JP3539739B2

JP3539739B2 - New muramyl dipeptide derivatives

Info

Publication number: JP3539739B2
Application number: JP28480191A
Authority: JP
Inventors: 正信沖
Original assignee: 第一製薬株式会社
Priority date: 1990-10-30
Filing date: 1991-10-30
Publication date: 2004-07-07
Anticipated expiration: 2019-07-07
Also published as: JPH05230098A

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、後述の一般式（Ｉ）で表される化合物及びその塩に関する。本発明の化合物はアジュバント活性を有するとともに、インフルエンザウイルス様人工膜ワクチン、すなわちいわゆるビロソームワクチンの構成成分として有用である。
【０００２】
【従来の技術】
現在使用されているインフルエンザＨＡワクチンは、流行ウィルスの血球凝集素分子上での突然変異によりその有効性は安定しないため、より効果的な、ワクチンの開発が強く望まれている。
その試みとしてＨＡ（血球凝集素）とＮＡ（ノイラミニダーゼ）とを主成分とするコンポーネントワクチンや、６−０−（２−テトラデシルヘキサデカノイル）−Ｎ−アセチルムラモイル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミンを用いたインフルエンザウィルス粒子様人工膜ワクチンいわゆるビロゾームワクチン（特開昭６１−２８２３２１号参照）などが知られている。特に、後者は、血中の抗体価の向上の点で優れた効果が得られる事が知られており有用性が期待されていた。
【０００３】
しかしながら、本ワクチンは投与部位における局所刺激性のため好ましからざる副作用として発赤がみられることがあり、医薬品としては必ずしも満足し得るものとは言えなかった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、より実用性の高いビロソームワクチンの構成成分を提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明は、特定の構造を有するムラミルジペプチド誘導体が実用性の高いビロソームワクチンの構成成分として有用であるとの知見に基づいてなされたのである。
すなわち、本発明は一般式
【０００６】
【化２】

【０００７】
〔式中、Ｒはアセチル基を、ＸはＬ−アラニン残基を、Ａは２−テトラデシルヘキサデカノイルを意味し、Ｒ₁ は水素原子及びＲ ₂ は水素原子、メチル基又はエチル基を意味する。〕で表される化合物及びその塩を提供する。
【００１３】
式（Ｉ）の化合物の部分構造 -NH(CONH₂)CHCH₂CH₂CO-については不斉炭素を１個有することからＤ体及びＬ体の異性体が存在するが一般的にはＤ体が好ましい。
又、式（Ｉ）の化合物の糖部分の１位については、α体及びβ体の異性体が存在するが、いずれも本発明のワクチンに使用可能である。
【００１４】
本明細書においては、両異性体を同時に表す時には便宜的に下記部分構造式で表わす。
【００１５】
【化３】

【００１６】
次に式（Ｉ）の化合物の製造法を説明する。
【００１７】
【化４】

【００１８】
即ち、式（II）の化合物を式（III)の化合物とカルボジイミド法、アイントップ法、活性エステル法等のペプチド合成で繁用される縮合方法を用いて反応させることにより目的の式（Ｉ）の化合物を製造することができる。例えば、活性エステル法を用いた場合には、式（II）の化合物をジメチルホルムアミド、テトラヒドロフラン、ジオキサン、アセトニトリルあるいはこれらの混合物に溶解しＮ，Ｎ−ジスクシンイミディルカルボナート、Ｎ，Ｎ−カルボニルイミダゾール、Ｎ，Ｎ−ジスクシンイミディルオキザラート等の試薬と、有機塩基例えばトリエチルアミン、Ｎ−メチルモルホリン、４−ジメチルアミノピリジンの存在下、通常０〜約６０℃程度で３０分〜数時間反応させることにより活性エステル体とし、ついで、先の反応と同様塩基の存在下、約−１５℃〜６０℃程度好ましくは、０℃〜２５℃で式（III)のアミン化合物を加え、数１０分〜１日程度反応することによって式（Ｉ）の化合物を製造することができる。尚、ここで、上記試薬は、式（ＩＩ）の化合物と等量で使用することができ、又有機塩基も式（ＩＩ）の化合物と等量又は過剰量で使用することができる。ついで生成物をシリカゲルカラムクロマトなどの手段を用いて精製することにより式（Ｉ）の化合物を得ることができる。
【００１９】
式（ＩＩ）の化合物の出発物質は、特公昭６３−１１３５９号公報に記載の方法により調製することができる。
【００２０】
【発明の効果】
本発明の化合物は、優れたアジュバント活性を示すと共に、該化合物とHANA抗原とを用いてインフルエンザビロソームワクチンを形成させた場合には、優れたワクチン効果が得られるとともに優れた安全性が得られた。従って、式（Ｉ）の化合物は、ビロソームワクチンの構成成分として極めて優れた化合物である。
【００２１】
以下、本発明を実施例及び試験例により説明するが、本発明はこれらにより限定されるものではない。
【００２２】
実施例１
（６−０−（２−テトラデシルヘキサデカノイル）−Ｎ−アセチルムラモイル）−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン1.０ｇをテトラヒドロフラン１００mlに溶解しＮ，Ｎ−ジスクシンイミデイルカルボナート0.３ｇ及びトリエチルアミン0.１５mlを加え室温で１時間半攪拌後２８％アンモニア水0.２２mlを加え、室温でさらに３０分攪拌する。
【００２３】
反応液を減圧濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィに付した。クロロホルム−メタノールで溶出して精製し、水−ジオキサンから凍結乾燥すると、（６−０−（２−テトラデシルヘキサデカノイル）−Ｎ−アセチルムラモイル）−Ｌ−アラニル−Ｄ−グルタムアミド0.４４ｇが得られた。
【００２４】
融点１５５〜１６５℃
分子量；926 (C₄₉H₉₁N₅O₁₁) ：
FAB Mas m/z927(M+1)
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ：0.85 (6H, t, J=7 Hz),
1.2 〜1.3, 1.39, 1.50 (58 H, m)
1.72 (1H, m), 1.80 (3H, s) 1.93 (1H, m)
2.08 (2H, t, J=8 Hz)，2.30 (1H, m),
3.28 (1H, t, J=9 Hz)，3.46 (1H, t, J=9 Hz)
3.67 (1H, m), 3.81 (1H, m) 4.02 (1H, d-d, J=12 Hz, 5 Hz), 4.12 (1H, d-q, J=9 Hz, 5 Hz)
4.31 (2H, m), 4.34 (1H, d, J=10 Hz)
4.44 および 4.98 (1H)
5.43 (1H, d, J=4 Hz)，6.67 (1H, d, J=4)
6.74 (1H, s) 7.01 (1H, s)，7.27 (1H, s)
7.30 (1H, s) 7.65 (1H, d, J=7 Hz)
8.08 (1H, d, J=8 Hz)，8.17 (1H, d, J=8 Hz)
【００２５】
実施例２
（６−０−（２−テトラデシルヘキサデカノイル）−Ｎ−アセチルムラモイル）−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン1.０ｇをテトラヒドロフラン１００mlに溶解しＮ，Ｎ−ジスクシンイミディルカルボナート0.３ｇ及びトリエチルアミン0.１５mlを加え室温で１時間半攪拌後４０％メチルアミン水溶液0.２mlを加え、室温でさらに３０分攪拌する。
【００２６】
反応液を減圧濃縮し残渣をシリカゲルカラムクロマトグラフィに付した。クロロホルム−メタノールで溶出して精製し、水−ジオキサンから凍結乾燥すると、（６−０−（２−テトラデシルヘキサデカノイル）−Ｎ−アセチルムラモイル）−Ｌ−アラニル−Ｎ^r−メチル−Ｄ−グルタムアミド0.５ｇが得られた。
【００２７】
融点９５〜１００℃
分子量；939 (C₅₀H₉₃N₅O₁₁) ：
FAB Mas m/z940(M+1)
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ：0.85 (6H, t, J=7 Hz),
1.2 〜1.3, 1.39, 1.50 (58 H, m)
1.73 (1H, m), 1.79 (3H, s) 1.93 (1H, m)
2.07 (2H, t, J=8 Hz)，2.30 (1H, m),
2.55 (3H, d, J=5 Hz)
3.26 (1H, t, J=9 Hz)，3.46 (1H, t, J=9 Hz)
3.68 (1H, m), 3.82 (1H, m) 4.03 (1H, d-d, J=12 Hz, 5 Hz), 4.12 (1H, d-q, J=9 Hz, 5 Hz)
4.30 (2H, m), 4.36 (1H, d, J=10 Hz)
4.98 (1H, t, J=3.5 Hz)
5.43 (1H, d, J=7 Hz)，6.67 (1H, d, J=4 Hz)
7.01 (1H, s)，7.31 (1H, s)
7.64 (1H, d, J=7 Hz) 7.71 (1H, d, J=5 Hz)
8.07 (1H, d, J=8 Hz)，8.17 (1H, d, J=8 Hz)
【００２８】
実施例３
実施例２と同様にして〔６−０−（２−テトラデシルヘキサデカノイル）−Ｎ−アセチルムラモイル〕−Ｌ−アラニル−Ｎ^r−エチル−Ｄ−グルタムアミドを製造した。
分子量；953 (C₅₁H₉₅N₅O₁₁) ：
FAB Mas m/z954(M+1)
¹H-NMR (DMSO-d₆) δ：0.85 (6H, t, J=7 Hz),
0.99 (3H, t, J=7 Hz)
1.2 〜1.3, 1.39, 1.50 (58 H, m)
1.71 (1H, m), 1.79 (3H, s) 1.93 (1H, m)
2.06 (2H, t, J=8 Hz)，2.29 (1H, m),
3.04 (2H, d-q, J=3.5 Hz, 7 Hz)
3.28 (1H, t, J=9 Hz)，3.45 (1H, t, J=9 Hz)
3.68 (1H, m), 3.81 (1H, m)
4.03 (1H, d-d, J=12 Hz, 5 Hz)
4.12 (1H, d-q, J=9 Hz, 5 Hz)
4.29 (2H, m), 4.35 (1H, d, J=10 Hz)
4.97 (1H, t, J=3.5 Hz)
5.44 (1H, d, J=7 Hz)，6.68 (1H, d, J=4 Hz)
7.01 (1H, s)，7.30 (1H, s),
7.64 (1H, d, J=7 Hz), 7.76 (1H, d, J=5.5 Hz)
8.07 (1H, d, J=8 Hz)，8.16 (1H, d, J=8 Hz)
【００２９】
試験例１
インフルエンザＨＡＮＡ抗原の調製
インフルエンザＡ／山形／１２０／８６株感染尿膜腔液から高速遠心処理（２３０００rpm ，９０分）低速遠心処理（６０００rpm ，６０分）、続いてショ糖密度勾配遠心処理（３００００rpm 、３時間）を行なうことによって精製ウィルスを得た。さらに、このウィルス液にトリトンＸ−１００を１％濃度となるように加え十分に攪拌し、ウィルスを可溶化後ショ糖密度勾配平衡法によって精製ＨＡＮＡ抗原液を得た。
【００３０】
ビロゾームワクチンの調製
上記で調製した精製ＨＡＮＡ抗原液を用い表１に示した配合の４種ワクチンサンプルを次の如くして調製した。まず、各成分を混合したのち、オクチルグルコシドを４％の濃度になるように添加して可溶化し、通常の方法で５％グルコース含有リン酸塩緩衝液（pH7.４）にて透析を行なった。得られた各サンプルをＨＡＮＡ抗原濃度で７０μｇ／mlになるように調整した。得られたサンプルはビロゾームを形成していた。本発明のサンプル No.１及び２のビロゾームを図１及び２に示した。
【００３１】
モルモット各群１０匹の背部皮下に本発明のビロゾームワクチン（ No.１，２）及び対照ワクチンの１５倍希釈液を0.５ml／匹の投与量で接種した。接種３週間後に、同量を追加接種した。３週目、５週目に採血を行ない、ＷＨＯ法に準じてヘマグルチニンインヒビション（Hemagglutinin Inhibition Test)を行ない、抗体産生能を測定した。結果を表１に示した。
【００３２】

【００３３】
上表から明らかなように、本発明の化合物を構成成分として用いたビロソームワクチンは対照化合物を構成成分として用いたビロソームワクチンに比べ同等以上の抗体産生能を示した。
＊対照化合物：６−０−（２−テトラデシルヘキサデカノイル）−Ｎ−アセチルムラモイル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミン
発赤反応試験
発赤反応試験は、ウサギ（５匹）の背皮内にサンプル0.５mlを接種し、経日的に発赤の表面積を測定し、５匹の合計面積を求め、次いで１匹当りの平均の発赤表面積を算出した。結果を表２に示した。
【００３４】

【００３５】
上表から明らかなように、本発明の化合物を構成成分として用いたビロソームワクチンは対照化合物を構成成分として用いたビロソームワクチンに比べ低い発赤を示した。
発熱試験
発熱試験は、生物学的製剤基準一般試験法を用い、ウサギの静脈内に各サンプルを１ml投与した。判定は、３匹の発熱反応の和が、1.３℃以下の場合には、発熱試験陰性また、2.５℃以上の場合は、発熱試験陽性とした。結果を表３に示した。
【００３６】

上表から明らかなように、本発明の化合物を構成成分として用いたビロソームワクチンは対照化合物を構成成分として用いたビロソームワクチンに比べ低い発熱性を示した。
【図面の簡単な説明】
【図１】本発明の化合物を用いたサンプルＮｏ．１のワクチンの粒子構造を示す９５，０００倍の電顕写真である。
【図２】本発明の化合物を用いたサンプルＮｏ．２のワクチンの粒子構造を示す９５，０００倍の電顕写真である。[0001]
[Industrial applications]
The present invention relates to a compound represented by the following general formula (I) and a salt thereof. The compound of the present invention has adjuvant activity and is useful as a component of an influenza virus-like artificial membrane vaccine, that is, a so-called virosome vaccine.
[0002]
[Prior art]
The efficacy of currently used influenza HA vaccines is not stable due to mutations in hemagglutinin molecules of endemic viruses, and there is a strong demand for the development of more effective vaccines.
As an attempt, a component vaccine containing HA (hemagglutinin) and NA (neuraminidase) as main components, 6-0- (2-tetradecylhexadecanoyl) -N-acetylmuramoyl-L-alanyl-D- Influenza virus particle-like artificial membrane vaccines using isoglutamine, so-called virosome vaccines (see JP-A-61-282321) and the like are known. In particular, the latter is known to have an excellent effect in terms of improving the antibody titer in blood and has been expected to be useful.
[0003]
However, this vaccine may cause redness as an undesirable side effect due to local irritation at the site of administration, and thus was not always satisfactory as a pharmaceutical.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
An object of the present invention is to provide a more practical component of a virosome vaccine.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
The present invention has been made based on the finding that muramyl dipeptide derivatives having a specific structure are useful as components of highly practical virosome vaccines.
That is, the present invention provides a compound represented by the general formula:
Embedded image

[0007]
[Wherein, R represents an acetyl group , X represents an L-alanine residue, A represents 2-tetradecylhexadecanoyl , R ₁ represents a hydrogen atom and R ₂ Represents a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group . And a salt thereof.
[0013]
The partial structure of the compound of the formula (I): -NH (CONH ₂ ) CHCH ₂ CH ₂ CO- has one asymmetric carbon and thus has D-isomer and L-isomer, but generally D-isomer Is preferred.
In addition, the 1-position of the sugar moiety of the compound of the formula (I) has α- and β-isomers, both of which can be used for the vaccine of the present invention.
[0014]
In the present specification, when both isomers are simultaneously represented, they are represented by the following partial structural formulas for convenience.
[0015]
Embedded image

[0016]
Next, a method for producing the compound of the formula (I) will be described.
[0017]
Embedded image

[0018]
That is, by reacting the compound of the formula (II) with the compound of the formula (III) using a condensation method commonly used in peptide synthesis such as a carbodiimide method, an eintop method, an active ester method, etc. Can be produced. For example, when the active ester method is used, the compound of the formula (II) is dissolved in dimethylformamide, tetrahydrofuran, dioxane, acetonitrile or a mixture thereof and dissolved in N, N-disuccinimidyl carbonate, N, N-carbonyl. Reaction with a reagent such as imidazole or N, N-disuccinimidyl oxalate in the presence of an organic base such as triethylamine, N-methylmorpholine or 4-dimethylaminopyridine, usually at about 0 to about 60 ° C. for 30 minutes to several hours Then, an amine compound of the formula (III) is added at about −15 ° C. to 60 ° C., preferably at 0 ° C. to 25 ° C., preferably in the presence of a base in the same manner as in the previous reaction, for several 10 minutes By reacting for about 1 day, the compound of formula (I) can be produced. Here, the reagent can be used in an equivalent amount to the compound of the formula (II), and an organic base can be used in an equivalent amount or an excess amount to the compound of the formula (II). Subsequently, the compound of the formula (I) can be obtained by purifying the product using a means such as silica gel column chromatography.
[0019]
The starting material of the compound of the formula (II) can be prepared by the method described in JP-B-63-11359.
[0020]
【The invention's effect】
The compound of the present invention exhibits excellent adjuvant activity, and when an influenza virosome vaccine is formed using the compound and the HANA antigen, an excellent vaccine effect and excellent safety are obtained. Was. Therefore, the compound of the formula (I) is a very excellent compound as a component of the virosome vaccine.
[0021]
Hereinafter, the present invention will be described with reference to Examples and Test Examples, but the present invention is not limited thereto.
[0022]
Example 1
1.0 g of (6-0- (2-tetradecylhexadecanoyl) -N-acetylmuramoyl) -L-alanyl-D-isoglutamine is dissolved in 100 ml of tetrahydrofuran and N, N-disuccinimidyl carbonate 0 is dissolved. After adding 0.3 g and 0.15 ml of triethylamine, stirring at room temperature for 1.5 hours, 0.22 ml of 28% aqueous ammonia was added, and the mixture was further stirred at room temperature for 30 minutes.
[0023]
The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was subjected to silica gel column chromatography. Purification by elution with chloroform-methanol and freeze-drying from water-dioxane gave 0.46 g of (6-0- (2-tetradecylhexadecanoyl) -N-acetylmuramoyl) -L-alanyl-D-glutamamide. was gotten.
[0024]
155-165 ° C
Molecular _{_{weight; 926 (C 49 H 91 N}} 5 O 11):
FAB Mas m / z927 (M + 1)
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ: 0.85 (6H, t, J = 7 Hz),
1.2 to 1.3, 1.39, 1.50 (58 H, m)
1.72 (1H, m), 1.80 (3H, s) 1.93 (1H, m)
2.08 (2H, t, J = 8 Hz), 2.30 (1H, m),
3.28 (1H, t, J = 9 Hz), 3.46 (1H, t, J = 9 Hz)
3.67 (1H, m), 3.81 (1H, m) 4.02 (1H, dd, J = 12 Hz, 5 Hz), 4.12 (1H, dq, J = 9 Hz, 5 Hz)
4.31 (2H, m), 4.34 (1H, d, J = 10 Hz)
4.44 and 4.98 (1H)
5.43 (1H, d, J = 4 Hz), 6.67 (1H, d, J = 4)
6.74 (1H, s) 7.01 (1H, s), 7.27 (1H, s)
7.30 (1H, s) 7.65 (1H, d, J = 7 Hz)
8.08 (1H, d, J = 8 Hz), 8.17 (1H, d, J = 8 Hz)
[0025]
Example 2
1.0 g of (6-0- (2-tetradecylhexadecanoyl) -N-acetylmuramoyl) -L-alanyl-D-isoglutamine was dissolved in 100 ml of tetrahydrofuran and N, N-disuccinimidyl carbonate was dissolved in 100 ml of tetrahydrofuran. After adding 0.3 g and 0.15 ml of triethylamine, stirring at room temperature for 1.5 hours, 0.2 ml of a 40% aqueous solution of methylamine was added, and the mixture was further stirred at room temperature for 30 minutes.
[0026]
The reaction solution was concentrated under reduced pressure, and the residue was subjected to silica gel column chromatography. Chloroform - eluting with methanol, water - and lyophilized from dioxane (6-0 (2-tetradecylhexadecanoyl) -N- acetylmuramoyl) -L- alanyl -N ^r - methyl -D 0.5 g of glutamamide was obtained.
[0027]
Melting point 95-100 ° C
Molecular _{_{weight; 939 (C 50 H 93 N}} 5 O 11):
FAB Mas m / z940 (M + 1)
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ: 0.85 (6H, t, J = 7 Hz),
1.2 to 1.3, 1.39, 1.50 (58 H, m)
1.73 (1H, m), 1.79 (3H, s) 1.93 (1H, m)
2.07 (2H, t, J = 8 Hz), 2.30 (1H, m),
2.55 (3H, d, J = 5 Hz)
3.26 (1H, t, J = 9 Hz), 3.46 (1H, t, J = 9 Hz)
3.68 (1H, m), 3.82 (1H, m) 4.03 (1H, dd, J = 12 Hz, 5 Hz), 4.12 (1H, dq, J = 9 Hz, 5 Hz)
4.30 (2H, m), 4.36 (1H, d, J = 10 Hz)
4.98 (1H, t, J = 3.5 Hz)
5.43 (1H, d, J = 7 Hz), 6.67 (1H, d, J = 4 Hz)
7.01 (1H, s), 7.31 (1H, s)
7.64 (1H, d, J = 7 Hz) 7.71 (1H, d, J = 5 Hz)
8.07 (1H, d, J = 8 Hz), 8.17 (1H, d, J = 8 Hz)
[0028]
Example 3
In the same manner as in Example 2 [6-0 (2-tetradecylhexadecanoyl) -N- acetylmuramoyl] -L- alanyl -N ^r - was prepared ethyl -D- Gurutamuamido.
Molecular _{_{weight; 953 (C 51 H 95 N}} 5 O 11):
FAB Mas m / z954 (M + 1)
¹ H-NMR (DMSO-d ₆ ) δ: 0.85 (6H, t, J = 7 Hz),
0.99 (3H, t, J = 7 Hz)
1.2 to 1.3, 1.39, 1.50 (58 H, m)
1.71 (1H, m), 1.79 (3H, s) 1.93 (1H, m)
2.06 (2H, t, J = 8 Hz), 2.29 (1H, m),
3.04 (2H, dq, J = 3.5 Hz, 7 Hz)
3.28 (1H, t, J = 9 Hz), 3.45 (1H, t, J = 9 Hz)
3.68 (1H, m), 3.81 (1H, m)
4.03 (1H, dd, J = 12 Hz, 5 Hz)
4.12 (1H, dq, J = 9 Hz, 5 Hz)
4.29 (2H, m), 4.35 (1H, d, J = 10 Hz)
4.97 (1H, t, J = 3.5 Hz)
5.44 (1H, d, J = 7 Hz), 6.68 (1H, d, J = 4 Hz)
7.01 (1H, s), 7.30 (1H, s),
7.64 (1H, d, J = 7 Hz), 7.76 (1H, d, J = 5.5 Hz)
8.07 (1H, d, J = 8 Hz), 8.16 (1H, d, J = 8 Hz)
[0029]
Test example 1
Preparation of influenza HANA antigen High-speed centrifugation (23,000 rpm, 90 minutes) and low-speed centrifugation (6000 rpm, 60 minutes) from influenza A / Yamagata / 120/86 strain-infected allantoic fluid, followed by sucrose density gradient centrifugation By performing the treatment (30000 rpm, 3 hours), a purified virus was obtained. Further, Triton X-100 was added to this virus solution to a concentration of 1%, and the mixture was sufficiently stirred. After solubilizing the virus, a purified HANA antigen solution was obtained by a sucrose density gradient equilibrium method.
[0030]
Preparation of virosome vaccine Using the purified HANA antigen solution prepared above, four vaccine samples having the formulations shown in Table 1 were prepared as follows. First, after mixing each component, octyl glucoside was added to a concentration of 4% to solubilize it, and dialyzed against a 5% glucose-containing phosphate buffer (pH 7.4) by an ordinary method. Was. Each of the obtained samples was adjusted to have a HANA antigen concentration of 70 μg / ml. The resulting sample formed virosomes. Virosomes of Sample Nos. 1 and 2 of the present invention are shown in FIGS.
[0031]
Ten groups of guinea pigs were inoculated subcutaneously at the back with a 15-fold dilution of the virosome vaccine of the present invention (Nos. 1 and 2) and a control vaccine at a dose of 0.5 ml / animal. Three weeks after the inoculation, the same amount was additionally inoculated. Blood was collected on the third and fifth weeks, and hemagglutinin inhibition (Hemagglutinin Inhibition Test) was performed according to the WHO method to measure the antibody-producing ability. The results are shown in Table 1.
[0032]

[0033]
As is clear from the above table, the virosome vaccine using the compound of the present invention as a component showed an equal or higher antibody-producing ability than the virosome vaccine using a control compound as a component.
* Control compound: 6-0- (2-tetradecylhexadecanoyl) -N-acetylmuramoyl-L-alanyl-D-isoglutamine
Redness reaction test In the redness reaction test, a sample (0.5 ml) was inoculated into the back skin of a rabbit (5 animals), the surface area of redness was measured daily, and the total area of the 5 animals was determined. The average redness surface area per animal was calculated. The results are shown in Table 2.
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As is clear from the above table, the virosome vaccine using the compound of the present invention as a component showed lower redness than the virosome vaccine using the control compound as a component.
Fever test The fever test used a biologics standard general test method, in which 1 ml of each sample was administered intravenously to rabbits. Judgment was made that the exothermic test was negative when the sum of the exothermic reactions of the three animals was 1.3 ° C or lower, and positive when the sum of the exothermic reactions was 2.5 ° C or higher. The results are shown in Table 3.
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As is clear from the above table, the virosome vaccine using the compound of the present invention as a component showed lower pyrogenicity than the virosome vaccine using the control compound as a component.
[Brief description of the drawings]
FIG. 1 shows a sample No. using the compound of the present invention. 9 is a 95,000-fold electron micrograph showing the particle structure of vaccine No. 1.
FIG. 2 shows a sample No. using the compound of the present invention. 9 is a 95,000-fold electron micrograph showing the particle structure of vaccine 2.

Claims

General formula

[Wherein, R represents an acetyl group , X represents an L-alanine residue, A represents 2-tetradecylhexadecanoyl , R ₁ represents a hydrogen atom and R ₂ represents a hydrogen atom, a methyl group or an ethyl group . means. And a salt thereof.