JP3623975B2 - マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品並びにその製造法 - Google Patents

Description

【０００１】
【産業上の利用分野】
フタラジノン誘導体アゼラスチン（ＩＮＮ）は、気管支喘息およびアレルギー性および季節性鼻炎の治療および予防において十分な成果をおさめて使用された。これは、ドイツ連邦共和国特許第２１６４０５８号明細書の記載により、合成によって入手可能である。
【０００２】
【従来の技術】
後続化合物として、Ｄ−１８０２４−塩酸塩（ＩＮＮ：フレゼラスチン）は、ラセミ体混合物の形態で展開されている。この製造は、欧州特許第２２２１９１号明細書に記載されている。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
前記の従来技術の視点より、本発明には、１つの課題が課された。
【０００４】
【課題を解決するための手段】
ところで、驚異的なことに、一般式Ｉ：
【０００５】
【化１０】

【０００６】
〔式中、
Ａは、フェニル基（非置換、一回または数回ハロゲン置換されている）、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_３アルキル基、２−フリル基または２−チエニル基を表し、
Ｒは、
【０００７】
【化５】

【０００８】
（但し、Ｙは、ＨまたはＣ_１〜Ｃ_６アルキル基を表し、この場合、アルキル基は、（置換された）フェニル環、ヒドロキシ基またはアルコキシカルボニル基で置換されていてもよい）を表す〕
で示されるフタラジノン誘導体並びに次式ＩＩ：
【０００９】
【化１２】

【００１０】
および式ＩＩＩ：
【００１１】
【化６】

【００１２】
および式ＩＶ：
【００１３】
【化１４】

【００１４】
で示される全ての生理学的に懸念されることのない酸付加塩並びにアゼラスチンの光学異性体およびフレゼラスチンの光学異性体は、抗不整脈作用を有することが見出された。これらは、おそらく第ＩＩＩ種抗不整脈作用化合物の群に分類することができる。
【００１５】
更に、この化合物は、鎮痛活性を有する。
【００１６】
更に、本発明による化合物は、アンチメティック作用（ａｎｔｉｍｅｔｉｓｃｈｅｎ Ｅｆｆｅｋｔ）を有する。このアンチメティック作用は、スプラチンによって誘発された嘔吐の抑制によって、覚醒しているブタにおいて、経口または静脈内投与後に見出された。
【００１７】
覚醒しているブタの中でのシスプラチンによって誘発された嘔吐の抑制。数字は、観察期間の間の嘔吐発作の回数を表す。値は、５つの異なる実験の平均値を表す。
【００１８】
【表１】

【００１９】
式Ｉによる化合物の製造は、ドイツ連邦共和国特許２１６４０５８号明細書の記載により行なわれ、式ＩＩによる化合物は、ドイツ連邦共和国特許第２１６０５８号明細書、例１０に記載の方法と同様にして得られる。
【００２０】
式ＩＩＩによる化合物は、欧州特許第１７４４６４号明細書中の例２と同様にして製造される。
【００２１】
式ＩＶによる化合物の合成は、欧州特許第０２２２１９１号明細書中に記載された方法（例３６）により行なわれる。
【００２２】
【実施例】
アゼラスチンおよびフレゼラスチンの光学異性体は、分別蒸溜された結晶の方法を用いて取得された。アゼラスチンの絶対立体配置は、Ｘ線構造分析法によって定められた。
【００２３】
抗不整脈作用の試験を、次の試験方法により行なった。
【００２４】
交雑種の２０羽の飼いウサギ（Ｋａｎｉｎｃｈｅｎ）および１４７５±７５ｇ（平均値±標準誤差（Ｓ．Ｅ））を有する雌雄を使用した。この動物を、頭部への打撃によって殺し、その心臓を摘出し、右心室の前方自由壁面（ｖｏｒｄｅｒｅｎ ｆｒｅｉｅｎ Ｗａｎｄ）の索並びに右心室の乳頭筋を解剖し、ロックの溶液（Ｌｏｃｋ’ｓ Ｌｏｅｓｕｎｇ）を含有する熱い器官浴の（“非毒性のゴム”）の底部に固定した。この溶液を、次のように合成しておいた：Ｎａ^＋１４０ミリモル／ｌ；Ｋ^＋５．６３ミリモル／ｌ；Ｃａ^２＋２．１７ミリモル／ｌ；グルコース１１ミリモル／ｌ；ＨＣＯ_３２５ミリモル／ｌ；Ｃｌ１２５ミリモル／ｌ；全部で３０９ミリモル／ｌ、ｐＨ７．４。Ｏ_２９５％およびＣＯ_２５％の混合物の導通を用いて、この溶液を連続的に撹拌し、かつ酸素負荷した。器官浴の温度を、３２℃で保持した。摘出した左心房、乳頭筋および右心室の前方自由壁面の索を、１マイクロセコンドの時間の矩形パルス、二重しきい値（Ｓｃｈｗｅｌｌｉｎｔｅｎｓｉｔａｅｔ）および周波数１００／分間を用いて、電気的に刺激した。試験が進行するにつれて次の電気生理学的パラメーターを測定した：電気的しきい値、有効不応時間（Ｒｅｆｒａｋｔａｅｒｚｅｉｔｒａｕｍ）および伝導時間（Ｋｏｎｄｕｋｔｉｏｎｚｅｉｔ）。有効不応時間（即ち、２つの順次の電気機械的反応の間の最小中断時間）を、ＤＩＳＡ Ｍｕｌｔｓｔｉｍの三重しきい値試験刺激（Ｓｃｈｗｅｌｌｅｎｖｅｒｓｕｃｈｓｒｅｉｚ）（１マイクロセコンド、矩形波）を用いて、種々の間隔で、ペースメーカーの刺激後に測定した。伝導時間を、オシロスコープ（Ｔｅｋｔｒｏｎｉｓ ２２３０）上で、ペースメーカーの刺激の発生と、両極性の白金電極を包含する引続く表面ポテンシャルの発生との間の間隔（即ち、時間）を測定した。同様に、増負荷的に測定した収縮性（最大収縮力を包含する（乳頭筋、左心房）。
【００２５】
対照溶液中での６０分間の平衡後に、調製物を、６０分間、試験溶液１０マイクロモルにさらした。有効不応時間（３０分間および６０分間だけ測定した）に対する作用を除いて、全てのパラメーターを、それぞれ１５分間、即ち、４回、組成物の規定された濃度の存在下に分析した。
【００２６】
表および図に記載された値は、平均値±標準誤差である。種々のパラメーターに対する組成物の作用を、Ｔ−試験（スチューデンド−ウェルチ）を用いて、ランダムに評価し；Ｐ値＜０．０５を有意であるとみなした。
【００２７】
結果は、第１表を見よ：
【００２８】
【表２】

【００２９】
末梢−鎮痛作用を、ライティング−テスト（Ｗｒｉｔｈｉｎｇ−Ｔｅｓｔ）の型およびランダル−セリット−炎症の痛み試験（Ｒａｎｄａｌｌ−Ｓｅｌｉｔｔｏ−Ｅｎｔｚｕｅｎｄｕｎｇｓｓｃｈｍｅｒｚｔｅｓｔ）（ＩＲＳ）の型で検出した。
【００３０】
第２表を見よ
【００３１】
【表１】

【００３２】
静細胞剤を用いる治療の場合には、腫瘍が、初期の処置を行なった後、治療抵抗性であることが判明するという現象が観察される。また、別の静細胞剤を用いる処置は、何等の成果も期待できない。
【００３３】
前記の現象を、マルチ薬剤耐性と呼称する（ＭＤＲ）（Ｖｅｎｄｒｉｋ，Ｂｅｒｇｅｒｓ，ｄｅ Ｊｏｎｇ，Ｓｔｅｅｒｅｎｂｅｒｇ Ｒｅｓｉｓｔａｎｃｅｔｏ ｃｙｔｏｓｔａｔｉｃ ｄｒｕｇｓ ａｔ ｔｈｅ ｃｅｌｌｕｌａｒｌｅｖｅｌ，Ｃａｎｃｅｒ Ｃｈｅｍｏｔｈｅｒ．Ｐｈａｒｍａｃｏｌ．（１９９２年）第２９巻、第４１３〜４２９頁）。
【００３４】
また、本発明による化合物は、前記現象に抗する医薬品の製造に好適である。
【００３５】
ＭＤＲを打ち砕く医薬品の製造のための化合物の適性を、以下に記載された試験装置を用いて測定した。
【００３６】
急性のブラウンノールウェイ型（Ｂｒｏｗｎ Ｎｏｒｗａｙ）の髄様白血病（Ｍｙｅｌｏｉｄ−Ｌｅｕｋａｅｍｉｅ）（ＢＮＭＬ）は、その成長特性およびその化学療法−反応（ＢＮＭＬに対する最近の概要、Ｍａｒｔｅｎｓ他、Ｌｅｕｋｅｍｉａ 第４巻、第２４１〜２５７頁、１９９０年を見よ）の点で、ヒトの場合の急性の髄様白血病に似ている。臨床的に重要な医薬品−抵抗性の白血病型を開発するために、ＬＴ１２という名称を有する、ＢＮＭＬによって引き継がれた細胞系列を選択した。前記のＢＮＭＬ−系列は、該系列が生体内および試験管内で成長することができるという利点を有する。
【００３７】
転写を用いてゲノム−ＤＮＡ中にヒトのｍｄｒ１−遺伝子を（試験管内で）挿入することによって、ＬＴ１２−細胞を、物質抵抗性（Ｓｔｏｆｆｒｅｓｉｓｔｅｎｔ）にした。前記の転写のために、制御しながら、ＨＢＶポリアデニル化信号が続くＣＭＶ−プロモーターのための早期の加速によって、ヒトｍｄｒ１−遺伝子の全てのｃＤＮＡを含有する発現ベクターｐＦＲＣＭＶ ｍｄｒ１．６を使用した。転写したＤＮＡの断片を、ミトキサントロン（Ｍｉｔｏｘａｎｔｒｏｎ）を用いて選択し、かつミトキサントロン２００ｎＭを用いて物質選択下に保持した。前記の方法は、ＬＴ１２／ｍｄｒと呼称される安定な物質抵抗性のＬＴ１２−細胞系列を生じた。
【００３８】
終点−フローサイトメトリー
フローサイトメトリーを用いて、細胞を、水平（大きさのパラメーター）および垂直な（構造のパラメーター）光散乱に基づいて同定することができる。全ての細胞に、３つの作用を、４８８ｎｍのレーザ照射の０．６Ｗによる興奮状態で、測定する：水平の光散乱、垂直の光散乱（４８８ｎｍのバンドフィルターを通過）およびダウノルビシン蛍光（５５０ｎｍの長いバンドフィルターを通過）。前記の散乱の値が、蛍光値と組み合わさる場合には、細胞群生のダウノマイシン含量を試験することができる。ｔが０である場合には、ダウノルビシン（最終濃度２μＭ）および試験化合物（最終濃度１．０μＭ、３．０μＭまたは１０μＭ）を、細胞懸濁液に添加した（フェノールレッドなしのＲＰＭＩ−１６４０培地中、細胞２・１０^５個／ｍｌ）。この細胞を、９０分間３７℃で培養した。
【００３９】
フローサイトメトリーを用いて、細胞内のダウノルビシン濃度を、その淡い蛍光の測定によって、４８８ｎｍのレーザ照射を用いた興奮状態で、測定した。
【００４０】
フェノールレッドなしのＲＰＭＩ−１６４０培地を、マイナスの対照として使用した。全ての試験の場合に、シクロスポリンＡ（０．３μＭ、１μＭおよび３μＭ）を、作用物質として使用した。
【００４１】
死んだ細胞を、非生体染料、ヘキスト社の３３２５８を用いる補色を用いて同定した（４０５ｎｍの長さの透過フィルターを通過するＵＶレーザ照射０．２Ｗを用いた興奮状態）。前記の死んだ細胞およびデトリタスを、分析の際に、常に排除した。
【００４２】
オンラインフローサイトメトリー
オンラインフローサイトメトリーは、試料の間断のない測定を数時間の時間に亘ってできるようにする標準的なフローサイトメトリー法の変法である。予め定められた時点で、試験用マイクロコンピュータに、いわゆるリストモードデータ注のそれぞれ２０００個の細胞のデータを記憶させる。全ての重要なパラメーター（例えば、大きさ、構造、物質蓄積等）が全ての細胞に記憶されているので、引続き、包括的なデータ分析および新たな試験実行ができる。
【００４３】
細胞懸濁液を、フローサイトメーターのフローキュベット（Ｆｌｕｓｓｋｕｅｖｅｔｔｅ）に接続されている恒温水ジャケットを有する反応容器中に、３７℃で保持する。細胞を含有する培地を、空気圧力を用いて、フローキュベットによって圧縮した。反応グラスのもう１つの入口は、細胞を観測している間に、物質を添加できるようにする。従って、オンラインフローサイトメトリーの方法は、細胞内の物質濃度の（迅速な）動的変化の測定に、特に好適である。
【００４４】
前記の試験型の場合、測定を、細胞懸濁液中にダウノルビシンなしに開始した（フェノールレッドなしのＲＰＭＩ−１６４０培地中、細胞２・１０^５個／ｍｌ）。ｔが０の場合には、細胞に、ダウノルビシンを添加した（最終濃度２μＭ）。引続き、細胞によってダウノルビシンの正味の吸収量を、６０分間の時間に亘って、物質蓄積の均一な水準が達成されるまで測定した。前記の瞬間に、細胞懸濁液に試験化合物を添加し、かつ物質蓄積を、更に６０分間測定した。この細胞懸濁液を、プラスの対照物質としてのシクロスポリンＡを添加した。
【００４５】
この結果は、前記の目的のための本発明による化合物の適性を証明している。ＬＴ１２／ｍｄｒ細胞は、処理せずに、２３％のダウノルビシン蛍光の値を示し、非抵抗性の細胞は、ダウノルビシン蛍光１００％を示す。比較物質シクロ−Ａは、０．３μモルの濃度の場合、１２０％、１．０μモルの場合、１１０％および３μモルの場合、１３０％のダウノルビシン蛍光を示す。
【００４６】
フレゼラスチンは、０．１μモルの場合、６０％、０．３μモルの場合、１１０％、０．５μモルの場合、１３０％、１．０μモルの場合、１３０％および３．０μモルの場合１４０％のダウノルビシン蛍光を生じる。
【００４７】
アゼラスチンは、０．１μモルの場合、５０％、０．３μモルの場合、７０％、０．５μモルの場合、９０％、１．０μモルの場合、１１０％および３．０μモルの場合、１４０％のダウノルビシン蛍光を示す。

Claims (8)

1. 式Ｉ：
   

   

   〔式中、
   Ａは、非置換であるかまたは一回または数回ハロゲン置換されているフェニル基、ＨまたはＣ _１ 〜Ｃ _３ アルキル基、２−フリル基または２−チエニル基を表し、
   

   

   （ここで、Ｙは、非置換であるかまたはフッ素置換されているフェニル環で置換されたＣ _１ 〜Ｃ _６ アルキル基を表す）である〕で示される化合物を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品。
2. 式ＩＩ：
   

   

   で示される化合物を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品。
3. 式ＩＩＩ：
   

   

   で示される化合物を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品。
4. フレゼラスチン並びにその光学異性体を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品。
5. フレゼラスチンの純粋（＋）異性体を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品。
6. フレゼラスチンの純粋（−）異性体を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品。
7. マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品を製造するための方法において、常用の助剤および担持剤とともに、フレゼラスチンの（＋）異性体を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品の製造法。
8. マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品を製造するための方法において、常用の助剤および担持剤とともに、フレゼラスチンの（−）異性体を含有することを特徴とする、マルチ薬剤耐性を回避するための医薬品の製造法。