JP2668232B2 - 放射線増感剤及び選択性細胞毒性剤としての１，２，４―ベンゾトリアジンオキシド - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】 政府の認可即ち契約についての言及 本明細書中に記載されている発明は、厚生省の認可即
ち厚生省との契約の下で仕事を進めている間になされた
ものである。政府は本発明に若干の権利を有している。 技術分野 本発明は、低酸素性細胞に対して効果のある細胞毒性
材及び放射線療法に関する。特に、本発明は、1,2,4−
ベンゾトリアジンオキシドを使用して、腫瘍細胞を選択
的に殺し且つ腫瘍細胞に放射線に対する感受性を与える
ことに関する。 背景技術 低酸素性細胞放射線増感剤は、破壊性放射線に対する
低酸素性細胞の感受性を選択的に増大させる化合物であ
る。低酸素状態下で高い活性を有する細胞毒素も又、低
酸素圧力下にある細胞を選択的に破壊する手段を提供す
る。低酸素性細胞に関するこの特殊性は重要である。何
故ならば、腫瘍はそのような細胞によって典型的に特徴
付けられているからである。固体状の塊として存在する
実質上すべての腫瘍はこれらの細胞を含む一方、正常な
細胞は通常十分な酸素の補給を受ける。従って、低酸素
状態下での高活性により、抗腫瘍剤は腫瘍に対する選択
性を与えられ得、そしてこれらの増感剤の存在下で放射
線がより効果的に使用され得る。 言うまでもなく、もし周囲の正常な組織への損傷が最
小化又は回避され得るならば、腫瘍細胞を破壊する放射
線治療が実用的である。放射線の効果は酸素の存在によ
って高められ、そして、放射線の線量が増大させられる
に従い、標的細胞を破壊することにおける放射線の効果
は、酸素が存在するときに最も劇的に高められるという
ことが証明されている。従って、放射線に関しての、腫
瘍細胞に対する選択性は達成するのが困難であり、そし
て、正常な細胞は、それらの酸素補給の故に、放射線に
対する感受性が腫瘍細胞よりも一般的に高い。このた
め、周囲の組織ではなく、腫瘍細胞を放射線治療に対し
て敏感にさせる手段を提供することが所望されている。
一解決策はこれらの腫瘍細胞への酸素の補給を増大させ
ることであろう。しかしながら、このことは実行するの
が困難であった。 種々の複素環式化合物、特に酸化された窒素成分を含
む複素環式化合物が、低酸素性腫瘍細胞に放射線感受性
を与えるために使用されてきた。確かに、酸化された窒
素の官能価がこの機能に関与しているということが仮定
されてきた。ニトロイミダゾール、特にミソニダゾール
（MIS）及びメトロニダゾールが広範囲に研究されてき
ており、そしてMISは放射線増感機能に関する生体外及
び生体内の試験における標準として一般的に使用されて
いる（例えば、アスキス（Asquith）等、ラジエーショ
ン・レス（Radiation Res）（1974）60:108−118;ホー
ル（Hall）等、ブリット・Ｊ・キャンサ（Brit J Cance
r）（1978）37:567−569;ブラウン（Brown）等、ラジエ
ーション・レス（Radiation Res）（1980）82:171−19
0;及び米国特許第4,371,540号参照）。ある１−置換３
（５）−ニトロ−ｓ−トリアゾール及び種々のキノキサ
リン−1,4−ジオキシド誘導体も開示されている。 更に、同一の譲受人に譲渡され且つ引用によって合体
化されている。1985年５月３日に提出された米国特許出
願第730,761号及び1985年10月18日に提出された米国特
許出願第788,762号は、酸化された窒素を含まない一群
の放射線増感剤、即ち置換ベンズアミド及びニコチンア
ミド並びにそれらのチオ類似物を開示している。これら
の化合物は、それでもやはり、放射線増感剤である。例
えば低酸素性細胞の酸素補給を高めることによってそれ
らに選択的に感受性を与える能力と、細胞に“感受性を
与える”ためのよくある他のメカニズム、即ち放射後
に、照射された細胞の修復に不可欠であると信じられて
いる酵素ポリ（ADP−リボース）ポリメラーゼの活動抑
制とを区別することが重要である。この修復メカニズム
は、低酸素性腫瘍細胞及び正常細胞の両方で作用する。
このため、この後者のメカニズムに従って作用する“放
射線増感剤”の投与は、標的腫瘍細胞に選択的に感受性
を与えるという所望されている目的を達成しない。 低酸素性細胞を選択的に殺したり、あるいはそのよう
な細胞に感受性を与えたりすることにおいて使用すると
いうことが以前には示唆されていなかった一群の化合物
は、３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジ−Ｎ
−オキシド及びそれに関連した化合物である。関連した
米国特許第3,980,779号、第3,868,371号及び4,001,410
号は、一群のこれらの化合物の調製及び、特に家畜の飼
い葉へのこれらの物質の添加による、抗微生物剤として
のそれらの使用を開示している。米国特許第3,991,189
号及び第3,957,799号は、３−アミノ基の窒素上に置換
基を有するこれらの化合物の誘導体を開示している。こ
れらの化合物も抗微生物機能を有している。 本発明は更に別の化合物を提供し、この化合物は生体
外において低酸素性細胞に特異的に放射線感受性を与
え、且つ、その上に、生体外及び生体内の両方において
低酸素性細胞に対する直接的な細胞毒性を有している。
従って、腫瘍の放射線治療に先立つ又はそれに続くこれ
らの化合物の投与は、放射線量に生き残った低酸素性
（腫瘍）細胞を選択的に殺す。生体外で低酸素性細胞に
放射線感受性を与えるというこれらの化合物の能力及び
特に低酸素性細胞を選択的に且つ直接的に殺すというそ
れらの能力は、共に、これらの化合物の予期しない性質
である。 発明の開示 本発明は、低酸素性腫瘍細胞用の選択性放射線増感剤
及び選択性細胞毒性剤として現在入手可能な一群の化合
物に貴重な追加をもたらす。この関連において有用ない
くつかの化合物は公知の化合物であり、他は新規であ
る。従って、本発明の一面は、式 〔式中、ＸはOH、OR、NH₂、NHR又はNR₂であり、各Ｒは
独立に１〜４個の炭素原子のアルキル、アミド又はモル
ホリノ成分であると共にヒドロキシ、アルコキシ、アミ
ノ又はハロゲン置換基で更に置換されても良く、 ｎは０又は１であり、そして Y¹及びY²は独立にＨ、ハロゲノ、ヒドロカルビル（１
〜14C）であって、環式及び不飽和ヒドロカルビルを含
み、ハロゲノ、ヒドロキシ、エポキシ、アルコキシ、ア
ルキルチオ、アミノ（モルホリノを含む）、アシルオキ
シ、アシルアミド及びこれらのチオ類似物からなる群か
ら選択される１又は２個の置換基で任意に置換されてい
るもの、アルキルスルホニル、アルキルホスホニル、カ
ルボキシ、アルコキシカルボニル、カルバミル又はアル
キルカルバミルであり、そして該ヒドロカルビルは単一
のエーテル（−Ｏ−）結合によって任意に中断され得、
あるいはY¹及びY²は独立にNHR′、Ｏ（CO）Ｒ′、NH（C
O）Ｒ′、Ｏ（SO）Ｒ′又はＯ（POR）Ｒ′であり、Ｒ′
は上記のように定義されている任意に置換されているヒ
ドロカルビルである〕の化合物で低酸素性腫瘍細胞を放
射線感受性にする又は選択的に殺す方法である。 従って、本発明の化合物は、３の位置における、置換
されているか又は置換されていない、ヒドロキシル基又
はアミノ基を含む任意に置換された1,2,4−ベンゾトリ
アジンのモノ−又はジオキシドである。式１によって定
義されるすべての化合物は放射線増感剤として広く効果
的である一方、３−アミノ置換基（即ち、Ｘ＝NH₂、NHR
又はNR₂であり、Ｒは上述のように定義されたものであ
る）を有し且つジ−Ｎ−オキシド（ｎ＝１）である化合
物のみが効果的な細胞毒性剤である。 式１によって包含される若干の化合物は、別の目的に
対して有用であるとして、技術上知られており、他の化
合物は新規である。本発明によって包含され且つ本明細
書中で開示される方法によって調製され得る新規な化合
物は、次の３つの級における、上記の式によって表され
る化合物を含む。I.XはOH、上述のように定義されてい
るＲを有するOR又はNR₂であり、ｎは０又は１であり、
そしてY¹及びY²は上述のように定義されたものである。
II.XはNH₂又は上述のように定義されているＲを有するN
HRであり、ｎは０であり、そしてY¹及びY²は上述のよう
に定義されたものである。III.XはNH₂であり、ｎは１で
あり、そしてY¹及びY²は、上述のように定義されたもの
の内でハロゲノを除いたもの、置換されていないか又は
ハロゲン置換されている飽和アルキル（１〜6C）、アル
コキシ（１〜6C）、カルバミル、カルボキシ又はカルボ
アルコキシ（１〜6C）である。 図面の簡単な説明 第1A図、第1B図及び第1C図はハムスター、マウス及び
ヒトの組織から得た低酸素性細胞に対する３−アミノ−
1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシドの選択的な細
胞毒性を示す。 第２図は、放射線と組み合わされた際の、腫瘍細胞を
殺すことを強めることにおける３−アミノ−1,2,4−ベ
ンゾトリアジン1,4−ジオキシドの生体内の効力を示
す。 第３図は、抗高血圧剤であるヒドラジンの腹膜内投与
によって腫瘍が低酸素にさせられた際の、３−アミノ−
1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシドによる、生体
内の腫瘍細胞を殺すことを示す。 発明を実施する方法 A.発明に有用な化合物 本明細書中に記載されているような低酸素性腫瘍細胞
に放射線感受性を与えるのに有用な化合物は、1,2,4−
ベンゾトリアジンオキシドの誘導体である。 Y¹又はY²によって表されるヒドロカルビル基は、１〜
14個の炭素原子を含んでいても良く、飽和又は不飽和、
環式又は非環式であっても良く、そして単一のエーテル
結合によって任意に中断されていても良い。従って、Y¹
又はY²の置換されていない形は、例えば、メチル、エチ
ル、ｎ−プロピル、ｓ−ブチル、ｎ−ヘキシル、２−メ
チル−ｎ−ペンチル、２−エトキシエチル、３−（ｎ−
プロポキシ）−ｎ−プロピル、４−メトキシブチル、シ
クロヘキシル、テトラヒドロフルフリル、フルフリル、
シクロヘキセニル、３−（ｎ−デシロキシ）−ｎ−プロ
ピル、４−メチルオクチル、4,7−ジメチルオクチル及
び類似物であり得る。 ヒドロカルビルは、下記のような、１又は２個の置換
基で置換されても良い。ハロゲノ置換基はフルオロ、ク
ロロ、ブロモ又はヨードである。OR′によって表されて
いるアルコキシ置換基は、１〜４個の炭素原子を含んで
いても良く、そして、例えば、メトキシ、ｎ−プロポキ
シ及びｔ−ブトキシを含む。アミノ置換基はNH₂、NHR又
はNR₂であって良く、各Ｒは独立に１〜４個の炭素のア
ルキル又はモルホリノ成分である。Ｒは１〜２個のヒド
ロキシ、アルコキシ、アミノ又はハロゲノ置換基と任意
に置換されても良い。 アシルオキシ基及びアシルアミド基はそれぞれＲ′CO
O−及びＲ′CONH−によって表され、Ｒ′は１〜４個の
炭素を含み、そしてそれらのチオ類似物はＲ′CSO−及
びＲ′CSNH−によって表される。アルキルスルホニル及
びアルキルホスホニルはそれぞれＲ′SO₂及びＲ′Ｐ（O
R′）Ｏ−であり、各Ｒ′は、独立に、上記のように定
義されたものである。カルボキシは基−Ｃ（Ｏ）OHであ
り、オルコキシカルボニルは−Ｃ（Ｏ）OR′であり、カ
ルバミルは−Ｃ（Ｏ）NH₂であり、そしてアルキルカル
バミルは−Ｃ（Ｏ）NHR′である。 ＸがOHの場合には、勿論、化合物は又、水酸化ナトリ
ウム、水酸化カリウム又は水酸化カルシウムのような無
機塩基から、あるいはカフェイン、エチルアミン及びリ
シンのような有機塩基から形成される、医薬品として適
格の塩として調製され且つ使用され得る。 ＸがNH₂の場合には、医薬品として適格の酸を加えた
塩が使用され得る。これらの塩は、塩酸、臭化水素酸又
は燐酸のような無機酸、あるいは酢酸、ピルビン酸、琥
珀酸、マンデル酸、ｐ−トルエンスルホン酸等のような
有機酸との塩である（ヒドロカルビル側鎖上のアミノ置
換基も又、勿論、塩に転換され得る）。 1,2,4−ベンゾトリアジンはモノ−又はジオキシドと
して使用され得る。トリアジノ環の１−窒素が酸化され
得るか、あるいは１−及び４−窒素の両方が酸化され得
る。 本発明の放射線感受性を与えること及び細胞毒性行為
において有用な、特定の特に好適な化合物は、 ３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシ
ド、 ３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキ
シド、 ３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジ−オキシ
ド、 ６（７）−メトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン１−オキシド、 ６（７）−メトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−メトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン１−オキシド ６（７）−メトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−エトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン１−オキシド、 ６（７）−エトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−エトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン１−オキシド、 ６（７）−エトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔４−アセトアミド−ｎ−ブタノキシ〕−３
−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシ
ド、 ６（７）−〔４−アセトアミド−ｎ−ブタノキシ〕−３
−ヒドロキシ−1,2,4−ベゾトリアジン1,4−ジオキシ
ド、 ６（７）−〔４−アセトアミド−ｎ−ブタノキシ〕−３
−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔４−アセトアミド−ｎ−ブタノキシ〕−３
−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔１−（2,3−ジヒドロキシ）プロポキシ〕
−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキ
シド、 ６（７）−〔１−（2,3−ジヒドロキシ）プロポキシ〕
−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオ
キシド、 ６（７）−〔１−（2,3−ジヒドロキシ）プロポキシ〕
−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシ
ド、 ６（７）−〔１−（2,3−ジヒドロキシ）プロポキシ〕
−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシ
ド、 ６（７）−〔（２−フリル）メチルアミノ〕−３−ヒド
ロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔（２−フリル）メチルアミノ〕−３−ヒド
ロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔（２−フリル）メチルアミノ〕−３−アミ
ノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔（２−フリル）メチルアミノ〕−３−アミ
ノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（２−メトキシエチルアミノ）−３−ヒドロ
キシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（２−メトキシエチルアミノ）−３−ヒドロ
キシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（２−メトキシエチルアミノ）−３−アミノ
−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（２−メトキシエチルアミノ）−３−アミノ
−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−カルベトキシメトキシ−３−ヒドロキシ−1,
2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−カルベトキシメトキシ−３−ヒドロキシ−1,
2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−カルベトキシメトキシ−３−アミノ−1,2,4
−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−カルベトキシメトキシ−３−アミノ−1,2,4
−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔（２−メトキシエチル）カルバミルメトキ
シ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−
オキシド、 ６（７）−〔（２−メトキシエチル）カルバミルメトキ
シ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−
ジオキシド、 ６（７）−〔（２−メトキシエチル）カルバミルメトキ
シ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキ
シド、 ６（７）−〔（２−メトキシエチル）カルバミルメトキ
シ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオ
キシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチル）カルバミルメト
キシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１
−オキシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチル）カルバミルメト
キシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4
−ジオキシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチル）カルバミルメト
キシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オ
キシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチル）カルバミルメト
キシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジ
オキシド、 ６（７）−〔１−（２−ヒドロキシ−３−モルホリノ）
プロポキシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン１−オキシド、 ６（７）−〔１−（２−ヒドロキシ−３−モルホリノ）
プロポキシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔１−（２−ヒドロキシ−３−モルホリノ）
プロポキシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン
１−オキシド、 ６（７）−〔１−（２−ヒドロキシ−３−モルホリノ）
プロポキシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン
1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔３−アミノ−ｎ−プロポキシ〕−３−ヒド
ロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔３−アミノ−ｎ−プロポキシ〕−３−ヒド
ロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔３−アミノ−ｎ−プロポキシ〕−３−アミ
ノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔３−アミノ−ｎ−プロポキシ〕−３−アミ
ノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔2,3−エポキシプロポキシ〕−３−ヒドロ
キシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔2,3−エポキシプロポキシ〕−３−ヒドロ
キシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔2,3−エポキシプロポキシ〕−３−アミノ
−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔2,3−エポキシプロポキシ〕−３−アミノ
−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔３−メトキシ−２−ヒドロキシ−ｎ−プロ
ポキシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン
１−オキシド、 ６（７）−〔３−メトキシ−２−ヒドロキシ−ｎ−プロ
ポキシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン
1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔３−メトキシ−２−ヒドロキシ−ｎ−プロ
ポキシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−
オキシド、 ６（７）−〔３−メトキシ−２−ヒドロキシ−ｎ−プロ
ポキシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−
ジオキシド、 ６（７）−〔４−エトキシ−３−ヒドロキシ−ｎ−ブト
キシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１
−オキシド、 ６（７）−〔４−エトキシ−３−ヒドロキシ−ｎ−ブト
キシ〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4
−ジオキシド、 ６（７）−〔４−エトキシ−３−ヒドロキシ−ｎ−ブト
キシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オ
キシド、 ６（７）−〔４−エトキシ−３−ヒドロキシ−ｎ−ブト
キシ〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジ
オキシド、 ６（７）−〔3,4−ジヒドロキシ−ｎ−ブトキシ〕−３
−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシ
ド、 ６（７）−〔3,4−ジヒドロキシ−ｎ−ブトキシ〕−３
−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシ
ド、 ６（７）−〔3,4−ジヒドロキシ−ｎ−ブトキシ〕−３
−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−〔3,4−ジヒドロキシ−ｎ−ブトキシ〕−３
−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−メチル−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾト
リアジン１−オキシド、 ６（７）−メチル−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾト
リアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−メチル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン１−オキシド、 ６（７）−メチル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−エチル−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾト
リアジン１−オキシド、 ６（７）−エチル−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾト
リアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−エチル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン１−オキシド、 ６（７）−エチル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−クロロアセトアミド−３−ヒドロキシ−1,2,
4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−クロロアセトアミド−３−ヒドロキシ−1,2,
4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−クロロアセトアミド−３−アミノ−1,2,4−
ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−クロロアセトアミド−３−アミノ−1,2,4−
ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチルオキシ）アセトア
ミド〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン１
−オキシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチルオキシ）アセトア
ミド〕−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4
−ジオキシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチルオキシ）アセトア
ミド〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オ
キシド、 ６（７）−〔（２−ヒドロキシエチルオキシ）アセトア
ミド〕−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジ
オキシド、 6,7−ジメトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン１−オキシド、 6,7−ジメトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン1,4−ジオキシド、 6,7−ジメトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジ
ン１−オキシド、 6,7−ジメトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジ
ン1,4−ジオキシド、 6,7−ジエトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン１−オキシド、 6,7−ジエトキシ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン1,4−ジオキシド、 6,7−ジエトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジ
ン１−オキシド、 6,7−ジエトキシ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジ
ン1,4−ジオキシド、 ６（７）−プロピオニル−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベ
ンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−プロピオニル−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベ
ンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−プロピオニル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン１−オキシド、 ６（７）−プロピオニル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（２−アセトキシエトキシ）−３−ヒドロキ
シ−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（２−アセトキシエトキシ）−３−ヒドロキ
シ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（２−アセトキシエトキシ）−３−アミノ−
1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（２−アセトキシエトキシ）−３−アミノ−
1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−ｎ−ヘキシルオキシ−３−ヒドロキシ−1,2,
4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−ｎ−ヘキシルオキシ−３−ヒドロキシ−1,2,
4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−ｎ−ヘキシルオキシ−３−アミノ−1,2,4−
ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−ｎ−ヘキシルオキシ−３−アミノ−1,2,4−
ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−エチルアミノ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベ
ンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−エチルアミノ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベ
ンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−エチルアミノ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン１−オキシド、 ６（７）−エチルアミノ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾ
トリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（２−メトキシエトキシ）−３−ヒドロキシ
−1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（２−メトキシエトキシ）−３−ヒドロキシ
−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（２−メトキシエトキシ）−３−アミノ−1,
2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（２−メトキシエトキシ）−３−アミノ−1,
2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（アミノアセトアミド）−３−ヒドロキシ−
1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（アミノアセトアミド）−３−ヒドロキシ−
1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（アミノアセトアミド）−３−アミノ−1,2,
4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（アミノアセトアミド）−３−アミノ−1,2,
4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（カルバミルメトキシ）−３−ヒドロキシ−
1,2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（カルバミルメトキシ）−３−ヒドロキシ−
1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−（カルバミルメトキシ）−３−アミノ−1,2,
4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−（カルバミルメトキシ）−３−アミノ−1,2,
4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−カルボキシメトキシ）−３−ヒドロキシ−1,
2,4−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−カルボキシメトキシ）−３−ヒドロキシ−1,
2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 ６（７）−カルボキシメトキシ）−３−アミノ−1,2,4
−ベンゾトリアジン１−オキシド、 ６（７）−カルボキシメトキシ）−３−アミノ−1,2,4
−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド、 及び医薬品として適格のこれらの塩及び上記リストの化
合物のチオアミド類似物を含む。上記化合物の大部分に
おいて６もしくは７の位置（“６（７）”で示されてい
る）又は６及び７の両方の位置（“6,7"で示されてい
る）のいずれか一方において存在するとして記載されて
いる“Y¹又はY²"置換基は、５及び／又は８の環位置に
おいても存在し得るということが留意されるべきであ
る。 本発明の方法において選択性細胞毒性剤又は放射線増
感剤として有用な上記化合物の内で、次の化合物が新規
である。I.前記の式によって与えられる化合物であっ
て、ＸがOH、OR又はNR₂であり、各Ｒは独立に１〜４個
の炭素原子のアルキル、アミド又はモルホリノ成分であ
ると共にヒドロキシ、アルコキシ、アミノ又はハロゲノ
置換基で更に置換されても良く、ｎが０又は１であり、
そしてY¹及びY²が独立にＨ、ハロゲノ、ヒドロカルビル
（１〜14C）であって、環式及び不飽和ヒドロカルビル
を含み、ハロゲノ、ヒドロキシ、エポキシ、アルコキ
シ、アルキルチオ、アミノ（モルホリノを含む）、アシ
ルオキシ、アシルアミド及びこれらのチオ類似物からな
る群から選択される１又は２個の置換基で任意に置換さ
れているもの、アルキルスルホニル、アルキルホスホニ
ル、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カルバミル又
はアルキルカルバミルであり、そして該ヒドロカルビル
は単一のエーテル（−Ｏ−）結合によって任意中断され
得、あるいはY¹及びY²が独立にNHR′、Ｏ（CO）Ｒ′、N
H（CO）Ｒ′、Ｏ（SO）Ｒ′又はＯ（POR）Ｒ′であり、
Ｒ′は上記のように定義されている任意に置換されてい
るヒドロカルビルであるもの。II.前記の式によって与
えられる化合物であって、ＸがNH₂又は上述のように定
義されているＲを有するNHRであり、ｎが０であり、そ
してY¹及びY²がＩで定義されたもの。III.前記の式によ
って与えられる化合物であって、ＸがNH₂であり、ｎが
１であり、そしてY¹及びY²が独立にＨ、ヒドロカルビル
（７〜14C、飽和又は不飽和）、不飽和ヒドロカルビル
（１〜6C）、ヒドロカルビル置換基であって、置換され
ていないかもしくはハロゲン、ヒドロキシ、エポキシ、
アルコキシ、アルキルチオ、アミノ（モルホリノを含
む）、アシルオキシ、アシルアミド及びこれらのチオ類
似物で置換されているもの、アルキルスルホニル又はア
ルキルホスホニルであり、そして該ヒドロカルビルは単
一のエーテル（−Ｏ−）結合によって任意に中断され
得、あるいはY¹及びY²が独立にNHR′、Ｏ（CO）Ｒ′、N
H（CO）Ｒ′、Ｏ（SO）Ｒ′又はＯ（POR）Ｒ′であり、
Ｒ′は上述のように定義されている任意に置換されてい
るヒドロカルビルであるもの。 B.発明の化合物の調製 いくつかの３−アミノ誘導体を調製する一般的な方法
は、先に引用したレイ（Ley）等への特許、例えば米国
特許第3,980,779号に見出される。化合物は、反応混合
物の酸性化が次に来る、シアナミドの塩との反応によっ
て、式 のベンゾフロキサンから調製される。ベンゾフロキサン
出発原料は、それ自身の５及び６の位置（これらは結果
として生ずる３−アミノベンゾトリアジンオキシドの６
及び７の位置である）に関して対称的ではない。このた
め、６−及び７−置換物質の混合物が結果として生じ得
る。もし望むならば、この混合物は、存来の手段を使用
して、６か７のいずれか一方の位置に置換基を有する個
々の成分に分離され得る。 二酸化物は過酸酸化により親の一酸化物から調製され
る（ロビンズ（Robbins）等、ジェイ・ケム・ソック（J
Chem Soc）3186（1975）及びメイスン（Mason）等、ジ
ェイ・ケム・ソック（J Chem Soc）Ｂ 911（1970）参
照）。 更に、一酸化物は、（１）H₂NCNを使用する１−ニト
ロ−２−アミノベンゼン化合物の環化、（２）構造 によって与えられる親の化合物の酸化によって、又は対
応する二酸化物の制御された還元によって調製され得る
（メイスン（Mason）、スープラ（supra）及びウルフ
（Wolf）等、ジェイ・アム・ケム・ソック（J Am Chem
Soc）76:355（1954）参照）。 ３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジンは、親の化合
物の環化（案Ｉ及びアルント（Arndt）、ケム・ベル（C
hem.Ber.）3522（1913）参照）によって、又は上述した
ような一酸化物又は二酸化物の還元によって調製され得
る。 ３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジンオキシド
は、過酸化物及び酸化タングステン（案II）、３−ヒド
ロキシ−1,4−ジオキシド化合物を作製するための新規
な合成手順、又は濃硫酸及び硝酸ナトリウムウム（案II
I）を使用して調製され得る。 C.処方及び投与 以下に示すように、本発明の酸化したベンゾトリアジ
ンは、定温動物宿主における低酸素性腫瘍細胞に感受性
を与えるために又はそれを選択的に殺すために使用され
得る。それらが使用され得る方法は、腫瘍に低酸素症を
選択的に引き起こすための公知の薬剤と関連している。
そのような方法は、ヒドララジン、即ち血流によって運
ばれる酸素の量に影響を及ぼす薬剤のような抗高血圧剤
の使用を含む。これらの化合物は人間の癌患者の治療に
おいて代表的に使用される一方、他の霊長類、牛のよう
な飼育動物、並びに馬、犬及び猫のようなスポーツ動物
及びペットのような他の定温動物種の低酸素性腫瘍細胞
を殺すためにそれらは使用され得る。 低酸素症はすべての型の固形の悪性新生細胞と結び付
いていると信じられている。従って、本発明の化合物
は、新生上皮細胞、内皮細胞、結合組織細胞、骨細胞、
筋細胞、神経細胞及び脳細胞に感受性を与えるために又
はそれらを殺すために使用され得る。癌腫及び肉腫の例
は、上皮細胞癌、酸性細胞癌、肺胞細胞癌、基底細胞
癌、基底鱗細胞癌、頚部癌、腎臓癌、肝臓癌、ハースル
癌、ルーク癌、ムチン癌及びウォーカー癌のような癌
腫、並びにアベルナシー肉腫、肺胞軟部肉腫、脈管肉
腫、ボチロイド肉腫、脳腫瘍、子宮内膜ストロマ肉腫、
ユーイング束肉腫、巨細胞肉腫、リンパ肉腫、イェンセ
ン肉腫、旁皮質性骨肉腫、血管肉腫、髄様癌及び滑膜性
腫瘍のような肉腫を含む。他の放射線増感剤で感受性を
与えられる腫瘍の特定の例は、アダムス（Adams）,G.
E.、癌：包括的な論文（Cancer:A Comprehensive Treat
ise）（F.ベッカー（Becker）編）第６巻、第181頁〜第
223頁、プレナム、ニューヨーク、1977年に報告されて
いる。 化合物は経口で又は非経口（静脈注射、皮下注射、筋
肉内注射、脊髄内注射、腹膜腔内注射及び類似物）で投
与され得る。非経口で投与される場合、化合物は、医薬
品として適格のビヒクルを有する、一単位投与量の、注
射が可能な形（溶液、懸濁液、乳濁液）で通常は処方さ
れよう。そのようなビヒクルは典型的に無毒性且つ非治
療性である。そのようなビヒクルの例は、水、水性ビヒ
クル、例えば食塩水、リンゲル液、デキストロース液及
びハンク液、並びに非水性ビヒクル、例えば不揮発性油
（例えばコーン油、綿実油、ピーナッツ油及びごま
油）、エチルオレエート及びイソプロピルミリステート
である。無菌食塩水は好適なビヒクルであり、そして化
合物は十分に水溶性であり、すべての予知し得る要求を
満たす溶液がもたらされる。ビヒクルは、溶解性、等張
性及び化学的安定性を高める物質、例えば酸化防止剤、
緩衝剤及び防腐剤のような添加剤を少量含んでいても良
い。経口で（又は直腸を介して）投与される場合、化合
物は、一単位投与量の、錠剤、カプセル、坐剤又はカシ
ェーのような形で通常は処方されよう。このような処方
は、固体、半固体もしくは液体の運搬体又は稀釈剤を典
型的に含む。稀釈剤及びビヒクルの例は、ラクトース、
デキストロース、スクロース、ソルビトール、マンニト
ール、スターチ、アラビアゴム、燐酸カルシウム、鉱
油、カカオ脂、アジネーツ、トラガカントゴム、ゼラチ
ン、シロップ、メチルセルロース、ポリオキシエチレン
ソルビタンモノラウレート、メチルヒドロキシベンゾエ
ート、プロピルヒドロキシベンゾエート、タルク及びス
テアリン酸マグネシウムである。 治療の対象に投与される化合物の量は、治療されるべ
き悪性新生細胞に放射線感受性を与えるのに十分な量又
は悪性新生細胞内で細胞毒性を発揮するのに十分な量で
あり、毒性効果を引き出し得る量より少ない量ではな
い。この量は、腫瘍の型、治療されるべき対象の種、意
図されている指示線量、及び対象の体重又は体表面積に
依存しよう。放射線は種々の異なった分別管現体制の下
に人間に投与され得る。即ち、全放射線量は、数日から
数週間の期間に亘って少しずつ与えられる。これらは、
６週間に亘る毎日（即ち１週間当り５回）の線量から４
〜６週間に亘る１週間に１度の線量まで変化するであろ
う。ベンゾトリアジンの１回の投与量は、各放射線治療
の前又は後に与えられ、そして0.01〜20mmol/kgの範囲
内、通常は0.1〜2mmol/kgの範囲内であろう。 選択性細胞毒性剤として使用される場合、本発明の化
合物は、単独で、放射線もしくは他の癌細胞毒性剤と共
に、血管に作用する薬剤（例えばヒドララジン）と共
に、又は血液によって運ばれる利用可能な酸素の量を減
少させる、貧血のような方法もしくは酸素とヘモグロビ
ンとの結合を強める薬剤と共に投与され得、これらのす
べては腫瘍における低酸素症の度合いを選択的に高め
る。上述したように、式１によって包含されるすべての
化合物は放射線増感剤として広く有用である一方、（置
換された又は置換されていない）３−アミノ−1,2,4−
ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド（即ち、Ｘ＝NH₂、NH
R又はNR₂であり、Ｒは前述のように定義されたものであ
り、そしてｎは１である）であるところのそれらの化合
物のみが選択性細胞毒性剤として有用である。 例 以下の例は、本発明の化合物及びそれらを用いる合成
方法を更に説明しているが、本発明を如何様にも限定す
るものではない。 例1:3−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジ
オキシドの調製 1.50g（9.25mmol）の３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリ
アジン１−オキシド（１）、100.0mlの酢酸及び30.0ml
の30％過酸化水素の撹拌された混合物が、3.05g（9.25m
mol）のNa₂WO₄・2H₂Oで処理された。混合物は油浴中60
℃で４日間撹拌された。黄橙色の混合物は、約30゜まで
冷却され、そして多分タングステン酸である淡黄色の非
UV吸収固形物を除去すべくろ過された。酢酸中の過酸化
水素の橙色の溶液は、大部分の過酸化物を除去するため
に水及び酢酸を数回に亘って追加しつつ、注意深く半乾
燥状態まで蒸発させられた。濃縮された溶液は室温まで
戻され、橙色の固形物の４つの収穫物、0.87g（２のナ
トリウム塩の42％の収率）がもたらされた。UV_max（20
％CH₃OH/H₂O）:262.2（ε39,460）;477（ε7,030）。IR
（ニート）:3530μ、3150μ、2650μ、2180μ及び1635
μ。計算値（ナトリウム塩について計算された）:C₇H₄N
₃O₃Na1.25H₂O、223.64:C、37.6;H、2.93;N、18.79。実
測値:C、37.8;H、2.75;N、18.65。例2:3−アミノ−７−トリフルオロメチル−1,2,4−ベン
ゾトリアジン１−オキシドの調製 エタノール（50ml）中のNa（1.13g、49.2mmol）の溶
液が、エタノール（50ml）中のグアニジンヒドロクロリ
ド（4.93g、51.6mmol）の溶液に加えられた。１時間
後、混合物はろ過され、ろ液はエタノール（25ml）中の
４−クロロ−３−ニトロ−ベンゾトリフルオライド（ア
ルトリッヒ（Aldrich）、5.5g、24.4mmol）の溶液と合
体させられた。混合物は、５時間に亘って撹拌且つ還流
され、０〜５℃まで冷却され、そして沈殿した固形物が
集められた。固形物は水とエタノールで洗浄され、そし
て風乾され、m.p.＞300℃の、淡黄色の固形物である、
0.48g（９％）の３が得られた。TLC:Rf0.60（シリカゲ
ルプレート上で9:1の塩化メチレン：メタノール）。質
量スペクトル:M⁺＝230（ｑ＝100）。 例3:3−アミノ−７−デシル−1,2,4−ベンゾトリアジン
１−オキシドの調製 ４−（１−デシル）−２−ニトロアニリンの調製：無
水酢酸（400ml）が、ヘキサン（2.4）中の４−デシル
アニリン（アルトリッヒ、80g、0.34mol）の撹拌されて
いる溶液に30分掛けて加えられた。１時間に亘る撹拌の
後、混合物は、冷却され、そして70％の硝酸（34ml）で
５〜10℃において30分に亘って処理された。撹拌が５〜
10℃で１時間そして25℃で16時間続けられた。混合物
は、H₂O（１）で稀釈され、５時間撹拌され、開口皿
に注がれ、そして16時間放置された。H₂O（1.5）で更
に稀釈された後、固形物が85％のエタノール溶液（水中
の）から集められ且つ再結晶化させられ、m.p.が64℃
の、橙色の固形物である、92g（84％）の中間体が得ら
れた。 水中の85％のKOH（19g、0.288mol）の溶液（100ml）
が、メタノール（900ml）中の、上述のようにして調製
された、４−（１−デシル）−２−ニトロアニリン（89
g、0.28mol）の懸濁液と合体させられた。混合物は、６
時間撹拌され、濃HClでpH7〜８に中和され、そしてほぼ
乾燥するまで真空中で蒸発させられた。H₂O（400ml）で
稀釈された後、固形物は集められ且つ風乾され、m.p.が
59℃の、橙色の固形物である、77g（100％）の中間体が
得られた。 1.0g（8.7mmol）のクロロアミジンヒドロクロライド
（シアナミドのエーテル溶液をHClガスで処理し、沈殿
した固形物を集めることにより、使用に供すべく以前に
調製された）が、前の段階で調製された４−（１−デシ
ル）−２−ニトロアニリン（500mg、1.8mmol）の予熱さ
れた溶融体（190℃）に10分掛けて少しずつ加えられ
た。反応混合物は、190℃で５分間加熱され、25℃まで
冷却され、6NKOH（10ml）で処理され、そして90〜95℃
で１時間加熱された。25℃まで冷却された後、固形物
は、集められ、H₂Oとエタノールで洗浄され、そして風
乾され、m.p.が177℃（dec）の、淡黄色の固形物であ
る、0.25g（46％）の化合物４が得られた。質量スペク
トル:M⁺＝285（ｑ＝100）、302（ｑ＝13）。 例4:3−アミノ−７−カルバミル−1,2,4−ベンゾトリア
ジン１−オキシドの調製 ４−クロロ−３−ニトロベンズアミドの調製:20.2g
（0.1mol）の４−クロロ−３−ニトロ安息香酸（アルト
リッヒ）及び塩基チオニル（20ml）が、合体させられ、
16時間放置され、そして４時間還流され、透明の赤色溶
液が得られた。溶液は真空中で蒸発させられ且つベンゼ
ンで共沸させられた。残留物は、アセトニトリル（20m
l）中に溶解させられ、そして冷たい（−10℃）濃水酸
化アンモニウム（100ml）に30分掛けて加えられた。−1
0℃で３時間そして25℃で16時間の後に、混合物は開口
皿に注がれ、蒸発して乾燥するのを許容された。残留物
はH₂O中でスラリーにされ、そして固形物は集められ且
つ風乾され、m.p.が153℃の、淡黄色の固形物である、1
9.8g（98％）の中間体が得られた。 エタノール（75ml）中のNa（3.45g、0.15mol）の溶液
が、エタノール（75ml）中のグアニジンヒドロクロリド
（15.8g、0.165mol）の溶液に加えられた。１時間後、
混合物はろ過され、ろ液はエタノール（50ml）中の、上
述のようにして調製された４−クロロ−３−ニトロベン
ズアミド（10g、0.05mol）の懸濁液と合体させられた。
混合物は、16時間に亘って撹拌且つ還流され、０〜５℃
まで冷却され、そして濃HCl（8ml）で酸性にされた。集
められた固形物はK₂CO₃（28g、0.2mol）及びH₂O（40m
l）と合体させられ、そして混合物は100℃で８時間に亘
って撹拌且つ加熱された。25℃まで冷却された後、固形
物は、集められ、H₂Oで洗浄され、そして風乾された。
固形物は、沸騰している酢酸エチル中に懸濁させられ、
集められ、そして熱い酢酸エチルで洗浄された。固形物
は沸騰しているジオキサン中に繰り返し懸濁させられ且
つ集められた（６×100ml）。合体したろ液は固形物を
生ずるまで真空中で蒸発させられた。固形物は、95％の
エタノール中に懸濁させられ、集められ、そして風乾さ
れ、m.p.＞300℃の、淡黄色の固形物である、0.44g（4.
3％）の化合物５が得られた。TLC:Rf＝0.23（2:1の塩化
メチレン：アセトン、シリカゲルプレート）。質量スペ
クトル:M⁺＝205（ｑ＝100）。 例5:7−アセチル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジ
ン１−オキシドオキサムの調製 ７−アセチル−３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジ
ン１−オキシド（例５で調製された;50mg、0.25mmo
l）、ヒドロキシルアミンヒドロクロリド（200mg、2.88
mmol）、ピリジン（1ml）及びエタノール（1ml）の合体
させられた混合物が、90〜95℃で１時間加熱され、次い
で25℃まで冷却された。混合物は95％のエタノール（5m
l）で稀釈され、そして固形物は集められ且つ風乾さ
れ、m.p.が278℃（dec）の、淡黄色の固形物である、30
mg（56％）の化合物６が得られた。TLC:Rf＝0.60（9:1
の塩基メチレン：メタノール）。質量スペクトル:M⁺＝2
19（ｑ＝100）。 例6:3−アミノ−６（７）−デシル−1,2,4−ベンゾトリ
アジン1,4−ジオキシドの調製 ５−（１−デシル）−ベンゾフロキサン:4−（１−デ
シル）−２−ニトロアニリン（77g、0.28mol）、H₂O中
で5.25％のNaOCl（476g、0.34mol）、85％のKOH（20.3
g、0.31mol）、Bn₄NHSO₄（4.7g、0.014mol）及びCH₂Cl₂
（2.28）の合体させられた混合物が、６時間に亘って
急速に撹拌され、そしてH₂O（500ml）及びCH₂Cl₂（１
）で稀釈された。分離した有機相は、1NHCl（１）
及びブライン（２×１）で連続的に洗浄され、乾燥さ
れ（Na₂SO₄）、そして真空中で濃縮され、70g（92％）
の赤い油が得られた。 DMSO（180ml）中の、上述のようにして調製された５
−（１−デシル）−ベンゾフロキサン（10g、0.036mo
l）及びベンジルトリエチルアンモニウムクロリド（0.3
6g、0.0016mol）の溶液が、シアナミド（13.0g、0.31mo
l）及びK₂CO₃（36.8g、0.27mol）で数時間に亘って徐々
に処理された。混合物は、48時間撹拌され、そしてろ過
された。ろ液は、H₂O（６）及び氷酢酸（40ml）で稀
釈され、そしてCH₂Cl₂（４×500ml）で抽出された。合
体された有機溶液は、５％のNaHCO₃溶液（１×500ml）
及びブライン（２×500ml）で連続的に洗浄され、乾燥
され（Na₂SO₄）、そして乾燥するまで真空中で蒸発させ
られた。粗製物はCH₂Cl₂:メタノール（98:2）を使用し
たシリカゲルによるクロマトグラフィによって精製さ
れ、m.p.が155℃（dec）の、赤い固形物である、1.8g
（16％）の化合物７が得られた。質量スペクトル:M⁺＝3
18（ｑ＝４）、285（ｑ＝100）。 例7:7−クロロ−３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン1,4−ジオキシドの調製 100mlの酢酸中の1.50g（7.63mmol）の８の混合物が、
2.52g（7.63mmol）のNa₂WO₄2H₂O及び30mlの30％H₂O₂で
処理された。混合物は、50℃で６日間に亘って撹拌且つ
加熱され、次いでH₂O₂を除去すべく乾燥するまでゆっく
りと蒸発させられた。残留物は、250mlのH₂O中で煮沸さ
れ、そして約25mgの出発原料８を除去すべくろ過され
た。次いで、水溶液は１回につき250mlの酢酸エチルで
２回抽出された。TLC及び質量分析によって10として識
別された真紅の結晶質材料が、上記の分配している混合
物中に生じ、そしてろ過によって集められ、下記のよう
に10として識別された60.0mgの黄橙色の固形物（3.7％
の収率）が得られ、この固形物は熱いイソプロピルアル
コールそれとの混合物に対して良好な溶解性を示した。
質量スペクトル:M⁺＝212（ｑ＝100）（化合物10）。TL
C:Rf＝0.34（アセトン、シリカゲルプレート）。 10をろ過除去した後のH₂O層から分離した、上記の過
酸エチルは乾燥するまで蒸発させられた。次いで、残留
物は室温においてイソプロピルアルコールで処理され、
無光沢の橙色の固形物である、0.41g（25％の収率）の
９が得られた。質量スペクトル:M⁺＝213（ｑ＝70）。TL
C:Rf＝0.22（アセトン、シリカゲルプレート）。化合物
９は、下記のように、m.w.が230.61の、アンモニウム
塩、C₇H₄ClN₃O₃NH₃として識別された。遊離酸９は、濃N
H₄OH中に溶解され、次いで氷で冷やされ、そして不溶性
の10の痕跡を除去すべくろ過された。赤色のろ液と洗液
が乾燥するまで蒸発させられ、赤橙色の固形物が得られ
た。この固形物は、50mlの沸騰している1,2−ジメトキ
シエタンで処理され、ろ過で集められ、そして追加の25
mlの熱い1,2−ジメチルエーテルで洗浄された。この固
形物は56℃/1.0mmのP₂O₅で乾燥され、0.244g（87％の収
率）の11が得られた。 C₇H₄ClN₃O₃NH₃（230.61）について計算された計算値:
C、36.5;H、3.06;N、24.30。実測値:C、36.5;H、3.07;
N、23.94。UV_max（H₂O）:219（ε12,580）;265.4（ε4
0,000）;4830486（ε6.640）。 例8:放射線との組合せにおける活性に関する生体内の測
定 本発明の化合物は、引用によって本明細書中に編入さ
れている、ブラウン（Brown）,J.M.、ラジエーション・
レス（Radiation Res）（1975）64:633−46の測定によ
り、活性に関して生体内で試験された。この測定のため
に、体重が20〜25gである雌のC3HマウスにおけるSCCVII
癌が使用された。これらのマウスは、病原体が存在しな
い特殊な状態の下で飼育され、各実験の開始時には生後
３〜４ケ月であった。SCVII腫瘍は、先立つ生体内の腫
瘍から取り出された後の腫瘍細胞の２代〜８代の生体外
の継代から採取された２×10⁵個の腫瘍細胞の接種か
ら、脇腹の皮膚内で成長させられた。１匹のマウスにつ
き２個の腫瘍が植え付けられ、そしてそれらは、それら
が略100mlの体積に到達した時に、実験対象の腫瘍とし
て使用された。この時点において、腫瘍は略20％の低酸
素性細胞を含んでいた。 試験化合物は、5mmol/kgかLD₅₀の2/3のいずれか一方
（いずれか低い方）の固定された注射量で試験された。
試験化合物を注射されたが照射されなかったマウス及び
食塩水を注射され且つ照射されたマウスの適切な対照も
又含まれていた。薬剤の注射後２時間から注射前３時間
までの種々の間隔において20Gyの一定の放射線量が適用
された。これらの間隔を使用することにより、結果は、
最適な照射時間、及び放射線のみと比較して余分に細胞
を殺す度合いの両方に関する指示を与える。３−アミノ
−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキシドを使用し
た。そのような時間経過実験の結果が第２図に示されて
いる。それらは、放射線のみと比較して、２つの別々の
細胞毒性の加算性に基づいて予想された以上に、細胞を
殺すことが強められているということを示している。薬
剤が放射線の前又は後に与えられても同じように増大す
る細胞毒性は、ベンゾトリアジンジオキシドの放射線増
感効果よりも、むしろ低酸素性細胞に対する選択的な毒
性を示している。 SCCVII腫瘍の照射は、プレキシグラス箱内の麻酔をか
けられていない、腫瘍のあるマウスを照射することによ
って行われた。照射条件は、250kVp X線、15mA、FSC33c
m、0.35mmCuの付加的なろ過、半値層1.3mmCu、及び317r
ad/分の線量率であった。 細胞を殺した量は、下記のように、ばらばらにされ且
つ培養された腫瘍細胞の生存率によって判定された。腫
瘍のあるマウスは照射されてから24時間後に殺され、そ
して、腫瘍は、皮膚から切り取られ、数個の小片に刻ま
れ、そして糸鋸に取り付けられたかみそりの刃による高
速切断によって微細なブライにされた。ブライは、0.02
％のデオキシリボヌクレアーゼ、0.005％のプロマーゼ
及び0.02％のコラゲナーゼを含有する、30mlのハンクの
緩衝食塩溶液（HBSS）に加えられた。懸濁液は、37℃で
30分間撹拌され、ろ過され、そして４℃において1600rp
mで10分間遠心分離された。細胞沈殿物は、15％の牛の
胎児の血清（FCS）とトリパン青を混合されたアリコー
トとを加えられた完全ウェイマウス培地に再懸濁させら
れ、そして血球計を使用して計数された。この血清の適
切な稀釈物は、60−又は100−mmのポリスチレンペトリ
皿（ラックス・サイエンティフィック・コープ（Lux Sc
ientific Corp）内で５又は15mlの培地を覆った。13日
間のインキュベーションの後、コロニーは固定且つ着色
され、そして50個以上の細胞を含むコロニーが計数され
た。60mmの皿において25〜100個のコロニーの平均総数
を生ずる稀釈物が、結果の計算において使用された。 例9:細胞毒性試験 細胞毒性試験は、３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリア
ジン1,4−ジオキシド並びに種々の培養した有気性細胞
及び低酸素性細胞（ヒト、マウス及びハムスター）を使
用して行われた。スピナーフラスコ内の細胞は、特定の
量の薬剤を加える前に、５％のCO₂を含有する空気か窒
素のいずれか一方により37℃で１時間ガス処理された。
第1A図、第1B図及び第1C図は、３−アミノ−1,2,4−ベ
ンゾトリアジン1,4−ジオキシドの種々の濃度における
マウス、ハムスター及びヒトの細胞の、細胞の生存に関
する結果を示す。有気性条件下の１〜２％の薬剤濃度の
みが、低酸素症下で等しく細胞を殺すのに必要であると
いうことが見出だされた。この選択的な低酸素性毒性の
比率（50〜100）は、今までに文献で報告されたどんな
化合物に関するそれよりも高い。 例10:LD₅₀の決定 BALB/c雌マウス（体重は20〜25g）におけるLD₅₀は、
もし試験される化合物が低い脂肪親和性を有さず且つ非
常に可溶性ではないならば、腹膜腔内注射（ip）によっ
て決定され、もし試験される化合物が低い脂肪親和性を
有し且つ非常に可溶性であるならば、静脈内（iv）投与
が使用される。１、２、５及び60日におけるLD₅₀値が、
注射する直前に生理的食塩水に溶解された薬剤の傾斜を
付けられた量を投与することによって決定される。 例11:生体外における放射線感受性 培養における低酸素性細胞の、1.6の増感剤増強比を
生ずるのに必要な薬剤の濃度を決定するための測定の結
果は、下記の通りである。化合物 Ｃ_1.6（mM） ７−クロロ−３−アミノ−1,2,4−ベンゾ トリアジン１−オキシド 3.3 ６（７）−メトキシ−３−アミノ−1,2,4 −ベンゾトリアジン1,4−ジオキシド 〜1.0 ３−ヒドロキシ−1,2,4−ベンゾトリアジ ン1,4−ジオキシド 〜2.0 本発明を実施するための上述した方法の変形であっ
て、化学、薬学、医学及び関連する技術における通常の
知識を有する者にとっては明らかなものは、下記の請求
の範囲の範囲内にあると意図されている。 例12:ヒドララジンを使用する、増強された腫瘍細胞毒
性 ヒドララジンは、血管の周囲の平滑筋を弛緩させるこ
とによって作用する抗高血圧剤である。これは血流を腫
瘍から正常な組織へ優先的にそらすという効果を有して
おり、この過程は腫瘍に即座の低酸素症を引き起こす。
もし３−アミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン1,4−ジオキ
シドがこの薬剤と共に与えられるならば、腫瘍細胞を殺
すことにおいて実質的な増大が得られる。この実験にお
いて、ヒドララジンも上述したベンゾトリアジン化合物
もSCCVII腫瘍において細胞を有意に殺すということはな
かったのに対し、この二つのものの組合せは10³倍も生
存を減らした（即ち、1000個の細胞当り唯１個の細胞の
みが育ち得た）。実験手順は例８で述べたのと同じであ
り、結果は第３図に示されている。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 グランジエ、エドワード・ダヴリユウ アメリカ合衆国カリフオルニア州 94306、パロ・アルト、ウエーヴアーリ イ・ストリート 3480 (72)発明者 マーチンズ、アベラード・ピー アメリカ合衆国カリフオルニア州 95129、サン・ジヨゼ、ボウモント・ド ライヴ 1111 (56)参考文献 Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｊｏｕ ｒｎａｌ ｏｆ Ｒａｄｉａｔｉｏｎ Ｏｎｃｏｌｏｇｙ，Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｐ ｈｙｓｉｃｓ Ｖｏｌ．12，Ｎｏ．７, Ｐ．1239−1242 Ｊ．Ｈｅｔｅｒｏｃｙｃｌｉｃ Ｃｈ ｅｍ．，Ｖｏｌ．19，Ｐ．497−501 （1982)

Claims (1)

1. (57)【特許請求の範囲】 １．低酸素性腫瘍細胞を放射線感受性にする組成物であ
   って、式 〔式中、ＸはOH、OR、NH₂、NHR又はNH₂であり、各Ｒは
   独立に１〜４個の炭素原子のアルキル又はホルモリノ成
   分であると共にヒドロキシ、アルコキシ、アミノ又はハ
   ロゲン置換基で更に置換されても良く、 ｎは０又は１であり、そして Y¹及びY²は独立にＨ、ハロゲノ、ヒドロカルビル（１〜
   14C）であって、環式及び不飽和ヒドロカルビルを含
   み、ハロゲノ、ヒドロキシ、エポキシ、アルコキシ、ア
   ルキルチオ、アミノ（モルホリノを含む）、アシルオキ
   シ、アシルアミド及びこれらのチオ類似物からなる群か
   ら選択される１又は２個の置換基で任意に置換されてい
   るもの、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カルバミ
   ル又はアルキルカルバミルであり、そして該ヒドロカル
   ビルは単一のエーテル（−Ｏ−）結合によって任意に中
   断され得、あるいはY¹及びY²は独立にNHR′、Ｏ（CO）
   Ｒ′、NH（CO）Ｒ′、Ｏ（SO）Ｒ′又はＯ（POR′）
   Ｒ′であり、Ｒ′は上記のように定義されている任意に
   置換されているヒドロカルビルである。ただし、３−ア
   ミノ−1,2,4−ベンゾトリアジン−1,4−ジオキシドを除
   く〕の化合物を含む上記組成物。 ２．式 〔式中、Y¹及びY²は独立にＨ、ハロゲノ、ヒドロカルビ
   ル（１〜14C）であって、環式及び不飽和ヒドロカルビ
   ルを含み、ハロゲノ、ヒドロキシ、エポキシ、アルコキ
   シ、アルキルチオ、アミノ（モルホリノを含む）、アシ
   ルオキシ、アシルアミド及びこれらのチオ類似物からな
   る群から選択される１又は２個の置換基で任意に置換さ
   れているもの、カルボキシ、アルコキシカルボニル、カ
   ルバミル又はアルキルカルバミルであり、そして該ヒド
   ロカルビルは単一のエーテル（−Ｏ−）結合によって任
   意に中断され得、あるいはY¹及びY²は独立にNHR′、Ｏ
   （CO）Ｒ′、NH（CO）Ｒ′、Ｏ（SO）Ｒ′もしくはＯ
   （POR′）Ｒ′であり、Ｒ′は上記のように定義されて
   いる任意に置換されているヒドロカルビルである〕の化
   合物を、少なくとも約50℃の温度において対応する３−
   アミノ−１−オキシド誘導体と過酸化水素とをNa₂WO₄・
   2H₂Oの存在下で反応させることによって製造する方法。