BG63064B2

BG63064B2 - Дерматомикозна ваксина

Info

Publication number: BG63064B2
Application number: BG098143A
Authority: BG
Inventors: Igоr Роlyакоv; Ludмillа Ivаnоvа
Original assignee: Boehringer Ingelheim Vetmedica Gmbh
Priority date: 1991-10-21
Filing date: 1993-10-07
Publication date: 2001-02-28
Also published as: HUT68503A; US20080075743A1; SK280570B6; SG49872A1; NL300112I1; JPH06506476A; PL299982A1; EP0564620A1; HU9301798D0; HU219263B; US20020155134A1; RU2020959C1; CZ287995B6; MX9206000A; PT100989A; US20040202672A1; CZ144893A3; US7666440B2; HK1010682A1; DE19975045I2

Abstract

Изобретението се отнася до универсални мъртви ваксини за специфично лечение и предпазване от дерматомикози при животни и до съответните имуногенни гъбични щамове. Те се получават по опростен начин, имат стабилни имуногенни свойства, цялостен асортимент от екзо- и ендоантигени на дерматофитните култури и не предизвикват странични реакции у животните. Като ваксиниращи щамове се използват следните гъбични щамове: Trychophyton verrucosum, T. mentagrophytes, T. equinum, Microsporum canis, M. canis var. obesum, M. canis var. distortum, M. gypseum. Ваксини могат да се получат чрез комбиниране на антигенен материал на посочените щамове и подходящ носител.@

Description

Изобретението се отнася до разработването на ваксини и използването им за получаване на средства за предпазване и лечение на дерматомикози.

Предшестващо състояние на техниката

Дерматомикозите при животните са антропозоонотични заболявания на кожата и свързаните с тях тъкани. Клиничните симптоми са загуба на косми в засегнатите участъци, хиперемия, отличаващи се със люспообразни и подобни на азбест струпеи. Възпаленията са често придружени от супурация. Освен това дерматомикозите често се отличават чрез локални инфекции на кожата.

Дерматомикозите при животните имат значително социаликономично значение. Заболелите животни се нуждаят от продължително лечение и могат да пренесат инфекциите както на животни,така и на хора.

До сега дерматомикозите се лекуват чрез използване на различни видове лекарства, които се нанасят локално върху засегнатите участъци на кожата. Това са средства, които включват мазилата YaM, Yuglon (Aisenberg, А.А., Noskow, A. I., Kolovatsky, P.P., „Primenenie

Yuglona v Veterenarii“ in Scientific and Technical Information Bulletin of the State Scientific Control Committee under the Moldavian Council of Ministers (1958), p. 99) и много други мазила, средства за втриване, разтвори и други препарати, които притежават фунгицидно и фунгистатично действащо средство.

Недостатъците на такива лечения са:

по-малка ефективност, те изискват предварително прилагането на карантинни мерки и дезинфекция на местата_?на които живеят животните (обори, развъдници за животни, ферми, зоологически градини, циркове и т.н.);

те са скъпоструващи по отношение на лекарствените средства и лечението на ветеринарния лекар;

те създават проблеми при обездвижването на животните (диви животни в кафези).

По-късно бяха разработени ваксини за лечение на трихофития при говеда (СССР патент No 268593, 1970), при животни с козина и зайци (СССР патент No 835446, 1980), при камили (СССР патент No 1190574, 1985) и при други животни.

По-рано беше разработена и ваксина за предпазване и лечение на трихофития при коне S-P-I (СССР патент No 548947, 1976).

S-P-I ваксината съдържа ваксиниращия щам Trichophyton equinum Nr 2251/71, депозиран от „USSR All-Union State Scientific Control Institute of Veterinary Preparations, култивиран в агар/бирена мая за 20 до 25 дни при температура от 26 до 28° С. Гъбичната маса се отделя след това от повърхността, смесва се със стерилна дестилирана вода, хомогенизира се и се нагласява на концентрация на клетките от 600 до 900 милиона в милилитър. Хомогенатът се прехвърля в отделно шише, стабилизира се със смес^съдържаща от 2 до 8 % желатин (желатоза) и 10 до 40 % захароза в съотношение 1:1 (± 25 %) и след това се лиофилизира.

За профилактични и лечебни цели ваксината се инжектира в мускулната тъкан на врата на млади и на израснали коне в две дози от 1 до 2 см³ в зависимост от възрастта на коня в интервел от 10 до 14 дни. При лечение се използват двойни дози.

Ваксини, които се получават по този метод,имат недостатъка, че не предават имунитет срещу микроспори и трихофитии, които се предизвикват от други причинители. Трябва също да се има предвид, че области, в които се използват живи ваксини, могат да се превърнат в специфични огнища на заболяване, в които в определен момент могат да се образуват култури на щамовете, с които се ваксинира. Ваксиниращите щамове притежават остатъчна вирулентност. Ако видовете домашни животни често са в контакт с хора, възникването на такива специфични огнища не е допустимо.

В ЕР 393 371 са цитирани общо 22 дерматофитни видове от „Medical Mycology Handbook“, Campbell and Stewart, 1989, като причинители на дерматомикози. Епизоотични култури на тези дерматофитни видове трябва да се култивират в течна среда, да се дезактивират с формалин, след това да се хомогенизират и да им се прибавя добавка, след което да се използват като ваксина

Като пример на моновалентна ваксина е дадена култура на М. canis. Като пример на поливалентна ваксина са описани две, също така съдържащи М. canis тривалентни ваксини, състоящи се от дезактивирани с формалин, хомогенизирани епизоотични дерматофитни М. canis, М. gypseum и един не съвсем дефиниран вид от рода Altemaria.

Други поливалентни ваксини на базата на даващи предимство комбинации от епизоотични щамове не са описани в ЕР 393 371

Техническа същност на изобретението

Изобретението се отнася до универсални мъртви ваксини за специфично лечение и предпазване от дерматомикози при животни и до съответните имуногенни гъбични щамове.

Изобретението се осъществява чрез използването на следните гъбични щамове като ваксиниращи щамове. Trychophyton verrucosum, по-специално Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410, T. mentagrophytes, по-специално T. mentagrophytes No VKPGF-930/1032, T. equinum, по-специално T. equinum No VKPGF-929/381, Microsporum canis, по-специално M. canis No VKPGF-928/1393, M. canis var. obesum, по-специално M. canis var. obesum No VKPGF-727/1311, M. canis var. distortum, по-специално M. canis var. distortum No VKPGF 728/120, M. gypseum, по-специално M. gypseum No VKPGF-729/59. Ваксини могат да се получат чрез комбиниране на антигенен материал на гореспоменатите щамове и подходящ носител.

При това предпочитана комбинация е Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410, Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-930/1032, Trychophyton equinum No VKPGF-551/68, Microsporum canis No VKPGF928/1393, Microsporum canis var. obesum No VKPGF-727/1311, Microsporum canis var. distortum No VKPGF 728/120 и Microsporum gypseum No VKPGF-729/59, особено за куче, котка и кон.

Предпочитана комбинация на ваксинни щамове е също Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410, Trychophyton mentagrophytes Nr VKPGF-930/1032 и Trychophyton sarkisovii No VKPGF551/68, по-специално за говеда.

Антигенният материал може да обхваща един единствен антиген от най-малко един, по-специално от гореспоменатите или от всички гореспоменати дерматофити или да обхваща множество антигени, доколкото се стимулира достатъчна имунна реакция, която създава резистентност срещу дерматофитна инфекция. Антигенен материал за такова приложение може да се получи по познат от нивото на техниката метод, например хомогенизиране на споменатите дерматофити или части от дерматофити, фракциониране на дерматофитните препарати, получаване на антигенен дерматофитен материал чрез рекомбинантни ДНК технологии и т.н. С предпочитание се използва хомогенизиран културален материал^съдържащ 40 до 120 милиона, с предпочитание 90 милиона микроконидии.

Подходящи физиологично приемливи носители за прилагане на ваксиниращите материали са известни от нивото на техниката и те могат да включват буфери, желета, микрочастички, имплантируеми твърди частички, разтвори и други добавки.

За умъртвяване на дерматофитите може да се използва тиомерзал (C₉H₉O₂SNaHg), формалдехид или 2-пропиолактон.

За получаването на ваксиниращия материал може да се подходи по следния начин:

Култури от щамовете се хомогенизират във воден разтвор с 0.2 до 2.0 % ферментирал, хидролизиран мускулен протеин (FGM-s), 5 до 12 % глюкоза и 0.1 до 1.2 % екстракт от мая. Концентрацията на микроконидиите се нагласява на 40 до 120 милиона за милилитър и сместа се дезактивира след 1 до 2 дни с примерно тиомерзал (C₉H₉O₂SNaHg) в съотношение 1:10000 до 1:25000 или с друго известно от нивото на техниката вещество. Получената суспензия се опакова и е готова за прилагане върху животни.

Получаването на ваксините, съответните дозировки и форми на прилагане за предпазване и лечение са дадени в примерите 1 до 3.

Съгласно изобретението се получава дезактивирана ваксина, коята намалява вероятността за реинфектиране и която предава висока степен на имуногенност. За разлика от известните ваксини, ваксината от изобретението предава практически имунитет срещу всички причинители на дерматомикози при животни. Ваксината от изобретението на кратко дава следните предимства:

създава при много видове, нападани от заболяването животни, имунитет след мускулно инжектиране;

създава имунитет срещу практически всички причинители на дерматомикози при животни;

притежава стабилни имуногенни свойства;

може да се получи по прост начин;

притежава цялостен асортимент от екзо- и ендоантигени на дерматофитните култури и не показва странични реакции при животни.

Ваксината бе изпитана успешно при над 500 различни видове животни, предимно в нападнати райони.

Щамовете, които са използвани за получаването на ваксината^са депозирани при All-Union Collection of Pathogenic Fungi within the USSR, Ministry of Health Centre for Deep Mycoses в Санкт Петербург, както и в „DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland.

* VKPG: Vsesoyuznaya kollektiya patogennykh gribov (All-Union Collection of Pathogenic Fungi) F: Fungi

Тяхната характеристика е, както следва:

Trychophyton venucosum No VKPGF-931/410

Щамът е депозиран в DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland на 01. 10. 1992 под означението DSM 7277.

Щамът се получава с помощта на насочена селекция, базираща се на спорова продукция и атенюиране на епизоотичния щам No 410, който бе намерен при елен през 1978 година. Щамът бе идентифициран с помощта на Rebell - Taplin - ключа (Rebell, G., Taplin, D., Dermatophytes, Their recgnition and identification, 1978) и съгласно Kashkin, P. N. et al., (Opredelitel patogennykh, toksigenykh vrednykh dlya cheloveka gribov, 1979).

Биологичните свойства на щама са описани на таблица 1.

Щамът - No VKPGF-931/410 се отличава от епизоотичния щам със своя по-бърз растеж в хранителна среда, огромно производство на микроконидии, по-малка вирулентност и отсъствие на реакция със свойте антигени.

Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-93Q/1032

Щамът е депозиран в DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland на 01. 10. 1992 под означението DSM 7279.

Щамът се получава с помощта на насочена селекция, базираща се на спорова продукция и атенюиране на епизоотичния щам No 1032, който бе намерен при кон през 1985 година. Щамът бе идентифициращ както е описано по-горе (Rebell - Taplin по-горе цитирани и съгласно Kashkin също цитиран по-горе).

Биологичните свойства на щама са описани на таблица 2.

Щамът - No VKPGF-930/1032 се отличава от епизоотичния щам със своя по-бърз растеж в хранителна среда, огромно производство на микроконидии, има по-малка вирулентност и отсъствие на реакция към свойте антигени.

Trychophyton equinum No VKPGF-929/381

Щамът е депозиран в DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen“, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland на 01. 10. 1992 под означението DSM 7276.

Щамът се получава с помощта на насочена селекция, базираща се на спорова продукция и атенюиране на епизоотичния щам No 381, който бе намерен при кон през 1986 година. Щамът бе идентифициран, както е описано по-горе (Rebell - Taplin по-горе цитирани и съгласно Kashkin, също цитиран по-горе).

Биологичните свойства на щама са описани на таблица 3.

Щамът - No VKPGF-929/381 се отличава от епизоотичния щам със своя по-бърз растеж в хранителна среда, има по-малка вирулентност и отсъствие на реакция със своите антигени.

Microspomm canis No VKPGF-928/1393

Щамът е депозиран в DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen“, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland на 01. 10. 1992 под означението DSM 7281.

Щамът се получава с помощта на насочена селекция, базираща се на спорова продукция и атенюиране на епизоотичния щам No 1393, който бе намерен при котка през 1988 година. Щамът бе идентифициран както е описано по-горе (Rebell - Taplin по-горе цитирани и съгласно Kashkin също цитиран по-горе).

Биологичните свойства на щама са описани на таблица 4.

Щамът - No VKPGF-928/1393 се отличава от епизоотичния щам със своя по-бърз растеж в хранителна среда, огромния си капацитет да дава спори, има по-малка вирулентност и отсъствие на реакция към своите антигени.

Microsporum canis var. obesum No VKPGF-727/1311

Щамът е депозиран в DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland на 01. 10. 1992 под означението DSM 7280.

Щамът се получава с помощта на насочена селекция, базираща се на спорова продукция и атенюиране на епизоотичния щам No 1311, който бе намерен при тигър през 1986 година. Щамът бе идентифициран, както е описано по-горе (Rebell - Taplin по-горе цитирани и съгласно Kashkin също цитиран по-горе).

Биологичните свойства на щама са описани на таблица 5.

Щамът - No VKPGF-727/1311 се отличава от епизоотичния щам със своя по-бърз растеж в хранителна среда, огромния си капацитет да дава спори, има по-малка вирулентност и отсъствие на реакция към своите антигени.

Microsporum canis var. distortum No VKPGF 728/120

Щамът е депозиран в DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen“, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland на 01. 10. 1992 под означението DSM 7275.

Щамът се получава с помощта на насочена селекция, базираща се на спорова продукция и атенюиране на епизоотичния щам No 120, който бе намерен върху черна пантера през 1987 година. Щамът бе идентифициран _? както е описано по-горе (Rebell - Taplin по-горе цитирани и съгласно Kashkin също цитиран по-горе).

Биологичните свойства на щама са описани на таблица 6.

Щамът - No VKPGF-728/120 се отличава от епизоотичния щам със своя по-бърз растеж в хранителна среда, огромния си капацитет да дава микроконидии, има по-малка вирулентност и отсъствие на реакция към свойте антигени.

Microsporum gypseum No VKPGF-729/59

Щамът е депозиран в DSM-Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen“, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland на 01. 10. 1992 под означението DSM 7274.

Щамът се получава с помощта на насочена селекция, базираща се на спорова продукция и атенюиране на епизоотичния щам Nr 59, който бе намерен върху кон през 1985 година. Щамът бе идентифициран, както е описано по-горе (Rebell - Taplin по-горе цитирани и съгласно Kashkin също цитиран по-горе).

Биологичните свойства на щама са описани на таблица 7.

Щамът - No VKPGF-729/59 се отличава от епизоотичния щам със своя по-бърз растеж в хранителна среда, огромния си капацитет да дава микроконидии, има по-малка вирулентност и отсъствие на реакция към свойте антигени.

Таблица 1 свойства и щам No VKPGF-931 /410 епизоотичен щам No 410 характеристика на щамовете

описание на културата	зрялост за 10 до 15 дни единична спорова колония в агар/бирена мая; бяла, кадифенообразна, конвексна, расте с тесен ръб, под повърхността безцветна, диаметър на колонията: 10 до 15 мм	зрялост за 25 до 30 дни в агар/бирена мая; кремава, кожено/кадифенообразна, нагъната под повърхността безцветна, диаметър на колонията: 9 до 13 мм
морфологична	зряла 10 до 15-дневна култура със	зряла 25 до 30 дневна култура със
характеристи-ка	септи с разклонени 1 до 3 мм дълги	септи с мицел с големина 1 до 3 мм;
	хифи; множество овални пириформни	малко овални пириформни,
	микроконидии от 1.5 до 3x3 до 5 мм;	цилиндрични микроконидии с големина
	малки макроконидии	от 1 до 3x3 до 7 мм; единични,
		продълговати, неравномерно
		оформени макроконидии с 2 до 5 септи с 3 до 5x25 до 30 мм, много артроспори във вериги с 6 до 8 мм диаметър, хламидоспори с 10 до 12 мм
		диаметър
патогенна	резултат 12 до 15 дни след прилагане на доза от 500000 до 600000 клетки гъбен
характеристика	материал на см² върху надраскана кожа на заяк:
	тънък некротичен струпей	плътен азбестоподобен струпей,
		възможна супурация
	спонтанно оздравяване след 19-20	спонтанно оздравяване след 25-30 дни
отговор на	в резултат на подкожно и мускулно инжектиране на дезактивирани
реакцията	корпускуларни антигени от култури
	няма наблюдавана промяна в	възпаление на мястото на
	клиничното състояние	инжектирането, едем

антигенна реакция антитела 20 до 25 дни след инжектиране на зайците с корпускуларни антигени, установени в кръвния серум чрез пасивна хемаглутинационна реакция (PHR)

1:320 до 1:640 1:320 до 1:640 чрез Elisa („Enzyme-linked Immunosorbent Assay“ 1;400до1:1б00 1:400до1:1600 имуногенна резултат от имушзирането на група зайци с дезактивиран антиген от култури (не реакция по-малко от петкратно повторение):

установен имунитет установен имунитет

Таблица 2

свойства и характеристика на щамовете	щам NoVKPGF-930/1032	епизоотичен щам No 1032
описание на	зрялост за 10 до 15 дни единична	зрялост за 25 до 30 дни колония в
културата	спорова колония в агар/бирена мая;	агар/бирена мая; бяла, плоска, расте с
	кремава, кадифенообразна/пуира,	тесен ръб, под повърхността
	плоска с леко издигане в центъра, под	червеникавокафява, диаметър на
	повърхността леко кафява, диаметър	колонията: 15 до 20 мм
	на колонията: 25 до 30 мм
морфологична	септи, разклонени хифи, 1 до 3 мм	септи, разклонени прави и
характеристика	широки, множество овални	спираловидни хифи с 1 до 3 мм; кръгли,
	пириформни микроконидии с големина	спрескани, пириформни,
	1 до 3x2 до 6 мм; няма макроконидии	микроконидии с големина от 1 до 3 х2 до 6 мм; малко продълговато-овални
		макроконидии с 2 до 5 сети с големина от 2 до 6 х15 до 25 мм
патогенна	резултат 9 до 10 дни след прилагане на доза от 500000 до 600000 клетки гъбен
характеристика	материал на см² върху надраскана кожа на заяк:
	тънък некротичен струпей	плътен азбестоподобен струпей,
		възможна супурация
	спонтанно оздравяване след 22 - 25	спонтанно оздравяване след 30 - 35
	дни	дни
отговор на	в резултат на подкожно и мускулно инжектиране на дезактивирани
реакцията	корпускуларни антигени от култури
	няма наблюдавана промяна в	възпаление на мястото на
	клиничното състояние	инжектирането, едем
антигенна реакция	антитела 20 до 25 дни след инжектиране на зайците с корпускуларни антигени,
	установени в кръвния серум чрез пасивна хемаглутинационна реакция (PHR)
	1:320 до 1:640	1:320 до 1:640
	чрез Elisa („Enzyme-linked Immunosorbent Assay
	1:400 до1:1600	1:400 до 1:1600
имуногенна	резултат от имунизирането на група зайци с дезактивиран антиген от култури (не
реакция	по-малко от петкратно повторение):
	установен имунитет	установен имунитет

Таблица 3

свойства и характеристика на щамовете	щам No VKPGF-929/381	епизоотичен щам No 381
описание на	зрялост за 10 до 15 дни единична	зрялост за 12 дни в агар/бирена мая;
културата	спорова колония в агар/бирена мая;	бяла, кадифенообразна, леко нагънат
	бяла, кадифенообразна/пудра, плоска	център, расте с тесен ръб, под
	с леко издигане в центъра, расте с	повърхността червеникаво-кафява,
	тесен ръб, разнищена, под	диаметър на колонията: 13 до 15 мм
	повърхността леко кафява, диаметър
	на колонията: 15 до 20 мм
морфологична	септи, разклонени хифи 1 до 3 мм,	септи, разклонени хифи с
характеристика	множество овални лириформни	бухалкообразни краища 1 до 4 мм;
	микроконидии с големина 2 до 3x3 до 6	малко овални, пириформни,
	мм; няма макроконидии	микроконидии с големина от 2 до 3x3
		до 7 мм; бухалкообразни
		макроконидии с 4 до 7 х 15 до25 мм
патогенна	резултат 10 до 12 дни след прилагане на доза от 500000 до 600000 клетки гъбен
характеристика	материал на см² върху надраскана кожа на заяк:
	некротичен струпей	азбестоподобен струпей, възможна
		супурация
	спонтанно оздравяване след 22 - 25	спонтанно оздравяване след 25 - 30
	дни	дни
отговор на	в резултат на подкожно и мускулно инжектиране на дезактивирани
реакцията	корпускуларни антигени от култури
	няма наблюдавана промяна в	възпаление на мястото на
	клиничното състояние	инжектирането, едем
антигенна реакция	антитела 20 до 25 дни след инжектиране на зайците с корпускуларни антигени,
	установени в кръвния серум чрез пасивна хемаглутинационна реакция (PHR)
	1:320 до 1:640	1:320 до 1:640
	чрез Elisa („Enzyme-linked Immunosorbent Assay
	1:800 до 1:1600	1:800до1:1600
имуногенна	резултат от имунизирането на група зайци с дезактивиран антиген от култури (не
реакция	по-малко от петкратно повторение):
	установен имунитет	установен имунитет

Таблица 4

свойства и характеристика на щамовете	щам No VKPGF-928/1393	епизоотичен щам No 1393
описание на	зрялост за 10 до 15 дни единична	зрялост за 15 дни колония в
културата	спорова колония в агар/бирена мая;	агар/бирена мая; сиво-бежава,
	бяла, рехава, конвексна, расте с тесен	арахноидна, в центъра напрашена,
	ръб, арахноидна, под повърхността	расте с разнищен ръб , под
	кафява, диаметър на колонията: 30 до	повърхността жълтеникава, диаметър
	35 мм	на колонията: 20 до 25 мм
морфологична	сеггти, разклонени хифи 1 до 4 мм,	сегтти, разклонени хифи 2 до 6 мм,
характеристика	множество пириформни, цилиндрични	малко пириформни, цилиндрични
	микроконидии, малко мъхообразни	микроконидии 1 ДО 3 X 3 до 7 мм,
	макроконидии с 3 до 11 селти с	множество мъхообразни
	големина 10 до 20 х 40 до 75 мм;	макроконидии с 3 до 11 септи с големина 10 до 20 х 45 до 85 мм;
патогенна	резултат 9 до 11 дни след прилагане на доза от 500000 до 600000 клетки гъбен
характеристика	материал на см² върху надраскана кожа на заяк:
	тънък некротичен струпей	плътен азбестоподобен струпей,
	спонтанно оздравяване след 20 - 24	спонтанно оздравяване след 25 - 45
	ДНИ	дни
отговор на	в резултат на подкожно и мускулно инжектиране на дезактивирани
реакцията	корпускуларни антигени от култури
	няма наблюдавана промяна в	едем и възпаление на мястото на
	клиничното състояние	инжектиране
антигенна реакция	антитела 20 до 25 дни след инжектиране на зайците с корпускуларни антигени,
	установени в кръвния серум чрез пасивна хемаглутинационна реакция (PHR)
	1:320 до 1:640	1:320 до 1:640
	чрез Elisa („Enzyme-linked Immunosorbent Assay“
	1:400 до 1:1600	1:400 до 1:1600
имуногенна	резултат от имунизирането на група зайци с дезактивиран антиген от култури (не
реакция	по-малко от петкратно повторение):
	установен имунитет	установен имунитет

Таблица 5

свойства и характеристика на щамовете	iuaMNoVKPGF-727/1311	епизоотичен щам No 1311
описание на	зрялост за 10 до 15 дни единична	зрялост за 15 дни колония в
културата	спорова колония в агар/бирена мая;	агар/бирена мая; сивкава,
	бяла, рехава, плоска с по-гъсто	храстовидна/арахноидна с части на
	централно куполробразно възвишение,	памукообразен, бял мицел, расте с
	расте с тесен ръб, разнищен, под	тесен ръб, под повърхността
	повърхността безцветна с кафяв	кафеникава, диаметър на колонията:
	център, диаметър на колонията: 30 до	23 до 28 мм
	35 мм
морфологична	септи, разклонени хифи 1 до 3 мм,	сегпи, разклонени хифи 1 до 5 мм,
характеристика	множество пириформни, овални	малко овални, цилиндрични
	микроконидии 1 до 3 х 3 до 7 мм;	микроконидии 1 до 3 х 3 до 8 мм;
	малко къси елиптични, мъхообразни	множество елиптични, мъхообразни,
	изтеглени-овални макроконидии, някои	изтеглено-овални или неравномерно
	от тях неравномерно оформени, по-	оформени макроконидии с 2 до 5 септи
	малко често остри, с 2 до 5 септи 11 до	с големина 11 до 20 х 25 до 55 мм;
	20 х 25 до 50 мм;
патогенна	резултат 12 до 15 дни след прилагане на доза от 500000 до 600000 клетки гъбен
характеристика	материал на см^г върху надраскана кожа на заяк:
	тънък некротичен струпей	азбестоподобен струпей,
	спонтанно оздравяване след 10-25	спонтанно оздравяване след 25 - 30
	дни	дни
отговор на	в резултат на подкожно и мускулно инжектиране на дезактивирани
реакцията	корпускуларни антигени от култури
	няма наблюдавана промяна в	едем и възпаление на мястото на
	клиничното състояние	инжектиране
антигенна реакция	антитела 20 до 25 дни след инжектиране на зайците с корпускуларни антигени, установени в кръвния серум чрез пасиена хемаглутинационна реакция (PHR)
	1;320 до 1:640	1:320 до 1:640
	чрез Elisa („Enzyme-linked Immunosorbent Assay“
	1:800 до 1:1600	1:800 до 1:1600
имуногенна	резултат от имунизирането на група зайци с дезактивиран антиген от култури (не
реакция	по-малко от петкратно повторение):
	установен имунитет	установен имунитет

Таблица 6

свойства и характеристика на щамовете	щам No VKPGF-728/120	епизоотичен щам No 120
описание на	зрялост за 10 до 15 дни колония в	зрялост за 15 дни колония в
културата	агар/бирена мая; кремава,	агар/бирена мая; светлобежова, като
	кадифенообразна /прахообразна, в	пудра, расте с тесен ръб , под
	ценьра по-висока като копче, расте с	повърхността кафява, диаметър на
	тесен ръб, фино разнищен, под повърхността леко кафява с тъмнокафяв център, диаметър на	колонията: 15 до 20 мм
	колонията: 25 до 30 мм
морфологична	сегпи , разклонени хифи 1 до 3 мм,	сегпи, разклонени хифи 1 мм, малко
характеристика	множество пириформни, овални,	пиридоформни, овални, цилиндрични
	цилиндрични микроконидии 1 до 3 X 3	микроконидии с големина 1 до 3 х 3 до
	до 8 мм; малко неравномерно	8 мм; множество неравномерни или
	деформирани макроконидии,	рехави макроконидии с 2 до 9 септи с
	деформирани или рехави с 2 до 9	големина 8 до 20 х 25 до 80 мм;
	сегпи 8 до 20 х 25 до 70 мм;
патогенна	резултат 12 до 15 дни след прилагане на доза от 500000 до 600000 клетки гъбен
характеристика	материал на см² върху надраскана кожа на заяк:
	тънък некротичен струпей	азбестоподобен струпей,
	спонтанно оздравяване след 20 - 25	спонтанно оздравяване след 27 - 45
	ДНИ	ДНИ
отговор на	в резултат на подкожно и мускулно инжектиране на дезактивирани
реакцията	корпускуларни антигени от култури
	няма наблюдавана промяна в	едем и възпаление на мястото на
	клиничното състояние	инжектиране
антигенна реакция	антитела 20 до 25 дни след инжектиране на зайците с корпускуларни антигени,
	установени в кръвния серум чрез пасивна хемаглугинационна реакция (PHR)
	1:320 до 1:640	1:320 до 1:640
	чрез Elisa („Enzyme-linked Immunosorbent Assay
	1:800 до 1:1600	1:800 до 1:1600
имуногенна	резултат от имунизирането на група зайци с дезактивиран антиген от култури (не
реакция	по-малко от петкратно повторение):
	установен имунитет	установен имунитет

Таблица 7

свойства и характеристика на щамовете	щам NoVKPGF-729/59	епизоотичен щам No 59
описание на	зрялост за 10 до 15 дни колония в	зрялост за 15 дни колония в
културата	агар/бирена мая;	агар/бирена мая; кремава,
	бяла.кадифенообразна/ рехава.	кадифенообразна/пудра, плоска с
	плоска леко възвишена в ценъра,	рехав бял мицел в центъра, расте с
	расте с тесен ръб, под повърхността	тесен ръб, под повърхността
	леко кафява, диаметър на колонията:	кафеникава, диаметър на колонията:
	25 до 30 мм	20 ДО 22 мм
морфологична	септи, разклонени хифи 2 до 3 мм,	септи, разклонени хифи 2 до 5 мм,
характеристика	множество овални, пириформни,	малко овални, пиридоформни.
	цилиндрични микроконидии 2 до 4 х 3	цилиндрични микроконидии с големина
	до 6 мм; липса или малко	2 до 4 х 3 до 7 мм; множество
	макроконидии елиптични, изтеглени-	елиптични, изтеглени-овални
	овални по форма с 2 до 5 с големина 7	макроконидии с 2 до 5 сегпи с
	до 15x25 до 40 мм;	големина 7 до 15 х 25 до 50 мм;
патогенна	резултат 12 до 15 дни след прилагане на доза от 500000 до 600000 клетки гъбен
характеристика	материал на см^г върху надраскана кожа на заяк;
	тънък некротичен струпей	плътен азбестоподобен струпей,
	спонтанно оздравяване след 20 - 22	спонтанно оздравяване след 25 - 28
	ДНИ	ДНИ
отговор на	в резултат на подкожно и мускулно инжектиране на дезактивирани
реакцията	корпускуларни антигени от култури
	няма наблюдавана промяна в	възпаление на мястото на инжектиране
	клиничното състояние
антигенна реакция	антитела 20 до 25 дни след инжектиране на зайците с корпускуларни антигени,
	установени в кръвния серум чрез паСи&ча хемаглутинационна реакция (PHR)
	1:320 до 1:640	1:320 до 1:640
	чрез Elisa („Enzyme-linked Immunosorbent Assay
	1:400 до 1:1600	1:400до1:1600
имуногенна	резултат от имунизирането на група зайци с дезактивиран антиген от култури (не
реакция	по-малко от петкратно повторение):
	установен имунитет	установен имунитет

Ваксината може да се получи чрез използване на щама Trichophyton sarkisovii, No 551/68. Той е описан например в US патент No 1177972 от 08. 05.1985г. При описаната в този патент ваксина се касае за жива ваксина срещу трихофития при камили. Този щам също е депозиран в DSM - Deutsche Sammlung von Microorganismen und Zellkulturen, Mascheroder Weg 1B, W-3300 Braunschweig, Deutschland, на 01.10.1992 год под номер DSM 7278.

Изобретението обхваща следните обекти:

дерматомикозна ваксина, характеризираща се с това, че съдържа антигенен материал от най-малко един от следните дерматофити:

Trychophyton verrucosum, по-специално Trychophyton verrucosum щам No VKPGF-931/410 и/или

Trychophyton mentagrophytes, по-специално Trychophyton mentagrophytes щам No VKPGF-930/1032 и/или

Microsporum canis, по-специално Microsporum canis щам No VKPGF-928/1393,

Microsporum canis var. obesum, по-специално Microsporum canis var. obesum щам No VKPGF-727/1311 и/или

Microsporum canis var. distortum, по-специално Microsporum canis var. distortum щам No VKPGF 728/120 и/или

Microsporum gypseum, по-специално Microsporum gypseum No VKPGF-729/59 както и физиологично приемлив носител;

дерматомикозна ваксина, по-специално средство за лечение на кучета, котки или коне, характеризиращо се с това, че включва антигенно средство на дерматофитните щамове Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410, Trychophyton mentagrophytes No VKPGF930/1032, Trychophyton equinum щам No VKPGF-929/381, Trichophyton sarkisovii, No VKPGF-551/68, Microsporum canis No VKPGF-928/1393, Microsporum canis var. obesum No VKPGF-727/1311, Microsporum canis var. distortum No VKPGF 728/120 и Microsporum gypseum No VKPGF729/59, както и физиологично приемлив носител;

дерматомикозна ваксина, по-специално средство за лечение на говеда, характеризираща се с това, че включва антигенно средство на дерматофитните щамове Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410, Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-930/1032 и Trychophyton sarkisovii No VKPGF-551/68 както и физиологично приемливо носител.

една от гореописаните дерматомикозни ваксини, характеризиращи се с това, че съдържа 40 до 120 милиона, предимно 90 милиона микроконидии;

една от гореописаните дерматомикозни ваксини, характеризиращи се с това, че съдържа тиомерзал или формалдехид или 2-пропиолактон като дезактиватор.

една от гореописаните дерматомикозни ваксини, характеризиращи се с това, че като физиологично приемлив носител се използва воден разтвор с 0.2 до 2.0 тегловни проценти ферментирал, хидролизиран мускулен протеин, 5 до 12 тегловни проценти глюкоза и 0.1 др 1.2 тегловни проценти екстракт от мая;

- дерматофитните щамове:

Trychophyton verrucosum щам No VKPGF-931/410,

Trychophyton mentagrophytes щам No VKPGF-930/1032,

Trychophyton equinum щам No VKPGF-929/381,

Microsporum canis щам No VKPGF-928/1393,

Microsporum canis var. obesum щам No VKPGF-727/1311,

Microsporum canis var. distortum щам No VKPGF 728/120 и Microsporum gypseum No VKPGF-729/59.

метод за получаване на ваксини, характеризиращи се с това, че

а. получава се антигенен материал от най-малко един от следните щамове

Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410,

Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-930/1032,

Trychophyton sarkisovii No VKPGF-551/68

Microsporum canis No VKPGF-928/1393,

Microsporum canis var. obesum No VKPGF-727/1311,

Microsporum canis var. distortum No VKPGF 728/120 и

Microsporum gypseum No VKPGF-729/59 и

б. антигенният материал се смесва с физиологично приемлив носител;

метод, както е описан по-горе, характеризиращ се с това, че средство, по-специално тиомерзал, формалдехид или 2-пропиолактон се прибавя като дезактиватор на дерматофитите.

Примери за изпълнение на изобретението

Пример 1.

За получаването на 1 л ваксина култури от щамовете VKPGF931/410, 930/1032, 929/381, 551/68, 928/1393, 727/1311, 728/120 и 729/59 се отглеждат върху агар/бирена мая при 26° С в продължение на 15 дни.

Всека от културите се отглежда в 8 шишета („mattress flasks). След това гъбната маса се отнема, хомогенизира се и към всеки от смесителите се поставя по 200 мл разтвор. Използваният разтвор е воден разтвор с 1 % ферментирал, хидролизиран мускулен протеин, 10 % глюкоза и 1 % екстракт от мая. Концентрацията от микроконидии се нагласява на 90 милиона за милилитър хомогенат. След два дни от всека суспензионна култура се отнемат по 125 мл и в отделен единичен съд се размесва. Ваксините могат селд това да се получат при размесване на различни комбинации от посочените щамове.

За дезактивиране на хомогенатните смеси директно се прибавя тиомерзал в съотношение 1 : 20 000. Към всеки литър хомогенат се прибавя по 20 мг тиомерзал. Клетъчната смес се съхранява в продължение на два дни при стайна температура.

Получената ваксина се разфасова в опаковки, проверява се за стерилност, сигурност и имунологични свойства съгласно изискванията на възприетите методи и се съхранява при 4°С.

Ваксините, които се получават по този начин, се използват за имунизиране на животни. За профилактични и лечебни цели ваксината се прилага в следните дози (таблица 8):

Таблица 8

	дрза (мл)
вид животни	възраст	начин на инжектиране	профилак -тична	лечебна
Felidae средни и голями котки малки котки	1-6 месеца 6 месеца + 1-5 месеца	глутеални мускули глутеални мускули	2 ДО 5 Здо 7	3 до 6 4 до 10
Ursidae	5 месеца + 1-12 мес. 12 мес.+	глутеални мускули глутеални мускули глутеални мускули глутеални мускули	1 до 1.5 1 ДО 2 1 ДО з 3 до 5	1 до 1.5 1 ДО 2 3 до 5 5 до 6

	доза (мл)
вид животни	възраст	начин на инжектиране	профилак -тична	лечебна
Procyonidae	1-10 мес. 10 мес. +	глутеални мускули глугеални мускули	0.3 до 0.5 0.3 др 0.5	0.5 0.5 до 1.0
Viverridae	1-12 мес. 12 мес.+	глутеални мускули глугеални мускули	0.3 до 0.5 0.5 до 1.0	0.5 0.5 до 1.0
Hyaenidae	1-12 мес. 12 мес.+	глугеални мускули глугеални мускули	1 до 3 3 до 5	1 ДО 3 5 до 6
Canidae	1-10 мес. 10 мес.+	глутеални и мускули на плешката	0.3 до 0.5 0.3 до 1.0	0.5 до 1.0 0.5 до 1.0
Equidae	3-12 мес. 12 мес. +	във врага във врата	0.3 до 0.5 0.5	0.5 до 1.0 0.5 до 1.0
Tyropodae	1-6 мес. 6 мес. +	в плешката и врата	3 до 5 5 до 8	5 до 10 7 до 10
Bovidae	1 -12 мес. 12 мес.	във врата във врата	3 до 5 5 до 8	5 до 10 7 до 10

Пример 2,

Получената съгласно метода от пример 1 ваксина се използва при лабораторни и различни други животни за проверка на ефективността й да предпазва и лекува от заболявания. Резултатите са дадени на таблица 9:

Таблица 9.

животно	брой	доза (мл)	резултат
зайци	10	1.0	няма симптоми на болестта след инжектиране на вирулентни култури от гъбичките Т. mentagrophytes, T.verrucosum, Т. equinum, М. canis, Μ.

ЖИВОТНО	брой	доза (мл)	резултат
			gypseum
домашни котки	3	1.0
коне	5	0.5	няма дерматомикози във връзка с гъбичките М. canis и Т. mentagrophytes след директен контакт с заболели животни
камили	2	5.0
мечки	2	3.0
леопарди	2	4.0
хиени	2	2.0	няма дерматомикози във връзка с гъбичките М. canis и Т. mentagrophytes след директен контакт с източници на зараза
сервал	2	3.0
оцелот	2	2.0
лъвове	2	3.0
тигри	3	7.0
назуа	3	0.5
тибетски котки	2	1.0
зайци	7	1.5	няма симптоми на заболяване след заразяване с вирулентни култури на гъбичките Т. sarkisovii и М. gypseum
кучета	3	0.5
домашни котки	3	1.5
черна пантера	2	5.0	няма дерматомикози във връзка с гъбичките М. canis, Т. mentagrophytes и Т. verrucosum след директен контакт с източници на зараза

животно	брой	доза (мл)	резултат
тигър	5	7.0
гъски	6	3.0
мечки	3	1.0
кучета	8	0.5
лама	2	3.0

Пример 3.

Получената съгласно пример 1 ваксина се използва за животни, заболели от дерматомикози. Резултатите са дадени на таблица 10. Таблица 10.

животни	брой	доза (мл)	ефект
черни пантери	5	7.0	Нападнати от микроспори на гъбичката М. canis. Оздравяването настъпва за 12 до 25 дни след имунизирането
черни пантери	3	4.0
коне	3	1.0
понита	2	0.5
лъвове	3	10
тигри	3	10
кучета	4	0.5
мечки	1	5.0
хиени	1	5.0
домашни котки	15	1.5	Нападнати от микроспори във връзка с гъбичката М. canis. Оздравяването настъпва за 10 до 20 дни след имунизирането.
кучета	5	0.5

коне	5	0.7
черни пантери	1	1.0	Нападнати с трихофити във връзка с гъбичката Т. mentagrophytes. Оздравяването настъпва за 12 до 15 дни
червена лисица	4	1.0
мечки	2	5.0
планински овце	1	7.0
коне	15	1.0	Нападнати от микроспори във връзка с гъбичката Т. equinum. Оздравяването настъпва за 12-20 дни след имунизирането.

Claims

Патентни претенции

1. Ваксина, характеризираща се с това, че съдържа антигенен материал от най-малко един от следните инактивирани (умъртвени) дерматофитни щамове:

Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410 (DSM-Nr 7277) или

Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-930/1032 (DSM-Nr 7279) или

Trychophyton equinum No VKPGF-929/381 (DSM-Nr 7276) или

Microsporum canis No VKPGF-928/1393 (DSM-Nr 7281) или

Microsporum canis var. obesum No VKPGF-727/1311 (DSM-Nr 7276) или

Microsporum canis var. distortum No VKPGF 728/120 (DSM-Nr 7275) или

Microsporum gypseum No VKPGF-729/59 (DSM-Nr 7274).
2. Ваксина съгласно претенция 1, характеризираща се с това, че съдържа антигенен материал на комбинация от споменатите в претенция 1 дерматофитни щамове.
3. Ваксина съгласно претенция 1 или 2, характеризираща се с това, че съдържа допълнително антигенен материал от Trychophyton sarkisovii No VKPGF-551/68 (DSM-Nr 7278).
4. Ваксина съгласно претенция 1 до 3, характеризираща се с това, че съдържа антигенен материал от следните дерматофитни щамове: Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410 (DSM-Nr 7277) и Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-930/1032 (DSM-Nr 7279) и Trychophyton sarkisovii No VKPGF-551/68 (DSM-Nr 7278).
5. Ваксина съгласно претенция 1 до 3, характеризираща се с това, че съдържа антигенен материал от следните дерматофитни щамове:

Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410 (DSM-Nr 7277) и

Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-930/1032 (DSM-Nr 7279) и

Trychophyton equinum No VKPGF-929/381 (DSM-Nr 7276) и

Microsporum canis No VKPGF-928/1393 (DSM-Nr 7281) и

Microsporum canis var. obesum No VKPGF-727/1311 (DSM-Nr 7276) и

Microsporum canis var. distortum No VKPGF 728/120 (DSM-Nr 7275) и

Microsporum gypseum No VKPGF 729/59 (DSM-Nr 7274).
6. Ваксина съгласно претенция 1 до 5, характеризираща се с това, че антигенният материал представлява дезактивирани чисти дермагофитни култури.
7. Ваксина съгласно претенция 1 до 6 характеризираща се с това, че дерматофитната култура се дезактивира с тиомерзал, 2пропиолакгон или формалдехид.
8. Ваксина съгласно претенция 1 до 7, характеризираща се с това, че дерматофитната култура е хомогенизирана.
9. Ваксина съгласно претенция 1 до 8, характеризираща се с това, че съдържа 40 до 120 милиона микроконидии в милилитър.
10. Ваксина съгласно претенция 1 до 9, характеризираща се с това, че съдържа допълнително вещество.
11. Ваксина съгласно претенция 1 до 10, характеризираща се с това, че съдържа физиологично приемлив носител.
12. Ваксина съгласно претенция 1 до 11, характеризираща се с това, че като физиологично приемлив носител съдържа воден разтвор с 0.2 до 2 тегловни % ферментирал, хидролизиран мускулен протеин, 5 до 12 тегловни проценти гликоза и 0.1 до 1.2 тегловни % екстракт от мая.
13. Trychophyton verrucosum No VKPGF-931/410 (DSM-Nr 7277).
14. Trychophyton mentagrophytes No VKPGF-930/1032 (DSM-Nr 7279).
15. Trychophyton equinum No VKPGF-929/381 (DSM-Nr 7276).
16. Microsporum canis No VKPGF 928/1393 (DSM-Nr 7281).
17. Microsporum canis var. obesum No VKPGF-727/1311 (DSM-Nr 7276).
18. Microsporum canis var. distortum No VKPGF 728/120 (DSM-Nr 7275).
19. Microsporum gypseum No VKPGF 729/59 (DSM-Nr 7274).
20. Използване на ваксина съгласно претенциите от 1 до 12 за получаване на лекарствено средство за профилактика и/или лечение на дерматомикози.
21. Използване на ваксина съгласно претенциите от 1 до 12 за получаване на лекарствено средство за образуване на имунитет и/или резистентност срещу инфекции от дерматофиги.
22. Метод за получаване на ваксина съгласно претенциите от 1 до 12, характеризиращ се с това, че дерматофитната култура се хомогенизира във воден разтвор, около два дни се инкубира и след това се дезактивира.
23. Метод съгласно претенция 22, характеризиращ се с това, че сместа след хомогенизирането се нагласява на 40 до 120 милиона микроконидии в милилитър.
24. Метод съгласно претенции 22 или 23, характеризиращ се с това, че сместа след хомогенизирането се нагласява на 90 микликонидии в милилитър.
25. Метод съгласно претенции 22 до 24, характеризиращ се с това, че дезактивирането се провежда с тиомерзал, 2-пропиолактон или формалдехид.
26. Метод съгласно претенции 22 до 25, характеризиращ се с това, че културата преди етапа на хомогенизиране се култивира върху твърда хранителна среда.