JP3216203B2 - カテコールアミンの測定試薬及びそれを用いるカテコールアミンの定量方法 - Google Patents
カテコールアミンの測定試薬及びそれを用いるカテコールアミンの定量方法Info
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】本発明は、アリールアミノメチル
誘導体及び新規な発蛍光基質のピロロベンズオキサゾー
ル誘導体、並びに該化合物を用いるカテコールアミンの
定量方法に関する。
誘導体及び新規な発蛍光基質のピロロベンズオキサゾー
ル誘導体、並びに該化合物を用いるカテコールアミンの
定量方法に関する。
【０００２】
【従来の技術】カテコールアミンは３，４−ジヒドロキ
シフェニル骨格をもつ生体アミンの総称で生理活性のあ
るものとしてドーパミン、ノルエピネフリン及びエピネ
フリンが知られている。これらは神経伝達物質又は副腎
髄質ホルモンとして生体の広範囲な調節機構に関与して
いる。従ってカテコールアミンの分析は内分泌系や神経
系の研究において欠かすことができない。しかしなが
ら、組織中のカテコールアミン含量は極めて低いため、
感度の高い分析法が要求されている。最近、使い勝手が
よく高感度を特徴とする蛍光分析法がカテコールアミン
の微量分析法として注目を集め、臨床検査の一つとして
カテコールアミンの分析も蛍光法により行われるように
なっている。なかでも、本発明者の開発による１，２−
ジフェニルエチレンジアミンを蛍光誘導体化試薬に用い
るカテコールアミンの蛍光定量法は従来の蛍光分析法に
比較して高感度かつ簡便なカテコールアミンの分析方法
として知られている（特開昭第６０−２０５２６２号公
報）。
シフェニル骨格をもつ生体アミンの総称で生理活性のあ
るものとしてドーパミン、ノルエピネフリン及びエピネ
フリンが知られている。これらは神経伝達物質又は副腎
髄質ホルモンとして生体の広範囲な調節機構に関与して
いる。従ってカテコールアミンの分析は内分泌系や神経
系の研究において欠かすことができない。しかしなが
ら、組織中のカテコールアミン含量は極めて低いため、
感度の高い分析法が要求されている。最近、使い勝手が
よく高感度を特徴とする蛍光分析法がカテコールアミン
の微量分析法として注目を集め、臨床検査の一つとして
カテコールアミンの分析も蛍光法により行われるように
なっている。なかでも、本発明者の開発による１，２−
ジフェニルエチレンジアミンを蛍光誘導体化試薬に用い
るカテコールアミンの蛍光定量法は従来の蛍光分析法に
比較して高感度かつ簡便なカテコールアミンの分析方法
として知られている（特開昭第６０−２０５２６２号公
報）。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】１，２−ジフェニルエ
チレンジアミンをカテコールアミンの蛍光誘導体化試薬
に用いる上記従来技術は、反応時間短縮のため、触媒に
モリブデン酸アンモニウムなどの金属酸化物イオンを用
いた場合、その濃度によっては、蛍光反応後反応液が白
濁し白色の物質が析出する可能性があり、カテコールア
ミン定量の際、大きな問題となっていた。また、蛍光誘
導体化試薬の１，２−ジフェニルエチレンジアミンはそ
の合成過程がやや複雑なため、試薬コストが高かった。
チレンジアミンをカテコールアミンの蛍光誘導体化試薬
に用いる上記従来技術は、反応時間短縮のため、触媒に
モリブデン酸アンモニウムなどの金属酸化物イオンを用
いた場合、その濃度によっては、蛍光反応後反応液が白
濁し白色の物質が析出する可能性があり、カテコールア
ミン定量の際、大きな問題となっていた。また、蛍光誘
導体化試薬の１，２−ジフェニルエチレンジアミンはそ
の合成過程がやや複雑なため、試薬コストが高かった。
【０００４】
【課題を解決するための手段】本発明者は、更に高感度
で試薬コストの安価なカテコールアミンの発蛍光試薬の
開発を目的として１，２−ジフェニルエチレンジアミン
とカテコールアミンの蛍光反応機構やその反応成績体の
構造決定を行い鋭意詳細な実験を重ねた結果、１，２−
ジフェニルエチレンジアミンを更にシンプルにデザイン
化したアリールアミノメチル誘導体を新しいカテコーア
ミンの蛍光誘導体化試薬として見出し、本発明を完成し
た。
で試薬コストの安価なカテコールアミンの発蛍光試薬の
開発を目的として１，２−ジフェニルエチレンジアミン
とカテコールアミンの蛍光反応機構やその反応成績体の
構造決定を行い鋭意詳細な実験を重ねた結果、１，２−
ジフェニルエチレンジアミンを更にシンプルにデザイン
化したアリールアミノメチル誘導体を新しいカテコーア
ミンの蛍光誘導体化試薬として見出し、本発明を完成し
た。
【０００５】すなわち、本発明は、一般式［Ｉ］で示さ
れるカテコールアミンの特異的蛍光誘導体化試薬である
アリールアミノメチル誘導体、
れるカテコールアミンの特異的蛍光誘導体化試薬である
アリールアミノメチル誘導体、
【０００６】
【化３】
【０００７】（式中、Ａｒはアリール基を示し、Ｌは脱
離基を示す）アリールアミノメチル誘導体とカテコール
アミンとの蛍光反応成績体である一般式［ＩＩ］で示さ
れる発蛍光基質のピロロベンズオキサゾール誘導体、
離基を示す）アリールアミノメチル誘導体とカテコール
アミンとの蛍光反応成績体である一般式［ＩＩ］で示さ
れる発蛍光基質のピロロベンズオキサゾール誘導体、
【０００８】
【化４】
【０００９】（式中、Ａｒはアリール基を示し、Ｒ1 お
よびＲ2 は同一または異なって水素原子、ヒドロキシル
基またはメチル基を示す）及び、一般式［Ｉ］で示され
るアリールアミノメチル誘導体を蛍光誘導体化試薬とし
て用いるカテコールアミンの定量方法を提供するもので
ある。
よびＲ2 は同一または異なって水素原子、ヒドロキシル
基またはメチル基を示す）及び、一般式［Ｉ］で示され
るアリールアミノメチル誘導体を蛍光誘導体化試薬とし
て用いるカテコールアミンの定量方法を提供するもので
ある。
【００１０】
【作用】以下、本発明を詳細に説明する。
【００１１】一般式［Ｉ］で示される本発明のアリール
アミノメチル誘導体においてＡｒで示されるアリール基
としては、フェニル基、置換フェニル基、ナフチル基、
置換ナフチル基（例えばメチルナフチル基、メトキシル
ナフチル基など）、ピリジル基、フリル基又はビフェニ
リル基などがあげられ、置換フェニル基の置換基として
は例えば２−，３−又は４−位メトキシル基、エトキシ
ル基、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、クロル
基、フルオロ基、ジメチルアミノ基、シアノ基、ニトロ
基、３，４−位ジメトキシル基、ジクロル基、メチレン
ジオキシル基などが挙げられる。
アミノメチル誘導体においてＡｒで示されるアリール基
としては、フェニル基、置換フェニル基、ナフチル基、
置換ナフチル基（例えばメチルナフチル基、メトキシル
ナフチル基など）、ピリジル基、フリル基又はビフェニ
リル基などがあげられ、置換フェニル基の置換基として
は例えば２−，３−又は４−位メトキシル基、エトキシ
ル基、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、クロル
基、フルオロ基、ジメチルアミノ基、シアノ基、ニトロ
基、３，４−位ジメトキシル基、ジクロル基、メチレン
ジオキシル基などが挙げられる。
【００１２】一般式［Ｉ］で示される本発明のアリール
アミノメチル誘導体においてＬで示される脱離基として
は、水素原子、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基（例え
ば、クロル基、フルオロ基、ブロム基など）、置換アシ
ル基、置換スルホニル基、ヒドロキシル基、チオール基
又はアリールアミノメチル基などが挙げられ、置換アシ
ル基及び置換スルホニル基の置換基としては、アルキル
基（例えばメチル基、エチル基など）、アミノ基、アミ
ノ置換基（例えばカルボキシルアルキル基、アルコキシ
カルボニル基、アミノアルキルカルボニル基、アミノア
リールスルホニル基、スルホアリール基、アミノカルボ
キシアリール基又はアミノアルコキシカルボニルアルキ
ル基など）が例示される。アリールアミノメチル基のア
リール基としては、フェニル基、置換フェニル基、ナフ
チル基、置換ナフチル基（例えばメチルナフチル基、メ
トキシルナフチル基など）、ピリジル基、フリル基又は
ビフェニリル基などが挙げられ、置換フェニル基の置換
基としては、２−，３−又は４−位メトキシル基、エト
キシル基、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、クロ
ル基、フルオロ基、ジメチルアミノ基、シアノ基、ニト
ロ基、３，４−位ジメトキシル基、ジクロル基、メチレ
ンジオキシル基などが挙げられる。
アミノメチル誘導体においてＬで示される脱離基として
は、水素原子、シアノ基、ニトロ基、ハロゲン基（例え
ば、クロル基、フルオロ基、ブロム基など）、置換アシ
ル基、置換スルホニル基、ヒドロキシル基、チオール基
又はアリールアミノメチル基などが挙げられ、置換アシ
ル基及び置換スルホニル基の置換基としては、アルキル
基（例えばメチル基、エチル基など）、アミノ基、アミ
ノ置換基（例えばカルボキシルアルキル基、アルコキシ
カルボニル基、アミノアルキルカルボニル基、アミノア
リールスルホニル基、スルホアリール基、アミノカルボ
キシアリール基又はアミノアルコキシカルボニルアルキ
ル基など）が例示される。アリールアミノメチル基のア
リール基としては、フェニル基、置換フェニル基、ナフ
チル基、置換ナフチル基（例えばメチルナフチル基、メ
トキシルナフチル基など）、ピリジル基、フリル基又は
ビフェニリル基などが挙げられ、置換フェニル基の置換
基としては、２−，３−又は４−位メトキシル基、エト
キシル基、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、クロ
ル基、フルオロ基、ジメチルアミノ基、シアノ基、ニト
ロ基、３，４−位ジメトキシル基、ジクロル基、メチレ
ンジオキシル基などが挙げられる。
【００１３】一般式［ＩＩ］で示される本発明のピロロ
ベンズオキサゾール誘導体においてＡｒで示されるアリ
ール基としては、フェニル基、置換フェニル基、ナフチ
ル基、置換ナフチル基（例えばメチルナフチル基、メト
キシルナフチル基など）、ピリジル基、フリル基又はビ
フェニリル基などが挙げられ、置換フェニル基の置換基
としては、２−，３−又は４−位メトキシル基、エトキ
シル基、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、クロル
基、フルオロ基、ジメチルアミノ基、シアノ基、ニトロ
基、３，４−位ジメトキシル基、ジクロル基、メチレン
ジオキシル基などが挙げられる。また、式中のＲ1 及び
Ｒ2 としては、水素原子、ヒドロキシル基、メチル基な
どが例示される。
ベンズオキサゾール誘導体においてＡｒで示されるアリ
ール基としては、フェニル基、置換フェニル基、ナフチ
ル基、置換ナフチル基（例えばメチルナフチル基、メト
キシルナフチル基など）、ピリジル基、フリル基又はビ
フェニリル基などが挙げられ、置換フェニル基の置換基
としては、２−，３−又は４−位メトキシル基、エトキ
シル基、ヒドロキシル基、メチル基、エチル基、クロル
基、フルオロ基、ジメチルアミノ基、シアノ基、ニトロ
基、３，４−位ジメトキシル基、ジクロル基、メチレン
ジオキシル基などが挙げられる。また、式中のＲ1 及び
Ｒ2 としては、水素原子、ヒドロキシル基、メチル基な
どが例示される。
【００１４】アリールアミノメチル誘導体とカテコール
アミンとの反応は従来の１，２−ジフェニルエチレンジ
アミン反応の場合と同様に、触媒、酸化剤、反応促進剤
の共存下、ｐＨ４−９において速やかに進行する。その
触媒としては、モリブデン酸アンモニウム、タングステ
ン酸塩、ニオブ酸塩又はクロム酸塩などの金属酸化物イ
オンが有効であり、好ましくはモリブデン酸アンモニウ
ムが挙げられる。その酸化剤としては、ＫＩＯ4 ，Ｎａ
ＩＯ4 ，ＮａＩＯ3 ，ＫＩＯ3 ，Ｋ3 Ｆｅ（ＣＮ）6 、
Ｈ2 ０2 などが効果があり、好ましくはＫＩＯ4 が挙げ
られる。その反応促進剤としては、メタノール、エタノ
ール、アセトニトリル、２−プロパノールなどの水溶性
有機溶媒が有効で、好ましくはメタノール、エタノール
などが例示される。
アミンとの反応は従来の１，２−ジフェニルエチレンジ
アミン反応の場合と同様に、触媒、酸化剤、反応促進剤
の共存下、ｐＨ４−９において速やかに進行する。その
触媒としては、モリブデン酸アンモニウム、タングステ
ン酸塩、ニオブ酸塩又はクロム酸塩などの金属酸化物イ
オンが有効であり、好ましくはモリブデン酸アンモニウ
ムが挙げられる。その酸化剤としては、ＫＩＯ4 ，Ｎａ
ＩＯ4 ，ＮａＩＯ3 ，ＫＩＯ3 ，Ｋ3 Ｆｅ（ＣＮ）6 、
Ｈ2 ０2 などが効果があり、好ましくはＫＩＯ4 が挙げ
られる。その反応促進剤としては、メタノール、エタノ
ール、アセトニトリル、２−プロパノールなどの水溶性
有機溶媒が有効で、好ましくはメタノール、エタノール
などが例示される。
【００１５】本発明によるカテコールアミンとアリール
アミノメチル誘導体との蛍光反応機構は図１に示すごと
くであり、その反応成績体は１，２−ジフェニルエチレ
ンジアミンとカテコールアミンとの反応成績体と全く同
じ構造を有するピロロベンズオキサゾール誘導体であ
る。本誘導体は非常に強い蛍光基質であり、極めて安定
である。
アミノメチル誘導体との蛍光反応機構は図１に示すごと
くであり、その反応成績体は１，２−ジフェニルエチレ
ンジアミンとカテコールアミンとの反応成績体と全く同
じ構造を有するピロロベンズオキサゾール誘導体であ
る。本誘導体は非常に強い蛍光基質であり、極めて安定
である。
【００１６】
【図１】
【００１７】本蛍光分析法は用手法はもとより、高速液
体クロマトグラフィーのプレラベル法やポストラベル法
にも応用可能な優れた方法である。
体クロマトグラフィーのプレラベル法やポストラベル法
にも応用可能な優れた方法である。
【００１８】
【実施例】以下、本発明を実施例により説明するが、本
発明はこれらにのみ限定されるものではない。
発明はこれらにのみ限定されるものではない。
【００１９】実施例で使用したカテコールアミンはノル
エピネフリン（ＮＥ）、エピネフリン（Ｅ）、ドーパミ
ン（ＤＡ）及び内標準物質に用いられるイソプロテレノ
ール（ＩＰ）であり、蛍光誘導体化試薬にはアリールア
ミノメチル誘導体のモデル化合物として２−フェニルグ
リシノニトリル（α−アミノベンジルシアナイド）（Ｐ
ＧＮ）を用い、条件を検討した。生体試料などのような
多成分が混在する場合には高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）が分離分析法として有力である。
エピネフリン（ＮＥ）、エピネフリン（Ｅ）、ドーパミ
ン（ＤＡ）及び内標準物質に用いられるイソプロテレノ
ール（ＩＰ）であり、蛍光誘導体化試薬にはアリールア
ミノメチル誘導体のモデル化合物として２−フェニルグ
リシノニトリル（α−アミノベンジルシアナイド）（Ｐ
ＧＮ）を用い、条件を検討した。生体試料などのような
多成分が混在する場合には高速液体クロマトグラフィー
（ＨＰＬＣ）が分離分析法として有力である。
【００２０】図２に本発明で考案したＰＧＮを用いるカ
テコールアミンのプレカラム蛍光誘導体化ＨＰＬＣの基
準操作法を示す。
テコールアミンのプレカラム蛍光誘導体化ＨＰＬＣの基
準操作法を示す。
【００２１】
【図２】
【００２２】蛍光誘導体化試薬とともに共存させる反応
補助剤としてはカテコールアミンに対し最も良好な結果
を与えたモリブデン酸アンモニウム（触媒）、ＫＩＯ4
（酸化剤）、メタノール（反応促進剤）を用いた。
補助剤としてはカテコールアミンに対し最も良好な結果
を与えたモリブデン酸アンモニウム（触媒）、ＫＩＯ4
（酸化剤）、メタノール（反応促進剤）を用いた。
【００２３】図３は図２の基準操作法に従って、モリブ
デン酸アンモニウム濃度を０ｍＭから３０ｍＭまで変化
させたときに得られた蛍光ピーク高さを縦軸に示したも
のである。各カテコールアミンともに、モリブデン酸ア
ンモニウムの添加により、蛍光ピーク高さが増大してい
ることが明らかである。モリブデン酸アンモニウムの濃
度として好ましくは１０−３０ｍＭであった。触媒とし
ては、モリブデン酸アンモニウム以外に、タングステン
酸塩、ニオブ酸塩及びクロム酸塩などの金属酸化物イオ
ンも有効であった。
デン酸アンモニウム濃度を０ｍＭから３０ｍＭまで変化
させたときに得られた蛍光ピーク高さを縦軸に示したも
のである。各カテコールアミンともに、モリブデン酸ア
ンモニウムの添加により、蛍光ピーク高さが増大してい
ることが明らかである。モリブデン酸アンモニウムの濃
度として好ましくは１０−３０ｍＭであった。触媒とし
ては、モリブデン酸アンモニウム以外に、タングステン
酸塩、ニオブ酸塩及びクロム酸塩などの金属酸化物イオ
ンも有効であった。
【００２４】
【図３】
【００２５】図４はＫＩＯ4 濃度が蛍光ピーク高さに与
える影響を示したものである。全てのカテコールアミン
に対してＫＩＯ4 が蛍光ピーク高さを増大させているこ
とが明らかである。ＫＩＯ4 の濃度として好ましくは
７．５−１５ｍＭであった。その他検討した酸化剤とし
ては、ＮａＩＯ4 ，ＫＩＯ3 ，ＮａＩＯ3 ，Ｋ3 Ｆｅ
（ＣＮ）6 及びＨ2 Ｏ2 なども有効であった。しかし、
Ｋ3 Ｆｅ（ＣＮ）6 については、５０ｍＭ以上では反応
後白濁を生じた。
える影響を示したものである。全てのカテコールアミン
に対してＫＩＯ4 が蛍光ピーク高さを増大させているこ
とが明らかである。ＫＩＯ4 の濃度として好ましくは
７．５−１５ｍＭであった。その他検討した酸化剤とし
ては、ＮａＩＯ4 ，ＫＩＯ3 ，ＮａＩＯ3 ，Ｋ3 Ｆｅ
（ＣＮ）6 及びＨ2 Ｏ2 なども有効であった。しかし、
Ｋ3 Ｆｅ（ＣＮ）6 については、５０ｍＭ以上では反応
後白濁を生じた。
【００２６】
【図４】
【００２７】図５は反応液中のメタノール濃度が蛍光ピ
ーク高さに与える影響を示した図である。メタノ−ルが
全てのカテコールアミンに対し高い蛍光ピークを与えて
いるのがわかる。反応液中のメタノール濃度として好ま
しくは、５２−６２％の範囲であった。その他の反応促
進剤としてはエタノール、アセトニトリル及び２−プロ
パノールなどの水溶性有機溶媒が有効であった。
ーク高さに与える影響を示した図である。メタノ−ルが
全てのカテコールアミンに対し高い蛍光ピークを与えて
いるのがわかる。反応液中のメタノール濃度として好ま
しくは、５２−６２％の範囲であった。その他の反応促
進剤としてはエタノール、アセトニトリル及び２−プロ
パノールなどの水溶性有機溶媒が有効であった。
【００２８】
【図５】
【００２９】図６はＰＧＮ濃度が蛍光ピーク高さに与え
る影響を示したものである。５−５０ｍＭの範囲で全て
のカテコールアミンに対して蛍光ピーク高さが増大して
いることが明らかである。ＰＧＮ濃度として好ましくは
３０−４５ｍＭであった。
る影響を示したものである。５−５０ｍＭの範囲で全て
のカテコールアミンに対して蛍光ピーク高さが増大して
いることが明らかである。ＰＧＮ濃度として好ましくは
３０−４５ｍＭであった。
【００３０】
【図６】
【００３１】図７は緩衝液にＢｒｉｔｔｏｎ−Ｒｏｂｉ
ｎｓｏｎ緩衝液を用いたときのｐＨが蛍光ピーク高さに
与える影響を示した図である。ｐＨ４．５−７．５の領
域において全てのカテコールアミンに対し高い蛍光ピー
クを与えていることが明らかである。好ましくはｐＨ５
−５．５の範囲であった。
ｎｓｏｎ緩衝液を用いたときのｐＨが蛍光ピーク高さに
与える影響を示した図である。ｐＨ４．５−７．５の領
域において全てのカテコールアミンに対し高い蛍光ピー
クを与えていることが明らかである。好ましくはｐＨ５
−５．５の範囲であった。
【００３２】
【図７】
【００３３】図８は５０℃での反応時間の影響を示した
ものである。これより反応時間は１５−２０分で完了し
ていることがわかる。
ものである。これより反応時間は１５−２０分で完了し
ていることがわかる。
【００３４】
【図８】
【００３５】図９は本発明方法によるＰＧＮを用いるカ
テコールアミンのプレカラム蛍光誘導体化ＨＰＬＣの基
準操作法（図２）に従って得られたクロマトグラム及び
その比較のため、ＰＧＮの代わりに従来法の蛍光誘導体
化試薬の１，２−ジフェニルエチレンジアミン（ＤＰ
Ｅ）を用いて得られたクロマトグラムを示したものであ
る（ＰＧＮのクロマトグラムは検出感度をＤＰＥの５倍
にして得たクロマトグラムである）。
テコールアミンのプレカラム蛍光誘導体化ＨＰＬＣの基
準操作法（図２）に従って得られたクロマトグラム及び
その比較のため、ＰＧＮの代わりに従来法の蛍光誘導体
化試薬の１，２−ジフェニルエチレンジアミン（ＤＰ
Ｅ）を用いて得られたクロマトグラムを示したものであ
る（ＰＧＮのクロマトグラムは検出感度をＤＰＥの５倍
にして得たクロマトグラムである）。
【００３６】
【図９】
【００３７】ＨＰＬＣ条件は以下の通りである。 カラム：ＴＳＫｇｅｌ ＯＤＳ−８０ＴＭ カラム温度：常温（２０〜２５℃） 溶離液：ＣＨ3 ＣＮ−ＣＨ3 ＯＨ（５０ｍＭ）−Ｔｒｉ
ｓ−ＨＣｌ（５：１：５，ｖ／ｖ）緩衝液（ｐＨ７．
０） 溶離液流量：０．８ｍｌ／ｍｉｎ 蛍光検出：Ｅｘ ３５０ｎｍ， Ｅｍ ４７５ｎｍ ＰＧＮによってもＤＰＥと同一の保持時間にそれぞれの
ピークを確認でき、ＰＧＮによるカテコールアミンの検
出限界（Ｓ／Ｎ＝３）は，１０ｆｍｏｌ（ＮＥ），３ｆ
ｍｏｌ（Ｅ），７ｆｍｏｌ（ＤＡ），７ｆｍｏｌ（Ｉ
Ｐ）であった。
ｓ−ＨＣｌ（５：１：５，ｖ／ｖ）緩衝液（ｐＨ７．
０） 溶離液流量：０．８ｍｌ／ｍｉｎ 蛍光検出：Ｅｘ ３５０ｎｍ， Ｅｍ ４７５ｎｍ ＰＧＮによってもＤＰＥと同一の保持時間にそれぞれの
ピークを確認でき、ＰＧＮによるカテコールアミンの検
出限界（Ｓ／Ｎ＝３）は，１０ｆｍｏｌ（ＮＥ），３ｆ
ｍｏｌ（Ｅ），７ｆｍｏｌ（ＤＡ），７ｆｍｏｌ（Ｉ
Ｐ）であった。
【００３８】従来のＤＰＥを用いる場合に比べ感度は多
少劣るが、それでもやはり全てのカテコールアミンに対
し非常に高感度であることがわかる。なおここで用いた
ＤＰＥ及びＰＧＮの濃度はともに１８．２ｐｍｏｌ／５
０μｌである。さらに、本発明によるアリールアミノメ
チル誘導体はカテコール骨格を有する化合物とのみ選択
的に反応し、ぶどう糖，アミノ酸などの生体成分とは全
く反応しない、カテコールアミンに対し選択的な試薬で
あることも確認した。
少劣るが、それでもやはり全てのカテコールアミンに対
し非常に高感度であることがわかる。なおここで用いた
ＤＰＥ及びＰＧＮの濃度はともに１８．２ｐｍｏｌ／５
０μｌである。さらに、本発明によるアリールアミノメ
チル誘導体はカテコール骨格を有する化合物とのみ選択
的に反応し、ぶどう糖，アミノ酸などの生体成分とは全
く反応しない、カテコールアミンに対し選択的な試薬で
あることも確認した。
【００３９】
【発明の効果】以上述べたごとく、本発明のアリールア
ミノメチル誘導体を蛍光誘導体化試薬として用いるカテ
コールアミンの定量法は、従来法に比べ、高感度で簡便
なカテコールアミンの定量法で、１，２−ジフェニルエ
チレンジアミンを蛍光誘導体化試薬に用いる場合と比べ
て、その試薬コストはかなり低減され得る。従って本発
明はカテコールアミンの分泌系や神経系の研究、並びに
臨床検査の分野に有用な発明である。
ミノメチル誘導体を蛍光誘導体化試薬として用いるカテ
コールアミンの定量法は、従来法に比べ、高感度で簡便
なカテコールアミンの定量法で、１，２−ジフェニルエ
チレンジアミンを蛍光誘導体化試薬に用いる場合と比べ
て、その試薬コストはかなり低減され得る。従って本発
明はカテコールアミンの分泌系や神経系の研究、並びに
臨床検査の分野に有用な発明である。
【図１】カテコールアミンとアリールアミノメチル誘導
体の蛍光反応機構を示す図。
体の蛍光反応機構を示す図。
【図２】ＰＧＮを用いるカテコールアミンのプレカラム
蛍光誘導体化ＨＰＬＣの基準操作法を示す図。
蛍光誘導体化ＨＰＬＣの基準操作法を示す図。
【図３】モリブデン酸アンモニウム濃度の影響を示す
図。
図。
【図４】ＫＩＯ4 濃度の影響を示す図。
【図５】メタノール濃度の影響を示す図。
【図６】ＰＧＮ濃度の影響を示す図。
【図７】ｐＨの影響を示す図。
【図８】５０℃での反応時間の影響を示す図。
【図９】本実施例および従来方法により得られたクロマ
トグラムを示す図。
トグラムを示す図。
フロントページの続き (56)参考文献 特開 平１−265158（ＪＰ，Ａ) 特開 平４−48263（ＪＰ，Ａ) 特開 昭61−88148（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−113152（ＪＰ，Ａ) 特開 昭59−42450（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−143766（ＪＰ，Ａ) 特開 昭60−205262（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−53165（ＪＰ，Ａ) 特開 平３−11071（ＪＰ，Ａ) 特開 昭63−14777（ＪＰ，Ａ) (58)調査した分野(Int.Cl.7，ＤＢ名) G01N 33/50 G01N 21/78 G01N 31/00 G01N 31/22 122
Claims (8)
- 【請求項１】一般式［Ｉ］で示されるカテコールアミン
の特異的蛍光誘導体化試薬であるアリールアミノメチル
誘導体。 【化１】 （式中、Ａｒはアリール基を示し、Ｌは脱離基を示す） - 【請求項２】アリールアミノメチル誘導体とカテコール
アミンとの蛍光反応成績体である一般式［ＩＩ］で示さ
れる発蛍光基質のピロロベンズオキサゾール誘導体。 【化２】 （式中、Ａｒはアリール基を示し、Ｒ1 およびＲ2 は同
一または異なって水素原子、ヒドロキシル基またはメチ
ル基を示す） - 【請求項３】請求項１項に記載の一般式［Ｉ］で示され
るアリールアミノメチル誘導体を蛍光誘導体化試薬とし
て用いることを特徴とするカテコールアミンの定量方
法。 - 【請求項４】請求項１項に記載の一般式［Ｉ］で示され
るアリールアミノメチル誘導体をプレカラム蛍光誘導体
化試薬又はポストカラム蛍光誘導体化試薬として使用す
ることを特徴とする請求項３項記載のカテコールアミン
の定量方法。 - 【請求項５】蛍光誘導体化試薬とともに共存させる反応
補助剤として、触媒、酸化剤、反応促進剤を用いること
を特徴とする請求項３又は４項記載のカテコールアミン
の定量方法。 - 【請求項６】触媒としてモリブデン酸アンモニウムなど
の金属酸化物イオンを用いることを特徴とする請求項５
項記載のカテコールアミンの定量方法。 - 【請求項７】酸化剤としてＫＩＯ4 ，ＮａＩＯ4 ，Ｎａ
ＩＯ3 ，ＫＩＯ3 ，Ｋ3 Ｆｅ（ＣＮ）6 又はＨ2 ０2 を
用いることを特徴とする請求項５項記載のカテコールア
ミンの定量方法。 - 【請求項８】反応促進剤としてメタノール、エタノー
ル、アセトニトリル又は２−プロパノールを用いること
を特徴とする請求項５項記載のカテコールアミンの定量
方法。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05611892A JP3216203B2 (ja) | 1992-02-07 | 1992-02-07 | カテコールアミンの測定試薬及びそれを用いるカテコールアミンの定量方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP05611892A JP3216203B2 (ja) | 1992-02-07 | 1992-02-07 | カテコールアミンの測定試薬及びそれを用いるカテコールアミンの定量方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JPH05223813A JPH05223813A (ja) | 1993-09-03 |
| JP3216203B2 true JP3216203B2 (ja) | 2001-10-09 |
Family
ID=13018160
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP05611892A Expired - Lifetime JP3216203B2 (ja) | 1992-02-07 | 1992-02-07 | カテコールアミンの測定試薬及びそれを用いるカテコールアミンの定量方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP3216203B2 (ja) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4849552B2 (ja) * | 2007-01-15 | 2012-01-11 | 独立行政法人産業技術総合研究所 | 蛍光誘導体物質の固体基板表面への固定化方法 |
-
1992
- 1992-02-07 JP JP05611892A patent/JP3216203B2/ja not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH05223813A (ja) | 1993-09-03 |
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