprana vodom (3x500 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (20%), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (23 g; 48 mmol; prinos 79,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 477,0 [M+H]<+>.

Korak 7: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (23,0 g; 48 mmol), N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-4-metil-6-tributilstanil-piridin-2-amina (62,0 g; 97 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (11,2 g; 9,7 mmol), kupro jodida (2,8 g; 15 mmol) i litijum hlorida (5,0 g; 119 mmol) u 1,4-dioksanu (320 ml) mešan je na 120 °C tokom 16 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je razblažen vodom (100 ml) i ekstrahovan etil acetatom (100 ml). Organski slojevi su zatim spojeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (30%), što je dalo tercbutil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (18,5 g; 25 mmol; prinos 51,6%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 745,3 [M+H]<+>.

Korak 8: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (18,5 g; 25 mmol), ptoluensulfonske kiseline (171,0 mg; 0,99 mmol) i N-jodsukcinimida (28,0 g; 125 mmol) u N,N-dimetilformamidu (350 ml) mešan je na 25 °C tokom 5 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je razblažen etil acetatom (1,5 l) i ispran zasićenim rastvorom natrijum tiosulfata (4x350 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom

4

(25%), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (16 g; 18,4 mmol; prinos 74%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 871,2 [M+H]<+>.

Korak 9: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (16,0 g; 18,4 mmol), metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetata (88,3 g; 460 mmol) i kupro jodida (42,0 g; 221 mmol) u N,N-metilacetamidu (400 ml) mešan je na 90 °C tokom 18 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je razblažen etil acetatom (2,0 l) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (4x350 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (30%), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (12,2 g; 15 mmol; prinos 81,7%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 813,3 [M+H]<+>.

Korak 10: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U rastvor (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola (4,32 g; 37,5 mmol) u tetrahidrofuranu (300 ml) polako je dodavan natrijum hidrid (2,1 g; 87,5 mmol) na 0 °C i mešan 1 tokom h na 25 °C. Zatim je terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (12,2 g; 15 mmol) dodat u reakcioni sistem i mešan na 25 °C tokom 1 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je deaktiviran metanolom (50 ml). Zatim je smeša koncentrovana pod vakuumom i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (6/94), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (8,6 g; 9,5 mmol; prinos 63,1%) u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 908,4 [M+H]<+>.

Korak 11: 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (8,6 g; 9,5 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (100 ml) mešan je na 50 °C tokom 4 h. Nakon završetka, reakcioni sistem je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren dihlormetanom (50 ml) i pH je podešen na pH = 9 sa N,N-diizopropiletilaminom. Nakon koncentrovanja pod vakuumom, ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom direktno pod sledećim uslovima: kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B:ACN, B% (5%~ 40% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (3,5 g; 6,17 mmol; prinos 65,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 568,2 [M+H]<+>.

Korak 12: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 17a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 17b)

U rastvor 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (2,5 g; 4,4 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (2,9 g; 22,5 mmol) u dihlormetanu (120 ml) dodat je akriloil hlorid (359,0 mg; 3,97 mmol) na -78 °C i mešan na -78 °C tokom 25 minuta. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom direktno pod sledećim uslovima: kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B:ACN, B% (5%~ 60% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (1,3 g; 2,09 mmol; prinos 47,5%) u vidu smeđe čvrste supstance. Smeša dijasteroizomera je razdvojena pomoću prephiralne-HPLC pod sledećim uslovima: kolona, CHIRALPAK IC-30,46*5 cm 3 um; mobilna faza, (heks: dihlormetan =3:1) (0,1%DEA):EtOH=50:50; detektor, 254 nm; protok, 1,0 ml/min; temperatura: 25 °C, što je dalo 657,7 mg 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Primer 17a) u vidu bele čvrste supstance i 352,1 mg 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (Primer 17b) u vidu bele čvrste supstance.

Primer 17a: LC-MS: (ESI, m/z): 622,2 [M+H]<+>,<1>H NMR: (400 MHz, CDCl3, ppm) δ 7,64 (s, 1H), 6,70-6,55 (m, 1H), 6,48 (s, 1H), 6,42-6,35 (m, 1H), 5,82-5,75 (m, 1H), 4,90-4,79 (m, 2H), 4,78-4,40 (m, 3H), 4,35-4,28 (m, 1H), 4,18-4,00 (m, 1H), 3,99-3,76 (m, 1H), 3,72-3,45 (m, 2H), 3,31-2,98 (m, 2H), 2,81-2,70 (m, 1H), 2,55-2,45 (m, 6H), 2,35-2,25 (m, 1H), 2,11-2,01 (m, 1H), 1,95-1,72 (m, 3H), 1,36-1,34 (m, 3H).

Primer 17b: LC-MS: (ESI, m/z): 622,2 [M+H]<+>,<1>H NMR: (400 MHz, CDCl3, ppm) δ 7.63 (s, 1H), 6,70-6,55 (m, 1H), 6,50 (s, 1H), 6,42-6,35 (m, 1H), 5,82-5,75 (m, 1H), 4,85-4,70 (m, 2H), 4,78-4,68 (m, 2H), 4,65-4,55 (m, 1H), 4,50-4,40 (m, 1H), 4,30-4,10 (m, 1H), 4,053,75 (m, 1H), 3,80-3,76 (m, 2H), 3,25-3,08 (m, 2H), 2,85-2,75 (m, 1H), 2,60-2,45 (m, 6H), 2,40-2,25 (m, 1H), 2,15-2,05 (m, 1H), 1,95-1,72 (m, 3H), 1,45-1,32 (m, 3H).

Referentni primeri 18a i 18b: (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-fluorbut-2-en-1-on i (E)-1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-fluorbut-2-en-1-on

Sintetički postupak

U rastvor 6-[6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (500 mg; 0,88 mmol), HATU (401 mg; 1,06 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (228 mg; 0,96 mmol) u dihlormetanu (25 ml) dodata je (E)-4-fluorobut-2-enska kiselina (100 mg; 3,97 mmol) na 25 °C i rastvor smeše je mešan tokom 0,5 h. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom direktno pod sledećim uslovima: kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B:ACN, B% (5%~ 60% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo smešu (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-fluorbut-2-en-1-ona i (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-fluorbut-2-en-1-ona (130 mg, 0,20 mmol, prinos 23%) u vidu bele čvrste supstance. Smeša dijasteroizomera je razdvojena pomoću prep-hiralne-HPLC sa sledećim uslovom: kolona: CHIRAL Cellulose-SB, dimenzije kolone: 0,46*10 cm;3 um, mobilna faza heks: EtOH=50:50, protok: 1,0 ml/min, temperatura: 25 °C, što je dalo 32 mg (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-fluorbut-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance i 29,9 mg (E)-1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-fluorbut-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 18a: LC-MS: (ESI, m/z): 654,2 [M+H]<+>,<1>HNMR: (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,82 (s, 1H), 6,85 (s, 2H), 6,83-6,68 (m, 2H), 6,50 (s, 1H), 5,20 (d,.J=2,8 Hz, 1H), 5,08 (d, J=2,8 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,41-4,23 (m, 2H), 4,19-3,94 (m, 3H), 3,73-3,65 (m, 1H), 3,43-3,07 (m, 2H), 2,96-2,93 (m, 1H), 2,60-2,50 (m, 1H), 2,37-2,36 (m, 6H), 2,18 (dd, J=16,4, 8,0 Hz, 1H), 1,99-1,90 (m, 1H), 1,72-1,59 (m, 3H), 1,27 (t, J =6,8 Hz, 3H).

Referentni primer 18b: LC-MS: (ESI, m/z): 654,2 [M+H]<+>,<1>HNMR: (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,80 (s, 1H), 6,85 (s, 2H), 6,83-6,68 (m, 2H), 6,50 (s, 1H), 5,20 (d, J =2,8 Hz, 1H), 5,08 (d, J=2,8 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,39-4,23 (m, 2H), 4,20-3,93 (m, 3H), 3,70-3,60 (m, 1H), 3,51-3,09 (m, 2H), 2,96-2,93 (m, 1H), 2,60-2,52 (m, 1H), 2,37-2,36 (m, 6H), 2,18 (dd, J=16,4, 8,0 Hz, 1H), 1,99-1,90 (m, 1H), 1,72-1,59 (m, 3H), 1,30 (t, J=8,0 Hz, 3H).

Referentni primer 19: 1-((3S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-4-metil-6-tributilstanilpiridin-2-amina (4,0 g; 6,27 mmol) i terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (2,31 g; 5,02 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (0,72 g; 0,63 mmol), litijum hlorida (0,66 g; 15,69 mmol) i kupro jodida (0,12 g; 0,63 mmol) u 1,4-dioksanu (100 ml) mešan je na 120 °C tokom 3 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (200 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml). Organski slojevi su zatim kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Organski slojevi su koncentrovani pod vakuumom, a ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/20), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,1 g; 1,54 mmol; prinos 24,6%) u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 713,3 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-jod-4-metil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (2 g; 3 mmol) i N-jodsukcinimida (1 g; 3,00 mmol) u acetonitrilu (200 ml) mešan je na 50 °C tokom 4 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan etil acetatom (4x50 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/20), što je dalo terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-jod-4-metil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1,3 g; 1,55 mmol; prinos 656,5%) u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 839,2 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilata (0,1 g; 0,12 mmol), (1,10-fenantrolin)(trifluormetil)bakra(I) (0,73 g; 2,34 mmol) i kupro jodida (0,45 g; 2,34 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan etil acetatom (4x350 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/5), što je dalo terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (60 mg; 0,075 mmol; prinos 64,4%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 781,3 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-[6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

1

Rastvor terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilata (0,1 g; 0,13 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (5,0 ml) mešan je na 50 °C tokom 3 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/9), što je dalo 6-[6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (40 mg; 0,08 mmol; prinos 69,9%) u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 441,1 [M+H]<+>.

Korak 5: 1-((3S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifiormetil)piridin-2-amina (0,04 g; 0,09 mmol) i HATU (0,07 g; 0,18 mmol), N,N-diizopropiletilamina (0,03 g; 0,26 mmol) u dihlormetanu (3 ml) mešan je na -78 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodata akrilna kiselina (0,01 g; 0,13 mmol) i mešana na -78 °C tokom 4 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Sirovi proizvod je dalje izolovan pomoću prep-HPLC pri sledećim uslovima: kolona: CHIRALPAK IE, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza A: MTBE (10 mM NH3-metanol)--HPLC, mobilna faza B: metanol --HPLC; protok: 20 ml/min; gradijent: 15 B do 15 B za 27 min; 220/254 nm; RT1: 17,672; RT2: 23,294, što je dalo 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (10 mg; 0,019 mmol; prinos 22,3%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 509,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 19:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,67 (s, 1H), 7,92 (s, 1H), 6,89-6,82 (m, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,32-6,26 (m, 1H), 5,83-5,80 (m,1H), 4,56-4,39 (m, 1H), 4,38-4,30 (m, 1H), 4,20-4,02 (m, 1H), 3,80-3,52 (m, 2H), 3,33-3,30 (m, 1H), 3,22-3,13 (m,

2

1H), 2,45 (s, 3H), 1,42 (d, J = 1,6 Hz, 3H).

Referentni primer 20: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(azetidin-1-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-[6-(azetidin-1-il)-7-brom-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-jod-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (5,5 g; 10,59 mmol), azetidina (1,2 g; 21,19 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (609,15 mg; 1,06 mmol), ksantfosa (1,22 g; 2,12 mmol) i cezijum karbonata (6,9 g; 21,19 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen etil acetatom (200 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (45/55), što je dalo terc-butil 4-[6-(azetidin-1-il)-7-brom-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (1,0 g, 2,24 mmol, prinos 21,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 448,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-[6-(azetidin-1-il)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-(azetidin-1-il)-7-brom-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1,0 g; 2,23 mmol), bis(pinakolato)dibora (5,66 g; 22,3 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (182,0 mg; 0,22 mmol) i kalijum acetata (437,15 mg; 4,46 mmol) u 1,4-dioksanu (15 ml) mešan je na 80 °C tokom 3 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen dihlormetanom (100 ml). Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u petrol etru (100 ml). Nakon filtracije, filter pogača je prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/1), što je dalo terc-butil 4-[6-(azetidin-1-il)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (500 mg; 1,01 mmol; prinos 45,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 496,3 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(azetidin-1-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-(azetidin-1-il)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 1,01 mmol), 6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (243,24 mg; 1,01 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (70,85 mg; 0,10 mmol) i kalijum fluorida (117,07 mg; 2,02 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (2 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (3/97), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(azetidin-1-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (280 mg; 0,53 mmol; prinos

4

52,4%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 530,2 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-[6-(azetidin-1-il)-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(azetidin-1-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,38 mmol) i silika gela (1,0 g) u toluenu (20 ml) mešan je na 110 °C tokom 12 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/9), što je dalo 6-[6-(azetidin-1-il)-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (150 mg; 0,35 mmol; prinos 92,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 430,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(azetidin-1-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-(azetidin-1-il)-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (150,0 mg; 0,35 mmol), akrilne kiseline (25,17 mg; 0,35 mmol), HATU (159,37 mg; 0,42 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (45 mg; 0,35 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen dihlormetanom i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom na koloni uz eluiranje acetonitrilom/vodom (1/1), što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(azetidin-1-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (5,9 mg; prinos 3,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 484,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 20:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,50 (s, 1H), 7,83 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,91-6,82 (m, 1H), 6,75-6,70 (m, 2H), 6,30 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,83 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 3,99-3,81 (m, 8H), 3,78-3,61 (m, 4H), 2,29-2,19 (m, 2H).

Referentni primer 21: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-(6-acetil-7-bromhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-jod-hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (1,8 g; 3,47 mmol), tributil(1-etoksivinil)kalaja (2,5 g; 6,93 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (243,4 mg; 0,35 mmol) u 1,4-dioksanu (40 ml) mešan je na 65 °C tokom 30 h. Nakon završetka, u rastvor je dodata hlorovodonična kiselina (40 ml; 2 M) i mešan je na 25 °C 0,5 h. Zatim je rastvarač koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren u vodi (40 ml), a pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 9 pomoću kalijum karbonata. Zatim je dodat di-terc-butil dikarbonat (1,67 g, 7,61 mmol) i rastvor je mešan na 25 °C tokom 2 h. Nakon završetka, rastvor je ekstrahovan etil acetatom (100 ml) i organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (1:1), što je dalo terc-butil 4-(6-acetil-7-bromhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (1,0 g; 2,30 mmol; prinos 66,3%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 435,1, 437,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-[7-brom-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(6-acetil-7-bromhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (1,2 g, 2,8 mmol), dietilaminosumpor trifluorida (3,6 ml, 27,6 mmol) u hloroformu (30 ml) mešan je na 25 °C tokom 36 h. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (5 ml) i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom na koloni uz eluiranje acetonitrilom/vodom (5/1), što je dalo terc-butil 4-[7-brom-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (570 mg; 1,2 mmol; prinos 45,2%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 457,1, 459,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[6-(1,1-difluoretil)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[7-brom-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (550,0 mg; 1,2 mmol), bis(pinakolato)dibora (1,5 g; 6,0 mmol) kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (88,0 mg; 0,1 mmol), kalijum acetata (353,6 mg; 3,6 mmol) u toluenu (20,0 ml) na 95 °C tokom 4 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (4/1), što je dalo terc-butil 4-[6-(1,1difluoretil)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (350,0 mg; 0,7 mmol; prinos 57,7%) u vidu svetložutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 505,3 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-(1,1-difluoretil)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (350,0 mg; 0,7 mmol), 6-brom-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (167,2 mg; 0,7 mmol), kalijum karbonata (287,3 mg; 2,1 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (48,7 mg; 0,1 mmol) u acetonitrilu (20 ml) i vodi (2 ml) mešan je 4 h na 95 °C. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (6:1), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (170 mg; 0,3 mmol; prinos 45,5%) kao svetlosmeđe ulje. LC-MS: (ESI, m/z): 539,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-(1,1-difluoretil)-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (160,0 mg; 0,3 mmol) u dihlormetanu (10 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml) mešan je na 25 °C tokom 3 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 6-[6-(1,1-difluoretil)-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (170 mg sirovog) kao svetlosmeđe ulje koje je korišćeno za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 439,2 [M+H]<+>

Korak 6: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor (6-[6-(1,1-difluoretil)-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (160,0 mg; 0,4 mmol), HATU (346,9 mg; 0,9 mmol), akrilne kiseline (52,6 mg; 0,7 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (235,4 mg; 1,8 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 1,0 h. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (5 ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (3x20 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (6/1), što je dalo 100 mg sirovog proizvoda. Zatim je sirovi proizvod prečišćen pomoću prep-HPLC, što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-(1,1-difluoretil)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (22,1 mg; 0,04 mmol; prinos 12,3%) u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 493,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 21:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,69 (s, 1H), 8,26 (s, 1H), 7,78 (d, J = 7,2 Hz, 1H), 7,67 (s, 1H), 6,84 (dd, J = 16,8, 10,4 Hz, 1H), 6,67 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,4, 2,0 Hz, 1H), 4,15-4,00 (m, 4H), 3,99-3,86 (m, 4H), 2,02 (dd, J = 19,2, 18,4 Hz, 3H).

Referentni primer 22: 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperidin-4-karbonitril

Korak 1: 7-brom-4,6-dihlorhinazolin

Rastvor 7-brom-6-hlor-3H-hinazolin-4-ona (50 g; 38,5 mmol), N,N-dimetilformamida (1,0 ml) u tionil hloridu (500 ml; 192,7 mmol) mešan je na 80 °C tokom 3 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je zatim prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/10), što je dalo 7-brom-4,6-dihlorhinazolin (26 g, prinos 98%) u vidu bele čvrste supstance.

Korak 2: 7 terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-hinazolin-4-il)-4-cijano-piperidin-1-karboksilat

U atmosferi azota, u rastvor 1-Boc-4-cijanopiperidina (18,9 g; 90,0 mmol) i 7-brom-4,6-dihlor-hinazolina (5,0 g; 18,0 mmol) u suvom toluenu (100 ml) dodat je TMPMgCl LiCl

1

(54,0 ml; 54,0 mmol; 1,0 M u THF-u) na -78 °C tokom 0,5 h. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x100 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom uz eluiranje smešom etil acetat/petrol etar (1/2), što je dalo sirovi proizvod. Sirova supstanca je zatim ponovo prečišćena reversno faznom hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (7/3), što je dalo terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-hinazolin-4-il)-4-cijano-piperidin-1-karboksilat (1,6 g; 3,5 mmol; prinos 19,7%). LC-MS: (ESI, m/z): 451,0 [M+H]<+>

Korak 3: terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]-4-cijano-piperidin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-hinazolin-4-il)-4-cijanopiperidin-1-karboksilata (1,0 g; 2,2 mmol), bis(pinakolato)dibora (2,8 g; 11,1 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (310,4 mg; 0,4 mmol) i kalijum acetata (650,8 mg; 6,6 mmol) u 1,4-dioksanu (30 ml) mešan je na 110 °C tokom 2 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (30 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (7/3), što je dalo terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]-4-cijano-piperidin-1-karboksilat (300 mg; 0,6 mmol; prinos 27,2%) u vidu beličaste čvrste supstance, LC-MS: (ESI, m/z): 499,2 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-4-cijano-piperidin-1-karboksilat

1 1

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]-4-cijano-piperidin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,48 mmol), 6-brom-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (134,7 mg; 0,5 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (33,7 mg; 0,05 mmol), kalijum fluorida (83,5 mg; 1,4 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (1 ml) mešan je na 80 °C tokom 1 h. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen hromatografijom na koloni silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (2/1), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-4-cijano-piperidin-1-karboksilat (140 mg; 0,26 mmol; prinos 53,3%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 547,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperidin-4-karbonitril 2,2,2-trifluoracetat

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-4-cijano-piperidin-1-karboksilata (140,0 mg; 0,26 mmol) u dihlormetanu (5 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (0,5 ml) mešan je na 25 °C tokom 3 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobilo 150 mg sirove supstance koja je korišćena za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 447,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperidin-4-karbonitril

1 2

Rastvor akrilne kiseline (32,3 mg; 0,5 mmol), HATU (85,1 mg; 0,2 mmol), N,N-diizopropiletilamina (86,6 mg; 0,7 mmol) i 4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperidin-4-karbonitril 2,2,2-trifluoracetata u dihlormetanu (5 ml) mešan je na 25 °C tokom 20 minuta. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (30 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x30 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (1/49), što je dalo sirovi proizvod. Sirova supstanca je zatim prečišćena reversno faznom hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (6/1), što je dalo 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-1-prop-2-enoil-piperidin-4-karbonitril (2,1 mg; 0,0042 mmol; prinos 1,9%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 501,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 22<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4ppm) δ 9,34 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,02 (s, 1H), 6,91-6,87 (m, 1H), 6,63 (s, 1H), 6,27 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,8, 2,0 Hz, 1H), 4,82-4,78 (m, 1H), 4,65(m, 1H), 4,44-4,35 (m, 1H), 3,81-3,72 (m, 1H), 3,40-3,35 (m, 1H), 2,69-2,60 (m, 2H), 2,48 (s, 3H), 2,45-2,35 (m, 1H).

Referentni primer 23: 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(ciklobuten-1-karbonil)piperazin-2-karbonitril

Sintetički postupak

1

Korak 1: ciklobuten-1-karbonil hlorid

Rastvor ciklobuten-1-karboksilne kiseline (300,0 mg; 3,1 mmol), N,N-dimetilformamida (22,3 mg; 0,3 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešan je na 0 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat hlorid oksalne kiseline (582,3 mg; 4,6 mmol) i mešan na 0 °C tokom 3 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobilo 350 mg sirovog proizvoda koji je korišćen direktno za sledeći korak.

Korak 2: 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-1-(ciklobuten-1-karbonil)piperazin-2-karbonitril

Rastvor 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-2-karbonitrila (150,0 mg; 0,3 mmol) i trietilamina (507,4 mg; 5,0 mmol) u dihlormetanu (25 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat ciklobuten-1-karbonil hlorid (195,2 mg, sirov) i mešan na 25 °C tokom 16 h. Reakcija je deaktivirana metanolom. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC pod sledećim uslovima: kolona, XBridge Shield RP18 OBD kolona 30*150 mm, 5 um;faza A:voda (10 MMOL/L NH4HCO3), faza B: ACN. Protok: 60 ml/min, RT: 6,15 min, što je dalo 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-1-(ciklobuten-1-karbonil)piperazin-2-karbonitril (50,6 mg, 0,0958 mmol; prinos 28,6%) u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 528,1 [M+H]<+>.

1 4

Referentni primer 23<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm) δ 8,88 (s, 1H), 8,15 (d, J = 12,3 Hz, 1H), 7,91 (s, 1H), 6,69 (d, J = 0,9 Hz, 1H), 6,51 (s, 1H), 5,82 (s, 1H), 4,85 (s, 2H), 4,47 (dd, J = 13,8, 7,8 Hz, 2H), 4,28 (d, J = 12,9 Hz, 1H), 3,88 (s, 1H), 3,40 (t, J = 15,8 Hz, 1H), 3,32-3,14 (m, 1H), 2,94 (s, 2H), 2,66-2,57 (m, 2H), 2,51 (s, 3H).

Referentni primer 24: 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(oksiran-2-karbonil)piperazin-2-karbonitril

Korak 1: terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (4,3 g; 9,0 mmol), 6-hlor-4-metil-5-

1

(trifluormetil)piridin-2-amina (1,5 g; 7,2 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (504,1 mg; 0,7 mmol), kalijum fluorida (1,6 g; 26,9 mmol) u acetonitrilu (15 ml) i vodi (1,5 ml) mešan je na 100 °C tokom 18 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (10/1), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (2,8 g, 5,4 mmol, prinos 59,8%) u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 523,2 [M+H]<+>.

Korak 2: 7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-ol

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (2,5 g; 4,8 mmol), natrijum hidroksida (573,7 mg; 14,3 mmol) u etanolu (30 ml) i vodi (10 ml) mešan je na 40 °C tokom 16 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/1), što je dalo 7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-ol (1,5 g, 4,2 mmol, prinos 88,5%) u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 355,0 [M+H]<+>.

Korak 3: 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-2-karbonitril

Rastvor piperazin-2-karbonitril dihidrohlorida (3,6 mg; 19,7 mmol), 7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-ola (1,4 g; 4,0 mmol), BOP (1,0 g; 23,7 mmol), N,N-diizopropiletilamina (5,1 g; 39,5 mmol) u dihlormetanu (50 ml) mešan je na 25 °C tokom 18 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo

1

4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-2-karbonitril (950 mg, 2,1 mmol, prinos 53,7%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 448,1 [M+H]<+>.

Korak 4: 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-1-(oksiran-2-karbonil)piperazin-2-karbonitril

Rastvor 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-2-karbonitrila (300,0 mg; 0,7 mmol), oksiran-2-karboksilne kiseline (88,5 mg; 1,0 mmol), BOP-a (592,6 mg; 1,3 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (432,1 mg; 3,4 mmol) u N,N-dimetil formamidu (20 ml) mešan je na 25 °C tokom 24 sata. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (40 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x100 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 220 mg sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC pod sledećim uslovima: kolona, X Bridge C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda/0,05%NH4HCO3, mobilna faza B: ACN; (uslovi); detektor, UV 254 nm.4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-1-(oksiran-2-karbonil)piperazin-2-karbonitril (10,6 mg; 0,02 mmol; prinos 3,1%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 518,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 24:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm) δ 8,90 (s, 1H), 8,21-8,09 (m, 1H), 7,91 (s, 1H), 6,50 (s, 1H), 5,85-5,75 (m, 1H), 4,82 (s, 2H), 4,47-4,21 (m, 3H), 4,05-3,95 (m, 1H), 3,73 (t, J = 3,4 Hz, 1H), 3,59-3,09 (m, 4H), 2,51 (s, 3H).

Referentni primer 25: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-2-(trifluormetil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

1

Sintetički postupak

Korak 1: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-2-(trifluormetil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-[3-(trifluormetil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (200,0 mg; 0,4 mmol) i akriloil hlorida (45,6 mg; 0,5 mmol), piridina (0,07 ml; 0,8 mmol) u N,N-dimetilformamidu (3 ml) mešan je na 0 °C tokom 3 sata. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (10 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x20 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (10 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/10), što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-2-(trifluormetil)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (19,4 mg; 0,04 mmol; prinos 8,7%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 531,1 [M+H]<+>.

1

Referentni primer 25:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,73 (s, 1H), 8,10 (s, 1H), 7,86-7,75 (m, 2H), 6,96 (s, 2H), 6,93-6,88 (m, 1H), 6,63 (d, 0,9 Hz, 1H), 6,27 (t, J = 12 Hz, 1H), 5,90-5,80 (m, 1H), 5,50-5,38 (m, 1H), 4,55-4,20 (m, 3H), 3,90-3,68 (m, 2H), 3,56-3,40 (m, 1H).

Referentni primer 26: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)-2-fluorprop-2-en-1-on

Korak 1: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)-2-fluorprop-2-en-1-on

1

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (240,0 mg; 0,6 mmol), 2-fluorprop-2-enske kiseline (60 mg; 0,7 mmol), HATU (260 mg; 0,7 mmol), N,N-diizopropiletilamina (150 mg; 1,2 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x30 ml). Kombinovani organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 108 mg (38%) 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)-2-fluorprop-2-en-1-ona u vidu čvrste bele supstance. LC-MS: (ESI, m/z) 495,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 26:<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 5,38-5,32 (dd, J = 18,8, 3,6 Hz, 1H), 5,29-5,25 (dd, J = 13,2, 4,0 Hz, 1H), 4,09-3,96 (m, 4H), 3,92 (s, 4H), 2,47 (s, 3H).

Referentni primer 27: 1-[4-[7-(3-amino-8-fluor-1-izohinolil)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-(6-hlor-8-fluor-7-(tributilstanil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

11

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (2,0 g; 4,5 mmol), heksabutildikalaja (5,2 g; 9,0 mmol), tris(dibenzilidenaceton)dipaladijuma (413 mg; 0,45 mmol), tricikloheksil fosfina (230 mg; 0,9 mmol) i litijum hlorida (565 mg; 13,5 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) mešan je na 110 °C tokom 5 sati. Nakon završetka, reakcioni sistem je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (10/1), što je dalo terc-butil 4-(6-hlor-8-fluor-7-(tributilstanil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (1,5 g, 2,3 mmol) kao crveno ulje. LC-MS: (ESI, m/z): 657,2 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(6-hlor-8-fluor-7-(tributilstanil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (500 mg; 0,76 mmol), 1-brom-8-fluorizohinolin-3-amina (183 mg; 0,76 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (88 mg; 0,076 mmol), kupro jodida (14,4 mg; 0,076 mmol) i litijum hlorida (96 mg; 2,28 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) mešan je na 120 °C tokom 16 sati. Nakon završetka, reakcioni sistem je razblažen vodom (10 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x20 ml). Organski slojevi su zatim spojeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijumsulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (2/1), što je dalo terc-butil 4-(7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (40 mg; 0,076 mmol; prinos 10%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 527,2 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-(6-hlor-8-fluor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-8-fluorizohinolin-3-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (60 mg; 0,1 mmol), trifluorsirćetne kiseline (1,0 ml) u dihlormetanu (5,0 ml) mešan je 30 minuta na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Zatim je ostatak rastvoren dihlormetanom (10 ml), a pH vrednost dobijenog rastvora je podešena na pH = 8 sa N,N-diizopropiletilaminom i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 30 mg 1-(6-hlor-8-fluor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-8-fluorizohinolin-3-amina kao belu čvrstu supstancu. LC-MS: (ESI, m/z): 427,1 [M+H]<+>.

Korak 4: 1-[4-[7-(3-amino-8-fluor-1-izohinolil)-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 1-(6-hlor-8-fluor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-8-fluor-izohinolin-3-amina (30,0 mg; 0,07 mmol), akrilne kiseline (5,1 mg; 0,07 mmol), N,N-diizopropiletilamina (18,1 mg; 0,14 mmol) i HATU (32,1 mg; 0,08 mmol) u dihlormetanu (2 ml) mešan je na -78 °C tokom 30 min. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana vodom (20 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3x50 ml). Rastvor je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (4/96), što je dalo 50 mg sirovog proizvoda. Zatim je sirovi proizvod dalje prečišćen pomoću prep-HPLC pod sledećim uslovima, što je dalo 1-[4-[7-(3-amino-8-fluor-1-izohinolil)-6-hlor-8-fluor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (4,2 mg; 0,0087 mmol; prinos 12,4%) u vidu bele čvrste supstance.

Prep-HPLC uslovi: kolona: kolona XBridge Prep C18 OBD, 5 um, 19*150 mm; mobilna faza A: voda (10 MMOL/L NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 35% B do 49% B za 7 min; 254/220 nm; Rt: 5,68 min

Referentni primer 27: LC-MS: (ESI, m/z): 481,1 [M+H]<+>.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,71 (s, 1H), 8,04 (s, 1H), 7,51-7,45 (m, 2H), 6,87-6,80 (m, 3H), 6,41 (d, J =5,2 Hz, 2H), 6,18 (d, J = 16,4, 2,0 Hz, 1H), 5,75(dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,94-3,77 (m, 8H).

Referentni primer 28: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-metilsulfonilhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-metilsulfonil-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

11

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1,0 g; 1,96 mmol), natrijum metansulfinata (810,3 mg; 7,86 mmol) i bakar(I) jodida (74,8 mg; 0,39 mmol) u dimetil sulfoksidu (20 ml) mešan je 10 sati na 80 °C. Nakon završetka, reakciona smeša je razblažena vodom (100 ml) i ekstrahovana etil acetatom (3x150 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (4/96), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-metilsulfonil-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (250 mg; 0,45 mmol; prinos 23%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 553,2 [M+H]<+>.

Korak 2: 6-(6-metilsulfonil-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-metilsulfonil-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (240,0 mg; 0,43 mmol) i trifluorsirćetne kiseline (1 ml) u dihlormetanu (5 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren dihlorometanom (5 ml) i pH rezultujućeg rastvora je podešen na pH = 9 sa N,N-diizopropiletilaminom. Nakon koncentrovanja pod vakuumom, ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom na koloni uz eluiranje vodom/acetonitrilom (62/38), što je dalo 6-(6-metilsulfonil-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (150 mg; 0,33 mmol; prinos 76,3%) u vidu čvrste žute supstance. LC-MS (ESI, m/z): 453,1 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-metilsulfonil-hinazolin-4il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-metilsulfonil-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (140,0 mg; 0,31 mmol), HATU (141,2 mg; 0,37 mmol), akrilne kiseline (22,3 mg; 0,31 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,11 ml; 0,62 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je na -78 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana vodom (20 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom na koloni uz eluiranje vodom/acetonitrilom (75/25), što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-metilsulfonil-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (20,5 mg; 0,0405 mmol; prinos 13,1%) u vidu čvrste bele supstance. LC-MS (ESI, m/z): 507,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 28:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,74 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 7,79 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,66 (s, 1H), 6,89 (s, 2H), 6,86-6,80 (m, 1H), 6,60 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 6,19 (dd, J = 16,8, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,5, 2,4 Hz, 1H), 4,05 (m, 4H), 3,86-3,72 (m, 4H), 3,42 (s, 3H).

Referentni primer 29: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-ciklopropilhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

11

1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-ciklopropil-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-ciklopropil-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (50,0 mg; 0,12 mmol), akrilne kiseline (8,7 mg; 0,12 mmol), HATU (45,87 mg; 0,12 mmol), N,N-diizopropiletilamina (15,6 mg; 0,12 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 20 minuta na -78 °C. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana vodom (20 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (4/96) da bi se dobio sirovi proizvod. Zatim je sirovi proizvod prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje vodom/acetonitrilom (3/2), što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-ciklopropil-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (2,8 mg; 0,006 mmol; prinos 5%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 469,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 29:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,62 (s, 1H), 7,85 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,63 (d, J = 11,4 Hz, 2H), 6,85 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,6, 1,9 Hz, 1H), 3,94 (s, 8H), 1,82 (t, J = 5,8 Hz, 1H), 0,97-0,83 (m, 3H), 0,71 (d, J = 5,6 Hz, 1H).

Referentni primer 30: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

11

Korak 1: 7-brom-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4(3H)-on

U rastvor 2-amino-4-brom-5-hlorbenzojeve kiseline (10 g; 39,9 mmol) u smeši hloroforma (100 ml) i N,N-diizopropiletilamina (7,5 ml) na 0 °C dodat je anhidrid trifluorsirćetne kiseline (84 g; 399,2 mmol). Nakon završetka dodavanja, reakciona smeša je zagrejana do refluksa i mešana je 3 sata. Zatim je reakciona smeša ohlađena na sobnu temperaturu i koncentrovana da bi se dobila sirova supstanca. Sirova supstanca je rastvorena u hloroformu (100 ml) zasićenim gasovitim amonijakom i zatim mešana tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, smeša je koncentrovana pod vakuumom i dobijena čvrsta supstanca je isprana vodom (100 ml). Nakon filtracije, filter pogača je sakupljena i nakon toga prekristalisana iz toluena, što je dalo 2,1 g (16%) 7-brom-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4(3H)-ona u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 326,9 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

11

Rastvor 7-brom-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4(3H)-ona (4,0 g; 12,2 mmol; 1,00 ekv.), terc-butil piperazin-1-karboksilata (4,6 g; 24,4 mmol), BOP (8,1 g; 18,3 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (4,7 g; 36,5 mmol) u hloroformu (100 ml) mešan je tokom 15 h na 80 °C. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/2), što je dalo 5,2 g (85%) terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 495,0 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-(6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (3,0 g; 6,0 mmol), bis(pinakolato)dibora (7,6 g; 30,3 mmol) kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (490,2 mg; 0,6 mmol) i kalijum acetata (1,8 g; 18,0 mmol) u 1,4-dioksanu (50 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (50 ml) i filtriran. Filter je sakupljen i koncentrovan pod vakuumom. Čvrsta supstanca je isprana petrol etrom (3x30 ml) i sakupljena filtracijom, što je dalo 2,0 sirovog (80% čistoće) terc-butil 4-(6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu beličaste čvrste supstance._LC-MS: (ESI, m/z): 543,2 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

11

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1,0 g sirovog, 80% čistoće, 1,5 mmol), 6-hlor-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (300 mg; 1,4 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (50 mg; 0,07 mmol), kalijum fluorida (250 mg; 4,3 mmol) u acetonitrilu (4 ml) i vodi (1 ml) mešan je 30 minuta na 100 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml). Zatim su organski slojevi kombinovani, isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (3x20 ml), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/2), što je dalo 400 mg (46%) tercbutil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 591,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluormetil)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (490 mg; 0,8 mmol) u dihlormetanu (5 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (5 ml) mešan je 30 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren dihlorometanom (5 ml) i pH rezultujućeg rastvora je podešen na pH = 9 sa N,N-diizopropiletilaminom. Nakon

11

koncentrovanja pod vakuumom, ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (85/15), što je dalo 230 mg (57%) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluormetil)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 491,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)-2-(trifluormetil)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (210 mg; 0,4 mmol), prop-2-enske kiseline (40 mg; 0,6 mmol), HATU (200 mg; 0,5 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (300 mg; 2,3 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Zatim je ostatak prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje vodom/acetonitrilom (3/2), što je dalo 49,6 mg (21%) 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 545,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 30:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,24 (s, 1H), 7,78 (s, 1H), 6,85-6,78 (m, 3H), 6,49 (s, 1H), 6,22-6,15 (m, 1H), 5,78-5,72 (m, 1H), 4,08-4,00 (m, 4H), 3,88-3,70 (m, 4H), 2,37 (s, 3H).

Referentni primer 31: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

12

Korak 1: terc-butil 4-[7-brom-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (3 g; 6,5 mmol), metilamin hidrohlorida (900 mg; 13,3 mmol), kalijum karbonata (2,3 g; 16,6 mmol), N,N-dimetilacetamida (60 ml) mešan je tokom 12 h na 100 °C. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (150 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x150 ml). Zatim su organski slojevi kombinovani i isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (3x100 ml). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 1,5 g (51%) terc-butil 4-[7-brom-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 456,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-[6-hlor-2-(metilamino)-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[7-brom-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500 mg; 1,1 mmol), bis(pinakolato)dibora (1,4 g; 5,5 mmol), kalijum acetata (323,1 mg; 3,3 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlorid dihlormetan (89,8 mg; 0,1 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) ozračen je mikrotalasnim zračenjem tokom 2 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (20 ml) i filtriran. Filter je sakupljen i koncentrovan pod vakuumom. Čvrsta supstanca je isprana petrol etrom (3x30 ml) i sakupljena filtracijom do 600 mg (sirovog) tercbutil 4-(6-hlor-2-(metilamino)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata. LC-MS: (ESI, m/z): 504,2 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(6-hlor-2-(metilamino)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (500 mg; 1,0 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (69,8 mg; 0,1 mmol), kalijum fluorida (115,5 mg; 2,0 mmol) i 6-hlor-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (229,9 mg; 1,1 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (2 ml) mešan je tokom 1 h na 110 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml). Zatim su organski slojevi kombinovani, isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (3x20 ml), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 300 mg (55%) terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 552,2 [M+H]<+>.

Korak 4: 7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-N-metil-4-(piperazin-1-il)hinazolin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (110 mg; 0,2 mmol) u dihlormetanu (5 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (1 ml) mešan je 30 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 110 mg (sirovog) 7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-N-metil-4-(piperazin-1-il)hinazolin-2-amina u vidu tamnocrvene čvrste supstance koja je korišćena za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 452,1 [M+H]<+>.

Korak 5: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-N-metil-4-(piperazin-1-il)hinazolin-2-amina (110 mg sirovog proizvoda), prop-2-enske kiseline (17,5 mg; 0,2 mmol), HATU (92,6 mg; 0,2 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (125,6 mg; 1,0 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen

12

iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1) da bi se dobio sirovi proizvod. Zatim je sirovi proizvod prečišćen preparativnom HPLC tehnikom pod sledećim uslovima: Kolona: kolona XSelect CSH Prep C18 OBD, 5 um,19*150 mm; mobilna faza A: voda (0,05% TFA), mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 15% B do 58% B za 7 min; 254/220 nm; Rt: 6,15 min, što je dalo 32,8 mg (27%) 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(metilamino)hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 506,2 [M+H]<+>

Referentni primer 31:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,16 (s, 1H), 7,59-7,25 (m, 1H), 6,79 (dd, J = 16,8, 10,5 Hz, 1H), 6,65 (s, 1H), 6,30 (dd, J = 16,5, 1,8 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,8, 2,1 Hz, 1H), 4,27 (s, 4H), 3,94 (s, 4H), 3,09 (s, 3H), 2,45 (s, 3H).

Referentni primer 32: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: 7-brom-6-hlor-2-metil-3,4-dihidrohinazolin-4-on

Rastvor 2-amino-4-brom-5-hlorbenzojeve kiseline (10 g; 39,9 mmol) i acetil acetata (50 ml) mešan je tokom 3 h na 130 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan. Zatim je ostatak rastvoren u hloroformu (100 ml) zasićenom gasovitim amonijakom i zatim mešan 2 sata na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom i dobijena čvrsta supstanca je isprana vodom (100 ml). Nakon filtracije, filter pogača je sakupljena i nakon toga prekristalisana iz toluena, što je dalo 8,4 g (77%) 7-brom-6-hlor-2-metil-3,4-dihidrohinazolin-4-ona u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 272,9 [M+H]<+>

Korak 2: terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor 7-brom-6-hlor-2-metil-3,4-dihidrohinazolin-4-ona (1 g; 3,66 mmol), terc-butil piperazin-1-karboksilata (1,37 g; 7,36 mmol), BOP (2,45 g; 5,54 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1,8 ml; 10,89 mmol) u hloroformu (30 ml) mešan je tokom 15 h na 8 °C. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/2), što je dalo 850 mg (53%) terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 441,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[6-hlor-2-metil-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

12

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (2 g; 4,5 mmol), bis(pinakolato)dibora (3,3 g; 13,0 mmol), kalijum acetata (1,3 g; 13,6 mmol; 3,0 ekv.) i kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetana (196 mg; 0,24 mmol) u 1,4-dioksanu (30 ml) mešan je tokom 12 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (30 ml) i filtriran. Filter je sakupljen i koncentrovan pod vakuumom. Čvrsta supstanca je isprana petrol etrom (3x30 ml) i sakupljena filtracijom, što je dalo 1,9 g sirovog (85% čistoće) terc-butil 4-[6-hlor-2-metil-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 489,2 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-hlor-2-metil-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1 g; 2,1 mmol), 6-hlor-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (430 mg; 2,04 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (144 mg; 0,2 mmol) i kalijum fluorida (195 mg; 3,4 mmol) u acetonitrilu (20 ml) i vodi (4 ml) mešan je tokom 1 h na 100 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (100 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x100 ml). Zatim su organski slojevi kombinovani, isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (3x30 ml), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 460 mg (42%) terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 537,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-hlor-2-metil-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

12

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (350 mg; 0,65 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml) i dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 700 mg (sirovog) 6-[6-hlor-2-metil-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 437,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-2-metil-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (285 mg, sirovog), prop-2-enske kiseline (94 mg; 1,30 mmol), HATU (370 mg; 1,0 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (2 ml) u dihlormetanu (15 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda/0,05% TFA, mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 30% B do 70% B za 10 min; 254 nm, što je dalo 79,2 mg (12%) 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-metilhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu

12

bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 491,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 32:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,12 (s, 1H), 7,62 (s, 1H), 6,84 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,64-6,57 (m, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 3,98-3,89 (m, 8H), 2,63 (s, 3H), 2,46 (s, 3H).

Referentni primer 33: 1-(4-[7-[6-amino-3-metil-4-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: 1-(4-[7-[6-amino-3-metil-4-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-metil-4-(trifluormetil)piridin-2-amina (290,0 mg; 0,7 mmol), HATU (312,9 mg; 0,8 mmol), N,N-diizopropiletilamina (177,3

12

mg; 1,4 mmol), prop-2-enske kiseline (49,4 mg; 0,7 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je tokom 1 h na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen reversno faznom hromatografijom na koloni uz eluiranje acetonitrilom/vodom (3/7), što je dalo 50,8 mg (16%) 1-(4-[7-[6-amino-3-metil-4-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 477,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 33:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) 8,68 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 7,76 (s, 1H), 6,89-6,70 (m, 2H), 6,50 (s, 2H), 6,21-6,15 (m, 1H), 5,78-5,72 (m, 1H), 3,88-3,78 (m, 8H), 1,99 (s, 3H)

Referentni primer 34: 1-(4-(7-(6-amino-4-ciklopropil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: 2,6-dihlor-4-ciklopropil piridin

U atmosferi azota, u rastvor 2,6-dihlor-4-jodpiridina (3,6 g; 13,2 mmol),

12

tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (1,5 g; 1,3 mmol) u suvom THF-u (30 ml) dodat je rastvor brom(ciklopropil)cinka (26,4 ml; 26,4 mmol; 1,0 M u THF-u), zatim je rastvor mešan tokom 1 h na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (10/1), što je dalo 2,2 g (79%) 2,6-dihlor-4-ciklopropil piridina u vidu narandžaste čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 188,0 [M+H]<+>.

Korak 2: 6-hlor-4-ciklopropil piridin-2-amin

U atmosferi azota, rastvor 2,6-dihlor-4-ciklopropil piridina (1,2 g; 6,4 mmol), difenilmetanimina (1,16 g; 6,4 mmol), kompleksa tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum hloroform (662 mg; 0,64 mmol), ksantfosa (370 mg; 0,64 mmol), cezijum karbonata (4,2 g; 12,8 mmol) u 1,4-dioksanu (25 ml) mešan je tokom 2 h na 90 °C. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml). Organski slojevi su sakupljeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je rastvoren hlorovodonikom (10 ml, 3M u 1,4-dioksanu) i mešan tokom 1 h na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je zatim rastvoren dihlormetanom (50 ml), a pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 9 sa N,N-diizopropiletilaminom. Zatim je dobijeni rastvor koncentrovan pod vakuumom i ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/3), što je dalo 690 mg (64%) 6-hlor-4-ciklopropilpiridin-2-amina u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 169,0 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-hlor-4-ciklopropil-5-jodpiridin-2-amin

Rastvor 6-hlor-4-ciklopropilpiridin-2-amina (690 mg; 4,1 mmol), N-jodsukcinimida (1,2 g; 5,3 mmol) u acetonitrilu (10 ml) mešan je tokom 1 h na 50 °C. Nakon završetka, rastvor je razblažen zasićenim rastvorom natrijum tiosulfata (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (4x50 ml). Organski slojevi su zatim kombinovani, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil

1

acetatom/petrol etrom (1/4), što je dalo 950 mg (79%) 6-hlor-4-ciklopropil-5-jodpiridin-2-amina u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 294,9 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-hlor-4-ciklopropil-5-jod-N,N-bis(4-metoksibenzil)piridin-2-amin

Rastvor 6-hlor-4-ciklopropil-5-jodpiridin-2-amina (690 mg; 2,3 mmol), kalijum karbonata (1,3 g; 9,4 mmol), 1-(hlormetil)-4-metoksibenzena (1,5 g; 9,6 mmol), kalijum jodida (200 mg; 1,2 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešan je tokom 2 h na 110 °C. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (25 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x30 ml). Organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (3/97), što je dalo 1,2 g (96%) 6-hlor-4-ciklopropil-5-jod-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amina u vidu bezbojnog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 535,1 [M+H]<+>.

Korak 5:6-hlor-4-ciklopropil-N,N-bis(4-metoksibenzil)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

U atmosferi azota, rastvor 6-hlor-4-ciklopropil-5-jod-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amina (1,2 g; 2,2 mmol), metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetata (960 mg; 4,9 mmol) i kupro jodida (880 mg; 4,621 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešan je tokom 1 h na 100 °C. Nakon završetka, rastvor je razblažen vodom (25 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x30 ml). Organski slojevi su kombinovani i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (3/97), što je dalo 1,0 g (93%) 6-hlor-4-ciklopropil-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina kao svetložuto ulje. LC-MS: (ESI, m/z): 477,1 [M+H]<+>.

Korak 6: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-ciklopropil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

1 1

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (500 mg; 1,05 mmol), 6-hlor-4-ciklopropil-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (553 mg; 1,16 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (77,2 mg; 0,1 mmol), kalijum fluorida (122 mg; 2,1 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (1 ml) mešan je 30 minuta na 100 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (50 ml) i ekstrahovan etil acetatom (3x50 ml). Zatim su organski slojevi kombinovani, isprani zasićenim vodenim rastvorom soli (3x20 ml), osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/2), što je dalo 491 mg (59%) tercbutil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-ciklopropil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 789,3 [M+H]<+>.

Korak 7: 6-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-4-ciklopropil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-ciklopropil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (491 mg; 0,62 mmol) u dihlormetanu (5 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (5 ml) mešan je 30 min na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren dihlorometanom (5 ml) i pH rezultujućeg rastvora je podešen na pH = 9 sa N,N-

1 2

diizopropiletilaminom. Nakon koncentrovanja pod vakuumom, ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (83/17), što je dalo 205 mg (74%) 6-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-4-ciklopropil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 449,1 [M+H]<+>.

Korak 8: 1-(4-(7-(6-amino-4-ciklopropil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-4-ciklopropil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (205 mg; 0,46 mmol), prop-2-enske kiseline (33 mg; 0,46 mmol), HATU (210 mg; 0,55 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (89 mg; 0,69 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (30 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Zatim je ostatak prečišćen reversno faznom hromatografijom uz eluiranje vodom/acetonitrilom (3/2), što je dalo 49,6 mg (21%) 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-(trifluormetil)hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 503,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 34:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, ppm) δ 8,75 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 6,75-6,65 (m, 1H), 6,42-6,37 (m, 1H), 6,22 (s, 1H), 5,81 (dd, J = 7,2, 2,4 Hz, 1H), 4,98 (s, 1H), 4,05-3,80 (m, 8H), 2,19 (s, 1H), 1,25 (s, 1H), 1,14-1,07 (m, 2H), 0,88 (s, 2H).

Referentni primer 35: 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

1

Sintetički postupak

Korak 1: terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

1 4

Rastvor 6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (400,0 mg; 2,04 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1,00 g; 2,11 mmol), kompleksa 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (164,1 mg; 0,20 mmol) i K3PO4(848,0 mg; 3,99 mmol) u 1,4-dioksanu (8 ml) i vodi (0,5 ml) mešan je 60 min na 100 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan, razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran vodom (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 200,0 mg (19%) terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 509,2 [M+H]<+>.

Korak 2: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 0,98 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml) i dihlormetanu (10 ml) mešan je 60 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan. To je dalo 600,0 mg (sirovog) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina kao smeđeg ulja. LC-MS (ESI, m/z): 409,1 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor prop-2-enske kiseline (10,0 mg; 0,14 mmol), 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-

1

il)hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (60,0 mg; 0,15 mmol), HATU (56,0 mg; 0,15 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1 ml; 5,69 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan i razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (40 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1). Proizvod je pripremljen pomoću HPLC pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda/0.05% TFA, mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 30% B do 70% B za 10 min; 254 nm. To je dalo 9,7 mg (15%) 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 463,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 35:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,72 (s, 1H), 6,95 (s, 2H), 6,84 (dd, J = 16,5, 10,2 Hz, 1H), 6,62 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,18 (dd, J = 16,8, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,5, 2,4 Hz, 1H), 3,87-3,79 (m, 8H).

Referentni primer 36: N-(1-(4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-6-hlorhinazolin-7-il)izohinolin-3-il)ciklopropan karboksamid

Sintetički postupak

1

Korak 1: N-(1-(4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-6-hlorhinazolin-7-il)izohinolin-3-il)ciklopropan karboksamid

U rastvor 1-(4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona (160 mg; 0,36 mmol), piridina (57 mg; 0,72 mmol) u dihlormetanu (10 ml) dodat je ciklopropan karbonil hlorid (41 mg; 0,4 mmol), zatim je rastvor mešan 30 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom (30 ml), ekstrahovan dihlormetanom (3x30 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (3x10 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC pod sledećim uslovima: kolona, kolona XBridge Shield RP18 OBD, 5 um,19*150 mm; mobilna faza, voda (voda sa 0,05% NH3) i ACN (10% ACN do 45% za 10 min); detektor, UV 254/220 nm. To je dalo 53,9 mg (29,3%) N-(1-(4-(4-akriloilpiperazin-1-il)-6-hlorhinazolin-7-il)izohinolin-3-il)ciklopropan karboksamida u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 513,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 36:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,71 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,95-7,92 (m, 2H), 7,74-7,69(m, 1H), 7,55 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,47-7,42 (m,

1

1H), 6,85 (dd, J = 16,8, 10,8 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 16,8, 1,8 Hz, 1H), 5,83 (dd, J = 10,6, 1,9 Hz, 1H), 4,08-4,04 (m, 4H), 3,98-3,92 (m, 4H), 1,95-1,92 (m, 1H), 1,05-1,01 (m, 2H), 0,94-0,89 (m, 2H).

Referentni primer 37: N-(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)-2-hidroksiacetamid

Sintetički postupak

Korak 1: N-(1-bromizohinolin-3-il)-2-hloracetamid

U rastvor 1-bromizohinolin-3-amina (200,0 mg, 0,9 mmol) i piridina (100,0 mg, 1,3 mmol) u dihlormetanu (5 ml) dodat je 2-hloracetil hlorid (150,0 mg, 1,3 mmol). Dobijeni rastvor je mešan 30 min na 0 °C i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (5/1), što je dalo 210,0 mg (78%) N-(1-bromizohinolin-3-il)-2-hloracetamida u obliku svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 299,0 [M+H]<+>.

1

Korak 2: 2-((1-bromizohinolin-3-il)amino)-2-oksoetil acetat

Rastvor N-(1-bromizohinolin-3-il)-2-hloracetamida (150,0 mg; 0,50 mmol) i kalijum acetata (75,0 mg; 0,76 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešan je tokom 2 h na 100 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je ohlađen na sobnu temperaturu i razblažen vodom (50 ml). Nakon filtracije, čvrste supstance su sakupljene i osušene pod vakuumom, što je dalo 120 mg (66%) 2-((1-bromizohinolin-3-il)amino)-2-oksoetil acetata u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 323,0 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[6-hlor-7-[3-(2-hidroksiacetamido)izohinolin-1-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor 2-((1-bromizohinolin-3-il)amino)-2-oksoetil acetata (150,0 mg; 0,46 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (250,0 mg; 0,53 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlorid dihlormetan (75,0 mg; 0,10 mmol) i cezijum karbonata (400,0 mg; 1,20 mmol) u vodi (1 ml) i acetonitrilu (5 ml) mešan je 30 minuta na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan, razblažen sa 150 ml dihlormetana, ispran vodom (3x80 ml), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 200,0 mg (78%) terc-butil 4-[6-hlor-7-[3-(2-hidroksiacetamido)izohinolin-1-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 549,2 [M+H]<+>.

Korak 4: N-[1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]izohinolin-3-il]-2-hidroksiacetamid

1

Rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-[3-(2-hidroksiacetamido)izohinolin-1-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,36 mmol) u dihlormetanu (5 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml) mešan je tokom 1 h na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je zatim rastvoren dihlormetanom (20 ml) i pH vrednost dobijenog rastvora je podešena na pH = 8 sa N,N-diizopropiletilaminom i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (85/15), što je dalo 100,0 mg (61%) N-[1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]izohinolin-3-il]-2-hidroksiacetamid u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 449,1 [M+H]<+>. Korak 5: N-(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)-2-hidroksiacetamid

U rastvor N-[1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]izohinolin-3-il]-2-hidroksiacetamida (50,0 mg; 0,10 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1 ml) u THF-u (5 ml) dodat je prop-2-enoil hlorid (11,0 mg; 0,10 mmol) i mešan 30 minuta na -78 °C.

Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (30 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC pod sledećim uslovima: kolona, kolona XBridge Shield RP18 OBD, 5 um,19*150 mm; mobilna faza, voda (voda sa 0,05% NH3) i ACN (20% ACN do 45% za 7 min). To je dalo 6,0 mg (11%) N-(1-[6-

14

hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)-2-hidroksiacetamida u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 503,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 37:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm): δ 8,71 (d, J = 4,6 Hz, 2H), 8,33 (s, 1H), 8,01 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,95 (s, 1H), 7,80-7,74 (m, 1H), 7,60-7,57 (m, 1H), 7,53-7,47 (m, 1H), 6,86 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 16,8, 1,9 Hz, 1H), 5,84 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 4,23 (s, 2H), 4,10-4,06 (m, 4H), 3,99-3,94 (m, 4H).

Referentni primer 38: 1-[4-(6-hlor-7-[3-[(propan-2-il)amino]izohinolin-1-il]hinazolin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-(6-hlor-7-[3-[(propan-2-il)amino]izohinolin-1-il]hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor terc-butil 4-[7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (400,0 mg; 0,82 mmol), AcOH (1 ml; 17,45 mmol), propan-2-ona (60,0 mg; 1,00 mmol) u dihlormetanu (5 ml) dodat je NaBH(OAc)3(500 mg; 2,4 mmol) i mešan je tokom 2 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran vodom (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 350 mg (81%) terc-butil 4-(6-hlor-7-[3-[(propan-2-il)amino]izohinolin-1-il]hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 533,2 [M+H]<+>.

Korak 2: 1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-N-(propan-2-il)izohinolin-3-amin

Rastvor terc-butil 4-(6-hlor-7-[3-[(propan-2-il)amino]izohinolin-1-il]hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (350,0 mg; 0,66 mmol) u TFA (2 ml) i dihlormetanu (10 ml) mešan je tokom 1 h na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Zatim je ostatak rastvoren dihlormetanom (10 ml), a pH vrednost dobijenog rastvora je podešena na pH = 8 sa N,N-diizopropiletilaminom i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (85/15), što je dalo 230,0 mg (81%) 1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-N-(propan-2-il)izohinolin-3-amina u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 433,2 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-[4-(6-hlor-7-[3-[(propan-2-il)amino]izohinolin-1-il]hinazolin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-N-(propan-2-il)izohinolin-3-amina (200,0 mg; 0,46 mmol) u THF-u (5 ml) dodat je N,N-diizopropiletilamin (120,0 mg; 0,93 mmol) i prop-2-enoil hlorid (42,0 mg; 0,46 mmol) i mešan je 60 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (30 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1). Proizvod je prečišćen preparativnom HPLC tehnikom pod sledećim uslovima: kolona, kolona XBridge Shield RP18 OBD, 5 um,19*150 mm; mobilna faza, voda (voda sa 0,05% NH3) i ACN (28,0% ACN do 70,0% za 7 min); detektor, UV 220 nm. To je dalo 10,3 mg (4,6%) 1-[4-(6-hlor-7-[3-[(propan-2-il)amino]izohinolin-1-il]hinazolin-4-il)piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 487,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 38:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, ppm) δ 8,80 (s, 1H), 8,18-8,06 (s, 2H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,52-7,47 (m, 1H), 7,35-7,33 (m, 1H), 7,13-7,11 (m, 1H), 6,66-6,59 (m, 2H), 6,39 (dd, J = 16,8, 1,8 Hz, 1H), 5,80 (dd, J = 10,5, 1,8 Hz, 1H), 3,95-3,82 (m, 9H), 1,35-1,34 (m, 6H).

Referentni primer 39: 2-[(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)amino]acetonitril

14

Korak 1: terc-butil N-(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)-N-(cijanometil) karbamat

U atmosferi azota, rastvor [6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]boronske kiseline (200,0 mg; 0,58 mmol), terc-butil N-(1-bromizohinolin-3-il)-N-(cijanometil)karbamata (167,0 mg; 0,46 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlormetan (47,0 mg; 0,06 mmol) i cezijum karbonata (373,0 mg; 1,14 mmol) u acetonitrilu (5 ml) ozračen je mikrotalasnim zračenjem tokom 1,5 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran vodom (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 150 mg (45%) terc-butil N-(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)-N-(cijanometil)karbamata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 584,2 [M+H]<+>.

Korak 2: 2-[(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)amino]acetonitril

Rastvor terc-butil N-(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)-N-(cijanometil)karbamata (200,0 mg; 0,34 mmol) i silika gela (205,0 mg; 3,41 mmol) u toluenu (3 ml) mešan je tokom 2 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/10), što je dalo 15,7 mg (9%) 2-[(1-[6-hlor-4-[4-(prop-2-enoil)piperazin-1-il]hinazolin-7-il]izohinolin-3-il)amino]acetonitrila u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 484,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 39:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,71 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,93 (s, 1H), 7,77 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,58 (ddd, J = 8,3, 6,7, 1,2 Hz, 1H), 7,45-7,42 (m, 1H), 7,23 (ddd, J = 8,4, 6,8, 1,2 Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 6,86 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 16,8, 1,9 Hz, 1H), 5,84 (dd, J = 10,6, 1,9 Hz, 1H), 4,44 (d, J = 1,9 Hz, 2H), 4,09-4,06 (m, 4H), 3,97-3,95 (m, 4H).

Referentni primer 40: 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetoksi)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

14

Korak 1: 3-(bromdifluormetoksi)-2-hlor-6-jodpiridin

U rastvor 2-hlor-6-jodpiridin-3-ola (2,0 g; 7,8 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15 ml) dodat je natrijum hidrid (1,0 g; 41,7 mmol), a zatim je rastvor dibromdifluormetana (5,0 g; 23,8 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešan tokom 3 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran dodavanjem vode (50 ml), ekstrahovan dihlormetanom (100 mlx3), ispran vodom (100 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela i prečišćen uz eluiranje petrol etrom, što je dalo 1,8 g (60%) 3-(bromdifluormetoksi)-2-hlor-6-jodpiridina u vidu svetložutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 383,8 [M+H]<+>.

Korak 2: 2-hlor-6-jod-3-(trifluormetoksi)piridin

U atmosferi azota, u rastvor 3-(bromdifluormetoksi)-2-hlor-6-jodpiridina (1,8 g; 4,7 mmol) u dihlormetanu (10 ml) dodato je srebro tetrafluorborat (2,00 g; 10,30 mmol) i mešan tokom 16 h na -78 °C. Čvrste supstance su uklonjene filtracijom i filtrat je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 1,0 g (sirovog) 2-hlor-6-jod-3-(trifluormetoksi)piridina u vidu svetložutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 323,9 [M+H]<+>.

Korak 3: N-(6-hlor-5-(trifluormetoksi)piridin-2-il)acetamid

14

U atmosferi azota, rastvor 2-hlor-6-jod-3-(trifluormetoksi)piridina (500,0 mg; 1,50 mmol), acetamida (100,0 mg; 1,7 mmol), adukta tris(dibenzilidenacetona)dipaladijumhloroform (80,0 mg; 0,1 mmol), ksantfosa (90,0 mg; 0,2 mmol) i cezijum karbonata (1,0 g; 3,1 mmol) u 1,4-dioksanu (5 ml) mešan je 20 minuta na 50 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (93/7), što je dalo 300,0 mg (76%) N-[6-hlor-5-(trifluormetoksi)piridin-2-il]acetamida u vidu svetlosmeđe čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 255,0 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[6-hlor-7-[6-acetamido-3-(trifluormetoksi)piridin-2-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor N-[6-hlor-5-(trifluormetoksi)piridin-2-il]acetamida (200,0 mg; 0,79 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (400,0 mg; 0,84 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (40,0 mg; 0,06 mmol) i kalijum fluorida (100,0 mg; 1,70 mmol) u acetonitrilu (5 ml) i vodi (1 ml) mešan je 20 minuta na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom (200 ml), ispran vodom (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (97/3), što je dalo 420 mg (94%) terc-butil 4-[6-hlor-7-[6-acetamido-3-(trifluormetoksi)piridin-2-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 567,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(trifluormetoksi)piridin-2-amin

14

Rastvor 4-[6-hlor-7-[6-acetamido-3-(trifluormetoksi)piridin-2-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (400,0 mg; 0,70 mmol) u hlorovodoničnoj kiselini (5 ml; 3 M u metanolu) mešan je tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren vodom (2 ml), a pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 10 zasićenim rastvorom kalijum karbonata. Smeša je zatim ekstrahovana pomoću n-butanola (60 mlx3) i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (9:1), što je dalo 150,0 mg (50%) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(trifluormetoksi)piridin-2-amina u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 425,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetoksi)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(trifluormetoksi)piridin-2-amina (100,0 mg; 0,24 mmol), HATU (150,0 mg; 0,39 mmol), prop-2-enske kiseline (20,0 mg; 0,28 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (100,0 mg; 0,80 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na 25 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x30 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 68,0 mg (60%) 1-(4-[7-[6-amino-3-

14

(trifluormetoksi)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 479,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 40:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4,ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,85 (s, 1H), 7,64-7,55 (m, 1H), 6,84 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,74 (d, J = 9,1 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,7, 2,0 Hz, 1H), 4,04-4,00 (m, 4H), 3,95-3,92 (m, 4H).

Referentni primer 41: 1-(4-[7-[6-amino-3-(difluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: 2,6-dihlor-3-(difluormetil)piridin

U rastvor 2,6-dihlorpiridin-3-karbaldehida (20,00 g; 113,64 mmol) u dihlormetanu (100 ml) dodat je dietilaminosumpor trifluorid (55,27 g; 342,86 mmol) i mešan 60 minuta na 0 °C. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana dodavanjem 400 ml zasićenog vodenog rastvora

14

natrijum karbonata, ekstrahovana dihlormetanom (200 mlx3), osušenog iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1:10), što je dalo 15,7 g (70%) 2,6-dihlor-3-(difluormetil)piridina u obliku bezbojnog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 198,0 [M+H]<+>.

Korak 2: 6-hlor-5-(difluormetil)-N-[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amin

Rastvor (4-metoksifenil)metanamina (459,0 mg; 3,35 mmol) i 2,6-dihlor-3-(difluormetil)piridina (600,0 mg; 3,03 mmol) u n-butanolu (5 ml) mešan je 60 minuta na 100 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/5), što je dalo 100,0 mg (10%) 6-hlor-5-(difluormetil)-N-[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amina u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 299,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[6-hlor-7-[3-(difluormetil)-6-[[(4-metoksifenil)metil]amino]piridin-2-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor 6-hlor-5-(difluormetil)-N-[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amina (300,0 mg; 1,00 mmol), kalijum fluorida (116,2 mg; 2,00 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (568,0 mg; 1,20 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (70,7 mg; 0,10 mmol) u acetonitrilu (5 ml) i vodi (1 ml) mešan je 60 min na 110 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, razblažena etil acetatom (200 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml x 3), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/5), što je dalo 280,0 mg (46%) terc-butil 4-[6-hlor-7-[3-(difluormetil)-6-[[(4-metoksifenil)metil]amino]piridin-2-

1

il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 611,2 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(difluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-[3-(difluormetil)-6-[[(4-metoksifenil)metil]amino]piridin-2-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (280,0 mg; 0,46 mmol) u dihlormetanu (2 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml) mešan je 60 minuta na 40 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je rastvoren vodom (2 ml), a pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 10 zasićenim rastvorom kalijum karbonata. Smeša je zatim ekstrahovana etil acetatom (50 mlx3), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/5), što je dalo 150,0 mg (84%) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(difluormetil)piridin-2-amina u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 391,1 [M+H]<+>.

Korak 5: 1-(4-[7-[6-amino-3-(difluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(difluormetil)piridin-2-amina (100,0 mg; 0,26 mmol), N,N-diizopropiletilamina (33,0 mg; 0,26 mmol), HATU (97,44 mg; 0,26 mmol) i prop-2-enske kiseline (18,48 mg; 0,26 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 60 minuta na 0 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (30 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x50 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum

1 1

sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/10) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je zatim prečišćen reversno faznom hromatografijom na koloni uz eluiranje acetonitrilom/vodom (3/7), što je dalo 3,2 mg (3%) 1-(4-[7-[6-amino-3-(difluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 445,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 41:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,22 (s, 1H), 7,81-7,78 (m, 2H), 6,87-6,73 (m, 2H), 6,53-6,16 (m, 2H), 5,81 (dd, J = 10,6, 1,9 Hz, 1H), 4,03-3,99 (m, 4H), 3,93-3,91 (m, 4H).

Referentni primer 42: 1-[4-[7-(6-amino-3-metansulfonilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

Korak 1: 2,6-dihlor-3-(metilsulfanil)piridin

U atmosferi azota, u rastvor 2,6-dihlorpiridina (10,00 g; 67,57 mmol) u tetrahidrofuranu (200 ml) polako je dodat n-butillitijum (35,0 ml; 81,96 mmol; 2,5 M rastvor u heksanu) i mešan tokom 1 h na -78 °C. Zatim je (metildisulfanil)metan (6,50 g; 69,00 mmol) polako dodat na -

1 2

78 °C i mešan tokom 5 h na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran zasićenim rastvorom amonijum hlorida, koncentrovan pod vakuumom, razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran vodom (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/5), što je dalo 5,0 g (38%) 2,6-dihlor-3-(metilsulfanil)piridina u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 194,0 [M+H]<+>.

Korak 2: 2,6-dihlor-3-metansulfonilpiridin

U rastvor 2,6-dihlor-3-(metilsulfanil)piridina (1,00 g; 5,15 mmol) u dihlormetanu (10 ml) dodata je m-hlor-peroksibenzojeva kiselina (3,50 g; 20,28 mmol) i mešan je tokom 12 h na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijena smeša je deaktivirana zasićenim rastvorom natrijum sulfita (40 ml) i ekstrahovana dihlormetanom (80 mlx3).

Organski slojevi su zatim sakupljeni i osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. To je dalo 1,6 g (sirovo) 2,6-dihlor-3-metansulfonilpiridina u obliku žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 225,9 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-hlor-5-metansulfonilpiridin-2-amin

U atmosferi amonijaka, rastvor 2,6-dihlor-3-metansulfonilpiridina (1,80 g; 7,96 mmol) u n-butanolu (20 ml) mešan je tokom 1 h na 90 °C. Dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, što je dalo 1,50 g (sirovog) 6-hlor-5-metansulfonilpiridin-2-amina u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 207,0 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-(6-amino-3-metansulfonilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

1

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (400,0 mg; 0,84 mmol), 6-hlor-5-metansulfonilpiridin-2-amina (200,0 mg; 0,97 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlorida (80,0 mg; 0,10 mmol) i natrijum karbonata (200,0 mg; 1,89 mmol) u dioksanu (10 ml) i vodi (2 ml) mešan je tokom 1 h na 100 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je razblažena dihlormetanom (100 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (30 mlx3). Organski slojevi su zatim osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (96/4), što je dalo 250 mg (57%) terc-butil 4-[7-(6-amino-3-metansulfonilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 519,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-metansulfonilpiridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-(6-amino-3-metansulfonilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (240,0 mg; 0,46 mmol) u dihlormetanu (10 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml) mešan je tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 200 mg (sirovo) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-metansulfonilpiridin-2-amina u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 419,1 [M+H]<+>.

1 4

Korak 6: 1-[4-[7-(6-amino-3-metansulfonilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-metansulfonilpiridin-2-amina (100,0 mg, sirovo), HATU (110,0 mg; 0,29 mmol), prop-2-enske kiseline (20,0 mg; 0,28 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (60 mg; 0,46 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x30 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 40 mg sirovog proizvoda. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC pod sledećim uslovima: kolona, kolona XBridge Shield RP18 OBD 5 um,19*150 mm; mobilna faza, voda (voda sa 0,05% NH3) i ACN (28,0% ACN do 70,0% za 7 min); detektor, UV 220 nm. To je dalo 2,6 mg (2%) 1-[4-[7-(6-amino-3-metansulfonilpiridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 473,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 42:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,17 (s, 1H), 8,07 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,84 (s, 1H), 6,84 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,76 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 4,05-3,92 (m, 8H), 2,99 (s, 3H).

Referentni primer 43: 1-(4-[7-[6-amino-3-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

1

Korak 1: 3-(brommetil)-2,6-dihlorpiridin

Rastvor 2,6-dihlor-3-metilpiridina (3,00 g; 18,52 mmol), 2,2'-azobis (izobutironitrila) (300,0 mg; 1,83 mmol) i N-bromsukcinimida (3,50 g; 19,44 mmol) u 1,2-dihloretanu (20 ml) mešan je tokom 12 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je razblažena dihlormetanom (200 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (10/1), što je dalo 2,5 g (56%) 3-(brommetil)-2,6-dihlorpiridina u obliku bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 239,9 [M+H]<+>.

Korak 2: 2,6-dihlor-3-(2,2,2-trifluoretil)piridin

1

U atmosferi azota, rastvor 3-(brommetil)-2,6-dihlorpiridina (1,00 g; 4,15 mmol), metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetata (1,00 g; 5,21 mmol) i kupro jodida (79,05 mg; 0,42 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15 ml) mešan je tokom 2 h na 110 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je razblažena dihlormetanom (100 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (20 ml x 3). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje smešom petrol etar : etil acetat (50:1), što je dalo 560,0 mg (59%) 2,6-dihior-3-(2,2,2-trifluoretil)piridina u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 230,0 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil N-[6-hlor-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il]karbamat

U atmosferi azota, rastvor 2,6-dihlor-3-(2,2,2-trifluoretil)piridina (560,0 mg; 2,44 mmol), terc-butil karbamata (570,4 mg; 4,87 mmol), adukta tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum-hloroform (126,0 mg; 0,12 mmol), ksantfosa (140,9 mg; 0,24 mmol) i cezijum karbonata (1,59 g; 4,87 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) mešan je tokom 1 h na 110 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je razblažena etil acetatom (200 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje smešom petrol etar / etil acetat (50/1), što je dalo 230,0 mg (30%) terc-butil N-[6-hlor-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il]karbamata u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 311,1 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-(6-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-3-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

1

U atmosferi azota, rastvor terc-butil N-[6-hlor-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il]karbamata (200,0 mg; 0,64 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (305,6 mg; 0,64 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (49,7 mg; 0,07 mmol) i kalijum fluorida (112,2 mg; 1,93 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (1 ml) mešan je 30 minuta na 110 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 200,0 mg (50%) terc-butil 4-[7-(6-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-3-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 623,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-(6-[[(terc-butoksi)karbonil]amino]-3-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (100,0 mg; 0,16 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml) i dihlormetanu (10 ml) mešan je tokom 2 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, što je dalo 100 mg (sirovog) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-amina u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 423,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-(4-[7-[6-amino-3-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

1

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-amina (60,0 mg, sirovog), prop-2-enske kiseline (10,2 mg; 0,14 mmol), HATU (64,7 mg; 0,17 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (36,7 mg; 0,28 mmol) u dihlormetanu (4 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x20 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 22,0 mg (33%) 1-(4-[7-[6-amino-3-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 477,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 43:<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm) δ 8,80 (s, 1H), 8,01 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,62 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,70 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,64 (dd, J = 16,8, 10,5 Hz, 1H), 6,40 (dd, J = 16,8, 1,9 Hz, 1H), 5,80 (dd,J = 10,5, 1,9 Hz, 1H), 5,12 (brs, 2H), 3,94-3,85 (m, 8H), 3,34-2,99 (m, 2H).

Referentni primer 44: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

1

Korak 1: terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor 6-hlor-4-metil-5(trifluormetil)piridin-2-amina (2,00 g; 9,50 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (5,40 g; 11,42 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (666,6 mg; 0,95 mmol) i kalijum fluorida (1,60 g; 28,50 mmol) u acetonitrilu (50 ml) i vodi (5 ml) mešan je 30 minuta na 100 °C. Nakon završetka, čvrste supstance su uklonjene filtracijom. Dobijena smeša je razblažena dihlormetanom (200 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (80 mlx3), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 3,1 g (62%) terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 523,2 [M+H]<+>.

Korak 2: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

1

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (4,00 g; 7,67 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (20 ml) i dihlormetanu (100 ml) mešan je tokom 1 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, što je dalo 4,10 g (sirovog) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu žutog ulja.<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,70 (s, 1H), 8,09 (s, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,61 (s, 1H), 3,95-3,81 (m, 4H), 3,10-3,00 (m, 4H), 2,46 (s, 3H) LC-MS (ESI, m/z): 423,1 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (3,00 g; 7,10 mmol), prop-2-enske kiseline (600,3 mg; 8,33 mmol), HATU (4,20 g; 11,05 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (4,60 g; 35,47 mmol) u dihlormetanu (50 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (50 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x80 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je zatim prečišćen reversno faznom hromatografijom (acetonitril 0-40/0,1% amonijum bikarbonat u

1 1

vodi), što je dalo 2,1 g (62%) 1-(4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 477,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 44:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,67 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,71 (s, 1H), 6,84 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,61 (m, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 4,03-3,91 (m, 8H), 2,48-2,46 (m, 3H).

Referentni primer 45: 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on so trifluorsirćetne kiseline

Korak 1: terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

1 2

Rastvor terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (4,00 g; 8,65 mmol), N,N-diizopropiletilamina (2,20 g; 17,38 mmol) i (2-aminoetil)dimetilamina (3,80 g; 43,40 mmol) u 2-propanolu (10 ml) mešan je 3 dana na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, što je dalo 2,70 g (sirovo) terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 513,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-brom-2-[[(terc-butoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (2,70 g, sirovog), di-terc-butil dikarbonata (1,70 g; 7,88 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1,40 g; 10,52 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je tokom 1 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je razblažena dihlormetanom (200 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 1,50 g (46%) terc-butil 4-(7-brom-2-[[(tercbutoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 613,2 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-(2-[[(terc-butoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

1

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-2-[[(terc-butoksi)karbonila][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 0,81 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolana (1,00 g; 4,08 mmol) i 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorida (66,7 mg; 0,09 mmol), kalijum acetata (240,2 mg; 2,45 mmol) u 1,4-dioksanu (10 ml) ozračen je mikrotalasnim zračenjem tokom 2 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je razblažena dihlormetanom (200 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3). Organski sloj je zatim sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 480 mg (sirovog) terc-butil 4-(2-[[(terc-butoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu tamnocrvene čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 661,4 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-2-[[(tercbutoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(2-[[(terc-butoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 0,76 mmol), kalijum fluorida (88,0 mg; 1,52 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (53,18 mg; 0,08 mmol) i 6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (178,0 mg; 0,91 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (2 ml) mešan je 60 min na 110 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1), što je dalo 200,0 mg (38%)

1 4

terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-2-[[(terc-butoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu crne čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 695,3 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-(6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-2-[[(tercbutoksi)karbonil][2-(dimetilamino)etil]amino]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,29 mmol) u dihlormetanu (8 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml) mešan je 30 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom, što je dalo 200,0 mg (sirovo) 6-(6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina. LC-MS (ESI, m/z): 495,2 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on; so trifluorsirćetne kiseline

Rastvor 6-(6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (150,0 mg; 0,30 mmol), HATU (138,4 mg; 0,36 mmol), N,N-diizopropiletilamina (469,8 mg; 3,63 mmol) i prop-2-enske kiseline (21,9 mg; 0,30 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana vodom (60 ml), ekstrahovana dihlormetanom (100 mlx3), osušena iznad anhidrovanog

1

natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1) da bi se dobio sirovi proizvod. Zatim je sirovi proizvod prečišćen preparativnom HPLC tehnikom pod sledećim uslovima: Kolona: kolona XSelect CSH Prep C18 OBD, 5 um,19*150 mm; mobilna faza A: voda (0,05% TFA), mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 15% B do 26% B za 7 min; 254/220 nm; Rt: 5,92 min, što je dalo 22,5 mg (11%) 1-(4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-2-[[2-(dimetilamino)etil]amino]hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on; trifluorsirćetne kiseline u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 549,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 45:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,22 (s, 1H), 7,85 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,56 (s, 1H), 6,84-6,75 (m, 2H), 6,31 (dd, J = 16,8, 1,9 Hz, 1H), 5,84 (dd, J = 10,6, 1,9 Hz, 1H), 4,31 (brs, 4H), 4,04-3,92 (m, 6H), 3,49 (t, J = 5,9 Hz, 2H), 2,99 (s, 6H).

Referentni primer 46a: (2S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-karbonitril

Referentni primer 46b: (2R)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-karbonitril

Sintetički postupak

Korak 1: 7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-3,4-dihidrohinazolin-4-on

1

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 0,98 mmol) i natrijum hidroksida (80,0 mg; 2,00 mmol) u etanolu (10 ml) i vodi (1 ml) mešan je tokom 2 h na 80 °C. Nakon završetka, pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 7,0 rastvorom hlorovodonične kiseline u 1,4-dioksanu, koncentrovan je pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1), što je dalo 150,0 mg (45%) 7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-3,4-dihidrohinazolin-4-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 341,0 [M+H]<+>.

Korak 2: 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-2-karbonitril

Rastvor piperazin-2-karbonitrila (94,0 mg; 0,85 mmol), 7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlor-3,4-dihidrohinazolin-4-ona (150,0 mg; 0,44 mmol), BOP (234,0 mg; 0,53 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,4 ml; 2,42 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 12 sati na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan i razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 70,0 mg (37%) 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-2-karbonitrila u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 434,1 [M+H]<+>.

Korak 3: (2S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-karbonitril i

(2R)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-karbonitril

1

Rastvor 4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-2-karbonitrila (70,0 mg; 0,16 mmol), 2-fluorprop-2-enske kiseline (15,0 mg; 0,17 mmol), BOP (85,0 mg; 0,19 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (62,0 mg; 0,48 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 60 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom (20 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x30 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je zatim pripremljen pomoću prep-HPLC pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda/0,05% TFA, mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 30% B do 70% B za 10 min; 254 nm. Proizvod je prečišćen pomoću hiralne preparativne HPLC hromatografije pod sledećim uslovima (prep-HPLC-009): kolona, CHIRAL ART celuloza-SB, 2*25 cm,5 um; mobilna faza, Heks--HPLC i etanol-HPLC (zadržavanje 40% etanola--HPLC tokom 10 min); detektor, UV 220/254 nm. To je dalo 5,6 mg (7%) (2S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-karbonitrila (pretpostavljeno) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (Esi, m/z): 506,1 [M+H]<+>i 6,0 mg (7%) (2R)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-karbonitrila (pretpostavljeno) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 506,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 46a:<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4, ppm) δ 8,79 (s, 1H), 8,31 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,85-7,83 (m, 2H), 6,74 (dd, J = 8,9, 0,9 Hz, 1H), 5,67 (brs, 1H), 5,55 (dd, J = 4,0, 1,3 Hz, 1H), 5,45-5,40 (m, 1H), 4,71 (dq, J = 14,1, 2,3 Hz, 1H), 4,52-4,47 (m, 1H), 4,38-4,34 (m, 1H), 3,83 (brs, 1H), 3,72 (ddd, J = 13,9, 10,2, 3,6 Hz, 1H), 3,54-3,43 (m, 1H).

Referentni primer 46b:<1>H NMR (400 MHz, Metanol-d4, ppm) δ 8,79 (s, 1H), 8,31 (d, J = 1,8 Hz, 1H), 7,85-7,83 (m, 2H), 6,74 (dd, J = 8,9, 0,9 Hz, 1H), 5,67 (brs, 1H), 5,55 (dd, J =4,0, 1,3 Hz, 1H), 5,45-5,40 (m, 1H), 4,71 (dq, J = 14,1, 2,3 Hz, 1H), 4,52-4,47 (m, 1H), 4,38-4,34 (m, 1H), 3,83 (brs, 1H), 3,72 (ddd, J = 13,9, 10,2, 3,6 Hz, 1H), 3,54-3,43 (m, 1H).

1

Referentni primer 47: 1-[4-[7-(6-amino-3-ciklopropilpiridin-2-il)-6-metoksihinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil 4-(7-brom-6-metoksihinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor 7-brom-6-metoksi-3,4-dihidrohinazolin-4-ona (5,00 g; 19,60 mmol), terc-butil piperazin-1-karboksilata (7,30 g; 39,19 mmol), BOP (17,30 g; 39,21 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (5,07 g; 39,23 mmol) u acetonitrilu (120 ml) mešan je tokom 4 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom i razblažena etil acetatom (150 ml), isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml x 3), osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/1). To je dalo 5,00 g (60%) terc-butil 4-(7-

1

brom-6-metoksihinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 506,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-[6-metoksi-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-metoksihinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (2,00 g; 4,73 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolana (4,80 g; 18,90 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlorida (139,3 mg; 0,24 mmol), kalijum acetata (927,4 mg; 9,45 mmol) u 1,4-dioksanu (100 ml) mešan je tokom 2 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan i razblažen etil acetatom (150 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1). To je dalo 700,0 mg (31%) terc-butil 4-[6-metoksi-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 471,3 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[7-(6-amino-3-ciklopropilpiridin-2-il)-6-metoksihinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-metoksi-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,43 mmol), 6-hlor-5-ciklopropilpiridin-2-amina (71,6 mg; 0,43 mmol), Pd2(dba)3(19,5 mg; 0,02 mmol), tricikloheksil fosfina (12,0 mg; 0,04 mmol) i kalijum karbonata (117,5 mg; 0,85 mmol) u dioksanu (5 ml) i vodi (1 ml)

1

mešan je 30 minuta na 110 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1). To je dalo 100,0 mg (49%) terc-butil 4-[7-(6-amino-3-ciklopropilpiridin-2-il)-6-metoksihinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu beličastog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 477,3 [M+H]<+>.

Korak 4: 5-ciklopropil-6-[6-metoksi-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-(6-amino-3-ciklopropilpiridin-2-il)-6-metoksihinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (100,0 mg; 0,21 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml) i dihlormetanu (10 ml) mešan je tokom 1 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijena smeša je koncentrovana pod vakuumom. To je dalo 100 mg (sirovog) 5-ciklopropil-6-[6-metoksi-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]piridin-2-amina u vidu žutog ulja. LC-MS (ESI, m/z): 377,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 1-[4-[7-(6-amino-3-ciklopropilpiridin-2-il)-6-metoksihinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 5-ciklopropil-6-[6-metoksi-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]piridin-2-amina (50,0 mg; 0,13 mmol), prop-2-enske kiseline (10,0 mg; 0,14 mmol), HATU (60,6 mg; 0,16 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (20,6 mg; 0,16 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je tokom 1 h na -78 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran (1 ml) i razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika

1 1

gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1). To je dalo 19,6 mg (34%) 1-[4-[7-(6-amino-3-ciklopropilpiridin-2-il)-6-metoksihinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 431,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 47:<1>H NMR (300 MHz, hloroform-d) δ 8.77 (s, 1H), 7,91 (s, 1H), 7,22-7,18 (m, 2H), 6,66 (dd, J = 16,8, 10,5 Hz, 1H), 6,56 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 6,38 (dd, J = 16,8, 1,9 Hz, 1H), 5,79 (dd, J = 10,5, 1,9 Hz, 1H), 4,65 (brs, 2H), 3,92-3,78 (m, 11H), 1,65-1,55 (m, 1H), 0,69-0,66 (m, 2H), 0,55-0,49 (m, 2H).

Referentni primer 48 1-[4-[7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: metil 2-cijano-2-(2-cijano-3-fluorfenil)acetat

Rastvor 2,6-difluorbenzonitrila (10,00 g; 71,89 mmol), metil 2-cijanoacetata (7,50 g;

1 2

75,69 mmol) i kalijum karbonata (20,00 g; 144,71 mmol) u DMSO-u (50 ml) mešan je tokom 12 h na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (100 ml). Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. To je dalo 11,5 g (73%) metil 2-cijano-2-(2-cijano-3-fluorfenil)acetata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 219,0 [M+H]<+>.

Korak 2: 2-(cijanometil)-6-fluorbenzonitril

Rastvor metil 2-cijano-2-(2-cijano-3-fluorfenil)acetata (1,00 g; 4,58 mmol) u DMSO-u (8 ml) i rastvoru hlorovodonika (6 M) (2 ml) mešan je tokom 12 sati na 70 °C. Nakon završetka, pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 9,0 rastvorom natrijum karbonata. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. Ovo je dalo 700,0 mg (95%) 2-(cijanometil)-6-fluorbenzonitrila kao sive čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 161,0 [M+H]<+>.

Korak 3: 1-brom-8-fluorizohinolin-3-amin

Rastvor 2-(cijanometil)-6-fluorbenzonitrila (3,00 g; 18,73 mmol) u HBr/AcOH (40%) (15 ml) mešan je 30 minuta na 0 °C. Nakon završetka, pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 8,0 zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata. Čvrsta supstanca je sakupljena filtracijom. To je dalo 1,70 g (38%) 1-brom-8-fluorizohinolin-3-amina u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 241,0 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

Suspenzija 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-

1

karboksilata (1,2 g; 2,48 mmol), 1-brom-8-fluorizohinolin-3-amina (600,0 mg; 2,49 mmol), Pd(dppf)Cl2(183,0 mg; 0,25 mmol) i K3PO4(1,00 g; 4,71 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (0,2 ml) mešana je 60 minuta na 100 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan i razblažen etil acetatom (250 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 200,0 mg (9%) terc-butil 4-[7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u obliku čvrste smeđe supstance. LC-MS (ESI, m/z): 509,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-8-fluorizohinolin-3-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,39 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml) i dihlormetanu (6 ml) mešan je 60 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. To je dalo 300 mg (sirovo) 1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-8-fluorizohinolin-3-amina u vidu smeđeg ulja. LC-MS (ESI, m/z): 409,2 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-[4-[7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-8-fluorizohinolin-3-amina (100,0 mg sirovog), prop-2-enske kiseline (53,0 mg; 0,73 mmol), HATU (109,0 mg; 0,29 mmol) i

1 4

N,N-diizopropiletilamina (155,0 mg; 1,20 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom (1 ml), razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda/0,05% TFA, mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 30% B do 70% B za 10 min; 254 nm. To je dalo 9,1 mg (8%) 1-[4-[7-(3-amino-8-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 463,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 48:<1>H NMR (300 MHz, DMSOs-d6, ppm) δ 8,69 (s, 1H), 8,14 (s, 1H), 7,83 (s, 1H), 7,49-7,40 (m, 2H), 6,89-6,76 (m, 3H), 6,35 (s, 2H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,88 (brs, 6H), 3,79 (brs, 2H).

Referentni primer 49: 1-[4-[7-(3-amino-7-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: 1-[4-[7-(3-amino-7-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

1

Rastvor 1-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-7-fluorizohinolin-3-amina (100,0 mg; 0,24 mmol), HATU (111,6 mg; 0,29 mmol), N,N-diizopropiletilamina (63,2 mg; 0,49 mmol) i prop-2-enske kiseline (17,6 mg; 0,25 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom (1 ml), razblažen dihlormetanom (150 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (40 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću prep-HPLC pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda/0.05% TFA, mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 30% B do 70% B za 10 min; 254 nm. To je dalo 3,8 mg (3%) 1-[4-[7-(3-amino-7-fluorizohinolin-1-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 463,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 49:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,70 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,90 (s, 1H), 7,73 (dd, J = 9,2, 5,4 Hz, 1H), 7,42-7,35 (m, 1H), 6,99-6,93 (m, 2H), 6,85 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 1,9 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 4,09-4,04 (m, 4H), 3,96-3,93(m, 4H).

Referentni primer 50: 1-(3-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]azetidin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

1

Korak 1: terc-butil 3-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)azetidin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor 7-brom-4,6-dihlorhinazolina (6,00 g; 21,59 mmol), [1-[(tercbutoksi)karbonil]azetidin-3-il](jod)cinka (30 ml; 15,49 mmol), adukta tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum-hloroform (998,0 mg; 0,96 mmol) i tri-2-furilfosfina (500,0 mg; 2,15 mmol) u N,N-dimetilformamidu (30 ml) mešan je 30 minuta na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (100 ml), ekstrahovan etil acetatom (100 ml x 3), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/5), što je dalo 3,3 g (42%) terc-butil 3-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)azetidin-1-karboksilat u obliku svetložute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 398,0 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 3-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]azetidin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 3-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)azetidin-1-

1

karboksilata (2,00 g; 5,02 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorida (400,6 mg; 0,55 mmol), kalijum acetata (1,48 g; 15,08 mmol) i 4,4,5,5-tetrametil-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolana (3,88 g; 15,28 mmol) u 1,4-dioksanu (30 ml) mešan je tokom 2 h na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen dihlormetanom (150 ml). Nakon filtracije, filtrat je sakupljen, koncentrovan pod vakuumom, ispran petrol etrom (10 ml x 3). To je dalo 1,4 g (sirovog) terc-butil 3-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]azetidin-1-karboksilata u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 446,2 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 3-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]azetidin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 3-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]azetidin-1-karboksilata (1,40 g; 3,14 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (220,5 mg; 0,31 mmol), kalijum fluorida (380,0 mg; 6,54 mmol) i 6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (620,0 mg; 3,15 mmol) u acetonitrilu (20 ml) i vodi (5 ml) mešan je 60 min na 110 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1). To je dalo 600,0 mg (40%) terc-butil 3-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]azetidin-1-karboksilata u vidu tamnocrvene čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 480,1 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-[4-(azetidin-3-il)-6-hlorhinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

1

Rastvor terc-butil 3-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]azetidin-1-karboksilata (300,0 mg; 0,63 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (5 ml) i dihlormetanu (15 ml) mešan je 20 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. To je dalo 320 mg (sirovog) 6-[4-(azetidin-3-il)-6-hlorhinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu tamnocrvene čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 380,1 [M+H]<+>.

Korak 5: 1-(3-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]azetidin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[4-(azetidin-3-il)-6-hlorhinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (300,0 mg; 0,79 mmol), HATU (300,8 mg; 0,79 mmol), N,N-diizopropiletilamina (408,4 mg; 3,16 mmol) i prop-2-enske kiseline (57,0 mg; 0,79 mmol) u dihlormetanu (15 ml) mešan je 60 minuta na -78 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom (1 ml), razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1). Zatim je sirovi proizvod prečišćen preparativnom HPLC tehnikom pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge Prep OBD C18 kolona 30x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 MMOL/L NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min; gradijent: 20% B do 50% B za 7 min; 254/220 nm; Rt: 6,62 min, što je dalo 141,2 mg (41%) 1-(3-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]azetidin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 434,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 50:<1>H NMR (300 MHz, Metanol-d4, ppm) δ 9,33 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 7,98 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 6,73 (dd, J = 9,0, 1,1 Hz, 1H), 6,47-6,38 (m, 1H), 6,29 (dd, J = 17,0, 2,1 Hz, 1H), 5,78 (ddd, J = 10,2, 2,3, 1,0 Hz, 1H), 5,00-4,88 (m, 2H), 4,84-4,76 (m, 1H), 4,64-4,50 (m, 2H).

Referentni primer 51: 1-[4-[7-[6-amino-3-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]-6-hlor-

1

hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

Korak 1: terc-butil N-[6-hlor-5-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]karbamat

Rastvor 6-hlor-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-karboksilne kiseline (300,0 mg; 1,25 mmol), difenilfosforil azida (0,27 ml; 1,25 mmol) i trietilamina (0,17 ml; 1,25 mmol) u 2-metil-1-propanolu (10 ml) mešan je na 85 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, rastvarač je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (90/10), što je dalo terc-butil N-[6-hlor-5-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]karbamat (100,0 mg, 0,32 mmol, prinos 25,7%) kao žuto ulje. LC-MS (ESI, m/z): 311,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-[7-[6-(terc-butoksikarbonilamino)-3-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

1

U atmosferi azota, rastvor terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (183,4 mg; 0,39 mmol), terc-butil N-[6-hlor-5-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]karbamata (100,0 mg; 0,32 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(ii)dihlorida (22,7 mg; 0,03 mmol) i kalijum fluorida (56,0 mg; 0,97 mmol) u acetonitrilu (3 ml) i vodi (0,5 ml) mešan je na 110 °C tokom 20 minuta. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (95/5), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-(terc-butoksikarbonilamino)-3-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (80 mg; 0,13 mmol; prinos 39,9%) u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 623,1 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-(6-hlor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-(terc-butoksikarbonilamino)-3-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (50,0 mg; 0,08 mmol) u TFA (2 ml) i dihlormetanu(10 ml) mešan je na 25 °C tokom 3 sata. Nakon završetka, rastvarač je koncentrovan pod vakuumom. Supstanca je preneta u sledeći korak bez daljeg prečišćavanja. LC-MS (ESI, m/z): 423,1 [M+H]<+>.

Korak 4: 1-[4-[7-[6-amino-3-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

1 1

Rastvor 6-(6-hlor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-5-(2,2,2-trifluoretil)piridin-2-amina (50,0 mg; 0,12 mmol), akrilne kiseline (8,5 mg; 0,12 mmol), HATU (54,0 mg; 0,14 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (22,9 mg; 0,18 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je na -78 °C tokom 30 min. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom (1 ml), razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (95/5), što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(2,2,2-trifluoretil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (7,6 mg; prinos 13,5%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 477,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 51:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,24 (s, 1H), 7,80 (s, 1H), 7,62 (d, J = 8,6 Hz, 1H), 6,84 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 4,06-4,01 (m, 4H), 3,98-3,93 (m, 4H), 3,43-3,36 (m, 1H), 3,16-3,00 (m, 1H).

Referentni primer 52: 1-[4-[7-[6-amino-4-etil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

1 2

Korak 1: 2,6-dihlor-4-etilpiridin

U atmosferi azota, rastvor 2,6-dihlor-4-jodpiridina (10,00 g; 36,51 mmol), trietilborana (36,0 ml; 36,00 mmol), 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorida (2,67 g; 3,65 mmol) i kalijum karbonata (10,00 g; 72,36 mmol) u N,N-dimetilformamidu (80 ml) mešan je 60 minuta na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (100 ml), ekstrahovan etil acetatom (150 mlx3), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (150 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (3/97), što je dalo 6,3 g (98%) 2,6-dihlor-4-etilpiridina u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 176,0 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil N-(6-hlor-4-etilpiridin-2-il)karbamat

Rastvor 2,6-dihlor-4-etilpiridina (3,00 g; 17,04 mmol), terc-butil karbamata (2,20 g; 18,78 mmol), adukta tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum-hloroform (880,0 mg; 0,85 mmol), ksantfosa (985,0 mg; 1,70 mmol) i cezijum karbonata (11,00 g; 33,76 mmol) u 1,4-dioksanu (50 ml) mešan je 60 minuta na 90 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod

1

vakuumom, razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela pomoću elucije etil acetatom/petrol etrom (1/10). To je dalo 3,3 g (69%) terc-butil N-(6-hlor-4-etilpiridin-2-il)karbamata u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 257,1 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-hlor-4-etilpiridin-2-amin

Rastvor terc-butil N-(6-hlor-4-etilpiridin-2-il)karbamata (3,00 g; 11,68 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (20 ml) i dihlormetanu (70 ml) mešan je 60 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen vodom (30 ml), pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 7,0 zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata, ekstrahovanim etil acetatom (100 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/3), što je dalo 1,52 g (83%) 6-hlor-4-etilpiridin-2-amina u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 157,0 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-hlor-4-etil-5-jodpiridin-2-amin

Rastvor 6-hlor-4-etilpiridin-2-amina (1,50 g; 9,58 mmol) i NIS (2,16 g; 9,60 mmol) u acetonitrilu (70 ml) mešan je tokom 2 h na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/10), što je dalo 1,73 g (64%) 6-hlor-4-etil-5-jodpiridin-2-amina u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 282,9 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-hlor-4-etil-5-jod-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amin

1 4

Rastvor 6-hlor-4-etil-5-jodpiridin-2-amina (1,05 g; 3,72 mmol), 1-(hlormetil)-4-metoksibenzena (1,75 g; 11,17 mmol) i natrijum hidrida (270,0 mg; 11,25 mmol) u N,N-dimetilformamidu (15,00 ml) mešan je 60 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran zasićenim rastvorom amonijum hlorida, ekstrahovan etil acetatom (100 ml x 3), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/10), što je dalo 1,10 g (57%) 6-hlor-4-etil-5-jod-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amina u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 523,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 6-hlor-4-etil-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor 6-hlor-4-etil-5-jod-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]piridin-2-amina (1,20 g; 2,30 mmol), bakar(I) jodida (0,87 g; 4,60 mmol) i metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetata (0,58 ml; 4,59 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešan je na 90 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen vodom (50 ml), ekstrahovan etil acetatom (100 mlx3), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/10), što je dalo 0,70 g (70%) 6-hlor-4-etil-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina. LC-MS (ESI, m/z): 465,1 [M+H] Korak 7: 6-hlor-4-etil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor 6-hlor-4-etil-N,N-bis[(4-metoksifenil)metil]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (1,20 g; 2,58 mmol) u dihlormetanu (10 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 40 °C tokom 2 sata. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen

1

vodom (50 ml), pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata, ekstrahovan etil acetatom (100 mlx3), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/10), što je dalo 0,59 g (89,6%) 6-hlor-4-etil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina. LC-MS (ESI, m/z): 225,0 [M+H]<+>.

Korak 8: terc-butil 4-[7-[6-amino-4-etil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor 6-hlor-4-etil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (560,0 mg; 2,49 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (1,42 g; 2,99 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II)dihlorida (175,5 mg; 0,25 mmol) i kalijum fluorida (289,7 mg; 4,99 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (2 ml) mešan je na 90 °C tokom 1 sata. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/20), što je dalo 250,0 mg (18,7%) terc-butil 4-[7-[6-amino-4-etil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata. LC-MS (ESI, m/z): 537,2 [M+H]<+>.

Korak 9: 6-(6-hlor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-4-etil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

1

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-amino-4-etil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (250,0 mg; 0,47 mmol) u dihlormetanu (10 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen vodom (50 ml), pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata, ekstrahovan etil acetatom (100 mlx3), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/5), što je dalo 142,0 mg (70%) 6-(6-hlor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-4-etil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina. LC-MS (ESI, m/z): 437,1 [M+H]<+>.

Korak 10: 1-[4-[7-[6-amino-4-etil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il)-4-etil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (211,0 mg; 0,48 mmol), akrilne kiseline (0,05 ml; 0,72 mmol), N,N-diizopropiletilamina (1,0 ml; 5,74 mmol) i HATU (220,4 mg; 0,58 mmol) u dihlormetanu (7 ml) mešan je na -78 °C tokom 0,5 h. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 48,4 mg (20,1%) 1-[4-[7-[6-amino-4-etil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona. LC-MS (ESI, m/z): 491,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 52:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,67 (s, 1H), 8,11 (s, 1H), 7,65 (s, 1H), 6,88-6,81 (m, 3H), 6,54 (s, 1H), 6,18 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 3,86 (brs, 7H), 3,78 (brs, 1H), 2,74-2,68 (m, 2H), 1,24 (t, J = 7,4 Hz, 3H).

Referentni primer 53: 1-(4-[6-hlor-7-[6-(metilamino)-3-(trifluormetil)piridin-2-

1

il]hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]karbamat

Rastvor 6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (1,04 g; 5,29 mmol), di-terc-butil dikarbonata (2,30 g, 10,54 mmol), trietilamina (1,55 g; 15,32 mmol) i 4-dimetilaminopiridina (70 mg; 0,57 mmol) u dihlormetanu (6 ml) mešan je 120 minuta na 60 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom (200 ml), ispran vodom (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (0~20%), što je dalo 1,37 g (65%) terc-butil N-[(terc-butoksi)karbonil]-N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]karbamata u vidu čvrste

1

supstance. LC-MS (ESI, m/z): 397,1 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]karbamat

Rastvor terc-butil A-[(terc-butoksi) karbonil]-N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]karbamata (1,37 g; 3,45 mmol) i natrijum hidroksida (848,0 mg; 21,20 mmol) u vodi (7 ml) i tetrahidrofuranu (7 ml) mešan je 120 minuta na 70 °C. Nakon završetka, pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 7,0 sa HCl/1,4-dioksanom, razblažen je etil acetatom (200 ml), ispran vodom (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (0~30%), što je dalo 523,0 mg (70%) terc-butil N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]karbamata u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 297,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]-N-metilkarbamat

Rastvor terc-butil N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]karbamata (1,00 g; 3,37 mmol) u N,N-dimetilformamidu (11 ml) dodat je natrijum hidrid (206,0 mg; 8,58 mmol) mešan je 5 minuta na 0 °C. Zatim je dodat jodmetan (1,00 g; 7,04 mmol) i mešan 30 minuta na 0 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran zasićenim rastvorom amonijum hlorida, ekstrahovan sa (80 ml x 3), ispran sa (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (0~30%), što je dalo 1,00 g (95%) terc-butil N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]-N-metilkarbamata u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 311,1 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-(6-[[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino]-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

1

U atmosferi azota, rastvor terc-butil N-[6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-il]-N-metilkarbamata (200,0 mg; 0,64 mmol), terc-butil 4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (360,0 mg; 0,76 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (45,0 mg; 0,064 mmol) i kalijum fluorida (120,0 mg; 2,07 mmol) u acetonitrilu (3 ml) i vodi (0,6 ml) mešan je 30 minuta na 80 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen etil acetatom (200 ml), ispran vodom (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (0~10%), što je dalo 380 mg (95%) terc-butil 4-[7-(6-[[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino]-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 623,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-N-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-(6-[[(terc-butoksi)karbonil](metil)amino]-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlorhinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (380,0 mg; 0,61 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml) i dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na 25 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 450,0 mg (sirovog) 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-N-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu smeđeg ulja. LC-MS (ESI, m/z): 523,2 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-(4-[6-hlor-7-[6-(metilamino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il]hinazolin-4-

1

il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il]-N-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (420,0 mg; 0,99 mmol), prop-2-enske kiseline (97,0 mg; 1,35 mmol), HATU (410,0 mg; 1,08 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1 ml; 6,05 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom (1 ml), razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran vodom (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (0~10%), što je dalo 40,1 mg (8%) 1-(4-[6-hlor-7-[6-(metilamino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il]hinazolin-4-il]piperazin-1-il)prop-2-en-1-ona u vidu čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 477,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 53:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,68 (s, 1H), 8,20 (s, 1H), 7,80-7,76 (m, 2H), 6,85 (dd, J = 16,8, 10,6 Hz, 1H), 6,65 (dd, J = 9,0, 0,9 Hz, 1H), 6,30 (dd, J = 16,8, 1,9 Hz, 1H), 5,83 (dd, J = 10,6, 2,0 Hz, 1H), 4,03-4,01 (m, 4H), 3,96-3,91 (m, 4H), 2,91 (s, 3H).

Referentni primer 54: 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

1 1

Korak 1: 7-brom-4,6-dihlorhinazolin

U rastvor 7-brom-6-hlor-3,4-dihidrohinazolin-4-ona (10,00 g; 38,54 mmol) u tionil hloridu (40 ml) dodat je N,N-dimetilformamid (0,2 ml) i mešan tokom 3 h na 90 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom. To je dalo 11,00 g (sirovog) 7-brom-4,6-dihlorhinazolina u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 276,9 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor 7-brom-4,6-dihlorhinazolina (10,00 g; 35,98 mmol), terc-butil (3 S)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (10,90 g; 54,424 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (9,3 g; 71,96 mmol) u 1,4-dioksanu (50 ml) mešan je tokom 1 h na 90 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen dihlormetanom (300 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 10,00 g (63%) terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 441,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil (3S)-4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-

1 2

il]-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1,00 g; 2,26 mmol), 4,4,5,5-tetrametil-2-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)-1,3,2-dioksaborolana (1,73 g; 6,81 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (186,0 mg; 0,23 mmol) i kalijum acetata (450 mg; 4,585 mmol) u 1,4-dioksanu (8 ml) mešan je tokom 1 h na 90 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 mlx3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na reversno faznu kolonu sa vodom:acetonitrilom (5%~60%). To je dalo 1,2 g (36%) terc-butil (3S)-4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-karboksilata u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 489,2 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil (3S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (3S)-4-[6-hlor-7-(tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-karboksilata (800,0 mg; 1,64 mmol), 6-hlor-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (257,0 mg; 1,31 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (115,0 mg; 0,16 mmol) i kalijum fluorida (190,0 mg; 3,27 mmol) u acetonitrilu (6 ml) i vodi (1 ml) mešan je tokom 1 h na 110 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1/20), što je dalo 80,0 mg (9%) terc-butil (3S)-4-

1

[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 523,2 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-[6-hlor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (3S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-karboksilata (100,0 mg; 0,19 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (1 ml) i dihlormetanu (3 ml) mešan je tokom 1 h na sobnoj temperaturi. Nakon završetka, dobijeni rastvor je koncentrovan pod vakuumom, razblažen vodom (50 ml), pH dobijenog rastvora je podešen na pH = 8 zasićenim vodenim rastvorom natrijum karbonata, ekstrahovan je etil acetatom (100 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. To je dalo 90 mg (sirovo) 6-[6-hlor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu sive čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 423,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor 6-[6-hlor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (200,0 mg; 0,47 mmol), prop-2-enske kiseline (41,0 mg; 0,57 mmol), HATU (270,0 mg; 0,71 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (122,0 mg; 0,94 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je 30 minuta na -78 °C. Nakon završetka, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom (1 ml), razblažen dihlormetanom (200 ml), ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (80 ml x 3),

1 4

osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1). Proizvod je pripremljen pomoću preparativne HPLC pod sledećim uslovima: Kolona: XBridge C18, 19*150 mm, 5 um; mobilna faza A: voda/0.05% TFA, mobilna faza B: ACN; protok: 20 ml/min; gradijent: 30% B do 70% B za 10 min; 254 nm. To je dalo 30,5 mg (14%) 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il]-6-hlorhinazolin-4-il]-3-metilpiperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 477,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 54:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,69 (s, 1H), 8,12 (s, 1H), 7,84 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,77 (s, 1H), 6,92-6,80 (m, 1H), 6,74 (dd, J = 8,9, 0,8 Hz, 1H), 6,31 (dd, J = 16,9, 5,7 Hz, 1H), 5,84 (dd, J = 10,7, 1,9 Hz, 1H), 4,59-4,41 (m, 1H), 4,34-4,29 (m, 1H), 4,23-4,05 (m, 1H), 3,85-3,60 (m, 2H), 3,39-3,37 (m, 1H), 3,26-3,19 (m, 1H), 1,44 (d, J = 6,8 Hz, 3H).

Referentni primer 55: 2-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Korak 1: terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

1

U rastvor 7-brom-2,4,6-trihlorhinazolina (536,5 mg; 1,67 mmol) u 1,4-dioksanu (7,5 ml) dodati su N,N-diizopropiletilamin (1,00 ml; 6,00 mmol) i 2-piperazin-2-ilacetonitril dihidrohlorid (300 mg; 1,50 mmol). Reakciona smeša je mešana na 60°C tokom 1 sata. Reakciona smeša je ohlađena na rt, a zatim je dodat 4-dimetilaminopiridin (37,5 mg; 0,303 mmol) i di-terc-butil dikarbonat (1022 mg; 4,54 mmol). Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi tokom 18 sati. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (562 mg; 74%). LCMS (ESI, m/z): 501,9 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola (0,334 ml; 2,70 mmol) u tetrahidrofuranu (18 ml) dodat je natrijum hidrid (60 mas. %) u ulju (108 mg; 2,70 mmol) na sobnoj temperaturi, a zatim je mešan 20 minuta. Reakcija je ohlađena na 0 °C i dodat je rastvor terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (450 mg; 0,90 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml). Reakcija je zagrejana na sobnu temperaturu i mešana je tokom 1 h. Reakciona smeša je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-2-

1

(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (224 mg; 43%). LCMS (ESI, m/z): 579,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-(6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

U rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (220 mg; 0,379 mmol) i bis(pinakolato)dibora (147 mg; 0,570 mmol) u 1,4-dioksanu (7,0 ml) dodat je kalijum acetat (55,9 mg; 0,570 mmol) i kompleks [1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II) dihlorometan (28,0 mg; 0,038 mmol). Reakciona smeša je degasirana, a zatim zagrevana na 95 °C tokom 2 h. Reakcija je filtrirana kroz celit, koncentrovana, što je dalo terc-butil 4-(6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat. Sirovi proizvod je prebačen u sledeći korak. LCMS (ESI, m/z): 545,1 [M+H]<+>(LCMS pokazuje masu borne kiseline).

Korak 4: terc-butil 4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

Suspenzija terc-butil 4-(6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (240 mg; 0,383 mmol), 6-brom-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (195,0 mg; 0,766 mmol), bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida (27,0 mg; 0,038 mmol), kalijum fluorida (223 mg; 3,83 mmol) u 1,4-dioksanu (7,0 ml) i vodi (3,5 ml) je degasirana. Reakciona smeša je

1

zagrevana u mikrotalasnoj pećnici na 125 °C tokom 25 minuta. Reakciona smeša je filtrirana kroz celit. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (uz eluiranje sa MeOH/DCM), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (112 mg; 43%). LCMS (ESI, m/z): 675,4 [M+H]<+>.

Korak 5: 2-(4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (112 mg; 0,166 mmol) u 5% trifluorsirćetnoj kiselini u heksafluorizopropanolu (2,509 ml; 1,66 mmol) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 4 h. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Reakcija je koncentrovana i sirovi proizvod je prečišćen HPLC-om da bi se dobio 2-(4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-2-il)acetonitril (50 mg; 52%). LCMS (ESI, m/z): 575,2 [M+H]<+>.

Korak 6: 2-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

U rastvor 2-(4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-

1

metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-2-il)acetonitrila (60 mg; 0,10 mmol), 2-fluorprop-2-enoiloksi natrijuma (14 mg; 0,13 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,09 ml; 0,52 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2,0 ml) dodat je HATU (83,5 mg; 0,21 mmol) na 0 °C i mešano je 20 minuta. Reakcija je ugašena vodom i ekstrahovana pomoću EtOAc. Organski slojevi su osušeni iznad natrijum-sulfata, filtrirani i koncentrovani rotacionim isparivačem. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću HPLC FA 5-50% 15 min, što je dalo 2-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril (34 mg; 50%).

Referentni primer 55:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,17 - 8,06 (m, 1H), 7,42 (d, J = 3,2 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,9 Hz, 2H), 6,46 (s, 1H), 5,48 - 5,18 (m, 2H), 4,86 (s, 1H), 4,36 (dt, J= 11,3, 5,7 Hz, 1H), 4,21 (qd, J = 10,4, 9,0, 6,0 Hz, 3H), 3,11 - 2,93 (m, 2H), 2,63 (s, 1H), 2,40 - 2,34 (m, 6H), 2,23 (q, J = 8,4 Hz, 2H), 2,02 - 1,88 (m, 1H), 1,67 (tdd, J = 16,1, 9,6, 4,8 Hz, 3H). LCMS (ESI, m/z): 647,3 [M+H]<+>.

Referentni primer 56: 2-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)piperazin-2-il]acetonitril

Referentni primer 56 je pripremljen u skladu sa istim protokolom kao i referentni primer 55, osim što je u koraku 2 referentnog primera 56 korišćen ((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metanol umesto [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola kao alternativni reagens.

Referentni primer 56:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,10 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 3,1 Hz, 1H), 6,77 (d, J = 2,8 Hz, 2H), 6,46 (s, 1H), 5,41 (dd, J = 18,0, 4,1 Hz, 1H), 5,37 - 5,08 (m, 2H), 4,39 (ddd, J = 11,5, 7,6, 4,7 Hz, 1H), 4,25 (ddq, J = 24,9, 12,6, 5,3 Hz, 3H), 2,92 (dd, J = 10,2, 5,3 Hz, 2H), 2,40 (s, 3H), 2,38 - 2,33 (m, 3H), 2,22 - 2,04 (m, 1H), 1,91 (dddd, J = 33,6, 14,8, 9,8, 5,9 Hz, 1H). LCMS (ESI, m/z): 665,3 [M+H]<+>.

Referentni primer 57: 1-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-2-(fluormetil)piperazin-1-il]-2-fluor-prop-

1

2-en-1-on

Referentni primer 57 je pripremljen u skladu sa istim protokolom kao i referentni primer 55, osim što je u koraku 1 referentnog primera 57 kao alternativni reagens korišćen terc-butil 2-(fluormetil)piperazin-1-karboksilat hidrohlorid umesto 2-piperazin-2-ilacetonitril dihidrohlorida.

Referentni primer 57:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,04 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 7,42 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,78 (d, J = 2,9 Hz, 2H), 6,46 (s, 1H), 5,43 - 5,18 (m, 2H), 4,74 (d, J = 43,0 Hz, 3H), 4,43 - 4,12 (m, 5H), 2,99 - 2,93 (m, 1H), 2,63 - 2,53 (m, 1H), 2,36 (s, 6H), 2,18 (q, J = 8,6 Hz, 1H), 2,01 - 1,89 (m, 1H), 1,74 - 1,56 (m, 4H). LCMS (ESI, m/z): 640,3 [M+H]<+>.

Referentni primer 58: 2-[(2R)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-1-(2-fluorprop-2-enoil)-5-metil-piperazin-2-il]acetonitril:

Referentni primer 58 je proizveden u skladu sa istim protokolom kao i referentni primer 55, osim što je u koraku 1 referentnog primera 58 korišćen 2-((2R)-5-metilpiperazin-2-il)acetonitril (Intermedijer 2) umesto 2-piperazin-2-ilacetonitril dihidrohlorida, a u koraku 2 referentnog primera 58, umesto [(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metanola, ((2S,4R)-4-fluor-1-

2

metilpirolidin-2-il)metanol je korišćen kao alternativni reagens.

Referentni primer 58:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8,08 (d, J = 10,5 Hz, 1H), 7,43 (d, J = 2,5 Hz, 1H), 6,77 (s, 2H), 6,46 (d, J = 1,5 Hz, 1H), 5,49 - 4,92 (m, 4H), 4,64 (s, 1H), 4,38 (dt, J = 10,6, 5,1 Hz, 1H), 4,34 - 4,22 (m, 1H), 4,21 - 3,93 (m, 2H), 3,71 (d, J = 29,2 Hz, 2H), 3,53 - 3,37 (m, 2H), 3,07 - 2,84 (m, 2H), 2,40 (dd, J = 2,4, 1,1 Hz, 4H), 2,38 - 2,34 (m, 3H), 2,13 (ddd, J = 25,1, 10,7, 4,0 Hz, 1H), 2,02 - 1,80 (m, 1H), 1,15 (d, J = 8,5 Hz, 3H). LCMS (ESI, m/z): 679,3 [M+H]<+>.

Referentni primeri 59a i 59b: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 59a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 59b)

Sintetički postupak

2 1

Korak 1: 2-amino-4-brom-3-fluor-5-jodbenzojeva kiselina

Rastvor 2-amino-4-brom-3-fluorbenzojeve kiseline (31,0 g; 132,47 mmol) i N-jodsukcinimida (32,86 g; 146,05 mmol) u N,N-dimetilformamidu (100 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 sata. LC-MS je pokazao formiranje željenog proizvoda. Dobijeni rastvor je razblažen vodom (2 l), filtriran, a čvrste supstance su sakupljene i isprane vodom da bi se dobila 2-amino-4-brom-3-fluor-5-jod-benzojeva kiselina (45 g; 125,03 mmol; prinos 94,4%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 357,9 [M-H]<+>

Korak 2: 7-brom-8-fluor-6-jodhinazolin-2,4(1H,3H)-dion

Rastvor uree (352,0 g; 5860,8 mmol) i 2-amino-4-brom-3-fluor-5-jodbenzojeve kiseline (44,0 g; 122,25 mmol) mešan je na 200 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao formiranje željenog proizvoda. Reakcija je ohlađena na 80 °C i naknadno razblažena vodom. Nakon

2 2

filtracije, čvrste supstance su sakupljene i isprane vodom (~50 °C), što je dalo 7-brom-8-fluor-6-jodhinazolin-2,4(1H,3H)-dion (45 g; 116,9 mmol; prinos 95,6%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z).382,8 [M-H]<+>

Korak 3: 7-brom-2,4-dihlor-8-fluor-6-jodhinazolin

Rastvor 7-brom-8-fluor-6-jodhinazolin-2,4(1H,3H)-diona (1,0 g; 2,6 mmol) i N,N-dimetilanilina (0,99 ml; 7,79 mmol) u fosfor oksihloridu (10 ml; 107,28 mmol) mešan je na 80 °C tokom 2 h. Po završetku, sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku.

Korak 4: terc-butil (S)-4-(7-brom-2-hlor-8-fluor-6-jodhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor 7-brom-2,4-dihlor-8-fluor-6-jodhinazolina (2,2 g; 5,22 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (4,58 ml; 26,31 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) mešan je na 25 °C tokom 2 minuta. Terc-butil (3S)-3-metil-1-piperazin karboksilat (3,1 g; 15,48 mmol) dodat je i mešan na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana pod vakuumom i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (85:15), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-brom-2-hlor-8-fluor-6-jodhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (700 mg; 1,1953 mmol; prinos 22,9%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 584,9 [M+H]<+>

Korak 5: terc-butil (S)-4-(7-brom-2,8-difluor-6-jodhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

2

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-brom-2-hlor-8-fluor-6-jodhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (5,0 g; 8,54 mmol) i kalijum fluorida (2,5 g; 43,03 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (10 ml) mešan je na 120 °C tokom 2 h. Po završetku, rastvor je razblažen etil acetatom i ispran vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (9:1), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-brom-2,8-difluor-6-jodhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (3,1 g; 5,4 mmol; prinos 63,8%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 569,0 [M+H]<+>

Korak 6: terc-butil (S)-4-(7-brom-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (S)-4-(7-brom-2,8-difluor-6-jodhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1,0 g; 1,76 mmol), bakar(I) jodida (3400 mg; 17,85 mmol) i srebro(I) trifluormetantiolata (1,1 g; 5,26 mmol) u N,N-dimetilformamidu (10 ml) mešan je na 90 °C tokom 2 h u mikrotalasnoj pećnici. Po završetku, ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (97:3), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-brom-2,8-difluor-6-((trifhiormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat. LC-MS: (ESI, m/z): 543,1 [M+H]<+>

Korak 7: terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

2 4

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (S)-4-(7-brom-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (2,0 g; 3,68 mmol), N,N-bis [(4-metoksifenil)metil]-4-metil-6-tributilstanil-piridin-2-amina (3,5 g; 5,49 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (2,1 g; 1,82 mmol), bakar(I) jodida (400 mg; 2,1 mmol) i litijum hlorida (400,0 mg; 9,22 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) dodat je i mešan na 90 °C tokom 16 h. Po završetku, reakcija je filtrirana, filtrat je razblažen etil acetatom i ispran vodom. Organski sloj je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (80:20), što je dalo tercbutil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1,6 g; 1,9 mmol; prinos 53,6%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 811,3 [M+H]<+>

Korak 8: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (3,7 g; 4,56 mmol), N-jodsukcinimida (1,25 g; 5,59 mmol) i monohidrata p-toluensulfonske kiseline (44,0 mg; 0,23 mmol) u N,N-dimetilformamidu (20 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, rastvor je razblažen etil acetatom, prebačen u levak za odvajanje i ispran vodom. Organski sloj je spojen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (75:25),

2

što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1,1 g; 1,1 mmol; prinos 25,7%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z) 937,1 [M+H]<+>

Korak 9: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,21 mmol), metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetata (1000,0 mg; 5,21 mmol) i bakar(I) jodida (404 mg; 2,12 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (10 ml) dodat je i mešan na 90 °C tokom 2 h. Po završetku, reakcija je filtrirana, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom i razblažen etil acetatom i ispran vodom. Organski sloj je spojen, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (80:20), što je dalo tercbutil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (160 mg; 0,18 mmol; prinos 85,3%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z) 879,2 [M+H]<+>

Korak 10: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor natrijum hidrida (165,0 mg; 4,12 mmol) u tetrahidrofuranu (50 ml) mešan je na 25 °C tokom 5 minuta. N-metil-1-prolinol (412,5 mg; 3,58 mmol) dodat je i mešan na 25

2

°C tokom 10 minuta. Zatim je dodat terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2,8-difluor-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1650,0 mg; 1,88 mmol) i mešan na 25 °C tokom 10 minuta. Po završetku, reakcija je koncentrovana, što je dalo sirovi terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1,5 g; 1,54 mmol; prinos 82%) koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 974,4 [M+H]<+>

Korak 11: 6-(8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1,3 g; 1,33 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (20 ml) mešan je na 60 °C tokom 16 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/vodom (25/75) i (60/40), što je dalo 6-(8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (410 mg; 0,6 mmol; prinos 48,5%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 634,2 [M+H]<+>

Korak 12: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 59a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 59b)

2

Rastvor N,N-diizopropiletilamina (288,0 mg; 2,23 mmol) i 6-(8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (720,0 mg; 1,14 mmol) u dihlormetanu (50 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (108,0 mg, 1,19 mmol) i reakcija je mešana na -78 °C tokom 30 minuta. Po završetku, reakcija je deaktivirana metanolom i razblažena dihlormetanom. Dobijena smeša je sipana u levak za odvajanje i isprana vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (65:35) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona Xselect CSH OBD 30*150 mm 5 um, n; mobilna faza A: voda (0,1%FA), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min. Dobijeni proizvod je prečišćen pomoću hiralne preparativne HPLC - kolona: CHIRALPAK IC, 2*25 cm,5 um; mobilna faza A: Heks: DCM=3:1 (10 mM NH3-MeOH)--HPLC, mobilna faza B: EtOH -HPLC; protok: 15 ml/min; što je dalo 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on u vidu bele čvrste supstance i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-6-((trifluormetil)tio)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (44,5 mg, 0,06 mmol, prinos 5,7%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 59a: LC-MS: (ESI, m/z): 688,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO, ppm) δ 8,12 (d, J = 21 Hz, 1H), 6,84 (s, 3H), 6,50 (s, 1H), 6,18 (d, J = 36,0 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 2,4, 10,2 Hz, 1H), 4,75-4,63 (m, 1H), 4,47-4,00 (m, 5H), 3,67-3,55 (m, 2H), 3,25-3,16 (m, 1H), 3,02-2,92 (m, 1H), 2,66-2,55 (m, 1H), 2,38 (s, 6H), 2,25-2,15 (m, 1H), 2,02-1,85 (m, 1H), 1,75-1,55 (m, 3H), 1,45-1,26 (m, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; n-heksan / dihlormetan = 3/1(0,1% dietilamin); protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 0,9 min (brži pik).

Referentni primer 59b: LC-MS: (ESI, m/z): 688,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO, ppm) δ 8,13 (s, 1H), 6,92-6,84 (m, 3H), 6,51 (s, 1H), 6,20 (d, J = 30,0 Hz, 1H), 5,75

2

(dd, J = 2,4, 10,2 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,45-4,35 (m, 1H), 4,30-3,90 (m, 4H), 3,80-3,55 (m, 2H), 3,28-3,04 (m, 1H), 3,01-2,90 (m, 1H), 2,65-2,55 (m, 1H), 2,43-2,31 (m, 6H), 2,23-2,11 (m, 1H), 2,04-1,87 (m, 1H), 1,75-1,55 (m, 3H), 1,34 (d, J = 6,6 Hz, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; n-heksan / dihlormetan = 3/1(0,1% dietilamin); protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 1,8 min (sporiji pik).

Referentni primer 60: 1-[(3S,5S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil (3S,5S)-4-(7-brom-6-hlor-hinazolin-4-il)-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat

Smeša 7-brom-4,6-dihlor-hinazolina (pogledajte referentni primer 22, korak 1) (1,0 g; 3,6 mmol), terc-butil (3S,5S)-3,5-dimetilpiperazin-1-karboksilata (1,1 g; 5,4 mmol) i natrijum karbonata (1,1 g; 10,7 mmol) u dimetil sulfoksidu (10 ml) mešana je na 60 °C tokom 16 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš

2

hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (9:1), što je dalo tercbutil (3S,5S)-4-(7-brom-6-hlor-hinazolin-4-il)-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (0,50 g; 1,0 mmol; prinos 30,5%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 455,1 [M+H]<+>

Korak 2: terc-butil (3S,5S)-4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat

U atmosferi azota, rastvor terc-butil (3S,5S)-4-(7-brom-6-hlor-hinazolin-4-il)-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilata (900,0 mg; 1,9 mmol), bis(pinakolato)dibora (5,0 g; 19,7 mmol), kompleksa [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihloropaladijum(II) dihlorometan (144,3 mg; 0,20 mmol) i kalijum acetata (387,0 mg; 3,9 mmol) u 1,4-dioksanu (90 ml) mešan je na 80 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je filtrirana i dobijena čvrsta supstanca je isprana heksanom. Sirovi proizvod je direktno upotrebljen u sledećem koraku. LC-MS: (ESI, m/z): 503,3 [M+H]<+>

Korak 3: terc-butil (3S,5S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (3S,5S)-4-[6-hlor-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilata (1,0 g; 1,9 mmol), 6-brom-4-metil-5-(trifluormetil)238iridin-2-amina (1,0 g; 3,9 mmol), kalijum fluorida (230,6 mg; 3,9 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (139,4 mg; 0,2 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (2 ml) mešan je na 80 °C tokom 1 h u atmosferi azota. Po završetku, reakcija je razblažena dihlormetanom, isprana vodom i osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20:1), dšto je dalo terc-butil (3S,5S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-hinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilat (300 mg;

21

0,5 mmol; prinos 27,4%) u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z).551,2 [M+H]<+>Korak 4: 1-[(3S,5S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor terc-butil (3S,5S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-karboksilata (300,0 mg; 0,5 mmol) u dihlormetanu (6 ml) dodata je trifluorsirćetna kiselina (1,2 ml; 15,7 mmol). Reakcija je mešana na 25 °C tokom 30 minuta i koncentrovana. Dobijena smeša je razblažena dihlormetanom (6 ml) i u nju je dodat N,N-diizopropiletilamin (343,3 mg; 2,6 mmol). Akriloil hlorid (48,1 mg; 0,5 mmol) dodat je na -78 °C i reakcija je mešana 30 minuta. Po završetku, reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20:1) da bi se dobila sirova čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 1-[(3S,5S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlorhinazolin-4-il]-3,5-dimetil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (90,1 mg; 0,18 mmol; prinos 33,5%) u vidu bele čvrste supstance. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona Xbridge Prep C18 OBD 19x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min.

Referentni primer 60:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,97 (d, J = 4,9 Hz, 1H), 8,22 (d, J = 5,2 Hz, 1H), 7,79 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 6,97 - 6,71 (m, 3H), 6,55 - 6,46 (m, 1H), 6,20 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,15 - 3,89 (m, 4H), 3,65 (s, 2H), 2,38 (d, J = 2,5 Hz, 3H), 1,01 (d, J = 6,4 Hz, 6H). LC-MS: (ESI, m/z): 505,1 [M+H]<+>Primer 61: 1-((S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)239iridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

Korak 1: terc-butil (S)-4-(7-brom-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Natrijum hidrid (1,01 g; 42,00 mmol) dodat je u rastvor (S)-(1-metilpirolidin-2-il)metanola (4,84 g; 42,00 mmol) u N,N-dimetilformamidu (40 ml) i mešan na 0 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat terc-butil (S)-4-(7-brom-2,6-dihlorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (Intermedijer 5) (10,00 g; 21,00 mmol) i dobijena smeša je mešana na 0 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodenim rastvorom amonijum hlorida, razblažena vodom, ekstrahovana etil acetatom, isprana vodom, osušena natrijum sulfatom i koncentrovana. Ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20 : 1), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-brom-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (10,50 g; 17,98 mmol; prinos 85,6%) u vidu žutog ulja. LCMS: (ESI, m/z): 556,4 [M+H]<+>

Korak 2: 4-((S)-4-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpiperazin-1-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il boronska kiselina

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-brom-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (2,00 g; 3,60 mmol), bis(pinakolato)dibora (2,75 g; 10,81 mmol), kalijum acetata (1,06 g; 10,81 mmol) i kompleksa [1,1’-bis(difenilfosfino)ferocen]dihlorpaladijum(II) dihlormetan (0,27 g; 0,36 mmol) u 1,4-dioksanu (15 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Po završetku, dobijeni rastvor je koncentrovan, razblažen dihlormetanom i filtriran. Filtrat je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 4-((S)-4-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpiperazin-1-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il boronsku kiselinu (3,00 g, sirovo) u vidu crnog ulja. Sirovi proizvod je direktno upotrebljen u sledećem koraku. LCMS: (ESI, m/z): 520,2 [M+H]<+>Korak 3: terc-butil (S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)241iridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor 4-((S)-4-(terc-butoksikarbonil)-2-metilpiperazin-1-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il boronske kiseline (2,20 g; 2,12 mmol), 6-brom-4-metil-5-(trifluormetil)241iridin-2-amina (0,54 g; 2,12 mmol), kalijum fluorida (0,25 g; 4,23 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) dihlorida (0,15 g; 0,21 mmol) u mešovitom rastvaraču od acetonitrila (35 ml) i vode (7 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Po završetku, dobijeni rastvor je razblažen dihlormetanom, ispran vodom, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10 : 1), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)241iridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (0,50 g; 0,72 mmol; prinos 34,2%) u vidu smeđe čvrste supstance. LCMS: (ESI, m/z): 650,3 [M+H]<+>

Korak 4: 1-((S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)241iridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

21

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)242iridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (0,30 g; 0,46 mmol) i trifluorsirćetne kiseline (0,6 ml; 7,79 mmol) u dihlormetanu (3 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana, razblažena dihlormetanom i podešena na pH >7 N,N-diizopropiletilaminom. Zatim je dodat akriloil hlorid (0,03 g, 0,37 mmol) i reakcija je mešana na -78 °C tokom 1 h. Po završetku, dobijeni rastvor je razblažen vodom, ekstrahovan dihlormetanom, osušen natrijum sulfatom i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 1-((S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)242iridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (28,7 mg; 0,05 mmol; prinos 15,1%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS: (ESI, m/z): 604,2 [M+H]<+>. Prep-HPLC uslovi: Kolona: kolona Xbridge Prep C18 OBD; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (33% do 50% za 7 min); detektor, UV 254 nm do

Primer 61:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,94 (d, J = 3,9 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H), 6,95 - 6,72 (m, 3H), 6,47 (s, 1H), 6,18 (d, J = 18,3 Hz, 1H), 5,75 (d, J = 10,5, 2,4 Hz, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,46 - 4,31 (m, 2H), 4,31 - 3,92 (m, 4H), 3,73 - 3,51 (m, 2H), 3,01 - 2,91 (m, 1H), 2,64 - 2,53 (m, 1H), 2,36 (s, 6H), 2,25 - 2,12 (m, 1H), 2,00 - 1,90 (m, 1H), 1,77 - 1,56 (m, 3H), 1,26 (d, J = 6,0 Hz, 3H).

Referentni primeri 62a i 62b: 1-((S)-4-(® -6-hlor-8-fluor-7-(4-metil-6-(metilamino)-3-(trifluormet242iridinedin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 62a) i 1-((S)-4-((S)-6-hlor-8-fluor-7-(4-metil-6-(metilamino)-3-(trifluormet243iridinedin-2-il)-2-(((S)-1-metilprolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 62b) (2 atropizomera)

Korak 1: terc-butil (S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metilpiridin-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor N-[(4-metoksifenil)metil]-N,4-dimetil-6-tributilstanil-piridin-2-amina (5,5 g; 10,35 mmol), terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il)-3-metil-piperazin-1-karboksilata (2,47 g; 5,17 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma (1,2 g; 1,03 mmol), kupro jodida (296,1 mg; 1,55 mmol) i litijum hlorida (548,4 mg; 12,94 mmol) u 1,4-dioksanu (100 ml) mešan je preko noći na 150 °C u atmosferi azota. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (7/3), što

21

je dalo terc-butil (S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metilpiridin-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (2,2 g; 3,48 mmol; prinos 67,2%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 639,3 [M+H]<+>

Korak 2: terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(3-jod-6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metilpiridin-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metilpiridin-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (2,22 g; 3,48 mmol), N-jodsukcinimida (1,57 g; 6,96 mmol) i p-toluensulfonske kiseline (129,5 mg; 0,75 mmol) rastvoren je u N,N-dimetilformamidu (100 ml) i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana etil-acetatom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (75/25), što je dalo tercbutil (3S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(3-jod-6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metilpiridin-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1,53 g; 2,00 mmol; prinos 57,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 765,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metil- il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetata (4,39 g; 22,85 mmol), terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(3-jod-6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metilpiridin-2-

21

il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (3,5 g; 4,57 mmol) i kupro jodida (870,0 mg; 4,57 mmol) u N,N-dimetilformamidu (70 ml) mešan je tokom 6 sati na 90 °C u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (75/25), što je dalo terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metil-3-(trifluormet245iridindin-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (2,5 g; 3,54 mmol; prinos 77,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 707,3 [M+H]<+>

Korak 4: terc-butil (3S)-4-(6-hlor-8-fluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metil-3-(trifluormet245iridindin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U rastvor N-metil-1-prolinola (70 mg; 0,57 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) dodat je natrijum hidrid (23 mg; 0,57 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) na 0 °C. Reakcija je mešana tokom 0,5 h. U dobijenu smešu je dodat terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2,8-difluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metil-3-(trifluormet246iridindin-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (0,2 g; 0,28 mmol) i reakcija je mešana na sobnoj temperaturi još 0,5 h. Reakciona smeša je deaktivirana vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (30%), što je dalo tercbutil (3S)-4-(6-hlor-8-fluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metil-3-(trifluormet246iridindin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (100 mg; 0,12 mmol; prinos 44,1%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 802,1 [M+H]<+>.

Korak 5: 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-N,4-dimetil-5-(trifluormet246iridindin-2-amin

21

Rastvor terc-butil (3S)-4-(6-hlor-8-fluor-7-(6-((4-metoksibenzil)(metil)amino)-4-metil-3-(trifluormet246iridindin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (2.1 g; 2,66 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (40 ml) mešan je na 50 °C tokom 2 h. Reakcioni rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (2/10), što je dalo 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-N,4-dimetil-5-(trifluormet247idindin-2-amin (1,2 g; 2,11 mmol; prinos 79,3%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 582,1 [M+H]<+>.

Korak 6: 1-((S)-4-((R)-6-hlor-8-fluor-7-(4-metil-6-(metilamino)-3-(trifluormet247iridindin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 62a) i 1-((S)-4-((S)-6-hlor-8-fluor-7-(4-metil-6-(metilamino)-3-(trifluormet247iridindin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 62b) (2 atropizomera)

Rastvor 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-N,4-dimetil-5-(trifluormet247iridindin-2-amina (400,0 mg; 0,69 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (177,3 mg; 1,37 mmol) u dihlormetanu (10 ml) ohlađen je na -78 °C. U reakciju je dodat akriloil hlorid (62 mg; 0,69 mmol) i smeša je mešana na -78 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je deaktivirana vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je izolovan pomoću

21

preparativne HP-C - kolona, CHIRAL ART Cellulose-SB, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza, -x--HPLC i etanol-HPLC (zadržano 40% eta-1--HPLC tokom 10 min); detektor, UV 220/254 nm da bi se dobila naslovna jedinjenja. Stereohemija naslovnih jedinjenja je dodeljena na osnovu potentnosti.

Referentni primer 62a: 1-((S)-4-((R)-6-hlor-8-fluor-7-(4-metil-6-(metilamino)-3-(trifluormet248iridindin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (70,9 mg, 0,11 mmol, prinos 16,2%, bela čvrsta supstanca).

<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,84 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,93 - 6,76 (m, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,31 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 5,87 - 5,79 (m, 1H), 4,59 - 4,38 (m, 3H), 4,28 - 4,22 (m, 2H), 4,20 - 4,15 (m, 2H), 4,05 (d, J = 14,1 Hz, 1H), 3,76 - 3,72 (m, 1H), 3,61 (s, 1H), 3,40 (s, 3H), 3,23 - 3,20 (m, 1H), 3,15 - 3,08 (m, 3H), 2,89 (s, 3H), 2,81 - 2,73 (m, 1H), 2,54 - 2,50 (m, 1H), 2,49 - 2,44 (m, 3H), 1,43 (s, 3H).

Referentni primer 62b: 1-((S)-4-((S)-6-hlor-8-fluor-7-(4-metil-6-(metilamino)-3-(trifluormet248iridindin-2-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (65,1 mg, 0,10 mmol, prinos 14,9%, bela čvrsta supstanca).

<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 7,84 (d, J = 1,7 Hz, 1H), 6,85 (d, J = 10,7 Hz, 1H), 6,53 (s, 1H), 6,31 (d, J = 17,5 Hz, 1H), 5,83 (d, J = 10,6 Hz, 1H), 4,51-4,48 (m, 3H), 4,31 (d, J = 13,9 Hz, 2H), 4,05 (d, J = 13,2 Hz, 1H), 3,76 (d, J = 14,0 Hz, 2H), 3,18 - 3,09 (m, 1H), 2,88 (s, 4H), 2,56 (s, 4H), 2,46 (s, 3H), 2,45 - 2,34 (m, 2H), 1,92 - 1,73 (m, 3H), 1,45 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 636,1 [M+H]<+>.

Referentni primeri 63a i 63b: 1-((S)-4-((R)-7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 63a) i 1-((S)-4-((S)-7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 63b)

Sintetički postupak

21

Korak 1: Terc-butil (S)-4-(7-brom-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor N-metil-1-prolinola (3,5 g, 30,39 mmol) i kalijum karbonata (5,6 g, 40,58 mmol) u dimetil sulfoksidu (20 ml) mešan je na 90 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil (S)-4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (10,0 g; 20,24 mmol) i mešan na 90 °C tokom 1 h. Po završetku, reakciona smeša je razblažena vodom. Dobijeni rastvor je ekstrahovan dihlormetanom i ispran vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (94:6), što je dalo tercbutil (S)-4-(7-brom-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (6,5 g; 11,3 mmol; prinos 56,1%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 572,1 [M+H]<+>

Korak 2: terc-butil (S)-4-(6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(tributilstanil)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

22

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-brom-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1,0 g; 1,75 mmol), heksabutildikalaja (2,9 g; 8,85 mmol), adukta tris(dibenzilidenaceton)dipaladijum-hloroform (181,0 mg; 0,1700 mmol), tricikloheksil fosfina (100,0 mg; 0,3600 mmol) i litijum hlorida (189,0 mg; 4,35 mmol) u 1,4-dioksanu (100 ml) mešan je na 105 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Po završetku, reakciona smeša je razblažena dihlormetanom. Dobijeni rastvor je ispran vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (19:1), što je dalo terc-butil (S)-4-(6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(tributilstanil)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (340 mg; 0,4 mmol; prinos 24,9%) u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 784,3 [M+H]<+>Korak 3: terc-butil (3S)-4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (S)-4-(6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(tributilstanil)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (212,5 mg; 0,27 mmol), 1-bromizohinolin-3-amina (50,0 mg; 0,2200 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (130,0 mg; 0,1100 mmol), bakar(I) jodida (22,5 mg; 0,1200 mmol) i litijum hlorida (22,5 mg; 0,5200 mmol) u N,N-dimetilformamidu (5 ml) mešan je na 90 °C tokom 1 h u atmosferi azota. Po završetku, rastvor je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (97:3), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (100 mg; 0,15 mmol; prinos 70,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 636,2 [M+H]<+>

Korak 4: 1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amin

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (600,0 mg; 0,94 mmol) u dihlormetanu (20 ml) i trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml; 129,8 mmol) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (40:60), što je dalo 1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amin (410 mg; 0,76 mmol; prinos 81,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 536,2 [M+H]<+>

Korak 5: 1-((S)-4-((R)-7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 63a) i 1-((S)-4-((S)-7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 63b)

Rastvor 1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)izohinolin-3-amina (410,0 mg; 0,76 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,13 ml; 0,77 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (76,0 mg; 0,84 mmol) i mešan je na -78 °C tokom 30 minuta. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (9:1) i dalje prečišćen pomoću preparativne HP-C - kolona: kolona Xcelect CSH F-pheny OBD 19*250 mm, 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: metanol; protok: 25 ml/min. Proizvod je prečišćen pomoću hiralne preparativne HP-C - kolona: CHIRALPAK IC, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza A: Heks:DCM=1:1(10 mM NH3-Me-)--HPLC, mobilna faza B: E-H--HPLC; protok: 18 ml/min. Ostatak je liofilizovan, što je dalo 1-((S)-4-((R)-7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 63) (39,7 mg, 0,06 mmol, prinos 8,8%) u vidu žute čvrste supstance i 1-((S)-4-((S)-7-(3-aminoizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 63b) (47,0 mg, 0,079 mmol, prinos 10,4%) u vidu žute čvrste supstance.

Referentni primer 63a: LC-MS: (ESI, m/z): 590,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm) δ 7,74 (s, 1H), 7,64 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,54-7,49 (m, 1H), 7,39 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,28-7,15 (m, 1H), 6,88 (s, 1H), 6,69-6,55 (m, 1H), 6,39 (dd, J = 1,8, 16,5 Hz, 1H), 5,79 (dd, J = 1,8, 10,5 Hz, 1H), 4,90-4,70 (m, 1H), 4,67-4,50 (m, 3H), 4,39-4,27 (m, 1H), 4,23-4,11 (m, 1H), 4,05-3,85 (m, 1H), 3,72-3,41 (m, 2H), 3,40-2,95 (m, 2H), 2,82-2,75 (m, 1H), 2,52 (s, 3H), 2,42-1,95 (m, 3H), 1,95-1,69 (m, 3H), 1,50-1,25 (m, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IG-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija pri 254 nm; (n-heksan / dihlormetan = 1/1)(0,1% dietilamin) / etanol = 1/1; protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 1,5 min (brži pik)

Referentni primer 63b: LC-MS: (ESI, m/z): 590,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, CDCl3, ppm) δ 7,73 (s, 1H), 7,65 (d, J = 8,1 Hz, 1H), 7,55-7,50 (m, 1H), 7,40 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 7,21-7,18 (m, 1H), 6,89 (s, 1H), 6,78-6,50 (m, 1H), 6,40 (dd, J = 2,1, 16,8 Hz, 1H), 5,80 (d, J = 11,1 Hz, 1H), 4,80-4,67 (m, 1H), 4,65-4,45 (m, 3H), 4,45-4,32 (m, 1H), 4,32-4,17 (m, 1H), 4,12-3,75 (m, 1H), 3,78-3,43 (m, 2H), 3,30-3,00 (m, 2H), 2,97-2,70 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,45-2,30 (m, 1H), 2,17-2,03 (m, 1H), 1,99-1,66 (m, 4H), 1,54-1,35 (m, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IG-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija pri 254 nm; (n-heksan / dihlormetan = 1/1)(0,1% dietilamin) / etanol = 1/1; protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 2,5 min (sporiji pik)

Referentni primeri 64a i 64b: (S)-5-((((S)-4-((S)-4-akriloil-2-metilpiperazin-1-il)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet253iridindin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-2-il)oksi)metil)-1-metilpirolidin-2-on (Referentni primer 64a) i (S)-5-((((R)-4-((S)-4-akriloil-2-metilpiperazin-1-il)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet253iridindin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-2-il)oksi)metil)-1-metilpirolidin-2-on (Referentni primer 64b) (2 atropizomera)

22

Korak 1: (5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimet254iridin254andin-2-on

Rastvor (5S)-5-(hidroksimetil)-2-pirolidinona (15,0 g; 130,29 mmol), imidazola (17,74 g; 260,58 mmol) i terc-butildimetilsilil hlorida (29,31 g; 195,43 mmol) u dihlormetanu (300 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (97/3), što je dalo 25 g (83,6%) (5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimet254iridin254andin-2-ona kao bezbojno ulje. LC-MS: (ESI, m/z): 230,1 [M+H]<+>

Korak 2: (5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-pirolidin-2-on

Rastvor (5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimet254iridin254andin-2-ona (18,0 g; 78,47 mmol) u tetrahidrofuranu (300 ml) dodat je natrijum hidrid (10,99 g; 274,64 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) mešan je na 25 °C tokom 10 minuta. Zatim je dodat jodmetan (22,29 g, 156,94 mmol) uz mešanje na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom i smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 10 g (52,4%) (5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-pirolidin-2-ona kao bezbojno ulje. LC-MS: (ESI, m/z): 244,1 [M+H]<+>

Korak 3: (5S)-5-(hidroksimetil)-1-metil-pirolidin-2-on

Rastvor (5S)-5-[[terc-butil(dimetil)silil]oksimetil]-1-metil-pirolidin-2-ona (1,06 g; 4,35 mmol) u HCl/dioksanu (30 ml; 4,35 mmol) mešan je na 25 °C tokom 2 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana, pH je podešen na 7~8 pomoću vodenog rastvora natrijum bikarbonata. Reakcija je koncentrovana i dobijena smeša je prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (95/5), što je dalo 550 mg (97,8%) (5S)-5-(hidroksimetil)-1-metil-pirolidin-2-ona u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 130,1 [M+H]<+>Korak 4: Terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat

U rastvor (5S)-5-(hidroksimetil)-1-metil-pirolidin-2-ona (0,54 g; 4,18 mmol) u tetrahidrofuranu (8 ml) dodat je natrijum hidrid (292,65 mg; 7,32 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) na 0 °C i mešan je na 25 °C tokom 1 h. Zatim je dodat terc-butil (3S)-4-[7-

22

[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (pogledajte korak 9 primera 17a/17b) (1,7 g; 2,09 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani vodom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (95/5), što je dalo 1,676 g (86,9%) terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 922,3 [M+H]<+>Korak 5: (5S)-5-[[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-2-il]oksimetil]-1-metil-pirolidin-2-on

Rastvor terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S)-1-metil-5-okso-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilata (1,63 g; 1,77 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (8 ml) mešan je na 50 °C tokom 24 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. pH je podešen na 8 pomoću N,N-diizopropiletilamina. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (5%~ 70% tokom 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 785 mg (76,1%) (5S)-5-[[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-2-il]oksimetil]-1-metil-pirolidin-2-ona u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 582,2 [M+H]<+>

Korak 6: (S)-5-((((S)-4-((S)-4-akriloil-2-metilpiperazin-1-il)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet256iridindin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-2-il)oksi)metil)-1-metilpirolidin-2-on (Referentni primer 64a) i (S)-5-((((R)-4-((S)-4-akriloil-2-metilpiperazin-1-il)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet257iridindin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-2-il)oksi)metil)-1-metilpirolidin-2-on (Referentni primer 64b) (2 atropizomera)

22

U rastvor (5S)-5-[[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-2-il] oksimetil]-1-metil-pirolidin-2-ona (463,0 mg; 0,80 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (513,13 mg; 3,98 mmol) u dihlormetanu (12 ml) dodat je akriloil hlorid (57,6 mg; 0,6400 mmol) na -78 °C i mešan na -78 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su spojeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (5%~ 70% tokom 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 251 mg sirovog proizvoda u vidu bele čvrste supstance. Smeša dijastereoizomera je razdvojena pomoću preparativne hiralne HP-C - kolona, Chiralpak IE-3 0,46*5 cm 3 um; mobilna faza, (Heks:dihlormetan=3:1) (0,1%DEA):EtOH=50:50; detektor, 254 nm; protok, 1,0 ml/min; temperatura: 25 °C, što je dalo 96,5 mg (19,1%) (S)-5-((((S)-4-((S)-4-akriloil-2-metilpiperazin-1-il)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet257iridindin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-2-il)oksi)metil)-1-metilpirolidin-2-ona u vidu bele čvrste supstance i 95,1 mg (18,8%) (S)-5-((((R)-4-((S)-4-akriloil-2-metilpiperazin-1-il)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet257iridindin-2-il)-6-hlor-8-fluorhinazolin-2-il)oksi)metil)-1-metilpirolidin-2-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 636,2 [M+H]<+>

Referentni primer 64a:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7.85 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,92-6,77 (m, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,30 (dd, J = 16,8, 3,2 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,8, 8,8 Hz, 1H), 4,82-4,78 (m, 1H), 4,52-4,48 (m, 2H), 4,31-4,28 (m, 1H), 4,28-4,01 (m, 2H), 3,87-3,52 (m, 2H), 3,40-3,44 (m, 1H), 3,32-3,17 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,61-2,58 (m, 1H), 2,46 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 2,37-2,27 (m, 2H), 2,10-2,05 (m, 1H), 1,43 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 636,2 [M+H]<+>hiralna HPLC: CHIRALPAK IE-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; Heks:DCM=3:1)(0,1% DEA):EtOH=50:50; protok = 1 ml/min; retenciono vreme: 1,74 min (brži pik).

Referentni primer 64b:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7.85 (d, J = 1,6 Hz,

22

1H), 6,92-6,77 (m, 1H), 6,62 (s, 1H), 6,30 (dd, J = 16,8, 3,2 Hz, 1H), 5,81 (dd, J = 10,8, 8,8 Hz, 1H), 4,85-4,77 (m, 1H), 4,53-4,49 (m, 2H), 4,31-4,28 (m, 1H), 4,28-4,01 (m, 2H), 3,87-3,52 (m, 2H), 3,36-3,34 (m, 1H), 3,30-3,17 (m, 1H), 2,92 (s, 3H), 2,61-2,58 (m, 1H), 2,46 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 2,37-2,27 (m, 2H), 2,11-2,05 (m, 1H), 1,43 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 636,2 [M+H]<+>hiralna HPLC: CHIRALPAK IE-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; Heks:DCM=3:1)(0,1% DEA):EtOH=50:50; protok = 1 ml/min; retenciono vreme: 3,48 min (sporiji pik).

Referentni primer 65: (E)-1-((S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet258iridindin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4,4-difluorbut-2-en-1-on

Sintetički postupak

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormet259iridindin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (pogledajte korak 3, primer 61) (0,29 g, 0,53 mmol) i trifluorsirćetne kiseline (0,6 ml, 7,79 mmol) u dihlormetanu (3 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakciona smeša je koncentrovana. Dobijena smeša je ponovo rastvorena u dihlormetanu (3 ml) i dodati su N,N-diizopropiletilamin (0,18 ml; 1,05 mmol), (E)-4,4-difluorbut-2-enska kiselina (0,07 g; 0,58 mmol) i 2-(7-azabenzotriazol-1-il)-N’,N’,N'-tetrametiluronijum heksafluorfosfat (0,26 g; 0,69 mmol). Smeša je mešana na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, dobijeni rastvor je razblažen vodom, ekstrahovan dihlormetanom, osušen natrijum sulfatom i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen na koloni silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1) da bi

22

se dobio proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 23 mg ®(E)-1-((S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluorm259iridiniridin-2-il)-6-hlor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4,4-difluorbut-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LCMS: (ESI, m/z): 654,3 [M+H]<+>. Prep-HPLC uslovi: Kolona: kolona XBridge Shield RP18 OBD; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (40%~ 62% za 7 min); detektor, UV 220 nm.

Referentni primer 65:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,94 (t, J = 7,2 Hz, 1H), 7,41 (s, 1H),-7,23 - 7,08 (m, 1H), 6,78 (s, 2H),-6,69 - 6,62 (m, 1H),-6,53 - 6,45 (m, 1H), 4,84-4,63 (m, 1H),-4,43 - 4,22 (m, 2H),-4,19 - 3,98 (m, 3H), 3,98-3,80 (m, 1H),-3,78 - 3,42 (m, 2H),-3,28 - 3,08 (m, 1H),-2,97 - 2,92 (m, 1H),-2,63 - 2,55 (m, 1H),-2,41 - 2,33 (m, 6H), 2,18 (q, J = 8,4 Hz, 1H),-2,01 - 1,92 (m, 1H),-1,73 - 1,58 (m, 3H), 1,35 -1,23 (m, 3H).

Referentni primer 66: 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[2-(dimetilamino)ciklopentoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: 2-(dimetil260iridin260anpentan-1-ol

Rastvor 2-aminociklopentan-1-ola (5,0 g; 49,4 mmol) dodat je u mravlju kiselinu (10

22

ml) na sobnoj temperaturi u atmosferi azota. Dodat je formaldehid (2,8 g) i reakcija je mešana na 100 °C tokom 2 h. Reakcija je ohlađena na sobnu temperaturu, razblažena vodom, a pH rastvora je podešen na 9 sa natrijum bikarbonatom. Dobijena smeša je ekstrahovana dihlormetanom, organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan, što je dalo 2-(dimetil260iridin260anpentan-1-ol (5 g, sirov) u vidu žutog ulja koje je korišćeno za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 129,2 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U rastvor 2-(dimetil261iridin261anpentan-1-ola (1,0 g; 7,7 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (30 ml) dodat je natrijum hidrid (584 mg; 14,6 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim je dodat terc-butil (3S)-4-(7-brom-2,6-dihlor-hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (Intermedijer 5) (2,0 g; 4,2 mmol) i mešan na 40 °C tokom 2 h. Reakciona smeša je deaktivirana vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski slojevi su zatim spojeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje etil acetatom/petrol etrom (1/8), što je dalo tercbutil (3S)-4-(7-brom-6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (2 g, 3,52 mmol, prinos 83%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 568,9 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-brom-6-hlor-2-((2-

2

(dimetilamino)ciklopentil)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (2,0 g; 3,52 mmol), bis(pinakolato)dibora (8,0 g; 31,3 mmol), dihlor[1,1-bis(difenilfosfino)ferocen]paladijuma(II) (256 mg; 0,35 mmol) i kalijum acetata (1400 mg; 10,9 mmol) u 1,4-dioksanu (20 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena etil acetatom (100 ml) i isprana vodom (3x100 ml), što je dalo terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (1 g,1,6 mmol; prinos 5,2%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 616,0 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil (3S)-4-(7-(6-amino-3-(trifluorm262iridiniridin-2-il)-6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (3S)-4-(6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)-7-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan-2-il)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1000 mg; 1,8 mmol), 6-brom-4-metil-5-(trifluorm262iridiniridin-2-amina (500 mg; 1,9 mmol), Pd(PPh3)2C12 (120 mg; 0,2 mmol) i kalijum fluorida (300 mg; 6,5 mmol) u acetonitrilu (10 ml) i vodi (1 ml) mešan je na 80 °C tokom 3 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je razblažena dihlormetanom (50 ml). Smeša je filtrirana kroz sloj celita i filtrat je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metil alkoholom/dihlormetanom (1:13), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-amino-3-(trifluorm262iridiniridin-2-il)-6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (200 mg; 0,2 mmol; prinos 14,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 650,1 [M+H]<+>

Korak 5: 6-[6-hlor-2-[2-(dimetilamino)ciklopentoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluorm262iridiniridin-2-amin

2 1

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-amino-3-(trifluorm263iridiniridin-2-il)-6-hlor-2-((2-(dimetilamino)ciklopentil)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (200 mg; 0,3 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (5 ml) i dihlormetanu (20 ml) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 1 h. Rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 6-[6-hlor-2-[2-(dimetilamino)ciklopentoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluorm263iridiniridin-2-amin (150 mg; 0,3 mmol; prinos 79,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 564,1 [M+H]<+>

Korak 6: 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[2-(dimetilamino)ciklopentoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 6-[6-hlor-2-[2-(dimetilamino)ciklopentoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluorm263iridiniridin-2-amina (250 mg; 0,4 mmol) u dihlormetanu (5 ml) i DIEA (171 mg; 1,3 mmol) dodat je akriloil hlorid (32 mg; 0,3 mmol) na -78 °C tokom 1 h. Rastvor je koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[2-(dimetilamino)ciklopentoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (32 mg; 0,1 mmol; prinos 11,6%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 66:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,93 (s, 1H), 7,42 (d, J = 3,4 Hz, 1H), 6,89 - 6,80 (m, 1H), 6,77 (s, 2H), 6,46 (s, 1H), 6,19 (d, J = 16,4 Hz, 1H), 5,75 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 5,40 (s, 1H), 4,70 (s, 1H), 4,40 - 4,19 (m, 1H), 4,15 - 3,89 (m, 2H), 3,62 - 3,40 (m, 2H), 3,25 - 3,05 (m, 2H), 2,40 - 2,25 (m, 8H), 2,13 - 1,97 (m, 3H), 1,68 - 1,52 (s, 4H), 1,39 - 1,25 (m, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 618,2 [M+H]<+>

2 2

Referentni primeri 67a i 67b: 1-((®4-((R)-7-(3-amino-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 67a) i 1-((S)-4-((S)-7-(3-amino-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 67b) (2 atropizomera)

Korak 1: terc-butil (3S)-4-(7-(3-acetamido-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (S)-4-(6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-7-(tributilstanil)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (pogledajte referentni primer 63a/63b, korak 2) (138,0 mg; 0,18 mmol), N-(1-brom-4-fluor-3-izohinolil)acetamida (50,0 mg; 0,18 mmol), tetrakis(trifenilfosfin)paladijuma(0) (102,0 mg; 0,09 mmol), bakar(I) jodida (17,0

2

mg; 0,09 mmol) i litijum hlorida (19,0 mg; 0,4400 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) mešan je na 105 °C tokom 16 h u atmosferi azota. Po završetku, reakcija je filtrirana, filtrat je razblažen etil acetatom i ispran vodom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (92:8), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(3-acetamido-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (60 mg; 0,08 mmol; prinos 48,8%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 696,3 [M+H]<+>

Korak 2: N-(1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-fluorizohinolin-3-il)acetamid

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(3-acetamido-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (800,0 mg; 1,15 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) i dihlormetanu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana i dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (3:7), što je dalo N-(1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-fluorizohinolin-3-il)acetamid (500 mg; 0,83 mmol; prinos 73%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 596,2 [M+H]<+>

Korak 3: 1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-fluorizohinolin-3-amin

Rastvor N-(1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-

2 4

il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-fluorizohinolin-3-il)acetamida (400,0 mg; 0,67 mmol) u metil alkoholu (20 ml) i hlorovodoničnoj kiselini (1 ml; 10 mmol) mešan je na 25 °C tokom 16 h. Po završetku, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod 1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-fluorizohinolin-3-amin (350 mg; 0,63 mmol; prinos 94,1%) direktno je korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 554,3 [M+H]<+>

Korak 4: 1-((S)-4-((R)-7-(3-amino-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 67a) i 1-((S)-4-((S)-7-(3-amino-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 67b) (2 atropizomera)

Rastvor 1-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-fluorizohinolin-3-amina (220,0 mg; 0,4000 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1 ml; 5,74 mmol) u dihlormetanu (20 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (36,0 mg; 0,4000 mmol) i reakcija je mešana na -78 °C tokom dodatnih 30 minuta. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (7:3) da bi se dobio sirovi proizvod. Proizvod je prečišćen pomoću hiralne preparativne HPLC - kolona: CHIRALPAK IC, 2*25 cm,5 um; mobilna faza A: Heks:DCM=1:1(10 mM NH3-MeOH)--HPLC, mobilna faza B: EtOH--HPLC; protok: 17 ml/min, što je dalo 1-((S)-4-((R)-7-(3-amino-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (36,9 mg; 0,060 mmol; prinos 15,3%) u vidu bele čvrste supstance i 1-((S)-4-((S)-7-(3-amino-4-fluorizohinolin-1-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (41,4 mg; 0,068 mmol; prinos 17,1%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 67a: LC-MS: (ESI, m/z): 608,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz,

2

DMSO, ppm) δ 8,01-7,74 (m, 2H), 7,73-7,60 (m, 1H), 7,40-7,30 (m, 1H), 7,25-7,17 (m, 1H), 6,75-7,00 (m, 1H), 6,33 (s, 2H), 6,22-6,09 (m, 1H), 5,74 (dd, J = 2,4, 10,5 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,42-3,95 (m, 5H), 3,87-3,37 (m, 2H), 3,29-3,02 (m, 1H), 2,98-2,83 (m, 1H), 2,68-2,54 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,19-2,09 (m, 1H), 2,00-1,85 (m, 1H), 1,70-1,52 (m, 3H), 1,38-1,25 (m, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; (n-heksan / dihlormetan = 1/1) (0,1% dietilamin) / etanol = 1/1; protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 1,4 min (brži pik).

Referentni primer 67b: LC-MS: (ESI, m/z): 608,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO, ppm) δ 8,05-7,75 (m, 2H), 7,73-7,53 (m, 1H), 7,51-7,30 (m, 1H), 7,27-7,10 (m, 1H), 7,00-6,6,63 (m, 1H), 6,33 (s, 2H), 6,22-6,15 (d, J = 21, 1H), 5,74 (dd, J = 2,4, 10,5 Hz, 1H), 4,80 (s, 1H), 4,42-3,95 (m, 5H), 3,87-3,37 (m, 2H), 3,29-3,02 (m, 1H), 2,98-2,83 (m, 1H), 2,68-2,54 (m, 1H), 2,32 (s, 3H), 2,19-2,09 (m, 1H), 2,01-1,87 (m, 1H), 1,80-1,53 (m, 3H), 1,33- 1,17 (m, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; (nheksan / dihlormetan = 1/1) (0,1% dietilamin) / etanol = 1/1; protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 2,4 min (sporiji pik).

Referentni primeri 68a i 68b: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluoroprop-2-en-1-on (Referentni primer 68a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluoroprop-2-en-1-on (Primer 68b) (2 atropizomera)

Sintetički postupak

2

Rastvor 6-[6-hlor-8-fluor-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (pogledajte korak 11, primer 17) (450,0 mg; 0,79 mmol), 2-fluorakrilne kiseline (64,21 mg; 0,71 mmol), HATU (451,85 mg; 1,19 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (408,8 mg; 3,17 mmol) u dihlormetanu (4 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je razblažena dihlormetanom i isprana vodom. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 150 mg 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]-2-fluor-prop-2-en-1-ona u vidu čvrste bele supstance. Sirovi proizvod je prečišćen direktno pomoću preparativne HPLC - kolone, kolona XBridge Prep C18 OBD 9*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: 10 mmol HCOOH u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo sirovi proizvod (130 mg) u vidu bele čvrste supstance. Smeša dijastereoizomera je razdvojena pomoću preparativne hiralne HPLC - kolone, CHIRALPAK IC-30,45*5 cm 3 um; mobilna faza, (Heks:dihlormetan=3:l)(0,1%DEA):EtOH=50:50; detektor, 254 nm; protok, 1,0 ml/min; temperatura: 25 °C, što je dalo 32 mg (6,3%) 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluoroprop-2-en-1-ona (nakon 1,01 min) u vidu bele čvrste supstance i 48 mg (9,5%) 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluoroprop-2 -en-1-ona (nakon 1,41 min) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 640,2 [M+H]<+>Referentni primer 68a:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,81 (s, 1H), 6,85 (s, 2H), 6,49 (s, 1H), 5,37-5,20 (m, 2H), 4,76 (s, 1H), 4,39 (dd, J = 10,8, 6,0 Hz, 1H), 4,18- 4,11 (m, 3H), 4,11-3,93 (m, 1H), 3,91-3,69 (m, 2H), 3,20-3,03 (m, 1H), 2,96-2,92 (m, 1H), 2,60-2,57 (m, 1H), 2,37-2,35 (m, 6H), 2,19-2,14 (m, 1H), 1,96-1,92 (m, 1H), 1,70-1,62 (m, 3H), 1,28 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 640,2 [M+H]<+>hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; Heks:DCM=3:1)(0,1% DEA):EtOH=50:50; protok =

2

1 ml/min; retenciono vreme: 1,00 min (brži pik).

Referentni primer 68b:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,79 (s, 1H), 6,84 (s, 2H), 6,49 (s, 1H), 5,37-5,19 (m, 2H), 4,73 (s, 1H), 4,37 (dd, J = 10,8, 6,0 Hz, 1H), 4,18-4,01 (m, 3H), 4,01-3,79 (m, 1H), 3,79-3,66 (m, 2H), 3,31-3,03 (m, 1H), 2,96-2,92 (m, 1H), 2,59-2,56 (m, 1H), 2,37-2,35 (m, 6H), 2,18-2,14 (m, 1H), 1,97-1,93 (m, 1H), 1,70-1,62 (m, 3H), 1,31 (d, J = 6,8 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 640,2 [M+H]<+>hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; Heks:DCM=3:1)(0,1% DEA):EtOH=50:50; protok = 1 ml/min; retenciono vreme: 1,41 min (sporiji pik).

Primer 69: 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

Korak 1: Terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

2

U rastvor [(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (300 mg; 2,2 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) dodat je natrijum hidrid (206 mg; 1,9 mmol) na sobnoj temperaturi. Dobijeni rastvor je mešan 30 minuta na sobnoj temperaturi. Zatim je dodat terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (pogledajte korak 9 primera 17a/17b) (1,6 g; 1,9 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi još 1 h. Reakcija je prekinuta dodatkom vode. Dobijeni rastvor je ekstrahovan etil acetatom (3x100 ml), a organski slojevi su spojeni. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (30%), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (900 mg, 0,8 mmol, prinos 44,4%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 926,4 [M+H]<+>

Korak 2: 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (900 mg; 0,9 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Reakcija je koncentrovana, što je dalo 6-[6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (500 mg; 0,7 mmol;

2

prinos 79%) u vidu žute čvrste supstance. Zatim, u rastvor 6-[6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (500 mg; 0,7 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1,2 g; 2,7 mmol) u dihlormetanu (30 ml) dodat je akriloil hlorid (70 mg; 0,7 mmol) na -78 °C. Dobijeni rastvor je mešan tokom 1 h na -78 °C, deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom (3x100 ml). Organski slojevi su kombinovani i koncentrovani, a ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona, CHIRALPAK IC-30,46*5 cm 3 um; mobilna faza, (Heks: DCM=3:1) (0,1% DEA):EtOH=50:50; detektor, 254 nm; protok, 1,0 ml/min; temperatura: 25 °C, što je dalo 1-[(3S)-4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (53 mg; 0,1 mmol; prinos 9,5%) (nakon 1,058 min) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 640,2 [M+H]<+>

Primer 69:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,80 (s, 1H), 6,85 (s, 3H), 6,50 (s, 1H), 6,25 - 6,12 (m, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 5,19 (d, J = 56,6 Hz, 1H), 4,71 (s, 1H), 4,51 - 4,19 (m, 3H), 4,19 - 3,91 (m, 2H), 3,61 (d, J = 12,3 Hz, 2H), 3,45 (m, J = 25,6, 11,5, 5,3 Hz, 1H), 3,25 - 3,02 (m, 1H), 2,93 (dd, J = 10,1, 5,3 Hz, 1H), 2,42 - 2,34 (m, 7H), 2,24 - 2,05 (m, 1H), 1,92 (m, J = 33,7, 14,9, 10,0, 6,0 Hz, 1H), 1,30 (d, J = 6,6 Hz, 3H).

Referentni primer 70: (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

24

Korak 1: terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor N-metil-1-prolinola (45,0 mg; 0,39 mmol) u tetrahidrofuranu (5 ml) dodat je natrijum hidrid (22,0 mg; 0,54 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) i smeša je mešana na 25 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Reakcioni rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su zatim spojeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (7/3), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (210 mg; 0,24 mmol; prinos 93,4%). LC-MS: (ESI, m/z): 862,2 [M+H]<+>

Korak 2: (S)-6-(6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (200,0 mg; 0,2300 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (5 ml) mešan je na 50 °C tokom 2 h. Nakon završetka, rastvarač je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (7/3), što je dalo (S)-6-(6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (90 mg; 0,17 mmol; prinos 74,3%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 522,2 [M+H]<+>

Korak 3: (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor (S)-6-(6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (100,0 mg; 0,19 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (1,0 ml; 5,74 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (17,0 mg; 0,19 mmol) i mešan je na -78 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, rastvarač je koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (19,3 mg; 0,034 mmol; prinos 17,5%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 576,2 [M+H]<+>

Referentni primer 70:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 6,82 (dd, J = 10,0, 16,4 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 2,4, 16,8 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 2,0, 10,4 Hz, 1H), 4,36 - 4,33 (m, 1H), 4,19 - 4,15 (m, 1H), 3,85 - 3,77 (m, 8H), 2,96 - 2,95 (m, 1H), 2,68 - 2,65 (s, 1H), 2,35 (s, 3H), 2,19 - 2,13 (m, 1H), 1,97 - 1,88 (m, 1H), 1,68 - 1,60 (m, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 576,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 71: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: ((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metanol

Rastvor (2S,4R)-1-terc-butoksikarbonil-4-etoksi-pirolidin-2-karboksilne kiseline (600,0 mg; 2,31 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 5 minuta. Zatim je dodat litijum aluminijum hidrid (352,0 mg; 9,26 mmol) i mešan na 25 °C tokom 6 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana vodom i etil acetatom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom, što je dalo ((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metanol (150 mg, sirovi) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 160,1 [M+H]<+>

Korak 2: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-

24

6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor ((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metanola (84,0 mg; 0,53 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) dodat je natrijum hidrid (21,6 mg; 0,54 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) i smeša je mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan na 25 °C tokom 6 h. Reakciona smeša je deaktivirana vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (4/1), što je dalo tercbutil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (160 mg; 0,18 mmol; prinos 67,7%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 906,4 [M+H]<+>Korak 3: 6-(6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (150,0 mg; 0,17 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (20 ml) mešan je na 50 °C tokom 6 h. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen C18 fleš hromatografijom uz eluiranje acetonitrilom/vodom (7/3), što je dalo 6-(6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (80 mg; 0,14 mmol; prinos 85,4%) u vidu beličaste čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 566,2 [M+H]<+>Korak 4: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (70,1 mg; 0,12 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (48,1 mg; 0,37 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je akriloil hlorid (12,0 mg; 0,13 mmol) ukapavanjem dodat u reakcioni sistem i mešan na -78 °C tokom 30 minuta. Nakon završetka, reakcija je deaktivirana vodom i koncentrovana. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-etoksi-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (32,9 mg; 0,053 mmol; prinos 42,9%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 71:<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,09 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,89 - 6,77 (m, 1H), 6,71 - 6,66 (m, 1H), 6,31 - 6,25 (m, 1H), 5,86 - 5,75 (m, 1H), 4,52 - 4,48 (m, 2H), 4,10 (s, 1H), 3,98 (s, 4H), 3,93 (s, 4H), 3,56 - 3,36 (m, 3H), 3,17 (s, 1H), 2,60 (s, 3H), 2,56 - 2,47 (m, 1H), 2,12 (s, 1H), 2,00 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 1,18 (t, J = 7,0 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 620,3 [M+H]<+>.

Referentni primer 72: (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2,4]-heptan-5-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

24

Korak 1: (S)-5-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan

U rastvor (S)-5-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-1-metilpirolidin-2-ona (pogledajte korak 2 referentnih primera 64a i 64b) (3,0 g; 12,32 mmol) u tetrahidrofuranu (40 ml) dodat je CH3Ti(Oi-Pr)3(13,96 g; 49,3 mmol) na 25 °C pu atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan tokom 0,5 h. Etilmagnezijum bromid (13,14 g; 98,6 mmol) dodat je na 0 °C i mešan na 25 °C tokom 6 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (7/1), što je dalo (S)-5-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan (1,5 g; 5,87 mmol; prinos 47,6%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 256,2 [M+H]<+>

Korak 2: (S)-(4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metanol

Rastvor (S)-5-(((terc-butildimetilsilil)oksi)metil)-4-metil-4-azaspiro[2,4]heptana (1,4 g; 5,48 mmol) u HCl/1,4-dioksanu (20 ml) mešan je na 50 °C tokom 6 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (5/1), što je dalo (S)-(4-metil-4-azaspiro[2,4]heptan-5-il)metanol (300 mg; 2,12 mmol; prinos 38,8%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 142,1

24

[M+H]+

Korak 3: terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor (S)-(4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metanola (148,0 mg; 1,05 mmol) i natrijum hidrida (60%) (50,0 mg; 2,08 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan na 25 °C tokom 6 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (8/1), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (96 mg; 0,11 mmol; prinos 41,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 888,5 [M+H]<+>

Korak 4: (S)-6-(6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2,4]heptan-5-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (80,0 mg; 0,09 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je nanet na kolonu silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (7/1), što je dalo

24

(S)-6-(6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2,4]heptan-5-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (40 mg; 0,073 mmol; prinos 81,1%). LC-MS: (ESI, m/z): 548,2 [M+H]<+>

Korak 5: (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor (S)-6-(6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (30,0 mg; 0,05 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (22,0 mg; 0,17 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (5,0 mg; 0,06 mmol) i mešan na -78 °C tokom 0,5 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4-metil-4-azaspiro[2.4]heptan-5-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (10,8 mg; 0,018 mmol; prinos 32,8%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 602,3 [M+H]<+>. Prep-HPLC uslovi: Kolona: kolona XBridge Shield RP18 OBD; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (40%~ 62% za 7 min); detektor, UV 220 nm.

Referentni primer 72:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3, ppm) δ 7,89 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,68 (s, 1H), 6,72 - 6,50 (m, 2H), 6,48 - 6,23 (m, 1H), 5,89 - 5,68 (m, 1H), 5,03-4,82 (m, 2H), 4,56 (s, 1H), 4,34 (s, 1H), 4,02 - 3,73 (m, 8H), 3,17 (s, 1H), 2,24 (s, 3H), 2,20-2,11 (m, 1H), 2,01-1,89 (m, 1H), 1,89-1,72 (m, 2H), 0,91 (s, 1H), 0,67 (s, 1H), 0,52 (s, 1H), 0,31 (s, 1H).

Referentni primer 73: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

24

Sintetički postupak

Korak 1: 1-(terc-butil) 2-metil 4,4-difluor-2-metilpirolidin-1,2-dikarboksilat

Rastvor 1-terc-butil 2-metil (2S)-4, 4-difluorpirolidin-1,2-dikarboksilata (3,0 g, 11,31 mmol) i litijum diizopropilamida (6,8 ml; 13,57 mmol; 2 M u tetrahidrofuranu) u tetrahidrofuranu (25 ml), mešan je na -78 °C tokom 0,5 h u atmosferi azota. Jodmetan (2,09 g; 14,7 mmol) ukapavanjem je dodat u reakcioni sistem i mešan na -78 °C tokom 5 h. Po završetku, rastvor je razblažen vodom i ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su sakupljeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Dobijen je željeni sirovi proizvod 1-(terc-butil) 2-metil 4, 4-difluor-2-metilpirolidin-1,2-dikarboksilat (2,6 g; 9,3097 mmol; prinos 82,3%). LC-MS: (ESI, m/z).280,1 [M+H]<+>

Korak 2: (4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metanol

Rastvor 1-(terc-butil) 2-metil 4,4-difluor-2-metilpirolidin-1,2-dikarboksilata (2,5 g; 8,95 mmol) u tetrahidrofuranu (25 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je u reakcioni sistem dodat litijum aluminijum hidrid (1,36 g; 35,81 mmol) i mešan na 25 °C tokom 5 h. Po završetku, rastvor je razblažen vodom i ekstrahovan etil acetatom. Organski slojevi su sakupljeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani, što je dalo sirovi

24

proizvod (4,4-difluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il)metanol (1,3 g; 7,87 mmol; prinos 87,9%). LC-MS: (ESI, m/z).166,1 [M+H]<+>

Korak 3: Terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor (4,4-difluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il)metanola (130,0 mg; 0,79 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Dodat je natrijum hidrid (19,0 mg; 0,79 mmol) i mešan na 25 °C tokom 0,5 h, zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (400,0 mg; 0,52 mmol) i mešan na 25 °C tokom 5 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan etil acetatom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (9:1), što je dalo tercbutil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (286 mg; 0,31 mmol; prinos 60,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z) 912,4 [M+H]<+>

Korak 4: 6-(6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (276,0 mg; 0,30 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (25 ml) mešan je na 50 °C tokom 8 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan etil acetatom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (97:3), što je dalo 6-(6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-

2

il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (120 mg; 0,21 mmol; prinos 69,4%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 572,2 [M+H]<+>Korak 5: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (110,0 mg; 0,19 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (75,0 mg; 0,58 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je akriloil hlorid (18,0 mg; 0,20 mmol) ukapavanjem dodat u reakcioni sistem i mešan na -78 °C tokom 30 minuta. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((4,4-difluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (54,5 mg; 0,09 mmol; prinos 45,3%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 73: LC-MS: (ESI, m/z): 626,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4) δ 8,09 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,91-6,75 (m, 1H), 6,70 (d, J = 9 Hz, 1H), 6,34-6,18 (m, 1H), 5,86-5,74 (m, 1H), 4,49-4,31 (m, 2H), 4,06-3,84 (m, 8H), 3,43-3,32 (m, 1H), 3,22-3,01 (m, 1H), 2,69-2,45 (m, 1H), 2,39 (s, 3H), 2,30-2,12 (m, 1H), 1,26 (s, 3H).

Referentni primer 74: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[1-metil-1-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

2 1

Korak 1: 2-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]propan-2-ol

2-[(2S)-pirolidin-2-il]propan-2-ol (1,0 g; 7,74 mmol) dodat je u 0,2 ml mravlje kiseline na 0 °C, nakon čega je dodato 0,15 ml 40% vodenog rastvora formaldehida. Zatim je smeša refluktovana na 120 °C tokom 24 h. Po završetku, smeša je zakiseljena 5 N hlorovodoničnom kiselinom i uparena. Ostatak je rastvoren u minimalnoj količini vode, zasićen natrijum hidroksidom i ekstrahovan hloroformom. Kombinovani ekstrakti su osušeni iznad kalijum karbonata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlorometanom/metanolom (96/4), što je dalo 510 mg (46%) 2-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]propan-2-ola u vidu žućkasto-smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 144,3 [M+H]<+>

Korak 2: terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((2-(1-metilpirolidin-2-il)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

U rastvor 2-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]propan-2-ola (112,01 mg; 0,78 mmol) u N,N-dimetilformamidu (22 ml) dodat je natrijum hidrid (125,13 mg; 3,13 mmol; 60% disperzija u

2 2

mineralnom ulju) na 0 °C i mešan na 25 °C tokom 1 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (300,0 mg; 0,39 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani vodom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (4%), što je dalo 105 mg (30,2%) terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((2-(1-metilpirolidin-2-il)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z) 890,4 [M+H]<+>

Korak 3: (S)-6-(6-hlor-2-((2-(1-metilpirolidin-2-il)propan-2-il)oksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((2-(1-metilpirolidin-2-il)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (96,0 mg; 0,11 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (21 ml; 0,11 mmol) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj reakciji. LC-MS: (ESI, m/ z): 550,4 [M+H]<+>

Korak 4: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[1-metil-1-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor (S)-6-(6-hlor-2-((2-(1-metilpirolidin-2-il)propan-2-il)oksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (59,0 mg; 0,11 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (55,35 mg; 0,43 mmol) u dihlormetanu (19 ml) dodat je akriloil hlorid (6,8 mg; 0,08 mmol) na -78 °C i mešan na -78 °C tokom 1 h. Po završetku, dobijeni rastvor je

2

deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski slojevi su zatim spojeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum-sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen direktno pomoću preparativne HPLC - kolona, XBridge Prep C18 OBD kolona19*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: 10 mmol amonijum bikarbonata u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 8 mg (12,3%) 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[1-metil-1-[(2S)-1-metilpirolidin-2-il]etoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 604,4 [M+H]<+>.

Referentni primer 74:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,00 (s, 1H), 7,77 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 6,88-6,78 (m, 3H), 6,59 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,16 (dd, J = 16,4, 2,0 Hz, 1H), 5,73 (dd, J = 10,8, 2,4 Hz, 1H), 3,83-3,79 (m, 8H), 3,12-3,09 (m, 1H), 2,98-2,96 (m, 1H), 2,37 (d, J = 9,6 Hz, 3H), 2,29-2,24 (m, 1H), 1,90-1,84 (m, 1H), 1,71-1,58 (m, 3H), 1,57-1,52 (m, 6H). LC-MS: (ESI, m/z): 604,4 [M+H]<+>.

Referentni primeri 75a i 75b: (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilazetidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 75a) i (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilazetidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 75b)

2 4

Korak 1: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[(1-metilazetidin-2-il)metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

Rastvor (1-metilazetidin-2-il)metanola (39,5 mg; 0,3 mmol) i natrijum hidrida (čistoća 60%) (23,4 mg; 0,5 mmol) u N,N-dimetilformamidu (2 ml) mešan je na 0 °C tokom 30 minuta. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (150,0 mg; 0,2 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana zasićenim rastvorom amonijum hlorida. Dobijeni rastvor je ekstrahovan etil-acetatom, a organski slojevi su spojeni. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[(1-metilazetidin-2-il)metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120,0 mg; 0,1 mmol; prinos 72%) u vidu žute tečnosti. LC-MS: (ESI, m/z): 848,3 [M+H]<+>

Korak 2: (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilazetidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 75a) i (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilazetidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 75b)

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[(1-metilazetidin-2-il)metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (100,0

2

mg; 0,1 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (2,6 ml; 35,3 mmol) mešan je na 50 °C tokom 12 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Dobijena smeša je ponovo rastvorena u dihlormetanu (1 ml) i redom su dodati N,N-diizopropiletilamin (76,1 mg; 0,5 mmol) i akriloil hlorid (17,8 mg; 0,2 mmol). Reakciona smeša je mešana na -78 °C tokom 0,5 h. Dobijeni rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je sakupljen, koncentrovan i prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1) kako bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC -kolona: kolona XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min; što je dalo dijastereoizomere kao bezbojno ulje. Dijastereoizomeri su izolovani pomoću preparativne hiralne HPLC (kolona: CHIRALPAK IE-3, 4,6*50 mm 3 um; mobilna faza A: (Heks: DCM=3:1)(0,1%DEA): IPA=80:20), što je dalo (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilazetidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 75a) (6,1 mg; 0,01 mmol; prinos 5,5%) u vidu bele čvrste supstance i (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-metilazetidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 75b) (6,6 mg; 0,01 mmol; prinos 6%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 75a: LC-MS: (ESI, m/z): 562,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,05 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,82 (dd, J = 16,5, 10,2 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,8, 2,4 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,5, 2,4 Hz, 1H), 4,33 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 3,85 - 3,77 (m, 8H), 2,82 - 2,72 (m, 1H), 2,29 (s, 3H), 2,02 - 1,93 (m, 2H), 1,26 - 1,23 (m, 2H). Hiralna HPLC: Kolona: CHIRALPAK IE-3, 4,6*50 mm 3 um; detekcija na 254 nm; (Heks : DCM=3:1) (0,1%DEA): IPA=80:20; protok: l ml/min; retenciono vreme: 3,723 min; (brži pik).

Referentni primer 75b: LC-MS: (ESI, m/z). 562,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,91 - 6,78 (m, 3H), 6,60 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,8, 2,4 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,5, 2,4 Hz, 1H), 4,30 (d, J = 5,4 Hz, 2H), 3,85 - 3,77 (m, 8H), 2,78 - 2,70 (m, 1H), 2,25 (s, 3H), 2,01 - 1,87 (m, 2H), 1,26 - 1,23 (m, 2H). Hiralna HPLC: Kolona: CHIRALPAK IE-3, 4,6*50 mm 3 um; detekcija na 254 nm; (Heks : DCM=3:1) (0,1%DEA): IPA=80:20; protok: l ml/min; retenciono vreme: 4,650 min; (sporiji pik).

Referentni primer 76: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2

Sintetički postupak

Korak 1: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Dodat je rastvor 2-[3-(fluormetil)azetidin-1-il]etanola (70,0 mg; 0,5300 mmol) i natrijum hidrida (20,0 mg; 0,5 mmol; čistoća 60%) u tetrahidrofuranu (5 ml) i mešan na 25 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan na 25 °C tokom 30 minuta. Po završetku, rastvor je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku. LC-MS: (ESI, m/z) 880,3 [M+H]<+>

Korak 2: 6-(6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

2

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (241,0 mg; 0,27 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 2 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (25:75), što je dalo 6-(6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (140 mg; 0,25 mmol; prinos 94,7%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 540,2 [M+H]<+>Korak 3: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (140,0 mg; 0,26 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,09 ml; 0,52 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (24,0 mg; 0,27 mmol) i mešan na -78 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (25:75) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona Xselect CSH OBD 30*150 mm 5 um, n; mobilna faza A: voda (0,1%FA), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min, što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(2-(3-(fluormetil)azetidin-1-il)etoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on so mravlje kiseline (16,8 mg; 0,026 mmol; prinos 10,1%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 76: LC-MS: (ESI, m/z): 594,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,78 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 7,00-6,67 (m, 3H), 6,60 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 2,1, 16,5 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 2,1, 10,5 Hz, 1H), 4,58 (d, J =

2

6,3 Hz, 1H), 4,42 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 4,31-4,15 (m, 2H), 3,93-3,70 (m, 8H), 3,32-3,29 (m, 2H), 3,02-2,93 (m, 2H), 2,83-2,66 (m, 3H).

Referentni primer 77: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: [(2R, 3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metanol

Litijum aluminijum hidrid (146,63 mg; 3,86 mmol) dodat je u rastvor (2R,3S)-1-tercbutoksikarbonil-3-fluor-pirolidin-2-karboksilne kiseline (450,0 mg; 1,93 mmol) u tetrahidrofuranu (18 ml) na 0 °C. Reakcija je zatim zagrevana na 60 °C tokom 1,5 h. Reakcija je ohlađena i deaktivirana vodom, filtrirana i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (96/4), što je dalo 80 mg (31%) [(2R, 3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metanola u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 134,3 [M+H]<+>.

2

Korak 2: Terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (138,85 mg; 1,04 mmol) u tetrahidrofuranu (12 ml) dodat je natrijum hidrid (166,84 mg; 4,17 mmol) na 0 °C. Reakcija je zagrejana na 25 °C i mešana tokom 1 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (400,0 mg; 0,52 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su kombinovani, isprani vodom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/1), što je dalo 69 mg (15%) terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 880,5 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-[6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (61,0 mg; 0,07 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (16 ml) mešan je na 50 °C tokom 3 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. pH je podešen na 10 pomoću N,N-diizopropiletilamina. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm,

2

što je dalo 37 mg 6-[6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 540,3 [M+H]<+>

Korak 4: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2R, 3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 6-[6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (37,0 mg; 0,07 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (35,36 mg; 0,27 mmol) u dihlormetanu (4,6 ml) dodat je akriloil hlorid (3,72 mg; 0,04 mmol) na -78 °C i mešan na -78 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su spojeni, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Sirovi proizvod je prečišćen direktno pomoću preparativne HPLC - kolona, kolona XBridge Prep C18 OBD 19*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: TFA u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 7,5 mg (18,4%) 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2R,3S)-3-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 594,2 [M+H]<+>

Referentni primer 77:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,05 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,91 (s, 2H), 6,98-6,78 (m, 1H), 6,59 (d, J = 8,8, 1H), 6,17 (dd, J = 16,8, 2,0 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 8,8, 2,0 Hz, 1H), 5,09 (d, J = 52,0, 1H), 4,39-4,35 (m, 1H), 4,15-4,13 (m, 1H), 3,90-3,86 (m, 6H), 3,76 (s, 2H), 2,94 (d, J = 6,8, 1H), 2,84-2,75 (m, 1H), 2,49-2,43 (m, 4H), 1,96-1,90 (m, 2H). LC-MS: (ESI, m/z): 594,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 78a: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2 1

Korak 1: ((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metanol

Rastvor (1S,2S,5R)-3-(terc-butoksikarbonil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (200,0 mg; 0,88 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat litijum aluminijum hidrid (67,0 mg; 1,77 mmol) i mešan na 25 °C tokom 6 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom, što je dalo ((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metanol (90 mg; 0,71 mmol; prinos 80,4%) koji je direktno prenet u sledeći korak. LC-MS: (ESI, m/z): 128,1 [M+H]<+>

Korak 2: Terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-

2 2

il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor ((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metanola (100,0 mg; 0,7900 mmol) i natrijum hidrida (32,0 mg; 1,33 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 0 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i reakcija je mešana na 25 °C tokom 3 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (97:3), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (56 mg; 0,06 mmol; prinos 24,6%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 874,4 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-(6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1,0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (83,0 mg; 0,09 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Reakcija je koncentrovana, što je dalo 6-(6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (25 mg; 0,05 mmol; prinos 89%). LC-MS: (ESI, m/z): 534,2 [M+H]<+>

Korak 4: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2

Rastvor 6-(6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (50,0 mg; 0,09 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (37,0 mg; 0,29 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (9,0 mg, 0,10 mmol) i smeša je mešana na -78 °C tokom 0,5 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom (2 ml) i ekstrahovan dihlormetanom (3x5 ml). Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je dalje izolovan pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona Xselect CSH OBD 30*150 mm 5 um, n; mobilna faza A: voda (0,1%FA), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min; što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1S,2S,5R)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (15,2 mg, 0,03 mmol, prinos 46%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 78a: LC-MS: (ESI, m/z): 588,3 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,09 (s, 1H), 7,80 (d, J = 9 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,83 (dd, J = 16,8, 10,8 Hz, 1H), 6,71 (d, J = 8,7, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 2,1 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,5, 1,8 Hz, 1H), 4,62-4,51 (m, 1H), 4,48-4,33 (m, 1H), 4,05-3,86 (m, 8H), 3,13 (d, J = 9 Hz, 1H), 3,01-2,92 (m, 1H), 2,58 (dd, J = 9, 3,9 Hz, 1H), 2,43 (s, 3H), 1,76-1,61 (m, 1H), 1,58-1,39 (m, 1H), 0,82-0,63 (m, 1H), 0,45-0,26 (m, 1H).

Referentni primer 78b: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

2 4

Korak 1: ((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metanol

Rastvor (1R,2S,5S)-3-(terc-butoksikarbonil)-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-karboksilne kiseline (200,0 mg; 0,88 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat litijum aluminijum hidrid (67,0 mg; 1,77 mmol) i mešan na 25 °C tokom 6 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan etil acetatom. Organski sloj je sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom, što je dalo ((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metanol (86 mg; 0,68 mmol; prinos 76,8%) koji je prenet u sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 128,1 [M+H]<+>Korak 2: Terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor ((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metanola (100,0 mg; 0,79 mmol) i natrijum hidrida (32,0 mg; 1,33 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 0 °C

2

tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i reakcija je mešana na 25 °C tokom 3 h. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (97:3), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (93 mg; 0,11 mmol; prinos 40,8%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 874,4 [M+H]<+>

Korak 3: 6-(6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (83,0 mg; 0,09 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Reakcija je koncentrovana, što je dalo 6-(6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (40 mg; 0,09 mmol; prinos 70,2%). LC-MS: (ESI, m/z): 534,2 [M+H]<+>

Korak 4: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (50,0 mg; 0,09 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (37,0 mg; 0,29 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat akriloil hlorid (10 mg; 0,10 mmol) i mešan na -78 °C tokom 0,5 h. Po završetku, rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski sloj je

2

sakupljen i osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Sirovi proizvod je dalje izolovan pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona Xselect CSH OBD 30*150 mm 5 um, n; mobilna faza A: voda (0,1%FA), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min; što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((1R,2S,5S)-3-metil-3-azabiciklo[3.1.0]heksan-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (15,4 mg; 0,026 mmol; prinos 37,8%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 78b: LC-MS: (ESI, m/z): 588,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,11 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,83 (dd, J = 10,8, 10,4 Hz, 1H), 6,72 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 16,8, 1,6 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,6, 2Hz, 1H), 4,72-4,56 (m, 1H), 4,55-4,37 (m, 1H), 4,14-3,68 (m, 8H), 3,29-3,13 (m, 2H), 2,79 (d, J = 9,6 Hz, 1H), 2,54 (s, 3H), 1,68-1,52 (m, 2H), 0,83-0,69 (m, 1H), 0,63-0,47 (m, 1H).

Referentni primeri 79a i 79b: (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on i (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: Terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

2

Rastvor 1-dimetilamino-2-propanola (40,0 mg; 0,39 mmol) i natrijum hidrida (10,0 mg; 0,4200 mmol; čistoća 60%) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 15 minuta. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan na 25 °C tokom 2 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Sirovi proizvod je direktno upotrebljen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 850,2 [M+H]<+>Korak 2: 6-(6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (243,0 mg; 0,29 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 2 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana pod vakuumom i dobijeni proizvod je direktno korišćen u sledećem koraku. LC-MS: (ESI, m/z): 510,2 [M+H]<+>

Korak 3: (R)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on i (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2

Rastvor 6-(6-hlor-2-((1-(dimetilamino)propan-2-il)oksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (60,0 mg; 0,12 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,06 ml; 0,35 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (11,0 mg; 0,12 mmol) i mešan je na -78 °C tokom 30 minuta. Po završetku, reakcija je koncentrovana da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona Xselect CSH OBD 30*150 mm 5 um, n; mobilna faza A: voda (0,1%FA), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min. Dobijeni rezultat je prečišćen pomoću hiralne preparativneHPLC - kolona: CHIRALPAK IC, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza A: Heks:DCM=3:1 (10 mM NH3-MeOH)--HPLC, mobilna faza B: MeOH--HPLC; protok: 18 ml/min, što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[(1S)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (8,1 mg; 0,014 mmol; prinos 12,2%) u vidu bele čvrste supstance i 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[(1R)-2-(dimetilamino)-1-metil-etoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (9,5 mg; 0,016 mmol; prinos 14,3%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 79a: LC-MS: (ESI, m/z): 564,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO, ppm) δ 8,03 (s, 1H), 7,79 (d, J = 8,0, 1H), 7,43 (s, 1H), 6,89 (s, 2H), 6,89-6,72 (m, 1H), 6,58 (d, J = 12,0, 1H), 6,17 (dd, J = 2,4, 16,8 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 2,4, 10,4 Hz, 1H), 5,41-5,23 (m, 1H), 3,95-3,62 (m, 8H), 2,60-2,51 (m, 1H), 2,40-2,31 (m, 1H), 2,19 (s, 6H), 1,35-1,20 (m, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; (nheksan / dihlormetan = 3/1)(0,1% dietilamin) / metanol = 7/3; protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 2,2 min (brži pik).

Referentni primer 79b: LC-MS: (ESI, m/z): 564,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (400 MHz, DMSO, ppm) δ 8,03 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,8, 1H), 7,43 (s, 1H), 6,89 (s, 2H), 6,85-6,72 (m, 1H), 6,60 (d, J = 8,8, 1H), 6,17 (dd, J = 2,4, 16,8 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 2,4, 10,4 Hz, 1H), 5,41-5,23 (m, 1H), 3,93-3,65 (m, 8H), 2,64-2,54 (m, 1H), 2,40-2,28 (m, 1H), 2,19 (s, 6H), 1,40-1,29 (m, 3H). Hiralna HPLC: CHIRALPAK IC-3 (0,46*5 cm; 3 um); detekcija na 254 nm; (nheksan / dihlormetan = 3/1)(0,1% dietilamin) / metanol = 7/3; protok = 1,0 ml/min; retenciono vreme: 3,0 min (sporiji pik).

Referentni primer 80: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2

Korak 1: (1-metilpirolidin-2,5-diil)dimetanol

Rastvor terc-butil 2,5-bis(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (1500,0 mg; 6,49 mmol) i litijum aluminijum hidrida (369,0 mg; 9,72 mmol) u tetrahidrofuranu (60 ml) mešan je na 25 °C 8 sati. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (1:4), što je dalo (1-metilpirolidin-2,5-diil)dimetanol (500 mg; 3,44 mmol; prinos 53,1%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 146,2 [M+H]<+>

Korak 2: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(hidroksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

2

Rastvor (1-metilpirolidin-2,5-diil)dimetanola (76,0 mg; 0,52 mmol) i natrijum hidrida (40,0 mg; 1 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) mešan je na 25 °C 10 minuta. Zatim je dodat tercbutil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan na 25 °C tokom 2 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom, koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (5:95), što je dalo tercbutil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(hidroksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (120 mg; 0,13 mmol; prinos 51,4%) u vidu čvrste žute supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 892,4 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(hidroksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (100,0 mg; 0,11 mmol) i natrijum hidrida (9,0 mg; 0,23 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 40 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat jodmetan (32,0 mg; 0,23 mmol) i mešan na 40 °C tokom 2 sata. Po završetku, reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (97:3), što je dalo tercbutil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (50 mg; 0,055 mmol; prinos 49,2%) u vidu čvrste žute supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 906,4 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-(6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

2 1

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (10,0 mg; 0,01 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (0,8 ml) mešan je na 50 °C tokom 2 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana i sirovi proizvod je direktno korišćen u sledećem. LC-MS: (ESI, m/z): 566,3 [M+H]<+>

Korak 5: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (100,0 mg; 0,17 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,06 ml; 0,33 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (15,0 mg; 0,17 mmol) i mešan je na -78 °C tokom 30 minuta. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i koncentrovana. Dobijeni ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (95:5) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min, što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((5-(metoksimetil)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on format (34,4 mg; 0,051 mmol; prinos 30,2%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 80: LC-MS: (ESI, m/z): 620,4 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, MeOD, ppm) δ 8,09 (s, 1H), 7,80 (d, J = 8,7 Hz, 1H), 7,54 (s, 1H), 6,82 (dd, J = 10,5, 16,8 Hz,

2 2

1H), 6,70 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 6,27 (dd, J = 1,8, 16,8 Hz, 1H), 5,80 (dd, J = 1,8, 10,5 Hz, 1H), 4,59-4,45 (m, 2H), 4,10-3,89 (m, 10H), 3,54-3,41 (m, 2H), 3,39 (s, 3H), 2,78-2,53 (m, 3H), 2,20-1,87 (m, 2H), 1,83-1,59 (m, 2H).S

Primeri 81a i 81b: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 81a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 81b) (2 atropizomera)

Korak 1: 3-brom-2,4-difluor-6-jodanilin

2

Rastvor 3-brom-2,4-difluoranilina (10,0 g; 48,08 mmol) i srebro sulfata (14,98 g; 48,32 mmol) i joda (13,5 g; 53,15 mmol) u etanolu (200 ml) mešan je na 20 °C tokom 4 h. Reakcija je filtrirana i filtrat je koncentrovan na silika gelu. Dobijena smeša je prečišćena fleš hromatografijom uz eluiranje petrol etrom, što je dalo 3-brom-2,4-difluor-6-jodanilin (15 g; 44,92 mmol; prinos 93,4%) u vidu čvrste smeđe supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 333,9 [M+H]<+>Korak 2: metil 2-amino-4-brom-3,5-difluorbenzoat

U atmosferi ugljen-monoksida, rastvor 3-brom-2,4-difluor-6-jodanilina (15,0 g; 44,92 mmol) i kompleksa 1,1-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (3,3 g; 4,51 mmol) u metanolu (500 ml) mešan je na 25 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat trietilamin (21 ml; 314,47 mmol) i mešan na 25 °C 8 sati. Rastvarač je koncentrovan i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (3/97), što je dalo metil 2-amino-4-brom-3,5-difluor-benzoat (8,6 g; 32,3 mmol) u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 266,0 [M+H]<+>

Korak 3: 7-brom-6,8-difluorhinazolin-2,4-diol

Rastvor metil 2-amino-4-brom-3,5-difluor-benzoata (15,0 g; 56,4 mmol) i NaOH (4,5 g; 112,8 mmol) u vodi (300 ml) i metanolu (300 ml) mešan je na 25 °C tokom 3 sata. Nakon nestanka metil 2-amino-4-brom-3,5-difluor-benzoata, reakcioni sistem je ispran dietil etrom. Zatim je pH rastvora podešen na 4 sa HOAc (30 ml; 56,4 mmol). U dobijeni rastvor je dodat KOCN (11,4 g; 140,53 mmol) i mešan na 40 °C tokom 3 h. Ova operacija je ponovljena tri puta dok se većina intermedijera nije formirala na LCMS-u. Zatim je dodat NaOH (90 g, 2256 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi 2 sata. Nakon završetka, pH reakcionog sistema je podešen na 4 sa koncentrovanom hlorovodoničnom kiselinom. Čvrste supstance su sakupljene nakon filtracije i isprane vodom, što je dalo 7-brom-6,8-difluorhinazolin-2,4-diol (5 g; 18,049 mmol; prinos 32%) u vidu crvene čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 276,9 [M+H]<+>Korak 4: 7-brom-2,4-dihlor-6,8-difluorhinazolin

2 4

Rastvor 7-brom-6,8-difluor-hinazolin-2,4-diola (5,0 g; 18,05 mmol) u POCl3(150 ml) mešan je na 120 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat N,N-diizopropiletilamin (46,7 g; 361,0 mmol) i mešan na 120 °C tokom 3 sata. Nakon završetka, rastvarač je koncentrovan pod vakuumom da bi se dobio 7-brom-2,4-dihlor-6,8-difluor-hinazolin (4 g, žuto ulje, sirovi) koji je korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 312,9 [M+H]<+>Korak 5: Terc-butil (S)-4-(7-brom-2-hlor-6,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

U rastvor 7-brom-2,4-dihlor-6,8-difluor-hinazolina (4 g, sirovi) u dihlormetanu (120 ml) dodat je N,N-diizopropiletilamin (10 ml), dobijeni rastvor je mešan na 20 °C tokom 5 minuta, zatim je dodat terc-butil (S)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (5,96 g; 29,8 mmol) i reakcija je mešana na 20 °C tokom 5 h. Nakon završetka, dobijeni rastvor je ispran zasićenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/4), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-brom-2-hlor-6,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (4,6 g; 9,6 mmol; prinos 65%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 477,0 [M+H]+

Korak 6: terc-butil (S)-4-(7-brom-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Smeša terc-butil (S)-4-(7-brom-2-hlor-6,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (1,0 g; 2,1 mmol) i kalijum fluorida (2,5 g; 43,0 mmol) u DMSO-u (25 ml) mešana je na 120 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Reakcija je filtrirana, filtrat je razblažen etil acetatom,

2

ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (10/1), što je dalo tercbutil (S)-4-(7-brom-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (600 mg; 1,3 mmol; prinos 62,1%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 461,1 [M+H]+ Korak 7: terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-brom-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 1,08 mmol), (6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)boronske kiseline (850,0 mg; 2,17 mmol), kompleksa 1,1’-bis(difenilfosfino)ferocenpaladijum(II)dihlorid dihlormetan (90,0 mg; 0,11 mmol), u tetrahidrofuranu (30 ml) i vodi (6 ml) dodat je kalijum fosfat (460,0 mg; 2,17 mmol) na 65 °C u atmosferi azota. Dobijeni rastvor je mešan na 65 °C tokom 3 h. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (9/1), što je dalo tercbutil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (650 mg; 0,89 mmol; prinos 82,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 729,3 [M+H]+.

Korak 8: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metilpiridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 0,69 mmol) i ptoluensulfonske kiseline (12,0 mg; 0,07 mmol) u N,N-dimetil formamidu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat NIS (309,0 mg; 1,37 mmol) i mešan na 25 °C 3 sata. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani vodom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz

2

eluiranje petrol etrom/etil acetatom (30/1), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (200 mg; 0,23 mmol; prinos 34,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 855,2 [M+H]<+>.

Korak 9: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-jod-4-metilpiridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (500,0 mg; 0,59 mmol) i CuI (450,0 mg; 2,36 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (20 ml) mešan je na 25 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetat (1130,0 mg; 5,88 mmol) i mešan na 90 °C tokom 3 sata u atmosferi azota. Reakcija je koncentrovana i ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (20/1), što je dalo tercbutil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (430 mg; 0,54 mmol; prinos 92,2%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 797,3 [M+H]<+>.

Korak 10: Terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor ((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metanola (168,0 mg; 1,26 mmol) i NaH (101,6 mg; 2,54 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) u tetrahidrofuranu (20 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2,6,8-trifluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (500,0 mg; 0,63 mmol) i mešan na 25 °C tokom 2 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani vodom,

2

osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (4/1), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (350 mg; 0,38 mmol; prinos 61,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 910,4 [M+H]<+>

Korak 11: 6-(6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (350,0 mg; 0,38 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 6 h. Nakon završetka, rastvarač je koncentrovan pod vakuumom, što je dalo 6-(6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (200 mg, sirovi) koji je korišćen za sledeći korak bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 570,2 [M+H]+

Korak 12: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 81a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 81b) (2 atropizomera)

Rastvor 6-(6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (400,0 mg; 0,70

2

mmol) i DIEA (274,0 mg; 2,12 mmol) u dihlormetanu (40 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (64,0 mg; 0,71 mmol) i mešan na -78 °C tokom 0,5 h. Nakon završetka, rastvor je deaktiviran vodom i koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen redom pomoću preparativne HPLC i hiralne HPLC da bi se dobila naslovna jedinjenja. Stereohemija naslovnih jedinjenja je dodeljena na osnovu potentnosti.

Primer 81a: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (67,7 mg; 0,11 mmol; prinos 15,5%, bela čvrsta supstanca).<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,53 (dd, J = 9,9, 8,1 Hz, 1H), 6,89 - 6,72 (m, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,31 - 6,25 (m, 1H), 5,81 (dd, J = 18, 10,5 Hz, 1H), 5,35 - 5,03 (m, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,64 - 4,31 (m, 3H), 4,31 - 3,94 (m, 2H), 3,82 - 3,45 (m, 3H), 3,28 - 3,06 (m, 2H), 2,73 - 2,62 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,45 (d, J = 1,5, 3H), 2,32 - 2,20 (m, 1H), 2,17 - 1,98 (m, 1H), 1,40 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 624,3 [M+H]<+>. Hiralna HPLC: Kolona: CHIRALPAK IE-3, 4,6*50 mm 3 um; mobilna faza: (Heks:DCM=3:1)(0,1%DEA):EtOH=80:20, protok: 1,0 ml/min; retenciono vreme: 1,836 min (brži pik).

Primer 81b: 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6,8-difluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,53 (dd, J = 9,9, 8,1 Hz, 1H), 6,94 - 6,71 (m, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,38 - 6,20 (m, 1H), 5,81 (dd, J = 18, 10,5 Hz, 1H), 5,45 - 5,03 (m, 1H), 4,81 (s, 1H), 4,64 - 4,31 (m, 3H), 4,31 - 3,94 (m, 2H), 3,82 - 3,45 (m, 3H), 3,28 - 3,06 (m, 2H), 2,79 - 2,60 (m, 1H), 2,55 (s, 3H), 2,45 (d, J = 1,5, 3H), 2,39 - 2,20 (m, 1H), 2,17 -1,78 (m, 1H), 1,40 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 624,3 [M+H]<+>. Hiralna HPLC: Kolona: CHIRALPAK IE-3, 4,6*50 mm 3 um; mobilna faza: (Heks:DCM=3:1)(0,1%DEA):EtOH=80:20, protok: 1,0 ml/min; retenciono vreme: 2,322 min (brži pik).

Referentni primeri 82a i 82b: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluorprop-2-en-1-on (Referentni primer 82a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluorprop-2-en-1-en (Referentni primer 82b)

2

Sintetički postupak

Rastvor 6-[6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (proizveden kao intermedijer u koraku 2 primera 69) (0,6 g; 1,02 mmol), 2-fluorakrilne kiseline (0,09 g; 1,02 mmol), HATU (0,58 g; 1,54 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (397 mg; 3,07 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakciona smeša je razblažena vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC i hiralne HPLC, što je dalo 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluoroprop-2-en-1-on (55,2 mg, 0,084 mmol, prinos 8,2%) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-2-fluoroprop-2-en-1-on (42,8 mg, 0,065 mmol, prinos 6,4%) kao žutu čvrstu supstancu. LCMS (ESI, m/z): 658,3 [M+H]<+>. Prep-HPLC uslov: Kolona: kolona XBridge Shield RP18 OBD, 30*150 mm,5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min;. Hiralna HPLC CHIRALPAK IC, 3*25 cm,5 um; mobilna faza A:

2

Heks:DCM=3:1(10 mM NH3-MeOH)--HPLC, mobilna faza B: EtOH--HPLC; protok:2 ml/min.

Referentni primer 82a<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,82 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 5,42-5,02 (m, 3H), 4,82 (s, 1H), 4,50 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 4,42-3,93 (m, 3H), 3,86-3,39 (m, 4H), 3,21-3,00 (m, 1H), 2,77-2,51 (s, 4H), 2,51-2,39 (m, 3H), 2,38-1,92 (m, 2H), 1,43 (d, J = 6,7 Hz, 3H).

Referentni primer 82b<1>H NMR (300 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,82 (s, 1H), 6,60 (s, 1H), 5,51-5,00 (m, 3H), 4,82 (s, 1H), 4,50 (d, J = 5,0 Hz, 2H), 4,46-3,93 (m, 3H), 3,88-3,39 (m, 4H), 3,26-3,00 (m, 1H), 2,78-2,51 (m, 4H), 2,51-2,40 (m, 3H), 2,40-1,90 (m, 2H), 1,43 (d, J = 6,7 Hz, 3H).

Referentni primeri 83a, 83c i primeri 83b i 83d:

2-((R)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (Referentni primer 83a);

2-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (Primer 83b);

2-((R)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (Referentni primer 83C) i

2-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)aceto

Sintetički postupak

2 1

Korak 1: terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-8-fluorhinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

Rastvor 7-brom-2,6-dihlor-8-fluorhinazolin-4(3H)-ona (3,9 g; 12,5 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (6,5 g; 50,3 mmol) u dihlormetanu (80 ml) mešan je na 20 °C tokom 5 minuta. Dodat je anhidrid metansulfonske kiseline (8,8 g, 50,3 mmol) i dobijena smeša je mešana na 20 °C tokom 20 minuta. Zatim su dodati 2-piperazin-2-ilacetonitril (5,0 g; 40,0 mmol) i N,N-diizopropiletilamin (9,7 g; 75,5 mmol) i smeša je mešana na 20 °C još 1 h. Nakon potpune konverzije u željeni proizvod, dodat je di-terc-butildikarbonat (32,7 g; 150 mmol) i smeša je mešana na 20 °C tokom 2 h. Reakcija je sipana u levak za odvajanje i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/4), što je dalo terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-8-fluor-hinazolin-4-il)-2-

2 2

(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (4,9 g; 9,4 mmol; prinos 75,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 518,0, 520,0 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(7-brom-2,6-dihlor-8-fluor-hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (9,7 g; 18,7 mmol) i kalijum fluorida (43,7 g; 752,6 mmol) u DMA (200 ml) mešan je na 120 °C tokom 3 h. Reakcija je filtrirana, razblažena etil acetatom (1 l) i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (200 ml*5). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/5), što je dalo terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (6,6 g; 13,1 mmol; prinos 70,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 502,0, 504,0 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-(7-brom-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il)-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (5,5 g; 10,9 mmol), [6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]boronske kiseline (12,0 g; 30,6 mmol), kompleksa 1,1'-bis(difenilfosfino)ferocen-paladijum(II)dihlorid dihlormetan (1,32 g; 1,8 mmol) i kalijum fosfata (5,12 g; 24,1 mmol) u tetrahidrofuranu (400 ml) i vodi (80 ml) mešano je na 65 °C tokom 2 h u atmosferi azota. Reakciona smeša je filtrirana i filtrat je razblažen dihlormetanom (500 ml) i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli (50 ml x 5). Organski sloj je osušen iznad

2

anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/3), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (5 g; 6,5 mmol; prinos 59,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z):770,3 [M+H]<+>.

Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-jod-4-metil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (5,0 g; 6,5 mmol) i srebro acetata (2,7 g; 16,3 mmol) i joda (4,97 g; 19,57 mmol) u N,N-dimetilformamidu (50 ml) mešan je na 20 °C tokom 4 h. Reakcija je filtrirana. Filtrat je razblažen etil acetatom (250 ml) i ispran zasićenim rastvorom natrijum tiosulfata (100 ml x 5). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/3), što je dalo tercbutil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-jod-4-metil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (4,8 g; 5,4 mmol; prinos 82,5%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 896,2 [M+H]<+>.

Korak 5: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-jod-4-metil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilata (2,5 g; 2,8 mmol) i

2 4

metil 2,2-difluor-2-(fluorsulfonil)acetata (13,4 g; 69,8 mmol) i kupro jodida (5,3 g; 27,9 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (80 ml) mešan je na 90 °C tokom 6 h. Reakcija je filtrirana. Filtrat je razblažen etil acetatom (400 ml) i ispran zasićenim vodenim rastvorom soli (100 ml x 5). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (1/3), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (2,2 g; 2,6 mmol; prinos 94,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 838,4 [M+H]<+>.

Korak 6: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-fluor-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-2-prop-2-inil-piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (420,37 mg; 3,16 mmol) u tetrahidrofuranu (43 ml) dodat je natrijum hidrid (180,39 mg; 4,51 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) na 0 °C i mešan na 25 °C tokom 1 h. Zatim je dodat terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-2-(cijanometil)piperazin-1-karboksilat (944,0 mg; 1,13 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani vodom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (4%), što je dalo terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-fluor-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-2-prop-2-inil-piperazin-1-karboksilat (929 mg; 0,98 mmol; prinos 86,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 951,3 [M+H]<+>.

Korak 7: 2-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril

2

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-4-fluor-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-2-prop-2-il-piperazin-1-karboksilata (909,0 mg; 0,96 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (91 ml; 0,96 mmol) mešan je na 50 °C tokom 3 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana i ostatak je rastvoren dihlormetanom i pH je podešen na 10 N,N-diizopropiletilaminom. Smeša je koncentrovana i ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 2-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-2-il]acetonitril (373 mg, 061 mmol; 63,9%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 611,2 [M+H]<+>.

Korak 8: 2-((R)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (Referentni primer 83a); 2-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (Primer 83b); 2-((R)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (Referentni primer 83c); i 2-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (Primer 83d)

Rastvor 2-[4-[7-[6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-2-il]acetonitrila (373,0 mg; 0,61 mmol), N,N-diizopropiletilamina (393,75 mg; 3,05 mmol), HATU (232,12

2

mg; 0,61 mmol) i 2-fluorakrilne kiseline (71,46 mg; 0,79 mmol) u dihlormetanu (10 ml) i N,N-dimetilformamidu (0,5 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, dobijena reakcija je koncentrovana. Sirovi proizvod je prečišćen direktno pomoću preparativne HPLC - kolona, XBridge Prep C18 OBD kolona19*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: 1 mmol FA u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 480 mg 2-(4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitrila u vidu bele čvrste supstance. Proizvod je dalje prečišćen pomoću hiralne preparativne HPLC sa sledećim uslovom (kolona, CHIRALPAK IE-3 4,6*50 mm 3 um; mobilna faza, Heks (0,1%DEA):EtOH=50:50; detektor, 254 nm; protok, 1,0 ml/min; temperatura: 25 °C) i (kolona, CHIRAL celuloza-SB 4,6*100 mm 3 um; mobilna faza, MtBE (0,1%DEA):EtOH=70:30; detektor, 254 nm; protok, 1,0 ml/min; temperatura: 25 °C) kako bi se dobila naslovna jedinjenja. Stereohemija naslovnih jedinjenja dodeljena je na osnovu podataka o potentnosti.

Referentni primer 83a: 2-((R)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril; (62,4 mg; 0,09 mmol; prinos 15%, bela čvrsta supstanca).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,42 - 5,12 (m, 3H), 5,11 - 4,90 (m, 1H), 4,58 - 4,40 (m, 4H), 4,35 - 4,01 (m, 1H), 3,91 - 3,59 (m, 3H), 3,57 - 3,46 (m, 1H), 3,18 - 3,07 (m, 3H), 2,73 - 2,62 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,46 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 2,36 - 2,25 (m, 1H), 2,12 - 1,96 (m, 1H). LC-MS: (ESI, m/z): 683,3 [M+H]<+>. Hiralna HPLC: CHIRAL celuloza-SB, 4,6*100 mm, 3 um; detekcija na 214 nm; MtBE (0,1%DEA): EtOH=70:30; protok = 1 ml/min; retenciono vreme: 2,041 min (prvi pik).

Primer 83b: 2-((S)-4-((S)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (64 mg; 0,09 mmol; prinos 15,3%, bela čvrsta supstanca).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,42 - 5,12 (m, 3H), 5,11 - 4,92 (m, 1H), 4,53 - 4,40 (m, 4H), 4,38 - 4,00 (m, 1H), 3,89 - 3,59 (m, 3H), 3,62 - 3,46 (m, 1H), 3,19 - 3,13 (m, 2H), 3,09 - 3,03 (m, 1H), 2,73 - 2,62 (m, 1H), 2,57 (s, 3H), 2,46 (d, J = 1,6 Hz, 3H), 2,33 - 2,18 (m, 1H), 2,15 - 1,91 (m, 1H). LC-MS: (ESI, m/z): 683,3 [M+H]<+>. Hiralna HPLC: CHIRAL celuloza-SB, 4,6*100 mm, 3 um; detekcija na 214 nm; MtBE (0,1% DEA): EtOH=70:30; protok = 1 ml/min; retenciono vreme: 2,704 min (Drugi pik).

Referentni primer 83c: 2-((R)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-

2

fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril (40,2 mg; 0,0589 mmol; prinos 9,6%; bela čvrsta supstanca).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,42 - 5,11 (m, 3H), 5,08 - 4,93 (m, 1H), 4,66 - 4,39 (m, 4H), 4,38 - 4,10 (m, 1H), 3,89 - 3,49 (m, 4H), 3,19 - 3,04 (m, 3H), 2,76 - 2,63 (m, 1H), 2,59 (s, 3H), 2,46 (d, J = 1,2 Hz, 3H), 2,33 - 2,26 (m, 1H), 2,16 - 1,98 (m, 1H). LC-MS: (ESI, m/z): 683,3 [M+H]<+>. Hiralna HPLC: CHIRALPAK IE-3, 4,6*50 mm, 3 urn; detekcija na 254 nm; Heks (0,1% DEA): EtOH=50:50; protok = 1 ml/min; retenciono vreme: 2,395 min (treći pik).

Primer 83d: 2-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-1-(2-fluorakriloil)piperazin-2-il)acetonitril. (92,1 mg, 0,13 mmol, prinos 22,1%, bela čvrsta supstanca).<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,96 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,62 (s, 1H), 5,43 - 5,14 (m, 3H), 5,11 - 4,91 (m, 1H), 4,62 - 4,40 (m, 4H), 4,37 - 3,98 (m, 1H), 3,90 - 3,47 (m, 4H), 3,22 - 3,05 (m, 3H), 2,89 - 2,69 (m, 1H), 2,61 (s, 3H), 2,46 (d, J = 4,0 Hz, 3H), 2,39 - 2,28 (m, 1H), 2,15 - 1,99 (m, 1H). LC-MS: (ESI, m/z): 683,3 [M+H]<+>. Hiralna HPLC: CHIRALPAK IE-3, 4,6*50 mm, 3 um; detekcija na 254 nm; Heks (0,1% DEA): EtOH=50:50; protok = 1 ml/min; retenciono vreme: 3,052 min (četvrti pik)

Referentni primeri 84a i 84b: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-3,4-dimetilpiridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 84a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-3,4-dimetilpiridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 84b) (2 atropizomera)

Sintetički postupak

2

Korak 1: terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3,4-dimetil-2-piridil]6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-jod-4-metil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilata (4,00 g; 4,5 mmol) i bis(trifenilfosfin)paladijum(II) hlorida (321,8 mg; 0,4 mmol) u 1,4-dioksanu (40 ml) mešan je na 25 °C tokom 5 minuta u atmosferi azota. Zatim je dodat dimetilcink u toluenu (1,2 M) (7,6 ml; 9,1 mmol) i mešan na 50 °C tokom 20 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom, ekstrahovana etil acetatom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (10/1), što je dalo terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3,4-dimetil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluor-hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (3,00 g; 3,9 mmol; prinos 86,1%) u vidu žutog ulja. LCMS (ESI, m/z): 759,3 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3,4-dimetil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat

2

Rastvor [(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (1052,2 mg; 7,9 mmol) u tetrahidrofuranu (30 ml) mešan je na 0 °C tokom 2 minuta. Zatim je dodat natrijum hidrid (60% čistoće) (632,1 mg; 15,8 mmol) i mešan na 0 °C tokom 10 minuta. Zatim je dodat terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3,4-dimetil-2-piridil]-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (3,0 g; 3,9 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana zasićenim rastvorom amonijum hlorida, ekstrahovana etil acetatom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3,4-dimetil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilat (2,4 g; 2,7 mmol; prinos 69,6%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 872,4 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-[6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4,5-dimetil-piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (3S)-4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3,4-dimetil-2-piridil]-6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]-3-metil-piperazin-1-karboksilata (2,4 g; 2,7 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (9 g; 82,5 mmol) mešan je na 50 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (40:60), što je dalo 6-[6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-

2

il]hinazolin-7-il]-4,5-dimetil-piridin-2-amin (1,2 g; 2,2 mmol; prinos 82%) u vidu žute čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 532,2 [M+H]<+>.

Korak 4: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-3,4-dimetilpiridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Referentni primer 84a) i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-3,4-dimetilpiridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (Primer 84b) (2 atropizomera)

Rastvor 6-[6-hlor-8-fluor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-[(2S)-2-metilpiperazin-1-il]hinazolin-7-il]-4,5-dimetil-piridin-2-amina (900,0 mg; 1,6 mmol), akrilne kiseline (97,5 mg; 1,3 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (654,6 mg; 5,0 mmol) u dihlormetanu (9 ml) mešan je na -78 °C tokom 2 minuta. Zatim je dodat HATU (643,2 mg, 1,6 mmol) na -78 °C tokom 1 sata. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom, ekstrahovana etil acetatom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovana pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10/1), što je dalo 197 mg čvrste sirove supstance. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda(10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min; što je dalo 117 mg željenog proizvoda. Dobijena čvrsta supstanca je prečišćena pomoću hiralne preparativne HPLC - kolona, CHIRALPAK IC-3, 0,46*5 cm; 3 um; mobilna faza: MtBE (0,3% IPAmin):MeOH=50:50; detektor, UV 254 nm. Brži pik je dobijen nakon 1,142 min. Sporiji pik je dobijen nakon 1,629 min, što je dalo 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-3,4-dimetilpiridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (38 mg, 0,06 mmol, prinos 3,8%) u vidu bele čvrste supstance i 1-((S)-4-((S)-7-(6-amino-3,4-dimetilpiridin-2-il)-6-hlor-8-

2 1

fluor-2-(((2S,4R)-4-fluor-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (35,1 mg, 0,06 mmol, prinos 3,5%) u vidu čvrste bele supstance.

Referentni primer 84a:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,82 (s, 1H), 6,92 -6,74 (m, 1H), 6,39 (s, 1H), 6,26 - 6,11 (m, 1H), 5,81 - 5,66 (m, 3H), 5,18 (d, J = 56,2 Hz, 1H), 4,75 (s, 1H), 4,50 - 4,23 (m, 3H), 4,19 - 3,91 (m, 2H), 3,74 - 3,38 (m, 3H), 3,26 - 2,85 (m, 2H), 2,44 - 2,29 (m, 4H), 2,24 - 2,05 (m, 4H), 2,03 - 1,87 (m, 1H), 1,81 (s, 3H), 1,28 (d, J = 6,5 Hz, 3H). LCMS (ESI, m/z):586,3 [M+H]<+>Chiral HPLC: Kolona: CHIRALPAK IC-3, 4,6*50 mm 3 um; detekcija na 254 nm; MtBE(0,3% IPAmine):MeOH=50:50; protok: 1 ml/min; retenciono vreme: 1,136 min; (brži pik).

Referentni primer 84b:<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7,82 (s, 1H), 6,95 -6,74 (m, 1H), 6,39 (s, 1H), 6,25 - 6,11 (m, 1H), 5,84 - 5,65 (m, 3H), 5,19 (d, J = 56,1 Hz, 1H), 4,74 (s, 1H), 4,49 - 4,22 (m, 3H), 4,21 - 3,88 (m, 2H), 3,74 - 3,53 (m, 2H), 3,50 - 3,38 (m, 2H), 3,25 - 3,01 (m, 1H), 3,03 - 2,86 (m, 1H), 2,41 (s, 3H), 2,20 (s, 3H), 2,13 - 1,87 (m, 2H), 1,83 (s, 3H), 1,30 (d, J = 6,5 Hz, 3H). LCMS (ESI, m/z):586,3 [M+H]<+>Chiral HPLC: Kolona: CHIRALPAK IC-3, 4,6*50 mm 3 um; detekcija na 254 nm; MtBE(0,3% IPAmine):MeOH=50:50; protok: 1 ml/min; retenciono vreme: 1,629 min; (sporiji pik).

Referentni primer 85: (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-hidroksibut-2-en-1-on

2 2

Rastvor 6-((R)-6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (pogledajte korak 11 u primeru 17a/17b) (156,0 mg; 0,27 mmol), 4-hidroksi-but-2-enske kiseline (42,06 mg; 0,41 mmol), N,N-diizopropiletilamina (141,72 mg; 1,1 mmol) i HATU (156,64 mg; 0,4100 mmol) u dihlormetanu (6,5 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je razblažena dihlormetanom i isprana zasićenim vodenim rastvorom soli. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 117 mg (65,3%) željenog atropizomera (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-hidroksibut-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 85: LC-MS: (ESI, m/z): 652,3 [M+H]<+>,<1>HNMR: (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 7.83 (s, 1H), 6,83-6,79 (m, 3H), 6,64-6,55 (m, 1H), 6,50 (s, 1H), 5,03-5,01 (m, 1H), 4,76 (s, 1H), 4,47-4,23 (m, 3H), 4,15-3,88 (m, 4H), 3,65-3,30 (m, 3H), 3,24-2,98 (m, 2H), 2,90-2,68 (m, 1H), 2,49-2,44 (m, 3H), 2,37-2,32 (m, 3H), 1,99-1,91 (m, 1H), 1,72-1,65 (m, 3H), 1,27 (s, 3H).

Referentni primer 86: (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-hlorobut-2-en-1-on

2

Rastvor željenog atropizomera 6-((R)-6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (pogledajte korak 11 primera 17a/17b) (108,0 mg; 0,190 mmol), (E)-4-hlorbut-2-enske kiseline (20,63 mg; 0,1700 mmol), N,N-diizopropiletilamina (98,11 mg; 0,7600 mmol) i HATU (108,44 mg; 0,2900 mmol) u dihlormetanu (2 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je isprana vodom i ekstrahovana dihlormetanom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm da bi se dobila bela čvrsta supstanca. Sirovi proizvod je prečišćen direktno pomoću preparativne HPLC - kolona, XBridge Prep C18 OBD kolona19*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: 0,1% mmol FA u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 44 mg (34,5%) (E)-1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-1-metilpirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)-4-hlorobut-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 86: LC-MS: (ESI, m/z): 670,3 [M+H]<+>,<1>HNMR: (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,18 (s, 1H), 7,82 (s, 1H), 6,83-6,71 (m, 3H), 6,49 (s, 1H), 4,90-4,75 (m, 1H), 4,40-4,30 (m, 3H), 4,30-4,06 (m, 3H), 4,01-3,88 (m, 1H), 3,67-3,55 (m, 2H), 3,13-3,15 (m, 1H), 3,05-2,93 (m, 1H), 2,61-2,56 (m, 1H), 2,43-2,26 (m, 6H), 2,19-2,15 (m, 1H), 1,97-1,93 (m, 1H), 1,70-1,62 (m, 3H), 1,28-1,25 (m, 3H).

Referentni primer 87: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

2 4

Korak 1: terc-butil-dimetil-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]rnetrioksi]silan

Smeša terc-butil-dimetil-[[(2S)-pirolidin-2-il]metoksi]silana (1600,0 mg; 7,43 mmol), 3-oksetanona (2700,0 mg; 37,47 mmol) i natrijum cijanoborhidrida (500,0 mg; 7,94 mmol) u metil alkoholu (10 ml) mešana je na 50 °C tokom 4 h. Dobijeni rastvor je razblažen vodom, ekstrahovan dihlormetanom i organski slojevi su kombinovani. Dobijena smeša je prečišćena pomoću preparativne HPLC, što je dalo terc-butil-dimetil-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]silan (1200 mg, 4,41 mmol, prinos 59,5%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 272,2 [M+H]<+>

Korak 2: [(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metanol

Smeša terc-butil-dimetil-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]silana (1800,0 mg; 6,63 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml; 40,39 mmol) mešana je tokom 3 h na 50 °C. Po završetku, pH vrednost je podešena na ~ 8,0 sa N,N-diizopropiletilaminom. Sirovi proizvod

2

je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo [(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metanol (880 mg; 5,57 mmol; prinos 84,4%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 158,1 [M+H]<+>.

Korak 3: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U smešu natrijum hidrida (36,0 mg; 1,5 mmol) u tetrahidrofuranu (3 ml) dodat je [(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metanol (90,0 mg; 0,57 mmol) i smeša je mešana tokom 15 minuta na 0 °C. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (300,0 mg; 0,39 mmol) i mešan tokom 2 sata na sobnoj temperaturi. Po završetku, reakcija je deaktivirana zasićenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana dihlormetanom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom kako bi se dobio sirovi proizvod koji se direktno koristi u sledećem koraku. LC-MS: (ESI, m/z): 904,4 [M+H]<+>

Korak 4: 6-[6-hlor-2-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)piperazin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-ilhinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Smeša terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2,S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (250,0 mg; 0,28 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (3 ml; 40,39 mmol) mešana je tokom 3 h na

2

50 °C. Reakciona smeša je podešena na pH 8 sa N,N-diizopropiletilaminom. Dobijeni rastvor je razblažen vodom, ekstrahovan dihlormetanom. Organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom, što je dalo 6-[6-hlor-2-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (150 mg; 0,27 mmol, prinos 96,2%) kao sirovi proizvod. Sirovi proizvod bi se direktno koristio u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 564,2 [M+H]<+>

Korak 5: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U smešu [(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metanola (60,0 mg; 0,11 mmol) u dihlormetanu (1 ml) dodat je N,N-diizopropiletilamin (25,0 mg; 0,19 mmol), 6-[6-hlor-2-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (60,0 mg; 0,11 mmol) i smeša je mešana 0,5 h na -78 °C. Po završetku, organski sloj je koncentrovan i sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona Xselect CSH F-Phenyl OBD, 19*250, 5 um; mobilna faza A: voda(10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: EtOH; protok: 25 ml/min; što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(oksetan-3-il)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (14,2 mg; 0,023 mmol, prinos 21,6%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 87: LC-MS: (ESI, m/z): 618,3 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,05 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,48 (d, J = 2,3 Hz, 1H), 6,98 - 6,75 (m, 3H), 6,60 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,7, 2,4 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,65 - 4,15 (m, 2H), 3,95 - 3,60 (m, 10H), 3,29 - 3,07 (m, 3H), 2,97 - 2,69 (m, 1H), 2,65 - 2,55 (m, 1H), 2,18 - 2,01 (m, 1H), 1,77 - 1,46 (m, 3H), 1,38 - 1,13 (m, 1H).

Referentni primer 88: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

2

Korak 1: (1-aminociklopropil)metanol

U rastvor terc-butil (1-(hidroksimetil)ciklopropil)karbamata (10,0 g; 53,41 mmol) u tetrahidrofuranu (100 ml) dodata je hlorovodonična kiselina (200 ml; 2 M u tetrahidrofuranu). Smeša je mešana na 25 °C tokom 16 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana i prečišćena fleš hromatografijom korišćenjem silika gela uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (4:1), što je dalo (1-aminociklopropil)metanol (4 g; 45,9 mmol; prinos 86%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 88,3 [M+H]<+>

Korak 2: (1-(dimetilamino)ciklopropil)metanol

2

Rastvor (1-aminociklopropil)metanola (500,0 mg; 5,74 mmol), formaldehida (16,7 ml; 66,6 mmol) i mravlje kiseline (500,0 mg; 10,86 mmol) mešan je na 100 °C tokom 8 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana i dodat je natrijum hidroksid za podešavanje pH na 13. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/dihlormetanom (3:7), što je dalo (1-(dimetilamino)ciklopropil)metanol (150 mg; 1,3 mmol; prinos 22,7%) u vidu bezbojnog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 116,2 [M+H]<+>Korak 3: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Rastvor (1-(dimetilamino)ciklopropil)metanola (60 mg; 0,50 mmol) i natrijum hidrida (25,0 mg; 1,1 mmol) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 40 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,3 mmol) i mešan na 40 °C tokom 1 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana da bi se dobio terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (250 mg; 0,17 mmol; prinos 56,7%; čistoća 60%) u vidu žutog ulja koje je direktno korišćeno u sledećem koraku. LC-MS: (ESI, m/z): 862,4 [M+H]<+>

Korak 4: 6-(6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

2

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (250 mg; 0,17 mmol; 60% čistoće) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (5 ml) i dihlormetanu (15 ml) mešan je na 50 °C tokom 2 h. Reakcija je koncentrovana i dobijena smeša je prečišćena fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje metanolom/vodom (3:7), što je dalo 6-(6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (80 mg; 0,15 mmol; prinos 90,3%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 522,3 [M+H]<+>

Korak 5: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (30,0 mg; 0,057 mmol), N,N-diizopropiletilamina (10,0 mg; 0,077 mmol) i dihlormetana (5 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (5,2 mg; 0,06 mmol) i mešan je na -78 °C tokom 30 minuta. Reakcija je koncentrovana i prečišćena fleš hromatografijom na C18 gelu uz eluiranje acetonitrilom/vodom (7:3) da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: XBridge Prep OBD C18, 30x150 mm 5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: ACN; protok: 60 ml/min; što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(dimetilamino)ciklopropil)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (17,3 mg; 0,03 mmol; prinos 52,3%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 88: LC-MS: (ESI, m/z): 576,2 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,77 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 7,43 (s, 1H), 6,87 (s, 2H), 6,79 (dd, J = 12,0, 18,0 Hz, 1H), 6,58 (d, J = 9,0 Hz, 1H), 6,15 (dd, J = 3,0, 18,0 Hz, 1H), 5,72 (dd, J = 3,0, 9,0 Hz, 1H), 4,40 (dd, J = 12,0, 27,0 Hz, 2H), 3,93-3,80 (m, 6H), 3,81-3,72 (m, 2H), 2,34 (s, 6H), 0,75-0,53 (m, 4H).

Referentni primer 89: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: metil (2S,4R)-4-fluorpirolidin-2-karboksilat

Rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-fluorpirolidin-1,2-dikarboksilata (5,0 g; 20,22 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (192 ml) mešan je na 25 °C tokom 1 h. Po završetku, rastvarač je koncentrovan. pH je podešen na 10 sa N,N-diizopropiletilaminom i smeša je koncentrovana i direktno korišćena u sledećoj reakciji. LC-MS: (ESI, m/z): 148,0 [M+H]<+>

1

Korak 2: metil (2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-karboksilat

Rastvor metil (2S,4R)-4-fluorpirolidin-2-karboksilata (2,8 g; 19,03 mmol), 2-brometil metil etra (5,82 g; 41,86 mmol) i kalijum karbonata (5,78 g; 41,86 mmol) u N,N-dimetilformamidu (40,8 ml) mešan je na 50 °C tokom 4 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan pod vakuumom. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj reakciji. LC-MS: (ESI, m/z): 206,1 [M+H]<+>

Korak 3: [(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metanol

Rastvor metil (2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-karboksilata (1,45 g; 7,07 mmol) u tetrahidrofuranu (14 ml) mešan je na 0 °C. Dodat je litijum aluminijum hidrid (0,54 g; 14,13 mmol) i reakcija je mešana na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom (0,5 ml), rastvorom natrijum hidroksida (15%) (0,5 ml), vodom (1,5 ml) i mešana na 0 °C tokom 1 h. Smeša je razblažena metanolom (50 ml) i mešana na 25 °C tokom 30 minuta. Smeša je zatim filtrirana i koncentrovana. Dobijeno ulje je ponovo rastvoreno u dihlormetanu, osušeno iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirano i koncentrovano da bi se dobio sirovi proizvod koji je prenet u sledeći korak. LC-MS: (ESI, m/z): 178,3 [M+H]<+>

Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metanola (250,86 mg; 1,42 mmol) u tetrahidrofuranu (27,84 ml) dodat je natrijum hidrid (188,74 mg; 4,72 mmol; 60%

2

disperzija u mineralnom ulju) na 0 °C i mešan na 25 °C tokom 1 h, dodat je terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (362,0 mg; 0,4700 mmol) i reakcija je mešana na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski sloj je sakupljen, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 180 mg (41,3%) tercbutil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 924,5 [M+H]<+>

Korak 5: 6-[6-hlor-2-[[(2S 4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (164,0 mg; 0,18 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (23 ml) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. pH je podešen na 10 pomoću N,N-diizopropiletilamina. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 60 mg (57,9%) 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 584,2 [M+H]<+>

Korak 6: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (48,0 mg; 0,0800 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (42,41 mg; 0,3300 mmol) u dihlormetanu (4 ml) dodat je akriloil hlorid (4,46 mg; 0,0500 mmol) na -78 °C i mešan je na -78 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen direktno pomoću preparativne HPLC - kolona, kolona XBridge Prep C18 OBD19*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: amonijum bikarbonat i NH3H2O u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 17 mg (32,4%) 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-fluor-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 638,2 [M+H]<+>

Referentni primer 89<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,77 (d, J = 9,2 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,89 (s, 2H), 6,86-6,72 (m, 1H), 6,59 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,19 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,73 (dd, J = 12,4, 2,0 Hz, 1H), 5,18 (d, J = 48 Hz, 1H), 4,43-4,31 (m, 1H), 4,30-4,18 (m, 1H), 3,98-3,58 (m, 8H), 3,52-3,42 (m, 1H), 3,41-3,37 (m, 2H), 3,22-3,13 (m, 4H), 3,13-3,05 (m, 1H), 2,72-2,57 (m, 2H), 2,21-2,09 (m, 1H), 1,98-1,78 (m, 1H). LC-MS: (ESI, m/z): 638,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 90: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

4

Korak 1: [(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metanol

Litijum aluminijum hidrid (310 mg; 8,1 mmol) dodat je u rastvor (2S,4R,5S)-1-tercbutoksikarbonil-4-fluor-5-metil-pirolidin-2-karboksilne kiseline (1,0 g; 4,0 mmol) u tetrahidrofuranu (25 ml) na 0 °C. Reakcija je zatim zagrevana na 60 °C tokom 1,5 h. Po završetku, reakcija je deaktivirana vodom. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (96/4), što je dalo 139 mg (15%) [(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetilpirolidin-2-il]metanola u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 148,3 [M+H]<+>Korak 2: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metanola (95,9 mg; 0,66 mmol) u tetrahidrofuranu (8 ml) dodat je natrijum hidrid (62,56 mg; 1,56 mmol) na 0 °C i smeša je mešana 30 minuta, dodat je terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan je na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (97/3), što je dalo 170 mg (72,9%) terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 894,5 [M+H]<+>

Korak 3: 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperaz-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (170,0 mg; 0,19 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (26 ml) mešan je na 50 °C tokom 3 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. pH je podešen na 10 pomoću N,N-diizopropiletilamina. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 105 mg 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-4piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu svetložute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 554,2 [M+H]<+>

Korak 4: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (105,0 mg; 0,19 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (122,25 mg; 0,95 mmol) u dihlormetanu (12 ml) dodat je akriloil hlorid (10,29 mg; 0,11 mmol) na -78 °C i smeša je mešana tokom 1 h (-78 °C). Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana.

Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeCN, B% (40%); detektor, UV 254 nm da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona, kolona XBridge Prep C18 OBD 19*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: FA u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 25 mg (21,7%) 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R,5S)-4-fluor-1,5-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 608,2 [M+H]<+>

Referentni primer 90:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,10 (s, 1H), 7,81 (d, J = 8,0 Hz, 1H), 7,55 (s, 1H), 6,86-6,79 (m, 1H), 6,71 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,29 (dd, J = 8,4, 2,0 Hz, 1H), 5,82 (dd, J = 10,4, 1,6 Hz, 1H), 4,88-4,62 (m, 1H), 4,54-4,44 (m, 2H), 4,00-3,93 (m, 8H), 3,15-3,11 (m, 1H), 2,75-2,62 (m, 1H), 2,51 (s, 3H), 2,26-1,98 (m, 2H), 1,21 (d, J = 6,4 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 608,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 91: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: terc-butil-dimetil-[[(2S)-pirolidiri-2-il]metoksi]silan

U smešu L-prolinola (20 g; 197,73 mmol), imidazola (4 g; 587,54 mmol) u tetrahidrofuranu (200 ml) dodat je terc-butildimetilhlorsilan (45 g, 298,57 mmol), smeša je mešana tokom 2 h na sobnoj temperaturi. Po završetku, dobijeni rastvor je razblažen vodom, ekstrahovan dihlormetanom i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan kako bi se dobio sirovi proizvod koji je direktno korišćen u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 216,2 [M+H]<+>Korak 2: terc-butil-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-dimetil-silan

Smeša terc-butil-dimetil-[[(2S)-pirolidin-2-il]metoksi]silana (3,8 g; 13,93 mmol), 2-brometil metil etra (3,85 g; 27,7 mmol) i kalijum karbonata (5,77 g; 41,81 mmol) u N,N-dimetilformamidu (30 ml) mešana je na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Po završetku, reakcija je razblažena vodom, ekstrahovana dihlormetanom. Organski sloj je ispran zasićenim vodenim rastvorom soli, osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod. Sirovi proizvod bi se direktno koristio u sledećem koraku bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 274,2 [M+H]<+>

Korak 3: [(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metanol

Smeša terc-butil-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-dimetil-silana (2,0 g, 7,31 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (2 ml; 26,93 mmol) mešana je tokom 4 h na 50 °C. Reakciona smeša je podešena na pH 8 sa N,N-diizopropiletilaminom. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo [(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metanol (800 mg; 5,0 mmol; prinos 68,7%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 160,1 [M+H]<+>Korak 4: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metanola (62,0 mg; 0,39 mmol) u tetrahidrofuranu (1 ml) dodat je natrijum hidrid (20,0 mg; 0,83 mmol) i mešan na 0 °C tokom 15 minuta. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (200,0 mg; 0,26 mmol) i mešan na sobnoj temperaturi tokom 2 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski sloj je koncentrovan i prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (19:1), što je dalo tercbutil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)piirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (120 mg; 0,125 mmol, prinos 50,8%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 906,4 [M+H]<+>Korak 5a: 6-[6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-ilhinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

U terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidiri-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat (150,0 mg; 0,17 mmol) dodata je trifluorsirćetna kiselina (1 ml; 13,23 mmol). Smeša je mešana tokom 2 h na 50 °C. Reakciona smeša je podešena na pH 8 N,N-diizopropiletilaminom. Sirovi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje metanolom/vodom (3/1), što je dalo 6-[6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-ilhinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (80 mg; 0,14 mmol, prinos 85,4%) u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 566,2 [M+H]<+>

Korak 5b: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U smešu 6-[6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-ilhinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (80,0 mg; 0,14 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (54 mg; 0,42 mmol) u dihlormetanu (1 ml) dodat je akriloil hlorid (14,0 mg; 0,15 mmol), i smeša je mešana tokom 0,5 h na -78 °C. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC - kolona: kolona XBridge Prep OBD C18, 19*250 mm ,5 um; mobilna faza A: voda (10 mmol/l NH4HCO3), mobilna faza B: MeOH--HPLC; protok: 25 ml/min; što je dalo 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S)-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-

1

il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on (15,1 mg; 0,024 mmol, prinos 17,2%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 91: LC-MS: (ESI, m/z): 620,3 [M+H]<+>,<1>H NMR (300 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,9 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,96 - 6,74 (m, 3H), 6,60 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,17 (dd, J = 16,6, 2,4 Hz, 1H), 5,74 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 4,38 - 4,27 (m, 1H), 4,15 - 3,99 (m, 1H), 3,94 - 3,70 (m, 8H), 3,42 (t, J = 6,2 Hz, 3H), 3,21 (s, 3H), 3,09 -2,95 (m, 2H), 2,84 (s, 1H), 2,31 - 2,18 (m, 1H), 1,95 - 1,80 (m, 1H), 1,75 - 1,54 (m, 3H).

Referentni primer 92: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Korak 1: 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-(difluormetoksi)pirolidin-1,2-dikarboksilat

U atmosferi azota, u rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (4,8 g; 19,57 mmol) u acetonitrilu (66 ml) dodat je kupro jodid (0,74 g; 3,91 mmol) na 25 °C i rastvor je mešan na 50 °C. Zatim je dodat rastvor

11

difluor(fluorsulfonil)sirćetne kiseline (4,18 g; 23,48 mmol) u acetonitrilu (19,8 ml) i rastvor je mešan na 50 °C tokom 1 h. Reakcija je koncentrovana i ostatak je suspendovan u etil acetatu. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Sirovi proizvod je korišćen u sledećoj reakciji. LC-MS: (ESI, m/z): 296,3 [M+H]<+>

Korak 2: ((2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metilpirolidin-2-il)metanol

U rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-(difluormetoksi)pirolidin-1,2-dikarboksilata (5,0 g; 16,93 mmol) u tetrahidrofuranu (66 ml) dodat je litijum aluminijum hidrid (1,29 g; 33,87 mmol) na 0 °C i rastvor je mešan na 60 °C tokom 30 minuta. Reakcija je deaktivirana vodom i filtrirana. Filtrat je koncentrovan i prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu korišćenjem dihlormetana/metanola (96/4), što je dalo 320 mg (10,4%) ((2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metilpirolidin-2-il)metanola u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 182,3 [M+H]<+>Korak 3: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metanola (183,02 mg; 1,01 mmol) u tetrahidrofuranu (16,5 ml) dodat je natrijum hidrid (80,81 mg; 2,02 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) na 0 °C i mešan je na 25 °C tokom 1 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (310,0 mg; 0,40 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani vodom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (96/4), što je dalo 245 mg (65,3%) terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu

12

žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 928,5 [M+H]<+>.

Korak 4: 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (229,0 mg; 0,25 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (29 ml) mešan je na 50 °C tokom 3 h. Reakcija je koncentrovana, pH podešen na ~10 sa N,N-diizopropiletilaminom i smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: MeOH, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 93 mg 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 588,4 [M+H]<+>

Korak 5: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 6-[6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (87,0 mg; 0,15 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (95,44 mg; 0,74 mmol) u dihlormetanu (14,5 ml) dodat je akriloil hlorid (10,71 mg; 0,12 mmol) na -78 °C i mešan je na -78 °C tokom 1 h. Po završetku, dobijeni rastvor je deaktiviran vodom i ekstrahovan dihlormetanom. Organski slojevi su zatim kombinovani, isprani vodom, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda,

1

B: MeCN, B% (40%); detektor, UV 254 nm. Smeša je ponovo prečišćena pomoću preparativne HPLC - kolona, kolona XBridge Prep C18 OBD 19*15 mm 5 um C-0013; mobilna faza, A: TFA u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 30 mg (31,6%) 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(2S,4R)-4-(difluormetoksi)-1-metil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 642,1 [M+H]<+>

Referentni primer 92:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 8,14 (s, 1H), 7,82 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,57 (s, 1H), 6,86-6,79 (m, 1H), 6,73-6,71 (m, 1H), 6,52 (s, 1H), 6,33-6,27 (m, 1H), 5,82 (dd, J = 10,4, 1,6 Hz, 1H), 4,99-4,98 (m, 1H), 4,77-4,73 (m, 1H), 4,63-4,58 (m, 1H), 3,98 (d, J = 3,6 Hz, 8H), 3,83-3,79 (m, 2H), 3,17-3,14 (m, 1H), 2,93 (s, 3H), 2,43-2,33 (m, 2H). LC-MS: (ESI, m/z): 642,1 [M+H]<+>.

Referentni primer 93: 1-((3S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

14

Korak 1: terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor terc-butil (S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-karboksilata (149,0 mg; 0,74 mmol) i natrijum hidrida (30,0 mg; 0,75 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) u tetrahidrofuranu (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (videti korak 9 primera 17a/17b) (300,0 mg; 0,37 mmol) i mešan na 25 °C tokom 3 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski slojevi su kombinovani, isprani zasićenim vodenim rastvorom soli, osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje petrol etrom/etil acetatom (10/1), što je dalo terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (298 mg; 0,30 mmol; prinos 81,2%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 994,4 [M+H]<+>

1

Korak 2: 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil (3S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-2-(((S)-1-(terc-butoksikarbonil)pirolidin-2-il)metoksi)-6-hlor-8-fluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (283,0 mg; 0,28 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 6 h. Reakcija je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (20/1), što je dalo 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (140 mg; 0,25 mmol; prinos 88,8%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 554,2 [M+H]<+>

Korak 3: 1-((3S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-8-fluor-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-7-il)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (70,0 mg; 0,13 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (49,0 mg; 0,38 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (12,0 mg; 0,13 mmol) i mešan na -78 °C tokom 0,5 h. Nakon završetka, rastvor je koncentrovan pod vakuumom. Ostatak je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 1-((3S)-4-(7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-(((S)-pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (4,3 mg; 0,0071 mmol; prinos 5,6%) u vidu bele čvrste supstance.

Referentni primer 93:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4, ppm) δ 7,67 (d, J = 1,6 Hz, 1H), 6,92 - 6,73 (m, 1H), 6,60 (s, 1H), 6,29 (d, J = 18,0 Hz, 1H), 5,87 - 5,76 (m, 1H), 4,69 (s, 1H), 4,54 (d, J = 16,2 Hz, 1H), 4,41 - 4,23 (m, 1H), 4,22 - 3,96 (m, 2H), 3,95 - 3,81 (m, 1H),

1

3,80 - 3,52 (m, 6H), 2,46 (s, 3H), 2,28 - 1,77 (m, 4H), 1,37 (d, J = 6,6 Hz, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 608,2 [M+H]<+>.

Referentni primer 94: (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: (S)-2,2-difluor-1-(2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il)etan-1-on

Rastvor (S)-pirolidin-2-ilmetanola (5,0 g; 49,4 mmol), 2,2-difluorsirćetne kiseline (7,1 g; 74,1 mmol), HATU (28,2 g; 74,1 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (19,1 g; 148,3 mmol) u dihlormetanu (50 ml) mešan je na 20 °C tokom 1 h. Reakciona smeša je isprana zasićenim rastvorom natrijum hlorida (200 ml), osušena (Na2SO4), filtrirana i koncentrovana da bi se dobio (S)-2,2-difluor-1-(2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il)etan-1-on (8,0 g; 44,7 mmol; prinos 90,3%) u vidu smeđeg ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 178,1 [M-H]<+>

Korak 2: (S)-(1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metanol

1

Rastvor (S)-2,2-difluor-1-(2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il)etan-1-ona (5,0 g; 27,9 mmol) i litijum aluminijum hidrida (4,2 g; 111,6 mmol) u tetrahidrofuranu (40 ml) mešan je na 20 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodenim rastvorom amonijum hlorida (40 ml). Smeša je filtrirana, a filtrat je ekstrahovan dihlormetanom (5 x 40 ml). Organski slojevi su kombinovani, osušeni natrijum sulfatom i koncentrovani da bi se dobio (S)-(1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metanol (380 mg; 2,3005 mmol; prinos 8,2%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 166,1 [M+H]<+>

Korak 3: terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Natrijum hidrid (124,0 mg; 3,1 mmol) dodat je u rastvor (S)-(1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metanola (320,0 mg; 1,9 mmol) u tetrahidrofuranu (8 ml). Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (297 mg; 0,4 mmol) i reakcija je mešana na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodenim rastvorom amonijum hlorida (20 ml), a zatim ekstrahovana dihlormetanom. Organski slojevi su osušeni iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovani pod vakuumom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu pomoću dihlormetana/metanola (10/1), što je dalo terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (320 mg; 0,35 mmol; prinos 18,1%) u vidu žute čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 912,3 [M+H]<+>.

Korak 4: (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

1

Rastvor terc-butil (S)-4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (150,0 mg; 0,16 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (16 ml) mešan je na 50 °C tokom 12 h i koncentrovan. Dobijeno ulje je zatim rastvoreno u dihlormetanu (9 ml) i dodat je N,N-diizopropiletilamin (424,0 mg; 3,3 mmol). Akriloil hlorid (13,0 mg; 0,14 mmol) dodat je u dobijenu smešu na -78 °C i reakcija je mešana tokom 15 minuta. Reakcija je deaktivirana zasićenim rastvorom amonijum hlorida (30 ml). Reakcija je ekstrahovana sa dihlormetanom (5 x 25 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo (S)-1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-((1-(2,2-difluoretil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (33,9 mg; 0,05 mmol; prinos 32,9%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 626,3 [M+H]<+>.

Referentni primer 94:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,46 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 6,82 (dd, J = 10,4, 10,8 Hz, 1H), 6,60 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,24 - 5,88 (m, 2H), 5,79 - 5,68 (m, 1H), 4,38 - 4,24 (m, 1H), 4,20 - 4,07 (m, 1H), 3,92 -3,68 (m, 8H), 3,39 - 3,21 (m, 1H), 3,16 - 3,06 (m, 1H), 3,05 - 2,95 (m, 1H), 2,90 - 2,74 (m, 1H), 2,45 - 2,37 (m, 1H), 1,98 - 1,86 (m, 1H), 1,79 - 1,68 (m, 2H), 1,67 - 1,56 (m, 1H).

Referentni primer 95: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

1

Sintetički postupak

Korak 1: 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat

Rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-hidroksipirolidin-1,2-dikarboksilata (30,0 g; 122,3 mmol) i natrijum hidrida (5,88 g; 245 mmol) u tetrahidrofuranu (1,3 l) mešan je na 20 °C tokom 0,5 h. Dodat je jodmetan (34,74 g; 244,7 mmol) i reakcija je mešana na 20 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodenim rastvorom amonijum hlorida (300 ml). Dobijena smeša je ekstrahovana etil acetatom, osušena iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtrirana i koncentrovana, što je dalo 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilat (22 g; 84,8 mmol; prinos 69,4%) u vidu smeđeg ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 260,3 [M+H]<+>Korak 2: metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-2-karboksilat

Rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-1,2-dikarboksilata (30,0 g; 115,7 mmol) i hlorovodonika u 1,4-dioksanu (200 ml) mešan je na 20 °C tokom 1,5 h. Smeša je koncentrovana pod vakuumom da bi se dobio metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-2-karboksilat (12 g; 75,4 mmol) u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 160,2 [M+H]<+>Korak 3: metil (2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-karboksilat

2

Rastvor metil (2S,4R)-4-metoksipirolidin-2-karboksilata (5,0 g; 31,4 mmol) i 1-brom-2-metoksietana (6,51 g; 46,8 mmol) i cezijum karbonata (20,5 g; 62,9 mmol) u acetonitrilu (150 ml) mešan je na 80 °C tokom 2 h. Nakon filtracije, filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom da bi se dobio metil (2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-karboksilat (4,4 g; 20,252 mmol; prinos 64,5%) u vidu smeđeg ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 218,3 [M+H]<+>Korak 4: ((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metanol

Rastvor metil (2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-karboksilata (2,0 g; 9,2 mmol) i litijum aluminijum hidrida (700,0 mg; 18,42 mmol) u tetrahidrofuranu (40 ml) mešan je na 20 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodenim rastvorom amonijum hlorida i ekstrahovana etil acetatom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan da bi se dobio ((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metanol (750 mg; 3,963 mmol; prinos 43,1%) u vidu smeđeg ulja. LC-MS (ESI, m/z): 190,3 [M+H]<+>.

Korak 5: terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat

Na 0 °C dodat je rastvor ((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metanola (650,0 mg; 3,4 mmol) u tetrahidrofuranu (20 ml) i natrijum hidrid (275,0 mg; 6,9 mmol). Dobijeni rastvor je mešan na 20 °C tokom 0,5 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (300,0 mg; 0,39 mmol) i mešan na 20 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodenim rastvorom amonijum hlorida (15 ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan etil-acetatom. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metil alkoholom (10/1), što je dalo terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-

21

(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (240 mg; 0,26 mmol; prinos 7,5%) u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 936,6 [M+H]<+>.

Korak 6: 6-(6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilata (230,0 mg; 0,250 mmol) u 2,2,2-trifluorsirćetnoj kiselini (50 ml) mešan je na 50 °C tokom 4 h. Dobijena smeša je filtrirana i filtrat je koncentrovan, što je dalo 6-(6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (120 mg; 0,20 mmol; prinos 81,9%) u vidu smeđe čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 596,2 [M+H]<+>.

Korak 7: 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-(6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)-4-(piperazin-1-il)hinazolin-7-il)-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (110 mg; 0,18 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (71,0 mg; 0,55 mmol) u dihlormetanu (10 ml) mešan je na -78 °C tokom 5 minuta. Dodat je akriloil hlorid (15,0 mg, 0,17 mmol) i smeša je mešana na -78 °C tokom 15 minuta. Reakcija je deaktivirana vodenim rastvorom amonijum hlorida (5 ml). Dobijeni rastvor je ekstrahovan dihlormetanom (5 x 8 ml) i organski slojevi su kombinovani. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Sirovi proizvod je

22

prečišćen pomoću preparativne HPLC, što je dalo 1-(4-(7-(6-amino-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-(((2S,4R)-4-metoksi-1-(2-metoksietil)pirolidin-2-il)metoksi)hinazolin-4-il)piperazin-1-il)prop-2-en-1-on (22,2 mg; 0,034 mmol; prinos 18,5%) u vidu bele čvrste supstance. LC-MS (ESI, m/z): 650,4 [M+H]<+>.

Referentni primer 95:<1>H NMR (400 MHz, metanol-d4) δ 8,10 (s, 1H), 7,80 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,57 (m, 1H), 6,87 - 6,76 (m, 1H), 6,70 (d, J = 8,8Hz, 1H), 6,31 - 6,23 (m, 1H), 5,84 - 5,77 (m, 1H), 4,63 - 4,48 (m, 2H), 4,05 - 3,99 (m, 5H), 3,92 (s, 4H), 3,66 - 3,36 (m, 5H), 3,33 (s, 5H), 3,29 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 3,05 - 2,78 (m, 2H), 2,55 - 1,88 (m, 2H).

Referentni primer 96: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

Sintetički postupak

Korak 1: 1-(terc-butil) 2-metil (4R)-4-fluor-2-metilpirolidin-1,2-dikarboksilat

U rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (4R)-4-fluorpirolidin-1,2-dikarboksilata (5,00 g; 20,22

2

mmol) u tetrahidrofuranu (19 ml) dodat je litijum diizopropilamid (12,1 ml; 24,27 mmol; 2,0 M u tetrahidrofuranu) i mešan je na -78 °C tokom 1 h. Dodat je jodmetan (4,31 g; 30,33 mmol) na -78 °C i reakcija je mešana na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je koncentrovana i sirovi proizvod je korišćen u sledećoj reakciji. LC-MS: (ESI, m/z): 206,1 [M-55]<+>

Korak 2: [(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metanol

U rastvor 1-(terc-butil) 2-metil (4R)-4-fluor-2-metilpirolidin-1,2-dikarboksilata (4,00 g, sirovi) u tetrahidrofuranu (75 ml) dodat je litijum aluminijum hidrid (1,45 g; 38,27 mmol) na 0 °C i mešan na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom, filtrirana i filtrat je koncentrovan. Dobijena smeša je prečišćena fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (96/4), što je dalo 700 mg (31,1%) [(4R)-4-fluor-1,2-dimetilpirolidin-2-il]metanola u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 148,1 [M+H]<+>

Korak 3: terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilat

U rastvor [(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metanola (479,6 mg; 3,26 mmol) u tetrahidrofuranu (14 ml) dodat je natrijum hidrid (208,5 mg; 5,21 mmol; 60% disperzija u mineralnom ulju) na 0 °C i mešan je na 25 °C tokom 1 h. Zatim je dodat terc-butil 4-(7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2-fluorhinazolin-4-il)piperazin-1-karboksilat (Intermedijer 3) (500,0 mg; 0,65 mmol) i mešan na 25 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski sloj je zatim osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata, filtriran i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (96/4), što je dalo 450 mg (80%) terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata u vidu žutog ulja. LC-MS: (ESI, m/z): 894,5 [M+H]<+>

24

Korak 4: 6-[6-hlor-2-[[(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

Rastvor terc-butil 4-[7-[6-[bis[(4-metoksifenil)metil]amino]-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-karboksilata (420,0 mg; 0,47 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (42 ml) mešan je na 50 °C tokom 3 h. Po završetku, reakcija je koncentrovana. pH vrednost je podešena na 10 N,N-diizopropiletilaminom i smeša je koncentrovana. Sirova supstanca je korišćena u sledećoj reakciji bez prečišćavanja. LC-MS: (ESI, m/z): 554,2 [M+H]<+>

Korak 5: 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-on

U rastvor 6-[6-hlor-2-[[(4R)-4-fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]-4-piperazin-1-il-hinazolin-7-il]-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (160,0 mg; 0,29 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (149,03 mg; 1,16 mmol) u dihlormetanu (14,76 ml) jdodat je akriloil hlorid (18,3 mg; 0,20 mmol) na -78 °C i rastvor je mešan na -78 °C tokom 1 h. Reakcija je deaktivirana vodom i ekstrahovana pomoću dihlormetana. Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom - kolona, C18 silika gel; mobilna faza, A: voda, B: acetonitril, B% (5%~ 70% za 30 min); detektor, UV 254 nm. Dobijena smeša je ponovo prečišćena direktno pomoću preparativne HPLC - kolona, kolona XBridge Prep C18 OBD 19*15 mm 5 um C0013; mobilna faza, A: 10 mmol/l NH4HCO3u vodi, B: ACN i B% (51%~73% za 7 min); detektor, UV 254 nm, što je dalo 47 mg (26,8%) 1-[4-[7-[6-amino-3-(trifluormetil)-2-piridil]-6-hlor-2-[[(4R)-4-

2

fluor-1,2-dimetil-pirolidin-2-il]metoksi]hinazolin-4-il]piperazin-1-il]prop-2-en-1-ona u vidu bele čvrste supstance. LC-MS: (ESI, m/z): 608,2 [M+H]<+>

Referentni primer 96:<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) δ 8,04 (s, 1H), 7,78 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 7,47 (s, 1H), 6,90 (s, 2H), 6,85-6,82 (m, 1H), 6,59 (d, J = 8,8 Hz, 1H), 6,19 (d, J = 2,4 Hz, 1H), 5,73 (dd, J = 10,4, 2,4 Hz, 1H), 5,26 (d, J = 56 Hz, 1H), 4,26-4,16 (m, 2H), 3,88-3,85 (m, 6H), 3,85-3,70 (m, 2H), 3,07-2,99 (m, 1H), 2,91-2,78 (m, 1H), 2,27 (s, 3H), 2,19-2,00 (m, 2H), 1,02 (s, 3H). LC-MS: (ESI, m/z): 608,2 [M+H]<+>

Referentni primer 97: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Korak 1: 2-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-ol

Rastvor 1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-ola (1,0 g; 6,7 mmol) i formaldehida (0,4 g; 13,4

2

mmol) u MeOH (10 ml) mešan je na 25 °C tokom 10 minuta. Zatim je dodat natrijum cijanoborhidrid (1,3 g; 20,1 mmol) i mešan na 25 °C tokom 30 minuta. Po završetku, smeša je koncentrovana. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1), što je dalo 2-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-ol (0,8 g, 4,5 mmol, prinos 67,3%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 164,2 [M+H]<+>.

Korak 2: terc-butil (S)-4-((R)-7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat

Rastvor 2-metil-3,4-dihidro-1H-izohinolin-5-ola (0,8 g; 4,92 mmol) i natrijum hidrida (0,4 g; 9,84 mmol) u N,N-dimetil formamidu (20 ml) mešan je na sobnoj temperaturi tokom 20 minuta. Zatim je dodat terc-butil (S)-4-((R)-7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-2,8-difluorhinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (pogledajte korak 9 primera 17a/17b) (2,0 g; 2,46 mmol) i rastvor je mešan na 60 °C tokom 30 minuta. Reakcija je deaktivirana vodom (10 ml), razblažena dihlormetanom (100 ml). Organski sloj je ispran vodom (30 ml x 3), osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1), što je dalo terc-butil (S)-4-((R)-7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilat (0,8 g; 0,77 mmol; prinos 31,3%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 956,3 [M+H]<+>.

Korak 3: 6-((R)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)hinazolin-7-il)-N,N-bis(4-metoksibenzil)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin

2

Rastvor terc-butila (S)-4-((R)-7-(6-(bis(4-metoksibenzil)amino)-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-karboksilata (0,8 g; 0,78 mmol) u trifluorsirćetnoj kiselini (10 ml) mešan je na 50 °C tokom 5 h. Nakon koncentracije, pH vrednost je podešena na ~7 sa N,N-diizopropiletilaminom (10 ml). Dobijeni ostatak je prečišćen reversno faznom hromatografijom (acetonitril 0-40/ u vodi), što je dalo 6-((R)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)hinazolin-7-il)-N,N-bis(4-metoksibenzil)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amin (0,23 g; 0,34 mmol; prinos 43,8%) u vidu bele čvrste supstance. LCMS (ESI, m/z): 616,2 [M+H]<+>.

Korak 4: 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on

Rastvor 6-((R)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)-4-((S)-2-metilpiperazin-1-il)hinazolin-7-il)-N,N-bis(4-metoksibenzil)-4-metil-5-(trifluormetil)piridin-2-amina (0,23 g; 0,37 mmol) i N,N-diizopropiletilamina (0,1 g; 0,75 mmol) u dihlormetanu (5 ml) mešan je na -78 °C tokom 2 minuta. Zatim je dodat akriloil hlorid (0,03 g; 0,37 mmol) i rastvor je mešan na -78 °C tokom 20 minuta. Reakcija je prekinuta dodatkom vode (5 ml). Reakciona smeša je razblažena dihlormetanom (50 ml) i isprana vodom (20 ml x 3). Organski sloj je osušen iznad anhidrovanog natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu uz eluiranje dihlormetanom/metanolom (10:1) da bi se dobio sirovi proizvod. Smeša je prečišćena pomoću

2

hiralne preparativne HPLC - kolona: CHIRAL ART Cellulose-SB, 2*25 cm, 5 um; mobilna faza A: Heks (8 mmol/l amonijak. metanol), mobilna faza B: EtOH; protok: 18 ml/min, što je dalo 1-((S)-4-((R)-7-(6-amino-4-metil-3-(trifluormetil)piridin-2-il)-6-hlor-8-fluor-2-((2-metil-1,2,3,4-tetrahidroizohinolin-5-il)oksi)hinazolin-4-il)-3-metilpiperazin-1-il)prop-2-en-1-on (38,9 mg; 0,0575 mmol; prinos 15,4%) nakon 6,942 min. LCMS (ESI, m/z): 670,3 [M+H]<+>Referentni primer 97: 1H NMR (400 MHz, DMSO-d6, ppm) 7,84 (s, 1H), 7,19 (t, J = 7,8 Hz, 1H), 6,99 (t, J = 8,5 Hz, 2H), 6,87 (s, 2H), 6,83 - 6,74 (m, 1H), 6,50 (s, 1H), 6,22 - 6,12 (m, 1H), 5,78 - 5,70 (m, 1H), 4,54 (d, J = 29,3 Hz, 1H), 4,30 - 3,86 (m, 3H), 3,55 (td, J = 24,5, 23,0, 13,2 Hz, 4H), 3,24 - 3,02 (m, 1H), 2,60 (d, J = 6,0 Hz, 2H), 2,57 - 2,52 (m, 2H), 2,37 (d, J = 2,3 Hz, 3H), 2,32 (s, 3H), 1,19 (t, J = 5,8 Hz, 3H).

Podaci iz primera 1-97 sumirani su u tabeli 2. Referentni primeri su označeni sa (*) Tabela 2

2

1

2

4

4

41

42

4

44

4

4

4

4

4

1

Biološki primeri

K-Ras G12C, SOS1, Raf RBD test homogene vremenski razložene fluorescencije (HTRF) za inhibiciju GTP razmene

Da bi se utvrdila potentnost jedinjenja za inhibiciju razmene nukleotida, različite koncentracije su inkubirane sa K-Ras G12C (25 nM u reakciji, 12,5 nM konačno). Nakon 18 sati na sobnoj temperaturi, dodat je faktor razmene SOS1 GTP (1,67 nM tokom razmene, 1,25 nM konačno) kako bi se pokrenula razmena nukleotida u GTP (200 µM tokom razmene, 150 µM konačno). Nivo razmene GTP-a procenjen je dodavanjem domena vezivanja Ras izvedenog iz C-Raf i HTRF antitela za detekciju Tb-anti-FLAG i D2-anti-his (Cis-Bio) na 50 nM, 1 nM i 12,5 nM, datim redosledom. Nakon 2 sata, odnos emisije od 665 nm do 615 nM sa 320 nM ekscitacijom izmeren je na čitaču ploča Envision (Perkin Elmer).

Konačna zapremina reakcije bila je 20 µl u ProxiPlate-384F Plus (Perkin Elmer), u puferu koji sadrži 20 mM HEPES, 150 mM NaCl, 1 mM MgCl2, 0,1% BSA, 0,03% Tween-20 i 1 mM DTT. K-Ras G12C (ostaci 2-188) i SOS1 (ostaci 564-1049) imali su N-terminalni 6-His, a Raf-RBD konstrukt (ostaci 51-186 RAFI) imao je N-terminalnu Flag oznaku. Svi konstrukti su eksprimirani u E. coli i imali su Tev mesto cepanja između oznake i proteina od interesa koji nije korišćen tokom prečišćavanja. HTRF podaci su predstavljeni u nastavku u Tabeli 3.

2

Vestern blot test za ćelijsko alkilovanje K-Ras G12C

HCC1171 ćelije su održavane u RPMI1640 sa dodatkom 10% FBS. Ćelije su zasejane na ploču sa 96 bunarčića sa 20.000 ćelija/bunarčiću i jedinjenja su sledećeg dana dodata u ćelije. Nakon 18 sati na 37 °C, ćelije su lizirane u RIPA puferu (Sigma R0278) sa 0,5% SDS i koktelom inhibitora proteaze/fosfataze. Nakon temeljnog mešanja kako bi se omogućila potpuna liza, lizati su očišćeni centrifugiranjem pa je 20 µl prebačeno iz svakog bunarčića i kombinovano sa puferom za punjenje i redukujućim agensom. Nakon zagrevanja tokom 10 minuta na 95 °C, 15 µl svakog uzorka je stavljeno na 4-20% Tris-glicin gela i elektroforirano na 110 V tokom 165 minuta u SDS-PAGE radnom puferu. Gelovi su preneti na nitroceluloznu membranu, blokirani 1 sat i obojeni preko noći na 4 °C sa primarnim antitelom protiv K-Ras (poliklonski Proteintech 12063-1-AP). Membrana je zatim temeljno isprana i kontraobojena antizečjim IRDye 800CW (LI-COR 926-32211) tokom jednog sata na sobnoj temperaturi. Nakon završnog ispiranja, membrana je snimljena na LI-COR Odyssey CLx u srednjoj rezoluciji. Alkilovani K-Ras je bio vidljiv na osnovu elektroforetskog pomeranja sa nemodifikovanog K-Ras. Da bi se kvantifikovao ovaj uticaj, softver LICOR je korišćen za crtanje pravougaonika preko alkilovanih i nealkilovanih traka za svaki bunarčić i merenje ukupnog intenziteta fluorescencije (FI) u svakoj od ovih traka. Zatim je korišćena sledeća formula za izračunavanje % alkilovanja: FI(alkilovano)/ (FI(alkilovano)+ FI(nealkilovano)) * 100 za svaki bunarčić.

Kriva odgovora na dozu od 7 tačaka korišćena je za određivanje IC50za svako jedinjenje. Podaci o alkilovanju ćelija prikazani su u nastavku u tabeli 3.

Tabela 3 daje rezultate HTRF i vestern Blot testova kao što je gore opisano. Referentni primeri su označeni sa (*).

Tabela 3.

4

ND = nije određeno

Test stabilnosti pune krvi

Test stabilnosti pune krvi je urađen korišćenjem sveže krvi sa konačnom koncentracijom leka od 1 µM. Smeše leka i krvi su inkubirane na 37 °C tokom 180 minuta. Poluživot reprezentativnih jedinjenja je naveden u tabeli 4. Referentni primeri su označeni sa (*).

Tabela 4.

CTG test održivost i selektivnosti 3D kulture K-Ras G12C

Procenom proliferacije može da se proceni efekat jedinjenja na održivost i specifičnost za ćelijske linije kancera koje pokreće K-Ras G12C. Procena proliferacije se vrši korišćenjem 3 linije koje pokreće G12C (H358, HCC1171 i HCC1792) i 2 linije koje ne pokreće G12C (PC-9 i A427) na pločama sa izuzetno niskim vezivanjem kako bi se podstakao rast 3D sferoida. 1. dana, 1000 ćelija po bunarčiću je zasejano u crne prozirne ploče sa okruglim dnom sa izuzetno niskim vezivanjem sa 384 bunarčića (Corning 3830) u 50 µl medijuma RPMI1640 sa dodatkom 10% FBS i 2 mM L-glutaminom. Sledećeg dana su dodate različite koncentracije jedinjenja, koristeći titraciju odgovora na dozu počevši od 20 uM i održavajući konačnu količinu DMSO konstantnom na 0,3%. Sedam dana nakon dodavanja jedinjenja, količina vijabilnih ćelija je određena dodavanjem 40 µl CTG 3D reagensa (Promega G9683) koji lizira ćelije i generiše signal luciferaze srazmerno količini oslobođenog ATP-a. Ploče su snažno tresene tokom 25 minuta. Ploče su zatim inkubirane dodatnih 10 minuta. Ploče su zatim nakratko centrifugirane pre očitavanja luminiscencije na čitaču ploča Envision (Perkin Elmer). Luminescencija iz bunarčića tretiranih samo DMSO-om koristi se za određivanje ukupne proliferacije, a 1 uM staurosporin se koristi za određivanje 100% inhibicije.

******

Karakteristike otkrivene u prethodnom opisu ili sledećim patentnim zahtevima, izražene u specifičnim oblicima ili u smislu sredstva za obavljanje otkrivene funkcije, ili postupaka ili procesa za postizanje otkrivenog rezultata, prema potrebi, mogu se koristiti za realizaciju pronalaska u različitim oblicima, odvojeno ili u bilo kojoj kombinaciji takvih karakteristika.

Prethodni pronalazak je opisan detaljnije kao ilustracija i primer, radi jasnoće i razumevanja. Stručnjaku za ovu oblast će biti očigledno da su moguće izmene i modifikacije u okviru priloženih patentnih zahteva. Stoga, treba shvatiti da je gore dati opis ilustrativan, a ne ograničavajući. Obim pronalaska stoga ne treba da bude određen s obzirom na prethodni opis, nego umesto toga mora biti određen s obzirom na sledeće priložene patentne zahteve.

Claims (1)

1. PATENTNI ZAHTEVI 1. Jedinjenje koje ima formulu (IVa), (IVb), (IVd) ili (IVg):

   ili njegov stereoizomer ili farmaceutski prihvatljivu so; pri čemu, Y je

   U je C(R6a); V je C(R6b); W je C(R6c); R6aje H; R6bje vodonik, halo ili haloalkil; i R6cje vodonik ili halo. 2. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema zahtevu 1, pri čemu, jedinjenje je jedinjenje koje ima formulu (IVa) ili (IVb). 3. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema zahtevu 1 ili 2, pri čemu, R6cje halo. 4. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema zahtevu 1 izabrani od sledeće formule:

   1

   5. Jedinjenje ili njegova farmaceutski prihvatljiva so prema zahtevu 4 koje ima formulu: 2

   7. Farmaceutski prihvatljiva so jedinjenja prema zahtevu 5, pri čemu jedinjenje ima formulu:

   8. Farmaceutska kompozicija koja sadrži jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-7 ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i farmaceutski prihvatljiv ekscipijens. 9. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-7 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 8, za upotrebu u terapiji. 10. In vitro postupak za regulisanje aktivnosti G12C mutiranog proteina K-Ras, pri čemu se postupak sastoji od reakcije mutiranog proteina sa jedinjenjem iz bilo kog od zahteva 1-7 ili njegovom farmaceutski prihvatljivom sollju. 11. In vitro postupak za inhibiciju proliferacije ćelijske populacije, pri čemu se postupak sastoji od dovođenja ćelijske populacije u kontakt sa jedinjenjem iz bilo kog od zahteva 1-7 ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju. 12. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-7 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 8, za upotrebu u postupku lečenja kancera posredovanog G12C mutacijom K-Ras kod pojedinca kome je to potrebno, pri čemu postupak opciono obuhvata: utvrđivanja da li pojedinac ima mutaciju; i ako se utvrdi da pojedinac ima mutaciju, primenu na pojedincu terapeutski efikasne količine jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli ili farmaceutske kompozicije. 13. Jedinjenje, njegova farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 12, pri čemu, kancer je kancer pluća, kolorektalni kancer, kancer slepog creva ili kancer pankreasa. 14. In vitro postupak za pripremu označenog G12C mutiranog proteina K-Ras, pri čemu se postupak sastoji od reakcije G12C mutiranog proteina K-Ras sa označenim jedinjenjem iz bilo kog od zahteva 1-7 ili njegovom farmaceutski prihvatljivom solju, kako bi se dobio označeni G12C mutirani protein K-Ras. 15. Jedinjenje, njegova farmaceutski prihvatljiva so ili farmaceutska kompozicija za upotrebu prema zahtevu 12, pri čemu, kancer je hematološki kancer, kancer pankreasa, polipoza povezana sa MYH, kolorektalni kancer ili kancer pluća, kao što je adenokarcinom pluća. 16. Jedinjenje iz bilo kog od zahteva 1-7 ili njegova farmaceutski prihvatljiva so, ili farmaceutska kompozicija iz zahteva 8, za upotrebu u postupku inhibicije tumorskih metastaza. Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5 4