Deprecated: The each() function is deprecated. This message will be suppressed on further calls in /home/zhenxiangba/zhenxiangba.com/public_html/phproxy-improved-master/index.php on line 456
RS66429B1 - Biciklični peptidni ligandi specifični za nektin-4 - Google Patents
[go: Go Back, main page]

RS66429B1 - Biciklični peptidni ligandi specifični za nektin-4 - Google Patents

Biciklični peptidni ligandi specifični za nektin-4

Info

Publication number
RS66429B1
RS66429B1 RS20250070A RSP20250070A RS66429B1 RS 66429 B1 RS66429 B1 RS 66429B1 RS 20250070 A RS20250070 A RS 20250070A RS P20250070 A RSP20250070 A RS P20250070A RS 66429 B1 RS66429 B1 RS 66429B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
seq
tumor
nectin
animals
peptide
Prior art date
Application number
RS20250070A
Other languages
English (en)
Inventor
Paul Beswick
Liuhong Chen
Gemma Elizabeth Mudd
Peter Park
Rietschoten Katerine Van
Michael Rigby
Stephen Blakemore
Tara Gelb
Nicholas KEEN
Original Assignee
Bicycletx Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Priority claimed from GBGB1810250.9A external-priority patent/GB201810250D0/en
Priority claimed from GBGB1815684.4A external-priority patent/GB201815684D0/en
Priority claimed from GBGB1818499.4A external-priority patent/GB201818499D0/en
Priority claimed from GBGB1904632.5A external-priority patent/GB201904632D0/en
Application filed by Bicycletx Ltd filed Critical Bicycletx Ltd
Publication of RS66429B1 publication Critical patent/RS66429B1/sr

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K7/00—Peptides having 5 to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K7/04—Linear peptides containing only normal peptide links
    • C07K7/08—Linear peptides containing only normal peptide links having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/40—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with one nitrogen as the only ring hetero atom, e.g. sulpiride, succinimide, tolmetin, buflomedil
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/07—Tetrapeptides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/04—Peptides having up to 20 amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • A61K38/10—Peptides having 12 to 20 amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/54—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound
    • A61K47/55—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic compound the modifying agent being also a pharmacologically or therapeutically active agent, i.e. the entire conjugate being a codrug
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K5/00—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof
    • C07K5/04—Peptides containing up to four amino acids in a fully defined sequence; Derivatives thereof containing only normal peptide links
    • C07K5/06—Dipeptides
    • C07K5/06008—Dipeptides with the first amino acid being neutral
    • C07K5/06017—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic
    • C07K5/06034—Dipeptides with the first amino acid being neutral and aliphatic the side chain containing 2 to 4 carbon atoms
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G—PHYSICS
    • G01—MEASURING; TESTING
    • G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
    • G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
    • G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
    • G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
    • G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
    • G01N33/575—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer
    • G01N33/5758—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumours, cancers or neoplasias, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides or metabolites
    • G01N33/5759—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for cancer involving compounds serving as markers for tumours, cancers or neoplasias, e.g. cellular determinants, receptors, heat shock/stress proteins, A-protein, oligosaccharides or metabolites involving compounds localised on the membrane of tumour or cancer cells
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/535—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with at least one nitrogen and one oxygen as the ring hetero atoms, e.g. 1,2-oxazines
    • A61K31/5375—1,4-Oxazines, e.g. morpholine
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Urology & Nephrology (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Pathology (AREA)
  • General Physics & Mathematics (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)

Description

Opis
OBLAST PRONALASKA
[0001] Prikazani pronalazak se odnosi na polipeptide koji su kovalentno vezani za molekulske skele tako da se dve ili više peptidnih petlji savijaju između tačaka vezivanja za skelu. Naročito, pronalazak opisuje peptide koji su visoko afinitetno vezivni za Nektin-4. Pronalazak takođe obuhvata konjugate leka koji sadrže pomenute peptide, konjugovane sa jednim ili više efektorskih i/ili funkcionalnih grupa, na farmaceutske kompozicije koje sadrže navedene peptidne ligande i konjugate lekova i na upotrebu navedenih peptidinih liganada i konjugata lekova u prevenciji, supresiji ili lečenju bolesti ili poremećaja posredovanih Nektinom-4.
STANJE PRONALASKA
[0002] Ciklični peptidi su u stanju da se vežu sa visokim afinitetom i ciljnom specifičnošću za proteinske mete i stoga su atraktivna klasa molekula za razvijanje terapeutika. U stvari, nekoliko cikličnih peptida se već uspešno koristi u klinici, kao na primer antibakterijski peptid vankomicin, imunosupresivni lek ciklosporin ili lek oktreotid protiv kancera (Driggers et al. (2008), Nat Rev Drug Discov 7 (7), 608-24). Dobra svojstva vezivanja nastaju iz relativno velike površine interakcije koja se obrazuje između peptida i cilja kao i smanjene konformacione fleksibilnosti cikličnih struktura. Obično, makrocikli se vezuju za površine od nekoliko stotina kvadratnih angstroma, kao na primer ciklični peptid CXCR4 antagonist CVX15 (400 Å2; Wu et al. (2007), Science 330, 1066-71), ciklični peptid sa Arg-Gly-Asp motivom vezivanja za integrin αVb3 (355 Å2) (Xiong et al. (2002), Science 296 (5565), 151-5) ili ciklični peptidni inhibitor upain-1 koji se vezuje za aktivator plazminogena tipa urokinaze (603 Å2; Zhao et al. (2007), J Struct Biol 160 (1), 1-10).
[0003] Zbog njihove ciklične konfiguracije, peptidni makromolekuli su manje fleksibilni od linearnih peptida, što dovodi do manjeg gubitka entropije pri vezivanju za mete i rezultira većim afinitetom vezivanja. Smanjena fleksibilnost takođe dovodi do zaključavanja konformacija specifičnih za metu, povećavajući specifičnost vezivanja u poređenju sa linearnim polipeptidima. Ovaj efekt je ilustrovan potentnim i selektivnim inhibitorom matriksne metaloproteinaze 8 (MMP-8), koji je izgubio svoju selektivnost u odnosu na druge MMP-e kada je njegov prsten otvoren (Cherney et al. (1998), J Med Chem 41 (11), 1749-51). Povoljna svojstva vezivanja postignuta makrociklizacijom su još izraženija kod multicikličnih peptida koji imaju više od jednog peptidnog prstena kao na primer kod vankomicina, nisina i aktinomicina.
[0004] Različiti istraživački timovi su prethodno povezivali polipeptide sa cisteinskim ostacima za sintetičku molekulsku strukturu (Kemp and McNamara (1985), J. Org. Chem; Timmerman et al. (2005), ChemBioChem). Meloen i saradnici su koristili tris(bromometil)benzen i srodne molekule za brzu i kvantitativnu ciklizaciju brojnih peptidnih petlji na sintetičke skele za strukturalnu mimikriju proteinskih površina (Timmerman et al. (2005), ChemBio-Chem). Postupci za dobijanje jedinjenja kandidata leka pri čemu su pomenuta jedinjenja dobijena spajanjem polipeptida koji sadrže cistein za molekularnu skelu kao što je na primer TATA (1,1’,1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on, Heinis et al. Angew Chem, Int Ed.2014; 53:1602-1606).
[0005] Kombinatorni pristupi zasnovani na fagnom prikazu razvijeni su za generisanje i skrining velikih biblioteka bicikličnih peptida za mete od interesa (Heinis et al. (2009), Nat Chem Biol 5 (7), 502-7 i WO 2009/098450). Ukratko, kombinatorne biblioteke linearnih peptida koji sadrže tri cisteinska ostatka i dva regiona od šest nasumičnih aminokiselina (Cys-(Xaa)6-Cys-(Xaa)6-Cys) su prikazane na fagu i ciklizovane kovalentnim povezivanjem bočnih lanaca cisteina sa skelama malih molekula. Chen et al. (2014) Angewandte Chemie 53(6), 1602-1606 prikazuje peptidne ligande koji su stabilizovani malim molekulima. WO 2016/067035 prikazuje polipeptide koji su kovalentno vezani za molekularne skele tako da dve ili više peptidnih petlji su savijene između tačaka vezivanja za skelu, naročito, peptide koji se visokim afinitetom vezuju za metaloproteaze membrane tipa 1 (MT1-MMP).
SUŠTINA PRONALASKA
[0006] Prema prvom aspektu pronalaska, u kome je obezbeđen peptidni ligand koji je specifičan za Nektin-4 koji sadrži polipeptid koji se sastoji iz najmanje tri cisteinska ostatka, razdvojena sa najmanje dve sekvence petlji, i molekularnom skelom koja obrazuje kovalentne veze sa cisteinskim ostacima polipeptida tako da sennajmanje dve polipeptidne petlje obrazuju na molekularnoj skeli, pri čemu peptidni ligand sadrži aminokiselinsku sekvencu: CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; gde 1Nal predstavlja 1-naftilalanin, HArg predstavlja homoarginin, HyP predstavlja hidroksiprolin i Ci, Ciii Ciiipredstavljaju prvi, drugi i treći cisteinski ostatak, redom.
[0007] Prema daljem aspektu pronalaska, obezbeđen je konjugat leka koji se sastoji iz peptidnog liganda kao što je ovde definisan koji je konjugovan sa jednim ili više efektorskih i/ili funkcionalnih grupa.
[0008] Prema daljem aspektu pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja se sastoji iz peptidnog liganda ili konjugata leka kao što je ovde definisan u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.
[0009] Prema daljem aspektu pronalaska, obezbeđen je konjugat leka kao što je ovde definisan za upotrebu u prevenciji, suprimiranju ili lečenju bolesti ili poremećaja posredovanih Nektinom-4.
[0010] Prema daljem aspektu pronalaska, obezbeđen je konjugat leka kao što je ovde definisan za upotrebu u prevenciji, suprimiranju ili lečenju kancera kod pacijenta koji je identifikovan da ima povećani broj varijacija u broju kopija (copy number variation) (CNV) Nektina-4.
KRATAK OPIS SLIKA NACRTA
[0011] Gde su prisutni na slikama, stubići (trake) grešaka predstavljaju standardnu grešku srednje vrednosti (SEM).
Slike 1 i 2: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim BALB/c nude miševima koji nose NCI-H292 ksenotransplantat.
Slike 3 i 4: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim CB17-SCID miševima koji nose HT-1376 ksenotransplantat.
Slika 5: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose Panc2.13 ksenotransplantat.
Slika 6: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose MDA-MB-468 ksenotransplantat.
Slika 7: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8549 (sa BCY8245 kao kontrolom), ženskim BALB/c nude miševima koji nose NCI-H292 ksenotransplantat.
Slika 8: Strategija gating za Nektin-4 u dojci (T-47D i MDA-MB-468).
Slika 9: Strategija gating za Nektin-4 u NCI-H292 i NCI-H322.
Slike 10 i 11: Strategija gating za Nektin-4 u NCI-H526 i HT1080, redom.
Slike 12-16: Strategija gating za Nektin-4 kod kancera bešike (HT1376; Slika 12), kancera dojke (MDA-MB-468; Slika 13), kolorektalnog kancera (HT-29; Slika 14A i HCT-116; Slika 14B), kancera pluća (A549; Slika 15A, NCI-H292; Slika 15B, NCI-H358; Slika 15C i NCI-526; Slika 15D), i kancera pankreasa (Panc02.13; Slika 16), redom.
Slika 17: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose A549 ksenotransplantat.
Slika 18: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose HCT116 ksenotransplantat.
Slika 19: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim CB17-SCID miševima koji nose HT-1376 ksenotransplantat.
Slika 20: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose MDA-MB-468 ksenotransplantat.
Slika 21: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose NCI-H292 ksenotransplantat.
Slika 22: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose NCI-H526 ksenotransplantat.
Slika 23: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ženskim Balb/c nude miševima koji nose Panc2.13 ksenotransplantat.
Slika 24: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 ili BCY8245 u kombinaciji sa BCY8234 ženskim Balb/c nude miševima koji nose MDA-MB-468 ksenotransplantat.
Slika 25: Tragovi zapremine tumora nakon primene BCY8245 pojedinačno ili BCY8245 u kombinaciji sa BCY8234 ženskim Balb/c nude miševima koji nose MDA-MB-468 ksenotransplantat.
Slike 26-31: Tragovi zapremine tumora u Lu-01-0412, LU-01-0007, CTG-1771, CTG-1171, CTG-1106, i CTG-0896 PDX ksenotransplantatima.
Slika 32: BT8009 (tj. BCY8245) u efikasnoj je korelaciji sa ekspresijom CDX/PDX ksenotransplantata. Ksenotransplantati sa malo/bez ekspresije Nektina-4 pokazuju smanjenu brzinu rasta tumora. Ksenotransplantati koji eksprimiraju Nektin-4 pokazuju regresije tumora. Oba modela PDX i CDX su obuhvaćena ovom analizom, vrednosti su prikupljene iz različitih izveštaja.
Slika 33: MDA-MB-468 ćelije eksprimiraju Nektin-4 i pokazuju produženo zadržavanje MMAE u tumoru.
Slika 34: HCS – Analiza podataka na MDA-MB-468 ćelijskoj liniji.
DETALJAN OPIS PRONALASKA
[0012] U jednom izvođenju, peptidni ligand CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od:
[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8234);
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8122);
Ac-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8126);
(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8116);
Fluorescein-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8205); i
[PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8846).
[0013] U daljem izvođenju, peptidni ligand CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od:
[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8234);
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8122);
Ac-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8126);
(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8116); i
Fluorescein-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8205).
[0014] U još daljem izvođenju, peptidni ligand CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od:
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8122);
Ac-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8126); i
(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8116).
[0015] Podaci su ovde prikazani u Tabeli 2 koja pokazuje da peptidni ligandi iz ovog izvođenja ispoljavaju odlične nivoe vezivanja za humani Nektin-4 o čemu svedoče podaci SPR vezivanja.
[0016] U još daljem izvođenju, peptidni ligand CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od:
Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8122); i
Ac-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8126).
[0017] Podaci su ovde prikazani u Tabeli 1 koja pokazuje da peptidni ligandi iz ovog izvođenja ispoljavaju odlične nivoe vezivanja za humani Nektin-4 o čemu svedoče podaci vezivanja podataka kompetitivnog vezivanja.
[0018] U još daljem izvođenju, peptidni ligand CiP[1Nal][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od:
[B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (dalje ovde označena kao BCY8234).
Podaci ovde predstavljeni u Tabeli 3 koja pokazuje da peptidni ligandi iz ovog izvođenja kada se spoje sa citotoksičnim agensom ispoljavaju odlične nivoe (< 10 nM) vezivanja za humani Nektin-4 o čemu svedoče podaci podaci SPR vezivanja.
[0019] U jednom izvođenju, molekularna skela je 1,1’,1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on (TATA).
[0020] Osim ukoliko nije drugačije definisano, svi ovde korišćeni tehnički i naučni termini imaju isto značenje kao što to uobičajno razumeju osobe koje su uobičajeno verzirane u stanje tehnike, kao što su oblasti tehnike hemije peptida, kulture ćelija i fagnog prikaza, hemije i biohemije nukleinskih kiselina. Korišćene su standardne tehnike za molekularnu biologiju, genetički i biohemijski postupci (videti Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 3rd ed., 2001, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY; Ausubel et al., Short Protocols in Molecular Biology (1999) 4th ed., John Wiley & Sons, Inc.).
Nomenklatura
Numeracija
[0021] Kada se odnose na položaje aminokiselinskih ostataka unutar peptida iz pronalaska, cisteinski ostaci (Ci, Ciii Ciii) su izostavljeni iz numeracije s obzirom na to da su nepromenjivi, prema tome, numeracija aminokiselinskih ostataka unutar peptida iz pronalaska se navodi kao što je prikazano u tekstu ispod:
Ci-P1-[1Nal]2-[dD]3-Cii-M4-[HArg]5-D6-W7-S8-T9-P10-[HyP]11-W12-Ciii(SEQ ID NO: 1)
[0022] Za svrhu ovog pronalaska, pretpostavlja se da su svi biciklični peptidi ciklizovani sa 1,1’,1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-an-1-onom (TATA) i dajući tri-supstituisanu strukturu. Ciklizacija sa TATA se dešava na Ci, Cii, i Ciii.
Molekularni Format
[0023] N-ili C terminalne ekstenzije sekvence jezgra bicikla se dodaju na levoj ili desnoj strani sekvence, odvojene crticom. Na primer, N terminalni βAla-Sar10-Ala rep bio bi označen kao:
βAla-Sar10-A-(SEQ ID NO: X).
Inverzne sekvence peptida
[0024] U smislu prikaza Nair et al (2003) J Immunol 170(3), 1362-1373, predviđeno je da ovde prikazane peptidne sekvence takođe mogu biti korisne u njihovom retro-inverzo obliku. Na primer, sekvenca je obrnuta (tj. N-kraj postaje C-kraj i obrnuto) i njihova stehiometrija je na sličan način takođe obrnuta (tj. D-aminokiseline postaju L-aminokiseline i obrnuto).
Peptidni Ligandi
[0025] Peptidni ligand, kao što je ovde označen, se odnosi na peptid koji je kovalentno vezan za molekularnu skelu. Obično, takvi peptidi sadrže dve ili više reaktivnih grupa (tj. cisteinski ostaci) koji su sposobni da obrazuju kovalentne veze sa skelom, i sekvenca koja je raspoređena između pomenutih reaktivnih grupa koja je označena kao sekvenca petlje, s obzirom na to da obrazuje petlju kada se peptid veže za skelu. U predmetnom slučaju, peptidi sadrže najmanje tri cisteinska ostatka (ovde označena kao Ci, Ciii Ciii), i obrazuju najmanje dve petlje na skeli.
Prednosti peptidnih liganada
[0026] Određeni biciklični peptidi iz predmetnog pronalaska imaju brojna korisna svojstva koji im omogućavaju da se smatraju pogodnim molekulima sličnim leku za primenu injekcijom, inhalacijom, nazalnim, očnom, oralnom ili lokalnom primenom. Takva korisna svojstva obuhvataju:
- Unakrsnu reaktivnost vrsta. Ovo je tipičan zahtev za prekliničke farmakodinamike i farmakokinetičku procenu;
- Proteaznu stabilnost. Biciklični peptidni ligandi idealno treba da pokažu stabilnost na protease iz plazme, epitelne ("usiderene u membranu") proteaze, protease želuca i creva, površinske protease pluća, intracelularne protease i slično. Stabilnost proteaze treba održavati između različitih vrsta tako da glavni kandidat bicikla može da se razvije u životinjskim modelima kao i da se primenjuje sa poverenjem ljudima;
- Poželjan profil rastvorljivosti. Ovo je funkcija proporcije naelektrisanih i hidrofilnih naspram hidrofobnih ostataka i intra/inter-molekularnog H-vezivanja, što je važno za formulaciju i apsorpciju;
- Optimalni polu-život plazme u cirkulaciji. U zavisnosti od kliničke indikacije i režima tretmana, može biti potrebno da se razvije biciklični peptid za kratko izlaganje u okruženju za lečenje akutne bolesti, ili da se razvije biciklični peptid sa pojačanim zadržavanjem u cirkulaciji, i stoga je optimalan za upravljanje više hroničnih bolesnih stanja. Drugi faktori koji pokreću željeni poluživot u plazmi su zahtevi za kontinuiranoj izloženosti za maksimalnu terapijsku efikasnost u odnosu na prateću toksikologiju zbog produžene izloženosti agensu; i
- Selekivnost. Određeni peptidni ligandi iz pronalaska pokazuju dobru selektivnost u odnosu na druge nektine.
Farmaceutski prihvatljive soli
[0027] Razume se da su oblici soli obuvaćeni obimom predmetnog pronalaska, i reference na peptidne ligande uključuju oblike soli pomenutih liganada.
[0028] Soli iz predmetnog pronalaska mogu se sintetisati iz roditeljskog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiselinski ostatak korišćenjem konvencionalnih hemijskih postupaka kao što su postupci koji su opisani u Pharmaceutical Salts: Properties, Selection, and Use, P. Heinrich Stahl (Editor), Camille G. Wermuth (Editor), ISBN: 3-90639-026-8, Hardcover, 388 pages, August 2002. Generalno, takve soli se mogu dobiti reakcijom slobodnih kiselinskih ili baznih oblika ovih jedinjenja sa odgovarajućom bazom ili kiselinom u vodi ili u organskom rastvaraču, ili u smeši ova dva.
[0029] Kisele adicione soli (mono- ili di-solu) mogu se obrazovati sa širokim spektrom kiselina, i neorganskim i organskim. Primeri kiselih adicionih soli uključuju mono- ili di-soli koje se obrazuju sa kiselinom koja je odabrana iz grupe koju čine sirćetna, 2,2-dihlorosirćetna, adipinska, alginska, askorbinska (npr. L-askorbinska), L-asparaginska, benzensulfonska, benzojeva, 4-acetamido benzojeva, butanska, (+) kamforna, kamfor-sulfonska, (+)-(1S)-kamfor-10-sulfonska, kaprinska, kapronska, kaprilna, cinaminska, limunska, ciklaminska, dodecilsumporna, etan-1,2-disulfonska, etansulfonska, 2-hidroksietansulfonska, mravlja, fumarna, galaktarna, gentisinska kiselina, glukoheptonska, D-glukonska, glukuronska (npr. D-glukuronska), glutaminska (npr. L-glutaminska), αoksoglutarna, glikolna, hipurinska, halogenovodonične kiseline (npr. bromovodonična, hlorovodonična, jodovodonična), izetionska, mlečna (npr. (+)-L-mlečna, (±)-DL mlečna), laktobionska, maleinska, jabučna, (-)-L-jabučna, malonska, (±)-DL-bademova, metansulfonska, naftalen-2-sulfonska, naftalen-1,5-disulfonska, 1-hidroksi-2-naftoična, nikotinska, azotna, oleinska, orotska, oksalna, palmitinska, pamoična, fosforna, propanska, piruvinska, L-piroglutaminska, salicilna, 4-aminosalicilna, sebacinska, stearinska, sukcinska, sumporna, taninska, (+)-L-vinska, tiocijanska, ptoluensulfonska, undecilenska i valerijanska kiselina, kao i acilovane aminokiseline i katjonske izmenjivačke smole.
[0030] Jedna posebna grupa soli sastoji se iz soli koje se dobijaju iz sirćetne, hlorovodonične, jodovodonične, fosforne, azotne, sumporne, limunske, mlečne, sukcinske, maleinske, jabučne, izetionske, fumarne, benzensulfonske, toluensulfonske, sumporne, metansulfonske (mezilat), etansulfonske, naftalen-sulfonske, valerijanske, propanske, butanske, malonske, glukuronske i laktobionske kiseline. Jedna posebna so je hlorovodonična so. Druga posebna so je acetatna so.
[0031] Ukoliko je jedinjenje anjonsko, ili ima funkcionalnu grupu koja može biti anjonska (npr., -COOH može biti -COO-), zatim se može obrazovati so sa organskom ili neorganskom bazom, stvarajući pogodan katjon. Primeri pogodnih neorganskih katjona obuhvataju, ali nisu ograničeni na, jone alkalnih metala kao što su Li<+>, Na<+>i K<+>, katjone zemnoalkalnih metala kao što su Ca<2+>i Mg<2+>, i drugi katjoni kao što su Al<3+>ili Zn<+>. Primeri pogodnih organskih katjona uključuju, ali nisu ograničeni na, amonijum jon (tj., NH<4+>) i supstituisane amonijumove jone (npr., NH3R<+>, NH2R<2+>, NHR<3+>, NR<4+>). Primeri nekih pogodnih supstituisanih amonijumovih jona su oni koji se dobijaju od: metilamina, etilamina, dietilamina, propilamina, dicikloheksilamina, trietilamina, butilamina, etilendiamina, etanolamina, dietanolamina, piperazina, benzilamina, fenilbenzilamina, holina, meglumina, i trometamina, kao i aminokiselina, kao što su lizin i arginin. Primer uobičajenog kvaternarnog amonijumovog jona je N(CH3)<4+>.
[0032] Gde peptidi iz pronalaska sadrže funkciju amina, oni mogu obrazovati kvaternarne amonijumove soli, na primer reakcijom sa agensom za alkilovanje prema postupcima koji su dobro poznati stručnjaku iz oblasti tehnike. Takva jedinjenja kvaternarnog amonijuma su obuhvaćena obimom pronalaska.
Modifikovani derivati
[0033] Biće jasno da su modifikovani derivati peptidnih liganada kao što je ovde definisano obuhvaćeni obimom predmetnog pronalaska. Primeri takvih pogodnih modifikovanih derivata uključuju jednu ili više modifikacija koje su izabrane od: modifikacija N-kraja i/ili C-kraja; zamena jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više neprirodnih aminokiselinskih ostataka (kao što je zamena jednog ili više polarnih aminokiselinskih ostataka sa jednom ili više izosteričnih ili izoelektričnih aminokiselina; zamena jedne ili više nepolarnih aminokiselinskih ostataka sa drugim neprirodnim izosteričnim ili izoelektričnim aminokiselinama); dodavanje grupe za odvajanje; zamena jednog ili više aminokiselinskih ostataka koji su osetljivi na oksidaciju sa jednim ili više aminokiselinskih ostataka otpornih na oksidaciju; zamena jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa alaninom, zamena jednog ili više L-aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više D-aminokiselinskih ostataka; N-alkilacija jedne ili više amidnih veza unutar bicikličnog peptidnog liganda; zamena jedne ili više peptidnih veza surogatnom vezom; modifikacija dužine okosnice peptida; supstitucija vodonika na alfa-ugljeniku jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa drugom hemijskom grupom, modifikacija aminokiselina sa cisteinom, lizinom, glutamatom/aspartatom i tirozinom sa pogodnim aminom, tiolom, karboksilnom kiselinom i fenol-reaktivnim reagensima za funkcionalizaciju pomenutih aminokiselina, i uvođenjem ili zamenom aminokiselina koje uvode ortogonalne reaktivnosti koje su pogodne za funkcionalizaciju, na primer aminokiseline koje nose azid ili alkin-grupu koje omogućavaju funkcionalizaciju sa alkinom ili ostacima koji nose azid, tim redom.
[0034] U jednom izvođenju, modifikovani derivat sadrži modifikaciju N-kraja i/ili C-kraja. U daljem izvođenju, u kome modifikovani derivat sadrži modifikaciju N-kraja korišćenjem pogodne aminoreaktivne hemije, i/ili modifikaciju C-kraja korišćenjem pogodne karboksi-reaktivne hemije. U daljem izvođenju, pomenuta modifikacija N-kraja ili C-kraja sadrži dodavanje efektorske grupe, uključujući ali nije ograničeno na citotoksični agens, radiohelator ili hromoforu.
[0035] U daljem izvođenju, modifikovani derivat sadrži modifikaciju N-kraja. U daljem izvođenju, modifikacija N-kraja sadrži acetilnu grupu na N-kraju. U ovom izvođenju, cisteinska grupa na N-kraju (grupa koja je ovde označena sa Ci) zatvorena je sa anhidridom sirćetne kiseline ili drugim odgovarajućim reagensima tokom sinteze peptida što dovodi do molekula koji je acetilovan na N-kraju. Ovo izvođenje obezbeđuje prednost u uklanjanju potencijalne tačke prepoznavanja za aminopeptidaze i izbegava potencijal za degradaciju bicikličnog peptida.
[0036] U alternativnom izvođenju, modifikacija N-kraja obuhvata dodavanje molekularne grupe za povezivanje koja olakšava spajanje efektorskih grupa i zadržavanje potencije bicikličnog peptida prema njegovoj meti.
[0037] U daljem izvođenju, modifikovani derivat sadrži modifikaciju C-kraja. U daljem izvođenju, modifikacija C-kraja sadrži amidnu grupu. U ovom izvođenju, cisteinska grupa C-kraja (grupa koja je ovde označena sa Ciii) sintetisana je kao amid tokom sinteze peptida što dovodi do molekula koji je amidiran na C-kraju. Ovo izvođenje daje prednost u uklanjanju potencijalne tačke prepoznavanja za karboksipeptidazu i smanjuje potencijal za proteolitičku degradaciju bicikličnog peptida.
[0038] U jednom izvođenju, modifikovani derivat sadrži zamenu jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više neprirodnih aminokiselinskih ostataka. U ovom izvođenju, neprirodne aminokiseline mogu da se izaberu sa izosteričnim/izoelektričnim bočnim lancima koji nisu prepoznati od strane degradirajućih proteaza niti imaju bilo koji neželjni efekat na ciljnu potenciju.
[0039] Alternativno, mogu se koristiti neprirodne aminokiseline koje imaju ograničene bočne lance aminokiselina, tako da je proteolitička hidroliza bliske peptidne veze konformaciono i sterno sprečena. Posebno, ovo se odnosi na analoge prolina, glomazne bočne lance, Cα-disubstituisane derivate (na primer, aminoizobuternu kiselinu, Aib), i ciklo aminokiselne, pri čemu je jednostavan derivat aminociklopropilkarboksilna kiselina.
[0040] U jednom izvođenju, modifikovani derivat sadrži dodavanje grupe za odvajanje (spacer group). U daljem izvođenju, modifikovani derivat sadrži dodavanje grupe za odvajanje cisteinu N-kraja (Ci) i/ili cisteinu C-kraja (Ciii).
[0041] U jednom izvođenju, modifikovani derivat sadrži zamenu jednog ili više aminokiselinskih ostataka ostetljivog na oksidaciju sa jednim ili više aminokiselinskih ostataka otpornih na oksidaciju.
[0042] U jednom izvođenju, modifikovani derivat sadrži supstituciju jednog ili više aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više hidrofobnih aminokiselinskih ostataka. U alternativnom izvođenju, modifikovani derivat sadrži zamenu jednog ili više hidrofobnih aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više naelektrisanih aminokiselinskih ostataka. Pravilna ravnoteža naelektrisanih prema hidrofobnim aminokiselinskim ostacima važna je karakteristika bicikličnih peptidnih liganada. Na primer, hidrofobni aminokiselinski ostaci utiču na stepen vezivanja za proteine plazme i stoga na koncentraciju slobodne dostupne frakcije u plazmi, dok naelektrisani aminokiselinski ostaci (naročito arginin) mogu uticati na interakciju peptida sa fosfolipidnim membranama na ćelijskim površinama. Ova dva u kombinaciji mogu uticati na poluživot, zapreminu distribucije i izloženost peptidnom leku, i mogu se prilagoditi prema kliničkoj krajnjoj tački. Dodatno, ispravna kombinacija i broj naelektrisanih u odnosu na hidrofobne aminokiselinske ostatke mogu smanjiti iritaciju na mestu injekcije (ukoliko je peptidni lek subkutano primenjen).
[0043] U jednom izvođenju, modifikovani derivat sadrži zamenu jednog ili više L-aminokiselinskih ostataka sa jednim ili više D-aminokiselinskih ostataka. Veruje se da ovo izvođenje povećava proteolitičku stabilnost sternom smetnjom i sklonosti D-aminokiselina da stabilizuju konformacije βokreta (Tugyi et al (2005) PNAS, 102(2), 413-418).
[0044] U jednom izvođenju, modifikovani derivat obuhvata uklanjanje bilo kojih aminokiselinskih ostataka i supstituciju sa alaninima. Ovo izvođenje obezbeđuje prednost uklanjanja potencijalnih mesta proteolitičkih napada.
[0045] Treba napomenuti da svaka od gore navedenih modifikacija služi za namerno poboljšanje potencije ili stabilnosti peptida. Dalja poboljšanja potencije zasnovana na modifikacijama mogu se postići kroz sledeće mehanizme:
- Uključivanje hidrofobnih ostataka koji iskorišćavaju hidrofobni efekat i dovode do snižavanja brzina tako da se postižu veći afiniteti;
- Uključivanje naelektrisanih grupa koje iskorišćavaju jonske interakcije dugog dometa, što dovodi do ubrzavanja brzine i do većih afiniteta (videti na primer Schreiber et al, Rapid, electrostatically assisted association of proteins (1996), Nature Struct. Biol.3, 427-31); i
- Uključivanje dodatnog ograničenja u peptid, na primer pravilnim ograničavanjem bočnih lanaca aminokiselina tako da je gubitak entropije minimalan nakon vezivanja za cilj, ograničavanjem torzionih uglova okosnice tako da je nakon vezivanja za cilj gubitak u entropiji minimalan i uvođenjem dodatnih ciklizacija u molekul iz identičnih razloga.
(za preglede videti Gentilucci et al, Curr. Pharmaceutical Design, (2010), 16, 3185-203, i Nestor et al, Curr. Medicinal Chem (2009), 16, 4399-418).
Izotopske varijacije
[0046] Predmetni pronalazak obuhvata sve farmaceutski prihvatljive (radio)izotopom-obeležene peptidne ligande iz pronalaska, što je jedan ili više atoma je zamenjeno atomima koji imaju isti atomski broj, ali atomsku masu ili maseni broj koji se razlikuje od atomske mase ili masenog broja koji se obično nalazi u prirodi, i peptidne ligande iz pronalaska, gde su vezane metalne helatne grupe (nazvane "efektor") koje su sposobne da drže relevantne (radio)izotope, i peptidne ligande iz pronalaska, što određene funkcionalne grupe su kovalentno zamenjene sa relevantnim (radio)izotopima ili izotopom obeleženim funkcionalnim grupama.
[0047] Primeri izotopa koji su pogodni za uključivanje u peptidne ligande iz pronalaska obuhvataju izotope vodonika, kao što su<2>H (D) i<3>H (T), ugljenik, kao što je<11>C,<13>C i<14>C, hlora, kao što je<36>Cl, fluora, kao što je<18>F, joda, kao što je<123>I,<125>I i<131>I, azota, kao što su<13>N i<15>N, kiseonika, kao što su<15>O,<17>O i<18>O, fosfora, kao što je<32>P, sumpora, kao što je<35>S, bakra, kao što je<64>Cu, galijuma, kao što su<67>Ga ili<68>Ga, itrijuma, kao što su<90>Y i lutecijuma, kao što je<177>Lu, i bizmuta, kao što je<213>Bi.
[0048] Određeni izotopom-obeleženi peptidni ligandi iz pronalaska, na primer, onih koji uključuju radioaktivni izotop, korisni su u studijama distribucije leka i/ili supstrata u tkivima, i za kliničku procenu prisustva i/ili odsustva mete Nektina-4 na obolelim tkivima. Peptidni ligandi iz pronalaska mogu dalje da imaju važna dijagnostička svojstva u tome što se mogu koristiti za detekciju ili identifikovanju obrazovanja kompleksa između obeleženog jedinjenja i drugih molekula, peptida, proteina, enzima ili receptora. Postupci za detekciju ili identifikovanje mogu koristiti jedinjenja koja su obeležena sa agensima za obeležavanje kao što su radioizotopi, enzimi, fluorescentne supstance, luminozne supstance (na primer, luminol, derivate luminola, luciferin, ekvorin i luciferaza), itd. Radioaktivni izotopi tricijuma, tj.<3>H (T), i ugljenika-14, tj.<14>C, su naročito korisni za ovu svrhu s obzirom na lakoću njihove ugradnje i spremna sredstva za detekciju.
[0049] Supstitucija sa težim izotopima kao što su deuterijum, tj.<2>H (D), može da pruži određene terapeutske prednosti koje su rezultat veće metaboličke stabilnosti, na primer, produženi in vivo poluživot ili smanjene zahteve za dozom, i stoga mogu biti poželjni u nekim slučajevima.
[0050] Supstitucija sa izotopima koji emituju pozitron, kao što je<11>C,<18>F,<15>O i<13>N, može biti korisna u u studijama pozitronske emisione topografije (PET) za ispitivanje zauzetosti mete.
[0051] Izotopom-obeležena jedinjenja peptidnih jedinjenja iz pronalaska se generalno mogu pripremiti konvencionalnim tehnikama poznatim stručnjacima iz oblasti tehnike ili postupcima analognim onim koji se opisuju u pridruženim Primerima korišćenjem odgovarajućeg izotopomobeleženog reagensa umesto ranije korišćenog neobeleženog reagensa.
Molekularne skele
[0052] U jednom izvođenju, molekularna skela sadrži neromatičnu molekularnu skelu. Ovde navedene reference na "nearomatičnu molekularnu skelu" se odnose na bilo koju molekularnu skelu kao što je ovde definisano koja ne sadrži aromatični (tj. nezasićeni) karbociklični ili heterociklični sistem prstena.
[0053] Pogodni primeri nearomatičnih molekularnih skela su opisani u Heinis et al (2014) Angewandte Chemie, International Edition 53(6) 1602-1606.
1
[0054] Kao što je navedeno u prethodnim dokumentima, molekularna skela može biti mali molekul, kao što je mali organski molekul.
[0055] U jednom izvođenju molekularna skela može biti makromolekul. U jednom izvođenju molekularna skela je makromolekul koji se sastoji iz aminokiselina, nukleotida ili ugljenih hidrata.
[0056] U jednom izvođenju molekularna skela sadrži reaktivne grupe koje su sposobne da reaguju sa funkcionalnim grup(a)ma polipeptida da se obrazuju kovalentne veze.
[0057] Molekularna skela može sadržati hemijske grupe koje obrazuju vezu sa peptidom, kao što su amini, tioli, alkoholi, ketoni, aldehidi, nitrili, karboksilne kiseline, estri, alkeni, alkini, azidi, anhidridi, sukcinimidi, maleimidi, alkil halogenidi i acil halogenidi.
[0058] Primer αβ nezasićenog karbonila koji sadrži jedinjenje je 1,1’,1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-on (TATA) (Angewandte Chemie, International Edition (2014), 53(6), 1602-1606).
Efektorske i funkcionalne grupe
[0059] Prema daljem aspektu iz pronalaska, obezbeđen je konjugat leka koji se sastoji iz peptidnog liganda kao što je ovde definisan konjugovan sa jednim ili više efektorskih i/ili funkcionalnih grupa.
[0060] Efektorske i/ili funkcionalne grupe mogu biti vezane, na primer, za N i/ili C krajeve polipeptida, za aminokiselinu unutar polipeptida, ili za molekularnu skelu.
[0061] Odgovarajuće efektorske grupe obuhvataju antitela i njihove delove ili fragmente. Na primer, efektorska grupa može uključiti konstantni region lakog lanca antitela (CL), domen CH1 teškog lanca antitela, domen CH2 teškog lanca antitela, domen CH3 teškog lanca antitela, ili bilo koju njihovu kombinaciju, pored jednog ili više domena konstantnih regiona. Efektorska grupa može takođe da obuhvati zglobni region antitela (takav region se obično nalazi između domena CH1 i CH2 molekula IgG).
[0062] U daljem izvođenju ovog aspekta pronalaska, efektorska grupa prema predmetnom pronalasku je Fc region molekula IgG. Povoljno, grupa peptidnog liganda-efektora prema predmetnom pronalasku sadrži ili se sastoji od fuzije peptidnog liganda Fc koji ima tβ poluživot od jednog dana ili više, dva dana ili više, 3 dana ili više, 4 dana ili više, 5 dana ili više, 6 dana ili više ili 7 dana ili više. Najpovoljnije, peptidni ligand prema predmetnom pronalasku sadrži ili se sastoji od fuzije peptidnog liganda Fc koji ima tβ polu-život od jednog dana ili više.
[0063] Funkcionalne grupe obuhvataju, uopšteno, grupe za vezivanje, lekove, reaktivne grupe za vezivanje drugih entiteta, funkcionalne grupe koje pomažu u preuzimanju makrocikličnih peptida u ćelije, i slično.
[0064] Sposobnost peptida da prodru u ćelije omogućiće efikasnost peptida protiv intracelularnih meta. Mete kojima peptidi sa sposobnošću da prodru u ćelije mogu pristupiti uključuju faktore transkripcije, molekule unutarćelijske signalizacije kao što su tirozin kinaze i molekuli uključeni u put apoptoze. Funkcionalne grupe koje omogućavaju prodiranje u ćelije uključuju peptide ili hemijske grupe koje se dodaju ili na peptid ili molekularnu skelu. Peptidi kao što su oni koji se dobijaju iz kao što je VP22, HIV-Tat, homeobox protein Drosophila (Antennapedia), npr. kao što je opisano u Chen and Harrison, Biochemical Society Transactions (2007) Tom 35, deo 4, p821; Gupta et al. in Advanced Drug Discovery Reviews (2004) Tom 579637. Primeri kratkih peptida za koje je pokazano da su efikasni u translokaciji kroz plazma membrane uključuju peptid penetratin od 16 aminokiseina iz proteina Drosophila Antennapedia (Derossi et al (1994) J Biol. Chem. Tom 269 p10444), ’model amfipatičnog peptida’ od 18 aminokiselina (Oehlke et al (1998) Biochim Biophys Acts Tom 1414 p127) i regione HIV TAT proteina koji su bogati arininom. Nepeptidni pristupi uključuju upotrebu malih molekula imitatora ili SMOCs koji se lako mogu vezati za biomolekule (Okuyama et al (2007) Nature Methods Tom 4 p153). Druge hemijske strategije za dodavanje gvanidinijum grupa na molekule takođe poboljšavaju prodiranje u ćelije (Elson-Scwab et al (2007) J Biol Chem Tom 282 p13585). Molekuli male molekulske težine kao što su steroidi mogu se dodati molekularnim skelama da bi se poboljšalo unošenje u ćelije.
[0065] Jedna klasa funkcionalnih grupa koje mogu biti vezane za peptidne ligande uključuju antitela i i njihove fragmente za vezivanje, kao što su Fab, Fv ili fragmenti jednog domena. Konkretno, mogu se koristiti antitela koja se vezuju za proteine koji mogu da povećaju poluživot peptidnog liganda in vivo.
[0066] U jednom izvođenju, peptidni ligand-efektorska grupa prema pronalasku ima tβ poluživot izabran iz grupe koju čine: 12 sati ili više, 24 sata ili više, 2 dana ili više, 3 dana ili više, 4 dana ili više, 5 dana ili više, 6 dana ili više, 7 dana ili više, 8 dana ili više, 9 dana ili više, 10 dana ili više, 11 dana ili više, 12 dana ili više, 13 dana ili više, 14 dana ili više, 15 dana ili više ili 20 dana ili više. Povoljno je da peptidni ligand-efektorska grupa ili kompozicija prema pronalasku će imati tβ poluživot u opsegu 12 do 60 sati. U daljem izvođenju, imaće tβ poluživot od jednog dana ili više. U daljem izvođenju, to će biti u opsegu od 12 do 26 sati.
[0067] U jednom posebnom izvođenju iz pronalaska, funkcionalna grupa je odabrana od helatora metala, koja je pogodna za kompleksiranje radioizotopa metala od medicinskog značaja.
[0068] Moguće efektorske grupe takođe uključuju enzime, na primer kao što je karboksipeptidaza G2 za upotrebu u terapiji enzimom/prolekom, gde peptidni ligand zamenjuje antitela u ADEPT.
[0069] U jednom posebnom izvođenju iz pronalaska, funkcionalna grupa je odabrana od leka, kao što je citotoksični agens za terapiju kancera. Pogodni primeri uključuju: alkilujuće agense kao što su cisplatin i karboplatin, kao i oksaliplatin, mehloretamin, ciklofosfamid, hlorambucil, ifosfamid; Antimetaboliti uključujući purinske analoge azatioprina i merkaptopurina ili pirimidinske analoge; biljne alkaloide i terpenoide uključujući vinka alkaloide kao što su Vinkristin, Vinblastin, Vinorelbin i Vindesin; Podofilotoksin i njegovi derovati etopozid i tenipozid; Taksani, uključujući paklitaksel, originalno poznat kao Taksol; inhibitori topoizomeraze uključujući kamptotecine: irinotekan i topotekan, i inhibitore tipa II uključujući amsakrin, etopozid, etopozid fosfat, i tenipozid. Dalji agensi mogu uključiti antibiotike protiv tumora koji uključuju imunosupresant daktinomicin (koji koristi kod transplantacija bubrega), doksorubicin, epirubicin, bleomicin, kaliheamicini, i drugi.
[0070] U jednom daljem izvođenju iz pronalaska, citotoksični agens je odabran iz majtanzinoida (kao što je DM1) ili monometil auristatina (kao što su MMAE).
[0071] DM1 je citotoksični agens koji je derivat majtanzina koji sadrži tiol i ima sledeću strukturu:
[0072] Podaci su ovde prikazani u Tabeli 3 koji pokazuju efekte peptidnog liganda spojenog sa toksinom koji sadrži DM1.
[0073] Monometil auristatin E (MMAE) je sintetički antineoplastični agens i koji ima sledeću strukturu:
[0074] Podaci su ovde prikazani u Tabeli 3 koji pokazuju efekte peptidnih liganada spojenih sa toksinom koji sadrži MMAE.
[0075] U još jednom posebnom izvođenju iz pronalaska, citotoksični agens je odabran od monometil auristatina E (MMAE).
[0076] U jednom izvođenju, citotoksični agens je vezan za biciklični peptid vezom koja se može cepati, kao što je disulfidna veza ili veza osetljiva na proteazu. U daljem izvođenju, grupe koje su susedne disulfidnoj vezi su modifikovane da kontrolišu smetnje disulfidne veze, a time i brzinu cepanja i istovremeno cepanje citotoksičnog agensa.
[0077] Objavljeni rad je uspostavio potencijal za modifikaciju podložnosti disulfidne veze redukciji uvođenjem sterične smetnje sa obe strane disulfidne veze (Kellogg et al (2011) Bioconjugate Chemistry, 22, 717). Veći stepen sterične smetnje smanjuje brzinu redukcije intracelularnim glutationom i takođe ekstracelularnim (sistemskim) redukcionim agensima, posledično smanjujući lakoću kojom se toksin oslobađa, kako unutar tako i van ćelije. Prema tome, odabir optimalne stabilnosti disulfida u cirkulaciji (koji minimizira neželjene sporedne efekte toksina) naspram efikasnog oslobađanja u intracelularnom miljeu (koje maksimizira terapeutski efekat) može se postići pažljivim odabirom stepena smetnji na bilo kojoj strani disulfidne veze.
[0078] Smetnja sa obe strane disulfidne veze je modulisana uvođenjem jedne ili više metil grupa ili na ciljni entitet (ovde, biciklični peptid) ili na strani toksina konstrukta molekula.
[0079] U jednom izvođenju, citotoksični agens i linker se biraju od bilo kojih kombinacija od onih koje se opisuju u WO 2016/067035.
[0080] U jednom izvođenju, linker između pomenutog citotoksičnog agensa i pomenutog bicikličnog peptida sadrži jedan ili više aminokiselinskih ostataka. Primeri pogodnih aminokiselinskih ostataka kao pogodnih linkera uključuju Ala, Cit, Lys, Trp i Val.
[0081] U jednom izvođenju, citotoksični agens je odabran od MMAE i pomenuti konjugat leka dodatno sadrži linker koji je odabran od: -PABC-Cit-Val-Glutaril- ili -PABC-ciklobutil-Ala-Cit-βAla-, gde PABC predstavlja p-aminobenzilkarbamat. Puni detalji o linkeru koji sadrže ciklobutil mogu se pronaći u Wei et al (2018) J. Med. Chem.61, 989-1000. U daljem izvođenju, citotoksični agens je odabran od MMAE a linker je -PABC-Cit-Val-Glutaril-.
1
[0082] U alternativnom izvođenju, citotoksični agens je DM1 i pomenuti konjugat leka dodatno sadrži linker koji je -SPDB-(SO3H)-, što SPDB predstavlja N-sukcinimidil 3-(2-piridilditio)propionat.
[0083] U alternativnom izvođenju, citotoksični agens je MMAE, biciklični peptid je odabran od BCY8234 kao što je ovde definisano i linker je odabran od -PABC-Cit-Val-Glutaril-. Ovaj BDC je ovde poznat kao BCY8245 i šematski je predstavljen u:
i može se detaljnije predstaviti kao:
�
[0084] Podaci koji su ovde prikazani koji pokazuju odlično vezivanje za humani Nektin-4 za BCY8245 u SPR testu vezivanja kao što je prikazano u Tabeli 3. BDC takođe je pokazao dobru aktivnost protiv tumora u modelu kancera pluća nemalih ćelija kao što je prikazano u Primeru 1, modelu kancera bešike kao što je prikazano u Primeru 2, modelu kancera pankreasa kao što je prikazano u Primeru 3 i modelu kancera dojke kao što je prikazano u Primeru 4.
[0085] U alternativnom izvođenju, citotoksični agens je MMAE, biciklični peptid je odabran od BCY8234 kao što je ovde definisano i linker je odabran od -PABC-ciklobutil-(B-Ala)-. Ovaj BDC je ovde poznat pod imenom BCY8549. Podaci koji su ovde prikazani koji pokazuju odlično vezivanje za humani Nektin-4 za BCY8549 u SPR testu vezivanja kao što je prikazano u Tabeli 3.
[0086] U daljem izvođenju, biciklični konjugat leka je odabran od BCY8245 ili BCY8549. U još daljem izvođenju, biciklični konjugat leka je BCY8245. Konjugat leka BCY8245 pokazao je superiornu aktivnost protiv tumora zavisnu od doze kao što je pokazano u ovde opisanim podacima.
Sinteza
[0087] Peptidi iz predmetnog pronalaska mogu se sintetički proizvesti standardnim postupcima nakon čega sledi reakcija sa molekularnom skelom in vitro. Kada se ovo sprovodi, može se koristiti standardna hemija. Ovo omogućava brzu pripremu velikih razmera rastvorljivog materijala za dalje nizvodne eksperimente ili validaciju. Takvi postupci se mogu postići korišćenjem konvencionalne hemije kao što je ona koja je predstavljena u Timmerman et al (supra).
[0088] Prema tome, pronalazak se takođe odnosi na proizvodnju polipeptida ili konjugata koji su odabrani kao što je ovde navedeno, pri čemu proizvodnja obuhvata po potrebi dalje korake kao što je objašnjeno ispod. U jednom izvođenju, ovi koraci se izvode na krajnjem proizvodu polipeptid/konjugat koji je napravljen hemijskom sintezom.
[0089] Opciono aminokiselinski ostaci u polipeptidu od interesa mogu biti zamenjeni kada se proizvodi konjugat ili kompleks.
[0090] Peptidi se takođe mogu proširiti, da bi se uključila na primer još jedna petlja i prema tome uvele višestruke specifičnosti.
[0091] Da bi se peptid proširio, jednostavno se može hemijski proširiti na njegovom N-kraju ili C-kraju ili unutar petlji korišćenjem ortogonalno zaštićenih lizina (i analoga) korišćenjem standardne hemije čvrste faze ili faze rastvora. Standardne tehnike (bio)konjugacije mogu se koristiti za uvođenje aktiviranog ili N- ili C-kraja koji se može aktivirati. Alternativno dodaci se mogu napraviti kondenzovanjem fragmenta ili prirodnim hemijskim spajanjem npr. kao što je opisano u (Dawson et al. 1994. Synthesis of Proteins by Native Chemical Ligation. Science 266:776-779), ili enzimima, na primer korišćenjem subtiligaze kako je opisano u (Chang et al. Proc Natl Acad Sci USA.1994 Dec 20; 91(26):12544-8 ili u Hikari et al Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters Tom 18, Izdanje 22, 15 novembar 2008, strane 6000-6003).
[0092] Alternativno, peptidi se mogu proširiti ili modifikovati daljim spajanjem preko disulfidnih veza. Ovo ima dodatnu prednost u omogućavanju prvom i drugom peptidu disociranje jedan od drugog jednom kada se nađu u redukujućem okruženju ćelije. U ovom slučaju, molekularna skela (npr. TATA) može se dodati u toku hemijske sinteze prvog peptida tako da reaguje sa tri cisteinske grupe; još jedan cisten ili tiol bi se zatim mogao dodati na N- ili C-kraj prvog peptida, tako da je ovaj cistein ili tiol reagovao samo sa slobodnim cisteinom ili tiolom drugog peptida, obrazujući disulfidno-povezan biciklični peptid-peptidni konjugat.
1
[0093] Slične tehnike se jednako primenjuju na sintezu/spajanje dva biciklična i bispecifična makromolekula, potencijalno stvarajući tetraspecifičan molekul.
[0094] Dalje, dodavanje drugih funkcionalnih grupa ili efektorskih grupa može se postići na isti način, upotrebom odgovarajuće hemije, spajanjem na N- ili C-krajevima ili preko bočnih lanaca. U jednom izvođenju, spajanje se sprovodi na takav način da ne blokira aktivnost nijednog entiteta.
Farmaceutske kompozicije
[0095] Prema daljem aspektu iz pronalaska, obezbeđena je farmaceutska kompozicija koja se sastoji iz peptidnog liganda ili konjugata leka kao što je ovde definisan u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa.
[0096] Generalno, ovi peptidni ligandi će se koristiti u prečišćenom obliku zajedno sa farmakološki odgovarajućim ekscipijensima ili nosačima. Obično, ovi ekscipijensi ili nosači obuhvataju vodene ili alkoholne/vodene rastvore, emulzije ili suspenzije, uključujući slani rastvor i/ili puferisani medij. Parenteralni nosači obuhvataju natrijum hloridni rastvor, Ringerovu dekstrozu, dekstrozu i natrijum hlorid i Ringerov laktat. Pogodni fiziološki prihvatljivi adjuvansi, ukoliko je potrebno da se polipeptidni kompleks drži u suspenziji, mogu se odabrati od sredstava za zgušnjavanje kao što su karboksimetilceluloza, polivinilpirolidon, želatin i alginati.
[0097] Intravenozni nosači obuhvataju sredstva za dopunu tečnosti i hranljivih materija i sredstva za dopunu elektrolita, kao što su ona koja su zasnovana na Ringerovoj dekstrozi. Konzervansi i drugi aditivi, kao što su antimikrobiotici, antioksidansi, helirajući agensi i inertni gasovi, mogu takođe biti prisutni (Mack (1982) Remington’s Pharmaceutical Sciences, 16th Edition).
[0098] Peptidni ligandi iz prikazanog pronalaska mogu se koristiti kao kompozicije koje se primenjuju odvojeno ili zajedno sa drugim agensima. Oni mogu uključivati antitela, fragmente antitela i različite imunoterapijske lekove, kao što je ciklosporin, metotreksat, adriamicin ili cisplatinu i imunotoksine. Farmaceutske kompozicije mogu obuhvatiti "koktel" različitih citotoksičnih ili drugih agenasa zajedno sa proteinskim ligandima predmetnog pronalaska, ili čak kombinacijama odabranih polipeptida prema prikazanom pronalasku koji imaju različite specifičnosti, kao što su polipeptidi koji su odabrani korišćenjem različitih ciljnih liganada, bilo da oni jesu ili nisu sakupljeni pre primene.
[0099] Ruta primene farmaceutskih kompozicija prema pronalasku može biti bilo koja od onih koji su kao što je opšte poznato stručnjacima iz oblasti tehnike. Za terapiju, peptidni ligandi iz pronalaska mogu se primeniti bilo kom pacijentu u skladu sa standardnim tehnikama. Primena može biti bilo kojim odgovarajućim načinom primene, uključujući parenteralni, intravenozni, intramuskularni, intraperitonealni, transdermalni, preko pluća, ili takođe, na odgovarajući način, direktnom infuzijom kateterom. Poželjno, farmaceutske kompozicije prema pronalasku će se primeniti inhalacijom. Doza i učestalost primene će zavisiti od starosti, pola i stanja pacijenta, istovremene primene drugih lekova, kontraindikacija i drugih parametara koje kliničar treba da uzme u obzir.
[0100] Peptidni ligandi iz ovog pronalaska mogu se liofilizovati za skladištenje i rekonstituisati u pogodnom nosaču pre upotrebe. Pokazalo se da je ova tehnika efikasna i mogu se koristiti tehnike liofilizacije i rekonstitucije koje su poznate iz oblasti tehnike. Stručnjak iz oblasti tehnike će razumeti da liofilizacija i rekonstitucija mogu dovesti do različitog stepena gubitka aktivnosti i ti nivoi će možda morati da se podese naviše radi kompenzovanja.
[0101] Kompozicije koje sadrže prisutne peptidne ligande ili njihov koktel mogu se davati za profilaktičke i/ili terapeutske tretmane. U određenim terapeutskim primenama, adekvatna količina za
1
postizanje bar delimične inhibicije, supresije, modulacije, ubijanja, ili nekog drugog merljivog parametra, populacije odabranih ćelija se definiše kao "terapeutski efikasna doza". Količine potrebne za postizanje ove doze zavisiće od težine bolesti i opšteg stanja pacijentovog imunog sistema, ali generalno se kreću od 0.005 do 5.0 mg odabranog peptidnog liganda po kilogramu telesne težine, sa dozama od 0.05 do 2.0 mg /kg/doze se češće koristi. Za profilaktičke primene, kompozicije koje sadrže prisutne peptidne ligande ili njihove koktele mogu se takođe primenjivati u sličnim ili nešto nižim dozama.
[0102] Kompozicija koja sadrži peptidni ligand u skladu sa ovim pronalaskom može se koristiti u profilaktičkim i terapijskim podešavanjima da bi se pomoglo u promeni, inaktivaciji, ubijanju ili uklanjanju odabrane populacije ciljnih ćelija kod sisara. Pored toga, ovde opisani peptidni ligandi mogu se koristiti ekstrakorporalno ili in vitro selektivno da ubiju, iscrpe ili na drugi način efikasno uklone ciljnu ćelijsku populaciju iz heterogene kolekcije ćelija. Krv sisara može se kombinovati ekstrakorporalno sa odabranim peptidnim ligandima pri čemu se neželjene ćelije ubijaju ili na drugi način uklanjaju iz krvi za vraćanje sisaru u skladu sa standardnim tehnikama.
Istovremena primena sa jednim ili više drugih terapeutskih agenasa
[0103] U zavisnosti od određenog stanja ili bolesti koje treba lečiti, dodatna terapeutska sredstva koja se normalno primenjuju za lečenje tog stanja, takođe mogu biti prisutna u kompozicijama iz ovog pronalaska. Prema tome, u jednom aspektu, farmaceutska kompozicija dodatno sadrži jedan ili više terapeutskih agenasa. Kako se ovde koristi, dodatni terapeutski agensi koji se normalno primenjuju za lečenje određene bolesti, ili stanja, poznati su kao "prikladni za bolest ili stanje, koje se leči".
[0104] U nekim izvođenjima, ovaj pronalazak obezbeđuje postupak lečenja otkrivene bolesti ili stanja koji se sastoji od davanja pacijentu kome je to potrebno efikasne količine ovde opisanog jedinjenja ili njegove farmaceutski prihvatljive soli i istovremenu ili uzastopnu primenu efikasnog količinu jednog ili više dodatnih terapeutskih agenasa, kao što su ona koja su ovde opisana. U nekim izvođenjima, postupak uključuje istovremeno davanje jednog dodatnog terapeutskog agensa. U nekim izvođenjima, postupak uključuje istovremeno davanje dva dodatna terapeutska sredstva. U nekim izvođenjima, kombinacija otkrivenog jedinjenja i dodatnog terapeutskog agensa ili agenasa deluje sinergistički.
[0105] Jedinjenje iz ovog pronalaska se takođe može koristiti u kombinaciji sa poznatim terapijskim procesima, na primer, primenom hormona ili zračenja. U određenim izvođenjima, obezbeđeno jedinjenje se koristi kao radiosenzibilizator, posebno za lečenje tumora koji pokazuju slabu osetljivost na terapiju zračenjem.
[0106] Jedinjenje iz ovog pronalaska može se davati samostalno ili u kombinaciji sa jednim ili više drugih terapeutskih jedinjenja, moguća kombinovana terapija u obliku fiksnih kombinacija ili primena jedinjenja pronalaska i jedno ili više drugih terapijskih jedinjenja koje se rasporede ili daju nezavisno jedan od drugog, ili kombinovano davanje fiksnih kombinacija i jednog ili više drugih terapeutskih jedinjenja. Jedinjenje iz ovog pronalaska može se pored ili dodatno davati posebno za terapiju tumora u kombinaciji sa hemoterapijom, radioterapijom, imunoterapijom, fototerapijom, hirurškom intervencijom ili kombinacijom ovih. Dugotrajna terapija je podjednako moguća kao i pomoćna terapija u kontekstu drugih strategija lečenja, kao što je gore opisano. Drugi mogući tretmani su terapija za održavanje statusa pacijenta nakon regresije tumora, ili čak hemopreventivna terapija, na primer kod pacijenata koji se nalaze u riziku.
[0107] Jedan ili više drugih terapeutskih agenasa se mogu primeniti odvojeno od jedinjenja ili kompozicije pronalaska, kao deo višestrukog režima doziranja. Alternativno, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa mogu biti deo jednog doznog oblika, pomešani zajedno sa jedinjenjem ovog
1
pronalaska u jednoj kompoziciji. Ako se primenjuje kao režim višestrukih doza, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa i jedinjenje ili kompozicija pronalaska mogu se davati istovremeno, uzastopno ili u vremenskom periodu jedno od drugog, na primer u roku od 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23 ili 24 sata jedan od drugog. U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa i jedinjenje ili kompozicija prema pronalasku se daju kao višestruki režim doziranja u razmaku od više od 24 sata.
[0108] Kako se ovde koristi, termin "kombinacija", "kombinovani" i srodni termini se odnose na istovremenu ili sekvencijalnu primenu terapeutskih sredstava u skladu sa ovim pronalaskom. Na primer, jedinjenje iz ovog pronalaska može se davati sa jednim ili više drugih terapeutskih agenasa istovremeno ili uzastopno u odvojenim jediničnim doznim oblicima ili zajedno u jednom jediničnom doznom obliku. Shodno tome, ovaj pronalazak obezbeđuje jedinični dozni oblik koji sadrži jedinjenje predmetnog pronalaska, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa i farmaceutski prihvatljiv nosač, adjuvans ili nosač.
[0109] Količina jedinjenja pronalaska i jednog ili više drugih terapeutskih agenasa (u onim kompozicijama koje sadrže dodatni terapeutski agens kao što je gore opisano) koji se mogu kombinovati sa materijalima nosača da bi se dobio jedan oblik doze razlikovaće se u zavisnosti od domaćina koji se leči i posebnog načina primene. Poželjno, kompozicija pronalaska treba da bude formulisana tako da se može primeniti doza između 0.01 - 100 mg/kg telesne težine/danu jedinjenja iz pronalaska.
[0110] U onim kompozicijama koje sadrže jedan ili više drugih terapeutskih agenasa, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa i jedinjenje iz pronalaska mogu delovati sinergistički. Prema tome, količina jednog ili više drugih terapeutskih agenasa u takvim kompozicijama može biti manja od one koja je potrebna u monoterapiji koja koristi samo taj terapeutski agens. U takvim kompozicijama može se primeniti doza između 0.01 – 1,000 µg/kg telesne težine/danu jednog ili više drugih terapeutskih agenasa.
[0111] Količina jednog ili više drugih terapeutskih agenasa prisutnih u kompozicijama ovog pronalaska ne može biti veća od količine koja bi se normalno primenila u kompoziciji koja sadrži taj terapeutski agens kao jedini aktivni agens. Poželjno, količina jednog ili više drugih terapeutskih agenasa u sada otkrivenim kompozicijama će biti u opsegu od oko 50% do 100% količine koja je normalno prisutna u kompoziciji koja sadrži taj agens kao jedini terapeutski aktivan agens. U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa se primenjuje u dozi od oko 50%, oko 55%, oko 60%, oko 65%, oko 70%, oko 75%, oko 80%, oko 85%, oko 90 %, ili oko 95% količine koja se normalno primenjuje za taj agens. Kako se ovde koristi, izraz "normalno primenjen" označava količinu terapeutskog agensa odobrenog od strane Agencije za hranu i lekove (eng. Food and Drug Administration, FDA) obezbeđenog za doziranje prema umetku na etiketi FDA.
[0112] Jedinjenja iz ovog pronalaska, ili njihove farmaceutske kompozicije, takođe mogu biti ugrađeni u kompozicije za oblaganje implantabilnog medicinskog uređaja, kao što su proteze, veštački zalisci, vaskularni transplantati, stentovi i kateteri. Vaskularni stentovi, na primer, korišćeni su za prevazilaženje restenoze (ponovno sužavanje zida krvnih sudova nakon povrede). Međutim, pacijenti koji koriste stentove ili druge implantabilne uređaje rizikuju stvaranje ugrušaka ili aktivaciju trombocita. Ovi neželjeni efekti se mogu sprečiti ili ublažiti prethodnim premazivanjem uređaja farmaceutski prihvatljivom kompozicijom koja sadrži inhibitor kinaze. Uređaji za implantaciju obloženi jedinjenjem ovog pronalaska jesu još jedno izvođenje ovog pronalaska.
1
Primeri drugih terapeutskih agenasa
[0113] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor Poli ADP riboza polimeraze (PARP). U nekim izvođenjima, PARP inhibitor je odabran od olapariba (Lynparza<®>, AstraZeneca); rukapariba (Rubraca<®>, Clovis Oncology); nirapariba (Zejula<®>, Tesaro); talazopariba (MDV3800/BMN 673/LT00673, Medivation/Pfizer/Biomarin); velipariba (ABT-888, AbbVie); i BGB-290 (BeiGene, Inc.).
[0114] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor histon deacetilaze (HDAC). U nekim izvođenjima, inhibitor HDAC je odabran od vorinostata (Zolinza<®>, Merck); romidepsina (Istodax<®>, Celgene); panobinostata (Farydak<®>, Novartis); belinostata (Beleodaq<®>, Spectrum Pharmaceuticals); entinostata (SNDX-275, Syndax Pharmaceuticals) (NCT00866333); i hidamid (Epidaza<®>, HBI-8000, Chipscreen Biosciences, China).
[0115] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor CDK, kao što je inhibitor CDK4/CDK6. U nekim izvođenjima, inhibitor CDK 4/6 je odabran od palbocikliba (Ibrance<®>, Pfizer); ribocikliba (Kisqali<®>, Novartis); abemacikliba (Ly2835219, Eli Lilly); i trilacikliba (G1T28, G1 Therapeutics).
[0116] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor fosfatidilinozitol 3 kinaze (PI3K). U nekim izvođenjima, inhibitor PI3K je odabran od idelalisiba (Zydelig<®>, Gilead), alpelisiba (BYL719, Novartis), taselisiba (GDC-0032, Genentech/Roche); piktilisiba (GDC-0941, Genentech/Roche); kopanlisiba (BAY806946, Bayer); duvelisiba (ranije IPI-145, Infinity Pharmaceuticals); PQR309 (Piqur Therapeutics, Switzerland); i TGR1202 (ranije RP5230, TG Therapeutics).
[0117] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je terapeutik na bazi platine, koji se takođe nazivaju platini. Platine izazivaju unakrsno povezivanje DNK, tako da inhibiraju reparaciju DNK i/ili sintezu DNK, uglavnom u ćelijama koje brzo proliferišu, kao što su ćelje kancera. U nekim izvođenjima, terapeutik na bazi platine je odabran od cisplatine (Platinol<®>, Bristol-Myers Squibb); karboplatine (Paraplatin<®>, Bristol-Myers Squibb; takođe, Teva; Pfizer); oksaliplatine (Eloxitin<®>Sanofi-Aventis); nedaplatine (Aqupla<®>, Shionogi), pikoplatine (Poniard Pharmaceuticals); i satraplatine (JM-216, Agennix).
[0118] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je jedinjenje taksana, koje izaziva poremećaj mikrotubula, koje su neophodne za ćeliju deobu. U nekim izvođenjima, jedinjenje taksana je odabrano od paklitaksela (Taxol<®>, Bristol-Myers Squibb), docetaksela (Taxotere<®>, Sanofi-Aventis; Docefrez<®>, Sun Pharmaceutical), paklitaksela vezanog za albumin (Abraxane<®>; Abraxis/Celgene), kabazitaksel (Jevtana<®>, Sanofi-Aventis), i SID530 (SK Chemicals, Co.) (NCT00931008).
[0119] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor nukleozida, ili terapeutski agens koji ometa normalnu sintezu DNK, sintezu proteina, ćelijsku replikaciju, ili na drugi način inhibira ćelije koje brzo proliferišu.
[0120] U nekim izvođenjima, nukleozidni inhibitor je odabran od trabektedin (gvanidin alkilirajući agens, Yondelis<®>, Janssen Oncology), mehloretamin (alkilirajući agens, Valchlor<®>, Aktelion Pharmaceuticals); vinkristin (Oncovin<®>, Eli Lilly; Vincasar<®>, Teva Pharmaceuticals; Marqibo<®>, Talon
2
Therapeutics); temozolomid (prolek za alkilujući agens 5-(3-metiltriazen-1-il)-imidazol-4-karboksamid (MTIC) Temodar<®>, Merck); injekcija citarabina (ara-C, antimetabolički analog citidina, Pfizer); lomustin (alkilujućći agens, CeeNU<®>, Bristol-Myers Squibb; Gleostine<®>, NextSource Biotechnology); azacitidin (analog pirimidin nukleozida citidina, Vidaza<®>, Celgene); omacetaksin mepesukcinat (cefalotaksin estar) (inhibitor sinteze proteina, Synribo<®>; Teva Pharmaceuticals); asparaginaza Erwinia chrysanthemi (enzim za smanjenje asparagina, Elspar<®>, Lundbeck; Erwinaze<®>, ELISA Pharma); eribulin mezilat (inhibitor mikrotubula, antimitotik na bazi tubulina, Halaven<®>, Eisai); kabazitaksel (inhibitor mikrotubula, antimitotik na bazi tubulina, Jevtana<®>, Sanofi-Aventis); kapacetrin (inhibitor timidilat sintaze, Xeloda<®>, Genentech); bendamustin (bifunkcionalni derivat mehloretamina, za koga se smatra da obrazuje međulančane unakrsne veze DNK, Treanda<®>, Cephalon/Teva); iksabepilon (polu-sintetički analog epotilona B, inhbitor mikrotubula, antimitotik na bazi tubulina, Ixempra<®>, Bristol-Myers Squibb); nelarabin (prolek analoga deoksiguanozina, nukleozidini metabolički inhibitor, Arranon<®>, Novartis); klorafabin (prolek inhibitora ribonukleotidne reduktaze, kompetitivni inhibitor deoksicitidina, Clolar<®>, Sanofi-Aventis); i trifluridin i tipiracil (analog nukleozida na bazi timidina i inhibitor timidin fosforilaze, Lonsurf<®>, Taiho Oncology).
[0121] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor kinaze ili antagonist VEGF-R. Odobreni inhibitori VEGF i inhibitori kinaze korisni u ovom pronalasku uključuju: bevacizumab (Avastin<®>, Genentech/Roche) anti-VEGF monoklonsko antitelo; ramucirumab (Cyramza<®>, Eli Lilly), anti-VEGFR-2 antitelo i ziv-aflibercept, takođe poznat pod imenom VEGF Trap (Zaltrap<®>; Regeneron/Sanofi). VEGFR inhibitori, kao što su regorafenib (Stivarga<®>, Bayer); vandetanib (Caprelsa<®>, AstraZeneca); aksitinib (Inlyta<®>, Pfizer); i lenvatinib (Lenvima<®>, Eisai); Raf inhibitori, kao što su sorafenib (Nexavar<®>, Bayer AG i Onyx); dabrafenib (Tafinlar<®>, Novartis); i vemurafenib (Zelboraf<®>, Genentech/Roche); MEK inhibitori, kao što su kobimetanib (Cotellic<®>, Exelexis/Genentech/Roche); trametinib (Mekinist<®>, Novartis); inhibitori Bcr-Abl tirozin kinaze, kao što su imatinib (Gleevec<®>, Novartis); nilotinib (Tasigna<®>, Novartis); dasatinib (Sprycel<®>, BristolMyersSquibb); bosutinib (Bosulif<®>, Pfizer); i ponatinib (Inclusig<®>, Ariad Pharmaceuticals); Her2 i EGFR inhibitori, kao što je gefitinib (Iressa<®>, AstraZeneca); erlotinib (Tarceeva<®>, Genentech/Roche/Astellas); lapatinib (Tykerb<®>, Novartis); afatinib (Gilotrif<®>, Boehringer Ingelheim); osimertinib (ciljanjem aktivirani EGFR, Tagrisso<®>, AstraZeneca); i brigatinib (Alunbrig<®>, Ariad Pharmaceuticals); c-Met i VEGFR2 inhibitori, kao što je kabozanitib (Cometriq<®>, Exelexis); i inhibitori multikinaze, kao što je sunitinib (Sutent<®>, Pfizer); pazopanib (Votrient<®>, Novartis); ALK inhibitori, kao što je krizotinib (Xalkori<®>, Pfizer); ceritinib (Zykadia<®>, Novartis); i alectinib (Alecenza<®>, Genentech/Roche); inhibitori Brutonove tirozin kinaze, kao što je ibrutinib (Imbruvica<®>, Pharmacyclics/Janssen); i inhibitori Flt3 receptora, kao što je midostaurin (Rydapt<®>, Novartis).
[0122] Drugi inhibitori kinaze i antagonisti VEGF-R koji su u razvoju i koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju: tivozanib (Aveo Pharmaecuticals); vatalanib (Bayer/Novartis); lucitanib (Clovis Oncology); dovitinib (TKI258, Novartis); Chiauanib (Chipscreen Biosciences); CEP-11981 (Cephalon); linifanib (Abbott Laboratories); neratinib (HKI-272, Puma Biotechnology); radotinib (Supect<®>, IY5511, II-Yang Pharmaceuticals, S. Korea); ruksolitinib (Jakafi<®>, Incyte Corporation); PTC299 (PTC Therapeutics); CP-547,632 (Pfizer); foretinib (Exelexis, GlaxoSmithKline); hizartinib (Daiichi Sankyo) i motesanib (Amgen/Takeda).
[0123] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor mTOR, koji inhibira proliferaciju ćelija, angiogenezu i unos glukoze. U nekim izvođenjima, inhibitor mTOR je everolimus (Afinitor<®>, Novartis); temsirolimus (Torisel<®>, Pfizer); i sirolimus (Rapamune<®>, Pfizer).
[0124] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor proteazoma. Odobreni inhibitori proteazoma koji su korisni u ovom pronalasku uključuju bortezomib (Velcade<®>, Takeda); karfilzomib (Kyprolis<®>, Amgen); i iksazomib (Ninlaro<®>, Takeda).
[0125] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je antagonist faktora rasta, kao što je antagonist faktora rasta poreklom iz trombocita (PDGF), ili epidermalni faktor rasta (EGF) ili njegov receptor (EGFR). Odobreni antagonisti PDGF koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju olaratumab (Lartruvo<®>; Eli Lilly). Odobrani antagonisti EGFR koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju: cetuksimab (Erbitux<®>, Eli Lilly); necitumumab (Portrazza<®>, Eli Lilly), panitumumab (Vectibix<®>, Amgen); i osimertinib (ciljanje aktiviranog EGFR, Tagrisso<®>, AstraZeneca).
[0126] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor aromataze. U nekim izvođenjima, inhibitor aromataze je odabran od: eksemestana (Aromasin<®>, Pfizer); anastazola (Arimidex<®>, AstraZeneca) i letrozola (Femara<®>, Novartis).
[0127] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je antagonist hedgehog puta. Odobrani inhibitori hedgehog puta koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju: sonidegib (Odomzo<®>, Sun Pharmaceuticals); i vismodegib (Erivedge<®>, Genentech), oba za lečenje karcinoma bazalnih ćelija.
[0128] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor folne kiseline. Odobreni inhibitori folne kiseline koji su korisni u ovom pronalasku uključuju pemetreksed (Alimta<®>, Eli Lilly).
[0129] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor CC hemokinskog receptora 4 (CCR4). Inhibitori CCR4 koji se proučavaju koji mogu biti koristi u ovom pronalasku uključuju mogamulizumab (Poteligeo<®>, Kyowa Hakko Kirin, Japan).
[0130] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor izocitratne dehidrogenaze (IDH). IDH inhibitori koji se proučavaju koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju: AG120 (Celgene; NCT02677922); AG221 (Celgene, NCT02677922; NCT02577406); BAY1436032 (Bayer, NCT02746081); IDH305 (Novartis, NCT02987010).
[0131] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor arginaze. Inhibitori arginaze koji se proučavaju koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju: AEB1102 (pegilovanu rekombinantnu arginazu, Aeglea Biotherapeutics), koja se proučava u fazi 1 kliničkih ispitivanja za akutnu mijeloidnu leukemiju i mijelodisplastični sindrom (NCT02732184) i čvrstih tumora (NCT02561234); i CB-1158 (Calithera Biosciences).
[0132] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inhibitor glutaminaze. Inhibitori glutaminaze koji se proučavaju koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju CB-839 (Calithera Biosciences).
[0133] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je antitelo koje se vezuje za tumorske antigene, to jest, proteine koji su eksprimirani na ćelijskoj površini tumorskih ćelija.
Odobrena antitela koja se vezuju za tumorske antigene koji se mogu koristiti u predmetnom pronalasku uključuju: rituksimab (Rituxan<®>, Genentech/Biogenldec); ofatumumab (anti-CD20, Arzerra<®>, GlaxoSmithKline); obinutuzumab (anti-CD20, Gazyva<®>, Genentech), ibritumomab (anti-CD20 i itrium-90, Zevalin<®>, Spectrum Pharmaceuticals); daratumumab (anti-CD38, Darzalex<®>, Janssen Biotech), dinutuksimab (anti-glikolipid GD2, Unituxin<®>, United Therapeutics); trastuzumab (anti-HER2, Herceptin<®>, Genentech); ado-trastuzumab emtanzin (anti-HER2, spojen sa emtanzinom, Kadcyla<®>, Genentech); i pertuzumab (anti-HER2, Perjeta<®>, Genentech); i brentuksimab vedotin (anti-CD30-lek konjugat, Adcetris<®>, Seattle Genetics).
[0134] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agensa je inibitor topoizomeraze. Odobreni inhibitori topoizomeraze koji su korisni u ovom pronalasku uključuju: irinotekan (Onivyde<®>, Merrimack Pharmaceuticals); topotekan (Hycamtin<®>, GlaxoSmithKline). Inhibitori topoizomeraze koji se proučavaju koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju piksantron (Pixuvri<®>, CTI Biopharma).
[0135] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugi terapeutski agens je inhibitor anti-apoptotskih proteina, kao što su BCL-2. Odobreni anti-apoptotici koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju: venetoclaks (Venclexta<®>, AbbVie/Genentech); i blinatumomab (Blincyto<®>, Amgen). Drugi terapeutski agensi koji ciljaju apoptotske proteine koji su prošli kliničko testiranje i mogu se koristiti u ovom pronalasku navitoklaks (ABT-263, Abbott), BCL-2 inhibitor (NCT02079740).
[0136] U nekim izvođenjima, jedan ili više terapeutskih agenasa je inhibitor receptora androgena. Odobreni inhibitori receptora androgena koji su korisni u predmetnom pronalasku uključuju enzalutamid (Xtandi<®>, Astellas/Medivation); odobreni inhibitori sinteze androgena uključuju abirateron (Zytiga<®>, Centocor/Ortho); odobren antagonist receptora gonadotropin-oslobađajućeg hormona (GnRH) (degaraliks, Firmagon<®>, Ferring Pharmaceuticals).
[0137] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa je selektivni modulator estrogenskog receptora (SERM), koji ometa sintezu ili aktivnost estrogena. Odobreni SERM korisni u predmetnom pronalasku uključuju raloksifen (Evista<®>, Eli Lilly).
[0138] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa je inhibitor resorpcije kostiju. Odobreni terapeutik koji inhibira resorpciju kostiju je Denosumab (Xgeva<®>, Amgen), antitelo koje vezuje RANKL, sprečava vezivanje za njegov receptor RANK, koji se nalazi na površini osteoklasta, njihovih prekursora, i džinovskih ćelija sličnih osteoklastima, što posreduje patologiji kostiju u čvrstim tumorima sa koštanim metastazama. Drugi odobreni terapeutici koji inhibiraju resorpciju kostiju uključuju bisfosfonate, kao što je zoledronska kiselina (Zometa<®>, Novartis).
[0139] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa je inhibitor interakcije između dva primarna p53 supresorska proteina, MDMX i MDM2. Inhibitori p53 supresorskih proteina koji se proučavaju koji se mogu koristiti u predmetnom pronalasku uključuju ALRN-6924 (Aileron), spojeni peptid koji se podjednako vezuje za i narušava interakciju MDMX i MDM2 sa p53. ALRN-6924 se trenutno procenjuje u kliničkim ispitivanjem za lečenje AML, uznapredovalog mijelodisplastičnog sindroma (MDS) i limfoma perifernih T-ćelija (PTCL) (NCT02909972; NCT02264613).
[0140] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa je inhibitor transformišućeg faktora rasta beta (TGF-beta ili TGFβ). Inhibitori proteina TGF-beta koji se proučavaju koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju NIS793 (Novartis), anti-TGF-beta antitelo koje se testira klinički za lečenje različitih kancera, uklučujući dojke, pluća, hepatocelularni, kolorektalni, pankreasa, prostate
2
i kancera bubrega (NCT 02947165). U nekim izvođenjima, the inhibitor proteina TGF-beta je fresolimumab (GC1008; Sanofi-Genzyme), koji se proučava za melanom (NCT00923169); karcinom bubrežnih ćelija (NCT00356460); i kancer nemalih ćelija pluća (NCT02581787). Dodatno, u nekim izvođenjima, dodatni terapeutski agens je TGF-beta trap, kao što se opisuje u Connolly et al. (2012) Int’l J. Biological Sciences 8:964-978. Jedno terapeutsko jedinjenja koje se trenutno nalazi u kliničkim ispitivanjima za lečenje čvrstih tumora je M7824 (Merck KgaA - prethodno MSB0011459X), koje je bispecifično, anti-PD-L1/TGFβ trap jedinjenje (NCT02699515); i (NCT02517398). M7824 se sastoji od potpuno humanog IgG1 antitela protiv PD-L1 spojenog sa ekstraćelijskim domenom humanog TGF-beta receptora II, koji funkcioniše kao TGFβ "trap."
[0141] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapeutskih agenasa je odabran od glembatumumab vedotin-monometil auristatina E (MMAE) (Celldex), anti-glikoproteina NMB (gpNMB) antitela (CR011) spojenog sa citotoksičnim MMAE. gpNMB je protein koji se eksprimira u višku u višestrukim tipovima tumora koji su povezani sa sposobnošću ćelija kancera da metastaziraju.
[0142] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih therapeutskih agenasa je anti proliferativno jedinjenje. Takva anti proliferativna jedinjenja uključuju, ali nisu ograničena na: inhibitore aromataze; antiestrogeni; inhibitori topoizomeraze I; inhibitore topoizomeraze II; aktivna jedinjenja mikrotubula; alkilujuća jedinjenja; inhibitori histon deacetilaze; jedinjenja koja indukuju procese ćelijske diferencijacije; inhibitori ciklooksigenaze; inhibitori MMP; inhibitori mTOR; antineoplastični antimetaboliti; jedinjenja platine; jedinjenja koja ciljaju/smanjuju aktivnost proteina ili lipidne kinaze i dalja anti-angiogena jedinjenja; jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibraju aktivnost proteina ili lipidne fosfataze; agonisti gonadorelina; antiandrogeni; inhibitori metionin aminopeptidaze; inhibitori matriksne metaloproteinaze; bisfosfonati; modifikatori biološkog odgovora; antiproliferativna antitela; inhibitori heparanaze; inhibitori onkogenih Ras izooblika; inhibitori telomeraze; inhibitori proteazoma; jedinjenja koja su korišćena u lečenju hematoloških maligniteta; jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost Flt-3; Hsp90 inhibitori kao što su 17-AAG (17-alilaminogeldan-amicin, NSC330507), 17-DMAG (17-dimetilaminoetilamino-17-demetoksi-geldanamicin, NSC707545), IPI-504, CNF1010, CNF2024, CNF1010 od Conforma Therapeutics; temozolomid (Temodal<®>); inhibitori proteina kinezinskog vretena (spindle), kao što su SB715992 or SB743921 od GlaxoSmithKline, ili pentamidin/hlorpromazin od CombinatoRx; MEK inhibitori kao što su ARRY142886 od Array BioPharma, AZd6244 od AstraZeneca, PD181461 od Pfizer i leukovorin.
[0143] Termin "inhibitor aromataze" kao što se ovde koristi se odnosi na jedinjenje koje inhibira proizvodnju estrogena, na primer, pretvaranje supstrata androstendiona i testosterona u estron i estradiol, redom. Termin uključuje, ali nije ograničen na steroide, posebno atamestan, eksemestan i formestan i, posebno, nesteroide, posebno aminoglutetimid, rogletimid, piridoglutetimid, trilostan, testolakton, ketokonazol, vorozol, fadrozol, anastrozol i letrozol. Eksemestan se prodaje pod M TM
trgovačkim imenom AromasinT . Formestan se prodaje pod trgovačkim imenom Lentaron . Fadrozol
TM
se prodaje pod trgovačkim imenom Afema . Anastrozol se prodaje pod trgovačkim imenom TM<TM>TM
Arimidex . Letrozol se prodaje pod trgovačkim imenima Femara ili Femar . Aminoglutetimid se
TM
prodaje pod trgovačkim imenima Orimeten . Kombinacija iz pronalaska sadrži hemoterapeutski agens koji je inhibitor aromataze posebno koristan u lečenju tumora koji su pozitivni na hormonski receptor, kao što su tumori dojke.
[0144] Termin "antiestrogen" kao što se ovde koristi se odnosi na jedinjenje koje antagonizuje efekat estrogena na nivou estrogenskog receptora. Termin uključuje, ali nije ograničen na tamoksifen, fulvestrant, raloksifen i raloksifen hidrohlorid. Tamoksifen se prodaje pod trgovačkim imenom TM TM
Nolvadex . Raloksifen hidrohlorid se prodaje pod trgovačkim imenom Evista . Fulvestrant se može
TM
primeniti pod trgovačkim imenom Faslodex . Kombinacija pronalaska koji sadrži hemoterapijski agens koji je antiestrogen posebno je korisna za lečenje tumora pozitivnih na estrogenski receptor, kao što su tumori dojke.
[0145] Termin "anti-androgen" kao što se ovde koristi odnosi se na bilo koju supstancu koja je sposobna za inhibiranje bioloških efekata androgenih hormona i uključuje, ali nije ograničen na, bikalutamid (CasodexTM). Termin "agonist gonadorelina" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na abareliks, goserelin i goserelin acetat. Goserelin se može primeniti pod trgovačkim TM
imenom Zoladex .
[0146] Termin "inhibitor topoizomeraze I" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na topotekan, gimatekan, irinotekan, kamptotecin i njegovi analozi, 9-nitrokamptotecin i konjugat makromolekularnog kamptotecina PNU-166148. Irinotecan se može primeniti, npr. u obliku u kome se prodaje, npr. pod trgovačkim imenom CamptosarTM . Topotekan se prodaje pod trgovačkim imenom HycamptinTM .
[0147] Termin "inhibitor topoizomeraze II" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na TM
antracikline kao što su doksorubicin (uključujući formulaciju lipozoma, kao što su Caelyx ), daunorubicin, epirubicin, idarubicin i nemorubicin, antrahinoni mitoksantrona i lozoksantrona, i podofilotoksin etopozida i tenipozida. Etopozid se prodaje pod trgovačkim imenom EtopophosTM . Tenipozid se prodaje pod trgovačkim imenom VM 26-Bristol. Doksorubicin se prodaje pod trgovačkim<TM>TM
imenom Acriblastin ili AdriamycinTM . Epirubicin se prodaje pod trgovačkim imenom Farmorubicin .
TM
Idarubicin se prodaje, pod trgovačkim imenom Zavedos . Mitoksantron se prodaje pod trgovačkim imenom Novantron.
[0148] Termin "aktivni agens mikrotubula" odnosi se na jedinjenja koja stabilizuju mikrotubule, jedinjenja koja destabilizuju mikrotubule i inhibitore polimerizacije mikrotubulina uključujući, ali bez ograničenja na: taksane, kao što su paklitaksel i docetaksel; vinka alkaloidi, kao što su vinblastin ili vinblastin sulfat, vinkristin ili vinkristin sulfat, i vinorelbin; diskodermolidi; kohicin i epotiloni i njihovi derivati. Paklitaksel se prodaje pod trgovačkim imenom TaxolTM . Docetaksel se prodaje pod trgovačkim
TM TM
imenom Taxotere . Vinblastin sulfat se prodaje pod trgovačkim imenom Vinblastin R.P . Vinkristin
TM
sulfat se prodaje pod trgovačkim imenom Farmistin .
[0149] Termin "alkilirajući agens" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, ciklofosfamid, ifosfamid, melfalan ili nitrozourea (BCNU ili Gliadel). Ciklofosfamid se prodaje pod trgovačkim imenom CiklostinTM . Ifosfamid se prodaje pod trgovačkim imenom HoloxanTM .
[0150] Termin "inhibitori histon deacetilaze" ili "HDAC inhibitori" se odnose na jedinjenja koja inhibiraju histon deacetilazu i koja sadrže antiproliferativnu aktivnost. Ovo uključuje, ali nije ogrančeno na, suberoilanilid hidroksaminske kiseline (SAHA).
[0151] Termin "antineoplastični antimetabolit" uključuje, ali nije ograničen na, 5-fluorouracil ili 5-FU, kapecitabin, gemcitabin, jedinjenja za demetilaciju DNK, kao što je 5-azacitidin i decitabin, metotreksat i edatreksat, i antagonisti folne kiseline kao što je pemetreksed. Kapecitabin se prodaje pod trgovačkim imenom XelodaTM . Gemcitabin se prodaje pod trgovačkim imenom GemzarTM .
[0152] Termin "jedinjenje platine" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, karboplatinu, cisplatinu, cisplatinum i oksaliplatin. Karboplatin se može primenjivati, npr., u obliku u kome se
2
prodaje, npr. pod trgovačkim imenom Carboplat . Oksaliplatin se može primeniti, npr., u obliku u kome se prodaje, npr. pod trgovačkim imenom EloxatinTM .
[0153] Termin "jedinjenja koja ciljaju/smanjuju proteinsku ili aktivnost lipidne kinaze; ili aktivnost proteina ili lipidne fosfataze; ili dalja anti-angiogena jedinjenja" kao što se ovde koriste uključuju, ali nije ograničeno na, inhibitore protein tirozin kinaze i/ili serin i/ili treonin kinaze ili inhibitore lipid kinaze, kao što su: a) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora faktora rasta koji potiču od pločica (PDGFR), kao što su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost PDGFR, posebno jedinjenja koja inhibiraju receptor PDGF, kao što je derivat N-fenil-2-pirimidin-amina, kao što je imatinib, SU101, SU6668 i GFB-111; b) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora faktora rasta fibroblasta (FGFR); c) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktvnost receptora I faktora rasta sličnog insulinu (IGF-IR), kao što su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost IGF-IR, posebno jedinjenja koja inhibiraju kinaznu aktivnost IGF-I receptora, ili antitela koja ciljaju vanćelijski domen IGF-I receptora ili njegovih faktora rasta; d) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije tirozin kinaze Trk receptora, ili efrin B4 inhibitore; e) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije tirozin kinaze Axl receptora; f) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinaze Ret receptora; g) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinaze Kit/SCFR receptora, kao što je imatinib; h) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost tirozin kinaza C-kit receptora, koja su deo familije PDGFR, kao što su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije receptora tirozin kinaze c-Kit, naročito jedinjenja koja inhibiraju c-Kit receptor, kao što je imatinib; i) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost članova familije c-Abl, njihove proizvode spajanja gena (npr. BCR-Abl kinaza) i mutante, kao što su jedinjenja koja ciljaju smanjuju ili inhibiraju aktivnost članova familije c-Abl i njihove proizvode spajanja gena, kao što su derivat N-fenil-2-pirimidin-amina, kao što je imatinib ili nilotinib (AMN107); PD180970; AG957; NSC 680410; PD173955 od ParkeDavis; ili dasatinib (BMS-354825); j) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost članova protein kinaze C (PKC) i Raf familije serin/treonin kinaza, članova MEK, SRC, JAK/pan-JAK, FAK, PDK1, PKB/Akt, Ras/MAPK, PI3K, SYK, TYK2, BTK i TEC familije, i/ili članova familije kinaze zavisne od ciklina (CDK) uključujući derivate staurosporina, kao što su midostaurin; primeri daljih jedinjenja uključuju UCN-01, safingol, BAY 43-9006, Briostatin 1, Perifosin; Ilmofosin; RO 318220 i RO 320432; GO 6976; Isis 3521; LY333531/LY379196; jedinjenja izohinolina; FTIs; PD184352 ili QAN697 (P13K inhibitor) ili AT7519 (CDK inhibitor); k) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost inhibitora protein-tirozin kinaze, kao što su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost inhibitora protein-tirozin
TM
kinaze uključuju imatinib mezilat (Gleevec ) ili tirfostin kao što je Tirfostin A23/RG-50810; AG 99; Tirfostin AG 213; Tirfostin AG 1748; Tirfostin AG 490; Tirfostin B44; Tirfostin B44 (+) enantiomer; Tirfostin AG 555; AG 494; Tirfostin AG 556, AG957 i adafostin adamantil estar (4-{[(2,5-dihidroksifenil)metil]amino}-benzojeve kiseline; NSC 680410, adafostin); I) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije receptora tirozin kinaza epiderimalnog faktora rasta (EGFR1 ErbB2, ErbB3, ErbB4 kao homo- ili heterodimeri) i njihovih mutananta, kao što su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost familije receptora epidermalnog faktora rasta su naročito jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju familiju receptora tirozin kinaze EGF, kao što je EGF receptor, ErbB2, ErbB3 i ErbB4 ili se vežu za EGF ili EGF srodne ligande, CP 358774, ZD 1839, ZM 105180; trastuzumab (Herceptin<T>M), cetuksimab (ErbituxTM), Iressa, Tarceva, OSI-774, CI-1033, EKB-569, GW-2016, E1.1, E2.4, E2.5, E6.2, E6.4, E2.11, E6.3 or E7.6.3, i 7H-pirolo-[2,3-d]pirimidin derivati; m) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost c-Met receptora, kao što su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost c-Met, naročito jedinjenja koja inhibiraju kinaznu aktivnost c-Met receptora, ili antitela koja ciljaju vanćelijski domen c-Met ili se vežu za HGF, n) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju kinaznu aktivnost jednog ili više članova familije JAK (JAK1/JAK2/JAK3/TYK2 i/ili pan-JAK), uključujući ali bez ograničenja na PRT-062070, SB-1578, baricitinib, pacritinib, momelotinib, VX-509, AZD-1480, TG-101348, tofacitinib, i ruksolitinib; o) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju kinaznu
2
aktivnost PI3 kinaze (PI3K) uključujući ali bez ograničenja na ATU-027, SF-1126, DS-7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, buparlisib, pictrelisib, PF-4691502, BYL-719, daktolisib, XL-147, XL-765, i idelalisib; i; i p) jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju efekte signalnih puteva proteina hedgehog (Hh) ili puteve zaglađenog receptora (SMO), uključujući ali bez ograničenja na ciklopamin, vismodegib, itrakonazol, erismodegib, i IPI-926 (saridegib).
[0154] Termin "inhibitor PI3K" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na jedinjenja koja imaju inhibitornu aktivnost protiv jednog ili više enzima u fosfatidilinozitol-3-kinaznoj familiji, uključujući, ali bez ograničenja na PI3Kα, PI3Kγ, PI3Kδ, PI3Kβ, PI3K-C2α, PI3K-C2β, PI3K-C2γ, Vps34, p110-α, p110-β, p110-γ, p110-δ, p85-α, p85-β, p55-γ, p150, p101, i p87. Primeri inhibitora PI3K korisnih u ovom pronalasku uključuju ali nisu ograničeni na ATU-027, SF-1126, DS- 7423, PBI-05204, GSK-2126458, ZSTK-474, buparlisib, pictrelisib, PF-4691502, BYL-719, daktolisib, XL-147, XL-765, i idelalisib.
[0155] Termin "inhibitor Bcl-2" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na jedinjenja koja imaju inhibitornu aktivnost protiv proteina 2 limfoma B-ćelija (Bcl-2), uključujući ali bez ograničenja na ABT-199, ABT-731, ABT-737, apogosipol, Ascenta-ove pan-Bcl-2 inhibitore, kurkumin (i njegove analoge), dvostruki inhibitori Bcl-2/Bcl-xL (Infinity Pharmaceuticals/Novartis Pharmaceuticals), Genasense (G3139), HA14-1 (i njegovi analozi; videti WO 2008/118802), navitoklaks (i njihovi analozi, videti US 7,390,799), NH-1 (Shenayng Pharmaceutical University), obatoklaks (i njihovi analozi, videti WO 2004/106328), S-001 (Gloria Pharmaceuticals), jedinjenja serija TW (Univ. Mičigen), i venetoklaks. U nekim izvođenjima inhibitor Bcl-2 je mali molekul terapeutik. U nekim izvođenjima inhibitor Bcl-2 je peptido-mimetik.
[0156] Termin "inhibitor BTK" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na jedinjenja koja imaju inhibitornu aktivnost protiv Brutonove tirozin kinaze (BTK), uključujući, ali nije ograničen na AVL-292 i ibrutinib.
[0157] Termin "SYK inhibitor" kao što se ovde koristi uključuju, ali nije ograničen na jedinjenja koja imaju inhibitornu aktivnost protiv tirozin kinaze slezine (SYK), uključujući ali nije ograničen na PRT-062070, R-343, R-333, Excellair, PRT-062607, i fostamatinib.
[0158] Dalji primeri jedinjenja koja inhibiraju BTK, i stanja koja se mogu lečiti takvim jedinjenjima u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska mogu se pronaći u WO 2008/039218 i WO 2011/090760.
[0159] Dalji primeri jedinjenja koja inhibiraju SYK, i stanja koja se mogu lečiti takvim jedinjenjima u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska mogu se pronaći u WO 2003/063794, WO 2005/007623, i WO 2006/078846.
[0160] Dalji primeri jedinjenja koja inhibiraju PI3K, i stanja koja se mogu lečiti takvim jedinjenjima u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska mogu se pronaći u WO 2004/019973, WO 2004/089925, WO 2007/016176, US 8,138,347, WO 2002/088112, WO 2007/084786, WO 2007/129161, WO 2006/122806, WO 2005/113554, i WO 2007/044729.
[0161] Dalji primeri jedinjenja koja inhibitoraju JAK, i stanja koja se mogu lečiti takvim jedinjenjima u kombinaciji sa jedinjenjima iz ovog pronalaska mogu se pronaći u WO 2009/114512, WO 2008/109943, WO 2007/053452, WO 2000/142246, i WO 2007/070514.
2
[0162] Dalja anti-angiogena jedinjenja uključuju jedinjenja koja imaju drugi mehanizam za njihove aktivnosti, npr. nevezano za inhibiciju proteina ili lipidne kinaze npr. talidomida (ThalomidTM) i TNP-470.
[0163] Primeri inhibitora proteazoma koji su korisni za upotrebu u kombinaciji sa jedinjenjima iz pronalaska uključuju, ali nisu ograničeni na bortezomib, disulfiram, epigalokatehin-3-galat (EGCG), salinosporamid A, karfilzomib, ONX-0912, CEP-18770, i MLN9708.
[0164] Jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteina ili lipidne fosfataze su npr. inhibitori fosfataze 1, fosfataze 2A, ili CDC25, kao što je okadainska kiselina ili njen derivat.
[0165] Jedinjenja koja indukuju procese ćelijske diferencijacije uključuju, ali nisu ograničeni na, retinoinsku kiselinu, α- γ- ili δ- tokoferol ili α- γ- ili δ-tokotrienol.
[0166] Termin inhibitor ciklooksigenaze kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, inhibitore Cox-2, 5-alkil supstituisanu 2-arilaminofenilsirćetnu kiselinu i derivate, kao što su celekoksib TM TM
(Celebrex ), rofekoksib (Vioxx ), etoricoksib, valdecoksib ili 5-alkil-2-arilaminofenilsirćetnu kiselinu, kao što je 5-metil-2- hloro-6’-fluoroanilino)fenil sirćetnu kiselinu i lumirakoksib.
[0167] Termin "bisfosfonati" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, etridonsku, klodronsku, tiludronsku, pamidronsku, alendronsku, ibandronsku, risedronsku i zoledronsku kiselinu.
TM
Etridonska kiselina se prodaje pod trgovačkim imenom Didronel . Klodrinska kiselina se prodaje pod TM TM
trgovačkim imenom Bonefos . Tiludronska kiselina se prodaje pod trgovačkim imenom Skelid .
TM
Pamidronska kiselina se prodaje pod trgovačkim imenom Aredia . Alendronska kiselina se prodaje pod trgovačkim imenom FosamaxTM . Ibandronska kiselina se prodaje pod trgovačkim imenom BondranatTM . Risedronska kiselina se prodaje pod trgovačkim imenom ActonelTM . Zoledronska kiselina se prodaje pod trgovačkim imenom ZometaTM . Termin " inhibitori mTOR" se odnosi na jedinjenja koja inhibiraju sisarski cilj za rapamicin (mTOR) i koji imaju anti proliferativnu aktivnost kao što je sirolimus TM
(Rapamune<®>), everolimus (Certican ), CCI-779 i ABT578.
[0168] Termin "inhibitor heparanaze" kao što se ovde koristi se odnosi na jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju degradaciju heparin sulfata. Termin uključuje, ali nije ograničen na, PI-88. Termin "modifikator biološkog odgovora" kao što se ovde koristi se odnosi na limfokine ili interferone.
[0169] Termin "inhibitor onkogenih izooblika Ras", kao što su H-Ras, K-Ras, ili N-Ras, kao što se ovde koriste se odnose na jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju onkogenu aktivnost Ras; na primer,
TM
"inhibitor farnezil transferaze" kao što je L-744832, DK8G557 ili R115777 (Zarnestra ). Termin "inhibitor telomeraze" kao što se ovde koristi se odnosi na jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost telomeraze. Jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost telomeraze su posebno jedinjenja koja inhibiraju receptor telomeraze, kao što je telomestatin.
[0170] Termin "inhibitor metioninske aminopeptidaze" kao što se ovde koristi se odnosi na jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost metioninske aminopeptidaze. Jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost metionin aminopeptidaze uključuju, ali nisu ograničene na, bengamid ili njegov derivat.
[0171] Termin "inhibitor proteazoma" kao što se ovde koristi se odnosi na jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteazoma. Jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost proteazoma uključuju, ali nisu ograničeni na, Bortezomib (VelcadeTM) i MLN 341.
2
[0172] Termin "inhibitor matriksne metaloproteinaze" ili ("MMP" inhibitor) kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničen na, kolagen peptidomimetičke i nepeptidomimetičke inhibitore, derivate tetraciklina, npr. hidroksamat peptidomimetički inhibitor batimastat i njegov oralno bioraspoloživi analog marimastat (BB-2516), prinomastat (AG3340), metastat (NSC 683551) BMS-279251, BAY 12-9566, TAA211 , MMI270B ili AAJ996.
[0173] Termin "jedinjenja koja su korišćena u lečenju hematoloških maligniteta" kao što su ovde su ovde korišćena uključuju, ali nisu ograničena na, inhibitori tirozin kinaze slični FMS, koja su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora tirozin kinaze slične FMS (Flt-3R); interferon, 1-β-D-arabinofuransilcitozin (ara-c) i bisulfan; i ALK inhibitore, koji su jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju anaplastičnu limfoma kinazu.
[0174] Jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost receptora tirozin kinaze sličnih FMS (Flt-3R) su posebno jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju članove familije Flt-3R receptor kinaze, kao što su PKC412, midostaurin, derivat staurosporina, SU11248 i MLN518.
[0175] Termin "inhibitori HSP90" kao što se ovde korisiti uključuje, ali nije ograničeno na, jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju intrinzičnu aktivnost ATPaze HSP90; degradiraju, ciljaju, smanjuju ili inhibiraju proteina klijenta HSP90 preko ubikvitin proteozomskog puta. Jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju intrinzičnu aktivnost ATPaze HSP90 su posebno jedinjenja, proteini ili antitela koja inhibiraju aktivnost ATPaze HSP90, kao što su 17-alilamino,17-demetoksigeldanamicin (17AAG), derivat geldanamicina; druga jedinjenja srodna geldanamicinom; radicikol i inhibitori HDAC.
[0176] Termin "antiproliferativna antitela" kao što se ovde koristi uključuje, ali nije ograničeno na, trastuzumab (HerceptinTM), Trastuzumab-DM1, erbituks, bevacizumab (AvastinTM), rituksimab (Rituxan<®>), PRO64553 (anti-CD40) i 2C4 Antitelo. Pod antitelima se označavaju intaktna monoklonska antitela, poliklonska antitela, multispecifična antitela koja se obrazuju od najmanje 2 intaktna antitela, i fragmente antitela sve dok pokazuju željenu biološku aktivnost.
[0177] Za lečenje akutne mijeloidne leukemije (AML), jedinjenja iz ovog pronalaska mogu se koristiti u kombinaciji sa standardnim terapijama leukemije, naročito u kombinaciji sa terapijama korišćenim za lečenje AML. Posebno, jedinjenja iz predmetnog pronalaska mogu se davati u kombinaciji sa, na primer, inhibitori farnezil transferaze i/ili drugi lekovi koji su korisni u lečenju AML, kao što su Daunorubicin, Adriamicin, Ara-C, VP-16, Tenipozid, Mitoksantron, Idarubicin, Kаrboplatina i PKC412.
[0178] Druga jedinjenja protiv leukemije uključuju, na primer, Ara-C, analog pirimidina, koji je 2’-alfahidroksi riboza (arabinozid) derivat deoksicitidina. Takođe je uključen purinski analog hipoksantina, 6-merkaptopurina (6-MP) i fludarabin fosfata. Jedinjenja koja ciljaju, smanjuju ili inhibiraju aktivnost inhibitora histon deacetilaze (HDAC) kao što su natrijum butirat i suberoilanilid hidroksaminske kiseline (SAHA) inhibiraju aktivnost enzima poznatih kao histon deacetilaze. Specifični inhibitori HDAC uključuju MS275, SAHA, FK228 (ranije FR901228), Trihostatin A i jedinjenja koja su prikazana u US 6,552,065 uključujući, ali bez ograničenja na, N-hidroksi-3-[4-[[[2-(2-metil-1H-indol-3-il)-etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamid, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i N-hidroksi-3-[4-[(2-hidroksietil){2-(1H-indol-3-il)etil]-amino]metil]fenil]-2E-2-propenamid, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, posebno laktatna so. Antagonisti receptora somatostatina kao što se ovde koriste se odnose se na jedinjenja koja ciljaju, leče ili inhibiraju receptor somatostatina kao što je oktreotid, i SOM230. Pristupi oštećenja tumorskih ćelija se odnose na pristupe kao što su jonizujuće zračenje. Termin "jonizujuće zračenje" koje se pominje gore u tekstu i ovde označava jonizujuće zračenje koje se pojavljuje ili kao elektromagnetni zraci (kao što su rendgenski zraci (X) i gama zraci) ili čestice (kao što su alfa i beta čestice). Jonizujuće zračenje je obezbeđeno u, ali nije ograničeno na, terapiju
2
zračenjem i poznato je u oblasti tehnike. Videti Hellman, Principles of Radiation Therapy, Cancer, in Principles and Practice of Oncology, Devita et al., Eds., 4. izdanje, tom 1, pp.248-275 (1993).
[0179] Takođe su uključeni EDG agensi vezivanja i inhibitori ribonukleotidne reduktaze. Termin "EDG agensi vezivanja" kao što se ovde koristi se odnosi na klasu imunosupresanata koji moduliraju recirkulaciju limfocita, kao što je FTY720. Termin "inhibitori ribonukleotidne reduktaze" se odnosi na analoge pirimidina ili purinskih nukleozida uključujući, ali bez ograničenja na, fludarabin i/ili citozin arabinozid (ara-C), 6-tiogvanin, 5-fluorouracil, kladribin, 6-merkaptopurin (naročito u kombinaciji sa ara-C protiv ALL) i/ili pentostatinom. Inhibitori ribonukleotidne reduktaze su naročito hidroksiurea ili derivate 2-hidroksi-1H-izoindol-1,3-diona.
[0180] Takođe su uključena naročito ona jedinjenja, proteini ili monoklonska antitela VEGF kao što su: 1-(4-hloroanilino)-4-(4-piridilmetil)ftalazin ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, 1-(4-hloroanilino)-
TM TM
4-(4-piridilmetil)ftalazin sukcinat; Angiostatin ; Endostatin ; amidi antranilne kiseline; ZD4190; Zd6474; SU5416; SU6668; bevacizumab; ili anti-VEGF antitela ili anti-VEGF receptorska antitela, kao što su rhuMAb i RHUFab, VEGF aptamer kao što je Macugon; FLT-4 inhibitori, FLT-3 inhibitori, VEGFR-2 IgGI antitelo, Angiozim (RPI 4610) i Bevacizumab (AvastinTM).
[0181] Fotodinamička terapija kao što se ovde koristi se odnosi na terapiju koja koristi određene hemikalije poznate kao photosenzibilizujuća jedinjenja za lečenje ili prevenciju kancera. Primeri fotodinamičke terapije uključuju tretman sa jedinjenjima, kao što su Visudyne<TM>i porfimer natrijum.
[0182] Angiostatski steroidi kao što se ovde koriste se odnose na jedinjenja koja blokiraju ili inhibiraju angiogenezu, kao što su, npr., anekortav, triamcinolon, hidrokortizon, 11-α-epihidrokotizol, korteksolon, 17α-hidroksiprogesteron, kortikosteron, dezoksikortikosteron, testosteron, estron i deksametazon.
[0183] Implanti koji sadrže kortikosteroide se odnose na jedinjenja, kao što su fluocinolon i deksametazon.
[0184] Druga hemoterapijska jedinjenja uključuju, ali nisu ograničena na: biljne alkaloide, hormonska jedinjenja i antagonisti; modifikatore bioloških odgovora, poželjno limfokine ili interferone; antisensne oligonukleotide ili derivate oligonukleotida; shRNK ili male interferirajuće RNK (siRNK); ili različita jedinjenja ili jedinjenja sa drugim nepoznatim mehanizmom delovanja.
[0185] Struktura aktivnih jedinjenja koja se identifikuju kodnim brojevima, generičkim ili trgovačkim imenima može se preuzeti iz stvarnog izdanja standardnog zbornika "The Merck Index" ili iz baze podataka, npr. Patents International (npr. IMS World Publications).
Primeri Imuno-onkoloških agenasa
[0186] U nekim izvođenjima, jedan ili više drugih terapijskih agenasa je imuno-onkološki agens. Kao što je ovde korišćen, termin "imuno-onkološki agens" se odnosi na agens koji je efikasan da bi pojačao, stimulisao, i/ili pojačano regulisao imunske odgovore kod subjekta. U nekim izvođenjima, primena imuno-onkološkog agensa sa jedinjenjem iz pronalaska ima sinergistički efekat u lečenju kancera.
[0187] Imuno-onkološki agens može biti, na primer, mali molekul leka, antitelo, ili biološki ili mali molekul. Primeri bioloških imuno-onkoloških agenasa uključuju, ali nije ograničeno na, vakcine protiv kancera, antitela, i citokine. U nekim izvođenjima, antitelo je monoklonsko antitelo. U nekim izvođenjima, monoklonsko antitelo je humanizovano ili humano.
[0188] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je (i) agonist stimulatornog (uključujući kostimulatorni) receptor ili (ii) antagonist inhibitornog (uključujući koinhibitorni) signal na T ćelijama, od kojih oba rezultiraju pojačavanjem antigen-specifičnih T ćelijskih odgovora.
[0189] Određeni stimulatorni i inhibitorni molekuli su članovi superfamilije imunoglobulina (IgSF). Jedna važna familija liganada vezanih za membranu koji se vežu za kostimulatorne ili koinhibitorne receptore je B7 familija, koja sadrži B7-1, B7-2, B7-H1 (PD-L1), B7-DC (PD-L2), B7-H2 (ICOS-L), B7-H3, B7-H4, B7-H5 (VISTA), i B7-H6. Druga familija membranski vezanih liganada koji se vezuju za kostimulatorne ili koinhibitorne receptore je familija TNF molekula koji se vezuju za srodne članove familije TNF receptora, što uključuje CD40 i CD40L, OX-40, OX-40L, CD70, CD27L, CD30, CD30L, 4-1BBL, CD137 (4-1BB), TRAIL/Apo2-L, TRAILR1/DR4, TRAILR2/DR5, TRAILR3, TRAILR4, OPG, RANK, RANKL, TWEAKR/Fn14, TWEAK, BAFFR, EDAR, XEDAR, TACI, APRIL, BCMA, LTβR, LIGHT, DcR3, HVEM, VEGI/TL1A, TRAMP/DR3, EDAR, EDA1, XEDAR, EDA2, TNFR1, Limfotoksin α/TNFβ, TNFR2, TNFα, LTβR, Limfotoksin α1β2, FAS, FASL, RELT, DR6, TROY i NGFR.
[0190] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je citokin koji inhibira aktivaciju T ćelija (npr., IL-6, IL-10, TGF-β, VEGF, i drugi imunosupresivni citokini) ili citokin koji stimuliše aktivaciju T ćelija, za stimulisanje imunskog odgovora.
[0191] U nekim izvođenjima, kombinacija jedinjenja iz pronalaska i imuno-onkološkim agensom može da stimuliše T ćelijske odgovore. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je: (i) antagonist proteina koji inhibira aktivaciju T ćelija (npr., inhibitori imunske kontrolne tačke) kao što su CTLA-4, PD-1, PD-L1, PD-L2, LAG-3, TIM-3, Galektin 9, CEACAM-1, BTLA, CD69, Galectin-1, TIGIT, CD113, GPR56, VISTA, 2B4, CD48, GARP, PD1H, LAIR1, TIM-1, i TIM-4; ili (ii) agonist proteina koji stimuliše aktivaciju T ćelija kao što su B7-1, B7-2, CD28, 4-1BB (CD137), 4-1BBL, ICOS, ICOS-L, OX40, OX40L, GITR, GITRL, CD70, CD27, CD40, DR3 i CD28H.
[0192] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antagonist inhibitornih receptora na NK ćelijama ili agonist aktivirajućih receptora na NK ćelijama. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antagonist KIR, kao što je lirilumab.
[0193] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je agens koji inhibira ili iscrpljuje makrofage ili monocite, uključujući ali bez ograničenja na antagoniste CSF-1R kao što su CSF-1R antagonistička antitela uključujući RG7155 (WO 2011/70024, WO 2011/107553, WO 2011/131407, WO 2013/87699, WO 2013/119716, WO 2013/132044) ili FPA-008 (WO 2011/140249; WO 2013/169264; WO 2014/036357).
[0194] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je odabran od agonističkih agenasa koji spajaju pozitivne kostimulatorne receptore, agense za blokiranje koji umanjuju signalizaciju kroz inhibitorne receptore, antagoniste, i jedan ili više agenasa koji sistemski povećavaju učestalost anti-tumorskih T ćelija, agenasa koji prevazilaze različite imuno supresorske puteve unutar tumorskog mikrookruženja (npr., blokiranje angažovanja inhibitornog receptora (npr., PD-L1/PD-1 interakcija), iscrpljivanje ili inhibiciju Treg ćelija (npr., korišćenjem anti-CD25 monoklonskog antitela (npr., daklizumab) ili iscrpljivanjem ex vivo anti-CD25 česticama), inhibira metaboličke enzime kao što su IDO, ili preokrenuti/sprečiti energiju T ćelija ili iscrpljivanje) i agense koji pokreću aktivaciju urođenog imuniteta i/ili inflamaciju na mestima tumora.
[0195] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je CTLA-4 antagonist. U nekim izvođenjima, CTLA-4 antagonist je antagonističko CTLA-4 antitelo. U nekim izvođenjima, antagonističko CTLA-4 antitelo je YERVOY (ipilimumab) ili tremelimumab.
1
[0196] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je PD-1 antagonist. U nekim izvođenjima, PD-1 antagonist se primenjuje infuzijom. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antitelo ili njegov deo koji veže antigen koji se specifično vezuje za receptor programirane smrti-1 (PD-1) i inhibira aktivnost PD-1. U nekim izvođenjima, PD-1 antagonist je antagonističko PD-1 antitelo. U nekim izvođenjima, antagonističko PD-1 antitelo je OPDIVO (nivolumab), KEYTRUDA (pembrolizumab), ili MEDI-0680 (AMP-514; WO 2012/145493). U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens može biti pidilizumab (CT-011). U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je rekombinantni protein koji se sastoji iz ekstraćelijskog domena PD-L2 (B7-DC) spojenim sa Fc delom IgG1, nazvanim AMP-224.
[0197] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je PD-L1 antagonist. U nekim izvođenjima, PD-L1 antagonist je antagonističko PD-L1 antitelo. U nekim izvođenjima, PD-L1 antitelo je MPDL3280A (RG7446; WO 2010/077634), durvalumab (MEDI4736), BMS-936559 (WO 2007/005874), i MSB0010718C (WO 2013/79174).
[0198] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antagonist LAG-3. U nekim izvođenjima, antagonist LAG-3 je antagonističko LAG-3 antitelo. U nekim izvođenjima, LAG3 antitelo je BMS-986016 (WO 2010/19570, WO 2014/08218), ili IMP-731 ili IMP-321 (WO 2008/132601, WO 2009/44273).
[0199] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je CD137 (4-1BB) agonist. U nekim izvođenjima, CD137 (4-1BB) agonist je agonističko CD137 antitelo. U nekim izvođenjima, CD137 antitelo je urelumab ili PF-05082566 (WO 2012/32433).
[0200] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je GITR agonist. U nekim izvođenjima, GITR agonist je agonističko GITR antitelo. U nekim izvođenjima, GITR antitelo je BMS-986153, BMS-986156, TRX-518 (WO 2006/105021, WO 2009/009116), ili MK-4166 (WO 2011/028683).
[0201] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antagonist indolamin (2,3)-dioksigenaze (IDO). U nekim izvođenjima, antagonist IDO je odabran od: epacadostata (INCB024360, Incyte); indoksimoda (NLG-8189, NewLink Genetics Corporation); kapmanitiba (INC280, Novartis); GDC-0919 (Genentech/Roche); PF-06840003 (Pfizer); BMS:F001287 (Bristol-Myers Squibb); Phy906/KD108 (Phytoceutica); enzima koji razgrađuje kinurenin (Kynase, Kyn Therapeutics); i NLG-919 (WO 2009/73620, WO 2009/1156652, WO 2011/56652, WO 2012/142237).
[0202] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je agonist OX40. U nekim izvođenjima, agonist OX40 je agonističko OX40 antitelo. U nekim izvođenjima, OX40 antitelo je MEDI-6383 ili MEDI-6469.
[0203] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antagonist OX40L. U nekim izvođenjima, antagonist OX40L je antagonističko OX40 antitelo. U nekim izvođenjima, antagonist OX40L je RG-7888 (WO 2006/029879).
[0204] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je agonist CD40. U nekim izvođenjima, agonist CD40 je agonističko CD40 antitelo. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antagonist CD40. U nekim izvođenjima, antagonist CD40 je antagonističko CD40 antitelo. U nekim izvođenjima, CD40 antibody je lukatumumab ili dacetuzumab.
[0205] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je CD27 agonist. U nekim izvođenjima, CD27 agonist je agonističko CD27 antitelo. U nekim izvođenjima, CD27 antitelo je varlilumab.
[0206] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je MGA271 (do B7H3) (WO 2011/109400).
2
[0207] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je abagovomab, adekatumumab, afutuzumab, alemtuzumab, anatumomab mafenatoks, apolizumab, atezolimab, avelumab, blinatumomab, BMS-936559, katumaksomab, durvalumab, epakadostat, epratuzumab, indoksimod, inotuzumab ozogamicin, intelumumab, ipilimumab, isatuksimab, lambrolizumab, MED14736, MPDL3280A, nivolumab, obinutuzumab, okaratuzumab, ofatumumab, olatatumab, pembrolizumab, pidilizumab, rituksimab, ticilimumab, samalizumab, ili tremelimumab.
[0208] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je imunostimulatorni agens. Na primer, antitela koja blokiraju osu inhibicije PD-1 i PD-L1 mogu da oslobode aktivirane tumor-reaktivne T ćelije i pokazalo se u kliničkim ispitivanjima da indukuju trajne anti-tumorske odgovore u rastućim brojevima histologija tumora, uključujući neke tipove tumora koji se konvencionalno ne smatraju osetljivim na imunoterapiju. Videti, npr., Okazaki, T. et al. (2013) Nat. Immunol. 14, 1212-1218; Zou et al. (2016) Sci. Transl. Med.8. Pokazalo se da anti-PD-1 antitelo nivolumab (Opdivo<®>, Bristol-Myers Squibb, also known as ONO-4538, MDX1106 and BMS-936558), ima potencijal da unapredi sveukupno preživljavanje kod pacijenata sa svetloćelijskim karcinomom bubrega (RCC) koji su doživeli progresiju bolesti tokom ili posle prethodne anti-angiogene terapije.
[0209] U nekim izvođenjima, imunomodulatorni terapeutik specifično indukuje apoptozu tumorskih ćelija. Odobreni imunomodulatorni terapeutici koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju: pomalidomid (Pomalyst<®>, Celgene); lenalidomid (Revlimid<®>, Celgene); ingenol mebutat (Picato<®>, LEO Pharma).
[0210] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je vakcina protiv kancera. U nekim izvođenjima, vakcina protiv kancera je odabrana od: sipuleucel-T (Provenge<®>, Dendreon/Valeant Pharmaceuticals), koji je odobren za lečenje asimptomatskog, ili minimalno simptomatskog metastatskog otpornog na kastraciju (hormonski-refraktornog) kancera prostate; i talimogene laherparepvec (Imlygic<®>, BioVex/Amgen, prethodno poznatog pod T-VEC), genetički modifikovane onkolitične virusne terapije koja je odabrana za lečenje neresektabilnih kutanih, subkutanih i nodalnih lezija u melanomu. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je odabran od onkolitične virusne terapije kao što je peksastimogen devacirepvec (PexaVec/JX-594, SillaJen/prethodno Jennerex Biotherapeutics), virus vakcinije sa nedostatkom timidin kinaze (TK-) modifikovan da eksprimira GM-CSF, za hepatocelularni karcinom (NCT02562755) i melanoma (NCT00429312); pelareorep (Reolysin<®>, Oncolytics Biotech), varijanta respiratornog enteričnog siročeta virusa (reovirus) koji se ne replicira u ćelijama koje nisu RAS-aktivirane, u brojnim kancerima, uključujući kolorektalni kancer (NCT01622543); kancer prostate (NCT01619813); kancer skvamoznih ćelija glave i vrata (NCT01166542); pankreasni adenokarcinom (NCT00998322); i karcinom pluća ne-malih ćelija (NSCLC) (NCT 00861627); enadenotucirev (NG-348, PsiOxus, ranije poznat pod imenom ColoAd1), i adenovirus koji je modifikovan da eksprimira CD80 pune dužine i fragment antitela koji je specifičan za protein CD3 receptora T-ćelije, u kanceru jajnika (NCT02028117); metastatski ili uznapredovali epitelni tumori kao što su u kolorektalnom kanceru, kanceru bešike, karcinomu skvamoznih ćelija glave i vrata i kanceru pljuvačnih žlezda (NCT02636036); ONCOS-102 (Targovax/formerly Oncos), adenovirus koji je modifikovan da eksprimira GM-CSF, u melanomu (NCT03003676); i peritonealnoj bolesti, kolorektalnom kanceru ili kanceru jajnika (NCT02963831); GL-ONC1 (GLV-1h68/GLV-1h153, Genelux GmbH), vakcinija virusima koji su modifikovani da eksprimiraju beta-galactozidazu (beta-gal)/beta-glukoronidazu ili beta-gal/humani natrijum jodid simporter (hNIS), redom, proučavani su u peritonealnoj karcinomatozi (NCT01443260); kanceru falopijevih tuba (jajovoda), kanceru jajnika (NCT 02759588); ili CG0070 (Cold Genesys), adenovirus koji je modifikovan da eksprimira GM-CSF, u kanceru bešike (NCT02365818).
[0211] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je odabran od: JX-929 (SillaJen/formerly Jennerex Biotherapeutics), virus vakcinije sa nedostatkom TK i faktora rasta vakcinije modifikovan da eksprimira citozin deaminazu, koja je sposobna da konvertuje prolek 5-fluorocitozin u citotoksičan lek 5fluorouracil; TG01 i TG02 (Targovax/formerly Oncos), imunoterapijski agensi zasnovani na peptidima koji su ciljani na mutacije RAS koje se teško leče; i TILT-123 (TILT Biotherapeutics), modifikovani adenovirus naznačen: Ad5/3-E2F-delta24-hTNFα-IRES-hIL20; i VSV-GP (ViraTherapeutics) virus vezikularnog stomatitisa (VSV) koji je modifikovan da eksprimira glikoprotein (GP) virusa limfocitnog horiomeningitisa (LCMV), koji se dalje može modifikovati da eksprimira antigene dizajnirane da podignu odgovor antigen specifičnih CD8<+>T ćelija.
[0212] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je T-ćelija koja je modifikovana da eksprimira himerni antigenski receptor, ili CAR. T-ćelije modifikovane da eksprimiraju takav himerni antigenski receptor se nazivaju CAR-T ćelije.
[0213] Konstruisani su CAR-ovi koji se sastoje od vezujućih domena, koji mogu biti izvedeni iz prirodnih liganada, jednolančanih varijabilnih fragmenata (scFv) izvedenih iz monoklonskih antitela koji su specifičnih za antigene na ćelijskoj površini, spojenih sa endodomenima koji su funkcionalni kraj T-ćelijskog receptora (TCR), kao što je CD3-zeta signalni domen iz TCR-a, koji je sposoban da generiše aktivacioni signal u T limfocitima. Nakon vezivanja antigena, takva CAR veza sa endogenim signalnim putevima u efektorskim ćelijama i stvaraju aktivirajuće signale slične onima koje pokreće TCR kompleks.
[0214] Na primer, u nekim izvođenjima CAR-T ćelija je jedna od onih koje se opisuju u U.S. Patentu 8,906,682, koji prikazuje CAR-T ćelije koje su modifikovane da sadrže ekstraćelijski domen koji ima domen za vezivanje antigena (kao što je domen koji se vezuje za CD19), koji je spojen sa unutarćelijskim domenom za signalizaciju zeta lanca kompleksa antigenskog receptora T ćelija (kao što je CD3 zeta). Kada se eksprimira u T ćelijama, CAR je sposoban da preusmeri prepoznavanje antigena na osnovu specifičnosti antigenskog vezivanja. U slučaju CD19, antigen je eksprimiran na malignim B ćelijama. Trenutno je u toku preko 200 kliničkih ispitivanja koja koriste CAR-T u širokom spektru indikacija. [https://clinicaltrials.gov/ct2/results?term=chimeric+anti- gen+receptors&pg=1].
[0215] U nekim izvođenjima, imunstimulatorni agens je aktivator siroče receptora γ povezanog sa receptorom retinoične kiseline (RORγt). RORγt je faktor transkripcije sa ključnim ulogama u diferencijaciji i održavanju efektorskih podskupova Tipa 17 CD4+ (Th17) i CD8+ (Tc17) T ćelija, kao i diferencijaciji podpopulacija urođenih imunskih ćelija koje eksprimiraju IL-17 kao što su NK ćelije. U nekim izvođenjima, aktivator RORγt je LYC-55716 (Lycera), koji se trenutno procenjuje u kliničkim ispitivanjima za lečenje čvrstih tumora (NCT02929862).
[0216] U nekim izvođenjima, imunstimulatorni agens je agonist ili aktivator receptora sličnog tolu (TLR). Pogodni aktivatori TLR-a uključuju agonist ili aktivator TLR9 kao što je SD-101 (Dynavax). SD-101 je imunostimulatorni CpG koji se proučava za B-ćelijske, folikularne i druge limfome (NCT02254772). Agonisti ili aktivatori TLR8 koji se mogu koristiti u predmetnom pronalasku uključuju motolimod (VTX-2337, VentiRx Pharmaceuticals) koji se proučava za karcinom skvamoznih ćelija glave i vrata (NCT02124850) i kancera jajnika (NCT02431559).
[0217] Drugi imuno-onkološki agensi koji se mogu koristiti u predmetnom pronalasku uključuju: urelumab (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), anti-CD137 monoklonsko antitelo; varlilumab (CDX-1127, Celldex Therapeutics), anti-CD27 monoklonsko antitelo; BMS-986178 (Bristol-Myers Squibb), anti-OX40 monoklonsko antitelo; lirilumab (IPH2102/BMS-986015, Innate Pharma, Bristol-Myers Squibb), anti-KIR monoklonsko antitelo; monalizumab (IPH2201, Innate Pharma, AstraZeneca) anti-NKG2A monoklonsko antitelo; andekaliksimab (GS-5745, Gilead Sciences), anti-MMP9 antitelo; i MK-4166 (Merck & Co.), anti-GITR monoklonsko antitelo.
4
[0218] U nekim izvođenjima, imunostimulatorni agens je odabran od elotuzumaba, mifamurtida, agonista ili aktivatora receptora sličnog tolu, i aktivatora RORγt.
[0219] U nekim izvođenjima, imunostimulatorni terapeutik je rekombinantni humani interleukin 15 (rhlL-15). rhIL-15 je klinički ispitan kao terapija za melanom i karcinom ćelija bubrega (NCT01021059 i NCT01369888) i leukemije (NCT02689453). U nekim izvođenjima, imunostimulatorni agens je rekombinantni humani interleukin 12 (rhIL-12). U nekim izvođenjima, imunoterapeutik zasnovan na IL-15 je heterodimerni IL-15 (hetIL-15, Novartis/Admune), spojeni kompleks koji se sastoji iz sintetičkog oblika endogenog IL-15 u kompleksu sa rastvorljivim IL-15 vezujućim proteinom IL-15 receptor alfa lanca (IL15:slL-15RA), koji je ispitan u fazi 1 kliničkih testiranja melanoma, karcinoma ćelija bubrega, kancera nemalih ćelija pluća i karcinoma skvamoznih ćelija glave i vrata (NCT02452268). U nekim izvođenjima, rekombinantni humani interleukin 12 (rhlL-12) je NM-IL-12 (Neumedicines, Inc.), NCT02544724, ili NCT02542124.
[0220] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je odabran od onih koji se opisuju u Jerry L. Adams et al., "Big opportunities for small molecules in immuno-oncology," Cancer Therapy 2015, Vol.
14, pages 603-622. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je odabran od primera koji su opisani u Tabeli 1 Jerry L. Adams et al. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je mali molekul koji cilja na imuno-onko metu odabranu od onih koji se navode u Tabeli 2 Jerry L. Adams et al. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je mali molekul agens koji je odabran od onih koji se navode u Tabeli 2 Jerry L. Adams et al.
[0221] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je odabran od malih molekula imuno-onkoloških agenasa koji su opisani u Peter L. Toogood, "Small molecule immuno-oncology therapeutic agents," Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters 2018, Vol.28, pages 319-329. U nekim izvođenjima, imunoonkološki agens je agens koji cilja puteve kao što su opisani u Peter L. Toogood.
[0222] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je odabran od onih koji su opisani u Sandra L. Ross et al., "Bispecific T cell engager (BiTE@) antibody constructs can mediate bystander tumor cell killing", PLoS ONE 12(8): e0183390. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je konstrukt antitela koji angažuje bispecifične T ćelije (BiTE@). U nekim izvođenjima, konstrukt antitela koji angažuje bispecifičnu T ćeliju (BiTE@) je konstrukt bispecifičnog antitela CD19/CD3. U nekim izvođenjima, konstrukt antitela koji angažuje bispecifične T ćelije (BiTE@) je konstrukt bispecifičnog antitela EGFR/CD3. U nekim izvođenjima konstrukt antitela koji angažuje bispecifične T ćelije (BiTE@) aktivira T ćelije. U nekim izvođenjima, konstrukt antitela koji angažuje bispecifične T ćelije (BiTE@) aktivira T ćelije, koje oslobađaju citokine uključujući pojačanu regulaciju unutarćelijskog adhezionog molekula 1 (ICAM-1) i FAS na bystander ćelije. U nekim izvođenjima, konstrukt antitela koji angažuje bispecifične T ćelije (BiTE@) aktivira T ćelije što rezultuje indukcijom lize bystander ćelija. U nekim izvođenjima, bystander ćelije su u čvrstim tumorima. U nekim izvođenjima, bystander ćelije koje su lizirane nalaze se u blizini BiTE<®>- aktiviranih T ćelija. U nekim izvođenjima, bystander ćelije sadrži ćelije kancera koje su negativne za tumor-povezani antigen (TAA). U nekim izvođenjima, bystander ćelije sadrže EGFR-negativne ćelije kancera. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je antitelo koje blokira PD-L1/PD1 osu i/ili CTLA4. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je ex vivo proširena T ćelija koja infiltrira tumor. U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je konstrukt bispecifičnog antitela ili himerni antigenski receptori (CARs) koji direktno povezuju T ćelije sa površinskim antigenima povezanim sa tumorom (TAAs).
Primeri inhibitora imunskih kontrolnih tačaka
[0223] U nekim izvođenjima, imuno-onkološki agens je inhibitor imunske kontrolne tačke kao što se ovde ovde opisuje.
[0224] Termin "inhibitor kontrolne tačke" kao što se ovde koristi se odnosi na agense korisne u u sprečavanju ćelija kancera u izbegavanju imunskog sistema pacijenta. Jedan od glavnih mehanizama subverzije antitumorskog imuniteta poznat je kao "iscrpljenost T-ćelija", koja je rezultat hroničnog izlaganja antigenima što je dovelo do pojačane regulacije inhibitornih receptora. Ovi inhibitorni receptori služe kao imunološke kontrolne tačke kako bi se sprečile nekontrolisane imunološke reakcije.
[0225] PD-1 i koinhibitorni receptori kao što je antigen 4 citotoksičnog T-limfocita (CTLA-4, B i T Limfocitni Atenuator (BTLA; CD272), T ćelijski Imunoglobulin i domen-3 Mucina (Tim-3), Limfocitni Aktivacioni Gen-3 (Lag-3; CD223), i drugi su često označeni kao regulatori kontrolne tačke. Oni deluju kao molekularni "čuvari vrata" koji omogućavaju ekstraćelijskim informacijama da diktiraju da li će se napredovanje ćelijskog ciklusa i nastaviti drugi intracelularni signalni procesi.
[0226] U nekim izvođenjima, inhibitor imunološke kontrolne tačke je antitelo na PD-1. PD-1 se vezuje za receptor 1 programirane ćelijske smrti (PD-1) da spreči vezivanje receptora za inhibitorni ligand PDL-1, čime se prevazilazi sposobnost tumora da potisnu antitumorski imuni odgovor domaćina.
[0227] U jednom aspektu, inhibitor kontrolne tačke je biološki terapeutik ili mali molekul. U drugom aspektu, inhibitor kontrolne tačke je monoklonsko antitelo, humanizovano antitelo, puno humano antitelo, spojeni protein ili njihova kombinacija. U daljem aspektu, inhibitor kontrolne tačke inhibira protein kontrolne tačke koji je odabran od CTLA-4, PDLI, PDL2, PDI, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK 1, CHK2, A2aR, B-7 familije liganda ili njihove kombinacije. U dodatnom aspektu, inhibitor kontrolne tačke interaguje sa ligandom proteina kontrolne tačke koji je odabran od CTLA-4, PDLI, PDL2, PDI, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD160, CGEN-15049, CHK 1, CHK2, A2aR, B-7 familije liganada ili njihove kombinacije. U aspektu, inhibitor kontrolne tačke je imunostumulatorni agens, faktor rasta T ćelija, interleukin, antitelo, vakcina ili njihova kombinacija. U daljem aspektu, interleukin je IL-7 ili IL-15. U specifičnom aspektu, interleukin je glikozilovani IL-7. U dodatnom aspektu, vakcina je vakcina dendritičnih ćelija (DC).
[0228] Inhibitori kontrolne tačke uključuju bilo koji agens koji blokira ili inhibira na statistički značajan način inhibitorne puteve imunog sistema. Takvi inhibitori mogu uključivati inhibitore malih molekula ili mogu uključivati antitela, ili njihove fragmente koji se vezuju za antigen, koji se vezuju za i blokiraju ili inhibiraju receptore imunološke kontrolne tačke ili antitela koja se vezuju za i blokiraju ili inhibiraju ligande receptora kontrolne tačke imuniteta. Ilustrativni molekuli kontrolnih tačaka koji mogu biti ciljani za blokiranje ili inhibiciju uključuju, ali nisu ograničeni na, CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, B7-H3, B7-H4, BTLA, HVEM, GAL9, LAG3, TIM3, VISTA, KIR , 2B4 (pripada CD2 porodici molekula i eksprimiran je na svim NK, γδ, i memorijskim CD8+ (αβ) T ćelijama), CD160 (koji se takođe naziva BI55), CGEN-15049, CHK 1 i CHK2 kinaze, A2aR i različiti ligandi B-7 porodice. Ligandi porodice B7 uključuju, ali nisu ograničeni na, B7-1, B7-2, B7-DC, B7-H1, B7-H2, B7-H3, B7-H4, B7-H5, B7-H6 i B7-H7. Inhibitori kontrolne tačke uključuju antitela ili njihove fragmente koji se vezuju za antigen, druge vezujuće proteine, biološke terapeutike ili male molekule, koji se vezuju za i blokiraju ili inhibiraju aktivnost jednog ili više CTLA-4, PDL1, PDL2, PD1, BTLA, HVEM, TIM3, GAL9, LAG3, VISTA, KIR, 2B4, CD 160 i CGEN-15049. Ilustrativni inhibitori imunološke kontrolne tačke uključuju Tremelimumab (antitelo koje blokira CTLA-4), anti-OX40, PD-LI monoklonsko antitelo (Anti-B7-HI; MEDI4736), MK-3475 (PD-1 blokator), Nivolumab (anti-PDI antitelo), CT-011 (anti-PDI antitelo), BY55 monoklonsko antitelo, AMP224 (anti-PDLI antitelo), BMS-936559 (anti-PDLl antitelo), MPLDL3280A (anti-PDLl antitelo), MSB0010718C (anti-PDLI antitelo) i ipilimumab (inhibitor anti-CTLA-4 kontrolne tačke).
[0229] Proteinski ligandi kontrolne tačke uključuju, ali nisu ograničeni na PD-LI, PD-L2, B7-H3, B7-H4, CD28, CD86 i TIM-3.
[0230] U određenim izvođenjima, inhibitor imunske kontrolne tačke je odabran od antagonista PD-1, antagonista PD-L1, i antagonista CTLA-4. U nekim izvođenjima, ihibitor kontrolne tačke je odabran iz grupe koja se sastoji iz nivolumaba (Opdivo<®>), ipilimumaba (Yervoy<®>), i pembrolizumaba (Keytruda<®>). U nekim izvođenjima, inhibitor kontrolne tačke je odabran od: nivolumaba (anti-PD-1 antitelo, Opdivo<®>, Bristol-Myers Squibb); pembrolizumaba (anti-PD-1 antitelo, Keytruda<®>, Merck); ipilimumaba (anti-CTLA-4 antitelo, Yervoy<®>, Bristol-Myers Squibb); durvalumaba (anti-PD- L1 antitelo, Imfinzi<®>, AstraZeneca); i atezolizumaba (anti-PD-L1 antitelo, Tecentriq<®>, Genentech).
[0231] U nekim izvođenjima, inhibitor kontrolne tačke je odabran iz grupe koja se sastoji iz lambrolizumaba (MK- 3475), nivolumaba (BMS-936558), pidilizumaba (CT-011), AMP-224, MDX-1105, MEDI4736, MPDL3280A, BMS-936559, ipilimumaba, lirlumaba, IPH2101, pembrolizumaba (Keytruda<®>), i tremelimumaba.
[0232] U nekim izvođenjima, inhibitor imunološke kontrolne tačke je: REGN2810 (Regeneron), anti-PD-1 antitelo testirano kod pacijenata sa karcinomom bazalnih ćelija (NCT03132636); NSCLC (NCT03088540); karcinom skvamoznih ćelija kože (NCT02760498); limfom (NCT02651662); i melanom (NCT03002376); pidilizumab (CureTech), takođe poznat kao CT-011, antitelo koje se vezuje za PD-1, u kliničkim ispitivanjima za difuzni krupnoćelijski B limfom i multipli mijelom; avelumab (Bavencio®, Pfizer/Merck KGaA), takođe poznat kao MSB0010718C), potpuno humano IgG1 anti-PD-L1 antitelo, u kliničkim ispitivanjima za karcinom pluća nemalih ćelija, karcinom Merkelovih ćelija, mezoteliom, čvrstge tumore, kancer bubrega, kancer jajnika, kancer mokraćne bešike, kancer glave i vrata i kancer želuca; ili PDR001 (Novartis), inhibitorno antitelo koje se vezuje za PD-1, u kliničkim ispitivanjima za kancer pluća ne-malih ćelija, melanom, trostruko negativan kancer dojke i uznapredovale ili metastatske čvrste tumore. Tremelimumab (CP-675,206; Astrazeneca) je potpuno humano monoklonsko antitelo protiv CTLA-4 koje je proučavano u kliničkim ispitivanjima za brojne indikacije, uključujući: mezoteliom, kolorektalni kancer, kancer bubrega, kancer dojke, kancer pluća i kancer nemalih ćelija pluća, duktalni adenokarcinom pankreasa, kancer pankreasa, kancer germinativnih ćelija, kancer skvamoznih ćelija glave i vrata, hepatocelularni karcinom, kancer prostate, kancer endometrijuma, metastatski kancer u jetri, kancer jetre, limfom velikih B ćelija, kancer jajnika, kancer grlića materice, metastatski anaplastični rak tiroidee, kancer urotela, kancer falopijevih tupa, multipli mijelom, kancer mokraćne bešike, sarkom mekog tkiva, i melanom. AGEN-1884 (Agenus) je anti-CTLA4 antitelo koje se proučava u kliničkim ispitivanjima Faze 1 za uznapredovale čvrste tumore (NCT02694822).
[0233] U nekim izvođenjima, inhibitor kontrolne tačke je inhibitor T-ćelijskog imunoglobulina mucina koji sadrži protein-3 (TIM-3). TIM-3 inhibitori koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju TSR-022, LY3321367 i MBG453. TSR-022 (Tesaro) je anti-TIM-3 antitelo koje se proučava kod čvrstih tumora (NCT02817633). LY3321367 (Eli Lilli) je anti-TIM-3 antitelo koje se proučava u čvrstim tumorima (NCT03099109). MBG453 (Novartis) je anti-TIM-3 antitelo koje se proučava kod uznapredovalih maligniteta (NCT02608268).
[0234] U nekim izvođenjima, inhibitor kontrolne tačke je inhibitor T ćelijskog imunoreceptora sa Ig i ITIM domenima, ili TIGIT, imuni receptor na određenim T ćelijama i NK ćelijama. Inhibitori TIGIT koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju BMS-986207 (Bristol-Myers Squibb), anti-TIGIT monoklonsko antitelo (NCT02913313); OMP-313M32 (On-comed); i anti-TIGIT monoklonsko antitelo (NCT03119428).
[0235] U nekim izvođenjima, inhibitor kontrolne tačke je inhibitor gena aktivacije limfocita-3 (LAG-3). LAG-3 inhibitori koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju BMS-986016 i REGN3767 i IMP321. BMS-986016 (Bristol-Myers Squibb), anti-LAG-3 antitelo, proučava se kod glioblastoma i gliosarkoma (NCT02658981). REGN3767 (Regeneron), takođe je anti-LAG-3 antitelo, i proučava se kod maligniteta (NCT03005782). IMP321 (Immutep S.A.) je LAG-3-!g spojeni protein, koji se proučava u: melanomu (NCT02676869); adenokarcinomu (NCT02614833); i metastatskom kanceru dojke (NCT00349934).
[0236] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju agoniste OX40. Agonisti OXS40 agonisti koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: PF-04518600/PF-8600 (Pfizer), agonističko anti-OX40 antitelo, kod metastatskog karcinoma bubrega (NCT03092856) i uznapredovalih kancera i neoplazmi (NCT02554812; NCT05082566); GSK3174998 (Merck), agonističko anti-OX40 antitelo, u Fazi 1 ispitivanja raka (NCT02528357); MEDI0562 (Medimmune/AstraZeneca), agonističko anti-OX40 antitelo, u uznapredovalim čvrstim tumorima (NCT02318394 i NCT02705482); MEDI6469, agonističko anti-OX40 antitelo (Medimmune/AstraZeneca), kod pacijenata sa kolorektalnim karcinomom (NCT02559024), kancerom dojke (NCT01862900), kancerom glave i vrata (NCT02274155) i metastatskim kancerom prostate (NCT01303705); i BMS-986178 (Bristol-Myers Squibb) agonističko anti-OX40 antitelo, kod uznapredovalih kancera (NCT02737475).
[0237] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju agoniste CD137 (takođe nazvan 4-1BB). Agonisti CD137 koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: utomilumab (PF-05082566, Pfizer) agonističko anti-CD137 antitelo, u difuznom krupnoćelijskom B-limfomu (NCT02951156) i kod uznapredovalih kancera i neoplazmi (NCT02554812 i NCT05082566); urelumab (BMS-663513, Bristol-Myers Squibb), agonističko anti-CD137 antitelo, kod melanoma i kancera kože (NCT02652455) i glioblastoma i gliosarkoma (NCT02658981).
[0238] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju agoniste CD27. Agonisti CD27 koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: varlilumab (CDX-1127, Celldex Therapeutics) agonističko anti-CD27 antitelo, kod skvamoznih ćelija kancera glave i vrata, karcinoma jajnika, kolorektalnog karcinoma, karcinoma bubrežnih ćelija i glioblastoma (NCT0235) ; limfomi (NCT01460134); i glioma i astrocitoma (NCT02924038).
[0239] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju agoniste receptora faktora nekroze tumora izazvanih glukokortikoidima (GITR). GITR agonisti koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: TRKS518 (Leap Therapeutics), agonističko anti-GITR antitelo, kod malignog melanoma i drugih malignih čvrstih tumora (NCT01239134 i NCT02628574); GWN323 (Novartis), agonističko anti-GITR antitelo, kod čvrstih tumora i limfoma (NCT02740270); INCAGN01876 (Incyte/Agenus), agonističko anti-GITR antitelo, kod uznapredovalih kancera (NCT02697591 i NCT03126110); MK-4166 (Merck), agonističko anti-GITR antitelo, u čvrstim tumorima (NCT02132754) i MEDI1873 (Medimmune/AstraZeneca), agonistički heksamerni GITR-ligand molekul sa humanim IgG1 Fc domenom, u uznapredovalim čvrstim tumorima (NCT021602).5
[0240] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju agoniste inducibilnog kostimulatora T-ćelija (ICOS, takođe poznat kao CD278). ICOS agonisti koje se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: MEDI-570 (Medimmune), agonističko anti-ICOS antitelo, u limfomima (NCT02520791); GSK3359609 (Merck), agonističko anti-ICOS antitelo, u Fazi 1 (NCT02723955); i JTX-2011 (Jounce Therapeutics), agonističko anti-ICOS antitelo, u Fazi 1 (NCT02904226).
[0241] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju inhibitore receptora sličnih IgG ubica (KIR). KIR inhibitori koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: lirilumab (IPH2102/BMS-986015, Innate Pharma/Bristol-Myers Squibb), anti-KIR antitelo, u leukemijama (NCT01687387, NCT02399917, NCT02481297, NCT02599649), multipli mijelom (NCT02252263), i limfom (NCT01592370); IPH2101 (1-7F9, Innate Pharma) u mijelomu (NCT01222286 i NCT01217203); i IPH4102 (Innate Pharma), anti-KIR antitelo koje se veže za tri domena dugog citoplazmatskog repa (KIR3DL2), u limfomu (NCT02593045).
[0242] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u predmetnom pronalasku uključuju inhibitore CD47 interakcije između CD47 i signalnog regulatornog proteina alfa (SIRPa). Inhibitori CD47/SIRPa koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: ALX-148 (Alexo Therapeutics), antagonistička varijanta (SIRPa) koja se vezuje za CD47 i sprečava CD47/SIRPa-posredovanu signalizaciju, u fazi 1 (NCT03013218); TTI-621 (SIRPa-Fc, Trillium Therapeutics), rastvorljivi rekombinantni spojeni protein koji je dobijen spajanjem N-terminalnog CD47-vezujućeg domena SIRPa sa Fc domenom humanog IgG1, deluje tako što vezuje humani CD47, i sprečava ga da isporuči svoj "ne jedi" signal makrofagima, nalazi se u kliničkim ispitivanjima u Fazi 1 (NCT02890368 i NCT02663518); CC-90002 (Celgene), anti-CD47 antitelo, u leukemijama (NCT02641002); i Hu5F9-G4 (Forty Seven, Inc.), u kolorektalnim neoplazmama i čvrstim tumorima (NCT02953782), akutna mijeloidna leukemija (NCT02678338) i limfom (NCT02953509).
[0243] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju inhibitore CD73. Inhibitori CD73 koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: MEDI9447 (Medimmune), anti-CD73 antitelo, kod čvrstih tumora (NCT02503774); i BMS-986179 (Bristol-Myers Squibb), anti-CD73 antitelo, u čvrstim tumorima (NCT02754141).
[0244] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju agoniste stimulatora proteina gena interferona (STING, takođe poznat kao transmembranski protein 173, ili TMEM173). Agonisti STING-a koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: MK-1454 (Merck), agonistički sintetički ciklični dinukleotid, kod limfoma (NCT03010176); i ADU-S100 (MIW815, Aduro Biotech/Novartis), agonistički sintetički ciklični dinukleotid, u Fazi 1 (NCT02675439 i NCT03172936).
[0245] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u predmetnom pronalasku uključuju inhibitore CSF1R. Inhibitori CSF1R koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju: peksidartinib (PLX3397, Plexxikon), CSF1R mali molekul inhibitor, u kolorektalnom kanceru, kanceru pankreasa, metastatskim i uznapredovalim kancerima (NCT02777710) i melanomu, kancer nemalih ćelija pluća, kancer skvamoznih ćelija glave i vrata, gastrointestinalni stromalni tumor (GIST) i kancer jajnika (NCT02452424); i IMC-CS4 (LY3022855, Lilly), anti-CSF-1R antitelo, u kanceru pankreasa (NCT03153410), melanom (NCT03101254), i čvrsti tumori (NCT02718911); i BLZ945 metilamid (4-[2((1R,2R)-2-hidroksicikloheksilamino)-benzotiazol-6-iloksil]-piridin-2-karboksilne kiseline, Novartis), oralno raspoloživ inhibitor CSF1R, u uznapredovalim čvrstim tumorima (NCT02829723).
[0246] Inhibitori kontrolne tačke koji se mogu koristiti u ovom pronalasku uključuju inhibitore NKG2A receptora. Inhibitori NKG2A receptora koji se proučavaju u kliničkim ispitivanjima uključuju monalizumab (IPH2201, Innate Pharma), anti-NKG2A antitelo, kod neoplazmi glave i vrata (NCT02643550) i hronične limfocitne leukemije (NCT02557516).
[0247] U nekim izvođenjima, inhibitor imunske kontrolne tačke je odabran od nivolumaba, pembrolizumaba, ipilimumaba, avelumaba, durvalumaba, atezolizumaba, ili pidilizumaba.
Terapeutske upotrebe
[0248] Biciklični peptidi pronalaska imaju specifičnu upotrebu kao agensi za vezivanje nektina-4.
[0249] Nektin-4 je površinski molekul koji pripada familiji proteina nektina, koja se sastoji od 4 člana. Nektini su molekuli ćelijske adhezije koji igraju ključnu ulogu u različitim biološkim procesima kao što su polaritet, proliferacija, diferencijacija i migracija, za epitelne, endotelne, imune i neuronske ćelije, tokom razvoja i odraslog života. Oni su uključeni u nekoliko patoloških procesa kod ljudi. Oni su glavni receptori za poliovirus, virus herpes simpleksa i virus malih boginja. Mutacije u genima koji kodiraju nektin-1 (PVRL1) ili nektin-4 (PVRL4) uzrokuju sindrome ektodermalne displazije povezane sa drugim abnormalnostima. Nektin-4 se eksprimuje tokom fetalnog razvoja. U tkivima odraslih njegova ekspresija je ograničenija nego kod drugih članova familije. Nektin-4 je antigen povezan sa tumorom u 50%, 49% i 86% karcinoma dojke, jajnika i pluća, uglavnom na tumorima koji nose loše prognoze. Njegova ekspresija se ne detektuje u odgovarajućim normalnim tkivima. Kod tumora dojke, nektin-4 je izražen uglavnom u trostruko negativnim i ERBB2+ karcinomima. U serumu pacijenata sa ovim karcinomima, otkrivanje rastvorljivih oblika nektina-4 je povezano sa lošom prognozom. Nivoi serumskog nektina-4 se povećavaju tokom metastatske progresije i smanjuju se nakon tretmana. Ovi rezultati sugerišu da bi nektin-4 mogao biti pouzdana meta za lečenje kancera. Shodno tome, nekoliko anti-nektin-4 antitela je opisano u prethodnom stanju tehnike. Konkretno, Enfortumab Vedotin (ASG-22ME) je konjugat antitela-leka (ADC) koji cilja na nektin-4 i trenutno se klinički ispituje za lečenje pacijenata koji pate od čvrstih tumora.
[0250] Polipeptidni ligandi odabrani u skladu sa postupkom ovog pronalaska mogu se koristiti u in vivo terapeutskim i profilaktičkim primenama, in vitro i in vivo dijagnostičkim primenama, in vitro testovima i primenama reagensa, i slično. Ligandi koji imaju odabrane nivoe specifičnosti korisni su u primenama koje uključuju testiranje na ne-humanim životinjama, gde je poželjna unakrsna reaktivnost, ili u dijagnostičkim aplikacijama, gde unakrsna reaktivnost sa homolozima ili paralozima treba da se pažljivo kontroliše. U nekim primenama, kao što su primene vakcina, sposobnost izazivanja imunološkog odgovora na unapred određene opsege antigena može se iskoristiti da bi se vakcina prilagodila specifičnim bolestima i patogenima.
[0251] Suštinski čisti peptidni ligandi sa najmanje 90 do 95% homogenosti su poželjniji za primenu kod sisara, a 98 do 99% ili više homogenosti je najpoželjniji za farmaceutsku upotrebu, posebno kada je sisar čovek. Jednom prečišćeni, delimično ili do homogenosti po želji, odabrani polipeptidi se mogu koristiti dijagnostički ili terapeutski (uključujući ekstrakorporalno) ili u razvoju i izvođenju procedura testova, imunofluorescentnog bojenja i slično (Lefkovite and Pernis, (1979 and 1981) Immunological Methods, Volumes I and II, Academic Press, NY).
[0252] Prema daljem aspektu pronalaska, obezbeđen je peptidni ligand ili konjugat leka kao što je ovde definisano, za upotrebu u prevenciji, supresiji ili lečenju bolesti ili poremećaja posredovanih nektinom-4.
[0253] Prema daljem aspektu pronalaska, obezbeđen je konjugat leka kako je ovde definisan za upotrebu u postupku prevencije, supresije ili lečenja bolesti ili poremećaja posredovanih nektinom-4, pri čemu pomenuti postupak obuhvata davanje pacijentu kome je to potrebno efektorske grupe i konjugata leka peptidnog liganda kao što je ovde definisano.
[0254] U jednom izvođenju, nektin-4 je nektin-4 sisara. U daljem izvođenju, nektin-4 sisara je humani nektin-4.
[0255] U jednom izvođenju, bolest ili poremećaj posredovan nektinom-4 se bira između virusnih infekcija, sindroma ektodermalne displazije i drugih abnormalnosti, karcinoma dojke, jajnika i pluća, metastatske progresije i čvrstih tumora.
[0256] U sledećem izvođenju, bolest ili poremećaj posredovan nektinom-4 je odabran od kancera.
[0257] Primeri kancera (i njihovi benigni parnjaci) koji se mogu tretirati (ili inhibirati) uključuju, ali nisu ograničeni na tumore epitelnog porekla (adenome i karcinome različitih tipova uključujući
4
adenokarcinome, skvamozne karcinome, karcinome prelaznih ćelija i drugi karcinomi) kao što su karcinomi bešike i urinarnog trakta, dojke, gastrointestinalnog trakta (uključujući jednjak, stomak (želudac), tanko crevo, debelo crevo, rektum i anus), jetre (hepatocelularni karcinom), žučne kese i bilijarnog sistema, egzokrinog pankreasa, bubrega, pluća (na primer adenokarcinoma, karcinoma malih ćelija pluća, karcinoma nemalih ćelija pluća, bronhioalveolarnih karcinoma i mezotelioma), glave i vrata (na primer kancera jezika, bukalne šupljine, larinksa, farinksa, nazofarinksa, krajnika, pljuvačnih žlezda, nazalne šupljine i paranazalnih šupljina), jajnika, falopijevih tuba, peritoneuma, vagine, vulve, penisa, grlića materice, miometrijuma, endometrijuma, tiroidee (na primer tiroidnog folikularnog karcinoma), nadbubrežne žlezde, prostate, kože i adneksa (na primer melanoma, karcinoma bazalnih ćelija, karcinoma skvamoznih ćelija, keratoakantoma, displastičnog nevusa); hematoloških maligniteta (tj. leukemije, limfomi) i premalignih hematoloških poremećaja i poremećaja graničnog maligniteta uključujući hematološke malignitete i srodna stanja limfoidne linije (na primer akutne limfocitne leukemije [ALL], hronične limfocitne leukemije [CLL], limfoma B-ćelija kao što je difuzni B krupnoćelijski limfom [DLBCL], folikularni limfom, Burkitov limfom, limfom mantle ćelija, T-ćelijski limfomi i leukemije, limfomi prirodnih ćelija ubica [NK], Hodčkinovih limfoma, leukemija dlakastih ćelija, monoklonske gamopatije neizvesnog značaja, plasmacitoma, multiplog mijeloma, i posttransplancionih limfoproliferativnih poremećaja), i hematoloških maligniteta i srodnih stanja mijeloidnih linija (na primer akutne mijelogene leukemije [AML], hronične mijelogene leukemije [CML], hronične mijelomonocitne leukemije [CMML], hipereozinofilnog sindroma, mijeloproliferativnih poremećaja kao što je policitemija vera, esencijalna trombocitemija i primarna mijelofibroza, mijeloproliferativni sindrom, mijelodisplastični sindrom, i promijelocitna leukemija); tumori mezenihmalnog porekla, na primer sarkomi mekih tkiva, kostiju ili hrskavice kao što su osteosarkomi, fibrosarkomi, hondrosarkomi, rabdomiosarkomi, lejomiosarkomi, liposarkomi, angiosarkomi, Kapošijev sarkom, Ewing-ov sarkom, sinovijalni sarkomi, epitelioidni sarkomi, gastrointestinalni stromalni tumori, benigni i maligni histiocitomi, i dermatofibrosarcomaprotuberans; tumori centralnog ili perifernog nervnog sistema (na primer astrocitomi, gliomi i glioblastomi, meningiomi, ependimomi, tumori epifize i švanomi); endokrini tumori (na primer tumori hipofize, tumori nadbubrežne žlezde, tumori ćelija ostrvaca, tumori paratiroidnih žlezda, karcinoidni tumori i medularni karcinom tiroidee); tumori oka i adneksa (na primer retinoblastom); tumori germinativnih ćelija i trofoblastični tumori (na primer teratomi, seminomi, disgerminomi, hidatidiformna mola i horiokarcinomi); i pedijatrijski i embrionalni tumori (na primer meduloblastom, neuroblastom, Vilmsov tumor i primitivni neuroektodermalni tumori); ili sindromi, urođeni ili drugi, koji čine pacijenta podložnim malignitetu (na primer Xeroderma Pigmentosum).
[0258] U daljem izvođenju, kancer je izabran od hematopojetskog maligniteta kao što je izabran između: ne-Hodčkinovog limfoma (NHL), Burkitovog limfoma (BL), multiplog mijeloma (MM), B hronične limfocitne leukemije (B-CLL), B i T akutna limfocitna leukemija (ALL), T ćelijskog limfoma (TCL), akutne mijeloidne leukemije (AML), leukemije dlakavih ćelija (HCL), Hodčkinovog limfoma (HL) i hronične mijeloidne leukemije (CML).
[0259] U još jednom izvođenju, kancer je odabran od kancera pluća (npr. ne-malih ćelija pluća), kancera bešike, kancera pankreasa i kancera dojke. Podaci su ovde predstavljeni u Primerima 1 do 5 koji pokazuju da odabrani biciklični konjugati leka prema pronalasku pokazuju antitumorsko delovanje u ovim modelima kancera.
[0260] Reference ovde na termin "prevencija" uključuju primenu zaštitne kompozicije pre indukcije bolesti. "Supresija" se odnosi na davanje kompozicije nakon induktivnog događaja, ali pre kliničke pojave bolesti. "Lečenje" podrazumeva davanje zaštitne kompozicije nakon što se simptomi bolesti ispolje.
[0261] Dostupni su sistemi životinjskih modela koji se mogu koristiti za skrining efikasnosti peptidnih liganada u zaštiti od ili u lečenju bolesti. Upotreba sistema životinjskih modela je olakšana ovim pronalaskom, koji omogućava razvoj polipeptidnih liganada koji mogu unakrsno reagovati sa humanim i životinjskim metama, kako bi se omogućila upotreba životinjskih modela.
[0262] Osim toga, ovde su predstavljeni podaci koji pokazuju povezanost između varijacije broja kopija (CNV) i ekspresije gena za nektin-4 iz više tipova tumora. Prema tome, prema daljem aspektu pronalaska, obezbeđen je konjugat leka kako je ovde definisan za upotrebu u postupku prevencije, supresije ili lečenja kancera, pri čemu pomenuti postupak obuhvata davanje pacijentu kome je to potrebno efektorske grupe i konjugata leka peptidnog liganda kako je ovde definisano, pri čemu je navedeni pacijent identifikovan da ima povećanu varijaciju broja kopija (CNV) nektina-4.
[0263] U jednom izvođenju, kancer je izabran od onih koji su ovde identifikovani kao da imaju povećan CNV nektina-4. U daljem izvođenju, kancer je odabran od onih koji su ovde identifikovani kao da imaju povećan CNV nektina-4, i to: dojke, materice, bešike, adenokarcinoma pluća, plućnog skvamoza, grlića materice, glave i vrata, pankreasa, štitne žlezde, kolorektalni, timom, sarkom, karcinom bistrih ćelija bubrega (RCC), prostate i stomaka.
[0264] Pronalazak je dalje opisan u nastavku sa pozivanjem na sledeće primere.
Primeri
Skraćenice
[0265]
1,2,4-TriAz 3-(1,2,4-Triazol-1-il)-alanin
1Nal 1-Naftilalanin
2FuAla 2-Furilalanin
2MePhe 2-Metil-Fenilalanin
2Nal 2-Naftilalanin
2Pal 2-Piridilalanin
3,3-DPA 3,3-Difenilalanin
3MePhe 3-Metil-Fenilalanin
3Pal 3-Piridilalanin
4,4-BPA 4,4-Bifenilalanin
4,4-DFP 4,4-Difluoroprolin
4MePhe 4-Metil-Fenilalanin
4Pal 4-Piridilalanin
4ThiAz Beta-(4-Tiazolil)-Alanin
5FTrp 5-Fluoro-L-triptofan
Agb 2-Amino-4-gvanidinobutanska kiselina
Aib Aminoizobuterna kiselina
AzaTrp Azatriptofan
Aze Azetidin
C5A Ciklopentil glicin
Cha 3-Cikloheksil-alanin
Cpa Ciklopropilalanin
Cya Cisteinska kiselina
DOPA 3,4-Dihidroksi-fenilalanin
HArg HomoArginin
HGIn HomoGlutamin
Hleu HomeLeucin
Hphe HomoFenilalanin
Hse(me) Homoserin(Me)
HSer HomoSerin
HyP Hidroksiprolin
Lys(Ac) Lizin(Acetil)
Met(O2) Metionin sulfon
Nle Norleucin
Oic Oktahidroindolkarboksilna kiselina
Oxa Oksazolidin-4-karboksilna kiselina
pCoPhe para-Karboksi-Fenilalanin
PheOPhe 4-Fenoksi-fenilalanin
Phg Fenilglicin
Pip Pipekolinska kiselina
Pro(4NH) 4-Amino-Prolin
tBuAla t-Butil-Alanin
TetraZ Tetrazol Alanin
Thi Tienil-alanin
THP(O) Tetrahidropiran-4-propanska kiselina
THP(SO2) Diokso-4-tetrahidrotiopiranilsirćetna kiselina
Trp(Me) Metil Trptofan
Materijali i postupci
Sinteza peptida
[0266] Sinteza peptida je zasnovana na hemiji Fmoc, koristeći Symphony peptidnog sintetizatora koji je proizveden od Peptide Instruments i Syro II sintetizatora od MultiSynTech. Korišćene su standardne Fmoc-aminokiseline (Sigma, Merck), sa odgovarajućim zaštitnim grupama bočnog lanca: tamo gde je primenjivo korišćeni su standardni uslovi spajanja u svakom slučaju, nakon čega je usledilo uklanjanje zaštite korišćenjem standardne metodologije.
[0267] Alternativno, peptidi su prečišćeni korišćenjem HPLC i nakon izolacije su modifikovani sa 1,3,5-triakriloilheksahidro-1,3,5-triazinom (TATA, Sigma). Za ovo, linearni peptid je razblažen sa 50:50 MeCN:H2O do ~35 mL, dodato je -500 µL 100 mM TATA u acetonitrilu i reakcija je započeta sa 5 mL 1 M NH4HCO3u H2O. Reakcija je ostavljena da se razvija ~30 -60 min na sobnoj temperaturi i liofilizovana kada je reakcija završena (prema MALDI). Kada je završeno, 1 ml 1M L-cistein hidrohlorid monohidrata (Sigma) u H2O je dodato u reakciju tokom ~60 min na sobnoj temperaturi da bi se ugasio bilo koji višak TATA. Posle liofilizacije, modifikovani peptid je prečišćen kao gore, dok je Luna C8 zamenjen sa Gemini C18 kolonom (Phenomenex), i promenjena kiselina u 0,1% trifluorosirćetnu kiselinu. Čiste frakcije koje sadrže ispravan TATA-modifikovani materijal su sakupljene, liofilizovane i čuvane na -20°C za skladištenje.
[0268] Sve aminokiseline, osim ako nije drugačije naznačeno, korišćene su u L- konfiguracijama.
[0269] U nekim slučajevima peptidi se konvertuju u aktivirane disulfide pre spajanja sa slobodnom tiolnom grupom toksina korišćenjem sledećeg postupka; rastvor 4-metil(sukcinimidil 4-(2-piridiltio)pentanoata) (100 mM) u suvom DMSO (1.25 mol ekviv.) je dodat u rastvor peptida (20 mM) u suvom DMSO (1 mol ekviv.). Reakcija je dobro mešana i dodat je DIPEA (20 mol ekviv). Reakcija je praćena pomoću LC/MS do završetka.
4
Priprema bicikličnih peptidnih konjugata leka
Priprema BCY8549
[0270]
Uslovi razdvajanja: A faza: 0.075% TFA u H2O, B faza: MeCN
Metoda razdvajanja: 18-48-55min, RT=53.5min
Kolona razdvajanja: Luna 200*25mm 10µm, C18, 110A i Gemin150*30mm, C18, 5µm, 110A, spoj, 50°C Postupak rastvaranja: DMF
Čistoća razdvajanja: 95%
BCI8234 je sintetisan sintezom u čvrstoj fazi
�
Priprema jedinjenja 2
[0271] Peptid je sintetizovan korišćenjem standardne Fmoc hemije.
1) Dodati DCM u posudu koja sadrži CTC smolu (5 mmol, 4.3 g, 1.17 mmol/g) i Fmoc-Cit-OH (2.0 g, 5 mmol, 1.0 ekv.) sa mehurićima N2.
2) Dodati DIEA (4.0 ekv.) kap po kap i mešati 2 sata.
3) Dodati MeOH (5 mL) i mešati 30 min.
4) Ocediti i isprati sa DMF-om 5 puta.
5) Dodati 20% piperidin/DMF i reagovati 30 min.
6) Ocediti i isprati sa DMF-om 5 puta.
7) Dodati rastvor Fmoc-aminokiseline i mešati 30 sekundi, zatim dodati pufer za aktivaciju, mehuriće N2oko 1 sat.
8) Ponovite gore navedene korake od 4 do 7 za spajanje sledećih aminokiselina.
Napomena:
[0272]
[0273] 20% piperidina u DMF-u je korišćeno za uklanjanje zaštite Fmoc tokom 30 min. Reakcija spajanja je praćena ninhidrinskim testom, a smola je isprana sa DMF-om 5 puta.
Cepanje i prečišćavanje peptida:
4
1) Dodati pufer za cepanje (20%TFIP/80%DCM) u balon koji sadrži peptid zaštićen bočnim lancem na sobnoj temperaturi i mešati dva puta 1 sat.
2) Filtrirati i sakupiti filtrat.
3) Koncentrovati da bi se uklonio rastvarač.
4) Sirovi peptid je liofilizovan da bi se dobio konačni proizvod (1.4 g, 85.0 % prinos).
Priprema jedinjenja 3
[0275] U rastvor jedinjenja 2 (1.65 g, 5.01 mmol, 1.0 ekv) u DCM-u (30 mL) i MeOH (15 mL) dodat je EEDQ (2.48 g, 10.02 mmol, 2,0 ekv) i (4-aminofenil)metanol (740.37 mg, 6.01 mmol, 1.2 ekv). Smeša je mešana na 15°C tokom 16 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 2 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni pik sa željenim m/z. TLC je pokazao da je jedinjenje 2 potpuno potrošeno i da se formiraju mnoge nove tačke. Reakciona smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio rastvarač da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (ISCO®; 80 SepaFlash® Silica Flash kolona, eluent od 0-15 DCM/MeOH gradijent @ 60 mL/min). Jedinjenje 3 (1.3 g, 2.99 mmol, 59.72% prinos) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
Priprema jedinjenja 4
[0276] U rastvor jedinjenja 3 (1.3 g, 2.99 mmol, 1,0 ekv) u DMF-u (10 mL) dodat je DIEA (2.32 g, 17.95 mmol, 3.13 mL, 6.0 ekv) i bis(4-nitrofenil) karbonat (3.64 g, 11.97 mmol, 4.0 ekv). Smeša je mešana na 15 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (neutralno stanje). Jedinjenje 4 (1.0 g, 1.67 mmol, 55.74% prinos) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
Priprema jedinjenja 5
[0277] U rastvor jedinjenja 5 (250.53 mg, 417.84 µmol, 1.5 ekv) u DMF-u (5 mL) dodat je HOBt (56.46 mg, 417.84 µmol, 1.5 ekv) i DIEA (108.01 mg, 835.68 µmol, 145.56 µL, 3.0 ekv), MMAE (0.200 g, 278.56 µmol, 1.0 ekv.) Smeša je mešana na 35 °C tokom 12 sati. LC-MS je pokazao da je MMAE u potpunosti potrošen i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z. Reakcija je direktno prečišćena prep-HPLC (neutralno stanje). Jedinjenje 5 (0.180 g, 152.74 µmol, 54.83% prinos) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
Priprema jedinjenja 6
[0278] U rastvor jedinjenja 5 (0.170 g, 144.26 µmol, 1.0 ekv) u THF-u (5 mL) i H20 (5 mL) dodat je LiOH.H20 (12.11 mg, 288.51 µmol, 2.0 ekv). Smeša je mešana na 15 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 5 potpuno potrošeno i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z. Podešeni PH=7 koji su koristili AcOH i THF je uklonjen pod sniženim pritiskom da bi se dobio ostatak. Ostatak je prečišćen prep-HPLC (neutralno stanje). Jedinjenje 6 (0.185 g, sirovo) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
Priprema BCY8549
[0279] U rastvor jedinjenja 6 (0.100 g, 86.93 µmol, 1.0 ekv) u DMA (4 mL) dodat je HOSu (10.00 mg, 86.93 µmol, 1.0 ekv) i EDCI (16.66 mg, 86.93 µmol, 1.0 ekv). Nakon što je formiran NHS estar, β-Ala-BCI8234 (525.98 mg, 173.85 µmol, 2.0 ekv) i DIEA (33.70 mg, 260.78 µmol, 45.42 µL, 3.0 ekv). Smeša je mešana na 15°C tokom 4 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 6 potpuno potrošeno i da je otkriven
4
jedan glavni pik sa željenim m/z. Reakcija je direktno prečišćena prep-HPLC (TFA stanje). Jedinjenje BCI8549 (0.0528 g, 12.15 µmol, 13.98% prinosa, 95.70% čistoće) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. Vreme zadržavanja = 11.48 min. Pronađena masa = 1386.4 (M/3+H)
Priprema BCY8245
[0280]
Uslovi razdvajanja: A faza: 0.075% TFA u H2O, B faza: MeCN
Postupak razdvajanja: 18-48-55min, RT=53.5min
Kolona razdvajanja: Luna 200*25mm 10um, C18, 110A i Gemin150*30mm, C18, 5um, 110A, spoj, 50°C Postupak rastvaranja: DMF
Čistoća razdvajanja: 95%
[0281] BCY8234 je sintetisan sintezom u čvrstoj fazi.
Reakciona šema BCY8245 je prikazana ispod:
[0282
4
4
Priprema jedinjenja 3
[0283] Jedinjenje 3 je sintetisano postupkom u čvrstoj fazi. Pripema jedinjenja 4
[0284] U rastvor jedinjenja 3 (1.3 g, 3.23 mmol, 1.0 ekv) u DCM-u (10 mL) i MeOH (5 mL) dodat je EEDQ (1.60 g, 6.46 mmol, 2.0 ekv.) i (4-aminofenil)metanol (517.16 mg, 4.20 mmol, 1.3 ekv). Smeša je mešana na 20°C tokom 16 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 3 potpuno potrošeno i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na silika gelu (ISCO®; 40 g SepaFlash® Silica Flash kolona, eluent 0-15% DCM/MeOH gradijent @ 40 mL/min). Jedinjenje 4 (0.950 g, 1.87 mmol, 57.94% prinos) je dobijeno kao žuta čvrsta supstanca.
Priprema jedinjenja 5
[0285] U rastvor jedinjenja 4 (0.950 g, 1.87 mmol, 1.0 ekv) u DMF-u (5 mL) dodat je DIEA (1.21 g, 9.36 mmol, 1.63 mL, 5.0 ekv) i bis(4-nitrofenil) karbonat (2.28 g, 7.49 mmol, 4.0 ekv). Smeša je mešana na 20 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 4 potpuno potrošeno i da je detektovan jedan glavni pik sa željenim m/z. Reakcija je direktno prečišćena prep-HPLC (neutralno stanje). Jedinjenje 5 (0.400 g, 594.64 µmol, 31.77% prinos) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Priprema jedinjenja 6
[0286] U rastvor jedinjenja 5 (0.200 g, 297.32 µmol, 1.0 ekv) u DMF-u (5 mL) dodat je HOBt (52.23 mg, 386.51 µmol, 1.3 ekv) i DIEA (115.28 mg, 891.95 µmol, 155.36 µL, 3.0 ekv), MMAE (192.12 mg, 267.59 µmol, 0.9 ekv.). Smeša je mešana na 20°C tokom 16 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 5 potpuno potrošeno i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z. Reakcija je direktno prečišćena prep-HPLC (neutralno stanje). Jedinjenje 6 (0.160 g, 127.84 µmol, 43.00% prinos) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Priprema jedinjenja 7
[0287] U rastvor jedinjenja 6 (0.160 g, 127.84 µmol, 1.0 ekv) u THF-u (3 mL) i H20 (3 mL) dodat je LiOH.H20 (26.82 mg, 639.21 µmol, 5.0 ekv). Smeša je mešana na 20 °C tokom 1 h. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 6 potpuno potrošeno i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z. THF je uklonjen pod sniženim pritiskom i podešen pH=7 pomoću AcOH, smeša je liofilizovana. Jedinjenje 7 (0.130 g, 105.05 µmol, 82.17% prinos) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Priprema jedinjenja 8
[0288] U rastvor jedinjenja 7 (36.27 mg, 315.15 µmol, 3.0 ekv) u DMA (6 mL) i DCM (2 mL) dodat je EDCI (60.41 mg, 315.15 µmol, 3.0 ekv). Smeša je mešana na 15 °C tokom 3 hr. LC-MS je pokazao da je jedinjenje 7 potpuno potrošeno i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z. DCM je uklonjen pod sniženim pritiskom. Reakcija je direktno prečišćena prep-HPLC (neutralno stanje). Jedinjenje 8 (0.095 g, 71.18 µmol, 67.76% prinos) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca.
Priprema BCY8245
[0289] U rastvor BCY8234 (66.41 mg, 22.48 µmol, 1.0 ekv) u DMA (4 mL) dodat je DIEA (8.72 mg, 67.44 µmol, 11.75 µL, 3.0 ekv) i jedinjenje 8 (0.030 g, 22.48 µmol, 1.0 ekv). Smeša je mešana na 20°C tokom 16 h. LC-MS je pokazao da je BCI8234 potpuno potrošen i da je otkriven jedan glavni pik sa željenim m/z ili željenom masom. Reakcija je direktno prečišćena prep-HPLC (TFA stanje). Jedinjenje BCY8245 (0.0427 g, 10.16 µmol, 45.19% prinosa, 99.30% čistoće) je dobijeno kao bela čvrsta supstanca. Vreme zadržavanja = 11,.7 min. Pronađena masa = 1043.9 (M/4+H)
1
BIOLOŠKI PODACI
Test direktnog vezivanja nektina-4
[0290] Afinitet peptida pronalaska za humani nektin-4 (Ki) je određen korišćenjem testa polarizacije fluorescencije, u skladu sa metodama otkrivenim u WO 2016/067035. Peptidi pronalaska sa fluorescentnom oznakom (bilo fluorescein, SIGMA ili Alexa Fluor488<TM>, Fisher Scientific) su razblaženi do 2.5 nM u PBS sa 0.01% tween 20 ili 50 mM HEPES sa 100 mM NaCl% i 0.01% tween pH 7.4. (oba označena kao pufer za ispitivanje). Ovo je kombinovano sa titracijom proteina u istom puferu za ispitivanje kao i peptid da bi se dobilo 1nM peptida u ukupnoj zapremini od 25µL u pločama sa 384 bunarčića sa malim zidovima i dnom niskog vezivanja, obično 5 µL pufera za ispitivanje, 10µL proteina zatim 10µL fluorescentnih peptida. Jedno od dva serijska razblaženja je korišćeno da bi se dobilo 12 različitih koncentracija sa najvišim koncentracijama u rasponu od 500 nM za poznata veziva visokog afiniteta do 10 µM za veziva niskog afiniteta i testovima selektivnosti. Merenja su sprovedena na BMG PHERAstar FS opremljenom optičkim modulom "FP 485520520" koji pobuđuje na 485 nm i detektuje paralelnu i okomitu emisiju na 520 nm. PHERAstar FS je postavljen na 25°C sa 200 bljeskova po otvoru i kašnjenjem pozicioniranja od 0.1 sekunde, pri čemu je svaki bunarić meren u intervalima od 5 do 10 minuta tokom 60 minuta. Dobitak koji je korišćen za analizu je određen za svaki tragač na kraju 60 minuta gde nije bilo proteina u bunarčiću. Podaci su analizirani korišćenjem Systat Sigmaplot verzije 12.0. mP vrednosti su bile prilagođene kvadratnoj jednačini koju je definisao korisnik za generisanje Kd vrednosti: f = ymin+(ymax-ymin)/Lig*((x+Lig+Kd)/2-sqrt((((x+Lig+Kd)/2)^2)-(Lig*x))). „Lig“ je bila definisana vrednost koncentracije korišćenog tragača.
Test vezivanja za kompeticiju nektina-4
[0291] Peptidi bez fluorescentne oznake su testirani u kompeticiji sa ACPFGCHTDWSWPIWCA-Sar6-K(FI) (SEQ ID NO: 2) i (Kd = 5 nM - određeno korišćenjem protokola iznad). Peptidi su razblaženi do odgovarajuće koncentracije u puferu za ispitivanje kao što je opisano u testu direktnog vezivanja sa maksimalno 5% DMSO, zatim serijski razblaženi 1 u 2. Pet µL razblaženog peptida je dodato na ploču, a zatim 10 µL humanog nektina-4, zatim je dodato 10 µL fluorescentnog peptida. Merenja su sprovedena kao i za test direktnog vezivanja, međutim pojačanje je određeno pre prvog merenja. Analiza podataka je bila u Systat Sigmaplot verziji 12.0 gde su mP vrednosti bile prilagođene korisnički definisanoj kubičnoj jednačini da bi se generisala Ki vrednost:
f=ymin+(ymax-ymin)/Lig*((2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)<∧>2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))<∧>0.5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)<∧>3+9*(Klig+Kcomp+Lig+Comp- Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)- 27*(-1*Klig*Kcomp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)<∧>2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp- Prot*c)+Klig*Kcomp))<∧>3)<∧>0.5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp+Prot*c)))/((3*Klig)+((2*((Klig+Kcomp+Lig+Comp- Prot*c)<∧>2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))<∧>5*COS(ARCCOS((-2*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)<∧>3+9*(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp)- 27*(-1*Klig*Kcomp*Prot*c))/(2*((((Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c)<∧>2-3*(Kcomp*(Lig-Prot*c)+Klig*(Comp-Prot*c)+Klig*Kcomp))<∧>3)<∧>0.5)))/3))-(Klig+Kcomp+Lig+Comp-Prot*c))))
[0292] "Lig", "KLig" i "Prot" su sve definisane vrednosti koje se odnose na: koncentraciju fluorescentnog peptida, Kd fluorescentnog peptida i koncentraciju nektina redom.
2
Nektin-4 Biacore SPR test vezivanja
[0293] Biacore eksperimenti su izvedeni da bi se odredile vrednosti ka(M<-1>s<-1>), kd(s<-1>), KD(nM) monomernih peptida koji se vezuju za humani protein Nektin-4 (dobijen iz Charles River).
[0294] Humani nektin-4 (ostaci Gly32-Ser349; NCBI RefSek: NP_112178.2) sa signalnom sekvencom gp67 i C-terminalnom oznakom FLAG kloniran je u pFastbac-1 i bakulovirusu napravljen korišćenjem standardnih Bac-to-Bac<TM>protokola (Life Technologies). Sf21 ćelije u količini od 1 x 10<6>ml<-1>u medijumu Excell-420 (Sigma) na 27°C inficirane su pri MOI od 2 sa P1 virusom, a supernatant je sakupljen 72 sata. Supernatant je serijski vezan tokom 1 sata na 4°C sa anti-FLAG M2 afinitetnom agaroznom smolom (Sigma) ispranom u PBS i smola je zatim prebačena u kolonu i isprana u velikoj meri sa PBS. Protein je eluiran sa 100 µg/ml FLAG peptida. Eluirani protein je koncentrovan do 2ml i stavljen na S-200 Superdex kolonu (GE Healthcare) u PBS pri 1ml/min. Sakupljene su frakcije od 2 ml i frakcije koje sadrže nektin-4 protein su koncentrovane do 16 mg/ml.
[0295] Protein je nasumično biotinilovan u PBS korišćenjem EZ-Link<TM>Sulfo-NHS-LC-LC-Biotin reagensa (Thermo Fisher) prema protokolu koji je predložio proizvođač. Protein je ekstenzivno odsoljen da bi se uklonio nevezani biotin pomoću spin kolona u PBS-u.
[0296] Za analizu vezivanja peptida, korišćen je Biacore 3000 instrument koji koristi CM5 čip (GE Healthcare). Streptavidin je imobilizovan na čipu korišćenjem standardne hemije spajanja amina na 25°C sa HBS-N (10 mM HEPES, 0.15 M NaCl, pH 7.4) kao tekućim puferom. Ukratko, površina karboksimetil dekstrana je aktivirana 7-minutnom injekcijom 1:1 odnosa 0.4 M 1-etil-3-(3-dimetilaminopropil) karbodiimid hidrohlorida (EDC)/0.1 M N-hidroksi sukcinimida (NHS) u brzini protoka od 10 µl/min. Za hvatanje streptavidina, protein je razblažen do 0.2 mg/ml u 10 mM natrijum acetatu (pH 4,5) i uhvaćen ubrizgavanjem 120 µl streptavidina na aktiviranu površinu čipa. Preostale aktivirane grupe su blokirane 7-minutnom injekcijom 1 M etanolamina (pH 8.5) i biotinilovani nektin-4 uhvaćen do nivoa od 1,200-1,800 RU. Pufer je promenjen u PBS/0,05% Tween 20 i pripremljena je serija razblaženja peptida u ovom puferu sa konačnom koncentracijom DMSO od 0.5%. Najviša koncentracija peptida bila je 100 nM sa 6 dodatnih 2-strukih razblaženja. SPR analiza je izvedena na 25°C pri brzini protoka od 50 µl/min sa 60 sekundi asocijacije i disocijacije između 400 i 1200 sekundi u zavisnosti od pojedinačnog peptida. Podaci su korigovani za efekte zapremine isključene DMSO. Svi podaci su dvostruko referencirani za prazne injekcije i referentnu površinu korišćenjem standardnih postupaka obrade, a obrada podataka i kinetičko prilagođavanje su izvedeni korišćenjem softvera Scrubber, verzija 2.0c (BioLogic Software). Podaci su postavljeni korišćenjem jednostavnog modela vezivanja 1:1 koji omogućava efekte transporta mase gde je to potrebno.
[0297] Određeni peptidni ligandi pronalaska su testirani u gore navedenim testovima vezivanja nektina-4 i rezultati su prikazani u Tabeli 1:
Tabela 1: Podaci o kom etitivnom vezivanu za odabrane e tidne li ande ronalaska
[0298] Određeni biciklični peptidi pronalaska su testirani u gore pomenutom SPR testu i rezultati su prikazani u Tabeli 2.
Tabela 2: SPR podaci za odabrane peptidne ligande pronalaska
[0299] Određeni biciklični peptidi pronalaska su konjugovani sa citotoksičnim agensima i testirani u gore pomenutom SPR testu, a rezultati su prikazani u Tabeli 3:
Tabela 3: SPR podaci za odabrane BDC-ove pronalaska
In Vivo Studije
[0300] U svakom od Primera 1 do 5 i 9 usvojena je sledeća metodologija za svaku studiju:
Proizvodi koji se ispituju i pozitivna kontrola:
[0301]
Eksperimentalni postupci i procedure
(i) Zapažanja
[0302] Sve procedure vezane za rukovanje životinjama, negu i tretman u studiji sprovedene su u skladu sa smernicama koje je odobrio Institucionalni komitet za negu i upotrebu životinja (IACUC) WuXi AppTec, prateći uputstva Udruženja za procenu i akreditaciju laboratorijskih životinja. Nega (AAALAC). U vreme rutinskog praćenja, životinje su svakodnevno proveravane za efekte rasta tumora i tretmana na normalno ponašanje, kao što su pokretljivost, potrošnja hrane i vode (samo gledanjem), povećanje/gubitak telesne težine, matiranje očiju/dlake i bilo koji drugi abnormalni efekat kako je navedeno u protokolu. Smrt i uočeni klinički znaci su zabeleženi na osnovu broja životinja u svakom podskupu.
(ii) Merenja tumora i krajnje tačke
[0303] Glavna krajnja tačka je bila da se vidi da li se rast tumora može odložiti ili da se miševi mogu izlečiti. Zapremina tumora je merena tri puta nedeljno u dve dimenzije pomoću kalipera, a zapremina je izražena u mm<3>korišćenjem formule: V = 0.5 a x b<2>gde su a i b dugi i kratki prečnici tumora, redom.
4
Veličina tumora je zatim korišćena za izračunavanje vrednosti T/C. Vrednost T/C (u procentima) je indikacija antitumorske efikasnosti; T i C su srednje zapremine tretiranih i kontrolnih grupa, redom, u datom danu.
[0304] TGI je izračunat za svaku grupu koristeći formulu: TGI (%) = [1-(Ti-T0)/ (Vi-V0)] X 100; Tije prosečna zapremina tumora u grupi za tretman u datom danu, T0je prosečna zapremina tumora tretirane grupe na dan početka lečenja, Vije prosečna zapremina tumora kontrolne grupe nosača istog dana sa Ti, i V0 je prosečna zapremina tumora grupe nosača na dan početka lečenja.
(iii) Statistička analiza
[0305] Zbirna statistika, uključujući srednju vrednost i standardnu grešku srednje vrednosti (SEM), data je za zapreminu tumora svake grupe u svakoj vremenskoj tački.
[0306] Statistička analiza razlike u zapremini tumora među grupama sprovedena je na podacima dobijenim u najboljem terapijskom vremenskom trenutku nakon finalne doze.
[0307] Urađena je jednosmerna ANOVA da bi se uporedila zapremin tumora među grupama, a kada je dobijena značajna F-statistika (odnos varijanse tretmana i varijanse greške), poređenja između grupa su izvršena pomoću Games-Howell-ovog testa. Svi podaci su analizirani korišćenjem GraphPad Prism 5.0. P < 0.05 se smatra statistički značajnim.
Primer 1: In vivo test efikasnosti BCY8245 u lečenju ksenotransplantata NCI-H292 (model kancera nemalih ćelija pluća (NSCLC)) kod BALB/c nude (golih) miševa
1. Cilj studije
[0308] Cilj istraživanja bio je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost BCY8245 u lečenju modela ksenotransplantata NCI-H292 kod BALB/c nude miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0309]
3. Materijali
3.1 Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 18 miševa za BCY8245 plus rezervni snabdevač životinja: Shanghai LC Laboratory Animal Co., LTD.
3.1.2. Uslovi boravka
[0311] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 životinje u svakom kavezu.
● Temperatura: 20-26 °C.
● Vlažnost 40-70%.
[0312] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0313] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0314] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0315] Identifikacija kaveza: Identifikacione oznake za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0316] Identifikacija životinja: Životinje su obeležene kodiranjem uha.
Proizvodi (articles) koji se ispituju i pozitivna kontrola:
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0317] NCI-H292 tumorske ćelije će se održavati u medijumu sa dodatkom 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije će se rutinski supkulturisati dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta biće sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2 Inokulacija tumora
[0318] Svaki miš će biti inokuliran subkutano na desnom boku sa NCI-H292 tumorskim ćelijama (10 x 10<6>) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora. Životinje će biti slučajno raspoređene (randomizovane) i tretman će započeti kada prosečna zapremina tumora dostigne približno 158-406 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u sledećoj tabeli eksperimentalnog dizajna. 4.3 Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
(nastavak)
(nastavak)
4.4 Sakupljanje uzorka
[0320] Na kraju studije, plazma je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 60 min i 120 min posle poslednjeg doziranja.
5. Rezultati
5.1 Krive tumorskog rasta
[0321] Krive tumorskog rasta su prikazane na Slikama 1 i 2.
5.2 Trag zapremine tumora
[0322] Srednja zapremina tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa sa ksenotransplantatom NCI-H292 prikazana je u Tabelama ispod:
Tabela 4: Trag zapremine tumora tokom vremena
Tabela 5: Trag zapremine tumora tokom vremena
5.3 Analiza inhibicije rasta tumora
[0323] Stopa inhibicije rasta tumora za BCY8245 u modelu ksenotransplantata NCI-H29214. dana je izračunata na osnovu merenja zapremine tumora.
Tabela 7: Analiza inhibicije rasta tumora
[0324] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost BCY8245 u modelu ksenotransplantata NCI-H292. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na Slikama 1 i 2 i Tabelama 4 do 7.
[0325] Srednja veličina tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 879 mm<3>14. dana.
[0326] BCY8245 pri 1mg/kg nije proizveo značajnu antitumorsku aktivnost, proizvod koji se ispituje je pokazao očiglednu antitumorsku aktivnost nakon povećanja doze na 3 mg/kg od 7. dana, ali efikasnost nije dodatno poboljšana nakon povećanja doze na 5 mg /kg 21. dana. U ovoj studiji, sve životinje koje su tretirane su pokazale kontinuirani gubitak telesne težine tokom rasporeda doziranja, što može biti posledica tumorskog opterećenja i toksičnosti ispitivanih proizvoda.
[0327] BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=149 mm<3>, TGI=101.4%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=65 mm<3>, TGI=112.2%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV=83 mm<3>, TGI=109.8%, p<0.001) proizvodi značajnu antitumorsku aktivnost.
Primer 2: In vivo test efikasnosti BCY7825, BCY8245, BCY8253, BCY8254 i BCY8255 u lečenju HT-1376 ksenotransplantata (model kancera bešike) kod CB17-SCID miševa
1. Cilj studije
[0328] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju HT-1376 ksenotransplantata kod CB17-SCID miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0329]
(nastavak)
3. Materijali
3.1 Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
Vrsta: Mus Musculus
Soj: CB17-SCID
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 21-41miševa plus rezervni
Snabdevač životinja: Shanghai LC Laboratory Animal Co., LTD.
3.1.2. Uslovi boravka
[0331] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0332] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0333] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0334] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0335] Identifikacija kaveza: Identifikacione oznake za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0336] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0337] HT-1376 tumorske ćelije su održavane in vitro kao jednoslojna kultura u EMEM medijumu sa dodatkom 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Ćelije tumora su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno tretmanom tripsin-EDTA. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2 Inokulacija tumora
[0338] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa HT-1376 tumorskim ćelijama (5 x 10<6>) u 0.2 ml PBS sa matrigelom (1:1) za razvoj tumora. Životinje su randomizovane kada je prosečna zapremina tumora dostigla 153-164 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3 Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
4.4 Sakupljanje uzoraka
[0340] Na kraju studije, plazma grupe 2 je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 60 min i 120 min posle poslednjeg doziranja. Plazma grupe 6 je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 60 min i 120 min posle poslednje doze. Tumor grupe 6 je sakupljen 2 h nakon poslednje doze. Tumor grupa 4 i 5 je sakupljen 2 h nakon poslednjeg doziranja.
5. Rezultati
5.1 Krive rasta tumora
[0341] Krive tumorskog rasta su prikazane na slikama 3 i 4.
5.2 Trag zapremine tumora
[0342] Prosečna zapremina tumora tokom vremena kod ženskih CB17-SCID miševa koji nose HT-1376 ksenotransplantata prikazana je u Tabelama 8 i 9.
Tabela 8: Trag zapremine tumora tokom vremena
Tabela 9: Trag zapremine tumora tokom vremena
1
[0343] Stopa inhibicije rasta tumora za proizvode koji se ispituju u modelu ksenotransplantata HT-1376 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 21. dana nakon početka tretmana.
Tabela 10: Analiza inhibicije tumorskog rasta
Tabela 11: Analiza inhibicije tumorskog rasta
a. Srednja vrednost ± SEM.
b. Inhibicija tumorskog rasta Inhibicija tumorskog rasta se izračunava deljenjem prosečne zapremine tumora grupe za tretiranu grupu prosečnom zapreminom tumora grupe za kontrolnu grupu (T/C).
[0344] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata HT-1376. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na Slici 3 i Tabelama 8 i 10.
[0345] Srednja veličina tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 884 mm<3>21. dana. BCY8245 u dozi od 1 mg/kg je proizveo blagu antitumorsku aktivnost, a bolja efikasnost je pronađena nakon povećanja doze na 3 mg/kg od 7. dana.
[0346] U ovoj studiji, neki miševi tretirani sa proizvodom koji se ispitujue u dozi od 3 mg/kg pokazali su gubitak telesne težine preko 10%.
Grupe 3-6
[0347] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata HT-1376. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 4 i tabelama 9 i 11.
[0348] BCY8245 na 3mg/kg, qw (TV=603mm<3>, TGI=50.9%,p<0.01), 3mg/kg, biw (TV=407mm<3>,TGI=72.3%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV=465 mm<3>, TGI=66.0%, p<0.001) proizveo je značajnu antitumorsku aktivnost.
[0349] U ovoj studiji, BCY8245 u dozi od 5 mg/kg qw prouzrokovao je preko 10% gubitka telesne težine životinja tokom rasporeda lečenja.
2
Primer 3: In vivo studija efikasnosti BCY8245 u lečenju Panc2.13 ksenotransplantata (model kancera pankreasa) u Balb/c golim miševima
1. Cilj studija
[0350] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju Panc2.13 ksenotransplantata kod Balb/c golih miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0351]
3. Materijali
3.1 Životinje i uslovi boravka
3.1.1 Životinje
[0352]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41miš plus rezervni
Snabdevač životinja: Shanghai LC Laboratory Animal Co., LTD.
3.1.2. Uslovi boravka
[0353] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0354] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0355] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0356] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0357] Identifikacija kaveza: Identifikacione nalepnice za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0358] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0359] Panc2.13 tumorske ćelije će se održavati u medijumu RMPI1640 sa dodatkom 15% toplotom inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma i 10 jedinica/ml humanog rekombinantnog insulina na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije će se rutinski supkulturisati dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta biće sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2 Inokulacija tumora
[0360] Svaki miš je inokulisan subkutano na desnom boku sa tumorskim ćelijama Panc2.13 (5 x 10<6>) sa Matrigelom (1:1) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora. 41 životinja je nasumično raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 149 mm<3>. Primena proizvoda koji se ispituje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3 Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0361]
4.4 Sakupljanje uzoraka
[0362] Na kraju studije, tumor svih grupa je sakupljen 2 h nakon poslednjeg doziranja.
5. Rezultati
5.1 Krive tumorskog rasta
[0363] Kriva tumorskog rasta je prikazana na Slici 5.
5.2 Trag zapremine tumora
[0364] Srednja zapremina tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa sa Panc2.13 ksenotransplantatom prikazana je u Tabeli 12.
4
Tabela 12: Trag zapremine tumora tokom vremena
5.3 Analiza inhibicije tumorskog rasta
[0365] Stopa inhibicije rasta tumora za proizvode koji se ispituju u modelu Panc2.13 ksenotransplantata izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
Tabela 13: Analiza inhibicije rasta tumora
g upu p oseč o ap e o tu o a g upe a o t o u g upu ( /C).
6. Rezime rezultata i diskusija
[0366] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu Panc2.13 ksenotransplantata. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 5 i tabelama 12 i 13.
[0367] BCY8245 na 3mg/kg, qw (TV=271mm<3>, TGI=69.2%,p<0.01), 3mg/kg, biw (TV=231mm<3>, TGI=79,1%,p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV=238 mm<3>, TGI=77.5%, p<0.001) proizveo je značajnu antitumorsku aktivnost.
Primer 4: In vivo studija efikasnosti BCI8245 u lečenju ksenotransplantata MDA-MB-468 (model kancera dojke) kod Balb/c nude miševa
1. Cilj studije
[0368] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost BCY8245 u lečenju MDA-MB-468 ksenotransplantata kod Balb/c golih miševa.
2. Eksperimentani dizajn
[0369]
3. Materijali
3.1 Životinje i uslovi boravka
3.1.1 Životinje
[0370]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41miš plus rezervni
Snabdevač životinja: Shanghai LC Laboratory Animal Co., LTD.
3.1.2. Uslovi boravka
[0371] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0372] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0373] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0374] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0375] Identifikacija kaveza: Identifikacione etikete za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0376] Identifikacija životinja: Životinje su obeležene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0377] Ćelije tumora su održavane u Leibovitz-ovom medijumu L-15 sa dodatkom 10% toplotom inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2 Inokulacija tumora
[0378] Svaki miš je inokulisan subkutano na desnom boku sa MDA-MB-468 tumorskim ćelijama (10 x 10<6>) u 0.2 ml PBS sa dodatkom 50% matrigela za razvoj tumora.41 životinja je nasumično raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 196 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3 Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0379]
4.4 Sakupljanje uzoraka
[0380] 21. dana studije, plazma grupe 2 je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 60 min i 120 min posle poslednjeg doziranja. Tumori grupa 1 i 3 su sakupljeni 2 h nakon poslednje doze. Životinje u grupi 4 su održavane još 21 dan bez ikakvog doziranja, a tumori ovih grupa su sakupljeni 42. dana.
5. Rezultati
5.1 Krive tumorskog rasta
[0381] Kriva tumorskog rasta je prikazana na slici 6.
5.2 Trag zapremine tumora
[0382] Prosečna zapremina tumora tokom vremena kod ženki Balb/c golih miševa sa MDA-MB-468 ksenotransplantatom prikazana je u tabelama 14 i 15.
Tabela 14: Trag zapremine tumora tokom vremena (Dan 0 do dana 21)
(nastavak)
5.3 Analiza inhibicije rasta tumora
[0383] Stopa inhibicije rasta tumora za proizvode koji se ispituju u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 21. dana nakon početka tretmana.
Tabela 16: Anali a inhibicije t morskog rasta
6. Rezime rezultata i diskusija
[0384] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 6 i tabelama 14 do 16.
[0385] BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=85 mm<3>, TGI=144.2%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=22 mm<3>, TGI=169.8%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV=29 mm<3>, TGI=168.4%, p<0.001) proizvedena je značajna antitumorska antitumorska aktivnost u zavisnosti od doze ili učestalostidoze.
[0386] Doziranje grupa od 5 mg/kg je suspendovano od 21. dana, tumori nisu pokazali nikakav relaps tokom dodatnog rasporeda praćenja od 3 nedelje.
Primer 5: In vivo test efikasnosti BCY8549 u lečenju NCI-H292 ksenotransplantata (model ne-malih ćelija kancera pluća (NSCLC)) kod BALB/c nude miševa
1. Cilj studije
[0387] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost BCY8549 u lečenju NCI-H292 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0388]
3. Materijali
3.1 Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
[0389]
Vrste: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 43miša plus rezervni
Snabdevač životinja: Shanghai Lingchang Biotechnology Experimantal Animal Co. LTD.
3.1.2. Uslovi boravka
[0390] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 4 životinje u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0391] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0392] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0393] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0394] Identifikacija kaveza: Identifikacione oznake za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0395] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalne metode i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0396] NCI-H292 tumorske ćelije su održavane in vitro kao jednoslojna kultura u medijumu RPMI-1640 sa dodatkom 10% toplotom inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Ćelije tumora su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno tretmanom tripsin-EDTA. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2 Inokulacija tumora
[0397] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa NCI-H292 tumorskim ćelijama (10 x 10<6>) u 0,2 ml PBS-a za razvoj tumora.43 životinje su randomizovane kada je prosečna zapremina tumora dostigla 168 mm3. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0398]
4.4 Sakupljanje uzoraka
[0399] Na kraju studije, plazma miševa grupe 2 je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 1 h i 2 h nakon poslednje doze.
5. Rezultati
5.1 Krive tumorskog rasta
[0400] Kriva rasta tumora je prikazana na Slici 7.
5.2 Trag zapremine tumora
[0401] Srednja zapremina tumora tokom vremena kod ženki Balb/c nude miševa sa ksenotransplantatom NCI-H292 prikazana je u Tabeli 17.
Tabela 17: Trag zapremine tumora tokom vremena
5.3 Analiza inhibicije rasta tumora
[0402] Stopa inhibicije rasta tumora za prozvode koji se ispituju u modelu ksenotransplantata NCI-H292 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
Tabela 18: Analiza inhibicije tumorskog rasta
6. Rezime rezultata i diskusija
[0403] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost BCI u modelu ksenotransplantata NCIH292. Izmerena zapremina tumora svih grupa tretmana u različitim vremenskim tačkama prikazana je na slici 7 i Tabelama 17 i 18.
[0404] Srednja vrednost veličine tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 843 mm<3>14. dana. BCY8549 u dozi od 3 mg/kg pokazao je značajnu antitumorsku aktivnost. U ovoj studiji, svi miševi su dobro održavali telesnu težinu.
Primer 6: Istraživanje povezanosti varijacija u broju kopija (CNV) i ekspresije gena za nektin-4 iz više tipova tumora
Postupci
[0405]
1. Izaberite sve studije na cBioPortal-u (http://vvv.cbioportal.org/) i potražite NECTIN4.
(a) Ukloniti privremene studije.
(b) Poništite izbor studija sa uzorcima koji se preklapaju da biste sprečili pristrasnost uzorka (na osnovu upozorenja u cBioPortal-u) – uvek zadržite PanCancer studiju ako je to opcija.
(c) Studije odabrane za analizu (Tabela 19).
1
Tabela 19: Studije analizirane sa cBioPortal-a i jedinica u studiji
(nastavak)
2
2. Izvezite podatke o ekspresiji CNV i RNK sa cBioPortal-a.
3. Testirajte da li su CNV statistički značajno povezane sa promenama u ekspresiji iRNK za nektin-4 (log2 nije primenjen).
(a) Pokrenite neparametarski Kruskal-Wallis-ov test u GraphPad Prism (7.04) i R/R studiju (prag značajnosti: p<0.01).
(i) GraphPad Prism: postavite tabelu kolona, pokrenite neparametarski test bez podudaranja ili uparivanja i ne pretpostavljajte Gausovu distribuciju.
(ii) Paketi koji se koriste u R:
1. XLConnect
2. dplir
3. Kruskal-Wllis-ov zbirni test: Kruskal.test.
4. Podesite za višestruka poređenja (uključite sva moguća poređenja čak i ako je n=1 unutar grupe) u R/R studio koristeći Dunn-ov test (prag značajnosti: p<0,025).
(a) dunn.test sa metodom višestrukog poređenja= "bonferonni".
Rezultati
[0406] Rezultati su prikazani u Tabeli 20 ispod. U 41 javno dostupnom TCGA skupu podataka koji izveštavaju o podacima o ekspresiji gena tumora CNV i iRNK za Nectin-4, postoje mnoge indikacije gde su prijavljeni slučajevi sa povećanjem u broju kopija Nektin-4 (2-3 kopije) ili amplifikacijom (>3 kopije). Pored toga, u odvojenim slučajevima je pokazano da imaju plitke delecije (< 2 kopije) sa retkim izveštajima o tumorima koji sadrže duboke delecije u skladu sa gubitkom više od 1 kopije ili bialelnim gubitkom nektina-4. Indikacije gde su amplifikacije najčešće otkrivene su kancer dojke (10-22%), kancer bešike (20%), kancer pluća (5-7%) i hepatocelularni karcinom (8%). Indikacije sa najčešćim gubitkom broja kopija bile su hromofob bubrega (77%), karcinom bistrih ćelija bubrega (RCC) (6,5%), sarkom (10%), kancer debelog creva (10%), kancer glave i vrata (7%) i skvamozni kancer pluća. Ovi podaci ukazuju na to da postoji niz CNV unutar i širom indikacija tumora i raznolikost uzoraka broja kopija u različitim indikacijama.
[0407] Pored CNV u okviru TCGA skupa podataka, srednji nivo ekspresije Nektin-4 iRNK po indikaciji pokriva približno 2<10>opsega. Stoga, imajući u vidu opseg nivoa ekspresije Nektin-4 iRNK i CNV-a uočenih širom i unutar tipova tumora, izvršeno je statističko testiranje da bi se identifikovale potencijalne veze između nivoa Nektin-4 iRNK i Nektin-4 CNV u okviru pojedinačnih skupova podataka/indikacija TCGA. Tumori po indikaciji su raspoređeni u 1 od 5 klasa:
a) Duboko brisanje;
b) Plitko brisanje;
c) Diploidni;
d) Sticanje; ili
d) Amplifikacija.
[0408] Kruskall-Vallis testiranje je zatim sprovedeno da bi se otkrilo da li se distribucije vrednosti ekspresije iRNK po klasama razlikuju između klasa (P < 0.01). Za one TCGA skupove podataka sa P < 0.01 i da bi se identifikovale koje su se klase međusobno razlikovale, izvršeno je post hoc testiranje izračunavanjem Z-statistike sa izračunatim prilagođenim P-vrednostima (Bonferonni). Radi jednostavnosti interpretacije pregledana su poređenja u paru u odnosu na diploid po indikaciji (iako su sve P-vrednosti u paru izračunate). 18/41 TCGA studije su zadovoljile Kruskall-Wallis P <0.01 i Bonferoni P < 0.025 za dobitke u odnosu na diploid i/ili amplifikaciju u odnosu na diploidna poređenja koja ukazuju na povezanost povećane ekspresije nektin-4 iRNK sa povećanim brojem kopija nektina-4. Ovih 18 studija predstavljalo je 14 nezavisnih histologija tumora:
dojke, materice, bešike, adenokarcinoma pluća, skvamoznog plućnog, grlića materice, glave i vrata, pankreasa, tireoidee, kolorektalnog, timoma, sarkoma, karcinoma bistrih ćelija bubrega (RCC) i želuca.
4
[0409] Pored toga, 6 studija je smanjilo ekspresiju iRNK povezanu sa gubitkom broja kopija. Četiri od ovih šest studija ne samo da su pokazale povezanost između gubitka CNV i smanjene ekspresije, već su takođe prijavile i dobitke CNV povezane sa visokom ekspresijom:
želudac, plućni skvamoz, debelo crevo i štitna žlezda.
[0410] Dok su dve indikacije, hromofob bubrega i kancer prostate samo prijavile povezanost sa gubitkom CNV i niskim brojem transkripta. Pored toga, postojala je posebna studija raka prostate (Metastatski kancer prostate, SU2C/PCF Dream Team (Robinson et al., Cell 2015)) koji je pokazao povećanje broja kopija povezano sa visokom ekspresijom (u odnosu na diploidnu).
[0411] Ova zapažanja gubitka i povećanja CNV tumora sa nivoima ekspresije iRNK mogu predstavljati mehanizam iza ekspresije tumorskog proteina Nektin-4 u onim indikacijama gde su takve asocijacije primećene. Jasno je da postoje indikacije gde se čini da CNV ne utiču na nivoe ekspresije iRNK u predvidljivom obrascu, kao što je hepatocelularni karcinom. Pokazano je da pretklinička efikasnost in vivo sa određenim Nektin-4 bicikličnim konjugatima lekova prema pronalasku korelira sa ekspresijom proteina Nektin-4 merenom IHC. Stoga, ako se tumorski Nektin-4 CNV povezuju sa nivoima iRNK i predviđaju nivoe ekspresije proteina, formalno je moguće da pacijenti sa tumorima koji sadrže povećanje broja kopija (sticanje ili amplifikaciju) mogu sa većom verovatnoćom reagovati na Nektin-4 biciklične konjugate leka prema pronalasku. Ako bi se pacijenti mogli identifikovati sa povećanom CNV u Nektinu-4, onda bi ove informacije mogle da se koriste za odabir pacijenata za tretman sa Nektin-4 bicikličnim konjugatima leka prema pronalasku.
n-4ti ek
zaije es sprek
ske en ig )
( ja piko u
brojuijajacri va u e z sti i o zan ve o p njaivait ispti ula ez
20: a elab T
k)va aast (n
k) a av ast (n
k)va sta(na
k)va sta(na
k)va sta(na
)vak taas(n
ak) av t as(n
)k va a st (na
ak)tav (nas
Primer 7: Analiza ekspresije nektina-4 u 6 ćelijskih linija
1. Cilj studije
[0412] Cilj studije je bio da se proceni ekspresija nektina-4 u 6 ćelijskih linija pomoću protočne citometrije, uključujući 2 karcinoma dojke (T-47D, MDA-MB-468), 3 kancera pluća (NCI-H292, NCI -H322, NCI-H526) i 1 ćelijska linija fibrosarkoma (HT-1080).
2. Dizajn panela
[0413] Panel za FCM u T-47D, MDA-MB-468, NCI-H292, NCI-H322 i HT-1080
[0414] Panel za NCI-H526
3. Materijal
3.1. Uzorak
Lista ćelijske linije
[0415]
3.2. Reagensi
[0416] Antitela i komplet za analizu protočne citometrije
(nastavak)
3.3. Instrumenti
[0417]
Eppendorf Centrifuge 5810R
BD FACS Canto Protočni Citometar (BD)
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1. Sakupljanje uzorka
[0418] Sakupite ćelijske linije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta. Izbrojati ćelije hemocitometrom sa bojenjem tripan plavom bojom. Centrifugirati ćelije na 400 Xg tokom 5 minuta na 4 °C, isprati ćelije dva puta puferom za bojenje i suspendujte ćelije u puferu za bojenje do 1 x 10<7>/mL.
4.2. Bojenje antitelima
[0419]
1) Alikvotirati 100 µL suspenzije ćelija u svaki bunarčić V-ploče sa 96 bazenčića.
2) Dodati kontrolu izotipa ili antitela u ćelije suspenzije i inkubirati 30 minuta na 4 °C u mraku. 3) Isprati ćelije 2X centrifugiranjem na 400 X g tokom 5 minuta na 4 °C i odbaciti supernatant. 4) Resuspendovati ćelije sa 100 µL fiksacionog pufera i inkubirati 30 minuta na 4 °C u mraku. 5) Isprati ćelije 2 X centrifugiranjem na 300 X g tokom 5 minuta na 4 °C i ukloniti supernatant 6) Resuspendovati ćelije u 400 µL pufera za bojenje.
7) Analizirati FACS podatke koristeći softver FlowJo V10.
4.3. Analiza podataka
[0420] Svi FACS podaci su analizirani pomoću softvera Flowjo V10 i softvera Graphpad Prism ili Excel.
5. Rezultati
5.1 Strategija gate-a za panel
[0421] Strategija gate-a za nektin-4 je prikazana na Slikama 8-11.
5.2. Analiza podataka
5.2.1. Vijabilnost ćelijskih linija
[0422] Vijabilnost ćelijskih linija je kao što je prikazana u nastavku.
(nastavak)
5.2.2. Pozitivna ekspresija nektina-4 u ćelijskim linijama
[0423] Pozitivna ekspresija i MFI nektina-4 u 6 ćelijskih linija su kao što je navedeno u listi.
6. Diskusija
[0424] Postojala je visoka ekspresija nektina-4 kod raka dojke T-47D (99.0%), MDA-MB-468 (99.0%) i kancera pluća NCI-H292 (97.9%), NCI-H322 (99.1%) U NCI-H526 i HT-1080 nije pronađena ekspresija nektina-4.
Primer 8: Analiza ekspresije nektina-4 u 9 CDX ćelijskih linija pomoću protočne citometrije 1. Cilj studija
[0425] Cilj ovog projekta je da se proceni površinska ekspresija nektina-4 (PVRL-4) u 9 ćelijskih linija, uključujući 1 kancer dojke (MDA-MB-468), 4 kancer pluća (NCI-H292, NCI- H358, NCI-H526, A549), 1 kancer pankreasa (Panc02.13), 2 kancer debelog creva (HCT-116, HT-29) i 1 ćelijske linije kancer bešike (HT1376).
2. Dizajn panela
[0426] Panel za FCM u 9 ćelijskih linija
3. Materijali
3.1 Uzorci
Lista ćelijskih linija
[0427]
(nastavak)
3.2. Reagensi
[0428]
1) DPBS (Corning, 21-031-CV)
2) Tripsin 0.25% (Invitrogen-25200072)
3) Pufer za bojenje (eBioscience, 00-4222)
4) Pufer za fiksiranje (BD, 554655)
5) Antitelo
3.3. Instrumenti
[0429]
Eppendorf Centrifuge 5810R
BD FACS Canto Protočni citometar (BD)
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kulture
Otapanje ćelija
[0430]
1) Očistiti zamrznute bočice sa 70% alkohola i brzo odmrznuti bočice u vodenom kupatilu na 37°C.
2) Suspenzija ćelija centrifugirana na približno 1000 obrtaja u minuti tokom 5 minuta, uklonjen supernatant i dodat je medijum za prethodno zagrevanje u boce.
3) Inkubirane bočice za kulturu na 37°C, inkubator sa 5% CO2.
Ćelijski pasaž
[0431]
1) Zagrejan medijum i tripsin u vodenom kupatilu na 37°C.
2) Uklonjen medijum kulture i ćelijski sloj ispran sa DPBS.
3) Dodato 5 mL 0.25% rastvora tripsina u balon i razblaženo tripsin sa 5 mL medijuma.
4) Centrifugirana suspenzija ćelija na 1000 obrtaja u minuti tokom 5 min.
5) Dodato 15 mL svežeg medijuma i ponovo suspendovane ćelije nežnim pipetiranjem.
6) Dodata odgovarajuća suspenzija ćelija u nove boce za kulturu.
7) Inkubirane bočice za kulturu na 37°C, inkubator sa 5% CO2.
4.2. Sakupljanje uzoraka
[0432] Sakupljene su ćelijske linije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta. Ćelije su izbrojane bojenjem sa tripan plavim. Centrifugirane ćelije na 400x g tokom 5 minuta na 4 °C, isprane ćelije puferom za bojenje dva puta i suspendovane ćelije u puferu za bojenje do 5 x10<6>/mL.
4.3. Bojenje antitelima
[0433] Alikvoti 100 µL ćelijske suspenzije u svaki bunarčić V-ploče sa 96 bunarčića. Dodata kontrola izotipa ili antitela u ćelije suspenzije i inkubirana 30 minuta na 4 °C u mraku. Ćelije su oprane 2 puta centrifugiranjem na 400x g tokom 5 minuta na 4 °C i odbačen supernatant. Resuspendovane ćelije u 300 µL pufera za bojenje. Analizirani su FACS podaci koristeći softver Flow Jo V10.
4.4. Analiza podataka
[0434] Svi FACS podaci su analizirani pomoću softvera FloW Jo V10 i softvera GraphPad Prism ili Excel.
5. Rezultati
5.1. Strategija Gate za Panel
[0435] Gate stategija za Nektin-4 je prikazana na Slikama 12-16.
5.2. Analiza podataka
[0436] Pozitivna ekspresija i MFI Nektina-4 u 9 ćelijskih linija je prikazana na listi.
6. Diskusija
[0437] Postojala je visoka ekspresija nektina-4 kod kancera bešike HT-1376 (92.4%), kancera dojke MDA-MB-468 (97.1%) i kancera pluća NCI-H358 (90.1%). Srednja ekspresija nektina-4 pronađena je u HT-29 (40.0%), NCI-H292 (71.1%) i Panc02.13 (51.9%). U HCT-116, A549 i NCI-526 nije pronađena ekspresija nektina-4. Ovi podaci će se koristiti za vođenje izbora modela za studije efikasnosti.
Primer 9: In vivo studije efikasnosti
Primer 9.1: In vivo studija efikasnosti testiranih proizvoda u lečenju A549 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa
1. Cilj studije
[0438] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju ksenotransplantat A549 kod Balb/c nude miševa.
2. Dizajn eksperimenta
[0439]
1
3. Materijali
Životinje i uslovi čuvanja
3.1.1. Životinje
[0440]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41 miš plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
[0441] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20~26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0442] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0443] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0444] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0445] Identifikacija kaveza: Identifikacione etikete za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0446] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1. Ćelijska kultura
[0447] A549 tumorske ćelije su održavane in vitro kao jednoslojna kultura u F-12K medijumu sa dodatkom 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Ćelije tumora su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno tretmanom tripsin-EDTA. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
2
4.2. Inokulacija tumora
[0448] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa A549 tumorskim ćelijama (5 x 10<6>) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora.41 životinja je nasumično raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 158 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Testiranje pripreme formulacije članka
[0449]
4.4. Kolekcija uzorka
[0450] Na kraju studije, tumor svih grupa je sakupljen 2 h nakon poslednjeg doziranja.
5. Rezultati
5.1. Krive tumorskog rasta
[0451] Kriva tumorskog rasta je prikazana na Slici 17.
5.2. Tragovi zapremine tumora
[0452] Srednja vrednost zapremine tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa koji nose A549 ksenotransplantat prikazan je u Tabeli 21.
Tabela 21: Tragovi zapremine tumora tokom vremena
5.3. Analiza inhibicije tumorskog rasta
[0453] Stopa inhibicije rasta tumora za testne artikle u modelu ksenotransplantata A549 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
Tabela 22: Analiza inhibicije tumorskog rasta
6. Rezime rezultata i diskusija
[0454] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata A549. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 17 i Tabelama 21 i 22.
[0455] Srednja veličina tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 568 mm<3>14. dana. BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=356 mm<3>, TGI=51.4%, p<0.05), 3 mg/kg, biw (TV =194 mm<3>, TGI=90.8%, p<0.01) i 5 mg/kg, qw (TV=228 mm<3>, TGI=82.6%, p<0.001) proizvelo je značajnu antitumorsko antitumorsku aktivnost u zavisnosti od doze ili učestalosti doze.
[0456] Životinje u grupama BCY8245 dobro su održavale telesnu težinu. U ovoj ćelijskoj liniji, koja pokazuje minimalnu ekspresiju nektina-4 u FACS studijama, rast tumora je ograničen od strane BCY8245, ali tumor ne prolazi kroz regresiju, naglašavajući cilj vođen zahtev za optimalnu efikasnost. Primer 9.2: In vivo studija efikasnosti proizvoda koji se ispituju u lečenju HCT116 ksenotransplantata kod Balb/c golih miševa
1. Cilj studije
[0457] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo anti-tumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju HCT116 ksenografta kod Balb/c nude miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0458]
4
3. Materijali
3.1. Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
[0459]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41 miš plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
[0460] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
● Temperatura: 20~26°C.
● Vlažnost 40-70%.
[0461] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza koji se menja dva puta nedeljno.
[0462] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0463] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0464] Identifikacija kaveza: Identifikacione etikete za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0465] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalne metode i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0466] Ćelije HCT116 su održavane u medijumu sa dodatkom 10% toplotom inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2. Inokulacija tumora
[0467] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa tumorskim ćelijama HCT116 (5.0 x 10<6>) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora. 41 životinja je nasumično raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 166 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Preparat formulacije za ispitivanje proizvoda
[0468]
4.4. Kolekcija uzorka
[0469] Na kraju studije 14. dana, tumori iz grupe 1 i 2 su prikupljeni za FFPE. Za grupu 4, plazma je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 60 min i 120 min posle doziranja. Tumori su takođe sakupljeni i čuvani na -80°C.
5. Rezultati
Tabela 23: Trag zapremine tumora tokom vremena
5.3. Analiza inhibicije tumorskog rasta
[0472] Stopa inhibicije rasta tumora za testirane proizvode u modelu ksenotransplantata HCT116 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
T b l 24 A li i hibij t k t
6. Rezime rezultata i diskusija
[0473] U ovoj studiji, procenjena je terapijska efikasnost testiranih proizvoda u modelu ksenotransplantata HCT116. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 18 i Tabelama 23 i 24.
[0474] Srednja veličina tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 769 mm<3>14. dana nakon početka tretmana. BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=425mm<3>, TGI=57.1%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV=197 mm<3>, TGI=94.9%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV=134 mm<3>, TGI=105.2%, p<0.001) proizvodi značajnu antitumor antitumorsku aktivnost u zavisnosti od doze ili učestalosti doze.
[0475] U ovoj studiji, životinje u svim grupama od 5 mg/kg qw izgubile su preko prosečnih 10% telesne težine.
[0476] U ovoj ćelijskoj liniji, koja pokazuje minimalnu ekspresiju nektina-4 u FACS studijama, rast tumora je ograničen od strane BCY8245, ali tumor ne prolazi kroz regresiju, naglašavajući cilj vođen zahtev za optimalnu efikasnost.
Primer 9.3: In vivo studija efikasnosti proizvoda koji se ispituju u lečenju HT-1376 ksenotransplantat kod CB17-SCID miševa
1. Cilj studija
[0477] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju HT-1376 ksenotransplant kod CB17-SCID miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0478]
(nastavak)
3. Materijali
3.1 Životinje i uslovi čuvanja
3.1.1. Životinje
[0479]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: CB17-SCID
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41 miš plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
[0480] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0481] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0482] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0483] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0484] Identifikacija kaveza: Identifikacione oznake za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0485] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0486] HT-1376 tumorske ćelije će se održavati u EMEM medijumu sa dodatkom 10% toplotom inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije će se rutinski supkulturisati dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta biće sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2 Inokulacija tumora
[0487] Svaki miš je inokulisan subkutano na desnom boku sa HT-1376 tumorskim ćelijama (5 x 10<6>) sa Matrigelom (1:1) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora. 41 životinja je nasumično raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 153 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0488]
4.4. Sakupljanje uzoraka
[0489] Na kraju studije, plazma grupe 4 je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 60 min i 120 min posle poslednje doze. Tumor grupe 4 je sakupljen 2 h nakon poslednje doze. Tumor grupa 1, 2 i 3 je sakupljen 2 h nakon poslednjeg doziranja.
5. Rezultati
5.1. Krive tumorskog rasta
[0490] Kriva tumorskog rasta je prikazana na Slici 19.
5.2. Trag zapremine tumora
[0491] Srednja zapremina tumora tokom vremena kod ženskih CB17-SCID miševa sa HT-1376 ksenotransplantatom prikazana je u Tabeli 25.
Tabela 25: Trag zapremine tumora tokom vremena
5.3. Analiza inhibicije rasta tumora
[0492] Stopa inhibicije rasta tumora za testne članke u modelu ksenotransplantata HT-1376 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
Tabela 26: Аnaliza inhibicije tumorskog rasta
6. Rezime rezultata i diskusija
[0493] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata HT-1376. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 19 i Tabelama 25 i 26.
[0494] Srednja veličina tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 1069 mm<3>14. dana. BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=603 mm<3>, TGI= 50.9%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV = 407 mm<3>, TGI= 72.3%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV= 465 mm<3>, TGI=660%, p<0.001) pokazao je značajnu antitumorsku aktivnost. U ovoj studiji, BCY8245 u dozi od 5 mg/kg qw prouzrokovao je preko 10% gubitka telesne težine životinja tokom rasporeda lečenja.
Primer 9.4: In vivo studija efikasnosti proizvoda koji se ispituju u lečenju MDA-MB-468 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa
1. Cilj studije
[0495] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju MDA-MB-468 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0496]
3. Materijali
3.1. Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
[0497]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41 miš plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
[0498] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0499] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0500] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
1
[0501] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0502] Identifikacija kaveza: Identifikacione nalepnice za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0503] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1. Ćelijska kultura
[0504] Ćelije tumora su održavane u Leibovitz-ovom medijumu L-15 sa dodatkom 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije su rutinski subkulturisane dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2. Inokulacija tumora
[0505] Svaki miš je inokulisan subkutano na desnom boku sa MDA-MB-468 tumorskim ćelijama (10 x 10<6>) u 0.2 ml PBS sa dodatkom 50% matrigela za razvoj tumora. 41 životinja je radnomizovano raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 196 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Preparat formulacije za testiranje proizvoda
[0506]
4.4. Sakupljanje uzorka
[0507] 21. dana studije, plazma grupe 2 je sakupljena 5 min, 15 min, 30 min, 60 min i 120 min posle poslednje doze. Tumori grupa 1 i 3 su sakupljeni 2 h nakon poslednje doze. Životinje u grupi 4 su držane na trčanju još 21 dan bez ikakvog doziranja, a tumori ovih grupa su sakupljeni 42. dana.
5. Rezultati
5.1. Krive rasta tumora
[0508] Kriva rasta tumora je prikazana na Slici 20.
5.2. Trag zapremine tumora
[0509] Srednja vrednost zapremine tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa sa MDA-MB-468 ksenotransplantatom prikazana je u Tabelama 27 i 28.
1 1
5.3. Analiza inhibicije rasta tumora
[0510] Stopa inhibicije rasta tumora za proizvode koji se ispituju u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 21. dana nakon početka tretmana.
Tabela 27: Trag zapremine tumora tokom vremena
nastavak
Tabela 28: Trag zapremine tumora tokom vremena
Tabela 29: Analiza inhibicije rasta tumora
6. Rezime rezultata i diskusija
1 2
[0511] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 20 i Tabelama 27 do 29.
[0512] Srednja vrednost veličine tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 447 mm<3>21. dana. BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=85 mm<3>, TGI= 144.2%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV = 22 mm<3>, TGI= 169.8%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV= 29 mm<3>, TGI=168.4%, p<0.001) proizvelo je značajnu anti-tumor antitumorsku aktivnost u zavisnosti od doze ili učestalosti doze.
[0513] Doziranje grupa od 5 mg/kg je suspendovano od 21. dana, tumori nisu pokazali nikakav relaps tokom dodatnog rasporeda praćenja od 3 nedelje. U ovoj ćelijskoj liniji, koja pokazuje visoku ekspresiju nektina-4 u FACS studijama, BCY8245 izaziva regresiju tumora naglašavajući ciljnu prirodu optimalne efikasnosti.
Primer 9.5: In vivo studija efikasnosti proizvoda koji se ispituju u lečenju NCI-H292 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa
1. Cilj studije
[0514] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju NCI-H292 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0515]
3. Materijali
3.1. Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
[0516]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41 miš plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
1
[0517] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0518] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0519] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0520] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0521] Identifikacija kaveza: Identifikacione oznake za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0522] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1. Ćelijska kultura
[0523] NCI-H292 tumorske ćelije su održavane in vitro kao jednoslojna kultura u medijumu RPMI-1640 dopunjenom sa 10% toplotom inaktiviranim fetalnim goveđim serumom na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Ćelije tumora su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno tretmanom tripsin-EDTA. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2. Inokulacija tumora
[0524] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa NCI-H292 tumorskim ćelijama (10 x 10<6>) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora.41 životinja je nasumično raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 162 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u Tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0525]
4.4. Sakupljanje uzoraka
[0526] Na kraju studije, tumor svih grupa je sakupljen 2 h nakon poslednjeg doziranja.
1 4
5. Rezultati
5.1 Krive tumorskog rasta
[0527] Kriva rasta tumora je prikazana na Slici 21.
5.2. Trag zapremine tumora
[0528] Srednja zapremina tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa koji nose NCI-H292 ksenotransplantat prikazan je u Tabeli 30.
Tabela 30: Trag zapremine tumora tokom vremena
Analiza inhibicije rasta tumora
[0529] Stopa inhibicije rasta tumora za proizvode koji se ispituju u modelu ksenotransplantata NCI-H292 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
Tabela 31: Analiza inhibicije tumorskog rasta
j j j p p g p g p prosečnom zapreminom tumora grupe za kontrolnu grupu (T/C).
6. Rezime rezultata i diskusija
[0530] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata NCI-H292. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 21 i Tabelama 30 i 31.
[0531] Srednja veličina tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 948 mm<3>14. dana. BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=149 mm<3>, TGI= 101.4%, p<0.001), 3 mg/kg, biw (TV = 65 mm<3>, TGI= 112.2%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV= 83 mm<3>, TGI=109.8%, p<0.001) pokazao je značajnu antitumorsku aktivnost.
[0532] Svi proizvodi koji se ispituju sa 3 mg/kg, qw, 3 mg/kg, biw i 5 mg/kg, qw pokazali su uporedivu antitumorsku aktivnost, efikasnost se nije dodatno poboljšala kada se povećava doza ili učestalost doze.
1
[0533] U ovoj studiji, miševi u svim grupama su dobro održavali telesnu težinu.
[0534] U ovoj ćelijskoj liniji, koja pokazuje visoku ekspresiju nektina-4 u FACS studijama, BCY8245 izaziva regresiju tumora naglašavajući ciljnu prirodu optimalne efikasnosti.
Primer 9.6: In vivo studija efikasnosti proizvoda koji se ispituju u lečenju NCI-H526 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa
1. Cilj studije
[0535] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju NCI-H526 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0536]
3. Materijali
3.1. Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
[0537]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 21 miš plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
[0538] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 životinje u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0539] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza koji se menja dva puta nedeljno.
1
[0540] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0541] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0542] Identifikacija kaveza: Identifikacione oznake za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0543] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0544] NCI-H526 ćelije su održavane u medijumu sa dodatkom 10% toplotom inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije su rutinski subkulturisane dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2. Inokulacija tumora
[0545] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa NCI-H526 tumorskim ćelijama (5.0 x 10<6>) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora.21 životinja je nasumično raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 181 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0546]
4.4. Sakupljanje uzoraka
[0547] Na kraju studije 14. dana, svi tumori su sakupljeni za FFPE.
5. Rezultati
5.1. Krive rasta tumora
[0548] Kriva rasta tumora je prikazana na Slici 22.
5.2. Trag zapremine tumora
1
[0549] Srednja vrednost zapremine tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa koji nose NCI-H526 ksenotransplantat prikazan je u Tabeli 32.
Tabela 32: Trag zapremine tumora tokom vremena
5.3. Analiza inhibicije rasta tumora
[0550] Stopa inhibicije rasta tumora za testne artikle u modelu ksenotransplantata NCI-H526 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
Tabela 33: Analiza inhibicije tumorskog rasta
6. Rezime rezultata i diskusija
[0551] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost proizvoda koji se ispituju u modelu ksenotransplantata NCI-H526. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 22 i Tabelama 32 i 33.
[0552] Srednja vrednost veličine tumora kod miševa tretiranih nosačem dostigla je 1365<3>14. dana nakon početka tretmana. BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=1205 mm<3>, TGI=13.4%, p>0.05) i 3 mg/kg, biw (TV=1109 mm<3>, TGI=21.6%, p>0.05) pokazao je blagu antitumorsku aktivnost, BCY8245 pri 5 mg/kg, qw (TV=476 mm<3>, TGI=75.0%, p<0.01) pokazao je značajnu antitumorsku aktivnost. U ovoj studiji, BCY8245 u dozi od 5 mg/kg biw prouzrokovao je preko 10% gubitka telesne težine životinja. U ovoj ćelijskoj liniji, koja pokazuje minimalnu ekspresiju nektina-4 u FACS studijama, rast tumora je ograničen od strane BCY8245, ali tumor ne prolazi kroz regresiju, naglašavajući cilj vođen zahtev za optimalnu efikasnost.
Primer 9.7: In vivo studija efikasnosti proizvoda koji se ispituju u lečenju Panc2.13 ksenotransplantata kod Balb/c golih miševa
1. Cilj studije
[0553] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost proizvoda koji se ispituju u lečenju Panc2.13 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa.
1
2. Eksperimentalni dizajn
[0554]
3. Materijali
3.1. Životinje i uslovi čuvanja
3.1.1. Životinje
[0555]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 41 miš plus rezervni
3.1.2. Uslovi čuvanja
[0556] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 3 ili 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0557] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza koji se menja dva puta nedeljno.
[0558] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0559] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0560] Identifikacija kaveza: Identifikacione etikete za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0561] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1. Ćelijska kultura
1
[0562] Panc2.13 tumorske ćelije će se održavati u medijumu RMPI1640 sa dodatkom 15% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma i 10 jedinica/ml humanog rekombinantnog insulina na 37°C u atmosferi od 5% CO2u vazduhu. Ćelije tumora će se rutinski supkulturisati dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta biće sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2. Inokulacija tumora
[0563] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa tumorskim ćelijama Panc2.13 (5 x 10<6>) sa Matrigelom (1:1) u 0.2 ml PBS-a za razvoj tumora.41 životinja je randomizovano raspoređena kada je prosečna zapremina tumora dostigla 149 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0564]
4.4. Sakupljanje uzoraka
[0565] Na kraju studije, tumor svih grupa je sakupljen 2 h nakon poslednjeg doziranja.
5. Rezultati
5.1. Krive rasta tumora
[0566] Kriva rasta tumora je prikazana na Slici 23.
5.2. Trag zapremine tumora
[0567] Srednja zapremina tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa koji nose Panc2.13 ksenotransplantat prikazan je u Tabeli 34.
Tabela 34: Trag zapremine tumora tokom vremena
11
Tabela 35: Analiza inhibicije tumorskog rasta
5.3. Analiza inhibicije rasta tumora
[0568] Stopa inhibicije rasta tumora za ispitivane proizvode u modelu Panc2.13 ksenotransplantata izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 14. dana nakon početka tretmana.
6. Rezime rezultata i diskusija
[0569] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost ispitivanog proizvoda u modelu Panc2.13 ksenotransplantata. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 23 i Tabelama 34 i 35.
[0570] Srednja vrednost veličine tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 545 mm<3>14. dana. BCY8245 pri 3 mg/kg, qw (TV=271 mm<3>, TGI= 69.2%, p<0.01), 3 mg/kg, biw (TV = 231 mm<3>, TGI= 79.1%, p<0.001) i 5 mg/kg, qw (TV= 238 mm<3>, TGI=77.5%, p<0.001) pokazao je značajnu antitumorsku aktivnost. U ovoj studiji, životinje u svim grupama od 5 mg/kg qw izgubile su u proseku 15% telesne težine. U ovoj ćelijskoj liniji, koja pokazuje samo umerenu ekspresiju nektina-4 u FACS studijama, rast tumora je ograničen BCY8245, ali tumor ne podleže regresiji.
Primer 9.8: In vivo studija efikasnosti ispitivanih proizvoda u lečenju MDA-MB-468 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa
1. Cilj studije
[0571] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost BCY8245 i BCY8245 u kombinaciji sa BCY8234 u lečenju MDA-MB-468 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa da bi se odredila uloga koju ciljno vezivanje ima u optimalnoj efikasnosti.
2. Eksperimentalni dizajn
[0572]
3. Materijali
3.1. Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
[0573]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 36 miševa plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
[0574] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 4 životinje u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
[0575] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0576] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0577] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0578] Identifikacija kaveza: Identifikacione nalepnice za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0579] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1. Ćelijska kultura
[0580] Ćelije tumora su održavane u Leibovitz-ovom medijumu L-15 sa dodatkom 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 0% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2. Inokulacija tumora
[0581] Svaki miš je inokulisan subkutano na desnom boku sa MDA-MB-468 tumorskim ćelijama (10 x 10<6>) u 0.2 ml PBS sa dodatkom 50% matrigela za razvoj tumora.36 životinja je slučajno raspoređeno kada je prosečna zapremina tumora dostigla 186 mm<3>. Primena proizvoda koji se ispituje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0582]
4.4. Sakupljanje uzoraka
[0583] 21. dana studije, tumori grupe 5 i 6 su sakupljeni za FFPE. Na kraju studije, tumori grupe 3 su prikupljeni za FFPE.
5. Rezultati
5.1. Kriva rasta tumora
[0584] Kriva rasta tumora je prikazana na Slici 24.
5.2. Trag zapremine tumora
[0585] Srednja zapremina tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa koji nose MDA-MB-468 ksenotransplantat je prikazana u Tabelama 36 do 38.
5.3. Analiza inhibicije rasta tumora
[0586] Stopa inhibicije rasta tumora za ispitivane proizvode u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 21. dana nakon početka tretmana.
6. Rezime rezultata i diskusija
[0587] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost ispitivanih proizvoda u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na slici 24 i tabelama 36 do 39.
[0588] Srednja vrednost veličine tumora miševa tretiranih nosačem dostigla je 420 mm<3>21. dana. BCY8245 pri 1 mg/kg, qw (TV=204 mm<3>, TGI=92.1%, p<0.001), 3 mg/kg, qw (TV =27 mm<3>, TGI=164.9%, p<0.001) proizveo je značajnu antitumorsku aktivnost u dozno zavisnim način. BCY8245 u dozi od 0.3 mg/kg qw ili biw nije pokazao nikakvu antitumorsku aktivnost.
11
[0589] BCY8245 pri 1 mg/kg, qw i 3 mg/kg, qw u kombinaciji sa BCY8234 (srodni peptid bez toksina) 300 mg/kg, qw proizvodi značajnu antitumorsku aktivnost (TV=242 mm<3>, TGI=75.4 %, p<0.01) proizvela je značajnu antitumorsko aktivnost. Kada se uporedi samo sa BCY8245, antitumorska aktivnost BCY8245 pri 3 mg/kg je bila antagonizovana sa BCY8234 pri 300 mg/kg (p<0.001). Ovo smanjenje efikasnosti konkurentnog peptida bez toksina pokazuje važnost vezivanja cilja za optimalnu efikasnost. Tokom sledećeg rasporeda praćenja, miševi tretirani sa BCY82451 mg/kg qw pokazali su očigledan relaps tumora, dok miševi tretirani sa BCY82453 mg/kg qw nisu pokazali nikakav relaps tumora.
Tabela 37: Trag zapremine tumora tokom vremena (Dan 23 do dana 32)
Tabela 38: Trag zapremine tumora tokom vremena (Dan 35 do dana 91)
Table 39: Analiza inhibicije tumorskog rasta
11
Primer 9.9: In vivo studija efikasnosti proizvoda koji se ispituju u lečenju MDA-MB-468 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa
1. Cilj studije
[0590] Cilj istraživanja je da se proceni in vivo antitumorska efikasnost BCY8245 samog ili u kombinaciji sa BCY8234 u lečenju MDA-MB-468 ksenotransplantata kod Balb/c nude miševa.
2. Eksperimentalni dizajn
[0591]
3. Materijali
3.1 Životinje i uslovi boravka
3.1.1. Životinje
[0592]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22 g
Broj životinja: 20 miševa plus rezervni
3.1.2. Uslovi boravka
[0593] Miševi su držani u pojedinačnim ventilacionim kavezima na konstantnoj temperaturi i vlažnosti sa 5 životinja u svakom kavezu.
• Temperatura: 20-26 °C.
• Vlažnost vazduha 40-70%.
11
[0594] Kavezi: Napravljeni od polikarbonata. Veličina je 300 mm x 180 mm x 150 mm. Podloga je klip kukuruza, koji se menja dva puta nedeljno.
[0595] Ishrana: Životinje su imale slobodan pristup ozračenoj sterilisanoj suvoj hrani u granulama tokom celog perioda istraživanja.
[0596] Voda: Životinje su imale slobodan pristup sterilnoj vodi za piće.
[0597] Identifikacija kaveza: Identifikacione oznake za svaki kavez sadržale su sledeće informacije: broj životinja, pol, soj, datum prijema, tretman, broj studije, broj grupe i datum početka tretmana.
[0598] Identifikacija životinja: Životinje su označene kodiranjem uha.
4. Eksperimentalni postupci i procedure
4.1 Ćelijska kultura
[0599] Tumorske ćelije su održavane u Leibovitz-ovom medijumu L-15 sa dodatkom 10% toplotno inaktiviranog fetalnog goveđeg seruma na 37°C u atmosferi od 0% CO2u vazduhu. Tumorske ćelije su rutinski supkulturisane dva puta nedeljno. Ćelije koje rastu u fazi eksponencijalnog rasta su sakupljene i prebrojane za inokulaciju tumora.
4.2. Inokulacija tumora
[0600] Svaki miš je inokuliran subkutano na desnom boku sa MDA-MB-468 tumorskim ćelijama (10 x 10<6>) u 0.2 ml PBS sa dodatkom 50% matrigela za razvoj tumora. 20 životinja je slučajno rapoređeno kada je prosečna zapremina tumora dostigla 464 mm<3>. Primena proizvoda za testiranje i broj životinja u svakoj grupi prikazani su u tabeli eksperimentalnog dizajna.
4.3. Dobijanje formulacije proizvoda koji se ispituje
[0601]
4.4. Sakupljanje uzoraka
[0602] Na kraju studije, tumori grupe 3 su sakupljeni za FFPE.
5. Rezultati
11
5.1. Kriva rasta tumora
[0603] Kriva rasta tumora je prikazana na Slici 25.
5.2. Trag zapremine tumora
[0604] Srednja vrednost zapremine tumora tokom vremena kod ženskih Balb/c nude miševa koji nose MDA-MB-468 ksenotransplantat prikazana je u Tabelama 40 do 42.
5.3. Analiza inhibicije rasta tumora
[0605] Stopa inhibicije rasta tumora za ispitivane proizvode u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468 izračunata je na osnovu merenja zapremine tumora 28. dana nakon početka lečenja.
6. Rezime rezultata i diskusija
[0606] U ovoj studiji, procenjena je terapeutska efikasnost ispitivanog proizvoda u modelu ksenotransplantata MDA-MB-468. Izmerene zapremine tumora svih grupa lečenja u različitim vremenskim tačkama prikazane su na Slici 25 i Tabelama 40 do 43.
[0607] Početna veličina tumora bila je namerno veća od one koja je prethodno korišćena da se utvrdi da li je BCY8245 pokazao efikasnost u ovoj većoj veličini. Srednja vrednost veličine tumora kod miševa tretiranih nosačem dostigla je 773 mm<3>28. dana. BCY8245 pri 1 mg/kg, qw (TV=384 mm<3>, TGI=126.6%, p<0.001) i 3 mg/kg, qw (TV=50 mm<3>, TGI=234.6%, p<0.001) proizvela je značajnu antitumorsku aktivnost na dozno zavisan način na dan 28. Među njima, miševi tretirani sa BCY8245, 3 mg/kg qw su pokazali izvestan relaps tumora nakon prestanka lečenja, dalje doziranje od 76. dana nije delovalo na potpunu regresiju tumora.
[0608] BCY8245 u dozi od 3 mg/kg, qw u kombinaciji sa BCY8234300 mg/kg, qw je proizveo značajnu anti-tumorsku aktivnost (TV=55 mm<3>, TGI=234.0%, p<0.001) 28. dana, a tumori nisu pokazali nikakav recidiv tokom celog rasporeda praćenja.
[0609] Miševi grupe nosača tretirani sa 10 mg/kg Nektin-4 ADC ili 5 mg/kg BCY8245 i miševi grupe 2 (BCI8245, 1 mpk, qw) tretirani sa 5 mg/kg BCY8245 na PG-D28 su pokazali efektivnu regresiju tumora u naredne 3 nedelje, nakon toga, tumori su pokazali ponovni rast u sledećih 4 nedelja nakon uzimanja leka.
[0610] BCY8245 je bio u stanju da izazove regresiju tumora u tumorima od približno 450 mm<3>, ali i kada je primenjen grupi koja je prethodno primala nosač, kod tumora sa početnom zapreminom od približno 770 mm<3>.
11
Tabela 41: Trag zapremine tumora tokom vremena (Dan 30 do dana 75)
T b l 43 A li i hibi ij t k t
Primer 10: In vivo PK Studije.
[0611] Životinjama sa MDA-MB-468 ksenotransplantatima je ubrizgan BCY8245 (BT8009) u dozi od 3 mg/kg. U različitim vremenskim tačkama, životinje su eutanazirane, a plazma i tumor uzeti i brzo zamrznuti. Uzorci su analizirani na MMAE. Nivoi BT8009 u plazmi (BCY8245) su iz istorijskih PK studija. Koncentracije MMAE u plazmi, MMAE u tumoru i BT8009 u plazmi prikazane su na slici 33. MMAE je zadržan u tumoru duže nego u plazmi što podržava hipotezu da je sistemska izloženost značajno manja od izloženosti tumoru.
Primer 11: HCS test.
[0612] HCS test je korišćen u studiji vezivanja Nektin-4 BDC. Ćelije su inkubirane sa test agensom i zatim isprane. Detekcija je bila pomoću fluorescentnog antitela na MMAE. MDA-MB-468 ćelije pokazuju umerenu ekspresiju nektina-4 sa 20000 ćelija koje daju najbolje slike. NCI-H292 ćelije pokazuju nisku ekspresiju u ovom testu, detekcija MMAE je bila loša čak i na 20000 ćelija. HCS podaci o ćelijskoj liniji MDA-MB-468 prikazani su na slici 34 i Tabeli 44.
Tabela 44
[0613] Nektin-4 ADC i BCI8245 su zadržani na ćelijama i ko-lokalizovani membranskom bojom. BCI8781 i MMAE su pokazali minimalno zadržavanje. Kd svih jedinjenja na ćelijskoj liniji MDA-MB-468 je u skladu sa istorijskim podacima. Nektin-4 ADC je pokazao afinitet vezivanja na MDA-MB-468 ćelijskoj liniji. BCY8425 je pokazao jednocifreni nanomolarni afinitet sa Bmax nižim nego za Nektin-4 ADC. Ovaj smanjeni maksimum intenziteta fluorescencije je zato što Nektin-4 ADC ima odnos MMAE prema leku od 4, dok BCY8245 ima odnos MMAE prema leku od 1. BCY8781 je pokazao samo veoma slab afinitet vezivanja na ćelijskoj liniji MDA-MB-468, dok je MMAE pokazao skoro nema detektabilnog afiniteta vezivanja na MDA-MB-468 ćelijskoj liniji.
Primer 12: In vivo efikasnost BCY8245 u dva PDX modela kancera pluća
Svrha
[0614] Za procenu efikasnosti BCY8245 u PDX modelu ne-malih ćelija skvamoznih ćelija i adenokarcinoma (oba karcinoma ne-malih ćelija).
Životinje
[0615]
Vrsta: Mus Musculus
Soj: Balb/c nude
Starost: 6-8 nedelja
Pol: ženski
Telesna težina: 18-22
Agensi u testu
BCY8245 i Nektin-4 ADC ili BCY8781
Životinje pre studija
[0616] Svaki miš je inokulisan subkutano na desnom boku sa LU-01-0007 ili LU-01-0412 fragmentom tumora (~30 mm<3>) za razvoj tumora. Životinje su slučajno raspoređene kada je prosečna zapremina tumora dostigla 161 mm<3>(LU-01-0007) ili 147 mm<3>(LU-01-0412)
U živim merenjima i krajnjim tačkama
[0617] Životinje su svakodnevno proveravane za bilo kakve efekte rasta tumora i tretmana na normalno ponašanje, kao što su pokretljivost, potrošnja hrane i vode (samo gledanjem), povećanje/gubitak telesne težine, matiranje očiju/dlake i bilo koji drugi abnormalni efekat kao što je navedeno u protokol. Smrt i uočeni klinički znaci su zabeleženi na osnovu broja životinja u svakom podskupu.
[0618] Glavna krajnja tačka je bila da se vidi da li se rast tumora može odložiti ili da se miševi mogu izlečiti. Zapremin tumora je merena tri puta nedeljno u dve dimenzije pomoću kalipera, a zapremina je izražena u mm<3>koristeći formulu: V = 0.5 a x b<2>gde su a i b dugi i kratki prečnik tumora, redom. Veličina tumora je zatim korišćena za izračunavanje vrednosti T/C. Vrednost T/C (u procentima) je indikacija antitumorske efikasnosti; T i C su srednje zapremine tretirane i kontrolne grupe, redom, u datom danu.
[0619] TGI je izračunat za svaku grupu korišćenjem formule: TGI (%) = [1-(Ti-T0)/ (Vi-V0)] 3100; Tije prosečna zapremina tumora u grupi za tretman u datom danu, T0je prosečna zapremina tumora tretirane grupe na dan početka lečenja, Vije prosečna zapremina tumora kontrolne grupe nosača istog dana sa Ti, i V0je prosečna zapremina tumora grupe nosača na dan početka lečenja.
[0620] Rezultati ovih studija su prikazani na Slikama 26 i 27.
[0621] Lu-01-0412 (Slika 26): BCY8245 je proizveo efikasnost u zavisnosti od doze u ovom PDX modelu sa smanjenjem stope rasta tumora na 1 mg/kg qw, ali izraženom regresijom tumora pri 3 mg/kg qw do početne vrednosti. Nakon prestanka doziranja (21. dan) 5/6 životinja nije pokazalo ponovni rast tumora do 105 dana nakon početka studije. Jedna životinja koja je pokazala ponovni rast je reagovala na 3 mg/kg BCY8245 i pokazala je obnovljenu regresiju na osnovnu liniju. BCY8781 nevezujući BDC je proizveo stabilnu bolest pri 3 mg/kg i po prestanku doziranja tumor je brzo rastao istom brzinom kao i grupa tretirana nosačem, pri čemu se naglašava povećana efikasnost koju vezivanje nektina-4 daje ovim agensima. Veliki tumori (grupa tretirana nosačem) su regresirali kao odgovor na jednu dozu BCY8245 ili BCY8781.
[0622] LU-01-0007 (Slika 27): BCY8245 je proizveo efikasnost u zavisnosti od doze sa 1 mg/kg qw koja proizvodi stabilnu bolest i 3 mg/kg izaziva potpunu regresiju. Doziranje se moralo održavati do 56. dana da bi se postigla potpuna regresija (kada je doziranje prestalo). U ovoj grupi nije bilo ponovnog rasta tumora (potonji je održan do 126 dana nakon početka studije). Nektin-4 ADC je dao sličan stepen efikasnosti. Grupa sa stabilnom bolešću od 1 mg/kg je reagovala na povećanje doze (3 i 5 mg/kg) što sugeriše da niske doze BCY8245 ne dovode do razvoja rezistencije.
Primer 13: In vivo procena BCY8245 u PDX modelima niskog pasaža kod humanih karcinoma dojke, jednjaka i bešike kod imunokompromitovanih miševa.
Svrha
[0623] Za procenu antitumorske aktivnosti Bycycle Agensa u modelima niskog pasaža TumorGraft Champions kod humanog kancera dojke, jednjaka i bešike kod imunokompromitovanih miševa.
Test Sistem
[0624]
Vrsta: Miš
Soj: Atimični Nude-Foxn1nu (imuno-kompromitovani)
Izvor: Envigo: Indianapolis, Indiana
Pol: Ženski
Ciljna starost na početku doziranja: Najmanje 6-8 nedelja starosti
Ciljna težina na početku doziranja: Najmanje 18 grama
12
Period privikavanja: 3 dana
Esperimentalni dizajn
[0625] Životinje pre ispitivanja: Kada dovoljan broj soja životinja dostigne 1.0 – 1.5 cm<3>, tumori će biti sakupljeni za ponovnu implantaciju u životinje pre ispitivanja. Životinje pre studije će biti implantirane jednostrano na levom boku sa fragmentima tumora sakupljenim od soja životinja. Svakoj životinji se implantira iz određenog lota pasaža i dokumentuje se.
[0626] Ispitivane životinje: Zapremine tumora pre studije su zabeležene za svaki eksperiment počevši od sedam do deset dana nakon implantacije. Kada tumori dostignu prosečnu zapreminu tumora od 150-300 mm<3>, životinje će biti uparene po zapremini tumora u grupe za lečenje ili kontrolne grupe koje će se koristiti za doziranje i doziranje započeto 0. dana.
Agensi u testu
[0627] BCY8245 i konjugat leka antitela na nektin-4, poređenje sa kontrolom nosača. Standardni agent za negu Docetaksel može biti uključen. Svi agensi koji se doziraju qw intravenskim putem, doze su prikazane na grafikonima.
Merenja na živo
[0628] Efikasnost Zapremina tumora: Zapremine tumora će se uzimati dva puta nedeljno. Konačna zapremina tumora će se uzeti na dan kada studija dostigne krajnju tačku. Ako je moguće, konačna zapremina tumora će se uzeti ako se nađe da je životinja na samrti.
[0629] Efikasnost težine životinja: Životinje će se meriti dva puta nedeljno. Konačna težina će se uzeti na dan kada studija dostigne krajnju tačku ili ako se utvrdi da je životinja na samrti, ako je moguće. Životinje koje pokazuju gubitak težine ≥10% u poređenju sa Danom 0 dobiće DietGel® ad libitum. Svaka životinja koja pokazuje >20% neto gubitka težine u periodu od 7 dana ili ako miševi pokažu >30% neto gubitka težine u poređenju sa Danom 0 smatraće se umrtvljenom i eutanaziranom.
Analiza podataka
[0630] Toksičnost agensa: Počevši od dana 0, životinje će se posmatrati svakodnevno i meriti dva puta nedeljno korišćenjem digitalne vage; podaci uključujući individualnu i srednju težinu grama (Srednja We ± SEM), srednji procenat promene težine u odnosu na Dan 0 (%vD0) biće zabeležen za svaku grupu i %vD0 će biti ucrtan na kraju studije. Uginuće životinja će se svakodnevno beležiti i označavati kao povezano sa lekom (D), tehničko (T), povezano sa tumorom (B) ili nepoznato (U) na osnovu gubitka težine i opšteg posmatranja; grupe sa pojedinačnim agensom ili kombinovane grupe koje prijavljuju srednju vrednost %vD0 >20% i/ili >10% mortaliteta će se smatrati iznad maksimalne tolerisane doze (MTD) za taj tretman na procenjenom režimu. Maksimalna srednja vrednost %vD0 (najniža težina) za svaku tretiranu grupu je prijavljena po završetku studije.
Efikasnost agensa
[0631] Inhibicija rasta tumora - Počevši od dana 0, dimenzije tumora se mere dva puta nedeljno digitalnom kaliperom i podaci uključuju pojedinačne i srednje procenjene zapremine tumora (Srednja vrednost TV ± SEM) zabeležene za svaku grupu; zapremina tumora se izračunava pomoću formule (1): TV= širina<2>x dužina x 0.52. Po završetku studije, vrednosti procenta inhibicije rasta tumora (%TGI) će biti izračunate i prijavljene za svaku tretiranu grupu (T) u odnosu na kontrolnu (C) korišćenjem početnih (i) i konačnih (f) merenja tumora po formuli (2): % TGI = 1 - (Tf-Ti) / (Cf-Ci). Pojedinačni miševi koji prijavljuju zapreminu tumora ≤30% merenja 0. dana za dva uzastopna merenja će se smatrati delimičnim odgovorima (PR). Pojedinačni miševi koji nemaju opipljive tumore (0.00 mm<3>za dva uzastopna merenja) biće klasifikovani kao potpuni odgovori (CR); CR koji traje do završetka studije smatraće se preživelim bez tumora (TFS). Vreme udvostručavanja tumora (DT) biće određeno za grupe tretirane nosačem korišćenjem formule DT = (Df - Di) * log2 / (logTVf - logTVi) gde je D = dan i TV = zapremina tumora. Svim podacima prikupljenim u ovoj studiji upravlja se elektronski i čuvaju se na redundantnom serverskom sistemu.
[0632] Rezultati ovih studija su prikazani na Slikama 28 do 31.
[0633] BCY8245 je testiran na četiri PDX modela niskog prolaza koji predstavljaju kanncer mokraćne bešike (CTG-1771), na estrogen i progesteron negativan Her2 pozitivan kancer dojke (CTG-1171), trostruko negativan kancer dojke (CTG-1106) i kancer jednjaka (CTG-0896). U svim ovim modelima BCY8245 je pokazao odličnu efikasnost izazivajući regresiju tumora i u tri od četiri potpunu regresiju na osnovnu liniju. Efikasnost je bila uporediva sa ADC u svim slučajevima i superiorna ili jednaka Docetaksel SOC. U svim modelima BCY8245 se bolje toleriše od Docetaksela.
12
��
��

Claims (19)

  1. Patentni zahtevi 1. Peptidni ligand specifičan za Nektin-4 koji sadrži polipeptid koji sadrži najmanje tri cisteinska ostatka, odvojena sa najmanje dve sekvence petlje, i molekularnu skelu koja formira kovalentne veze sa cisteinskim ostacima polipeptida tako da se formiraju najmanje dve polipeptidne petlje na molekularnoj skeli, pri čemu peptidni ligand sadrži aminokiselinsku sekvencu: CiP[1NaI][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so; gde 1Nal predstavlja 1-naftilalanin, HArg predstavlja homoarginin, HyP predstavlja hidroksiprolin i Ci, Ciii Ciiipredstavljaju redom prvi, drugi i treći cisteinski ostatak.
  2. 2. Peptidni ligand prema patentnom zahtevu 1, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja se bira od: [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8234); Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8122); Ac-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8126); (SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8116); Fluorescein-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8205); i [PYA][B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8846), kao što je: [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8234); Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8122); Ac-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8126); (SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8116); i Fluorescein-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8205).
  3. 3. Peptidni ligand prema patentnom zahtevu 1 ili patentnom zahtevu 2, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od: Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8122); Ac-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8126); i (SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8116).
  4. 4. Peptidni ligand prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od: Ac-[B-Ala][Sar5]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8122); i Ac-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8126).
  5. 5. Peptidni ligand prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 3, koji sadrži aminokiselinsku sekvencu koja je odabrana od: [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) (ovde označen sa BCY8234).
  6. 6. Peptidni ligand prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, pri čemu je molekularna skela izabrana od 1, 1’, 1 "-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-ona (TATA).
  7. 7. Peptidni ligand prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 6, gde se farmaceutski prihvatljiva so bira od slobodne kiseline ili soli natrijuma, kalijuma, kalcijuma, amonijuma.
  8. 8. Peptidni ligand prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 7, gde je Nektin-4 humani Nektin-4.
  9. 9. Konjugat leka koji sadrži peptidni ligand kao što je definisan u bilo kom od patentnih zahteva 1 do 8, spojen sa jednom ili više efektorskih i/ili funkcionalnih grupa, kao što su jedan ili više citotoksičnih agenasa, posebno MMAE ili DM1, određenije MMAE.
  10. 10. Konjugat leka kao što je definisan u patentnom zahtevu 9, gde je citotoksični agens MMAE i pomenuti konjugat dodatno sadrži linker koji se bira od: -PABC-Cit-Val-Glutaril- ili - PABC-ciklobutil-Ala-Cit-βAla-, kao što je -PABC-Cit-Val-Glutaril-, gde PABC predstavlja p-aminobenzilkarbamat.
  11. 11. Konjugat leka kao što je definisan u patentnom zahtevu 9, gde je citotoksični agens DM1 i pomenuti konjugat dodatno sadrži linker koji je -SPDB-(SO3H)-, gde SPDB predstavlja N-sukcinimidil 3-(2-piridilditio)propionat.
  12. 12. Konjugat leka kao što je definisan u bilo kom od patentnih zahteva 9 do 11, koje se bira od: BCY8245 ili BCY8549, posebno BCY8245.
  13. 13. Jedinjenje koje je BCY8245 (BCY00008245) ili njegova farmaceutski prihvatljiva so; gde BCY8245 ima strukturu:
    gde BCY00008234 (BYC8234) je polipeptid sekvence: [B-Ala][Sar10]-(SEQ ID NO: 1) gde SEQ ID NO: 1 ima sekvencu: CiP[1NaI][dD]CiiM[HArg]DWSTP[HyP]WCiii(SEQ ID NO: 1) gde Ci, Ciii Ciii predstavljaju redom prvi, drugi i treći cisteinski ostatak, i gde polipeptid SEQ ID NO: 1 je ciklizovan na Ci, Ciii Ciiisa 1,1’,1"-(1,3,5-triazinan-1,3,5-triil)triprop-2-en-1-onom (TATA).
  14. 14. Jedinjenje prema patentnom zahtevu 13 koje je
    ili njegova farmaceutski prihvatljiva so. 1
  15. 15. Peptidni ligand, konjugat leka ili jedinjenje prema bilo kom od prethodnih patentnih zahteva, gde je SEQ ID NO: 1 amidiran na C-kraju.
  16. 16. Farmaceutska kompozicija koja sadrži peptidni ligand, konjugat leka ili jedinjenje prema bilo kom od patentnih zahteva 9 do 15, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih ekscipijenasa, i opciono jednim ili više terapeutskih agenasa.
  17. 17. Konjugat leka, jedinjenje ili farmaceutska kompozicija kao što je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 9 do 15, za upotrebu u prevenciji, supresiji ili lečenju bolesti ili poremećaja posredovanih nektinom-4, kao što je kancer.
  18. 18. Konjugat leka, jedinjenje ili farmaceutska kompozicija kao što je definisano u bilo kom od patentnih zahteva 9 do 15, za upotrebu u prevenciji, supresiji ili lečenju kancera kod pacijenta identifikovanog da ima povećanu varijaciju broja kopija (CNV) nektina-4.
  19. 19. Konjugat leka, jedinjenje ili farmaceutska kompozicija za upotrebu kao što se definiše u patentnom zahtevu 17 ili 18, gde se kancer bira od: dojke, materice, bešike, adenokarcinoma pluća, plućnog skvamoza, grlića materice, glave i vrata, pankreasa, tiroidee, kolorektalnog, timoma, sarkoma, karcinoma bistrih ćelija bubrega (RCC), prostate i želuca. 1 1
RS20250070A 2018-06-22 2019-06-21 Biciklični peptidni ligandi specifični za nektin-4 RS66429B1 (sr)

Applications Claiming Priority (6)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GBGB1810250.9A GB201810250D0 (en) 2018-06-22 2018-06-22 Bicycle peptide ligands specific for nectin-4
GBGB1815684.4A GB201815684D0 (en) 2018-09-26 2018-09-26 Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
GBGB1818499.4A GB201818499D0 (en) 2018-11-13 2018-11-13 Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
GBGB1904632.5A GB201904632D0 (en) 2019-04-02 2019-04-02 Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
PCT/GB2019/051741 WO2019243833A1 (en) 2018-06-22 2019-06-21 Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
EP19734150.6A EP3810167B1 (en) 2018-06-22 2019-06-21 Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS66429B1 true RS66429B1 (sr) 2025-02-28

Family

ID=67106071

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20250070A RS66429B1 (sr) 2018-06-22 2019-06-21 Biciklični peptidni ligandi specifični za nektin-4

Country Status (26)

Country Link
US (8) US11180531B2 (sr)
EP (5) EP3810169A1 (sr)
JP (4) JP7641121B2 (sr)
KR (3) KR102795633B1 (sr)
CN (6) CN119405829A (sr)
AU (4) AU2019289200B2 (sr)
BR (1) BR112020025985A2 (sr)
CA (2) CA3101427A1 (sr)
DK (1) DK3810167T3 (sr)
ES (1) ES3001186T3 (sr)
FI (1) FI3810167T3 (sr)
HR (1) HRP20250081T1 (sr)
HU (1) HUE069969T2 (sr)
IL (3) IL279489B2 (sr)
LT (1) LT3810167T (sr)
MX (3) MX421475B (sr)
PH (1) PH12020552179A1 (sr)
PL (1) PL3810167T3 (sr)
PT (1) PT3810167T (sr)
RS (1) RS66429B1 (sr)
SG (2) SG11202012413TA (sr)
SI (1) SI3810167T1 (sr)
SM (1) SMT202400535T1 (sr)
TW (1) TWI851580B (sr)
WO (2) WO2019243833A1 (sr)
ZA (1) ZA202100442B (sr)

Families Citing this family (44)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN107148425B (zh) 2014-10-29 2021-08-03 拜斯科阿迪有限公司 对mt1-mmp特异性的双环肽配体
EP3645549A1 (en) 2017-06-26 2020-05-06 BicycleRD Limited Bicyclic peptide ligands with detectable moieties and uses thereof
JP7670481B2 (ja) 2017-08-04 2025-04-30 バイスクルテクス・リミテッド Ｃｄ１３７に対して特異的な二環式ペプチドリガンド
GB201721265D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for EphA2
TWI825046B (zh) 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
CN111902429A (zh) 2018-02-23 2020-11-06 拜斯科技术开发有限公司 多聚体双环肽配体
EP3774851A1 (en) * 2018-04-04 2021-02-17 BicycleTX Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
GB201810316D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicyclerd Ltd Peptide ligands for binding to EphA2
IL279489B2 (en) * 2018-06-22 2025-10-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4, a drug conjugate containing the peptide ligands and a pharmaceutical composition containing the drug conjugate
GB201820295D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for MT1-MMP
GB201820325D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for psma
GB201820288D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicycle Tx Ltd Bicycle peptide ligaands specific for MT1-MMP
WO2020128527A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligands specific for pd-l1
US12492224B2 (en) 2018-12-21 2025-12-09 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for PD-L1
GB201900529D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for CD38
WO2020225577A1 (en) 2019-05-09 2020-11-12 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for ox40
TWI860386B (zh) 2019-07-30 2024-11-01 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
US11508566B2 (en) * 2019-09-03 2022-11-22 National Taiwan University Use of anthranilic acid derivative as matrix for MALDI mass spectrometry
SMT202500247T1 (it) * 2019-10-03 2025-09-12 Bicycletx Ltd Complessi peptidici eterotandem biciclici
GB201914872D0 (en) * 2019-10-15 2019-11-27 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
AU2021226133A1 (en) * 2020-02-28 2022-10-20 Ascend Biopharmaceuticals Ltd Methods of treatment and related compositions
US20230181749A1 (en) * 2020-05-20 2023-06-15 Bicycle TX Limited Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4 and uses thereof
AU2021322934A1 (en) 2020-08-03 2023-03-30 Bicycletx Limited Peptide-based linkers
CA3186504A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Stephen J. Blakemore Bicycle conjugates specific for nectin-4 and uses thereof
WO2022060831A1 (en) * 2020-09-17 2022-03-24 Mirati Therapeutics, Inc. Combination therapies
GB202016331D0 (en) * 2020-10-15 2020-12-02 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
AU2022206577A1 (en) 2021-01-08 2023-08-24 Bicycletx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
US20250186539A2 (en) 2021-01-11 2025-06-12 Bicycletx Limited Methods for treating cancer
CA3217112A1 (en) * 2021-04-30 2022-11-03 Wei Zhou Antibody-drug conjugate targeting nectin-4 and preparation method therefor and use thereof
WO2022253051A1 (zh) * 2021-06-01 2022-12-08 南京明德新药研发有限公司 多肽偶联药物及其应用
CN118103075A (zh) 2021-09-03 2024-05-28 拜斯科技术开发有限公司 双环肽毒素偶联物及其中间体的合成
MX2024003876A (es) * 2021-09-29 2024-04-19 Conjustar Zhuhai Biologics Co Ltd Conjugado farmaco-polipeptido triciclico y sus aplicaciones.
GB202114279D0 (en) * 2021-10-06 2021-11-17 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
WO2023066314A1 (zh) * 2021-10-19 2023-04-27 海思科医药集团股份有限公司 Nectin-4的双环肽配体及其用途
CN114133434B (zh) * 2021-12-01 2022-11-15 北京大学第一医院 靶向Nectin-4的双环肽核素配体与探针
CN116768978A (zh) * 2022-03-11 2023-09-19 上海智肽生物科技有限公司 Nectin-4靶向肽化合物及其药物偶联物
CN115400141B (zh) * 2022-09-20 2023-08-11 天津医科大学总医院 Sting激动剂在制备治疗慢性瘙痒的药物中的应用
EP4676539A1 (en) 2023-03-09 2026-01-14 BicycleTx Limited Synthesis of bicycle toxin conjugates, and intermediates thereof
WO2024222840A1 (zh) * 2023-04-28 2024-10-31 天津星联肽生物科技有限公司 新型放射性核素标记的多肽偶联物及其应用
CN121419788A (zh) 2023-05-04 2026-01-27 坦博公司 用于体内递送有效载荷的基于四嗪的靶向剂
EP4731638A1 (en) 2023-06-23 2026-04-29 BicycleTx Limited Bicyclic peptide ligands specific for nk cells
WO2025007839A1 (zh) * 2023-07-03 2025-01-09 韦恩生物科技有限公司 一种偶联体化合物及其制备方法和用途
CN119390781B (zh) * 2023-08-04 2026-04-17 湖南中晟全肽生物科技股份有限公司 特异性结合Nectin-4的多肽及其用途
WO2025248261A1 (en) * 2024-05-31 2025-12-04 Bicycletx Limited Method for identifying patients

Family Cites Families (228)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR901228A (fr) 1943-01-16 1945-07-20 Deutsche Edelstahlwerke Ag Système d'aimant à entrefer annulaire
US2642514A (en) 1946-08-10 1953-06-16 American Cyanamid Co Ion exchange process with magnetic ion exchange resins
GB1239978A (en) 1968-07-15 1971-07-21 Permutt Company Ltd Ion-exchange processes
US4650750A (en) 1982-02-01 1987-03-17 Giese Roger W Method of chemical analysis employing molecular release tag compounds
US4709016A (en) 1982-02-01 1987-11-24 Northeastern University Molecular analytical release tags and their use in chemical analysis
US5650270A (en) 1982-02-01 1997-07-22 Northeastern University Molecular analytical release tags and their use in chemical analysis
US5516931A (en) 1982-02-01 1996-05-14 Northeastern University Release tag compounds producing ketone signal groups
US5595756A (en) 1993-12-22 1997-01-21 Inex Pharmaceuticals Corporation Liposomal compositions for enhanced retention of bioactive agents
US20020164788A1 (en) 1994-12-02 2002-11-07 The Wellcome Foundation Limited Humanized antibodies to CD38
ES2176484T3 (es) 1995-08-18 2002-12-01 Morphosys Ag Bancos de proteinas/(poli)peptidos.
JP2001505194A (ja) 1996-11-05 2001-04-17 ブリストル―マイヤーズ・スクイブ・カンパニー 分枝ペプチド・リンカー
GB9819592D0 (en) 1998-09-08 1998-11-04 Smithkline Beecham Plc Novel compounds
US6326144B1 (en) 1998-09-18 2001-12-04 Massachusetts Institute Of Technology Biological applications of quantum dots
EP1115888B1 (en) 1998-09-24 2008-03-12 Indiana University Research and Technology Corporation Water-soluble luminescent quantum dots and bioconjugates thereof
US6927203B1 (en) 1999-08-17 2005-08-09 Purdue Research Foundation Treatment of metastatic disease
DE60037345T2 (de) 1999-12-10 2008-11-13 Pfizer Products Inc., Groton Pyrrolo(2,3-d)pyrimidin-Verbindungen
PE20020354A1 (es) 2000-09-01 2002-06-12 Novartis Ag Compuestos de hidroxamato como inhibidores de histona-desacetilasa (hda)
DE60217322T2 (de) 2001-04-27 2007-10-04 Zenyaku Kogyo K.K. Heterocyclische verbindung und antitumormittel, das diese als wirkstoff enthält
TWI329105B (en) 2002-02-01 2010-08-21 Rigel Pharmaceuticals Inc 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
HUE026218T2 (en) 2002-02-21 2016-05-30 Inst Virology MN / CA IX-Specific Monoclonal Antibodies and Methods for MN / CA IX Deficient Mice
PT1536827E (pt) 2002-08-14 2009-03-20 Silence Therapeutics Ag Utilização de proteína cinase n beta
WO2004052404A2 (en) 2002-12-12 2004-06-24 Tel Aviv University Future Technology Development L.P. Glycogen synthase kinase-3 inhibitors
EP1452868A2 (en) 2003-02-27 2004-09-01 Pepscan Systems B.V. Method for selecting a candidate drug compound
AU2004228668B2 (en) 2003-04-03 2011-10-27 Park Funding, Llc PI-3 kinase inhibitor prodrugs
ES2382377T3 (es) 2003-05-30 2012-06-07 Gemin X Pharmaceuticals Canada Inc. Compuestos triheterocíclicos, composiciones, y métodos para tratar cáncer
EP1692153A4 (en) 2003-07-03 2007-03-21 Univ Pennsylvania INHIBITION OF EXPRESSION OF SYK-KINASE
KR20140066259A (ko) 2004-02-06 2014-05-30 모르포시스 아게 항-ｃｄ３８ 인간 항체 및 그의 용도
CA2505655C (en) 2004-04-28 2013-07-09 Warren Chan Stable, water-soluble quantum dot, method of preparation and conjugates thereof
WO2005113556A1 (en) 2004-05-13 2005-12-01 Icos Corporation Quinazolinones as inhibitors of human phosphatidylinositol 3-kinase delta
US20090214517A1 (en) * 2004-07-27 2009-08-27 Justin Wong Compositions and methods of use for modulators of nectin 4, semaphorin 4b, igsf9, and kiaa0152 in treating disease
TWI380996B (zh) 2004-09-17 2013-01-01 Hoffmann La Roche 抗ｏｘ４０ｌ抗體
AU2006206458B2 (en) 2005-01-19 2012-10-25 Rigel Pharmaceuticals, Inc. Prodrugs of 2,4-pyrimidinediamine compounds and their uses
WO2006078161A1 (en) 2005-01-24 2006-07-27 Pepscan Systems B.V. Binding compounds, immunogenic compounds and peptidomimetics
US7989590B2 (en) 2005-03-22 2011-08-02 Rohto Pharmaceutical Co., Ltd Peptides that increase collagen or hyaluronic acid production
PT2343320T (pt) 2005-03-25 2018-01-23 Gitr Inc Anticorpos anti-gitr e as suas utilizações
PL1888550T3 (pl) 2005-05-12 2014-12-31 Abbvie Bahamas Ltd Promotory apoptozy
GB0510390D0 (en) 2005-05-20 2005-06-29 Novartis Ag Organic compounds
PT1907424E (pt) 2005-07-01 2015-10-09 Squibb & Sons Llc Anticorpos monoclonais humanos para o ligando 1 de morte programada (pd-l1)
US7402325B2 (en) 2005-07-28 2008-07-22 Phoenix Biotechnology, Inc. Supercritical carbon dioxide extract of pharmacologically active components from Nerium oleander
EP1928912A4 (en) 2005-09-07 2010-02-24 Medimmune Inc EPH ANTI-RECEPTOR ANTIBODIES CONJUGATED TO TOXINS
US7989622B2 (en) 2005-10-07 2011-08-02 Exelixis, Inc. Phosphatidylinositol 3-kinase inhibitors and methods of their use
JP5191391B2 (ja) 2005-11-01 2013-05-08 ターゲジェン インコーポレーティッド キナーゼのビ−アリールメタ−ピリミジン阻害剤
SG10202003901UA (en) 2005-12-13 2020-05-28 Incyte Holdings Corp Heteroaryl substituted pyrrolo[2,3-b]pyridines and pyrrolo[2,3-b]pyrimidines as janus kinase inhibitors
JO2660B1 (en) 2006-01-20 2012-06-17 نوفارتيس ايه جي Pi-3 inhibitors and methods of use
WO2007093836A1 (en) 2006-02-13 2007-08-23 Cellectis Meganuclease variants cleaving a dna target sequence from a xp gene and uses thereof
WO2007129161A2 (en) 2006-04-26 2007-11-15 F. Hoffmann-La Roche Ag Thieno [3, 2-d] pyrimidine derivative useful as pi3k inhibitor
KR20090053863A (ko) 2006-09-15 2009-05-27 지멘스 메디컬 솔루션즈 유에스에이, 인크. 인테그린에 대한 이미지화제로서 클릭 화학반응-유래된 시클로펩티드 유도체
DK2526933T3 (en) 2006-09-22 2015-05-18 Pharmacyclics Inc Inhibitors of Bruton's tyrosine kinase
CN101232326B (zh) 2007-01-22 2012-01-11 中兴通讯股份有限公司 用于无源光网络系统的动态带宽分配装置及其实现方法
KR101566840B1 (ko) 2007-03-12 2015-11-06 와이엠 바이오사이언시즈 오스트레일리아 피티와이 엘티디 페닐 아미노 피리미딘 화합물 및 이의 용도
WO2008118802A1 (en) 2007-03-23 2008-10-02 Regents Of The University Of Minnesota Therapeutic compounds
JP2010526091A (ja) 2007-04-30 2010-07-29 インテザイン テクノロジーズ， インコーポレイテッド 癌の処置のための生物学的な標的基の改変
EP1987839A1 (en) 2007-04-30 2008-11-05 I.N.S.E.R.M. Institut National de la Sante et de la Recherche Medicale Cytotoxic anti-LAG-3 monoclonal antibody and its use in the treatment or prevention of organ transplant rejection and autoimmune disease
PE20090717A1 (es) 2007-05-18 2009-07-18 Smithkline Beecham Corp Derivados de quinolina como inhibidores de la pi3 quinasa
US20100254996A1 (en) 2007-06-18 2010-10-07 Medimmune, Llc Synergistic treatment of cells that express epha2 and erbb2
US8591886B2 (en) 2007-07-12 2013-11-26 Gitr, Inc. Combination therapies employing GITR binding molecules
EP2044949A1 (en) 2007-10-05 2009-04-08 Immutep Use of recombinant lag-3 or the derivatives thereof for eliciting monocyte immune response
US10047066B2 (en) 2007-11-30 2018-08-14 Newlink Genetics Corporation IDO inhibitors
CN103372215B (zh) 2008-01-03 2016-03-09 艾克斯-马赛大学 抗hiv治疗期间使用的组合物和方法
WO2009097397A2 (en) 2008-01-30 2009-08-06 Dyax Corp. Metalloproteinase binding proteins
CN101497878B (zh) 2008-01-30 2012-11-07 房学迅 特异性高效亲和膜ⅰ型基质金属蛋白酶(mt1-mmp)的多肽、蛋白及其应用
EP2653545A1 (en) 2008-02-05 2013-10-23 Bicycle Therapeutics Limited Methods and compositions
CA2717060C (en) 2008-02-27 2016-11-01 Avigdor Scherz Rgd-(bacterio)chlorophyll conjugates for photodynamic therapy and imaging of necrotic tumors
HUE029767T2 (en) 2008-03-11 2017-04-28 Incyte Holdings Corp JAK inhibitor azetidine and cyclobutane derivatives
US8293714B2 (en) 2008-05-05 2012-10-23 Covx Technology Ireland, Ltd. Anti-angiogenic compounds
WO2009156652A1 (fr) 2008-05-29 2009-12-30 Saint-Gobain Centre De Recherches Et D'etudes Europeen Structure en nid d'abeille a base de titanate d'aluminium
FR2932189A1 (fr) 2008-06-10 2009-12-11 Commissariat Energie Atomique Biopuces pour la detection de l'activite enzymatique d'une enzyme protease
US8338439B2 (en) 2008-06-27 2012-12-25 Celgene Avilomics Research, Inc. 2,4-disubstituted pyrimidines useful as kinase inhibitors
US8834926B2 (en) 2008-08-08 2014-09-16 University Of Delaware Macromolecular diffusion and release from self-assembled β-hairpin peptide hydrogels
AR072999A1 (es) 2008-08-11 2010-10-06 Medarex Inc Anticuerpos humanos que se unen al gen 3 de activacion linfocitaria (lag-3) y los usos de estos
EP3255060A1 (en) 2008-12-09 2017-12-13 F. Hoffmann-La Roche AG Anti-pd-l1 antibodies and their use to enhance t-cell function
GB0913775D0 (en) 2009-08-06 2009-09-16 Medical Res Council Multispecific peptides
EP2433322A4 (en) 2009-05-19 2015-11-04 East Penn Mfg Co COMPOSITE CURRENT COLLECTOR AND RELATED METHODS
GB0914110D0 (en) 2009-08-12 2009-09-16 Medical Res Council Peptide libraries
KR101790802B1 (ko) 2009-09-03 2017-10-27 머크 샤프 앤드 돔 코포레이션 항-ｇｉｔｒ 항체
EP2493862B1 (en) 2009-10-28 2016-10-05 Newlink Genetics Corporation Imidazole derivatives as ido inhibitors
JP5999702B2 (ja) 2009-11-23 2016-09-28 パラティン テクノロジーズ, インコーポレイテッドPalatin Technologies, Inc. メラノコルチン−１受容体特異的環状ペプチド
ES2722300T3 (es) 2009-12-10 2019-08-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen preferentemente al dominio extracelular 4 de CSF1R y su uso
US9073974B2 (en) 2009-12-21 2015-07-07 The Regents Of The University Of California RGD-containing cyclic peptides
EP2343081A1 (en) 2009-12-31 2011-07-13 Rijksuniversiteit Groningen Interferon analogs
JP2013518807A (ja) * 2010-02-04 2013-05-23 メディカル リサーチ カウンシル 多重特異性ペプチド
EP2542256B1 (en) 2010-03-04 2019-05-22 MacroGenics, Inc. Antibodies reactive with b7-h3, immunologically active fragments thereof and uses thereof
JP5989547B2 (ja) 2010-03-05 2016-09-07 エフ・ホフマン−ラ・ロシュ・アクチェンゲゼルシャフト ヒトｃｓｆ−１ｒに対する抗体及びその使用
US9169323B2 (en) 2010-03-05 2015-10-27 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies against human CSF-1R
HRP20190047T1 (hr) 2010-05-04 2019-02-22 Five Prime Therapeutics, Inc. Protutijela koja se vežu na csf1r
MX337040B (es) 2010-09-09 2016-02-09 Pfizer Moleculas de union a 4-1bb.
MX347954B (es) * 2010-09-29 2017-05-19 Agensys Inc Conjugados de anticuerpo farmaco (adc) que enlazan a proteinas 191p4d12.
WO2012057624A1 (en) 2010-10-25 2012-05-03 Pepscan Systems B.V. Novel bicyclic peptide mimetics
PH12013501201A1 (en) 2010-12-09 2013-07-29 Univ Pennsylvania Use of chimeric antigen receptor-modified t cells to treat cancer
US20130072598A1 (en) 2011-03-18 2013-03-21 Board Of Regents Of The University Of Nebraska Thermoplastics from Distillers Dried Grains and Feathers
NO2694640T3 (sr) 2011-04-15 2018-03-17
JP6072771B2 (ja) 2011-04-20 2017-02-01 メディミューン，エルエルシー Ｂ７−ｈ１およびｐｄ−１に結合する抗体およびその他の分子
US9828643B2 (en) 2011-05-18 2017-11-28 Dana-Farber Cancer Institute, Inc. Chromosome copy number gain as a biomarker of urothelial carcinoma lethality
EP2714730A1 (en) * 2011-06-01 2014-04-09 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Novel antigen peptide and uses thereof
GB201117428D0 (en) 2011-10-07 2011-11-23 Bicycle Therapeutics Ltd Structured polypeptides with sarcosine linkers
PL2764140T3 (pl) * 2011-10-07 2018-04-30 Bicyclerd Limited Modulacja specyficzności polipeptydów ustrukturyzowanych
KR101764096B1 (ko) 2011-11-28 2017-08-02 메르크 파텐트 게엠베하 항-ｐｄ-ｌ1 항체 및 그의 용도
RU2658603C2 (ru) 2011-12-15 2018-06-21 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела против человеческого csf-1r и их применения
KR20140127855A (ko) 2012-02-06 2014-11-04 제넨테크, 인크. Csf1r 억제제를 사용하는 조성물 및 방법
AR090263A1 (es) 2012-03-08 2014-10-29 Hoffmann La Roche Terapia combinada de anticuerpos contra el csf-1r humano y las utilizaciones de la misma
RU2670743C9 (ru) 2012-05-11 2018-12-19 Файв Прайм Терапьютикс, Инк. Способы лечения состояний антителами, которые связывают рецептор колониестимулирующего фактора 1 (csf1r)
UY34887A (es) 2012-07-02 2013-12-31 Bristol Myers Squibb Company Una Corporacion Del Estado De Delaware Optimización de anticuerpos que se fijan al gen de activación de linfocitos 3 (lag-3) y sus usos
CN107759690A (zh) 2012-08-31 2018-03-06 戊瑞治疗有限公司 用结合群落刺激因子1受体(csf1r)的抗体治疗病状的方法
EP2898085B1 (en) 2012-09-24 2019-01-23 MedImmune Limited Cell lines
US9587001B2 (en) 2012-10-19 2017-03-07 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Conjugated knottin mini-proteins containing non-natural amino acids
EP3666795A1 (en) 2013-03-12 2020-06-17 Molecular Templates, Inc. Cytotoxic proteins comprising cell-targeting binding regions and shiga toxin a subunit regions for selective killing of specific cell types
US20140274759A1 (en) 2013-03-15 2014-09-18 Bicycle Therapeutics Limited Modification of polypeptides
JP6574754B2 (ja) 2013-03-19 2019-09-11 ベイジン シェノゲン ファーマ グループ リミテッド エストロゲン受容体関連疾患を処置するための抗体及び方法
GB201306623D0 (en) 2013-04-11 2013-05-29 Bicycle Therapeutics Ltd Modulation of structured polypeptide specificity
US9868767B2 (en) 2013-05-23 2018-01-16 Ohio State Innovation Foundation Chemical synthesis and screening of bicyclic peptide libraries
US9937230B2 (en) 2013-07-22 2018-04-10 Kineta One, Llc Ophthalmic uses of toxin-based therapeutic peptides and pharmaceutical compositions thereof
NZ718283A (en) 2013-09-25 2022-05-27 Cytomx Therapeutics Inc Matrix metalloproteinase substrates and other cleavable moieties and methods of use thereof
ES2715379T3 (es) 2013-10-28 2019-06-04 Bicyclerd Ltd Novedosos polipéptidos
AU2015210833B2 (en) 2014-02-03 2019-01-03 Vitae Pharmaceuticals, Llc Dihydropyrrolopyridine inhibitors of ROR-gamma
DK3140653T3 (da) 2014-05-08 2022-06-20 Novodiax Inc Direkte immunhistokemianalyse
JP6807831B2 (ja) 2014-05-21 2021-01-06 エントラーダ セラピューティクス，インコーポレイテッド 細胞膜透過性ペプチド、並びにこの作製方法及び使用方法
GB201416960D0 (en) 2014-09-25 2014-11-12 Antikor Biopharma Ltd Biological materials and uses thereof
CN115093463A (zh) 2014-09-30 2022-09-23 波利弗尔股份公司 β-发夹肽模拟物
WO2016065258A1 (en) 2014-10-24 2016-04-28 Research Corporation Technologies, Inc. Small antibody-like polypeptides that bind to epha2 receptor
CN107148425B (zh) 2014-10-29 2021-08-03 拜斯科阿迪有限公司 对mt1-mmp特异性的双环肽配体
AU2015339012B2 (en) 2014-10-31 2020-11-05 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-CS1 antibodies and antibody drug conjugates
US10335495B2 (en) 2014-12-04 2019-07-02 Celgene Corporation Biomolecule conjugates
IL237525A (en) 2015-03-03 2017-05-29 Shalom Eli Method for labeling a prostate-specific membrane antigen with a radioactive isotope
WO2016171272A1 (ja) 2015-04-22 2016-10-27 三井化学株式会社 関節用サポーター部を備える衣類、及び膝用サポーター
WO2016171242A1 (ja) 2015-04-24 2016-10-27 第一三共株式会社 Ｅｐｈａ２の検出
CN107810190A (zh) * 2015-04-28 2018-03-16 洛桑联邦政府综合工科学校（Epfl) 酶活化因子XII (FXIIa)的新型抑制剂
US10844111B2 (en) 2015-05-06 2020-11-24 Janssen Biotech, Inc. Prostate specific membrane antigen binding fibronectin type III domains
EP3314027A4 (en) 2015-06-29 2019-07-03 Caris Science, Inc. THERAPEUTIC OLIGONUCLEOTIDES
EP3115066A1 (en) 2015-07-07 2017-01-11 Technische Universität München Novel psma-specific binding proteins
US10941176B2 (en) 2015-07-28 2021-03-09 Caris Science, Inc. Therapeutic oligonucleotides
EP3347048B1 (en) * 2015-09-09 2020-04-01 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Antibodies having specificity to nectin-4 and uses thereof
CN115418401A (zh) 2015-10-08 2022-12-02 会聚基因学有限公司 用于膀胱癌的尿监测的诊断测定
US9963495B2 (en) 2015-10-27 2018-05-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Polypeptides targeting vascular endothelial growth factor receptor and prostate specific membrane antigen
EP3181146A1 (en) 2015-12-16 2017-06-21 Ruprecht-Karls-Universität Heidelberg Cyclic ntcp-targeting peptides and their uses as entry inhibitors
GB201600911D0 (en) 2016-01-18 2016-03-02 Bicycle Therapeutics Ltd Stabilized peptide derivatives
US10765625B2 (en) 2016-03-15 2020-09-08 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Knottin-drug conjugates and methods of using the same
JP2019512477A (ja) 2016-03-16 2019-05-16 メリマック ファーマシューティカルズ インコーポレーティッド エフリン受容体ａ２（ｅｐｈａ２）のナノリポソーム標的化及び関連する診断
JP2019513371A (ja) 2016-04-01 2019-05-30 アビディティー バイオサイエンシーズ エルエルシー 核酸ポリペプチド組成物とその使用
BR112018071465A2 (pt) 2016-04-20 2019-02-05 Hangzhou Dac Biotech Co Ltd derivados de toxinas de amanita e sua conjugação a uma molécula de ligação celular
EP3445788B1 (en) * 2016-04-22 2022-01-19 Alligator Bioscience AB Novel bispecific polypeptides against cd137
GB201607827D0 (en) 2016-05-04 2016-06-15 Bicycle Therapeutics Ltd Bicyclic peptide-toxin conjugates specific for MT1-MMP
BR112018074453A2 (pt) 2016-05-27 2019-03-19 Abbvie Biotherapeutics Inc. proteínas de ligação biespecíficas ligando uma protéina imunomoduladora e um antígeno tumoral
SG11201901466PA (en) 2016-09-07 2019-03-28 Agency Science Tech & Res A method of identifying risk of cancer and therapeutic options
US20200032265A1 (en) 2016-09-27 2020-01-30 Caris Science, Inc. Oligonucleotide Probes and Uses Thereof
EP3544621A1 (en) 2016-11-27 2019-10-02 BicycleRD Limited Methods for treating cancer
US20190389907A1 (en) 2016-12-23 2019-12-26 Bicycletx Limited Peptide ligands for binding to mt1-mmp
WO2018115203A1 (en) 2016-12-23 2018-06-28 Bicyclerd Limited Peptide derivatives having novel linkage structures
US10624968B2 (en) 2017-01-06 2020-04-21 Bicyclerd Limited Compounds for treating cancer
WO2018132916A1 (en) 2017-01-20 2018-07-26 Genomedx Biosciences, Inc. Molecular subtyping, prognosis, and treatment of bladder cancer
WO2018144854A1 (en) 2017-02-02 2018-08-09 Caris Science, Inc. Targeted oligonucleotides
AU2018224094B2 (en) 2017-02-24 2025-04-17 Macrogenics, Inc. Bispecific binding molecules that are capable of binding CD137 and tumor antigens, and uses thereof
US20180296685A1 (en) * 2017-04-13 2018-10-18 Tarveda Therapeutics, Inc. Targeted constructs and formulations thereof
GB201706477D0 (en) 2017-04-24 2017-06-07 Bicycle Therapeutics Ltd Modification of polypeptides
US10857196B2 (en) 2017-04-27 2020-12-08 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands and uses thereof
WO2018222987A1 (en) 2017-06-01 2018-12-06 Tarveda Therapeutics, Inc. Targeted constructs
WO2018226578A1 (en) * 2017-06-05 2018-12-13 Agensys, Inc. Nectin-4-binding proteins and methods of use thereof
US11506668B2 (en) 2017-06-23 2022-11-22 Engebraaten Olav Diagnosis and treatment of cancer
EP3645549A1 (en) 2017-06-26 2020-05-06 BicycleRD Limited Bicyclic peptide ligands with detectable moieties and uses thereof
JP7670481B2 (ja) 2017-08-04 2025-04-30 バイスクルテクス・リミテッド Ｃｄ１３７に対して特異的な二環式ペプチドリガンド
WO2019034866A1 (en) 2017-08-14 2019-02-21 Bicyclerd Limited BICYCLIC PEPTIDE LIGANDS CONJUGATES AND USES THEREOF
WO2019034868A1 (en) 2017-08-14 2019-02-21 Bicyclerd Limited CONJUGATES PEPTIDE BICYCLIC-LIGAND PPR-A AND USES THEREOF
WO2019084060A1 (en) 2017-10-24 2019-05-02 Silverback Therapeutics, Inc. CONJUGATES AND METHODS OF USE FOR THE SELECTIVE DELIVERY OF IMMUNOMODULATORY AGENTS
MX2020004691A (es) 2017-11-07 2020-08-20 Regeneron Pharma Enlazadores hidrofilicos para conjugados anticuerpo-farmaco.
GB201721265D0 (en) 2017-12-19 2018-01-31 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for EphA2
TWI825046B (zh) 2017-12-19 2023-12-11 英商拜西可泰克斯有限公司 Epha2特用之雙環胜肽配位基
US11572370B2 (en) 2018-01-08 2023-02-07 Biohaven Therapeutics Ltd. CD16A binding agents and uses thereof
WO2019157345A1 (en) 2018-02-09 2019-08-15 The Broad Institute, Inc. Compositions and methods for characterizing bladder cancer
CN111902429A (zh) 2018-02-23 2020-11-06 拜斯科技术开发有限公司 多聚体双环肽配体
EP3774851A1 (en) 2018-04-04 2021-02-17 BicycleTX Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
CA3099308A1 (en) 2018-05-21 2019-11-28 Compass Therapeutics Llc Compositions and methods for enhancing the killing of target cells by nk cells
GB201810327D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicycletx Ltd Peptide ligands for binding to IL-17
IL279489B2 (en) * 2018-06-22 2025-10-01 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4, a drug conjugate containing the peptide ligands and a pharmaceutical composition containing the drug conjugate
GB201810320D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicycletx Ltd Peptide ligands for binding to CD38
GB201810325D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicycletx Ltd Peptide ligands for binding to PSMA
GB201810329D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicycletx Ltd Peptide ligands for binding to integrin avB3
GB201810316D0 (en) 2018-06-22 2018-08-08 Bicyclerd Ltd Peptide ligands for binding to EphA2
CA3115922A1 (en) 2018-10-09 2020-04-16 Genecentric Therapeutics, Inc. Detecting cancer cell of origin
US20210355545A1 (en) 2018-10-15 2021-11-18 The Johns Hopkins University Methods and materials for assessing and treating cancer
WO2020084305A1 (en) 2018-10-23 2020-04-30 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands and uses thereof
SG11202104356VA (en) 2018-10-30 2021-05-28 Bicyclerd Ltd Bt1718 for use in treating cancer
GB201820295D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for MT1-MMP
WO2020120984A1 (en) 2018-12-13 2020-06-18 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for mt1-mmp
GB201820288D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicycle Tx Ltd Bicycle peptide ligaands specific for MT1-MMP
GB201820325D0 (en) 2018-12-13 2019-01-30 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for psma
EP3897851A2 (en) 2018-12-17 2021-10-27 Revitope Limited Twin immune cell engager
WO2020128527A1 (en) 2018-12-21 2020-06-25 Bicyclerd Limited Bicyclic peptide ligands specific for pd-l1
US12492224B2 (en) 2018-12-21 2025-12-09 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for PD-L1
US10882987B2 (en) 2019-01-09 2021-01-05 Nova Chemicals (International) S.A. Ethylene interpolymer products having intermediate branching
GB201900525D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for caix
GB201900526D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for caix
GB201900529D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for CD38
GB201900530D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for CD38
GB201900527D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligands specific for integrin avb3
GB201900528D0 (en) 2019-01-15 2019-03-06 Bicyclerd Ltd Bicyclic peptide ligands specific for integrin AVB3
WO2020165600A1 (en) 2019-02-14 2020-08-20 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligand sting conjugates and uses thereof
WO2020178574A1 (en) 2019-03-04 2020-09-10 Bicyclerd Limited Synthesis of bicycle toxin conjugates, and intermediates thereof
CN113631910A (zh) 2019-03-29 2021-11-09 豪夫迈·罗氏有限公司 细胞表面蛋白质相互作用的调节剂及其相关方法和组合物
SG11202110828UA (en) 2019-04-02 2021-10-28 Bicycletx Ltd Bicycle toxin conjugates and uses thereof
WO2020225577A1 (en) 2019-05-09 2020-11-12 Bicycletx Limited Bicyclic peptide ligands specific for ox40
TWI869398B (zh) 2019-05-10 2025-01-11 英商拜西克爾德有限公司 治療癌症之方法
KR20220016155A (ko) 2019-05-30 2022-02-08 브리스톨-마이어스 스큅 컴퍼니 면역-종양학 (i-o) 요법에 적합한 대상체를 확인하는 방법
WO2020243570A1 (en) 2019-05-30 2020-12-03 Bristol-Myers Squibb Company Cell localization signature and combination therapy
EP3754030A1 (en) 2019-06-21 2020-12-23 Fundacio Institut mar d'Investigacions Médiques (IMIM) Genomic predictor of outcome in high grade t1 non-muscle invasive bladder cancer
TWI860386B (zh) 2019-07-30 2024-11-01 英商拜西可泰克斯有限公司 異質雙環肽複合物
US20220275053A1 (en) 2019-08-13 2022-09-01 Bicycletx Limited Modified multimeric bicyclic peptide ligands
GB201912320D0 (en) 2019-08-28 2019-10-09 Bicycletx Ltd PBP Binding Bicyclic Peptide Ligands
SMT202500247T1 (it) 2019-10-03 2025-09-12 Bicycletx Ltd Complessi peptidici eterotandem biciclici
GB201914872D0 (en) 2019-10-15 2019-11-27 Bicycletx Ltd Bicyclic peptide ligand drug conjugates
WO2021074647A1 (en) 2019-10-16 2021-04-22 Bicyclerd Limited Methods for treating cancer
WO2021092221A1 (en) 2019-11-06 2021-05-14 Bristol-Myers Squibb Company Methods of identifying a subject with a tumor suitable for a checkpoint inhibitor therapy
MX2022006001A (es) 2019-11-27 2022-10-27 Bicycletx Ltd Ligandos de peptidos biciclicos especificos para el receptor 2 tipo a de efrina (epha2) y usos de los mismos.
IT202000001231A1 (it) 2020-01-22 2021-07-22 Celery S R L Nuovi ceppi di batteri lattici, composizione alimentare che li comprende, preparazione di tale composizione
GB202002706D0 (en) 2020-02-26 2020-04-08 Bicycletx Ltd Pbp3 binding bicyclic peptide ligands
GB202002705D0 (en) 2020-02-26 2020-04-08 Bicycletx Ltd Anti-infective bicyclic peptide conjugates
EP3901288A1 (en) 2020-04-20 2021-10-27 Fraunhofer-Gesellschaft zur Förderung der angewandten Forschung e.V. Multi-gene expression assay for prostate carcinoma
US20230181749A1 (en) 2020-05-20 2023-06-15 Bicycle TX Limited Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4 and uses thereof
MX2022015727A (es) 2020-06-10 2023-03-23 Univ Texas Metodo para determinar riesgo de parto prematuro.
CN115698720A (zh) 2020-06-12 2023-02-03 拜斯科技术开发有限公司 特征在于促红细胞生成素产生肝细胞受体a2(epha2)的过表达的疾病的治疗
AU2021322934A1 (en) 2020-08-03 2023-03-30 Bicycletx Limited Peptide-based linkers
CA3186504A1 (en) 2020-08-17 2022-02-24 Stephen J. Blakemore Bicycle conjugates specific for nectin-4 and uses thereof
CA3195446A1 (en) 2020-10-16 2022-04-21 Amelie Eriksson Karlstrom Pna probes for pretargeted imaging and therapy
KR20240015054A (ko) 2020-12-21 2024-02-02 더 존스 홉킨스 유니버시티 무세포 dna 단편화를 이용한 폐암 검출
DK4274838T3 (da) 2021-01-08 2024-10-21 Bicycletx Ltd Bicykliske peptidligander, der er specifikke for NK-celler
US20240083945A1 (en) 2021-01-08 2024-03-14 Bicycletx Limited Anti-infective bicyclic peptide ligands
AU2022206577A1 (en) 2021-01-08 2023-08-24 Bicycletx Limited Heterotandem bicyclic peptide complexes
US20250186539A2 (en) 2021-01-11 2025-06-12 Bicycletx Limited Methods for treating cancer
CN118103075A (zh) 2021-09-03 2024-05-28 拜斯科技术开发有限公司 双环肽毒素偶联物及其中间体的合成
KR20240100420A (ko) 2021-11-16 2024-07-01 바이사이클티엑스 리미티드 암을 치료하기 위한 방법

Also Published As

Publication number Publication date
SMT202400535T1 (it) 2025-01-14
PH12020552179A1 (en) 2021-06-28
JP2024062999A (ja) 2024-05-10
EP4461739A3 (en) 2025-04-23
KR102795633B1 (ko) 2025-04-15
CA3101164A1 (en) 2019-12-26
CN112566651B (zh) 2024-12-13
MX2020013784A (es) 2021-03-02
IL279489B2 (en) 2025-10-01
BR112020025985A2 (pt) 2021-03-23
EP4588934A3 (en) 2025-09-24
KR20210029783A (ko) 2021-03-16
US20230287047A1 (en) 2023-09-14
US20250002536A1 (en) 2025-01-02
IL279488B1 (en) 2025-10-01
EP4461739A2 (en) 2024-11-13
PT3810167T (pt) 2025-01-07
IL279488A (en) 2021-01-31
AU2026200222A1 (en) 2026-02-05
KR20210025603A (ko) 2021-03-09
KR20250057062A (ko) 2025-04-28
US11180531B2 (en) 2021-11-23
US12459974B2 (en) 2025-11-04
JP2021527701A (ja) 2021-10-14
JP2021527702A (ja) 2021-10-14
NZ772052A (en) 2025-03-28
AU2019289200A1 (en) 2021-02-11
MX2025001638A (es) 2025-03-07
CN119529029A (zh) 2025-02-28
EP4464715A3 (en) 2025-04-23
JP2024122976A (ja) 2024-09-10
DK3810167T3 (da) 2025-01-20
CA3101427A1 (en) 2019-12-26
US11912792B2 (en) 2024-02-27
US20250263438A9 (en) 2025-08-21
SG11202012413TA (en) 2021-01-28
AU2024264558B2 (en) 2025-10-23
TW202504912A (zh) 2025-02-01
HRP20250081T1 (hr) 2025-03-28
US20240400616A1 (en) 2024-12-05
EP4588934A2 (en) 2025-07-23
IL322722A (en) 2025-10-01
IL279489B1 (en) 2025-06-01
CN119158033A (zh) 2024-12-20
AU2024264558A1 (en) 2024-12-19
US11453702B2 (en) 2022-09-27
EP3810167B1 (en) 2024-12-11
JP7641121B2 (ja) 2025-03-06
LT3810167T (lt) 2025-01-27
EP3810167A1 (en) 2021-04-28
CN119405829A (zh) 2025-02-11
KR102795633B9 (ko) 2025-10-29
TW202016129A (zh) 2020-05-01
MX2021000195A (es) 2021-03-25
BR112020025715A2 (pt) 2021-04-06
CN112601539A (zh) 2021-04-02
CN119158034A (zh) 2024-12-20
MX421475B (es) 2025-03-14
US20210269480A1 (en) 2021-09-02
US20220089643A1 (en) 2022-03-24
ES3001186T3 (es) 2025-03-04
IL279489A (en) 2021-01-31
EP3810169A1 (en) 2021-04-28
FI3810167T3 (fi) 2025-02-03
AU2019289200B2 (en) 2024-11-21
WO2019243833A1 (en) 2019-12-26
HUE069969T2 (hu) 2025-04-28
AU2019289199A1 (en) 2021-02-11
US20250051392A1 (en) 2025-02-13
US20250066421A1 (en) 2025-02-27
TWI851580B (zh) 2024-08-11
AU2019289199B2 (en) 2024-12-19
EP4464715A2 (en) 2024-11-20
IL279488B2 (en) 2026-02-01
SI3810167T1 (sl) 2025-04-30
US20190389906A1 (en) 2019-12-26
SG11202012415PA (en) 2021-01-28
ZA202100442B (en) 2022-08-31
WO2019243832A1 (en) 2019-12-26
PL3810167T3 (pl) 2025-03-24
CN112566651A (zh) 2021-03-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US11912792B2 (en) Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
HK40117195A (en) Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
HK40117688A (en) Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
HK40121640A (en) Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
HK40050151A (en) Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
HK40050151B (en) Bicyclic peptide ligands specific for nectin-4
BR112020025715B1 (pt) Ligante peptídico bicíclico específico para nectina-4, conjugado de fármaco, uso dos mesmos, e composição farmacêutica
EA045862B1 (ru) Бициклические пептидные лиганды, специфичные к нектину-4