JP3219296B2 - カラム充填剤及びその製造方法 - Google Patents

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【産業上の利用分野】本発明はカラム充填剤及びその製
造方法、特にその活性基修飾状態の改良に関する。

【０００２】

【従来の技術】従来より各種液体試料の分離に充填剤を
詰めたカラムが用いられており、血清等の各種物質の混
合試料の分離、分析には液体クロマトグラフィー、特に
高速液体クロマトグラフィー（ＨＰＬＣ）が汎用され、
また工業的にも特定成分の分離・抽出にカラム充填剤が
応用されている。ところで、血清等のタンパク質成分を
多量に含有する生体成分中の薬物や代謝物等をＨＰＬＣ
を用いて定量する場合、タンパク質のカラム充填剤への
吸着による弊害を除去するため、従来は除タンパク等の
前処理を必要としていた。

【０００３】しかし、このような前処理操作は、多大の
時間と労力を要し、且つ分析精度を悪化させるという問
題を有している。そこで、近年これらの除タンパク操作
を行うことなく直接タンパク質成分含有試料を注入し、
この試料中に含まれる各種成分を分離することのできる
カラム充填剤が開発されている。これらの改良されたカ
ラム充填剤は、多孔性ガラスやシリカゲルを担体とし
て、その細孔内外に異なる性質を付与したものである。

【０００４】そして、この充填剤を用いれば血清中のタ
ンパク質（アルブミンやグロブリン）は巨大分子なので
細孔内に入らず、且つ親水性の外表面（孔外面）に吸着
されることなくカラムを素通りし、比較的小さな薬物等
の分子は疎水性の内表面（孔内面）に吸着して分離され
ることとなる。このような充填剤の具体例としては、特
開昭６０−５６２５６号公報に記載されたものが挙げら
れる。この充填剤では、オクタデシルシリル（ＯＤＳ）
基を化学結合させたシリカの外表面にタンパク質をコー
トしている。このコート用タンパク質はウシ血清アルブ
ミンあるいは家兎血漿タンパク質よりなり、該タンパク
質をＯＤＳ結合シリカに吸着、変性させることにより充
填剤を得ている。

【０００５】しかしながら、上述した充填剤のうちタン
パク質をコートしたＯＤＳシリカ充填剤では、使用が長
期にわたると吸着・変性したタンパク質が溶離を起こす
ことがあり、また高分離効率のカラムが得られない等、
耐久性や分離能の点で課題を残している。このような点
を改良するため、特開昭６１−６５１５９号公報及び特
開平１−１２３１４５号公報に記載されたように、 多孔質担体の内表面及び外表面に疎水性基を導入す
る。 それ自身が巨大分子であり、シリカ等の細孔内に侵入
できない酵素を用いて外表面の疎水性基だけを切断す
る。 その後、外表面に親水性基を導入する。 ことにより、カラム充填剤を得る方法も開発されてい
る。

【０００６】すなわち、特開昭６１−６５１５９号公報
記載の方法では、グリセリルプロピル基を導入した多孔
性シリカを出発原料とし、これにカルボニルジイミダゾ
ールを介してオリゴペプチド（グリシル−フェニルアラ
ニル−フェニルアラニン等）を結合させ、タンパク質加
水分解酵素であるカルボキシペプチダーゼＡを用いて加
水分解を行うことにより外表面のフェニルアラニン側鎖
を切断している。その結果、充填剤の内表面には疎水性
リガンドとしてグリシル−フェニルアラニル−フェニル
アラニンが残り、外表面は親水性のグリシル−グリセリ
ルプロピル基となる。

【０００７】一方、特開平１−１２３１４５号公報記載
の方法は、アミノプロピル基を導入した多孔性シリカを
出発原料として、トリエチルアミン存在下、オクタノイ
ルクロリドを反応させ、アミド結合を介して疎水性基を
導入し、次にポリミキシン・アシラーゼにより外表面の
アシル基を加水分解し、外表面のアミノ基をグリシドー
ルとの反応を行うことにより親水性とする方法である。

【０００８】

【発明が解決しようとする課題】ところが、特開昭６１
−６５１５９号公報あるいは特開平１−１２３１４５号
公報に記載された方法では、酵素反応を利用しているた
め、工程が複雑化するとともに得られた充填剤の特性に
バラツキが生じやすいものであった。また、これらの充
填剤は溶離液のｐＨが狭い範囲に限定されたり、安定し
た信頼性の高い測定結果を得るのが困難である等の課題
もあった。本発明は前記従来技術の課題に鑑みてなされ
たものであり、その目的は製造が容易でしかも分離能の
高いカラム用充填剤及びその製造方法を提供することに
ある。

【０００９】

【課題を解決するための手段】前記目的を達成するため
に本発明者が鋭意検討した結果、多孔性担体の表面を疎
水性基及び水酸基を有する親水性基で修飾することによ
りタンパク含有試料等の分離能が極めて高いカラム充填
剤が得られることを見出し、本発明を完成するに到っ
た。すなわち本出願の請求項１記載のカラム充填剤は、
Ｓｉ−Ｒ（Ｒは疎水性基）結合、及びＳｉ−Ｒ’（Ｒ’
は水酸基を有する親水性基）結合を有するシリコーンポ
リマーで被覆された多孔性担体よりなることを特徴とす
る。

【００１０】請求項２に記載のカラム充填剤は、Ｒは炭
素数１〜１８の炭化水素残基であることを特徴とする。
請求項３に記載のカラム充填剤の製造方法は、多孔性担
体をシリコーンポリマーで被覆する被覆工程と、前記被
覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基に、二重結合
を有する炭化水素基Ｒを結合させ、−Ｓｉ−Ｒ基とする
疎水性化工程と、前記被覆シリコンポリマー−ＳｉＨ残
基の残部の少なくとも一部に、二重結合および水酸基を
有する親水性基Ｒ’を結合させ、−Ｓｉ−Ｒ’基とする
親水性化工程と、を含むことを特徴とする。

【００１１】請求項４に記載のカラム充填剤の製造方法
は、多孔性担体をシリコーンポリマーで被覆する被覆工
程と、前記被覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基
に、二重結合および水酸基を有する親水性基Ｒ’を結合
させ、−Ｓｉ−Ｒ’基とする親水性化工程と、前記被覆
シリコンポリマー−ＳｉＨ残基の残部の少なくとも一部
に、二重結合を有する炭化水素基Ｒを結合させ、−Ｓｉ
−Ｒ基とする疎水性化工程と、を含むことを特徴とす
る。

【００１２】請求項５に記載のカラム充填剤の製造方法
は、多孔性担体をシリコーンポリマーで被覆する被覆工
程と、前記被覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基
に、二重結合を有する炭化水素基Ｒと、二重結合および
水酸基を有する親水性基Ｒ’を修飾し、−Ｓｉ−Ｒ基お
よび−Ｓｉ−Ｒ’基を形成する修飾工程と、を含むこと
を特徴とする。

【００１３】請求項６に記載のカラム充填剤の製造方法
は、多孔性担体をシリコーンポリマーで被覆する被覆工
程と、前記被覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基
に、二重結合を有する炭化水素基Ｒを結合させ、−Ｓｉ
−Ｒ基とする疎水性化工程と、前記被覆シリコンポリマ
ー−ＳｉＨ残基の残部の少なくとも一部に、二重結合を
有し他端にエポキシ基を有する中間基を結合させる中間
基修飾工程と、前記中間基のエポキシ基に、グリセリン
基を反応させ、−Ｓｉ−Ｒ’基とする親水性化工程と、
を含むことを特徴とする。以下、本発明の構成を詳細に
説明する。

【００１４】多孔性担体 本発明において用いられる多孔性担体としては、例えば
液体クロマトグラフィー用の担体として一般に使用され
ている任意の粉体であるシリカゲル、アルミナ、ガラス
ビーズ（例えばポーラスガラス）、ゼオライト、ヒドロ
キシアパタイト又はグラファイト等を使用することがで
きる。また、複合粉体、例えばポリアミド、アクリル樹
脂、又はポリビニルアルコール等の合成樹脂の表面に、
微細な無機粉体、例えばシリカゲル、二酸化チタン又は
ヒドロキシアパタイトを被覆処理した粉体も使用するこ
とができる。

【００１５】また、多孔性担体の平均粒径は２〜２００
μmで、比表面積２００〜８００ｍ²／ｇ、４０〜１２０
Åの細孔を有するものが好適である。特に好適な多孔性
担体としては、６０〜８０Åの細孔を持ち、比表面積が
４００〜６００ｍ²／ｇで粒径３〜５０μmの球形あるい
は破砕型のシリカゲルである。

【００１６】シリコーンポリマー 本発明において使用されるＳｉ−Ｈ基を有するシリコー
ン化合物は、下記一般式化１

【化１】 （Ｒ¹ＨＳｉＯ）_a（Ｒ²Ｒ³ＳｉＯ）_b（Ｒ⁴Ｒ⁵Ｒ⁶ＳｉＯ_1/2)_c （化１中Ｒ¹、Ｒ²及びＲ³は相互に独立に水素原子であ
るか又はハロゲン原子の少なくとも１個で置換されてい
ることのある炭素数１〜１０の炭化水素基であるが、Ｒ
¹，Ｒ²，Ｒ³が同時に水素原子であることはない。ま
た、Ｒ⁴，Ｒ⁵，Ｒ⁶は相互に独立に水素原子であるか又
はハロゲン原子に少なくとも一個で置換されていること
のある炭素数１〜１０の炭化水素基である。ａは０又は
１以上の整数であり、ｂは０又は１以上の整数であり、
ｃは０又は２であるが、但しｃが０である場合にはａと
ｂとの和が３以上の整数であるものとする）の少なくと
も一種である。

【００１７】上記化１のシリコーン化合物は２種の群か
らなる。第１の群は、前記化１においてｃ＝０の場合に
相当し、下記一般式化２

【化２】（Ｒ¹ＨＳｉＯ）_a（Ｒ²Ｒ³ＳｉＯ）_b （化２中Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、ａ及びｂは前記と同じ意味で
あるが、好ましくはＲ¹、Ｒ²及びＲ³が相互に独立にハ
ロゲン原子に少なくとも一個で置換されていることのあ
る炭素数１〜１０の炭化水素基であり、ａとｂとの和が
３以上である）で表わされた環状シリコーン化合物であ
る。

【００１８】この化合物の代表例を挙げれば以下の通り
である。

【化３】

【化４】 上記の化３および化４で示される化合物は、それぞれ単
独で又はそれらの混合物の形で使用することができる。
上記化３及び化４の各式において、ｎ（又はａ＋ｂ）は
好ましくは３〜７である。ｎの値が小さくなるのにした
がってその沸点が低下するので、蒸発して担体上に吸着
する量が多くなる。特に３量体及び４量体は、その立体
性質上、重合しやすいので特に適している。

【００１９】前記式化２の環状シリコーン化合物の具体
例としては、ジハイドロジェンヘキサメチルシクロテト
ラシロキサン、トリハイドロジェンペンタメチルシクロ
テトラシロキサン、テトラハイドロジェンテトラメチル
シクロテトラシロキサン、ジハイドロジェンオクタメチ
ルシクロペンタシロキサン、トリハイドロジェンヘプタ
メチルシクロペンタシロキサン、テトラハイドロジェン
ヘキサメチルシクロペンタシロキサン、及びペンタハイ
ドロジェンペンタメチルシクロペンタシロキサン等を挙
げることができる。

【００２０】前記式化１のシリコーン化合物の第二の群
は、前記式化１においてｃ＝２の場合に相当し、下記一
般式化５

【化５】 （Ｒ¹ＨＳｉＯ）_a（Ｒ²Ｒ³ＳｉＯ）_b（Ｒ⁴Ｒ⁵Ｒ⁶ＳｉＯ_1/2）_c （化５中Ｒ¹、Ｒ²、Ｒ³、Ｒ⁴、Ｒ⁵、Ｒ⁶、ａ及びｂは前
記と同じ意味であり、ｃは２であるが、好ましくはＲ¹
〜Ｒ⁶が相互に独立にハロゲン原子の少なくとも１個で
置換されていることのある炭素数１〜１０の炭化水素基
である）で表わされる直鎖状シリコーン化合物である。
この化合物の代表例としては、下記一般式化６

【化６】 で表わされる化合物を挙げることができる。

【００２１】上記式化５の直鎖状シリコーン化合物の具
体例としては、1,1,1,2,3,4,4,4-オクタメチルテトラシ
ロキサン、1,1,1,2,3,4,5,5,5-ノナメチルペンタシロキ
サン、及び1,1,1,2,3,4,5,6,6,6-デカメチルヘキサシロ
キサン等を挙げることができる。前記一般式化１で表わ
されるシリコーン化合物は、気相状態又は液相状態で前
記多孔性担体と接触させる。

【００２２】気相状態での接触（気相処理）は、例えば
密閉容器を用い、１２０℃以下好ましくは１００℃以下
の温度下で、好ましくは２００mmHg以下さらに好ましく
は１００mmHg以下の圧力下において、前記シリコーン化
合物の蒸気を分子状態で担体表面上に接触させる方法、
１２０℃以下好ましくは１００℃以下の温度下で前記シ
リコーン化合物とキャリアーガスとの混合ガスを担体と
接触させる方法等により行うことができる。この気相処
理に適したシリコーン化合物としては、例えばテトラヒ
ドロテトラエチルシクロテトラシロキサン、テトラヒド
ロテトラメチルシクロテトラシロキサンを挙げることが
できる。

【００２３】一方、液相状態での接触（液相処理）は、
例えば前記シリコーン化合物を溶解することができる揮
発性溶媒であるベンゼン、ジクロロメタン、又はクロロ
ホルム等、特にはヘキサンに溶解した１〜５０重量％シ
リコーン化合物溶液を担体１重量部に対してシリコーン
化合物０．０１〜１重量部になるように担体に添加すれ
ば良い。この場合、攪拌下に添加することが好ましい。
担体表面上でのシリコーン化合物の表面重合は前記接触
処理後の担体を温度５０〜２００℃で２時間以上放置あ
るいは攪拌することによって行うことができる。

【００２４】この表面重合は、担体自身の表面活性点の
作用により促進されるので、特に触媒を加える必要はな
い。ここで、「活性点」とはシロキサン結合（Ｓｉ−Ｏ
−Ｓｉ）またはＳｉ−Ｈ（ヒドロシリル）基をもつシリ
コーン化合物の重合を触媒することのできる部位であ
り、例えば酸点、塩基点、酸化点、又は還元点を意味す
る。表面重合は、担体表面の活性点がシリコーンポリマ
ーの被膜で覆われてしまうまで行われる。担体自体の活
性が非常に弱い場合には、前記接触処理前又は後の担体
にアルカリ触媒例えば水酸化ナトリウム、水酸化カリウ
ム、水酸化リチウム、水酸化アンモニウム若しくは水酸
化カルシウム等、アルキル金属触媒例えばジブチル錫等
を適宜添加した後に重合させても良い。

【００２５】担体表面を被覆したシリコーンポリマー被
覆の構造には２種類のものがある。すなわち、重合がシ
ロキサン結合（−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉ）の開裂及び再結合に
よって起きるシリコーンポリマーでは−Ｓｉ−Ｏ−Ｓｉ
−単位の鎖状構造のみを持ち、一方重合がＨ₂Ｏ又はＯ₂
の存在下におけるヒドロシリル結合（Ｓｉ−Ｈ）同士の
架橋反応によって起きる場合には、

【化７】 から誘導される、

【化８】 単位をもつ網状構造をシリコーンポリマーが含むことに
なる。

【００２６】以上の二つの異なった型の重合は、担体の
種類や反応条件（温度、触媒等）によって、それぞれ単
独に進行する場合と、両方の型の重合が同時に進行する
場合とがある。そして、重合の程度も様々である。以上
のように、本発明においては分子量の低いシリコーン化
合物を担体と接触させるので、シリコーン化合物が担体
の細孔内部にまで侵入して粉体の実質的全表面上に付着
又は吸着して重合し、シリコーンポリマーの極めて薄い
被膜（３Å〜３０Åの被膜）が担体上に形成され、担体
の多孔性が実質的に元のまま維持される。この多孔性
は、続いて実施するビニル化合物付加等によっても実質
的に損われない。

【００２７】以上の重合反応により担体表面に形成され
たシリコーンポリマーの分子量（重量平均分子量）は１
５万以上である。但し、シリコーン化合物の場合、重合
により高分子化するにつれ、水や有機溶媒に溶けにくく
なってしまい、ポリマーを抽出して分子量を測定するこ
とはできず、また担体表面上にコートされている状態で
のポリマーの分子量を測定することも不可能である。

【００２８】そこで、重合進行中の各段階のポリマーを
クロロホルム抽出し、ポリスチレン換算でポリマーの分
子量を求めたところ、最大１５万のポリマーが存在する
ことが確認された。従って、クロロホルムに抽出されな
い状態にまで充分に重合させたポリマーの分子量は、１
５万以上であると言うことができるが、より詳しく分子
量を確認することは困難である。

【００２９】疎水性基 ところで、担体表面を被覆したシリコーンポリマー中に
は、未反応のＳｉ−Ｈ基が残存している。このＳｉ−Ｈ
基に、分子中にビニル基を有する炭化水素を反応させる
ことによって、Ｓｉ−Ｃ結合を有するシリコーンポリマ
ーとすることができる。前記のビニル化合物としては、
例えば一般式

【化９】Ｒ₈−ＣＨ＝ＣＨ−Ｒ₉ （式中、Ｒ₈及びＲ₉は、相互に独立に水素原子、炭素数
１〜４０のアルキル基、炭素数４〜８のシクロアルキル
基若しくはシクロアルケニル基、又は炭素数１〜２０の
アルキル基で置換されていることのあるアリール基であ
る）で表わされる化合物を使用することができる。

【００３０】前記一般式で表わされるビニル化合物は、
Ｒ₈及びＲ₉がともに水素原子であるエチレン、Ｒ₈及び
Ｒ₉の一方が水素原子であって他方が水素原子以外の置
換基であるビニル化合物例えばα−オレフィン化合物、
Ｒ₈及びＲ₉がともに水素原子以外の同じ置換基である対
称形ビニル化合物、あるいはＲ₈及びＲ₉が水素以外の異
なる置換基である非対称形ビニル化合物のいずれかであ
っても良い。

【００３１】好ましいビニル化合物は、前記一般式にお
いてＲ₈及びＲ₉が相互に独立に、水素原子；炭素数４〜
２０のアルキル基例えば１−ヘキシル基、１−オクチル
基、１−デシル基、１−ドデシル基、１−ヘキサデシル
基、又は１−オクタデシル基；シクロヘキシル基又はシ
クロヘキセニル基；フェニル基又はナフチル基；又は炭
素数１〜４の低級アルキル基で置換されているフェニル
基又はナフチル基であるビニル化合物である。

【００３２】Ｒ₈が水素原子であり、Ｒ₉がエチル基、ヘ
キシル基、ヘキサデシル基、又はフェニル基であるビニ
ル化合物を付加させると、それぞれ従来の化学結合型充
填剤のＣ₄−タイプ、Ｃ₈−タイプ、Ｃ₁₈−タイプ又はフ
ェニルタイプに相当するものを得ることができる。前記
ビニル化合物と前記シリコーンポリマー被覆粉体との反
応は、例えば溶媒の存在下において５０〜３００℃、気
相あるいは液相で２時間以上接触させることにより行う
ことができる。触媒としては、白金属触媒すなわちルテ
ニウム、ロジウム、パラジウム、オスミウム、イリジウ
ム又は白金の化合物が適している。特にパラジウム化合
物及び白金化合物が良好である。

【００３３】この反応の確認はＦＴ−ＩＲ装置を用いた
拡散反射スペクトルの測定により行える。すなわち、21
60cm^-1のＳｉ−Ｈ基の吸収は、ビニル化合物の付加によ
り吸収強度が大幅に減少し、これに変って2800cm^-1〜30
00cm^-1に新たにアルキル基に基づく吸収が表われる。従
って、この吸収強度の比を求めることによって反応率が
計算される。

【００３４】親水性基 本発明にかかる液体クロマトグラフィー用充填剤を得る
ためには、上記のようにして得たシリコーンポリマー被
覆担体の表面のＳｉＨ基の一部を親水性に変える必要が
ある。ここで、水酸基を有する親水性基としては、次の
化１０に示すテトラオール等が用いられる。

【化１０】なお、このテトラオールは、次のように合成
される。

【化１１】ここで、ジグリセリンをポリグリセリンとす
れば、ポリオールが形成され、これらもまた本発明の水
酸基を有する親水性基として用い得る。

【００３５】また、水酸基を有する親水性基としては、
次の化１２に示すポリオキシエチレンアリルエーテルを
用いることも好適である。

【化１２】なお、このポリオキシエチレンアリルエーテ
ルは化１３に示すようにアリルアルコールにエチレンオ
キサイドを付加させることによって合成することができ
る。

【化１３】以上のようにして得た充填剤は、化学結合型
を特徴とする従来の充填剤とはタイプが異なり、使用可
能なｐＨ範囲も２〜１０と極めて広く、従来の充填剤で
は用い得なかったアルカリ性溶媒でも使用でき、安定性
も非常に良い。

【００３６】また、本発明にかかる充填剤を用いて血漿
等の生体成分中の薬物や代謝物をＨＰＬＣを用いて定量
する場合、繁雑な前処理なしに生体成分を直接注入して
も精度よく分析が可能である。なお、本発明により得ら
れる充填剤は、完全なポリマーコート型であり、ルイス
酸を用いないため、２−エチルピリジンやＮ，Ｎ’−ジ
メチルアニリンのような塩基性物質も溶出可能である。

【００３７】疎水性化−親水性化法 本発明にかかる充填剤は、シリコーンポリマーで被覆さ
れた多孔性担体を、まず疎水性化し、その次に親水性化
する方法で製造することができる。すなわち、図１
（Ａ）に示すように多孔性担体１０の表面を、前述した
方法によりシリコーンポリマー１２で被覆する。この
際、シリコーン単体の有する−ＳｉＨ基は重合に用いら
れるが、そのすべてが消費されてしまうわけではない。
そして、図１（Ｂ）に示すようにそのシリコーンポリマ
ー１２に残存する−ＳｉＨ基と、二重結合を有する疎水
性基Ｒを反応させ、−ＳｉＲ基１４とする。なお、ここ
でシリコーンポリマー１２のすべての−ＳｉＨ基が−Ｓ
ｉＲ基となってしまうと、後の水酸基を有する親水性基
導入が行ない得ないので、疎水性基Ｒの添加量ないし反
応条件を目的に応じて定める。

【００３８】次に図１（Ｃ）に示すようにシリコーンポ
リマー１２の未反応−ＳｉＨ基と、二重結合および水酸
基を有する親水性基Ｒ’（図中○−で示す）１６を反応
させ、親水性の−ＳｉＲ’基を形成する。従って、シリ
コーンポリマー１２の表面は、疎水性基Ｒと水酸基を有
する親水性基Ｒ’により修飾されたいわゆるミックスド
ファンクション構造となり、両基の修飾割合等により特
異的な溶離特性を得ることができる。なお、疎水性化−
親水性化法は、特に保持に大きな影響を及ぼす疎水性基
の導入が容易に制御可能なため、疎水性基の導入量を調
整することにより保持の大きさを調整できる利点があ
る。

【００３９】親水性化−疎水性化法 本発明にかかる充填剤は、シリコーンポリマーで被覆さ
れた多孔性担体を、まず親水性化し、その次に疎水性化
する方法でも製造することができる。すなわち、図２
（Ａ）に示すように多孔性担体１０の表面を、シリコー
ンポリマー１２で被覆する。そして、図２（Ｂ）に示す
ようにそのシリコーンポリマー１２に残存する−ＳｉＨ
基と、二重結合および水酸基を有する親水性基Ｒ’（図
中○−で示す）１６を反応させ、−ＳｉＲ’基１６とす
る。なお、ここでシリコーンポリマー１２のすべての−
ＳｉＨ基が−ＳｉＲ’基１６となってしまうと、後の疎
水性基導入が行ない得ないので、水酸基を有する親水性
基Ｒ’の添加量ないし反応条件を目的に応じて定める。

【００４０】次に図２（Ｃ）に示すようにシリコーンポ
リマー１２の未反応−ＳｉＨ基と、二重結合を有する疎
水性基Ｒを反応させ、疎水性の−ＳｉＲ基１４を形成す
る。この親水性化−疎水性化法は、先に親水性化を行な
うため、その親水性化率は大きく、タンパク質の吸着は
少ない。親水性化反応は、水中で行なうことが望まし
く、シリコーンポリマーで覆われたシリカゲルは撥水性
があり、反応は細孔外表面から起こっていく。従って、
細孔外表面は相対的に細孔内表面と比較してより親水性
であると考えられる。疎水性化は相対的に外より内で起
こりやすいと考えられる。

【００４１】疎水，親水性化同時処理法 本発明にかかる充填剤は、シリコーンポリマーで被覆さ
れた多孔性担体の親水性化および疎水性化を同時に行な
う方法でも製造することができる。すなわち、図３
（Ａ）に示すように多孔性担体１０の表面を、シリコー
ンポリマー１２で被覆する。そして、図３（Ｂ）に示す
ようにそのシリコーンポリマー１２に残存する−ＳｉＨ
基と、末端に二重結合を有する疎水性基Ｒ、および末端
に二重結合を有し、水酸基を有する親水性基Ｒ’（図中
○−で示す）を反応させ、親水性の−ＳｉＲ基１４およ
び疎水性の−ＳｉＲ’基１６とする。

【００４２】この、疎水，親水性化同時処理法は、反応
が一回でよいという利点がある。相対的に疎水性基（ス
チレン等）の化合物を水酸基を有する親水性基の化合物
（テトラオール、ポリオール等）よりその添加量を少な
くし、反応性の違い（疎水性基の化合物は水酸基を有す
る親水性基化合物よりかさ高くなく、反応性はより高い
と考えられる）によって目的とする充填剤を得ることが
できる。反応溶媒としてはアルコール（スチレンおよび
テトラオール等を同時に混合することも可能）が望まし
い。

【００４３】疎水性化−エポキシ化−親水性化法 本発明にかかる充填剤は、シリコーンポリマーで被覆さ
れた多孔性担体を、まず疎水性化し、その次にエポキシ
基を有するエポキシ化合物を導入し、該末端エポキシ基
に水酸基を有する親水性基を結合させて親水性化する方
法で製造することができる。すなわち、図４（Ａ）に示
すように、多孔性担体１０の表面を、前述した方法によ
りシリコーンポリマー１２で被覆する。

【００４４】そして、図４（Ｂ）に示すようにそのシリ
コーンポリマー１２に残存する−ＳｉＨ基と、二重結合
を有する疎水性基Ｒを反応させ、−ＳｉＲ基１４とす
る。なお、ここでシリコーンポリマー１２のすべての−
ＳｉＨ基が−ＳｉＲ基となってしまうと、後の親水性基
導入が行ない得ないので、疎水性基Ｒの添加量ないし反
応条件を目的に応じて定める。

【００４５】次に図４（Ｃ）に示すようにシリコーンポ
リマー１２の未反応−ＳｉＨ基と、二重結合及びエポキ
シ基を有するエポキシ化合物１８を反応させる。このた
め、エポキシ化合物は二重結合端でシリコーンポリマー
と結合し、エポキシ基を有する状態となる。次に図４
（Ｄ）に示すように水酸基を有する親水性基（図中○で
示す）２０を反応させ、親水性の−ＳｉＲ’基１６を形
成する。

【００４６】この、疎水性化−エポキシ化−親水性化法
は、先に疎水性基を導入した後、まずアリルグリシジル
エーテル（末端に二重結合、もう一つの末端にエポキシ
基）のようなテトラオールよりかさ高くない基を導入
し、さらにグリセリンやジグリセリンを反応させること
により、親水性化密度を大きくすることが可能である。
このため、タンパク質の回収率が高くなる。例えば、ま
ず始めに疎水性基（フェニル基、Ｃ₈、Ｃ₁₈）を導入
し、その後アリルグリシジルエーテル（一方の末端に二
重結合をもち、好ましくは他方の末端にエポキシ基をも
つもの）を結合させ、ジグリセリン、グリセリン等の水
酸基を有する親水性基をもつものをエポキシ基に結合さ
せる。

【００４７】疎水性基およびアリルグリシジルエーテル
のような末端に二重結合をもつものと、Ｓｉ−Ｈ基の反
応は白金酸等を触媒として反応させる（ヒドロシリル
化）。また、エポキシ基とジグリセリン等の反応は、ル
イス酸、四級アンモニウム塩、三級アミン等が用いられ
る。なお、アリルグリシジルエーテル付加後、酸性溶液
中でエポキシ環を開環させ、ジオール型にするだけでも
よい。

【００４８】

【実施例】以下、本発明の好適な実施例をさらに詳細に
説明する。なお、本発明はこれにより限定されるもので
はない。また、配合量は重量％で示す。

【００４９】実施例１ 疎水性化処理−親水性化処理に
より製造された充填剤 製造法 約６０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（前記化１におい
て、Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）
２ｇとを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環
状シリコーン化合物を窒素バブリングすることによって
気相状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させ
た。

【００５０】続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出
し、恒温槽内において１０５℃で１時間加熱した。冷却
後、粉体１０ｇを２００mlの三ツ口フラスコに取り、反
応溶液としてトルエン４０ml、触媒として塩化白金酸の
トリ−ｎ−ブチルアンモニウム塩１mg、スチレン（疎水
性基Ｒ）１１８．４mg（Ｓｉ−Ｈ基のモル数に対して３
％（モル比）に相当）、ｐ−ｔ−ブチルカテコール（ス
チレンの重合禁止剤）１０ｍｇとを加えて油浴中におい
て１２０℃で５時間還流加熱した後、グラスフィルター
（Ｇ−４）を用いて濾過し、さらにトルエンおよびアセ
トンで充分洗浄し、しかる後１０５℃の恒温槽に入れ１
時間乾燥させた。

【００５１】次いで得られた粉末１０ｇおよび触媒とし
て塩化白金酸１mgを５００mlの三ツ口フラスコにとり、
これに水１００ml、およびテトラオール（水酸基を有す
る親水性基Ｒ’）１０ｇを加えて油浴中で４時間還流加
熱した。これをグラスフィルターで濾過し、続いて水お
よびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５℃の恒温槽
に入れ１時間乾燥して本実施例にかかる液体クロマトグ
ラフィー用充填剤を得た。 溶出例１−１ 実施例１にかかる充填剤１．５ｇをパッカーとポンプを
用い、内径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチール
製カラムに平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成
した。

【００５２】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）、およびラットコントロール血漿にカルバ
マゼピン（１０μg/ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）
の分離を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−
１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４２．５−４
２．５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は２８５
nmで行なった。また、注入量は１０μlであった。得ら
れたクロマトグラムを図５に示す。

【００５３】図５（Ａ）は試料Ａの溶出状態を示すもの
で、ラット血漿タンパクのピークが注入後直ちに溶出し
た。図５（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、ラット血漿タン
パクの後に、カルバマゼピンのピークが溶出し、血漿
成分と良好に分離している。溶出例１−２ 実施例１にかかる充填剤をパッカーとポンプを用い、内
径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチール製カラム
に平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成した。

【００５４】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）、およびラットコントロール血漿にフェニ
トイン（４０μg/ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）の
分離状態を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄
−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４２．５−４
２．５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は２５４
nmで行なった。また、注入量は１０μlであった。得ら
れたクロマトグラムを図６に示す。

【００５５】図６（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラット
血漿タンパクのピークが注入後直ちに溶出した。図６
（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、ラット血漿タンパクの後
に、フェニトインのピークが溶出し、血漿成分と良好
に分離している。溶出例１−３ 実施例１にかかる充填剤をパッカーとポンプを用い、内
径４．６mm、長さ１５cmのステンレススチール製カラム
に平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成した。

【００５６】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）、およびラットコントロール血漿にテオフ
ィリン（１０μg/ml）およびカフェイン（１０μg/ml）
を標準添加したもの（試料Ｂ）の分離状態を調べた。移
動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂Ｈ
ＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４７．５−４７．５−５）を１．０
ml/minで送液し、検出は２７０nmで行なった。また、注
入量は１０μlであった。

【００５７】得られたクロマトグラムを図７に示す。図
７（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラット血漿タンパクの
ピークが注入後直ちに溶出した。図７（Ｂ）は試料Ｂを
示すもので、ラット血漿タンパクの後に、テオフィリン
およびカフェインのピークが溶出し、血漿成分と良
好に分離している。

【００５８】スチレン量の検討 前記実施例１においては、シリコーンポリマーで被覆し
たシリカゲルの元素分析測定を行なうことにより、Ｓｉ
−Ｈ基のモル数を算出し、得られたＳｉ−Ｈ基のモル数
に対して３％に相当するスチレンの量（モル数）を決定
している。なお、このシリコーンポリマーの被覆の反応
条件によって微妙にＳｉ−Ｈ基の量が異なるため、添加
量は常にこの量比でいいというわけではない。ただし、
一般的には前記条件下でスチレンの添加量は１００〜４
００mgの範囲である。

【００５９】また、スチレンの添加量を増加することに
より、保持力の調整が可能となる。一般に添加量が増加
すると保持力も大きくなる。図８にはスチレンをモル比
で３％…（Ａ），５％…（Ｂ），１０％…（Ｃ）とした
場合の、ナフタレン（↓で示す）のクロマトグラムの変
化を示している。なお、測定条件は、カラムサイズ：内
径４．６mm×長さ１００mm、温度：４０℃、移動相：メ
タノール／水＝５０／５０、流速：１．０mm/ml、検出
器：ＵＶ（２５４nm）である。

【００６０】同図より明らかなように、ピークが溶出す
るまでの保持時間が、スチレンの量が多くなるにつれて
大きくなることが理解される。塩基性物質の溶出 本実施例にかかる充填剤は、親水性化ないし疎水性化処
理にルイス酸を用いないため、完全なポリマーコート型
であり、ルイス酸に起因する金属が残存していない。こ
のため、図９にも示すように２−エチルピリジンやＮ，
Ｎ’−ジメチルアニリンのような溶出も可能である。

【００６１】実施例２ 親水性化処理−疎水性化処理に
より製造された充填剤（１） 製造法 約６０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（化１において、
Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）２ｇ
とを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環状シ
リコーン化合物を窒素バブリングすることによって気相
状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させた。
続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出し、恒温槽内
において１０５℃で１時間加熱した。

【００６２】冷却後、粉体５ｇを２００mlの三ツ口フラ
スコに取り、これに触媒として塩化白金酸０．５mg、テ
トラオール（水酸基を有する親水性基Ｒ’）５ｇ、水４
０mｌを加えて、油浴中において０．５時間還流加熱し
た後、グラスフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、さ
らに水およびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５℃
の恒温槽に入れ２時間乾燥させた。

【００６３】次いで得られた乾燥粉末を１００mlの三ツ
口フラスコにとり、これに触媒として塩化白金酸のトリ
−ｎ−オクチルメチルアンモニウム塩０．５mgと１−オ
クテン（疎水性基Ｒ Ｃ₈）４０mlを加えて油浴中で５
時間還流加熱した。これをグラスフィルターで濾過し、
続いてクロロホルムおよびアセトンで充分洗浄し濾過し
た後、１０５℃の恒温槽に入れ２時間乾燥して実施例２
にかかる液体クロマトグラフィー用充填剤を得た。

【００６４】溶出例２−１ 上記実施例２で作成した充填剤を内径４．６mm、長さ１
０cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で
充填し、充填カラムを作成した。このカラムを用いてラ
ットコントロール血漿（試料Ａ）、およびラットコント
ロール血漿にフェニトイン（４０μg/ml）を標準添加し
たもの（試料Ｂ）の分離状態を調べた。移動相は、１０
０mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃
ＣＮ（４２．５−４２．５−１５）を１．０ml/minで送
液し、検出は２５４nmで行なった。また、注入量は１０
μlであった。

【００６５】得られたクロマトグラムを図１０に示す。
図１０（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラット血漿タンパ
クのピークが注入後直ちに溶出した。図１０（Ｂ）は試
料Ｂを示すもので、ラット血漿タンパクの後に、フェニ
トインのピークが溶出し、血漿成分と良好に分離して
いる。溶出例２−２ 実施例２で作成した充填剤を、内径４．６mm、長さ１０
cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で充
填し、充填カラムを作成した。

【００６６】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）、およびラットコントロール血漿にカルバ
マゼピン（１０μg/ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）
の分離状態を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂Ｐ
Ｏ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４２．５−
４２．５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は２８
５nmで行なった。また、注入量は１０μlであった。得
られたクロマトグラムを図１１に示す。図１１（Ａ）は
試料Ａを示すもので、ラット血漿タンパクのピークが注
入後直ちに溶出した。

【００６７】図１１（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、ラッ
ト血漿タンパクの後に、カルバマゼピンのピークが溶
出し、血漿成分と良好に分離している。溶出例２−３ 実施例２で作製した充填剤を、内径４．６mm、長さ１０
cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で充
填し、充填カラムを作成した。このカラムを用いてラッ
トコントロール血漿（試料Ａ）、およびラットコントロ
ール血漿にフェノバルビタール（２０μg/ml）を標準添
加したもの（試料Ｂ）の分離状態を調べた。移動相は、
１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−Ｃ
Ｈ₃ＣＮ（４５−４５−１０）を１．０ml/minで送液
し、検出は２４０nmで行なった。また、注入量は１０μ
lであった。

【００６８】得られたクロマトグラムを図１２に示し
た。図１２（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラット血漿タ
ンパクのピークが注入後直ちに溶出した。図１２（Ｂ）
は試料Ｂを示すもので、ラット血漿タンパクの後に、フ
ェノバルビタールのピークが溶出し、血漿成分と良好
に分離している。

【００６９】実施例３ 親水性化処理−疎水性化処理に
より製造した充填剤（２） 製造法 約６０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体５ｇと環状シリコーン化合物（化１において、Ｒ
₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）２ｇと
を、両者が連結された別々の密封容器にとり、環状シリ
コーン化合物を窒素バブリングすることによって気相状
態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させた。

【００７０】続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出
し、恒温槽内において１０５℃で１時間加熱した。冷却
後、粉体５ｇを２００mlの三ツ口フラスコに取り、これ
に触媒として塩化白金酸０．５mg、テトラオール５ｇと
水４０mlとを加えて油浴中において０．５時間還流加熱
した後、グラスフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、
さらに水およびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５
℃の恒温槽に入れ２時間乾燥させた。

【００７１】次いで得られた粉末を１００mlの三ツ口フ
ラスコにとり、これに触媒として塩化白金酸のトリ−ｎ
−ブチルアンモニウム塩０．５mgとスチレン（疎水性基
Ｒフェニル）２５mlを加えて油浴中で５時間還流加熱し
た。これをグラスフィルターで濾過し、続いてトルエ
ン、クロロホルムおよびアセトンで充分洗浄し濾過した
後、１０５℃の恒温槽に入れ２時間乾燥して本実施例に
かかる液体クロマトグラフィー用充填剤を得た。

【００７２】溶出例３−１ 上記実施例３で作成した充填剤を内径４．６mm、長さ１
０cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で
充填し、充填カラムを作成した。このカラムを用いてラ
ットコントロール血漿（試料Ａ）およびラットコントロ
ール血漿にフェニトイン（４０μg/ml）を標準添加した
もの（試料Ｂ）の分離状態を調べた。移動相は、１００
mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃Ｃ
Ｎ（４２．５−４２．５−１５）を１．０ml/minで送液
し、検出は２５４nmで行なった。また、注入量は１０μ
lであった。得られたクロマトグラムを図１３に示す。

【００７３】図１３（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラッ
ト血漿タンパクのピークが注入後直ちに溶出した。図１
３（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、ラット血漿タンパクの
後に、フェニトインのピークが溶出し、血漿成分と良
好に分離している。溶出例３−２ 実施例３で作成した充填剤を、内径４．６mm、長さ１０
cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で充
填し、充填カラムを作成した。

【００７４】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）およびラットコントロール血漿にカルバマ
ゼピン（１０μg/ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）の
分離状態を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄
−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４２．５−４
２．５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は２８５
nmで行なった。また、注入量は１０μlであった。得ら
れたクロマトグラムを図１４に示す。図１４（Ａ）は試
料Ａを示すもので、ラット血漿タンパクのピークが注入
後直ちに溶出した。図１４（Ｂ）は試料Ｂを示すもの
で、ラット血漿タンパクの後に、カルバマゼピンのピ
ークが溶出し、血漿成分と良好に分離している。

【００７５】実施例４ 親水性化処理−疎水性化処理に
より製造した充填剤（３） 製造法 約６０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（化１において、
Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）２ｇ
とを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環状シ
リコーン化合物を窒素バブリングすることによって気相
状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させた。
続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出し、恒温槽内
において１０５℃で１時間加熱した。

【００７６】冷却後、粉体５ｇを２００mlの三ツ口フラ
スコに取り、これに触媒として塩化白金酸０．５mg、テ
トラオール（水酸基を有する親水性基Ｒ’）５ｇ、水４
０mｌを加えて油浴中において６時間還流加熱した後、
グラスフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、さらに水
およびエタノールで充分洗浄し、しかる後１０５℃の恒
温槽に入れ２時間乾燥させた。

【００７７】次いで得られた乾燥粉末を１００mlの三ツ
口フラスコにとり、これに触媒として塩化白金酸のトリ
−ｎ−オクチルメチルアンモニウム塩０．５mgと１−オ
クタデセン（疎水性基Ｒ Ｃ₁₈）３０mlを加えて油浴中
で５時間還流加熱した。これをグラスフィルターで濾過
し、続いてクロロホルム、メタノールおよび水で充分洗
浄し濾過した後、１０５℃の恒温槽に入れ２時間乾燥し
て実施例４にかかる液体クロマトグラフィー用充填剤を
得た。

【００７８】溶出例４−１ 上記実施例４で作成した充填剤を内径４．６mm、長さ１
０cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で
充填し、充填カラムを作成した。このカラムを用いてラ
ットコントロール血漿（試料Ａ）およびラットコントロ
ール血漿にフェノバルビタール（２０μg/ml）を標準添
加したもの（試料Ｂ）の分離状態を調べた。移動相は、
１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−Ｃ
Ｈ₃ＣＮ（４５−４５−１０）を１．０ml/minで送液
し、検出は２４０nmで行なった。また、注入量は１０μ
lであった。得られたクロマトグラムを図１５に示し
た。

【００７９】図１５（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラッ
ト血漿タンパクのピークが注入後直ちに溶出した。図１
５（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、ラット血漿タンパクの
後に、フェノバルビタールのピークが溶出し、血漿成
分と良好に分離している。溶出例４−２ 実施例４で作成した充填剤を、内径４．６mm、長さ１０
cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で充
填し、充填カラムを作成した。

【００８０】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）およびラットコントロール血漿にカルバマ
ゼピン（１０μg/ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）の
分離を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１
００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ 3ＣＮ（４２．５−４２．
５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は２８５nmで
行なった。また、注入量は１０μlであった。

【００８１】得られたクロマトグラムを図１６に示す。
図１６（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラット血漿タンパ
クのピークが注入後直ちに溶出した。図１６（Ｂ）は試
料Ｂを示すもので、ラット血漿タンパクの後に、カルバ
マゼピンのピークが溶出し、血漿成分と良好に分離し
ている。

【００８２】実施例５ 疎水，親水性化同時処理により
製造した充填剤 製造法 約６０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（化１において、
Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）２ｇ
とを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環状シ
リコーン化合物を窒素バブリングすることによって気相
状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させた。

【００８３】続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出
し、恒温槽内において１０５℃で１時間加熱した。冷却
後、粉体３ｇを２００mlの三ツ口フラスコに取り、これ
に触媒として塩化白金酸０．５mg、テトラオール（水酸
基を有する親水性基Ｒ’）１．６３８ｇ、スチレン（疎
水性基Ｒ フェニル）０．１２１９ｇ、ｐ−ｔ−ブチル
カテコール１mgおよびジメチルホルムアミド４０mlを加
えて油浴中において１２０℃で５時間還流加熱した後、
グラスフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、さらにア
セトンおよび水で充分洗浄し、しかる後１０５℃の恒温
槽に入れ２時間乾燥させた。

【００８４】なお、上記の反応は、シリコーンポリマー
で被覆したシリカゲルにおける、シリコーンポリマーの
Ｓｉ−Ｈ基の総モル数を１０としたとき、テトラオー
ル：スチレンのモル比が１０：２となる場合の添加量で
ある。なお、ここでは、Ｓｉ−Ｈ基のモル数から換算
し、その添加量を決定しているが、この添加量は任意に
かえることができる。また、疎水性基の添加量をＳｉ−
Ｈ基の総モル数より少なくし、テトラオールの添加量は
過剰量を加えても問題はない。すなわち、テトラオール
の量をスチレン（１−オクタデセン，１−オクテン等）
より過剰に加えることができる。

【００８５】これは−ＳｉＨ基とスチレンとの反応性
が、−ＳｉＨ基とテトラオールとの反応性と比較して極
めて大きいためである。なお、反応溶媒はエタノール、
メタノール、イソプロパノール等のアルコールあるいは
水−アルコール系が好ましいと考えられる。溶出例５−１ 上記実施例５で作成した充填剤を内径４．６mm、長さ１
０cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で
充填し、充填カラムを作成した。

【００８６】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）、およびラットコントロール血漿にフェニ
トイン（４０μg/ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）の
分離を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１
００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ 3ＣＮ（４２．５−４２．
５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は２５４nmで
行なった。また、注入量は１０μlであった。得られた
クロマトグラムを図１７に示した。

【００８７】図１７（Ａ）は試料Ａを示すもので、ラッ
ト血漿タンパクのピークが注入後直ちに溶出した。図１
７（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、ラット血漿タンパクの
後に、フェニトインのピークが溶出し、血漿成分と良
好に分離している。溶出例５−２ 実施例５で作成した充填剤を、内径４．６mm、長さ１０
cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で充
填し、充填カラムを作成した。

【００８８】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）、およびラットコントロール血漿にカルバ
マゼピン（１０μg/ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）
の分離を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−
１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４２．５−４
２．５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は２８５
nmで行なった。また、注入量は１０μlであった。得ら
れたクロマトグラムを図１８に示す。図１８（Ａ）は試
料Ａを示すもので、ラット血漿タンパクのピークが注入
後直ちに溶出した。図１８（Ｂ）は試料Ｂを示すもの
で、ラット血漿タンパクの後に、カルバマゼピンのピ
ークが溶出し、血漿成分と良好に分離している。

【００８９】実施例６ 疎水性化−エポキシ化−親水性
化法 製造法 約６０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（化１において、
Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）２ｇ
とを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環状シ
リコーン化合物を窒素バブリングすることによって気相
状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させた。
続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出し、恒温槽内
において１０５℃で１時間加熱した。

【００９０】冷却後、粉体８ｇを２００mlの三ツ口フラ
スコに取り、これに触媒として塩化白金酸のトリ−ｎ−
ブチルアミン塩０．５mg、スチレン（疎水性基Ｒ フェ
ニル）０．１５７９ｇ、トルエン４０mlおよびｐ−ｔ−
ブチルカテコール１０mgを加えて油浴中において１２０
℃で５時間還流加熱した後、グラスフィルター（Ｇ−
４）を用いて濾過し、さらにトルエンおよびアセトンで
充分洗浄し、しかる後１０５℃の恒温槽に入れ２時間乾
燥させた。次いで、乾燥粉体と、触媒として塩化白金酸
０．５mgとを２００mlを三ツ口フラスコにとり、イソプ
ロピルアルコール３０mlおよびアリルグリシジルエーテ
ル（中間基）１５ｇを加えて油浴中で５時間還流加熱し
た。これをグラスフィルターで濾過し、続いてイソプロ
ピルアルコールおよびアセトンで充分洗浄した後、濾過
し１０５℃の恒温槽に入れ１時間乾燥させた。

【００９１】次に、乾燥粉体１．５ｇを２００mlの三ツ
口フラスコにとり、これに触媒としてリン酸二水素アン
モニウム０．２ｇと水４０mlおよびジグリセリン４ｇを
加えて油浴中で５時間還流加熱した。これをグラスフィ
ルターで濾過し、水およびアセトンで充分洗浄した後、
濾過し、１０５℃の恒温槽に入れ１時間乾燥させて実施
例６にかかる充填剤を得た。溶出例６−１ 上記実施例６で作成した充填剤を内径４．６mm、長さ１
０cmのステンレススチール製カラムに平衡スラリー法で
充填し、充填カラムを作成した。

【００９２】このカラムを用いてラットコントロール血
漿（試料Ａ）、およびラットコントロール血漿にフェノ
バルビタール（２０μg/ml）を標準添加したもの（試料
Ｂ）の分離状態を調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ
₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４５−
４５−１０）を１．０ml/minで送液し、検出は２４０nm
で行なった。また、注入量は１０μlであった。得られ
たクロマトグラムを図１９に示す。図１９（Ａ）は試料
Ａを示すもので、ラット血漿タンパクのピークが注入後
直ちに溶出した。図１９（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、
ラット血漿タンパクの後に、フェニトインのピークが
溶出し、血漿成分と良好に分離している。

【００９３】実施例７ 疎水性化処理−親水性化処理に
より製造された充填剤 製造法 約８０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（前記化１におい
て、Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）
２ｇとを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環
状シリコーン化合物を窒素バブリングすることによって
気相状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させ
た。続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出し、恒温
槽内において１０５℃で１時間加熱した。

【００９４】冷却後、粉体１０ｇを２００mlの三ツ口フ
ラスコに取り、反応溶液としてトルエン４０ml、触媒と
して塩化白金酸のトリ−ｎ−ブチルアンモニウム塩１m
g、スチレン（疎水性基Ｒ）１９７．３mg（Ｓｉ−Ｈ基
のモル数に対して５％（モル比）に相当）、ｐ−ｔ−ブ
チルカテコール（スチレンの重合禁止剤）１０ｍｇとを
加えて油浴中において１２０℃で５時間還流加熱した
後、グラスフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、さら
にトルエンおよびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０
５℃の恒温槽に入れ１時間乾燥させた。

【００９５】次いで得られた粉末１０ｇおよび触媒とし
て塩化白金酸１mgを５００mlの三ツ口フラスコにとり、
これに水１００ml、およびテトラオール（水酸基を有す
る親水性基Ｒ’）１０ｇを加えて油浴中で４時間還流加
熱した。これをグラスフィルターで濾過し、続いて水お
よびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５℃の恒温槽
に入れ１時間乾燥して本実施例にかかる液体クロマトグ
ラフィー用充填剤を得た。 溶出例７−１ 実施例７にかかる充填剤１．５ｇをパッカーとポンプを
用い、内径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチール
製カラムに平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成
した。

【００９６】このカラムを用いてコウシコントロール血
清にカルバマゼピン（１０μg/ml）を標準添加したもの
を試料とし試料注入を連続して行い、試験開始時と５０
０回連続注入後のカルバマゼピンのｋ’及びピ−ク形状
について調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−
１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４４−４４−１
２）を１．０ml/minで送液し、検出は２８５nmで行なっ
た。また、注入量は１０μlであった。

【００９７】得られたクロマトグラムを図２０に示す。
図２０（Ａ）は試料の試験開始時を示すもので、コウシ
血清タンパクのピークが注入後直ちに溶出し、カルバマ
ゼピンのｋ’は１３．２であった。図２０（Ｂ）は試
料注入５００回目を示すもので、コウシ血清タンパクの
後に、カルバマゼピンのピークが溶出し、ｋ’は１
３．７と試験開始時とほとんど変化なく、またピ−ク形
状も変化なく、本充填剤は非常に安定であった。

【００９８】実施例８ 疎水性化処理−親水性化処理に
より製造された充填剤 製造法 約８０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（前記化１におい
て、Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）
２ｇとを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環
状シリコーン化合物を窒素バブリングすることによって
気相状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させ
た。続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出し、恒温
槽内において１０５℃で１時間加熱した。

【００９９】冷却後、粉体４ｇを２００mlの三ツ口フラ
スコに取り、反応溶液としてトルエン４０ml、触媒とし
て塩化白金酸のトリ−オクチルメチルアンモニウム塩２
mg、１−オクテン（疎水性基Ｒ）１７０．１mg（Ｓｉ−
Ｈ基のモル数に対して１０％（モル比）に相当）とを加
えて油浴中において１２０℃で５時間還流加熱した後、
グラスフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、さらにト
ルエンおよびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５℃
の恒温槽に入れ１時間乾燥させた。

【０１００】次いで得られた粉末１．８ｇおよび触媒と
して塩化白金酸１mgを２００mlの三ツ口フラスコにと
り、これに水４０ml、およびポリオキシエチレンアリル
エ−テル（エチレンオキサイド１６モル添加物）（水酸
基を有する親水性基Ｒ’）４ｇを加えて油浴中で４時間
還流加熱した。これをグラスフィルターで濾過し、続い
て水およびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５℃の
恒温槽に入れ１時間乾燥して本実施例にかかる液体クロ
マトグラフィー用充填剤を得た。 溶出例８−１ 実施例８にかかる充填剤をパッカーとポンプを用い、内
径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチール製カラム
に平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成した。

【０１０１】このカラムを用いてコウシコントロール血
清（試料Ａ）、およびコウシコントロール血清にテオフ
ィリン（１０μg/ml）及びカフェイン（１０μg/ml）を
標準添加したもの（試料Ｂ）の分離状態を調べた。移動
相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰ
Ｏ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４７．５−４７．５−５）を１．０ml
/minで送液し、検出は２７０nmで行なった。また、注入
量は１０μlであった。 得られたクロマトグラムを図
２１に示す。

【０１０２】図２１（Ａ）は試料Ａを示すもので、コウ
シ血清タンパクのピークが注入後直ちに溶出した。図２
１（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、コウシ血清タンパクの
後に、テオフィリン及びカフェインのピークが溶出
し、血清成分と良好に分離している。溶出例８−２ 実施例８にかかる充填剤１．５ｇをパッカーとポンプを
用い、内径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチール
製カラムに平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成
した。

【０１０３】このカラムを用いてコウシコントロール血
清にフェノバルビタ−ル（２０μg/ml）を標準添加した
ものを試料とし試料注入を連続して行い、試験開始時と
５００回連続注入後のフェノバルビタ−ルのｋ’及びピ
−ク形状について調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ
₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４２．
５−４２．５−１５）を１．０ml/minで送液し、検出は
２５４nmで行なった。また、注入量は２０μlであっ
た。

【０１０４】得られたクロマトグラムを図２２に示す。
図２２（Ａ）は試料の試験開始時を示すもので、コウシ
血清タンパクのピークが注入後直ちに溶出し、フェノバ
ルビタ−ルのｋ^,は５．８５であった。図２２（Ｂ）は
試料注入５００回目を示すもので、コウシ血清タンパク
の後に、フェノバルビタ−ルのピークが溶出し、ｋ^,
は５．８５と試験開始時と変化なく、またピ−ク形状も
ほとんど変化なく、本充填剤は非常に安定であった。

【０１０５】実施例９ 疎水性化処理−親水性化処理に
より製造された充填剤 製造法 約８０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（前記化１におい
て、Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）
２ｇとを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環
状シリコーン化合物を窒素バブリングすることによって
気相状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させ
た。続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出し、恒温
槽内において１０５℃で１時間加熱した。

【０１０６】冷却後、粉体４ｇを１００mlの三ツ口フラ
スコに取り、反応溶液としてトルエン２０ml、触媒とし
て塩化白金酸のトリ−ｎ−ブチルアンモニウム塩２mg、
スチレン（疎水性基Ｒ）１５７．９mg（Ｓｉ−Ｈ基のモ
ル数に対して１０％（モル比）に相当）、ｐ−ｔ−ブチ
ルカテコール（スチレンの重合禁止剤）１mgとを加えて
油浴中において１２０℃で５時間還流加熱した後、グラ
スフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、さらにトルエ
ンおよびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５℃の恒
温槽に入れ１時間乾燥させた。

【０１０７】次いで得られた粉末２ｇおよび触媒として
塩化白金酸１mgを２００mlの三ツ口フラスコにとり、こ
れに水４０ml、およびポリオキシエチレンアリルエ−テ
ル（水酸基を有する親水性基Ｒ’）６ｇを加えて油浴中
で５時間還流加熱した。これをグラスフィルターで濾過
し、続いて水およびアセトンで充分洗浄し、しかる後１
０５℃の恒温槽に入れ１時間乾燥して本実施例にかかる
液体クロマトグラフィー用充填剤を得た。 溶出例９−１ 実施例９にかかる充填剤をパッカーとポンプを用い、内
径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチール製カラム
に平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成した。

【０１０８】このカラムを用いてコウシコントロール血
清（試料Ａ）、およびコウシコントロール血清にフェノ
バルビタ−ル（２０μg/ml）、カルバマゼピン（１０μ
g/ml）、フェニトイン（４０μg/ml）を標準添加したも
の（試料Ｂ）の分離状態を調べた。移動相は、１００mM
ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ
（４２．５−４２．５−１５）を１．０ml/minで送液
し、検出は２５４nmで行なった。また、注入量は１０μ
lであった。

【０１０９】得られたクロマトグラムを図２３に示す。
図２３（Ａ）は試料Ａを示すもので、コウシ血清タンパ
クのピークが注入後直ちに溶出した。図２３（Ｂ）は試
料Ｂを示すもので、コウシ血清タンパクの後に、フェノ
バルビタ−ル、カルバマゼピン及びフェニトイン
のピークが溶出し、血清成分と良好に分離している。

【０１１０】実施例１０ 疎水性化処理−親水性化処理
により製造された充填剤 製造法 約８０Åの細孔を有し、平均粒径５μmの球形シリカゲ
ル粉体１０ｇと環状シリコーン化合物（前記化１におい
て、Ｒ₁＝ＣＨ₃、ａ＝３〜５、ｂ＝０、ｃ＝０のもの）
２ｇとを、両者が連結された別々の密封容器にとり、環
状シリコーン化合物を窒素バブリングすることによって
気相状態でシリカゲル粉体表面に接触させ表面重合させ
た。続いて、容器からシリカゲル粉体を取り出し、恒温
槽内において１０５℃で１時間加熱した。

【０１１１】冷却後、粉体４ｇを１００mlの三ツ口フラ
スコに取り、反応溶液としてトルエン２０ml、触媒とし
て塩化白金酸のトリ−ｎ−ブチルアンモニウム塩２mg、
スチレン（疎水性基Ｒ）３１５．８mg（Ｓｉ−Ｈ基のモ
ル数に対して２０％（モル比）に相当）、ｐ−ｔ−ブチ
ルカテコール（スチレンの重合禁止剤）１ｍｇとを加え
て油浴中において１２０℃で５時間還流加熱した後、グ
ラスフィルター（Ｇ−４）を用いて濾過し、さらにトル
エンおよびアセトンで充分洗浄し、しかる後１０５℃の
恒温槽に入れ１時間乾燥させた。

【０１１２】次いで得られた粉末２ｇおよび触媒として
塩化白金酸１mgを２００mlの三ツ口フラスコにとり、こ
れに水４０ml、およびポリオキシエチレンアリルエ−テ
ル（水酸基を有する親水性基Ｒ’）６ｇを加えて油浴中
で５時間還流加熱した。これをグラスフィルターで濾過
し、続いて水およびアセトンで充分洗浄し、しかる後１
０５℃の恒温槽に入れ１時間乾燥して本実施例にかかる
液体クロマトグラフィー用充填剤を得た。 溶出例１０−１ 実施例１０にかかる充填剤１．５ｇをパッカーとポンプ
を用い、内径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチー
ル製カラムに平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作
成した。

【０１１３】このカラムを用いてコウシコントロール血
清（試料Ａ）、およびコウシコントロール血清にコルチ
ゾ−ル（１０μg/ml）及びコルチコステロン（１０μg/
ml）を標準添加したもの（試料Ｂ）の分離を調べた。移
動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄−１００mM Ｎａ₂Ｈ
ＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４２．５−４２．５−１５）を１．
０ml/minで送液し、検出は２５４nmで行なった。また、
注入量は１０μlであった。得られたクロマトグラムを
図２４に示す。

【０１１４】図２４（Ａ）は試料Ａの溶出状態を示すも
ので、コウシ血清タンパクのピークが注入後直ちに溶出
した。図２４（Ｂ）は試料Ｂを示すもので、コウシ血清
タンパクの後に、コルチゾ−ル及びコルチコステロン
のピークが溶出し、血清成分と良好に分離している。溶出例１０−２ 実施例１０にかかる充填剤をパッカーとポンプを用い、
内径４．６mm、長さ１０cmのステンレススチール製カラ
ムに平衡スラリー法で充填し、充填カラムを作成した。

【０１１５】このカラムを用いてコウシコントロール血
清にトリメトプリム（２５μg/ml）を標準添加したもの
を試料とし、試料注入を連続して行い、試験開始時と３
５０回連続注入後のトリメトプリムのｋ’及びピ−ク形
状について調べた。移動相は、１００mM ＮａＨ₂ＰＯ₄
−１００mM Ｎａ₂ＨＰＯ₄−ＣＨ₃ＣＮ（４５−４５−
１０）を１．０ml/minで送液し、検出は２５４nmで行な
った。また、注入量は２０μlであった。

【０１１６】得られたクロマトグラムを図２５に示す。
図２５（Ａ）は試料の試験開始時を示すもので、コウシ
血清タンパクのピークが注入後直ちに溶出し、トリメト
プリムのｋ’は６．８８であった。図２５（Ｂ）は試料
注入３５０回目を示すもので、コウシ血清タンパクの後
に、トリメトプリムのピークが溶出し、ｋ’は６．８
６と試験開始時とほとんど変化なく、またピ−ク形状も
変化なく、本充填剤は非常に安定であった。

【０１１７】

【発明の効果】以上説明したように本発明にかかるカラ
ム充填剤は、シリコーン樹脂が担体を均一にコートした
樹脂カプセル型であるため、個々の粉体の持つ極性基
（例えばシリカゲルのシラノール基）の影響をほとんど
受けない。また、充填剤の外表面の一部は親水性である
ため、タンパク質等の吸着は行われず、安定でしかも分
離能に優れた充填剤を得ることができる。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明にかかる疎水性化−親水性化法の工程説
明図である。

【図２】本発明にかかる親水性化−疎水性化法の工程説
明図である。

【図３】本発明にかかる疎水，親水性化同時処理法の工
程説明図である。

【図４】本発明にかかる疎水性化−エポキシ化−親水性
化法の工程説明図である。

【図５】，

【図６】，

【図７】，

【図８】，

【図９】本発明の実施例１にかかる充填剤による分離状
態の説明図である。

【図１０】，

【図１１】，

【図１２】本発明の実施例２にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図１３】，

【図１４】本発明の実施例３にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図１５】，

【図１６】本発明の実施例４にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図１７】，

【図１８】本発明の実施例５にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図１９】本発明の実施例６にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図２０】本発明の実施例７にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図２１】，

【図２２】本発明の実施例８にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図２３】本発明の実施例９にかかる充填剤による分離
状態の説明図である。

【図２４】，

【図２５】本発明の実施例１０にかかる充填剤による分
離状態の説明図である。

【符号の説明】

１０ 多孔性担体（シリカゲル） １２ シリコーンポリマー １４ 疎水性基 １６ 水酸基を有する親水性基

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者 大津 裕 神奈川県横浜市港北区新羽町1050番地 株式会社 資生堂研究所内 (56)参考文献 神田武利、坂本敦男及び横内未知夫、 日本化学会第61春季年会講演予稿集▲Ｉ ▼、61ｓｔ、Ｎｏ．１、第615頁 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) G01N 30/48 B01D 15/08 B01J 20/26 ＣＡ（ＳＴＮ) ＪＩＣＳＴファイル（ＪＯＩＳ)

Claims (6)

(57)【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 Ｓｉ−Ｒ（Ｒは疎水性基）結合、及びＳ
   ｉ−Ｒ’（Ｒ’は水酸基を有する親水性基）結合を有す
   るシリコーンポリマーで被覆された多孔性担体よりなる
   ことを特徴とするカラム充填剤。
2. 【請求項２】 請求項１に記載のカラム充填剤におい
   て、Ｒは炭素数１〜１８の炭化水素残基であることを特
   徴とするカラム充填剤。
3. 【請求項３】 多孔性担体をシリコーンポリマーで被覆
   する被覆工程と、 前記被覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基に、二
   重結合を有する炭化水素基Ｒを結合させ、−Ｓｉ−Ｒ基
   とする疎水性化工程と、 前記被覆シリコンポリマー−ＳｉＨ残基の残部の少なく
   とも一部に、二重結合および水酸基を有する親水性基
   Ｒ’を結合させ、−Ｓｉ−Ｒ’基とする親水性化工程
   と、 を含むことを特徴とするカラム充填剤の製造方法。
4. 【請求項４】 多孔性担体をシリコーンポリマーで被覆
   する被覆工程と、 前記被覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基に、二
   重結合および水酸基を有する親水性基Ｒ’を結合させ、
   −Ｓｉ−Ｒ’基とする親水性化工程と、 前記被覆シリコンポリマー−ＳｉＨ残基の残部の少なく
   とも一部に、二重結合を有する炭化水素基Ｒを結合さ
   せ、−Ｓｉ−Ｒ基とする疎水性化工程と、 を含むことを特徴とするカラム充填剤の製造方法。
5. 【請求項５】 多孔性担体をシリコーンポリマーで被覆
   する被覆工程と、 前記被覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基に、二
   重結合を有する炭化水素基Ｒと、二重結合および水酸基
   を有する親水性基Ｒ’を修飾し、−Ｓｉ−Ｒ基および−
   Ｓｉ−Ｒ’基を形成する修飾工程と、 を含むことを特徴とするカラム充填剤の製造方法。
6. 【請求項６】 多孔性担体をシリコーンポリマーで被覆
   する被覆工程と、 前記被覆シリコンポリマーの一部の−ＳｉＨ残基に、二
   重結合を有する炭化水素基Ｒを結合させ、−Ｓｉ−Ｒ基
   とする疎水性化工程と、 前記被覆シリコンポリマー−ＳｉＨ残基の残部の少なく
   とも一部に、二重結合を有し他端にエポキシ基を有する
   中間基を結合させる中間基修飾工程と、 前記中間基のエポキシ基に、グリセリン基を反応させ、
   −Ｓｉ−Ｒ’基とする親水性化工程と、 を含むことを特徴とするカラム充填剤の製造方法。