JP4011938B2

JP4011938B2 - Lipid metabolism improving agent and food containing the same

Info

Publication number: JP4011938B2
Application number: JP2002063778A
Authority: JP
Inventors: 弘子早川; 範江小野寺; 智史松原; 康久島川; 恵美安田; 文保石川
Original assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Current assignee: Yakult Honsha Co Ltd
Priority date: 2002-03-08
Filing date: 2002-03-08
Publication date: 2007-11-21
Anticipated expiration: 2016-10-29
Also published as: JP2002326946A

Description

【０００１】
【発明の属する技術分野】
本発明は、ビフィドバクテリウム属微生物を用いた発酵豆乳を含有するコレステロールの腸管からの吸収抑制剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】
豆乳には、大豆蛋白質、リン脂質、イソフラボンが含まれており、脂質代謝に有効であることが期待されている。しかしながら、豆乳には特有の不快臭や不快味があるため多くの消費者から敬遠されているのが現状である。
そこで、豆乳特有の不快臭を軽減するために、乳酸菌やビィフィズス菌で豆乳を発酵させることなども試みられているが、発酵豆乳に優れた脂質代謝改善効果があることは未だ報告されていない。
【０００３】
【発明が解決しようとする課題】
動脈硬化症の予防・改善には、血中コレステロール量を低下させることが一般的であり、高コレステロール血症、特に高ＬＤＬ(低比重リポタンパク質）コレステロール血症の改善が効果的である（馬淵宏ら(1987)Coronary vol4,281）。
また、動脈硬化の発生は、ＬＤＬの酸化変性が発端となって起こることが報告されており（Steinberg,D.ら(1989)New Engl J.Med.,321,1196-1197)、ＬＤＬに対し抗酸化活性を有する物質が注目されている。
【０００４】
従って、本発明の目的は、動脈硬化症の予防・改善に効果的な優れた脂質代謝改善剤を提供することにある。
【０００５】
【課題を解決するための手段】
かかる実情に鑑み、本発明者らは、豆乳の持つ有効成分に着目し鋭意研究を行った結果、豆乳にビフィドバクテリウム属微生物、特にビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６３、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６４、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６５、ビフィドバクテリウム・ロンガムＹＩＴ４０３８、ビフィドバクテリウム・ロンガムＹＩＴ４０７８、ビフィドバクテリウム・アドレスセンティスＹＩＴ４０４５を作用させて得られた発酵豆乳が、優れた脂質の腸管からの吸収抑制作用を有し、脂質代謝改善剤として有用であることを見出し、本発明を完成した。
【０００６】
すなわち、本発明は、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６３、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６４、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６５、ビフィドバクテリウム・ロンガムＹＩＴ４０３８、ビフィドバクテリウム・ロンガムＹＩＴ４０７８及びビフィドバクテリウム・アドレスセンティスＹＩＴ４０４５から選ばれる一種又は二種以上のビフィドバクテリウム属微生物を豆乳に作用させて得られる発酵豆乳を含有するコレステロールの腸管からの吸収抑制剤を提供することにある。
【０００７】
【発明の実施の形態】
本発明において原料となる豆乳は、油脂を含有した丸大豆、脱皮大豆、又はフレーク大豆等を原料としたものが好ましいが、脱脂大豆を原料としたものであってもよい。
【０００８】
豆乳は原料を水につけた後、熱水又は０．５〜１．０重量％（以下、単に％で示す）の炭酸ナトリウムを含む熱水を添加して磨砕後、おからを取り除き、更に加熱殺菌して製造することができるが、本発明で用いる豆乳はいかなる方法で製造されたものであってもよい。
【０００９】
豆乳には、後の微生物処理のために、ショ糖、ブドウ糖、果糖、転化糖等の食品に用いられる糖；肉エキス、ペプトン、酵母エキス、ペプチド等の微生物の増殖に必要な栄養素を添加してもよい。また、微生物の至適ｐＨに調整するために豆乳にクエン酸、リンゴ酸、アスコルビン酸、乳酸、酢酸等の食品に用いられる酸を添加してもよい。
【００１０】
本発明のコレステロールの腸管からの吸収抑制剤は、豆乳にビフィドバクテリウム属微生物を作用させて得られた発酵豆乳を主成分とする。豆乳に作用させるビフィドバクテリウム属微生物はビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６３、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６４、ビフィドバクテリウム・ブレーベＹＩＴ４０６５、ビフィドバクテリウム・ロンガムＹＩＴ４０３８、ビフィドバクテリウム・ロンガムＹＩＴ４０７８及びビフィドバクテリウム・アドレスセンティスＹＩＴ４０４５から選ばれる一種又は二種以上である。
【００１１】
これらビフィドバクテリウム属微生物を豆乳に作用させる方法は特に限定されず、例えば、培養したビフィドバクテリウム属微生物の菌液を上記豆乳に接種した後、その微生物に適した温度、時間、嫌気性菌なら嫌気性等の条件を適宜決定して発酵を行えばよい。なお、発酵は、菌株を複数種組み合わせた混合発酵であってもよいし、菌株を複数種組み合わせた連続発酵であってもよい。
また、ビフィドバクテリウム属微生物及びそれ以外の微生物を用いた上記混合発酵あるいは連続発酵でもよい。
【００１２】
豆乳にビフィドバクテリウム属微生物を作用させて得られた発酵豆乳は、そのまま本発明の脂質代謝改善剤とすることができるが、食品や経口医薬品に通常使用されている添加物を加えてもよい。ここで用いる添加物としては、糖類、蛋白質、脂質、ビタミン類、植物抽出物、動物抽出物、ゲル化剤、香料、着色剤等が挙げられる。なお、本発明において発酵豆乳は、殺菌してから用いることもできる。
【００１３】
本発明の脂質代謝改善剤及びＬＤＬ抗酸化剤を医薬として使用する場合の投与量は、投与法、患者の年齢、体重、容態によって異なるが、経口投与の場合、成人患者に対して１日あたり１００〜５００mlとすることが好ましい。
【００１４】
また、本発明の脂質代謝改善剤は、任意の範囲で食品に添加して用いることができ、脂質代謝改善食品とすることができる。食品としては、乳酸菌飲料、発酵乳、豆乳、牛乳、チーズ、プリン等に１０〜８０％、好ましくは４０〜７０％程度含有させればよく、その他ビスケット、パン等に含有させることもできる。
【００１５】
【実施例】
以下実施例を挙げて本発明を更に詳細に説明するが、本発明はこれら実施例に限定されるものではない。
【００１６】
実施例１
素豆乳（四国化工機製、固形分12.0％、粗脂肪2.48％、粗タンパク4.71％）を100 ℃で90分蒸気滅菌後、Bifidobacterium breve YIT4065(FERM P-15488)（豆乳培地）を接種し、３０時間培養した。培養終了後の菌液のｐＨは4.82、滴定酸度は8.25であった。これを凍結乾燥した発酵豆乳凍結乾燥物の組成は、素豆乳の組成とほぼ一致していた。また、対照として発酵豆乳のタンパクをカゼインに、脂質をコーン油に、残りをシュクロースで置換した対照混合物を調製した。これらの発酵豆乳、豆乳及び対照混合物を使用し、表１に示すコレステロール無添加食餌及び表２に示すコレステロール添加食餌をそれぞれ調製した。なお、表１及び表２において、ビタミン混合、塩類混合はAIN-76に準じたものである。
【００１７】
【表１】

【００１８】
【表２】

【００１９】
５週齢のシリアンハムスター（ＳＬＣ）雄36匹を使用し、３日間ＭＦ（オリエンタル酵母工業（株）製）固形食、４日間ＭＦ粉末食にて予備飼育後、平均体重に差がでないように６群に分けて（１群６匹）、室温24±1℃、湿度55±5％の環境下、個別ブラケットケージで上記食餌にて飼育した。なお、食餌及び水は自由摂取とした。
２〜３日おきに摂取量を測定し、試験開始７日後、４時間絶食後、ネンブタール麻酔下で解剖し、腹大動脈より採血し血漿を分離して脂質を分析した。
【００２０】
分析は、血漿脂質は総コレステロール、HDL（高比重リポタンパク質）-コレステロール、トリグリセライドについて臨床検査キット（デタミナTC555／協和メディクス（株）製、HDL-コレステロールテストワコー／和光純薬（株）製、トリグリセライドＧテストワコー／和光純薬（株）製）にて測定することにより行った。
統計処理は、分散分析（等分散性が認められなかった場合はlog 変換後分散分析）の後Tukeyの検定にて多重比較した。結果を表３〜表６に示す。値は平均値と標準偏差で表した（ｎ＝６）。有意水準は0.05とした。
同じアルファベットが付されている値は有意差がないことを示す。表３及び表５において終体重は絶食前の体重を示す。動脈硬化指数は計算式（１）により算出した。
【００２１】
【数１】

【００２２】
【表３】

【００２３】
【表４】

【００２４】
【表５】

【００２５】
【表６】

【００２６】
コレステロール無添加食において、終体重、体重増加量、飼料効率への豆乳及び発酵豆乳の影響は認められなかった。摂食量において豆乳と発酵豆乳で対照に比べて多い傾向にあるが多重比較すると差が検出されなかった。豆乳と発酵豆乳の血漿トリグリセライドの値は対照と比べて半減した。
総コレステロールに３群間の差はなかったが、HDL-コレステロールは発酵豆乳群で対照群に比べ増加し、（VLDL（超低比重リポタンパク質）＋LDL）-コレステロール値は減少した。
動脈硬化指数も発酵豆乳群で対照群と比べて低下した。豆乳群ではHDL-コレステロール、（VLDL＋LDL）-コレステロール、動脈硬化指数いずれも対照とも発酵豆乳とも差は認められなかった。
【００２７】
コレステロール添加食においては、豆乳及び発酵豆乳群の体重増加量と摂食量及び飼料効率は対照群と比較してそれぞれ増加した。血漿トリグリセライド値は豆乳と発酵豆乳群で対照群の約１／４に減少した。
また、総コレステロールについても豆乳群、発酵豆乳群は対照群と比べて、１５％程度減少した。豆乳、発酵豆乳群はHDL-コレステロールの上昇、（VLDL＋LDL）-コレステロールの減少が認められ、動脈硬化指数が約半分に減少し、コレステロール無添加の対照群の値に近くなった。
【００２８】
以上の結果により、発酵豆乳は、コレステロール添加、無添加にかかわらず、対照に比べ明らかにHDL-コレステロールの上昇と（VLDL＋LDL）-コレステロールの減少が認められ、脂質代謝改善効果が確認された。
更に発酵豆乳は、コレステロール無添加において、豆乳に比べ明らかに優れた脂質代謝改善効果を有することが確認された。
【００２９】
実施例２
嫌気ＧＡＭ培地にて前培養したヒト由来ビフィドバクテリウム属微生物（１０株）を素豆乳（100℃90分滅菌）に１％接種し、37℃、48時間培養した。
培養液１mlに３mlのメタノールを加えて攪拌、４℃で一晩放置したのち、遠心分離（3000rpm、10分間）して上清（４倍希釈液）を得た。これを更にメタノールで希釈し、40倍希釈サンプルを調製した。
【００３０】
シリアンハムスター（雄、６週齢）をＭＦ飼料で１週間予備飼育したのち、0.5％コレステロール、及び5％ラードを添加したＭＦ飼料で２週間飼育した。解剖前日に24時間絶食させ、腹部大動脈から採血を行い、EDTA法により血漿を調製した。この血漿から超遠心法によりLDL 画分を採取し、生理的リン酸緩衝液で24時間透析したのち、適当な濃度に希釈して酸化反応用LDL とした。
【００３１】
ＬＤＬ（終濃度250μg/ml protein）はサンプル添加後、5μM ＣｕＳＯ₄存在下で37℃、4時間インキュベートして酸化させ、EDTA添加ののち冷却して反応を止め、反応液中のThiobarbituric acid reactive substance（以下、TBARSで示す）を比色法による吸光度測定から求めた。サンプルのかわりにメタノールを添加したものをコントロールとし、計算式（２）にてＬＤＬ脂質酸化抑制率（％）を求めた。結果を表７に示す。なお、抗酸化性は、滅菌済素豆乳の値を100としたときの比抑制率として表した。
【００３２】
【数２】

【００３３】
【表７】

【００３４】
以上の結果により、ビフィドバクテリウム属微生物による発酵豆乳は、ＬＤＬ抗酸化活性を有し、豆乳と比較しても優れたＬＤＬ抗酸化活性が認められた。
【００３５】
実施例３
嫌気ＧＡＭ培地にて前培養したビフィドバクテリウム属微生物（２４株）を素豆乳（四国加工機製、100 ℃90分滅菌）に１％接種し、所定時間37℃で好気培養した後、測定まで−20℃で保存した。
上記のとおり調製した発酵豆乳200mgに、後述する方法で調製した人工脂質ミセルを200μlを加えて、37℃で１時間放置後、遠心分離（1000rpm,15分）し、上清のコレステロール濃度をデタミナTC555（協和メディックス）を用いて測定した。コントロールとしては素豆乳を用い、各発酵豆乳の沈殿に移行したコレステロール量をコレステロール不溶化率とした。結果を表８に示す。
【００３６】
〔人工脂質ミセルの調製〕
リン酸バッファー（150mM,pH7.0)75mlに、oxgall(DIFCO)2g、コレステロール（和光純薬工業（株）製) 921mg 、リゾフォスファチジルコリン（SIGMA)135mgの順で加えて溶解し、次いでモノオレイン酸（東京化成工業（株）製）90.2mg、オイレン酸(和光純薬工業（株）製) 702.2mg を加え混合し、リン酸バッファーを加えて全量を100mlとした。
溶液を攪拌しながら、室温での超音波処理(SONIFR,スモールチップ）を行った。このエマルジョン及びミセル溶液をしばらく攪拌後100,000×ｇ(RP50-2,40,000rpm)、25℃にて超遠心分離を16〜18時間行った。超遠心分離後、透明なミセル層のみを回収し、人工脂質ミセルを調製した。
【００３７】
【表８】

【００３８】
以上の結果により、ビフィドバクテリウム属微生物による発酵豆乳はいずれも豆乳に比べミセル不溶化作用が強かった。コレステロールが小腸粘膜から吸収されるにはミセルに溶解していることが必須である。よって発酵豆乳は豆乳よりもコレステロールの吸収を抑制することが示唆された。
【００３９】
【発明の効果】
本発明の脂質代謝改善剤は、HDL-コレステロールを増加させる一方、（VLDL＋LDL）-コレステロールを減少させるので、動脈硬化症の予防・改善効果が期待できる。特に、コレステロール無添加の条件下では、対照混合物と豆乳には差が認められないのに対し、本発明の脂質代謝改善剤は、有意に（VLDL＋LDL）-コレステロールを減少させる効果が認められ、常人においても動脈硬化症の効果的な予防が期待できる。
また、本発明の脂質代謝改善剤は、ＬＤＬに対する優れた抗酸化活性を有するので、動脈硬化の発端とされるＬＤＬの酸化変性を効果的に防止することができる。更に、本発明の脂質代謝改善剤は、豆乳にビフィドバクテリウム属微生物を作用させて得られた発酵豆乳からなるので、安全性にも全く問題のない官能的にも優れた脂質代謝改善剤であり、動脈硬化の予防及び治療に有用である。[0001]
BACKGROUND OF THE INVENTION
The present invention relates to an absorption inhibitor for cholesterol from the intestinal tract containing fermented soymilk using a Bifidobacterium microorganism.
[0002]
[Prior art]
Soymilk contains soy protein, phospholipids, and isoflavones, and is expected to be effective for lipid metabolism. However, since the soy milk has a peculiar unpleasant odor and unpleasant taste, it is currently avoided by many consumers.
Therefore, in order to reduce the unpleasant odor peculiar to soymilk, attempts have been made to ferment soymilk with lactic acid bacteria or bifidobacteria, but it has not yet been reported that fermented soymilk has an excellent lipid metabolism improving effect.
[0003]
[Problems to be solved by the invention]
For prevention and improvement of arteriosclerosis, it is common to lower the blood cholesterol level, and it is effective to improve hypercholesterolemia, particularly high LDL (low density lipoprotein) cholesterolemia. Hiro et al. (1987) Coronary vol4,281).
In addition, the occurrence of arteriosclerosis has been reported to be triggered by oxidative degeneration of LDL (Steinberg, D. et al. (1989) New Engl J. Med., 321, 1196-1197). Substances having antioxidant activity have attracted attention.
[0004]
Accordingly, an object of the present invention is to provide an excellent lipid metabolism improving agent effective in preventing and improving arteriosclerosis.
[0005]
[Means for Solving the Problems]
In view of this situation, the present inventors have conducted intensive research focusing on the active ingredients possessed by soy milk. As a result, the soy milk contains Bifidobacterium microorganisms, particularly Bifidobacterium breve YIT4063, Bifidobacterium breve. YIT4064, Bifidobacterium breve YIT4065, Bifidobacterium longum YIT4038, Bifidobacterium longum YIT4078, Bifidobacterium addresscentis YIT4045 is a fermented soymilk that has excellent lipid intestinal tract The present invention was completed by discovering that it has an action of inhibiting absorption from water and is useful as an agent for improving lipid metabolism.
[0006]
That is, the present invention relates to Bifidobacterium breve YIT4063, Bifidobacterium breve YIT4064, Bifidobacterium breve YIT4065, Bifidobacterium longum YIT4038, Bifidobacterium longum YIT4078 and Bifidobacterium It is to provide an absorption inhibitor of cholesterol from the intestinal tract containing fermented soymilk obtained by allowing one or more Bifidobacterium microorganisms selected from Address Centis YIT4045 to act on soymilk.
[0007]
DETAILED DESCRIPTION OF THE INVENTION
The soy milk used as a raw material in the present invention is preferably a raw material made from whole soybeans, moulted soybeans or flake soybeans containing fats and oils, but may also be made from defatted soybeans.
[0008]
For soy milk, after adding the raw material to water, after adding and grinding with hot water or hot water containing 0.5 to 1.0% by weight (hereinafter simply referred to as%) sodium carbonate, the okara is removed. Although it can manufacture by heat-sterilizing, the soymilk used by this invention may be manufactured by what kind of method.
[0009]
To soymilk, sugars used in foods such as sucrose, glucose, fructose, and invert sugar are added for nutrients necessary for the growth of microorganisms such as meat extract, peptone, yeast extract, and peptides. May be. Moreover, in order to adjust to the optimal pH of microorganisms, you may add the acid used for foodstuffs, such as a citric acid, malic acid, ascorbic acid, lactic acid, and an acetic acid, to soymilk.
[0010]
The inhibitor for absorption of cholesterol from the intestinal tract according to the present invention contains, as a main component, fermented soymilk obtained by allowing Bifidobacterium microorganisms to act on soymilk. Bifidobacterium microorganisms that act on soy milk are Bifidobacterium breve YIT4063, Bifidobacterium breve YIT4064, Bifidobacterium breve YIT4065, Bifidobacterium longum YIT4038, Bifidobacterium longum YIT4078 And at least one selected from Bifidobacterium addresscentis YIT4045.
[0011]
The method for allowing these Bifidobacterium microorganisms to act on soy milk is not particularly limited. For example, after inoculating the cultured Bifidobacterium microorganism solution into the soy milk, the temperature, time, and anaerobic condition suitable for the microorganism If it is a sex bacterium, conditions such as anaerobicity may be appropriately determined and fermentation may be performed. The fermentation may be mixed fermentation in which a plurality of strains are combined, or continuous fermentation in which a plurality of strains are combined.
Further, the above mixed fermentation or continuous fermentation using a microorganism belonging to the genus Bifidobacterium and other microorganisms may be used.
[0012]
Fermented soymilk obtained by allowing Bifidobacterium genus microorganisms to act on soymilk can be used as the lipid metabolism improving agent of the present invention as it is, but additives usually used in foods and oral medicines can be added. Good. Examples of the additive used here include sugars, proteins, lipids, vitamins, plant extracts, animal extracts, gelling agents, fragrances, and coloring agents. In the present invention, fermented soymilk can be used after sterilization.
[0013]
The dosage in the case of using the lipid metabolism improving agent and LDL antioxidant of the present invention as a medicine varies depending on the administration method, patient age, body weight, and condition, but in the case of oral administration, it is per day for adult patients It is preferable to make it 100-500 ml.
[0014]
In addition, the lipid metabolism improving agent of the present invention can be used by adding to a food within an arbitrary range, and can be a lipid metabolism improving food. As food, it may be contained in lactic acid bacteria beverages, fermented milk, soy milk, milk, cheese, pudding, etc. in an amount of 10 to 80%, preferably about 40 to 70%, and can also be contained in other biscuits, bread and the like.
[0015]
【Example】
EXAMPLES Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to examples, but the present invention is not limited to these examples.
[0016]
Example 1
Raw soymilk (manufactured by Shikoku Kako, solid content 12.0%, crude fat 2.48%, crude protein 4.71%) is steam-sterilized at 100 ° C for 90 minutes, then inoculated with Bifidobacterium breve YIT4065 (FERM P-15488) (soymilk medium), 30 Incubate for hours. The pH of the bacterial solution after completion of the culture was 4.82, and the titratable acidity was 8.25. The composition of the freeze-dried fermented soymilk obtained by freeze-drying this was almost the same as the composition of the soymilk. As a control, a control mixture was prepared in which the protein of fermented soymilk was replaced with casein, the lipid was replaced with corn oil, and the rest was replaced with sucrose. Using these fermented soymilk, soymilk and a control mixture, a cholesterol-free diet shown in Table 1 and a cholesterol-added diet shown in Table 2 were prepared. In Tables 1 and 2, vitamin mixing and salt mixing are in accordance with AIN-76.
[0017]
[Table 1]

[0018]
[Table 2]

[0019]
36 male 5-week-old Syrian hamsters (SLC) were used, so that there was no difference in average body weight after preparatory feeding on MF (Oriental Yeast Industry Co., Ltd.) solid food for 4 days and MF powdered food for 4 days. Divided into 6 groups (6 animals per group), they were reared on the above diet in individual bracket cages in an environment of room temperature 24 ± 1 ° C. and humidity 55 ± 5%. Food and water were freely consumed.
The intake was measured every 2 to 3 days, 7 days after the start of the test, after fasting for 4 hours, dissected under Nembutal anesthesia, blood was collected from the abdominal aorta, plasma was separated and lipid was analyzed.
[0020]
Analysis of plasma lipids is total cholesterol, HDL (high density lipoprotein) -cholesterol, and triglyceride clinical test kit (Detamina TC555 / Kyowa Medics Co., Ltd., HDL-Cholesterol Test Wako / Wako Pure Chemical Industries, Ltd. G test Wako / manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.).
The statistical processing was subjected to multiple comparisons by Tukey's test after analysis of variance (or log analysis after log conversion if equal variance was not found). The results are shown in Tables 3 to 6. The value was expressed as an average value and standard deviation (n = 6). The significance level was 0.05.
Values with the same alphabet indicate no significant difference. In Tables 3 and 5, the final body weight indicates the weight before fasting. The arteriosclerosis index was calculated by the calculation formula (1).
[0021]
[Expression 1]

[0022]
[Table 3]

[0023]
[Table 4]

[0024]
[Table 5]

[0025]
[Table 6]

[0026]
In the cholesterol-free diet, the effects of soy milk and fermented soy milk on final body weight, weight gain, and feed efficiency were not observed. There was a tendency for soy milk and fermented soy milk to be higher in intake than in the control, but no difference was detected when multiple comparisons were made. Plasma triglyceride values in soymilk and fermented soymilk were halved compared to controls.
Although there was no difference in total cholesterol among the three groups, HDL-cholesterol increased in the fermented soymilk group as compared to the control group, and (VLDL (very low density lipoprotein) + LDL) -cholesterol value decreased.
The arteriosclerosis index also decreased in the fermented soymilk group compared with the control group. In the soy milk group, HDL-cholesterol, (VLDL + LDL) -cholesterol, and arteriosclerosis index were not different from the control and fermented soy milk.
[0027]
In the cholesterol-added diet, the weight gain, food intake, and feed efficiency of the soymilk and fermented soymilk groups increased as compared to the control group. Plasma triglyceride values were reduced to about 1/4 of the control group in the soymilk and fermented soymilk groups.
In addition, total cholesterol decreased about 15% in the soy milk group and the fermented soy milk group as compared with the control group. In the soymilk and fermented soymilk groups, an increase in HDL-cholesterol and a decrease in (VLDL + LDL) -cholesterol were observed, the arteriosclerosis index decreased by about half, and it was close to the value of the control group without addition of cholesterol.
[0028]
Based on the above results, fermented soymilk clearly showed an increase in HDL-cholesterol and a decrease in (VLDL + LDL) -cholesterol compared to the control, regardless of whether or not cholesterol was added, confirming the effect of improving lipid metabolism.
Furthermore, it was confirmed that fermented soymilk has a lipid metabolism improvement effect that is clearly superior to that of soymilk when no cholesterol is added.
[0029]
Example 2
Human-derived Bifidobacterium microorganisms (10 strains) pre-cultured in an anaerobic GAM medium were inoculated into 1% of soy milk (sterilized at 100 ° C. for 90 minutes) and cultured at 37 ° C. for 48 hours.
3 ml of methanol was added to 1 ml of the culture solution, stirred and allowed to stand overnight at 4 ° C., and then centrifuged (3000 rpm, 10 minutes) to obtain a supernatant (4-fold diluted solution). This was further diluted with methanol to prepare a 40-fold diluted sample.
[0030]
Syrian hamsters (male, 6 weeks old) were bred for 1 week on MF diet and then MF diet supplemented with 0.5% cholesterol and 5% lard for 2 weeks. The day before dissection, the animals were fasted for 24 hours, blood was collected from the abdominal aorta, and plasma was prepared by the EDTA method. The LDL fraction was collected from this plasma by ultracentrifugation, dialyzed with physiological phosphate buffer for 24 hours, and diluted to an appropriate concentration to prepare LDL for oxidation reaction.
[0031]
LDL (final concentration 250 μg / ml protein) is oxidized after incubation by incubating for 4 hours at 37 ° C. in the presence of 5 μM CuSO _4. After adding EDTA, the reaction is stopped by cooling, and the thiobarbituric acid reactive substance in the reaction solution (Hereinafter referred to as TBARS) was determined from absorbance measurement by a colorimetric method. LDL lipid oxidation inhibition rate (%) was determined by the calculation formula (2) using a sample in which methanol was added instead of the sample. The results are shown in Table 7. The antioxidant property was expressed as a ratio inhibition rate when the value of the sterilized raw soymilk was 100.
[0032]
[Expression 2]

[0033]
[Table 7]

[0034]
Based on the above results, fermented soymilk by Bifidobacterium microorganisms has LDL antioxidant activity, and excellent LDL antioxidant activity was recognized even compared with soymilk.
[0035]
Example 3
Bifidobacterium microorganisms (24 strains) pre-cultured in anaerobic GAM medium are inoculated into 1% of soy milk (manufactured by Shikoku Processing Machine, sterilized at 100 ° C for 90 minutes), and after aerobic culture at 37 ° C for a predetermined time Until -20 ° C.
Add 200 μl of artificial lipid micelle prepared by the method described below to fermented soymilk prepared as described above, leave it at 37 ° C. for 1 hour, centrifuge (1000 rpm, 15 minutes), and determine the cholesterol concentration in the supernatant Measured using TC555 (Kyowa Medics). As a control, soy milk was used, and the amount of cholesterol transferred to the precipitation of each fermented soy milk was defined as the cholesterol insolubilization rate. The results are shown in Table 8.
[0036]
(Preparation of artificial lipid micelle)
In 75 ml of phosphate buffer (150 mM, pH 7.0), oxgall (DIFCO) 2 g, cholesterol (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 921 mg and lysophosphatidylcholine (SIGMA) 135 mg were added and dissolved in this order. Monooleic acid (manufactured by Tokyo Chemical Industry Co., Ltd.) 90.2 mg and oleic acid (manufactured by Wako Pure Chemical Industries, Ltd.) 702.2 mg were added and mixed, and phosphate buffer was added to make the total volume 100 ml.
While stirring the solution, sonication at room temperature (SONIFR, small chip) was performed. The emulsion and micelle solution were stirred for a while and then centrifuged at 100,000 × g (RP50-2,40,000 rpm) at 25 ° C. for 16 to 18 hours. After ultracentrifugation, only the transparent micelle layer was collected to prepare artificial lipid micelles.
[0037]
[Table 8]

[0038]
Based on the above results, fermented soymilk by Bifidobacterium microorganisms had a stronger micellar insolubility than soymilk. In order for cholesterol to be absorbed from the small intestinal mucosa, it must be dissolved in micelles. Therefore, it was suggested that fermented soymilk suppresses cholesterol absorption more than soymilk.
[0039]
【The invention's effect】
Since the lipid metabolism improving agent of the present invention increases HDL-cholesterol and decreases (VLDL + LDL) -cholesterol, an effect of preventing or improving arteriosclerosis can be expected. In particular, there is no difference between the control mixture and soy milk under the condition where no cholesterol is added, whereas the lipid metabolism-improving agent of the present invention has a significant effect of reducing (VLDL + LDL) -cholesterol. Can be expected to effectively prevent arteriosclerosis.
Moreover, since the lipid metabolism improving agent of the present invention has excellent antioxidant activity against LDL, it can effectively prevent oxidative degeneration of LDL, which is the origin of arteriosclerosis. Furthermore, since the lipid metabolism improving agent of the present invention comprises fermented soy milk obtained by allowing Bifidobacterium microorganisms to act on soy milk, the lipid metabolism improving agent is also excellent in terms of functionality without any safety problems. It is useful for the prevention and treatment of arteriosclerosis.

Claims

Selected from Bifidobacterium breve YIT4063, Bifidobacterium breve YIT4064, Bifidobacterium breve YIT4065, Bifidobacterium longum YIT4038, Bifidobacterium longum YIT4078 and Bifidobacterium addresscentis YIT4045 An inhibitor of absorption of cholesterol from the intestinal tract containing fermented soy milk obtained by allowing one or more Bifidobacterium microorganisms to act on soy milk.