Deprecated: The each() function is deprecated. This message will be suppressed on further calls in /home/zhenxiangba/zhenxiangba.com/public_html/phproxy-improved-master/index.php on line 456
JP2554611B2 - ワクチン - Google Patents
[go: Go Back, main page]

JP2554611B2 - ワクチン - Google Patents

ワクチン

Info

Publication number
JP2554611B2
JP2554611B2 JP57037146A JP3714682A JP2554611B2 JP 2554611 B2 JP2554611 B2 JP 2554611B2 JP 57037146 A JP57037146 A JP 57037146A JP 3714682 A JP3714682 A JP 3714682A JP 2554611 B2 JP2554611 B2 JP 2554611B2
Authority
JP
Japan
Prior art keywords
pathogenic
genes
plasmid
gene
vaccine
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
JP57037146A
Other languages
English (en)
Other versions
JPS57171926A (en
Inventor
ウオルタ−・サウスウイツク・ダラス
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Novartis Vaccines and Diagnostics Inc
Original Assignee
Cetus Corp
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Cetus Corp filed Critical Cetus Corp
Publication of JPS57171926A publication Critical patent/JPS57171926A/ja
Application granted granted Critical
Publication of JP2554611B2 publication Critical patent/JP2554611B2/ja
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/025—Enterobacteriales, e.g. Enterobacter
    • A61K39/0258—Escherichia
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/195—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria
    • C07K14/24—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from bacteria from Enterobacteriaceae (F), e.g. Citrobacter, Serratia, Proteus, Providencia, Morganella, Yersinia
    • C07K14/245—Escherichia (G)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/67—General methods for enhancing the expression
    • C12N15/68—Stabilisation of the vector
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
    • A61K2039/52—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells
    • A61K2039/523—Bacterial cells; Fungal cells; Protozoal cells expressing foreign proteins
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Description

【発明の詳細な説明】 この発明は一般的には免疫の分野に関するものであ
り、もつと詳しく云うなら胃腸疾患の予防のための改良
型ワクチンに関するものである。また、発明はこのよう
なワクチンを用いて人間以外の哺乳動物にワクチン接種
する事の改良型方法とこのようなワクチン産生のための
改良法に関するものである。
大腸菌や類似バクテリアによつてひきおこされるもの
のように、人間や他の動物の多くの胃腸病は一般得には
胃腸管に作用して流動バランスを破壊する毒素産生の結
果である。その結果、胃腸管中の上皮細胞からの流動体
と電解液が過度に産生される。（Moon,H.W.Adv.Vet.Sc
i.and Compt.Med.,18巻,179−211ページ,1974年）例と
して、大腸菌のある菌株は、人間と、い飼育動物に、熱
安定なSTと熱に不安定なLTとして単離され同定された２
つの毒素のいずれの作用からの結果といつてもさしつか
えないところのコレラ様の病気をひき起す。Kohler,E.
M。,Am.J.Vet.Res.29巻,2263−2274ページ,1968年,Gyle
s,C.L.とBarnum,D.A.,J.Inf.Dis.120巻,419−426ペー
ジ,1968年。
最近の研究は、病原菌が首尾よく繁殖するためには、
哺乳動物の体の細胞表面へ吸着して増殖出来るような能
力を持つ事が病原菌にとつて必要であるという事を示し
た。コロニー形成後、病原菌は望ましくない徴候をひき
起す毒素のような作用物質を産生する。Science,209巻,
1103−1106ページ,9月,1980年。この吸着にとつて必要
であるアドヘシン（adhesin）はバクテリアの細胞表面
上の糸様突起物で、病原菌が病気をひき起す時は主とし
て必要である線毛（pili）と呼ばれる典型的構造であ
る。
病原菌に対する免疫能は菌が産生する毒素に対して免
疫することによつて、Dobrescu,L.とHuygelen,C.,Zpl.D
et.Med.B,23巻、79−88ページ,1976年，そして付着因子
に対して免疫することによつて、Jones,G.W.,とRutter,
J.M.,Am.J.of Clinical Nutrition,27巻,1441−1449ペ
ージ,12月号,1974年Nagy,B.,Infect.Immun.,27巻,21−2
4ページ,1月号,1980年，授与される事が出来るという事
が確立された。このような免疫能を受けるワクチンは菌
自身が宿主をそこなう物質を産生すための遺伝子を含む
死菌で調製される。加わるに、ワクチンは精製アドヘシ
ンそれ自体を用いて調製された。
先に述べた方法によるワクチンの調製に重大な問題が
ある。もし病原菌そのものが用いられるなら免疫で防ぐ
ように計画されている感染をひきおこす事をさけるため
に病原菌は弱菌可または殺されねばならない。もちろ
ん、これは病原菌を適当に弱菌化するか殺すかして安全
にするため、ワクチン製造で高度な質的制御が要求され
る。さらにまた、この様な方法でこのタイプのワクチン
を製造するには、人の病気の場合製造過程に関連して人
に感作力のある巨大量の病原菌の増殖条件を備える必要
がある。加うるに、病原菌をまわりの環境へ逃さないと
の保証が得られるまで非常な注意が払われなければなら
ない。
多くの病原菌によるさらにその他の問題は莢膜抗原に
よつてもたらされるものである。これ等多糖類層は活性
のある抗体反応を受けた表面抗原に変化をもたらす。そ
の結果、１つのタイプのワクチンによつて活性化された
一組の抗体は、莢膜抗原から生じた変異表面性状をもつ
た同じ病原菌に対して無効になるかもしれない。先に述
べた別の問題と同様これはコストを高め、この方法によ
るワクチン製造を複雑にする。
先に述べたようにワクチンはワクチン注射された宿主
に抗体応答をひき起すことが出来る精製された綿毛を用
いて開発された。Morgan,R.L.,Isaacsol,R.E.とTo,C.C.
Infect.Immun.22巻771−777ページ,12月号,1978年。し
かしながら、目的とする物質を精製するとワクチンのコ
ストを非常に増加させ、操作が非常に困難になり不経済
となるであろう。
それ故に、ワクチンの改良型を供給する事がここに示
す発明の目的である。
発明のもう一つの目的は非病原性微生物から成る改良
型ワクチンを供給する事である。
発明の別の目的の一つはこのような物質の精製と単離
を要求しない抗体決定子としてのトキソイドおよびアド
ヘシンを用いて改良型ワクチンを供給することである。
発明の別の目的は次に述べる事から当業者には明らか
となるであろう。
非常に一般的に云うなら、発明のワクチンは安定な複
製系プラスミドを含む非病原性微生物を意味し、それぞ
れのプラスミドはプラスミド本来のものではない遺伝子
をもつている。その遺伝子は哺乳類中の病原性微生物の
吸着に必要なアドヘシンの遺伝子および病気の原因とな
る毒素のトキソイドのための遺伝子である。遺伝子の二
つのタイプの組み合せもまた可能である。
本発明は新しく明らかになつたDNA組み換え技術を利
用した。この様な技法を用いることによつて、微生物を
遺伝子操作して、無害で、しかし目的とする抗体の産生
を促進する蛋白産物をつくる事が出来る微生物にし得
る。宿主微生物中に導入される遺伝子はプラスミドクロ
ーニングベクターによつて導入される。その遺伝子は患
者に接種される病原微生物吸着のために必要なアドヘシ
ンおよび病気の原因となる毒素のトキソイドのための遺
伝子である。いずれにせよ、遺伝子が導入された非病原
性宿主はそれら遺伝子によつて暗号化されている蛋白を
製造し、ワクチン接種されたものに、このような蛋白に
応答しうる抗体を産生させるようにする。そして、これ
ら抗体は、もちろん病原性微生物種を含めて、これら蛋
白を製造する全ての他の微生物種に対して免疫能を授与
するであろう。
吸着の場合に、４つの知られたK88タイプ、ab,ac,ad
とad（ｅ）がある。K88（ac）とK99は首尾よくクローン
化されている。これらアドヘシンは子ブタ、子ウシ、子
ヒツジの新生児下痢に対する要因である。それらは保護
応答を刺激し抗原性決定子として重要な免疫原であるこ
とがまた判明した。Jones,G.W.とRutter,J.M.Am.J.of C
lin.Nutr.,27巻,1441−1449ページ,12月号,1974年,Guin
ee,P.A.M.,Veldkamp,J.,とJansen,W.H.,Infect.Immun.1
5巻,676−678ページ,1977年。熱不安定な毒素LTのため
の遺伝子はクローン化された。So,M.,Dallas,W.S.,Falk
ow,S.,Infect.Immun.,21巻,405−411ページ,1978年。ま
た、LTのサブユニツトの一であるLT−B,すなわち上記毒
素の無害な部分のための遺伝子がクローン化された。LT
−Ｂは毒素LTに対する抗体反応を促進する決定子である
事が示された。
LTはヒトのコレラに応答する毒素に似ている事が示さ
れた。Clements,J.D.,とFinkelstein,R.A.,Infect.Immu
n.,22巻,709−713ページ,1978年,Cyles,C.,Infect.Immu
n.,9巻,564−569ページ,1974年,Dallas,W.S.,とFalkow,
S.,Nature,288巻,499−501ページ。このように、LT−Ｂ
は病気を起す大腸菌の多くのものと同様この病気のワク
チンとして、生きた非病原性微生物が首尾よく用いられ
る。
次の実施例は発明の実例として提供された。しかしな
がら、特許請求の範囲は発明の全ての形態を含み、そし
てこの実施例の範囲にとどまらない。
実施例 Ｉ 子ブタの下痢を伴う病気は、LT（熱不安定な毒素）と
ST（熱安定毒素）という二つの型の腸毒素を産生する大
腸菌によつてしばしば引き起こされる。これら両者の毒
素はプラスミドによつて仲介されたものである。Gyles,
C.,So,M.,とFalkow,S.,J.Infect.Dis.,130巻,40−49ペ
ージ,1974年。しばしばこの様な毒素を産生する大腸菌
の菌株は、上部腸の上皮細胞に対し、その吸着性の点で
病原性菌株となるフイラメント様表面付属肢または綿毛
を形成する同定されたサブユニツトから成る表面抗体を
持つている。Jones,G.W.とRutter,J.M.,Infect.Immun.,
6巻,918−927ページ,1972年。この抗原の形態は、K88a
b,K88ac,K88adとK88ad（ｅ）として知られる、少くとも
血清学上４つに区別される異つた形で存在する。
K88遺伝子（K88ac）はシアトルのワシントン大学で最
初にクローン化された。Shipley,P.L.,Dallas,W.S.,Dou
gan,G.,とFalkow,S.,Microbiology,1979年（American S
ociety for Microbionogy,176−180ページ）。特別な技
法は報告されなかつたけれども、本質的にはありふれた
クローニング法である。
これを完成するため、90,000塩基対の大きさのプラス
ミドpPS100は制限酵素Hind IIIで切断される。K88遺伝
子に含まれる7,800塩基対DNA断片はプラスミドpBR322中
のHind III切断部位に導入され、大きさにおいて12,100
塩基対を持ちpPS002と名づけられたプラスミドが造られ
る。このプラスミドはプラスミドが入つている大腸菌K1
2株の形質転換体を直接選択出来るアンピシリン（Am
pR）に抵抗性を持つ機能遺伝子を保有している。これら
の形質転換体は、次にテトラサイクリン抵抗性を支配す
る遺伝子を不活化したpBR322のHind III切断部位にDNA
断片を導入したことによるテトラサイクリン感受性（Te
tS）でふるい分けられる。次にテトラサイクリン感受性
形質転換体は、K88抗体を用い、K88産生についてテスト
される。次に制限酵素EcoR Iで切られた小さなDNA断片
（4,800縁切対）は宿主細胞に負担の少いK88プラスミド
を造るために除かれる。
本発明を実施する際、スクリーニングによりいくつか
の陽性クローンが得られた。これらクローンの全ては同
じHind III断片をもつており、これら全ては現象を観察
するかぎり同じであり、そしてラジオイムノアッセイで
測定したところ、これらのクローンは全て野生型病原性
菌株の約４倍のK88抗原を合成した。クローニングベク
ターは細胞当り、10−20個の宿主中に存在するけれど、
K88の産生は野生型のそれの10〜20倍よりは低く、たぶ
ん今までのところ真価が認められていない事によるので
あろう。次にこのような系は生きたまま用いられても良
いし、ワクチン調製での、すでに知られているワクチン
注射調製法によつて弱菌化または殺されてもよい。すで
に知られているワクチン注射法に従つて使用してよい。
しかし望ましくは、雌ブタに分べんの６週前、そして再
び４週前に各々１回ずつ注射する。
実施例 II K99はブタの腸の病気にある程度、そして子ヒツジや
子ウシの腸の病気に比較的高い程度で反応し得るアドヘ
シンまたは綿毛に似たものである。K99を含むワクチン
の調製において、K88に関する実施例Ｉと本質的に同じ
方法が用いられた。使用されたプラスミドはpBR313、Te
tRAmpRと名づけられ、選択はアンピシリン抵抗性、テト
ラサイクリン感受性そしてK99抗体との凝集について行
なつた。その結果、プラスミドpwD010（15,450塩基対）
が選択された。
再び、ワクチンは生きた状態で用いられても良く、知
られている調製法によつて弱菌化または死菌化されたも
ので良い。ワクチン注射は、雌ブタ、雌ヒツジ、雌ウシ
に分べん６週前そして４週前に各々１回皮下注射するこ
とにより、首尾よくワクチンの成果を達成出来る。
実施例 III もちろんK88を産生す微生物とK99を産生する有機体を
混ぜてワクチンを造り出す事も可能である。しかしなが
らこのような技法は二つの異つた型のちがつた増殖形態
の微生物を含む。製造目的のためには、単一微生物中で
２種の毛因子か２種のアドヘシンを産生する事は望まし
い事であるかもしれない。これをするための二つの方法
がある。この実施例は単一の微生物が、一つはK88遺伝
子を含み、他はK99遺伝子を含む２種の異つたプラスミ
ドを含むところの状態で扱う。すぐ後に続く、実施例IV
はK88とK99遺伝子の両方を含む単一プラスミドを用いた
技法を例示する。
K88遺伝子を含む実施例Ｉで組み立てられたプラスミ
ドはpPS002（ATCCNo.39060（ブダペスト条約にもとづく
寄託））と呼ばれる。K99遺伝子を含む実施例IIのプラ
スミドpWD010は、プラスミドpBR313から由来したもので
ある。K88遺伝子を含む、プラスミドpPS002（ATCCNo.39
060（ブタペスト条約にもとづく寄託））はプラスミドp
BR322由来であるので、プラスミドpPS002（ATCCNo.3906
0（ブタペスト条約にもとづく寄託））とpWD010は両方
とも同じ不和合性グループに属する。異なる不和合性グ
ループのメンバーであるプラスミドのみが共に安定に存
在できる。それ故にpWD010のK99遺伝子はpACYC184と呼
ばれるプラスミドのテトラサイクリン抵抗遺伝子（Te
tR）中のBamH−Ｉ断片としてクローンされ、pCTS3002
（ATCCNo.39059（ブダベスト条約にもとづく寄託））
（10,650塩基対）と呼ばれるプラスミドを産生する。こ
のプラスミドは細胞にクロラムフエニコール抵抗性を授
与し、そのテトラサイクリン抵抗遺伝子の機能を失い
（TetS）そしてK99を産生する。このようにプラスミド
はK99遺伝子を含んで造り出される。しかしK88遺伝子を
含むプラスミドのそれとは異つた不和合性グループに属
する。
このような二つのプラスミドによって大腸菌K12株を
形質転換すると、K88とK99両方を産生する細胞になる
が、時間が経過すると不安定性が見られる。このような
形質転換体は上に述べたワクチン注射操作に用いられて
もよい。
実施例 IV 先に述べたようにこの実施例はK88とK99のための両遺
伝子を含む単一プラスミドの利用に関係する。pWD600と
呼ばれる組み立てられたプラスミドは22,200塩基対の大
きさで、宿主細胞へラムフエニコール抵抗性（CMR）とK
88とK99の形質発現を与える。
pPS002（ATCCNo.39060（ブタペスト条約にもとづく寄
託））（12,100塩基対、アンピシリン抵抗性K88陽性）
からK88遺伝子を含むHind III断片がプラスミドpCTS300
2（ATCCNo.39059（ブタベスト条約にもとづく寄託））
（10,650塩基対、クロラムフエニコール抵抗性、K99陽
性）中に導入される異によつて造り出された。T4DNAリ
ガーゼの存在下でプラスミド自身が再環化してしまうの
を防ぐめ、プラスミドpCTS3002（ATCC No.39059）のHin
d III処理につづいてアルカリ性ホスファターゼ処理を
行った。組み立てられたプラスミドは、凝集反応によつ
て評価されるように両方の抗原を産生する。しかし抗原
産生のレベルは別の細菌中のそれぞれの遺伝子によるよ
りは低い。しかしながら、プラスミドは安定で産生を続
けた。
この組み立てられたプラスミドを含むこれら菌株は、
先に述べたようにワクチン注射に用いられる。
実施例 Ｖ LT遺伝子はSo,M.,Dallas,W.S.,とFalkow,S.,Infect.I
mmun.21巻,405−411ページ,1978年によつて報告された
ようにプラスミドp307からクローン化された。段階の次
の続きはDallas,W.S.,Gill,D.M.,Falkow,S.,J.Bacterio
l.,139巻,850−858ページ,1979年に述べられたようにプ
ラスミドEWD299（ATCC No.39071（ブタペスト条約にも
とづく寄託））を産生する。LTのＢサブユニツトのため
に暗号化されたシストロンは次にEWD299（ATCC No.3907
1（ブタペスト条約にもとづく寄託））をEcoR Iで切断
し、EcoR Iで切断されたpJJS500へこのDNAをリガーゼで
付けることによつて形質発現ベクターpJJS500中で個々
にクローン化される。プラスミドはLT−Ｂを産生し、LT
−Ａを産生しないところの特徴で同定された。そしてEW
D1000と名ずけられた。LT−Ｂシストロンはこのプラス
ミドでUV5ラクトースプロモーターから転写される。
分析によれば、病原性野生株に比べて非病原株中では
LT−Ｂが10〜20％多く産生された。
pJJS500はまた肝炎ウイルスＢの表面抗原の遺伝子を
含むことが知られている点に注目されるべきである。し
かしながら、この表面抗体は、形質発現されず、最終産
生は存在しないであろう。しかしながら、肝炎ウイルス
Ｂの表面抗原のための遺伝子を全体にわたつて除去する
ことが望ましいかもしれない。これをするために、プラ
スミドpJJS500はLT−Ｂのための遺伝子はもちろんUV5ラ
クトースプロモーターの遺伝子の全てを除くために制限
酵素Hind IIIとBamH−Ｉによつて切断される。次にこの
断片はpPM31からHind III−BamH−Ｉ断片の特有な除去
後に生み出されたHind III−BamH−Ｉの間隙に導入され
る事によつてプラスミドpPM31に導入される。結果とし
てのプラスミドはテトラサイクリン感受性である（テト
ラサイクリン抵抗性の遺伝子部分はHind III−BamH−Ｉ
断片で除かれるため）。このプラスミドはまた肝炎ウイ
ルスＢ抗原のための遺伝子を欠損している。
実施例 VI LT−ＢとK88は先の実施例ＩとＶ中で造られたたよう
な２つの異つたプラスミドpPS002とEWD10000（ATCC No.
39072（ブダペスト条約にもとづく寄託））から同じ宿
主中で産生される。これら組立てられたプラスミド異つ
た適合性グループであり、そしてそのため同じ宿主中で
安定である。抗原産生はすでに検討した結果と類似であ
る。
先の実施例の全てにおいて、抗生物質抵抗性遺伝子は
用いらいれたプラスミドから除かれることが望ましい。
ワクチン中に抵抗遺伝子を持たない事が望ましくそして
これらは遺伝要素によつて置き換えられ、ラクトース利
用のために必要な酵素の構成的形質発現の能力を微生物
に授与し、組み換えプラスミドによるバクテリアの同定
を容易にする。
それゆえに、本発明は改良ワクチンや、生菌のままで
も弱菌化または死菌化した非病原性微生物が用いられる
改良型ワクチン注射操作法を生み出した。このように微
生物によつて産生される別の毒素または別の病気運搬因
子はワクチン中に存在しない。生菌でありそして胃腸毒
素のための非毒性抗原決定因子に属する適当な吸着因子
を含むワクチンは永久に胃腸管にコロニー化することが
出来たので長期持続性免疫能を授与できた。
本発明のワクチンの効果を具体的に示す下記免疫試験
を行った。４つの分画（K88,K99および987P線毛抗原バ
クテリン：およびLTB毒素）すべてを別個に評価し、そ
の後組合せて個々の活性および各フラクション間の干渉
の強さを測定した。さらに、本発明のワクチンを、４種
類の抗原同時投与に対する保護能力について試験した。
（自然界ではこれらのきびしい同時抗原投与が生じる可
能性はない。） 実験法 同日に分娩する飼育された雌ブタまたは若い雌ブタを
ワクチン投与群に非ワクチン投与対照群とに分けた。分
娩の約６週間前と３週間前にワクチンを適当なバクテリ
ンとトキソイドをとともに短い針で首に非経口投与し
た。
分娩時、子ブタを確認のために誕生順にしるしをつけ
た。哺乳が観察された後（通常誕生から２〜４時間）、
子ブタに適当な抗原菌株を経口投与した。子ブタを５日
間24時間毎に監視し、下痢、抑うつ、脱水および死亡に
ついて臨床点数方式によって記録した。
新生児ブタの死亡原因を決定することは必ずしも可能
ではないので、弱く生れついたか、または明らかな奇形
を持つかまたは死亡前の感染の証拠を少しも示さない子
ブタは被験動物から除いた。
研究の結果、同産子の下痢にかかわりのある死亡の平
均％は表１に示すとおりである。
＊K88およびK99線毛抗原の間に交叉保護も干渉も存在す
ることは知られていないので、K88およびK99バクテリン
の組合せを試験のために選択した。
＊＊K88かLTのいずれかを投与しても、K88とLT抗原の両
方が被投与動物に存在した。これは病原性K88がLTを発
現したからである。同じく、LTはK88抗原と組合せての
み投与できた。
表１中の括弧内の数字はブタ胎児の数を示す。
考察 試験１〜４、すなわち各分画についての効力試験にお
いて、各抗原は充分な免疫反応を雌ブタに生ぜしめて子
ブタに受動免疫を与えた。保護レベルにいく分ちがいが
あるものの、各試験においてワクチン投与の同産子と対
照の同産子との間の死亡率には有意の差があった。
抗原干渉試験（試験５〜７）においてもワクチン投与
された雌ブタや子ブタは保護されていることが観察さ
れ、分画間の干渉は見られなかった。事実、試験５のデ
ータK88およびLTB分画が相補的保護を与えることができ
ることを示唆している。試験５においては、ワクチン投
与された群の死亡はK88またはLTB個別の抗原試験のどち
らよりも低い。対照群の死亡数はこれら３つの試験にお
いてほとんど一致している。
試験６および７については、保護の有意性を支持する
充分なデータはないが、平均死亡％はワクチン投与群の
方が小さい。試験６においてワクチン投与された雌ブタ
の同産子の保護が小さいのは、バクテリン−トキソイド
の免疫反応促進能力以外の要因にもとづくらしい。
試験６で使用されたK99バクテリンのロットを製造す
るのに使用された抗原の量は、試験２で使用された量の
半分であった。試験２と６の結果を比較すると、同量の
K99バクテリン抗原について対等と非干渉を示してい
る。さらに、同産子のサイズ、新生ブタの生命力、雌ブ
タの一般的健康および該雌ブタが産生し放出し得る初乳
の量も保護を生ぜじめる因子であって、ワクチン投与に
よって影響されない。
試験８に示された抗原投与群の不自然に高い死亡％に
もかかわらず、結果は注目に値する。ワクチン投与され
た１つの同産子がすべて死亡したが、この同産子を無視
すれば、ワクチン投与された雌ブタの同産子の平均死亡
％は8.5％となり、対照群に対して有意に有効である。
安全性試験 本発明のワクチンの安全性は416匹の健康な妊娠ブタ
を含むフィールドでの試験によって確認した。これらの
試験におてバクテリン−トキソイドの使用にもとづく副
作用は見られなかった。
投与および投与量 本発明のワクチンを接種するために、容器をよく振と
うし、5ml量を引き出した。妊娠後期の雌ブタに筋肉内
または皮下投与した。一次ワクチン投与のためには少な
くとも３週間間隔をあけて２回投与することが必要であ
る。最後の投与は分娩の２週間以前に投与する。続く妊
娠においては、分娩の２週間前以前に１回投与すべきで
ある。
ここに示し、述べた事に加えて発明の種々の修飾は先
の記載から技術に熟練した者にとつては明らかとなるで
あろう。このような修飾は特許請求の範囲内にある。

Claims (13)

    (57)【特許請求の範囲】
  1. 【請求項１】病原性微生物によって生じる哺乳動物の胃
    腸疾患の予防のためのワクチンであって： （ｉ）哺乳動物における上記病原性微生物の吸着に必要
    なアドヘシンのための遺伝子及び（ii）上記疾患の原因
    となる毒素のトキソイドのための遺伝子を有する非病原
    性微生物株であって、上記２つの遺伝子は、両方の遺伝
    子を有する単一の安定な複製可能なプラスミドあるいは
    上記遺伝子の一方ずつを有する２つの異なる安定な複製
    可能なプラスミドによって導入されている非病原性微生
    物株からなるワクチン。
  2. 【請求項２】上記プラスミドがDNA分配断片を含有して
    いる特許請求の範囲第１項記載のワクチン。
  3. 【請求項３】上記病原性微生物及び非病原性微生物がイ
    ー・コリ（E.coli）であって、アドヘシンがK88およびK
    99からなる群から選択される特許請求の範囲第１項記載
    のワクチン。
  4. 【請求項４】上記病原性微生物及び非病原性微生物がイ
    ー・コリ（E.coli）であって、トキソイドがLT−Ｂであ
    る特許請求の範囲第１項記載のワクチン。
  5. 【請求項５】病原性微生物によって生じた胃腸病の予防
    のために人間以外の哺乳動物に予防接種する方法であっ
    て： 上記動物に、（ｉ）哺乳動物における上記病原性微生物
    の吸着に必要なアドヘシンのための遺伝子及び（ii）上
    記疾患の原因となる毒素のトキソイドのための遺伝子を
    有する非病原性微生物株であって、上記２つの遺伝子
    は、両方の遺伝子を有する単一の安定な複製可能なプラ
    スミドあるいは上記遺伝子の一方ずつを有する２つの異
    なる安定な複製可能なプラスミドによって導入されてい
    る非病原性微生物株を投与することからなる方法。
  6. 【請求項６】上記プラスミドがDNA分配断片を含有する
    特許請求の範囲第５項記載の方法。
  7. 【請求項７】上記病原性微生物及び非病原性微生物がイ
    ー・コリ（E.coli）であって、アドヘシンがK88およびK
    99からなる群から選択される特許請求の範囲第５項記載
    の方法。
  8. 【請求項８】上記病原性微生物及び非病原性微生物がイ
    ー・コリ（E.coli）であって、トキソイドがLT−Ｂであ
    る特許請求の範囲第５項記載の方法。
  9. 【請求項９】疾患がコレラであり、トキソイドがLT−Ｂ
    である特許請求の範囲第５項記載の方法。
  10. 【請求項１０】病原性微生物によって哺乳動物に生ぜし
    められる胃腸疾患の予防のためのワクチンの製造方法で
    あって、 非病原性微生物株の中に、（ｉ）上記哺乳動物における
    上記病原性微生物の吸着に必要なアドヘシンのための遺
    伝子及び（ii）上記疾患を生ぜしめる毒素のトキソイド
    のための遺伝子を導入することからなり、上記２つの遺
    伝子は、両方の遺伝子を有する単一の安定な複製可能な
    プラスミドあるいは上記遺伝子の一方ずつを有する２つ
    の異なる安定な複製可能なプラスミドによって上記非病
    原性微生物株の中に導入されることからなる方法。
  11. 【請求項１１】上記プラスミドがDNA分配断片を含有す
    る特許請求の範囲第10項記載の方法。
  12. 【請求項１２】上記病原性微生物及び非病原性微生物が
    イー・コリ（E.coli）であって、アドヘシンがK88およ
    びK99からなる群から選択される特許請求の範囲第10項
    記載の方法。
  13. 【請求項１３】上記病原性微生物及び非病原性微生物が
    イー・コリ（E.coli）であって、トキソイドがLT−Ｂで
    ある特許請求の範囲第10項記載の方法。
JP57037146A 1981-03-09 1982-03-09 ワクチン Expired - Lifetime JP2554611B2 (ja)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US24159481A 1981-03-09 1981-03-09
US241594 1981-03-09

Publications (2)

Publication Number Publication Date
JPS57171926A JPS57171926A (en) 1982-10-22
JP2554611B2 true JP2554611B2 (ja) 1996-11-13

Family

ID=22911341

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
JP57037146A Expired - Lifetime JP2554611B2 (ja) 1981-03-09 1982-03-09 ワクチン

Country Status (9)

Country Link
EP (1) EP0060129B1 (ja)
JP (1) JP2554611B2 (ja)
AT (1) ATE47961T1 (ja)
AU (1) AU559550B2 (ja)
CA (1) CA1201076A (ja)
DE (1) DE3280019D1 (ja)
DK (1) DK172670B1 (ja)
NZ (1) NZ199866A (ja)
WO (1) WO1982003088A1 (ja)

Families Citing this family (35)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5137721A (en) * 1981-03-09 1992-08-11 Cetus Corporation Employing strains of E. coli expressing non-indigenous adhesins and toxoids of E. coli
US5360897A (en) * 1981-08-31 1994-11-01 The University Of Rochester Immunogenic conjugates of streptococcus pneumonial capsular polymer and toxin or in toxiad
US5097020A (en) * 1983-07-05 1992-03-17 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4673574A (en) * 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US4902506A (en) * 1983-07-05 1990-02-20 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
CA1338705C (en) * 1981-10-22 1996-11-12 Roy Curtiss Iii Vaccines obtained from antigenic gene products of recombinant genes
JPS58502181A (ja) * 1982-01-18 1983-12-22 サンド・アクチエンゲゼルシヤフト 新規プラスミドと細菌株並びにその製造法
JPS58146596A (ja) * 1982-02-25 1983-09-01 Takeda Chem Ind Ltd 組換えｄｎａ、それで形質転換させた微生物およびそれらの用途
GB8314645D0 (en) * 1983-05-26 1983-06-29 Wellcome Found Bivalent vaccines
US4761283A (en) * 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
NZ209308A (en) * 1983-08-30 1991-08-27 Genentech Inc Vaccine against hsv involving a truncated membrane-free derivative of a membrane-bound protein
WO1985003521A1 (en) * 1984-02-01 1985-08-15 Enterovax Research Pty. Ltd. Bacterial strains
AU619908B2 (en) * 1984-02-01 1992-02-06 Enterovax Research Pty. Ltd. Bacterial strains
DK219084D0 (da) * 1984-05-02 1984-05-02 Frederik Carl Peter Lindberg Antigen
CA1340372C (en) * 1984-07-09 1999-02-02 John D. Clements Production of e. coli lt-b enterotoxin subunit
US4808700A (en) * 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
US5308835A (en) * 1984-07-09 1994-05-03 Praxis Biologics, Inc. Production of the E. coli LT-B enterotoxin subunit
ES8705033A1 (es) * 1984-12-04 1987-04-16 Biotech Australia Pty Ltd Un metodo para preparar una vacuna para uso en el tratamiento prevencion de diarrea porcina neonatol.
DK41885A (da) * 1985-01-31 1986-11-13 Slagteriernes Forskningsinst 987p-fimbrie-producerende mikroorganisme, vaccine til immunisering af grise samt fremgangsmaade til fremstilling af vaccinen
JP2660511B2 (ja) * 1985-05-15 1997-10-08 バイオテクノロジ−・オ−ストラリア・ピ−テイ−ワイ・リミテツド 経口ワクチン
IL78775A (en) * 1985-05-15 1992-06-21 Biotech Australia Pty Ltd Oral vaccines
US6103243A (en) * 1985-05-15 2000-08-15 Biotechnology Australia Pty, Ltd Oral vaccines
EP0264150B1 (fr) * 1986-10-13 1993-01-07 Solvay Microorganismes comportant des pili comme protéines porteuses, pili isolés à partir de ces microorganismes, procédé d'excrétion de peptides ou de protéines à l'aide de ces pili et utilisation de ceux-ci
FR2605017B1 (fr) * 1986-10-13 1989-10-06 Solvay Microorganismes comportant des pili comme proteines porteuses, pili isoles a partir de ces microorganismes et procede d'excretion de peptides ou de proteines a l'aide de ces pili.
DE3712890A1 (de) * 1987-04-15 1988-10-27 Teichmann Reinhard K Priv Doz Verwendung antigener substanzen zur prophylaxe oder therapie von stoerungen und krankheiten im verdauungstrakt von tieren und menschen
US5162226A (en) * 1987-08-24 1992-11-10 University Of Tennessee Research Corp. (U.T.R.C.) Therapeutic compositions against streptococcal infections, transformed hosts, methods of immunization and genetically engineered products
US5124153A (en) * 1987-08-24 1992-06-23 University Of Tennessee Research Corp. Therapeutic compositions against streptococcal infections, transformed hosts, methods of immunization and genetically engineered products
DE3871489D1 (de) * 1987-10-26 1992-07-02 Akzo Nv Impfstoff gegen e.coli-blutvergiftung bei gefluegel.
US5079165A (en) * 1988-06-29 1992-01-07 Praxis Biologics, Inc. Production of the E. coli LT-B enterotoxin subunit in S. typhi
CA1339307C (en) * 1988-09-06 1997-08-19 Roy Curtiss, Iii Oral immunization by transgenic plants
AU2793797A (en) * 1997-05-21 1998-12-11 Dae Woong Pharmaceutical Co., Ltd. A recombinant microorganism expressing an antigenic protein, adhesin
HU221664B1 (hu) * 1999-03-31 2002-12-28 MTA Állatorvostudományi Kutatóintézete Élő, szájon át adható Escherichia coli vakcina készítésére alkalmas törzs a sertések választási hasmenésének megelőzésére és a törzs előállítására alkalmas eljárás
JP2006506991A (ja) 2002-11-25 2006-03-02 デン・コンゲリエ・ヴェテリネー−オ・ランボホイスコレ ブタ多型およびその検出のための方法
HUE024565T2 (hu) 2004-02-03 2016-02-29 Prevtec Microbia Inc Élõ baktériumok alkalmazása növekedésserkentésre állatokban
WO2009004002A1 (en) * 2007-07-02 2009-01-08 Sbl Vaccin Ab Hybrid operon for expression of colonization factor (cf) antigens of enterotoxigenic escherichia coli

Family Cites Families (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NL294835A (ja) * 1962-07-19 1900-01-01
US3907987A (en) * 1972-05-25 1975-09-23 Canadian Patents Dev Enteric disease vaccine
GB1472624A (en) * 1974-09-02 1977-05-04 Canadian Patents Dev Enteric disease vaccine
US4237224A (en) * 1974-11-04 1980-12-02 Board Of Trustees Of The Leland Stanford Jr. University Process for producing biologically functional molecular chimeras
DE2530275A1 (de) * 1975-07-07 1977-01-27 Max Planck Gesellschaft Salmonella-coli-hybride, verfahren zu deren herstellung und vermehrung und apathogener lebend-impfstoff gegen salmonellosen
NO158880C (no) * 1977-11-08 1988-11-09 Genentech Inc Fremgangsmaate for fremstilling av et spesifikt pattedyrhormon.
FR2442271A1 (fr) * 1978-11-27 1980-06-20 Pasteur Institut Vecteur permettant l'insertion d'un gene procaryote ou eucaryote, et l'excretion de la proteine exprimee
US4337314A (en) * 1979-05-23 1982-06-29 Research Corporation Genetically attenuated bacterial vaccines with multiple mutations of the same phenotype

Also Published As

Publication number Publication date
EP0060129B1 (en) 1989-11-15
AU8331082A (en) 1982-09-28
ATE47961T1 (de) 1989-12-15
CA1201076A (en) 1986-02-25
DK172670B1 (da) 1999-05-10
JPS57171926A (en) 1982-10-22
WO1982003088A1 (en) 1982-09-16
AU559550B2 (en) 1987-03-12
NZ199866A (en) 1984-11-09
DK101982A (da) 1982-09-10
EP0060129A2 (en) 1982-09-15
DE3280019D1 (en) 1989-12-21
EP0060129A3 (en) 1983-06-01

Similar Documents

Publication Publication Date Title
JP2554611B2 (ja) ワクチン
Zhang et al. Protective immunity of a multivalent vaccine candidate against piglet diarrhea caused by enterotoxigenic Escherichia coli (ETEC) in a pig model
JP4179627B2 (ja) コレラワクチンとしての欠失変異体
Van den Broeck et al. Induction of immune responses in pigs following oral administration of purified F4 fimbriae
JP2640525B2 (ja) 無毒の微生物とその使用
US7355092B2 (en) Genetic vaccines for the production of chicken egg-yolk antibodies against enterotoxigenic Escherichia coli and other pathogens
CN102971008B (zh) 降低弯曲菌属感染的疫苗和方法
Vishwanath et al. A recombinant Rickettsia conorii vaccine protects guinea pigs from experimental boutonneuse fever and Rocky Mountain spotted fever
WO1985003521A1 (en) Bacterial strains
JP2002507414A (ja) ワクチンに使用する弱毒化細菌
EP0474646A1 (en) Bordetella vaccines
US20190322707A1 (en) Mutated Salmonella Enterica
ES2824402T3 (es) Vacunas atenuadas contra Pasteurella multocida y procedimientos de fabricación y uso de las mismas
EP0127153A2 (en) Bivalent vaccines
EP0314224B1 (en) Vaccine against e.coli septicaemia in poultry
JP7728784B2 (ja) ストレプトコッカス・スイス血清型９、配列型１６に対する防御のためのワクチン
Attridge et al. Towards a live oral vaccine against enterotoxigenic Escherichia coli of swine
JPH08502253A (ja) 細胞媒介性免疫応答の増強方法
Nandre et al. Adjuvant effect of Escherichia coli heat labile enterotoxin B subunit against internal egg contamination in domestic fowl immunised with a live Salmonella enterica serovar Enteritidis vaccine
US5137721A (en) Employing strains of E. coli expressing non-indigenous adhesins and toxoids of E. coli
Zhang et al. An Attenuated Escherichia coli K88ac LT (S63K) Δ STb Efficiently Provides Protection Against Enterotoxigenic Escherichia coli in the Mouse Model
WO2025040792A1 (en) Multivalent vaccine against swine infections
JP2024527138A (ja) 様々な血清型のストレプトコッカス・スイスに対して保護するためのワクチン
JP2024528169A (ja) 様々な血清型のストレプトコッカス・スイスに対する防御のためのワクチン