JP3611083B2

JP3611083B2 - 植物分裂組織に特異的なプロモーター

Info

Publication number: JP3611083B2
Application number: JP34849498A
Authority: JP
Inventors: 明義河岡; 悦子松永; 宏安海老沼
Original assignee: Nippon Paper Industries Co Ltd
Current assignee: Nippon Paper Industries Co Ltd
Priority date: 1998-12-08
Filing date: 1998-12-08
Publication date: 2005-01-19
Anticipated expiration: 2018-12-08
Also published as: JP2000166565A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、植物の分裂組織において、その制御下の構造遺伝子の発現を特異的に促進するプロモーターに関する。
【０００２】
【従来の技術】
近年の植物分子生物学の発展に伴い、センス遺伝子やアンチセンス遺伝子を利用し、病虫害抵抗性や除草剤耐性などの有用形質を備えた植物品種等を育種することが可能となってきた。即ち、目的の形質の発現に関与する構造遺伝子を、植物で発現可能なプロモーターにセンス方向又はアンチセンス方向に連結してキメラ遺伝子を作成し、これをベクターとして植物に導入することにより、その目的形質の発現を促進、抑制するのである。現在既に、かかる手法を応用して、例えば、Ｂａｃｉｌｌｕｓｔｈｕｒｉｎｇｅｎｓｉｓ由来の殺虫性ＢＴ毒素遺伝子をセンス方向に導入した病虫害抵抗性植物（Ｄ．Ａ．Ｆｉｓｃｈｈｏｆｆ等、Ｂｉｏ／Ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ、ｖｏｌ．２３２：７３８、１９８７）や、トマト果実の過熟に関するポリガラクツロナーゼ遺伝子をアンチセンス方向に導入した日持ち良好なトマト（Ｃ．Ｊ．Ｓｍｉｔｈ等、Ｎａｔｕｒｅ、ｖｏｌ．３３４：７２４、１９８８）等が作出されている。
【０００３】
一方、こうして導入される構造遺伝子のプロモーターとしては、専らカリフラワーモザイクウィルス（ＣａＭＶ）３５Ｓプロモーターが用いられている。このＣａＭＶ３５Ｓプロモーターは、強力に構造遺伝子の転写を促進する働きを有するものの、その促進作用は非特異的であって、植物の生長ステージや組織の種類に拘わらず、これが導入された植物細胞において、その制御下におかれた構造遺伝子の転写を常に促進する。このため、構造遺伝子の種類によっては、その過剰発現から遺伝子導入細胞の代謝異常を招き、植物組織や植物体自体の奇形・生育阻害等を引起すことがあった。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
従って、本発明は組織特異的、時期特異的に構造遺伝子の発現を制御し得るプロモーターを提供することを目的とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決すべく鋭意検討を行った結果、ユーカリ属より単離したヒストンＨ３構造遺伝子のプロモーターが、植物の茎頂点、根端、カルス等の分裂組織において特異的に構造遺伝子の転写を促進することを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
即ち、本発明の上記課題はこのプロモーター、具体的には、配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡ、又は、このＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、その制御下の構造遺伝子の発現を、植物の分裂組織において特異的に促進する機能を有するＤＮＡにより解決される。なお、ここでストリンジェントな条件としては、緩衝液として６×ＳＳＣ（０．９ＭＮａＣｌ、０．０９Ｍクエン酸ナトリウム）、温度５５℃を採用する。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明のプロモーターとしては、配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡであれば制限なく使用できる。また、このＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡも、その制御下の構造遺伝子の発現を、植物の分裂組織、例えば茎頂点、根端、カルス等において特異的に促進する機能を有する限り、使用できる。
【０００８】
かかるＤＮＡは、その由来を問わない。植物、例えばＥｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｌｏｂｕｌｕｓ（以下、Ｅ．グロブラスと略す。）、Ｅｕｃａｌｙｐｔｕｓｇｒａｎｄｉｓ等のユーカリ属より定法を用いて単離したものを用いることもできるが、ホスファイトトリエステル法（Ｍ．Ｈｕｎｋａｐｉｌｌｅｒ等、Ｎａｔｕｒｅ、３１０：１０５、１９８４）等の一般的な方法により化学合成したものを用いることもできる。
【０００９】
本発明のプロモーターにより制御すべき構造遺伝子は、プロモーターの下流域に連結する。通常、プロモーター領域の末端と構造遺伝子のＡＴＧ翻訳開始コドンとの距離は、１０ｂｐ以内であることが好ましい。また、ＡＴＧ翻訳開始コドンの直後、このコドンと制御すべき構造遺伝子との間に、ユーカリ属ヒストンＨ３構造遺伝子の第一イントロンを含む一部を連結することで、本発明のプロモーター活性は一層向上させることができる。
【００１０】
本発明において、植物細胞への遺伝子導入は、上記のようにしてプロモーターとこれにより制御すべき構造遺伝子とを連結してベクターを作成し、このベクターを用い、定法により行うことができる。即ち、このベクターを用い、植物に感染するウィルスや細菌、例えば、カリフラワーモザイクウィルス、ジェミニウィルス、タバコモザイクウィルス、ブロムモザイクウィルス、アグロバクテリウム・ツメファシエンス（以下、Ａ．ツメファシエンスと略す。）、アグロバクテリウム・リゾジェネス等を介して間接的に植物細胞への遺伝子導入を行うこともでき、また、マイクロインジェクション法、エレクトロポレーション法、ポリエチレングリコール法、融合法、高速バリスティックベネトレーション法等の物理的・化学的手法により、直接的に植物細胞への遺伝子導入を行うこともできる（Ｉ．Ｐｏｔｒｙｋｕｓ、Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．ＰｌａｎｔＰｈｙｓｉｏｌ．ＰｌａｎｔＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．、４２：２０５、１９９１）。更に、これらの方法により遺伝子が導入された植物細胞からは、その植物の種類等に応じた適当な条件下でこれを培養することにより、植物体を再分化させることもできる。このようにして得られた植物細胞・植物体は、本発明のプロモーターにより制御された構造遺伝子が導入されている植物細胞であり、植物体である。
【００１１】
本発明のプロモーターは、ヒストンＨ３遺伝子のみならず、他の様々なタンパク質をコードする構造遺伝子の発現を制御することができる。従って、本発明においては、農業的に優れた形質を付与する遺伝子、医薬産業等において有用な物質の生産に関与する遺伝子、遺伝子発現機構の研究に必要とされる遺伝子等、種々の構造遺伝子を、目的に応じてセンス遺伝子又はアンチセンス遺伝子として使用することができる。
【００１２】
また、本発明のプロモーターを使用することのできる植物の種類も特に限定されない。ユーカリ以外でも、例えば、タバコを始め、イネ、アラビドプシス、ペチュニア等の草本植物、ヤマナラシ、ポプラ、アカシア、スギ、マツ等の木本植物に本発明のプロモーターを使用することができる。
【００１３】
【作用】
ヒストンは、真核細胞の核内ＤＮＡに結合している塩基性タンパクであり、Ｈ１、Ｈ２Ａ、Ｈ２Ｂ、Ｈ３、Ｈ４の５種類の存在が知られ、細胞周期中Ｓ期（ＤＮＡ合成期）において、新たに合成されたＤＮＡがクロマチンを構築する際に重要な役割を果たしている。従って、これらをコードする遺伝子は、真核細胞において相同性が高く、また、細胞周期中Ｓ期において特異的に発現するものと考えられる。
【００１４】
本発明者らは、これらヒストンの内、Ｈ３をコードする構造遺伝子のプロモーターが、植物の分裂組織において、植物の種類、構造遺伝子の種類に関わらず、その発現を促進することを見出した。かかるヒストンＨ３構造遺伝子プロモーターの特性も、このようなヒストン構造遺伝子の特性、即ち、生物種間における高い相同性及び細胞周期特異的な発現と、関連を有しているものと考えられる。
【００１５】
【実施例】
以下に、本発明を実施例に基づいて説明する。
【００１６】
［実施例１］
１．ユーカリゲノムＤＮＡライブラリーの単離・精製
播種後、約６ヶ月間生育させたＥ．グロブラスより完全に展開する前の葉を採取し、液体窒素下で粉砕した。この粉砕した葉を材料として、Ｄｏｙｌｅらの方法（Ｆｏｃｕｓ、１２：１３、１９８９）に従い、できるだけ物理的損傷を受けないようにしてゲノムＤＮＡの単離・精製を行ったところ、材料に供した葉約１０ｇ（新鮮重）当り約１ｍｇのゲノムＤＮＡを採取することができた。
【００１７】
２．ユーカリゲノムＤＮＡライブラリーの作成
１で得られたユーカリゲノムＤＮＡ２０μｇをＨ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ／ｐＨ７．５、１０ｍＭＭｇＣｌ_２、１００ｍＭＮａＣｌ、１ｍＭＤＴＴ）２００μｌに溶解し、これに１^−４ユニットの制限酵素ＥｃｏＲＩ（東洋紡績（株）製）を加えて３７℃で部分消化を行い、１時間後、反応液にエチレンジアミン四酢酸塩（ＥＤＴＡ）を５０ｍＭ、ドデシル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）を０．５％加えて反応を停止させた。なお、ここでユニットとは、上記緩衝液５０μｌに溶解したラムダＤＮＡ１μｇを、３７℃、６０分間で完全に分解する酵素活性を１ユニットとする単位である。部分消化されたＤＮＡは、反応停止後の反応液に２．５倍量のエタノールを加え、−８０度で１時間冷却することにより析出させ、遠心分離によりこれを回収した。この結果、ベクターに連結可能なゲノムＤＮＡの部分消化物１４μｇを得ることができた。
【００１８】
次いで、このユーカリゲノムＤＮＡ部分消化物を、ラムダファージベクターに連結した。即ち、ＥｃｏＲＩで消化し、アルカリホスファターゼで脱リン酸化処理した置換型のラムダファージベクターＺＡＰＩＩ（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社製）２μｇと上記のようにして得られたゲノムＤＮＡ部分消化物５μｇとを、ＡＴＰ１ｍＭ及びＴ４ＤＮＡリガーゼ（東洋紡績（株）製）２ユニットの存在下、緩衝液（１０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ／ｐＨ７．５、１０ｍＭＭｇＣｌ_２、１ｍＭＤＴＴ）２０μｌ中で１６℃、１晩反応させた後、６５℃で５分間熱処理を行って反応を停止させ、組換えファージＤＮＡを得た。なお、ここでのユニットとは、上記緩衝液２０μｌに溶解させたラムダＤＮＡのＨｉｎｄＩＩＩ分解物６μｇを、１６℃、３０分間で９０％以上ライゲーションさせる酵素活性を１ユニットとする単位である。得られた組換えファージＤＮＡは、ラムダファージ外被タンパクと混和し、２２℃、２時間放置してｉｎｖｉｔｒｏパッケージングを行い、組換えＤＮＡを有するラムダファージを再生した（ＳＴＲＡＴＡＧＥＮＥ社製ｉｎｖｉｔｒｏパッケージングキットＧｉｇａｐａｃｋＧＯＬＤを使用。）。
【００１９】
一方、大腸菌ＸＬ１−ＢｌｕｅＭＲＦ´株を１０ｍｌのＬＢＭＭ培地（トリプトン１％、食塩１％、酵母エキス０．５％、硫酸マグネシウム１０ｍＭ及びマルトース０．４％）に接種し、３７℃で１２時間振とうして前培養した。前培養後、遠心分離により菌体を集めて、予め４℃に冷却された１０ｍＭの硫酸マグネシウム１０ｍｌに懸濁し、ラムダファージを感染しやすくしておいて上記の組換えラムダファージと混和し、３７℃、１５分間放置してこれに感染させた。感染後の菌は、０．７％アガロース含有ＬＢＭＭ培地に懸濁し、更にこの懸濁液を、１．５％の寒天で固化させたＬＢＭＭ培地の表面に薄く広げ、３７℃で１２時間培養を行った。培養後、このシャーレにＳＭ緩衝液（５０ｍＭＴｒｉｓ−ＨＣｌ／ｐＨ７．５、０．１ＭＮａＣｌ、７ｍＭＭｇＳＯ_４、０．０１％ゼラチン）１０ｍｌを添加して４℃で８時間保持した後、この緩衝液を回収し、得られた回収液をユーカリゲノムＤＮＡライブラリーとして以後の操作を行った。
【００２０】
３．ユーカリヒストンＨ３遺伝子の塩基配列の決定
２で得られたユーカリゲノムＤＮＡライブラリーを鋳型として、ＰＣＲ法により、ユーカリヒストンＨ３遺伝子を含むＤＮＡ断片の増幅を行った。
【００２１】
即ち、プライマーとして、アラビドプシス、イネ、インゲンマメのヒストンＨ３遺伝子においてＡＴＧ翻訳開始コドンより３６５〜３８４ｂｐ下流側に存在する共通領域に対応したプライマーＢ（５´−ＣＧＣＧＡＧＣＴＧＧＡＴＧＴＣＣＴＴＧＧ）と、ＺＡＰＩＩベクターのクローニングサイト脇に存在する一方の領域に対応したＫＳプライマー（５´−ＴＣＧＧＧＴＣＧＡＣＧＧＴＡＴＧ）とを用い、上記ライブラリーを鋳型としてＰＣＲ法を行い、増幅されたＤＮＡ断片をアガロースゲル電気泳動にて分離したところ、約２ｋｂｐのＤＮＡ断片の増幅が確認された。そこで、このＤＮＡ断片の両末端をＴ４ＤＮＡポリメラーゼ処理により平滑化した後、ポリヌクレオチドキナーゼによりリン酸化し、プラスミドｐＵＣ１９の脱リン酸化処理したＳｍａＩ制限酵素部位に組込んでサブクローニングを行い、このサブクローニングされたＤＮＡ断片について、ＤＮＡシークエンサー（ＤＮＡシークエンサーＭｏｄｅｌ３７３Ｓ（Ｐｅｒｋｉｎ−Ｅｌｍｅｒ社製））を用い、ダイデオキシ法により塩基配列を決定した。このＤＮＡ断片は、５´末端から６６０ｂｐの位置に存在するＡＴＧ翻訳開始コドン下流の構造遺伝子領域が、他の公知の植物ヒストンＨ３構造遺伝子と非常に高い相同性を有しており、また、コムギヒストンＨ３プロモーター領域のシスエレメントであり、ヒストン構造遺伝子のＳ期特異的発現に関与すると考えられているヘキサマー配列が３４ｂｐに、ＯＬＳ−１、ＯＬＳ−２がそれぞれ４５、５６ｂｐに、更に、オクタマー配列とノナマー配列とがそれぞれ２２９、２５６ｂｐに存在している（蛋白質・核酸・酵素、ｖｏｌ．３７：１１４６、１９９２）。以上より、このＤＮＡ断片がユーカリヒストンＨ３遺伝子、つまり、ユーカリヒストンＨ３構造遺伝子とそのプロモーターとを含むものであることを確認した。
【００２２】
４．ユーカリヒストンＨ３プロモーターの発現調節活性の確認
３で塩基配列が決定されたＤＮＡ断片について、ＨｉｎｄＩＩＩ制限酵素部位を含むプライマーと、ＢａｍＨＩ制限酵素部位を含むプライマーとを用いてＰＣＲ法を行い、ユーカリヒストンＨ３プロモーター領域約６７０ｂｐを増幅し、植物形質転換用ベクターｐＢＩ１０１（ＣＬＯＮＴＨＥＣ社製）のＨｉｎｄＩＩＩ−ＢａｍＨＩ制限酵素部位間に挿入して、これをプラスミドｐＥｇＨ３−ＧＵＳと命名した。このｐＥｇＨ３−ＧＵＳにおいてユーカリヒストンＨ３プロモーターは、β−グルクロニダーゼ（ＧＵＳ）構造遺伝子の上流側に隣接して位置し、これがプロモーターとして機能する場合には、このＧＵＳ構造遺伝子の発現を制御することとなる。ここでＰＣＲ法にて増幅した約６７０ｂｐの領域の内、ＡＴＧ翻訳開始コドンから上流に延びる、全長６６２ｂｐのＤＮＡの塩基配列を配列番号１に示す。この塩基配列中、ＡＴＧ翻訳開始コドンは６６０〜６６２ｂｐに位置している。また、ｐＥｇＨ３−ＧＵＳおいて、植物ゲノムＤＮＡに組込まれる部分の模式図を図１に示す。図中、ＮＰＴＩＩはカナマイシン抵抗性遺伝子、Ｎｏｓ−ｔｅｒはノパリン合成酵素のポリアデニル化シグナルである。
【００２３】
次いで、ｐＥｇＨ３−ＧＵＳをアグロバクテリウム法により、タバコ（ＮｉｃｏｔｉａｎａｔａｂａｃｕｍＬｃｖ．ＳＲ−１）に導入した。即ち、ｐＥｇＨ３−ＧＵＳをエレクトロポレーション法によりＡ．ツメファシエンスＥＨＡ１０５に導入した（１０％グリセロール中、電気パルスとして２５００Ｖ、２５μＦを付与。バイオラッド社製ＧＥＮＥＰＵＳＥＲＩＩを使用。）後、このＡ．ツメファシエンスをカナマイシン５０ｍｇ／ｌを含むＬＢ寒天培地（トリプトン１％、食塩０．５％、酵母エキス０．５％）で２８℃、２日間培養することにより選抜し、これを種子発芽後４週間無菌培養したタバコの葉に感染させた。
【００２４】
感染は、約５ｍｍ角に切断した上記タバコ葉を、ｐＥｇＨ３−ＧＵＳ導入Ａ．ツメファシエンスの培養液に、その葉の表皮を下にして１〜３分間浸漬することにより行った。感染処理後の葉片は、滅菌した紙タオル等で付着している培養液を除去してから、カルス誘導培地（ムラシゲ・スクーグ基本培地（以下、ＭＳ培地と略す。）、３％しょ糖、０．８％寒天、１ｍｇ／ｌナフタレン酢酸、０．１ｍｇ／ｌベンジルアデニン）に置床し、２５℃連続照明下で３日間培養、更にシュート形成用培地（ＭＳ基本培地、３％しょ糖、０．８％寒天、０．１ｍｇ／ｌナフタレン酢酸、１ｍｇ／ｌベンジルアデニン、１００ｍｇ／ｌカナマイシン、５００ｍｇ／ｌカルベニシリン）に移植して同じ温度・光条件下で培養を続け、茎葉を分化させた。分化した茎葉は、シュート形成用培地での培養から約４週間後に切取り、カナマイシン１００ｍｇ／ｌとカルベニシリン５００ｍｇ／ｌを含むＭＳ基本培地（しょ糖３％、寒天０．８％又はゲランガム０．２５％も添加。）に移植して、同じ温度・光条件下で約４週間培養することにより発根させて植物体を再生した後、バーミキュライト（日本耐火工業社製）とピートモス（和泉農材製）を１：２の割合で混合した培養土に移植して、２５℃の温室で生育させた。
【００２５】
得られたｐＥｇＨ３−ＧＵＳ導入タバコ、即ちユーカリヒストンＨ３プロモーター―ＧＵＳ融合遺伝子を有するタバコについて、その茎頂点、茎、葉、根及びカルスを対象とし、Ｊｅｆｆｅｒｓｏｎらの方法（ＰｌａｎｔＭｏｌ．Ｂｉｏｌ．Ｒｅｐ．、ｖｏｌ．５：３８７、１９８７）に準拠してＧＵＳ遺伝子の発現試験を行った。その結果、根、茎頂点、カルスの分裂組織において、特に強いＧＵＳ遺伝子の発現が確認され、ここでｐＥｇＨ３−ＧＵＳに挿入されたユーカリヒストンＨ３プロモーターは、その制御下に置かれた構造遺伝子の植物分裂組織特異的な発現を促進し、しかも、その機能は、これが由来する植物（ユーカリ）とは異なる植物においても、また、これが本来プロモーターとして作用する構造遺伝子とは全く異なるＧＵＳ構造遺伝子のプロモーターとして用いた場合でも、発揮されることが示された。
【００２６】
［実施例２］
実施例１の４で得られたプラスミドｐＥｇＨ３−ＧＵＳ導入Ａ．ツメファシエンスを、実施例１と同様にして、無菌培養された交雑ヤマナラシ（Populus sieboldii×P.grandidentata）Ｙ６３の葉柄に感染させた。
【００２７】
感染処理後の葉柄は、感染に用いたＡ．ツメファシエンス培養液をその表面より除去してから、ゼアチン０．５ｍｇ／ｌを含み、ＮＨ₄ ⁺、ＮＯ₃ ^-の濃度をそれぞれ１０ｍＭ、３０ｍＭとした改変ＭＳ培地（３％しょ糖、０．８％寒天）に置床して３日間培養し、次いで、ゼアチン０．５ｍｇ／ｌ、カナマイシン１００ｍｇ／ｌ、カルベニシリン５００ｍｇ／ｌを添加した改変ＭＳ培地（３％しょ糖、０．８％寒天）に移植し、約４ヶ月培養して茎葉を分化させた。ｐＥｇＨ３−ＧＵＳが導入された交雑ヤマナラシは、この茎葉を、無機塩成分を２／３に希釈したＭＳ培地（しょ糖３％、寒天０．８％又はゲランガム０．２５％、カナマイシン１００ｍｇ／ｌ、カルベニシリン５００ｍｇ／ｌ）に移植して発根させることにより再生した。なお、このときの温度及び光条件は実施例１の４で採用したものと同様である。
【００２８】
得られたｐＥｇＨ３−ＧＵＳ導入交雑ヤマナラシについて、実施例１と同様にしてＧＵＳ遺伝子の発現試験を行ったところ、タバコの場合と同様に、根、茎頂点、カルスの分裂組織において、特に強いＧＵＳ遺伝子の発現が確認された。
【００２９】
［実施例３］
実施例１の４で得られたプラスミドｐＥｇＨ３−ＧＵＳ導入Ａ．ツメファシエンスを、実施例１と同様にして、無菌下で播種し、出芽させたユーカリ（Eucalyptus globulus）の胚軸に感染させた。
【００３０】
感染処理後の胚軸は、感染に用いたＡ．ツメファシエンス培養液をその表面より除去してから、ゼアチン１．０ｍｇ／ｌを含む改変ＭＳ培地（３％しょ糖、０．８％寒天）に置床して３日間培養し、次いで、ゼアチン１．０ｍｇ／ｌ、カナマイシン５０ｍｇ／ｌ、ティカルシリン５００ｍｇ／ｌを添加した改変ＭＳ培地（３％しょ糖、０．２５％ゲランガム）で培養することにより、カルスを形成させた。
【００３１】
得られたｐＥｇＨ３−ＧＵＳ導入ユーカリカルスについて、実施例１と同様にしてＧＵＳ遺伝子の発現試験を行ったところ、強いＧＵＳ遺伝子の発現が確認された。
【００３２】
以上の結果より、本発明のプロモーター、即ち、ユーカリヒストンＨ３プロモーターとして単離された配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡは、これを導入する植物の種類に限定されず、また、これが本来プロモーターとして作用する構造遺伝子とは全く異なる構造遺伝子に対しても、その分裂組織特異的な発現を促進できることが明らかとなった。
【００３３】
【発明の効果】
本発明のプロモーター、即ち、配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡは、組織特異的、時期特異的に構造遺伝子の発現を制御する能力を有する。つまり、これを使用することにより、その制御下に置かれた構造遺伝子を、植物の分裂組織において特異的に発現させることが可能となる。しかも、このプロモーターは、使用できる植物・構造遺伝子の種類を問わない。
【００３４】
従って、合目的的に構造遺伝子を選択し、これを本発明のプロモーターの制御下に置いてベクターを作成し、このベクターを用いて所望の植物の形質転換を行えば、その植物の分裂組織においてのみその構造遺伝子を発現させることができるので、目的とする形質を付与するために導入した構造遺伝子が、予定外の組織・時期に発現することによって生じる問題を回避することができる。
【００３５】
また、配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡもまた、その制御下の構造遺伝子の発現を、植物の分裂組織において特異的に促進する機能を有する限り、上記問題を回避することができる。
【００３６】
従って、合目的的に構造遺伝子を選択し、これを本発明のプロモーターの制御下に置いてベクターを作成し、このベクターを用いて所望の植物の形質転換を行えば、その植物の分裂組織においてのみその構造遺伝子を発現させることができるので、目的とする形質を付与するために導入した構造遺伝子が、予定外の組織・時期に発現することによって生じる問題を回避することができる。
【００３７】
また、配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズするＤＮＡもまた、その制御下の構造遺伝子の発現を、植物の分裂組織において特異的に促進する機能を有する限り、上記問題を回避することができる。
【配列表】

【図面の簡単な説明】
【図１】図１は、プラスミドｐＥｇＨ３−ＧＵＳおいて、植物ゲノムＤＮＡに組込まれる部分の模式図である。

Claims

配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡ。
配列番号１に示す塩基配列を有するＤＮＡとストリンジェントな条件でハイブリダイズし、かつ、その制御下の構造遺伝子の発現を、植物の分裂組織において特異的に促進する機能を有するＤＮＡ。
請求項１又は２に記載のＤＮＡ、及び、これらのＤＮＡによりその発現が制御される構造遺伝子を有するベクター。
請求項１又は２に記載のＤＮＡ、及び、これらのＤＮＡによりその発現が制御される構造遺伝子が導入された植物細胞。
請求項４に記載の植物細胞から再生された植物体。