JP3723596B2 - 処理種子 - Google Patents
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Description
【０００１】
【産業上の利用分野】
本発明は、常套の始働(primed)種子と比較して長い貯蔵寿命を有する処理始働種子、そのような種子を得る方法およびそれ由来の植物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
始働種子およびそれらを得る方法は当分野で既知である。始働種子は、未始働種子と比較して、一般に速い発芽および発芽時の良好な同調性を示す。既知の種子始働法は、欧州特許第３０９５１１Ｂ１号および欧州特許第２５４５６９Ｂ１号に記載されている。
【０００３】
【発明の構成】
本発明は始働種子を水ストレス、熱処理またはそれらの組み合わせ処理に付し、その後必要に応じて所望の水分含量(ＭＣ)までドライ・バック(dry back)させることを特徴とする、所望により常套法によりドライ・バックさせた実質的に同じＭＣを有する同種の始働種子と比較して貯蔵寿命の延長をもたらす、始働種子の処理方法を提供する。
【０００４】
上記のような種子のドライ・バックは、種子ＭＣの減少を含むものであって、ドライ・バックは任意の所望のＭＣまでなし得るが、好ましい態様において未処理種子、即ち始働していない乾燥種子のＭＣまでである。
以後、「ＭＣ」および「水分含量」の語を同義に使用するが、ＭＣは特記しない限り生種子重量に基づいて％で表す。
【０００５】
水ストレスは、より低いＭＣを有する種子をもたらすであろう当分野で既知の任意の方法でなし得る。
一般に水ストレスは、常套法で始働させた種子のＭＣを５％単位またはそれ以上、即ち既知の始働種子が当初ＭＣ２５％を有する場合、２０％またはそれ以下に減少させ、既知の始働種子が当初ＭＣ５５％を有する場合、５０％またはそれ以下に減少させて得られる。更に具体的には、水ストレスは一般にＭＣを５〜２０％単位減少させて得られ、それにより一般にＭＣの値が１５％より少なくならないことが有利である。
【０００６】
水ストレスは、とりわけ温度に依存して長時間、一般に１〜７日維持されるべきであり、最適条件は種子の種に依存し、標準試験により決定できる。これは常套法で始働させた種子のＭＣをその所望の減少レベル(便宜的には既知の始働種子のＭＣより５から２０％単位低いレベル)に一定に維持するか、または既知の始働種子を水ストレス下で十分に長期間生き残るようにゆっくり乾燥させることにより達成されることは認められるであろう。
【０００７】
従って、延長した貯蔵寿命は、水ストレスを誘導する水ポテンシャルで始働種子をインキュベーションすることにより達成され得る。当該水ストレスの誘導は、始働種子のＭＣをゆっくりと減少させることにより、または始動種子がなお水ストレスに付されているMCまで初めに迅速なＭＣ減少を行い、次いでここに得られた部分的に乾燥された始働種子をインキュベーションするかまたはゆっくりとしたＭＣ減少を行うことにより、または熱ショックを行うことにより達成することが出来る。遅い、すなわちゆっくりとしたＭＣ減少は、自体常套の方法により、例えば緩和な条件下で乾燥するか、または始働種子をそれに対して毒性を示さない、０MPa以下の水ポテンシャルを有する浸透物質と接触させることにより、達成することができる。以下の工程(ａ)、(ｂ)および(ｃ)の記載は、始働種子を水ストレスに付する典型的な条件を説明するものである。
【０００８】
水ストレスは：
ａ)始働種子を３から４０℃の温度で３から７日間ゆっくり乾燥する、または
ｂ）始働種子のＭＣを、常套の乾燥条件下５から２０％単位まで減少させ、このように乾燥させた種子を１から７日間最少空気および水分交換容器内で、３から４０℃に保存する、または
ｃ）始働種子のＭＣを５から２０％単位減少させるために選択した水ポテンシャルで浸透物質中で１から７日間インキュベーションする
ことにより達成し得る。
【０００９】
熱処理は、始働種子を２５から４５℃の範囲で、約１から５時間熱ショックに付することにより、達成し得る。
【００１０】
本発明の方法により製造された種子は、常套法で始働させた種子と比較して、大きい乾燥耐性胚を有し、後記の環境保存条件下で長い保存期間生き残る。
【００１１】
乾燥耐性胚を有する種子は、脱水種子に典型的な値、例えば約５〜７％までの種子のＭＣの減少が、実質的に種子の生存率に不利に働かない種子を意味し、生存率は、好適な成育条件下に置いた場合、または、環境保存条件で持続保存期間の前または後の好適な標準試験、例えば制御低下試験(後記参照)の後の発芽の能力に関して測定する。
【００１２】
種子の胚は、子葉、軸および非突出幼根頂端のような種子の発育に必要な重要な構造から成り、集合的にまたは部分的に乾燥耐性を獲得することが可能である。
【００１３】
始働種子は数週間約５℃で保存できるが、環境保存条件下で長期間保存するには不適である。
【００１４】
始働種子の語は(特記しない限り)、種子が後記のような常套の始働技術に付され、２０から５５％(種に依存)のＭＣを有し、常套の始働種子に典型的な乾燥耐性を有すること意味する。全未始働種子が乾燥耐性、即ち乾燥して生存することができ、乾燥耐性の程度は種依存性であることは認められるであろう。常套の方法による始働において、種子は低乾燥耐性となり（この乾燥耐性の喪失は始働の期間の増加とともに増加する）、種子は種子がもはや乾燥耐性であると言えなくなるまで低乾燥耐性となり、この乾燥耐性の完全な損失は種子の発芽の時点でおこる。後記のような本発明の方法は、常套の始働法で始働した未発芽種子に適用される。未発芽種子は、本明細書では幼根および／または胚軸が種子殻または果皮から突出または出現していない種子と定義する。幼根および／または胚軸は、種子殻の中裂またはひび割れの原因となり得るが、それは中裂またはひび割れから突出しない。胚の回りの内乳は、中裂またはひび割れを通して見ることができる。本発明の方法を適用した未発芽既知の始働種子は、以後処理種子と呼ぶ。本発明の方法を適用していない未発芽既知の始働種子は以後常套法で始働させた種子と呼ぶ。始働していない商業的に許容される種子は、未処理種子と呼ぶ。
【００１５】
発芽工程の段階を、物理的因子、例えば大きさ、容量または密度により測定することもまた可能である。本方法により、本発明で処理すべき種子の選択をすることができる。
【００１６】
従って、下記に記載のように、処理種子は同じ種およびＭＣの既知の始働種子と比較して長い貯蔵寿命を有する。長い貯蔵寿命は、制御低下試験、または環境条件下での保存の後、同じまたは類似の条件、例えば標準成育条件(下記に定義)下での発芽％を測定することにより示すことができる；処理種子は、同様の制御低下試験または保存条件下に付した既知の始働種子と比較して、正常植物の高い発芽％を有する。
【００１７】
標準成育条件は、空気および水の存在下で１５から２０℃の範囲の温度を意味する。
【００１８】
本明細書で使用の貯蔵寿命の語は、生存率として(即ち、環境保存条件下で保存後、例えば、制御低下(ＣＤ)試験(ターキス、エー・エムおよびブラッドフォールド・ケー・ジェー、Exptal.Bot.、４３巻、１９８２、２４８号、３０７−３１７頁)に付した後、発芽し、正常植物を発生する能力として)表す。ＣＤ試験に付した種子の生存率は、国際規約(ＩＳＴＡ、１９７６)による研究室試験で測定し得る。ＣＤ試験結果間の差は、環境保存条件下で保存した後の貯蔵寿命の差と一般に相関がある。
【００１９】
常套の始働法の一般的な例は、種子を浸透物質(とりわけハイデッカーにより記載されているような、および例えばドラム・プライミング法(Drum Priming Method)のようなその変法、固体マトリックス(とりわけ欧州特許第３０９５５１Ｂ１号に記載のような)中の水による処理)で処理すること等を含む。
【００２０】
“環境保存条件”は、環境温度および相対湿度(ＲＨ)で保存することを意味する。
本明細書で使用の“環境温度”の語は、約３℃から約２５℃を意味する。“環境ＲＨ”の語は、約２０％から約９０％の範囲のＲＨを意味する。
【００２１】
下記に記載のような本発明の方法(ａ)、(ｂ)または(ｃ)の適用が、種子ＭＣの減少に含まれる。
【００２２】
本発明の方法(ａ)は始働種子の遅い速度での水分損失を含む(以後、遅い乾燥と呼ぶ)。従って、始働種子を、水分損失の速度が約０.１種子乾燥重量％から１.０種子乾燥重量％時間-1、好ましくは約０.２種子乾燥重量％から約０.４種子乾燥重量％ｈ-1の範囲に維持されるインキュベーション相に付する。遅い乾燥は、ドラム缶中で行い(ドラム缶始働)得、酸素化ガスまたは酸素を積極的に供給するか、空気を系中に、単に混合により挿入し得る(受動条件)。水分損失の速度は、インキュベーションの異なった時点で種子を秤量し、期間中の種子重量をプロットすることにより決定する。長い貯蔵寿命の導入に必要である水分損失の速度が、種により、上記定義の範囲内で変化することは認められるであろう。このような条件下に置かれた種子は、始働種子より低い、約５％から約２０％、一般に約５％から約１５％の間の最終ＭＣを有するであろう。
【００２３】
遅い乾燥において、種子は３℃から約４０℃までの任意の温度でインキュベーションできる。好ましくは、種子を約２０℃から約３５℃の温度範囲でインキュベーションする。インキュベーション期間は、インキュベーション温度に依存して約２４時間から約１週間またはそれ以上まで続く。従って、例えば、種子の型に依存して、温度が２０℃でインキュベーション期間は２４時間から約３日またはそれ以上であり、８℃のような低い温度では種に依存してまたは１週間またはそれ以上まであり得る。低温が、例えば病原菌への感染の危険性を少なくするために用いることができる。
【００２４】
以後加湿度保存と呼ぶ方法(ｂ)により、始働種子を始働種子の種子ＭＣより少ない種子ＭＣでインキュベーションする。従って始働種子のＭＣは、(常套の乾燥条件、例えば“速い乾燥条件”により)３から２０％単位の間、好ましくは５％から１５％単位の間、２４時間より少ない時間、例えば８時間またはそれ以下で減少する。種子を乾燥する最少ＭＣ値は約１５％である。その後、そのように乾燥した種子を、最少空気および水分交換の容器内で、温度およびインキュベーション期間は上記の遅い乾燥に従ってインキュベーションすることにより水ストレスに付する。
【００２５】
上記(および下記)方法(ｂ)に関して使用している既知の乾燥条件の語は、常套の乾燥条件、例えば当分野で既知で、一般に既知の始働種子の乾燥に適用される環境温度での高速空気流の手段でドライ・バックすることを意味する。
【００２６】
始働種子を水ストレスに付する更なる方法、本発明の方法(ｃ)によるインキュベーションは、ＰＥＧ(または他の好適な浸透溶液)処理を含み、それは水ポテンシャルが０MPaより少ない溶液内でインキュベーションすることにより始働工程に付した種子の種子ＭＣの減少を含む。インキュベーションの間、種子水分含量は、溶液の浸透ポテンシャルを、約−０.５から約−４.０Mpaの間の特異的値に維持することにより、方法(ｂ)で記載のように３から２０％単位ゆっくり減少する。この段階において、種子は、遊離水の利用能の欠乏により、緩和な水ストレスを経験する。インキュベーションは、好ましくは水カラム(液体インキュベーション)内で、好ましくは通気条件下で行われる。浸透溶液で飽和させた濾紙上に予備発芽種子を置くことによりまた行うことができる。
【００２７】
方法(ｂ)および(ｃ)のための好適なインキュベーション条件(長さ、温度)は、とりわけ方法(ａ)で述べたような条件を含む。
【００２８】
方法(ｃ)によるインキュベーションは、始働種子から水を出させるのに十分低い水ポテンシャルを有する浸透物質中で典型的には行われる。種子を傷付けない任意の好適な浸透物質、例えばＰＥＧ８０００(ブリティッシュ・ペトロリウム(British Peroleum))のようなポリエチレングリコール(ＰＥＧ)溶液が使用できる。一般に、種子をＰＥＧ８０００、マンニトールまたはＮａＣｌのような塩等の溶液に接触させる。浸透ポテンシャルは、種子ＭＣが乾燥耐性の導入を起こすのに十分低い濃度に維持させるものでなければならない。
【００２９】
植物成長調整因子を、約１０-2Ｍから１０-8Ｍの間の濃度で、最初のインキュベーションに加え得る。好適な調整因子はジベレリン、アブシシン酸(ＡＢＡ)およびインドール酪酸(ＩＢＡ)のようなオーキシンを含む。
【００３０】
水カラム内でのインキュベーションにおいて、溶液単位用量当たりの種子の量は、１−２００ｇ種子ｌ-1であることができる。好ましくは、種子は約２５ｇ種子ｌ-1で存在する。一般に、インキュベーションは数日、数週またはそれ以上まで伸び得る。インキュベーションの後、種子を水で洗浄する。
【００３１】
濾紙上でのインキュベーションでは、紙を好適な浸透物質(上記のような)で湿らせる。一般に、吸水し、約２５％および５５％の間のＭＣに始働された種子は、高いＲＨ、例えば１００％、温度および接触時間は上記の通りの密閉系内で加湿濾紙上にのせることができる。
【００３２】
望ましい場合、上記の浸透物質内でのインキュベーションの前に、始働種子のＭＣを、速い乾燥により、例えば約１０％単位減少することができる。しかしながら、このような工程は必須ではない。
【００３３】
熱処理において、始働種子を約２５℃から４５℃、好ましくは３５℃から４０℃の範囲の熱ショックに、約１から約５時間の時間付する。好ましくは熱ショックに付する種子のＭＣは、始働後の種子ＭＣより０から２０％単位低い。一般に、熱ショックに付する種子のＭＣは、１５％より少なくないことが有利である。熱ショックは、任意の既知の好適な方法により適用し得る。従って、好適には、種子を容器内に置き、それを次にインキュベーター内に置く。
【００３４】
所望の結果(長い貯蔵寿命を有する始働種子)は、水ストレスおよび熱ストレスの組み合わせ、即ち熱ショックと工程(ａ)、(ｂ)または(ｃ)の組み合わせによりまた得られ得ることは認められるであろう。
【００３５】
与えられた種のための上記の工程(ａ)から(ｃ)および熱ショックのための最適な工程および最適な条件は、貯蔵寿命ポテンシャルおよび発芽率(ｔ50)をそれ自身既知の方法で測定することにより確立し得る。
【００３６】
上記のような任意の方法(ａ)から(ｃ)、熱ショックまたはこのような方法の組み合わせおよび続いて−望ましい場合−種子を所望のＭＣまで乾燥して戻すことによる始働種子の処理は、実質的に同じＭＣを有する同種の常套法で始働させた種子と比較して長い貯蔵寿命を有する種子をもたらす。
【００３７】
従って、本発明は上記のような方法(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、熱ショックまたはこのような方法の組み合わせおよび続いて−望ましい場合−種子を所望のＭＣまでドライ・バックすることにより得られる種子を提供する。
【００３８】
本発明はまた環境保存条件下で保存した場合、実質的に同じＭＣを有し、そのＭＣを所望により既知の乾燥条件下で減少させた同種の常套法で始働させた種子より実質的に長い貯蔵寿命を有する、湿ったまたは乾燥形の処理始働種子を提供する。
【００３９】
本発明の種子は、乾燥、即ち未処理種子に一般的なＭＣから発芽的代謝工程以外の代謝工程が続くＭＣまでの範囲のＭＣを有する。
【００４０】
本発明の種子の典型的な商業的な型は、１５％以上から５５％までの範囲(以後、本発明の湿った種子と呼ぶ)を有する種子およびおおまかに乾燥種子のＭＣまでドライ・バックした、即ち種子の約２％から約１５％の範囲のＭＣを有する(以後、本発明の乾燥種子と呼ぶ)種子を含む。
【００４１】
本発明の乾燥種子は、本発明の方法(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、熱ショック、熱ショックと(ａ)、(ｂ)または(ｃ)の組み合わせにより得られた種子を、非発芽、非始働種子(即ち未処理種子)のＭＣまで、常套の、即ち速い乾燥条件でドライ・バックすることにより得る。常套の乾燥条件下で、１０℃から５０℃、一般に２０℃から約３５℃の範囲の温度、３０％から９０％、一般に３０％から約５０％の範囲の相対湿度で、滞留空気または種子のドライ・バックに一般的な速度の空気流中で種子をドライ・バックできる。例えば、空気流速度は２ｍ ｓ-1までまたはそれ以上であり得る。期間は、用いる乾燥条件に依存して、２４時間までの任意の間隔であり得る。好適な常套の乾燥条件は、例えば１６時間にわたる、２ｍ ｓ-1の空気流中２０℃の温度、４０％の相対湿度を含む。
【００４２】
本発明の乾燥種子は、その発芽速度が同種の未処理種子より実質的に短いため、有用である。発芽速度は一般にｔ50、即ち種子サンプルの５０％が発芽した時間として示す。
本発明の湿った種子は、とりわけそれらが既知の方法で本発明の乾燥種子にドライ・バックできるため、有用である。
本発明の−乾燥および湿った−種子は、同種の実質的に同じＭＣを有する既知の始働種子より長い貯蔵寿命を有するため、さらに有利である。
【００４３】
本発明は、従って、種子が未処理種子のＭＣを有する場合、または常套の乾燥条件下でそのようなＭＣまでドライ・バックした後、同種の未処理種子より実質的に短いｔ５０を有することを特徴とする、２から５５％の範囲のＭＣを有する未発芽種子を提供する。好適にはｔ５０は同種の未処理種子の６０％またはそれより少ない。好適にはｔ５０は５０％またはそれより少ない、さらに好ましくは４０％またはそれより少ない。未処理種子のＭＣは、一般的には２から１５％の範囲にある。本発明の乾燥種子のｔ５０は、実質的に同じＭＣを有する同種の既知の始働種子のｔ５０と比較と、一般に、実質的に同じである。
【００４４】
ｔ50は常套の方法、例えばオーチャード・ティー・ジー(１９７７)、Seed Sci．&Technol.、５巻、６１−６９頁の方法に従って測定し得る。一般に、そのような測定は約１５から２０℃の温度範囲で、例えば水飽和濾紙上で行う。
【００４５】
本発明は、環境温度で保存した場合、湿った形または常套の乾燥条件に付した後のいずれかの既知の種子より実質的に長い貯蔵寿命を有する湿ったまたは乾燥形の処理始働種子を提供する。
【００４６】
本明細書で使用する貯蔵寿命の語は、種子が環境保存条件下で、実質的にその発芽する能力の損失なしに保存できる期間(期限)を意味する。
本発明の種子の発芽する能力は、従って、一定期間にわたって、既知の始働種子の発芽能力(正常植物発芽％として表現可能)に不利に働く条件下で保存した後、実質的に影響を受けていない。
【００４７】
簡便のために、植物の発芽％が保存後２０％単位、好ましくは１５％単位、さらに好ましくは１０％単位より少なく減少していれば、種子がその発芽する能力を実質的に損失しないことは認められよう。
【００４８】
従って、“本発明の種子は少なくとも常套法で始働させた種子より３５％長い貯蔵寿命を有する”という文は、その発芽能力(正常植物発芽％)を実質的に損失するために、同条件下で保存した同種の既知の始働種子と比較して、本発明の種子が少なくとも３５％保存期間単位長くかかることを意味する。
【００４９】
本発明の乾燥種子は、同種の実質的に同じＭＣを有する常套法で始働させた種子と比較して実質的に長い貯蔵寿命を有する。好適には、貯蔵寿命は、既知の始働種子を既知の始働種子の乾燥に一般的に用いる速い乾燥条件下で未処理種子のＭＣまでドライ・バックした場合、同種の既知の始働種子より少なくとも３５％、さらに特異的には少なくとも５０％長い。最適なインキュベーション／熱処理条件下で、貯蔵寿命は１５０％またはそれ以上延長し得る。典型的に、貯蔵寿命は５０から１２０％、余り最適でない条件下でインキュベーション／熱処理後でさえ、５０から１００％延長する。絶対期間において、本発明の乾燥種子の貯蔵寿命は容易に８カ月、さらに特異的には１２カ月、未処理種子に典型的な条件下で保存した場合、２４カ月またはそれ以上に伸びる。本発明の乾燥種子は、好ましくは５％から８％の範囲のＭＣを有する。本発明の種子の貯蔵寿命は、同種の未処理種子より長くない。
【００５０】
本発明の乾燥種子に好適な保存条件は環境保存条件であり、未処理種子のための、例えば、種子の型に依存して、相対湿度は一般的に約２０％から９０％、好ましくは約３０％から６０％および温度は約３℃から２５℃である。
【００５１】
本発明の湿った種子のための好適な棚貯蔵条件は、種子の型に依存して、約３℃から１０℃の温度で最少空気および水分交換の容器内を含む。このような保存条件下で、種子は約４から６週間の貯蔵寿命を有する。
【００５２】
本発明の種子は、常套の始働工程を適用できる任意の所望の種であり得る。好適な種子型の例は、トマト(tomatoes)、トウガラシ(peppers)、メロン(melons)、スイカ(waetr melons)、キュウリ(cucumbers)、アブラナ属(Brassicas)、白ネギ(leeks)、ニンジン(carrots)、タマネギ(onions)、カボチャ(squashes)、小キュウリ(gherkins)、エンダイブ(endives)、ツリフネソウ属(Impatiens)、クマツヅラ属(Verbenas)、サクラソウ属(Primulas)、テンジクアオイ属(Pelargoniums)、スミレ属(Viola)、チゴリウム(Chigoriums)およびシクラメン属(Cyclamen)を含む。アブラナ属の具体的な例は、キャベツ、ブロッコリー、カリフラワーおよび芽キャベツである。
【００５３】
本明細書に記載の種子から成育した植物もまた本発明の範囲内に含まれる。
【００５４】
当分野で既知である多くの種子始働法がある。以下は短い復習である：
種に依存して、未始働、即ち未処理種子を数時間、例えば水カラム内の水性溶液に、予備始働処理として浸し得る。このような予備処理は当分野で既知であり、始働の間種子が違いにくっつくのを防ぎ、および／または種子の始働を容易にする。
【００５５】
未始働種子または上記予備始働処理を受けた種子を、種子が水を予備発芽代謝工程が開始し、続くが、(上記定義のような)発芽は不可能である条件、例えば時間、温度、種子が摂取する水の下に置く。
【００５６】
吸水は任意の吸水法で行い得る。従って、例えば吸水すべき(未発芽)種子を、ドラム缶または水カラム中に、通気しながらまたはせずに、０MPa(もし種子を水中に置くなら)、またはもし種子を浸透溶液中に置くなら約０MPaから約−１.５MPaの間の水ポテンシャルへ置き得る。選択した始働法に依存して、吸水の量は、始働溶液(水カラムのような水性液体始働技術中)および系に添加すべき水の量(例えばドラム缶始働技術)により決める。
【００５７】
種子は、そのＭＣが、一般的に約２５％から約５５％、好ましくは約３０％から約５０％まで、種子の型に依存して上昇するまで、添加した水を吸水する。
種子のＭＣは、以下の式：
【数１】
（式中、Ｗｉ＝最初の重量、Ｗａ＝種子を１０３℃で１６時間、若しくは１３０℃で２時間にわたって乾燥させた後の重量）
を使用して計算する。
【００５８】
吸水は、水の摂取を伝導する任意の温度で行い得、一般に種に依存して、約５℃から約３０℃である。吸水を水カラム中で行う場合、通気の割合は、種子を浮かせ続ける、即ち浮遊し続けるのに十分でなければならない。吸水は、２４時間までの任意の好適な期間、好ましくは種に依存して約４から約１０時間であることができる。始働前の別の工程であり得、または始働の必須部分であり得る。
【００５９】
適切な始働のために、種子のＭＣを相対的に一定の濃度、即ち所望のＭＣ、典型的には種子の約２０％から約５５％、好ましくは約３０％から約５０％の±１から３％に維持する。好ましくは始働はドラム缶内で、種に依存して、例えば１から２１日、好ましくは約２日から約１５日、一般的には約５℃から約３０℃の温度範囲、好ましくは約１５℃から約２５℃の範囲で行う。
【００６０】
最適な種子ＭＣおよび始働工程の長さは、使用する具体的な種子の型に依存する。これらの最適な値は既知の方法、例えば種子の異なったＭＣに合わせ、種子をある制御条件、例えば温度、ＲＨおよび通気下で、異なったインキュベーション時間に付することにより、発見することができる。
【００６１】
種子に生物学的物質を添加するのが好ましい場合、生物学的物質は当分野で既知の技術を使用して適用し得る。従って、生物学的物質は、任意の好適な形、例えば好適な媒体中の微生物の懸濁液、乾燥真菌胞子またはフリーズ・ドライまたは凍結乾燥(lyophilised)細菌であり得／あり得ない接種で加え得る。生物学的物質は本発明の方法の任意の好適な段階で加え得る。好ましくは、接種の形で、始働時またはその開始時付近で加え得、あるいは始働前、そのような予備処理時またはその開始時付近で処理を含み得る。
【００６２】
好適な生物学的物質は、バシラス(Bacillus)、シュードモナス(Pseudomonas)、トリコデルマ(Trichodesma)およびリゾビア(Rhizobia)のような有益な微生物からなる群から選択し得る。好適な微生物の具体的な例は、シュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas fluorescence)、シュードモナス・プティダ(Pseudomonas putida)、キサントモナス・マルトフィリア(Xanthomonas maltophilia)、バシラス・サブチリス(Basillus subtilis)、バシラス・ツリンジェンシス(Bacilus thuringiensis)、バシラス・セレウス(Bacillus cereus)のようなバシラス属、トリコデルマ・ビリデ(Trichoderma viride)、トリコデルマ・ハルザリウム(Trichoderma harzarium)、トリコデルマ・コニンギ(Trichoderma koningii)、グリオクラジウム・ビレンス(Gliocladium virens)、フサリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)(非病原性単離物)等を含む。生物学的物質は、特異的な植物病原菌、例えばシュードモナスに対する耐性を、ピチウム(Pythium)に非常に感染していることが知られている土壌に蒔くための種子に加え得るように種子を処理するのが望ましい場合に具体的に選択し得、またはバシラス属はアルテナリア属(Alternaria spp.)に攻撃されやすい種子、例えばニンジンの種子の蒔かなければいけない種子に加え得る。
【００６３】
一般に生物学的物質は１０3から１０9コロニー形成単位(cfu)種子-1の範囲で、種子および生物学的物質の種に依存して存在しなければならない。従って、例えばリゾビアのcfuは、アルファルファのようなマメ科植物上で、約１０3種子-1でなければならない。しかしながら、殆どの生物学的物質について、cfu 種子-1は、約１０4から１０7の範囲であり得る。
【００６４】
種子被覆を適用する場合、インキュベーション期間の前、後または途中および任意の続く乾燥工程の前または後に適用し得る。被覆は種子の被覆に一般的に使用される任意の既知の材料を含み得、既知の被覆またはペレット化技術を使用して添加し得る。被覆はジベレリンまたはオーキシンのような植物成長調節因子および／またはシュードモナスまたはトリコデルマ等のような任意の上記微生物を含み得る。典型的に、成長調節因子を、被覆材料の重量の約０.０００１％から約０.１％の範囲で含み得る。
【００６５】
被覆は、種子の保護またはペレット化法に通常使用されている任意の既知の材料を含み得る。好適な材料は、サブベントナイト(sub-bentonite)およびベントナイト(bentonite)のような粘土、蛭石(Vermiculite)と、真珠岩(perlite)、軽石(pumice)、金属ステアリン酸、ポリエテン、ポリスチレン、ポリウレタン、滑石粉末(talcum powder)、塩化ポリビニル、澱粉、ローム(loams)、糖、アラビアゴム、有機ポリマー、セルロース、木屑のような細粉、石英粉末等の添加剤と共に含み得る。
【００６６】
従って、本発明は種子に有益な生物学的物質が定着している、上記の方法のいずれか一つにより得られる種子を提供する。
更に別の態様において、本発明は、種子が、所望により生物学的物質を添加されていてもよい保護的被覆されて提供される、上記の方法のいずれか一つにより得られる種子を提供する。
【００６７】
以下は、本発明を更に説明する実施例が続く。実施例は本発明をいかなる意味においても限定するものでないことは理解されるべきである。
【００６８】
実施例１(遅い乾燥)
スミレ属の乾燥予備処理種子６０ｇを、３rpmでその側が回転している６ｌのドラム缶に、３日間、室温が２０℃に制御され、部屋のＲＨが７０％に制御されている部屋の中で置くことにより始働する。ドラム缶は直径７.５cmの口を蓋に有し、その上に綿のメッシュを置き(メッシュサイズ約０.１mm)、種子の通気を可能にする。始働の間の種子のＭＣは種子の湿重量の３５％に維持する。乾燥種子の最初のＭＣは、種子の重量を、１３０℃で２時間乾燥前および後で秤量することにより決定する。種子乾燥重量は、当分野で既知の方法を使用して行う。種子のＭＣを所望の濃度、この場合、湿重量の３５％まで上げるために、好適な量の水をドラム缶に加える。蒸発(生重量を基本にして計算して１日当たり１−２％)を、ドラム缶および含量を秤量して追跡し、一日を基本にして、水をつぎたし、秤量の間に観察された重量変化を埋め合わせる。
【００６９】
対照始働種子１０ｇ(湿重量)を３日後ドラム缶から取り出し、空気流(２ｍ／ｓ)中で、２０℃の温度および４０％のＲＨで、１６時間乾燥する。乾燥速度は、乾燥種子重量を基本に計算して５−１０％水分損失／時間である。乾燥後の種子ＭＣは６％である。
【００７０】
試験サンプルのこのように始働した種子(ＭＣ３５％)７０ｇを、以下の遅い乾燥条件下の温度、相対湿度および水分損失速度の部屋の中で、同じドラム缶内で更に３日間インキュベーションすることにより、更なるインキュベーションに付する：温度２０℃、ＲＨ９０％および水分損失の速度０.１−０.３％ＭＣ／時間、上記のように秤量により測定。ドラム缶口は、ポアサイズ約０.６mmのナイロンメッシュで覆い、蒸発を促進する。種子を、次いで、ドラム缶から取り出し、上記の対象種子と同じ条件下で、ＭＣ６％まで乾燥させる。
【００７１】
種子を、水飽和濾紙上に蒔き、２０℃で光の下インキュベーションする。発芽種子の割合を毎日計数し、発芽の平均時間ｔ50をオーチャード・ティー・ジー(１９７７)Seed Sci.&Technol.、５巻、６１−６９頁に従って計算する。
【００７２】
正常植物の割合を、トレイの、ＥＧＯ、オランダ(ＥＧＯ１ピートソイル、ｐＨ５.５、電気的導電率０.９mS、全窒素含量５.１mmol／ｌ)から供給された標準鉢植え用砂の３cmの層に蒔いた種子から測定する。トレイを透明な覆いで覆い、光の下(１０,０００lux)に、２０℃の温度で置く。２１日後、苗木を、ハンド・ブック・フォー・シードリング・エバルエーション、前掲、６４頁に記載のＩＳＴＡ規則に従って、子葉および胚軸を可視により評価する。
【００７３】
貯蔵寿命を、上記に引用したターキスら、１９９１の引用文献に記載のようなＣＤ試験を使用して測定する。ＣＤ試験のために、種子ＭＣは、７５％ＲＨに３日間、２０℃でインキュベーションすることにより斉一に１０％まで上昇させた。７５％のＲＨで平衡させた種子のサンプルを、次いで保温機内に密封し、それを４８℃で２４時間インキュベーションする。低下試験の最後に、種子を２０℃で、紙上で発芽させる。正常苗木を、１４日後計数する。ＣＤの結果は正常植物の発芽％で示す。
【００７４】
種子を１８℃、相対湿度３０％で、９、１４および２３カ月保存する。保存の後、種子を土壌で発芽させる。結果は表１に示す。
【表１】
【００７５】
上記の表の結果は、既知の始働種子の１８℃での保存の間の生存率の損失は、本発明の種子より速いことを意味する。従って、既知の始働種子の生存率は、９から１４カ月の間に落ちるが、一方本発明の種子は２３カ月以上、即ち、少なくとも既知の始働種子より少なくとも２倍長い期間生存し続ける。
【００７６】
実施例２(遅い乾燥)
トウガラシ属(トウガラシ)の乾燥予備処理種子６０ｇを、始働の間種子の湿重量の３７％にＭＣを維持する以外、実施例１のようなドラム缶始働に付する。従って、種子ＭＣを３７％までもっていくために十分な量の水を加える。
対照種子１０ｇ(湿重量)を３日後ドラム缶から除き、実施例１の対照種子と同様に、種子ＭＣ７％まで乾燥させる。
【００７７】
試験サンプルのこのように始働した種子(ＭＣ３７％)７０ｇを、実施例１のようなインキュベーションに付し、その水分損失は０.４％ＭＣ／時間である。種子を次いでＭＣ７％まで、実施例１の対照種子と同様の条件下で乾燥させる。貯蔵寿命を、種子が４９℃で２４および４８時間インキュベーションする以外、実施例１のＣＤ試験に付する。結果は下記の表２に示す。
【表２】
【００７８】
実施例３(遅い乾燥)
トウガラシ属(トウガラシ)の乾燥種子６０ｇを、水分損失の速度がわずかに違う実施例２に記載の方法に付する。それは０.３％ＭＣ／時間である。次いで、種子をドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下でＭＣ７％に乾燥する。
【００７９】
対照種子(既知の始働種子)および本発明の種子は、気密性アルミホイル袋に２０℃で８カ月保存する。
種子を水飽和濾紙上に蒔き、２０℃で光の下インキュベーションする。発芽種子の割合を毎日に計数し、発芽の平均時間を実施例１の通り計算する。
【００８０】
貯蔵寿命は、種子を５０℃でインキュベーションした以外、実施例１のようなＣＤ試験を使用する。
土壌での正常植物％を、実施例１に記載のように測定する。
表は、本発明の種子がＣＤ条件および正常保存条件の両方で、対照種子より非常に長い期間生存することを示す。
【００８１】
【表３】
表３：本発明の始働種子と比較した既知の処理トウガラシ種子の貯蔵寿命の比較。処理前のｔ50は３.０日、両方の処理後のｔ50は０.７日。
【００８２】
実施例４(遅い乾燥)
トマトの乾燥種子６０ｇを、始働の時間が７日であり、インキュベーション間のＭＣを種子の湿重量の３８％に維持する以外、実施例１のドラム缶始働に付する。従って、十分な量の水を、種子ＭＣを３８％まで維持するために加える。
【００８３】
対照種子１０ｇ(湿重量)をドラム缶から７日後に除去し、実施例１の対照種子のように、ＭＣ６％まで乾燥する。
試験サンプルのこのように始働した種子(ＭＣ３８％)７０ｇを、水損失速度が０.１−０.３％ＭＣ／時間である実施例１のようなインキュベーションに付する。種子を、次いで、実施例１の対照種子と同様の条件でＭＣ６％まで乾燥する。
【００８４】
種子を水飽和濾紙に蒔き、２０℃で光の下インキュベーションする。発芽種子の割合を毎日計数し、発芽の平均時間を実施例１のように計算する。
種子を５０℃で２４時間、２８時間および７２時間インキュベーションする以外、実施例１のＣＤ試験を使用して貯蔵寿命を測定する。結果を表４に示す。
【００８５】
【表４】
本発明により始働したトマト種子と比較した既知の始働トマト種子の貯蔵寿命。
始働前の平均ｔ５０は４.０日、両方の処理後は０．５日。
ＣＤ試験期間(時間) 紙試験での正常植物％
標準始働 遅い乾燥
ロット１ ロット２ ロット１ ロット２
０ ８７ ９２ ９３ ９２
２４ ８４ ９０ ９２ ９０
４８ ７ ３６ ６９ ８６
７２ ２ ７ ３７ ６９
【００８６】
実施例５(遅い乾燥)
カリフラワー・シーブイ・セラノ(Cauliflower cv.Serrano)の乾燥種子１２００ｇを、始働の間室温を１５℃に制御し、種子ＭＣを３５％に保つ以外、実施例１のドラム缶始働に付する。
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【００８７】
試験サンプルの種子(ＭＣ３５％)１００ｇを、６リットルドラム缶内の５日間の、室温を２０℃に制御し、室内ＲＨを７５％に制御したインキュベーションに付する。ドラム缶口をポアサイズ約０.６mmのナイロンメッシュで覆い、蒸発を促進する。一日目の水分損失速度(０.６２％ＭＣ／時間)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下で乾燥する。
【００８８】
貯蔵寿命を、種子を４８℃で４８時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表５は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働種子の貯蔵寿命を、未始働種子、即ち未処理種子の貯蔵寿命まで非常に改善することを示す。
【００８９】
【表５】
【００９０】
実施例６(遅い乾燥)
ニンジン、シーブイ・オータム・キング・トロフィー(cv. Autumn king Trophy)の乾燥種子１２００ｇを、６日間、実施例５のような始働条件下でドラム缶始働に付し、始働の間の種子ＭＣは種子の湿重量の３８％に維持する。水分損失速度(生重量を基本に計算して１日当たり１−２％)を、ドラム缶および含量を毎日秤量して追跡し、秤量の間に観察された重量差を埋め合わせるために毎日水をつぎたす。
【００９１】
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【００９２】
試験サンプルの種子１００ｇを、実施例５のインキュベーション条件と同じインキュベーションに５日間付する。一日目の水分損失速度(０.６７％ＭＣ ｈ-1)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子のように乾燥する。
【００９３】
貯蔵寿命を、種子を４８℃で２４時間および４８時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表６は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働ニンジン種子の貯蔵寿命を非常に改善することを示す。
【００９４】
【表６】
【００９５】
実施例７(遅い乾燥)
チコリー・ウィットルーフ・シーブイ・リバティー(Chicory witloof cv. Liberty)の乾燥種子１２００ｇを、種子ＭＣを３８％に保つ以外、実施例１のドラム缶始働に付する。
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【００９６】
試験サンプルの種子４５０ｇを、２４リットルドラム缶内の５日間の、室温を２０℃に制御し、部屋ＲＨを７５％に制御したインキュベーションに付する。ドラム缶口をポアサイズ約０.１mmの綿布で覆い、蒸発を促進する。一日目の水分損失速度(０.２９％ＭＣ／時間)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下で乾燥する。
【００９７】
貯蔵寿命を、種子を５０℃で２４時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表７は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働ウィットルーフ種子の貯蔵寿命を、未始働種子の貯蔵寿命まで非常に改善することを示す。
【００９８】
【表７】
【００９９】
実施例８(遅い乾燥)
リーキ・シーブイ・ラティナ(Leek cv. Latina)の乾燥種子１２００ｇを、実施例５の始働条件下で４日間始働する。０.０１ｇ／種子kgのアートパム(Aatopam)を種子に加える。始働の間の種子ＭＣを種子の湿重量の３８％に維持する。
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【０１００】
試験サンプルの種子２００ｇを、２４リットルドラム缶内の５日間の、室温を２０℃に制御し、部屋ＲＨを４０％に制御したインキュベーションに付する。ドラム缶口をポアサイズ約０.６mmのナイロンメッシュで覆い、蒸発を促進する。一日目の水分損失速度(１.０４％ＭＣ／時間)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下で乾燥する。
【０１０１】
貯蔵寿命を、種子を４８℃で２４、４８および７２時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表８は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働リーキ種子の貯蔵寿命を未始働種子の貯蔵寿命まで非常に改善することを示す。
【０１０２】
【表８】
【０１０３】
実施例９(加湿保存)
パンジー種子を実施例１記載のように予備処理し始働する。
対照種子１０ｇを３日後にドラム缶から除去し、実施例１の対照のように６％まで乾燥する。
試験サンプル種子(ＭＣ３４％)１０ｇを、対照種子のようにであるが、ＭＣ２５％まで乾燥する。
【０１０４】
次いで、種子を防水であるが気密ではないプラスチック容器に移し、２０℃で３日間インキュベーションする。このインキュベーションの後、種子を更に対照種子と同じまで乾燥する。
対照(既知の始働)、本発明の種子(加湿保存)および未処理種子(即ち未始働)種子の貯蔵寿命を、実施例１に記載のように測定する。
【０１０５】
表９は、未処理種子と比較した相対値で示した、既知の始働種子および本発明の種子のＣＤ試験２４時間後の生存を示す。表は、減少したが一定の種子ＭＣ(始働後のＭＣと比較して)が始働種子の貯蔵寿命を回復させることを示す。
【０１０６】
【表９】
既知のドラム缶始働または本発明により処理した(加湿保存)のパンジー種子のＣＤ試験データ(未処理種子と比較した)。
【０１０７】
実施例１０(加湿種子)
トウガラシ属(トウガラシ)シーブイ・アブデラ(cv.Abdera)を実施例３のようにドラム缶始働する。
始働後の種子ＭＣは３５.３％であった。１６５分において、種子をＭＣ４.８％まで、温度２５℃、ＲＨ４０％および空気流２ms-1で乾燥した。２個の複製の種子サンプルを、ＭＣ３５.３(最初のＭＣ)、３０.６％、２５.５％、２０.０％、１４.８％および９.６％で取り出した。これらのサンプルを密閉容器(０.１５dl)内で、一つのサンプルは８℃、他方は２０℃で、７日間インキュベーションした。
【０１０８】
インキュベーションの後、全てのサンプルを最初の乾燥工程と同様の条件で最終ＭＣ４.８％まで乾燥した。
対照(既知の始働)、本発明の種子(加湿保存)および未処理種子(即ち未始働)の貯蔵寿命を実施例１に記載のように測定する。
【０１０９】
表１０は、始働直後にＭＣ４.８％までドライ・バックした始働種子は、ＣＤ試験後低い生存率を示すが、一方始働後のＭＣと比較して５から１５％減少したＭＣでインキュベーションした種子は、未処理種子と殆ど同様の貯蔵寿命を有する。
本導入工程の間の温度は方法には重要ではない。
【０１１０】
【表１０】
【０１１１】
実施例１１(加湿保存)
トマト種子を実施例４のように始働し、種子ＭＣを３７.１％に維持する。
対照種子１０ｇを６日後にドラム缶から取り出し、実施例１の対照種子のように６％まで乾燥させた。
試験サンプルの種子(ＭＣ３７.１％)１０ｇを、対照種子のようにであるがＭＣ２５％まで乾燥させた。
【０１１２】
次いで、種子を防水ではあるが気密ではないプラスチック容器に移し、２０℃で３日間インキュベーションする。インキュベーション後、種子を更に対照種子のように乾燥する。
発芽速度および貯蔵寿命を実施例４に記載のように測定する。対照種子はｔ50４.４日、本発明により処理した種子はｔ50１.５日であった。
【０１１３】
表１１は種子を５０℃で４８時間インキュベーションした以外実施例１のようなＣＤ試験を用いた後の生存率を示し、未処理対照種子と比較して相対的に示す。表は、減少しているが一定の種子ＭＣ、即ち加湿保存(始働後の種子ＭＣと比較して)が、既知の始働トマト種子の貯蔵寿命を回復することを示す。
【０１１４】
【表１１】
【０１１５】
実施例１２(加熱保存)
トウガラシ属(トウガラシ)シーブイ・アブレダ(cv.Abdera)を実施例３のように始働する。
始働後の種子ＭＣは３５.３％であった。１６５分において、種子をＭＣ４.８％まで、温度２５℃、ＲＨ４０％および空気流２ms-1で乾燥した。種子サンプルを、ＭＣ３５.３(最初のＭＣ)、３０.６％、２５.５％、２０.０％、１４.８％および９.６％で取り出した。これらのサンプルを密閉アルミ袋内で、３時間、４０℃の温度の水浴中でインキュベーションした。インキュベーションの後、全てのサンプルを最初の乾燥工程と同様の条件で最終ＭＣ４.８％まで乾燥した。
【０１１６】
対照(既知の始働)、本発明の種子(加湿保存)および未処理種子(即ち未始働)の貯蔵寿命を実施例１に記載のように測定する。
表１２は、処理直後にＭＣ４.８％までドライ・バックした始働種子は、ＣＤ試験後低い生存率を示すが、一方熱ショックを与えた種子は、良好にＣＤ試験で生存した。熱ショックは種子ＭＣを１５％まで有効に減少する。
【０１１７】
【表１２】
【０１１８】
実施例１３(ＰＥＧ処理)
ペッパー・シーブイ・アブデラ(Pepper cv. Abdera)種子１０ｇを、水飽和濾紙上で、透明なプラスチック箱中で２５℃で光の下インキュベーションする。
１ｇの種子サンプルを、４日目まで毎日回収する。４日目に、種子の４０％が発芽したが、３日目には発芽種子は観察されなかった。対照種子を、実施例１のように乾燥した。試験サンプルを浸透ポテンシャル−１.５MPaのポリエチレングリコール溶液で飽和させた濾紙に移し、３日間２５℃の温度でインキュベーションした。処理後、これらの種子を洗浄し、対照種子と同様に乾燥した。
【０１１９】
貯蔵寿命は実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表１３は、水中で１日インキュベーションした種子が、いくらか促進された貯蔵寿命を有するが、２および３日のインキュベーションは貯蔵寿命の悪化した損失を示し、一方比較して、本発明の種子(ＰＥＧ溶液内でインキュベーション)は、延長された貯蔵寿命を示す。
【０１２０】
【表１３】
【０１２１】
実施例１４：水ストレスおよび熱ストレスの組み合わせ。
スミレ属(ロック・イエロー)の乾燥種子５０ｇを実施例１に記載のように始働する。始働３日後、種子を２０℃の温度の通気水に移す。通気水に２４時間の後、大半の種子に種子殻の裂け目があったが、幼根は包まれている内乳をまだ破っていなかった。種子を、次いで水から回収し、遠心する。種子ＭＣは４８.５％である。
【０１２２】
これらの種子５ｇ(湿重量)を、２０℃で、ＲＨ４０％の滞留空気にさらすことにより乾燥する。２４時間乾燥後、種子のＭＣは６％である。種子の残りを３分割し、各々を２ms-1の空気流、２０℃でＲＨ４０％にさらす。種子を、３分割の各々が、それぞれ、ＭＣ４０、３５および３０に到達するまで数分間空気流にさらす。１０ｇの２個のサンプルを各々の分割から取り出し、最少水分および空気交換プラスチック容器(１８０ml)に包み、その後、２０℃または３２℃の温度でインキュベーションする。指示した温度で１および７日インキュベーション後、各々のサンプルの２ｇを上記のように乾燥前にインキュベーションしていない種子と同様の条件下で乾燥する。
【０１２３】
処理乾燥種子の貯蔵寿命を、実施例１に記載のＣＤ試験を使用して測定する：実施例１に記載のように種子をＲＨ４０％で平衡化し、５０℃で９６時間インキュベーションし、紙上で２０℃で発芽させる。
最終発芽率を１４日後計数する：下記の結果は、ＣＤ試験なしの対照およびＣＤ試験後(９６時間)の発芽％を示す。
【０１２４】
【表１４】
【産業上の利用分野】
本発明は、常套の始働(primed)種子と比較して長い貯蔵寿命を有する処理始働種子、そのような種子を得る方法およびそれ由来の植物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
始働種子およびそれらを得る方法は当分野で既知である。始働種子は、未始働種子と比較して、一般に速い発芽および発芽時の良好な同調性を示す。既知の種子始働法は、欧州特許第３０９５１１Ｂ１号および欧州特許第２５４５６９Ｂ１号に記載されている。
【０００３】
【発明の構成】
本発明は始働種子を水ストレス、熱処理またはそれらの組み合わせ処理に付し、その後必要に応じて所望の水分含量(ＭＣ)までドライ・バック(dry back)させることを特徴とする、所望により常套法によりドライ・バックさせた実質的に同じＭＣを有する同種の始働種子と比較して貯蔵寿命の延長をもたらす、始働種子の処理方法を提供する。
【０００４】
上記のような種子のドライ・バックは、種子ＭＣの減少を含むものであって、ドライ・バックは任意の所望のＭＣまでなし得るが、好ましい態様において未処理種子、即ち始働していない乾燥種子のＭＣまでである。
以後、「ＭＣ」および「水分含量」の語を同義に使用するが、ＭＣは特記しない限り生種子重量に基づいて％で表す。
【０００５】
水ストレスは、より低いＭＣを有する種子をもたらすであろう当分野で既知の任意の方法でなし得る。
一般に水ストレスは、常套法で始働させた種子のＭＣを５％単位またはそれ以上、即ち既知の始働種子が当初ＭＣ２５％を有する場合、２０％またはそれ以下に減少させ、既知の始働種子が当初ＭＣ５５％を有する場合、５０％またはそれ以下に減少させて得られる。更に具体的には、水ストレスは一般にＭＣを５〜２０％単位減少させて得られ、それにより一般にＭＣの値が１５％より少なくならないことが有利である。
【０００６】
水ストレスは、とりわけ温度に依存して長時間、一般に１〜７日維持されるべきであり、最適条件は種子の種に依存し、標準試験により決定できる。これは常套法で始働させた種子のＭＣをその所望の減少レベル(便宜的には既知の始働種子のＭＣより５から２０％単位低いレベル)に一定に維持するか、または既知の始働種子を水ストレス下で十分に長期間生き残るようにゆっくり乾燥させることにより達成されることは認められるであろう。
【０００７】
従って、延長した貯蔵寿命は、水ストレスを誘導する水ポテンシャルで始働種子をインキュベーションすることにより達成され得る。当該水ストレスの誘導は、始働種子のＭＣをゆっくりと減少させることにより、または始動種子がなお水ストレスに付されているMCまで初めに迅速なＭＣ減少を行い、次いでここに得られた部分的に乾燥された始働種子をインキュベーションするかまたはゆっくりとしたＭＣ減少を行うことにより、または熱ショックを行うことにより達成することが出来る。遅い、すなわちゆっくりとしたＭＣ減少は、自体常套の方法により、例えば緩和な条件下で乾燥するか、または始働種子をそれに対して毒性を示さない、０MPa以下の水ポテンシャルを有する浸透物質と接触させることにより、達成することができる。以下の工程(ａ)、(ｂ)および(ｃ)の記載は、始働種子を水ストレスに付する典型的な条件を説明するものである。
【０００８】
水ストレスは：
ａ)始働種子を３から４０℃の温度で３から７日間ゆっくり乾燥する、または
ｂ）始働種子のＭＣを、常套の乾燥条件下５から２０％単位まで減少させ、このように乾燥させた種子を１から７日間最少空気および水分交換容器内で、３から４０℃に保存する、または
ｃ）始働種子のＭＣを５から２０％単位減少させるために選択した水ポテンシャルで浸透物質中で１から７日間インキュベーションする
ことにより達成し得る。
【０００９】
熱処理は、始働種子を２５から４５℃の範囲で、約１から５時間熱ショックに付することにより、達成し得る。
【００１０】
本発明の方法により製造された種子は、常套法で始働させた種子と比較して、大きい乾燥耐性胚を有し、後記の環境保存条件下で長い保存期間生き残る。
【００１１】
乾燥耐性胚を有する種子は、脱水種子に典型的な値、例えば約５〜７％までの種子のＭＣの減少が、実質的に種子の生存率に不利に働かない種子を意味し、生存率は、好適な成育条件下に置いた場合、または、環境保存条件で持続保存期間の前または後の好適な標準試験、例えば制御低下試験(後記参照)の後の発芽の能力に関して測定する。
【００１２】
種子の胚は、子葉、軸および非突出幼根頂端のような種子の発育に必要な重要な構造から成り、集合的にまたは部分的に乾燥耐性を獲得することが可能である。
【００１３】
始働種子は数週間約５℃で保存できるが、環境保存条件下で長期間保存するには不適である。
【００１４】
始働種子の語は(特記しない限り)、種子が後記のような常套の始働技術に付され、２０から５５％(種に依存)のＭＣを有し、常套の始働種子に典型的な乾燥耐性を有すること意味する。全未始働種子が乾燥耐性、即ち乾燥して生存することができ、乾燥耐性の程度は種依存性であることは認められるであろう。常套の方法による始働において、種子は低乾燥耐性となり（この乾燥耐性の喪失は始働の期間の増加とともに増加する）、種子は種子がもはや乾燥耐性であると言えなくなるまで低乾燥耐性となり、この乾燥耐性の完全な損失は種子の発芽の時点でおこる。後記のような本発明の方法は、常套の始働法で始働した未発芽種子に適用される。未発芽種子は、本明細書では幼根および／または胚軸が種子殻または果皮から突出または出現していない種子と定義する。幼根および／または胚軸は、種子殻の中裂またはひび割れの原因となり得るが、それは中裂またはひび割れから突出しない。胚の回りの内乳は、中裂またはひび割れを通して見ることができる。本発明の方法を適用した未発芽既知の始働種子は、以後処理種子と呼ぶ。本発明の方法を適用していない未発芽既知の始働種子は以後常套法で始働させた種子と呼ぶ。始働していない商業的に許容される種子は、未処理種子と呼ぶ。
【００１５】
発芽工程の段階を、物理的因子、例えば大きさ、容量または密度により測定することもまた可能である。本方法により、本発明で処理すべき種子の選択をすることができる。
【００１６】
従って、下記に記載のように、処理種子は同じ種およびＭＣの既知の始働種子と比較して長い貯蔵寿命を有する。長い貯蔵寿命は、制御低下試験、または環境条件下での保存の後、同じまたは類似の条件、例えば標準成育条件(下記に定義)下での発芽％を測定することにより示すことができる；処理種子は、同様の制御低下試験または保存条件下に付した既知の始働種子と比較して、正常植物の高い発芽％を有する。
【００１７】
標準成育条件は、空気および水の存在下で１５から２０℃の範囲の温度を意味する。
【００１８】
本明細書で使用の貯蔵寿命の語は、生存率として(即ち、環境保存条件下で保存後、例えば、制御低下(ＣＤ)試験(ターキス、エー・エムおよびブラッドフォールド・ケー・ジェー、Exptal.Bot.、４３巻、１９８２、２４８号、３０７−３１７頁)に付した後、発芽し、正常植物を発生する能力として)表す。ＣＤ試験に付した種子の生存率は、国際規約(ＩＳＴＡ、１９７６)による研究室試験で測定し得る。ＣＤ試験結果間の差は、環境保存条件下で保存した後の貯蔵寿命の差と一般に相関がある。
【００１９】
常套の始働法の一般的な例は、種子を浸透物質(とりわけハイデッカーにより記載されているような、および例えばドラム・プライミング法(Drum Priming Method)のようなその変法、固体マトリックス(とりわけ欧州特許第３０９５５１Ｂ１号に記載のような)中の水による処理)で処理すること等を含む。
【００２０】
“環境保存条件”は、環境温度および相対湿度(ＲＨ)で保存することを意味する。
本明細書で使用の“環境温度”の語は、約３℃から約２５℃を意味する。“環境ＲＨ”の語は、約２０％から約９０％の範囲のＲＨを意味する。
【００２１】
下記に記載のような本発明の方法(ａ)、(ｂ)または(ｃ)の適用が、種子ＭＣの減少に含まれる。
【００２２】
本発明の方法(ａ)は始働種子の遅い速度での水分損失を含む(以後、遅い乾燥と呼ぶ)。従って、始働種子を、水分損失の速度が約０.１種子乾燥重量％から１.０種子乾燥重量％時間-1、好ましくは約０.２種子乾燥重量％から約０.４種子乾燥重量％ｈ-1の範囲に維持されるインキュベーション相に付する。遅い乾燥は、ドラム缶中で行い(ドラム缶始働)得、酸素化ガスまたは酸素を積極的に供給するか、空気を系中に、単に混合により挿入し得る(受動条件)。水分損失の速度は、インキュベーションの異なった時点で種子を秤量し、期間中の種子重量をプロットすることにより決定する。長い貯蔵寿命の導入に必要である水分損失の速度が、種により、上記定義の範囲内で変化することは認められるであろう。このような条件下に置かれた種子は、始働種子より低い、約５％から約２０％、一般に約５％から約１５％の間の最終ＭＣを有するであろう。
【００２３】
遅い乾燥において、種子は３℃から約４０℃までの任意の温度でインキュベーションできる。好ましくは、種子を約２０℃から約３５℃の温度範囲でインキュベーションする。インキュベーション期間は、インキュベーション温度に依存して約２４時間から約１週間またはそれ以上まで続く。従って、例えば、種子の型に依存して、温度が２０℃でインキュベーション期間は２４時間から約３日またはそれ以上であり、８℃のような低い温度では種に依存してまたは１週間またはそれ以上まであり得る。低温が、例えば病原菌への感染の危険性を少なくするために用いることができる。
【００２４】
以後加湿度保存と呼ぶ方法(ｂ)により、始働種子を始働種子の種子ＭＣより少ない種子ＭＣでインキュベーションする。従って始働種子のＭＣは、(常套の乾燥条件、例えば“速い乾燥条件”により)３から２０％単位の間、好ましくは５％から１５％単位の間、２４時間より少ない時間、例えば８時間またはそれ以下で減少する。種子を乾燥する最少ＭＣ値は約１５％である。その後、そのように乾燥した種子を、最少空気および水分交換の容器内で、温度およびインキュベーション期間は上記の遅い乾燥に従ってインキュベーションすることにより水ストレスに付する。
【００２５】
上記(および下記)方法(ｂ)に関して使用している既知の乾燥条件の語は、常套の乾燥条件、例えば当分野で既知で、一般に既知の始働種子の乾燥に適用される環境温度での高速空気流の手段でドライ・バックすることを意味する。
【００２６】
始働種子を水ストレスに付する更なる方法、本発明の方法(ｃ)によるインキュベーションは、ＰＥＧ(または他の好適な浸透溶液)処理を含み、それは水ポテンシャルが０MPaより少ない溶液内でインキュベーションすることにより始働工程に付した種子の種子ＭＣの減少を含む。インキュベーションの間、種子水分含量は、溶液の浸透ポテンシャルを、約−０.５から約−４.０Mpaの間の特異的値に維持することにより、方法(ｂ)で記載のように３から２０％単位ゆっくり減少する。この段階において、種子は、遊離水の利用能の欠乏により、緩和な水ストレスを経験する。インキュベーションは、好ましくは水カラム(液体インキュベーション)内で、好ましくは通気条件下で行われる。浸透溶液で飽和させた濾紙上に予備発芽種子を置くことによりまた行うことができる。
【００２７】
方法(ｂ)および(ｃ)のための好適なインキュベーション条件(長さ、温度)は、とりわけ方法(ａ)で述べたような条件を含む。
【００２８】
方法(ｃ)によるインキュベーションは、始働種子から水を出させるのに十分低い水ポテンシャルを有する浸透物質中で典型的には行われる。種子を傷付けない任意の好適な浸透物質、例えばＰＥＧ８０００(ブリティッシュ・ペトロリウム(British Peroleum))のようなポリエチレングリコール(ＰＥＧ)溶液が使用できる。一般に、種子をＰＥＧ８０００、マンニトールまたはＮａＣｌのような塩等の溶液に接触させる。浸透ポテンシャルは、種子ＭＣが乾燥耐性の導入を起こすのに十分低い濃度に維持させるものでなければならない。
【００２９】
植物成長調整因子を、約１０-2Ｍから１０-8Ｍの間の濃度で、最初のインキュベーションに加え得る。好適な調整因子はジベレリン、アブシシン酸(ＡＢＡ)およびインドール酪酸(ＩＢＡ)のようなオーキシンを含む。
【００３０】
水カラム内でのインキュベーションにおいて、溶液単位用量当たりの種子の量は、１−２００ｇ種子ｌ-1であることができる。好ましくは、種子は約２５ｇ種子ｌ-1で存在する。一般に、インキュベーションは数日、数週またはそれ以上まで伸び得る。インキュベーションの後、種子を水で洗浄する。
【００３１】
濾紙上でのインキュベーションでは、紙を好適な浸透物質(上記のような)で湿らせる。一般に、吸水し、約２５％および５５％の間のＭＣに始働された種子は、高いＲＨ、例えば１００％、温度および接触時間は上記の通りの密閉系内で加湿濾紙上にのせることができる。
【００３２】
望ましい場合、上記の浸透物質内でのインキュベーションの前に、始働種子のＭＣを、速い乾燥により、例えば約１０％単位減少することができる。しかしながら、このような工程は必須ではない。
【００３３】
熱処理において、始働種子を約２５℃から４５℃、好ましくは３５℃から４０℃の範囲の熱ショックに、約１から約５時間の時間付する。好ましくは熱ショックに付する種子のＭＣは、始働後の種子ＭＣより０から２０％単位低い。一般に、熱ショックに付する種子のＭＣは、１５％より少なくないことが有利である。熱ショックは、任意の既知の好適な方法により適用し得る。従って、好適には、種子を容器内に置き、それを次にインキュベーター内に置く。
【００３４】
所望の結果(長い貯蔵寿命を有する始働種子)は、水ストレスおよび熱ストレスの組み合わせ、即ち熱ショックと工程(ａ)、(ｂ)または(ｃ)の組み合わせによりまた得られ得ることは認められるであろう。
【００３５】
与えられた種のための上記の工程(ａ)から(ｃ)および熱ショックのための最適な工程および最適な条件は、貯蔵寿命ポテンシャルおよび発芽率(ｔ50)をそれ自身既知の方法で測定することにより確立し得る。
【００３６】
上記のような任意の方法(ａ)から(ｃ)、熱ショックまたはこのような方法の組み合わせおよび続いて−望ましい場合−種子を所望のＭＣまで乾燥して戻すことによる始働種子の処理は、実質的に同じＭＣを有する同種の常套法で始働させた種子と比較して長い貯蔵寿命を有する種子をもたらす。
【００３７】
従って、本発明は上記のような方法(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、熱ショックまたはこのような方法の組み合わせおよび続いて−望ましい場合−種子を所望のＭＣまでドライ・バックすることにより得られる種子を提供する。
【００３８】
本発明はまた環境保存条件下で保存した場合、実質的に同じＭＣを有し、そのＭＣを所望により既知の乾燥条件下で減少させた同種の常套法で始働させた種子より実質的に長い貯蔵寿命を有する、湿ったまたは乾燥形の処理始働種子を提供する。
【００３９】
本発明の種子は、乾燥、即ち未処理種子に一般的なＭＣから発芽的代謝工程以外の代謝工程が続くＭＣまでの範囲のＭＣを有する。
【００４０】
本発明の種子の典型的な商業的な型は、１５％以上から５５％までの範囲(以後、本発明の湿った種子と呼ぶ)を有する種子およびおおまかに乾燥種子のＭＣまでドライ・バックした、即ち種子の約２％から約１５％の範囲のＭＣを有する(以後、本発明の乾燥種子と呼ぶ)種子を含む。
【００４１】
本発明の乾燥種子は、本発明の方法(ａ)、(ｂ)、(ｃ)、熱ショック、熱ショックと(ａ)、(ｂ)または(ｃ)の組み合わせにより得られた種子を、非発芽、非始働種子(即ち未処理種子)のＭＣまで、常套の、即ち速い乾燥条件でドライ・バックすることにより得る。常套の乾燥条件下で、１０℃から５０℃、一般に２０℃から約３５℃の範囲の温度、３０％から９０％、一般に３０％から約５０％の範囲の相対湿度で、滞留空気または種子のドライ・バックに一般的な速度の空気流中で種子をドライ・バックできる。例えば、空気流速度は２ｍ ｓ-1までまたはそれ以上であり得る。期間は、用いる乾燥条件に依存して、２４時間までの任意の間隔であり得る。好適な常套の乾燥条件は、例えば１６時間にわたる、２ｍ ｓ-1の空気流中２０℃の温度、４０％の相対湿度を含む。
【００４２】
本発明の乾燥種子は、その発芽速度が同種の未処理種子より実質的に短いため、有用である。発芽速度は一般にｔ50、即ち種子サンプルの５０％が発芽した時間として示す。
本発明の湿った種子は、とりわけそれらが既知の方法で本発明の乾燥種子にドライ・バックできるため、有用である。
本発明の−乾燥および湿った−種子は、同種の実質的に同じＭＣを有する既知の始働種子より長い貯蔵寿命を有するため、さらに有利である。
【００４３】
本発明は、従って、種子が未処理種子のＭＣを有する場合、または常套の乾燥条件下でそのようなＭＣまでドライ・バックした後、同種の未処理種子より実質的に短いｔ５０を有することを特徴とする、２から５５％の範囲のＭＣを有する未発芽種子を提供する。好適にはｔ５０は同種の未処理種子の６０％またはそれより少ない。好適にはｔ５０は５０％またはそれより少ない、さらに好ましくは４０％またはそれより少ない。未処理種子のＭＣは、一般的には２から１５％の範囲にある。本発明の乾燥種子のｔ５０は、実質的に同じＭＣを有する同種の既知の始働種子のｔ５０と比較と、一般に、実質的に同じである。
【００４４】
ｔ50は常套の方法、例えばオーチャード・ティー・ジー(１９７７)、Seed Sci．&Technol.、５巻、６１−６９頁の方法に従って測定し得る。一般に、そのような測定は約１５から２０℃の温度範囲で、例えば水飽和濾紙上で行う。
【００４５】
本発明は、環境温度で保存した場合、湿った形または常套の乾燥条件に付した後のいずれかの既知の種子より実質的に長い貯蔵寿命を有する湿ったまたは乾燥形の処理始働種子を提供する。
【００４６】
本明細書で使用する貯蔵寿命の語は、種子が環境保存条件下で、実質的にその発芽する能力の損失なしに保存できる期間(期限)を意味する。
本発明の種子の発芽する能力は、従って、一定期間にわたって、既知の始働種子の発芽能力(正常植物発芽％として表現可能)に不利に働く条件下で保存した後、実質的に影響を受けていない。
【００４７】
簡便のために、植物の発芽％が保存後２０％単位、好ましくは１５％単位、さらに好ましくは１０％単位より少なく減少していれば、種子がその発芽する能力を実質的に損失しないことは認められよう。
【００４８】
従って、“本発明の種子は少なくとも常套法で始働させた種子より３５％長い貯蔵寿命を有する”という文は、その発芽能力(正常植物発芽％)を実質的に損失するために、同条件下で保存した同種の既知の始働種子と比較して、本発明の種子が少なくとも３５％保存期間単位長くかかることを意味する。
【００４９】
本発明の乾燥種子は、同種の実質的に同じＭＣを有する常套法で始働させた種子と比較して実質的に長い貯蔵寿命を有する。好適には、貯蔵寿命は、既知の始働種子を既知の始働種子の乾燥に一般的に用いる速い乾燥条件下で未処理種子のＭＣまでドライ・バックした場合、同種の既知の始働種子より少なくとも３５％、さらに特異的には少なくとも５０％長い。最適なインキュベーション／熱処理条件下で、貯蔵寿命は１５０％またはそれ以上延長し得る。典型的に、貯蔵寿命は５０から１２０％、余り最適でない条件下でインキュベーション／熱処理後でさえ、５０から１００％延長する。絶対期間において、本発明の乾燥種子の貯蔵寿命は容易に８カ月、さらに特異的には１２カ月、未処理種子に典型的な条件下で保存した場合、２４カ月またはそれ以上に伸びる。本発明の乾燥種子は、好ましくは５％から８％の範囲のＭＣを有する。本発明の種子の貯蔵寿命は、同種の未処理種子より長くない。
【００５０】
本発明の乾燥種子に好適な保存条件は環境保存条件であり、未処理種子のための、例えば、種子の型に依存して、相対湿度は一般的に約２０％から９０％、好ましくは約３０％から６０％および温度は約３℃から２５℃である。
【００５１】
本発明の湿った種子のための好適な棚貯蔵条件は、種子の型に依存して、約３℃から１０℃の温度で最少空気および水分交換の容器内を含む。このような保存条件下で、種子は約４から６週間の貯蔵寿命を有する。
【００５２】
本発明の種子は、常套の始働工程を適用できる任意の所望の種であり得る。好適な種子型の例は、トマト(tomatoes)、トウガラシ(peppers)、メロン(melons)、スイカ(waetr melons)、キュウリ(cucumbers)、アブラナ属(Brassicas)、白ネギ(leeks)、ニンジン(carrots)、タマネギ(onions)、カボチャ(squashes)、小キュウリ(gherkins)、エンダイブ(endives)、ツリフネソウ属(Impatiens)、クマツヅラ属(Verbenas)、サクラソウ属(Primulas)、テンジクアオイ属(Pelargoniums)、スミレ属(Viola)、チゴリウム(Chigoriums)およびシクラメン属(Cyclamen)を含む。アブラナ属の具体的な例は、キャベツ、ブロッコリー、カリフラワーおよび芽キャベツである。
【００５３】
本明細書に記載の種子から成育した植物もまた本発明の範囲内に含まれる。
【００５４】
当分野で既知である多くの種子始働法がある。以下は短い復習である：
種に依存して、未始働、即ち未処理種子を数時間、例えば水カラム内の水性溶液に、予備始働処理として浸し得る。このような予備処理は当分野で既知であり、始働の間種子が違いにくっつくのを防ぎ、および／または種子の始働を容易にする。
【００５５】
未始働種子または上記予備始働処理を受けた種子を、種子が水を予備発芽代謝工程が開始し、続くが、(上記定義のような)発芽は不可能である条件、例えば時間、温度、種子が摂取する水の下に置く。
【００５６】
吸水は任意の吸水法で行い得る。従って、例えば吸水すべき(未発芽)種子を、ドラム缶または水カラム中に、通気しながらまたはせずに、０MPa(もし種子を水中に置くなら)、またはもし種子を浸透溶液中に置くなら約０MPaから約−１.５MPaの間の水ポテンシャルへ置き得る。選択した始働法に依存して、吸水の量は、始働溶液(水カラムのような水性液体始働技術中)および系に添加すべき水の量(例えばドラム缶始働技術)により決める。
【００５７】
種子は、そのＭＣが、一般的に約２５％から約５５％、好ましくは約３０％から約５０％まで、種子の型に依存して上昇するまで、添加した水を吸水する。
種子のＭＣは、以下の式：
【数１】
を使用して計算する。
【００５８】
吸水は、水の摂取を伝導する任意の温度で行い得、一般に種に依存して、約５℃から約３０℃である。吸水を水カラム中で行う場合、通気の割合は、種子を浮かせ続ける、即ち浮遊し続けるのに十分でなければならない。吸水は、２４時間までの任意の好適な期間、好ましくは種に依存して約４から約１０時間であることができる。始働前の別の工程であり得、または始働の必須部分であり得る。
【００５９】
適切な始働のために、種子のＭＣを相対的に一定の濃度、即ち所望のＭＣ、典型的には種子の約２０％から約５５％、好ましくは約３０％から約５０％の±１から３％に維持する。好ましくは始働はドラム缶内で、種に依存して、例えば１から２１日、好ましくは約２日から約１５日、一般的には約５℃から約３０℃の温度範囲、好ましくは約１５℃から約２５℃の範囲で行う。
【００６０】
最適な種子ＭＣおよび始働工程の長さは、使用する具体的な種子の型に依存する。これらの最適な値は既知の方法、例えば種子の異なったＭＣに合わせ、種子をある制御条件、例えば温度、ＲＨおよび通気下で、異なったインキュベーション時間に付することにより、発見することができる。
【００６１】
種子に生物学的物質を添加するのが好ましい場合、生物学的物質は当分野で既知の技術を使用して適用し得る。従って、生物学的物質は、任意の好適な形、例えば好適な媒体中の微生物の懸濁液、乾燥真菌胞子またはフリーズ・ドライまたは凍結乾燥(lyophilised)細菌であり得／あり得ない接種で加え得る。生物学的物質は本発明の方法の任意の好適な段階で加え得る。好ましくは、接種の形で、始働時またはその開始時付近で加え得、あるいは始働前、そのような予備処理時またはその開始時付近で処理を含み得る。
【００６２】
好適な生物学的物質は、バシラス(Bacillus)、シュードモナス(Pseudomonas)、トリコデルマ(Trichodesma)およびリゾビア(Rhizobia)のような有益な微生物からなる群から選択し得る。好適な微生物の具体的な例は、シュードモナス・フルオレッセンス(Pseudomonas fluorescence)、シュードモナス・プティダ(Pseudomonas putida)、キサントモナス・マルトフィリア(Xanthomonas maltophilia)、バシラス・サブチリス(Basillus subtilis)、バシラス・ツリンジェンシス(Bacilus thuringiensis)、バシラス・セレウス(Bacillus cereus)のようなバシラス属、トリコデルマ・ビリデ(Trichoderma viride)、トリコデルマ・ハルザリウム(Trichoderma harzarium)、トリコデルマ・コニンギ(Trichoderma koningii)、グリオクラジウム・ビレンス(Gliocladium virens)、フサリウム・オキシスポラム(Fusarium oxysporum)(非病原性単離物)等を含む。生物学的物質は、特異的な植物病原菌、例えばシュードモナスに対する耐性を、ピチウム(Pythium)に非常に感染していることが知られている土壌に蒔くための種子に加え得るように種子を処理するのが望ましい場合に具体的に選択し得、またはバシラス属はアルテナリア属(Alternaria spp.)に攻撃されやすい種子、例えばニンジンの種子の蒔かなければいけない種子に加え得る。
【００６３】
一般に生物学的物質は１０3から１０9コロニー形成単位(cfu)種子-1の範囲で、種子および生物学的物質の種に依存して存在しなければならない。従って、例えばリゾビアのcfuは、アルファルファのようなマメ科植物上で、約１０3種子-1でなければならない。しかしながら、殆どの生物学的物質について、cfu 種子-1は、約１０4から１０7の範囲であり得る。
【００６４】
種子被覆を適用する場合、インキュベーション期間の前、後または途中および任意の続く乾燥工程の前または後に適用し得る。被覆は種子の被覆に一般的に使用される任意の既知の材料を含み得、既知の被覆またはペレット化技術を使用して添加し得る。被覆はジベレリンまたはオーキシンのような植物成長調節因子および／またはシュードモナスまたはトリコデルマ等のような任意の上記微生物を含み得る。典型的に、成長調節因子を、被覆材料の重量の約０.０００１％から約０.１％の範囲で含み得る。
【００６５】
被覆は、種子の保護またはペレット化法に通常使用されている任意の既知の材料を含み得る。好適な材料は、サブベントナイト(sub-bentonite)およびベントナイト(bentonite)のような粘土、蛭石(Vermiculite)と、真珠岩(perlite)、軽石(pumice)、金属ステアリン酸、ポリエテン、ポリスチレン、ポリウレタン、滑石粉末(talcum powder)、塩化ポリビニル、澱粉、ローム(loams)、糖、アラビアゴム、有機ポリマー、セルロース、木屑のような細粉、石英粉末等の添加剤と共に含み得る。
【００６６】
従って、本発明は種子に有益な生物学的物質が定着している、上記の方法のいずれか一つにより得られる種子を提供する。
更に別の態様において、本発明は、種子が、所望により生物学的物質を添加されていてもよい保護的被覆されて提供される、上記の方法のいずれか一つにより得られる種子を提供する。
【００６７】
以下は、本発明を更に説明する実施例が続く。実施例は本発明をいかなる意味においても限定するものでないことは理解されるべきである。
【００６８】
実施例１(遅い乾燥)
スミレ属の乾燥予備処理種子６０ｇを、３rpmでその側が回転している６ｌのドラム缶に、３日間、室温が２０℃に制御され、部屋のＲＨが７０％に制御されている部屋の中で置くことにより始働する。ドラム缶は直径７.５cmの口を蓋に有し、その上に綿のメッシュを置き(メッシュサイズ約０.１mm)、種子の通気を可能にする。始働の間の種子のＭＣは種子の湿重量の３５％に維持する。乾燥種子の最初のＭＣは、種子の重量を、１３０℃で２時間乾燥前および後で秤量することにより決定する。種子乾燥重量は、当分野で既知の方法を使用して行う。種子のＭＣを所望の濃度、この場合、湿重量の３５％まで上げるために、好適な量の水をドラム缶に加える。蒸発(生重量を基本にして計算して１日当たり１−２％)を、ドラム缶および含量を秤量して追跡し、一日を基本にして、水をつぎたし、秤量の間に観察された重量変化を埋め合わせる。
【００６９】
対照始働種子１０ｇ(湿重量)を３日後ドラム缶から取り出し、空気流(２ｍ／ｓ)中で、２０℃の温度および４０％のＲＨで、１６時間乾燥する。乾燥速度は、乾燥種子重量を基本に計算して５−１０％水分損失／時間である。乾燥後の種子ＭＣは６％である。
【００７０】
試験サンプルのこのように始働した種子(ＭＣ３５％)７０ｇを、以下の遅い乾燥条件下の温度、相対湿度および水分損失速度の部屋の中で、同じドラム缶内で更に３日間インキュベーションすることにより、更なるインキュベーションに付する：温度２０℃、ＲＨ９０％および水分損失の速度０.１−０.３％ＭＣ／時間、上記のように秤量により測定。ドラム缶口は、ポアサイズ約０.６mmのナイロンメッシュで覆い、蒸発を促進する。種子を、次いで、ドラム缶から取り出し、上記の対象種子と同じ条件下で、ＭＣ６％まで乾燥させる。
【００７１】
種子を、水飽和濾紙上に蒔き、２０℃で光の下インキュベーションする。発芽種子の割合を毎日計数し、発芽の平均時間ｔ50をオーチャード・ティー・ジー(１９７７)Seed Sci.&Technol.、５巻、６１−６９頁に従って計算する。
【００７２】
正常植物の割合を、トレイの、ＥＧＯ、オランダ(ＥＧＯ１ピートソイル、ｐＨ５.５、電気的導電率０.９mS、全窒素含量５.１mmol／ｌ)から供給された標準鉢植え用砂の３cmの層に蒔いた種子から測定する。トレイを透明な覆いで覆い、光の下(１０,０００lux)に、２０℃の温度で置く。２１日後、苗木を、ハンド・ブック・フォー・シードリング・エバルエーション、前掲、６４頁に記載のＩＳＴＡ規則に従って、子葉および胚軸を可視により評価する。
【００７３】
貯蔵寿命を、上記に引用したターキスら、１９９１の引用文献に記載のようなＣＤ試験を使用して測定する。ＣＤ試験のために、種子ＭＣは、７５％ＲＨに３日間、２０℃でインキュベーションすることにより斉一に１０％まで上昇させた。７５％のＲＨで平衡させた種子のサンプルを、次いで保温機内に密封し、それを４８℃で２４時間インキュベーションする。低下試験の最後に、種子を２０℃で、紙上で発芽させる。正常苗木を、１４日後計数する。ＣＤの結果は正常植物の発芽％で示す。
【００７４】
種子を１８℃、相対湿度３０％で、９、１４および２３カ月保存する。保存の後、種子を土壌で発芽させる。結果は表１に示す。
【表１】
上記の表の結果は、既知の始働種子の１８℃での保存の間の生存率の損失は、本発明の種子より速いことを意味する。従って、既知の始働種子の生存率は、９から１４カ月の間に落ちるが、一方本発明の種子は２３カ月以上、即ち、少なくとも既知の始働種子より少なくとも２倍長い期間生存し続ける。
【００７６】
実施例２(遅い乾燥)
トウガラシ属(トウガラシ)の乾燥予備処理種子６０ｇを、始働の間種子の湿重量の３７％にＭＣを維持する以外、実施例１のようなドラム缶始働に付する。従って、種子ＭＣを３７％までもっていくために十分な量の水を加える。
対照種子１０ｇ(湿重量)を３日後ドラム缶から除き、実施例１の対照種子と同様に、種子ＭＣ７％まで乾燥させる。
【００７７】
試験サンプルのこのように始働した種子(ＭＣ３７％)７０ｇを、実施例１のようなインキュベーションに付し、その水分損失は０.４％ＭＣ／時間である。種子を次いでＭＣ７％まで、実施例１の対照種子と同様の条件下で乾燥させる。貯蔵寿命を、種子が４９℃で２４および４８時間インキュベーションする以外、実施例１のＣＤ試験に付する。結果は下記の表２に示す。
【表２】
実施例３(遅い乾燥)
トウガラシ属(トウガラシ)の乾燥種子６０ｇを、水分損失の速度がわずかに違う実施例２に記載の方法に付する。それは０.３％ＭＣ／時間である。次いで、種子をドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下でＭＣ７％に乾燥する。
【００７９】
対照種子(既知の始働種子)および本発明の種子は、気密性アルミホイル袋に２０℃で８カ月保存する。
種子を水飽和濾紙上に蒔き、２０℃で光の下インキュベーションする。発芽種子の割合を毎日に計数し、発芽の平均時間を実施例１の通り計算する。
【００８０】
貯蔵寿命は、種子を５０℃でインキュベーションした以外、実施例１のようなＣＤ試験を使用する。
土壌での正常植物％を、実施例１に記載のように測定する。
表は、本発明の種子がＣＤ条件および正常保存条件の両方で、対照種子より非常に長い期間生存することを示す。
【００８１】
【表３】
表３：本発明の始働種子と比較した既知の処理トウガラシ種子の貯蔵寿命の比較。処理前のｔ50は３.０日、両方の処理後のｔ50は０.７日。
実施例４(遅い乾燥)
トマトの乾燥種子６０ｇを、始働の時間が７日であり、インキュベーション間のＭＣを種子の湿重量の３８％に維持する以外、実施例１のドラム缶始働に付する。従って、十分な量の水を、種子ＭＣを３８％まで維持するために加える。
【００８３】
対照種子１０ｇ(湿重量)をドラム缶から７日後に除去し、実施例１の対照種子のように、ＭＣ６％まで乾燥する。
試験サンプルのこのように始働した種子(ＭＣ３８％)７０ｇを、水損失速度が０.１−０.３％ＭＣ／時間である実施例１のようなインキュベーションに付する。種子を、次いで、実施例１の対照種子と同様の条件でＭＣ６％まで乾燥する。
【００８４】
種子を水飽和濾紙に蒔き、２０℃で光の下インキュベーションする。発芽種子の割合を毎日計数し、発芽の平均時間を実施例１のように計算する。
種子を５０℃で２４時間、２８時間および７２時間インキュベーションする以外、実施例１のＣＤ試験を使用して貯蔵寿命を測定する。結果を表４に示す。
【００８５】
【表４】
本発明により始働したトマト種子と比較した既知の始働トマト種子の貯蔵寿命。
始働前の平均ｔ５０は４.０日、両方の処理後は０．５日。
ＣＤ試験期間(時間) 紙試験での正常植物％
標準始働 遅い乾燥
ロット１ ロット２ ロット１ ロット２
０ ８７ ９２ ９３ ９２
２４ ８４ ９０ ９２ ９０
４８ ７ ３６ ６９ ８６
７２ ２ ７ ３７ ６９
【００８６】
実施例５(遅い乾燥)
カリフラワー・シーブイ・セラノ(Cauliflower cv.Serrano)の乾燥種子１２００ｇを、始働の間室温を１５℃に制御し、種子ＭＣを３５％に保つ以外、実施例１のドラム缶始働に付する。
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【００８７】
試験サンプルの種子(ＭＣ３５％)１００ｇを、６リットルドラム缶内の５日間の、室温を２０℃に制御し、室内ＲＨを７５％に制御したインキュベーションに付する。ドラム缶口をポアサイズ約０.６mmのナイロンメッシュで覆い、蒸発を促進する。一日目の水分損失速度(０.６２％ＭＣ／時間)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下で乾燥する。
【００８８】
貯蔵寿命を、種子を４８℃で４８時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表５は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働種子の貯蔵寿命を、未始働種子、即ち未処理種子の貯蔵寿命まで非常に改善することを示す。
【００８９】
【表５】
実施例６(遅い乾燥)
ニンジン、シーブイ・オータム・キング・トロフィー(cv. Autumn king Trophy)の乾燥種子１２００ｇを、６日間、実施例５のような始働条件下でドラム缶始働に付し、始働の間の種子ＭＣは種子の湿重量の３８％に維持する。水分損失速度(生重量を基本に計算して１日当たり１−２％)を、ドラム缶および含量を毎日秤量して追跡し、秤量の間に観察された重量差を埋め合わせるために毎日水をつぎたす。
【００９１】
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【００９２】
試験サンプルの種子１００ｇを、実施例５のインキュベーション条件と同じインキュベーションに５日間付する。一日目の水分損失速度(０.６７％ＭＣ ｈ-1)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子のように乾燥する。
【００９３】
貯蔵寿命を、種子を４８℃で２４時間および４８時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表６は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働ニンジン種子の貯蔵寿命を非常に改善することを示す。
【００９４】
【表６】
実施例７(遅い乾燥)
チコリー・ウィットルーフ・シーブイ・リバティー(Chicory witloof cv. Liberty)の乾燥種子１２００ｇを、種子ＭＣを３８％に保つ以外、実施例１のドラム缶始働に付する。
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【００９６】
試験サンプルの種子４５０ｇを、２４リットルドラム缶内の５日間の、室温を２０℃に制御し、部屋ＲＨを７５％に制御したインキュベーションに付する。ドラム缶口をポアサイズ約０.１mmの綿布で覆い、蒸発を促進する。一日目の水分損失速度(０.２９％ＭＣ／時間)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下で乾燥する。
【００９７】
貯蔵寿命を、種子を５０℃で２４時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表７は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働ウィットルーフ種子の貯蔵寿命を、未始働種子の貯蔵寿命まで非常に改善することを示す。
【００９８】
【表７】
実施例８(遅い乾燥)
リーキ・シーブイ・ラティナ(Leek cv. Latina)の乾燥種子１２００ｇを、実施例５の始働条件下で４日間始働する。０.０１ｇ／種子kgのアートパム(Aatopam)を種子に加える。始働の間の種子ＭＣを種子の湿重量の３８％に維持する。
対照種子１０ｇ(湿重量)を７日後にドラム缶から除き、実施例１の対照種子のようにＭＣ６％まで乾燥する。
【０１００】
試験サンプルの種子２００ｇを、２４リットルドラム缶内の５日間の、室温を２０℃に制御し、部屋ＲＨを４０％に制御したインキュベーションに付する。ドラム缶口をポアサイズ約０.６mmのナイロンメッシュで覆い、蒸発を促進する。一日目の水分損失速度(１.０４％ＭＣ／時間)を、上記のように秤量により測定する。種子を、次いでドラム缶から取り出し、対照種子と同様の条件下で乾燥する。
【０１０１】
貯蔵寿命を、種子を４８℃で２４、４８および７２時間インキュベーションする以外、実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表８は種子ＭＣの遅い減少を可能にするインキュベーションの期間が、始働リーキ種子の貯蔵寿命を未始働種子の貯蔵寿命まで非常に改善することを示す。
【０１０２】
【表８】
実施例９(加湿保存)
パンジー種子を実施例１記載のように予備処理し始働する。
対照種子１０ｇを３日後にドラム缶から除去し、実施例１の対照のように６％まで乾燥する。
試験サンプル種子(ＭＣ３４％)１０ｇを、対照種子のようにであるが、ＭＣ２５％まで乾燥する。
【０１０４】
次いで、種子を防水であるが気密ではないプラスチック容器に移し、２０℃で３日間インキュベーションする。このインキュベーションの後、種子を更に対照種子と同じまで乾燥する。
対照(既知の始働)、本発明の種子(加湿保存)および未処理種子(即ち未始働)種子の貯蔵寿命を、実施例１に記載のように測定する。
【０１０５】
表９は、未処理種子と比較した相対値で示した、既知の始働種子および本発明の種子のＣＤ試験２４時間後の生存を示す。表は、減少したが一定の種子ＭＣ(始働後のＭＣと比較して)が始働種子の貯蔵寿命を回復させることを示す。
【０１０６】
【表９】
既知のドラム缶始働または本発明により処理した(加湿保存)のパンジー種子のＣＤ試験データ(未処理種子と比較した)。
実施例１０(加湿種子)
トウガラシ属(トウガラシ)シーブイ・アブデラ(cv.Abdera)を実施例３のようにドラム缶始働する。
始働後の種子ＭＣは３５.３％であった。１６５分において、種子をＭＣ４.８％まで、温度２５℃、ＲＨ４０％および空気流２ms-1で乾燥した。２個の複製の種子サンプルを、ＭＣ３５.３(最初のＭＣ)、３０.６％、２５.５％、２０.０％、１４.８％および９.６％で取り出した。これらのサンプルを密閉容器(０.１５dl)内で、一つのサンプルは８℃、他方は２０℃で、７日間インキュベーションした。
【０１０８】
インキュベーションの後、全てのサンプルを最初の乾燥工程と同様の条件で最終ＭＣ４.８％まで乾燥した。
対照(既知の始働)、本発明の種子(加湿保存)および未処理種子(即ち未始働)の貯蔵寿命を実施例１に記載のように測定する。
【０１０９】
表１０は、始働直後にＭＣ４.８％までドライ・バックした始働種子は、ＣＤ試験後低い生存率を示すが、一方始働後のＭＣと比較して５から１５％減少したＭＣでインキュベーションした種子は、未処理種子と殆ど同様の貯蔵寿命を有する。
本導入工程の間の温度は方法には重要ではない。
【０１１０】
【表１０】
実施例１１(加湿保存)
トマト種子を実施例４のように始働し、種子ＭＣを３７.１％に維持する。
対照種子１０ｇを６日後にドラム缶から取り出し、実施例１の対照種子のように６％まで乾燥させた。
試験サンプルの種子(ＭＣ３７.１％)１０ｇを、対照種子のようにであるがＭＣ２５％まで乾燥させた。
【０１１２】
次いで、種子を防水ではあるが気密ではないプラスチック容器に移し、２０℃で３日間インキュベーションする。インキュベーション後、種子を更に対照種子のように乾燥する。
発芽速度および貯蔵寿命を実施例４に記載のように測定する。対照種子はｔ50４.４日、本発明により処理した種子はｔ50１.５日であった。
【０１１３】
表１１は種子を５０℃で４８時間インキュベーションした以外実施例１のようなＣＤ試験を用いた後の生存率を示し、未処理対照種子と比較して相対的に示す。表は、減少しているが一定の種子ＭＣ、即ち加湿保存(始働後の種子ＭＣと比較して)が、既知の始働トマト種子の貯蔵寿命を回復することを示す。
【０１１４】
【表１１】
実施例１２(加熱保存)
トウガラシ属(トウガラシ)シーブイ・アブレダ(cv.Abdera)を実施例３のように始働する。
始働後の種子ＭＣは３５.３％であった。１６５分において、種子をＭＣ４.８％まで、温度２５℃、ＲＨ４０％および空気流２ms-1で乾燥した。種子サンプルを、ＭＣ３５.３(最初のＭＣ)、３０.６％、２５.５％、２０.０％、１４.８％および９.６％で取り出した。これらのサンプルを密閉アルミ袋内で、３時間、４０℃の温度の水浴中でインキュベーションした。インキュベーションの後、全てのサンプルを最初の乾燥工程と同様の条件で最終ＭＣ４.８％まで乾燥した。
【０１１６】
対照(既知の始働)、本発明の種子(加湿保存)および未処理種子(即ち未始働)の貯蔵寿命を実施例１に記載のように測定する。
表１２は、処理直後にＭＣ４.８％までドライ・バックした始働種子は、ＣＤ試験後低い生存率を示すが、一方熱ショックを与えた種子は、良好にＣＤ試験で生存した。熱ショックは種子ＭＣを１５％まで有効に減少する。
【０１１７】
【表１２】
実施例１３(ＰＥＧ処理)
ペッパー・シーブイ・アブデラ(Pepper cv. Abdera)種子１０ｇを、水飽和濾紙上で、透明なプラスチック箱中で２５℃で光の下インキュベーションする。
１ｇの種子サンプルを、４日目まで毎日回収する。４日目に、種子の４０％が発芽したが、３日目には発芽種子は観察されなかった。対照種子を、実施例１のように乾燥した。試験サンプルを浸透ポテンシャル−１.５MPaのポリエチレングリコール溶液で飽和させた濾紙に移し、３日間２５℃の温度でインキュベーションした。処理後、これらの種子を洗浄し、対照種子と同様に乾燥した。
【０１１９】
貯蔵寿命は実施例１のようなＣＤ試験を用いて測定する。
表１３は、水中で１日インキュベーションした種子が、いくらか促進された貯蔵寿命を有するが、２および３日のインキュベーションは貯蔵寿命の悪化した損失を示し、一方比較して、本発明の種子(ＰＥＧ溶液内でインキュベーション)は、延長された貯蔵寿命を示す。
【０１２０】
【表１３】
実施例１４：水ストレスおよび熱ストレスの組み合わせ。
スミレ属(ロック・イエロー)の乾燥種子５０ｇを実施例１に記載のように始働する。始働３日後、種子を２０℃の温度の通気水に移す。通気水に２４時間の後、大半の種子に種子殻の裂け目があったが、幼根は包まれている内乳をまだ破っていなかった。種子を、次いで水から回収し、遠心する。種子ＭＣは４８.５％である。
【０１２２】
これらの種子５ｇ(湿重量)を、２０℃で、ＲＨ４０％の滞留空気にさらすことにより乾燥する。２４時間乾燥後、種子のＭＣは６％である。種子の残りを３分割し、各々を２ms-1の空気流、２０℃でＲＨ４０％にさらす。種子を、３分割の各々が、それぞれ、ＭＣ４０、３５および３０に到達するまで数分間空気流にさらす。１０ｇの２個のサンプルを各々の分割から取り出し、最少水分および空気交換プラスチック容器(１８０ml)に包み、その後、２０℃または３２℃の温度でインキュベーションする。指示した温度で１および７日インキュベーション後、各々のサンプルの２ｇを上記のように乾燥前にインキュベーションしていない種子と同様の条件下で乾燥する。
【０１２３】
処理乾燥種子の貯蔵寿命を、実施例１に記載のＣＤ試験を使用して測定する：実施例１に記載のように種子をＲＨ４０％で平衡化し、５０℃で９６時間インキュベーションし、紙上で２０℃で発芽させる。
最終発芽率を１４日後計数する：下記の結果は、ＣＤ試験なしの対照およびＣＤ試験後(９６時間)の発芽％を示す。
【０１２４】
【表１４】
Claims (2)
- 生重量基準（ｆｗｂ）で２〜１５％の水分含量（ＭＣ）を有する、まだ発芽していないが始働した（primed）種子の貯蔵寿命を、その発芽速度を保持したまま延長する方法であって、当該始働種子を上記水分含量にドライバックする前に
（ａ）１時間あたりの水分減少が種子の乾燥重量の約０．１ないし１．０％の範囲内に維持されるインキュベーションに付す、あるいは
（ｂ）２４時間より少ない時間内に生重量基準で水分含量が３％ないし２０％単位減少させられ、その後、１時間あたりの水分減少が種子の乾燥重量の０．１ないし１．０４％の範囲内に維持されるインキュベーションに付す、あるいは
（ｃ）−０．５ないし−４．０Ｍｐａの範囲の水ポテンシャルに付す、あるいは
（ｄ）１ないし５時間、２５ないし４５℃の熱処理に付す、あるいは
（ｅ）工程ｄ）と、工程ａ）、ｂ）およびｃ）の１つまたはそれ以上の工程との組み合わせに付す
ことを特徴とする方法。 - 種子が、トマト（tomatoes）、トウガラシ（peppers）、メロン（melons）、スイカ（water melons）、キュウリ（cucumbers）、アブラナ属（Brassicas）、白ネギ（leeks）、ニンジン（carrots）、タマネギ（onions）、カボチャ（squashes）、小キュウリ（gherkins）、エンダイブ（endives）、ツリフネソウ属（Impatiens）、クマツヅラ属（Verbenas）、サクラソウ属（Primulas）、テンジクアオイ属（Pelargoniums）、スミレ属（Viola）、チゴリウム（Chigoriums）およびシクラメン属（Cyclamen）の種子からなる群より選択されるものである、請求項１記載の方法。
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