【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、新規テルペノイド化合物に関し、詳しくは、医薬、食品、化粧料等の用途に用いることが期待される新規なテルペノイド化合物に関する。
【０００２】
【従来の技術】
テルペノイド化合物とは、イソプレンを構成単位とする（Ｃ5Ｈ8）ｎの組成の炭化水素及びこれらを前駆物質として導かれると考えられるアルコール、アルデヒド、ケトン、カルボン酸等の含酸素化合物並びにこれらと不飽和度を異にする一群の有機化合物の総称である。テルペノイド化合物の大部分は植物体に存在し、稀に動物体にも存在する。この様な起源動植物から、水蒸気蒸留や有機溶媒による抽出等の方法でテルペノイド化合物を含有する成分を抽出し、必要に応じて更にこれらを精製してテルペノイド化合物を単離し、香料原料、医薬、食品、化学工業原料等として利用することは、従来より広く行われている。
【０００３】
例えば、中国生薬は全てが天然物由来であり、多数の中国生薬が優れた薬効を有する薬剤として使用されているが、これらから、さらにより薬効の高い単一成分の一種としてテルペノイド化合物が単離精製されて医薬、食品、化粧料等の分野で利用されている。しかし、起源動植物からテルペノイド化合物を含有する成分を抽出することは比較的容易に行えるものの、これらの抽出物から機能性の高い単一テルペノイド化合物を分離精製することは困難な場合が多く、有用性は期待されていても、いまだ、単離されていないテルペノイド化合物も多数存在するのが現状である。
【０００４】
【発明が解決しようとする課題】
本発明は、上記観点からなされたものであり、安全性や薬効が確認されている中国生薬の抽出物より医薬、食品、化粧料等の用途に用いることが期待される新規なテルペノイド化合物を単離することを課題とする。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
本発明者らは、上記課題を解決するために各種中国生薬の抽出物から新規なテルペノイド化合物を単離すべく鋭意研究を重ねた結果、苦丁茶の極性溶媒抽出物から下記一般式（Ｉ）で表される新規なテルペノイド化合物を単離することに成功し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち本発明は、下記一般式（Ｉ）で表されるテルペノイド化合物である。
【０００７】
【化４】
【０００８】
但し、（Ｉ）式中Ｒ1は水素原子又は水酸基を表し、Ｒ2は水酸基及び／又は短鎖長アルコキシル基を有してもよい芳香環を表す。また、点線の結合はあってもなくてもよいが、これらのうちＲ1に結合する結合線を除く点線の結合の少なくとも１箇所は結合が存在するものとする。
【０００９】
ここで、上記一般式（Ｉ）中のＲ2は、水酸基及び／又は短鎖長アルコキシル基を有してもよい芳香環を表すが、短鎖長アルコキシル基とは炭素数１〜６程度のアルコキシル基をいい、Ｒ2として具体的には、フェニル基、ヒドロキシフェニル基、メトキシフェニル基やｔ−ブトキシフェニル基などのアルコキシフェニル基、ヒドロキシメトキシフェニル基やｔ−ブトキシヒドロキシフェニル基などのアルコキシヒドロキシフェニル基、ジメトキシフェニル基やビス（ｔ−ブトキシ）フェニル基などのジアルコキシフェニル基等を挙げることができる。
【００１０】
また、一般式（Ｉ）のテルペノイド化合物として、具体的には、化５で表される１−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−オクタン−２，５−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート、化６で表される１−（１−（３，７−ジメチル−オクタン−２，６−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート等が挙げられる。
【００１１】
【化５】
【００１２】
【化６】
【００１３】
なお、上記本発明の新規テルペノイド化合物の範疇には、上記一般式（Ｉ）で表されるテルペノイド化合物のナトリウム、カリウムなどのアルカリ金属塩、カルシウムやマグネシウムなどのアルカリ土類金属塩、トリエチルアミンやトリエタノールアミンなどの有機アミン塩、リジンやアルギニンなどの塩基性アミノ酸塩等の塩類も含まれるものである。
【００１４】
上記本発明の新規テルペノイド化合物は、具体的には、雲南苦丁茶、四川苦丁茶等の苦丁茶を極性溶媒で抽出し、抽出物をシリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂等を充填したカラムを用いて各画分に分画し、これらについてマススペクトルや核磁気共鳴スペクトル等の測定を行って同定することにより得られる。
【００１５】
【発明の実施の形態】
上記本発明の新規テルペノイド化合物は、上述のように苦丁茶の極性溶媒抽出物から得られるが、以下にその方法について説明する。
【００１６】
原料として用いられる苦丁茶としては、雲南苦丁茶（リグストラム プルプラセンス）、四川苦丁茶（リグストラム ペドンクラレ）等が挙げられる。これらは、モクセイ科イボタノキ属の植物であり、中国雲南地方や四川地方で消炎、抗疲労などの効能があるとされ古くから用いられている中国生薬である。これらの入手は、中華材料店等を通して容易に可能である。植物体の使用部位としては、特段の限定はないが、入手がしやすく、本発明のテルペノイド化合物の含有量が多いことが確認されている葉部を用いるのが好ましい。また、抽出に際して必要に応じて、これらの植物体に、切断、乾燥、粉砕等の前処理を施しても構わない。
【００１７】
抽出に用いる極性溶剤としては、水、メタノールやエタノール等のアルコール類、ジエチルエーテルやテトラヒドロフラン等のエーテル類、クロロホルムや塩化メチレン等のハロゲン化炭化水素類、アセトンやメチルエチルケトン等のケトン類、アセトニトリル等のニトリル類等が好適に例示できる。これらは一種を単独で用いても、二種以上を混合して用いてもよい。より好ましい抽出溶媒は、安全性上問題の少ない、水あるいはアルコール類である。
【００１８】
また、抽出は、植物体或いはその加工物に対して１〜１０倍量の抽出溶媒を加え、室温であれば数日、抽出溶媒の沸点付近の温度であれば数時間、浸漬する等の方法で行われる。必要に応じて撹拌を加えることもできる。
【００１９】
この様にして得られた抽出物は、必要に応じて濾過等による不溶物除去、溶媒の溜去等の処理が施された後、通常の方法に従って、シリカゲル、ＯＤＳ、イオン交換樹脂等のカラムクロマトグラフィーで順次分画精製され、これらの画分から本発明のテルペノイド化合物を単離する。
【００２０】
具体例として、雲南苦丁茶の水抽出物をダイアイオンＨＰ−２０（三菱化成製）を充填したカラムに流した後、このカラムに水、２０％エタノール水溶液、エタノールを順次流し吸着物を溶出させ、得られたエタノールフラクションについて溶媒を溜去後、これをシリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１００：０→５０：５０）、ＯＤＳカラムを装着した分取高速液体クロマトグラフィー（溶出溶媒：３５％アセトニトリル水溶液及び５０％メタノール水溶液）で精製することにより、１−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−オクタン−２，５−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート、及び１−（１−（３，７−ジメチル−オクタン−２，６−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネートが得られる。
【００２１】
【実施例】
以下に本発明の実施例を説明する。
雲南苦丁茶１００ｇに水１Ｌを加え、９０℃で３時間加熱した後、濾過により不溶物を除去した。得られた抽出液をダイアイオンＨＰ−２０（三菱化成製）を充填したカラムに流した後、このカラムに水、２０％エタノール、エタノールを順次３Ｌづつ流し吸着物を溶出させた。この内のエタノールのフラクションについてエタノールを溜去させた後、シリカゲルカラムクロマトグラフィー（溶出溶媒；クロロホルム：メタノール＝１００：０→５０：５０）、ＯＤＳカラムを装着した分取高速液体クロマトグラフィー（溶出溶媒：３５％アセトニトリル水溶液及び５０％メタノール水溶液）で精製し、１−（７−ヒドロキシ−３，７−ジメチル−オクタン−２，５−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート（化合物１）を１９０ｍｇ、１−（１−（３，７−ジメチル−オクタン−２，６−ｔｒａｎｓ−ジエン−１−イル）−３−Ｏ−（６−デオキシ−α−Ｌ−マンノピラノシル−β−Ｄ−グルコシラノシド−４−（３−（４−ヒドロキシフェニル）−２−ｔｒａｎｓ−プロペネート（化合物２）を２８０ｍｇ得た。得られた化合物１及び化合物２のＦＡＢ−ＭＳ、ＮＭＲ測定結果を以下に示す。
【００２２】
（化合物１）
ＦＡＢ−ＭＳ：６４７［Ｍ＋Ｎａ］+
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
1.09(3H d) 1.28(6H s) 1.69(3H s) 2.75(2H brd) 3.29(1H t) 3.40(1H dd)
3.52(1H m) 3.57(1H m) 3.58(1H dd) 3.56-3.62(2H m) 3.82(1H t)
3.92(1H dd) 4.27(1H br dd) 4.37(1H d) 4.38(1H br dd) 4.92(1H t)
5.20(1H d) 5.43(1H m) 5.61(1H dd) 5.64(1H dd) 6.33(1H d) 6.81(2H d)
7.46(2H d) 7.66(1H d)
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
16.6 18.4 30.0 43.2 62.4 66.6 70.4 70.7 71.1 72.1 72.3 73.8 76.1 81.6
102.8 102.9 114.8 116.9 122.1 125.3 127.0 131.3 141.0 141.2 161.6 168.3
【００２３】
（化合物２）
ＦＡＢ−ＭＳ：６３１［Ｍ＋Ｎａ］+
1Ｈ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
1.08(3H d) 1.62(3H s) 1.69(6H s) 2.10(4H brd) 3.35(2H m) 3.58(5H m)
3.82(1H t) 3.92(1H dd) 4.31(2H m) 4.38(1H d) 4.38(1H d) 4.90(1H m)
5.12(1H br t) 5.19(1H d) 5.38(1H t) 6.34(1H d) 6.81(2H d) 7.47(2H d)
7.66(1H d)
13Ｃ−ＮＭＲ（δｐｐｍ；ＣＤ3ＯＤ）
16.5 17.8 18.4 25.9 27.4 40.6 62.4 66.5 70.4 70.6 72.0 72.3 73.7 76.1
81.6 102.5 103.0 114.8 116.8 121.4 125.1 127.1 131.3 132.5 142.0 147.6
161.4 168.2
【００２４】
＜本発明の新規テルペノイド化合物の有する作用＞
本発明で得られた新規テルペノイド化合物の有する生体作用としてコレステロールアシルトランスフェラーゼ活性（ＡＣＡＴ）阻害作用の測定を行い、これにより、本発明の新規テルペノイド化合物の有用性を示す。すなわち、本発明の新規テルペノイド化合物として、上記実施例で得られた化合物１及び化合物２を用い、以下の方法でＡＣＡＴ阻害作用を測定した。
【００２５】
チューブに８０μＭのウシ血清アルブミン水溶液４μｌ、２ｍＭジチオスレイトール水溶液０．８μｌ、１５０ｍＭリン酸２水素１カリウムバッファー（ｐＨ７）８μｌ、１２０μｇ／８μｌのラット肝ミクロソーム水分散液８μｌ、１００μＭの［１−14Ｃ］オレオイルＣｏＡ水溶液５μｌ、水１５．２μｌ、検体（表１に示す各種最終濃度となるように化合物１又は２を添加した水溶液）４μｌを秤込み、３０℃で５分間インキュベートした後、これにメタノール２００μｌ、コレステリルオレート１００μｇ、［７−14Ｃ］コレステリルオレート２μｌ、ヘキサン９００μｌを順次加え混合した。この混合液からヘキサン相０．６ｍｌを採取し窒素ガスで乾固した後、これをクロロホルムに溶かし薄層クロマトグラフ板にスポットして石油エーテル：ジエチルエーテル：酢酸＝８５：１５：３で展開した。これにより分画されたコレステリルオレートを沃素で発色させ、切りとり液体シンチレーターで放射線量を測定して、生成したコレステリルオレート量を算出した。
【００２６】
また、上記測定において検体の替わりに同量の水を加えた以外は全く同様の測定を行いコントロールのコレステリルオレート量を求め、次式からＡＣＡＴ阻害値（％）を算出した。結果を表１に示す。
【００２７】
【数１】
ＡＣＡＴ阻害値（％）＝（コントロールのコレステリルオレート量−検体存在時のコレステリルオレート量）×１００／コントロールのコレステリルオレート量
【００２８】
【表１】
【００２９】
更に、非線形直線回帰式より、表１の結果をもとに化合物１のＩＣ50を算出したところ２．８８×１０-3Ｍであった。これらの結果より本発明の新規テルペノイド化合物はＡＣＡＴ阻害作用に優れることがわかる。
【００３０】
【発明の効果】
本発明の新規テルペノイド化合物は、安全性や薬効が確認されている苦丁茶の抽出物より単離されたものであり、医薬、食品、化粧料等の用途に用いることが期待できる。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to a novel terpenoid compound, and more particularly to a novel terpenoid compound expected to be used for uses such as medicine, food, and cosmetics.
[0002]
[Prior art]
The terpenoid compound is a hydrocarbon having a composition of (C 5 H 8 ) n having isoprene as a structural unit, an oxygen-containing compound such as alcohol, aldehyde, ketone, carboxylic acid, etc. A generic term for a group of organic compounds with different degrees of unsaturation. Most of the terpenoid compounds are present in plants and rarely in animals. From these origins of animals and plants, components containing terpenoid compounds are extracted by methods such as steam distillation or extraction with organic solvents, and these are further purified as necessary to isolate terpenoid compounds. The use as a chemical industrial raw material has been widely performed.
[0003]
For example, Chinese herbal medicines are all derived from natural products, and many Chinese herbal medicines are used as drugs with excellent medicinal properties. From these, terpenoid compounds are isolated as a kind of single component with even higher medicinal effects. It is refined and used in fields such as medicine, food, and cosmetics. However, although it is relatively easy to extract components containing terpenoid compounds from plants and animals of origin, it is often difficult to separate and purify highly functional single terpenoid compounds from these extracts. However, there are still many terpenoid compounds that have not been isolated yet.
[0004]
[Problems to be solved by the invention]
The present invention has been made from the above viewpoint, and a novel terpenoid compound, which is expected to be used in medicines, foods, cosmetics and the like, is extracted from a Chinese herbal medicine extract that has been confirmed to be safe and effective. The issue is to separate.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
In order to solve the above-mentioned problems, the present inventors have conducted extensive research to isolate novel terpenoid compounds from various Chinese herbal extracts. As a result, the following general formula (I) The present invention was completed by isolating a novel terpenoid compound represented by the formula:
[0006]
That is, the present invention is a terpenoid compound represented by the following general formula (I).
[0007]
[Formula 4]
[0008]
However, in formula (I), R 1 represents a hydrogen atom or a hydroxyl group, and R 2 represents an aromatic ring which may have a hydroxyl group and / or a short-chain length alkoxyl group. In addition, although there may or may not be a dotted bond, it is assumed that at least one of the dotted bonds excluding the bond line bonded to R 1 has a bond.
[0009]
Here, R 2 in the general formula (I) represents an aromatic ring which may have a hydroxyl group and / or a short chain length alkoxyl group, and the short chain length alkoxyl group has about 1 to 6 carbon atoms. Specific examples of R 2 include an alkoxyphenyl group such as a phenyl group, a hydroxyphenyl group, a methoxyphenyl group and a t-butoxyphenyl group, and an alkoxyhydroxy group such as a hydroxymethoxyphenyl group and a t-butoxyhydroxyphenyl group. Examples thereof include dialkoxyphenyl groups such as a phenyl group, a dimethoxyphenyl group, and a bis (t-butoxy) phenyl group.
[0010]
Further, as the terpenoid compound of the general formula (I), specifically, 1- (7-hydroxy-3,7-dimethyl-octane-2,5-trans-dien-1-yl) represented by Chemical formula 5 -3-O- (6-deoxy-α-L-mannopyranosyl-β-D-glucosilanoside-4- (3- (4-hydroxyphenyl) -2-trans-propenate, 1- (1- (3,7-dimethyl-octane-2,6-trans-dien-1-yl) -3-O- (6-deoxy-α-L-mannopyranosyl-β-D-glucosilanoside-4- (3- (4-hydroxyphenyl) -2-trans-propenate and the like.
[0011]
[Chemical formula 5]
[0012]
[Chemical 6]
[0013]
The category of the novel terpenoid compound of the present invention includes alkali metal salts such as sodium and potassium, alkaline earth metal salts such as calcium and magnesium, triethylamine and triethylamine, which are represented by the general formula (I). Salts such as organic amine salts such as ethanolamine and basic amino acid salts such as lysine and arginine are also included.
[0014]
Specifically, the novel terpenoid compound of the present invention is a column in which bitter tea such as Yunnan bitter tea and Sichuan bitter tea is extracted with a polar solvent, and the extract is packed with silica gel, ODS, ion exchange resin and the like. Is obtained by fractionating each fraction using, and measuring and identifying mass spectra and nuclear magnetic resonance spectra.
[0015]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
As described above, the novel terpenoid compound of the present invention is obtained from a polar solvent extract of bitter tea, and the method will be described below.
[0016]
Examples of bitter tea used as a raw material include Yunnan bitter tea (Rigstrum Plu Placence), Sichuan bitter tea (Rigstrum pedon Kuraray) and the like. These are plants belonging to the genus Amanita, which are Chinese herbal medicines that have been used for a long time in the Yunnan and Sichuan regions of China. These can be easily obtained through a Chinese material store or the like. Although there is no special limitation as a site | part of use of a plant body, it is preferable to use the leaf part which is easy to acquire and confirmed that there is much content of the terpenoid compound of this invention. Moreover, you may give pretreatments, such as cutting | disconnection, drying, and a grinding | pulverization, to these plant bodies as needed in the case of extraction.
[0017]
Examples of polar solvents used for extraction include water, alcohols such as methanol and ethanol, ethers such as diethyl ether and tetrahydrofuran, halogenated hydrocarbons such as chloroform and methylene chloride, ketones such as acetone and methyl ethyl ketone, and acetonitrile. Nitriles and the like can be suitably exemplified. These may be used alone or in combination of two or more. More preferred extraction solvents are water or alcohols, which have few safety problems.
[0018]
In addition, extraction is performed by adding 1 to 10 times the amount of the extraction solvent to the plant body or its processed product, and immersing it for several days at room temperature or for several hours at a temperature near the boiling point of the extraction solvent. Done in Stirring can be added as necessary.
[0019]
The extract thus obtained is subjected to treatments such as removal of insoluble matters by filtration or the like, removal of the solvent, etc., if necessary, and then a column such as silica gel, ODS, ion exchange resin or the like according to a usual method. The fractions are purified sequentially by chromatography, and the terpenoid compound of the present invention is isolated from these fractions.
[0020]
As a specific example, after flowing a water extract of Yunnan bitter tea through a column packed with Diaion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei), water, a 20% ethanol aqueous solution, and ethanol are sequentially passed through the column to elute the adsorbate. After the solvent was distilled off from the ethanol fraction obtained, this was subjected to silica gel column chromatography (elution solvent; chloroform: methanol = 100: 0 → 50: 50), preparative high performance liquid chromatography equipped with an ODS column (elution) Solvent: 35% acetonitrile aqueous solution and 50% methanol aqueous solution) to give 1- (7-hydroxy-3,7-dimethyl-octane-2,5-trans-dien-1-yl) -3-O- (6-Deoxy-α-L-mannopyranosyl-β-D-glucosilanoside-4- (3- (4-hydroxyl Enyl) -2-trans-propenate and 1- (1- (3,7-dimethyl-octane-2,6-trans-dien-1-yl) -3-O- (6-deoxy-α-L-) Mannopyranosyl-β-D-glucosilanoside-4- (3- (4-hydroxyphenyl) -2-trans-propenate is obtained.
[0021]
【Example】
Examples of the present invention will be described below.
After adding 1 L of water to 100 g of Yunnan bitter tea and heating at 90 ° C. for 3 hours, insoluble matters were removed by filtration. The obtained extract was applied to a column packed with Diaion HP-20 (manufactured by Mitsubishi Kasei), and then 3 L of water, 20% ethanol and ethanol were sequentially supplied to the column to elute the adsorbate. The ethanol fraction of the ethanol fraction was distilled off, followed by silica gel column chromatography (elution solvent; chloroform: methanol = 100: 0 → 50: 50), preparative high performance liquid chromatography equipped with an ODS column (elution solvent). : 35% aqueous acetonitrile and 50% aqueous methanol), and purified by 1- (7-hydroxy-3,7-dimethyl-octane-2,5-trans-dien-1-yl) -3-O- (6- 190 mg of deoxy-α-L-mannopyranosyl-β-D-glucosilanoside-4- (3- (4-hydroxyphenyl) -2-trans-propenate (Compound 1), 1- (1- (3,7- Dimethyl-octane-2,6-trans-dien-1-yl) -3-O- (6-deoxy-α-L-manno 280 mg of ranosyl-β-D-glucosilanoside-4- (3- (4-hydroxyphenyl) -2-trans-propenate (compound 2) was obtained.FAB-MS, NMR of the obtained compound 1 and compound 2 The measurement results are shown below.
[0022]
(Compound 1)
FAB-MS: 647 [M + Na] +
1 H-NMR (δ ppm; CD 3 OD)
1.09 (3H d) 1.28 (6H s) 1.69 (3H s) 2.75 (2H brd) 3.29 (1H t) 3.40 (1H dd)
3.52 (1H m) 3.57 (1H m) 3.58 (1H dd) 3.56-3.62 (2H m) 3.82 (1H t)
3.92 (1H dd) 4.27 (1H br dd) 4.37 (1H d) 4.38 (1H br dd) 4.92 (1H t)
5.20 (1H d) 5.43 (1H m) 5.61 (1H dd) 5.64 (1H dd) 6.33 (1H d) 6.81 (2H d)
7.46 (2H d) 7.66 (1H d)
13 C-NMR (δ ppm; CD 3 OD)
16.6 18.4 30.0 43.2 62.4 66.6 70.4 70.7 71.1 72.1 72.3 73.8 76.1 81.6
102.8 102.9 114.8 116.9 122.1 125.3 127.0 131.3 141.0 141.2 161.6 168.3
[0023]
(Compound 2)
FAB-MS: 631 [M + Na] +
1 H-NMR (δ ppm; CD 3 OD)
1.08 (3H d) 1.62 (3H s) 1.69 (6H s) 2.10 (4H brd) 3.35 (2H m) 3.58 (5H m)
3.82 (1H t) 3.92 (1H dd) 4.31 (2H m) 4.38 (1H d) 4.38 (1H d) 4.90 (1H m)
5.12 (1H br t) 5.19 (1H d) 5.38 (1H t) 6.34 (1H d) 6.81 (2H d) 7.47 (2H d)
7.66 (1H d)
13 C-NMR (δ ppm; CD 3 OD)
16.5 17.8 18.4 25.9 27.4 40.6 62.4 66.5 70.4 70.6 72.0 72.3 73.7 76.1
81.6 102.5 103.0 114.8 116.8 121.4 125.1 127.1 131.3 132.5 142.0 147.6
161.4 168.2
[0024]
<Action of novel terpenoid compound of the present invention>
Cholesterol acyltransferase activity (ACAT) inhibitory action was measured as a biological action of the novel terpenoid compound obtained in the present invention, thereby showing the usefulness of the novel terpenoid compound of the present invention. That is, as the novel terpenoid compound of the present invention, Compound 1 and Compound 2 obtained in the above Examples were used, and the ACAT inhibitory action was measured by the following method.
[0025]
Bovine serum albumin aqueous solution 4μl of 80μM to the tube, 2mM dithiothreitol aqueous 0.8 .mu.l, 150 mM dihydrogen phosphate monopotassium buffer (pH7) 8μl, 120μg / 8μl of rat liver microsomes aqueous dispersion 8 [mu] l, of 100 [mu] M [1-14 C] Weigh 5 μl of oleoyl CoA aqueous solution, 15.2 μl of water, and 4 μl of specimen (aqueous solution to which compound 1 or 2 is added so as to have various final concentrations shown in Table 1), and incubate at 30 ° C. for 5 minutes. methanol 200 [mu] l, cholesteryl oleate 100μg to, [7- 14 C] cholesteryl oleate 2 [mu] l, were mixed sequentially added hexane 900 [mu] l. From this mixture, 0.6 ml of hexane phase was sampled and dried with nitrogen gas. Then, this was dissolved in chloroform, spotted on a thin layer chromatograph plate and developed with petroleum ether: diethyl ether: acetic acid = 85: 15: 3. . The fractionated cholesteryl oleate was colored with iodine, cut out, and the radiation dose was measured with a liquid scintillator to calculate the amount of cholesteryl oleate produced.
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Further, in the above measurement, except that the same amount of water was added instead of the sample, the same measurement was performed to determine the amount of cholesteryl oleate as a control, and the ACAT inhibition value (%) was calculated from the following formula. The results are shown in Table 1.
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[Expression 1]
ACAT inhibition value (%) = (control cholesteryl oleate amount−cholesteryl oleate amount in the presence of specimen) × 100 / control cholesteryl oleate amount
[Table 1]
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Further, the IC 50 of compound 1 was calculated from the nonlinear linear regression equation based on the results in Table 1. As a result, it was 2.88 × 10 −3 M. From these results, it can be seen that the novel terpenoid compound of the present invention is excellent in ACAT inhibitory action.
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【The invention's effect】
The novel terpenoid compound of the present invention is isolated from an extract of bitter tea that has been confirmed to be safe and effective, and can be expected to be used in medicines, foods, cosmetics and the like.