CN102697784B - 一种兽用恩诺沙星注射液及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及兽用药物制剂技术领域，具体公开了一种兽用恩诺沙星注射液及其制备方法。注射液原料由恩诺沙星、青蒿琥酯、甲氧苄啶、氟尼辛葡甲胺、L-精氨酸、抗氧剂、螯合剂、复合有机溶剂和注射用水组成。本发明能显著增强药物的抗菌效果，抗炎效果好，主要用于治疗畜禽敏感细菌、支原体所引起的严重混合感染，同时还能有效减少耐药性的产生，降低毒副作用。本发明的兽用恩诺沙星注射液制备方法简单，成本低、稳定性好，使用方便、适合工业化生产。

Description

一种兽用恩诺沙星注射液及其制备方法

技术领域

本发明涉及兽用药物制剂技术领域，具体涉及一种兽用恩诺沙星注射液，同时涉及该注射液的制备方法。

背景技术

恩诺沙星为动物专用的第三代氟喹诺酮类广谱抗菌药物，具有广谱杀菌作用，对革兰氏阴性杆菌和球菌、阳性菌、支原体、衣原体均有杀灭作用。对静止期和生长期的细菌体均有效。敏感菌在接触本品后20-30分钟内死亡。杀菌活性强，高效，低毒，临床主要用于治疗畜禽细菌、支原体所引起的肠炎、肺炎、乳房炎及软组织感染性疾病。

Meinen等（1995）研究表明恩诺沙星杀菌作用具有浓度依赖性，在组织和血浆中，恩诺沙星的浓度必须较高并且维持足够长的时间才能对目标病原菌起到抑制作用，恩诺沙星由于最小抑菌浓度MIC相对较低（对绝大多数敏感菌株的MIC均小于1μg/m L），而且和最小杀菌浓度MBC相近，因此具有很强的抗菌活性。但不难看出，提高恩诺沙星浓度，就能增大恩诺沙星的杀菌效果。

随着该药的大剂量使用和滥用，导致许多病原菌对该药产生了耐药性，使得抗菌活性下降，临床效果越来越差。恩诺沙星浓度也由最初的0.5%（m/v，g/mL）逐步发展到现在的10%（m/v，g/mL），目前又有向15%、20%或者更高浓度发展的趋势。由于恩诺沙星在碱性溶液中的溶解度有限，生产上易出现结晶析出、抗冻性差等问题，这样向高浓度挑战的难度将更大。另外，喹诺酮类药物在体内分布广泛，为了达到有效的治疗效果，增大药物剂量，这样易造成药物在其他组织中残留的增高并产生一些毒副作用。

发明内容

针对现有技术中存在的不足，本发明的第一个目的在于提供了一种兽用恩诺沙星注射液，该注射液抗菌、抗炎效果好，主要用于治疗畜禽敏感细菌、支原体所引起的严重混合感染，并能有效减少耐药性的产生，降低毒副作用。

本发明的第二个目的在于提供了一种上述的兽用恩诺沙星注射液的制备方法，该方法制得的产品稳定性高，成本低，简单易行，适合工业化大生产。

实现本发明第一个目的的技术方案如下：

一种兽用恩诺沙星注射液，其特征在于，每100mL该注射液的组成如下：

恩诺沙星2-10g，

青蒿琥酯0.2-1g，

甲氧苄啶0.4-2g，

氟尼辛葡甲胺0.1-0.5g，

L-精氨酸5-10g，

抗氧剂0.1-0.3g，

螯合剂0.01-0.05g，

复合有机溶剂15-60mL，

余量为注射用水；

其中，恩诺沙星与青蒿琥酯的质量比为10:1，恩诺沙星与甲氧苄啶的质量比为5:1；

其中，抗氧剂为亚硫酸钠或硫代硫酸钠；

其中，螯合剂为乙二胺四乙酸钠；

所述的复合有机溶剂为丙二醇与乙醇的混合物，两者的体积比为1:1-2:1。

实现本发明第二个目的的技术方案如下：

一种上述的兽用恩诺沙星注射液的制备方法，其步骤如下：

（1）将L-精氨酸加入注射用水中，加热至50-60℃溶解，溶解完后加入恩诺沙星搅拌均匀得A液；

（2）将抗氧剂和螯合剂在搅拌下溶于注射用水中，得B液；

（3）将丙二醇加热至75-85℃，加入甲氧苄啶，溶解完全后，冷却至30℃，得C液；

（4）将氟尼辛葡甲胺用注射用水溶解完全，得D液；

（5）将青蒿琥酯用乙醇溶解完全，得E液；

（6）将B液倒入A液中，充分混合均匀，溶液澄明后再加入C液、D液和E液，余量用注射用水补齐，药液澄明后，必要时，用乙醇胺调节pH值至9.5-10.5（原料中L-精氨酸既是助溶剂又是pH调节剂，所以乙醇胺只用很少量或者不用），过滤，滤液灌封灭菌，即得本发明的兽用恩诺沙星注射液。

本发明采用L-精氨酸为恩诺沙星注射液的助溶剂，L-精氨酸在这里还是pH调节剂及溶液稳定剂。

本发明中添加了具有抗炎与抗菌增敏作用的青蒿琥酯，青蒿琥酯是具有倍半萜结构的抗疟药青蒿素的衍生物，化学名为二氢青蒿素-12-α-丁二酸单酯。青蒿素类化合物除了是治疗疟疾的首选药，还具有很多重要药理活性，如抗病原微生物（血吸虫、弓形虫、附红细胞体等）、清热、抗炎、抗病毒及免疫调节作用等。青蒿琥酯单独使用几乎没有抗菌作用，但与不同抗生素联合使用时有明显的抗菌增敏作用，可减少抗生素的使用剂量；明显降低细菌（包括革兰氏阴性、阳性菌）、灭活大肠杆菌攻击小鼠死亡率，显著抑制小鼠血清LPS含量和致炎细胞因子TNF-α、IL-6的释放。青蒿琥酯联合抗生素治疗细菌感染效果更佳。目前未见青蒿琥酯联合恩诺沙星的报道。在兽医临床上，青蒿琥酯同青蒿素一样主要用于畜禽等立克次体、原虫、细菌、病毒等引起的多种瘟热疫病，而且活性更高。

选用增效因子甲氧苄啶（Trimethoprim，TMP），能大大增强磺胺类、喹诺酮类等多种抗生素药物的抗菌活性，其作用机理是抑制二氢叶酸还原酶，使二氢叶酸不能还原为四氢叶酸，因而阻断敏感叶酸代谢和利用，从而防碍菌体核酸合成。恩诺沙星是通过抑制细菌DNA螺旋酶和拓扑异构酶Ⅳ的活性阻断细菌DNA复制来发挥抗菌作用的。二者联合，可同时阻断细菌生长繁殖所必需的核酸和蛋白合成过程，从而增加抗菌效果，减少耐药菌株的出现。

氟尼辛葡甲胺是一种强效环氧化酶抑制剂，具有镇痛、解热、抗炎和抗风湿作用。畜禽受到细菌、病毒、支原体侵袭发病时，临床通常伴有炎性症状（发热、疼痛），从而影响畜禽的正常饮食及健康等，故在抗菌、抗病毒的过程中是有必要消炎（解热、镇痛）的。氟尼辛葡甲胺单独或与抗生素联合用药能够明显改善临床症状，并可以增强抗生素的活性。兽医临床上常用于缓解马的内脏绞痛、肌肉与骨骼紊乱引起的疼痛及抗炎；牛的各种疾病感染引起的急性炎症的控制，如蹄叶炎、关节炎等，另外也可用于母猪乳房炎、子宫炎及无乳综合征的辅助治疗。

与现有技术相比，本发明的优点和有益效果如下：

1、本发明选择了具有抗炎与抗菌增敏作用的青蒿琥酯与抗生素恩诺沙星联用，增强了恩诺沙星的抗菌强度。

2、抗菌增效剂甲氧苄啶（TMP）的加入，使得恩诺沙星的抗菌活性增强了3-6倍。

3、氟尼辛葡甲胺为镇痛、解热、抗炎和抗风湿药物，不良反应少，剂量轻，药效强，个体差异小，对于家禽发热、疼痛性疾病效果显著。

4、根据各原料性质，本注射液选用了合适的溶媒、抗氧剂、螯合剂，增强了兽用恩诺沙星注射液的稳定性，而且抗冻性很好。

本发明的兽用恩诺沙星注射液广谱、高效，可用于治疗畜禽敏感细菌、支原体所引起的严重混合感染，能广泛运用于畜禽感染性疾病的治疗。

具体实施方式

下面申请人将结合具体的实施例对本发明做进一步的详细说明，以便本领域的技术人员更好地理解本发明，但以下内容不应被理解为对本发明权利要求书请求保护范围的限制。

实施例1：2.5m/v%（g/mL）兽用恩诺沙星注射液制备

一种兽用恩诺沙星注射液，每100mL该注射液的配方如下：

恩诺沙星2.5g，

青蒿琥酯0.25g，

甲氧苄啶0.5g，

氟尼辛葡甲胺0.125g，

L-精氨酸5g，

亚硫酸钠0.1g，

乙二胺四乙酸钠0.01g，

丙二醇10mL，

乙醇5mL，

注射用水加至100mL。

上述配方的兽用恩诺沙星注射液按照如下步骤制备而得：

1)将L-精氨酸加入20mL注射用水中，加热至55℃溶解，溶解完后加入恩诺沙星搅拌均匀得A液。

2)将亚硫酸钠和乙二胺四乙酸钠在搅拌下溶于5mL注射用水中，得B液。

3)将丙二醇加热至80℃，加入甲氧苄啶，溶解完全后，冷却至30℃，得C液。

4)将氟尼辛葡甲胺用5mL注射用水溶解完全，得D液。

5)将青蒿琥酯用乙醇溶解完全，得E液。

6)将B液倒入A液中，充分混合均匀，溶液澄明后再加入C液、D液和E液，再加入余量的注射用水至100mL，药液澄明后，用乙醇胺调节pH值至10.3-10.4，过滤，滤液灌封灭菌，即得2.5m/v%（g/mL）的兽用恩诺沙星注射液。

实施例2：5m/v%（g/mL）兽用恩诺沙星注射液制备

一种兽用恩诺沙星注射液，每100mL该注射液的配方如下：

恩诺沙星5g，

青蒿琥酯0.5g，

甲氧苄啶1g，

氟尼辛葡甲胺0.25g，

L-精氨酸8g，

硫代硫酸钠0.2g，

乙二胺四乙酸钠0.02g，

丙二醇20mL，

乙醇15mL，

注射用水加至100mL。

注射液的制备步骤同实施例1。

实施例3：7.5m/v%（g/mL）兽用恩诺沙星注射液制备

一种兽用恩诺沙星注射液，每100mL该注射液的配方如下：

恩诺沙星7.5g，

青蒿琥酯0.75g，

甲氧苄啶1.5g，

氟尼辛葡甲胺0.375g，

L-精氨酸9g

硫代硫酸钠0.25g，

乙二胺四乙酸钠0.03g，

丙二醇25mL，

乙醇15mL，

注射用水加至100mL。

注射液的制备步骤同实施例1。

实施例4：10m/v%（g/mL）兽用恩诺沙星注射液制备

一种兽用恩诺沙星注射液，每100mL该注射液的配方如下：

恩诺沙星10g，

青蒿琥酯1g，

甲氧苄啶2g，

氟尼辛葡甲胺0.5g，

L-精氨酸10g，

硫代硫酸钠0.3g，

乙二胺四乙酸钠0.05g，

丙二醇30mL，

乙醇30mL，

注射用水加至100mL。

注射液的制备步骤同实施例1。

试验例1：抗菌活性比较试验

目的：比较青蒿琥酯是否可提高恩诺沙星的抗菌活性。

对照样品：恩诺沙星原料药及普通5%恩诺沙星注射液，均购自广东省海康兽药厂。

试验样品：按实施例2的方法制备兽用恩诺沙星注射液，但不加甲氧苄啶、氟尼辛葡甲胺。

采用试管二倍稀释法，分别测定恩诺沙星原料、普通5%恩诺沙星注射液、试验样品对大肠杆菌ATCC₂₅₉₂₂和金黄色葡萄球菌ATCC₂₅₉₂₃的最小抑菌浓度（MIC）和最小杀菌浓度（MBC），以比较试验样品与对照样品的抗菌效果，结果见表1。

表1抗菌活性比较试验结果

由表1可知，含有青蒿琥酯的恩诺沙星注射液对大肠杆菌ATCC₂₅₉₂₂和金黄色葡萄球菌ATCC₂₅₉₂₃的抗菌活性均为对照样品原料药及普通制剂的2倍，结果表明青蒿琥酯增强了恩诺沙星的抗菌活性，与其普通制剂相比，添加了青蒿琥酯的恩诺沙星注射液具有较强的抗菌作用。

试验例2：本发明的兽用恩诺沙星注射液的稳定性试验

方法：分别取实施例1-4制备的兽用恩诺沙星注射液产品，按照中国兽药典2010年版一部附录兽药稳定性试验指导原则进行加速试验，按市售包装，在温度40±2℃、相对湿度75±5%的条件下放置6个月，在试验期间的第1、2、3、6个月末分别取样一次，对注射液的外观性状、pH值和含量（按标示量的百分含量计）进行检测。

稳定性试验结果：经过6个月的加速试验后，产品各类指标，详见下表。

实施例1产品

实施例2产品

实施例3产品

实施例4产品

从以上数据可以看出，经过6个月的产品加速试验后，本发明产品的性状、pH值均无明显变化，恩诺沙星含量也符合国家兽药标准有效成分为标示量的95%-105%范围内的规定，说明本品在该试验条件下十分稳定。

试验例3：本发明的兽用恩诺沙星注射液的抗冻试验

方法：取实施例1-4制备的兽用恩诺沙星注射液产品，按市售包装，分别放在4±2℃冷藏和-20±2℃冷冻，在试验期的第1、2、3、6个月末分别取样一次，对注射液的外观性状、解冻状况(室温解冻)和含量（按标示量百分含量计）进行检测。

抗冻试验结果：经过6个月的加速试验后，产品各类指标，详见下表。

实施例1产品

实施例2产品

实施例3产品

实施例4产品

从以上数据可以看出，在低温条件下冷藏，产品性状良好，无析出，恩诺沙星含量符合国家兽药标准（有效成分为标示量的95%-105%）规定；并且在-20±2℃冷冻6个月，前2个月稳定，虽然在3-6月出现了或多或少的结晶，但均可复溶，含量测定也符合要求，说明产品的耐低温，抗冻性效果良好。

试验例4：临床试验

使用实施例2的产品进行试验，对照组选用广东省海康兽药厂生产的5%恩诺沙星注射液组，恩诺沙星用量：猪：肌肉注射10-20mg（恩诺沙星计），2次/日，连续给药2-3天。鸡:150-200mL兑100kg水，供鸡自由饮用，1-2次/日，连续给药2-3天。牛：肌肉注射5-10mg（恩诺沙星计），1次/日，连续给药2-3天；牛乳房炎采用乳房灌注，每个乳室250mg（恩诺沙星计），1次/日，连续给药2-3天。试验数据如下：

实施例2产品的临床治疗效果

临床治疗效果比较结果

试验例5：临床试验

某猪场饲养猪500头，在7月份时发病，表现为体温升高、渐进性食欲下降，呕吐，猪卧地不起，寒颤，走路蹒跚，有的关节肿大，有的出现神经症状，有的口流泡沫样物质。眼睛圈发乌，结膜炎严重，有的眼结膜苍白或发红。咳嗽，流鼻涕、明显的喘气，严重的呼吸困难（类似打呼噜状声音)，疑为猪混感高热（由猪圆环病毒、蓝耳病毒、流感病毒、链球菌和副嗜血杆菌交叉混合感染引起），采用实施例4制备的兽用恩诺沙星注射液，肌肉注射，按每公斤体重15-20mg（恩诺沙星计），每日2次，连续给药3-4天，治愈率95.62%。

安全性试验结果：注射后病猪无异常死亡，观察30天，给药后的患畜长势良好，无任何病发生。

通过以上实验表明本品对治疗畜禽敏感细菌、支原体所引起的消化系统、呼吸系统、泌尿系统感染及猪弓形虫病、附红细胞体等感染有明显治疗效果，患畜禽注射后起效快；治疗多种病菌、支原体引起的混合感染及严重感染有很好的治疗效果。

安全实验表明，本发明的产品均未见毒副作用。

Claims (1)

1.一种兽用恩诺沙星注射液，其特征在于，所述注射液的制备方法步骤如下：

（1）将5-10g L-精氨酸加入注射用水中，加热至50-60℃溶解，溶解完后加入2-10g恩诺沙星搅拌均匀得A液；

（2）将0.1-0.3g抗氧剂和0.01-0.05g乙二胺四乙酸钠在搅拌下溶于注射用水中，得B液；

（3）将丙二醇加热至75-85℃，加入0.4-2g甲氧苄啶，溶解完全后，冷却至30℃，得C液；

（4）将0.1-0.5g氟尼辛葡甲胺用注射用水溶解完全，得D液；

（5）将0.2-1g青蒿琥酯用乙醇溶解完全，得E液；

（6）将B液倒入A液中，充分混合均匀，溶液澄明后再加入C液、D液和E液，再加入注射用水至100mL，药液澄明后，必要时，用乙醇胺调节pH值至9.5-10.5，过滤，滤液灌封灭菌，即得所述兽用恩诺沙星注射液；

所述恩诺沙星与青蒿琥酯的质量比为10:1，恩诺沙星与甲氧苄啶的质量比为5:1；

所述抗氧剂为亚硫酸钠或硫代硫酸钠；

所述丙二醇与乙醇体积比为1:1-2:1，所述丙二醇与乙醇组成复合有机溶剂，复合有机溶剂体积为15-60mL。