CN110441536A - 检测维生素b12的化学发光试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了检测维生素B12的化学发光试剂盒，包括链霉亲和素磁珠混悬液、维生素B12标准品、生物素标记的维生素B12单抗、碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗、化学发光底物、标准品稀释液、抗体稀释液、洗涤液、96孔酶标板；本发明利用磁珠的技术特点，结合生物素‑亲和素酶联免疫放大作用及碱性磷酸酶标记的酶促化学发光体系检测血清中维生素B12水平，具有非常高的灵敏度；本发明与现有技术比较更具技术和价格优势，操作简单，节省时间，易于实现全自动化操作，无需昂贵的特殊仪器，对操作人员技术水平及实验室条件要求相对较低，适于基层医院推广使用，具有较大的临床应用价值。
Description
技术领域
本发明涉及体外诊断领域，具体涉及检测维生素B12的化学发光试剂盒。
背景技术
维生素是各种生物维持正常生理功能所必需的一类低分子有机化合物，它们大多数是生化代谢过程中的主要辅酶，在体内参与、调节、控制许多合成和分解代谢，当生物体缺乏维生素时，就会引发物质代谢障碍，引起多种疾病。维生素B12又叫钴胺素，为浅红色的针状结晶，易溶于水和乙醇，在pH值4.5～5.0弱酸条件下最稳定，强酸(pH<2)或碱性溶液中分解，遇热可有一定程度破坏，但短时间的高温消毒损失小，遇强光或紫外线易被破坏其主要生理功能是参与制造骨髓红细胞，防止恶性贫血，防止大脑神经受到破坏。维生素B12对于促进畜禽生长特别是在促进幼畜生长发育方面效果显著，在畜禽体内主要以参与一碳单位和丙酸代谢发挥作用，影响遗传物质的合成，还能维持神经功能的完整性，是畜禽不可缺少的营养原料。养殖生产过程中，常规饲料中的维生素B12一般作为安全用量，额外添加适量维生素B12可以提高畜禽生产性能，带来可观的经济效益。
目前，维生素B12的检测方法有多种，包括酶联免疫、微生物法和同位素放射免疫方法等，然而免疫检测方法和微生物方法有很多的弊端，如下：第一、免疫反应对反应条件的要求比较严苛，必须保证适宜的pH、电解质环境和排除交叉反应；第二，不同厂商检测试剂盒检测结果存在显著差异，即免疫反应的检测准确度得不到保障；第三，特异性差，不能有效区分钴胺素和类咕啉，不能给出准确的维生素B12含量；第四，放射性免疫法存在放射线辐射和污染等问题。专利号为201210273343.6，名称为“检测维生素B12的酶联免疫试剂盒及其应用”的专利采用酶联免疫法检测谷物、奶粉、原奶中的维生素B12，耗费时间长，准确度不高。
发明内容
本发明的目的在于提供检测维生素B12的化学发光试剂盒，能够定量检测人血清和血浆中的维生素B12，解决了耗费时间长，准确度不高的问题。
为实现上述目的，本发明的技术方案提供检测维生素B12的化学发光试剂盒，包括链霉亲和素磁珠混悬液、维生素B12标准品、生物素标记的维生素B12单抗、碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗、化学发光底物、标准品稀释液、抗体稀释液、洗涤液、96孔酶标板。
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述链霉亲和素磁珠混悬液为10ml，浓度为0.1mg/ml。
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述维生素B12标准品为白色冻干粉，浓度为1μg/ml。
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述生物素标记的维生素B12单抗为0.2ml，浓度为1mg/ml。
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗为0.2ml，浓度为1mg/ml
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述化学发光底物(Lumi-phos530)为100ml。
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述标准品稀释液含1％牛血清白蛋白、0.02％Procline-300的磷酸盐缓冲液(0.01M，p H7.4)，容量为10ml。
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述抗体稀释液含1％牛血清白蛋白、1M NaCl、0.02％Procline-300的磷酸盐缓冲液(0.01M，pH7.4)，容量为10ml。
上述检测维生素B12的化学发光试剂盒，其中，所述洗涤液为含0.8gNaCL、0.02gKCL、0.3g Tris、0.05％吐温-20的三羟甲基氨基甲烷洗涤液(pH 7.4)，容量为20ml。
使用本发明试剂盒对维生素B12标准品进行检测，方法如下：
(1)生物素标记的维生素B12单抗为一抗，用抗体稀释液1/2000倍稀释。
(2)碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗为二抗，抗体稀释液1/2000倍稀释。
(3)将维生素B12校准品用标准品稀释液稀释，浓度依次为10、5、2、1、0.5、0.2、0.1ng/ml。
(4)96孔酶标板中分别加入50μl一抗，50μl二抗和100μl维生素B12校准品。
(5)振荡混匀后，37℃恒温箱温育60min。
(6)每孔分别加入100ul链霉亲和素磁珠混悬液，浓度为0.1mg/ml。
(7)振荡混匀后，37℃恒温箱温育30min。
(8)取出酶标板，于磁性分离机中静置3-5min以分离磁珠与上清液，弃上清液。
(9)每用洗涤液清洗3次，每次300μl。
(10)每孔加入200μl化学发光底物液，于化学发光仪中读取发光值。
本发明具有有益效果，本发明利用磁珠的技术特点，结合生物素-亲和素酶联免疫放大作用及碱性磷酸酶标记的酶促化学发光体系检测血清中维生素B12水平，具有非常高的灵敏度，本发明与现有技术比较更具技术和价格优势，操作简单，节省时间，易于实现全自动化操作；无需昂贵的特殊仪器，对操作人员技术水平及实验室条件要求相对较低，适于基层医院推广使用，具有较大的临床应用价值。
附图说明
图1为本试剂盒检测不同浓度维生素B12标准品的标准曲线图。
具体实施方式
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。
实施例1
检测维生素B12的化学发光试剂盒，包括链霉亲和素磁珠混悬液、维生素B12标准品、生物素标记的维生素B12单抗、碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗、化学发光底物、标准品稀释液、抗体稀释液、洗涤液、96孔酶标板。
所述链霉亲和素磁珠混悬液为10ml，浓度为0.1mg/ml。所述维生素B12标准品为白色冻干粉，浓度为1μg/ml。所述生物素标记的维生素B12单抗为0.2ml，浓度为1mg/ml。所述碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗为0.2ml，浓度为1mg/ml。所述化学发光底物(Lumi-phos530)为100ml。所述标准品稀释液含1％牛血清白蛋白、0.02％Procline-300的磷酸盐缓冲液(0.01M，p H7.4)，容量为10ml。所述抗体稀释液含1％牛血清白蛋白、1M NaCl、0.02％Procline-300的磷酸盐缓冲液(0.01M，pH7.4)，容量为10ml。所述洗涤液为含0.8gNaCL、0.02gKCL、0.3g Tris、0.05％吐温-20的三羟甲基氨基甲烷洗涤液(pH 7.4)，容量为20ml。
本发明化学发光底物Lumi-phos 530具有灵敏度高的特点，在低浓度碱性磷酸酶的情况下，产生的发光信号可持续24h，发光强度与碱性磷酸酶的浓度成线性关系。
实施例2
使用实施例1中的试剂盒对维生素B12标准品进行检测，方法如下：
(1)生物素标记的维生素B12单抗为一抗，用抗体稀释液1/2000倍稀释。
(2)碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗为二抗，抗体稀释液1/2000倍稀释。
(3)将维生素B12校准品用标准品稀释液稀释，浓度依次为10、5、2、1、0.5、0.2、0.1ng/ml。
(4)96孔酶标板中分别加入50μl一抗，50μl二抗和100μl维生素B12校准品。
(5)振荡混匀后，37℃恒温箱温育60min。
(6)每孔分别加入100ul链霉亲和素磁珠混悬液，浓度为0.1mg/ml。
(7)振荡混匀后，37℃恒温箱温育30min。
(8)取出酶标板，于磁性分离机中静置3-5min以分离磁珠与上清液，弃上清液。
(9)每用洗涤液清洗3次，每次300μl。
(10)每孔加入200μl化学发光底物液，于化学发光仪中读取发光值。
用不同浓度的维生素B12标准品进行测定，建立标准曲线，其中标准溶液浓度为X轴，发光值为Y轴，如图1所述，得到线性方程y＝43.532x-0.0179，R2＝0.9999，说明本实施检测方法得到的测定值与理论值几乎无差异，二者具有较高的一致性。
表1维生素B12标准品稀释后检测结果
为了考察在低浓度样本中检测的准确性，选取3例低浓度样本进行检测，结果如表2所示：
表2低浓度样本检测
| 样本 | 浓度值(ng/ml) | 测定浓度(ng/ml) | 测值偏差 |
| 1 | 0.0242 | 0.0237 | 2.1％ |
| 2 | 0.035 | 0.0339 | 3.2％ |
| 3 | 0.0163 | 0.0159 | 2.5％ |
从上述结果中可以看出，本试剂盒对低浓度样本检测的准确度较好，偏差在4％之内，且可检出浓度为0.0163ng/ml的样本，市场上常见试剂盒检测限为0.03ng/ml，本试剂盒检测限远低于市场上常见试剂盒。
尽管已经示出和描述了本发明的实施例，对于本领域的普通技术人员而言，可以理解在不脱离本发明的原理和精神的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由所附权利要求及其等同物限定。
Claims (9)
1.检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，包括链霉亲和素磁珠混悬液、维生素B12标准品、生物素标记的维生素B12单抗、碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗、化学发光底物、标准品稀释液、抗体稀释液、洗涤液、96孔酶标板。
2.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述链霉亲和素磁珠混悬液为10ml，浓度为0.1mg/ml。
3.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述维生素B12标准品为白色冻干粉，浓度为1μg/ml。
4.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述生物素标记的维生素B12单抗为0.2ml，浓度为1mg/ml。
5.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述碱性磷酸酶标记的维生素B12单抗为0.2ml，浓度为1mg/ml。
6.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述化学发光底物(Lumi-phos 530)为100ml。
7.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述标准品稀释液含1％牛血清白蛋白、0.02％Procline-300的磷酸盐缓冲液(0.01M，pH7.4)，容量为10ml。
8.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述抗体稀释液含1％牛血清白蛋白、1M NaCl、0.02％Procline-300的磷酸盐缓冲液(0.01M，pH7.4)，容量为10ml。
9.如权利要求1所述的检测维生素B12的化学发光试剂盒，其特征在于，所述洗涤液为含0.8gNaCL、0.02gKCL、0.3g Tris、0.05％吐温-20的三羟甲基氨基甲烷洗涤液(pH 7.4)，容量为20ml。
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Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113495158A (zh) * | 2020-03-20 | 2021-10-12 | 郑州达诺生物技术有限公司 | 一种样本前处理剂、一种维生素b12定量检测试剂盒及使用方法 |
| CN119709632A (zh) * | 2024-09-24 | 2025-03-28 | 江南大学 | 一种分泌维生素b12单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103575914A (zh) * | 2012-08-02 | 2014-02-12 | 北京勤邦生物技术有限公司 | 检测维生素b12的酶联免疫试剂盒及其应用 |
| CN106996928A (zh) * | 2016-01-22 | 2017-08-01 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种检测结核感染的磁珠化学发光试剂盒及其应用 |
| CN107918013A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-04-17 | 浙江天科高新技术发展有限公司 | 化学发光酶免测定循环肿瘤细胞中K‑Ras蛋白的方法及试剂盒 |
-
2019
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Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103575914A (zh) * | 2012-08-02 | 2014-02-12 | 北京勤邦生物技术有限公司 | 检测维生素b12的酶联免疫试剂盒及其应用 |
| CN106996928A (zh) * | 2016-01-22 | 2017-08-01 | 上海复星长征医学科学有限公司 | 一种检测结核感染的磁珠化学发光试剂盒及其应用 |
| CN107918013A (zh) * | 2017-09-25 | 2018-04-17 | 浙江天科高新技术发展有限公司 | 化学发光酶免测定循环肿瘤细胞中K‑Ras蛋白的方法及试剂盒 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| AUDREY SASSOLAS ET AL.: "Optical detection systems using immobilized aptamers", 《BIOSENSORS AND BIOELECTRONICS》 * |
| DENNIS J.ORTON ET AL.: "Fasting time and vitamin B12 levels in a community-based population", 《CLINICA CHIMICA ACTA》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN113495158A (zh) * | 2020-03-20 | 2021-10-12 | 郑州达诺生物技术有限公司 | 一种样本前处理剂、一种维生素b12定量检测试剂盒及使用方法 |
| CN119709632A (zh) * | 2024-09-24 | 2025-03-28 | 江南大学 | 一种分泌维生素b12单克隆抗体的杂交瘤细胞株及其应用 |
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