JP3626203B2

JP3626203B2 - 染色されたデニムの複合糊抜及び「ストーンウォッシュ」方法

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Publication number: JP3626203B2
Application number: JP51851797A
Authority: JP
Inventors: ルント，ヘンリク
Original assignee: ノボザイムスアクティーゼルスカブ
Priority date: 1995-11-15
Filing date: 1996-11-15
Publication date: 2005-03-02
Anticipated expiration: 2016-11-15
Also published as: BR9611446A; EP1021513A1; DE69631610D1; AU7620796A; WO1997018286A1; MX9803673A; EP1021513B1; JP2000500176A; DE69631610T2; ES2216072T3; PL326846A1; US6261828B1; MA24009A1; CN1211274A; CN1151247C; TR199800866T2

Description

本発明は、一段階法糊抜及び「ストーンウォッシュ」方法に関し、それにより改良された均斉度の色密度の局在化された染色されたデニム、特に染色されたデニム衣服、たとえば、デニムのジーンズが、まさに同じ方法工程で澱粉分解性酵素及び２つの異なるエンドグルカナーゼで処理することにより実現する。
発明の背景
繊維製品の機織の間に、糸は相当な機械的歪にさらされる。機械的織機での機織の前に、経糸はそれらの引張強度を増加させ、破断を防ぐために、しばしば、澱粉糊または澱粉誘導体糊で被覆される。最も一般的なサイジング剤は、天然または変性した形の澱粉であるが、他の高分子化合物、たとえばポリビニルアルコール（PVA）、ポリビニルピロリドン（PVP）、ポリアクリル酸（PAA）またはセルロースの誘導体〔たとえば、カルボキシメチルセルロース（CMC）、ヒドロキシエチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロースまたはメチルセルロース〕もサイズに豊富である。
一般に繊維製品が機織された後、布帛は糊抜段階に進み、１または複数の追加の布帛処理工程が続く。糊抜は織物材料からサイズを取り除く行為である。機織後、サイズの被覆は均質性と洗浄耐久検査結果を保証するために、さらなる布帛の処理の前に取り除かなければならない。糊抜の好ましい方法は、澱粉分解性酵素によるサイズの酵素加水分解である。
デニム布の製造のために、布帛は裁断され、衣服に縫製され、その後で仕上げされる。特にデニム衣服の製造のために種々の酵素仕上げ方法が開発された。デニム衣服の仕上げは通常は酵素糊抜工程で始まり、その間に衣服は、布帛に柔軟性をもたらし、連続する酵素仕上げ上程に木綿をより利用し易くするために澱粉分解性酵素の作用を受ける。
木綿の機織の速度を増加させるために木綿ワックス及び他の減摩剤を糸に適用できる。より高融点のワックスも用いられる。ワックス減摩剤は主としてトリグリセリドエステルを基礎とする減摩剤である。糊抜後、ワックスは布帛上に残存するか、再付着するかのいずれかであって、その結果として、布帛は色合いが暗くなり、光沢のある点ができ、より硬くなる。
国際特許出願WO93/13256号（ノボノルディスク A/S）は、布帛から疎水性エステルを除去する方法を記載し、その方法においては、糊抜工程の間、布帛にリパーゼの水溶液をしみ込ませる。この方法は布帛縮充機を用いるためにのみ開発されたもので、存在する布帛縮充設備、すなわち、パッドロール、ジッガーまたはＪボックスを用いてのみ行なわれる。
特開平２−80673号は、セルロース繊維をアミラーゼとセルラーゼの両方を含有する水溶液で処理することにより糊抜と柔軟加工を達成する方法を開示している。
長年デニムジーンズの製造者は、彼等の衣服を、柔軟な手触り並びに所望の流行の「ストーンウォッシュ」外観を達成するのに仕上げ洗濯機で軽石を用いて洗濯してきた。この摩耗効果は局所的に表面に結合した染料を除去することにより得られる。最近、セルロース分解酵素が仕上方法に取り入れられ、ストーンウォッシュ方法を「バイオ−ストーニング方法」に変えた。
バイオ−ストーニング方法のゴールは衣服の独特であるが均質な摩耗（ストーンウォッシュ外見）が得られることである。しかしながら、不均一なストーンウォッシュ（「縞」及び「しわ」）が非常にしばしば起こる。その結果修復作業（「後−彩色」）が、洗濯機中で加工されたストーンウォッシュジーンズの大部分（約80％まで）に必要である。
したがって、本発明の目的は、仕上げデニム衣服の縞及びしわの問題を減少させる方法を提供することである。
発明の概要
したがって、本発明は布帛の処理方法を提供し、その方法は色分布／均斉度、ストーンウォッシュ品質等を改良し、仕上げられた布の後−彩色の必要性を減じる。
本発明は染色されたデニムの酵素糊抜及びストーンウォッシュのための一段階方法を提供し、その方法はデニムを澱粉分解性酵素、たとえばアミラーゼといっしょに、第１研摩単成分エンドグルカナーゼと第２縞減少単成分エンドグルカナーゼで処理することを含む。
発明の詳細な説明
本発明は布帛の酵素処理方法を提供し、その方法により、改良された視覚的品質の糊抜され、酵素でストーンウォッシュされた染色デニムを提供することが可能である。
上記のように、布帛の酵素処理は慣習的に、澱粉分解性酵素を用いることによる布帛の糊抜、任意に衣服の染色が後に続く、セルロース分解性酵素を用いることによる衣服の柔軟加工（バイオ−研摩、バイオ−ストーニング及び／または衣服洗濯）、衣服の洗濯、及び／または、化学的柔軟加工剤、典型的にはカチオン性、ある場合にはシリコーンを基礎とする表面活性化合物を用いる衣服の柔軟加工の工程を包含する。本発明の方法は慣用の衣服製造工程の糊抜及び／または柔軟加工工程の間に便利に行なわれる。
したがって、好ましい態様では、本発明の方法は染色されたデニムの複合糊抜及び「ストーンウォッシュ」のための一段階方法に関し、ここで、デニムは澱粉分解性酵素、たとえばα−アミラーゼといっしょに第１研摩単成分エンドグルカナーゼ及び第２縞−減少単成分エンドグルカナーゼで処理される。
この文脈では、用語「研摩エンドグルカナーゼ（またはセルラーゼ）」は、染色されたデニム布帛（通常は衣服、特にジーンズに縫製された）の表面に着色密度に局部的な変化をもたらすことができるエンドグルカナーゼを意味することを意図する。研摩セルラーゼの例は、WO90/02790号として公開された国際特許出願PCT/US89/03274号（参照により本明細書に組み込まれる）に記載されたものである。
用語「単成分エンドグルカナーゼ」は、他のタンパク質、特に他のエンドグルカナーゼを本質的に含まないエンドグルカナーゼをいう。単成分エンドグルカナーゼは典型的には組換え技術により、すなわち、同族宿主または異種宿主における関連する遺伝子のクローニング及び発現により生産される。
この文脈では、用語「縞−減少エンドグルカナーゼ（またはセルラーゼ）」または「均染」エンドグルカナーゼは、デニムの表面の着色密度に局在的な変化をもたらすために、酵素ストーンウォッシュ方法または軽石を用いる方法のいずれかの「ストーンウォッシュ」方法にかけられた、染色されたデニム布帛（通常、衣服、特にジーンズに縫製された）の表面に通常存在する縞の形成を減少させることが可能であるエンドグルカナーゼを意味することを意図している。縞−減少または均染セルラーゼの例は、WO95/24471号として公開された国際特許出願PCT/DK95/00108号（参照により本明細書に組み入れられる）に記載されているものである。
第１エンドグルカナーゼは好ましくは真菌のEG V型セルラーゼである。他の有用なエンドグルカナーゼはトリコデルマ（Trichoderma）属の菌株から得られる、真菌のEG III型セルラーゼである。有用な真菌のEG III型セルラーゼの例は、WO92/06184号、WO93/20208号及びWO93/20209号並びにWO94/21801号（参照により本明細書に組み入れられる）に開示されたものである。
好ましくは、EG V型エンドグルカナーゼは、シタリジウム（Scytalidium）（f.Humicola）、フザリウム（Fusarium）、マイセリオフトラ（Myceliophthora）の菌株から由来するかまたはそれにより生産することができ、より好ましくはシタリジウム・サーモフィルム（thermophilum）（f.Humicola insolens）、フザリウム・オキシスポルム（oxysporum）またはマイセリオフトラ・ゼモフィラ（themophila）から由来またはそれにより生産することができ、最も好ましくは、フミコラ・インソレンスであるDSM 1800、フザリウム・オキシスポルムであるDSM 2672またはマイセリオフトラ・ゼモフィラであるCBS 117.65から由来するものである。
本発明の１態様では、第１エンドグルカナーゼは配列番号１に示された、フミコラ・インソレンスのエンドグルカナーゼのアミノ酸配列を含むエンドグルカナーゼであるか、または配列番号１に示された配列と少なくとも60％相同であり、前記エンドグルカナーゼに対して生じた抗体と反応し、及び／または前記エンドグルカナーゼをコードするDNA配列とハイブリダイズするDNA配列によりコードされる、前記エンドグルカナーゼの類似体である。
本発明の他の態様では、第１エンドグルカナーゼは配列番号２で示されるフザリウム・オキシスポルムのエンドグルカナーゼのアミノ酸配列を含むエンドグルカナーゼであるか、または配列番号２に示された配列と少なくとも60％相同であり、前記エンドグルカナーゼに対して生じた抗体と反応し、及び／または前記エンドグルカナーゼをコードするDNA配列とハイブリダイズするDNA配列によりコードされる、前記エンドグルカナーゼの類似体である。
この文脈では、相同性は、当分野で公知のコンピュータープログラム、たとえば、GCGパッケージ中に供給されたGAPにより、２以上のアミノ酸配列の間の同一性の程度として決定することができる（Needleman及びWunsch「Journal of Molecular Biology」48，第443〜453頁、1970年）。本発明のための２つのアミノ酸配列の間の同一性の程度を決定する目的のためにGAPは次のセッティングで用いられる。GAP創造ペナルティー3.0及びGAP伸長ペナルティー0.1。
この文脈では抗体反応性は次のように決定できる。
免疫学的交差反応性を決定するのに用いられる抗体は関連する精製された酵素を用いることにより製造できる。より詳細にはその酵素に対する血清を、N.Axelsen他の「定量的免疫電気泳動の手引き（A Manual of Quantitative Immunoelectrophoresis）」23章（Blackwell Scientific Publications,1973）またはA.Johnstone及びR.Thorpeの「実際問題としての免疫化学（Immunochemistry in Practice）」（Blackwell Scientific Publications,1982年）（より詳細には第27〜31頁）に記載された手順に従って、免疫にする兎（または他の齧歯動物）により生じさせることができる。精製された免疫グロブリンは、たとえば、塩析（（NH₄）₂SO₄）、次いで透析及びイオン交換クロマトグラフィー、たとえばDEAE−Sephadex上により、血清から得ることができる。タンパク質の免疫化学的特徴づけは、交差免疫電気泳動（N.Axelsen他、上記、３及び４章）による、アウトシャーロニィ（Outcherlony）二重−拡散分析（O.Outcherlony「Handbook of Experimental Immunology（D.W.Weir編）」Blackwell Scientific Publications,1967年、第655〜706頁）またはロケット免疫電気泳動（N.Axelsen他、２章）のいずれかによりなされる。
ハイブリダイズはDNA（または相当するRNA）配列を次の条件下にハイブリダイズさせることにより決定できる。
ハイブリダイズさせるDNA断片またはRNAを含有するフィルターの５×SSC（塩化ナトリウム／クエン酸ナトリウム、Sambrook他、1989年）に10分間予備浸漬並びに５×SSC、５×デンハルツ溶液（Sambrook他、1989年）、0.5％SDS及び100μg/mlの変性超音波処理さけ精子DNA（Sambrook他、1989年）の溶液中での該フィルターの予備ハイブリダイズ、続いて、ランダムに詰め込まれた（randam−primed）³²P−dCTP標識化（特異的活性＞１×10⁹cpm/μｇ）プローブを含有する同じ溶液中で約45℃で12時間のハイブリダイズ。次に、該フィルターを２×SSC 0.5％SDS中で、少なくとも55℃、より好ましくは少なくとも60℃、さらにより好ましくは少なくとも65℃、なおより好ましくは少なくとも70℃（高ストリンジェンシー）、さらにより好ましくは少なくとも75℃で30分間２回洗浄する。これらの条件下で該オリゴヌクレオチドプローブにハイブリダイズする分子をＸ線フィルムを用いて検出する。
本発明の方法の好ましい態様では、第２エンドグルカナーゼはpH8.5で、少なくとも0.01S^-1、好ましくは少なくとも0.1S^-1、より好ましくは少なくとも1S^-1のKcatに相当するセロトリオースに関する触媒活性を有している。
好ましくは第２エンドグルカナーゼは、フミコラ、トリコデルマ、マイセリオフトラ、ペニシリウム、イルペクス（Irpex）、アスペルギルス、シタリジウムまたはフザリウムの菌株、より好ましくはフミコラ・インソレンス、フザリウム・オキシスポルムまたはトリコデルマ・リーセイ（reesei）の菌株により得ることができるか、またはそれらに由来する。好ましい第２エンドグルカナーゼはEG I型である。
有用な第２エンドグルカナーゼの例は、配列番号３に示されたフミコラ・インソレンスのアミノ酸配列を含むエンドグルカナーゼまたは配列番号３に示された配列と少なくとも60％相同で、前記エンドグルカナーゼに対して生じた抗体と反応し、及び／または前記エンドグルカナーゼをコードするDNA配列とハイブリダイズするDNA配列によりコードされる前記エンドグルカナーゼの類似体である。
本発明の方法では、第１及び第２エンドグルカナーゼをそれぞれ、１リットルの糊抜／「ストーンウォッシュ」液当り５〜8,000ECU、好ましくは１リットルの液当り10〜5,000ECU、より好ましくは１リットルの液当り50〜500ECUのセルラーゼ活性に相当する量で用いることができる。第１及び第２エンドグルカナーゼを、それぞれ、好ましくは0.01〜40mgエンドグルカナーゼ/l、より好ましくは0.1〜2.5mg/l、特に0.1〜1.25mg/lに相当する量で投与する。
本発明の方法の基質は染色されたデニムである。デニムは天然または合成染料で染色することができる。合成染料の例は、直接染料、繊維反応性染料または間接染料である。好ましい態様ではデニムはインジゴで染色される。典型的には、デニムを本発明の方法にかける前に裁断して衣服に縫製する。衣服の例はジーンズ、ジャケット及びスカートである。特に好ましい例はインジゴで染色されたデニムのジーンズである。
本発明の方法では、慣用の糊抜酵素、特に澱粉分解性酵素を澱粉含有サイズを除去するために用いることができる。
したがって、澱粉分解性酵素、好ましくはα−アミラーゼを本発明の間に加えることができる。慣用的に、細菌のα−アミラーゼ、たとえばバシラスの菌株、特にバシラス・リケニホルミス（licheniformis）の菌株、バシラス・アミロリケファシエンス（amyloliquefaciens）の菌株もしくはバシラス・ステアロサーモフィルス（stearothermophilus）の菌株またはそれらの変異体から由来するα−アミラーゼが糊抜のために用いられる。上記アミラーゼのアミノ酸配列は、たとえば、WO95/21247号から明らかである。適切な市販のα−アミラーゼの例は、Termamyl（商標）、Aquazym（商標）Ultra及びAquazym（商標）（デンマーク国のノボノルディスク A/Sから入手できる）。
しかしながら、真菌のα−アミラーゼも用いることができる。真菌のα−アミラーゼの例はアスペルギルスの菌株から由来するものてある。他の有用なα−アミラーゼはWO95/21247号に開示された、酸化安定性α−アミラーゼ変異体である。たとえば、α−アミラーゼ変異体は、親α−アミラーゼから、１または複数のメチオニンアミノ酸残基をLeu,Thr,Ala,Gly,Ser,Ile,AsnまたはAspアミノ酸残基、好ましくはLeu,Thr,AlaまたはGlyアミノ酸残基で置換することにより製造された。特に興味があるのは、位置197のメチオニンが、他のあらゆるアミノ酸残基、特に、Leu,Thr,Ala,Gly,Ser,Ile,AsnまたはAspアミノ酸残基、好ましくはLeu,Thr,AlaまたはGlyアミノ酸残基で置換された、バシラス・リケニホルミスから製造されたα−アミラーゼ変異体である。
澱粉分解性酵素は慣用に糊抜方法で用いられる量、たとえば、約10〜約10,000KNU/l、たとえば100〜約10,000KNU/lまたは10〜約5,000KNU/lのα−アミラーゼ活性に相当する量で加えることができる。また、本発明による方法では、１〜10mMのCa⁺⁺を安定剤として加えることができる。
本発明の方法は、当業者により行なわれるように、慣習的に糊抜／「ストーンウォッシュ」方法で普及している方法条件で達成できる。本発明の方法は、たとえば、洗濯機抽出機中で、１回ごとに行なうことができる。
現在では、適切な液／繊維製品比は約20:1〜約1:1の範囲、好ましくは約15:1〜約5:1の範囲であると考えられている。
慣用の糊抜及び／「ストーンウォッシュ」方法では、反応時間は通常約１時間〜約24時間の範囲である。しかしながら、本発明の方法では、反応時間は、１時間より少なく、すなわち、約５分〜約55分で申し分ないであろう。好ましくは反応時間は約５または10〜約120分の範囲内である。
反応媒体のpHは非常に当該酵素に依存する。好ましくは本発明の方法は約pH3〜約pH11の範囲、好ましくは約pH6〜約pH9の範囲または約pH5〜約pH8の範囲内で行なわれる。
緩衝液を用いられた酵素のために適切なpHを維持するために反応媒体に加えることができる。緩衝液は適切には、リン酸塩、ホウ酸塩、クエン酸塩、酢酸塩、アジピン酸塩、トリエタノールアミン、モノエタノールアミン、ジエタノールアミン、炭酸塩（特に炭酸、アルカリ金属もしくはアルカリ土金属、特にナトリウムもしくはカリウムまたはアンモニウム及びHCl塩）、ジアミン、特にジアミノエタン、イミダゾールまたはアミノ酸緩衝液であることができる。
本発明の方法は、湿潤剤、高分子試薬、分散剤等を包含する、慣用の繊維製品仕上げ剤の存在において行うことができる。
慣用の湿潤剤は、方法において用いられる基質と酵素の間の接触を改良するために用いることができる。湿潤剤は、非イオン界面活性剤、たとえばエトキシ化脂肪アルコール、エトキシ化オキソアルコール、エトキシ化アルキルフェノールまたはアルコキシ化脂肪アルコールであってもよい。
適切なポリマーの例は、タンパク質（たとえば、ウシ血清アルブミン、ホエー、カゼインまたはまめ科植物タンパク質）、タンパク質加水解物（たとえば、ホエー、カゼインまたは大豆タンパク質水解物）、ポリペプチド、リグノスルホン酸塩、多糖類及びそれらの誘導体、ポリエチレングリコール、ポリプロピレングリコール、ポリビニルピロリドン、エチレンオキシもしくはプロピレンオキシドと縮合したエチレンジアミン、エトキシ化ポリアミンまたはエトキシ化アミンポリマーを包含する。
分散剤は、適切には非イオン、アニオン、カチオン、両性または双極性界面活性剤であってよい。より詳細には、分散剤は、カルボキシメチルセルロース、ヒドロキシプロピルセルロース、アルキルアリールスルホン酸塩、長鎖アルコール硫酸塩（第１級及び第２級アルキル硫酸塩）、スルホン化オレフィン、硫酸化モノグリセリド、硫酸化エーテル、スルホコハク酸塩、スルホン化メチルエーテル、アルカンスルホン酸塩、リン酸塩エステル、アルキルイソチオン酸塩、アシルサルコシド、アルキルタウリド、フッ素界面活性剤、脂肪アルコール及びアルキルフェノール縮合物、脂肪酸縮合物、エチレンオキシドとアミンとの縮合物、エチレンオキシドとアミドとの縮合物、スクロースエステル、ソルビタンエステル、アルキロアミド、脂肪アミンオキシド、エトキシ化モノアミン、エトキシ化ジアミン、アルコールエトキシ化物並びにそれらの混合物から選択することができる。
本発明の他の好ましい態様では、上昇した温度で脂肪分解を行なうことができる脂肪分解性酵素を用いてこの方法を実施することができる。高融点の疎水性エステルを能率良く加水分解するために、約60℃以上の温度で充分な熱安定性及び脂肪分解活性を有する脂肪分解性酵素が好ましい。適切な加水分解は、酵素投与量の増加により、脂肪分解性酵素の最適温度の上または下ですら得ることができる。
脂肪分解性酵素は、動物、植物または微生物起原であってもよい。上記熱安定性脂肪分解性酵素を生産する微生物の例は、フミコラの菌株、好ましくはフミコラ・ブレビスポラ（brevispora）の菌株、フミコラ・ラヌギノサ（lanuginosa）の菌株、フミコラ・ブレビス変異体サーモイディア（brevis var.thermoidea）の菌株、フミコラ・インソレンスの菌株、フザリウムの菌株、好ましくは、フザリウム・オキシスポルムの菌株、リゾムコル（Rhizomucor）の菌株、好ましくは、リゾムコル・ミエヘイの菌株、クロモバクテリウム（Chromobacterium）の菌株、好ましくはクロモバクテリウム・ビスコスム（viscosum）の菌株及びアスペルギルスの菌株、好ましくはアスペルギルス・ニガー（niger）の菌株である。好ましい熱安定性脂肪分解性酵素はカンジダまたはシュードモナスの菌株、特にカンジダ・アンタルクチカ（antarctica）の菌株、カンジダ・ツクバエンシス（tsukubaensis）の菌株、カンジダ・アウリキュラリエ（auriculariae）の菌株、カンジダ・フミコラの菌株、カンジダ・フォリアルム（foliarum）の菌株、カンジダ・シリンドラセ（cylindracea）〔カンジダ・ルゴサ（rugosa）とも呼ぶ〕の菌株、シュードモナス・セパキア（cepacia）の菌株、シュードモナス・フルオレセンス（fluorescens）の菌株、シュードモナス・フラジ（fragi）の菌株、シュードモナス・スチュツェリ（Stutzeri）の菌株またはサーモミセス・ラヌギノスの菌株から由来する。
カンジダ・アンタルクチカ（antarctica）及びシュードモナス・セパキア（cepacia）の菌株から由来するタンパク質分解性酵素、特にカンジダ・アンタルクチカからのリパーゼＡが好ましい。上記タンパク質分解性酵素及びその製造のための方法は、たとえばWO88/02775号及び米国特許第4,876,024号及びWO89/01032号（これらの刊行物は参照により本明細書に組み入れる）から公知である。
酵素の投与量は、当該酵素、所望の反応時間、温度、液体／繊維製品比等を包含する、いくつかの因子に依存する。現在、脂肪分解性酵素は約0.01〜約10,000KLU/l、好ましくは約0.1〜約1000KLU/lに相当する量で投与することができると考えられている。
本発明の方法において存在することができる慣用の仕上剤は、限定するものではないが、軽石及び真珠岩を包含する。真珠岩は天然の火山岩である。好ましくは、熱膨張した真珠岩を用いることができる。熱膨張真珠岩は、たとえば組成物の全重量に基づいて20〜95w/w％の量で存在することができる。
セルロース分解活性
セルロース分解活性は、基質としてカルボキシメチルセルロース（CMC）を用いてpH7.5で決定された、エンドセルラーゼ単位（ECU）で測定し得る。
ECUアッセイは試料中に存在する触媒活性の量を、試料のカルボキシメチルセルロース（CMC）の溶液の粘度を低下させる能力を測定することにより定量する。アッセイは40℃、pH7.5、0.1Mリン酸塩緩衝液で、CMC Hercules 7 LFD基質の粘度を低下させるための相対的酵素標準、酵素濃度約0.15ECU/mlを用いて行なわれる。主要な標準は8200ECU/gと定義される。
澱粉分解性活性
澱粉分解性活性は基質としてジャガイモ澱粉を用いて決定することができる。この方法は酵素による変性ジャガイモ澱粉の崩壊に基づき、澱粉／酵素溶液の試料とヨウ素溶液とを混合することによって、反応が続く。最初に黒みがかった青色が生ずるが、澱粉の崩壊の間に、青色が弱くなり、徐々に赤褐色に変る。この赤褐色を着色されたガラス標準と比較する。
１キロノボ α−アミラーゼ単位（KNU）を標準条件下（すなわち、37℃＋／−0.05,0.0003M Ca²⁺及びpH5.6）で5.26gの乾燥澱粉基質Merck Amylum solubileをデキストリン化する酵素の量と定義する。
さらに詳細にこの分析方法を記載するAF 9/6パンフレットは、デンマーク国のノボノルディスク A/Sに請求することにより入手でき、このパンフレットは参照により本明細書に組み入れる。
脂肪分解性活性
脂肪分解性活性を基質としてトリブチリンを用いて決定することができる。この方法は酵素によるトリブチリンの加水分解に基づき、アルカリ消費量を時間の関数として記載する。
１リパーゼ単位（LU）は、標準条件下（すなわち、30.0℃、pH7.0で、乳化剤としてアラビアゴム、基質としてトリブチリンを用いて）で、１分当り１μモルの滴定可能な酪酸を遊離する酵素の量と定義される（1KLU＝1000LU）。
この分析方法をより詳細に記載するAF 95/5パンフレットは、デンマーク国のノボノルディスク A/Sに請求することにより入手でき、このパンフレットは参照により本明細書に組み入れられる。
例１
次の例は、デニムジーンズまたは他の衣服の多数の縞を減少させ、均一に局在化された着色変化を有するデニム衣服、特にジーンズを製造するための複合糊抜−摩耗方法に縞−減少または均染エンドグルカナーゼを加えることの効果を説明する。
洗浄試験を次の条件下に行なった。
繊維製品：
青色デニムDAKOTA、14^1/2オンス、100％木綿
前記デニムを裁断し、約37.5×100cm（各約375g）の「脚部」に縫製した。
２本の新しい脚部と１本の古い（一回使用した）脚部を各試験（合計約1100gの繊維製品）に用いた。
酵素：
試験A:
アミラーゼ:Termamyl（登録商標）、投与量:200KNU/l
エンドグルカナーゼ（セルラーゼ）：
EG V（配列番号１のアミノ酸配列を有する、フミコラ・インソレンス、DSM 1800からの単成分ほぼ43kDのエンドグルカナーゼ）、投与量:10ECU/gデニム
試験B:
アミラーゼ:Termamyl（登録商標）、投与量:200KNU/l
エンドグルカナーゼ（セルラーゼ）：
EG V（試験Ａと同じ）、投与量 10ECU/gデニム
EG I（配列番号３のアミノ酸配列を有する、フミコラ・インソレンス、DSM 1800からの単成分エンドグルカナーゼ）、投与量:10ECU/gデニム
洗浄はワスケーター（wascator）（FOM71 LAB）中で行なった。
洗浄プログラム：
１）緩衝液及び酵素が添加された20リットルの水中で55℃で120分間の主洗浄
緩衝液:30gのKH₂PO₄＋20gのNa₂HPO₄、pH7
２）排水 30秒
３）濯ぎ、80℃で通常の作動、20gのNa₂CO₃を加えた32リットルの水で15分間
４）排水 30秒
５）濯ぎ、54℃で通常の作動、32リットルの水で５分間
６）排水 30秒
７）濯ぎ、14℃で通常の作動、32リットルの水で５分間
８）排水 30秒
９）低速で40秒、高速で50秒回転
乾燥：試料をタンブル乾燥機中で乾燥させた。
２つの試験からのジーンズをほぼ同じレベルまで研摩した。
評価：
デニム評価の５人の熟練した人にデニムの脚部（各試験からの２本の脚部、脚部「１」と「３」は試験Ｂから、脚部「２」と「４」は試験Ａから）を１〜４に等級づけるように頼んだ。１は最も縞の少ないデニムの脚部で、４が最も縞が多い脚部である。
等級づけを下記表に示した。

表から分かるように、研摩及び縞−減少性をそれぞれ有する２つの単成分エンドグルカナーゼの組み合せ、たとえばEG V型及びEG I型セルラーゼを用いる本発明の複合方法で処理されたデニムの脚部は縞及び局在化された着色変化の均斉度に関して最も良い外観を有するものとすべての人が評価した。
図１及び2:
本発明の方法における縞−減少または均染エンドグルカナーゼ（セルラーゼ）を用いて得ることができる均斉度の変化を説明するために、試験Ａ及びＢからの小片をコンピューターに走査させ（HP Scan Jet II CX）、白黒に印刷した。
図１は試験Ｂからのデニムの脚部の部分を示し、図２は試験Ａからのデニムの脚部の部分を示す。
配列表
配列番号:1についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:415アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：タンパク質
（iv）起源
（Ａ）生物名：フミコラ・インソレンス
（Ｂ）株名:DSM 1800
（xi）配列番号:1:

配列番号:2についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:409アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：タンパク質
（iv）起源
（Ａ）生物名：フザリウム・オキシスポルム
（Ｂ）株名:DSM 2672
（xi）配列番号:2:

配列番号:3についての情報
（ｉ）配列の特徴
（Ａ）配列の長さ:415（435）アミノ酸
（Ｂ）配列の型：アミノ酸
（Ｃ）鎖の数：一本鎖
（Ｄ）トポロジー：直鎖状
（ii）配列の種類：タンパク質
（iv）起源
（Ａ）生物名：フミコラ・インソレンス
（Ｂ）株名:DSM 1800
（xi）配列番号:3:
配列表
（−21〜415まで、合計435aaを番号をつけかえた方がよいかもしれない。）

Claims

染色されたデニムの複合糊抜及び「ストーンウォッシュ」のための一段階方法であって、デニムを澱粉分解性酵素といっしょに第１研摩単成分エンドグルカナーゼ及び第２縞−減少単成分エンドグルカナーゼで処理する前記方法。
前記澱粉分解性酵素がα−アミラーゼである請求項１に記載の方法。
前記α−アミラーゼが細菌バシラスまたは真菌アスペルギルスによって生産し得るものである請求項２に記載の方法。
前記α−アミラーゼが、バシラス・リケニホルミス、バシラス・アミロリケファシエンス、バシラス・ズブチリスもしくはバシラス・ステアロサーモフィルスまたはそれらの変異体により生産し得るものである請求項２に記載の方法。
前記第１エンドグルカナーゼがトリコデルマ属の菌株から得られる真菌のEG V型セルラーゼまたは真菌のEG III型セルラーゼである請求項１〜４のいずれか１項に記載の方法。
前記EG V型エンドグルカナーゼが、シタリジウム（f.フミコラ）、フザリウムまたはマイセリオフトラの菌株から由来するかまたは前記菌株により生産し得るものである請求項５に記載の方法。
前記EG Vがシタリジウム・サーモフィルム（f.フミコラ・インソレンス）、フザリウム・オキシスポルムまたはマイセリオフトラ・ゼモフィラから由来するか、またはそれらにより生産し得るものである請求項６に記載の方法。
請求項７に記載の方法であって、前記エンドグルカナーゼが、配列番号１に示されたフミコラ・インソレンスのエンドグルカナーゼのアミノ酸配列を含むかまたは前記エンドグルカナーゼの類似体であって、
ｉ）配列番号１に示された配列と少なくとも60％相同であり、
ii）前記エンドグルカナーゼに対して生じた抗体と反応し、及び／または、
iii）前記エンドグルカナーゼをコードするDNA配列とハイブリダイズするDNA配列によりコードされるものである前記方法。
請求項７に記載の方法であって、前記グルカナーゼが配列番号２に示されたフザリウム・オキシスポルムのエンドグルカナーゼのアミノ酸配列を含むかまたは前記エンドグルカナーゼの類似体であって、
ｉ）配列番号２に示された配列と少なくとも60％相同であり、
ii）前記エンドグルカナーゼに対して生じた抗体と反応し、及び／または
iii）前記エンドグルカナーゼをコードするDNA配列とハイブリダイズするDNA配列によりコードされるものである前記方法。
請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法であって、前記第２エンドグルカナーゼが、pH8.5で少なくとも0.01S^-1、好ましくは少なくとも0.1S^-1 のKcatに相当するセロトリオースに関する触媒活性を有している請求項１〜９のいずれか１項に記載の方法。
前記エンドグルカナーゼが、フミコラ、トリコデルマ、マイセリオフトラ、ペニシリウム、イルペクス、アスペルギルス、シタリジウムもしくはフザリウムの菌株により得られるか、または前記菌株に由来するものである請求項10に記載の方法。
前記エンドグルカナーゼが、フミコラ・インソレンス、フザリウム・オキシスポルムまたはトリコデルマ・リーセイの菌株から由来し得るものである請求項11に記載の方法。
請求項11に記載の方法であって、前記エンドグルカナーゼが配列番号３に示されたフミコラ・インソレンスのエンドグルカナーゼのアミノ酸配列を含むか、または前記エンドグルカナーゼの類似体であって、
ｉ）配列番号３に示された配列と少なくとも60％相同であり、
ii）前記エンドグルカナーゼに対して生じた抗体と反応し、及び／または、
iii）前記エンドグルカナーゼをコードするDNA配列とハイブリダイズするDNA配列によりコードされるものである前記方法。
前記第１及び第２エンドグルカナーゼをそれぞれ糊抜／「ストーンウォッシュ」液１リットル当り５〜8000ECUのセルラーゼ活性に相当する量で用いる請求項１〜13のいずれか１項に記載の方法。
前記処理を30〜100℃の範囲の温度で、３〜11の範囲のpHで行なう請求項１〜14のいずれか１項に記載の方法。
デニムを天然染料または合成染料で染色する請求項１〜15のいずれか１項に記載の方法。
請求項１〜16のいずれか１項に記載の方法であって、前記デニムをさらに熱安定性脂肪分解性酵素で処理する前記方法。
前記脂肪分解性酵素を約0.01〜約10,000KLU/ｌの量で投与する請求項17に記載の方法。
前記α−アミラーゼを約100〜約10,000KNU/lの量で投与する請求項１〜18のいずれか１項に記載の方法。