JP3535513B2

JP3535513B2 - Ｄｎａ損傷因子に対する細胞の感受性を増強する方法および組成物

Info

Publication number: JP3535513B2
Application number: JP50094194A
Authority: JP
Inventors: エス．スティーグ，パトリシア; エイ．リオッタ，ランス; フラトウ，ウルシュラ; チュー，ギルバート
Priority date: 1992-05-20
Filing date: 1993-05-20
Publication date: 2004-06-07
Anticipated expiration: 2019-06-07
Also published as: AU4385793A; WO1993023546A1; CA2136094A1; EP0642583A1; EP0642583B1; DK0642583T3; ES2110612T3; DE69314633T2; CA2136094C; GR3025500T3; ATE159294T1; US5770386A; DE69314633D1; JPH08501205A; AU677589B2

Description

【発明の詳細な説明】発明の背景種々の参考文献および特許を以下に記載する。これら
の参考文献の全ての開示は、当該技術の状況をさらに完
全に記載するために、本明細書中に参考として援用され
ている。

NM23は、高度に転移性の腫瘍細胞において、発現が減
少することに基づいて同定されたタンパク質である。19
87年10月13日出願の米国特許第5,049,662号（1991年９
月17日発行）は、nm23のクローニングが最初に成功した
こと、およびnm23のRNAレベルから転移性の潜在能力が
予想されることを記載している（LeoneらのCell 65:25
〜35（1991）もまた参照のこと）。nm23は、続いて、タ
マホコリカビ（Dictyostelium）ヌクレオチドジホスフ
ェートキナーゼ（これ以後は「NDPK」とする）と相同で
あることが示された（WalletらのJ.Natl.Cancer Inst.8
2:1199〜1202（1990））。NDPKは、末端のリン酸を、ヌ
クレオシド三リン酸からヌクレオシド二リン酸へ変換す
ることが長い間知られていた。ヒトnm23の密接に関連し
た２つの形態、nm23−H1およびnm23−H2（DNAレベルで
約90％が相同である）が同定されている（Rosengardら
のNature 342:177〜180（1989）;StahlらのCancer Res.
48:6550〜6554（1991））。

ChuおよびChangのScience 242:564〜567（1988）は、
核因子（損傷したDNAを結合させ、色素性乾皮症の被験
体のＥ相補グループでは欠落している）を同定した。
「XPE−BF」と称されるこの因子は、DNA除去修復の認識
段階において関連していると考えられる。XPE−BFの機
能相同体は、酵母の光リアーゼ（ピリミジンの二量体を
修復する光回復酵素）である（PattersonおよびChuのMo
l.Cell−Biol.9:5105〜5112（1989））。DNAを損傷させ
る化学療法薬剤であるシスプラチンの濃度を徐々に増大
させて成長した腫瘍細胞系を、核のXPE−BFレベルに対
して試験した（ChuおよびChangのP.N.A.S.87:3324〜332
7（1990））。HeLa−R1細胞系は、親のHeLa細胞より
も、シスプラチンの成長阻害に対して4.7倍耐性である
ことが見い出され、そして同時に、XPE−BFレベルを４
倍増大することを示した。しかしながら、シスプラチン
においてHeLa−R3細胞系をさらに選択すると、シスプラ
チンの成長阻害に対して親細胞よりも14倍耐性であり、
XPE−BFレベルのさらなる増加は伴わなかった。

本発明は、増強したnm23の発現が、化学療法および放
射線療法に対する細胞の感受性を増強するという驚くべ
き発見を提供する。さらに、主要なデータは、nm23の発
現が増強されると、XPE−BFのレベルが低下し得ること
を示している。従って、本発明は、DNA損傷因子に対す
る腫瘍細胞の感受性を増強するための興味ある手段を提
供する。さらに、薬剤耐性が、放射線療法および化学療
法の失敗の主な理由であるので、本発明は、これらの治
療に対する腫瘍細胞の耐性を低下させるのに非常に必要
とされる手段を提供する。

発明の要旨本発明は、細胞中のNM23の量を増大させる工程を包含
する、DNA損傷因子に対する細胞の感受性を増強する方
法を提供する。この方法は、化学療法および放射線に対
する腫瘍細胞の感受性を増強するのに特に有用である。

図面の簡単な説明図１は、マウスＫ−1735 TKコントロール２−４およ
びNM23を発現する４−６細胞クローンのインビトロでの
シスプラチン感受性を示している。表示された投与量の
シスプラチンで、細胞を２日間インキュベートし、トリ
バンブルー排除および血球計を用いて、培養物あたりの
生存細胞の数を測定した。このデータは、平均値±S.E.
M.（シスプラチン処理細胞をシスプラチン未処理細胞で
割った比）として示される。

図２は、マウスＫ−1735 TKコントロールA2およびNM2
3を発現するA3細胞クローンのインビトロでのシスプラ
チン感受性を示している。

図３は、ヒトMDA−MB−435乳癌細胞系のコントロール
Ｃ−100およびＣ−103クローンならびにNM23−H1を発現
するH1−170およびH1−177クローンのシスプラチンに対
するインビトロでの感受性を示している。

発明の詳細な説明本発明は、細胞中のNM23の量を増大させる工程を包含
する、DNA損傷因子に対する細胞の感受性を増強する方
法を提供する。重要な発見とは、実施例で示すように、
細胞中のNM23を増大させることによって、細胞がDNA損
傷因子（例えば、化学療法剤および放射線）に対してさ
らに感受性が大きくなることである。従って、「感受性
を増強すること」によって、腫瘍細胞の増殖を阻害する
のに必要とされるか、または細胞毒性効果を生じるのに
必要とされる、DNA損傷因子の平均用量が減少すること
が意図される。また、「感受性を増強すること」とは、
細胞が耐性を示す前に、投与されるDNA損傷因子の平均
用量が増加することを意味する。

上記の重要な発見によって理解され得るように、NM23
の量を増加させる厳密な方法は重要ではない。典型的に
は、NM23の量は、細胞内でNM23の発現を増強するものに
よって増加される。実施例に例示される一つの方法は、
細胞内でNM23タンパク質を発現し得るnm23遺伝子をコー
ドするベクターを、細胞にトランスフェクトすることで
ある。インビボでの使用のためには、このベクターは、
転写を行うため、細胞に感染しそしてnm23をコードする
核酸の組み込みを生じさせるウイルスであり得る。この
方法は、当該分野において周知である。例えば、Rosenb
ergらのNEJM 323:570〜578（1990）では、エクスビボ
（ex vivo）で遺伝子を細胞に導入するためのウイルス
性ベクターが記載されている。類似の構築物が、それら
の安定性を改良し組織の特異的発現のために、少し改変
されてインビボで使用され得る。転写を促進する他の方
法は、nm23遺伝子の転写を促進する、薬剤、サイトカイ
ン、またはホルモンのような化合物を用いることを包含
する。例えば、これらの化合物は、nm23をコードする遺
伝子の存在下でスクリーニングされ得る。NM23の発現を
増強するいかなる化合物も、NM23の発現を増強するため
に細胞を処理するのに用いられ得る。このような化合物
のスクリーニングは、当該分野において周知である。簡
単に言えば、低いレベルでNM23−H1およびNM23−H2を発
現する細胞系（例えば、ヒトMDA−MD−435乳癌細胞系）
が用いられ得る。細胞は、マイクロタイター皿にプレー
ト塗布され得、そして種々の薬剤でインキュベートされ
得る。インキュベーション後、培地を除去し、細胞を溶
解させる。細胞溶解物中のNM23タンパク質のレベルは、
ELISAまたは類似のアッセイにおいて、NM23のモノクロ
ーナルまたはポリクローナル抗体を用いて定量され得
る。正のコントロールとして、MDA−MD−435のトランス
フェクトH1−177クローン中のNM23タンパク質の量は、
著しいシスプラチンの感受性と関連したNM23タンパク質
の発現の量を示す。

上記の重要な発見、および実施例からも理解され得る
ように、事実上、任意の適切なDNA損傷因子に対する感
受性は、細胞中のNM23の量を増大させることにより増強
され得る。従って、実施例では、DNA損傷因子としてシ
スプラチンの使用が指示されているが、NM23の発現が増
強されることによりさらに効果的となる任意の因子が、
本発明の範囲内にある。他の適切なDNA損傷因子は、実
施例のシスプラチンに対して用いられる方法で試験され
得る。さらに、シスプラチンだけが例示されているが、
他のDNA損傷因子は通常に試験され得、そして、請求の
範囲の範囲は、NM23が増強されることによりさらに効果
的となるようなDNA損傷因子のみを包含する。

同様に、以後に示す実施例は、NM23−H1の使用を記載
している。しかしながら、NM23−H1とNM23−H2との高い
相同性のために、NM23−H2もまた本発明の方法に有効で
ある。従って、「NM23」によって、DNA損傷因子に対す
る細胞の感受性を増強するタンパク質の任意の部分が意
図される。NM23−H2およびNM23の他の任意の部分は、実
施例に示す方法を用いて、活性に対して通常に試験され
得る。NM23のフラグメントは、他のタンパク質と同様に
作製され得、そして活性は、通常の方法により試験され
得る。簡単に言うと、NM23タンパク質の部位特異的突然
変異誘発（ここで、NM23タンパク質のアミノ酸が変化す
る）が行われ得る。突然変異誘発した構築物が、腫瘍細
胞へトランスフェクトされ得、そしてシスプラチンに対
する感受性が決定され得る。NM23の感受性増強活性を停
止させる特定のアミノ酸が見い出されるとき、タンパク
質のその部分は、候補的な活性フラグメントである。確
立することは、タンパク質のフラグメントを腫瘍細胞の
翻訳開始部位上にクローニングすること、およびトラン
スフェクトした親細胞のシスプラチン耐性または感受性
を決定することを含む。あるいは、nm23の遺伝子は、挿
入または欠失と共に合成され得、発現され、そして活性
に対してスクリーニングされ得る。

いかなる細胞の感受性も、本発明の方法を用いて増強
され得るが、典型的には、感受性を増強する標的は腫瘍
細胞である。この増強された感受性は、被験体から腫瘍
をより効果的に根絶させるのに用いられ得る。実施例
は、黒色腫および癌細胞系を含む種々の細胞を用いてい
る。本明細書中に示すデータは、インビトロにおいてで
あるが、このデータからインビボで感受性を増強するこ
とが予見される。DNAの修復に関する分野において、イ
ンビトロでのデータがインビボでの成功の予見となった
多くの例が存在する（例えば、FosterらのPharmacol 2
2:147〜152（1988）;PoirierらのP.N.A.S.79:6443〜644
7（1982）;HanssonらのCancer Research 51:3384〜3390
（1991）;KinsellaおよびHaranのCancer Research 51:1
855〜1859（1991）；およびHancockらのCancer Researc
h 51:4575〜4580（1991）を参照のこと）。

本発明はまた、細胞中のNM23の量を増大させる工程を
包含する、適切な細胞中のDNA修復酵素または因子の活
性を低下させる方法を提供する。従って、DNA損傷因子
に対する細胞の感受性の増強が行われ得る一つの可能な
メカニズムは、修復酵素（例えば、XPE−BF）と結合す
ることにより、その転写を妨害することであるか、ある
いは修復酵素を不活性化することである。しかしなが
ら、NM23が、DNA損傷因子に対する細胞の感受性を増強
させるために作用するメカニズムは、上記のメカニズム
に限定されない。

少量のNM23を有する細胞に薬剤を接触させる工程、お
よび細胞に対するその効果を測定する工程を包含する、
化学療法DNA損傷活性に対して薬剤をスクリーニングす
る方法もまた提供される。この方法は、可能性のある化
学療法剤の有用性を試験するために、化学療法に耐性の
細胞系を使用する手段を提供する。従って、成功のため
のさらに正確な予想が行われる。

細胞中のNM23の発現の量を検出する工程、この量と耐
性細胞における量とを比較する工程を包含する、DNA損
傷因子に対する耐性を検出する方法もまた提供され、耐
性細胞とほぼ等しいかまたはそれより少ない量のNM23が
存在すると、耐性であることを示す。典型的な耐性細胞
中のNM23の量は、耐性であることが知られている種々の
細胞型におけるMN23の量の通常の試験により確かめられ
得る。次いで、問題となる細胞をその量で比較すること
により、化学療法または放射線療法に対する感受性を決
定する。

本発明は、さらに、被験体由来の腫瘍細胞中のNM23の
量を測定する工程、その細胞中のNM23の量とその治療に
対して感受性の細胞中の量とを比較する工程を包含す
る、DNA損傷療法に対する腫瘍の応答を予想する方法を
提供し、感受性細胞とほぼ等しいかまたはそれより多い
量のNM23が存在すると、治療に対して応答性であること
を示す。この方法はまた、本明細書中に提供される重要
な発見から支持される。この方法は、最も効果的な治療
のために、被験体の腫瘍細胞を予備スクリーニングする
手段を与える。

本発明はまた、因子に対する細胞の感受性を増強する
量でNM23の転写を促進する手段、および薬学的に受容可
能なキャリアーを含む、DNA損傷因子に対する細胞の感
受性を調節するキットを提供する。従って、このキット
としては、例えば、発現のための適切な配列を有するnm
23を含むベクター（例えば、ウイルス）が挙げられる。
転写を促進する他の手段としては、細胞に投与され得る
薬剤、サイトカイン、およびホルモンが挙げられる。こ
れらの化合物およびベクターの量は、通常の試験により
達成され得、そして当該分野において以前に知られてい
ない量である。適切なキャリアーは、例えば、リン酸緩
衝生理食塩水である。

最後に、本発明は、細胞中のNM23の量を検出する手
段、およびそのNM23の量とDNA損傷療法に対して感受性
であることが知られている量とを比較する手段を含む、
DNA損傷療法に対する細胞の感受性を検出するキットを
提供する。NM23の量を検出する手段は、多くの周知の方
法（例えば、NM23と特異的に反応する抗体を用いる方
法）を包含する。比較する手段は、上記のように、公知
の感受性量のデータであり得る。

以下の実施例は、本発明を例示することを意図してお
り、本発明を制限するものではない。

実施例1:NM23の発現によりDNA結合因子XPE−BFのレベル
が低下する。

Ｋ−1735 TK黒色腫細胞系に、構成的SV40初期プロモ
ーターに連結したマウスnm23−1 cDNAおよびLeoneらのC
ell 65:25〜35（1991）に記載されるようなマーカーと
してのpRSVネオマイシン耐性遺伝子を共トランスフェク
トした。コントロールとして、TK細胞にpRSVネオマイシ
ン耐性遺伝子のみをトランスフェクトするか、または、
nm23−１およびpRSVネオマイシン耐性遺伝子を共トラン
スフェクトし、そしてNM23−１構築物を発現しないクロ
ーンを選択した（LeoneらのCell 65:25〜35（199
1））。２回のトランスフェクション実験を、腫瘍転移
能力の異なる二つの別の継代TK細胞系を用いて、マウス
Ｋ−1735 TK細胞について行った。１セットの安定で、
高度なNM23−１発現クローンおよびコントロールクロー
ンを、TK細胞系の継代35から誘導し、これをそれぞれ４
−６および２−４と称した。別のセットの安定で、高度
なNM23−１発現クローンおよびコントロールトランスフ
ェクトTKクローンを、TK細胞系の継代10から作製し、こ
れをそれぞれA3およびA2と称した。４−６およびA3クロ
ーンにおけるトランスフェクトnm23−1 cDNAの発現を、
内因性の0.8kbのnm23 RNAに加えて、ノーザンブロット
における高分子量nm23RNA転写物を存在させることによ
り確認した。さらに、４−６およびA3のnm23−１トラン
スフェクトクローンは、それぞれ、２−４およびA2コン
トロールクローンよりも多くの免疫沈降可能なNM23タン
パク質を合成した（Leonら、前出）。

nm23−１トランスフェクト４−６クローン、コントロ
ール２−４クローン、nm23−１トランスフェクトA3クロ
ーン、およびA2コントロールクローン由来の６×10⁶個
の生存細胞を、従来の方法によって、90％（v/v）培
地、10％（v/v）DMSO中で凍結させた。これらの凍結細
胞から核抽出物を調製した。0.6μｇの核抽出物を0.2ng
の標識DNA（細菌のクロラムフェニコールアセチルトラ
ンスフェラーゼ遺伝子の5'フランキング領域およびコー
ド領域由来の148bp Pvu II−Hind IIIフラグメント（Pa
ttersonおよびChu、前出におけるf148）であって、これ
をUV殺菌ランプ（6,000J/m²）で照射し、そしてHind II
Iによる5'突出部を埋めるクレノウポリメラーゼを用い
て³²P−dATPで末端標識した）とインキュベートした。4
0ngの交互共重合体ポリ（dl−dC）−ポリ（dl−dC）お
よび20ngのサケ精子DNAを、非特異的なDNA結合をマスク
するために加えた。12％グリセロール、12mM HEPES（pH
7.9）、60mM KCl、5mM MgCl₂、4mMトリス−HCl、0.6mM
EDTA、0.6mM DTTを含有する緩衝液中で、最終体積を10
μｌにし、室温で45分間反応を行った。TBE緩衝液（89m
Mトリス−HCl、pH8、89mMホウ酸塩、2mM EDTA）中で、
厚さ0.75mmの５％ポリアクリルアミドゲルを通じて、15
0ボルトで電気泳動することにより、反応生成物を分離
した。ゲルをDE81濾紙上で乾燥させ、そしてオートラジ
オグラフに記録した。XPE−BFに対する正のコントロー
ルとして、ヒトHeLa細胞系由来の核調製物もまたアッセ
イした。

HeLa核抽出物由来のXPE−BFと損傷DNAとの結合は、移
動度の遅いバンドとして示される。Ｋ−1735 TK黒色腫
クローンからの結合活性体は、HeLa細胞の結合活性体と
類似した移動度で電気泳動した。結合活性体は、損傷DN
Aに特異的であることが示された。従って、Ｋ−1735 TK
クローンの結合活性体は、XPE−BFのマウス相同体であ
ると考えられた。コントロール２−４細胞におけるマウ
スXPE−BFの量は、NM23−１を発現する４−６細胞のそ
れよりも多かった。別のトランスフェクション実験から
は、コントロールA2クローンにおけるXPE−BFの量は、N
M23−１を発現するA3クローンのそれよりも多かった。
従って、トランスフェクトしたTKマウス黒色腫細胞にお
けるNM23の発現の増強は、核のXPE結合因子レベルの減
少に関連していた。

実施例2:化学療法薬剤であるシスプラチンに対するマウ
ス黒色腫の感受性に関するNM23発現の効果。

図１は、NM23−１を発現する４−６およびコントロー
ルの２−４のｋ−1735 TK黒色腫クローンのシスプラチ
ンに対するインビトロでの感受性を示している。図２
は、NM23−１を発現するA3およびコントロールのA2のＫ
−1735 TK黒色腫クローンのシスプラチンに対するイン
ビトロでの感受性を示している。これらの実験では、各
系からの８×10⁴個の生存腫瘍細胞を、0.9mlの完全培地
（抗生物質、グルタミン、10％ウシ胎児血清を含有する
ダルベッコMEM）中においてTC24組織培養皿にプレート
塗布し、そして37℃で数時間インキュベートし、細胞培
養皿に細胞を付着させた。シスプラチン（National Ins
titutes of Health Pharmacyから入手）を、製造者の指
定に従って水に希釈した。アリコートを遮光した容器内
で−70℃で貯蔵し、そして使用のために一度溶解させ
た。効力は、およそ１カ月の貯蔵に対して安定であり、
その後は低下した。20μml〜１μmlの最終濃度までの範
囲の投与量で、シスプラチンを培養物に加えた。コント
ロール培養物には、シスプラチンを与えなかった。培養
物を２日間インキュベートした。培地を取り除き、細胞
をトリプシン処理し、そして血球計を用いてトリパンブ
ルー中で生存細胞数/mlを計測することにより、細胞数
および細胞生存率を測定した。実験によって、二組また
は三組の培養物を各シスプラチン濃度において計測し
た。シスプラチンの各投与量における生存細胞の数を生
存コントロール細胞の数で割った。Ｋ−1735 TKクロー
ンもまた、シスプラチンを存在させて５日間までの培養
でインキュベートし、類似の阻害データを観察した。

図１に示すように、コントロール２−４細胞は、シス
プラチンの投与量に依存した成長阻害を示し、ID₅₀（50
％の細胞の成長を阻害するシスプラチンの投与量）は、
約400ng/mlであった。４−６クローンの細胞（NM23の発
現の増強で２−４と異なる）は、約110ng/mlのID₅₀を示
し、従って、これらの細胞はこの薬剤の阻害効果に対し
て非常に感受性であった。

コントロール２−４クローンは、このアッセイにおい
て、約70μg/mlのシスプラチンに対して完全な耐性を示
した。対照的に、NM23を発現する４−６細胞クローンで
は、約1ng/mlでシスプラチンに対する完全な耐性を観察
した。薬剤耐性細胞の発生は、癌治療失敗の主な理由の
一つであると考えられ、そして完全な耐性のレベルは、
臨床的な有用性に関連している。しかしながら、両測定
から、NM23の発現は、シスプラチンに対する黒色腫細胞
の感受性を増強した。

Ｋ−1735 TK黒色腫コントロールA2クローンおよびNM2
3−１発現A3クローンのシスプラチンに対する感受性を
示す図２のグラフは、これらのデータを裏付けている。
コントロールA2クローンは、約180ng/mlのシスプラチン
でID₅₀を示したが、対応するNM23発現A3クローンは、約
11ng/mlのID₅₀を示した。コントロールA2クローンは、
シスプラチンに対しほぼ完全な耐性であるブロードなシ
ョルダー（10ng/mlから延びている）を示した。NM23発
現A3クローンのほぼ完全な耐性は、シスプラチン1ng/ml
で観察された。

実施例3:化学療法薬剤であるシスプラチンに対するヒト
乳癌の感受性に関するNM23発現の効果。

一般に入手可能なMDA−MB−435細胞系を、ヒト乳癌の
胸膜滲出液から得た。これは、ヌードマウスの乳脂肪パ
ッドへの注入に対して腫瘍性かつ転移性の作用を示す。
シスプラチン感受性におけるNM23発現の効果を試験する
ため、MDA−435細胞系に、以下の２つの構築物のうち１
つをトランスフェクトした：（ａ）CMVプロモーターを
含有したpCMVneo Bam構築物（pCMVneo Bam構築物は、以
前に出版物に記載されていた（BakerらのScience 249:9
12〜915（1990））、しかし発現される接続遺伝子がな
い；（ｂ）同様のpCMVneo Bamベクターであって、これ
へ、ヒトnm23−H1 cDNA（RosengerdetらのNature 342:1
77〜180（1989））を、Bam H I部位への平滑末端連結に
より、CMVプロモーターの隣にクローニングした。連結
したプラスミドを、細菌へ形質転換し、そして微量調製
物を制限エンドヌクレアーゼ消化およびアガロースゲル
電気泳動により試験した。全ての構築物は、ネオマイシ
ン耐性マーカー遺伝子を含んでいた。標準リン酸カルシ
ウム法を用いて、MDA−435細胞に、いずれかのベクター
をトランスフェクトした。ネオマイシン耐性のnm23−H1
トランスフェクトクローンを、ノーザンブロットで観察
し得る外因性（高分子量）nm23転写物の存在に対して試
験した。２つのコントロールトランスフェクトクロー
ン、Ｃ−100およびＣ−103を、ネオマイシン耐性のコン
トロールトランスフェクトコロニーからランダムに選択
した。２つのnm23−H1トランスフェクトクローン、H1−
177およびH1−170は、コントロールクローンと比較し
て、高いレベルのNM23−H1タンパク質を発現し、これ
は、パルス標識NM23タンパク質の免疫沈降およびウェス
タンブロット分析により決定された。

図３は、コントロールＣ−100およびＣ−103ならびに
NM23−H1発現H1−170およびH1−177クローンのインビト
ロでのシスプラチン感受性を示している。コントロール
クローンは、シスプラチン５〜10μg/mlのID₅₀を示した
のに対して、H1−170およびH1−177は、それぞれ、シス
プラチン0.75〜2.0μg/mlのID₅₀を示した。ヒトNM23−H
1タンパク質の発現は、従って、ヒト乳癌細胞系のシス
プラチン感受性を増強した。マウス黒色腫細胞系と同様
に、このデータは、シスプラチン耐性が考慮される際に
さらに衝撃的である。コントロールクローンは、約1.5
〜７μg/mlのシスプラチンで、シスプラチンに対する完
全な耐性を示したのに対し、NM23−H1発現クローンは、
約140ng/mlのシスプラチンで耐性を示した。

本発明は、現時点で好ましい実施態様に関して記載さ
れているが、種々の変更が、本発明の意図から逸脱する
ことなく行われ得ることが理解されるべきである。従っ
て、本発明は、以下の請求の範囲によってのみ制限され
る。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩＣ１２Ｐ 21/02 Ａ６１Ｋ 48/00 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/577 Ｂ // Ａ６１Ｋ 48/00 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＡＧ０１Ｎ 33/577 5/00 Ｂ (72)発明者スティーグ，パトリシアエス. アメリカ合衆国メリーランド 21042, エリコットシティー，マックキュービンバレイトレイル 3513 (72)発明者リオッタ，ランスエイ. アメリカ合衆国メリーランド 20854, ポトマック，ミストウッドドライブ 9027 (72)発明者フラトウ，ウルシュラアメリカ合衆国メリーランド 20817, ベセスダ，ブリックストンレーン 9913 (72)発明者チュー，ギルバートアメリカ合衆国カリフォルニア 94303，パロアルト，コークオークウェイ 3416 (56)参考文献特表平４−506457（ＪＰ，Ａ) Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，1990年，Ｖｏｌ．８，ｐ. 3324−3327 Ｃｅｌｌ，1991年，Ｖｏｌ．65，ｐ. 25−35 ＰｒｏｃｅｅｄｉｎｇｓｏｆｔｈｅＡｍｅｒｉｃａｎＡｓｓｏｃｉａｔｉｏｎｆｏｒＣａｎｃｅｒＲｅｓｅａｒｃｈ，1990年，Ｖｏｌ．31, ｐ．504−505 (58)調査した分野(Int.Cl.⁷，ＤＢ名) C12N C12Q G01N ＢＩＯＳＩＳ／ＷＰＩ（ＤＩＡＬＯＧ) ＰｕｂＭｅｄ

Claims

(57)【特許請求の範囲】

【請求項１】NM23をコードするベクターおよび薬学的に
受容可能なキャリアを含有する、DNA損傷因子に対する
該細胞の感受性を増強するための、薬学的組成物であっ
て、該ベクターは、該細胞中のM23の量を増大させる、
薬学的組成物。
【請求項２】前記損傷因子が、化学療法剤または放射線
である、請求項１に記載の薬学的組成物。
【請求項３】前記NM23が、NM23−H1またはNM23−H2であ
る、前記のいずれかの請求項に記載の薬学的組成物。
【請求項４】前記細胞が腫瘍細胞である、前記のいずれ
かの請求項に記載の薬学的組成物。
【請求項５】前記腫瘍細胞が、黒色腫細胞、癌細胞、ま
たは肉腫細胞である、請求項４に記載の薬学的組成物。
【請求項６】請求項１から３のいずれかに記載されるNM
23増強因子および薬学的に受容可能なキャリアを含む、
前記細胞中のDNA修復酵素またはDNA修復因子の活性を低
下させるための、薬学的組成物。
【請求項７】前記酵素がXPE−BFである、請求項６に記
載の薬学的組成物。
【請求項８】化学療法DNA損傷活性について薬剤をスク
リーニングする方法であって、複数の細胞型により産生
されるNM23の量を測定する工程、細胞により産生される
NM23の量を決定する工程、最も少量のNM23を有する細胞
型を選択する工程、該薬剤と該選択された細胞型の細胞
とを接触させる工程、および該細胞に対する効果を測定
する工程を包含する、方法。
【請求項９】細胞中のNM23の発現の量を検出する工程、
および該量と耐性細胞における量とを比較する工程を包
含する、DNA損傷因子に対する耐性を予想する方法であ
って、該耐性細胞とほぼ等しいかまたはそれより少ない
量でNM23が存在すると、耐性であることを示す、方法。
【請求項１０】腫瘍細胞を有する被験体のDNA損傷療法
に対する応答を予想する方法であって、該被験体から腫
瘍細胞を得る工程、該細胞中のNM23の量を測定する工
程、および該細胞中のNM23の量と該治療に対して感受性
の細胞中の量とを比較する工程を包含し、感受性細胞と
ほぼ等しいかまたはそれより多い量でNM23が存在する
と、該治療に対して応答性であることを示す、方法。
【請求項１１】DNA損傷療法に対する細胞の感受性を検
出するためのキットであって、該細胞中のNM23の量を検
出する手段を含む、キット。
【請求項１２】NM23の量を検出する前記手段が、NM23と
特異的に反応する抗体を含む、請求項11に記載のキッ
ト。
【請求項１３】細胞中でNM23遺伝子をコードするベクタ
ーを発現させる工程を包含する、DNA損傷因子に対する
エキソビボ細胞の感受性を増強する、方法であって、該
ベクターは、該細胞中のNM23の量を増大させる、方法。