CN118119397A - 用于治疗神经病症的组合物和方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及包含大麻素的组合物。本发明还涉及药物组合物、剂量形式和通过将所述组合物施用于需要其的患者来治疗神经病症的方法。

Description

用于治疗神经病症的组合物和方法

发明领域

本发明涉及包含大麻素的组合物。本发明还涉及药物组合物、剂量形式和通过将所述组合物施用于需要其的患者来治疗神经病症的方法。

背景技术

以下背景技术的讨论仅仅是为了便于理解本发明。该讨论不是承认或认可所提及的任何材料是或曾经是在本申请的优先权日时的公知常识的一部分。

A.神经炎症

神经炎症指在炎性攻击、例如由损伤、感染、暴露于毒素、神经变性疾病或衰老引起的炎性攻击之后触发脑的先天免疫系统的过程。神经炎症在导致多种神经病学疾病和躯体疾病中有牵连，所述神经病学疾病和躯体疾病包括阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化、脑缺血、创伤性脑损伤、类风湿性关节炎、慢性偏头痛、癫痫、自闭症谱系障碍(ASD)、注意缺陷多动障碍(ADHD)、脑性瘫痪及相关亚型、神经性疼痛和抑郁症。

在中枢神经系统(CNS)中，先天免疫应答在生理学和病理学情况中都起着重要作用。CNS疾病，包括创伤性脑损伤、缺血性中风、脑肿瘤以及脑血管和神经变性疾病，触发广泛定义为神经炎症的事件级联，其特征在于小胶质细胞和星形胶质细胞群体的活化。在另一方面，已经证实小胶质细胞和星形胶质细胞活化、T淋巴细胞浸润和炎性细胞因子的过量产生与动物和人组织中的神经元改变相关。因此，神经炎症是当代神经科学中的重要课题。

炎性细胞因子/标记物或促炎细胞因子/标记物是一类由免疫细胞如辅助T细胞和巨噬细胞以及促进神经炎症过程和一般炎症过程的某些其它细胞类型分泌的信号传导分子。这些包括白细胞介素-1(IL-1)、IL-12和IL-18、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、干扰素γ(IFNγ)和粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)。这些炎性细胞因子主要由炎性反应的上调产生并参与炎性反应的上调，并且在介导先天免疫应答中起重要作用。

B.神经病症

“基于神经炎性”的神经病症的实例包括：阿尔茨海默病(阿尔茨海默病是最普遍的慢性进行性神经变性疾病，并且是痴呆的原因)；帕金森症；多发性硬化；肌萎缩性侧索硬化；脑缺血；创伤性脑损伤；类风湿性关节炎；慢性偏头痛；癫痫；自闭症谱系障碍；注意缺陷多动障碍；脑性瘫痪和相关亚型；神经性疼痛；和抑郁症。

C.小胶质细胞活化/神经变性

小胶质细胞是中枢神经系统(CNS)的独特的居留巨噬细胞。它们在CNS发育和成人内稳态期间起重要作用。它们对成人神经发生和神经炎症具有主要贡献(Zhan Y.,Paolicelli R.C.,Sforazzini F.,等人,Deficient neuron-microglia signalingresults in impaired functional brain connectivity and social behavior.NatureNeuroscience.2014,17(3):400–406；Guruswamy R,ElAli A.Complex Roles ofMicroglial Cells in Ischemic Stroke Pathobiology:New Insights and FutureDirections.Int J Mol Sci.2017,18:18)。因此，它们参与神经变性疾病的发病机制和促进衰老。它们在维持和打破血脑屏障中起重要作用。作为先天免疫细胞，它们实质上有助于对抗影响CNS的感染因子的免疫应答(Xiong XY,Liu L,Yang QW.Functions andmechanisms of microglia/macrophages in neuroinflammation and neurogenesisafter stroke.Prog Neurobiol.2016,142:23–44)。它们还在CNS肿瘤的生长中起主要作用。因此，小胶质细胞是连接神经和免疫系统的关键细胞群(Xiong XY,Liu L,YangQW.Functions and mechanisms of microglia/macrophages in neuroinflammation andneurogenesis after stroke.Prog Neurobiol.2016,142:23–44)。

在生理条件下，分支的静息小胶质细胞提供神经保护环境(David S,GreenhalghAD,Kroner A.Macrophage and microglial plasticity in the injured spinalcord.Neuroscience.2015,307:311–18；Bieber K,Autenrieth SE.Insights howmonocytes and dendritic cells contribute and regulate immune defense againstmicrobial pathogens.Immunobiology.2015；220:215–26)。然而，大多数CNS病变以及再生努力包括小胶质细胞的活化与相应的炎性事件(Hoogland IC,Houbolt C,van WesterlooDJ,van Gool WA,van de Beek D.Systemic inflammation and microglial activation:systematic review of animal experiments.J Neuroinflammation.2015；12:114；Ascoli BM,Géa LP,Colombo R,Barbé-Tuana FM,Kapczinski F,Rosa AR.The role ofmacrophage polarization on bipolar disorder:identifying new therapeutictargets.Aust N Z JPsychiatry.2016,50:618–30；Cherry JD,Olschowka JA,O’BanionMK.Neuroinflammation and M2 microglia:the good,the bad,and the inflamed.JNeuroinflammation.2014,11:98)。因此，活化的炎性小胶质细胞具有神经毒性，通过吞噬神经元或释放各种神经毒性分子和因子(包括活性氧簇(ROS)、谷氨酸、Fas-配体、肿瘤坏死因子α(TNFα)等)来杀死神经元(Loane DJ,Kumar A.Microglia in the TBI brain:thegood,the bad,and the dysregulated.Exp Neurol.2016,275:316–27；Nakagawa Y,ChibaK.Diversity and plasticity of microglial cells in psychiatric andneurological disorders.Pharmacol Ther.2015,154:21–35)。

驱动慢性神经炎症的活化的小胶质细胞也显示出对CNS老化(Loane DJ,KumarA.Microglia in the TBI brain:the good,the bad,and the dysregulated.ExpNeurol.2016,275:316–27)、慢性神经性疼痛(Orihuela R,McPherson CA,HarryGJ.Microglial M1/M2polarization and metabolic states.Br J Pharmacol.2016,173:649–65)和精神疾病(Orihuela R,McPherson CA,Harry GJ.Microglial M1/M2polarization and metabolic states.Br JPharmacol.2016,173:649–65)以及神经变性疾病、包括阿尔茨海默病(Nakagawa Y,Chiba K.Diversity and plasticity ofmicroglial cells in psychiatric and neurological disorders.PharmacolTher.2015,154:21–35)、帕金森病(Orihuela R,McPherson CA,Harry GJ.Microglial M1/M2polarization and metabolic states.Br J Pharmacol.2016,173:649–65)、肌萎缩性侧索硬化(ALS)和多发性硬化具有实质性的贡献。衰老与免疫系统的全身性慢性激活和朝向低水平炎性状态的极化平行发生(Ransohoff RM.A polarizing question:do M1 andM2 microglia exist？Nat Neurosci.2016,19:987–91；Tang Y,Le W.Differential Rolesof M1 and M2 Microglia in Neurodegenerative Diseases.Mol Neurobiol.2016,53:1181–94)。

D.大麻的医学应用

大麻(Cannabis sativa L.)具有传统医学用途。医用大麻由于其抗炎、抗氧化和抗坏死保护作用以及在人类中显示出有利的安全性和耐受性特征而引起了显著的兴趣，使其在多种治疗途径中成为有希望的候选物。然而，由于对中枢神经系统的不良反应以及滥用和成瘾的可能性，临床应用受到限制。该植物渗出一种含有大麻素混合物的树脂，所述大麻素混合物具有两种主要成分Δ9-四氢大麻酚(THC)和大麻二酚(CBD)。CBD的结构在20世纪60年代有记载，其由于没有精神活性而受到关注。由于其在人类中的优异耐受性、没有精神活性作用和低滥用可能性，其似乎是临床试验的理想选择。

E.大麻素

除了其良好的安全性和没有精神活性作用之外，CBD还表现出广泛的治疗作用。一些体外和体内实验研究证明了抗炎和免疫调节、抗精神病、镇痛和抗癫痫作用。由于这些原因，CBD是目前研究最多的大麻素之一。与Δ9-THC相比，CBD显示出对大麻素受体1型(CB₁)和2型(CB₂)的低亲和力。CB₁受体主要存在于中枢和外周神经元的末端，CB₂受体主要存在于免疫细胞中。数项体外研究已经表明，低浓度的CBD具有弱的CB₁和CB₂拮抗效应。

研究表明CBD表现为CB₁的负变构调节剂，意味着CBD不直接激活受体，而是改变CBD1的正构配体Δ9-THC和2-花生四烯酰甘油(2-AG)的效力和功效。这些初步结果需要进一步验证，但是可以解释在体外、体内和人临床研究中报道的CBD拮抗Δ9-THC的一些作用的能力。还已经提出，CBD作为CB₁的变构调节剂的作用可以解释其在治疗中枢和外周神经系统病症中的治疗作用。CBD还显示出抑制嗜中性粒细胞趋化性和增殖。其还可以诱导花生四烯酸释放和减少前列腺素E2(PGE2)和一氧化氮(NO)产生。

然而，并非CBD的所有生理作用都是由大麻素受体介导的。CBD在内源性大麻素系统之外具有许多靶标，其独立于大麻素受体的作用是最近药理学研究的主题。一些作用，例如抗炎和免疫抑制作用，由多于一种靶标介导。所述抗炎、免疫抑制作用可能通过激活腺苷受体A_1A和A_2A和士的宁敏感性α1和α1β甘氨酸受体以及抑制平衡性核苷转运蛋白介导。此外，CBD的活性可以从相同的靶标引发不同的生理效应。例如，相同的甘氨酸受体同时参与抗炎和抑制神经性疼痛。对血清素5HT1A受体的作用可能产生抗焦虑、抗惊恐和抗抑郁作用，因而研究已经显示了对CBD的分子药理学的深入综述。尽管在CBD的分子药理学方面取得了进展，但是CBD的许多药理学机制仍然未被表征。

在动物中公开的研究证实，大麻二酚的口服生物利用度已经显示为约13-19％。血浆和脑浓度在动物中是剂量依赖性的，生物利用度随各种油制剂而增加。大麻素经历广泛的首过代谢，其代谢物主要通过肾脏排泄。

大麻素被肝脏广泛代谢，其中其被P450酶、主要是CYP3A(2/4)和CYP2C(8/9/19)同工酶家族羟基化为7-OH-CBD。然后，该代谢物在肝脏中经历显著的进一步代谢，所得代谢物在粪便中排泄和在小得多的程度上在尿液中排泄。

已知大麻二酚作用于内源性大麻素系统的大麻素(CB)受体(CB1和CB2)，所述受体存在于身体的多个区域，包括外周和中枢神经系统，包括脑。内源性大麻素系统调节身体的多种生理响应，包括疼痛、记忆、食欲和情绪。更特别地，在脑和脊髓的疼痛途径内可以发现CB1受体，在那里它们可以影响大麻二酚诱导的镇痛和抗焦虑，并且CB2受体对免疫细胞具有作用，其中它们可以影响大麻二酚诱导的抗炎过程。

已经证明大麻二酚作为大麻素CB1受体的负变构调节剂，大麻素CB1受体是体内最丰富的G蛋白偶联受体(GPCR)。受体的变构调节是通过在来自激动剂或拮抗剂结合位点的功能不同位点上调节受体活性实现的。大麻二酚的负变构调节作用在治疗上是重要的，因为直接激动剂受到其拟精神病作用的限制，而直接拮抗剂受到其抑制作用的限制。

在CBD的监管批准方面已经有一些发展。是一种植物来源的药物级大麻二酚(CBD)药物，于2018年在美国获得FDA批准使用。含有100mg大麻二酚/毫升(mL)溶液，每天口服两次。澳大利亚治疗用品管理局(TGA)于2020年9月批准了Epidiolex用于治疗两岁或以上患者的Lennox-Gastaut综合征(LGS)或Dravet综合征相关的发作。

在本领域需要改进的大麻素组合物和神经病症的有效治疗。本发明的一个目标是克服现有技术预示的一个或多个问题。

发明简述

在第一方面，本发明广泛地在于包含以下大麻素的组合物：约50w/w％的CBDA；并且其中所有其它大麻素共计约15w/w％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物包含以下大麻素：

w/w％

CBDA 40-60％；

CBD 1-5％；

CBG 1-10％；

CBDP 1-5％；

CBDB 1-5％；

CBGA 1-10％；

CBN 1-3％；和

THC<1％。

在另一个优选的实施方案中，所述组合物包含以下大麻素：

w/w％

CBDA 50％；

CBD 2％；

CBG 5％；

CBDP 2％；

CBDB 2％；

CBGA 5％；

CBN 1-3％；和

THC<0.3％。

在另一个优选的实施方案中，所述组合物包含以下大麻素：

w/w％

CBDA 49％；

CBD 2％；

CBG 5％；

CBDP 2％；

CBDB 2％；

CBGA 5％；

CBN 3％；和

THC<0.3％。

在另一个优选的实施方案中，所述组合物包含以下大麻素：

w/w％

CBDA 45％；

CBD 1％；

CBG 4％；

CBDP 1％；

CBDB 2％；

CBGA 4％；

CBN 2％；和

THC<0.2％。

在另一个优选的实施方案中，所述组合物包含以下大麻素：

w/w％

CBDA 45％；

CBD 1％；

CBG 4％；

CBDP 1％；

CBDB 2％；

CBGA 4％；

CBN 1％；和

THC<0.2％。

在一个优选的实施方案中，所述组合物包含选自任何一个上述实施方案的量的大麻素。

在第二方面，本发明是药物组合物，其包含本发明第一方面的组合物以及药学上可接受的载体。

在第三方面，本发明是包含本发明第一方面的组合物的剂量形式。

在第四方面，本发明是治疗病症的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的本发明的剂量形式。

在第五方面，本发明是本发明的组合物在制备用于治疗病症的药物中的用途。

在第六方面，本发明是从大麻植物材料中提取本发明的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

1)将大麻植物材料研磨至足够的研磨尺寸；

2)使由步骤a)产生的研磨物与油接触；

3)将研磨物和油混合足够的时间以形成混合物；

4)挤压该混合物以回收油；

5)离心所述油以进一步精炼所述油；和

6)将油提取物收集在适宜的容器/钢器皿中。

在第七方面，本发明是从大麻植物材料中提取本发明的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

1)将大麻植物材料研磨至足够的研磨尺寸；

2)使由步骤a)产生的研磨物与醇接触；

3)将所述研磨物和醇混合足够的时间以形成混合物；

4)超声处理所述混合物；

5)离心所述混合物；和

6)将醇提取物收集在适宜的容器/钢器皿中。

在第八方面，本发明是由本发明的方法生产的产品。

在第九方面，本发明是药盒，其包含本发明的剂量形式及其使用说明书。

在第九方面，本发明包括如下实施例所述的组合物、方法和工艺。

本发明的其它特征在下述多个非限制性实施方案的说明中被更全面地描述。包括该说明仅为了示例说明本发明的目的。不应当将其理解为对如上文所阐述的本发明的广泛概述、公开内容或描述的限制。

附图简述

下面是每幅图和附图的简要说明。

图1是大麻素标准混合物(各10ppm)的UPLC质谱色谱图；a)正离子化模式；和b)负离子化模式。

图2是来自参比溶液的CBD和CBG的源内片段化。

图3显示了NTI164的质谱色谱图。

图4显示了NTI164的CBD变体的四重质谱色谱图以鉴定CBDB和CBDP。

图5表示NTI164的炎症诱导的iNOS表达的正常化。该图显示，NTI164使炎症诱导的iNOS表达正常化。

图6表示使用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基-)-2,5-二苯基-2H-四唑鎓溴化物]定量的神经元生存力。该图显示，在基础条件下(短期暴露)，NTI164增加神经元的数量。

图7证实，即使不存在任何谷氨酸诱导的损伤，NTI164也刺激未成熟神经元成熟为健康细胞。该图显示了单独的NTI164对神经元的影响(无谷氨酸)。

图8证实CBD在该范例中是有毒的，而NTI164是无毒的，并且对细胞数量和细胞生存力具有积极作用。该图显示，在兴奋毒性细胞损伤范例中，NTI164不增加细胞死亡。

图9显示了在评估精氨酸酶1表达的炎性条件下的小胶质细胞响应。该图显示了NTI164使炎症诱导的(受损细胞)Arg1表达正常化。

图10是概述精氨酸代谢及其对抗炎和促炎信号的总体平衡的作用的图。(参考文献：Review. S.Clemente,Aren van Waarde,Inês F.Antunes,Alexander 和Philip H.Elsinga.Arginase as a Potential Biomarker of Disease Progression:AMolecular Imaging Perspective.(2020))。

图11显示了实施例6的积极使用NTI164的患者的分布。

图12显示了实施例6的在基线时按照CGI-S疾病严重程度的积极患者的疾病严重程度分布。

图13显示了实施例6的积极患者的最大耐受剂量。

图14显示了在NTI164治疗28天时CGI-S总体改善。

图15显示了在28天治疗之后疾病的CGI-S严重程度。

图16显示了在28天治疗之后疾病的CGI-S严重程度。

图17显示了在28天治疗之后CGI-S治疗效果。

图18显示了在实施例7中积极使用NTI164的患者的年龄分布。

图19显示了实施例7的在基线时按照CGI-S疾病严重程度的积极患者的疾病严重程度分布。CGI-S指临床总体印象量表-疾病严重程度。

图20显示了在NTI164治疗20周时CGI-S总体改善。

图21显示了随时间推移直到并包括NTI164治疗20周的CGI-S总体改善。

图22显示了在治疗20周时疾病的CGI-S严重程度。

图23显示了随时间推移直到并包括治疗20周的疾病CGI-S严重程度。

图24显示了在治疗20周时疾病的CGI-S严重程度。

图25显示了随时间推移直到并包括治疗20周时的CGI-S治疗效果。

图26显示了在治疗20周时的CGI-S治疗效果。

发明详述

为了方便起见，以下部分概括地列出了本文使用的术语的各种含义。在该讨论之后，讨论了关于本发明的组合物、药物用途和方法的一般方面，然后是证明本发明的各实施方案的性质以及可以如何实施它们的具体实施例。

本领域技术人员将理解，本文描述的本发明可以进行具体描述那些之外的变化和修饰。本发明包括所有这些变化和修饰。本发明还包括说明书中单独或共同提及或指出的所有步骤、特征、制剂和化合物以及所述步骤或特征的任意和所有组合或任意两个或更多个所述步骤或特征。

在本文中引用的每篇文献、参考文献、专利申请或专利均明确地将其全部内容通过援引并入本文，这意味着读者应将其作为本文的一部分阅读和考虑。本文中引用的文件、参考文献、专利申请或专利在本文中未重复仅仅是为了简明的原因。然而，所引用的材料或包含在该材料中的信息都不应当被理解为公知常识。

对本文或通过援引并入本文的任意文献中提及的任意产品而言的制造商说明书、描述、产品描述和产品页通过援引并入本文，并且可用于本发明的实施。

本发明的范围不受本文所述的任何具体实施方案的限制。这些实施方案仅用于举例说明的目的。功能等同的产品、制剂和方法清楚地在如本文所述的本发明的范围内。

1.定义

以下提供了说明书、实施例和所附权利要求书中使用的一些术语和短语的含义。如果本领域中术语的使用与本文提供的其定义之间存在明显的差异，则以说明书内提供的定义为准。

除了在操作实施例中或其中另有说明之外，本文使用的表示成分的量或反应条件的所有数字应当理解为在所有情况下由术语“约”修饰。当与百分比结合使用时，术语“约”可以指±1％。

本文所述的发明可以包括一个或多个数值范围(例如尺寸、浓度等)。值的范围将被理解为包括该范围内的所有值，包括定义该范围的值，以及与该范围相邻的值，其产生与紧邻限定该范围边界的值的值相同或基本相同的结果。例如，本领域技术人员将理解，范围的上限或下限的10％变化可以是完全适当的并且被本发明涵盖。更特别地，范围的上限或下限的变化将为5％或如本领域中通常认识到的，以较大者为准。

在本申请中，除非另有特别说明，否则单数的使用也包括复数。在本申请中，除非另有说明，否则使用“或”指“和/或”。此外，使用术语“包括”以及其它形式如“包括(includes和included)”不是限制性的。此外，除非另有特别说明，否则术语如“元件”或“组分”涵盖包含一个单元的元件和组分以及包含多于一个亚单元的元件和组分两者。此外，使用术语“部分”可以包括部分的一部分或整个部分。

在说明书通篇，除非上下文另有要求，否则词语“包含”或其变体如“包含(comprises，comprising)”应当理解为暗指包括所述整数或整数集合，但不排除任何其它整数或整数集合。

如本文使用的关于治疗方法和特别是药物剂量的“治疗有效量”应当指在需要该治疗的显著量对象中施用药物时提供特定药理学响应的剂量。需要强调的是，在特定情况下施用于特定对象的“治疗有效量”在治疗本文所述的疾病中并不总是有效，即使这样的剂量被本领域技术人员认为是“治疗有效量”。还应当理解，在特定情况下，药物剂量以口服剂量测量，或参考血液中测量的药物水平测量。对这种用途有效的量将取决于：期望的治疗效果；生物活性材料的效力；期望的治疗持续时间；所治疗疾病的阶段和严重程度；患者的体重和一般健康状态；以及处方医师的判断。需要滴定治疗剂量以优化安全性和功效。本领域技术人员将理解，用于治疗的合适剂量水平因此将部分地根据使用活性剂的适应症、施用途径以及患者的体型(体重、体表或器官大小)和状况(年龄和一般健康)而变化。因此，临床医生可以滴定剂量并修改施用途径以获得最佳治疗效果。取决于上述因素，典型的剂量可以在约0.1μg/kg至高达约100mg/kg或更多的范围。在其它实施方案中，剂量可以在0.1μg/kg至约100mg/kg的范围；或1μg/kg直至约100mg/kg；或5μg/kg直至约100mg/kg。

给药频率将取决于活性剂和所用制剂的药代动力学参数。通常，临床医生将施用组合物直至达到实现预期效果的剂量。因此，组合物可以作为单剂量施用，或作为随时间推移的两个或更多个剂量(其可以含有或可以不含有相同量的期望分子)施用，或作为经由植入装置或导管的连续输注施用。适当剂量的进一步精化由本领域普通技术人员常规进行，并且在他们常规执行的任务范围内。可以通过使用适当的剂量-响应数据来确定适当的剂量。

如本文使用的“药学上可接受的载体”包括生理上相容的任何和所有溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。

如本文使用的术语“对象”通常包括哺乳动物，例如：人；农场动物，如绵羊、山羊、猪、牛、马、美洲驼；伴侣动物，如狗和猫；灵长类动物；鸟类，如鸡、鹅和鸭；鱼；和爬行动物。对象优选是人。

本文使用的所选术语的其它定义可以在发明的详细内容中找到并适用于全文。除非另有定义，否则本文使用的所有其它科学和技术术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的含义相同的含义。

现在将参考以下非限制性说明和实(施)例讨论本发明的特征。

2.实施方案

组合物

本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

约50w/w％的CBDA；和

其中所有其它大麻素总计约15w/w％。

在一个优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

约50％的CBDA；和

约2％的CBD。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

约50％的CBDA；和

约5％的CBG。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

约50％的CBDA；和

约2％的CBDP。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

约50％的CBDA；和

约2％的CBDB。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

约50％的CBDA；和

约5％的CBGA。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含大麻素的组合物，其中CBDA与所有其它大麻素的比例在4:1和2:1之间。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含大麻素的组合物，其中CBDA与所有其它大麻素的比例为约3:1。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含大麻素的组合物，其中CBDA与所有其它大麻素的比例为约3.21:1。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 40-60％；

CBD 1-5％；

CBG 1-10％；

CBDP 1-5％；

CBDB 1-5％；

CBGA 1-10％；

CBN 1-3％；和

THC<1％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 45-55％；

CBD 1-3％；

CBG 3-7％；

CBDP 1-3％；

CBDB 1-3％；

CBGA 3-7％；

CBN 1-3％；和

THC<0.5％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 50％；

CBD 2％；

CBG 5％；

CBDP 2％；

CBDB 2％；

CBGA 5％；

CBN 3％；和

THC<0.3％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 49％；

CBD 2％；

CBG 5％；

CBDP 2％；

CBDB 2％；

CBGA 5％；

CBN 2％；和

THC<0.3％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 48.78％；

CBD 1.89％；

CBG 4.88％；

CBDP 1.68％；

CBDB 1.76％；

CBGA 4.76％；

CBN 1％；和

THC<0.18％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 45％；

CBD 1％；

CBG 4％；

CBDP 1％；

CBDB 2％；

CBGA 4％；

CBN 2％；和

THC<0.2％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 45.28％；

CBD 1.39％；

CBG 3.88％；

CBDP 1.18％；

CBDB 1.56％；

CBGA 3.76％；

CBN 1％；和

THC<0.18％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 62.78％；

CBD 5.80％；

CBG 0.44％；

CBGA 1.26％；

CBN 1.98％；和

THC<0.70％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了包含以下大麻素的组合物：

w/w％

CBDA 60.29％；

CBD 5.34％；

CBG 0.39％；

CBGA 1.14％；

CBN 0.85％；和

THC<0.65％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了其中大麻素以选自以下的量存在的组合物：

组合物1，包含

w/w％

CBDA 50％；

CBD 2％；

CBG 5％；

CBDP 2％；

CBDB 2％；

CBGA 5％；

CBN 3％；和

THC<0.3％；

和

组合物2，包含

w/w％

CBDA 45％；

CBD 1％；

CBG 4％；

CBDP 1％；

CBDB 2％；

CBGA 4％；

CBN 2％；和

THC<0.2％。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了一种组合物，其中大麻素的量通过选自以下的方法测定：高效色谱(HPLC)、质子核磁共振光谱(H¹ NMR)和质谱。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了来源于大麻植物材料的组合物。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了一种组合物，其中所述列出的大麻素是合成的。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了一种组合物，其中所述列出的大麻素是植物来源的和合成的大麻素的混合物。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了一种组合物，其进一步包含选自以下的油：合成油；基于植物的油；矿物油；卡诺拉油；和橄榄油。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物包含小于5％w/w的萜。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物包含小于2％w/w的有机植物材料。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物包含小于2％w/w的植物酚。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物包含选自类黄酮、蛋白质、甾醇和酯的组分。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物是基本上纯的。优选地，纯度通过选自以下的方法测定：高效色谱(HPLC)、质子核磁共振光谱(H¹NMR)和质谱。优选地，纯度选自：大于75％的纯度；大于80％的纯度；大于85％的纯度；大于90％的纯度；大于95％的纯度；大于96％的纯度；大于97％的纯度；大于98％的纯度；大于99％的纯度；大于99.5％的纯度；大于99.6％的纯度；大于99.7％的纯度；大于99.8％的纯度；大于99.9％的纯度；大于99.95％的纯度；大于99.96％的纯度；大于99.97％的纯度；大于99.98％的纯度和大于99.99％的纯度。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物包含小于0.1wt％的有机杂质，如通过选自以下的方法测量：高效色谱(HPLC)、质子核磁共振光谱(H¹ HMR)；和质谱。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物基本上不含大气氧。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物是无菌的。在一个供选的优选实施方案中，所述组合物不是无菌的。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了一种组合物，其中所述组合物的大麻素组分选自：浓度在1至500mg/ml之间；在10至100mg/ml之间；浓度为50mg/ml。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了一种组合物，其中所述组合物的CBDA组分选自：浓度在1至500mg/ml之间；在10至100mg/ml之间；浓度为50mg/ml。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物是液体。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物是油。

在进一步优选的实施方案中，当在选自以下的时间点测量时，所述组合物显示没有大麻素降解或脱羧：在1天；在2天；在7天；在14天；在28天；在5周；在6周；和在32周。

在进一步优选的实施方案中，当在选自以下的时间点测量时，所述组合物显示出大麻素稳定：在1天；在2天；在7天；在14天；在28天；在5周；在6周；和在32周。

在进一步优选的实施方案中，当以递送120mg/ml CBDA的浓度递送时，所述组合物没有显示出诱变性、致癌性或基因毒性。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物适于抑制以下任何一种生物标志物的活性：COX-2；iNOS；TNF-α；IL-2；IL-12和GS-MCF。

优选地，所述组合物适于抑制神经炎症。更优选地，所述组合物适于治疗神经病症。

在进一步优选的实施方案中，本发明提供了具有对应于图3的UPLC质谱图的组合物，采用实施例1中所述的条件测定。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物包含另外的活性成分。

优选地，所述另外的活性成分选自：多肽；抗体；NSAID；神经调节剂；和神经递质。

在进一步优选的实施方案中，大麻素组分和所述另外的活性成分的比例选自：1单位w/w的大麻素：1单位w/w/的所述另外的活性成分；2:1；3:1；4:1；5:1；在10,000:1和1:1之间；在1,000:1和1:1之间；在500:1和1:1之间；在100:1和1:1之间；在50:1和1:1之间；以及在10:1和1:1之间。

在进一步优选的实施方案中，所述另外的活性成分和大麻素的比例选自：1单位w/w的所述另外的活性成分和1单位w/w/的大麻素；2:1；3:1；4:1；5:1；在10,000:1和1:1之间；在1,000:1和1:1之间；在500:1和1:1之间；在100:1和1:1之间；在50:1和1:1之间；以及在10:1和1:1之间。

在进一步优选的实施方案中，CBDA和所述另外的活性成分的比例选自：1单位w/w的CBDA:1单位w/w/的所述另外的活性成分；2:1；3:1；4:1；5:1；在10,000:1和1:1之间；在1,000:1和1:1之间；在500:1和1:1之间；在100:1和1:1之间；在50:1和1:1之间；以及在10:1和1:1之间。

在进一步优选的实施方案中，所述另外的活性成分和CBDA的比例选自：1单位w/w的所述另外的活性成分和1单位w/w/的CBDA；2:1；3:1；4:1；5:1；在10,000:1和1:1之间；在1,000:1和1:1之间；在500:1和1:1之间；在100:1和1:1之间；在50:1和1:1之间；以及在10:1和1:1之间。

在一个优选的实施方案中，神经调节剂是致幻物质。

优选地，神经调节剂选自：3,4-亚甲二氧基甲基苯丙胺；麦角酰二乙胺；和裸盖菇素。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物表现出协同生物活性。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物表现出的生物活性水平大于以下的总和：(1)当在不存在另外的活性成分的情况下递送时大麻素组分的生物活性；和(2)当在不存在大麻素组分的情况下递送时另外的活性成分的生物活性。

在进一步优选的实施方案中，生物活性选自：抑制炎症；抑制神经炎症；治疗神经病症；抑制COX-2的活性；抑制iNOS的活性；抑制TNF-α的活性；抑制IL-2的活性；抑制IL-12的活性和抑制GS-MCF的活性。

在进一步优选的实施方案中，所述组合物选自：治疗组合物；药物组合物；化妆品组合物；和兽用组合物。

药物组合物

本发明还提供了一种药物组合物，其包含本发明的组合物和药学上可接受的载体。

治疗组合物在本发明的范围内。优选地，组合物与药学上可接受的载体或稀释剂组合以产生药物组合物(其可以用于人或动物用途)。适宜的载体和稀释剂包括等渗盐水溶液，例如磷酸盐缓冲盐水。如本文使用的“药学上可接受的载体”包括任何和所有的溶剂、分散介质、包衣、抗细菌剂和抗真菌剂、等渗剂和吸收延迟剂等。这类介质和试剂用于药物活性物质的用途是本领域熟知的。除非任何常规介质或试剂与活性成分不相容，否则其在治疗组合物中的用途被考虑在内。补充的活性成分也可以掺入组合物中。参见例如Remington's Pharmaceutical Sciences,第19版(1995,Mack Publishing Co.,Easton,Pa.)将其通过引用并入本文。

药物组合物可以含有用于改变、维持或保存例如组合物的pH、渗透压、粘度、澄清度、颜色、等渗性、气味、无菌性、稳定性、溶解或释放速率、吸附或渗透的制剂材料。适宜的制剂材料包括但不限于氨基酸(例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、精氨酸或赖氨酸)；抗微生物剂；抗氧化剂(例如抗坏血酸、亚硫酸钠或亚硫酸氢钠、维生素E、维生素E磷酸盐-脂溶性维生素、纳米乳液)；缓冲剂(例如硼酸盐、碳酸氢盐、Tris-HCl、柠檬酸盐、磷酸盐或其它有机酸)；填料(例如甘露醇或甘氨酸)；螯合剂(例如乙二胺四乙酸(EDTA))；配位剂(例如咖啡因、聚乙烯吡咯烷酮、β-环糊精或羟丙基-β-环糊精)、填充剂；单糖、二糖；和其它碳水化合物(例如葡萄糖、甘露糖或糊精)；蛋白质(例如血清白蛋白、明胶或免疫球蛋白)；着色剂、调味剂(天然和天然衍生产品)和稀释剂；乳化剂；亲水性聚合物(例如聚乙烯吡咯烷酮)；低分子量多肽；成盐抗衡离子(例如钠)；防腐剂(例如苯扎氯铵、苯甲酸、水杨酸、硫柳汞、苯乙醇、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、氯己定、山梨酸或过氧化氢)；溶剂(例如甘油、丙二醇或聚乙二醇)；糖醇(包括人造甜味剂，例如甘露醇或山梨糖醇)；助悬剂；表面活性剂或润湿剂(例如普朗尼克、PEG、山梨坦酯、聚山梨酯如聚山梨酯20、聚山梨酯80、triton、氨丁三醇、卵磷脂、胆固醇、泰洛沙泊)；稳定性增强剂(蔗糖或山梨醇)；张力增强剂(例如碱金属卤化物，优选氯化钠或氯化钾)、递送载体、稀释剂、赋形剂和/或药物佐剂。

最佳药物组合物将由本领域技术人员根据例如预期的施用途径、递送形式和期望的剂量来确定。这类组合物可影响本发明组合物的物理状态、稳定性、体内释放速率和体内清除速率。药物组合物的优选形式取决于预期的施用模式和治疗应用。

药物组合物中的主要溶媒或载体本质上是水性和非水性的。例如，适宜的溶媒或载体可以是注射用水、生理盐水溶液，可能补充有其它物质。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是另外的示例性溶媒。其它示例性的药物组合物包含约pH 7.0-8.5的tris缓冲液或约pH4.0-5.5的乙酸盐缓冲液，其还可以包含山梨醇或其适宜的替代物。在本发明的一个实施方案中，可以通过将具有期望纯度的所选组合物与水溶液形式的任选配制剂混合来制备药物组合物用于储存。

制剂组分以施用部位可接受的浓度存在。例如，缓冲液用于将组合物保持在生理pH或略微较低的pH，通常在约5至约8的pH范围内。

另外的药物组合物，包括缓释或控释制剂形式的本发明的制剂，对于本领域技术人员而言将是显而易见的。用于配制各种其它持续或控制递送手段的技术，例如脂质体载体、可生物侵蚀的微粒或多孔珠粒和贮库注射剂，也是本领域技术人员已知的。持续-持续释放制剂的其它实例包括成形制品形式的半渗透性聚合物基质，例如膜或微胶囊。持续释放基质可包括聚酯、水凝胶、聚交酯、L-谷氨酸和γ-乙基-L-谷氨酸酯的共聚物、乙烯乙酸乙烯酯或聚-D(-)-3-羟基丁酸。持续释放组合物还可以包括脂质体，其可以通过本领域已知的多种方法中的任一种制备。

用于体内施用的药物组合物通常必须是无菌的。这可以通过无菌过滤膜过滤来实现。此外，通常将组合物置于具有无菌入口的容器中。一旦配制了药物组合物，就可以将其作为溶液储存在无菌小瓶中。

在另一个优选的实施方案中，所述组合物保持其有效生物活性达到选自以下的时间段：大于24小时；大于36小时；和大于48小时。优选地，组合物稳定达到选自以下的时间段：6个月、1年和2年。在一个实例中，组合物在选自-4℃、4℃、18℃和25℃的温度下是稳定的。

剂量形式

剂量形式在本发明的范围内。在一个优选的实施方案中，本发明提供了包含如本发明第一方面描述的组合物的剂量形式。

优选地，所述剂量形式的组合物的大麻素组分选自：在1mg和1000mg之间；在1mg和500mg之间；在1和100mg之间；小于400mg；小于300mg；小于200mg和小于100mg。更优选地，所述组合物的大麻素组分选自：600mg；400mg；300mg；200mg；100mg；50mg；10mg；5mg；2mg；1mg。优选地，所述剂量形式的组合物的CBDA组分选自：在1mg和1000mg之间；在1mg和500mg之间；在1和100mg之间；小于400mg；小于300mg；小于200mg和小于100mg。更优选地，所述组合物的CBDA组分选自：600mg；400mg；300mg；200mg；100mg；50mg；10mg；5mg；2mg；1mg。

在一个进一步的实施方案中，所述剂量形式选自以下形式：溶液、片剂、胶囊、糯米纸囊剂(wafer)、干粉小袋和小瓶/冷冻干燥。

优选地，剂量形式储存在密封且无菌的容器中。

治疗方法

本发明还提供了治疗疾病的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的本发明的剂量形式。

在进一步优选的实施方案中，所述剂量形式以至少部分地治疗所述疾病的量施用。

在进一步优选的实施方案中，治疗有效量是选自以下的大麻素的量：在1至100mg/kg/天之间；在2和50mg/kg/天之间；在5和40mg/kg/天之间；在10和30mg/kg/天之间；在20和25mg/kg/天之间；和20mg/kg/天。优选地，治疗有效量是选自以下的大麻素的量：10mg/天；15mg/天；40mg/天；400mg/天；600mg/天；800mg/天；1280mg/天；1500mg/天。

在进一步优选的实施方案中，治疗有效量是选自以下的CBDA的量：在1至100mg/kg/天之间；在2和50mg/kg/天之间；在5和40mg/kg/天之间；在10和30mg/kg/天之间；在20和25mg/kg/天之间；和20mg/kg/天。优选地，治疗有效量是选自以下的CBDA的量：10mg/天；15mg/天；40mg/天；400mg/天；600mg/天；800mg/天；1280mg/天；1500mg/天。

在进一步优选的实施方案中，Tmax出现在1至4小时之间。

在进一步优选的实施方案中，T1/2出现在1.1至2.4小时之间。

在进一步优选的实施方案中，将治疗有效量施用于对象以治疗疾病。

优选地，利用选自以下的给药方案将治疗有效量施用于对象：每小时两次；每小时；每六小时一次；每8小时一次；每12小时一次；每天一次；每周两次；每周一次；每2周一次；每6周一次；每月一次；每2个月；每3个月；每6个月一次；和每年一次。

优选地，使用选自以下的方法将治疗有效量施用于对象：口服、静脉内、肌内、鞘内、皮下、舌下、口腔、直肠、阴道、局部、肠胃外、粘膜、通过眼途径、通过耳途径、经鼻、通过吸入、经皮、透皮和全身。

在进一步优选的实施方案中，所述疾病由炎症引起。

在进一步优选的实施方案中，所述疾病由神经炎症引起。

优选地，所述病症是神经病症。更优选地，所述神经病症选自：阿尔茨海默病；帕金森病；多发性硬化；肌萎缩性侧索硬化；脑缺血；创伤性脑损伤；类风湿性关节炎；慢性偏头痛；癫痫；自闭症谱系障碍；注意缺陷多动障碍；脑性瘫痪和相关亚型；神经性疼痛；和抑郁症。

在进一步优选的实施方案中，ASD是ASD II/III级，并且在CGI严重程度量表上是“轻度患病”、“中度患病”、“显著患病”或“重度患病”。

在进一步优选的实施方案中，治疗减轻了神经炎症。优选地，治疗抑制了以下生物标志物中的任一种的活性：COX-2；iNOS；TNF-α；IL-2；IL-12和GS-MCF。

可以用本发明治疗的对象将包括人以及其它哺乳动物和动物。

在进一步优选的实施方案中，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的本发明的剂量形式以及另外的活性成分。在一个优选的形式中，使用选自以下的给药方案施用另外的活性成分：在施用本发明的剂量形式的同时；在施用本发明的剂量形式之前；在施用本发明的剂量形式之后；与施用本发明的剂量形式同时；在施用本发明的剂量形式之前依次施用；和在施用本发明的剂量形式之后依次施用。

施用的治疗组合物的效果可以通过标准诊断方法监测。

组合物在制备药物中的用途

用途在本发明的范围内。本发明还提供了本发明第一方面的组合物在制备用于治疗病症的药物中的用途。

在一个优选的实施方案中，本发明是包含以下大麻素的组合物在制备用于治疗病症的药物中的用途：

w/w％

CBDA 40-60％；

CBD 1-5％；

CBG 1-10％；

CBDP 1-5％；

CBDB 1-5％；

CBGA 1-10％；

CBN 1-3％

和

THC<1％。

在进一步优选的实施方案中，在制备治疗病症的药物中，组合物的大麻素以选自以下的量存在：

组合物1，包含

w/w％

CBDA 50％；

CBD 2％；

CBG 5％；

CBDP 2％；

CBDB 2％；

CBGA 5％；

CBN 3％；和

THC<0.3％；

和

组合物2，包含

w/w％

CBDA 45％；

CBD 1％；

CBG 4％；

CBDP 1％；

CBDB 2％；

CBGA 4％；

CBN 2％和

THC<0.2％。

在一个进一步的实施方案中，所述组合物进一步包含选自以下的油：合成油；基于植物的油；矿物油；卡诺拉油；和橄榄油。

在一个进一步的实施方案中，所述组合物包含小于5％w/w的萜。

在一个进一步的实施方案中，所述组合物包含小于2％w/w的有机植物材料。

在一个进一步的实施方案中，所述组合物包含小于2％w/w的植物酚。

在一个进一步的实施方案中，所述组合物的大麻素组分选自：浓度在1至500mg/ml之间；在10至100mg/ml之间；浓度为50mg/ml。

在一个进一步的实施方案中，所述组合物的CBDA组分选自：浓度在1至500mg/ml之间；在10至100mg/ml之间；浓度为50mg/ml。

在一个进一步的实施方案中，所述组合物具有对应于图3的UPLC质谱图，采用实施例1中所述的条件测定。

方法

本发明还提供了从大麻植物材料中提取本发明的第一方面的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

1)将大麻植物材料研磨至足够的研磨尺寸；

2)使由步骤a)产生的研磨物与油接触；

3)将研磨物和油混合足够的时间以形成混合物；

4)挤压该混合物以回收油；

5)离心所述油以进一步精炼所述油；和

6)将油提取物收集在适宜的容器/钢器皿中。

在进一步优选的实施方案中，大麻植物材料来源于大麻(Cannabis sativa L.)。

在进一步优选的实施方案中，足够的研磨尺寸选自：在0.1mm和3mm之间；在1mm和2mm之间；以及在0.5mm和2.5mm之间。

在进一步优选的实施方案中，足够的时间选自：在30分钟至2小时之间；在45分钟至1.5小时之间；1小时。

在进一步优选的实施方案中，步骤(2)中研磨材料与油的比例选自：400mg的研磨物：1ml的油；300mg的研磨物：1ml的油；200mg的研磨物：1ml的油；100mg的研磨物：1ml的油；和333mg的研磨物：1ml的油。

优选地，油是橄榄油。

本发明还提供了从大麻植物材料中提取本发明的第一方面的组合物的供选方法，所述方法包括以下步骤：

1)将大麻植物材料研磨至足够的研磨尺寸；

2)使由步骤a)产生的研磨物与醇接触；

3)将所述研磨物和醇混合足够的时间以形成混合物；

4)超声处理所述混合物；

5)离心所述混合物；和

6)将醇提取物收集在适宜的容器中。

在进一步优选的实施方案中，醇是乙醇。

在进一步优选的实施方案中，醇选自：乙醇、异丙醇、甲醇、苯甲醇、1,4-丁二醇、1,2,4-丁三醇、丁醇、1-丁醇、2-丁醇和叔丁醇。

在进一步优选的实施方案中，足够的研磨尺寸选自：在0.1mm至3mm之间；在1mm至2mm之间；和在0.5mm至2.5mm之间。在进一步优选的实施方案中，足够的时间选自：在30分钟至2小时之间；在45分钟至1.5小时之间；1小时。

在进一步优选的实施方案中，步骤(2)中研磨材料与醇的比例选自：400mg的研磨物：1ml的醇；300mg的研磨物：1ml的醇；200mg的研磨物：1ml的醇；100mg的研磨物：1ml的醇；100mg的研磨物：4ml的醇；100mg的研磨物：3ml的醇；100mg的研磨物：2ml的醇；和333mg的研磨物：1ml的醇。

方法的产品

本发明还提供了由上述方法生产的产品。

药盒

本发明还提供了包含本发明的一个方面的剂量形式及其使用说明书的药盒。

装置

装置在本发明的范围内。在一个优选的实施方案中，本发明提供了一种装置，其中所述装置包含：(1)如本发明的第一方面中所述的组合物；和(2)施用器。

用于稳定的方法

用于稳定组合物的方法在本发明的范围内。

在进一步优选的实施方案中，所述方法保护组合物免于降解。

在另一个进一步优选的实施方案中，所述组合物保持其有效生物活性达到选自以下的时间段：大于24小时；大于36小时；大于48小时。

从安全的观点来看，加入批准的药物赋形剂来稳定组合物是优选的，因为较简单的方法可能产生变化较小的结果，并且赋形剂的选择可以限于具有公认安全(GRAS)状态的那些。基于其化学性质和作用机制，用于稳定蛋白质溶液的赋形剂可以分为四大类：盐、糖、聚合物或蛋白质/氨基酸。盐(例如氯化物、硝酸盐)通过离子相互作用屏蔽电荷来稳定蛋白质的三级结构。糖(例如甘油、山梨醇、果糖、海藻糖)增加溶液的表面张力和粘度以防止蛋白质聚集。类似地，聚合物(例如聚乙二醇、纤维素衍生物)通过增加溶液粘度来稳定蛋白质三级结构以防止蛋白质聚集以及蛋白质中氨基酸之间的分子内和分子间静电相互作用。蛋白质(例如人血清白蛋白)能够通过离子、静电和疏水相互作用稳定其它蛋白质的结构。类似地，不带净电荷的小氨基酸，例如丙氨酸和甘氨酸，通过形成弱静电相互作用来稳定蛋白质。

如上文讨论，本发明的药物可以包括一种或多种药学上可接受的载体。这类介质和试剂用于制备药物的用途是本领域熟知的。除非任意常规介质或试剂与药学上可接受的材料不相容，否则其在制备本发明的药物组合物中的用途被考虑在内。本发明的药学上可接受的载体可包括一个或多个以下实例：

a.表面活性剂和聚合物，包括但不限于聚乙二醇(PEG)、聚乙烯吡咯烷酮、聚乙烯醇、交聚维酮、聚乙烯吡咯烷酮-聚乙烯丙烯酸酯共聚物、纤维素衍生物、HPMC、羟丙基纤维素、羧甲基乙基纤维素、羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸酯、聚丙烯酸酯和聚甲基丙烯酸酯、脲、糖、多元醇及其聚合物、乳化剂、糖胶、淀粉、有机酸及其盐、乙烯基吡咯烷酮和乙酸乙烯酯；和/或

b.粘合剂，例如各种纤维素和交联聚乙烯吡咯烷酮、微晶纤维素；和/或(3)填充剂，例如乳糖一水合物、无水乳糖、微晶纤维素和各种淀粉；和/或

c.填充剂，例如乳糖一水合物、无水乳糖、甘露醇、微晶纤维素和各种淀粉；和/或

d.润滑剂，例如作用于剂量形式从包装腔排出的能力增加的试剂，和/或

e.甜味剂，例如任何天然或人造甜味剂，包括蔗糖、木糖醇、糖精钠、环拉酸盐、阿斯巴甜和乙酰舒泛K；和/或

f.矫味剂；和/或

g.防腐剂，例如山梨酸钾、尼泊金甲酯、尼泊金丙酯、苯甲酸及其盐、对羟基苯甲酸的其它酯如尼泊金丁酯、醇如乙醇或苯甲醇、酚类化学品如苯酚、或季化合物如苯扎氯铵；和/或

h.缓冲液；和/或

i.稀释剂，例如药学上可接受的惰性填充剂，例如微晶纤维素、乳糖、磷酸氢钙、糖类和/或任意前述物质的混合物；和/或

j.吸收促进剂，例如三硝酸甘油酯；和/或

k.其它药学上可接受的赋形剂。

适用于动物和特别是人的本发明的药物通常必须是无菌的和在制造和储存条件下稳定。

本发明还提供了如前述实例所述的组合物、方法和工艺。

现在将参考以下非限制性实施例描述本发明。实施例的描述决不限制本说明书的前述段落，而是提供用于举例说明本发明的方法和组合物。

实施例

对于研磨和制药领域的技术人员将显而易见的是，在不脱离基本发明构思的情况下，可以对上述方法进行多种增强和修饰。例如，在一些应用中，生物活性材料可以被预处理并以预处理的形式提供给所述方法。所有这些修饰和增强都被认为在本发明范围内，本发明的性质由前述描述和所附权利要求确定。而且，提供以下实施例仅用于示例目的，并不旨在限制本发明的方法或组合物的范围。

A实施例1-NTI164的提取和纯化

A.1研究目标

采用基于惰性油的提取方法从NTI164植物菌株提取和鉴定最想要的组分。

A.2材料和方法

A.2.1NTI164植物材料

NTI164植物是全谱医用大麻植物(Cannabis sativa种属)，发明人随后鉴定出其含有大麻二酚酸(CBDA)、大麻二酚(CBD)、大麻萜酚酸(CBGA)、次大麻二酚(CBDV)和大麻酚(CBN)，但其具有＞0.03％的四氢大麻酚(THC)。根据药品控制办公室(ODC)的执照和许可证，按照良好生产工艺(GMP)和TGO 93和100指南培育、干燥和包装了NTI164植物。

A.2.2提取方法-基于油

装置：使用以下装置：10mL带盖玻璃闪烁瓶；Cobram's Estate橄榄油；植物研磨机(类似于咖啡或食品级研磨机)，孔径至多50μm；瓦特曼纸(Whatman paper)，1级；移液管；重量秤(转移船和匙)；Eppendorf管；50mL Falcon管；台式离心机(Eppendorf Centrifuge5702)；Oz Design Brand 6Litre Fruit,Wine and Cider Press。

提取：挤压和离心：所有工作均在标准实验室温度(18-22℃)下进行。将NTI164的芽从硬茎上剥离，丢弃茎。用70％ EtOH清洁研磨机，研磨室填充干燥的植物材料。将物质在三种设置中的最细设置下研磨10秒(1-2mm粒径)。然后，将研磨物与100ml橄榄油在高压灭菌的Schott瓶中以333mg/mL的植物/油比例混合。接着，在室温下，将其置于搅拌器上1小时，用磁性搅拌子(50rpm)搅拌。然后，将油加植物混合物放入Oz Design Brand 6LitreFruit,Wine and Cider Press中，以从所述植物回收油组分(醪液)。接着，将回收的油置于50mL Falcon管中，在室温下以300g旋转15分钟(分离1)。然后，将油移入干净的Schott瓶中，记录回收的体积。用于分离1的油的回收率为约40％。每次分离后弃去醪液。向回收的油中加入另外的333mg/mL研磨植物/油(另外100ml)物质，重复1小时混合，并回收和再利用油，直到总共999μg/mL(3×100ml)的植物/油混合物通过(分离2)。用于分离2的油的回收率为约50％。对于最后一次，我们放入Falcon管中并如上所述旋转(分离3)。分离3的油的回收率为约50％。然后，我们仅收集油，并将油置于Eppendorf管中进行处理。这种三重提取方法产生了总体积50ml的最终产物，其浓度为48mg CBDA在1ml橄榄油中，采用UPLC效价试验、采用下述方法测定。

A.2.3提取方法-基于乙醇

提取：挤压和离心：一种供选方法包括基于使用乙醇的提取。在该方法中，将500毫克研磨的NTI164植物材料与20mL乙醇在50ml离心管中混合。将管剧烈振摇60秒，然后置于30℃超声浴中10分钟。接着，将样品置于振荡器(200rpm)上30分钟。一旦完成，置于离心机中，在4400rcf下离心5分钟。然后，可以在各种临床前模型中评估上清液。

A.2.4解析分析

使用超高效液相色谱(UPLC)反相和液相色谱质谱(LCMS)鉴定了由上述方法得到的NTI164浓缩物中的组分。使用集成(U)HPLC系统和具有电喷雾电离(ESI)接口的单个四极杆质谱检测器进行了分析。

使用的UPLC设置和条件是：Cortecs UPLC Shield RP 18，(0A 1.6uM,2.1×100mm)；分析流速：0.7mL/min；流动相A：水0.1％TFA；流动相B：乙腈；等浓度：41:59流动相A/流动相B；温度：35C；检测器：Acquity UPLC PDA；进样体积：对于1.0mg/ml参比标准制品，0.7uL，样品溶液规模适当地缩放；软件：Empower 3CDS。参比标准溶液获自Novachem，Cerilliant Corporation(TX，USA)。这些是预先溶解的溶液，所有这些都是以前显示适合产生校准曲线的。

制备16种大麻素在甲醇中的混合物，其含有各自10ppm的次大麻二酚(CBDV)、大麻二酚(CBD)、大麻萜酚(CBG)、四氢次大麻酚(THCV)、大麻酚(CBN)、Δ⁹-四氢大麻酚(Δ⁹-THC)、Δ⁸-四氢大麻酚(Δ⁸-THC)、大麻环萜酚(CBC)、它们各自的酸形式和大麻环醇(cannabicyclol,CBL)。使用的所有溶剂均为LCMS级，标准品通过用90％流动相B和10％去离子水稀释来制备。UPLC-LCMS分析的详细分析条件列于表1中。

表1：UPLC和LCMS分析的参数和条件

A.3结果

A.3.1UPLC和LCMS分析结果

图1呈现了混合标准溶液(即，参比溶液)中大麻素的分离。在实验条件下，中性大麻素如Δ9-THC、CBD和CBL以正模式电离，而它们各自的酸性形式以负模式电离。尽管CBD和CBG从柱子共洗脱，但它们的分子量不同，并且它们可以通过质谱鉴定。此外，图2显示了针对CBD和CBG(即，作为进一步的参比溶液)获得的SID片段化模式之间的差异。这些高度特异性的结果显示了LCMS在分析和鉴定大麻素方面优于LC-UV的优点。

图3显示了使用基于油的方法提取的NTI164的UPLC质谱图。这些结果发现NTI164提取物(油混悬液)含有表2中所示的以下组分。另外的组分将包括类黄酮、蛋白质、酚、甾醇和酯。这些是已知的组分，构成全植物大麻材料的30-40％。表4呈现了图3的UPLC质谱图的伴随洗脱时间和所鉴定的CBD峰的峰下面积。

表2：所提取的NTI164油中的组分(小数点后两位，超过0.5向上取整，低于0.5向下取整)

组分	w/w％	w/w％
			大麻二酚酸(CBD-A)	48.78％	49％
大麻二酚(CBD)	1.89％；	2％；
			大麻萜酚(CBG)	4.88％；	5％；
大麻二庚酚(Cannabidiphorol)(CBDP)	1.68％；	2％；
			Canabidibutol(CBDB)	1.76％；	2％；
大麻萜酚酸(CBGA)	4.76％；	5％；
			四氢大麻酚(THC)	<0.18％	<0.3％
萜类	<5％	<5％
			有机植物材料-包括酚	2％	2％

表3呈现了使用乙醇提取法提取的NTI164组合物和使用本文所述方法定量的组分。

表3：所提取的NTI164乙醇中的组分(小数点后两位，超过0.5向上取整，低于0.5向下取整)

组分	w/w％	w/w％
			大麻二酚酸(CBD-A)	45.28％	45％
大麻二酚(CBD)	1.39％；	1％；
			大麻萜酚(CBG)	3.88％；	4％；
大麻二庚酚(Cannabidiphorol)(CBDP)	1.18％；	1％；
			Canabidibutol(CBDB)	1.56％；	2％；
大麻萜酚酸(CBGA)	3.76％；	4％；
			四氢大麻酚(THC)	<0.18％	<0.2％
萜类	<5％	<5％
			有机植物材料-包括酚	2％	2％

表4呈现了图3(NTI164)的UPLC质谱的伴随洗脱时间和鉴定的CBD峰的峰下面积。

表4：洗脱时间和峰下面积

请注意，较稀少的大麻素如CBDB和CBDP仅使用Quad MS(其不同于用于其它大麻素的常规HPLC)检测到。这些结果呈现在图4中。

B实施例2-NTI164的稳定性特性的表征

B.1研究目标

为了评估在室温下混悬在油制剂中的NTI164样品的稳定性。

B.2材料和方法

B.2.1样品制备

使用上述方法制备一式三份的NTI164样品。

对于对照样品，如下获得三个代表性的预制备浓缩物样品NTI164(油和干燥的花)。油S＝如上所述制备样品：对于花，将一部分均质化的植物材料加入乙腈或乙醇中并超声处理20分钟。将随后的提取物通过0.22μm注射器尖端过滤器直接过滤到2mL样品小瓶中用于分析。用异丙醇作为提取溶剂类似地制备浓缩物。

B.2.2取样

每周测定NTI164样品，使用CBDA作为主要标记物/稳定性指示剂。使用与CORTECSUPLC Shield RP18颗粒化学组合的ACQUITY UPLC H-Class系统以10.5分钟循环时间提供主要大麻素的UPLC等浓度分离。如上所述使用采用UPLC的分析方法。

参比标准溶液获自Cerilliant Corporation(Round Rock，TX)。这些预溶解的溶液以前已经被证明适合于生成校准曲线。

如下进行标准曲线的制备。测定在0.004mg/mL和1.000mg/mL之间的10种浓度(使用适当的标准品在甲醇中系列稀释而制备)的主要大麻素(-)Δ⁹-THC和CBD的线性度，作为方法线性度的代表性证明。表5概述了分离中使用的大麻素。

表5：分离中使用的大麻素

B.3结果

B.3.1UPLC/质谱分析结果

使用与CORTECS UPLC Shield RP18颗粒化学组合的ACQUITY UPLC H-Class系统以10.5分钟循环时间提供主要大麻素的UPLC等浓度分离。每周测定NTI164样品，CBDA用作主要标志物作为稳定性指示剂。表6呈现的结果证实，NTI164在室温下在惰性油介质中稳定超过6周。在该时间框没有观察到脱羧或产物降解。

表6：NTI164在室温下的稳定性

C实施例3-NTI164的生物学性质的表征

C.1研究目标

为了评价NTI164在神经元和小胶质细胞系中的抗炎和神经保护作用。

神经炎症是神经变性的主要触发因素之一。对能够诱导炎性响应的第一步的因子和途径的研究将导致对通过其停止许多疾病进展的潜在治疗靶点的鉴定。

C.2材料和方法

C.2.1.样品制备和稀释

将500mg干燥的NTI164植物材料混悬在20ml绝对乙醇中(使用适于离心的50ml蓝顶Falcon管)，强力搅拌/振摇60秒。然后，将管置于35-40C的超声浴中10分钟。在超声处理完成后，然后在室温下将样品置于盘式搅拌器(200rpm)中30分钟。一旦完成，则将样品以4400rpm离心5分钟。收集上清液用于测试和显色。

用于描述测试产品的处置的单位和NTI164的浓度。

a.提取物的1/1000稀释-10UL(储备物质是NTI164-10uL，其等于2μg/ml的CBDA)

b.提取物的1/3000稀释-3UL(储备物质是NTI164-3UL，其等于6μg/ml的CBDA)

c.提取物的1/10000稀释-1UL(储备物质是NTI164-1UL，其等于0.1μg/ml的CBDA)。

对于CBD样品，使用纯标准品(粉末形式)。CBD 98％分离物购自LGC Standards(英国伦敦)(CAS号13956-29-1)作为参比标准。制备浓度为1mg/ml(在乙腈中)的CBD标准参比。如下制备在乙腈中的CBD稀释液：2μg/ml；6μg/ml；和0.1μg/ml。

在这些研究中使用的NTI164(CBDA同等物)和CBD的终浓度为2μg/ml。

C.2.2.小胶质细胞BV2培养物

无限增殖化小胶质细胞系BV2购自美国典型培养物保藏中心(American TissueCulture Collection.)。将BV2在含有庆大霉素并补充有10％FBS(用于扩增)和5％胎牛血清(FBS)(当铺板用于实验时)的RPMI培养基中培养。所有细胞都来自传代数39和45之间。将细胞以45,000个细胞/mm²铺板，在铺板后用磷酸盐缓冲盐水(PBS，作为对照)或白细胞介素-1B+干扰素-γ(IL-1B+IFNγ，以诱导炎症)处理24小时。为了测试NTI164改变炎性响应的作用，在炎症前1小时(预处理)或炎症后1小时(后处理)应用NTI164。从采用原始提取方案获得的分离物以10uL、3uL或1uL应用NTI164：从质谱数据确定的范围＝1.0-0.1ug CBDA。

C.2.3.多重细胞因子/趋化因子测定

在处理开始后收获小胶质细胞培养基，短暂离心以除去颗粒(300g，10分钟)。根据制造商的说明书(Bio-Rad)，使用具有96孔磁性板测定的Bio-Plex 200测量小胶质细胞培养基中的细胞因子和趋化因子水平。测量的细胞因子和趋化因子包括IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12(p70)、IL-13、IL-17、G-CSF、GM-CSF、IFNγ、TNFα、CXCL1(KC)、CCL2(MCP-1)和CCL5(RANTES)。所有样品都一式两份运行，用Bio-Plex Manager软件分析数据。

C.2.4.免疫组织化学(蛋白质水平)测定

将细胞用PBS中的4％多聚甲醛(PFA)固定10分钟。在用PBS洗涤3×5分钟后，将细胞与一级抗体(抗-COX2，抗ARG1)1:1000于4℃培养过夜，并且在PBS中洗涤3×5分钟之后，将细胞然后在室温下在适当的荧光二级抗体1:250(Invitrogen)中培养2小时。在最终洗涤之后，如前所述，将细胞核用在封固介质中的DAPI染色。在来自一式两份孔的每孔三个视场中拍摄细胞的显微照片，使用Fiji分析每种标记物的区域覆盖。

C.2.5.细胞活力(线粒体活性)测定

使用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基-)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物；Sigma]定量小胶质细胞活力。在该测定中，MTT(一种四唑染料)被线粒体生物还原成不溶于组织培养基的甲臜产物。简言之，在用PBS、LPS或IL-4(有或没有试验产物)处理后的各时间点，将MTT加入细胞中至最终浓度为250μg/ml。在30分钟后，将甲臜溶于DMSO中，使用分光光度计(Glomax Multi+，Promega，UK)在490nm处测量吸光度。

C.2.6.统计学

将实验内重复的数据求平均值，然后使用Graph Pad Prism或students-t-test分析来自至少三次独立实验的数据。

C.3结果

C.3.1INOS表达

NTI164使炎症诱导的iNOS表达正常化。iNOS表达由于炎症而增加，并且在炎症活化的小胶质细胞中，NTI164使表达朝向对照水平正常化，因此减少了由iNOS触发的炎性过程。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)是由氨基酸L-精氨酸产生一氧化氮(NO)的三种关键酶之一。诱导型一氧化氮合酶(iNOS)在多发性硬化(MS)和实验性自身免疫性脑脊髓炎(EAE)的调控中起着重要的作用。先前的研究已经证明，iNOS在MS和EAE以及多种其它神经炎性疾病中发挥致病以及调控作用。图5证明了NTI164使炎症诱导的iNOS表达正常化。

C.3.2神经元活力

在基础条件(短期暴露)下，NTI164增加了活神经元的数量。使用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基-)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物；Sigma]定量神经元活力。在短期谷氨酸暴露之后，NTI164处理的细胞能够在基础条件下增加“健康”细胞的数量。通过谷氨酸活化(3mM)实现了细胞兴奋性毒性。在短期谷氨酸诱导的“损伤”之后，NTI164能够刺激细胞生长。

使用细胞活力(线粒体活性)测定(或MTT测定)来测定了细胞内微胶囊中的细胞活力或代谢活性。其是基于代谢活性细胞将水溶性染料[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物]转化为不溶性甲臜的能力。细胞活力是群体内活的健康细胞的比例的量度，细胞活力测定用于确定细胞的总体健康。图6呈现了使用MTT[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基-)-2,5-二苯基-2H-四唑溴化物]定量的神经元活力。

C.3.3未成熟神经元的成熟

即使不存在任何谷氨酸诱导的损伤，NTI164也刺激未成熟神经元成熟为健康细胞。本研究证实，NTI164可以刺激未成熟神经元的“健康成熟”。该过程在创伤或损伤之后可以是至关重要的。NTI164能够提供健康的神经元细胞发育，这是从神经炎症、神经元损伤中恢复的重要过程。图7表明，即使不存在任何谷氨酸诱导的损伤，NTI164(NTI株)也刺激未成熟神经元成熟为健康细胞。

C.3.4细胞死亡

NTI164不增加兴奋毒性细胞损伤范例中的细胞死亡。

图7表明，CBD在该范例中是有毒的，而NTI164是无毒的并且对细胞数量和细胞活力具有积极作用。

C.3.5ARG1表达

NTI164使炎症诱导的(受损细胞)Arg 1表达正常化。通常认为精氨酸酶-1的巨噬细胞特异性上调促进炎症。精氨酸酶1表达由于炎症而增加，但是在炎性活化细胞中，NT1164使表达朝向对照水平标准化。图9显示了在评估精氨酸酶1表达的炎性条件下的小胶质细胞反应。

图10概述了精氨酸代谢及其对抗炎和促炎信号的总体平衡的影响。

D实施例4-与参与神经炎症的生物标志物相关的临床前研究

D.1研究目标

为了确定NTI164对人衍生的小胶质细胞中COX-2、IL2和TNF-α水平的影响。

多种神经病症由于免疫应答失调诱导的炎症而发生。

例如，多发性硬化(MS)是一种进行性炎性疾病，其特征在于中枢神经系统内髓鞘的丧失。典型症状包括疲劳、行走困难以及言语和视力受损。环氧合酶-2(COX-2)被认为是引起炎症的主要酶，炎症是MS中牵涉的疾病的共同机制。COX-2是评估疾病进展和总体治疗管理的有力的临床生物标志物。

IL2在免疫调节中起重要作用，并且在MS进展中起重要作用。IL-12是在多发性硬化的发病机制中起关键作用的细胞因子。在该疾病的动物模型和多个人类试验中，通过中和抗体阻断该细胞因子引起了显著改善。

TNF-α在MS发作中牵涉的急性炎症的调节异常中起重要作用。

D.2材料和方法

D.2.1COx-2

免疫组织化学(蛋白质水平)测定：将细胞用PBS中的4％多聚甲醛(PFA)固定10分钟。在用PBS洗涤3×5分钟后，将细胞与一级抗体(抗-COX2)以1:1000于4℃培养过夜，并在PBS中洗涤3×5分钟之后，然后将细胞在适当的荧光二级抗体1:250(Invitrogen)中于室温培养2小时。在最后一次洗涤后，如前所述，在固定培养基中用DAPI染色细胞核。在来自一式两份孔的每孔三个视场中拍摄细胞的显微照片，使用Fiji分析每种标记物的区域覆盖。

D.2.2IL-2和TNF-α

多重细胞因子/趋化因子测定：将处理开始后收获的小胶质细胞培养基短暂离心以除去颗粒(300g，10分钟)。根据制造商的说明书(Bio-Rad)，使用具有96孔磁性板测定的Bio-Plex 200测量小胶质细胞培养基中的细胞因子和趋化因子水平。测量的细胞因子和趋化因子包括IL-1α、IL-1β、IL-2、IL-6、IL-10、IL-12(p70)、IL-13、G-CSF、GM-CSF、IFNγ、TNFα、CXCL1(KC)、CCL2(MCP-1)和CCL5(RANTES)。所有样品一式两份运行，用Bio-Plex Manager软件分析数据。

D.2.3样品制备和稀释

将500mg干燥的NTI164植物材料混悬在20ml绝对乙醇中(使用适于离心的50ml蓝顶Falcon管)，强力搅拌/振摇60秒。然后，将管置于35-40C的超声浴中10分钟。在超声处理完成后，然后在室温下将样品置于盘式振摇器(200rpm)中30分钟。一旦完成，则将样品以4400rpm离心5分钟。收集上清液用于测试和显色。

用于描述试验产品的处理和NTI164浓度的单位。

a.提取物的1/1000稀释-10UL(储备物质是NTI164-10UL，其等于2μg/ml的CBDA)

b.提取物的1/3000稀释-3UL(储备物质是NTI164-3UL，其等于6μg/ml的CBDA)

c.提取物的1/10000稀释-1UL(储备物质是NTI164-1UL，其等于0.1μg/ml的CBDA)

对于CBD样品，使用纯标准品(粉末形式)。CBD 98％分离物购自LGC Standards(英国伦敦)(CAS号13956-29-1)作为参比标准。制备浓度为1mg/ml(在乙腈中)的CBD标准参比。如下制备在乙腈中的CBD稀释液：2μg/ml；6μg/mL；和0.1μg/mL。

在这些研究中使用的NTI164(CBDA同等物)和CBD的终浓度为2μg/ml。

D.3结果

D.3.1COX-2

使用免疫组织化学分析在细胞中进行的临床前研究证实，NTI164可以压制和抑制人衍生的小胶质细胞中COX-2的表达。当与单独的CBD相比时，NTI164在炎性损伤前和炎性损伤后抑制COX-2的效力高达三倍。参见下表7。

表7：概述了当用NTI164相对于单独的CBD处理时细胞中的COX-2抑制

D.3.2IL2和TNF-α

当与单独的CBD和CBD|THC(1:1)混合物相比时，NTI164在统计学上更有效地抑制关键生物标志物：IL-12和TNF-α。

这些结果证实：NTI164 IL-12P＝0.0011相对于单独的CBD是高度显著的；NTI164TNF-αP＝0.0575相对于单独的CBD是正趋势；NTI164 IL-12P＝0.0069相对于CBD\THC组合是高度显著的；NTI164 TNF-αP＝0.0446相对于CBD\THC组合是显著的。

表8概述了NTI164相对于单独的CBD和CBD\THC组合(1:1浓度比)在抑制TNF-α和IL-12方面的显著性。

D.4讨论

D.4.1COX-2、IL2和TNF-α

这些显示了抑制COX-2、IL2和TNF-α的结果再次证实了NTI164在调节其中由免疫应答诱导的炎症失调的神经病症中的炎性过程中的有效性质。

E实施例5-NTI164的进一步表征

E.1研究目标

使用UPLC/MS方法(如上述实施例中所述)对通过油提取的NTI164进行组成分析。

E.2材料和方法

使用与CORTECS UPLC Shield RP18颗粒化学组合的ACQUITY UPLC H-Class系统以10.5分钟循环时间提供主要大麻素的UPLC等浓度分离。每周测定NTI164样品，使用CBDA作为稳定性指示剂的主要标志物。表6中给出的结果证实，NTI164在室温下在惰性油介质中稳定超过6周。在该时间范围没有观察到脱羧或产物降解。

装置：使用以下装置：10mL带盖玻璃闪烁瓶；Cobram's Estate橄榄油；植物研磨机(类似于咖啡或食品级研磨机)，孔径至多50μm-80μm；瓦特曼纸，1级；移液管；重量秤(转移船和匙)；Eppendorf管；50mL Falcon管；台式离心机(Eppendorf Centrifuge 5702)；OzDesign Brand6Litre Fruit,Wine and Cider Press。

提取：挤压和离心：所有工作均在标准实验室温度(18-22℃)下进行。将NTI164的芽从硬茎上剥离，丢弃茎。用70％ EtOH清洁研磨机，研磨室填充干燥的植物材料。将物质在三种设置中的最细设置下研磨10秒(1-2mm粒径)。然后，将研磨物与100ml橄榄油在高压灭菌的Schott瓶中以333mg/mL的植物/油比例混合。接着，在室温下，将其置于搅拌器上1小时，用磁性搅拌子(50rpm)搅拌。然后，将油加植物混合物放入Oz Design Brand 6LitreFruit,Wine and Cider Press中，以从所述植物回收油组分(醪液)。接着，将回收的油置于50mL Falcon管中，在室温下以300g旋转15分钟(分离1)。然后，将油移入干净的Schott瓶中，记录回收的体积。用于分离1的油的回收率为约40％。每次分离后弃去醪液。向回收的油中加入另外的333mg/mL研磨植物/油(另外100ml)物质，重复1小时混合，并回收和再利用油，直到总共999μg/mL(3×100ml)的植物/油混合物通过(分离2)。用于分离2的油的回收率为约50％。对于最后一次，我们放入Falcon管中并如上所述旋转(分离3)。分离3的油的回收率为约50％。然后，我们仅收集油，并将油置于Eppendorf管中进行处理。这种三重提取方法产生了总体积50ml的最终产物，其浓度为48mg CBDA在1ml橄榄油中，采用UPLC效价试验、采用下述方法测定。

E.3结果

UPLC分析的结果呈现在下表9中。

表9显示了使用乙醇提取法提取的NTI164组合物和使用本文所述UPLC方法定量的组分

通过将研磨机系统中的孔径从50μM扩大到80μM，我们能够提取到在最终的油提取产物中1-3％的大麻酚(CBN)。

F实施例6-NTI164用于治疗ASD水平II/III-4周

F.1ASD研究设计和方法

在纳入研究的18名患者中，接受NTI164的患者占94％(n＝17)。积极患者占78％(n＝14)，在接受其第一次NTI164剂量之后中断的患者占16％(n＝3)，在接受NTI164之前但在纳入之后中止的患者占6％(n＝1)。积极患者的平均年龄为13.4岁，最年轻的患者为10岁，最年长的患者为17岁(图11)。

所有积极患者被诊断为患有ASD水平II/III，在基线时在CGI严重程度量表上被评估为“轻度患病”、“中度患病”、“显著患病”或“重度患病”(图12)。

患者开始5mg/kg/天的NTI164治疗，每周增加5mg/kg/天，持续4周，直至20mg/kg/天或达到最大耐受剂量。通过将剂量乘以患者体重、然后除以CBDA在油中的浓度(53mg/mL)计算了日剂量。这返回至以mL计的总每日体积(表10)，其被分成每日两次(BD)AM和PM剂量。

表10-每名患者的日剂量的计算

积极患者的平均最大日剂量为16.7mg/kg/天，其中64％的患者耐受20mg/kg/天的最大剂量，36％的患者耐受在6mg/kg/天至19mg/kg/天之间的最大日剂量(图13)。

F.2研究结果

使用临床总体印象-严重程度(CGI-S)量表进行评估：

总体改善：评级总体改善，无论在临床医生的判断中是否完全由于药物治疗引起；

疾病严重程度：基线和基线后(28天NTI164治疗)的比较；和

功效指数：仅基于药效评级。这是基于治疗效果和副作用的程度计算的评分。

总体改善

93％的积极患者在每天用NTI164治疗28天之后显示出改善。这些患者中有64％具有“很大改善”的总体改善，29％具有“最低限度改善”的总体改善，仅一名患者(7％)具有“无变化”(图14)。使用Wilcoxon Signed-Rank Test和配对t检验评估了统计学显著性：

配对t检验：在28天治疗和基线之间CGI-S的平均差异为-0.714，95％置信区间＝-1.332，-0.097，p值＝0.027。Wilcoxon Signed-Rank Test统计为：-15，相应的p值为0.047。

疾病严重程度

在基线时，疾病严重程度的平均评级为4.4(图12)。在NTI164处理28天之后，其降低至3.6的平均评级(图15、16)。

治疗效果

在每天用NTI164治疗28天之后，14％的积极患者表现出第二高的可能的功效指数2：显著的治疗效果，具有不显著干扰患者功能的副作用。

72％的积极患者具有功效指数5或6：中等治疗效果，这些患者中的一半没有副作用，另一半具有不显著干扰患者功能的副作用；7％具有功效指数9：最小治疗效果，没有副作用；只有一名患者，7％，具有基于观察到病症没有变化的功效指数，13：没有改变或更差，没有副作用(图17)。

G实施例7-NTI164用于治疗ASD水平II/III-20周

G.1ASD研究设计和方法

上述实施例6提供了在4周(28天)时间点的治疗结果(n＝14积极)。该实施例7呈现了在20周时间点的治疗结果(n＝12积极)。如上文实施例6中所讨论，患者以5mg/kg/天开始NTI164治疗，其每周增加5mg/kg/天，持续4周时间直至20mg/kg/天或达到最大耐受剂量和(在本研究中)继续其最大耐受剂量16周(提供20周的总每日给药期)。

本研究的总体目的是评估在20周时间每天施用的NTI164的持续安全性和功效。次要目的是评估NTI164在治疗与自闭症谱系相关的症状中的功效。功效用本领域中使用的各种医生主导和父母主导的标准问卷进行了测量。

患者(n＝12)

在第20周，积极患者的平均年龄为13.3岁，最年轻的患者为10岁，最大的患者为17岁(错误！未找到引用源。)。所有积极患者被诊断为具有ASD水平II/III，并且在基线时在CGI严重程度量表上被评估为“轻度患病”、“中度患病”、“显著患病”或“重度患病”(图19)。

剂量

基于全世界进行的儿科试验，本研究选择的最大剂量为20mg/kg/天。

为了降低副作用的风险，研究药物历经四周过程逐渐增加剂量，以5mg/kg/天开始，每周增加5mg直至达到最大耐受剂量或20mg/kg/天。然后，在20周过程中施用最大耐受剂量。每日体积经两个剂量AM和PM施用。

用于计算每名患者剂量的公式是：体重×剂量/NTI164浓度＝日剂量/2＝每日两次剂量。在治疗的第一周期间，每名患者接受5mg/kg/天的NTI164。在治疗的第二周期间，每名患者接受10mg/kg/天的NTI164。在治疗的第三周期间，每名患者接受15mg/kg/天的NTI164。在治疗的第四周期间，每名患者接受20mg/kg/天的NTI164。在治疗的第5-20周期间，每名患者接受其最大耐受剂量或20mg/kg/天的NTI164。

在油中制备NTI164用于口服施用。油的总浓度为53mg/ml。

在第20周结束时，参与者选择结束他们的参与并向下逐渐减少5mg/kg/周直至他们停止研究药物或继续他们的最大耐受剂量直至第52周。

主要终点

使用本领域的标准步骤监测和测量安全性。除了在基线和每四周完成的父母/护理者和医师调查问卷直至第20周，还使用了全血检查、肝脏和肾脏功能测试和生命体征来监测和测量安全性。

次要终点

使用本领域的标准步骤监测和测量功效。

临床总体印象量表-疾病严重程度(CGI-S)。在7-点量表上反映临床医生对疾病严重程度的印象，范围从1＝完全没有直到7＝在最严重的疾病中。[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

Vineland适应性行为量表，第三版(Vineland-3)。用于测量跨三个核心领域(沟通、日常生活技能和社会性)和两个任选领域(运动技能和适应不良行为)的适应性功能；各项在3-点量表上评级(0＝从不；1＝有时；2＝通常或经常)。核心领域总和为总的适应性行为组合。[时间框：基线，第20周]。

社会反应性量表，第二版-School-Age Form(SRS-2)。评估了五个领域，包括：社会意识、社会认知、社会沟通、社会动机、及限制兴趣和重复行为。各项目在4-点量表上评级(范围从1＝不是真的，直到4＝几乎总是真的)。[时间框：基线，第20周]。

临床总体印象量表-改善-护理者(CGI-I-Ca)。其为测量症状从基线变化的7-点量表。提供为基线和基线后护理者和临床医生调查问卷。[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

临床总体印象量表-改善-临床医师(CGI-I-Cl)。其为测量症状从基线变化的7-点量表。提供为基线和基线后护理者和临床医生调查问卷。[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

临床总体印象量表-目标行为变化(CGI-C)。在7-点量表上反映临床医生对行为变化的印象，范围从1＝完全没有直到7＝非常严重的问题。提供为基线和基线后调查问卷。[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

临床总体印象量表-注意力变化(CGI-CA)。在7-点量表上反映临床医生对注意力变化的印象，范围从1＝完全没有直到7＝非常严重的问题。提供为基线和基线后调查问卷。[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

儿童焦虑量表-自闭症谱系障碍-父母版(ASC-ASD-P)。被开发用以检测患有ASD的年轻人的焦虑症状的父母/护理者形式。由四个分量表(表现焦虑、不确定、焦虑唤醒和分离焦虑)组成，各项目在4-点量表上评级(0＝从不，3＝总是)。分量表总和等于总分。[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

儿童焦虑量表-自闭症谱系障碍-儿童版(ASC-ASD-C)。被开发用以检测患有ASD的年轻人的焦虑症状的儿童形式。由四个分量表(表现焦虑、不确定、焦虑唤醒和分离焦虑)组成，各项目在4-点量表上评级(0＝从不，3＝总是)。分量表总和等于总分。[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

儿童睡眠障碍量表(SDSC)。六个分量表包括启动和保持睡眠障碍、睡眠呼吸障碍、觉醒障碍、睡眠觉醒转换障碍、过度嗜睡障碍和睡眠多汗。各项目以5-点量表评级，其中1＝从不，5＝总是(每天)。分量表评分总和等于总评分[时间框：基线、第4周、第8周、第12周、第20周]。

G.2研究结果

安全性结果

安全性数据得出如下结论：在该研究群体中，以每天两次剂量施用5、10、15和20mg/kg的NTI164是安全的和良好耐受的。该结论进一步得到实验室数值的支持。患者的全血检查、肝功能或肾功能测试未观察到变化。患者生命体征也没有观察到任何变化。

功效结果

使用Wilcoxon Signed-Rank Test和配对t检验评估所分析的数据集的统计学显著性。

配对t检验：在20周治疗和基线之间CGI-S的平均差异为-1.08，95％置信区间＝-1.772，-0.3948，p值＝0.005303。

Wilcoxon Signed-Rank Test统计为：-15，相应的p值为0.009654。

在每天用NTI164治疗20周之后，100％的患者(n＝12)表现出与疾病严重程度有关的症状的“很大改善”。

下表15是在第20周对所分析的数据集进行Wilcoxon Signed-Rank Test和配对T检验的结果概述。

表15-在20周时对所分析的数据集进行Wilcoxon Signed-Rank Test和配对T检验的概述

总体改善。100％的积极患者(n＝12)在每天用NTI164治疗20周后表现出改善，所有患者的总体改善为“2.很大改善”。这些患者中有3名在治疗4周之后先前评分为“3.最小改善”。参见图20和21。

疾病严重程度。在基线时疾病严重程度的平均评级为4.3。在每日NTI164治疗20周之后，其降低至3.3的平均评级。参见图22至图24。

治疗效果。在每天NTI164治疗20周之后，67％的积极患者表现出最高的可能的功效指数1和2：显著治疗效果—大幅改善。所有症状完全或几乎完全缓解。33％的患者具有功效指数5、6或7：中等治疗效果—明显的改善。症状部分缓解。参见图25和26。

结论

NTI164显示直到20/mg/kg/天的剂量是安全的和良好耐受的。在每日治疗20周之后，NTI164在改善与自闭症谱系障碍相关的症状方面显示出统计学显著的功效。

Claims (22)

1.组合物，其包含以下大麻素：

w/w％

CBDA 40-60％；

CBD 1-5％；

CBG 1-10％；

CBDP 1-5％；

CBDB 1-5％；

CBGA 1-10％；

CBN 1-3％

和

THC<1％。

2.权利要求1的组合物，其中所述大麻素以选自以下的量存在：

组合物1，包含

w/w％

CBDA 50％；

CBD 2％；

CBG 5％；

CBDP 2％；

CBDB 2％；

CBGA 5％；

CBN 3％；和

THC<0.3％；

和

组合物2，包含

w/w％

CBDA 45％；

CBD 1％；

CBG 4％；

CBDP 1％；

CBDB 2％；

CBGA 4％；

CBN 2％；和

THC<0.2％。

3.上述权利要求任一项的组合物，其还包含选自以下的油：合成油；基于植物的油；矿物油；卡诺拉油；和橄榄油。

4.上述权利要求任一项的组合物，其中所述组合物包含小于5％w/w的萜。

5.上述权利要求任一项的组合物，其中所述组合物包含小于2％w/w的有机植物材料。

6.上述权利要求任一项的组合物，其中所述组合物包含小于2％w/w的植物酚。

7.上述权利要求任一项的组合物，其中所述组合物的大麻素组分选自：浓度在1至500mg/ml之间；在10至100mg/ml之间；浓度为50mg/ml。

8.上述权利要求任一项的组合物，其中所述组合物的CBDA组分选自：浓度在1至500mg/ml之间；在10至100mg/ml之间；浓度为50mg/ml。

9.上述权利要求任一项的组合物，其具有对应于图3的UPLC质谱图，采用实施例1中所述的条件测定。

10.药物组合物，其包含权利要求1至11任一项的组合物和药学上可接受的载体。

11.剂量形式，其包含权利要求1至9任一项的组合物。

12.权利要求11的剂量形式，其中所述组合物的CBDA组分选自：在1mg和1000mg之间；在1mg和500mg之间；在1和100mg之间；小于400mg；小于300mg；小于200mg；和小于100mg。

13.权利要求11至12任一项的剂量形式，其中所述组合物的CBDA组分选自：600mg；400mg；300mg；200mg；100mg；50mg；10mg；5mg；2mg；1mg。

14.治疗病症的方法，所述方法包括向需要其的患者施用治疗有效量的权利要求11至13的剂量形式。

15.权利要求14的方法，其中所述病症为神经病症。

16.权利要求14至15任一项的方法，其中所述神经病症选自：阿尔茨海默病(AD)；帕金森症(PD)；多发性硬化；肌萎缩性侧索硬化；脑缺血；创伤性脑损伤；类风湿性关节炎；慢性偏头痛；癫痫；自闭症谱系障碍(ASD)；注意缺陷多动障碍(ADHD)；脑性瘫痪和相关亚型；神经性疼痛；和抑郁症。

17.权利要求1和9的组合物在制备用于治疗病症的药物中的用途。

18.从大麻植物材料提取权利要求1至9的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将大麻植物材料研磨至足够的研磨尺寸；

(2)使由步骤a)产生的研磨物与油接触；

(3)将研磨物和油混合足够的时间以形成混合物；

(4)挤压该混合物以回收油；

(5)离心所述油以进一步精炼所述油；和

(6)将所述油提取物收集在适宜的容器中。

19.从大麻植物材料提取权利要求1至9的组合物的方法，所述方法包括以下步骤：

(1)将大麻植物材料研磨至足够的研磨尺寸；

(2)使由步骤a)产生的研磨物与醇接触；

(3)将所述研磨物和醇混合足够的时间以形成混合物；

(4)超声处理所述混合物；

(5)离心所述混合物；和

(6)将醇提取物收集在适宜的容器中。

20.由权利要求18或19的方法生产的产品。

21.药盒，其包含权利要求11至13的剂量形式和使用说明书。

22.如前述实施例所述的组合物、方法和工艺。