ES2221770B2

ES2221770B2 - Metodo de preparacion de un compuesto para la regeneracion de tejidos.

Info

Publication number: ES2221770B2
Application number: ES200200922A
Authority: ES
Inventors: Eduardo Anitua Aldecoa
Original assignee: Individual
Current assignee: Individual
Priority date: 2002-04-19
Filing date: 2002-04-19
Publication date: 2006-07-16
Anticipated expiration: 2022-04-19
Also published as: ES2221770A1

Abstract

Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos. Un método de preparación de un compuesto obtenido a partir de coágulo rico en proteínas y con factores de crecimiento que se utiliza para tratamiento de regeneración de tejidos en diversidad de lesiones.

Description

Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos.

Sector de la técnica

La presente invención se refiere a un método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos, que se obtiene a partir de sangre y se utilizará para la regeneración de tejidos en general y más concretamente en aquellas lesiones epidérmicas o subepidérmicas, así como en lesiones de articulaciones, cartílagos, tendones, ojos, tejido óseo, tejido graso, etc.

Estado de la técnica

En el estado de la técnica es conocido, por la patente WO-A-00/44314 del mismo solicitante, un preparado compuesto obtenido directamente a partir de la sangre del propio paciente o procedente de un banco de sangre, con el cual se logra un plasma que es rico en fibrinógeno y proteínas, entre ellas las citoquinas. Este plasma presenta un estado inicial líquido y un estado final de coágulo, y en fase de coágulo se aplica con unos excelentes resultados en la regeneración del tejido óseo.

Al aplicar la acción de este plasma a otros tejidos se han encontrado ciertos inconvenientes e, incluso, contraindicaciones desde el punto de vista de resultados prácticos de regeneración, tanto si se utiliza en forma de coágulo plasma viscoso - como en plasma propiamente dicho - todavía en fase líquida - pero con un alto contenido de fibrinógeno.

Estudiando el comportamiento del coágulo se ha advertido que si en su propia composición existe una presencia excesiva de fibrina, hay una cierta dificultad para su aplicación en algunas situaciones, así como en los resultados prácticos correspondientes cuando se intenta utilizarlo para la regeneración de otros tejidos, como por ejemplo, músculos y cartílagos.

Descripción de la invención

Es objeto de la invención un compuesto líquido obtenido a partir del plasma obtenido según el método WO-A-00/44314. El compuesto según la invención presenta cualidades regeneradoras de tejido óseo u otros tejidos, y puede ser aplicado por ejemplo en circunstancias en las que el plasma obtenido por el método reivindicado en WO-A-00/44314 no presenta un comportamiento óptimo. Además, el compuesto según la invención es fácil de obtener, cómodo en su preparación y económico en su costo de obtención.

El compuesto según la invención se obtiene según un método cuyos pasos iniciales son aquellos descritos en WO-A-00/44313 para la obtención de un plasma rico en factores de crecimiento. El método de obtención del compuesto según la invención es el siguiente:

1): Según WO-A-00/44313, en primera instancia se extrae sangre del paciente o se utiliza la procedente de un banco de sangre adecuada al caso. Esto se realiza minutos previos al inicio de su utilización ya que la sangre es un compuesto dinámico, es decir, cambiante en función del tiempo.

2): Según WO-A-00/44313, en tubos esterilizados de 5 ml. por ejemplo donde previamente se ha depositado citrato sódico concentrado al 10% para que actúe como anticoagulante, se introduce la sangre en cuantía entre 10 a 40 cm^{3}, al menos, y se centrifuga todo el contenido de los mencionados tubos a velocidades entre 160 y 800 G - en función de diferentes protocolos a llevar a cabo - alrededor de unos 10 minutos o menos (según la velocidad) y a temperatura ambiente. Como consecuencia, se disgrega el compuesto en:

-: glóbulos rojos en la parte inferior del tubo;

-: plasma rico en factores de crecimiento P.R.F.C., encima de los glóbulos rojos;

-: plasma pobre en factores de crecimiento P.P.F.C., en la parte superior del tubo;

-: además, existe una zona situada inmediatamente por encima de los glóbulos rojos que puede ser utilizada, en cuantía de 50 a 80 \mul, para posibles aplicaciones posteriores si las circunstancias así lo requieren.

3): Según WO-A-00/44313, el plasma rico en factores de crecimiento P.R.F.C. se traspasa a tubos esterilizados de cristal en una cuantía de 1 a 1,2 ml. por tubo añadiendo 50 p.l de cloruro cálcico concentrado al 10%. La acción del cloruro cálcico sobre el plasma forma una proteína denominada trombina que fragmenta el fibrinógeno contenido en el plasma y lo transforma en fibrina durante el proceso de transformación de plasma líquido a coágulo sólido-viscoso Manteniendo de esta forma el plasma se transforma en coágulo de P.R.F.C. en un lapso de tiempo de 5 a 25 minutos.

: Para la obtención instantánea (de 3 a 10 seg.) del coágulo de P.R.F.C., se mezcla el plasma rico en factores de crecimiento P.R.F.C. con cloruro cálcico y trombina.

4): A partir del plasma obtenido según WO-A-00/44313, y según propone la presente invención, se realiza la retracción del coágulo por un medio adecuado. Durante dicha retracción del coágulo, la trombina actúa sobre la membrana de las plaquetas que están en la malla de fibrina, y provoca cambios en su estructura originando un proceso de desgranulación, con lo cual se vacían de contenido las plaquetas, apareciendo dos fases:

-: una fase sólida que es una estructura tridimensional de fibrina, y

-: otra fase líquida sobrenadante, que contiene proteínas y metabolitos plaquetarios y plasmáticos.

: El medio adecuado que permite realizar la retracción del coágulo puede ser o bien ninguno (realizándose la retracción de forma espontánea y más lenta), o bien un medio acelerador de la retracción, preferentemente:

-: una centrifugación del coágulo, con o sin aportación de calor, o

-: una aportación de calor al coágulo a una temperatura de 37ºC.

5): Según propone la presente invención, se extrae el compuesto sobrenadante líquido obtenido, el cual es rico en proteínas y factores de crecimiento (P.R.G.F.) y está perfectamente preparado para ampliar el espectro de aplicación del producto regenerador de tejido en un sentido muy amplio.

: Como resultado, por término medio, se logra la obtención de 0,8 cm^{3} de compuesto sobrenadante rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos partiendo de 1 cm^{3} de coágulo, cuya retracción aporta también 0,2 cm^{3} de fibrina.

El compuesto obtenido presenta una consistencia líquida además de las propiedades beneficiosas ya conocidas por el plasma rico en factores de crecimiento obtenido según el método de WO-A-00/44313, y puede ser utilizado de forma ventajosa en diversas aplicaciones.

Por una parte, el compuesto obtenido puede ser utilizado como regenerador de tejidos y órganos sobre el propio cuerpo del paciente, y por su consistencia líquida permite alcanzar lesiones que necesiten tratamiento intra-articular, intra-muscular y subepidérmico. Además, puede ser utilizado en aplicaciones intratisulares o en tratamiento ocular o intra-ocular. También puede ser aplicado mezclado con otros productos.

Por otra parte, el compuesto obtenido puede ser utilizado en un medio de cultivo de células extraídas del propio paciente (de diferentes tejidos, autólogos o heterólogos, de diferentes líneas celulares, de órganos diferentes, cultivo de células madre autólogas, a partir de punción, de tejido adiposo, cordón umbilical del paciente y otros factores de uso) u obtenidas de bancos de tejidos y/o de órganos, de forma que el compuesto mejora el cultivo en laboratorio de dichas células de forma "in vitro", para su posterior implantación o trasplantación al propio paciente del que se ha extraído el plasma a partir del cual se ha obtenido el compuesto sobrenadante. En la práctica, se ha advertido que se obtienen resultados excelentes utilizando el compuesto líquido sobrenadante proveniente de la retracción del plasma WO-A-00/44313 en medios de cultivo y regeneración "in vitro" de tejidos tanto óseos como blandos.

Por otra parte, el compuesto obtenido puede ser utilizado como colirio, para el tratamiento ocular.

Claims

1. Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, que se caracteriza porque comprende las siguientes fases:

-: la realización de una retracción por el medio adecuado de una determinada cantidad de coágulo rico en factores de crecimiento (P.R.F.C.) obtenido según el método de WO-A-00/44313, obteniéndose como consecuencia de la retracción una fase sólida y una fase líquida sobrenadan-te,

-: la extracción de al menos parte de la fase líquida sobrenadante generada como consecuencia de la retracción, constituyendo dicha fase líquida sobrenadante extraída al menos parte del compuesto.

2. Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la reivindicación 1, que se caracteriza porque el medio adecuado es ninguno, realizándose la retracción del coágulo de forma espontánea.

3. Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la reivindicación 1, que se caracteriza porque el medio adecuado es un medio acelerador de la retracción que comprende un centrifugado con aportación de calor.

4. Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la reivindicación 1, que se caracteriza porque el medio adecuado es un medio acelerador de la retracción que comprende un centrifugado sin aportación de calor.

5. Método de preparación de un compuesto para la regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, según la reivindicación 1, que se caracteriza porque el medio adecuado es un medio acelerador de la retracción que comprende la aportación de calor mantenido a una temperatura de 37ºC.

6. Compuesto para la regeneración de tejidos, rico en proteínas, factores de crecimiento y metabolitos plaquetarios y plasmáticos, obtenido a partir de un método de preparación según cualquiera de las reivindicaciones anteriores.

7. Utilización de un compuesto según la reivindicación 6 para la fabricación de un producto para la regeneración de tejidos.

8. Utilización de un compuesto según la reivindicación 6 como componente de un medio de cultivo de células.

9. Utilización de un compuesto según la reivindicación 6 para la fabricación de un producto para el tratamiento ocular o colirio.