JP2750222B2 - ナタマイシン回収方法 - Google Patents
ナタマイシン回収方法Info
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- JP2750222B2 JP2750222B2 JP7525534A JP52553495A JP2750222B2 JP 2750222 B2 JP2750222 B2 JP 2750222B2 JP 7525534 A JP7525534 A JP 7525534A JP 52553495 A JP52553495 A JP 52553495A JP 2750222 B2 JP2750222 B2 JP 2750222B2
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- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
- C12P19/44—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides
- C12P19/60—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin
- C12P19/62—Preparation of O-glycosides, e.g. glucosides having an oxygen of the saccharide radical directly bound to a non-saccharide heterocyclic ring or a condensed ring system containing a non-saccharide heterocyclic ring, e.g. coumermycin, novobiocin the hetero ring having eight or more ring members and only oxygen as ring hetero atoms, e.g. erythromycin, spiramycin, nystatin
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Description
【発明の詳細な説明】 発明の背景 ナタマイシンはピマリシンとしても知られ、最初は19
55年に、南アフリカのナタールのピーターマリツバーグ
の町の近くで採取された土壌から得られたストレプトマ
イセス・ナタレンシス（Streptomyces natalensis）の
培養物の発酵ブロスから単離された。（A.P.Struykら，
Antibiotics,Annual,878（1957−1958））WHOによって
ナタマイシンを示す名称であるピマリシンは、ストレプ
トマイセス・ナタレンシス(Streptomyces natalensi
s）あるいはストレプトマイセス・ギルボスポレウス(St
reptomyces gilvosporeus）のいずれかによって産生さ
れる。
55年に、南アフリカのナタールのピーターマリツバーグ
の町の近くで採取された土壌から得られたストレプトマ
イセス・ナタレンシス（Streptomyces natalensis）の
培養物の発酵ブロスから単離された。（A.P.Struykら，
Antibiotics,Annual,878（1957−1958））WHOによって
ナタマイシンを示す名称であるピマリシンは、ストレプ
トマイセス・ナタレンシス(Streptomyces natalensi
s）あるいはストレプトマイセス・ギルボスポレウス(St
reptomyces gilvosporeus）のいずれかによって産生さ
れる。
初期の特許には多数回の精製工程を必要とし比較的高
価なユニット操作を含む回収方法が記載されている。英
国特許第846,933号はメタノール、ブタノールおよびア
セトンのような水混和性溶媒を使用した発酵ブロスから
のナタマイシンの吸着／溶出回収を開示している。米国
特許第3,892,850号は限られた水混和性を有する有機溶
媒への抽出、次いで該溶媒からの回収による発酵ブロス
からの回収を開示している。米国特許第3,378,441号は
発酵ブロスの塩析、ついで溶媒溶解および蒸発による沈
殿によるナタマイシンの回収をクレームしている。その
後の特許である英国特許第2,106,498号は濾過された発
酵ブロスを真空濃縮またはブタノール抽出して原材料で
ある抗菌複合体を得、ここからナタマイシンを単離でき
る。WO92/10580はナタマイシンをメタノールで低pHで溶
解し、ブロス固形物を除去することを開示している。こ
れらの条件下でナタマイシンは酸分解に感受性であっ
て、収量の低下および生成物純度の低下に有効である。
このように、先行技術は高い品質のナタマイシンの効率
的な回収方法を教示していない。
価なユニット操作を含む回収方法が記載されている。英
国特許第846,933号はメタノール、ブタノールおよびア
セトンのような水混和性溶媒を使用した発酵ブロスから
のナタマイシンの吸着／溶出回収を開示している。米国
特許第3,892,850号は限られた水混和性を有する有機溶
媒への抽出、次いで該溶媒からの回収による発酵ブロス
からの回収を開示している。米国特許第3,378,441号は
発酵ブロスの塩析、ついで溶媒溶解および蒸発による沈
殿によるナタマイシンの回収をクレームしている。その
後の特許である英国特許第2,106,498号は濾過された発
酵ブロスを真空濃縮またはブタノール抽出して原材料で
ある抗菌複合体を得、ここからナタマイシンを単離でき
る。WO92/10580はナタマイシンをメタノールで低pHで溶
解し、ブロス固形物を除去することを開示している。こ
れらの条件下でナタマイシンは酸分解に感受性であっ
て、収量の低下および生成物純度の低下に有効である。
このように、先行技術は高い品質のナタマイシンの効率
的な回収方法を教示していない。
発明の総括 本発明は、実質的に水混和性溶媒をアルカリ性pHで使
用する発酵ブロスから高品質のナタマイシンを回収する
新しい単純な効率的方法に関する。詳細には、ナタマイ
シンは発酵ブロスから以下の方法で回収される： ａ）上記ブロスのpHを約10より上に調節し、上記ブロス
にナタマイシンを溶解させるに十分な量の実質的に水混
和性の溶媒を加え； ｂ）pH調節されたブロスから不溶性固体を除去し； ｃ）該ブロスのpHをナタマイシンを該ブロスから沈殿さ
せるに十分なレベルに低下させ； ｄ）ナタマイシンを上記ブロスから取り出す。
用する発酵ブロスから高品質のナタマイシンを回収する
新しい単純な効率的方法に関する。詳細には、ナタマイ
シンは発酵ブロスから以下の方法で回収される： ａ）上記ブロスのpHを約10より上に調節し、上記ブロス
にナタマイシンを溶解させるに十分な量の実質的に水混
和性の溶媒を加え； ｂ）pH調節されたブロスから不溶性固体を除去し； ｃ）該ブロスのpHをナタマイシンを該ブロスから沈殿さ
せるに十分なレベルに低下させ； ｄ）ナタマイシンを上記ブロスから取り出す。
好適具体例において、ブロスのpHは段階ａ）では10な
いし11に、段階ｃ）においては5.5ないし7.5に調節され
る。段階ｂ）およびｄ）においてはいくつかの方法、た
とえば、遠心分離、深部濾過および交差流濾過を使用で
きるが、好ましい方法は交差流濾過である。回収段階の
前に発酵ブロスをたとえば重量／容量にもとづいて10な
いし50％固体に濃縮するのが好ましい。回収工程の間の
ナタマイシンの大きな安定性のため、BHA、BHT、アスコ
ルビン酸またはエリスロビン酸ナトリウムのような抗酸
化剤を添加できる。
いし11に、段階ｃ）においては5.5ないし7.5に調節され
る。段階ｂ）およびｄ）においてはいくつかの方法、た
とえば、遠心分離、深部濾過および交差流濾過を使用で
きるが、好ましい方法は交差流濾過である。回収段階の
前に発酵ブロスをたとえば重量／容量にもとづいて10な
いし50％固体に濃縮するのが好ましい。回収工程の間の
ナタマイシンの大きな安定性のため、BHA、BHT、アスコ
ルビン酸またはエリスロビン酸ナトリウムのような抗酸
化剤を添加できる。
発明の詳細な説明 発酵によるナタマイシンの生産は周知である。上述の
英国特許、GB846,933は代表的であり、ストレプトマイ
セス・ギルボスポレウス（Storeptomuces gilbosporeu
s）を使用した発酵によってナタマイシンを製造するこ
とを開示している。
英国特許、GB846,933は代表的であり、ストレプトマイ
セス・ギルボスポレウス（Storeptomuces gilbosporeu
s）を使用した発酵によってナタマイシンを製造するこ
とを開示している。
ナタマイシンを含む発酵ブロスは、所望なら、蒸発、
深部濾過、交差流濾過および遠心分離のような適当な方
法によって濃縮できるが、好ましい方法は交差流濾過で
ある。重量／容量にもとづいて約10ないし50％固体の範
囲に濃縮するのが好ましい。濃縮の間ブロスは50ないし
70℃の範囲に加熱して蒸発または濾過速度を改善する。
深部濾過、交差流濾過および遠心分離のような適当な方
法によって濃縮できるが、好ましい方法は交差流濾過で
ある。重量／容量にもとづいて約10ないし50％固体の範
囲に濃縮するのが好ましい。濃縮の間ブロスは50ないし
70℃の範囲に加熱して蒸発または濾過速度を改善する。
上記ブロスを適当な塩基性化剤、たとえばNa2CO3，K2
CO3,KOH,NaOHまたはその組み合わせを使用して約10を越
えるpH、好ましくは約10ないし約11に調節した。濃縮段
階での水除去の程度に依って、この濃縮物の水または水
混和性による希釈を行ってpH調節の間の撹拌を促す必要
があるかも知れない。さらに、上記pH調節濃縮物にナタ
マイシンを溶解させるに十分量の実質的に水混和性の溶
媒を加える。適当な水混和性溶媒は、たとえば、エタノ
ール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、テ
トラヒドロフランおよびそれらの組み合わせである。こ
れらのうち、イソプロパノールが好適である。典型的に
は、濃縮物１容量部当たり１ないし２容量部のイソプロ
パノールが必要である。
CO3,KOH,NaOHまたはその組み合わせを使用して約10を越
えるpH、好ましくは約10ないし約11に調節した。濃縮段
階での水除去の程度に依って、この濃縮物の水または水
混和性による希釈を行ってpH調節の間の撹拌を促す必要
があるかも知れない。さらに、上記pH調節濃縮物にナタ
マイシンを溶解させるに十分量の実質的に水混和性の溶
媒を加える。適当な水混和性溶媒は、たとえば、エタノ
ール、プロパノール、イソプロパノール、アセトン、テ
トラヒドロフランおよびそれらの組み合わせである。こ
れらのうち、イソプロパノールが好適である。典型的に
は、濃縮物１容量部当たり１ないし２容量部のイソプロ
パノールが必要である。
ナタマイシンの溶解度は水あるいはイソプロパノール
のいずれでも低いが（"Solubility of Antibiotics in
Twenty−Six Solvents",Journal of the Association o
f Official Analytical Chemists,vol.50,no.2,196
7），高いpHでは溶媒混合物において40ないし120g/l以
上で可溶性である。文献ではナタマイシンはあるかりせ
いpHでは不安定であると報告されているが（H.Brik"Ana
lytical Profiles of Drug Substances"）、実際は本発
明の条件下には適当に安定である。所望なら、安定性は
アスコルビン酸、エリソルビン酸、BHAおよびBHTのよう
な抗酸化剤をナタマイシン活性の約0.2重量％までの量
を添加することによってさらに改善される。WO92/10580
に開示されているような低いpHの回収工程の条件下に
は、ナタマイシンは急速な失活およびナタマイシンから
容易には分離されないナタマイシン類似物の形成に感受
性である。
のいずれでも低いが（"Solubility of Antibiotics in
Twenty−Six Solvents",Journal of the Association o
f Official Analytical Chemists,vol.50,no.2,196
7），高いpHでは溶媒混合物において40ないし120g/l以
上で可溶性である。文献ではナタマイシンはあるかりせ
いpHでは不安定であると報告されているが（H.Brik"Ana
lytical Profiles of Drug Substances"）、実際は本発
明の条件下には適当に安定である。所望なら、安定性は
アスコルビン酸、エリソルビン酸、BHAおよびBHTのよう
な抗酸化剤をナタマイシン活性の約0.2重量％までの量
を添加することによってさらに改善される。WO92/10580
に開示されているような低いpHの回収工程の条件下に
は、ナタマイシンは急速な失活およびナタマイシンから
容易には分離されないナタマイシン類似物の形成に感受
性である。
不活性なブロス固体は、深部濾過、交差流濾過および
遠心分離のようないくつかの方法のいずれかによってナ
タマイシン溶液から取り出される。所望なら、上記固体
は、たとえば、40−60％イソプロパノール水溶液で洗っ
て残留ナタマイシン活性を抽出し、回収量を改善でき
る。交差流濾過はブロスの固体を除去するのに好適な方
法である。交差流濾過はJ.M.WalkerおよびM.Coxga"The
Language of Biotechnology"（American Chemical Soci
ety,Washington,D.C.,1988）で定義されているよう
に、”主液体流はフィルターと平行していて該液体が主
液体流に対して垂直に通過するようにした濾過装置のた
めの操作レジメである。このレジメはフィルターケーキ
の形成を最小にし、したがって濾過速度も低下する。フ
ィルター助剤または凝集剤の必要なしに急速な濾過がで
きる。”特許請求された方法においては、濾過助剤の添
加なしに交差流濾過により急速濾過速度および高い最終
固体濃度が可能になる。使用されるセラミックフィルタ
ーにより高い交差流速度が可能となり濾過表面を効果的
に掃くことができる。これらは高温で使用でき、さらに
フラックス強化できる。苛酷なpHおよび温度条件に対す
るこれらの安定性により滑らかな洗浄が促進され、栓塞
を最小にする操作の間にバックパルスされ得る。
遠心分離のようないくつかの方法のいずれかによってナ
タマイシン溶液から取り出される。所望なら、上記固体
は、たとえば、40−60％イソプロパノール水溶液で洗っ
て残留ナタマイシン活性を抽出し、回収量を改善でき
る。交差流濾過はブロスの固体を除去するのに好適な方
法である。交差流濾過はJ.M.WalkerおよびM.Coxga"The
Language of Biotechnology"（American Chemical Soci
ety,Washington,D.C.,1988）で定義されているよう
に、”主液体流はフィルターと平行していて該液体が主
液体流に対して垂直に通過するようにした濾過装置のた
めの操作レジメである。このレジメはフィルターケーキ
の形成を最小にし、したがって濾過速度も低下する。フ
ィルター助剤または凝集剤の必要なしに急速な濾過がで
きる。”特許請求された方法においては、濾過助剤の添
加なしに交差流濾過により急速濾過速度および高い最終
固体濃度が可能になる。使用されるセラミックフィルタ
ーにより高い交差流速度が可能となり濾過表面を効果的
に掃くことができる。これらは高温で使用でき、さらに
フラックス強化できる。苛酷なpHおよび温度条件に対す
るこれらの安定性により滑らかな洗浄が促進され、栓塞
を最小にする操作の間にバックパルスされ得る。
次いで生成物に富んだ溶液のpHを塩酸のような適当な
酸で調節してナタマイシンを沈殿させる。酸の選択は重
要ではなく、経済と簡便のため塩酸が好ましい。沈殿さ
れたナタマイシン結晶は適当な方法、たとえば、深部濾
過、交差流濾過および遠心分離で単離される。さらに公
知の精製工程、たとえば、水−イソプパノール混合物で
洗い乾燥することによって行われる。遠心分離または交
差流濾過によりナタマイシンを単離するには、濾過母液
を同様の溶媒組成の洗浄液で置き換えて水不溶性不純物
が沈殿するのを避けることが必要である。乾燥生成物は
典型的には無水状態で少なくとも94％の純度を有する。
40−70％の回収率が典型的である。交差流濾過は上述の
ようにナタマイシンの好適単離方法であって、母液およ
び洗浄液を急速に除去する。この場合の生成物は濃縮結
晶スラリーであり、これは種々の方法、たとえば蒸発ま
たは噴霧乾燥によって乾燥固体に転換できる。
酸で調節してナタマイシンを沈殿させる。酸の選択は重
要ではなく、経済と簡便のため塩酸が好ましい。沈殿さ
れたナタマイシン結晶は適当な方法、たとえば、深部濾
過、交差流濾過および遠心分離で単離される。さらに公
知の精製工程、たとえば、水−イソプパノール混合物で
洗い乾燥することによって行われる。遠心分離または交
差流濾過によりナタマイシンを単離するには、濾過母液
を同様の溶媒組成の洗浄液で置き換えて水不溶性不純物
が沈殿するのを避けることが必要である。乾燥生成物は
典型的には無水状態で少なくとも94％の純度を有する。
40−70％の回収率が典型的である。交差流濾過は上述の
ようにナタマイシンの好適単離方法であって、母液およ
び洗浄液を急速に除去する。この場合の生成物は濃縮結
晶スラリーであり、これは種々の方法、たとえば蒸発ま
たは噴霧乾燥によって乾燥固体に転換できる。
ナタマイシンは結晶の形では温度安定性である（H.A.
Morrisら、Cultured Dairy Products Journal,p23,（19
78年８月）。生成物水分が約６％以下で運転されない限
り70℃に維持された乾燥温度が受容できる。ナタマイシ
ンは通常三水和物として存在する。無水ナタマイシンは
水和物より不安定であるが、あまり過剰に乾燥すると生
成物の純度に悪影響を及ぼす。
Morrisら、Cultured Dairy Products Journal,p23,（19
78年８月）。生成物水分が約６％以下で運転されない限
り70℃に維持された乾燥温度が受容できる。ナタマイシ
ンは通常三水和物として存在する。無水ナタマイシンは
水和物より不安定であるが、あまり過剰に乾燥すると生
成物の純度に悪影響を及ぼす。
本発明の回収方法によっては典型的に94ないし99％
（無水状態にもとづいて計算）の乾燥生成物純度および
40−70％の回収率が達成される。
（無水状態にもとづいて計算）の乾燥生成物純度および
40−70％の回収率が達成される。
実施例１ 回転エバポレイターによって、10.5g/lのナタマイシ
ン濃度の1027mlの発酵ブロスを500mlに濃縮した。pHを1
0M水酸化ナトリウムで10.5に調節し、500mlのイソプロ
パノールを加えた。この混合物を約２時間撹拌し、次い
で遠心分離した。透明な暗色ナタマイシンに富んだ溶液
を傾瀉し、12M塩酸でpH6.5ないし7.5に調節し数時間か
けて結晶化させた。ナタマイシン結晶を遠心分離により
単離し、水：イソプロパノール1:1混合物40mlでフィル
ター漏斗に移し、濾過し、水：イソプロパノール1:1混
合物20mlずつで３回洗い、真空オーブン中35℃で一定重
量まで乾燥し、無水状態にもとづいて純度96.2％の8gの
ナタマイシン固体を得た。ブロスからの収率は69％であ
った。
ン濃度の1027mlの発酵ブロスを500mlに濃縮した。pHを1
0M水酸化ナトリウムで10.5に調節し、500mlのイソプロ
パノールを加えた。この混合物を約２時間撹拌し、次い
で遠心分離した。透明な暗色ナタマイシンに富んだ溶液
を傾瀉し、12M塩酸でpH6.5ないし7.5に調節し数時間か
けて結晶化させた。ナタマイシン結晶を遠心分離により
単離し、水：イソプロパノール1:1混合物40mlでフィル
ター漏斗に移し、濾過し、水：イソプロパノール1:1混
合物20mlずつで３回洗い、真空オーブン中35℃で一定重
量まで乾燥し、無水状態にもとづいて純度96.2％の8gの
ナタマイシン固体を得た。ブロスからの収率は69％であ
った。
実施例２ ナタマイシン濃度134g/lの発酵ブロス濃縮物の10.2リ
ットル部分を炭酸ナトリウム1100g、140mlの50％水酸化
ナトリウム溶液および十分量の水（1.3リットル）を添
加することによりpH10.6に調節しこのpH調節の間に重い
沈殿物を混合させた。得られたスラリーに、6gのBHAを
含むイソプロパノール6kgを加え、混合物を撹拌してナ
タマイシンを溶解させた。ブロスの固体を25−30℃で交
差流濾過により取り出した。この操作の間に保持された
ブロスの固体のスラリーは濃厚となったので、水：イソ
プロパノール1:1混合物10リットルを加えて残留するナ
タマイシンを洗い出した。濾液を5M塩酸でpH6.6に調節
し、ナタマイシンを１−２時間かけて結晶化した。ナタ
マイシンをビュッフェナー漏斗で濾過し、約500mlのイ
ソプロパノールと水40:60の混合物で洗い、約500mlの水
で洗い、実験室フードで乾燥して550gのナタマイシン固
体を得た。これは無水状態での純度97％を越えていた。
ブロス濃縮物からの収率は約40％であった。
ットル部分を炭酸ナトリウム1100g、140mlの50％水酸化
ナトリウム溶液および十分量の水（1.3リットル）を添
加することによりpH10.6に調節しこのpH調節の間に重い
沈殿物を混合させた。得られたスラリーに、6gのBHAを
含むイソプロパノール6kgを加え、混合物を撹拌してナ
タマイシンを溶解させた。ブロスの固体を25−30℃で交
差流濾過により取り出した。この操作の間に保持された
ブロスの固体のスラリーは濃厚となったので、水：イソ
プロパノール1:1混合物10リットルを加えて残留するナ
タマイシンを洗い出した。濾液を5M塩酸でpH6.6に調節
し、ナタマイシンを１−２時間かけて結晶化した。ナタ
マイシンをビュッフェナー漏斗で濾過し、約500mlのイ
ソプロパノールと水40:60の混合物で洗い、約500mlの水
で洗い、実験室フードで乾燥して550gのナタマイシン固
体を得た。これは無水状態での純度97％を越えていた。
ブロス濃縮物からの収率は約40％であった。
実施例３ 1.06％のナタマイシンを含む9600ガロンの容量の発酵
ブロスを55−60℃での交差流濾過によって535ガロンの
容量に濃縮した。この操作の間に保持したスラリーが濃
縮されたので915ガロンの水を洗浄液として加えた。保
持され洗浄されたブロス濃縮物がもはや濾過できないと
き、それを炭酸ナトリウムと水酸化ナトリウムでpH10.6
に調節し、8000kgのイソプロパノールを加えてナタマイ
シンを溶解し１ポンドのエリスロビン酸ナトリウム加え
て酸化から保護した。ブロスの固体を23−28℃で交差流
濾過により除去した。この操作の間に保持されたブロス
の固体のスラリーは濃厚となったので、水：イソプロパ
ノール1:1混合物1625ガロンを加えて残留するナタマイ
シンを洗い出した。ナタマイシンを含む濾液を塩酸でpH
6.5に調節した。ナタマイシンを１−２時間かけて結晶
化し、水で洗い、乾燥し、240kgのナタマイシンを得
た。これは無水状態での純度98％であった。収率は約60
％であった。
ブロスを55−60℃での交差流濾過によって535ガロンの
容量に濃縮した。この操作の間に保持したスラリーが濃
縮されたので915ガロンの水を洗浄液として加えた。保
持され洗浄されたブロス濃縮物がもはや濾過できないと
き、それを炭酸ナトリウムと水酸化ナトリウムでpH10.6
に調節し、8000kgのイソプロパノールを加えてナタマイ
シンを溶解し１ポンドのエリスロビン酸ナトリウム加え
て酸化から保護した。ブロスの固体を23−28℃で交差流
濾過により除去した。この操作の間に保持されたブロス
の固体のスラリーは濃厚となったので、水：イソプロパ
ノール1:1混合物1625ガロンを加えて残留するナタマイ
シンを洗い出した。ナタマイシンを含む濾液を塩酸でpH
6.5に調節した。ナタマイシンを１−２時間かけて結晶
化し、水で洗い、乾燥し、240kgのナタマイシンを得
た。これは無水状態での純度98％であった。収率は約60
％であった。
フロントページの続き (72)発明者 スクラヴォーノス，コンスタンティン アメリカ合衆国コネチカット州06385, ウォーターフォード，イースト・ワー フ・ロード ７
Claims (12)
- 【請求項１】ナタマイシンを含む発酵ブロスからナタマ
イシンを回収する方法であって、下記段階からなる方
法： ａ）上記ブロスのpHを約10より上に調節し、上記ブロス
にナタマイシンを溶解させるに十分な量の実質的に水混
和性の溶媒を加え； ｂ）上記pH調節されたブロスから不溶性固体を除去し； ｃ）該ブロスのpHをナタマイシンを沈殿させるに十分な
レベルに低下させ； ｄ）ナタマイシンを上記ブロスから取り出す。 - 【請求項２】水混和性溶媒が、エタノール、プロパノー
ル、イソプロパノール、アセトン、テトラヒドロフラン
およびそれらの組み合わせから選択される請求項１記載
の方法。 - 【請求項３】水混和性溶媒がイソプロパノールである請
求項２記載の方法。 - 【請求項４】段階ａ）において上記ブロスのpHが10と11
との間に調節される請求項１記載の方法。 - 【請求項５】段階ａ）において上記ブロスのpHが10と11
との間に調節される請求項３記載の方法。 - 【請求項６】段階ｃ）において上記ブロスのpHを5.5と
7.5との間に低下させる請求項１記載の方法。 - 【請求項７】段階ｃ）において上記ブロスのpHがを.5と
7.5との間に低下させる請求項５記載の方法。 - 【請求項８】段階ｂ）が交差流濾過を利用する請求項１
記載の方法。 - 【請求項９】段階ｂ）が交差流濾過を利用する請求項７
記載の方法。 - 【請求項１０】上記ブロスを濃縮する予備段階を含む請
求項１記載の方法。 - 【請求項１１】上記ブロスが10−50重量／容量％の固体
濃度に濃縮される請求項10記載の方法。 - 【請求項１２】上記予備段階が交差流濾過を利用する請
求項10記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US22196094A | 1994-03-31 | 1994-03-31 | |
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