JP2804232B2 - 抗う蝕、歯周病剤およびこれを含有する口腔用組成物 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明は、ユーカリ属植物由来の
う蝕、歯周病の予防、治療剤およびこれを含有する口腔
用組成物に関する。

【０００２】

【従来の技術】う蝕および歯周病は口腔内の二大疾患で
あり、いずれも特定の細菌による感染症であることが明
らかにされている。

【０００３】ストレプトコッカス・ミュータンス、スト
レプトコッカス・ソブリヌスは人のう蝕病巣や歯垢の中
に見出され、う蝕発生において重要な役割を果たしてい
る。本菌種は酵素グルコシルトランスフェラーゼを産生
し、ショ糖を基質として粘着性の高い高分子多糖体グル
カンを合成し、歯のエナメル質表層に強く定着して歯垢
を形成する。形成された歯垢には微生物群が棲息し、そ
の糖代謝に伴う酸産生により歯のエナメル質が脱灰して
う蝕が誘発されるのである。

【０００４】一方、歯周病は作用因子、環境および宿主
からなる多因性疾患である。この中で最も病因的な役割
を果たすのが細菌であり、近年の研究によりいくつかの
病原菌およびその病原性因子などが報告されている。中
でもポルフィロモナス・ジンジバリスは歯周炎患者の歯
周ポケットから高頻度に分離されることや、コラゲナー
ゼ、免疫グロブリン分解酵素、繊維芽細胞増殖阻害活
性、揮発性硫化物等の強い病原性因子を有することか
ら、歯周病の中でも最も多い成人性歯周炎の病原菌とし
て有力視されている。

【０００５】従って、う蝕および歯周病を予防するため
には、病巣において本菌類の生育を阻害することおよび
菌の病原性因子を抑制することが重要であることは明ら
かである。菌の抑制という観点では、本菌類に対して有
効な抗菌性物質を適用するのが効果的である。従来では
テトラサイクリン、ミノサイクリン等の抗生物質が用い
られていたが、これらは作用が強力である反面、耐性菌
の出現、副作用等から日常的な利用に適しているとはい
えない。

【０００６】そこで近年、天然物、特にユーカリの抽出
物をう蝕および歯周病の予防、治療に使用する試みがな
されるようになってきている。ユーカリの精油成分（ユ
ーカリ油）およびその主要成分であるシネオール（ユー
カリプトール）に関しては防腐剤としての効果や抗菌活
性物質の作用を増強することが知られている（特開昭６
２−２８９５１１号公報、抗細菌性口腔用組成物）。し
かし、これらのものはユーカリ油やシネオール自体のう
蝕、歯周病原因菌に対する抗菌活性は弱く、またその強
い独特の臭気により口腔内で使用するに当たり用途や添
加量においてかなりの制約を受ける欠点がある。

【０００７】さらに、特開平５−３０６２５２号公報
（新規マクロカルパール類及びその製造法）はユーカリ
属植物の溶媒抽出液より採取したマクロカルパール類が
アルドースリダクターゼ阻害活性および抗菌活性を示す
ことを開示しているが、その抗菌活性はグラム陽性菌に
対して選択的に作用することが明らかにされているに過
ぎず（同公報第１１頁第１９欄下から第１１〜１０行参
照）、グラム陽性菌および陰性菌の両者に有効であるこ
とを必要とするう蝕、歯周病の予防、治療には不十分な
ものである。

【０００８】一方、特開昭５８−３９６１５号公報（歯
磨組成物）は、ユーカリの採油残渣、溶媒抽出残渣の溶
媒抽出物とアルキル硫酸ナトリウムとの併用が歯周病原
因菌に対する抗菌活性を示すことを開示している。しか
し、このユーカリ溶媒抽出物はアルキル硫酸ナトリウム
との併用をもって始めて抗菌活性を発現するもので、そ
れ自体に抗菌活性は存在しないか、あっても非常に微弱
なことが示唆されるのである。しかもこの組成物にはう
蝕に対する効果が認められていない。

【０００９】また、特開平３−４４３１６号公報（歯垢
形成抑制剤組成物）は、ユーカリを脱脂、脱色した残渣
を酸含有有機溶媒で抽出したものが、う蝕の原因となる
グルコシルトランスフェラーゼ酵素阻害作用を有するこ
とを開示している。しかし、このものは前の特開昭５８
−３９６１５号公報にかかる組成物とは逆に、抗う蝕効
果はあるが歯周病に対する効果が認められていないので
ある。

【００１０】このようにユーカリ属抽出物は各種開示さ
れているが、いずれもう蝕、歯周病の予防、治療には不
十分で汎用性に乏しいものである。

【００１１】

【発明が解決しようとする課題】そこで本発明者等はユ
ーカリ属植物からう蝕、歯周病両者の予防、治療に有効
な成分を抽出せんとして鋭意研究を行った結果、ユーカ
リ属植物から精油成分（ユーカリ油）を除去した残渣を
極性溶媒で抽出した抽出物およびこれに含まれるフロロ
グルシノール誘導体がう蝕、歯周病の各原因菌に対して
非常に強い抗菌活性を有すること、さらには歯周病原因
菌であるポルフィロモナス・ジンジバリスの産生するコ
ラゲナーゼ阻害効果をも併せ持つことを見出し、本発明
を完成させるに至った。

【００１２】なお、ユーカリ属植物植物に含まれるフロ
ログルシノール誘導体については抗ウイルス作用、ＨＩ
Ｖ逆転写酵素阻害作用などが報告されているが、本発明
における抗う蝕、歯周病効果については知られておら
ず、本発明によって初めて明らかにされたものである。

【００１３】

【課題を解決するための手段】本発明はユーカリ属植物
から精油成分（ユーカリ油）を除去した残渣を極性溶媒
で処理した抽出物およびこの抽出物から活性本体として
得られるフロログルシノール誘導体を有効成分とする抗
う蝕、歯周病剤並びにこれらを用いた口腔用組成物であ
る。

【００１４】以下に、本発明製剤の抽出製造例を挙げて
説明する。

【００１５】先ず、ユーカリ属植物、例えばユーカリ葉
を粉砕機等の適当な粉砕手段で粉砕し、好ましくは通常
精油抽出で使用する水蒸気蒸留装置を用いて精油成分を
除去する。この精油成分の除去はｎ−ヘキサン、石油エ
ーテル等の低極性溶媒を用いて常温で抽出することもで
きる。

【００１６】このようにして得られた精油抽出残渣に酢
酸エチル、アセトン、エタノール、メタノール、水等の
極性溶媒の少なくとも１つの溶媒を適用して抽出を行
い、得られた抽出液を減圧濃縮することにより抽出物の
形態で本発明製剤を得る。

【００１７】このようにして得られた製剤を、さらにカ
ラムクロマトグラフィ等の適当な分離精製手段を用いて
分離精製することにより化合物の形態の本発明製剤であ
るフロログルシノール誘導体を得る。

【００１８】このフロログルシノール誘導体は、一般式

【化２】

【００１９】（式中、ＲはＣ₁₅Ｈ₂₃、Ｃ₁₅Ｈ₂₅Ｏ、Ｃ₁₅
Ｈ₂₃Ｏ₂ 、Ｃ₁₅Ｈ₂₇Ｏ₂ で表され、二重結合、カルボニ
ル基、水酸基を含んでいてもよく、環を形成していても
よい）で表される白色〜微黄色の非結晶性粉末である。

【００２０】本発明製剤として使用するフロログルシノ
ール誘導体の具体例としては、次の構造式のものが挙げ
られる。

【００２１】

【化３】

【００２２】

【化４】

【００２３】

【化５】

【００２４】

【化６】

【００２５】

【化７】

【００２６】

【化８】

【００２７】

【化９】

【００２８】

【化１０】

【００２９】

【化１１】

【００３０】なお、フロログルシノール誘導体の分離精
製に使用するカラムクロマトグラフィとしては、吸着ク
ロマトグラフィ、分配クロマトグラフィ、高速液体クロ
マトグラフィ、薄層クロマトグラフィ等が挙げられる。

【００３１】本発明製剤の用途については種々考えられ
るが、香り、呈味性に優れ、安全性が高いことからチュ
ーインガム、キャンディ、錠菓、含そう剤、練り歯磨等
の食品および衛生用品に配合する等の日常的な利用が可
能である。本発明製剤を食品または衛生用品に配合する
場合、０．００１〜１０重量％の割合になるように添加
するのが好適である。

【００３２】以下に実施例、試験例、応用例を挙げて説
明するが、これらの例は本発明の範囲を制限するもので
はない。

【００３３】

【実施例】実施例１ ユーカリ葉粉末１ｋｇから水蒸気蒸留装置を用いて製油
成分を除去した後、エタノール５リットルを加え、３時
間加熱還流抽出を行った。得られた濾液を減圧下濃縮す
ることにより本発明製剤である抽出物２１４ｇを得た。

【００３４】実施例２ ユーカリ葉粉末１ｋｇから水蒸気蒸留装置を用いて製油
成分を除去した後、エタノール−水（１：１）混液５リ
ットルを加え、３時間加熱還流抽出を行った。得られた
濾液を減圧下濃縮することにより本発明製剤である抽出
物２３４ｇを得た。

【００３５】実施例３ 実施例２で得られた抽出物１００ｇに水を加えて分散さ
せた後、酢酸エチルで分配し、酢酸エチル可溶画分（２
９．５ｇ）を得た。この酢酸エチル可溶画分をシリカゲ
ル（ワコーゲルＣ−２００、和光純薬）１ｋｇを充填し
たカラムに吸着させた。

【００３６】このカラムをジクロロメタン−メタノール
（５０：１〜２：１）混液にて溶出させ、分画を行っ
た。ＴＬＣプレート（６０Ｆ２５４、メルク）を用いて
ジクロロメタン−メタノール（３：１）混合溶液で展開
した時、Ｒｆ値０．２〜０．４付近にＵＶ吸収があり、
１０％硫酸により紫色、灰色もしくは茶色のスポットを
呈する画分を集めた。この画分を高速液体クロマトグラ
フィ（ＨＰＬＣ）用のオクタデシルシラノール型（ＯＤ
Ｓ）分取カラム（センシュー科学）を用いて、メタノー
ル−水（９０：１０〜１００：０）で溶出させ、２８５
ナノメータのＵＶ吸収をモニターしながら各ピークを分
取した。

【００３７】それぞれのピークはさらにＨＰＬＣ用シリ
カゲル分取カラム（センシュー科学）を用いてジクロロ
メタン−メタノール（８５：１５〜９８：２）で、また
ＨＰＬＣ用ＯＤＳ分取カラムを用いて、さらにメタノー
ル−水（９０：１０〜１００：０）およびアセトニトリ
ル−水（９０：１０〜１００：０）で繰り返し精製して
本発明製剤である前記化合物１〜９を得た。

【００３８】因みに化合物５〜９の物理化学的性質を以
下に記載する。

【００３９】（化合物５）

【数１】

【００４０】

【化１２】

【００４１】（化合物６）

【数２】

【００４２】

【化１３】

【００４３】（化合物７）

【数３】

【００４４】

【化１４】

【００４５】（化合物８）

【数４】

【００４６】

【化１５】

【００４７】（化合物９）

【数５】

【００４８】

【化１６】

【００４９】試験例１ 実施例１〜３で調製した本発明製剤の口腔内細菌に対す
る抗菌活性を、以下の方法により試験した。

【００５０】試料としてユーカリ油および殺菌剤として
知られるチモールを用いて本発明製剤との抗菌活性の比
較を行った。

【００５１】 １）供試菌株、使用培地および培養条件 供試菌株 使用培地 培養条件 ・う蝕原因菌（グラム陽性菌） 1.ストレプトコッカス・ミュータンスIngbritt株 Ａ 37℃ 好気培養 2.ストレプトコッカス・ミュータンスLA7 株 Ａ 37℃ 好気培養 3.ストレプトコッカス・ソブリヌス6715株 Ａ 37℃ 好気培養 4.ストレプトコッカス・ソブリヌスB13 株 Ａ 37℃ 好気培養 ・歯周病原因菌（グラム陰性菌） 5.ポルフィロモナス・ジンジバリスATCC33277 株 Ｂ 37℃ 嫌気培養 6.プレボテイラ・インテルメディアATCC25611 株 Ｂ 37℃ 嫌気培養 7.プレボテイラ・メラニノジェニカATCC25845 株 Ｂ 37℃ 嫌気培養 8.キャプノサイトファーガ・オクラセアATCC33596 株 Ｂ 37℃ 嫌気培養 Ａ：ブレイン・ハート・インフュージョン液体倍地 Ｂ：トリプチケイス・ソイ液体培地にヘミン( 5 μg/ml) メナジオン(0.5μg/ml ) を添加

【００５２】２）抗菌活性試験法 う蝕原因菌４株および歯周病原因菌６株をそれぞれの培
地および培養条件で２４〜４８時間培養し、菌を充分に
生育させた。９６穴平底マイクロプレートを用い、各ウ
エル中で試料溶液（１００μｌ）の２倍希釈系列を調製
した。２倍濃度で調製した培地に各々の菌を接種し、そ
の１００μｌを各ウエルに添加した。

【００５３】２４〜４８時間培養した後、マイクロプレ
ートリーダーを用いて各ウエルの濁度（５５０ｎｍ）を
測定し、菌の生育を判定し、その最小発育阻止濃度（Ｍ
ＩＣ）を求めた。

【００５４】試験結果を表１に示す。本発明製剤はう蝕
原因菌および歯周病原因菌に対して抗菌活性を示し、そ
の作用はチモールよりもかなり強いことが判った。また
ユーカリ油は本発明製剤の抗菌活性と比較するとその作
用は著しく劣るものであった。

【００５５】

【表１】

【００５６】試験例２ 実施例１〜３で調製した本発明製剤の口腔内細菌に対す
るコラゲナーゼ阻害活性を以下の方法により試験した。

【００５７】コラゲナーゼ活性の測定はコラゲノキット
ＣＬＮ−１００（コスモバイオ）を用いて行った。コラ
ゲナーゼ活性阻害試料として、ユーカリ油およびコラゲ
ナーゼ活性阻害効果が報告されている塩酸テトラサイク
リンを用いてその効果の比較を行った。

【００５８】１）コラゲナーゼ調製法 本試験で用いたコラゲナーゼ溶液は、以下の方法により
調製した。

【００５９】ポリフィロモナス・ジンジバリスＦＤＣ３
８１株をトリプチケイス・ソイ液体培地［ヘミン（５μ
ｇ／ｍｌ）、メナジオン（０．５μｇ／ｍｌ）を添加］
１５００ｍｌに接触し、３７℃で３日間嫌気培養する。
培養液を遠心分離し、上清を４℃下硫酸アンモニウム８
０％飽和とし、遠心分離し、上清を除き、５ｍＭ塩化カ
ルシウムを含む０．０５Ｍトリス−塩酸緩衝液（ｐＨ
７．５）３００ｍｌにて沈殿を回収した。同緩衝液を用
いて充分に透析を行い、透析内液を濾過（０．２２μ
ｍ）したものをコラゲナーゼ溶液とした。

【００６０】２）コラゲナーゼ阻害活性試験法 コラゲノキットＣＬＮ−１００は、ＦＩＴＣ標識コラー
ゲンを基質としコラゲナーゼと反応後に生じる分解物の
みを３５℃で選択的に変成させ、エタノールによって抽
出される分解物の蛍光光度を測定することによりコラゲ
ナーゼ活性を定量する。

【００６１】実験系としてはコラゲナーゼ溶液１００μ
ｌ、試料溶液１００μｌ、基質コラーゲン溶液２００μ
ｌの計４００μｌとし、３５℃で２時間の反応によりそ
れぞれのコラゲナーゼ活性を測定した。試料のコラゲナ
ーゼ阻害活性は、コントロール（試料未添加）のコラゲ
ナーゼ活性を１００とし、試料添加時におけるコラゲナ
ーゼ活性の減少度合を％で示した。

【００６２】試験結果を表２に示す。本発明製剤はコラ
ゲナーゼ阻害剤として知られている塩酸テトラサイクリ
ンよりも強いＰ．ジンバリス コラゲナーゼ阻害効果を
有していた。また、ユーカリ油にはコラゲナーゼ阻害活
性は全くみられなかった。

【００６３】

【表２】

【００６４】応用例１ 実施例３の方法により調製したフロログルシノール誘導
体（化合物１〜５）を用いて、次の処方によりチューイ
ンガム、キャンディ、錠菓、含そう剤および練り歯磨を
製造した。

【００６５】

【００６６】

【００６７】

【００６８】

【００６９】

【００７０】応用例２ 応用例１の１の処方で、化合物１の代わりに化合物６を
０．００５％、砂糖を５５．１９５％含有する他は同様
にしてチューインガムを製造した。

【００７１】応用例３ 応用例１の２の処方で、化合物２の代わりに化合物７を
８．２％、砂糖を４２％含有する他は同様にしてキャン
ディを製造した。

【００７２】応用例４ 応用例１の３の処方で、化合物３の代わりに化合物８を
使用する他は同様にして錠菓を製造した。

【００７３】応用例５ 応用例１の４の処方で、化合物４の代わりに化合物９を
使用する他は同様にして含そう剤を製造した。

【００７４】応用例６ 応用例１の５の処方で、化合物５の代わりに実施例１の
方法で得られたユーカリ抽出物を使用する他は同様にし
て練り歯磨を製造した。

【００７５】応用例７ 応用例１の１の処方で、化合物１の代わりに実施例２の
方法で得られたユーカリ抽出物を使用する他は同様にし
てチューインガムを製造した。

【００７６】

【発明の効果】本発明製剤は、高度にう蝕原因菌、歯周
病原因菌の生育を抑え、さらに歯周病原因菌ポルフィロ
モナス・ジンジバリスの産生するコラゲナーゼに対する
高い阻害作用を併せ持つ抗う蝕、歯周病剤である。本発
明製剤の原料となるユーカリはハーブティや香料成分と
して用いられているものであり、その安全性については
問題なく、抗生物質を使用した場合にみられる副作用等
の恐れがない。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁶ 識別記号 ＦＩ // Ｃ０７Ｃ 47/565 Ｃ０７Ｃ 47/565 (58)調査した分野(Int.Cl.⁶，ＤＢ名) A61K 7/26 A61K 31/11 A61K 31/12 A61K 35/78 C07C 49/443 C07C 47/565 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＷＰＩＤＳ（ＳＴＮ)

Claims (3)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 ユーカリ属植物より精油成分を除去し、
   その残渣を極性溶媒で抽出した抽出物を有効成分とする
   ことを特徴とする抗う蝕、歯周病剤。
2. 【請求項２】 ユーカリ属植物より精油成分を除去し、
   その残渣を極性溶媒で抽出した抽出物をさらに分離精製
   することにより得られる、一般式 【化１】 （式中、ＲはＣ₁₅Ｈ₂₃、Ｃ₁₅Ｈ₂₅Ｏ、Ｃ₁₅Ｈ₂₃Ｏ₂ 、Ｃ
   ₁₅Ｈ₂₇Ｏ₂ で表され、二重結合、カルボニル基、水酸基
   を含んでいてもよく、環を形成していてもよい）で表さ
   れるフロログルシノール誘導体を有効成分とすることを
   特徴とする抗う蝕、歯周病剤。
3. 【請求項３】 請求項１または２に記載の抗う蝕、歯周
   病剤を含有することを特徴とする口腔用組成物。