JP2899062B2 - 化合物ｅｓ―２４２ - Google Patents
化合物ｅｓ―２４２Info
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- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P17/00—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
- C12P17/16—Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
- C12P17/162—Heterorings having oxygen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. Lasalocid
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- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
- A61P25/18—Antipsychotics, i.e. neuroleptics; Drugs for mania or schizophrenia
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- A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
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- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
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- C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
- C07D311/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings
- C07D311/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one oxygen atom as the only hetero atom, condensed with other rings ortho- or peri-condensed with carbocyclic rings or ring systems
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Description
【発明の詳細な説明】 産業上の利用分野 本発明はヴァーティシリウム（Verticillium）属に属
する微生物により生産され、かつ神経細胞保護作用およ
び神経変性障害および痴呆症の治療におけるＮ−メチル
−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を有する化合
物ES−242に関する。かかる拮抗剤は、卒中、低血糖
症、一過性虚血性脳発作、心肺手術または心停止時の脳
虚血、周産期窒息、てんかん、ハンチントン舞踏病、ア
ルツハイマー症、脳性まひ、オリーブ橋小脳萎縮症なら
びに溺水、脊髄損傷などの無酸素症のような病的状態に
おける神経変性障害の予防および治療のために使用され
る。
する微生物により生産され、かつ神経細胞保護作用およ
び神経変性障害および痴呆症の治療におけるＮ−メチル
−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を有する化合
物ES−242に関する。かかる拮抗剤は、卒中、低血糖
症、一過性虚血性脳発作、心肺手術または心停止時の脳
虚血、周産期窒息、てんかん、ハンチントン舞踏病、ア
ルツハイマー症、脳性まひ、オリーブ橋小脳萎縮症なら
びに溺水、脊髄損傷などの無酸素症のような病的状態に
おける神経変性障害の予防および治療のために使用され
る。
従来の技術 本発明化合物に構造的に類似する化合物としては、東
アフリカの薬用植物から単離されたシングエアノール
（singueanol）−Ｉおよび−IIが知られている。
アフリカの薬用植物から単離されたシングエアノール
（singueanol）−Ｉおよび−IIが知られている。
これらは、テトラヒドロアントラセン二量体の構造を
もち、抗菌作用と鎮痙作用を示す。
もち、抗菌作用と鎮痙作用を示す。
しかし本発明化合物ES−242は上記化合物とは明らか
に異なり、文献未記載の新規化合物である。
に異なり、文献未記載の新規化合物である。
発明が解決しようとする課題 本発明の目的は優れた神経細胞保護作用およびＮ−メ
チル−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を有する
新規生理活性物質を提供することにある。
チル−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を有する
新規生理活性物質を提供することにある。
課題を解決するための手段 本発明によれば、一般式（Ｉ） 〔式中、R1は水素、水酸基あるいはアセトキシ基を表
わし、R2は水酸基あるいはアセトキシ基を表わす。〕で
表わされる化合物ES−242を提供することができる。
わし、R2は水酸基あるいはアセトキシ基を表わす。〕で
表わされる化合物ES−242を提供することができる。
該化合物はヴァーティシリウム属に属する微生物を培
養することにより得ることができる。
養することにより得ることができる。
以下に本発明を詳細に説明する。
化合物ES−242において、R1が水素およびR2がアセト
キシ基である化合物ES−242−１、R1およびR2が共にア
セトキシ基である化合物をES−242−２、R1が水酸基でR
2がアセトキシ基である化合物ES−242−３、R1およびR2
が共に水酸基である化合物をES−242−４、R1が水素お
よびR2が水酸基である化合物をES−242−５とそれぞれ
命名する。
キシ基である化合物ES−242−１、R1およびR2が共にア
セトキシ基である化合物をES−242−２、R1が水酸基でR
2がアセトキシ基である化合物ES−242−３、R1およびR2
が共に水酸基である化合物をES−242−４、R1が水素お
よびR2が水酸基である化合物をES−242−５とそれぞれ
命名する。
ES−242−１の理化学的性質を以下に示す。
（ｉ）ES−242−１ 性状：淡黄色の結晶（中性物質） 分子量:604 分子式：C34H36O10 質量分析： 実測値:SIMS 604（M+） 高分解能 EIMS 604.2268 計算値:604.2306 融点:233−237℃（分解） 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3380,1735,1623,1576,1457,1381,1361,1157,
1097,1050 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:347,309,297,2391 H−NMRスペクトル：（500MHz,CDCl3） 9.49（s,1H）,9.37（s,1H）,6.48（d,J＝2.2Hz,1H）,6.
36（d,J＝2.2Hz,1H）,5.93（d,J＝2.2Hz,1H）,5.89（d,
J＝2.2Hz,1H）,5.35（d,J＝1.6Hz,1H）,5.28（d,J＝15.
7Hz,1H）,5.18（d,J＝15.4Hz,1H）,4.88（d,J＝15.4Hz,
1H）,4.83（d,J＝15.7Hz,1H）,4.07（s,3H）,4.03（s,3
H）,3.87（m,1H）,3.78（d,q,J＝6.4,1.7Hz,1H）,3.44
（s,3H）,3.42（s,3H）,2.15（d,d,J＝17.0,3.1Hz,1
H）,2.02（d,d,J＝17.0,10.4Hz,1H）,1.20（s,3H）,1.1
6（d,J＝6.2Hz,3H）,1.11（d,J＝6.4Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（125MHz,CDCl3） 169.0（ｓ）,157.5（ｓ）,157.3（ｓ）,157.2（ｓ）,15
6.6（ｓ）,149.3（ｓ）,149.1（ｓ）,135.4（ｓ）,135.
1（ｓ）,133.7（ｓ）,130.9（ｓ）,126.9（ｓ）,122.6
（ｓ）,115.4（ｓ）,115.2（ｓ）,110.6（ｓ）,109.3
（ｓ）,98.5（ｄ）,98.4（ｄ）,97.8（ｄ）,96.7
（ｄ）,73.5（ｄ）,70.2（ｄ）,66.8（ｄ）,65.2
（ｔ）,64.6（ｔ）,59.3（ｑ）,56.2（ｑ）,55.2
（ｑ）,55.1（ｑ）,34.5（ｔ）,21.5（ｑ）,19.4
（ｑ）,17.0（ｑ） 比旋光度：▲［α］D 27▼＝＋11°（ｃ＝0.46,メタノ
ール） 溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチルおよびク
ロロホルムに易溶、水およびｎ−ヘキサンに不溶。
1097,1050 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:347,309,297,2391 H−NMRスペクトル：（500MHz,CDCl3） 9.49（s,1H）,9.37（s,1H）,6.48（d,J＝2.2Hz,1H）,6.
36（d,J＝2.2Hz,1H）,5.93（d,J＝2.2Hz,1H）,5.89（d,
J＝2.2Hz,1H）,5.35（d,J＝1.6Hz,1H）,5.28（d,J＝15.
7Hz,1H）,5.18（d,J＝15.4Hz,1H）,4.88（d,J＝15.4Hz,
1H）,4.83（d,J＝15.7Hz,1H）,4.07（s,3H）,4.03（s,3
H）,3.87（m,1H）,3.78（d,q,J＝6.4,1.7Hz,1H）,3.44
（s,3H）,3.42（s,3H）,2.15（d,d,J＝17.0,3.1Hz,1
H）,2.02（d,d,J＝17.0,10.4Hz,1H）,1.20（s,3H）,1.1
6（d,J＝6.2Hz,3H）,1.11（d,J＝6.4Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（125MHz,CDCl3） 169.0（ｓ）,157.5（ｓ）,157.3（ｓ）,157.2（ｓ）,15
6.6（ｓ）,149.3（ｓ）,149.1（ｓ）,135.4（ｓ）,135.
1（ｓ）,133.7（ｓ）,130.9（ｓ）,126.9（ｓ）,122.6
（ｓ）,115.4（ｓ）,115.2（ｓ）,110.6（ｓ）,109.3
（ｓ）,98.5（ｄ）,98.4（ｄ）,97.8（ｄ）,96.7
（ｄ）,73.5（ｄ）,70.2（ｄ）,66.8（ｄ）,65.2
（ｔ）,64.6（ｔ）,59.3（ｑ）,56.2（ｑ）,55.2
（ｑ）,55.1（ｑ）,34.5（ｔ）,21.5（ｑ）,19.4
（ｑ）,17.0（ｑ） 比旋光度：▲［α］D 27▼＝＋11°（ｃ＝0.46,メタノ
ール） 溶解性：メタノール、アセトン、酢酸エチルおよびク
ロロホルムに易溶、水およびｎ−ヘキサンに不溶。
（ii）ES−242−２ 性状：淡黄色の粉末 分子量:662 分子式：C36H38O12 質量分析： 実測値:SIMS 662（M+） 高分解能 EIMS 662.2357 計算値:662.689 融点:161−162℃ 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3400,1735,1620,1580,1460,1380,1360,1230,
1150,1090,1045 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:354,338,309,297,2391 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.46（s,1H）,6.42（d,J＝2.2Hz,1H）,5.90（d,J＝2.2H
z,1H）,5.42（d,J＝1.7Hz,1H）,5.27（d,J＝15.6Hz,1
H）,4.88（d,J＝15.6Hz,1H）,4.05（s,3H）,3.96（d,q,
J＝6.4,1.7Hz,1H）,3.40（s,3H）,1.13（s,3H）,1.12
（d,J＝6.4Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 169.0（ｓ）,157.2（ｓ）,156.9（ｓ）,149.7（ｓ）,13
5.6（ｓ）,131.2（ｓ）,125.1（ｓ）,115.8（ｓ）,110.
5（ｓ）,98.9（ｄ）,97.9（ｄ）,73.3（ｄ）,66.9
（ｄ）,65.1（ｔ）,56.3（ｑ）,55.2（ｑ）,19.2
（ｑ）,16.9（ｑ） 比旋光度：▲［α］D 21▼＝＋44°（ｃ＝0.15,CHC
l3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 （iii）ES−242−３ 性状：淡黄色の粉末 分子量:620 分子式：C34H36O11 質量分析： 実測値:SIMS 620（M+） 高分解能 EIMS 620.2246 計算値:620.6518 融点:137−139℃ 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3400,1735,1625,1575,1455,1380,1355,1220,
1145,1085,1040 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:355,309,2391 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.54（s,1H）,9.45（s,1H）,6.46（d,J＝2.2Hz,1H）,6.
41（d,J＝2.2Hz,1H）,5.96（d,J＝2.2Hz,1H）,5.92（d,
J＝2.2Hz,1H）,5.34（d,J＝1.7Hz,1H）,5.29（d,J＝15.
7Hz,1H）,5.36（d,J＝15.6Hz,1H）,4.89（d,J＝15.6Hz,
1H）,4.81（d,J＝15.7Hz,1H）,4.06（s,3H）,4.04（s,3
H）,3.87（Bd,Ca,J＝6.4Hz,1H）,3.85（d,q,J＝6.4,1.3
Hz,1H）,3.78（d,q,J＝6.4,1.7Hz,1H）,3.43（s,3H）,
3.42（s,3H）,1.42（d,J＝6.6Hz,1H）,1.28（d,J＝6.4H
z,3H）,1.13（s,3H）,1.10（d,J＝6.4Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 168.9（ｓ）,157.9（ｓ）,157.4（ｓ）,157.3（ｓ）,15
7.0（ｓ）,149.94（ｓ）,149.85（ｓ）,136.1（ｓ）,13
5.7（ｓ）,135.6（ｓ）,131.3（ｓ）,125.3（ｓ）,123.
8（ｓ）,115.5（ｓ）,114.7（ｓ）,110.6（ｓ）,110.4
（ｓ）,99.0（ｄ）,98.6（ｄ）,98.1（ｄ）,97.7
（ｄ）,73.9（ｄ）,73.7（ｄ）,66.8（ｄ）,66.7
（ｄ）,65.2（ｔ）×2,56.4（ｑ）,56.3（ｑ）,55.3
（ｑ）,55.2（ｑ）,19.2（ｑ）,17.1（ｑ）,17.0（ｑ） 比旋光度：▲［α］22 546nm▼＝＋50°（ｃ＝0.16,CH
Cl3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 （iv）ES−242−４ 性状：無色の結晶 分子量:578 分子式：C32H34O10 質量分析： 実測値:SIMS 578（M+） 高分解能 EIMS 578.2104 計算値:578.61046 融点:184−185℃ 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3400,1620,1575,1455,1375,1355,1250,1195,
1150,1085,1040 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:351,336,309,297,2381 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.53（s,1H）,6.45（d,J＝2.2Hz,1H）,5.99（d,J＝2.2H
z,1H）,5.24（d,J＝15.8Hz,1H）,4.81（d,J＝15.8Hz,1
H）,4.05（s,3H）,3.81（Bs,1H）,3.67（d,q,J＝6.4,1.
4Hz,1H）,3.45（s,3H）,1.46（Bs,1H）,1.27（d,J＝6.4
Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 157.9（ｓ）,157.6（ｓ）,150.1（ｓ）,136.1（ｓ）,13
5.7（ｓ）,123.9（ｓ）,114.4（ｓ）,110.5（ｓ）,98.4
（ｄ）,98.0（ｄ）,73.9（ｄ）,66.7（ｄ）,65.3
（ｔ）,56.4（ｑ）,55.3（ｑ）,17.1（ｑ） 比旋光度：▲［α］D 21▼＝−54°（ｃ＝0.18,CHC
l3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 （ｖ）ES−242−５ 性状：淡黄色の粉末 分子量:562 分子式：C32H34O9 質量分析： 実測値:SIMS 562（M+） 高分解能 EIMS 562.221 計算値:562.220 融点:157−158℃ 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3400,1625,1575,1455,1375,1355,1245,1190,
1140,1080,1035 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:346,337,308,298,282,2381 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.48（s,1H）,9.45（s,1H）,6.47（d,J＝2.2Hz,1H）,6.
40（d,J＝2.2Hz,1H）,5.97（d,J＝2.2Hz,1H）,5.96（d,
J＝2.2Hz,1H）,5.25（d,J＝15.8Hz,1H）,5.19（d,J＝1
5.5Hz,1H）,4.84（d,J＝15.8Hz,1H）,4.82（d,J＝15.5H
z,1H）,4.06（s,3H）,4.04（s,3H）,3.81（d,d,J＝4.7,
1.2Hz,1H）,3.74（m,1H）,3.67（d,q,J＝6.2Hz,約1.2H
z,1H）,3.46（s,3H）,3.45（s,3H）,2.13〜1.98（m,2
H）,1.56（d,J＝4.7Hz,1H）,1.27（d,J＝6.4Hz,3H）,1.
16（d,J＝6.2Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 157.8（ｓ）,157.6（ｓ）×2,157.3（ｓ）,149.5
（ｓ）,149.4（ｓ）,135.8（ｓ）,135.3（ｓ）,135.2
（ｓ）,134.1（ｓ）,125.4（ｓ）,122.7（ｓ）,115.3
（ｓ）,114.3（ｓ）,110.5（ｓ）,109.3（ｓ）,98.2
（ｄ）,97.7（ｄ）,97.5（ｄ）,97.3（ｄ）,73.9
（ｄ）,70.4（ｄ）,66.6（ｄ）,65.3（ｔ）,64.5
（ｔ）,56.3（ｑ）,56.2（ｑ）,55.30（ｑ）,55.27
（ｑ）,34.4（ｔ）,21.5（ｑ）,17.1（ｑ） 比旋光度：［α］D 20＝＋21°（ｃ＝0.12,CHCl3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 なお以上のデータは下記の機器により測定した。
1150,1090,1045 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:354,338,309,297,2391 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.46（s,1H）,6.42（d,J＝2.2Hz,1H）,5.90（d,J＝2.2H
z,1H）,5.42（d,J＝1.7Hz,1H）,5.27（d,J＝15.6Hz,1
H）,4.88（d,J＝15.6Hz,1H）,4.05（s,3H）,3.96（d,q,
J＝6.4,1.7Hz,1H）,3.40（s,3H）,1.13（s,3H）,1.12
（d,J＝6.4Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 169.0（ｓ）,157.2（ｓ）,156.9（ｓ）,149.7（ｓ）,13
5.6（ｓ）,131.2（ｓ）,125.1（ｓ）,115.8（ｓ）,110.
5（ｓ）,98.9（ｄ）,97.9（ｄ）,73.3（ｄ）,66.9
（ｄ）,65.1（ｔ）,56.3（ｑ）,55.2（ｑ）,19.2
（ｑ）,16.9（ｑ） 比旋光度：▲［α］D 21▼＝＋44°（ｃ＝0.15,CHC
l3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 （iii）ES−242−３ 性状：淡黄色の粉末 分子量:620 分子式：C34H36O11 質量分析： 実測値:SIMS 620（M+） 高分解能 EIMS 620.2246 計算値:620.6518 融点:137−139℃ 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3400,1735,1625,1575,1455,1380,1355,1220,
1145,1085,1040 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:355,309,2391 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.54（s,1H）,9.45（s,1H）,6.46（d,J＝2.2Hz,1H）,6.
41（d,J＝2.2Hz,1H）,5.96（d,J＝2.2Hz,1H）,5.92（d,
J＝2.2Hz,1H）,5.34（d,J＝1.7Hz,1H）,5.29（d,J＝15.
7Hz,1H）,5.36（d,J＝15.6Hz,1H）,4.89（d,J＝15.6Hz,
1H）,4.81（d,J＝15.7Hz,1H）,4.06（s,3H）,4.04（s,3
H）,3.87（Bd,Ca,J＝6.4Hz,1H）,3.85（d,q,J＝6.4,1.3
Hz,1H）,3.78（d,q,J＝6.4,1.7Hz,1H）,3.43（s,3H）,
3.42（s,3H）,1.42（d,J＝6.6Hz,1H）,1.28（d,J＝6.4H
z,3H）,1.13（s,3H）,1.10（d,J＝6.4Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 168.9（ｓ）,157.9（ｓ）,157.4（ｓ）,157.3（ｓ）,15
7.0（ｓ）,149.94（ｓ）,149.85（ｓ）,136.1（ｓ）,13
5.7（ｓ）,135.6（ｓ）,131.3（ｓ）,125.3（ｓ）,123.
8（ｓ）,115.5（ｓ）,114.7（ｓ）,110.6（ｓ）,110.4
（ｓ）,99.0（ｄ）,98.6（ｄ）,98.1（ｄ）,97.7
（ｄ）,73.9（ｄ）,73.7（ｄ）,66.8（ｄ）,66.7
（ｄ）,65.2（ｔ）×2,56.4（ｑ）,56.3（ｑ）,55.3
（ｑ）,55.2（ｑ）,19.2（ｑ）,17.1（ｑ）,17.0（ｑ） 比旋光度：▲［α］22 546nm▼＝＋50°（ｃ＝0.16,CH
Cl3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 （iv）ES−242−４ 性状：無色の結晶 分子量:578 分子式：C32H34O10 質量分析： 実測値:SIMS 578（M+） 高分解能 EIMS 578.2104 計算値:578.61046 融点:184−185℃ 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3400,1620,1575,1455,1375,1355,1250,1195,
1150,1085,1040 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:351,336,309,297,2381 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.53（s,1H）,6.45（d,J＝2.2Hz,1H）,5.99（d,J＝2.2H
z,1H）,5.24（d,J＝15.8Hz,1H）,4.81（d,J＝15.8Hz,1
H）,4.05（s,3H）,3.81（Bs,1H）,3.67（d,q,J＝6.4,1.
4Hz,1H）,3.45（s,3H）,1.46（Bs,1H）,1.27（d,J＝6.4
Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 157.9（ｓ）,157.6（ｓ）,150.1（ｓ）,136.1（ｓ）,13
5.7（ｓ）,123.9（ｓ）,114.4（ｓ）,110.5（ｓ）,98.4
（ｄ）,98.0（ｄ）,73.9（ｄ）,66.7（ｄ）,65.3
（ｔ）,56.4（ｑ）,55.3（ｑ）,17.1（ｑ） 比旋光度：▲［α］D 21▼＝−54°（ｃ＝0.18,CHC
l3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 （ｖ）ES−242−５ 性状：淡黄色の粉末 分子量:562 分子式：C32H34O9 質量分析： 実測値:SIMS 562（M+） 高分解能 EIMS 562.221 計算値:562.220 融点:157−158℃ 赤外部吸収スペクトル：（KBr法で測定） （cm-1）3400,1625,1575,1455,1375,1355,1245,1190,
1140,1080,1035 紫外部吸収スペクトル：（メタノール中で測定） λmax（nm）:346,337,308,298,282,2381 H−NMRスペクトル：（400MHz,CDCl3） 9.48（s,1H）,9.45（s,1H）,6.47（d,J＝2.2Hz,1H）,6.
40（d,J＝2.2Hz,1H）,5.97（d,J＝2.2Hz,1H）,5.96（d,
J＝2.2Hz,1H）,5.25（d,J＝15.8Hz,1H）,5.19（d,J＝1
5.5Hz,1H）,4.84（d,J＝15.8Hz,1H）,4.82（d,J＝15.5H
z,1H）,4.06（s,3H）,4.04（s,3H）,3.81（d,d,J＝4.7,
1.2Hz,1H）,3.74（m,1H）,3.67（d,q,J＝6.2Hz,約1.2H
z,1H）,3.46（s,3H）,3.45（s,3H）,2.13〜1.98（m,2
H）,1.56（d,J＝4.7Hz,1H）,1.27（d,J＝6.4Hz,3H）,1.
16（d,J＝6.2Hz,3H）13 C−NMRスペクトル：（100MHz,CDCl3） 157.8（ｓ）,157.6（ｓ）×2,157.3（ｓ）,149.5
（ｓ）,149.4（ｓ）,135.8（ｓ）,135.3（ｓ）,135.2
（ｓ）,134.1（ｓ）,125.4（ｓ）,122.7（ｓ）,115.3
（ｓ）,114.3（ｓ）,110.5（ｓ）,109.3（ｓ）,98.2
（ｄ）,97.7（ｄ）,97.5（ｄ）,97.3（ｄ）,73.9
（ｄ）,70.4（ｄ）,66.6（ｄ）,65.3（ｔ）,64.5
（ｔ）,56.3（ｑ）,56.2（ｑ）,55.30（ｑ）,55.27
（ｑ）,34.4（ｔ）,21.5（ｑ）,17.1（ｑ） 比旋光度：［α］D 20＝＋21°（ｃ＝0.12,CHCl3） 呈色反応：FeCl3、I2、H2SO4、Ce（SO4）2−H2SO4に
陽性 なお以上のデータは下記の機器により測定した。
融点：柳本製作所 ミクロ融点測定装置 赤外部吸収スペクトル： 島津製作所IR−27G赤外分光光度計 紫外部吸収スペクトル：日立製作所 200−20型ダブルビーム分光光度計 NMRスペクトル：ブルッカー社 ES−242−1 AM500核磁気共鳴装置 ES−242−２〜5 AM400核磁気共鳴装置 旋光度：日本分光 DIP−370 デジタル旋光計 マススペクトル：日立製作所 Ｍ−80B質量分析計 以上のデータよりES−242−１〜５はそれぞれ新規化
合物であることが判明した。
合物であることが判明した。
つぎに各種展開剤による化合物ES−242の薄層クロマ
トグラフィーのRf値を実験１、実験２、実験３および実
験４により測定した。結果を第１表に示す。
トグラフィーのRf値を実験１、実験２、実験３および実
験４により測定した。結果を第１表に示す。
実験１ 薄層；キーゼルゲル60F254（メルク社製、Art.5628） 展開溶媒;n−ヘキサン：アセトン＝1:1 展開方法；室温、上昇法、15〜60分 実験２ 薄層および展開方法は実験１と同様 展開溶媒；クロロホルム：酢酸エチル＝1:1 実験３ 薄層および展開方法は実験１と同様 展開溶媒;n−ヘキサン：アセトン＝3:2 実験４ 薄層:RP−18（メルク社製、Art.13724） 展開溶媒:100％メタノール 展開方法：実験１と同様 検出はヨウ素反応もしくは253.7nmの紫外線照射法に
よりおこなった。
よりおこなった。
つぎに化合物ES−242の生物活性について、神経保護
作用を試験例１、試験例２および試験例３で、Ｎ−メチ
ル−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を試験例４
で説明する。
作用を試験例１、試験例２および試験例３で、Ｎ−メチ
ル−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を試験例４
で説明する。
試験例１ 培養神経細胞における保護作用 マウス胎児脳より中隔野を摘出し、トリプシンおよび
DNアーゼＩで細胞を分散後、５％馬血清および５％牛胎
児血清を含むピット（Pit）培地〔ダルベッコ変法イー
グル培地：ハムF12培地（いずれも日水製薬社製）＝1:1
混液〕で１日培養した。培養液に10μＭのシトシンアラ
ビノシドを添加し、さらに10日培養した。培養液に100
μＭのＬ−グルタミン酸とES−242−１を加えて神経細
胞の生存率を測定した。なお、100μＭのグルタミン酸
および／またはES−242−１の代わりに0.5％のジメチル
スルホキシド（DMSO）を加えて神経細胞の生存率を測定
したものを対照とした。神経細胞の生死の判定にはCost
aらの方法〔プロシーディングス オブザ ナショナル
アカデミー オブ サイエンス ユー・エス・エー
（Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,）85,7351−7355（198
8）〕に従い、蛍光染色法を用いた。結果は第２表に示
す。
DNアーゼＩで細胞を分散後、５％馬血清および５％牛胎
児血清を含むピット（Pit）培地〔ダルベッコ変法イー
グル培地：ハムF12培地（いずれも日水製薬社製）＝1:1
混液〕で１日培養した。培養液に10μＭのシトシンアラ
ビノシドを添加し、さらに10日培養した。培養液に100
μＭのＬ−グルタミン酸とES−242−１を加えて神経細
胞の生存率を測定した。なお、100μＭのグルタミン酸
および／またはES−242−１の代わりに0.5％のジメチル
スルホキシド（DMSO）を加えて神経細胞の生存率を測定
したものを対照とした。神経細胞の生死の判定にはCost
aらの方法〔プロシーディングス オブザ ナショナル
アカデミー オブ サイエンス ユー・エス・エー
（Proc.Natl.Acad.Sci.USA.,）85,7351−7355（198
8）〕に従い、蛍光染色法を用いた。結果は第２表に示
す。
また、上記で用いた中隔野の代わりに小脳を用いる以
外は同様な方法でおこなった。結果を第３表に示す。
外は同様な方法でおこなった。結果を第３表に示す。
第２表および第３表に示すようにES−242−１はＬ−
グルタミン酸による神経細胞死を容量依存的に抑制す
る。
グルタミン酸による神経細胞死を容量依存的に抑制す
る。
試験例２ 培養試験細胞における保護作用 試験例１で用いた中隔野の代わりに小脳を用い、ES−
242−１の代わりにES−242−２もしくはES−242−５を
用いる以外は試験例１と同様な方法でおこなった。結果
を第４表および第５表に示す。
242−１の代わりにES−242−２もしくはES−242−５を
用いる以外は試験例１と同様な方法でおこなった。結果
を第４表および第５表に示す。
第４表および第５表に示すようにES−242−２およびE
S−242−５はＬ−グルタミン酸による神経細胞死を容量
依存的に抑制する。
S−242−５はＬ−グルタミン酸による神経細胞死を容量
依存的に抑制する。
試験例３ 虚血性神経細胞障害に対する保護作用 桐野らの方法（脳神経38巻、12号、1157−1163頁、19
86年）に従って、砂ネズミの両側総頸動脈を５分間閉塞
することにより海馬のCA1領域に発生する虚血性神経細
胞障害に対する試験化合物の保護作用を調べた。
86年）に従って、砂ネズミの両側総頸動脈を５分間閉塞
することにより海馬のCA1領域に発生する虚血性神経細
胞障害に対する試験化合物の保護作用を調べた。
試験化合物は、生理食塩水に溶解し、血流を再開した
直後に経口的に１回投与した。投与の１週間後、砂ネズ
ミを経心的に還流固定した。固定の翌日、脳を取り出
し、海馬CA1領域を含む切片を作成し、海馬錐体細胞層
の長さ1mm当たりに残存する正常神経細胞数を測定し
た。対照として正常神経細胞に生理食塩水を投与した群
（正常対照）、正常神経細胞に虚血処理を施し、生理食
塩水を投与した群（虚血対照）を設けた。結果を第６表
に示す。
直後に経口的に１回投与した。投与の１週間後、砂ネズ
ミを経心的に還流固定した。固定の翌日、脳を取り出
し、海馬CA1領域を含む切片を作成し、海馬錐体細胞層
の長さ1mm当たりに残存する正常神経細胞数を測定し
た。対照として正常神経細胞に生理食塩水を投与した群
（正常対照）、正常神経細胞に虚血処理を施し、生理食
塩水を投与した群（虚血対照）を設けた。結果を第６表
に示す。
第６表に示すように虚血性神経細胞障害に対してES−
242−１は100mg/kgにおいて有意な保護作用を示した。
242−１は100mg/kgにおいて有意な保護作用を示した。
試験例４ 結合試験 ラット脳に対するＮ−〔１−（２−チエニル）シクロ
ヘキシル〕−3,4−〔3H〕ピペリジンの試験管内結合性
を、Vignonら〔ブレイン リサーチ（Brain Researc
h），280,194−197（1983）〕の修正法に従い、ラット
大脳破砕物を用いてラット脳に対するＮ−〔１−（２−
チエニル）シクロヘキシル〕−3,4−〔3H〕ピペリジン
の結合を50％阻害するのに必要な濃度（IC50）を測定し
た。結果を第７表に示す。
ヘキシル〕−3,4−〔3H〕ピペリジンの試験管内結合性
を、Vignonら〔ブレイン リサーチ（Brain Researc
h），280,194−197（1983）〕の修正法に従い、ラット
大脳破砕物を用いてラット脳に対するＮ−〔１−（２−
チエニル）シクロヘキシル〕−3,4−〔3H〕ピペリジン
の結合を50％阻害するのに必要な濃度（IC50）を測定し
た。結果を第７表に示す。
次に化合物ES−242の製造法について説明する。
化合物ES−242はヴァーティシリウム属に属し、化合
物ES−242生産能を有する微生物を培地に培養し、培養
物中に化合物ES−242を生成蓄積させ、該培養物から化
合物ES−242を採取することによって得ることができ
る。
物ES−242生産能を有する微生物を培地に培養し、培養
物中に化合物ES−242を生成蓄積させ、該培養物から化
合物ES−242を採取することによって得ることができ
る。
化合物ES−242生産性微生物としてはヴァーティシリ
ウム属に属し、化合物ES−242生産能を有するものであ
ればいずれの微生物でも用いることができる。また、こ
れらの菌株を人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ
線照射、変異誘起剤処理などによって変異させた変異株
あるいは自然的に変異した変異株などでも化合物ES−24
2生産能を有していれば本発明に用いることができる。
具体的に好適な例として、ヴァーティシリウム・スピー
シーズ（Verticillium sp.）SPC−15898株があげられ
る。
ウム属に属し、化合物ES−242生産能を有するものであ
ればいずれの微生物でも用いることができる。また、こ
れらの菌株を人工的変異方法、たとえば紫外線照射、Ｘ
線照射、変異誘起剤処理などによって変異させた変異株
あるいは自然的に変異した変異株などでも化合物ES−24
2生産能を有していれば本発明に用いることができる。
具体的に好適な例として、ヴァーティシリウム・スピー
シーズ（Verticillium sp.）SPC−15898株があげられ
る。
ヴァーティシリウム・スピーシーズ SPC−15898株の
菌学的性質は次の通りである。
菌学的性質は次の通りである。
肉眼的観察 麦芽エキス寒天培地を用いて、20℃で培養したとき、
集落の直径は培養10日目で13〜16mmに達する。集落表面
は白色綿毛状で、裏面は、淡橙色を呈する。
集落の直径は培養10日目で13〜16mmに達する。集落表面
は白色綿毛状で、裏面は、淡橙色を呈する。
バレイショ・ブドウ糖寒天培地を用いて、20℃で培養
したとき、集落の直径は培養10日目で16〜19mmに達す
る。集落表面は白色綿毛状で、裏面はくすんだ暗褐色を
呈する。
したとき、集落の直径は培養10日目で16〜19mmに達す
る。集落表面は白色綿毛状で、裏面はくすんだ暗褐色を
呈する。
本菌株の至適生育温度は１〜33℃であり、20〜28℃で
最も良好に生育する。生育しうるpHは２〜11で至適生育
pHは６〜８である。
最も良好に生育する。生育しうるpHは２〜11で至適生育
pHは６〜８である。
麦芽エキス寒天培地上で培養したときの本菌株の光
学顕微鏡的観察 菌糸は隔壁を有し、無色、平滑でよく分岐する。菌糸
が束状になることはほとんどない。フィアライドは単生
あるいは気中菌糸に輪生する。しばしば、気中菌糸から
分生子柄が立ち上がり、１〜３回程度分岐することもあ
り、その先端にフィアライドを３〜５本形成する。フィ
アライドは、無色、平滑で、きり状あるいは倒棍棒形を
呈し、先端になるにしたがい細かくなる。フィアライド
の長さは８〜23μｍで、幅は最も広いところで1.5〜２
μｍであり先端は細く、幅0.3〜0.5μｍである。分生子
の個体発生様式は内生出芽型であり、分生子はフィアラ
イド先端に集塊となって固まる。分生子の長軸はフィア
ライドの縦軸に斜めあるいは直角に位置する。フィアロ
型分生子は、単細胞、無色、平滑で、楕円形、長楕円
形、倒卵形あるいは側面がくぼんだ楕円形を呈し、その
両端はわずかに丸みを帯びる。分生子の長さは、3.5〜
５μｍで、幅は１〜２μｍである。厚膜胞子は形成され
ない。本菌株は、上述したアナモルフ（anamorph）のみ
観察され、テレオモルフ（teleomorph）は観察されな
い。
学顕微鏡的観察 菌糸は隔壁を有し、無色、平滑でよく分岐する。菌糸
が束状になることはほとんどない。フィアライドは単生
あるいは気中菌糸に輪生する。しばしば、気中菌糸から
分生子柄が立ち上がり、１〜３回程度分岐することもあ
り、その先端にフィアライドを３〜５本形成する。フィ
アライドは、無色、平滑で、きり状あるいは倒棍棒形を
呈し、先端になるにしたがい細かくなる。フィアライド
の長さは８〜23μｍで、幅は最も広いところで1.5〜２
μｍであり先端は細く、幅0.3〜0.5μｍである。分生子
の個体発生様式は内生出芽型であり、分生子はフィアラ
イド先端に集塊となって固まる。分生子の長軸はフィア
ライドの縦軸に斜めあるいは直角に位置する。フィアロ
型分生子は、単細胞、無色、平滑で、楕円形、長楕円
形、倒卵形あるいは側面がくぼんだ楕円形を呈し、その
両端はわずかに丸みを帯びる。分生子の長さは、3.5〜
５μｍで、幅は１〜２μｍである。厚膜胞子は形成され
ない。本菌株は、上述したアナモルフ（anamorph）のみ
観察され、テレオモルフ（teleomorph）は観察されな
い。
以上の菌学的性質から、本菌の分類学上の位置をウォ
ルター・ガムス（Walter Gams）著の「セファロスポリ
ウム−アールティゲ・シメルピルツェ（ヒフォミセテ
ス）（Cephalosporium−artige Schimmelpilze（Hyphom
ycetes）」（Gustav Fischer Verlag,Stuttgart,1971
年）に従って検索した結果、本菌株は、ヴァーティシリ
ウム属に属することが認められた。本発明者らは、本菌
株を“ヴァーティシリウム・スピーシーズ（Verticilli
um sp.）SPC−15898"と命名し、ブダペスト条約にもと
づき平成１年９月20日付で微工研条寄第2604号（FERM B
P−2604）として、微生物工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託した。
ルター・ガムス（Walter Gams）著の「セファロスポリ
ウム−アールティゲ・シメルピルツェ（ヒフォミセテ
ス）（Cephalosporium−artige Schimmelpilze（Hyphom
ycetes）」（Gustav Fischer Verlag,Stuttgart,1971
年）に従って検索した結果、本菌株は、ヴァーティシリ
ウム属に属することが認められた。本発明者らは、本菌
株を“ヴァーティシリウム・スピーシーズ（Verticilli
um sp.）SPC−15898"と命名し、ブダペスト条約にもと
づき平成１年９月20日付で微工研条寄第2604号（FERM B
P−2604）として、微生物工業技術院微生物工業技術研
究所に寄託した。
微生物の培養に際しては糸状菌の培養に用いられる通
常の培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化
しうる炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培
地であれば天然培地、合成培地いずれでも用いられる。
常の培養方法が適用される。用いられる培地は菌の資化
しうる炭素源、窒素源、無機物などを程よく含有する培
地であれば天然培地、合成培地いずれでも用いられる。
炭素源としては、グルコース、フラクトース、シュー
クロース、スタビロース、澱粉、デキストリン、マンノ
ース、マルトース、糖蜜などの炭水化物、クエン酸、リ
ンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノール、
エタノールなどのアルコール、メタン、エタン、プロパ
ン、ｎ−パラフィンなどの炭化水素、グルタミン酸など
のアミノ酸あるいはグリセロールなどが用いられる。
クロース、スタビロース、澱粉、デキストリン、マンノ
ース、マルトース、糖蜜などの炭水化物、クエン酸、リ
ンゴ酸、酢酸、フマール酸などの有機酸、メタノール、
エタノールなどのアルコール、メタン、エタン、プロパ
ン、ｎ−パラフィンなどの炭化水素、グルタミン酸など
のアミノ酸あるいはグリセロールなどが用いられる。
窒素源としては塩化アンモニウム、硫酸アンモニウ
ム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどのアン
モニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シスチン、
アラニンなどのアミノ酸、尿素、ペプトン、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大
豆粉、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメ
ディアなどが用いられる。
ム、硝酸アンモニウム、リン酸アンモニウムなどのアン
モニウム塩、アスパラギン酸、グルタミン、シスチン、
アラニンなどのアミノ酸、尿素、ペプトン、肉エキス、
酵母エキス、乾燥酵母、コーン・スチープ・リカー、大
豆粉、綿実粕、大豆カゼイン、カザミノ酸、ファーマメ
ディアなどが用いられる。
無機物としてはリン酸一水素カリウム、リン酸二水素
カリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸マグネシウ
ム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、硫酸コバル
ト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム、モリブデン酸
アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸バリウ
ム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩などが用いら
れる。
カリウム、リン酸二水素ナトリウム、硫酸マグネシウ
ム、硫酸第一鉄、硫酸マンガン、硫酸銅、硫酸コバル
ト、硫酸亜鉛、パントテン酸カルシウム、モリブデン酸
アンモニウム、硫酸アルミニウムカリウム、炭酸バリウ
ム、炭酸カルシウム、塩化コバルト、食塩などが用いら
れる。
その他必要に応じて培地にビタミンなど菌体の増殖あ
るいは化合物ES−242の生産性を促進する物質を加える
ことができる。
るいは化合物ES−242の生産性を促進する物質を加える
ことができる。
用いられる微生物が特定の物質を要求する場合はもち
ろん生育に必要な物を加えることが必要である。
ろん生育に必要な物を加えることが必要である。
培養は振盪培養法、通気攪拌培養法などにより、温度
20〜40℃、pH中性付近でおこなわれる。
20〜40℃、pH中性付近でおこなわれる。
３〜15日の培養によって化合物ES−242の蓄積は最大
に達する。
に達する。
培養物中に、蓄積した化合物ES−242を培養液から単
離採取するに際しては、通常の生理活性物質の培養液か
ら採取する方法が適用される。
離採取するに際しては、通常の生理活性物質の培養液か
ら採取する方法が適用される。
すなわち、アセトン、メタノールなどの有機溶媒によ
る菌体成分の抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除
去、吸着樹脂、シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、
逆層シリカゲル、アルミニウム、セルロース、ケイ藻
土、ケイ酸マグネシウム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂
などを用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層ク
ロマトグラフィーによる活性物質の吸脱着処理、適当な
溶媒系による分配などによって化合物ES−242は単離さ
れる。
る菌体成分の抽出、ろ過、遠心分離などによる菌体除
去、吸着樹脂、シリカゲル、シラナイズドシリカゲル、
逆層シリカゲル、アルミニウム、セルロース、ケイ藻
土、ケイ酸マグネシウム、ゲルろ過剤、イオン交換樹脂
などを用いるカラムクロマトグラフィーもしくは薄層ク
ロマトグラフィーによる活性物質の吸脱着処理、適当な
溶媒系による分配などによって化合物ES−242は単離さ
れる。
培養液から化合物ES−242は単離する一例は次の通り
である。
である。
培養液をろ過もしくは遠心分離することによって得ら
れる菌体を有機溶媒で抽出するか、もしくは培養液上清
を吸着樹脂で吸着後、適当な溶媒を用いて溶出して得ら
れる抽出液もしくは溶出液を減圧濃縮することにより溶
剤を除去し水溶液とする。ついで、この水溶液に水と混
和しない溶媒、たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル、ヘキ
サンなどを添加して抽出する。抽出液を減圧濃縮し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーで処理して活性物質
を吸着する。ついで、クロロホルムなどの適当な溶剤に
て溶出する。溶出液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマト
グラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどで活性画
分を吸着し、適当な溶媒で溶出することにより、化合物
ES−242を得る。
れる菌体を有機溶媒で抽出するか、もしくは培養液上清
を吸着樹脂で吸着後、適当な溶媒を用いて溶出して得ら
れる抽出液もしくは溶出液を減圧濃縮することにより溶
剤を除去し水溶液とする。ついで、この水溶液に水と混
和しない溶媒、たとえば酢酸エチル、酢酸ブチル、ヘキ
サンなどを添加して抽出する。抽出液を減圧濃縮し、シ
リカゲルカラムクロマトグラフィーで処理して活性物質
を吸着する。ついで、クロロホルムなどの適当な溶剤に
て溶出する。溶出液を減圧下で濃縮し、シリカゲルカラ
ムクロマトグラフィー、逆相シリカゲルカラムクロマト
グラフィー、高速液体クロマトグラフィーなどで活性画
分を吸着し、適当な溶媒で溶出することにより、化合物
ES−242を得る。
上記精製工程中の化合物ES−242の検出は蛍光剤入り
シリカゲル（キーゼルゲルF254、メルク社）を用いた薄
層クロマトグラフィーにかけ、ヨウ素反応または253.7n
mの紫外線照射法によりおこなう。
シリカゲル（キーゼルゲルF254、メルク社）を用いた薄
層クロマトグラフィーにかけ、ヨウ素反応または253.7n
mの紫外線照射法によりおこなう。
実施例１ 種菌として、ヴァーティシリウム・スピーシーズ（Ve
rticillium sp.）SPC−15898を用い、第一種培地として
V8野菜ジュース（キャンベル社製）20ml/dlおよび炭酸
カルシウム0.3g/dl（pH6.4）の組成からなる培地を用い
た。種菌１白金耳を、50ml容太型試験管にいれた上記第
一種培地10mlに植菌し、25℃で５日間振盪培養した（第
一種培養）。
rticillium sp.）SPC−15898を用い、第一種培地として
V8野菜ジュース（キャンベル社製）20ml/dlおよび炭酸
カルシウム0.3g/dl（pH6.4）の組成からなる培地を用い
た。種菌１白金耳を、50ml容太型試験管にいれた上記第
一種培地10mlに植菌し、25℃で５日間振盪培養した（第
一種培養）。
第一種培養により得られた培養液（第一培養液）5ml
を300ml容三角フラスコに入った50mlの第二種培地に植
菌した。第二種培地の組成は第一種培地の組成と同じで
ある。第二種培養は25℃で２日間おこなった。この第二
種培養液50mlを2l容バッフル付き三角フラスコに入った
500mlの主発酵培地に植菌した。主発酵培地として、グ
ルコース2.0g/dl、ペプトン2.0g/dlマッシュポテトの素
（雪印乳業社製）2.0g/dl、リン酸二水素カリウム0.05g
/dlおよびリン酸マグネシウム0.05g/dl（pH6.0）の組成
からなる培地を用いた。主発酵培養は25℃で５日間振盪
しておこなわれた。
を300ml容三角フラスコに入った50mlの第二種培地に植
菌した。第二種培地の組成は第一種培地の組成と同じで
ある。第二種培養は25℃で２日間おこなった。この第二
種培養液50mlを2l容バッフル付き三角フラスコに入った
500mlの主発酵培地に植菌した。主発酵培地として、グ
ルコース2.0g/dl、ペプトン2.0g/dlマッシュポテトの素
（雪印乳業社製）2.0g/dl、リン酸二水素カリウム0.05g
/dlおよびリン酸マグネシウム0.05g/dl（pH6.0）の組成
からなる培地を用いた。主発酵培養は25℃で５日間振盪
しておこなわれた。
このようにして得られた発酵終了液5lを遠心分離（70
00rpm）した。分別した菌体に4lのメタノールを加え攪
拌後、４℃下、24時間放置した。
00rpm）した。分別した菌体に4lのメタノールを加え攪
拌後、４℃下、24時間放置した。
菌体を別して得られたメタノール抽出液約4lを減圧
濃縮して約150mlにし、ヘキサン500mlで５回抽出した。
ヘキサン層を濃縮乾固すると褐色の油状物質約2.0gが得
られた。この油状物を5mlのクロロホルムに溶解し、ク
ロロホルムを用いて充填した200mlのシリカゲルカラム
（ワコーゲル、和光純薬社製）の上端にのせクロロホル
ムで溶出した。溶出画分を10gずつ分取し、分取した順
番にフラクション番号を付与した。シリカゲル薄層を用
い各フラクションを調べた結果、フラクション番号58か
ら74にES−242−１が溶出されていることがわかった。
この画分を集め減圧下で濃縮乾固すると約250mgの淡黄
色粉末が得られた。この粉末1mlのヘキサン−アセトン
（9:1）混合溶液で洗浄した余分な溶媒を減圧留去する
と約26mgの粗粉末が得られた。この粗粉末を、1mlのメ
タノールに溶解し５℃で放置すると約１日間で約15mgの
淡黄色結晶が得られた。
濃縮して約150mlにし、ヘキサン500mlで５回抽出した。
ヘキサン層を濃縮乾固すると褐色の油状物質約2.0gが得
られた。この油状物を5mlのクロロホルムに溶解し、ク
ロロホルムを用いて充填した200mlのシリカゲルカラム
（ワコーゲル、和光純薬社製）の上端にのせクロロホル
ムで溶出した。溶出画分を10gずつ分取し、分取した順
番にフラクション番号を付与した。シリカゲル薄層を用
い各フラクションを調べた結果、フラクション番号58か
ら74にES−242−１が溶出されていることがわかった。
この画分を集め減圧下で濃縮乾固すると約250mgの淡黄
色粉末が得られた。この粉末1mlのヘキサン−アセトン
（9:1）混合溶液で洗浄した余分な溶媒を減圧留去する
と約26mgの粗粉末が得られた。この粗粉末を、1mlのメ
タノールに溶解し５℃で放置すると約１日間で約15mgの
淡黄色結晶が得られた。
実施例２ 種菌として、ヴァーティシリウム・スピーシーズ（Ve
rticillium sp.）SPC−15898を用い、第一種培地として
V8野菜ジュース（キャンベル社製）20ml/dl、炭酸カル
シウム0.3g/dl（pH6.4）の組成からなる培地を用いた。
rticillium sp.）SPC−15898を用い、第一種培地として
V8野菜ジュース（キャンベル社製）20ml/dl、炭酸カル
シウム0.3g/dl（pH6.4）の組成からなる培地を用いた。
種菌１白金耳を、250ml容三角フラスコにいれた上記
第一種培地40mlに植菌し、25℃で４日間振盪培養した
（第一種培養）。
第一種培地40mlに植菌し、25℃で４日間振盪培養した
（第一種培養）。
第一種培養により得られた培養液（第一培養液）30ml
を６つの2l容バッフル付三角フラスコに入った300mlの
第二種培地に各々植菌した。第二種培地の組成は第一種
培地の組成と同じである。第二種培養は25℃で２日間お
こなった。得られた第二種培養液1.8lを200l容培養タン
クにはいった100lの第三種培地に植菌した。第三種培地
の組成は第一種培地の組成と同じである。第三種培養は
25℃で２日間おこなった。得られた第三種培養液100lを
2kl容培養タンクに入った1000lの主発酵培地に植菌し
た。主発酵培地として、グルコース2.0g/dl、ペプトン
2.0g/dl、ポテトスターチ2.0g/dl、リン酸二水素カリウ
ム0.05g/dl、リン酸マグネシウム0.05g/l（pH6.0）の組
成からなる培地を用いた。主発酵培養は25℃で４日間攪
拌しておこなわれた。
を６つの2l容バッフル付三角フラスコに入った300mlの
第二種培地に各々植菌した。第二種培地の組成は第一種
培地の組成と同じである。第二種培養は25℃で２日間お
こなった。得られた第二種培養液1.8lを200l容培養タン
クにはいった100lの第三種培地に植菌した。第三種培地
の組成は第一種培地の組成と同じである。第三種培養は
25℃で２日間おこなった。得られた第三種培養液100lを
2kl容培養タンクに入った1000lの主発酵培地に植菌し
た。主発酵培地として、グルコース2.0g/dl、ペプトン
2.0g/dl、ポテトスターチ2.0g/dl、リン酸二水素カリウ
ム0.05g/dl、リン酸マグネシウム0.05g/l（pH6.0）の組
成からなる培地を用いた。主発酵培養は25℃で４日間攪
拌しておこなわれた。
このようにして得られた発酵終了液1000lにケイ藻土8
0kgを加え、ろ過した。分別した菌体600lのｎ−プロパ
ノールを加え攪拌後再びろ過した。ろ液を1200lの水で
希釈し、あらかじめ洗浄しておいたダイアイオンHP−20
（三菱化成社製）カラム（60l）に通塔後、200lの60％
メタノールでカラムを洗浄し、アセトン250lで溶出し
た。
0kgを加え、ろ過した。分別した菌体600lのｎ−プロパ
ノールを加え攪拌後再びろ過した。ろ液を1200lの水で
希釈し、あらかじめ洗浄しておいたダイアイオンHP−20
（三菱化成社製）カラム（60l）に通塔後、200lの60％
メタノールでカラムを洗浄し、アセトン250lで溶出し
た。
溶出画分を減圧濃縮し、20lのヘキサンで抽出した。
水層に更に10lの酢酸エチルを加え抽出した。
水層に更に10lの酢酸エチルを加え抽出した。
ヘキサン層を減圧乾固して得られた油状物を300mlの
クロロホルムに溶解し、クロロホルムを用いて充填した
2lのシリカゲルカラム（ワコーゲル、和光純薬社製）の
上端にのせクロロホルムで洗浄後クロロホルム−メタノ
ール（99:1）混合溶液で溶出した。この画分を集め減圧
下で濃縮乾固し、70％メタノールに溶かし同じ溶媒で平
衡化したYMC−ODS（ヤマムラ化学社製）カラム600mlの
上端にのせ、70％エタノールで溶出した。溶出の際に溶
出液の吸光度を分光光度計（日本分光社製:UVDEC−100
−III）を用い、242nmで検出すると大きなピークが得ら
れた。そのピークを分取すると、ES−242−２が133mg得
られた。
クロロホルムに溶解し、クロロホルムを用いて充填した
2lのシリカゲルカラム（ワコーゲル、和光純薬社製）の
上端にのせクロロホルムで洗浄後クロロホルム−メタノ
ール（99:1）混合溶液で溶出した。この画分を集め減圧
下で濃縮乾固し、70％メタノールに溶かし同じ溶媒で平
衡化したYMC−ODS（ヤマムラ化学社製）カラム600mlの
上端にのせ、70％エタノールで溶出した。溶出の際に溶
出液の吸光度を分光光度計（日本分光社製:UVDEC−100
−III）を用い、242nmで検出すると大きなピークが得ら
れた。そのピークを分取すると、ES−242−２が133mg得
られた。
酢酸エチル層を減圧濃縮したものの一部（37.1g）を
少量のクロロホルムに溶解し、クロロホルムを用いて充
填した2lのシリカゲルカラム（Art.7734、メルク社製）
の上端にのせ、クロロホルムで溶出した。この画分を集
め減圧下で濃縮乾固すると7gの油状物質が得られた。こ
の油状物質を少量のクロロホルムに溶解し、少量のケイ
藻土を加え、減圧乾固したものをヘキサン−アセトン
（9:1）混合溶液を用いて充填シリカゲルカラム（ワコ
ーゲル、和光純薬社製）500mlの上端にのせ、ヘキサン
−アセトン（8:2）混合溶液で溶出した。溶出液を17ml
ずつ分取するとフラクション番号135から176にES−242
−５が溶出された。この画分を集め、同様のシリカゲル
カラムクロマトグラフィーを用い更に２回同様の操作を
おこなったところ、ES−242−５が77mg得られた。
少量のクロロホルムに溶解し、クロロホルムを用いて充
填した2lのシリカゲルカラム（Art.7734、メルク社製）
の上端にのせ、クロロホルムで溶出した。この画分を集
め減圧下で濃縮乾固すると7gの油状物質が得られた。こ
の油状物質を少量のクロロホルムに溶解し、少量のケイ
藻土を加え、減圧乾固したものをヘキサン−アセトン
（9:1）混合溶液を用いて充填シリカゲルカラム（ワコ
ーゲル、和光純薬社製）500mlの上端にのせ、ヘキサン
−アセトン（8:2）混合溶液で溶出した。溶出液を17ml
ずつ分取するとフラクション番号135から176にES−242
−５が溶出された。この画分を集め、同様のシリカゲル
カラムクロマトグラフィーを用い更に２回同様の操作を
おこなったところ、ES−242−５が77mg得られた。
ヘキサン−アセトン（8:2）混合溶液で３回溶出した
後のシリカゲルカラムを酢酸エチルで溶出するとES−24
2−３およびES−242−４をふくむ画分が得られた。この
画分を減圧乾固し、少量のクロロホルムを加え溶解し、
ケイ藻土を加え再び減圧乾固した。これをヘキサン−ア
セトン（7:3）混合溶液を用いて充填したシリカゲルカ
ラム（Art.9385、メルク社製）300mlの上端にのせ、ヘ
キサン−アセトン（7:3）混合溶液で溶出した。溶出液
を17mlずつ分取すると、フラクション番号51から67にES
−242−３が、78から96にES−242−４が溶出された。フ
ラクション番号78から96を集め、減圧乾固し、アセトン
に溶解後、ヘキサンを滴下することによりES−242−４
の結晶が102mg得られた。フラクション番号51から67を
集め、減圧乾固した。これをヘキサン−アセトン（7:
3）混合溶液を用いて充填したシリカゲルカラム（Art.9
385）150mlの上端にのせ、ヘキサン−アセトン（7:3）
混合溶液で溶出した。溶出液を15mlずつ分取するとフラ
クション番号45から56にES−242−３が溶出された。こ
の画分を集め減圧乾固し、70％メタノールに溶解後、70
％エタノールであらかじめ平衡化しておいた逆層シリカ
ゲルカラム（YMC−ODS:ヤマムラ化学社製）20mlの上端
にのせ、70％メタノールで溶出した。溶出の際に溶出液
の吸光度を分光光度計（日本分光社製:UVDEC−100−II
I）を用い242nmで検出すると大きなピークが得られた。
そのピークが分取すると、ES−242−３が2.6mg得られ
た。
後のシリカゲルカラムを酢酸エチルで溶出するとES−24
2−３およびES−242−４をふくむ画分が得られた。この
画分を減圧乾固し、少量のクロロホルムを加え溶解し、
ケイ藻土を加え再び減圧乾固した。これをヘキサン−ア
セトン（7:3）混合溶液を用いて充填したシリカゲルカ
ラム（Art.9385、メルク社製）300mlの上端にのせ、ヘ
キサン−アセトン（7:3）混合溶液で溶出した。溶出液
を17mlずつ分取すると、フラクション番号51から67にES
−242−３が、78から96にES−242−４が溶出された。フ
ラクション番号78から96を集め、減圧乾固し、アセトン
に溶解後、ヘキサンを滴下することによりES−242−４
の結晶が102mg得られた。フラクション番号51から67を
集め、減圧乾固した。これをヘキサン−アセトン（7:
3）混合溶液を用いて充填したシリカゲルカラム（Art.9
385）150mlの上端にのせ、ヘキサン−アセトン（7:3）
混合溶液で溶出した。溶出液を15mlずつ分取するとフラ
クション番号45から56にES−242−３が溶出された。こ
の画分を集め減圧乾固し、70％メタノールに溶解後、70
％エタノールであらかじめ平衡化しておいた逆層シリカ
ゲルカラム（YMC−ODS:ヤマムラ化学社製）20mlの上端
にのせ、70％メタノールで溶出した。溶出の際に溶出液
の吸光度を分光光度計（日本分光社製:UVDEC−100−II
I）を用い242nmで検出すると大きなピークが得られた。
そのピークが分取すると、ES−242−３が2.6mg得られ
た。
発明の効果 本発明によれば、神経細胞保護作用およびＮ−メチル
−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を有する化合
物ES−242を提供することができる。
−Ｄ−アスパラギン酸レセプター拮抗作用を有する化合
物ES−242を提供することができる。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.6 識別記号 ＦＩ Ｃ１２Ｒ 1:645） (72)発明者 池田 淳一 静岡県三島市中126―１ (72)発明者 久保 和博 静岡県田方郡修善寺町柏久保532―６ 審査官 小暮 道明 (58)調査した分野(Int.Cl.6，ＤＢ名) C07D 311/92 C12P 17/00 - 17/18 ＣＡ（ＳＴＮ) ＲＥＧＩＳＴＲＹ（ＳＴＮ) ＢＩＯＳＩＳ（ＤＩＡＬＯＧ) ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】一般式（Ｉ） 〔式中、R1は水素、水酸基あるいはアセトキシ基を表わ
し、R2は水酸基あるいはアセトキシ基を表わす。〕で表
わされる化合物ES−242。
Priority Applications (4)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP2133322A JP2899062B2 (ja) | 1989-09-28 | 1990-05-23 | 化合物ｅｓ―２４２ |
| DE69012033T DE69012033T2 (de) | 1989-09-28 | 1990-09-18 | Naphthopyranverbindungen. |
| EP90310172A EP0420470B1 (en) | 1989-09-28 | 1990-09-18 | Naphthopyran compounds |
| US07/584,278 US5081264A (en) | 1989-09-28 | 1990-09-18 | Bioxanthracene derivatives |
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP1-253098 | 1989-09-28 | ||
| JP25309889 | 1989-09-28 | ||
| JP2133322A JP2899062B2 (ja) | 1989-09-28 | 1990-05-23 | 化合物ｅｓ―２４２ |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH03178974A JPH03178974A (ja) | 1991-08-02 |
| JP2899062B2 true JP2899062B2 (ja) | 1999-06-02 |
Family
ID=26467704
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2133322A Expired - Lifetime JP2899062B2 (ja) | 1989-09-28 | 1990-05-23 | 化合物ｅｓ―２４２ |
Country Status (4)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5081264A (ja) |
| EP (1) | EP0420470B1 (ja) |
| JP (1) | JP2899062B2 (ja) |
| DE (1) | DE69012033T2 (ja) |
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| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5602171A (en) * | 1995-06-07 | 1997-02-11 | Sugen Inc. | Methods of inhibiting phosphatase activity and treatment of disorders associated therewith using naphthopyrones and derivatives thereof |
| US9052304B2 (en) | 2009-03-13 | 2015-06-09 | Terrasep, Llc | Methods and apparatus for centrifugal liquid chromatography |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3892848A (en) * | 1974-01-31 | 1975-07-01 | Searle & Co | Microbiological production of biologically active 8,8{40 -bi-1h-naphtho{8 2,3-c{9 Pyrans and products |
| GB8600783D0 (en) * | 1986-01-14 | 1986-02-19 | Merck Sharp & Dohme | N-methyl-d-aspartate receptor antagonists |
-
1990
- 1990-05-23 JP JP2133322A patent/JP2899062B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-18 US US07/584,278 patent/US5081264A/en not_active Expired - Fee Related
- 1990-09-18 EP EP90310172A patent/EP0420470B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1990-09-18 DE DE69012033T patent/DE69012033T2/de not_active Expired - Fee Related
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0420470A2 (en) | 1991-04-03 |
| DE69012033T2 (de) | 1995-05-04 |
| EP0420470A3 (en) | 1991-07-10 |
| DE69012033D1 (de) | 1994-10-06 |
| JPH03178974A (ja) | 1991-08-02 |
| US5081264A (en) | 1992-01-14 |
| EP0420470B1 (en) | 1994-08-31 |
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