JP3147953B2 - 生体内物質測定法 - Google Patents
生体内物質測定法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は５−ヒドロキシクレアチ
ニンをメチルグアニジンに変換して測定することを特徴
とする５−ヒドロキシクレアチニンの定量法に関する。
ニンをメチルグアニジンに変換して測定することを特徴
とする５−ヒドロキシクレアチニンの定量法に関する。
【０００２】
【従来の技術】メチルグアニジンは腎不全患者の血中に
蓄積する主要な尿毒素の一つとして知られており、クレ
アチニンから活性酸素により生成するものと考えられて
いる。本発明者らは腎障害におけるクレアチニン代謝に
関して研究した結果、腎障害患者の血中及び尿中から新
規な化合物、５−ヒドロキシクレアチニンを単離同定し
た。この物質は健常人の血中にはなく、腎障害患者の血
中に特有にみられ、病態の進行に伴い産生昂進が認めら
れること、また５−ヒドロキシクレアチニンは種々の実
験結果より、クレアチニンからメチルグアニジンが産生
される際のメチルグアニジンの前駆体であることを見出
した。本発明はこれらの事実に基づき、血中又は尿中に
おける５−ヒドロキシクレアチニンを測定することによ
って、腎不全、尿毒症等各種腎障害の早期診断を可能と
したものである。
蓄積する主要な尿毒素の一つとして知られており、クレ
アチニンから活性酸素により生成するものと考えられて
いる。本発明者らは腎障害におけるクレアチニン代謝に
関して研究した結果、腎障害患者の血中及び尿中から新
規な化合物、５−ヒドロキシクレアチニンを単離同定し
た。この物質は健常人の血中にはなく、腎障害患者の血
中に特有にみられ、病態の進行に伴い産生昂進が認めら
れること、また５−ヒドロキシクレアチニンは種々の実
験結果より、クレアチニンからメチルグアニジンが産生
される際のメチルグアニジンの前駆体であることを見出
した。本発明はこれらの事実に基づき、血中又は尿中に
おける５−ヒドロキシクレアチニンを測定することによ
って、腎不全、尿毒症等各種腎障害の早期診断を可能と
したものである。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、腎機
能障害の検査法として有用な５−ヒドロキシクレアチニ
ンの定量法を提供することにある。
能障害の検査法として有用な５−ヒドロキシクレアチニ
ンの定量法を提供することにある。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明は５−ヒドロキシ
クレアチニンをメチルグアニジンに変換して測定するこ
とを特徴とする５−ヒドロキシクレアチニンの定量法で
ある。
クレアチニンをメチルグアニジンに変換して測定するこ
とを特徴とする５−ヒドロキシクレアチニンの定量法で
ある。
【０００５】グアニジノ化合物の測定法としては、ニン
ヒドリン、ベンゾイン、９，１０−フェナンスレンキノ
ン（ＰＱ試薬）などを用いる蛍光分析が繁用されてい
る。５−ヒドロキシクレアチニンは分子内にグアニジノ
骨格を有しているが、これら蛍光分析用試薬との反応性
は極めて低く微量分析が容易でない。そこで、上記蛍光
試薬に対してメチルグアニジンが５−ヒドロキシクレア
チニンよりも反応性が高いことから、５−ヒドロキシク
レアチニンをメチルグアニジンに変換して測定する本発
明定量法を見出した。
ヒドリン、ベンゾイン、９，１０−フェナンスレンキノ
ン（ＰＱ試薬）などを用いる蛍光分析が繁用されてい
る。５−ヒドロキシクレアチニンは分子内にグアニジノ
骨格を有しているが、これら蛍光分析用試薬との反応性
は極めて低く微量分析が容易でない。そこで、上記蛍光
試薬に対してメチルグアニジンが５−ヒドロキシクレア
チニンよりも反応性が高いことから、５−ヒドロキシク
レアチニンをメチルグアニジンに変換して測定する本発
明定量法を見出した。
【０００６】以下に本発明測定法について詳細に説明す
る。５−ヒドロキシクレアチニンをメチルグアニジンに
変換させる方法としては、一般に用いられている加水分
解等の方法が利用でき、例えば酸又はアルカリで処理す
る方法や酸又はアルカリの存在下或いは非存在下にて加
熱処理する方法などが挙げられる。また、酵素を用いて
５−ヒドロキシクレアチニンをメチルグアニジンに変換
させる方法も利用できる。
る。５−ヒドロキシクレアチニンをメチルグアニジンに
変換させる方法としては、一般に用いられている加水分
解等の方法が利用でき、例えば酸又はアルカリで処理す
る方法や酸又はアルカリの存在下或いは非存在下にて加
熱処理する方法などが挙げられる。また、酵素を用いて
５−ヒドロキシクレアチニンをメチルグアニジンに変換
させる方法も利用できる。
【０００７】上記メチルグアニジンへの変換処理につい
ては、陽イオン交換樹脂等による分画法や該樹脂を用い
た高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などによっ
て５−ヒドロキシクレアチニンを分離した後に加水分解
処理する方法が挙げられる。また、５−ヒドロキシクレ
アチニンを分離する前に加水分解処理を行い、その試料
中の全メチルグアニジンを測定することも可能である。
この場合、分離前のメチルグアニジン量を別途に求め、
全メチルグアニジン量よりこの量を引いて補正してもよ
いが、このような補正を行なわずとも、腎障害の病態の
進行に伴い産生昂進が認められる５−ヒドロキシクレア
チニン及びメチルグアニジンの両方を合わせて測定する
ことも、腎機能障害の診断として有用である。加水分解
の方法や条件によっては、試料中に存在する５−ヒドロ
キシクレアチニン以外の物質からメチルグアニジンが産
生されてくる場合を考慮に入れると、５−ヒドロキシク
レアチニンのみを選択的にメチルグアニジンに変換でき
るような加水分解等の方法及び条件を適宜設定するのが
好ましい。
ては、陽イオン交換樹脂等による分画法や該樹脂を用い
た高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）などによっ
て５−ヒドロキシクレアチニンを分離した後に加水分解
処理する方法が挙げられる。また、５−ヒドロキシクレ
アチニンを分離する前に加水分解処理を行い、その試料
中の全メチルグアニジンを測定することも可能である。
この場合、分離前のメチルグアニジン量を別途に求め、
全メチルグアニジン量よりこの量を引いて補正してもよ
いが、このような補正を行なわずとも、腎障害の病態の
進行に伴い産生昂進が認められる５−ヒドロキシクレア
チニン及びメチルグアニジンの両方を合わせて測定する
ことも、腎機能障害の診断として有用である。加水分解
の方法や条件によっては、試料中に存在する５−ヒドロ
キシクレアチニン以外の物質からメチルグアニジンが産
生されてくる場合を考慮に入れると、５−ヒドロキシク
レアチニンのみを選択的にメチルグアニジンに変換でき
るような加水分解等の方法及び条件を適宜設定するのが
好ましい。
【０００８】５−ヒドロキシクレアチニンを変換して得
られたメチルグアニジンを測定する方法としては、ニン
ヒドリン、ベンゾイン、ＰＱ試薬等の蛍光試薬と反応さ
せる蛍光分析法、メチルグアニジンアミジノヒドラーゼ
を用いる酵素法など通常行われているメチルグアニジン
の測定法が利用できる。例えば、ＰＱ試薬を用いる方法
においては、ＰＱ試薬はアルカリ性でグアニジノ化合物
と反応するため、アルカリの存在下にて５−ヒドロキシ
クレアチニンを加水分解処理してメチルグアニジンに変
換するのが、後のＰＱ試薬との反応において有利であり
手間を省くことができる。
られたメチルグアニジンを測定する方法としては、ニン
ヒドリン、ベンゾイン、ＰＱ試薬等の蛍光試薬と反応さ
せる蛍光分析法、メチルグアニジンアミジノヒドラーゼ
を用いる酵素法など通常行われているメチルグアニジン
の測定法が利用できる。例えば、ＰＱ試薬を用いる方法
においては、ＰＱ試薬はアルカリ性でグアニジノ化合物
と反応するため、アルカリの存在下にて５−ヒドロキシ
クレアチニンを加水分解処理してメチルグアニジンに変
換するのが、後のＰＱ試薬との反応において有利であり
手間を省くことができる。
【０００９】
実施例１． （１）血清及び尿の調製法 血清は早朝空腹時に採血し、４℃で遠心分離した後、上
清を凍結保存した。又、尿は２４時間尿を採取し、尿量
を記録後、凍結保存した。これら検体をトリクロロ酢酸
等により除蛋白処理してから以下の測定に供した。
清を凍結保存した。又、尿は２４時間尿を採取し、尿量
を記録後、凍結保存した。これら検体をトリクロロ酢酸
等により除蛋白処理してから以下の測定に供した。
【００１０】（２）ＨＰＬＣによる分画 クレアチニン、メチルグアニジン等のグアニジノ化合物
の測定は、ＨＰＬＣで分離した後、ＰＱ試薬と反応させ
蛍光を測定する山本らの方法に準じて行った。〔Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１６
２（１９７９），３２７−３４０〕カラムは陽イオン交
換樹脂（ＴＯＳＯ ＳＣＸ，ＳＨＩＭＡＺＵ ＩＳＣ−
０７／Ｓ１５０４等）を用い、溶離液の組成は東館らの
方法に準じた。〔分析化学，３３（１９８４），３６６
−３７０〕
の測定は、ＨＰＬＣで分離した後、ＰＱ試薬と反応させ
蛍光を測定する山本らの方法に準じて行った。〔Ｊｏｕ
ｒｎａｌ ｏｆ Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１６
２（１９７９），３２７−３４０〕カラムは陽イオン交
換樹脂（ＴＯＳＯ ＳＣＸ，ＳＨＩＭＡＺＵ ＩＳＣ−
０７／Ｓ１５０４等）を用い、溶離液の組成は東館らの
方法に準じた。〔分析化学，３３（１９８４），３６６
−３７０〕
【００１１】（３）蛍光試薬 ポストカラムにおける蛍光試薬としては、２Ｍ水酸化ナ
トリウム水溶液及びＰＱ試薬溶液（１ｌのジメチルホル
ムアミドに５００ｍｇのＰＱを溶解して調製）を用い
た。
トリウム水溶液及びＰＱ試薬溶液（１ｌのジメチルホル
ムアミドに５００ｍｇのＰＱを溶解して調製）を用い
た。
【００１２】（４）５−ヒドロキシクレアチニンの測定
系 ５−ヒドロキシクレアチニンをメチルグアニジンに変換
して測定する定量分析システムの流路構成図を第１図に
示す。第１反応コイルには長さが５ｍ、内径が０．５ｍ
ｍのステンレス管を用い、反応器を１２５℃に設定する
ことにより、定量分析系における発色が最大となった。
蛍光検出器の励起波長は３４０ｎｍに、蛍光波長は４９
５ｎｍに設定した。
系 ５−ヒドロキシクレアチニンをメチルグアニジンに変換
して測定する定量分析システムの流路構成図を第１図に
示す。第１反応コイルには長さが５ｍ、内径が０．５ｍ
ｍのステンレス管を用い、反応器を１２５℃に設定する
ことにより、定量分析系における発色が最大となった。
蛍光検出器の励起波長は３４０ｎｍに、蛍光波長は４９
５ｎｍに設定した。
【００１３】実施例２． （１）ホウ酸による５−ヒドロキシクレアチニンのメチ
ルグアニジンへの変換 １ｍｌの血清に１Ｍホウ酸−水酸化ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）を加え、１時間水浴（約５０℃）で加熱
した。この処理により５−ヒドロキシクレアチニンは完
全にメチルグアニジンに変換されることが確かめられ
た。尚、この条件下ではクレアチニン等からメチルグア
ニジンが生成することはなかった。
ルグアニジンへの変換 １ｍｌの血清に１Ｍホウ酸−水酸化ナトリウム緩衝液
（ｐＨ７．０）を加え、１時間水浴（約５０℃）で加熱
した。この処理により５−ヒドロキシクレアチニンは完
全にメチルグアニジンに変換されることが確かめられ
た。尚、この条件下ではクレアチニン等からメチルグア
ニジンが生成することはなかった。
【００１４】（２）陽イオン交換樹脂を用いたメチルグ
アニジンの分離 血清中にはアルギニン等のグアニジノ化合物が大量に含
まれており、微量分析のためには、これらとメチルグア
ニジンを分離する必要がある。メチルグアニジンは強塩
基性物質であり陽イオン交換樹脂に強く吸着するため、
試料を添加した陽イオン交換樹脂カラムを、先ずｐＨ９
〜１０の緩衝液（例えば、０．１Ｍ〜０．２Ｍリン酸緩
衝液）で洗浄し、グアニジン以外のクアニジノ化合物を
溶出させた。その後、１Ｎ〜２Ｎ水酸化ナトリウム溶液
等の強塩基性溶液によって吸着したメチルグアニジン等
を溶出させた。
アニジンの分離 血清中にはアルギニン等のグアニジノ化合物が大量に含
まれており、微量分析のためには、これらとメチルグア
ニジンを分離する必要がある。メチルグアニジンは強塩
基性物質であり陽イオン交換樹脂に強く吸着するため、
試料を添加した陽イオン交換樹脂カラムを、先ずｐＨ９
〜１０の緩衝液（例えば、０．１Ｍ〜０．２Ｍリン酸緩
衝液）で洗浄し、グアニジン以外のクアニジノ化合物を
溶出させた。その後、１Ｎ〜２Ｎ水酸化ナトリウム溶液
等の強塩基性溶液によって吸着したメチルグアニジン等
を溶出させた。
【００１５】ホウ酸処理をしなかったときのメチルグア
ニジン量との差から５−ヒドロキシクレアチニンの量を
求めることができる。またグアニジンが混在していても
それが大量で無い限り問題はない。グアニジンも尿毒素
の一つと考えられており、５−ヒドロキシクレアチニ
ン、メチルグアニジン及びグアニジンの総和を腎不全の
指標として設定することもでき、この場合は特にホウ酸
無処理時との差を求める必要はない。
ニジン量との差から５−ヒドロキシクレアチニンの量を
求めることができる。またグアニジンが混在していても
それが大量で無い限り問題はない。グアニジンも尿毒素
の一つと考えられており、５−ヒドロキシクレアチニ
ン、メチルグアニジン及びグアニジンの総和を腎不全の
指標として設定することもでき、この場合は特にホウ酸
無処理時との差を求める必要はない。
【００１６】（３）メチルグアニジンの定量法 血清をホウ酸による変換処理を行った後、トリクロロ酢
酸を用いて除蛋白処理した。次いで、陽イオン交換樹脂
を用いた分離操作を行い、得られた試料中のメチルグア
ニジン量を、ニンヒドリン、ベンゾイン、ＰＱ試薬等の
蛍光試薬を用いて測定した。
酸を用いて除蛋白処理した。次いで、陽イオン交換樹脂
を用いた分離操作を行い、得られた試料中のメチルグア
ニジン量を、ニンヒドリン、ベンゾイン、ＰＱ試薬等の
蛍光試薬を用いて測定した。
【００１７】ａ）ニンヒドリン法 試料液２ｍｌ（１Ｎ水酸化ナトリウム溶液）に０．５％
ニンヒドリン水溶液を加え攪拌した。１０分間反応させ
た後、３９０ｎｍの励起光を用い、４９５ｎｍの蛍光を
測定した。
ニンヒドリン水溶液を加え攪拌した。１０分間反応させ
た後、３９０ｎｍの励起光を用い、４９５ｎｍの蛍光を
測定した。
【００１８】ｂ）ベンゾイン法 試料液１ｍｌ（２Ｎ水酸化ナトリウム溶液）に０．５ｍ
ｌの４ｍＭベンゾイン／メチルセロソルブ溶液と０．５
ｍｌの０．１Ｍβ−メルカプトエタノール／０．２Ｍ亜
硫酸ナトリウム溶液を加え混和した後、１００℃で１０
分間加熱した。冷却してから１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ
９．２）と４Ｎ塩酸の等量混合液を１ｍｌ加えた後、３
２７ｎｍの励起光を用い、４２７ｎｍの蛍光を測定し
た。
ｌの４ｍＭベンゾイン／メチルセロソルブ溶液と０．５
ｍｌの０．１Ｍβ−メルカプトエタノール／０．２Ｍ亜
硫酸ナトリウム溶液を加え混和した後、１００℃で１０
分間加熱した。冷却してから１Ｍトリス緩衝液（ｐＨ
９．２）と４Ｎ塩酸の等量混合液を１ｍｌ加えた後、３
２７ｎｍの励起光を用い、４２７ｎｍの蛍光を測定し
た。
【００１９】ｃ）ＰＱ法 試料液１ｍｌ（１Ｎ水酸化ナトリウム溶液）に０．１ｍ
ＭＰＱ−ジメチルホルムアミド溶液１ｍｌを加え混和し
た後、室温で４０分間反応させた。濃塩酸１ｍｌ及び水
２．５ｍｌを加えて混ぜ合わせた後、３１０ｎｍの励起
光を用い、３９０ｎｍの蛍光を測定した。
ＭＰＱ−ジメチルホルムアミド溶液１ｍｌを加え混和し
た後、室温で４０分間反応させた。濃塩酸１ｍｌ及び水
２．５ｍｌを加えて混ぜ合わせた後、３１０ｎｍの励起
光を用い、３９０ｎｍの蛍光を測定した。
【００２０】
【発明の効果】５−ヒドロキシクレアチニンのニンヒド
リン、ベンゾイン、ＰＱ試薬等の蛍光試薬に対する反応
性が極めて低いため、微量分析は困難であったが、本発
明方法に従ってメチルグアニジンに変換した後、これら
蛍光試薬と反応させることにより、高感度で定量分析で
きることが明らかになった。本発明のＨＰＬＣや陽イオ
ン交換樹脂を用いた５−ヒドロキシクレアチニン定量分
析系は再現性も優れ、実際の生体試料の分析に十分適用
可能であった。例えば、ＨＰＬＣを用いた本発明測定法
の定量性を検討した結果、１．５ｎｍｏｌまで原点を通
る直線が得られることを確認できた。
リン、ベンゾイン、ＰＱ試薬等の蛍光試薬に対する反応
性が極めて低いため、微量分析は困難であったが、本発
明方法に従ってメチルグアニジンに変換した後、これら
蛍光試薬と反応させることにより、高感度で定量分析で
きることが明らかになった。本発明のＨＰＬＣや陽イオ
ン交換樹脂を用いた５−ヒドロキシクレアチニン定量分
析系は再現性も優れ、実際の生体試料の分析に十分適用
可能であった。例えば、ＨＰＬＣを用いた本発明測定法
の定量性を検討した結果、１．５ｎｍｏｌまで原点を通
る直線が得られることを確認できた。
【００２１】陽イオン交換樹脂を用いた実施例２の方法
では、ニンヒドリン法、ベイゾイン法、ＰＱ法など種々
の蛍光試薬による測定法について比較したが、各検出方
法において操作性、蛍光の安定性、選択性等の点で少々
差があったがいずれも充分利用可能であり、血清中の５
−ヒドロキシクレアチニンを検出限界０．５〜１ｎｍｏ
ｌ／ｍｌの感度で測定できることが明らかになった。こ
の方法の再現性は高く、且つＨＰＬＣを用いた系の測定
値と良好な相関が認められた。
では、ニンヒドリン法、ベイゾイン法、ＰＱ法など種々
の蛍光試薬による測定法について比較したが、各検出方
法において操作性、蛍光の安定性、選択性等の点で少々
差があったがいずれも充分利用可能であり、血清中の５
−ヒドロキシクレアチニンを検出限界０．５〜１ｎｍｏ
ｌ／ｍｌの感度で測定できることが明らかになった。こ
の方法の再現性は高く、且つＨＰＬＣを用いた系の測定
値と良好な相関が認められた。
【００２２】糖尿病性腎症及び慢性腎炎、ループス腎
炎、腎硬化症等の非糖尿病性腎疾患の患者の血中及び尿
中のクレアチニン、メチルグアニジン並びに５−ヒドロ
キシクレアチニンの各値を本発明方法により測定した。
その結果、これら３物質の血清中の値は各々正の相関関
係が見られた。一例として糖尿病性腎症における血清ク
レアチニン値と血清５−ヒドロキシクレアチニン値との
相関関係を第２図に示す。血清５−ヒドロキシクレアチ
ニン値は血清クレアチニン値と強い相関を示すことよ
り、本発明５−ヒドロキシクレアチニン定量法は腎機能
障害の診断に有用であることが示された。
炎、腎硬化症等の非糖尿病性腎疾患の患者の血中及び尿
中のクレアチニン、メチルグアニジン並びに５−ヒドロ
キシクレアチニンの各値を本発明方法により測定した。
その結果、これら３物質の血清中の値は各々正の相関関
係が見られた。一例として糖尿病性腎症における血清ク
レアチニン値と血清５−ヒドロキシクレアチニン値との
相関関係を第２図に示す。血清５−ヒドロキシクレアチ
ニン値は血清クレアチニン値と強い相関を示すことよ
り、本発明５−ヒドロキシクレアチニン定量法は腎機能
障害の診断に有用であることが示された。
【００２３】メチルグアニジンは血清中のクレアチニン
値が約２ｍｇ／ｄｌ以上でなければ検出されないのに対
して、５−ヒドロキシクレアチニンはクレアチニン値が
２ｍｇ／ｄｌより低い場合でも検出されるため、症状が
軽い初期の腎疾患の早期発見、早期治療を可能とするも
のである。また腎不全患者において、５−ヒドロキシク
レアチニンはメチルグアニジンの１０倍程度含有されて
おり、例えばメチルグアニジン含量が検出限界の１０分
の１の血清でも５−ヒドロキシクレアチニンを検出する
ことができ、本発明測定法は初期の腎機能障害の診断に
特に有用なものである。
値が約２ｍｇ／ｄｌ以上でなければ検出されないのに対
して、５−ヒドロキシクレアチニンはクレアチニン値が
２ｍｇ／ｄｌより低い場合でも検出されるため、症状が
軽い初期の腎疾患の早期発見、早期治療を可能とするも
のである。また腎不全患者において、５−ヒドロキシク
レアチニンはメチルグアニジンの１０倍程度含有されて
おり、例えばメチルグアニジン含量が検出限界の１０分
の１の血清でも５−ヒドロキシクレアチニンを検出する
ことができ、本発明測定法は初期の腎機能障害の診断に
特に有用なものである。
【００２４】腎機能が正常であれば５−ヒドロキシクレ
アチニンは尿に速やかに排泄されるため血中には蓄積せ
ず、健常人血中では検出されない。しかし、腎機能の低
下とともに５−ヒドロキシクレアチニンの血中での蓄積
が増加する。また、腎機能障害が重症になるにつれて尿
毒素でありメチルグアニジンの前駆体である５−ヒドロ
キシクレアチニンの総量は増加し、それに伴い体液中並
びに尿中の５−ヒドロキシクレアチニン量が増加するも
のと考えられる。従って、血液等の体液中や尿中の５−
ヒドロキシクレアチニン値の測定は、腎機能障害を診断
するうえで非常に重要である。
アチニンは尿に速やかに排泄されるため血中には蓄積せ
ず、健常人血中では検出されない。しかし、腎機能の低
下とともに５−ヒドロキシクレアチニンの血中での蓄積
が増加する。また、腎機能障害が重症になるにつれて尿
毒素でありメチルグアニジンの前駆体である５−ヒドロ
キシクレアチニンの総量は増加し、それに伴い体液中並
びに尿中の５−ヒドロキシクレアチニン量が増加するも
のと考えられる。従って、血液等の体液中や尿中の５−
ヒドロキシクレアチニン値の測定は、腎機能障害を診断
するうえで非常に重要である。
【００２５】以上の述べたように、５−ヒドロキシクレ
アチニンをメチルグアニジンに変換して測定する本発明
定量法は、蛍光試薬との反応性が極めて低い５−ヒドロ
キシクレアチニンの微量分析を可能としたものである。
特に血中の５−ヒドロキシクレアチニン値を測定するこ
とは腎機能障害の早期診断に有用であり、本発明測定法
は腎不全、尿毒症、慢性腎炎、尿路閉塞等の各種腎障害
を早期診断可能な検査法として有用性が高い。
アチニンをメチルグアニジンに変換して測定する本発明
定量法は、蛍光試薬との反応性が極めて低い５−ヒドロ
キシクレアチニンの微量分析を可能としたものである。
特に血中の５−ヒドロキシクレアチニン値を測定するこ
とは腎機能障害の早期診断に有用であり、本発明測定法
は腎不全、尿毒症、慢性腎炎、尿路閉塞等の各種腎障害
を早期診断可能な検査法として有用性が高い。
【図１】５−ヒドロキシクレアチニンのＨＰＬＣを用い
た定量分析システムの流路構成図である。
た定量分析システムの流路構成図である。
【図２】糖尿病性腎症における血清クレアチニン値と血
清５−ヒドロキシクレアチニン値を測定し、その相関関
係を調べた結果である。
清５−ヒドロキシクレアチニン値を測定し、その相関関
係を調べた結果である。
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 家永 和治 兵庫県加東郡社町木梨字川北山442番１ 日本臓器製薬株式会社 生物活性科学 研究所内 (56)参考文献 特許2948649（ＪＰ，Ｂ２) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/70 ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ)
Claims (1)
- 【請求項１】 ５−ヒドロキシクレアチニンをホウ酸に
よりメチルグアニジンに変換して測定することを特徴と
する５−ヒドロキシクレアチニンの定量法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP30520091A JP3147953B2 (ja) | 1991-10-23 | 1991-10-23 | 生体内物質測定法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
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