JP2559907B2 - ヒト・オステオカルシンフラグメントに対する抗体 - Google Patents
ヒト・オステオカルシンフラグメントに対する抗体Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、ヒト・オステオカルシ
ンのフラグメントに選択的に結合する抗体に関する。
ンのフラグメントに選択的に結合する抗体に関する。
【０００２】
【従来の技術】オステオカルシン〔別名、ｂｏｎｅ ｇ
ｌａ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＧＰ）〕は、骨のビタミンＫ
依存性のカルシウム結合性タンパクである。その分子量
は５，８００であり４９のアミノ酸残基により構成され
ている。このタンパクは、オステオブラスト（骨芽球）
から生産され、骨の非コラーゲンタンパクの構成成分の
約２０％を占めている。このタンパクにはγ−ｃａｒｂ
ｏｘｙｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓが
あり、これはハイドロキシアパタイトと強いアフィニテ
イがあり、それゆえに骨マトリックス形成に重要な役割
を有しているものと推定されている。
ｌａ ｐｒｏｔｅｉｎ（ＢＧＰ）〕は、骨のビタミンＫ
依存性のカルシウム結合性タンパクである。その分子量
は５，８００であり４９のアミノ酸残基により構成され
ている。このタンパクは、オステオブラスト（骨芽球）
から生産され、骨の非コラーゲンタンパクの構成成分の
約２０％を占めている。このタンパクにはγ−ｃａｒｂ
ｏｘｙｇｌｕｔａｍｉｃａｃｉｄ ｒｅｓｉｄｕｅｓが
あり、これはハイドロキシアパタイトと強いアフィニテ
イがあり、それゆえに骨マトリックス形成に重要な役割
を有しているものと推定されている。
【０００３】このオステオカルシンは、ニワトリとウシ
の骨から見出されたのが最初であるが〔Ｐｒｏｃ． Ｎ
ａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，ｖｏｌ．７
２，ｐｐ３９２５〜３９２９（１９７５）、同ｖｏｌ．
７３，ｐｐ１４４７〜１４５１（１９７６）〕、その他
ヒトを含めて種々の動物の骨から見出されており〔Ｔｈ
ｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ｖｏｌ．２５５，ｐｐ８６８５〜８
６９１（１９８０）〕、その構造の類似性が言われてい
る。
の骨から見出されたのが最初であるが〔Ｐｒｏｃ． Ｎ
ａｔｌ． Ａｃａｄ． Ｓｃｉ． ＵＳＡ，ｖｏｌ．７
２，ｐｐ３９２５〜３９２９（１９７５）、同ｖｏｌ．
７３，ｐｐ１４４７〜１４５１（１９７６）〕、その他
ヒトを含めて種々の動物の骨から見出されており〔Ｔｈ
ｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃ
ｈｅｍｉｓｔｒｙ ｖｏｌ．２５５，ｐｐ８６８５〜８
６９１（１９８０）〕、その構造の類似性が言われてい
る。
【０００４】このオステオカルシンの測定に関して、い
くつかのグループがチャレンジしている。Ｐｒｉｃｅら
〔Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ｖｏｌ．６６，
ｐｐ８７８〜８８３（１９８０）〕や、Ｄｅｌｍａｓら
〔Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ｖｏｌ．７１，
ｐｐ１３１６〜１３２１（１９８３）〕がウシとヒト・
オステオカルシンの構造の類似性を利用してウシのオス
テオカルシンに対する抗体を用いて競合法によりヒト・
オステオカルシンを測定するためのラジオイムノアッセ
イを開発している。
くつかのグループがチャレンジしている。Ｐｒｉｃｅら
〔Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ｖｏｌ．６６，
ｐｐ８７８〜８８３（１９８０）〕や、Ｄｅｌｍａｓら
〔Ｊ． Ｃｌｉｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ｖｏｌ．７１，
ｐｐ１３１６〜１３２１（１９８３）〕がウシとヒト・
オステオカルシンの構造の類似性を利用してウシのオス
テオカルシンに対する抗体を用いて競合法によりヒト・
オステオカルシンを測定するためのラジオイムノアッセ
イを開発している。
【０００５】また、Ｃａｔｈｅｒｗｏｏｄらは〔Ｂｏｎ
ｅ ｖｏｌ．６，ｐｐ９〜１３（１９８５）〕、ウシと
ヒト・オステオカルシンに共通なアミノ酸配列であるＮ
末端側から数えて３７から４９残基（Ｃ端）のペプチド
を合成し、その抗体を利用して同様に競合法により、ラ
ジオイムノアッセイを構成し、ヒト・オステオカルシン
の測定を可能にしている。
ｅ ｖｏｌ．６，ｐｐ９〜１３（１９８５）〕、ウシと
ヒト・オステオカルシンに共通なアミノ酸配列であるＮ
末端側から数えて３７から４９残基（Ｃ端）のペプチド
を合成し、その抗体を利用して同様に競合法により、ラ
ジオイムノアッセイを構成し、ヒト・オステオカルシン
の測定を可能にしている。
【０００６】一方、これらの方法がポリクローナル抗体
を用いた測定法であるのに対し、感度、精度の面の改良
を目的として、特開平１−１６０４９３号公報では同様
にウシのオステオカルシンに対するモノクローナル抗体
（以下ＭＣＡと記す）をとり、その中にＣ末端（45Ｐｈ
ｅ−49Ｖａｌ）を認識するＭＣＡと、中間領域を認識す
る（21Ｇｌａ−31Ｇｌｕ）ＭＣＡとの２種のＭＣＡを用
いたサンドイッチ法が開示されている。従って、この方
法も、ウシとヒトのオステオカルシンの共通アミノ酸配
列を利用して測定系を構成し、ヒトの血中系の測定を行
っていることになる。
を用いた測定法であるのに対し、感度、精度の面の改良
を目的として、特開平１−１６０４９３号公報では同様
にウシのオステオカルシンに対するモノクローナル抗体
（以下ＭＣＡと記す）をとり、その中にＣ末端（45Ｐｈ
ｅ−49Ｖａｌ）を認識するＭＣＡと、中間領域を認識す
る（21Ｇｌａ−31Ｇｌｕ）ＭＣＡとの２種のＭＣＡを用
いたサンドイッチ法が開示されている。従って、この方
法も、ウシとヒトのオステオカルシンの共通アミノ酸配
列を利用して測定系を構成し、ヒトの血中系の測定を行
っていることになる。
【０００７】従来、以上のようなヒト・オステオカルシ
ンの測定に対する種々のアプローチがあるが、特定のオ
ステオカルシンフラグメントを選択的に測定しようとす
る試みはほとんどない。このフラグメントは、骨吸収に
おいて出現する可能性が示されている〔Ｊ． Ｃｌｉ
ｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ｖｏｌ．７７，ｐｐ１７６２〜
１７６９（１９８６）〕。このフラグメントを測定する
試みとして、我々は、国際公開ＷＯ９０／０９５８７号
公報にてその内容を公開している。しかしながらこの方
法においては、完全ヒト・オステオカルシンおよびその
フラグメントの合計量を測定し、別に測定した完全ヒト
・オステオカルシンの量と組合せてそれらの差を算出す
る必要がある。
ンの測定に対する種々のアプローチがあるが、特定のオ
ステオカルシンフラグメントを選択的に測定しようとす
る試みはほとんどない。このフラグメントは、骨吸収に
おいて出現する可能性が示されている〔Ｊ． Ｃｌｉ
ｎ． Ｉｎｖｅｓｔ． ｖｏｌ．７７，ｐｐ１７６２〜
１７６９（１９８６）〕。このフラグメントを測定する
試みとして、我々は、国際公開ＷＯ９０／０９５８７号
公報にてその内容を公開している。しかしながらこの方
法においては、完全ヒト・オステオカルシンおよびその
フラグメントの合計量を測定し、別に測定した完全ヒト
・オステオカルシンの量と組合せてそれらの差を算出す
る必要がある。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明は、ヒト・オス
テオカルシンフラグメントを選択的に測定するための抗
体を提供することを目的とする。
テオカルシンフラグメントを選択的に測定するための抗
体を提供することを目的とする。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明は、ヒト・オステ
オカルシンのＮ末端１〜１９残基以内のペプチドでその
ペプチドのＣ末端が１９残基目であるペプチドを免疫し
て得られるヒト・オステオカルシンフラグメントに対す
る抗体である。本発明のヒト・オステオカルシンフラグ
メントに対する抗体は、ヒト・オステオカルシンのＮ末
端１〜１９残基以内、好ましくはＮ末端１０〜１９残基
以内のペプチドでそのペプチドのＣ末端が１９残基目で
あるペプチドを免疫して得られる。このペプチドは、ま
た４残基以上のアミノ酸が結合しているものであること
が好ましい。またこのペプチドはそのＮ末端側に、例え
ばシステインのような、キャリヤータンパクとの結合性
を有する官能基が結合されているものであることが好ま
しい。本発明の抗体は、ヒト・オステオカルシン１〜４
９に対する反応性が低く、ヒト・オステオカルシン１〜
１９に対する反応性が高いことが好ましい。固相抗原競
合法による具体的な反応比は２．５以上であることが好
ましく、固相抗原結合法による反応比が１０以上である
ことがさらに好ましい。ここで固相抗原競合法は評価す
べき抗体に対応する抗原を固相化しておき（固相化抗
原）、この固相化抗原と、別に添加した抗原とを競合さ
せて抗体がどちらに選択的に反応するかを評価する方法
であり、固相抗原結合法は、評価すべき抗体に対応する
抗原とその他の抗原をいずれも固相化しておき、抗体が
いずれの抗原と選択的に反応するかを評価する方法であ
る。
オカルシンのＮ末端１〜１９残基以内のペプチドでその
ペプチドのＣ末端が１９残基目であるペプチドを免疫し
て得られるヒト・オステオカルシンフラグメントに対す
る抗体である。本発明のヒト・オステオカルシンフラグ
メントに対する抗体は、ヒト・オステオカルシンのＮ末
端１〜１９残基以内、好ましくはＮ末端１０〜１９残基
以内のペプチドでそのペプチドのＣ末端が１９残基目で
あるペプチドを免疫して得られる。このペプチドは、ま
た４残基以上のアミノ酸が結合しているものであること
が好ましい。またこのペプチドはそのＮ末端側に、例え
ばシステインのような、キャリヤータンパクとの結合性
を有する官能基が結合されているものであることが好ま
しい。本発明の抗体は、ヒト・オステオカルシン１〜４
９に対する反応性が低く、ヒト・オステオカルシン１〜
１９に対する反応性が高いことが好ましい。固相抗原競
合法による具体的な反応比は２．５以上であることが好
ましく、固相抗原結合法による反応比が１０以上である
ことがさらに好ましい。ここで固相抗原競合法は評価す
べき抗体に対応する抗原を固相化しておき（固相化抗
原）、この固相化抗原と、別に添加した抗原とを競合さ
せて抗体がどちらに選択的に反応するかを評価する方法
であり、固相抗原結合法は、評価すべき抗体に対応する
抗原とその他の抗原をいずれも固相化しておき、抗体が
いずれの抗原と選択的に反応するかを評価する方法であ
る。
【００１０】抗体としては、モノクローナル抗体および
ポリクローナル抗体のいずれであってもよいがポリクロ
ーナル抗体であることが好ましい。また本発明の抗体
は、抗体全分子、Ｆ（ａｂ′）2 、Ｆａｂ′またはＦａ
ｃｂフラグメントなど抗原との結合能を保持しているも
のであればそのいずれであってもよい。かかるフラグメ
ントは、Ｆ（ａｂ′）2 やＦａｂ′の場合には後記のよ
うにして得られるモノクローナル抗体またはポリクロー
ナルを公知の方法、例えば該抗体をペプシンで分解して
Ｆ（ａｂ′）2 フラグメントとするか、さらにＦ（ａ
ｂ′）2 フラグメントを還元処理することによってＦａ
ｂ′フラグメントとすることにより得られる〔Ｎｉｓｏ
ｎｏｆｆ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．：Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． ８９ ２３０（１９６
０）、Ｐａｒｈａｍ，Ｐ．：Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１３１ ２８９５（１９８３）など〕。この抗体は、Ｎ
末端１９残基ヒト・オステオカルシンフラグメントに対
して選択的に反応する。
ポリクローナル抗体のいずれであってもよいがポリクロ
ーナル抗体であることが好ましい。また本発明の抗体
は、抗体全分子、Ｆ（ａｂ′）2 、Ｆａｂ′またはＦａ
ｃｂフラグメントなど抗原との結合能を保持しているも
のであればそのいずれであってもよい。かかるフラグメ
ントは、Ｆ（ａｂ′）2 やＦａｂ′の場合には後記のよ
うにして得られるモノクローナル抗体またはポリクロー
ナルを公知の方法、例えば該抗体をペプシンで分解して
Ｆ（ａｂ′）2 フラグメントとするか、さらにＦ（ａ
ｂ′）2 フラグメントを還元処理することによってＦａ
ｂ′フラグメントとすることにより得られる〔Ｎｉｓｏ
ｎｏｆｆ，Ａ．，ｅｔ ａｌ．：Ａｒｃｈ． Ｂｉｏｃ
ｈｅｍ． Ｂｉｏｐｈｙｓ． ８９ ２３０（１９６
０）、Ｐａｒｈａｍ，Ｐ．：Ｊ． Ｉｍｍｕｎｏｌ．
１３１ ２８９５（１９８３）など〕。この抗体は、Ｎ
末端１９残基ヒト・オステオカルシンフラグメントに対
して選択的に反応する。
【００１１】本発明は、またヒト・オステオカルシンの
Ｎ末端４５〜４９残基のペプチドを免疫して得られる抗
体である。このペプチドはそのＣ末端側に、例えばシス
テインのような、キャリヤータンパクとの結合性を有す
る官能基が結合されているものであることが好ましい。
この抗体は、ヒト・オステオカルシン１〜４９に対する
反応性が低く、Ｎ末端４５〜４９に対する反応性が高い
ことが好ましく、固相抗原競合法による具体的な反応比
は１．５以上であることが好ましく、固相抗原結合法に
よる反応比が５．０以上であることがさらに好ましい。
抗体としては、モノクローナル抗体およびポリクローナ
ル抗体のいずれであってもよいがポリクローナル抗体で
あることが好ましい。またこの抗体は、抗体全分子、Ｆ
（ａｂ′）2 、Ｆａｂ′またはＦａｃｂフラグメントな
ど抗原との結合能を保持しているものであればそのいず
れであってもよいことは前記と同様である。この抗体
は、Ｃ末端５残基ヒト・オステオカルシンフラグメント
に選択的に反応する。
Ｎ末端４５〜４９残基のペプチドを免疫して得られる抗
体である。このペプチドはそのＣ末端側に、例えばシス
テインのような、キャリヤータンパクとの結合性を有す
る官能基が結合されているものであることが好ましい。
この抗体は、ヒト・オステオカルシン１〜４９に対する
反応性が低く、Ｎ末端４５〜４９に対する反応性が高い
ことが好ましく、固相抗原競合法による具体的な反応比
は１．５以上であることが好ましく、固相抗原結合法に
よる反応比が５．０以上であることがさらに好ましい。
抗体としては、モノクローナル抗体およびポリクローナ
ル抗体のいずれであってもよいがポリクローナル抗体で
あることが好ましい。またこの抗体は、抗体全分子、Ｆ
（ａｂ′）2 、Ｆａｂ′またはＦａｃｂフラグメントな
ど抗原との結合能を保持しているものであればそのいず
れであってもよいことは前記と同様である。この抗体
は、Ｃ末端５残基ヒト・オステオカルシンフラグメント
に選択的に反応する。
【００１２】以下、本発明の抗体の作成法のそれぞれに
ついてポリクローナル抗体を例として説明する。抗体が
モノクローナル抗体である場合は、以下のようにして得
られた免疫源を用い、ケーラーとミルシュタインによる
細胞融合法〔Ｇ．Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔ
ｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）、２５６、４９
５─４９７（１９７５）〕により作製されたハイブリド
ーマを培養して分泌させ、その培養液から分離すること
により調製することができる。（Ｉ）Ｎ末端１９残基オ
ステオカルシンフラグメントに選択的に反応する抗体の
採取 Ｉ−ａ 免疫源の作成 Ｉ−ａ− Ｎ末端（ 1Ｔｒｙ−19Ａｒｇ）合成ペプチ
ドの作成 ヒト・オステオカルシンのＮ末端側 1ＴｒｙのＮ末端に
システインを入れて下 記アミノ酸配列 Ｈ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｙ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−
Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨで示されるペプチドを合成する。ペ
プチドの合成についてはＡＢＩ社ペプチド合成機を用い
ることができる。 Ｉ−ａ− Ｎ末端（15Ｐｒｏ−19Ａｒｇ）合成ペプチ
ドの作成 ペプチド15Ｐｒｏ−19ＡｒｇのＮ末端にシステインを入
れて下記アミノ酸配列 Ｈ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−ＯＨ で示されるペプチドを合成する。
ついてポリクローナル抗体を例として説明する。抗体が
モノクローナル抗体である場合は、以下のようにして得
られた免疫源を用い、ケーラーとミルシュタインによる
細胞融合法〔Ｇ．Ｋｏｅｈｌｅｒ ａｎｄ Ｍｉｌｓｔ
ｅｉｎ、Ｎａｔｕｒｅ（Ｌｏｎｄｏｎ）、２５６、４９
５─４９７（１９７５）〕により作製されたハイブリド
ーマを培養して分泌させ、その培養液から分離すること
により調製することができる。（Ｉ）Ｎ末端１９残基オ
ステオカルシンフラグメントに選択的に反応する抗体の
採取 Ｉ−ａ 免疫源の作成 Ｉ−ａ− Ｎ末端（ 1Ｔｒｙ−19Ａｒｇ）合成ペプチ
ドの作成 ヒト・オステオカルシンのＮ末端側 1ＴｒｙのＮ末端に
システインを入れて下 記アミノ酸配列 Ｈ−Ｃｙｓ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｌｎ−Ｔｒｙ
−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ａｌａ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−
Ｔｙｒ−Ｐｒｏ−Ａｓｐ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐ
ｒｏ−Ａｒｇ−ＯＨで示されるペプチドを合成する。ペ
プチドの合成についてはＡＢＩ社ペプチド合成機を用い
ることができる。 Ｉ−ａ− Ｎ末端（15Ｐｒｏ−19Ａｒｇ）合成ペプチ
ドの作成 ペプチド15Ｐｒｏ−19ＡｒｇのＮ末端にシステインを入
れて下記アミノ酸配列 Ｈ−Ｃｙｓ−Ｐｒｏ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ
−ＯＨ で示されるペプチドを合成する。
【００１３】Ｉ−ｂ 合成ペプチドとキャリヤータンパ
クとの結合 免疫にあたっては、免疫源のペプチドを比較的大きな分
子に変換して被免疫動物に投与する。ペプチドを大きな
分子に変換するには、ペプチドとキャリヤータンパクと
結合させる方法と他の高分子物質と結合させる方法があ
る。このキャリヤータンパクとしては、アルブミン、キ
ーホール リンペット ヘモシアニン（ＫＬＨ）または
プロテインＡなどが挙げられるが、アルブミン、ＫＬＨ
が好ましい。また、他の高分子物質としては、ポリビニ
ルピロリドンの如き水溶性高分子が挙げられる。ペプチ
ドとキャリヤータンパクとを結合させるに当たっては、
ペプチドのＣＯＯＨ末端基、ＮＨ2 末端基を用いるか、
あるいはキャリヤータンパクと結合しうる適当な官能基
を導入する。ペプチドのＣＯＯＨ末端基を利用する場合
にはカルボジイミドを用い、一方、ＮＨ2 末端基を利用
する場合にはグルタルアルデヒドが好ましくは使用され
る。さらに、特異的な結合を求める場合には、ペプチド
に例えばシステインなどのキャリヤータンパクとの結合
性を有する官能基を導入して、キャリヤータンパク側に
マレイミド基またはジチオピリジル基を導入しこれを結
合させることにより作成する。なかでもキャリヤータン
パクと結合しうる適当な官能基を導入する方法が好まし
い。適当な官能基としてはシステインが好ましく使用さ
れる。キャリヤータンパクとの結合性を有する官能基の
導入はペプチドのＮ末端側、Ｃ末端側のいずれでもよい
が、なかでもＮ末端（ 1Ｔｒｙ−19Ａｒｇ）合成ペプチ
ドの場合はＮ末端側が好ましい。
クとの結合 免疫にあたっては、免疫源のペプチドを比較的大きな分
子に変換して被免疫動物に投与する。ペプチドを大きな
分子に変換するには、ペプチドとキャリヤータンパクと
結合させる方法と他の高分子物質と結合させる方法があ
る。このキャリヤータンパクとしては、アルブミン、キ
ーホール リンペット ヘモシアニン（ＫＬＨ）または
プロテインＡなどが挙げられるが、アルブミン、ＫＬＨ
が好ましい。また、他の高分子物質としては、ポリビニ
ルピロリドンの如き水溶性高分子が挙げられる。ペプチ
ドとキャリヤータンパクとを結合させるに当たっては、
ペプチドのＣＯＯＨ末端基、ＮＨ2 末端基を用いるか、
あるいはキャリヤータンパクと結合しうる適当な官能基
を導入する。ペプチドのＣＯＯＨ末端基を利用する場合
にはカルボジイミドを用い、一方、ＮＨ2 末端基を利用
する場合にはグルタルアルデヒドが好ましくは使用され
る。さらに、特異的な結合を求める場合には、ペプチド
に例えばシステインなどのキャリヤータンパクとの結合
性を有する官能基を導入して、キャリヤータンパク側に
マレイミド基またはジチオピリジル基を導入しこれを結
合させることにより作成する。なかでもキャリヤータン
パクと結合しうる適当な官能基を導入する方法が好まし
い。適当な官能基としてはシステインが好ましく使用さ
れる。キャリヤータンパクとの結合性を有する官能基の
導入はペプチドのＮ末端側、Ｃ末端側のいずれでもよい
が、なかでもＮ末端（ 1Ｔｒｙ−19Ａｒｇ）合成ペプチ
ドの場合はＮ末端側が好ましい。
【００１４】Ｉ−ｃ ポリクローナル抗体の作成 前記免疫源の免疫方法としては、高分子物質に変換され
たペプチドをアジュバントに混ぜ、被免疫動物に投与し
それ自体知られた方法に従って抗体を作成する方法が採
用される。アジュバンドとしては、完全フロイントアジ
ュバンド、不完全フロイントアジュバンドまたは水酸化
アルミニウムなどが使用される。また、免疫すべき動物
としては、山羊、ウサギ、馬、羊、犬、マウス、モルモ
ット、ブタなどがある。
たペプチドをアジュバントに混ぜ、被免疫動物に投与し
それ自体知られた方法に従って抗体を作成する方法が採
用される。アジュバンドとしては、完全フロイントアジ
ュバンド、不完全フロイントアジュバンドまたは水酸化
アルミニウムなどが使用される。また、免疫すべき動物
としては、山羊、ウサギ、馬、羊、犬、マウス、モルモ
ット、ブタなどがある。
【００１５】（II）Ｃ末端５残基オステオカルシンフラ
グメントに選択的に反応する抗体の採取 II−ａ 免疫源の作成 II−ａ− Ｃ末端（45Ｐｈｅ−49Ｖａｌ）合成ペプチ
ドの作成 ペプチド45Ｐｈｅ−49ＶａｌのＣ末端にシステインを入
れて下記アミノ酸配列 Ｈ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ
−ＯＨ で示されるペプチドを合成する。ペプチドの合成にあた
っては、ＡＢＩ社のペプチド合成機を使用することがで
きる。 II−ｂ 合成ペプチドとキャリヤータンパクとの結合 Ｉ−ｂと同様にして好ましくはキャリヤータンパクとの
結合体を作成する。キャリヤータンパクとの結合体を作
成するにあたっては、システインなどのキャリヤータン
パクと結合性を有する官能基は合成ペプチドのＣ末端側
に導入することが好ましい。 II−ｃ ポリクローナル抗体の作成 Ｉ−ｃに準じて作成することができる。
グメントに選択的に反応する抗体の採取 II−ａ 免疫源の作成 II−ａ− Ｃ末端（45Ｐｈｅ−49Ｖａｌ）合成ペプチ
ドの作成 ペプチド45Ｐｈｅ−49ＶａｌのＣ末端にシステインを入
れて下記アミノ酸配列 Ｈ−Ｐｈｅ−Ｔｙｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｖａｌ−Ｃｙｓ
−ＯＨ で示されるペプチドを合成する。ペプチドの合成にあた
っては、ＡＢＩ社のペプチド合成機を使用することがで
きる。 II−ｂ 合成ペプチドとキャリヤータンパクとの結合 Ｉ−ｂと同様にして好ましくはキャリヤータンパクとの
結合体を作成する。キャリヤータンパクとの結合体を作
成するにあたっては、システインなどのキャリヤータン
パクと結合性を有する官能基は合成ペプチドのＣ末端側
に導入することが好ましい。 II−ｃ ポリクローナル抗体の作成 Ｉ−ｃに準じて作成することができる。
【００１６】
【実施例】以下、実施例により本発明を詳述するが、本
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 実施例１（Ｎ末端１〜１９残基高選択性抗体の作成） （１）免疫源の作成 （ア）Ｎ末端１９残基のペプチドの合成 ヒト・オステオカルシンのＮ末端に特異的なアミノ酸配
列１９残基のＮ末端側にシステインを入れて図１に示す
ペプチドを合成した。合成に際してはＡＢＩ社ペプチド
合成機を用いた。以下このペプチドの名称をＨＯｓｔ−
Ｎ（１９）とした。 （イ）Ｎ末端５残基のペプチドの合成 ヒト・オステオカルシンのＮ末端１５〜１９残基のペプ
チドのＮ末端側にシステインを入れて図２に示すペプチ
ドを合成した。このペプチドの名称をＨＯｓｔ−Ｎ（１
５−１９）とした。 （ウ）合成ペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）、ＨＯｓｔ
−Ｎ（１５−１９）〕とキャリヤータンパクとの結合体
の合成代表的なキャリヤータンパクであるキーホール
リンペット ヘモシアニン（ＫＬＨ）をＮ−（ｍ−マレ
イミド安息香酸）−Ｎ−サクシンイミドエステル（ＭＢ
Ｓ）によリマレイミド化した。一方、ＨＯｓｔ−Ｎ（１
９）またはＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）を２−メルカプ
トエタノールによりＳＨ基をフリーにし、ＭＢＳ化ＫＬ
ＨにＨＯｓｔ−Ｎ（１９）またはＨＯｓｔ−Ｎ（１５−
１９）を滴下しながら反応液をｐＨ６．０〜６．５に保
ちつつ反応させた。３時間反応後透析し、得られた生成
物を免疫源として用いた。 （エ）比較のための合成ペプチド−キャリヤータンパク
結合体の合成ヒト・オステオカルシンＮ末端１〜２０
（２１残基目システイン）、ヒト・オステオカルシン全
分子１〜４９をペプチド合成機により合成し、それぞれ
ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）、ＨＯｓｔ（１−４９）と命名し
た。つぎにマレイミド化したＫＬＨとＨＯｓｔ−Ｎ（２
０）との結合体、およびジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（ＤＣＣ）を用いてＨＯｓｔ（１−４９）とＫＬＨと
の結合体を作成した。
発明はこれらの実施例に限定されるものではない。 実施例１（Ｎ末端１〜１９残基高選択性抗体の作成） （１）免疫源の作成 （ア）Ｎ末端１９残基のペプチドの合成 ヒト・オステオカルシンのＮ末端に特異的なアミノ酸配
列１９残基のＮ末端側にシステインを入れて図１に示す
ペプチドを合成した。合成に際してはＡＢＩ社ペプチド
合成機を用いた。以下このペプチドの名称をＨＯｓｔ−
Ｎ（１９）とした。 （イ）Ｎ末端５残基のペプチドの合成 ヒト・オステオカルシンのＮ末端１５〜１９残基のペプ
チドのＮ末端側にシステインを入れて図２に示すペプチ
ドを合成した。このペプチドの名称をＨＯｓｔ−Ｎ（１
５−１９）とした。 （ウ）合成ペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）、ＨＯｓｔ
−Ｎ（１５−１９）〕とキャリヤータンパクとの結合体
の合成代表的なキャリヤータンパクであるキーホール
リンペット ヘモシアニン（ＫＬＨ）をＮ−（ｍ−マレ
イミド安息香酸）−Ｎ−サクシンイミドエステル（ＭＢ
Ｓ）によリマレイミド化した。一方、ＨＯｓｔ−Ｎ（１
９）またはＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）を２−メルカプ
トエタノールによりＳＨ基をフリーにし、ＭＢＳ化ＫＬ
ＨにＨＯｓｔ−Ｎ（１９）またはＨＯｓｔ−Ｎ（１５−
１９）を滴下しながら反応液をｐＨ６．０〜６．５に保
ちつつ反応させた。３時間反応後透析し、得られた生成
物を免疫源として用いた。 （エ）比較のための合成ペプチド−キャリヤータンパク
結合体の合成ヒト・オステオカルシンＮ末端１〜２０
（２１残基目システイン）、ヒト・オステオカルシン全
分子１〜４９をペプチド合成機により合成し、それぞれ
ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）、ＨＯｓｔ（１−４９）と命名し
た。つぎにマレイミド化したＫＬＨとＨＯｓｔ−Ｎ（２
０）との結合体、およびジシクロヘキシルカルボジイミ
ド（ＤＣＣ）を用いてＨＯｓｔ（１−４９）とＫＬＨと
の結合体を作成した。
【００１７】（２）抗体の作成 （１）（ウ）および（エ）で作成した３種の合成ペプチ
ド、ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）、ＨＯｓｔ−Ｎ（２
０）、ＨＯｓｔ（１−４９）とＫＬＨとの結合体を完全
フロイントアジュバントと混合し家兎に免疫した。抗体
価の上昇を確認後、採血を行い、抗血清を採取した。一
方、ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）、ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１
９）、ＨＯｓｔ（１−４９）のＫＬＨ結合体を完全フロ
イントアジュバンドと混合し、マウスに免疫した。抗体
価の上昇を確認後、採血を行い、抗血清を採取した。
ド、ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）、ＨＯｓｔ−Ｎ（２
０）、ＨＯｓｔ（１−４９）とＫＬＨとの結合体を完全
フロイントアジュバントと混合し家兎に免疫した。抗体
価の上昇を確認後、採血を行い、抗血清を採取した。一
方、ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）、ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１
９）、ＨＯｓｔ（１−４９）のＫＬＨ結合体を完全フロ
イントアジュバンドと混合し、マウスに免疫した。抗体
価の上昇を確認後、採血を行い、抗血清を採取した。
【００１８】（３）抗体のＮ末端１〜１９残基特異性の
検討（固相抗原競合法） Ｎ末端１〜１９〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）〕をその水溶液
を用いてマイクロプレートの固相に固定し、１％牛血清
アルブミン（ＢＳＡ）にてアフターコート後、（２）で
調製した抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体を１次抗体として
反応させた。２次抗体として抗家兎ＩｇＧ・ＨＲＰ標識
を反応させ、１次抗体量に依存した曲線が得られた。こ
れに基づいて至適な抗体量を決定し、液中にＨＯｓｔ−
Ｎ（１９）の量をかえ添加し競合的に反応させ、添加し
たＨＯｓｔ−Ｎ（１９）の量を横軸に、縦軸に固相に結
合した抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体量に対応した量を示
した検量線が得られた。その検量線を用いてＨＯｓｔ−
Ｎ（１９）のかわりにＮａｔｉｖｅなヒト・オステオカ
ルシン〔ＨＯｓｔ（１−４９）〕を添加し同様に添加量
依存曲線を描いた。これらの結果を図３に示す。図中、
黒丸はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）を添加した場合を、白丸は
ＨＯｓｔ（１−４９）を添加した場合を示す。
検討（固相抗原競合法） Ｎ末端１〜１９〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）〕をその水溶液
を用いてマイクロプレートの固相に固定し、１％牛血清
アルブミン（ＢＳＡ）にてアフターコート後、（２）で
調製した抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体を１次抗体として
反応させた。２次抗体として抗家兎ＩｇＧ・ＨＲＰ標識
を反応させ、１次抗体量に依存した曲線が得られた。こ
れに基づいて至適な抗体量を決定し、液中にＨＯｓｔ−
Ｎ（１９）の量をかえ添加し競合的に反応させ、添加し
たＨＯｓｔ−Ｎ（１９）の量を横軸に、縦軸に固相に結
合した抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体量に対応した量を示
した検量線が得られた。その検量線を用いてＨＯｓｔ−
Ｎ（１９）のかわりにＮａｔｉｖｅなヒト・オステオカ
ルシン〔ＨＯｓｔ（１−４９）〕を添加し同様に添加量
依存曲線を描いた。これらの結果を図３に示す。図中、
黒丸はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）を添加した場合を、白丸は
ＨＯｓｔ（１−４９）を添加した場合を示す。
【００１９】同様に抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）抗体
を用いて前記の操作を行い、その添加量依存曲線を得
た。結果を図４に示す。図中、黒三角はＨＯｓｔ−Ｎ
（１９）を添加した場合を、白三角はＨＯｓｔ（１−４
９）を添加した場合を示す。添加量依存曲線におけるＭ
ａｘ．ＯＤの１／２ＯＤを与える抗原量に基づいて反応
比を求めた。その結果、抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）選
択性は、抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体は２．６倍、一方
抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）抗体の場合は４．３倍で
あった。
を用いて前記の操作を行い、その添加量依存曲線を得
た。結果を図４に示す。図中、黒三角はＨＯｓｔ−Ｎ
（１９）を添加した場合を、白三角はＨＯｓｔ（１−４
９）を添加した場合を示す。添加量依存曲線におけるＭ
ａｘ．ＯＤの１／２ＯＤを与える抗原量に基づいて反応
比を求めた。その結果、抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）選
択性は、抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体は２．６倍、一方
抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）抗体の場合は４．３倍で
あった。
【００２０】（４）抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）／ＨＯ
ｓｔ（１−４９）反応比の検討（固相抗原結合法） ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）、ＨＯｓｔ（１−４９）をバッフ
ァー溶液にてマイクロプレートに固定し、１％ＢＳＡに
てアフターコート後、家兎抗ＨＯｓｔ（１−４９）抗
体、同抗ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体、同抗ＨＯｓｔ−Ｎ
（１５−１９）抗体を用いて反応させた。次いで２次抗
体として抗家兎ＩｇＧ・ＨＲＰ標識を反応させ洗浄後発
色反応を行った。抗血清の希釈倍率を横軸に、固相に結
合した抗体量に対応した量（ＯＤ420nm ）を縦軸に示す
グラフを得た。これを図５に示す。図中黒丸はＨＯｓｔ
−Ｎ（１９）と結合した家兎抗ＨＯｓｔ（１−４９）抗
体を、黒三角はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と結合した家兎抗
ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体を、黒四角はＨＯｓｔ−Ｎ
（１９）と結合した家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）
抗体を、白丸はＨＯｓｔ（１−４９）と結合した家兎抗
ＨＯｓｔ（１−４９）抗体を、白三角はＨＯｓｔ（１−
４９）と結合した家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体を、
白四角はＨＯｓｔ（１−４９）と結合した家兎抗ＨＯｓ
ｔ−Ｎ（１５−１９）抗体を示す。その結果、家兎抗Ｈ
Ｏｓｔ（１−４９）抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）／ＨＯ
ｓｔ（１−４９）反応比は約１／２５と抗ＨＯｓｔ（１
−４９）抗体はＨＯｓｔ（１−４９）に対して選択性が
高く、逆に家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）抗体の同
反応比は約１００／１とＨＯｓｔ−Ｎ（１９）に対して
選択性が高い結果が得られた。
ｓｔ（１−４９）反応比の検討（固相抗原結合法） ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）、ＨＯｓｔ（１−４９）をバッフ
ァー溶液にてマイクロプレートに固定し、１％ＢＳＡに
てアフターコート後、家兎抗ＨＯｓｔ（１−４９）抗
体、同抗ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体、同抗ＨＯｓｔ−Ｎ
（１５−１９）抗体を用いて反応させた。次いで２次抗
体として抗家兎ＩｇＧ・ＨＲＰ標識を反応させ洗浄後発
色反応を行った。抗血清の希釈倍率を横軸に、固相に結
合した抗体量に対応した量（ＯＤ420nm ）を縦軸に示す
グラフを得た。これを図５に示す。図中黒丸はＨＯｓｔ
−Ｎ（１９）と結合した家兎抗ＨＯｓｔ（１−４９）抗
体を、黒三角はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と結合した家兎抗
ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体を、黒四角はＨＯｓｔ−Ｎ
（１９）と結合した家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）
抗体を、白丸はＨＯｓｔ（１−４９）と結合した家兎抗
ＨＯｓｔ（１−４９）抗体を、白三角はＨＯｓｔ（１−
４９）と結合した家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体を、
白四角はＨＯｓｔ（１−４９）と結合した家兎抗ＨＯｓ
ｔ−Ｎ（１５−１９）抗体を示す。その結果、家兎抗Ｈ
Ｏｓｔ（１−４９）抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）／ＨＯ
ｓｔ（１−４９）反応比は約１／２５と抗ＨＯｓｔ（１
−４９）抗体はＨＯｓｔ（１−４９）に対して選択性が
高く、逆に家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）抗体の同
反応比は約１００／１とＨＯｓｔ−Ｎ（１９）に対して
選択性が高い結果が得られた。
【００２１】一方同様にマウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）
抗体、同抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体および同抗ＨＯｓ
ｔ−Ｎ（１５−１９）抗体を用いて反応させ、抗血清の
希釈倍率と固相に結合した抗体量に対応した量との関係
を得た。この関係を示すグラフを図６に示す。図中、黒
丸はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と反応したマウス抗ＨＯｓｔ
−Ｎ（２０）抗体を、黒三角はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と
反応したマウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体を、黒四角
はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と反応したマウス抗ＨＯｓｔ−
Ｎ（１５−１９）抗体を、白丸はＨＯｓｔ（１−４９）
と反応したマウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体を、白三
角はＨＯｓｔ（１−４９）と反応したマウス抗ＨＯｓｔ
−Ｎ（１９）抗体を、白四角はＨＯｓｔ（１−４９）と
反応したマウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）抗体を示
す。
抗体、同抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体および同抗ＨＯｓ
ｔ−Ｎ（１５−１９）抗体を用いて反応させ、抗血清の
希釈倍率と固相に結合した抗体量に対応した量との関係
を得た。この関係を示すグラフを図６に示す。図中、黒
丸はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と反応したマウス抗ＨＯｓｔ
−Ｎ（２０）抗体を、黒三角はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と
反応したマウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体を、黒四角
はＨＯｓｔ−Ｎ（１９）と反応したマウス抗ＨＯｓｔ−
Ｎ（１５−１９）抗体を、白丸はＨＯｓｔ（１−４９）
と反応したマウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（２０）抗体を、白三
角はＨＯｓｔ（１−４９）と反応したマウス抗ＨＯｓｔ
−Ｎ（１９）抗体を、白四角はＨＯｓｔ（１−４９）と
反応したマウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１９）抗体を示
す。
【００２２】この結果、マウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）
抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）／ＨＯｓｔ（１−４９）反
応比は約４０／１、マウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１
９）抗体の該反応比は約２５０／１とＨＯｓｔ−Ｎ（１
９）に対して高い選択性がうかがわれた。
抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）／ＨＯｓｔ（１−４９）反
応比は約４０／１、マウス抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１
９）抗体の該反応比は約２５０／１とＨＯｓｔ−Ｎ（１
９）に対して高い選択性がうかがわれた。
【００２３】実施例２：Ｃ末端５残基高選択性抗体の作
成 （１）免疫源の作成 （ア）Ｃ末端５残基のペプチドの合成 ヒト・オステオカルシンのＣ末端に特異的なアミノ酸配
列５残基のＣ末端側にシステインを入れて図７に示すペ
プチドを合成し、このペプチドの名称をＨＯｓｔ−Ｃ
（５）とした。 （イ）免疫源とキャリヤータンパクの結合体の合成 実施例１（１）（ウ）に準じてＨＯｓｔ−Ｃ（５）とＫ
ＬＨとの結合体を合成した。 （２）抗体の作成 実施例１（２）に準じて作成した。
成 （１）免疫源の作成 （ア）Ｃ末端５残基のペプチドの合成 ヒト・オステオカルシンのＣ末端に特異的なアミノ酸配
列５残基のＣ末端側にシステインを入れて図７に示すペ
プチドを合成し、このペプチドの名称をＨＯｓｔ−Ｃ
（５）とした。 （イ）免疫源とキャリヤータンパクの結合体の合成 実施例１（１）（ウ）に準じてＨＯｓｔ−Ｃ（５）とＫ
ＬＨとの結合体を合成した。 （２）抗体の作成 実施例１（２）に準じて作成した。
【００２４】（３）抗体のＣ末端５残基特異性の検討
（固相抗原競合法） Ｃ末端５残基〔ＨＯｓｔ−Ｃ（５）〕の水溶液を用いて
マイクロプレートに固定し、１％ＢＳＡにてアフターコ
ートした。次いで、１次抗体〔抗ＨＯｓｔ−Ｃ（５）抗
体〕を反応させ、２次抗体として抗家兎ＩｇＧ・ＨＲＰ
標識を反応させ、１次抗体量に依存した曲線を得た。抗
体量を５μｇ／ｍｌに固定しＨＯｓｔ−Ｃ（５）の濃度
を数種類かえて同抗体と共存させ、競合反応を行った。
次いで２次抗体を反応後発色を行い、添加したＨＯｓｔ
−Ｃ（５）量を横軸に、固相に結合した抗ＨＯｓｔ−Ｃ
（５）抗体量（すなわち発色のＯＤ）を縦軸に検量線を
得た。その検量線を用いてＮａｔｉｖｅなヒトオステオ
カルシン〔ＨＯｓｔ（１−４９）〕を添加し、添加量依
存曲線を得た。この結果を図８に示す。図中、黒四角は
ＨＯｓｔ−Ｃ（５）を添加した場合を、白四角はＨＯｓ
ｔ（１−４９）を添加した場合を示す。その結果、抗体
のＨＯｓｔ−Ｃ（５）選択性は３．９倍であった。
（固相抗原競合法） Ｃ末端５残基〔ＨＯｓｔ−Ｃ（５）〕の水溶液を用いて
マイクロプレートに固定し、１％ＢＳＡにてアフターコ
ートした。次いで、１次抗体〔抗ＨＯｓｔ−Ｃ（５）抗
体〕を反応させ、２次抗体として抗家兎ＩｇＧ・ＨＲＰ
標識を反応させ、１次抗体量に依存した曲線を得た。抗
体量を５μｇ／ｍｌに固定しＨＯｓｔ−Ｃ（５）の濃度
を数種類かえて同抗体と共存させ、競合反応を行った。
次いで２次抗体を反応後発色を行い、添加したＨＯｓｔ
−Ｃ（５）量を横軸に、固相に結合した抗ＨＯｓｔ−Ｃ
（５）抗体量（すなわち発色のＯＤ）を縦軸に検量線を
得た。その検量線を用いてＮａｔｉｖｅなヒトオステオ
カルシン〔ＨＯｓｔ（１−４９）〕を添加し、添加量依
存曲線を得た。この結果を図８に示す。図中、黒四角は
ＨＯｓｔ−Ｃ（５）を添加した場合を、白四角はＨＯｓ
ｔ（１−４９）を添加した場合を示す。その結果、抗体
のＨＯｓｔ−Ｃ（５）選択性は３．９倍であった。
【００２５】
【発明の効果】本発明によれば、ヒト・オステオカルシ
ンのフラグメントに選択性の高い抗体を得ることができ
る。従って、これらの抗体を用いることによりヒト・オ
ステオカルシンのフラグメントに選択性の高い測定系が
構成しえ、その測定法は骨代謝のなかの骨吸収を反映す
ることが期待される。
ンのフラグメントに選択性の高い抗体を得ることができ
る。従って、これらの抗体を用いることによりヒト・オ
ステオカルシンのフラグメントに選択性の高い測定系が
構成しえ、その測定法は骨代謝のなかの骨吸収を反映す
ることが期待される。
【図１】実施例１で合成したヒト・オステオカルシンＮ
末端１９残基のペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）〕を示
す。
末端１９残基のペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）〕を示
す。
【図２】実施例１で合成したヒト・オステオカルシンＮ
末端１５〜１９残基のペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−
１９）〕を示す。
末端１５〜１９残基のペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−
１９）〕を示す。
【図３】実施例１において、抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗
体を用いた場合の添加量依存曲線を示す。
体を用いた場合の添加量依存曲線を示す。
【図４】実施例１において、抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５−１
９）抗体を用いた場合の添加量依存曲線を示す。
９）抗体を用いた場合の添加量依存曲線を示す。
【図５】実施例１において、家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５
−１９）抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）に対する選択性を
示す。
−１９）抗体のＨＯｓｔ−Ｎ（１９）に対する選択性を
示す。
【図６】実施例１において、家兎抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１５
−１９）抗体および抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体のＨＯ
ｓｔ−Ｎ（１９）に対する選択性を示す。
−１９）抗体および抗ＨＯｓｔ−Ｎ（１９）抗体のＨＯ
ｓｔ−Ｎ（１９）に対する選択性を示す。
【図７】実施例２で合成したヒト・オステオカルシンＣ
末端５残基のペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｃ（５）〕を示す。
末端５残基のペプチド〔ＨＯｓｔ−Ｃ（５）〕を示す。
【図８】実施例２において、抗ＨＯｓｔ−Ｃ（５）抗体
を用いた場合の添加量依存曲線を示す。
を用いた場合の添加量依存曲線を示す。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 庁内整理番号 ＦＩ 技術表示箇所 Ｃ０７Ｋ 7/08 8517−4Ｈ Ｃ０７Ｋ 7/08 (72)発明者 中本 忠克 東京都日野市旭が丘４丁目３番２号 帝 人株式会社東京研究センター内 (56)参考文献 特開 平１−160493（ＪＰ，Ａ) 国際公開90／9587（ＷＯ，Ａ)
Claims (3)
- 【請求項１】 完全ヒト・オステオカルシンのＮ末端側
の１〜１９残基部分に相当するヒト・オステオカルシン
フラグメントに対する抗体であって、固相抗原競合法に
よって測定した場合の該フラグメントに対する反応性
が、完全ヒト・オステオカルシンに対する反応性よりも
２．５倍以上高いことを特徴とする、ヒト・オステオカ
ルシンフラグメントに対する抗体。 - 【請求項２】 請求項１に記載のヒト・オステオカルシ
ンフラグメントに対する抗体であって、該フラグメント
のＮ末端からみて１０〜１９残基部分に結合性を有す
る、ヒト・オステオカルシンフラグメントに対する抗
体。 - 【請求項３】 完全ヒト・オステオカルシンのＮ末端か
らみて４５〜４９残基部分に相当するヒト・オステオカ
ルシンフラグメントに対する抗体であって、固相抗原競
合法によって測定した場合の該フラグメントに対する反
応性が、完全ヒト・オステオカルシンに対する反応性よ
りも３．９倍以上高いことを特徴とする、ヒト・オステ
オカルシンフラグメントに対する抗体。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2415242A JP2559907B2 (ja) | 1990-12-27 | 1990-12-27 | ヒト・オステオカルシンフラグメントに対する抗体 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2415242A JP2559907B2 (ja) | 1990-12-27 | 1990-12-27 | ヒト・オステオカルシンフラグメントに対する抗体 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH04225162A JPH04225162A (ja) | 1992-08-14 |
| JP2559907B2 true JP2559907B2 (ja) | 1996-12-04 |
Family
ID=18523622
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2415242A Expired - Fee Related JP2559907B2 (ja) | 1990-12-27 | 1990-12-27 | ヒト・オステオカルシンフラグメントに対する抗体 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2559907B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP7030834B2 (ja) * | 2017-03-16 | 2022-03-07 | 深▲セン▼先進技術研究院 | エネルギー代謝を調節するポリペプチド及びその使用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2613067B2 (ja) * | 1987-12-18 | 1997-05-21 | 寶酒造株式会社 | モノクローナル抗体及びその使用方法 |
-
1990
- 1990-12-27 JP JP2415242A patent/JP2559907B2/ja not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH04225162A (ja) | 1992-08-14 |
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