JP2818624B2 - 鱗翅目害虫に対して活性なバチルス・チューリンゲンシス単離物 - Google Patents
鱗翅目害虫に対して活性なバチルス・チューリンゲンシス単離物Info
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- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
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Description
【発明の詳細な説明】 1.発明の分野 本発明は、新規の生物学的に純粋なバチルス・チュー
リンゲンシス（Bacillus thuringiensis）（B.t.）単離
物であって約130,000ダルトンの分子量及び鱗翅目（lep
idopteran）害虫に対する活性をもつCry I A（ａ）−様
クリスタル・デルタ−内毒素（Cry I A（ａ）−like cr
ystal delta−endotoxin）を単独で生産する単離物並び
にその胞子、クリスタル・デルタ−内毒素及び／又は突
然変異体に関する。本発明は、それから得ることができ
る殺虫組成物にも関する。さらに本発明は、鱗翅目から
の昆虫害虫を防除するための殺虫組成物の使用方法にも
関する。
リンゲンシス（Bacillus thuringiensis）（B.t.）単離
物であって約130,000ダルトンの分子量及び鱗翅目（lep
idopteran）害虫に対する活性をもつCry I A（ａ）−様
クリスタル・デルタ−内毒素（Cry I A（ａ）−like cr
ystal delta−endotoxin）を単独で生産する単離物並び
にその胞子、クリスタル・デルタ−内毒素及び／又は突
然変異体に関する。本発明は、それから得ることができ
る殺虫組成物にも関する。さらに本発明は、鱗翅目から
の昆虫害虫を防除するための殺虫組成物の使用方法にも
関する。
2.発明の背景 毎年、食品、繊維、及び様々な自家植物を含む世界の
商業的に重要な農作物のかなりの部分が害虫の寄生に失
われ、数百万ドルの損失をもたらしている。このような
害虫を防除するために様々な戦略が使用されてきた。
商業的に重要な農作物のかなりの部分が害虫の寄生に失
われ、数百万ドルの損失をもたらしている。このような
害虫を防除するために様々な戦略が使用されてきた。
１つの戦略は、広いレンジの活性をもつ化学的殺虫剤
の使用である。しかしながら、このような化学的殺虫剤
の使用には多くの欠点が存在する。特に、それらの広い
活性スペクトルのために、それらの殺虫剤は非−標的生
物、例えば、有益な昆虫及び破壊性害虫の寄生虫を破壊
することができる。さらに、これらの化学的殺虫剤はし
ばしば動物及びヒトに毒性であり、そしてこのような物
質に繰り返し晒されるとき標的害虫はしばしば耐性を顕
出する。
の使用である。しかしながら、このような化学的殺虫剤
の使用には多くの欠点が存在する。特に、それらの広い
活性スペクトルのために、それらの殺虫剤は非−標的生
物、例えば、有益な昆虫及び破壊性害虫の寄生虫を破壊
することができる。さらに、これらの化学的殺虫剤はし
ばしば動物及びヒトに毒性であり、そしてこのような物
質に繰り返し晒されるとき標的害虫はしばしば耐性を顕
出する。
他の戦略は、作物の昆虫、菌及び雑草の寄生を防除す
るために天然の病原体を利用する生物殺虫剤（biopesti
cide）を使用することを含む。
るために天然の病原体を利用する生物殺虫剤（biopesti
cide）を使用することを含む。
生物殺虫剤は、毒素、害虫に対して毒性な物質を生産
するバクテリアを含んで成る。生物殺虫剤は、一般的に
化学的殺虫剤よりも全体として非−標的生物及び環境に
より少なく有害である。最も広く使用される生物殺虫剤
は、バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuring
iensis）（B.t.）である。B.t.は、広く分布し、桿菌形
状、好気性及び胞子形成性の微生物である。
するバクテリアを含んで成る。生物殺虫剤は、一般的に
化学的殺虫剤よりも全体として非−標的生物及び環境に
より少なく有害である。最も広く使用される生物殺虫剤
は、バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuring
iensis）（B.t.）である。B.t.は、広く分布し、桿菌形
状、好気性及び胞子形成性の微生物である。
その胞子形成サイクルの間、B.t.は、摂取の間に昆虫
の幼虫を殺す27−140kdのレンジにある分子量をもつク
リスタル・デルタ−内毒素として知られる結晶形態にお
けるアルカリ性可溶性タンパク質（単数又は複数）を生
産する。毒性は、所定のB.t.株においては１以上のこの
ような結晶性タンパク質に在ることができる。ほとんど
のデルタ−内毒素は、その標的昆虫の中腸内でより小さ
い毒性（切り詰められた）ポリペプチドにタンパク質分
解的に変換される前毒素である（Hoefte and Whitely,1
989,Microbiol.Rev.53:242−255）。このデルタ−内毒
素はcry（crystalタンパク質）遺伝子によりエンコード
されている。このcry遺伝子は、構造類似性及び殺虫特
異性に基いて６つのクラス及び幾つかのサブクラスに分
けられている。主要なクラスは、鱗翅目−特異性（cry
I）；鱗翅目−及び双翅目（Diptera）−特異性（cry I
I）；鞘翅目（Coleoptera）−特異性（cry III）；双翅
目−特異性（cry IV）である（Hoefte and Whitely,198
9,Microbiol.Rev.53:242−255）；鞘翅目−及び鱗翅目
−特異性（Tailor et al.,1992,Mol.Micobiol.6:1211−
1217によりcry Vといわれる）；及び線虫（nematode）
−特異性（Feitelson et al.,1992,Bio/Technology 10:
271−275によりcry V及びcry VIといわれる。）であ
る。
の幼虫を殺す27−140kdのレンジにある分子量をもつク
リスタル・デルタ−内毒素として知られる結晶形態にお
けるアルカリ性可溶性タンパク質（単数又は複数）を生
産する。毒性は、所定のB.t.株においては１以上のこの
ような結晶性タンパク質に在ることができる。ほとんど
のデルタ−内毒素は、その標的昆虫の中腸内でより小さ
い毒性（切り詰められた）ポリペプチドにタンパク質分
解的に変換される前毒素である（Hoefte and Whitely,1
989,Microbiol.Rev.53:242−255）。このデルタ−内毒
素はcry（crystalタンパク質）遺伝子によりエンコード
されている。このcry遺伝子は、構造類似性及び殺虫特
異性に基いて６つのクラス及び幾つかのサブクラスに分
けられている。主要なクラスは、鱗翅目−特異性（cry
I）；鱗翅目−及び双翅目（Diptera）−特異性（cry I
I）；鞘翅目（Coleoptera）−特異性（cry III）；双翅
目−特異性（cry IV）である（Hoefte and Whitely,198
9,Microbiol.Rev.53:242−255）；鞘翅目−及び鱗翅目
−特異性（Tailor et al.,1992,Mol.Micobiol.6:1211−
1217によりcry Vといわれる）；及び線虫（nematode）
−特異性（Feitelson et al.,1992,Bio/Technology 10:
271−275によりcry V及びcry VIといわれる。）であ
る。
６つのCry I遺伝子が同定されている:Cry I A
（ａ）、Cry I A（ｂ）、Cry I A（ｃ）、Cry I B、Cry
I C及びCry I D（Hoefte and Whitely,1989,Microbio
l.Rev.53:242−255）。Cry I A（ａ）、Cry I A（ｂ）
及びCry I A（ｃ）は80％以上のアミノ酸の同一性を示
すので、それらは、Cry I A群の一部であると考えられ
る。
（ａ）、Cry I A（ｂ）、Cry I A（ｃ）、Cry I B、Cry
I C及びCry I D（Hoefte and Whitely,1989,Microbio
l.Rev.53:242−255）。Cry I A（ａ）、Cry I A（ｂ）
及びCry I A（ｃ）は80％以上のアミノ酸の同一性を示
すので、それらは、Cry I A群の一部であると考えられ
る。
多数のB.t.株が単離され、それらは、鱗翅目の昆虫害
虫に対して活性であることが発見されている。B.t.亜
種、Kurstaki HD−１は、胞子形成の間にそれぞれの細
胞内に２ピラミッド状及び立方体状の結晶タンパク質を
生産し（Luethy et al.,in Microbial and Viral Pesti
cides,ed.E.Kurstak,Marcel Marcel Dekker,New York,1
982,pp.35−74）；この２ピラミッド状結晶は、様々なC
ry I A遺伝子によりエンコードされていることが発見さ
れた（Aronson et al.,1986,Microbiol.Rev.50:1−5
0）。B.t.亜種、Kurstaki HD−73は、そのクリスタル・
デルタ−内毒素のためCry I A（ｃ）遺伝子を含む。（A
dang et al.,1985,Gene 36:289−300）。B.t.亜種、den
drolimus HD−７及びHD−37は、Cry I A及びCry IIタン
パク質を含み;B.t.亜種、sottoは、そのハロタイプCry
I A（ａ）タンパク質と24アミノ酸程異なるアルカリ性
可溶性タンパク質を含み;B.t.亜種、subtoxicus HD−10
は、Cry I A及びCry I Bタンパク質を含み;B.t.亜種、t
olworthi HD−121は、Cry I A及びCry IIタンパク質を
含み;B.t.亜種、entomocidus HD−110,4448は、Cry I
A、Cry I B、及びCry I Bタンパク質を含み；そしてB.
t.亜種、aizawai HD−68は、Cry I Aタンパク質を含む
（Hoefte and Whiteley,1989,Microbiol.Reviews.53:24
2−255）。B.t.亜種、aizawai HD−11は、Cry I Aタン
パク質並びにP2結晶を含む。Padua,1990,Microbiol.Let
t.66:257−262は、２つのクリスタル・デルタ−内毒
素、鱗翅目害虫に対する活性をもつ144kDタンパク質及
び蚊に対する活性をもつ66kDタンパク質を含む２つの突
然変異体の単離について開示している。1993年２月５日
に付与されたPayne,米国特許第4,990,332号は、B.t.PS8
5A1の単離物及びその単離物PS85A1の突然変異体につい
て開示しており、その両方がPlutella xylostellaに対
して活性をもち、そして130,000及び60,000ダルトンの
分子量をもつアルカリ性可溶性タンパク質を生産する。
1991年７月３日に付与されたPayne,米国特許第5,045,46
9号は、同様に130,000及び60,000ダルトンの分子量をも
つアルカリ性可溶性タンパク質を生産し且つSpododopte
ra exigua及びT.niに対する活性をもつPS81Fと命名され
たB.t.単離物；その毒素Spodoptera exigua及びT. ni;
B.t.亜種、kurstaki HD−１からの毒素遺伝子に少しの
相同性をもつようであるPS81Fからの毒素遺伝子につい
て開示している。1992年６月25日に出願され、1993年４
月27日に付与されたPayne,米国特許第5,206,166号は、1
33,601及び133,367ダルトンのアルカリ−可溶性タンパ
ク質を生産するB.t.単離物PS81A2及びPS81RR1について
開示しており；この両方がTrichoplusia ni、Spodopter
a exigua及びPlutella xylostellaに対する活性をも
ち、そしてB.t.亜種、kurstaki HD−１及び他のB.t.単
離物とは異なる。1988年11月１に出願され、1992年12月
２日に付与されたPayne,米国特許第5,169,629号は、鱗
翅目害虫に対して活性なB.t.単離物PS81GGであって２ピ
ラミッド形状の（130,000ダルトン）及び立方体状の（6
0,000ダルトン）のクリスタル・デルタ−内毒素を生産
するものについて開示している、1989年12月14日に出願
され、1993年２月23日に付与されたPayne,米国特許第5,
188、960号は、７の鞭毛血清型をもつ130,000ダルトン
のアルカリ性可溶性タンパク質を生産するB.t.PS81I、H
D−１と区別されることができ、そしてSpodoptera exig
ua、Plutella xylostella、及びChoristoneura occiden
talisに対して活性であるaizawaiについて開示してい
る。Bernier et al.,米国特許第5,061,489号及びWO 90/
03434は、少なくとも３つの遺伝子:6.6−5.3−、及び4.
5−タイプの遺伝子（Cry I A（ａ）−様、Cry I A
（ｂ）、及びCry I A（ｃ））によりエンコードされて
いるデルタ−内毒素を生産するA20株について開示して
いる。Bradfish et al.,米国特許第5,208,017号は、B.
t.単離物PS86A1及びPS86Q3であってそれぞれ58,000及び
45,000ダルトン並びに155,000、135,000、98,000、62,0
00、及び58,000ダルトンをもつアルカリ−可溶性タンパ
ク質を生産し、そして鱗翅目及び鞘翅目の害虫に対して
活性をもつものについて開示している。
虫に対して活性であることが発見されている。B.t.亜
種、Kurstaki HD−１は、胞子形成の間にそれぞれの細
胞内に２ピラミッド状及び立方体状の結晶タンパク質を
生産し（Luethy et al.,in Microbial and Viral Pesti
cides,ed.E.Kurstak,Marcel Marcel Dekker,New York,1
982,pp.35−74）；この２ピラミッド状結晶は、様々なC
ry I A遺伝子によりエンコードされていることが発見さ
れた（Aronson et al.,1986,Microbiol.Rev.50:1−5
0）。B.t.亜種、Kurstaki HD−73は、そのクリスタル・
デルタ−内毒素のためCry I A（ｃ）遺伝子を含む。（A
dang et al.,1985,Gene 36:289−300）。B.t.亜種、den
drolimus HD−７及びHD−37は、Cry I A及びCry IIタン
パク質を含み;B.t.亜種、sottoは、そのハロタイプCry
I A（ａ）タンパク質と24アミノ酸程異なるアルカリ性
可溶性タンパク質を含み;B.t.亜種、subtoxicus HD−10
は、Cry I A及びCry I Bタンパク質を含み;B.t.亜種、t
olworthi HD−121は、Cry I A及びCry IIタンパク質を
含み;B.t.亜種、entomocidus HD−110,4448は、Cry I
A、Cry I B、及びCry I Bタンパク質を含み；そしてB.
t.亜種、aizawai HD−68は、Cry I Aタンパク質を含む
（Hoefte and Whiteley,1989,Microbiol.Reviews.53:24
2−255）。B.t.亜種、aizawai HD−11は、Cry I Aタン
パク質並びにP2結晶を含む。Padua,1990,Microbiol.Let
t.66:257−262は、２つのクリスタル・デルタ−内毒
素、鱗翅目害虫に対する活性をもつ144kDタンパク質及
び蚊に対する活性をもつ66kDタンパク質を含む２つの突
然変異体の単離について開示している。1993年２月５日
に付与されたPayne,米国特許第4,990,332号は、B.t.PS8
5A1の単離物及びその単離物PS85A1の突然変異体につい
て開示しており、その両方がPlutella xylostellaに対
して活性をもち、そして130,000及び60,000ダルトンの
分子量をもつアルカリ性可溶性タンパク質を生産する。
1991年７月３日に付与されたPayne,米国特許第5,045,46
9号は、同様に130,000及び60,000ダルトンの分子量をも
つアルカリ性可溶性タンパク質を生産し且つSpododopte
ra exigua及びT.niに対する活性をもつPS81Fと命名され
たB.t.単離物；その毒素Spodoptera exigua及びT. ni;
B.t.亜種、kurstaki HD−１からの毒素遺伝子に少しの
相同性をもつようであるPS81Fからの毒素遺伝子につい
て開示している。1992年６月25日に出願され、1993年４
月27日に付与されたPayne,米国特許第5,206,166号は、1
33,601及び133,367ダルトンのアルカリ−可溶性タンパ
ク質を生産するB.t.単離物PS81A2及びPS81RR1について
開示しており；この両方がTrichoplusia ni、Spodopter
a exigua及びPlutella xylostellaに対する活性をも
ち、そしてB.t.亜種、kurstaki HD−１及び他のB.t.単
離物とは異なる。1988年11月１に出願され、1992年12月
２日に付与されたPayne,米国特許第5,169,629号は、鱗
翅目害虫に対して活性なB.t.単離物PS81GGであって２ピ
ラミッド形状の（130,000ダルトン）及び立方体状の（6
0,000ダルトン）のクリスタル・デルタ−内毒素を生産
するものについて開示している、1989年12月14日に出願
され、1993年２月23日に付与されたPayne,米国特許第5,
188、960号は、７の鞭毛血清型をもつ130,000ダルトン
のアルカリ性可溶性タンパク質を生産するB.t.PS81I、H
D−１と区別されることができ、そしてSpodoptera exig
ua、Plutella xylostella、及びChoristoneura occiden
talisに対して活性であるaizawaiについて開示してい
る。Bernier et al.,米国特許第5,061,489号及びWO 90/
03434は、少なくとも３つの遺伝子:6.6−5.3−、及び4.
5−タイプの遺伝子（Cry I A（ａ）−様、Cry I A
（ｂ）、及びCry I A（ｃ））によりエンコードされて
いるデルタ−内毒素を生産するA20株について開示して
いる。Bradfish et al.,米国特許第5,208,017号は、B.
t.単離物PS86A1及びPS86Q3であってそれぞれ58,000及び
45,000ダルトン並びに155,000、135,000、98,000、62,0
00、及び58,000ダルトンをもつアルカリ−可溶性タンパ
ク質を生産し、そして鱗翅目及び鞘翅目の害虫に対して
活性をもつものについて開示している。
いずれかの所定の昆虫害虫についてのより広いスペク
トルの生物殺虫剤が存在するようにバチルス・チューリ
ンゲンシス（Bacillus thuringiensis）の新規の株を単
離することが有利である。
トルの生物殺虫剤が存在するようにバチルス・チューリ
ンゲンシス（Bacillus thuringiensis）の新規の株を単
離することが有利である。
3.発明の要約 本発明は、新規の生物学的に純粋なバチルス・チュー
リンゲンシス（Bacillus thuringiensis）株又はその胞
子又はその突然変異体であって、従来技術において開示
されたB.t.株に対してその株又は突然変異体が鱗翅目の
昆虫害虫に対する活性及び約130,000ダルトンの分子量
をもつCry I A（ａ）−様クリスタル・デルタ−内毒素
を単独で生産するものに関する。本明細書に定義すると
き、“生物学的に純粋な"B.t.株は、他の微生物汚染物
を本質的に含まない株である。本発明の特定の態様にお
いては、本発明に係るこのチューリンゲンシス株は、NR
RL B−21014及びNRRL B−21015の同定特徴をそれぞれ有
するEMCC−0073及びEMCC−0074である。
リンゲンシス（Bacillus thuringiensis）株又はその胞
子又はその突然変異体であって、従来技術において開示
されたB.t.株に対してその株又は突然変異体が鱗翅目の
昆虫害虫に対する活性及び約130,000ダルトンの分子量
をもつCry I A（ａ）−様クリスタル・デルタ−内毒素
を単独で生産するものに関する。本明細書に定義すると
き、“生物学的に純粋な"B.t.株は、他の微生物汚染物
を本質的に含まない株である。本発明の特定の態様にお
いては、本発明に係るこのチューリンゲンシス株は、NR
RL B−21014及びNRRL B−21015の同定特徴をそれぞれ有
するEMCC−0073及びEMCC−0074である。
本明細書虫に定義するとき、Cry I A（ａ）様−クリ
スタル・デルタ−内毒素は、Cry I A（ａ）タンパク質
に対する抗体と免疫グロブリン学的に反応性であり且つ
Cry I A（ａ）タンパク質と本質的に同一の殺虫活性を
もつCry I A（ａ）タンパク質に実質的に相同な結晶形
態におけるタンパク質である。好ましくは、Cry I A
（ａ）−様タンパク質は、Cry I A（ａ）タンパク質と
少なくとも90％の相同性；より好ましくは少なくとも95
％の相同性、そして最も好ましくは少なくとも99％の相
同性をもつ。
スタル・デルタ−内毒素は、Cry I A（ａ）タンパク質
に対する抗体と免疫グロブリン学的に反応性であり且つ
Cry I A（ａ）タンパク質と本質的に同一の殺虫活性を
もつCry I A（ａ）タンパク質に実質的に相同な結晶形
態におけるタンパク質である。好ましくは、Cry I A
（ａ）−様タンパク質は、Cry I A（ａ）タンパク質と
少なくとも90％の相同性；より好ましくは少なくとも95
％の相同性、そして最も好ましくは少なくとも99％の相
同性をもつ。
先に詳述したように、従来技術の株は、Cry I A
（ａ）遺伝子によるだけでなく他の遺伝子によってもエ
ンコードされたクリスタル・デルタ−内毒素を生産する
株である。このCry I A（ａ）−様クリスタル・デルタ
−内毒素はCry I A（ａ）−様遺伝子の少なくとも１の
コピーによりエンコードされている。本明細書中に定義
するように、“Cry I A（ａ）−様遺伝子”は、先に定
義したCry I A（ａ）−様タンパク質をエンコードして
いるDNA配列である。特定の態様においては、このCry I
A（ａ）−様遺伝子は、上記Cry I A（ａ）遺伝子と少
なくとも90％の相同性を、好ましくはそのCry I A
（ａ）遺伝子と少なくとも95％の相同性を、そして最も
好ましくはそのCry I A（ａ）遺伝子と少なくとも99％
の相同性をもつ。
（ａ）遺伝子によるだけでなく他の遺伝子によってもエ
ンコードされたクリスタル・デルタ−内毒素を生産する
株である。このCry I A（ａ）−様クリスタル・デルタ
−内毒素はCry I A（ａ）−様遺伝子の少なくとも１の
コピーによりエンコードされている。本明細書中に定義
するように、“Cry I A（ａ）−様遺伝子”は、先に定
義したCry I A（ａ）−様タンパク質をエンコードして
いるDNA配列である。特定の態様においては、このCry I
A（ａ）−様遺伝子は、上記Cry I A（ａ）遺伝子と少
なくとも90％の相同性を、好ましくはそのCry I A
（ａ）遺伝子と少なくとも95％の相同性を、そして最も
好ましくはそのCry I A（ａ）遺伝子と少なくとも99％
の相同性をもつ。
本発明は、実質的に純粋なクリスタル・デルタ−内毒
素にも関する。本明細書中に定義するとき、“実質的に
純粋な”クリスタル・デルタ−内毒素は、他のタンパク
質及び／又は他の汚染物を実質的に含まない（＞95
％）。以下、セクション５中に詳述するように、本発明
に係るクリスタル・デルタ−内毒素は本発明の株から得
ることができる。
素にも関する。本明細書中に定義するとき、“実質的に
純粋な”クリスタル・デルタ−内毒素は、他のタンパク
質及び／又は他の汚染物を実質的に含まない（＞95
％）。以下、セクション５中に詳述するように、本発明
に係るクリスタル・デルタ−内毒素は本発明の株から得
ることができる。
新規のバチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thu
ringiensis）株、胞子、突然変異体又はクリスタル・デ
ルタ−内毒素は、本発明の範囲内で、殺虫剤組成物中に
配合されることができる。１つの態様においては、この
株、胞子、突然変異体又はクリスタル・デルタ−内毒素
は、殺虫性担体と併合されることができる。この殺虫性
組成物は、鱗翅目からの昆虫害虫、特にSpodoptera exi
gua、Heliothis zea、及びHeliothis virescensを、昆
虫−防除有効量のこのような殺虫性組成物にその害虫を
晒すことを含んで成る方法で、防除するために使用され
ることができる。
ringiensis）株、胞子、突然変異体又はクリスタル・デ
ルタ−内毒素は、本発明の範囲内で、殺虫剤組成物中に
配合されることができる。１つの態様においては、この
株、胞子、突然変異体又はクリスタル・デルタ−内毒素
は、殺虫性担体と併合されることができる。この殺虫性
組成物は、鱗翅目からの昆虫害虫、特にSpodoptera exi
gua、Heliothis zea、及びHeliothis virescensを、昆
虫−防除有効量のこのような殺虫性組成物にその害虫を
晒すことを含んで成る方法で、防除するために使用され
ることができる。
4.図面の簡単な説明 図１は、アガロース・ゲル電気泳動によるCry I A遺
伝子についてのバチルス・チューリンゲンシス（Bacill
us thuringiensis）株のPCR分析の結果を示している。
レーン１及び14は、分子量マーカー（1kbラダー、Bethe
sda Research Laboratories）を示す。レーン２−４
は、それぞれCry I A（ａ）、Cry I A（ｂ）、及びCry
I A（ｃ）オリゴヌクレオチド・プライマーによるEMCC
−0073株の分析を示しており；レーン５−７は、それぞ
れCry I A（ａ）、Cry I A（ｂ）、及びCry I A（ｃ）
オリゴヌクレオチド・プライマーによるEMCC−0073株の
分析を示しており；レーン５−７は、それぞれcry I A
（ａ）、cry I A（ｂ）、及びcry I A（ｃ）オリゴヌク
レオチド・プライマーによるEMCC−0074株の分析を示し
ており；レーン８−10は、それぞれCry I A（ａ）、Cry
I A（ｂ）、及びCry I A（ｃ）オリゴヌクレチド・プ
ライマーによるEMCC−0086株の分析を示しており；そし
てレーン11−13は、それぞれCry I A（ａ）、Cry I A
（ｂ）、及びCry I A（ｃ）オリゴヌクレオチド・プラ
イマーによるcry III Aのみを含むバチルス・チューリ
ンゲンシス（Bacillus thuringiensis）亜種、tenebrio
nis株の分析を示している。EMCC−0086は、３つのCry I
A遺伝子のすべてを含むバチルス・チューリンゲンシス
（Bacillus thuringiensis）亜種、kurstaki株である。
伝子についてのバチルス・チューリンゲンシス（Bacill
us thuringiensis）株のPCR分析の結果を示している。
レーン１及び14は、分子量マーカー（1kbラダー、Bethe
sda Research Laboratories）を示す。レーン２−４
は、それぞれCry I A（ａ）、Cry I A（ｂ）、及びCry
I A（ｃ）オリゴヌクレオチド・プライマーによるEMCC
−0073株の分析を示しており；レーン５−７は、それぞ
れCry I A（ａ）、Cry I A（ｂ）、及びCry I A（ｃ）
オリゴヌクレオチド・プライマーによるEMCC−0073株の
分析を示しており；レーン５−７は、それぞれcry I A
（ａ）、cry I A（ｂ）、及びcry I A（ｃ）オリゴヌク
レオチド・プライマーによるEMCC−0074株の分析を示し
ており；レーン８−10は、それぞれCry I A（ａ）、Cry
I A（ｂ）、及びCry I A（ｃ）オリゴヌクレチド・プ
ライマーによるEMCC−0086株の分析を示しており；そし
てレーン11−13は、それぞれCry I A（ａ）、Cry I A
（ｂ）、及びCry I A（ｃ）オリゴヌクレオチド・プラ
イマーによるcry III Aのみを含むバチルス・チューリ
ンゲンシス（Bacillus thuringiensis）亜種、tenebrio
nis株の分析を示している。EMCC−0086は、３つのCry I
A遺伝子のすべてを含むバチルス・チューリンゲンシス
（Bacillus thuringiensis）亜種、kurstaki株である。
5.発明の詳細な説明 本発明に係る胞子及びクリスタル・デルタ−内毒素
は、本発明に係る株から獲得できる。本発明に係る株
は、本分野において公知の培地及び発酵技術を使用して
培養されることができる（例えば、Rogoff et al.,196
9,J.Invertebrate Path.14:122−129;Dulmage et al.,1
971,J.Invertebrate Path.18:353−358;Dulmage et a
l.,in Microbial Control of Pests and Plant Disease
s,H.D.Burges,ed.,Academic Press,N.Y.,1980を参照の
こと。）。この発酵サイクルの完結において、バクテリ
アを、本分野においてよく知られた手段、例えば、遠心
分離によりその発酵ブロスからB.t.胞子とクリスタル・
デルタ−内毒素とを分離することにより収穫することが
できる。これらの胞子及び結晶性タンパク質はそのペレ
ット中に含まれる。
は、本発明に係る株から獲得できる。本発明に係る株
は、本分野において公知の培地及び発酵技術を使用して
培養されることができる（例えば、Rogoff et al.,196
9,J.Invertebrate Path.14:122−129;Dulmage et al.,1
971,J.Invertebrate Path.18:353−358;Dulmage et a
l.,in Microbial Control of Pests and Plant Disease
s,H.D.Burges,ed.,Academic Press,N.Y.,1980を参照の
こと。）。この発酵サイクルの完結において、バクテリ
アを、本分野においてよく知られた手段、例えば、遠心
分離によりその発酵ブロスからB.t.胞子とクリスタル・
デルタ−内毒素とを分離することにより収穫することが
できる。これらの胞子及び結晶性タンパク質はそのペレ
ット中に含まれる。
このクリスタル・デルタ−内毒素の精製は、非限定的
にクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニ
ティー、疎水性及びサイズ排除）、さらなる遠心分離、
電気泳動手順、分別溶解性、又はタンパク質の精製のた
めのいずれかの他の標準的な技術を含む様々な本分野に
おいて公知の手順により、行われることができる。
にクロマトグラフィー（例えば、イオン交換、アフィニ
ティー、疎水性及びサイズ排除）、さらなる遠心分離、
電気泳動手順、分別溶解性、又はタンパク質の精製のた
めのいずれかの他の標準的な技術を含む様々な本分野に
おいて公知の手順により、行われることができる。
本発明は、その親株よりも多量の及び／又は大きな結
晶のCry I A（ａ）−様クリスタル・デルタ−内毒素を
生産する突然変異体B.t.株にも向けられている。“親
株”は本明細書中に定義するとき、突然変異前の元のバ
チルス（Bacillus）株である。特定の態様においては、
この突然変異体は、Cry I A（ａ）−様遺伝子の１以上
のコピーを含む。
晶のCry I A（ａ）−様クリスタル・デルタ−内毒素を
生産する突然変異体B.t.株にも向けられている。“親
株”は本明細書中に定義するとき、突然変異前の元のバ
チルス（Bacillus）株である。特定の態様においては、
この突然変異体は、Cry I A（ａ）−様遺伝子の１以上
のコピーを含む。
このような突然変異体を得るために、その親株を、例
えば、化学的手段、例えば、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ
−ノトロソグアニジン又はエチル・メタンスルホネー
ト、ガンマ−照射、Ｘ線又はUV−照射による突然変異原
により処理することができる。特に、バチルス株を突然
変異誘発し、そしてこのような突然変異体を選択する１
つの方法においては、 ｉ）その親株を突然変異原により処理し； ii）そのように処理された突然変異体を突然変異体株の
選択に好適な培地中で成長させ；そして iii）突然変異体株を選択する。
えば、化学的手段、例えば、Ｎ−メチル−Ｎ′−ニトロ
−ノトロソグアニジン又はエチル・メタンスルホネー
ト、ガンマ−照射、Ｘ線又はUV−照射による突然変異原
により処理することができる。特に、バチルス株を突然
変異誘発し、そしてこのような突然変異体を選択する１
つの方法においては、 ｉ）その親株を突然変異原により処理し； ii）そのように処理された突然変異体を突然変異体株の
選択に好適な培地中で成長させ；そして iii）突然変異体株を選択する。
この方法の好ましい態様に従えば、この選択されたコ
ロニーを正常な生産培地中で成長させ、そして増加した
Cry I A（ａ）−様タンパク質生産が可能である株につ
いての最終的な選択を実施する。
ロニーを正常な生産培地中で成長させ、そして増加した
Cry I A（ａ）−様タンパク質生産が可能である株につ
いての最終的な選択を実施する。
あるいは、突然変異体を本分野において公知の組換え
体DNA法を使用して獲得することができる。例えば、Cry
I A（ａ）−様遺伝子の２以上のコピーを含むDNA配列
を、適当な発現ベクター内に挿入し、そしてその後本分
野において公知の手順を使用して親株に導入することが
できる。
体DNA法を使用して獲得することができる。例えば、Cry
I A（ａ）−様遺伝子の２以上のコピーを含むDNA配列
を、適当な発現ベクター内に挿入し、そしてその後本分
野において公知の手順を使用して親株に導入することが
できる。
様々な昆虫害虫に対する本発明に係るB.t.株又はその
胞子、突然変異体又はクリスタル・デルタ−内毒素の活
性を、本分野において公知の手順、例えば、人工的昆虫
食餌取り込み検定法、人工的食餌重層、葉塗布、葉浸
漬、及び葉へのスプレーを使用して検定することができ
る。このような検定法の特定の態様を、以下セクション
６中に与える。
胞子、突然変異体又はクリスタル・デルタ−内毒素の活
性を、本分野において公知の手順、例えば、人工的昆虫
食餌取り込み検定法、人工的食餌重層、葉塗布、葉浸
漬、及び葉へのスプレーを使用して検定することができ
る。このような検定法の特定の態様を、以下セクション
６中に与える。
5.1.組成物 先に記載した本発明に係る株、胞子、クリスタル・デ
ルタ−内毒素、又は突然変異体を、許容される担体と共
に、例えば、懸濁液、溶液、エマルジョン、粉剤（dust
ing powder）、分散性粒剤（dispersible granule）、
水和粉末（wettable powder）、乳化性濃縮物、エアロ
ゾル又は含浸粒剤（impregnated granule）である殺虫
性組成物に、配合することができる。
ルタ−内毒素、又は突然変異体を、許容される担体と共
に、例えば、懸濁液、溶液、エマルジョン、粉剤（dust
ing powder）、分散性粒剤（dispersible granule）、
水和粉末（wettable powder）、乳化性濃縮物、エアロ
ゾル又は含浸粒剤（impregnated granule）である殺虫
性組成物に、配合することができる。
先に開示したこのような組成物を表面活性剤、不活性
担体、保存剤、湿潤剤、飼養刺激剤、誘引物質、カプセ
ル化剤、バインダー、乳化剤、染料、U.V.保護剤、バッ
ファー、流れ改善剤、又は特定の標的害虫のための製品
の取扱い及び適用を容易にすための他の成分の添加によ
り得ることができる。
担体、保存剤、湿潤剤、飼養刺激剤、誘引物質、カプセ
ル化剤、バインダー、乳化剤、染料、U.V.保護剤、バッ
ファー、流れ改善剤、又は特定の標的害虫のための製品
の取扱い及び適用を容易にすための他の成分の添加によ
り得ることができる。
好適な表面−活性剤は、非限定的にアニオン化合物、
例えば、カルボキシレート、例えば、長鎖脂肪酸の金属
カルボキシレート;N−アシルサルコシネート；脂肪アル
コール・エトシキレートとリン酸とのモノ又はジ−エス
テル又はこのようなエステルの塩；脂肪アルコール・ス
ルフェート、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、オクタ
デシル硫酸ナトリウム又はセチル硫酸ナトリウム；エト
キシ化脂肪アルコール・スルフェート；エトキシ化アル
キルフェノール・スルフェート；リグニン・スルホネー
ト；石油スルホネート；アルキル・アリール・スルホネ
ート、例えば、アルキル−ベンゼン・スルホネート又は
低級アルキルナフタレン・スルホネート、例えば、ブチ
ル−ナフタレン・スルホネート；スルホン化ナフタレン
−ホルムアルデヒド縮合物の塩；スルホン化フェノール
−ホルムアルデヒド縮合物の塩；又はより複雑なスルホ
ネート、例えば、アミド・スルホネート、例えば、オレ
イン酸とＮ−メチル・タウリンとのスルホン化縮合生成
物又はジアルキル・スルホスクシネート、例えば、ナト
リウム・スルホネート又はジオクチル・スクシネートを
含む。非−イオン剤は、脂肪酸エステル、脂肪アルコー
ル、脂肪酸アミド又は脂肪−アルキル−若しくはアルケ
ニル−置換フェノールとエチレン・オキサイドとの縮合
生成物、多価アルコール・エーテルの脂肪エステル、例
えば、ソルビタン脂肪酸エステル、このようなエステル
とエチレン・オキサイドとの縮合生成物、例えば、ポリ
オキシエチレン・ソルビタン脂肪酸エステル、エチレン
・オキサイドとプロピレン・オキサイドとのブロック・
コポリマー、アセチレン・グリコール、例えば、2,4,7,
9−テトラエチル−５−デシン−4,7−ジオール、又はエ
トキシル化アセチレン・グリコールを含む。カチオン表
面−活性剤の例は、例えば、アセテート、ナフタレート
又はオレエートとしての脂肪酸モノ−、ジ−、又はポリ
アミン；酸素−含有アミン、例えば、ポリオキシエチレ
ン・アルキルアミンのアミン・オキサイド；カルボン酸
とジ−又はポリアミンとの縮合により製造されたアミド
−結合アミン；又は第四アンモニウム塩を含む。
例えば、カルボキシレート、例えば、長鎖脂肪酸の金属
カルボキシレート;N−アシルサルコシネート；脂肪アル
コール・エトシキレートとリン酸とのモノ又はジ−エス
テル又はこのようなエステルの塩；脂肪アルコール・ス
ルフェート、例えば、ドデシル硫酸ナトリウム、オクタ
デシル硫酸ナトリウム又はセチル硫酸ナトリウム；エト
キシ化脂肪アルコール・スルフェート；エトキシ化アル
キルフェノール・スルフェート；リグニン・スルホネー
ト；石油スルホネート；アルキル・アリール・スルホネ
ート、例えば、アルキル−ベンゼン・スルホネート又は
低級アルキルナフタレン・スルホネート、例えば、ブチ
ル−ナフタレン・スルホネート；スルホン化ナフタレン
−ホルムアルデヒド縮合物の塩；スルホン化フェノール
−ホルムアルデヒド縮合物の塩；又はより複雑なスルホ
ネート、例えば、アミド・スルホネート、例えば、オレ
イン酸とＮ−メチル・タウリンとのスルホン化縮合生成
物又はジアルキル・スルホスクシネート、例えば、ナト
リウム・スルホネート又はジオクチル・スクシネートを
含む。非−イオン剤は、脂肪酸エステル、脂肪アルコー
ル、脂肪酸アミド又は脂肪−アルキル−若しくはアルケ
ニル−置換フェノールとエチレン・オキサイドとの縮合
生成物、多価アルコール・エーテルの脂肪エステル、例
えば、ソルビタン脂肪酸エステル、このようなエステル
とエチレン・オキサイドとの縮合生成物、例えば、ポリ
オキシエチレン・ソルビタン脂肪酸エステル、エチレン
・オキサイドとプロピレン・オキサイドとのブロック・
コポリマー、アセチレン・グリコール、例えば、2,4,7,
9−テトラエチル−５−デシン−4,7−ジオール、又はエ
トキシル化アセチレン・グリコールを含む。カチオン表
面−活性剤の例は、例えば、アセテート、ナフタレート
又はオレエートとしての脂肪酸モノ−、ジ−、又はポリ
アミン；酸素−含有アミン、例えば、ポリオキシエチレ
ン・アルキルアミンのアミン・オキサイド；カルボン酸
とジ−又はポリアミンとの縮合により製造されたアミド
−結合アミン；又は第四アンモニウム塩を含む。
不活性材料の例は、非限定的に無機鉱物、例えば、カ
オリン、フィロシリケート、カーボネート、スルフェー
ト、ホスフェート又は植物性材料、例えば、コルク、粉
末トウモロコシ穂軸、ピーナッツ殻、籾殻、及びクルミ
の殻を含む。
オリン、フィロシリケート、カーボネート、スルフェー
ト、ホスフェート又は植物性材料、例えば、コルク、粉
末トウモロコシ穂軸、ピーナッツ殻、籾殻、及びクルミ
の殻を含む。
本発明に係る組成物は、直接適用のために好適な形態
又は濃縮物としてあるいは適用前に水又は他の希釈剤の
好適な量による希釈が必要な一次組成物であることがで
きる。この殺虫性濃縮物は、特定の配合の性質、特にそ
れが濃縮物であるか又は直接的に使用されるか否かに依
存して変化するであろう。この組成物は、１〜98％の固
体又は液体不活性担体、及び０〜50％、好ましくは0.1
〜50％の界面活性剤を含む。これらの組成物は、商業的
製品について表示された割合において、好ましくは乾燥
形態におけるときはエーカー当たり約0.01lb−5.0lb、
そして液体形態におけるときはエーカー当たり約0.01pt
s−10ptsにおいて、投与されるでろう。
又は濃縮物としてあるいは適用前に水又は他の希釈剤の
好適な量による希釈が必要な一次組成物であることがで
きる。この殺虫性濃縮物は、特定の配合の性質、特にそ
れが濃縮物であるか又は直接的に使用されるか否かに依
存して変化するであろう。この組成物は、１〜98％の固
体又は液体不活性担体、及び０〜50％、好ましくは0.1
〜50％の界面活性剤を含む。これらの組成物は、商業的
製品について表示された割合において、好ましくは乾燥
形態におけるときはエーカー当たり約0.01lb−5.0lb、
そして液体形態におけるときはエーカー当たり約0.01pt
s−10ptsにおいて、投与されるでろう。
さらなる態様においては、本発明に係る株、胞子、ク
リスタル・デルタ−内毒素又は突然変異体を、その前処
理がそのクリスタル・デルタ−内毒素に有害でない限り
標的害虫の環境に適用されるとき殺虫活性を遅延化する
ための配合に先立って、処理することができる。このよ
うな処理は、その処理が組成物の特性に有害に影響しな
い限り化学的及び／又は物理的手段によるものであるこ
とができる。化学的試薬の例は、非限定的にハロゲン化
剤；アルデヒド、例えば、ホルムアルデヒド及びグルタ
ルアルデヒド；抗−感染剤、例えば、塩化ゼフィラン；
アルコール、例えば、イソプロパノール及びエタノー
ル；及び組織学的固定剤、例えば、Bouni's固定剤及びH
elly's固定剤を含む（例えば、Humason,Animal Tissue
Techniques,W.H.freeman and Co.,1967を参照のこ
と。）。
リスタル・デルタ−内毒素又は突然変異体を、その前処
理がそのクリスタル・デルタ−内毒素に有害でない限り
標的害虫の環境に適用されるとき殺虫活性を遅延化する
ための配合に先立って、処理することができる。このよ
うな処理は、その処理が組成物の特性に有害に影響しな
い限り化学的及び／又は物理的手段によるものであるこ
とができる。化学的試薬の例は、非限定的にハロゲン化
剤；アルデヒド、例えば、ホルムアルデヒド及びグルタ
ルアルデヒド；抗−感染剤、例えば、塩化ゼフィラン；
アルコール、例えば、イソプロパノール及びエタノー
ル；及び組織学的固定剤、例えば、Bouni's固定剤及びH
elly's固定剤を含む（例えば、Humason,Animal Tissue
Techniques,W.H.freeman and Co.,1967を参照のこ
と。）。
本発明に係る組成物は、例えば、保護的手段として害
虫が植物上に現れ始めたとき又は害虫の出現前に噴霧又
は散布（spraying or dusting）ことによりその植物に
直接に適用されることができる。本発明の範囲内で保護
されるべき植物は、非限定的に、穀物（小麦、大麦、ラ
イ麦、オーツ、米、ソールガム及び関連穀物）、ビート
（サトウキビ及び飼料ビート）、石果（drupes）、ナシ
状果（pomes）及び柔果実（リンゴ、ナシ、プラム、モ
モ、アーモンド、サクランボ、イチゴ、ラズベリー、及
び黒イチゴ）、マメ科植物（アルファルファ、インゲン
豆、ヒラマメ、ソラ豆、大豆）、油植物（ナタネ、マス
タード、ポピー、オリーブ、ヒマワリ、ココナッツ、ヒ
マシ油植物、ココア豆、塊茎植物）、キュウリ植物（キ
ュウリ、大粒インゲンマメ（marrows）、メロン）、繊
維植物（綿、アマ、アサ、ジュート）、柑橘類（オレン
ジ、レモン、グレープフルーツ、マンダリン）、野菜
（ホウレンソウ、レタス、アスパラガス、キャベツ及び
他のアブラナ属、ニンジン、タマネギ、トマト、ポテ
ト、パプリカ）、クスノキ科（アボガド、シナモン、樟
脳）、落葉性の木及び針葉樹（例えば、リンデン−木、
イチイ−木、オーク−木、ハンノキ、ポプラ、シラカバ
−木、モミ、カラマツ、松）、又は植物、例えば、メイ
ズ、芝植物、タバコ、ナッツ、コーヒー、サトウキビ、
茶、ブドウ・ホップ、バナナ及び天然ゴム植物、並びに
観葉植物を含む。両方の場合において、適用の好ましい
方法は、葉への噴霧である。一般的に、植物成長の初期
段階において害虫の良好な防除を得ることが重要であ
る。なぜなら、これが、植物が最も重篤にダメージを受
けることができるときであるからである。スプレー又は
粉剤は、これが必要であると考えられる場合に、便利に
は他の殺虫剤を含むことができる。好ましい態様におい
ては、本発明に係る組成物は、植物に直接的に適用され
る。
虫が植物上に現れ始めたとき又は害虫の出現前に噴霧又
は散布（spraying or dusting）ことによりその植物に
直接に適用されることができる。本発明の範囲内で保護
されるべき植物は、非限定的に、穀物（小麦、大麦、ラ
イ麦、オーツ、米、ソールガム及び関連穀物）、ビート
（サトウキビ及び飼料ビート）、石果（drupes）、ナシ
状果（pomes）及び柔果実（リンゴ、ナシ、プラム、モ
モ、アーモンド、サクランボ、イチゴ、ラズベリー、及
び黒イチゴ）、マメ科植物（アルファルファ、インゲン
豆、ヒラマメ、ソラ豆、大豆）、油植物（ナタネ、マス
タード、ポピー、オリーブ、ヒマワリ、ココナッツ、ヒ
マシ油植物、ココア豆、塊茎植物）、キュウリ植物（キ
ュウリ、大粒インゲンマメ（marrows）、メロン）、繊
維植物（綿、アマ、アサ、ジュート）、柑橘類（オレン
ジ、レモン、グレープフルーツ、マンダリン）、野菜
（ホウレンソウ、レタス、アスパラガス、キャベツ及び
他のアブラナ属、ニンジン、タマネギ、トマト、ポテ
ト、パプリカ）、クスノキ科（アボガド、シナモン、樟
脳）、落葉性の木及び針葉樹（例えば、リンデン−木、
イチイ−木、オーク−木、ハンノキ、ポプラ、シラカバ
−木、モミ、カラマツ、松）、又は植物、例えば、メイ
ズ、芝植物、タバコ、ナッツ、コーヒー、サトウキビ、
茶、ブドウ・ホップ、バナナ及び天然ゴム植物、並びに
観葉植物を含む。両方の場合において、適用の好ましい
方法は、葉への噴霧である。一般的に、植物成長の初期
段階において害虫の良好な防除を得ることが重要であ
る。なぜなら、これが、植物が最も重篤にダメージを受
けることができるときであるからである。スプレー又は
粉剤は、これが必要であると考えられる場合に、便利に
は他の殺虫剤を含むことができる。好ましい態様におい
ては、本発明に係る組成物は、植物に直接的に適用され
る。
本発明に係る組成物は、非限定的に、鱗翅目の害虫、
例えば、Achronia grisella、Acleris gloverana、Acle
ris variana、Adoxophyes orana、Agrotis ipsilon、Al
abama argillacea、Alsophila pometaria、Amyelois tr
ansitella、Anagasta Kuehniella、Anarsia lineatell
a、Anisota senatoria、Antheraea pernyi、Anticarsia
gemmatalis、Archips sp.、Argyrotaenia sp.、Atheti
smindara、Bombyx mori、Bucculaatrix thurberiella、
Cadra cautella、Chorisutooneura sp.、Cochylls hosp
es、Colias eurytheme、Corcyra cephalonica、Cydia l
atiferreanus、Cydia pomonella、Datana integerrim
a、Dendrolimus sibericus、Desia funeralis、Diaphan
ia hyalinata、Diaphania nitidalis、Diatraea grandi
osella、Diatraea saccharalis、Ennomos subsignari
a、Eoreuma loftini、Ephestia elutella、Erannis til
aria、Estigemene acrea、Eulia salubricola、Eupocoe
llia embiguella、Eupoecilia ambiguella、Euproctis
chrysorrhoea、Euxoa messoria、Galleria mellonell
a、Grapholita molesta、Harrisina americana、Helico
verpa subflexa、Helicoverpa zea、Heliothis viresce
ns、Hemileuca oliviae、Homeosoma electellum、Hypha
ntria cunea、Keiferia lycopersicella、Lambdina fis
cellaria fiscellaria、Lambdina fiscellaria lugubro
sa、Leucoma salicis、Lobesia botrana、Loxostege st
icticalis、Lymantria dispar、Macalla thyrsisalis、
Malacosoma sp.、Mamestra brassicae、Mamestra confi
gurata、Manduca quinquemaculata、Manduca sexta、Ma
ruca testulalis、Melanchra picta、Operophtera brum
ata、Orgya sp.、Ostrinia nubilalis、Paleacrita ver
nata、Papilio cresphontes、Pectinophora gossypiell
a、Phryganidia californica、Phyllonorycter blancar
della、Pieris napi、Pieris rapae、Plathypena scabr
a、Platynota fluendana、Platynota stultana、Platyp
tilia carduidactyla、Plodia interpunctella、Plutel
la xylostella、Pontia protodice、Pseudaletia unipu
ncta、Pseudoplasia includens、Sabulodes aerotata、
Schizura concinna、Sitotroga cerealella、Spilonota
ocellana、Spodoptera sp.、Thaurnstopoea pityocamp
a、Tineola bisselliella、Trichoplusia ni、Udea rub
igalis、Xylomyges curialis、Yponomeuta padellaを含
む害虫に対して有効であることができる。
例えば、Achronia grisella、Acleris gloverana、Acle
ris variana、Adoxophyes orana、Agrotis ipsilon、Al
abama argillacea、Alsophila pometaria、Amyelois tr
ansitella、Anagasta Kuehniella、Anarsia lineatell
a、Anisota senatoria、Antheraea pernyi、Anticarsia
gemmatalis、Archips sp.、Argyrotaenia sp.、Atheti
smindara、Bombyx mori、Bucculaatrix thurberiella、
Cadra cautella、Chorisutooneura sp.、Cochylls hosp
es、Colias eurytheme、Corcyra cephalonica、Cydia l
atiferreanus、Cydia pomonella、Datana integerrim
a、Dendrolimus sibericus、Desia funeralis、Diaphan
ia hyalinata、Diaphania nitidalis、Diatraea grandi
osella、Diatraea saccharalis、Ennomos subsignari
a、Eoreuma loftini、Ephestia elutella、Erannis til
aria、Estigemene acrea、Eulia salubricola、Eupocoe
llia embiguella、Eupoecilia ambiguella、Euproctis
chrysorrhoea、Euxoa messoria、Galleria mellonell
a、Grapholita molesta、Harrisina americana、Helico
verpa subflexa、Helicoverpa zea、Heliothis viresce
ns、Hemileuca oliviae、Homeosoma electellum、Hypha
ntria cunea、Keiferia lycopersicella、Lambdina fis
cellaria fiscellaria、Lambdina fiscellaria lugubro
sa、Leucoma salicis、Lobesia botrana、Loxostege st
icticalis、Lymantria dispar、Macalla thyrsisalis、
Malacosoma sp.、Mamestra brassicae、Mamestra confi
gurata、Manduca quinquemaculata、Manduca sexta、Ma
ruca testulalis、Melanchra picta、Operophtera brum
ata、Orgya sp.、Ostrinia nubilalis、Paleacrita ver
nata、Papilio cresphontes、Pectinophora gossypiell
a、Phryganidia californica、Phyllonorycter blancar
della、Pieris napi、Pieris rapae、Plathypena scabr
a、Platynota fluendana、Platynota stultana、Platyp
tilia carduidactyla、Plodia interpunctella、Plutel
la xylostella、Pontia protodice、Pseudaletia unipu
ncta、Pseudoplasia includens、Sabulodes aerotata、
Schizura concinna、Sitotroga cerealella、Spilonota
ocellana、Spodoptera sp.、Thaurnstopoea pityocamp
a、Tineola bisselliella、Trichoplusia ni、Udea rub
igalis、Xylomyges curialis、Yponomeuta padellaを含
む害虫に対して有効であることができる。
以下の実施例を限定的なものとしてではなく説明のた
めに提示する。
めに提示する。
6.実施例 6.1. B.t.株EMCC−0073及びEMCCP0074の培養 Nutrient Broth Agarスラント上で維持したEMCC−007
3及びEMCC−0074のサブカルチャーを以下の組成をもつ5
0mlの倍地を含む250mlのバッフル振とうフラスコを接種
するために使用する。
3及びEMCC−0074のサブカルチャーを以下の組成をもつ5
0mlの倍地を含む250mlのバッフル振とうフラスコを接種
するために使用する。
コーン・スティープ・リカー 15g/l Maltrin−100 40g/l Potato Starch 30g/l KH2PO4 1.77g/l K2HPO4 4.53g/l この培地のpHを10N NaOHを使用して7.0に調整する。
接種後、振とうフラスコを72時間250rpm振とうしなが
らロータリー振とうしながらロータリー振とう装置上で
30℃においてインキュベートする。上記発酵において得
られたB.t.結晶及び胞子をSorvall RC−5B遠心分離機を
使用して15分間15,000rpmにおける遠心分離により回収
する。
らロータリー振とうしながらロータリー振とう装置上で
30℃においてインキュベートする。上記発酵において得
られたB.t.結晶及び胞子をSorvall RC−5B遠心分離機を
使用して15分間15,000rpmにおける遠心分離により回収
する。
6.2. EMCC−0073及びEMCC−00074の殺虫活性 EMCC−0073及びEMCC−00074を前記セクション6.1中に
記載したように振とうフラスコ内で培養する。培養ブロ
スの1:50希釈を行う。5mlのこのような希釈培養ブロス
を50mlポリエチレン遠心分離管内に移す。20mlの抗生物
質含有人工昆虫食餌をその遠心分離管内に添加する。こ
の混合物をその後バイオアッセイ・トレー内に小分けす
る。ビート・アワヨトウ幼虫（beet armyworm）（Spodo
ptera exigua）、コーン果穂幼虫（corn earworm）（He
liothis zea）及びタバコ芽食い虫（tobacco budworm）
（Heliothis virescens）のそれぞれの３〜６の卵をそ
の“食餌（diet）”の表面に適用した。Mylarをそのバ
イオアッセイ・トレイの上にのばし、そしてそのトレー
を光期間を伴わずに28℃においてインキュベートした。
評価を７及び１日目に行った。
記載したように振とうフラスコ内で培養する。培養ブロ
スの1:50希釈を行う。5mlのこのような希釈培養ブロス
を50mlポリエチレン遠心分離管内に移す。20mlの抗生物
質含有人工昆虫食餌をその遠心分離管内に添加する。こ
の混合物をその後バイオアッセイ・トレー内に小分けす
る。ビート・アワヨトウ幼虫（beet armyworm）（Spodo
ptera exigua）、コーン果穂幼虫（corn earworm）（He
liothis zea）及びタバコ芽食い虫（tobacco budworm）
（Heliothis virescens）のそれぞれの３〜６の卵をそ
の“食餌（diet）”の表面に適用した。Mylarをそのバ
イオアッセイ・トレイの上にのばし、そしてそのトレー
を光期間を伴わずに28℃においてインキュベートした。
評価を７及び１日目に行った。
テストさた投与量において、EMCC−0073及びEMCC−00
74は、Spodoptera exigua及びHeliothis zeaを発育阻害
させた。７日間のインキュベーションの後、Spodoptera
exigua及びHeliothis zeaの両方がその対照幼虫のサイ
ズの25％未満にだけ成長する。同一投与量においては、
EMCC−0073とEMCC−0074は、Heliothis virescensのテ
スト集団のそれぞれ50％と70％を殺す。表Ｉ中、Spodop
tera exigua及びHeliothis zeaに対するEMCC−0073とEM
CC−0074の生物活性を発育阻害等級（stunt score）（S
S）の言葉で表わす。この発育阻害等級は、７日間上記
トレーをインキュベートした後に測定する。この系にお
いて、４＝完全サイズの幼虫（対照幼虫）;3＝3/4サイ
ズの対照幼虫;2＝1/2サイズの対照幼虫；及び１＝1/4サ
イズの対照幼虫である。その数が小さくなればなる程、
B.t.活性は高くなる。Heliothis virescensに対するEMC
C−0073とEMCC−0074の生物活性を％死亡率の言葉で測
定し、そして、その生きた幼虫（生存者）をそれらのサ
イズについて生育阻害等級（SS）により評価した。
74は、Spodoptera exigua及びHeliothis zeaを発育阻害
させた。７日間のインキュベーションの後、Spodoptera
exigua及びHeliothis zeaの両方がその対照幼虫のサイ
ズの25％未満にだけ成長する。同一投与量においては、
EMCC−0073とEMCC−0074は、Heliothis virescensのテ
スト集団のそれぞれ50％と70％を殺す。表Ｉ中、Spodop
tera exigua及びHeliothis zeaに対するEMCC−0073とEM
CC−0074の生物活性を発育阻害等級（stunt score）（S
S）の言葉で表わす。この発育阻害等級は、７日間上記
トレーをインキュベートした後に測定する。この系にお
いて、４＝完全サイズの幼虫（対照幼虫）;3＝3/4サイ
ズの対照幼虫;2＝1/2サイズの対照幼虫；及び１＝1/4サ
イズの対照幼虫である。その数が小さくなればなる程、
B.t.活性は高くなる。Heliothis virescensに対するEMC
C−0073とEMCC−0074の生物活性を％死亡率の言葉で測
定し、そして、その生きた幼虫（生存者）をそれらのサ
イズについて生育阻害等級（SS）により評価した。
6.3. EMCC−0073及びEMCC−0074のためのcry遺伝子特
性 EMCC−0073及びEMCC−0074のためのcry遺伝子特性
を、AmpliTaq DNA PolymeraseによるPerkin Elmer Cet
us Gene Amp PCR Reagent Kit文献中に記載されてい
るPCR法を使用して測定する。２本鎖DNAを熱−変性し、
そして２つのオリゴヌレオチドCry I A（ａ）（配列番
号１及び２）、Cry I A（ｂ）（配列番号３及び４）、
又はCry I A（ｃ）（配列番号５及び６）を低温におい
てアニールし、そして次に中間温度において増幅する。
性 EMCC−0073及びEMCC−0074のためのcry遺伝子特性
を、AmpliTaq DNA PolymeraseによるPerkin Elmer Cet
us Gene Amp PCR Reagent Kit文献中に記載されてい
るPCR法を使用して測定する。２本鎖DNAを熱−変性し、
そして２つのオリゴヌレオチドCry I A（ａ）（配列番
号１及び２）、Cry I A（ｂ）（配列番号３及び４）、
又はCry I A（ｃ）（配列番号５及び６）を低温におい
てアニールし、そして次に中間温度において増幅する。
PCR分析からの結果は図１中に示され、そしてB.t.株E
MCC−0073及びEMCC−0074がCry I A（ａ）を含んでいる
がCry I A（ｂ）又はCry I A（ｃ）遺伝子をいずれも含
んでいないことを示している。それ故、B.t.株EMCC−00
73及びEMCC−0074のクリスタル・デルタ−内毒素は、Cr
y I A（ａ）遺伝子のみによってエンコードされてい
る。
MCC−0073及びEMCC−0074がCry I A（ａ）を含んでいる
がCry I A（ｂ）又はCry I A（ｃ）遺伝子をいずれも含
んでいないことを示している。それ故、B.t.株EMCC−00
73及びEMCC−0074のクリスタル・デルタ−内毒素は、Cr
y I A（ａ）遺伝子のみによってエンコードされてい
る。
EMCC−0073の完全Cry I A（ａ）−様遺伝子のポリメ
ラーゼ連鎖反応（PCR）増幅のためのオリゴヌクレオチ
ド・プライマーをバチルス・チューリンゲンシス（Baci
llus thuringensis）亜種、kurstaki HD−１からクロー
ン化されたハロタイプCry I A（ａ）遺伝子の配列に基
づいて設計した（Schnepf et al.,1985,J.Biol.Chem.26
0:6264−6272）。プライマーを配列番号７及び配列番号
８として配列表中に示す。（Schnepf et al.,1985,J.Bi
ol.Chem.260:6264−6272により報告された配列のヌクレ
オチド380〜4205に対応する。EMCC−0073のCry I A
（ａ）−様遺伝子を担持する断片を２つの別個のPCRか
らクローン化し、これらを２つの別個のPCRからクロー
ン化し、これらを２つの別個のPCRからpCR TMII（Invit
rogen corporation）又はpBCSK＋（Stratagene Cloning
Systems）内でクローン化した。DNA配列決定を、この
ハロタイプCry I A（ａ）遺伝子の配列に基く合成オリ
ゴヌクレオチドによるApplied Biosystems 373A DNA Se
quencer及びPRISM Ready Reaction DyeDeoxy Terminato
r Cycle Sequencing Kitを使用して上記２クローン上で
行った。これらのクローンは、ハロタイプCry I A
（ａ）遺伝子に対して２つのヌクレオチドの差異を共有
しており（Schnepf et al.,1985,J.Biol.Chem.260:6264
−6272のナンバリングに従って、nt756におけるＣから
Ｔ及びnt3551におけるＣからＧ）、これは、ハロタイプ
Cry I Aa前毒素に対する２つのアミノ酸の変更（残基77
におけるProからLeu及び残基1009におけるLeuからVal）
に対応する。このヌクレオチド配列を配列番号９として
配列表示中に示し、そしてそのアミノ酸配列を配列番号
10として配列表中に示す。
ラーゼ連鎖反応（PCR）増幅のためのオリゴヌクレオチ
ド・プライマーをバチルス・チューリンゲンシス（Baci
llus thuringensis）亜種、kurstaki HD−１からクロー
ン化されたハロタイプCry I A（ａ）遺伝子の配列に基
づいて設計した（Schnepf et al.,1985,J.Biol.Chem.26
0:6264−6272）。プライマーを配列番号７及び配列番号
８として配列表中に示す。（Schnepf et al.,1985,J.Bi
ol.Chem.260:6264−6272により報告された配列のヌクレ
オチド380〜4205に対応する。EMCC−0073のCry I A
（ａ）−様遺伝子を担持する断片を２つの別個のPCRか
らクローン化し、これらを２つの別個のPCRからクロー
ン化し、これらを２つの別個のPCRからpCR TMII（Invit
rogen corporation）又はpBCSK＋（Stratagene Cloning
Systems）内でクローン化した。DNA配列決定を、この
ハロタイプCry I A（ａ）遺伝子の配列に基く合成オリ
ゴヌクレオチドによるApplied Biosystems 373A DNA Se
quencer及びPRISM Ready Reaction DyeDeoxy Terminato
r Cycle Sequencing Kitを使用して上記２クローン上で
行った。これらのクローンは、ハロタイプCry I A
（ａ）遺伝子に対して２つのヌクレオチドの差異を共有
しており（Schnepf et al.,1985,J.Biol.Chem.260:6264
−6272のナンバリングに従って、nt756におけるＣから
Ｔ及びnt3551におけるＣからＧ）、これは、ハロタイプ
Cry I Aa前毒素に対する２つのアミノ酸の変更（残基77
におけるProからLeu及び残基1009におけるLeuからVal）
に対応する。このヌクレオチド配列を配列番号９として
配列表示中に示し、そしてそのアミノ酸配列を配列番号
10として配列表中に示す。
6.4. EMCC−0073からの精製胞子の殺虫活性 前記セクション6.1.から得られたB.t.カルチャーを滅
菌250mlの遠心分離ボトル内に移し、そして結晶及び胞
子を集めるために５℃において30分間Sorvall RC−5B遠
心分離機内で10,000rpmにおいて遠心分離する。ペレッ
トを次に滅菌脱イオン水により３回洗浄する。このペレ
ットを10ml当たり1g湿重量まで脱イオン水中に懸濁さ
せ、その後凝集のいずれをも破壊するために氷上でその
懸濁物を音波処理する。それぞれ10mlの懸濁液を脱イオ
ン水によりさらに希釈する。10ml 3M NaCl、23.4ml 20
％ポリエチレン・グリコール、及び33.4ml 20％デキス
トラン硫酸ナトリウムをすべて添加し、そして先に希釈
した懸濁液（33.2ml）と分液漏斗内でよく混合する。追
加の100ml 20％ポリエチレン・グリコールを次にこの分
液漏斗に添加し、そしてこの混合物をそれらの相を混合
するように激しく振とうする。この混合物の相分離を室
温において30分間重力により達成する。上相は、多量の
胞子から成り、これをピペットにより取り出すことがで
きた。
菌250mlの遠心分離ボトル内に移し、そして結晶及び胞
子を集めるために５℃において30分間Sorvall RC−5B遠
心分離機内で10,000rpmにおいて遠心分離する。ペレッ
トを次に滅菌脱イオン水により３回洗浄する。このペレ
ットを10ml当たり1g湿重量まで脱イオン水中に懸濁さ
せ、その後凝集のいずれをも破壊するために氷上でその
懸濁物を音波処理する。それぞれ10mlの懸濁液を脱イオ
ン水によりさらに希釈する。10ml 3M NaCl、23.4ml 20
％ポリエチレン・グリコール、及び33.4ml 20％デキス
トラン硫酸ナトリウムをすべて添加し、そして先に希釈
した懸濁液（33.2ml）と分液漏斗内でよく混合する。追
加の100ml 20％ポリエチレン・グリコールを次にこの分
液漏斗に添加し、そしてこの混合物をそれらの相を混合
するように激しく振とうする。この混合物の相分離を室
温において30分間重力により達成する。上相は、多量の
胞子から成り、これをピペットにより取り出すことがで
きた。
精製胞子を次に前記セクション6.2.中に記載した食餌
取り込みバイオアッセイを使用してSpodoptera exigua
に対してバイオアッセイに供する。結果を表IIに中に示
す。48の第二齢幼虫をそれぞれの点において使用する。
死亡率を処理後７日目に記録する。
取り込みバイオアッセイを使用してSpodoptera exigua
に対してバイオアッセイに供する。結果を表IIに中に示
す。48の第二齢幼虫をそれぞれの点において使用する。
死亡率を処理後７日目に記録する。
EMCC−0073からの胞子は、対照株のB.t.k.タイプから
の胞子よりもSpodoptera exiguaに対する有意に高い活
性をもつ。
の胞子よりもSpodoptera exiguaに対する有意に高い活
性をもつ。
7. 微生物の寄託 バチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringen
sis）の以下の株をAgricultural Reseach Servise Pate
nt Culture Collection（NRRL）,Northern Regional Re
search Center,1815 University Street,Peoria,Illino
is,61604,USAに寄託した。
sis）の以下の株をAgricultural Reseach Servise Pate
nt Culture Collection（NRRL）,Northern Regional Re
search Center,1815 University Street,Peoria,Illino
is,61604,USAに寄託した。
上記株は、そのカルチャーへのアクセスが、37C.F.R.
§1.14及び35U.S.C. §122の下、及びブダペスト条約
の条件下、本特許出願の係属の間、それに指名されるべ
き特許及び商標の行政官により決定された者に利用され
ることができるということを保証する条件下で、寄託さ
れている。寄託物は、それぞれの寄託された株の生物学
的に純粋なカルチャーを提示する。この寄託物は、本出
願に対抗するもの、又はそれを承継するものが出願され
る国内における外国特許法により要求されるとき入手可
能である。しかしながら、寄託物の入手可能性は、政府
の行為により認可される特許権の滅損における本発明の
実施例のためのライセンスを構成するものではない。
§1.14及び35U.S.C. §122の下、及びブダペスト条約
の条件下、本特許出願の係属の間、それに指名されるべ
き特許及び商標の行政官により決定された者に利用され
ることができるということを保証する条件下で、寄託さ
れている。寄託物は、それぞれの寄託された株の生物学
的に純粋なカルチャーを提示する。この寄託物は、本出
願に対抗するもの、又はそれを承継するものが出願され
る国内における外国特許法により要求されるとき入手可
能である。しかしながら、寄託物の入手可能性は、政府
の行為により認可される特許権の滅損における本発明の
実施例のためのライセンスを構成するものではない。
本明細書中に記載され且つ請求された発明は、本明細
書中に開示された特定の態様により範囲を限定されなけ
ればならない。なぜなら、それらの態様は、本発明の幾
つかの態様を説明するものと意図されているからであ
る。いずれかの等価な態様が本発明の範囲内にあると意
図されている。実際、本発明の様々な修正は、本明細書
中に示され且つ記載されたものに加えて、これまでの記
載から当業者に明らかになるであろう。このような修正
も、添付のクレームの範囲内に落ちることが意図され
る。
書中に開示された特定の態様により範囲を限定されなけ
ればならない。なぜなら、それらの態様は、本発明の幾
つかの態様を説明するものと意図されているからであ
る。いずれかの等価な態様が本発明の範囲内にあると意
図されている。実際、本発明の様々な修正は、本明細書
中に示され且つ記載されたものに加えて、これまでの記
載から当業者に明らかになるであろう。このような修正
も、添付のクレームの範囲内に落ちることが意図され
る。
様々な文献を本明細書中に引用し、それらの開示をそ
れらの全体として、引用により本明細書中に取り込む。
れらの全体として、引用により本明細書中に取り込む。
配列表 （１）一般情報： （ｉ）出願人:Liu,Chi−Li （ii）発明の名称：鱗翅目害虫に対して活性な新規の
バチルス・チューリンゲンシス単離物 （iii）配列数:10 （iv）：宛て名： （Ａ）住所:Novo Nordisk of North America,Inc. （Ｂ）街:405Lexington Avenue （Ｃ）市:New York （Ｄ）州:New York （Ｅ）国:USA （Ｆ）郵便番号:10174−6201 （ｖ）コンピュータ読み込み形態： （Ａ）媒質型：フロッピー・ディスク （Ｂ）コンピュータ:IBM PC互換性 （Ｃ）オペレーティング・システム:PC−DOS/MS−D
OS （Ｄ）ソフトウェア:PatentIn Release ＃1.0,Vers
ion ＃1.25 （vi）最新の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （vi）先の出願データ： （Ａ）出願番号:US 07/981,048 （Ｂ）出願日:1992年11月24日 （viii）アトーニー／エージェント情報： （Ａ）氏名:Agris,Cheryl H. （Ｂ）登録番号:34,086 （Ｃ）参照／書類番号:3674.204−WO （ix）遠距離通信情報： （Ａ）電話:212−867−0123 （Ｂ）ファックス:212−867−0298 （２）配列番号１の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:20塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号1: （２）配列番号２の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:22塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号2: （２）配列番号３の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:22塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号3: （２）配列番号４の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:27塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号4: （２）配列番号５の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:21塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号5: （２）配列番号６の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:25塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号6: （２）配列番号７の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:39塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号7: （２）配列番号８の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:43塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号8: （２）配列番号９の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:3286塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号9: （２）配列番号10の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:1176アミノ酸 （Ｂ）配列タイプ：アミノ酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ：タンパク質 （xi）配列の記載：配列番号10:
バチルス・チューリンゲンシス単離物 （iii）配列数:10 （iv）：宛て名： （Ａ）住所:Novo Nordisk of North America,Inc. （Ｂ）街:405Lexington Avenue （Ｃ）市:New York （Ｄ）州:New York （Ｅ）国:USA （Ｆ）郵便番号:10174−6201 （ｖ）コンピュータ読み込み形態： （Ａ）媒質型：フロッピー・ディスク （Ｂ）コンピュータ:IBM PC互換性 （Ｃ）オペレーティング・システム:PC−DOS/MS−D
OS （Ｄ）ソフトウェア:PatentIn Release ＃1.0,Vers
ion ＃1.25 （vi）最新の出願データ： （Ａ）出願番号： （Ｂ）出願日： （Ｃ）分類： （vi）先の出願データ： （Ａ）出願番号:US 07/981,048 （Ｂ）出願日:1992年11月24日 （viii）アトーニー／エージェント情報： （Ａ）氏名:Agris,Cheryl H. （Ｂ）登録番号:34,086 （Ｃ）参照／書類番号:3674.204−WO （ix）遠距離通信情報： （Ａ）電話:212−867−0123 （Ｂ）ファックス:212−867−0298 （２）配列番号１の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:20塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号1: （２）配列番号２の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:22塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号2: （２）配列番号３の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:22塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号3: （２）配列番号４の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:27塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号4: （２）配列番号５の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:21塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号5: （２）配列番号６の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:25塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号6: （２）配列番号７の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:39塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号7: （２）配列番号８の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:43塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号8: （２）配列番号９の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:3286塩基対 （Ｂ）配列タイプ：核酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ:cDNA （xi）配列の記載：配列番号9: （２）配列番号10の情報： （ｉ）配列の特徴： （Ａ）長さ:1176アミノ酸 （Ｂ）配列タイプ：アミノ酸 （Ｃ）鎖：一本鎖 （Ｄ）トポロジー：直鎖状 （ii）分子タイプ：タンパク質 （xi）配列の記載：配列番号10:
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:07） (Ｃ１２Ｐ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:07） (56)参考文献 特開 昭63−49085（ＪＰ，Ａ) 特開 昭62−107782（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−181372（ＪＰ，Ａ) 特開 平２−270804（ＪＰ，Ａ) 特開 平１−309680（ＪＰ，Ａ) 特表 平２−503510（ＪＰ，Ａ) Ｔｈｅ Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ｂｉ ｏｌｏｇｉｃａｌ Ｃｈｃｍｉｓｔｒ ｙ，260［10］（1985），ｐ．6264− 6272 Ａｇｒｉｃ．Ｂｉｏｌ．Ｃｈｅｍ．, 52［６］（1988），ｐ．1565−1573
Claims (4)
- 【請求項１】生物学的に純粋なバチルス・チューリンゲ
ンシス（Bacillus thuringiensis）株又はその胞子であ
って、その株が、鱗翅目の昆虫害虫に対する殺虫活性を
有し且つ約130,000ダルトンの分子量をもつCry I A
（ａ）−様クリスタル・デルタ−内毒素をコードする遺
伝子を含有するが、Cry I A（ｂ）−及びCry I A（ｃ）
−様クリスタル・デルタ−内毒素をコードする遺伝子を
含有せず、そしてその株がNRRL B−21014の同定特徴を
もつバチルス・チューリンゲンシス（Bacillus thuring
iensis）EMCC−0073であることを特徴とする、前記株又
はその胞子。 - 【請求項２】生物学的に純粋なバチルス・チューリンゲ
ンシス（Bacillus thuringiensis）株又は胞子であっ
て、その株が鱗翅目の昆虫害虫に対する殺虫活性を有し
且つ約130,000ダルトンの分子量をもつCry I A（ａ）様
クリスタル・デルタ−内毒素をコードする遺伝子を含有
するが、Cry I A（ｂ）−及びCry I A（ｃ）−様クリス
タル・デルタ−内毒素をコードする遺伝子を含有せず、
そしてその株がNRRL B−21015の同定特徴をもつバチル
ス・チューリンゲンシス（Bacillus thuringiensis）EM
CC−0074であることを特徴とする、前記株又はその胞
子。 - 【請求項３】殺虫性担体と共に、請求項１又は２に記載
の生物学的に純粋な株を含んで成る殺虫性組成物。 - 【請求項４】鱗翅目の昆虫害虫の防除方法であって、そ
の害虫を、昆虫−防除有効量の請求項３に記載の殺虫性
組成物に晒すことを含む方法。
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